ES2688970A1 - Composición que comprende mirnas para su uso como medicamento. - Google Patents

Composición que comprende mirnas para su uso como medicamento. Download PDF

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Michael Hackenberg
Michail Kotsyfakis
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Biology Centre Of Czech Acad Of Sciences
Universidad de Granada
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Universidad de Granada
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
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    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
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Abstract

Composición que comprende miRNAs para su uso como medicamento. La presente invención proporciona una composición que comprende al menos un oligonucleótido derivado de miRNAs de saliva de la garrapata Ixodes ricinus. Dicha composición es útil como método de tratamiento de un trastorno seleccionado entre cánceres, enfermedades inflamatorias, alergias, dermatitis atópica, lupus, asma, dolor crónico, trastornos relacionados con el ritmo circadiano, enfermedades metabólicas, diabetes, glaucoma, hepatitis, enfermedades cardiovasculares, Parkinson, enfermedades neurológicas y neurodegenerativas y epilepsia.

Description

COMPOSICIÓN QUE COMPRENDE MIRNAS PARA SU USO COMO MEDICAMENTO
SECTOR DE LA TÉCNICA
[0001] La presente invención se refiere a miRNAs aislados de la saliva de la garrapata Ixodes ricinus y combinaciones de los mismos, que muestran un efecto significativo en vías de
señalización relevantes en particular para el tratamiento de cánceres, enfermedades inflamatorias, trastornos relacionados con el ritmo circadiano, epilepsia y otros trastornos.
ESTADO DE LA TÉCNICA
[0002] Un microRNA (abreviado como “miRNA”) es una pequeña molécula de ARN no codificante que se encuentra tanto en plantas como en animales, y que, a veces, ejerce una función relacionada con la regulación post-transcripcional de la expresión génica degradando ciertas RNAm o impendiendo su traducción. Mientras que la mayoría de miRNAs se encuentran dentro de la célula, algunos miRNAs, comúnmente conocidos como miRNAs circulantes o extracelulares, también se han encontrado en el espacio extracelular, incluyendo diversos fluidos biológicos y medios de cultivo celular.
[0003] Las garrapatas del genero Ixodes son importantes vectores de enfermedades que transmiten patógenos que causan varias enfermedades humanas incluyendo la enfermedad de Lyme y la encefalitis transmitida por garrapatas. Las glándulas salivales y la saliva son vitales para el éxito biológico de las garrapatas y son una importante vía de transmisión de patógenos. Las glándulas salivales de la garrapata experimentan un notable crecimiento y diferenciación durante el período de alimentación de sangre, y la composición de la saliva incluye muchos componentes diseñados para influir en el huésped. Aún no se han descrito miRNAs en las garrapatas de Ixodes ricinus.
[0004] Recientemente, los miRNAs han llamado la atención como potenciales dianas terapéuticas. Sus funciones reguladoras de la expresión génica los convierten en una diana ideal para el tratamiento de enfermedades genéticas caracterizadas por la desregulación de diferentes genes. Hasta la fecha, varios miRNAs (predominantemente miRNAs humanos) han sido identificados como dianas potenciales para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, diferentes tipos de cáncer, enfermedades metabólicas, hepatitis, aterosclerosis, insuficiencia cardíaca y diabetes. Sin embargo, estos miRNAs son miRNA humanos y sirven como objetivo para el tratamiento. Los paradigmas de tratamiento sugeridos hasta el momento implican la administración de sustancias que afectan la cantidad o función de los propios miRNAs del organismo, incluyendo la administración de secuencias que imitan los propios miRNAs del organismo en enfermedades causadas por la infraexpresión de estos miRNAs (Ajay Francis Christopher et al.: Perspect Clin Res. 2016 Apr-Jun; 7(2): 68–74; Eva van Rooij and Sakari Kauppinen, EMBO Mol Med. 2014 Jul; 6(7): 851–864).
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
[0005] La presente invención se basa en un descubrimiento reciente que demuestra que los miRNAs presentes en la saliva de Ixodes ricinus regulan genes codificantes en mamíferos biológicamente activos (en particular humanos) y por tanto mediante la regulación de la expresión de estas proteínas se regulan también las vías de señalización en las que dichas proteínas participan. La desregulación de estas vías de señalización desempeña un papel clave en muchas enfermedades de mamíferos (en particular humanos). La presente invención abre así un nuevo paradigma para el tratamiento de enfermedades de mamíferos que implican desregulación de la expresión génica, incluyendo la administración terapéutica de miRNAs que ocurren naturalmente en organismos no mamíferos, tales como garrapatas.
[0006] La presente invención proporciona así una composición que comprende al menos un oligonucleótido derivado de un miRNA obtenido de la saliva de la garrapata de Ixodes ricinus, seleccionado dicho oligonucleótido del grupo que comprende:
-
Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO: 1), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2),
-
Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279ª-3p, SEQ ID NO. 3), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p, SEQ ID NO. 14),
-Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p, SEQ ID NO. 21).
[0007] Preferiblemente, la composición de la presente invención comprende al menos dos, o al menos tres, o al menos cuatro oligonucleótidos seleccionados del grupo de oligonucleótidos de la invención, derivados de los miRNAs obtenidos de la saliva de la garrapata Ixodes ricinus, según se enumera en el párrafo [0006].
[0008] Preferiblemente, la composición de la presente invención comprende al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que comprende: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-3173p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a3p),
-un oligonucleótido que tiene la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miRbantam-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X83p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-53075p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-2763p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miRbantam-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X265p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X123p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p),
-un oligonucleótido que tiene la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-1905p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-20015p).
[0009] Preferiblemente, la composición de la presente invención comprende al menos dos, o al menos tres, o al menos cuatro oligonucleótidos seleccionados del grupo de oligonucleótidos que corresponden a miRNAs obtenidos de la saliva de la garrapata Ixodes ricinus, según se enumera en el párrafo [0008].
[0010] En una realización preferida, la composición de la presente invención comprende al menos dos o al menos tres oligonucleótidos seleccionados del grupo que consiste en: -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por:
-Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por: -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por:
-
Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p), 7
-
Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p), -Un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por:
-
un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p);
O seleccionados del grupo compuesto por:
-
un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p);
Y opcionalmente al menos una secuencia adicional seleccionada del grupo definido anteriormente en el párrafo [0006].
[0011] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende al menos
dos o al menos tres oligonucleótidos seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-83p),
-un oligonucleótido que tiene la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR317-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR279a-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miRbantam-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miRX1h-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X175p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miRX8-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR5307-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-963p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-2763p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-713p);
O seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido que tiene la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR279a-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miRbantam-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miRX26-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miRX12-3p);
O seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido que tiene la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-85p),
-un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-83p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a5p),
5 -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h5p);
O seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a5p),
10 -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-13p),
-
un oligonucleótido que tiene la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR190-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR
15 2001-5p); Y opcionalmente al menos una secuencia adicional seleccionada del grupo definido anteriormente en el párrafo [0008].
[0012] En una representación más preferida, la composición de la presente invención
20 comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p),
25 -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p).
30 [0013] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-3173p),
35 -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a3p),
-un oligonucleótido que tiene la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miRbantam-3p),
[0014] En otra realización preferida, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p).
[0015] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X83p).
[0016] En otra realización aún más preferida, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p).
[0017] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-53075p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-2763p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p).
[0018] En otra realización preferida adicional, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p).
[0019] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido que tiene la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miRbantam-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X265p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X123p).
[0020] En otra realización aún más preferida, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p),
-un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p).
[0021] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido que tiene la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h5p).
[0022] En aún otra realización preferida, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p),
-un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95% de similitud con la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p).
[0023] Más preferiblemente, la composición de la presente invención comprende los siguientes oligonucleótidos: -un oligonucleótido que tiene la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p),
-un oligonucleótido que tiene la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-1905p), -un oligonucleótido que tiene la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-20015p).
[0024] La diferencia del 10% (es decir, una similitud de secuencia del 90%) en la secuencia de los oligonucleótidos de la invención puede darse acortando o extendiendo la secuencia, o mediante mutaciones puntuales. Más preferiblemente, las secuencias de los oligonucleótidos de la invención tienen al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, o al menos el 97%, o al menos el 98%, o al menos 99% de similitud con las secuencias listadas. Las diferencias correspondientes en las secuencias oligonucleotídicas se pueden lograr acortando o extendiendo la secuencia, o mediante mutaciones puntuales.
[0025] Los oligonucleótidos de la presente invención pueden obtenerse por métodos estándar bien conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante métodos de síntesis en fase sólida o por métodos de bioproducción.
[0026] Debe entenderse que las composiciones definidas que comprenden al menos uno, al menos dos, al menos tres, o al menos cuatro oligonucleótidos”, también pueden comprender adicionalmente otros oligonucleótidos seleccionados del grupo definido en el párrafo [0006] o en el párrafo [0008], o cualquier otro oligonucleótido o sustancia, preferiblemente sustancias farmacéuticamente aceptables.
[0027] Las composiciones de la presente invención pueden comprender además sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables. Las composiciones líquidas comprenden preferiblemente agentes auxiliares farmacéuticamente aceptables seleccionados entre disolventes, conservantes, estabilizantes, emulsionantes, agentes solubilizantes, sustancias reguladoras de la viscosidad, sales y tampones. Las composiciones sólidas comprenden preferiblemente agentes auxiliares farmacéuticamente aceptables seleccionados de entre los vehículos, cargas, aglutinantes, desintegrantes, reguladores de flujo, lubricantes, auxiliares de granulación, conservantes y estabilizantes. Las composiciones se preparan por métodos conocidos en el estado de la técnica, tales como mezcla, liofilización, granulación, formación de comprimidos, etc.
[0028] En el marco de la presente invención, se observó que las garrapatas usan exosomas para administrar los miRNA presentes en la saliva al organismo huésped. Por lo tanto, en una realización preferida, la composición de la presente invención comprende también componentes que forman los liposomas. Dicha composición comprende entonces las secuencias de oligonucleótidos en forma de liposomas y es útil para administrar las secuencias de oligonucleótidos con una mejor biodisponibilidad.
[0029] Los liposomas son vesículas que tienen al menos una bicapa lipídica. Están típicamente compuestas por un núcleo que en la presente invención contiene las secuencias de oligonucleótidos y opcionalmente sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables y al menos una bicapa lipídica que comprende típicamente fosfolípidos u otras sustancias lipídicas anfipáticas, es decir, sustancias lipídicas que comprenden una cabeza hidrófila y una cola hidrófoba. Los liposomas se producen típicamente sonicando una dispersión que comprende los compuestos a encapsular y sustancias lipídicas anfipáticas, mediante extrusión o secado por pulverización.
[0030] En el marco de la presente invención, se exploró la interacción de los miRNA aislados de la saliva de la garrapata Ixodes ricinus con la regulación de la expresión génica de proteínas que participan en vías de señalización implicadas en la progresión o regulación de trastornos de salud de mamíferos (en particular humanos). Se encontró que los miRNAs obtenidos de la saliva de la garrapata Ixodes ricinus afectan a las vías de señalización, y en combinaciones de al menos dos, al menos tres o al menos cuatro miRNAs los oligonucleótidos interactúan sinérgicamente para regular las vías de señalización. Se encontró que las vías de señalización comprenden genes con zonas que actúan como diana para los miRNAs, Preferiblemente, las vías de señalización implican a genes que comprenden combinaciones de dianas para los miRNAs. La interacción puede producirse, por ejemplo, mediante el silenciamiento o regulación negativa de la expresión génica de las proteínas que participan en dichas vías de señalización.
[0031] Se ha demostrado que los oligonucleótidos de acuerdo con la presente invención y las combinaciones de los mismos regulan la expresión de proteínas que participa en vías de señalización implicadas en la progresión o regulación de trastornos de salud. Por lo tanto, los oligonucleótidos y sus combinaciones son útiles como medicamentos, por ejemplo en la regulación de la homeostasis de un organismo mamífero (en particular humano).
[0032] En particular, los oligonucleótidos de acuerdo con la presente invención son útiles en el tratamiento de cánceres, enfermedades inflamatorias, alergias, dermatitis atópica, lupus, asma, dolor crónico, trastornos relacionados con el ritmo circadiano, enfermedades metabólicas, diabetes, glaucoma, hepatitis, tratamiento del dolor, tratamiento local del dolor, enfermedades cardiovasculares, enfermedad de Parkinson, enfermedades neurológicas y neurodegenerativas y epilepsia. Los oligonucleótidos y / o combinaciones de los mismos, de acuerdo con la presente invención han mostrado una regulación negativa de la expresión 15
génica de proteínas de vías de señalización implicadas en la regulación de estos trastornos, dichas vías de señalización incluyendo las vías siguientes (el número entre paréntesis es el número de identificador (ID) de la vía KEGG ID) que se discuten como ejemplos de vías de señalización que desempeñan papeles clave en diversas enfermedades. Otras vías con regulación negativa participan en la progresión y desarrollo de enfermedades, y el experto no tendría ninguna dificultad para encontrar la información relevante para cada vía en los libros y artículos científicos pertinentes, o utilizando las bases de datos pertinentes, como la base de datos KEGG. La presente invención proporciona además un método de tratamiento de un mamífero que sufre de una enfermedad como diferentes tipos de cánceres, enfermedades inflamatorias, alergias, dermatitis atópica, lupus, asma, dolor crónico, trastornos relacionados con el ritmo circadiano, enfermedades metabólicas, diabetes, glaucoma, hepatitis, enfermedades cardiovasculares, enfermedad de Parkinson, enfermedades neurológicas y neurodegenerativas y epilepsia. Dicho método comprende una etapa de administración de la composición de la presente invención al mamífero.
[0033] Unión gap (4540): Se refiere a un tipo de conexión entre células como las que se basan en la transmisión sináptica eléctrica entre las neuronas. Actúa en enfermedades neurológicas, epilepsia y glaucoma. Además, la capacidad de las proteínas de unión gap para regular las respuestas inmunes, la proliferación celular, la migración, la apoptosis y la carcinogénesis las convierten en dianas terapéuticas atractivas para tratar trastornos inflamatorios y neoplásicos en diferentes sistemas de órganos. Se observan alteraciones en el perfil de la unión gap y en los niveles de expresión en trastornos cutáneos hiperproliferativos, enfermedades vasculares linfáticas, enfermedades pulmonares inflamatorias, lesiones hepáticas y trastornos neoplásicos.
[0034] Vía de señalización GnRH (4912): La secreción de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) del hipotálamo actúa sobre su receptor en la pituitaria anterior para regular la producción y liberación de las gonadotropinas, LH y FSH. El GnRHR se acopla a proteínas Gq / 11 para activar la fosfolipasa C que transmite su señal a diacilglicerol (DAG) e inositol 1,4,5-trisfosfatasa (IP3). DAG activa la vía intercelular de proteína quinasa C (PKC) e IP3 estimula la liberación intracelular de calcio. Además de la clásica Gq / 11, el acoplamiento de Gs se observa de vez en cuando de una manera específica de la célula. La señalización aguas abajo de la proteína quinasa C (PKC) conduce a la transactivación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF) y la activación de las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK), incluyendo la quinasa regulada por una señal extracelular (ERK), quinasa N-terminal Jun (JNK) y p38 MAPK. Las MAPK activas se trasladan al núcleo, dando 16
como resultado la activación de factores de transcripción y la inducción rápida de genes tempranos. Esta vía de señalización está relacionada con el cáncer de mama en las mujeres, la hipertrofia prostática benigna y el carcinoma prostático en los hombres, y la pubertad precoz central en los niños.
[0035] Vía de señalización ErbB (4012): La familia ErbB son receptores tirosina quinasa (RTK), que son el enlace entre la unión de ligandos de factores de crecimiento extracelulares y las vías de señalización intracelular que regulan diversas respuestas biológicas, incluyendo proliferación, diferenciación, motilidad celular y supervivencia. La unión del ligando a los cuatro miembros estrechamente relacionados de esta familia de receptores -factor de crecimiento epidérmico de la familia RTK (EGFR, también conocido como ErbB-1 o HER1), ErbB-2 (HER2), ErbB-3 (HER3) y ErbB-4 (HER4) -induce la formación de homo-y heterodímeros y la activación del dominio de quinasa intrínseca, dando como resultado la fosforilación de residuos de tirosina específicos (pY) dentro de la cola citoplásmica. La regulación negativa de la vía ErbB juega un papel clave en el tratamiento del cáncer de mama.
[0036] Vía de señalización Fc epsilon RI (4664): Las vías de señalización mediadas por Fc epsilon RI en mastocitos se inician por la interacción de un antígeno con IgE unido al dominio extracelular de la cadena alfa de Fc epsilon RI. Los mastocitos que se activan así liberan gránulos preformados que contienen aminas biógenas (histaminas) y proteoglicanos (heparina). La activación de la fosfolipasa A2 provoca la liberación de lípidos de la membrana seguido del desarrollo de mediadores lipídicos tales como leucotrienos (LTC4, LTD4 y LTE4) y prostaglandinas (especialmente PDG2). También hay secreción de citoquinas, las más importantes de las cuales son TNF-alfa, IL-4 e IL-5. Estos mediadores y citoquinas contribuyen a respuestas inflamatorias y alérgicas, dermatitis atópica y lupus.
[0037] Vía de señalización de oxitocina (4921): guarda relación con diabetes, obesidad y enfermedades cardiovasculares. La oxitocina ejerce una amplia variedad de efectos centrales y periféricos. En el sistema cardiovascular, la OTR está asociada con las vías ANP-GMPc y NO-cGMP, que reducen la fuerza y la tasa de contracción y aumentan la vasodilatación.
[0038] Contracción del músculo liso vascular (4270): La célula vascular del músculo liso (VSMC) es una célula altamente especializada cuya función principal es la contracción. Al contraerse, las CMLV se acortan, disminuyendo así el diámetro de un vaso sanguíneo para regular el flujo sanguíneo y la presión. La vía está indicada en enfermedades
cardiovasculares, aneurisma cerebral o enfermedad vascular; Asma, enfermedad funcional gastrointestinal.
[0039] Potenciación a largo plazo (4720): La potenciación a largo plazo del hipocampo (LTP), un aumento duradero de la eficacia sináptica, es la base molecular para el aprendizaje y la memoria. También se ha implicado en el dolor crónico y la hipertensión.
[0040] La dopamina (DA) es un importante neurotransmisor prototípico que actúa en el cerebro de mamíferos, donde controla una variedad de funciones incluyendo la actividad locomotora, la motivación, la recompensa, el aprendizaje, la memoria, y la regulación endocrina. DA influye en la actividad neuronal, la plasticidad sináptica y el comportamiento. Los D2Rs presinápticamente localizados regulan la síntesis y liberación de DA como principal autoreceptor del sistema dopaminérgico. Esta vía está implicada en la enfermedad de Parkinson, enfermedades del SNC, y la esquizofrenia.
[0041] Sinapsis colinérgica (4725): Implica la señalización de acetilcolina que afecta muchas funciones, como el aprendizaje, la memoria, la atención y el control motor.
[0042] Vía del cáncer colorrectal (5210): Está implicada en el cáncer colorrectal. Se han identificado dos mecanismos principales de inestabilidad genómica en la progresión esporádica de la vía del CRC. La primera, conocida como inestabilidad cromosómica (CIN), resulta de una serie de cambios genéticos que implican la activación de oncogenes como K-ras e inactivación de TSG (supresores de tumores) como p53, DCC / Smad4 y APC. La segunda, conocida como inestabilidad de microsatélites (MSI), resulta de la inactivación de los genes de reparación de ADN MLH1 y / o MSH2 por hipermetilación de su promotor, y la mutación secundaria de genes con microsatélites codificantes, tales como el receptor II del factor de crecimiento transformante (TGF-RII) y BAX.
[0043] Ritmo circadiano (4710): Es una ruta que desempeña un papel clave en el reloj biológico interno, que permite mantener un ritmo de aproximadamente 24 horas en ausencia de señales ambientales. En los mamíferos, el mecanismo del reloj circadiano consiste en bucles de retroalimentación de transcripción-traducción autónoma de células que impulsan patrones de expresión rítmicos de 24 horas de los componentes del reloj de núcleo. El primer bucle de retroalimentación negativa es una transcripción rítmica de los genes del período (PER1, PER2 y PER3) y los genes del criptocromo (CRY1 y CRY2). Las proteínas PER y CRY forman un heterodímero, que actúa sobre el heterodímero CLOCK / BMAL1 para reprimir su 18
propia transcripción. Las proteínas PER y CRY son fosforiladas por la caseína quinasa épsilon (CKIepsilon), lo que conduce a la degradación y reinicio del ciclo. El segundo bucle es un bucle de retroalimentación positivo impulsado por el heterodímero CLOCK / BMAL1, que inicia la transcripción de genes diana que contienen secuencias potenciadoras cis-reguladoras de
5 E-box.
[0044] Arrastre circadiano (4713): Es una propiedad fundamental por la que el periodo del reloj biológico interno es arrastrado por señales exógenas recurrentes, de tal manera que el ritmo endocrino y el de comportamiento del organismo se sincronizan con señales ambientales.
10 [0045] Proteoglicanos en el cáncer (5205): Se ha demostrado que muchos proteoglicanos (PG) en el microambiente tumoral son macromoléculas clave que contribuyen a la biología de varios tipos de cáncer incluyendo proliferación, adhesión, angiogénesis y metástasis, afectando el progreso del tumor. Su infra-regulación (down-regulation) contribuye al
15 tratamiento del cáncer.
[0046] Hepatitis C (5160): El virus de la hepatitis C (VHC) es la mayor causa de hepatitis crónica. El VHC emplea varias estrategias para perturbar la inmunidad de la célula huésped. Después de la invasión, el genoma de ARN del VHC funciona directamente como un ARN 20 mensajero (ARNm o mRNA) en el citoplasma de la célula huésped y forma complejos de replicación asociados a la membrana junto con proteínas no estructurales. El ARN viral puede desencadenar la vía RIG-I y la producción de interferón durante este proceso. Las proteínas del HCV regulan la respuesta inmune para inhibir la acción del interferón. VHC proteínas y las proteínas NS5A parecen ser las moléculas más importantes con funciones reguladoras que
25 modulan la transcripción, la proliferación celular y la apoptosis.
[0047] La presente invención comprende además preparaciones que comprenden al menos una composición de la presente invención y al menos otra sustancia farmacéuticamente activa. Tales preparaciones son adecuadas para la administración simultánea o secuencial.
30 Las preparaciones pueden estar en forma de un kit que comprende la composición de la presente invención en una forma de administración, y al menos otra sustancia farmacéuticamente activa en una forma de administración separada.
Lista de secuencias:
SEQ ID NO. 1: iri-miR-8-3p SEQ ID NO. 2: iri-miR-317-3p SEQ ID NO. 3: iri-miR-279a-3p SEQ ID NO. 4: iri-miR-bantam-3p SEQ ID NO. 5: iri-miR-X1h-5p SEQ ID NO. 6: iri-miR-X1h-3p SEQ ID NO. 7: iri-miR-X17-5p SEQ ID NO. 8: iri-miR-X8-3p SEQ ID NO. 9: iri-miR-5307-5p SEQ ID NO. 10: iri-miR-96-3p SEQ ID NO. 11: iri-miR-276-3p SEQ ID NO. 12: iri-miR-71-3p SEQ ID NO. 13: iri-miR-279a-5p SEQ ID NO. 14: iri-miR-bantam-5p SEQ ID NO. 15: iri-miR-X26-5p SEQ ID NO. 16: iri-miR-X12-3p SEQ ID NO. 17: iri-miR-8-5p SEQ ID NO. 18: iri-miR-9a-5p SEQ ID NO. 19: iri-miR-1-3p SEQ ID NO. 20: iri-miR-190-5p SEQ ID NO. 21: iri-miR-2001-5p
EJEMPLOS DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN
Disección de tejido de garrapata, extracción del ARN total y secuenciación
[0048] Se colocaron 1.080 ninfas y 420 adultos (hembras y machos) sobre animales de experimentación para su alimentación. El ARN total se extrajo del tejido combinado diseccionado de garrapatas adultas y garrapatas ninfales que se eliminaban en intervalos de 3 horas hasta un total de 24 horas (ninfas) o 36 horas (adultos) para producir diez muestras: cuatro muestras a 0-12h y 12-24h para ninfas Glándulas salivales (SG) e intestinos medios anteriores (MG, del inglés midgut. Parte del embrión a partir de la que se desarrollan el intestino medio), respectivamente, y seis muestras a 0-12h, 12-24h, y 24-36h para adultos SG y MG, respectivamente. La saliva de la garrapata fue obtenida como se describe en: (Horká,H., Cerná-Kýcková,K., Skallová,A. and Kopecký,J. (2009) Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks. Int J Med Microbiol, 299, 373–380). Las muestras se prepararon y se 20
secuenciaron en un Genome Analyzer IIx (Illumina, San Diego, CA) usando un protocolo de secuenciación estándar (longitud máxima de lecturas 36 nt) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las bibliotecas de secuenciación se prepararon de acuerdo con las instrucciones del TrueSeq Small RNA Sample preparation kit (Illumina). Los grupos o clusters se generaron utilizando la estación de agrupamiento de Illumina (Illumina cluster station). Las imágenes fluorescentes se convirtieron a secuencias utilizando el software de Illumina, Genome Analyzer Pipeline Analysis v1.8.
[0049] Dado que no se han reportado miRNAs en I. ricinus anteriormente, hemos utilizado sRNAbench y miRanalyzer para predecir miRNAs de I. ricinus utilizando las lecturas combinadas de todas las muestras. En el primer paso, el muestreo de lecturas se tomó de entre todas las muestras experimentales, y sólo se aceptaron predicciones / anotaciones de alta confianza. En una segunda ronda de anotación, se han utilizado sucesivamente las diez muestras para la predicción de miRNAs, eliminando en cada ronda los miRNAs previamente predichos para evitar que fuesen detectados de nuevo.
[0050] También se obtuvieron predicciones de nuevos miRNAs usando como base el genoma de I. scapularis.Sin embargo, en algunos casos, la secuencia pre-miRNA de I. scapularis no era idéntica a la secuencia de I. ricinus dada la divergencia evolutiva entre las dos especies desde su último antecesor común. Sin embargo, se determinó la secuencia madura correcta de I. ricinus como una de las secuencias presentes en las lecturas de I. ricinus. Por lo tanto, en los casos de variación de secuencia (desemparejamientos) entre la secuencia madura de
I. scapularis e I. ricinus, se ha "corregido" la secuencia de I. scapularis reemplazando la secuencia madura con la correcta de I. ricinus. En la práctica, esto significa que para algunos nuevos miRNAs predichos en el genoma de I. scapularis, la secuencia del pre-miRNA es un híbrido (la secuencia del miRNA maduro siempre es de I. ricinus pero la secuencia restante corresponde a I. scapularis). Las estructuras secundarias de los nuevos miRNAs fueron predichas utilizando RNAfold y se representan mediante el servidor web 'forna', del paquete ViennaRNA ( Lorenz,R., Bernhart,S.H., Höner Zu Siederdissen,C., Tafer,H., Flamm,C., Stadler,P.F. and Hofacker,I.L. (2011) ViennaRNA Package 2.0. Algorithms Mol Biol, 6, 26).
miRNA familias y taxonomía
[0051] Se asignó cada miRNA al nodo taxonómico de su primera aparición (basado en el análisis filogenético). Primero se descargó la base de datos de la taxonomía de NCBI para 21
generar el linaje completo para cada especie y luego asignamos todos los miRNAs a sus miRNAs putativamente homólogos en miRBase si: i) tienen la misma región semilla siendo definida la semilla como la secuencia comprendida entre los nucleótidos 2-8; ii) el alineamiento global tiene menos de cuatro desemparejamientos. Obsérvese que para todos los nuevos miRNAs, ambos brazos fueron apoyados por lecturas, de modo que definimos el brazo funcional (guía) como el que tiene un mayor número de miRNAs homólogos en miRBase (secuencia más conservada). También tenga en cuenta que para la mayoría de los miRNAs el número de posibles secuencias homologas es muy diferente para las secuencias guía y pasajero.
Expresión diferencial y normalización
[0052] Nuestro diseño experimental dio lugar a diferentes posibles comparaciones: i) SG (glándulas salivales) vs. MG (intestino medio anterior) en adultos, ii) SG vs. MG en ninfas, y iii) adultos vs. ninfas en SG. Usamos edgeR para determinar la expresión diferencial entre dos condiciones (Robinson,M.D., McCarthy,D.J. and Smyth,G.K. (2010) edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics, 26, 139–140). Mediante el módulo de expresión diferencial del sRNAbench, se ha generado una matriz de expresión que contiene los recuentos de lecturas sin normalizar, formato obligatorio de entrada del edgeR para obtener los miRNAs diferencialmente expresados.
EdgeR normaliza los datos utilizando el método Trimmed Mean of M-values (TMM). También se generó una matriz de expresión con valores normalizados (Lecturas por millón o RPM,del inglés “Reads Per Million” ) utilizando el método de "asignación única" (‘single assignment’) de sRNAbench. Como resultado, se asigna las lecturas que mapean a varias secuencias de referencia solamente a la más expresada. Los valores RPM se obtuvieron dividiendo el recuento de lecturas de un miRNA por el número total de lecturas asignadas a la biblioteca de miRNA. Finalmente, los miRNAs posiblemente regulados en función del tiempo de alimentación se definieron como: a) al menos una diferencia de un factor dos entre los valores de expresión a las 12h y 36h; Y b) un valor de RPM a las 24 horas situado en medio.
[0053] De los sesenta y siete miRNAs diferentes (secuencias únicas del miRNA guía) detectados, los 20 miRNAs más expresados en SG y saliva fueron seleccionados para la presentación de la estructura secundaria.
Predicción de dianas de los miRNAs de la garrapata y análisis funcional “in silico”
[0054] Para predecir los genes del huésped regulados por los miRNAs de la garrapata, se utilizaba TargetSpy (Sturm,M., Hackenberg,M., Langenberger,D. and Frishman,D. (2010) TargetSpy: a supervised machine learning approach for microRNA target prediction. BMC Bioinformatics, 11, 292), MIRANDA ( John,B., Enright,A.J., Aravin,A., Tuschl,T., Sander,C. and Marks,D.S. (2004) Human MicroRNA targets. PLoS Biol, 2, e363), y PITA (Kertesz,M., Iovino,N., Unnerstall,U., Gaul,U. and Segal,E. (2007) The role of site accessibility in microRNA target recognition. Nat Genet, 39, 1278–1284) implementados en el programa miRNAconsTarget de la colección sRNAtoolbox (Rueda,A., Barturen,G., Lebrón,R., GómezMartín,C., Alganza,Á., Oliver,J.L. and Hackenberg,M. (2015) sRNAtoolbox: an integrated collection of small RNA research tools. Nucleic Acids Res, 43, W467–73). Para los siguientes análisis sólo se emplearon interacciones entre ARNm y miRNA predichas por todos (los tres) programas. La predicción de las dianas produce un alto número de falsos positivos pero información filogenética y efectos combinatorias pueden reducir este número (Min,H. and Yoon,S. (2010) Got target? Computational methods for microRNA target prediction and their extension. Exp Mol Med, 42, 233–244). No se puede suponer que las dianas de los miRNA de la garrapata se encuentran conservadas en el huésped (debido a procesos adaptativos entre la garrapata y el huésped o “tick-host adaptations”), por lo que se aplicaron solamente los efectos combinatorios para mejorar la calidad de la predicción. Como resultado, se analizó el efecto de conjuntos compuestos por cuatro miRNAs, teniendo en cuenta solamente los transcritos regulados por al menos 3 de los 4 miRNAs. Los conjuntos de genes que cumplen con los requisitos enumerados arriba, fueron analizados funcionalmente mediante el servidor web STRING (Franceschini,A., Szklarczyk,D., Frankild,S., Kuhn,M., Simonovic,M., Roth,A., Lin,J., Minguez,P., Bork,P., Mering,C. von, et al. (2013) STRING v9.1: protein-protein interaction networks, with increased coverage and integration. Nucleic Acids Res, 41, D808–15). Para cumplir con el formato de entrada los nombres de los transcritos fueron convertidos primero a los nombres de la proteínas mediante la herramienta ‘Retrieve/ID mapping’ (UniProt consortium (Apweiler,R., Bairoch,A., Wu,C.H., Barker,W.C., Boeckmann,B., Ferro,S., Gasteiger,E., Huang,H., Lopez,R., Magrane,M., et al. (2004) UniProt: the Universal Protein knowledgebase. Nucleic Acids Res, 32, D115–9)). Las redes de interacción entre los genes regulados y las rutas KEGG estadísticamente significativas fueron extraídas de la salida de STRING.
[0055] Las interacciones identificadas y resultados de los análisis funcionales se muestran en las tablas siguientes: A) Un conjunto de cuatro miRNAs (Tabla 1): GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p),
CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p), GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p), ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p).
ID de la vía
Descripción de la vía Conteo de genes observa dos tasa de falso descubri miento proteínas coincidentes en la red (labels)
4722
Vía de señalización de neurotrofinas 12 5,94E-07 Camk2d, Camk4, Frs2, Mapk10, Ntrk2, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Sort1, Sos1, Traf6, Ywhae
4012
Vía de señalización de ErbB 9 2,18E-05 Abl2, Camk2d, Ereg, Mapk10, Nrg3, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Sos1
4068
Vía de señalización de FoxO 9 0,000707 Homer2, Mapk10, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkaa2, Setd7, Smad2, Sos1
5205
Proteoglicanos en cáncer 11 0,000909 Arhgef12, Camk2d, Fgf12, Frs2, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Smad2, Sos1, Timp3
4664
Vía de señalización de Fc epsilon RI 6 0,00258 Mapk10, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Sos1
4960
Aldosteroneregulated sodium reabsorption 5 0,00258 Atp1b4, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkca
5160
Hepatitis C 8 0,00258 Cldn1, Cldn19, Mapk10, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Sos1, Traf6
4919
Vía de señalización de hormonas Tiroideas 7 0,00619 Atp1b4, Ncoa2, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Thrb
5223
Células no pequeñas de cáncer de pulmón 5 0,00619 Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Sos1
5214
Glioma 5 0,00847 Camk2d, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Sos1
4014
Vía de señalización de Ras 9 0,00901 Abl2, Fgf12, Gng4, Kitl, Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Sos1
4150
Vía de señalización de mTOR 5 0,00901 Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkaa2, Prkca
4910
Vía de señalización de Insulina 7 0,00933 Mapk10, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkaa2, Rhoq, Sos1
4261
Señalización adrenérgica en cardiomiocitos 7 0,0108 Atp1b4, Atp2b2, Camk2d, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Slc8a1
4151
Vía de señalización de PI3K-Akt 11 0,0124 Fgf12, Gng4, Itga4, Kitl, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkaa2, Prkca, Sos1, Ywhae
4725
Sinapsis colinérgica 6 0,0144 Camk2d, Camk4, Gng4, Pik3ca, Pik3r1, Prkca
4921
Vía de señalización de Oxitocina 7 0,0149 Camk2d, Camk4, Mylk4, Pik3ca, Pik3r1, Prkaa2, Prkca
4510
Adhesión focal 8 0,0166 Itga4, Mapk10, Mylk4, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Sos1
4978
Absorción Mineral 4 0,0166 Atp1b4, Slc31a1, Slc8a1, Steap2
4022
Vía de señalización de cGMP-PKG 7 0,0187 Atp1b4, Atp2b2, Mylk4, Pde5a, Pik3ca, Pik3r1, Slc8a1
4670
Migración transendotelial de leucocitos 6 0,0187 Cldn1, Cldn19, Itga4, Pik3ca, Pik3r1, Prkca
4912
Vía de señalización de GnRH 5 0,0202 Camk2d, Map3k2, Mapk10, Prkca, Sos1
5213
Cáncer de endometrior 4 0,0202 Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Sos1
4710
Ritmo circadiano 3 0,0345 Clock, Prkaa2, Rorb
4620
Vía de señalización del receptores tipo tipo Toll (o Tolllike receptor, TLRs) 5 0,0367 Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Tirap, Traf6
4010
Vía de señalización de MAPK 8 0,0368 Fgf12, Map3k2, Mapk10, Ntrk2, Prkca, Sos1, Taok1, Traf6
5142
Enfermedad de Chagas (Tripanosomiasi s Americana) 5 0,0368 Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Smad2, Traf6
5210
Cáncer Colorrectal 4 0,0368 Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Smad2
5212
Cáncer de Páncreas 4 0,0369 Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Smad2
5200
Vías de señalización en cancer 9 0,045 Fgf12, Kitl, Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Prkca, Smad2, Sos1, Traf6
4971
Secreción de ácido gástrico 4 0,0465 Atp1b4, Camk2d, Mylk4, Prkca
5145
Toxoplasmosis 5 0,0465 Mapk10, Pdpk1, Pik3ca, Pik3r1, Traf6
4810
Regulación de citoesqueleto de 7 0,0475 Arhgef12, Fgf12, Itga4, Mylk4, Pik3ca, Pik3r1, Sos1
actina (actin cytoskeleton)
4662
Vía de señalización de receptor de células B 4 0,048 Ifitm1, Pik3ca, Pik3r1, Sos1
Tabla 1. Interacciones y resultados del análisis funcional. Conjunto A.
B) Un conjunto de cuatro miRNAs (Tabla 2): GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p), CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p), CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p), CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p)
ID de la vía
Descripción de la vía Conteo de genes observados tasa de falso descubrimiento proteínas coincidentes en la red (labels)
4720
Potenciación a largo plazo 5 0,00398 Camk4, Gnaq, Gria1, Nras, Rps6ka3
4725
Sinapsis colinérgica 5 0,0336 Camk4, Gnaq, Kcnj3, Kcnq2, Nras
Tabla 2. Interacciones y resultados del análisis funcional. Conjunto B.
10 C) Un conjunto de cuatro miRNAs (Tabla 3): TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p), AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p), TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p),
15 TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p).
ID de la vía
Descripción de la vía Conteo de genes observa dos tasa de falso descubr imiento proteínas coincidentes en la red (labels)
4720
Potenciación a largo plazo 7 0,0172 Adcy1, Braf, Cacna1c, Camk4, Grm5, Itpr2, Prkcb
4022
Vía de señalización de cGMP-PKG 10 0,0271 Adcy1, Atp2b4, Cacna1c, Creb1, Gucy1a2, Irs1, Itpr2, Pik3ca, Pik3r1, Slc8a1
4723
Señalización de endocannabinoi des retrógrados 8 0,0271 Adcy1, Cacna1c, Gabra4, Gabrb2, Grm5, Itpr2, Mapk10, Prkcb
4725
Sinapsis colinérgica 8 0,0271 Adcy1, Cacna1c, Camk4, Creb1, Itpr2, Pik3ca, Pik3r1, Prkcb
5206
MicroARNs en cancer 9 0,0271 Fzd3, Gls, Irs1, Mdm4, Prkcb, Rdx, Slc7a1, Tgfb2, Zeb2
5210
Cáncer colorrectal 6 0,0271 Braf, Dcc, Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Tgfb2
4915
Vía de señalización de estrógenos 7 0,0322 Adcy1, Creb1, Esr1, Itpr2, Pik3ca, Pik3r1, Sp1
4921
Vía de señalización de oxitocina 9 0,0322 Adcy1, Cacna1c, Camk1d, Camk4, Gucy1a2, Itpr2, Pik3ca, Pik3r1, Prkcb
5205
Proteoglicanos en cánver 11 0,0322 Braf, Cblb, Esr1, Fzd3, Itpr2, Pik3ca, Pik3r1, Prkcb, Rdx, Tgfb2, Wnt5a
4930
Diabetes mellitus Tipo II 5 0,0343 Cacna1c, Irs1, Mapk10, Pik3ca, Pik3r1
4068
Vía de señalización de FoxO 8 0,041 Braf, Homer2, Irs1, Mapk10, Pik3ca, Pik3r1, Rag1, Tgfb2
Tabla 3. Interacciones y resultados del análisis funcional. Conjunto C.
D) Un conjunto de cuatro miRNAs (Tabla 4): TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p), TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p), TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p).
ID de la vía
Descripción de la vía Conteo de genes observa dos tasa de falso descubr imiento proteínas coincidentes en la red (labels)
4540
Unión Gap 10 0,00136 Adcy1, Gnaq, Gucy1a2, Map3k2, Prkacb, Prkca, Prkcb, Prkg1, Sos1, Tjp1
4912
Vía de señalización de GnRH 10 0,00136 Adcy1, Gnaq, Map2k4, Map3k2, Mapk10, Mapk8, Prkacb, Prkca, Prkcb, Sos1
4012
Vía de señalización de ErbB signaling pathway 9 0,00435 Braf, Gsk3b, Map2k4, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Sos1
4664
Vía de señalización de Fc epsilon RI signaling pathway 8 0,00435 Map2k4, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Prkce, Sos1
4921
Vía de señalización de oxitocina 12 0,00435 Adcy1, Camk1d, Camk4, Eef2k, Gnaq, Gucy1a2, Pik3ca, Prkacb, Prkca, Prkcb, Rgs2, Rock2
4270
Contracción del músculo blando vacular 10 0,00808 Adcy1, Braf, Gnaq, Gucy1a2, Prkacb, Prkca, Prkcb, Prkce, Prkg1, Rock2
4720
Potenciación a largo plazo 7 0,00815 Adcy1, Braf, Camk4, Gnaq, Prkacb, Prkca, Prkcb
4728
Sinapsis dopaminérgica 10 0,00815 Clock, Gnal, Gnaq, Gsk3b, Kif5c, Mapk10, Mapk8, Prkacb, Prkca, Prkcb
5210
Cáncer colorrectal 7 0,00887 Braf, Dcc, Gsk3b, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Smad2
4750
Regulación mediada 9 0,0155 Adcy1, Gnaq, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Prkacb, Prkca, Prkcb, Prkce
mediante inflamación de los canales TRP
4916
Melanogénesis 8 0,0155 Adcy1, Ednrb, Fzd3, Gnaq, Gsk3b, Prkacb, Prkca, Prkcb
4970
Secreción salivar 7 0,0155 Adcy1, Gnaq, Gucy1a2, Prkacb, Prkca, Prkcb, Prkg1
5206
MicroARNs en cancer 10 0,0155 Bcl2l11, Dnmt3a, Fzd3, Igf2bp1, Mdm4, Prkca, Prkcb, Prkce, Pten, Sos1
5223
Células no pequeñas de pulmón 6 0,0155 Braf, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Rxra, Sos1
4360
Guía axonal 9 0,0174 Dcc, Gsk3b, Plxna2, Plxna4, Rock2, Sema3a, Sema5a, Unc5c, Unc5d
4510
Adhesión focal 12 0,0174 Braf, Cav2, Gsk3b, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Pten, Rock2, Sos1, Xiap
4723
Señalización de endocannabinoi des retrógrados 8 0,0174 Adcy1, Gabrb2, Gnaq, Mapk10, Mapk8, Prkacb, Prkca, Prkcb
4730
Depresión a largo plazo 6 0,0174 Braf, Gnaq, Gucy1a2, Prkca, Prkcb, Prkg1
5142
Enfermedad de Chagas (Tripanosomias is Americana) 8 0,0174 Adcy1, Gnal, Gnaq, Map2k4, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Smad2
5214
Glioma 6 0,0174 Braf, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Pten, Sos1
4150
Vía de señalización de mTOR 6 0,0198 Braf, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Pten, Rictor
4068
Vía de señalización de FoxO 9 0,0207 Bcl2l11, Braf, Fbxo32, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Pten, Smad2, Sos1
4914
Maduración de oocitos mediada por progesterona 7 0,0211 Adcy1, Braf, Mapk10, Mapk8, Pgr, Pik3ca, Prkacb
4010
Vía de señalización de MAPK 13 0,0224 Braf, Elk4, Map2k4, Map3k2, Mapk10, Mapk8, Ntrk2, Prkacb, Prkca, Prkcb, Rasa2, Sos1, Taok1
4022
Vía de señalización de cGMP-PKG 10 0,0227 Adcy1, Ednrb, Gnaq, Gucy1a2, Pik3ca, Prkce, Prkg1, Rgs2, Rock2, Slc8a1
4724
Sinapsis Glutamatérgica 8 0,0227 Adcy1, Gnaq, Prkacb, Prkca, Prkcb, Slc1a2, Slc38a1, Slc38a2
4727
Sinápsis GABAérgica 7 0,0227 Adcy1, Gabrb2, Prkacb, Prkca, Prkcb, Slc38a1, Slc38a2
4310
Vía de señalización de Wnt 9 0,0231 Fzd3, Gsk3b, Mapk10, Mapk8, Prkacb, Prkca, Prkcb, Rock2, Tbl1xr1
5200
Vías de señalización en cáncer 15 0,0231 Braf, Dcc, Fzd3, Gsk3b, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Prkca, Prkcb, Pten, Runx1, Rxra, Smad2, Sos1, Xiap
4722
Vía de señalización de neurotrofinas 8 0,0254 Braf, Camk4, Gsk3b, Mapk10, Mapk8, Ntrk2, Pik3ca, Sos1
4713
Arrastre Circadiano 7 0,0262 Adcy1, Gnaq, Gucy1a2, Prkacb, Prkca, Prkcb, Prkg1
5166
Infección por HTLV-I 13 0,0279 Adcy1, Elk4, Fzd3, Gsk3b, Il2ra, Map2k4, Mapk8, Myb, Pik3ca, Prkacb, Smad2, Trp53inp1, Xiap
4020
Vía de señalización del Calcio 10 0,0294 Adcy1, Camk4, Ednrb, Gnal, Gnaq, Pde1c, Prkacb, Prkca, Prkcb, Slc8a1
5213
Cáncer de endometrio 5 0,0307 Braf, Gsk3b, Pik3ca, Pten, Sos1
4917
Vía de señalización de prolactina 6 0,0318 Gsk3b, Mapk10, Mapk8, Pik3ca, Prlr, Sos1
4961
Reabsorción de calico regulada por factores endocrinos y otros factores 5 0,0402 Gnaq, Prkacb, Prkca, Prkcb, Slc8a1
Tabla 4. Interacciones y resultados del análisis funcional. Conjunto D.
E) Un conjunto de cuatro miRNAs (Tabla 5): CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p), TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p), TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p).
ID de la vía
Descripción de la vía Conteo de genes observa dos tasa de falso descubri miento proteínas coincidentes en la red (labels)
4360
Guía axonal 11 0,0125 Cxcl12, Pak3, Plxna4, Rgs3, Robo2, Sema3a, Sema3d, Sema5a, Srgap3, Unc5c, Unc5d
4070
Sistema de señalización de fosfatidilinositol 8 0,0129 Impad1, Inpp4b, Pik3ca, Pikfyve, Prkca, Prkcb, Pten, Synj1
4720
Potenciación a largo plazo 7 0,0129 Adcy1, Braf, Camk4, Gnaq, Grm5, Prkca, Prkcb
4730
Depresión a largo plazo 7 0,0129 Braf, Gna13, Gnaq, Gucy1a2, Prkca, Prkcb, Prkg1
4540
Unión Gap 8 0,0148 Adcy1, Gnaq, Grm5, Gucy1a2, Map3k2, Prkca, Prkcb, Prkg1
4725
Sinapsis colinérgica 9 0,0148 Adcy1, Bcl2, Camk4, Gnaq, Kcnj2, Kcnj3, Pik3ca, Prkca, Prkcb
4713
Arrastre Circadiano 8 0,0194 Adcy1, Gnaq, Gria4, Gucy1a2, Kcnj3, Prkca, Prkcb, Prkg1
4723
Sñalización de endocannabini odes retrógrados 8 0,0313 Adcy1, Gabrb2, Gnaq, Gria4, Grm5, Kcnj3, Prkca, Prkcb
562
Metabolismo del Inositol fosfato 6 0,0366 Impad1, Inpp4b, Pik3ca, Pikfyve, Pten, Synj1
4012
Vía de señalización de ErbB 7 0,0366 Abl2, Braf, Crk, Pak3, Pik3ca, Prkca, Prkcb
4724
Sinapsis glutamatérgica 8 0,0442 Adcy1, Gnaq, Gria4, Grm5, Kcnj3, Prkca, Prkcb, Slc38a1
4064
Vía de señalización de NF-kappa B 7 0,0456 Bcl2, Cxcl12, Ikbkg, Map3k7, Prkcb, Tab3, Xiap
Tabla 5. Interacciones y resultados del análisis funcional. Conjunto E.
F) Un conjunto de cuatro miRNAs (Tabla 6): TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p), TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p), AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p), TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p).
ID de la vía
Descripción de la vía Conteo de genes observados tasa de falso descubrimiento proteínas coincidentes en la red (labels)
4710
Ritmo circadiano 5 0,0116 Clock, Creb1, Prkaa2, Rora, Rorb
Tabla 6. Interacciones y resultados del análisis funcional. Conjunto F. 33

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Una composición que comprende al menos un oligonucleótido derivado de miRNAs obtenidos de la saliva de la garrapata Ixodes ricinus, siendo seleccionado dicho oligonucleótido del grupo que comprende: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p, SEQ ID NO. 3), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p, SEQ ID NO. 14), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15),
    -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19),
    -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p, SEQ ID NO. 21).
  2. 2.
    La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende al menos dos, o al menos tres, o al menos cuatro oligonucleótidos derivados de miRNAs de saliva de la garrapata Ixodes ricinus.
  3. 3.
    La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende al menos un oligonucleótido de miRNA de saliva de la garrapata Ixodes ricinus seleccionado del grupo que comprende: -un oligonucleótido con secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2), -un oligonucleótido con secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p, SEQ ID NO. 3), -un oligonucleótido con secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4), -un oligonucleótido con secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -un oligonucleótido con secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -un oligonucleótido con secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7), -un oligonucleótido con secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8),
    -un oligonucleótido con secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -un oligonucleótido con secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -un oligonucleótido con secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), -un oligonucleótido con secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12), -un oligonucleótido con secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13), -un oligonucleótido con secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p, SEQ ID NO. 14), -un oligonucleótido con secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15), -un oligonucleótido con secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16), -un oligonucleótido con secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17), -un oligonucleótido con secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19),
    -un oligonucleótido con secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), -un oligonucleótido con secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p, SEQ ID NO. 21).
  4. 4.
    La composición de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende al menos dos, o al menos tres, o al menos cuatro oligonucleótidos de miRNA de saliva de la garrapata Ixodes ricinus.
  5. 5.
    La composición de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que comprende al menos dos o al
    menos tres oligonucleótidos seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1),
    -
    un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p, SEQ ID NO. 3), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p, SEQ ID NO. 14), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17),
    -
    un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5); o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19),
    -
    un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p, SEQ ID NO. 21);
    Y opcionalmente al menos una secuencia adicional seleccionada del grupo definido en la reivindicación 1.
  6. 6. La composición de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende al menos dos o al
    menos tres oligonucleótidos seleccionados del grupo compuesto por: -un oligonucleótido con secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2), -un oligonucleótido con secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p, SEQ ID NO. 3), -un oligonucleótido con secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -un oligonucleótido con secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -un oligonucleótido con secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7),
    -
    un oligonucleótido con secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -un oligonucleótido con secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -un oligonucleótido con secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), -un oligonucleótido con secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13), -un oligonucleótido con secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam5p, SEQ ID NO. 14), -un oligonucleótido con secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15), -un oligonucleótido con secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17), -un oligonucleótido con secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5);
    o seleccionados del grupo compuesto por -un oligonucleótido con secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19),
    -
    un oligonucleótido con secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), 39
    -
    un oligonucleótido con secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p,
    SEQ ID NO. 21); Y opcionalmente al menos una secuencia adicional seleccionada del grupo definido en la reivindicación 1.
  7. 7. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:
    Una mezcla de -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p, SEQ ID NO. 3), y -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7), y -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), y -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13),
    -
    un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam-5p, SEQ ID NO. 14), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15), y -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la
    secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), y -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19),
    -
    un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), y -un oligonucleótido con una secuencia que tiene al menos 90% de similitud con la secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p, SEQ ID NO. 21).
  8. 8. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:
    Una mezcla de -un oligonucleótido con secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con secuencia TGAACACAGCTGGTGGTATATCAG (iri-miR-317-3p, SEQ ID NO. 2), -un oligonucleótido con secuencia TGACTAGATCCACACTCATCCA (iri-miR-279a-3p, SEQ ID NO. 3), y -un oligonucleótido con secuencia TGAGATCATTGTGAAAGCTGATT (iri-miR-bantam-3p, SEQ ID NO. 4);
    o una mezcla de 41
    -un oligonucleótido con secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5), -un oligonucleótido con secuencia CCAACCCACTAACTGACGGAAC (iri-miR-X1h-3p, SEQ ID NO. 6), -un oligonucleótido con secuencia CCCCCTTCGTCCACGTTCTAG (iri-miR-X17-5p, SEQ ID NO. 7), y -un oligonucleótido con secuencia CGGCTCTGGCGCTGGCCCCAGC (iri-miR-X8-3p, SEQ ID NO. 8);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con secuencia TAATCTCATTTGGTATCTCTGGG (iri-miR-5307-5p, SEQ ID NO. 9), -un oligonucleótido con secuencia AAAAATTGTGGTAGTGTCAAGC (iri-miR-96-3p, SEQ ID NO. 10), -un oligonucleótido con secuencia TAGGAACTTCATACCATGCTCG (iri-miR-276-3p, SEQ ID NO. 11), y -un oligonucleótido con secuencia TCTCACTACCTTGTCTTTGTTG (iri-miR-71-3p, SEQ ID NO. 12);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con secuencia GATGACTGTGCCTCTAGTCCATG (iri-miR-279a-5p, SEQ ID NO. 13), -un oligonucleótido con secuencia CTGGTTTTCACAATGATCGTCCAGA (iri-miR-bantam5p, SEQ ID NO. 14), -un oligonucleótido con secuencia GCTGTCAGTTTGTGGGCTGGTGC (iri-miR-X26-5p, SEQ ID NO. 15), y -un oligonucleótido con secuencia ACTCGACGTAGCGCCCGCACTC (iri-miR-X12-3p, SEQ ID NO. 16);
    o una mezcla de -un oligonucleótido con secuencia CATCTTACCAGACAGCATTAGA (iri-miR-8-5p, SEQ ID NO. 17), -un oligonucleótido con secuencia TAATACTGTCAGGTAAAGATGTC (iri-miR-8-3p, SEQ ID NO. 1), -un oligonucleótido con secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), y -un oligonucleótido con secuencia GCTGTTAGTTTGTAGGGTGGTG (iri-miR-X1h-5p, SEQ ID NO. 5);
    o una mezcla de 42
    -un oligonucleótido con secuencia TCTTTGGTTATCTAGCTGTATGA (iri-miR-9a-5p, SEQ ID NO. 18), -un oligonucleótido con secuencia TGGAATGTAAAGAAGTATGGAG (iri-miR-1-3p, SEQ ID NO. 19),
    -un oligonucleótido con secuencia AGATATGTTTGATATTCTTGGTT (iri-miR-190-5p, SEQ ID NO. 20), y -un oligonucleótido con secuencia TTGTGACCGTTACAATGGGCAT (iri-miR-2001-5p, SEQ ID NO. 21).
  9. 9.
    La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende los oligonucleótidos en forma de liposomas.
  10. 10.
    La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para el uso como medicamento.
  11. 11.
    La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para el uso en un método de tratamiento de un trastorno seleccionado entre cánceres, enfermedades inflamatorias, alergias, dermatitis atópica, lupus, asma, dolor crónico, dolor local, trastornos relacionados con el ritmo circadiano, enfermedades del metabolismo, diabetes, glaucoma, hepatitis, enfermedades cardiovasculares, enfermedad de Parkinson, enfermedades neurológicas y neurodegenerativas y epilepsia.
  12. 12.
    La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para el uso en un método de regulación de la homeostasis de un organismo de mamífero.
  13. 13.
    Una preparación que comprende al menos una composición de la presente invención y al menos otra sustancia farmacéuticamente activa, preferiblementeo destinada a administración simultánea o secuencial.
  14. 14.
    Un oligonucleótido que tiene al menos 90%, preferiblemente al menos 95%, más preferiblemente 100%, de similitud con una secuencia de miRNA de la garrapata, preferiblemente con una secuencia de miRNA de la garrapata Ixodes ricinus, para su uso como medicamento en el tratamiento de trastornos de salud de mamíferos; tratamiento de un trastorno de mamífero seleccionado entre cánceres, enfermedades inflamatorias, alergias, dermatitis atópica, lupus, asma, dolor crónico, dolor local, trastornos relacionados con el ritmo circadiano, enfermedades metabólicas, diabetes, glaucoma, hepatitis, enfermedades 43
    cardiovasculares, enfermedad de Parkinson, enfermedades neurológicas y neurodegenerativas y epilepsia.
    <110>
    <120>
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    <211>
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    <213>
    <400>
    Universidad de Granada Biologicke centrum AV CR, v. v. i. Composition comprising miRNAs for use as medicament IPR-657 21
    PatentIn version 3.5 1 23 DNA Ixodes ricinus
    1
    taatactgtc aggtaaagat gtc 23
    <210>
    2
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    24
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    DNA
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    Ixodes ricinus
    <400>
    2
    tgaacacagc tggtggtata tcag 24
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    DNA
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    Ixodes ricinus
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    3
    tgactagatc cacactcatc ca 22
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    Ixodes ricinus
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    4
    tgagatcatt gtgaaagctg att 23
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    Ixodes ricinus
    <400> 5 gctgttagtt tgtagggtgg tg
    <210> 6
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 6 ccaacccact aactgacgga ac
    <210> 7
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 7 cccccttcgt ccacgttcta g
    <210> 8
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    <212> DNA
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    <400> 8 cggctctggc gctggcccca gc
    <210> 9
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    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
    <400> 9 taatctcatt tggtatctct ggg
    <210> 10
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 10 aaaaattgtg gtagtgtcaa gc
    <210> 11
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    22
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    <400> 11 taggaacttc ataccatgct cg
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 12 tctcactacc ttgtctttgt tg
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 13 gatgactgtg cctctagtcc atg
    <210> 14
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 14 ctggttttca caatgatcgt ccaga
    <210> 15
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    <213> Ixodes ricinus
    <400> 15 gctgtcagtt tgtgggctgg tgc
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    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
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    <210> 17
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    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
    22
    22
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    25
    23
    22
    <400> 17 catcttacca gacagcatta ga
    <210> 18
    <211> 23
    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
    <400> 18 tctttggtta tctagctgta tga
    <210> 19
    <211> 22
    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
    <400> 19 tggaatgtaa agaagtatgg ag
    <210> 20
    <211> 23
    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
    <400> 20 agatatgttt gatattcttg gtt
    <210> 21
    <211> 22
    <212> DNA
    <213> Ixodes ricinus
    <400> 21 ttgtgaccgt tacaatgggc at
    22
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