ES2687220A1 - Método de obtención de datos útiles para el cribado y diagnóstico de la osteoporosis - Google Patents

Abstract

Método de obtención de datos útiles para el cribado y diagnóstico de la osteoporosis. La presente invención se refiere al uso de la composición para el tratamiento de la osteoporosis, el uso de unos marcadores y un método de obtención de datos útiles para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis, kit o dispositivo y usos.

Description

MÉTODO DE OBTENCiÓN DE DATOS ÚTILES PARA EL CRIBADO V DIAGNÓSTICO DE LA OSTEOPOROSIS

CAMPO DE LA INVENCiÓN

S 10

La presente invención se encuentra dentro del campo de la biomedicina y la biotecnologia, y se refiere a un método para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis para el tratamiento de aquellos individuos seleccionados a través de dicho método. Dicho cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento se realiza cuantificando una serie de marcadores: marcadores péptido similar al glucagón 1 (GLP-1) , péptido similar al glucag6n 2 (GLP-2), polipéptido inhibidor gáslrico (GIP), péplido VV, amilina, dipeptidil peptidasa 4 (DPP-4), 25-0H vitamina D, calcio, fósforo, magnesio, hormona paratiroidea (PTH) , osteocalcina, propéptido aminoterminal del procolageno, y telopéptido carboxiterminal del colageno Beta-ctx (CTX-Beta cross-Iaps).

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ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN

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El gran avance producido en los últimos años en torno a la acción que determinados péptidos intestinales desempeñan en relación al metabolismo de la glucosa y su aplicación en el tratamiento de la diabetes mellitus, ha abierto nuevas vías de investigación sobre la acción de estas sustancias en otras areas, habiéndose mostrado la existencia de una relación de estas hormonas intestinales en la salud ósea, especialmente en la osteoporosis.

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La osteoporosis y su principal complicación, las fracturas osteoporóticas, constituyen un grave problema de salud pública, siendo responsables de un exceso de mortalidad , morbilidad. dolor crónico, mayor grado de dependencia, ingreso en instituciones y costes económicos afectando seriamente la calidad de vida de personas que podrian disfrutar de los últimos años de su vida (Baim et al 2008).

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La osteoporosis se define como "Trastorno del esqueleto caracterizado por alteración de la resistencia ósea que predispone a un incremento del riesgo de fractura. La resistencia del hueso es el reflejo de la integración de dos características principales: densidad y calidad óseaB • El deterioro de tejido óseo que se produce en la osteoporosis es el resultado de una disminución de masa ósea y la alteración de la microarquitectura del hueso, por desequilibrio en los procesos de formación y reabsorción ósea (Baim et al 2008).

El remodelado óseo es un complejo sistema de homeostasis de la masa ósea, con un eficiente sistema de autocontrol, regulado por numerosos factores entre los que se incluyen factores genéticos, mecánicos, hormonales, nutricionales y factores de crecimiento. En circunstancias normales, los procesos de reabsorción y de formación, están estrechamente acoplados y el resultado es que no se produce un cambio neto en la masa ósea (Baim et al

2008).

El remodelado óseo se produce con un ritmo circadiano, habiéndose demostrado una elevación de los marcadores de remodelado óseo durante la noche y su disminución durante el día (Yavropoulou & Yovos 2013), predominando en el periodo nocturno los fenómenos de reabsorción ósea (Henriksen et al 2007). Los marcadores de formación ósea también siguen un ritmo circadiano, pero la magnitud de la variación es más corta que la de reabsorción. La formación ósea disminuye después de 4 días de ayuno, concretamente, la osteocalcina (parámetro de formación ósea) no se modifica tras las primeras 24 horas de ayuno (Walsh & Henriksen, 2010). Se ha intentado explicar este hecho por el paralelismo en la secreción circadiana de hormonas como el cortisol, paratohormona (PTH) o melatonina, pero hasta ahora, no se ha podido confirmar este supuesto (Yavrapaulou & Yovos 2013).

El aspecto clave en esta secuencia de ritmo del remodelado óseo, ha sido comprobar cómo la reabsorción ósea se afecta significativamente durante los periodos de ayuno (Walsh & Henriksen, 2010), habiéndose propuesto que la principal causa del ritmo circadiano del remodelado óseo es la variación en la ¡ngesta de alimentos. El ritmo de remodelado se ve afectado dependiendo de la ¡ngesta de alimentos, aumentando por la noche con el ayuno nocturno (Deal 2009). Como se ha comentado anteriormente, el proceso más afectado es la reabsorción, mientras que los parámetros de formación ósea no se ven afectados por la ingesta de nutrientes, siendo explicado este hecho por la existencia de un desacoplamiento de los dos procesos en el momento postprandial (Yavropoulou & Yavos 2013).

Los mecanismos mediante los cuales la alimentación regula el recambio óseo son complejos, estando implicados varios mediadores. La ingesta de glucosa, proteínas, grasas e ingesta mixta se asocia con una reducción significativa de los marcadores de reabsorción del hueso, detectable veinte minutos después de la alimentación (Henriksen et al 2003). La formación de hueso también se ve influida, pero parece ser que su respuesta a nutrientes es menor que la reabsorción (Clowes et al 2002). El análisis bioquímico de la reabsorción ósea demuestra que la ingesta de alimentos es la principal causa de reducción de la reabsorción ósea durante el día, que es seguido por un aumento nocturno de la misma (Bjarnason et al

2002).

El hecho determinante de la dramática reducción de la reabsorción ósea que se produce tras la ingesta de una comida junto con otras pruebas significativas tales como que la respuesta del remodelado óseo a la administración oral de glucosa es mucho mayor que cuando se administra esta misma glucosa vía intravenosa (Walsh & Henriksen, 2010), o el hecho de que durante el reposo digestivo que se produce con la nutrición parenteral existe una reducción de la masa ósea, reafirma la idea de una relación funcional entre intestino y metabolismo óseo, que posiblemente estaría mediado por hormonas, que responderían ante la absorción de nutrientes (Clowes et al 2005, Maibellau et al 2013).

Se ha mostrado que los más importantes efectores de la respuesta aguda que se produce en el metabolismo óseo en relación con la ingesta de alimentos son los péptidos intestinales y pancreáticos (Walsh & Henriksen, 2010).

Los péptidos intestinales, son un conjunto de peptidos (algunos con carácter hormonal) que se producen en el aparato digestivo e intervienen en la regulación de las diferentes etapas de la digestión. A diferencia de otras hormonas, estos péptidos no suelen estar producidos por glándulas concretas, sino que son secretadas al líquido extracelular y a la sangre por células endocrinas aisladas distribuidas a lo largo del tubo digestivo, constituyendo los que algunos autores denominan sistema endocrino intrlnseco del sistema gastrointestinal. En otras ocasiones, son producidos por neuronas de los plexos mesentérico y submucoso, o por los islotes pancreáticos. Los péptidos intestinales son liberados en respuesta a distintos estímulos presentes en la luz intestinal, cÓmo el pH, distensión mecánica, tonicidad y presencia de nutrientes (Martinez de Victoria 2010).

La investigación de estos péptidos ha sido de interés fundamental en los últimos años sobre todo en relación con la diabetes mellitus, desarrollándose el concepto de ¡ncretinas, que se definen como péptidos intestinales liberados después de la ingestión de alimentos y que tienen una acción moduladora en la homeostasis de la glucosa, dando lugar al diseño de nuevos fármacos para el tratamiento de la diabetes mellitus, pero también ha puesto de manifiesto la implicación de estas sustancias en otras áreas del metabolismo intermediario, destacando sus efectos a nivel del tejido óseo. Así, se ha mostrado la existencia de una relación de estas hormonas con la formación y la reabsorción ósea, con datos preliminares sugerentes de efectos positivos de varios de estos péptidos intestinales sobre la regulación de la reabsorción ósea que se produce como respuesta a la alimentación. Esta regulación sería muy compleja y en ella participarían distintos mediadores.

Los péptidos intestinales más importantes que se han relacionado con el remodelado óseo son: péptido similar al glucagon 1 y 2 (GLP -1, GLP -2), péptido insulinotrópico dependiente

de la glucosa (GIP) , también llamado péptido gastro·inhibidor, y en menor medida el Péptido

VV, y hormonas producidas por las células beta pancreáticas: como la amilina, y el

polipéptido pancreático (PP) (Walsh & Henriksen 2010). Fundamental sería además del

concurso de estos péptidos, sustancias tales como los análogos del receptor del péptido

5

similar al glucagon·1(GLP-1 RA) , como por ejemplo los derivados de la exendina 4

(exenatide) y de los inhibidores de la enzima dipeptidil peptidasa 4 (DPPAi), enzima

encargada de la metabolización de algunos de estos péptidos como el GLP-1 y 2

(Dicembrini et al 2012). Los péptidos que se han asociado al efecto incretina son

fundamentalmente los GLP-1 y el GIP, los cuales tienen un efecto hipoglucemiante,

10

controlando e incluso disminuyendo el peso corporal, lo que ha motivado el desarrollo de

fármacos principalmente análogos del GLp·1 e inhibidores de la DPP-4, que actualmente se

usan en el tratamiento de la diabetes mellitus.

Distintos estudios han evidenciado la relación entre los péptidos anteriormente mencionados

y el remodelado óseo y la osteoporosis. En 2003, Henriksen y colaboradores en un doble

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estudio realizado en voluntarios sanos, ponen de manifiesto, como la ingesta de distintos

tipos de nutrientes (proteínas, grasa, glucosa y fructosa) reducen la reabsorción ósea

provocando una secreción en paralelo del GLP-1 y GLP-2. En el mismo estudio la inyección

intravenosa de GLP-2 a distintas dosis en 60 mujeres postmenopáusicas provoca una

reducción de la reabsorción ósea, no mostrando acción sobre los parámetros de formación

20

ósea (Henriksen et al 2003). La disminución de la reabsorción ósea por GLP-2 requiere un

tracto gastrointestinal intacto, donde los receptores del GLP-2 que han sido localizados en el

plexo mesentérico, estén intactos.

Posteriormente, otro estudio del grupo de Henriksen administrando GLP-2 durante 14 días a

un grupo de mujeres sanas postmenopausicas, muestra , por un lado la seguridad del

2S

tratamiento, y por otro la disminución significativa de la reabsorción ósea , sin que se afecte

al parecer la formación ósea, como evidencian los niveles de osteocalcina estables durante

el tratamiento (Henriksen et al 2007).

En un ensayo en 160 mujeres postmenopáusicas que recibieron tratamiento con GLP-2, en

el día 120 tras la inyección, mostró un incremento en la densidad ósea en cadera y una

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reducción del incremento nocturno de la concentración C·telopeptido, marcador de

reabsorción ósea, mientras que no se modificaba la osteocalcina, un marcador de formación

ósea (Deal 2009).

En contraste con la evidencia del GLp·2 en relación sobre la formación y la resorción ósea

que proviene principalmente de estudios en humanos, el papel fisiológico del GLP-1 sobre el

5

hueso ha sido sólo investigado principalmente en roedores En un estudio realizado en ratas

Wistar sometidas a dietas hiperlipídicas, la administración de GLP-1 , Y de su análogo,

estimulante del receptor, la exendina , mejoran por un lado el metabolismo lipidico y de la

glucosa y por otro aumenta la expresión de genes que codifican la osteocalcina y

5

osteoprotegerina, revirtiendo la pérdida de masa ósea (Nuche-Berenguer et al 2011). En

esta misma linea, un reciente estudio muestra como la exendina administrado a ratas

ovariectomizadas favorece la formación y disminuye la reabsorción ósea (Ma et al 2013).

Respecto al GIP, se ha mostrado que existen receptores para GIP en los osteoblastos, y

que la estimulación de estos receptores favorece la síntesis de colágeno tipo 1 e incrementa

10

la actividad de la fosfatasa alcalina (8011ag et al 2001), y como se demuestra en este estudio

realizado en ratas, la administración de GIP provoca un aumento de la masa ósea medida

mediante densitometria, curiosamente sin aumentar el peso de los roedores, argumentando

que el GIP sería como una hormona centinela que además de esta acción directa sobre el

hueso, podría actuar maximizando el efecto de los nutrientes y la acción de otras hormonas

15

(amilina, insulina) sobre el tejido óseo (801la9 et al 2001). Posteriormente también se ha

demostrado en un estudio realizado en cultivos celulares, que el GIP actúa asimismo sobre

los osteoclastos inhibiendo la reabsorción ósea, corroborando de esta forma el hecho de

que el GIP seria mediador en el efecto que la ingesta alimenticia tiene inhibiendo la

reabsorción ósea (Zhong et al 2007).

20

Por otra parte se ha podido comprobar cómo el calcio procedente de la alimentación es

depositado en el tejido óseo mediante el concurso del GIP (Tsukiyama et al 2006). Estos

autores muestran además como el GIP tiene una acción sobre la homeostasis del calcio, y

una acción antiapoptótica en los osteoblastos, no habiéndose comprobado ninguna acción

sobre los osteoclastos. En un estudio posterior realizado por el grupo de Maibel1au, en

2S

ratones con deficiencia del receptor para GIP (GIPR-Knockout), se muestra como la

ausencia de este receptor favorece un aumento de la masa ósea mediante un aumento de la

formación, pero con un tejido óseo de baja calidad (Gaudin-Audrain et al, 2013).

Hay que destacar también un estudio en el que se muestra como en pacientes con

alteración de la masa ósea existe una disminución de distintos péptidos intestinales. Este

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estudio se realiza en pacientes diagnosticadas de anorexia nerviosa, mostrándose una

disminución de los valores de GIP y de amilina en relación con la disminución de la masa

ósea (Wojcik et al 2010), aunque este estudio está limitado por el pequeño tamaño de

muestra.

Por otra parte, es sabido que en la diabetes mellitus existe un aumento del riesgo de fractura osteoporótica (Dicembrini et al 2011), y es reconocido que el tratamiento con análogos del GLP-1 conlleva una disminución de peso y la posible acción positiva de estos en la homeostasis ósea pOdría ser eclipsada por la disminución del peso, que como se sabe puede conllevar una disminución de masa ósea (Labouesse 2014). Sin embargo se ha pOdido comprobar en un ensayo con humanos, cómo el tratamiento con exenatide (agonista del receptor del GLP-1), no modifica el riesgo de fractura (Bunck et al 2011).

La osteoporosis es una enfermedad crónica, y actualmente no se puede curar, por tanto se supone que su tratamiento debe ser indefinido. Los fármacos autorizados actualmente son: Estrógenos, Estimulantes de receptores estrogénicos, Bifosfonatos, Denosumab, Teriparatida, Ranelato de estroncio (solo autorizado en osteoporosis muy graves).

Debido a la escasez de medios terapéuticos, las contraindicaciones y efectos adversos, es necesario plantear tratamientos alternativos para ir modificando en función del paciente y de sus caracteristicas. lo que se llama Uterapia secuencial-, tal como propone la Guía de la Sociedad Española de Investigación en Osteoporosis y metabolismo Mineral (SEIOMM 2014). Se hace por tanto necesario investigar nuevas lineas de tratamiento que puedan constituirse en alternativa segura y eficaz para el tratamiento de la osteoporosis.

BREVE DESCRIPCiÓN DE LA INVENCiÓN

Un primer aspecto de la invención se refiere al uso de una composición, de ahora en adelante composición de la invención, que comprende el péptido similar al glucagón 1 (GLP1), análogos de GLP-1 , agonistas de los receptores de GLP-1 , péptido similar al glucagón 2

(GLP-2), análogos de GLP-2, agonistas de los receptores de GLP-2, inhibidores de DPP-4, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéutica mente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de la osteoporosis.

Alternativamente se refiere al uso de una composición, que consiste en el péptido similar al glucagón 1 (GLP-1), análogos de GLP-1 , agonistas de los receptores de GLP-1, péptido similar al glucagón 2 (GLP-2), análogos de GLP-2, agonislas de los receplores de GLP-2, inhibidores de OPP-4, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmaceuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de la osteoporosis.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, además comprende GIP, péptido YY, amilina o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéutica mente aceptables.

En otra realización preferida, se refiere a que los análogos y agonistas de los receptores de GLP-1 se seleccionan de la lista que consiste en repaglinida, nateglinida, exenatida, pramlintida, liraglutida, lixisenatida, albiglutida, dulaglutida o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida, se refiere a que el análogo de GLP-2 consiste en teduglutida.

En otra realización preferida, se refiere a que los inhibidores de OPP-4 se seleccionan de la lista que consiste en sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, alogliptina, linagliptina, gemigliptina, sitagliptina y simvastatina, o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición además comprende otro principio activo, preferiblemente un agente que afecta a la estructura ósea y la mineralización que se selecciona de la lista que consiste en bifosfonatos, proteínas morfogénicas óseas, ranelato de estroncio, denosumab, estrógenos, estimulantes de receptores estrogénicos, raloxifeno, teriparatida, hormona paratiroidea, calcitonina, calcio, colecalciferol, calcifediol o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida, la composición además comprende uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

Un segundo aspecto de la invención se refiere al uso de los marcadores péptido similar al glucagón 1 (GLP-1), telopéptido carboxiterminal del colágeno Beta-ctx (CTX-Beta crosslaps), o su combinación para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, además comprende el péptido similar al glucagón 2 (GLP-2), dipeptidil peptidasa 4 (OPP-4), o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida además comprende el polipéptido inhibidor gástrico (GI P), péptido VV, amilina, o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida además comprende la 25-0H vitamina O, calcio, fósforo, magnesio, hormona paratiroidea (PTH), o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida además comprende el osteocalcina, propeptido aminoterminal del procolágeno, telopeptido carboxiterminal del colágeno Beta-ctx (CTX-Beta cross-Iaps), o cualquiera de sus combinaciones.

Un tercer aspecto de la invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para 5 el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis, de ahora en adelante primer método de la invención, que comprende:

a) cuantificar los productos de expresión GLP-1 , GLP-2, OPP-4 Y CTX-Beta cross-Iaps, tal como se define en la presente invención, en una muestra biológica aislada de un individuo al que se le ha administrado previamente un preparado nutricional, y el

10 Zscorelumbar, y

b) calcular la probabilidad de un individuo de padecer osteoporosis en base a la fórmula

(1):

Probabilidad = ,+ e (-O.06B 'GI.PI.o.m ' crx'.oI.411 ' ZSCORELUMBAR.9.0L6)

Fórmula (1)

15 donde

GLP1 : es el valor del péptido similar al glucagón 1 (GLP-1) ;

CTX: es el valor del parámetro de remodelado óseo CTX Beta-cross laps; y

Zscorelumbar: es el valor del Z score lumbar obtenido mediante Densitometria ósea (DEXA).

En otra realización preferida , la muestra biológica aislada en el paso a) es sangre.

Un cuarto aspecto de la invención se refiere a un método para cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis, que comprende los pasos (a) y (b) según se describe en la presente invención, de ahora en adelante segundo método de la invención, y

25 además comprende:

c) asignar al individuo al grupo de individuos que presentan osteoporosis cuando el resultado de la Formula I es mayor a 0,5.

En una realización preferida, se refiere al segundo método de la invención para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

En aIra realización preferida, la muestra biológica aislada en el paso a) es sangre.

S

Un quinto aspecto de la invención se refiere al uso de la composición de la invención para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de los individuos seleccionados por los métodos de la invención.

Un sexto aspecto de la invención se refiere a un kit o dispositivo, de ahora en adelante kit o dispositivo de la invención, que comprende un:

componente A, formado por un colector de sangre, y/o

10

componente B, formado por uno o más tubos de muestra de sangre con 1 O ~L de un inhibidor de la OPP·4 por cada mL de sangre, una placa de 96 pocillos, conjugated magnetic beads, anticuerpos especificas, estándares, buffers, disolventes, streptavidin·PE, placa filtro, placa inferior plana, cinta de sellado, y/o

15

componente e, formado uno o más tubos de muestra de sangre, EDTA tri potásico, heparina sódica, ylo

componente D, formado por dispositivo de medida del espectro de luz, y/o

componente E, formado por un densitómetro, y/o

o cualquiera de sus combinaciones.

20

Un séptimo aspecto de la invención se refiere al uso del kit o dispositivo de la invención, para la obtención de datos útiles para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

Un octavo aspecto de la invención se refiere a un programa de ordenador que comprende instrucciones de programa para hacer que un ordenador lleve a la práctica el procedimiento de acuerdo con cualquiera de los métodos de la invención.

2S

Un noveno aspecto de la invención se refiere a un medio de almacenamiento legible por un ordenador que comprende instrucciones de programa capaces de hacer que un ordenador lleve a cabo los pasos de cualquiera de los métodos de la invención.

Un décimo aspecto de la invención se refiere a una señal transmisible que comprende instrucciones de programa capaces de hacer que un ordenador lleve a cabo los pasos de cualquiera de los métodos de la invención.

S

DESCRIPCiÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Curva ROC con los valores de las probabilidades pronosticadas del modelo y la variable dependiente original.

DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN

10

Los autores de la presente invención describen el uso de un método para cribado, diagnóstico, pronóstico ylo seguimiento de la osteoporosis cuantificando una serie de marcadores, concretamente GLP-1 , GLP-2, GIP, OPP-4 Y CTX-Beta cross-Iaps.

lS

En este trabajo se aplicó un análisis basado en un estudio de casos y controles, para buscar potenciales marcadores, principalmente los péptidos intestinales GLP-1 , GLP-2 Y GIP, así como la enzima encargada de su metabolización, OPP-4, y CTX-Beta cross-Iaps que puedan ayudar a entender los procesos patológicos relacionados con la osteoporosis.

20

Se tomaron muestras de sangre como material biológico y se analizaron por técnicas de luminiscencia . El conjunto de marcadores significativos identificados, junto con el Z-score lumbar se utilizaron para aplicar un modelo de regresión logística multivariante para agrupar a los pacientes en los grupos de riesgo de padecer osteoporosis con fines de detección precoz o cribado y diagnóstico, así como con fines de prevención , alivio, mejora y tratamiento.

COMPOSICIÓN DE LA INVENCIÓN

25 30

Por tanto, un primer aspecto de la invención se refiere al uso de una composición, de ahora en adelante composición de la invención, que comprende el péptido similar al glucagón 1 (GLP-1), análogos de GLP-1 , agonistas de los receptores de GLP-1, péptido similar al glucagón 2 (GLP-2), análogos de GLP-2, agonistas de los receptores de GLP-2, inhibidores de DPP-4, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio, mejora ylo tratamiento de la osteoporosis.

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Alternativamente se refiere al uso de una composición, que consiste en el peptido similar al glucagón 1 (GLP-1 l, analogos de GLP-l , agonistas de los receptores de GLP-1 , péptido similar al glucagón 2 (GLP-2), análogos de GLP-2, agonistas de los receptores de GLP-2, inhibidores de OPP-4, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, soJvatos e hidratos farmaceuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de la osteoporosis.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, además comprende GIP, péptido YY, amilina o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables.

En otra realización preferida, se refiere a que los análogos y agonistas de los receptores de GLP-1 se seleccionan de la lista que consiste en repaglinida, nateglinida, exenatida, pramlintida, liraglutida, lixisenatida, albiglutida, dulaglutida o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida, se refiere a que el análogo de GLP-2 consiste en teduglutida.

En otra realización preferida, se refiere a que los inhibidores de OPP-4 se seleccionan de la lista que consiste en sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, alogliptina, linagliptina, gemigliptina, sitagliptina y simvastatina, o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida de este aspecto de la invención, la composición además comprende otro principio activo, preferiblemente un agente que afecta a la estructura ósea y la mineralización que se selecciona de la lista que consiste en bifosfonatos, proteínas morfogénicas óseas, ranelato de estroncio, denosumab, estrógenos, estimulantes de receptores estrogénicos, raloxifeno, teriparatida, hormona paratiroidea, calcitonina, calcio, colecalciferol, calcifediol o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida, la composición además comprende uno o más excipientes farmacéutica mente aceptables.

En otra realización preferida, la administración se realiza por vía oral, sublingual, inhalatoria, transdérmica, intramuscular (1M), intravenosa (IV), o subcutánea (Se).

En otra realización preferida de este aspecto de la invención, cualquiera de los principios activos de la presente invención pueden administrarse a un individuo de manera simultánea, combinada, o secuencial, es decir, que los principios activos no tienen que estar

interaccionando químicamente formando parte de una composición, encontrarse yuxtapuestos sin ser parte de una combinación verdadera.

sino que pueden

S

El término "prevención" tal como se entiende en la presente invención consiste en evitar la aparición de la enfermedad, es decir, evitar que se produzca la enfermedad o la condición patológica en un sujeto (preferiblemente mamífero, y mas preferiblemente un humano), en particular, cuando dicho sujeto tiene predisposición por la condición patológica.

10

El término "tratamiento" tal como se entiende en la presente invención se refiere a combatir los efectos causados como consecuencia de una enfermedad o condición patológica de interés en un sujeto (preferiblemente mamífero, y mas preferiblemente un humano) que incluye:

(i) inhibir la enfermedad o condición patológica, es decir, detener su desarrollo;

(ii) aliviar la enfermedad o la condición patológica, es decir, causar la regresión de la enfermedad o la condición patológica o su sintomatologia;

(iH) estabilizar la enfermedad o la condición patológica.

15 20

Se entiende por ·osteoporosis~ tal como se define en la presente invención como un trastorno del esqueleto caracterizado por alteración de la resistencia ósea que predispone a un incremento del ríesgo de fractura. La resistencia del hueso es el reflejo de la integración de dos características princípales: densidad y calidad ósea. El deterioro de tejido óseo que se produce en la osteoporosis es el resultado de una disminución de masa ósea y la alteración de la microarquitectura del hueso, por desequilibrio en los procesos de formación y reabsorción ósea.

2S

Según su etiología, la osteoporosis puede clasificarse en primaria o secundaria. La osteoporosis primaria se trata del tipo mas frecuente de osteoporosis. Este diagnóstico se establece cuando, tras evaluar al paciente, no se encuentra la causa que la provoca. A su vez, la osteoporosis primaria puede categorizarse como juvenil, postmenopáusica, relacionada con la edad e idiopática.

30

Se diagnostica osteoporosis secundaria cuando la pérdida de masa ósea es causada por otra enfermedad o por el uso de fármacos en particular. Las fracturas Se dan con mayor frecuencia en los huesos de la cadera, las vértebras de la columna vertebral y los huesos de la muñeca. Las fracturas vertebrales pueden ocasionar pérdida de altura y deformidad de la caja torácica.

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La osteoporosis no provoca síntomas y suele pasar desapercibida, motivo por el cual se la ha denominado "la epidemia silenciosa". Las manifestaciones clinicas de la osteoporosis aparecen como consecuencia de sus complicaciones: las fracturas. Así mismo, la osteoporosis es una enfermedad crónica, y actualmente no dispone de cura, por tanto su tratamiento es crónico. El primer paso antes de recomendar un tratamiento es evaluar al paciente para determinar si se trata de una osteoporosis primaria o secundaria, con el fin de detectar las enfermedades que la provocan, algunas de las cuales suelen pasar desapercibidas. Si se trata de manera adecuada la enfermedad causante y la baja densidad ósea para la edad persiste, el tratamiento dependerá de la dinámica de los huesos. Las pautas generales se basan en recomendar una cantidad adecuada de calcio en la dieta, la práctica de ejercicio físico y el empleo de medicamentos que contribuyan al mantenimiento o aumento de la masa ósea. Los fármacos autorizados actualmente son: estrógenos, estimulantes de receptores estrogénicos, bifosfonatos, denosumab, teriparatida, ranelato de estroncio (solo autorizado en osteoporosis muy graves).

El término "principio activo", KfármacoK "sustancia activa", "sustancia farmacéuticamente

,

activa", "ingrediente activo" ó "ingrediente farmacéuticamente activo" tal como se emplea en la presente memoria significa cualquier componente que potencialmente proporcione una actividad farmacológica u otro efecto diferente en el diagnóstico, cura, mitigación, tratamiento, o prevención de una enfermedad, o que afecta a la estructura o función del cuerpo del hombre u otros animales. El término incluye aquellos componentes que promueven un cambio químico en la elaboración del fármaco y están presentes en el mismo de una forma modificada prevista que proporciona la actividad específica o el efecto.

El término ·péptido similar al glucagon 1 GLP-1" se refiere una hormona derivada de la transcripción de un gen llamado proglucagón cuya función fisiológica se fundamenta sobre la concentración sanguínea de glucosa. La fuente principal de GLP-1 en el organismo son las células L del intestino, las cuales secretan a la hormona como un producto intestinal. La forma biológicamente activa de la hormona GLP-1 son GLP-1-(7-37) y GLP-1-(7-36)NH2.

El término "análogos de GLP-1 y agonistas de los receptores de GLP_1 K hace referencia a aquellos principios activos que tienen una acción agonistas del receptor de GLP-1, también llamados miméticos de incretina, son un tipo de fármaco con acción ¡ncretina. Estos fármacos, repaglinida, naleglinida, exenalida, pramlinlida, liraglulida, lixisenalida, albiglulida, y dulaglutida , copian o imitan la acción del GLP-1 producido por el cuerpo. Los efectos del GLP~1 duran solo unos minutos, pero los análogos y agonistas de los receptores de GLP-1 duran aproximadamente 10 horas. Los agonistas del receptor de GLP-1 se formulan en forma liquida, que se inyecta bajo la piel del estómago, muslo o brazo. Según el el fármaco de elección, se inyecta una o dos veces al día, o una vez a la semana.

El término ~péptido similar al glucagon 2 GLP-2" se refiere a un péptido de 33 aminoácidos con la secuencia HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLlQTKITD en seres humanos. El GLP-2 es producido por la célula L endocrina intestinal y por varias neuronas en el sistema nervioso central. El GLP-2 intestinal es co-secretado junto con GLP-1 tras la ingestión de nutrientes. Cuando se administra externamente, el GLP-2 produce una serie de efectos en humanos y roedores, incluyendo el crecimiento intestinal, el aumento de la función intestinal, la reducción de la descomposición de los huesos y la neuroprotección. GLP-2 puede actuar en una forma endocrina para vincular el crecimiento intestinal y el metabolismo con la ingesta de nutrientes. GLP-2 y análogos relacionados pueden ser tratamientos para el síndrome de intestino corto, enfermedad de Crohn, osteoporosis y como terapia adyuvante durante la quimioterapia contra el cáncer.

El término "análogo de GLP-2~ hace referencia a aquellos principios activos que tienen una acción similar al GLP-2, concretamente la teduglutida.

El término ~polipéptido inhibidor gástrico GIP o péptido insulinotrópico dependiente de la glucosau (del inglés gastric inhibitory pofypeptide), es un miembro de la familia de hormonas secretina. El GIP, junto con el péptido similar al glucagón tipo 1 (GLP-1), pertenecen a una clase de moléculas conocidas como incretinas. La función del GIP es inducir la secreción de insulina, que es estimulada principalmente por la hiperosmolaridad de glucosa en el duodeno. La cantidad de insulina secretada es mayor cuando la glucosa es administrada oralmente que por vía intravenosa.

En esta memoria se entiende por ~dipeptidjl peptidasa-4 DPP-4, adenosina deaminasa proteína acomplejante 2 o CD26u como una proteína que, en humanos, se encuentra codificada por el gen DPP4. La OPP-4 presenta actividad enzimática y actúa degradando a las hormonas incretinicas GLP-, y GIP. Se han desarrollado unos inhibidores de esta proteína, los -inhibidores de DPP-4" que están siendo utilizados como una nueva clase de medicamentos para el tratamiento de la diabetes tipo 2, concretamente en clínica se están utilizando sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, alogliptina, y linagliptina. Estos compuestos bloquean la degradación de las hormonas incretínicas, tales como la GLP-1 , Y pueden incrementar sus niveles naturales en circulación favoreciendo el control glucémico en pacientes diabéticos tipo 2.

Cuando en la presente memoria se menciona los "agentes que afectan a la estructura ósea y la mineralización" se refiere a todos aquellos principios activos cuya acción principal se basa en tratar los trastornos del esqueleto caracterizado por alteración de la resistencia Ósea que predispone a un incremento del riesgo de fractura. Preferiblemente, estos agentes pueden tratar la densidad y calidad ósea.

En esta memoria, cuando se hace mención al término "sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos" se refiere a cualquier sal, éster, tautómero, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptables, o cualquier otro compuesto que, en su administración, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto tal y como los descritos en el presente documento. No obstante, se observará que las sales farmacéuticamente inaceptables también caen dentro del alcance de la invención, ya que éstas pueden ser útiles para la preparación de sales farmacéutica mente aceptables. La preparación de sales, profármacos y derivados puede ser llevada a cabo mediante métodos conocidos en el estado de la técnica.

El término "solvato·, tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos de los compuestos presentes en la composición de la invención que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por Jos expertos en la materia.

La expresión ·cantidad terapéuticamente efectiva-se refiere a la cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar la acción terapéutica determinada por sus propiedades farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los compuestos, además de la edad, estado del paciente, la severidad de la alteración o trastorno, y de la ruta y frecuencia de administración.

De acuerdo con la definición de la EMEA, se considera excipiente cualquier componente en la composiCión distinto de un principio activo. Un ejemplo de excipientes adicionales farmacéuticamente aceptables podría ser, aunque sin limitarnos, aquellos que se seleccionan de la lista que consiste en: metanol, el propilenglicol, el etilenglicol, el dimetilsulfóxido, el 2,3 butanediol, el glicerol, y otros alcoholes, la galactosa, la glucosa, la

sacarosa, la trehalosa y otros carbohidratos o glúcidos, la polivinilpirrolidona, el alcohol polivinílico, el hialuronidato de sodio y otros polímeros, o cualquiera de sus combinaciones.

5

Los adyuvantes y vehículos farmacéutica mente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas.

10 15 20

Las composición farmacéutica tal como se menciona en la invención se puede administrar por vía tópica, transdérmica, oral, nasal, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, enteral o parenteral. Ejemplos ilustrativos de administración tópica o transdérmica incluye, aunque no se limita, iontoforesis, sonoforesis, electroporación, presión mecánica, gradiente de presión osmótica, cura oclusiva, microinyecciones, inyecciones sin agujas mediante presión, parches microeléctricos y cualquier combinación de ellas. Ejemplos ilustrativos de formas farmacéuticas de administración por vía oral incluyen comprimidos, cápsulas, granulados, soluciones, suspensiones, etc., y pueden contener los excipientes convencionales, tales como aglutinantes, diluyentes , desintegrantes, lubrificantes, humectantes, etc., y pueden ser preparadas por métodos convencionales. Las composiciones farmacéuticas también pueden ser adaptadas para su administración parenteral, en forma de, por ejemplo, soluciones, suspensiones o productos liofilizados, estériles, en la forma de dosificación apropiada; en este caso, dichas composiciones farmacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tajes como tampones, tensioactivos, etc. En cualquier caso, los excipientes se elegirán en función de la forma farmacéutica de administración seleccionada. Una revisión de las distintas formas farmacéuticas de

administración de fárm acos y de su preparación puede encontrarse en el libro MTratado de Farmacia Galénjca~, de C. Fauli i Trillo, 10 Edición, 1993, Luzan 5, S.A. de Ediciones.

2S

El término "medicamento", tal y como se usa en esta memoria, hace referencia a cualquier sustancia usada para prevención, diagnóstico, alivia, tratamiento o curación de enfermedades en el hombre y los animales.

30

Las composiciones de la presente invención pueden ser empleadas junto con otros medicamentos en terapias combinadas. Los otros fármacos pueden formar parte de la misma composición o de otra composición diferente, para su administración al mismo tiempo o en tiempos diferentes.

Tanto las composiciones de la presente invención, así como la preparación combinada pueden formularse para su administración a un animal, y más preferiblemente a un mamífero, incluyendo al hombre, en una variedad de formas conocidas en el estado de la

técnica. Tales composiciones o preparaciones combinadas y/o sus formulaciones puede administrarse a un animal, incluyendo un mamífero y, por tanto, al hombre, en una variedad de formas, incluyendo, pero sin limitarse a, intraperitoneal, intravenoso, intramuscular, subcutáneo, intratecal, intraventricular, oral, enteral, parenteral, ¡ntranasal o dérmico.

s

La administración de las composiciones o formas farmacéuticas de la presente invención puede ser realizada mediante cualquier método adecuado, como la administración intramuscular, subcutánea, o infusión intravenosa . La administración intramuscular es la preferida por la conveniencia farmacocinética y por la gravedad de la enfermedad a tratar.

10

La cantidad administrada de los principios activos presentes en la composición de la invención dependerá de la relativa eficacia de los compuestos elegidos, la severidad de la enfermedad a tratar y el peso del paciente. Es importante tener en cuenta que puede ser necesario introducir variaciones en la dosis, dependiendo de la edad y de la condición del paciente, así como modificaciones en la vía de administración.

15

Debe enfatizarse que el térm ino ~ preparación combinada" o también denominada ~yuxtaposic¡ónn, en esta memoria, significa que los componentes de la preparación combinada no necesitan encontrarse presentes como unión, por ejemplo en una composición, para poder encontrarse disponibles para su aplicación separada o secuencial. De esta manera, la expresión Myuxtapuesta" implica que no resulta necesariamente una combinación verdadera, a la vista de la separación física de los componentes.

20

USO DE BIOMARCADORES

2S

Un seg undo aspecto de la invención se refiere al uso de los marcadores péptido similar al glucagón 1 (GLP-1), telopéptido carboxiterminal del colageno Beta-ctx (CTX-Beta crosslaps), o su combinación para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, además comprende el péptido similar al glucag6n 2 (GLP-2) , dipeptidil peptidasa 4 (DPP-4), o cualquiera de sus combinaciones.

30

En otra realización preferida además comprende el pOlipéptido inhibidor gástrico (GIP), péptido VY, amilina, o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida además comprende la 25·0H vitamina D, calcio, fósforo, magnesio, hormona paratiroidea (PTH), o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida además comprende el osteocalcina, propéptido aminoterminal del procolágeno, telopéptido carboxiterminal del cOlágeno Beta·ctx (CTX-Beta cross-Iaps), o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida los marcadores se seleccionan de la lista que consiste en GLP· 1, GLP-2, GIP, DPP-4, CTX-Beta cross·laps o cualquiera de sus combinaciones. En una realización más preferida, el marcador es el GLP-1 y el GLP-2. En una realización aún más preferida, el marcador es el GLp·1.

El término ~Marcador, biomarcador o marcador biológico· se utiliza para designar aquella sustancia utilizada como indicador de un estado biológico. Debe poder medirse objetivamente y ser evaluado como un indicador de un proceso biológico normal, estado patogénico o de respuesta a un tratamiento farmacológico.

El término Utelopéptido carboxiterminal del colágeno Beta·ctx o CTX·Beta cross·laps~ hace referencia a un indicador del metabolismo óseo, y es una ayuda a la hora de valorar el tratamiento con fármacos antiresortivos (bifosfonatos, denosumab, ranelato de estroncio) o formadores (teriparatida, estimulante selectivos de receptores de estrógenos).

El término uCribado poblacional o Screening" tal como se usa en la presente invención se refiere a la estrategia aplicada sobre una población para detectar una enfermedad en individuos sin signos o síntomas de esa enfermedad de manera temprana dentro de una comunidad. Para que esta estrategia de prevención sea considerada como cribado debe cumplir con los criterios de Frame y Carlson:

•

La enfermedad buscada sea una causa común de morbimortalidad (enfermedad prevalente).

•

Sea detectable en etapa presintomática.

•

Las pruebas diagnósticas deben ser efectivas y eficaces (sensibilidad y especificidad aceptables).

•

El tratamiento temprano debe ser mejor que en la etapa sintomática.

•

El daño potencial de la intervención debe ser menor que en el tratamiento no precoz.

El término ~diagnóstico· en esta memoria hace mención a un procedimiento por el cual se identifica una enfermedad, entidad nosológica, síndrome, o cualquier estado de salud o enfermedad.

En la presente invención se entiende por "pronóstico" la evolución esperada de una enfermedad y se refiere a la valoración de la probabilidad según la cual un sujeto padece una enfermedad así como a la valoración de su inicio, estado de desarrollo, evolución, o de su regresión, y/o el pronóstico del curso de la enfermedad en el futuro. Como entenderán los expertos en la materia, tal valoración, aunque se prefiere que sea, normalmente puede no ser correcta para el 100% de los sujetos que se van a diagnosticar. El término, sin embargo, requiere que una parte estadísticamente significativa de los sujetos se pueda identificar como que padecen la enfermedad o que tienen predisposición a la misma. Si una parte es estadísticamente significativa se puede determinar sin más por el experto en la materia usando varias herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación de valores p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Los intervalos de confianza preferidos son al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95%. Los valores de p son, preferiblemente, 0,2, 0,1, 0,05. A su vez, atendiendo al método de la presente invención , se podrían establecer otras subclasificaciones dentro de esta principal, facilitando, por tanto, la elección y el establecimiento de regímenes terapéuticos o tratamiento adecuados. Esta discriminación tal y como es entendida por un experto en la materia no pretende ser correcta en un 100% de las muestras analizadas. Sin embargo, requiere que una cantidad estadísticamente significativa de las muestras analizadas sean clasificadas correctamente. La cantidad que es estadísticamente significativa puede ser establecida por un experto en la materia mediante el uso de diferentes herramientas estadísticas, por ejemplo, pero sin limitarse, mediante la determinación de intervalos de confianza, determinación del valor significación P, test de Student o funciones discriminantes de Fisher, medidas no paramétricas de Mann Whitney, correlación de Spearman, regresión logistica, regresión lineal, área bajo la curva de ROC (AUC). Preferiblemente, los intervalos de confianza son al menos del 90%, al menos del 95%, al menos del 97%, al menos del 98% o al menos del 99%. Preferiblemente, el valor de p es menor de 0,1, de 0,05, de 0,01 , de 0,005 o de 0,0001 . Preferiblemente, la presente invención permite detectar correctamente la enfermedad de forma diferencial en al menos el 60%, más preferiblemente en al menos el 70%, mucho más preferiblemente en al menos el 80%, o aún mucho más preferiblemente en al menos el 90% de los sujetos de un determinado grupo o población analizada.

El término useguimiento· tal como se recoge en esta memoria hace referencia a un proceso de atención sanitaria que continua a otra intervención diagnóstica o terapéutica, con el objetivo de finalizar el episodio de atención iniciado para conseguir su completa recuperación, o de mantener un estado de salud satisfactorio en enfermedades crónicas.

MtcTODOS DE LA INVENCiÓN

Un tercer aspecto de la invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para 5 el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis, de ahora en adelante primer método de la invención, que comprende:

a) cuantificar los productos de expresión GLP-1, GLP-2, OPP-4 Y CTX-Beta cross-Iaps, tal como se define en la presente invención, en una muestra biológica aislada de un individuo al que se le ha administrado previamente un preparado nutricional, y el

10 Zscorelumbar, y

b) calcular la probabilidad de un individuo de padecer osteoporosis en base a la fórmula (1):

. . 1

Probabilidad = (-0068 ' GLPI-om ' crX-4418 ' ZSCORELUMBAR.9016)

l+e ' .. .

Fórmula (1)

15 donde

GLP1 : es el valor del péptido similar al glucagón 1 (GLP-1);

CTX: es el valor del parámetro de remodelado óseo CTX Beta-cross laps; y

Zscorelumbar: es el valor del Z score lumbar obtenido mediante Densitometria ósea

(OEXA).

En una realización preferida, se refiere al primer método de la invención para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

En otra realización preferida, la muestra biológica aislada en el paso a) es sangre. Preferiblemente la sangre es extraída de la vena antecubital. Más preferiblemente la

25 extracción sanguínea se hace 20 minutos después de la ingesta de un preparado nulricional de composición químicamente definida. Aún más preferiblemente, el preparado nutricional tiene una concentracíón calórica de 1 '25 kcal/ml, 18'8 9 de proteínas, vitaminas, minerales y oligoelementos.

Un cuarto aspecto de la invención se refiere a un método para cribado, diagnóstico, pronóstico yJo seguimiento de la osteoporosis, que comprende los pasos (a) y (b) según se describe en la presente invención, de ahora en adelante segundo método de la invención, y ademas comprende:

c) asignar al individuo al grupo de individuos que presentan osteoporosis cuando el resultado de la Formula (1) es mayor a 0,5.

En una realización preferida, se refiere al segundo método de la invención para el cribado, diagnóstico, pronóstico ylo seguimiento de la osteoporosis.

En otra realización preferida, la muestra biológica aislada en el paso a) es sangre. Preferiblemente la sangre es extraída de la vena antecubital. Más preferiblemente la extracción sanguínea se hace 20 minutos después de la ¡ngesta de un preparado nutricional de composición químicamente definida. Aún mas preferiblemente, el preparado nutricional tiene una concentración calórica de 1 '25 kcalfml, 18'8 g de proteínas, vitaminas, minerales y oligoelementos.

Un uindividuo" o "sujeto'\ como se usa aquí, se refiere a un mamífero, humano o no humano, en observación, y más preferiblemente un ser humano. El individuo puede ser cualquiera, un individuo predispuesto a una enfermedad (por ejemplo Pea) o un individuo que padece dicha enfermedad.

El término ~cuantificar" tal y como se utiliza en la descripción, se refiere pero no se limita, a la determinación de la cantidad absoluta o relativa de los marcadores, de su concentración en sangre o plasma, así como a cualquier otro valor o para metro relacionado con los mismos o que pueda derivarse de éstos. Dichos valores o parámetros comprenden valores de intensidad de la señal obtenidos a partir de cualquiera de las propiedades físicas o químicas de dichos productos de expresión obtenidos mediante medida directa. Adicionalmente, dichos valores o parámetros incluyen todos aquellos obtenidos mediante medida indirecta, por ejemplo, cualquiera de los sistemas de medida descritos en otra parte del presente documento.

El término uZ-score, Z score lumbar o Zscorelumbar" es el numero de desviaciones estándar de un paciente con Densidad promedio mineral del hueso (OPH) diferente del promedio de DPH por su edad, sexo, etnia. Este valor es usado en mujeres premenopáusicas, hombres debajo de los 50, y en niños. También sirve para establecer si el paciente tiene un DPH tan bajo con respecto a su grupo etario que haga presumir alguna causa secundaria. Este valor es el valor del obtenido mediante Densitometría ósea (DEXA).

El término "modelo de regresión logística, modelo logístico. modelo logit, o clasificador de máxima entropía" hace referencia a un tipo de análisis de regresión, el cual utiliza la fórmula 1, utilizado para predecir el resultado de una variable categórica (una variable que puede adoptar un número limitado de categorías) en función de las variables independientes o predictoras. Es útil para modelar la probabilidad de un evento ocurriendo como función de otros factores.

Una "muestra biológica" tal como se define aquí, es una pequeña parte de un sujeto, representativa del conjunto y puede estar constituida por una biopsia o una muestra de fluido corporal. Las biopsias son pequeñas piezas de tejido y pueden ser frescas, congeladas o fijas, como fijada con formalina y embebidas en parafina (formalin· fixed and paraffin embedded FFPE). Muestras de fluidos corporales pueden ser sangre, plasma, suero, orina, esputo, líquido cefalorraquídeo, leche o muestras de fluido ductal y pueden asimismo ser frescos, congelados o fijados. Las muestras se pueden extirpar quirúrgicamente, mediante extracción, es decir, con agujas hipodérmicas o de otro tipo, por microdisección o captura láser. La muestra debe contener cualquier material biológico adecuado para detectar el marcador, biomarcador o biomarcadores deseado/s, por lo tanto, dicha muestra debe comprender ventajosamente material de las células del sujeto. Por lo tanto, en una realización particular, la muestra es una muestra de fluido corporal tal como una muestra de sangre u orina; preferiblemente, la muestra es de sangre.

Una "muestra de referencia", como se usa aquí, significa una muestra obtenida de los individuos, preferiblemente dos o más individuos, de los que se sabe que están libres de la enfermedad (osteoporosis) y/o, alternativamente, de la población sana. Los niveles adecuados de referencia de los marcadores se pueden determinar mediante la medición de los niveles de dichos marcadores en varios individuos adecuados, y tales niveles de referencia se pueden ajustar para poblaciones de individuos o sujetos específicos. En una realización preferida, la muestra de referencia se obtiene de un grupo de individuos o sujetos sanos o de sujetos sin historia previa de osteoporosis. El perfil de niveles de marcadores en la muestra de referencia puede, preferiblemente, generarse a partir de una población de dos o más individuos; por ejemplo, la población puede comprender 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 o más individuos o sujetos. En otra realización preferida, la población sana de referencia comprende 58 individuos o sujetos. En otra realización preferida , la población con historia previa de osteoporosis de referencia comprende 58 individuos O sujetos.

La determinación de los marcadores se puede hacer por cualquier medio conocido por el experto en la materia. En una realización preferida, las determinaciones se han realizado por métodos de luminiscencia.

s

Un ~ preparado nutricional-tal como se hace referencia en la presente invención se refiere a la ingesta de un preparado de composición qulmicamente definida con una concentración calórica de 1 '25 kcal/ml, 18'8 g de proteínas, vitaminas, minerales y oligoelementos, empleado para mejorar las determinación de los marcadores en sangre de los individuos.

USOS MÉDICOS

10

Un quinto aspecto de la invención se refiere al uso de la composición de la invención para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de los individuos seleccionados por los métodos de la invención.

KIT O DISPOSITIVOS Y USOS

Un sexto aspecto de la invención se refiere a un kit o dispositivo, de ahora en adelante kit o dispositivo de la invención, que comprende un:

15

componente A, formado por un colector de sangre, y/o

componente 8, formado por uno o mas tubos de muestra de sangre con 10 IJL de un inhibidor de la DPP-4 por cada mL de sangre, una placa de 96 pocillos, conjugated magnetic beads, anticuerpos específicos, estandares, buffers, disolventes, streptavidin-PE, placa filtro, placa inferior plana, cinta de sellado, y/o

20

componente e, formado uno o más tubos de muestra de sangre, EOTA tripotásico, heparina sódica, y/o

componente D, formado por dispositivo de medida del espectro de luz, y/o

componente E, formado por un densitómetro, y/o

o cualquiera de sus combinaciones.

25

Por otro lado, el kit puede incluir todos los soportes y recipientes necesarios para su puesta en marcha y optimización. Preferiblemente, el kit comprende además las instrucciones para llevar a cabo los métodos de la invención.

El término -densitometria ósea o OEXN se refiere a una prueba para determinar la densidad mineral ósea. Se puede realizar con rayos X, ultrasonidos o isótopos radiactivos. Sirve para

S

el diagnóstico de osteoporosis. El test se realiza con el aparato que mide las imágenes y da una cifra de la cantidad mineral ósea por superficie. El test trabaja midiendo un hueso especifico, o más, usualmente de la columna vertebral , cadera, antebrazo. La densidad de esos huesos es comparada con un valor promedio basado en edad, sexo, tamaño. La comparación de resultados se usa para determinar el riesgo de fracturas y el estado de osteoporosis en un individuo.

10

Un séptimo aspecto de la invención se refiere al uso del kit o dispositivo de la invención, para la obtención de datos útiles para el cribado, diagnóstico, pronóstico ylo seguimiento de la osteoporosis.

MÉTODOS IMPLEMENTADOS POR ORDENADOR

lS

La invención se extiende también a programas de ordenador adaptados para que cualquier medio de procesamiento pueda llevar a la práctica los métodos de la invención. Tales programas pueden tener la forma de código fuente, código objeto, una fuente intermedia de código y código objeto, por ejemplo, como en forma parcialmente compilada, o en cualquier otra forma adecuada para uso en la puesta en práctica de los procesos según la invención. Los programas de ordenador también abarcan aplicaciones en la nube basadas en dicho procedimiento.

20

Un octavo aspecto de la invención se refiere a un programa de ordenador que comprende instrucciones de programa para hacer que un ordenador lleve a la práctica el procedimiento de acuerdo con cualquiera de los métodos de la invención.

25

En particular, la invención abarca programas de ordenador dispuestos sobre o dentro de una portadora. La portadora puede ser cualquier entidad o dispositivo capaz de soportar el programa. Cuando el programa va incorporado en una señal que puede ser transportada directamente por un cable u otro dispositivo o medio, la portadora puede estar constituida por dicho cable u otro dispositivo o medio. Como variante, la portadora podria ser un circuito integrado en el que va incluido el programa, estando el circuito integrado adaptado para ejecutar, o para ser utilizado en la ejecución de los procesos correspondientes.

30

Por ejemplo, los programas podrían estar incorporados en un medio de almacenamiento, como una memoria ROM, una memoria CD ROM o una memoria ROM de semiconductor, una memoria USB , o un soporte de grabación magnética como , por ejemplo, un disco flexible o un disco duro. Alternativamente, los programas podrian estar soportados en una

señal portadora transmisible. Por ejemplo, podría tratarse de una señal eléctrica u óptica que pOdría transportarse a través de cable eléctrico u óptico, por radio o por cualesquiera otros medios.

Un noveno aspecto de la invención se refiere a un medio de almacenamiento legible por un ordenador que comprende instrucciones de programa capaces de hacer que un ordenador lleve a cabo los pasos de cualquiera de los métodos de la invención.

Un décimo aspecto de la invención se refiere a una señal transmisible que comprende instrucciones de programa capaces de hacer que un ordenador lleve a cabo los pasos de cualquiera de los métodos de la invención.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención,

EJEMPLOS DE LA INVENCiÓN

En pacientes osteoporóticos, los niveles de los péptidos intestinales, principalmente GLp·1, GLP·2, o GIP están disminuidos en comparación con pacientes sin osteoporosis de la misma edad y sexo. Es por ello que la determinación de los niveles de estos marcadores, así como del marcador OPP-4 podría ser una buena estrategia para encontrar nuevas formas para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

Así mismo, los preparados análogos a los péptidos intestinales GLp·1, GLp·2, GIP, así como la enzima encargada de su metabolización, OPP·4, junto con la amilina pueden ser utilizados como tratamiento de la osteoporosis.

Para probar esta hipótesis se diseñó el proyecto qua actualmente se está desarrollando.

En este trabajo, se aplicó un estudio de casos y controles, emparejados 1: 1 por sexo y edad (+/·1 año) para buscar potenciales marcadores, principalmente los péptidos intestinales GLP-1, GLP·2 Y GIP, así como la enzima encargada de su metabolización, OPP-4, y su relación con la osteoporosis, que puedan ayudar a entender los procesos patOlógicos relacionados con esta patología.

Así mismo se analizaron de manera más particular la relación de los siguientes marcadores y su asociación con la osteoporosis:

Los péptidos intestinales Péptido YY y amilina. Los parámetros sanguíneos que intervienen en el remodelado óseo y su asociación con la osteoporosis y con los péptidos intestinales GLP·1, GLP·2, GIP, péptido YY, amilina y la enzima DPP-4, especialmente: 25·0H vitamina D, Calcio, fósforo, Magnesio, PTH, osteocalcina, propéptido aminoterminal del procolágeno, y telopéptido earboxiterminal del colágeno Beta-ctx (CTX-Beta eross-Iaps). Otros parámetros sanguíneos que se relacionan con la osteoporosis: hemograma, glucosa, colesterol total y fracciones, triglicéridos y HbA 1 C. Parámetros antropométricos: peso, talla, el índice de masa corporal (IMC), y los compartimentos corporales: masa libre de grasa, masa grasa (medida por impedanciometría) se asocian con los peptidos intestinales estudiados, con la osteoporosis y con los parámetros referidos de remodelado óseo (osteocalcina, propéptido aminoterminal del procolágeno, CTX·Beta cross·laps). La ingesta de los principales grupos de alimentos (lácteos, verduras y hortalizas, legumbres, frutas, carnes, pescado y huevos, aceites) y su asociación con la osteoporosis y con los péptidos referenciados anteriormente: GLP·1 , GLP·2, GIP, péptido YY, amilina y la enzima DPP-4. La ingesta de los macronutrientes (proteínas, lípidos, carbohidratos) y de micro nutrientes (calcio, zinc, vitamina C, vitamina 812, ácido fálico, vitamina 86, vitamina O) estudiando su relación con la osteoporosis y con los péptidos intestinales: GLP-1 , GLP-2, GIP, péptido YY, amilina y la enzima DPP-4. La actividad física, los posibles tratamientos farmacológicos y su asociación con los péptidos intestinales GLP·1 , GLP·2, GIP, péptido YY, amilina y la enzima OPP·4 y con la osteoporosis.

La pOblación del estudio en este trabajo corresponde al área de influencia del Complejo Hospitalario de Jaén.

Ejemplo 1. Diseño del estudio

Como se ha mencionado anteriormente, este trabajo se basa en un estudio de casos y controles, emparejados 1:1 por sexo y edad (+/·1 año). Se ha considerado como exposición tener niveles de péptidos intestinales disminuidos, y como efecto presentar osteoporosis.

Tamaño de muestra y Procedimiento de muestreo

Según los resultados mostrados en Wojcik et al 2011 (2011 ), considerando un error a del 5%, una potencia del 90% y un 10% de pérdidas, para detectar diferencias en el contraste de la hipótesis nula HO:IJ,=1J2 mediante una Prueba T~Student bilateral para dos muestras independientes, y asumiendo que la media del grupo de Casos es de 92,20 unidades, la media del grupo Controles es de 106,30 unidades y la desviación típica de ambos grupos es de 12,00 unidades, se necesitarían 38 pacientes en el estudio.

Para salvar las diferencias que existe entre el estudio de Wojcik y el presente y para poder llevar a cabo los análisis estadísticos planteados con suficiente potencia, se ha decidido ampliar la muestra hasta un total de 58 pacientes por grupo (casos y control), en total 116 pacientes con edades comprendidas entre 18-65 años del área de influencia del Complejo Hospitalario de Jaén. Al tratarse de un estudio no invasivo esta ampliación de muestra no presenta ningún conflicto ético.

El procedimiento de muestreo utilizado será de forma consecutiva a la identificación de los pacientes, los cuales se sometieron a una entrevista y la revisión de sus historias cHnicas.

Los criterios de exclusión que se han marcado para ambos grupos son los siguientes:

Diabetes mellitus (determinada por la medición de HbA1C). Diagnóstico de osteoporosis secundaria. Enfermedades relacionadas con el metabolismo del calcio: hipo o hiperparatiroidismo, hiperfosfatemia, hipertiroidismo subclínico y clínico. Enfermedad de Cushing. Gestación. Ingreso hospitalario anterior en los últimos 6 meses. Diagnóstico de enfermedad cancerosa grave en el momento de la inclusión en el estudio. Enfermedad ileocólica: enfermedad inflamatoria intestinal, malabsorción intestinal, resección y fístulas intestinales. Diagnóstico de insuficiencia renal crónica estadio 4 (FG < 30). En tratamiento activo con: factores biológicos; análogos del GLP-1; inhibidores de la DDP~4; colestiramina; anticomiciales: fenitoína, fenobarbital, carbamacepina o valproato; rifampicina; antiácidos: sales de aluminio; antineoplásicos: ciclofosfamida; bifosfonatos; ranelato de estroncio teriparatida; fluoruro sódico; corticoides; y terapia hormonal substitutiva.

Se seleccionarán de forma consecutiva a su identificación entre los pacientes que sean diagnosticadas de osteoporosis primaria en el servicio de Reumatología del Complejo Hospitalario de Jaén y que cumplan los siguientes criterios de selección.

Estar diagnosticados de osteoporosis por densitometría (absorciometría dual por Rayos X (DEXA)). Acepten la participación en el estudio a través de la firma del consentimiento informado.

Controles

Los controles o pacientes sanos se reclutaron en el entorno familiar de los incluidos en el grupo de casos, emparejados 1: 1 por edad y sexo con el grupo de controles y que además:

No presentan criterios de osteopenia ni de osteoporosis en la DEXA No hayan presentado fractura por fragilidad. Acepten la participación en el estudio a través de la firma del consentimiento informado.

Ejemplo 2. Método y Recogida de datos

A todos los pacientes se les sometió a una serie de pruebas para hacer la determinación de los marcadores expuestos anteriormente:

Determinación de masa ósea

Se ha realizado mediante densitómetro marca GE HC, modelo LUNAR OPX. Después de pesar y tallar al paciente se realizó la medición en columna lumbar: concretamente se analizaron las vértebras desde L 1-L4, Y en la cadera se analizaron el cuello femoral. Los resultados se compararon con los considerados como normales según edad y sexo.

Los niveles o puntos de corte de la DMO medida por DXA en columna lumbar y cadera se han establecido como:

Normal: cuando los valores de DMO son mayores de -1 DE en relación con la media de adultos (T-score > -1).

s

Osteopenia o masa ósea baja: valores de DMO entre -1 y -2,5 DE (T-score entre-1 y -2,5). Osteoporosis: valores de DMO < -2,5 DE (Tscore < -2,5), Y osteoporosis establecida cuando a las condiciones previas se asocia a una o más fractura osteoporótic3. (WHO Scientific Group 2007).

Determinaciones sanguíneas

Se realizaron dos extracciones sanguíneas:

10

Basal: para la determinación de parámetros de metabolismo óseo y bioquímica general. Postprandial: A los 20 minutos de la ¡ngesta de un preparado nutricional con formulación químicamente definida para la determinación de GLP-1 , GLP-2, amilina, péptidos VY, así como la actividad de la enzima DPP-4.

lS

En el laboratorio de Análisis Cllnicos del Complejo Hospitalario de Jaén se realizaron las siguientes determinaciones:

20

Generales: hemograma; bioquimica: glucosa; HBA1C; Urea; creatinina; colesterol total y fracciones; calcio; fósforo; y magnesio. Parámetros de metabolismo y remodelado 6seo: 25-0H vitamina D, PTH, osteocalcina, propéptido aminoterminal del procolágeno, CTX-Beta cross-laps. Estos parámetros se determinaron en condiciones basales después del ayuno de al menos 8 h.

2S 30

En la Universidad de Jaén en el departamento de Fisiologia, se realizaron las determinaciones de GLP-1, GLP-2. GIP, psptido YY, amilina y DPP-4. La determinación de los péptidos intestinales se llevará a cabo en muestras de plasma obtenida a partir de sangre extraída a los 20 minutos de la ingesta de un preparado nutricional con composici6n químicamente definida (Resource protein®), de la vena antecubital, siendo los tubos colocados en hielo y centrifugados inmediatamente a 4 grados centígrados, y a 3000 x g, 30 minutos, guardándose inmediatamente después en un congelador a -80 grados centígrados. Antes de la extracción sanguínea y solo en el tubo con la muestra de sangre correspondiente al estudio de los péptidos, se añadirá 10 IJL de un inhibidor de la OPP-4 (DPP4IDPP4-010, Linco Research Inc, St Charles,Missouri, USA) por cada mL de sangre, siguiendo la técnica que se indica en Hattori et al (2013). Para las determinaciones se

S 10

utilizara el Kit 8io-Plex Pro Human Diabetes 10-Plex Assay, de 8io-Rad, específicamente diseñado para la determinación de los niveles de GLP-1 , GLP-2, GIP, péptido YY y amilina, utilizando la tecnología Luminex x-MAP technology. Estas determinaciones se llevarán a cabo en los servicios técnicos de investigación de la Universidad de Jaén. La actividad DPP4 (Dipeptidil-aminopeptídasa-4) se determinaron por técnicas fluorímétrícas utilizando el Kit -DPP4 Activity Assay Kit" de Sigma-Aldrich. Este ensayo se basa en la hidrólisis por parte del enzima del Sustrato H-Gly-Pro-AMe, liberándose el producto 7-Amino-4-Methyleoumarin (AMe) cuya fluorescencia se medirá a una excitación de 360 nm y una emisión de 460 nm tras la incubación a 37°C. La actividad se expresará como JJmol de AMC por minuto y por mi de plasma. Estos análisis se llevaron a cabo en los laboratorios del área de Fisiología de la Universidad de Jaén.

Determinaciones antropométricas y bioimpedancia

Se realizaron una serie de determinaciones de parámetros, según:

15

Peso, talla, perímetro de la cintura (cm), e Indice de Masa Corporal (IMC). Comportamientos corporales: se realizaron mediante un analizador de la composición corporal mediante impedancia, marca Tanita, modelo Me-180MA, y se determinó: Segmental Multifrecuencia.Masa grasa total y segmental (%), Masa libre de grasa total y segmental (%), y Masa muscular total y segmental (%).

Encuesta alimentaria y datos de actividad física

20 2S

Se utilizó un cuestionario de frecuencia de consumo alimentario semicuantitativo adaptado a población española (Martín-Moreno et al 2003) complementado con el cuestionario usado en el estudio de la cohorte SUN , valorándose la actividad física en METs, (Martínez-González el al 2003). Se recoge información de frecuencia de consumo en función del tipo de alimento (diario, semanal, mensual, anual) del año anterior. Se determinara la ¡ngesta por día de energ ía (Kcalldia) macro nutrientes (carbohidratos, proteínas, I¡pidos) en gramos/día, y micronutrientes: calcio, fósforo, zinc, vitamina O, vitamina e , vitamina 812 y ácido fólico.

Ejemplo 3. Variables del estudio

Las variables que se van a tener en cuenta en el estudio de casos y controles son:

30

Sociodemográficas: Edad (años); Sexo (hombre, (domicilio, institución). Variable Dependiente: Osteoporosis: Si/No. mujer); Residencia habitual

31

Determinaciones analíticas:

• Específicas:

o Péptidos intestinales: GLP-l (pg/ml), GLP-2 (pg/ml), GIP (pg/ml), Amilina (pg/ml), Péptido YY (pg/ml), Actividad de la DPP-4: La

actividad se expresará como IJmol de AMC por minuto y por mL de plasma.

o Parámetros de metabolismo y remodelado óseo: PTH (pg/ml), 25-0H vitamina O sérica (ng/ml), Osteocalcina (ng/ml), teJopéptido carboxiterminal del cOlágeno Beta-cross laps (CTX) (ng/ml), Propéptido aminoterminal del procolágeno total tipo lIP1 NP (ng/ml)

(propéptido).

• Generales:

o Hemograma: hematies, leucocitos, plaquetas (unidades/L).

o Bioquimica estándar: glucosa (mg/dl), HbAlc (%), urea (mg/dl),

creatinina (g/di), colesterol (total y fracciones) (mg/dl), triglicéridos

(mg/dl), electrolitos (mEq/L) (sodio, potasio, cloro).

o Calcio sérico (mg/dl).

o Fósforo sérico (mg/dl).

o Magnesio sérico (mg/dl).

o Albúmina serica (g/di).

• Masa ósea:

o Columna lumbar

o Cadera Parámetros antropométricos:

•

Peso (kg)

•

Talia (cm)

•

IMe (kg/m2)

Parámetros de composición corporal:

•

Masa grasa total y segmental (%)

•

Masa libre de grasa total y segmentar (%)

•

Masa muscular total y segmental (%)

Ingesta alimenticia:

• Ingesta de los principales grupos de alimentos (lácteos, verduras y hortalizas, legumbres, frutas, carnes, pescado y huevos, aceites) g/dia.

•

Energía (Kcal/día) .

•

Macronutrientes: carbohidratos (g/dia), Proteínas (g/día), Lípidos (g/día).

•

Micronutrientes: Calcio (mg/día), Fósforo (mg/dia), Vitamina O (mg/día) , Zinc (mg/dia), Vitamina e (mgldía), Vitamina 812 (~g/dia), vitamina 86 (lJg/día)

•

Ácido f6lico (~g/dia).

s Actividad física: METs/dia. Tratamientos farmacológicos.

Ejemplo 4. Análisis estadístico de las variables de estudio

Los datos recogidos sobre las variables dependientes e independientes mencionadas en 10 este estudio se registraron en una base de datos anonimizada, construida para tal fin y procesadas estadísticamente mediante el programa estadístico SPSS v21 .

En primer lugar se realiza un análisis estadístico descriptivo de cada una de las variables de la base de datos, para ello en el caso de las variables cualitativas se presenta una tabla de frecuencias y como representación gráfica el grafico de sectores. Para el caso de las

lS variables cuantitativas se presentará medidas de tendencia central y como representación gráfica el diagrama de caja y bigotes.

A continuación se presenta un análisis bivariante para evaluar los diferentes objetivos.

De este modo para comprobar la relación entre los péptidos intestinales y la presencia de la osteoporosis y el resto de variables su utilizaron los diferentes test.

20 En el caso de una variable cualitativa dicotómica y una variable cuantitativa el Test t-$tudent para muestras independientes o el test no paramétrico U-Mann Whitney, si la variable cualitativa presente 3 o más modalidades se realizó para el análisis un ANOVA o el test no paramétrico de Kruskal Wallis, en el caso de dar resultados significativos se estudiaron las correspondientes comparaciones múltiples.

2S En el caso de variables cualitativas el test Chi-cuadrado (en tablas r x s) o el test de Fisher (en tablas 2x2), evaluando los Odds Ratio y sus correspondientes intervalos de confianza. Si ambas variables son cuantitativas el coeficiente de correlación de Pearson, o Spearman

(según la normalidad de las variables) .

El estudio de la normalidad de las variables cuantitativas se realizó a través del test de 30 Kolmogorov Smirnov o Test de Shapiro Wilks, dependiendo del tamaño de la muestra.

En el análisis multivariable se utilizarán modelos de regresión logística, para determinar qué variables se asocian con la presencia o no de la osteoporosis. Se consideraron como factores de confusión, los que no sean variables intermedias entre la exposición y el efecto, y mantengan una relación con la exposición (GLP-1 , GLP-2, GIP) Y el efecto (osteoporosis). Como criterio pragmático se utilizaron en la detección de un factor de confusión el cambio en el coeficiente en un 10% o más.

Para todos los análisis se consideraron significativo un valor 0=0.05

En el análisis descriptivo, se valoró nivel de estudios, tipo de trabajo, antecedentes de enfermedad, tratamientos farmacológicos, ingesta alimenticia, actividad física. En el test de diferencia de medias, no se encuentran diferencias significativas entre casos y controles en tipo de trabajo, antecedentes de enfermedad ni tratamientos farmacológicos ni tampoco en tipo de alimentación, lo que indica una gran homegeneidad entre ambos grupos. No se encuentra diferencias significativas en GLP-1 y GLP-2 entre casos y controles en el test de diferencia de medias (t-test).

Tampoco se ha encontrado diferencias significativas en los análisis generales de parámetros bioquímicos y hematimétricos entre casos y controles en el test de diferencia de medias.

Sí se han encontrado diferencias estadísticamente significativas entre casos y controles en relación a parámetros antropométricos (peso, índice de masa corporal) y en los compartimentos corporales medidos por bioimpedancia.

En relación a los resultados obtenidos en los valores de los péptidos intestinales, y aunque

o se ha encontrado correlación significativa en GLP-1 y GLP-2 entre casos y controles en el test de diferencia de medias (t-test), sí se ha encontrado una asociación significativa en análisis regres ión lineal entre GLP-1 y GLP-2 Y el T-score y Z-score lumbar.

Así se ha visto que el GLP-1 se relaciona de forma negativa con el T-score y Z-score, en el límite de la significación en el grupo de casos (p = 0,056 Y 0,064 respectivamente) y estadísticamente significativa en los controles (p = 0,015 Y 0,010 respectivamente), mientras que el GLP-2, presenta una asociación postiva con el T-score lumbar en el grupo de los casos (p= 0.029).

En el análisis de regresión logística condicional multivariable, ajustando por distintos factores de confusión, GLP-1 muestra una disminución significativa del riesgo de osteoporosis (OR = 0.89, intervalo de confianza del 95% (0.81 -0.98».

S

En relación a la actividad de la OPP·4, existe una correlación significativa de OPP·4 con los marcadores de remodelado óseo en el análisis de regresión lineal: se muestra una asociación positiva y significativa de la actividad de la OPP--4 en el grupo de casos entre actividad DPP-4 y osteoealeina (p =0,006) , propéptido (p =a,Ot2), Y CTX (p =0,007), mientras que en el grupo de controles, solo muestra asociación significativa con la actividad de la DPP-4, el propéptido (p = 0,022).

No se ha encontrado relación entre el péptido YY y la osteoporosis.

Los resultados respecto estadístico.

a la amilina han sido muy heterogéneos y no admitian análisis

10

No se encuentra relación entre antropometría y bioimpedancia. los PI estudiados y variables de remodelado óseo,

Como era de esperar sí se encuentra asociación significativa entre osteoporosis y:

15

Valores de masa ósea medida por OEXA (T·score y Z·score en cadera y columna). Marcadores de remodelado 6seo (osteoealeina, propétidoy CTX). Antropometría: peso, IMe, y de bioimpedancia: masa libre de grasa (FFM), masa muscular total (Musc·T) y masa grasa total (Fat·T) que se muestra tanto en test de diferencia de medias y análisis de OR.

En resumen, teniendo en cuenta los resultados más importantes, podemos decir que:

20 25

No se ha demostrado que exista una disminución significativa de GLP·1 , GLp·2, PYY, ni aumento de la actividad de la OPP4 en pacientes con osteoporosis frente a pacientes sin osteoporosis. El GLp·1 se correlaciona de forma negativa con el T·score y Z·score lumbar principalmente en los controles. El GLP-2se correlaciona de forma positiva con el T·score lumbar en los casos, no en los controles. La actividad de DPP4se correlaciona de forma positiva y significativamente con los marcadores de remodelado óseo. En la regresión logística condicional multivariable, el GLP·1 , se asocia con una disminución significativa del riesgo de padecer osteoporosis.

35

Estos resultados muestran que existe una relación del GLP·1 y GLP·2 con los valores de masa ósea medida DEXA

En el caso de GLP-1, se ha comprobado que aunque la asociación con el T·score y Z·score lumbar es negativa, en los análisis de regresión logística, se comprueba que los niveles de GLP·1 se asocian con el riesgo de fractura, es decir, niveles más elevados de GLP·1 disminuyen el riesgo de padecer osteoporosis.

Estos resultados, aunque pueden parecer contradictorios están en la linea de otros estudios que muestran resultados a favor y en contra del efecto del GLP-1 sobre el tejido óseo.

Así, mientras que Oriessen y col (2015), en un estudio de cohortes, muestran que el tratamiento con GLp·1 no incide en el riesgo de fractura, importantes estudios experimentales han puesto de manifiesto que el uso de agonistas del receptor de GLp·1 (exenatide y liraglutide) mejora la masa ósea en ratas ovariectamizadas , principalmente el hueso trabecular, e incrementando el nO de osteoclastos, demostrando que existe receptor de GLp·1 también en osteoclastos, que podría mediar el efecto beneficioso de los agonistas del receptor GLP-1 sobre el tejido óseo, disminuyendo la resorción ósea (Pereira et al 2015). Previamente , se había demostrado que existen receptores para GLP-1 en adipocitos y osteocitos lo que favorecería la formación de osteoblastos, y en las células C del tiroides lo que estimularía la secreción de calcitonina e indirectamente se inhibiría la reabsorción ósea, y también en osteoblastos, receptor de GLP-1 , que difiere del existente en células pancreática (Nuche-Berenguer et al 2010).

Por tanto los diferentes resultados serían explicados porque no existe un solo tipo de receptor. Existen distintos polimorfismos en el receptor de GLP-1 . Estos diferentes polimorfismos en el receptor de GLP·1 , dan lugar a respuestas disociadas (Cantini et al 2016, Luo et al 2016), y posiblemente serían la causa de que existan individuos respondedores y no respondedores a la acción de GLp·1 sobre el tejido óseo.

Respecto al GLp·2, los resultados son coherentes con lo mostrado en anteriores estudios, principalmente los del grupo de Henriksen y colaboradores, que muestran que GLP-2 favorece el aumento de masa ósea (Henriksen, 2003, 200709 Askav-Hansen 2013).

En relación a la actividad de la OPP4, los resultados publicados hasta ahora son contradictorios. Monami y col (2011) en un metaanálisis muestran que el tratamiento con inhibidores de la OPP4 disminuye el riesgo de fractura. Bunk et al (2012), por el contrario, no mostraron relación del tratamiento con inhibidores de la OPP·4 en el remodelado óseo (Bunck el al 2012).

Más recientemente se ha mostrado asociación de la actividad de la DPP-4 con el riesgo de osteoporosis (Zheng et al 2015), y con el riesgo de fractura (Kim et al 2017). Los resultados demuestran que existe una relación positiva y significativa entre actividad de la DPP-4 con los marcadores de remodelado óseo: osteocalcina, propéptido y CTX, coincidiendo con los resultados de Notsu et al (2016), donde también se muestra una asociación de los marcadores de remodelado óseo con la DPP-4 (Notsu et al 2016).

Hay que tener en cuenta las limitaciones del estudio debido a que es un estudio transversal, y se ha realizado una sola determinación analítica.

Aunque no se ha demostrado que en pacientes osteoporóticos exista una disminución significativa de los niveles de GLP-1, GLP-2, PYY o aumento de la actividad DPP4, sí se ha comprobado que:

GLP-2 se relaciona de forma positiva con la MO en columna lumbar en pacientes con osteoporosis. GLP-1 disminuye el riesgo de osteoporosis. La actividad de la DPP4 se relaciona de forma positiva y significativamente con los marcadores de remodelado óseo. Hacen falta más estudios que profundicen en la relación existente entre PI y tejido óseo.

Ejemplo 5. Modelo de regresión logística multivariante para la clasificación de pacientes en casos y controles

Se plantea un modelo multivariante siendo la variable dependiente la que mide si los pacientes son casos o controles, y como variables independientes GLP-1 , CTX y Z-score lumbar.

En el modelo se incluye la información de 102 pacientes, ya que 19 presentan valores perdidos.

La Pruebas omnibus sobre los coeficientes del modelo indica que el modelo calculado es estadísticamente significativo, p_valor=O,OOO (tabla 1).

Tabla 1. Pruebas omnibus sobre los coeficientes del modelo

Chi cuadrado

gl Sig o

Paso 1

Paso Bloque Modelo 120,913 120,913 120,913 3 3 3 ,000 ,000 ,000

El coeficiente R cuadrado de Cox y Snell indica que el modelo explica el 69,4% de la variabilidad de la variable dependiente, lo que demuestra que el modelo es muy adecuado.

5 La Prueba de Hosmer y Lemeshow comprueba que la clasificación que hace el modelo de los pacientes a la osteoporosis no difiere significativamente de la realidad, lo cual significa que el modelo clasifica de forma correcta, p_valor=1 ,OOO.

Tabla 2. Prueba de Hosmer y Lemeshow

Paso

Chi cuadrado gl Sigo

1

,545 8 1,000

En la siguiente tabla (tabla 3) se puede comprobar que las frecuencias observadas y esperadas no difieren apenas.

Tabla 3. Tabla de contingencias para la prueba de Hosmer y Lemeshow

CASCON CONTROL

CASCO N = CASO Total

Observado

Esperado Observado Esperado

1

10 10,000 O ,000 10

2

10 9,994 O ,006 10

3

10 9,962 O ,038 10

4

10 9,714 O ,286 10

5

8 8,341 2 1,659 10

Paso 1

6

2 1,877 8 8,123 10

7

O ,086 10 9,914 10

8

O ,022 10 9,978 10

9

O ,003 10 9,997 10

10

O ,000 12 12,000 12

El modelo clasifica correctamente el 97,1 % de los casos (tabla 4), además presenta altos valores de sensibilidad, especificidad, VPN y vpp (tabla 5).

Tabla 4. Tabla de clasificación

Pronosticado

Observado CASCON Porcentaje

CONTROL CASO correcto

Paso 1

CONTROL 49 1 98,0 CASCON CASO 2 50 96,2

Porcentaje global 97,1

Tabla 5. Tabla de valores de sensibilidad, especificidad, VPN y VPP.

IC

Valor

Lim . Inl Lim. Sup

VPN

98,00 93,12 100,00

VPP

96,15 89,97 100,00

Sensibilidad

98,04 93,25 100,00

Especifi cidad

96,08 89,77 100,00

s

De acuerdo a esta información se puede comprobar que el ajuste del modelo calculado es adecuado.

Finalmente, en el modelo obtenido se puede ver Que tanto GLP-1 y ZSCORCOLUM son

10 variables estadisticamente significativas en el modelo (p_valor = 0,009 Y p_valor = 0,001 respectivamente), mientras que la variable CTX no es significativa pero permanece en el modelo por su importancia en el estudio (tabla 6).

Tabla 6. Variables en la ecuación.

B

E.T. Wald gl Sig o Exp(B) I.C. 95% para EXP(B)

Inferior

Superior

GLP1

-,068 ,026 6,853 1 ,009 ,934 ,888 ,983

Paso

CTX -,772 4,286 ,032 1 ,857 ,462 ,000 2053,844

l '

ZSCORCOLUM -4,418 1,273 12,033 1 ,001 ,012 ,001 ,146

Constante

9,016 3,984 5,122 1 ,024 8229,918

Por lo que finalmente se obtiene una ecuación para clasificar a los pacientes con riesgo de padecer osteoporosis:

Probabilidad de padecer OSleoporosis = 1+ / ,0,068 ' GLP1.(),712'crL,418' z.scORELUMBAR+9,016)

5 De este modo, cuando se evalúe un nuevo paciente, si el resultado de la ecuación es mayor de 0,5 será clasificado como paciente osteoporótico. Mientras que si el resultado es inferior a 0,5 será clasificado como paciente no osteoporótico.

Para determinar la capacidad predictiva del modelo se calcula la Curva ROC con los valores de las probabilidades pronosticadas del modelo y la variable dependiente original. Los

10 resultados indican que área bajo la curva ROe es de 0,994, es decir la capacidad predictiva del modelo es del 99,4%, por lo que el modelo tiene una capacidad predictiva muy alta (Figura 1).

Finalmente, como el estudio de regresión planteado incluye variables cuantitativas se ha realizado un estudio de la linealidad en ellogi1. A través de los coeficientes de correlación de

15 Pearson se comprueba que dicha linealidad existe y es estadísticamente significativa (Tabla 7).

Tabla 6. Correlaciones.

GLP1

CTX ZSCORCOLUM

LOGIT_P

Correlación de Pearson -,211 ,431 .. -,971 ..

Sig o (bilateral)

,033 ,000 ,000

N

102 102 102

REFERENCIAS

Alvarez-Nebreda ML, Jiménez AB, Rodríguez P, Serra JA. Epidemiology of hip fracture in 5 the elderly in Spain. Bone. 200B Feb;42(2):27B-B5.

Askov-Hansen C, Jeppesen PB, Lund P, Hartmann B, Holst JJ, Henriksen OB. Effect of glucagon-like peptide-2 exposure on bone resorption: Effectiveness of high concentration versus prolonged exposure. Regul Pept. 2013 Feb 10;181:4-8

Baim S, Binkley N, Bilezikian JP, KendJer ol, Hans oB, Lewiecki EM, Silverman S. Official 10 Positions of the International Society for Clinical oensítometry and executive summary of the 2007 ISCo Position Oevelopment Conference. J Clin oensítom. 2008; 11 :75-91.

Baró F, Cano A, Sánchez Borrego R, Ferrer J, González Rodríguez SP, Neyro JL, Rodríguez Bueno E, Sancho C, Inaraja V, Fernández C, Corral C; FROSPE StudyGroup. Frequency 01 FRAX risk factors in osteopenic postmenopausal women with and without history af fragility

15 fracture. Menapause. 2012; 19: 1193-9.

Bjarnason NH, Henriksen EE, Alexandersen P, Christgau S. Henriksen OB, Christian sen C. Mechanism of circadian variation in bone resorption. Bone. 2002; 30: 307-313.

Bolla9 RJ , Zhong a , Ding KH , Phillips P, Zhong L, ain F, et al. Glucose-dependent insulinotropic peptide is an integrative hormane with osteotropic effects. Mol Cell Endocrino!. 20 2001 . 25; 177:35-41.

42 Sunck MC, Cornér A, Etiasson B, Heine RJ, Shaginian RM, Taskinen MR. Effects of exenatide on measures of ¡3-cell function after 3 years in metformin-treated patients with type 2 diabetes. Diabetes Careo 2011; 34:2041-7.

Bunck MC, Poelma M, Eekhoff EM, Schweizer A, Heine RJ, Nijpels G, Foley JE,Diamant M. Effects of vildagliptin on postprandial markers of bone resorption and calcium homeostasis in recently diagnosed, well-control1ed type 2 diabetes patients. J Diabetes. 2012;4:181-5.

Cantini G, Mannucci E, Luconi M. Perspectives in GLP-1 Research: New Targets,New Receptors. Trends Endocrinol Metab. 2016 Jun;27(6):427-38.Clowes JA, Hannon R, Yap T, Hoyle NR, Blumsohn A, Eastell R.Effect of feeding on bone turnover markers and its impact on biological variability of measurement". Sone 2002; 30: 886-90.

Clowes JA, Khosla S, Eastell R. Potencial role of pancreatic and enteric hormones in regulating bone turnover. J Bone Min Res 2005; 20: 1497-506.

Oeal C. Future therapeutic targets in osteoporosis. Current Opinion in Rheumatology. 2009. 21; 380-5.

Oicembrini 1, Mannucci E, Rotella CM. Sone: incretin hormones perceiver or receiver? Exp Diabetes Res. 2012; 2012:519784.

Oriessen JH, Henry RM, van Onzenoort HA, Lalmohamed A, Burden AM,

Prieto-Alhambra O, Neef C, Leufkens HG, de Vries F. Sone fracture risk is not associated with the use of glucagon-like peptide-1 receptor agonists: a population-based cohort analysis. Calcif Tissue Int. 2015; 97: 1 04-12

Gaudin-Audrain C, Irwin N, Mansur S, Flatt PR, Thorens S, Baslé M, Chappard O, Mabilleau

G. Glucose-dependent insulinotropic po!ypeptide receptor deficiency leads to modifications of trabecular bane volume and quality in mice. Bane. 2013; 53:221-30.

Henriksen OS, Alexandersen P, Bjarnason NH, Vilsb011 T, Hartmann S, Henriksen EE, et al. Role of gastrointestinal hormones in postprandial reduction of bane resarption. J Sone Miner Res. 2003;18:2180-9.

Henriksen OS, Alexandersen P, Hartmann B, Adrian CL, Syrjalsen 1. Sone HG,et al. Disassociation of bone resorption and formation by GLP-2: a 14-day study in healthy postmenopausal women. Sane 2007;40:723-9.

Henriksen OS, Alexandersen P, Hartmann 8 , Adrian CL, Syrjalsen 1, Sone HG,HoIst JJ, Christiansen C. Four-month treatment with GLP-2 significantly increases hip SMo: a randomized, placebo-controlled, dose-ranging study in postmenopausal women with low BMD. Bone. 2009 ;45:833-42.

S

Janssen P, Rotondo A, Mulé F, Tack J. Review article: a comparison of glucagon-like peplides I and 2. Alimenl Pharmaeol Ther. 2013 Jan;37(1): 18-36.

Jódar E. [Characteristics and types of GLP-1 receptor a90nists. individualized Iherapy]. Med Clin (Bare). 2014 Sep;143 SuppI2:12-7.

An opportunity for

10

Kim H, Baek KH , Lee SY, Ahn SH, Lee SH, Koh JM, Rhee Y, Kim CH , Kim DY, Kang MI , Kim BJ, Min YK. Association of circulating dipeptidyl-peptidase 4 levels with osteoporotic fraelure in poslmenapausal women. Osleoporos Inl. 2017 Mar;28: 1 099-11 08.

Labouesse MA, Gertz ER, Pieeolo BD, Souza EC, Sehusler GU , Wilbraehl MG , el al. Associations among endocrine,inflammatory, and bone markers, body composition and weight loss induced bone loss. Sane. 2014 Jul; 64: 138-46.

15

Luo G, Liu H, Lu H. Glucagon-like peptide-1 (GLP-1 ) receptor agonists: potential to reduce fracture risk in diabetic patients? Sr J Cl in Pharmacol. 2016 Jan;81 (1):78-88.

Ma X, Meng J, Jia M, et al. Exendin-4, a glucagon-like peptide-1 receptor agonist, prevents osteopenia by promoting bone formation and suppressing bone resorption in aged ovariectomized rats. J. Sone Miner Res. 2013;28:1641 -52.

20

Mabilfeau G, Mieczkowska A, Irwin N, Flatt PR, Chappard D. Optimal bone mechanical and material properties require a functional glucagon-like peptide-1 receptor. J Endocrinol 2013; 219:59-68.

Mannucci E, Dicembrini 1. Drugs for type 2 diabetes: role metabolism. Clin Cases Miner Sone Metab. 2015; 12: 130-4.

in the regulation of bone

25

Martin Moreno JM, Boyle P, Gorgojo L, Maisonneuve P, Fernández Rodriguez JC, Salvini S, Willett WC. 1993. oevelopment and validation of a tood frequency questionnaire in Spain. Int J Epidemiol; 22: 512-9.

Martinez de Vitoria E, Mañas M, Yago MD. Fisiolog ia de la Digestión. En Gil A (director). Tratado de Nutrición. Madrid 2010. Panamericana. 173-201 .

44

Martínez-González MA, Sánchez-Villegas A, de Irala-Estévez J, Marti A, Martínez JA. 2002. Mediterranean diel and stroke: objectives and design of the SUN Projet. Nutritional Neuroscience; 5: 65-73.

S

Monami M, Dicembrini 1, Antenore A, Mannucci E. Dipeptidyl peptidase-4 inhibitors and bone fractures: a meta-analysis of randomized clinical trials. Diabetes Care. 2011 ; 34:2474-6

Nuche-Berenguer 8, Lozano D, Gutiérrez-Rojas 1, Moreno Villanueva-Peñacarrillo ML GLP-1 and exendin-4 can osteopenia. J Endocrinol. 2011 May; 209:203-10.

P, Mariñoso ML, Esbrit P, reverse hyper1ipidic-related

10

Nuche-Berenguer S, Portal-Núñez S, Moreno P, González N, Acitores A, López-Herradón A, Esbrit P, Valverde 1, Villanueva-PeñacarrilJo ML. Presence of a functional receptor for GLP-1 in osteoblastic cells, independent of the cAMP-linked GLP-1 receptor. J Cell Physiol. 2010 Nov;225(2):585-92.

15

Nuche-Berenguer 8 , Moreno P, Esbrit P, Dapía S, Caeiro JR, Cancelas J, Haro-Mora JJ, Villanueva-PeñacarrilJo ML. Effect of GLP-1 treatment on bone turnover in normal, type 2 diabetic, and ¡nsulin-resistant states. Calcif Tissue Int. 2009 Jun;84(6):453-61 .

Notsu M, Kanazawa 1, Tanaka S, Yamaguchi T, Sugimoto T. Serum dipeptidylpeptidase-4 ls associated with multiple vertebral fractures in type 2 diabetes mellitus. Clln Endocrinol (Oxf). 2016 Mar;84:332-7

20

Pereira M, Jeyabalan J, J0rgensen CS, Hopkinson M, AI-Jazzar A, Roux JP,Chavassieux P, Orriss IR, Cleasby ME, Chenu C. Chronic administration of Glucagon-like peptide-1 receptor agoni5ts improves 1rabecular bone mass and architecture in ovariectomised mice. Sone. 2015 Oec;81 :459-67.

2S

SEOIMM. Guias de práctica clínica en la osteoporosis posmenopáusica, glucocorticoidea y del varón. Sociedad española de investigación ósea y del metabolismo mineral. Versión 2014. Actualizada Marzo 2015.

Tsukiyama K, Yamada Y, Yamada C, Harada N, Kawasaki Y, Ogura M, et al. Gastric inhibitory polypeptide as an endogenous factor promoting new bone formation after food ingestion. Mol Endocrinol. 2006; 20:1644-51 .

Walsh JS, Henriksen OS. Feeding and bone. Arch Siochem Biophys. 2010. 1; 503:11-9.

45

WHO Scientific Group. Assessment of osteoporosis at the primary health care level Geneva

(Switzerland). World Health Organization; 2007 [actualizado 2007; citado Mayo 2011].

Wojcik M, Meenaghan E, Lawson E. Reduced Amylin Levels Are Associated with Low Bone Mineral Density in Women with Anorexia Nervosa. Bone. 2010 March ; 46: 796 -800.

5 Yavropoulou MP, Yovos JG. Incretins and bone: evolving concepts in nutrient-dependent

regulation 01 bone turnover. Hormones (Athens). 2013; 12:214-23.Zhong a , Itokawa T,

Sridhar S, Ding KH, Xie D, Kang B, 801la9 WB, et al. Effects of glucose-dependent insulinotropic peptide on osteoclast function. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2007;

292:E543-8.

10 Zheng T, Yang L, Liu Y, Liu H, Yu J, Zhang X, ain S. Plasma OPP4 Activities Are Associated

With Osteoporosis in Postmenopausal Women With Normal Glucose Tolerance. J Clin

Endocrinol Metab. 2015 Oct; 1 00(1 0):3862-70.

Claims (18)

1. REIVINDICACIONES

   1. Uso de una composición que comprende el péptido similar al glucagón 1 (GLP-1 ), análogos de GLP-1 , agonistas de los receptores de GLP-1, péptido similar al

   5 glucagón 2 (GLP-2), análogos de GLP-2, agonistas de los receptores de GLP-2, inhibidores de OPP-4, o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, o cualquiera de sus combinaciones, en la elaboración de un medicamento para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de la osteoporosis.

   10 2. Uso de la composición según la reivindicación anterior que además comprende GIP, péptido YV, amilina o cualquiera de sus sales, ésteres, tautómeros, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables.
2. 3. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde los análogos y agonistas de los receptores de GLP-1 se seleccionan de la lista que

   15 consiste en repaglinida, nateglinida, exenatida, pramlintida, liraglutida, lixisenatida, albiglutida, dulaglutida o cualquiera de sus combinaciones.

3. 4.

   Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el análogo de GLP-2 consiste en teduglutida.

4. 5.

   Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde los

   20 inhibidores de DPP-4 se seleccionan de la lista que consiste en sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, alogliptina, linagliptina, gemigliptina, sitagliptina y simvastatina, o cualquiera de sus combinaciones.
5. 6. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde la composición además comprende otro principio activo, preferiblemente un agente

   25 que afecta a la estructura ósea y la mineralización que se selecciona de la lista que consiste en bifosfonatos, proteinas morfogénicas óseas, ranelato de estroncio, denosumab, estr6genos, estimulantes de receptores estrogénicos, raloxifeno, teriparatida, hormona paratiroidea, calcitonina, calcio, colecalciferol, calcifediol o cualquiera de sus combinaciones.

   30 7. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde la composición además comprende uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

6. 8.

   Uso de los marcadores péptido similar al glucagón 1 (GLP-1 ), telopéptido carboxiterminal del colágeno Beta-ctx (CTX-Beta cross-Iaps), o su combinación para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

7. 9.

   El uso de los marcadores según la reivindicación anterior que además comprende el péptido similar al glucag6n 2 (GLP-2), dipeptidil peptidasa 4 (OPP-4), o cualquiera de sus combinaciones.

8. 10.

   El uso de los marcadores según cualquiera de las reivindicaciones 8·9, que además comprende el pOlipéptido inhibidor gástrico (GIP), péptido YY, amilina, o cualquiera de sus combinaciones.

9. 11 . El uso de los marcadores según cualquiera de las reivindicaciones 8-10, que además comprende la 25-0H vitamina O, calcio, fósforo, magnesio, hormona paratiroidea (PTH), o cualquiera de sus combinaciones.

10. 12.

    El uso de los marcadores según cualquiera de las reivindicaciones 8-11, que además comprende el osteocalcina, propéptido aminoterminal del procolágeno, telopéptido carboxiterminal del colágeno Beta-ctx (CTX-Beta cross-Iaps) , o cualquiera de sus combinaciones.

11. 13.

    Un método de obtención de datos útiles para el cribado, diagnostico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis, que comprende:

    a) cuantificar los productos de expresi6n GLP-1, GLP-2, DPP-4 Y CTX-Beta crosslaps, tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en una muestra biológica aislada de un individuo al que se le ha administrado previamente un preparado nutricional, y el Zscorelumbar, y

    b) calcular la probabilidad de un individuo de padecer osteoporosis en base a la 16nmula (1 ):

    Probabilidad

    1+ e(-O,068 °GLP1-O.77PCTX-4,4LS"ZSCORElUMBAR .,.9.0l6J

    Fórmula (1)

    donde

    GLP1: es el valor del péptido similar al glucag6n 1 (GLP-1);

    CTX: es el valor del parámetro de remodelado 6seo CTX Beta-cross laps; y

    Zscorelumbar: es el valor del Z score lumbar obtenido mediante Oensitometría ósea (DEXA).
12. 14. Un método para cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis,

    5 que comprende los pasos (a) y (b) según la reivindicación anterior, y además comprende:

    e) asignar al individuo al grupo de individuos que presentan osteoporosis cuando el resultado de la Formula I es mayor a 0,5.
13. 15. El método según cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde la muestra 10 biológica aislada en el paso a) es sangre.

14. 16.

    Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1~7, para la prevención, alivio, mejora ylo tratamiento de los individuos seleccionados por el método según cualquiera de las reivindicaciones 13-15.

15. 17.

    Un kit o dispositivo que comprende un:

    15 componente A, fonnado por un colector de sangre, y/o

    componente B, formado por uno o más tubos de muestra de sangre con 10 IJL de un inhibidor de la OPP-4 por cada mL de sangre, una placa de 96 pocillos, microesferas magnéticas conjugadas, anticuerpos especificos, estándares, tampones, disolventes, streptavidin-PE, placa filtro, placa inferior plana, cinta de sellado, ylo

    20 componente C, fonnado por EDTA tripotásico, heparina s6dica, ylo

    componente O, formado por dispositivo de medida del espectro de luz, ylo

    componente E, formado por un densitómetro, ylo

    o cualquiera de sus combinaciones.
16. 18. Uso del kit o dispositivo según la reivindicación 17, para la obtención de datos útiles 25 para el cribado, diagnóstico, pronóstico y/o seguimiento de la osteoporosis.

17. 19.

    Un programa de ordenador que comprende instrucciones de programa para hacer que un ordenador lleve a la práctica el método según se describe en cualquiera de las reivindicaciones 13-15.

18. 20.

    Un medio de almacenamiento legible por un ordenador que comprende instrucciones de programa capaces de hacer que un ordenador lleve a cabo los pasos de cualquiera de Jos métodos que se describen en cualquiera de las reivindicaciones

    13-15.

    S 21 . Una señal transmisible que comprende instrucciones de programa capaces de hacer que un ordenador lleve a cabo los pasos de cualquiera de los métodos que se describen en cualquiera de las reivindicaciones 13-15.