ES2666712B1 - USE OF A MATERIAL FOR THE MANUFACTURE OF A CUBREOBJETOS, A PORTALUESTRAS OR A CELLULAR CULTURE VESSEL - Google Patents
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Description
Uso de un material para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celularUse of a material for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture container
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
La presente invención se refiere al uso de un material que comprende un recubrimiento capaz de reflejar total o parcialmente y de forma selectiva luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del VIS, del IR y del UV, y un sustrato transparente a la luz VIS, para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular, particularmente un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular que se utilizan en microscopía óptica.The present invention relates to the use of a material comprising a coating capable of totally or partially and selectively reflecting light of wavelengths between 350 nm and 800 nm, corresponding to the electromagnetic spectrum regions of the VIS, the IR and the UV, and a substrate transparent to VIS light, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture container, particularly a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel that are used in optical microscopy.
Por tanto, la invención se podría encuadrar en el sector de las técnicas de análisis y caracterización de muestras, particularmente por microscopía óptica.Therefore, the invention could be framed in the field of sample analysis and characterization techniques, particularly by optical microscopy.
ESTADO DE LA TÉCNICASTATE OF THE ART
Normalmente, el enfoque automático de una imagen en microscopía óptica se realiza midiendo la luz reflejada sobre un portamuestras o cubreobjetos transparente, cuando se utiliza una luz IR como fuente de iluminación, donde la detección de la luz reflejada se realiza en paralelo al sistema de iluminación. El problema de escasa estabilidad/nitidez de la imagen enfocada automáticamente aparece, por ejemplo, cuando se utilizan objetivos de inmersión de aceite cuyo índice de refracción es similar al del cubreobjetos o el del portamuestras comúnmente un material de vidrio, cuarzo o un material plástico transparente y, por tanto, la luz que se refleja es pequeña.Normally, the automatic focusing of an image in optical microscopy is done by measuring the reflected light on a transparent specimen holder or coverslip, when an IR light is used as a source of illumination, where the detection of the reflected light is made in parallel to the lighting system . The problem of poor stability / sharpness of the automatically focused image appears, for example, when using oil immersion lenses whose refractive index is similar to that of the coverslip or the specimen holder commonly a material of glass, quartz or a transparent plastic material and, therefore, the light that is reflected is small.
En la bibliografía se pueden encontrar diferentes formas de mejorar la estabilidad/nitidez de la imagen enfocada automáticamente en un microscopio óptico.In the bibliography you can find different ways to improve the stability / sharpness of the image automatically focused on an optical microscope.
Por ejemplo, US2010033811 describe un sistema de autoenfoque del microscopio que corrige la imagen de una muestra a lo largo del camino óptico utilizando un divisor de haz.For example, US2010033811 describes a microscope autofocus system that corrects the image of a sample along the optical path using a beam splitter.
US2011017902 describe sistema de autoenfoque y su procedimiento de operación para alcanzar una mayor velocidad y una robustez en las medidas de muestras biológicas por microscopía. El sistema de autoenfoque del microscopio se basa en corregir las imágenes de las muestras a lo largo del camino óptico; la alta velocidad de medida del sistema de autoenfoque se alcanza realizando un patrón con luz sobre la muestra y midiendo, con un detector espacial, al menos dos patrones de reflexión de dicho patrón.US2011017902 describes autofocus system and its operating procedure to achieve greater speed and robustness in the measurements of samples biological by microscopy. The microscope's autofocus system is based on correcting the images of the samples along the optical path; the high measurement speed of the autofocus system is achieved by performing a light pattern on the sample and measuring, with a spatial detector, at least two reflection patterns of said pattern.
WO2013063096 describe un sistema de enfoque automático multifunción basado en enfocar la imagen de la muestra con la ayuda de un posicionamiento por reflexión y correcciones de astigmatismo y aberración cromática a lo largo del eje z, es decir, corregir las imágenes de las muestras a lo largo del camino óptico.WO2013063096 describes a multi-function autofocus system based on focusing the image of the sample with the help of a reflection positioning and corrections of astigmatism and chromatic aberration along the z-axis, that is, correcting the images of the samples throughout of the optical path.
Dichos sistemas son complicados y costosos, por lo que es necesario desarrollar nuevos sistemas que ayuden a mejorar la estabilidad/nitidez de las imágenes obtenidas por microscopía óptica.These systems are complicated and expensive, so it is necessary to develop new systems that help improve the stability / clarity of the images obtained by optical microscopy.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓNDESCRIPTION OF THE INVENTION
La presente invención se refiere al uso de un material que comprende un recubrimiento capaz de reflejar total o parcialmente y de forma selectiva luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del visible, del IR y del UV, y un sustrato transparente a la luz VIS, para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular, particularmente un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular que se utilizan en microscopía óptica.The present invention relates to the use of a material comprising a coating capable of totally or partially and selectively reflecting light of wavelengths between 350 nm and 800 nm, corresponding to the regions of the electromagnetic spectrum of the visible, the IR and the UV, and a substrate transparent to VIS light, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture container, particularly a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel that are used in optical microscopy.
Como el cubreobjetos, portamuestras o recipiente de cultivo celular de la presente invención refleja total o parcialmente y de forma selectiva luz de longitudes de onda entre 350 y 800, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del visible, del IR y del UV, dicho recubrimiento puede reflejar la luz que emite el sistema de autoenfoque de un microscopio óptico, por lo que se corrige la estabilidad y nitidez de la imagen enfocada automáticamente mediante un sistema autoenfoque en un microscopio óptico.As the coverslip, sample holder or cell culture vessel of the present invention reflects light or totally and selectively light of wavelengths between 350 and 800, corresponding to the regions of the electromagnetic spectrum of the visible, IR and UV, said coating it can reflect the light emitted by the auto-focusing system of an optical microscope, so the stability and sharpness of the automatically focused image is corrected by means of an auto-focusing system in an optical microscope.
Cabe señalar que esta mejora de la nitidez, la estabilidad y la calidad de la imagen se obtiene también cuando se utilizan objetivos de aceite de inmersión. It should be noted that this improvement in sharpness, stability and image quality is also obtained when immersion oil lenses are used.
El cubreobjetos de la presente invención refleja luz UV, es decir, bloquea el paso de la luz UV a su través. Este hecho le confiere una ventaja a la hora de analizar muestras biológicas que se deterioran bajo luz UV.The coverslip of the present invention reflects UV light, that is, it blocks the passage of UV light therethrough. This fact gives it an advantage when analyzing biological samples that deteriorate under UV light.
El uso de un material que además es capaz de transmitir la fluorescencia de una muestra biológica, por ejemplo, una muestra de tejido humano, para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular tiene especial interés en microscopia óptica de fluorescencia.The use of a material that is also capable of transmitting the fluorescence of a biological sample, for example, a sample of human tissue, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel is of special interest in fluorescence optical microscopy .
Por tanto, el primer aspecto de la presente invención se refiere al uso (a partir de aquí el uso de la invención) de un material que comprende un sustrato y un recubrimiento caracterizado por queTherefore, the first aspect of the present invention relates to the use (hereinafter the use of the invention) of a material comprising a substrate and a coating characterized in that
• dicho sustrato es transparente a la luz visible,• said substrate is transparent to visible light,
• el índice de refracción del material de dicho recubrimiento es mayor que el índice de refracción del material de dicho sustrato,• the refractive index of the material of said coating is greater than the refractive index of the material of said substrate,
• dicho recubrimiento está depositado sobre al menos una cara del sustrato,• said coating is deposited on at least one side of the substrate,
• dicho recubrimiento tiene un espesor inferior a 1 pm, y• said coating has a thickness less than 1 pm, and
• dicho recubrimiento es capaz de reflejar total o parcialmente y de forma selectiva, luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del visible, del IR y del UV,• said coating is capable of totally or partially and selectively reflecting light of wavelengths between 350 nm and 800 nm, corresponding to the electromagnetic spectrum regions of the visible, IR and UV,
para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular.for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel.
En la presente invención se entiende por “recipiente de cultivo celular” como aquel recipiente en los que se puede preparar un cultivo celular. Ejemplos de dichos recipientes son una placa Petri, o una placa de pocillos múltiples. In the present invention, "cell culture vessel" is understood as that vessel in which a cell culture can be prepared. Examples of such containers are a Petri dish, or a multiwell plate.
En una realización preferida de la presente invención, el recubrimiento está depositado sobre ambas caras del sustrato. De este modo, si una cara se estropea o se ensucia, se podría utilizar la otra.In a preferred embodiment of the present invention, the coating is deposited on both sides of the substrate. In this way, if one face is damaged or dirty, the other could be used.
En otra realización preferida de la invención, el recubrimiento es una lámina delgada de óxido de tantalio de espesor de entre 25 nm y 200 nm. Más preferiblemente, la lámina delgada de óxido de tantalio tiene un espesor de entre 75 nm y 125 nm.In another preferred embodiment of the invention, the coating is a thin sheet of tantalum oxide of thickness between 25 nm and 200 nm. More preferably, the thin sheet of tantalum oxide has a thickness between 75 nm and 125 nm.
En la presente invención se entiende por "sustrato transparente a la luz visible” como aquel sustrato formado por un material capaz de transmitir la luz correspondiente a un rango de longitudes de onda del espectro electromagnético de entre 350 nm y 800 nm.In the present invention, "visible light transparent substrate" is understood as that substrate formed by a material capable of transmitting light corresponding to a range of wavelengths of the electromagnetic spectrum between 350 nm and 800 nm.
En otra realización preferida, el soporte transparente se selecciona de entre un vidrio, cuarzo o una composición polimérica y un copolímero.In another preferred embodiment, the transparent support is selected from a glass, quartz or polymer composition and a copolymer.
Ejemplos de polímeros transparentes susceptibles de ser utilizados como sustrato son polidimetilsiloxano (PDMS), polimetilmetacrilato (PMMA), hidroxi-etil-metacrilato (HEMA) ó resina epoxi fotosensible negativa que comprende 8 grupos epoxi (SU8).Examples of transparent polymers capable of being used as a substrate are polydimethylsiloxane (PDMS), polymethylmethacrylate (PMMA), hydroxyethyl methacrylate (HEMA) or negative photosensitive epoxy resin comprising 8 epoxy groups (SU8).
Ejemplos de copolímeros transparentes susceptibles de ser utilizados como sustrato son copolímeros basados en estireno y polimetilpenteno (PMP).Examples of transparent copolymers capable of being used as a substrate are copolymers based on styrene and polymethylpentene (PMP).
En una realización preferida, el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular se utilizan en microscopía óptica, por lo que el recipiente de cultivo celular debe tener el tamaño adecuado para poder situarse en la zona de visualización de un microscopio óptico.In a preferred embodiment, the coverslip, the sample holder or the cell culture vessel are used in optical microscopy, so that the cell culture vessel must be sized to be able to be placed in the viewing area of an optical microscope.
En otra realización preferida, el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular reflejan la luz del sistema de autoenfoque de un microscopio óptico y dicha luz del sistema de autoenfoque incide sobre la superficie de dicho cubreobjetos, dicho portamuestras o dicho recipiente de cultivo celular, por la cara que comprende el recubrimiento.In another preferred embodiment, the coverslip, the sample holder or the cell culture container reflect the light of the auto-focusing system of an optical microscope and said light of the autofocus system impinges on the surface of said coverslip, said sample holder or said cell culture vessel , by the face comprising the coating.
El ángulo de incidencia depende de la apertura numérica del objetivo. En la presente invención, el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular refleja la luz del sistema de autoenfoque de un microscopio óptico y dicha luz del sistema de autoenfoque incide a cualquier ángulo y con cualquier objetivo sobre la superficie de dicho cubreobjetos, dicho portamuestras o dicho recipiente de cultivo celular, por la cara que comprende el recubrimiento.The angle of incidence depends on the numerical aperture of the objective. In the present invention, the coverslip, the sample holder or the cell culture vessel reflects the light of the auto-focusing system of an optical microscope and said light of the autofocus system impinges at any angle and with any objective on the surface of said coverslip, said sample holder or said cell culture container, on the face comprising the coating.
En la presente invención, se entiende por "enfocar automáticamente” al uso de un sistema de autoenfoque de un microscopio óptico que enfoca una imagen de un microscopio mediante la medida o detección de la reflexión de una luz incidente procedente de un sistema de iluminación sobre una placa que comprende a una muestra o una placa que cubre una muestra, donde la medida o detección de la luz reflejada se realiza en paralelo al sistema de iluminación.In the present invention, "automatically focus" means the use of an auto-focusing system of an optical microscope that focuses an image of a microscope by measuring or detecting the reflection of an incident light from a lighting system on a plate comprising a sample or a plate that covers a sample, where the measurement or detection of the reflected light is made in parallel to the lighting system.
El término "luz incidente del sistema de autoenfoque” se refiere a aquella luz que emite una luz LED o un sistema láser que forma parte de un sistema de enfoque automático de un microscopio óptico en el rango del espectro electromagnético correspondiente a unas longitudes de onda A de entre 350 nm y 800 nm.The term "incident light of the autofocus system" refers to that light that emits an LED light or a laser system that is part of an automatic focusing system of an optical microscope in the range of the electromagnetic spectrum corresponding to wavelengths A between 350 nm and 800 nm.
En la presente invención, concretamente en la interfaz entre el recubrimiento y el sustrato se produce un cambio de índice de refracción que también ofrece ventajas en sistemas de microscopía óptica, en concreto en microscopia de fluorescencia de reflexión interna total (en inglés, Total internal reflection fluorescence microscopy o TIRFM), en la microscopía de iluminación delgada inclinada (en inglés Highly inclined thin illumination o HILO), así como en técnicas de nanoscopía, es decir de microscopía de resolución nanométrica como el sistema por depleción del estado basal (en inglés Ground state depletion and single-molecule return o GSDIM) o Depleción de emisión por estimulación (en inglés stimulated emission depletion o STED).In the present invention, specifically at the interface between the coating and the substrate, a change in the refractive index occurs which also offers advantages in optical microscopy systems, specifically in total internal reflection fluorescence microscopy (in English, Total internal reflection). fluorescence microscopy or TIRFM), in the thinly inclined illumination microscopy (in English Highly inclined thin illumination or HILO), as well as in nanoscopy techniques, that is to say of nanometric resolution microscopy as the system for depletion of the basal state (in English Ground state depletion and single-molecule return or GSDIM) o Depletion emission by stimulation (in English stimulated emission depletion or STED).
El cambio en el índice de refracción que se produce en el interfaz entre el recubrimiento y el sustrato en la presente invención permite la optimización de la ruta lumínica en los microscopios TIRFM e HILO.The change in the refractive index that occurs at the interface between the coating and the substrate in the present invention allows the optimization of the light path in the TIRFM and HILO microscopes.
El cambio de índice de refracción que se produce en la interfaz entre el recubrimiento y el sustrato en la presente invención produce una mejora de la reflexión de la luz incidente que utilizan los microscopios de resolución nanométrica GSDIM y STED resultando en una mayor resolución.. The change in refractive index that occurs at the interface between the coating and the substrate in the present invention results in an improvement in the reflection of the incident light using the nanometer resolution microscopes GSDIM and STED resulting in a higher resolution.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un material (a partir de aquí el material de la invención) que comprende un recubrimiento formado por una lámina delgada de óxido de tantalio de espesor de entre 25 nm y 200 nm y un sustrato transparente a la luz visible, donde el recubrimiento está depositado sobre al menos una de las caras de dicho sustrato.Another aspect of the present invention relates to a material (hereinafter the material of the invention) comprising a coating formed by a thin sheet of tantalum oxide of thickness between 25 nm and 200 nm and a substrate transparent to the visible light, where the coating is deposited on at least one of the faces of said substrate.
En una realización preferida del material de la invención, el recubrimiento está depositado sobre ambas caras de dicho sustrato.In a preferred embodiment of the material of the invention, the coating is deposited on both sides of said substrate.
En otra realización preferida del material de la invención, la lámina delgada de óxido de tantalio del material de la invención tiene un espesor de entre 75 nm y 125 nm.In another preferred embodiment of the material of the invention, the thin sheet of tantalum oxide of the material of the invention has a thickness between 75 nm and 125 nm.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.Throughout the description and the claims the word "comprises" and its variants do not intend to exclude other technical characteristics, additives, components or steps. For those skilled in the art, other objects, advantages and characteristics of the invention will emerge partly from the description and partly from the practice of the invention. The following examples and figures are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
FIG. 1. Ejemplo de rutina de autoenfoque y esquema de microscopio equipado con sistema de enfoque de luz infrarroja. (a) Ejemplo de rutina de autoenfoque y (b) Esquema ejemplo de microscopio equipado con sistema de enfoque por luz infrarroja. FIG. 1. Example of auto-focus routine and microscope scheme equipped with infrared light focusing system. (a) Example of autofocus routine and (b) Schematic example of a microscope equipped with an infrared light focusing system.
FIG. 2. Sección transversal de las muestras 1 a 5 obtenida por reflexión óptica en un microscopio confocal. FIG. 2. Cross section of samples 1 to 5 obtained by optical reflection in a confocal microscope.
FIG. 3. Imágenes de reflexión de la luz con o sin el empleo del recubrimiento en objetivos secos y de inmersión. FIG. 3. Images of reflection of light with or without the use of the coating in dry and immersion objectives.
FIG. 4. Imágenes adquiridas con un objetivo de 20X de inmersión en aceite para 3 marcadores (azul verde y rojo) que emiten a lo largo del visible. FIG. 4. Images acquired with a 20X objective of immersion in oil for 3 markers (blue green and red) that emit along the visible.
FIG. 5. Curva de transmisión de luz de un recubrimiento diseñado para reflejar la radiación ultravioleta FIG. 5. Light transmission curve of a coating designed to reflect ultraviolet radiation
EJEMPLOSEXAMPLES
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la efectividad del producto de la invención.The invention will now be illustrated by means of tests carried out by the inventors, which highlights the effectiveness of the product of the invention.
La FIG. 1a muestra un ejemplo de rutina de autoenfoque, donde el sistema de autoenfoque comprende los siguientes elementos:FIG. 1a shows an example of an autofocus routine, wherein the autofocus system comprises the following elements:
(a) Situación del objetivo con la muestra enfocada(a) Objective situation with the focused sample
1 Plano de foco1 Focus plane
2 Objetivo2 Objective
3 Distancia del cubreobjetos al plano de foco3 Distance from the coverslip to the focus plane
(b) Perdida del plano de enfoque(b) Loss of focus plane
1 Posición de foco (desenfocada)1 Focus position (out of focus)
2 Cubreobjetos2 Coverslips
(c) Corrección de posición del objetivo y enfoque(c) Correction of target position and focus
1 Laser o Led de enfoque1 Laser or Focus LED
2 Movimiento de objetivo2 Objective movement
(d) Mecanismo de recuperación de enfoque(d) Focus recovery mechanism
1 Muestra1 Sample
2 Distancia del cubreobjetos al plano de foco2 Distance from the coverslip to the focus plane
La FIG. 1b muestra un esquema ejemplo de microscopio equipado con sistema de enfoque por luz infrarroja que comprende los siguientes elementos.FIG. 1b shows an example scheme of a microscope equipped with an infrared light focusing system comprising the following elements.
1 Medio de montaje1 Mounting medium
2 Muestra2 Sample
3 Interfaz entre muestra y cubreobjetos3 Interface between sample and coverslip
4 Cubreobjetos 4 Coverslips
5 Medio de inmersión (aceite, agua o aire)5 Immersion medium (oil, water or air)
6 Objetivo6 Objective
7 Sistema de autoenfoque7 Autofocus system
8 Luz infrarroja8 Infrared light
9 Led o láser9 Led or laser
10 Cámara ccd en línea10 Camera ccd online
11 Cámara del Microscopio para toma de imagen11 Microscope camera for shooting
Las muestras están compuestas por placas de vidrio (portaobjetos) recubiertas con óxido de tantalio y cuyo índice de refracción está alrededor de 2 y es transparente en una amplia región del espectro visible. El recubrimiento es una película delgada depositada por pulverización catódica. Cada muestra tiene un espesor diferente.The samples are composed of glass plates (slides) coated with tantalum oxide and whose refractive index is around 2 and is transparent over a wide region of the visible spectrum. The coating is a thin film deposited by sputtering. Each sample has a different thickness.
Se han realizado 5 deposiciones sobre 5 placas de vidrio con 5 espesores diferentes, que son 100 nm (1), 75 nm (2), 50 nm (3), 25 nm (4) y 200 nm (5), para ilustrar el efecto del espesor del recubrimiento sobre la nitidez de la imagen observada por microscopía óptica.5 stools have been made on 5 glass plates with 5 different thicknesses, which are 100 nm (1), 75 nm (2), 50 nm (3), 25 nm (4) and 200 nm (5), to illustrate the effect of the thickness of the coating on the sharpness of the image observed by optical microscopy.
Se han realizado medidas de transmisión óptica en un microscopio confocal de cada una de las muestras de 1 a 5 preparadas. Las imágenes 1 a 5 corresponden a los espesores 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm y 200 nm, respectivamente. La imagen 0 corresponde a una placa de vidrio sin recubrimiento.Optical transmission measurements have been made in a confocal microscope of each of the samples from 1 to 5 prepared. Images 1 to 5 correspond to the thicknesses 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm and 200 nm, respectively. Image 0 corresponds to an uncoated glass plate.
La FIG. 2 muestra a sección transversal de las muestras 1 a 5. La FIG. 2a corresponde al reflejo de la luz en 488 nm y la FIG. 2b en 633 nm en cada una de las dos caras.FIG. 2 shows the cross section of samples 1 to 5. FIG. 2a corresponds to the reflection of light at 488 nm and FIG. 2b at 633 nm on each of the two faces.
En las muestras de 1 a 5 se obtuvo una mejora del enfoque automático independientemente de la magnificación del objetivo utilizado con o sin aceite de inmersión.In the samples from 1 to 5 an improvement of the autofocus was obtained regardless of the magnification of the lens used with or without immersion oil.
En general es deseable que la luz de color verde, típica de la fluorescencia, se refleje con poca intensidad, por lo que en este caso el mejor espesor del recubrimiento corresponde al caso numero 1 (100 nm de espesor). In general it is desirable that the green light, typical of fluorescence, be reflected with little intensity, so in this case the best coating thickness corresponds to case number 1 (100 nm thickness).
La FIG. 3 muestra imágenes de reflexión de la luz con o sin el empleo del recubrimiento en objetivos secos y de inmersión, en ambos casos se produce un aumento claro de dicha reflexión.FIG. 3 shows images of light reflection with or without the use of the coating in dry and immersion objectives, in both cases there is a clear increase in said reflection.
La FIG. 4 muestra imágenes adquiridas con un objetivo de 20X de inmersión en aceite para 3 marcadores (azul verde y rojo) que emiten a lo largo del visible. Se observa una mejora de la calidad de imagen gracias a la mejora de autoenfoque.FIG. 4 shows images acquired with a 20X objective of immersion in oil for 3 markers (blue green and red) that emit along the visible. An improvement of the image quality is observed thanks to the improvement of autofocus.
La FIG. 5 muestra la curva de transmisión de luz diseñado para reflejar la radiación ultravioleta. En la FIG. 5 se observa cómo se bloquea el paso de la luz ultravioleta. FIG. 5 shows the light transmission curve designed to reflect ultraviolet radiation. In FIG. 5 it is observed how the passage of ultraviolet light is blocked.
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2666712 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20190328 |
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| FA2A | Application withdrawn |
Effective date: 20190906 |