ES2562807T3 - Monoterpenos poliméricos para tratar la función neurológica alterada - Google Patents

Monoterpenos poliméricos para tratar la función neurológica alterada Download PDF

Info

Publication number
ES2562807T3
ES2562807T3 ES10826225.4T ES10826225T ES2562807T3 ES 2562807 T3 ES2562807 T3 ES 2562807T3 ES 10826225 T ES10826225 T ES 10826225T ES 2562807 T3 ES2562807 T3 ES 2562807T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
polymeric
monoterpene
oil
cells
pharmaceutical composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES10826225.4T
Other languages
English (en)
Inventor
Zadik Hazan
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Regenera Pharma Ltd
Original Assignee
Regenera Pharma Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regenera Pharma Ltd filed Critical Regenera Pharma Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2562807T3 publication Critical patent/ES2562807T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/745—Polymers of hydrocarbons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/01—Hydrocarbons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/01—Hydrocarbons
    • A61K31/015—Hydrocarbons carbocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/08—Mydriatics or cycloplegics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Una composición farmacéutica para su uso terapéutico en el tratamiento de la función neurológica alterada, en la que la composición farmacéutica comprende al menos una forma polimérica de un monoterpeno, en la que el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, α-pineno, β-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y en la que la composición está desprovista sustancialmente de la forma monomérica correspondiente de dicho monoterpeno.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
DESCRIPCION
Monoterpenos polimericos para tratar la funcion neurologica alterada.
CAMPO DE LA INVENClON
La invencion se refiere a usos terapeuticos de formas polimericas de los compuestos de monoterpeno alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, es decir, a una composicion que comprende formas polimericas aisladas de monoterpenos en un vehfculo adecuado para su uso en el tratamiento de la funcion neurologica alterada.
ANTECEDENTES DE LA INVENClON
Se han aislado diversos monoterpenos a partir de fuentes vegetales y/o se han sintetizado qufmicamente. Se han descrito usos de monoterpenos en productos alimenticios, perfumerfa, productos higienicos y agroqufmicos.
La Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2004/052922 se refiere a composiciones farmaceuticas y dieteticas, asf como a productos alimenticios funcionales utiles como coadyuvantes tanto para tratar como prevenir los procesos del envejecimiento y afecciones relacionadas: aterosclerosis, hipertension, diabetes, tumores, obesidad y sobrepeso, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, envejecimiento de la piel, alopecia, paniculopatfa (celulitis), osteoporosis, envejecimiento cerebral (Alzheimer, Parkinson, demencia senil, etc.) y perdida de memoria, estres, depresion, sfndromes menopausicos, hipertrofia prostatica benigna, etc. Dichas composiciones comprenden: a) una mezcla lipfdica rica en acidos poliinsaturados y vitaminas, junto con al menos dos componentes seleccionados; b) uno o mas terpenos seleccionados entre monoterpenos y/o sesquiterpenos; c) 1 -piperoilpiperidina en la forma pura y/o extractos o fracciones purificadas enriquecidas en pimienta negra que las contienen; o d) uno o mas policosanoles y/o acidos policosanolicos.
La Patente de Estados Unidos N° 7.780.974 desvela compuestos de saponina que comprende un resto de triterpeno, que es tfpicamente un acido acacico u oleanolico, y que comprende adicionalmente un resto de monoterpeno, tal como acido trans-2-hidroximetil-6-metil-6-hidroxi-2,7-octadienoico o trans-2,6-dimetil-6-hidroxi-2,7- octadienoico. Se desvela adicionalmente el uso de los compuestos para endoprotesis vasculares recubiertas, el uso de los mismos para la terapia de reestenosis, y la actividad de los compuestos como agentes antiinflamatorios y antiestres y para prevenir una proliferacion anormal de celulas epiteliales mamfferas.
La Patente de Estados Unidos N° 6.063.383 desvela un compuesto de supositorio farmaceutico para el tratamiento de la fiebre y la gripe que comprende aceite volatil de radix bupleuri scorzonerifolium salvaje, en el que dicho aceite volatil contiene diversos compuestos de terpeno, tales como p-terpineno, limoneno, camfeno, p-fencheno, pulegona, isoborneol, p-terpineol, linalool, a-copaeno, humuleno, a-farneseno, aromadendreno, cis-cariofileno, iso-cariofileno, entre otros.
La Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2009/0304799 desvela una vacuna de nanoemulsion para la gripe que comprende un aceite volatil, entre otros, un monoterpeno.
La Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2006/0222723 desvela una composicion de sustancias basadas en terpeno obtenidas a partir de resinas naturales, tales como resina de olfbano, resina de mirra y resina de Dacryoides klaineana. De acuerdo con la divulgacion, una fraccion de sesquiterpeno de Dacryoides puede contener oligomeros o polfmeros de sesquiterpenos y monoterpenos. La composicion es aparentemente util para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central y periferico, entre otros, ansiedad, depresion, epilepsia, esquizofrenia, enfermedad de Parkinson, esclerosis multiple, enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrofica, drogodependencia y tumor cerebral.
La Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2006/0104997 desvela una composicion farmaceutica que comprende: un monoterpeno o un derivado del mismo, uno o mas tensioactivos, y opcionalmente uno o mas codisolventes, y uso de los mismos para tratar una enfermedad neoplasica. De acuerdo con la divulgacion, el monoterpeno puede ser alcohol perflico (1-hidroximetil-4-isopropenil-1-ciclohexeno), (R)-1-metil-4-(1- metiletenil)ciclohexeno (d-limoneno), 1-metil-4-hidroxipropil-1-ciclohexeno (a-terpineol), carveol, carvona,
dihidrocarveol, dihidrocarvona, pulegona, isopulegol, mentol, mentona, terpinen-4-ol, sobrerol, oxido de limoneno, uroterpenol, perilaldehfdo, acido dihidroperflico, ester metflico del acido dihidroperilflico, p-mirceno, acido perflico- 8,9-OH, a-pineno, linalool o acido perflico, entre otros.
El documento WO 2004/066912 desvela un metodo para tratar una afeccion medica asociada a la inflamacion, que comprende administrar un compuesto, entre otros, un monoterpeno tal como citronelol, geraniol, nerol, linalool, citral, carvona, pulegona, limoneno, mirceno, a-terpineno, y-terpineno, terpinoleno, carena, terpinol, a-terpinol, a-tujeno, a- pineno y p-pineno, entre otros. De acuerdo con la divulgacion, la enfermedad puede ser una enfermedad neurologica
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
inflamatoria, entre otras, esclerosis multiple, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, miastenia gravis, neuropatfa motora y sfndrome de Guillain-Barre.
El documento WO 2002/051395 desvela un metodo para aumentar la diferenciacion de celulas neuronales mamfferas y para aliviar una enfermedad neurodegenerativa, entre otras, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica o enfermedad de Alzheimer, que comprende el uso de un gran numero de compuestos diol C3- C50, entre otros, (1R)-2-pineno-10-ol.
El documento WO 2008/070783 desvela una composicion que comprende un gingerol, y que comprende adicionalmente un aceite esencial, entre otros, felandreno, limoneno o p-pineno. Se desvela adicionalmente el uso de la composicion para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson y para la proteccion de la piel.
El documento WO 1998/000168 desvela una composicion que comprende un compuesto antihistamfnico aplicable por via topica junto con un compuesto terpenoide, entre otro, 3-careno o limoneno para el tratamiento topico de enfermedades de la piel alergicas e inflamatorias.
La Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2008/0121139 desvela un revestimiento que comprende un polfmero que comprende un terpeno y un monomero que se polimeriza con terpeno por polimerizacion de radicales libres, donde el terpeno puede comprender a-pineno, p-pineno o limoneno.
La Patente de Estados Unidos N° 5.776.361 desvela una composicion secuestrante de oxfgeno que comprende al menos un politerpeno, entre otros, poli(a-pineno), poli(dipenteno), poli(p-pineno), poli(d-limoneno) o poli(d,1- limoneno); y al menos un catalizador para su uso como un revestimiento sobre lamina o papel de aluminio, o formado en frascos u otros recipientes rfgidos.
La Patente de Estados Unidos N° 5.154.927 desvela una goma de mascar con un principio activo de liberacion controlada donde la base de la goma de mascar comprende perlas polimericas que comprenden un copolfmero de pares monomericos seleccionados entre el grupo que consiste en estireno y divinilbenceno, limoneno y divinilbenceno, carvona y divinilbenceno, eugenol y divinilbenceno, y ocimeno y divinilbenceno.
Se ha descrito el efecto del alocimeno en la cicatrizacion de la piel y heridas de la piel y musculo (Pravdich- Neminskaya y col., Bulletin of Experimental Biology and Medicine Volumen 85, Numero 1, 57-60, enero de 1978).
La Patente de Estados Unidos N° 3.979.371 desvela un polfmero de epoxido de limoneno y la preparacion del mismo, util como un adherente en una composicion adhesiva para cauchos o elastomeros.
La Patente de Estados Unidos N° 2.264.774 desvela un proceso para polimerizar un terpeno, tal como p-pineno.
La Patente de Estados Unidos N° 4.165.301 desvela una composicion de perfumerfa lfquida monofasica compuesta que comprende, entre otros, productos de dimerizacion de diversos terpenos, tal como de a-pineno, p-pineno, camfeno, d-limoneno o de turpentina.
La Patente de Estados Unidos N° 6.265.478 desvela un material resinoso polimerico que comprende unidades obtenidas a partir de limoneno, y uso del mismo en una llanta neumatica.
Se han desvelado polfmeros lfquidos-cristalinos con una estructura de limoneno-co-metil metacrilato (Mishra y col., J Appl Polym Sci 102: 4595-4600, 2006).
Se ha desvelado la sfntesis de polfmeros de p-pineno y a-felandreno a traves de polimerizacion cationica (Green Chem. 2006, vol. 8, pags. 878-882).
La Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2009/0209720 desvela un polfmero de pineno que tiene un peso molecular medio en peso de 90.000 a 1.000.000, obtenido polimerizando p-pineno en presencia de un compuesto de vinilo bifuncional.
La Patente de Estados Unidos N° 4.694.047 describe poli(alocimeno) halogenado y uso del mismo en revestimientos y muestra material de liberacion para pesticidas.
La tecnica anterior no contiene ninguna ensenanza o sugerencia de los usos terapeuticos para monoterpenos oligomericos o polimericos ya sean los obtenidos a partir de plantas u obtenidos por sfntesis qufmica, como principios activos en una composicion farmaceutica o en una aplicacion terapeutico para tratar afecciones metabolicas neurologicas.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
RESUMEN DE LA INVENCION
El alcance de la presente invencion se define por las reivindicaciones adjuntas.
La presente invencion se basa en parte en el descubrimiento inesperado de que las formas polimericas de los compuestos de monoterpeno cfclicos y acfclicos alocimeno, limoneno, a-pineno (tambien representado en el presente documento como alfa-pineno), p-pineno (tambien representado en el presente documento como beta- pineno), acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, muestran actividades biologicas beneficiosas que pueden aprovecharse para una diversidad de aplicaciones terapeuticas. Mas especfficamente, se descubrio que las formas polimericas producidas sinteticamente de cada uno de estos monoterpenos tenfan una potente actividad en la induccion de la regeneracion o diferenciacion de una diversidad de tipos celulares, incluyendo celulas neuronales, endoteliales y epidermicas, incluyendo las de linajes ectodermicos, mesodermicos y endodermicos.
Por lo tanto, se desvela por primera vez que las formas polimericas de estos monoterpenos especfficos pueden emplearse como un principio activo en composiciones farmaceuticas para tratar trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, asf como para inducir la regeneracion tisular, por ejemplo para tratar trastornos cutaneos, incluyendo heridas cronicas. Ademas, los inventores de la presente invencion han demostrado que dichos polfmeros que tienen grados de polimerizacion en el intervalo de aproximadamente 6 a aproximadamente 200, muestran una actividad superior sobre los monoterpenos correspondientes en forma monomerica, los ultimos de los cuales no pudieron mostrar las actividades atribuidas a los compuestos objeto desvelados en el presente documento.
Las ensenanzas de la presente invencion se han ilustrado con monoterpenos polimericos sinteticos sintetizados a partir de monomeros de limoneno, pineno, alocimeno y acetato de geranilo. Ademas, las ensenanzas de la presente invencion son particularmente sorprendentes e inesperadas sobre la tecnica anterior, ensenando esta ultima algunos usos terapeuticos de los monomeros de monoterpeno, pero no de polfmeros.
Sin desear quedar ligando a teorfa o mecanismo de accion alguno, la actividad de los monoterpenos polimericos en la induccion de la diferenciacion de celulas neuronales, como se desvela en el presente documento, hace util la presente invencion para volver a formar conexiones inter-neuronales y superar una comunicacion inter-neuronal defectuosa en el cerebro y el tejido neural afectados por patologfas asociadas a una formacion sinaptica inadecuada. Esta patologfa es la base de muchas patologfas del sistema nervioso, incluyendo, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer e ictus, que pueden beneficiarse de los efectos regeneradores y troficos de los compuestos.
Ademas, la invencion puede usarse para revertir los efectos adversos de diversos farmacos que actuan en el sistema nervioso, tales como anestesicos. Los polfmeros proporcionados son utiles adicionalmente para promover la cicatrizacion de heridas y el rejuvenecimiento de un gran numero de celulas y tejidos.
Como se usa en el presente documento "monoterpenos polimericos" incluyen formas polimericas de monoterpenos que tienen un grado de polimerizacion de al menos 6. Los monoterpenos polimericos incluyen los formados a partir de alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, e incluyen adicionalmente homopolfmeros de los mismos, asf como heteropolfmeros de los mismos.
Se entendera explfcitamente que el uso de formas polimericas de mirceno no se incluye dentro del alcance de la presente invencion.
De acuerdo con un primer aspecto, la presente invencion proporciona una composicion que comprende al menos una forma polimerica de un monoterpeno, para su uso en el tratamiento de la funcion neurologica alterada, donde el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno; y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
Ademas, se describe en el presente documento una composicion que comprende al menos una forma polimerica de un monoterpeno, para su uso en el tratamiento de un trastorno cutaneo o del cuero cabelludo donde el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno; y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
De acuerdo con otro aspecto mas, la invencion proporciona una composicion que comprende al menos una forma polimerica de un monoterpeno para su uso en la induccion de un proceso regenerativo, donde el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno; y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En realizaciones particulares, la composicion comprende un monoterpeno polimerico seleccionado el grupo que
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
consiste en alocimeno polimerico, limoneno polimerico, a-pineno polimerico, p-pineno polimerico, acetato de geranilo polimerico, 3-careno polimerico, 2-careno polimerico y combinaciones de los mismos. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En realizaciones particulares, el monoterpeno polimerico se selecciona entre alocimeno polimerico y limoneno polimerico.
En realizaciones particulares, la composicion esta desprovista sustancialmente de la forma monomerica correspondiente del monoterpeno.
En realizaciones particulares, la composicion comprende dicho monoterpeno polimerico como el unico principio activo.
En realizaciones particulares, la composicion comprende alocimeno polimerico como el unico principio activo. En realizaciones particulares, la composicion comprende limoneno polimerico como el unico principio activo.
En realizaciones particulares, la composicion consiste en un monoterpeno polimerico seleccionado el grupo que consiste en alocimeno polimerico, limoneno polimerico, a-pineno polimerico, P-pineno polimerico, acetato de geranilo polimerico, 3-careno polimerico, 2-careno polimerico y combinaciones de los mismos; y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion. En realizaciones particulares, el monoterpeno polimerico se selecciona entre alocimeno polimerico y limoneno polimerico.
En realizaciones particulares, la composicion consiste en alocimeno polimerico y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. En realizaciones particulares, la composicion consiste en limoneno polimerico y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
En realizaciones particulares, la composicion esta desprovista sustancialmente de un gingerol. En realizaciones particulares, la composicion esta desprovista sustancialmente de un monoterpeno en forma monomerica, donde dicho monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, a-felandreno, y-terpineno, 3-careno, 2-careno y combinaciones de los mismos. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En realizaciones particulares, un uso que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que consiste en al menos uno de: alocimeno polimerico, limoneno polimerico, a-pineno polimerico, p- pineno polimerico, acetato de geranilo polimerico, 3-careno polimerico o 2-careno polimerico; y un vehfculo farmaceuticamente aceptable; donde la composicion esta desprovista sustancialmente de la forma monomerica correspondiente de dicho monoterpeno.
En realizaciones particulares, la composicion comprende menos del 1 % (p/p) de la forma monomerica
correspondiente de dicho monoterpeno.
En realizaciones particulares, la composicion comprende menos del 0,5 % (p/p) de la forma monomerica
correspondiente de dicho monoterpeno.
En realizaciones particulares, la composicion comprende menos del 0,2 % (p/p) de la forma monomerica
correspondiente de dicho monoterpeno.
En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico esta presente en la composicion en una cantidad de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 12 % (p/p), en base al peso total de la composicion.
En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene un grado de polimerizacion en el intervalo de al menos aproximadamente 6 a aproximadamente 200. En una realizacion particular, el grado de polimerizacion esta en el intervalo de aproximadamente 6 a aproximadamente 50. En una realizacion particular, el grado de polimerizacion es al menos aproximadamente 25. En una realizacion particular, el grado de polimerizacion esta en el intervalo de aproximadamente 30 a aproximadamente 100, o en el intervalo de aproximadamente 50 a aproximadamente 150.
En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero de al menos aproximadamente 1000. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero de hasta aproximadamente 25.000.
En una realizacion particular, el peso molecular medio en numero es al menos aproximadamente 3000. En una realizacion particular, el peso molecular medio en numero es al menos aproximadamente 5000. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero en el intervalo de al menos aproximadamente 1000 a aproximadamente 25.000. En realizaciones particulares, el peso molecular medio en
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
numero esta en un intervalo seleccionado entre el grupo que consiste en: al menos aproximadamente de 1000 a aproximadamente 5000; al menos aproximadamente de 1000 a aproximadamente 15.000; de aproximadamente 5000 a aproximadamente 15.000; de aproximadamente 5000 a aproximadamente 20.000; de aproximadamente 15.000 a aproximadamente 25.000; y combinaciones de los mismos. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene una distribucion molecular menor de 5.
En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico es un producto de una sfntesis qufmica. En una realizacion particular, la forma polimerica de dicho monoterpeno se afsla de una fraccion botanica. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico esta presente en una fraccion botanica aislada.
En otra realizacion, el monoterpeno polimerico es un producto de una sfntesis qufmica y tiene un peso molecular medio en numero en el intervalo de aproximadamente 1000 a aproximadamente 25.000. En realizaciones particulares, el peso molecular medio en numero esta en un intervalo seleccionado entre el grupo que consiste en: al menos aproximadamente de 1000 a aproximadamente 5000; al menos aproximadamente de 1000 a aproximadamente 15.000; aproximadamente de 5000 a aproximadamente 15.000; aproximadamente de 5000 a aproximadamente 20.000; aproximadamente de 15.000 a aproximadamente 25.000; y combinaciones de los mismos. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En una realizacion particular, la sfntesis qufmica comprende el uso de un monoterpeno monomerico como un sustrato, donde el monoterpeno monomerico se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a- pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno. En una realizacion particular, el sustrato de monoterpeno monomerico se obtiene a partir de una especie vegetal.
En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico es un producto de una sfntesis qufmica y esta desprovisto sustancialmente de formas monomericas del mismo monoterpeno. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico es un producto de una sfntesis qufmica y la composicion esta desprovista sustancialmente de formas monomerica y oligomericas del mismo sustrato de monoterpeno.
En una realizacion particular, la sfntesis qufmica se selecciona entre el grupo que consiste en una reaccion de polimerizacion anionica, una reaccion de polimerizacion cationica, una polimerizacion radicalaria, una polimerizacion catalizada con metal, una polimerizacion catalizada con metal de transicion y una reaccion de fotopolimerizacion.
En una realizacion particular, el vehfculo farmaceuticamente aceptable comprende al menos un aceite. En una realizacion particular, el al menos un aceite se selecciona entre el grupo que consiste en un aceite mineral, un aceite vegetal, y combinaciones de los mismos. En una realizacion particular, el aceite vegetal se selecciona entre el grupo que consiste en aceite de almendras, aceite de colza, aceite de coco, aceite de mafz, aceite de semilla de algodon, aceite de semilla de uva, aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de azafran, aceite se sesamo, aceite de soja, y combinaciones de los mismos. En una realizacion particular, el aceite mineral es aceite mineral ligero.
En realizaciones particulares, la composicion farmaceutica esta en una forma seleccionada entre el grupo que consiste en una capsula, un comprimido, un supositorio, una suspension y una pomada. En realizaciones particulares, la composicion farmaceutica compre al menos uno de un liposoma, una pelfcula, una emulsion, una microemulsion, una microcapsula y un cemento.
En diversas realizaciones, la etapa de administracion se realiza por una ruta seleccionada entre el grupo que consiste en topica, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, subcutanea, intradermica, vaginal, rectal, intracraneal, intranasal, intraocular y auricular. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En diversas realizaciones, la etapa de administracion se realiza por la ruta oral. En diversas realizaciones, la etapa de administracion se realiza por una ruta que es distinta de una ruta oral o enteral.
En realizaciones particulares, la etapa de administracion comprende poner en contacto celulas con la composicion, donde las celulas son de un tipo particular, de un linaje particular, o estan en una fase particular de diferenciacion.
En realizaciones particulares, las celulas se seleccionan entre el grupo que consiste en celulas neurales, celulas neuronales, celulas endoteliales, celulas epiteliales, osteoblastos y condrocitos. En realizaciones particulares, las celulas son de un linaje seleccionado entre el grupo que consiste en linajes ectodermicos, mesodermicos y entodermicos. En diversas realizaciones, la etapa de poner en contacto las celulas se realiza in vivo, ex vivo o in vitro.
En una realizacion particular, las celulas se ponen en contacto ex vivo o in vitro con la composicion y, por lo tanto, se implantan o se trasplantan en el sujeto. En una realizacion particular, las celulas para implante o trasplante sonde un
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
organo o tejido. En una realizacion particular, las celulas son aquellas que secretan factores solubles.
En realizaciones particulares, la etapa de administracion comprende extraer celulas o fluidos corporales del sujeto o animal, poner en contacto las celulas o fluidos corporales con la composicion, y devolver dichas celulas o fluidos corporales al sujeto o animal.
En una realizacion particular, la funcion neurologica alterada comprende un descenso de una funcion seleccionada entre el grupo que consiste en una funcion cognitiva, funcion sensorial, funcion motora y combinaciones de las mismas. En realizaciones particulares, la funcion neurologica alterada se asocia a una afeccion o enfermedad seleccionada entre el grupo que consiste en demencia vascular, demencia senil, enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrofica (ALS), enfermedad de Huntington, esclerosis multiple y enfermedad de Parkinson. Cada posibilidad es una realizacion separada de la invencion.
En una realizacion particular, la funcion neurologica alterada se debe a una exposicion a un farmaco, tal como un farmaco anestesico.
Los trastornos cutaneos y del cuero cabelludo incluyen trastornos de piel, cuero cabelludo y apendices pilosos, incluyendo por ejemplo, unas y folfculos pilosos. El trastorno cutaneo o del cuero cabelludo puede seleccionarse entre el grupo que consiste en alopecia, eccema, psoriasis, acne, queratosis seborreica y seborrea. El trastorno cutaneo puede ser una herida de la piel, incluyendo, por ejemplo, una ulcera venosa de la pierna, una ulcera por presion, una ulcera del pie en diabeticos, una quemadura, una herida por amputacion, una ulcera de decubito (ulcera de cama), un injerto de donante de espesor parcial, un sitio de donante de injerto de piel, un sitio de implante de dispositivo medico, una herida por mordedura, una herida por congelacion, un herida por puncion, una herida de metralla, una dermoabrasion, una herida por infeccion y una herida quirurgica. En una realizacion particular, la fuente de la herida se selecciona entre el grupo que consiste en una infeccion; exposicion a radiacion ionizante; exposicion a laser, y exposicion a un agente qufmico.
Los usos desvelados en el presente documento, la etapa de administracion o poner en contacto las celulas puede comprender el uso de un artfculo de fabricacion, donde la composicion se dispone en o dentro del artfculo de fabricacion. En una realizacion particular, la composicion se dispone en el artfculo de fabricacion en forma de un revestimiento. En una realizacion particular, el artfculo de fabricacion comprende un recipiente, donde la composicion se dispone dentro del recipiente. En una realizacion particular, el artfculo de fabricacion se selecciona entre el grupo que consiste en un artfculo de tela, un panal, un vendaje para heridas, un dispositivo medico, una aguja o una pluralidad de agujas, una microaguja o una pluralidad de microagujas, un dispositivo de inyeccion y un dispensador por pulverizacion. En una realizacion particular, el artfculo de fabricacion comprende una pluralidad de microagujas.
En realizaciones particulares, el dispositivo medico se selecciona entre el grupo que consiste en una protesis, un organo artificial o componente del mismo, una valvula, un cateter, un tubo, una endoprotesis vascular, una membrana artificial, un marcapasos, un sensor, un endoscopio, un dispositivo de imagen, una bomba, un cable y un implante. En una realizacion particular, el implante se selecciona entre el grupo que consiste en un implante cardiaco, un implante coclear, un implante corneal, un implante craneal, un implante dental, un implante maxilofacial, un implante de organo, un implante ortopedico, un implante vascular, un implante intraarticular y un implante de mama.
En una realizacion particular, la composicion se administra/se pone en contacto antes de o tras la implantacion de un dispositivo medico en el sujeto. En una realizacion particular, el dispositivo medico es un implante de organo. En una realizacion particular, el implante de organo comprende celulas autologas del sujeto. En una realizacion particular, el metodo se realiza antes de o tras el trasplante de las celulas, el tejido, o un organo en el sujeto.
En una realizacion particular, la etapa de administrar o poner en contacto comprende un medio seleccionado entre el grupo que consiste en electroporacion, sonicacion, radiofrecuencia, rociado a presion, y combinaciones de los mismos.
En una realizacion particular, la etapa de puesta en contacto comprende establecer contacto entre el lfquido intersticial y la composicion. En una realizacion particular, la etapa de establecer contacto entre el lfquido intersticial y la composicion comprende perforar y/o desgarrar la dermis con una aguja, una microaguja, o un aparato que comprende una pluralidad de agujas o microagujas.
En una realizacion particular, el sujeto es un ser humano. En una realizacion particular, el sujeto se selecciona entre un mamffero no humano, un pez o u ave.
De acuerdo con otro aspecto, la presente invencion proporciona el uso de una forma polimerica de un monoterpeno, donde el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, para la preparacion de un medicamento para tratar la funcion neurologica alterada.
Se describe adicionalmente el uso de una forma polimerica de un monoterpeno, donde el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, para la preparacion de un medicamento para tratar un trastorno cutaneo o del cuero cabelludo.
Tambien se reivindican o se describen en el presente documento formas mas cortas y mas largas de monoterpenos polimericos de los monoterpenos descritos, incluyendo, formas sinteticas y semi-sinteticas, incluyendo copolfmeros, y derivados sustituidos con diversas funcionalidades, y conjugados con moleculas adicionales, como se conocen en la tecnica, con la condicion de que estas variante y modificaciones conserven la capacidad terapeutica de los compuestos de material polimerico en el contexto de los metodos de la presente invencion.
Otros objetos, caracterfsticas y ventajas de la presente invencion se haran evidentes a partir de la siguiente descripcion y los dibujos.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra formas monomericas de monoterpenos cfclicos y acfclicos que pueden usarse para producir oligomeros y polfmeros.
La figura 2 muestra la diferenciacion neuronal en las celulas ARPE-19 de RPE inducida por limoneno polimerico. La figura 2A muestra celulas que se trataron con limoneno polimerico. La figura 2B muestra celulas que se trataron con vehfculo (aceite de semilla de algodon).
La figura 3 muestra la diferenciacion neuronal en las celulas ARPE-19 de RPE inducida por alocimeno polimerico. La figura 3A muestra celulas que se trataron con alocimeno polimerico. La figura 3B muestra celulas que se trataron con vehfculo (aceite de semilla de algodon).
La figura 4 muestra una comparacion de los efectos de alocimeno polimerico y alocimeno monomerico sobre las celulas ARPE-19 de RPE. Las celulas se trataron con alocimeno polimerico (figura 4A), alocimeno monomerico (figura 4B), o vehfculo de aceite de semilla de algodon (figura 4C).
La figura 5 es una cromatograffa de exclusion por tamano del alocimeno polimerico sintetizado qufmicamente, que muestra picos en el tiempo de retencion (TR) de 7,841 y 7,917 min.
La figura 6 es una cromatograffa de exclusion por tamano del limoneno polimerico sintetizado qufmicamente, que muestra picos en TR de 8,493, 8,703 y 9,271 min.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION
El inventor de la presente invencion ha descubierto sorprendentemente que las formas polimericas qufmicamente sintetizadas de monoterpenos especfficos de diversos intervalos de peso molecular, tienen actividad en la mejora de la funcion neurologica alterada, promoviendo la diferenciacion de celulas neurales; la cicatrizacion de heridas y la mejora de diversas afecciones de la piel.
En particular, se desvela en el presente documento por primera vez que, debido a sus diversas actividades en la estimulacion y la induccion de la regeneracion celular, pueden emplearse monoterpenos polimericos, conocidos previamente unicamente para su uso en aplicaciones industriales, para su uso terapeutico en seres humanos. Sorprendentemente, los compuestos polimericos de la invencion son ventajosos sobre los monoterpenos monomericos correspondientes, ya que estos ultimos no muestran las actividades de estimulacion celular desveladas en el presente documento.
Ventajosamente, las composiciones pueden usarse en el tratamiento de la funcion neurologica alterada y afecciones cutaneas y del cuero cabelludo. Tras el contacto con las celulas de sujetos tanto humanos como no humanos, la composicion induce la diferenciacion celular en una amplia gama de tejidos, compartimentos celulares y linajes celulares, incluyendo la piel, endotelio, membranas mucosas, huesos, tendones y cartflagos. Ademas, la actividad de la diferenciacion celular de la composicion farmaceutica puede aprovecharse para promover la incorporacion in vivo de dispositivos medicos, implantes y trasplantes de organos.
Por lo tanto, se desvela en el presente documento por primera vez que las formas polimericas de alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, a-felandreno, y-terpineno, 3-careno y 2-careno, de diversos intervalos de peso molecular, tienen actividad en la induccion de la diferenciacion en celulas del epitelio pigmentado retinal. Tambien se ha descubierto que las lfneas celulares de melanoma y neuroblastoma se indujeron para diferenciar y, por lo tanto, reducir su potencial maligno. Por ejemplo, las celulas de melanoma maligno tratadas con alocimeno polimerico asumieron una morfologfa menos maligna, y el cambio observado en la diferenciacion se acompano por una produccion de melanina tfpica en el citoplasma.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Definiciones
Como se usa en el presente documento, "compuestos de terpeno" se refiere a hidrocarburos que contienen isopreno, que tienen unidades de isopreno (CH2=C(CH3)-CH=CH2) en una orientation de principio a fin. Los hidrocarburos de terpeno en general, tienen la formula molecular (C5H8)n, e incluyen hemiterpenos, (C5), monoterpenos (C10), sesquiterpenos (C15), diterpenos (C20), triterpenos (C30) y tetraterpenos (C40) que tienen respectivamente 1, 2, 3, 4, 6 y 8 unidades de isopreno. Los terpenos pueden clasificarse adicionalmente como acfclicos o cfclicos.
Los ejemplos de monoterpenos incluyen acetato de geranilo, alocimeno, limoneno y pineno.
Como se usa en el presente documento, "monoterpenos polimericos" incluyen formas polimericas de monoterpenos que tienen un grado de polimerizacion de al menos 6. Los monoterpenos polimericos para su uso en la invention incluyen los formados a partir de alocimeno, limoneno, a-pineno polimerico, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, cada uno por si mismo o en diversas combinaciones. Por consiguiente, los monoterpenos polimericos incluyen tanto homopolfmeros como heteropolfmeros (tambien conocidos como copolfmeros). Tambien se incluyen isomeros geometricos, isomeros opticos y diaestereoisomeros de estos compuestos polimericos.
El polfmero de monoterpeno puede obtenerse a partir de una fuente vegetal o es un producto de reaction sintetica qufmica. El polfmero de monoterpeno tiene preferiblemente un peso molecular definido o un intervalo de peso molecular.
Como se usa en el presente documento, "homopolimero" se refiere a un polfmero que se produce a partir de un unico tipo de monomero. Por ejemplo, el limoneno polimerico es un homopolimero cuando se produce unicamente a partir de monomeros de limoneno, por ejemplo R+ limoneno. Un homopolimero tambien puede ser una mezcla de polfmeros producidos a partir del mismo monomero, pero que tienen un grado variable de polimerizacion, es decir, de longitud de cadena. Por consiguiente, el limoneno polimerico, por ejemplo, puede incluir una gama de compuestos de diferentes longitudes de cadena y, por consiguiente, diferentes pesos moleculares. Ademas, un homopolimero puede contener monomeros que tienen diferentes configuraciones isomericas, por ejemplo, isomeros p y a.
Los homopolfmeros para su uso en la invencion incluyen alocimeno polimerico, limoneno polimerico, a-pineno polimerico, p-pineno polimerico, acetato de geranilo polimerico, 3-careno polimerico y 2-careno polimerico.
Como se usa en el presente documento, "heteropolfmero" y "copolimero" se refieren a un polfmero producido a partir de mas de un tipo de monomero. Por lo tanto, por ejemplo, un copolimero de limoneno se produce a partir de monomeros de limoneno, ademas de un tipo heterologo de monomero que no es limoneno, por ejemplo, pineno. Los copolfmeros incluyen copolfmeros alternados, copolfmeros periodicos, copolfmeros aleatorios, copolfmeros de bloque, y copolfmeros estadfsticos, como se conoce en la tecnica.
Como se usa en el presente documento, el termino "monoterpeno oligomerico" se refiere a formas oligomerizadas de monoterpenos que tienen un grado de oligomerization en el intervalo de 2 a 5. Los monoterpenos oligomericos incluyen los formados a partir de alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, a-felandreno, y- terpineno, 3-careno y 2-careno, cada uno por si mismo o en diversas combinaciones. Por consiguiente, los monoterpenos oligomericos incluyen tanto homo-oligomeros como hetero-oligomeros.
Como se usa en el presente documento, "homo-oligomero" se refiere a un oligomero que se produce a partir de unidades de un unico tipo de monomero, por ejemplo, unicamente p-pineno.
Como se usa en el presente documento, "heter-oligomero" se refiere a un oligomero que se produce a partir de diferentes tipos de monomero, por ejemplo, a partir de y-terpineno y p-pineno.
Como se usa en el presente documento, "grado de polimerizacion" se refiere al numero de monomeros o unidades monomericas que se asocian covalentemente entre si para formar un polfmero o un oligomero, por ejemplo, el numero de monomeros de limoneno en un limoneno polimerico.
Como se usa en el presente documento, "peso molecular medio en peso" se refiere al peso molecular medio de un polfmero que tiene moleculas de diferentes longitudes de cadena, como se expresa por la ecuacion:
imagen1
donde N es el numero de moleculas de peso molecular M. El peso molecular medio en peso puede determinarse,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
por ejemplo, por dispersion de luz, dispersion de neutrones de angulo reducido, dispersion de rayos X y velocidad de sedimentation.
Como se usa en el presente documento, "peso molecular medio en numero" se refiere al peso molecular medio de un polfmero que tiene moleculas de diferentes longitudes de cadena, como se expresa por la ecuacion:
M„ =
IaNM
EiiVi
donde Ni es el numero de moleculas de peso molecular M. El peso molecular medio en numero puede determinarse, por ejemplo, por cromatograffa de permeation en gel (tambien conocida como cromatograffa de exclusion de tamano) o viscometrfa.
Las expresiones "fndice de polidispersidad" y "distribution molecular" se usan en el presente documento de forma intercambiable para referirse a la relation del peso molecular medio en peso con respecto al peso molecular medio en numero.
Como se usa en el presente documento, "una forma oligomerica" en referencia a un monoterpeno se refiere a un monoterpeno oligomerico en el que las unidades monomericas son cualquiera del mismo monoterpeno o de diferentes monoterpenos, y se unen en cualquier disposition posible, y se conectan entre si a traves de cualquier enlace o grupo funcional posible.
Como se usa en el presente documento, "desprovisto sustancialmente" significa que una preparation o composition de acuerdo con la invention contiene menos del 3 % de la sustancia indicada, preferiblemente menos del 1 % y mucho mas preferiblemente menos del 0,5 %.
Como se usa en el presente documento, "desprovisto sustancialmente de la forma monomerica correspondiente" significa que una preparacion o composicion que comprende un monoterpeno oligomerico o polimerico de acuerdo con la invencion, contiene menos del 3 % de la forma monomerica del mismo monoterpeno que constituye la forma oligomerica o polimerica objeto, preferiblemente menos del 1 % y mucho mas preferiblemente menos del 0,5 %.
Como se usa en el presente documento, "cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un ingrediente farmaceutico que sustancialmente induce, promueve o da como resultado un efecto terapeutico deseado.
Como se usa en el presente documento, "vehfculo farmaceuticamente aceptable" se refiere a un diluyente o vehfculo que se usa para mejorar la administration y/o las propiedades farmacocineticas de un ingrediente farmaceutico con el que se formula, pero no tiene ningun efecto terapeutico por si mismo, ni induce ni causa ningun efecto no deseado o adverso o reaction secundaria en el sujeto.
Como se usa en el presente documento, "vehfculo hidrofobo farmaceuticamente aceptable" se refiere a un diluyente o vehfculo no polar hidrofobo en el que el monoterpeno oligomerico o polimerico de la invencion se disuelve o se suspende. En general, el vehfculo hidrofobo farmaceuticamente aceptable no interfiere con la actividad terapeutica del monoterpeno que se ha mencionado anteriormente, ni es irritante o perjudicial para el sujeto.
Como se usa en el presente documento, "diferenciacion celular" se refiere al proceso en el que una celula menos especializada se convierte en una celula mas especializada. La diferenciacion celular puede establecerse sobre la base de cambios en cualquiera de varias caracterfsticas celulares, incluyendo, pero sin limitation, tamano, forma, aspecto del organelo, potencial de membrana, actividad metabolica, y sensibilidad a senales. Puede darse un "grado" particular a un tipo de celula para describir el alcance de la diferenciacion.
Como se usa en el presente documento, "funcion neurologica alterada" se refiere a una reduction o disminucion en al menos una de la funcion sensorial, cognitiva o motora, en comparacion con un nivel previo de funcion o actividad, y/o en comparacion con individuos no alterados emparejados de acuerdo con los criterios aceptados.
Monoterpenos
Pineno (C10H16; masa mol. 136,23) es un monoterpeno bicfclico, del cual, los dos isomeros estructurales a-pineno (2,6,6,-trimetilbiciclo[3.2.1]hept-2-eno) y p-pineno (6,6,dimetil-2-metilenobiciclo[3.1.1]heptano) existen en la naturaleza. Ambas formas son constituyentes importantes de resinas de pino y muchas otras confferas, y tambien se encuentran en especies vegetales no confferas.
Biosinteticamente, tanto a-pineno como p-pineno se producen a partir de pirofosfato de geranilo, a traves de ciclacion de pirofosfato de linaloflo seguido de una perdida de un proton del equivalente carbocation.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Ambas formas de pineno estan presentes en muchos aceites esenciales, pero se obtienen en su mayorfa a parti r de turpentina, obtenida por la destilacion seca de madera u otro material botanico seco). El a-pineno obtenido en aceites de America del Norte es en gran medida dextrorrotatorio, mientras que los aceites Europeos son levorrotatorios. La mayor parte del p-pineno, independientemente de su origen, es levorrotatorio. Como ejemplos, el a-pineno y el p-pineno se encuentran en aceite de madera de cedro, aceite de naranja, aceite de piel de mandarina y en muchas fragancias.
El limoneno (C10H16; masa mol. 136,24) es un monoterpeno cfclico caracterizado por su fuerte olor cftrico. Es una molecula quiral, y las fuentes biologicas (principalmente los cftricos) producen D-limoneno ((+)-limoneno), que es el enantiomero (R) (1-metil-4-(1-metiletenil)-ciclohexeno).
El limoneno racemiza en dipenteno a 300 °C. Al calentarse con acido mineral, el limoneno isomeriza en el dieno a- terpineno conjugado.
Biosinteticamente, el limoneno se forma a partir de pirofosfato de geranilo, a traves de la ciclacion de un carbocation de nerilo o su equivalente. La etapa final implica la perdida de un proton del cation para formar el alqueno.
El alocimeno (C10H16; masa mol. 136,24) es el monoterpeno acfclico 2,6-dimetil-2,4,6-octatrieno, como se describe, por ejemplo, en Milks y col., J. Org. Chem. 1965, 30(3) 888-891. El compuesto incluye las formas estereoisomericas. 2,4,6-octatrieno, 2,6-dimetil-, (E,E)-; (4Z,6z)-2,6-dimetil-2,4,6-octatrieno; (4Z,6e)-2,6-dimetil-2,4,6-octatrieno; 2,4,6- octatrieno, 2,6-dimetil-, (e,z)- y 2,6-dimetil-octa-2,4,6-trieno, cis.
El poli(alocimeno) epoxidado y un uso del mismo como un reticulador (agente de curacion) para composiciones de revestimiento de poliester, polieter y poliuretano se describe en la Patente de Estados Unidos N° 4.690.982. El poli(alocimeno) halogenado y un uso del mismo en revestimiento como resina barrera se describe en la Patente de Estados Unidos N° 4.694.047.
El acetato de geranilo (C12H20O2; masa mol. 196,29; tambien denominado como etanoato de geranilo) es el monoterpeno acfclico, acetato de 3,7-dimetil-2,6-octadieno.
El acetato de geranilo puede aislarse a partir de diversos aceites esenciales, incluyendo, citronela de Ceilan, palmarosa, hierba de limon, grano menudo, aceite de flores de naranjo, geranio, cilandro, zanahoria y sasafras. Puede obtenerse por destilacion fraccional de aceites esenciales, o pueden prepararse semi-sinteticamente por la condensacion sencilla del terpeno natural comun geraniol con acido acetico.
Los monoterpenos cfclicos incluyen los isomeros a-felandreno (2-metil-5-(1-metiletil)-1,3-ciclohexadieno) y p- felandreno (3-metileno-6-(1-metiletil)ciclohexeno) (cada uno C10H16 y 136,24), que pueden aislarse de aceites de eucalipto y aceites balsamicos, respectivamente.
Los monoterpenos cfclicos isomericos adicionales son a-terpineno (4-metil-1-(1-metiletil)-1,3-ciclohexadieno); p- terpineno (4-metileno-1-(1-metiletil)ciclohexeno) y y-terpineno (4-metil-1-(1-metiletil)-1,4-ciclohexadieno), cada uno C10H16 y masa mol. 136,24. El a-terpineno puede aislarse de varias fuentes vegetales, incluyendo cardamomo y aceites de mejorana. El p-terpineno no tiene ninguna fuente natural conocida, pero puede prepararse sinteticamente a partir de sabinena. El y-terpineno puede aislarse de diversas fuentes vegetales.
Monoterpenos polimericos y oligomericos
Los monoterpenos oligomericos descritos en el presente documento no forman parte del alcance de la invencion.
Los monoterpenos polimericos se refieren a un compuesto polimerico, o una mezcla de polfmeros de diferente peso molecular, que se forman a partir de al menos 6 subunidades de monoterpeno monomerico. Los monoterpenos oligomericos se refieren a compuestos oligomericos, que se forman a partir de 2 a 5 subunidades de monoterpeno monomerico.
El monoterpeno oligomerico o polimerico puede ser un producto sintetico, producido por un proceso qufmico usando como sustrato una forma monomerica de un monoterpeno especffico, por ejemplo alocimeno, limoneno, a-pineno polimerico, p-pineno, acetato de geranilo, a-felandreno, y-terpineno, 3-careno o 2-careno, como se describe en el presente documento. El material de sustrato monomerico puede aislarse de una planta o producto vegetal tal como un aceite, o puede convertirse qufmica o enzimaticamente a partir de un terpeno precursor, como se conoce en la tecnica.
Una fraccion aislada de material de monoterpeno oligomerico o polimerico puede obtenerse como el producto purificado de una reaccion de sfntesis qufmica, como se ilustra en los Ejemplos 1-10.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Las reacciones de sfntesis qufmica adecuadas incluyen, por ejemplo, una reaccion de polimerizacion anionica, una reaccion de polimerizacion cationica, una polimerizacion radicalaria, una polimerizacion catalizada con metal, una polimerizacion catalizada con metal de transicion y una reaccion de fotopolimerizacion.
En una realizacion particular, la sfntesis qufmica es una reaccion de polimerizacion anionica. La reaccion de polimerizacion anionica puede comprender el uso de butil litio como catalizador.
En una realizacion particular, la sfntesis qufmica es una reaccion de polimerizacion cationica. La reaccion de polimerizacion cationica puede comprender el uso de un acido de Lewis como catalizador. Los acidos de Lewis adecuados incluyen cloruro de aluminio (AlCh), cloruro de bismuto (SbCh), cloruro de estano (IV) (SnCU), eterato de trifluoruro de boro (BF.Et2O), cloruro de titanio (IV) (TiCU), o cualquier combinacion de los mismos.
En una realizacion particular, la sfntesis qufmica es una polimerizacion radicalaria. La polimerizacion radicalaria puede comprender el uso de cualquier luz, calor y un iniciador radicalario como iniciador. En una realizacion particular, la polimerizacion radicalaria comprende una etapa de iniciacion en la que se usa luz como iniciador. En una realizacion particular, se usa calor como el iniciador en la etapa de iniciacion. En una realizacion particular, se usa un iniciador radicalario como inhibidor en la etapa de iniciacion. En una realizacion particular, se usan tanto luz como un iniciador radicalario como iniciadores en la etapa de iniciacion. En una realizacion particular, se usan tanto calor como un iniciador radicalario como iniciadores en la etapa de iniciacion. En una realizacion particular, cada uno de luz, calor y un iniciador radicalario se usa como iniciador en la etapa de iniciacion.
El iniciador radicalario puede ser un compuesto organico o inorganico, por ejemplo peroxido de benzoflo, 2,2'- azobisisobutironitrilo (AIBN), peroxido de hidrogeno o peroxisulfato potasico. En una realizacion particular, el iniciador radicalario es peroxido de benzoflo. En una realizacion particular, el iniciador radicalario es peroxido de benzoflo combinado con calentamiento. En una realizacion particular, el iniciador radicalario es peroxido de benzoflo combinado con calentamiento y luz. En una realizacion particular, el iniciador radicalario es peroxido de benzoflo combinado con luz.
En una realizacion particular, la sfntesis qufmica es una reaccion de polimerizacion y/o oligomerizacion catalizada con metal. La polimerizacion y/o oligomerizacion catalizada con metal puede comprender el uso de un catalizador de metal de transicion. Puede comprender adicionalmente el uso de peroxido de hidrogeno como iniciador.
En algunas realizaciones preferidas, la sfntesis qufmica es una reaccion de fotopolimerizacion que comprende el uso de una fuente de energfa para proporcionar la etapa de iniciacion. Las fuentes de energfa adecuadas incluyen luz solar, una lampara UV, una lampara de luz visible. En otra realizacion, se usa una fuente de radiacion gamma para iniciar la oligomerizacion y/o la polimerizacion. En otra realizacion, se usa una combinacion de luz y radiacion gamma como iniciador.
Los monoterpenos oligomericos o polimericos qufmicamente sintetizados, por ejemplo, pineno polimerico o alocimeno polimerico, pueden aislarse de un sustrato sin reaccionar y otros reactivos, analizarse y fraccionarse adicionalmente de acuerdo con el peso molecular usando metodos analfticos y de separacion como se conocen en la tecnica. Dichos metodos incluyen los que separan moleculas basandose en el tamano, la carga o hidrofobicidad, incluyendo, por ejemplo, cromatograffa de exclusion de tamano (SEC), cromatograffa lfquida de alto rendimiento (HPLC), cromatograffa lfquida de gases (GLC), y combinaciones de los mismos. Los metodos analfticos para determinar la estructura qufmica precisa del polfmero obtenido incluyen resonancia magnetica nuclear (por ejemplo 1RMN y 13RMN) y cromatograffa de gases-espectrometrfa de masas (GCMS). Pueden usarse los mismos metodos y enfoques para purificar y caracterizar los monoterpenos polimericos aislados de plantas.
En una realizacion preferida, una fraccion de alocimeno polimerico, que es un producto de una sfntesis qufmica, esta desprovista sustancialmente de monomeros. Tal fraccion puede usarse directamente, o purificarse adicionalmente, caracterizarse y/o fraccionarse usando medios conocidos en la tecnica. Las formas monomericas de terpenos y otras moleculas volatiles pueden eliminarse por evaporacion.
Los disolventes no polares adecuados para su uso en la separacion purificacion y analisis incluyen, por ejemplo, diclorometano, hexano, tetrahidrofurano, y combinaciones de los mismos. Para la preparacion de una composicion para uso terapeutico, los disolventes hidrofobos no polares adecuados incluyen aceites farmaceuticamente aceptables como se describe en el presente documento.
Las formas oligomericas y polimericas de los monoterpenos pueden obtenerse usando extraccion de disolvente polar, tal como con etanol y metanol. Los monoterpenos monomericos se disolveran en el disolvente polar, dejando las formas oligomericas y polimericas de forma aislada.
En una realizacion actualmente preferida, el grado de polimerizacion del monoterpeno polimerico es al menos aproximadamente 6, por ejemplo en el intervalo de aproximadamente 6 a aproximadamente 200. En una realizacion
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
particular, el grado de polimerizacion es al menos aproximadamente 25. En una realizacion particular, al material polimerico tiene un grado de polimerizacion en el intervalo de aproximadamente 6 a aproximadamente 50. Los intervalos ejemplares adecuados incluyen de aproximadamente 30 a aproximadamente 100, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 150. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero de al menos aproximadamente 1000. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero de hasta aproximadamente 25.000.
El peso molecular medio en numero del monoterpeno polimerico es preferiblemente al menos aproximadamente 3000, e incluso mas preferiblemente, el peso molecular medio en numero es al menos aproximadamente 5000. En una realizacion particular, el material polimerico tiene un peso molecular medio en numero en el intervalo de al menos aproximadamente 1000 a aproximadamente 25.000. En realizaciones particulares, el peso molecular medio en numero esta en un intervalo seleccionado entre el grupo que consiste en: al menos aproximadamente de 1000 a aproximadamente 5000; al menos aproximadamente de 1000 a aproximadamente 15.000; de aproximadamente 5000 a aproximadamente 15.000; de aproximadamente 5000 a aproximadamente 20.000; de aproximadamente 15.000 a aproximadamente 25.000; y combinaciones de los mismos. En una realizacion particular, el monoterpeno polimerico tiene una distribucion molecular de menos de 5.
El peso molecular del monoterpeno polimerico puede expresarse de varias maneras, por ejemplo, peso molecular medio en peso o peso molecular medio en numero, como se conoce en la tecnica. El peso molecular puede determinarse por cualquiera de varios medios, tales como dispersion de luz, dispersion de neutrones de angulo reducido, dispersion de rayos X, velocidad de sedimentacion, viscometrfa (ecuacion de Mark-Houwink) y cromatograffa de permeacion en gel.
El monoterpeno polimerico, por ejemplo limoneno, puede existir en forma de diferentes isomeros geometricos, resultantes de la disposicion de sustituyentes alrededor del doble enlace carbono-carbono. Dichos isomeros estan disenados como la configuracion cis o trans (tambien denominados respectivamente como la configuracion Z o E), donde cis (o Z) representa los sustituyentes en el mismo lado del doble enlace carbono-carbono, y trans (o E) representa los sustituyentes en lados opuestos del doble enlace carbono-carbono. Los diversos isomeros geometricos y mezclas de los mismos se incluyen dentro del alcance de la invencion. En una realizacion particular, la composicion comprende una pluralidad de isomeros geometricos.
El producto de monoterpeno polimerico puede contener uno o mas atomos de carbono asimetricos y, por lo tanto, puede mostrar isomerfa optica y/o diastereoisomerfa. Todos los estereoisomeros y diaestereoisomeros se incluyen dentro del alcance de la invencion, ya sea en forma de un isomero individual o como una mezcla de formas isomericas estereoqufmicas. Los diversos estereoisomeros y diaestereoisomeros pueden separarse usando tecnicas convencionales, por ejemplo cromatograffa o cristalizacion fraccionada. Como alternativa, los isomeros opticos deseados pueden hacerse por reaccion de los materiales de partida opticamente activos apropiados en condiciones que no provocaran racemizacion o epimerizacion, o por derivacion, por ejemplo con un acido homoquiral seguido de separacion de los derivados diastereomericos por medios convencionales. En una realizacion particular, la composicion comprende una pluralidad de estereoisomeros y/o diaestereoisomeros.
En realizaciones particulares, el monoterpeno polimerico tiene una conformacion lineal, una conformacion ramificada, o una conformacion cfclica.
Ademas, en el presente documento se describe al menos una forma oligomerica de los monoterpenos objeto. Las formas oligomericas incluyen dfmeros, trfmeros, tetrameros y pentameros. Las composiciones pueden incluir adicionalmente una combinacion de dichos oligomeros, del mismo monoterpeno o una mezcla de oligomeros formada de diferentes monoterpenos.
La forma oligomerica puede ser una combinacion de dfmeros y trfmeros.
Los monoterpenos oligomericos incluyen alocimeno oligomerico, limoneno oligomerico, a-pineno oligomerico, p- pineno oligomerico, acetato de geranilo oligomerico, a-felandreno oligomerico, y-terpineno oligomerico, 3-careno oligomerico, 2-careno oligomerico.
El monoterpeno oligomerico puede seleccionarse entre alocimeno oligomerico y limoneno oligomerico. Composiciones farmaceuticas y modos de administracion
La composicion para su uso en la invencion comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de monoterpeno polimerico, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. El vehfculo es preferiblemente lipofilo.
Un vehfculo adecuado comprende un aceite, tal como, por ejemplo un aceite mineral, un aceite vegetal o combinaciones de los mismos.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
La expresion "aceite mineral" se refiere a un lfquido transparente incoloro casi inodoro e insfpido obtenido de la destilacion de petroleo. Tambien puede denominarse como aceite blanco, aceite mineral blanco, vaselina lfquida, parafina lfquida o aceite blanco de parafina. De acuerdo con una realizacion particular de la invencion, el aceite mineral es aceite mineral ligero, un producto disponible en el mercado que puede obtenerse como un producto de calidad NF (Formulario Nacional) o como un producto de calidad USP (Farmacopea de Estados Unidos). Para su uso en la invencion, el aceite mineral esta preferiblemente libre de compuestos aromaticos e insaturados.
Los aceites vegetales adecuados incluyen, pero sin limitacion, aceite de almendras, aceite de colza, aceite de coco, aceite de mafz, aceite de semilla de algodon, aceite de semilla de uva, aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de azafran, aceite se sesamo, aceite de soja, y combinaciones de los mismos. En una realizacion particular, el aceite mineral es aceite mineral ligero.
El vehfculo farmaceuticamente aceptable puede comprender, como alternativa, o ademas, un reemplazo de aceite adecuado. Los reemplazos de aceite incluyen alcanos que tienen al menos 10 carbonos (por ejemplo, isohexadecano), benzoato esteres, esteres alifaticos, esteres no comodogenicos, compuestos de silicona volatil (por ejemplo, ciclometicona), y sustitutos de silicona volatil. Los ejemplos de benzoato esteres incluyen benzoato de alquilo C12C15, benzoato de isoestearilo, hexil benzoato de 2-etilo, benzoato de dipropilenglicol, benzoato de octildodecilo, benzoato de estearilo, y benzoato de behenilo. Los ejemplos de esteres alifaticos incluyen octonoato de alquilo C12C15 y maleato de dioctilo. Los ejemplos de esteres no comodogenicos incluyen isononanoato de isononilo, isononanoato de isodecilo, dilinoleato de dfmero de diisostearilo, propionato de araquidilo e isononanoato de isotridecilo. Los ejemplos de sustitutos de silicona volatil incluyen decanoato de isohexilo, isononanoato de octilo, octanoato de isononilo, y dioctanoato de dietilenglicol.
La ciclometicona es una silicona evaporativa que puede incluirse en el vehfculo para facilitar la preparacion de la composicion susceptible de eyeccion de un dispensador por pulverizacion. Ademas, debido a su propiedad evaporativa, la ciclometicona puede facilitar la retencion y la fijacion de la formulacion sobre la superficie en la que se pulveriza, por ejemplo, un sitio de herida.
La composicion farmaceutica puede formularse para su administracion en cualquiera de varias formas, tal como, por ejemplo, una capsula (incluyendo un capsula de gel), un comprimido, un gel, un supositorio, una suspension, una pulverizacion, una pelfcula, o una pomada. Las formulaciones pueden estar adicionalmente en forma de una o mas de una solucion, un liposoma, una emulsion, una microemulsion, un cemento, o un polvo. Preferiblemente, los oligomeros y polfmeros se formulan por un proceso que protege contra y/o minimiza cualquier oxidacion, reduccion o precipitacion.
Las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden administrarse por cualquier medio que consiga su fin previsto. Por ejemplo, la administracion puede ser por via topica, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, subcutanea, intradermica, ectodermica, mesodermica, entodermica, vaginal, rectal, intrauterina, intrauretral, intracardiaca, intracraneal, intranasal, intrapulmonar, intratecal, intraocular, intra-renal, intrahepatica, intratendinosa y auricular.
Ademas, la administracion puede comprender una tecnica o medio, tal como electroporacion, o sonicacion para facilitar su administracion, por ejemplo por via transdermica. La administracion oral puede incluir el uso de una formulacion protegida por liposoma como se ha descrito anteriormente. Otras tecnicas que pueden emplearse incluyen, por ejemplo, radiofrecuencia o aplicacion por rociado a presion.
La dosificacion administrada dependera de la edad, salud y peso del sujeto, el uso de tratamiento concomitante, si lo hubiera, la frecuencia del tratamiento, y la naturaleza del efecto deseado. La cantidad del monoterpeno polimerico de la presente invencion en cualquier forma de dosificacion unitaria comprende una cantidad terapeuticamente eficaz que puede variar dependiendo del sujeto receptor, la ruta y la frecuencia de administracion.
En general, la cantidad de monoterpeno polimerico presente en la composicion farmaceutica puede estar convenientemente en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % a aproximadamente el 12 % en una base peso por peso, en base al peso total de la composicion. Para su uso topico, el porcentaje de monoterpeno polimerico en la composicion puede estar en el intervalo de aproximadamente el 0,05 % a aproximadamente el 10 %. Para la administracion por inyeccion, el porcentaje de monoterpeno polimerico en la composicion puede estar convenientemente en el intervalo de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 7 %. Para la administracion oral, el porcentaje de monoterpeno polimerico en la composicion puede estar en el intervalo de aproximadamente el 0,005 % a aproximadamente el 10 %.
Las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden fabricarse de una manera que se conoce por un experto en la tecnica, por ejemplo, por medio de procesos convencionales de mezcla, granulacion, preparacion de grageas, encapsulacion en gel, disolucion, extraccion o liofilizacion. Por lo tanto, las composiciones farmaceuticas para uso oral pueden obtenerse combinando los compuestos activos con excipientes solidos y semi-solidos y conservantes
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
adecuados, y/o antioxidantes protegidos de gases reactivos.
En las capsulas blandas, los compuestos activos se disuelven o se suspenden preferiblemente en los lipidos adecuados, tales como aceites grasos, o parafina lfquida o parafinas semisolidas, ceras, y una combinacion de los mismos. Ademas, pueden anadirse estabilizantes y antioxidantes.
El vehfculo comprende preferiblemente un vehfculo basado en lipidos. Por ejemplo, la composicion puede estar en forma de una emulsion o una microemulsion, basadas en lipidos polares y tensioactivos. Pueden incluirse adicionalmente potenciadores de la absorcion.
Se forman comunmente emulsiones de aceite en agua (a/a) a partir de uno o mas aceites, uno o mas tensioactivos, y una fase acuosa. Los aceites adecuados para su uso en emulsiones tfpicas incluyen aceite mineral, vegetal, animal, esencial y sintetico, o mezclas de los mismos. En muchos casos, se usan aceites ricos en trigliceridos, tales como aceite de cartamo, aceite de semilla de algodon, aceite de oliva o aceite de soja. En su forma mas sencilla, una formulacion que contiene trigliceridos adecuada para administrar un agente terapeutico es una emulsion de aceite en agua que contiene el agente terapeutico. Dichas emulsiones contienen el agente terapeutico solubilizado en una fase de aceite que se dispersa en un entorno acuoso con la ayuda de un tensioactivo o una combinacion de tensioactivos. Por lo tanto, un procedimiento es solubilizar un agente terapeutico en un aceite y dispersar esta fase oleosa en una solucion acuosa. Dependiendo de si un aceite es un solido o lfquido a la temperatura ambiente, la emulsion de aceite en agua puede caracterizarse en forma de un particulado lipfdico solido. Tambien se requieren tensioactivos para formar emulsiones solidas. Con el fin evitar la precipitacion de un farmaco en la interfaz lfpido/agua, la dispersion puede estabilizarse mediante agentes emulsionantes y proporcionarse en forma de emulsion. Los farmacos disueltos en la fase oleosa o la fase nuclear lipfdica solida pueden dispersarse por fuerza mecanica para crear gotas o esferas suspendidas en la fase acuosa que son estables en almacenamiento en forma de una preparacion farmaceutica.
La formacion de una emulsion de aceite en agua estable puede mejorarse mediante el uso de tensioactivos que forman la interfaz entre el agente estrictamente hidrofobo y agua. Dependiendo de la naturaleza del aceite y uno o mas tensioactivos, se forman gotas grandes caracterfsticas de emulsiones de aceite en agua o estructuras mucho mas pequenas caracterfsticas de microemulsiones o estructurales micelares. Puede obtenerse un control adicional sobre el tamano de las gotas o las partfculas por homogeneizacion a alta presion o fuerzas de cizalladura similares. Las partfculas lipfdicas se forman tfpicamente a temperaturas ambientes superiores para fundir los componentes hidrofobos.
Los sistemas de microemulsion son sistemas terciarios y cuaternarios formados tfpicamente a partir de una fase oleosa, un tensioactivo y agua. Por ejemplo, la Pat. de Estados Unidos N° 5.707.648 describe microemulsiones que contienen una fase oleosa, una fase acuosa, y una mezcla de tensioactivos. Las microemulsiones son termodinamicamente estables, de tal forma que las gotas no se aglutinaran y precipitaran con el tiempo. El diametro de las gotas de microemulsion esta en el intervalo de 10 a 200 nanometros, mientras que las gotas de emulsion son generalmente mayores de un micrometro.
Se han descrito vehfculos adecuados para formar las composiciones que comprenden monoterpenos, por ejemplo, en la Publicacion de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2006/0104997.
Otras composiciones farmaceuticas para uso oral incluyen una pelfcula disenada para adherirse a la mucosa oral, como se desvela, por ejemplo, en las Patentes de Estados Unidos N° 4.713.243; 5.948.430; 6.177.096; 6.284.264; 6.592.887; y 6.709.671.
Las composiciones farmaceuticas en forma de supositorios consisten en una combinacion del compuesto o compuestos activos con una base de supositorio. Las bases de supositorio adecuadas incluyen, por ejemplo, trigliceridos naturales o sinteticos, polietilenglicoles o hidrocarburos de parafina.
Las formulaciones para administracion parenteral incluyen suspensiones y dispersiones de micropartfculas de los compuestos activos segun sea apropiado. En una realizacion particular, pueden administrarse suspensiones en inyeccion oleosa. Los disolventes lipofilos adecuados o vehfculos incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de sesamo, o esteres de acidos grasos sinteticos, por ejemplo, oleato de etilo, trigliceridos, polietilenglicol-400, cremophor, o ciclodextrinas. Las suspensiones en inyeccion que pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspension incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa sodica, sorbitol y/o dextrano. Opcionalmente, la suspension tambien puede contener estabilizantes.
Las composiciones farmaceuticas tambien pueden prepararse usando liposomas que comprenden el principio activo. Como se conoce en la tecnica, los liposomas se obtienen generalmente a partir de fosfolfpidos u otras sustancias lipfdicas. Los liposomas se forman por cristales lfquidos hidratados mono o multi-lamelares que se dispersan en un medio acuoso. Puede usarse cualquier lfpido no toxico, fisiologicamente aceptable y metabolizable capaz de formar
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
liposomas. En general, los lipidos preferidos son fosfolfpidos y las fosfatidil colinas (lecitinas), tanto naturales como de forma sintetica. Se conocen en la tecnica metodos para formar liposomas, como se desvela, por ejemplo, en Prescott, Ed., Methods en Cell Biology, Volume. Tambien pueden incluirse antioxidantes, asf como agentes que imparten color o fragancia, si se desea. Pueden formularse pomadas, por ejemplo, mezclando una solucion del principio activo en un aceite vegetal, tal como aceite de almendras con parafina blanda caliente, y dejando que la mezcla se enfrfe.
La composicion farmaceutica puede formularse en forma de un pegamento, tal como los que comprenden octocianoacrilato usado para aplicaciones de cierre de heridas. Estas etapas se toman despues de que el material de monoterpeno polimerico se haya protegido mediante una envoltura lipofila e hidrofoba que forma una barrera entre el polfmero activo y los excipientes adicionales deseados en la formula.
Usos terapeuticos
La presente invencion proporciona composiciones para su uso en el tratamiento de la funcion neurologica alterada en un sujeto que necesita el mismo. Los usos comprenden administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende monoterpenos polimericos, como se describe en el presente documento.
Se describe adicionalmente un metodo para tratar un trastorno cutaneo o del cuero cabelludo, que comprende administrar por via topica al sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende monoterpenos oligomericos o polimericos, como se describe en el presente documento.
Se describe adicionalmente una composicion para su uso en la induccion de un proceso regenerativo en un animal, que comprende administrar al animal una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende monoterpenos polimericos, como se describe en el presente documento.
La etapa de administrar la composicion puede comprender cualquier ruta aceptable que incluye oral, topica, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, subcutanea, intradermica, ectodermica, mesodermica, entodermica, vaginal, rectal, intrauterina, intrauretral, intracardiaca, intracraneal, intramiocardica, intranasal, intrapulmonar, intratecal, intraocular, intra-renal, intrahepatica, intratendinosa y auricular.
En realizaciones particulares, la etapa de administracion comprende poner en contacto celulas de un tipo particular, de un linaje particular o en una fase de diferenciacion particular, con la composicion. Las celulas pueden ser cualquiera de una gran diversidad de tipos celulares, incluyendo, en particular, celulas neurales, celulas neuronales, celulas endoteliales y celulas epiteliales. Ademas, las celulas pueden ser de cualquier linaje, por ejemplo, linajes ectodermicos, mesodermicos y entodermicos. En diversas realizaciones, la etapa de poner en contacto las celulas se realiza in vivo, ex vivo o in vitro.
El metodo desvelado en el presente documento para tratar la funcion neurologica alterada es particularmente ventajoso para sujetos afectados por afecciones y enfermedades neurodegenerativas, incluyendo, en particular, demencia vascular, demencia senil, enfermedad de Alzheimer, esquizofrenia, esclerosis lateral amiotrofica (ALS), esclerosis multiple y enfermedad de Parkinson. En otros casos, el metodo puede aplicarse ventajosamente en sujetos que padecen funcion neurologica alterada debido a una infeccion (por ejemplo, vfrica, bacteriana, fungica, parasitaria) o un trastorno inmunologico. En una realizacion particular, la funcion neurologica alterada se debe a la exposicion a un farmaco, tal como un anestesico.
Los trastornos cutaneos o del cuero cabelludo incluyen todos los trastornos de piel, cuero cabelludo y apendices pilosos, incluyendo, por ejemplo, unas y folfculos pilosos. Las afecciones particulares que pueden beneficiarse de la invencion incluyen alopecia, eccema, psoriasis, acne, vitiligo, queratosis seborreica, seborrea y heridas de la piel. Las heridas de la piel incluyen ulceras venosas de la pierna, ulceras por presion, ulceras del pie en diabeticos, quemaduras, heridas por amputacion, ulceras de decubito (ulcera de cama), injertos de donante de espesor parcial, sitios de donante de injerto de piel, sitios de implante de dispositivos medicos, heridas por mordedura, heridas por congelacion, heridas por puncion, heridas de metralla, dermoabrasiones, heridas por infeccion y heridas quirurgica. Las heridas pueden ser el resultado de una infeccion; exposicion a radiacion ionizante; exposicion a laser, o exposicion a un agente quimico.
Las composiciones descritas pueden ser particularmente eficaces y economicas para el tratamiento de heridas cronicas no cicatrizadas. Como se conoce por un experto en la tecnica, las heridas no cicatrizadas se distinguen por diversos criterios, incluyendo la velocidad de cierre medida por longitud, anchura y profundidad de la herida en el tiempo.
La etapa de poner en contacto las celulas puede realizarse in vitro o ex vivo. En particular, las celulas, o un organo o tejido obtenido de las mismas que se pretende implantar o trasplantar en el sujeto, puede tratarse de acuerdo con la invencion. Por ejemplo, los explantes celulares o las celulas o tejidos cultivados y mantenidos en cultivo pueden
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
ponerse en contacto con la composicion. Las celulas pueden originarse por ejemplo, a partir de celulas madre de un donante autologo u homologo, y estan destinadas a la regeneracion de organos y/o la implantacion en un receptor. En otros casos, las celulas son de un donante heterologo y estan destinadas a implantacion o trasplante en un receptor. En una realizacion particular, las celulas son aquellas de un organo o tejido de un donante heterologo destinadas a la implantacion o trasplante en un receptor. En una realizacion particular, las celulas son aquellas que secretan factores solubles.
El uso medico puede realizarse antes de o tras la implantacion de un dispositivo medico en el sujeto. Los dispositivos medicos incluyen, pero sin limitacion, una protesis, un organo artificial o componente del mismo, una valvula, un cateter, un tubo, una endoprotesis vascular, una membrana artificial, un marcapasos, un sensor, un endoscopio, un dispositivo de imagen, una bomba, un cable y un implante. Los implantes incluyen, pero sin limitacion, un implante cardiaco, un implante coclear, un implante corneal, un implante craneal, un implante dental, un implante maxilofacial, un implante de organo, un implante ortopedico, un implante vascular, un implante intraarticular y un implante de mama.
En una realizacion particular, es dispositivo medico es un implante de organo, que puede comprender, en ciertos casos, celulas autologas del sujeto.
En una realizacion particular, la etapa de puesta en contacto comprende un medio seleccionado entre el grupo que consiste en electroporacion, sonicacion, radiofrecuencia, rociado a presion y combinaciones de los mismos.
En una realizacion particular, la etapa de puesta en contacto comprende establecer un contacto entre el lfquido intersticial o una superficie celular y la composicion. Esto puede ser particularmente ventajoso para heridas que estan rodeadas de lfquido intersticial. El contacto entre el lfquido intersticial y la composicion puede realizarse por perforacion y/o desgarro de la dermis con una aguja, una microaguja, o un aparato que comprende una pluralidad de agujas o microagujas. Dichas agujas o microagujas son preferiblemente no huecas, y pueden tener una pluralidad de formas, por ejemplo, un peine o un aparato tipo cepillo.
Los usos de la invencion son adecuados para su aplicacion en seres humanos, mamfferos no humanos, y sujetos no mamfferos, tales como peces y aves.
Artfculos de fabricacion
La invencion puede incluir el uso de un artfculo de fabricacion que incorpora la composicion que comprende los monoterpenos polimericos descritos en el presente documento.
La composicion farmaceutica puede estar en forma de un revestimiento en el artfculo de fabricacion, y puede estar contenido dentro de un recipiente que esta integrado al artfculo de fabricacion. La composicion farmaceutica esta presente ventajosamente como un revestimiento en dispositivos que se insertan en el cuerpo y estan disenados para su integracion en el mismo, por ejemplo, un implante. Por lo tanto, la composicion farmaceutica puede promover el cierre tisular sobre el implante debido a la actividad de los monoterpenos polimericos en la induccion de la diferenciacion celular o la regeneracion que conduce a la reparacion del tejido atrofico.
La composicion farmaceutica puede incorporarse ventajosamente sobre o en artfculos usados en la cicatrizacion de heridas, por ejemplo, un aposito o vendaje. Por lo tanto, la composicion farmaceutica puede promover la cicatrizacion de heridas debido a la actividad del monoterpeno polimerico en la induccion de la diferenciacion celular.
En otros casos, la composicion farmaceutica puede incorporarse en un dispositivo de administracion, tal como una aguja, un dispositivo de inyeccion o un dispensador por pulverizacion desde el cual se administra la composicion en un sitio del cuerpo que requiera terapia, por ejemplo, un sitio de herida.
Los artfculos de fabricacion incluyen, pero sin limitacion, un artfculo de tela, un panal, un vendaje para heridas, un dispositivo medico, una aguja, una microaguja, un dispositivo de inyeccion y un dispensador por pulverizacion. En una realizacion particular, el artfculo de fabricacion comprende una pluralidad de microagujas. Los dispositivos medicos e implantes son como se han descrito anteriormente en el presente documento.
Los siguientes ejemplos se presentan para ilustrar mas completamente ciertas realizaciones de la invencion. Sin embargo, de ningun modo no deben interpretarse como limitantes del amplio alcance de la invencion. Un experto en la tecnica puede elaborar facilmente muchas variaciones o modificaciones de los principios desvelados en el presente documento.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ejemplos
Ejemplo 1. Polimerizacion iniciada por base de monoterpenos aciclicos.
La reaction sintetica usada para los monoterpenos aciclicos polimericos, tal como alocimeno, implica un mecanismo de polimerizacion anionica (conocido como la "reaccion de Michael"), representado por el siguiente esquema:
imagen2
imagen3
H H
Init—CH2—C—CH2—C O
kA
*
Polfmero
Para que la initiation sea un exito, la energfa libre de la etapa de initiation debe ser favorable. Por lo tanto, es necesario emparejar el monomero con la fuerza apropiada del iniciador de manera que la primera adicion sea "cuesta abajo". Una reaccion anionica tfpica es la polimerizacion de estireno usando butil litio, C4H9U, en un disolvente inerte, tal como n-hexano.
Fuerte, inicia estireno, isopreno
imagen4
Cuando se realizan en las condiciones apropiadas, las reacciones de termination no se producen en la polimerizacion anionica. Se anade tfpicamente un compuesto, tal como agua o alcohol para terminar el proceso. La nueva especie anionica es demasiado debil para el reinicio, como se muestra en el siguiente esquema.
R /'"'n m r
------CHj-Ce + h-or .------*- ------CH2—i-H + e0R
R R
Los compuestos tales como agua, alcoholes, oxfgeno molecular, dioxido de carbono, etc., reaccionan muy rapidamente con los carbaniones en los extremos de cadena, terminando la propagation. Dado que los extremos de cadena son relativamente pocos, unicamente ha de estar presente una cantidad de agua muy pequena para terminar la realization de polimerizacion. La terminacion no se produce por la interaction polfmero-polfmero.
La polimerizacion anionica da lugar a distribuciones de masa molecular muy marcadas ya que los procesos de transferencia estan ausentes. Si el disolvente es extremadamente puro, las cadenas polimericas aun estaran activas despues de que se haya consumido todo el monomero.
El grado de polimerizacion es sencillamente:
imagen5
Como se ha indicado anteriormente, el butil litio es un iniciador apropiado para la polimerizacion anionica para moleculas que contienen isopreno, tales como terpenos. Por lo tanto, se ha usado en la sfntesis de los polfmeros descritos en el presente documento. Ventajosamente, el procedimiento que se ha descrito anteriormente no requiere ningun tipo de tratamiento aparte de la evaporation y el reemplazo de disolvente.
Aunque el procedimiento que se ha descrito anteriormente se desvela generalmente en la tecnica anterior (vease, por ejemplo, Newmark y col., (1988) J. Polym Sci. 26: 71-77), las modificaciones importantes desveladas en el presente documento son el tratamiento con una alta dilucion de hexano, y la etapa final de cambiar el disolvente por aceite, para obtener el polfmero puro que conserva su actividad biologica con alta potencia.
Ejemplo 2. Polimerizacion catalizada con acido de a-pineno.
Se anadieron tolueno (20 ml), AlCh (150 mg, 1,2 mMol) y SbCh (121 mg, 0,6 mMol) en un matraz de 3 bocas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a -15 C. Despues, se anadieron 5 g (0,36 mol) de a-pineno. La reaccion se agito durante 4 h a -30 °C. El catalizador se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que el producto polimerico obtenido tenia un peso molecular en el intervalo de 10-0,5 kDa.
Ejemplo 3. Polimerizacion catalizada con acido de alocimeno.
Se anadieron tolueno (20 ml) y eterato de trifluoruro de boro (BF3-O(Et)2; 0,1 ml 0,8 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a -30 °C. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de alocimeno. La reaccion se agito durante 4 h a -30 °C. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC (figura 5) indico que el producto polimerico obtenido tenia un peso molecular en el intervalo de 2-10 kDa.
Ejemplo 4. Fotopolimerizacion de acetato de geranilo usando peroxido de benzoilo.
Se anadieron heptano (20 ml) y peroxido de benzoilo (1 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. Despues, se anadieron 5 g (25 mmol) de acetato de geranilo. La reaccion se calento a reflujo durante 4 h. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que el producto oligomerico obtenido tenia un peso molecular en el intervalo de 0,3-0,5 kDa.
Ejemplo 5. Polimerizacion catalizada por acido de limoneno.
Se anadieron tolueno (20 ml) y BF3-O(Et)2 (0,1 ml 0,8 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a-70 °C. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de limoneno. La reaccion se agito durante 4 h a -70 °C. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC (figura 6) indico que el producto polimerico obtenido tenia un peso molecular en el intervalo de 2-5 kDa.
Ejemplo 6. Polimerizacion catalizada con acido de B-pineno.
Se anadieron tolueno (20 ml), AlCh (0,8 mMol) y SbCh (0,4 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a -20 °C. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de a-pineno. La reaccion se agito durante 4 h a -20 °C. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que el producto obtenido era una mezcla de oligomeros y polfmero de un peso molecular en el intervalo de 0,5-4,5 kDa.
Ejemplo 7. Polimerizacion catalizada con acido de y-terpineno.
Se anadieron tolueno (20 ml) y SnCL (1 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a -20 °C. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de y-terpineno. La reaccion se agito durante 4 h a -20 °C. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que la mezcla de oligomeros obtenida tenia un peso molecular de aproximadamente 0,5 kDa.
Ejemplo de Referencia 8. Oligomerizacion catalizada con acido de 3-careno.
Se anadieron tolueno (20 ml) y AlCh (1 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a -30 °C. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de 3-careno. La reaccion se agito durante 4 h a -30 °C. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que el producto obtenido era una mezcla de dfmeros y trfmeros.
Ejemplo 9. Polimerizacion catalizada con acido de a-felandreno.
Se anadieron tolueno (20 ml) y AlCh (1,2 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un condensador y en una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se enfrio a -70 °C. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de a-felandreno. La reaccion se agito durante 4 h a -70 °C. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que el producto polimerico obtenido tenia un peso molecular de aproximadamente 1 kDa.
Ejemplo 10. Polimerizacion de y-terpineno usando peroxido de benzoilo como el iniciador radicalario.
Se anadieron heptano (20 ml) y peroxido de benzoilo (1 mMol) en un matraz de 3 bocas equipado con un
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
condensador y en una atmosfera de N2. Despues, se anadieron 5 g (36 mmol) de y-terpineno. La reaccion se calento a reflujo durante 4 h. El material insoluble se retiro por filtracion y el disolvente y otros volatiles se evaporaron aplicando vacfo. El analisis por SEC indico que el producto oligomerico obtenido tenia un peso molecular en el intervalo de 0,4-0,5 kDa.
Ejemplo 11. Las formas polimericas de limoneno y de alocimeno inducen la diferenciacion de tipo neuronal en cultivos de celulas epiteliales de pigmento retinal.
Resumen
La presente invencion se refiere una induccion de la diferenciacion y la maduracion celular, y tiene aplicacion directa en la regeneracion de un tejido funciona, en particular tejido neuronal. Estos hallazgos experimentales muestran que los terpenos polimericos ensayados, que incluyen limoneno, alocimeno, pineno y geranilo, inducen la diferenciacion de celulas epiteliales de pigmento retinal, un tejido epitelial de origen neuronal, en celulas neuronales morfologicas que producen axones, dendritas y conexiones entre las celulas conocidas como sinapsis. La diferenciacion morfologica en celulas tratadas va acompanada por expresion de novo de la tubulina p3 de antigeno de diferenciacion especifica de neuronas. La induccion de diferenciacion en las celulas neuronales sugiere fuertemente que los polimeros afectan a la diferenciacion de las celulas madre neuronales en neuronas funcionales.
El dogma actual sobre la patologia de la demencia y la enfermedad de Alzheimer sostiene que la deficiencia implica el fallo de las neuronas para formar conexiones sinapticas funcionales (Kimura R, Ohno M. Impairments in remote memory stabilization precede hippocampal synaptic and cognitive failures in 5XFAD Alzheimer mouse model. Neurobiol Dis. 5 de noviembre de 2008).
Por consiguiente, los experimentos descritos en el presente documento apoyan el uso de terpenos polimericos, como una modalidad terapeutica para obtener la neuro-regeneracion en enfermedades neurodegenerativas, tales como demencia y enfermedad de Alzheimer.
Celulas epiteliales del pigmento retinal (RPE)
Estudios dirigidos a evaluar los efectos de los monoterpenos polimericos sobre diversas lineas celulares de origen humano conducen al uso de celulas ARPE-19, una linea de celulas epiteliales del pigmento retinal humano no maligna.
El epitelio pigmentario retinal (RPE) es una capa individual de celulas epiteliales pigmentadas hexagonales de origen neuronal, que forma la capa celular externa de la retina del ojo y esta unica a la coroides subyacente. Las funciones del RPE incluyen el soporte, nutricion y proteccion de los fotorreceptores subyacentes de la neuro-retina.
Las celulas RPE estan implicadas en la fagocitosis del segmento externo de las celulas fotorreceptoras, en el ciclo de la vitamina A donde isomerizan todo-trans retinol en 11-cis retinal, y en la alimentacion de los fotorreceptores con D-glucosa, aminoacidos y acido ascorbico.
Aunque in vivo el RPE esta pigmentado, las celulas ARPE-19 no forman melanina y no estan pigmentadas. En el cultivo, las celulas crecen con forma de husillo y como celulas poligonales.
Metodos
Las celulas ARPE-19 (obtenidas de la Coleccion Americana de Cultivos Tipo, ATCC) se colocaron en placas en microplacas de cultivo tisular de 96 pocillos con el fondo plano (Costar) a una concentracion de 2-5 x 103 celulas por pocillo (1-2,5 x 104 celulas/ml) en un medio de crecimiento que consistia en DMEM:Ham F-12, 1:1, complementado con suero fetal bovino al 10 %, glutamina 200 mM, 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina. Se dejo a las celulas adherirse a la superficie de las placas durante una noche antes del tratamiento con monoterpeno polimerico.
Cada tipo de monoterpeno polimerico se sintetizo para proporcionar una solucion al 10 % en aceite de semilla de uva, aceite de oliva, Mygliol 810 o Mygliol 812. Las preparaciones se anadieron a los cultivos a volumenes de 0,5 pl, 2 pl, 5 pl y 20 pl. Estos volumenes, introducidos en un volumen de medio de muestra total de 200 pl, corresponden a concentraciones de alocimeno finales del 0,025 %, 0,1 %, 0,25 % y el 1 %, respectivamente. El vehiculo de aceite sirvio como vehiculo de control y se aplico a cultivos de control a los mismos volumenes.
Los cultivos se incubaron en una incubadora de CO2 al 5 % a 37 °C durante 72 h. Despues, el medio se elimino, el cultivo se lavo dos veces con solucion salina tamponada con fosfato (PBS), se fijo con metanol absoluto durante 10 min y se tino con reactivos Hemacolor® (Boehringer Mannheim), que tineron las celulas de una manera similar a Giemsa, y pueden usarse en un ensayo de viabilidad celular cuantitativo (vease Keisari, Y. A colorimetric microtiter
5
10
15
20
25
30
35
40
45
assay for the quantitation of cytokine activity on adherent cells in tissue culture. J. Immunol. Methods 146, 155-161, 1992). El grado de diferenciacion se determino por microscopfa optica.
Se descubrio inesperadamente que el tratamiento de celulas ARPE-19 de RPE con los monoterpenos polimericos indujo cambios morfologicos drasticos que son una caracterfstica inequfvoca de la neuro-diferenciacion. Los cambios morfologicos no se produjeron en los cultivos de control tratados con el vehfculo de aceite en solitario, independientemente del aceite usado como vehfculo para el compuesto activo. Los cambios morfologicos tambien se asociaron al cese de la proliferacion celular, sosteniendo adicionalmente la conclusion de que los monoterpenos polimericos incluyen la neuro-diferenciacion.
La figura 2 muestra el efecto del limoneno polimerico en las celulas ARPE-19 de RPE. Los cultivos tratados con aceite de control mostraron la forma de husillo tfpica y un patron de crecimiento poligonal caracterfstico de las celulas ARPE-19 de RPE (figura 2B). Despues de 72 horas de incubacion, las celulas tratadas con polfmero (0,025 %; 0,25 mg/ml) mostraron un mayor numero de salientes largos mas estrechos que recuerdan a las dendritas (figura 2A). Los largos y estrechos salientes formaron conexiones con salientes similares en celulas adyacentes creando una red de celulas interconectadas, potencialmente capaces de comunicar informacion entre si. Normalmente se producen redes similares entre neuronas en el sistema nervioso central y permiten la transmision y el procesamiento de informacion.
Los experimentos realizados usando preparaciones oxidadas de limoneno polimerico no indujeron tal diferenciacion.
La figura 3 muestra el efecto del alocimeno polimerico en las celulas ARPE-19 de RPE. La figura 3A muestra que las celulas que se trataron con alocimeno polimerico mostraron cambios de tipo diferenciacion, mientras que las celulas que se trataron con vehfculo (aceite de semilla de algodon) en solitario, no mostraron dichos cambios (figura 3B).
La figura 4 muestra una comparacion de los efectos del alocimeno polimerico y el alocimeno monomerico en las celulas ARPE-19 de RPE. La figura 4A muestra que las celulas ARPE-19 de RPE tratadas con alocimeno polimerico mostraron evidencia de diferenciacion, mientras que las celulas tratadas con alocimeno monomerico (figura 4B) o con vehfculo de aceite de semilla de algodon (figura 4C) no mostraron tales efectos.
Un sistema de puntuacion para la potencia de los monoterpenos polimericos en la induccion de la diferenciacion celular
En base a los resultados anteriores, se desarrollo un sistema de puntuacion para evaluar la potencia de los monoterpenos polimericos para la induccion de la diferenciacion en un cultivo celular, con celulas colocadas en placas, 2 x 103 por pocillos. Los grados y sus respectivas descripciones se exponen en la Tabla 1.
Tabla 1.
Efecto
Grado
Velocidad de proliferacion
Alto = 0 Medio = 1 Baio = 2 0 0 0 1 1 1 2 1 2 1 2
Las celulas forman salientes alargados
No = 0 salientes = 1 tipo neurona = 2 0 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2
Relacion neuritas (elongaciones tipo neurona)/cuerpo
<2 = 0 >2<3 = 1 >3 = 4 0 0 0 0 1 1 1 1 1 4 4
Porcentaje de celulas diferenciadas
<10 % = 0 >10 % <3 0 % = 1 >30 % <7 0 % = 2 >70 % = 3 0 0 0 0 0 1 1 2 2 2 3
Conexiones claramente visibles entre las neuritas y/o los cuerpos celulares
<30 %,= 0 >30 % <7 0 %, = 1 >70 % = 2 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 2
Botones tipo sinaptico visibles claros transparentes a lo largo de las neuritas y en los extremos de las neuritas.
<30 % = 0 >30 % <5 0 % = 1 >70 % = 2 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 2
Grado de Diferenciacion Total
0 1 1 2 3 4 5 6 10 11 15
Puntuacion de Diferenciacion
0 1 2 3 4 5
Ejemplo de Referencia 12. El alocimeno polimerico induce la diferenciacion celular seguida de muerte celular en lfneas celulares tumorales
Se investigaron los efectos del alocimeno polimerico en dos lfneas celulares de melanoma y tres lfneas celulares de neuroblastoma. Tanto la lfnea celular de melanoma humano 5151 como la lfnea celular de melanoma murino B16F10 proliferan en cultivo tisular de manera no diferenciada y no producen melanina. Las lfneas celulares de neuroblastoma humano Lan-1 Lan-5 y SY5Y proliferan en cultivo como celulas con forma de husillo que no muestran
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
morfologfa de diferenciacion. Metodos
Las celulas se pusieron en placas a 2 x 103 celulas por pocillo en microplacas con fondo plano de 96 pocillos (Costar) y se cultivaron en 200 microlitros de medio DMEM (medio de Dulbecco) complementado con suero fetal bovino 10, L-glutamina 200 mM, 100 unidades/ml de penicilina y 100 microgramos/ml de estreptomicina (todos los reactivos de Gibco-BRL). Tras una adhesion durante una noche, se anadio alocimeno polimerico (de una solucion al 10 % en aceite de semilla de uva) a los cultivos celulares para proporcionar concentraciones finales del 0,025 %, 0,1 %, 0,25 % y el 0,5 %, y la incubacion continuo durante 48 y 72 horas. El vehfculo de aceite de semilla de uva se uso como control. Despues de 72 horas, las celulas se fijaron con metanol y se tineron con reactivos Hemacolor® (Boehringer Mannheim).
Resultados
Se descubrio que el tratamiento de celulas de melanoma con alocimeno polimerico indujo la formacion de melanina despues de 24-48 h, en comparacion con las celulas tratadas con control. El tratamiento polimerico causo adicionalmente la detencion de la replicacion, como se muestra por el descenso de la densidad celular. En 72 horas, se produjo la muerte celular en los cultivos incubados con cada una de las cuatro concentraciones polimericas ensayadas.
Tras el tratamiento de las lfneas celulares de neuroblastoma Lan-1 Lan-5 y SY5Y con alocimeno polimerico (concentracion final al 0,025 %), las celulas comenzaron a desarrollar salientes tipo dendritas y la proliferacion celular se detuvo. Mayores concentraciones causaron la muerte celular en todo el cultivo. Por lo tanto, el tratamiento con alocimeno polimerico indujo las caracterfsticas de diferenciacion tipo neuronal morfologicas que se siguieron de muerte celular.
Conclusion
El alocimeno polimerico es eficaz para inducir la diferenciacion de las lfneas celulares obtenidas a partir del melanoma y neuroblastoma de canceres malignos.
Un bloqueo en la diferenciacion terminal se reconoce como una via importante en la perpetuacion de la proliferacion celular en el cancer. Ya se ha demostrado que superar este bloqueo es una modalidad de tratamiento eficaz de varias formas de cancer (por ejemplo, retinoides en el tratamiento de leucemia promielocftica aguda) y ahora se conoce como "terapia dirigida". Las terapias dirigidas no matan las celulas cancerosas, sino que modifican su comportamiento, principalmente induciendo la diferenciacion. Por consiguiente, la agresividad de muchos canceres puede reducirse.
Como se desvela en el presente documento, se descubrio que un monoterpeno polimerico supera el bloqueo en la diferenciacion de celulas tumorales, como se indica por la formacion de dendritas de celulas neuronales en las lfneas celulares de neuroblastoma, y la induccion de la formacion de melanina en las lfneas celulares de melanoma. En ambos casos, estos cambios se asociaron al cese de la proliferacion celular y la muerte celular.
Ejemplo 13. Las formas polimericas qufmicamente sintetizadas de alocimeno, limoneno, pineno, o acetato de geranilo inducen la diferenciacion celular en cultivos de celulas epiteliales del pigmento retinal.
Las formas qufmicamente sintetizadas de limoneno, acetato de geranilo, pineno y alocimeno se usaron por separado. Las celulas se pusieron en placas en microplacas para cultivo tisular de 96 pocillos con fondo plano (BIOFIL) a una concentracion de 5 x 103 celulas por pocillo (2,5 x 104 celulas/ml) en un medio de crecimiento que consistfa en DMEM:Ham F-12, 1:1, complementado con suero fetal bovino al 10 %, glutamina 200 mM, 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina. Se dejo a las celulas adherirse a la superficie de las placas durante una noche antes del tratamiento con los polfmeros qufmicamente sintetizados.
Los cultivos se incubaron en una incubadora de CO2 al 5 % a 37 °C durante 72 h. Despues, el medio se elimino, el cultivo se lavo dos veces con solucion salina tamponada con fosfato (PBS), se fijo con metanol absoluto durante 10 min y se tino con reactivos Hemacolor®.
Resultados
Todos los polfmeros que se han mencionado anteriormente mostraron que tenfan actividad en la induccion de la neurodiferenciacion en celulas ARPE-19.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Conclusion
Los resultados observados respaldan la conclusion de que los monoterpenos polimericos qufmicamente sintetizados tienen actividad en la induccion de la diferenciacion de las celulas neuronales.
Ejemplo 14. Comparacion de alocimeno polimerico con alocimeno monomerico en la induccion de la diferenciacion celular en cultivos de celulas epiteliales del pigmento retinal.
El procedimiento experimental fue identico al descrito en el Ejemplo 13. La figura 4A muestra que el alocimeno polimerico indujo una neuro-diferenciacion mientras que el alocimeno monomerico (figura 4B) no tiene ninguna influencia en las celulas, similar a los resultados observados con celulas que se trataron unicamente con vehfculo (figura 4C).
Los resultados observados respaldan la conclusion de que el alocimeno polimerico qufmicamente sintetizado tiene actividad en la induccion de la diferenciacion de celulas neuronales. Por el contrario, el alocimeno monomerico no muestra esta actividad.
Ejemplo de Referencia 15. Cicatrizacion en perros.
Un perro hembra con una herida cronica abierta durante mas de tres meses que resistio al tratamiento tfpico estandar se trato por tratamiento topico con alocimeno polimerico sintetico. El tratamiento dio como resultado un rapido cierre de la herida partiendo de una rapida epitelizacion y la formacion de tejido de granulacion, apreciable en tres dfas. La herida se curo completamente en 4 semanas. Sorprendentemente, un tejido sin cicatriz cubrio la herida. La cicatrizacion se contrajo hacia dentro hacia el centro de la herida, lo que sugerfa la presencia de fibro-miocitos (de origen mesodermico). Se informaron resultados similares por un veterinario que trato una herida no cicatrizada en la pata de un caballo. En ambos casos, la piel alrededor de la herida comenzo a mostrar la renovacion de la piel joven.
En otro perro macho mayor afectado por alopecia, el tratamiento topico con alocimeno polimerico dio como resultado el crecimiento de la piel hasta integrarse con la piel circundante.
Ejemplo de Referencia 16. El tratamiento de heridas en peces.
El pez Goldfish, asf como el pez koi (ambos de la familia de las carpas) son propensos a ulceras tegumentosas causadas por bacterias, en particular Aeuromonas hidrophila.
Los peces Goldfish con un peso de aproximadamente 100 gramos cada uno, que habfan desarrollado ulceras bacterianas, se dividieron en dos grupos en tanques separados, conteniendo cada grupo cuatro peces. Cada tanque se lleno con un volumen de 100 litros de agua y se mantuvo en aireacion con una bomba de aire. Los grupos se aleatorizaron por peso y tamano de la herida (en el intervalo de 0,7-1,5 cm por 0,7-1,5 cm). A cada pez se le inyectaron por via muscular a traves del tegumento intacto en un sitio aproximadamente 5 mm de una ulcera, 10 microlitros de aceite de semilla de uva en solitario (grupo de control), o una solucion al 1 % de cada uno de alocimeno polimerico y limoneno (como se describe en los Ejemplos 3 y 5) en aceite de semilla de uva (grupo de tratamiento).
Los peces en el grupo de ensayo comenzaron a mejorar progresivamente tras 4 ciclos semanales de tratamiento con los monoterpenos polimerizados y se curaron durante un periodo de 4-6 semanas. Todos los peces de este grupo sobrevivieron a lo largo de las 7 semanas de duracion del estudio. Estos peces tambien mostraron una conducta de alerta y responsiva, incluyendo nado activo, busqueda y arrebatamiento del alimento proporcionado en la superficie del agua, y movimiento rapido asustado en respuesta a la percusion en la pared del tanque.
Por el contrario, los peces del grupo de control no mostraron ninguna mejorfa en la condicion de sus ulceras. Los peces estaban letargicos, mostraron una conducta sedentaria en el fondo del tanque, y no respondieron a la estimulacion. Todos los peces de este grupo murieron transcurridas seis semanas.
Las diferencias entre estos dos grupos fueron altamente significativas en ambos parametros: supervivencia de los peces y cierre de heridas. Ademas, el grupo tratado mostro mas en actividad en la reaccion a estfmulos tales como estado de alerta con respecto a la alimentacion suministrada y percusion en la pared del tanque.

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    1. Una composicion farmaceutica para su uso terapeutico en el tratamiento de la funcion neurologica alterada, en la que la composicion farmaceutica comprende al menos una forma polimerica de un monoterpeno, en la que el monoterpeno se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable; y en la que la composicion esta desprovista sustancialmente de la forma monomerica correspondiente de dicho monoterpeno.
  2. 2. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la funcion neurologica alterada se asocia a una afeccion seleccionada entre el grupo que consiste en demencia vascular, demencia senil, enfermedad de Alzheimer, esquizofrenia, esclerosis lateral amiotrofica (ALS), enfermedad de Huntington, esclerosis multiple y enfermedad de Parkinson.
  3. 3. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la composicion comprende un monoterpeno polimerico seleccionado el grupo que consiste en alocimeno polimerico, limoneno polimerico, a-pineno polimerico, p-pineno polimerico, acetato de geranilo polimerico, 3-careno polimerico, 2-careno polimerico, y combinaciones de los mismos.
  4. 4. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en la que la composicion comprende de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 12 % (p/p) de dicho monoterpeno polimerico, en base al peso total de la composicion.
  5. 5. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la composicion comprende una pluralidad de isomeros de dicho monoterpeno, en la que la pluralidad de isomeros se selecciona entre isomeros geometricos, estereoisomeros, diaestereoisomeros y combinaciones de los mismos.
  6. 6. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en la que el monoterpeno polimerico tiene un grado de polimerizacion en el intervalo de al menos aproximadamente 6 a aproximadamente 200.
  7. 7. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 6, en la que el grado de polimerizacion es al menos aproximadamente 25; o en la que el grado de polimerizacion esta en el intervalo de aproximadamente 6 a aproximadamente 50.
  8. 8. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en el que el
    monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero de al menos aproximadamente 3000.
  9. 9. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en la que el
    monoterpeno polimerico tiene un peso molecular medio en numero en el intervalo de al menos aproximadamente 1000 a aproximadamente 25.000; preferiblemente en la que el peso molecular medio en numero esta en un intervalo seleccionado entre el grupo que consiste en al menos aproximadamente 1000 a aproximadamente 5000; de al menos aproximadamente 1000 a aproximadamente 15.000; de aproximadamente 5000 a aproximadamente 15.000; de aproximadamente 5000 a aproximadamente 20.000; de aproximadamente 15.000 a aproximadamente 25.000, y combinaciones de los mismos.
  10. 10. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en la que el
    monoterpeno polimerico es el producto de la sfntesis qufmica seleccionada entre el grupo que consiste en una
    reaccion de polimerizacion anionica, una reaccion de polimerizacion cationica, una polimerizacion radicalaria, una polimerizacion catalizada con metal y una reaccion de fotopolimerizacion.
  11. 11. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 10, en la que la sfntesis qufmica comprende el uso de un monoterpeno monomerico como un sustrato, y en la que el monoterpeno monomerico se selecciona entre el grupo que consiste en alocimeno, limoneno, a-pineno, p-pineno, acetato de geranilo, 3-careno y 2-careno.
  12. 12. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 11, en la que el sustrato de monoterpeno monomerico se obtiene a partir de una especie vegetal.
  13. 13. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la composicion comprende un vehfculo farmaceuticamente aceptable que comprende al menos un aceite o cera; preferiblemente en la que el aceite es un aceite vegetal seleccionado entre el grupo que consiste en aceite de almendras, aceite de colza, aceite de coco, aceite de mafz, aceite de semilla de algodon, aceite de semilla de uva, aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de azafran, aceite se sesamo, aceite de soja, y combinaciones de los mismos.
  14. 14. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la composicion farmaceutica se va a administrar por una ruta que es distinta de una ruta oral o enteral; o en la que la composicion farmaceutica se va a administrar por una ruta seleccionada entre el grupo que consiste en topica, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, subcutanea, intradermica, vaginal, rectal, intracraneal, intranasal, intraocular y auricular.
    5
  15. 15. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la composicion farmaceutica se va a administrar poniendo en contacto las celulas de un sujeto con la composicion farmaceutica, y en la que las celulas se seleccionan entre el grupo que consiste en celulas neurales, celulas neuronales, celulas endoteliales, celulas epiteliales, celulas de linaje ectodermico, celulas de linaje mesodemico y celulas de linaje
    10 entodermico; y en la que la etapa de poner en contacto las celulas se realiza ex vivo o in vitro y, por lo tanto, dichas celulas se trasplantan o se implantan en el sujeto.
ES10826225.4T 2009-10-28 2010-10-28 Monoterpenos poliméricos para tratar la función neurológica alterada Active ES2562807T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US27273709P 2009-10-28 2009-10-28
US272737P 2009-10-28
PCT/IL2010/000893 WO2011051945A1 (en) 2009-10-28 2010-10-28 Therapeutic uses of oligomeric and polymeric monoterpenes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2562807T3 true ES2562807T3 (es) 2016-03-08

Family

ID=43921435

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10826225.4T Active ES2562807T3 (es) 2009-10-28 2010-10-28 Monoterpenos poliméricos para tratar la función neurológica alterada

Country Status (6)

Country Link
US (2) US20120213727A1 (es)
EP (1) EP2493461B9 (es)
AU (1) AU2010310946A1 (es)
CA (1) CA2779025A1 (es)
ES (1) ES2562807T3 (es)
WO (1) WO2011051945A1 (es)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9982073B2 (en) 2015-03-27 2018-05-29 Khashayar Ghandi Homopolymers of terpenoid alcohols and their uses
US9850340B2 (en) 2015-10-08 2017-12-26 Northwestern University Apopinene as a biorenewable monomer for ring-opening metathesis polymerization
WO2019002889A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Industrial Technology Research Institute METHOD FOR TREATING AUTOIMMUNE NEUROLOGICAL DISEASE AND / OR NEURODEGENERATIVE DISEASE AND PHARMACEUTICAL FORMULAS FOR LIQUID GALENIC FORM AND CONTROLLED RELEASE GALENIC FORM
US11904038B2 (en) 2017-10-26 2024-02-20 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Composition for preventing hair loss or promoting hair development, comprising phellandrene as active ingredient
US11453818B2 (en) * 2019-04-11 2022-09-27 Nextier Completion Solutions Inc. Composition and methods for enhancing the production of hydrocarbons
WO2021146461A1 (en) * 2020-01-14 2021-07-22 P2 Science, Inc. Vicinal diol ether derivatives of polyether polymers
CN116919930A (zh) * 2022-04-06 2023-10-24 沈阳药科大学 萜类化合物在调节脑膜淋巴循环促进脑内异常蛋白通过淋巴途径清除中的应用
FR3143597B1 (fr) * 2022-12-16 2025-05-02 Myceliance Utilisation de composés organiques encapsulés à titre de biostimulants de mycéliums et de champignons

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4347356A (en) * 1978-10-20 1982-08-31 Taito Co., Ltd. Novel nitrogen-containing monoterpene derivatives
US4694047A (en) 1986-11-06 1987-09-15 Union Camp Corporation Halogenated poly(alloocimene)
US5288488A (en) * 1990-02-23 1994-02-22 Auburn University Method of controlling foliar microorganism populations
DE19646392A1 (de) 1996-11-11 1998-05-14 Lohmann Therapie Syst Lts Zubereitung zur Anwendung in der Mundhöhle mit einer an der Schleimhaut haftklebenden, Pharmazeutika oder Kosmetika zur dosierten Abgabe enthaltenden Schicht
US6063383A (en) 1999-01-28 2000-05-16 Hsu; Wu-Ching Pharmaceutical suppository composites for fever and influenza and method of producing the composites
IT1320180B1 (it) 2000-12-29 2003-11-26 Hunza Di Marazzita Maria Carme Preparazioni nutrizionali e terapeutiche dotate di attivita'antiossidante ed in grado di controllare gli eccessi ponderali e
US20030064948A1 (en) * 2001-02-08 2003-04-03 Alfred Fahr Invasomes for therapy of disorders, their preparation and use
ITPD20020138A1 (it) 2002-05-24 2003-11-24 Matteo Bevilacqua Composizione di sostanze a base terpenica, metodo di preparazione e metodo di dispersione in ambiente della medesima.
JP2004051702A (ja) * 2002-07-17 2004-02-19 Yoshida Seibutsu Kenkyusho:Kk リモネン重合体組成物および硬化性組成物
EP1587482A4 (en) * 2003-01-31 2010-08-25 Technion Res & Dev Foundation INFLAMMATORY COMPOSITIONS AND ITS USES
CA2580847C (en) 2004-09-20 2013-11-26 Research Development Foundation Coated stents
US20070009463A1 (en) * 2005-07-06 2007-01-11 Niebauer Michael F Rheology profile for a personal care composition
KR101321452B1 (ko) * 2006-08-17 2013-10-30 굼링크 에이/에스 수지로 캡슐화된 고강도 감미료
WO2008036932A2 (en) * 2006-09-21 2008-03-27 Herbalscience Singapore Pte. Ltd. Compositions and methods comprising boswellia species
WO2008044640A1 (en) 2006-10-11 2008-04-17 Yasuhara Chemical Co., Ltd. β-PINENE POLYMER AND PROCESS FOR PRODUCTION THEREOF
US9144606B2 (en) 2008-04-21 2015-09-29 Nanobio Corporation Nanoemulsion influenza vaccine
EP3578191A1 (en) * 2009-03-04 2019-12-11 Regenera Pharma Ltd. Compositions of polymeric myrcene
AU2010220056B2 (en) * 2009-03-04 2015-04-02 Regenera Pharma Ltd. Therapeutic uses of mastic gum fractions

Also Published As

Publication number Publication date
EP2493461A1 (en) 2012-09-05
EP2493461A4 (en) 2013-04-03
WO2011051945A1 (en) 2011-05-05
CA2779025A1 (en) 2011-05-05
EP2493461B1 (en) 2016-01-06
US20120213727A1 (en) 2012-08-23
US20150079021A1 (en) 2015-03-19
EP2493461B9 (en) 2016-05-18
AU2010310946A1 (en) 2012-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2562807T3 (es) Monoterpenos poliméricos para tratar la función neurológica alterada
US10307449B2 (en) Compositions of polymeric myrcene
AU2010220056B2 (en) Therapeutic uses of mastic gum fractions
AU2015203595B2 (en) Therapeutic uses of mastic gum fractions
AU2015203604A1 (en) Insecticidal Composition and Method