ES2496965T3 - Uso de Lactobacillus kefiranofaciens como un probiótico y un simbiótico - Google Patents

Uso de Lactobacillus kefiranofaciens como un probiótico y un simbiótico Download PDF

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methyl
lactobacillus kefiranofaciens
probiotic
gluconate
symbiotic
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Pierre Lemieux
Louis-Philippe Precourt
Eric Simard
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BIOLACTIS Inc
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Abstract

Una composición probiótica que comprende una cantidad efectiva de Lactobacillus kefiranofaciens en asociación con un portador adecuado, en donde dicho Lactobacillus kefiranofaciens es una cepa seleccionada del grupo que consiste en R2C2, INIX1 K2, y ES1, para usar en la protección de un sujeto contra la inflamación intestinal.

Description

imagen1
imagen2
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imagen4
Tabla 1 Resultados de la fermentación para carbohidratos usando API 50CH
Sustratos
R2C2 INIX K2 ES1 ATCC 43761
Número de pruebas
4 2 3 3
Glicerina
Eritritol
D-Arabinosa
L-Arabinosa
Ribosa
D-xilosa
L-xilosa
Adonitol
β-Metil glicósido
Galactosa
D-Glucosa
D-Fructosa
D-Manosa
L-Sorbosa
Ramnosa
Dulcitol
Inositol
Manitol
Sorbitol
α-metil-D
α-metil-D
N-acetil
Amigdalina
Arbutina
Esculina
Salicina
Celobiosa
Maltosa
Lactosa
Melibiosa
Sacarosa
Trehalosa
Inulina
Melezitosa
D-Rafinosa
Almidón
Glicógeno
xilitol
β-Gentibiosa
D-Turanosa
D-Lixosa
D-Tagarosa
D-Fucosa
L-Fucosa
D-Arabitol
L-Arabitol
Gluconato
2-ceto-gluconato
5-ceto-gluconato
imagen5
6
Perfiles de fermentación de metabolitos
Las Tablas 2 a 4 proporcionan los datos acerca de la fermentación de metabolitos (escala de 1 a 5 definida como 1 es débil a 5 que es fuerte, + = 5 y - significa que no hay reacción.
Tabla 2
Fermentación de metabolitos para la cepa R2C2
imagen6
imagen7 JM 3 JM 19 2 JM7 imagen8 JJFT
Tiempo de incubación (h)
imagen9 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96
imagen10
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Glicerina
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Eritritol
imagen45 imagen46 imagen47 imagen48 imagen49 imagen50 imagen51 imagen52 imagen53 imagen54 imagen55 imagen56 imagen57 imagen58 imagen59 imagen60 imagen61
D-Arabinosa
imagen62 imagen63 imagen64 imagen65 imagen66 imagen67 imagen68 imagen69 imagen70 imagen71 imagen72 imagen73 imagen74 imagen75 imagen76 imagen77 imagen78
L-Arabinosa
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Ribosa
imagen96 imagen97 imagen98 imagen99 imagen100 imagen101 imagen102 imagen103 imagen104 imagen105 imagen106 imagen107 imagen108 imagen109 imagen110 imagen111 imagen112
D-xilosa
imagen113 imagen114 imagen115 imagen116 imagen117 imagen118 imagen119 imagen120 imagen121 imagen122 imagen123 imagen124 imagen125 imagen126 imagen127 imagen128 imagen129
L-xilosa
imagen130 imagen131 imagen132 imagen133 imagen134 imagen135 imagen136 imagen137 imagen138 imagen139 imagen140 imagen141 imagen142 imagen143 imagen144 imagen145 imagen146
Adonitol
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β-Metil glicósido
imagen164 imagen165 imagen166 imagen167 imagen168 imagen169 imagen170 imagen171 imagen172 imagen173 imagen174 imagen175 imagen176 imagen177 imagen178 imagen179 imagen180
Galactose
imagen181 5 5 5 5 imagen182 imagen183 imagen184 imagen185 imagen186 imagen187 imagen188 imagen189 imagen190 imagen191 imagen192 imagen193
D-Glucosa
imagen194 5 5 5 5 5 5 5 5 + + + + 4 5 5 imagen195
D-Fructosa
imagen196 5 5 5 5 5 5 5 5 + + + + 4 5 5 imagen197
D-Manosa
imagen198 3 5 5 5 - 3 3 3 + + + + - - 1 imagen199
L-Sorbosa
imagen200 imagen201 imagen202 imagen203 imagen204 imagen205 imagen206 imagen207 imagen208 imagen209 imagen210 imagen211 imagen212 imagen213 imagen214 imagen215 imagen216
Ramnosa
imagen217 imagen218 imagen219 imagen220 imagen221 imagen222 imagen223 imagen224 imagen225 imagen226 imagen227 imagen228 imagen229 imagen230 imagen231 imagen232 imagen233
Dulcitol
imagen234 imagen235 imagen236 imagen237 imagen238 imagen239 imagen240 imagen241 imagen242 imagen243 imagen244 imagen245 imagen246 imagen247 imagen248 imagen249 imagen250
Inositol
imagen251 imagen252 imagen253 imagen254 imagen255 imagen256 imagen257 imagen258 imagen259 imagen260 imagen261 imagen262 imagen263 imagen264 imagen265 imagen266 imagen267
Manitol
imagen268 4 4 5 5 2 4 5 5 4 4 + + 1 4 5 imagen269
Sorbitol
imagen270 imagen271 imagen272 imagen273 imagen274 imagen275 imagen276 imagen277 imagen278 imagen279 imagen280 imagen281 imagen282 imagen283 imagen284 imagen285 imagen286
α-Metil-D-Manosida
imagen287 imagen288 imagen289 imagen290 imagen291 imagen292 imagen293 imagen294 imagen295 imagen296 imagen297 imagen298 imagen299 imagen300 imagen301 imagen302 imagen303
α-Metil-D-glucósido
imagen304 imagen305 imagen306 imagen307 imagen308 imagen309 imagen310 imagen311 imagen312 imagen313 imagen314 imagen315 imagen316 imagen317 1 - -
N-acetil glucosamina
imagen318 4 5 5 5 imagen319 imagen320 imagen321 imagen322 + + + + 0 4 5 imagen323
Amigdalina
imagen324 imagen325 imagen326 imagen327 imagen328 imagen329 imagen330 imagen331 imagen332 imagen333 imagen334 imagen335 imagen336 imagen337 imagen338 imagen339 imagen340
Arbutina
imagen341 imagen342 imagen343 imagen344 imagen345 - - 1 2 1 3 4 + imagen346 imagen347 imagen348 imagen349
Esculina
imagen350 1 4 4 4 3 4 4 4 3 4 + + 4 5 5 imagen351
Salicina
imagen352 1 1 1 2 - 3 3 3 1 4 + + - - 2 imagen353
Celobiosa
imagen354 imagen355 imagen356 imagen357 imagen358 imagen359 imagen360 imagen361 imagen362 imagen363 imagen364 imagen365 imagen366 imagen367 imagen368 imagen369 imagen370
Maltosa
imagen371 3 4 5 5 2 4 5 5 + + + + 1 3 3 imagen372
7
imagen373
D-Manosa
4 4 5 5 2 5 5 5
L-Sorbosa
imagen374 imagen375 imagen376 imagen377 imagen378 imagen379 imagen380 imagen381
Ramnosa
imagen382 imagen383 imagen384 imagen385 imagen386 imagen387 imagen388 imagen389
Dulcitol
imagen390 imagen391 imagen392 imagen393 imagen394 imagen395 imagen396 imagen397
Inositol
imagen398 imagen399 imagen400 imagen401 imagen402 imagen403 imagen404 imagen405
Manitol
4 4 5 5 1 3 5 5
Sorbitol
imagen406 imagen407 imagen408 imagen409 imagen410 imagen411 imagen412 imagen413
α-Metil-D-Manosida
imagen414 imagen415 imagen416 imagen417 imagen418 imagen419 imagen420 imagen421
α-Metil-D-glucósido
imagen422 imagen423 imagen424 imagen425 imagen426 imagen427 imagen428 imagen429
N-acetil glucosamina
1 3 5 5 - 1 1 1
Amigdalina
imagen430 imagen431 imagen432 imagen433 imagen434 imagen435 imagen436 imagen437
Arbutina
imagen438 imagen439 imagen440 imagen441 1 1 2 2
Esculina
2 4 4 4 4 4 4 5
Salicina
1 3 3 3 1 2 3 4
Celobiosa
imagen442 imagen443 imagen444 imagen445 imagen446 imagen447 imagen448 imagen449
Maltosa
3 4 5 5 2 4 5 5
Lactosa
5 5 5 5 5 5 5 5
Melbiosa
imagen450 imagen451 imagen452 imagen453 imagen454 imagen455 imagen456 imagen457
Sacarosa
3 4 5 5 - 1 3 3
Trehalosa
5 5 5 5 1- 5 5 5
Inulina
imagen458 imagen459 imagen460 imagen461 imagen462 imagen463 imagen464
Melezitosa
imagen465 imagen466 imagen467 imagen468 imagen469 imagen470 imagen471 imagen472
D-Rafinosa
1 3 5 5 - 1 2 2
Almidón
imagen473 imagen474 imagen475 imagen476 imagen477 imagen478 imagen479 imagen480
Glicógeno
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Xilitol
imagen489 imagen490 imagen491 imagen492 imagen493 imagen494 imagen495 imagen496
β-Gentibiosa
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D-Turanosa
imagen505 imagen506 imagen507 imagen508 imagen509 imagen510 imagen511 imagen512
D-Lixosa
imagen513 imagen514 imagen515 imagen516 imagen517 imagen518 imagen519 imagen520
D-Taqarosa
imagen521 imagen522 imagen523 imagen524 imagen525 imagen526 imagen527 imagen528
D-Fucosa
imagen529 imagen530 imagen531 imagen532 imagen533 imagen534 imagen535 imagen536
D-Arabitol
imagen537 imagen538 imagen539 imagen540 imagen541 imagen542 imagen543 imagen544
L-Arabitol
imagen545 imagen546 imagen547 imagen548 imagen549 imagen550 imagen551 imagen552
Gluconato
imagen553 imagen554 imagen555 imagen556 imagen557 imagen558 imagen559 imagen560
2-ceto-gluconato
imagen561 imagen562 imagen563 imagen564 imagen565 imagen566 imagen567 imagen568
5-ceto-gluconato
imagen569 imagen570 imagen571 imagen572 imagen573 imagen574 imagen575 imagen576
9
Tabla 4
Fermentación de metabolitos para la cepa K2
imagen577
JM 34 JM 21 2 JM6
Tiempo de incubación (h)
24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96
imagen578
imagen579 imagen580 imagen581 imagen582 imagen583 imagen584 imagen585 imagen586 imagen587 imagen588 imagen589 imagen590
Glicerina
imagen591 imagen592 imagen593 imagen594 imagen595 imagen596 imagen597 imagen598 imagen599 imagen600 imagen601 imagen602
Eritritol
imagen603 imagen604 imagen605 imagen606 imagen607 imagen608 imagen609 imagen610 imagen611 imagen612 imagen613 imagen614
D-Arabinosa
imagen615 imagen616 imagen617 imagen618 imagen619 imagen620 imagen621 imagen622 imagen623 imagen624 imagen625 imagen626
L-Arabinosa
imagen627 imagen628 imagen629 imagen630 imagen631 imagen632 imagen633 imagen634 imagen635 imagen636 imagen637 imagen638
Ribosa
imagen639 imagen640 imagen641 imagen642 imagen643 imagen644 imagen645 imagen646 imagen647 imagen648 imagen649 imagen650
D-xilosa
imagen651 imagen652 imagen653 imagen654 imagen655 imagen656 imagen657 imagen658 imagen659 imagen660 imagen661 imagen662
L-xilosa
imagen663 imagen664 imagen665 imagen666 imagen667 imagen668 imagen669 imagen670 imagen671 imagen672 imagen673 imagen674
Adonitol
imagen675 imagen676 imagen677 imagen678 imagen679 imagen680 imagen681 imagen682 imagen683 imagen684 imagen685 imagen686
β-Metil glicósido
imagen687 imagen688 imagen689 imagen690 imagen691 imagen692 imagen693 imagen694 imagen695 imagen696 imagen697 imagen698
Galactosa
imagen699 imagen700 imagen701 imagen702 imagen703 imagen704 imagen705 imagen706 imagen707 imagen708 imagen709 imagen710
D-Glucosa
5 5 5 5 5 5 5 5 + + + +
D-Fructosa
5 5 5 5 5 5 5 5 + + + +
D-Manosa
4 5 5 5 4 5 5 5 + + + +
L-Sorbosa
imagen711 imagen712 imagen713 imagen714 imagen715 imagen716 imagen717 imagen718 imagen719 imagen720 imagen721 imagen722
Ramnosa
imagen723 imagen724 imagen725 imagen726 imagen727 imagen728 imagen729 imagen730 imagen731 imagen732 imagen733 imagen734
Dulcitol
imagen735 imagen736 imagen737 imagen738 imagen739 imagen740 imagen741 imagen742 imagen743 imagen744 imagen745 imagen746
Inositol
imagen747 imagen748 imagen749 imagen750 imagen751 imagen752 imagen753 imagen754 imagen755 imagen756 imagen757 imagen758
Manitol
imagen759 imagen760 imagen761 imagen762 imagen763 imagen764 imagen765 imagen766 imagen767 imagen768 imagen769 imagen770
Sorbitol
imagen771 imagen772 imagen773 imagen774 imagen775 imagen776 imagen777 imagen778 imagen779 imagen780 imagen781 imagen782
α-Metil-D-Manosida
imagen783 imagen784 imagen785 imagen786 imagen787 imagen788 imagen789 imagen790 imagen791 imagen792 imagen793 imagen794
α-Metil-D-glucósido
imagen795 imagen796 imagen797 imagen798 imagen799 imagen800 imagen801 imagen802 imagen803 imagen804 imagen805 imagen806
N-acetilo glucosamina
imagen807 imagen808 imagen809 imagen810 3 5 5 5 + + + +
Amigdalina
1 1 - - - - 3 5 1 4 + +
Arbutina
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Esculina
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Salicina
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Celobiosa
5 5 5 5 5 5 5 5 + + + +
Maltosa
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Lactosa
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Melbiosa
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Sacarosa
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Trehalosa
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Inulina
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Melezitosa
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D-Rafinosa
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Almidón
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Glicógeno
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xilitol
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β-Gentibiosa
4 5 5 5 4 4 4 4 + + + +
D-Turanosa
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D-Lixosa
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D-Tagarosa
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D-Fucosa
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D-Arabitol
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L-Arabitol
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Gluconato
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2-ceto-gluconato
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Trehalosa
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Clasificación de la cepa para especies de Lactobacillus kefiranofaciens:
La comparación de secuencias de ARN 16S es un medio ampliamente aceptado para la clasificación de cepas de lactobacillus. El gen 16S de las cinco cepas de lactobacilos diferentes fueron amplificados por PCR (mediante el uso de las secuencias de iniciador directo de sec. con núm. de ident.:1 y la del iniciador inverso de sec. con núm. de ident.:2) y se secuenciaron. Las diferentes cepas se clasificaron todas filogenéticamente para las especies de Lactobacillus kefiranofaciens a través de un alineamiento de las secuencias obtenidas con las de 80 secuencias 16S de Lactobacillus disponibles en NCBI y de la cepa de referencia ATCC 43761.
Las secuencias complementarias correspondientes de secuencias de ARN 16S de las cepas R2C2 (sec. con núm. de ident.:3), INIX (sec. con núm. de ident.:4) , BioSP (sec. con núm. de ident.:5), K2 (sec. con núm. de ident.:6) y ES1 (sec. con núm. de ident.:7) se enumeran en el listado de secuencias.
Procedimiento de conteo bacteriano
El método FACS para evaluar el número de bacterias y la supervivencia se usó como sigue. Antes de realizar un conteo de bacterias mediante el uso de un citómetro, todos los agregados tienen que ser disociados. Las cepas de lactobacilos R2C2 e INIX presentadas en la presente tienen una tendencia a formar agregados pequeños e inestables. La disociación se puede conseguir fácilmente por resuspensión de las cepas en PBS pirofosfato (15 mM). Las cepas BioSP y K2 (particularmente BioSP) forman agregados de gran tamaño que no pueden ser disociados mediante el uso de sólo PBS pirofosfato. Después de la resuspensión, estas dos cepas se deben calentar a 55 °C durante un período de 30 minutos. Después, las cepas se exponen durante 15 minutos a temperatura ambiente a bromuro de etidio, que se une al ADN para que cada bacteria se vuelva detectable por citometría. Las series de diluciones (1/10, 1/100, 1/1000) se llevan a cabo a continuación, para hacer un conteo más preciso.
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