ES2396397B1

ES2396397B1 - INDUCTION AND SYNCHRONIZATION METHOD OF OVULATION FOR SYSTEMATIC ARTIFICIAL INSEMINATION IN CAPRINE LIVESTOCK, IMPROVED.

Info

Publication number: ES2396397B1
Application number: ES201131349A
Authority: ES
Inventors: Antonio LÓPEZ SEBASTIÁN; Juan Antonio CARRIZOSA DURÁN; Baltasar URRUTIA LÓPEZ; Amelia GÓMEZ BRUNET; Julián SANTIAGO MORENO; Adolfo TOLEDANO DÍAZ; Miguel Ángel COLOMBA EUSEBIO
Original assignee: Instituto Nacional de Investigacion y Tecnologia Agraria y Alimentaria INIA
Current assignee: Instituto Nacional de Investigacion y Tecnologia Agraria y Alimentaria INIA
Priority date: 2011-08-02
Filing date: 2011-08-02
Publication date: 2014-01-22
Anticipated expiration: 2031-08-02
Also published as: ES2396397A1

Abstract

Adición a la patente ES2235654 método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino.#La presente invención divulga un método basado en la inducción de la ovulación mediante estímulo ovárico provocado por la presencia de los machos después de un periodo de aislamiento de machos y hembras (efecto macho); además el tratamiento comprende la administración a la hembra de progesterona vía intravaginal, con lo que se consigue la sincronización del celo y la ovulación, que permite la inseminación artificial sistemática por los métodos habituales.Addition to patent ES2235654 method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in goats. # The present invention discloses a method based on the induction of ovulation by ovarian stimulation caused by the presence of males after a period of time. isolation of males and females (male effect); In addition, the treatment includes the administration to the female of progesterone intravaginally, thereby achieving synchronization of heat and ovulation, which allows systematic artificial insemination by the usual methods.

Description

ADICIÓN A LA PATENTE ES2235654 MÉTODO DE INDUCCIÓN Y SINCRONIZACIÓN DE LA OVULACIÓN PARA LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL SISTEMÁTICA EN GANADO CAPRINO. ADDITION TO THE PATENT ES2235654 METHOD OF INDUCTION AND SYNCHRONIZATION OF OVULATION FOR SYSTEMATIC ARTIFICIAL INSEMINATION IN CAPRINE LIVESTOCK.

5 FIELD OF THE INVENTION

La presente invención es una adición a la patente ES 2235654. La invención divulga un método para el control de la ovulación en la reproducción de ganado caprino. Más concretamente se trata de un sistema de inducción y sincronización de la ovulación en las The present invention is an addition to the patent ES 2235654. The invention discloses a method for the control of ovulation in the reproduction of goats. More specifically, it is an ovulation induction and synchronization system in the

10 hembras, para llevar acabo el proceso de inseminación artificial sistemática, sin detección previa del celo. El objeto de la invención es proporcionar un método eficaz, basado en la capacidad de estímulo ovárico de las hembras, provocado por la presencia de los machos (efecto macho) y la administración intravaginal de progesterona, junto con el efecto luteolítico de los análogos de la prostaglandina F2α. Se trata de un método aplicable en el 10 females, to carry out the systematic artificial insemination process, without prior heat detection. The object of the invention is to provide an effective method, based on the ovarian stimulation capacity of females, caused by the presence of males (male effect) and intravaginal administration of progesterone, together with the luteolitic effect of analogues of the prostaglandin F2α. This is an applicable method in the

15 sector ganadero para la reproducción de ganado caprino. 15 livestock sector for the breeding of goats.

STATE OF THE TECHNIQUE

En el ganado caprino el desarrollo de la inseminación artificial está ligado al uso de In goats, the development of artificial insemination is linked to the use of

20 metodologías de inducción y sincronización del celo y la ovulación, mediante tratamientos hormonales que permiten un alto grado de sincronización del celo en los grupos de hembras tratadas, y esto a su vez permite el uso de la inseminación artificial sistemática sin detección previa del celo. Estos sistemas tienen numerosas ventajas de tipo práctico, como es la posibilidad de 20 methodologies for induction and synchronization of heat and ovulation, through hormonal treatments that allow a high degree of heat synchronization in the treated female groups, and this in turn allows the use of systematic artificial insemination without prior heat detection. These systems have numerous practical advantages, such as the possibility of

25 realizar la inseminación simultánea de grupos numerosos de hembras, en muy poco tiempo, manteniendo la calidad del semen y la uniformidad de la inseminación. Estos métodos implican el uso de un progestágeno, generalmente en un soporte de espuma de poliuretano que se inserta por vía vaginal y, se mantiene intravaginalmente durante 11 días. El día 9 después de la inserción se inyectan, por vía intramuscular 100 μg de un análogo de la 25 Perform simultaneous insemination of numerous groups of females, in a very short time, maintaining semen quality and uniformity of insemination. These methods involve the use of a progestogen, usually in a polyurethane foam holder that is inserted vaginally and is maintained intravaginally for 11 days. On day 9 after insertion, 100 μg of an analogue of the injection is injected intramuscularly

30 prostaglandina F2α, junto con una dosis, también intramuscular, de alrededor de 300 UI de gonadotropina coriónica equina (eCG). 30 prostaglandin F2α, along with a dose, also intramuscular, of about 300 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG).

El día 11 se retiran las esponjas vaginales y el celo comienza a aparecer a partir de las 24 horas, siendo la mayor concentración de celo sobre las 30 horas, teniendo lugar las ovulaciones entre las 48 y 60 horas. Todas las hembras tratadas son inseminadas a las 46 - 47 35 horas después de la retirada de las esponjas vaginales, con semen refrigerado a 5ºC o con semen congelado, por vía cervical, con los catéteres habituales de inseminación para estaOn day 11 the vaginal sponges are removed and the heat begins to appear after 24 hours, with the highest concentration of heat over 30 hours, with ovulations taking place between 48 and 60 hours. All treated females are inseminated at 46-47 35 hours after removal of vaginal sponges, with semen refrigerated at 5 ° C or with frozen semen, cervically, with the usual insemination catheters for this

especie. Con estos tratamientos, los porcentajes de fertilidad medios de este celo inducido son de alrededor del 50%. species. With these treatments, the average fertility percentages of this induced heat are around 50%.

Junto a la ventaja de hacer posible la inseminación de grandes grupos de hembras simultáneamente, con celo sincronizado, estos métodos, presentan también diversos inconvenientes. Los mayores son los relacionados con las características de los compuestos hormonales utilizados, principalmente los progestágenos, ya que los residuos, sobre todo en leche, obligan a periodos de supresión del ordeño durante el tratamiento y hasta 14 días después del mismo. Together with the advantage of making it possible to inseminate large groups of females simultaneously, with synchronized heat, these methods also have several drawbacks. The major ones are those related to the characteristics of the hormonal compounds used, mainly progestogens, since residues, especially in milk, require periods of milking suppression during treatment and up to 14 days after it.

Otros inconvenientes son los relacionados con el uso de la eCG, ya que siendo una proteína de alto peso molecular, de origen equino, provoca tasas elevadas de anticuerpos, con el consiguiente fallo de respuesta a partir del segundo o tercer tratamiento. Other disadvantages are those related to the use of eCG, since being a high molecular weight protein, of equine origin, causes high antibody rates, with the consequent failure of response from the second or third treatment.

Estos tratamientos hormonales no tienen tampoco una eficacia total en el porcentaje de hembras con celo inducido, que no suele alcanzar de media el 90% de las hembras tratadas, así como el porcentaje de hembras ovulando y el grado de sincronización de las ovulaciones que oscila en un rango mínimo de 24 horas. Teniendo en cuenta las limitaciones que plantea este tipo de tratamientos, la patente ES 2235654 resolvió de forma plenamente satisfactoria la problemática anteriormente expuesta. Dicha patente ES 2235654 divulga un método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino, caracterizado porque comprende las etapas de: These hormonal treatments also do not have a total efficacy in the percentage of females with induced heat, which usually does not reach on average 90% of the females treated, as well as the percentage of females ovulating and the degree of synchronization of the ovulations that oscillates in a minimum range of 24 hours. Taking into account the limitations posed by this type of treatment, the patent ES 2235654 solved in a fully satisfactory manner the problem set forth above. Said patent ES 2235654 discloses a method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in goats, characterized in that it comprises the steps of:

--: Separación de hembras y machos, evitando contactos de visión y olor durante al menos un mes; Separation of females and males, avoiding vision and odor contacts for at least one month;

--: Introducción de machos y administración a las hembras de 25 mg de progesterona en vehículo oleoso por vía intramuscular; Introduction of males and administration to females of 25 mg of progesterone in an oily vehicle intramuscularly;

--: Pasados 9 días, se realiza el tratamiento de las hembras, por vía intramuscular, administrándolas un análogo de la prostaglandina F2! a una concentración de 100 ∀g; After 9 days, the females are treated intramuscularly, giving them an analog of prostaglandin F2! at a concentration of 100 ;g;

--: Finalmente, 50 horas después del tratamiento con prostaglandina F2!, se lleva a cabo la inseminación artificial sistemática por los métodos habituales. Finally, 50 hours after treatment with prostaglandin F2 !, systematic artificial insemination is carried out by the usual methods.

A posteriori, la Unión Europea prohibió la administración, vía intramuscular, de determinadas sustancias de naturaleza hormonal, entre ellas la progesterona, por lo que el método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino descrito en la solicitud ES 2235654 no podía ser utilizado. Para solucionar este inconveniente, la presente invención ha diseñado una nueva metodología para la inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino, basada en el efecto macho junto con la administración intravaginal de progesterona mediante una formulación veterinaria en forma de capsulas de gelatina que contienen progesterona en un vehículo oleoso. Subsequently, the European Union banned the administration, intramuscularly, of certain substances of a hormonal nature, including progesterone, so that the method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in goat cattle described in application ES 2235654 could not be used. To solve this problem, the present invention has designed a new methodology for the induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in goats, based on the male effect together with intravaginal administration of progesterone through a veterinary formulation in the form of capsules. of gelatin containing progesterone in an oily vehicle.

DESCRIPTION OF THE INVENTION

El nuevo método de inducción y sincronización de la ovulación para la reproducción e inseminación artificial sistemática en ganado caprino que la invención propone, resuelve de forma plenamente satisfactoria la problemática anteriormente expuesta. Este método, al igual que el descrito en la patente ES 2235654, está basado en la capacidad de estímulo ovárico provocado por la presencia de los machos después de un periodo de aislamiento de machos y hembras (efecto macho). El estímulo viene determinado por el efecto de las feromonas del macho, que a través de los bulbos olfatorios alcanzan el hipotálamo y son capaces de estimular la pulsatilidad de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) induciendo la ovulación. En el caso del ganado caprino, el celo fértil y la ovulación inducida por la presencia de los machos, se producen entre el día 7 y 9 después de la introducción de los machos. The new method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial reproduction and insemination in goats that the invention proposes, solves in a fully satisfactory way the problems previously exposed. This method, like the one described in the patent ES 2235654, is based on the capacity of ovarian stimulation caused by the presence of the males after a period of isolation of males and females (male effect). The stimulus is determined by the effect of male pheromones, which through the olfactory bulbs reach the hypothalamus and are capable of stimulating the pulsatility of the gonadotropin-releasing hormone (GnRH) by inducing ovulation. In the case of goats, fertile heat and ovulation induced by the presence of males, occur between day 7 and 9 after the introduction of the males.

Una vez inducido el celo y la ovulación de las hembras, es importante su sincronización, de manera que se pueda llevar a cabo la inseminación artificial sistemática a todo el grupo de hembras. Como método de sincronización de la ovulación inducida por la presencia de los machos así como reducción del intervalo entre la introducción de los machos y la ovulación, se administra progesterona por vía intravaginal, mediante una formulación veterinaria en forma de cápsula o similar que contiene 120 mg de progesterona diluida en un vehículo, preferentemente, de naturaleza oleosa, en el momento de la introducción de los machos. Dicha formulación veterinaria está comprendida en una sustancia inerte, preferentemente gelatina, lo que permite, junto con el vehículo de naturaleza oleosa y el resto de excipientes que puede contener la formulación, como por ejemplo, lecitina de soja, la liberación mantenida o prolongada de la progesterona durante al menos unas 30 horas después de la administración de dichas cápsulas. Once the females' ovulation and ovulation are induced, their synchronization is important, so that systematic artificial insemination can be carried out to the entire group of females. As a method of synchronization of the ovulation induced by the presence of the males as well as reduction of the interval between the introduction of the males and the ovulation, progesterone is administered intravaginally, by means of a capsule or similar veterinary formulation containing 120 mg. of progesterone diluted in a vehicle, preferably oily in nature, at the time of the introduction of the males. Said veterinary formulation is comprised of an inert substance, preferably gelatin, which allows, together with the vehicle of an oily nature and the rest of the excipients that the formulation may contain, such as, for example, soy lecithin, the sustained or prolonged release of the progesterone for at least about 30 hours after administration of said capsules.

Una vez realizado todo el proceso anteriormente descrito de inducción y sincronización del celo y la ovulación, el momento más idóneo para la inseminación artificial sistemática son 60 horas después del tratamiento con prostaglandina, obteniendo con ello unos resultados de fertilidad medios del 60% de las hembras tratadas, superiores a los hasta ahora conocidos en el estado de la técnica. Once all the previously described process of induction and synchronization of heat and ovulation has been performed, the most suitable time for systematic artificial insemination is 60 hours after treatment with prostaglandin, thereby obtaining average fertility results of 60% of females treated, superior to those previously known in the state of the art.

Por tanto, uno de los objetos de la presente invención se refiere a una formulación veterinaria en forma de cápsula o similar que comprende progesterona en combinación con un vehículo, preferentemente, oleoso. La formulación veterinaria de la invención, si se desea, puede contener también, cuando sea necesario, excipientes para aumentar, controlar o dirigir de otro modo el efecto deseado de la misma, así como sustancias auxiliares o sustancias veterinariamente aceptables, tales como agentes tamponantes, tensioactivos, codisolventes, conservantes, etc. Dichas sustancias aceptables para preparar una formulación veterinaria son conocidas, en general, por los técnicos en la materia y se usan normalmente en la elaboración de dichas composiciones. Ejemplos de vehículos veterinarios adecuados se pueden encontrar en cualquier manual de tecnología farmacéutica y/o veterinaria (Farmacia Galénica). Therefore, one of the objects of the present invention relates to a capsule or similar veterinary formulation comprising progesterone in combination with a preferably oily vehicle. The veterinary formulation of the invention, if desired, may also contain, when necessary, excipients for increasing, controlling or otherwise directing the desired effect thereof, as well as auxiliary substances or veterinarily acceptable substances, such as buffering agents, surfactants, cosolvents, preservatives, etc. Said acceptable substances for preparing a veterinary formulation are generally known to those skilled in the art and are normally used in the preparation of said compositions. Examples of suitable veterinary vehicles can be found in any pharmaceutical and / or veterinary technology manual (Galenic Pharmacy).

El término “vehículo" se refiere a cualquier sustancia empleada en las formulaciones farmacéuticas y/o veterinarias, para diluir el complejo total hasta un volumen o peso determinado. Dichas sustancias deben estar aprobadas por una agencia reguladora del gobierno federal o un gobierno estatal o enumerado en la Farmacopea Estadounidense o la Farmacopea Europea, u otra farmacopea reconocida generalmente para su uso en animales. The term "vehicle" refers to any substance used in pharmaceutical and / or veterinary formulations, to dilute the total complex to a certain volume or weight. Such substances must be approved by a federal government regulatory agency or a state or listed government in the American Pharmacopoeia or the European Pharmacopoeia, or other pharmacopoeia generally recognized for use in animals.

Otro de los objetos de la presente invención se refiere a un método de inducción y sincronización de la ovulación en ganado caprino que comprende la administración vía intravaginal, de la formulación veterinaria descrita previamente. Another object of the present invention relates to a method of induction and synchronization of ovulation in goats that includes intravaginal administration of the veterinary formulation previously described.

Esta metodología, y debido a las variaciones estacionales de la actividad cíclica de las hembras, se empleará entre los meses de marzo a junio, época de anestro estacional. El resto del año, cuando existen porcentajes más o menos elevados de hembras cíclicas, el tratamiento será el mismo pero se incluirá además, una inyección del análogo de la prostaglandina F2α en el momento de la introducción de los machos, para sincronizar el celo de las posibles hembras cíclicas. This methodology, and due to seasonal variations in the cyclic activity of females, will be used between the months of March to June, the season of seasonal anestrous. The rest of the year, when there are more or less high percentages of cyclic females, the treatment will be the same but it will also include an injection of the prostaglandin analogue F2α at the time of the introduction of the males, to synchronize the heat of the Possible cyclic females.

Description of the figures

Figura 1. Liberación de progesterona en muestras de plasma sanguíneo de cabras sometidas a un método de administración de progesterona mediante inyección intramuscular (D) o mediante cápsulas por vía intravaginal (#). En el eje X se muestra el tiempo expresado en horas y en el eje Y se muestra la concentración de progesterona expresada en ng/ml. Figure 1. Progesterone release in blood plasma samples from goats undergoing a method of progesterone administration by intramuscular injection (D) or by intravaginal capsules (#). The time expressed in hours is shown on the X axis and the progesterone concentration expressed in ng / ml is shown on the Y axis.

Detailed description of the invention

Uno de los objetos de la presente invención se refiere a una formulación veterinaria de administración intravaginal, de liberación no inmediata, preferentemente prolongada, que comprende progesterona y, al menos, un vehículo veterinariamente aceptable. One of the objects of the present invention relates to a veterinary formulation of intravaginal administration, non-immediate release, preferably prolonged, comprising progesterone and, at least, a veterinarily acceptable carrier.

En una realización preferida, la formulación de la invención se caracteriza por que la formulación se presenta en forma de cápsula o similar, preferentemente en forma de cápsula de gelatina. A efectos de la presente invención, el término similar hace referencia a cualquier formulación, según se define en la presente invención que permita una liberación prolongada In a preferred embodiment, the formulation of the invention is characterized in that the formulation is presented in the form of a capsule or the like, preferably in the form of a gelatin capsule. For the purposes of the present invention, the term similar refers to any formulation, as defined in the present invention that allows prolonged release.

o mantenida de su contenido, pudiendo presentarse en forma de cápsula, píldora, tableta, comprimido, gragea, etc. En otra realización preferida, la formulación de la invención se caracteriza por que comprende además, al menos, un excipiente veterinariamente aceptable. or maintained of its content, being able to present itself in the form of a capsule, pill, tablet, tablet, tablet, etc. In another preferred embodiment, the formulation of the invention is characterized in that it further comprises at least one veterinarily acceptable excipient.

En otra realización preferida, la formulación de la invención se caracteriza por que la concentración de progesterona varía entre 100 mg a 150 mg, siendo preferentemente dicha concentración de 120 mg. In another preferred embodiment, the formulation of the invention is characterized in that the concentration of progesterone ranges from 100 mg to 150 mg, said concentration being preferably 120 mg.

En otra realización preferida, la formulación de la invención se caracteriza por que el vehículo es de naturaleza oleosa y se selecciona entre cualquiera de los siguientes: aceite de palma o aceite de oliva. In another preferred embodiment, the formulation of the invention is characterized in that the vehicle is oily in nature and is selected from any of the following: palm oil or olive oil.

En otra realización preferida, la formulación de la invención se caracteriza por que el vehículo de naturaleza oleosa es aceite de palma. In another preferred embodiment, the formulation of the invention is characterized in that the oily nature vehicle is palm oil.

Otro de los objetos descritos en la presente invención se refiere al uso de la formulación descrita anteriormente para la inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado, preferentemente ganado caprino. Another object described in the present invention relates to the use of the formulation described above for the induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in cattle, preferably goats.

Otro de los objetos de la presente invención se refiere a un método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado, caracterizado por que comprende las siguientes etapas: Another object of the present invention relates to an ovulation induction and synchronization method for systematic artificial insemination in cattle, characterized in that it comprises the following steps:

--: Introducción de machos y administración a las hembras, vía intravaginal, de la formulación veterinaria descrita en la presente invención; Introduction of males and administration to females, intravaginally, of the veterinary formulation described in the present invention;

--: Administración, por vía intramuscular, 9 días después de la introducción de los machos y de la administración intravaginal de la formulación veterinaria de la invención, de un análogo de la prostaglandina F2α; Administration, intramuscularly, 9 days after the introduction of males and intravaginal administration of the veterinary formulation of the invention, of an analogue of prostaglandin F2α;

--: 60 horas después del tratamiento con prostaglandina F2α, se lleva a cabo la inseminación artificial sistemática por los métodos habituales. 60 hours after treatment with prostaglandin F2α, systematic artificial insemination is carried out by the usual methods.

En otra realización preferida, el método de la invención se caracteriza por que se realiza en ganado caprino. In another preferred embodiment, the method of the invention is characterized in that it is carried out in goats.

En otra realización preferida de la invención, el método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino se caracteriza por que los machos se introducen en una proporción mínima de 1/12. In another preferred embodiment of the invention, the method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in goats is characterized in that males are introduced in a minimum proportion of 1/12.

En otra realización preferida, el método de la invención se caracteriza por que la formulación comprende entre 100 mg a 150 mg de progesterona, siendo preferentemente dicha concentración de 120 mg. In another preferred embodiment, the method of the invention is characterized in that the formulation comprises between 100 mg to 150 mg of progesterone, said concentration being preferably 120 mg.

En otra realización preferida, el método de la invención se caracteriza por que la progesterona está diluida en un vehículo oleoso, siendo el mismo, preferentemente, aceite de palma. In another preferred embodiment, the method of the invention is characterized in that the progesterone is diluted in an oily vehicle, the same being preferably palm oil.

En otra realización preferida, el método de la invención se caracteriza por que la dosis administrada del análogo de la prostaglandina F2α, preferentemente el cloprostenol varía entre 50 μg a 100 μg siendo preferentemente dicha concentración de 75 μg. In another preferred embodiment, the method of the invention is characterized in that the administered dose of the prostaglandin analog F2α, preferably cloprostenol ranges from 50 μg to 100 μg, said concentration being preferably 75 μg.

En otra realización preferida el método de la invención, se caracteriza por que la formulación veterinaria descrita en la presente invención se encuentra en forma de cápsula o similar, preferentemente en forma de cápsula de gelatina. In another preferred embodiment the method of the invention is characterized in that the veterinary formulation described in the present invention is in the form of a capsule or the like, preferably in the form of a gelatin capsule.

En otra realización preferida, el método de la invención se caracteriza por que en el periodo del año que no esté comprendido entre marzo y junio, el tratamiento será el mismo que el descrito en las reivindicaciones anteriores, pero incluirá la inyección a las hembras de una dosis del análogo de la prostaglandina F2α, en el momento de la introducción de los machos. In another preferred embodiment, the method of the invention is characterized in that in the period of the year that is not between March and June, the treatment will be the same as that described in the preceding claims, but will include the injection into the females of a dose of the prostaglandin analog F2α, at the time of the introduction of the males.

El ejemplo que se describe a continuación tiene como objeto ilustrar la invención, sin limitar el alcance de la misma. The example described below is intended to illustrate the invention, without limiting the scope thereof.

Ejemplo. Comparación entre la efectividad del método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial en ganado caprino basado en la administración de progesterona mediante inyección intramuscular respecto a la administración de progesterona vía intravaginal. Example. Comparison between the effectiveness of the ovulation induction and synchronization method for artificial insemination in goats based on the administration of progesterone by intramuscular injection with respect to the administration of progesterone intravaginally.

En primer lugar se analizó la capacidad de la administración de progesterona mediante la formulación veterinaria descrita en la presente invención, vía intravaginal, en cabras para inducir la descarga preovulatoria de la hormona luteinizante (LH), responsable First, the ability to administer progesterone was analyzed using the veterinary formulation described in the present invention, intravaginally, in goats to induce the unloading of the luteinizing hormone (LH), responsible for

de la ovulación, respecto al método basado en la inyección intramuscular de progesterona descrito en la patente ES 2235654. Para ello, se llevo a cabo la separación de los animales hembras y machos, privándolos de visión y olor durante al menos un mes. Las hembras (n=24) se dividieron en of ovulation, with respect to the method based on the intramuscular injection of progesterone described in the patent ES 2235654. For this, the separation of the female and male animals was carried out, depriving them of vision and smell for at least one month. The females (n = 24) were divided into

5 tres grupos (n=8). Pasado ese tiempo se introducen los machos, en una proporción de uno por cada 12 hembras y a la vez se administra a cada grupo de hembras el tratamiento adecuado. El grupo 1 (G1) fue tratado con 25 mg de progesterona vía intramuscular en aceite de oliva en el momento de introducción de los machos. El grupo 3 (G3) fue tratado con la formulación veterinaria de la invención, vía intravaginal, que contenía 120 mg de 5 three groups (n = 8). After that time the males are introduced, in a proportion of one for every 12 females and at the same time the appropriate treatment is administered to each group of females. Group 1 (G1) was treated with 25 mg of progesterone intramuscularly in olive oil at the time of introduction of the males. Group 3 (G3) was treated with the veterinary formulation of the invention, intravaginally, containing 120 mg of

10 progesterona en aceite de palma, también en el momento de introducción de los machos. El grupo 2 (G2) se corresponde con el grupo control que fue tratado con un tratamiento clásico, progestágeno vía esponja intravaginal (FGA: acetato de fluorogestona) durante 30 h después de la introducción de los machos. 10 progesterone in palm oil, also at the time of introduction of the males. Group 2 (G2) corresponds to the control group that was treated with a classic treatment, progestogen via intravaginal sponge (FGA: fluorogestone acetate) for 30 h after the introduction of the males.

Como se puede observar en la Tabla 1, no se mostraron diferencias significativas en 15 el tratamiento ni en el intervalo de aparición del celo o en el pico pre-ovulatorio de la LH. As can be seen in Table 1, no significant differences were shown in the treatment or in the interval of occurrence of heat or in the pre-ovulatory peak of LH.

Tabla 1. Número de horas medio de aparición del pico pre-ovulatorio de la LH tras la administración de progesterona vía intramuscular (Grupo 1), administración de progestágeno vía intravaginal mediante esponja (Grupo 2) o administración de progesterona vía Table 1. Average number of hours of appearance of the pre-ovulatory peak of LH after intramuscular administration of progesterone (Group 1), administration of intravaginal progesterone via sponge (Group 2) or administration of progesterone via

20 intravaginal mediante cápsulas de gelatina (Grupo 3). 20 intravaginal by means of gelatin capsules (Group 3).

Grupo 1 Group 1: Grupo 2 Grupo 3 Group 2 Group number 3

Nº Animal Animal No.
Nº Animal Animal No.
Nº Animal Animal No.

4038 6010 7002 8015 7020 8013 7023 6052 4038 6010 7002 8015 7020 8013 7023 6052: 18 3021 3013 6034 6033 7029 8016 8010 3026 6047 6046 7035 7031 8020 7114 8014 18 3021 3013 6034 6033 7029 8016 8010 3026 6047 6046 7035 7031 8020 7114 8014

Media Half: 67,00 64,00 58,00 67.00 64.00 58.00

SD SD: 3,55 3,70 7,09 3.55 3.70 7.09

ES IS: 0,24 0,24 0,33 0.24 0.24 0.33

Mediante el tratamiento intramuscular con progesterona, la descarga de LH endógena y por tanto, la ovulación se retrasan unas horas respecto al tratamiento con la cápsula intravaginal de progesterona, pero el grado de respuesta y sincronización es similar. El pico pre-ovulatorio de LH ocurrió a las 67,0 ± 3,5 h en el grupo G1 al que se le administró la progesterona por vía intramuscular. El pico pre-ovulatorio de LH ocurrió a las 64,0 ± 3,7 h en el grupo G2 (grupo control) al que se le administró el progestágeno FGA mediante esponjas intravaginales, las cuales se retiraron 30 horas después de su aplicación y, por último, en el grupo G3, grupo tratado con las capsulas intravaginales según la formulación veterinaria descrita en la presente invención, el pico pre-ovulatorio de LH ocurrió a las 65,0 ± 1,3 h. 58,0 ± 7,1 h. Through intramuscular treatment with progesterone, the discharge of endogenous LH and therefore, ovulation is delayed a few hours compared to treatment with the intravaginal progesterone capsule, but the degree of response and synchronization is similar. The pre-ovulatory peak of LH occurred at 67.0 ± 3.5 h in the G1 group to which the progesterone was administered intramuscularly. The pre-ovulatory peak of LH occurred at 64.0 ± 3.7 h in the G2 group (control group) to which the FGA progestogen was administered by intravaginal sponges, which were removed 30 hours after application and, Finally, in group G3, a group treated with intravaginal capsules according to the veterinary formulation described in the present invention, the pre-ovulatory peak of LH occurred at 65.0 ± 1.3 h. 58.0 ± 7.1 h.

Adicionalmente, se analizó la liberación de progesterona en el plasma sanguíneo de cabras tratadas con progesterona vía intramuscular o vía intravaginal respectivamente. Ambos grupos de cabras estaban ovariectomizadas, dado que para el análisis de liberación de progesterona mediante cualquier método conocido en el estado de la técnica, es necesaria la ovariectomía de los animales y posteriormente, se les recogieron muestras de sangre cada hora y cada 2 horas después del tratamiento. Una vez recogidas las muestras de sangre y sometidas a centrifugación para obtener el plasma sanguíneo, se determinaron las concentraciones de progesterona en dicho plasma mediante técnicas de análisis radioinmunológico. Additionally, the release of progesterone in blood plasma from goats treated with progesterone intramuscularly or intravaginally, respectively, was analyzed. Both groups of goats were ovariectomized, since for the analysis of progesterone release by any method known in the state of the art, ovariectomy of the animals is necessary and subsequently, blood samples were collected every hour and every 2 hours after of treatment Once the blood samples were collected and subjected to centrifugation to obtain the blood plasma, the progesterone concentrations in said plasma were determined by radioimmunological analysis techniques.

Como se puede observar en la Figura 1, la liberación de progesterona en ambos grupos de animales fue similar, por lo tanto y como ya hemos comentado previamente, la sincronización de la ovulación es similar en ambos grupos de animales. Por tanto, el nuevo método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino basado en la administración intravaginal de progesterona mediante la formulación veterinaria descrita en la presente invención, es una alternativa válida para llevar a cabo dicho método y salvar la prohibición de la UE para la administración de progesterona vía intramuscular. As can be seen in Figure 1, the release of progesterone in both groups of animals was similar, therefore and as we have already commented previously, the synchronization of ovulation is similar in both groups of animals. Therefore, the new method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in goats based on intravaginal administration of progesterone by the veterinary formulation described in the present invention, is a valid alternative to carry out said method and save the EU ban on the administration of intramuscular progesterone.

Posteriormente, se procedió al análisis de las tasas de gestación que presentaban las cabras tratadas con progesterona por vía intramuscular respecto a las tratadas con progesterona por vía intravaginal, como se describe en la presente invención. Pasados 9 días del tratamiento con progesterona vía intramuscular o intravaginal, y efecto macho se sometió a ambos grupos de animales al tratamiento, vía intramuscular, con un análogo de la prostaglandina F2!, específicamente con closprostenol (Estrumate®, Schering-Plough) a una dosis que puede variar de entre 50 ∀g a 100 ∀g, utilizando preferentemente una dosis de Subsequently, the gestation rates presented by the goats treated with intramuscular progesterone with respect to those treated with intravaginal progesterone were analyzed, as described in the present invention. After 9 days of treatment with progesterone intramuscularly or intravaginally, and male effect, both groups of animals were subjected to intramuscular treatment with an analogue of prostaglandin F2 !, specifically with closprostenol (Estrumate®, Schering-Plow) at a dose that can vary from 50 ∀ to 100 ∀g, preferably using a dose of

75 μg. 60 horas después del tratamiento con dicho análogo de la prostaglandina F2!, ambos grupos de animales fueron inseminados vía intravaginal mediante los métodos habituales. Las tasas de gestación obtenidas en ambos grupos de animales fueron similares. El grupo de animales tratados con la administración intramuscular de progesterona (n=61) 75 μg 60 hours after treatment with said prostaglandin analog F2 !, both groups of animals were inseminated intravaginally by the usual methods. The gestation rates obtained in both groups of animals were similar. The group of animals treated with intramuscular administration of progesterone (n = 61)

5 presentaron una tasa de gestación de un 60,6% y el grupo de animales tratados con las cápsulas intravaginales de progesterona (n = 62) descritas en la presente invención, mostraron una tasa de gestación de un 58,5%. 5 presented a pregnancy rate of 60.6% and the group of animals treated with the intravaginal progesterone capsules (n = 62) described in the present invention showed a pregnancy rate of 58.5%.

En conclusión, los resultados ponen de manifiesto que el uso, por vía intravaginal, de las cápsulas de progesterona descritas en la presente invención, en el momento de la In conclusion, the results show that the use, intravaginally, of the progesterone capsules described in the present invention, at the time of

10 introducción de los machos, seguido del tratamiento, vía intramuscular, con un análogo de la prostaglandina F2!, nueve días más tarde, constituye un método efectivo para sincronizar estros y ovulaciones durante el anestro estacional en ganado caprino. The introduction of males, followed by intramuscular treatment, with an analogue of prostaglandin F2 !, nine days later, is an effective method to synchronize estrus and ovulation during seasonal anesthesia in goats.

Claims

R E I V I N D I C A C I O N E S

1. Method of induction and synchronization of ovulation for systematic artificial insemination in cattle characterized by comprising the following stages: - Separation of females and males, avoiding vision and odor contacts for at least one month;

--: Introducción de machos y administración a las hembras, vía intravaginal, de una formulación veterinaria de liberación no inmediata que comprenda progesterona; Introduction of males and administration to females, intravaginally, of a non-immediate veterinary formulation comprising progesterone;

--: Administración, por vía intramuscular, de un análogo de la prostaglandina F2α, 9 días después de la introducción de los machos de la administración intravaginal de la formulación veterinaria de liberación no inmediata que comprenda progesterona; Administration, intramuscularly, of an analogue of prostaglandin F2α, 9 days after the introduction of males of intravaginal administration of the non-immediate veterinary formulation comprising progesterone;

2. 2.: Método según la reivindicación 1 caracterizado por que el ganado es caprino. Method according to claim 1 characterized in that the cattle are goats.

3. 3.: Método según las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado por que los machos se introducen en una proporción mínima de 1/12. Method according to claims 1 to 2, characterized in that the males are introduced in a minimum proportion of 1/12.

4. Four.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la formulación de progesterona comprende además un vehículo veterinariamente aceptable. Method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the progesterone formulation further comprises a veterinarily acceptable carrier.

5.5.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que la concentración de progesterona en la formulación varía de entre 100-150 mg. Method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the concentration of progesterone in the formulation varies between 100-150 mg.

6. 6.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que la concentración de progesterona en la formulación es de 120 mg. Method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the concentration of progesterone in the formulation is 120 mg.

7. 7.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, caracterizado por que el vehículo es de naturaleza oleosa. Method according to any of claims 4 to 6, characterized in that the vehicle is oily in nature.

8. 8.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, caracterizado por que el vehículo de naturaleza oleosa se selecciona entre: aceite de palma o aceite de oliva. Method according to any of claims 4 to 7, characterized in that the oily nature vehicle is selected from: palm oil or olive oil.

9. 9.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, caracterizado por que el vehículo de naturaleza oleosa es aceite de palma. Method according to any of claims 4 to 8, characterized in that the oily nature vehicle is palm oil.

10.10.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado por que la formulación está en forma de cápsula. Method according to any one of claims 1 to 9, characterized in that the formulation is in capsule form.

11. eleven.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado por que el análogo de la prostaglandina es closprostenol. Method according to any of claims 1 to 10, characterized in that the analog of prostaglandin is closprostenol.

12. 12.: Método según la reivindicación 11, caracterizado por que la dosis administrada del análogo de la prostaglandina F2α, closprostenol, es de 75 μg. Method according to claim 11, characterized in that the administered dose of the prostaglandin analog F2α, closprostenol, is 75 μg.

13. 13.: Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado por que en el periodo del año que no esté comprendido entre marzo y junio, el tratamiento será el mismo que el descrito en las reivindicaciones anteriores, pero incluirá la inyección a las hembras de una dosis del análogo de la prostaglandina F2α, en el momento de la introducción de los machos. Method according to any of claims 1 to 12, characterized in that in the period of the year that is not included between March and June, the treatment will be the same as that described in the preceding claims, but will include the injection to the females of a dose of the prostaglandin analog F2α, at the time of the introduction of the males.

14. 14.: Uso de una formulación veterinaria de administración intravaginal de liberación no inmediata que comprende progesterona y, al menos, un vehículo veterinariamente aceptable para la inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial en ganado, utilizable en el método de las reivindicaciones 1-13. Use of a non-immediate release intravaginal veterinary formulation comprising progesterone and at least one veterinarily acceptable vehicle for induction and synchronization of ovulation for artificial insemination in cattle, usable in the method of claims 1-13.

15. fifteen.: Uso según la reivindicación 14 dónde la formulación veterinaria comprende además un excipiente veterinariamente aceptable. Use according to claim 14 wherein the veterinary formulation further comprises a veterinarily acceptable excipient.

16. 16.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 15 donde la concentración de progesterona en la formulación varía de entre 100 a 150 mg. Use according to any of claims 14 to 15 wherein the concentration of progesterone in the formulation ranges from 100 to 150 mg.

17. 17.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16 donde la concentración de progesterona en la formulación es 120 mg. Use according to any of claims 14 to 16 wherein the concentration of progesterone in the formulation is 120 mg.

18. 18.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17 caracterizado por que el vehículo veterinariamente aceptable de la formulación es de naturaleza oleosa. Use according to any of claims 14 to 17 characterized in that the veterinarily acceptable vehicle of the formulation is of an oily nature.

19. 19.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18 caracterizado por que el vehículo de naturaleza oleosa se selecciona entre: aceite de palma o aceite de oliva. Use according to any of claims 14 to 18, characterized in that the oily nature vehicle is selected from: palm oil or olive oil.

20. Use according to any of claims 14 to 19 characterized in that the oil-based vehicle 5 is palm oil.

21. Use according to any of claims 14 to 20 characterized in that the formulation is presented in capsule form or the like.

10. Use according to any of claims 14 to 21 characterized in that the cattle are goats.

Figure 1

SPANISH OFFICE OF THE PATENTS AND BRAND

Application number: 201131349

SPAIN

Date of submission of the application: 02.08.2011

Priority Date:

REPORT ON THE STATE OF THE TECHNIQUE

51 Int. Cl.: A61D19 / 00 (2006.01)

RELEVANT DOCUMENTS

Categoría Category: 56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas 56 Documents cited Claims Affected

A TO: DÍAZ DELFA et al. Inducción y sincronización de ovulaciones en cabras de la raza murcianogranadina, mediante la utilización del efecto macho y progesterona. SEOC 2002, [en línea] [recuperado el 26.09.2012]. Recuperado en Internet: <URL:http://www.exopol.com/seoc/docs/gxg8p7cw.pdf>. Material y Métodos. 1-22 DÍAZ DELFA et al. Induction and synchronization of ovulations in goats of the Murcian breed, through the use of the male and progesterone effect. SEOC 2002, [online] [retrieved on 26.09.2012]. Recovered on the Internet: <URL: http: //www.exopol.com/seoc/docs/gxg8p7cw.pdf>. Material and methods. 1-22

A TO: RUIZ et al. Evaluación de diferentes tratamientos hormonales para la sincronización del estro en cabras criollas serranas durante el verano. Zootecnia Tropical. 2002, Vol. 20, nº 4, páginas 473-482. Material y Métodos. 1-22 RUIZ et al. Evaluation of different hormonal treatments for the synchronization of estrus in Creole mountain goats during the summer. Tropical Zootechnics 2002, Vol. 20, No. 4, pages 473-482. Material and methods. 1-22

A TO: LASSOUED et al. Effect of progesterone on ovulation rate andoestrus cycle length induced by the male effect in the Barbarineewe and Tunisian local goat. Reproduction Nutrition Development. 1995, Vol. 35, nº 4, páginas 415-426. Resumen. Recuperado en Internet: <URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7546232> 1-22 LASSOUED et al. Effect of progesterone on ovulation rate andoestrus cycle length induced by the male effect in the Barbarineewe and Tunisian local goat. Reproduction Nutrition Development. 1995, Vol. 35, No. 4, pages 415-426. Summary. Recovered on the Internet: <URL: http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7546232> 1-22

Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud Category of the documents cited X: of particular relevance Y: of particular relevance combined with other / s of the same category A: reflects the state of the art O: refers to unwritten disclosure P: published between the priority date and the date of priority submission of the application E: previous document, but published after the date of submission of the application

El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº: This report has been prepared • for all claims • for claims no:

Fecha de realización del informe 28.09.2012 Date of realization of the report 28.09.2012: Examinador J. López Nieto Página 1/4 Examiner J. López Nieto Page 1/4

REPORT OF THE STATE OF THE TECHNIQUE

Application number: 201131349

Minimum documentation sought (classification system followed by classification symbols) A61D Electronic databases consulted during the search (name of the database and, if possible, terms of

search used) INVENES, EPODOC, WPI, ELSEVIER DATABASE

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WRITTEN OPINION

Application number: 201131349

Date of Written Opinion: 28.09.2012

Statement

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Novelty (Art. 6.1 LP 11/1986): Reivindicaciones 1-22 Reivindicaciones SI NO Claims 1-22 Claims IF NOT

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Inventive activity (Art. 8.1 LP11 / 1986): Reivindicaciones 1-22 Reivindicaciones SI NO Claims 1-22 Claims IF NOT

The application is considered to comply with the industrial application requirement. This requirement was evaluated during the formal and technical examination phase of the application (Article 31.2 Law 11/1986).

Opinion Base.-

This opinion has been made on the basis of the patent application as published.

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WRITTEN OPINION

Application number: 201131349

1. Documents considered.-

The documents belonging to the state of the art taken into consideration for the realization of this opinion are listed below.

Documento Document: Número Publicación o Identificación Fecha Publicación Publication or Identification Number publication date

D01 D01: DÍAZ DELFA et al. Inducción y sincronización de ovulaciones en cabras de la raza murciano-granadina, mediante la utilización del efecto macho y progesterona. SEOC 2002, [en línea] [recuperado el 26.09.2012]. Recuperado en Internet: <URL:http://www.exopol.com/seoc/docs/gxg8p7cw.pdf>. Material y Métodos DÍAZ DELFA et al. Induction and synchronization of ovulations in goats of the Murcia-Granada race, through the use of the male and progesterone effect. SEOC 2002, [online] [retrieved on 26.09.2012]. Recovered on the Internet: <URL: http: //www.exopol.com/seoc/docs/gxg8p7cw.pdf>. Material and methods

D02 D02: RUIZ et al. Evaluación de diferentes tratamientos hormonales para la sincronización del estro en cabras criollas serranas durante el verano. Zootecnia Tropical. 2002, Vol. 20, nº 4, páginas 473-482. Material y Métodos. RUIZ et al. Evaluation of different hormonal treatments for the synchronization of estrus in Creole mountain goats during the summer. Tropical Zootechnics 2002, Vol. 20, No. 4, pages 473-482. Material and methods.

D03 D03: LASSOUED et al. Effect of progesterone on ovulation rate andoestrus cycle length induced by the male effect in the Barbarineewe and Tunisian local goat. Reproduction Nutrition Development. 1995, Vol. 35, nº 4, páginas 415-426. Resumen. Recuperado en Internet: <URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7546232 LASSOUED et al. Effect of progesterone on ovulation rate andoestrus cycle length induced by the male effect in the Barbarineewe and Tunisian local goat. Reproduction Nutrition Development. 1995, Vol. 35, No. 4, pages 415-426. Summary. Recovered on the Internet: <URL: http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7546232

2. Statement motivated according to articles 29.6 and 29.7 of the Regulations for the execution of Law 11/1986, of March 20, on Patents on novelty and inventive activity; quotes and explanations in support of this statement

The object of the invention is an ovulation induction and synchronization method for systematic artificial insemination in cattle that is characterized by comprising the following stages: -Separation of males and females, avoiding vision and odor contacts for at least one month; -Introduction of males and administration to females, intravaginally, of a non-immediate veterinary formulation comprising progesterone; - Administration, intramuscularly, of an analogue of prostaglandin F2-alpha, 9 days after the introduction of males and intravaginal administration of progesterone; - Performing systematic artificial insemination 60 hours after treatment with prostaglandin F2-alpha (Claims 1-14) The use of a veterinary formula for intravaginal administration of non-immediate release comprising progesterone and at least one vehicle is also claimed. Veterinarily acceptable for induction and synchronization of ovulation for artificial insemination in cattle, usable in the previous method (Claims 15-22) Document D01 contains a study on the induction and synchronization of ovulation in goats by using the male effect and progesterone (Material and Methods) As in the method of the invention, progesterone is administered in an oily vehicle to a group of females, before putting them in contact with the males, however, in this procedure, the progesterone is delivered intramuscularly. and in addition prostaglandin F2-alpha is not subsequently administered. Document D02 is a study to evaluate the efficiency of two hormonal treatments in heat synchronization in goats. One hormonal treatment consisted in the administration of prostaglandin and the other in the application of intravaginal sponges impregnated with medroxyprogesterone (Materials and methods) Although this procedure pursues the synchronization of ovulation in goats and uses hormones similar to those of the process of the invention, The steps that follow are different from the claimed procedure. In document D03 female goats are treated with intramuscular progesterone just before their contact with males to study the effect of progesterone on the induction of ovulation in females (Summary) In this study we conclude that Progesterone increases the ovulation rate induced by the male effect. The manner of administering progesterone and the total process are different from that of the invention. Documents D01-D03 are part of the state of the art close to the invention but do not affect its novelty or inventive activity. Therefore, the invention set forth in claims 1-22 meets the requirements of novelty and inventive activity within the meaning of Art. 6.1 and 8.1 of Patent Law 11/86.

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