ES2376205B1 - BACTERIAL MICROORGANISM HEREROTROFO TERMOFILO OF THE GENRE UREIBACILLUS AND ITS USE FOR THE PRODUCTION OF SULFATES - Google Patents
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Abstract
Microorganismo bacteriano heterótrofo termófilo del género Ureibacillus y su uso para la producción de sulfatos.#La presente invención se refiere a un microorganismo de la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. También se refiere al uso de un microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus o de una población bacteriana que comprende un microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus, para la producción de sulfato, donde preferiblemente el sulfato forma un precipitado, o a un método concreto para la producción de sulfato. Asimismo, la presente invención se refiere al uso de dichos microorganismos para consolidar y/o remediar un material inerte mediante el sulfato precipitado y a un método concreto para la consolidación y/o remediación de dicho material inerte.Heterotrophic thermophilic bacterial microorganism of the genus Ureibacillus and its use for the production of sulfates. # The present invention relates to a microorganism of the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628. It also refers to the use of a microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus or a bacterial population comprising a microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus, for the production of sulfate, where sulfate preferably forms a precipitate, or to a specific method for Sulfate production Likewise, the present invention relates to the use of said microorganisms to consolidate and / or remedy an inert material by precipitated sulfate and to a specific method for the consolidation and / or remediation of said inert material.
Description
La presente invención se refiere a un microorganismo de la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. También se refiere al uso de un microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus o de una población bacteriana que comprende un microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus, para la producción de sulfato, donde preferiblemente el sulfato forma un precipitado, o a un método concreto para la producción de sulfato. Asimismo, la presente invención se refiere al uso de dichos microorganismos para consolidar y/o remediar un material inerte mediante el sulfato precipitado y a un método concreto para la consolidación y/o remediación de dicho material inerte. The present invention relates to a microorganism of the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628. It also refers to the use of a microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus or a bacterial population comprising a microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus, for the production of sulfate, where sulfate preferably forms a precipitate, or to a specific method for Sulfate production Likewise, the present invention relates to the use of said microorganisms to consolidate and / or remedy an inert material by precipitated sulfate and to a specific method for the consolidation and / or remediation of said inert material.
Frente al deterioro de materiales rocosos, por ejemplo edificios y monumentos, se ha propuesto que podrían ser útil diversos mecanismos de compactación de materiales disgregados (como por ejemplo, arenas o areniscas) o la impermeabilización de superficies construidas es de importancia para consolidar estructuras y materiales o evitar un progresivo deterioro de superficies y edificios. En este sentido, son conocidos diversos procedimientos para la consolidación de piedras de construcción o superficies de materiales usando bacterias calcinogénicas productoras de CaCO3 como es el caso de los géneros Micrococcus y Bacillus para el refuerzo de piedra por precipitación y formación de cristales de CaCO3 (Tiano et al., 1999. Journal of Microbiological Methods, 36 [1-2]: 139-145), por biomineralización bacteriana usando bacterias productoras de carbonatos, como Myxococcus xanthus, que producen la precipitación de carbonato cálcico en la piedra (Jiménez-López et al., 2007. Chemosphere, 68 [10]: 1929-1936) o un procedimiento de protección y/o tratamiento de superficies artificiales por revestimiento de la superficie, preferiblemente roca calcárea, mediante la incrustación de carbonatos de calcio llevada a cabo por microorganismos, preferiblemente de los géneros Bacillus o Pseudomonas (ES2064673 T3). Faced with the deterioration of rocky materials, for example buildings and monuments, it has been proposed that various mechanisms for compacting disaggregated materials (such as sand or sandstone) could be useful or the waterproofing of constructed surfaces is of importance to consolidate structures and materials or avoid progressive deterioration of surfaces and buildings. In this sense, various procedures for the consolidation of building stones or material surfaces using calcinogenic bacteria producing CaCO3 are known, such as the Micrococcus and Bacillus genera for stone reinforcement by precipitation and crystal formation of CaCO3 (Tiano et al., 1999. Journal of Microbiological Methods, 36 [1-2]: 139-145), by bacterial biomineralization using carbonate-producing bacteria, such as Myxococcus xanthus, that cause precipitation of calcium carbonate in the stone (Jiménez-López et al., 2007. Chemosphere, 68 [10]: 1929-1936) or a method of protection and / or treatment of artificial surfaces by surface coating, preferably calcareous rock, by embedding calcium carbonates carried out by microorganisms, preferably of the genera Bacillus or Pseudomonas (ES2064673 T3).
Uno de los inconvenientes del uso de carbonatos es que la precipitación y disolución de los mismos depende del pH, por tanto, agua de lluvia (generalmente con un pH ácido, por debajo de 7) puede dar lugar a la disolución de esos precipitados. Esto es lo que ocurre en muchos monumentos y edificios debido al lavado o disolución de minerales. Además, las bacterias propuestas para la remediación de dichos materiales son capaces de crecer a temperaturas ambientales lo que podría originar consecuencias secundarias como resultado de su crecimiento posterior. One of the disadvantages of the use of carbonates is that the precipitation and dissolution thereof depend on the pH, therefore, rainwater (generally with an acidic pH, below 7) can lead to the dissolution of these precipitates. This is what happens in many monuments and buildings due to the washing or dissolution of minerals. In addition, the bacteria proposed for the remediation of these materials are capable of growing at ambient temperatures, which could lead to secondary consequences as a result of their subsequent growth.
También es conocido el uso de especies del género Pseudomonas en procesos de restauración como frescos o monumentos (Ranalli et al., 2005. Journal of Applied Microbiology, 98: 73-83) o utilizando la enzima Proteasa purificada de dicha bacteria. En dicha publicación, Ranalli et al., propusieron eliminar compuestos orgánicos (pegamentos, por ejemplo, utilizando Pseudomonas). It is also known to use species of the genus Pseudomonas in restoration processes such as frescoes or monuments (Ranalli et al., 2005. Journal of Applied Microbiology, 98: 73-83) or using the Protease enzyme purified from said bacterium. In that publication, Ranalli et al., Proposed eliminating organic compounds (adhesives, for example, using Pseudomonas).
Por tanto, existe la necesidad de compactar materiales excesivamente porosos, remediar materiales que tras erosión o disolución hayan perdido parte de sus componentes minerales, así como impermeabilizar los substratos, superficies, Therefore, there is a need to compact excessively porous materials, remedy materials that after erosion or dissolution have lost part of their mineral components, as well as waterproofing substrates, surfaces,
o edificios, entre otras estructuras, por medio de un procedimiento biológico que solucione el problema planteado sin generar efectos derivados, es decir, evitando el crecimiento posterior de los microorganismos así como la disolución de los complejos precipitados. or buildings, among other structures, by means of a biological procedure that solves the problem posed without generating derivative effects, that is, avoiding the subsequent growth of microorganisms as well as the dissolution of precipitated complexes.
La presente invención se refiere a un microorganismo de la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. El microorganismo pertenece muy probablemente a la especie Ureibacillus thermosphaericus ya que, tras la secuenciación de 656 nucleótidos del gen 16S rRNA se determinó que la identidad era del 97% respecto a dicha especie. La presente invención también se refiere al uso de un microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus o de una población bacteriana que comprende un microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus, para la producción de sulfato, donde preferiblemente el sulfato forma un precipitado, o a un método concreto para la producción de sulfato. Asimismo, la presente invención se refiere al uso de dichos microorganismos para consolidar y/o remediar un material inerte mediante el sulfato precipitado y a un método concreto para la consolidación y/o remediación de dicho material inerte. The present invention relates to a microorganism of the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628. The microorganism most likely belongs to the species Ureibacillus thermosphaericus since, after sequencing of 656 nucleotides of the 16S rRNA gene it was determined that the identity was 97% with respect to that species. The present invention also relates to the use of a microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus or of a bacterial population comprising a microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus, for the production of sulfate, where sulfate preferably forms a precipitate, or a Concrete method for sulfate production. Likewise, the present invention relates to the use of said microorganisms to consolidate and / or remedy an inert material by precipitated sulfate and to a specific method for the consolidation and / or remediation of said inert material.
La presente invención se refiere al uso de una cepa de la especie Ureibacillus sp. (bacteria heterótrofa termófila) capaz de producir sulfatos durante su crecimiento. Aunque los inventores han observado la existencia de especies bacterianas que presentan esas propiedades, han seleccionado la cepa Ureibacillus sp. CECT7628 porque produce cantidades de sulfatos en una concentración más alta que el resto de cepas ensayadas o conocidas en el estado de la técnica. Esta bacteria crece óptimamente entre 45 y 55ºC, con temperaturas máximas de crecimiento de unos 70ºC. El medio empleado para su crecimiento es caldo nutritivo (definido en el apartado de ejemplos). Para obtener sulfatos precipitados se puede complementar el medio con cloruro de calcio para obtener sulfato de calcio o yeso como producto final. Las bacterias propuestas producen sulfatos a partir del azufre presente en los nutrientes orgánicos del medio y este proceso no depende de compuestos inorgánicos de azufre en el medio. The present invention relates to the use of a strain of the species Ureibacillus sp. (thermophilic heterotrophic bacteria) capable of producing sulfates during their growth. Although the inventors have observed the existence of bacterial species that have these properties, they have selected the strain Ureibacillus sp. CECT7628 because it produces amounts of sulfates in a higher concentration than the other strains tested or known in the state of the art. This bacterium grows optimally between 45 and 55ºC, with maximum growth temperatures of about 70ºC. The medium used for its growth is nutritious broth (defined in the examples section). To obtain precipitated sulfates, the medium can be supplemented with calcium chloride to obtain calcium sulfate or gypsum as the final product. The proposed bacteria produce sulfates from the sulfur present in the organic nutrients of the medium and this process does not depend on inorganic sulfur compounds in the medium.
La cepa bacteriana propuesta produce concentraciones de sulfatos superiores a 1 mM en solución y esta cantidad se aumenta considerablemente al complementar el medio, por ejemplo, pero sin limitarse, con cloruro de calcio y precipitar los sulfatos en solución. El crecimiento de esta bacteria se produce en un máximo de unos cinco días, dependiendo de las condiciones de temperatura y nutrientes a que se lleva a cabo dicho crecimiento. En condiciones óptimas, la bacteria termófila propuesta puede alcanzar su máximo crecimiento en uno o dos días. Tras el crecimiento, se puede llevar a cabo un lavado con agua de la suspensión de células y nutrientes proporcionados para eliminar en lo posible los restos del tratamiento. The proposed bacterial strain produces sulfate concentrations greater than 1 mM in solution and this amount is considerably increased by supplementing the medium, for example, but not limited to, with calcium chloride and precipitating the sulfates in solution. The growth of this bacterium occurs in a maximum of about five days, depending on the temperature and nutrient conditions at which said growth takes place. Under optimal conditions, the proposed thermophilic bacterium can reach its maximum growth in one or two days. After growth, a water wash of the suspension of cells and nutrients provided can be carried out to eliminate as much as possible the remains of the treatment.
La cepa seleccionada en la presente invención puede usarse, por ejemplo, en la conservación de materiales rocosos, por ejemplo edificios y monumentos, o en la compactación de materiales disgregados (como por ejemplo, arenas o areniscas) o en la impermeabilización de superficies construidas. The strain selected in the present invention can be used, for example, in the conservation of rocky materials, for example buildings and monuments, or in the compaction of disaggregated materials (such as sand or sandstone) or in the waterproofing of constructed surfaces.
Un aspecto de la presente invención se refiere a un microorganismo de la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. Tal como se muestra en los ejemplos de la presente invención, la secuenciación de 656 nucleótidos del gen 16S rRNA dió como resultado un 97% de identidad con otras cepas de la especie Ureibacillus thermosphaericus al comparar dicha secuencia con las secuencias disponibles de las bases de datos públicas, por tanto, la cepa de la presente invención puede pertenecer, muy probablemente a la especie U. thermosphaericus. One aspect of the present invention relates to a microorganism of the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628. As shown in the examples of the present invention, sequencing of 656 nucleotides of the 16S rRNA gene resulted in 97% identity with other strains of the Ureibacillus thermosphaericus species when comparing said sequence with the available sequences of the databases public, therefore, the strain of the present invention may belong, most likely to the species U. thermosphaericus.
La clasificación científica de la cepa CECT7628 de la presente invención es: Reino: Bacteria / División: Firmicutes / Clase: Bacilli / Orden: Bacillales / Familia: Noctuoidea / Género: Ureibacillus. The scientific classification of strain CECT7628 of the present invention is: Kingdom: Bacteria / Division: Firmicutes / Class: Bacilli / Order: Bacillales / Family: Noctuoidea / Genus: Ureibacillus.
Dicho microorganismo ha sido depositado en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) el 13 de noviembre de 2009 y le correspondió el nº de depósito CECT7628. La dirección de dicha Autoridad Internacional de depósito es: Universidad de Valencia / Edificio de investigación / Campus de Burjassot / 46100 Burjassot (Valencia). Said microorganism has been deposited in the Spanish Type Culture Collection (CECT) on November 13, 2009 and corresponded with deposit number CECT7628. The address of said International Deposit Authority is: University of Valencia / Research building / Campus of Burjassot / 46100 Burjassot (Valencia).
La cepa CECT7628 es capaz de crecer en caldo nutritivo (por litro: Extracto de Carne, 3,0 g; Peptona, 5,0 g; pH 6,8-7,0. Para medio sólido se añaden 20 g de agar), a una temperatura óptima de crecimiento de 50ºC. Las temperaturas mínima y máxima de crecimiento son 40ºC y 70ºC, respectivamente. The strain CECT7628 is capable of growing in nutritious broth (per liter: Meat Extract, 3.0 g; Peptone, 5.0 g; pH 6.8-7.0. For a solid medium 20 g of agar are added), at an optimum growth temperature of 50 ° C. The minimum and maximum growth temperatures are 40ºC and 70ºC, respectively.
Asimismo, la presente invención también se refiere a un microorganismo derivado del microorganismo depositado con nº de acceso CECT7628. El microorganismo derivado puede producirse de forma intencionada, por métodos mutagénicos conocidos en el estado de la técnica como por ejemplo, el crecimiento de dicho microorganismo original en exposición con conocidos agentes capaces de forzar mutagénesis. Likewise, the present invention also relates to a microorganism derived from the microorganism deposited with accession number CECT7628. The derived microorganism can be produced intentionally, by mutagenic methods known in the state of the art such as, for example, the growth of said original microorganism on exposure with known agents capable of forcing mutagenesis.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a una población bacteriana que comprende el microorganismo con número de acceso CECT7628. La población bacteriana puede estar formada por otras cepas de microorganismos pertenecientes a la misma especie o a una especie distinta. La población bacteriana es un conjunto de al menos dos células en cualquier fase del estado de desarrollo, entre las cuales al menos una es del microorganismo mencionado. El microorganismo de la presente invención puede formar esporas, por tanto, dicho microorganismo puede referirse tanto a una célula esporulada como no esporulada. Another aspect of the present invention relates to a bacterial population comprising the microorganism with accession number CECT7628. The bacterial population may be formed by other strains of microorganisms belonging to the same or a different species. The bacterial population is a set of at least two cells at any stage of the developmental state, among which at least one is of the mentioned microorganism. The microorganism of the present invention can form spores, therefore, said microorganism can refer to both a sporulated and non-sporulated cell.
Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus, o al uso de una población bacteriana que comprende un microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus, para la producción de sulfato. Es decir, este aspecto de la invención se refiere al uso de cualquier cepa de la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus o a una población que comprenda cualquier cepa del microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus, para la producción de sulfato. Another aspect of the present invention relates to the use of a microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus, or to the use of a bacterial population comprising a microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus, for the production of sulfate. That is, this aspect of the invention relates to the use of any strain of the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus or to a population comprising any strain of the microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus, for the production of sulfate.
La bacteria de la presente invención es capaz de crecer a expensas de la oxidación de compuestos orgánicos. Existen distintos compuestos orgánicos que contienen azufre, como por ejemplo, las proteínas (en los aminoácidos cisteina y metionina). Cofactores y coenzimas (como la coenzima A y sus derivados entre otros), vitaminas (biotina, vitamina B1, ácido lipoico), o una variedad de compuestos encontrados en la naturaleza como DMSO (sulfóxido de dimetilo) o ácidos húmicos entre otros muchos. En estudios previos, las bacterias que oxidan compuestos reducidos del azufre suelen oxidar comúnmente ácido sulfhídrico (H2S), azufre elemental (S0) o tiosulfato (S2O32-), The bacterium of the present invention is capable of growing at the expense of the oxidation of organic compounds. There are different organic compounds that contain sulfur, such as proteins (in the amino acids cysteine and methionine). Cofactors and coenzymes (such as coenzyme A and its derivatives among others), vitamins (biotin, vitamin B1, lipoic acid), or a variety of compounds found in nature such as DMSO (dimethyl sulfoxide) or humic acids among many others. In previous studies, bacteria that oxidize reduced sulfur compounds usually oxidize hydrogen sulfide (H2S), elemental sulfur (S0) or thiosulfate (S2O32-),
o cualquier otro compuesto inorgánico reducido del azufre, produciendo sulfato como producto final: or any other reduced inorganic sulfur compound, producing sulfate as the final product:
S2- + 2 O2 ---------- SO42-S0 + 2 H2O + ½ O2 ---------- SO42- + 2 H+ S2O32-+ H2O + 2 O2 ---------- 2 SO42- + 2 H+ S2- + 2 O2 ---------- SO42-S0 + 2 H2O + ½ O2 ---------- SO42- + 2 H + S2O32- + H2O + 2 O2 ---- ------ 2 SO42- + 2 H +
Los compuestos reducidos del azufre de la presente invención tienen origen orgánico ya que, como demuestran los inventores, sólo se observa producción de sulfatos cuando se añade un medio que comprende compuestos orgánicos que contengan azufre y no cuando se añaden compuestos inorgánicos que contienen azufre. The reduced sulfur compounds of the present invention have organic origin since, as the inventors demonstrate, sulphate production is only observed when a medium comprising sulfur-containing organic compounds is added and not when sulfur-containing inorganic compounds are added.
Por tanto, el sulfato producido por la bacteria de la presente invención es el ión sulfato (SO42-). Therefore, the sulfate produced by the bacterium of the present invention is the sulfate ion (SO42-).
Una realización preferida se refiere al uso del microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628, o a la población bacteriana que comprende la bacteria Ureibacillus sp. CECT7628, para la producción de sulfato. A preferred embodiment refers to the use of the microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628, or to the bacterial population comprising the bacterium Ureibacillus sp. CECT7628, for sulfate production.
Una realización más preferida de la presente invención se refiere al uso de cualquier microorganismo o de la población bacteriana de la invención, para la producción de un sulfato precipitado, es decir, para producir una sal insoluble de sulfato. El precipitado insoluble de la presente invención puede ser un anión sulfato (ión con dos cargas negativas) unido a cualquier metal divalente (catión con dos cargas positivas) como por ejemplo, pero sin limitarse Be, Mg, Ca, Sr, Ba, Ra, Zn, Cd, Al, Cu, Hg, Fe, Co, Ni, Sn, Pb, Pt, Cr o Mn, o unido a cualquier otro catión que produzca la insolubilización total o parcial del compuesto que se forma. Generalmente, el sulfato precipitado es sulfato de calcio, aunque otras opciones, pero sin limitarse, son el sulfato de bario (Ba) y el sulfato de estroncio (Sr). El término “insoluble” empleado en la presente invención se refiere a que dicho sulfato precipitado no se disuelve en soluciones acuosas en condiciones de temperatura ambiente y a valores de pH entre 4 y 9 que comprende los valores más comunes de pH que suelen encontrarse en substratos naturales y en edificios o construcciones. A more preferred embodiment of the present invention relates to the use of any microorganism or bacterial population of the invention, for the production of a precipitated sulfate, that is, to produce an insoluble sulfate salt. The insoluble precipitate of the present invention can be a sulfate anion (ion with two negative charges) attached to any divalent metal (cation with two positive charges) as for example, but not limited to Be, Mg, Ca, Sr, Ba, Ra, Zn, Cd, Al, Cu, Hg, Fe, Co, Ni, Sn, Pb, Pt, Cr or Mn, or attached to any other cation that produces total or partial insolubilization of the compound that is formed. Generally, the precipitated sulfate is calcium sulfate, although other options, but not limited to, are barium sulfate (Ba) and strontium sulfate (Sr). The term "insoluble" used in the present invention refers to said precipitated sulfate not dissolving in aqueous solutions at ambient temperature conditions and at pH values between 4 and 9 which comprises the most common pH values that are usually found in natural substrates. and in buildings or constructions.
En la presente invención se usa el término “cualquier microorganismo de la presente invención” o “cualquier microorganismo de la invención” para referirse a cualquier cepa de la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus o a la cepa que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. In the present invention the term "any microorganism of the present invention" or "any microorganism of the invention" is used to refer to any strain of the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus or to the strain belonging to the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628.
Asimismo, el término “población de la presente invención” o “población de la invención” se refiere a la población bacteriana que comprende cualquier cepa de la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus y/o la cepa que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. Likewise, the term "population of the present invention" or "population of the invention" refers to the bacterial population comprising any strain of the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus and / or the strain belonging to the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628.
Una realización aún más preferida se refiere al uso de cualquier microorganismo o población bacteriana de la presente invención, para consolidar y/o remediar un material inerte por medio de la producción de sulfato precipitado. El término “material inerte” tal como se entiende en la presente invención se refiere a material compuesto en su mayor parte por minerales. El material inerte puede tener procedencia natural, es decir, puede ser cualquier tipo de roca, de cualquier composición mineral, textura o estructura, como por ejemplo, pero sin que sirva para limitarse, calcita, aragonito, o yesos. También puede ser un material inerte artificial, como por ejemplo un material inerte creado para la construcción. Según una realización más preferida el material inerte es un material de construcción. El material de construcción al que se hace referencia en la presente invención puede ser, pero sin limitarse, ladrillo, hormigón, mortero, arcilla, productos de alfarería (por ejemplo pero sin limitarse, teja, ladrillo, porcelana, loza) An even more preferred embodiment refers to the use of any microorganism or bacterial population of the present invention, to consolidate and / or remediate an inert material through the production of precipitated sulfate. The term "inert material" as understood in the present invention refers to material composed mostly of minerals. The inert material can have a natural origin, that is, it can be any type of rock, of any mineral composition, texture or structure, such as, but not limited to, calcite, aragonite, or gypsum. It can also be an artificial inert material, such as an inert material created for construction. According to a more preferred embodiment, the inert material is a construction material. The construction material referred to in the present invention may be, but is not limited to, brick, concrete, mortar, clay, pottery products (for example, but not limited to, tile, brick, porcelain, earthenware)
El término “consolidar” tal como se entiende en la presente invención se refiere a dar firmeza y solidez a un material inerte. El término “remediar” se refiere a corregir, enmendar o poner remedio a un daño de un material inerte. The term "consolidate" as understood in the present invention refers to giving firmness and solidity to an inert material. The term "remedy" refers to correcting, amending or remedying damage to an inert material.
Otra realización preferida de la presente invención se refiere al uso del microorganismo o de la población de la presente invención, donde dichos microorganismos y/o el sulfato producido se administra a un suelo. El sulfato producido por dichos microorganismos puede tener función fertilizante para plantas en suelos de cultivo o en cualquier otro tipo de suelo no destinado al cultivo para enriquecer dicho suelo en sulfatos. En este caso, es necesario que el sulfato no precipite y para ello puede utilizarse en el medio de cultivo una sal de sodio, ya que el sulfato de sodio resultante es soluble en el rango de temperaturas y pH que pueden alcanzarse en los distintos tipos de suelo.). Another preferred embodiment of the present invention relates to the use of the microorganism or the population of the present invention, wherein said microorganisms and / or the sulfate produced is administered to a soil. The sulfate produced by these microorganisms can have a fertilizing function for plants in crop soils or in any other type of soil not intended for cultivation to enrich said soil in sulfates. In this case, it is necessary that the sulfate does not precipitate and for this a sodium salt can be used in the culture medium, since the resulting sodium sulfate is soluble in the range of temperatures and pH that can be reached in the different types of ground.).
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para la producción de sulfato que comprende: Another aspect of the present invention relates to a method for sulfate production comprising:
a) inocular un microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus, o de una población bacteriana que comprende un microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus en un medio de cultivo que comprende nutrientes orgánicos que contiene azufre, e b) incubar el cultivo del paso (a) a una temperatura de entre 40ºC y 70ºC. a) inoculate a microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus, or from a bacterial population that comprises a microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus in a culture medium comprising organic nutrients containing sulfur, eb) incubate the culture of the passage (a ) at a temperature between 40ºC and 70ºC.
Una realización preferida de la invención se refiere al método para la producción de sulfato, donde el microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus sp. es la bacteria con número de acceso CECT7628, o la población bacteriana es la población que comprende la bacteria Ureibacillus sp. CECT7628. A preferred embodiment of the invention relates to the method for the production of sulfate, where the microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus sp. is the bacterium with access number CECT7628, or the bacterial population is the population that comprises the bacterium Ureibacillus sp. CECT7628.
Otra realización preferida de la presente invención se refiere al método para la producción de sulfato, donde la incubación del paso (b) se lleva a cabo a una temperatura de entre 45ºC y 55ºC. Another preferred embodiment of the present invention relates to the method for sulfate production, where the incubation of step (b) is carried out at a temperature between 45 ° C and 55 ° C.
Otra realización más preferida se refiere al método para la producción de un sulfato precipitado que comprende los pasos de cualquier método anterior para la producción de sulfato, donde además el medio de cultivo comprende una sal cuyo catión se una al anión sulfato (SO42-), formando un sulfato precipitado. Another more preferred embodiment refers to the method for the production of a precipitated sulfate comprising the steps of any previous method for the production of sulfate, wherein in addition the culture medium comprises a salt whose cation joins the sulfate anion (SO42-), forming a precipitated sulfate.
Otra realización aún más preferida de la presente invención se refiere a cualquier método anterior para la producción de sulfato, donde el catión de la sal es calcio, es decir, el sulfato precipitado es sulfato de calcio. Otras sales preferidas son el sulfato de bario y el sulfato de estroncio ya que son insolubles en agua. Another even more preferred embodiment of the present invention relates to any previous method for sulfate production, where the salt cation is calcium, that is, the precipitated sulfate is calcium sulfate. Other preferred salts are barium sulfate and strontium sulfate since they are insoluble in water.
En adelante se podrá hacer referencia a cualquier método para la producción de sulfato mediante el término “método de producción de sulfatos de la presente invención” o “método de producción de sulfatos de la invención”, Reference may now be made to any method for sulfate production by the term "sulfate production method of the present invention" or "sulfate production method of the invention",
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para consolidar y/o remediar un material, que comprende los pasos del método de producción de sulfatos de la presente invención donde el medio de cultivo comprende una sal cuyo catión se una al anión sulfato (SO42-), formando un sulfato precipitado en condiciones de temperatura ambiental, o el método donde la sal es cloruro de calcio, donde además el microorganismo o la población bacteriana de la presente invención se pone en contacto con dicho material. El término “temperatura ambiental” tal como se entiende en la presente invención se refiere a la temperatura que se puede encontrar en cualquier momento del día, en cualquier mes del año, en el ambiente en el que se encuentre el material inerte al que se ha hecho referencia en la presente invención. El sulfato de calcio es muy poco soluble a temperatura ambiental. Aunque la forma principal cambia de yeso a anhidrita con un punto de inflexión alrededor de los 54ºC. El sulfato de calcio tiene un comportamiento anormal en cuanto a su solubilidad y el efecto de la temperatura y pH. El pH, prácticamente no afecta su solubilidad a valores entre 4 y 9. Another aspect of the present invention relates to a method for consolidating and / or remediating a material, comprising the steps of the sulfate production method of the present invention where the culture medium comprises a salt whose cation joins the sulfate anion ( SO42-), forming a sulfate precipitated under ambient temperature conditions, or the method where the salt is calcium chloride, where in addition the microorganism or bacterial population of the present invention is contacted with said material. The term "ambient temperature" as understood in the present invention refers to the temperature that can be found at any time of the day, at any month of the year, in the environment in which the inert material to which it has been found is located. referenced in the present invention. Calcium sulfate is very poorly soluble at room temperature. Although the main form changes from plaster to anhydrite with a turning point around 54 ° C. Calcium sulfate has an abnormal behavior in terms of its solubility and the effect of temperature and pH. The pH practically does not affect its solubility at values between 4 and 9.
Una realización preferida se refiere al método para consolidar y/o remediar un material, que además comprende eliminar el microorganismo y/o nutrientes del medio de cultivo, presentes en dicho material. La eliminación de los microorganismos y del medio de cultivo, o de los microorganismos o del medio de cultivo, presentes en dicho material se puede llevar a cabo mediante cualquier método conocido en el estado de la técnica como por ejemplo, pero sin limitarse, mediante lavado de dicho material con una solución acuosa. Además, el lavado de dicho material puede llevarse a cabo mediante una solución acuosa que puede comprender al menos un agente antimicrobiano. A preferred embodiment refers to the method for consolidating and / or remediating a material, which further comprises removing the microorganism and / or nutrients from the culture medium, present in said material. The elimination of the microorganisms and the culture medium, or the microorganisms or the culture medium, present in said material can be carried out by any method known in the state of the art such as, for example, but not limited, by washing of said material with an aqueous solution. In addition, the washing of said material can be carried out by an aqueous solution that can comprise at least one antimicrobial agent.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la Throughout the description and the claims the word "comprises" and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps. For those skilled in the art, other objects, advantages and features of the invention will be derived partly from the description and partly from the practice of the invention. The following figures and examples are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the
presente invención. present invention
Con la intención de complementar la descripción que se ha llevado a cabo, así como de ayudar a un mejor entendimiento de las características de la invención, de acuerdo con algunos ejemplos realizados, se muestran aquí, con carácter ilustrativo y no limitante, las siguientes figuras: With the intention of complementing the description that has been carried out, as well as helping to better understand the characteristics of the invention, according to some examples made, the following figures are shown here, for illustrative and non-limiting purposes :
Las bacterias mostradas en dicha gráfica pertenecen a los siguientes géneros: The bacteria shown in this graph belong to the following genera:
1: Paenibacillus (Firmicutes) / 2: Klebsiella (Proteobacteria gamma) / 3: Cellulomonas (Actinobacteria) / 4: Streptomyces (Actinobacteria) / 5: Neocosmopora (Hongo) / 6: Enterobacter (Proteobacteria gamma) / 7: Bacillus (Firmicutes) / 8: Geobacillus (Firmicutes) / 9: Geobacillus (Firmicutes) / 11: Geobacillus (Firmicutes) / 12: Ureibacillus (Firmicutes). 1: Paenibacillus (Firmicutes) / 2: Klebsiella (Proteobacteria gamma) / 3: Cellulomonas (Actinobacteria) / 4: Streptomyces (Actinobacteria) / 5: Neocosmopora (Fungus) / 6: Enterobacter (Proteobacteria gamma) / 7: Bacillus (Firmicutes) / 8: Geobacillus (Firmicutes) / 9: Geobacillus (Firmicutes) / 11: Geobacillus (Firmicutes) / 12: Ureibacillus (Firmicutes).
FIG. 2. Muestra la producción de sulfatos (A) y crecimiento bacteriano (B) en relación con la concentración de nutrientes orgánicos (distintas concentraciones de caldo nutritivo) por distintos géneros y cultivos bacterianos termófilos que crecen a 50ºC. FIG. 2. It shows the production of sulfates (A) and bacterial growth (B) in relation to the concentration of organic nutrients (different concentrations of nutrient broth) by different genera and thermophilic bacterial cultures that grow at 50 ° C.
La concentración de caldo nutritivo mostrada hace referencia al caldo de cultivo cuya composición se ha mostrado en los ejemplos (1), a un caldo de cultivo con el doble de concentración de cada uno de los componentes que el medio 1 (2) y a un caldo de cultivo con una concentración 10 veces menor de cada uno de los componentes que el medio 1 (0,1). The nutrient broth concentration shown refers to the culture broth whose composition has been shown in examples (1), a culture broth with twice the concentration of each of the components as medium 1 (2) and a broth of culture with a concentration 10 times lower of each of the components than medium 1 (0,1).
Las bacterias mostradas en dicha gráfica pertenecen a los siguientes géneros: 7: Bacillus (Firmicutes) / 8: Geobacillus (Firmicutes) / 9: Geobacillus (Firmicutes) / 11: Geobacillus (Firmicutes) / 12: Ureibacillus (Firmicutes). The bacteria shown in this graph belong to the following genera: 7: Bacillus (Firmicutes) / 8: Geobacillus (Firmicutes) / 9: Geobacillus (Firmicutes) / 11: Geobacillus (Firmicutes) / 12: Ureibacillus (Firmicutes).
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos ilustrativos y de carácter no limitante, realizados por los inventores que describen el aislamiento e identificación de las cepas de la presente invención así como su capacidad para la producción de sulfatos. The invention will now be illustrated by illustrative and non-limiting tests carried out by the inventors who describe the isolation and identification of the strains of the present invention as well as their ability to produce sulfates.
EJEMPLO 1. Aislamiento e identificación de cepas productoras de sulfatos. EXAMPLE 1. Isolation and identification of sulfate producing strains.
Muestras de suelos de las provincias de Teruel y Sevilla se procesaron para el aislamiento de bacterias con capacidad de crecimiento bien a 25ºC bien a 50ºC, correspondiendo a los rangos de crecimiento de bacterias mesófilas y termófilas, respectivamente. Los cultivos se prepararon en agar nutritivo (3 g de extracto de carne, 5 g de peptona y 20 g de agar llevado hasta un volumen de 1L con agua. Se ajustó el pH a 7.0 y se esterilizó en autoclave), se inocularon con la muestra natural e incubaron a la temperatura seleccionada. Soil samples from the provinces of Teruel and Seville were processed for the isolation of bacteria with growth capacity either at 25 ° C or 50 ° C, corresponding to the growth ranges of mesophilic and thermophilic bacteria, respectively. The cultures were prepared in nutritive agar (3 g of meat extract, 5 g of peptone and 20 g of agar taken to a volume of 1L with water. The pH was adjusted to 7.0 and autoclaved), inoculated with the natural sample and incubated at the selected temperature.
Las colonias obtenidas se aislaron en placa y se identificaron por secuenciación de sus genes 16S rRNA siguiendo procedimientos estándar previamente descritos (González et al. 2003). The colonies obtained were plaque isolated and identified by sequencing their 16S rRNA genes following standard procedures previously described (González et al. 2003).
Para identificar las cepas bacterianas aisladas, éstas se cultivaron en caldo nutritivo (3 g de extracto de carne y 5 g de peptona llevado hasta un volumen de 1L con agua. Se ajustó el pH a 7.0 y se esterilizó en autoclave) se centrifugaron en un tubo eppendorf (1.5 ml) y se descartó el sobrenadante. Las células se lisaron y su ADN genómico se extrajo utilizando el kit de purificación de ADN NucleospinFood (Mackerey-Nügel, Alemania). El ADN obtenido se utilizó directamente como ADN molde en una reacción de PCR (Polymerase Chain Reaction) para amplificar un fragmento del gen ARNr 16S. Los cebadores utilizados fueron el cebador directo SEQ ID NO: 1 y el cebador reverso SEQ ID NO: 2. Las condiciones de amplificación consisten en un paso a 95ºC de 3 minutos, seguido de 35 ciclos con pasos de 95ºC 15 segundos, 55ºC 15 segundos y 72ºC 1 minuto, utilizando la ADN polimerasa ExTaq (Takara, Japón). Los productos de amplificación se purificaron con el kit de purificación de productos de PCR (JetQuick, Alemania) y se enviaron al servicio de secuenciación de la empresa Secugen (Madrid). Las secuencias obtenidas se editaron con el software Chromas y la secuencia en formato fasta se envió para su comparación en las bases de datos de ADN con el programa Blastn en el National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Blast/). To identify the isolated bacterial strains, these were grown in nutritious broth (3 g of meat extract and 5 g of peptone brought to a volume of 1L with water. The pH was adjusted to 7.0 and autoclaved) they were centrifuged in a eppendorf tube (1.5 ml) and the supernatant was discarded. The cells were lysed and their genomic DNA was extracted using the NucleospinFood DNA purification kit (Mackerey-Nügel, Germany). The DNA obtained was used directly as template DNA in a PCR reaction (Polymerase Chain Reaction) to amplify a fragment of the 16S rRNA gene. The primers used were the direct primer SEQ ID NO: 1 and the reverse primer SEQ ID NO: 2. The amplification conditions consist of a step at 95 ° C of 3 minutes, followed by 35 cycles with steps of 95 ° C 15 seconds, 55 ° C 15 seconds and 72 ° C for 1 minute, using ExTaq DNA polymerase (Takara, Japan). The amplification products were purified with the PCR product purification kit (JetQuick, Germany) and sent to the sequencing service of the Secugen company (Madrid). The sequences obtained were edited with the Chromas software and the sequence in fasta format was sent for comparison in the DNA databases with the Blastn program in the National Center for Biotechnology Information (http: //www.ncbi.nlm.nih .gov / Blast /).
El fragmento obtenido mediante la reacción PCR descrita, perteneciente a la cepa CECT7628 de la presente invención, se secuenció, obteniendo una secuencia de 656 nucleótidos del gen que codifica para el 16S rRNA cuya secuencia se facilita en la lista de secuencias adjunta como SEQ ID NO: 3. Dicho fragmento tiene un 97% identidad con otras cepas pertenecientes a la especie Ureibacillus thermosphaericus. The fragment obtained by the described PCR reaction, belonging to strain CECT7628 of the present invention, was sequenced, obtaining a sequence of 656 nucleotides of the gene encoding the 16S rRNA whose sequence is given in the sequence list attached as SEQ ID NO : 3. This fragment has a 97% identity with other strains belonging to the species Ureibacillus thermosphaericus.
Las bacterias aisladas se utilizaron en experimentos en los que se determinó la producción de sulfatos por cada uno de dichos cultivos. Las cepas aisladas se inocularon en matraces estériles con caldo nutritivo y se incubaron a su temperatura óptima de crecimiento (25 ó 50ºC). A lo largo del tiempo de incubación, específicamente en las fases exponencial y estacionaria de crecimiento de cada cepa, se midió la concentración de sulfatos en el medio. El procedimiento para estimar la concentración de sulfatos es el descrito por Kolmet et al. (Kolmet et al., 2000. J. Microbiol. Meth., 41: 179-184). La producción de sulfato se estimó como la diferencia entre la concentración calculada y su concentración inicial. The isolated bacteria were used in experiments in which sulfate production was determined for each of said cultures. The isolated strains were inoculated in sterile flasks with nutrient broth and incubated at their optimum growth temperature (25 or 50 ° C). Throughout the incubation time, specifically in the exponential and stationary growth phases of each strain, the sulfate concentration in the medium was measured. The procedure for estimating sulfate concentration is that described by Kolmet et al. (Kolmet et al., 2000. J. Microbiol. Meth., 41: 179-184). Sulfate production was estimated as the difference between the calculated concentration and its initial concentration.
El rango de temperaturas que permite el crecimiento de las cepas aisladas se determinó incubando los cultivos correspondientes a distintas temperaturas en incubadores termostatizados con agitación (150 rpm) y calculando la tasa de crecimiento a cada una de esas temperaturas basándose en medidas de absorbancia (a 600 nm) de las suspensiones celulares. Con objeto de verificar la producción de sulfato a distintas concentraciones de nutrientes, se realizaron experimentos como se ha descrito pero en cultivos con concentraciones de un caldo nutritivo concentrado dos veces (2), a concentración estándar (1) y diluido diez veces (0,1) (FIG. 2). El nivel de crecimiento bacteriano en estos cultivos a distinta concentración de nutrientes se monitorizó determinando la cantidad de proteína bacteriana siguiendo el método de Bradford (BioRad Protein Assay kit). Las temperaturas se determinaron con un termómetro digital equipado con un termopar-K (Hanna Instruments, Ann Arbor, Michigan, USA). Las diferencias entre tratamientos se determinaron con test ANOVA (Sokal y Rohlf, 1981. Biometry. Freeman WH & Co, New York). The temperature range that allows the growth of the isolated strains was determined by incubating the cultures corresponding to different temperatures in thermostated incubators with stirring (150 rpm) and calculating the growth rate at each of those temperatures based on absorbance measures (at 600 nm) of cell suspensions. In order to verify sulfate production at different nutrient concentrations, experiments were performed as described but in cultures with concentrations of a nutrient broth concentrated twice (2), at standard concentration (1) and diluted ten times (0, 1) (FIG. 2). The level of bacterial growth in these cultures at different concentrations of nutrients was monitored by determining the amount of bacterial protein following the method of Bradford (BioRad Protein Assay kit). Temperatures were determined with a digital thermometer equipped with a K-thermocouple (Hanna Instruments, Ann Arbor, Michigan, USA). The differences between treatments were determined with the ANOVA test (Sokal and Rohlf, 1981. Biometry. Freeman WH & Co, New York).
Mientras que la producción de sulfato fue insignificante por parte de bacterias mesófilas, las bacterias termófilas han dado lugar a aumentos en la concentración de sulfatos durante su crecimiento. Estos resultados se muestran en la FIG.1. Las cepas ensayadas se muestran en la Tabla 1. Entre las bacterias termófilas productoras de sulfato destaca la cepa de la presente invención de la especie Ureibacillus sp (muy probablemente de la especie U. thermosphaericus) con nº de depósito CECT7628. While sulfate production was negligible by mesophilic bacteria, thermophilic bacteria have resulted in increases in sulfate concentration during their growth. These results are shown in FIG. 1. The strains tested are shown in Table 1. Among the sulfate producing thermophilic bacteria, the strain of the present invention of the Ureibacillus sp species (most likely of the U. thermosphaericus species) with deposit number CECT7628 stands out.
Tabla 1. Cepas utilizadas en la presente invención. Entre paréntesis se muestra la división bacteriana a la que pertenece cada una de las bacterias: Table 1. Strains used in the present invention. In brackets the bacterial division to which each of the bacteria belongs belongs:
- Nº No.
- Afiliación taxonómica Temperatura de crecimiento (ºC) Taxonomic Affiliation Growth temperature (ºC)
- 1 one
- Paenibacillus (Firmicutes) 25 Paenibacillus (Firmicutes) 25
- 2 2
- Klebsiella (Proteobacteria gamma) 25 Klebsiella (Gamma Proteobacteria) 25
- 3 3
- Cellulomonas (Actinobacteria) 25 Cellulomonas (Actinobacteria) 25
- 4 4
- Streptomyces (Actinobacteria) 25 Streptomyces (Actinobacteria) 25
- 5 5
- Neocosmopora (Hongo) 25 Neocosmopora (Fungus) 25
- 6 6
- Enterobacter (Proteobacteria gamma) 25 Enterobacter (Gamma Proteobacteria) 25
- 7 7
- Bacillus (Firmicutes) 50 Bacillus (Firmicutes) fifty
- 8 8
- Geobacillus (Firmicutes) 50 Geobacillus (Firmicutes) fifty
- 9 9
- Geobacillus (Firmicutes) 50 Geobacillus (Firmicutes) fifty
- 11 eleven
- Geobacillus (Firmicutes) 50 Geobacillus (Firmicutes) fifty
- 11eleven
- Ureibacillus (Firmicutes) 50 Ureibacillus (Firmicutes) fifty
5 Tal como fue demostrado por los inventores, el sulfato producido procedía del azufre contenido en compuestos orgánicos, tales como las proteínas y sus aminoácidos (Cisteína y Metionina), coenzimas (como la coenzima A y sus derivados), y vitaminas (biotina, tiamina, vitamina B1, ácido lipoico) entre otros compuestos. En ausencia de nutrientes orgánicos, las cepas estudiadas no 10 mostraban crecimiento, por lo que su crecimiento es heterotrófico. La producción de sulfato fue proporcional a la concentración de nutrientes orgánicos presentes en el cultivo tal y como se observa en la FIG. 2. 5 As demonstrated by the inventors, the sulfate produced came from sulfur contained in organic compounds, such as proteins and their amino acids (Cysteine and Methionine), coenzymes (such as coenzyme A and its derivatives), and vitamins (biotin, thiamine , vitamin B1, lipoic acid) among other compounds. In the absence of organic nutrients, the strains studied did not show growth, so their growth is heterotrophic. Sulfate production was proportional to the concentration of organic nutrients present in the culture as seen in FIG. 2.
Tal como puede observarse en la FIG. 1, la cepa reseñada con el nº 12, es As can be seen in FIG. 1, the strain reviewed with No. 12, is
15 decir, la cepa seleccionada de la presente invención perteneciente a la especie Ureibacillus sp. con nº de depósito CECT7628 presenta una producción de sulfatos significativamente superior a la producción de sulfatos de cepas de bacterias mesófilas (cuya temperatura óptima de crecimiento es de 25ºC) y, todavía más importante, cuya producción de sulfato es significativamente 15, the strain selected from the present invention belonging to the species Ureibacillus sp. With deposit number CECT7628 has a sulphate production significantly higher than sulfate production of mesophilic bacteria strains (whose optimum growth temperature is 25 ° C) and, even more important, whose sulfate production is significantly
20 superior a la de otras cepas de bacterias termófilas (cuya temperatura óptima 20 higher than that of other strains of thermophilic bacteria (whose optimum temperature
de crecimiento está entre 50 y 60ºC) pertenecientes a los géneros Bacillus y Geobacillus, pero que comparten el mismo “Filo” con la cepa de Ureibacillus. of growth is between 50 and 60ºC) belonging to the genera Bacillus and Geobacillus, but that share the same “Phylum” with the strain of Ureibacillus.
5 En la FIG. 2 se observa cómo la producción de sulfatos (A) y crecimiento bacteriano (B) en relación con la concentración de nutrientes orgánicos (distintas concentraciones de caldo nutritivo) es significativamente superior con la cepa Ureibacillus sp. con nº de depósito CECT7628 seleccionada en la presente invención. 5 In FIG. 2 it is observed how the production of sulfates (A) and bacterial growth (B) in relation to the concentration of organic nutrients (different concentrations of nutrient broth) is significantly higher with the strain Ureibacillus sp. with deposit number CECT7628 selected in the present invention.
Claims (17)
- 1. one.
- Microorganismo de la especie bacteriana Ureibacillus sp. con número de acceso CECT7628. Microorganism of the bacterial species Ureibacillus sp. with access number CECT7628.
- 2. 2.
- Población bacteriana que comprende el microorganismo según la reivindicación 1. Bacterial population comprising the microorganism according to claim 1.
- 3. 3.
- Uso de un microorganismo que pertenece a la especie bacteriana Ureibacillus thermosphaericus o de una población bacteriana que comprende un microorganismo de la especie Ureibacillus thermosphaericus, para la producción de sulfato. Use of a microorganism belonging to the bacterial species Ureibacillus thermosphaericus or a bacterial population comprising a microorganism of the species Ureibacillus thermosphaericus, for the production of sulfate.
- 4. Four.
- Uso según la reivindicación 3, donde el microorganismo es la bacteria según la reivindicación 1, o la población bacteriana es la población según la reivindicación 2. Use according to claim 3, wherein the microorganism is the bacterium according to claim 1, or the bacterial population is the population according to claim 2.
- 5. 5.
- Uso del microorganismo o de la población según cualquiera de las reivindicaciones 3 ó 4, donde dichos microorganismos y/o el sulfato producido se administra a un suelo. Use of the microorganism or of the population according to any of claims 3 or 4, wherein said microorganisms and / or the sulfate produced is administered to a soil.
- 6. 6.
- Uso del microorganismo o de la población según cualquiera de las reivindicaciones 3 ó 4, donde el sulfato forma un precipitado. Use of the microorganism or population according to any of claims 3 or 4, wherein the sulfate forms a precipitate.
- 7. 7.
- Uso del microorganismo o de la población según la reivindicación 6 para consolidar y/o remediar un material inerte. Use of the microorganism or population according to claim 6 to consolidate and / or remedy an inert material.
- 8. 8.
- Uso del microorganismo o de la población según la reivindicación 7, donde el material inerte es un material de construcción. Use of the microorganism or population according to claim 7, wherein the inert material is a building material.
- 9. 9.
- Método para la producción de sulfato que comprende: Method for sulphate production comprising:
- Categoría Category
- Documentos citados Reivindicaciones afectadas Documents cited Claims Affected
- A TO
- ES 2 064 673 T3 (UNIVERSITE PIERRE ET MARIE CURIE PARIS VI) 19.09.1990, columna 1, líneas 13-21; reivindicaciones 1,3,9. 1-2,6-11,14-15 EN 2 064 673 T3 (UNIVERSITE PIERRE ET MARIE CURIE PARIS VI) 19.09.1990, column 1, lines 13-21; claims 1,3,9. 1-2,6-11,14-15
- A TO
- JIMÉNEZ-LÓPEZ C. et al . Consolidation of degraded ornamental porous limestone stone by calcium carbonate precipitation induced by the microbiota inhabiting the stone. 08.2007. CHEMOSPHERE, Volume 68, Issue 10, Páginas 1929-1936. Todo el documento. 1-7,14-15 JIMÉNEZ-LÓPEZ C. et al. Consolidation of degraded ornamental porous limestone stone by calcium carbonate precipitation induced by the microbiota inhabiting the stone. 08.2007. CHEMOSPHERE, Volume 68, Issue 10, Pages 1929-1936. Whole document. 1-7,14-15
- A TO
- TIANO P. et al. Bacterial bio-mediated calcite precipitation for monumental stones conservation: methods of evaluation . 01.05.1999. Journal of Microbiological Methods, Volume 36, Issues 1-2, Páginas 139-145. Todo el documento. 1-7,14-15 TIANO P. et al. Bacterial bio-mediated calcite precipitation for monumental stones conservation: methods of evaluation. 01.05.1999. Journal of Microbiological Methods, Volume 36, Issues 1-2, Pages 139-145. Whole document. 1-7,14-15
- A TO
- WEBSTER A. y MAY E. Bioremediation of weathered-building stone surfaces. TRENDS IN BIOTECHNOLOGY. 01.06.2006. Vol. 24 No. 6. Pág. 255-260. 1-2,6-7,14 WEBSTER A. and MAY E. Bioremediation of weathered-building stone surfaces. TRENDS IN BIOTECHNOLOGY. 06.06.2006. Vol. 24 No. 6. Page 255-260. 1-2.6-7.14
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud Category of the documents cited X: of particular relevance Y: of particular relevance combined with other / s of the same category A: reflects the state of the art O: refers to unwritten disclosure P: published between the priority date and the date of priority submission of the application E: previous document, but published after the date of submission of the application
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº: TODAS This report has been produced • for all claims • for claims no: ALL
- Fecha de realización del informe 12.11.2010 Date of realization of the report 12.11.2010
- Examinador I. Abad Gurumeta Página 1/4 Examiner I. Abad Gurumeta Page 1/4
- Documento Document
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación Publication or Identification Number publication date
- D01 D01
- ES 2 064 673 T3 (Universite Pierre et Marie Curie Paris VI) 19.09.1990 ES 2 064 673 T3 (Universite Pierre et Marie Curie Paris VI) 19.09.1990
- D02 D02
- JIMENEZ-LOPEZ C. et al . Consolidation of degraded ornamental porous limestone stone by calcium carbonate precipitation induced by the microbiota inhabiting the stone. 08.2007. CHEMOSPHERE, Volume 68, Issue 10, Pages 1929-1936. Todo el documento. 08.2007 JIMENEZ-LOPEZ C. et al. Consolidation of degraded ornamental porous limestone stone by calcium carbonate precipitation induced by the microbiota inhabiting the stone. 08.2007. CHEMOSPHERE, Volume 68, Issue 10, Pages 1929-1936. Whole document. 08.2007
- D03 D03
- TIANO P. et al. Bacterial bio-mediated calcite precipitation for monumental stones conservation: methods of evaluation . 01.05.1999. Journal of Microbiological Methods, Volume 36, Issues 1-2, Pages 139-145. Todo el documento 01.05.1999 TIANO P. et al. Bacterial bio-mediated calcite precipitation for monumental stones conservation: methods of evaluation. 01.05.1999. Journal of Microbiological Methods, Volume 36, Issues 1-2, Pages 139-145. Whole document 01.05.1999
- D04 D04
- WEBSTER A. y MAY E. Bioremediation of weathered-building stono surfaces. TRENDS IN BIOTECHNOLOGY. 01.06.2006. Vol. 24 No.6. Pág. 255-260. 01.06.2006 WEBSTER A. and MAY E. Bioremediation of weathered-building stono surfaces. TRENDS IN BIOTECHNOLOGY. 06.06.2006. Vol. 24 No.6. Page 255-260. 06.06.2006
- 1.one.
- NOVEDAD (ART. 6.1 Ley 11/1986) NEW (ART. 6.1 Law 11/1986)
- 2.2.
- ACTIVIDAD INVENTIVA (ART. 8.1 Ley 11/1986) INVENTIVE ACTIVITY (ART. 8.1 Law 11/1986)
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