ES2374244A1 - Microrna that can be used for treating arrhythmogenic channelopathies - Google Patents

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ES2374244A1 ES201031205A ES201031205A ES2374244A1 ES 2374244 A1 ES2374244 A1 ES 2374244A1 ES 201031205 A ES201031205 A ES 201031205A ES 201031205 A ES201031205 A ES 201031205A ES 2374244 A1 ES2374244 A1 ES 2374244A1
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Abstract

MocroRNA useful for the treatment of arrhythmogenic channelopathies. The present invention proposes the use of the hsa-mir-219-5p microRNA, of SEQ ID NO: 1, of the modified polynucleotides derived from it, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 5, or of its precursors, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 6, for the elaboration of medicines useful for the treatment of arrhythmogenic channelopathies, preferably those that are due to alterations in the function of the cardiac sodium channel, more preferably syndrome type 3 long QT and Brugada syndrome. These polynucleotides are capable of modulating the function of the cardiac sodium channel through its binding to the mRNA of the SCN5A gene. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Description

MicroRNA útil para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas.MicroRNA useful for the treatment of arrhythmogenic canalopathies.

La presente invención se encuadra en el campo de la terapia génica y la cardiología y específicamente se refiere al uso del microRNA hsa-mir-219-5p, de SEQ ID NO: 1, de los polinucleótidos modificados derivados de él, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5, o de sus precursores, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6, para la elaboración de medicamentos útiles para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas, preferiblemente de aquellas que se deben a alteraciones en la función del canal de sodio cardíaco, más preferiblemente de síndrome de QT largo tipo 3 y de síndrome de Brugada.The present invention falls within the field of gene therapy and cardiology and specifically refers to microRNA use hsa-mir-219-5p, of SEQ ID NO: 1, of the modified polynucleotides derived therefrom, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 5, or its precursors, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 6, for the preparation of useful medicines for the treatment of arrhythmogenic canalopathies, preferably of those due to alterations in the function of the cardiac sodium, more preferably of type 3 long QT syndrome and of Brugada syndrome.

Estado de la técnica anteriorPrior art

Las arritmias ventriculares constituyen la causa más frecuente de muerte súbita en las sociedades desarrolladas y suelen relacionarse con la existencia de cardiopatía isquémica, de la que pueden ser la primera manifestación en sujetos hasta entonces asintomáticos. Con menor frecuencia ocurre en sujetos sin cardiopatía estructural y más jóvenes. Los avances de la biología molecular en la última década han permitido identificar diversas entidades clínicas que comparten su origen en mutaciones en genes que codifican para subunidades de canales iónicos, los cuales son responsables de la generación del potencial de acción de las células cardíacas. Este conjunto de enfermedades hereditarias se denominan canalopatías arritmogénicas. En los últimos años, se ha avanzado mucho en el conocimiento de la base genética y funcional de distintos síndromes arritmogénicos, entre los cuales cabe destacar el síndrome de Brugada y el síndrome de QT largo.Ventricular arrhythmias are the cause more frequent sudden death in developed societies and are usually related to the existence of ischemic heart disease, of which may be the first manifestation in subjects until then asymptomatic Less frequently occurs in subjects without structural heart disease and younger. The advances of biology molecular in the last decade have allowed to identify various clinical entities that share their origin in gene mutations encoding subunits of ion channels, which are responsible for generating the action potential of cells cardiac This set of inherited diseases are called arrhythmogenic canalopathies. In recent years, progress has been made much in the knowledge of the genetic and functional basis of different arrhythmogenic syndromes, including Brugada syndrome and long QT syndrome.

El síndrome de Brugada es una canalopatía asociada a anomalías en los canales de sodio, concretamente a mutaciones en el gen SCN5A que codifica para la proteína transmembrana Nav1.5, las cuales provocan en todos los casos una falta de función de dicho canal y suele presentarse asociada a arritmias ventriculares polimórficas en sujetos sin cardiopatía. Estos sujetos presentan un electrocardiograma característico: elevación del segmento ST en las derivaciones precordiales derechas y patrón de bloqueo de la rama derecha del haz de His, generalmente con QT normal. Por otro lado, la base genética del síndrome de QT largo tipo 3 ó LQT3 es más heterogénea, aunque hay que resaltar que esta patología también presenta alteraciones moleculares en los canales de sodio debidas a mutaciones en el gen SCN5A, que provocan en este caso una ganancia de función de dicho canal (Jeffrey E. Saffitz, 2005, Circulation, 112:3672-3674).Brugada syndrome is a canalopathy associated with abnormalities in the sodium channels, specifically mutations in the SCN5A gene that codes for the transmembrane protein Nav1.5, which in all cases cause a lack of function of this channel and usually occur associated with polymorphic ventricular arrhythmias in subjects without heart disease. These subjects have a characteristic electrocardiogram: ST segment elevation in the right precordial leads and block pattern of the right bundle of the His bundle, usually with normal QT. On the other hand, the genetic basis of long QT syndrome type 3 or LQT3 is more heterogeneous, although it should be noted that this pathology also presents molecular alterations in sodium channels due to mutations in the SCN5A gene, which in this case cause gain of function of said channel (Jeffrey E. Saffitz, 2005, Circulation , 112: 3672-3674).

En la actualidad existen tratamientos farmacológicos, como los agentes beta-bloqueantes (Riera A. R., et al., 2007, Cardiology Journal, 14(1):97-106), que permiten modular este tipo de patologías arritmogénicas, si bien tienen una alta variabilidad en su efectividad en función del paciente tratado (Michowitz Y., et al., 2009, Heart Rhythm, 6(7):1047-1049) y además ejercen un efecto sistémico en él, encaminado a paliar pero no a restituir la fisiopatología cardíaca.Currently there are pharmacological treatments, such as beta-blocking agents (Riera AR, et al ., 2007, Cardiology Journal , 14 (1): 97-106), which allow modulating this type of arrhythmogenic pathologies, although they have a high variability in its effectiveness depending on the patient treated (Michowitz Y., et al ., 2009, Heart Rhythm , 6 (7): 1047-1049) and also exert a systemic effect on it, aimed at alleviating but not restoring the pathophysiology cardiac

Una alterativa a los tratamientos farmacológicos es la implantación de un cardiovertor (ICD), sin embargo, este mecanismo, además de suponer un elevado coste médico, está contraindicado en pacientes con alto riesgo de sufrir episodios de muerte súbita (Sherrid M. V., et al., 2008, Progress in Cardiovascular Diseases, 51 (3):237-63).An alternative to pharmacological treatments is the implantation of a cardioverter (ICD), however, this mechanism, in addition to assuming a high medical cost, is contraindicated in patients at high risk of sudden death episodes (Sherrid MV, et al . , 2008, Progress in Cardiovascular Diseases , 51 (3): 237-63).

Otra posibilidad para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas relacionadas con disfunciones en los canales de sodio es el uso de polipéptidos codificados por polinucleótidos que comprenden la secuencia del gen SCN5A con mutaciones que están presentes en los individuos sanos (US2008214457 A1).Another possibility for the treatment of arrhythmogenic canalopathies related to dysfunctions in Sodium channels is the use of polypeptides encoded by polynucleotides comprising the sequence of the SCN5A gene with mutations that are present in healthy individuals (US2008214457 A1).

Se sabe que algunas mutaciones en el gen SCN5A conducen a una disminución en la conductancia del canal de sodio, por lo que esta aproximación se plantea como otra posibilidad para controlar las arritmias cardíacas cuya base molecular se encuentre en alteraciones de ganancia de función en los canales de sodio (G. Alex Papadatos, et al., 2002, PNAS, Vol. 99(9): 6210-6215).It is known that some mutations in the SCN5A gene lead to a decrease in the conductance of the sodium channel, so this approach is considered as another possibility to control cardiac arrhythmias whose molecular basis is found in alterations of function gain in the channels sodium (G. Alex Papadatos, et al ., 2002, PNAS , Vol. 99 (9): 6210-6215).

Por otro lado, los microRNAs son moléculas de RNA monocatenario de pequeño tamaño (22 nucleótidos aproximadamente) y no codificantes, que se unen a secuencias específicas de las regiones no codificantes (principalmente las 3'UTR) de los RNA mensajeros diana, inhibiendo su traducción y/o desestabilizándolos, lo que provoca igualmente una disminución en la cantidad total de proteína. Existen diversos microRNAs que tienen como diana transcritos que codifican para proteínas de los canales iónicos cardíacos, por ejemplo, el microRNA-195 y el microRNA-1 actúan sobre la expresión del gen SCN5A (Baofeng Yang, et al., 2008, Cardiovascular Research, Vol. 79: 571-580).On the other hand, microRNAs are small-sized single-stranded RNA molecules (approximately 22 nucleotides) and non-coding, which bind to specific sequences of the non-coding regions (mainly the 3'UTR) of the target messenger RNAs, inhibiting their translation and / or destabilizing them, which also causes a decrease in the total amount of protein. There are several microRNAs that target transcripts encoding cardiac ion channel proteins, for example, microRNA-195 and microRNA-1 act on the expression of the SCN5A gene (Baofeng Yang, et al ., 2008, Cardiovascular Research , Vol. 79: 571-580).

En resumen, es necesario diseñar nuevas estrategias terapéuticas de modulación de la función del canal de sodio para tratar arritmias cardíacas, las cuales restauren la deficiencia biológica del paciente y no se limiten únicamente a paliar la sintomatología de la enfermedad. Por otro lado, estas nuevas estrategias terapéuticas deberían evitar las complicaciones de las actuales terapias con drogas o con el cardiovertor.In summary, it is necessary to design new therapeutic strategies of modulation of the channel function sodium to treat cardiac arrhythmias, which will restore the Biological deficiency of the patient and not limited only to alleviate the symptomatology of the disease. On the other hand, you are New therapeutic strategies should avoid complications of the current therapies with drugs or with the cardioverter.

Descripción de la invenciónDescription of the invention

La presente invención propone el uso del microRNA hsa-mir-219-5p, de SEQ ID NO: 1, de los polinucleótidos modificados derivados de él, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5, o de sus precursores, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6, para la elaboración de medicamentos útiles para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas, preferiblemente de aquellas que se deben a alteraciones en la función del canal de sodio cardíaco, más preferiblemente de síndrome de QT largo tipo 3 y de síndrome de Brugada.The present invention proposes the use of microRNA hsa-mir-219-5p, of SEQ ID NO: 1, of the modified polynucleotides derived therefrom, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 5, or its precursors, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 6, for the preparation of useful medicines for the treatment of arrhythmogenic canalopathies, preferably of those due to alterations in the function of the cardiac sodium, more preferably of type 3 long QT syndrome and of Brugada syndrome.

El pequeño tamaño de los microRNAs, su fácil manipulación, la biodisponibilidad de sus precursores (pre-miR o pre-microRNA) y su elevada estabilidad termodinámica, hacen de ellos moléculas con un alto potencial terapéutico. Además, la conjugación de los polinucleótidos de la invención con, por ejemplo, aunque sin limitarnos, residuos lipídicos, permite su biodisponibilidad en el organismo del paciente al que le son administrados.The small size of the microRNAs, its easy manipulation, bioavailability of its precursors (pre-miR or pre-microRNA) and its high thermodynamic stability, make them molecules with a high therapeutic potential In addition, the conjugation of polynucleotides of the invention with, for example, but without limit ourselves, lipid residues, allows its bioavailability in the organism of the patient to whom they are administered.

Las secuencias polinucleotídicas de la invención o polinucleótidos de la invención, preferiblemente, las SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, permiten modular la función del canal de sodio cardíaco a través de su unión al mRNA que codifica para la proteína Nav1.5, o en el caso de los precursores, proporcionando el polinucleótido que se une a este mRNA, lo que arroja la posibilidad de incrementar la función del canal de sodio en pacientes con, por ejemplo, aunque sin limitarnos, síndrome de Brugada, o disminuirla en pacientes con, por ejemplo, aunque sin limitarnos, síndrome LQT3, y de este modo revertir la función biológica alterada en dichas patologías cardíacas, en contraposición con los actuales métodos biomecánicos o farmacológicos que solo permiten mitigar parcialmente la sintomatología de estas enfermedades.The polynucleotide sequences of the invention or polynucleotides of the invention, preferably, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6, allow modulating the function of the cardiac sodium channel to through its binding to the mRNA encoding the Nav1.5 protein, or in the case of precursors, providing the polynucleotide that joins this mRNA, which gives the possibility of increasing the sodium channel function in patients with, for example, but without limit ourselves, Brugada syndrome, or decrease it in patients with, by example, but not limited to, LQT3 syndrome, and thus reverse altered biological function in these pathologies cardiac, as opposed to current biomechanical methods or pharmacological that only partially mitigate the symptomatology of these diseases.

Los inventores demuestran que el microRNA hsa-mir-219-5p, o miR-219a, de SEQ ID NO: 1, es capaz de reducir la expresión del gen SCN5A, el cual codifica para la proteína transmembrana Nav1.5 responsable del potencial de acción en las células musculares cardíacas. El análisis in vitro de este microRNA muestra que su sobreexpresión disminuye la expresión del gen SCN5A hasta un 50% en las células musculares cardíacas auriculares (Figura 3), reduciendo así su capacidad y ritmo contráctil. Por ello, en la presente invención se propone el uso de este microRNA para la elaboración de medicamentos destinados al tratamiento de canalopatías arritmogénicas, preferiblemente de aquellas canalopatías arritmogénicas cuya causa sean alteraciones en los canales de sodio, más preferiblemente cuando las alteraciones en dichos canales se deban a mutaciones de ganancia de función en el gen SCN5A, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, el síndrome de LQT3.The inventors demonstrate that the hsa-mir-219-5p microRNA, or miR-219a, of SEQ ID NO: 1, is capable of reducing the expression of the SCN5A gene, which codes for the Nav1.5 transmembrane protein responsible for the potential of action in cardiac muscle cells. In vitro analysis of this microRNA shows that its overexpression decreases the expression of the SCN5A gene up to 50% in atrial cardiac muscle cells (Figure 3), thus reducing its capacity and contractile rhythm. Therefore, the present invention proposes the use of this microRNA for the preparation of medicaments for the treatment of arrhythmogenic canalopathies, preferably of those arrhythmogenic canalopathies whose cause is alterations in the sodium channels, more preferably when the alterations in said channels are due to function gain mutations in the SCN5A gene, such as, but not limited to, LQT3 syndrome.

Además, en la presente invención se han sustituido los tres nucleótidos (CAA) adyacentes al extremo 3' de la secuencia GAUUGUC o secuencia complementaria al mRNA del gen SCN5A comprendida en la SEQ ID NO: 1, por otros tres nucleótidos (AGC), de manera que se ha obtenido la SEQ ID NO: 3, polinucleótido que presenta al menos un 85% de identidad con la SEQ ID NO: 1 y que comprende tres sitios complementarios más que esta secuencia con el mRNA del gen SCN5A, por lo que posee una mayor capacidad de unión al mismo que la secuencia del microRNA nativo o SEQ ID NO: 1. Por ello, la SEQ ID NO: 3 también es útil para la elaboración de medicamentos destinados al tratamiento de canalopatías arritmogénicas, preferiblemente de aquellas canalopatías arritmogénicas cuya causa sean alteraciones en los canales de sodio, más preferiblemente cuando las alteraciones en dichos canales se deban a mutaciones de ganancia de función en este gen, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, el síndrome de LQT3.In addition, in the present invention replaced the three nucleotides (CAA) adjacent to the 3 'end of the GAUUGUC sequence or sequence complementary to the mRNA of the SCN5A gene included in SEQ ID NO: 1, for three other nucleotides (AGC), of such that SEQ ID NO: 3, polynucleotide that It has at least 85% identity with SEQ ID NO: 1 and that it comprises three complementary sites more than this sequence with the mRNA of the SCN5A gene, so it has a greater ability to bind to same as the native microRNA sequence or SEQ ID NO: 1. Therefore, SEQ ID NO: 3 is also useful for the preparation of medicines intended for the treatment of arrhythmogenic canalopathies, preferably of those arrhythmogenic canalopathies whose cause are alterations in the sodium channels, more preferably when the alterations in these channels are due to mutations of function gain in this gene, as for example, although without limit ourselves, the LQT3 syndrome.

Por tanto, un primer aspecto de la invención se refiere al uso de un polinucleótido aislado, de ahora en adelante "polinucleótido de la invención", que comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 60%, preferiblemente con al menos un 75%, más preferiblemente con al menos un 80% y aun más preferiblemente con al menos un 85% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1 para la elaboración de un medicamento, o alternativamente, a un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 60%, preferiblemente con al menos un 75%, más preferiblemente con al menos un 80% y aun más preferiblemente con al menos un
85% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1 para su uso como medicamento.Thus, a first aspect of the invention relates to the use of an isolated polynucleotide, hereinafter "polynucleotide of the invention", which comprises a nucleotide sequence with at least 60%, preferably with at least 75%, more preferably with at least 80% and even more preferably with at least 85% identity with respect to the full length of the sequence SEQ ID NO: 1 for the preparation of a medicament, or alternatively, to an isolated polynucleotide comprising a nucleotide sequence with at least 60%, preferably with at least 75%, more preferably with at least 80% and even more preferably with at least one
85% identity with respect to the full length of the sequence SEQ ID NO: 1 for use as a medicine.

Los términos "secuencia nucleotídica", "secuencia de nucleótidos", "ácido nucleico", "oligonucleótido" y "polinucleótido" se usan aquí de manera intercambiable y se refieren a una forma polimérica de nucleótidos de cualquier longitud que pueden estar o no, química o bioquímicamente modificados. Se refieren, por tanto, a cualquier polirribonucleótido o polidesoxirribonucleótido, tanto de cadena sencilla como de doble hebra.The terms "nucleotide sequence", "nucleotide sequence", "nucleic acid", "oligonucleotide" and "polynucleotide" are used herein of interchangeable manner and refer to a polymeric form of nucleotides of any length that may or may not be chemical or biochemically modified. They refer, therefore, to any polyiribonucleotide or polydeoxyribonucleotide, both chain Simple as double strand.

El polinucleótido de la invención puede obtenerse de manera artificial mediante métodos de clonación y selección convencional, o mediante secuenciación.The polynucleotide of the invention can Obtained artificially by cloning methods and conventional selection, or by sequencing.

En una realización preferida, el polinucleótido de la invención comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 3, la cual presenta al menos un 85% de identidad con respecto a la longitud completa de la SEQ ID NO: 1. En una realización más preferida, el polinucleótido de la invención es SEQ ID NO: 4, secuencia nucleotídica precursora de la SEQ ID NO: 3 que comprende esta secuencia.In a preferred embodiment, the polynucleotide of the invention comprises the nucleotide sequence SEQ ID NO: 3, which has at least 85% identity with respect to the full length of SEQ ID NO: 1. In one more embodiment preferred, the polynucleotide of the invention is SEQ ID NO: 4, precursor nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3 comprising this sequence

Otro aspecto de la invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 3.Another aspect of the invention relates to a isolated polynucleotide comprising the nucleotide sequence SEQ ID NO: 3.

Otro aspecto de la invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 4.Another aspect of the invention relates to a isolated polynucleotide comprising the nucleotide sequence SEQ ID NO: 4.

Por otro lado, en la presente invención se han sustituido tres de los nucleótidos de la secuencia GAUUGUC comprendida en la SEQ ID NO: 1 para obtener un polinucleótido, SEQ ID NO: 5, que presenta al menos un 85% de identidad con la SEQ ID NO: 1 y que comprende tres sitios complementarios menos que esta secuencia con el mRNA del gen SCN5A, por lo que posee una menor capacidad de unión al mismo que la secuencia del microRNA nativo o SEQ ID NO: 1. Por ello, la SEQ ID NO: 5 también es útil para la elaboración de medicamentos destinados al tratamiento de canalopatías arritmogénicas, preferiblemente de aquellas canalopatías arritmogénicas cuya causa sean alteraciones en los canales de sodio, más preferiblemente cuando las alteraciones en dichos canales se deban a mutaciones de ganancia de función en este gen, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, el síndrome de LQT3, puesto que, aunque esta secuencia posea menos sitios complementarios que la SEQ ID NO: 1 con el mRNA diana también es capaz de unirse a dicho mRNA y reducir su función; estos medicamentos podrían ser útiles, por ejemplo, aunque sin limitarnos, en pacientes de síndrome de LQT3 en los que exista una deficiencia en la expresión del microRNA nativo. La SEQ ID NO: 5 también es útil para la elaboración de medicamentos destinados al tratamiento de canalopatías arritmogénicas cuya causa sean mutaciones de pérdida de función en este gen, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, el síndrome de Brugada, ya que esta secuencia compite con el microRNA nativo presente en las células por la unión al mRNA diana reduciendo la capacidad de este último de inhibir la función de dicho gen.On the other hand, in the present invention substituted three of the nucleotides of the GAUUGUC sequence included in SEQ ID NO: 1 to obtain a polynucleotide, SEQ ID NO: 5, which has at least 85% identity with SEQ ID NO: 1 and comprising three complementary sites less than this sequence with the mRNA of the SCN5A gene, so it has a lower binding capacity to the same as the native microRNA sequence or SEQ ID NO: 1. Therefore, SEQ ID NO: 5 is also useful for preparation of medicines for the treatment of arrhythmogenic canalopathies, preferably those arrhythmogenic canalopathies whose cause are alterations in the sodium channels, more preferably when alterations in these channels are due to function gain mutations in this gene, such as, but not limited to, LQT3 syndrome, since, although this sequence has fewer complementary sites that SEQ ID NO: 1 with the target mRNA is also able to join said mRNA and reduce its function; these medications could be useful, for example, but not limited to, in syndrome patients of LQT3 in which there is a deficiency in the expression of native microRNA. SEQ ID NO: 5 is also useful for processing of medicines for the treatment of canalopathies arrhythmogenic whose cause is loss of function mutations in this gene, such as, but not limited to, the syndrome of Brugada, since this sequence competes with the native microRNA present in cells by binding to the target mRNA reducing the ability of the latter to inhibit the function of said gene.

Por ello, en otra realización preferida del primer aspecto de la invención, el polinucleótido de la invención comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 5, la cual presenta al menos un 85% de identidad con respecto a la longitud completa de la SEQ ID NO: 1. En una realización más preferida, el polinucleótido de la invención es SEQ ID NO: 6, secuencia nucleotídica precursora de la SEQ ID NO: 5 que comprende esta secuencia.Therefore, in another preferred embodiment of the first aspect of the invention, the polynucleotide of the invention comprises the nucleotide sequence SEQ ID NO: 5, which has at least 85% identity with respect to the full length of SEQ ID NO: 1. In a more preferred embodiment, the polynucleotide of the invention is SEQ ID NO: 6, precursor nucleotide sequence of SEQ ID NO: 5 comprising this sequence.

Otro aspecto de la invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 5.Another aspect of the invention relates to a isolated polynucleotide comprising the nucleotide sequence SEQ ID NO: 5.

Otro aspecto de la invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 6.Another aspect of the invention relates to a isolated polynucleotide comprising the nucleotide sequence SEQ ID NO: 6.

En otra realización preferida del primer aspecto de la invención, el polinucleótido de la invención comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 90% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1. En una realización más preferida, el polinucleótido de la invención comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 95% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1. En una realización más preferida, el polinucleótido de la invención comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 98% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1. En una realización más preferida, el polinucleótido de la invención comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1. En una realización aun más preferida, el polinucleótido de la invención es SEQ ID NO: 2, secuencia nucleotídica precursora de la SEQ ID NO: 1 que comprende esta secuencia.In another preferred embodiment of the first aspect of the invention, the polynucleotide of the invention comprises a nucleotide sequence with at least 90% identity with with respect to the full length of the sequence SEQ ID NO: 1. In a most preferred embodiment, the polynucleotide of the invention comprises a nucleotide sequence with at least 95% of identity with respect to the full length of the sequence SEQ ID NO: 1. In a more preferred embodiment, the polynucleotide of the invention comprises a nucleotide sequence with at least 98% of identity with respect to the full length of the SEQ sequence ID NO: 1. In a more preferred embodiment, the polynucleotide of the invention comprises the nucleotide sequence SEQ ID NO: 1. In a even more preferred embodiment, the polynucleotide of the invention is SEQ ID NO: 2, precursor nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 Who understands this sequence.

Dentro del alcance de esta invención se encuentran también los precursores o secuencias nucleotídicas precursoras. El término "precursor" o "secuencia precursora" tal como aquí se utiliza incluye a cualquier secuencia nucleotídica que cuando se procesa mediante, por ejemplo, aunque sin limitarnos, corte enzimático, es capaz de proporcionar un polinucleótido con al menos un 60%, preferiblemente con al menos un 65%, más preferiblemente con al menos un 70%, con al menos un 75%, con al menos un 80%, con al menos un 85%, con al menos un 90%, con al menos un 95% o con al menos un 98% de identidad con respecto a la longitud completa de la SEQ ID NO: 1, o bien que es capaz de proporcionar un polinucleótido de secuencia SEQ ID NO: 1; o que es capaz de proporcionar un polinucleótido de secuencia SEQ ID NO: 3; o que es capaz de proporcionar un polinucleótido de secuencia SEQ ID NO: 5. Ventajosamente, dicho precursor es una secuencia nucleotídica que aumenta la biodisponibilidad de los polinucleótidos que proporciona cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación de los mismos en un compartimento biológico. Preferiblemente, las secuencias nucleotídicas precursoras de la invención son la SEQ ID NO: 2, secuencia a la que también se hará referencia como pre-miR-219a y que es precursora de la SEQ ID NO: 1; la SEQ ID NO: 4, secuencia precursora de la SEQ ID NO: 3; y la SEQ ID NO: 6, secuencia precursora de la SEQ ID NO: 5. Todas estas secuencias nucleotídicas precursoras comprenden los polinucleótidos SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 5, respectivamente.Within the scope of this invention, they also find the precursors or nucleotide sequences precursors The term "precursor" or "sequence precursor "as used here includes any nucleotide sequence that when processed by, for example, although without limitation, enzymatic cutting, is able to provide a polynucleotide with at least 60%, preferably with at least one 65%, more preferably with at least 70%, with at least 75%, with at least 80%, with at least 85%, with at least 90%, with at least 95% or with at least 98% identity with respect to the full length of SEQ ID NO: 1, or that it is capable of providing a sequence polynucleotide SEQ ID NO: 1; or, what is it capable of providing a sequence polynucleotide SEQ ID NO: 3; or which is capable of providing a polynucleotide of sequence SEQ ID NO: 5. Advantageously, said precursor is a nucleotide sequence. which increases the bioavailability of the polynucleotides that provides when administered to an individual or that enhances the release of them in a biological compartment. Preferably, the precursor nucleotide sequences of the invention are SEQ ID NO: 2, sequence to which it will also be done reference as pre-miR-219a and that It is a precursor to SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 4, sequence precursor of SEQ ID NO: 3; and SEQ ID NO: 6, sequence precursor of SEQ ID NO: 5. All these nucleotide sequences precursors comprise the polynucleotides SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 5, respectively.

Los medicamentos y composiciones farmacéuticas de la invención son útiles para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas, preferiblemente, para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas que se deben a alteraciones en los canales de sodio, ya que el polinucleótido de la invención es capaz de reducir la expresión del gen SCN5A que codifica para una proteína transmembrana de los canales de sodio, por lo que puede ser empleado en aquellas canalopatías arritmogénicas debidas a alteraciones de ganancia de función en estos canales. El polinucleótido de la invención que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 5 o el de SEQ ID NO: 6, presenta una menor complementariedad con el mRNA de este gen que el microRNA nativo, por lo que al competir con este último por dicha unión es capaz de incrementar los niveles de mRNAs de este gen, en comparación con el microRNA nativo, por lo que es útil para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas debidas a alteraciones de pérdida de función en los canales de sodio.Medications and pharmaceutical compositions of the invention are useful for the treatment of canalopathies arrhythmogenic, preferably, for the treatment of canalopathies arrhythmogenic due to alterations in sodium channels, since the polynucleotide of the invention is able to reduce the SCN5A gene expression encoding a transmembrane protein of the sodium channels, so it can be used in those arrhythmogenic canalopathies due to alterations in the gain of function in these channels. The polynucleotide of the invention that comprises the nucleotide sequence SEQ ID NO: 5 or that of SEQ ID NO: 6, presents a lower complementarity with the mRNA of this gene than the native microRNA, so competing with the latter for said binding is able to increase the levels of mRNAs of this gene, compared to the native microRNA, so it is useful for the treatment of arrhythmogenic canalopathies due to alterations of loss of function in sodium channels.

Por tanto, otro aspecto de la invención se refiere al uso del polinucleótido de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas, o alternativamente, al polinucleótido de la invención para su uso como medicamento para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas. En una realización preferida, las canalopatías arritmogénicas se deben a alteraciones en los canales de sodio. En una realización más preferida, la canalopatía arritmogénica que se debe a alteraciones en los canales de sodio es el síndrome de QT largo tipo 3.Therefore, another aspect of the invention is refers to the use of the polynucleotide of the invention for the development of a medicine for the treatment of canalopathies arrhythmogenic, or alternatively, to the polynucleotide of the invention for use as a medicament for the treatment of arrhythmogenic canalopathies. In a preferred embodiment, the arrhythmogenic canalopathies are due to alterations in the channels of sodium. In a more preferred embodiment, the canalopathy Arrhythmogenic due to alterations in sodium channels is long QT syndrome type 3.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso del polinucleótido de la invención que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 5 o del polinucleótido de la invención de secuencia SEQ ID NO: 6 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de síndrome de Brugada.Another aspect of the invention relates to the use of the polynucleotide of the invention comprising the sequence of nucleotides SEQ ID NO: 5 or of the polynucleotide of the invention of sequence SEQ ID NO: 6 for the preparation of a medicament for Brugada syndrome treatment.

El término "medicamento", tal y como se usa en esta descripción, hace referencia a cualquier sustancia usada para la prevención, el diagnóstico, el alivio, el tratamiento o la curación de enfermedades en el hombre y los animales. En el contexto de la presente invención se refiere a una preparación que comprenda, al menos, el polinucleótido de la invención.The term "medication", as used in this description, refers to any substance used for prevention, diagnosis, relief, treatment or Healing of diseases in man and animals. In the context of the present invention refers to a preparation comprising, at least, the polynucleotide of the invention.

El polinucleótido de la invención se formula en una composición farmacéutica apropiada, en la cantidad terapéuticamente efectiva, preferiblemente junto con uno o más vehículos, adyuvantes o excipientes farmacéuticamente aceptables.The polynucleotide of the invention is formulated in an appropriate pharmaceutical composition, in the amount therapeutically effective, preferably together with one or more Pharmaceutical vehicles, adjuvants or excipients acceptable.

El término "tratamiento", tal como se entiende en la presente invención, supone combatir los efectos causados como consecuencia de las canalopatías arritmogénicas, preferiblemente, de las canalopatías arritmogénicas que se deben a alteraciones en los canales de sodio, más preferiblemente del síndrome de QT largo tipo 3 o del síndrome de Brugada, para estabilizar el estado de los individuos o prevenir daños posteriores. El término "prevención", tal como se entiende en la presente invención, consiste en evitar la aparición de daños cuya causa sean las canalopatías arritmogénicas, preferiblemente, las canalopatías arritmogénicas que se deben a alteraciones en los canales de sodio, más preferiblemente el síndrome de QT largo tipo 3 o el síndrome de Brugada.The term "treatment," as understood in the present invention, is to combat the effects caused as a result of arrhythmogenic canalopathies, preferably, of arrhythmogenic canalopathies that are due to alterations in sodium channels, more preferably of type 3 long QT syndrome or Brugada syndrome, for stabilize the condition of individuals or prevent damage later. The term "prevention", as understood in The present invention is to prevent the occurrence of damage whose cause are arrhythmogenic canalopathies, preferably arrhythmogenic canalopathies due to alterations in the sodium channels, more preferably type 3 long QT syndrome or Brugada syndrome.

Se entiende por "canalopatía arritmogénica" cualquier cardiomiopatía (o alteración de la función del miocardio) genética que resulta de mutaciones en los genes responsables del correcto funcionamiento de los canales iónicos que generan el potencial de acción transmembrana, lo cual conlleva defectos en la función (ganancia o pérdida) de dichos canales, alteraciones fisiológicas de la duración del potencial de acción transmembrana y/o predisposición a desarrollar arritmias ventriculares en ausencia de cardiopatía estructural. Ejemplos de canalopatías arritmogénicas incluyen, aunque sin limitarnos, síndrome de Brugada, síndrome de QT largo, síndrome de QT corto o taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica. Las canalopatías arritmogénicas pueden ser diagnosticadas, por ejemplo, aunque sin limitarnos, como se describe en Cabrera Ortega M., et al., 2009, Revista Cubana Pediatría,
81 (4)."Arrhythmogenic canalopathy" is understood as any genetic cardiomyopathy (or impaired myocardial function) that results from mutations in the genes responsible for the proper functioning of the ion channels that generate the potential for transmembrane action, which leads to defects in function ( gain or loss) of said channels, physiological alterations of the duration of the potential for transmembrane action and / or predisposition to develop ventricular arrhythmias in the absence of structural heart disease. Examples of arrhythmogenic canalopathies include, but are not limited to, Brugada syndrome, long QT syndrome, short QT syndrome or catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia. Arrhythmogenic canalopathies can be diagnosed, for example, but not limited to, as described in Cabrera Ortega M., et al ., 2009, Cuban Journal of Pediatrics ,
81 (4).

Las "canalopatías arritmogénicas que se deben a alteraciones en los canales de sodio" son aquellas canalopatías cuya base genética se encuentra en mutaciones (de pérdida o de ganancia de función) en al menos uno de los genes que codifican para dichos canales, preferiblemente, en el gen SCN5A de SEQ ID NO: 7. La detección de este tipo de canalopatías se puede realizar mediante, por ejemplo, aunque sin limitarnos, un electrocardiograma, mediante el cual es posible hacer un diagnóstico potencial de las corrientes alteradas (Antzelevitch et al., 2005a, 2005b, Circulation, 111:659-670); o bien mediante PCR de los genes que codifican para los canales de sodio, preferiblemente del gen SCN5A, y posterior secuenciación, lo cual permite detectar alteraciones en el gen que puedan ser las causantes de la canalopatía (Ashley & Niebauer, 2004, J. Cardiology explained; Kapplinger et al., 2010, Heart Rhythm,
7(1):33-46)."Arrhythmogenic canalopathies due to alterations in sodium channels" are those canalopathies whose genetic basis is found in mutations (loss or gain of function) in at least one of the genes that code for said channels, preferably, in the SCN5A gene of SEQ ID NO: 7. The detection of this type of canalopathies can be performed by, for example, but not limited to, an electrocardiogram, by which it is possible to make a potential diagnosis of the altered currents (Antzelevitch et al . , 2005a, 2005b, Circulation , 111: 659-670); or by PCR of the genes that code for the sodium channels, preferably of the SCN5A gene, and subsequent sequencing, which allows to detect alterations in the gene that may be the cause of the canalopathy (Ashley & Niebauer, 2004, J. Cardiology explained ; Kapplinger et al ., 2010, Heart Rhythm ,
7 (1): 33-46).

El "síndrome de QT largo tipo 3" o "LQT3" se caracteriza por una alteración en la repolarización ventricular traducida en el electrocardiograma por un alargamiento en el intervalo QT corregido (QTc) por fórmula de Bazzet (QTc=QT/\surdR) \geq 440 ms, que predispone a arritmia de puntas torcidas (torsade de pointe) y muerte súbita. Puede diagnosticarse, por tanto, mediante por ejemplo, aunque sin limitarnos, electrocardiograma o registro Holter. Otros criterios diagnósticos de este síndrome son el síncope inducido por estrés y/o alternancia eléctrica de la onda T. Este síndrome se debe a mutaciones en el gen SCN5A que originan anomalías en el canal de sodio. Este gen se localiza en el brazo corto del cromosoma 3 (3p21-24)."Long QT syndrome type 3" or "LQT3" is characterized by an alteration in ventricular repolarization translated on the electrocardiogram by an elongation in the corrected QT interval (QTc) by Bazzet's formula (QTc = QT / \ surdR) \ 440 ms, which predisposes to arrhythmia of twisted tips ( torsade de pointe ) and sudden death. It can be diagnosed, therefore, by means of, for example, but not limited to, electrocardiogram or Holter recording. Other diagnostic criteria for this syndrome are stress-induced syncope and / or electrical alternation of the T wave. This syndrome is due to mutations in the SCN5A gene that cause sodium channel abnormalities. This gene is located in the short arm of chromosome 3 (3p21-24).

El "síndrome de Brugada" se caracteriza por la probabilidad de presentar episodios sincopales o parada cardíaca causados por taquicardia ventricular polimórfica o fibrilación ventricular durante el reposo o el sueño, con un patrón electrocardiográfico de aparente bloqueo de rama derecha y supradesnivel del segmento ST que cae con lentitud y finaliza en una onda T negativa en V1, V2 y V3, sin depresión de las derivaciones opuestas. Genéticamente se han identificado siete tipos de síndrome de Brugada, los más frecuentes son, aunque sin limitarnos, síndrome de Brugada de tipo 1 o síndrome de Brugada de tipo 2.The "Brugada syndrome" is characterized by the probability of presenting syncopal episodes or cardiac arrest caused by polymorphic ventricular tachycardia or fibrillation ventricular during rest or sleep, with a pattern electrocardiogram of apparent right bundle branch block and ST segment elevation that falls slowly and ends in a negative T wave in V1, V2 and V3, without depression of the leads opposite. Genetically, seven types of syndrome have been identified from Brugada, the most frequent are, but not limited to, syndrome Brugada type 1 or Brugada syndrome type 2.

Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica, de ahora en adelante, "primera composición farmacéutica de la invención", que comprende el polinucleótido de la invención que comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 60%, preferiblemente con al menos un 65%, más preferiblemente con al menos un 70%, con al menos un 75%, con al menos un 80%, con al menos un 85%, con al menos un 90%, con al menos un 95% o con al menos un 98% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1, o que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1, o de SEQ ID NO: 2, o que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 3 o de SEQ ID NO: 4.Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition, hereafter, "first pharmaceutical composition of the invention ", which comprises the polynucleotide of the invention comprising a sequence of nucleotides with at least 60%, preferably with at least one 65%, more preferably with at least 70%, with at least 75%, with at least 80%, with at least 85%, with at least 90%, with at least 95% or with at least 98% identity with respect to the full length of the sequence SEQ ID NO: 1, or comprising the nucleotide sequence SEQ ID NO: 1, or of SEQ ID NO: 2, or that It comprises the nucleotide sequence SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: Four.

En una realización preferida, la primera composición farmacéutica de la invención además comprende otro principio activo. En una realización más preferida, la primera composición farmacéutica de la invención además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.In a preferred embodiment, the first pharmaceutical composition of the invention further comprises another active principle. In a more preferred embodiment, the first Pharmaceutical composition of the invention further comprises a pharmaceutically acceptable vehicle.

Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica, de ahora en adelante, "segunda composición farmacéutica de la invención", que comprende el polinucleótido de la invención que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 5 o de SEQ ID NO: 6.Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition, hereafter, "second pharmaceutical composition of the invention ", which comprises the polynucleotide of the invention comprising the sequence of nucleotides SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

En una realización preferida, la segunda composición farmacéutica de la invención además comprende otro principio activo. En una realización más preferida, la segunda composición farmacéutica de la invención además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.In a preferred embodiment, the second pharmaceutical composition of the invention further comprises another active principle. In a more preferred embodiment, the second Pharmaceutical composition of the invention further comprises a pharmaceutically acceptable vehicle.

Como se emplea aquí, el término "principio activo", "sustancia activa", "sustancia farmacéuticamente activa", "ingrediente activo" ó "ingrediente farmacéuticamente activo" significa cualquier componente que potencialmente proporcione una actividad farmacológica u otro efecto diferente en el diagnóstico, cura, mitigación, tratamiento, o prevención de una enfermedad, o que afecta a la estructura o función del cuerpo del hombre u otros animales. El término incluye aquellos componentes que promueven un cambio químico en la elaboración del fármaco y están presentes en el mismo de una forma modificada prevista que proporciona la actividad específica o el efecto.As used here, the term "principle active "," active substance "," pharmaceutically active substance active "," active ingredient "or" ingredient pharmaceutically active "means any component that potentially provide a pharmacological activity or other effect different in diagnosis, cure, mitigation, treatment, or prevention of a disease, or that affects the structure or function of the body of man or other animals. The term includes those components that promote a chemical change in the elaboration of drug and are present in it in a modified way intended to provide the specific activity or effect.

Los "adyuvantes" y "vehículos farmacéuticamente aceptables" se refieren a aquellas sustancias, o combinación de sustancias, conocidas en el sector farmacéutico, utilizadas en la elaboración de formas farmacéuticas de administración e incluyen, pero sin limitarse, sólidos, líquidos, disolventes o tensioactivos. Los vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en la presente invención son los vehículos conocidos en el estado de la técnica, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, los residuos lipídicos.The "adjuvants" and "vehicles pharmaceutically acceptable "refers to those substances, or combination of substances, known in the pharmaceutical sector, used in the preparation of pharmaceutical forms of administration and include, but not limited to, solids, liquids, solvents or surfactants. The vehicles pharmaceutically Acceptable that can be used in the present invention are the vehicles known in the state of the art, as per example, but not limited to lipid residues.

Las composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención pueden utilizarse en un método de tratamiento o de prevención de forma aislada o conjuntamente con otros compuestos farmacéuticos destinados al tratamiento o prevención de las canalopatías arritmogénicas, preferiblemente, de las canalopatías arritmogénicas que se deben a
alteraciones en los canales de sodio, más preferiblemente, de síndrome de QT largo tipo 3 o de síndrome de Brugada.The pharmaceutical compositions and medicaments of the present invention can be used in a method of treatment or prevention in isolation or in conjunction with other pharmaceutical compounds intended for the treatment or prevention of arrhythmogenic canalopathies, preferably, of arrhythmogenic canalopathies due to
alterations in the sodium channels, more preferably, of type 3 long QT syndrome or Brugada syndrome.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden formularse para su administración en una variedad de formas conocidas en el estado de la técnica.The pharmaceutical compositions herein invention can be formulated for administration in a variety in ways known in the state of the art.

Tales composiciones y/o sus formulaciones pueden administrarse a un animal, incluyendo un mamífero y, por tanto, al hombre, en una variedad de formas, incluyendo, pero sin limitarse, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intradérmica, intraarticular, intrasinovial, intralesional, intraarterial, intracardíaca, intramuscular, intranasal, subcutánea, intracapsular, tópica, mediante parches transdérmicos, mediante administración percutánea, implante quirúrgico, pintura quirúrgica interna, bomba de infusión o vía catéter.Such compositions and / or their formulations may administered to an animal, including a mammal and, therefore, to man, in a variety of ways, including, but not limited to, parenteral, intraperitoneal, intravenous, intradermal, intraarticular, intrasynovial, intralesional, intraarterial, intracardiac, intramuscular, intranasal, subcutaneous, intracapsular, topical, by transdermal patches, by administration percutaneous, surgical implant, internal surgical paint, pump of infusion or catheter.

La dosificación para obtener una cantidad terapéuticamente efectiva depende de una variedad de factores, como por ejemplo, la edad, peso, sexo o tolerancia del individuo. En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de las composiciones farmacéuticas de la invención que produzca el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de dichas composiciones farmacéuticas y el efecto terapéutico a conseguir.The dosage to obtain an amount therapeutically effective depends on a variety of factors, such as for example, the age, weight, sex or tolerance of the individual. At meaning used in this description, the expression "quantity therapeutically effective "refers to the amount of pharmaceutical compositions of the invention that produce the effect desired and, in general, will be determined, among other causes, by the characteristics of said pharmaceutical compositions and The therapeutic effect to be achieved.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la primera y de la segunda composición farmacéutica de la invención para la elaboración de un medicamento, o alternativamente, a la primera y segunda composición farmacéutica de la invención para su uso como medicamento. En una realización preferida, el medicamento es para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas. En una realización más preferida, las canalopatías arritmogénicas se deben a alteraciones en los canales de sodio. En una realización aun más preferida, la canalopatía arritmogénica que se debe a alteraciones en los canales de sodio es el síndrome de QT largo tipo 3.Another aspect of the invention relates to the use of the first and second pharmaceutical composition of the invention for the preparation of a medicament, or alternatively, to the first and second pharmaceutical composition of the invention for Its use as a medicine. In a preferred embodiment, the Medication is for the treatment of arrhythmogenic canalopathies. In a more preferred embodiment, arrhythmogenic canalopathies are due to alterations in sodium channels. In one embodiment yet most preferred, arrhythmogenic canalopathy due to alterations in sodium channels is the long type QT syndrome 3.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la segunda composición farmacéutica de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de síndrome de Brugada, o alternativamente, a la segunda composición farmacéutica de la invención para su uso como medicamento para el tratamiento de síndrome de Brugada.Another aspect of the invention relates to the use of the second pharmaceutical composition of the invention for the development of a medication for the treatment of syndrome Brugada, or alternatively, to the second pharmaceutical composition of the invention for use as a medicament for the treatment of Brugada syndrome

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos o componentes. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.Throughout the description and the claims the word "comprises" and its variants not intend to exclude other technical characteristics, additives or components. For those skilled in the art, other objects, advantages and features of the invention will be partly detached of the description and in part of the practice of the invention. The following examples and drawings are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.

Descripción de las figurasDescription of the figures

Fig. 1. Muestra el esquema de complementariedad del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) con la región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A. Secuencia superior: región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A (posición 1.416-1.422, 5'-3'). Secuencia inferior: secuencia del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1, 3'-5') con la secuencia complementaria al mensajero del gen SCN5A (GAUUGUC) marcada en blanco. Barras negras: nucleótidos complementarios.Fig. 1. Shows the complementarity scheme of hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) with the 3'UTR region of the SCN5A gene messenger . Upper sequence: 3'UTR region of the messenger of the SCN5A gene (position 1.416-1.422, 5'-3 '). Lower sequence: sequence of hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1, 3'-5 ') with the complementary sequence to the SCN5A gene messenger (GAUUGUC) marked in white. Black bars: complementary nucleotides. 

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Fig. 2. Muestra la secuencia del hsa-mir-219-5p maduro y de su precursor. A. Muestra la secuencia del hsa-mir-219-5p maduro (SEQ ID NO: 1). En negrita se destaca la secuencia que presenta complementariedad con la región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A, es decir, la secuencia GAUUGUC. B. Muestra la secuencia del pre-miR-219a (SEQ ID NO: 2). En negrita se destaca la región correspondiente al hsa-mir-219-5p maduro (SEQ ID NO: 1). C. Muestra el esquema de la estructura en horquilla del pre-miR-219a. En gris se destaca la secuencia madura del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) en las dos hebras complementarias del pre-miR-219a (SEQ ID NO: 2).Fig. 2. Shows the sequence of the mature hsa-mir-219-5p and its precursor . A. Shows the sequence of mature hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1). In bold, the sequence that shows complementarity with the 3'UTR region of the SCN5A gene messenger is highlighted, that is, the GAUUGUC sequence. B. Shows the sequence of pre-miR-219a (SEQ ID NO: 2). In bold, the region corresponding to the mature hsa-mir-219-5p stands out (SEQ ID NO: 1). C. Shows the outline of the fork structure of the pre-miR-219a. Gray highlights the mature sequence of hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) in the two complementary strands of pre-miR-219a (SEQ ID NO: 2). 

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Fig. 3. Muestra el análisis por qRT-PCR de la expresión del gen SCN5A en células miocárdicas atriales (HL-1) 6 horas tras la transfección con el hsa-mir-21 9-5p de SEQ ID NO: 1. Barras negras: células control, donde no se transfectó el hsa-mir-219-5p. Barras blancas: células donde se transfectó el hsa-mir-219-5p.Fig. 3. Shows the qRT-PCR analysis of the expression of the SCN5A gene in atrial myocardial cells (HL-1) 6 hours after transfection with the hsa-mir-21 9-5p of SEQ ID NO: 1 . Black bars: control cells, where hsa-mir-219-5p was not transfected. White bars: cells where hsa-mir-219-5p was transfected. 

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Fig. 4. Muestra los resultados de los ensayos inmunohistoquímicos contra el producto de expresión del gen SCN5A en células control (panel izquierdo) y en células a las que se les transfectó el hsa-mir-219-5p (panel derecho). El panel izquierdo muestra la expresión proteica normal de Nav1.5 (SCN5A) en la célula cardiomiocítica. Tras la transfección con miR-219-5p (panel derecho) Nav1.5 parece quedar secuestrado en el aparato de Golgi, y por tanto está muy poco representado en la membrana citoplasmática, donde normalmente ejerce su función de transporte de iones sodio.Fig. 4. It shows the results of immunohistochemical tests against the expression product of the SCN5A gene in control cells (left panel) and in cells that were transfected by hsa-mir-219-5p (right panel) . The left panel shows the normal protein expression of Nav1.5 (SCN5A) in the cardiomyocytic cell. After transfection with miR-219-5p (right panel) Nav1.5 appears to be sequestered in the Golgi apparatus, and therefore is very poorly represented in the cytoplasmic membrane, where it normally exerts its sodium ion transport function. 

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Fig. 5. Muestra un esquema ilustrativo de la estrategia para el tratamiento de síndrome de QT largo tipo 3 donde hay ganancia de función del gen SCN5A. A. Secuencia superior: región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A (posición 1.416-1.422, 5'-3'). Secuencia inferior: secuencia del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1, 3'-5') con la secuencia complementaria al mensajero del gen SCN5A (GAUUGUC) marcada en blanco. El recuadro de la secuencia inferior muestra los tres nucleótidos que se han sustituido por los nucleótidos que se muestran en la parte inferior para dar lugar a la SEQ ID NO: 3. Se muestra la complementariedad entre ambas secuencias, superior e inferior (barras). Las barras grises representan los nuevos sitios complementarios creados para dar lugar a la SEQ ID NO: 3. B. Muestra la secuencia del precursor de la SEQ ID NO: 1, pre-miR-219a, de SEQ ID NO: 2, donde se destaca en gris la secuencia madura del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) en las dos hebras complementarias del pre-miR-219a, en un recuadro se señalan los tres nucleótidos modificados para diseñar la SEQ ID NO: 3. C. Muestra la SEQ ID NO: 3 (en negrita) comprendida en su secuencia precursora o SEQ ID NO: 4. En gris se destacan los nucleótidos modificados.Fig. 5. It shows an illustrative scheme of the strategy for the treatment of long QT syndrome type 3 where there is gain of function of the SCN5A gene . A. Upper sequence: 3'UTR region of the messenger of the SCN5A gene (position 1.416-1.422, 5'-3 '). Lower sequence: sequence of hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1, 3'-5 ') with the complementary sequence to the SCN5A gene messenger (GAUUGUC) marked in white. The box in the lower sequence shows the three nucleotides that have been replaced by the nucleotides shown in the lower part to give rise to SEQ ID NO: 3. The complementarity between both upper and lower sequences (bars) is shown. The gray bars represent the new complementary sites created to give rise to SEQ ID NO: 3. B. Shows the precursor sequence of SEQ ID NO: 1, pre-miR-219a, of SEQ ID NO: 2, where the mature sequence of hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) stands out in gray in the two complementary strands of the pre-miR-219a, in a box the three modified nucleotides are indicated to design SEQ ID NO: 3 C. Shows SEQ ID NO: 3 (in bold) included in its precursor sequence or SEQ ID NO: 4. In gray, the modified nucleotides are highlighted. 

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Fig. 6. Muestra un esquema ilustrativo de la estrategia para el tratamiento de síndrome de Brugada donde hay pérdida de función del gen SCN5A. A. Secuencia superior: región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A (posición 1.416-1.422, 5'-3'). Secuencia inferior: secuencia del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1, 3'-5') con la secuencia complementaria al mensajero del gen SCN5A (GAUUGUC) marcada en blanco. Los recuadros de la secuencia inferior muestran los tres nucleótidos que se han sustituido por los nucleótidos que se muestran en la parte inferior para dar lugar a la SEQ ID NO: 5. Se muestra la complementariedad entre ambas secuencias, superior e inferior (barras). B. Muestra la secuencia del precursor de la SEQ ID NO: 1 pre-miR-219a, de SEQ ID NO: 2, donde se destaca en gris la secuencia madura del hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) en las dos hebras complementarias del pre-miR-219a, en un recuadro se señalan los tres nucleótidos modificados para diseñar la SEQ ID NO: 5. C. Muestra la SEQ ID NO: 5 (en negrita) comprendida en su secuencia precursora o SEQ ID NO: 6. En gris se destacan los nucleótidos modificados.Fig. 6. It shows an illustrative scheme of the strategy for the treatment of Brugada syndrome where there is loss of function of the SCN5A gene . A. Upper sequence: 3'UTR region of the messenger of the SCN5A gene (position 1.416-1.422, 5'-3 '). Lower sequence: sequence of hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1, 3'-5 ') with the complementary sequence to the SCN5A gene messenger (GAUUGUC) marked in white. The boxes in the lower sequence show the three nucleotides that have been replaced by the nucleotides shown in the lower part to give rise to SEQ ID NO: 5. The complementarity between both upper and lower sequences (bars) is shown. B. Shows the sequence of the precursor of SEQ ID NO: 1 pre-miR-219a, of SEQ ID NO: 2, where the mature sequence of hsa-mir-219-5p is highlighted in gray (SEQ ID NO: 1) in the two complementary strands of the pre-miR-219a, a box indicates the three modified nucleotides to design SEQ ID NO: 5. C. Shows SEQ ID NO: 5 (in bold) included in its precursor sequence or SEQ ID NO: 6. Gray shows the modified nucleotides. 

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Fig. 7. Muestra la expresión del gen SCN5A en células miocárdicas atriales (HL-1) transfectadas con la SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6 durante 12 horas. Células control (wt), donde se transfectó el precursor de hsa-mir-219-5p o miR-219a endógeno (SEQ ID NO: 2). miR-219a-: Células transfectadas con el precursor de miR-219a-(SEQ ID NO: 4), diseñado para tratar canalopatías arritmogénicas debidas a una ganancia de función en el gen SCN5A. miR-219a+: Células transfectadas con el precursor de miR-219+ (SEQ ID NO: 6), diseñado para tratar canalopatías arritmogénicas debidas a una pérdida de función en el gen SCN5A. La figura muestra que las células HL-1 transfectadas con la SEQ ID NO: 4 muestran una disminución en la expresión de SCN5A en comparación con las células transfectadas con el precursor endógeno de miR-219a (SEQ ID NO: 2), mientras que las células miocárdicas transfectadas con la SEQ ID NO: 6 muestran incremento en la expresión de SCN5A en comparación con las células transfectadas con el precursor endógeno de miR-219a (SEQ ID NO: 2).Fig. 7. Shows the expression of the SCN5A gene in atrial myocardial cells (HL-1) transfected with SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 6 for 12 hours . Control cells (wt), where the precursor of endogenous hsa-mir-219-5p or miR-219a (SEQ ID NO: 2) was transfected. miR-219a-: Cells transfected with the precursor of miR-219a- (SEQ ID NO: 4), designed to treat arrhythmogenic canalopathies due to a gain in function in the SCN5A gene. miR-219a +: Cells transfected with the precursor of miR-219 + (SEQ ID NO: 6), designed to treat arrhythmogenic canalopathies due to a loss of function in the SCN5A gene. The figure shows that HL-1 cells transfected with SEQ ID NO: 4 show a decrease in SCN5A expression compared to cells transfected with the endogenous precursor of miR-219a (SEQ ID NO: 2), while those Myocardial cells transfected with SEQ ID NO: 6 show increased expression of SCN5A compared to cells transfected with the endogenous precursor of miR-219a (SEQ ID NO: 2).

Ejemplos Examples

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de manifiesto la especificidad y la efectividad de las secuencias polinucleotídicas de la invención en la modulación de la función del gen SCN5A. Los siguientes ejemplos específicos que se proporcionan en este documento de patente sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención. Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos más adelante ilustran la invención sin limitar el campo de aplicación de la misma.The invention will be illustrated below through tests carried out by the inventors, who put manifest the specificity and effectiveness of the sequences polynucleotides of the invention in modulating the function of the SCN5A gene. The following specific examples provided in this patent document they serve to illustrate the nature of The present invention. These examples are included only with illustrative purposes and should not be construed as limitations to the invention claimed herein. Therefore, the examples described below illustrate the invention without limiting the field of application of it.

Ejemplo 1Example 1 Efecto de la expresión de hsa-mir-219-5p en la expresión del gen SCN5A en células miocárdicas atrialesEffect of the expression of hsa-mir-219-5p in the SCN5A gene expression in atrial myocardial cells

El hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) es capaz de unirse a la región 3'UTR del mRNA del gen SCN5A como se muestra en la figura 1, en concreto mediante la región correspondiente a la secuencia GAUUGUC incluida en la SEQ ID NO: 1 (marcada en negrita en la figura 2A). Este hsa-mir-219-5p se encuentra incluido en la secuencia de su precursor o pre-miR-219a (SEQ ID NO: 2) como se observa en las figuras 2B y 2C.He hsa-mir-219-5p (SEQ ID NO: 1) is able to bind to the 3'UTR region of the gene mRNA SCN5A as shown in Figure 1, specifically through the region corresponding to the GAUUGUC sequence included in SEQ ID NO: 1 (marked in bold in Figure 2A). This hsa-mir-219-5p se is included in the sequence of its predecessor or pre-miR-219a (SEQ ID NO: 2) as see in figures 2B and 2C.

En la presente invención, se exploró in vitro el efecto de la sobreexpresión de hsa-mir-219-5p en la actividad del gen Scn5a. Para ello se transfectaron células miocárdicas atriales (HL-1) con hsa-mir-219-5p, y se valoraron los niveles de expresión del gen SCN5A en las mismas mediante qRT-PCR. El análisis de la expresión de SCN5A a 6 h post-transfección y normalizado con dos controles internos distintos (beta-actina y gapdh) mostró una severa disminución de la expresión del canal de sodio mediada por SCN5A (Figura 3).In the present invention, the effect of overexpression of hsa-mir-219-5p on the activity of the Scn5a gene was explored in vitro . For this, atrial myocardial cells (HL-1) were transfected with hsa-mir-219-5p, and the expression levels of the SCN5A gene were evaluated in them by qRT-PCR. Analysis of the expression of SCN5A at 6 h post-transfection and normalized with two different internal controls (beta-actin and gapdh) showed a severe decrease in the expression of the sodium channel mediated by SCN5A (Figure 3).

Para constatar estos datos de forma independiente, se realizaron también ensayos inmunohistoquímicos contra el producto de expresión de SCN5A, en los cuales se observó que existía un cambio sustancial en la localización del canal de sodio codificado por SCN5A tras la transfección con hsa-mir-219-5p. En las células control, la localización del producto de expresión de SCN5A era principalmente citoplasmática y, de forma global, se encontraba localizado en la membrana plasmática, mientras que en las células transfectadas con hsa-mir-219-5p, el canal de sodio se encontraba retenido en el retículo endoplasmático y/o aparato de Golgi, y la localización citoplasmática y/o de membrana celular se encontraba seriamente disminuida (Figura 4). Por tanto, estos datos estaban en consonancia con los datos obtenidos mediante qRT-PCR.To verify this data in a way independent, immunohistochemical tests were also performed against the expression product of SCN5A, in which it was observed that there was a substantial change in the location of the channel of Sodium encoded by SCN5A after transfection with hsa-mir-219-5p. In control cells, the location of the expression product of SCN5A was mainly cytoplasmic and, overall, It was located in the plasma membrane, while in the cells transfected with hsa-mir-219-5p, the sodium channel was retained in the endoplasmic reticulum and / or Golgi apparatus, and the cytoplasmic location and / or of cell membrane was severely diminished (Figure 4). By Therefore, these data were in line with the data obtained by qRT-PCR.

Finalmente se evaluó si la transfección de hsa-mir-219-5p condicionaba la capacidad contráctil de los cardiomiocitos en cultivo. De este modo, se contaron las contracciones de los cardiomiocitos controles y de los cardiomiocitos transfectados con hsa-mir-219-5p, y se observó que el ritmo estaba disminuido en un 30% aproximadamente en estos últimos, y que el patrón de contracción era asincrónico (Tabla 1). Por tanto, estos datos revelaron que hsa-mir-219-5p puede regular la función del canal de sodio, lo cual es muy importante puesto que supone un mecanismo molecular de fácil manipulación y alta accesibilidad que permite corregir la falta o ganancia de función del canal de sodio cardíaco que subyace a síndromes arritmogénicos como Brugada o QT largo, respectivamente.Finally it was evaluated whether the transfection of hsa-mir-219-5p conditioned the contractile capacity of cardiomyocytes in culture. In this way, the contractions of the control cardiomyocytes and cardiomyocytes transfected with hsa-mir-219-5p, and it observed that the rhythm was decreased by approximately 30% in the latter, and that the contraction pattern was asynchronous (Table one). Therefore, these data revealed that hsa-mir-219-5p can regulate the function of the sodium channel, which is very important since it involves a molecular mechanism of easy manipulation and high accessibility that allows to correct the lack or gain of function of the cardiac sodium channel underlying syndromes arrhythmogenic like Brugada or long QT, respectively. 

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TABLA 1TABLE 1 Capacidad contráctil de las células miocárdicas atriales (HL-1) control y transfectadas con hsa-mir-219-5pContractile capacity of myocardial cells atrial (HL-1) control and transfected with hsa-mir-219-5p

1one 

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Ejemplo 2Example 2 Efecto de la expresión de los hsa-mir-219-5p modificados de SEQ ID NO: 3 y de SEQ ID NO: 5 en la expresión del gen SCN5A en células miocárdicas atrialesEffect of the expression of hsa-mir-219-5p modified from SEQ ID NO: 3 and from SEQ ID NO: 5 in the expression of SCN5A gene in atrial myocardial cells

Respecto a la generación de los microRNAs modificados, de SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 5, se modificó parcialmente la estructura primaria del precursor pre-miR-219a (figuras 5 y 6), para incrementar o disminuir, respectivamente, su capacidad de unión al RNA mensajero de SCN5A respecto al hsa-mir-219-5p, y de esta forma aumentar (en pacientes con síndrome de Brugada) o disminuir (en pacientes con síndrome de QT largo tipo 3) la función del canal de sodio cardíaco.Regarding the generation of microRNAs modified, of SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 5, was modified partially the primary structure of the precursor pre-miR-219a (figures 5 and 6), for increase or decrease, respectively, their ability to bind to Messenger RNA of SCN5A regarding hsa-mir-219-5p, and of this form increase (in patients with Brugada syndrome) or decrease (in patients with long QT syndrome type 3) the function of the cardiac sodium channel.

2.1. Polinucleótido para el tratamiento de síndrome de QT largo tipo 32.1. Polynucleotide for the treatment of QT syndrome long type 3

Se modificaron tres nucleótidos en el pre-miR-219a nativo de acuerdo con la secuencia de la región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A, como se muestra en la figura 5A, 5B y 5C, diseñándose así una hebra madura que tenía 12 sitios de unión complementarios al mRNA diana en lugar de los 9 nativos. Por tanto, el precursor de este microRNA, de SEQ ID NO: 4, así diseñado incrementó la eficacia en la reducción de la expresión del gen SCN5A (Figura 7).Three nucleotides were modified in the pre-miR-219a native according to the sequence of the 3'UTR region of the messenger of the SCN5A gene, as shown in Figure 5A, 5B and 5C, thus designing a mature strand which had 12 complementary binding sites to the target mRNA instead of the 9 natives. Therefore, the precursor of this microRNA, from SEQ ID NO: 4, thus designed, increased efficiency in reducing SCN5A gene expression (Figure 7).

2.2. Polinucleótido para el tratamiento de síndrome de Brugada2.2. Polynucleotide for the treatment of syndrome Brugada

Por otro lado, se modificaron tres nucleótidos comprendidos en la secuencia GAUUGUC del hsa-mir-219-5p contenido en el precursor pre-miR-219a de acuerdo con la secuencia de la región 3'UTR del mensajero del gen SCN5A, como se muestra en la figura 6A, 6B y 6C, diseñándose así una hebra madura que tenía únicamente 6 sitios de unión complementarios, y además dispersos, al mRNA diana en lugar de los 9 nativos. Por tanto, el precursor de este microRNA, de SEQ ID NO: 6, así diseñado incrementó la expresión del gen SCN5A respecto al microRNA-219a nativo (Figura 7).On the other hand, three nucleotides were modified included in the GAUUGUC sequence of hsa-mir-219-5p precursor content pre-miR-219a according to the sequence of the 3'UTR region of the messenger of the SCN5A gene, as shown in Figure 6A, 6B and 6C, thus designing a mature strand which had only 6 complementary binding sites, and also scattered, to the target mRNA instead of the 9 natives. Therefore the precursor of this microRNA, of SEQ ID NO: 6, thus designed increased SCN5A gene expression with respect to microRNA-219a native (Figure 7).

<110> Universidad de Jaén<110> University of Jaén 

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<120> "microRNA útil para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas"<120> "microRNA useful for treatment of arrhythmogenic canalopathies " 

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<130> ES1881.6<130> ES1881.6 

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<160> 7<160> 7 

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<170> PatentIn version 3.5<170> PatentIn version 3.5 

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<210> 1<210> 1 

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<211> 21<211> 21 

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<212> RNA<212> RNA 

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<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens 

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<400> 1<400> 1 

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22 

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<210> 2<210> 2 

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<211> 110<211> 110 

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<212> RNA<212> RNA 

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<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens 

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<400> 2<400> 2 

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33 

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<210> 3<210> 3 

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<211> 21<211> 21 

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<212> RNA<212> RNA 

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<213> Secuencia artificial<213> Artificial sequence 

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<220><220> 

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<223> Polinucleótido que comprende 3 sitios complementarios más que el hsa-mir-219-5p nativo (SEQ ID NO: 1) con el mRNA del gen SCN5A<223> Polynucleotide comprising 3 complementary sites more than the hsa-mir-219-5p native (SEQ ID NO: 1) with the mRNA of the SCN5A gene 

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<400> 3<400> 3 

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44 

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<210> 4<210> 4 

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<211> 110<211> 110 

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<212> RNA<212> RNA 

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<213> Secuencia artificial<213> Artificial sequence 

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<220><220> 

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<223> Precursor de la SEQ ID NO: 3<223> Precursor of SEQ ID NO: 3 

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<400> 4<400> 4 

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55 

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<210> 5<210> 5 

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<211> 21<211> 21 

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<212> RNA<212> RNA 

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<213> Secuencia artificial<213> Artificial sequence 

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<220><220> 

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<223> Polinucleótido que comprende 3 sitios complementarios menos que el hsa-mir-219-5p nativo (SEQ ID NO: 1) con el mRNA del gen SCN5A<223> Polynucleotide comprising 3 complementary sites less than the hsa-mir-219-5p native (SEQ ID NO: 1) with the mRNA of the SCN5A gene 

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<400> 5<400> 5 

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         \hskip1cm\ hskip1cm
66 

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         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<210> 6<210> 6 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<211> 110<211> 110 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<212> RNA<212> RNA 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<213> Secuencia artificial<213> Artificial sequence 

         \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip
      

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<220><220> 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<223> Precursor de la SEQ ID NO: 5<223> Precursor of SEQ ID NO: 5 

         \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip
      

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<400> 6<400> 6 

         \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip
      

         \hskip1cm\ hskip1cm
77 

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         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<210> 7<210> 7 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<211> 102817<211> 102817 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<212> DNA<212> DNA 

         \vskip0.400000\baselineskip\ vskip0.400000 \ baselineskip

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens 

         \newpage\ newpage
      

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<400> 7<400> 7 

         \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip

88

99

1010

11eleven

1212

1313

1414

15fifteen

1616

1717

1818

1919

20twenty

21twenty-one

2222

232. 3

2424

2525

2626

2727

2828

2929

3030

3131

3232

3333

343. 4

3535

3636

3737

3838

3939

4040

4141

4242

4343

4444

45Four. Five

4646

4747

4848

4949

50fifty

5151

5252

5353

5454

5555

5656

5757

Claims (23)

1. Uso de un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 85% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1 para la elaboración de un medicamento.1. Use of an isolated polynucleotide that comprises a nucleotide sequence with at least 85% of identity with respect to the full length of the sequence SEQ ID NO: 1 for the preparation of a medicine. 2. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 1 donde el polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 90% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1.2. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 1 wherein the polynucleotide comprises a sequence of nucleotides with at least 90% identity with respect to the full length of sequence SEQ ID NO: 1. 3. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 2 donde el polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 95% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1.3. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 2 wherein the polynucleotide comprises a sequence of nucleotides with at least 95% identity with respect to the full length of sequence SEQ ID NO: 1. 4. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 3 donde el polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 98% de identidad con respecto a la longitud completa de la secuencia SEQ ID NO: 1.4. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 3 wherein the polynucleotide comprises a sequence of nucleotides with at least 98% identity with respect to the full length of sequence SEQ ID NO: 1. 5. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 4 donde el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1.5. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 4 wherein the polynucleotide comprises the sequence of nucleotides SEQ ID NO: 1. 6. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 5 donde el polinucleótido es SEQ ID NO: 2.6. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 5 wherein the polynucleotide is SEQ ID NO: 2. 7. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 1 donde el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 3.7. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 1 wherein the polynucleotide comprises the sequence of nucleotides SEQ ID NO: 3. 8. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 7 donde el polinucleótido es SEQ ID NO: 4.8. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 7 wherein the polynucleotide is SEQ ID NO: 4. 9. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 1 donde el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 5.9. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 1 wherein the polynucleotide comprises the sequence of nucleotides SEQ ID NO: 5. 10. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 9 donde el polinucleótido es SEQ ID NO: 6.10. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 9 wherein the polynucleotide is SEQ ID NO: 6. 11. Uso de un polinucleótido aislado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas.11. Use of an isolated polynucleotide as defined in any one of claims 1 to 10 for the development of a medicine for the treatment of canalopathies arrhythmogenic 12. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 11 donde las canalopatías arritmogénicas se deben a alteraciones en los canales de sodio.12. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 11 where arrhythmogenic canalopathies are due to alterations in sodium channels. 13. Uso de un polinucleótido aislado según la reivindicación 12 donde la canalopatía arritmogénica es el síndrome de QT largo tipo 3.13. Use of an isolated polynucleotide according to the claim 12 where arrhythmogenic canalopathy is the syndrome of long QT type 3. 14. Uso de un polinucleótido aislado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 9 ó 10 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de síndrome de Brugada.14. Use of an isolated polynucleotide as defined in any of claims 9 or 10 for the development of a medication for the treatment of syndrome Brugada 15. Composición farmacéutica que comprende un polinucleótido aislado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.15. Pharmaceutical composition comprising a isolated polynucleotide as defined in any of the claims 1 to 8. 16. Composición farmacéutica según la reivindicación 15 que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.16. Pharmaceutical composition according to claim 15 further comprising a pharmaceutically carrier acceptable. 17. Composición farmacéutica que comprende un polinucleótido aislado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 9 ó 10.17. Pharmaceutical composition comprising a isolated polynucleotide as defined in any of the claims 9 or 10. 18. Composición farmacéutica según la reivindicación 17 que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.18. Pharmaceutical composition according to claim 17 further comprising a pharmaceutically carrier acceptable. 19. Uso de la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18 para la elaboración de un medicamento.19. Use of the pharmaceutical composition according to any of claims 15 to 18 for the preparation of a medicine. 20. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 19 donde el medicamento es para el tratamiento de canalopatías arritmogénicas.20. Use of the pharmaceutical composition according to claim 19 wherein the medicament is for the treatment of arrhythmogenic canalopathies. 21. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 20 donde las canalopatías arritmogénicas se deben a alteraciones en los canales de sodio.21. Use of the pharmaceutical composition according to claim 20 where arrhythmogenic canalopathies are due to alterations in sodium channels. 22. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 21 donde la canalopatía arritmogénica es el síndrome de QT largo tipo 3.22. Use of the pharmaceutical composition according to claim 21 where arrhythmogenic canalopathy is the syndrome of long QT type 3. 23. Uso de la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 17 ó 18 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de síndrome de Brugada.23. Use of the pharmaceutical composition according to any of claims 17 or 18 for the preparation of a medication for the treatment of Brugada syndrome.
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