ES2372506A1 - Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes. - Google Patents
Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes. Download PDFInfo
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Abstract
Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes.Método in vitro para el análisis de la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el cuerpo. El método comprende determinar si en una muestra biológica de un individuo está presente el antígeno HLA-DRB1*3 del complejo mayor de histocompatibilidad. También se describe el uso de un kit para llevar a cabo la determinación y el empleo del antígeno como marcador genético.
Description
Método de detección de la susceptibilidad a
desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con
bioimplantes.
La presente invención está relacionada con la
medicina, más concretamente está relacionada con los efectos
adversos derivados de los bioimplantes que son aplicados o
insertados en el organismo principalmente por razones estéticas
(cosméticas o terapéuticas). La invención va dirigida a la
preservación de la salud y proporciona herramientas para analizar el
riesgo de efectos secundarios severos derivados de la aplicación de
dichos bioimplantes.
Existe cada vez un mayor número de personas que
buscan soluciones médicas para la piel con apariencia envejecida o
bien con finalidades puramente estéticas y cosméticas. Otras
personas, debido a situaciones patológicas, optan también por el
empleo de bioimplantes. Un bioimplante se define como un material
implantado quirúrgicamente en el cuerpo de una persona para
reemplazar un tejido dañado. El término bioimplante define una clase
de implante que está generalmente asociado a un implante no
metálico. Las áreas comunes de aplicación de dichos bioimplantes
incluyen la cirugía ortopédica reconstructiva (en particular la
maxilofacial), las prótesis para aumento de mamas, las prótesis
cardíacas (válvulas cardíacas artificiales como la válvula de
corazón Chitra), cutáneas y de la córnea. Una clase de bioimplantes
ampliamente utilizados hoy en día son los implantes poliméricos o
cerámicos, siendo un ejemplo de los mismos los implantes de relleno
o microprótesis dérmicos y sub-dérmicos.
Actualmente, los médicos especialistas pueden
utilizar diferentes tipos de implantes de relleno dérmicos y
sub-dérmicos, incluyendo los materiales no
permanentes, permanentes, reversibles o no reversibles. Los
implantes de relleno dérmicos y sub-dérmicos son
materiales que se inyectan para corregir las arrugas, líneas de
expresión, lipodistrofia y otros rasgos que un individuo puede
desear o necesitar corregir, principalmente a nivel facial. Estos
compuestos se emplean para rellenar las cavidades o estrías en el
tejido dérmico ocasionadas por múltiples diferentes causas. Se han
propuesto diversas clasificaciones de implantes de relleno según su
origen y longevidad (duración). En la actualidad, la mayoría de
implantes de relleno utilizados en todo el mundo son acrilamidas
(compuestos de poliacrilamida y polialquilimida), compuestos del
ácido hialurónico, ácido poliláctico, compuestos de
polimetilmetacrilato, hidroxiapatita cálcica y aceite de silicona.
Aunque los fabricantes y las diferentes publicaciones sostienen que
los implantes de relleno no son tóxicos y no son inmunogénicos, y
que las complicaciones derivadas de su uso no son muy comunes, en
realidad se han detectado efectos secundarios indeseados con todos
los compuestos utilizados. Algunos de estos efectos secundarios son
efectos de aparición tardía, los cuales en muchos casos son
difíciles de correlacionar con el empleo de dichos implantes de
relleno o bioimplantes. Los efectos secundarios adversos asociados a
la inyección de implantes de relleno dérmicos o
sub-dérmicos pueden ser efectos secundarios severos,
que derivan hacia manifestaciones locales granulomatosas crónicas y,
aunque raramente, a enfermedades autoinmunes. Así, se observa que en
la clasificación habitual de los implantes de relleno utilizados,
existe todavía la necesidad de definir otros dos conceptos: la
seguridad a largo plazo y la reversibilidad de los efectos
secundarios derivados de los
mismos.
mismos.
Cuando un material de relleno dérmico es
inyectado, tienen lugar las reacciones normales de tipo cuerpo
extraño (los llamados "granulomas estables").
Desafortunadamente, en algunas personas dichos granulomas estables
se convierten en granulomas nocivos inflamatorios y persistentes, en
trastornos granulomatosos o, si bien en raras ocasiones, en
enfermedades autoinmunes. Algunas veces los efectos secundarios
indeseables derivados del material de relleno aparecen durante un
traumatismo menor o después de una infección. Existe la hipótesis
que los antecedentes genéticos (propios y específicos de cada
individuo) deben jugar un papel importante en el desarrollo de estas
reacciones adversas, pero aún se desconoce su origen exacto y no se
pueden efectuar predicciones. Este hecho representa un verdadero
problema si se considera el número creciente de personas que optan
por el empleo de estas clases de
bioimplantes.
bioimplantes.
Entre los pacientes que presentan efectos
adversos inmediatos o tardíos relacionados con los implantes de
relleno dérmicos, la mayoría de ellos presentan efectos secundarios
locales o generales, principalmente relacionados con enfermedades
del tejido conectivo. Cabe destacar que varios de los pacientes
presentan trastornos inmunomediados sistémicos inflamatorios, tales
como esclerodermia o síndrome esclerodermiformes, polimiositis,
síndrome de Sjögren, sarcoidosis cutánea, trastornos granulomatosos,
pneumonitis y enfermedad por adyuvante humana.
Una manera de detectar previamente si un
individuo es susceptible a presentar efectos adversos inmediatos o
tardíos (aparición tardía) relacionados con los implantes de relleno
dérmicos y sub-dérmicos, consiste en inyectar 0.1 ml
del implante de relleno intradérmicamente en la dermis del antebrazo
y visualizar si existe reacción. Sin embargo, el tiempo que
transcurre hasta la aparición de algunas reacciones es normalmente
de 5-8 semanas. Además, en la biopsia (prueba) la
dermis se lesiona. Por otra parte, las autoridades sanitarias
discrepan de este procedimiento. Así, existe la necesidad de
encontrar otras formas para detectar si un paciente reaccionará
adversamente al implante de relleno colocado o inyectado.
El sistema de antígenos leucocitarios humanos
(HLA) es el nombre del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC)
en humanos. Es un superlocus que contiene un gran número de genes
relacionados con la función del sistema inmunológico en humanos.
Todos estos genes están agrupados en un segmento de 4 Mb en el brazo
corto del cromosoma 6 en humanos. La región HLA comprende seis loci
principales que codifican proteínas estructuralmente homologas, las
cuales son clasificadas en la Clase I HLA (HLA-A, B,
Cw) y Clase II (HLA-DR, DQ, DP), que presentan
antígenos a dos sub-conjuntos diferentes de
células.
Las moléculas de Clase I consisten en dos
cadenas de polipéptidos, \alpha- y
\beta2-microglobulina. Las dos cadenas están
unidas no covalentemente por medio de la interacción de la
\beta2-microglobulina y el dominio \alpha3.
Solamente la cadena \alpha es polimórfica y codificada por el gen
HLA, mientras que la subunidad de la
\beta2-microglobulina no es polimórfica y es
codificada por el gen de la \beta2-microglobulina.
El dominio \alpha3 se encuentra en el anclaje de la membrana
plasmática e interacciona con el co-receptor
transmembrana glucoproteínico CD8 de las células T. Los dominios
\alpha1 y \alpha2 se pliegan para formar un surco para que los
péptidos se unan. Las moléculas de Clase I del MHC se unen a
péptidos que tienen una longitud de 8-10
aminoácidos.
En el caso del locus HLA-B, los
polimorfismos se encuentran principalmente localizados en los exones
2 y 3. Hasta la fecha, se conocen cientos de variantes alélicas de
este locus, lo que significa que este locus es el más polimórfico de
los loci HLA. Las variaciones alélicas del locus
HLA-B son las más importantes en la selección de un
posible transplante dentro de las moléculas de Clase I. A cada una
de las variantes alélicas se le da un número particular (tal como
HLA-B8). Los alelos que están íntimamente
relacionados se agrupan juntos; por ejemplo, existen por lo menos 54
alelos muy semejantes y que son subtipos de HLA-B8.
Estos subtipos están designados como HLA-B*080101 a
HLA-B*0854. El gen HLA-B comprende
múltiples variaciones normales muy diferentes, lo que permite que el
sistema inmmunológico de cada persona reaccione a una amplia gama de
invasores extraños.
Las moléculas de Clase II son glucoproteínas
heterodiméricas que se componen de una cadena alfa no polimórfica y
una cadena beta polimórfica. Las moléculas de la Clase II HLA (o
MHC) se expresan en la superficie celular de los macrófagos, células
B, células T activadas, y otros tipos de células involucradas en la
presentación de antígenos a células T que expresan la glucoproteína
CD4 en la superficie de la célula. Los genes DP, DQ y DR están
localizados en regiones separadas del MHC. En la región DR, un único
locus DRA codifica la cadena DRalfa no polimórfica, pero nueve loci
DRB diferentes, denominados DRB1 a DRB9, codifican la cadena
polimórfica. Por otra parte, el número de alelos DRB identificados
va aumentando continuamente.
En el caso del locus HLA-DRB1,
diferentes alelos de este locus se denominan DRB1*01, DRB1*02,
DRB1*03 etc., y estos alelos en conjunto forman lo que se llama un
"grupo alélico" en esta descripción. Por otra parte, varias
secuencias genéticas se agrupan bajo un alelo DRB1 específico. Así,
el alelo DRB1*03 puede tener diferentes secuencias que se denominan
DRB1*0301, DRB1*0302, DRB1*031101, DRB1*031102, etc.
Los genes que codifican el sistema de antígenos
de leucocitos humanos (HLA) se encuentran entre los genes más
variables en humanos, y cada variante codifica moléculas que se unen
a un conjunto diferente de péptidos.
Dichos genes son los mismos en todas las células
de un individuo particular, pero difieren de una persona a otra.
Aunque la variabilidad alélica de HLA se ha
investigado en profundidad y se han descubierto algunos marcadores
genéticos que permiten la realización de pruebas para evitar el
rechazo de transplante de órganos, solo existen datos menores no
representativos que correlacionan la predisposición genética de un
individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con los
materiales implantados en el cuerpo humano.
Varios estudios han tratado de vincular muchas
enfermedades autoinmunes o granulomatosas sistémicas con diferentes
haplotipos de HLA (MHC), especialmente con los antígenos de Clase I
y Clase II. Así, en el documento Di Lorenzo et al.,
"Morphea after Silicone Gel Breast Implantaron for Cosmetic
Reasons in an HLA-BS, DR3-Positive
Woman", Int. Arch Allerqy Immunol 1997. vol. 112,
pp. 93-95, los autores describen un único paciente
HLA-B8, DR3-positivo con morfea
localizada después de implantación de mamas de gel de silicona. Los
autores sugieren que existe un antecedente genético y que el
haplotipo mencionado está implicado en la respuesta autoinmune, la
cual podría estar propiciada por el bioimplante de silicona. Por
otra parte, los autores consideran que los datos no apoyan una clara
relación entre el haplotipo y los efectos observados, y que son
necesarios más estudios. De hecho, este caso es uno de los pocos
casos en los cuales el implante de silicona podría ser el causante
de una reacción autoinmune, y no se puede atribuir significancia
estadística al mismo.
La silicona utilizada como implante de relleno
es un gel que consiste en siloxanos polimerizados. Aunque se emplea
extensamente desde 1960, los efectos secundarios que se derivan de
su uso como implante de relleno son más bajos en tipo y número de
casos que los observados cuando se utilizan otros implantes de
relleno como bioimplantes, tales como los asociados con el empleo de
bioimplantes orgánicos, es decir, implantes de colágeno, ácido
L-poliláctico, poliacrilamida, polialquilimida,
ácido hialurónico, politetrafluoroetileno, metacrilato, así como el
implante inorgánico hecho de microesferas de hidroxiapatita cálcica.
Todos estos materiales tienen diferentes características
estructurales, por lo que es deseable encontrar un patrón de
referencia común que permita correlacionar la predisposición
genética al rechazo de un implante o a desarrollar efectos
secundarios adversos para todos los bioimplantes.
Los inventores, sospechando que posiblemente, en
un huésped predispuesto, las probabilidades en desarrollar
diferentes trastornos de hipersensibilidad o inmunomediados de tipo
IV pueden estar relacionados con una exposición antigénica diversa y
repetitiva, estudiaron ampliamente los genotipos de pacientes que
presentaban efectos secundarios adversos severos (efectos adversos)
después de la implantación de un material, esto es, de un
bioimplante, tal como un implante de relleno dérmico o
sub-dérmico.
La invención proporciona, en un primer aspecto,
un método in vitro para el análisis de la predisposición
genética de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados
con materiales no metálicos implantados en el cuerpo, que comprende
determinar en una muestra biológica de dicho individuo si el
antígeno HLA-DRB1*3 del complejo mayor de
histocompatibilidad está presente. La presencia de dicho antígeno es
un indicativo de predisposición genética a desarrollar dichos
efectos adversos relacionados con los biomateriales.
El método de la invención representa una
solución para los problemas pendientes del estado de la técnica ya
que permite al individuo y al médico considerar todos los factores
antes de la aplicación en el cuerpo de materiales no metálicos,
concretamente bioimplantes, tales como los implantes de relleno
dérmicos o sub-dérmicos. Así, el método de la
invención es un ensayo útil para detectar previamente, de manera
inocua, la probabilidad de un individuo a desarrollar efectos
secundarios adversos cuando se aplica un bioimplante a dicho
individuo.
Un segundo aspecto de la invención es el empleo
de un kit que comprende anticuerpos para determinar la presencia del
antígeno HLA-DRB1*3 del complejo mayor de
histocompatibilidad, para el análisis de la predisposición genética
de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con
materiales no metálicos implantados en el
cuerpo.
cuerpo.
Otro aspecto de la invención es el empleo de un
kit que comprende sondas de oligonucleótidos con secuencia
específica (SSOP) para la genotipificación del alelo
HLA-DRB1*3, o cualquier alteración en desequilibrio
de enlace con el gen que codifica dicho antígeno, para el análisis
de la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos
adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el
cuerpo.
Además, es también un aspecto de la invención el
uso del antígeno HLA-DRB1*3, como marcador para el
análisis de la predisposición genética de un individuo a desarrollar
efectos adversos relacionados con materiales no metálicos
implantados en el cuerpo.
Se facilitan las siguientes definiciones a
efectos de comprensión:
Los términos "efecto adverso" y "efecto
secundario adverso" se utilizan como sinónimos en esta
descripción y se refieren a cualquier efecto nocivo y/o indeseable
que resulta de una medicación u otro tipo de intervención, tal como
la cirugía. Se puede denominar "efecto secundario" a un efecto
adverso cuando se considera que es secundario a un efecto principal
o terapéutico.
Los términos "genotipificación" y
"tipificación" se utilizan como sinónimos en esta descripción y
se refieren a cualquier ensayo que revele los alelos específicos
heredados por un individuo, lo cual es particularmente útil para
situaciones en las que más de una combinación genotípica puede estar
asociada a una misma sintomatología clínica.
En la presente descripción, el término
"locus" significa la posición ocupada por cada gen HLA (p.ej.,
locus B de HLA). "Loci" (plural de locus) para los antígenos DR
incluye DRA y DRB1-9.
El término "alelo" se refiere a una de las
dos o más formas alternativas de un gen, que difiere en la secuencia
genética y que da por resultado diferencias observables en el
carácter hereditario (fenotipo), y que se encuentran en el mismo
lugar en un cromosoma.
"Enlace" describe la tendencia de los
genes, alelos, loci o marcadores genéticos a ser heredados
conjuntamente por estar localizados en el mismo cromosoma. Se pueden
determinar por recombinación porcentual entre los dos genes, alelos,
loci o marcadores genéticos que están físicamente enlazados en el
mismo cromosoma.
En el sentido de esta descripción,
"alteración" del gen significa cualquier modificación
estructural en la secuencia del nucleótido considerado como de tipo
salvaje. Ejemplos de alteraciones pueden incluir polimorfismo de un
único nucleótido, una supresión, inserción, substitución o
duplicación de uno o más nucleótidos, y una modificación química
sobre un nucleótido (p.ej., metilación).
"Desequilibrio de enlace (DE)" o
"asociación alélica" significa la asociación preferente de un
alelo o marcador genético particular con un alelo o marcador
genético específico en una localización cromosómica cercana más
frecuentemente que la esperada al azar para cualquier frecuencia de
alelo particular en la población. Por ejemplo, si el locus X tiene
los alelos a y b, los cuales ocurren igualmente frecuentemente, y el
locus unido Y tiene los alelos c y d, los cuales ocurren igualmente
frecuentemente, se esperaría que el haplotipo ac ocurriera con una
frecuencia de 0.25 en una población de individuos. Si ac ocurre más
frecuentemente, entonces se considera que los alelos a y c están en
desequilibrio de enlace. El desequilibrio de enlace puede resultar
de la selección natural de una cierta combinación de alelos o porque
un alelo se ha introducido en una población demasiado recientemente
para haber alcanzado equilibrio (asociación aleatoria) entre alelos
enlazados.
Un "haplotipo" es una combinación de alelos
en múltiples loci que se transmiten conjuntamente en el mismo
cromosoma. El haplotipo puede referirse a tan solo un locus o a un
cromosoma entero, dependiendo del número de recombinaciones que han
ocurrido entre un conjunto dado de loci.
El término "análisis de la predisposición
genética" incluye la determinación de la probabilidad de un
individuo a desarrollar un fenotipo específico debido a su carga
genética inherente. En el caso de la invención, el término define la
determinación de la probabilidad de desarrollar efectos secundarios
adversos relacionados con bioimplantes debido a la dotación genética
de cada individuo.
Un "marcador genético" o "marcador" es
un gen o secuencia de ADN con una localización conocida en un
cromosoma que puede ser utilizado para identificar células,
individuos o especies. Se puede describir como una variación
observable, que puede surgir debido a una mutación o alteración de
los loci genómicos. Un marcador genético puede ser una secuencia
corta de ADN, tal como una secuencia que conlleva un simple cambio
de pares de bases (polimorfismo de nucleótido simple, SNP), o una
secuencia larga, como minisatélites, translocaciones, o repeticiones
de pares de bases.
Los términos "bioimplante" y "material no
metálico implantado en el cuerpo" se utilizan como sinónimos en
esta descripción. Se puede clasificar un implante como implante
metálico (p.ej., fémur de titanio), implante cerámico (p.ej.,
hidroxiapatita), implante polimérico (p.ej., polialquilimida) o
implante biológico (p.ej., toxina botulínica). Cuando en esta
descripción se mencionan implantes no metálicos, se pretende que
abarquen los implantes cerámicos, los implantes de material
polimérico o los implantes biológicos. Los implantes cerámicos se
consideran material no metálico inorgánico. Cuando se utiliza
"material polimérico", éste incluye todos los materiales
poliméricos naturales o biológicos, tal como el colágeno, así como
los materiales poliméricos sintéticos, tales como los implantes de
polialquilimida. Los implantes pueden aplicarse en una zona amplia
para sustituir o actuar en gran parte de un tejido, tal como el
implante mamario de silicona. Otros implantes se aplican a una zona
reducida. Cuando se aplican a zonas reducidas, la mayoría de dichos
implantes son también referidos como implantes de relleno, conocidos
asimismo como implantes de relleno dérmicos o
sub-dérmicos. Ejemplos de implantes de relleno son
el colágeno, ácido L-poliláctico, poliacrilamida,
polialquilimida, ácido hialurónico, politetrafluoroetileno y
metacrilato. Otro implante de relleno ampliamente empleado es la
hidroxiapatita cálcica.
Las áreas más comunes de aplicación de los
implantes no metálicos (bioimplantes) incluyen las prótesis
ortopédicas (especialmente maxilofaciales) reconstructivas, prótesis
para aumento de mamas, prótesis cardíacas (válvulas cardíacas
artificiales como la válvula de corazón Chitra), cutáneas y de la
córnea.
Tal como se ha indicado anteriormente, el método
de la invención comprende determinar si una muestra biológica de un
individuo contiene el antígeno HLA-DRB1*3 del
complejo mayor de histocompatibilidad, donde la presencia de al
menos uno de los antígenos es indicativo de predisposición genética
a desarrollar efectos adversos.
La determinación de la presencia del antígeno se
puede llevar a cabo mediante varias técnicas. Así, una manera de
determinar si el antígeno está presente en una muestra es mediante
inmunoensayo con anticuerpos específicos frente a los epítopos del
antígeno (proteínas) HLA-DRB1*3. Otras tecnologías,
las cuales se describen ampliamente más abajo, se basan en la
detección de la codificación de ADN o ARN para dicho antígeno, o
sea, en detectar la presencia de los alelos que codifican
HLA-DRB1*3, si es que hay alguno de ellos en una
muestra de un individuo. La presencia de los alelos de interés se
puede llevar a cabo usando ADN genómico o codificador, el cual se
amplifica y luego se detecta por medio de sondas específicas. En
términos generales, las técnicas incluyen aislar el contenido
genómico o transcrito, principalmente del ADN de las células de una
muestra, la amplificación posterior del locus o loci de interés, el
cual o los cuales es/son detectados además por medio de sondas
específicas. El locus o loci son finalmente identificados y
correlacionados con un patrón de referencia. Dependiendo de la
asociación de los cebadores y las sondas, las metodologías del ADN
se clasifican como metodologías de baja resolución o metodologías de
alta resolución. Las metodologías de alta resolución dan información
con respecto al alelo específico de un grupo de alelos. Es decir,
informan sobre la secuencia específica o subtipo de alelo, tal como
HLA-DRB1*0322, HLA-DRB1*0323,
HLA-B*0838, HLA-B*0839. Las
metodologías de baja resolución permiten determinar si en una
muestra está o están presentes un alelo de HLA-B*08
y/o el antígeno HLA-DRB1*03.
Así, en una realización preferida, el método
comprende determinar la presencia del antígeno
HLA-DRB1*3 por genotipificación del alelo de
HLA-DRB1*3 contenido en la muestra de un individuo;
o cualquier alteración en desequilibrio de enlace con los genes que
codifican dichos antígenos. La genotipificación del alelo significa
determinar la secuencia de ADN específica para el mismo. La
detección de un alelo que codifique por el antígeno
HLA-DRB1*3 del complejo mayor de
histocompatibilidad, es indicativo de predisposición genética a
desarrollar efectos adversos relacionados con materiales no
metálicos implantados en el cuerpo.
En una realización preferida, el método
comprende la genotificación para determinar si una muestra biológica
de dicho individuo contiene simultáneamente al menos un alelo del
antígeno HLA-B8 y al menos un alelo del antígeno
HLA-DRB1*3 del complejo mayor de
histocompatibilidad, y que define un haplotipo que está siendo
indicativo de predisposición genética a desarrollar efectos adversos
relacionados con los materiales no metálicos implantados en el
cuerpo.
\newpage
El individuo es preferiblemente un mamífero y
más preferiblemente un humano. No obstante, el sistema HLA o, en
términos generales, el Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC)
en humanos tiene su conjunto equivalente de genes en la mayoría de
vertebrados. Por lo tanto, aquellas secuencias genéticas entre
especies diferentes que comparten un alto porcentaje de homología,
es probable que lleven a los mismos efectos observados.
En otra realización preferida, el método
comprende determinar la presencia del alelo del antígeno
HLA-DRB1*3 seleccionado del grupo que consiste en:
HLA-DRB1*03010101 (HLA00671),
HLA-DRB1*03010102 (HLA03483),
HLA-DRB1*030102 (HLA00672),
HLA-DRB1*030103 (HLA00672),
HLA-DRB1*030104 (HLA02830), HLA-
DRB1*030105 (HLA02955), HLA-DRB1*030106 (HLA03061), HLA-DRB1*030107 (HLA03855), HLA-
DRB1*030108 (HLA04577), HLA-DRB1*030109(HLA04691), HLA-DRB1*030201 (HLA00673), HLA-
DRB1*030202 (HLA00674), HLA-DRB1*0303 (HLA00675), HLA-DRB1*0304 (HLA00676), HLA-DRB1*030501 (HLA00677), HLA-DRB1*030502 (HLA01428), HLA-DRB1*030503 (HLA03765), HLA-DRB1*0306
(HLA00678), HLA-DRB1*0307 (HLA00679), HLA-DRB1*0308 (HLA00680), HLA-DRB1*0309 (HLA00681),
HLA-DRB1*0310 (HLA00682), HLA-DRB1*031101 (HLA00683), HLA-DRB1*031102 (HLA04406), HLA-
DRB1*0312 (HLA00684), HLA-DRB1*031301 (HLA01007), HLA-DRB1*031302 (HLA03684), HLA-DRB1*0314 (HLA01008), HLA-DRB1*0315 (HLA01087), HLA-DRB1*0316 (HLA01152), HLA-DRB1*0317 (HLA01153),
HLA-DRB1*0318 (HLA01349), HLA-DRB1*0319 (HLA01432), HLA-DRB1*0320 (HLA01455), HLA-
DRB1*0321 (HLA01501), HLA-DRB1*0322 8 HLA01557), HLA-DRB1*0323 (HLA01614), HLA-DRB1*0324 (HLA01687), HLA-DRB1*0325 (HLA01692), HLA-DRB1*0326 (HLA01868), HLA-DRB1*0327 (HLA01930),
HLA-DRB1*0328 (HLA01933), HLA-DRB1*0329 (HLA02420), HLA-DRB1*0330 (HLA02603), HLA-
DRB1*0331 (HLA02606), HLA-DRB1*0332 (HLA02827), HLA-DRB1*0333 (HLA02870), HLA-DRB1*0334
(HLA02886), HLA-DRB1*0335 (HLA02902), HLA-DRB1*0336 (HLA02996), HLA-DRB1*0337 (HLA03059),
HLA-DRB1*0338 (HLA03067), HLA-DRB1*0339 (HLA03075), HLA-DRB1*0340 (HLA03370), HLA-
DRB1*0341 (HLA03641), HLA-DRB1*0342 (HLA03749), HLA-DRB1*0343 (HLA03836), HLA-DRB1*0344
(HLA03842), HLA-DRB1*0345 (HLA03843), HLA-DRB1*0346 (HLA03844), HLA-DRB1*0347 (HLA03859),
HLA-DRB1*0348 (HLA03869), HLA-DRB1*0349 (HLA04355), HLA-DRB1*0350 (HLA04386), HLA-
DRB1*0351 (HLA04411), y HLA-DRB1*0352 (HLA04634).
DRB1*030105 (HLA02955), HLA-DRB1*030106 (HLA03061), HLA-DRB1*030107 (HLA03855), HLA-
DRB1*030108 (HLA04577), HLA-DRB1*030109(HLA04691), HLA-DRB1*030201 (HLA00673), HLA-
DRB1*030202 (HLA00674), HLA-DRB1*0303 (HLA00675), HLA-DRB1*0304 (HLA00676), HLA-DRB1*030501 (HLA00677), HLA-DRB1*030502 (HLA01428), HLA-DRB1*030503 (HLA03765), HLA-DRB1*0306
(HLA00678), HLA-DRB1*0307 (HLA00679), HLA-DRB1*0308 (HLA00680), HLA-DRB1*0309 (HLA00681),
HLA-DRB1*0310 (HLA00682), HLA-DRB1*031101 (HLA00683), HLA-DRB1*031102 (HLA04406), HLA-
DRB1*0312 (HLA00684), HLA-DRB1*031301 (HLA01007), HLA-DRB1*031302 (HLA03684), HLA-DRB1*0314 (HLA01008), HLA-DRB1*0315 (HLA01087), HLA-DRB1*0316 (HLA01152), HLA-DRB1*0317 (HLA01153),
HLA-DRB1*0318 (HLA01349), HLA-DRB1*0319 (HLA01432), HLA-DRB1*0320 (HLA01455), HLA-
DRB1*0321 (HLA01501), HLA-DRB1*0322 8 HLA01557), HLA-DRB1*0323 (HLA01614), HLA-DRB1*0324 (HLA01687), HLA-DRB1*0325 (HLA01692), HLA-DRB1*0326 (HLA01868), HLA-DRB1*0327 (HLA01930),
HLA-DRB1*0328 (HLA01933), HLA-DRB1*0329 (HLA02420), HLA-DRB1*0330 (HLA02603), HLA-
DRB1*0331 (HLA02606), HLA-DRB1*0332 (HLA02827), HLA-DRB1*0333 (HLA02870), HLA-DRB1*0334
(HLA02886), HLA-DRB1*0335 (HLA02902), HLA-DRB1*0336 (HLA02996), HLA-DRB1*0337 (HLA03059),
HLA-DRB1*0338 (HLA03067), HLA-DRB1*0339 (HLA03075), HLA-DRB1*0340 (HLA03370), HLA-
DRB1*0341 (HLA03641), HLA-DRB1*0342 (HLA03749), HLA-DRB1*0343 (HLA03836), HLA-DRB1*0344
(HLA03842), HLA-DRB1*0345 (HLA03843), HLA-DRB1*0346 (HLA03844), HLA-DRB1*0347 (HLA03859),
HLA-DRB1*0348 (HLA03869), HLA-DRB1*0349 (HLA04355), HLA-DRB1*0350 (HLA04386), HLA-
DRB1*0351 (HLA04411), y HLA-DRB1*0352 (HLA04634).
En una realización también preferida, el método
comprende determinar la presencia del alelo del antígeno
HLA-B8 seleccionado del grupo que consiste en:
HLA-B*080101 (HLA00146),
HLA-B*080102 (HLA02219),
HLA-B*080103 (HLA02400),
HLA-B*080104 (HLA02853),
HLA-B*080105 (HLA03034),
HLA-B*080106
(HLA03449), HLA-B*080107 (HLA03939), HLA-B*080108 (HLA04210), HLA-B*080109 (HLA04221), HLA-B*080110 (HLA04504), HLA-B*0802 (HLA00147), HLA-B*0803 (HLA00148), HLA-B*0804 (HLA00149), HLA-B*0805 (HLA00150), HLA-B*0806 (HLA00151), HLA-B*0807 (HLA00974), HLA-B*0808N (HLA00975), HLA-B*0809 (HLA00976), HLA-B*0810 (HLA01082), HLA-B*0811 (HLA01193), HLA-B*081201 (HLA01230), HLA-B*081202 (HLA03935), HLA-B*081203 (HLA04186), HLA-B*0813 (HLA01352), HLA-B*0814 (HLA01418),
HLA-B*0815 (HLA01535), HLA-B*0816 (HLA01641), HLA-B*0817 (HLA01654), HLA-B*0818 (HLA01701), HLA-B*0819N (HLA01717), HLA-B*0820 (HLA01752), HLA-B*0821 (HLA01772), HLA-B*0822 (HLA01917), HLA-B*0823 (HLA02132), HLA-B*0824 (HLA02142), HLA-B*0825 (HLA02252), HLA-B*0826 (HLA02308), HLA-B*0827 (HLA02406), HLA-B*0828 (HLA02490), HLA-B*0829 (HLA02496), HLA-B*0830N (HLA02591), HLA-B*0831 (HLA02762), HLA-B*0832 (HLA02771), HLA-B*0833 (HLA 02849), HLA-B*0834 (HLA03091), HLA-B*0835 (HLA03164), HLA-B*0836 (HLA03265), HLA-B*0837 (HLA03450), HLA-B*0838 (HLA03481), HLA-B*0839 (HLA03663), HLA-B*0840 (HLA03648), HLA-B*0841 (HLA03902), HLA-B*0842 (HLA03941), HLA-B*0843 (HLA04081), HLA-B*0844 (HLA04188), HLA-B*0845 (HLA04230), HLA-B*0846 (HLA04234), HLA-B*0847 (HLA04240), HLA-B*0848 (HLA04438), HLA-B*0849 (HLA04442), HLA-B*0850 (HLA04499), HLA-B*0851 (HLA04507), HLA-B*0852 (HLA04515), HLA-B*0853 (HLA04516), HLA-B*0854 (HLA04520), HLA-B*0855 (HLA04708), HLA-B*0856 (HLA04720), HLA- B*0857 (HLA04722), HLA- B*0858 (HLA04753), HLA- B*0859 (HLA04788), HLA- B*0860 (HLA04816), HLA-B*0861 (HLA04860).
(HLA03449), HLA-B*080107 (HLA03939), HLA-B*080108 (HLA04210), HLA-B*080109 (HLA04221), HLA-B*080110 (HLA04504), HLA-B*0802 (HLA00147), HLA-B*0803 (HLA00148), HLA-B*0804 (HLA00149), HLA-B*0805 (HLA00150), HLA-B*0806 (HLA00151), HLA-B*0807 (HLA00974), HLA-B*0808N (HLA00975), HLA-B*0809 (HLA00976), HLA-B*0810 (HLA01082), HLA-B*0811 (HLA01193), HLA-B*081201 (HLA01230), HLA-B*081202 (HLA03935), HLA-B*081203 (HLA04186), HLA-B*0813 (HLA01352), HLA-B*0814 (HLA01418),
HLA-B*0815 (HLA01535), HLA-B*0816 (HLA01641), HLA-B*0817 (HLA01654), HLA-B*0818 (HLA01701), HLA-B*0819N (HLA01717), HLA-B*0820 (HLA01752), HLA-B*0821 (HLA01772), HLA-B*0822 (HLA01917), HLA-B*0823 (HLA02132), HLA-B*0824 (HLA02142), HLA-B*0825 (HLA02252), HLA-B*0826 (HLA02308), HLA-B*0827 (HLA02406), HLA-B*0828 (HLA02490), HLA-B*0829 (HLA02496), HLA-B*0830N (HLA02591), HLA-B*0831 (HLA02762), HLA-B*0832 (HLA02771), HLA-B*0833 (HLA 02849), HLA-B*0834 (HLA03091), HLA-B*0835 (HLA03164), HLA-B*0836 (HLA03265), HLA-B*0837 (HLA03450), HLA-B*0838 (HLA03481), HLA-B*0839 (HLA03663), HLA-B*0840 (HLA03648), HLA-B*0841 (HLA03902), HLA-B*0842 (HLA03941), HLA-B*0843 (HLA04081), HLA-B*0844 (HLA04188), HLA-B*0845 (HLA04230), HLA-B*0846 (HLA04234), HLA-B*0847 (HLA04240), HLA-B*0848 (HLA04438), HLA-B*0849 (HLA04442), HLA-B*0850 (HLA04499), HLA-B*0851 (HLA04507), HLA-B*0852 (HLA04515), HLA-B*0853 (HLA04516), HLA-B*0854 (HLA04520), HLA-B*0855 (HLA04708), HLA-B*0856 (HLA04720), HLA- B*0857 (HLA04722), HLA- B*0858 (HLA04753), HLA- B*0859 (HLA04788), HLA- B*0860 (HLA04816), HLA-B*0861 (HLA04860).
Los alelos de los antígenos
HLA-B8 y HLA-DRB1*3 identificados
anteriormente son las secuencias oficiales (Versión de 1 de abril de
2010) aprobadas por el Comité de Nomenclatura de Factores para el
Sistema HLA de la Organización Mundial de la Salud (OMS). La
identificación entre paréntesis de cada alelo (HLAxxxxx) se refiere
al número de acceso (IMGT/HLA Acc No:) de la secuencia que define
cada alelo y registrado en la Base de Datos IMGT/HLA de las bases de
datos EMBL/GenBank/DDBJ.
En una realización preferida, la
genotipificación se efectúa por amplificación de la reacción en
cadena de la polimerasa múltiple (PCR multiplex) con cebadores
específicos, seguida de detección.
En una realización más preferida, la
genotipificación se efectúa por PCR con oligonucleótidos de
secuencia específica (PCR-SSO).
La genotipificación de HLA por la técnica de PCR
se ha convertido en una alternativa a los métodos serológicos, la
cual se utiliza extensamente en la práctica clínica. Los métodos de
tipificación basados en la PCR más comúnmente usados son la PCR con
cebadores de secuencia específica (PCR-SSP) y la PCR
con oligonucleótidos de secuencia específica
(PCR-SSO). En el método PCR-SSO, se
prepara una membrana (en donde se inmoviliza el ADN amplificado por
los cebadores específicos del gen HLA), y las sondas de
oligonucleótidos específicos para el respectivo tipo de HLA se
hibridan para la tipificación. Un ejemplo de la genotipificación de
HLA por PCR-SSO es el procedimiento comercial
llevado a cabo con los kits de tipificación Lifecodes
HLA-SSO para ser utilizados con la tecnología
Luminex® (Lifecodes Molecular Diagnostics).
La mayoría de tecnologías utilizadas para
analizar el contenido genómico de una muestra emplean el ADN de las
células del individuo analizadas. No obstante, también se puede
utilizar el ARN.
Alternativamente y tal como se ha expuesto
anteriormente, el método de la invención puede ser realizado
detectando la presencia de la proteína codificada por los alelos de
interés. Esta clase de detección se efectúa principalmente con
anticuerpos específicos. La detección con anticuerpos permite
determinar si el antígeno HLA-DRB1*03 está presente
en una muestra, lo cual ya resulta útil para el análisis de la
predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos
adversos relacionados con los materiales no metálicos implantados en
el cuerpo.
Aunque el ADN, ARN o proteínas para ser
analizadas pueden preparase utilizando cualquiera de los métodos
conocidos a partir de cualquier tipo de muestra biológica, se
prefiere una muestra de sangre, ya sea procedente de sangre total o
de sangre de cordón umbilical. Otras muestras biológicas adecuadas
incluyen tarjetas de papel impregnadas con sangre (stain cards),
hisopos (escobillas) bucales, y orina.
Un ejemplo del método para la recogida y
preparación de la muestra para ser analizada es el método QIAAmp®
(Qiagen).
El método de la invención permite el análisis de
la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos
adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el
cuerpo, siendo preferidos aquéllos que se vienen usando extensamente
y que tienen una estructura química orgánica, tal como el colágeno,
el ácido L-poliláctico, la poliacrilamida, la
polialquilimida, el ácido hialurónico, el politetrafluoroetileno y
el metacrilato. Todos estos compuestos son implantes de material
polimérico. Otro implante de material polimérico es el aceite de
silicona (o silicona de grado médico).
Otro material para el cual el método también
proporciona un análisis adecuado de la predisposición genética de un
individuo a desarrollar efectos adversos, es el material inorgánico
hidroxiapatita, siendo preferida la hidroxiapatita cálcica (usada
extensamente en forma de microesferas). La hidroxiapatita cálcica es
una clase de implante
cerámico.
cerámico.
También se puede utilizar una mezcla de al menos
dos de los citados materiales no metálicos para ser implantados en
el cuerpo. La invención también proporciona un método para analizar
la predisposición genética a desarrollar efectos adversos cuando se
implantan más de uno de los materiales.
Aunque varios efectos secundarios adversos
parecen ocurrir cuando se aplica un bioimplante a ciertos
individuos, el método de la invención es particularmente útil para
evitar (debido a un análisis "realizado con anticipación") los
llamados efectos adversos de aparición tardía, los cuales en algunos
casos son efectos secundarios severos con una evolución crónica. Por
lo tanto, el método de la invención permite detectar con
anticipación (antes de la implantación) la susceptibilidad de un
individuo a presentar efectos secundarios adversos, lo cual resulta
de gran interés. Por otra parte, el método completa un vacío en el
estado de la técnica, y al mismo tiempo permite reducir casos
putativos que habrían desarrollado, no inmediatamente pero quizás
posteriormente y lentamente, condiciones patológicas críticas y
severas.
Algunos de los efectos adversos relacionados con
los materiales no metálicos implantados en el cuerpo se seleccionan
del grupo que consiste en rechazo al implante, lipoatrofia,
trastornos granulomatosos, inflamación de nódulos, induración,
angioedema, sarcoidosis, trastornos inmunomediados sistémicos
inflamatorios, sarcoidosis cutánea, pneumonitis, enfermedad por
adyuvante humana y más de uno de dichos efectos adversos.
Algunos de los efectos adversos relacionados con
los materiales no metálicos implantados en el cuerpo se seleccionan
preferentemente entre rechazo al implante; lipoatrofia relacionada
con terapia antirretroviral de alta intensidad que incluye los
fármacos anti-proteasa (tal como la terapia
antirretroviral administrada a pacientes de SIDA); reacciones
granulomatosas tardías, incluyendo los granulomas derivados de
diferentes causas; sarcoidosis; nodulosis; induración cutánea;
abscesos y pseudo-abscesos; fibrosis; angioedema;
hipersensibilidad; pneumonitis; hepatitis; escleroderma; o miopatía
idiopática inflamatoria, la mayoría de las mismos encuadrados como
trastornos inmunomediados. Todos estos efectos adversos están
correlacionados con la determinación en una muestra del alelo del
antígeno
HLA-DRB1*3.
HLA-DRB1*3.
En otra realización preferida, el antígen
HLA-DRB1*3 se emplea como marcador para el análisis
de la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos
adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el
cuerpo.
Tal como se ha expuesto anteriormente, la
determinación del marcador se efectúa preferiblemente por
genotipificación y la determinación del haplotipo que queda definido
por la presencia de al menos un alelo de HLA-B8 y/o
la presencia de al menos un alelo de HLA-DRB1*3.
\newpage
Cuando se proporcionan conjuntamente los medios
apropiados para llevar a cabo el método de la invención, se obtiene
un kit que es útil para el análisis de la predisposición genética de
un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con
materiales no metálicos implantados en el cuerpo. El kit puede
comprender medios para llevar a cabo una PCR con oligonucleótidos de
secuencia específica (PCR-SSO), incluyendo así los
cebadores para la amplificación específica de alelos que codifican
por el HLA-DRB1*3, para obtener los correspondientes
amplicones (regiones de ADN amplificadas); sondas para el
aislamiento y detección de los amplicones; y medios para interpretar
los resultados obtenidos, tal como un patrón de referencia.
De la misma manera, el método de la invención se
lleva a cabo utilizando cualquier otro kit conocido que comprende
medios apropiados para determinar la presencia de un alelo de
HLA-DRB1*3. Estos kits comprenden medios para
efectuar la genotipificación del alelo de
HLA-DRB1*3, o cualquier alteración en desequilibrio
de enlace (DE) con el gen que codifica dicho antígeno.
Alternativamente, el kit utilizado en el método
de la invención puede comprender medios apropiados para determinar
la presencia de las proteínas, es decir, del antígeno
HLA-DRB1*3. Medios apropiados incluyen cualquier
anticuerpo específico para los antígenos y compuestos (anticuerpos
secundarios, marcadores fluorescentes o radioisotópicos, etc) que
permiten la detección de los complejos
anticuerpo-antígeno.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos,
ventajas y características de la invención se desprenderán en parte
de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los
siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se
pretende que sean limitativos de la presente invención. Además, la
presente invención cubre todas las posibles combinaciones de
realizaciones particulares y preferidas aquí descritas.
Esta invención se basa en parte en el
descubrimiento y caracterización de un nuevo locus de
susceptibilidad para la predisposición a desarrollar efectos
secundarios adversos después de la implantación de materiales no
metálicos. Dicho locus es el de HLA-DRB1*3, o el
haplotipo HLA-B8 HLA-DRB1*3, así
como las proteínas (serotipos) derivadas de los genes de dichos
loci.
Ejemplo
A)
Se efectuó una genotipificación de baja
resolución de los alelos HLA-B y DRB1 de 245
pacientes y controles por métodos de sonda de oligonucleótidos con
secuencia específica (SSOP) mediante tecnología de microesferas
Luminex (Kits de tipificación Lifecodes HLA-SSO para
su uso con Luminex®, referencia y versión LC775IVD.11(02/09);
Tepnel Lifecodes Molecular Diagnostics - Stamford). Tal como se
ilustra en la Tabla 1, algunos individuos manifestaron efectos
adversos derivados de la inyección de un bioimplante, tal como un
implante de relleno dérmico o sub-dérmico de
naturaleza química orgánica o inorgánica.
El procedimiento de tipificación LIFECODES
HLA-SSO se basa en la hibridación de un amplicón de
PCR de cadena sencilla con sondas SSO. Las sondas pueden ser
homologas a una secuencia exclusiva de un alelo o grupo de alelos
del ADN amplificado. Las sondas hibridan con una región
complementaria que puede o no estar presente en el amplicón. Se
emplean también sondas de consenso homologas a secuencias presentes
en todos los alelos de un locus, las cuales actúan como indicadores
de éxito de los pasos de amplificación e hibridación. En la
tipificación por el procedimiento LIFECODES HLA-SSO,
las sondas se unen a microesferas Luminex® adaptadas para utilizarse
con el Instrumento Luminex®. Se mezclan y se analizan conjuntamente
varias poblaciones de microesferas Luminex®, ya que cada población
de microesferas se distingue por su color característico. Está
tecnología es ventajosa porque puede también utilizarse para
cuantificar las cantidades relativas de productos de la PCR, lo que
conduce a la determinación del fenotipo HLA de cada muestra
(individuo).
Se extrajo ADN de las muestras de sangre de los
pacientes y controles; y se preparó utilizando el método QIAAmp®
(Qiagen, S.A.). El ADN aislado se conservó en TRIS 10 mM, ph
8.0-9.0, en agua libre de nucleasas. La
concentración final de ADN estaba comprendida entre
10-200 ng/\mul.
Los componentes y cantidades de reacción para la
amplificación de ADN fueron los siguientes:
- -
- Mezcla de cebadores (LIFECODES Master Mix); 15 \mul
- -
- ADN genómico; hasta 200 ng
- -
- Taq polimerasa recombinante; 0.5 \mul (2.5 U)
- -
- Agua libre de nucleasas (Tepnel Lifecodes); hasta 50 \mul de volumen final.
\vskip1.000000\baselineskip
La mezcla de cebadores incluye el tampón y los
dNTP (nucleótidos) para efectuar la amplificación.
Las condiciones del ciclador térmico para la
amplificación fueron las siguientes:
- -
- 5 minutos a 95ºC,
- -
- 1 ciclo con los siguientes pasos: 95ºC durante 30 segundos (s); 60ºC durante 45 s; 72ºC durante 45 s,
- -
- 8 ciclos con los siguientes pasos: 95ºC durante 30 segundos (s); 63ºC durante 45 s; 72ºC durante 45 s, y
- -
- 32 ciclos a 72ºC durante 15 minutos (min).
\vskip1.000000\baselineskip
La amplificación se llevó a cabo en placas de 96
pocillos del ciclador térmico PCR (Costar®, No. 6509).
Se añadió una alícuota de 5 \mul de producto
de la PCR de cada locus específico a una placa de 96 pocillos del
ciclador térmico (Costar®, No. 6509), junto con una alícuota de 15
\mul de mezcla de sondas (LIFECODES HLA Probe Mix®). La placa se
selló con película Microseal®. Las muestras se hibridaron de acuerdo
con las condiciones de incubación siguientes:
- -
- 97ºC durante 5 min; 47ºC durante 30 min; 56ºC durante 10 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Una vez concluida la hibridación, se añadieron
170 \mul de una solución de
estreptavidina-ficoeritrina (1:200) a cada pocillo.
A continuación las muestras fueron transferidas a un Instrumento
Luminex® que incluye el software necesario para interpretar los
resultados, es decir, el patrón diana de sondas de cada muestra se
comparó con la tabla diana de sondas suministrada con el kit.
La Tabla 1 muestra la genotipificación de todas
las muestras analizadas tal como se ha expuesto anteriormente, y se
correlaciona cada haplotipo con la presencia de efectos adversos
relacionados con la aplicación de bioimplantes. La columna
"bioimplante" se refiere al bioimplante o mezcla de
bioimplantes aplicados a cada muestra. La columna "Observaciones
y/o Efectos adversos" se refiere a la manifestación patológica
observada y a algunas anotaciones médicas. Las muestras fueron
individuos a los cuales se implantó un material no metálico.
"S" significa si; "N" significa no (y actúan como
controles); "NI" significa nódulo inflamado;
HLA-B* (1) es el alelo de tipo HLA-B
heredado del progenitor (1); HLA-B* (2) es el alelo
de tipo HLA-B heredado del progenitor (2);
HLA-DRB*1 (1) es el alelo de tipo
HLA-DRB*1 heredado del progenitor (1);
HLA-DRB*1 (2) es el alelo de tipo
HLA-DRB*1 heredado del progenitor (2).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
De la Tabla 1 se deduce que utilizando el test
predictivo o el método de la invención, los efectos adversos de
aparición tardía y algunos efectos adversos inmediatos relacionados
con los bioimplantes, concretamente, con los implantes de relleno
dérmicos y sub-dérmicos, se podrían prevenir en el
30-40% de los individuos que optaron por la
implantación de biomateriales. En otras palabras, la probabilidad de
desarrollar un efecto adverso es mayor en un individuo que incorpora
al menos un alelo del antígeno HLA-DRB1*3.
Más concretamente, la incidencia de un efecto
adverso de aparición tardía relacionado con un bioimplante es 600
veces mayor en individuos que incorporan el haplotipo definido por
la presencia simultánea de un alelo de HLA-B8 y un
alelo de HLA-DRB1*3 (haplotipo
HLA-B8/HLA-DRB1*3). El riesgo
relativo (rr) que representa ser portador de un alelo de los
antígenos descritos frente al riesgo relativo cuando se presenta el
haplotipo HLA-B8/HLA-DRB1*3 es de 1
a 5.9 (rr=1 vs. rr=5.9).
Todos los datos de la Tabla 1 fueron analizados
estadísticamente por la prueba exacta de Fisher (2 colas) con un
intervalo de confianza del 95%. Las muestras que contienen el
haplotipo HLA-B8/HLA-DRB1*3
revelaron un valor para el cociente de probabilidades de 5.81 y la
prueba exacta de Fisher fue inferior a 0.02.
Entonces, aunque la presencia del haplotipo
HLA-B8/HLA-DRB1*3 implica un mayor
riesgo de desarrollar efectos adversos relacionados con los
bioimplantes, la presencia de al menos un único alelo de
HLA-DRB1*3 tiene que ser considerado también como un
factor de riesgo, de acuerdo con los datos de la Tabla 1.
De la Tabla 1 también se puede deducir que
algunos efectos adversos de aparición tardía pueden ser
desarrollados con correlación a un haplotipo diferente del de
HLA-B8 y HLA-DRB1*3. Estos casos no
pueden ser detectados con el método de la invención y requieren
estudios adicionales.
En una forma más detallada, la Tabla 1 muestra
los efectos secundarios adversos detectados. Las reacciones
granulomatosas tardías se han relacionado con los implantes de
colágeno, silicona, ácido L-poliláctico,
poliacrilamida, polialquilimida, ácido hialurónico,
politetrafluoroetileno (Gore-Tex®) y metacrilato. Se
ha descrito el mismo tipo de reacciones adversas con el empleo de
combinaciones de metacrilato-colágeno (Artecoll®) o
etilmetacrilato-hialurónico (Dermalive®). También se
han reportado diferentes reacciones adversas tardías a la
polialquilimida. Se han descrito incluso granulomas histológicos
diferentes y específicos relacionados con el ácido hialurónico
(HA-AH, Dermalive®), el
metacrilato-colágeno (Artecoll®), el ácido
poliláctico (New-Fill®), la silicona y la
poliacrilamida (Aquamid®). La capacidad de los bioimplantes de
inducir efectos adversos immunomediados en humanos puede estar
relacionada con las características biológicas del individuo y la
composición química de los mismos bioimplantes. Es conocido que
todos los bioimplantes pueden, in vitro, provocar una
reacción de tipo cuerpo extraño inmunomediada primaria, basada en la
activación de los macrofagos y la posible inducción de la respuesta
de las células T. En teoría y en lo que se refiere al desarrollo de
granulomas, el desarrollo gradual de la estructura de las fibras de
colágeno alrededor de las partículas de bioimplantes parece
coincidir con una disminución de la reacción inflamatoria a los
mismos. Sin embargo, los llamados granulomas estables pueden
evolucionar a una respuesta granulomatosa anormal progresiva debido
a los bioimplantes, como por ejemplo los implantes de relleno
dérmicos o sub-dérmicos. Algunas veces y según se ha
indicado, los efectos indeseables aparecen durante un traumatismo
menor o después de una infección. Existe la hipótesis de que los
propios y específicos antecedentes genéticos deben jugar un papel
importante en el desarrollo de dichas reacciones adversas.
Ejemplo
B)
Un paciente de 60 años que presentaba
antecedentes atópicos y posible hipersensibilidad a fármacos, y que
deseaba ser tratado por un cirujano para mejorar las arrugas de la
cara, fue sometido en primer lugar a análisis por medio del método
de la presente invención. La finalidad fue determinar si el paciente
era susceptible al rechazo de implantes (implante de relleno
sub-dérmico) o a desarrollar efectos secundarios
adversos. El implante de relleno seleccionado sería el ácido
hialurónico. Después de efectuar un análisis rutinario
(determinación de ANA, CH50, C4, proteinograma) y después del ensayo
experimental del haplotipo de HLA-B y
HLA-DRB1 (mediante los kits de tipificación
Lifecodes HLA-SSO para su uso con Luminex®,
LC775IVD. 11(02/09) (Tepnel Lifecodes Molecular Diagnostics -
Stamford), se determinó que el paciente presentaba el siguiente
haplotipo: HLA-B*08 y HLA-DRB1*03.
El cirujano rehusó inyectar el implante de relleno de ácido
hialurónico y procedió solamente a efectuar un "lifting"
facial.
Ejemplo
C)
C1. Un paciente de 45 años solicitó atención
médica debido a la aparición de nódulos faciales, lesiones cutáneas
y síndrome seco, 18 meses después de la colocación de implantes
faciales (inyección con implante de relleno) de ácido hialurónico y
metacrilato. El análisis de sangre reveló hipergammaglobulinemia,
elevación de reactantes de fase aguda, así como valores altos de la
enzima convertidora de angiotensina. Después del ensayo experimental
del haplotipo de HLA-B y HLA-DRB1
procedente de torundas (escobillas) bucales, se determinó que el
paciente presentaba el siguiente haplotipo: HLA-B*08
y HLA-DRB1*03 (mediante el kit de tipificación
Lifecodes HLA-SSO para su uso con Luminex®,
LC775IVD.11(02/09) (Tepnel Lifecodes Molecular Diagnostics -
Stamford). El paciente fue debidamente informado del alto riesgo de
desarrollar efectos adversos en caso de que fueran utilizados nuevos
bioimplantes (inyección con implante de relleno).
C2. Se sometió a análisis un paciente que fue
derivado del especialista dermatólogo con objeto de determinar el
posible riesgo de efectos adversos de aparición tardía relacionados
con los bioimplantes. El paciente parecía haber desarrollado una
reacción adversa previa en el rostro después de la inyección de
colágeno y metacrilato. Después de determinarse experimentalmente,
tal como se ha efectuado en el Ejemplo B, el haplotipo de
HLA-B y HLA-DRB1 a partir de una
muestra de de sangre, se determinó que el paciente presentaba el
siguiente haplotipo: HLA-B*08 y
HLA-DRB1*03. El paciente fue debidamente informado
del alto riesgo de desarrollar efectos adversos en el caso de que
utilizara de nuevo bioimplantes (implantes de relleno). Asimismo, el
cirujano fue informado y desestimó la inyección de cualquier
implante de relleno. Sin embargo, el paciente consultó a otro
especialista que accedió a inyectar el implante de relleno de ácido
hialurónico. Tres meses después de la inyección del implante de
relleno, se observó un proceso inflamatorio severo en la primera y
segunda zonas del rostro tratadas.
Según el leal saber y entender de los
inventores, hasta la fecha no se han reportado datos estadísticos
significativos que correlacionen la predisposición genética de un
individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con los
materiales implantados en el cuerpo. Ello puede ser debido a que las
empresas que comercializan los bioimplantes han guardado silencio
sobre el riesgo de efectos secundarios derivados de los implantes, o
simplemente porque la mayoría de los efectos secundarios son efectos
adversos de aparición tardía, difíciles de ser correlacionados
inmediatamente con la colocación de un biomaterial, realizada dicha
colocación algunos años atrás.
Merece especial énfasis el hecho que en todos
los individuos estudiados (pacientes o controles), no se detectaron
anticuerpos reactivos al bioimplante. Así, las reacciones
inflamatorias y los trastornos inmunológicos observados no son
debidos a un patrón de reacción autoinmune. De la misma manera, no
se han detectado en las muestras autoanticuerpos específicos
dirigidos a los diferentes bioimplantes, como por ejemplo implantes
de relleno. Además, las biopsias observadas en el caso de los
efectos secundarios adversos relacionados con los bioimplantes son
bastante diferentes de las observadas en las derivadas de
enfermedades autoinmunes. Normalmente, el patrón histopatológico
observado en estas biopsias procedentes de individuos con efectos
secundarios adversos es característico de la reacción de
hipersensibilidad tipo IV (Clasificación de Gell y Coombs). Así, se
demuestra la implicación de las células T más que de las células B.
No obstante, la evolución de la inflamación a un estado crónico
podría producir el desarrollo o "despertar" de trastornos
autoimmunes, tal como vasculitis, polimiositis, síndrome de Sjögren,
etc. Se pueden evitar estos trastornos severos cuando se efectúa el
método de la invención para un individuo a quién se ha sugerido
recibir un bioimplante (implante de material no metálico).
El método de la invención resulta del primer
ensayo significativamente estadístico que correlaciona un haplotipo
o la presencia de unos alelos del sistema HLA, o la presencia de las
proteínas (antígenos) codificadas por los alelos, con el riesgo de
desarrollar efectos adversos después de la implantación de un
biomaterial. Aunque y, afortunadamente, la prevalencia de los
efectos adversos relacionados con los bioimplantes es baja, la
aparición de dichos efectos adversos puede ser realmente severa.
Así, el método de la invención es importante porque permite la
discriminación de un tratamiento quirúrgico o cosmético que podría
conducir al desarrollo de efectos adversos severos, contrario a la
propia finalidad del tratamiento.
Por tanto, la presente invención proporciona por
primera vez datos estadísticos significativos que asocian un
haplotipo específico con la susceptibilidad o predisposición de un
individuo a desarrollar efectos adversos (de aparición tardía o
inmediatos) derivados de materiales implantados en el cuerpo,
principalmente implantes de relleno dérmicos y
sub-dérmicos.
- Di Lorenzo et al., "Morphea
after Silicone Gel Breast Implantation for Cosmetic Reasons in an
HLA-BS, DR3-Positive Woman", Int.
Arch Allergy Immunol 1997. vol. 112, pp.
93-95.
Claims (11)
1. Método in vitro para el análisis de la
predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos
adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el
cuerpo, que comprende determinar, en una muestra biológica de dicho
individuo, la presencia del antígeno HLA-DRB1*3 del
complejo mayor de histocompatibilidad; y donde la presencia de dicho
antígeno es indicativa de predisposición genética a desarrollar
dichos efectos adversos.
2. Método según la reivindicación 1, donde la
determinación de la presencia del antígeno
HLA-DRB1*3 se lleva a cabo por genotipificación del
alelo deHLA-DRB1*3; o cualquier alteración en
desequilibrio de enlace con el gen que codifica dicho antígeno.
3. Método según la reivindicación 2, donde el
alelo del antígeno HLA-DRB1*3 se selecciona del
grupo que consiste en: HLA-DRB1*03010101,
HLA-DRB1*03010102, HLA-DRB1*030102,
HLA-DRB1*030103, HLA-
DRB1*030104, HLA-DRB1*030105, HLA-DRB1*030106, HLA-DRB1*030107, HLA-DRB1*030108, HLA-
DRB1*030201, HLA-DRB1*030202, HLA-DRB1*0303, HLA-DRB1*0304, HLA-DRB1*030501, HLA-
DRB1*030502, HLA-DRB1*030503, HLA-DRB1*0306, HLA-DRB1*0307, HLA-DRB1*0308, HLA-DRB1*0309, HLA-DRB1*0310, HLA-DRB1*031101, HLA-DRB1*031102, HLA-DRB1*0312, HLA-DRB1*031301, HLA-
DRB1*031302, HLA-DRB1*0314, HLA-DRB1*0315, HLA-DRB1*0316, HLA-DRB1*0317, HLA-
DRB1*0318, HLA-DRB1*0319, HLA-DRB1*0320, HLA-DRB1*0321, HLA-DRB1*0322, HLA-DRB1*0323,
HLA-DRB1*0324, HLA-DRB1*0325, HLA-DRB1*0326, HLA-DRB1*0327, HLA-DRB1*0328, HLA-
DRB1*0329, HLA-DRB1*0330, HLA-DRB1*0331, HLA-DRB1*0332, HLA-DRB1*0333, HLA-DRB1*0334,
HLA-DRB1*0335, HLA-DRB1*0336, HLA-DRB1*0337, HLA-DRB1*0338, HLA-DRB1*0339, HLA-
DRB1*0340, HLA-DRB1*0341, HLA-DRB1*0342, HLA-DRB1*0343, HLA-DRB1*0344, HLA-DRB1*0345,
HLA-DRB1*0346, HLA-DRB1*0347, HLA-DRB1*0348, HLA-DRB1*0349, HLA-DRB1*0350, HLA-
DRB1*0351, y HLA-DRB1*0352.
DRB1*030104, HLA-DRB1*030105, HLA-DRB1*030106, HLA-DRB1*030107, HLA-DRB1*030108, HLA-
DRB1*030201, HLA-DRB1*030202, HLA-DRB1*0303, HLA-DRB1*0304, HLA-DRB1*030501, HLA-
DRB1*030502, HLA-DRB1*030503, HLA-DRB1*0306, HLA-DRB1*0307, HLA-DRB1*0308, HLA-DRB1*0309, HLA-DRB1*0310, HLA-DRB1*031101, HLA-DRB1*031102, HLA-DRB1*0312, HLA-DRB1*031301, HLA-
DRB1*031302, HLA-DRB1*0314, HLA-DRB1*0315, HLA-DRB1*0316, HLA-DRB1*0317, HLA-
DRB1*0318, HLA-DRB1*0319, HLA-DRB1*0320, HLA-DRB1*0321, HLA-DRB1*0322, HLA-DRB1*0323,
HLA-DRB1*0324, HLA-DRB1*0325, HLA-DRB1*0326, HLA-DRB1*0327, HLA-DRB1*0328, HLA-
DRB1*0329, HLA-DRB1*0330, HLA-DRB1*0331, HLA-DRB1*0332, HLA-DRB1*0333, HLA-DRB1*0334,
HLA-DRB1*0335, HLA-DRB1*0336, HLA-DRB1*0337, HLA-DRB1*0338, HLA-DRB1*0339, HLA-
DRB1*0340, HLA-DRB1*0341, HLA-DRB1*0342, HLA-DRB1*0343, HLA-DRB1*0344, HLA-DRB1*0345,
HLA-DRB1*0346, HLA-DRB1*0347, HLA-DRB1*0348, HLA-DRB1*0349, HLA-DRB1*0350, HLA-
DRB1*0351, y HLA-DRB1*0352.
4. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 2-3, donde la genotipificación se
efectúa por amplificación mediante PCR múltiple seguida de
detección.
5. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, donde la muestra biológica es
una muestra de sangre.
6. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 1-5, donde el material no metálico
implantado en el cuerpo es un material polimérico.
7. Método según la reivindicación 6, donde el
material polimérico se selecciona del grupo que consiste en
colágeno, ácido L-poliláctico, poliacrilamida,
polialquilimida, ácido hialurónico, politetrafluoroetileno,
metacrilato, silicona y mezclas de los mismos.
8. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 1-7, donde los efectos adversos
relacionados con los materiales no metálicos implantados en el
cuerpo se seleccionan del grupo que consiste en rechazo al implante,
lipoatrofia, trastornos granulomatosos, inflamación de nódulos,
induración, angioedema, sarcoidosis, trastornos del sistema
inmunemediado sistémico, sarcoidosis cutánea, pneumonitis,
enfermedad por adyuvante humana y más de uno de dichos efectos
adversos.
9. Uso de un kit que comprende anticuerpos
específicos para determinar la presencia del antígeno
HLA-DRB1*3 del complejo mayor de
histocompatibilidad, para el análisis de la predisposición genética
de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con
materiales no metálicos implantados en el cuerpo.
10. Uso de un kit que comprende sondas de
oligonucleótidos con secuencia específica (SSOP) para efectuar la
genotipificación del alelo de HLA-DRB1*3, o
cualquier alteración en desequilibrio de enlace con el gen que
codifica dicho antígeno, para el análisis de la predisposición
genética de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados
con materiales no metálicos implantados en el cuerpo.
11. Uso del antígeno HLA-DRB1*3,
como marcador para el análisis de la predisposición genética de un
individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con materiales
no metálicos implantados en el cuerpo.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201130348A ES2372506B1 (es) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201130348A ES2372506B1 (es) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2372506A1 true ES2372506A1 (es) | 2012-01-23 |
| ES2372506B1 ES2372506B1 (es) | 2012-11-29 |
Family
ID=45439931
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES201130348A Withdrawn - After Issue ES2372506B1 (es) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes. |
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|---|---|
| ES (1) | ES2372506B1 (es) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO1997038310A1 (en) * | 1996-04-04 | 1997-10-16 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for detecting organ allograft rejection and uses thereof |
-
2010
- 2010-04-26 ES ES201130348A patent/ES2372506B1/es not_active Withdrawn - After Issue
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO1997038310A1 (en) * | 1996-04-04 | 1997-10-16 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for detecting organ allograft rejection and uses thereof |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2372506B1 (es) | 2012-11-29 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2372506 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20121129 |
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| FA2A | Application withdrawn |
Effective date: 20130403 |