ES2360811T3

ES2360811T3 - COMPOSITION FOR PROTEASOME INHIBITION.

Info

Publication number: ES2360811T3
Application number: ES05853385T
Authority: ES
Inventors: Evan R. Lewis; Mark Nguyen Ho; Fabiana N. Fonseca
Original assignee: Proteolix Inc
Current assignee: Onyx Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2004-12-07
Filing date: 2005-12-07
Publication date: 2011-06-09
Anticipated expiration: 2025-12-07
Also published as: SI1819353T1; DK2260835T3; SI2261236T1; SI2260835T1; DK2261236T3

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de proteasoma que tiene la estructura y una ciclodextrina seleccionada entre hidroxipropil beta-ciclodextrina (HPBCD) y sulfobutiléter beta-ciclodextrina (SBECD).A pharmaceutical composition comprising a proteasome inhibitor having the structure and a cyclodextrin selected from hydroxypropyl beta-cyclodextrin (HPBCD) and sulfobutyl ether beta-cyclodextrin (SBECD).

Description

Background of the Invention

El proteasoma se ha validado como una diana terapéutica, como se ha demostrado mediante la aprobación reciente de la FDA de bortezomib, un inhibidor de proteasoma de ácido borónico, para el tratamiento de mieloma múltiple. Sin embargo, otros inhibidores más altamente específicos de proteasoma que podrían tener menos efectos secundarios tóxicos se han descubierto recientemente. Estos compuestos incluyen epoxi cetonas de péptidos tales como epoxomicina y péptido (b) descrito en la Patente de Estados Unidos Nº 6.831.099 y el péptido (a) descrito en la Solicitud Provisional de los Estados Unidos Nº 60/569.096, presentada el 7 de mayo de 2004 publicada como el documento WO 2005105827. Sin embargo, la baja solubilidad acuosa de algunos de estos compuestos hace difícil formular composiciones con biodisponibilidad óptima. Por tanto, se necesitan procedimientos adicionales de formulación de epoxi cetonas de péptido. The proteasome has been validated as a therapeutic target, as demonstrated by the recent FDA approval of bortezomib, a boronic acid proteasome inhibitor, for the treatment of multiple myeloma. However, other more highly specific proteasome inhibitors that could have fewer toxic side effects have recently been discovered. These compounds include epoxy ketone peptides such as epoxomycin and peptide (b) described in U.S. Patent No. 6,831,099 and the peptide (a) described in U.S. Provisional Application No. 60 / 569,096, filed on 7 May 2004 published as WO 2005105827. However, the low aqueous solubility of some of these compounds makes it difficult to formulate compositions with optimal bioavailability. Therefore, additional methods of formulating epoxy peptide ketones are needed.

Los inhibidores de proteasoma peptídicos se describen en Elofsson M. y col.: Chemistry and Biology, Current Biology, Londres, GB, volumen 6, nº 11, 1995, páginas 811-822; Myung J. y col.: Molecular Cell, febrero de 2001, volumen 7, nº 2, febrero de 2001 (2001-02), páginas 411-420, Sin N. y col.: Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999, Vol. 9, páginas 2283-2288 y en el documento WO01/28579. Peptide proteasome inhibitors are described in Elofsson M. et al .: Chemistry and Biology, Current Biology, London, GB, volume 6, No. 11, 1995, pages 811-822; Myung J. et al .: Molecular Cell, February 2001, volume 7, No. 2, February 2001 (2001-02), pages 411-420, Sin N. et al .: Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999, Vol. 9, pages 2283-2288 and in WO01 / 28579.

Loftsson T. y col., J. Pharm. Sc., 1996, Vol. 85, páginas 1017-1025 y Thompson, D.O., Crit. Rev. Ther. Drug, Corr. Syst., 1997, Vol. 14, páginas 1-104 proporciona visiones de conjunto sobre aplicaciones farmacéuticas de ciclodextrinas. Strickley, G. R., Pharm. Res., 2004, 21(2), páginas 201-229 y Tong W. en: “Water Insoluble Drug Formation”, R Lin, Ed., 2000, páginas 111-139 describe enfoques para la solubilización de compuestos de fármaco. Loftsson T. et al., J. Pharm. Sc., 1996, Vol. 85, pages 1017-1025 and Thompson, D.O., Crit. Rev. Ther. Drug, Corr. Syst., 1997, Vol. 14, pages 1-104 provides aggregate views on pharmaceutical applications of cyclodextrins. Strickley, G. R., Pharm. Res., 2004, 21 (2), pages 201-229 and Tong W. in: "Water Insoluble Drug Formation", R Lin, Ed., 2000, pages 111-139 describe approaches for the solubilization of drug compounds.

Summary of the invention

Ahora se ha descubierto que la solubilidad de los inhibidores de proteasoma, tales como la epoxi cetona de péptido (a) como se define más adelante se mejora significativamente cuando se formulan con una ciclodextrina. It has now been found that the solubility of proteasome inhibitors, such as the epoxy peptide ketone (a) as defined below, is significantly improved when formulated with a cyclodextrin.

En una realización, la presente invención es una composición farmacéutica como se define en las reivindicaciones adjuntas que incluye el inhibidor de proteasoma (a), una ciclodextrina y opcionalmente un tampón. Tales composiciones farmacéuticas típicamente incluyen una cantidad farmacéuticamente eficaz del inhibidor de proteasoma, por ejemplo, que mejora los efectos de enfermedades neurodegenerativas (tal como enfermedad de Alzheimer), afecciones inmunológicas, enfermedades degenerativas del músculo, cáncer, enfermedades infecciosas crónicas, fiebre, enfermedad muscular, denervación, lesión de nervios y/o ayuno, entre otros, cuando se administra a un paciente. In one embodiment, the present invention is a pharmaceutical composition as defined in the appended claims that includes the proteasome inhibitor (a), a cyclodextrin and optionally a buffer. Such pharmaceutical compositions typically include a pharmaceutically effective amount of the proteasome inhibitor, for example, which improves the effects of neurodegenerative diseases (such as Alzheimer's disease), immune conditions, degenerative muscle diseases, cancer, chronic infectious diseases, fever, muscle disease. , denervation, nerve injury and / or fasting, among others, when administered to a patient.

En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones antiinflamatorias que incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de inhibidor de proteasoma (a), una ciclodextrina y opcionalmente un tampón como se define en las reivindicaciones adjuntas. In another aspect, the present invention provides anti-inflammatory compositions that include a therapeutically effective amount of proteasome inhibitor (a), a cyclodextrin and optionally a buffer as defined in the appended claims.

Las composiciones de la invención son adecuadas para procedimientos que implican administrar o poner en contacto a un sujeto, una célula, un tejido, un órgano o un organismo con una cantidad eficaz de dicha composición. Estos procedimientos incluyen, aunque no están limitados a, inhibir o reducir infección por VIH en un sujeto; influir sobre el nivel de expresión génica viral en un sujeto; alterar la variedad de péptidos antigénicos producidos por el proteasoma en un organismo; determinar si un proceso celular, de desarrollo o fisiológico o producción en un organismo está regulado por la actividad proteolítica de una hidrolasa Ntn particular; tratar enfermedad de Alzheimer en un sujeto; reducir el índice de degradación de proteínas en el músculo en una célula; reducir el índice de degradación de proteína intracelular en una célula; reducir el índice de degradación de proteína p53 en una célula; inhibir el crecimiento de cánceres relacionados con p53 en un sujeto; inhibir la presentación de antígeno en una célula; suprimir el sistema inmune de un sujeto (por ejemplo, afecciones tales como choque séptico, psoriasis, rechazo de injerto y artritis reumatoide); inhibir la degradación de IκB-α en un organismo; reducir el contenido de NF-κB en una célula, músculo, órgano o sujeto; influir sobre los ciclos celulares eucariotas dependientes de ciclina; tratar enfermedad proliferativa en un sujeto; influir sobre la regulación dependiente de proteasoma de oncoproteínas en una célula; tratar el crecimiento de cáncer en un sujeto; tratar apoptosis relacionada con p53 en un sujeto; y seleccionar proteínas procesadas por hidrolasas con nucleófilo N-terminal en una célula. The compositions of the invention are suitable for methods that involve administering or contacting a subject, a cell, a tissue, an organ or an organism with an effective amount of said composition. These procedures include, but are not limited to, inhibiting or reducing HIV infection in a subject; influence the level of viral gene expression in a subject; alter the variety of antigenic peptides produced by the proteasome in an organism; determine whether a cellular, developmental or physiological or production process in an organism is regulated by the proteolytic activity of a particular Ntn hydrolase; treat Alzheimer's disease in a subject; reduce the rate of protein breakdown in muscle in a cell; reduce the rate of degradation of intracellular protein in a cell; reduce the degradation rate of p53 protein in a cell; inhibit the growth of p53-related cancers in a subject; inhibit the presentation of antigen in a cell; suppress a subject's immune system (for example, conditions such as septic shock, psoriasis, graft rejection and rheumatoid arthritis); inhibit the degradation of IκB-α in an organism; reduce the content of NF-κB in a cell, muscle, organ or subject; influence cyclin dependent eukaryotic cell cycles; treat proliferative disease in a subject; influence the protease-dependent regulation of oncoproteins in a cell; treat cancer growth in a subject; treat apoptosis related to p53 in a subject; and select proteins processed by hydrolases with an N-terminal nucleophile in a cell.

Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y de las reivindicaciones. Other features and advantages of the invention will be apparent from the following detailed description and claims.

El péptido (a) se define en la reivindicación 1. Peptide (a) is defined in claim 1.

Brief description of the drawings

5 5

10 10

15 fifteen

20 twenty

25 25

30 30

35 35

40 40

45 Four. Five

La Figura 2 muestra el porcentaje de péptido (a) restante en soluciones acuosas de SBECD al 10% (p/v)/citrato de sodio 10 mM a lo largo del tiempo a diversos valores de pH. Figure 2 shows the percentage of peptide (a) remaining in aqueous solutions of 10% SBECD (w / v) / 10 mM sodium citrate over time at various pH values.

Detailed description

Las composiciones farmacéuticas de la invención como se define en las reivindicaciones adjuntas incluyen un inhibidor de proteasoma prácticamente insoluble, una ciclodextrina y opcionalmente un tampón. The pharmaceutical compositions of the invention as defined in the appended claims include a practically insoluble proteasome inhibitor, a cyclodextrin and optionally a buffer.

La cantidad de inhibidor de proteasoma que se puede solubilizar depende de varios parámetros. Un parámetro de este tipo es el pH. Como se muestra en la Figura 1, pH más elevados dan como resultado una solubilidad más baja de un compuesto básico y un pH más bajo se esperaría que disminuyera la solubilidad de un compuesto ácido, como se conoce bien en la técnica. Sin embargo, se debe seleccionar un pH para proporcionar estabilidad adecuada al inhibidor de proteasoma. Por ejemplo, el pH más bajo da como resultado la estabilidad química disminuida de un compuesto de este tipo, como se demuestra en la Figura 2. Los efectos del pH sobre la estabilidad y solubilidad de un compuesto se pueden determinar fácilmente usando procedimientos ampliamente conocidos en la técnica y descritos en el presente documento. Para formulaciones que se tienen que administrar a un mamífero, el pH preferentemente es de pH 2,5 a pH The amount of proteasome inhibitor that can be solubilized depends on several parameters. Such a parameter is the pH. As shown in Figure 1, higher pH results in a lower solubility of a basic compound and a lower pH would be expected to decrease the solubility of an acid compound, as is well known in the art. However, a pH should be selected to provide adequate stability to the proteasome inhibitor. For example, the lower pH results in the decreased chemical stability of such a compound, as shown in Figure 2. The effects of pH on the stability and solubility of a compound can be readily determined using methods widely known in the technique and described herein. For formulations that have to be administered to a mammal, the pH is preferably from pH 2.5 to pH

9. 9.

En muchas composiciones de la invención, la fuente principal de control de pH es el tampón. Típicamente, el tampón se presenta como un ácido o una base y su base o ácido conjugado, respectivamente. En una realización, el intervalo de sal tampón es 1-100 mM, preferentemente entre 5-50 mM, más preferentemente aproximadamente 10 mM (en formulaciones sólidas, la cantidad de tampón se selecciona para producir esta concentración después de la reconstitución/dilución). La concentración de tampón y el pH de la solución se escogen provechosamente para proporcionar un equilibrio óptimo de solubilidad y estabilidad. In many compositions of the invention, the main source of pH control is the buffer. Typically, the buffer is presented as an acid or a base and its base or conjugate acid, respectively. In one embodiment, the buffer salt range is 1-100 mM, preferably between 5-50 mM, more preferably about 10 mM (in solid formulations, the amount of buffer is selected to produce this concentration after reconstitution / dilution). The buffer concentration and the pH of the solution are helpfully chosen to provide an optimal balance of solubility and stability.

Los ejemplos de tampones adecuados incluyen mezclas de ácidos débiles y sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio, potasio) de la base conjugada de ácidos débiles tales como tartrato de sodio y citrato de sodio. El tampón preferido es citrato de sodio/ácido cítrico. Examples of suitable buffers include mixtures of weak acids and alkali metal salts (eg, sodium, potassium) of the conjugate base of weak acids such as sodium tartrate and sodium citrate. The preferred buffer is sodium citrate / citric acid.

Las ciclodextrinas de la invención son hidroxipropil beta-ciclodextrina (HPBCD) y sulfobutiléter beta-ciclodextrina (SBECD), preferentemente SBECD. En una realización, la ciclodextrina está presente, por ejemplo, desde el 5-20% (p/v). En una realización determinada, la cantidad preferida de una ciclodextrina es aproximadamente el 10% (p/v). Las ciclodextrinas sustituidas aumentan la solubilidad de la ciclodextrina y alivian los efectos tóxicos asociados con ciclodextrinas no sustituidas. The cyclodextrins of the invention are hydroxypropyl beta-cyclodextrin (HPBCD) and sulfobutyl ether beta-cyclodextrin (SBECD), preferably SBECD. In one embodiment, cyclodextrin is present, for example, from 5-20% (w / v). In a given embodiment, the preferred amount of a cyclodextrin is approximately 10% (w / v). Substituted cyclodextrins increase the solubility of cyclodextrin and alleviate the toxic effects associated with unsubstituted cyclodextrins.

Una realización particular de la presente invención es una formulación farmacéutica que comprende de 1 a 5 mg/ml del inhibidor de proteasoma (a), del 5% al 25% (p/v) de una ciclodextrina seleccionada entre HPBCD o SBECD y 5 mM a 20 mM de un tampón que produce un pH de aproximadamente pH 3 a aproximadamente pH 6, por ejemplo, una solución de 2 mg/ml del inhibidor de proteasoma (péptido (a)), SBECD al 10% (p/v), citrato de sodio 10 mM, pH 3,5. A particular embodiment of the present invention is a pharmaceutical formulation comprising 1 to 5 mg / ml of the proteasome inhibitor (a), 5% to 25% (w / v) of a cyclodextrin selected from HPBCD or SBECD and 5 mM at 20 mM of a buffer that produces a pH of about pH 3 to about pH 6, for example, a 2 mg / ml solution of the proteasome inhibitor (peptide (a)), 10% SBECD (w / v), 10 mM sodium citrate, pH 3.5.

El inhibidor de proteasoma (a) tiene la siguiente estructura: The proteasome inhibitor (a) has the following structure:

imagen1image 1

Dispositivos Médicos Medical devices

Las composiciones de acuerdo con la invención se pueden incluir en un dispositivo médico. En una realización, la composición se incorpora dentro de un dispositivo médico. En determinadas realizaciones, el dispositivo médico es un gel que comprende una matriz de polímero o una matriz cerámica y un inhibidor. Dicho polímero puede ser de origen natural o sintético. En otra realización, dichos geles sirven como un fármaco de liberación prolongada, un adhesivo, una sutura, una barrera o un sellador. The compositions according to the invention can be included in a medical device. In one embodiment, the composition is incorporated into a medical device. In certain embodiments, the medical device is a gel comprising a polymer matrix or a ceramic matrix and an inhibitor. Said polymer may be of natural or synthetic origin. In another embodiment, said gels serve as an extended release drug, an adhesive, a suture, a barrier or a sealant.

Otro aspecto se refiere a un dispositivo médico que comprende un sustrato que tiene una superficie sobre la cual se dispone una composición de la presente invención. En una realización, el inhibidor se dispone directamente sobre un dispositivo médico. En otra realización, también se dispone un revestimiento, comprendiendo el revestimiento una matriz de polímero o matriz cerámica con una composición de la presente invención dispersa o disuelta en la misma. Another aspect relates to a medical device comprising a substrate having a surface on which a composition of the present invention is arranged. In one embodiment, the inhibitor is disposed directly on a medical device. In another embodiment, a coating is also provided, the coating comprising a polymer matrix or ceramic matrix with a composition of the present invention dispersed or dissolved therein.

En una realización, el dispositivo médico es una endoprótesis vascular coronaria, vascular, periférica o biliar. Más particularmente, la endoprótesis vascular de la presente invención es una endoprótesis vascular expandible. Cuando se reviste con una matriz que contiene una composición de la invención, la matriz es flexible para adaptarse a los estados comprimido y expandido de una endoprótesis vascular expandible de este tipo. En otra realización, la endoprótesis vascular tiene al menos una parte que es insertable o implantable en el cuerpo de un paciente, en la que la parte tiene una superficie que está adaptada para exposición a tejido corporal y en la que al menos una parte de la superficie está revestida con una composición de la invención o un revestimiento que comprende una matriz que tiene una composición de la invención se dispersa o disuelve en la misma. Un ejemplo de una endoprótesis vascular adecuada se describe en la Patente de Estados Unidos Nº 4.733.665. In one embodiment, the medical device is a coronary, vascular, peripheral or biliary vascular stent. More particularly, the stent of the present invention is an expandable stent. When coated with a matrix containing a composition of the invention, the matrix is flexible to adapt to the compressed and expanded states of such an expandable vascular stent. In another embodiment, the stent has at least one part that is insertable or implantable in the body of a patient, in which the part has a surface that is adapted for exposure to body tissue and in which at least a part of the surface is coated with a composition of the invention or a coating comprising a matrix having a composition of the invention is dispersed or dissolved therein. An example of a suitable stent is described in US Patent No. 4,733,665.

En otra realización, el dispositivo médico es un implemento quirúrgico tal como un implante vascular, un dispositivo intraluminal, un sellador quirúrgico o un soporte vascular. Más particularmente, el dispositivo médico es un catéter, un puerto de acceso vascular implantable, un catéter venoso central, un catéter arterial, un injerto vascular, un balón de contrapulsación intraaórtico, una sutura, una bomba de ayuda ventricular, una barrera de elución de fármaco, un adhesivo, una envoltura vascular, un soporte extra/perivascular, un filtro sanguíneo o un filtro adaptado para despliegue en un vaso sanguíneo, revestido con una composición de la invención directamente o mediante una matriz que contiene una composición de la invención. In another embodiment, the medical device is a surgical implement such as a vascular implant, an intraluminal device, a surgical sealant or a vascular support. More particularly, the medical device is a catheter, an implantable vascular access port, a central venous catheter, an arterial catheter, a vascular graft, an intra-aortic counterpulsation balloon, a suture, a ventricular support pump, an elution barrier. drug, an adhesive, a vascular envelope, an extra / perivascular support, a blood filter or a filter adapted for deployment in a blood vessel, coated with a composition of the invention directly or by means of a matrix containing a composition of the invention.

En determinar realizaciones, el dispositivo médico intraluminal se reviste con una composición de la invención o un revestimiento que comprende una matriz biológicamente tolerada y una composición de la invención dispersa en el polímero, teniendo dicho dispositivo una superficie interior y una superficie exterior, que tiene el revestimiento aplicado a al menos una parte de la superficie interior, la superficie exterior o ambas. In determining embodiments, the intraluminal medical device is coated with a composition of the invention or a coating comprising a biologically tolerated matrix and a composition of the invention dispersed in the polymer, said device having an inner surface and an outer surface, which has the coating applied to at least a part of the inner surface, the outer surface or both.

En determinadas realizaciones, el dispositivo médico puede ser útil para prevenir reestenosis después de la angioplastia. El dispositivo médico también puede ser útil para el tratamiento de diversas enfermedades y afecciones proporcionando administración localizada de una composición de la invención. Tales enfermedades y afecciones incluyen reestenosis, inflamación, artritis reumatoide, lesión de tejido debido a inflamación, enfermedades híper proliferativas, psoriasis grave o artrítica, enfermedades degenerativas del músculo, enfermedades infecciosas crónicas, respuesta inmune anormal, afecciones que implican placas vulnerables, lesiones relacionadas con afecciones isquémicas e infección y proliferación viral. Los ejemplos de enfermedades y afecciones que están sujetos a tratamiento que incluyen los dispositivos médicos revestidos con fármacos de la presente invención incluyen aterosclerosis, síndrome coronario agudo, enfermedad de Alzheimer, cáncer, fiebre, desuso muscular (atrofia), denervación, oclusiones vasculares, apoplejía, infección por VIH, lesión del nervio, insuficiencia renal asociada con acidosis e insuficiencia hepática. Véase, por ejemplo, Goldberg, la Patente de Estados Unidos Nº 5.340.736. In certain embodiments, the medical device may be useful for preventing restenosis after angioplasty. The medical device may also be useful for the treatment of various diseases and conditions by providing localized administration of a composition of the invention. Such diseases and conditions include restenosis, inflammation, rheumatoid arthritis, tissue injury due to inflammation, hyperproliferative diseases, severe or arthritic psoriasis, degenerative muscle diseases, chronic infectious diseases, abnormal immune response, conditions involving vulnerable plaques, lesions related to Ischemic conditions and infection and viral proliferation. Examples of diseases and conditions that are subject to treatment including the medical devices coated with drugs of the present invention include atherosclerosis, acute coronary syndrome, Alzheimer's disease, cancer, fever, muscle disuse (atrophy), denervation, vascular occlusions, stroke. , HIV infection, nerve injury, renal failure associated with acidosis and liver failure. See, for example, Goldberg, U.S. Patent No. 5,340,736.

Como se usa en el presente documento, el término “inhibidor” tiene por objeto describir un compuesto que bloquea o reduce una actividad de una enzima (por ejemplo, inhibición de escisión proteolítica de sustratos de péptidos fluorogénicos convencionales tales como suc-LLVY-AMC, Box-LLR-AMC y Z-LLE-AMC, inhibición de diversas actividades catalíticas del proteasoma 20S). Un inhibidor puede actuar con inhibición competitiva, acompetitiva o no competitiva. Un inhibidor se puede unir reversiblemente o irreversiblemente y por lo tanto el término incluye compuestos que son sustratos suicidas de una enzima. Un inhibidor puede modificar uno o más sitios en o cerca del sitio activo de la enzima o el mismo puede provocar un cambio conformacional en otro sitio en la enzima. As used herein, the term "inhibitor" is intended to describe a compound that blocks or reduces an activity of an enzyme (eg, inhibition of proteolytic cleavage of conventional fluorogenic peptide substrates such as suc-LLVY-AMC, Box-LLR-AMC and Z-LLE-AMC, inhibition of various catalytic activities of the 20S proteasome). An inhibitor can act with competitive, non-competitive or competitive inhibition. An inhibitor can be reversibly or irreversibly bound and therefore the term includes compounds that are suicidal substrates of an enzyme. An inhibitor can modify one or more sites at or near the active site of the enzyme or it can cause a conformational change at another site in the enzyme.

Como se usa en el presente documento, el término “péptido” incluye no sólo el enlace amida convencional con sustituyentes α convencionales, sino peptidomiméticos utilizados comúnmente, otros enlaces modificados, cadenas laterales que no son de origen natural y modificaciones de cadena lateral, como se detalla en el presente documento. As used herein, the term "peptide" includes not only conventional amide bonding with conventional α substituents, but commonly used peptidomimetics, other modified bonds, non-naturally occurring side chains and side chain modifications, as details in this document.

Los términos “policiclilo” o “policíclico” se refieren a dos o más anillos (por ejemplo, cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos, heteroarilos y/o heterociclilos) en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos unidos, por ejemplo, los anillos son “anillos fusionados”. Cada uno de estos anillos del policiclo puede ser sustituido o no sustituido. The terms "polycyclyl" or "polycyclic" refer to two or more rings (for example, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkynyl, aryl, heteroaryl and / or heterocyclyl) in which two or more carbons are common to two joined rings, for example , the rings are "fused rings". Each of these polycycle rings can be substituted or unsubstituted.

La expresión “prácticamente insoluble” se refiere a inhibidores de proteasoma que generalmente tienen una solubilidad menor de 0,1 mg/ml en agua. La invención también abarca inhibidores de proteasoma que tienen una solubilidad en agua menor de 0,05 mg/ml e incluso menor de 0,01 mg/ml. The term "practically insoluble" refers to proteasome inhibitors that generally have a solubility of less than 0.1 mg / ml in water. The invention also encompasses proteasome inhibitors that have a water solubility of less than 0.05 mg / ml and even less than 0.01 mg / ml.

El término “prevenir” se reconoce en la técnica y cuando se usa en relación con una afección, tal como una recidiva local (por ejemplo, dolor), una enfermedad tal como cáncer, un síndrome complejo tal como insuficiencia cardíaca o cualquier otra afección médica, se comprende bien en la técnica e incluye la administración de una composición que reduce la frecuencia o retrasa la aparición de síntomas de una afección médica en un sujeto con relación a un sujeto que no recibe la composición. Por tanto, la prevención de cáncer incluye, por ejemplo, reducir el número de crecimientos cancerosos detectables en una población de pacientes que reciben un tratamiento profiláctico con relación a una población de control no tratada y/o retrasar la aparición de crecimientos cancerosos detectables en una población tratada frente a una población de control no tratada, por ejemplo, mediante una cantidad estadísticamente y/o clínicamente significativa. La prevención de una infección incluye, por ejemplo, reducir el número de diagnósticos de la infección en una población tratada frente a una población de control no tratada y/o retrasar la aparición de síntomas de la infección en una población tratada frente a una población de control no tratada. La prevención de dolor incluye, por ejemplo, reducir la magnitud de, o como alternativa retrasar, las sensaciones de dolor experimentadas por sujetos en una población tratada frente a una población de control no tratada. The term "prevent" is recognized in the art and when used in connection with a condition, such as a local recurrence (eg, pain), a disease such as cancer, a complex syndrome such as heart failure or any other medical condition. It is well understood in the art and includes the administration of a composition that reduces the frequency or delays the appearance of symptoms of a medical condition in a subject in relation to a subject that does not receive the composition. Therefore, cancer prevention includes, for example, reducing the number of detectable cancerous growths in a population of patients receiving prophylactic treatment in relation to an untreated control population and / or delaying the occurrence of detectable cancerous growths in a treated population versus an untreated control population, for example, by a statistically and / or clinically significant amount. The prevention of an infection includes, for example, reducing the number of diagnoses of the infection in a treated population versus an untreated control population and / or delaying the onset of infection symptoms in a treated population versus a population of untreated control. Pain prevention includes, for example, reducing the magnitude of, or alternatively delaying, pain sensations experienced by subjects in a treated population versus an untreated control population.

La expresión tratamiento “profiláctico o terapéutico” se reconoce en la técnica e incluye la administración al huésped de una The term "prophylactic or therapeutic" treatment is recognized in the art and includes administration to the host of a

o más de las composiciones objeto. Si se administra antes de la manifestación clínica de la afección indeseada (por ejemplo, enfermedad u otro estado indeseado del animal huésped) entonces el tratamiento es profiláctico, (es decir, el mismo protege al huésped frente al desarrollo de la afección indeseada), mientras que si se administra después de la manifestación de la afección indeseada, el tratamiento es terapéutico (es decir, tiene por objeto disminuir, mejorar o estabilizar la afección indeseada existente o los efectos secundarios de la misma). or more of the subject compositions. If it is administered before the clinical manifestation of the unwanted condition (for example, disease or other unwanted state of the host animal) then the treatment is prophylactic, (that is, it protects the host against the development of the unwanted condition), while that if it is administered after the manifestation of the unwanted condition, the treatment is therapeutic (that is, it is intended to decrease, improve or stabilize the existing unwanted condition or its side effects).

El término “proteasoma” como se usa en el presente documento tiene por objeto incluir inmunoproteasomas y proteasomas constitutivos. The term "proteasome" as used herein is intended to include immunoproteasomes and constitutive proteasomes.

Una “cantidad terapéuticamente eficaz” de un compuesto con respecto al procedimiento objeto de tratamiento, se refiere a una cantidad del compuesto o los compuestos en una preparación que, cuando se administra como parte de un régimen de dosificación deseado (a un mamífero, preferentemente un ser humano) alivia un síntoma, mejora una afección o ralentiza la aparición de afecciones patológicas de acuerdo con normas clínicamente aceptables para el trastorno o afección que se tiene que tratar o el fin cosmético, por ejemplo, a una proporción razonable de beneficio/riesgo aplicable a cualquier tratamiento médico. A "therapeutically effective amount" of a compound with respect to the process being treated, refers to an amount of the compound or compounds in a preparation which, when administered as part of a desired dosage regimen (to a mammal, preferably a human being) relieves a symptom, improves a condition or slows the onset of pathological conditions according to clinically acceptable standards for the disorder or condition to be treated or the cosmetic purpose, for example, at a reasonable rate of applicable benefit / risk to any medical treatment.

El término “tioéter” se refiere a un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, que tiene un resto de azufre unido al mismo. En realizaciones preferidas, el "tioéter" se representa mediante -S-alquilo. Los grupos tioéter representativos incluyen metiltio, etiltio y similares. The term "thioether" refers to an alkyl group, as defined above, which has a sulfur moiety attached thereto. In preferred embodiments, the "thioether" is represented by -S-alkyl. Representative thioether groups include methylthio, ethylthio and the like.

Como se usa en el presente documento, el término “tratar” o “tratamiento” incluye invertir, reducir o detener los síntomas, signos clínicos y patología subyacente de una afección de manera de mejorar o estabilizar la condición de un sujeto. As used herein, the term "treat" or "treatment" includes reversing, reducing or stopping the symptoms, clinical signs and underlying pathology of a condition in order to improve or stabilize the condition of a subject.

Usos de Composiciones Composition Uses

-Las consecuencias biológicas de la inhibición de proteasoma son numerosas. La inhibición de proteasoma se ha sugerido como una prevención y/o tratamiento de una multitud de enfermedades incluyendo, pero sin limitación, enfermedades proliferativas, enfermedades neurotóxicas/degenerativas, Alzheimer, afecciones isquémicas, inflamación, enfermedades autoinmunes, VIH, cánceres, rechazo de injerto de órganos, choque séptico, inhibición de presentación de antígenos, reducción de expresión génica viral, infecciones parasitarias, afecciones asociadas con acidosis, degeneración macular, afecciones pulmonares, enfermedades degenerativas del músculo, enfermedades fibróticas, enfermedades de crecimiento de huesos y pelo. Por lo tanto, las formulaciones farmacéuticas para compuestos muy potentes específicos de proteasoma, tales como la clase de moléculas de cetona epoxi, proporcionan un medio para administrar el fármaco al paciente y tratar estas afecciones. -The biological consequences of proteasome inhibition are numerous. Proteasome inhibition has been suggested as a prevention and / or treatment of a multitude of diseases including, but not limited to, proliferative diseases, neurotoxic / degenerative diseases, Alzheimer's, ischemic conditions, inflammation, autoimmune diseases, HIV, cancers, graft rejection of organs, septic shock, inhibition of antigen presentation, reduction of viral gene expression, parasitic infections, conditions associated with acidosis, macular degeneration, lung conditions, degenerative muscle diseases, fibrotic diseases, bone and hair growth diseases. Therefore, pharmaceutical formulations for very potent proteasome-specific compounds, such as the class of epoxy ketone molecules, provide a means to administer the drug to the patient and treat these conditions.

A nivel celular, la acumulación de proteínas poliubiquitinadas, los cambios morfológicos celulares y la apoptosis se han informado tras el tratamiento de células con diversos inhibidores de proteasoma. La inhibición de proteasoma también se ha sugerido como una posible estrategia terapéutica antitumoral. El hecho de que la epoxomicina se identificó inicialmente en una exploración para compuestos antitumorales valida el proteasoma como una diana quimioterapéutica antitumoral. Por consiguiente, estas composiciones son útiles para tratar el cáncer. La inhibición de proteasoma también se ha asociado con inhibición de activación de NF_κB y estabilización de niveles de p53. Por tanto, las composiciones de la invención también se pueden usar para inhibir la activación de NF-κH y estabilizar los niveles de p53 en cultivo celular. Ya que NF-κB es un regulador clave de la inflamación, es una diana atractiva para la intervención terapéutica antiinflamatoria. Por lo tanto, las composiciones de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento de afecciones asociadas con inflamación, incluyendo, aunque sin limitación, EPOC, psoriasis, bronquitis, enfisema y fibrosis quística. At the cellular level, the accumulation of polyubiquitinated proteins, cell morphological changes and apoptosis have been reported after treatment of cells with various proteasome inhibitors. Proteasome inhibition has also been suggested as a possible antitumor therapeutic strategy. The fact that epoxomycin was initially identified in a screening for antitumor compounds validates the proteasome as an antitumor chemotherapeutic target. Therefore, these compositions are useful for treating cancer. Proteasome inhibition has also been associated with inhibition of NF_κB activation and stabilization of p53 levels. Therefore, the compositions of the invention can also be used to inhibit NF-κH activation and stabilize p53 levels in cell culture. Since NF-κB is a key regulator of inflammation, it is an attractive target for anti-inflammatory therapeutic intervention. Therefore, the compositions of the present invention may be useful for the treatment of conditions associated with inflammation, including, but not limited to, COPD, psoriasis, bronchitis, emphysema and cystic fibrosis.

Las composiciones descritas se pueden usar para tratar afecciones mediadas directamente por la función proteolítica del proteasoma tales como desgaste muscular o mediadas indirectamente a través de proteínas que se procesan por el proteasoma tales como NF-κB. El proteasoma participa en la eliminación rápida y el procesamiento postraduccional de proteínas (por ejemplo, enzimas) implicadas en la regulación celular (por ejemplo, ciclo celular, transcripción génica y rutas metabólicas), comunicación intercelular y la respuesta inmune (por ejemplo, presentación de antígenos). Los ejemplos específicos descritos más adelante incluyen proteína β-amiloide y proteínas reguladoras tales como ciclinas y factor de transcripción NF-κB. The described compositions can be used to treat conditions directly mediated by proteasome proteolytic function such as muscle wasting or indirectly mediated through proteins that are processed by the proteasome such as NF-κB. The proteasome participates in the rapid elimination and post-translational processing of proteins (for example, enzymes) involved in cell regulation (for example, cell cycle, gene transcription and metabolic pathways), intercellular communication and immune response (e.g., presentation of antigens). Specific examples described below include β-amyloid protein and regulatory proteins such as cyclines and NF-κB transcription factor.

Las composiciones descritas en el presente documento se pueden usar para el tratamiento de enfermedades y afecciones neurodegenerativas, incluyendo, aunque sin limitación, apoplejía, daño isquémico al sistema nervioso, trauma neural (por ejemplo, daño cerebral percusivo, lesión de médula espinal y daño traumático al sistema nervioso), esclerosis múltiple y otras neuropatías mediadas por el sistema inmune (por ejemplo, síndrome de Guillain-Barre y sus variantes, neuropatía axonal motora aguda, polineuropatía desmielinizante inflamatoria aguda y Síndrome de Fisher), complejo de demencia VIH/SIDA, axonomía, neuropatía diabética, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, meningitis bacteriana, parasitaria, fúngica y viral, encefalitis, demencia vascular, demencia multiinfarto, demencia por cuerpos de Lewy, demencia de lóbulo frontal tal como enfermedad de Pick, demencias subcorticales (tales como Huntington o parálisis supranuclear progresiva), síndromes de atrofia cortical focal (tales como afasia primaria), demencias tóxicas metabólicas (tales como hipotiroidismo crónico o deficiencia de B12) y demencias provocadas por infecciones (tales como sífilis o meningitis crónica). The compositions described herein can be used for the treatment of neurodegenerative diseases and conditions, including, but not limited to, stroke, ischemic damage to the nervous system, neural trauma (eg, percussive brain damage, spinal cord injury and traumatic damage to the nervous system), multiple sclerosis and other neuropathies mediated by the immune system (for example, Guillain-Barre syndrome and its variants, acute motor axonal neuropathy, acute inflammatory demyelinating polyneuropathy and Fisher's syndrome), HIV / AIDS dementia complex, axonomy, diabetic neuropathy, Parkinson's disease, Huntington's disease, multiple sclerosis, bacterial, parasitic, fungal and viral meningitis, encephalitis, vascular dementia, multi-infarct dementia, Lewy body dementia, frontal lobe dementia such as Pick's disease, dementias subcorticals (such as Huntington or progre supranuclear paralysis siva), focal cortical atrophy syndromes (such as primary aphasia), metabolic toxic dementias (such as chronic hypothyroidism or B12 deficiency) and dementias caused by infections (such as syphilis or chronic meningitis).

La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por depósitos extracelulares de proteína β-amiloide (β-AP) en placas seniles y vasos cerebrales. β-AP es un fragmento peptídico de 39 a 42 aminoácidos obtenido a partir de un precursor de proteína amiloide (APP). Se conocen al menos tres isoformas de APP (695, 751 y 770 aminoácidos). El corte y empalme alternativo de ARNm genera las isoformas; el procesamiento normal influye en una parte de la secuencia de βAP, evitando de ese modo la generación de β-AP. Se cree que el procesamiento de proteína anormal mediante el proteasoma contribuye a la abundancia de β-AP en el cerebro con Alzheimer. La enzima de procesamiento de APP en ratas contiene aproximadamente diez subunidades diferentes (22 kDa-32 kDa). La subunidad de 25 kDa tiene una secuencia N-terminal de X-Gln-Asn-Pro-Met-X-Thr-Gly-Thr-Ser, que es idéntica a la subunidad β de macropaína humana (Kojima, S. y col., Fed Eur. Biochem. Soc., (1992) 304: 57-60). La enzima de procesamiento de APP escinde en el enlace Gln15-Lys16; en presencia del ión calcio, la enzima también escinde en el enlace Met-1—Asp1 y en los enlaces Asp1—Ala2 para liberar el dominio extracelular de β-AP. Alzheimer's disease is characterized by extracellular deposits of β-amyloid protein (β-AP) in senile plaques and cerebral vessels. β-AP is a peptide fragment of 39 to 42 amino acids obtained from an amyloid protein precursor (APP). At least three isoforms of APP (695, 751 and 770 amino acids) are known. Alternative mRNA splicing generates the isoforms; normal processing influences a part of the βAP sequence, thereby preventing the generation of β-AP. It is believed that abnormal protein processing by proteasome contributes to the abundance of β-AP in the brain with Alzheimer's. The APP processing enzyme in rats contains approximately ten different subunits (22 kDa-32 kDa). The 25 kDa subunit has an N-terminal sequence of X-Gln-Asn-Pro-Met-X-Thr-Gly-Thr-Ser, which is identical to the β subunit of human macropain (Kojima, S. et al. , Fed Eur. Biochem. Soc., (1992) 304: 57-60). The APP processing enzyme cleaves at the Gln15-Lys16 link; in the presence of the calcium ion, the enzyme also cleaves at the Met-1-Asp1 bond and at the Asp1-Ala2 bonds to release the extracellular domain of β-AP.

Por lo tanto, las composiciones de la invención son adecuadas para un procedimiento para tratamiento de enfermedad de Alzheimer, que incluye administrar a un sujeto una cantidad eficaz de una composición descrita en el presente documento. Tal tratamiento incluye reducir el índice de procesamiento de β-AP, reducir el índice de formación de placas de β-AP, reducir el índice de generación de β-AP y reducir los signos clínicos de enfermedad de Alzheimer. Therefore, the compositions of the invention are suitable for a method for treating Alzheimer's disease, which includes administering to an individual an effective amount of a composition described herein. Such treatment includes reducing the β-AP processing rate, reducing the β-AP plaque formation rate, reducing the β-AP generation rate and reducing the clinical signs of Alzheimer's disease.

Otras indicaciones para las composiciones de la invención se refieren a caquexia y enfermedades degenerativas del músculo. El proteasoma degrada muchas proteínas en reticulocitos en maduración y fibroblastos en crecimiento. En células privadas de insulina o suero, el índice de proteólisis casi se duplica. Inhibir el proteasoma reduce la proteólisis, reduciendo de ese modo tanto la pérdida de proteína muscular como la carga de nitrógeno en los riñones o hígado. Los inhibidores de la invención son útiles para tratar afecciones como cáncer, enfermedades infecciosas crónicas, fiebre, desuso muscular (atrofia) y denervación, lesión del nervio, ayuno, insuficiencia renal asociada con acidosis e insuficiencia hepática. Véase, por ejemplo, Goldberg, Patente de Estados Unidos Nº 5.340.736. Por lo tanto, las composiciones de la invención son útiles para: reducir el índice de degradación de proteína muscular en una célula; reducir el índice de degradación de proteína intracelular; reducir el índice de degradación de proteína p53 en una célula e inhibir el crecimiento de cánceres relacionados con p53. Cada uno de estos procedimientos incluye poner en contacto una célula (in vivo o in vitro, por ejemplo, un músculo en un sujeto) con una cantidad eficaz de una composición farmacéutica desvelada en el presente documento. Other indications for the compositions of the invention relate to cachexia and degenerative muscle diseases. The proteasome degrades many proteins in maturing reticulocytes and growing fibroblasts. In insulin or serum-deprived cells, the proteolysis rate almost doubles. Inhibiting the proteasome reduces proteolysis, thereby reducing both the loss of muscle protein and the nitrogen load in the kidneys or liver. The inhibitors of the invention are useful for treating conditions such as cancer, chronic infectious diseases, fever, muscle disuse (atrophy) and denervation, nerve injury, fasting, kidney failure associated with acidosis and liver failure. See, for example, Goldberg, U.S. Patent No. 5,340,736. Therefore, the compositions of the invention are useful for: reducing the rate of degradation of muscle protein in a cell; reduce the rate of degradation of intracellular protein; reduce the degradation rate of p53 protein in a cell and inhibit the growth of p53-related cancers. Each of these procedures includes contacting a cell (in vivo or in vitro, for example, a muscle in a subject) with an effective amount of a pharmaceutical composition disclosed herein.

La fibrosis es la formación excesiva y persistente de tejido cicatricial que se produce como resultado del crecimiento hiperproliferativo de fibroblastos y está asociada con la activación de la ruta de señalización de TGF-β. La fibrosis implica la deposición extensa de matriz extracelular y se puede producir dentro de prácticamente cualquier tejido o a través de varios tejidos diferentes. Normalmente, el nivel de proteína de señalización intracelular (Smad) que activa la transcripción de genes diana tras la estimulación de TGF-β está regulado por la actividad de proteasoma (Xu y col., 2000). Sin embargo, la degradación acelerada de los componentes de señalización de TGF-β se ha observado en cánceres y otras afecciones hiperproliferativas. Por tanto, las composiciones de la presente invención son útiles para un procedimiento para tratar afecciones hiperproliferativas tales como retinopatía diabética, degeneración macular, nefropatía diabética, gloméruloesclerosis, nefropatía de IgA, cirrosis, atresia biliar, insuficiencia cardiaca congestiva, esclerodermia, fibrosis inducida por radiación y fibrosis pulmonar (fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad vascular de colágeno, sarcoidosis, enfermedades pulmonares intersticiales y trastornos pulmonares extrínsecos). El tratamiento de víctimas de quemaduras con frecuencia se ve obstaculizado por la fibrosis, por tanto, una realización adicional de la presente invención es la administración tópica o sistémica de los inhibidores para tratar quemaduras. El cierre de heridas después de cirugía con frecuencia está asociado con cicatrices desfigurantes, que se pueden evitar mediante la inhibición de fibrosis. Por lo tanto, las composiciones de la presente invención son útiles para un procedimiento para la prevención o reducción de formación de cicatrices. Fibrosis is the excessive and persistent formation of scar tissue that occurs as a result of hyperproliferative growth of fibroblasts and is associated with the activation of the TGF-β signaling pathway. Fibrosis involves extensive deposition of extracellular matrix and can occur within virtually any tissue or through several different tissues. Normally, the level of intracellular signaling protein (Smad) that activates transcription of target genes after TGF-β stimulation is regulated by proteasome activity (Xu et al., 2000). However, accelerated degradation of TGF-β signaling components has been observed in cancers and other hyperproliferative conditions. Therefore, the compositions of the present invention are useful for a method of treating hyperproliferative conditions such as diabetic retinopathy, macular degeneration, diabetic nephropathy, glomerulosclerosis, IgA nephropathy, cirrhosis, biliary atresia, congestive heart failure, scleroderma, radiation-induced fibrosis and pulmonary fibrosis (idiopathic pulmonary fibrosis, collagen vascular disease, sarcoidosis, interstitial lung diseases and extrinsic pulmonary disorders). The treatment of burn victims is often hampered by fibrosis, therefore, a further embodiment of the present invention is the topical or systemic administration of the inhibitors for treating burns. Wound closure after surgery is often associated with disfiguring scars, which can be avoided by inhibiting fibrosis. Therefore, the compositions of the present invention are useful for a procedure for the prevention or reduction of scar formation.

Otra proteína procesada por el proteasoma es NF-κB, un miembro de la familia de proteína Rel. La familia Rel de proteínas activadoras transcripcionales se puede dividir en dos grupos. El primer grupo requiere el procesamiento proteolítico e incluye p50 (NF-κB1, 105 kDa) y p52 (NF-κ2, 100 kDa). El segundo grupo no requiere procesamiento proteolítico e incluye p65 (RelA, Rel (c-Rel) y RelB). Tanto los homo como los heterodímeros pueden estar formados por miembros de la familia Rel; NF-κB, por ejemplo, es un heterodímero p50-p65. Después de la fosforilación y ubiquitinación de IκB y p105, las dos proteínas se degradan y procesan, respectivamente, para producir NF-κB activa que se transporta del citoplasma al núcleo. La p105 ubiquitinada también se procesa mediante proteasomas purificados (Palombella y col., Cell (1994) 78: 773-785). La NF-κB activa forma un complejo potenciador estereoespecífico con otros activadores transcripcionales y, por ejemplo, HMG I(Y), que inducen expresión selectiva de un gen particular. Another protein processed by the proteasome is NF-κB, a member of the Rel protein family. The Rel family of transcriptional activating proteins can be divided into two groups. The first group requires proteolytic processing and includes p50 (NF-κB1, 105 kDa) and p52 (NF-κ2, 100 kDa). The second group does not require proteolytic processing and includes p65 (RelA, Rel (c-Rel) and RelB). Both homo and heterodimers can be formed by members of the Rel family; NF-κB, for example, is a p50-p65 heterodimer. After phosphorylation and ubiquitination of IκB and p105, the two proteins are degraded and processed, respectively, to produce active NF-κB that is transported from the cytoplasm to the nucleus. Ubiquitinated p105 is also processed by purified proteasomes (Palombella et al., Cell (1994) 78: 773-785). The active NF-κB forms a stereospecific enhancer complex with other transcriptional activators and, for example, HMG I (Y), which induce selective expression of a particular gene.

NF-κB regula los genes implicados en la respuesta inmune e inflamatoria y los acontecimientos mitóticos. Por ejemplo, NF-κB es necesaria para la expresión del gen κ de cadena ligera de inmunoglobulina, el gen de cadena α del receptor de IL-2, el gen del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I y varios genes de citoquina que codifican, por ejemplo, IL-2, IL-6, factor estimulante de colonias de granulocitos e IFN-β (Palombella y col., Cell (1994) 78: 773-785). Las composiciones de la invención son útiles para procedimientos para influir en el nivel de expresión de IL-2, MHC-I, IL-6, TNFα, IFN-β o cualquiera de las otras proteínas mencionadas anteriormente, incluyendo cada procedimiento administrar a un sujeto una cantidad eficaz de una composición desvelada en el presente documento. Los complejos que incluyen p50 son mediadores rápidos de respuestas inflamatorias e inmunes agudas (Thanos, d. y Maniatis, T., Cell (1995) 80: 529-532). NF-κB regulates the genes involved in the immune and inflammatory response and mitotic events. For example, NF-κB is necessary for the expression of the immunoglobulin light chain κ gene, the IL-2 receptor α chain gene, the major histocompatibility class I gene and several cytokine genes encoding, for example, IL-2, IL-6, granulocyte colony stimulating factor and IFN-β (Palombella et al., Cell (1994) 78: 773-785). The compositions of the invention are useful for methods of influencing the level of expression of IL-2, MHC-I, IL-6, TNFα, IFN-β or any of the other proteins mentioned above, including each method administered to a subject. an effective amount of a composition disclosed herein. The complexes that include p50 are rapid mediators of acute inflammatory and immune responses (Thanos, d. And Maniatis, T., Cell (1995) 80: 529-532).

NK-κB también participa en la expresión de los genes de adhesión celular que codifican E-selectina, P-Selectina, ICAM y VCAM-1 (Collins, T., Lab. Invest. (1993) 68: 499-508). Las composiciones de la invención son útiles para un procedimiento para inhibir la adhesión celular (por ejemplo, la adhesión celular mediada por E-selectina, P-Selectina, ICAM o VCAM-1), incluyendo poner en contacto una célula con (o administrar a un sujeto) una cantidad eficaz de una composición farmacéutica desvelada en el presente documento. NK-κB also participates in the expression of cell adhesion genes encoding E-selectin, P-Selectin, ICAM and VCAM-1 (Collins, T., Lab. Invest. (1993) 68: 499-508). The compositions of the invention are useful for a method for inhibiting cell adhesion (eg, cell adhesion mediated by E-selectin, P-Selectin, ICAM or VCAM-1), including contacting a cell with (or administering to a subject) an effective amount of a pharmaceutical composition disclosed herein.

Las lesiones de isquemia y reperfusión dan como resultado hipoxia, una afección en la que existe una deficiencia de oxígeno que llega a los tejidos del organismo. Esta afección provoca degradación aumentada de Iκ-Bα, dando como resultado, por lo tanto, la activación de NF-κB (Koong y col., 1994). Se ha demostrado que la gravedad de la lesión que se produce como resultado en la hipoxia se puede reducir con la administración de un inhibidor de proteasoma (Gao y col., 2000; Bao y col., 2001; Pye y col., 2003). Por lo tanto, las composiciones de la invención son útiles para un procedimiento para tratar una afección isquémica o lesión de reperfusión que comprende administrar a un sujeto que necesita tal tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto desvelado en el presente documento. Los ejemplos de tales afecciones o lesiones incluyen, aunque sin limitación, síndrome coronario agudo (placas vulnerables), enfermedad oclusiva arterial (oclusiones cardiaca, cerebral, arterial periférica y vascular), aterosclerosis (esclerosis coronaria, arteriopatía coronaria), infartos, insuficiencia cardiaca, pancreatitis, hipertrofia de miocardio, estenosis y reestenosis. Ischemia and reperfusion lesions result in hypoxia, a condition in which there is an oxygen deficiency that reaches the body's tissues. This condition causes increased degradation of Iκ-Bα, thus resulting in the activation of NF-κB (Koong et al., 1994). It has been shown that the severity of the lesion that results in hypoxia can be reduced with the administration of a proteasome inhibitor (Gao et al., 2000; Bao et al., 2001; Pye et al., 2003) . Therefore, the compositions of the invention are useful for a method of treating an ischemic condition or reperfusion injury comprising administering to an individual in need of such treatment an effective amount of a compound disclosed herein. Examples of such conditions or injuries include, but are not limited to, acute coronary syndrome (vulnerable plaques), arterial occlusive disease (cardiac, cerebral, peripheral and vascular arterial occlusions), atherosclerosis (coronary sclerosis, coronary artery disease), heart attacks, heart failure, pancreatitis, myocardial hypertrophy, stenosis and restenosis.

NF-κB también se une específicamente al potenciador/promotor de VIH. Cuando se compara con el Nef de mac239, la proteína reguladora de VIH Nef de pbj 14 difiere en dos aminoácidos en la región que controla la unión de proteína quinasa. Se cree que la proteína quinasa señaliza la fosforilación de IκB, desencadenando la degradación de IκB a través de la ruta de ubiquitina-proteasoma. Después de la degradación, NF-κB se libera en el núcleo, potenciando de esa manera la transcripción de VIH (Cohen, J., Science, (1995) 267: 960). Dos aplicaciones adecuadas de los compuestos de la invención son un procedimiento para inhibir o reducir infección por VIH en un sujeto y un procedimiento para disminuir el nivel de expresión génica viral, incluyendo cada procedimiento administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición desvelada en el presente documento. NF-κB also specifically binds to the HIV enhancer / promoter. When compared to mac239 Nef, the pbj 14 HIV Nef regulatory protein differs by two amino acids in the region that controls protein kinase binding. It is believed that protein kinase signals phosphorylation of IκB, triggering degradation of IκB through the ubiquitin-proteasome pathway. After degradation, NF-κB is released into the nucleus, thereby enhancing HIV transcription (Cohen, J., Science, (1995) 267: 960). Two suitable applications of the compounds of the invention are a method to inhibit or reduce HIV infection in a subject and a procedure to decrease the level of viral gene expression, each procedure including administering to the subject an effective amount of a composition disclosed herein. document.

La sobreproducción de citoquinas inducidas por lipopolisacárido (LPS) tales como TNFα se considera que es central a los procesos asociados con choque séptico. Adicionalmente, generalmente se acepta que la primera etapa en la activación de las células mediante LPS es la unión de LPS a receptores de membrana específicos. Las subunidades α y β del complejo de proteasoma 20S se han identificado como proteínas de unión a LPS, sugiriendo que la transducción de señal inducida por LPS puede ser una diana terapéutica importante en el tratamiento o prevención de sepsis (Qureshi, N. y col., J. Immun. (2003) 171: 1515-1525). Por lo tanto, las composiciones de la invención se pueden usar para la inhibición de TNF-α para prevenir y/o tratar choque séptico. Overproduction of lipopolysaccharide-induced cytokines (LPS) such as TNFα is considered to be central to the processes associated with septic shock. Additionally, it is generally accepted that the first stage in the activation of cells by LPS is the binding of LPS to specific membrane receptors. The α and β subunits of the 20S proteasome complex have been identified as LPS binding proteins, suggesting that LPS-induced signal transduction may be an important therapeutic target in the treatment or prevention of sepsis (Qureshi, N. et al. , J. Immun. (2003) 171: 1515-1525). Therefore, the compositions of the invention can be used for the inhibition of TNF-α to prevent and / or treat septic shock.

La proteólisis intracelular genera péptidos pequeños para presentación a linfocitos T para inducir respuestas inmunes mediadas por MHC de clase I. El sistema inmune selecciona las células autólogas que están infectadas viralmente o que han experimentado transformación oncogénica. Un uso adecuado para las composiciones es un procedimiento para inhibir la presentación de antígeno en una célula, incluyendo exponer la célula a una composición descrita en el presente documento. Un uso adecuado adicional para las composiciones es un procedimiento para suprimir el sistema inmune de un sujeto (por ejemplo, inhibir el rechazo de trasplante, alergia, asma), que incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición descrita en el presente documento. Las composiciones de la invención también se pueden usar para tratar enfermedades autoinmunes tales como lupus, artritis reumatoide, esclerosis múltiple y enfermedades inflamatorias intestinales tales como colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. Intracellular proteolysis generates small peptides for presentation to T lymphocytes to induce immune responses mediated by MHC class I. The immune system selects autologous cells that are virally infected or have undergone oncogenic transformation. A suitable use for the compositions is a method for inhibiting the presentation of antigen in a cell, including exposing the cell to a composition described herein. An additional suitable use for the compositions is a method of suppressing a subject's immune system (for example, inhibiting transplant rejection, allergy, asthma), which includes administering to the subject an effective amount of a composition described herein. The compositions of the invention can also be used to treat autoimmune diseases such as lupus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis and inflammatory bowel diseases such as ulcerative colitis and Crohn's disease.

Otro uso adecuado adicional para las composiciones es un procedimiento para alterar el repertorio de péptidos antigénicos producidos por el proteasoma u otros Ntn con actividad multicatalítica. Por ejemplo, si la actividad PGPH de proteasoma 20S se inhibe selectivamente, se producirá un conjunto diferente de péptidos antigénicos por el proteasoma y se presentarán en moléculas de MHC en la superficie de las células que los que se producirían y presentarían sin ninguna inhibición enzimática, o con, por ejemplo, inhibición selectiva de la actividad similar a quimiotripsina del proteasoma. Another additional suitable use for the compositions is a method for altering the repertoire of antigenic peptides produced by the proteasome or other Ntn with multicatalytic activity. For example, if the PGPH activity of 20S proteasome is selectively inhibited, a different set of antigenic peptides will be produced by the proteasome and will be presented in MHC molecules on the surface of the cells that would be produced and presented without any enzymatic inhibition, or with, for example, selective inhibition of the chymotrypsin-like activity of the proteasome.

Determinados inhibidores de proteasoma bloquean tanto la degradación como el procesamiento de NF-κB ubiquitinada in vitro e in vivo. Los inhibidores de proteasoma también bloquean la degradación de IκB-α y la activación de NF-κB (Palombella, y col. Cell (1994) 78: 773-785; y Traenckner, y col., EMBO J. (1994) 13: 5433-5441). Un uso adecuado para las composiciones de la invención es un procedimiento para inhibir la degradación de IκB-α, que incluye poner en contacto la célula con una composición descrita en el presente documento. Un uso adecuado adicional para las composiciones es un procedimiento para reducir el contenido celular de NF-κB en una célula, músculo, órgano o sujeto, que incluye poner en contacto la célula, músculo, órgano o sujeto con una composición descrita en el presente documento. Certain proteasome inhibitors block both degradation and processing of ubiquitinated NF-κB in vitro and in vivo. Proteasome inhibitors also block the degradation of IκB-α and the activation of NF-κB (Palombella, et al. Cell (1994) 78: 773-785; and Traenckner, et al., EMBO J. (1994) 13: 5433-5441). A suitable use for the compositions of the invention is a method for inhibiting the degradation of IκB-α, which includes contacting the cell with a composition described herein. A further suitable use for the compositions is a method for reducing the cellular content of NF-κB in a cell, muscle, organ or subject, which includes contacting the cell, muscle, organ or subject with a composition described herein. .

Otros factores de transcripción eucariotas que necesitan el procesamiento proteolítico incluyen el factor de transcripción general TFIIA, la proteína accesoria del virus del herpes simplex VP 16 (factor de célula huésped), la proteína del factor regulador de IFN 2 inducible por virus y la proteína de unión del elemento regulador de esterol unido a membrana 1. Other eukaryotic transcription factors that need proteolytic processing include the general TFIIA transcription factor, the herpes simplex virus VP 16 accessory protein (host cell factor), the virus-inducible IFN 2 regulatory factor protein and the protein binding of the membrane-bound sterol regulatory element 1.

Las composiciones de la invención son útiles para procedimientos para influir los ciclos celulares eucariotas dependientes de ciclina, incluyendo la exposición a una célula (in vitro o in vivo) a una composición desvelada en el presente documento. Las ciclinas son proteínas implicadas en el control del ciclo celular. El proteasoma participa en la degradación de ciclinas. Los ejemplos de ciclinas incluyen ciclinas mitóticas, ciclinas G1 y ciclina B. La degradación de ciclinas posibilita a una célula salir de una fase del ciclo celular (por ejemplo, mitosis) y entrar a otra (por ejemplo, división). Se cree que todas las ciclinas están asociadas con proteína quinasa p34cdc2 o quinasas relacionadas. La señal de dirección de proteólisis se localiza en los aminoácidos 42-RAALGNISEN-50 (caja de destrucción). Existe evidencia de que la ciclina se convierte en una forma vulnerable bajo una ubiquitina ligasa o que una ligasa específica de ciclina se activa durante la mitosis (Ciechanover, A., Cell, (1994) 79: 13-21). La inhibición del proteasoma inhibe la degradación de ciclina, y, por lo tanto, inhibe la proliferación celular, por ejemplo, en cánceres relacionados con ciclinas (Kumatori y col., proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. (1990) 87: 7071-7075). Un uso adecuado para las composiciones de la presente invención es un procedimiento para tratar una enfermedad proliferativa en un sujeto (por ejemplo, cáncer, psoriasis, o reestenosis), que incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición desvelada en el presente documento. La invención también permite su uso para tratar inflamación relacionada con ciclina en un sujeto, incluyendo la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición descrita en el presente documento. The compositions of the invention are useful for methods of influencing cyclin dependent eukaryotic cell cycles, including exposure to a cell (in vitro or in vivo) to a composition disclosed herein. Cyclines are proteins involved in the control of the cell cycle. The proteasome participates in the degradation of cyclines. Examples of cyclines include mitotic cyclines, G1 cyclines and cyclin B. Degradation of cyclines allows a cell to exit one phase of the cell cycle (for example, mitosis) and enter another (for example, division). It is believed that all cyclines are associated with protein kinase p34cdc2 or related kinases. The proteolysis direction signal is located in amino acids 42-RAALGNISEN-50 (destruction box). There is evidence that cyclin becomes a vulnerable form under a ubiquitin ligase or that a specific cyclin ligase is activated during mitosis (Ciechanover, A., Cell, (1994) 79: 13-21). Proteasome inhibition inhibits cyclin degradation, and therefore inhibits cell proliferation, for example, in cyclin-related cancers (Kumatori et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87: 7071-7075). A suitable use for the compositions of the present invention is a method of treating a proliferative disease in a subject (eg, cancer, psoriasis, or restenosis), which includes administering to the subject an effective amount of a composition disclosed herein. The invention also allows its use to treat cyclin-related inflammation in a subject, including administration to a subject of a therapeutically effective amount of a composition described herein.

Los usos adecuados adicionales son procedimientos para influir sobre la regulación dependiente de proteasoma de oncoproteínas y los procedimientos para tratar o inhibir el crecimiento del cáncer, incluyendo cada procedimiento exponer a una célula (in vivo, por ejemplo, en un sujeto o in vitro) a una composición desvelada en el presente documento. Las proteínas E6 obtenidas de HPV-16 y HPV-18 estimulan la conjugación dependiente de ATP y de ubiquitina y la degradación de p53 en lisados de reticulocitos brutos. El oncogén recesivo p53 se ha demostrado que se acumula a la temperatura no permisiva en una línea celular con una E1 termolábil mutada. Los niveles elevados de p53 pueden conducir a apoptosis. Los ejemplos de proto-oncoproteínas degradadas por el sistema de ubiquitina incluyen c-Mos, c-Fos y c-Jun. Las composiciones de la invención son útiles en un procedimiento para tratar apoptosis relacionada con p53, incluyendo administrar a un sujeto una cantidad eficaz de una composición desvelada en el presente documento. Additional suitable uses are procedures for influencing oncoprotein proteasome-dependent regulation and procedures for treating or inhibiting cancer growth, including each procedure exposing a cell (in vivo, for example, in a subject or in vitro) to a composition disclosed herein. The E6 proteins obtained from HPV-16 and HPV-18 stimulate ATP and ubiquitin-dependent conjugation and the degradation of p53 in crude reticulocyte lysates. The recessive p53 oncogene has been shown to accumulate at non-permissive temperature in a cell line with a mutated thermolabile E1. Elevated levels of p53 can lead to apoptosis. Examples of proto-oncoproteins degraded by the ubiquitin system include c-Mos, c-Fos and c-Jun. The compositions of the invention are useful in a method of treating apoptosis related to p53, including administering to an individual an effective amount of a composition disclosed herein.

Las composiciones desveladas son útiles para el tratamiento de una infección parasitaria, tal como infecciones causadas por parásitos protozoarios. El proteasoma de estos parásitos se considera que está implicado principalmente en la diferenciación celular y las actividades de replicación (Paugam y col., Trends Parasitol. 2003, 19(2): 55-59). Adicionalmente, se ha demostrado que las especies de entamoeba pierden la capacidad de enquistación cuando se exponen a inhibidores de proteasoma (Gonzales, y col., Arch. Med. Res. 1997, 28, Spec Nº: 139-140). Las composiciones desveladas son útiles para el tratamiento de infecciones parasitarias en seres humanos provocadas por un parásito protozoario seleccionado entre Plasmodium sps. (incluyendo P. falciparum, P. vivax, P. malariae y P. ovale, que provoca la malaria), Trypanosoma sps. (incluyendo T. cruzi, que provoca enfermedad de Chagas y T. brucei que provoca enfermedad del sueño africano), Leishmania sps. (que incluye L. amazonesis, L. donovani, L. infantum, L. mexicana, etc.), Pneumocystis carinii (un protozoario que se conoce que provoca la neumonía en pacientes de SIDA y otras inmunosupresiones), Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Entamoeba invadens y Giardia lamblia. En determinadas realizaciones, las composiciones desveladas son útiles para el tratamiento de infecciones parasitarias en animales y ganado provocadas por un parásito protozoario seleccionado entre Plasmodium hermani, Cryptosporidium sps., Echinococcus granulosus, Eimeria tenella, Sarcocystis neurona y Neurospora crassa. Otros compuestos útiles como inhibidores de proteasoma en el tratamiento de enfermedades parasitarias se describen en el documento WO 98/10779. The disclosed compositions are useful for the treatment of a parasitic infection, such as infections caused by protozoan parasites. The proteasome of these parasites is considered to be mainly involved in cell differentiation and replication activities (Paugam et al., Trends Parasitol. 2003, 19 (2): 55-59). Additionally, entamoeba species have been shown to lose encyst capacity when exposed to proteasome inhibitors (Gonzales, et al., Arch. Med. Res. 1997, 28, Spec No.: 139-140). The disclosed compositions are useful for the treatment of parasitic infections in humans caused by a protozoan parasite selected from Plasmodium sps. (including P. falciparum, P. vivax, P. malariae and P. ovale, which causes malaria), Trypanosoma sps. (including T. cruzi, which causes Chagas disease and T. brucei that causes African sleeping sickness), Leishmania sps. (which includes L. amazonesis, L. donovani, L. infantum, L. mexicana, etc.), Pneumocystis carinii (a protozoan known to cause pneumonia in AIDS patients and other immunosuppressions), Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Entamoeba invadens and Giardia lamblia. In certain embodiments, the disclosed compositions are useful for the treatment of parasitic infections in animals and livestock caused by a protozoan parasite selected from Plasmodium hermani, Cryptosporidium sps., Echinococcus granulosus, Eimeria tenella, Sarcocystis neurona and Neurospora crassa. Other compounds useful as proteasome inhibitors in the treatment of parasitic diseases are described in WO 98/10779.

Las composiciones desveladas inhiben la actividad del proteasoma irreversiblemente en un parásito. Tal inhibición irreversible ha demostrado inducir la interrupción de la actividad enzimática sin recuperación en glóbulos rojos y glóbulos blancos. La semivida larga de las células sanguíneas puede proporcionar protección prolongada con respecto a la terapia frente a exposiciones recurrentes a parásitos. La semivida prolongada de las células sanguíneas puede proporcionar protección prolongada con respecto a la quimioprofilaxis frente a infección futura. The disclosed compositions inhibit proteasome activity irreversibly in a parasite. Such irreversible inhibition has been shown to induce disruption of enzyme activity without recovery in red blood cells and white blood cells. The long half-life of blood cells can provide prolonged protection with respect to therapy against recurrent exposures to parasites. Prolonged half-life of blood cells may provide prolonged protection from chemoprophylaxis against future infection.

También se ha demostrado que los inhibidores que se unen al proteasoma 20S estimulan la formación de hueso en cultivos de órganos óseos. Adicionalmente, cuando tales inhibidores se han administrado sistémicamente a ratones, determinados inhibidores de proteasoma aumentaron los índices de volumen óseo y de formación ósea por encima del 70% (Garrett, I. R y col., J. Clin. Invest. (2003) 111: 1771-1782), sugiriendo de ese modo que la maquinaria ubiquitinaproteasoma regula la diferenciación de osteoblastos y la formación ósea. Por lo tanto, las composiciones desveladas pueden ser útiles en el tratamiento y/o prevención de enfermedades asociadas con pérdida ósea, tales como osteoporosis. It has also been shown that inhibitors that bind to the 20S proteasome stimulate bone formation in bone organ cultures. Additionally, when such inhibitors have been administered systemically to mice, certain proteasome inhibitors increased bone volume and bone formation rates above 70% (Garrett, I. R et al., J. Clin. Invest. (2003) 111: 1771-1782), thereby suggesting that the ubiquitin proteasome machinery regulates osteoblast differentiation and bone formation. Therefore, the disclosed compositions may be useful in the treatment and / or prevention of diseases associated with bone loss, such as osteoporosis.

El tejido óseo es una fuente excelente de factores que tienen la capacidad de estimular las células óseas. Por tanto, los extractos de tejido óseo bovino contienen no sólo proteínas estructurales que son responsables de mantener la integridad estructural del hueso, sino también factores de crecimiento óseo biológicamente activos que pueden estimular a las células óseas a proliferar. Entre estos últimos factores existe una familia de proteínas descrita recientemente denominadas proteínas morfogenéticas óseas (BMP). Todos estos factores de crecimiento tienen efectos sobre otros tipos de células, así como sobre las células óseas, incluyendo Hardy, M. H., y col., Trans Genet (1992) 8: 55-61 describen evidencias de que las proteínas morfogenéticas óseas (BMP) se expresan de forma diferencial en folículos pilosos durante el desarrollo. Harris, S. E., y col., J Bone Miner Res (1994) 9: 855-863 describen los efectos de TGF-β sobre la expresión de BMP-2 y otras sustancias en células óseas. La expresión de BMP-2 en folículos maduros también ocurre durante la maduración y después del periodo de proliferación celular (Hardy, y col. (1992, mencionado anteriormente)). Por tanto, los compuestos de la invención también pueden ser útiles para la estimulación del crecimiento de folículos pilosos. Bone tissue is an excellent source of factors that have the ability to stimulate bone cells. Therefore, bovine bone tissue extracts contain not only structural proteins that are responsible for maintaining the structural integrity of bone, but also biologically active bone growth factors that can stimulate bone cells to proliferate. Among these latter factors there is a family of recently described proteins called bone morphogenetic proteins (BMP). All of these growth factors have effects on other cell types, as well as on bone cells, including Hardy, MH, et al., Trans Genet (1992) 8: 55-61 describe evidence that bone morphogenetic proteins (BMP) They are differentially expressed in hair follicles during development. Harris, S. E., et al., J Bone Miner Res (1994) 9: 855-863 describe the effects of TGF-β on the expression of BMP-2 and other substances in bone cells. BMP-2 expression in mature follicles also occurs during maturation and after the period of cell proliferation (Hardy, et al. (1992, mentioned above)). Therefore, the compounds of the invention can also be useful for stimulating hair follicle growth.

Finalmente, las composiciones desveladas también son útiles como agentes de diagnóstico (por ejemplo, en kits de diagnóstico o para uso en laboratorios clínicos) para seleccionar proteínas (por ejemplo, enzimas, factores de transcripción) procesadas por las Ntn hidrolasas, incluyendo el proteasoma. Las composiciones desveladas también son útiles como reactivos de investigación para unirse específicamente a la subunidad X/MB1 o cadena α e inhibir las actividades proteolíticas asociadas con la misma. Por ejemplo, se puede determinar la actividad de (y los inhibidores específicos de) otras subunidades del proteasoma. Finally, the disclosed compositions are also useful as diagnostic agents (for example, in diagnostic kits or for use in clinical laboratories) to select proteins (for example, enzymes, transcription factors) processed by Ntn hydrolases, including the proteasome. The disclosed compositions are also useful as research reagents to specifically bind the X / MB1 subunit or α chain and inhibit proteolytic activities associated therewith. For example, the activity of (and specific inhibitors of) other proteasome subunits can be determined.

La mayoría de las proteínas celulares están sujetas a procedimientos proteolíticos durante la maduración o activación. Los inhibidores enzimáticos desvelados en el presente documento se pueden usar para determinar si un proceso o producción celular, del desarrollo o fisiológico está regulado por la actividad proteolítica de una Ntn hidrolasa particular. Un procedimiento de este tipo incluye obtener un organismo, una preparación de células intactas o un extracto celular; exponer el organismo, la preparación celular o el extracto de células a una composición desvelada en el presente documento; exponer el organismo, la preparación celular o el extracto celular expuesto al compuesto a una señal y supervisar el procedimiento o resultado. La selectividad elevada de los compuestos desvelados en el presente documento permite la eliminación rápida y precisa o la implicación de la Ntn (por ejemplo, el proteasoma 20S) en un proceso celular, de desarrollo o fisiológico dado. Most cellular proteins are subject to proteolytic procedures during maturation or activation. The enzymatic inhibitors disclosed herein can be used to determine whether a cellular, developmental or physiological process or production is regulated by the proteolytic activity of a particular Ntn hydrolase. Such a procedure includes obtaining an organism, an intact cell preparation or a cell extract; exposing the organism, the cell preparation or the cell extract to a composition disclosed herein; expose the organism, the cell preparation or the cell extract exposed to the compound to a signal and monitor the procedure or result. The high selectivity of the compounds disclosed herein allows rapid and precise elimination or involvement of Ntn (eg, the 20S proteasome) in a given cellular, developmental or physiological process.

Administración Administration

Las composiciones preparadas como se ha descrito en el presente documento se pueden administrar de diversas formas, dependiendo del trastorno que se tiene que tratar y de la edad, condición y peso corporal del paciente, como se conoce bien en la técnica. Por ejemplo, cuando las composiciones se tienen que administrar por vía oral, las mismas se pueden formular como comprimidos, cápsulas, gránulos, polvos o jarabes; o para administración parenteral, las mismas se pueden formular como inyecciones (intravenosa, intramuscular o subcutánea), preparaciones de infusión de goteo o supositorios. Para aplicación mediante la vía de la membrana mucosa oftálmica, las mismas se pueden formular como colirios o ungüentos oculares. Estas formulaciones se pueden preparar mediante medios convencionales junto con los procedimientos descritos en el presente documento y, si se desea, el ingrediente activo se puede mezclar con cualquier aditivo convencional o excipiente, tal como un aglutinante, un agente disgregante, un lubricante, un correctivo, un agente solubilizante, una ayuda de suspensión, un agente emulsificante o un agente de revestimiento adicionalmente a una ciclodextrina y a un tampón. Aunque la dosis variará dependiendo de los síntomas, edad y peso corporal del paciente, la naturaleza y gravedad del trastorno que se tiene que tratar o prevenir, la vía de administración y la forma del fármaco, en general, una dosis diaria de 0,01 a 2000 mg del compuesto se recomienda para un paciente humano adulto y ésta se puede administrar en una dosis única o en dosis divididas. La cantidad del ingrediente activo que se puede combinar con un material de vehículo para producir una forma de dosificación única generalmente será esa cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. En general, las composiciones pretendidas para uso parenteral (por ejemplo, inyección intravenosa o subcutánea) incluyen una ciclodextrina sustituida. Las composiciones administradas a través de otras vías, particularmente la vía oral, incluyen una ciclodextrina sustituida o no sustituida. Compositions prepared as described herein can be administered in various ways, depending on the disorder to be treated and the age, condition and body weight of the patient, as is well known in the art. For example, when the compositions have to be administered orally, they can be formulated as tablets, capsules, granules, powders or syrups; or for parenteral administration, they can be formulated as injections (intravenous, intramuscular or subcutaneous), drip infusion preparations or suppositories. For application via the ophthalmic mucous membrane pathway, they can be formulated as eye drops or eye ointments. These formulations may be prepared by conventional means together with the procedures described herein and, if desired, the active ingredient may be mixed with any conventional additive or excipient, such as a binder, a disintegrating agent, a lubricant, a corrective , a solubilizing agent, a suspension aid, an emulsifying agent or a coating agent in addition to a cyclodextrin and a buffer. Although the dose will vary depending on the symptoms, age and body weight of the patient, the nature and severity of the disorder to be treated or prevented, the route of administration and the form of the drug, in general, a daily dose of 0.01 at 2000 mg of the compound is recommended for an adult human patient and this can be administered in a single dose or in divided doses. The amount of the active ingredient that can be combined with a carrier material to produce a single dosage form will generally be that amount of the compound that produces a therapeutic effect. In general, compositions intended for parenteral use (for example, intravenous or subcutaneous injection) include a substituted cyclodextrin. Compositions administered through other routes, particularly the oral route, include a substituted or unsubstituted cyclodextrin.

El tiempo de administración exacto y/o la cantidad de la composición que producirá los resultados más eficaces en función de la eficacia del tratamiento de un paciente dado dependerá de la actividad, farmacocinética y biodisponibilidad de un compuesto particular, la condición fisiológica del paciente (incluyendo edad, sexo, tipo y fase de la enfermedad, condición física general, respuesta a una dosis dada y tipo de medicación), vía de administración, etc. Sin embargo, las directrices anteriores se pueden usar como la base para ajustar el tratamiento con más precisión, por ejemplo, determinar el tiempo y/o la cantidad óptimos de administración, lo cual necesitará no más que experimentación de rutina que consiste en supervisar al sujeto y ajustar la dosis y/o el tiempo. The exact administration time and / or the amount of the composition that will produce the most effective results depending on the efficacy of the treatment of a given patient will depend on the activity, pharmacokinetics and bioavailability of a particular compound, the physiological condition of the patient (including age, sex, type and phase of the disease, general physical condition, response to a given dose and type of medication), route of administration, etc. However, the above guidelines can be used as the basis for adjusting the treatment with more precision, for example, determining the optimal time and / or amount of administration, which will need no more than routine experimentation that involves monitoring the subject and adjust the dose and / or time.

La expresión “farmacéuticamente aceptable” se emplea en el presente documento para referirse a aquellos ligandos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico, adecuados para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica excesivos u otro problema o complicación, en proporción con una relación beneficio/riesgo razonable. The term "pharmaceutically acceptable" is used herein to refer to those ligands, materials, compositions and / or dosage forms that are, within the scope of medical criteria, suitable for use in contact with the tissues of human beings and animals without toxicity, irritation, excessive allergic response or other problem or complication, in proportion to a reasonable benefit / risk ratio.

La expresión “vehículo farmacéuticamente aceptable” como se usa en el presente documento significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como una carga, diluyente, excipiente, disolvente o material de encapsulación líquido o sólido. Cada vehículo tiene que ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no dañino para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz, almidón de patata y β-ciclodextrina sustituida o no sustituida; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetil celulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras de supositorio; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja;(10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua libre de pirógeno; (17) solución salina isotónica; (18) solución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) soluciones de tampón fosfato; y (21) otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas. En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente invención son no pirógenas, es decir, no inducen elevaciones de temperatura significativas cuando se administran a un paciente. The term "pharmaceutically acceptable carrier" as used herein means a pharmaceutically acceptable material, composition or carrier, such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, solvent or encapsulation material. Each vehicle must be "acceptable" in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not harmful to the patient. Some examples of materials that can serve as pharmaceutically acceptable carriers include: (1) sugars, such as lactose, glucose and sucrose; (2) starches, such as corn starch, potato starch and substituted or unsubstituted β-cyclodextrin; (3) cellulose and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; (4) tragacanth powder; (5) malt; (6) gelatin; (7) talc; (8) excipients, such as cocoa butter and suppository waxes; (9) oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; (10) glycols, such as propylene glycol; (11) polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; (12) esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; (13) agar; (14) buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; (15) alginic acid; (16) pyrogen free water; (17) isotonic saline solution; (18) Ringer's solution; (19) ethyl alcohol; (20) phosphate buffer solutions; and (21) other compatible non-toxic substances used in pharmaceutical formulations. In certain embodiments, the pharmaceutical compositions of the present invention are non-pyrogenic, that is, they do not induce significant temperature rises when administered to a patient.

La expresión “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a las sales de adición ácidas inorgánicas y orgánicas relativamente no tóxicas del inhibidor o los inhibidores. Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y la purificación final del inhibidor o inhibidores o sometiendo a reacción por separado un inhibidor o inhibidores purificados en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislando la sal formada de ese modo. Las sales representativas incluyen las sales de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato, laurilsulfonato y sales de aminoácido y similares. (Véase, por ejemplo, Berge y col. (1977) “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 66: 1-19.) The term "pharmaceutically acceptable salt" refers to the relatively non-toxic inorganic and organic acid addition salts of the inhibitor or inhibitors. These salts can be prepared in situ during the isolation and final purification of the inhibitor or inhibitors or by reacting separately an inhibitor or inhibitors purified in their free base form with a suitable organic or inorganic acid and isolating the salt thus formed. . Representative salts include the salts of hydrobromide, hydrochloride, sulfate, bisulfate, phosphate, nitrate, acetate, valerate, oleate, palmitate, stearate, laurate, benzoate, lactate, phosphate, tosylate, citrate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, naphthylate , mesylate, glucoheptonate, lactobionate, lauryl sulfonate and amino acid salts and the like. (See, for example, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19.)

En las composiciones también pueden estar presentes agentes humectantes, emulsificantes y lubricantes, tales como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como también agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de revestimiento, edulcorantes, saporíferos y agentes perfumantes, conservantes y antioxidantes. Wetting, emulsifying and lubricating agents, such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as coloring agents, release agents, coating agents, sweeteners, flavorings and perfuming agents, preservatives and antioxidants may also be present in the compositions.

Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, propil galato, alfa-tocoferol y similares; y (3) agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilenodiamina tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares. Examples of pharmaceutically acceptable antioxidants include: (1) water soluble antioxidants, such as ascorbic acid, cysteine hydrochloride, sodium bisulfate, sodium metabisulfite, sodium sulfite and the like; (2) oil-soluble antioxidants, such as ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), lecithin, propyl gallate, alpha-tocopherol and the like; and (3) metal chelating agents, such as citric acid, ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), sorbitol, tartaric acid, phosphoric acid and the like.

Las formulaciones adecuadas para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, obleas, píldoras, comprimidos, grageas (usando una base saborizada, habitualmente sacarosa y un goma arábiga o tragacanto), polvos, gránulos o como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite líquida o como un elixir o jarabe o como pastillas (usando una matriz inerte, tal como gelatina y glicerina o sacarosa y goma arábiga) y/o como enjuagues bucales y similares, cada uno conteniendo una cantidad predeterminada de un inhibidor o inhibidores como un ingrediente activo. Una composición también se puede administrar como un bolo, electuario o pasta. Formulations suitable for oral administration may be in the form of capsules, wafers, pills, tablets, dragees (using a flavored base, usually sucrose and an arabic gum or tragacanth), powders, granules or as a solution or suspension in an aqueous liquid or non-aqueous or as an oil-in-water emulsion or water in liquid oil or as an elixir or syrup or as tablets (using an inert matrix, such as gelatin and glycerin or sucrose and gum arabic) and / or as mouthwashes and similar, each containing a predetermined amount of an inhibitor or inhibitors as an active ingredient. A composition can also be administered as a bolus, electuary or paste.

En formas de dosificación sólida para administración oral (cápsulas, comprimidos, píldoras, grageas, polvos, gránulos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o cualquiera de los siguientes: (1) cargas o diluyentes, tales como almidones, ciclodextrinas, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o o ácido silícico; (2) aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetil celulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; (3) humectantes, tales como glicerol; (4) agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y carbonato de sodio; (5) agentes retardantes de solución, tales como parafina; (6) aceleradores de absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; (7) agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol acetílico y monoestearato de glicerol, (8) absorbentes, tales como caolín y arcilla de bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio y mezclas de los mismos; y In solid dosage forms for oral administration (capsules, tablets, pills, dragees, powders, granules and the like), the active ingredient is mixed with one or more pharmaceutically acceptable carriers, such as sodium citrate or dicalcium phosphate and / or any of the following: (1) fillers or diluents, such as starches, cyclodextrins, lactose, sucrose, glucose, mannitol and / or silicic acid; (2) binders, such as, for example, carboxymethyl cellulose, alginates, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sucrose and / or gum arabic; (3) humectants, such as glycerol; (4) disintegrating agents, such as agar-agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicates and sodium carbonate; (5) solution retarding agents, such as paraffin; (6) absorption accelerators, such as quaternary ammonium compounds; (7) wetting agents, such as, for example, acetyl alcohol and glycerol monostearate, (8) absorbents, such as kaolin and bentonite clay; (9) lubricants, such as talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, sodium lauryl sulfate and mixtures thereof; Y

(10) agentes colorantes. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes tampón. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como cargas en cápsulas de gelatina suave y dura rellenas usando tales excipientes como lactosa o azúcares de la leche, así como polietilenglicoles de peso molecular elevado y similares. (10) coloring agents. In the case of capsules, tablets and pills, the pharmaceutical compositions may also comprise buffering agents. Solid compositions of a similar type can also be used as fillers in soft and hard filled gelatin capsules using such excipients as lactose or milk sugars, as well as high molecular weight polyethylene glycols and the like.

Un comprimido se puede preparar mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos preparados por compresión se pueden preparar usando agente aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetil celulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, disgregante (por ejemplo, glicolato de almidón de sodio o carboximetilcelulosa de sodio reticulada), tensioactivo o de dispersión. Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del inhibidor o inhibidores en polvo humedecida con un diluyente líquido inerte. A tablet can be prepared by compression or molding, optionally with one or more accessory ingredients. Compressed tablets may be prepared using binder (for example, gelatin or hydroxypropylmethyl cellulose), lubricant, inert diluent, preservative, disintegrant (eg, sodium starch glycolate or crosslinked sodium carboxymethylcellulose), surfactant or dispersion. Molded tablets may be prepared by molding in a suitable machine a mixture of the inhibitor or powder inhibitors moistened with an inert liquid diluent.

Los comprimidos y otras formas de dosificación sólidas, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, pueden ser opcionalmente ranurados o prepararse con revestimientos y capas, tales como revestimientos entéricos y otros revestimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Los mismos también se pueden formular de forma de proporcionar liberación lenta o controlada del ingrediente activo en el mismo, usando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Los mismos se pueden esterilizar mediante, por ejemplo, filtración a través de un filtro de retención de bacterias o incorporando agentes esterilizantes en la forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver en agua estéril o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes del uso. Estas composiciones también pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de una composición que los mismos liberen el ingrediente o los ingredientes activos únicamente, o preferentemente, en una determinada parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de una manera retardada. Los ejemplos de composiciones para impregnar que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El ingrediente activo también puede estar en forma microencapsulada, si es apropiada, con uno o más de los excipientes descritos anteriormente. Tablets and other solid dosage forms, such as dragees, capsules, pills and granules, can be optionally grooved or prepared with coatings and layers, such as enteric coatings and other coatings well known in the art of pharmaceutical formulation. They can also be formulated to provide slow or controlled release of the active ingredient therein, using, for example, hydroxypropylmethyl cellulose in varying proportions to provide the desired release profile, other polymeric matrices, liposomes and / or microspheres. They can be sterilized by, for example, filtration through a bacteria retention filter or by incorporating sterilizing agents in the form of sterile solid compositions that can be dissolved in sterile water or some other sterile injectable medium immediately before use. These compositions may also optionally contain opacifying agents and may be of a composition that they release the active ingredient or ingredients only, or preferably, in a certain part of the gastrointestinal tract, optionally, in a delayed manner. Examples of impregnating compositions that can be used include polymeric substances and waxes. The active ingredient may also be in microencapsulated form, if appropriate, with one or more of the excipients described above.

Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Adicionalmente al ingrediente activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsificantes tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1-3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, de cacahuete, de maíz, de germen, de oliva, de ricino y de sésamo), glicerol, alcohol de tetrahidrofurilo, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos. Liquid dosage forms for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, microemulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs. In addition to the active ingredient, liquid dosage forms may contain inert diluents commonly used in the art, such as, for example, water or other solvents, solubilizing and emulsifying agents such as ethyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1-3-butylene glycol, oils (in particular, cottonseed, peanut, corn, germ, olive, castor and sesame oils), glycerol, tetrahydrofuryl alcohol , polyethylene glycols and esters of sorbitan fatty acids and mixtures thereof.

Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsificantes y de suspensión, edulcorantes, saporíferos, colorantes, perfumantes y agentes conservantes. In addition to inert diluents, oral compositions may also include adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweeteners, flavorings, dyes, perfumes and preservatives.

Las suspensiones, además del inhibidor o los inhibidores activos pueden contener agentes de suspensión tales, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilen sorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, aga-agar y tragacanto y mezclas de los mismos. The suspensions, in addition to the inhibitor or active inhibitors may contain suspending agents such as, for example, ethoxylated isostearyl alcohols, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, aga-agar and tragacanth and mixtures thereof .

Las formulaciones para administración rectal o vaginal se pueden presentar como un supositorio, que se puede preparar mezclando uno o más inhibidores con uno o más excipientes o vehículos no irritantes adecuados comprendiendo, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera de supositorio o un salicilato, que sea sólido a temperatura ambiente, pero líquido a la temperatura corporal y, por lo tanto, se fundirá en el recto o la cavidad vaginal y liberará el agente activo. Formulations for rectal or vaginal administration may be presented as a suppository, which may be prepared by mixing one or more inhibitors with one or more suitable non-irritating excipients or vehicles comprising, for example, cocoa butter, polyethylene glycol, a suppository wax or a Salicylate, which is solid at room temperature, but liquid at body temperature and, therefore, will melt in the rectum or vaginal cavity and release the active agent.

Las formulaciones que son adecuadas para administración vaginal también incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones para pulverización que contienen tales vehículos como se conoce en la técnica que es apropiado. Formulations that are suitable for vaginal administration also include pessaries, buffers, creams, gels, pastes, foams or spray formulations containing such vehicles as is known in the art that is appropriate.

Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un inhibidor o inhibidores incluyen polvos, pulverizaciones, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. El componente activo se puede mezclar en condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable y con cualquier conservante, tampón o propulsor que pueda ser necesario. Dosage forms for topical or transdermal administration of an inhibitor or inhibitors include powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, patches and inhalants. The active component may be mixed under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier and with any preservative, buffer or propellant that may be necessary.

Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además del inhibidor o inhibidores, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de cinc o mezclas de los mismos. Ointments, pastes, creams and gels may contain, in addition to the inhibitor or inhibitors, excipients, such as animal and vegetable fats, oils, waxes, paraffins, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicic acid, talc and zinc oxide or mixtures thereof.

Los polvos y pulverizaciones pueden contener, además de un inhibidor o inhibidores, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida o mezclas de estas sustancias. Las pulverizaciones adicionalmente pueden contener propulsores convencionales, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos no sustituidos volátiles, tales como butano y propano. Powders and sprays may contain, in addition to an inhibitor or inhibitors, excipients such as lactose, talc, silicic acid, aluminum hydroxide, calcium silicates and polyamide powder or mixtures of these substances. The sprays may additionally contain conventional propellants, such as chlorofluorohydrocarbons and volatile unsubstituted hydrocarbons, such as butane and propane.

El inhibidor o los inhibidores se pueden administrar de forma alternativa mediante aerosol. Esto se consigue preparando un aerosol acuoso, preparación liposomal o partículas sólidas que contengan la composición. Se podría usar una suspensión no acuosa (por ejemplo, propulsor de fluorocarbono). Los nebulizadores sónicos se prefieren debido a que los mismos minimizan la exposición del agente a la rotura, lo cual podría dar como resultado la degradación del compuesto. The inhibitor or inhibitors may alternatively be administered by aerosol. This is achieved by preparing an aqueous aerosol, liposomal preparation or solid particles containing the composition. A non-aqueous suspension could be used (eg, fluorocarbon propellant). Sonic nebulizers are preferred because they minimize the exposure of the agent to breakage, which could result in the degradation of the compound.

Normalmente, un aerosol acuoso se prepara formulando una solución acuosa o suspensión del agente junto con vehículos y estabilizantes farmacéuticamente aceptables convencionales. Los vehículos y estabilizantes varían con los requerimientos de la composición particular, pero típicamente incluyen tensioactivos no iónicos (Tweens, Pluronics, ésteres de sorbitán, lecitina, Cremóforos), co-disolventes farmacéuticamente aceptables tales como polietilenglicol, proteínas inocuas como albúmina sérica, ésteres de sorbitán, ácido oleico, lecitina, aminoácidos tales como glicina, tampones, sales, azúcares o alcoholes de azúcares. Los aerosoles generalmente se preparan a partir de soluciones isotónicas. Normally, an aqueous aerosol is prepared by formulating an aqueous solution or suspension of the agent together with conventional pharmaceutically acceptable carriers and stabilizers. Vehicles and stabilizers vary with the requirements of the particular composition, but typically include non-ionic surfactants (Tweens, Pluronics, sorbitan esters, lecithin, Cremophors), pharmaceutically acceptable co-solvents such as polyethylene glycol, harmless proteins such as serum albumin, esters of sorbitan, oleic acid, lecithin, amino acids such as glycine, buffers, salts, sugars or sugar alcohols. Aerosols are generally prepared from isotonic solutions.

Los parches transdérmicos tienen la ventaja añadida de proporcionar el suministro controlado de un inhibidor o inhibidores al organismo. Tales formas de dosificación se pueden preparar disolviendo o dispersando el agente en el medio apropiado. También se pueden usar potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del inhibidor o inhibidores a través de la piel. La velocidad de tal flujo se puede controlar proporcionando una membrana de control de velocidad o dispersando el inhibidor o inhibidores en una matriz polimérica o gel. Transdermal patches have the added advantage of providing controlled delivery of an inhibitor or inhibitors to the body. Such dosage forms can be prepared by dissolving or dispersing the agent in the appropriate medium. Absorption enhancers can also be used to increase the flow of the inhibitor or inhibitors through the skin. The speed of such a flow can be controlled by providing a speed control membrane or by dispersing the inhibitor or inhibitors in a polymer matrix or gel.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para administración parenteral comprenden péptido (a) en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones farmacéuticamente aceptables estériles acuosas o no acuosas, o polvos estériles que se pueden reconstituir en soluciones inyectables estériles o dispersiones inmediatamente antes del uso, que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, solutos que vuelven a la formulación isotónica con la sangre del receptor pretendido o agentes de suspensión o espesantes. Pharmaceutical compositions of the present invention suitable for parenteral administration comprise peptide (a) in combination with one or more sterile aqueous or non-aqueous pharmaceutically acceptable solutions, dispersions, suspensions or emulsions, or sterile powders that can be reconstituted into sterile injectable solutions or dispersions immediately before use, they may contain antioxidants, buffers, bacteriostats, solutes that return to the isotonic formulation with the intended recipient's blood or suspending agents or thickeners.

Los ejemplos de vehículos acuosos y no acuosos adecuados que se pueden emplear en las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares) y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de revestimiento, tales como lecitina, manteniendo el tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones y mediante el uso de tensioactivos. Examples of suitable aqueous and non-aqueous vehicles that may be employed in the pharmaceutical compositions of the present invention include water, ethanol, polyols (such as glycerol, propylene glycol, polyethylene glycol and the like) and suitable mixtures thereof, vegetable oils, such as Olive oil and injectable organic esters, such as ethyl oleate. The proper fluidity can be maintained, for example, by the use of coating materials, such as lecithin, by maintaining the required particle size in the case of dispersions and by the use of surfactants.

Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsificantes y agentes de dispersión. La prevención de la acción de microorganismos se puede asegurar mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorbutanol, ácido sórbico de fenol y similares. También puede ser deseable incluir agentes de ajuste de la tonicidad, tales como azúcares, cloruro de sodio y similares en las composiciones. Adicionalmente, se puede conseguir la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable mediante la inclusión de agentes que retardan la absorción tales como monoestearato de aluminio y gelatina. These compositions may also contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents. The prevention of the action of microorganisms can be ensured by the inclusion of various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorbutanol, phenolic sorbic acid and the like. It may also be desirable to include tonicity adjusting agents, such as sugars, sodium chloride and the like in the compositions. Additionally, prolonged absorption of the injectable pharmaceutical form can be achieved by the inclusion of agents that delay absorption such as aluminum monostearate and gelatin.

En algunos casos, a fin de prolongar el efecto de un fármaco, es deseable ralentizar la absorción del fármaco a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Por ejemplo, la absorción retardada de una forma de fármaco administrada por vía parenteral se consigue disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo oleoso. In some cases, in order to prolong the effect of a drug, it is desirable to slow the absorption of the drug from subcutaneous or intramuscular injection. For example, delayed absorption of a drug form administered parenterally is achieved by dissolving or suspending the drug in an oily vehicle.

Las formas de liberación prolongada inyectables se preparan formando matrices microencapsuladas de inhibidor o inhibidores en polímeros biodegradables, tales como poliláctido-poliglicólido. Dependiendo de la proporción de fármaco a polímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar el índice de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones inyectables de liberación prolongada también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal. Injectable extended release forms are prepared by forming microencapsulated inhibitor matrices or inhibitors in biodegradable polymers, such as polylactide-polyglycolide. Depending on the proportion of drug to polymer and the nature of the particular polymer employed, the drug release rate can be controlled. Examples of other biodegradable polymers include poly (orthoesters) and poly (anhydrides). Injectable extended-release formulations are also prepared by trapping the drug in liposomes or microemulsions that are compatible with body tissue.

Las preparaciones de agentes se pueden proporcionar por vía oral, por vía parenteral, por vía tópica o por vía rectal. Las mismas, por supuesto, se proporcionan mediante formas adecuadas para cada vía de administración. Por ejemplo, las mismas se administran en forma de comprimidos o cápsulas, mediante inyección, inhalación, loción ocular, ungüento, supositorio, infusión; por vía tópica mediante loción o ungüento y por vía rectal mediante supositorios. Se prefiere la administración oral. Agent preparations can be provided orally, parenterally, topically or rectally. They, of course, are provided by suitable forms for each route of administration. For example, they are administered in the form of tablets or capsules, by injection, inhalation, eye lotion, ointment, suppository, infusion; topically by lotion or ointment and rectally by suppositories. Oral administration is preferred.

Las expresiones “administración parenteral” y “administrado por vía parenteral” como se usan en el presente documento se refieren a modos de administración diferentes a la administración enteral y tópica, habitualmente mediante inyección e incluyen, sin limitación, inyección intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal e infusión. The terms "parenteral administration" and "parenterally administered" as used herein refer to modes of administration other than enteral and topical administration, usually by injection and include, without limitation, intravenous, intramuscular, intraarterial injection, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal and intrasternal and infusion.

Las expresiones “administración sistémica”, “administrado por vía sistémica”, “administración periférica” y “administrado por vía periférica” como se usan en el presente documento significan la administración de un ligando, fármaco u otro material de manera diferente a directamente en el sistema nervioso central, de forma que el mismo entra en el sistema del paciente y, por tanto, se somete al metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo, administración subcutánea. The terms "systemic administration", "systemically administered", "peripheral administration" and "peripherally administered" as used herein mean the administration of a ligand, drug or other material differently than directly in the central nervous system, so that it enters the patient's system and, therefore, undergoes metabolism and other similar processes, for example, subcutaneous administration.

El inhibidor se puede administrar a seres humanos y otros animales para terapia mediante cualquier vía adecuada de administración, incluyendo por vía oral, por vía nasal, como mediante, por ejemplo, una pulverización, por vía rectal, por vía intravaginal, por vía parenteral, por vía intracisternal y por vía tópica, como por medio de polvos, ungüentos o gotas, incluyendo por vía bucal y por vía sublingual. The inhibitor can be administered to humans and other animals for therapy by any suitable route of administration, including orally, nasally, such as, for example, a spray, rectally, intravaginally, parenterally, intracisternally and topically, such as through powders, ointments or drops, including orally and sublingually.

Independientemente de la vía de administración seleccionada, el inhibidor, que se puede usar en una forma hidratada adecuada y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables mediante procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la materia. Regardless of the route of administration selected, the inhibitor, which can be used in a suitable hydrated form and / or the pharmaceutical compositions of the present invention, are formulated in pharmaceutically acceptable dosage forms by conventional procedures known to those skilled in the art.

Los niveles de dosis reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden variar de forma de obtener una cantidad del ingrediente activo que sea eficaz para conseguir la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición y modo de administración particulares, sin ser tóxico para el paciente. The actual dose levels of the active ingredients in the pharmaceutical compositions of the present invention can be varied so as to obtain an amount of the active ingredient that is effective in achieving the desired therapeutic response for a particular patient, composition and mode of administration, without Be toxic to the patient.

La concentración de un compuesto desvelado en una mezcla farmacéuticamente aceptable variará dependiendo de varios factores, incluyendo la dosis del compuesto que se tiene que administrar, las características farmacocinéticas del compuesto o los compuestos empleados y la vía de administración. En general, las composiciones de la presente invención se pueden proporcionar en solución acuosa que contiene aproximadamente del 0,1-10% p/v de un compuesto desvelado en el presente documento, entre otras sustancias, para administración parenteral. Los intervalos de dosis típicos son de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día, proporcionados en 1-4 dosis divididas. Cada dosis dividida puede contener el mismo compuesto o compuestos diferentes de la invención. La dosis será una cantidad eficaz dependiendo de varios factores que incluyen la salud general de un paciente y la formulación y la vía de administración del compuesto o los compuestos seleccionados. The concentration of a disclosed compound in a pharmaceutically acceptable mixture will vary depending on several factors, including the dose of the compound to be administered, the pharmacokinetic characteristics of the compound or compounds employed and the route of administration. In general, the compositions of the present invention can be provided in aqueous solution containing approximately 0.1-10% w / v of a compound disclosed herein, among other substances, for parenteral administration. Typical dose ranges are from about 0.01 to about 50 mg / kg body weight per day, provided in 1-4 divided doses. Each divided dose may contain the same compound or different compounds of the invention. The dose will be an effective amount depending on several factors that include the general health of a patient and the formulation and route of administration of the selected compound or compounds.

En una realización preferida, el inhibidor de proteasoma es un polvo seco antes de su adición a la solución de ciclodextrina. El procedimiento para disolver el fármaco en la solución de ciclodextrina se puede potenciar mezclando, revolviendo o agitando. En la realización más preferida, el disolvente en la solución de ciclodextrina es “agua para inyección” (API), lo que significa que está purificada, es estéril y baja en endotoxina. Esta formulación es adecuada para administración tanto parenteral como oral. In a preferred embodiment, the proteasome inhibitor is a dry powder before being added to the cyclodextrin solution. The process for dissolving the drug in the cyclodextrin solution can be enhanced by mixing, stirring or stirring. In the most preferred embodiment, the solvent in the cyclodextrin solution is "water for injection" (API), which means that it is purified, sterile and low in endotoxin. This formulation is suitable for both parenteral and oral administration.

En otra realización preferida, la composición farmacéutica es una solución oral o una solución parenteral. Otra realización es una preparación liofilizada que se puede reconstituir antes de la administración. Como un sólido, esta formulación puede incluir también comprimidos, cápsulas o polvos. In another preferred embodiment, the pharmaceutical composition is an oral solution or a parenteral solution. Another embodiment is a lyophilized preparation that can be reconstituted before administration. As a solid, this formulation may also include tablets, capsules or powders.

Otro aspecto proporciona una terapia conjunta en la que se administran uno o más agentes terapéuticos diferentes con la composición de inhibidor del proteasoma. Tal tratamiento conjunto se puede conseguir por medio de la dosificación simultánea, secuencial o separada de los componentes individuales del tratamiento. Another aspect provides a joint therapy in which one or more different therapeutic agents are administered with the proteasome inhibitor composition. Such joint treatment can be achieved by means of simultaneous, sequential or separate dosing of the individual components of the treatment.

En determinadas realizaciones, una composición de la invención se administra de forma conjunta con uno o más inhibidores de proteasoma diferentes. In certain embodiments, a composition of the invention is co-administered with one or more different proteasome inhibitors.

En determinadas realizaciones, una composición se administra de forma conjunta con un quimioterapéutico. Los quimioterapéuticos adecuados pueden incluir, productos naturales tales como alcaloides de vinca (es decir, vinblastina, vincristina y vinorelbina), paclitaxel, epidipodofilotoxinas (es decir, etopósido, tenipósido), antibióticos (dactinomicina (actinomicina D) daunorrubicina, doxorrubicina e idarrubicina), antraciclinas, mitoxantrona, bleomicinas, plicamicina (mitramicina) y mitomicina, enzimas (L-asparaginasa que metaboliza sistémicamente L-asparagina y priva las células que no tienen la capacidad de sintetizar su propia asparagina); agentes antiplaquetarios; agentes alquilantes antiproliferativos/antimitóticos tales como mostazas de nitrógeno (mecloretaminas, ciclosfosfamida y análogos, melfalan, clorambucil), etileniminas y metilmelaminas (hexametilmelamina y tiotepa), alquil sulfonatos (busulfan), nitrosoureas (carmustina (BCNU) y análogos, estreptozocina), trazenos dacarbazinina (DTIC), antimetabolitos antiproliferativos/antimitóticos tales como análogos de ácido fólico (metotrexato), análogos de pirimidina ((fluorouracilo, floxuridina y citarabina), análogos de purina e inhibidores relacionados (mercaptopurina, tioguanina, pentostatina y 2clorodesoxiadenosina); inhibidores de aromatasa (anastrozol, exemestano y letrozol); y complejos de coordinación de platino (cisplatino, carboplatino), procarbazina, hidroxiúrea, mitotano, aminoglutetimida; inhibidores de histona desacetilasa (HDAC) (tricostatina, butirato de sodio, apicidan, ácido hidroxámico suberoil anilida); hormonas (es decir, estrógeno) y agonistas de hormonas tales como agonistas de la hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH) (goserelina, leuprolide y triptorelina). Otros agentes quimioterapéuticos pueden incluir mecloretamina, camptotecina, ifosfamida, tamoxifeno, raloxifeno, gemcitabina, navelbina o cualquier análogo o variante derivada de los anteriores. In certain embodiments, a composition is co-administered with a chemotherapeutic agent. Suitable chemotherapeutics may include, natural products such as vinca alkaloids (ie vinblastine, vincristine, and vinorelbine), paclitaxel, epidipodophyllotoxins (ie etoposide, teniposide), antibiotics (dactinomycin (actinomycin D) daunorubicin, doxorubicin and idarubicin), anthracyclines, mitoxantrone, bleomycins, plicamycin (mitramycin) and mitomycin, enzymes (L-asparaginase that systemically metabolizes L-asparagine and deprives cells that do not have the ability to synthesize their own asparagine); antiplatelet agents; antiproliferative / antimitotic alkylating agents such as nitrogen mustards (mechlorethamines, cyclophosphamide and the like, melphalan, chlorambucil), ethylenimines and methylmelamines (hexamethylmelamine and thiotepa), alkyl sulphonates (busulfan), nitrosoureas (carmustine, streptograms, BCNUzeng) dacarbazinine (DTIC), antiproliferative / antimitotic antimetabolites such as folic acid analogs (methotrexate), pyrimidine analogs ((fluorouracil, floxuridine and cytarabine), purine analogs and related inhibitors (mercaptopurine, thioguanine, pentostadiaceous and 2-pentoacetatin inhibitors); (anastrozole, exemestane and letrozole); and coordination complexes of platinum (cisplatin, carboplatin), procarbazine, hydroxyurea, mitotane, aminoglutethimide; histone deacetylase (HDAC) inhibitors (tricostatin, sodium butyrate, apicide, suberoyl anhydroxide); hormones (i.e. estrogen) and hormone agonists such It's like luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) agonists (goserelin, leuprolide and triptorelin). Other chemotherapeutic agents may include mechlorethamine, camptothecin, ifosfamide, tamoxifen, raloxifene, gemcitabine, navelbine or any analogue or variant derived from the foregoing.

En determinadas realizaciones, una composición de la invención se puede administrar en conjunto con una citoquina. Las citoquinas incluyen, pero sin limitación, Interferón-γ -α y-β, Interleuquinas 1-8, 10 y 12, factor Estimulante de Colonias de Monocitos y Granulocitos (GM-CSF), TNF-α y-β y TGF-β. In certain embodiments, a composition of the invention can be administered in conjunction with a cytokine. Cytokines include, but are not limited to, Interferon-γ-α and -β, Interleukins 1-8, 10 and 12, Monocyte and Granulocyte Colon Stimulating Factor (GM-CSF), TNF-α and -β and TGF-β .

En determinadas realizaciones, una composición de la invención se puede administrar de forma conjunta con un esteroide. Los esteroides adecuados pueden incluir, aunque sin limitación, 21-aceoxipregnenolona, alclometasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, cloroprednisona, clobetasol, clocortolona, cloprednol, corticosterona, cortisona, cortivazol, deflazacort, desonida, desoximetasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difuprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronida, flumetasona, flunisolida, fluocinolona acetonida, fluocinonida, butil fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandrenolida, propionato de fluticasona, formocortal, halcinonida, propionato de halobetasol, halometasona, hidrocortisona, tabonato de loteprednol, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, 25-dietilaminoacetato de prednisolona, prednisolona fosfato de sodio, prednisona, prednival, prednilideno, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, acetonide triamcinolona, benetonide triamcinolona, hexacetonide triamcinolona y sales y/o derivados de los mismos. In certain embodiments, a composition of the invention can be co-administered with a steroid. Suitable steroids may include, but are not limited to, 21-aceoxipregnenolone, alclomethasone, algestone, amcinonide, beclomethasone, betamethasone, budesonide, chloroprednisone, clobetasol, clocortolone, cloprednol, corticosterone, cortisone, cortivazole, deflazaathoxamone, delazaathoxamone, delazaathoxamone, delazaathoxamone, delazaathoxamone, diflucortolone, difuprednato, enoxolone, fluazacort, flucloronide, flumethasone, flunisolide, fluocinolone acetonide, fluocinonide, fluocortin butyl, fluocortolone, fluorometholone acetate, fluperolone, fluprednidene acetate, fluprednisolone, flurandrenolide, fluticasone propionate, formocortal, halcinonide, halobetasol propionate, halomethasone, hydrocortisone, loteprednol tabonate, mazipredone, medrisone, meprednisone, methylprednisolone, mometasone furoate, parametasone, prednicarbate, prednisolone, 25-diethylaminoacetate prednisolone, prednisolone sodium phosphate, prednisoneol, prednisoneol, prednisoneol, prisonazolone onide triamcinolone, benetonide triamcinolone, hexacetonide triamcinolone and salts and / or derivatives thereof.

En determinadas realizaciones, una composición de la presente invención se puede administrar de forma conjunta con un agente inmunoterapéutico. Los agentes inmunoterapéuticos pueden incluir, pero sin limitación, moduladores de MDR (verapamil, valspordar, biricodar, tariquidar, laniquidar), ciclosporina, talidomida y anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales pueden ser desnudos o conjugados tales como rituximab, tositumomab, alemtuzumab, epratuzumab, ibritumomab tiuxetan, gemtuzumab ozogamicin, bevacizumab, cetuximab, erlotinib y trastuzumab. In certain embodiments, a composition of the present invention can be co-administered with an immunotherapeutic agent. Immunotherapeutic agents may include, but are not limited to, MDR modulators (verapamil, waltzdardar, biricodar, tariquidar, laniquidar), cyclosporine, thalidomide and monoclonal antibodies. Monoclonal antibodies can be naked or conjugated such as rituximab, tositumomab, alemtuzumab, epratuzumab, ibritumomab tiuxetan, gemtuzumab ozogamicin, bevacizumab, cetuximab, erlotinib and trastuzumab.

Procedimientos de Preparación Preparation Procedures

Otro aspecto de la presente invención implica el procedimiento de preparar una composición farmacéutica de un inhibidor de proteasoma. El procedimiento comprende determinar el volumen deseado, preparar una solución de ciclodextrina que comprende la ciclodextrina y el tampón ácido en del 20% al 90% (por ejemplo, el 75%) del volumen final deseado de H2O, suspender la cantidad apropiada del inhibidor de proteasoma en la solución de ciclodextrina y agitar hasta disolución, ajustar el pH (por ejemplo, con una solución de base, preferentemente una solución de hidróxido de sodio) y después añadir suficiente diluyente acuoso para conseguir el volumen final deseado. Another aspect of the present invention involves the process of preparing a pharmaceutical composition of a proteasome inhibitor. The process comprises determining the desired volume, preparing a cyclodextrin solution comprising the cyclodextrin and the acid buffer in 20% to 90% (eg, 75%) of the desired final volume of H2O, suspending the appropriate amount of the inhibitor of Proteasome in the cyclodextrin solution and stir until dissolved, adjust the pH (for example, with a base solution, preferably a sodium hydroxide solution) and then add enough aqueous diluent to achieve the desired final volume.

Un aspecto adicional de la presente invención implica el procedimiento de preparar una composición farmacéutica de un inhibidor de proteasoma. El procedimiento determinar el volumen deseado, preparar una solución de ciclodextrina que comprende la ciclodextrina y el tampón base en el 20% al 90% (por ejemplo, el 75%) del volumen final deseado de H2O, suspender la cantidad apropiada del inhibidor de proteasoma en la solución de ciclodextrina y agitar hasta disolución, ajustar el pH (por ejemplo, con una solución ácida) y después añadir suficiente diluyente acuoso para conseguir el volumen final deseado. A further aspect of the present invention involves the process of preparing a pharmaceutical composition of a proteasome inhibitor. The method of determining the desired volume, preparing a cyclodextrin solution comprising the cyclodextrin and the base buffer in 20% to 90% (for example, 75%) of the desired final volume of H2O, suspending the appropriate amount of the proteasome inhibitor in the cyclodextrin solution and stir until dissolved, adjust the pH (for example, with an acid solution) and then add enough aqueous diluent to achieve the desired final volume.

Un procedimiento alternativo para preparar una composición farmacéutica de la invención implica disolver un inhibidor de proteasoma en un disolvente apropiado (por ejemplo, un alcohol tal como etanol), disolver una ciclodextrina en un disolvente miscible, preferentemente el mismo, y mezclar los dos juntos. El disolvente después se retira, tal como mediante evaporación rotatoria, secado por pulverización o liofilización, para obtener un sólido. Después el sólido se disuelve en diluyente acuoso apropiado y después el pH se ajusta, si es necesario. An alternative method for preparing a pharmaceutical composition of the invention involves dissolving a proteasome inhibitor in an appropriate solvent (for example, an alcohol such as ethanol), dissolving a cyclodextrin in a miscible solvent, preferably the same, and mixing the two together. The solvent is then removed, such as by rotary evaporation, spray drying or lyophilization, to obtain a solid. The solid is then dissolved in an appropriate aqueous diluent and then the pH is adjusted, if necessary.

Puede haber un periodo entre la obtención del sólido y la redisolución del mismo en tampón acuoso. En un ejemplo, el sólido se esteriliza (por ejemplo, para permitir el almacenamiento y/o el envío, generalmente en un recipiente sin contaminantes y a prueba de contaminantes) y se disuelve inmediatamente antes del uso. There may be a period between obtaining the solid and its redisolution in aqueous buffer. In one example, the solid is sterilized (for example, to allow storage and / or shipping, generally in a container without contaminants and contaminant-proof) and dissolves immediately before use.

Las composiciones obtenidas anteriormente típicamente se esterilizan antes del uso, a menos que la preparación implique una etapa de esterilización y no ocurra contaminación antes del uso. The compositions obtained above are typically sterilized before use, unless the preparation involves a sterilization step and no contamination occurs before use.

El inhibidor de proteasoma disuelto en tampón acuosos, preferentemente a continuación de la esterilización, opcionalmente se puede liofilizar (en un recipiente a prueba de y sin contaminantes) y reconstituir en un diluyente acuoso apropiado inmediatamente antes del uso. Siendo el diluyente preferido agua para inyección (API). The proteasome inhibitor dissolved in aqueous buffers, preferably after sterilization, can optionally be lyophilized (in a container free of and without contaminants) and reconstituted in an appropriate aqueous diluent immediately before use. The preferred diluent being water for injection (API).

Exemplification

Ejemplo 1 Example 1

Formulación de péptido (a)/SBECD Formulation of peptide (a) / SBECD

2 mg/ml de péptido (a) se formularon en solución acuosa que contenía el 10% (p/v) de SBECD y ácido cítrico 10 mM ajustado a pH 3,5 con hidróxido de sodio acuoso 0,1 M. 2 mg / ml peptide (a) was formulated in aqueous solution containing 10% (w / v) SBECD and 10 mM citric acid adjusted to pH 3.5 with 0.1 M aqueous sodium hydroxide.

Se añadieron masas apropiadas de SBECD y ácido cítrico a un volumen de API correspondiente a aproximadamente el 75% del de la formulación final. Después esta mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que se logró la disolución completa del SBECD y del ácido cítrico. Después se añadió una masa apropiada de péptido (a) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente hasta que el péptido (a) añadido se hubo disuelto. Después se sumergió un electrodo de pH en la solución y, con agitación rápida, el pH se ajustó a 3,5 mediante adición lenta de hidróxido de sodio 0,1 M en API; la adición lenta de la solución de hidróxido de sodio con agitación adecuada fue necesaria para evitar la precipitación de péptido (a). Con la agitación rápida, la solución resultante después se diluyó con API hasta una concentración de péptido (a) final de 2,0 mg/ml. Después esta solución se esterilizó por filtración para producir la formulación final. Appropriate masses of SBECD and citric acid were added to an API volume corresponding to approximately 75% of that of the final formulation. This mixture was then stirred at room temperature until complete dissolution of SBECD and citric acid was achieved. An appropriate mass of peptide (a) was then added and the resulting mixture was stirred at room temperature until the added peptide (a) had dissolved. A pH electrode was then immersed in the solution and, with rapid stirring, the pH was adjusted to 3.5 by slow addition of 0.1 M sodium hydroxide in API; Slow addition of the sodium hydroxide solution with adequate stirring was necessary to avoid precipitation of peptide (a). With rapid stirring, the resulting solution was then diluted with API to a final peptide concentration (a) of 2.0 mg / ml. This solution was then sterilized by filtration to produce the final formulation.

Se usaron varios valores de pH finales diferentes para las formulaciones de péptido (a)/SBECD. La Figura 1 muestra la solubilidad de péptido (a) a diversos valores de pH en soluciones acuosas de sulfobutil éter beta-ciclodextrina (SBECD) al 10% (p/v)/citrato de sodio 10 mM. Several different final pH values were used for peptide (a) / SBECD formulations. Figure 1 shows the solubility of peptide (a) at various pH values in aqueous solutions of sulfobutyl ether beta-cyclodextrin (SBECD) at 10% (w / v) / 10 mM sodium citrate.

Adicionalmente, se determinó la estabilidad de péptido (a) en estas formulaciones. La Figura 2 muestra el porcentaje de péptido (a) restante en soluciones acuosas de SBECD al 10% (p/v)/citrato de sodio 10 mM a lo largo del tiempo a diversos valores de pH. Additionally, the stability of peptide (a) in these formulations was determined. Figure 2 shows the percentage of peptide (a) remaining in aqueous solutions of 10% SBECD (w / v) / 10 mM sodium citrate over time at various pH values.

Ejemplo 2 Example 2

Formulación de péptido(A) (3X)/SBECD, Liofilización de formulación y Reconstitución. Formulation of peptide (A) (3X) / SBECD, Freeze-drying formulation and Reconstitution.

6 mg/ml de péptido (a) se formularon en solución acuosa que contenía SBECD al 30% (p/v) y ácido cítrico 30 mM ajustado a pH 3,5 con hidróxido de sodio acuoso 0,5 M. 6 mg / ml peptide (a) was formulated in aqueous solution containing 30% SBECD (w / v) and 30 mM citric acid adjusted to pH 3.5 with 0.5 M aqueous sodium hydroxide.

Se añadieron masas apropiadas de SBECD y ácido cítrico a un volumen de API correspondiente al 70% del de la formulación final. Después esta mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que la disolución completa del SBECD y el ácido cítrico se hubo logrado. Después se añadió una masa apropiada de péptido (a) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente hasta que se hubo disuelto el péptido (a) añadido. Después se sumergió un electrodo de pH en la solución y, con agitación rápida, el pH se ajustó hasta 3,5 mediante adición lenta de hidróxido de sodio 0,5 M en API; la adición lenta de la solución de hidróxido de sodio con agitación adecuada fue necesaria para evitar la precipitación de péptido (a). Con agitación rápida, la solución resultante después se diluyó con API hasta una concentración de péptido Appropriate masses of SBECD and citric acid were added to an API volume corresponding to 70% of that of the final formulation. This mixture was then stirred at room temperature until complete dissolution of SBECD and citric acid was achieved. An appropriate mass of peptide (a) was then added and the resulting mixture was stirred at room temperature until the added peptide (a) had dissolved. A pH electrode was then immersed in the solution and, with rapid stirring, the pH was adjusted to 3.5 by slow addition of 0.5 M sodium hydroxide in API; Slow addition of the sodium hydroxide solution with adequate stirring was necessary to avoid precipitation of peptide (a). With rapid stirring, the resulting solution was then diluted with API to a peptide concentration.

(a) final de 6,0 mg/ml. Después esta solución se esterilizó por filtración hasta producir la formulación final. (a) final 6.0 mg / ml. This solution was then sterilized by filtration to produce the final formulation.

Los viales que contienen el producto se cargaron en los estantes y la temperatura se ajustó a 5ºC durante 2 h. Después los estantes se enfriaron a una velocidad de 30ºC por hora hasta un punto de referencia diana de -45ºC que después se mantuvo durante 4 horas para completar el congelamiento. El condensador se ajustó a por debajo de -50ºC y la cámara se evacuó hasta una presión diana de 60 µm Hg. La presión de la cámara se controló mediante purgado en Nitrógeno filtrado a 0,2 µ, de NF en la cámara. Después los estantes se calentaron hasta un punto de referencia diana de -18ºC a una velocidad controlada promedio de 30ºC por hora y se ajustó el control en ese punto de referencia para completar el secado primario. Después los estantes se calentaron hasta un punto de referencia diana de 30ºC a una velocidad controlada promedio de 12ºC por hora y el control en ese punto de referencia durante 12 h para completar el secado secundario. The vials containing the product were loaded on the shelves and the temperature was set at 5 ° C for 2 h. The shelves were then cooled at a rate of 30 ° C per hour to a target reference point of -45 ° C which was then maintained for 4 hours to complete freezing. The condenser was set below -50 ° C and the chamber was evacuated to a target pressure of 60 µm Hg. The chamber pressure was controlled by filtration in 0.2 µm filtered nitrogen of NF in the chamber. The shelves were then heated to a target reference point of -18 ° C at an average controlled rate of 30 ° C per hour and the control at that reference point was adjusted to complete primary drying. The shelves were then heated to a target reference point of 30 ° C at an average controlled rate of 12 ° C per hour and control at that reference point for 12 h to complete secondary drying.

Después la cámara se rellenó con Nitrógeno filtrado 0,2 µ, NF seguido por taponado del producto a 1 atm. The chamber was then filled with 0.2 µ filtered nitrogen, NF followed by plugging the product at 1 atm.

La reconstitución se logró mediante la adición de 9,75 ml de API, Farmacopea de los Estados Unidos, para producir el volumen de llenado deseado dentro del vial de 10,5 ml. El vial se invirtió varias veces. El tiempo de disolución fue menor de 2 minutos. Después el vial se dejó reposar durante varios minutos para permitir que las burbujas subieran a la superficie. Se produjo una solución incolora transparente libre de materia particulada visible. El pH medido fue 3,5 ± 0,1. Reconstitution was achieved by adding 9.75 ml of API, Pharmacopoeia of the United States, to produce the desired filling volume within the 10.5 ml vial. The vial was inverted several times. The dissolution time was less than 2 minutes. Then the vial was allowed to stand for several minutes to allow the bubbles to rise to the surface. A clear colorless solution free of visible particulate matter was produced. The measured pH was 3.5 ± 0.1.

Ejemplo 3 Example 3

Formulación en polvo seco de péptido (a)/SBECD Dry powder formulation of peptide (a) / SBECD

El péptido (a) se formuló como un polvo seco en complejo con ciclodextrina para disolución en ácido cítrico 10 mM antes de administración IV. Peptide (a) was formulated as a dry powder in complex with cyclodextrin for dissolution in 10 mM citric acid before IV administration.

Se añadieron masas apropiadas de péptido y SBECD a un volumen apropiado de etanol anhidro para producir una solución etanólica que contenía 4 mg/ml de péptido (a) y 200 mg/ml de SBECD. Esta solución se esterilizó por filtración (0,2 µm) y después se evaporó (en condiciones estériles) hasta sequedad a temperatura ambiente bajo presión reducida para producir un sólido blanco a blanquecino. Después este sólido se trituró (en condiciones estériles) para producir un polvo fluido. Una masa apropiada de este sólido se llenó de forma estéril en un vial estéril de tamaño apropiado. Después el vial se selló con un sistema de cierre de recipiente de tapón de elastómero perforable estéril/sello flip-off de aluminio. Un volumen apropiado de ácido cítrico 10 mM en API (pH ajustado a 3,2 con hidróxido de sodio 0,1 M en API) se añadió después a través una aguja y jeringa estéril a través del tapón de elastómero perforable y se agitó a temperatura ambiente hasta que todo el material sólido se disolvió para producir una solución final que contenía 2 mg/ml de péptido (a), 100 mg/ml de SBECD y ácido cítrico 10 mM/tampón de citrato de sodio pH 3,2 – 4,0. Appropriate masses of peptide and SBECD were added to an appropriate volume of anhydrous ethanol to produce an ethanol solution containing 4 mg / ml of peptide (a) and 200 mg / ml of SBECD. This solution was sterilized by filtration (0.2 µm) and then evaporated (under sterile conditions) to dryness at room temperature under reduced pressure to produce a white to off-white solid. This solid was then triturated (under sterile conditions) to produce a fluid powder. An appropriate mass of this solid was sterile filled in a sterile vial of appropriate size. The vial was then sealed with a sterile perforable elastomer cap / flip-off aluminum seal container closure system. An appropriate volume of 10 mM citric acid in API (pH adjusted to 3.2 with 0.1 M sodium hydroxide in API) was then added through a sterile needle and syringe through the pierceable elastomer plug and stirred at temperature ambient until all solid material was dissolved to produce a final solution containing 2 mg / ml peptide (a), 100 mg / ml SBECD and 10 mM citric acid / sodium citrate buffer pH 3.2-4, 0.

Claims

1. A pharmaceutical composition comprising a proteasome inhibitor having the structure

image 1

and a cyclodextrin selected from hydroxypropyl beta-cyclodextrin (HPBCD) and sulfobutyl ether beta-cyclodextrin 5 (SBECD).

2. 2.: La composición farmacéutica de la reivindicación 1, comprendiendo además un tampón. The pharmaceutical composition of claim 1, further comprising a buffer.

3. 3.: La composición farmacéutica de la reivindicación 1 ó 2, en la que la ciclodextrina es SBECD. The pharmaceutical composition of claim 1 or 2, wherein the cyclodextrin is SBECD.

4. Four.: La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el tampón es citrato de sodio/ácido cítrico. The pharmaceutical composition of any one of claims 1 to 3, wherein the buffer is sodium citrate / citric acid.

The pharmaceutical composition of any one of claims 2 to 4, comprising 1 to 5 mg / ml of the proteasome inhibitor, 5-25% (w / v) of the cyclodextrin and 5-20 mM of the buffer producing a pH in the range of 3 to 6.

6. 6.: La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que contiene SBECD al 10% (p/v) y ácido cítrico 10 mM con el pH ajustado a 3,5. The pharmaceutical composition of claim 1, containing 10% SBECD (w / v) and 10 mM citric acid with the pH adjusted to 3.5.

7. 7.: La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que está en forma de un liofilizado. The pharmaceutical composition of any one of claims 1 to 4, which is in the form of a lyophilisate.