ES2358089T3

ES2358089T3 - METHODS AND COMPOSITIONS TO REDUCE NEURODEGENERATION IN AMIOTROPHIC SIDE STERHERISIS.

Info

Publication number: ES2358089T3
Application number: ES05820886T
Authority: ES
Inventors: Seo Hong Yoo
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-11-01
Filing date: 2005-10-31
Publication date: 2011-05-05
Anticipated expiration: 2025-10-31
Also published as: CN101048164A; CN101048164B

Abstract

Una composición que comprende una solución acuosa transparente que comprende: (a) un primer material seleccionado entre ácido ursodesoxicólico o una sal sódica del ácido ursodesoxicólico (UDCA); (b) un carbohidrato seleccionado entre el grupo compuesto por un producto soluble acuoso de la conversión del almidón o un polisacárido soluble acuoso no de almidón; (c) agua, donde el primer material y el carbohidrato ambos permanecen en solución para cualquier subconjunto del intervalo de valores de pH obtenibles en un sistema acuoso suficiente para que una formulación farmacéutica permanezca en solución desde la preparación, hasta la administración, y hasta la absorción en el cuerpo; para su uso en el tratamiento de al menos un síntoma de la esclerosis lateral amiotrófica.A composition comprising a transparent aqueous solution comprising: (a) a first material selected from ursodeoxycholic acid or a sodium salt of ursodeoxycholic acid (UDCA); (b) a carbohydrate selected from the group consisting of an aqueous soluble starch conversion product or a non-starch aqueous soluble polysaccharide; (c) water, where the first material and the carbohydrate both remain in solution for any subset of the range of pH values obtainable in an aqueous system sufficient for a pharmaceutical formulation to remain in solution from preparation, to administration, and until absorption in the body; for use in the treatment of at least one symptom of amyotrophic lateral sclerosis.

Description

La presente descripción se refiere a composiciones y métodos para mejorar o tratar al menos un síntoma de un proceso o enfermedad neurodegenerativa. The present description refers to compositions and methods for improving or treating at least one symptom of a neurodegenerative process or disease.

En cualquier momento dado, tantos como 30.000 americanos padecen esclerosis lateral amiotrófica (ALS), que casi siempre es fatal. La ALS, también conocida como enfermedad de Lou Gehrig, es una enfermedad neurodegenerativa progresiva que ataca a las neuronas motoras del cerebro y la médula espinal y provoca debilidad y atrofia muscular. Los síntomas tempranos incluyen pérdida de destreza y el modo de andar. Según progresa la enfermedad, los pacientes llegan a quedar paralizados y requieren asistencia para respirar. La esperanza de vida de pacientes con ALS habitualmente es de 3 a 5 años después del diagnóstico siendo la causa principal de muerta la pérdida de función respiratoria. At any given time, as many as 30,000 Americans suffer from amyotrophic lateral sclerosis (ALS), which is almost always fatal. ALS, also known as Lou Gehrig's disease, is a progressive neurodegenerative disease that attacks motor neurons in the brain and spinal cord and causes muscle weakness and atrophy. Early symptoms include loss of dexterity and gait. As the disease progresses, patients become paralyzed and require breathing assistance. The life expectancy of patients with ALS is usually 3 to 5 years after diagnosis, the main cause of death being loss of respiratory function.

La etiología de la ALS está sólo parcialmente comprendida. Los casos familiares (hereditarios) componente sólo aproximadamente el 5-10% de todos los pacientes con ALS. Dentro de este subconjunto de pacientes con ALS, uno de cada cinco porta el único defecto genético identificado hasta la fecha, una mutación en el gen SODI. El alelo mutante conduce a la producción de una proteína que se cree que es tóxica para las neuronas motoras. La mayoría de los casos, es decir, el 90-95% restante, surge aparentemente de forma espontánea y sin un patrón identificable. Por tanto, parece que la ALS es capaz de atacar a cualquiera en cualquier momento. Las terapias eficaces son escasas o inexistentes. The etiology of ALS is only partially understood. Family cases (hereditary) component only approximately 5-10% of all patients with ALS. Within this subset of patients with ALS, one in five carries the only genetic defect identified to date, a mutation in the SODI gene. The mutant allele leads to the production of a protein that is believed to be toxic to motor neurons. The majority of cases, that is, the remaining 90-95%, appear apparently spontaneously and without an identifiable pattern. Therefore, it seems that the ALS is capable of attacking anyone at any time. Effective therapies are scarce or non-existent.

El lector puede informarse adicionalmente en cuando al estado de la técnica por referencia a los siguientes documentos: WO 01/56547 A (YOO, SEO, HONG) 9 de agosto de 2001 (09-08-2001), WO 00/04875 A (YOO, SEO, HONG) 3 de febrero de 2000 (03-02-2000), WO 2004/012686 A (NITROMED, INC; GARVEY, DAVID, S; IYENGAR, RADHA) 12 de febrero de 2004 (12-02-2004), KEENE C DIRK ET AL: "A bile acid protects against motor and cognitive deficits and reduces striatal degeneration in the 3-nitropropionic acid model of Huntington's disease" EXPERIMENTAL NEUROLOGY, vol. 171, nº 2, octubre de 2001 (10-2001), páginas 351-360, XP0023750471SSN: 0014-4886, RODRIGUES CECILIA M P ET AL: "Bilirubin and amiloid-beta peptide induce cytochrome c release through mitochondrial membrane permeabilization" MOLECULAR MEDICINE (NEW YORK), vol. 6, nº 11, noviembre de 2000 (200011), páginas 936-946, XP009064467 ISSN: 1076-1551. Puede encontrarse un análisis detallada de la importancia de estas descripciones en el archivo de seguimiento. The reader can be informed in addition to the state of the art by reference to the following documents: WO 01/56547 A (YOO, SEO, HONG) August 9, 2001 (08-09-2001), WO 00/04875 A ( YOO, SEO, HONG) February 3, 2000 (03-02-2000), WO 2004/012686 A (NITROMED, INC; GARVEY, DAVID, S; IYENGAR, RADHA) February 12, 2004 (12-02-2004 ), KEENE C DIRK ET AL: "A bile acid protects against motor and cognitive deficits and reduces striatal degeneration in the 3-nitropropionic acid model of Huntington's disease" EXPERIMENTAL NEUROLOGY, vol. 171, No. 2, October 2001 (10-2001), pages 351-360, XP0023750471SSN: 0014-4886, RODRIGUES CECILIA MP ET AL: "Bilirubin and amyloid-beta peptide induces cytochrome c release through mitochondrial membrane permeabilization" MOLECULAR MEDICINE ( NEW YORK), vol. 6, No. 11, November 2000 (200011), pages 936-946, XP009064467 ISSN: 1076-1551. A detailed analysis of the importance of these descriptions can be found in the tracking file.

Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición que comprende una solución acuosa se caracterizan en las reivindicaciones dependientes. Accordingly, the present invention provides a composition comprising an aqueous solution characterized in the dependent claims.

En realizaciones que contienen tanto polisacárido soluble no de almidón como producto de conversión del almidón de elevado peso molecular, las cantidades de cada uno son tales que cuando se combinan juntos en la composición, son suficientes para permitir que el componente UDCA, el producto de conversión del almidón de elevado peso molecular, el polisacárido soluble no de almidón y el compuesto farmacéutico, si lo hay, permanezcan en solución a cualquier pH dentro de un intervalo de pH seleccionado. In embodiments containing both soluble non-starch polysaccharide and high molecular weight starch conversion product, the amounts of each are such that when combined together in the composition, they are sufficient to allow the UDCA component, the conversion product of the high molecular weight starch, the non-starch soluble polysaccharide and the pharmaceutical compound, if any, remain in solution at any pH within a selected pH range.

En algunas realizaciones de la descripción, se proporciona una composición de terapia de combinación que puede aumentar la intensidad de respuesta a o la eficacia de un agente farmacéutico. Más específicamente, la administración de una composición de la descripción que comprende un UDCA y riluzol a un sujeto que padece un trastorno neurodegenerativo puede tener más de un efecto aditivo de la administración de cada compuesto solo. In some embodiments of the description, a combination therapy composition is provided that can increase the intensity of response to or efficacy of a pharmaceutical agent. More specifically, the administration of a composition of the description comprising a UDCA and riluzole to a subject suffering from a neurodegenerative disorder may have more than one additive effect of the administration of each compound alone.

Algunas realizaciones ejemplares específicas de la descripción pueden comprenderse por referencia, en parte, a la siguiente descripción y los dibujos adjuntos, en los que: Some specific exemplary embodiments of the description may be understood by reference, in part, to the following description and the accompanying drawings, in which:

la FIGURA 1A es la esperanza de vida y su resultado se muestra como el porcentaje de supervivencia en el tiempo cuando el animal muere; FIGURE 1A is the life expectancy and its result is shown as the percentage of survival over time when the animal dies;

la FIGURA 1B es un ensayo de rotarod (rodillo giratorio) y su resultado se muestra como el tiempo que permanecieron sobre el rodillo antes de caerse todas las semanas hasta la muerte; FIGURE 1B is a rotarod test (rotating roller) and its result is shown as the time they remained on the roller before falling every week until death;

la FIGURA 2 es una gráfico de barras que muestra los resultados de un ensayo de viabilidad celular con células de tipo silvestre, células A4V, y células G93A en el que las células no se trataron (panel de la izquierda) o se incubaron con 200 nM de UDCA solubilizado en solución de la descripción (panel central), o 20 M de UDCA solubilizado en solución de la descripción (panel de la derecha); FIGURE 2 is a bar graph showing the results of a cell viability test with wild-type cells, A4V cells, and G93A cells in which the cells were not treated (left panel) or incubated with 200 nM of UDCA solubilized in solution of the description (central panel), or 20 M of UDCA solubilized in solution of the description (right panel);

la FIGURA 3 es un gráfico de barras que muestra los resultados de un ensayo de viabilidad celular con células de tipo silvestre, células A4V, y células G93A en el que las células no se trataron (panel de la izquierda) o se incubaron con S-nitrosoglutatión 500 M (GSNO; panel central), o GSNO 500 M seguido de una solución de UDCA 20 M de la descripción; FIGURE 3 is a bar graph showing the results of a cell viability test with wild-type cells, A4V cells, and G93A cells in which the cells were not treated (left panel) or incubated with S- 500 M nitrosoglutathione (GSNO; center panel), or GSNO 500 M followed by a 20 M UDCA solution of the description;

la FIGURA 4A es una micrografía que muestra células A4V no tratadas (células de control); FIGURE 4A is a micrograph showing untreated A4V cells (control cells);

la FIGURA 4B es una micrografía que muestra células A4V incubadas con S-nitrosoglutatión 500 M (GSNO); FIGURE 4B is a micrograph showing A4V cells incubated with 500 µM S-nitrosoglutathione (GSNO);

la FIGURA 4C es una micrografía que muestra células A4V incubadas con GSNO 500 M y después, incubadas en sucesión con 20 M de UDCA solubilizado en solución de la descripción; FIGURE 4C is a micrograph showing A4V cells incubated with 500 µM GSNO and then incubated in succession with 20 µM solubilized UDCA in solution of the description;

la FIGURA 4D es una micrografía que muestra células G93A no tratadas; FIGURE 4D is a micrograph showing untreated G93A cells;

la FIGURA 4E es una micrografía que muestra células G93A incubadas con GSNO 500 M; y FIGURE 4E is a micrograph showing G93A cells incubated with 500 µM GSNO; Y

la FIGURA 4F es una micrografía que muestra células G93A incubadas con GSNO 500 M y después, incubadas en sucesión con 20 M de UDCA solubilizado en solución de la descripción. FIGURE 4F is a micrograph showing G93A cells incubated with 500 µM GSNO and then incubated in succession with 20 µM solubilized UDCA in solution of the description.

Aproximadamente el 85-90% de los pacientes con ALS de aparición en el adulto no tienen historia familiar de la enfermedad. Esta incidencia aparentemente aleatoria o fortuita ha conducido a algunos facultativos a identificar estos casos como ALS esporádica (SALS). Por el contrario, la ALS puede heredarse como una afección dominante autonómica en aproximadamente el 10-15% de los pacientes. Estos casos se han identificado como ALS familiar (FALS). En aproximadamente un quinto de los casos de FALS, el gen mutante es una enzima citoplasmática, la Cu/Zn superóxido dismutasa-1 (SOD). Se han identificado más de 90 mutaciones en la Cu/Zn SOD y están extendidas a lo largo de más de 30 sitios. Estas mutaciones pueden dar lugar a una nueva función adversa que conduce a FALS en oposición a la simple alteración de una función normal del producto génico. Por ejemplo, en experimentos con ratones transgénicos que sobre-expresan una Cu/Zn SOD humana mutante (A4V, G93A, G85R, G37R), no había correlación entre las pérdidas de actividad de SODI y la aparición o gravedad de la enfermedad. Approximately 85-90% of patients with ALS of adult onset have no family history of the disease. This apparently random or fortuitous incidence has led some physicians to identify these cases as sporadic ALS (SALS). In contrast, ALS can be inherited as a dominant autonomic condition in approximately 10-15% of patients. These cases have been identified as family ALS (FALS). In approximately one fifth of FALS cases, the mutant gene is a cytoplasmic enzyme, Cu / Zn superoxide dismutase-1 (SOD). More than 90 mutations in the Cu / Zn SOD have been identified and are spread throughout more than 30 sites. These mutations can lead to a new adverse function that leads to FALS as opposed to the simple alteration of a normal function of the gene product. For example, in experiments with transgenic mice that overexpress a mutant human Cu / Zn SOD (A4V, G93A, G85R, G37R), there was no correlation between losses of SODI activity and the onset or severity of the disease.

Los síntomas y la patología de pacientes con FALS con mutaciones en SODI se parecen mucho a los de pacientes con SALS. El progreso clínico y las alteraciones patológicas en las neuronas motoras de ratones que expresan SODI mutante también son sorprendentemente similares a las encontradas en pacientes con SALS, lo que sugiere que los mecanismos de neurodegeneración para SALS y FALS pueden compartir componentes comunes. Las mitocondrias desempeñan una tarea central en muchas vías metabólicas y apoptóticas que regulan la vida y la muerte de las células. Las mitocondrias también son el sitio de inicio de la cascada apoptótica intrínseca, que puede activarse por la liberación de factores pro-apoptóticos que pueden actuar de un modo dependiente de caspasa o independiente de caspasa. La disfunción mitocondrial puede estar directamente implicada en la patogénesis de la ALS. The symptoms and pathology of patients with FALS with mutations in SODI closely resemble those of patients with SALS. The clinical progress and pathological alterations in the motor neurons of mice expressing mutant SODI are also surprisingly similar to those found in patients with SALS, suggesting that neurodegeneration mechanisms for SALS and FALS may share common components. Mitochondria play a central task in many metabolic and apoptotic pathways that regulate the life and death of cells. Mitochondria are also the start site of the intrinsic apoptotic cascade, which can be activated by the release of pro-apoptotic factors that can act in a caspase-dependent or caspase-independent manner. Mitochondrial dysfunction may be directly involved in the pathogenesis of ALS.

La disfunción mitocondrial causa muerte de las neuronas motoras predisponiéndolas a excitotoxicidad mediada por calcio, aumentando la generación de especies de oxígeno reactivas, y/o iniciando la vía apoptótica intrínseca. La disfunción mitocondrial puede provocar liberaciones cuantales de factores pro-apoptóticos, tales como citocromo c, el factor inductor de la apoptosis (AIF), y endoG, desde mitocondrias individuales, quizá en respuesta a toxicidad mediada por calcio local, por ejemplo, en sinapsis de excitación. Esta toxicidad local podría inducir la muerte de compartimientos subcelulares, por ejemplo, las ramificaciones dendríticas o axonales. Este tipo de degeneración compartimental subcelular podría ser insuficiente para inducir que la célula muera inmediatamente, pero podría propagarse a los cuerpos celulares en un periodo de tiempo. Coherente con este escenario, en ALS, los axones se degeneran en dirección distal a proximal (muerte retrógrada) y las dendritas llegan a atrofiarse antes de la muerte final de la neurona motora. Este mecanismo de muerte celular puede ser único para la degeneración neuronal ya que las neuronas tienen ramificaciones subcelulares complejas, y puede progresar de forma relativamente lenta en comparación con los mecanismos de muerte celular típicos en otros tipos celulares. Como consecuencia, puede ser que en cualquier momento dado en el transcurso de la enfermedad, solamente una pequeña cantidad de células esté muriendo realmente de apoptosis. Mitochondrial dysfunction causes death of motor neurons predisposing them to calcium-mediated excitotoxicity, increasing the generation of reactive oxygen species, and / or initiating the intrinsic apoptotic pathway. Mitochondrial dysfunction can cause quantum releases of pro-apoptotic factors, such as cytochrome c, apoptosis inducing factor (AIF), and endoG, from individual mitochondria, perhaps in response to local calcium-mediated toxicity, for example, at synapse of excitement This local toxicity could induce the death of subcellular compartments, for example, dendritic or axonal ramifications. This type of subcellular compartmental degeneration may be insufficient to induce the cell to die immediately, but it could spread to cell bodies over a period of time. Consistent with this scenario, in ALS, axons degenerate in the distal to proximal direction (retrograde death) and dendrites become atrophied before the final death of the motor neuron. This mechanism of cell death may be unique for neuronal degeneration since neurons have complex subcellular ramifications, and can progress relatively slowly compared to the typical cell death mechanisms in other cell types. As a consequence, it may be that at any given time in the course of the disease, only a small number of cells are actually dying of apoptosis.

La degeneración de neuronas motoras por mutación en SODI puede investigarse en cultivo celular y en modelos de ratones transgénicos. En análisis in vitro, puede observarse la muerte extendida y progresiva de las neuronas motoras en mutaciones sin sentido tales como G93A (glicina a alanina en la posición 93) y A4V (alanina a valina en la posición 4) en el gen de la Cu/Zn-superóxido dismutasa humana (hSODI). Por ejemplo, se evaluó la viabilidad de las células con hSODI de tipo silvestre, G93A, y A4V 24 h después de la diferenciación neuronal usando tanto el ensayo MTT como tinción con azul de tripán. La viabilidad se reducía significativamente en el tiempo. En las células de tipo silvestre, la viabilidad disminuía significativamente a las 48 h después de la diferenciación neuronal (85,91 ± 9,08%) (P < 0,05), y era de 59,41 ± 13,54% a las 72 h (P < 0,01). La viabilidad disminuía incluso más en células G93A (63,71 ± 6,25%) y A4V (58,85 ± 7,83%) en comparación con células silvestres (100 + 6,97%) a las 24 h después de la diferenciación neuronal. A las 48 h, la viabilidad se reducía adicionalmente hasta 23,12 ± 8,96% en células G93A y 20,79 ± 8,07% en células A4V (P < 0,01). A las 72 h, estas células mutantes estaban casi muertas con viabilidades a aproximadamente el 0%. Estos resultados sugieren que las mutaciones G93A o A4V en hSODI hacen a las neuronas motoras más vulnerables. En vista de estos resultados, los análisis realizados de acuerdo con la presente descripción pueden, en algunas realizaciones, realizarse a aproximadamente las 24 h para evitar la viabilidad sustancialmente inferior que puede existir en momentos puntuales posteriores. The degeneration of motor neurons by mutation in SODI can be investigated in cell culture and in models of transgenic mice. In vitro analysis, the extended and progressive death of motor neurons in nonsense mutations such as G93A (glycine to alanine at position 93) and A4V (alanine to valine at position 4) can be observed in the Cu / gene. Human Zn-superoxide dismutase (hSODI). For example, the viability of cells with wild-type hSODI, G93A, and A4V 24 h after neuronal differentiation was evaluated using both the MTT assay and trypan blue staining. The viability was significantly reduced over time. In wild-type cells, viability decreased significantly at 48 h after neuronal differentiation (85.91 ± 9.08%) (P <0.05), and was 59.41 ± 13.54% at 72 h (P <0.01). Viability decreased even more in G93A (63.71 ± 6.25%) and A4V (58.85 ± 7.83%) cells compared to wild cells (100 + 6.97%) at 24 h after neuronal differentiation At 48 h, the viability was further reduced to 23.12 ± 8.96% in G93A cells and 20.79 ± 8.07% in A4V cells (P <0.01). At 72 h, these mutant cells were almost dead with viability at approximately 0%. These results suggest that G93A or A4V mutations in hSODI make motor neurons more vulnerable. In view of these results, the analyzes performed in accordance with the present description may, in some embodiments, be performed at approximately 24 hours to avoid substantially lower viability that may exist at subsequent point moments.

Los ratones transgénicos que expresan G93A o A4V desarrollan un grave síndrome degenerativo de las neuronas motoras a pesar de las actividades SOD normales o por encima del normal. Por el contrario, estos síntomas no existen en ratones en los que Cu/Zn SOD está eliminada o sobre-expresada. Transgenic mice expressing G93A or A4V develop a severe degenerative motor neuron syndrome despite normal or above normal SOD activities. On the contrary, these symptoms do not exist in mice in which Cu / Zn SOD is eliminated or overexpressed.

El óxido nítrico (NO) puede desempeñar una tarea en los procesos fisiológicos y patológicos en el sistema nervioso central y las mitocondrias pueden ser las dianas principales para la toxicidad con NO en el cerebro. El NO puede interaccionar con un anión superóxido para formar peroxinitritos reactivos, que pueden causar muerte celular por daño oxidativo, alteración del metabolismo energético, la homeostasis del calcio, y la función mitocondrial. Esta toxicidad puede evitarse por un inhibidor de la NOS y un aceptor de óxido nítrico, es decir, un aceptor de radicales peroxinitrito e hidroxilo. El S-nitrosoglutatión (GSNO) puede ser un donante de NO útil que puede liberar lenta y espontáneamente NO en condiciones fisiológicas. El GSNO puede ser un vehículo de almacenamiento y/o transporte para el NO en el cuerpo. Una enzima metabólica para el GSNO puede estar conservada de bacterias a seres humanos. El GSNO endógeno, que puede generarse en células endoteliales y células astrogliales durante estrés oxidativo, puede localizarse en el cerebelo en ratas. Por tanto, el GSNO puede ser un depósito endógeno de NO y puede desempeñar una o más tareas en el cerebro. De forma interesante, puede una apoptosis notable cuando las células se tratan con GSNO. Nitric oxide (NO) can play a role in physiological and pathological processes in the central nervous system and mitochondria can be the main targets for toxicity with NO in the brain. NO can interact with a superoxide anion to form reactive peroxynitrites, which can cause cell death due to oxidative damage, impaired energy metabolism, calcium homeostasis, and mitochondrial function. This toxicity can be avoided by a NOS inhibitor and a nitric oxide acceptor, that is, a peroxynitrite and hydroxyl radical acceptor. S-nitrosoglutathione (GSNO) can be a useful NO donor that can slowly and spontaneously release NO under physiological conditions. The GSNO can be a storage and / or transport vehicle for the NO in the body. A metabolic enzyme for GSNO can be conserved from bacteria to humans. Endogenous GSNO, which can be generated in endothelial cells and astroglial cells during oxidative stress, can be located in the cerebellum in rats. Therefore, GSNO can be an endogenous deposit of NO and can perform one or more tasks in the brain. Interestingly, a remarkable apoptosis can occur when cells are treated with GSNO.

Algunas de las enzimas Cu/ZnSOD mutantes de FALS pueden inducir una actividad peroxidativa significativamente aumentada en comparación con la proteína de tipo silvestre in vitro. El peroxinitrito, un producto del superóxido (O2) y el óxido nítrico (NO), reacciona con el Cu2+ de SOD mutantes, produciendo iones nitronio, lo que conduce a la nitración de proteínas y posterior neurotoxicidad, las neuronas motoras de pacientes con ALS muestran inmuno-reactividad aumentada a nitrotirosina. La actividad peroxidasa potenciada puede aumentar la producción de radicales hidroxilo, que podrían dañar las neuronas. Some of the FALS mutant Cu / ZnSOD enzymes can induce a significantly increased peroxidative activity compared to wild-type protein in vitro. Peroxynitrite, a product of superoxide (O2) and nitric oxide (NO), reacts with the Cu2 + of mutant SODs, producing nitronium ions, which leads to protein nitration and subsequent neurotoxicity, the motor neurons of patients with ALS show increased immuno-reactivity to nitrotyrosine. Enhanced peroxidase activity can increase the production of hydroxyl radicals, which could damage neurons.

En algunas realizaciones, una composición de ácido biliar de la descripción puede carecer de una o más de las características desventajosas de las formas de dosificación comerciales existentes de UDCA. Además, una composición de ácido biliar de la descripción puede, en algunas realizaciones, mejorar y/o tratar al menos un síntoma de la ALS y/o ALS avanzada. Las formas de dosificación de ácido biliar, de acuerdo con algunas realizaciones de la descripción, pueden ser adecuadas o adaptables para administración oral y parenteral. En algunas realizaciones, una composición de ácido biliar de la descripción puede incluir una molécula intacta de UDCA y un producto soluble acuoso de la conversión del almidón (por ejemplo, un producto resultante de la hidrólisis del almidón). Una composición de ácido biliar, de acuerdo con algunas realizaciones de la descripción, puede solubilizarse en agua y puede permanecer en solución acuosa sin precipitación a cualquier pH. In some embodiments, a bile acid composition of the description may lack one or more of the disadvantageous characteristics of the existing commercial dosage forms of UDCA. In addition, a bile acid composition of the description can, in some embodiments, improve and / or treat at least one symptom of ALS and / or advanced ALS. Bile acid dosage forms, according to some embodiments of the description, may be suitable or adaptable for oral and parenteral administration. In some embodiments, a bile acid composition of the description may include an intact UDCA molecule and an aqueous soluble starch conversion product (eg, a product resulting from starch hydrolysis). A bile acid composition, according to some embodiments of the description, can be solubilized in water and can remain in aqueous solution without precipitation at any pH.

En algunas realizaciones, la solubilidad de UDCA en una solución de la descripción puede ser aproximadamente 3.000 veces mayor que la de UDCA comercializado (0,15 mol frente a 0,05 mmol) y puede ser 300 veces mayor que la de TUDCA. Una solución de la descripción puede, en algunas realizaciones, suministrar UDCA solubilizado a la sangre, el cerebro, el estómago, el duodeno, el yeyuno, el íleo y/o el colon. En algunas realizaciones, una forma de dosificación oral y parenteral puede contener, por ejemplo, 500 mg de UDCA y puede tener una Cmáx que es al menos 8 veces mayor que una forma de UDCA comercial existente y un Tmáx que es aproximadamente 4-6 veces más corto que una forma de UDCA comercial existente. In some embodiments, the solubility of UDCA in a solution of the description may be approximately 3,000 times greater than that of commercialized UDCA (0.15 mol vs. 0.05 mmol) and may be 300 times greater than that of TUDCA. A solution of the description may, in some embodiments, supply solubilized UDCA to the blood, brain, stomach, duodenum, jejunum, ileus and / or colon. In some embodiments, an oral and parenteral dosage form may contain, for example, 500 mg of UDCA and may have a Cmax that is at least 8 times greater than an existing commercial UDCA form and a Tmax that is approximately 4-6 times shorter than an existing commercial UDCA form.

Además, de acuerdo con algunas realizaciones, una composición de ácido biliar de la descripción puede no contener ninguna precipitación a cualquier pH y puede funcionar como un fármaco sistémico. Puede administrarse una solución, de acuerdo con algunas realizaciones, de forma concurrente con uno o más compuestos farmacéuticos (por ejemplo, un compuesto farmacéutico que es terapéuticamente activo con la ALS). La administración de una composición de ácido biliar de la descripción con otro compuesto farmacéutico puede, en algunas realizaciones, (a) aumentar la intensidad de una respuesta al compuesto farmacéutico, (b) aumentar la eficacia del compuesto farmacéutico, (c) disminuir la dosis necesaria del compuesto farmacéutico, y/o (d) disminuir la toxicidad del compuesto farmacéutico. Las soluciones de la descripción también pueden administrarse por separado, en términos tanto de la vía como del tiempo de administración. In addition, according to some embodiments, a bile acid composition of the description may not contain any precipitation at any pH and may function as a systemic drug. A solution, according to some embodiments, may be administered concurrently with one or more pharmaceutical compounds (for example, a pharmaceutical compound that is therapeutically active with ALS). Administration of a bile acid composition of the description with another pharmaceutical compound may, in some embodiments, (a) increase the intensity of a response to the pharmaceutical compound, (b) increase the effectiveness of the pharmaceutical compound, (c) decrease the dose necessary of the pharmaceutical compound, and / or (d) decrease the toxicity of the pharmaceutical compound. The solutions of the description can also be administered separately, in terms of both the route and the time of administration.

Una solución de la descripción puede usarse, en algunas realizaciones, para tratar o mejorar la enfermedad de ALS y/o la enfermedad de ALS avanzada. Por ejemplo, una solución de la descripción puede incluir un compuesto farmacéutico que disminuye la muerte de neuronas motoras tal como pasiniazida (tuberculostático), benztiazida (diurético, antihipertensivo), prednisolona (glucocorticoide), analgésico tópico de mentol, (antipurítico), naftalenosulfonato de mebhidrolina (HI, antihistamina), triclormetiazida (diurético, antihipertensivo), oxitetraciclina (antibacteriano), sulfato de arcaína (inhibidor de NOS, inhibidor de NMDA, antiprotozoario), eritromicina (antibacteriano), glutatión (envenenamiento por metales pesados, antioxidante), trioxsaleno (agente melanizante, antipsoriásico), nilhidrina HCl (vasodilatador periférico), desmetildiazepam (sedante, tranquilizante menor), tonzilamina HCl (antihistamina), valproato (anticonvulsivo Na), aminofenazona (antipirético, analgésico), sulfametizol (antibacteriano), droperidol (neuroléptico), 2-tiouracilo para la tiroides (depresor), ácido quinurénico (nutriente en enfermedades de deficiencia de vitamina B), ácido fusídico (antibacteriano), leucovorina Ca (antianémico, antídoto para antagonistas de ácido fólico), sulfato de esparteína (oxitócico), amigdalina (anti-inflamatorio, antineoplásico experimental), pratnoxina HCl (anestésico; tópico), furosemida (diurético, antihipertensivo), dinitolmida (antiprotozoario), budesonida (antiinflamatorio), flopropiona (antiespasmódico), fluorometolona (glucocorticoide, anti-inflamatorio), Nformilmetionilfenilalanina (péptido quimiotáctico), tiopental Na (anestésico) lansoprazol (antiulcerante), tosilato de bretilio (inhibidor de la liberación de orepinefrina), cefamandol Na (antimicrobiano), oxibendazol (antihelmíntico), cicloleucilglicina (inhibe la sensibilidad a dopamina R inducida por narcóticos), dantroleno Na (relajante del músculo esquelético), tetroquinona (queratolítico), piperazina (antihelmíntico), esculina (anti-inflamatorio), etisterona (progestina), dimetadiona (anticonvulsivo), griseofulvina (antifúngico, inhibe la mitosis en metafase, interacciona con microtúbulos polimerizados y proteínas asociadas), acetaminosalol (analgésico, antipirético), isoguvacina HCl (agonista GABA), putrescina diHCl (inhibidor de la ornitina descarboxilasa, factor de crecimiento celular), emetina HCl (antiamébico, inhibe la síntesis de ARN, ADN y proteínas), sulfanilamida (antibacteriano), mimosina (agente depilatorio), acetilcolina (depresor cardiaco, miótico, vasodilatador periférico), mesilato de pralidoxima (reactivador de colinesterasa), lisiltriptofanil-lisina (acetato que se une al ADN), hecogenina (precursor de esteroides), acetato de prednisolona (glucocorticoide), albendazol (antihelmíntico), hidroclorotiazida (diurético), demeclociclina HCl (antibacteriano), nitrofurazona (anti-infeccioso tópico), dicloxacilina Na (antibacteriano), alfa-tocoferol (deficiencia de vitamina E), tetraciclina HCl (antiamébico, antibacteriano, anti-riquetsiano), fenofibrato (anti-hiperlipémico), probenecid (uricosúrico), tretinoína (queratolítico), acetaminofeno (analgésico, antipirético), hidrastinina HCl (cardiotónico, homeostático uterino), acetato de d[-Arg-2]quiotorfina (analgésico), NMDA (agonista NMDA), cefmetazol Na (antimicrobiano), ribavirina (Antiviral), 0-bencil-L-serina (derivado aminoacídico), picrotoxina (estimulante, convulsivo, antagonista de GABA R, ictiotoxina), oxetazina (anestésico local), sulfatiazol (antibacteriano), triclormetina (antineoplásico, citotóxico), nabumetona (anti-inflamatorio), cloranfenicol (antibacteriano, anti-riquetsiano, inhibe la síntesis de proteínas), riluzol, ginseng y su extracto, glicirricina y ácido glicirrícico, derivados de carboquinona, coenzima Q10, creatina, factor de crecimiento-1 tipo insulina, minociclina, mecamserina, xaliproden, gabapentina, dextrometorfano, talampanel, IL-1, TR500, procisteína, factor neurotrófico derivado de cerebro, baclofeno, tizanidina, benzodiazepinas, glicopirrolato, atropina, quinina, fenitoína y morfina. A solution of the description can be used, in some embodiments, to treat or improve ALS disease and / or advanced ALS disease. For example, a solution of the description may include a pharmaceutical compound that decreases the death of motor neurons such as pasiniazide (tubercultatic), benzthiazide (diuretic, antihypertensive), prednisolone (glucocorticoid), topical menthol analgesic, (antipuritic), naphthalene sulfonate mebhydroline (HI, antihistamine), trichlormethiazide (diuretic, antihypertensive), oxytetracycline (antibacterial), arcaine sulfate (NOS inhibitor, NMDA inhibitor, antiprotozoal), erythromycin (antibacterial), glutathione (heavy metal poisoning) (melanizing agent, antipsoriatic agent), nylhydrin HCl (peripheral vasodilator), demethyldiazepam (sedative, minor tranquilizer), tonzilamine HCl (antihistamine), valproate (anticonvulsant Na), aminophenazone (antipyretic, analgesic), sulfamethizol (antibacterial), neuroleptics (antibacterial) , 2-Thiouracil for the thyroid (depressant), quinurenic acid (nutrient in the disease) ages of vitamin B deficiency), fusidic acid (antibacterial), leucovorin Ca (antianemic, antidote for folic acid antagonists), spartein sulfate (oxytocic), tonsillin (anti-inflammatory, experimental antineoplastic), pratnoxin HCl (anesthetic; topical), furosemide (diuretic, antihypertensive), dinitolmide (antiprotozoal), budesonide (anti-inflammatory), flopropionate (antispasmodic), fluorometholone (glucocorticoid, anti-inflammatory), Nformylmethionylphenylalanine (chemotapental-acetyl) Bretilium tosylate (orepinephrine release inhibitor), cephamandol Na (antimicrobial), oxybendazole (anthelmintic), cycloleucylglycine (inhibits sensitivity to narcotic-induced dopamine R), dantrolene Na (skeletal muscle relaxant), tetroquinone (keratolytic), piperazine (anthelmintic), esculin (anti-inflammatory), etisterone (progestin), dimetadione (anticonvulsant), griseofulvin (antifungal, inhibits mitosis in metaphase, interacts with polymerized microtubules and associated proteins), acetaminosalol (analgesic, isogyrotic) (GABA agonist), putrescine diHCl (ornithine decarboxylase inhibitor, cell growth), emetin HCl (antiabetic, inhibits the synthesis of RNA, DNA and proteins), sulfanilamide (antibacterial), mimosine (depilatory agent), acetylcholine (cardiac depressant, miotic, peripheral vasodilator), pralidoxime mesylate (cholinesterase reactivator) , lisiltriptofanil-lysine (acetate that binds to DNA), hecogenin (precursor of steroids), prednisolone acetate (glucocorticoid), albendazole (anthelmintic), hydrochlorothiazide (diuretic), demeclocycline HCl (antibacterial), nitrofurazonone (anti-tonic) , dicloxacillin Na (antibacterial), alpha-tocopherol (vitamin E deficiency), tetracycline HCl (antiamébico, antibacterial, anti-enriquetsiano), fenofibrate (anti-hyperlipémic), probenecid (uricosuric), tretinoin (keratolytic), acetaminophen (analgesic antipyretic), hydrastinin HCl (cardiotonic, uterine homeostatic), d [-Arg-2] chiotorphine acetate (analgesic), NMDA (NMDA agonist), cefmetazole Na (antimicrobial), ribavirin (Antiviral), 0-benzyl-L-serine (amino acid derivative), picrotoxin (stimulant, convulsive, GABA R antagonist, ichthyotoxin), oxetazine (local anesthetic), sulfathiazole (antibacterial), trichlormetin (antineoplastic, cytotoxic) (anti-inflammatory), chloramphenicol (antibacterial, anti-enriquetsian, inhibits protein synthesis), riluzole, ginseng and its extract, glycyrrhizin and glycyrrhizic acid, derivatives of carboquinone, coenzyme Q10, creatine, growth factor-1 insulin type, minocycline, mecamserine, xaliproden, gabapentin, dextromethorphan, talampanel, IL-1, TR500, procysteine, brain-derived neurotrophic factor, baclofen, tizanidine, benzodiazepines, glycopyrrolate, atropine, quinine, phenytoin and morphine.

Las sales biliares hidrófobas suministradas a ratas pueden inducir apoptosis en el hígado. Además, la coadministración de ácido ursodesoxicólico (UDCA) puede inhibir la apoptosis de los hepatocitos in vivo. La apoptosis tanto de en hepatocitos como en células no hepáticas puede inducirse con diversos factores tales como ácidos hidrófobos, etanol, factor- de crecimiento transformante, un anticuerpo Fas agonista, o ácido ocadaico. Sorprendentemente, el UDCA puede atenuar la apoptosis y presentar citoprotección modulando la perturbación de la membrana mitocondrial, la translocación de Bax y/o la liberación de citocromo c. Hydrophobic bile salts supplied to rats can induce apoptosis in the liver. In addition, co-administration of ursodeoxycholic acid (UDCA) can inhibit hepatocyte apoptosis in vivo. Apoptosis in both hepatocytes and non-hepatic cells can be induced with various factors such as hydrophobic acids, ethanol, transforming growth factor-,, a Fas agonist antibody, or ocadaic acid. Surprisingly, the UDCA can attenuate apoptosis and present cytoprotection by modulating mitochondrial membrane disruption, Bax translocation and / or cytochrome c release.

El ácido ursodesoxicólico (ácido 3D-7D-dihidroxi-5D-colánico; UDCA) es un ácido biliar hidrófilo no tóxico y normalmente presente en la bilis humana, aunque en una baja concentración de sólo aproximadamente el 3% de los ácidos biliares totales. El UDCA puede usarse para el tratamiento de diversos trastornos colestáticos para los que es el único fármaco aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos (FDA). Un componente principal de la bilis del oso, UDCA, puede ser útil como agente farmacéutico para el tratamiento de y la protección contra muchos tipos de enfermedades hepáticas. Sus usos médicos actualmente incluyen la disolución de cálculos biliares radiolúcidos y diversos trastornos colestáticos que son cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, colestasis intrahepática en el embarazo, enfermedad hepática asociada con fibrosis quística, varios trastorno hepáticos pediátricos, y enfermedad crónica de injerto contra hospedador del hígado. Ursodeoxycholic acid (3D-7D-dihydroxy-5D-collanic acid; UDCA) is a non-toxic hydrophilic bile acid and normally present in human bile, although at a low concentration of only about 3% of total bile acids. The UDCA can be used for the treatment of various cholestatic disorders for which it is the only drug approved by the United States Food and Drug Administration (FDA). A major component of bear bile, UDCA, can be useful as a pharmaceutical agent for the treatment of and protection against many types of liver diseases. Its medical uses currently include the dissolution of radiolucent gallstones and various cholestatic disorders that are primary biliary cirrhosis, primary sclerosing cholangitis, intrahepatic cholestasis in pregnancy, liver disease associated with cystic fibrosis, various pediatric liver disorders, and chronic graft versus host disease of the liver

La acción farmacológica del UDCA puede incluir el remplazo y/o desplazamiento de los ácidos biliares tóxicos a través de UDCA de un modo dependiente de la dosis, efectos citoprotectores de un modo dependiente de la dosis, estabilización/protección de las membranas celulares de n modo dependiente de la dosis, efectos antiapoptóticos de un modo dependiente de la dosis, efectos inmunomoduladores debido a la activación del receptor de glucocorticoides intracelular de un modo dependiente de la dosis, efectos anti-inflamatorios debidos a la represión de NF-kB y la inhibición de la inducción de la óxido nítrico sintasa, estimulación de la secreción de bilis de un modo dependiente de la dosis, estimulación de la exocitosis y la inserción de transportadores de membrana canaliculares de un modo dependiente de la dosis. The pharmacological action of UDCA may include the replacement and / or displacement of toxic bile acids through UDCA in a dose-dependent manner, cytoprotective effects in a dose-dependent manner, stabilization / protection of cell membranes in a n-way dose-dependent, antiapoptotic effects in a dose-dependent manner, immunomodulatory effects due to activation of the intracellular glucocorticoid receptor in a dose-dependent manner, anti-inflammatory effects due to repression of NF-kB and inhibition of the induction of nitric oxide synthase, stimulation of bile secretion in a dose-dependent manner, stimulation of exocytosis and the insertion of canalicular membrane transporters in a dose-dependent manner.

El UDCA es prácticamente insoluble a pH 1 a 8. La solubilidad de su forma protonada es de aproximadamente 0,05 mM. La solubilidad de su metabolito conjugado con taurina (UDCA; 0,45 mM) es aproximadamente diez veces mayor que la solubilidad de UDCA. Además, el TUDCA es el único ácido biliar (BA) con solubilidad relativamente baja cuando está protonado. Después de administración oral, aproximadamente del 30 al 60% del UDCA se absorbe a lo largo del yeyuno y el íleo por difusión pasiva no iónica y se absorbe en el íleo por mecanismos de transporte activo y en pequeña medida (el 20% de una dosis ingerida) en el colon debido a la insolubilidad del UDCA cristalino, que causa una disolución extremadamente lenta e incompleta debido a la baja solubilidad acuosa de sus moléculas no ionizadas y la mayor lipofilicidad que las especies de sales biliares ionizadas, y por lo tanto pueden dividirse en las membranas biológicas. The UDCA is practically insoluble at pH 1 to 8. The solubility of its protonated form is approximately 0.05 mM. The solubility of its taurine-conjugated metabolite (UDCA; 0.45 mM) is approximately ten times greater than the solubility of UDCA. In addition, TUDCA is the only bile acid (BA) with relatively low solubility when protonated. After oral administration, approximately 30 to 60% of the UDCA is absorbed along the jejunum and ileus by non-ionic passive diffusion and is absorbed in the ileum by active transport mechanisms and to a small extent (20% of a dose ingested) in the colon due to the insolubility of the crystalline UDCA, which causes an extremely slow and incomplete dissolution due to the low aqueous solubility of its non-ionized molecules and the greater lipophilicity than the ionized bile salt species, and therefore can be divided in the biological membranes.

Una vez captado por los hepatocitos, el UDCA puede conjugarse con TUDCA y GUDCA, siendo los dos últimos los ácidos biliares secretados en seres humanos y excretados en la bilis por la eliminación hepática de primer paso. Por consiguiente, sus niveles sanguíneos son extremadamente bajos en la circulación sistémica. Los ácidos biliares experimentan reciclado hepático extensivo, o el UDCA libre también puede secretarse por los hepatocitos en la bilis donde puede reabsorberse de forma activa y eficaz por los colangiocitos. El UDCA y el GUDCA se absorben por mecanismos de transporte tanto activos como pasivos, mientras que el UDCA tauro-conjugado (TUDCA) puede transportarse de forma activa en el íleo terminal. Once captured by hepatocytes, the UDCA can be conjugated with TUDCA and GUDCA, the last two being bile acids secreted in humans and excreted in the bile by first-pass hepatic elimination. Consequently, their blood levels are extremely low in the systemic circulation. Bile acids undergo extensive liver recycling, or free UDCA can also be secreted by hepatocytes in the bile where it can be reabsorbed actively and effectively by cholangiocytes. The UDCA and the GUDCA are absorbed by both active and passive transport mechanisms, while the Taurus-conjugate UDCA (TUDCA) can be actively transported in the terminal ileum.

En algunas realizaciones, una dosis de UDCA por encima de 10+12 mg/kg por día puede no aumentar adicionalmente su proporción en la bilis ya que una gran cantidad del UDCA puede biotransformarse en CDCA a través del ácido 7-ceto-litocólico por las bacterias intestinales. Como alternativa, el UDCA puede convertirse en CDCA por epimerización del grupo 7-hidroxilo y adicionalmente en ácido litocólico (LCA). Por lo tanto, con dosis crecientes de UDCA disminuye la absorción de UDCA. In some embodiments, a dose of UDCA above 10 + 12 mg / kg per day may not further increase its proportion in bile since a large amount of UDCA can be biotransformed into CDCA through 7-keto-lithocholic acid by intestinal bacteria Alternatively, the UDCA can be converted into CDCA by epimerization of the 7-hydroxyl group and additionally into lithocolic acid (LCA). Therefore, increasing doses of UDCA decreases the absorption of UDCA.

En algunas realizaciones, la administración de una composición de la descripción puede conseguir cantidades adecuadas de UDCA en el hígado, en la circulación sistémica, y/o en el cerebro para tener un efecto terapéutico. Una solución de la descripción puede, en algunas realizaciones, presentar solubilidad acuosa significativamente aumentada de UDCA, permeabilidad aumentada de la membrana, protección de la epimerización de UDCA en CDCA. In some embodiments, administration of a composition of the description can achieve adequate amounts of UDCA in the liver, in the systemic circulation, and / or in the brain to have a therapeutic effect. A solution of the description may, in some embodiments, exhibit significantly increased aqueous solubility of UDCA, increased membrane permeability, protection of UDCA epimerization in CDCA.

El tiempo de supervivencia y la calidad de vida para pacientes con ALS pueden mejorarse por terapia respiratoria proporcionada mientras se duerme durante las fases tempranas de la enfermedad y métodos de alimentación alternativos que mantienen una buena nutrición según progresa la enfermedad y llega a ser difícil el tragar. Hasta la fecha, solamente un fármaco, el riluzol, se ha aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos para el tratamiento de ALS. Sin embargo, la duración de la vida de pacientes que reciben riluzol solamente se amplía en unos pocos meses. Las investigaciones relacionadas con células madre y terapia génica son fronteras prometedoras, pero aún no han potenciado las opciones disponibles para los médicos de tratamiento. Survival time and quality of life for patients with ALS can be improved by respiratory therapy provided while sleeping during the early stages of the disease and alternative feeding methods that maintain good nutrition as the disease progresses and swallowing becomes difficult. . To date, only one drug, riluzole, has been approved by the United States Food and Drug Administration for the treatment of ALS. However, the life span of patients receiving riluzole is only extended in a few months. Research related to stem cells and gene therapy are promising frontiers, but they have not yet enhanced the options available to treatment physicians.

Sin el deseo de limitarse a ningún mecanismo particular de acción, la presente descripción proporciona soluciones estables y transparentes de ácidos biliares solubles que pueden mejorar un proceso neurodegenerativo. En algunas realizaciones de la descripción, las composiciones comprenden riluzol. El riluzol, el único fármaco para tratar la ALS que hasta ahora ha recibido la aprobación de la FDA, puede funcionar reduciendo la cantidad de glutamato liberado durante la transducción de señales. La eficacia del riluzol se ha demostrado principalmente en dos ensayos clínicos controlados principales. Los efectos adversos más frecuentes del fármaco son náuseas, vómitos, anorexia, diarrea, astenia, somnolencia, vértigos, parestesia circumoral, dolor abdominal y mareos. De éstos, los vértigos, la diarrea, las náuseas, la parestesia circumoral y la anorexia aparecen más frecuentemente en pacientes que reciben dosis más elevadas. Generalmente se han observado niveles séricos elevados de transaminasa en los tres meses desde el comienzo del tratamiento con riluzol, sin embargo, estos niveles retroceden después de dos a seis meses de tratamiento. Se sugiere el control de los niveles séricos de transaminasa durante el primer año de tratamiento con riluzol. Without wishing to limit themselves to any particular mechanism of action, the present description provides stable and transparent solutions of soluble bile acids that can improve a neurodegenerative process. In some embodiments of the description, the compositions comprise riluzole. Riluzole, the only drug to treat ALS that has so far received FDA approval, can work by reducing the amount of glutamate released during signal transduction. The efficacy of riluzole has been demonstrated primarily in two main controlled clinical trials. The most frequent adverse effects of the drug are nausea, vomiting, anorexia, diarrhea, asthenia, drowsiness, dizziness, circumoral paraesthesia, abdominal pain and dizziness. Of these, dizziness, diarrhea, nausea, circumoral paraesthesia and anorexia appear more frequently in patients receiving higher doses. Generally elevated serum transaminase levels have been observed within three months from the start of riluzole treatment, however, these levels recede after two to six months of treatment. Control of serum transaminase levels is suggested during the first year of treatment with riluzole.

Los ácidos biliares pueden actuar como agentes de señalización intracelular, que modulan el transporte celular, alteran los niveles intracelulares de Ca2+, y activan los receptores de superficie celular. El ácido ursodesoxicólico (UDCA) es un ácido biliar hidrófilo con eficacia clínica demostrada en el tratamiento de trastornos hepatobiliares. El UDCA puede conjugarse rápidamente con glicina o taurina in vivo para producir los ácidos glicoursodesoxicólico y tauroursodesoxicólico (TUDCA), respectivamente. El UDCA y sus derivados y conjugados pueden funcionar como agentes citoprotectores inhibiendo la apoptosis. Bile acids can act as intracellular signaling agents, which modulate cell transport, alter intracellular levels of Ca2 +, and activate cell surface receptors. Ursodeoxycholic acid (UDCA) is a hydrophilic bile acid with clinical efficacy demonstrated in the treatment of hepatobiliary disorders. The UDCA can be rapidly conjugated with glycine or taurine in vivo to produce glycerodeoxycholic and tauroursodeoxycholic acids (TUDCA), respectively. The UDCA and its derivatives and conjugates can function as cytoprotective agents by inhibiting apoptosis.

Como la neurotoxicidad por glutamato puede provocar muerte celular a través de la apoptosis, el bloqueo de la apoptosis puede ralentizar los procesos neurodegenerativos agudos y crónicos. En algunas realizaciones de la descripción, una composición de ácido biliar bloquea un efecto tóxico mediado por p53. En algunas realizaciones de la descripción, una composición de ácido biliar bloque un efecto tóxico mediado por un proceso oxidativo. Because glutamate neurotoxicity can cause cell death through apoptosis, blocking apoptosis can slow down acute and chronic neurodegenerative processes. In some embodiments of the description, a bile acid composition blocks a toxic effect mediated by p53. In some embodiments of the description, a bile acid composition blocks a toxic effect mediated by an oxidative process.

La presente descripción se refiere a una solución acuosa que comprende (i) uno o más ácidos biliares solubles, derivados de ácidos biliares solubles acuosos, sales de ácidos biliares, o ácido biliar conjugado con una amina, (colectivamente "ácido biliar"), (ii) agua, y (iii) uno o más productos solubles acuosos de la conversión del almidón o polisacáridos solubles acuosos no de almidón en una cantidad suficiente para producir una solución que no forma un precipitado a ningún pH dentro de un intervalo deseado de pH. La composición puede contener un ácido biliar o una sal de ácido biliar que por sí misma tiene eficacia farmacéutica. Las formulaciones de la descripción pueden actuar como un vehículo, un adyuvante o potenciador para el suministro de un material farmacéutico que permanece disuelto en la composición de la descripción en el intervalo deseado de pH. Como alternativa, de acuerdo con algunas realizaciones de la descripción, la composición puede comprender un agente farmacéutico de ácido biliar que es insuficientemente soluble. The present description refers to an aqueous solution comprising (i) one or more soluble bile acids, derivatives of aqueous soluble bile acids, salts of bile acids, or bile acid conjugated to an amine, (collectively "bile acid"), ( ii) water, and (iii) one or more aqueous soluble products of the conversion of non-starch aqueous soluble starch or polysaccharides in an amount sufficient to produce a solution that does not form a precipitate at any pH within a desired pH range. The composition may contain a bile acid or a bile acid salt that by itself has pharmaceutical efficacy. The formulations of the description can act as a vehicle, an adjuvant or enhancer for the supply of a pharmaceutical material that remains dissolved in the composition of the description in the desired pH range. Alternatively, according to some embodiments of the description, the composition may comprise a pharmaceutical agent of bile acid that is insufficiently soluble.

En algunas realizaciones, una ventaja de esta descripción puede ser que el ácido biliar y el carbohidrato permanezcan en solución sin precipitación a ningún pH de ácido a alcalino. Estos sistemas de solución acuosa de ácido biliar están sustancialmente libres de precipitados o partículas. Una ventaja adicional de esta descripción es que los sistemas de solución acuosa no muestran cambios en el aspecto físico tales como cambios en la transparencia, el color In some embodiments, an advantage of this description may be that bile acid and carbohydrate remain in solution without precipitation at any pH of acid to alkaline. These aqueous bile acid solution systems are substantially free of precipitates or particles. An additional advantage of this description is that aqueous solution systems do not show changes in physical appearance such as changes in transparency, color

o el olor después de la adición de ácidos o bases fuertes incluso después de varios meses de observación en condiciones aceleradas de almacenamiento a 50ºC. or the smell after the addition of strong acids or bases even after several months of observation under accelerated storage conditions at 50 ° C.

En algunas realizaciones de la descripción, se administra por vía oral un sistema de solución acuosa de un ácido biliar después de lo cual alcanza el intestino a través del tracto gastrointestinal sin precipitación de los ácidos biliares por exposición a los jugos gástricos ácidos y los jugos alcalinos del intestino. Estas formulaciones de ácido biliar disueltas muestran sistemas de solución intactos en el intestino que pueden absorberse de forma eficaz y completa y, por consiguiente, experimentar reciclado enterohepático. De acuerdo con una realización de la descripción, la solubilidad del ácido biliar (por ejemplo, la precipitación y cambios en el aspecto físico) está afectada por si una cadena lateral de ácido carboxílico de ciertos ácidos biliares puede protonarse (no ionizada), está ionizada, o es un ácido carboxílico simple. El estado de ionización de una cadena lateral de ácido carboxílico del ácido biliar puede afectar enormemente a la hidrofobicidad y la hidrofilicidad del ácido biliar en algunos sistemas de solución acuosa. En algunas realizaciones de la descripción, el estado de ionización se manipula ajustando el pH para controlar la toxicidad, la absorción, y la anfifilicidad de los ácidos biliares. Puede disolverse uno o más ácidos biliares en estos sistemas de solución acuosa como un agente terapéuticamente activo, como un adyuvante de un fármaco, como un vehículo de un fármaco o como un potenciador de la solubilidad del fármaco. Estos sistemas de solución acuosa pueden prepararse para consumo oral, enemas, enjuagues bucales, gárgaras, preparaciones nasales, preparaciones óticas, inyecciones, irrigadores, preparaciones cutáneas tópicas, preparaciones tropicales, y preparaciones cosméticas que tienen un pH deseado sin la desventaja de precipitación o deterioro en el aspecto físico después de largos periodos de tiempo. In some embodiments of the description, an aqueous solution system of a bile acid is administered orally after which it reaches the intestine through the gastrointestinal tract without precipitation of bile acids by exposure to acid gastric juices and alkaline juices. of the intestine These dissolved bile acid formulations show intact solution systems in the intestine that can be absorbed efficiently and completely and, therefore, undergo enterohepatic recycling. According to one embodiment of the description, the solubility of bile acid (for example, precipitation and changes in physical appearance) is affected by whether a carboxylic acid side chain of certain bile acids can protonate (not ionized), is ionized , or is a simple carboxylic acid. The ionization state of a carboxylic acid side chain of bile acid can greatly affect the hydrophobicity and hydrophilicity of bile acid in some aqueous solution systems. In some embodiments of the description, the ionization state is manipulated by adjusting the pH to control the toxicity, absorption, and amphiphilicity of bile acids. One or more bile acids can be dissolved in these aqueous solution systems as a therapeutically active agent, as a drug adjuvant, as a drug carrier or as a drug solubility enhancer. These aqueous solution systems can be prepared for oral consumption, enemas, mouthwashes, gargles, nasal preparations, ear preparations, injections, irrigators, topical skin preparations, tropical preparations, and cosmetic preparations that have a desired pH without the disadvantage of precipitation or deterioration in the physical aspect after long periods of time.

Los ácidos biliares solubles son cualquier tipo de ácidos biliares solubles acuosos. Una sal de ácido biliar es cualquier sal soluble acuosa de un ácido biliar. Las sales biliares muestran mayor capacidad de solubilización para fosfolípidos y colesterol y por consiguiente son mejores detergentes. Sales biliares más hidrófobas pueden ser más dañinas para diversas membranas, tanto in vivo como in vitro. Las sales acuosas de sales biliares disueltas puede formarse por la reacción de los ácidos biliares descritos anteriormente y una amina incluyendo, aunque sin limitación, aminas alifáticas libres tales como trientina, dietilentriamina, tetraetilenpentamina, y aminoácidos básicos tales como arginina, lisina, ornitina, y amoniaco, y aminoazúcares tales como D-glucamina, N-alquilglucaminas, y derivados de amonio cuaternario tales como colina, aminas heterocíclicas tales como piperazina, N-alquilpiperazina, piperidina, Nalquilpiperidina, morfolina, N-alquilmorfolina, pirrolidina, trietanolamina, y trimetanolamina. De acuerdo con la descripción, las sales metálicas solubles acuosas de ácidos biliares, el compuesto de inclusión entre el ácido biliar y ciclodextrina y sus derivados, y los ácidos biliares O-sulfonatados solubles acuosos también se incluyen como sales de ácidos biliares solubles. Soluble bile acids are any type of aqueous soluble bile acids. A bile acid salt is any aqueous soluble salt of a bile acid. Bile salts show greater solubilization capacity for phospholipids and cholesterol and therefore are better detergents. More hydrophobic bile salts can be more harmful to various membranes, both in vivo and in vitro. Aqueous salts of dissolved bile salts may be formed by the reaction of the bile acids described above and an amine including, but not limited to, free aliphatic amines such as trientine, diethylenetriamine, tetraethylenepentamine, and basic amino acids such as arginine, lysine, ornithine, and ammonia, and amino sugars such as D-glucamine, N-alkylglucamines, and quaternary ammonium derivatives such as choline, heterocyclic amines such as piperazine, N-alkylpiperazine, piperidine, Nalkylpiperidine, morpholine, N-alkylmorpholine, pyrrolidine, triethanolamine, triethanolamine. According to the description, aqueous soluble metal salts of bile acids, the inclusion compound between bile acid and cyclodextrin and its derivatives, and aqueous soluble O-sulfonated bile acids are also included as salts of soluble bile acids.

Los derivados de ácido biliar solubles de acuerdo con algunas realizaciones de esta descripción, pueden ser aquellos derivados que son tan solubles en solución acuosa como o más solubles en solución acuosa que el ácido biliar no derivatizado correspondiente. Los derivados de ácido biliar incluyen, aunque sin limitación, derivados formados en los grupos hidroxilo y ácido carboxílico del ácido biliar con otros grupos funcionales incluyendo, aunque sin limitación, halógenos y grupos amino. El ácido biliar soluble puede incluir una preparación acuosa de una forma de ácido libre del ácido biliar combinada con uno de HCl, ácido fosfórico, ácido cítrico, ácido acético, amoniaco, o arginina. The soluble bile acid derivatives according to some embodiments of this description may be those derivatives that are as soluble in aqueous solution as or more soluble in aqueous solution than the corresponding non-derivatized bile acid. Bile acid derivatives include, but are not limited to, derivatives formed in the hydroxyl and carboxylic acid groups of bile acid with other functional groups including, but not limited to, halogens and amino groups. Soluble bile acid may include an aqueous preparation of a bile acid free acid form combined with one of HCl, phosphoric acid, citric acid, acetic acid, ammonia, or arginine.

Los ácidos biliares que pueden usarse de acuerdo con los contenidos de esta descripción incluyen, sin limitación, ácido ursodesoxicólico, ácido quenodesoxicólico, ácido cólico, ácido hiodesoxicólico, ácido desoxicólico, ácido 7-oxolitocólico, ácido litocólico, ácido yododesoxicólico, ácido iocólico, ácido tauroursodesoxicólico, ácido tauroquenodesoxicólico, ácido taurodesoxicólico, ácido taurolitocólico, ácido glicoursodesoxicólico, ácido taurocólico, ácido glicocólico, y sus derivados en un grupo hidroxilo o ácido carboxílico en el núcleo esteroide. En algunas realizaciones de la descripción, una ventaja puede ser que el suministro del ácido biliar en solución consigue niveles mayores in vivo de ácidos biliares que las preparaciones comerciales existentes. Por lo tanto, el potencial terapéutico del ácido biliar puede conseguirse más completamente que con las formulaciones previas. Los niveles in vivo de ácidos biliares que se pueden obtener con las formulaciones existentes en las que el ácido biliar se solubiliza completamente son inferiores y requieren la administración de cantidades mayores de ácidos biliares. Como el ácido biliar se disuelve completamente en las formulaciones de la invención, pueden conseguirse niveles in vivo mayores de ácido biliar, incluso aunque se administren dosis inferiores. Bile acids that can be used in accordance with the contents of this description include, without limitation, ursodeoxycholic acid, chenodeoxycholic acid, colic acid, hyodeoxycholic acid, deoxycholic acid, 7-oxolitocolic acid, lithocholic acid, iododeoxycholic acid, iocolic acid, tauroursodeoxycholic acid , tauroquenodeoxycholic acid, taurodeoxycholic acid, taurolitocolic acid, glycerodeoxycholic acid, taurocholic acid, glycolic acid, and their derivatives in a hydroxyl group or carboxylic acid in the steroid nucleus. In some embodiments of the description, an advantage may be that the supply of bile acid in solution achieves higher in vivo levels of bile acids than existing commercial preparations. Therefore, the therapeutic potential of bile acid can be achieved more completely than with the previous formulations. The in vivo levels of bile acids that can be obtained with existing formulations in which the bile acid is completely solubilized are lower and require the administration of larger amounts of bile acids. Since bile acid dissolves completely in the formulations of the invention, higher levels of bile acid can be achieved in vivo, even if lower doses are administered.

En algunas realizaciones de la descripción, puede usarse una pluralidad de ácidos biliares en una única formulación. Las mezclas de dos o más sales biliares de actividad hidrófoba diferente pueden comportarse como una única sal biliar de una actividad hidrófoba intermedia. Como resultado, las propiedades detergentes y la toxicidad de las mezclas de dos ácidos biliares de actividad hidrófoba diferente a menudo son intermedias entre los componentes individuales. In some embodiments of the description, a plurality of bile acids can be used in a single formulation. Mixtures of two or more bile salts of different hydrophobic activity can behave as a single bile salt of an intermediate hydrophobic activity. As a result, the detergent properties and toxicity of mixtures of two bile acids of different hydrophobic activity are often intermediate between the individual components.

Las mezclas de dos o más sales biliares de actividad hidrófoba diferente pueden comportarse como una única sal biliar de una actividad hidrófoba intermedia. Como resultado, las propiedades detergentes y la toxicidad de las mezclas de dos ácidos biliares de actividad hidrófoba diferente a menudo son intermedias entre los componentes individuales. Mixtures of two or more bile salts of different hydrophobic activity can behave as a single bile salt of an intermediate hydrophobic activity. As a result, the detergent properties and toxicity of mixtures of two bile acids of different hydrophobic activity are often intermediate between the individual components.

Los carbohidratos adecuados para su uso en la descripción incluyen productos solubles acuosos de la conversión del almidón y polisacáridos solubles acuosos no de almidón. De acuerdo con algunas realizaciones de la presente descripción, los productos solubles acuosos de la conversión del almidón incluyen carbohidratos obtenidos directamente de la hidrólisis parcial o incompleta del almidón en diversas condiciones de pH. Los ejemplos no limitantes incluyen maltodextrina, dextrina, glucosa líquida, jarabe de maíz sólido (polvo seco de glucosa líquida), y almidón soluble (por ejemplo, maltodextrina o jarabe de maíz sólido). En algunas realizaciones, puede usarse MALTRIN® M200, un jarabe de maíz sólido, y MALTRIN® M700, una maltodextrina, ambos cuales están fabricados por GPC®, Grain Processing Corporation of Muscatine, Iowa. Para el propósito de esta realización, la expresión "jarabe de maíz" incluye tanto jarabe de maíz como glucosa líquida. Si un producto de conversión del almidón es polimérico, el polímero tiene al menos un extremo reductor y al menos un extremo no reductor y puede ser lineal o ramificado. El peso molecular puede ser de aproximadamente 100 unidades de masa hasta más de 106 unidades de masas. Los productos solubles acuosos de la conversión del almidón de elevado peso molecular son aquellos que tienen un peso molecular de más de 105. Suitable carbohydrates for use in the description include aqueous soluble starch conversion products and non-starch aqueous soluble polysaccharides. In accordance with some embodiments of the present description, aqueous soluble starch conversion products include carbohydrates obtained directly from partial or incomplete hydrolysis of starch under various pH conditions. Non-limiting examples include maltodextrin, dextrin, liquid glucose, solid corn syrup (dry liquid glucose powder), and soluble starch (eg, maltodextrin or solid corn syrup). In some embodiments, MALTRIN® M200, a solid corn syrup, and MALTRIN® M700, a maltodextrin, both of which are manufactured by GPC®, Grain Processing Corporation of Muscatine, Iowa can be used. For the purpose of this embodiment, the expression " corn syrup "includes both corn syrup and liquid glucose. If a starch conversion product is polymeric, the polymer has at least one reducing end and at least one non-reducing end and can be linear or branched. The molecular weight can be from about 100 mass units to more than 106 mass units. Aqueous soluble products of high molecular weight starch conversion are those with a molecular weight of more than 105.

De acuerdo con algunas realizaciones de la presente descripción, los polisacáridos solubles acuosos no de almidón pueden estar en diversas condiciones de pH por diversos mecanismos hidrolíticos o sintéticos. Los ejemplos no limitantes incluyen dextrano, goma guar, pectina, fibra soluble no digerible. Si son poliméricos, el polímero tiene al menos un extremo reductor y al menos un extremo no reductor. El polímero puede ser lineal o ramificado. El peso molecular es de aproximadamente 100 unidades de masa hasta más de 106 unidades de masa. Preferiblemente el peso molecular es de más de 105 unidades de masa. According to some embodiments of the present description, the non-starch aqueous soluble polysaccharides may be in various pH conditions by various hydrolytic or synthetic mechanisms. Non-limiting examples include dextran, guar gum, pectin, soluble, non-digestible fiber. If they are polymeric, the polymer has at least one reducing end and at least one non-reducing end. The polymer can be linear or branched. The molecular weight is about 100 mass units to more than 106 mass units. Preferably the molecular weight is more than 105 mass units.

La cantidad de producto soluble acuoso de la conversión del almidón de elevado peso molecular y/o polisacárido soluble no de almidón usada en realizaciones de la descripción es al menos la cantidad necesaria para volver al ácido o ácidos biliares elegidos en la preparación solubles en la concentración deseada y en el intervalo de pH deseado. En algunas realizaciones de la descripción, la proporción ponderal mínima de maltodextrina a UDCA necesaria para evitar la precipitación del UDCA es de 6:1 (es decir 1,2 g por cada 0,2 g de UDCA, 6 g por cada 1 g de UDCA, y 12 g por cada 2 g de UDCA en 100 ml de agua). En algunas realizaciones de la descripción, la cantidad mínima aproximada de maltodextrina es de 30 g por cada 200 mg de ácido quenodesoxicólico, 12 g por cada 200 mg de ácido 7-cetolitocólico, 10 g por cada 200 mg de ácido cólico y 50 g por cada 200 mg de ácido desoxicólico. En algunas realizaciones de la descripción, la proporción ponderal mínima aproximada de glucosa líquida (jarabe de maíz ligero comercial) a UDCA necesaria para evitar la precipitación de los ácidos biliares en las formas de dosificación de solución acuosa de la descripción es de aproximadamente 25:1 (es decir 12,5 g por cada 500 mg de UDCA en 100 ml de agua y 25 g por cada 1 g de ácido ursodesoxicólico en 200 ml de agua). En algunas realizaciones de la descripción, la cantidad mínima aproximada de polvo seco de glucosa líquida (jarabe de maíz sólido, por ejemplo MALTRIN® M200) necesaria para evitar la precipitación de los ácidos biliares en las formas de dosificación de solución acuosa de la descripción es de 30 g por cada 1 g de ácido ursodesoxicólico en 100 ml de agua, y de aproximadamente 60 g por cada 2 g de ácido ursodesoxicólico en 200 ml de agua. En algunas realizaciones de la descripción, la cantidad mínima aproximada de polisacárido soluble no de almidón necesaria para evitar la precipitación de los ácidos biliares en las formas de dosificación de solución acuosa de la descripción es de 50 g de goma guar por cada 500 mg de ácido ursodesoxicólico en 100 ml de agua y 80 g de pectina por cada 500 mg de ácido ursodesoxicólico en 100 ml de agua. La cantidad mínima necesaria de productos solubles acuosos de la conversión del almidón de elevad peso molecular o polisacárido soluble no de almidón se determina principalmente por la cantidad absoluta de ácidos biliares en la formulación de solución en lugar de la concentración. The amount of aqueous soluble product of the conversion of the high molecular weight starch and / or non-starch soluble polysaccharide used in embodiments of the description is at least the amount necessary to return to the concentration or bile acids chosen in the preparation soluble in the concentration desired and in the desired pH range. In some embodiments of the description, the minimum weight ratio of maltodextrin to UDCA necessary to prevent precipitation of the UDCA is 6: 1 (ie 1.2 g for every 0.2 g of UDCA, 6 g for every 1 g of UDCA, and 12 g for every 2 g of UDCA in 100 ml of water). In some embodiments of the description, the approximate minimum amount of maltodextrin is 30 g per 200 mg of chenodeoxycholic acid, 12 g per 200 mg of 7-ketocytocholic acid, 10 g per 200 mg of colic acid and 50 g per every 200 mg of deoxycholic acid. In some embodiments of the description, the approximate minimum weight ratio of liquid glucose (commercial light corn syrup) to UDCA necessary to prevent precipitation of bile acids in the aqueous solution dosage forms of the description is approximately 25: 1 (i.e. 12.5 g for every 500 mg of UDCA in 100 ml of water and 25 g for every 1 g of ursodeoxycholic acid in 200 ml of water). In some embodiments of the description, the approximate minimum amount of dry liquid glucose powder (solid corn syrup, for example MALTRIN® M200) necessary to prevent precipitation of bile acids in the aqueous solution dosage forms of the description is 30 g per 1 g of ursodeoxycholic acid in 100 ml of water, and approximately 60 g per 2 g of ursodeoxycholic acid in 200 ml of water. In some embodiments of the description, the approximate minimum amount of soluble non-starch polysaccharide necessary to prevent precipitation of bile acids in the aqueous solution dosage forms of the description is 50 g of guar gum per 500 mg of acid ursodeoxycholic in 100 ml of water and 80 g of pectin per 500 mg of ursodeoxycholic acid in 100 ml of water. The minimum amount of aqueous soluble products required for the conversion of high molecular weight starch or non-starch soluble polysaccharide is determined primarily by the absolute amount of bile acids in the solution formulation instead of the concentration.

En algunas realizaciones de la descripción, una formulación puede comprender ciclodextrina además de un producto de la conversión del almidón y/o un polisacárido no de almidón. Como alternativa, en algunas realizaciones, una composición de la descripción puede carecer de ciclodextrina. In some embodiments of the description, a formulation may comprise cyclodextrin in addition to a starch conversion product and / or a non-starch polysaccharide. Alternatively, in some embodiments, a composition of the description may lack cyclodextrin.

En algunas realizaciones de la descripción, la formulación comprende adicionalmente fibra de la dieta. Los ejemplos no limitantes de fibra de la dieta incluyen goma guar, pectina, psilio, goma de avena, fibra de soja, salvado de avena, salvado de maíz, celulosa y salvado de trigo. In some embodiments of the description, the formulation additionally comprises dietary fiber. Non-limiting examples of dietary fiber include guar gum, pectin, psyllium, oatmeal, soy fiber, oat bran, corn bran, cellulose and wheat bran.

En algunas realizaciones de la descripción, la formulación comprende adicionalmente agentes emulsionantes. Para el propósito de la descripción, la expresión "agente emulsionante" incluye agentes emulsionantes y agentes de suspensión. Los ejemplos no limitantes de agentes emulsionantes incluyen goma guar, pectina, goma arábiga, carragenina, carboximetilcelulosa sódica, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa, alcohol polivinílico, povidona, goma de tragacanto, goma xantana, y éster de sorbitán. In some embodiments of the description, the formulation further comprises emulsifying agents. For the purpose of the description, the term "emulsifying agent" includes emulsifying agents and suspending agents. Non-limiting examples of emulsifying agents include guar gum, pectin, gum arabic, carrageenan, sodium carboxymethylcellulose, hydroxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, polyvinyl alcohol, povidone, tragacanth gum, xanthan gum, and sorbitan ester.

El intervalo de pH seleccionado para que la formulación no precipite su ácido biliar, producto de la conversión del almidón, polisacárido soluble no de almidón o su compuesto farmacéutico puede ser cualquier intervalo de niveles de pH obtenibles con un sistema acuoso. Preferiblemente, este intervalo es entre aproximadamente pH 1 y aproximadamente pH 14 y más preferiblemente entre aproximadamente pH 1 y aproximadamente pH 10. Aún más preferiblemente el intervalo es cualquier subconjunto del intervalo de niveles de pH obtenibles en un sistema acuoso suficiente para que una formulación farmacéutica permanezca en solución desde la preparación, hasta la administración, y hasta la absorción en el cuerpo, de acuerdo con el método de administración. Por tanto, la composición puede usarse como una formulación farmacéutica en la que el compuesto farmacéutico permanece en solución sin precipitación a los niveles de pH predominantes en la boca, el estómago y los intestinos. En algunas realizaciones de la descripción, un ácido biliar permanece disuelto en condiciones ácidas como un ácido biliar libre a pesar de la insolubilidad general de los ácidos biliares en condiciones ácidas. The pH range selected so that the formulation does not precipitate its bile acid, product of the conversion of starch, soluble non-starch polysaccharide or its pharmaceutical compound can be any range of pH levels obtainable with an aqueous system. Preferably, this range is between about pH 1 and about pH 14 and more preferably between about pH 1 and about pH 10. Even more preferably the range is any subset of the range of pH levels obtainable in an aqueous system sufficient for a pharmaceutical formulation. remain in solution from preparation, until administration, and until absorption in the body, according to the method of administration. Therefore, the composition can be used as a pharmaceutical formulation in which the pharmaceutical compound remains in solution without precipitation at the predominant pH levels in the mouth, stomach and intestines. In some embodiments of the description, a bile acid remains dissolved under acidic conditions such as a free bile acid despite the general insolubility of bile acids under acidic conditions.

En algunas realizaciones de la descripción, el agente farmacéutico es riluzol. Los ejemplos no limitantes de otros compuestos farmacéuticos incluyen hormonas, antagonistas de hormonas, analgésicos, antipiréticos, fármacos anti-inflamatorio, fármacos inmuno-reactivos, fármacos antineoplásicos, antibióticos, agentes anti-inflamatorios, fármacos simpatomiméticos, fármacos anti-infecciosos, agentes anti-tumorales, y anestésicos. Ejemplos adicionales incluyen fármacos que están dirigidos o afectan al tracto gastrointestinal, el hígado, el sistema cardiovascular, y el sistema respiratorio. Ejemplos no limitantes adicionales de compuestos farmacéuticos incluyen insulina, heparina, calcitonina, ampicilina, octreotida, citrato de sildenafil, calcitriol, dihidrotaquisterol, ampomorfina, yohimbina, trazodona, aciclovir, amantadina»HCI, rimantadina»HCI, cidofovir, mesilato de delavirdina, didanosina, fameciclovir, forscarnet sódico, fluorouracilo, ganciclovir sódico, idoxuridina, interferón-, lamivudina, nevirapina, penciclovir, ribavirina, estavudina, trifluridina, valacoclovir*HCl, zalcitabina, zidovudina, indinavir*H2SO4, ritonavir, netfinavir«CH3SO3H, saquinavir*CH3SO3H, d-penicilamina, cloroquina, hidroxicloroquina, aurotioglucosa, tiomalato sódico de oro, auranofina levamisol, DTC, isoprinosina, metil inosina monofosfato, muramil dipéptido, diazoxida, hidralazina»HCI, minoxidil, dipiridamol, isoxsuprina*HCl, niacina, nilidrina»HCl, fentolamina, doxazosina*CH3SO3H, prazosina*HCl, teraxocina»HCl, clonidina*HCl, nifedipina, molsidomina, amiodarona, ácido acetilsalicílico, verapamil, diltiazem, nisoldipina, isradipina, bepridil, dinitrato de isosorbide, tetranitrato de pentaeritritol, nitroglicerina, cimetidina, famotidina, nizatidina, ranitidina, lansoprazol, omeprazol, misoprostol, sucralfato, metoclopramida*HCl, eritromicina, compuesto de bismuto, alprostadil, albuterol, pirbuterol, terbutalina*H2SO4, salmetrol, aminofilina, difilina, efedrina, etilnorepinefrina, isoetarina, isoproterenol, metaproterenol, n-docromil, oxitrifilina, teofilina, bitolterol, fenoterol, budesonida, flunisolida, dipropionato de beclometasona, propionato de fluticasona, codeína, sulfato de codeína, fosfato de codeína, dextrometorfano*HBr, triamcinolona*acetonida, montelukast sódico, zafirlukast, zileuton, cromolina sódica, bromuro de ipratropio, benzonato sódico de nedocromil, difenhidramina»HCl, bitartarato de hidrocodona, metadona*HCl, sulfato de morfina, acetilcisteína, guaifenesina, carbonato de amonio, cloruro de amonio, tartarato de potasio y antimonio, glicerina, terpina*hidrato, palmitato de colfosceril, atorvastatina*calcio, cervastatina»sodio, fluvastatina*sodio, lovastatina, pravastatina»sodio, simvastatina, picrorrhazia kurrva, andrographis paniculata, moringa oleifera, albizzia lebeck, adhata vasica, curcuma longa, momordica charantia, gymnema sylvestre, terminalia arjuna, azadirachta indica, tinosporia cordifolia, metronidazol, anfotericina B, clotrimazol, fluconazol, haloprogina, cetoconazol, griseofulvina, itraconazol, terbinafina»HCl, econazol*HNO3, miconazol, nistatina, oxiconazol«HNO3, sulconazol*HNO3, cetirizina»2HCl, dexametasona, hidrocortisona, prednisolona, cortisona, catequiza y sus derivados, glicirricina, ácido glicirrícico, betametasona, acetato de ludrocortisona, flunisolida, propionato de fluticasona, metil prednisolona, somatostatina, lispro, glucagón, proinsulina, insulinas insolubles, acarbosa, clorpropamida, glipizida, gliburida, metformina*HCl, repaglinida, tolbutamida, aminoácido, colchicina, sulfinpirazona, alopurinol, piroxicam, tolmetina sódica, indometacina, ibuprofeno, diflunisal, ácido mefenámico, naproxeno, y trientina. In some embodiments of the description, the pharmaceutical agent is riluzole. Non-limiting examples of other pharmaceutical compounds include hormones, hormone antagonists, analgesics, antipyretics, anti-inflammatory drugs, immuno-reactive drugs, antineoplastic drugs, antibiotics, anti-inflammatory agents, sympathomimetic drugs, anti-infective drugs, anti-inflammatory agents. Tumor and anesthetic. Additional examples include drugs that are targeted or affect the gastrointestinal tract, the liver, the cardiovascular system, and the respiratory system. Additional non-limiting examples of pharmaceutical compounds include insulin, heparin, calcitonin, ampicillin, octreotide, sildenafil citrate, calcitriol, dihydrotaquisterol, ampomorphine, yohimbine, trazodone, acyclovir, amantadine »HCI, rimantadine» HCI, cidofovirine, deladylate mesylate fameciclovir, sodium forscarnet, fluorouracil, sodium ganciclovir, idoxuridine, interferon-, lamivudine, nevirapine, penciclovir, ribavirin, stavudine, trifluridine, valacoclovir * HCl, zalcitabine, zidovudine, chonavir SO3, chinavir 3 H, navir SO3, CH3virvir, H3 d-penicillamine, chloroquine, hydroxychloroquine, aurothioglucose, golden sodium thiomalate, auranofin levamisole, DTC, isoprinosine, methyl inosine monophosphate, muramyl dipeptide, diazoxide, hydralazine »HCI, minoxidil, dipyridamole, isoxsuprine HCl , doxazosin * CH3SO3H, prazosin * HCl, teraxocin »HCl, clonidine * HCl, nifedipine, molsidomine, amiodarone, ace acid tilsalicylic, verapamil, diltiazem, nisoldipine, isradipine, bepridil, isosorbide dinitrate, pentaerythritol tetranitrate, nitroglycerin, cimetidine, famotidine, nizatidine, ranitidine, lansoprazole, omeprazole, misprostol, thrompthrochloride, eroprostide, mothromate, thrompthrochloride, erythrochloride, bichlorochromate, michlorochromate, thrompthrochloride, erythrochloride, bichlorochromate, michlorochromicide albuterol, pyrbuterol, terbutaline * H2SO4, salmetrol, aminophylline, diphilin, ephedrine, ethylnorepinephrine, isoetarin, isoproterenol, metaproterenol, n-docromil, oxytrifillin, theophylline, bitolterol, fenoterol, budesonide, flionacin, codesonate, flunisolide, dethionate, flunisolide, deionic acid codeine sulfate, codeine phosphate, dextromethorphan * HBr, triamcinolone * acetonide, montelukast sodium, zafirlukast, zileuton, sodium chromoline, ipratropium bromide, nedocromil sodium benzonate, diphenhydramine »HCl, hydrocodone sulfonate, methaphine , acetylcysteine, guaifenesin, ammonium carbonate, ammonium chloride, potassium tartarate and ant imonium, glycerin, terpina * hydrate, colfosceril palmitate, atorvastatin * calcium, cervastatin »sodium, fluvastatin * sodium, lovastatin, pravastatin» sodium, simvastatin, picrorrhazia kurrva, andrographis paniculata, moringa oleifera, albizzma lebeica, adbmaia lebeica, curb, lebicate momordica charantia, gymnema sylvestre, terminalia arjuna, azadirachta indica, tinosporia cordifolia, metronidazole, amphotericin B, clotrimazole, fluconazole, haloprogin, ketoconazole, griseofulvin, itraconazole, terbinafine »HCl, econazole * HNO3, nconazole, honazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol, nonazol HNO3, cetirizine »2HCl, dexamethasone, hydrocortisone, prednisolone, cortisone, catechism and its derivatives, glycyrrhizin, glycyrrhizic acid, betamethasone, ludrocortisone acetate, flunisolide, fluticasone propionate, methyl prednisolone, somatolinsin, insulin glutanesin, somatolinsin, insulin, insulin acarbose, chlorpropamide, glipizide, glyburide, metformin * HCl, repaglinide, tolbutamide, amino acid, colchic ina, sulfinpyrazone, allopurinol, piroxicam, sodium tolmetin, indomethacin, ibuprofen, diflunisal, mefenamic acid, naproxen, and trientine.

Ejemplos adicionales de compuestos farmacéuticos que pueden incluirse en la formulación, son cualquier compuesto que permanezca soluble cuando se añada a la formulación. Con un compuesto farmacéutico adicional en la formulación, un ácido biliar en solución puede actuar como un adyuvante, vehículo, o potenciador para la solubilidad de ciertos agentes terapéuticamente activos, incluyendo, aunque sin limitación, insulina (pH 7,4-7,8), heparina (pH 5-7,5), calcitonina, ampicilina, amantadina, rimantadina, sildenafil, sulfato de neomicina (pH 5-7,5), apomorfina, yohimbina, trazodona, ribavirina, paclitaxel y sus derivados, retinol, y tretinoína, que son solubles y estables en ácido y/o base y pueden añadirse según se necesite a estas formas de dosificación en solución acuosa de ciertas concentraciones de ácidos biliares de esta descripción. Ciertos agentes terapéuticamente activos, incluyendo, aunque sin limitación, metformina HCl (pH 5-7), ranitidina HCl, cimetidina, lamivudina, cetirizina 2HCl (pH 4-5), amantadina, rimantadina, sildenafil, apomorfina, yohimbina, trazodona, ribavirina y dexametasona, hidrocortisona, prednisolona, triamcinolona, cortisona, niacina, taurina, vitaminas, aminoácidos de origen natural, catequina y sus derivados, extracto de glicirricina y sus constituyentes principales tales como glicirricina y ácido glicirrícico, compuestos de bismuto solubles en agua (por ejemplo, tartrato sódico de bismuto), y que son solubles y estable en ácido y/o base pueden añadirse según sea necesario a estas formulaciones de dosificación en solución acuosa que contienen ácido ursodesoxicólico de esta descripción. Additional examples of pharmaceutical compounds that can be included in the formulation are any compound that remains soluble when added to the formulation. With an additional pharmaceutical compound in the formulation, a bile acid in solution can act as an adjuvant, carrier, or enhancer for the solubility of certain therapeutically active agents, including, but not limited to, insulin (pH 7.4-7.8) , heparin (pH 5-7.5), calcitonin, ampicillin, amantadine, rimantadine, sildenafil, neomycin sulfate (pH 5-7.5), apomorphine, yohimbine, trazodone, ribavirin, paclitaxel and its derivatives, retinol, and tretinoin , which are soluble and stable in acid and / or base and can be added as needed to these dosage forms in aqueous solution of certain concentrations of bile acids of this description. Certain therapeutically active agents, including, but not limited to, metformin HCl (pH 5-7), ranitidine HCl, cimetidine, lamivudine, cetirizine 2HCl (pH 4-5), amantadine, rimantadine, sildenafil, apomorphine, yohimbine, trazodone, ribavirin and dexamethasone, hydrocortisone, prednisolone, triamcinolone, cortisone, niacin, taurine, vitamins, naturally occurring amino acids, catechin and its derivatives, glycyrrhizine extract and its main constituents such as glycyrrhizin and glycyrrhizic acid, water-soluble bismuth compounds (for example, sodium bismuth tartrate), and which are soluble and stable in acid and / or base can be added as necessary to these aqueous solution dosage formulations containing ursodeoxycholic acid of this description.

Algunas realizaciones de la descripción pueden poner en práctica con agentes de ajuste del pH. Los ejemplos no limitantes incluyen HCl, H3PO4, H2SO4, HNO3, CH3COOH, ácido cítrico, ácido málico, ácido tartárico, ácido láctico, fosfato, ácido eidético y bases. Some embodiments of the description may be implemented with pH adjusting agents. Non-limiting examples include HCl, H3PO4, H2SO4, HNO3, CH3COOH, citric acid, malic acid, tartaric acid, lactic acid, phosphate, eidetic acid and bases.

La descripción contempla el tratamiento de ALS, trastornos relacionados con ALS. The description includes the treatment of ALS, disorders related to ALS.

En algunas realizaciones de la descripción, la formulación está comprendida en una solución parenteral (por ejemplo, una solución inyectable, una solución, un jarabe, un jarabe espeso o una pasta). Un ejemplo no limitante de un jarabe es una solución de maltodextrina donde la concentración de maltodextrina es de menos de 500 g/l. Un ejemplo no limitante de un jarabe es una solución de maltodextrina donde la concentración de maltodextrina está entre 500 g/l y 1,0 kg/l inclusive. Un ejemplo no limitante de un jarabe espeso es una solución de maltodextrina donde la concentración de maltodextrina está entre 1,0 kg/l y 1,2 kg/l inclusive. Un ejemplo no limitante de una pasta es una solución de maltodextrina donde la concentración de maltodextrina es mayor de 1,2 kg/l. In some embodiments of the description, the formulation is comprised in a parenteral solution (for example, an injectable solution, a solution, a syrup, a thick syrup or a paste). A non-limiting example of a syrup is a solution of maltodextrin where the concentration of maltodextrin is less than 500 g / l. A non-limiting example of a syrup is a solution of maltodextrin where the concentration of maltodextrin is between 500 g / l and 1.0 kg / l inclusive. A non-limiting example of a thick syrup is a solution of maltodextrin where the concentration of maltodextrin is between 1.0 kg / l and 1.2 kg / l inclusive. A non-limiting example of a paste is a solution of maltodextrin where the concentration of maltodextrin is greater than 1.2 kg / l.

La estabilidad de las formulaciones de dosificación de la descripción puede evaluarse midiendo la concentración del ácido biliar pertinente en el tiempo en preparaciones que comprenden ácido biliar soluble, un producto soluble acuoso de la conversión del almidón de elevado peso molecular, y agua a diversos niveles de pH y temperatura. El tiempo de retención (cromatografía líquida de alto rendimiento) de cada ácido biliar puede ajustarse según se necesite para permitir el análisis individual de cada ácido biliar presente en muestras complejas, es decir, una muestra que tiene una pluralidad de ácidos biliares. Los ensayos de estabilidad también pueden realizarse evaluando las propiedades de dispersión de la luz de una solución de ensayo. Además, pueden usarse condiciones de ensayo aceleradas estabilizadas. The stability of the dosage formulations of the description can be evaluated by measuring the concentration of the relevant bile acid over time in preparations comprising soluble bile acid, an aqueous soluble product of high molecular weight starch conversion, and water at various levels of pH and temperature The retention time (high performance liquid chromatography) of each bile acid can be adjusted as needed to allow individual analysis of each bile acid present in complex samples, that is, a sample having a plurality of bile acids. Stability tests can also be performed by evaluating the light scattering properties of a test solution. In addition, stabilized accelerated test conditions can be used.

Todos los ensayos de estabilidad realizados sobre soluciones de la descripción fueron satisfactorios ya que la concentración del ácido biliar medida por HPLC no cambiaba de forma apreciable en el tiempo a diversos niveles de pH. Particularmente, todas las formulaciones en solución de ácido biliar ensayadas mostraron excelentes resultados en los ensayos de estabilidad son precipitación ni cambios en el aspecto físico durante el periodo de ensayo. Algunas formulaciones permanecen estables durante más de 2 años. Las formas de dosificación en solución acuosa de acuerdo con esta descripción que se ensayaron no cambiaron ni física no químicamente a diversas condiciones de pH en las condiciones aceleradas a pesar de la adición de agentes terapéutica y químicamente activos que son estables y solubles en solución de ácido clorhídrico. Por lo tanto, estos sistemas de solución acuosa pueden ser formas de dosificación farmacéuticas extremadamente valiosas para las preparaciones de ácidos biliares terapéuticamente activos, y/o las preparaciones de suministro de fármaco (compuesto farmacéutico) en las que los ácidos biliares desempeñan tareas como adyuvante del fármaco, vehículo del fármaco, o potenciador de la solubilidad de un fármaco por formación de micelas a diversas condiciones de pH son problemas de estabilidad, incluyendo precipitación, en condiciones ácidas. All stability tests performed on solutions of the description were satisfactory since the concentration of bile acid measured by HPLC did not change appreciably over time at various pH levels. Particularly, all bile acid solution formulations tested showed excellent results in the stability tests are precipitation or changes in physical appearance during the test period. Some formulations remain stable for more than 2 years. The dosage forms in aqueous solution according to this description that were tested did not change even physically or chemically at various pH conditions under accelerated conditions despite the addition of therapeutically and chemically active agents that are stable and soluble in acid solution. hydrochloric. Therefore, these aqueous solution systems can be extremely valuable pharmaceutical dosage forms for therapeutically active bile acid preparations, and / or drug delivery preparations (pharmaceutical compound) in which bile acids perform tasks as adjuvant to the drug, drug carrier, or drug solubility enhancer by micelle formation at various pH conditions are stability problems, including precipitation, in acidic conditions.

Se trataron células neuronales humanas con una solución de la descripción y 50 M de peróxido de hidrógeno y/o cisplatino. El peróxido de hidrógeno es un fuerte oxidante. El cisplatino estimula la producción de especies de oxígeno reactivas (ROS), que interfieren con el sistema de defensa antioxidante. La proliferación celular y la apoptosis se analizaron después por medición de la reducción de MTT. Varios estudios, que usan ROS exógena, y H2O2, en particular, demuestran que la exposición de células del músculo liso vascular (VSMC) periféricas humanas y de rata a niveles relativamente bajos de estrés oxidante, durante cortos periodos, promueve el crecimiento celular, mientras que una exposición prolongada a concentraciones mayores condice a muerte celular, ya sea por apoptosis o necrosis. Human neuronal cells were treated with a solution of the description and 50 µM of hydrogen peroxide and / or cisplatin. Hydrogen peroxide is a strong oxidant. Cisplatin stimulates the production of reactive oxygen species (ROS), which interfere with the antioxidant defense system. Cell proliferation and apoptosis were then analyzed by measurement of MTT reduction. Several studies, which use exogenous ROS, and H2O2, in particular, show that exposure of human and rat peripheral vascular smooth muscle cells (VSMC) to relatively low levels of oxidative stress, for short periods, promotes cell growth, while that prolonged exposure to higher concentrations results in cell death, either by apoptosis or necrosis.

La viabilidad celular para el peróxido de hidrógeno con y sin solución de la descripción se evaluó usando el ensayo MTT. Las células tratadas con una solución de la descripción (0,2 mg/ml de UDCA solubilizado) y peróxido de hidrógeno (50 M) presentaron la mayor viabilidad celular (el 75% en comparación con el control, 100%). La viabilidad celular más baja (el 26% en comparación con el control, 100%) se observó en células tratadas con peróxido de hidrógeno (50 M) solo. Estos efectos se hallaron de un modo dependiente de la dosificación. The cell viability for hydrogen peroxide with and without solution of the description was evaluated using the MTT assay. Cells treated with a solution of the description (0.2 mg / ml of solubilized UDCA) and hydrogen peroxide (50 µM) had the highest cell viability (75% compared to the control, 100%). The lowest cell viability (26% compared to the control, 100%) was observed in cells treated with hydrogen peroxide (50 M) alone. These effects were found in a dosage dependent manner.

La viabilidad celular en presencia de cisplatino se evaluó de una forma similar. La mayor viabilidad celular (el 87% en comparación con el control, 100%) se observó en células tratadas tanto con cisplatino (20 M) como con una solución de la descripción (1 mg/ml de UDCA soluble), mientras que la viabilidad celular más baja (el 35% en comparación con el control, 100%) se observó en células tratadas con cisplatino (20 M) solo. Estos efectos también se hallaron de un modo dependiente de la dosificación. De acuerdo con los ensayos MTT, una solución de la descripción puede bloquear casi completamente la citotoxicidad oxidativa inducida por peróxido de hidrógeno y puede bloquear completamente la citotoxicidad oxidativa inducida por cisplatino. En conclusión, la solución de la descripción tiene fuertes propiedades antioxidativas y no tiene citotoxicidad. Cell viability in the presence of cisplatin was evaluated in a similar way. The highest cell viability (87% compared to the control, 100%) was observed in cells treated with both cisplatin (20 µM) and with a solution of the description (1 mg / ml of soluble UDCA), while the Lower cell viability (35% compared to the control, 100%) was observed in cells treated with cisplatin (20 M) alone. These effects were also found in a dosage dependent manner. According to the MTT assays, a solution of the description can almost completely block the oxidative cytotoxicity induced by hydrogen peroxide and can completely block the oxidative cytotoxicity induced by cisplatin. In conclusion, the solution of the description has strong antioxidant properties and has no cytotoxicity.

EXAMPLES

Algunas realizaciones de la presente descripción pueden comprenderse en relación a los siguientes ejemplos. Sin embargo, los especialistas en la técnica apreciarán fácilmente que los materiales específicos, composiciones, y resultados descritos son simplemente ilustrativos de la descripción, y se pretende que sean, no deben considerarse como, limitantes del alcance de la descripción y sus diversas realizaciones. Some embodiments of the present description can be understood in relation to the following examples. However, those skilled in the art will readily appreciate that the specific materials, compositions, and results described are simply illustrative of the description, and are intended to be, should not be considered as, limiting the scope of the description and its various embodiments.

Ejemplo 1: Preparación de soluciones de ácido biliar Example 1: Preparation of bile acid solutions

Se preparó una solución madre de ácido biliar disolviendo primero UDCA (60 g) en 500 ml de solución de NaOH (6,7 g). A continuación, a la solución transparente resultante, se añadieron 375 g de maltodextrina, por partes, con agitación vigorosa. El pH después se ajustó a entre 7,0 y 7,2 por la adición gota a gota de HCI con sonicación de alto rendimiento (750 W, 20 kHz). El volumen después se ajustó a 1,0 l con agua destilada inyectable. Finalmente, la solución transparente resultante se filtró a esterilidad usando una membrana GP express plus de 0,22  en condiciones asépticas. (Esta filtración es importante para la esterilización, pero no para eliminar la materia paniculada ya que la solución ya es transparente.) Se preparación diluciones de esta solución a la concentración deseada de UDCA de acuerdo con la práctica convencional en la farmacia. A stock solution of bile acid was prepared by first dissolving UDCA (60 g) in 500 ml of NaOH solution (6.7 g). Then, to the resulting clear solution, 375 g of maltodextrin were added, in parts, with vigorous stirring. The pH was then adjusted to 7.0 to 7.2 by the dropwise addition of HCI with high performance sonication (750 W, 20 kHz). The volume was then adjusted to 1.0 L with injectable distilled water. Finally, the resulting clear solution was filtered to sterility using a 0.22 GP GP plus plus membrane under aseptic conditions. (This filtration is important for sterilization, but not to eliminate paniculate matter since the solution is already clear.) Dilutions of this solution were prepared at the desired concentration of UDCA in accordance with conventional pharmacy practice.

Ejemplo 2: Preparación de soluciones de ácido biliar Example 2: Preparation of bile acid solutions

Se preparó una solución madre de ácido biliar disolviendo primero UDCA (25 g) en 400 ml de solución de NaOH (2,7 g). A continuación, a la solución transparente resultante, se añadieron 745 g de maltodextrina, por partes, con agitación vigorosa. A esta solución resultante se añadieron 100 ml de una solución conservante que contiene 0,95 g de p-hidroxibenzoato de metilo y 0,3 g de hidrogenosulfito sódico y después se agitó. El volumen después se ajustó a 1,0 l con agua de calidad farmacéutica. Finalmente, la solución transparente resultante se filtró con un aparato de filtrado apropiado. (Esta filtración no se realiza para retirar la materia particulada ya que la solución ya es transparente.) Se prepararon diluciones de esta solución a la concentración deseada de UDCA de acuerdo con la práctica convencional en la farmacia. A stock solution of bile acid was prepared by first dissolving UDCA (25 g) in 400 ml of NaOH solution (2.7 g). Then, to the resulting clear solution, 745 g of maltodextrin was added, in parts, with vigorous stirring. To this resulting solution, 100 ml of a preservative solution containing 0.95 g of methyl p-hydroxybenzoate and 0.3 g of sodium hydrogen sulphite were added and then stirred. The volume was then adjusted to 1.0 l with pharmaceutical grade water. Finally, the resulting clear solution was filtered with an appropriate filtering apparatus. (This filtration is not carried out to remove the particulate matter since the solution is already clear.) Dilutions of this solution were prepared at the desired concentration of UDCA according to conventional practice in the pharmacy.

Example 3: Animal test

Ratas transgénicas; los animales transgénicos usados en este ejemplo eran portadores de hSODI heterocigóticos con una mutación glicina93-alanina (G93A). La ceba se registró como B6SJL-TgN(SOD1-G93A) IGur (The Jackson Lab., Bar Harbor, ME, EEUU) que contenía una cantidad de copias reducida de hSODI. Se adquirieron de Jackson Laboratories. Los ratones transgénicos, que sobre-expresan el gen SOD1 humano con una mutación identificada en pacientes con ALS, desarrollan un deterioro motor progresivo, de aparición en el adulto. Estos ratones transgénicos se consideran un modelo para esta enfermedad y se han usado para ensayar varias estrategias para retardar el progreso y la mortalidad de la enfermedad. Transgenic rats; The transgenic animals used in this example were heterozygous hSODI carriers with a glycine93-alanine (G93A) mutation. The fat was recorded as B6SJL-TgN (SOD1-G93A) IGur (The Jackson Lab., Bar Harbor, ME, USA) containing a reduced amount of hSODI copies. They were purchased from Jackson Laboratories. Transgenic mice, which overexpress the human SOD1 gene with a mutation identified in patients with ALS, develop progressive motor impairment, which appears in adults. These transgenic mice are considered a model for this disease and have been used to test various strategies to slow the progress and mortality of the disease.

Para evaluar el beneficio potencial de la presente en ALS, se dieron 240 mg/kg de UDCA solubilidad en la presente solución por administración oral dos veces a la semana, empezando cuando los ratones transgénicos G93A tenían 70 días de edad y continuando hasta la muerte. To assess the potential benefit of this in ALS, 240 mg / kg of soluble UDCA in the present solution was given by oral administration twice a week, beginning when the G93A transgenic mice were 70 days old and continuing until death.

Esperanza de vida y sus resultados; la esperanza media de vida de los ratones de control (n=8) y los ratones tratados (n=8) se muestra en la Fig. 1. La solución transparente (25 mg/kg) aumentada el tiempo medio de supervivencia de 134,8 días en los ratones de control (n=8) a 146,6 días en los ratones tratados (n=8), un retardo de la mortalidad de 13 días. Esto corresponde a un aumento del 8,81% en la duración de la vida de los ratones G93A. Life expectancy and its results; The average life expectancy of control mice (n = 8) and treated mice (n = 8) is shown in Fig. 1. The clear solution (25 mg / kg) increased the average survival time of 134, 8 days in control mice (n = 8) to 146.6 days in treated mice (n = 8), a 13-day mortality delay. This corresponds to an 8.81% increase in the life span of G93A mice.

Ensayo rotarod y sus resultados; se usó un rotarod para evaluar el funcionamiento motor. Los ratones se colocaron sobre el rodillo contra la dirección de rotación, forzándolos a mantener el movimiento hacia delante para evitar caerse del rodillo hacia atrás. Después de un periodo de aprendizaje de varios días, los ratones eran capaces de mantenerse sobre el rotarod rotando a 15 r.p.m. Los ratones se ensayaron una vez a la semana. A cada ratón se le hicieron tres pruebas en cada ensayo rotarod y se registró el tiempo que permanecía sobre el rodillo antes de caerse (latencia). Se eligió el mayor tiempo de permanencia sobre el rotarod entre las tres pruebas como una medida del funcionamiento motor. Rotarod trial and its results; A rotarod was used to evaluate motor performance. The mice were placed on the roller against the direction of rotation, forcing them to keep moving forward to avoid falling from the roller backwards. After a learning period of several days, the mice were able to keep on the rotarod rotating at 15 r.p.m. Mice were tested once a week. Each mouse was tested three times on each rotarod test and the time it remained on the roller before falling (latency) was recorded. The longest residence time on the rotarod was chosen among the three tests as a measure of motor performance.

El funcionamiento motor de los ratones tratados mejoraba enormemente según progresaba la enfermedad, mientras que el funcionamiento motor de los ratones no tratados descendía cada vez más rápidamente según progresaba la enfermedad. Las diferencias en el funcionamiento motor entre los ratones no tratados y tratados era altamente significativo en el día 112 (p=0,01), en el día 119 (0,001), en el día 126 (p=0,01), en el día 133 (p=0,001) y en el día 140 (p=0,043). The motor functioning of the treated mice improved greatly as the disease progressed, while the motor functioning of the untreated mice decreased more and more rapidly as the disease progressed. Differences in motor functioning between untreated and treated mice were highly significant on day 112 (p = 0.01), on day 119 (0.001), on day 126 (p = 0.01), on day 133 (p = 0.001) and on day 140 (p = 0.043).

Conclusión; a los 70 días de edad, una edad a la que empiezan a mostrarse extensivamente las alteraciones citoesqueléticas progresivas en ratas SOD1-G93A, se ha conocido como la aparición clínica de ALS. Estos datos demuestran que la solución de UDCA solubilizado prolonga significativamente la duración de la vida, retarda la aparición de parálisis y ralentiza la evolución de los parámetros funcionales relacionados con la fuerza muscular en el modelo de ratón de ALS. Además, el funcionamiento motor mejorado en los modelos más mayores de 70 días de edad con la administración de UDCA solubilizado ha demostrado que esta solución de la invención puede tratar la enfermedad de ALS avanzada con recuperación del funcionamiento motor. Conclusion; At 70 days of age, an age at which progressive cytoskeletal alterations begin to show extensively in SOD1-G93A rats has been known as the clinical appearance of ALS. These data demonstrate that the solubilized UDCA solution significantly prolongs the duration of life, retards the onset of paralysis and slows the evolution of functional parameters related to muscle strength in the ALS mouse model. In addition, improved motor performance in models older than 70 days of age with the administration of solubilized UDCA has shown that this solution of the invention can treat advanced ALS disease with recovery of motor functioning.

Ejemplo 4: Experimentos de supervivencia celular Example 4: Cell Survival Experiments

Para evaluar el efecto protector de la solución de UDCA solubilizado sobre células de tipo silvestre, células G93A, y células A4V, estas células se trataron con soluciones que contenían UDCA solubilizado 200 nM o 20 M después de la diferenciación neuronal y después, se incubaron durante 24 h. El efecto protector de la solución de UDCA solubilizado sobre células de tipo silvestre, células G93A, y células A4V se determinó usando tanto el ensayo MTT como la tinción con azul de tripán. La viabilidad celular puede expresarse como un porcentaje de la supervivencia celular como se muestra en la Figura 2. To evaluate the protective effect of the solubilized UDCA solution on wild-type cells, G93A cells, and A4V cells, these cells were treated with solutions containing 200 nM or 20 µM solubilized UDCA after neuronal differentiation and then incubated. for 24 h. The protective effect of the solubilized UDCA solution on wild-type cells, G93A cells, and A4V cells was determined using both the MTT assay and trypan blue staining. Cell viability can be expressed as a percentage of cell survival as shown in Figure 2.

Se ha sabido que el GSNO está asociado con la apoptosis celular. Para evaluar el efecto antiapoptótico de UDCA solubilizado frente a GSNO sobre células de tipo silvestre y células que contienen las mutaciones G93A y A4V en hSODI, se incubaron células de tipo silvestre, células G93A, y células A4V con GSNO 500 M durante 24 h para inducir la apoptosis y después se determinó la viabilidad celular. Estas células de tipo silvestre, células G93A, y células A4V con apoptosis inducida se incubaron a continuación con UDCA solubilizado 20 M durante 24 h y se determinó la viabilidad celular de nuevo usando tanto el ensayo MTT como la tinción con azul de tripán. La viabilidad celular puede expresarse como un porcentaje de la supervivencia celular como se muestra en la Figura 3. It has been known that GSNO is associated with cell apoptosis. To evaluate the antiapoptotic effect of solubilized UDCA against GSNO on wild-type cells and cells containing G93A and A4V mutations in hSODI, wild-type cells, G93A cells, and A4V cells were incubated with 500 NOM GSNO for 24 h for induce apoptosis and then cell viability was determined. These wild-type cells, G93A cells, and A4V cells with induced apoptosis were then incubated with 20 µM solubilized UDCA for 24 h and cell viability was determined again using both the MTT assay and trypan blue staining. Cell viability can be expressed as a percentage of cell survival as shown in Figure 3.

Cultivo celular: se mantuvieron VSC 4.1 (células híbridas de motoneuronas-neuroblastoma de médula espinal ventral 4.1) en medio de Eagle modificado por Dulbecco/medio de crecimiento F-12 (Gibco, Grand Island, NY) con componentes de Sato (Sigma, St. Louis, MD) y suero de ternera recién nacida inactivado por calor al 2% (HyClone, Logan, UT). Se cultivaron en crecimiento de fase logarítmica en placas de cultivo pre-recubiertas con poli-(L-ornitina) (Falcon, Franklin lakes, NJ). Después de alcanzar confluencia, las células se sembraron en placas de 96 pocillos (NUNC, Denmark) a una densidad de 1 X 10n (n=4) células/pocillo. Para la inmunotransferencia, se sembraron 1X10n (n=5) células en placas de 100 mm (Falcon, Franklin Lakes, NJ). Cell culture: VSC 4.1 (hybrid motor neuron-neuroblastoma cells of the ventral spinal cord 4.1) were maintained in Dulbecco-modified Eagle's medium / F-12 growth medium (Gibco, Grand Island, NY) with Sato components (Sigma, St Louis, MD) and 2% heat-inactivated newborn calf serum (HyClone, Logan, UT). They were grown in logarithmic phase growth in culture plates pre-coated with poly- (L-ornithine) (Falcon, Franklin lakes, NJ). After reaching confluence, the cells were seeded in 96-well plates (NUNC, Denmark) at a density of 1 X 10n (n = 4) cells / well. For immunoblotting, 1X10n (n = 5) cells were plated in 100 mm plates (Falcon, Franklin Lakes, NJ).

Construcciones y establecimiento de la línea celular estable: se clonó ADNc de Cu/Zn SOD-I humana de tipo silvestre (control) o mutante (G93A, A4V) en los sitios BamHI y EcoRII de pcDNA 3.0. Se usó un vector vacío que no contenía el inserto para el control. Las células se transfectaron (Superfect, Qiagen, Valencia, CA) y se mantuvieron en un medio que contenía G418 a una concentración de 400 mg/ml (Gibco, Grand Island, NY). Se usaron colonias sencillas o combinadas para el experimento después de dilucidar la expresión de SOD1 humana (WT, Mutante) por análisis de transferencia de Western usando un anticuerpo policlonal anti-SOD1 humana (Calbiochem La Jolla, CA). Estas líneas celulares se cultivaron en las mismas condiciones que las células VSC 4.1. Constructions and establishment of the stable cell line: human / mutant (G93A, A4V) human / Cu / Zn SOD-I cDNA cDNA was cloned in the BamHI and EcoRII sites of pcDNA 3.0. An empty vector was used that did not contain the insert for the control. The cells were transfected (Superfect, Qiagen, Valencia, CA) and maintained in a medium containing G418 at a concentration of 400 mg / ml (Gibco, Grand Island, NY). Single or combined colonies were used for the experiment after elucidating the expression of human SOD1 (WT, Mutant) by Western blot analysis using a human anti-SOD1 polyclonal antibody (Calbiochem La Jolla, CA). These cell lines were cultured under the same conditions as VSC 4.1 cells.

Ensayo MTT y tinción con azul de tripán para evaluar la eficacia protectora y sus resultados; se absorbe bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) en las células y se convierte en formazán por la acción de la succinato deshidrogenada mitocondrial. Por lo tanto, la acumulación de formazán refleja la actividad de las mitocondrias directamente y la viabilidad celular indirectamente. Por tanto, se sembraron células neuronalmente diferenciadas (células de tipo silvestre (control), células G93A, células A4V) a una densidad de 1X10n (n=4) células/pocillo en una placa de 96 pocillos. Para evaluar el efecto de las mutaciones G93A o A4V sobre la viabilidad, las células sembradas se incubaron con el medio de cultivo que contenían dibutiril AMPc 1 mM y 0,025 g/ml de afidicolina, y se evaluó la viabilidad de las células de tipo silvestre, las células G93A, y las células A4V como una función de la concentración. Para evaluar el efecto protector de UDCA solubilizado sobre la viabilidad, se añadieron 200 nM y 20 M de UDCA solubilizado en el medio. A las 24 h de incubación, se añadieron 50 l de 2 mg/ml de MTT (Sigma, Saint Louis, MO, USA) después del medio (200 l) en cada pocillo. Posteriormente, se retiraron 220 l de la solución de cada pocillo, y después se volvieron a añadir 150 l de dimetilsulfóxido a cada pocillo. Finalmente, se leyó la densidad óptica (OD) a 540 nm en el lector de placa ELISA después de que las partículas se disolvieran en el pocillo por una mezcladora de microplaca durante 10 min. Los resultados se calibraron usando la OD medida son cultivo celular. Para la tinción con azul de tripán, se añadieron 10 l de solución de azul de tripán a 10 l de células recogidas de cada placa, y las células se incubaron durante 2 min. Se contaron las células vivas no teñidas en un hemocitómetro. La viabilidad celular se expresó como un porcentaje de la supervivencia celular. La viabilidad de las células de tipo silvestre, las células G93A, y las células A4V fue del 100%, 130% y 115%, respectivamente, en comparación con las células de tipo silvestre no tratadas (control; 100%) cuando se trataron con UDCA solubilizado 200 nM. A una concentración 100 veces mayor de UDCA solubilizado (20 M) que 200 M, la viabilidad de las células de tipo silvestre, las células G93A, y las células A4V era del 89%, 133% y 101%, respectivamente, en comparación con las células de tipo silvestre no tratadas (control; 100%). Estos datos experimentales mostraron que el UDCA solubilizado tiene un efecto protector sobre las células G93A y células A4V, y es no tóxico para las células de tipo silvestre, las células G93A y las células A4V. MTT test and trypan blue staining to assess protective efficacy and its results; 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) is absorbed into the cells and converted to formazan by the action of mitochondrial dehydrogenated succinate. Therefore, the formation of formazan reflects the activity of mitochondria directly and cell viability indirectly. Thus, neuronally differentiated cells (wild type (control) cells, G93A cells, A4V cells) were seeded at a density of 1X10n (n = 4) cells / well in a 96-well plate. To assess the effect of G93A or A4V mutations on viability, seeded cells were incubated with the culture medium containing 1 mM dibutyryl cAMP and 0.025 µg / ml afidicoline, and the viability of wild-type cells was evaluated. , G93A cells, and A4V cells as a function of concentration. To assess the protective effect of solubilized UDCA on viability, 200 nM and 20 µM of solubilized UDCA were added in the medium. At 24 h of incubation, 50 µl of 2 mg / ml MTT (Sigma, Saint Louis, MO, USA) was added after medium (200 µl) in each well. Subsequently, 220 µl of the solution was removed from each well, and then 150 µl of dimethylsulfoxide was added back to each well. Finally, the optical density (OD) at 540 nm was read in the ELISA plate reader after the particles were dissolved in the well by a microplate mixer for 10 min. The results were calibrated using the measured OD are cell culture. For staining with trypan blue, 10 µl of trypan blue solution was added to 10 µl of cells collected from each plate, and the cells were incubated for 2 min. Live unstained cells were counted in a hemocytometer. Cell viability was expressed as a percentage of cell survival. The viability of wild-type cells, G93A cells, and A4V cells was 100%, 130% and 115%, respectively, compared to untreated wild-type cells (control; 100%) when treated with 200 nM solubilized UDCA. At a 100 times higher concentration of solubilized UDCA (20 M) than 200 M, the viability of wild-type cells, G93A cells, and A4V cells was 89%, 133% and 101%, respectively, in comparison with untreated wild-type cells (control; 100%). These experimental data showed that solubilized UDCA has a protective effect on G93A cells and A4V cells, and is non-toxic to wild-type cells, G93A cells and A4V cells.

Tinción con DAPI para evaluar la apoptosis por GSNO y sus resultados; se realizó tinción con diclorhidato de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) para evaluar la apoptosis del siguiente modo. Después de la diferenciación, las células de tipo silvestre (control), G93A, y A4V se incubaron con/sin GSNO 500 M durante 24 h; después las células se centrifugaron a 265 g durante 2 min., y se añadió formalina tamponada neutral al 4% (100 l) a cada sedimento celular. Se aplicó una alícuota de 50 l de la suspensión celular a un portaobjetos de vidrio y se secó a temperatura ambiente. Las células fijadas se lavaron en PBS, se secaron al aire, y se tiñeron durante 20 min. con el fluorocromo específico de ADN, DAPI (Sigma, Saint Louis, MO, EEUU). Las células adheridas se aclararon con PBS, se secaron al aire, y se montaron con glicerol al 90%. Los portaobjetos se observaron bajo un microscopio de fluorescencia Olympus (fotografías). La viabilidad celular se expresó como un porcentaje de la supervivencia celular. DAPI staining to evaluate GSNO apoptosis and its results; staining with 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole dichlorohydrate (DAPI) was performed to evaluate apoptosis as follows. After differentiation, wild-type (control), G93A, and A4V cells were incubated with / without 500 NOM GSNO for 24 h; The cells were then centrifuged at 265 g for 2 min., and 4% neutral buffered formalin (100 µl) was added to each cell pellet. A 50 µl aliquot of the cell suspension was applied to a glass slide and dried at room temperature. The fixed cells were washed in PBS, air dried, and stained for 20 min. with the specific DNA fluorochrome, DAPI (Sigma, Saint Louis, MO, USA). The adhered cells were rinsed with PBS, air dried, and mounted with 90% glycerol. The slides were observed under an Olympus fluorescence microscope (photographs). Cell viability was expressed as a percentage of cell survival.

La tinción con DAPI mostró que el porcentaje de células apoptóticas entre las células G93A y A4V (el 19% frente al 25%, respectivamente) aumentaba significativamente en comparación con las células de tipo silvestre (8%). El porcentaje aumentado de células que experimentan apoptosis en las células G93A y A4V proporcionó evidencias de que el efecto apoptótico de GSNO era más significativo sobre las células G93A y las células A4V que sobre las células de tipo silvestre. DAPI staining showed that the percentage of apoptotic cells between G93A and A4V cells (19% vs. 25%, respectively) increased significantly compared to wild-type cells (8%). The increased percentage of cells undergoing apoptosis in G93A and A4V cells provided evidence that the GSNO apoptotic effect was more significant on G93A cells and A4V cells than on wild-type cells.

Ensayo MTT y tinción con azul de tripán para evaluar los efectos anti-apoptóticos de UDCA solubilizado y sus resultados; se absorbe bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) en las células y se convierte en formazán por la acción de la succinato deshidrogenada mitocondrial. Por lo tanto, la acumulación de formazán refleja la actividad de las mitocondrias directamente y la viabilidad celular indirectamente. Por tanto, se sembraron células neuronalmente diferenciadas (células de tipo silvestre (control), células G93A, células A4V) a una densidad de 1X10n (n=4) células/pocillo en una placa de 96 pocillos. Las células sembradas se incubaron con el medio de cultivo que contenía dibutiril AMPc 1 mM y 0,025 g/ml de afidicolina, y después, se incubaron adicionalmente durante 24 h con/sin la adición de GSNO 500 M. Para evaluar el efecto anti-apoptótico de UDCA solubilizado sobre las células, se añadió UDCA solubilizado 200 nM y 20 M en el medio. A las 24 h de incubación, se añadieron 50 l de 2 mg/ml de MTT (Sigma, Saint Louis, MO, USA) después del medio (200 l) en cada pocillo. Posteriormente, se retiraron 220 l de la solución de cada pocillo, y después se añadieron de nuevo 150 l de dimetilsulfóxido a cada pocillo. Finalmente, se leyó la densidad óptica (OD) a 540 nm en el lector de placa ELISA después de que se disolvieran las partículas del pocillo por una mezcladora de microplaca durante 10 min. Los resultados se calibraron usando la OD medida sin cultivo celular. Para la tinción con azul de tripán, se añadieron 10 l de solución de azul de tripán a 10 l de células recogidas de cada placa, y las células se incubaron durante 2 min. Se contaron las células vivas no teñidas en un hemocitómetro. La viabilidad celular se expresó como un porcentaje de la supervivencia celular. MTT assay and trypan blue staining to assess the anti-apoptotic effects of solubilized UDCA and its results; 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) is absorbed into the cells and converted to formazan by the action of mitochondrial dehydrogenated succinate. Therefore, the formation of formazan reflects the activity of mitochondria directly and cell viability indirectly. Thus, neuronally differentiated cells (wild type (control) cells, G93A cells, A4V cells) were seeded at a density of 1X10n (n = 4) cells / well in a 96-well plate. The seeded cells were incubated with the culture medium containing 1 mM dibutyryl cAMP and 0.025 µg / ml afidicoline, and then further incubated for 24 h with / without the addition of 500 µM GSNO. To assess the anti-apoptotic effect of solubilized UDCA on the cells, 200 nM and 20 µM solubilized UDCA was added in the medium. At 24 h of incubation, 50 µl of 2 mg / ml MTT (Sigma, Saint Louis, MO, USA) was added after medium (200 µl) in each well. Subsequently, 220 µl of the solution was removed from each well, and then 150 µl of dimethylsulfoxide was added again to each well. Finally, the optical density (OD) at 540 nm was read in the ELISA plate reader after the well particles were dissolved by a microplate mixer for 10 min. The results were calibrated using the OD measured without cell culture. For staining with trypan blue, 10 µl of trypan blue solution was added to 10 µl of cells collected from each plate, and the cells were incubated for 2 min. Live unstained cells were counted in a hemocytometer. Cell viability was expressed as a percentage of cell survival.

La disminución de la viabilidad por la apoptosis inducida por S-nitrosoglutatión era más prominente en las células G93A y las células A4V que en las células de tipo silvestre. El aumento de la viabilidad por el UDCA solubilizado en células tratadas con GSNO (apoptóticas) fue significativo en células G93A y células A4V en comparación con las células de tipo silvestre. Más específicamente, en comparación con las células de tipo silvestre (92%), las viabilidades de las mutaciones G93A y A4V eran del 81% y 75%, respectivamente, a las 24 h después de la incubación con GSNO 500 M. Después de añadir UDCA solubilizado e incubar adicionalmente, la viabilidad de las células de tipo silvestre, las células G93A y las células A4V aumentó hasta el 98% a partir del 92% en las células de tipo silvestre, aumentó hasta el 100% a partir del 81% en células G93A, y aumentó hasta el 115% a partir del 75% en células A4V. The decrease in viability by S-nitrosoglutathione-induced apoptosis was more prominent in G93A cells and A4V cells than in wild-type cells. The increase in viability by solubilized UDCA in GSNO-treated cells (apoptotic) was significant in G93A cells and A4V cells compared to wild-type cells. More specifically, compared with wild-type cells (92%), the viability of the G93A and A4V mutations was 81% and 75%, respectively, at 24 h after incubation with 500 GSM GSNO. After adding solubilized UDCA and further incubating, the viability of wild-type cells, G93A cells and A4V cells increased up to 98% from 92% in wild-type cells, increased to 100% from 81% in G93A cells, and increased to 115% from 75% in A4V cells.

Este experimento demuestra que la solución de UDCA soluble puede proteger a células G93A y A4V de la apoptosis mediada por NO y puede revivir células de ALS dañadas por apoptosis. This experiment demonstrates that the soluble UDCA solution can protect G93A and A4V cells from NO-mediated apoptosis and can revive ALS cells damaged by apoptosis.

Como entenderán los especialistas en la técnica, otros métodos equivalentes o alternativos, y/o composiciones para mejorar y/o tratar un síntoma de una enfermedad neurodegenerativa y/o una enfermedad de las neuronas motoras. Por ejemplo, los métodos y dosificaciones pueden modificarse en escala para diagnosticar y/o tratar a sujetos que diferentes tamaños (por ejemplo, niños y adultos), sujetos con alergias o afecciones adicionales, y/o sujetos que tienen As those skilled in the art will understand, other equivalent or alternative methods, and / or compositions to improve and / or treat a symptom of a neurodegenerative disease and / or a motor neuron disease. For example, the methods and dosages can be modified in scale to diagnose and / or treat subjects of different sizes (for example, children and adults), subjects with additional allergies or conditions, and / or subjects who have

una intensidad variables de la alergia y/o los síntomas. Además, los métodos y dosificaciones pueden adaptarse a fluctuaciones en el tiempo (por ejemplo, de forma mensual o temporal). Estos equivalentes y alternativas junto con cambios y modificaciones obvias se pretende que estén incluidos dentro del alcance de la presente descripción. Por ejemplo, no se pretende que los puntos finales de valores y/o intervalos proporcionados sean límites rígidos para todas 5 las realizaciones. Además, un especialista en la técnica apreciará que no se pretende que ninguna realización, uso, y/o ventaja individual controle o excluya de forma universal otras realizaciones, usos, y/o ventajas. Por ejemplo, un facultativo médico puede estimar las circunstancias que garanticen dar preferencia a una u otra. Aunque la presente descripción incluye información extensiva acerca de las percepciones actuales de la genética, la bioquímica, y la biología celular de la ALS y el metabolismo del ácido biliar, futuros trabajos pueden revelar que los aspectos de estas 10 percepciones son imprecisos o incompletos. Por consiguiente, como entenderán los especialistas en la técnica, la presente descripción, tomada en conjunto o en parte, no está limitada a un modelo o mecanismo de acción particular. Además, un especialista en la técnica reconocerá que pueden usarse otras composiciones y métodos equivalentes o alternativos. Por ejemplo, aunque se han descrito varios compuesto con capacidad de administración con un ácido biliar, también pueden incluirse otros compuestos. Además, la administración de un agente farmacéutico puede realizarse al a variable intensity of allergy and / or symptoms. In addition, the methods and dosages can be adapted to fluctuations over time (for example, on a monthly or temporary basis). These equivalents and alternatives along with obvious changes and modifications are intended to be included within the scope of this description. For example, the endpoints of values and / or intervals provided are not intended to be rigid limits for all embodiments. In addition, one skilled in the art will appreciate that it is not intended that any individual embodiment, use, and / or advantage universally control or exclude other embodiments, uses, and / or advantages. For example, a medical practitioner can estimate the circumstances that guarantee giving preference to one or the other. Although the present description includes extensive information about current perceptions of genetics, biochemistry, and cellular biology of ALS and bile acid metabolism, future work may reveal that aspects of these 10 perceptions are inaccurate or incomplete. Therefore, as those skilled in the art will understand, the present description, taken in whole or in part, is not limited to a particular model or mechanism of action. In addition, one skilled in the art will recognize that other equivalent or alternative compositions and methods may be used. For example, although several compounds capable of administration with a bile acid have been described, other compounds may also be included. In addition, administration of a pharmaceutical agent can be performed at

15 mismo tiempo que la administración de una composición de ácido biliar o las dos pueden simplemente administrarse durante los mismos periodos de tiempo o periodos de tiempo solapantes (por ejemplo, durante la misma hora, el mismo día, o la misma semana). Por consiguiente, la descripción anterior pretende ser ilustrativa, pero no limitante, del alcance de la descripción ilustrada por las siguientes reivindicaciones. The same time as the administration of a bile acid composition or both may simply be administered during the same overlapping periods of time (for example, during the same time, the same day, or the same week). Accordingly, the foregoing description is intended to be illustrative, but not limiting, of the scope of the description illustrated by the following claims.

Claims

1. A composition comprising a transparent aqueous solution comprising:

(a) (to): un primer material seleccionado entre ácido ursodesoxicólico o una sal sódica del ácido ursodesoxicólico (UDCA); a first material selected from ursodeoxycholic acid or a sodium salt of ursodeoxycholic acid (UDCA);

(b)(b): un carbohidrato seleccionado entre el grupo compuesto por un producto soluble acuoso de la conversión del almidón o un polisacárido soluble acuoso no de almidón; a carbohydrate selected from the group consisting of an aqueous soluble starch conversion product or a non-starch aqueous soluble polysaccharide;

(c)(C): agua, donde el primer material y el carbohidrato ambos permanecen en solución para cualquier subconjunto del intervalo de valores de pH obtenibles en un sistema acuoso suficiente para que una formulación farmacéutica permanezca en solución desde la preparación, hasta la administración, y hasta la absorción en el cuerpo; water, where the first material and the carbohydrate both remain in solution for any subset of the range of pH values obtainable in an aqueous system sufficient for a pharmaceutical formulation to remain in solution from preparation, until administration, and until absorption in the body;

for use in the treatment of at least one symptom of amyotrophic lateral sclerosis.

2. 2.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en le que la esclerosis lateral amiotrófica es esclerosis lateral amiotrófica avanzada. The composition according to claim 1, wherein the amyotrophic lateral sclerosis is advanced amyotrophic lateral sclerosis.

3. 3.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el síntoma se selecciona entre el grupo compuesto por duración de la vida acortada y parálisis. The composition according to claim 1, wherein the symptom is selected from the group consisting of shortened life span and paralysis.

4. Four.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el sujeto es un mamífero. The composition according to claim 1, wherein the subject is a mammal.

5. 5.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el sujeto es un ser humano. The composition according to claim 1, wherein the subject is a human being.

6. 6.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el primer material está presente en una cantidad terapéuticamente activa. The composition according to claim 1, wherein the first material is present in a therapeutically active amount.

7. 7.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el producto soluble acuoso de la conversión del almidón se selecciona entre el grupo compuesto por maltodextrina, dextrina, glucosa líquida, jarabe de maíz sólido, y almidón soluble. The composition according to claim 1, wherein the aqueous soluble starch conversion product is selected from the group consisting of maltodextrin, dextrin, liquid glucose, solid corn syrup, and soluble starch.

8. 8.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el intervalo de pH seleccionado está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 inclusive. The composition according to claim 1, wherein the selected pH range is between about 1 and about 10 inclusive.

9. 9.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el producto soluble acuoso de la conversión del almidón es maltodextrina. The composition according to claim 1, wherein the aqueous soluble starch conversion product is maltodextrin.

10. 10.: La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polisacárido soluble acuoso no de almidón se seleccionan entre el grupo compuesto por dextrano, goma guar, pectina, fibra soluble no digerible. The composition according to claim 1, wherein the non-starch aqueous soluble polysaccharide is selected from the group consisting of dextran, guar gum, pectin, non-digestible soluble fiber.

11. eleven.: La composición de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes que comprende adicionalmente: The composition according to one of the preceding claims further comprising:

(d) a pharmaceutically effective amount of a pharmaceutical compound selected from the following:

The pharmaceutical compound is selected from the group consisting of pasiniazide, benzthiazide, prednisolone, menthol, mebhydroline, naphthalenesulfonate, trichlormethiazide, oxytetracycline, arcaine sulfate, erythromycin, glutathione, trioxsalene, nylhydrin HCl, demethyldiazene naphthalamine naphthalamine naphthalamine , droperidol, 2-thiouracil, quinurenic acid, fusidic acid, leucovorin Ca, spartein sulfate, amygdalin, pramoxin HCl, furosemide, dinitolmide, budesonide, flopropiona, fluorometolone, anti-inflammatory), N-formyl-methionylphenylalanine, thiopentalol, tosio, thiopentalol, tosio bretylium, cefamandole Na, oxibendazole, cicloleucilglicina, dantrolene Na, tetroquinona, piperazine, esculin, ethisterone, dimethadione, griseofulvin, acetaminosalol, isoguvacine HCl, diHCl putrescine, emetine HCl, sulfanilamide, mimosine, acetylcholine, pralidoxime mesylate, lysyl triptofanil- lysine, hecogenin, prednisolone acetate, albendazole, hydrochlorothiazide, d emeclocycline HCl, nitrofurazone, dicloxacillin Na, alpha-tocopherol, tetracycline HCl, fenofibrate, probenecid, tretinoin, acetaminophen, hydrastinine HCl, d [-Arg-2] chiotorphine, NMDA, cefmetazole Na, ribavirin, benzyl, benzyl picrotoxin, oxetazine, sulphatiazole, trichlormetin, nabumetone, chloramphenicol, riluzole, ginseng and its extract, glycyrrhizin and glycyrrhizic acid, derivatives of carboquinone, coenzyme Q10, creatine, growth factor-1 insulin type, minocycline, mecamserine, xalipropentin, gabatrinthorpentine, xalipropentin, gabanetromethorphan, trichlorpentine , talampanel, IL-1, TR500, procysteine, brain-derived neurotrophic factor, baclofen, tizanidine, benzodiazepines, glycopyrrolate, atropine, quinine, phenytoin and morphine

which decreases the death of motor neurons, and where the first material, the carbohydrate, and the pharmaceutically effective amount of the pharmaceutical compound all remain in solution for all the pH values of the solution within a selected range of pH values.

12. The composition according to claim 11, wherein the first material is present in a neuroprotective amount.