ES2350481T3 - A TEST AND METHOD DEVICE FOR DETECTING THE PRESENCE OF AN ANALYTE RESIDUE IN A SAMPLE. - Google Patents
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Abstract
Un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para determinar si uno o más miembros de una familia de analitos, que comprende antibióticos betalactámicos se encuentra presente en una muestra de ensayo, comprendiendo dicho método: b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un receptor microbiano betalactámico, donde dicho receptor se caracteriza por una capacidad de unirse a miembros de dicha familia de analitos, para permitir que dicho receptor se una a uno o más miembros de dicha familia de analitos en dicha muestra; b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un aglutinante de analito adicional, teniendo dicho aglutinante de analito adicional especificidad de unión para al menos un miembro de dicha familia de analitos al que se une dicho receptor, de modo que hay competición entre el receptor y el aglutinante de analito adicional para unirse a dicho al menos un analito, causando dicha competición una disminución en la sensibilidad de ensayo, relativa a dicho al menos un miembro, a un nivel umbral seleccionado; y c) detectar dicho uno o más miembros de dicha familia de analitos.A method that uses a lateral flow test strip to determine if one or more members of a family of analytes, comprising beta-lactam antibiotics, is present in a test sample, said method comprising: b) allowing said sample to come into contact with a beta-lactam microbial receptor, wherein said receptor is characterized by an ability to bind members of said family of analytes, to allow said receptor to join one or more members of said family of analytes in said sample; b) allowing said sample to come into contact with an additional analyte binder, said additional analyte binder having binding specificity for at least one member of said family of analytes to which said receptor binds, so that there is competition between the receptor and the additional analyte binder to bind said at least one analyte, said competition causing a decrease in test sensitivity, relative to said at least one member, at a selected threshold level; and c) detecting said one or more members of said family of analytes.
Description
Se han desarrollado kits y métodos de ensayo inmunocromatográfico o de flujo lateral para detectar la presencia o concentración de residuos químicos o analitos, o clases de los mismos, a partir de muestras líquidas. Un ejemplo de uno de tales kits de ensayo incluye un kit de prueba de embarazo. Immunochromatographic or lateral flow assay kits and methods have been developed to detect the presence or concentration of chemical residues or analytes, or classes thereof, from liquid samples. An example of one such test kit includes a pregnancy test kit.
Particularmente, hace mucho que se ha reconocido en el área de salubridad de los alimentos que se debería efectuar de modo preciso, económico y sencillo la detección de residuos. Los consumidores y los gobiernos son cada vez más conscientes de la necesidad de hacer ensayos con los alimentos para detectar la presencia de residuos no deseables que se presentan naturalmente, o de otro modo. In particular, it has long been recognized in the area of food safety that the detection of waste should be carried out precisely, economically and easily. Consumers and governments are increasingly aware of the need to conduct tests with food to detect the presence of undesirable waste that occurs naturally, or otherwise.
Ya que una gran parte de los consumidores son niños, la salubridad de los alimentos hace mucho que es crítica en la industria láctea. Los residuos antibióticos usados en una granja láctea aparecen ocasionalmente en el suministro de leche. Los peligros asociados con estos residuos no deseables incluyen las reacciones alérgicas, la ayuda a la propagación de nuevos microbios, y a veces resistentes a los medicamentos, y otros riesgos sanitarios a largo plazo. Since a large part of consumers are children, food safety has long been critical in the dairy industry. Antibiotic residues used in a dairy farm occasionally appear in the milk supply. The hazards associated with these undesirable residues include allergic reactions, aid in the spread of new microbes, and sometimes resistant to medications, and other long-term health risks.
Los organismos públicos han establecido, en algunos casos, límites legales para ciertos residuos en los alimentos, por ejemplo, residuos antibióticos en la leche. Los residuos por encima del límite legal se consideran inseguros para el consumo humano. Los niveles de residuos por debajo del límite legal se consideran “seguros”. Es importante, por lo tanto, que los métodos de detección, además de ser efectuados de modo económico y sencillo, no proporcionen resultados positivos cuando los residuos están por debajo de los límites legales, de manera que la leche u otros alimentos, por otra parte aceptables, no se descarten o se traten de otro modo como que contienen residuos por encima de los límites legales. Public bodies have established, in some cases, legal limits for certain residues in food, for example, antibiotic residues in milk. Waste above the legal limit is considered unsafe for human consumption. Waste levels below the legal limit are considered "safe." It is important, therefore, that the detection methods, in addition to being carried out in an economical and simple way, do not provide positive results when the residues are below the legal limits, so that milk or other foods, on the other hand Acceptable, not discarded or otherwise treated as containing residues above the legal limits.
El documento WO 93/17338 describe un ensayo para determinar la presencia de un concentración umbral de un solo analito en una muestra, que comprende, primero hacer reaccionar la muestra con una cantidad de anti-analito seleccionado para reducir el analito libre hasta una concentración ligeramente detectable, poner después en contacto la muestra con anti-analito inmovilizado en una región de ensayo sobre una fase sólida. WO 93/17338 describes an assay to determine the presence of a threshold concentration of a single analyte in a sample, which comprises first reacting the sample with an amount of anti-analyte selected to reduce the free analyte to a concentration slightly detectable, then contact the sample with immobilized anti-analyte in a test region on a solid phase.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN SUMMARY OF THE INVENTION
La invención se refiere a un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para la detección del analito o residuo en una muestra. The invention relates to a method that employs a lateral flow test strip for the detection of the analyte or residue in a sample.
En su sentido más amplio, la invención se define en la reivindicación independiente 1: In its broadest sense, the invention is defined in independent claim 1:
Un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para determinar si uno o más miembros de una familia de analitos, que comprende antibióticos betalactámicos se encuentra presente en una muestra de ensayo, comprendiendo dicho método: a) permitir que dicha muestra entre en contacto con un receptor microbiano betalactámico, donde dicho receptor se caracteriza por una capacidad de unirse a miembros de dicha familia de analitos, para permitir que dicho receptor se una a uno o más miembros de dicha familia de analitos en dicha muestra; b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un aglutinante de analito adicional, teniendo dicho aglutinante de analito adicional especificidad de unión para al menos un miembro de dicha familia de analitos al que se une dicho receptor, de modo que hay competición entre el receptor y el aglutinante de analito adicional para unirse a dicho al menos un analito, causando dicha competición una disminución en la sensibilidad de ensayo, relativa a dicho al menos un miembro, a un nivel umbral seleccionado; y c) detectar dicho uno o más miembros de dicha familia de analitos. A method that uses a lateral flow test strip to determine if one or more members of a family of analytes, comprising beta-lactam antibiotics, is present in a test sample, said method comprising: a) allowing said sample to come into contact with a beta-lactam microbial receptor, wherein said receptor is characterized by an ability to bind members of said family of analytes, to allow said receptor to join one or more members of said family of analytes in said sample; b) allowing said sample to come into contact with an additional analyte binder, said additional analyte binder having binding specificity for at least one member of said family of analytes to which said receptor binds, so that there is competition between the receptor and the additional analyte binder to bind said at least one analyte, said competition causing a decrease in test sensitivity, relative to said at least one member, at a selected threshold level; and c) detecting said one or more members of said family of analytes.
Habitualmente, un líquido, tal como leche, tiene una o más impurezas o analitos que están en cantidades mínimas que se tienen que analizar. A fin de detectar el analito, la presente invención emplea un receptor marcado que reacciona con el analito para formar un complejo analito-receptor. El receptor marcado está situado dentro de o próximo a una membrana y, cuando se expone al líquido, se presenta flujo capilar lateral sobre el mismo. En el flujo, el líquido porta con él el complejo analitoreceptor y cualquier receptor marcado desunido. Una zona de ensayo está situada sobre la membrana en la trayectoria de flujo. La zona de ensayo tiene un analito conjugado representativo fijado a la membrana, para unir un receptor desunido a fin de formar un primer complejo analito-conjugado-receptor que, como consecuencia del marcador, tiene una señal que se puede ver a simple vista o leer con un instrumento. Usually, a liquid, such as milk, has one or more impurities or analytes that are in minimum amounts that have to be analyzed. In order to detect the analyte, the present invention employs a labeled receptor that reacts with the analyte to form an analyte-receptor complex. The labeled receptor is located within or near a membrane and, when exposed to the liquid, lateral capillary flow is presented thereon. In the flow, the liquid carries with it the complex analyzer receptor and any markedly disjointed receptor. A test zone is located on the membrane in the flow path. The test zone has a representative conjugate analyte attached to the membrane, to bind a disjointed receptor to form a first analyte-conjugate-receptor complex that, as a consequence of the marker, has a signal that can be seen with the naked eye or read with an instrument
El flujo capilar del líquido sigue sobre la membrana hasta una zona de control. La zona de control incluye un aglutinante fijado a la membrana, que se une con el receptor marcado. Una vez unido, la zona de control cambia a una señal que se puede ver a simple vista, leer con un instrumento o ver bajo condiciones especiales de luz, tal como con luz ultravioleta. Si la señal en la zona de ensayo es más intensa que la señal en la zona de control, el ensayo indica que el analito no está presente en una cantidad suficiente (un ensayo negativo). Si la señal en la zona de ensayo es menos intensa que la señal en la zona de control, el ensayo indica que el analito está presente en una cantidad en exceso de los niveles permisibles (un ensayo positivo). The capillary flow of the liquid continues over the membrane to a control zone. The control zone includes a membrane bound binder, which binds with the labeled receptor. Once connected, the control zone changes to a signal that can be seen with the naked eye, read with an instrument or see under special light conditions, such as with ultraviolet light. If the signal in the test zone is more intense than the signal in the control zone, the test indicates that the analyte is not present in a sufficient amount (a negative test). If the signal in the test zone is less intense than the signal in the control zone, the test indicates that the analyte is present in an amount in excess of the permissible levels (a positive test).
El receptor puede unir una familia de analitos (uno o una pluralidad de analitos) que tengan puntos de unión estructural similares. Los miembros de una familia de analitos pueden tener diferentes requisitos de niveles de detección y, por lo tanto, se pueden emplear aglutinantes adicionales de analitos, por ejemplo, anticuerpos monoclonales o policlonales, que unen una porción del analito en competencia con el receptor, en la muestra, disminuyendo por ello la sensibilidad del ensayo. Los anticuerpos se mezclan con el receptor marcado en una cantidad a fin de ajustar la sensibilidad frente a un analito específico o un grupo de analitos. La sensibilidad del ensayo se ajusta de manera que no se obtenga un resultado positivo en las pruebas a menos que un cierto umbral de analito esté presente en la muestra. The recipient can bind a family of analytes (one or a plurality of analytes) that have similar structural junction points. Members of a family of analytes may have different detection level requirements and, therefore, additional analyte binders may be employed, for example, monoclonal or polyclonal antibodies, which bind a portion of the analyte in competition with the recipient, in the sample, thereby decreasing the sensitivity of the assay. The antibodies are mixed with the labeled receptor in an amount to adjust sensitivity to a specific analyte or group of analytes. The sensitivity of the assay is adjusted so that a positive test result is not obtained unless a certain analyte threshold is present in the sample.
El dispositivo de ensayo incluye una banda soporte y una matriz de banda absorbente adjunta a la banda soporte. La matriz de muestra absorbente es un material para absorber una cantidad de la muestra por ejemplo una esponja. El dispositivo de ensayo también incluye un soporte de fase móvil para sostener una composición de fase móvil. El soporte de fase móvil está adjunto a la banda soporte y está en contacto con la matriz de muestra absorbente. Se coloca una composición de fase móvil dentro o sobre el soporte de fase móvil y tiene un receptor marcado para unirse con el analito. La composición de fase móvil puede ser llevada en la muestra y fluir junto con la muestra. Se adjunta una membrana de fase estacionaria a la banda soporte y tiene un primer extremo de la membrana en contacto con la composición de fase móvil y un segundo extremo en contacto con la zona de eliminación. La membrana permite flujo capilar lateral de la muestra desde el primer extremo de la membrana hasta el segundo extremo de la membrana. Una zona de ensayo está en la membrana de fase estacionaria entre el primer extremo de membrana y segundo extremo de membrana y tiene un analito conjugado para unirse con un receptor marcado libre. Hay una zona de control sobre la membrana de fase estacionaria entre la zona de ensayo y el segundo extremo de membrana y tiene una unión, por ejemplo un anticuerpo del receptor particular, para unirse con un receptor analito-unido y exceso de receptor libre. The test device includes a support band and an absorbent band matrix attached to the support band. The absorbent sample matrix is a material for absorbing a quantity of the sample, for example a sponge. The test device also includes a mobile phase support to support a mobile phase composition. The mobile phase support is attached to the support band and is in contact with the absorbent sample matrix. A mobile phase composition is placed inside or on the mobile phase support and has a receptor marked to bind with the analyte. The mobile phase composition can be carried in the sample and flow along with the sample. A stationary phase membrane is attached to the support band and has a first end of the membrane in contact with the mobile phase composition and a second end in contact with the elimination zone. The membrane allows lateral capillary flow of the sample from the first end of the membrane to the second end of the membrane. A test zone is in the stationary phase membrane between the first membrane end and the second membrane end and has a conjugate analyte to bind with a free labeled receptor. There is a control zone on the stationary phase membrane between the test zone and the second membrane end and it has a junction, for example a particular receptor antibody, to bind with an analyte-bound receptor and excess free receptor.
La presente descripción también incluye un dispositivo de ensayo de analito para detectar, en una posición general horizontal, un analito en una muestra líquida mediante flujo capilar lateral en una banda de ensayo de cromatografía. El dispositivo incluye un hueco alargado que define una cavidad de banda alargada que tiene una apertura de utilización abierta en un extremo y tiene otro extremo. La cavidad está adaptada para recibir y sostener una banda de ensayo. El hueco se caracteriza por una cavidad de utilización dilatada que se extiende hacia fuera desde la cubierta superior y tiene o se adapta para tener un extremo abierto en el extremo de utilización. El dispositivo de ensayo incluye una banda de ensayo colocada en la cavidad de banda. The present description also includes an analyte test device for detecting, in a general horizontal position, an analyte in a liquid sample by lateral capillary flow in a chromatography test band. The device includes an elongated gap that defines an elongated band cavity that has an open use opening at one end and has another end. The cavity is adapted to receive and hold a test band. The hollow is characterized by a dilated utilization cavity that extends outwardly from the upper deck and has or is adapted to have an open end at the utilization end. The test device includes a test band placed in the band cavity.
La banda de ensayo incluye una banda soporte con varias zonas secuenciales de contacto, muestra líquida, permeables que se extienden desde el primer extremo al segundo extremo. Las zonas permiten flujo capilar lateral desde la muestra líquida desde el primer extremo al segundo extremo. Las zonas incluyen una zona de absorción de muestra y filtrado compuesta por una capa de material expansible, poroso, comprimido que se mueve, en contacto con la muestra líquida, entre un estado no expandido a un estado expandido sobre absorción de una cantidad preseleccionada de la muestra líquida, y un soporte de fase móvil que tiene una capa de composición de fase móvil encima o dentro con un receptor marcado para unir el analito en la muestra líquida, normalmente un área visible que contiene gotas coloreadas y una membrana generalmente de nitrocelulosa que incluye una zona de reacción que tiene al menos referencia de analito conjugado estacionario o línea de ensayo, o normalmente una prueba y una línea de control separada y opcionalmente una zona de eliminación de material absorbente de muestra líquida para absorber menos muestra líquida y ayudar al flujo capilar hacia el segundo extremo. The test band includes a support band with several sequential contact zones, permeable liquid sample, extending from the first end to the second end. The zones allow lateral capillary flow from the liquid sample from the first end to the second end. The zones include a sample absorption and filtering zone composed of a layer of expandable, porous, compressed material that moves, in contact with the liquid sample, between an unexpanded state to an expanded state upon absorption of a preselected amount of the liquid sample, and a mobile phase support having a layer of mobile phase composition on top or inside with a receptor marked to bind the analyte in the liquid sample, usually a visible area containing colored drops and a generally nitrocellulose membrane that includes a reaction zone that has at least reference of stationary conjugate analyte or test line, or usually a separate test and control line and optionally a liquid sample absorbent material removal zone to absorb less liquid sample and aid capillary flow towards the second end.
La zona absorbente de muestra con la capa de material comprimido se coloca junto a la cavidad de utilización. La capa de material comprimido y la cavidad de utilización están diseñadas para permitir que la capa de material comprimido absorba una cantidad seleccionada de muestra líquida para la prueba y en una cantidad suficiente para llevar a cabo la prueba y para expandirse de una forma seca, no expandida a un estado húmedo, expandido. La capa de material en un estado húmedo, expandido, rellena significativamente la cavidad de utilización y causa suficiente presión en las paredes del hueco para dirigir el flujo capilar de la muestra líquida en la cavidad de utilización a un volumen seleccionado cuando el extremo de utilización abierto del dispositivo de ensayo se inserta en un líquido para obtener la muestra líquida o cuando una cantidad conocida de muestra se pipetea al interior de la cavidad de utilización. The sample absorbent area with the layer of compressed material is placed next to the utilization cavity. The compressed material layer and the utilization cavity are designed to allow the compressed material layer to absorb a selected amount of liquid sample for the test and in an amount sufficient to carry out the test and to expand in a dry manner, not expanded to a wet state, expanded. The layer of material in a wet, expanded state significantly fills the utilization cavity and causes sufficient pressure in the walls of the recess to direct the capillary flow of the liquid sample in the utilization cavity to a selected volume when the open end of use of the test device is inserted into a liquid to obtain the liquid sample or when a known amount of sample is pipetted into the utilization cavity.
En una realización, se utiliza un hueco, tal como un material de una pieza, integral, moldeado por inyección, completamente transparente, plástico, seleccionado In one embodiment, a gap is used, such as a one-piece, integral, injection molded, fully transparent, plastic, selected material.
o diseñado para ser sometido a temperaturas de incubación de 30ºC o mayores para tiempos de incubación de, por ejemplo, 2 a 10-15 minutos, dependiendo de la prueba en particular aunque no todas las pruebas requieren incubación a temperaturas distintas de la temperatura ambiente. or designed to be subjected to incubation temperatures of 30 ° C or greater for incubation times of, for example, 2 to 10-15 minutes, depending on the particular test although not all tests require incubation at temperatures other than room temperature.
En una realización, el hueco incluye una forma general de cepillo de dientes, con una ampliación, generalmente triangular, con cabeza de tipo cepillo de dientes ene In one embodiment, the recess includes a general toothbrush shape, with an extension, generally triangular, with a toothbrush type head Jan
extremo de utilización abierto del hueco, con un material seco, inerte, poroso, expandido, permeable a líquido, absorbente, en una capa generalmente triangular como una zona de absorción en la banda de ensayo, por ejemplo, de celulosa o nitrocelulosa, colocada bajo el fondo abierto de la cavidad de utilización o cámara. La capa absorbente en contacto, tal como inmersión del extremo de utilización del hueco del dispositivo de ensayo en un líquido, absorbe una cantidad preseleccionada de la muestra líquida necesaria para la prueba. El material de capa absorbente se expande, por ejemplo, de uno a tres segundos, para rellenar o rellenar significativamente la cavidad de expansión y estar en contacto con las paredes que rodean el huevo de la cavidad de expansión, para causar suficiente presión sobre la cavidad de expansión y el estado expandido del material para conducir el flujo capilar lateral en la banda de ensayo de abajo lateralmente hacia el extremo del hueco alargado donde se coloca la banda de ensayo. El hueco de expansión y el material de capa absorbente de abajo que generalmente imita dos dimensiones de la cavidad de expansión, permite absorber y filtrar la cantidad seleccionada de muestra líquida para la banda de ensayo. La cavidad de expansión y el material de capa absorbente ayudan a dirigir el flujo lateral de la muestra de líquido en la banda de ensayo en el hueco hacia la zona de eliminación en el extremo de la banda para recibir la muestra de líquido cuando se usó. Si la capa absorbente no se expande suficientemente para rellenar o rellenar significativamente la cavidad de expansión, la velocidad y tiempo del flujo lateral o capilar pueden ser insatisfactorios. La velocidad de flujo puede ser demasiado lenta y el periodo de tiempo puede ser demasiado largo. Si la capa absorbente se usa en exceso, entonces tiene lugar exceso de presión en la cavidad e expansión, y la capa absorbente expandida tiende a retardar el flujo lateral deseado de la muestra líquida. open end of use of the hole, with a dry, inert, porous, expanded, liquid permeable, absorbent material, in a generally triangular layer as an absorption zone in the test strip, for example, cellulose or nitrocellulose, placed under the open bottom of the utilization cavity or chamber. The contact absorbent layer, such as immersion of the end of use of the recess of the test device in a liquid, absorbs a preselected amount of the liquid sample necessary for the test. The absorbent layer material expands, for example, from one to three seconds, to significantly fill or refill the expansion cavity and be in contact with the walls surrounding the egg of the expansion cavity, to cause sufficient pressure on the cavity of expansion and the expanded state of the material to drive the lateral capillary flow in the test band below laterally towards the end of the elongated gap where the test band is placed. The expansion gap and the absorbent layer material below that generally mimics two dimensions of the expansion cavity, allows the selected amount of liquid sample to be absorbed and filtered for the test strip. The expansion cavity and the absorbent layer material help direct the lateral flow of the liquid sample in the test band in the recess towards the disposal zone at the end of the band to receive the liquid sample when it was used. If the absorbent layer does not expand sufficiently to fill or refill the expansion cavity significantly, the velocity and time of the lateral or capillary flow may be unsatisfactory. The flow rate may be too slow and the period of time may be too long. If the absorbent layer is used in excess, then excess pressure in the cavity and expansion occurs, and the expanded absorbent layer tends to retard the desired lateral flow of the liquid sample.
El hueco con el diseño con forma de cepillo de dientes puede incluir un hueco moldeado por inyección separado con un cubierta final opcional, para proteger el extremo de utilización expuesto antes de la muestra y después de la muestra, y en la cámara de incubación, para evitar contaminación cruzada desde otras fuentes. El dispositivo de ensayo con el hueco moldeado permite al usuario manipular el mango del hueco y obtener una muestra líquida simplemente goteando un líquido en la cavidad de utilización abierta. The recess with the toothbrush-shaped design may include a separate injection molded recess with an optional end cover, to protect the end of use exposed before the sample and after the sample, and in the incubation chamber, for avoid cross contamination from other sources. The test device with the molded recess allows the user to manipulate the recess handle and obtain a liquid sample simply by dripping a liquid into the open use cavity.
El hueco puede incluir un diseño con forma de cepillo de dientes, donde la cavidad de expansión se forma en un paquete plástico, normalmente transparente, tipo ampolla que se sella sobre una superficie plana, como una banda de papel u otra banda de plástico, y que junto con el paquete empolla rodea la banda de ensayo seleccionada. El paquete ampolla incluye una banda de sellado que se puede quitar en un extremo de utilización de la banda de ensayo encerrada, para despegar o quitar antes de usar y para introducir un volumen seleccionado del líquido a la zona de absorción utilización de la banda de ensayo mientras está en el paquete ampolla, por ejemplo pipeteando. El paquete ampolla con la muestra líquida y la banda de ensayo se puede incubar en la incubadora y los resultados de la prueba se pueden observar visualmente o leer mediante un instrumento. The hole may include a toothbrush-shaped design, where the expansion cavity is formed in a plastic, normally transparent, blister-type package that is sealed on a flat surface, such as a paper band or other plastic band, and which, together with the packet, surrounds the selected test band. The blister pack includes a sealing band that can be removed at one end of the use of the enclosed test band, to take off or remove before use and to introduce a selected volume of the liquid to the absorption zone using the test band while in the blister pack, for example by pipetting. The blister pack with the liquid sample and the test band can be incubated in the incubator and the test results can be observed visually or read using an instrument.
En otra realización, se ha descubierto que es deseable proporcionar una o más aperturas en el hueco que define la cavidad de expansión para permitir controlar el tiempo y absorción más rápida de la muestra líquida por el material de absorción para una absorción más eficaz y para reducir el tiempo de absorción de la muestra líquida. En particular, se deberían colocar una o más aperturas sobre la cubierta superior o superficie del hueco cavidad de expansión, en particular del hueco moldeado, mejor que en los lados, de modo que el aire atrapado tras la inmersión se descargue desde la cavidad de expansión, a medida que la capa de absorción se expanda en un estado húmedo, de absorción, expandido. Mientras que una banda de material de absorción plano, rectangular se muestra con una cavidad de expansión generalmente rectangular que imita y proporciona bandas expandidas, rectangulares, se reconoce que el tamaño, material, dimensiones y forma del material de absorción y la forma o tipo de la cavidad de expansión pueden variar. Típicamente, el fondo abierto de la cavidad de expansión está sobre la capa de absorción y normalmente tiene aproximadamente las mismas dimensiones de anchura y longitud, para permitir expansión sin restricción de la capa de absorción dentro de la cavidad de expansión. In another embodiment, it has been found that it is desirable to provide one or more openings in the recess that defines the expansion cavity to allow faster time and absorption of the liquid sample to be controlled by the absorption material for more efficient absorption and to reduce the absorption time of the liquid sample. In particular, one or more openings should be placed on the top cover or surface of the expansion cavity, in particular the molded hole, better than on the sides, so that the air trapped after immersion is discharged from the expansion cavity , as the absorption layer expands in a wet, absorbed, expanded state. While a band of flat, rectangular absorption material is shown with a generally rectangular expansion cavity that mimics and provides expanded, rectangular bands, it is recognized that the size, material, dimensions and shape of the absorption material and the shape or type of The expansion cavity may vary. Typically, the open bottom of the expansion cavity is on the absorption layer and usually has approximately the same width and length dimensions, to allow unrestricted expansion of the absorption layer within the expansion cavity.
Mientras que es deseable una cubierta superior completamente transparente para cerrar la banda de ensayo y que los resultados se observen o lean sobre la banda de ensayo, se reconoce que la cubierta superior se pueda abrir o tenga una apertura para ver los resultados de ensayo, o que solamente una sección de la cubierta superior sea transparente para ver los resultados de ensayo, o que donde se pueda se modifique el hueco, de modo que los resultados de ensayo se puedan determinar por medio de instrumentos ópticos o electrónicos. While a completely transparent top cover is desirable to close the test band and that the results are observed or read on the test band, it is recognized that the top cover can be opened or has an opening to view the test results, or that only one section of the top cover is transparent to see the test results, or where the gap can be modified, so that the test results can be determined by means of optical or electronic instruments.
El dispositivo de ensayo se puede empaquetar para usar en un paquete tipo ampolla o usar una tapa de protección fija o deslizante en el extremo de utilización, para proteger el dispositivo de ensayo después de estar en contacto con la muestra líquida y en la incubadora (cuando la prueba lo requiera), para protección frente a contaminación cruzada. La tapa de protección se puede quitar y encierra totalmente el extremo de utilización del hueco, o simplemente es deslizante hacia afuera desde el extremo de utilización entre una posición de uso replegada y una posición extendida, protectora, cerrada. The test device can be packaged for use in a blister package or use a fixed or sliding protective cap on the end of use, to protect the test device after being in contact with the liquid sample and in the incubator (when the test requires it), for protection against cross contamination. The protective cover can be completely removed and encloses the use end of the hole, or it is simply sliding outward from the use end between a retracted use position and an extended, protective, closed position.
El dispositivo de prueba utiliza una banda de ensayo seleccionada para detectar la presencia o concentración de analitos seleccionados o residuos, o bien un único residuo o sus clases, y visualmente mediante referencia a una zona de ensayo de reacción o una línea de referencia en la banda de ensayo que se puede observar o medir. Normalmente, se coloca una zona de control o línea ligeramente por debajo de la zona de referencia o líneas con propósitos de control. El hueco del dispositivo de ensayo se puede utilizar en una amplia variedad de bandas de ensayo utilizadas o descritas actualmente que están basadas en flujo lateral o flujo capilar, sin importar la naturaleza de la prueba de analito-residuo en particular, siempre que la porción de la banda de ensayo de utilización o en contacto con líquido requiera o use un material de absorción filtración que se mueva por contacto con muestra líquida entre un estado no expandido a expandido o hacia un extremo de utilización del dispositivo de ensayo. Normalmente, la banda de ensayo tiene un soporte e incluye en una superficie pluralidad de zonas secuénciales de contacto, permeables a líquido o secciones con una zona estacionaria, una zona móvil y, opcionalmente, una zona de eliminación. El dispositivo de ensayo es particularmente útil en relación con la muestra líquida que comprende un fluido, por ejemplo, orina, sangre, leche o extracto de maíz en la detección de antibióticos, como beta-lactamas, toxinas, virus, bacterias, pesticidas y similares. Sin embargo, el dispositivo de ensayo puede emplear una o más bandas de ensayo dirigidas a diversidad de ensayos. The test device uses a selected test band to detect the presence or concentration of selected analytes or residues, either a single residue or its classes, and visually by reference to a reaction test zone or a reference line in the band of test that can be observed or measured. Normally, a control zone or line is placed slightly below the reference zone or lines for control purposes. The recess of the test device can be used in a wide variety of currently used or described test bands that are based on lateral flow or capillary flow, regardless of the nature of the analyte-residue test in particular, provided that the portion of The test band for use or in contact with liquid requires or uses a filtration absorbing material that moves by contact with liquid sample between an unexpanded or expanded state or towards an end of use of the test device. Normally, the test band has a support and includes on a surface a plurality of sequential contact areas, liquid permeable or sections with a stationary zone, a mobile zone and, optionally, a disposal zone. The test device is particularly useful in relation to the liquid sample comprising a fluid, for example, urine, blood, milk or corn extract in the detection of antibiotics, such as beta-lactams, toxins, viruses, bacteria, pesticides and the like. . However, the test device may employ one or more test bands aimed at a variety of tests.
Cuando se use, el dispositivo de ensayo se emplea en combinación con una incubadora, como una incubadora portátil, calentada eléctricamente, con una cámara de incubación que se puede dimensionar para albergar el hueco del dispositivo de ensayo ajustado para calentar durante un tiempo de incubación seleccionado, por ejemplo, a una temperatura en el intervalo entre aproximadamente 45 y 75ºC, preferentemente entre 55 y 65ºC, y durante un periodo de 1 a 10-15 minutos. El dispositivo de ensayo y la incubadora también incluyen un cronómetro, de modo que el periodo de incubación se puede cronometrar por el usuario. When used, the test device is used in combination with an incubator, such as a portable, electrically heated incubator, with an incubation chamber that can be sized to house the recess of the adjusted test device for heating during a selected incubation time , for example, at a temperature in the range between about 45 and 75 ° C, preferably between 55 and 65 ° C, and for a period of 1 to 10-15 minutes. The test device and the incubator also include a stopwatch, so that the incubation period can be timed by the user.
En funcionamiento, el dispositivo de ensayo con una cubierta protectora o tapa tiene la cubierta o tapa quitada y el extremo de utilización en contacto con un líquido que se va a examinar, tal como mediante inmersión, durante aproximadamente uno a diez segundos, y luego se quita, o una muestra de líquido pipeteada sobre el extremo de utilización. El material de absorción se deja expandir en la cavidad de expansión, por ejemplo de uno a quince segundos, después el dispositivo de ensayo se coloca en una incubadora durante un periodo de tiempo, después se saca y los resultados de la prueba se observan o miden. Si la muestra se pipetea el dispositivo se coloca en la incubadora y la muestra se pipetea sobre la cavidad de muestra. In operation, the test device with a protective cover or cover has the cover or cover removed and the use end in contact with a liquid to be examined, such as by immersion, for approximately one to ten seconds, and then remove, or a sample of pipetted liquid on the end of use. The absorption material is allowed to expand in the expansion cavity, for example one to fifteen seconds, then the test device is placed in an incubator for a period of time, then removed and the test results are observed or measured. . If the sample is pipetted the device is placed in the incubator and the sample is pipetted over the sample cavity.
La presente descripción incluye muchas ventajas, tales como la combinación de receptores o anticuerpos de amplio espectro y alta pureza con alta actividad específica por área superficial, combinados con anticuerpos específicos frente a residuos contrarrestantes (por ejemplo, monoclonales) para conseguir la detección de residuos del orden de niveles de partes por mil millones (ppb) (10-9) o partes por billón (ppt) (10-12) en o próximos a las disposiciones reglamentarias. Al seleccionar como objetivo el resto activo del residuo químico se permite la detección de un amplio espectro de fármacos activos (por ejemplo, medicamentos veterinarios, productos químicos agrícolas (por ejemplo, plaguicidas) o toxinas microbianas y sus metabolitos activos). Además, se pueden añadir anticuerpos adicionales para ajustar el umbral de sensibilidad del ensayo. The present description includes many advantages, such as the combination of receptors or antibodies of broad spectrum and high purity with high specific activity per surface area, combined with specific antibodies against counter-residual residues (for example, monoclonal) to achieve the detection of residues of the order of levels of parts per billion (ppb) (10-9) or parts per billion (ppt) (10-12) in or near regulatory provisions. Selecting as an objective the active residue of the chemical residue allows the detection of a broad spectrum of active drugs (for example, veterinary drugs, agricultural chemicals (for example, pesticides) or microbial toxins and their active metabolites). In addition, additional antibodies can be added to adjust the sensitivity threshold of the assay.
Otras ventajas incluyen que todos los componentes puedan ser incorporados en el dispositivo y que no sea necesaria la preparación del reactivo. El dispositivo es un ensayo de un solo paso o etapa que no requiere temporización (los resultados son estables de cuatro minutos a unas pocas horas). El dispositivo que tiene un control construido en negativo elimina la necesidad de niveles de control externos. Other advantages include that all components can be incorporated into the device and that reagent preparation is not necessary. The device is a single step or stage test that does not require timing (the results are stable from four minutes to a few hours). The device that has a negative built control eliminates the need for external control levels.
La figura 1 es una vista en perspectiva y en despiece ordenado de un dispositivo de ensayo de carcasa moldeada. Figure 1 is an exploded perspective view of a molded housing test device.
Las figuras 2, 3 y 4 son vistas esquemáticas, ilustrativas del uso del dispositivo de ensayo de la figura 1. Figures 2, 3 and 4 are schematic, illustrative views of the use of the test device of Figure 1.
La figura 5 es una vista en perspectiva de una estufa de incubación y del dispositivo de ensayo con una muestra líquida. Figure 5 is a perspective view of an incubator and the test device with a liquid sample.
La figura 6 es una vista en planta frontal a escala ampliada de la tira de ensayo de las figuras 1-5, con vistas frontales en sección a escala ampliada de resultados positivos y negativos en las pruebas. Figure 6 is an enlarged front plan view of the test strip of Figures 1-5, with front views in enlarged section of positive and negative test results.
La figura 7 es una vista en perspectiva y en despiece ordenado de un dispositivo de ensayo tipo blíster. Figure 7 is an exploded perspective view of a blister type test device.
Las figuras 8, 9 y 10 son vistas laterales esquemáticas, ilustrativas del uso del dispositivo de ensayo de la figura 7. Figures 8, 9 and 10 are schematic side views, illustrative of the use of the test device of Figure 7.
Las figuras 11 y 12 son vistas en perspectiva de una estufa de incubación y del dispositivo de ensayo con una muestra líquida. Figures 11 and 12 are perspective views of an incubator and the test device with a liquid sample.
La figura 13 es una vista en planta frontal a escala ampliada de la tira reactiva de las figuras 7-12, con vistas en sección frontales a escala ampliada de resultados positivos y negativos en las pruebas. Figure 13 is an enlarged front plan view of the test strip of Figures 7-12, with enlarged front sectional views of positive and negative test results.
La figura 14 es una vista en perspectiva y en despiece ordenado de un dispositivo de ensayo tipo blíster con refuerzo y estrechamiento sobresalientes de blíster para producir lugares de apriete. Figure 14 is an exploded perspective view of a blister-type test device with protruding blister reinforcement and narrowing to produce tightening locations.
Las figuras 15, 16 y 17 son vistas laterales, esquemáticas e ilustrativas del uso del dispositivo de ensayo de la figura 14. Figures 15, 16 and 17 are side, schematic and illustrative views of the use of the test device of Figure 14.
La figura 18 es una vista a escala ampliada de la zona 114 de restricción de movimiento de la tira. Figure 18 is an enlarged view of the zone 114 restricting movement of the strip.
Lo anterior y otros objetivos, características y ventajas de la invención resultarán evidentes de la descripción más concreta de las realizaciones preferidas de la invención, tal como se muestra en los dibujos que se acompañan en los que como caracteres de referencia se refieren a las mismas partes en diferentes vistas. Los dibujos no son necesariamente a escala, enfatizando en los principios de la invención en vez de la ilustración. Todos los porcentajes y partes son de peso, salvo que se indique lo contrario. The foregoing and other objects, features and advantages of the invention will be apparent from the more concrete description of the preferred embodiments of the invention, as shown in the accompanying drawings in which reference characters refer to the same parts. in different views. The drawings are not necessarily to scale, emphasizing the principles of the invention instead of the illustration. All percentages and parts are by weight, unless otherwise indicated.
Se describen un dispositivo de ensayo y un método para detectar la presencia de un analito residuo en una muestra. El ensayo y el dispositivo utilizan color directo, ensayos de amplio espectro basados en el reconocimiento por infrarrojo o fluorescencia para detectar rápidamente la baja presencia de partes por billón (ppb) de un producto químico o de una familia de residuos químicos que comparten puntos de reconocimiento común. Los kits están diseñados para evaluar antibióticos, toxinas y pesticidas en alimentos o muestras medioambientales en el campo, o en el laboratorio. Los ensayos no son competitivos utilizando saturación química. A test device and a method for detecting the presence of a residual analyte in a sample are described. The test and the device use direct color, broad-spectrum assays based on infrared or fluorescence recognition to quickly detect the low presence of parts per billion (ppb) of a chemical or a family of chemical residues that share recognition points common. The kits are designed to evaluate antibiotics, toxins and pesticides in food or environmental samples in the field, or in the laboratory. The tests are not competitive using chemical saturation.
En los dibujos, las figuras 1-6 muestran un dispositivo de ensayo 10 de analitos que incluye una carcasa 12 alargada moldeada. La carcasa 12 puede estar formada por un polímero de estireno transparente en una pieza, moldeado por inyección. La carcasa 12 define una cavidad 14 alargada de carcasa con un extremo abierto 16, y con una cavidad de expansión 18 de aplicación agrandada y rectangular en el extremo abierto 16 de la carcasa 12. La carcasa 12 incluye una cavidad inferior alargada formada durante el procedimiento de moldeo por inyección. La carcasa incluye una tapa protectora 22 opcional amovible ajustada por rozamiento o con salto elástico, adaptada para ajustar sobre el extremo abierto 16 de la carcasa 12, y unas aberturas 19 de expansión de líquido en la cubierta superior de la cavidad de aplicación de carcasa para aumentar el rendimiento de la expansión de una matriz de absorción de muestras, tal como una esponja 32, en el tiempo de ensayo. In the drawings, Figures 1-6 show an analyte test device 10 that includes a molded elongated housing 12. The housing 12 may be formed by a one-piece transparent styrene polymer, injection molded. The housing 12 defines an elongated housing cavity 14 with an open end 16, and with an enlarged and rectangular application expansion cavity 18 at the open end 16 of the housing 12. The housing 12 includes an elongated lower cavity formed during the process Injection molding The housing includes an optional removable protective cover 22 friction-adjusted or with elastic jump, adapted to fit over the open end 16 of the housing 12, and liquid expansion openings 19 in the upper cover of the housing application cavity for increase the performance of the expansion of a sample absorption matrix, such as a sponge 32, at the test time.
La cavidad 14 de carcasa incluye en su interior, sobre la superficie inferior, una tira reactiva 28 de flujo lateral adaptada para detectar la presencia de un analito en una muestra líquida, tal como leche. La tira reactiva 28 incluye una tira de soporte 30, con la esponja 32 fijada en un extremo. La esponja 32 puede incluir una pluralidad de capas secuenciales, que comprenden una almohadilla rectangular de material celulósico seco y comprimido, como un absorbente de líquidos-muestras asegurado a la superficie frontal de la tira de soporte 30. La esponja 32 se selecciona para que al expandirse en contacto con el líquido, tal como leche, llene la cavidad de expansión 18, esponja 32 que se representa en dos dimensiones. Por ejemplo, con la leche, la esponja 32 tiene unas medidas aproximadamente de 3-4 mm por 12-14 mm, mientras que la cavidad 18 tiene aproximadamente de 5-6 mm por 15-16 mm, y por 4-6 mm de altura. La cavidad de expansión 18 puede estar dimensionada aproximadamente del 60% al 30% menor que la expansión completa del material de esponja. The housing cavity 14 includes on its interior, on the lower surface, a lateral flow test strip 28 adapted to detect the presence of an analyte in a liquid sample, such as milk. The test strip 28 includes a support strip 30, with the sponge 32 fixed at one end. Sponge 32 may include a plurality of sequential layers, comprising a rectangular pad of dry and compressed cellulosic material, such as a liquid-sample absorbent secured to the front surface of the support strip 30. Sponge 32 is selected so that at expand in contact with the liquid, such as milk, fill the expansion cavity 18, sponge 32 which is represented in two dimensions. For example, with milk, sponge 32 measures approximately 3-4 mm by 12-14 mm, while cavity 18 is approximately 5-6 mm by 15-16 mm, and 4-6 mm of height. The expansion cavity 18 can be sized approximately 60% to 30% smaller than the complete expansion of the sponge material.
La tira de soporte 30 incluye un soporte 33 tratado de fase móvil con una composición 34 de fase móvil, una membrana 36 de fase estacionaria, que incluye una zona de ensayo 38 y una zona de control 40 para el analito a detectar, y una zona de eliminación 43 en el segundo extremo de la tira de soporte 30 para capturar la muestra líquida en exceso. La carcasa 12 incluye una cubierta superior 42 transparente para la observación visual de la zona de ensayo (zona de referencia) 38 y la zona de control The support strip 30 includes a mobile phase treated support 33 with a mobile phase composition 34, a stationary phase membrane 36, which includes a test zone 38 and a control zone 40 for the analyte to be detected, and a zone of removal 43 at the second end of the support strip 30 to capture the excess liquid sample. The housing 12 includes a transparent top cover 42 for visual observation of the test zone (reference zone) 38 and the control zone
40. La tira reactiva 28 está colocada y situada de modo flojo en la cavidad 14 alargada, con la esponja 32 situada debajo de la cavidad de expansión 18, extendiéndose la esponja 32, de modo general, hasta aproximada o ligeramente más allá del plano del extremo de aplicación abierto, estando cubierto el extremo antes del uso por la tapa protectora 22. 40. The test strip 28 is positioned and positioned loosely in the elongated cavity 14, with the sponge 32 located below the expansion cavity 18, the sponge 32 extending, generally, until approximately or slightly beyond the plane of the open end, the end being covered before use by the protective cap 22.
En funcionamiento, la tapa protectora 22 se retira antes del uso y el extremo de aplicación abierto de la carcasa 12 se inserta brevemente (aproximadamente de uno a diez segundos) en el líquido a ensayar, tal como leche, empleando la carcasa 12 alargada como mango. Véase la figura 2. Se retira el dispositivo de ensayo 10 y se permite que la esponja 32 se expanda para llenar la cavidad de expansión 18 y para comenzar el flujo lateral de la muestra de leche a través de la tira reactiva 28 (de 2 a 6 minutos). Véanse las figuras 3 y 4. Preferiblemente, se inserta la tapa protectora 22 para proteger contra contaminación cruzada, y se coloca entonces el dispositivo de ensayo 10 en una posición horizontal, extendiéndose hacia abajo la cavidad de aplicación 18 en una estufa de incubación 46 calentada eléctricamente, estando conformada una cavidad 47 de estufa de incubación para recibir el dispositivo de ensayo, y llevándose a cabo la incubación, por ejemplo, por un tiempo de tres a diez minutos. La temperatura de incubación se observa a través de una escala 48 indicadora de temperaturas. Véase la figura 5. Se retira e invierte entonces el dispositivo de ensayo 10 incubado, y se observa la vista frontal del dispositivo de ensayo, con la zona de ensayo 38 y la zona de control 40. Véase la figura 6. Las lecturas de las líneas para los controles positivos y negativos se ilustran en la figura 6, adyacentes a la vista frontal del dispositivo de ensayo 10. En la esponja 32, la expansión está controlada por el volumen y tamaño de la cavidad de expansión 18, dando como resultado que la esponja 32 llena completamente la cavidad de expansión 18 con un volumen preseleccionado de líquido, por ejemplo de 0,1 a 1,0 ml, de manera que la cantidad de muestra líquida tomada para el ensayo se controla hasta la cantidad correcta. Las dimensiones de la cavidad de expansión 18 impiden que la almohadilla 32 de esponja se expanda completamente, de manera que se mantiene la presión en la esponja expandida, tal como se muestra en la figura 4, para ayudar a forzar el flujo capilar lateral de la muestra líquida a través de la tira reactiva 28 en la carcasa 12. In operation, the protective cap 22 is removed before use and the open application end of the housing 12 is briefly inserted (approximately one to ten seconds) into the liquid to be tested, such as milk, using the elongated housing 12 as a handle . See Figure 2. The test device 10 is removed and the sponge 32 is allowed to expand to fill the expansion cavity 18 and to begin lateral flow of the milk sample through the test strip 28 (2 to 6 minutes) See Figures 3 and 4. Preferably, the protective cap 22 is inserted to protect against cross contamination, and the test device 10 is then placed in a horizontal position, the application cavity 18 extending downward in a heated incubator 46 electrically, an incubation oven cavity 47 being formed to receive the test device, and the incubation being carried out, for example, for a time of three to ten minutes. The incubation temperature is observed through a temperature indicator scale 48. See Figure 5. The incubated test device 10 is then removed and inverted, and the front view of the test device is observed, with the test zone 38 and the control zone 40. See Figure 6. The readings of the Lines for the positive and negative controls are illustrated in Figure 6, adjacent to the front view of the test device 10. In the sponge 32, the expansion is controlled by the volume and size of the expansion cavity 18, resulting in that Sponge 32 completely fills expansion cavity 18 with a pre-selected volume of liquid, for example 0.1 to 1.0 ml, so that the amount of liquid sample taken for the test is controlled to the correct amount. The dimensions of the expansion cavity 18 prevent the sponge pad 32 from fully expanding, so that the pressure in the expanded sponge, as shown in Figure 4, is maintained to help force the lateral capillary flow of the liquid sample through the test strip 28 in the housing 12.
Los dibujos de las figuras 7-13 ilustran otra realización de ensayo 50 en un blíster transparente, que incluye una tira de sellado 52 de plástico de cinta transparente, con una etiqueta de desprendimiento 54 en un extremo, y un blíster 56 transparente asegurado de manera adhesiva a la tira 52, para encerrar en su interior la tira reactiva 28. El blíster 56 incluye una cavidad alargada para contener la tira 28 y una cavidad de expansión 58 de carcasa en un primer extremo para constituir una cavidad, generalmente en forma de cepillo de dientes, dentro del blíster 56 de plástico y la tira 52. La tira reactiva 28 seleccionada está sellada y encerrada dentro del blíster The drawings of Figures 7-13 illustrate another test embodiment 50 in a transparent blister, which includes a sealing strip 52 of transparent tape plastic, with a detachment tag 54 at one end, and a transparent blister 56 secured in a manner adhesive to the strip 52, to enclose the test strip 28 therein. The blister 56 includes an elongated cavity to contain the strip 28 and a housing expansion cavity 58 at a first end to constitute a cavity, generally in the form of a brush of teeth, inside the plastic blister 56 and the strip 52. The selected test strip 28 is sealed and enclosed within the blister
56. 56.
La figura 8 muestra una vista en sección lateral del dispositivo 50 de ensayo tipo blíster antes del uso. La figura 9 muestra el dispositivo 50 de ensayo tipo blíster con un extremo desprendido hacia atrás por la patilla de desprendimiento 54, para exponer la cavidad de expansión 58 de carcasa y la esponja 32 de la tira reactiva 28, de manera que se puede añadir una cantidad definida de una muestra líquida, por ejemplo, con una pipeta, tal como se muestra. En una realización preferida, la cavidad 18 tiene forma triangular similar a la esponja 32, tal como se muestra en la figura 9. Figure 8 shows a side sectional view of the blister-type test device 50 before use. Figure 9 shows the blister-type test device 50 with an end detached backwards by the detachment pin 54, to expose the housing expansion cavity 58 and the sponge 32 of the test strip 28, so that a defined quantity of a liquid sample, for example, with a pipette, as shown. In a preferred embodiment, the cavity 18 has a triangular shape similar to the sponge 32, as shown in Figure 9.
La figura 10 ilustra el dispositivo de ensayo 50 después de la adición de la muestra líquida, con la patilla de desprendimiento 54 vuelta a sellar y con la esponja 32 completamente expandida por la muestra líquida dentro de la cavidad 58 de carcasa, y listo para ser incubado. Figure 10 illustrates the test device 50 after the addition of the liquid sample, with the detachment pin 54 resealed and with the sponge 32 fully expanded by the liquid sample inside the housing cavity 58, and ready to be incubated
La figura 11 ilustra el dispositivo de ensayo 50 al revés y colocado en una de las dos cavidades 47 en la estufa de incubación 46. La figura 12 ilustra la técnica de añadir la muestra líquida con una pipeta, mientras se arranca la patilla de desprendimiento 54 lejos del extremo del dispositivo de ensayo 50 en la estufa de incubación 46. Se sella e incuba el dispositivo de ensayo 50. Los resultados en las pruebas del ensayo terminado se pueden leer entonces a través de una cubierta superior transparente del blíster 56, tal como se muestra en la figura 13, para proporcionar resultados positivos o negativos en las pruebas. Figure 11 illustrates the test device 50 upside down and placed in one of the two cavities 47 in the incubation oven 46. Figure 12 illustrates the technique of adding the liquid sample with a pipette, while tearing off the pin 54 away from the end of the test device 50 in the incubator 46. The test device 50 is sealed and incubated. The results in the tests of the finished test can then be read through a transparent top cover of the blister 56, such as It is shown in Figure 13, to provide positive or negative test results.
La tira reactiva 28 del análisis de inhibición (figura 7) seleccionada para betalactámicos en leche es para un ensayo rápido de betalactámicos en la leche mezclada, cruda y pasteurizada. En funcionamiento, se verifica un calibrador 48 de temperaturas en la estufa de incubación 46 para asegurar una temperatura de la estufa de incubación de aproximadamente 55°C. Por ejemplo, el indicador 48 de temperaturas puede estar coloreado, por ejemplo, en verde, para su uso. El dispositivo de ensayo 50 se coloca en una cavidad 47 de la estufa de incubación 46, con el lado plano mirando hacia arriba y la patilla de desprendimiento 54 suficientemente desprendida hacia atrás para exponer la esponja 32, por ejemplo, un centímetro. La leche se mezcla a fondo antes del ensayo, y se añaden aproximadamente de 0,2-0,7 ml, preferiblemente de 0,3-0,5 ml, con una pipeta a la esponja 32 expuesta. La patilla 54 con cinta adhesiva se vuelve a sellar por presión manual y se cierra la cubierta de la estufa de incubación 46. Se incuba el dispositivo de ensayo 50, por ejemplo, al menos de 6 a 8 minutos y, luego, se retira de la estufa de incubación 46, se mantiene verticalmente y se hace una comparación aproximadamente en una hora entre la zona de ensayo 38 y la zona de control 40. Si no aparece ninguna zona de control 40, el ensayo no es válido. Se presenta un ensayo negativo cuando la zona de referencia 38 es la misma o más oscura que la zona de control 40. Se indica un ensayo positivo cuando la zona de ensayo 38 está ausente o evidentemente más clara que la zona de control 40. Test strip 28 of the inhibition analysis (Figure 7) selected for beta-lactams in milk is for a rapid test of beta-lactams in mixed, raw and pasteurized milk. In operation, a temperature gauge 48 is checked in the incubation oven 46 to ensure an incubation oven temperature of approximately 55 ° C. For example, the temperature indicator 48 may be colored, for example, in green, for use. The test device 50 is placed in a cavity 47 of the incubator 46, with the flat side facing up and the detachment pin 54 sufficiently detached back to expose the sponge 32, for example, a centimeter. The milk is thoroughly mixed before the test, and approximately 0.2-0.7 ml, preferably 0.3-0.5 ml, is added with a pipette to the exposed sponge 32. The pin 54 with adhesive tape is resealed by manual pressure and the incubator cover 46 is closed. The test device 50 is incubated, for example, for at least 6 to 8 minutes and then removed from The incubation oven 46 is maintained vertically and a comparison is made in approximately one hour between the test zone 38 and the control zone 40. If no control zone 40 appears, the test is not valid. A negative test is presented when the reference zone 38 is the same or darker than the control zone 40. A positive test is indicated when the test zone 38 is absent or obviously lighter than the control zone 40.
Con más detalle, el dispositivo de ensayo 10, capaz de detectar analitos en fluidos biológicos, incluye los siguientes componentes: In more detail, the test device 10, capable of detecting analytes in biological fluids, includes the following components:
una esponja 32, un material comprimido, tal como celulosa, es capaz de absorber un fluido biológico y actuar como un prefiltro para eliminar impurezas macroscópicas, tales como pelo, suciedad, etc. La esponja 32 está dimensionada para absorber una cantidad fija de muestra requerida a fin de completar el análisis. Este material comprimido, cuando se expande y contacta con la pared interior de la carcasa 12, ocasiona una presión suficiente para activar el flujo capilar a lo largo de la esponja 32 de componentes, el soporte 33 de fase móvil, la membrana 36 de fase estacionaria y la zona de eliminación 43, y en el tiempo requerido (aproximadamente de 3 a 8 minutos) para un ensayo comercialmente vendible. La esponja 32 solapa el soporte de fase móvil (almohadilla de conjugados) 33 de 1 a 10 mm, de manera que, cuando se añade una muestra acuosa, tal como leche, a la esponja 32, la muestra circula sobre el soporte 33 de fase móvil. a sponge 32, a compressed material, such as cellulose, is able to absorb a biological fluid and act as a prefilter to remove macroscopic impurities, such as hair, dirt, etc. Sponge 32 is sized to absorb a fixed amount of sample required in order to complete the analysis. This compressed material, when expanded and contacts the inner wall of the housing 12, causes sufficient pressure to activate the capillary flow along the component sponge 32, the mobile phase support 33, the stationary phase membrane 36 and elimination zone 43, and in the time required (approximately 3 to 8 minutes) for a commercially salable trial. The sponge 32 overlaps the mobile phase support (conjugate pad) 33 from 1 to 10 mm, so that, when an aqueous sample, such as milk, is added to the sponge 32, the sample circulates on the phase support 33 mobile.
El dispositivo de ensayo puede usar un receptor biológico que esté marcado con cantidades abundantes de tintes de color, infrarrojos, fluorescentes o luminescentes. La muestra licuada (por ejemplo, leche, maíz, pienso, extracto de cacahuete, extracto de carne, suero, muestra ambiental, etc.) vuelve a poner en suspensión el receptor marcado, que se estabiliza previamente con aditivos fácilmente solubles en una composición de fase móvil. El receptor marcado liberado de control temporal reacciona con el analito en la muestra, al tiempo que entra en una zona de reacción sobre la membrana 36 de fase estacionaria. The test device may use a biological receptor that is labeled with abundant amounts of color, infrared, fluorescent or luminescent dyes. The liquefied sample (for example, milk, corn, feed, peanut extract, meat extract, whey, environmental sample, etc.) re-suspends the labeled receptor, which is previously stabilized with readily soluble additives in a composition of mobile phase The labeled receptor released from temporary control reacts with the analyte in the sample, while entering a reaction zone on the stationary phase membrane 36.
Los anticuerpos monoclonales específicos frente a residuos se incluyen también en la composición de fase móvil para unir específicamente el residuo en exceso con alta sensibilidad, ajustando, así, la sensibilidad para esos residuos específicos hacia abajo (para hacer el ensayo menos sensible). Como la menor parte de estos residuos están disponibles para competir con el receptor de amplio espectro, la sensibilidad se ajusta más próxima a las disposiciones reglamentarias. Por ejemplo, la sensibilidad inicial del receptor de betalactámicos a cefapirina es 3-5 ppb. Incluyendo los anticuerpos específicos frente a cefapirina, la sensibilidad se ajusta a 15-20 ppb. El nivel “seguro” normativo de la Food and Drug Administration en leche cruda y mezclada es 20 ppb. Specific monoclonal antibodies against residues are also included in the mobile phase composition to specifically bind the excess residue with high sensitivity, thus adjusting the sensitivity for those specific residues downwards (to make the assay less sensitive). As the minor part of these wastes are available to compete with the broad spectrum receiver, the sensitivity is adjusted closer to the regulatory provisions. For example, the initial sensitivity of the beta-lactam receptor to cefapirin is 3-5 ppb. Including the specific antibodies against cefapirin, the sensitivity is adjusted to 15-20 ppb. The normative “safe” level of the Food and Drug Administration in raw and mixed milk is 20 ppb.
Se apreciará que un complejo de anticuerpos específicos con antibióticos libres en una muestra, hace que los antibióticos con complejos no estén disponibles para una medición adicional en cualquier análisis de inhibición de receptores o de unión. It will be appreciated that a complex of specific antibodies with free antibiotics in a sample makes antibiotics with complexes not available for further measurement in any receptor inhibition or binding assay.
La carcasa 12 se debería usar para permitir la adición de muestra biológica, por inmersión, vertido o pipetado. La carcasa 12 puede estar construida de un material flexible o duro, tal como poliestireno, polipropileno o polietileno. The housing 12 should be used to allow the addition of biological sample, by immersion, pouring or pipetting. The housing 12 may be constructed of a flexible or hard material, such as polystyrene, polypropylene or polyethylene.
El soporte 33 de fase móvil puede estar hecho de una membrana de vidrio o un polímero, tal como poliéster o polietileno, que actúa como un filtro secundario para la eliminación de materiales más microscópicos (células somáticas). El soporte se pretrata con una disolución química, tal como una de citrato de sodio de 0,01 a 0,2 M , pH 6-8, capaz de neutralizar las interferencias encontradas en las muestras biológicas. El soporte de fase móvil solapa la membrana 36 de fase estacionaria (tira reactiva) aproximadamente de 1 a 4 mm. The mobile phase support 33 may be made of a glass membrane or a polymer, such as polyester or polyethylene, which acts as a secondary filter for the removal of more microscopic materials (somatic cells). The support is pretreated with a chemical solution, such as a 0.01 to 0.2 M sodium citrate, pH 6-8, capable of neutralizing the interferences found in biological samples. The mobile phase support overlaps the stationary phase membrane 36 (test strip) approximately 1 to 4 mm.
Las microesferas de colores o fluorescentes revestidas con receptores/anticuerpos están en suspensión en una disolución que contiene proteínas, por ejemplo, albúmina sérica bovina (BSA), glicerol, azúcar o equivalentes de los mismos, por ejemplo, sacarosa (SUC) o trehalosa (TRE), polietilenglicol 8.000 MW (PEG), mezclas de aminoácidos (AA) o detergentes, como estabilizadores y agentes de humectación, y se absorben o se rocían en la membrana usando un instrumento de rociado, tal como el disponible de la firma Biodot. Además, los anticuerpos específicos frente a residuos se secan o se inmovilizan por rociado en esta matriz. La amortiguación de la muestra se optimiza aquí también usando un tampón con un pH dado, sal o cualquier cofactor requerido necesitado para optimizar la cinética de unión con receptores/anticuerpos. The colored or fluorescent microspheres coated with receptors / antibodies are suspended in a solution containing proteins, for example, bovine serum albumin (BSA), glycerol, sugar or equivalents thereof, for example, sucrose (SUC) or trehalose ( TRE), 8,000 MW polyethylene glycol (PEG), mixtures of amino acids (AA) or detergents, such as stabilizers and wetting agents, and are absorbed or sprayed on the membrane using a spray instrument, such as that available from Biodot. In addition, specific antibodies against residues are dried or immobilized by spraying in this matrix. The sample buffer is also optimized here using a buffer with a given pH, salt or any required cofactor needed to optimize receptor / antibody binding kinetics.
Una fase móvil incluye proteínas de unión altamente específicas, tales como una enzima o unos anticuerpos monoclonales, capaces de unirse a un analito y tituladas hasta una concentración conocida para hacer que no esté disponible para reacción/detección adicionales de una cantidad conocida de analito. Esta no disponibilidad para reacción/detección adicionales permite el ajuste de un nivel de detección de uno o más analitos hasta un nivel especificado de interés. Por ejemplo, en ceftiofur, a un betalactámico con un nivel de tolerancia de 50 ppb en la leche, se le puede cambiar la sensibilidad desde 5 ppb hasta entre 40-50 ppb, por la adición de un anticuerpo monoclonal específico frente a ceftiofur. El anticuerpo monoclonal específico compite con el receptor marcado para impedir que un analito específico se una a un receptor o anticuerpo, que es capaz de unirse a una familia de compuestos relacionados. A mobile phase includes highly specific binding proteins, such as an enzyme or monoclonal antibodies, capable of binding to an analyte and titrated to a known concentration to make it unavailable for further reaction / detection of a known amount of analyte. This unavailability for additional reaction / detection allows adjustment of a detection level of one or more analytes to a specified level of interest. For example, in ceftiofur, a beta-lactam with a tolerance level of 50 ppb in milk, the sensitivity can be changed from 5 ppb to between 40-50 ppb, by the addition of a specific monoclonal antibody against ceftiofur. The specific monoclonal antibody competes with the labeled receptor to prevent a specific analyte from binding to a receptor or antibody, which is capable of binding to a family of related compounds.
Las proteínas altamente purificadas, tales como receptores de beta-lactama, preparadas mediante purificación de afinidad y/o una combinación de cromatografía hidrofóbica/de intercambio iónico, están fijadas a una sonda coloreada, fluorescente o infrarroja que se puede observar por medios ópticos/de instrumental, o por ambos. La fijación de proteínas a una sonda se denomina complejo de proteínas de unión/sonda. Highly purified proteins, such as beta-lactam receptors, prepared by affinity purification and / or a combination of hydrophobic / ion exchange chromatography, are attached to a colored, fluorescent or infrared probe that can be observed by optical / instrumental, or both. The binding of proteins to a probe is called the binding protein / probe complex.
La composición 34 de fase móvil, tal como esferillas de oro, se realizan con un tamaño de partícula entre 10 y 60 nm. Las esferillas se pueden rociar sobre un soporte 33 de fase móvil, tal como un polietileno de alta densidad pretratado. La composición de fase móvil se rocía usando una máquina, tal como la de las firmas Ivek, Biodot o Camag, o se absorbe en la esponja 32, en una disolución que contiene del 5 al 20% en azúcar, tal como sacarosa o trehalosa, del 5 al 20% en proteínas, tal como BSA o Primatone, de 5 a 100 mM de una disolución tampón (base de fosfatos o trizma base) con un pH final entre 6-8. La composición de fase móvil se rocía sobre la porción superior del soporte de fase móvil, de manera que la esponja 32 no solape la porción rociada de la composición de fase móvil del soporte de fase móvil, al colocar la porción más alta de la esponja 32 de 1 a 7 mm por delante de la porción rociada de la composición de fase móvil. The mobile phase composition 34, such as gold chips, is made with a particle size between 10 and 60 nm. The spheres can be sprayed on a mobile phase support 33, such as a pretreated high density polyethylene. The mobile phase composition is sprayed using a machine, such as that of Ivek, Biodot or Camag, or is absorbed in sponge 32, in a solution containing 5 to 20% sugar, such as sucrose or trehalose, 5 to 20% in proteins, such as BSA or Primatone, 5 to 100 mM of a buffer solution (phosphate base or trizma base) with a final pH between 6-8. The mobile phase composition is sprayed on the upper portion of the mobile phase support, so that the sponge 32 does not overlap the sprayed portion of the mobile phase composition of the mobile phase support, by placing the highest portion of the sponge 32 1 to 7 mm ahead of the sprayed portion of the mobile phase composition.
Una membrana de fase estacionaria puede consistir en nitrocelulosa o nailon, que tiene múltiples zonas de reacción. La zona de control, que contiene el anticuerpo frente al receptor, se rocía al mismo tiempo y se seca la nitrocelulosa. El grosor de la zona se ajusta por la BSA añadida a la composición de fase móvil. La composición de fase móvil se rocía sobre la porción superior del soporte 33 de fase móvil, de manera que la composición 34 de fase móvil no solape la esponja 32, sino más bien el soporte 33 de fase móvil solape la esponja 32, al colocar la porción más alta de la esponja 32 aproximadamente de 1 a 7 mm por delante de la porción rociada de la fase móvil. El soporte de fase móvil se seca y se ensaya en un sistema de análisis para sensibilidad de todos los medicamentos. Se ajustan entonces, tal como se necesiten, las concentraciones de anticuerpos en la disolución de la composición de fase móvil. A stationary phase membrane may consist of nitrocellulose or nylon, which has multiple reaction zones. The control zone, which contains the antibody against the receptor, is sprayed at the same time and the nitrocellulose is dried. The thickness of the zone is adjusted by the BSA added to the mobile phase composition. The mobile phase composition is sprayed on the upper portion of the mobile phase support 33, so that the mobile phase composition 34 does not overlap the sponge 32, but rather the mobile phase support 33 overlaps the sponge 32, when placing the highest portion of the sponge 32 approximately 1 to 7 mm ahead of the sprayed portion of the mobile phase. The mobile phase support is dried and tested in an analysis system for sensitivity of all medications. The antibody concentrations in the solution of the mobile phase composition are then adjusted as needed.
Para que la fase móvil obtenga la mejor respuesta en color o fluorescencia, se pueden preparar proteínas altamente purificadas (por ejemplo, receptores de betalactama) mediante (i) purificación de afinidad y/o (ii) una combinación de cromatografía hidrofóbica/de intercambio iónico. In order for the mobile phase to obtain the best color or fluorescence response, highly purified proteins (eg, beta-lactam receptors) can be prepared by (i) affinity purification and / or (ii) a combination of hydrophobic / ion exchange chromatography .
Para sondas de color, infrarrojas o fluorescentes, el receptor/anticuerpo puede ser un tinte de color, infrarrojo o fluorescente inmovilizado, por ejemplo, en una microesfera de 0,02-10 micrómetros o en oro coloidal. Estos soportes absorben proteínas o presentan grupos funcionales, tales como NH2, COOH o CHO, para unión covalente a proteínas. La microesfera está, de modo general, revestida con una alta concentración de proteínas de unión altamente específicas. For color, infrared or fluorescent probes, the receptor / antibody may be an immobilized color, infrared or fluorescent dye, for example, in a 0.02-10 micrometer microsphere or in colloidal gold. These supports absorb proteins or have functional groups, such as NH2, COOH or CHO, for covalent protein binding. The microsphere is generally coated with a high concentration of highly specific binding proteins.
Típicamente, la membrana de fase estacionaria está formada por nitrocelulosa, nailon, polietileno u otro material adecuado. En la fase estacionaria, el medicamento representativo de analitos está fijado con alta relación específica a un portador, por ejemplo, una proteína, tal como BSA, IgG o proteína A. La membrana 36 de fase estacionaria presenta múltiples zonas de reacción e incluye la zona de ensayo 38 rociada en una línea, usando un instrumento adecuado de rociado. El fin de la zona de ensayo es capturar un complejo sin reaccionar de proteínas de unión/sonda para su visión o medición. La zona de ensayo 38 (figura 6) consiste en un analito de detección; es decir, ceforanida o un miembro de la familia de analitos, es decir, betalactámicos, acoplado a una proteína portadora, es decir, BSA, IgG, KLH, en suspensión en una disolución tampón de 5 a 100 mM (tal como una base de fosfatos o tampón) en un intervalo de pH de 3-10, preferiblemente de 6-8. La concentración de proteínas total de la disolución de anticuerpos varía desde 0,2 hasta 100 mg/ml. El analito-portador, disuelto en una disolución tampón, por ejemplo, un tampón de fosfatos 10 mM, pH 6,9, que contiene azúcares, tales como trehalosa u otros aditivos, se rocía como una línea sobre la membrana de fase estacionaria. La inmovilización de tentáculos del analito conjugado a una portadora de múltiples puntos de unión, tales como proteínas A o microesferas de látex, aumenta la estabilidad y la capacidad de unión. Un tratamiento térmico posterior de la membrana estabiliza además la adhesión. Sobre el dispositivo de ensayo, se puede añadir una segunda zona de ensayo a la zona de reacción para ensayar un segundo analito. Por ejemplo, la primera zona de ensayo puede tener un primer aglutinante para amoxicilina, ampicilina, ceftiofur, cefaparina y penicilina G. La segunda zona de ensayo puede tener un segundo aglutinante para cloxacilina. Alternativamente, la primera zona de ensayo puede hacer ensayos con betalactámicos y la segunda zona de ensayo puede hacer ensayos con sulfonamidas. Se pueden añadir zonas de ensayo adicionales para hacer ensayos con analitos adicionales. Typically, the stationary phase membrane is formed of nitrocellulose, nylon, polyethylene or other suitable material. In the stationary phase, the analyte representative drug is fixed with a high specific ratio to a carrier, for example, a protein, such as BSA, IgG or protein A. The stationary phase membrane 36 has multiple reaction zones and includes the zone Test 38 sprayed on a line, using a suitable spray instrument. The purpose of the test zone is to capture an unreacted complex of binding proteins / probe for viewing or measurement. Test zone 38 (Figure 6) consists of a detection analyte; that is, ceforanide or a member of the analyte family, that is, beta-lactam, coupled to a carrier protein, that is, BSA, IgG, KLH, suspended in a 5 to 100 mM buffer solution (such as a base of phosphates or buffer) in a pH range of 3-10, preferably 6-8. The total protein concentration of the antibody solution ranges from 0.2 to 100 mg / ml. The analyte-carrier, dissolved in a buffer solution, for example, a 10 mM phosphate buffer, pH 6.9, containing sugars, such as trehalose or other additives, is sprayed as a line on the stationary phase membrane. The immobilization of tentacles of the analyte conjugated to a carrier of multiple binding points, such as A proteins or latex microspheres, increases stability and binding capacity. A subsequent heat treatment of the membrane also stabilizes the adhesion. On the test device, a second test zone can be added to the reaction zone to test a second analyte. For example, the first test zone may have a first binder for amoxicillin, ampicillin, ceftiofur, cefaparin and penicillin G. The second test zone may have a second binder for cloxacillin. Alternatively, the first test zone can do beta-lactam tests and the second test zone can do sulfonamide tests. Additional test zones can be added to perform tests with additional analytes.
La zona de reacción incluye también la zona de control 40, mostrada en la figura 13, rociada en forma de línea, usando un instrumento adecuado de rociado. Un objetivo de la zona de control 40 es capturar un complejo de proteínas de unión/sonda que no se ha unido a la zona de ensayo 38. La zona de control 40 puede consistir en un anticuerpo específico frente a las proteínas de unión/sonda en suspensión en una disolución tampón de 5 a 100 mM (de fosfatos o trizma) en un intervalo de pH de 3 a The reaction zone also includes the control zone 40, shown in Figure 13, sprayed in the form of a line, using a suitable spray instrument. An objective of the control zone 40 is to capture a binding / probe protein complex that has not bound to the test zone 38. The control zone 40 may consist of a specific antibody against the binding / probe proteins in suspension in a buffer solution of 5 to 100 mM (phosphate or trizma) in a pH range of 3 to
10. La concentración de proteínas total de la disolución de anticuerpos varía, de modo general, desde 0,2 hasta 100 mg/ml. 10. The total protein concentration of the antibody solution varies, in general, from 0.2 to 100 mg / ml.
En una realización, el material para ceforanida-SM se añade a la disolución SMCC-BSA-NEM y la reacción sigue con agitación durante la noche a 4°C. La ceforanida-BSA se dializa para eliminar la ceforanida libre. La zona de control incluye un anticuerpo frente al receptor marcado o un anticuerpo de amplio espectro, que está inmovilizado como una línea paralela a la zona de ensayo. Así, el receptor/anticuerpo de la composición de fase móvil se captura en esta línea, independientemente de la presencia o ausencia de analitos en la muestra. La zona de control consiste en un anticuerpo realizado frente al receptor de betalactámicos. El receptor es purificado mediante cromatografía de afinidad. In one embodiment, the material for ceforanide-SM is added to the SMCC-BSA-NEM solution and the reaction continues with stirring overnight at 4 ° C. Ceforanide-BSA is dialyzed to eliminate free ceforanide. The control zone includes an antibody against the labeled receptor or a broad-spectrum antibody, which is immobilized as a line parallel to the test zone. Thus, the receptor / antibody of the mobile phase composition is captured in this line, regardless of the presence or absence of analytes in the sample. The control zone consists of an antibody made against the beta-lactam receptor. The receptor is purified by affinity chromatography.
Una comparación de la zona de control con la zona de ensayo produce el resultado en las pruebas. Típicamente, si la zona de control es más oscura que la zona de ensayo, un analito está presente al nivel de detección o a un mayor nivel (véase la figura 6). A comparison of the control zone with the test zone produces the test result. Typically, if the control zone is darker than the test zone, an analyte is present at the detection level or at a higher level (see Figure 6).
La zona de eliminación 43, mostrada en la figura 7, está realizada típicamente de celulosa prensada u otro material absorbente para mantener consistente el flujo de muestra y para retener la muestra reaccionada. La zona de eliminación solapa, de modo general, la membrana 36 de fase estacionaria aproximadamente de 1 a 5 mm. The disposal zone 43, shown in Figure 7, is typically made of pressed cellulose or other absorbent material to keep the sample flow consistent and to retain the reacted sample. The elimination zone overlaps, generally, the stationary phase membrane 36 approximately 1 to 5 mm.
La movilidad de la muestra (leche, suero sanguíneo u otros fluidos) se ensaya para optimizar los tiempos y la uniformidad de reacción. Se usan membranas de poros de gran tamaño (15 a 140 µm) para permitir el flujo de muestras viscosas, como leche The mobility of the sample (milk, blood serum or other fluids) is tested to optimize reaction times and uniformity. Large pore membranes (15 to 140 µm) are used to allow the flow of viscous samples, such as milk
o suero. or serum
La zona de eliminación 43 incluye típicamente una almohadilla absorbente que es una membrana de absorción hecha de una esponja sintética de celulosa, o de otro material. Esta almohadilla mantiene la muestra circulando y detiene el flujo en la saturación, proporcionando así al análisis control temporal y reduciendo el ruido de fondo. The removal zone 43 typically includes an absorbent pad that is an absorption membrane made of a synthetic cellulose sponge, or other material. This pad keeps the sample circulating and stops the saturation flow, thus providing the analysis with temporary control and reducing background noise.
En otra realización específica, se añade una muestra biológica acuosa a la esponja 32 del dispositivo de ensayo. La esponja 32 sirve como una almohadilla para muestras que se expande a medida que absorbe la muestra. La almohadilla 32 de esponja solapa al soporte 33 de fase móvil, y al flujo de fluido sobre el soporte 33 de fase móvil, en el que los materiales de fase móvil se disuelven en el fluido biológico. Los analitos presentes en la muestra empiezan a unirse con la o las proteínas de unión específicas fijadas a la muestra. Al mismo tiempo, anticuerpos específicos unidos o desunidos o proteínas de unión se unen con analitos específicos para ajustar su sensibilidad al ensayo. El soporte 33 de fase móvil solapa la membrana 36 de fase estacionaria, y el fluido biológico, junto con la composición 34 de fase móvil (esferillas coloreadas), siguen reaccionando, a medida que los materiales fluyen hacia arriba de la membrana 36 de fase estacionaria. Cuando el complejo de proteínas de unión/sonda alcanza la zona de ensayo 38, una porción del complejo de proteínas de unión/sonda se une a la zona de ensayo. En una muestra positiva, el analito en la misma se une al complejo de proteínas de unión/sonda, reduciendo la cantidad de complejo de proteínas de unión/sonda capaz de unirse a la zona de ensayo 38. Cuando el material alcanza la zona de control 40, una porción del complejo de proteínas de unión/sonda se une a la zona de control 40. El reactivo en exceso se absorbe entonces en la almohadilla de eliminación 43. In another specific embodiment, an aqueous biological sample is added to the sponge 32 of the test device. Sponge 32 serves as a sample pad that expands as it absorbs the sample. The sponge pad 32 overlaps the mobile phase support 33, and the fluid flow over the mobile phase support 33, in which the mobile phase materials dissolve in the biological fluid. The analytes present in the sample begin to bind with the specific binding protein (s) attached to the sample. At the same time, specific bound or disjointed antibodies or binding proteins bind with specific analytes to adjust their sensitivity to the assay. The mobile phase support 33 overlaps the stationary phase membrane 36, and the biological fluid, together with the mobile phase composition 34 (colored splinters), continue to react, as the materials flow up the stationary phase membrane 36 . When the binding / probe protein complex reaches test zone 38, a portion of the binding / probe protein complex binds to the test zone. In a positive sample, the analyte in it binds to the binding protein / probe complex, reducing the amount of binding protein / probe complex capable of binding to test zone 38. When the material reaches the control zone 40, a portion of the binding / probe protein complex binds to the control zone 40. The excess reagent is then absorbed into the removal pad 43.
En una muestra negativa, los reactivos se titulan de manera que la zona de ensayo 38 tenga la misma cantidad o, preferiblemente, una mayor cantidad de la sonda uniéndose a ella que en la zona de control 40. Al contrario a esto, en una muestra positiva, la zona de control 40 tiene una mayor cantidad de la sonda uniéndose a ella que la zona de ensayo 38. In a negative sample, the reagents are titrated so that the test zone 38 has the same amount or, preferably, a larger amount of the probe joining it than in the control zone 40. Contrary to this, in a sample positive, the control zone 40 has a greater amount of the probe joining it than the test zone 38.
Aún en otra realización de la invención, se realiza un ensayo de betalactámicos para analizar los mismos en la leche con un nivel seguro. Se une un receptor de betalactámicos parcialmente purificado a partir del BST (Bacillus stearothermophilus)a una disolución de oro coloidal para conseguir una sonda de proteínas de unión a betalactámicos/esferillas de oro. Ésta es rociada sobre el soporte 33 de fase móvil, junto con anticuerpos monoclonales frente a ceftiofur, cefapirina, ampicilina y amoxicilina, a fin de reducir la sensibilidad de estos cuatro antibióticos, de manera que el ensayo proporcione una respuesta deseada a la dosis. Se rocía sobre la zona de ensayo 38 una ceforanida-BSA conjugada, y se rocía en la zona de control 40 un anticuerpo frente al receptor de betalactámicos BST. Se aplica una muestra de leche cruda, preferiblemente entre 0,1-1,0 ml, a la almohadilla para muestras con una pipeta y se incuba la tira reactiva a 55°C. Después de aproximadamente ocho minutos, se retira la tira reactiva 10 de la estufa de incubación, y se analiza. Si la zona de ensayo 38 es más oscura o del mismo color que la línea de la zona de control 40, la muestra es negativa y, si la zona de ensayo 38 es más clara que la zona de control 40, la muestra es positiva. In yet another embodiment of the invention, a beta-lactam assay is performed to analyze them in milk with a safe level. A partially purified beta-lactam receptor from BST (Bacillus stearothermophilus) is attached to a colloidal gold solution to achieve a beta-lactam binding protein / gold splinter probe. This is sprayed on the mobile phase support 33, together with monoclonal antibodies against ceftiofur, cefapirin, ampicillin and amoxicillin, in order to reduce the sensitivity of these four antibiotics, so that the assay provides a desired dose response. A conjugated ceforanide-BSA is sprayed on the test zone 38, and an antibody against the BST beta-lactam receptor is sprayed in the control zone 40. A sample of raw milk, preferably between 0.1-1.0 ml, is applied to the sample pad with a pipette and the test strip is incubated at 55 ° C. After approximately eight minutes, the test strip 10 is removed from the incubator, and analyzed. If the test zone 38 is darker or the same color as the line of the control zone 40, the sample is negative and, if the test zone 38 is lighter than the control zone 40, the sample is positive.
Los resultados en las pruebas se muestran en la siguiente Tabla 1: The test results are shown in the following Table 1:
Tabla 1. Análisis de betalactámicos en leche usando un dispositivo de ensayo de flujo lateral. Table 1. Analysis of beta-lactams in milk using a lateral flow test device.
- Número de Number of
- Muestra Resultado Sample Outcome
- análisis analysis
- 30 30
- control nulo todos negativos null control all negative
- 10 10
- penicilina G a 5 ppb todos positivos penicillin G at 5 ppb all positive
- 10 10
- penicilina G a 4 ppb 5 positivos, 5 negativos penicillin G at 4 ppb 5 positive, 5 negative
- 10 10
- penicilina G a 3 ppb 3 positivos, 7 negativos penicillin G at 3 ppb 3 positive, 7 negative
- 10 10
- ampicilina a 6 ppb todos positivos 6 ppb ampicillin all positive
- 10 10
- ampicilina a 4 ppb todos positivos 4 ppb ampicillin all positive
- 10 10
- ampicilina a 3 ppb 5 positivos, 5 negativos 3 ppb ampicillin 5 positive, 5 negative
- 10 10
- amoxicilina a 6 ppb todos positivos 6 ppb amoxicillin all positive
- 10 10
- amoxicilina a 4 ppb 8 positivos, 2 negativos 4 ppb amoxicillin 8 positive, 2 negative
- 10 10
- amoxicilina a 3 ppb 4 positivos, 6 negativos 3 ppb amoxicillin 4 positive, 6 negative
- 10 10
- ceftiofur a 30 ppb 3 positivos, 7 negativos ceftiofur at 30 ppb 3 positive, 7 negative
- 10 10
- ceftiofur a 40 ppb 8 positivos, 2 negativos ceftiofur at 40 ppb 8 positive, 2 negative
- 10 10
- ceftiofur a 50 ppb 10 positivos ceftiofur at 50 ppb 10 positive
- 10 10
- cefapirina a 12 ppb 2 positivos, 8 negativos cefapirin at 12 ppb 2 positive, 8 negative
- 10 10
- cefapirina a 15 ppb 5 positivos, 5 negativos cefapirin at 15 ppb 5 positive, 5 negative
- 10 10
- cefapirina a 20 ppb 10 positivos, 0 negativos cefapirin at 20 ppb 10 positive, 0 negative
El ensayo descrito es un análisis de tipo inhibición. El analito en la muestra se une con una sonda de proteínas de unión a betalactámicos/de composición de fase móvil e impide la unión a un betalactámico estacionario unido a la superficie de la membrana. La adición de un anticuerpo monoclonal específico frente a ceftiofur ha alterado su nivel de inhibición desde aproximadamente cinco ppb hasta entre 40 y 50 ppb. La adición de un anticuerpo monoclonal específico frente a cefapirina ha reducido su sensibilidad desde aproximadamente 3-5 ppb hasta entre 15 a 20 ppb. The assay described is an inhibition type analysis. The analyte in the sample binds with a beta-lactam binding protein / mobile phase composition probe and prevents binding to a stationary beta-lactam bound to the membrane surface. The addition of a specific monoclonal antibody against ceftiofur has altered its level of inhibition from approximately five ppb to between 40 and 50 ppb. The addition of a specific monoclonal antibody against cefapirin has reduced its sensitivity from about 3-5 ppb to between 15 to 20 ppb.
El dispositivo de ensayo se puede usar con tiras reactivas para detectar una variedad de analitos, tales como toxinas tipo alfatoxinas, plaguicidas, tales como organofosfatos y carbamatos; así como betalactámicos, tales como penicilina, ampicilina, amoxicilina, cloxacilina, dicloxacilina, oxacilina, ceftiofur y cefapirina; tetraciclinas, tales como clorotetraciclina, oxitetraciclina y tetraciclina; sulfonamidas, tales como sulfametazina, sulfadimetoxina, sulfamerazina, sulfatiazol y sulfadiazina; macrolidas, tales como eritromicina, espiramicina y tilosina; aminoglicosidas, tales como gentamicina, neomicina y DH/estriptomicina; y otros, tales como dapsona, cloramfenicol, novobiocina, espectinomicina y trimetoprima, para detectar los límites de residuo-analito máximos en la muestra. La mayoría de los elementos para cada ensayo son los mismos, excepto las sustancias químicas de la fase móvil, la zona de ensayo y la zona de control, que están adaptados a la detección de analitos específicos. The test device can be used with test strips to detect a variety of analytes, such as alfatoxin-like toxins, pesticides, such as organophosphates and carbamates; as well as beta-lactams, such as penicillin, ampicillin, amoxicillin, cloxacillin, dicloxacillin, oxacillin, ceftiofur and cefapirin; tetracyclines, such as chlorotetracycline, oxytetracycline and tetracycline; sulfonamides, such as sulfametazine, sulfadimethoxine, sulfamerazine, sulfathiazole and sulfadiazine; macrolides, such as erythromycin, spiramycin and tylosin; aminoglycosides, such as gentamicin, neomycin and DH / striptomycin; and others, such as dapsone, chloramphenicol, novobiocin, spectinomycin and trimethoprim, to detect maximum residue-analyte limits in the sample. Most of the elements for each test are the same, except the chemicals of the mobile phase, the test zone and the control zone, which are adapted to the detection of specific analytes.
A medida que la muestra entra desde la membrana 36 de fase estacionaria en la zona de eliminación 43 (hasta que se satura la almohadilla absorbente), el receptor marcado sin reaccionar es capturado en la zona de reacción por un analito inmovilizado representativo de grupo. El residuo químico en la muestra reacciona con el receptor marcado, haciéndolo que no reaccione a la línea de ensayo. Así, cuantos más residuos hay en la muestra, menos señales se detectan en la zona de ensayo. As the sample enters from the stationary phase membrane 36 in the elimination zone 43 (until the absorbent pad is saturated), the unreacted labeled receptor is captured in the reaction zone by a representative immobilized group analyte. The chemical residue in the sample reacts with the labeled receptor, causing it not to react to the test line. Thus, the more residues in the sample, the less signals are detected in the test zone.
La membrana de fase estacionaria está construida a partir de una matriz altamente porosa adecuada para muestras viscosas, tales como leche o extractos de carne. En cada zona, está embebida una combinación de polímeros solubles (por ejemplo, proteínas, polietilenglicol, etc.) para controlar la cinética de movilidad de la muestra desde la composición de fase móvil hasta la zona de reacción, y en la propia zona de reacción. The stationary phase membrane is constructed from a highly porous matrix suitable for viscous samples, such as milk or meat extracts. In each zone, a combination of soluble polymers (for example, proteins, polyethylene glycol, etc.) is embedded to control the mobility kinetics of the sample from the mobile phase composition to the reaction zone, and in the reaction zone itself .
Se generaron datos con un receptor de betalactámicos microbianos, unos anticuerpos específicos frente a sulfametazina, tretraciclina y aflatoxina (pt CHII AOAC) para detectar la presencia de residuos correspondientes en la leche o en otras matrices, tal como suero. Se detectaron con estos experimentos unos niveles de 3-5 ppb de penicilina G (PEN G), de 5-20 ppb de cefapirina, de 30-100 ppb de oxitetraciclina (OXT), de 10-100 ppb de sulfametazina (SMZ) y de 2-40 ppb de aflatoxina B1. Data were generated with a microbial beta-lactam receptor, specific antibodies against sulfametazine, tretracycline and aflatoxin (pt CHII AOAC) to detect the presence of corresponding residues in milk or other matrices, such as serum. With these experiments, levels of 3-5 ppb of penicillin G (PEN G), 5-20 ppb of cefapirin, 30-100 ppb of oxytetracycline (OXT), 10-100 ppb of sulfametazine (SMZ) were detected and 2-40 ppb aflatoxin B1.
Se prefiere, de modo general, una estufa de incubación con temperatura ajustable que varíe hasta 70°C. El dispositivo de ensayo puede emplear un colorímetro portátil, un fluorímetro de refracción o un lector de infrarrojos. En una realización preferida, el dispositivo de ensayo incluye un lector que se usa para leer una tira reactiva que contiene dos líneas. La línea de control es una línea de referencia que asegura que el ensayo ha discurrido correctamente. La línea de control se usa también como una referencia cuando el lector determina si la muestra es positiva o negativa. La línea de ensayo indica la concentración de la sustancia que se está ensayando. Cuanto más oscura es la línea de ensayo, mayor es la concentración de la sustancia en la muestra. El lector incluye dos componentes, un controlador y un medidor. In general, an incubator with an adjustable temperature that varies up to 70 ° C is preferred. The test device may employ a portable colorimeter, a refractive fluorimeter or an infrared reader. In a preferred embodiment, the test device includes a reader that is used to read a test strip containing two lines. The control line is a reference line that ensures that the test has run correctly. The control line is also used as a reference when the reader determines whether the sample is positive or negative. The test line indicates the concentration of the substance being tested. The darker the test line, the higher the concentration of the substance in the sample. The reader includes two components, a controller and a meter.
El medidor lee la tira, cuando ésta se inserta en el medidor, al que se da la orden de leer la tira. El medidor selecciona entonces una serie de diodos emisores de luz (LED), preferiblemente, siete. La luz emitida desde los LED rebota en la tira que se está leyendo. La luz se refleja entonces en un optosensor 128 x 1. El sensor envía 128 valores de fecha que representan la intensidad de la luz en cada uno de los 128 píxeles para un microcontrolador a bordo. La fecha del píxel se almacena en la memoria del medidor. Las áreas oscuras de la tira tienen un valor inferior al de las áreas claras. Esta información se usa más tarde para calcular la intensidad de las dos líneas que se están leyendo. The meter reads the strip, when it is inserted into the meter, to which the order is given to read the strip. The meter then selects a series of light emitting diodes (LED), preferably seven. The light emitted from the LEDs bounces off the strip that is being read. The light is then reflected in a 128 x 1 optosensor. The sensor sends 128 date values that represent the intensity of the light in each of the 128 pixels for an on-board microcontroller. The pixel date is stored in the meter's memory. The dark areas of the strip have a lower value than the light areas. This information is used later to calculate the intensity of the two lines that are being read.
El controlador envía una orden al medidor a fin de pedir la fecha leída por este último. El controlador realiza cálculos con la fecha para determinar la intensidad de las dos líneas. Si la línea de ensayo es más oscura que la línea de control, entonces, se dice que el ensayo tiene un resultado negativo. Si la línea de ensayo es más clara que la línea de control, entonces, se dice que el ensayo tiene un resultado positivo. El controlador presenta al usuario el resultado, así como un valor sin procesar que representa la diferencia en la intensidad de las dos líneas. The controller sends an order to the meter to request the date read by the latter. The controller calculates with the date to determine the intensity of the two lines. If the test line is darker than the control line, then the test is said to have a negative result. If the test line is clearer than the control line, then the test is said to have a positive result. The controller presents the result to the user, as well as an unprocessed value that represents the difference in the intensity of the two lines.
La integración de la estufa de incubación con fibra óptica para leer los resultados puede hacer que el ensayo esté completamente automatizado. The integration of the incubator with fiber optics to read the results can make the test completely automated.
La unidad de ensayo, con una forma tal como de blíster, se coloca en una estufa de incubación, que se calienta hasta aproximadamente 56,5°C ± 1°C. Se desprende hacia atrás la cinta y se añade una muestra líquida, de 0,3 ml, al pocillo para muestras, y se vuelve a sellar la cinta. La unidad de ensayo se incuba al menos durante cinco minutos. The test unit, with a blister-shaped shape, is placed in an incubation oven, which is heated to approximately 56.5 ° C ± 1 ° C. The tape is pulled back and a 0.3 ml liquid sample is added to the sample well, and the tape is resealed. The test unit is incubated for at least five minutes.
Una vez que la muestra se añade al pocillo para muestras, es absorbida por la esponja para muestras, que se expande en el interior del pocillo. La porción superior del pocillo de plástico impide que la esponja se expanda completamente. La presión de la esponja contra el pocillo, en la parte superior, y contra el soporte de fase móvil, en la parte inferior, proporciona algo de fuerza añadida para propulsar la muestra líquida hacia arriba de la tira de ensayo con un régimen mayor que el que se presentaría de otro modo. La esponja se expande, y la muestra se mueve, a continuación, sobre el soporte de fase móvil e interactúa con la composición de fase móvil. La composición de fase móvil comienza a moverse sobre la nitrocelulosa. Durante este tiempo, los residuos o analitos producidos en la muestra se unen al receptor o anticuerpo fijado al conjugado de fase móvil. Once the sample is added to the sample well, it is absorbed by the sample sponge, which expands inside the well. The upper portion of the plastic well prevents the sponge from fully expanding. The pressure of the sponge against the well, at the top, and against the mobile phase support, at the bottom, provides some added force to propel the liquid sample up the test strip with a regime greater than the that would be presented differently. The sponge expands, and the sample then moves on the mobile phase support and interacts with the mobile phase composition. The mobile phase composition begins to move on the nitrocellulose. During this time, the residues or analytes produced in the sample bind to the receptor or antibody bound to the mobile phase conjugate.
Cuando la composición de fase móvil alcanza la zona de ensayo, el receptor marcado libre se une a la zona de ensayo, dando como resultado una línea inferior oscura. El receptor o anticuerpo con analito unido no se une a la línea de ensayo, dando como resultado una línea de zona de ensayo no coloreada o ligeramente coloreada. Este es un análisis de tipo inhibición secuencial, en el que el compuesto de interés no se une a la zona de ensayo. La composición de fase móvil se mueve hasta más allá de la zona de control y sobre una almohadilla absorbente, que sirve como depósito para recoger la composición desunida de fase móvil. When the mobile phase composition reaches the test zone, the free labeled receptor binds to the test zone, resulting in a dark bottom line. The receptor or antibody with bound analyte does not bind to the test line, resulting in a non-colored or slightly colored test zone line. This is a sequential inhibition type analysis, in which the compound of interest does not bind to the test zone. The mobile phase composition moves beyond the control zone and onto an absorbent pad, which serves as a reservoir to collect the disjointed mobile phase composition.
Las figuras 14-17 ilustran una realización del dispositivo 101 en el blíster 103 transparente, que incluye una tira de sellado 111 de plástico de cinta transparente para encerrar en su interior la tira reactiva 105. El blíster 103 incluye una cavidad alargada para contener la tira 105 y una cavidad-carcasa de expansión 104 para formar una cavidad, generalmente en forma de cepillo de dientes, dentro del blíster 103 de plástico y la tira 105. Tal como se muestra, la cavidad-carcasa de expansión 104 está conformada triangularmente. El blíster 103 incluye una zona 114 de restricción de movimiento que rodea la almohadilla de eliminación 106 y otra zona 115 de restricción de movimiento que rodea el refuerzo adhesivo 113 en el punto en el que éste sobresale por delante de la esponja 109 de absorción de muestras. Las zonas 114, 115 de restricción de movimiento forman lugares de apriete que aseguran la tira 105 dentro del blíster 103. El dispositivo, por lo tanto, está diseñado de manera que una posición en la que se presenta estrechamiento está en la almohadilla de eliminación 106, zona en la que hay situado un material absorbente que actúa como almohadilla absorbente. Preferiblemente, el dispositivo está diseñado, y los componentes están situados, de manera que aproximadamente un cm de refuerzo adhesivo sobresale por delante de la almohadilla de esponja de muestra contenida dentro de la zona de aplicación de muestra. Por lo tanto, la tira está asegurada en su sitio en uno cualquiera Figures 14-17 illustrate an embodiment of the device 101 in the transparent blister 103, which includes a sealing strip 111 of transparent tape plastic for enclosing the test strip 105 therein. The blister 103 includes an elongated cavity for containing the strip 105 and an expansion cavity-housing 104 to form a cavity, generally in the form of a toothbrush, within the plastic blister 103 and the strip 105. As shown, the expansion cavity-housing 104 is triangularly shaped. The blister 103 includes a movement restriction zone 114 surrounding the removal pad 106 and another movement restriction zone 115 surrounding the adhesive reinforcement 113 at the point where it protrudes in front of the sample absorption sponge 109 . The movement restriction zones 114, 115 form tightening places that secure the strip 105 within the blister 103. The device, therefore, is designed such that a position in which narrowing occurs is in the removal pad 106 , an area in which an absorbent material that acts as an absorbent pad is located. Preferably, the device is designed, and the components are positioned, so that approximately one cm of adhesive reinforcement protrudes in front of the sample sponge pad contained within the sample application area. Therefore, the strip is secured in place at any one
5 o en ambos extremos, permitiendo por ello un flujo libre de muestra. 5 or at both ends, thereby allowing a free flow of sample.
La figura 15 muestra una vista en sección lateral del dispositivo 101 de ensayo tipo blíster antes del uso. La figura 15 muestra el dispositivo 101 de ensayo tipo blíster, con un extremo desprendido hacia atrás por una patilla de desprendimiento 112, para exponer la cavidad-carcasa de expansión 104 y secar la almohadilla 109 de esponja Figure 15 shows a side sectional view of the blister-type test device 101 before use. Figure 15 shows the blister-type test device 101, with one end detached backwards by a detachment pin 112, to expose the expansion cavity 104 and dry the sponge pad 109
10 absorbente de filtro de la tira reactiva 105, de manera que se puede añadir una cantidad definida de una muestra líquida, por ejemplo, con una pipeta, tal como se muestra. La figura 17 ilustra el dispositivo de ensayo 101 después de la adición de la muestra líquida, con la patilla de desprendimiento 112 vuelta a sellar y con la almohadilla 109 de esponja completamente expandida por la muestra líquida dentro de 10 filter absorbent of the test strip 105, so that a defined amount of a liquid sample can be added, for example, with a pipette, as shown. Figure 17 illustrates the test device 101 after the addition of the liquid sample, with the detachment pin 112 resealed and with the sponge pad 109 fully expanded by the liquid sample within
15 la cavidad-carcasa 104, y listo para ser incubado. La figura 18 es una vista a escala ampliada de la almohadilla absorbente 109 del dispositivo de ensayo. La figura 18 ilustra el estrechamiento de las paredes interiores de la carcasa en la zona A para formar la zona 114 de restricción de movimiento, asegurando que el refuerzo adhesivo 113, y, por ello, la tira 105 (no 15 the cavity-housing 104, and ready to be incubated. Figure 18 is an enlarged view of the absorbent pad 109 of the test device. Figure 18 illustrates the narrowing of the inner walls of the housing in zone A to form the movement restriction zone 114, ensuring that the adhesive reinforcement 113, and therefore the strip 105 (not
20 mostrada en la figura 18) se mantiene en su sitio dentro del blíster 113 de plástico. La figura 18 ilustra también la zona B de cámara de aire que existe entre la tira 105 y el refuerzo adhesivo 113, lo que permite un flujo consistente de la muestra a lo largo de la tira. 20 shown in Figure 18) is held in place within the plastic blister 113. Figure 18 also illustrates the zone B of the air chamber that exists between the strip 105 and the adhesive reinforcement 113, which allows a consistent flow of the sample along the strip.
Claims (9)
- 1. one.
- Un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para determinar si uno o más miembros de una familia de analitos, que comprende antibióticos betalactámicos se encuentra presente en una muestra de ensayo, comprendiendo dicho método: b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un receptor microbiano betalactámico, donde dicho receptor se caracteriza por una capacidad de unirse a miembros de dicha familia de analitos, para permitir que dicho receptor se una a uno o más miembros de dicha familia de analitos en dicha muestra; b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un aglutinante de analito adicional, teniendo dicho aglutinante de analito adicional especificidad de unión para al menos un miembro de dicha familia de analitos al que se une dicho receptor, de modo que hay competición entre el receptor y el aglutinante de analito adicional para unirse a dicho al menos un analito, causando dicha competición una disminución en la sensibilidad de ensayo, relativa a dicho al menos un miembro, a un nivel umbral seleccionado; y c) detectar dicho uno o más miembros de dicha familia de analitos. A method that uses a lateral flow test strip to determine if one or more members of a family of analytes, comprising beta-lactam antibiotics, is present in a test sample, said method comprising: b) allowing said sample to come into contact with a beta-lactam microbial receptor, wherein said receptor is characterized by an ability to bind members of said family of analytes, to allow said receptor to join one or more members of said family of analytes in said sample; b) allowing said sample to come into contact with an additional analyte binder, said additional analyte binder having binding specificity for at least one member of said family of analytes to which said receptor binds, so that there is competition between the receptor and the additional analyte binder to bind said at least one analyte, said competition causing a decrease in test sensitivity, relative to said at least one member, at a selected threshold level; and c) detecting said one or more members of said family of analytes.
- 2. 2.
- Un método según la reivindicación 1, que comprende además detectar dicho uno o más miembros mediante observación comparativa del color de una zona de ensayo y zona de control en la tira de ensayo de flujo lateral. A method according to claim 1, further comprising detecting said one or more members by comparative observation of the color of a test zone and control zone in the lateral flow test strip.
- 3. 3.
- Un método según la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que el receptor comprende un receptor etiquetado. A method according to claim 1 or claim 2, wherein the receiver comprises a labeled receptor.
- 4. Four.
- Un método según cualquier reivindicación precedente, que comprende además permitir que dicha muestra entre en contacto con una zona de ensayo en la tira de ensayo de flujo lateral, comprendiendo dicha zona de ensayo un aglutinante de la zona de ensayo, donde dicho aglutinante de la zona de ensayo comprende un analito conjugado que se une al receptor si dicho receptor no está unido a un analito de la muestra. A method according to any preceding claim, further comprising allowing said sample to come into contact with a test zone in the lateral flow test strip, said test zone comprising a binder of the test zone, wherein said binder of the zone Assay comprises a conjugate analyte that binds to the receptor if said receptor is not bound to an analyte in the sample.
- 5. 5.
- Un método según la reivindicación 4, caracterizado adicionalmente por que el método es para determinar el nivel de beta-lactama en leche. A method according to claim 4, further characterized in that the method is for determining the level of beta-lactam in milk.
- 6. 6.
- Un método según cualquier reivindicación precedente, que comprende además permitir que dicha muestra entre en contacto con una zona de control en la tira de ensayo de flujo lateral, comprendiendo dicha zona de control un aglutinante de A method according to any preceding claim, further comprising allowing said sample to come into contact with a control zone in the lateral flow test strip, said control zone comprising a binder of
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