ES2345505T3 - Procedimiento ex vivo para introduccion de genes. - Google Patents
Procedimiento ex vivo para introduccion de genes. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2345505T3 ES2345505T3 ES06726867T ES06726867T ES2345505T3 ES 2345505 T3 ES2345505 T3 ES 2345505T3 ES 06726867 T ES06726867 T ES 06726867T ES 06726867 T ES06726867 T ES 06726867T ES 2345505 T3 ES2345505 T3 ES 2345505T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- magnetic
- procedure
- particles
- particle
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
- A61N2/00—Magnetotherapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
- A61N2/00—Magnetotherapy
- A61N2/004—Magnetotherapy specially adapted for a specific therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
- A61N2/00—Magnetotherapy
- A61N2/02—Magnetotherapy using magnetic fields produced by coils, including single turn loops or electromagnets
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un procedimiento ex vivo de introducción de un agente en una célula diana, comprendiendo el procedimiento las etapas de: (a) dirigir partículas magnéticas que comprenden el agente hacia la célula usando un medio magnético para aplicar una fuerza magnética a dichas partículas magnéticas para tender a mover dichas partículas magnéticas hacia dicho medio magnético, y (b) hacer oscilar al mismo tiempo dicho medio magnético.
Description
Procedimiento ex vivo para introducción
de genes.
La presente invención se refiere a
procedimientos para la introducción de agentes terapéuticos en
células diana.
La fibrosis quística hace que el cuerpo produzca
secreciones espesas que afectan a los pulmones y al tracto
digestivo. 1 de cada 10 bebés que nacen con fibrosis quística son
sometidos a una operación los primeros días de vida debido a
obstrucción intestinal. Los niños y adultos padecen infecciones
respiratorias reiteradas y problemas con la función pancreática.
Esta última complicación hace que los que padecen fibrosis quística
tengan dificultades para digerir los alimentos. Esto puede producir
malnutrición, poco crecimiento, debilidad física y un retraso de la
pubertad. En los pacientes más mayores, la producción de insulina
puede ser insuficiente debido al aumento de trastornos
pancreáticos, lo cual produce diabetes. La fibrosis quística también
puede producir bloqueos de los conductos hepáticos. Esto se produce
aproximadamente en el 8% de los que la padecen; sin embargo, el
riesgo para la salud es tan grave que son necesarios trasplantes de
hígado. Aunque la enfermedad tiene efectos graves en el intestino,
páncreas, hígado y aparato reproductor, el efecto que tiene en los
pulmones es el más grave. Ciclos reiterados de infección conducen a
una inflamación continua y daños en los pulmones, lo que, en última
instancia, conduce a fallo respiratorio y
fallecimiento.
fallecimiento.
La fibrosis quística es una enfermedad genética
producida por una mutación en un único gen, CFTR (regulador de la
conductancia transmembrana de la fibrosis quística). Por tanto,
tratando a los pacientes usando terapia génica es posible tratar la
causa subyacente de la enfermedad y no los síntomas. La introducción
del CFTR ha mostrado que corrige el defecto de la fibrosis quística
in vitro. La terapia génica se ha ensayado en humanos usando
virus y liposomas como vectores de transfección. Los virus
recombinantes usados para la transferencia génica tienen que ser
capaces de infectar las células tanto en división como en no
división, integrarse en el genoma del huésped y proporcionar
expresión génica a largo plazo. De todos los vectores víricos
ensayados hasta ahora (adenovirus, retrovirus, virus
adeno-asociados y virus sendai), ninguno tiene estas
características. Los vectores víricos usados como sistemas de
introducción de genes también tienen potenciales problemas de
seguridad y son ineficaces a largo plazo debido a que desencadenan
una respuesta inmunitaria. Son aplicables problemas de transfección
similares a una amplia gama de enfermedades genéticas.
La presente invención trata la necesidad de un
agente de transfección génica no vírico que mitigue las desventajas
asociadas con los vectores víricos recombinantes. Los agentes no
víricos son no infecciosos, relativamente no inmunogénicos, tienen
baja toxicidad, pueden llevar plásmidos de ADN más grandes y se
pueden producir de forma más barata a gran escala. Un tipo de
agente es partículas magnéticas recubiertas de ADN.
Los actuales sistemas magnéticos de transfección
tienen una baja eficacia de transformación. Los presentes
inventores han desarrollado un sistema de introducción basado en
partículas magnéticas que, sorprendentemente, ha mostrado tener una
eficacia de transformación 10 veces mayor que la de los actuales
sistemas, basada en estudios iniciales in vitro.
El documento WO2004/034876 se refiere a terapia
radiactiva y describe un procedimiento que usa un campo magnético
no alterno para guiar un componente magnético hasta un lugar diana y
depositar energía en el lugar diana.
El documento US4.652.257 describe un
procedimiento de introducción de un agente en una zona diana usando
vesículas lipídicas que encapsulan partículas magnéticas y agentes
terapéuticos. Se describe la oscilación de un campo magnético para
controlar la velocidad de liberación del agente terapéutico
encapsulado en el lugar diana.
\vskip1.000000\baselineskip
Según un primer aspecto de la invención, se
proporciona un procedimiento ex vivo de introducción de un
agente en una célula diana, comprendiendo el procedimiento las
etapas de (a) dirigir partículas magnéticas que comprenden el
agente hasta la célula usando un medio magnético para aplicar una
fuerza magnética a dichas partículas magnéticas para tender a mover
dichas partículas magnéticas hacia dicho medio magnético, y (b)
hacer oscilar al mismo tiempo dicho medio magnético.
Según otro aspecto de la invención, se
proporciona el uso de una partícula magnética en la fabricación de
un medicamento para uso en un procedimiento de tratamiento de una
enfermedad, en el que la partícula magnética comprende un agente
terapéutico y el procedimiento implica la introducción del agente
terapéutico en células diana, en el que el procedimiento comprende
(a) dirigir partículas magnéticas que comprenden el agente
terapéutico hacia las células in vivo usando un medio
magnético para aplicar una fuerza magnética a dichas partículas
para tender a mover dichas partículas hacia dicho medio magnético, y
(b) hacer oscilar al mismo tiempo dicho medio magnético.
Según un aspecto preferido de la invención, el
medio magnético se usa para aplicar una fuerza magnética a las
partículas para tender a mover las partículas en una primera
dirección hacia el medio magnético y, al mismo tiempo, mover el
medio magnético respecto a las partículas en una segunda dirección
con una ángulo respecto a la primera dirección.
El movimiento del medio magnético en una segunda
dirección es generalmente con ángulos distintos de cero respecto a
la primera dirección, por ejemplo, con un ángulo entre 0 y 180º, tal
como un ángulo de entre 0 y 90º, respecto a la primera
dirección.
El movimiento del medio magnético en una segunda
dirección es un movimiento oscilante. La frecuencia de oscilación a
la cual se activa el (los) imán(es) habitualmente variará y
generalmente estará en el intervalo de 0 hasta 100 Hz, aunque
también se pueden usar valores fuera de este intervalo.
Según un aspecto preferido de la invención, el
movimiento del medio magnético en una segunda dirección es
básicamente perpendicular a la primera dirección en la cual las
partículas tienden a moverse.
La fuerza magnética aplicada a las partículas
para mover las partículas hacia el medio magnético se puede
describir como una fuerza de traslación. La fuerza de traslación es
producida por un campo magnético con un gradiente. Preferiblemente,
la dirección de la fuerza de traslación es hacia el imán.
Según un aspecto preferido de la invención, el
medio magnético es un imán o conjunto de imanes. El imán puede ser
un electroimán.
Las partículas pueden ser atraídas hacia el
medio magnético.
Según un aspecto preferido adicional de la
invención, la partícula es una partícula magnética. Preferiblemente,
la partícula está hecha de un material magnetizable. La partícula
magnetizable puede ser inherentemente magnética o puede ser una que
reaccione en un campo magnético.
Generalmente, se puede usar cualquier material
magnético; sin embargo, con el término magnético nos referimos, por
ejemplo, a un material que sea paramagnético, superparamagnético,
ferromagnético y/o antiferromagnético, ejemplos de los cuales
incluyen hierro elemental, manganeso de cromo, cobalto, níquel o un
compuesto de los mismos. El compuesto de hierro puede ser una sal
de hierro que se puede seleccionar del grupo que incluye magnetita
(Fe_{3}O_{4}), magemite (\gammaFe_{2}O_{3}) y greigita
(Fe_{3}S_{4}), o cualquier combinación de las mismas. El
compuesto de cromo puede ser dióxido de cromo.
Las partículas se pueden proporcionar dentro de
los poros de un polímero. Alternativamente, las partículas pueden
comprender un núcleo magnético con un recubrimiento biocompatible.
El recubrimiento biocompatible puede comprender un polímero, p. ej.
dextrano, alcohol de polivinilo (PVA), polietilenimina (PEI) o
sílice.
Según un aspecto preferido adicional de la
invención, las partículas tienen un tamaño medio de entre 10 \mum
y 5 nm, por ejemplo, entre 1 \mum y 10 nm.
Preferiblemente, las partículas son
nanopartículas.
Partículas mas grandes magnéticamente bloqueadas
(> 30 nm para la magnetita) experimentarán un par torsor en el
campo oscilante, puesto que el vector del campo cambia su ángulo
respecto al vector de magnetización de las partículas según la
ecuación:
\tau =
\muBsen\theta
en la que \tau es el par torsor,
\mu es el momento magnético, B es la densidad de flujo magnético
y \theta es el ángulo entre el campo aplicado y el vector de
magnetización de las partículas. Esta torsión, presión y tracción
mejoran el movimiento del complejo partícula/agente terapéutico,
produciendo una absorción mejorada en las
células.
En el procedimiento de la invención, la célula
puede ser una célula bacteriana, una célula vegetal o una célula
animal. La célula animal puede ser una célula de mamífero, por
ejemplo, una célula humana.
En el procedimiento de la invención la célula
puede ser una célula pulmonar, célula renal, célula del sistema
nervioso, célula mesenquimal, célula muscular (cardiomiocito),
célula hepática, glóbulo rojo o blanco (p.ej. eritrocito,
linfocito, monocito, macrófago, leucocito), célula \beta
pancreática; célula epitelial (p.ej. pulmonar, gástrica), célula
endotelial, célula ósea, célula cutánea, célula gastrointestinal,
célula de la vejiga, célula reproductora (espermatozoide u ovulo),
células del útero, próstata o glándula endocrina (p.ej.
pituitaria); células madre (ES) embrionarias; células germinales
(EG) embrionarias, células tumorales, células cancerosas.
El procedimiento de la invención puede ser un
procedimiento ex vivo o in vivo. Preferiblemente, el
procedimiento se lleva a cabo in vivo.
El procedimiento descrito en el presente
documento tiene aplicación para el tratamiento de una amplia gama
de trastornos incluyendo. Por tanto, el procedimiento tiene
aplicación como un procedimiento para el tratamiento o prevención
de trastornos y enfermedades clínicos.
En el procedimiento de la invención, el agente
terapéutico puede ser un agente farmacéutico, nutracéutico o
agroquímico. El agente farmacéutico puede incluir ADN, ARN, ARN de
interferencia (ARNi), un péptido, polipéptido, un anticuerpo (p.ej.
fragmento de anticuerpo tal como un fragmento de anticuerpo de una
sola cadena), un aptamero, una molécula pequeña. Las moléculas
pequeñas pueden incluir, pero no se limitan a, péptidos, péptidos
miméticos (p.ej. peptoides), aminoácidos, análogos de aminoácidos,
polinucleótidos, análogos de polinucleótidos, compuestos orgánicos
o inorgánicos (es decir, incluyendo compuestos
hetero-orgánicos y organometálicos) que tengan un
peso molecular inferior a aproximadamente 10.000 gramos por mol,
compuestos orgánicos o inorgánicos que tengan un peso molecular
inferior a aproximadamente 5.000 gramos por mol, compuestos
orgánicos o inorgánicos que tengan un peso molecular inferior a
aproximadamente 1.000 gramos por mol, compuestos orgánicos o
inorgánicos que tengan un peso molecular inferior a aproximadamente
500 gramos por mol, y sales, ésteres y otras formas
farmacéuticamente aceptables de tales compuestos.
En un procedimiento preferible de la invención
el agente terapéutico es ADN. En un procedimiento preferible
adicional de la invención el agente terapéutico es el gen
codificador del regulador de la conductancia transmembrana de la
fibrosis quística.
Esta memoria descriptiva proporciona el uso de
un medio magnético móvil en la fabricación de un sistema para
dirigir partículas que comprenden un agente terapéutico hacia una
célula diana. Preferiblemente, el medio magnético está en
movimiento, más preferiblemente en movimiento constante.
Según un uso preferido, el medio magnético se
usa para aplicar una fuerza magnética a las partículas para tender
a mover las partículas hacia el medio magnético moviendo al mismo
tiempo el medio magnético.
Según un uso preferido adicional, el medio
magnético se usa para aplicar una fuerza magnética a las partículas
para tender a mover las partículas en una primera dirección hacia el
medio magnético y, al mismo tiempo, mover el medio magnético
respecto a las partículas en una segunda dirección con un ángulo
respecto a la primera dirección.
Cuando el uso es in vivo, el medio
magnético se puede mover externo al cuerpo. El movimiento del medio
magnético puede ser controlado por un motor o un imán. El movimiento
del medio magnético se puede controlar a distancia.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones de esta memoria descriptiva, las palabras
"comprender" y "contener" y variaciones de las palabras,
por ejemplo, "comprendiendo" y "comprende/n", significan
"incluyendo pero sin limitarse a", y no se pretende que
excluyan (y no excluyen) otros restos, aditivos, componentes,
números enteros o etapas.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones de esta memoria descriptiva, el singular abarca el
plural a menos que el contexto requiera lo contrario. En concreto,
cuando se usa el artículo indefinido, se debe sobreentender que la
memoria descriptiva contempla una pluralidad así como la
singularidad, a menos que el contexto requiera lo contrario.
Se deben sobreentender que los rasgos, números
enteros, características, compuestos y restos o grupos químicos
descritos en conjunción con un aspecto, realización o ejemplo
particular de la invención son aplicables a cualquier otro aspecto,
realización o ejemplo descrito en el presente documento a menos que
sean incompatibles con el mismo.
La invención se describirá solo a modo de
ejemplo con referencia a las siguientes figuras:
Figura 1. Es una representación esquemática del
sistema de activación del conjunto de imanes y el soporte de
muestras para cultivo celular in vitro y estudios (tisulares)
de entrecara aire/líquido.
Figura 2. Muestra la expresión de la GFP en las
células HEK293T transfectadas con nanopartículas magnéticas de 150
nm recubiertas con ADN pEGFPC1 en respuesta al campo magnético.
Figura 3. Es un histograma que muestra la
actividad luciferasa en células T HEK293 transfectadas con
nanopartículas magnéticas de 150 nm recubiertas con indicador de
luciferasa pCIKLux.
Figura 4. Es un histograma que muestra la
actividad luciferasa en células epiteliales pulmonares humanas
NCI-H292 transfectadas con partículas OzBiosciences
Polymag® recubiertas con un constructo de un indicador de luciferasa
pCIKLux en respuesta a los campos magnéticos estático y oscilante.
Todas las transfecciones se realizaron en placas de cultivo tisular
de 96 pocillos usando 0,1 \mug de ADN/pocillo. Las transfecciones
con Genejuice (GJ) y Lipofectamina 2000 (LF2000) se llevaron a cabo
según el protocolo recomendado por el fabricante. Los datos se
muestran como la media \pm SEM (n=6 para todos los grupos).
Diámetro del imán = 6 mm.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
Los genes indicadores, la proteína verde
fluorescente (GFP) y la luciferasa se fijaron a nanopartículas
magnéticas comercialmente disponibles. Las partículas generalmente
estaban constituidas por un núcleo magnético (magnetita
Fe_{3}O_{4} - y/o su producto de oxidación magemita -
gFe_{2}O_{3}) con un recubrimiento polimérico, tal como
dextrano, PVA o sílice, y variaban en tamaño de \sim 10 nm a
\sim1 \mum. La magnetita es un óxido de hierro que aparece de
forma natural y se encuentra en muchos órganos del cuerpo humano.
Además, la magnetita está aprobada por la FDA para la mejora del
contraste en RMN y, por tanto, es adecuada para ensayos
clínicos.
Se incubaron nanopartículas recubiertas por
polietilenimina ramificada 1800 (PEI) con ADN para unir los genes
indicadores a las partículas. El complejo gen/partícula se introdujo
entonces en cultivos monocapa de células de riñón HEK293T dentro de
la incubadora. Se colocaron placas de cultivo en un soporte hecho a
medida por encima del conjunto de imanes, alojados dentro de la
incubadora.
El complejo gen indicador/partícula se dirigió a
las células mediante un imán de tierras raras (NdFeb) de elevado
gradiente que se enfocó al lugar diana. Estos imanes producen una
fuerza de traslación en las partículas debido al elevado producto
fuerza/gradiente del campo según la ecuación:
en la que x_{2} es la
susceptibilidad magnética por unidad de volumen de la partícula
magnética, x_{1} es la susceptibilidad magnética por unidad de
volumen del medio circundante, \mu_{0} es la permeabilidad
magnética del vacío, B es la densidad del flujo magnético en Telsa
(T) (Pankhurst y col. 2003). Esta fuerza de traslación tira de las
partículas hacia el
imán.
Las partículas se suministran usando un sistema
de activación horizontal oscilante de alta precisión que es
controlado por un ordenador y un software de control específicamente
diseñado, diseñado por Jon Dobson. La amplitud del sistema de
activación del conjunto puede variar entre nanómetros y milímetros y
la frecuencia puede variar de estática hasta 100 Hz dependiendo de
los parámetros de la diana.
Las células HEK293T se sembraron en placas de 96
pocillos con 5 x 10^{3} células/pocillo. Las células se
transfectaron con 5 ug/pocillo de nanopartículas de material
compuesto de dextrano/magnetita de 150 nm recubiertas con PEI,
cargadas con ADN pCIKlux (capacidad de unión de aprox. 0,2 \mug de
ADN/\mug de partículas). Las células se expusieron a campos
magnéticos como se muestra durante 24 tras la transfección, usando
un conjunto de 3 imanes de NdFeB de 4 mm por pocillo. Las células
expuestas al campo móvil se expusieron durante 2 horas a 2 Hz
usando un desplazamiento de 200 \mum y, a continuación, los imanes
se dejaron durante 22 horas en posición estática.
Los datos se muestran en las figuras 2 y 3 como
la media \pm SEM (n=12 para cada grupo).
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias citadas por el
solicitante está prevista únicamente para ayudar al lector y no
forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha puesto
el máximo cuidado en su realización, no se pueden excluir errores u
omisiones y la OEP declina cualquier responsabilidad al
respecto.
\bullet WO 2004034876 A [0006] \hskip2cm
\bullet US 4652257 A [0007]
Claims (33)
1. Un procedimiento ex vivo de
introducción de un agente en una célula diana, comprendiendo el
procedimiento las etapas de:
(a) dirigir partículas magnéticas que comprenden
el agente hacia la célula usando un medio magnético para aplicar
una fuerza magnética a dichas partículas magnéticas para tender a
mover dichas partículas magnéticas hacia dicho medio magnético,
y
(b) hacer oscilar al mismo tiempo dicho medio
magnético.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un procedimiento según la reivindicación 1,
en el que la dirección de oscilación del medio magnético es
básicamente perpendicular a la dirección de atracción de las
partículas magnéticas hacia dicho medio magnético.
3. Un procedimiento según la reivindicación 1 o
la reivindicación 2, en el que el agente es ADN, ARN, ARN de
interferencia, un péptido, polipéptido, un anticuerpo, un fragmento
de anticuerpo de una sola cadena, un aptamero, una molécula
pequeña, un poli nucleótido o un análogo de poli nucleótido.
4. Un procedimiento según la reivindicación 1 o
2, en el que el agente es un poli nucleótido, ADN o ARN y el
procedimiento es un procedimiento de transformación genética de la
célula diana.
5. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, en el que el agente es un agente
terapéutico.
6. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que el medio magnético oscila con una
frecuencia en el intervalo de 0 a 100 Hz.
7. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el medio magnético es un
campo magnético.
8. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que el medio magnético es un
electroimán o un imán permanente.
9. Un procedimiento según la reivindicación 8,
en el que el medio magnético es un único imán o un conjunto de
imanes.
10. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, en el que la amplitud de oscilación del
medio magnético está en el intervalo de manométrico a
milimétrico.
11. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la célula es una célula
bacteriana, vegetal o animal.
12. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 10, en el que la célula es de mamífero o
humana.
13. Un procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la partícula magnética está
hecha de un material magnetizable.
14. Un procedimiento según la reivindicación 13,
en el que el material magnetizable se selecciona del grupo que
incluye hierro elemental, manganeso de cromo, cobalto, níquel o un
compuesto de los mismos.
15. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que las partículas magnéticas
tienen un tamaño medio entre 10 \mum y 5 nm.
16. Un procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 15, en el que las partículas magnéticas tienen
un tamaño medio entre 1 \mum y 10 nm.
17. Uso de una partícula magnética en la
fabricación de un medicamento para uso en un procedimiento de
tratamiento de una enfermedad, en el que la partícula magnética
comprende un agente terapéutico y el procedimiento implica la
introducción del agente terapéutico en células diana, en el que el
procedimiento comprende:
(a) dirigir partículas magnéticas que comprenden
el agente terapéutico hacia células in vivo usando un medio
magnético para aplicar una fuerza magnética a dichas partículas para
tender a mover dichas partículas hacia dicho medio magnético, y
(b) hacer oscilar al mismo tiempo dicho medio
magnético.
\vskip1.000000\baselineskip
18. Una partícula magnética para uso en un
procedimiento de tratamiento de una enfermedad, en el que la
partícula magnética comprende un agente terapéutico y el
procedimiento implica la introducción del agente terapéutico en
células diana, en el que el procedimiento comprende:
(a) dirigir partículas magnéticas que comprenden
el agente terapéutico hacia las células in vivo usando un
medio magnético para aplicar una fuerza magnética a dichas
partículas para tender a mover dichas partículas hacia dicho medio
magnético, y
(b) hacer oscilar al mismo tiempo dicho medio
magnético.
\vskip1.000000\baselineskip
19. Un uso o partícula según la reivindicación
17 o 18, en el que el medio magnético se mueve externo al
cuerpo.
20. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 19, en el que la dirección de oscilación
del medio magnético es básicamente perpendicular a la dirección de
atracción de las partículas hacia dicho medio magnético.
21. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 20, en el que el agente es ADN, ARN, ARN
de interferencia, un péptido, polipéptido, un anticuerpo, un
fragmento de anticuerpo de una sola cadena, un aptamero, una
molécula pequeña, un poli nucleótido o un análogo de poli
nucleótido.
22. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 20, en el que el agente es un poli
nucleótido, ADN o ARN y el procedimiento o uso dan como resultado la
transformación genética de la célula diana.
23. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 22, en el que el medio magnético oscila
con una frecuencia en el intervalo de 0 a 100 Hz.
24. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 23, en el que el medio magnético es un
campo magnético.
25. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 23, en el que el medio magnético es un
electroimán o un imán permanente.
26. Un uso o partícula según la reivindicación
25, en el que el medio magnético es un único imán o un conjunto de
imanes.
27. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 26, en el que la amplitud de oscilación
del medio magnético está en el intervalo de manométrico a
milimétrico.
28. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 27, en el que la célula es una célula
bacteriana, vegetal o animal.
29. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 27, en el que la célula es de mamífero o
humana.
30. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 29, en el que la partícula magnética está
hecha de un material magnetizable.
31. Un uso o partícula según la reivindicación
30, en el que el material magnetizable se selecciona del grupo que
incluye hierro elemental, manganeso de cromo, cobalto, níquel o un
compuesto de los mismos.
32. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 31, en el que las partículas magnéticas
tienen un tamaño medio entre 10 \mum y 5 nm.
33. Un uso o partícula según una cualquiera de
las reivindicaciones 17 a 31, en el que las partículas magnéticas
tienen un tamaño medio entre 1 \mum y 10 nm.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0508110 | 2005-04-22 | ||
| GBGB0508110.4A GB0508110D0 (en) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | Gene delivery |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2345505T3 true ES2345505T3 (es) | 2010-09-24 |
Family
ID=34639915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06726867T Active ES2345505T3 (es) | 2005-04-22 | 2006-04-21 | Procedimiento ex vivo para introduccion de genes. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8232102B2 (es) |
| EP (1) | EP1885450B1 (es) |
| JP (1) | JP5167119B2 (es) |
| CN (1) | CN101193681A (es) |
| AT (1) | ATE470477T1 (es) |
| AU (1) | AU2006238697B2 (es) |
| CA (1) | CA2605533A1 (es) |
| DE (1) | DE602006014821D1 (es) |
| ES (1) | ES2345505T3 (es) |
| GB (1) | GB0508110D0 (es) |
| WO (1) | WO2006111770A2 (es) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITRM20030376A1 (it) | 2003-07-31 | 2005-02-01 | Univ Roma | Procedimento per l'isolamento e l'espansione di cellule staminali cardiache da biopsia. |
| US11660317B2 (en) | 2004-11-08 | 2023-05-30 | The Johns Hopkins University | Compositions comprising cardiosphere-derived cells for use in cell therapy |
| EP2023813A4 (en) * | 2006-05-15 | 2013-03-13 | Dmitri B Kirpotin | MAGNETIC MICROPARTICLES COMPRISING ORGANIC SUBSTANCES |
| GB0717582D0 (en) * | 2007-09-10 | 2007-10-17 | Univ Keele | Magnetic transfection device |
| EP2338520A1 (de) | 2009-12-21 | 2011-06-29 | Ludwig Maximilians Universität | Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung |
| US9845457B2 (en) | 2010-04-30 | 2017-12-19 | Cedars-Sinai Medical Center | Maintenance of genomic stability in cultured stem cells |
| US9249392B2 (en) | 2010-04-30 | 2016-02-02 | Cedars-Sinai Medical Center | Methods and compositions for maintaining genomic stability in cultured stem cells |
| US9669200B2 (en) | 2010-08-06 | 2017-06-06 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Systems and methods for the treatment of pelvic disorders including magnetic particulates |
| US9180172B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-11-10 | Ams Research Corporation | Treatment of Peyronies disease |
| US8979797B2 (en) | 2010-12-16 | 2015-03-17 | Ams Research Corporation | High pressure delivery system and method for treating pelvic disorder using large molecule therapeutics |
| CN102172410B (zh) * | 2011-01-14 | 2013-08-07 | 华南理工大学 | 用于癌症诊断与治疗的靶向纳米粒传输系统的构建方法 |
| WO2013184527A1 (en) | 2012-06-05 | 2013-12-12 | Capricor, Inc. | Optimized methods for generation of cardiac stem cells from cardiac tissue and their use in cardiac therapy |
| BR112014029807A2 (pt) * | 2012-06-08 | 2017-06-27 | Ethris Gmbh | administração pulmonar de rna mensageiro |
| EP2882445B1 (en) | 2012-08-13 | 2019-04-24 | Cedars-Sinai Medical Center | Exosomes and micro-ribonucleic acids for tissue regeneration |
| US9951374B2 (en) | 2013-02-19 | 2018-04-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Enhanced throughput mineral coatings for optimization of stem cell behavior |
| US11357799B2 (en) | 2014-10-03 | 2022-06-14 | Cedars-Sinai Medical Center | Cardiosphere-derived cells and exosomes secreted by such cells in the treatment of muscular dystrophy |
| WO2017123662A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Cedars-Sinai Medical Center | Cardiosphere-derived cells and exosomes secreted by such cells in the treatment of heart failure with preserved ejection fraction |
| US11351200B2 (en) | 2016-06-03 | 2022-06-07 | Cedars-Sinai Medical Center | CDC-derived exosomes for treatment of ventricular tachyarrythmias |
| WO2018057542A1 (en) | 2016-09-20 | 2018-03-29 | Cedars-Sinai Medical Center | Cardiosphere-derived cells and their extracellular vesicles to retard or reverse aging and age-related disorders |
| JP7336769B2 (ja) | 2017-04-19 | 2023-09-01 | シーダーズ―シナイ メディカル センター | 骨格筋ジストロフィーを治療する方法及び組成物 |
| EP3727351A4 (en) | 2017-12-20 | 2021-10-06 | Cedars-Sinai Medical Center | MODIFIED EXTRACELLULAR VESICLES FOR IMPROVED TISSUE DELIVERY |
| WO2020171783A1 (en) * | 2019-02-20 | 2020-08-27 | Sabanci Üniversitesi | Rotary magnetic actuation system |
| EP4292660A1 (de) * | 2022-06-13 | 2023-12-20 | Fortis GmbH | System zur verabreichung eines wirkstoffs |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4652257A (en) * | 1985-03-21 | 1987-03-24 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Magnetically-localizable, polymerized lipid vesicles and method of disrupting same |
| AU6639596A (en) * | 1995-07-28 | 1997-02-26 | James R. Gray | Use of a polarizing field to modify the efficacy of a bioactive agent |
| US6203487B1 (en) * | 1997-12-31 | 2001-03-20 | Thomas Jefferson University | Use of magnetic particles in the focal delivery of cells |
| EP1297169B1 (en) * | 2000-06-26 | 2012-08-08 | Ethris Gmbh | Method for transfecting cells using a magnetic field |
| US6997863B2 (en) * | 2001-07-25 | 2006-02-14 | Triton Biosystems, Inc. | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
| CA2476188A1 (en) * | 2002-02-12 | 2003-08-21 | The Mollennium Laboratories | Molecule vibrator |
| AU2003301251A1 (en) * | 2002-10-15 | 2004-05-04 | Ferx Incorporated | Magnetically guided particles for radiative therapies |
| AU2003301322A1 (en) | 2002-10-16 | 2004-05-04 | Yoshiro Okami | Apparatus for introducing biological material, method of introducing biological material and magnetic support for introducing biological material |
| US8001977B2 (en) * | 2005-04-08 | 2011-08-23 | Nanobiomagnetics, Inc. | Device for moving magnetic nanoparticles through tissue |
| WO2005025508A2 (en) * | 2003-09-12 | 2005-03-24 | Bankruptcy Estate Of Ferx, Inc. | Magnetically targetable particles comprising magnetic components and biocompatible polymers for site-specific delivery of biologically active agents |
-
2005
- 2005-04-22 GB GBGB0508110.4A patent/GB0508110D0/en not_active Ceased
-
2006
- 2006-04-21 WO PCT/GB2006/001477 patent/WO2006111770A2/en active Application Filing
- 2006-04-21 US US11/912,198 patent/US8232102B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-04-21 AU AU2006238697A patent/AU2006238697B2/en not_active Ceased
- 2006-04-21 EP EP06726867A patent/EP1885450B1/en not_active Not-in-force
- 2006-04-21 JP JP2008507169A patent/JP5167119B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-04-21 DE DE602006014821T patent/DE602006014821D1/de active Active
- 2006-04-21 ES ES06726867T patent/ES2345505T3/es active Active
- 2006-04-21 CN CNA2006800208906A patent/CN101193681A/zh active Pending
- 2006-04-21 CA CA002605533A patent/CA2605533A1/en not_active Abandoned
- 2006-04-21 AT AT06726867T patent/ATE470477T1/de not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-06-27 US US13/535,267 patent/US20120288505A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2006111770A3 (en) | 2007-05-18 |
| AU2006238697B2 (en) | 2011-12-08 |
| CA2605533A1 (en) | 2006-10-26 |
| US8232102B2 (en) | 2012-07-31 |
| GB0508110D0 (en) | 2005-06-01 |
| DE602006014821D1 (de) | 2010-07-22 |
| AU2006238697A1 (en) | 2006-10-26 |
| US20120288505A1 (en) | 2012-11-15 |
| ATE470477T1 (de) | 2010-06-15 |
| CN101193681A (zh) | 2008-06-04 |
| JP2008536907A (ja) | 2008-09-11 |
| WO2006111770A2 (en) | 2006-10-26 |
| US20080286361A1 (en) | 2008-11-20 |
| JP5167119B2 (ja) | 2013-03-21 |
| EP1885450B1 (en) | 2010-06-09 |
| EP1885450A2 (en) | 2008-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2345505T3 (es) | Procedimiento ex vivo para introduccion de genes. | |
| Estelrich et al. | Iron oxide nanoparticles for magnetically-guided and magnetically-responsive drug delivery | |
| Gandra et al. | Virus‐mimetic cytoplasm‐cleavable magnetic/silica nanoclusters for enhanced gene delivery to mesenchymal stem cells | |
| Chen et al. | Bacterial magnetic nanoparticles for photothermal therapy of cancer under the guidance of MRI | |
| Mok et al. | Superparamagnetic iron oxide nanoparticle-based delivery systems for biotherapeutics | |
| Kievit et al. | Surface engineering of iron oxide nanoparticles for targeted cancer therapy | |
| US9095610B2 (en) | Uniform field magnetization and targeting of therapeutic formulations | |
| US8651113B2 (en) | Magnetically responsive nanoparticle therapeutic constructs and methods of making and using | |
| Khan et al. | Recent development for biomedical applications of magnetic nanoparticles | |
| Wang et al. | Gadolinium embedded iron oxide nanoclusters as T 1–T 2 dual-modal MRI-visible vectors for safe and efficient siRNA delivery | |
| Samal et al. | Multilayered magnetic gelatin membrane scaffolds | |
| Wang et al. | Magnetic multi-walled carbon nanotubes for tumor theranostics | |
| Oral et al. | Effect of varying magnetic fields on targeted gene delivery of nucleic acid-based molecules | |
| Lei et al. | Stem cell labeling with superparamagnetic iron oxide nanoparticles using focused ultrasound and magnetic resonance imaging tracking | |
| Miranda et al. | Magnetic micellar nanovehicles: Prospects of multifunctional hybrid systems for precision theranostics | |
| Alsharedeh et al. | Magnetosomes as Potential Nanocarriers for Cancer Treatment | |
| US20120184941A1 (en) | multicomponent magnetic nanoparticle delivery system for local delivery to heart valve leaflets and other animal tissues | |
| Cruz-Acuña et al. | From oleic acid-capped iron oxide nanoparticles to polyethyleneimine-coated single-particle magnetofectins | |
| Uthaman et al. | 9—Fabrication and development of magnetic particles for gene therapy | |
| Skoda et al. | Potential and challenges of graphene in medicine | |
| Prosen et al. | Magnetofection: an effective, selective and feasible non-viral gene delivery method | |
| Shan et al. | High efficiency intracellular transport of cationic peptide stearate for gene delivery in tumor cells and multipotent stem cells | |
| Funnell | Magnetic electrospun fibers for neural regeneration applications | |
| Singh et al. | Autonomously Propelled Colloids for Penetration and Payload Delivery in Complex Extracellular Matrices. Micromachines 2021, 12, 1216 | |
| Çikim et al. | Effect of varying magnetic fields on targeted gene delivery of nucleic acid-based molecules |