ES2327079B1 - Uso de la (des-gly10,d-ala6)-lhrh ethyl-amide para inseminacion intravaginal en conejas. - Google Patents
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Abstract
Uso de la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide para inseminación intravaginal en
conejas. Uso de la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide por vía intravaginal, añadido a la
dosis seminal, para la inducción de la ovulación en conejas
sometidas a inseminación artificial. Además se puede añadir al semen
hasta 24 horas antes de su aplicación.
Description
Uso de la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide para inseminación intravaginal en
conejas.
La presente invención pertenece al ámbito de la
producción animal y más concretamente a la cría intensiva de
conejos mediante inseminación artificial.
El uso de la inseminación artificial en las
explotaciones cunícolas es una práctica común en Europa. Como
consecuencia, se han introducido numerosos cambios en el manejo de
los animales para su adaptación a esta técnica. En general, estos
cambios han contribuido a mejorar la calidad de vida del cunicultor
y la productividad de las explotaciones. Sin embargo, aún es
posible mejorar los sistemas de manejo actuales en aspectos como
reducir la administración de sustancias exógenas o simplificar la
aplicación de otras, que al menos de momento, no se pueden
eliminar, como es el caso de la administración de GnRH para la
inducción de la ovulación.
En la coneja, la ovulación no ocurre
espontáneamente, se produce por un reflejo neurohormonal que se
inicia durante el coito. Cuando se utiliza la inseminación
artificial, el macho no está presente y la ovulación debe inducirse
mediante métodos artificiales. El método más frecuentemente
empleado para la inducción de la ovulación es la administración
intramuscular de GnRH o uno de sus análogos sintéticos. Algunos
métodos alternativos a la aplicación de esta hormona son:
.- La administración intravenosa de acetato de
cobre (Kishk W, Awad M, Ayoub M. Non-hormonal
substances for the induction of ovulation in rabbit does. 7^{th}
World Rabbit Congress. Valencia. Spain. 2000). Investigaciones
realizadas por diferentes autores demuestran que las sales de cobre
pueden provocar un pico de LH seguido de la ovulación, de forma
similar al inducido por el coito. Este efecto se debe a un
sinergismo entre el cobre y las gonadotropinas. Sin embargo,
cualquier método que implique la administración intravenosa de una
sustancia hace que sea imposible su aplicación por la dificultad y
el tiempo requerido.
.- Uso de machos vasectomizados (Khalifa RM,
El-Alamy MA, Beshir MA. Vasectomized buck gave
better reproductive results in artificial insemination techniques in
rabbit than GnRH or HCG. 7^{th} World Rabbit Congress. Valencia.
Spain. 2000). Su uso permite la obtención de resultados similares a
los obtenidos mediante la administración de GnRH por vía
intramuscular. Sin embargo, el tiempo requerido para conseguir el
efecto deseado es muy superior y es necesario mantener un grupo de
machos vasectomizados en la granja. Estos inconvenientes hacen que
no sea aplicable su uso a nivel de campo.
En la mayor parte de las explotaciones, la
preparación y administración de la GnRH está a cargo del
cunicultor, con un cierto riesgo de errores y con un incremento del
tiempo necesario para la realización de la inseminación artificial.
La GnRH o sus análogos son normalmente administrados por vía
intramuscular, sin embargo, al tratarse de moléculas de bajo peso
molecular, es posible su absorción a través de las mucosas. En este
sentido, existen referencias que indican que es posible la
absorción de análogos de la GnRH a través de las mucosas, ya que en
medicina humana se utilizan algunos por vía intranasal, aunque la
dosis es superior a la aplicada por vía intramuscular (Camier B,
Gagneur O, Arlot S, Thépot F, Vitse M. Preliminary study of the use
of intranasal buserelin in the long-term protocol of
ovarian stimulation with the view toward fertilization in
vitro. Rev Fr Gynecol Obstet 1989, 84:
659-661).
La administración vía intravaginal de la GnRH,
añadida al semen, reduciría el tiempo necesario para realizar la
inseminación artificial y los posibles errores como consecuencia de
una manipulación por personas no cualificadas, ya que se podría
añadir en el Centro de inseminación, lugar en el que se elaboran
las dosis seminales que serán utilizadas en la inseminación
artificial de las conejas.
En este sentido, existen pruebas de que la
administración de un análogo sintético de la GnRH, concretamente la
Buserelina, por vía intravaginal añadiendo la hormona a la dosis
seminal, es igual de eficaz induciendo ovulación que la administrada
por vía intramuscular (Quintela, L.A; Peña, A.I.; Vega, MaD.;
Gullón, J.; Prieto, C.; Barrio, M.; Becerra, J.J.; Maseda, F. y
Herradón, P.G. Ovulation induction in rabbit does submitted to
artificial insemination by adding buserelin to the seminal dose.
Reprod. Nutr. Dev. 2004, 44: 79-88).
La presente invención, describe la eficacia
induciendo la ovulación en la coneja de un análogo o sintético de
la GnRH, la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
Ethyl-Amide, CAS Register Number
[52435-06-0], administrado por vía
intravaginal. Esta eficacia es incluso superior a la demostrada por
la GnRH administrada por vía intramuscular, y, además, se puede
añadir al semen hasta 24 horas antes de su aplicación. La invención
facilita considerablemente el empleo de la inseminación artificial
en cunicultura, al reducir el tiempo necesario para su realización y
evitar la manipulación de las hormonas por personal no cualificado,
con los consiguientes errores de dosificación o incluso problemas
sanitarios debidos al uso en varios animales de las mismas agujas.
Asimismo, supone una alternativa a la vía de administración
habitual de la hormona responsable de la inducción de la ovulación
en la coneja.
\newpage
También, la invención consiste en un método de
inducción de la ovulación en conejas que radica en la adición de un
análogo de la GnRH a la dosis seminal. Con esto se consigue
eliminar la preparación de las dosis de hormona y la administración
intramuscular a cada animal. La hormona en este caso es
administrada al mismo tiempo que se insemina la coneja, sin un
trabajo extra. Por otra parte, se reducen los errores al reducir la
manipulación que el cunicultor debe realizar de la hormona.
La presente invención esta dirigida a obtener
una alternativa más eficaz al sistema tradicional de inducción de
la ovulación en conejas sometidas a inseminación artificial.
Esta alternativa consiste en la administración
por vía intravaginal, añadida a la dosis seminal, del análogo de la
GnRH cuya denominación es la: [Des-G1y10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide, CAS Register Number
[52435-06-0].
La dosis recomendada para obtener los mejores
resultados de fertilidad y prolificidad es la de 25 \mug. por
coneja, añadida a la dosis seminal hasta 24 h. antes de uso,
manteniendo ésta a la temperatura de conservación normal del semen
de conejo (16ºC).
En los ejemplos descritos a continuación se
demuestra la eficacia de la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide administrada por vía vaginal añadida
a la dosis seminal, en la inducción de la ovulación en la
coneja.
En todos los ejemplos se utilizaron conejas
híbridas comerciales (Hyplus línea PS19, Grimaud Freres, Francia).
Todas las conejas procedían de una explotación industrial de
conejos. Los ejemplos fueron realizados en la Universidade de
Santiago de Compostela, Facultad de Veterinaria de Lugo durante los
meses de noviembre de 2004 a junio de 2005 Las conejas estaban
alojadas en una granja experimental sin ventanas, con luz artificial
que aportaba una intensidad de 70 lux y con un sistema de
ventilación forzada y de climatización de forma que la temperatura
interior se mantuviese en un rango entre 18 y 22ºC. Las luces
estaban conectadas a un programador que mantenía un fotoperiodo
artificial de 12 horas de luz y 12 de oscuridad. Seis días antes de
la inseminación artificial este fotoperiodo se incrementaba a 16
horas de luz y 8 de oscuridad. Durante los 4 días siguientes a la
inseminación artificial se reducía 1 hora de luz al día hasta volver
al fotoperiodo inicial de 12 h. de luz/12 h. de oscuridad.
Las conejas estaban alojadas en jaulas
individuales (0,3 m^{2}), comunicadas con un nido exterior (0,12
m^{2}), por un orificio circular que se cierra mediante una puerta
deslizante. Las conejas preñadas o lactantes se alimentaron ad
libitum, mientras que las no gestantes y no lactantes fueron
racionadas a 150 g/día de un pienso comercial, excepto en el
intervalo que va de los 6 días anteriores a la inseminación
artificial (IA) al diagnóstico de gestación, en que fueron
alimentadas ad libitum. Se emplearon dos tipos diferentes de
dietas: de los 21 días posparto al destete (30-35
días), todas las conejas, por razones prácticas, incluidas las no
lactantes, fueron alimentadas con un pienso de gazapos (15.3%
Proteína Bruta, 16.5 Fibra Bruta, 1800 Kcal Energía Digestible),
durante el resto de los días recibieron un pienso de maternidad
(17.8% Proteína Bruta, 13.3 Fibra Bruta, 2300 Kcal Energía
Digestible).
Todas las hembras fueron inseminadas el mismo
día, con un intervalo de 42 días (11 días posparto). Todas las
hembras fueron tratadas hormonalmente para sincronizar el estro. El
tratamiento hormonal consistente en 20 UI eCG (Follygon®,
Laboratorios Intervet, Salamanca, España), inyectado en un volumen
de 1 mL, 48 h. antes de la inseminación artificial.
Se les aplicó un programa de amamantamiento
controlado a todas las hembras entre los días 0 a 10 posparto,
manteniendo la puerta del nido cerrada y abriéndola sólo cada 24 h,
a las 12:00 h, para permitir a las crías mamar una vez al día. El
día de la inseminación el amamantamiento fue retrasado hasta las
17:00 h, 5-10 minutos antes de llevar a cabo la
inseminación artificial, lo que supuso una separación
coneja-gazapo de 30 h. Desde el día 12 posparto (1
día pos-inseminación) hasta el destete
(30-35 días posparto) se permitió la lactancia
libre dejando la puerta del nido abierta. Entre los días 11 y 14
pos-inseminación se realizó el diagnóstico de
gestación de todas las conejas mediante palpación
transabdominal.
Al destete los conejos fueron trasladados a una
nave de cebo para finalizar su crecimiento, y durante este periodo
(7-12 días previos al siguiente parto) se llevó a
cabo la limpieza y desinfección de los nidales a fin de preparar el
próximo parto.
Los partos tuvieron lugar principalmente a los
30 días pos-inseminación y en la mañana del día 31.
En aquellas conejas que no hubiesen parido el mediodía del día 31,
se les indujo el parto mediante la inyección subcutánea 2 UI
Oxytocina (Hormohipra®, Laboratorios Hipra, Girona, España).
Después de este tratamiento (aplicado aproximadamente a un 5% de
las parturientas), el parto comienza por lo general a los
5-10 minutos y se completa en 15 minutos.
Una vez paridas todas las conejas se anota el
número de nacidos vivos y nacidos muertos. Posteriormente, las
camadas son igualadas hasta las 10 crías cada una, con un tamaño de
éstas similar dentro de cada grupo. Las crías sobrantes son
eutanasiadas mediante la inyección intraperitoneal de pentobarbital
sódico (Dolethal®, Laboratorios Vetoquinol, Madrid, España).
\vskip1.000000\baselineskip
El semen empleado se obtuvo de un centro de
inseminación artificial, en donde rutinariamente el semen de conejo
es recogido, diluido y almacenado a 16ºC usándolo en un intervalo
de 24 horas.
Eyaculados de 8-12 conejos
(Hyplus PS39, Grimaud Freres, France), son recogidos usando una
vagina artificial, mezclados y diluidos con un diluyente comercial
(MA 24®, Laboratorios Ovejero, León, España) hasta una
concentración estándar de 60x10^{6} espermatozoides/mL. Sólo
fueron empleados aquellos eyaculados cuyo volumen libre de gel era
superior a 0.2 mL y la motilidad espermática (evaluación subjetiva
con microscopio) mayor al 70%.
Las hembras fueron inseminadas vaginalmente
usando pipetas de plástico de un único uso, con una dosis de 30 x
10^{6} espermatozoides en un volumen de 0.5 mL. En el momento de
realizar la inseminación artificial fue observado el color de la
vulva y clasificado como blanco, rosa, rojo o púrpura.
\vskip1.000000\baselineskip
18 conejas de aproximadamente 30 semanas de edad
(secundíparas) divididas al azar en 3 grupos de 6 fueron
inseminadas 5 veces consecutivas. Cada grupo recibió un tratamiento
hormonal diferente para la inducción de la ovulación en el momento
de la IA:
1.- Grupo control: 20 mg/coneja de GnRH natural
(Inducel GNRH®, Laboratorios Ovejero S.A, León, España) vía
intramuscular.
2.- Grupo T25: 25 \mug/coneja de
[Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide diluido en solución salina
fisiológica en relación 1/1 administrado intravaginal añadiendo la
hormona a la dosis seminal (25 \muL.).
3.- Grupo T30: 30 \mug/coneja de
[Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide diluido en solución salina
fisiológica en relación 1/1 administrado intravaginal añadiendo la
hormona a la dosis seminal (30 \muL.).
\vskip1.000000\baselineskip
A cuatro conejas elegidas aleatoriamente en cada
uno de los tres grupos del experimento anterior en la 5ª IA, se les
recogieron muestras de sangre justo antes de la IA y a los 60, 90,
120 y 150 min. de la IA, para la determinación de los niveles de LH
en plasma. Las muestras fueron recogidas en la vena marginal de la
oreja en tubos de EDTA e inmediatamente centrifugados a 1000 g.
durante 10 min. El plasma sanguíneo así obtenido se congeló a -20ºC
hasta su análisis hormonal.
\vskip1.000000\baselineskip
En este ejemplo se demuestra que mediante la
adición al semen de [des-Gly10,
D-Ala6] - LHRH ethyl-amide en
las dosis probadas se obtienen resultados similares a los que se
conseguirían con la administración intramuscular de gonadorelina
siguiendo el protocolo tradicional. Por otra parte, aunque en
ningún caso las diferencias entre grupos fueron estadísticamente
significativas, la dosis de 25 \mug parece ser la mejor.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados obtenidos en este experimento no
vienen más que a confirmar lo observado en el experimento anterior.
Comprobamos que tras la administración de 25 o 30 \mug de
[Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide se consigue un pico de LH a los 90
min. de la administración, de igual forma que en el protocolo
tradicional, e incluso ligeramente superior (Figura 1.- Gráfica en
la que se muestra el momento en el que se produce el pico de LH en
conejas a las que se les administró GnRH por vía intramuscular o
25/30 \mug de [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide añadida al semen).
\vskip1.000000\baselineskip
Representación de la Figura 1.- Concentraciones
de LH en plasma justo antes de la inseminación artificial y a los
60, 90, 120 y 150 minutos postinseminación en función del
tratamiento administrado (C: 20 mg/coneja de GnRH natural
(Inducel GNRH®, Laboratorios Ovejero S.A, León, España) vía
intramuscular; 25: 25 \mug/coneja de
[Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide diluido en solución salina
fisiológica en relación 1/1 administrado intravaginal añadiendo la
hormona a la dosis seminal (25 \muL.); 30: 30
\mug/coneja de [des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide diluido en solución salina
fisiológica en relación 1/1 administrado intravaginal añadiendo la
hormona a la dosis seminal
(30 \muL.)).
(30 \muL.)).
Claims (2)
1. Uso de la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide para preparar una composición
veterinaria, de administración intravaginal, destinada a la
inducción de la ovulación en las conejas sometidas a inseminación
artificial.
2. Uso de la [Des-Glyl0,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide, según la reivindicación 1,
caracterizada porque la composición veterinaria consiste en
adicionar la [Des-Gly10,
D-Ala6]-LHRH
ethyl-amide a la dosis seminal diluida.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200603050A ES2327079B1 (es) | 2006-11-21 | 2006-11-21 | Uso de la (des-gly10,d-ala6)-lhrh ethyl-amide para inseminacion intravaginal en conejas. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200603050A ES2327079B1 (es) | 2006-11-21 | 2006-11-21 | Uso de la (des-gly10,d-ala6)-lhrh ethyl-amide para inseminacion intravaginal en conejas. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2327079A1 ES2327079A1 (es) | 2009-10-23 |
| ES2327079B1 true ES2327079B1 (es) | 2010-05-31 |
Family
ID=41165252
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200603050A Active ES2327079B1 (es) | 2006-11-21 | 2006-11-21 | Uso de la (des-gly10,d-ala6)-lhrh ethyl-amide para inseminacion intravaginal en conejas. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2327079B1 (es) |
-
2006
- 2006-11-21 ES ES200603050A patent/ES2327079B1/es active Active
Non-Patent Citations (6)
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2327079A1 (es) | 2009-10-23 |
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