ES2315205B1 - Bacillus amyloliquefaciens bam 2507 (cect 7313) degradador de residuos oleosos de la industria alimentaria y hostelera, y procedimiento para su aplicacion. - Google Patents
Bacillus amyloliquefaciens bam 2507 (cect 7313) degradador de residuos oleosos de la industria alimentaria y hostelera, y procedimiento para su aplicacion. Download PDFInfo
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Abstract
Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507 (CECT
7313) degradador de residuos oleosos de la industria alimentaria y
hostelera, y procedimiento para su aplicación.
Cepa bacteriana Bacillus
amyloliquefaciens Bam 2507
(CECT 7313), caracterizada por su capacidad degradadora de residuos oleosos de la industria alimentaria y hostelera, debido a su capacidad de crecimiento en las agua oleosas ricas en polifenoles y a su capacidad de biotransformación de los propios polifenoles y de las grasas mediante sus actividades enzimáticas esterasa, esterasa lipasa y lipasa. Esta cepa ha sido aislada y caracterizada para ser utilizada en el tratamiento biológico de los efluentes oleosos componentes de dichos residuos, clasificados de tóxicos o peligrosos, generados durante el proceso de elaboración del aceite de oliva y otros aceites vegetales, así como tras su posterior consumo, según un procedimiento que, para el caso particular de las emulsiones de aceites comestibles usados, consiste en un tratamiento físico-químico previo del residuo y la posterior inoculación del microorganismo para la biotransformación.
(CECT 7313), caracterizada por su capacidad degradadora de residuos oleosos de la industria alimentaria y hostelera, debido a su capacidad de crecimiento en las agua oleosas ricas en polifenoles y a su capacidad de biotransformación de los propios polifenoles y de las grasas mediante sus actividades enzimáticas esterasa, esterasa lipasa y lipasa. Esta cepa ha sido aislada y caracterizada para ser utilizada en el tratamiento biológico de los efluentes oleosos componentes de dichos residuos, clasificados de tóxicos o peligrosos, generados durante el proceso de elaboración del aceite de oliva y otros aceites vegetales, así como tras su posterior consumo, según un procedimiento que, para el caso particular de las emulsiones de aceites comestibles usados, consiste en un tratamiento físico-químico previo del residuo y la posterior inoculación del microorganismo para la biotransformación.
Description
Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507 (CECT
7313) degradador de residuos oleosos de la industria alimentaria y
hostelera, y procedimiento para su aplicación.
El objeto de la presente invención es la cepa
bacteria Bacillus amyloliquefaciens, de código de laboratorio
Bam 2507, aislada y caracterizada a los efectos de ser utilizada en
la biodegradación de los residuos oleosos de la industria
alimentaria y hostelera, como es el caso de la fabricación y
consumo al mayor de aceite de oliva, debido a la capacidad que
tiene dicho microorganismo de desarrollarse en las aguas y
efluentes oleosos ricos en polifenoles componentes de dichos
residuos, clasificados de tóxicos o peligrosos, y de degradar los
propios polifenoles y las grasas existentes en los mismos.
Esta cepa ha sido depositada con fines de
patente en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT), con fecha
16 de octubre de 2007, donde se le ha asignado el número 7313. La
CECT tiene su sede en el edificio de investigación de la
Universidad de Valencia, sito en el campus de Burjassot (DP 46100 -
Valencia, España).
También es objeto de la presente invención el
procedimiento por el cual el microorganismo es aplicado al
tratamiento de aquellos residuos oleosos procedentes del consumo en
hostelería de aceite vegetal, principalmente aceite de oliva, con
el fin de que el proceso degradativo de las emulsiones aceitosas
pueda realmente llevarse acabo.
Por tanto, la invención se encuadra en el amplio
campo de la biotecnología, y dentro de éste, en el del tratamiento
biológico de los efluentes y aguas oleosas componentes de los
residuos de aceites tóxico o peligrosos, tanto de la industria
alimentaria, generados durante el proceso de fabricación (los
conocidos alpechines y alpeorujos en el caso del aceite de oliva),
como el producido tras su consumo en hostelería (emulsiones de
aceites comestibles
usados).
usados).
Por ser un método de tratamiento biológico de
residuos, es en sí mismo un método respetuoso con el medio ambiente
y económico, en comparación con los tradicionales de eliminación o
de tratamientos físico-químicos de los residuos
oleosos, pero además en este caso, por ir dirigido a transformar
polifenoles y otras sustancias especialmente tóxicas de las aguas y
efluentes generados en la producción y consumo de los aceites
vegetales, resulta un método de realmente eficaz.
Se define residuo como cualquier sustancia u
objeto del cual su poseedor se desprenda o tenga intención u
obligación de desprenderse (Ley 10/1998 de residuos). De acuerdo
con la legislación vigente, son residuos peligrosos aquellos que
reúnen, al menos, una de las siguientes características:
explosividad, comburente, inflamable, irritante, nocivo, tóxico,
cancerígeno, corrosivo, infeccioso, teratógeno, mutagénico,
inestable, fuente de compuestos secundarios o ecotóxico. Como
ejemplo podemos decir que un residuo es corrosivo si presenta
cualquiera de las siguientes propiedades: ser acuoso y tener un pH
inferior a 2 o superior a 12.5, y/o ser líquido y corroer el acero
a una tasa superior de 6,35 mm/año a una temperatura de 55ºC. Y un
residuo sería tóxico cuando tiene el potencial de causar la muerte,
lesiones graves, o efectos perjudiciales para la salud del ser
humano si se ingiere, inhala o entra en contacto con la piel.
Como resultado de determinadas actividades
industriales relacionadas con los aceites vegetales, como la
fabricación de aceite de oliva, el sector hostelero, o la
producción de porcino, se generan unos efluentes oleosos que
incluye sustancias tóxicas para la salud y nocivas para el medio
ambiente, por lo que son considerados residuos tóxicos o
peligrosos. Entre tales sustancias cabe destacar a los
polifenoles.
En la industria alimentaria y hostelera los
polifenoles existentes como resultado de multitud de procesos
industriales relacionados con el aceite vegetal, como es el caso
del aceite de oliva. En los efluentes de la producción del aceite
de oliva, tanto en las aguas oleosas o alpechines (método de
extracción continúa en tres fases), como en los pastosos alpeorujos
(método de extracción en dos fases), existe una alta concentración
de polifenoles, además de otros componentes orgánicos y compuestos
inorgánicos, todos de naturaleza muy tóxica y a su vez muy diversa
(Moreno et al., 1990; Ramos et al., 2000). En el caso
particular de los polifenoles, la mayoría se consideran
extremadamente tóxicos para las células animales y contaminantes
para el medio ambiente, además producen una acción eutrofizadora
muy acusada de las aguas, lo que justifica el enorme efecto
contaminante de los residuos.
Por tanto, los residuos oleosos sobre los que
actúa esta propuesta de patente están considerados como residuos
peligrosos, tanto por la referida legislación estatal (Ley 10/98 de
Residuos), como por la comunitaria (Directiva del Consejo 91/156).
En la directiva de la UE de residuos peligrosos 91/689/CEE en sus
anexos I, II y III, clasifica en categorías o tipos genéricos de
residuos peligrosos relacionados según su naturaleza o la actividad
que los generó. Así tenemos en el anexo I.A. nº 9.- aceite/agua,
mezclas de hidrocarburo/agua, emulsiones; o en el anexo I.B. nº
19.- jabones, grasas y ceras animales o vegetales; nº 38.- aceites
vegetales. También podemos comprobar esta clasificación en el
Catálogo Europeo de Residuos (CER), incluido en el capítulo 20 de
la lista, correspondiente a residuos municipales (residuos
domésticos y asimilables procedentes de los comercios industrias e
instituciones), incluidas las fracciones recogidas selectivamente
en el punto 20 01 25 y 20 01 26.
Es por ello, por lo que la Ley de residuos
obliga a los productores a eliminar (o transformar) los residuos
oleosos, bien a través de un gestor autorizado, bien a través de un
tratamiento, como por ejemplo una EDAR en el caso de producción de
porcino. Su eliminación resulta un verdadero problema para
determinadas empresas, sobre todo si están incluidas en el anexo 1
de la IPPC, ya que están obligadas a obtener la Autorización
Ambiental Integrada.
Los métodos tradicionales para la eliminación o
tratamiento de los efluentes de la producción de aceites vegetales,
especialmente en lo relativo a las aguas oleosas ricas en
polifenoles, han sido la eliminación directa, a través de
depuradoras, fertilizantes, piensos o vertidos controlados, la
evaporación, natural en balsas o acelerada por tratamiento térmico,
y los tratamientos físico-químicos (filtración,
incineración, destilación-evaporación, etc.). Estos
métodos son en general perjudiciales para el medio ambiente, y
también bastante costosos. Por eso desde hace unos años atrás, a
interrumpido con fuerza los métodos de tratamiento biológico, como
la generación de biogás, el compostaje o la fermentación, que es en
el campo donde se encuadra la invención que más abajo se
presenta.
La legislación y la tecnología orientadas a la
limpieza del ambiente y la prevención de su deterioro han sido dos
de los mayores avances del final del siglo XX y han propiciado el
nacimiento de tecnologías basadas en el uso de microorganismos con
amplias capacidades biodegradadoras. En el caso particular de la
industria de producción del aceite de oliva existen antecedentes
que ponen de manifiesto el interés de tratar biológicamente
residuos oleosos ricos en polifenoles para la producción de compost
(FAIR CT96 1420. Anexo A2/Annex A2. FINAL REPORT. PROJECT
IMPROLIVE. Improvements of Treatments and Validation of the
Liquid-Solid Waste from the
Two-Phase Olive Oil Extraction. February 2000).
Una de dichas técnicas basadas en el uso de
microorganismos es la biorremediación, que emplea microorganismos
vivos para la eliminación de contaminantes ambientales (Atlas y
Pramer, 1990; Atlas y Bartha 2002). Esta es una de las tecnologías
aplicables al fin perseguido con la presente invención.
Para que la biorremediación sea eficaz los
contaminantes deben ser susceptibles de ataque microbiano
(transformación metabólica), los productos metabólicos deben ser
inocuos y el proceso no debe tener efectos secundarios adversos en
los ecosistemas. Las condiciones ambientales deben permitir el
crecimiento in situ de los agentes microbianos que llevan a
cabo la biorremediación o la extracción del contaminante de manera
que pueda biodegradarse ex situ en biorreactores.
Son muchas las cepas de microorganismos
pertenecientes al género Bacillus sp. que han sido utilizados en
multitud de procesos de biodegradación. A pesar de que se conocen
algunas de las rutas de biotransformación de polifenoles por parte
de especies del género Bacillus, debemos considerar que las
especies microbianas presentan una tasa de degradación óptima en
condiciones particulares, y en el caso de los aceites tóxicos o
peligrosos todavía no se emplean técnicas de biotransformación con
la intención expresa de reducir la concentración de polifenoles. Un
dato que avala esta conclusión es la inexistencia de patentes o
solicitudes de patentes publicadas por la OEPM en relación procesos
de biodegradación de residuos oleosos de la industria
alimentaria.
No existiendo en la actualidad ningún trabajo
sobre biotransformación en aceites tóxicos de origen industrial u
hostelero publicado en documentos de patente o a través de
literatura no patente, se entiende oportuno proponer alternativas
de eliminación o reutilización más respetuosas para el medio
ambiente que las empleadas hasta el
momento.
momento.
Los polifenoles que se encuentran en los
residuos acuosos generados en la producción y utilización del
aceite vegetal, y que son parte fundamental de la fracción oleosa
que se destina al consumo (Ortalli, 2004), mantienen, en general,
una baja tasa de degradación. Además, ésta sólo la realizan unas
pocas especies de microorganismos. Por eso son más difíciles de
eliminar de forma natural y persisten por más tiempo afectando al
medio ambiente. Entre estos polifenoles se han detectado tirosol,
ácido vaníllico, ácido protocatequico y ácido caféico. , y como más
tóxicos, el catecol y metil-catecol.
Lo que ha conseguido el equipo inventor es
aislar una cepa bacteriana del genero Bacillus con capacidad
degradadora de parte de dichos componentes tóxicos, y que es
especialmente novedosa respecto a cepas del mismo género ya
conocidas por su capacidad degradadora de polifenoles, debido a la
capacidad de la nueva cepa de crecer en un residuo oleoso con alta
concentración de estas sustancias y ser capaz de degradarlas en una
elevada tasa. Además, el nuevo microorganismo presenta una
actividad enzimática esterasa, esterasa lipasa y lipasa que le
permite degradar las grasas de los residuos oleosos de origen en la
industria alimentaria y hostelera.
Pero este microorganismo degradador de residuos
oleosos no pueden añadirse directamente al residuo, sino que
precisa de un tratamiento físico-químico previo del
mismo para su utilización, lo cual también es el objeto de esta
invención.
El referido microorganismo potencialmente
degradador de residuos oleosos de la industria alimentaria y
hostelera, y que se reivindica de propia invención, es el
Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507, con número de depósito
7313 en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) a los fines
de patente.
Se trata de un microorganismo de la especie
B. amyloliquefaciens, género Bacillus, con una
importante capacidad de crecimiento en las aguas oleosas ricas en
polifenoles que se generan durante el proceso de producción de los
aceites vegetales, y que también están presentes en las emulsiones
de los aceites usados provenientes del consumo domestico y la
hostelería, así como por la capacidad que tiene dicho
microorganismo para la biotransformación de los propios polifenoles
y de las grasas mediante sus actividades enzimáticas esterasa,
esterasa lipasa y lipasa existentes en dichos residuos.
Los polifenoles de las aguas oleosas en el que
se desarrolla y actúa el microorganismo en cuestión son tirosol,
ácido vaníllico, ácido protocatequico, ácido caféico, catecol y
metil-catecol, entre otros.
Una vez aislado y caracterizado, se ha
constatado que Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507 presenta
una actividad bioquímica especialmente interesante para el fin a
que se destina. Entre sus características destacan las
siguientes:
Es un microorganismo mesófilo, por lo que la
temperatura ideal de incubación debe situarse ente los 28 a 40
grados centígrados.
Asimismo, la fase esporulada del microorganismo
es termorresistente, de manera que soporta temperaturas por debajo
de 80ºC durante largos periodos de tiempo.
Mantiene un metabolismo
aerobio-anaerobio facultativo y es capaz de
biotransformar los polifenoles en ambas condiciones.
Se comporta como ácido tolerante pero mantiene
una tasa de biotransformación óptima en pH de 5,5 a 7.
Tiene una actividad degradadora de las grasas
mediante sus actividades enzimáticas esterasa, esterasa lipasa y
lipasa.
Por tanto, Bacillus amyloliquefaciens Bam
2507 puede ser utilizado para su aplicación en la eliminación de
polifenoles y grasas de las aguas oleosas de la industria
alimentaria y hostelera, y en la biodegradación de los residuos
oleosos de origen en esta industria.
En los casos donde el residuo oleoso de carácter
tóxico o peligroso lo componen emulsiones de aceite vegetal usado
(agua oleosa con carga iónica disuelta), procedente en su mayor
volumen del consumo en hostelería, se ha desarrollado un
procedimiento de aplicación de la cepa bacteriana de invención para
posibilitar su acción biodegradadora de los polifenoles y demás
componentes tóxicos una vez en contacto con el residuo.
Este procedimiento, que también se reivindica
como de propia invención, consiste en un tratamiento
físico-químico previo del residuo y la posterior
inoculación del microorganismo para la biotransformación, según
estas tres operaciones básicas que más abajo se describen más en
detalle:
1) Emulsión del aceite residual en decantador y
separación de la fase acuosa-oleosa de la orgánica
mediante flotación con vapor de agua, realizada por inyección de
vapor de agua desde el fondo del decantador.
2) Corrección del pH de la fase
acuosa-oleosa hasta un valor comprendido entre 5 y
7,5.
3) Inoculación del microorganismo en la fase
acuosa-oleosa para provocar su
biotransformación.
La ventaja de esta invención ha quedado clara de
todo lo arriba expuesto; el disponer de una cepa bacteriana con la
capacidad de degradar los polifenoles y grasas presentes en las
aguas y efluentes oleosos generados durante la producción y consumo
de los aceites vegetales, como el aceite de oliva, siendo la base
para un nuevo tratamiento biológico de estos componentes
residuales, un tratamiento que resulta limpio y económico, en
cuanto se basa en procesos de biorremedaición, y especialmente
eficaz como descontaminante, al actuar sobre unos componentes de
alto grado de toxicidad, en referencia a los polifenoles, y sobre
diferentes tipos de grasas muy presentes en los
residuos.
residuos.
Además, en el caso del tratamiento de los
residuos de aceites vegetales usados, que son un problema en el
sector de la hostelería, también se dispone del procedimiento de
aplicación de la cepa en cuestión a la fase
acuosa-oleosa delas emulsiones aceitosas, lo que
hace que la invención pueda ser directamente utilizable en la
industria.
El gráfico de la Figura 1 refleja la eficacia de
la invención como descontaminante, al compararse la evolución
fenólica de dos medios oleosos, uno original, y otro inoculado con
Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507, donde puede comprobarse
que mientras la valoración de polifenoles se mantiene prácticamente
constante en el tiempo (V_{0}, V_{1}, V_{2}) en el medio
original, en el inoculado con la bacteria disminuye notablemente,
como más abajo se explica.
La metodología de aplicación de la cepa
Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507 a residuos oleosos de
carácter tóxico o peligroso ya ha sido arriba esbozada para un caso
donde ese residuo se compone de emulsiones de aceite vegetal usado
(agua oleosa con carga iónica disuelta) provenientes
fundamentalmente del consumo en la industria hostelera.
Como se ha señalado, lo primero es la
preparación del residuo por tratamiento
físico-químico, según un proceso en el que las
citadas emulsiones se someten a una etapa de flotación con vapor de
agua en orden a separar la fase orgánica de la fase
acuosa-oleosa, seguido de la corrección del pH de
esta segunda.
La operación de flotación se realiza en un
decantador en el que se introduce el vapor a través de conductos
con numerosas boquillas inyectoras de 0,5 mm de diámetro.
La inyección de vapor de agua desde el fondo del
decantador produce tres efectos: El primero el calentamiento de la
emulsión, con lo que se separa mejor la fase orgánica de la acuosa
al aumentar la flotabilidad del aceite respecto al agua, el segundo
es el arrastre por flotación del aceite hacia la superficie,
producido por las pequeñas burbujas ascendentes de vapor, y por
último, se aumenta la capacidad de solubilización de los ácidos
orgánicos, cetonas y aldehídos en la fase acuosa.
La fase orgánica puede emplearse para otros
fines como producción de biodiesel, no siendo objeto de ensayo
para la presente invención. Sin embargo, la fase
acuosa-oleosa no presenta esta utilidad, siendo
interesante biotratarla con la intención de destoxificarla y poder
valorizarla como compost u otros usos.
El pH de la fase acuosa-oleosa
del residuo debe corregirse hasta acercarlo a la neutralidad antes
del inoculación del microorganismo para su biotransformación. Para
que el proceso sea óptimo el pH debe mantenerse entre 5 a 7,5.
Para la corrección del pH se propone emplear
NaOH (hidróxido sódico) en concentración y volumen según la
cantidad y composición del residuo.
Una vez preparado el residuo, el inóculo de la
cepa bacteriana pude preparase a partir de cualquier medio general
completo y complejo. El volumen y concentración de la bacteria debe
adecuarse al volumen del residuo a biotransformar, así como al
biorreactor a emplear.
La inoculación del microorganismo en la fase
acuosa-oleosa se realiza a partir de un cultivo
previo en medio líquido LB a 37ºC durante 24 h, hasta alcanzar una
concentración superior a 5 x 10^{11} ufc/ml (unidades formadoras
de colonias por mililitro), verificada por el método de recuento en
placa, e inoculado a razón de 500 ml de cultivo por metro cúbico de
residuo.
A continuación se muestran los resultados de
algunos de las pruebas y experimentos realizados que justifican la
eficacia de la invención.
La tabla I muestra los resultados de valoración
fenólica de un medio oleoso inoculado con la cepa Bacillus
amyloliquefaciens Bam 2507 en comparación un medio original,
donde V1 es la valoración de polifenoles a t1 (mg/ml), V2 la
valoración de polifenoles a t2 (mg/ml), "Media" es la media
estadística del par de valores correspondiente (mg/ml), y "D.
stándar", la desviación estándar.
\vskip1.000000\baselineskip
La evolución fenólica de los dos medios
comparados, el original u el inoculado con Bam 2507, es reflejada
en el gráfico de la Figura 1. En este gráfico, V0 es la valoración
de polifenoles a t0 (mg/ml), V1 la valoración de polifenoles a t1
(mg/ml), siendo t1 un tiempo de incubación de 7 días, V2 la
valoración de polifenoles a t2 (mg/ml), siendo t2 un tiempo de
incubación de 14 días.
La Tabla II muestra la valoración de la
actividad microbiana esterasa, esterasa-lipasa y
lipasa a las 24 horas de Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507,
según el método API ZYM BioMérieux.
Los resultados confirman que la cepa propuesta
para patente muestra una marcada actividad esterasa y
esterasa-lipasa. De este modo el fraccionamiento de
las grasas puede facilitar la disolución del oxígeno atmosférico
de la microbiota aerobia. Esta podría ser una de las claves que
regulen la eficacia de la biotransformación en este proceso.
Una reutilización última de estos residuos
(valorización) podría ser el biocompost siendo esta cepa una buena
candidata para esta biotransformación por estar presentes de manera
normal en suelo libre. Estos microorganismos, pueden favorecer el
desarrollo y protección de especies de cultivo.
Generalmente los estudios dirigidos hacia la
biodegradación se han realizado bajo condiciones de anaerobiosis en
procesos destinados a la biorremediación (Bouallagui et al.,
2004), como la biodegradación de aceites vegetales y sus
intermedios metabólicos en sedimentos de agua dulce enriquecidos
con aceite (Li et al., 2005), pero no exclusivamente. De
acuerdo con Eusebio et al. (2005), nuestro estudio se ha
realizado en condiciones aerobias lo que puede generar alternativas
a los diferentes métodos de biodegradación, en especial los
empleados con efluentes tratados de la industria
agroalimentaria.
Para Shuichi et al. (2001), el compostaje
es un proceso anaerobio de la materia orgánica. El papel de las
bacterias en el compost depende de la variedad de enzimas
secretadas por dichos microorganismos. La aplicación de técnicas de
DNA recombinante para la transformación puede incrementar el
repertorio de enzimas digestivas de estas bacterias y requerirá
información de sus sistemas genéticos. En este sentido el
biocompost en condiciones de anaerobiosis ha sido empleado para la
generación de metano como fuente de energía (Bouallagui et
al., 2004). Estas emisiones pueden producir también daños en
las instalaciones y alteraciones en el medio ambiente. Sin
embargo, este problema se minimiza en condiciones de aerobiosis como
es nuestro caso. A su vez la eficacia de biotransformación
Bacillus es mayor en condiciones de aerobiosis, motivo por
el cual fijamos estas condiciones para nuestro ensayo.
Claims (7)
1. Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507
(CECT 7313), microorganismo, género Bacillus,
caracterizado por su capacidad degradadora de residuos
oleosos de la industria alimentaria y hostelera, debida a su
capacidad de crecimiento en las agua oleosas ricas en polifenoles y
a su capacidad de biotransformación de los propios polifenoles y
de las grasas mediante sus actividades enzimáticas esterasa,
esterasa lipasa y lipasa.
2. Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507
(CECT 7313), según reivindicación 1, donde los polifenoles de las
aguas oleosas en el que se desarrolla y actúa este microorganismo
son tirosol, ácido vaníllico, ácido protocatequico, ácido caféico,
catecol y metil-catecol.
3. Uso de Bacillus amyloliquefaciens Bam
2507 (CECT 7313), según reivindicaciones 1 y 2, en la
biodegradación de residuos oleosos de la industria alimentaria y
hostelera.
4. Uso de Bacillus amyloliquefaciens Bam
2507 (CECT 7313), según reivindicación 3, en la eliminación de
polifenoles y grasas de las aguas oleosas de la industria
alimentaria y hostelera.
5. Procedimiento para la aplicación del
microorganismo Bacillus amyloliquefaciens Bam 2507 (CECT
7313) a residuos tóxicos o peligrosos de aceites vegetales usados,
a los fines de las reivindicaciones anteriores, consistente en las
siguientes operaciones: 1) emulsión del aceite en decantador y
separación de la fase acuosa-oleosa de la orgánica
mediante flotación con vapor de agua, realizada por inyección de
vapor de agua desde el fondo del decantador, 2) corrección del pH
de la fase acuosa-oleosa hasta un valor comprendido
entre 5 y 7,5, y 3) inoculación del microorganismo para
biotransformación del residuo.
6. Procedimiento para la aplicación del
microorganismo Bacillus amyloliquefaciens Bam
2507(CECT 7313) a residuos tóxicos o peligrosos de aceites
vegetales usados, según reivindicación 5, caracterizado
porque la corrección del pH de la fase
acuosa-oleosa se realiza mediante adición de
hidróxido sódico (NaOH), en concentración y volumen variable en
función de la cantidad y composición del residuo.
7. Procedimiento para la aplicación del
microorganismo Bacillus amyloliquefaciens Bam
2507(CECT 7313) a residuos tóxicos o peligrosos de aceites
vegetales usados, según reivindicación 5, caracterizado
porque la inoculación del microorganismo en la fase
acuosa-oleosa se realiza a partir de un cultivo
previo en medio líquido LB a 37ºC durante 24 h, hasta alcanzar una
concentración superior a 5 x 10^{11} ufc/ml (unidades formadoras
de colonias por mililitro), verificada por el método de recuento en
placa, e inoculado a razón de 500 ml de cultivo por metro cúbico
de residuo.
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