ES2307561T3

ES2307561T3 - STABILIZED LIQUID PREPARATION OF THE ACTIVATING PROTEASE OF FACTOR VII OF THE SANGUINEA COAGULATION, OR ITS PROENZYME.

Info

Publication number: ES2307561T3
Application number: ES01129605T
Authority: ES
Inventors: Jurgen Roemisch; Annette Feussner; Christian Kannemeier; Hans-Arnold Stoehr
Original assignee: CSL BEHRING GmbH; CSL Behring GmbH Deutschland
Current assignee: CSL BEHRING GmbH; CSL Behring GmbH Deutschland
Priority date: 2001-01-08
Filing date: 2001-12-12
Publication date: 2008-12-01
Anticipated expiration: 2021-12-12
Also published as: ATE397939T1; DE10131404A1

Abstract

A stabilized liquid formulation (A), comprises: (A) blood coagulation Factor VII activating protease (or its pro-enzyme) (I); and (B) at least one aminoacid or derivative (II). A stabilized liquid formulation (A), comprises: (A) blood coagulation Factor VII activating protease (or its pro-enzyme) (I); and (B) at least one aminoacid or derivative (II) selected from ornithine. diaminopimelic acid, agmatine, creatine, guanidinoacetic acid, acetylornithine, citrulline, arginino-succinic acid, tranexamic acid and iota -aminocaproic acid (including their salts or derivatives).

Description

Preparación líquida estabilizada de la proteasa activadora del Factor VII de la coagulación sanguínea, o de su proenzima.Stabilized liquid protease preparation activator of blood coagulation factor VII, or its proenzyme

Objeto de la invención es una preparación líquida estabilizada de la proteasa activadora del Factor VII de la coagulación sanguínea o de su proenzima, que es estable al almacenamiento durante varios meses, sin mostrar pérdidas de actividad o alteraciones esenciales del producto.Object of the invention is a preparation stabilized liquid of Factor VII activating protease blood clotting or its proenzyme, which is stable at storage for several months, without showing losses of essential activity or alterations of the product.

Por la memoria descriptiva de la publicación de patente alemana 199 03 693 se conocen una proteasa para la activación del Factor VII de la coagulación sanguínea, un proceso para su obtención, para su detección y para su desactivación, así como preparaciones de medicamentos que contienen esta proteasa o su proenzima. Se informa también en dicho lugar que esta proteasa y su proenzima después de enriquecimiento o aislamiento experimentan una pérdida rápida de actividad, que se ha observado en una solución que contiene Tris 20 mM, NaCl 0,15 M a un valor de pH de 7,5. Para la estabilización se propuso en dicho documento una preparación, que se produceFor the descriptive memory of the publication of German patent 199 03 693 a protease for the Activation of Factor VII of blood coagulation, a process for its obtaining, for its detection and for its deactivation, as well as preparations of medications that contain this protease or its proenzyme It is also reported in this place that this protease and its proenzyme after enrichment or isolation experience a rapid loss of activity, which has been observed in a solution that It contains 20 mM Tris, 0.15 M NaCl at a pH value of 7.5. For the stabilization was proposed in said document a preparation, which produces

a)to): por adición de uno o más aminoácidos en una cantidad de 0,01 mol/l, preferiblemente más de 0,05 mol/l; y/oby addition of one or more amino acids in an amount of 0.01 mol / l, preferably more than 0.05 mol / l; I

b)b): por adición de un azúcar o de una combinación de azúcares diferentes con una concentración total mayor que 0,05 g/ml, preferiblemente mayor que 0,2 g/ml y/oby adding a sugar or a combination of different sugars with a total concentration greater than 0.05 g / ml, preferably greater that 0.2 g / ml and / or

c)C): por adición de una o más sustancias, que son capaces de complejar iones calcio, como citrato, oxalato, ácido etilenodiaminatetraacético, etc.by addition of one or more substances, which are capable of complexing ions calcium, such as citrate, oxalate, ethylenediaminetetraacetic acid, etc.

En este caso, la preparación se ajusta en un campo de pH de 3,5 a 8,0, preferiblemente en un campo de pH de 4,0 a 6,8.In this case, the preparation is adjusted in a pH range 3.5 to 8.0, preferably in a pH range 4.0 to 6.8.

Aunque por la aplicación de los agentes mencionados anteriormente se alcanzan ya éxitos de estabilización considerables, se ha considerado necesario buscar estabilizadores y mezclas de estabilizadores adicionales, que sean apropiados para el empleo en preparaciones líquidas de la proteasa mencionada y de su proenzima y asegurarse de que las preparaciones de este tipo pueden almacenarse durante periodos de tiempo prolongados, que pueden ser de varios meses, sin pérdidas esenciales de actividad o cualesquiera otras alteraciones del producto.Although by the application of the agents mentioned above are already achieved stabilization successes considerable, it has been considered necessary to look for stabilizers and mixtures of additional stabilizers, which are appropriate for the use in liquid preparations of the aforementioned protease and its proenzyme and make sure that preparations of this type can be stored for extended periods of time, which can be of several months, without essential losses of activity or any Other product alterations.

Se ha encontrado ahora que una preparación líquida de la proteasa activadora del Factor VII de la coagulación sanguínea o de su proenzima se estabiliza durante periodos de tiempo prolongados, es decir durante varios meses, cuando la misma contiene uno o más compuestos seleccionados del grupo de ornitina, ácido diaminopimélico, agmatina, creatina, ácido guanidinacético, acetilornitina, citrulina, ácido argininosuccínico, ácido tranexámico y ácido \varepsilon-aminocaproico o de una de sus sales y derivados y exhibe un valor de pH entre 2,0 y 8,0, preferentemente de 2,5 a 6,8. Asimismo, es satisfactoriamente aplicable un intervalo de pH de 3,5 a 6,8.It has now been found that a preparation coagulation factor VII activating protease fluid blood or its proenzyme stabilizes for periods of time prolonged, that is to say for several months, when the same contains one or more compounds selected from the ornithine group, diaminopimelic acid, agmatine, creatine, guanidinacetic acid, acetylornitin, citrulline, argininosuccinic acid, acid tranexamic and ε-aminocaproic acid or of one of its salts and derivatives and exhibits a pH value between 2.0 and 8.0, preferably 2.5 to 6.8. It is also satisfactorily applicable a pH range of 3.5 to 6.8.

La estabilidad de una preparación de este tipo puede mejorarse todavía más, cuando la misma contiene adicionalmenteThe stability of such a preparation can be further improved, when it contains further

a)to): uno o más detergentes;one or more detergents;

b)b): uno o más azúcares;one or more sugars;

c)C): uno o más aminoácidos; y/oone or more amino acids; I

d)d): proteínas, preferiblemente albúmina, gelatina, fibronectina y vitronectina o proteínas análogas, y/oproteins, preferably albumin, gelatin, fibronectin and vitronectin or similar proteins, I

e)and): uno o más compuestos, que son capaces de complejar los iones calcio.one or more compounds, which are capable of complexing ions calcium.

Como detergentes se emplean uno o más agentes tensioactivos iónicos o no iónicos, que se conocen por ejemplo bajo el nombre comercial Tween® y Triton®. Los mismos se emplean por regla general en concentraciones comprendidas entre 0,001 y 0,5% en peso.As detergents, one or more agents are used ionic or non-ionic surfactants, which are known for example under the trade name Tween® and Triton®. They are used by general rule in concentrations between 0.001 and 0.5% in weight.

La proteasa o su proenzima se emplean de acuerdo con la invención en forma liofilizada. Después de la disolución del liofilizado, la actividad se mantiene en comparación con la solución antes de la liofilización en proporción mayor que 90%. La proteasa y su proenzima se mantienen en solución de modo particularmente satisfactorio, cuando la fuerza iónica de la solución alcanza un valor mayor que 10 mSi. Para ello debe añadirse una cantidad suficiente de una sal, por ejemplo sal común. La fuerza iónica es particularmente de gran importancia cuando se emplean concentraciones de proteasa superiores a 0,5 mg/ml.Protease or its proenzyme are used according with the invention in lyophilized form. After the dissolution of the lyophilized, the activity is maintained compared to the solution before lyophilization in proportion greater than 90%. The protease and its proenzyme are kept in solution so particularly satisfactory, when the ionic strength of the solution reaches a value greater than 10 mSi. To do this you must add a sufficient amount of a salt, for example common salt. The ionic strength is particularly important when it employ protease concentrations greater than 0.5 mg / ml.

Entre los azúcares a emplear para la estabilización de acuerdo con la invención pueden citarse sobre todo glucosa, arabinosa o manosa. Los mismos pueden emplearse en cantidades de 5 a 100 mM.Among the sugars to be used for stabilization according to the invention can be cited above all glucose, arabinose or mannose. They can be used in amounts from 5 to 100 mM.

Como aminoácidos pueden añadirse a la preparación líquida sobre todo arginina, lisina o glicina. Como compuestos complejantes de los iones calcio son aplicables, además de citratos, oxalatos y sales del ácido etilenodiaminatetraacético.As amino acids they can be added to the Liquid preparation especially arginine, lysine or glycine. How complexing compounds of calcium ions are also applicable of citrates, oxalates and acid salts ethylenediaminetetraacetic.

Las preparaciones líquidas así obtenidas de la proteasa activadora del Factor VII de la coagulación sanguínea o de su proenzima son apropiadas para la realización de una pasteurización, de una nanofiltración o de una desactivación de virus por medio de vapor y calor fuerte. Las mismas pueden emplearse como agente de coagulación de la sangre sea solas o junto con las sustancias que aumentan la actividad de la proteasa tales como heparina o sustancias análogas a heparina, como sulfato de heparano, pudiendo añadirse adicionalmente a estos agentes el Factor VII en su forma inactiva. El empleo de un agente de este tipo puede por ejemplo estar indicado con aprovechamiento de su actividad de bypass de FVIII (FEIBA), cuando existen incompatibilidades frente al Factor VIII y/o el Factor IX y/o el Factor XI y/o las proteínas de la fase de contacto, como Factor XII por ejemplo debido a la presencia de anticuerpos, o cuando están presentes situaciones carenciales de otro tipo. La activación del Factor VIII puede realizarse luego, sea in vivo, en plasma, en fracciones enriquecidas o por influencia del Factor VII purificado. Asimismo puede realizarse la utilización ex vivo para la profilaxis general de las hemorragias o para corte de hemorragias con la preparación líquida correspondiente a la invención.The liquid preparations thus obtained from the activating protease of Factor VII of blood coagulation or its proenzyme are suitable for pasteurization, nanofiltration or virus deactivation by means of steam and strong heat. They can be used as a blood clotting agent either alone or together with substances that increase protease activity such as heparin or substances similar to heparin, such as heparan sulfate, and Factor VII may be added to these agents in addition. inactive form. The use of such an agent may, for example, be indicated by taking advantage of its FVIII bypass activity (FEIBA), when there are incompatibilities against Factor VIII and / or Factor IX and / or Factor XI and / or proteins of the contact phase, such as Factor XII for example due to the presence of antibodies, or when other types of deficiency situations are present. Activation of Factor VIII can then be carried out, either in vivo , in plasma, in enriched fractions or under the influence of purified Factor VII. It can also be used ex vivo for general prophylaxis of hemorrhages or for cutting hemorrhages with the liquid preparation corresponding to the invention.

Las preparaciones líquidas correspondientes a la invención pueden emplearse también sin embargo en el caso de enfermedades o complicaciones tromboembólicas como en el caso de las trombosis venosas de las piernas, el infarto de miocardio o derrames cerebrales.The liquid preparations corresponding to the invention can also be used however in the case of thromboembolic diseases or complications as in the case of venous thrombosis of the legs, myocardial infarction or strokes

Por la memoria descriptiva de la patente alemana 199 03 693 se sabe que la proteasa activadora del Factor VII de la coagulación sanguínea puede utilizarse para la activación endógena u exógena de activadores del plasminógeno como de la prouroquinasa o de la sctPA. Debido a esta propiedad puede emplearse no sólo la proteasa activadora del Factor VII para la profilaxis o terapia de enfermedades tromboembólicas, sino también de hecho en combinación con activadores del plasminógeno monocatenarios o bicatenarios o anticoagulantes. El efecto reforzador de los activadores del plasminógeno del activador del Factor VII es promovido particularmente por calcio y/o heparina y sustancias análogas a heparina como sulfato de dextrano. Debido a la acción fibrinolítica particular, las preparaciones correspondientes a la invención que contienen la proteasa activadora del Factor VII de la coagulación sanguínea pueden emplearse para el tratamiento de enfermedades que son provocadas por trombos que contienen fibrina. A éstas pertenecen también los procesos de curación de las heridas. En este caso la proteasa mencionada puede administrarse por vía intravenosa o local, subcutánea, intradérmica, intramuscular o en el caso de lesiones o heridas también por vía tópica o unidas a una matriz de soporte apropiada. No sólo puede emplearse para ello la proteasa o su proenzima obtenidas a partir de líquidos corporales tales como sangre o plasma, sino también proteasa recombinante o producida transgénicamente.For the descriptive memory of the German patent 199 03 693 it is known that the activating protease of Factor VII of the blood coagulation can be used for endogenous activation or exogenous plasminogen activators such as prourokinase or of the sctPA. Due to this property, not only the Factor VII activating protease for prophylaxis or therapy of thromboembolic diseases, but also in fact in combination with single chain or double stranded plasminogen activators or anticoagulants The reinforcing effect of the activators of Factor VII activator plasminogen is promoted particularly for calcium and / or heparin and substances analogous to heparin as dextran sulfate. Due to fibrinolytic action in particular, the preparations corresponding to the invention which contain the coagulation factor VII activating protease blood can be used to treat diseases that they are caused by thrombi that contain fibrin. These wound healing processes also belong. In this case the protease mentioned can be administered intravenously or local, subcutaneous, intradermal, intramuscular or in the case of lesions or wounds also topically or attached to a matrix of appropriate support. Not only can protease or its proenzyme obtained from body fluids such as blood or plasma, but also recombinant or produced protease transgenically

Claims

1. Stabilized liquid preparation of the activating protease of Factor VII of blood coagulation or its proenzyme, characterized in that

a)to): contiene uno o más compuestos seleccionados del grupo ornitina, ácido diaminopimélico, agmatina, creatina, ácido guanidinacético, acetilornitina, citrulina, ácido argininosuccinico, ácido tranexámico y ácido \varepsilon-aminocaproico o sus sales y derivados ycontains one or more compounds selected from the group ornithine, diaminopimelic acid, agmatine, creatine, guanidinacetic acid, acetylornitin, citrulline, acid argininosuccinic, tranexamic acid and acid ε-aminocaproic acid or its salts and derivatives Y

b)b): exhibe un valor de pH entre 2,0 y 8,0.exhibits a pH value between 2.0 and 8.0.

2. Stabilized liquid preparation according to claim 1, characterized in that it additionally contains

a)to): uno o más detergentes;one or more detergents;

b)b): uno o más azúcares;one or more sugars;

c)C): uno o más aminoácidos; y/oone or more amino acids; I

d)d): uno o más compuestos, que son capaces de complejar los iones calcio.one or more compounds, which are capable of complexing ions calcium.

3. Stabilized liquid preparation according to claims 1 and 2, characterized in that it contains one or more ionic or non-ionic detergents.

4. Stabilized liquid preparation according to claims 1 to 3, characterized in that it contains detergents in an amount of 0.001 to 0.5% by weight.

5. Stabilized liquid preparation according to claims 1 to 4, characterized in that it is adjusted by adding salt to an ionic strength of> 10 mSi.

6. Stabilized liquid preparation according to claims 1 to 5, characterized in that it contains the protease or its proenzyme in lyophilized form.

7. Stabilized liquid preparation according to claims 1 to 6, characterized in that the protease or its proenzyme is present in an amount of> 0.5 mg / ml.

8. Use of a liquid according to claim 1 for the production of a pharmaceutical formulation.

9. Use of a liquid according to claim 1 for the production of a diagnostic reagent.