ES2304295B2 - Metodo para la micropropagacion de iris boissieri y sus aplicaciones. - Google Patents
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Abstract
Método para la micropropagación de Iris
boissieri y sus aplicaciones.
La presente invención se refiere a un método o
procedimiento para la micropropagación de Iris boissieri
Henriq., así como sus distintas aplicaciones, tales como la
obtención de material in vitro a partir de pocas plantas
madre; conservación ex situ de la especie con riesgo mínimo
de alteraciones genéticas; multiplicación hortícola de la especie a
partir de un callo; conservación de germoplasma in vitro; y
obtención de plantas libres de enfermedades víricas a partir de
meristemos.
Description
Método para la micropropagación de Iris
boissieri y sus aplicaciones.
La presente invención se encuadra dentro del
campo técnico de la biología vegetal y en concreto se refiere a un
método o procedimiento para la micropropagación de Iris
boissieri Henriq., así como sus posibles aplicaciones.
Iris boissieri Henriq. es una especie
geófita que presenta bulbo de túnica membranosa.
Su hábitat son suelos poco profundos,
desarrollados sobre rocas de granodioritas, a una altitud de entre
500 a 1.450 m.
Esta especie se encuentra escasamente
distribuida, en Galicia y Norte de Portugal. En Galicia está
presente en el parque natural de Baixa Limia Serra do Xurés y
su entorno (Ourense) y la Serra do Courel
(Lugo), hay zonas donde solamente en el pasado se han
encontrado algunos ejemplares como en el Monte Pindo (A
Coruña), Serra de Aneares y Montes do Oribio
(Lugo) donde sin embargo no se ha vuelto a localizar la
especie en los últimos años. En el norte de Portugal se distribuye
por las sierras que hacen frontera con el suroeste de Ourense.
De forma generalizada se ha detectado un
descenso importante de sus poblaciones, de hecho existen zonas en
las que no se ha vuelto a localizar esta especie en los últimos
años. Florece en junio. (Bañares A., Blanca G., Güemes J.,
Moreno J.C. & Ortiz S., eds. 2004. Atlas y libro rojo de la
flora vascular amenazada de España. Dirección general de
conservación de la naturaleza. Madrid, 1.069 pp).
La formación de sus estructuras vegetativas,
implica que la propagación asexual comienza con la iniciación de
bulbillos sobre la placa basal en las axilas de las escamas
bulbares.
Se ha observado que en este período inicial, que
generalmente dura una sola estación de crecimiento, los bulbillos
son casi inadvertibles ya que se encuentran dentro de otro bulbo
mayor en crecimiento, el cual se desintegra al florecer, dejando
unos pocos bulbos nuevos de tamaños diferentes que se iniciaron en
la estación anterior. Si alguno llega al tamaño adecuado puede
florecer en la siguiente estación, pero los que no lo alcanzan,
requieren varios años de desarrollo antes de su floración,
dificultando su propagación agámica.
Su forma principal de propagación es por
hijuelos, los cuales permanecen adheridos al bulbo progenitor
durante varias temporadas, ya que la reproducción sexual se
encuentra seriamente limitada.
Los estudios previos realizados, llevan a pensar
que las semillas son recalcitrantes y con problemas de viabilidad,
pudiéndolas clasificar, a falta de estudios posteriores más
profundos, como de corta duración y con letargo de tipo químico por
cubiertas y morfológicos por causa embrionaria. (Iglesias, I,
Feijoó, M. C. & Ortiz, S., 2000. Conservación Vegetal
5:1-2).
A los problemas de extinción de esta especie,
inherentes a las condiciones morfológicas propias de la misma y de
las condiciones de su hábitat natural, se suma la presión que
ejerce el hombre que no solo destruye el mismo sino que además
somete a las poblaciones a una recolección incontrolada de
ejemplares como sucede con otros numerosos tipos de bulbosas.
Hasta el momento, no se conoce ningún método
para la micropropagación de Iris boissieri, existiendo por
tanto, la necesidad de uno que permita realizarlo.
Por tanto, el objetivo de la presente invención
consiste en desarrollar técnicas de propagación sexual y asexual,
que permitan la obtención de numerosas plantas, bien con distintos
genotipos, bien clonadas, con una doble finalidad: suministro de
bulbos para repoblación o translocación y un fin comercial, ya que
los integrantes del género Iris son especies conocidas desde la
antigüedad por su interés desde el punto de vista fitoquímico, ya
que son productoras de flavonas, sesquiterpenos, fenoles,
terpenoides, etc. Además, tienen una gran importancia a nivel
ornamental ya que su morfología floral y sus peculiares exigencias
en cuanto a condiciones climáticas, convierten a esta especie en una
firme candidata para la jardinería comercial. Por otro lado no se
debe olvidar su importancia como planta simbólica del Parque do
Xurés.
Un aspecto de la presente invención, proporciona
un método para la micropropagación de Iris boissieri
Henriq., comprendiendo dicho método las siguientes etapas, las
cuales serán descritas de forma más detallada en el modo de
realización:
- a)
- Limpieza de las plantas madre salvajes y obtención del material que se va a establecer;
- b)
- Aislamiento y establecimiento del material;
- c)
- Multiplicación de plántulas y bulbillos obtenidos en la etapa anterior;
- d)
- Bulbificación del todo el material obtenido en la etapa anterior;
- e)
- Enraizamiento; y
- f)
- Aclimatación y paso a tierra.
\vskip1.000000\baselineskip
Otro aspecto de la presente invención está
relacionado con las posibles aplicaciones que presenta el método de
micropropagación anteriormente mencionado, tales como:
- -
- la obtención de material in vitro a partir de pocas plantas madre;
- -
- la conservación ex situ de la especie con riesgo mínimo de alteraciones genéticas;
- -
- la multiplicación hortícola de la especie a partir de un callo;
- -
- la conservación de germoplasma in vitro; y
- -
- la obtención de plantas libres de enfermedades víricas a partir de meristemos.
\vskip1.000000\baselineskip
La exposición que a continuación se relaciona,
se describe como soporte de aspectos particulares de la invención y
en ningún caso para limitar el alcance de la misma.
El método anteriormente mencionado, para la
micropropagación de Iris boissieri Henriq., comprende las
siguientes etapas:
\vskip1.000000\baselineskip
La finalidad de esta primera etapa consiste en
la obtención del material que se va a establecer in
vitro.
Para esto, se retiran los frutos y además se
limpian los bulbos de tierra, eliminándose las capas externas secas
de color marrón del bulbo.
A continuación, guardan los frutos y bulbos en
cámara fría, oscuridad y ambiente húmedo, ambos espolvoreados con
el fungicida Captosán®, manteniéndose durante 2 meses a una
temperatura de 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
En esta segunda etapa se aíslan por un lado las
semillas de los frutos y por otro lado las capas externas
engrosadas, placa basal y meristemos de los bulbos (es decir, los
explantos).
Tras realizar dicho aislamiento, se
establecerán, en condiciones estériles, en tubos de cristal para
cultivo in vitro tanto las semillas como los explantos
mencionados anteriormente.
Para poder trabajar en estas condiciones, se
debe desinfectar el material aislado, tal y como a continuación se
describe:
\vskip1.000000\baselineskip
Se dejan las semillas durante 72 h bajo agua
corriente del grifo, a temperatura de laboratorio, y a continuación
se pasan las semillas a una solución en agua estéril al 5% p/v de
fungicida Captán con 10% v/v de jabón líquido comercial tipo Fairy®,
sometiéndolas durante 15 min. a ultrasonidos.
A continuación se trasladan las semillas a una
solución de hipoclorito sódico aproximadamente al 2,63% v/v
obtenida a partir de una lejía comercial, con un 10% v/v de jabón
Fairy®, y sometida durante 15 min. a ultrasonidos, tras lo cual se
pasarán por 3 baños de agua estéril de 10 min. cada uno.
Antes de la inoculación de semillas en el medio
de establecimiento, se les practica a estas un corte en el extremo
opuesto al del embrión.
Se desinfectan los bulbos manteniéndolos bajo
agua corriente del grifo durante 8 h-24 h.
Posteriormente, en una solución de agua estéril
al 5% p/v de Captán con 10% v/v de jabón Fairy®, se dejan secar y
se procede a una inmersión rápida en etanol al 96% v/v, tras lo
cual se flamean repitiéndose la operación tres veces.
A continuación, se introducen los bulbos en una
solución aproximadamente del 2,63% v/v obtenida a partir de una
lejía comercial, con un 10% v/v de jabón Fairy® y sometida durante
15 min. a ultrasonidos, tras lo cual se bañan con agua estéril y se
aíslan las zonas citadas (capas externas, placa basal y meristemo
del bulbo).
Las capas externas del bulbo se cortan, en
condicionas estériles, en porciones cuadrangulares de
aproximadamente 0,5 cm x 0,5 cm; la placa basal se pone entera o se
parte en dos, y el meristemo se pone tal cual.
Tras la desinfección, las semillas y cada pieza
del material aislado de las capas externas y la placa basal de los
bulbos, se inoculan aisladamente dentro de tubos para cultivo in
vitro de 50 mL con 15 mL de un medio con los macro y
micronutrientes de MS (Murashige & Skoog, 1962, Physiol.
Plant., 15, 473-497.), autoclavados a 121ºC y
103,5 kPa durante 15 min:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
al que se
añade:
Por otra parte, los meristemos se asilan del
bulbo tal y como a continuación se describe. Tras despojar al bulbo
de sus gruesas capas exteriores, y de la mayoría de la placa basal,
lo que queda es el meristemo rodeado de primordios foliares, los
cuales son eliminados excepto el más pequeño que rodea al
meristemo.
Por tanto, una vez aislado así el meristemo, con
un primordio foliar y un poco de tejido de la placa basal, se
coloca en el medio de inoculación citado anteriormente, pero además
dicho medio se enriquece con 1 mg/L de ácido
1-naftalén acético (NAA).
A continuación, los tubos para el cultivo in
vitro mencionados anteriormente se guardan en cámaras de
cultivo, en las siguientes condiciones:
- En semillas:
- A oscuridad constante y un termoperíodo de 15 \pm 2ºC durante 16 h y 10 \pm 2ºC, durante 8 h.
- En capas externas, placa basal y meristemos
del bulbo:
- Con un fotoperíodo de luz de 16 h y oscuridad de 8 h., una intensidad lumínica de 38 \mumol.m^{-2}.s^{-2}, mediante tubos fluorescentes de luz fría.
- El termoperíodo es de 18 \pm 2ºC durante las 16 h de luz, y de 10 \pm 2ºC en oscuridad.
- Todo el material vegetal se mantiene en las condiciones citadas anteriormente durante un período de 12 semanas, para asegurar de que se detecta bien la contaminación, eliminando aquellos tubos en los que aparezca contaminación.
- A las 6 semanas se pasan los tubos no contaminados a un medio fresco, en iguales condiciones que los anteriores.
Tras la eliminación del material contaminado, se
mantiene el material vegetal durante un periodo de 4 semanas en el
medio de cultivo que a continuación se describe.
Es un medio de cultivo dispensado en tarros de
cristal de 500 mL, con 100 mL de medio de cultivo cada uno, en
condiciones similares a las de la etapa b) autoclavados a 121ºC y
103,5 kPa durante 20 min, y con los siguientes cambios:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
al que se
añade:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Todo el material vegetal obtenido en la etapa
anterior, se mantiene durante un periodo de 4 semanas en la
oscuridad, en un medio de cultivo en condiciones similares a las de
la etapa c):
\vskip1.000000\baselineskip
con:
y con los siguientes
cambios:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los bulbos con un tamaño de entre 1,2 cm a 2 cm
de diámetro, se dejan en el mismo medio para la siguiente etapa.
Aquellos bulbos cuyo diámetro es inferior a 1,2 cm, se pasan a un
medio fresco con idénticas condiciones durante otras 4 semanas, para
que estos adquieran el tamaño adecuado.
\vskip1.000000\baselineskip
Los bulbos con un diámetro entre 1,2 cm y 2 cm
obtenidos en la etapa anterior, pasan al mismo medio:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con otros
componentes:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
pero sin agar (medio líquido) ni
reguladores y como soporte del cultivo se usa lana de roca para
estaquillado de Grodán-Ibérica® lavada y autoclavada
durante 30 min a 121ºC y 103,5 kPa, a . 18ºC-16 h
Luz / 10ºC-8 h
Oscuridad.
A continuación, se mantienen los bulbos durante
8 semanas, tiempo en el que emitirán raíces, y cuando estas
alcanzan aproximadamente 0.3 cm de longitud el bulbo se pasa a la
siguiente etapa consistente en su aclimatación y paso a tierra.
\vskip1.000000\baselineskip
Se lavan los bulbos bajo el agua corriente del
grifo, retirándose la lana de roca salvo la que quede enredada
entre las raíces.
Se colocan los bulbos en una cámara de
climatización a 20 \pm 2ºC de temperatura durante 16 h de luz y
10\pm 2ºC durante 8 h a la oscuridad y espolvoreados con
Captosán®, en macetas de turba con sustrato seco Composana® hasta
la total acomodación de los bulbos bajo campanas de plástico, que
se irán retirando a medida que las capas externas de los bulbos se
endurecen, es decir, hasta que estos adquieran consistencia
resistente y se sequen ligeramente sin pudrirse, momento en que se
retirará la campana. Este proceso dura uno o dos meses
aproximadamente.
Una vez que los ápices vegetativos comienzan a
desarrollarse, se pasan las macetas ligeramente humedecidas a
tierra, en un emplazamiento provisional o definitivo, donde los
bulbos florecerán y formarán bulbos hijos en tierra.
El presente método para la micropropagación de
Iris boissieri Henriq tiene distintas aplicaciones en
función del medio de cultivo que se utilice, y siempre partiendo del
material obtenido en la etapa d) referida a la bulbificación.
Una de las aplicaciones, consistiría en
micropropagar dicha especie para la conservación ex situ de
la misma, ya que como se ha comentado anteriormente, esta especie se
encuentra en peligro de extinción. Esta aplicación se enfoca hacia
la obtención del mayor número de plantas, pero con el mínimo riesgo
de que existan alteraciones genéticas debido al empleo de
reguladores. Para lo cual, se parte de los bulbos obtenidos en la
etapa d) y en concreto aquellos cuyo diámetro es inferior a 1,2 cm.
Dichos bulbos se pasan a un medio de cultivo fresco con la
formulación completa de MS:
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\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
o bien la formulación empleada en
la etapa
d):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con:
carente de reguladores de
crecimiento y con 2 gr/L de CA con un fotoperíodo de luz de 16 h y
oscuridad de 8 h., e intensidad lumínica 38
\mumol.m^{-2}.s^{-2} (tubos fluorescentes de luz fría). El
termoperíodo es de 18 \pm 2ºC durante las 16 h de luz, y de 10
\pm 2ºC durante las 8 h de oscuridad, a lo largo de 8 semanas.
Tras esta limpieza de reguladores en el material in vitro,
se continúa el proceso en iguales condiciones hasta tener suficiente
material libre de la influencia de los reguladores, momento en el
cual una parte de las plantitas in vitro o vitroplantas
obtenidas se pasan a las etapas d) a f), tal como se ha descrito
previamente.
Otra de las aplicaciones del presente método de
micropropagación sería para la multiplicación hortícola de la
especie a partir de un callo (masa amorfa de células tisulares
producidas a partir de tejidos parenterales), al cual se fuerza,
mediante las condiciones de cultivo, a producir vitroplantas.
Este proceso implica inestabilidad genética que
incluso podría traducirse en alteraciones fenotípicas, que debido a
la finalidad ornamental de esta aplicación en concreto, no sería un
inconveniente sino todo lo contrario.
Se parte del material obtenido directamente en
la etapa d), bulbos que tienen un diámetro entre 1,2 y 2 cm, que se
ponen en un medio de cultivo completo con los macro y
micronutrientes de MS (1962) y con el doble de concentración de
vitaminas:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con el doble de
vitaminas:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
al que se añade
además:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
De este medio se dispensan 15 mL en placas Petri
de 9 cm de diámetro, en condiciones estériles.
Una vez los tejidos inoculados originan callo,
se separan aquellas secciones con un tamaño que oscila entre 0,5 y
1,0 cm de lado, se pasan a un medio fresco en las mismas
condiciones que las descritas anteriormente, pero en donde se
sustituyen los anteriores reguladores de crecimiento por 5,0 mg/L
de BA, durante 8 semanas a 18 \pm 2ºC y oscuridad constante. Tras
este tiempo, las pequeñas plantas se separan y se pasan al mismo
medio y condiciones que en la etapa d), continuándose con el resto
de las fases hasta finalizar el proceso.
Otra aplicación del presente método
reivindicado, sería la conservación de germoplasma in vitro.
Consiste en la comprobación de la capacidad que presentan los bulbos
obtenidos en la etapa d), es decir aquellos bulbos que tienen un
diámetro entre 1,2 y 2 cm, conservados en la oscuridad a 4 \pm 2ºC
durante 24 meses, para retomar las etapas c) a f).
El material vegetal, tras el citado proceso de
conservación, se pasa a las mismas condiciones de la etapa c), y se
continúa con éxito hasta la última etapa f).
Finalmente, otra aplicación que tiene el
presente método es la obtención de plantas libres de virus y
viroides, a partir de los meristemos. Para ello, se aísla el
meristemo del bulbo, tras el tratamiento de desinfección de los
mismos descrito en la etapa b).
Tal y como se ha descrito anteriormente en la
etapa b), el aislamiento consiste en que tras despojar al bulbo de
sus gruesas capas externas y de la mayor parte de la placa basal,
quedará un meristemo rodeado de primordios foliares, los cuales
serán eliminados salvo el más pequeño que rodee al meristemo.
Una vez aislado dicho meristemo con un primordio
foliar y un poco de tejido de la placa basal, se coloca en el medio
de inoculación citado para las semillas y explantos.
al que se
añaden:
pero enriquecido con 1 mg/L de
NAA.
A continuación, este material vegetal se pasa a
las mismas condiciones de la etapa c), y se continúa con éxito hasta
la última etapa f).
Claims (15)
1. Método para la micropropagación de Iris
boissieri Henriq., que comprende las etapas de:
- a)
- obtención del material vegetal (semillas, capas externas, placa basal y meristemo del bulbo) a establecer in vitro;
- b)
- aislamiento y posterior establecimiento de dicho material vegetal en un medio de cultivo con los macro y micronutrientes de MS (Murashige & Skoog), al que se añade mioinositol (100 mg/L), tiamina HCl (0,4 mg/L), carbono activo (2 gr/L), sacarosa (30 g/L), y agar (10 g/L), a un pH de 5,6-5,8;
- c)
- multiplicación del material vegetal obtenido en la etapa anterior (plántulas y bulbillos), en un medio de cultivo con los macro y micronutrientes de MS, al que se añade mioinositol (100 mg/L), tiamina HCl (0,4 mg/L), sacarosa (30 g/L), agar (10 g/L), y los reguladores de crecimiento ácido 1-naftalén acético (NAA) (0,1 mg/L) y 6-bencil adenina (BA) (0,5 mg/L), a un pH de 5,6-5,8;
- d)
- bulbificación de plántulas y bulbillos en un medio de cultivo con los macro y micronutrientes de MS, al que se añade mioinositol (100 mg/L), tiamina HCl (0,4 mg/L), sacarosa (30 g/L), agar (6 g/L), y los reguladores de crecimiento kinetina (2 mg/L) y ácido 1-H-indol-3-acético (IAA) (2 mg/L);
- e)
- enraizamiento de los bulbos obtenidos en la etapa anterior, con un diámetro mayor de 1,2 cm., en el mismo medio de cultivo que en la etapa d) pero sin agar ni reguladores de crecimiento, usando como soporte del cultivo lana de roca para estaquillado, a 18ºC durante 16 h de luz y 10ºC durante 8 h de oscuridad; y
- f)
- aclimatación de los bulbos anteriormente enraizados, en macetas de turba con sustrato seco universal, a 20 \pm 2ºC durante 16 h de luz y 10 \pm 2ºC durante 8 h de oscuridad, espolvoreados con fungicida, y posterior paso a tierra.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Método según la reivindicación 1, en el que
en la etapa b) antes del establecimiento del material vegetal, se
realiza una desinfección del mismo.
3. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 1 y 2, en el que en la etapa b) una vez aislados
los meristemos, estos se establecen en el mismo medio de cultivo que
el descrito en la etapa b) además enriquecido con el regulador de
crecimiento ácido 1-naftalén acético (NAA) (1
mg/L).
4. Método según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que el material vegetal aislado
y establecido según la etapa b), se guarda durante 12 semanas en las
siguientes condiciones:
- -
- en semillas: a oscuridad constante y termoperiodo de 15 \pm 2ºC durante 16 h y 10 \pm 2ºC durante 8 h;
- -
- en capas externas, placa basal y meristemos: termoperiodo de 18 \pm 2ºC durante 16 h de luz y 10 \pm 2ºC durante 8 h de oscuridad.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Método según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que en la etapa d) aquellos
bulbos con un diámetro inferior a 1,2 cm. son pasados a un medio de
cultivo fresco con idénticas condiciones que el descrito en d)
durante 4 semanas.
6. Uso del método de micropropagación descrito
en las reivindicaciones anteriores, para la obtención de material
in vitro a partir de pocas plantas madre.
7. Uso del método de micropropagación descrito
en las reivindicaciones anteriores, para la conservación ex
situ de Iris boissieri Henriq.
8. Uso del método de micropropagación según la
reivindicación 7, en el que los bulbos obtenidos en la etapa d) se
pasan a un medio de cultivo fresco con la formulación completa de
MS (Murashige & Skoog).
9. Uso del método de micropropagación según la
reivindicación 7, en el que los bulbos obtenidos en la etapa d) se
pasan al medio de cultivo descrito en la etapa d) pero sin agar ni
reguladores de crecimiento, y añadiendo carbono activo (2 gr/L), a
termoperiodo de 18 \pm 2ºC durante 16 h de luz y 10 \pm 2ºC
durante 8 h de oscuridad, durante 8 semanas, tras lo cual se
continúa con el resto de etapas descritas previamente, hasta
finalizar el proceso.
10. Uso del método de micropropagación, según
las reivindicaciones de 1 a 5, para la multiplicación hortícola de
Iris boissieri Henriq., a partir de un callo.
\newpage
11. Uso del método según la reivindicación 10,
en el que los bulbos obtenidos en la etapa d) se pasan a un medio
de cultivo completo de MS (Murashige & Skoog), con el
doble de concentración de vitaminas, al que además se añaden los
reguladores de crecimiento ácido
2,4-diclorofenoxiacético (2,4 D) (1 mg/L), kinetina
(1 mg/L) y ácido 1-naftalén acético (NAA) (1
mg/L).
12. Uso del método según cualquiera de las
reivindicaciones 10 y 11, en el que una vez se originan los callos,
estos se pasan a un medio de cultivo fresco en las mismas
condiciones que en la reivindicación 11, pero sustituyendo los
reguladores de crecimiento por 6-bencil adenina
(BA) (5 mg/L), durante 8 semanas a 18 \pm 2ºC a oscuridad
constante, continuándose con el resto de las etapas descritas
previamente, hasta finalizar el proceso.
13. Uso del método de micropropagación, según
las reivindicaciones de la 1 a la 5, para la conservación de
germoplasma in vitro, en el que los bulbos obtenidos en la
etapa d) se conservan en oscuridad a 4 \pm 2ºC durante 24 meses,
retomando posteriormente las etapas c) a f).
14. Uso del método de micropropagación, según
las reivindicaciones de la 1 a la 5, para la obtención de plantas
libres de virus y viroides, a partir de meristemos.
15. Uso del método según la reivindicación 14,
en el que una vez aislado el meristemo, se pasa al mismo medio de
cultivo que el descrito en la etapa b), además enriquecido con
ácido 1-naftalén acético (NAA) (1 mg/L), retomado
posteriormente las etapas c) a f).
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200602221A ES2304295B2 (es) | 2006-07-31 | 2006-07-31 | Metodo para la micropropagacion de iris boissieri y sus aplicaciones. |
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| ES2304295A1 ES2304295A1 (es) | 2008-10-01 |
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN105052743A (zh) * | 2015-08-20 | 2015-11-18 | 浙江大学 | 一种有效保存黄菖蒲胚性愈伤组织的方法 |
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| CN108496800B (zh) * | 2018-04-10 | 2021-07-16 | 黑龙江省科学院自然与生态研究所 | 基于愈伤组织诱导建立马蔺高频再生体系方法 |
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|---|---|---|---|---|
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-
2006
- 2006-07-31 ES ES200602221A patent/ES2304295B2/es active Active
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|---|---|
| ES2304295A1 (es) | 2008-10-01 |
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