ES2301369B1 - Utilizacion del editrodiol para la preparacion de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en celulas malignas de tumores solidos. - Google Patents
Utilizacion del editrodiol para la preparacion de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en celulas malignas de tumores solidos. Download PDFInfo
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Abstract
Utilización del eritrodiol para la preparación
de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en células
malignas de tumores sólidos.
Eritrodiol como agente quimioterapéutico contra
el cáncer. El eritrodiol, también llamado
Olean-12-ene-3\beta,28-diol,
es un alcohol triterpenico aislado de la cutícula y las hojas del
olivo. El objeto de la invención es la aplicación farmacológica del
eritrodiol como agente inductor de "anoikis" o muerte por
desarraigo en tumores sólidos. Esto hace que el eritrodiol sea útil
como agente quimioterapéutico antineoplásico, particularmente frente
a astrocitoma humano.
Description
Utilización del eritrodiol para la preparación
de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en células
malignas de tumores sólidos.
El objeto de la invención es la aplicación
farmacológica del eritrodiol en la terapia de enfermedades
proliferativas. La invención pone de manifiesto la capacidad
antiproliferativa e inductora de muerte por desarraigo (anoikis) de
este compuesto en células de tumores solidos y mas específicamente
sobre astrocitoma humano, y por tanto su aplicabilidad para el
tratamiento y control de las neoplasias y su potencial
metastásico.
\vskip1.000000\baselineskip
El cáncer es una acumulación aberrante neta de
células atípicas, que pueden formarse como resultado de un exceso
de proliferación, una insuficiencia de apoptosis, o una combinación
de ambas. Las células malignas pueden separase del tumor primario y
propagarse por el cuerpo gracias a dos mecanismos: invasión y
metástasis. La invasión es la migración y la penetración directa
por las células del cáncer en los tejidos vecinos. La metástasis es
la capacidad de las células cancerigenas de penetrar en la matriz
extracelular y una vez en el torrente circulatorio infiltrar tejidos
diana sanos formando focos tumorales secundarios a distancia.
Esta capacidad de propagarse y diseminarse,
consecuencia de la aparición de nuevas potencialidades en las
células tumorales, es posible por múltiples factores entre los que
destacan la perdida de cohesión entre las células del tejido
tumoral, la formación de nuevos vasos sanguíneos, la resistencia a
la "anoikis" y la posterior implantación de las células
cancerosas en un sitio heterotrópico.
En la actualidad existen cada vez más datos de
que alteraciones en los sistemas celulares de cohesión así como la
pérdida del contacto celular puede privar a las células de las
señales de supervivencia, lo cual da lugar a que las células
desprendidas experimenten un proceso activo de muerte programada.
Este hecho se ha denominado "anoikis", una palabra derivada
del griego que significa "sin hogar". Aunque la anoikis
transcurre con características similares a la apoptosis, es
inducida específicamente por la pérdida de anclaje de una célula a
su soporte o a otras células. En los mecanismos de contacto hay que
destacar la participación activa que juegan el citoesqueleto de
actina y las proteínas asociadas. Así, los cambios morfologicós
distintivos de este proceso incluyen alteraciones en las proteínas
del citoesqueleto, un rapido ascenso en los niveles de especies
reactivas de oxigeno (probablemente provenientes de la mitocondria),
contracción celular, segmentación nuclear, condensación y
fraccionamiento de DNA y finalmente la formación de cuerpos
apoptóticos (Wyllie et al. Int. Rev. Cytol. 68:351, 1980). De
esta manera la anoikis puede actuar como una barrera en la
progresión del cáncer y las metástasis.
Los métodos convencionales para tratar el cáncer
incluyen tratamientos quirúrgicos, administración de radioterapia,
quimioterapia o sus combinaciones. Sin embargo, hasta la fecha,
tales tratamientos han tenido un éxito limitado y los
procedimientos dirigidos a la curación de las metástasis no son
efectivos en la mayoría de los pacientes. Los tratamientos
quirúrgicos generalmente sólo tienen éxito si el cáncer se detecta
en una etapa temprana y la administración de radio y quimioterapia
presentan unos efectos secundarios nefastos, que son mal tolerados
por los pacientes, haciendo no factible el tratamiento de los
tumores. Resultaría, por tanto, muy ventajoso el disponer de
novedosos agentes terapeúticos que provoquen escasa destrucción de
los tejidos sanos y presenten un efecto de estimulación destruyendo
las células malignas y/o inhibiendo la mitosis, teniendo en cuenta
el fenómeno de metastatización de las células tumorales.
La investigación farmacológica está enfocada en
hallar novedosos agentes terapéuticos, y en los últimos años el
Reino Vegetal está demostrando ser una excelente fuente de recursos
para el hallazgo de esos nuevos compuestos. En este contexto, el
eritrodiol
(Olean-12-ene-3\beta,28-diol)
es un alcohol triterpénico pentacíclico del grupo de los oleananos,
presente en plantas frecuentemente utilizadas en la medicina
tradicional de diversos países. Este triterpeno ha sido aislado de
distintas especies vegetales, destacándose su presencia en Olea
europaea.
Existen diversas publicaciones que reconocen al
eritrodiol como constituyente permanente de hojas y semillas. En el
olivo, se halla principalmente en hojas, frutos verdes,
especialmente en la cutícula. Se encuentra además en aceitunas
maduras, aceite de oliva virgen y aceite de orujo donde es elemento
diferencial con los aceites de oliva virgen y refinado. En nuestro
estudio se ha obtenido a partir de la cutícula y las hojas.
Algunos autores han observado diversas
propiedades terapéuticas beneficiosas de los triterpenos
pentacíclicos, aunque sus mecanismos de acción aun no se conocen.
Existen diversos estudios que recogen las actividades biológicas y
farmacológicas del eritrodiol, así se ha descrito: actividad
inhibidora sobre la elastasa de leucocitos humanos (Ying QL et
al. 1991, Biochem J. 277:521-6),
espasmolitica (Mata R et al. 1997 Planta Med.,
63:31-5), antiinflamatoria (Mañez S et al.
1997, Eur J Pharmacol, 334:103-5), inhibidor
de la activación de promotores tumorales (Ukiya M et al.
2002, Cancer Lett, 177:7-12), vasodilatadora
(Rodríguez-Rodriguez R et al. 2004, Br J
Nutr, 92:635-42), y antioxidante (Perona JS
et al. 2005, J Agric Food Chem, 53:730-5).
Además, se ha encontrado que el eritrodiol es capaz de reducir
eficazmente el edema causado a partir del ácido araquidónico o por
el activador tisular de plasminógeno (TPA) con una posible acción
sobre la fosfolipasa A2, (sPLA2), y de disminuir la infiltración de
neutrófilos en el tejido inflamado (De la Puerta R et al.
2000, Z Naturforsch [C]; 55:814-9).
La presente invención está relacionada con la
búsqueda de nuevos tratamientos contra el cáncer y la capacidad
invasiva del mismo, así se describe una nueva aplicación
farmacológica del eritrodiol como agente capaz de inducir anoikis
en células neoplásicas humanas inhibiendo el crecimiento del tumor y
controlando su potencial metastático.
El objeto de la presente invención es la
utilización del eritrodiol para la preparación de un medicamento
como agente inhibidor del crecimiento e inductor de procesos de
muerte por desarraigo en células malignas de tumores sólidos.
Particularmente, el eritrodiol se emplea en la preparación de un
medicamento inductor de anoikis en células de astrocitoma
humano.
Dicho efecto se manifiesta a través de:
- i)
- la inducción de pérdida de adherencia de las células con el sustrato y disminución de moléculas relacionadas con la adhesión celular, particularmente inhibición en la expresión de proteínas que intervienen en la adhesión celular como CD44, provocando la perdida de adhesión con la matriz.
- ii)
- alteraciones en la organización de las proteínas de citoesqueleto que llevan a un encogimiento celular.
- iii)
- aumento rápido en los niveles de especies reactivas de oxigeno y caída del potencial mitocondrial
- iv)
- inhibición en la proliferación de las células cultivadas en presencia de agentes mitogénicos
- v)
- aparición de morfología nuclear típica de procesos de muerte programada: núcleos condensados y fragmentados únicamente en las células que han perdido el anclaje a la superficie de crecimiento
- vi)
- alteración en la simetría de los fosfolipidos de la membrana celular, que se refleja por el incremento de la unión de anexina-v e
- vii)
- inducción en la superficie de la membrana celular de la expresión de proteínas con relevancia en los procesos de muerte celular, particularmente Fas/FasL y TNR1.
Figura 1: El eritrodiol induce desprendimiento
en células 1321N1. A, Contraste de fase de células 1321N1 de
astrocitoma humano tratadas durante distintos tiempos con 25 \muM
de eritrodiol y B, modulación de la expresión de CD44 tras el
tratamiento durante 18 h con 25 \muM de eritrodiol.
Figura 2: El eritrodiol induce cambios
morfológicos relacionados con el citoesqueleto. Las células fueron
estimuladas con 25 \muM de eritrodiol durante 0, 3 y 6 h y teñidas
con Faloidina-FITC (verde),
anti-paxilina (rojo) y DAPI (azul) para su posterior
analisis al microscopio de fluorescencia. A, D, G, Muestra la
tinción de la paxilina. B, E, H, Muestra la doble tinción de
F-actina y núclear. C, F, I, Contraste de fase.
Figura 3: El eritrodiol induce acumulación de
especias reactivas de oxigeno y cambios en la funcionalidad de la
mitocondria en células de astrocitoma humano. A, Para estudiar la
producción de ROS, las células 1321N1 marcadas con 10 \muM
DCFH-DA se trataron 30 min con 25 \muM de
eritrodiol y se analizaron por citometria de flujo. B, Para estudiar
el estado de las mitocondrias, las células 1321N1 se trataron
durante 12 h con 25 \muM de eritrodiol. A continuación se
incubaron durante 30 min. con 4 \muM Rodamina 123 y se analizaron
por citometría de flujo y microscopia de fluorescencia.
Figura 4: Inhibición de la incorporación de
[3H]-Timidina inducida por el suero (A) y agentes
mitogénicos como la trombina (B), en las células 1321N1 de
astrocitoma humano por efecto del eritrodiol.
Figura 5: Cambios en la distribución del ciclo
celular de los astrocitos 1321N1 tratados con diferentes dosis de
eritrodiol durante 18 h.
Figura 6: Incremento en la unión de
anexina-V en las células 1321N1 de astrocitoma
humano por efecto del eritrodiol. A, estudios de
dosis-respuesta y B, estudios de cinética. Análisis
de las células por citometria de flujo. C, Células incubadas durante
18 h en ausencia o presencia de 25 \muM de eritrodiol y analizadas
al microscopio de fluorescencia.
Figura 7: Aparición en células 1321N1 de
astrocitoma humano por efecto del tratamiento con 25 \muM de
eritrodiol durante 18 h de una morfología nuclear propia de los
procesos apoptoticos: núcleos condensados y fragmentados. A,
estudios en condiciones adherentes y B, estudios en condiciones
standart.
Figura 8: Modulación de la expresión de
proteínas en la superficie de las células 1321N1. Las células se
estimulan 18 h con 25 \muM de eritrodiol y por citometria de flujo
se observa aumento en la expresión de moléculas proapoptoticas como
Fas, FasL y TNFR1.
\vskip1.000000\baselineskip
La nueva aplicación farmacológica del eritrodiol
como agente antiproliferativo e inductor de anoikis se ha observado
en la línea celular 1321N1 de astrocitoma humano. En la Figura 1 se
muestran imagenes representativas de un cultivo de astrocitoma
1321N1 tratado durante distintos tiempos con 25 \muM de
eritrodiol. Puede observase como las células van redondeandose y
perdiendo adherencia con el soporte de cultivo. Se puede apreciar
que después de una incubación de 6 horas en la presencia del
alcohol triterpenico una significativa cantidad de células
comienzan a perder contacto con las células vecinas así como
adherencia al sustrato, siendo mayor a las 18 horas. Sin embargo,
las células incubadas durante tiempos iguales o inferiores a 1 hora
permanecieron adheridas al sustrato de forma similar a aquellas
células no tratadas (control). En consonancia con esta perdida de
adhesividad de las células tratadas con el eritrodiol, observamos
que tras estimular las células 1321N1 con 25 \muM de eritrodiol
durante 18 h, se produce una disminución de la molécula de adhesión
CD44 (Fig. 1B). El cluster de diferenciación CD44 es una familia de
isoformas que tienen múltiples funciones y su expresión se asocia a
la capacidad invasiva de las células cancerosas.
Estos cambios observados pueden ser debidos
tanto a alteraciones en las moléculas de adhesión de la membrana
plasmática como a cambios estructurales. En la Figura 2 se muestra
como este compuesto triterpénico natural aislado del aceite de
orujo fue capaz de inducir cambios en la conformación de elementos
del citoesqueleto. Así, mientras que las células control presentan
las típicas fibras de stress, tras el tratamiento con 25 \muM de
eritrodiol se observa un dramático cambio en la morfología celular
con importantes modificaciones en el citoesqueleto de actina,
disminución en la expansión y retracción de los astrocitos,
encontrándose alterada tanto la formación de fibras de
F-actina como la formación de adhesiones
focales.
Además, de acuerdo con recientes evidencias que
sugieren que la perdida de adherencia es precedida de una elevación
en los niveles de especies reactivas de oxigeno (ROS) intracelulares
y relacionan el estrés oxidativo con la activación de la anoikis,
se ha hallado que el eritrodiol es capaz de inducir rápidamente
acumulación de ROS (Fig. 3A) y producir cambios en la integridad de
la mitocondria (Fig 3B). La funcionalidad de la mitocondria se
analizo incubando a los astrocitos con la sonda permeable y
selectiva, Rodamina 123. Esta sonda es secuestrada y queda retenida
en mitocondrias activas. En la Figura 3B las imágenes del
microscopio de fluorescencia muestran en los astrocitos control una
fluorescencia roja brillante y uniforme distribuida por toda la
célula, reflejo de una mitocondria funcional. Tras 12 h de
tratamiento con 25 \muM de eritrodiol se origina una pérdida
progresiva en la intensidad de la fluorescencia de la mitocondria,
especialmente en las células que han perdido adherencia, evidencia
de la disfunción mitocondrial, lo cual se encuentra ligado a perdida
de viabilidad y apoptosis. La disminución de fluorescencia en los
astrocitos tratados con el alcohol triterpénico se cuantificó
mediante citometría de flujo.
En la Figura 4 se muestra como el eritrodiol fue
capaz de inhibir la proliferación celular inducida por agentes
mitogénicos como el suero (10%) o la trombina (0.5 U/ml) con un IC50
= 5x10^{-6}M en células 1321N1.
El análisis del ciclo celular se ha realizado
para conocer la viabilidad y los cambios en el perfil del ciclo de
los astrocitos 1321N1 como consecuencia de su incubación con
distintas dosis de eritrodiol. La Figura 5, muestra mediante
histogramas la distribución de las células 1321N1 en las distintas
fases del ciclo según su contenido en DNA. Este análisis mostró un
incremento dosis-dependiente en el número de células
acumuladas en la región de DNA subdiploide
(sub-G1), que se corresponde con células en estado
de apoptosis.
Para determinar el índice de apoptosis se ha
utilizado un conjugado fluorescente del anexina-V
(anexina-V-PE) ya que esta proteína
se une especialmente a fosfatidilserina y la externalización de éste
fosfolipido es un indicador de apoptosis. Así, las células 1321N1
fueron expuestas a distintas concentraciones de eritrodiol durante
18 h o a una dosis de 25 \muM por distintos tiempos. A
continuación, las células se incubaron en presencia de
anexina-V durante 15 min. y se analizaron mediante
citometria de flujo y microscopia de fluorescencia (Fig. 6). Con la
intención de identificar la morfología nuclear condensada y
fragmentada característica de los procesos de apoptosis, las
células 1321N1 tratadas durante 18 h con 25 \muM de eritrodiol se
sometieron a tinción con DAPI (Fig 7). La respuesta a la presencia
del eritrodiol fue un incremento dosis/tiempo dependiente en la
cantidad de anexina-V unida (Fig 6) y la aparición
de núcleos fragmentados y picnoticos (Fig 7). Es interesante
destacar que las células cultivadas en condiciones Standard (sin
polilisina en la superficie de crecimiento) van a comenzar a
soltarse de la superficie de las placas a las 2-3
horas de tratamiento con el eritrodiol, y únicamente en las células
que se encuentran en suspensión son en las que se comienza a
apreciar la aparición de morfología nuclear apoptotica. Las células
sembradas en cristales con poli-lisina y que
permanecen adheridas durante todo el tiempo del tratamiento con el
eritrodiol, no cambian su fenotipo nuclear ni tras 24 horas de
tratamiento con el alcohol triterpenico pentaciclico. Sugiriendo por
tanto que la pérdida de adhesión con la matriz podría ser el
desencadenante de la activación del proceso de muerte celular. Estos
procesos además de eliminar las células que ya han dejado de formar
parte del tejido al perder sus conexiones a él, evitan que se
puedan unir a matrices en otras localizaciones originando
metástasis.
Otras proteínas de superficie que observamos
sujetas a modulación por el eritrodiol son la diada Fas/FasL y TNFR1
(Fig. 8B).
Considerando el importante papel que estas
proteínas juegan por si mismas en los procesos de muerte celular es
importante destacar, que el eritrodiol no solo pone en marcha
procesos de anoikis en las células de astrocitoma humano sino que
favorece la expresión de moléculas que potencian/promueven el
fenómeno de la apoptosis.
Los resultados obtenidos sugieren que este
triterpeno contenido en la cutícula y hojas del olivo, podría tener
efectos anti-tumorales sobre tumores solidos y
especialmente sobre astrocitomas humanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Para la realización de los experimentos se han
utilizado la línea tumoral adherente 1321N1 de astrocitoma humano
(cedida por el laboratorio de la Dra. J.H. Brown). Las células se
han cultivado en monocapa a 37ºC en atmósfera de CO_{2} al 5%
en medio Dulbecco modificado por Eagle (DMEM), 5% suero de ternera
fetal (STF), 2 \mumol/ml de glutamina, 100 unidades/ml de
penicilina y 100 \mug/ml de estreptomicina. Los estudios se
realizan cuando las células en el cultivo alcanzan el
60-80% de confluencia.
\vskip1.000000\baselineskip
Los anticuerpos empleados en los estudios:
paxilina, anexina V-PE, Fas, FasL, TNFR1, CD44 y
anticuerpos secundarios
IgG-conjugada-PE o FITC fueron
proporcionados por BD Biosciences. La rodamina 123 fue proporcionada
por Molecular Probes. Los reactivos químicos generales, así como el
DCFH-DA
(2,7-dicloro-dihidro-fluoresceina
diacetato), la Faloidina-FITC, el ioduro de
propidio (IP) y el DAPI
(2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine
dihydrochloride) fueron proporcionados por Sigma Chemical Co. (St.
Louis, MO, USA). El compuesto natural alcohol eritrodiol fue
suministrado por Cymit Química S.L. (Barcelona, Spain).
El eritrodiol fue inicialmente disuelto en
etanol, para preparar una solución stock de 50 x 10^{-3} M. Las
posteriores diluciones del triterpeno se realizaron en el medio de
cultivo hasta obtener las concentraciones deseadas. La
concentración final de etanol alcanzada en los cultivos celulares no
afectó significativamente a los resultados.
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip0.900000\baselineskip
Los ensayos in vitro se realizan en
condiciones de esterilidad en placas de cultivo de 6 pocillos en un
volumen final de 1 ml. El efecto del eritrodiol sobre la
proliferación celular se evalúa a las 24 h de cultivo en presencia
de STF o trombina (agente mitogénico) a través de la técnica de
incorporación de Timidina tritiada (20 Ci/mmol). Para ello, los
cultivos celulares son pulsados por un periodo de 4 h con 0,5
\muCi/ml [^{3}H]-Timidina (Amersham), tras el
cual las células se lavan para eliminar la radiactividad no
incorporada con 0,1 M MgCl_{2} (3 veces) y 5% ácido
tricloroacetico (1 vez). Finalmente, la fracción precipitable con el
ácido tricloacetico se disuelve en 500 \mul de 1N NaOH. La
timidina radioactiva incorporada al ADN se cuantifica en contador de
centelleo líquido. Las concentraciones de eritrodiol usadas en el
estudio son 1, 5, 25 y 50 \muM.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células 1321N1, cultivadas en frascos de 25
cm^{2}, se incuban durante 18 h con distintas concentraciones de
eritrodiol, y a continuación se recogen y se lavan con PBS. Tras
centrifugarlas 10 min. a 1000 rpm a 4ºC se retira el sobrenadante
sin alterar el pellet y con el tubo en un vortex a alta
velocidad se añade gota a gota 1 ml de etanol 70% frío. Se dejan
fijar con el etanol entre 4-18 h y se centrifugan 5
min. a 3000 rpm. Finalmente, se añade 50 \mug/ml de ioduro de
propidio y se dejan marcar las muestras 30 min. a temperatura
ambiente en oscuridad antes de analizarlas en el citómetro de flujo
EPICS XL:MCL (Beckman-Culter).
\vskip1.000000\baselineskip
Las células cultivadas en frascos de 25
cm^{2}, se incuban durante 18 h con distintas concentraciones de
eritrodiol, o durante distintos tiempos con 25 \muM de eritrodiol.
Tras recoger las células y centrifugarlas 10' a 1000 rpm a 4ºC, se
resuspenden en 100 \mul de un tampón rico en sales "Binding
Buffer" de Becton Dickinson. Por cada muestra se añade 2,5
\mul de anexina-V conjugada con ficoeritrina (PE)
y tras 10 min. de incubación a oscuras y a temperatura ambiente, se
diluyen con otros 400 \mul de "Binding Buffer" y se analizan
por citometría de flujo o microscopia de fluorescencia. En los
histogramas, el pico relleno se corresponde con la unión de
anexina-V en situación control y el pico negro vacío
con la unión de anexina-V en presencia del
triterpeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células 1321N1, cultivadas sobre
portaobjetos de 12 mm de diámetro (recubiertos o no con polilisina),
se incuban durante 18 h con 25 \muM de eritrodiol. Tras lavar con
PBS a 4ºC, las células se fijan con
para-formaldehído (PFA) al 4% durante 15 min. A
continuación tras un nuevo lavado con PBS a 4ºC, se incuban durante
10 min. con 0,3 \mug/ml de DAPI a temperatura ambiente y en
oscuridad. Tras varios lavados con PBS se preparan los cristales
para analizar la morfología nuclear al microscopio de
fluorescencia.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células cultivadas en frascos de 25
cm^{2}, se incuban durante 30 min con la sonda fluorescente 10
\muM DCFH-DA. A continuación se estimulan durante
18 h con 25 \muM de eritrodiol. Tras recoger las células y
centrifugarlas se resuspenden en 100 \mul PBS y se analizan en el
citometro de flujo. En el histograma, el pico relleno se
corresponde con la situación control y el pico negro vacío con la
generación de ROS en presencia del triterpeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células 1321N1, cultivadas sobre
portaobjetos de 12 mm de diámetro se incuban durante los tiempos
indicados con 25 \muM de eritrodiol. Tras lavar con PBS a 4ºC,
las células se fijan con para-formaldehído (PFA) al
4%. A continuación tras un nuevo lavado con PBS a 4ºC, se incuban
durante 30 min. con Rodamina 123, anti-paxilina o
FITC-faloidina a temperatura ambiente y en
oscuridad. Tras varios lavados con PBS se preparan los cristales
para analizar la morfología celular al microscopio de
fluorescencia.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células 1321N1, cultivadas en frascos de 25
cm^{2}, se incuban a 37ºC durante 18 h con 25 \muM de
eritrodiol. Tras recoger las células y lavarlas con PBS a 4ºC, se
resuspenden en 100 \mul de PBS suplementado con 1% (p/v) de BSA
deslipidada. A continuación se incuban 1 h a 4ºC con 2 \mug/ml del
anticuerpo de la proteína de interés (CD44, FasL, Fas, TNFR1). Tras
sucesivos lavados con PBS-BSA 1%, se tratan 30 min.
a 4ºC, con el anticuerpo secundario correspondiente conjugado con
fluoresceína. Finalmente, las células resuspendidas en 500 \mul
de PBS se analizan en el citómetro de flujo. En los histogramas, el
pico gris relleno se corresponde con la fluorescencia inespecífica,
el pico negro vacío con la expresión de la proteína en situación
control y el pico gris vacío con la expresión de proteína tras el
tratamiento con el triterpeno.
\global\parskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El efecto antiproliferativo e inductor de muerte
por desarraigo del alcohol eritrodiol se puso de manifiesto mediante
la adición de diferentes dosis de este compuesto (10^{-6} - 50
10^{-6} M), a distintos tiempos, sobre las células de astrocitoma
humano 1321N1.
\vskip1.000000\baselineskip
Los estudios se han realizado en duplicado o
triplicado. Cada grupo de experimentos se ha repetido al menos tres
veces obteniéndose resultados similares. Al menos que se indique,
los datos presentados corresponden a un experimento representativo.
En los ensayos de incorporación de timidina los resultados se
expresan como porcentaje de la incorporación máxima inducida por el
agonista, con su correspondiente error (\pmSEM)
Claims (7)
1. Utilización del alcohol eritrodiol para la
preparación de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en
células malignas de tumores sólidos.
2. utilización del alcohol eritrodiol según la
reivindicación 1, caracterizado porque se emplea en la
preparación de un medicamento inductor de anoikis.
3. Utilización del alcohol eritrodiol según las
reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque la inducción de
muerte celular por desarraigo se manifiesta en células de
astrocitoma humano.
4. Utilización del alcohol eritrodiol según las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho efecto
sobre las células malignas de tumores sólidos se manifiesta a través
de la pérdida de adherencia con el sustrato, así como de una
alteración en la organización de las proteínas de citoesqueleto que
llevan a un encogimiento celular.
5. Utilización del alcohol eritrodiol según las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho efecto
sobre las células malignas de tumores sólidos se manifiesta a través
de la inhibición en la expresión de proteínas que intervienen en la
adhesión celular como CD44, provocando la perdida de adhesión con
la matriz.
6. Utilización del alcohol eritrodiol según la
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho efecto
sobre las células malignas de tumores sólidos se manifiesta en las
células que han perdido el anclaje a la superficie de crecimiento, a
través de la inhibición de la proliferación celular, la aparición
de células en la fase subdiploide, con una morfología nuclear
condensada y fragmentada, así como de una alteración en la simetría
de los fosfolipidos de la membrana celular, que se refleja por el
incremento en la unión de anexina-V.
7. Utilización del alcohol eritrodiol según las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque induce en la
superficie de la membrana de las células malignas de tumores sólidos
la expresión de proteínas con relevancia en los procesos de muerte
celular, particularmente Fas/FasL y TNR1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200601669A ES2301369B1 (es) | 2006-06-21 | 2006-06-21 | Utilizacion del editrodiol para la preparacion de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en celulas malignas de tumores solidos. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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|---|---|
| ES2301369A1 ES2301369A1 (es) | 2008-06-16 |
| ES2301369B1 true ES2301369B1 (es) | 2009-06-12 |
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|---|---|---|---|
| ES200601669A Expired - Fee Related ES2301369B1 (es) | 2006-06-21 | 2006-06-21 | Utilizacion del editrodiol para la preparacion de un medicamento inductor de muerte por desarraigo en celulas malignas de tumores solidos. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2301369B1 (es) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002224595A1 (en) * | 2000-07-31 | 2002-02-13 | The Nisshin Oil Mills, Ltd. | Antitumor agents |
-
2006
- 2006-06-21 ES ES200601669A patent/ES2301369B1/es not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| NISHINO, H. et al.: "{}Inhibition of the tumor-promoting action of 12-O-tetradecanoylphorbol-13 acetate by some oleanane-type triterpenoid compounds"{}. Cancer Research, 1988, vol. 48, páginas 5210-5215, ISSN 0008-5472, página 5214, columna 2. * |
| OHSAKI, A et al.: "{}Four triterpenoids from Maytenus Ilicifolia"{} Journal of Natural Products, 2004, vol. 67, páginas 469-471, página 470, columna 2, líneas 1-12. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2301369A1 (es) | 2008-06-16 |
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Legal Events
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| EC2A | Search report published |
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