ES2270614T3 - 3-desazaadenosina utilizada en la prevencion de la ateroesclerosis y la vasculopatia de los injertos. - Google Patents
3-desazaadenosina utilizada en la prevencion de la ateroesclerosis y la vasculopatia de los injertos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2270614T3 ES2270614T3 ES99946099T ES99946099T ES2270614T3 ES 2270614 T3 ES2270614 T3 ES 2270614T3 ES 99946099 T ES99946099 T ES 99946099T ES 99946099 T ES99946099 T ES 99946099T ES 2270614 T3 ES2270614 T3 ES 2270614T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- desazaadenosine
- prevention
- previous
- accordance
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
- A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
¿ Uso de 3¿desazaadenosina y sales de la misma o precursores de 3¿desazaadenosina que pueden ser degrada- dos en el cuerpo en condiciones fisiológicas para dar 3¿ desazaadenosina, en el cual el precursor se selecciona de fosfatos de 3¿desazaadenosina, ácido 3¿desazaadenosina¿ 3''¿monofosfórico, 3¿desazaadenosina¿3'', 5''¿ciclofosfato y/o ácido 3¿desazaadenosina¿5''¿difosfórico, para la fa- bricación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de la vasculopatía de los trasplantes.
Description
3-desazaadenosina utilizada en
la prevención de la ateroesclerosis y la vasculopatía de los
injertos.
La invención se refiere al uso de
3-desazaadenosina (c^{3}Ado) para la preparación
de un medicamento contra las enfermedades vasculares o el rechazo de
los injertos, especialmente la ateroesclerosis y la vasculopatía de
los injertos.
La adhesión de los leucocitos a la capa de
células endoteliales y su migración subsiguiente a la pared vascular
se cree que juegan un papel fundamental durante el desarrollo de las
lesiones ateroescleróticas. Los monocitos/macrófagos y linfocitos,
por ejemplo, son ubicuos en todas las etapas del desarrollo de la
placa ateroesclerótica y propagan el proceso inflamatorio local.
Adicionalmente, los macrófagos cargados de lípidos se acumulan en la
placa, conduciendo con ello a inestabilidad con rotura subsiguiente,
trombosis y cierre agudo de los vasos (1-3).
Se ha apreciado de modo generalizado que la
inhibición de la adhesión y migración de los leucocitos puede tener
efectos protectores en el desarrollo de la placa
(4-6). La adhesión y migración celulares están
mediadas por diversas moléculas de la superfamilia de las
selectinas, integrinas e inmunoglobulinas, tales como las moléculas
de adhesión molécula-1 de adhesión de células
vasculares (VCAM-1) y molécula-1 de
adhesión intercelular (ICAM-1). Estudios previos han
demostrado la expresión incrementada de VCAM-1 e
ICAM-1 en la superficie de las células musculares
lisas endoteliales y vasculares de las placas humanas y en modelos
experimentales de ateroesclerosis (7-13). Un estudio
reciente sobre ratones C57/BL6 con mutaciones homocigóticas para
diversas moléculas de adhesión ha indicado que las moléculas de
adhesión endoteliales están implicadas directamente en la
patogénesis de la ateroesclerosis (14).
La adhesión de leucocitos al endotelio vascular
es también un paso precoz en el rechazo de injertos, conduciendo a
la migración de células inflamatorias a los tejidos subyacentes. Las
células endoteliales contribuyen a la adhesión por expresar varias
moléculas de la superficie celular inducibles que se fijan a
diversas células inflamatorias. Junto con moléculas del MHC, las
moléculas de adhesión tienen un papel importante en la activación de
las células T. En cuanto a la adhesión de células inflamatorias a
células endoteliales activadas están implicados al menos tres pares
receptor/ligando separados:
ICAM-1/LFA-1,
VCAM-1/VLA-4, y
E-selectina/sialil-Lewis X, y/o
carbohidratos afines en leucocitos.
Los modelos actuales proponen que los miembros
de la familia de genes de las selectinas (selectina E, P, y L)
median las interacciones adhesivas iniciales, con inclusión de la
laminación de los leucocitos, y que la adhesión y diapedesis firme
subsiguientes requieren incorporación dependiente de la activación
de integrinas con sus ligandos endoteliales y
PECAM-1, respectivamente.
Varios estudios previos han demostrado que
VCAM-1, ICAM-1, selectina P, y
LFA-1 están expresadas extensamente en células
endoteliales en la ateroesclerosis de aloinjertos de corazón de
rata. El tratamiento de animales con anticuerpos para
VCAM-1, VLA-4,
ICAM-1 y LFA-1 indujo
inmunosupresión e inhibió la ateroesclerosis de los injertos.
Asimismo, la administración de oligonucleótidos antisentido de
ICAM-1 condujo a inmunosupresión. En contraste, en
ratones deficientes en ICAM no pudo detectarse prolongación alguna
de la supervivencia de los aloinjertos cardiacos, lo que indicaba
que esta proteína no es la única responsable de la inducción del
rechazo o vasculopatía de los injertos.
La 3-desazaadenosina
(c^{3}Ado), un análogo estructural de adenosina, es un fármaco
anti-inflamatorio que se ha demostrado inhibe la
quimiotaxis y fagocitosis de los monocitos (15-18).
Adicionalmente, existen datos reveladores de que este análogo de
adenosina reduce la adhesión de los macrófagos inducida por el
factor \alpha de necrosis tumoral a las células endoteliales in
vitro por la inhibición selectiva de la síntesis de
ICAM-1 (19). Los mecanismos moleculares subyacentes
no han sido todavía totalmente esclarecidos. c^{3}Ado inhibe la
metilación celular de los fosfolípidos de la membrana y suprime la
adenosilhomocisteína-hidrolasa
(20-21). Sin embargo, se ha sugerido que las
acciones biológicas de c^{3}Ado son independientes de estos
mecanismos (21-24).
El documento EP 0 010 668 da a conocer la
utilidad de c^{3}Ado para suprimir la respuesta inmunitaria, y por
consiguiente también para prevenir el rechazo de células extrañas,
tales como injertos, con inclusión de trasplantes de órganos.
Debido a sus propiedades
anti-inflamatorias, c^{3}Ado ha sido estudiada en
un ensayo clínico en pacientes con artritis reumatoide (19, 25), y
este fármaco será ensayado en humanos respecto a su actividad
antiviral (HIV) in vitro (26). El fármaco no ha sido ensayado
nunca en modelos animales de enfermedad vascular.
Sorprendentemente, se ha encontrado que
c^{3}Ado inhibe la adhesión de los leucocitos in vivo y la
formación concomitante de lesiones ateroescleróticas por inhibición
de la expresión de moléculas de adhesión de las células
endoteliales, tales como VCAM-1 e
ICAM-1, como se ha demostrado en ratones hembra
C57/BL6. Estos animales son reproduciblemente propensos a la
formación de lesiones grasas, lo que se asemeja estrechamente a las
placas ateroescleróticas precoces detectadas en humanos
(27-31).
Adicionalmente, se ha encontrado que c^{3}Ado
inhibe el rechazo de injertos y la ateroesclerosis de injertos en
corazones trasplantados.
Un aspecto de la presente invención es el uso de
3-desazaadenosina o análogos de la misma para la
fabricación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento
de la vasculopatía de los trasplantes.
Un aspecto adicional de la presente invención es
un stent recubierto con 3-desazaadenosina y/o
análogos de la misma.
De acuerdo con la presente invención, pueden
utilizarse 3-desazaadenosina y análogos de la misma.
Ejemplos de tales análogos son sales de
3-desazaadenosina y precursores de
3-desazaadenosina que pueden degradarse en el cuerpo
en condiciones fisiológicas para dar
3-desazaadenosina, v.g. fosfatos de
3-desazaadenosina. Ejemplos adicionales de análogos
son desazanucleósidos tales como ácido
3-desazaadenosina-3'-monofosfórico,
3-desazaadenosina-3',5'-ciclofosfato
y ácido
3-desaza-adenosina-5'-difosfórico
y sales y precursores de los mismos, respectiva-
mente.
mente.
La 3-desazaadenosina y los
análogos de la misma son capaces de prevenir o retardar la aparición
de la ateroesclerosis. Los mismos previenen la aparición de
formulación de vetas grasas y todas las restantes etapas del
desarrollo de la placa ateroesclerótica en la capa íntima de los
vasos sanguíneos arteriales por inhibición de la expresión de
moléculas de adhesión en las células endoteliales vasculares. Esto
conduce a una reducción de la adhesión e infiltración consecutiva de
monocitos en la capa endotelial. Por consiguiente, la inhibición de
la expresión endotelial de VCAM-1 e
ICAM-1 es el mecanismo fundamental, por el cual
c^{3}Ado inhibe la ateroesclerosis.
Por el mismo mecanismo, c^{3}Ado y sus
análogos inhiben la ateroesclerosis de los injertos en órganos
transplantados. Ejemplos de órganos trasplantados son corazones,
riñones, hígado, pulmón, etc. La administración de
3-desazaadenosina y análogos de la misma conduce a
una oclusión reducida de los vasos sanguíneos, particularmente de
los vasos sanguíneos arteriales en los órganos trasplantados.
Adicionalmente, se consigue una reducción del rechazo de órganos
trasplantados, por ejemplo, reducción del rechazo de corazones
trasplantados.
Así pues, c^{3}Ado es adecuado para la
prevención y/o el tratamiento de la vasculopatía de los
trasplantes.
Indicaciones adicionalmente preferidas de
3-desaza-adenosina y análogos de la
misma son la prevención del rechazo de xenotrasplantes, prevención
de la restenosis después de intervenciones coronarias, especialmente
después de implantación de stents. La restenosis en los stents
(restenosis in-stent) puede prevenirse por
recubrimiento del stent a utilizar con
3-desazaadenosina. La combinación del enlace
covalente de la 3-desazaadenosina a los stents es
eficaz para la prevención de la restenosis. Indicaciones
adicionalmente preferidas son la prevención de las lesiones de
reperfusión, v.g. en el corazón o el pulmón, el tratamiento y la
prevención de síndromes coronarios infecciosos e inflamatorios, la
prevención y el tratamiento de la cardiomiopatía dilatada, la
prevención y el tratamiento de la miocarditis viral y la prevención
y el tratamiento de infecciones por parásitos tales como Malaria
tropica.
Otra indicación preferida es el uso de
3-desaza-adenosina y análogos de la
misma para reducir el nivel de homocisteína.
La 3-desazaadenosina y sus
análogos pueden utilizarse individualmente o en combinación con
otros medicamentos. Cuando se tratan enfermedades vasculares, por
ejemplo, es admisible la combinación con agentes reductores del
colesterol. Para prevenir el rechazo de injertos, pueden utilizarse
3-desazaadenosina y análogos de la misma en
combinación con medicamentos inmunosupresores, v.g. ciclosporina. La
3-desazaadenosina y análogos de la misma pueden
combinarse también con azatioprina, cortisona, rapamicina,
tacrolimus y otros fármacos inmunosupresores.
El medicamento puede administrarse por cualquier
vía, v.g. parenteralmente por medio de inyección u oralmente. Se
prefiere la administración oral, v.g. en la forma de tabletas,
cápsulas etc.
La dosis administrada depende de la clase y
gravedad de la enfermedad. Normalmente, la dosis oscila entre 0,1 y
500 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente entre 1 y 200
mg/kg de peso corporal por día. La administración puede efectuarse a
lo largo de un periodo corto de uno o más días. Sin embargo, la
administración se efectúa usualmente durante un periodo de al menos
una semana. La dosis puede variarse durante el periodo de
administración, en caso necesario.
La invención se explica con mayor detalle por
las Figuras y ejemplos que siguen.
Fig. 1 análisis morfométrico de secciones
aórticas en C57BL/J6. Los gráficos de barras que muestran la
relación media de áreas neoíntima a medial (NI/M) para ratones de
control (n = 9), ratones sometidos a dieta aterogénica (n = 9), y
ratones sometidos a dieta aterogénica y tratamiento con
3-desazaadenosina (c^{3}Ado) (n = 9). El valor
medio de NI/M se calculó para 3 secciones histológicas por animal.
El espesor íntima/neoíntima tal como se midió por NI/M era 94% menor
en los ratones tratados con c^{3}Ado comparados con ratones
alimentados con dieta aterogénica sin c^{3}Ado (p < 0,001). No
había diferencia alguna en NI/M entre los ratones de control y los
tratados con c^{3}Ado. Los valores son valores medios\pmSEM.
Fig. 2 Micrografía óptica de la sección
transversal de la pared aórtica tomada de ratones hembra C57BL/6J
alimentados con una dieta aterogénica durante 9 semanas. Obsérvese
la gran veta grasa rica en lípidos y rica en macrófagos de gran
tamaño. Rojo de aceite O y hemalaun; aumento original x 100; barra =
5 \mum.
Fig. 3 (A-C) Micrografías
ópticas correspondientes de secciones transversales de la pared
aórtica (200 \mum desde la válvula craneal a la aórtica) tomadas
de ratones hembra C57BL/6J. (A) Grupo 2, alimentado con la dieta
aterogénica durante 9 semanas, demuestra la proliferación de la capa
íntima aórtica. En contraste, la neoíntima estaba ausente en los
ratones tratados con 3-desazaadenosina (B). (C)
Controles. Rojo de aceite O y hemalaun. A-C: aumento
original x 40; barra = 10 \mum.
Fig. 4 (A-F) Secciones
transversales de la aorta ascendente con células endoteliales
intensas ICAM-1-positivas (A) e
intensas VCAM-1-positivas (B) en
ratones con dieta aterogénica. En los ratones tratados con
3-desazaadenosina (C+D) así como en los controles
(E+F), no se detectó expresión endotelial alguna de
ICAM-1 y VCAM-1 en la aorta. La
tinción de ICAM-1 y VCAM-1 con
anticuerpos anti-ratón monoclonales de rata
utilizando el método APAAP y contratinción con hemalaun.
A-F: aumento original x 100; barra = 5 \mum.
Fig. 5 Vista con gran aumento de la pared
aórtica con una lesión ateroesclerótica de la capa íntima y
monocitos positivos a CD11b (grupo 2, dieta aterogénica). Tinción de
CD11b con anticuerpos anti-ratón monoclonales de
rata utilizando el método APAAP y contratinción con hemalaun.
Aumento original x 100; barra = 5 \mum.
Ratones hembra C57BL/J6 de 6 a 8 semanas
(Charles Rivers Wiga, Sulzfeld, Alemania) con un peso corporal medio
de 20 g de dividieron aleatoriamente en 3 grupos:
Grupo 1: animales de control (n = 9) mantenidos
con una dieta normal para ratones (Altromin, Dieta Estándar, Lage,
Alemania).
Grupo 2: 9 animales que recibieron una dieta
aterogénica basada en comida equilibrada normal para ratones pero
que difería en contenido total de grasa (10% frente a 5%), contenido
de proteínas (15,4% frente a 22%) y contenido de colesterol (1%
frente a 0%). La energía total era 3790 frente a 3000 kcal/kg.
Grupo 3: 9 animales sometidos a una dieta
aterogénica como se ha descrito arriba, y
3-desazaadenosina (c^{3}Ado) (Southern Research,
Birmingham, AL, EE.UU.) mezclada en la alimentación a una
concentración final de 0,04 mg/g, de acuerdo con una dosis oral
diaria de 10 mg/kg c^{3}Ado por animal.
La ingestión media de comida para cada animal
era 5,2 g por día. Se restablecieron la comida y el agua cada dos
días, y se registraron los volúmenes consumidos por cada jaula. Los
ratones se mantuvieron de acuerdo con los requerimientos estándar
para cuidado de animales y se mantuvieron en un ciclo de 12 horas de
luz-oscuridad con agua tratada en autoclave en un
ambiente de temperatura controlada. Todos los animales se
mantuvieron sanos durante el periodo experimental. Después de 9
semanas, se sacrificaron los ratones por inhalación de
diclorometano. Se extrajeron el corazón y la aorta ascendente y se
lavaron con PBS DULBECCO'S (Life Technologies, Paisley, Escocia). La
mitad inferior del corazón se sometió a transección a lo largo de
una línea entre las puntas de las aurículas para obtener una base
para la aorta ascendente emergente. Este procedimiento permitió una
incrustación vertical exacta de la aorta en
Tissue-Tek (Miles, EE.UU.) para secciones
transversales planas óptimas. Las secciones se congelaron en
nitrógeno líquido y se guardaron a -80ºC hasta su estudio
ulterior.
Se utilizó una modificación del método descrito
por Paigen et al. (29) para evaluar la formación de lesiones
aórticas. Los bloques de tejido congelados se pusieron en un
criotomo, y se recogieron secciones seriadas de 8 \mum de la aorta
ascendente sobre portaobjetos de vidrio recubiertos hasta que fue
posible localizar la porción más próxima al cráneo del seno aórtico
por examen de secciones sin teñir. Una vez identificada esta sección
(No. 1), las 35 secciones craneales, que cubrían 280 \mum de la
aorta ascendente, se pusieron sobre portaobjetos separados para
evaluación ulterior. Cada quinta sección de los primeros 280 \mum
de la aorta ascendente se tiñó con rojo de aceite O (Riedel de Haen,
Alemania) y se sometió a contratinción con hemalaun (Merck,
Darmstadt, Alemania) y elástica van Gieson (Chroma Gesellschaft,
Schmid GmbH, Köngen, Alemania). El área de la lesión así como el
área de la capa íntima y la media se determinaron a ciegas
utilizando un sistema de planimetría por microscopía ayudado por
video-ordenador (Zeiss, Oberkochen, Alemania; Video
Camera 3 CCD, Sony; aumento de lente 40x; IBAS-2 con
IBAS Version 2.0 Standard, Kontron, Munich, Alemania).
Se contó el número de lesiones como se ha
descrito previamente por revisión de cada 5ª sección. Este
procedimiento dio como resultado 40 \mum entre cada sección
evaluada. Se contó también el número de lesiones de cada sección
transversal. El tamaño de las lesiones se determinó como longitud de
lesión a lo largo del perímetro aórtico luminal que se relacionó con
el perímetro aórtico luminal total en la sección.
\global\parskip0.920000\baselineskip
La extensión de la proliferación de la neoíntima
se cuantificó por medida del área (\mum^{2}) de la neoíntima y
la media en cada aorta ascendente a partir de 3 secciones (No. 10,
20 y 30). En cada sección se analizaron 4 sectores (a 0º, 90º, 180º
y 270º) de la pared del vaso en una ventana definida de 63 \mum x
63 \mum para medir el área de la neoíntima confinada por la capa
endotelial y la lámina elástica interna y la lámina elástica
externa. Se promedió para cada animal la relación de áreas de la
neoíntima a la media (NI/M).
Se seleccionaron secciones criostáticas seriadas
(8 \mum) de las tres partes siguientes de la aorta ascendente:
8-32 \mum, 120-144 \mum y
240-264 \mum distales al seno aórtico. Las
secciones congeladas se fijaron en acetona enfriada con hielo y se
secaron durante 10 minutos. Las secciones se incubaron luego durante
10 minutos en una dilución 1:1000 de suero de ratón (Sigma, St.
Louis, Missouri, EE.UU.). Después de lavar con RPMI 1640 (Life
Technologies, Paisley, Escocia), las secciones se incubaron durante
40 minutos a la temperatura ambiente con una dilución 1:100 de un
anticuerpo monoclonal de rata anti-ratón contra
ICAM-1 (CF54) o VCAM-1 (CD106,
Dianova GmbH, Hamburgo, Alemania). La detección de
monocitos/macrófagos se realizó utilizando el anticuerpo monoclonal
de rata anti-ratón CD11b (MAC-1)
(Serotec Ltd., Oxford, Inglaterra).
Después de pasos de lavado adicionales con
tampón TRIS (USB, Cleveland, OH, EE.UU.) e incubación con un
anticuerpo secundario (IgG AffiniPureMouse
anti-rata, Dianova, Alemania) (1:400) durante 10
minutos, seguidos por incubación con un anticuerpo enlazador
(Dualsystem-Brückenantikörper; Dianova, Hamburgo,
Alemania) (1:600) durante 10 minutos, las secciones se incubaron con
un complejo de fosfatasa
alcalina-anti-fosfatasa alcalina
(APAPP) (1:50; Dianova, Hamburgo, Alemania) durante 30 minutos. El
revelado de las secciones se realizó en solución reveladora de
neufuchsina. Las secciones se sometieron finalmente a contratinción
con hemalaun (Merck, Darmstadt, Alemania) durante 10 segundos. Las
secciones de control se trataron con anticuerpo enlazador secundario
y complejo APAAP solamente.
La intensidad de la tinción con
ICAM-1 y VCAM-1 se evaluó de 1 a 4
como sigue: registro 1 = tinción nula, registro 2 = tinción débil,
registro 3 = tinción moderada, y registro 4 = tinción fuerte de las
células vasculares. El número de células positivas a CD11b se
sometió a recuento en cada sección, y se clasificó la localización
de las células como adherentes a la pared, o localizadas en la capa
íntima o en la media.
Se recogió sangre por la vía de la vena del rabo
de todos los ratones después de mantenerse en ayunas durante una
noche antes de la iniciación del experimento, después de 14 días de
alimentación con las dietas diferentes, y en el momento de la
muerte. Los niveles de colesterol total en plasma se determinaron
utilizando el método CHOD-PAP (Boehringer Mannheim,
Alemania) como ha sido descrito previamente (32).
Se analizaron los resultados por análisis de dos
vías de la varianza con medidas repetidas y análisis de una sola vía
de la varianza con contrastes apareados por Scheffé. Las diferencias
en la expresión de monocitos positivos a ICAM-1,
VCAM-1 y CD11b se analizaron con el método Anova no
paramétrico de Kruskal-Wallis de una sola vía. Los
valores de área de la neoíntima y la relación NI/M se promediaron
para todos los grupos y las diferencias se analizaron asimismo con
el método Anova de Kruskal-Wallis de una sola vía.
Los datos representados son valores medios\pmSEM. Todos los
ensayos se realizaron con SPSS para la Versión Windows 6.1.3.
Las concentraciones medias de colesterol en los
grupos de estudio el día 35 eran: Grupo 1 (control) 92\pm3 mg/dl,
Grupo 2 (dieta aterogénica) 445\pm10 mg/dl y Grupo 3 (dieta
aterogéncia y c^{3}Ado) 410\pm19 mg/dl. La Tabla 1 resume las
características de los diferentes grupos. Obsérvese el aumento
adicional desde el día 35 al día 65 durante el tratamiento con
c^{3}Ado (Grupo 3), que era estadísticamente significativo (p <
0,026) y puede ser debido a una interacción de
3-desazaadenosina con el metabolismo de las
lipoproteínas.
Con objeto de examinar la aorta en cuanto a
formación de vetas grasas, se cuantificaron 7 secciones congeladas
de la aorta ascendente por animal. Los ratones de control no
exhibían cambio ateroesclerótico alguno, mientras que los animales
del Grupo de estudio 2 exhibían lesiones múltiples que contenían
lípidos, que cubrían la pared del vaso de la aorta ascendente como
se demostró por tinción con rojo de aceite O (Figura 2). El número
medio de lesiones por animal en este grupo era 5,4\pm1,6
(intervalo 0-14), y el porcentaje del revestimiento
aórtico era 3,4\pm2,8% (véase la Tabla 3). En contraste, los
animales del Grupo 3 que recibieron c^{3}Ado además de la dieta
aterogénica, no tenían lesión detectable alguna en las secciones
estudiadas.
\global\parskip0.990000\baselineskip
Los ratones del Grupo 2 exhibían proliferación
notablemente incrementada de la neoíntima cuando se compararon con
los animales del Grupo 1 o el Grupo 3 (Figura 3). El análisis
planimétrico de las áreas íntimas de la aorta ascendente proximal
demostró un fuerte aumento de la neoíntima (450\pm775
\mum^{2}) cuando se comparó con ratones de control (160\pm38
\mum^{2}, p < 0,001). El tratamiento con c^{3}Ado en
ratones alimentados con la dieta aterogénica dio como resultado una
inhibición de la proliferación de la neoíntima (125\pm32
\mum^{2}; p < 0,001). El espesor de la neoíntima tal como se
midió por la relación NI/M era 94% menor en los ratones tratados con
c^{3}Ado en comparación con ratones sometidos a dieta aterogénica
sola (0,002\pm0,0004 frente a 0,033\pm0,005; p < 0,001). Los
ratones de control exhibían la misma relación NI/M comparados con el
grupo de tratamiento. Estos resultados se resumen en la Tabla 3 y la
Figura 1.
Los animales alimentados con la dieta
aterogénica exhibían células monocíticas positivas a CD11b que se
adherían al endotelio y estaban localizadas en el interior de la
capa íntima de la aorta. La mayoría de estas células estaban
asociadas por lesiones ateroescleróticas (Figura 5). En contraste,
no se detectó célula monocítica alguna en el interior de la capa
íntima y únicamente un pequeño número de células adherentes
positivas a CD11b en la superficie luminal en los animales del Grupo
3 que habían recibido c^{3}Ado. En las secciones de los animales
de control sometidos a dieta estándar no se encontraba monocito
alguno.
Los autores de la invención investigaron
ulteriormente la regulación de las moléculas de adhesión
VCAM-1 e ICAM-1 que se ha sugerido
en ambos casos están implicadas directamente en la formación de
lesiones ateroescleróticas. La tinción inmunohistológica demostró
una expresión endotelial intensa de VCAM-1 e
ICAM-1 en todas las secciones congeladas analizadas
de la aorta ascendente de los ratones sometidos a la dieta
aterogénica. Ambas moléculas de adhesión se expresaban
abundantemente en las lesiones con extensión hacia regiones no
implicadas. En notable contraste, la expresión de
VCAM-1 e ICAM-1 estaba completamente
ausente en los ratones tratados con c^{3}Ado como lo estaba en los
animales de control (Figura 4). c^{3}Ado inhibía por completo la
expresión endotelial de ambas moléculas de adhesión. Para una
cuantificación de las imágenes, se remite a la Tabla 2.
Los valores se expresan como valores
medios\pmSEM. Las diferencias entre los controles y los Grupos 2 y
3 eran estadísticamente significativas. *p < 0,001, analizado por
análisis de dos vías de la varianza con medidas repetidas y análisis
de una sola vía de la varianza con contraste apareado por Scheffé.
NS indica no significativo.
Las diferencias entre el grupo 2 y el grupo 3
eran estadísticamente significativas. *p < 0,001 y
\daggerp=0,004 analizadas por sumas medias de rango obtenidas con
el ensayo Kruskal-Wallis.
\ddagger Valor medio\pmSEM por sección
registrado de 3 secciones definidas por animal.
\vskip1.000000\baselineskip
Las diferencias eran estadísticamente
relevantes.
*p < 0,001 analizada por sumas medias de
rangos obtenidas con el ensayo Kruskal-Wallis.
\dagger Valor medio\pmSEM determinado de 3
secciones por animal.
\ddagger Valor medio\pmSEM calculado a
partir de 7 secciones por animal.
Se administró por vía oral
3-desazaadenosina por mezcla en la alimentación
regular a una concentración final de 0,04 mg/g, de acuerdo con una
dosis oral diaria de 10 mg/kg de c^{3}Ado por animal, además de o
en ausencia de ciclosporina (0,2 mg/kg de peso corporal) a ratas
Lewis que recibieron corazones trasplantados heterotópicamente
procedentes de ratas Fisher. Para un tercer grupo de control, se
administró únicamente ciclosporina cada día a los otros receptores
de aloinjertos. Todos los animales recibieron una dieta estándar a
todo lo largo del período de estudio. Los aloinjertos se recogieron
el día 120, y se evaluó el latido del injerto cardiaco por palpación
diaria, interpretándose como rechazo la cesación completa del latido
del injerto. Todas las ratas aceptaron aloinjertos cardiacos sin
tratamiento ulterior alguno durante la duración de observación.
Para el análisis inmunohistoquímico de
VCAM-1 e ICAM-1, se obtuvieron dos
secciones transversales completas del corazón trasplantado de
aproximadamente 3 mm de espesor, y se guardaron en un compuesto con
temperatura de corte óptima. Se cortaron secciones seriadas y se
sumergieron en acetona fría durante 10 minutos. Los procedimientos
de tinción se realizaron como se ha descrito previamente. La
expresión de las moléculas de adhesión se registró sobre la base de
células endoteliales y células musculares lisas de arterias
epicárdicas y arteriolas intramiocárdicas. El análisis se realizó
semicuantitativamente por registro de la intensidad de la tinción y
recuento del número de células
teñidas.
teñidas.
La definición de la vasculopatía del injerto se
realizó como sigue: los vasos sanguíneos que tenían una capa de
células musculares lisas bien definida y lámina elástica interna en
la pared vascular se identificaron como arterias rastreables. Se
calculó cada sección transversal completa de las arterias
rastreables. Las secciones fueron revisadas por dos revisores
independientes que ignoraban la condición de los portaobjetos, y los
cambios histológicos se evaluaron semicuantitativamente. Los cambios
de engrosamiento de la capa íntima se registraron como ligero
(registro 1, < 25% de oclusión del lumen) cuando la capa íntima
era fácilmente apreciable, o como moderado (registro 2,
25-50% de oclusión) a severo (registro 3, > 50%
de oclusión).
Los isoinjertos y aloinjertos en ratas que
habían recibido 3-desazaadenosina o ciclosporina o
ambos fármacos juntos se mantuvieron latiendo durante toda la
duración de la observación. La intensidad del latido de los
aloinjertos era comparable a la de los isoinjertos. No se registró
complicación alguna como resultado de la terapia con
3-desaza. En los ratones que recibieron
3-desaza los injertos se mantuvieron completamente
exentos de rechazo, mientras que en los animales que recibieron
ciclosporina sola se observó un rechazo ligero.
Así pues, la 3-desazaadenosina
reducía significativamente el rechazo de los corazones trasplantados
con la misma (o mejor) eficacia que el conocido fármaco
inmunosupresor ciclosporina.
Los corazones nativos y los isoinjertos no
exhibían engrosamiento alguno de la capa íntima en las arterias
coronarias. En el grupo de ratas que recibieron ciclosporina, las
arterias intramiocardica y epicárdica exhibían un engrosamiento
significativo de la capa íntima y un tercio de los vasos estaban
prácticamente ocluidos al cabo de 120 días. El grupo de ratas que
recibieron 3-desazaadenosina, no se registraba
prácticamente engrosamiento alguno de la capa íntima arterial.
Por consiguiente, la
3-desazaadenosina inhibía significativamente la
ateroesclerosis de los injertos en los corazones trasplantados.
Los isoinjertos y corazones nativos estaban
exentos por igual de la expresión de ICAM-1 y
VCAM-1. En contraste, estas moléculas estaban
fuertemente reguladas en sentido creciente en la neoíntima de los
corazones trasplantados que recibieron ciclosporina sola. Por el
contrario, no se registraba prácticamente expresión alguna de
ICAM-1 y VCAM-1 en las ratas que
recibieron 3-desazaadenosina.
Por consiguiente, la
3-desazaadenosina bloquea la expresión de
ICAM-1 y VCAM-1 en la capa íntima de
las arterias coronarias de los corazones trasplantados.
1. Ross, Nature 1993,
362:801-9
2. Alexander, N.Engl.J.Med.
1994, 331:468-9
3. Entmann and Ballantyne,
Circulation 1993, 22:800-3
4. Springer, Cell 1994,
76:301-314
5. Steinberg and Witztum,
JAMA 1990, 264:3047-3052
6. Jang et al.,
J.Am.Coll.Cardiol. 1994, 24:1591-1601
7. Poston et al., Am. J.Pathol.
1992, 140:665-673
8. Cybulsky et al., Science
1991, 251:788-91
9. Li et al.,
Atheroscler.Thromb. 1993, 13:197-204
10. Richardson et al.,
Arterioscler.Thromb. 1994, 14:760-769
11. Qiao et al.,
Arterioscler.Thromb. 1994,
14:1480-1497
12. van der Wal et al., Am.
J.Pathol. 1992, 141:1427-1433
13. O'Brien et al.,
J.Clin.Invest. 1993, 92:945-951
14. Nageh et al.,
Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol. 1997,
17:1517-1520
15. Aksamit et al., J.Biol.Chem.
1982, 257:621-625
16. Aksamit et al., J.Biol.Chem.
1983, 258:20-23
17. García-Castro et
al., J.Biol.Chem. 1983, 4345-4349
18. Medzihradsky, J.Immunol.
1984, 133:946-949
19. Jurgensen et al., J.Immunol.
1990, 144:653-661
20. Chiang: in Biological Methylation
and Drug Design (Borchardt RT, Creveling CR, Ueland PM, eds.),
Humana Press, Clifton, NJ
1986:239-251
21. Cantoni: in Biological Methylation
and Drug Design (Borchardt RT, Creveling CR, Ueland PM, eds.),
Humana Press, Clifton, NJ
1986:227-238
22. Sung and Silverstein,
J.Biol.Chem. 1985, 260:546-554
23. Zimmermann et al.,
J.Biol.Chem. 1984, 259:1122-1126
24. Zimmermann et al.: in
Biological Methylation and Drug Design (Borchardt RT, Creveling CR,
Ueland PM, eds.), Humana Press, Clifton, NJ
1986:417-426
25. Smith et al.,
Int.J.Tiss.Reac. 1991, 13:1-18
26. Flexner et al., Lancet
1992, 339:438 (letter)
27. Paigen et al.,
Atherosclerosis 1985, 57:65-73
28. Paigen et al.,
Proc.Natl.Acad.Sci. USA 1987, 84:
3763-3767
29. Paigen et al.,
Atherosclerosis 1987, 68:231-240
30. Ishida and Paigen: in
Atherosclerosis in the Mouse. Genetic Factors in Atherosclerosis:
Approaches and Model Systems. 1989, Basel Switzerland,
Karger, pp. 189-222
31. Emeson and Shen,
Am.J.Pathol. 1993, 142:1905-1915
32. Kattermann et al.,
J.Clin.Chem.Clin.Biochem. 1984,
22:245-251
33. Lin et al., Atherosclerosis
1995, 115:85-88
34. Berrity, Am.J.Pathol.
1981, 103:181-190
35. Munro and Cotran,
Lab.Invest. 1988, 58:249-261
36. Ross and Fuster,
Atherosclerosis and Coronary Arte-ry Disease. Edited
by Fuster V, Ross R and Topol EJ. Philadelphia,
Lippincott-Raven Publisher, 1996,
pp.511-537
37. Cybulsky et al, FASEB J.
1992, 6:1030A
38. Davies et al., J.Pathol.
1993, 171:223-229
39. Leonard et al.,
Biochem.Biophys.Res.Commun. 1974,
84:102-110
40. Shankar et al., J.Biol.Chem.
1992, 267:9376-9382
Claims (17)
1. Uso de 3-desazaadenosina y
sales de la misma o precursores de 3-desazaadenosina
que pueden ser degradados en el cuerpo en condiciones fisiológicas
para dar 3-desazaadenosina, en el cual el precursor
se selecciona de fosfatos de 3-desazaadenosina,
ácido
3-desazaadenosina-3'-monofosfórico,
3-desazaadenosina-3',5'-ciclofosfato
y/o ácido
3-desazaadenosina-5'-difosfórico,
para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o el
tratamiento de la vasculopatía de los trasplantes.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el
cual la vasculopatía de los trasplantes está asociada con la
expresión de las moléculas de adhesión ICAM-1 y
VCAM-1 en las células endoteliales.
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 a 2
para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o el
tratamiento de la ateroesclerosis de los injertos en órganos
trasplantados.
4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3 para
la fabricación de un medicamento contra la ateroesclerosis en los
corazones trasplantados.
5. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores para reducir el rechazo de órganos
trasplantados.
6. Uso de acuerdo con la reivindicación 5 para
reducir el rechazo de corazones trasplantados.
7. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores para la fabricación de un medicamento
para la prevención de la restenosis in-stent.
8. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores para la fabricación de un medicamento
para reducción del nivel de homocisteína.
9. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores en combinación con un medicamento
inmunosupresor.
10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9 en
combinación con ciclosporina.
11. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores en combinación con un agente reductor
del colesterol.
12. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores en el cual el medicamento se administra
por vía oral.
13. Uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores en el cual la dosis está comprendida en
el intervalo de 0,1 a 500 mg/kg de peso corporal por día.
14. Un stent recubierto con
3-desazaadenosina o una sal de la misma o precursor
de 3-desazaadenosina que puede desarrollarse en el
cuerpo en condiciones fisiológicas para dar
3-desazaadenosina, en el cual el precursor se
selecciona de fosfatos de 3-desazaadenosina, ácido
3-desazaadenosina-3'-monofosfórico,
3-desazaadenosina-3',5'-ciclofosfato
y/o ácido
3-desazaadenosina-5'-difos-fórico.
15. El stent de acuerdo con la reivindicación 14
que está recubierto covalentemente.
16. El stent de acuerdo con la reivindicación 14
para uso en la prevención de la restenosis, para la prevención de la
lesión de reperfusión, el tratamiento y la prevención de síndromes
coronarios infecciosos e inflamatorios, la prevención y el
tratamiento de la cardiomiopatía dilatada, la prevención y el
tratamiento de la miocarditis viral, y la prevención y el
tratamiento de infecciones por parásitos.
17. El stent de acuerdo con la reivindicación 16
para uso en la prevención de la restenosis después de intervenciones
coronarias.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP98116658 | 1998-09-03 | ||
| EP98116658 | 1998-09-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2270614T3 true ES2270614T3 (es) | 2007-04-01 |
Family
ID=8232575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES99946099T Expired - Lifetime ES2270614T3 (es) | 1998-09-03 | 1999-09-02 | 3-desazaadenosina utilizada en la prevencion de la ateroesclerosis y la vasculopatia de los injertos. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6693088B1 (es) |
| EP (1) | EP1107765B1 (es) |
| AT (1) | ATE335493T1 (es) |
| AU (1) | AU5858899A (es) |
| DE (1) | DE69932728T2 (es) |
| ES (1) | ES2270614T3 (es) |
| WO (1) | WO2000013691A2 (es) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69932728T2 (de) * | 1998-09-03 | 2007-09-06 | Kerckhoff-Klinik Gmbh | 3-deazaadenosin zur vorbeugung der atherosklerose und mit transplantat assoziierten vaskulopathie |
| DE10124820A1 (de) * | 2001-05-21 | 2002-12-05 | Heinrich Wieland | Zusammensetzung und Verwendung von Substanzen zur Stabilisierung von schwefelhaltigen Aminosäuren im Blut |
| US8814937B2 (en) | 2008-09-18 | 2014-08-26 | Peter L. Mayer | Intervertebral disc prosthesis, method for assembling, method for implanting prosthesis, and method for explanting |
| US8187333B2 (en) | 2008-09-18 | 2012-05-29 | Mayer Peter L | Intervertebral disc prosthesis and method for implanting and explanting |
| US9393126B2 (en) | 2012-04-20 | 2016-07-19 | Peter L. Mayer | Bilaterally placed disc prosthesis for spinal implant and method of bilateral placement |
| US9364339B2 (en) | 2012-04-30 | 2016-06-14 | Peter L. Mayer | Unilaterally placed expansile spinal prosthesis |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK431879A (da) | 1978-10-13 | 1980-04-14 | Wellcome Found | Fremgangsmaade til fremstilling af praeparater og konbinationer indeholdende adenosinderivater |
| GB2074858B (en) | 1980-04-23 | 1985-03-20 | Wellcome Found | Compositions containing 3-deazaaden-osine |
| US4322411A (en) * | 1980-04-25 | 1982-03-30 | Burroughs Wellcome Co. | Anti-inflammatory nucleosides |
| ES2071207T3 (es) * | 1990-02-08 | 1995-06-16 | Howmedica | Dilatador hinchable. |
| US20030203976A1 (en) * | 1993-07-19 | 2003-10-30 | William L. Hunter | Anti-angiogenic compositions and methods of use |
| DE69932728T2 (de) * | 1998-09-03 | 2007-09-06 | Kerckhoff-Klinik Gmbh | 3-deazaadenosin zur vorbeugung der atherosklerose und mit transplantat assoziierten vaskulopathie |
-
1999
- 1999-09-02 DE DE69932728T patent/DE69932728T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-02 AT AT99946099T patent/ATE335493T1/de active
- 1999-09-02 EP EP99946099A patent/EP1107765B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-02 WO PCT/EP1999/006462 patent/WO2000013691A2/en active IP Right Grant
- 1999-09-02 US US09/786,672 patent/US6693088B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-02 AU AU58588/99A patent/AU5858899A/en not_active Abandoned
- 1999-09-02 ES ES99946099T patent/ES2270614T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-09-04 US US10/655,225 patent/US7785614B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-11-04 US US12/612,537 patent/US8158142B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7785614B2 (en) | 2010-08-31 |
| ATE335493T1 (de) | 2006-09-15 |
| EP1107765A2 (en) | 2001-06-20 |
| US20040106563A1 (en) | 2004-06-03 |
| US20100106244A1 (en) | 2010-04-29 |
| EP1107765B1 (en) | 2006-08-09 |
| WO2000013691A3 (en) | 2000-06-02 |
| DE69932728D1 (de) | 2006-09-21 |
| DE69932728T2 (de) | 2007-09-06 |
| US6693088B1 (en) | 2004-02-17 |
| US8158142B2 (en) | 2012-04-17 |
| WO2000013691A2 (en) | 2000-03-16 |
| AU5858899A (en) | 2000-03-27 |
| WO2000013691A9 (en) | 2000-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lin et al. | Lowering of dietary advanced glycation endproducts (AGE) reduces neointimal formation after arterial injury in genetically hypercholesterolemic mice | |
| US8518882B2 (en) | Methods and compositions for ameliorating or inhibiting decline in memory or intelligence or improving same | |
| US8158142B2 (en) | 3-deazaadenosine prevents atherosclerosis and graft vasculopathy | |
| Brunetti et al. | 5-Fluorouracil enhances azidothymidine cytotoxicity: in vitro, in vivo, and biochemical studies | |
| Keating et al. | Evidence of brain methyltransferase inhibition and early brain involvement in HIV-positive patients | |
| CN103599124A (zh) | 含有cdp-胆碱的组合物及其使用方法 | |
| Breil et al. | Alteration of n-3 fatty acid composition in lung tissue after short-term infusion of fish oil emulsion attenuates inflammatory vascular reaction | |
| ES2244968T3 (es) | Reduccion del volumen de infarto usando citocolina. | |
| IL117420A (en) | Use of citicoline for the prepartion of a medicament for protecting the brain | |
| Shimamoto | Hyperreactive arterial endothelial cells in atherogenesis and cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor in prevention and treatment of atherosclerotic disorders | |
| WO2014087240A2 (en) | Compositions, methods and kits for preventing, reducing, and eliminating cancer metastasis | |
| Tanaka et al. | Probucol inhibits neointimal formation in carotid arteries of normocholesterolemic rabbits and the proliferation of cultured rabbit vascular smooth muscle cells | |
| Moulinoux et al. | The growth of MAT-LyLu rat prostatic adenocarcinoma can be prevented in vivo by polyamine deprivation | |
| Preckel et al. | Inert gases as the future inhalational anaesthetics? | |
| Windsor et al. | An investigation of routes of administration of heparin other than injection | |
| Ishidate et al. | Effect of polychlorinated biphenyls (PCBs) administration on phospholipid biosynthesis in rat liver | |
| Nakamura et al. | A novel adenosine analog, AMP579, inhibits neutrophil activation, adherence and neutrophil-mediated injury to coronary vascular endothelium | |
| Trauner et al. | Nitric oxide and guanosine 3′, 5′‐cyclic monophosphate stimulate bile secretion in isolated rat hepatocyte couplets, but not in isolated bile duct units | |
| Cartwright | Use of antibiotics. Antifungals. | |
| Worth | Azathioprine effect on normal canine liver and kidney function | |
| Kessler et al. | Effect of DL-ethionine on the intestinal absorption and transport of palmitic acid-1-14 C and tripalmitin-14 C. Role of intramucosal factors in the uptake of luminal lipids | |
| Friedman et al. | Experimental Stress, Blood Lipids, and Atherosclerosis | |
| Cornford | Glucose utilization rates are linked to the internal free glucose gradient in the rat tapeworm | |
| Kown et al. | The use of 99mtechnetium-labeled MCP-1 to assess graft coronary artery disease in rat cardiac allografts | |
| WO2022018705A1 (en) | A pharmaceutical composition for treating cardiovascular and cerebrovascular disorders,diseases in pregnant women and improving exercise tolerance |