ES2268970A1 - Nuevo medio de cultivo para la deteccion de dekkera bruxellensis/nrettanomyces bruxellensis. - Google Patents
Nuevo medio de cultivo para la deteccion de dekkera bruxellensis/nrettanomyces bruxellensis. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2268970A1 ES2268970A1 ES200501117A ES200501117A ES2268970A1 ES 2268970 A1 ES2268970 A1 ES 2268970A1 ES 200501117 A ES200501117 A ES 200501117A ES 200501117 A ES200501117 A ES 200501117A ES 2268970 A1 ES2268970 A1 ES 2268970A1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- culture medium
- amount
- yeasts
- food
- bruxellensis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 46
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 42
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 title claims abstract description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 6
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title abstract description 4
- 244000027711 Brettanomyces bruxellensis Species 0.000 claims abstract description 34
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 235000000287 Brettanomyces bruxellensis Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 19
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 claims abstract description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 claims description 17
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 7
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims description 7
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 7
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 claims description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical group Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 6
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 claims description 5
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 230000033629 detection of yeast Effects 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 4
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004886 process control Methods 0.000 claims description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 2
- -1 glucose Chemical compound 0.000 claims 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 37
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 description 9
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 4
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 4
- 241000235036 Debaryomyces hansenii Species 0.000 description 3
- OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N ethanol etoh Chemical compound CCO.CCO OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 2,2-dichloro-n-[(1s,2s)-1,3-dihydroxy-1-(4-nitrophenyl)propan-2-yl]acetamide Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@@H](CO)[C@@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- HXDOZKJGKXYMEW-UHFFFAOYSA-N 4-ethylphenol Chemical compound CCC1=CC=C(O)C=C1 HXDOZKJGKXYMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001489226 Barnettozyma californica Species 0.000 description 2
- 241000722885 Brettanomyces Species 0.000 description 2
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 2
- 241001123232 Kazachstania unispora Species 0.000 description 2
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 2
- 241001123224 Naumovozyma dairenensis Species 0.000 description 2
- 241000222051 Papiliotrema laurentii Species 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 241000235062 Pichia membranifaciens Species 0.000 description 2
- 241001123228 Saccharomyces paradoxus Species 0.000 description 2
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000222295 [Candida] zeylanoides Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 2
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXQGCWUGDFDQMF-UHFFFAOYSA-N 2-Ethylphenol Chemical class CCC1=CC=CC=C1O IXQGCWUGDFDQMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001522017 Brettanomyces anomalus Species 0.000 description 1
- 241001455953 Candida parapsilosis CBS 1954 Species 0.000 description 1
- 241001149669 Hanseniaspora Species 0.000 description 1
- 241000276227 Kazachstania kunashirensis Species 0.000 description 1
- 241001508816 Kazachstania transvaalensis Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000235087 Lachancea kluyveri Species 0.000 description 1
- 241000235651 Lachancea waltii Species 0.000 description 1
- 241001161419 Meyerozyma guilliermondii ATCC 6260 Species 0.000 description 1
- 241001397466 Millerozyma farinosa CBS 185 Species 0.000 description 1
- 241001443590 Naganishia albida Species 0.000 description 1
- 241001136637 Priceomyces carsonii Species 0.000 description 1
- 241000235072 Saccharomyces bayanus Species 0.000 description 1
- 241000302202 Saccharomyces bayanus CBS 424 Species 0.000 description 1
- 241000670409 Saccharomyces castelli Species 0.000 description 1
- 235000018370 Saccharomyces delbrueckii Nutrition 0.000 description 1
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000018368 Saccharomyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 244000288561 Torulaspora delbrueckii Species 0.000 description 1
- 235000014681 Torulaspora delbrueckii Nutrition 0.000 description 1
- 241000796515 Torulaspora delbrueckii CBS 1146 Species 0.000 description 1
- 241000500449 Vanderwaltozyma yarrowii Species 0.000 description 1
- 241000235017 Zygosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000235029 Zygosaccharomyces bailii Species 0.000 description 1
- 241000235033 Zygosaccharomyces rouxii Species 0.000 description 1
- 241000551280 Zygosaccharomyces rouxii CBS 732 Species 0.000 description 1
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000002547 anomalous effect Effects 0.000 description 1
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229940031154 kluyveromyces marxianus Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000004853 tetrahydropyridinyl group Chemical class N1(CCCC=C1)* 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000009369 viticulture Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/045—Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
La presente invención se refiere a un medio de cultivo caracterizado por una composición de glucosa como fuente de carbono, carbonato cálcico como tampón, agentes inhibidores de otros microorganismos, un inhibidor del crecimiento de bacterias, una fuente de nitrógeno y un indicador de pH, para detectar la presencia de levaduras de la especie Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis, contaminante de alimentos y bebidas. Proporcionando un método y sistema de detección de estas levaduras y su uso en la industria alimentaria y de bebidas.
Description
Nuevo medio de cultivo para la detección de
Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis.
La presente invención se refiere a un medio de
cultivo, en concreto a un medio de cultivo y su uso para el
aislamiento, detección diferencial y enumeración de levaduras de la
especie Dekkera bruxellensis/Bretanomyces bruxellensis
contaminantes de alimentos, bebidas y localizados también en
materiales usados para la manipulación y/o elaboración de alimentos
y bebidas.
Las levaduras causantes de deterioros
constituyen un problema cada vez mayor en la industria alimentaria.
El empleo de algunos procesos y/o procedimientos en esta industria
favorecen la colonización de levaduras. Aunque algunas especies de
levaduras patógenas han llegado a ser detectadas en alimentos y
pueden ser peligrosas para determinadas personas, el riesgo
fundamental no es sanitario, sino que estriba en el deterioro que
provocan en los alimentos, con las consecuentes pérdidas
económicas.
Una de las consecuencias de este deterioro,
asociado con grandes perdidas económicas, la encontramos en la
industria vinícola, donde los productos metabólicos responsables de
la alteración del vino por levaduras de la especie Dekkera
bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis son principalmente
fenoles volátiles, ácido acético y tetrahidropiridinas (cf. Kunkee,
R et al. The yeasts: Yeast Technology 1993, vol. 5,
pp.69-127; Fugelsang, K.C. Wine microbiology
1996, California State University at Fresno, Chapman &
Hall:London), provocando el "olor fenólico" característico en
el vino, debido a la presencia de cantidades significativas de
4-etil-fenol y
4-etil-guayacol (cf. Chatonnet P.
et al., American Journal Enology Viticulture 1997,
vol.48(4), pp. 443-448). Estos
descubrimientos renovaron el interés en el estudio de estos
compuestos, así como en los métodos de detección de
Dekkera/Brettanomyces bruxellensis.
Antes de estos trabajos, el origen de los
fenoles volátiles en los vinos se pensó que podría estar
relacionado con la actividad bacteriana (cf. Baumes B.J. et
al., Journal Science Food Agriculture 1986, vol.37, pp.
927-943; Cavin J.F. et al., Enologie
1998, pp. 498-533), pero las bacterias lácticas
sólo producen trazas de etilfenoles en las condiciones del vino y
las levaduras fermentadoras como Saccharomyces cerevisiae
son incapaces de producir estos compuestos (cf. Chatonnet P. et
al., Journal Science Food Agriculture 1992, vol. 60, pp.
65-178).
Teniendo en cuenta que los datos del estudio de
Chatonnet confirmaron que los microorganismos responsables de la
producción de fenoles volátiles en vinos son levaduras de la
especie Dekkera bruxellensis/Brettanomynes bruxellensis, se
diseñaron medios de cultivo para el aislamiento de este tipo de
levaduras.
Uno de los medios de cultivo es el llamado DBDM
y utiliza un indicador de pH para detectar la producción de ácido
(cf. Gerbaux et al., O.I.V. 2000, vol. 73
(835-836), pp. 581-599), el segundo
es el medio ITV Brett, que contiene ácidos cumárico y/o ferúlico
como fuente de carbono (cf. Rodrigues et al., Journal
Applied Microbiology 2001, vol 90(4), pp.
588-599; PT102306). Estos medios de cultivo son
complejos y contienen sustancias tóxicas.
Existe la necesidad de encontrar un nuevo medio
de cultivo fácil de preparar, más seguro y más barato que los ya
existentes.
Los autores de la presente invención han
descubierto, sorprendentemente, un medio de cultivo que contribuye
sustancialmente al aislamiento, detección y enumeración de cepas de
la especie Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis,
potencialmente contaminante en alimentos, bebidas y utensilios
usados para la manipulación, elaboración o envasado de alimentos y
bebidas. La detección rápida y segura de estas levaduras permite
evitar pérdidas económicas al producirse un deterioro en los
productos contaminados.
De acuerdo con un aspecto de la presente
invención, se proporciona un medio de cultivo para el aislamiento,
detección y enumeración de levaduras de la especie Dekkera
bruxellensis/Bretanomyces bruxellensis, contaminantes de
alimentos y de bebidas, que comprende una fuente de carbono, como
es la glucosa; un tampón y detector de la producción de ácido
acético, como es el carbonato cálcico; un inhibidor del crecimiento
de bacterias; agentes inhibidores de otros microorganismos; una
fuente de nitrógeno; un indicador de pH; y
agar-agar para su solidificación.
Una realización preferida de la presente
invención comprende cloranfenicol como inhibidor del crecimiento de
bacterias, etanol y cicloheximida como agentes inhibidores de otros
microorganismos, extracto de levadura como fuente de nitrógeno,
vitaminas, elementos traza, etc. y rojo neutro como indicador de
pH, con un rango de pH 6,4-8.
El medio de cultivo, proporcionado por la
presente invención, comprende la siguiente composición: una
cantidad de glucosa de entre 10 y 100 g/l, una cantidad de
carbonato cálcico de entre 20 y 30 g/l, una cantidad de extracto de
levadura de entre 3 y 5 g/l, una cantidad de etanol de entre 50 y 60
g/l, una cantidad de cloranfenicol de entre 0,5 y 0,6 g/l, una
cantidad de cicloheximida de entre 0,1 y 0,2 g/l, una cantidad de
rojo neutro de entre 0,03 y 0,07 g/l y una cantidad de
agar-agar de entre 15 y 20 g/l.
Una realización preferida del medio de cultivo
comprende 100 g/l de glucosa, 20 g/l de carbonato cálcico, 3 g/l de
extracto de levadura, 60 g/l de etanol, 0,5 g/l de cloranfenicol,
0,1 g/l de cicloheximida, 0,05 g/l de rojo neutro y 20 g/l de
agar-agar.
Otro aspecto de la invención es proporcionar un
método para la detección de levaduras de la especie Dekkera
bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis, contaminantes de
alimentos y bebidas, que comprende el medio de cultivo descrito en
la presente invención.
La detección en el medio de cultivo se produce
por incubación de una muestra en adecuadas condiciones de
crecimiento, apareciendo halos transparentes alrededor de las
colonias de estas levaduras y un olor a ácido acético
característico de esta especie. Donde la muestra puede ser
alimentos, bebidas y materiales usados en cualquier proceso de
elaboración y/o manipulación de alimentos y bebidas.
Otro aspecto más de la presente invención es
proporcional un kit o sistema de detección de levaduras de la
especie Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis en
alimentos, bebidas y materiales usados en cualquier proceso de
elaboración y/o manipulación de alimentos y bebidas que comprende
el medio de cultivo descrito en la presente invención.
Aún otro aspecto más de la presente invención es
proporcionar un uso del medio de cultivo, descrito en la presente
invención, para la inclusión en una galería de identificaciones,
junto con otros tests de identificación de levaduras.
Otro aspecto de la presente invención es
proporcional el uso del medio de cultivo, descrito en la presente
invención, en la industria alimentaria y de bebidas,
preferiblemente en calidad y control de procesos.
A lo largo de toda la descripción y
reivindicaciones de la especificación, la palabra "comprende"
y las variaciones de la misma, no pretenden excluir otros aspectos
de la presente invención, que resultarán evidentes para un experto
en la materia a la vista de la descripción.
La exposición detallada de los, modos de
realización que siguen se proporcionan a modo de ilustración y no
pretenden ser limitantes de la presente invención.
A continuación se ilustrará la invención
mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de
manifiesto la especificidad y efectividad de uso del nuevo medio de
cultivo.
Ejemplo
1
Fue preparado usando la siguiente
composición:
| - glucosa | 100 g/l | |
| - extracto de levadura | 3 g/l | |
| - carbonato cálcico | 20 g/l | |
| - agar-agar | 20 g/l | |
| - cloranfenicol | 0,5 g/l | |
| - cicloheximida | 0,1 g/l | |
| - etanol | 60 g/l | |
| - rojo neutro | 0,05 g/l |
Se pesaron los componentes uno por uno, excepto
el etanol y la cicloheximida, y se disolvieron en 930 ml de agua
(volumen necesario para preparar un litro de medio de cultivo). Se
esterilizó esta suspensión durante 15 minutos a 121ºC y se dejó
enfriar hasta una temperatura de 40-50ºC.
Posteriormente se pesó la cicloheximida para preparar 1 l de medio
de cultivo, se disolvió en 10 ml de agua destilada, se esterilizó
por filtración y se añadió al medio de cultivo ya estéril y
enfriado a 40-50ºC. Por último, se añadieron 60 ml
de etanol en condiciones asépticas al medio ya estéril y enfriado a
40-50ºC.
Ejemplo
2
El medio de cultivo de la presente invención fue
validado utilizando cepas de referencia de colecciones de cultivo
de distintas especies de levaduras potencialmente vínicas y se
probó en dos versiones, con etanol y sin etanol para comprobar sobre
qué levaduras tiene un mayor efecto la presencia de este componente
en el medio de cultivo.
Estas cepas se incubaron durante
10-15 días a 28ºC en estufa de incubación en el
medio de cultivo, con y sin etanol, y los resultados obtenidos se
recogen en la Tabla 1.
Se comprobó que de las especies analizadas, sólo
Candida tropicalis, Candida zeylanoides, Dekkera bruxellensis,
Saccharomyces unisporus, Saccharomyces dairenensis, Kluyveromyces
marxianus y Yarrowia lypolytica fueron capaces de crecer
en el medio diseñado tanto en presencia como en ausencia de
etanol.
Debaryomyces hansenii y Dekkera anómala
presentaron un crecimiento débil. Cryptococcus laurentii
creció solo en ausencia de etanol y Pichoa membranifaciens
lo hizo débilmente.
En ninguno de los casos se originó un halo de
solubilización del carbonato sódico, salvo en el caso de las cepas
de Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis. Esta es
la característica principal, junto con el olor a ácido acético
(olor a vinagre), de la presencia de estas levaduras.
| Crecimiento en | Crecimiento en | ||
| Microorganismos | el medio sin | el medio con | Halo |
| etanol | etanol | ||
| Cryptococcus albidus subsp. albidus CECT 1071 | - | - | - |
| Cryptococcus laurentii CECT 1077 | + | - | - |
| Candida glabrata CECT 1448 | - | - | - |
| Candida tropicalis CBS 1920 | + | + | - |
| Candida parapsilosis CBS 1954 | - | - | - |
| Candida zeylanoides CECT 1441 | + | + | - |
| Debaryomyces hansenii subsp. hansenii CBS 767 | - | - | - |
| Debaryomyces hansenii CECT 10019 | débil | débil | - |
| Dekkera anomala CBS 76 | débil | débil | - |
| Dekkera bruxellensis CBS 74 | + | + | + |
| Dekkera bruxellensis CECT 1451 | + | + | + |
| Hansiaspora uvarum CBS 314 | + | + | - |
| Hanseniaspora vinea CBS 2171 | + | + | - |
| Kluyveromyces qfricanus CBS 1963 | - | - | - |
| Kluyveromyces lactis CBS 683 | - | - | - |
| Kluyveromyces maxianus CECT 1442 | + | + | - |
| Kuyveromyces marxianus subsp. marxianus CECT 1018 | + | + | - |
| Kluyveromyces yarrowii CECT 1958 | - | - | - |
| Kluyveromyces waltii CECT 1950 | + | débil | - |
| Pichia carsonii CECT 1129 | - | - | - |
| Pichia farinosa CBS 185 | - | - | - |
| Pichia fermentan CECT 1455 | - | - | - |
| Crecimiento en | Crecimiento en | ||
| Microorganismos | el medio sin | el medio con | Halo |
| etanol | etanol | ||
| Pichia fermentan CBS 187 | - | - | - |
| Pichia guilliermondii ATCC 6260 | - | - | - |
| Pichia membranifaciens CBS 107 | - | - | - |
| Pichia membranifaciens CECT 1115 | débil | - | - |
| Saccharomyces bayanus CBS 424 | - | - | - |
| Saccharomyces bayanus CBS 380 | - | - | - |
| Saccharomyces castelli CBS 4309 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CBS 1171 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CECT 1317 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CECT 1319 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CECT 1171 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CECT 1325 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CECT 1318 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae CECT 1319 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae (oviformis) CBS 429 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae (norbensis) CBS 5378 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae (oleaceus) CBS 3093 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae aceti CBS 4054 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae subsp. italicum CBS 459 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae subsp. hienipiensis CBS 4903 | - | - | - |
| Saccharomyces paradoxus (fructosum) CBS 1544 | - | - | - |
| Saccharomyces cerevisiae subsp. willianensis CBS 381 | - | - | - |
| Saccharomyces martiniae CBS 6334 | - | - | - |
| Saccharomyces dairenensis CBS 421 | + | débil | - |
| Saccharomyces kluyveri CBS 3082 | - | - | - |
| Saccharomyces transvaalensis CBS 2189 | - | - | - |
| Saccharomyces kudriazevii NCYC 2889 | - | - | - |
| Saccharomyces kunashirensis CBS 7662 | - | - | - |
| Saccharomyces ludwigii CECT 10450 | - | - | - |
| Saccharomyces paradoxus CBS 1397 | - | - | - |
| Crecimiento en | Crecimiento en | ||
| Microorganismos | el medio sin | el medio con | Halo |
| etanol | etanol | ||
| Saccharomyces paradoxes CBS 1544 | - | - | - |
| Saccharomyces transvalensis CBS 2186 | - | - | - |
| Saccharomyces unisporus CBS 398 | + | + | - |
| Schizosaccharomyces pombe CBS 356 | - | - | - |
| Schizosaccharomyces pombe CECT 1378 | - | - | - |
| Torulaspora delbrueckii CECT 115 | - | - | - |
| Torulaspora delbrueckii CBS 1146 | - | - | - |
| Trichosporum beigelii CECT 1304 | - | - | - |
| Yarrowia lypolytica CBS 599 | + | + | - |
| Yarrowia lypolytica CBS 1808 | + | + | - |
| Yarrowia lypolytica CECT 1469 | + | + | - |
| Williopsis californica CBS 252 | - | - | - |
| Williopsis californica CBS 5760 | - | - | - |
| Zygosaccharomyces bailii CBS 680 | - | - | - |
| Zygosaccharomyces florentinos CBS 764 | - | - | - |
| Zygosaccharomyces rouxii CECT 1229 | - | - | - |
| Zygosaccharomyces rouxii CBS 732 | - | - | - |
Ejemplo
3
En este ejemplo se recogieron muestras de vinos
sospechosos de contener este tipo de levaduras por el olor a
fenoles volátiles cuya presencia fue confirmada por cromatografía
de gases.
Se analizó 1 ml de cada muestra de vino, que se
dispersó sobre las placas conteniendo el medio de cultivo, ya
descrito en el ejemplo 1, y se incubaron durante
10-15 días a 28ºC en una estufa de incubación.
Pasados 10-15 días de incubación
de las muestras se detectaron halos transparentes en el medio de
cultivo como resultado de la solubilización del carbonato cálcico y
un olor a ácido acético típico de estas especies de levaduras (olor
a vinagre).
En el medio de cultivo objeto de esta invención,
las colonias de Dekkera bruxellensis/Brettanomyces
bruxellensis aparecieron cinco días antes que en otros medios
de cultivo comerciales, conocidos por cualquier experto en la
materia, en los cuáles el crecimiento se frena además rápidamente
debido a la gran producción de ácido por parte de estas levaduras
que sólo puede neutralizar adecuadamente el carbonato cálcico
presente en el medio de cultivo descrito en la presente
invención.
Claims (14)
1. Un medio de cultivo para el aislamiento,
detección y enumeración de levaduras de la especie Dekkera
bruxellensis/Bretanomyces bruxellensis contaminantes de
alimentos y bebidas, caracterizado porque comprende una
fuente de carbono como la glucosa, un tampón como el carbonato
cálcico, un inhibidor del crecimiento de bacterias, agentes
inhibidores de otros microorganismos, una fuente de nitrógeno, un
indicador de pH y agar-agar.
2. Un medio de cultivo según la reivindicación
1, donde el inhibidor del crecimiento de bacterias es
cloranfenicol.
3. Un medio de cultivo según la reivindicación
1, donde los agentes inhibidores de otros microorganismos son
etanol y cicloheximida.
4. Un medio de cultivo según la reivindicación
1, donde la fuente de nitrógeno es extracto de levadura.
5. Un medio de cultivo según la reivindicación
1, donde el indicador de pH es rojo neutro.
6. Un medio de cultivo según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, donde la cantidad de glucosa está
entre 10 y 100 g/l, la cantidad de carbonato cálcico está entre 20
y 30 g/l, la cantidad de extracto de levadura está entre 3 y 5 g/l,
la cantidad de etanol está entre 50 y 60 g/l, la cantidad de
cloranfenicol está entre 0,5 y 0,6 g/l, la cantidad de
cicloheximida está entre 0,1 y 0,2 g/l, la cantidad de rojo neutro
está entre 0,05 y 0,07 g/l y la cantidad de
agar-agar está entre 15 y 20 g/l.
7. Un medio de cultivo según la reivindicación
6, donde la cantidad de glucosa es de 100 g/l, la cantidad de
carbonato cálcico es de 20 g/l, la cantidad de extracto de levadura
es de 3 g/l, la cantidad de etanol es de 60 g/l, la cantidad de
cloranfenicol es de 0,5 g/l, la cantidad de cicloheximida es de 0,1
g/l, la cantidad de rojo neutro es de 0,05 g/l y la cantidad de
agar-agar es de 20 g/l.
8. Un método para detección de levaduras de la
especie Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis
contaminantes de alimentos y bebidas, caracterizado porque
comprende un medio de cultivo, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7.
9. Un método según la reivindicación anterior,
donde la detección de las levaduras del genero Dekkera
bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis en el medio de cultivo
se produce por incubación de una muestra en adecuadas condiciones
de crecimiento, detectándose la aparición de halos transparentes
alrededor de las colonias de estas levaduras y de un olor a ácido
acético.
10. Un método según cualquiera de las
reivindicaciones 8 y 9, donde las muestras pueden ser alimentos,
bebidas y materiales usados en cualquier proceso de elaboración y/o
manipulación de alimentos y bebidas.
11. Kit para la detección de levaduras de la
especie Dekkera bruxellensis/Brettanomyces bruxellensis en
alimentos, bebidas y materiales usados en cualquier proceso de
elaboración y/o manipulación de alimentos y bebidas,
caracterizado porque comprende un medio de cultivo según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
12. Uso del medio de cultivo según las
reivindicaciones 1 a 7, para la inclusión en una galería de
identificación, junto con otros tests de identificación de
levaduras.
13. Uso del medio de cultivo según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 7, en la industria alimentaria y de
bebidas.
14. Uso del medio de cultivo según la
reivindicación anterior, en calidad y control de procesos.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200501117A ES2268970B1 (es) | 2005-05-10 | 2005-05-10 | Nuevo medio de cultivo para la deteccion de dekkera bruxellensis/brettanomyces bruxellensis. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200501117A ES2268970B1 (es) | 2005-05-10 | 2005-05-10 | Nuevo medio de cultivo para la deteccion de dekkera bruxellensis/brettanomyces bruxellensis. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2268970A1 true ES2268970A1 (es) | 2007-03-16 |
| ES2268970B1 ES2268970B1 (es) | 2008-02-16 |
Family
ID=38293743
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200501117A Active ES2268970B1 (es) | 2005-05-10 | 2005-05-10 | Nuevo medio de cultivo para la deteccion de dekkera bruxellensis/brettanomyces bruxellensis. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2268970B1 (es) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2311425A1 (es) * | 2007-10-24 | 2009-02-01 | Universidad Politecnica De Madrid | Nuevo metodo de deteccion y cuantificacion de levaduras de los generos brettanomyces y/o dekkera en vinos tintos y otras bebidas fermentadas o carbonizadas. |
| WO2014155369A2 (en) | 2013-03-29 | 2014-10-02 | Szegedi Tudományegyetem | Selective chromogenic medium |
| IT201900004015A1 (it) * | 2019-03-20 | 2020-09-20 | Dispositivo e procedimento per il rilevamento di un lievito del genere brettanomyces in una bevanda alcolica. |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000073495A1 (en) * | 1999-05-31 | 2000-12-07 | Instituto Superior De Agronomia | Culture medium for detection of dekkera and brettanomyces |
-
2005
- 2005-05-10 ES ES200501117A patent/ES2268970B1/es active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000073495A1 (en) * | 1999-05-31 | 2000-12-07 | Instituto Superior De Agronomia | Culture medium for detection of dekkera and brettanomyces |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2311425A1 (es) * | 2007-10-24 | 2009-02-01 | Universidad Politecnica De Madrid | Nuevo metodo de deteccion y cuantificacion de levaduras de los generos brettanomyces y/o dekkera en vinos tintos y otras bebidas fermentadas o carbonizadas. |
| WO2009053508A1 (es) * | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Universidad Politécnica de Madrid | Método de detección y cuantificación de levaduras de los géneros brettanomyces y/o dekkera en vinos tintos y otras bebidas fermentadas o carbonatadas |
| WO2014155369A2 (en) | 2013-03-29 | 2014-10-02 | Szegedi Tudományegyetem | Selective chromogenic medium |
| IT201900004015A1 (it) * | 2019-03-20 | 2020-09-20 | Dispositivo e procedimento per il rilevamento di un lievito del genere brettanomyces in una bevanda alcolica. | |
| WO2020188410A1 (en) * | 2019-03-20 | 2020-09-24 | Campolongo Simona | Device and method for detecting a yeast of the brettanomyces genus in an alcoholic beverage |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2268970B1 (es) | 2008-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Regueiro et al. | A review on the fermentation of foods and the residues of pesticides—biotransformation of pesticides and effects on fermentation and food quality | |
| Loureiro et al. | Spoilage yeasts in the wine industry | |
| Shearer et al. | Evaluation of a polymerase chain reaction–based system for detection of Salmonella Enteritidis, Escherichia coli O157: H7, Listeria spp., and Listeria monocytogenes on fresh fruits and vegetables | |
| Rouse et al. | Lactic acid bacteria with potential to eliminate fungal spoilage in foods | |
| Hammami et al. | Patulin and patulin producing Penicillium spp. occurrence in apples and apple-based products including baby food | |
| Arthur et al. | Microbial survey of selected Ontario-grown fresh fruits and vegetables | |
| Longin et al. | Efficiency of population-dependent sulfite against Brettanomyces bruxellensis in red wine | |
| Caggia et al. | Occurrence of Listeria monocytogenes in green table olives | |
| Castro-Rosas et al. | Incidence and behavior of Salmonella and Escherichia coli on whole and sliced zucchini squash (Cucurbita pepo) fruit | |
| JP2011521937A (ja) | 柑橘精油混合物の蒸気及びその抗微生物特性 | |
| ES2268970B1 (es) | Nuevo medio de cultivo para la deteccion de dekkera bruxellensis/brettanomyces bruxellensis. | |
| Beuchat | Thermal inactivation of yeasts in fruit juices supplemented with food preservatives and sucrose | |
| Malfeito-Ferreira | Spoilage yeasts in red wines | |
| Kłapeć et al. | Microbiological characterization of vegetables and their rhizosphere soil in Eastern Poland | |
| ES2624665T3 (es) | Medio cromogénico selectivo | |
| EP2377919B1 (en) | Method for identification of bacteria of the genus Pectinatus and culture medium therefor | |
| Wade et al. | Proteolytic fungi isolated from decayed and damaged raw tomatoes and implications associated with changes in pericarp pH favorable for survival and growth of foodborne pathogens | |
| JP7469060B2 (ja) | 微生物の検出方法、培地 | |
| PT1012225E (pt) | Métodos e composições para diminuir a degradação da cerveja | |
| Kawaguchi et al. | Effects of UV irradiation on Penicillium strains isolated from a bread plant and the application to bakery products | |
| Mubarak et al. | Antifungal activity of Hevea brasiliensis fresh latex and rubber processing effluent in relation to polyphenol composition and polyphenol oxidase activity as a possible protection approach against fungal disease. | |
| Dabhole et al. | Production and effect of killer toxin by Saccharomyces cerevisiae and Pichia kluyveri on sensitive yeasts and fungal pathogens | |
| Wang et al. | Recovery of Salmonella from internally and externally contaminated whole tomatoes using several different sample preparation procedures | |
| Pitt et al. | Methods for enumeration, isolation and identification | |
| McNamara et al. | Recovery of Alicyclobacillus from inhibitory fruit juice concentrates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20070316 Kind code of ref document: A1 |
|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2268970B1 Country of ref document: ES |