ES2245361T3 - Utilizacion de anetola-ditioletiona para la prevencion y tratamiento de toxicidad en el tendon inducida por un medicamento. - Google Patents
Utilizacion de anetola-ditioletiona para la prevencion y tratamiento de toxicidad en el tendon inducida por un medicamento.Info
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Abstract
Utilización de la anetol-ditioletiona para la fabricación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de la tenotoxicidad inducida por un medicamento inductor.
Description
Utilización de
anetola-ditioletiona para la prevención y
tratamiento de toxicidad en el tendón inducida por un
medicamento.
La presente invención se refiere a una nueva
utilización de la anetol-ditioletiona (o anetol
tritiona).
Las quinolonas, y especialmente las quinolonas de
segunda generación, las fluoroquinolonas, son unos antibióticos de
síntesis que, a causa de su gran actividad, son muy ampliamente
utilizadas.
Dichos productos son relativamente bien
tolerados; sin embargo, se ha evidenciado un efecto secundario
desde los años 90. Se trata de tendinopatías, que reagrupa
tendinitis y rupturas tendinosas que se presentan en la mayoría de
los casos a nivel del tendón de Aquiles, pero pueden afectar
igualmente al tendón cuadricipital, o, a nivel de la espalda, al
tendón superespinoso.
La duración de invalidez es de un promedio de 62
días para tendinitis simples y de 98 días para rupturas. (Simonin y
otros, Antimicrobial agents and chemotherapy, 44 (4), Abril 2000,
867-872).
Otras moléculas parecen tener efectos similares,
tales como las estatinas. En efecto, ciertos casos de tendinopatías
y de rupturas de tendón han sido catalogadas con la simvastatina
(Zocor® o Lodales®) pero también con las nuevas generaciones de
estatinas recientemente comercializadas.
Este fenómeno de tenotoxicidad era hasta el
presente mal conocido y no existían productos para ponerle
remedio.
La célula constitutiva del tendón es el tenocito;
en el tendón, dichas células están organizadas en columnas entre
las fibras de colágeno.
Los autores de la presente invención han
estudiado en un modelo celular de tenocito el efecto citotóxico de
las fluoroquinolonas. Inmediatamente han comprobado en este modelo
que la anetol-ditioletiona (Sulfarlem®), probada en
pretratamiento con puesta en contacto con dichos xenobióticos,
protege de manera sorprendente y única contra dicha tenotoxicidad,
mostrando el interés de esta molécula en la prevención y el
tratamiento de la tenotoxicidad inducida por medicamentos tales
como las quinolonas o las estatinas.
La anetol-ditioletiona puede ser
utilizada, por tanto, como medicamento administrado solo o en
administración conjunta con el antibiótico o la estatina en
prevención de la tenotoxicidad inducida por xenobióticos tales como
las quinolonas o las estatinas.
La presente invención tiene por objeto, por
tanto, la utilización de la anetol-ditioletiona
para la preparación de un medicamento destinado a la prevención y
al tratamiento de la tenotoxicidad inducida por medicamentos tales
como las quinolonas o las estatinas, que contienen la
anetol-ditioletiona sola o una mezcla o una
asociación con un medicamento inductor.
La anetol-ditioletiona puede ser
utilizada bajo una forma que contenga de 10 a 200 mg y puede ser
administrada a dosis de 10 a 200 mg/día.
A continuación se expondrán los resultados de
ensayos que ponen en evidencia el efecto de protección de la
anetol-ditioletiona.
La prueba efectuada es una prueba MIFALC
(Microtiración Fluorimetic Assay on Living Cells) de tipo II, es
decir que todas las etapas, comprendidas incluso la
detección/revelación, se hacen sobre células vivas, utilizando la
prueba una detección fluorimétrica en luz fría, a fin de
obtener la sensibilidad y la especificidad de detección máxima
necesaria para los estudios intracelulares. Los ensayos se llevan a
cabo sobre una línea de tenocitos inmortalizados, denominados TENO
(Teno Cell Line).
Los cultivos se llevan a cabo en frascos de 75
cm^{3} para la multiplicación celular y en placas de 96 pozos con
fondo plano para cultivo.
Los tenocitos son puestos en suspensión con un
poco de tripsina. Cuando las células se desprenden, la acción de la
tripsina es bloqueada por adición de medio de cultura que contenga
suero fetal de ternera. Después de centrifugación, el fondo se
recupera con medio completo HAM F-12, luego las
células son contadas con ayuda de un hemocitómetro de Malassez o de
Thoma. Se prepara a continuación una solución con 27500 células/ml
en un medio de cultivo completo y se depositan 200 \mul en cada
uno de los 60 pozos centrales de las microplacas de 96 pozos. Así
se tienen 5500 células por pozo. Las placas se ponen a incubar a
37ºC en atmósfera húmeda aire/CO_{2} (95%/5%). La prueba se
realiza después de 48 horas cuando las células se adhieren al
soporte.
Las diferentes fluoroquinolonas (o estatinas) son
utilizadas en solución yendo de 0,1 \muM a 1 mM en un disolvente
adaptado cuya inocuidad ha sido verificada previamente. La
tenotoxicidad de dichas moléculas ha sido estudiada según
diferentes protocolos: sin pretratamiento o con pretratamiento con
la anetol-ditioletiona ( a la dosis de 20 \muM),
72 horas antes de la puesta en contacto con los xenobióticos; las
células son colocadas entonces en cultivo en microplacas
directamente en suspensión en las soluciones de la
anetol-ditioletiona.
El día de la prueba, después de haber observado
la confluencia y el estado microscópico de las células, se elimina
el medio de cultura por inversión de las placas y se distribuyen en
cada pozo 200 \mul de una solución 20 \muMolar de
dihidro-diclorofluoresceína diacetato
(H_{2}DCF-DA), sonda fluorógena que penetra en las
células y permanece localizada en su citosol; este producto es
utilizado en rutina para evaluar los radicales libres producidos
por la
célula.
célula.
Las placas son colocadas entonces en estufa a 37º
durante 20 minutos.
Después de eliminación de la sonda por inversión
de las placas, los pozos son tratados con las diferentes soluciones
de xenobióticos y colocadas en la estufa. Se colocan a continuación
las placas en el fluorímetro equipado con el filtro de emisión de
535 nm y con el filtro de excitación de 485 nm.
Las unidades de fluorescencia son leídas después
de 40 minutos.
Los resultados están expresados en porcentaje de
fluorescencia con relación al testigo.
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Claims (2)
1. Utilización de la
anetol-ditioletiona para la fabricación de un
medicamento para la prevención o el tratamiento de la tenotoxicidad
inducida por un medicamento inductor.
2. Utilización, según la reivindicación 1, para
la fabricación de un medicamento que contenga de 10 a 200 mg de
anetol-ditioletiona.
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