ES2204326B1 - PROCEDURE FOR DETERMINING MICROBIAL CONTAMINATION OF A HARD SURFACE. - Google Patents

PROCEDURE FOR DETERMINING MICROBIAL CONTAMINATION OF A HARD SURFACE.

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Abstract

Procedimiento para determinar la contaminación microbiana de una superficie dura, que comprende a) unir de forma separable una placa estéril a dicha superficie dura, b) separar la placa de dicha superficie después de un tiempo determinado, c) incubar dicha placa con un medio de cultivo y d) inspecciona el crecimiento microbiano en dicho medio de cultivo. Este procedimiento puede ser realizado usando kit de componentes que comprende al menos una placa estéril, medios para manipular dicha placa de forma estéril y un adhesivo no pirógeno, no desinfectante y no tóxico.Method for determining microbial contamination of a hard surface, comprising a) separating a sterile plate from said hard surface, b) separating the plate from said surface after a certain time, c) incubating said plate with a means of culture and d) inspects the microbial growth in said culture medium. This procedure can be performed using a component kit comprising at least one sterile plate, means for handling said plate in a sterile manner and a non-pyrogenic, non-disinfectant and non-toxic adhesive.

Description

Procedimiento para determinar la contaminación microbiana de una superficie dura.Procedure to determine contamination microbial of a hard surface.

La presente invención se relaciona con el campo del control del entorno microbiano de superficies duras.The present invention relates to the field of the microbial environment control of hard surfaces.

El método para estudiar las cargas microbianas sobre superficies duras no ha cambiado desde hace 50 años por lo menos. Normalmente, las superficies se limpian y luego se procede a inocular cajas Petra con diluyente. Una variante de este método consiste en el uso de tiras de material plástico revestidas con medios de cultivo. Dichas tiras se aplican a las superficies a ensayar y luego se incuban a una temperatura adecuada. El principal inconveniente de estas técnicas es la necesidad de basarse en el supuesto de que los microorganismos se eliminan de la superficie en una cantidad importante y que, en consecuencia, los números de los recuentos constituyen una indicación real de la carga microbiana existente sobre la superficie. Sin embargo, cuando quedan retenidas bacterias sobre la superficie o en el algodón usado para su limpieza, siempre se obtienen valores inferiores.The method to study microbial loads on hard surfaces has not changed for 50 years so less. Normally, surfaces are cleaned and then proceed to inoculate Petra boxes with diluent. A variant of this method It consists of the use of strips of plastic material coated with culture media. These strips are applied to surfaces to test and then incubate at a suitable temperature. He main drawback of these techniques is the need to be based on the assumption that microorganisms are removed from the area in a significant amount and that, consequently, the count numbers constitute a real indication of the existing microbial load on the surface. But nevertheless, when bacteria are retained on the surface or in the cotton used for cleaning, values are always obtained lower.

La entidad solicitante ha comprobado ahora que es posible evaluar la microbiología de superficies duras mediante el uso de pequeñas "superficies de ensayo" modelo. El uso de pequeños "chips de ensayo" que se fijan sobre la superficie dura a controlar permite evaluar de manera fiable el nivel de contaminación de una zona determinada y, por ejemplo, comprobar de forma cruzada la eficacia de los protocolos de limpieza y desinfección. La ventaja de utilizar una "superficie de ensayo" estándar es que con ello se evita cualquier ambigüedad a la hora de evaluar la carga bacteriana: la formación de biopelículas y/o la unión de bacterias a la superficie dura por desecación o por cualquier otro mecanismo deja de ser ya un hecho relevante, dado que se analiza todo el sistema ("chip de ensayo").The requesting entity has now verified that it is possible to evaluate the hard surface microbiology by Use of small "test surfaces" model. The use of small "test chips" that are fixed on the surface hard to control allows you to reliably assess the level of contamination of a given area and, for example, check for cross-way the effectiveness of cleaning protocols and disinfection. The advantage of using a "surface of "standard essay is that this avoids any ambiguity to when assessing bacterial load: the formation of biofilms and / or the binding of bacteria to the hard surface by drying or by any other mechanism is no longer a fact relevant, since the entire system is analyzed ("chip test").

La presente invención, según una primera modalidad, proporciona un procedimiento para determinar la contaminación microbiana de una superficie dura, caracterizado porque comprende: a) unir, de forma separable, una placa estéril a dicha superficie dura, b) separar dicha placa de dicha superficie después de un determinado tiempo, c) incubar dicha placa con un medio de cultivo y d) inspeccionar el crecimiento microbiano en dicho medio de cultivo.The present invention, according to a first modality, provides a procedure to determine the microbial contamination of a hard surface, characterized because it comprises: a) separably joining a sterile plate to said hard surface, b) separating said plate from said surface after a certain time, c) incubate said plate with a culture medium and d) inspect microbial growth in said culture medium.

El procedimiento según la invención está dirigido especialmente a la industria del procesado de productos alimenticios. El control de los procedimientos de limpieza y desinfección queda incluido en el sistema Hazard Analisis and Critical Control Points. Este sistema es de obligado cumplimiento en todas las industrias alimentarias de Europa y USA y, por tanto, en todos los países que exportan productos alimenticios a tales países. La tecnología de la presente invención, debido a su posibilidad de utilizarse directamente sobre las superficies, destaca claramente entre los protocolos actuales para determinar los niveles de contaminación y la eficacia de los procedimientos de limpieza y desinfección.The process according to the invention is directed especially to the product processing industry food. Control of cleaning procedures and disinfection is included in the Hazard Analysis and Critical Control Points. This system is mandatory in all food industries in Europe and the USA and therefore in all countries that export food products to such countries The technology of the present invention, due to its possibility of being used directly on surfaces, clearly stands out among the current protocols to determine the pollution levels and the effectiveness of the procedures of Cleaning and disinfection.

El procedimiento según la presente invención se puede emplear también para determinar la situación en el campo doméstico. Por medio de esta invención es posible evaluar fácilmente el tiempo necesario para detectar una contaminación doméstica. Además, es posible medir el nivel de actividad de un producto antibacteriano en situaciones reales.The process according to the present invention is you can also use to determine the situation in the field domestic. Through this invention it is possible to evaluate easily the time needed to detect a contamination domestic In addition, it is possible to measure the activity level of a antibacterial product in real situations.

La placa a utilizar en el procedimiento según la invención está constituida preferentemente de acero inoxidable. Sin embargo, es posible utilizar placas hechas de otros materiales tal como PVC, madera o plástico. La placa consiste preferentemente en un disco el cual tiene convenientemente un diámetro de 1 a 5 cm, más preferentemente de alrededor de 2 cm. Se pueden emplear, con resultados particularmente buenos, discos de acero 304 de la Calidad 2B (2 cm de diámetro) y con un tratamiento de acabado en ambos lados. Con preferencia, las superficies de las placas no deberán ser completamente planas, sino que tendrán un pequeño reborde en uno de los lados o serán de una forma ligeramente convexa (aproximadamente 1 mm de altura a un diámetro de 2 cm) para facilitar su unión sobre las superficies, en particular mediante aplicación de un adhesivo. Para evitar las influencias de metabolitos de suciedad y/o microbianos, es preferible que las placas se utilicen solo una vez, es decir, las placas deberán ser desechadas una vez utilizadas.The plate to be used in the procedure according to the The invention preferably consists of stainless steel. Without However, it is possible to use plates made of other materials such like PVC, wood or plastic. The plate preferably consists of a disc which conveniently has a diameter of 1 to 5 cm, more preferably about 2 cm. They can be used, with particularly good results, 304 steel discs of the Quality 2B (2 cm in diameter) and with a finishing treatment in both sides. Preferably, the surfaces of the plates do not they should be completely flat, but they will have a small flange on one side or they will be slightly convex  (approximately 1 mm high at a diameter of 2 cm) to facilitate bonding on surfaces, in particular by Application of an adhesive. To avoid the influences of dirt and / or microbial metabolites, it is preferable that plates are used only once, that is, the plates must be discarded once used.

Antes de su uso, las placas tienen que ser limpiadas, eliminando la grasa de su superficie. Para ese fin, deberá utilizarse un detergente y agua destilada estéril.Before use, the plates have to be cleaned, removing grease from its surface. For that end, a detergent and sterile distilled water should be used.

A continuación, puede realizarse una desinfección química, por ejemplo basada en el uso de alcohol isopropílico, para evitar cualquier modificación de la superficie de las placas inducida por la temperatura del autoclave cuando en su lugar se utiliza un método de desinfección por calor.Then a disinfection can be performed chemistry, for example based on the use of isopropyl alcohol, for avoid any modification of the surface of the plates temperature induced by the autoclave when instead Use a heat disinfection method.

Después de estas etapas preparativas, las placas deberán ser utilizadas directamente o deberán mantenerse en condiciones estériles, por ejemplo en cajas Petra, hasta el momento de su utilización. Para su uso, se emplea un medio estéril, por ejemplo unas pinzas, para tomar y fijar las placas sobre la superficie a estudiar. Para realizar esto, en uno de los lados de la placa se puede colocar una sustancia adhesiva. Esta sustancia adhesiva deberá ser no pirógena, carecer de actividad desinfectante y ser no tóxica. Con preferencia, no deberá ser un adhesivo a base de cianoacrilato. La placa puede pegarse entonces sobre la superficie a estudiar. Después de un tiempo dado, por ejemplo, una semana, para asegurar la contaminación normal que se produce en un hogar, el disco se separa de la superficie, por ejemplo con ayuda de un cortador, y se coloca en una caja Petra, preferentemente con una capa fina de agar. Sin embargo, si el objetivo consiste en evaluar la contaminación relacionada con la preparación de un alimento, y el tiempo necesario para preparar el alimento es de 1 hora, entonces el tiempo propuesto para mantener la placa sobre la superficie dura es de 1 hora. Se puede añadir entonces un agente neutralizante universal (por ejemplo, 1 ml) a la caja Petra y a continuación se puede dispensar una capa (por ejemplo, 15 ml aproximadamente) de medio de cultivo (por ejemplo, PCA o TSA). Cuando el medio de cultivo es sólido la cápsula de Petri puede ser incubada, (por ejemplo a 30° C aproximadamente durante 24-48 horas) en una incubadora, procediendo entonces a observar el crecimiento microbiano.After these preparatory stages, the plates they must be used directly or they must be kept in sterile conditions, for example in Petra boxes, so far of its use. For use, a sterile medium is used, for example some tweezers, to take and fix the plates on the surface to study. To do this, on one side of The plate can be placed an adhesive substance. This substance Adhesive should be non-pyrogenic, lack of disinfectant activity And be non-toxic. Preferably, it should not be a base adhesive of cyanoacrylate. The plate can then stick on the surface to study. After a given time, for example, a week, to ensure the normal contamination that occurs in a home, the disk separates from the surface, for example with help of a cutter, and placed in a Petra box, preferably with A thin layer of agar. However, if the goal is to evaluate the contamination related to the preparation of a food, and the time needed to prepare the food is 1 hour, then the proposed time to keep the plate on the Hard surface is 1 hour. You can then add an agent universal neutralizer (for example, 1 ml) to the Petra box and to a layer can then be dispensed (for example, 15 ml approximately) of culture medium (for example, PCA or TSA). When the culture medium is solid, the Petri dish can be incubated, (for example at approximately 30 ° C for 24-48 hours) in an incubator, proceeding Then observe the microbial growth.

Otra modalidad de la presente invención consiste en un kit (estuche) de partes componentes adecuado para utilizarse en el procedimiento antes descrito, que comprende al menos una placa estéril, medios para manipular dicha placa de: un modo estéril y un adhesivo no pirógeno, no desinfectante y no tóxico. Los otros componentes mencionados como útiles para el procedimiento de la invención, pueden estar también contenidos en dicho kit, por ejemplo, este último puede comprender además detergente, neutralizante, medio de cultivo y/o al menos una cápsula de Petri estéril. En una modalidad preferida, el kit comprende de 2 a 100, más preferentemente de 5 a 20 placas.Another embodiment of the present invention consists of in a kit (case) of component parts suitable for use in the procedure described above, which comprises at least one sterile plate, means for manipulating said plate in: one way Sterile and a non-pyrogenic, non-disinfectant and non-toxic adhesive. The  other components mentioned as useful for the process of the invention may also be contained in said kit, by example, the latter may also comprise detergent, neutralizer, culture medium and / or at least one Petri dish sterile. In a preferred embodiment, the kit comprises from 2 to 100, more preferably 5 to 20 plates.

El procedimiento según la presente invención permite un control muy sencillo de la contaminación microbiana sobre superficies duras, normalizando el método a utilizar, y hace que la comparación de los protocolos de limpieza y desinfección sean más fiables. La formación de biopelículas sobre superficies duras es fácil de controlar.The process according to the present invention allows very simple control of microbial contamination on hard surfaces, normalizing the method to use, and does that the comparison of cleaning and disinfection protocols Be more reliable. The formation of biofilms on surfaces Hard is easy to control.

Mediante el procedimiento según la presente invención es posible controlar las fuentes de contaminación sobre superficies duras, la evolución de las cargas microbianas sobre puntos de control críticos, por ejemplo durante la preparación de productos alimenticios, productos farmacéuticos, productos tecnológicos y cualesquiera otros productos que necesiten un control ambiental de bacterias, siendo posible también evaluar la eficacia de los protocolos de limpieza y desinfección.By the procedure according to the present invention it is possible to control the sources of contamination over hard surfaces, the evolution of microbial loads on critical control points, for example during the preparation of food products, pharmaceuticals, products technology and any other products that need a environmental control of bacteria, being possible also to evaluate the efficacy of cleaning and disinfection protocols.

Las placas se pueden colocar sobre áreas grandes para realizar mapeados de tales áreas. Por ejemplo, un conjunto de varios discos se puede distribuir sobre una pared, con un espacio de separación entre los discos de 1 m. Después de un análisis completo de las placas, se puede determinar con precisión en qué punto existe la contaminación más importante. En consecuencia, el área concreta en donde deberán intensificarse las operaciones de limpieza y desinfección queda identificada de un modo preciso y sencillo. Por otro lado, se puede unir un conjunto de discos a la superficie para realizar mapeados del proceso. Para realizar esto, se retiran, en tiempos determinados, discos individuales entre varios discos concentrados en un área pequeña (idealmente un punto), para poder obtener una imagen de la evolución de la contaminación en función del tiempo, por ejemplo durante un proceso industrial. Esto indicará el momento crítico para aplicar procedimientos concretos de limpieza y desinfección.Plates can be placed over large areas to map these areas. For example, a set of several discs can be distributed on a wall, with a space of separation between the discs of 1 m. After an analysis full of the plates, you can determine precisely on what point there is the most important pollution. Consequently, the specific area where the operations of cleaning and disinfection is precisely identified and simple. On the other hand, a set of discs can be attached to the surface for mapping the process. To do this, individual discs are removed at certain times between several disks concentrated in a small area (ideally a point), in order to obtain an image of the evolution of the pollution as a function of time, for example during a process industrial. This will indicate the critical moment to apply specific cleaning and disinfection procedures.

Claims (17)

1. Procedimiento para determinar la contaminación microbiana de una superficie dura, caracterizado porque comprende a) unir de forma separable una placa estéril a dicha superficie dura, b) separar la placa de dicha superficie después de un tiempo determinado, c) incubar dicha placa con un medio de cultivo y d) inspeccionar el crecimiento microbiano en dicho medio de cultivo.1. Method for determining microbial contamination of a hard surface, characterized in that it comprises a) separating a sterile plate from said hard surface, b) separating the plate from said surface after a certain time, c) incubating said plate with a culture medium and d) inspect the microbial growth in said culture medium. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la placa es de PVC, madera o acero inoxidable.2. Method according to claim 1, characterized in that the plate is made of PVC, wood or stainless steel. 3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado porque la placa es un disco y tiene un diámetro de 1 a 5 cm, con preferencia de alrededor de 2 cm.3. Method according to claim 2, characterized in that the plate is a disk and has a diameter of 1 to 5 cm, preferably about 2 cm. 4. Procedimiento según la reivindicación 2 o 3, caracterizado porque el disco tiene un reborde en uno de los lados o presenta una forma ligeramente convexa.Method according to claim 2 or 3, characterized in that the disk has a flange on one of the sides or has a slightly convex shape. 5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la placa estéril se une a la superficie utilizando un adhesivo no pirógeno, no desinfectante y no tóxico.5. Method according to any of claims 1 to 4, characterized in that the sterile plate is bonded to the surface using a non-pyrogenic, non-disinfectant and non-toxic adhesive. 6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque antes de la etapa a) la placa se esteriliza usando una desinfección química.Method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that prior to step a) the plate is sterilized using a chemical disinfection. 7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque, una vez separada la placa de la superficie, dicha placa se coloca en una cápsula de Petri, se añade un neutralizante universal y luego se dispensa una capa de medio de cultivo.Method according to any one of claims 1 to 6, characterized in that, once the plate is separated from the surface, said plate is placed in a Petri dish, a universal neutralizer is added and then a layer of culture medium is dispensed. 8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la placa con el medio de cultivo se incuba a 30° C aproximadamente durante 24-48 horas.Method according to any one of claims 1 to 7, characterized in that the plate with the culture medium is incubated at 30 ° C for approximately 24-48 hours. 9. Un kit de componentes de utilidad en el procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque comprende al menos una placa estéril, medios para manipular dicha placa de forma estéril y un adhesivo no pirógeno, no desinfectante y no tóxico.A kit of components useful in the process according to any one of claims 1 to 8, characterized in that it comprises at least one sterile plate, means for handling said plate in a sterile manner and a non-pyrogenic, non-disinfectant and non-toxic adhesive. 10. Un kit según la reivindicación 9, caracterizado porque comprende además un neutralizante.10. A kit according to claim 9, characterized in that it further comprises a neutralizer. 11. Un kit según la reivindicación 9 o 10, caracterizado porque comprende además al menos una cápsula de Petri estéril.11. A kit according to claim 9 or 10, characterized in that it further comprises at least one sterile Petri dish. 12. Un kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque los medios para manipular dicha placa consisten en pinzas estériles.12. A kit according to any of claims 9 to 11, characterized in that the means for handling said plate consist of sterile tweezers. 13. Un kit según la reivindicación 12, caracterizado porque comprende al menos una pinza estéril para cada análisis.13. A kit according to claim 12, characterized in that it comprises at least one sterile clamp for each analysis. 14. Un kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, caracterizado porque comprende de 2 a 100, preferentemente de 5 a 20 placas.14. A kit according to any of claims 9 to 13, characterized in that it comprises from 2 to 100, preferably from 5 to 20 plates. 15. Un kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, caracterizado porque la placa es un disco de acero inoxidable.15. A kit according to any of claims 9 to 14, characterized in that the plate is a stainless steel disc. 16. Un kit según la reivindicación 15, caracterizado porque el disco tiene un diámetro de 1 a 5 cm, preferentemente de alrededor de 2 cm.16. A kit according to claim 15, characterized in that the disk has a diameter of 1 to 5 cm, preferably about 2 cm. 17. Un kit según la reivindicación 15 o 16, caracterizado porque el disco tiene un reborde o presenta una forma ligeramente convexa.17. A kit according to claim 15 or 16, characterized in that the disc has a flange or has a slightly convex shape.
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