ES1295630U - SELECTION OF CAPACITATED SPERM (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) - Google Patents

SELECTION OF CAPACITATED SPERM (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) Download PDF

Info

Publication number
ES1295630U
ES1295630U ES202231325U ES202231325U ES1295630U ES 1295630 U ES1295630 U ES 1295630U ES 202231325 U ES202231325 U ES 202231325U ES 202231325 U ES202231325 U ES 202231325U ES 1295630 U ES1295630 U ES 1295630U
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
height
hollow
opening
spermatozoa
hollow compartment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
ES202231325U
Other languages
Spanish (es)
Other versions
ES1295630Y (en
Inventor
Parra Carmen Matas
Luis Alberto Vieira
Aguirregomezcorta Jon Romero
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Euskal Herriko Unibertsitatea
Universidad de Murcia
Original Assignee
Euskal Herriko Unibertsitatea
Universidad de Murcia
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Euskal Herriko Unibertsitatea, Universidad de Murcia filed Critical Euskal Herriko Unibertsitatea
Priority to ES202231325U priority Critical patent/ES1295630Y/en
Publication of ES1295630U publication Critical patent/ES1295630U/en
Application granted granted Critical
Publication of ES1295630Y publication Critical patent/ES1295630Y/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Device for selecting spermatozoa comprising: - at least a first hollow compartment (1), with an opening (A1) and with a height (H1); - at least a second hollow compartment (2) with an opening (A2) and with a height (H2); - a duct (3) located between the two hollow compartments (1) and (2), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), and connecting them at a height (T3) measured from the opening (A1, A2) and that is less than the height (H1, H2); - plugs (4), equal in number to the number of hollow compartments (1, 2), configured to be introduced into the opening (A1, A2) inside the hollow compartment (1, 2) up to a height (T1) or (T2), where the height (T1) and (T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3), said heights measured from the opening (A1, A2); so that the opening (A1, A2) of each hollow compartment (1, 2) is arranged at one of the ends of the height (H1, H2) and when all the plugs (4) close all the hollow compartments (1, 2) due to its opening (A1, A2), the device is hermetically closed and there is no connection between the inside of the device and the outside; and in which, by opening and filling the at least one first hollow compartment (1) to a depth (H1-T1) with a training medium (C1) and then proceeding to its closure, being at least a second hollow compartment (2) also closed, the air that occupied the volume where the plug (4) is inserted partially displaces and pushes the training medium inside the conduit (3); and when the at least one second hollow compartment (2) is opened and filled with training medium (C2) comprising spermatozoa, and then closed, the air that occupied the volume where the plug (4) is inserted displaces and partially pushes the capacitation means (C2) with sperm into the conduit (3), causing the capacitation means of both hollow compartments (1, 2) to come into contact at this time. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Description

DESCRIPCIÓNDESCRIPTION

SELECCIÓN DE ESPERMATOZOIDES CAPACITADOSSELECTION OF CAPACITATED SPERM

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓNTECHNICAL FIELD OF THE INVENTION

La presente invención se encuadra en el campo de la reproducción asistida de mamíferos, incluida la especie humana y, en concreto, en las técnicas de selección espermática, de análisis espermático y en las técnicas de fecundación in vitro. Más en particular, la presente invención describe un dispositivo para la selección de espermatozoides, así como el procedimiento de selección de espermatozoides y de técnicas de fecundación in vitro que comprenden el uso de dicho dispositivo.The present invention falls within the field of assisted reproduction of mammals, including the human species and, specifically, in sperm selection techniques, sperm analysis and in vitro fertilization techniques. More particularly, the present invention describes a sperm selection device, as well as the sperm selection procedure and in vitro fertilization techniques that comprise the use of said device.

ESTADO DE LA TÉCNICASTATE OF THE ART

En condiciones in vivo, los espermatozoides deben superar una serie de obstáculos en el aparato genital femenino, de modo que de entre los millones de espermatozoides que son eyaculados en la vagina, el número que llega al oviducto o trompa de Falopio está en el rango de decenas a cientos. Curiosamente, este bajo número de espermatozoides es suficiente para encontrar y fecundar al ovocito in vivo, mientras que, para que una fecundación asistida sea exitosa, se requieren, en muchas ocasiones, varios miles. Esta discrepancia podría explicarse por la presencia de diferentes poblaciones de espermatozoides dentro del eyaculado que varían en madurez o calidad intrínseca. En este sentido, se ha demostrado que solo una fracción de espermatozoides del eyaculado es capaz de navegar por el tracto genital femenino para fecundar el ovocito. Por lo tanto, hay una fuerte presión de selección que promueve el movimiento de una pequeña subpoblación de espermatozoides de calidad óptima hacia el lugar de fecundación (oviducto o trompa de Falopio).Under in vivo conditions, spermatozoa must overcome a series of obstacles in the female genital tract, so that among the millions of spermatozoa that are ejaculated in the vagina, the number that reach the oviduct or fallopian tube is in the range of tens to hundreds. Curiously, this low number of spermatozoa is enough to find and fertilize the oocyte in vivo, while for assisted fertilization to be successful, many thousands are required. This discrepancy could be explained by the presence of different sperm populations within the ejaculate that vary in maturity or intrinsic quality. In this sense, it has been shown that only a fraction of ejaculate spermatozoa is capable of navigating through the female genital tract to fertilize the oocyte. Therefore, there is a strong selection pressure that promotes the movement of a small subpopulation of optimal quality sperm to the fertilization site (oviduct or fallopian tube).

Los espermatozoides, una vez eyaculados y en el tracto genital femenino, alcanzan la madurez a través de un proceso conocido como capacitación, el cual les confiere la capacidad de fecundar. Sin embargo, este proceso solo tiene lugar aproximadamente en el 10% de los espermatozoides eyaculados. Se ha observado también que esta fracción espermática tiene la capacidad de seguir señales de migración hacia el ovocito a través del oviducto [Perez-Cerezales, et al., (2015). Asian J Androl 17(4), 628-32]. Asimismo, dentro de los diferentes mecanismos descritos para guiar a los espermatozoides, dos de ellos, termotaxis y quimiotaxis, actúan solo sobre espermatozoides capacitados. La termotaxis es el movimiento dirigido de las células a lo largo de un gradiente de temperatura, como guía a largo plazo en el oviducto [Bahat, A. et al., (2003) Nat Med 9(2), 149-50], mientras que la quimiotaxis es el movimiento de las células hacia un gradiente de concentración, como guía a corto plazo, mecanismo que actúa cerca del ovocito dentro de la ampolla del oviducto, donde tiene lugar la fecundación [Eisenbach, M. et al.,(2006) Nat Rev Mol Cell Biol 7(4), 276-85]. Por lo tanto, ambos fenómenos, termotaxis y quimiotaxis, pueden ser vistos como mecanismos para seleccionar espermatozoides capacitados y, por ende, óptimos para fecundar al ovocito.Once ejaculated and in the female genital tract, spermatozoa reach maturity through a process known as capacitation, which gives them the ability to fertilize. However, this process only takes place in approximately 10% of ejaculated sperm. It has also been observed that this sperm fraction has the ability to follow migration signals towards the oocyte through the oviduct [Perez-Cerezales, et al., ( 2015). Asian J Androl 17 ( 4), 628-32]. Also, within the different mechanisms described to guide sperm, two of them, thermotaxis and chemotaxis, act only on capacitated sperm. Thermotaxis is the directed movement of cells along a temperature gradient, for long-term guidance in the oviduct [Bahat, A. et al., ( 2003) Nat Med 9 ( 2), 149-50], while chemotaxis is the movement of cells towards a concentration gradient, as a short-term guide, a mechanism that acts near the oocyte inside the ampulla of the oviduct, where fertilization takes place [Eisenbach, M. et al., ( 2006) Nat Rev Mol Cell Biol 7 ( 4), 276-85]. Therefore, both phenomena, thermotaxis and chemotaxis, can be seen as mechanisms to select capacitated spermatozoa and, therefore, optimal to fertilize the oocyte.

Diferentes estudios han demostrado que los espermatozoides humanos se acumulaban in vitro en el líquido folicular y que hay una notable correlación entre esta acumulación in vitro y la fecundación de los ovocitos, por lo que la quimiotaxis hacia el líquido folicular parece estar altamente correlacionada con la posibilidad de fecundar al ovocito. Experimentos posteriores han confirmado que esta acumulación es, de hecho, consecuencia de la quimiotaxis y que este fenómeno se producía tanto en especies de fecundación externa (especies marinas), como de fecundación interna (mamíferos). En este sentido, el fluido presente en el oviducto, denominado fluido oviductal (FO), también es un quimioatrayente (sustancia que produce un proceso de quimiotaxis) y es posible que, a medida que los espermatozoides se acercan al sitio de fecundación, perciban un gradiente de quimioatrayente que se origina en las células del cúmulus del ovocito y que los guíe hacia él.Different studies have shown that human spermatozoa accumulated in vitro in the follicular fluid and that there is a notable correlation between this accumulation in vitro and the fertilization of the oocytes, so that chemotaxis towards the follicular fluid seems to be highly correlated with the possibility of to fertilize the oocyte. Subsequent experiments have confirmed that this accumulation is, in fact, a consequence of chemotaxis and that this phenomenon occurred both in species with external fertilization (marine species) and internal fertilization (mammals). In this sense, the fluid present in the oviduct, called oviductal fluid (FO), is also a chemoattractant (substance that produces a chemotaxis process) and it is possible that, as the spermatozoa approach the fertilization site, they perceive a chemoattractant gradient originating from and guiding cumulus cells of the oocyte.

Además, recientemente se ha comenzado a considerar las vesículas secretadas por las células como una nueva clase de factores de comunicación intercelular con roles importantes en diferentes procesos fisiológicos. Dentro de este tipo de vesículas se encuentran los exosomas, los cuales transportan materiales bioactivos que incluyen proteínas y microARNs en diferentes fluidos corporales, siendo estos últimos, moléculas de ARN no codificantes que regulan la expresión génica durante la diferenciación celular y el desarrollo de los tejidos. Se demostró inicialmente que dichas vesículas extracelulares se encontraban presentes en el FO de ratón, denominándose oviductosomas. Posteriormente la presencia de estos oviductosomas se ha demostrado en diferentes especies, como en la especie bovina, en la cual se ha comprobado que su adición a los medios de cultivo mejora el desarrollo y la calidad de los embriones producidos [Lopera-Vasquez, R. et al, (2017) Reproduction 153(4), 461-470]. También se ha demostrado la presencia de estas vesículas extracelulares en el FO humano, conteniendo diferentes tipos de microARNs no codificantes [Canovas, S. et al, (2017a) Human Reproduction 32, 111-111]. In addition, vesicles secreted by cells have recently begun to be considered as a new class of intercellular communication factors with important roles in different physiological processes. Within this type of vesicles are exosomes, which transport bioactive materials that include proteins and microRNAs in different body fluids, the latter being non-coding RNA molecules that regulate gene expression during cell differentiation and tissue development. . It was initially shown that these extracellular vesicles were present in mouse FO, called oviductosomes. Subsequently, the presence of these oviductosomes has been demonstrated in different species, such as bovine species, in which it has been verified that their addition to culture media improves the development and quality of the embryos produced [Lopera-Vasquez, R. et al, ( 2017) Reproduction 153 ( 4), 461-470]. The presence of these extracellular vesicles has also been demonstrated in human FO, containing different types of non-coding microRNAs [Canovas, S. et al, ( 2017a) Human Reproduction 32, 111-111].

Por otro lado, se ha observado que los espermatozoides que llegan al oviducto (istmo y ampolla) presentan una mayor integridad del ADN. Sin embargo, todavía se desconoce el proceso de selección, el mecanismo involucrado y las características que identifican a esta fracción óptima de espermatozoides. En efecto, la falta de un método eficaz de selección de espermatozoides in vitro para uso en las técnicas de reproducción asistida podría ser una de las razones adicionales de las bajas tasas de gestación y nacimientos logradas de esta manera.On the other hand, it has been observed that the spermatozoa that reach the oviduct (isthmus and ampulla) have greater DNA integrity. However, the selection process, the mechanism involved, and the characteristics that identify this optimal fraction of spermatozoa are still unknown. Indeed, the lack of an effective method of sperm selection in vitro for use in assisted reproductive techniques could be one of the additional reasons for the low pregnancy and birth rates achieved in this way.

Por otro lado, dentro del término “fecundación asistida” se incluyen diferentes técnicas, entre las que se encuentran la inseminación artificial (uterina), la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) y la fecundación in vitro (FIV).On the other hand, the term “assisted fertilization” includes different techniques, among which are artificial (uterine) insemination, intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and in vitro fertilization (IVF).

En la actualidad, las clínicas de reproducción asistida se han inclinado a utilizar de forma casi exclusiva, la ICSI, aunque el problema de fertilidad no se deba al factor masculino. En este procedimiento (ICSI), es el propio técnico el que selecciona y decide el espermatozoide que va a microinyectar, por lo que los procesos fisiológicos que debe experimentar un espermatozoide, como son el reconocimiento de gametos, la reacción acrosómica, la penetración de la zona pelúcida y la fusión de membranas, son obviados. Consecuencia de ello, se podría estar utilizando un espermatozoide con una alteración no visible al microscopio, como es el daño del ADN, que haría fracasar todo el proceso. Además, en el caso de que la gestación llegue a término, dependiendo del tipo de alteración en el ADN que pudiera presentar el espermatozoide, podría llegar a afectar a la salud del niño/a o del individuo adulto procedente de dicha ICSI. At present, assisted reproduction clinics have tended to use ICSI almost exclusively, even though the fertility problem is not due to the male factor. In this procedure (ICSI), it is the technician himself who selects and decides the sperm to be microinjected, so the physiological processes that a sperm must undergo, such as gamete recognition, acrosomal reaction, penetration of the zona pellucida and membrane fusion are ignored. As a consequence of this, a spermatozoon with an alteration not visible under a microscope, such as DNA damage, could be used, which would make the whole process fail. In addition, in the event that the pregnancy reaches term, depending on the type of DNA alteration that the spermatozoon could present, it could affect the health of the child or adult individual from said ICSI.

Por lo tanto, el desarrollo de un procedimiento de selección de espermatozoides in vitro que excluya efectivamente a los espermatozoides con ADN dañado y que seleccione de manera efectiva preferentemente aquellos espermatozoides que sean capaces de fecundar un ovocito, es uno de los principales desafíos actuales de las técnicas de reproducción asistida, especialmente de la ICSI.Therefore, the development of an in vitro sperm selection procedure that effectively excludes sperm with damaged DNA and that effectively preferentially selects those sperm that are capable of fertilizing an oocyte, is one of the main current challenges of assisted reproductive techniques, especially ICSI.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓNBRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION

Un primer aspecto de la presente invención se refiere a un dispositivo para seleccionar espermatozoides que comprende:A first aspect of the present invention refers to a device for selecting sperm that comprises:

- al menos un primer compartimento hueco (1), con una apertura (A1) y con una altura (H1); - at least a first hollow compartment (1), with an opening (A1) and with a height (H1);

- al menos un segundo compartimento hueco (2) con una apertura (A2) y con una altura (H2);- at least a second hollow compartment (2) with an opening (A2) and with a height (H2);

- un conducto (3) que se encuentra entre ambos compartimentos huecos (1) y (2), de longitud (L3) perpendicular a la altura (H1, H2), que los comunica a una altura (T3) medida desde la apertura (A1, A2) y que es menor que la altura (H1, H2);- a duct (3) located between the two hollow compartments (1) and (2), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), which connects them at a height (T3) measured from the opening ( A1, A2) and that is less than the height (H1, H2);

- tapones (4), en igual número al número de compartimentos huecos (1, 2), configurados para ser introducidos en la apertura (A1, A2) dentro del compartimento hueco (1, 2) hasta una altura (T1) o (T2), en donde la altura (T1) y (T2) es menor que la altura (H1) y (H2) respectivamente y que la altura (T3), medidas dichas alturas desde la apertura (A1, A2); de manera que cuando todos los tapones (4) cierran todos los compartimentos huecos (1,2), el dispositivo queda cerrado herméticamente.- plugs (4), in equal number to the number of hollow compartments (1, 2), configured to be introduced in the opening (A1, A2) inside the hollow compartment (1, 2) until a height (T1) or (T2), where the height (T1) and (T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3), said heights measured from the opening (A1 , A2); so that when all the caps (4) close all the hollow compartments (1,2), the device is hermetically closed.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de dicho dispositivo de la invención para la selección in vitro de espermatozoides o para técnicas de fecundación in vitro. Another aspect of the present invention refers to the use of said device of the invention for the in vitro selection of sperm or for in vitro fertilization techniques.

Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a un procedimiento de selección de espermatozoides in vitro caracterizado porque comprende las siguientes etapas:An additional aspect of the present invention refers to an in vitro sperm selection procedure characterized in that it comprises the following stages:

(i) proporcionar el dispositivo descrito en el primer aspecto de la invención;(i) providing the device described in the first aspect of the invention;

(ii) cerrar herméticamente el primer compartimento hueco (1) y el al menos segundo compartimento hueco (2) con los tapones (4);(ii) sealing the first hollow compartment (1) and the at least second hollow compartment (2) with the caps (4);

(iii) abrir el primer compartimento hueco (1), añadir un medio de capacitación (C) que comprende de 0,1% a 2% v/v de fluido folicular en dicho compartimento hueco (1) hasta una altura (H1-T1) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iii) opening the first hollow compartment (1), adding a capacitation medium (C) comprising 0.1% to 2% v/v of follicular fluid in said hollow compartment (1) up to a height (H1-T1 ) and close it again with a stopper (4);

(iv) abrir el al menos un segundo compartimento hueco (2), añadir medio de capacitación (C) que comprende espermatozoides en dicho al menos un segundo compartimento hueco (2) hasta una altura (H2-T2) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iv) opening the at least one second hollow compartment (2), adding capacitation medium (C) comprising spermatozoa in said at least one second hollow compartment (2) up to a height (H2-T2) and closing it again with a stopper (4);

(v) incubar el dispositivo;(v) incubate the device;

(vi) destapar el primer compartimento hueco (1); y recuperar el medio de dicho primer compartimento hueco (1).(vi) uncover the first hollow compartment (1); and recovering the medium from said first hollow compartment (1).

Finalmente, otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de fecundación in vitro caracterizado porque comprende las siguientes etapas:Finally, another aspect of the present invention refers to an in vitro fertilization procedure characterized in that it comprises the following stages:

(i) proporcionar el dispositivo descrito en el primer aspecto de la invención;(i) providing the device described in the first aspect of the invention;

(ii) cerrar herméticamente el primer compartimento hueco (1) y el al menos segundo compartimento hueco (2) con los tapones (4);(ii) sealing the first hollow compartment (1) and the at least second hollow compartment (2) with the caps (4);

(iii) abrir el primer compartimento hueco (1), añadir un medio de capacitación (C) que comprende de 0,1% a 2% v/v de fluido folicular en dicho compartimento hueco (1) hasta una altura (H1-T1) y, volver a cerrarlo con un tapón (4); (iii) opening the first hollow compartment (1), adding a capacitation medium (C) comprising 0.1% to 2% v/v of follicular fluid in said hollow compartment (1) up to a height (H1-T1 ) and close it again with a stopper (4);

(iv) abrir el al menos un segundo compartimento hueco (2), añadir medio de capacitación (C) que comprende espermatozoides en dicho al menos un segundo compartimento hueco (2) hasta una altura (H2-T2) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iv) opening the at least one second hollow compartment (2), adding capacitation medium (C) comprising spermatozoa in said at least one second hollow compartment (2) up to a height (H2-T2) and closing it again with a stopper (4);

(v) incubar el dispositivo;(v) incubate the device;

(vi) destapar el primer compartimento hueco (1); y depositar un ovocito y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) con un tapón (4) para proceder a una fecundación in vitro incubando el dispositivo en condiciones adecuadas.(vi) uncover the first hollow compartment (1); and deposit an oocyte and close said first hollow compartment (1) with a stopper (4) to proceed with in vitro fertilization by incubating the device under suitable conditions.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

FIGURA 1. La figura 1A es una representación en alzado de una realización particular del dispositivo de la invención en el que se pueden distinguir dos compartimentos huecos (1) y (2) de aperturas (A1) y (A2) respectivamente. La figura 1B es una vista superior de dicha realización particular en la que se ve las aperturas (A1, A2) de cada uno de los dos compartimentos huecos (1, 2), siendo los diámetros de cada una de dichas aperturas (D1) y (D2) respectivamente y el conducto (3) que une dichos compartimentos huecos (1, 2). FIGURE 1 . Figure 1A is a representation in elevation of a particular embodiment of the device of the invention in which two hollow compartments (1) and (2) with openings (A1) and (A2) respectively can be distinguished. Figure 1B is a top view of said particular embodiment in which the openings (A1, A2) of each of the two hollow compartments (1, 2) are seen, the diameters of each of said openings (D1) and (D2) respectively and the conduit (3) that joins said hollow compartments (1, 2).

FIGURA 2. La figura 2A muestra una representación en alzado de una realización particular de un tapón (4) del dispositivo de la invención en el que se puede distinguir una parte (6) externa con un reborde (B) configurado para quedar en el exterior de los compartimentos huecos (1, 2), no mostrados, cuando el tapón (4) cierra herméticamente dichos compartimentos (1, 2); una parte (5) interna con una junta tórica (J5) que permite el cierre hermético de los compartimentos (1, 2) con dicho tapón (4). La figura 2B muestra una vista lateral de dicha realización particular del tapón (4) en el que se puede apreciar la altura (E6) y el reborde (B) de la parte (6) externa, así como la altura (T1, T2) de la parte (5) interior del tapón (4) con una junta tórica (J5). FIGURE 2 . Figure 2A shows a representation in elevation of a particular embodiment of a cap (4) of the device of the invention in which an external part (6) can be distinguished with a rim (B) configured to remain outside the compartments. gaps (1, 2), not shown, when the plug (4) hermetically closes said compartments (1, 2); an internal part (5) with an O-ring (J5) that allows the hermetic closure of the compartments (1, 2) with said plug (4). Figure 2B shows a side view of said particular embodiment of the stopper (4) in which the height (E6) and the rim (B) of the external part (6) can be seen, as well as the height (T1, T2) from the inner part (5) of the cap (4) with an O-ring (J5).

FIGURA 3. La figura 3A muestra una representación en alzado, y la figura 3B muestra una vista superior, de una realización particular del dispositivo de la invención en la que se pueden distinguir dos compartimentos huecos (1) y (2), cerrados con tapones (4), con una parte (6) exterior de diámetro D6 y un conducto (3) que comunica ambos compartimentos huecos (1, 2). FIGURE 3 . Figure 3A shows an elevation representation, and Figure 3B shows a top view, of a particular embodiment of the device of the invention in which two hollow compartments (1) and (2) can be distinguished, closed with plugs (4). , with an outer part (6) of diameter D6 and a conduit (3) that communicates both hollow compartments (1, 2).

FIGURA 4. La figura 4A muestra un corte transversal de una realización particular del dispositivo de la invención con los compartimentos huecos (1,2) abiertos, mostrando la altura (H1, H2) de dichos compartimentos (1, 2) y el conducto (3) que los comunica posicionado a una altura T3. La figura 4B muestra un corte transversal de dicha realización particular del dispositivo en la que los compartimentos (1, 2) se encuentran cerrados por tapones (4) que se introducen hasta una altura (T1, T2) medida desde la apertura (A1, A2), definiendo un volumen de altura (H1-T1) o (H2-T2) dentro de cada compartimento hueco (1,2). FIGURE 4. Figure 4A shows a cross section of a particular embodiment of the device of the invention with the hollow compartments (1,2) open, showing the height (H1, H2) of said compartments (1, 2) and the conduit (3) that connects them positioned at a height T3. Figure 4B shows a cross section of said particular embodiment of the device in which the compartments (1, 2) are closed by plugs (4) that are inserted up to a height (T1, T2) measured from the opening (A1, A2). ), defining a volume of height (H1-T1) or (H2-T2) inside each hollow compartment (1,2).

DESCRIPCIÓN DETALLADADETAILED DESCRIPTION

Un primer aspecto de la presente invención se refiere a un dispositivo para seleccionar espermatozoides que comprende:A first aspect of the present invention refers to a device for selecting sperm that comprises:

- al menos un primer compartimento hueco (1), con una apertura (A1) y con una altura (H1); - at least a first hollow compartment (1), with an opening (A1) and with a height (H1);

- al menos un segundo compartimento hueco (2) con una apertura (A2) y con una altura (H2);- at least a second hollow compartment (2) with an opening (A2) and with a height (H2);

- un conducto (3) que se encuentra entre ambos compartimentos huecos (1) y (2), de longitud (L3) perpendicular a la altura (H1, H2), que los comunica a una altura (T3) medida desde la apertura (A1, A2) y que es menor que la altura (H1, H2);- a duct (3) located between the two hollow compartments (1) and (2), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), which connects them at a height (T3) measured from the opening ( A1, A2) and that is less than the height (H1, H2);

- tapones (4), en igual número al número de compartimentos huecos (1, 2), configurados para ser introducidos en la apertura (A1, A2) dentro del compartimento hueco (1,2) hasta una altura (T1) o (T2), en donde la altura (T1) y (T2) es menor que la altura (H1) y (H2) respectivamente y que la altura (T3), medidas dichas alturas desde la apertura (A1, A2); de manera que cuando todos los tapones (4) cierran todos los compartimentos huecos (1,2), el dispositivo queda cerrado herméticamente.- plugs (4), equal in number to the number of hollow compartments (1, 2), configured to be introduced into the opening (A1, A2) inside the hollow compartment (1, 2) up to a height (T1) or (T2 ), where the height (T1) and (T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3), said heights measured from the opening (A1, A2); so that when all the caps (4) close all the hollow compartments (1,2), the device is hermetically closed.

Así, el dispositivo de la invención está adaptado para contener medio de capacitación adecuado para mantener la motilidad de los espermatozoides de mamíferos, incluyendo la de espermatozoides humanos. En una realización dicho dispositivo es estéril o aséptico, preferentemente de uso desechable. Preferentemente el dispositivo está fabricado de un material biocompatible que no sea citotóxico de acuerdo con los estándares establecidos en el campo de la técnica de los métodos de fecundación in vitro. Es decir, el dispositivo está fabricado, preferentemente, en un material no citotóxico y compatible con la viabilidad celular y que, además, permita que los espermatozoides se muevan y que no se adhieran al fondo. Ejemplos adecuados, no limitantes, de materiales biocompatibles, adecuados para la fabricación del dispositivo de la invención son: poliestireno de clase VI polipropileno, policarbonato y cicloolefinas, que cumplan los estándares de la farmacopea de Estados Unidos (por sus siglas en inglés: USP) o de la Sociedad Americana para la Evaluación de Materiales (por sus siglas en inglés: ASTM), entre otros. Thus, the device of the invention is adapted to contain suitable capacitation medium to maintain the motility of mammalian spermatozoa, including human spermatozoa. In one embodiment, said device is sterile or aseptic, preferably for disposable use. Preferably the device is made of a biocompatible material that is not cytotoxic in accordance with the standards established in the technical field of in vitro fertilization methods. In other words, the device is preferably made of a non-cytotoxic material that is compatible with cell viability and that also allows sperm to move and not adhere to the bottom. Suitable, non-limiting, examples of biocompatible materials, suitable for the manufacture of the device of the invention are: class VI polystyrene, polypropylene, polycarbonate and cycloolefins, which meet the standards of the United States Pharmacopeia (USP) or the American Society for the Evaluation of Materials (for its acronym in English: ASTM), among others.

A efectos de la presente invención el término altura, referido a las dimensiones (H1, H2), (T1, T2), (T3), (H1-T1) o (H2-T2) se refiere a una dimensión que tiene la dirección de la fuerza de la gravedad. Por tanto, la longitud (L3) del conducto (3) es perpendicular a dicha fuerza de la gravedad.For the purposes of the present invention the term height, referring to the dimensions (H1, H2), (T1, T2), (T3), (H1-T1) or (H2-T2) refers to a dimension that has the direction of the force of gravity. Therefore, the length (L3) of the conduit (3) is perpendicular to said force of gravity.

En una realización, la apertura (A1, A2) está dispuesta en uno de los extremos de la altura (H1, H2). Es decir, los compartimentos huecos (1, 2) forman un volumen vacío con una apertura (A1, A2) y altura (H1, H2).In one embodiment, the opening (A1, A2) is arranged at one of the ends of the height (H1, H2). That is, the hollow compartments (1, 2) form an empty volume with an opening (A1, A2) and height (H1, H2).

El tamaño de los compartimentos huecos (1), (2), así como del de tapones (4) y del conducto (3) puede ser seleccionado dependiendo de las necesidades y, en particular, de la especie de mamífero de la cual provengan los espermatozoides.The size of the hollow compartments (1), (2), as well as the plugs (4) and the conduit (3) can be selected depending on the needs and, in particular, on the mammalian species from which they come. sperm.

Además, el dispositivo de la invención puede tener el número de compartimentos huecos (1) y (2) unidos entre sí por un conducto (3), que sean necesarios, con la finalidad de llevar a cabo varios experimentos de forma simultánea.In addition, the device of the invention can have the number of hollow compartments (1) and (2) connected to each other by a conduit (3), which are necessary, in order to carry out several experiments simultaneously.

En una realización particular de la invención, el dispositivo cuenta con dos compartimentos huecos (1) y (2) unidos por un conducto (3), así como dos tapones (4) que cierran herméticamente el dispositivo.In a particular embodiment of the invention, the device has two hollow compartments (1) and (2) connected by a conduit (3), as well as two caps (4) that hermetically close the device.

El tapón (4) consta al menos de dos partes:The plug (4) consists of at least two parts:

- una primera parte (5) interna, de altura (T1, T2), que queda introducida dentro de los compartimentos huecos (1, 2) cuando el tapón (4) cierra herméticamente dichos compartimentos (1) y (2), formándose una cavidad de altura (H1-T1) o (H2-T2) en cada uno de los compartimentos (1, 2) respectivamente, en donde la altura (T1, T2) es menor que la altura (H1) y (H2) respectivamente y que la altura (T3) medida desde la apertura (A1, A2); y- a first internal part (5), of height (T1, T2), which remains inserted inside the hollow compartments (1, 2) when the cap (4) hermetically closes said compartments (1) and (2), forming a height cavity (H1-T1) or (H2-T2) in each of the compartments (1, 2) respectively, where the height (T1, T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3) measured from the opening (A1, A2); Y

- una segunda parte (6) externa, de altura E6, que queda fuera de los compartimentos huecos (1) y (2); de manera que cuando todos los tapones (4) cierran los compartimentos huecos (1, 2), el dispositivo queda cerrado herméticamente.- a second external part (6), of height E6, which is outside the hollow compartments (1) and (2); so that when all the caps (4) close the hollow compartments (1, 2), the device is hermetically closed.

Los tapones (4) cierran herméticamente el dispositivo, dado que no comprenden ningún orificio, de manera que cuando todos los tapones (4) cierran los compartimentos huecos (1, 2), no existe conexión entre el interior del dispositivo y el exterior.The plugs (4) hermetically close the device, since they do not comprise any hole, so that when all the plugs (4) close the hollow compartments (1, 2), there is no connection between the inside of the device and the outside.

La parte (6) externa permite extraer fácilmente el tapón (4) del compartimento hueco (1, 2). The external part (6) allows the cap (4) to be easily removed from the hollow compartment (1, 2).

El tapón (4) cierra herméticamente el compartimento hueco (1, 2), por su abertura (A1, A2) de varias maneras: mediante un sistema de rosca, mediante inserción por presión, o cualquier otro medio que permita el cierre hermético de los compartimentos.The stopper (4) hermetically closes the hollow compartment (1, 2), through its opening (A1, A2) in several ways: by means of a screw system, by insertion by pressure, or any other means that allows the hermetic closure of the compartments.

Dependiendo del volumen de muestra a seleccionar o de la concentración espermática de ésta, se utilizarán dispositivos con un número de compartimentos huecos (1, 2) variable. Debe entenderse que el dispositivo no está limitado a ningún tamaño, forma o geometría. Se puede emplear cualquier configuración que pueda proporcionar una subpoblación de espermatozoides mejorada de acuerdo con los principios de la presente invención.Depending on the sample volume to be selected or its sperm concentration, devices with a variable number of hollow compartments (1, 2) will be used. It is to be understood that the device is not limited to any size, shape, or geometry. Any configuration that can provide an improved sperm subpopulation can be employed in accordance with the principles of the present invention.

Preferentemente, los compartimentos huecos (1, 2) y la parte (5) interna de los tapones (4) son cilíndricos, de manera que el diámetro (D1, D2) de los compartimentos huecos (1) y (2), respectivamente, es algo mayor que el diámetro D5 de la parte (5) interna los tapones (4) y de manera que los tapones (4) cierran herméticamente dichos compartimentos al ser introducida la parte (5) interna del tapón (4) en los compartimentos huecos (1, 2).Preferably, the hollow compartments (1, 2) and the internal part (5) of the caps (4) are cylindrical, so that the diameter (D1, D2) of the hollow compartments (1) and (2), respectively, is somewhat greater than the diameter D5 of the internal part (5) of the plugs (4) and so that the plugs (4) hermetically close said compartments when the internal part (5) of the plug (4) is introduced into the hollow compartments (1, 2).

En una realización preferente, todos los compartimentos huecos (1, 2) tienen las mismas dimensiones.In a preferred embodiment, all the hollow compartments (1, 2) have the same dimensions.

Las figuras incluidas en el presente documento muestran una realización preferente, pero de ninguna manera limitante, del dispositivo de la invención, que comprende dos compartimentos huecos (1) y (2) cilíndricos e iguales, con aberturas circulares (A1, A2) iguales y altura (H1, H2) también igual.The figures included in this document show a preferred, but in no way limiting, embodiment of the device of the invention, which comprises two equal cylindrical hollow compartments (1) and (2), with equal circular openings (A1, A2) and height (H1, H2) also equal.

En una realización particular de la invención cada compartimento hueco (1) y (2) tiene una altura igual (H1=H2) comprendida de entre 8,5 mm y 13,5 mm y forma cilíndrica, preferentemente con un mismo diámetro (D1=D2) comprendido entre 4,5 mm y 9,5 mm. Además, preferentemente, la parte (5) interna del tapón (4) tiene siempre una misma altura (T1=T2) comprendida entre 2,5 mm y 5 mm y un mismo diámetro (D5) de 4 mm a 9,3 mm. En dicha realización particular de la invención, la parte (6) externa del tapón (4) es de forma cilíndrica y tiene una altura (E6) de entre 5 mm y 10 mm y un diámetro (D6) comprendido entre 5 mm y 13 mm.In a particular embodiment of the invention, each hollow compartment (1) and (2) have an equal height (H1=H2) between 8.5 mm and 13.5 mm and a cylindrical shape, preferably with the same diameter (D1= D2) between 4.5 mm and 9.5 mm. In addition, preferably, the internal part (5) of the stopper (4) always has the same height (T1=T2) between 2.5 mm and 5 mm and the same diameter (D5) from 4 mm to 9.3 mm. In said particular embodiment of the invention, the external part (6) of the stopper (4) is cylindrical in shape and has a height (E6) of between 5 mm and 10 mm and a diameter (D6) of between 5 mm and 13 mm. .

En una realización preferente, la parte (5) interna se divide a su vez en dos partes separadas por una pequeña hendidura, más preferentemente de entre 0,8 mm y 1,8 mm, donde se inserta una junta tórica (J5), fabricada en un material flexible, que permite el cierre hermético del dispositivo. In a preferred embodiment, the internal part (5) is in turn divided into two parts separated by a small slit, more preferably between 0.8 mm and 1.8 mm, where an O-ring (J5) is inserted, manufactured in a flexible material, which allows the hermetic closure of the device.

Los compartimentos se encuentran comunicados por un conducto (3), de longitud (L3) perpendicular a la altura (H1, H2), a una altura (T3), medida desde la apertura (A1, A2), en donde dicha altura (T3) es menor que, respectivamente, la altura (H1) y (H2). Así el conducto (3) comunica los compartimentos huecos (1, 2), en un punto entre la apertura (A1, A2) y el fondo del compartimento hueco (1, 2). Cuando el tapón (4) cierra el compartimento (1, 2), su parte (5) interna queda insertada dentro del compartimento hueco (1, 2) hasta una altura (T1, T2) medida desde la apertura (A1, A2), que es menor que las alturas (H1, H2) y (T3), también medidas desde la apertura (A1, A2). Así, cuando el tapón (4) cierra el compartimento hueco (1, 2), la parte (5) interna del tapón (4) queda por encima del punto en el que el conducto (3) comunica ambos compartimentos huecos (1, 2). Preferentemente, el conducto (3) cuenta con una longitud (L3) comprendida entre 2 mm y 50 mm y un diámetro (D3) de entre 0,1 mm y 10 mm.The compartments are connected by a duct (3), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), at a height (T3), measured from the opening (A1, A2), where said height (T3 ) is less than, respectively, the height (H1) and (H2). so the conduit (3) communicates the hollow compartments (1, 2), at a point between the opening (A1, A2) and the bottom of the hollow compartment (1, 2). When the cap (4) closes the compartment (1, 2), its internal part (5) remains inserted inside the hollow compartment (1, 2) up to a height (T1, T2) measured from the opening (A1, A2), which is less than the heights (H1, H2) and (T3), also measured from the opening (A1, A2). Thus, when the plug (4) closes the hollow compartment (1, 2), the internal part (5) of the plug (4) remains above the point where the duct (3) connects both hollow compartments (1, 2). ). Preferably, the conduit (3) has a length (L3) of between 2 mm and 50 mm and a diameter (D3) of between 0.1 mm and 10 mm.

Las dimensiones de los compartimentos huecos (1,2) y del conducto (3) permiten poder disponer de un volumen suficiente de medio una vez seleccionados los espermatozoides para analizar diferentes parámetros con la misma muestra en paralelo, a la vez que las medidas señaladas permite no usar medio en exceso y, por tanto, desperdiciarlo. Además, es aplicable a todas las especies de mamíferos con las que se desea trabajar. Asimismo, el investigador o técnico tiene la opción de elegir el tamaño de los compartimentos huecos (1,2) en función de las necesidades y la especie con la finalidad de rentabilizar y, por consiguiente, abaratar el coste tanto del material como del medio.The dimensions of the hollow compartments (1,2) and of the conduit (3) allow having a sufficient volume of medium available once the spermatozoa have been selected to analyze different parameters with the same sample in parallel, while the measures indicated allow do not overuse medium and therefore waste it. In addition, it is applicable to all species of mammals with which it is desired to work. Likewise, the researcher or technician has the option of choosing the size of the hollow compartments (1,2) depending on the needs and the species in order to make profitable and, consequently, lower the cost of both the material and the medium.

Más preferentemente el conducto (3) tiene una longitud (L3) y un diámetro (D3) (no mostrado en las figuras), seleccionados en función de la especie animal de la cual proceden los espermatozoides.More preferably, the conduit (3) has a length (L3) and a diameter (D3) (not shown in the figures), selected according to the animal species from which the spermatozoa originate.

A efectos de la presente invención, el término "comprende” indica que incluye un grupo de características, pero no excluye la presencia de otras características, siempre y cuando la presencia de las otras características no haga la invención impracticable. Además, los términos "consta de”, "contiene”, "incluye”, "tiene”, "abarca” y sinónimos de dichos términos, deben ser interpretados de la misma manera que el término "comprende”.For purposes of the present invention, the term "comprising" indicates that it includes a group of features, but does not exclude the presence of other features, as long as the presence of the other features does not render the invention impracticable. In addition, the terms "consists of”, “contains”, “includes”, “has”, “includes” and synonyms of said terms, must be interpreted in the same way as the term “comprises”.

Adicionalmente, a efectos de la presente invención, el término "comprende” puede ser reemplazado por cualquiera de los términos "consiste de”, "consiste en”, "consisten sustancialmente de” o "consisten sustancialmente en”. Así, cuando el término "comprende” se refiere a un grupo de características técnicas A, B y C, debe interpretarse que puede incluir adicionalmente otras características técnicas además de las características técnicas A, B y C, siempre y cuando la presencia de las otras características no haga la invención impracticable, pero también puede interpretarse como que solamente comprende dichas características A, B y C o, sustancialmente dichas características A, B y C y, por tanto, el término "comprende” referido a un grupo que comprende las características A, B y C debe interpretarse que incluye un grupo que consiste de las características A, B y C, o que consiste sustancialmente de las características A, B y C.Additionally, for the purposes of the present invention, the term "comprises" can be replaced by any of the terms "consists of", "consists of", "substantially consists of" or "substantially consists of". Thus, when the term " comprises” refers to a group of technical characteristics A, B and C, it should be interpreted that it may additionally include other technical characteristics in addition to technical characteristics A, B and C, as long as the presence of the other characteristics does not render the invention impracticable , but it can also be interpreted as only comprising said characteristics A, B and C or, substantially, said characteristics A, B and C and, therefore, the term "comprising" referring to a group comprising features A, B and C shall be construed to include a group consisting of features A, B and C, or consisting substantially of features A, B and C.

El dispositivo de la invención está configurado para contener el medio de capacitación adecuado para mantener la motilidad de espermatozoides de mamíferos, incluyendo los seres humanos. Es estéril o aséptico y puede ser, preferentemente, desechable.The device of the invention is configured to contain the appropriate capacitation medium to maintain sperm motility in mammals, including humans. It is sterile or aseptic and may preferably be disposable.

Así, el dispositivo de la invención permite la selección de espermatozoides potencialmente fértiles a partir de un eyaculado, con el objetivo principal de seleccionar espermatozoides adecuados para uso en técnicas de reproducción asistida o para estudios de fertilidad, seleccionando solamente aquellos espermatozoides con mayor probabilidad de producir un embrión viable y sano. En particular dicho dispositivo es útil para la selección de espermatozoides para su uso en la técnica ICSI, pero también es útil para otros tipos de técnicas de reproducción asistida, en humanos u otros mamíferos.Thus, the device of the invention allows the selection of potentially fertile spermatozoa from an ejaculate, with the main objective of selecting suitable spermatozoa for use in assisted reproduction techniques or for fertility studies, selecting only those spermatozoa with the highest probability of producing a viable and healthy embryo. In particular, said device is useful for the selection of spermatozoa for use in the ICSI technique, but it is also useful for other types of assisted reproductive techniques, in humans or other mammals.

Por tanto, otro aspecto de la presente invención se refiere al uso del dispositivo de la invención para la selección de espermatozoides. Preferentemente dichos espermatozoides están capacitados y son útiles en técnicas de reproducción asistida o en estudios de fertilidad. Therefore, another aspect of the present invention refers to the use of the device of the invention for the selection of spermatozoa. Said spermatozoa are preferably capacitated and are useful in assisted reproduction techniques or in fertility studies.

Por otro lado, otro aspecto adicional de la presente invención se refiere al uso del dispositivo de la invención en una técnica de reproducción asistida in vitro. Adicionalmente, la presente invención se refiere también al uso del dispositivo de la invención en un estudio de fertilidad masculina in vitro. On the other hand, another additional aspect of the present invention refers to the use of the device of the invention in an in vitro assisted reproduction technique. Additionally, the present invention also relates to the use of the device of the invention in an in vitro male fertility study.

Así, un aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de selección in vitro de espermatozoides caracterizado porque comprende:Thus, one aspect of the present invention refers to an in vitro sperm selection procedure characterized in that it comprises:

(i) proporcionar un dispositivo de acuerdo con la presente invención, que comprende:(i) providing a device according to the present invention, comprising:

- al menos un primer compartimento hueco (1), con una apertura (A1) y con una altura (H1);- at least a first hollow compartment (1), with an opening (A1) and with a height (H1);

- al menos un segundo compartimento hueco (2) con una apertura (A2) y con una altura (H2);- at least a second hollow compartment (2) with an opening (A2) and with a height (H2);

- un conducto (3) que se encuentra entre ambos compartimentos huecos (1) y (2), de longitud (L3) perpendicular a la altura (H1, H2), que los comunica a una altura (T3) medida desde la apertura (A1, A2) y que es menor que la altura (H1, H2); - a duct (3) located between the two hollow compartments (1) and (2), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), which connects them at a height (T3) measured from the opening ( A1, A2) and that is less than the height (H1, H2);

- tapones (4), en igual número al número de compartimentos huecos (1, 2), configurados para ser introducidos por la apertura (A1, A2) dentro del compartimento hueco (1,2) hasta una altura (T1) o (T2), en donde la altura (T1) y (T2) es menor que la altura (H1) y (H2) respectivamente y que la altura (T3), medidas dichas alturas desde la apertura (A1, A2); de manera que cuando todos los tapones (4) cierran todos los compartimentos huecos (1,2), el dispositivo queda cerrado herméticamente; - plugs (4), equal in number to the number of hollow compartments (1, 2), configured to be introduced through the opening (A1, A2) inside the hollow compartment (1, 2) up to a height (T1) or (T2 ), where the height (T1) and (T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3), said heights measured from the opening (A1, A2); so that when all the plugs (4) close all the hollow compartments (1,2), the device is hermetically closed;

(ii) cerrar herméticamente el primer compartimento hueco (1) y el al menos segundo compartimento hueco (2) con los tapones (4);(ii) sealing the first hollow compartment (1) and the at least second hollow compartment (2) with the plugs (4);

(iii) abrir el primer compartimento hueco (1), añadir un medio de capacitación (C1) que comprende de 0,1% a 2% v/v de fluido folicular en dicho compartimento hueco (1) hasta una profundidad (H1-T1) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iii) opening the first hollow compartment (1), adding a capacitation medium (C1) comprising 0.1% to 2% v/v of follicular fluid in said hollow compartment (1) to a depth (H1-T1 ) and close it again with a stopper (4);

(iv) abrir el al menos segundo compartimento hueco (2), añadir medio de capacitación (C2) que comprende espermatozoides en dicho al menos segundo compartimento hueco (2) hasta una profundidad (H2-T2) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iv) opening the at least second hollow compartment (2), adding capacitation medium (C2) comprising spermatozoa in said at least second hollow compartment (2) to a depth (H2-T2) and closing it again with a stopper (4);

(v) incubar el dispositivo;(v) incubate the device;

(vi) destapar el primer compartimento hueco (1); y recuperar el medio de dicho primer compartimento hueco (1).(vi) uncover the first hollow compartment (1); and recovering the medium from said first hollow compartment (1).

Además, otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de fecundación in vitro caracterizado porque comprende:In addition, another aspect of the present invention refers to an in vitro fertilization procedure characterized in that it comprises:

(i) proporcionar un dispositivo de acuerdo con la presente invención, que comprende:(i) providing a device according to the present invention, comprising:

- al menos un primer compartimento hueco (1), con una apertura (A1) y con una altura (H1);- at least a first hollow compartment (1), with an opening (A1) and with a height (H1);

- al menos un segundo compartimento hueco (2) con una apertura (A2) y con una altura (H2);- at least a second hollow compartment (2) with an opening (A2) and with a height (H2);

- un conducto (3) que se encuentra entre ambos compartimentos huecos (1) y (2), de longitud (L3) perpendicular a la altura (H1, H2), que los comunica a una altura (T3) medida desde la apertura (A1, A2) y que es menor que la altura (H1, H2);- a duct (3) located between the two hollow compartments (1) and (2), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), which connects them at a height (T3) measured from the opening ( A1, A2) and that is less than the height (H1, H2);

- tapones (4), en igual número al número de compartimentos huecos (1, 2), configurados para ser introducidos por la apertura (A1, A2) dentro del compartimento hueco (1,2) hasta una altura (T1) o (T2), en donde la altura (T1) y (T2) es menor que la altura (H1) y (H2) respectivamente y que la altura (T3), medidas dichas alturas desde la apertura (A1, A2); de manera que cuando todos los tapones (4) cierran todos los compartimentos huecos (1,2), el dispositivo queda cerrado herméticamente; - plugs (4), equal in number to the number of hollow compartments (1, 2), configured to be introduced through the opening (A1, A2) inside the hollow compartment (1, 2) up to a height (T1) or (T2 ), where the height (T1) and (T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3), measures said heights from the opening (A1, A2); so that when all the plugs (4) close all the hollow compartments (1,2), the device is hermetically closed;

(ii) cerrar herméticamente el primer compartimento hueco (1) y el al menos segundo compartimento hueco (2) con los tapones (4);(ii) sealing the first hollow compartment (1) and the at least second hollow compartment (2) with the plugs (4);

(iii) abrir el primer compartimento hueco (1), añadir un medio de capacitación (C1) que comprende de 0,1% a 2% v/v de fluido folicular en dicho compartimento hueco (1) hasta una profundidad (H1-T1) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iii) opening the first hollow compartment (1), adding a capacitation medium (C1) comprising 0.1% to 2% v/v of follicular fluid in said hollow compartment (1) to a depth (H1-T1 ) and close it again with a stopper (4);

(iv) abrir el al menos segundo compartimento hueco (2), añadir medio de capacitación (C2) que comprende espermatozoides en dicho al menos segundo compartimento hueco (2) hasta una profundidad (H2-T2) y, volver a cerrarlo con un tapón (4);(iv) opening the at least second hollow compartment (2), adding capacitation medium (C2) comprising spermatozoa in said at least second hollow compartment (2) to a depth (H2-T2) and closing it again with a stopper (4);

(v) incubar el dispositivo;(v) incubate the device;

(vi) destapar el primer compartimento hueco (1); y depositar un ovocito y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) con un tapón (4) para proceder a una fecundación in vitro incubando el dispositivo en condiciones adecuadas.(vi) uncover the first hollow compartment (1); and deposit an oocyte and close said first hollow compartment (1) with a stopper (4) to proceed with in vitro fertilization by incubating the device under suitable conditions.

De esta manera, dado que, los tapones (4) no tienen ningún orificio, cierran herméticamente el dispositivo. Por ello, al proceder, en el paso (iii), a abrir y llenar el primer compartimento hueco (1) hasta una profundidad (H1-T1) con medio de capacitación (C1) que comprende fluido folicular, y proceder, después, a su cierre, estando el al menos un segundo compartimento hueco (2) también cerrado, el aire que ocupaba el volumen donde se inserta el tapón (4) desplaza y empuja parcialmente el medio de capacitación (C1) con fluido folicular dentro del conducto (3). Así, cuando se procede, en el paso (iv), a abrir y llenar el al menos un segundo compartimento hueco (2) con medio de capacitación (C2) que comprende espermatozoides, y después a su cierre, el aire que ocupaba el volumen donde se inserta el tapón (4) desplaza y empuja parcialmente el medio de capacitación (C2) con espermatozoides dentro del conducto (3), haciendo que, en este momento, que los medios de capacitación de ambos compartimentos huecos (1,2) entren en contacto, pero sin que sea posible la mezcla significativa entre los líquidos contenidos en dichos compartimentos huecos (1, 2). Una vez en contacto, se incuba el dispositivo produciéndose una migración de los espermatozoides que tengan movilidad, por el conducto (3), desde el al menos un segundo compartimento hueco (2) en el cual han sido añadidos, hasta el primer compartimento hueco (1) en el que se encuentra el medio de capacitación (C1) con el fluido folicular. In this way, since the caps (4) do not have any holes, they hermetically close the device. Therefore, when proceeding, in step (iii), to open and fill the first hollow compartment (1) to a depth (H1-T1) with capacitation medium (C1) comprising follicular fluid, and then proceed to its closure, with the at least one second hollow compartment (2) also closed, the air that occupied the volume where the plug (4) is inserted partially displaces and pushes the training means (C1) with follicular fluid inside the duct (3 ). Thus, when proceeding, in step (iv), to open and fill the at least one second hollow compartment (2) with capacitation medium (C2) comprising spermatozoa, and after its closure, the air that occupied the volume where the plug (4) is inserted, partially displaces and pushes the capacitation means (C2) with spermatozoa inside the conduit (3), causing, at this moment, the capacitation means of both hollow compartments (1,2) to enter in contact, but without significant mixing between the liquids contained in said hollow compartments (1, 2) being possible. Once in contact, the device is incubated, producing a migration of sperm that have mobility, through the conduit (3), from the at least one second hollow compartment (2) in which they have been added, to the first hollow compartment ( 1) in which the capacitation medium (C1) is found with the follicular fluid.

Dichos procedimientos pueden ser llevados a cabo con espermatozoides de cualquier especie de mamífero. Preferentemente dicha especie de mamífero es un ser humano. también preferentemente dicha especie es un mamífero no humano.These procedures can be carried out with sperm from any mammalian species. Preferably said species of mammal is a human. also preferably said species is a non-human mammal.

Preferentemente las condiciones adecuadas, para llevar a cabo la fecundación in vitro tras el paso (vi), comprenden, entre otras, una humedad relativa de entre 90 y 100%.Preferably, the suitable conditions to carry out in vitro fertilization after step (vi) include, among others, a relative humidity of between 90 and 100%.

Cuando la fecundación in vitro se refiere a la especie humana, el procedimiento de fecundación in vitro de la presente invención lleva a cabo, tras depositar un ovocito humano y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) del dispositivo con un tapón (4) en el paso (vi), una incubación de dicho dispositivo a una humedad relativa de 90-100%, durante 15-20 horas, a 37°C y en presencia de 5% de O2 y 5% CO2. Más preferentemente durante 18 horas.When in vitro fertilization refers to the human species, the in vitro fertilization procedure of the present invention is carried out, after depositing a human oocyte and closing said first hollow compartment (1) of the device with a plug (4) in the step (vi), an incubation of said device at a relative humidity of 90-100%, for 15-20 hours, at 37°C and in the presence of 5% O 2 and 5% CO 2 . More preferably for 18 hours.

Cuando la fecundación in vitro se refiere a ratones, el procedimiento de fecundación in vitro de la presente invención lleva a cabo, tras depositar un ovocito de ratón y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) del dispositivo con un tapón (4) en el paso (vi), una incubación de dicho dispositivo a una humedad relativa de 90-100%, durante 4-7 horas, a 37°C y en presencia de 5% CO2. Más preferentemente durante 5 horas.When in vitro fertilization refers to mice, the in vitro fertilization procedure of the present invention is carried out, after depositing a mouse oocyte and closing said first hollow compartment (1) of the device with a stopper (4) in the passage (vi), an incubation of said device at a relative humidity of 90-100%, for 4-7 hours, at 37°C and in the presence of 5% CO 2 . More preferably for 5 hours.

Cuando la fecundación in vitro se refiere a la especie porcina o equina, el procedimiento de fecundación in vitro de la presente invención lleva a cabo, tras depositar un ovocito de cerdo o equino y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) del dispositivo con un tapón (4) en el paso (vi), una incubación de dicho dispositivo a una humedad relativa de 90-100%, durante 15-20 horas, a 38,5°C y en presencia de 5% CO2. Más preferentemente durante 18 horas. When in vitro fertilization refers to porcine or equine species, the in vitro fertilization procedure of the present invention is carried out, after depositing a pig or equine oocyte and closing said first hollow compartment (1) of the device with a cap. (4) in step (vi), an incubation of said device at a relative humidity of 90-100%, for 15-20 hours, at 38.5°C and in the presence of 5% CO 2 . More preferably for 18 hours.

Cuando la fecundación in vitro se refiere a la especie bovina, el procedimiento de fecundación in vitro de la presente invención lleva a cabo, tras depositar un ovocito bovino y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) del dispositivo con un tapón (4) en el paso (vi), una incubación de dicho dispositivo a una humedad relativa de 90-100%, durante 18-25 horas, a 38,5°C y en presencia de 5% CO2. Más preferentemente durante 20 a 22 horas.When in vitro fertilization refers to the bovine species, the in vitro fertilization procedure of the present invention is carried out, after depositing a bovine oocyte and closing said first hollow compartment (1) of the device with a plug (4) in the step (vi), an incubation of said device at a relative humidity of 90-100%, for 18-25 hours, at 38.5°C and in the presence of 5% CO 2 . More preferably for 20 to 22 hours.

Tal como se puede observar en los ejemplos mostrados a continuación, en el presente documento, los procedimientos de la invención permiten seleccionar espermatozoides que producen el mayor número de uniones a la zona pelúcida, así como el mayor porcentaje de ovocitos penetrados. Por tanto, la utilización de los procedimientos de la invención permite seleccionar aquellos espermatozoides que tienen mayor capacidad de producir una fecundación exitosa en técnicas de fecundación asistida. As can be seen in the examples shown below, in the present document, the methods of the invention allow the selection of spermatozoa that produce the highest number of unions to the zona pellucida, as well as the highest percentage of penetrated oocytes. Therefore, the use of the procedures of the invention makes it possible to select those spermatozoa that have the greatest capacity to produce successful fertilization in assisted fertilization techniques.

Esto quiere decir que, aunque la utilización de otros quimioatrayentes, diferentes al fluido folicular, en el procedimiento de la invención, produzcan una mayor quimiotaxis (produzcan una mayor acumulación de espermatozoides), la utilización de los procedimientos de la invención, con fluido folicular, permiten seleccionar de manera más efectiva aquellos espermatozoides que tienen una mayor posibilidad de producir una fecundación (medido como mayor número de uniones a la zona pelúcida y/o mayor porcentaje de ovocitos penetrados), es decir, aquellos espermatozoides con una mayor capacitación espermática.This means that, although the use of other chemoattractants, different from follicular fluid, in the procedure of the invention, produces greater chemotaxis (produces a greater accumulation of spermatozoa), the use of the procedures of the invention, with follicular fluid, they allow a more effective selection of those spermatozoa that have a greater possibility of producing fertilization (measured as a greater number of unions to the zona pellucida and/or a greater percentage of oocytes penetrated), that is, those spermatozoa with greater sperm capacitation.

A efectos de la presente invención se denomina sustancia quimioatrayente a aquellas sustancias que producen un proceso de quimiotaxis, es decir, una sustancia que provoca la migración mediante gradiente de concentración, de espermatozoides.For the purposes of the present invention, the term chemoattractant substance refers to those substances that produce a chemotaxis process, that is, a substance that causes migration by means of a concentration gradient of spermatozoa.

A efectos de la presente invención se denomina estado de capacitación espermática a aquellas características funcionales o metabólicas que permiten a los espermatozoides disponer de una mayor capacidad de fecundación de un ovocito.For the purposes of the present invention, the term sperm capacitation state refers to those functional or metabolic characteristics that allow spermatozoa to have a greater capacity to fertilize an oocyte.

Los espermatozoides no tienen la capacidad de sintetizar proteínas como respuesta a estímulos externos, sino que llevan a cabo modificaciones, como la fosforilación de proteínas, metilaciones o nitrosilación de proteínas. Se ha comprobado que, durante la capacitación espermática, se produce una fosforilación de proteínas en los espermatozoides, concretamente en los aminoácidos serina, treonina y tirosina de las proteínas. La fosforilación del aminoácido tirosina se ha descrito como una señal que se produce durante la capacitación y, por ello, es utilizado como medida de este fenómeno. El aumento de los niveles de fosforilación en tirosina de las proteínas es un indicador primordial de la probabilidad de éxito en la fecundación.Sperm do not have the ability to synthesize proteins in response to external stimuli, but instead carry out modifications such as protein phosphorylation, methylation, or protein nitrosylation. It has been verified that, during sperm capacitation, protein phosphorylation occurs in spermatozoa, specifically in the serine, threonine and tyrosine amino acids of the proteins. The phosphorylation of the amino acid tyrosine has been described as a signal that occurs during capacitation and, therefore, it is used as a measure of this phenomenon. Increased levels of protein tyrosine phosphorylation is a primary indicator of the probability of successful fertilization.

Así, la utilización del dispositivo de la invención permite mantener el estado de capacitación espermática (medido como fosforilación de tirosina), viabilidad y daño acrosomal, motilidad, receptores de progesterona y morfología de los espermatozoides durante todo el procedimiento. Thus, the use of the device of the invention makes it possible to maintain the state of sperm capacitation (measured as tyrosine phosphorylation), viability and acrosomal damage, motility, progesterone receptors, and sperm morphology throughout the entire procedure.

De manera preferente el medio de capacitación (C1) y el medio de capacitación (C2) son iguales. Sin embargo, dichos medios de capacitación pueden ser diferentes, siempre y cuando la viscosidad de ambos medios sea idéntica.Preferably the training means (C1) and the training means (C2) are the same. However, said training media can be different, as long as the viscosity of both media is identical.

La composición de los medios de capacitación (C1) y (C2) varía en función de la especie animal para la cual se lleva a cabo el procedimiento de selección de espermatozoides de la invención. En una realización preferente, el medio de capacitación (C1) y (C2) son un medio Tyrode modificado con albúmina. The composition of the capacitation media (C1) and (C2) varies depending on the animal species for which the sperm selection procedure of the invention is carried out. In a preferred embodiment, the capacitation medium (C1) and (C2) are albumin-modified Tyrode's medium.

Más preferentemente el medio de capacitación (C1) y el medio de capacitación (C2) son ambos una solución de Tyrode con albúmina, lactato y piruvato (TALP).More preferably the capacitation medium (C1) and the capacitation medium (C2) are both a Tyrode's solution with albumin, lactate and pyruvate (TALP).

En una realización preferente, cuando la especie para la cual se lleva a cabo los procedimientos es la especie equina, el medio de capacitación (C1) y el medio de capacitación (C2) son ambos un medio Tyrode modificado que comprende NaCl, KCl, MgSO4 , KH2PO4 , HEPES, glucosa, lactato, piruvato y albúmina.In a preferred embodiment, when the species for which the procedures are carried out is the equine species, the capacitation medium (C1) and the capacitation medium (C2) are both a modified Tyrode medium comprising NaCl, KCl, MgSO 4 , KH 2 PO 4 , HEPES, glucose, lactate, pyruvate and albumin.

En otra realización preferente, cuando la especie para la cual se lleva a cabo los procedimientos es la especie bovina, el medio de capacitación (C1) y el medio de capacitación (C2) son ambos un medio Tyrode modificado que comprende NaCl, KCl, NaH2PO4 , ácido láctico, CaCl2 , MgCl2 , HEPES, bicarbonato y albúmina, suplementado con piruvato, penicilina y estreptomicina.In another preferred embodiment, when the species for which the procedures are carried out is the bovine species, the capacitation medium (C1) and the capacitation medium (C2) are both a modified Tyrode medium comprising NaCl, KCl, NaH 2 PO 4 , lactic acid, CaCl 2 , MgCl 2 , HEPES, bicarbonate and albumin, supplemented with pyruvate, penicillin and streptomycin.

En otra realización preferente, cuando la especie para la cual se lleva a cabo los procedimientos es la especie porcina, el medio de capacitación (C1) y el medio de capacitación (C2) son ambos un medio Tyrode modificado que comprende NaCl, KCl, MgCh, lactato, NaH2PO4 , glucosa, bicarbonato, cafeína, lactato, polivinilacetato (PVA), kanamicina y rojo fenol suplementado con albúmina y piruvato, ajustando el pH a 7,4.In another preferred embodiment, when the species for which the procedures are carried out is porcine species, the capacitation medium (C1) and the capacitation medium (C2) are both a modified Tyrode medium comprising NaCl, KCl, MgCh , lactate, NaH 2 PO 4 , glucose, bicarbonate, caffeine, lactate, polyvinylacetate (PVA), kanamycin and phenol red supplemented with albumin and pyruvate, adjusting the pH to 7.4.

En otra realización preferente, cuando la especie para la cual se lleva a cabo los procedimientos es la especie caprina, el medio de capacitación (C1) y el medio de capacitación (C2) son ambos un medio Tyrode modificado que comprende NaCl, KCl, NaH2PO4 , ácido láctico, CaCh, MgCh, HEPES, bicarbonato y albúmina libre de ácidos grasos, suplementado con suero de cabra en celo y heparina.In another preferred embodiment, when the species for which the procedures are carried out is the caprine species, the capacitation medium (C1) and the capacitation medium (C2) are both a modified Tyrode medium comprising NaCl, KCl, NaH 2 PO 4 , lactic acid, CaCh, MgCh, HEPES, bicarbonate and free fatty acid albumin, supplemented with goat serum in heat and heparin.

Los procedimientos de la invención seleccionan espermatozoides que son capaces de moverse hacia el medio de capacitación con fluido folicular, que actúa como quimioatrayente, pero, además, los espermatozoides seleccionados también se habrán impregnado de factores maternos presentes en las vesículas extracelulares de dicho fluido folicular. Tal como se explicó anteriormente, dentro de este tipo de vesículas se encuentran los exosomas, los cuales transportan materiales bioactivos que incluyen proteínas y microARNs en diferentes fluidos corporales, siendo estos últimos, moléculas de ARN no codificantes que regulan la expresión génica durante la diferenciación celular y el desarrollo de los tejidos.The methods of the invention select spermatozoa that are capable of moving towards the capacitation medium with follicular fluid, which acts as a chemoattractant, but, in addition, the selected spermatozoa will also have been impregnated with maternal factors present in the extracellular vesicles of said follicular fluid. As explained above, within this type of vesicles are exosomes, which transport bioactive materials that include proteins and microRNAs in different body fluids, the latter being non-coding RNA molecules that regulate gene expression during cell differentiation. and tissue development.

De manera preferente, los espermatozoides comprendidos en el medio del paso (iv) se han procesado previamente a su utilización en el procedimiento de la invención mediante: lavado, gradiente de densidad o swim-up. Preferably, the spermatozoa included in the means of step (iv) have been processed prior to their use in the method of the invention by: washing, density gradient or swim-up.

En el caso que los espermatozoides comprendidos en el medio del paso (iv) no hayan sido procesados previamente mediante las técnicas mencionadas, permanecerán más tiempo en el medio de capacitación antes de que dicho medio sea añadido al dispositivo para llevar a cabo la incubación del paso (v), dependiendo de la especie y/o tipo de conservación previamente realizada.In the event that the spermatozoa included in the medium of step (iv) have not been previously processed by the aforementioned techniques, they will remain longer in the capacitation medium before said medium is added to the device to carry out the incubation of step (v), depending on the species and/or type of conservation previously carried out.

A efectos de la presente invención, se denomina capacitación espermática al procesado del esperma que permite adquirir a los espermatozoides la capacidad de fecundar un óvulo. La capacitación de los espermatozoides se produce de forma natural a lo largo del tracto reproductor femenino. Las técnicas de reproducción asistida realizan técnicas de capacitación in vitro para mejorar las probabilidades de éxito en la fecundación. De entre las técnicas de capacitación in vitro pueden ser mencionadas: capacitación por lavado, capacitación por swim-up y capacitación por gradiente de densidad.For the purposes of the present invention, sperm capacitation refers to the processing of the sperm that allows the sperm to acquire the capacity to fertilize an ovum. Sperm capacitation occurs naturally throughout the female reproductive tract. Assisted reproduction techniques perform in vitro training techniques to improve the chances of successful fertilization. Among the in vitro training techniques, the following can be mentioned: training by washing, training by swim-up and training by density gradient.

El lavado consiste en una centrifugación de la muestra de semen para eliminar plasma seminal. Aunque dicha técnica se engloba dentro de las técnicas de capacitación, no implica ningún proceso de selección de espermatozoides.Washing consists of centrifuging the semen sample to remove seminal plasma. Although this technique is included within the training techniques, it does not imply any sperm selection process.

El swim-up es un procedimiento que comprende realizar una incubación en medio de cultivo en la cual se seleccionan los espermatozoides que ascienden a la superficie dado que son los que tienen mejor movilidad.The swim-up is a procedure that involves carrying out an incubation in a culture medium in which the spermatozoa that rise to the surface are selected since they are the ones with the best mobility.

En la capacitación por gradiente de densidad se coloca la muestra de semen en la parte superior de un tubo de centrifugación en el que se han incluido varios medios con diferente densidad colocados de manera que forman un gradiente. Tras el centrifugado los espermatozoides que hayan sido capaces de descender hasta el fondo del tubo, superando todos los gradientes de densidad, son seleccionados.In density gradient capacitation, the semen sample is placed in the upper part of a centrifugation tube in which several media with different densities have been included, placed in such a way that they form a gradient. After centrifugation, the spermatozoa that have been able to descend to the bottom of the tube, overcoming all the density gradients, are selected.

Además, preferentemente, el medio de capacitación del paso (iv) comprende espermatozoides con una concentración de entre 1x103 espermatozoides/ml a 50x106 espermatozoides/mL.Furthermore, preferably, the capacitation medium of step (iv) comprises spermatozoa with a concentration of between 1x103 spermatozoa/ml to 50x106 spermatozoa/mL.

También, de manera preferente, el fluido folicular utilizado en el procedimiento de la invención es fluido folicular procedente de un folículo maduro. Más preferentemente el fluido folicular proviene del folículo ovárico del cual se aísla el ovocito que va a ser fecundado en una técnica de reproducción asistida.Also, preferably, the follicular fluid used in the method of the invention is follicular fluid from a mature follicle. More preferably, the follicular fluid comes from the ovarian follicle from which the oocyte to be fertilized in an assisted reproduction technique is isolated.

Los folículos ováricos, que se encuentran en el interior de los ovarios comprenden un ovocito, células granulosas y fluido folicular. Dichos folículos sufren un proceso de maduración (foliculogénesis) que culmina en la formación un folículo maduro que se encuentra listo para la ovulación (folículo de Graaf).Ovarian follicles, found within the ovaries, comprise an oocyte, granule cells, and follicular fluid. These follicles undergo a maturation process (folliculogenesis) culminating in the formation of a mature follicle that is ready for ovulation (Graafian follicle).

En una realización de la invención el medio de capacitación (C) con fluido folicular utilizado en el procedimiento de la invención se obtiene mediante los pasos de:In an embodiment of the invention, the capacitation medium (C) with follicular fluid used in the procedure of the invention is obtained through the steps of:

- puncionar el folículo ovárico in vitro, separando el ovocito del fluido folicular;- puncturing the ovarian follicle in vitro, separating the oocyte from the follicular fluid;

- centrifugar el fluido folicular para retirar restos celulares;- centrifuging the follicular fluid to remove cell debris;

- opcionalmente, criopreservar dicho fluido folicular centrifugado a -80oC; y- optionally, cryopreserve said centrifuged follicular fluid at -80oC; Y

- añadir el fluido folicular después de su centrifugación o después de descongelar al medio de capacitación (C); preferentemente a una concentración de 0,1% a 2% (v/v).- adding the follicular fluid after its centrifugation or after thawing to the capacitation medium (C); preferably at a concentration of 0.1% to 2% (v/v).

El paso de incubación (v) puede variar entre 10 minutos hasta unas pocas horas, generalmente de 3 a 5 horas, dependiendo de la especie animal en la que se aplique. En una realización, el paso (v) comprende incubar el dispositivo durante 10 minutos a 5 horas. Más preferentemente durante 10 a 30 minutos.The incubation step (v) can vary from 10 minutes to a few hours, generally from 3 to 5 hours, depending on the animal species in which it is applied. In one embodiment, step (v) comprises incubating the device for 10 minutes to 5 hours. More preferably for 10 to 30 minutes.

Además, preferentemente, el paso (v) comprende incubar el dispositivo a entre 35°C y 39°C y con 0% a 8% de CO2.Furthermore, preferably, step (v) comprises incubating the device at between 35°C and 39°C and with 0% to 8% CO 2 .

Dado que el dispositivo de la invención se encuentra configurado para uso en la selección de espermatozoides de seres humanos o de otros mamíferos (cerdos, vacas, ovejas, ratones, conejos, etc.), en una realización preferente, el medio del paso (iv) comprende espermatozoides procedentes de seres humanos.Since the device of the invention is configured for use in the selection of spermatozoa from humans or other mammals (pigs, cows, sheep, mice, rabbits, etc.), in a preferred embodiment, the passage medium (iv ) comprises spermatozoa derived from humans.

Cuando el procedimiento de la invención es un procedimiento de selección de espermatozoides in vitro, el paso (vi) comprende destapar el primer compartimento (1); y recuperar el medio de dicho primer compartimento hueco (1).When the method of the invention is an in vitro sperm selection method, step (vi) comprises uncovering the first compartment (1); and recovering the medium from said first hollow compartment (1).

Cuando el procedimiento de la invención es un procedimiento de fecundación in vitro, el paso (vi) comprende destapar el primer compartimento (1); y depositar un ovocito y cerrar dicho primer compartimento hueco (1) con un tapón (4) para proceder a una fecundación in vitro. When the procedure of the invention is an in vitro fertilization procedure, step (vi) comprises uncovering the first compartment (1); and depositing an oocyte and closing said first hollow compartment (1) with a stopper (4) to proceed with in vitro fertilization.

Así, cuando el procedimiento de la invención es un procedimiento de selección de espermatozoides in vitro, se podrá utilizar el medio con los espermatozoides seleccionados para llevar a cabo técnicas de reproducción asistida tales como: la inyección intracitoplasmática de espermatozoides, inseminación artificial intravaginal, inseminación artificial intracervical, inseminación artificial intrauterina e inseminación artificial intratubárica. Thus, when the procedure of the invention is an in vitro sperm selection procedure, the medium with the selected sperm may be used to carry out assisted reproduction techniques such as: intracytoplasmic sperm injection, intravaginal artificial insemination, artificial insemination intracervical, intrauterine artificial insemination and intratubal artificial insemination.

En cambio, cuando el procedimiento de la invención es un procedimiento de fecundación in vitro, permite llevar a cabo la fecundación de un ovocito directamente en el mismo compartimento hueco (1) en el que han migrado los espermatozoides seleccionados, por lo que el procedimiento de la invención permite disminuir el tiempo de manipulación, el nivel de estrés y, consecuentemente, las posibles alteraciones epigenéticas producidas por factores ambientales de manipulación.On the other hand, when the procedure of the invention is an in vitro fertilization procedure, it allows the fertilization of an oocyte to be carried out directly in the same hollow compartment (1) in which the selected spermatozoa have migrated, so the procedure of The invention makes it possible to reduce the handling time, the level of stress and, consequently, the possible epigenetic alterations produced by environmental handling factors.

EJEMPLOSEXAMPLES

A continuación, se expone un ejemplo no limitante de aplicación de la invención. En concreto la especie utilizada como modelo experimental en que se basa este ejemplo es la especie porcina, habiéndose usado espermatozoides obtenidos de verracos fértiles con edad comprendida entre 12 y 24 meses, en régimen de colecta para su utilización en programas de inseminación artificial. Los verracos pertenecían a la Granja Veterinaria de la Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia. Las fases del procedimiento se muestran a continuación:Below is a non-limiting example of application of the invention. Specifically, the species used as an experimental model on which this example is based is the porcine species, having used sperm obtained from fertile boars aged between 12 and 24 months, in a collection regime for use in artificial insemination programs. The boars belonged to the Veterinary Farm of the Faculty of Veterinary Medicine, University of Murcia. The phases of the procedure are shown below:

Ejemplo 1. Determinación de la concentración de quimioatrayente.Example 1. Determination of the concentration of chemoattractant.

Para evaluar la capacidad de diferentes sustancias como quimioatrayentes, se eligieron, en base a pruebas realizadas previamente en laboratorio con resultados relevantes en la fecundación in vitro [Soriano-Ubeda, C. et al. (2017) SciRep 7, 12]: fluido folicular (FF), fluido oviductal (FO), progesterona (P4) y medio condicionado (MC), dentro de rangos de concentración fisiológicos [Ballester, L. et al., Fertil Steril. 2014; 102, (1762-1768)]. Se empleó progesterona de uso comercial Sigma (Sigma; P8783-5g). El FF se obtuvo de folículos antrales de tamaño comprendido entre 3 y 6 mm de diámetro, el FO procedió de oviductos de cerdas próximas a la ovulación y el MC se obtuvo tras la maduración de los ovocitos en el medio NCSU-37 (North Caroline State University 37 Medium).To evaluate the capacity of different substances as chemoattractants, they were chosen, based on tests previously carried out in the laboratory with relevant results in in vitro fertilization [Soriano-Ubeda, C. et al. ( 2017) SciRep 7, 12]: follicular fluid (FF), oviductal fluid (FO), progesterone (P4) and conditioned medium (MC), within physiological concentration ranges [Ballester, L. et al., Fertil Steril. 2014; 102, (1762-1768)]. Sigma commercial progesterone (Sigma; P8783-5g) was used. The FF was obtained from antral follicles with a size between 3 and 6 mm in diameter, the FO came from oviducts of sows close to ovulation, and the MC was obtained after maturation of the oocytes in NCSU-37 medium ( North Caroline State University 37 Medium).

La composición del medio NCSU se describe en la tabla 1 a continuación:The composition of the NCSU medium is described in Table 1 below:

Figure imgf000019_0001
Figure imgf000019_0001

Figure imgf000020_0001
Figure imgf000020_0001

Tabla 1Table 1

A la solución stock se le añade Cisteína (0,57 mM), p-mercaptoetanol (50 ^M), insulina (5 mg/L) y 10% de fluido folicular porcino (v/v). Para la evaluación de dichas sustancias se emplearon las siguientes concentraciones (% en v/v): FF: 0,13, 0,25, 0,5, 1 y 1,5%; FO: 0,13, 0,25, 0,5, 1 y 1,5%; MC: 0,033, 0,065, 0,13, 0,25 y 0,5%.Cysteine (0.57 mM), p-mercaptoethanol (50 ^M), insulin (5 mg/L) and 10% porcine follicular fluid (v/v) are added to the stock solution. For the evaluation of said substances, the following concentrations (% in v/v) were used: FF: 0.13, 0.25, 0.5, 1 and 1.5%; FO: 0.13, 0.25, 0.5, 1 and 1.5%; MC: 0.033, 0.065, 0.13, 0.25 and 0.5%.

Las concentraciones de progesterona (P4) se analizaron en dos etapas porque tras efectuar el estudio con concentraciones de 1 pM a 10 pM se observó que la mayor concentración (10 pM) utilizada atrajo mayor porcentaje de espermatozoides, y se diseñó, por tanto, una segunda etapa en la que se estudiaron mayores concentraciones de progesterona, partiendo de 10 pM hasta 20 pM:The concentrations of progesterone (P4) were analyzed in two stages because after carrying out the study with concentrations of 1 pM to 10 pM it was observed that the highest concentration (10 pM) used attracted a greater percentage of spermatozoa, and therefore a test was designed. second stage in which higher concentrations of progesterone were studied, starting from 10 pM to 20 pM:

- primera etapa con concentraciones: 1 pM, 2,5 pM, 5 pM, 7,5 pM y 10 pM; y- first stage with concentrations: 1 pM, 2.5 pM, 5 pM, 7.5 pM and 10 pM; Y

- segunda etapa con concentraciones: 10 pM, 12,5 pM, 15 pM, 17,5 pM y 20 pM.- second stage with concentrations: 10 pM, 12.5 pM, 15 pM, 17.5 pM and 20 pM.

Los espermatozoides procedieron de animales fértiles y se lavaron a través de un gradiente de densidad con Percoll® (45/90). Se prepararon muestras de 500 ^L de medio Tyrode modificado con albúmina y piruvato, para especie porcina (TALP) con cada una de las concentraciones de FF, FO, MC y P4, así como una muestra control sin quimioatrayente (TALP). El medio TALP utilizado modificado para especie porcina tenía la siguiente composición que se indica en la tabla 2:The spermatozoa came from fertile animals and were washed through a density gradient with Percoll® (45/90). Samples of 500 ^L of Tyrode's medium modified with albumin and pyruvate, for porcine species (TALP) were prepared with each of the concentrations of FF, FO, MC and P4, as well as a control sample without chemoattractant (TALP). The TALP medium used modified for porcine species had the following composition indicated in Table 2:

Figure imgf000020_0002
Figure imgf000020_0002

Figure imgf000021_0001
Figure imgf000021_0001

Tabla 2: Tyrode’s Albúmina Lactato Piruvato modificado para especie porcina Table 2: Tyrode's Albumin Lactate Pyruvate modified for porcine species

Inmediatamente después de preparar la mezcla se mide el pH ajustándolo a 7,4 y se suplementó con 3 mg/mL de albúmina de suero bovino (BSA, SIGMA A 9647) y 0,12 mg/mL de piruvato sódico (SIGMA P 2256).Immediately after preparing the mixture, the pH is measured, adjusting it to 7.4 and supplemented with 3 mg/mL of bovine serum albumin (BSA, SIGMA A 9647) and 0.12 mg/mL of sodium pyruvate (SIGMA P 2256). .

Las muestras de medio TALP modificado con cada uno de los quimioatrayentes, o el control de TALP, se cargaron en el compartimento hueco (1) del dispositivo, mientras que el compartimento hueco (2) permaneció cerrado. Posteriormente, se cerró herméticamente el compartimento hueco (1) y, se abrió el compartimento hueco (2) y se añadió medio de capacitación TALP con una concentración de 20x106/mL, cerrándolo de nuevo a continuación. El dispositivo se incubó durante 20 minutos y, a continuación, se recogió el contenido del compartimento hueco (1) para evaluar las concentraciones de los espermatozoides en todos los grupos.Samples of TALP medium modified with each of the chemoattractants, or the TALP control, were loaded into the hollow compartment (1) of the device, while the hollow compartment (2) remained closed. Subsequently, the hollow compartment (1) was sealed and, the hollow compartment (2) was opened and TALP capacitation medium was added with a concentration of 20x10 6 /mL, closing it again afterwards. The device was incubated for 20 minutes, and then the contents of the hollow compartment (1) were collected to assess sperm concentrations in all groups.

Las concentraciones de espermatozoides se determinaron con una cámara de recuento celular Neubauer. Cuando se realizó la curva de concentración se observó que las concentraciones de 0,25% de FF (Tabla 3), 0,25% de FO (Tabla 4), 0,065% y 0,13% de MC (Tabla 5) y 10 pM de la P4 (Tablas 6.1 y 6.2), seleccionaron el mayor porcentaje de espermatozoides (P < 0,05).Sperm concentrations were determined with a Neubauer cell counting chamber. When the concentration curve was carried out, it was observed that the concentrations of 0.25% FF (Table 3), 0.25% FO (Table 4), 0.065% and 0.13% MC (Table 5) and 10 pM of the P4 (Tables 6.1 and 6.2), selected the highest percentage of spermatozoa (P < 0.05).

Figure imgf000021_0002
Figure imgf000021_0002

Tabla 3. Concentración de espermatozoides tras 20 minutos de incubación en el compartimento hueco (1) suplementado con distintas concentraciones de FF. Se expresa en total de espermatozoides (SPZ ) recogidos y el porcentaje de los que han migrado del total (%SPZ). (N= número de muestras analizadas). * diferencias significativas P <0,05. Table 3. Sperm concentration after 20 minutes of incubation in the hollow compartment (1) supplemented with different concentrations of FF. It is expressed in total spermatozoa (SPZ ) collected and the percentage of those that have migrated out of the total (%SPZ). (N= number of samples analyzed). * significant differences P < 0.05.

Figure imgf000022_0003
Figure imgf000022_0003

Tabla 4. Concentración de espermatozoides tras 20 minutos de incubación en el compartimento hueco (1) suplementado con distintas concentraciones de FO. Se expresa en total de espermatozoides (SPZ ) recogidos y el porcentaje de los que han migrado del total (%SPZ). (N= número de muestras analizadas). * diferencias significativas P <0,05. Table 4. Sperm concentration after 20 minutes of incubation in the hollow compartment (1) supplemented with different concentrations of FO. It is expressed in total spermatozoa (SPZ) collected and the percentage of those that have migrated out of the total (%SPZ). (N= number of samples analyzed). * significant differences P < 0.05.

Figure imgf000022_0001
Figure imgf000022_0001

Tabla 5. Concentración de espermatozoides tras 20 minutos de incubación en el compartimento hueco (1) suplementado con distintas concentraciones de MC. Se expresa en total de espermatozoides (SPZ ) recogidos y el porcentaje de los que han migrado del total (%SPZ). (N= número de muestras analizadas). * diferencias significativas P <0,05. Table 5. Sperm concentration after 20 minutes of incubation in the hollow compartment (1) supplemented with different concentrations of MC. It is expressed in total spermatozoa (SPZ) collected and the percentage of those that have migrated out of the total (%SPZ). (N= number of samples analyzed). * significant differences P < 0.05.

Figure imgf000022_0002
Figure imgf000022_0002

Figure imgf000023_0001
Figure imgf000023_0001

Tabla 6.1. Concentración de espermatozoides tras 20 minutos de incubación en el compartimento hueco (1) que se había sido suplementado con distintas concentraciones de progesterona (1-10 pM). Se expresa en total de espermatozoides (SPZ ) recogidos y el porcentaje de los que han migrado del total (%SPZ). (N= número de muestras analizadas). diferencias significativas P <0,05. Table 6.1. Sperm concentration after 20 minutes of incubation in the hollow compartment (1) that had been supplemented with different concentrations of progesterone (1-10 pM). It is expressed in total spermatozoa (SPZ) collected and the percentage of those that have migrated out of the total (%SPZ). (N= number of samples analyzed). significant differences P < 0.05.

Figure imgf000024_0001
Figure imgf000024_0001

Tabla 6.2. Concentración de espermatozoides tras 20 minutos de incubación en el compartimento hueco (1) que se había sido suplementado con distintas concentraciones de progesterona (10-20 pM). Se expresa en total de espermatozoides (SPZ ) recogidos y el porcentaje de los que han migrado del total (%SPZ). (N= número de muestras analizadas). * diferencias significativas P <0,05. Table 6.2. Sperm concentration after 20 minutes of incubation in the hollow compartment (1) that had been supplemented with different concentrations of progesterone (10-20 pM). It is expressed in total spermatozoa (SPZ) collected and the percentage of those that have migrated out of the total (%SPZ). (N= number of samples analyzed). * significant differences P < 0.05.

Las concentraciones marcadas en negrita (FF 0,25%, FO 0,25%, MC 0,13% y P410 pM) son las que, para cada una de las sustancias evaluadas como quimioatrayente, indujeron una migración de un mayor % de espermatozoides.The concentrations marked in bold (FF 0.25%, FO 0.25%, MC 0.13% and P410 pM) are those that, for each of the substances evaluated as chemoattractant, induced a migration of a greater % of spermatozoa. .

En base a dichos resultados se seleccionaron dichas concentraciones marcadas en negrita (FF 0,25%, FO 0,25%, MC 0,13% y P4 10 pM) para establecer el medio que selecciona espermatozoides de mayor calidad.Based on these results, said concentrations marked in bold (FF 0.25%, FO 0.25%, MC 0.13% and P4 10 pM) were selected to establish the medium that selects higher quality spermatozoa.

Ejemplo 2. Selección de espermatozoides capacitados.Example 2. Selection of capacitated sperm.

Fluido folicular (FF), fluido oviductal (FO), progesterona (P4) y medio condicionado (MC), se mezclaron con medio de capacitación Tyrode con albúmina, lactato y piruvato (TALP) modificado para medio porcino, de acuerdo con la tabla 2 indicada anteriormente, y fueron añadidas al compartimento hueco (1) de un dispositivo según la invención. El medio de capacitación se equilibró previamente durante 3 horas a 38,5°C, 5% de CO2 en atmósfera saturada de humedad.Follicular fluid (FF), oviductal fluid (FO), progesterone (P4) and conditioned medium (MC) were mixed with Tyrode capacitation medium with albumin, lactate and pyruvate (TALP) modified for porcine medium, according to Table 2. indicated above, and were added to the hollow compartment (1) of a device according to the invention. The capacitation medium was previously equilibrated for 3 hours at 38.5°C, 5% CO 2 in a moisture saturated atmosphere.

Asimismo, se utilizaron espermatozoides procedentes de animales fértiles, que fueron procesados mediante gradiente de densidad utilizando Percoll® (45/90) para eliminar el plasma seminal y restos celulares. Finalmente, las concentraciones de espermatozoides se determinaron con una cámara de recuento celular Neubauer. Likewise, spermatozoa from fertile animals were used, which were processed by density gradient using Percoll® (45/90) to eliminate seminal plasma and cell debris. Finally, sperm concentrations were determined with a Neubauer cell counting chamber.

Se preparó además un control de solamente medio de capacitación TALP y otro en el que se estudió el efecto de todos los biofluidos juntos como quimioatrayentes (TALP con FF, FO, MC, identificado como I). Se analizó el porcentaje de espermatozoides que respondieron a los quimioatrayentes, así como el estado funcional mediante fecundación in vitro de dichos espermatozoides.A control of only TALP capacitation medium was also prepared, and another in which the effect of all biofluids together as chemoattractants was studied (TALP with FF, FO, MC, identified as I). The percentage of spermatozoa that responded to the chemoattractants was analyzed, as well as the functional status through in vitro fertilization of said spermatozoa.

Los resultados mostraron que el FF presentaba la mayor tasa de penetración (P <0,05). En vista de los resultados de este primer ensayo, mostrados en la tabla 5, se puede concluir que el medio que contiene fluido folicular FF es el quimioatrayente, bajo condiciones in vitro, que mejor resultado ofrece.The results showed that the FF had the highest penetration rate (P <0.05). In view of the results of this first test, shown in Table 5, it can be concluded that the medium containing FF follicular fluid is the chemoattractant, under in vitro conditions, that offers the best results.

Figure imgf000025_0001
Figure imgf000025_0001

Tabla 7. Utilización de los espermatozoides seleccionados en un procedimiento de fecundación in vitro (FIV). * diferencias significativas (P<0,05). ZP BINDING: número de espermatozoides unidos a la zona pelúcida, PEN (%): porcentaje de ovocitos penetrados. (N= número de muestras analizadas). Table 7. Use of selected spermatozoa in an in vitro fertilization (IVF) procedure. * significant differences (P<0.05). ZP BINDING: number of spermatozoa bound to the zona pellucida, PEN (%): percentage of oocytes penetrated. (N= number of samples analyzed).

Sorprendentemente, tal como se aprecia en la tabla 7, el uso de FF produjo un mayor % de ovocitos penetrados. Esto quiere decir que, aunque en el ejemplo anterior pudiera parecer que el uso de, por ejemplo, progesterona, produce una mayor acumulación de espermatozoides, los espermatozoides seleccionados cuando se utiliza fluido folicular tienen una mayor posibilidad de producir una fecundación. Además, la mezcla de todas las sustancias no produjo una mejora en la capacidad de selección (tal como se ve en los resultados obtenidos, I).Surprisingly, as shown in table 7, the use of FF produced a higher % of oocytes penetrated. This means that, although in the previous example it might seem that the use of, for example, progesterone, produces a greater accumulation of spermatozoa, the spermatozoa selected when follicular fluid is used have a greater possibility of producing fertilization. In addition, the mixture of all the substances did not produce an improvement in the selection capacity (as seen in the results obtained, I).

Así, solamente el uso de fluido folicular produce una selección de espermatozoides con mayor calidad, medida como capacidad de penetrar ovocitos.Thus, only the use of follicular fluid produces a selection of sperm with higher quality, measured as the ability to penetrate oocytes.

Tras el ensayo descrito anteriormente se llevó a cabo el diseño e impresión en 3D de un dispositivo con material biocompatible MED-610™ para mejorar la manipulación de los gametos y medios. El estado de capacitación espermática (evaluado mediante fosforilación de tirosina), viabilidad, motilidad, receptores de progesterona y formas anormales, no se vio afectado por el material utilizado ni por los quimioatrayentes utilizados tal como se ve en las tablas a continuación:After the test described above, the design and 3D printing of a device with biocompatible material MED-610™ was carried out to improve the handling of gametes and media. Sperm capacitation status (assessed by tyrosine phosphorylation), viability, motility, progesterone receptors and abnormal shapes, was not affected by the material used or by the chemoattractants used as seen in the tables below:

Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0001

Tabla 8: Fosforilación de tirosina en espermatozoides decerdo. Evaluación del efecto de distintosquimioatrayentessobre la capacitacion mediante imunofluorescencia (IFI). *diferencias significativas P <0,05. Table 8: Tyrosine phosphorylation in boar sperm. Evaluation of the effect of different chemoattractants on capacitation by immunofluorescence (IFI). *significant differences P <0.05.

En la tabla 8 se observa el resultado de la capacitación de los espermatozoides porcino evaluado por la inmunofluorescencia indirecta con cinco patrones diferentes (patrón I: sin señal, patrón II: región acrosomal, patrón III: región postacrosomal (triangulo), patrón IV: región acrosomal y postacrosomal, patrón V: cola). Patrón I, II: baja capacitación, patrón III, V: capacitación intermedia y patrón: IV: capacitado. No se observaron diferencia significativa entre los tratamientos (TALP, FF, FO, MC, X) P>0,05. Table 8 shows the result of porcine sperm capacitation evaluated by indirect immunofluorescence with five different patterns (pattern I: no signal, pattern II: acrosomal region, pattern III: postacrosomal region (triangle), pattern IV: region acrosomal and postacrosomal pattern V: tail). Pattern I, II: low training, pattern III, V: intermediate training and pattern: IV: trained. No significant difference was observed between the treatments (TALP, FF, FO, MC, X) P>0.05.

En este sentido, los espermatozoides sin señales o con las señales en la región acrosomal, no serían capaces de penetrar a los ovocitos, y si lo hacen, el porcentaje de penetración sería muy bajo. Sin embargo, los espermatozoides de patrón IV sí que tienen un porcentaje de penetración alto. En anteriores trabajos se ha demostró la correlación de cada patrón mencionado con la tasa de penetración (López-Úbeda et al., Asian Journal of Andrology (2017) 19, 396-403). In this sense, spermatozoa without signals or with signals in the acrosomal region would not be able to penetrate the oocytes, and if they did, the percentage of penetration would be very low. However, pattern IV sperm do have a high penetration rate. In previous works, the correlation of each mentioned pattern with the penetration rate has been demonstrated (López-Úbeda et al., Asian Journal of Andrology (2017) 19, 396-403).

Figure imgf000027_0001
Figure imgf000027_0001

Tabla 9. Morfoanomalia de espermatozoides porcino despues 20 minutos de incubación. *diferencias significativas P <0,05 Table 9. Morphoanomaly of porcine spermatozoa after 20 minutes of incubation. *significant differences P <0.05

En base a dichos datos, los tratamientos FF y P4 seleccionarion mayor porcentaje de espermatozoides normales que los demás tratamientos (TALP, FO,MC, I ) P<0,05.Based on these data, the FF and P4 treatments selected a higher percentage of normal sperm than the other treatments (TALP, FO, MC, I) P<0.05.

Figure imgf000027_0002
Figure imgf000027_0002

Tabla 10. Localización mediante inmufluorescencia indirecta de receptores de progesterona en espermatozoides porcinos seleccionados tras la incubación. Patrones de localización de los receptores de progesterona: patrón I: no marcado, patrón II: región subecuatorial, patrón III: región subecuatorial y flagelo, patrón IV: flagelo y patrón V: cabeza espermática (región subecuatorial y acrosomal). En la especie porcina, el patrón más importante es el V (región de la cabeza). Los resultados indican que no se observaron diferencias significativas entre los tratamientos (P > 0,05). Table 10. Localization by indirect immunofluorescence of progesterone receptors in selected porcine sperm after incubation. Progesterone receptor localization patterns: pattern I: unmarked, pattern II: subequatorial region, pattern III: subequatorial region and flagellum, pattern IV: flagellum, and pattern V: sperm head (subequatorial and acrosomal region). In the porcine species, the most important pattern is the V (region of the head). The results indicate that no significant differences were observed between the treatments (P > 0.05).

Figure imgf000028_0001
Figure imgf000028_0001

Tabla 11. Motilidad de espermatozoides porcino después de 20 min de incubación con diferentes concentraciones de varios quimioatrayentes (FF-FO-MC-P4) comparada con motilidad de semen fresco eyaculado sin ningún tratamiento (SEM). * diferencias significativas P <0,05. VCL (jm/s): velocidad curvilínea, VSL (jm/s): velocidad rectilínea, VAP (jm/s): Velocidad media, ALH (jm/s): Amplitud del desplazamiento lateral de la cabeza, LIN (%): índice de linealidad, STR (%): índice de rectitud, WOB (%): índice de oscilación, BCF (HZ): frecuencia de batido de la cabeza. Table 11. Motility of porcine spermatozoa after 20 min of incubation with different concentrations of various chemoattractants (FF-FO-MC-P4) compared with motility of fresh ejaculated semen without any treatment (SEM). * significant differences P < 0.05. VCL (jm/s): Curvilinear velocity, VSL (jm/s): Rectilinear velocity, VAP (jm/s): Mean velocity, ALH (jm/s): Amplitude of lateral head displacement, LIN (%): linearity index, STR (%): straightness index, WOB (%): oscillation index, BCF (HZ): head beat frequency.

En cuanto la motilidad tampoco se ha observado diferencia significativa entre los tratamientos. Por tanto, si bien, las características de motilidad y fenotípicas no se ven alteradas con la utilización de fluido folicular como quimioatrayente, frente al uso de otros fluidos, sorprendentemente, tal como se puedo apreciar en la tabla 7, el uso de FF produjo un mayor % de ovocitos penetrados. Esto quiere decir que, aunque pudiera parecer que el uso de, por ejemplo, progesterona, produce una mayor acumulación de espermatozoides, o que todos los tratamientos seleccionan espermatozoides con características similares, los espermatozoides seleccionados cuando se utiliza fluido folicular tienen una mayor posibilidad de producir una fecundación. Regarding motility, no significant difference was observed between treatments. Therefore, although the motility and phenotypic characteristics are not altered with the use of follicular fluid as a chemoattractant, compared to the use of other fluids, surprisingly, as can be seen in Table 7, the use of FF produced a higher % of oocytes penetrated. This means that, although it might seem that the use of, for example, progesterone, produces a greater accumulation of spermatozoa, or that all treatments select spermatozoa with similar characteristics, the spermatozoa selected when follicular fluid is used have a greater possibility of producing a fertilization.

Claims (7)

REIVINDICACIONES 1. Dispositivo para seleccionar espermatozoides que comprende:1. Device to select spermatozoa comprising: - al menos un primer compartimento hueco (1), con una apertura (A1) y con una altura (H1);- at least a first hollow compartment (1), with an opening (A1) and with a height (H1); - al menos un segundo compartimento hueco (2) con una apertura (A2) y con una altura (H2);- at least a second hollow compartment (2) with an opening (A2) and with a height (H2); - un conducto (3) que se encuentra entre ambos compartimentos huecos (1) y (2), de longitud (L3) perpendicular a la altura (H1, H2), y que los comunica a una altura (T3) medida desde la apertura (A1, A2) y que es menor que la altura (H1, H2);- a duct (3) located between the two hollow compartments (1) and (2), with a length (L3) perpendicular to the height (H1, H2), and connecting them at a height (T3) measured from the opening (A1, A2) and that is less than the height (H1, H2); - tapones (4), en igual número al número de compartimentos huecos (1, 2), configurados para ser introducidos en la apertura (A1, A2) dentro del compartimento hueco (1,2) hasta una altura (T1) o (T2), en donde la altura (T1) y (T2) es menor que la altura (H1) y (H2) respectivamente y que la altura (T3), medidas dichas alturas desde la apertura (A1, A2); de manera que la apertura (A1, A2) de cada compartimento hueco (1,2) está dispuesta en uno de los extremos de la altura (H1, H2) y cuando todos los tapones (4) cierran todos los compartimentos huecos (1, 2) por su apertura (A1, A2), el dispositivo queda cerrado herméticamente y no existe conexión entre el interior del dispositivo y el exterior; y en el que, al abrir y llenar el al menos un primer compartimento hueco (1) hasta una profundidad (H1-T1) con un medio de capacitación (C1) y proceder, después, a su cierre, estando el al menos un segundo compartimento hueco (2) también cerrado, el aire que ocupaba el volumen donde se inserta el tapón (4) desplaza y empuja parcialmente el medio de capacitación dentro del conducto (3);- plugs (4), equal in number to the number of hollow compartments (1, 2), configured to be introduced into the opening (A1, A2) inside the hollow compartment (1, 2) up to a height (T1) or (T2 ), where the height (T1) and (T2) is less than the height (H1) and (H2) respectively and than the height (T3), said heights measured from the opening (A1, A2); so that the opening (A1, A2) of each hollow compartment (1,2) is arranged at one of the ends of the height (H1, H2) and when all the plugs (4) close all the hollow compartments (1, 2) due to its opening (A1, A2), the device is hermetically closed and there is no connection between the inside of the device and the outside; and in which, by opening and filling the at least one first hollow compartment (1) to a depth (H1-T1) with a capacitation means (C1) and then proceeding to its closure, being the at least one second hollow compartment (2) also closed, the air that occupied the volume where the plug (4) is inserted partially displaces and pushes the training medium inside the conduit (3); y cuando se procede a abrir y llenar el al menos un segundo compartimento hueco (2) con medio de capacitación (C2) que comprende espermatozoides, y después a su cierre, el aire que ocupaba el volumen donde se inserta el tapón (4) desplaza y empuja parcialmente el medio de capacitación (C2) con espermatozoides dentro del conducto (3), haciendo que, en este momento, que los medios de capacitación de ambos compartimentos huecos (1, 2) entren en contacto. and when the at least one second hollow compartment (2) is opened and filled with training medium (C2) comprising spermatozoa, and then closed, the air that occupied the volume where the plug (4) is inserted displaces and partially pushes the capacitation means (C2) with sperm into the conduit (3), causing the capacitation means of both hollow compartments (1, 2) to come into contact at this time. 2. Dispositivo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el conducto (3) tiene una longitud (L3) y un diámetro (D3) seleccionados en función de la especie animal de la cual proceden los espermatozoides.Device according to claim 1, in which the conduit (3) has a length (L3) and a diameter (D3) selected as a function of the animal species from which the spermatozoa originate. 3. Dispositivo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que el conducto (3) tiene una longitud (L3) comprendida entre 2 mm y 50 mm.Device according to any of claims 1 or 2, in which the conduit (3) has a length (L3) comprised between 2 mm and 50 mm. 4. Dispositivo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que el conducto (3) tiene un diámetro (D3) comprendido entre 0,1 mm y 10 mm.Device according to any of claims 1 or 2, in which the conduit (3) has a diameter (D3) between 0.1 mm and 10 mm. 5. Dispositivo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho dispositivo está fabricado con un material biocompatible.Device according to any of claims 1 to 4, wherein said device is made of a biocompatible material. 6. Uso de un dispositivo de las reivindicaciones 1 a 5 para la selección in vitro de espermatozoides.6. Use of a device of claims 1 to 5 for the in vitro selection of spermatozoa. 7. Uso de un dispositivo de las reivindicaciones 1 a 5 en una técnica de fecundación in vitro. 7. Use of a device of claims 1 to 5 in an in vitro fertilization technique.
ES202231325U 2020-04-01 2020-04-01 SELECTION OF CAPACITATED SPERM Active ES1295630Y (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES202231325U ES1295630Y (en) 2020-04-01 2020-04-01 SELECTION OF CAPACITATED SPERM

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES202231325U ES1295630Y (en) 2020-04-01 2020-04-01 SELECTION OF CAPACITATED SPERM

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES1295630U true ES1295630U (en) 2022-11-22
ES1295630Y ES1295630Y (en) 2023-02-17

Family

ID=84102501

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES202231325U Active ES1295630Y (en) 2020-04-01 2020-04-01 SELECTION OF CAPACITATED SPERM

Country Status (1)

Country Link
ES (1) ES1295630Y (en)

Also Published As

Publication number Publication date
ES1295630Y (en) 2023-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bavister et al. Fertilization and cleavage of rhesus monkey oocytes in vitro
Antinori et al. Cryotop vitrification of human oocytes results in high survival rate and healthy deliveries
Brackett et al. Fertilization and early development of cow ova
Abeydeera et al. In vitro penetration of pig oocytes in a modified Tris-buffered medium: effect of BSA, caffeine and calcium
Tremoleda et al. Organisation of the cytoskeleton during in vitro maturation of horse oocytes
US20220220438A1 (en) Method to prepare sperm
US3854470A (en) Reproduction processes for cellular bodies
JP2005529609A (en) In vitro fertilization
Davachi et al. The effect of conspecific ampulla oviductal epithelial cells during in vitro maturation on oocyte developmental competence and maturation-promoting factor (MPF) activity in sheep
Choi et al. Effect of medium variations (zinc supplementation during oocyte maturation, perifertilization pH, and embryo culture protein source) on equine embryo development after intracytoplasmic sperm injection
US3866598A (en) Processes for reproduction of cellular bodies
Cox et al. Differences in sperm migration through cervical mucus in vitro relates to sperm colonization of the oviduct and fertilizing ability in goats
ES1295630U (en) SELECTION OF CAPACITATED SPERM (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
ES2860354A1 (en) SELECTION OF TRAINED SPERM (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Wheeler et al. Zona pellucida penetration assay for capacitation of bovine sperm
Ng et al. Micro-centrifugation of human spermatozoa: its effect on fertilization of hamster oocytes after micro-insemination spermatozoal transfer
Hafez et al. Mammalian fertilization, IVF, ICSI: physiological/molecular parameters, clinical application
Kane Culture of preimplantation rabbit embryos
Karaşahin et al. Investigation of conception rates achieved with the transfer of sexed and unsexed bovine embryos
ES2922353A1 (en) Sperm selection plate for intra -ite microinjection (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Bedford et al. Comparison of the longevity of motility of stallion spermatozoa incubated at 38 C in different capacitating media and containers
Ruiz Díaz Analysis of sperm capacitation and sperm selection bythermotaxis in stallion, bull and rabbit
Pushett Assisted reproduction and subsequent embryo development to form embryos for transfer and cryobanking in endangered cats using the domestic cat as a model
Thundathil In vitro fertilizing characteristics of bovine sperm with abnormal morphology
RU2244525C2 (en) Method for growing normal descendants from oocytes injected with spermatozoa treated by drying with freezing

Legal Events

Date Code Title Description
CA1K Utility model application published

Ref document number: 1295630

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: U

Effective date: 20221122

FG1K Utility model granted

Ref document number: 1295630

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: Y

Effective date: 20230212