EP3535277A1 - Composition thérapeutique dérivée d'anthostema senegalense - Google Patents
Composition thérapeutique dérivée d'anthostema senegalenseInfo
- Publication number
- EP3535277A1 EP3535277A1 EP17797397.1A EP17797397A EP3535277A1 EP 3535277 A1 EP3535277 A1 EP 3535277A1 EP 17797397 A EP17797397 A EP 17797397A EP 3535277 A1 EP3535277 A1 EP 3535277A1
- Authority
- EP
- European Patent Office
- Prior art keywords
- molecule
- molecules
- chemical composition
- hiv
- plant extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 72
- 241001553164 Anthostema senegalense Species 0.000 title claims description 24
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 57
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 25
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 40
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 14
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 7
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 7
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 7
- 238000005325 percolation Methods 0.000 claims description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 claims description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 241001553166 Anthostema Species 0.000 claims description 4
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 4
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 claims description 3
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 3
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 claims description 3
- 238000005563 spheronization Methods 0.000 claims description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 3
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 claims description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 42
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 4
- -1 bulbs Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N nevirapine Chemical compound C12=NC=CC=C2C(=O)NC=2C(C)=CC=NC=2N1C1CC1 NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N Didanosine Chemical compound O1[C@H](CO)CC[C@@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 229960002656 didanosine Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 3
- 240000003241 Silphium laciniatum Species 0.000 description 2
- 235000009543 Silphium laciniatum Nutrition 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 2
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000000399 hydroalcoholic extract Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229960000689 nevirapine Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 2
- KLZYRCVPDWTZLH-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylsuccinic acid Chemical class OC(=O)C(C)C(C)C(O)=O KLZYRCVPDWTZLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- BBTIMXAYZRWPNG-UHFFFAOYSA-N 3beta,Delta4-stigmasten-3-ol Natural products C1CC2=CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 BBTIMXAYZRWPNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 241000223105 Trypanosoma brucei Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940124522 antiretrovirals Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N beclamide Chemical compound ClCCC(=O)NCC1=CC=CC=C1 JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- QADVIPISOOQJMJ-WLKYTNTRSA-N beta-stigmasterol Natural products CCC(CC)C=C[C@@H](C)[C@H]1CC[C@@H]2[C@@H]1CC[C@H]3[C@H]2CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]34C QADVIPISOOQJMJ-WLKYTNTRSA-N 0.000 description 1
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000001739 density measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical class 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 229930005346 hydroxycinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N hydroxycinnamic acid group Chemical class OC(C(=O)O)=CC1=CC=CC=C1 DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010359 hydroxycinnamic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 150000002966 pentacyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 1
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002311 trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
- C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/47—Euphorbiaceae (Spurge family), e.g. Ricinus (castorbean)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
- A23L33/11—Plant sterols or derivatives thereof, e.g. phytosterols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/17—Preparation or pretreatment of starting material involving drying, e.g. sun-drying or wilting
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
Definitions
- the present invention is in the field of chemical compositions for use in the preparation of medicaments or food supplements.
- the invention allows the preparation of drugs or dietary supplements capable of increasing the immunity and the defenses of the body, especially against viruses, bacteria, fungi, protozoa responsible for many pathologies, sometimes fatal.
- the invention specifically relates to a chemical composition comprising biologically active molecules that help to increase and stimulate the immune activity of the body and improve immune defenses, especially against viruses.
- the chemical composition of the invention has a biological activity against the "Human Immunodeficiency Virus” (HIV) and its resultant “Acquired Immunodeficiency Syndrome” (AIDS), usually accompanied by its opportunistic infections. .
- HIV Human Immunodeficiency Virus
- AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome
- HIV is a retrovirus infecting humans, of which two types are currently known: HIV-1 and HIV-2. HIV infection is a pandemic covering the entire planet, especially sub - Saharan Africa, which alone accounts for 69% of cases. A patient's infection with HIV evolves in several phases:
- the primary infection phase consists of the active, organized replication of HIV, which destroys the cells of the immune system, particularly T4 lymphocytes.
- the “latency” phase represents a phase in which the viral load decreases slightly and stabilizes in the body.
- the “AIDS” phase consists of an increased and invasive multiplication of HIV where AIDS symptoms appear, as well as opportunistic diseases, with the ultimate goal of patient death.
- HIV virus
- tritherapy type treatments combining three antiviral molecules are used to slow the development and multiplication of HIV in the body and its evolution to the AIDS stage.
- the present invention aims to overcome the disadvantages of the state of the art by proposing a chemical composition consisting of an alternative solution to the aforementioned solutions.
- This alternative must be effective and allow to increase the immune defenses, especially in patients with HIV, while limiting the effects secondary effects due to taking the drug comprising the alternative chemical composition.
- the chemical composition must be the least toxic possible for the body and target only viruses, fungi, protozoa responsible for diseases weakening the immune system.
- the chemical composition has a maximum of elements of natural origin, judged to be of little harm to health and the environment.
- the present invention aims to overcome the drawbacks of the state of the art, by proposing a chemical composition comprising:
- the moléc molecule or one of its physiologically acceptable salts is biologically active and stimulates the immune activity
- the molecule B or one of its physiologically acceptable salts is biologically active and stimulates the immune activity.
- said molecule A has:
- glycosilation or esterification in the form of -OR where "R” is either a feruloyl or caffeoyl group, or a sugar or an amide.
- said molecule A is conjugated with amino acids, quaternary ammonium salts, glycosides, hemiphtalates or carbamates.
- said molecule B has, in position 28, an esterification with an amide or a sugar.
- said chemical composition of the invention comprises at least one of the following molecules or one of its physiologically acceptable salts, or one of the possible combinations of the following molecules, said molecule (s) ) being chosen from the following list!
- each of said molecules A, B, and each of their physiologically acceptable salts is of synthetic origin and from a chemical synthesis in the laboratory or a semisynthesis.
- each of said molecules A, B and each of their physiologically acceptable salts of said composition of the invention is of natural origin and derived from a plant extract of Anthostema senegalense.
- said plant extract is obtained from trunk bark, in particular dried, of Anthostema senegalense.
- said chemical composition of the invention is intended to be used as a medicament or as a dietary supplement.
- said chemical composition of the invention is intended to be used in the treatment of HIV infection type 1 or type 2, AIDS and clinical manifestations that accompany it.
- said chemical composition of the invention is in an oral dosage form, or in a dosage form of infusette.
- said composition of the invention is in an oral dosage form of microspheres produced by an extrusion and spheronization process, tablets, soft capsules, granules, capsules, powder, bulbs, syrup or ecoctés.
- the present invention also relates to a method of isolation by extraction, identification and selection of the biologically active molecule (s) of the chemical composition of the invention wherein: - Part of the plant Anthostema senegalense is dried;
- a plant extract is prepared from the part of the dried plant by extraction with an apolar or polar solvent or by maceration, infusion, decoction, percolation, digestion or lixivation,
- Molecules having an index of selectivity against said pathogen ⁇ 50 and a CC 50 ⁇ 45 ⁇ g / ml are selected and isolated.
- the separated molecule (s), selected and isolated by nuclear magnetic resonance and mass spectrometry, are identified.
- the part of the plant of Anthostema sengalense that is dried consists of the bark of the trunk, or the bark of roots or leaves or fruits;
- a plant extract is prepared by percolation with CHCl 3 to obtain an apolar plant extract
- the molecules of the plant extract are separated by repeated column chromatography and thin layer chromatography.
- the molecules of said apolar plant extract are separated by column chromatography with, as stationary phase, a polar silica gel and, as mobile phase, an apolar eluent consisting of a gradient of CHCl 3 in hexane.
- the present invention relates to a chemical composition
- a chemical composition comprising molecule A and / or molecule B, or a physiologically acceptable salt thereof.
- said chemical composition comprises the molecule A or one of the physiologically acceptable salts of the molecule A; in the presence or absence of the molecule B or one of the physiologically acceptable salts of the molecule B.
- said chemical composition comprises molecule B or one of the physiologically acceptable salts of molecule B; in the presence or absence of the molecule A or one of the physiologically acceptable salts of the molecule A.
- physiologically acceptable means that the molecule or molecules and their salts do not interfere with the functioning or the mechanical, physical or biochemical organization of a living organism, in particular with the organism. To be human.
- the chemical composition of the invention is “physiologically acceptable” in its entirety, that is to say that all the elements that compose it are “physiologically acceptable”.
- Said chemical composition of the invention is “physiologically acceptable” through its various components, that is to say that it is biocompatible, non or slightly toxic for the proper functioning of the body and without physical or chemical property making it difficult and complicated to administer and metabolize.
- composition of the invention is also “pharmaceutically acceptable", that is, it can be used as a medicament for treating a patient and that there are more positive effects than negative effects. on the health of the patient.
- the molecule (s) A and / or B are "biologically active", in particular against the viral, bacterial, protozoan or fungi entities responsible for pathologies.
- the molecule A or the molecule B has an effect alone or synergistically against the proliferation of said entities responsible for said pathologies.
- the molecule (s) A and / or B have the property and effect of stimulating the immune activity of the body and increasing it.
- the molecule A a pentacyclic triterpenoid Medrane, has the following formula:
- the formula of the molecule A may be modified so that:
- the molecule A may be conjugated with amino acids, quaternary ammonium salts, glycosides, hemiphthalates or carbamates.
- the molecule B is in the following formula:
- the molecule B may undergo esterifications in the position of its carbon 28, in particular with sugars of the rhamnose, arabinose, glucose, aminosugar, glucosamine or galactosamine type, or else with amides of benzylamide or heteroaromatic amide type.
- a coupling can be done with a side chain of amino acids or peptides among others at its carbon 28.
- the molecule B can undergo modifications in its carbon 3, such as:
- estersifications with various acids such as ferulic or caffeic acids, hydroxycinnamic acids, dimethylsuccinic acids,
- said chemical composition of the invention may comprise, in addition to molecules A and / or B, one of the following molecules, one of its physiologically acceptable salts, or one of the possible combinations of the following molecules:
- the molecule E 3-O-acetyl-o-friedo-olean-14-en-28-oic acid (O-acetyl aleuritolic acid), of formula:
- each of the abovementioned molecules A to J is of natural origin, issued and selected from a plant extract of Anthostema senegalense, in particular for its ability to be biologically active.
- said plant extract is obtained from trunk bark, in particular dried, of Anthostema senegalense.
- Anthostema senegalense plant such as leaves, root bark or fruits may also be used to obtain said plant extract.
- said plant extract of Anthostema senegalense consists of a polar, aqueous, alcoholic or hydro-alcoholic extract or an apolar extract, or alternatively of a mother tincture of Anthostema senegalense with an ethanol content of approximately 70% V / V.
- Anthostema senegalense is a widespread forest tree in West Africa, particularly in Guinea, Guinea-Bissau, Senegal, Mali, Côte d'Ivoire, Sierra Leone, Benin, Nigeria, etc., which are countries with little and the possibility of access to care is often limited.
- each of the above-mentioned molecules A to J is of synthetic origin, that is to say derived from a complete chemical synthesis in the laboratory or else from a hemi-synthesis.
- said chemical composition of the invention is intended to be used as a medicament or as a dietary supplement.
- said chemical composition of the invention is intended to be used by tired people whose immune system is weakened by the presence of a viral pathogen, bacterial, fungal etc ....
- the Applicant has been able to demonstrate that the chemical composition of the invention has a biological activity against HIV type 1 and type 2, AIDS and clinical manifestations that accompany it, as well as certain protozoa in particular Trypanosoma crazl, Trypanosoma brucei, Plasmodium falclparvm.
- the biological activity of the chemical composition of the invention is, in particular, due to the presence of the molecules that compose it. More specifically, molecule A, molecule B and molecules C to J are responsible for and the origin of the biological activity of the chemical composition of the invention. The presence of these molecules A to J in the human body generates the biological activity.
- said chemical composition can be used for the preparation of a pharmaceutical composition helping to fight against HIV, AIDS, its opportunistic pathologies associated but also against diseases resulting from certain protozoa such as trypanosomiasis or malaria.
- the present invention also protects a pharmaceutical composition comprising the chemical composition of the invention, said pharmaceutical composition being in an oral dosage form.
- oral dosage form refers to the form in which the excipients and active ingredients are placed, namely molecules A to J alone or in combination, constituting a drug for oral use.
- the chemical composition of the invention may be in the form of tea bags, this only when it is entirely of natural origin and derived from a plant extract of the invention.
- Anthostema senegalense Anthostema senegalense.
- infantette refers to the form in which the active ingredient, ie molecules ⁇ to J preferably derived from a plant extract of Anthostema senegalense, is presented. More specifically, a tea bag is a small sachet containing a dose of dried plant extract to be infused.
- the pharmaceutical composition comprising the chemical composition of the invention may be in the form of a sachet containing a dried plant extract of Anthostema senegalense that can be infused.
- the plant extract of the sachet containing itself at least one of the molecules A or B is advantageously a combination of the molecules A to J.
- the pharmaceutical composition of the invention is in the oral dosage form, in particular of the microsphere type.
- the latter are produced by an extrusion and spheronization process.
- the pharmaceutical composition of the invention may also be in an oral dosage form different from the microspheres, especially in the form of tablets, soft capsules, granules, capsules, powder, ampoules, syrup or decocts.
- the pharmaceutical composition of the invention has the advantage of presenting an effective and inexpensive alternative for treating patients with HIV type 1 or type 2, AIDS or clinical diseases that result.
- the oral dosage form or the infusette form of the pharmaceutical composition of the invention facilitates its taking by the patient, requires little or no material for the taking and does not pose a conservation problem.
- the activity of the molecule (s) of the chemical composition of the invention has been demonstrated following the isolation by extraction, the identification and the selection of the molecule (s) of interest biologically active from a plant of Anthostema senegalense.
- the present invention also relates to a method of isolation by extraction, identification and selection of the biologically active molecule (s) of the chemical composition of the invention.
- This method makes it possible to extract from an Anthostema senegalense plant, the molecule (s) of interest which is / are then of entirely natural origin.
- the molecule (s) of interest being (s) having a biological activity against the pathogens, in particular a biological activity described as "significant".
- a "significant" biological activity defines a compound having, against the pathogen, a cytotoxic concentration (CC 50 ) ⁇ 45 ⁇ g / mL and a selectivity index ⁇ 50.
- the method comprises the following steps:
- Anthostema senegalense is dried, for example the bark of the trunk or the leaves;
- a plant extract is prepared from the portion of the dried plant by extraction with a polar or apolar solvent, cold or hot, by aqueous extraction, alcoholic or hydro-alcoholic or by maceration, infusion, decoction, percolation, digestion or lixivation,
- Anthostema sengalense which is dried consists of the bark of the trunk, or of the root bark or of leaves or fruits;
- a plant extract is prepared by percolation with CHCl 3 to obtain an apolar plant extract
- the molecules of the apolar plant extract are separated by repeated column chromatography on silica gel using, as eluent, a gradient of CHCl 3 in hexane and by thin layer chromatography.
- Thin layer chromatography can be carried out with, as mobile phase, a mixture of dichloromethane / toluene or a mixture of toluene / chloroform or with chloroform.
- the implementation of the method of the invention made it possible to identify and isolate the biologically active molecules present in a biologically active plant extract against HIV. Then, the realization of the process made it possible to select, through the In Vitro test, the molecules possessing the "significant" biological activity and stimulating the immune system.
- the viral anti-replication efficiency of the molecules of the chemical composition of the invention has been tested in vitro against the replication of HIV virus type 1 (strain III B ) and HIV type 2 (strain ROD) within infected MT-4 cells.
- This method consists in carrying out a cell culture of MT-4 in a microplate containing, as a cell culture medium: the Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640) medium, embryonic calf serum, glutamine, sodium bicarbonate and gentamicin as a bacterial inhibitor.
- RPMI 1640 Roswell Park Memorial Institute
- the molecules of the chemical composition of the invention are added at different concentrations to the cell growth medium. Each concentration of molecules to be tested is made of triplicate.
- the MT4 cells placed in the presence of the test molecules are called "treated cells”.
- In each cell growth well is added a defined amount of HIV-1 or HIV-2 to obtain the same concentration of virus in each well.
- the number of live cells is counted by a colorimetric test with MTT (Tetrazolium salt) by measuring the optical density at 540 nm.
- the E De Clercq method makes it possible to obtain a density measurement at 540 nm for:
- the IC 50 is the concentration in molecule to reduce by 50% the viral proliferation of the negative control in vitro for a given time, that is to say of HIV without substance, only growing in its culture medium.
- CC 50 is the concentration of active molecules to halve the cytopathic effect of HIV on infected cells. In other words, it is the concentration of active molecules to reduce the viability of the cells by 50%.
- the EC 50 corresponds to the concentration of molecules necessary so that 50% of the cells growing in the medium do not undergo the action of the virus, that is to say that they are protected from the cytopathic effect of the virus .
- the EC50 is calculated with the following formula:
- (DO T ) HIV represents the measurement of optical density at 540 nm, 5 days after infection, for cells not infected with HIV and treated with the composition of the invention, ie in the presence of the molecules of the composition of the invention:
- ( c ) HIV- represents the measurement of optical density at 540 nm, 5 days after infection, for cells not infected with HIV in the absence of the molecules of the composition of the invention.
- the selectivity index represents the ratio CC 50 / EC 50 .
- the biological activity against the pathogen preferably HIV-1 and 2
- the selectivity index is ⁇ 50 and a CC 50 ⁇ 45 pg / ml.
- the molecules present in the Asc4.5 fraction exhibit significant activity against HIV type 1 and type 2.
- the molecules present in each of the AsC4.2, AsC4.5, AsC4.6 and AsC4.7 fractions have a significant biological activity against HIV type 2.
- the IC 50 of the molecules contained in each of these fractions is better than Nevirapine and Dideoxyinosine positive controls.
- the molecules of these fractions act in synergy to fight against viral multiplication.
- the molecules of the fractions AsC4.5 and Asc4.6 have a strong biological activity, better than those antiretrovirals Nevirapine, Dideoxycitidine and Dideoxyinosine, against HIV type 2.
- a polar plant extract is produced by percolation with liquid CHC1 3 .
- the polar plant extract is concentrated under vacuum.
- Thin layer chromatography is performed with each of the above-mentioned ten AsCl, AsC2, AsC3, AsC4, AsC5, AsC6, AsC7, AsC8, AsC9, AsClO fractions, in order to detect the number of potentially different molecules of each of the fractions.
- each of the fractions was tested in vitro with respect to HIV type 1 and HIV type 2, according to the method explained later.
- the AsC4 fraction showed the best anti-HIV activity.
- This AsC4 fraction therefore contains an assembly of molecules with significant biological activity against HIV.
- This AsC4 fraction was consequently separated by column chromatography until 8 fractions ranging from AsC4.1 to AsC4.8 were obtained.
- the anti-HIV activity was tested in vitro according to Clerq's method on each of the abovementioned fractions AsC4.1, AsC4.2, AsC4.3, AsC4.4, AsC4.5, AsC4.6, AsC4.7 and AsC4.8.
- the molecules present in the majority in these fractions are responsible for the biological activity anti HIV.
- the AsC4.5 fraction has a "significant" biological activity within the meaning of the invention against HIV-1 and the best "significant” biological activity against HIV-2.
- molecule A and molecule B are considered to be responsible for the "significant" biological activity of each of the AsC4.5 and Asc4.6 samples.
- the eluents used as the mobile phase are as follows:
- the technical effect of inhibiting the proliferation of HIV 1 or 2 of the "significant" inhibitory activity fractions is due to the specific presence and action of the A and / or B molecules.
- the molecule A as well as the molecule B possess an activity of inhibition of the proliferation of HIV-1 or 2, each of the molecules A or B being capable of stimulating the immune activity of an infected organism.
- the molecules A and B alone or in combination have been specially selected and selected by Applicant, among the molecules A to J for which an inhibition activity of HIV-1 and 2 has also been noted, to include them in the chemical composition of the invention biologically stimulating the immune activity.
- the molecules A and B being predominantly in the HIV-1 and HIV-2 proliferative inhibitory moieties, are believed to be responsible for the majority and major biological activity against viruses, particular of HIV 1 or 2.
- the Applicant has specifically selected the molecules A and / or B from among all the molecules A to J exhibiting a biological activity, since these two molecules A and B have the expected significant effect against proliferation of HIV-1 and 2 and stimulate immune activity.
- the chemical composition of the invention provides an effective alternative, inexpensive, accessible to developing countries, easy to produce if it comes from natural origin, which is biologically active and stimulates immune activity. .
- the chemical composition of the invention can be used in the pharmaceutical field in the treatment of infection with the HIV virus, AIDS and the clinical manifestations which accompany it.
- composition of the invention can also be used as a dietary supplement to stimulate the immune activity and natural immune defenses of the human being which can be immunocompromised.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Botany (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Composition chimique La présente invention a trait à une composition chimique caractérisée en ce qu'elle comprend : - la molécule A ou un de ses sels physiologiquement acceptables, et/ou; - la molécule B ou un de ses sels physiologiquement acceptables, ladite molécule A étant de formule suivante : et la molécule B étant de formule suivante : la molécule A ou un de ses sels physiologiquement acceptables étant biologiquement actif (ve) et stimulateur (trice) de l'activité immunitaire, la molécule B ou un de ses sels physiologiquement acceptables étant biologiquement actif (ve) et stimulateur (trice) de l'activité immunitaire.
Description
COMPOSITION THÉRAPEUTIQUE DÉRIVÉE D'ANTHOSTEMA
SENEGALENSE
La présente invention entre dans le domaine des compositions chimiques utilisables dans la préparation de médicaments ou de compléments alimentaires.
En particulier, l'invention permet la préparation de médicaments ou compléments alimentaires capables d' augmenter l'immunité et les défenses de l'organisme, notamment contre les virus, les bactéries, les champignons, les protozoaires responsables de nombreuses pathologies, parfois mortelles.
L'invention concerne spécifiquement une composition chimique comprenant des molécules actives biologiquement qui contribuent à augmenter et stimuler l'activité immunitaire de l'organisme et améliorent les défenses immunes, notamment contre les virus.
Plus particulièrement, la composition chimique de l'invention présente une activité biologique contre le « Virus de l' Immunodéficience Humaine » (VIH) et de sa résultante : le « Syndrome d' Immunodéficience Acquise » (SIDA) , accompagné généralement de ses infections opportunistes.
On notera que le VIH est un rétrovirus infectant l'homme dont on connaît actuellement deux types : le VIH-1 et le VIH-2. L' infection par le VIH est une pandémie couvrant la planète entière, en particulier l'Afrique subsaharienne qui rassemble à elle seule 69% des cas. L'infection d'un patient par le VIH évolue en plusieurs phases :
- La première phase dite de « primo-infection » ;
- Une phase asymptomatique, dite de « latence »,
- Une phase d' immunodépression accrue dite « SIDA » .
La phase de primo-infection consiste en la réplication active, dans l'organise, du VIH qui entraine la destruction des cellules du système immunitaire notamment des lymphocytes T4.
La phase de « latence » représente une phase dans laquelle la charge virale diminue légèrement et se stabilise dans 1' organisme .
La phase « SIDA » consiste en une multiplication accrue et invasive du VIH où les symptômes du SIDA apparaissent, ainsi que les maladies opportunistes, avec comme finalité le décès du patient.
A ce jour, il n'existe aucun traitement pour guérir du
SIDA et éliminer complètement la propagation et le développement du virus (VIH) dans l'organisme des patients atteints .
De manière connue, des traitements de type trithérapie associant trois molécules antivirales sont utilisés pour ralentir le développement et la multiplication du VIH dans l'organisme et son évolution vers le stade SIDA.
Néanmoins, ces traitements restent très coûteux à l'achat car longs à fabriquer et à produire à échelle industrielle. De plus, ces derniers nécessitent des conditions strictes de conservation, ainsi leur accessibilité est restreinte pour les patients des pays sous-développés .
En outre, les traitements actuels ne sont pas forcément efficaces sur tous les patients. En effet, la rapidité de multiplication et de mutation du VIH dans l'organisme étant telle, ces traitements perdent au cours du temps de leur efficacité.
De plus , même lorsqu' ils sont efficaces , ces traitements ont pour désavantage de présenter de nombreux effets secondaires indésirables sur la santé du patient traité qui va perdre en qualité de vie. En effet, les traitements actuels présentent une certaine toxicité nuisible pour l'organisme du patient, notamment due à de nombreux excipients chimiques de synthèse d'origine non naturelle pouvant présenter des risques de rejet par l'organisme.
Ainsi, la présente invention a pour but de pallier les inconvénients de l'état de la technique en proposant une composition chimique consistant en une solution alternative aux solutions susmentionnées. Cette alternative doit être efficace et permettre d' augmenter les défenses immunitaires , notamment chez les patients atteints du VIH, tout en limitant les effets
secondaires dus à la prise du médicament comprenant la composition chimique alternative.
En outre, cette solution alternative se doit d'être accessible aux patients des pays sous-développés , aussi bien en termes de coûts de production que de coûts d'achat, mais aussi en matière de conservation du produit actif, et de facilité de prise par le patient.
En outre, pour atteindre cet objectif, la composition chimique se doit d'être la moins toxique possible pour l'organisme et cibler uniquement les virus, bactéries champignons, protozoaires responsables des pathologies affaiblissant le système immunitaire. Afin de limiter les risques de toxicité, il est avantageux que la composition chimique présente un maximum d' éléments d' origine naturelle, jugés peu nuisibles pour la santé et l'environnement.
La présente invention a pour but de pallier les inconvénients de 1 'état de la technique , en proposant une composition chimique comprenant :
- la molécule A ou un de ses sels physiologiquement acceptables ,
et/ou ;
- la molécule B ou un de ses sels physiologiquement acceptables ,
ladite molécule A étant de formule suivante :
et la molécule B étant de formule suivante ;
De manière spécifique dans la composition chimique de 1' invention :
- la molécule Ά ou un de ses sels physiologiquement acceptables est biologiquement actif (ve) et stimulateur (trice) de l'activité immunitaire,
- la molécule B ou un de ses sels physiologiquement acceptables est biologiquement actif (ve) et stimulateur (trice) de l'activité immunitaire.
Avantageusement, ladite molécule A présente :
- en position 16, en remplacement de la fonction carbonyl =0, soit un -OH, soit un groupement carbonyl aldéhyde- RCOH, soit une cétone -R1-CO-R2, soit un ester -R-C00- R' , soit un amide de type -R-C (=0)NH2 ; et/ou
- en position 3, une glycosilation ou une estérification sous la forme de -OR, où « R » est soit un groupe feruloyl ou caffeoyl, soit un sucre ou soit un amide.
Avantageusement encore, ladite molécule A est conjuguée avec des amino-acides , des sels d' ammonium quaternaires , des glycosides , des hemiphtalates ou encore des carbamates .
De manière avantageuse aussi, ladite molécule B présente, en position 28, une estérification avec un amide ou un sucre.
De plus, selon d'autres caractéristiques de l'invention, ladite composition chimique de l'invention comporte au moins une des molécules suivantes ou un de ses sels physiologiquement acceptables, ou une des combinaisons possibles desdites molécules suivantes, la ou lesdites molécule (s) étant
choisie (s) parmi la liste suivante !; - La molécule C de formule :
avec « n » compris entre 8 et 26
La molécule D de formule
- La molécule F de formule :
~ La molécule G de formule :
La molécule H de formule ;
- La molécule I de formule
Selon un premier mode de réalisation de l'invention, chacune desdites molécules A, B, et chacun de leurs sels physiologiquement acceptables est d' origine synthétique et
issue d'une synthèse chimique en laboratoire ou d'une hémisynthèse .
Selon une autre caractéristique de l'invention, chacune desdites molécules A, B et chacun de leur sels physiologiquement acceptables de ladite composition de l'invention est d'origine naturelle et issue d'un extrait végétal d'Anthostema senegalense.
Avantageusement, l'extrait végétal d'Anthostema senegalense :
- consiste en un extrait polaire, aqueux, alcoolique ou hydro-alcoolique ou un extrait apolaire ou une teinture mère d'Anthostema senegalense avec une teneur en éthanol de 70% V/V,
- ledit extrait végétal est obtenu à partir d'écorces de tronc, notamment séchées, d'Anthostema senegalense.
De manière avantageuse également, ladite composition chimique de l'invention est destinée à être utilisée comme médicament ou comme complément alimentaire.
Plus spécifiquement encore, ladite composition chimique de l'invention est destinée à être utilisée dans le traitement de l'infection par le VIH de type 1 ou de type 2, du SIDA et des manifestations cliniques qui l'accompagnent.
De préférence, ladite composition chimique de l'invention se présente sous une forme galénique orale, ou sous une forme galénique d' infusette .
Selon un autre mode de réalisation, ladite composition de l'invention, se présente sous une forme galénique orale de microsphères réalisées par un procédé d'extrusion et de sphéronisation, de comprimés, de capsules molles, de granules, de gélules, de poudre, d'ampoules, de sirop ou encore de écoctés .
La présente invention concerne également un procédé d'isolation par extraction, d'identification et de sélection de la ou des molécules biologiquement active (s) de la composition chimique de 1' invention dans lequel :
- On sèche une partie de la plante d'Anthostema senegalense ;
- On prépare un extrait végétal, à partir de la partie de la plante séchée, par extraction avec un solvant apolaire ou polaire ou par macération, infusion, décoction, percolation, digestion ou lixivation,
- On concentre sous vide ledit extrait végétal,
- On sépare les molécules de l'extrait végétal par chromatographie,
- On teste in Vitro l'activité biologique desdites molécules à 1' encontre d'un pathogène virale de type VIH selon la méthode de E de Clercq,
- On sélectionne et isole les molécules possédant un index de sélectivité à 1' encontre dudit pathogène ≥ 50 et une CC50 ≥ 45 pg/mL,
- On identifie la ou les molécules séparées, sélectionnées et isolées par résonance magnétique nucléaire et spectrométrie de masse.
Plus spécifiquement pour la mise en œuvre dudit procédé de 1' invention :
- La partie de la plante d'Anthostema sengalense qui est séchée consiste en l'écorce du tronc, ou en l'écorce de racines ou en des feuilles ou en des fruits ;
- on prépare un extrait végétal par percolation au CHC13 pour obtenir un extrait végétal apolaire ;
- après concentration sous vide, on sépare les molécules de l'extrait végétal par chromatographie sur colonne répétée et chromatographie sur couche mince.
De manière avantageuse, dans ledit procédé d' isolation par extraction de la ou des molécules biologiquement active (s) et stimulatrice (s) du système immunitaire, on sépare les molécules dudit extrait végétal apolaire par chromatographie sur colonne avec, comme phase stationnaire, un gel de silice polaire et, comme phase mobile, un éluant apolaire constitué par un gradient de CHC13 dans de l'hexane.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention
rassortiront de la description détaillée qui va suivre des modes de réalisation non limitatifs de 1 ' invention.
La présente invention concerne une composition chimique comprenant la molécule A et/ou la molécule B, ou un de ses sels physiologiquement acceptables.
En d' autres termes , ladite composition chimique comprend la molécule A ou un des sels physiologiquement acceptables de la molécule A ; en présence ou non de la molécule B ou un des sels physiologiquement acceptable de la molécule B.
De la même manière, ladite composition chimique comprend la molécule B ou un des sels physiologiquement acceptables de la molécule B ; en présence ou non de la molécule A ou un des sels physiologiquement acceptables de la molécule A.
On entend par l'expression « physiologiquement acceptables » le fait que la ou les molécules ainsi que leur (s) sels ne nuisent pas au fonctionnement ni à l'organisation mécanique, physique, biochimique d'un organisme vivant, en particulier de l'être humain.
La composition chimique de l'invention est « physiologiquement acceptable » dans sa globalité, c'est-à- dire que tous les éléments qui la composent sont « physiologiquement acceptables ». Ladite composition chimique de l'invention est « physiologiquement acceptable » au travers de ses différents composants, c'est-à-dire qu'elle est biocompatible, non ou peu toxique pour le bon fonctionnement de l'organisme et sans propriété physique ou chimique rendant difficiles et compliquées son administration et sa métabolisation.
Ainsi, la composition de l'invention est également « pharmaceutiquement acceptable », c'est-à-dire qu'elle peut être utilisée comme médicament pour soigner un patient et qu' il y a plus d'effets positifs que d'effets négatifs sur la santé du patient.
La ou lesdites molécule (s) A et/ou B sont « biologiquement active (s) », notamment à 1' encontre des entités virales, bactériennes , protozoaires ou champignons responsables de
pathologies . En d' autres termes , la molécule A ou la molécule B a un effet seul ou de manière synergique à l' encontre de la prolifération desdites entités responsables desdites pathologies .
Ainsi grâce à la capacité d'être « biologiquement active (s) », la ou lesdites molécule (s) A et/ou B ont pour propriété et effet de stimuler l'activité immune de l'organisme et de l'augmenter.
Selon l'invention, la molécule A, un pentacyclic triterpenoid gammacerane, présente la formule suivante :
Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, la formule de la molécule A peut être modifiée de sorte que :
- En position 16, le carbonyl =o peut être réduit et donner un - OH, ou encore la fonction carbonyl aldéhyde -RCOH, une cétone -R1-CO-R2, un ester -R-COO-R' , un amide par exemple de type -R-C (=0)NH2 ;
- En position 3, une glycosilation ou une estérification peut être réalisée sous la forme de groupement fonctionnel de type 3-OR, où « R » peut être un groupe feruloyl ou caffeoyl, un sucre ou un amide par exemple de type -R-C (=0)NH2.
Selon un autre mode de réalisation particulier, la molécule A peut-être conjuguée avec des amino-acides , des sels d' ammonium quaternaires , des glycosides , des hemiphtalates ou encore des carbamates.
Selon l'invention, la molécule B se présente sous la formule suivante :
Selon un mode de réalisation particulier, la molécule B peut subir des estérifications en position de son carbone 28 notamment avec des sucres de type rhamnose, arabinose, glucose, aminosucres , glucosamine , galactosamine ou encore avec des amides de type benzylamide, amide hétéroaromatique .
Far exemple, pour la molécule B, un couplage peut se faire avec une chaine latérale d' aminoacides ou de peptides entre autre au niveau de son carbone 28.
Selon un mode de réalisation particulier, la molécule B peut subir des modifications au niveau de son carbone 3, telles que :
- des estérifications avec divers acides comme des acides féruliques ou caféiques , acides hydroxycinnamiques , acides diméthylsucciniques ,
- des conjugaisons avec des nucléosides inhibiteurs de la transcriptave inverse tels que la zidovudine, 1' azidothymidine,
- des liaisons avec des sucres de type mono ou oligosaccharides .
De préférence, ladite composition chimique de l'invention peut comporter, en plus des molécules A et/ou B, l'une des molécules suivantes, un de ses sels physiologiquement acceptables, ou encore une des combinaisons possibles desdites molécules suivantes :
La molécule E : 3-0-acetyl-o-friedo-olean-14-en-28-oic- acid (O-acetyl aleuritolic acid) , de formule :
- La molécule F ; un (3β) -Stigmasta-5, 22, 25-trien-3-ol de formule :
- La molécule 6, un β-Stigmasterol, de formule :
La molécule I, un benzoate d' iso-alcool , de formule
Avec « n » compris entre 14 et 26 ;
- La molécule J de formule :
De manière avantageuse et selon un mode de réalisation particulier, chacune des molécules A à J susmentionnées est d'origine naturelle, issue et sélectionnée à partir d'un extrait végétal d'Anthostema senegalense notamment pour ses capacités à être biologiquement active.
Avantageusement, ledit extrait végétal est obtenu à partir d'écorce de tronc, notamment séchée, d'Anthostema senegalense.
Néanmoins, d'autres parties de la plante d'Anthostema senegalense telles que les feuilles, l'écorce de racine ou les fruits peuvent également être utilisés pour obtenir ledit extrait végétal .
De préférence, ledit extrait végétal d'Anthostema senegalense consiste en un extrait polaire, aqueux, alcoolique ou hydro-alcoolique ou un extrait apolaire, ou encore en une teinture mère d'Anthostema senegalense avec une teneur en éthanol d'environ 70% V/V.
Partir d'un extrait végétal d'origine naturelle pour obtenir les molécules biologiquement actives et stimulatrices de l'activité immunitaire a pour avantage de les rendre accessibles en termes de coûts de production pour les pays sous-développés .
En effet, Anthostema senegalense est un arbre forestier répandu en Afrique Occidentale, notamment en Guinée, Guinée- Bissao , Sénégal , Mali , en Côte d' Ivoire , en Sierra Leone , au Bénin, au Nigéria, etc., qui sont des pays présentant peu de
moyens et dont la possibilité d' accès aux soins est souvent limitée .
En outre, partir d'un extrait végétal d'origine naturelle permet de limiter les risques de toxicité et entre dans une démarche écoresponsable où l'on puise les molécules d'intérêt directement dans le milieu naturel.
Selon un autre mode de réalisation, chacune des molécules A à J susmentionnées est d'origine synthétique, c'est à dire issue d'une synthèse chimique complète en laboratoire ou encore d'une hémi-synthèse.
Selon une particularité de l'invention, ladite composition chimique de l'invention est destinée à être utilisée comme médicament ou en tant que complément alimentaire.
En particulier, ladite composition chimique de l'invention est destinée à être utilisée par les personnes fatiguées dont le système immunitaire est affaibli par la présence d'un pathogène viral, bactérien, fongique etc....
De manière avantageuse, la demanderesse a pu démontrer que la composition chimique de l'invention possède une activité biologique à l' encontre du VIH de type 1 et de type 2, du SIDA et des manifestations cliniques qui l'accompagnent, ainsi que de certains protozoaires en particulier Trypanosoma crazl, Trypanosoma brucei, Plasmodium falclparvm.
L'activité biologique de la composition chimique de l'invention est, en particulier, due à la présence des molécules qui la composent. Plus spécifiquement, la molécule A, la molécule B et les molécules C à J sont responsables et à l'origine de l'activité biologique de la composition chimique de 1' invention . La présence de ces molécules A à J dans le corps humain génère l'activité biologique.
Plus spécifiquement, l'activité biologique des molécules A à J a été démontrée par des tests in vitro mentionnés ultérieurement.
Ainsi, selon l'invention, ladite composition chimique peut servir à la préparation d'une composition pharmaceutique aidant à lutter contre le VIH, le SIDA, ses pathologies opportunistes
associées mais également contre les maladies résultant de certains protozoaires comme des trypanosomiases ou le paludisme .
En outre, la présente invention protège également une composition pharmaceutique comprenant la composition chimique de l'invention, ladite composition pharmaceutique se présentant sous une forme galénique orale.
Le terme « forme galénique orale » désigne la forme sous laquelle sont mis les excipients et les principes actifs, à savoir les molécules A à J seules ou en combinaison, constituant un médicament à usage par voie orale.
Selon un mode de réalisation particulier de la composition pharmaceutique de l'invention, la composition chimique de l'invention peut se présenter sous forme d' infusettes , ceci uniquement lorsqu'elle est intégralement d'origine naturelle et issue d'un extrait végétal d'Anthostema senegalense.
Le terme « infusette » désigne la forme sous laquelle se présente le principe actif, c'est-à-dire les molécules Ά à J issues de préférence d'un extrait végétal d'Anthostema senegalense. Plus spécifiquement, une infusette est un petit sachet contenant une dose d'extrait de plante séchée à infuser.
Ainsi, dans le cadre de l'invention, la composition pharmaceutique comprenant la composition chimique de l'invention peut se présenter sous la forme d'un sachet contenant un extrait végétal d'Anthostema senegalense séché que l'on va pouvoir infuser. Dans ce cas, l'extrait végétal du sachet contenant lui-même au moins l'une des molécules A ou B, est avantageusement une combinaison des molécules A à J.
De préférence, la composition pharmaceutique de l'invention se présente sous la forme galénique orale, notamment de type microsphères . Ces dernières sont réalisées par un procédé d'extrusion et de sphéronisation . La composition pharmaceutique de 1' invention peut également se présenter sous une forme galénique orale différente des microsphères, notamment sous la forme de comprimés, de capsules molles, de
granules, de gélules, de poudre, d'ampoules, de sirop ou encore de décoctés .
La composition pharmaceutique de l'invention a pour avantage de présenter une alternative efficace et peu coûteuse pour soigner les patients atteints du VIH de type 1 ou de type 2, du SIDA ou des maladies cliniques qui en découlent.
En effet, la forme galénique orale ou la forme d' infusette de la composition pharmaceutique de l'invention facilite sa prise par le patient, ne nécessite que peu ou pas de matériel pour la prise et ne pose pas de problème de conservation.
L'activité de la ou des molécule (s) de la composition chimique de l'invention a été démontrée suite à l'isolation par extraction, 1' identification et la sélection de la ou desdite (s) molécule (s) d'intérêt actives biologiquement à partir d'une plante d'Anthostema senegalense.
En conséquence, la présente invention concerne également un procédé d'isolation par extraction, d'identification et de sélection de la ou des molécules biologiquement active (s) de la composition chimique de l'invention.
Ce procédé permet d'extraire d'une plante d'Anthostema senegalense, la ou les molécule (s) d'intérêt qui est/sont alors d'origine entièrement naturelle. La ou les molécules d'intérêt étant celle (s) possédant une activité biologique à 1' encontre des pathogènes, en particulier une activité biologique qualifiée de « significative ».
Dans la présente demande, une activité biologique « significative » définit un composé possédant, à 1' encontre du pathogène, une concentration cytotoxique (CC50) ≥ 45 μg/mL et un index de sélectivité ≥ 50.
Ledit procédé comprend les étapes suivantes :
- On sèche une partie de la plante d'Anthostema senegalense, par exemple l'écorce du tronc ou les feuilles ;
- On prépare un extrait végétal à partir de la partie de la plante séchée par extraction avec un solvant polaire ou apolaire, à froid ou à chaud, par extraction aqueuse,
alcoolique ou hydro-alcoolique ou par macération, infusion, décoction, percolation, digestion ou lixivation,
- On concentre sous vide ledit extrait végétal,
* On sépare les molécules de l'extrait végétal par chromatographie ,
~ On teste in Vitro l'activité biologique desdites molécules à 1' encontre d'un pathogène virale de type VIH selon la méthode de E de Clercq,
* On sélectionne et isole les molécules possédant un index de sélectivité à 1' encontre dudit pathogène ≥ 50 et une CC 50 ≥ 45 μg/mL,
- On identifie la structure de la ou des molécules séparées et sélectionnées par Résonance Magnétique Nucléaire et spectrométrie de masse.
Selon un mode de réalisation particulier du procédé de 1' invention :
- la partie de la plante d'Anthostema sengalense qui est séchée consiste en l'écorce du tronc, ou en l'écorce de racine ou en des feuilles ou en des fruits ;
- on prépare un extrait végétal par percolation au CHC13 pour obtenir un extrait végétal apolaire ;
- après concentration sous vide, on sépare les molécules dudit extrait végétal apolaire par chromatographie sur colonne répétée sur gel de silice avec, comme éluant, un gradient de CHC13 dans de l'hexane et par chromatographie sur couche mince.
La chromatographie sur couche mince peut être effectuée avec, comme phase mobile, un mélange de dichlorométhane/toluène ou un mélange de toluène/chloroforme ou encore avec du chloroforme .
Ainsi, la mise ne œuvre du procédé de l'invention a permis d' identifier et d' isoler les molécules à activité biologique présentes dans un extrait végétal biologiquement actif à 1' encontre du VIH. Puis, la réalisation du procédé a permis de
sélectionner, au travers du test In Vitro, les molécules possédant l'activité biologique « significative » et stimulatrice du système immunitaire.
Les expériences et résultats ci-dessous ont permis à la demanderesse d'illustrer l'activité biologique et stimulatrice du système immunitaire de la ou des molécules active (s) biologiquement de la composition chimique de l'invention.
1/Test in vitro de l'activité biologique des molécules de la composition chimique de l'invention
L'efficacité anti-réplication virale des molécules de la composition chimique de l'invention a été testée in vitro contre la réplication du virus du VIH de type 1 (souche IIIB) et du VIH de type 2 (souche ROD) au sein de cellules MT-4 infectées .
Cette efficacité a été réalisée en comparaison à trois molécules antirétrovirales témoins positifs : la néviparine, la didéoxycitidine et la didéoxyinosine .
Plus spécifiquement, l'activité antirétrovirale des molécules a été testée en mettant en œuvre la méthode de E De Clercq en microplaque.
Cette méthode consiste à réaliser une culture cellulaire de MT-4 en microplaque contenant, comme milieu de culture cellulaire : le milieu du Roswell Park Mémorial Institute (dit « RPMI 1640) , du sérum embryonnaire de veau, de la glutamine, du bicarbonate de sodium et de la gentamicine en tant qu'inhibiteur bactérien.
Les molécules de la composition chimique de l'invention sont ajoutées à des concentrations différentes au milieu de croissance cellulaire. Chaque concentration en molécules à tester est réalisée en triplica. Les cellules MT4 mises en présence des molécules à tester sont nommées « cellules traitées ».
Dans chaque puits de croissance cellulaire est ajoutée une quantité définie de VIH -1 ou VIH -2 afin d'obtenir la même concentration de virus dans chaque puits .
Les cellules mises en présence du VIH sont nommées « cellules infectées ».
Cinq jours après le début de l'infection des cellules MT4 par le VIH 1 ou le VIH-2 en présence des molécules à tester à des concentrations différentes, on compte le nombre de cellules vivantes par un test colorimétrique au MTT (Sel de tétrazolium) en mesurant la densité optique à 540 nm.
En tant que témoins négatifs, on utilisera des cellules sans VIH 1 ou VIH 2, dites « cellules non infectées », mais aussi des cellules sans molécules à tester dites « cellules non traitées » .
Ainsi, de manière succincte, la méthode de E De Clercq permet d' obtenir une mesure de densité à 540 nm pour :
- des cellules infectées par le VIH-1 ou 2, traitées avec les molécules de la composition de l'invention ;
- des cellules non infectées, traitées avec les molécules de la composition de l'invention ;
- des cellules infectées par le VIH-1 ou VIH 2, non traitées avec les molécules de la composition de 1' invention ;
- des cellules non infectées, non traitées avec les molécules de la composition de l'invention.
En particulier, l'efficacité des molécules de la composition de l'invention a été testée :
- par mesure et calcul de la concentration inhibitrice médiane (IC50) ,
- par mesure et calcul de la concentration cytotoxique (CCso) ,
- par mesure et calcul de la dose effective 50 (EC50) , et
- par mesure et calcul de l'index de sélectivité (SI), des fractions contenant lesdites molécules en présence des deux souches de VIH.
L' IC50 est la concentration en molécule permettant de diminuer de 50% la prolifération virale du témoin négatif in vitro pour un temps donné, c'est-à-dire du VIH sans substance, uniquement en croissance dans son milieu de culture.
La CC50 est la concentration en molécules actives permettant de diminuer de moitié l'effet cytopathique du VIH sur les cellules infectées. En d'autres termes, c'est la concentration en molécules actives permettant de diminuer de 50% la viabilité des cellules.
L'EC50 correspond à la concentration en molécules nécessaires pour que 50% des cellules en croissance dans le milieu ne subissent pas l'action du virus, c'est-à-dire qu'elles soient protégées de l'effet cytopathique du virus.
L'EC50 se calcule avec la formule suivante :
[(DO T)VIH+] - [(DO c) VIH+]/[(DO T) VIH-] - [(DO c) VIH-] X 100 Où :
• (DO T)VIH+ représente la mesure de densité optique à 540 nm, 5 jours après l'infection, pour les cellules infectées avec du VIH et traitées avec la composition de l'invention, c'est à dire en présence des molécules de la composition de l'invention ;
* (DO c) VIH+ représente la mesure de densité optique à 540 nm, 5 jours après l'infection, pour les cellules infectées avec du VIH en absence des molécules de la composition de l'invention ;
» (DO T) VIH" représente la mesure de densité optique à 540 nm, 5 jours après l'infection, pour les cellules non infectées avec du VIH et traitées avec la composition de l'invention, c'est à dire en présence des molécules de la composition de l'invention ; i (DO c) VIH- représente la mesure de densité optique à 540 nm, 5 jours après l'infection, pour les cellules non infectées avec du VIH en l'absence des molécules de la composition de 1' invention.
L'index de sélectivité représente le rapport CC50/ EC50.
Dans le cadre de la présente demande, il sera considéré que l'activité biologique à 1' encontre du pathogène, de préférence du VIH -1 et 2, est significative et qu'il y a une activité biologique stimulatrice de l'activité immunitaire, lorsque l'index de sélectivité est ≥ à 50 et une CC50≥ 45 pg/ml.
Les résultats sont illustrés dans le tableau 1 ci-dessous qui montre les valeurs moyennes obtenues sur des duplicatas pour l'ICSO, CC50 et SI :
On constate que les molécules présentes dans les fractions AsC4.2, AsC4.5, AsC4.6 et AsC4.7 possèdent une activité biologique significative à 1' encontre du VIH-1 et du VIH-2.
En particulier, les molécules présentes dans la fraction Asc4.5 présentent une activité significative contre le VIH de type 1 et de type 2.
Les molécules présentes dans chacune des fractions AsC4.2 , AsC4.5 , AsC4.6 et AsC4.7 possèdent une activité biologique significative à l' encontre du VIH de type 2. L' IC50 des molécules contenues dans chacune de ces fractions est meilleure que celle des témoins positifs de Nevirapine et Dideoxyinosine. Ainsi, les molécules de ces fractions agissent en synergie pour lutter contre la multiplication virale.
En particulier, les molécules des fractions AsC4.5 et Asc4.6 ont une forte activité biologique, meilleure que celles
des antirétroviraux Nevirapine, Dideoxycitidin et Dideoxyinosine, à 1' encontre du VIH de type 2.
L'isolation, l'identification et la sélection des molécules à activité biologique significative de la composition chimique de l'invention, issues desdites fractions « actives biologiquement » sont décrites ci-dessous .
2/ Préparation des fractions, isolation et sélection des molécules à activité biologique de l'invention :
A partir d' un extrait brut d' écorce du tronc d' une plante d'Anthostema senegalense, on réalise, par percolation au CHC13 liquide, un extrait végétal polaire. On concentre sous vide ledit extrait végétal polaire.
Puis on réalise une chromatographie sur colonne avec, comme éluant, un gradient de polarité de CHC13 dans de l'hexane, ceci afin de séparer les constituants en fonction de leur charge. Suite à la chromatographie, on obtient dix fractions nommées respectivement Ascl à AsClO.
Une chromatographie sur couche mince est réalisée avec chacune des dix fractions AsCl, AsC2, AsC3, AsC4, AsC5, AsC6, AsC7, AsC8, AsC9, AsclO susmentionnées, afin de détecter le nombre de molécules potentiellement différentes de chacune des fractions .
Afin de démontrer l'activité biologique de chacune des fractions, notamment stimulatrices , du système immunitaire, chacune des fractions a été testée in vitro vis-à-vis du VIH de type 1 et du VIH de type 2, selon la méthode expliquée ultérieurement.
La fraction AsC4 a montré la meilleure activité anti VIH.
Cette fraction AsC4 contient donc un assemblage de molécules à activité biologique significative à 1' encontre du VIH.
Cette fraction AsC4 a, en conséquence, été séparée par chromatographie sur colonne jusqu' à obtention de 8 fractions allant de AsC4.1 à AsC4.8.
L'activité anti-VIH a été testée in vitro selon la méthode de £ de Clerq sur chacune des fractions susmentionnées AsC4.1 , AsC4.2, AsC4.3, AsC4.4 , AsC4.5, AsC4.6, AsC4.7 et AsC4.8.
Les fractions AsC4.5 ; AsC4.6 ; AsC4.2 et AsC4.7 ont montré les meilleures activités antivirales telles qu'illustrées dans le tableau 1 susmentionné.
Ainsi, les molécules présentes en majorité dans ces fractions sont responsables de l'activité biologique anti VIH.
Plus spécifiquement, la fraction AsC4.5 présente une activité biologique « significative » au sens de l'invention contre le VIH-1 et la meilleure activité biologique « significative » à 1' encontre du VIH-2.
Plus précisément également, à 1' encontre du VIH-2, l'intégralité des fractions AsC4.5 ; AsC4.6 ; AsC4.2 et AsC4.7 présentent une activité biologique « significative » au sens de 1' invention.
Un échantillon de chacune de ces fractions AsC4.5 et AsC4.6 a été séparé par chromatographie en gel de silice Si02 , puis les molécules ont été identifiées par RMN (Résonnace Magnétique Nucléaire) et Spectrométrie de Masse.
Les résultats montrent une présence majoritaire, dans chacun de ces échantillons AsC4.5 et AsC4.6 , de ladite molécule A et de ladite molécule B, en plus d' une série d' autres molécules plus minoritaires .
Ainsi, la molécule A et la molécule B sont envisagées comme étant responsables de l'activité biologique « significative » de chacun des échantillons AsC4.5 et Asc4.6.
Afin de confirmer cette opinion, d'autres analyses ont été réalisées .
En particulier ; l'intégralité des fractions AsC4.5,
AsC4.6 , AsC4.2 et AsC4.7 présentant une activité biologique anti-VIH a été mélangée et séparée sur colonne de chromatographie en gel de silice Si02 de façon répétitive (au moins six fois) avec, comme éluant, du toluène/CHCl3 créant un gradient de polarité pour obtenir les sous- fractions nommées AsC4.5.1 à AsC4.5.7.
Chacune des sous- fractions AsC4.5.1 à AsC4.5.7 a fait l'objet d'un test in vitro tel que susmentionné sur le virus du VIH 1 et du VIH 2. Les résultats des tests ont montré une activité inhibitrice significative contre ces deux souches pour chacune des sous-fractions testées.
Chacune des sous fractions susmentionnées Asc4.5.1, AsC4.5.2, AsC4.5.3, AsC4.5.4, AsC4.5.5, AsC4.5.6, AsC4.5.7 a été séparée et purifiée sur chromatographie sur couche mince préparative en utilisant différents éluants comme phase mobile.
Les éluants utilisés en tant que phase mobile sont les suivants :
- une phase mobile de CH2Cl2/Toluène dans un ratio 1 :2 volume à volume,
- une phase mobile de Toluène / CHC13 dans un ratio 4 : 1 volume à volume ;
- une phase mobile de Toluène / CHC13 dans un ratio 1 : 1 volume à volume ;
- une phase mobile de CHC13 100%.
Plus d'une dizaine de composés différents a été obtenue pour l'ensemble des différentes phases mobiles utilisées. Chaque composé a été testé individuellement à 1' encontre du VIH-1 et du VIH-2 selon la méthode in vitro susmentionnée.
De manière spécifique, parmi l'ensemble des composés, seuls les composés ci-dessous ont montrés une activité biologique « significative » au sens de l'invention à 1' encontre de la prolifération du VIH-1 ou 2.
- Les composés AsC4.5.1.1 et R.3.6.6.1, obtenus avec une phase mobile de CH2Cl2/Toluène dans un ratio 1 :2 volume à volume ;
- Le composé AsC4.5.2.1, obtenu avec une phase mobile de
Toluène / CHC13 dans un ratio 4 : 1 volume à volume ;
- Le composé AsC4.5.4.1, obtenu avec une phase mobile de Toluène / CHC13 dans un ratio 1 : 1 volume à volume ;
- Les composés AsC4.5.5.1, AsC4.5.6.1, AsC4.5.7.1 et AsC4.5.7.2, obtenus avec une phase mobile de CHC13 100% .
De manière avantageuse, les composés AsC4.5.1.1 et AsC4.5.7.2 présentent une activité inhibitrice au moins deux fois supérieure à l' encontre du VIH-1 et du VIH-2 à celle des autres composants identifiés comme possédant une activité biologique « significative ».
L'identification de l'ensemble des composés à activité biologique « significative » susmentionnés a été réalisée par résonnance magnétique nucléaire et spectrométrie de masse.
Après identifications, il s'avère que les composés identifiés qui possède une activité à 1' encontre du VIH-1 et du VIH-2 sont constitués par les molécules A à J susmentionnées .
De manière plus précise, il a été constaté que les composés AsC4.5.1.1 et AsC4.5.7.2 correspondent respectivement à la molécule A et à la molécule B revendiquées dans l'invention. Ces deux molécules A et B sont, en conséquence, bien responsables de l'effet inhibiteur significatif de la prolifération du VIH-1 et 2.
En outre , dans les fractions les plus actives AsC4.5 et AsC4.6 à l' encontre du VIH-1, il été constaté que les deux molécules A et B sont représentées majoritairement et en forte concentration.
De la même manière, toujours à l' encontre du VIH-1, dans la fraction active AsC4.2 on retrouve majoritairement la molécule A mais pas la molécule B, et dans la fraction active AsC4.7 on retrouve majoritairement la molécule B mais pas la molécule A.
En conséquence, l'effet technique d'inhibition de la prolifération du VIH 1 ou 2 des fractions à activité inhibitrice « significative » est dû à la présence spécifique et à l'action des molécules A et/ou B.
La molécule A, ainsi que la molécule B possèdent une activité d' inhibition de la prolifération du VIH-1 ou 2 , chacune des molécules A ou B étant capable de stimuler l'activité immunitaire d'un organisme infecté.
Au regard de ces résultats, les molécules A et B seules ou combinées ont été spécialement sélectionnées et choisies par la
demanderesse, parmi les molécules A à J pour lesquelles une activité d'inhibition du VIH-1 et 2 a également été constatée, pour les inclure dans la composition chimique de l'invention stimulant biologiquement l'activité immunitaire.
II résulte de ces études que chacune des molécules A à J de l'invention isolées par les techniques susmentionnées présentent une activité synergique inhibitrice à 1' encontre de la prolifération au sein des cellules infectées par le VIH de type 1 et du VIH de type 2. L' activité biologique de chacune de ces molécules prise individuellement ou en combinaison à l' encontre du VIH-1 ou VIH-2 a été démontrée par ces expériences .
Plus spécifiquement, les molécules A et B étant représentées en majorité dans les fractions à activité inhibitrice de la prolifération du VIH -1 et VIH-2, sont considérées comme responsables de l'activité biologique majoritaire et principale à 1' encontre des virus, en particulier du VIH 1 ou 2.
Des études complémentaires de l'activité biologique des molécules A et B, prises seules ou en combinaison ont montré que l'activité biologique contre le VIH est essentiellement due à la présence de ces deux molécules. En particulier, la présence de la molécule A et/ou B dans une composition chimique a ainsi pour effet d' inhiber la prolifération virale du VIH-1 et 2 donc de stimuler biologiquement le système immun.
C'est pourquoi, dans une démarche inventive, la demanderesse a sélectionné spécifiquement les molécules A et/ou B parmi l'ensemble des molécules A à J présentant une activité biologique, car ces deux molécules A et B présentent l'effet significatif attendu contre la prolifération du VIH-1 et 2 et permettent de stimuler l'activité immunitaire.
Les résultats d'expériences ont montré qu'aussi bien la molécule A seule, la molécule B seule, ou la combinaison des deux molécules A et B, a/ont une activité biologique significative à 1' encontre du VIH-1 ou 2.
De plus, l'activité biologique significative est augmentée en présence des deux molécules A et B. En conséquence, il y a bien synergie entre les deux molécules quant à leur activité et leur effet contre le VIH-1 ou 2. En d' autres termes , une synergie existe entre ces deux molécules pour accroître leur effet inhibiteur respectif contre la prolifération du VIH 1 ou 2.
De manière avantageuse, la composition chimique de l'invention propose une alternative efficace, peu coûteuse, accessible aux pays en voie de développement, de production facile si elle est issue d'origine naturelle, qui soit biologiquement active et stimulatrice de l'activité immunitaire .
En particulier, la composition chimique de l'invention peut être utilisée dans le domaine pharmaceutique dans le traitement de l'infection par le virus du VIH, du SIDA et des manifestations cliniques qui l'accompagnent.
En outre, la composition chimique de l'invention peut être utilisée également en tant que complément alimentaire permettant de stimuler l'activité immunitaire et les défenses immunes naturelles de l'être humain qui peut être immunodéprimé.
Claims
REVENDICATIONS 1. Composition chimique caractérisée en ce qu'elle comprend:
- la molécule A ou un de ses sels physiologiquement acceptables ,
et/ou ;
- la molécule B ou un de ses sels physiologiquement acceptables ,
ladite molécule A étant de formule suivante :
et la molécule B étant de formule suivante :
la molécule A ou un de ses sels physiologiquement acceptables étant biologiquement actif (ve) et stimulateur (trice) de l'activité immunitaire, la molécule B ou un de ses sels physiologiquement acceptables étant biologiquement actif (ve) et stimulateur (trice) de l'activité immunitaire.
2. Composition chimique, selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ladite molécule Ά présente :
- en position 16, en remplacement de la fonction carbonyl =0, soit un -OH, soit un groupement carbonyl aldehyde-RCOH, soit une cétone -R1-CO-R2 , soit un ester -R-COO-R' soit un amide de type -R-C (=0)NH2 ; et/ou
- en position 3, une glycosilation ou une esterification sous la forme de -OR, où « R » est soit un groupe feruloyl ou caffeoyl, soit un sucre ou soit un amide.
3. Composition chimique, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite molécule A est conjuguée avec des amino-acides , des sels d' ammonium quaternaires , des glycosides , des hemiphtalates ou encore des carbamates.
4. Composition chimique, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite molécule B présente, en position 28, une estérification avec un amide ou un sucre.
5. Composition chimique, selon l'une quelconques des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comporte, en outre, au moins une des molécules suivantes ou un de ses sels physiologiquement acceptables ; ou une des combinaisons possibles desdites molécules suivantes ; la ou lesdites molécule (s) étant choisie (s) parmi la liste suivante :
- La molécule C de formule :
avec « n » compris entre 8 et 26
La molécule D de formule
- La molécule E de formule
La molécule F de formule
-
La molécule 6 de formule
La molécule H de formule
La molécule I de formule
6. Composition chimique, selon l'une quelconques des revendications précédentes , caractérisée en ce que chacune desdites molécules A, B, et chacun de leur sels physiologiquement acceptables est d'origine synthétique et issue d'une synthèse chimique en laboratoire ou d'une hémi synthèse.
7. Composition chimique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que chacune desdites
molécules A, Β et chacun de leur sels physiologiquement acceptables est d'origine naturelle et issue d'un extrait végétal d'Anthostema senegalense.
8. Composition chimique, selon la revendication précédente, caractérisée en ce que l'extrait végétal d'Anthostema senegalense consiste en un extrait polaire, aqueux, alcoolique ou hydro-alcoolique ou un extrait apolaire ou une teinture mère d'Anthostema senegalense avec une teneur en éthanol de 70% V/V.
9. Composition chimique, selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ledit extrait végétal est obtenu à partir d'écorce de tronc, notamment séchée, d'Anthostema senegalense.
10. Composition chimique, selon l'une quelconque des revendications précédentes, destinée à être utilisée comme médicament ou comme complément alimentaire.
11. Composition pharmaceutique , caractérisée en ce qu' elle comprend la composition chimique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, destinée à être utilisée dans le traitement de l'infection par le VIH de type 1 ou de type 2, du SIDA et des manifestations cliniques qui l'accompagnent.
12. Composition pharmaceutique, selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme galénique orale.
13. Composition pharmaceutique, selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme galénique orale de microsphères réalisées par un procédé d'extrusion et de sphéronisation, de comprimés, de capsules molles, de granules, de gélules, de poudre, d'ampoule, de sirop ou encore de décoctés.
14. Procédé d'isolation par extraction, d'identification et de sélection de la ou des molécules biologiquement active (s) de la composition chimique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 dans lequel :
- On sèche une partie de la plante d'Anthostema senegalense ;
- On prépare un extrait végétal, à partir de la partie de la plante séchée, par extraction avec un solvant apolaire ou polaire ou par macération, infusion, décoction, percolation, digestion ou lixivation,
- On concentre sous vide ledit extrait végétal,
- On sépare les molécules de l'extrait végétal par chromatogràphie ,
- On teste in Vitro l'activité biologique desdites molécules à 1' encontre d'un pathogène de type VIH selon la méthode de E de Clercq,
On sélectionne et isole les molécules possédant un index de sélectivité à 1' encontre dudit pathogène ≥ 50 et une CC50 ≥ 45 μg/mL,
- On identifie la ou les molécules séparée (s) , sélectionnée (s) et isolée (s) par résonance magnétique nucléaire et spectrométrie de masse.
15. Procédé, selon la revendication précédente, caractérisé en ce que :
- La partie de la plante d'Anthostema sengalense qui est séchée consiste en l'écorce du tronc, ou en l'écorce de racines ou en des feuilles ou en des fruits ;
- On prépare un extrait végétal par percolation au CHC13 pour obtenir un extrait végétal apolaire ;
- Après concentration sous vide, on sépare les molécules de l'extrait végétal par chromatogràphie sur colonne répétée et chromatographie sur couche mince .
16. Procédé, selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'on sépare les molécules dudit extrait végétal apolaire par chromatographie sur colonne répétée avec comme phase stationnaire un gel de silice polaire et comme phase mobile un éluant apolaire constitué par un gradient de CHC13 dans de l'hexane.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1660230A FR3057865A1 (fr) | 2016-10-21 | 2016-10-21 | Composition chimique |
| FR1750080A FR3057866B1 (fr) | 2016-10-21 | 2017-01-05 | Composition chimique |
| PCT/FR2017/052891 WO2018073551A1 (fr) | 2016-10-21 | 2017-10-20 | Composition thérapeutique dérivée d'anthostema senegalense |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EP3535277A1 true EP3535277A1 (fr) | 2019-09-11 |
Family
ID=58547642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EP17797397.1A Withdrawn EP3535277A1 (fr) | 2016-10-21 | 2017-10-20 | Composition thérapeutique dérivée d'anthostema senegalense |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20190350995A1 (fr) |
| EP (1) | EP3535277A1 (fr) |
| CN (1) | CN110099916A (fr) |
| FR (2) | FR3057865A1 (fr) |
| RU (1) | RU2019120255A (fr) |
| WO (1) | WO2018073551A1 (fr) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6245789B1 (en) * | 1998-05-19 | 2001-06-12 | The Procter & Gamble Company | HIV and viral treatment |
| FR3021871B1 (fr) * | 2014-06-10 | 2018-07-13 | Aliou Mamadou Balde | Composition a base d'anthostema senegalense utilisee comme medicament contre le sida |
-
2016
- 2016-10-21 FR FR1660230A patent/FR3057865A1/fr active Pending
-
2017
- 2017-01-05 FR FR1750080A patent/FR3057866B1/fr active Active
- 2017-10-20 WO PCT/FR2017/052891 patent/WO2018073551A1/fr unknown
- 2017-10-20 US US16/476,192 patent/US20190350995A1/en not_active Abandoned
- 2017-10-20 CN CN201780079975.XA patent/CN110099916A/zh active Pending
- 2017-10-20 RU RU2019120255A patent/RU2019120255A/ru unknown
- 2017-10-20 EP EP17797397.1A patent/EP3535277A1/fr not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR3057865A1 (fr) | 2018-04-27 |
| RU2019120255A (ru) | 2020-12-28 |
| RU2019120255A3 (fr) | 2020-12-28 |
| FR3057866A1 (fr) | 2018-04-27 |
| CN110099916A (zh) | 2019-08-06 |
| US20190350995A1 (en) | 2019-11-21 |
| FR3057866B1 (fr) | 2020-10-30 |
| WO2018073551A1 (fr) | 2018-04-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bermudez et al. | Current drug therapy and pharmaceutical challenges for Chagas disease | |
| Fan et al. | The clinical applications of curcumin: current state and the future | |
| CA2980173C (fr) | Activite antivirale de champignons medicinaux contenant des composes de carboxylate de phenyle et d'acrylate de phenyle | |
| ES2618952T3 (es) | Composiciones que incluyen antocianidinas y métodos de uso | |
| CA2608061C (fr) | Composition pharmaceutique comprenant un antitumoral et un actif choisi parmi le calveol, le thymol, l'eugenol, le borneol et la carvacrol | |
| Leteane et al. | Old plants newly discovered: Cassia sieberiana DC and Cassia abbreviata Oliv. Oliv. root extracts inhibit in vitro HIV-1c replication in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) by different modes of action | |
| US20100028469A1 (en) | Extracts of Cranberry and Methods of Using Thereof | |
| Debnath et al. | Inhibitory effect of Nymphaea pubescens Willd. flower extract on carrageenan-induced inflammation and CCl4-induced hepatotoxicity in rats | |
| Asanka Sanjeewa et al. | Exploiting biological activities of brown seaweed Ishige okamurae Yendo for potential industrial applications: A review | |
| Mehta et al. | A fresh look on bergenin: vision of its novel drug delivery systems and pharmacological activities | |
| EP3785709A1 (fr) | Composition pharmaceutique destinée à inhiber l'infectiosité du vih, à traiter le syndrome d'immunodéficience acquise (sida) et ses complications | |
| Hou et al. | Bioactivities and Mechanisms of Action of Sinomenine and Its Derivatives: A Comprehensive Review | |
| Kaur et al. | Oral delivery of antidiabetic polypeptide-k: journey so far and the road ahead | |
| WO2018073551A1 (fr) | Composition thérapeutique dérivée d'anthostema senegalense | |
| Shettar et al. | Studies on in vitro antidiabetic activities of Hopea ponga and Vitex leucoxylon | |
| Khader et al. | Endophytic fungi hosted anti-diabetic medicinal plants as a source of α-Amylase and α-Glucosidase inhibitors | |
| KR20140072464A (ko) | 와송 유래 핵산 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| Syiem et al. | Evaluation of anti-diabetic potential of Albizzia Lebbek bark in normal and alloxan-induced diabetic mice | |
| Manal et al. | Changes in body weight and serum biochemical parameters of wistar rats orally dosed with Maerua pseudopetalosa (gilg and bened.) De wolf tuber extracts | |
| KR20130046094A (ko) | 어저귀 추출물을 포함하는 염증성질환 예방 또는 치료용 의약 조성물 | |
| Kumar et al. | Amelioration of diazepam induced memory impairment by fruit of Cucumis sativus L in aged mice by using animal models of Alzheimer’s disease | |
| OA19672A (en) | Therapeutic composition derived from anthostema senegalense. | |
| EP1491197A1 (fr) | Composition pharmaceutique à base de voacamine pour la stimulation et modulation du système immunitaire humain | |
| EP2459188A1 (fr) | Utilisation de l'acide rosmarinique et de ses dérivés pour traiter la ciguatéra | |
| Nakano et al. | Anti-HIV activity of alkaline extract from pine seed shells (Pinus koraiensis) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| STAA | Information on the status of an ep patent application or granted ep patent |
Free format text: STATUS: UNKNOWN |
|
| STAA | Information on the status of an ep patent application or granted ep patent |
Free format text: STATUS: THE INTERNATIONAL PUBLICATION HAS BEEN MADE |
|
| PUAI | Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase |
Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012 |
|
| STAA | Information on the status of an ep patent application or granted ep patent |
Free format text: STATUS: REQUEST FOR EXAMINATION WAS MADE |
|
| 17P | Request for examination filed |
Effective date: 20190710 |
|
| AK | Designated contracting states |
Kind code of ref document: A1 Designated state(s): AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR |
|
| AX | Request for extension of the european patent |
Extension state: BA ME |
|
| DAV | Request for validation of the european patent (deleted) | ||
| DAX | Request for extension of the european patent (deleted) | ||
| STAA | Information on the status of an ep patent application or granted ep patent |
Free format text: STATUS: EXAMINATION IS IN PROGRESS |
|
| 17Q | First examination report despatched |
Effective date: 20210408 |
|
| STAA | Information on the status of an ep patent application or granted ep patent |
Free format text: STATUS: EXAMINATION IS IN PROGRESS |
|
| STAA | Information on the status of an ep patent application or granted ep patent |
Free format text: STATUS: THE APPLICATION HAS BEEN WITHDRAWN |
|
| 18W | Application withdrawn |
Effective date: 20240212 |