EP3368091A1 - Bifunctional prodrugs - Google Patents

Bifunctional prodrugs

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EP3368091A1
EP3368091A1 EP16790323.6A EP16790323A EP3368091A1 EP 3368091 A1 EP3368091 A1 EP 3368091A1 EP 16790323 A EP16790323 A EP 16790323A EP 3368091 A1 EP3368091 A1 EP 3368091A1
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EP
European Patent Office
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group
antibody
alkyl
optionally substituted
alkyl group
Prior art date
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Application number
EP16790323.6A
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German (de)
French (fr)
Inventor
Lutz F. Tietze
Kamala PENCHALAIAH
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Georg August Universitaet Goettingen
Original Assignee
Georg August Universitaet Goettingen
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Publication date
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    • A61K47/6899—Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy [ADEPT]
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/02—Heterocyclic radicals containing only nitrogen as ring hetero atoms

Definitions

  • the present invention is directed to novel compounds, more particularly to novel bifunctional prodrugs and drugs.
  • the present invention is directed to antibody-compound conjugates wherein the compound is a compound of the invention and to pharmaceutical compositions containing the compound or the antibody-compound conjugate.
  • chemotherapeutic agents are distributed throughout the body through the bloodstream so that they can reach all cells. Chemotherapeutic agents have cytostatic effects on human cells, that is, they prevent cell proliferation, or they are cytotoxic, that is, they cause the cells to die.
  • cytostatics show their mechanism of action in proliferating cells and tumor cells are among the rapidly proliferating cell types, they are used as chemotherapeutic agents.
  • the non-tumor cells of the treated person are also affected, especially those of the bone marrow, the hair roots or mucosal cells.
  • cytostatic agents used in chemotherapy are categorized according to their mechanisms of action in the classes of alkylating agents, antimetabolites, mitotic inhibitors, topoisomerase inhibitors and cytostatic antibiotics.
  • the alkylating agents represent a numerically significant, structurally very diverse class of extremely reactive substances. After an optionally preceding activation of the medicament, the active ingredient reacts as an electropophile, in particular with nucleic acids to form covalent bonds. As a result, cross-linking of the DNA, abnormal base pairing or strand breaks occur that prevent replication and eventually lead to cell death.
  • Typical examples of alkylating agents are cyclophosphamide but also cisplatin.
  • a group of particularly effective alkylating agents include the natural antibiotic CC-1065, duocarmycins, yatakemycin, as well as derivatives and analogues of this class of natural products.
  • Chemotherapy for malignant disease is today associated with severe neoplasms. as differentiation between healthy and malignant tissue occurs only through the increased proliferation rate of cancer cells. Therefore, new concepts have been developed which exploit genotypic and phenotypic properties of tumor cells and enable a targeted activation of reversible detoxified prodrug directly at the site of action. Such a targeted activation can be done, for example, by a changed pH, for example a pH reduction. Another possibility is the so-called ADEPT concept (Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy). This antibody-enzyme conjugates are used, which causes a direct conversion of the non-toxic prodrug into the drug directly at the tumor and achieve high selectivity. This binary therapy approach consists of two steps.
  • a certain amount of antibody-enzyme conjugate is applied, which is then distributed through the bloodstream throughout the organism.
  • the conjugate binds to specific antigens on tumor cell surfaces or is degraded or excreted by the body. If the unbound antibody-enzyme conjugate can no longer be detected, the application of the prodrug takes place in the second step.
  • the possibly non-toxic prodrug is likewise distributed throughout the organism and, due to the enzyme, which is ideally present only on the tumor surface in the form of the antibody-enzyme conjugate, is specifically toxified in the tumor tissue.
  • the released drug then unfolds its toxic effect upon penetration through the cell membrane, while the enzyme remains active on the outside of the tumor cell and can activate further prodrug molecules.
  • ICso Value toxin concentration at which cell growth is suppressed by 50%
  • conjugates of drugs and tumor-specific ligands can be used for selective targeting in cancer therapy. After selective binding of the ligand to a receptor on the tumor surface, internalization of the conjugate and, subsequently, intracellular release occur.
  • CC-1065 For analogues of the antibiotic CC-1065 and the duocarmycines various attempts have been made to achieve the above-mentioned goal.
  • the CC-1065 itself has an IC 50 value of 20 pmol, but in animal try to delay lethal hepatotoxicity and is therefore not suitable for clinical applications. Therefore, attempts have been made to present analogs of this compound.
  • the DNA binding moiety was changed, but also the pharmacophore itself was modified in various forms.
  • seco and prodrug compounds have been synthesized which generally have similar toxicity and selectivities as the spirocyclopropyl compounds, eg CC-1065 or duocarmycins.
  • CC-1065 analogues were described which reversibly give an excellent cytotoxicity result by glycosidation of the detoxified anti-methyl-seco-CBI-DMAI- ⁇ -D-galactoside (+) - (1S, 1 OR) compound and achieve the quotients of the cytotoxicity of the prodrug and the prodrug in the presence of the activated enzyme. QICso values of over 4500 were achieved.
  • Bifunctional alkylating agents are those with two reactive centers. They have the ability to cause intra- or interstrand cross-links of the DNA. With regard to the interstrand cross-linking, particularly good damage to the cells and thus cell death are achieved. These compounds have a high cytotoxicity. Bifunctional derivatives of e.g. Pyrrole benzodiazidepines are described in the literature.
  • a radiation treatment (“beam”, eg radiotherapy with gamma radiation or radioactive isotopes) is indicated, in an advanced stage, in which metastases have already formed
  • beam eg radiotherapy with gamma radiation or radioactive isotopes
  • chemotherapy is usually carried out promptly, and new therapeutic approaches such as treatment with angiogenesis inhibitors and kinase inhibitors, as well as immune and hormone therapy have been introduced.
  • Classic antineoplastic chemotherapy is usually associated with severe side effects.
  • As part of a chemotherapy drugs are administered, which can be distributed through the bloodstream in the peripheral system and so can reach almost all cells.
  • Chemotherapeutics either act cytostatically on human cells, i.e. they prevent cell growth, or cytotoxic, that is, they cause cell death.
  • the cytostatics currently used in cancer therapy are classified according to their targets in the cell cycle in the classes of alkylating agents, antimetabolites, mitotic inhibitors, topoisomerase inhibitors and cytostatic antibiotics.
  • the structurally very diverse class of alkylating agents acts primarily phase-unspecific. Frequently, the drugs in the body are first activated to undergo carbocation before they react with N, O or S nucleophiles in proteins or, in particular, nucleic acids and form covalent bonds. As a consequence, crosslinks of the DNA strands (cross links), abnormal base pairings or strand breaks occur, which impede replication and thus cell division and ultimately lead to cell death.
  • cyclophosphamide (1) which is converted into the actual active ingredient 2 only through biotransformations in the body (poisoning) and is therefore called a prodrug (FIG. 1 a).
  • Platinum complexes with cisplatin (3) (FIG. 1 a) as well-known representatives ter belong to the class of alkylating agents and act primarily by intra- or interstrand cross-links of DNA.
  • the natural antibiotic CC-1065, duocarmycins, yatakemycin, as well as derivatives and analogues of this class of natural products are also classed as particularly effective alkylating agents.
  • Antimetabolites are structural analogues of the body's own metabolite components, which, as antagonists, displace the actual metabolites. They act phase-specifically preferentially in the S-phase of the cell cycle and inhibit important enzymes or lead to the emergence of nonfunctional macro-molecules.
  • a prominent example is the folic acid antagonist methotrexate (4), which as the wrong substrate inhibits dihydrofolate reductase and thereby prevents the formation of tetrahydrofolic acid ( Figure 1 b). This is again u.a. essential for purine synthesis and thus for cell proliferation.
  • Mitosis inhibitors also called spindle toxins enter into the mitosis phase of the cell cycle by binding to the ß-unit of the tubulin dimer and thereby either the structure of the nuclear spindles (eg colchicine, vinca alkaloids such as vincristine (6) and vinblastine (7), ( 1 b) or their degradation (taxol, epothionon).
  • the nuclear spindles eg colchicine, vinca alkaloids such as vincristine (6) and vinblastine (7), ( 1 b) or their degradation (taxol, epothionon).
  • cytostatics consists of inhibitors of topoisomerases I and II. Topoisomerases are assigned the task of unwinding, interrupting and then resealing the twisted strands during DNA replication. If these enzymes are inhibited, they can no longer dissociate from the DNA, causing strand breaks and eventually causing cell death. Typical representatives of this class of substances are etoposide, irinotecan and derivatives of the alkaloid camptothecin (8) (FIG. 1 c).
  • the cytostatic antibiotics include, first and foremost, the anthracyclines daunorubicin (9) and doxorubicin (10) isolated from Streptomyces species (FIG. 1 c), which preferentially act in the S phase of the cell cycle. They intercalate into DNA, interfering with DNA and RNA synthesis. Furthermore, they can induce strand breaks by radical formation and inhibition of topoisomerase II.
  • the clinical benefit in the treatment of cancer has been significantly increased by the use of chemotherapeutic agents, especially in cases of surgically difficult to reach neoplasias or metastases.
  • chemotherapy in addition to the sometimes severe acute side effects that may require a discontinuation of therapy, often brings long-term consequences. These include the induction of secondary tumors, damage to the bone marrow, pulmonary fibrosis or immune deficiencies.
  • a further problem is the development of resistance of tumors to individual cytostatic agents or classes, which occurs due to the natural selection of resistant cells during treatment.
  • Immunotherapy has become the fourth and most recent pillar of cancer treatment.
  • cytokines or antibodies which have immunomodulating or direct antiproliferative properties.
  • a key role is played by the characteristic cell surfaces of the different cell types.
  • glycocalyx On the extracellular side of each cell membrane is the glycocalyx, which consists of glycolipids, glycoproteins and glycosaminoglycans and serves, inter alia, for cell recognition, communication and signal acquisition. Certain components of the glycocalyx function here as antigens which - presented on the surface - are specific for cancer cells (specific antigens) or are over-expressed in tumor cells in comparison to healthy cells (tumor-associated antigens). These antigens represent the central starting point of an immunotherapy: Monoclonal antibodies can selectively bind to the antigens, thus selectively marking the cancer cells and then destroy itself or as a conjugate malignant degeneration.
  • FIG. 2 shows a few examples of the immunotherapy of malignant tumors.
  • cytokines eg interleukin-2, IL-2
  • IL-2 interleukin-2
  • antibodies can be linked to T lymphocytes, causing direct cytolysis of the tumor cell (B).
  • the fusion of cancer cells with antigen-presenting cells is another approach to mobilizing the body's own immune system to destroy neoplasms.
  • the resulting hybrids express more tumor-associated antigens on their surface and thus activate cytotoxic lymphocytes (CTL), which - stimulated by the tumor antigen-presenting hybrids - eliminate cancer cells with identical antigens.
  • CTL cytotoxic lymphocytes
  • DZ dendritic cells
  • C DNA
  • ADC antibody-drug conjugate
  • antibody-enzyme conjugates are used, which convert reversibly detoxified drugs (prodrugs) selectively at the cancer cell into cytotoxic drugs (D).
  • radioimmunotherapy which couples antibodies to radioactive isotopes ( 131 l, 90 Y), exists (F).
  • This approach is used not only in tumor therapy, but also in diagnostics, where it enables, among other things, the localization of metastases.
  • Significant problems with the development of antibody-drug conjugates on the one hand are the cytotoxicity of the toxin and the systemic toxicity of the conjugate, which is often too low.
  • One approach pursued is the use of relatively non-toxic prodrugs of the highly toxic duocarmycin which release the toxin after being taken up into the cell.
  • the work is based on the dimeric duocarmycin analogues developed by the present inventors, in which two CBI units are linked to dicarboxylic acids via a diamide bond.
  • Such compounds have an IC50 of up to 150 fmol and thus constitute the cytotoxic compounds known.
  • these compounds are not suitable to bind a monoclonal antibody, since they have no corresponding functionalities.
  • dimeric duocarmycins have been proposed, which can be linked to a monoclonal antibody via a linker.
  • these compounds all have high systemic toxicity and are in no way superior to the known ADC.
  • ADCs Antibody Drug Conjugates
  • the general problem in the treatment of malignant tumors is that the available chemotherapeutic agents have only a relatively small therapeutic window and therefore there are massive side effects.
  • ADCs are suitable in which usually a cytotoxic small molecule is linked to a monoclonal antibody which binds to tumor-associated antigens. This makes it possible via a so-called targeting the toxin selectively infiltrate into a cancer cell without attacking normal cells.
  • certain conditions must be met for good efficacy and tolerability.
  • it is necessary for the toxin to have a high IC 50 value of ⁇ 1 nmol, but the conjugate with the antibody has only a low toxicity. This is not guaranteed in many cases.
  • the monoclonal antibody used should also not be attached to the Epithelium of normal cells bind. Further difficulties lie in the choice of linker, which on the one hand needs to be stable enough that the toxin is not released in the serum, but is labile enough that it is cleaved off in the cell after endocytosis of the conjugate. Another problem lies in the reduction of the cytotoxicity of the toxin used by introducing functionalities that allow a connection to the monoclonal antibody. In one of the most promising ADCs of the first generation with a doxorubicin as toxin and a Lewis Y antibody, the problem can be understood very well.
  • Adcetris and Kadcyla are further substances with calicheamicin, MMAE, DM1 and DM4 as toxins in the clinical trial.
  • Substances that contain a duo-carmycin or a related compound are not included.
  • conjugates with bifunctional duocarmycin analogs are disclosed. However, these compounds show only moderate activity; this is presumably due to the high toxicity of the conjugate and the comparatively low cytotoxicity of the toxin used, which has lost its effectiveness as a result of the derivatization carried out.
  • WO2007089149 discloses conjugates with monofunctional duocarmycin analogs. Compared to the bifunctional analogs, these compounds have the disadvantage of lower cytotoxicity.
  • WO 2015/1 10935 A1 discloses a multiplicity of bifunctional cytotoxic describe xic means. These include CPI prodrugs and CBI prodrugs.
  • the object of the present invention is to provide novel compounds suitable for the preparation of conjugates with, for example, antibodies, in order to control the compounds in the form of prodrugs to the corresponding therapeutic targets, for example the target cells.
  • chemotherapeutic drugs and prodrugs that will target them to the target areas, such as the target cells.
  • new compounds which represent bifunctional alkylating agents in particular for use in a selective tumor therapy.
  • the novel compounds described herein are characterized by the fact that these new dimers are more cytotoxic than the monomeric prodrugs or drugs.
  • the IC 50 value of the compounds according to the invention is in the pmol range.
  • a much larger QICso value is achieved. That is, the quotient between cytotoxicity of the drug and the cytotoxicity of the prodrug is much greater.
  • a better therapeutic effectiveness associated with a lower cytotoxicity of the prodrug and thus lower side effects in applications in patients can be achieved.
  • a and B are formed independently of each other from the structure I.
  • Hal is a halide selected from F, Cl, Br, I;
  • R is H or an optionally substituted C 1 -C 4 -alkyl group, an optionally substituted C 1 -C 4 -alkoxy group, an optionally substituted aryl group, an optionally substituted heteroaryl group, an optionally substituted C 1 -C 4 -alkylcarboxy-C 1 -C 4 -alkyl group, halo, CN, a optionally subsitutechnisch Ci - C4 alkylsulfanyl group, an optionally substituted Arylsulfanyl distr, an NR group Z as defined below;
  • Ri is H or a Ci - C4 alkyl group or a Ci - C4 alkoxy group
  • Xi is O, S, N R5, wherein R5 is selected from H and optionally substituted Ci - C4 alkyl;
  • R2 is selected from hydrogen or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate;
  • G is independently absent, hydrogen or a functional group, in particular selected from an alkyne group, an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, a carboxyl group, an azide group or a polyglycine group, wherein G is present as a functional group at least once in the compound ALB ;
  • L is a linking group to the covalent bond of A and B, where L has the structure Z-Y-Z ';
  • each Rz is independently selected from hydrogen and optionally substituted Ci - C4 alkyl or optionally substituted C1 - C4 acyl;
  • Y is selected from a structure according to structure II I or structure IV; Structure II I
  • each RA is independently selected from hydrogen or optionally substituted C1 - C4 alkyl or optionally substituted C1 - C4 acyl;
  • o and p are independently selected from an integer of 1 to 20; where o and p can take the same value or a different value.
  • G is as defined above;
  • X 2 is i) N or S or ii) an aryl or heteroaryl group, wherein (CRA) O and (CRA) P are arranged in metaposition on this aryl group or on this heteroaryl group,
  • R3 is selected from C1 - C10 alkyl such as C1 - C4 alkyl; Co - C4 alkylaryl Co - C10 alkyl group such as Co - C4 alkylaryl Co - C4 alkyl group; Co - C4 Alkylhe- teroaryl Co - C10 alkyl group, such as Co - C4 alkylheteroaryl Co - C4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate; or is not present;
  • R4 is i) absent or a C1 - C10 alkyl group, such as a C1 - C4 alkyl group; a Co - C4 alkylarylCo - C10 alkyl group such as Co - C4 alkylarylCo - C4 alkyl group; a Co - C4 alkylheteroaryl Co - C10 alkyl group, such as Co - C4 alkylheteroaryl Co - C4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a chemical cleavable substrate, when X 2 is N or S, or ii) R 4 is a C 1 -C 10 alkyl group, such as a C 1 -C 4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate; or is absent if X2 is an aryl or heteroaryl group;
  • glycosidic prodrugs of dimeric duocarmycin are used, which in themselves have only low toxicity, and whose activity after ingestion into the cell is developed by elimination of the sugar component.
  • cleavable linkers wherein a cleavage can be carried out, for example, via an acid-catalyzed hydrolysis, an enzymatic transformation or a glutathione-induced cleavage of disulfides.
  • Acid labile linkers can contain hydrazone, acetal, enol ether, and azomethine functions.
  • compounds containing sugar components or the dipeptide valine-citrulline which can be cleaved by cathepsin B, which is strongly expressed intracellularly are suitable.
  • Disulfide linkers are based on the finding that glutathione occurs intracellularly in much higher concentrations than extracellularly.
  • the attachment of antibodies according to the invention to the linker can be effected via the addition of a lysine-Nh group or a cysteine-SH group to a maleimidocaproyl, a maleimidomethylcyclohexanecarboxylate, a maleimidodioxacaproyl function or comparable functionalities. Further connections can be made by linking two amino functionalities with diethyl squarate and comparable functionalities to form a diamide. The addition of nucleophiles to ⁇ , ⁇ -unsaturated carbonyl compounds has also been used.
  • Another linkage method is the 1, 3-dipolar cycloaddition of linkers with an alkyne or an azide group with antibodies that carry an azide or an alkyne group.
  • an enzymatically induced linkage of polyglycine-substituted toxins or precursors thereof (prodrug) with the aid of a sortase to an antibody can also take place.
  • R 2 , R 3 and / or R 4 is selected from a substrate which is obtained by enzymatic cleavage, such as by proteolytic, oxidative or reductive enzymes, plasmin, cathepsin, cathepsin B, beta-glucuronidase, galactosidase, mannosidase, glucosidase, neuramidase , Saccharosidase, maltase, fructosidase, glycosylases, prostate-specific antigen (PSA), urokinase-type plasminogen activator (u-PA), metalloproteinase, cytochrome P450, or an enzyme targeted by enzyme-directed prodrug therapy how ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, or PDEPT can be split; or a substituent which can be split off or transformed under hypoxic conditions or by reduction by nitroreductase, in particular R2, R3 and / or R4
  • the term "functional group” is understood herein to mean a substituent which can undergo a further structure, the target structure, in particular proteins, in particular antibodies or antibody fragments, a preferably covalent compound in order to bind the compounds according to the invention to these target structures in particular to prepare antibody-compound conjugates according to the invention.
  • cleavable substrate or "cleavable substrate”, as used herein, is understood to mean a structure, such as the target structure, which, under appropriate conditions and / or using appropriate molecules, cleaves off the prodrug and ultimately the active drug becomes. As stated, a corresponding cleavage can be effected physically or chemically, in particular enzymatically.
  • Antibody fragments also include aptamers, lectins, biological modifiers of an answer, enzymes, vitamins, growth factors, steroids, nutrients, sugar residues, oligosaccharide residues, hormones and derivatives, and combinations thereof.
  • antibody is understood here to mean a naturally occurring or recombinant antibody but also antibody fragments, in one embodiment the antibodies are humanized antibodies or antibody fragments. if appropriate, these antibodies or antibody fragments are modified in such a way that binding to the compounds according to the invention can take place via the functional group described herein.
  • the antibodies are directed to tumor-associated antigens or other cell surface components of the target structures so that target-directed delivery of the prodrugs into the cells can occur.
  • antibody-conjugate conjugate is understood here to mean a conjugate of antibody and compound according to the invention, in which case the compound is, for example, a prodrug or drug molecule
  • This conjugate is a form of a target-structure-compound conjugate, eg with the above-mentioned target structures and the compounds according to the invention.
  • the linkage of the compound according to the invention with the antibody takes place via the functional group G in order to covalently connect the antibody according to the invention, including antibody fragments, to the compound according to the invention. If necessary, this covalent bond can be redissolved by suitable means.
  • an embodiment relates to a compound wherein R2 is independently a hydrogen or CH3.
  • a compound is one wherein Hai is Cl and R1 is H.
  • One embodiment relates to a compound, wherein L is a compound according to the structure II, Structure II
  • an embodiment of the present invention is one having a compound wherein X 2 is an aryl group, especially a benzyl group, Y is a structure IV wherein R 4 is a C 1 -C 4 alkyl group, and G is a functional group defined herein.
  • one embodiment is a compound wherein the functional group G is present only on the radical R2.
  • the compounds of the invention showed in vitro experiments excellent cytotoxicity values with IC50 values in the pmol range, partially below the pmol range. Furthermore, the compounds showed an excellent quotient of the IC50.
  • the QICso value of the tested compounds was over 1 000, especially suitable compounds showed values above 1 00 000.
  • the compounds presented herein which are new dimeric prodrugs and drugs of CC-1065 analogues, have a very high cytotoxicity as a drug, while the prodrugs show less cytotoxicity. Thus, these compounds should be much safer in therapeutic use.
  • the compounds of diamines according to the invention are furthermore substantially more cytotoxic than the monomeric prodrugs or drugs. The compounds are thus characterized by a high efficacy with fewer side effects in the application.
  • the compounds according to the invention are distinguished by the fact that they exhibit cytotoxicity values in the pmol range and have a very large quotient of the IC 50 values of the drug to the prodrug.
  • alkyl refers to straight-chained or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon substituents, examples of the alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, octyl, decyl, isopropyl, sec Butyl, isobutyl, tert-butyl, isopentyl, vinyl, allyl, 1-butenyl, 2-butenyl, isobutenyl, pentenyl and the like.
  • cycloalkyl or “carbon cycles” as used herein refers to saturated or unsaturated, non-aromatic hydrocarbon cycles which may consist of one, two or more rings. Examples thereof include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclopentadienyl, cyclohexyl, cyclohexonyl, etc.
  • heteroalkyl refers to straight-chained or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon substituents in which at least one carbon has been replaced by a heteroatom
  • the heteroatoms are preferably selected from S, N, O. , and P.
  • aryl refers to aromatic substituents which may consist of one or more fused rings, and examples of aryl include phenyl, naphthyl and antracenyl.
  • heteroaryl refers to aromatic substituents which may consist of one or more fused rings, wherein at least one carbon atom of the aromatic ring group is replaced by a heteroatom.
  • Ryl groups include pyridinyl, furanyl, pyrrolyl, triazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiophenyl, indolyl, benzofuranyl, benzimidazolyl, indazolyl, benzotriazolyl, benzisoxazolyl, and quinolinyl.
  • heterocycloalkyl or “heterocycles” as used herein refers to saturated or unsaturated, non-aromatic cyclic hydrocarbon substituents which may consist of one or more fused rings, with at least one carbon in one replaced by a heteroatom.
  • heterocycloalkyls include: tetrahydrofuranyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, 1,4-dioxanyl, morpholinyl, piperazinyl, oxyzolidinyl, decahydroquinolinyl.
  • R2, R3 and / or R 4 and conjugated through G antibodies the compounds can be incorporated easily and directed into cells.
  • R2, R3 and / or R 4 is preferably hydrogen.
  • R 2, R 3 and / or R 4 represents a substrate which can be cleaved enzymatically, for example, to convert prodrugs which have a cleavable product on the substituent R 2, R 3 and / or R 4 into drugs.
  • the substrate R2, R3 and / or R 4 is a cleavable product.
  • a cleavage can be done by chemical reaction, for example due to a change in environmental conditions, such as pH, concentration of certain ions, etc.
  • the substrate R2, R3 and / or R 4 is a cleavable substrate.
  • This cleavable substrate is preferably one obtained by proteolytic enzymes, plasmin, cathepsin, cathepsin B, beta-glucuronidase, galactosidase, mannosidase, glucosidase, neuramidase, sucrose, maltase, fructosidase, glycosylases, prostate specific antigen (PSA), urokinase type Plasminogen activator (u-PA), metalloproteinase, or an enzyme that can be specifically cleaved using targeted enzyme prodrug therapy, such as ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, or PDEPT; or a substituent which can be cleaved or transformed under hypoxic conditions or by reduction by nitroreductase.
  • proteolytic enzymes plasmin, cathepsin, cathepsin B, beta-glucuronidase, galactosidase, mannosidase, glucos
  • the radical R 2, R 3 and / or R 4 is preferably one selected from the group comprising monosaccharide, disaccharide or oligosaccharide, in particular hexoses, pentoses or heptoses, optionally as the deoxy derivative or amino derivative and optionally substituted by halogen, C 1 -8 alkyl, C1-8 acyl, C1-8 heteroalkyl, C3-7 cycloalkyl, C3-7 heterocycloalkyl, C4-12 aryl or C4-12 heteroaryl, amino or amide groups, or with amino, amido or carboxy moieties which may optionally be substituted with halogen, C 1-8 alkyl, C 1-8 acyl, C 1-8 heteroalkyl, C 3-7 cycloalkyl, C 3-7 heterocycloalkyl, C 4-12 aryl or C 4-12 heteroaryl, amino or amide radicals; Dextran, dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, oligopeptide,
  • labile substituents can be used under certain environmental conditions, such as hemiacetals and acetals, benzyl groups and substituted benzyl groups.
  • a targeting of the compounds according to the invention to target structures may be possible. That is, a targeted coupling of the compounds according to the invention to target structures for targeting these conjugates, for example into the target cells or target tissue, is possible, and a corresponding introduction of these compounds according to the invention into, for example, selected cells and cell types is possible.
  • the split off or the transformation of the compound of the invention with R2, R3 and / or R4 other than H may be carried out by chemical, photochemical, physical, biological or enzymatic processes under the appropriate conditions.
  • the substrate is suitably accessible to known methods such as ADEPT (Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy), PDEPT (Polymer Directed Enzyme Prodrug Therapy) or MDEPT (Macromolecular-Directed Enzyme Prodrug Therapy), VDEPT (Virus-Directed Enzyme Prodrug Therapy) or GDEPT ( Gene-Directed Enzyme Prodrug Therapy).
  • ADEPT Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy
  • PDEPT Polymer Directed Enzyme Prodrug Therapy
  • MDEPT Macromolecular-Directed Enzyme Prodrug Therapy
  • VDEPT Virus-Directed Enzyme Prodrug Therapy
  • GDEPT Gene-Directed Enzyme Prodrug Therapy
  • Another aspect of the present invention is directed to an antibody-conjugate conjugate wherein an antibody via the functional group G is linked to the compound of the invention as defined above.
  • the conjugate is one wherein the antibody is directed against a tumor antigen or an antigen that is expressed on a target structure, such as a cell.
  • the antibody-compound conjugate is one wherein the antibody is one of an antibody, an antibody fragment such as F (ab ') 2, F (ab'), Fab, Fv, sFv, scFv.
  • the present application is directed to pharmaceutical compositions containing the compounds of the invention, optionally with pharmaceutically acceptable carriers or diluents.
  • the compounds according to the invention can be present in the form of pharmaceutically acceptable salts or solvates. That is, the pharmaceutical composition contains a compound of the present invention or an antibody-compound conjugate of the present invention.
  • salts are in particular acid addition salts which are formed correspondingly to amine groups. Likewise, base addition salts are possible or corresponding zwitter addition salts.
  • pharmaceutically acceptable solvates refers to the association of one or more solvent molecules and a inventive compound.
  • solvent molecules which form pharmaceutically acceptable solvates include water, isopropyl alcohol, ethanol, methanol, DSMO, ethyl acetate and acetic acid.
  • the compounds of the invention are particularly suitable for the preparation of pharmaceutical compositions suitable in tumor therapy.
  • Monomers of the bifunctional compounds of the invention are known as cytotoxic compounds suitable for tumor therapy.
  • the present invention includes pharmaceutical compositions which contain the compounds according to the invention in addition to the customary carriers or diluents.
  • the preparation of the pharmaceutical preparations listed above is carried out in a conventional manner by known methods, e.g. by mixing the agent or excipients.
  • the compounds according to the invention can be administered in total amounts of 0.5 to about 500, preferably 1 to 150 mg / kg of body weight per 24 hours, optionally in the form of several single doses, to obtain the desired results.
  • the person skilled in the art knows the possibilities for determining the dose amount. This can be done depending on the age, the body weight, the type and severity of the disease of the patient, the type of preparation and the application of the drug and the period or the interval of administration.
  • the seco-duocarmycin derivatives described herein carry, for example, alkyne, carboxyl, amino, azide, thiol and hydroxy groups, ie functional groups G, which can be easily linked to antibodies using the methods discussed above.
  • FIG. 1 A typical approach of many possible for the attachment of an antibody to the bifunctional seco-duocarmycin analogs is shown in FIG. The presented method even includes the possibility of inserting two different antibodies and thus of addressing different tumor-associated antigens.
  • the compounds can be very efficiently detoxified by glycosidation with values of about 6,000 for the monofunctional or about 1,000,000 for the bifunctional compounds. Such a procedure is very difficult with other toxins.
  • compound 1 has a slightly increased IC 50 value of 60 pM.
  • a cleavable linker of known type, functionalized benzene-1,3-diacetates can be used.
  • the chains may additionally contain one or two oxygen atoms, one or two nitrogen atoms with an alkyl or aryl group or one or two sulfur atoms ,
  • bifunctional CBI derivatives for example with an N atom in the chain connecting the two CBI units, can also be used for insertion of moieties. noclonal antibodies are used
  • n is an integer from 0 to 1 o and o and p is an integer from 0 to 5, in the chains () 0 and () P can additionally one or two oxygen atoms, one or two Stickstoffatonne with an alkyl or aryl group or contain one or two sulfur atoms.
  • All compounds can e.g. be detoxified by benzylation or glycosidation of the phenolic hydroxyl groups.
  • the release of the toxin then occurs in the lysosome by oxidative cleavage with P 450 or by reaction with a glycohydrolase: b) attachment of a monoclonal antibody via the benzene ring of a benzyl-protected bifunctional duocarmycin derivative.
  • the compounds are stable in serum and the conjugates show very low toxicity.
  • r may be an integer of 0-5, the radical () r may further contain one or two oxygen atoms, one or two sulfur atoms or one or two NRz groups, wherein Rz is as defined above.
  • the group () r may be a group Y as defined above.
  • dicarboxylic acid components In order to have the possibility of binding the dimeric duocarmycin derivatives, dicarboxylic acid components have been developed that carry functionality in the center.
  • the functionality may be an alkyne group, an amino group, an OH group, an SH group or a polyglycine group. Numerous methods are known for linking such functionalities to monoclonal antibodies.
  • R can be an alkyl having 0 to 5 atoms, halogen, OH, CO to C5 alkoxy, N-C0 to C5 alkyl and / or S-C0 to C5 alkyl and / or S-aryl.
  • the described compounds and antibody-compound conjugates can be used in order to introduce the prodrugs into the target cells or the target tissue in order to treat a tumor treatment or precursors thereof.
  • the tumors include in particular solid tumors.
  • FIGS. 3 and 4 show the synthesis of a precursor of bifunctional seco-CBI glycosides. Shown is the formation of the acetals on the sugar and formation of a triazole group for the protection of the azide group, wherein the azide group is suitable later to form a corresponding antibody-conjugate conjugate with the antibody.
  • FIGS. 6 and 7 show the examples of structures according to the invention and their in vitro cytotoxicity in human bronchial carcinoma cells of the A549 line.
  • FIG. 5 shows a suitable structure of an antibody compound
  • This compound represents an example of suitable linking of the compound according to the invention via a cleavable substrate with an antibody.
  • multiplicities of the first order were designated as: s (singlet), d (doublet), t (triplet), q (quartet), dd (doublet of doublets), etc.
  • Higher order signals were referred to as m (multiplet).
  • IR spectroscopy IR spectrums were recorded using Bruker vector 22 spectrometer, UV spectroscopy: UV spectrums were recorded using JASCO V-630 spectrometer, mass spectrometry: ESI-MS and ESI-HRMS spectra were recorded using Bruker Daltonics Apex IV.
  • Tetrakis (triphenylphosphine) palladium (O) ((6 mg, 5 ⁇ mol, 5 mol%), copper iodide ( 2 mg, 10 ⁇ , 10 mol%), and then ethynyl trimethylsilane (22 ⁇ , 1 58 ⁇ mol, 1 .5 eq.) was added at room temperature, and stirring was continued for 16 hours at the same temperature. Evaporation of the solvent under high pressure gave the crude product, which was then purified by flash chromatography (EtOAcPE 2: 3 to EtOAc: PE 3: 2) to give 55 (61 mg, 88%).
  • Figures 8 to 14 show the in vitro cytotoxicity of the above-mentioned synthesized compounds in human bronchial carcinoma cells of the A549 line. The effectiveness of the exemplary compounds can be clearly seen, the IC 50 values are shown accordingly.

Abstract

A first aspect of the invention relates to novel compounds and more precisely to novel bifunctional prodrugs and drugs. An additional aspect of the invention relates to antibody compound conjugates, wherein the compound is a claimed compound, and to pharmaceutical compositions containing the compound or antibody compound conjugate. The invention lastly relates to the use of this compound or antibody compound conjugates according to the invention in order to treat tumour diseases, particularly in mammals.

Description

Bifunktionale Prodrugs  Bifunctional prodrugs
In einem ersten Aspekt richtet sich die vorliegende Erfindung auf neue Verbindungen, genauer auf neue bifunktionale Prodrugs und Drugs. In einem weite- ren Aspekt richtet sich die vorliegende Erfindung auf Antikörper-Verbindung- Konjugate, wobei die Verbindung eine erfindungsgemäße Verbindung ist sowie auf pharmazeutische Zusammensetzungen enthaltend die Verbindung beziehungsweise das Antikörper-Verbindung-Konjugat. Schließlich wird die Verwendung dieser Verbindung beziehungsweise der Antikörper-Verbindung- Konjugate gemäß der vorliegenden Erfindung zur Behandlung von Tumorerkrankungen insbesondere in Säugetieren beschrieben. In a first aspect, the present invention is directed to novel compounds, more particularly to novel bifunctional prodrugs and drugs. In a further aspect, the present invention is directed to antibody-compound conjugates wherein the compound is a compound of the invention and to pharmaceutical compositions containing the compound or the antibody-compound conjugate. Finally, the use of this compound or of the antibody-compound conjugates according to the present invention for the treatment of tumorous diseases, in particular in mammals, is described.
Stand der Technik State of the art
Die vielfältigen Erscheinungsformen der Krebserkrankung erfordern indi- viduelle Therapiekonzepte. Als Reaktion auf die Komplexität einer Tumorerkrankung stellen die meisten heute klinisch angewandten Behandlungsmethoden Kombinationen verschiedener Therapieansätze dar. Einerseits wird bei gut zugänglichen und klar umgrenzten Tumoren eine chirurgische Entfernung des entarteten Gewebes als die Methode der Wahl herangezogen. Ist der Tumor allerdings schwerer zugänglich oder betrifft es lebenswichtige Strukturen, so ist eine Strahlenbehandlung die Methode der Wahl . In einem fortgeschritteneren Stadium, in dem es bereits zur Bildung von Metastasen gekommen ist oder zumindest die Gefahr einer Metastasierung besteht, erfolgt meist umgehend eine Chemotherapie. Weiterhin werden die Methoden der Hormontherapie, der Immuntherapie sowie die Therapie mit Angiogenesehemmern und Kinaseinhibi- toren in der Tumortherapie verwendet.  The manifold manifestations of the cancer require individual therapy concepts. In response to the complexity of a tumor disease, most of today's clinically applied treatments are combinations of different therapeutic approaches. On the one hand, in well-accessible and well-defined tumors, surgical removal of degenerated tissue is used as the method of choice. However, if the tumor is more difficult to access or vital to structures, radiotherapy is the method of choice. In a more advanced stage, in which metastases have already formed or at least risk metastasizing, chemotherapy is usually performed immediately. Furthermore, the methods of hormone therapy, immunotherapy and therapy with angiogenesis inhibitors and kinase inhibitors are used in tumor therapy.
Im Fall einer bereits nachgewiesenen oder zu befürchteten Metastasie- rung sowie im Fall systemischer Tumoren ist die Chemotherapie die derzeit wichtigste Behandlungsmethode, obwohl sie oftmals mit schweren Nebenwirkungen, wie Störung des Blutbildes, Immunschwäche, Mucositis, Fieber, Übelkeit, Erbrechen, etc., verbunden ist. Üblicherweise werden die Chemotherapeu- tika über den Blutkreislauf in den gesamten Körper verteilt, so dass diese alle Zellen erreichen können. Chemotherapeutika wirken auf die menschlichen Zellen zytostatisch, d.h., sie verhindern die Zellvermehrung, oder sie wirken zytotoxisch, d .h ., sie bewirken das Absterben der Zellen. In the case of already proven or feared metastasis In the case of systemic tumors, chemotherapy is currently the most important treatment, although it is often associated with severe side effects such as blood disorder, immunodeficiency, mucositis, fever, nausea, vomiting, etc. Typically, the chemotherapeutic agents are distributed throughout the body through the bloodstream so that they can reach all cells. Chemotherapeutic agents have cytostatic effects on human cells, that is, they prevent cell proliferation, or they are cytotoxic, that is, they cause the cells to die.
Da die meisten Zytostatika ihren Wirkmechanismus bei proliferierenden Zellen aufzeigen und Tumorzellen zu den schnell proliferierenden Zellentypen gehören, werden sie als Chemotherapeutika verwendet. Allerdings sind auch die Nicht-Tumorzellen der behandelten Person betroffen, insbesondere solche des Knochenmarks, der Haarwurzeln oder Schleimhautzellen.  Since most cytostatics show their mechanism of action in proliferating cells and tumor cells are among the rapidly proliferating cell types, they are used as chemotherapeutic agents. However, the non-tumor cells of the treated person are also affected, especially those of the bone marrow, the hair roots or mucosal cells.
Die derzeit bekannten, in der Chemotherapie eingesetzten Zytostatika werden gemäß ihrer Wirkmechanismen in die Klassen Alkylantien, Antimetabo- litika, Mitosehemmstoffe, Topoisomerase-Hemmstoffe und zytostatische Antibiotika eingeteilt.  The currently known cytostatic agents used in chemotherapy are categorized according to their mechanisms of action in the classes of alkylating agents, antimetabolites, mitotic inhibitors, topoisomerase inhibitors and cytostatic antibiotics.
Die Alkylantien stellen eine zahlenmäßig bedeutende, strukturell sehr vielfältige Klasse äußerst reaktiver Substanzen dar. Nach einer gegebenenfalls vorhergehenden Aktivierung des Medikaments reagiert der Wirkstoff als elekt- rophil, insbesondere mit Nukleinsäuren unter Ausbildung kovalenter Bindungen. Als Folge treten Quervernetzungen der DNA, abnorme Basenpaarungen oder Strangbrüche auf, die eine Replikation verhindern und schließlich zum Zelltod führen. Typische Beispiele von Alkylantien sind Cyclophosphamid aber auch Cisplatin. Zu einer Gruppe der besonders wirksamen Alkylantien gehören darüber hinaus das natürliche Antibiotikum CC-1065, die Duocarmycine, das Yatakemycin sowie Derivate und Analoge dieser Naturstoffklasse.  The alkylating agents represent a numerically significant, structurally very diverse class of extremely reactive substances. After an optionally preceding activation of the medicament, the active ingredient reacts as an electropophile, in particular with nucleic acids to form covalent bonds. As a result, cross-linking of the DNA, abnormal base pairing or strand breaks occur that prevent replication and eventually lead to cell death. Typical examples of alkylating agents are cyclophosphamide but also cisplatin. In addition, a group of particularly effective alkylating agents include the natural antibiotic CC-1065, duocarmycins, yatakemycin, as well as derivatives and analogues of this class of natural products.
Aufgrund der Notwendigkeit chemotherapeutischer Behandlungen, der starken Nebenwirkungen eines Großteils klinisch verwendeten Wirkstoffe, so- wie dem Auftreten von Resistenzen gegen viele bekannte Chemotherapeutika, ist eine ständige Weiterentwicklung im Bereich der Chemotherapeutika notwendig.  Due to the need for chemotherapeutic treatments, the strong side effects of a majority of clinically used drugs, and the emergence of resistance to many known chemotherapeutic agents, continuous development in the field of chemotherapeutics is needed.
Eine Chemotherapie maligner Erkrankung ist heute mit schweren Ne- benwirkungen verbunden, da eine Differenzierung zwischen gesunden und malignen Gewebe lediglich über die gesteigerte Proliferationsrate von Krebszellen erfolgt. Es wurden daher neue Konzepte entwickelt, die genotypische und phänotypische Eigenschaften von Tumorzellen ausnutzen und eine gezielte Akti- vierung von reversiblen detoxifizierten Prodrug direkt am Wirkort ermöglichen. Eine solche gezielte Aktivierung kann z.B. durch einen geänderten pH-Wert, z.B. eine pH-Wert-Senkung, erfolgen. Eine weitere Möglichkeit ist das so genannte ADEPT-Konzept (Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapie). Hierbei werden Antikörper-Enzym-Konjugate genutzt, die direkt am Tumor eine Um- Wandlung des untoxischen Prodrugs in das Drug bewirkt und eine hohe Selektivität erzielen. Dieser binäre Therapieansatz besteht aus zwei Schritten. Zunächst wird eine bestimmte Menge eines Antikörper-Enzym-Konjugats appliziert, dieses wird dann durch den Blutkreislauf im gesamten Organismus verteilt. Das Konjugat bindet an spezifische Antigene auf Tumorzelloberflächen oder wird vom Körper abgebaut bzw. ausgeschieden. Wenn sich das ungebundene Antikörper-Enzym-Konjugat nicht mehr nachweisen lässt, erfolgt im zweiten Schritt die Applikation des Prodrugs. Das möglichst untoxische Prodrug wird ebenfalls im gesamten Organismus verteilt und aufgrund des idealerweise nur an der Tumoroberfläche in Form des Antikörper-Enzym-Konjugats vorhan- denen Enzyms gezielt im Tumorgewebe toxifiziert. Das freigesetzte Drug entfaltet dann nach Penetration durch die Zellmembran seine toxische Wirkung, während das Enzym an der Außenseite der Tumorzelle weiterhin aktiv bleibt und weitere Prodrug-Moleküle aktivieren kann . Eine Spaltung der Prodrugs durch körpereigene Enzymsysteme sollte im Rahmen dieses Ansatzes mög- liehst nicht erfolgen, da ansonsten die Aktivität der Therapie vermindert oder aufgehoben wäre. Nachteile bisher bekannter Prodrugs sind aber ein zu geringer Zytotoxitätsunterschied zwischen dem Prodrug und dem daraus generierten Drug sowie eine zu geringe Zytotoxität des gebildeten Drugs selbst. Chemotherapy for malignant disease is today associated with severe neoplasms. as differentiation between healthy and malignant tissue occurs only through the increased proliferation rate of cancer cells. Therefore, new concepts have been developed which exploit genotypic and phenotypic properties of tumor cells and enable a targeted activation of reversible detoxified prodrug directly at the site of action. Such a targeted activation can be done, for example, by a changed pH, for example a pH reduction. Another possibility is the so-called ADEPT concept (Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy). This antibody-enzyme conjugates are used, which causes a direct conversion of the non-toxic prodrug into the drug directly at the tumor and achieve high selectivity. This binary therapy approach consists of two steps. First, a certain amount of antibody-enzyme conjugate is applied, which is then distributed through the bloodstream throughout the organism. The conjugate binds to specific antigens on tumor cell surfaces or is degraded or excreted by the body. If the unbound antibody-enzyme conjugate can no longer be detected, the application of the prodrug takes place in the second step. The possibly non-toxic prodrug is likewise distributed throughout the organism and, due to the enzyme, which is ideally present only on the tumor surface in the form of the antibody-enzyme conjugate, is specifically toxified in the tumor tissue. The released drug then unfolds its toxic effect upon penetration through the cell membrane, while the enzyme remains active on the outside of the tumor cell and can activate further prodrug molecules. Cleavage of the prodrugs by the body's own enzyme systems should not be possible within the scope of this approach, since otherwise the activity of the therapy would be reduced or eliminated. Disadvantages of hitherto known prodrugs, however, are too low a cytotoxicity difference between the prodrug and the drug generated therefrom as well as a too low cytotoxicity of the drug itself.
Als Richtlinie bei der Entwicklung von Verbindungen für das ADEPT- Konzept gilt, dass der QICso-Wert (QICso = ICso (Prodrug)/ICso (Prodrug in Anwesenheit des Enzyms)) größer 1000 sein sollte und die Zytotoxität des zu Grunde liegenden Drugs einen ICso-Wert (Toxinkonzentration, bei der das Zellwachstum um 50% unterbunden wird) kleiner 10 nM aufweisen sollte. Ein weiterer Ansatz im Rahmen einer gezielten Behandlung maligner Tumoren stellt die Prodrug-Monotherapie dar. Diese basiert auf dem Vorliegen von in Tumoren überexprimierten Enzymen, die in der Lage sind, ein entsprechendes Prodrug unter Freisetzung des korrespondierenden Drugs zu spalten. Ein mögliches Enzym ist z.B. die ß-D-Glucuronidase, die in erhöhten Konzentrationen in nekrotischen Bereichen von Tumorgeweben nachgewiesen werden konnte. Alternativ können auch Konjugate aus Wirkstoffen und tumorspezifischen Liganden für ein selektives Targeting in der Krebstherapie verwendet werden. Hier kommt es nach einer selektiven Bindung des Liganden an einen Rezeptor auf der Tumoroberfläche zu einer Internalisierung des Konjugats und im Folgenden zu einer intrazellulären Freisetzung . As a guideline for the development of compounds for the ADEPT concept, the QICso value (QICso = ICso (prodrug) / ICso (prodrug in the presence of the enzyme)) should be greater than 1000 and the cytotoxicity of the underlying drug an ICso Value (toxin concentration at which cell growth is suppressed by 50%) should be less than 10 nM. A further approach in the context of a targeted treatment of malignant tumors is the prodrug monotherapy dar. This is based on the presence of overexpressed in tumors enzymes that are able to cleave a corresponding prodrug to release the corresponding drug. One possible enzyme is, for example, β-D-glucuronidase, which could be detected in elevated concentrations in necrotic areas of tumor tissues. Alternatively, conjugates of drugs and tumor-specific ligands can be used for selective targeting in cancer therapy. After selective binding of the ligand to a receptor on the tumor surface, internalization of the conjugate and, subsequently, intracellular release occur.
Weitere Verfahren neben dem oben beschriebenen ADEPT-Verfahren sind die dem Fachmann bekannten Verfahren PDEPT (Polymer-Directed Enzyme Prodrug-Therapy) oder MDEPT (Macromolecular-Directed Enzyme Pro- drug Therapy) sowie die VDEPT (Virus-Directed Enzyme Prodrug Therapy) o- der GDEPT (Gene-Directed Enzyme Prodrug Therapy). Insbesondere die beiden letzten genannten Verfahren stellen Möglichkeiten dar, die oben genannte Prodrug-Monotherapie zu verstärken.  Further methods in addition to the ADEPT method described above are the methods known in the art PDEPT (Polymer-Directed Enzyme Prodrug Therapy) or MDEPT (Macromolecular-Directed Enzyme Pro Drug Therapy) and the VDEPT (Virus-Directed Enzyme Prodrug Therapy) o- the GDEPT (Gene-Directed Enzyme Prodrug Therapy). In particular, the latter two methods provide opportunities to enhance the above-mentioned prodrug monotherapy.
Für das ADEPT-Konzept wurden bereits klinische Studien durchgeführt. Es zeigte sich, dass das ADEPT-Konzept per se für eine selektive Tumortherapie geeignet ist, das jedoch noch Verbesserungsbedarf hinsichtlich verschiedener Punkte besteht, um eine selektive und effiziente Therapie zu ermöglichen . Eine dieser wesentlichen Verbesserungspunkte umfasst die Bereitstellung neuer und effektiver Prodrugs, die einen hohen Zytotoxitätsunterschied zwischen dem Prodrug und dem korrespondierenden Drug, eine hohe Zytotoxi- tät des Drugs und eine kurze Plasmahalbwertszeit des Drugs aufweisen.  Clinical trials have already been conducted for the ADEPT concept. It turned out that the ADEPT concept per se is suitable for selective tumor therapy, but there is still room for improvement with regard to various points in order to enable a selective and efficient therapy. One of these significant improvement points is the provision of new and effective prodrugs that have a high cytotoxicity difference between the prodrug and the corresponding drug, a high cytotoxicity of the drug and a short plasma half-life of the drug.
Es besteht daher nach wie vor ein Bedarf entsprechende Prodrugs bereitzustellen, die zu dem Drug einen hohen Zytotoxitätsunterschied aufweisen und als Prodrug selbst eine geringe Zytotoxität aufzeigen. Der gebildete Wirk- stoff (Drug) selbst soll eine möglichst hohe Zytotoxität aufweisen.  There is therefore still a need to provide corresponding prodrugs which have a high cytotoxicity difference from the drug and, as a prodrug itself, exhibit low cytotoxicity. The drug itself should have the highest possible cytotoxicity.
Für Analoga des Antibiotikums CC-1065 und der Duocarmycine wurden verschiedenste Versuche durchgeführt, das oben genannte Ziel zu erreichen. Das CC-1065 selbst weist einen ICso-Wert von 20 pmol auf, führte aber in Tier- versuchen zu verzögerter letaler Hepatoxizität und ist daher für klinische Anwendungen nicht geeignet. Daher wurde versucht, entsprechende Analoga dieser Verbindung darzustellen . So wurde die DNA-Bindestruktureinheit verändert, aber auch des Pharmakophors selbst wurde in verschiedenster Form modifi- ziert. Darüber hinaus wurden seco- und Prodrug-Verbindungen synthetisiert, die im Allgemeinen ähnliche Toxitäten und Selektivitäten wie die Spirocyclop- ropylverbindungen, z.B. CC-1065 oder Duocarmycine aufweisen. So wurden CC-1065 Analoga beschrieben, die reversibel durch Glycosidierung des detoxi- fizierten anti-Methyl-seco-CBI-DMAI-ß-D-Galactosid (+)-(1 S, 1 OR)-Verbindung ein hervorragendes Ergebnis bezüglich der Zytotoxität und den Quotienten der Zytotoxität des Prodrugs und des Prodrugs in Anwesenheit des aktivierten Enzyms erzielen. Es wurden QICso-Werte von über 4500 erzielt. For analogues of the antibiotic CC-1065 and the duocarmycines various attempts have been made to achieve the above-mentioned goal. The CC-1065 itself has an IC 50 value of 20 pmol, but in animal try to delay lethal hepatotoxicity and is therefore not suitable for clinical applications. Therefore, attempts have been made to present analogs of this compound. Thus, the DNA binding moiety was changed, but also the pharmacophore itself was modified in various forms. In addition, seco and prodrug compounds have been synthesized which generally have similar toxicity and selectivities as the spirocyclopropyl compounds, eg CC-1065 or duocarmycins. Thus, CC-1065 analogues were described which reversibly give an excellent cytotoxicity result by glycosidation of the detoxified anti-methyl-seco-CBI-DMAI-β-D-galactoside (+) - (1S, 1 OR) compound and achieve the quotients of the cytotoxicity of the prodrug and the prodrug in the presence of the activated enzyme. QICso values of over 4500 were achieved.
Bifunktionale Alkylantien sind solche mit zwei reaktiven Zentren. Sie besitzen die Möglichkeit Intra- oder Interstrang-Quervernetzungen der DNA zu verursachen. In Bezug auf die Interstrang-Quervernetzungen werden besonders gute Schädigungen der Zellen und somit ein Zelltod erzielt. Diese Verbindungen weisen eine hohe Zytoxität auf. Bifunktionale Derivate von z.B. Pyrro- lobenzodiazidpine sind in der Literatur beschrieben.  Bifunctional alkylating agents are those with two reactive centers. They have the ability to cause intra- or interstrand cross-links of the DNA. With regard to the interstrand cross-linking, particularly good damage to the cells and thus cell death are achieved. These compounds have a high cytotoxicity. Bifunctional derivatives of e.g. Pyrrole benzodiazidepines are described in the literature.
Krebserkrankungen erfordern aufgrund ihrer vielfältigen Erscheinungs- formen stets individuelle Therapiekonzepte, wobei die meisten klinisch angewandten Methoden verschiedene Ansätze kombinieren. Drei Säulen der Krebsbehandlung sind„Stahl, Strahl und Chemotherapie". Bei soliden, gut zugänglichen und klar umgrenzten Neoplasien bietet eine chirurgische Entfernung („Stahl") die besten Heilungschancen und geringsten Nebenwirkungen. Ist der Tumor schwer zugänglich, betrifft er lebenswichtige Strukturen oder handelt es sich z.B. um Knochenmetastasen, so ist eine Strahlenbehandlung („Strahl", z.B. Radiotherapie mit Gammastrahlung oder radioaktiven Isotopen) angezeigt. Im fortgeschrittenen Stadium, in dem es bereits zur Bildung von Metastasen gekommen ist oder zumindest die Gefahr einer Metastasierung besteht, erfolgt meist umgehend eine Chemotherapie. Hierein haben auch neuere Therapieansätze wie z.B. die Behandlung mit Angiogenesehemmern und Kinase- inhibitoren sowie die Immun- und Hormontherapie Einzug gehalten . Chemotherapie Due to their diverse forms of appearance, cancer always requires individual therapy concepts, with most clinically applied methods combining different approaches. Three pillars of cancer treatment are "Steel, Ray and Chemotherapy." For solid, accessible and well-defined neoplasms, surgical removal ("steel") offers the best chance of recovery and the least side effects. If the tumor is difficult to access, if it concerns vital structures or if it concerns, for example, bone metastases, a radiation treatment ("beam", eg radiotherapy with gamma radiation or radioactive isotopes) is indicated, in an advanced stage, in which metastases have already formed If there is or at least a risk of metastasis, chemotherapy is usually carried out promptly, and new therapeutic approaches such as treatment with angiogenesis inhibitors and kinase inhibitors, as well as immune and hormone therapy have been introduced. chemotherapy
Die klassische antineoplastische Chemotherapie geht meist mit schweren Nebenwirkungen einher. Vorrangig kommt es zu Störungen in der Hämato- poese sowie im Gastrointestinaltrakt (Übelkeit, Erbrechen), zu Mucositis (Schleimhautentzündung), Alopezie (Haarausfall), Fieber, Immunschwäche, Infertilität und Teratogenität, was für Krebspatienten sowohl eine starke körperliche als auch psychische Belastung darstellt. Im Rahmen einer Chemotherapie werden Medikamente verabreicht, die sich über den Blutkreislauf im peripheren System verteilen und so nahezu alle Zellen erreichen können . Chemothe- rapeutika wirken auf menschliche Zellen entweder zytostatisch, d.h., sie verhindern das Zellwachstum, oder zytotoxisch, d.h ., sie führen den Zelltod herbei. Aufgrund ihrer Wirkmechanismen schädigen die meisten Substanzen bevorzugt schnell-proliferierende Zellen, die durch einen erhöhten Stoffwechsel die Wirkstoffe schneller aufnehmen . Hierzu gehört jedoch nicht nur ein Großteil der Tumorzellen, sondern auch nicht-maligne Zellen wie Knochenmark-, Haarwurzel- oder Schleimhautzellen. Da sie ebenso beeinträchtigt werden, sind meist die o.g. typischen Nebenwirkungen im Zusammenhang mit einer Chemotherapie zu beobachten.  Classic antineoplastic chemotherapy is usually associated with severe side effects. Primarily, there are disorders in the haematopoietis and in the gastrointestinal tract (nausea, vomiting), mucositis (mucosal inflammation), alopecia (hair loss), fever, immunodeficiency, infertility and teratogenicity, which represents a strong physical as well as psychological stress for cancer patients , As part of a chemotherapy drugs are administered, which can be distributed through the bloodstream in the peripheral system and so can reach almost all cells. Chemotherapeutics either act cytostatically on human cells, i.e. they prevent cell growth, or cytotoxic, that is, they cause cell death. Due to their mechanisms of action, most substances preferentially damage fast-proliferating cells, which absorb the active ingredients more quickly through increased metabolism. However, this not only includes a large part of the tumor cells, but also non-malignant cells such as bone marrow, hair root or mucous membrane cells. Since they are also affected, the o.g. to observe typical side effects associated with chemotherapy.
Die derzeit in der Krebstherapie eingesetzten Zytostatika werden gemäß ihrer Angriffspunkte im Zellzyklus in die Klassen Alkylantien, Antimetabolite, Mitosehemmstoffe, Topoisomerase-Hemmstoffe und zytostatische Antibiotika eingeteilt. Die strukturell sehr vielfältige Klasse der Alkylantien wirkt primär phasenunspezifisch. Häufig werden die Medikamente im Körper erst zum Car- bokation aktiviert, bevor sie mit N-, O- oder S-Nucleophilen in Proteinen oder insbesondere Nukleinsäuren reagieren und kovalente Bindungen ausbilden. Als Folge treten Quervernetzungen der DNA-Stränge (cross links), abnorme Basenpaarungen oder Strangbrüche auf, die eine Replikation und somit die Zellteilung behindern und schließlich zum Zelltod führen.  The cytostatics currently used in cancer therapy are classified according to their targets in the cell cycle in the classes of alkylating agents, antimetabolites, mitotic inhibitors, topoisomerase inhibitors and cytostatic antibiotics. The structurally very diverse class of alkylating agents acts primarily phase-unspecific. Frequently, the drugs in the body are first activated to undergo carbocation before they react with N, O or S nucleophiles in proteins or, in particular, nucleic acids and form covalent bonds. As a consequence, crosslinks of the DNA strands (cross links), abnormal base pairings or strand breaks occur, which impede replication and thus cell division and ultimately lead to cell death.
Wichtige Vertreter dieser Substanzklasse sind Stickstoff-Loste wie etwa Cyclophosphamid (1 ), das erst durch Biotransformationen im Körper in den eigentlichen Wirkstoff 2 überführt (Giftung) und daher als Prodrug bezeichnet wird (Fig. 1 a).  Important representatives of this class of substances are nitrogen vacancies, such as cyclophosphamide (1), which is converted into the actual active ingredient 2 only through biotransformations in the body (poisoning) and is therefore called a prodrug (FIG. 1 a).
Auch Platinkomplexe mit Cisplatin (3) (Fig. 1 a) als bekanntestem Vertre- ter gehören zur Klasse der Alkylantien und wirken vor allem durch Intra- oder Interstrang-Quervernetzungen der DNA. Darüber hinaus zählen ebenso das natürliche Antibiotikum CC-1065, die Duocarmycine, Yatakemycin sowie Derivate und Analoga dieser Naturstoffklasse zur Klasse besonders wirksamer Al- kylantien. Platinum complexes with cisplatin (3) (FIG. 1 a) as well-known representatives ter belong to the class of alkylating agents and act primarily by intra- or interstrand cross-links of DNA. In addition, the natural antibiotic CC-1065, duocarmycins, yatakemycin, as well as derivatives and analogues of this class of natural products are also classed as particularly effective alkylating agents.
Antimetabolite sind Strukturanaloga körpereigener Stoffwechselbausteine, die als Antagonisten die eigentlichen Metabolite verdrängen. Sie wirken phasenspezifisch bevorzugt in der S-Phase des Zellzyklus und hemmen wichtige Enzyme oder führen zur Entstehung funktionsuntüchtiger Makro- moleküle. Ein prominentes Beispiel ist der Folsäureantagonist Methotrexat (4), der als falsches Substrat die Dihydrofolat-Reduktase inhibiert und dadurch die Bildung von Tetrahydrofolsäure verhindert (Fig . 1 b). Diese ist wiederum u.a. essentiell für die Purinsynthese und damit für die Zellproliferation .  Antimetabolites are structural analogues of the body's own metabolite components, which, as antagonists, displace the actual metabolites. They act phase-specifically preferentially in the S-phase of the cell cycle and inhibit important enzymes or lead to the emergence of nonfunctional macro-molecules. A prominent example is the folic acid antagonist methotrexate (4), which as the wrong substrate inhibits dihydrofolate reductase and thereby prevents the formation of tetrahydrofolic acid (Figure 1 b). This is again u.a. essential for purine synthesis and thus for cell proliferation.
Mitosehemmstoffe (auch Spindelgifte genannt) greifen in die Mitosepha- se des Zellzyklus ein, indem sie an die ß-Einheit des Tubulindimers binden und dadurch entweder den Aufbau der Kernspindeln (z.B. Colchicin, Vincaalkaloide wie Vincristin (6) und Vinblastin (7), (Fig . 1 b) oder ihren Abbau (Taxol, Epothi- lon) blockieren. Infolge des gestörten Spindelapparates kann eine Kern- und Zellteilung nicht mehr stattfinden .  Mitosis inhibitors (also called spindle toxins) enter into the mitosis phase of the cell cycle by binding to the ß-unit of the tubulin dimer and thereby either the structure of the nuclear spindles (eg colchicine, vinca alkaloids such as vincristine (6) and vinblastine (7), ( 1 b) or their degradation (taxol, epothionon). As a result of the disturbed spindle apparatus, nuclear and cell division can no longer take place.
Eine weitere Klasse von Zytostatika besteht aus Hemmstoffen der Topoisomerasen I und II. Topoisomerasen wird die Aufgabe zuteil, während der DNA-Replikation die verdrillten Stränge zu entwinden, zu unterbrechen und anschließend wieder zu verschließen. Werden diese Enzyme gehemmt, können sie nicht mehr von der DNA abdissoziieren, wodurch Strangbrüche auftreten und schließlich der Zelltod herbeigeführt wird . Typische Vertreter dieser Substanzklasse sind Etoposid, Irinotecan und Derivate des Alkaloids Camptothecin (8) (Fig. 1 c).  Another class of cytostatics consists of inhibitors of topoisomerases I and II. Topoisomerases are assigned the task of unwinding, interrupting and then resealing the twisted strands during DNA replication. If these enzymes are inhibited, they can no longer dissociate from the DNA, causing strand breaks and eventually causing cell death. Typical representatives of this class of substances are etoposide, irinotecan and derivatives of the alkaloid camptothecin (8) (FIG. 1 c).
Zu den zytostatischen Antibiotika zählen in erster Linie die aus Strepto- myces-Arten isolierten Anthracycline Daunorubicin (9) und Doxorubicin (10) (Fig . 1 c), die bevorzugt in der S-Phase des Zellzyklus wirken. Sie interkalieren in die DNA und stören dadurch die DNA- und RNA-Synthese. Des weiteren können sie durch Radikalbildung und Hemmung der Topoisomerase I I Strangbrüche induzieren . Der klinische Benefit bei der Krebsbehandlung konnte durch die Anwendung von Chemotherapeutika maßgeblich gesteigert werden, insbesondere in Fällen chirurgisch schwer zugänglicher Neoplasien oder bei Metastasenbildung. Allerdings bringt eine Chemotherapie neben den zum Teil schweren akuten Nebenwirkungen, die unter Umständen einen Abbruch der Therapie erfordern, häufig auch Spätfolgen mit sich. Hierzu zählen die Induktion von Sekundärtumoren, Schädigungen des Knochenmarks, Lungenfibrosen oder Immundefekte. Ein weiteres Problem stellt die Resistenzentwicklung von Tumoren gegen einzelne Zytostatika oder -klassen dar, die aufgrund der natürlichen Se- lektion resistenter Zellen während einer Behandlung auftritt. The cytostatic antibiotics include, first and foremost, the anthracyclines daunorubicin (9) and doxorubicin (10) isolated from Streptomyces species (FIG. 1 c), which preferentially act in the S phase of the cell cycle. They intercalate into DNA, interfering with DNA and RNA synthesis. Furthermore, they can induce strand breaks by radical formation and inhibition of topoisomerase II. The clinical benefit in the treatment of cancer has been significantly increased by the use of chemotherapeutic agents, especially in cases of surgically difficult to reach neoplasias or metastases. However, chemotherapy in addition to the sometimes severe acute side effects that may require a discontinuation of therapy, often brings long-term consequences. These include the induction of secondary tumors, damage to the bone marrow, pulmonary fibrosis or immune deficiencies. A further problem is the development of resistance of tumors to individual cytostatic agents or classes, which occurs due to the natural selection of resistant cells during treatment.
Trotz der schweren Sekundäreffekte und Resistenzen hat sich die Chemotherapie als unentbehrliche Behandlungsmethode etabliert. Gerade deswegen ist jedoch auch eine ständige Weiterentwicklung vorhandener Therapieansätze und Wirkstoffe notwendig, mit erhöhter Selektivität und somit weniger Nebenwirkungen als primärem Ziel .  Despite the severe secondary effects and resistances, chemotherapy has become established as an indispensable method of treatment. Precisely because of this, however, a constant further development of existing therapy approaches and active substances is necessary, with increased selectivity and thus fewer side effects as the primary target.
Immuntherapie immunotherapy
Als vierte und jüngste Säule der Krebsbehandlung hat sich die Immuntherapie entwickelt. Hierfür werden beispielsweise Cytokine oder Antikörper verwendet, die immunmodulierende oder direkte antiproliferative Eigenschaften aufweisen. Eine tragende Rolle übernehmen dabei die charakteristischen Zelloberflächen der verschiedenen Zelltypen.  Immunotherapy has become the fourth and most recent pillar of cancer treatment. For this purpose, for example, cytokines or antibodies are used which have immunomodulating or direct antiproliferative properties. A key role is played by the characteristic cell surfaces of the different cell types.
Auf der extrazellulären Seite einer jeden Zellmembran findet sich die Glykokalyx, welche aus Glykolipiden, Glykoproteinen und Glykosaminoglyka- nen besteht und u.a. der Zellerkennung, Kommunikation und Signalaufnahme dient. Bestimmte Bestandteile der Glykokalyx fungieren hierbei als Antigene, die - auf der Oberfläche präsentiert - z.B. spezifisch für Krebszellen sind (spezifische Antigene) oder in Tumorzellen im Vergleich zu gesunden Zellen über- exprimiert werden (tumorassoziierte Antigene). Eben diese Antigene stellen den zentralen Ansatzpunkt einer Immuntherapie dar: Monoklonale Antikörper können selektiv an die Antigene binden, somit die Krebszellen gezielt markieren und anschließend selbst oder als Konjugat die maligne Entartung zerstören. Diese 1975 von Köhler und Milstein erstmals hergestellten Immunglobuline sind heute standardmäßig mit Hilfe der Hybridomtechnik zugänglich. Bekannte Vertreter Antitumor-aktiver Antikörper sind Trastuzumab gegen HER2/neu- positive Mammakarzinome sowie Bevacizumab als Angiogeneseinhibitor. Figur 2 zeigt einige Beispiele für die Immuntherapie maligner Tumore. Eine Möglich- keit ist, das Immunglobulin mit Zytokinen (z.B. lnterleukin-2, IL-2) zu kuppeln, wobei das resultierende Immunzytokin dann die körpereigene Immunabwehr am Tumor auslöst (A). Des Weiteren können Antikörper mit T-Lymphozyten verknüpft werden, was eine direkten Zytolyse der Tumorzelle bewirkt (B). Die Verschmelzung von Krebszellen mit Antigen-präsentierenden Zellen ist ein wei- terer Ansatz, um die körpereigene Immunabwehr zur Zerstörung von Neoplasien zu mobilisieren. Die erhaltenen Hybride exprimieren auf ihrer Oberfläche verstärkt tumorassoziierte Antigene und aktivieren somit zytotoxische Lymphozyten (CTL), die - stimuliert durch die Tumorantigen-präsentierenden Hybride - Krebszellen mit identischen Antigenen eliminieren. Ein vergleichbarer Effekt kann auch durch das Beladen dendritischer Zellen (DZ) mit Tumorproteinen, - Peptiden oder -DNA erzielt werden (C). On the extracellular side of each cell membrane is the glycocalyx, which consists of glycolipids, glycoproteins and glycosaminoglycans and serves, inter alia, for cell recognition, communication and signal acquisition. Certain components of the glycocalyx function here as antigens which - presented on the surface - are specific for cancer cells (specific antigens) or are over-expressed in tumor cells in comparison to healthy cells (tumor-associated antigens). These antigens represent the central starting point of an immunotherapy: Monoclonal antibodies can selectively bind to the antigens, thus selectively marking the cancer cells and then destroy itself or as a conjugate malignant degeneration. This 1975 by Köhler and Milstein first produced immunoglobulins are now available by default with the help of hybridoma technology. Known representatives of antitumor-active antibodies are trastuzumab against HER2 / neu-positive breast carcinomas and bevacizumab as an angiogenesis inhibitor. FIG. 2 shows a few examples of the immunotherapy of malignant tumors. One possibility is to couple the immunoglobulin with cytokines (eg interleukin-2, IL-2), the resulting immunocytokine then triggering the body's own immune defense on the tumor (A). Furthermore, antibodies can be linked to T lymphocytes, causing direct cytolysis of the tumor cell (B). The fusion of cancer cells with antigen-presenting cells is another approach to mobilizing the body's own immune system to destroy neoplasms. The resulting hybrids express more tumor-associated antigens on their surface and thus activate cytotoxic lymphocytes (CTL), which - stimulated by the tumor antigen-presenting hybrids - eliminate cancer cells with identical antigens. A comparable effect can also be achieved by loading dendritic cells (DZ) with tumor proteins, peptides or DNA (C).
Eine andere Therapieform, die ebenfalls auf großes Interesse gestoßen ist, verwendet Antikörper-Drug-Konjugate (ADC) (E). Unter Ausnutzung der An- tikörper-Spezifität können im Idealfall gezielt Toxine zum Tumor geleitet wer- den, ohne dabei gesundes Gewebe zu schädigen. Gemtuzumab-Ozogamicin (Mylotarg®, Konjugat aus Antikörper gegen CD-33 und einem Calicheamicin- Derivat) war der erste Wirkstoff dieses Typs mit Marktzulassung (USA), die allerdings im Herbst 201 0 wegen schwerwiegender Nebenwirkungen wie Myelo- suppression aufgehoben wurde. Die beiden neueren Präparate Adcetris und Kadcycla mit MMAE und DM1 als Toxine wurden kürzlich zugelassen. Den An- tikörper-Drug-Konjugaten gegenüber steht das ADEPT-Konzept (antibody- directed enzyme prodrug therapy). Dort werden Antikörper-Enzym-Konjugate verwendet, die reversibel detoxifizierte Wirkstoffe (Prodrugs) selektiv an der Krebszelle in zytotoxische Drugs überführen (D). Darüber hinaus existiert die Radioimmuntherapie, die Antikörper mit radioaktiven Isotopen (131 l, 90Y) kuppelt (F). Dieser Ansatz wird nicht nur in der Tumortherapie, sondern auch in der Diagnostik angewandt und ermöglicht dort u.a. die Lokalisation von Metastasen. Wesentliche Probleme bei der Entwicklung von Antikörper-Drug- Conjugates ist zum einen die häufig zu niedrige Zytotxizität des verwendeten Toxins und die systemische Toxizität des Conjugates. Ein verfolgter Lösungsansatz ist die Verwendung von relativ untoxischen Prodrugs des hoch- toxischen Duocarmycins die nach Aufnahme in die Zelle das Toxin freisetzen. Grundlage für die Arbeiten sind den vorliegenden Erfindern uns entwickelte „dimere Duocarmycin-Analoga, in den denen zwei CBI-Einheiten über eine Di- amid-Bindung mit Dicarbonsäuren verknüpft sind. Derartige Verbindungen haben eine IC50 von bis zu 150 fMol und stellen damit die cytotoxischen Verbin- düngen dar, die bekannt. Allerdings sind diese Verbindungen nicht geeignet einen monoklonalen Antikörper anzubinden, da sie keine entsprechenden Funktionalitäten aufweisen. Kürzlich wurden zahlreiche dimere Duocarmycine vorgestellt, die über einen Linker an einen monoklonalen Antikörper gebunden werden können. Diese Verbindungen haben jedoch alle eine hohe systemische Toxizität und sind den bekannten ADC in keiner Weise überlegen. Another form of therapy that has also met with great interest is antibody-drug conjugate (ADC) (E). Taking advantage of antibody specificity, toxins can ideally be targeted to the tumor without harming healthy tissue. Gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg ®, conjugate of antibodies against CD 33 and a Calicheamicin- derivative) was the first drug of this type with MA (USA), which has been somewhat diminished suppression in the fall 201 0 because of serious side effects such as myeloperoxidase. The two newer drugs Adcetris and Kadcycla with MMAE and DM1 as toxins were recently approved. The antibody-drug conjugates are complemented by the ADEPT concept (antibody-directed enzyme prodrug therapy). There, antibody-enzyme conjugates are used, which convert reversibly detoxified drugs (prodrugs) selectively at the cancer cell into cytotoxic drugs (D). In addition, radioimmunotherapy, which couples antibodies to radioactive isotopes ( 131 l, 90 Y), exists (F). This approach is used not only in tumor therapy, but also in diagnostics, where it enables, among other things, the localization of metastases. Significant problems with the development of antibody-drug conjugates on the one hand are the cytotoxicity of the toxin and the systemic toxicity of the conjugate, which is often too low. One approach pursued is the use of relatively non-toxic prodrugs of the highly toxic duocarmycin which release the toxin after being taken up into the cell. The work is based on the dimeric duocarmycin analogues developed by the present inventors, in which two CBI units are linked to dicarboxylic acids via a diamide bond. Such compounds have an IC50 of up to 150 fmol and thus constitute the cytotoxic compounds known. However, these compounds are not suitable to bind a monoclonal antibody, since they have no corresponding functionalities. Recently, numerous dimeric duocarmycins have been proposed, which can be linked to a monoclonal antibody via a linker. However, these compounds all have high systemic toxicity and are in no way superior to the known ADC.
Die Verwendung von Antibody Drug Conjugates (ADCs) ist eine neuartiger Ansatz zur Verbesserung der Krebstherapie. So ist das generelle Problem bei der Behandlung von malignen Tumoren, dass die verfügbaren Chemotherapeutika nur ein verhältnismäßig kleines therapeutisches Fenster aufweisen und es daher zum Auftreten von massiven Nebenwirkungen kommt. Um die Dosis limitierende Toxizität zu verringern, ist es erforderlich Substanzen zu entwickeln, die eine selektive Zerstörung der Krebszellen durch eine verbesserte Diskriminierung zwischen normalen und malignen Zellen haben . Hierzu sind im Prinzip ADCs geeignet, bei denen üblicherweise ein zytotoxisches kleines Molekül mit einem monoklonalen Antikörper verknüpft ist, der an tumorassoziierte Antigene bindet. Dadurch wird es möglich über ein sogenanntes Targeting das Toxin selektiv in eine Krebszelle einzuschleusen ohne normale Zellen anzugreifen. Allerdings müssen für eine gute Wirksamkeit und Verträglichkeit gewisse Voraussetzungen erfüllt sein. So ist es erforderlich, dass das Toxin einen hohen ICso-Wert von < 1 nmol, aber das Konjugat mit dem Antikö- per nur eine geringe Toxizität aufweist. Dies ist in vielen Fällen nicht gewährleistet.  The use of Antibody Drug Conjugates (ADCs) is a novel approach to improving cancer therapy. Thus, the general problem in the treatment of malignant tumors is that the available chemotherapeutic agents have only a relatively small therapeutic window and therefore there are massive side effects. In order to reduce dose-limiting toxicity, it is necessary to develop substances that have selective destruction of the cancer cells through improved discrimination between normal and malignant cells. For this purpose, in principle ADCs are suitable in which usually a cytotoxic small molecule is linked to a monoclonal antibody which binds to tumor-associated antigens. This makes it possible via a so-called targeting the toxin selectively infiltrate into a cancer cell without attacking normal cells. However, certain conditions must be met for good efficacy and tolerability. Thus, it is necessary for the toxin to have a high IC 50 value of <1 nmol, but the conjugate with the antibody has only a low toxicity. This is not guaranteed in many cases.
Der verwendete monoklonalen Antiköper sollte zudem nicht an das Epithel von Normalzellen binden . Weitere Schwierigkeiten liegen in der Wahl des Linkers, der zum einen stabil genug sein muss, dass das Toxin nicht im Serum freigesetzt wird, aber labil genug ist, dass er nach Endocytose des Kon- jugats in der Zelle abgespalten wird . Ein weiteres Problem liegt in der Redukti- on der Zytotoxizität des verwendeten Toxins durch Einführung von Funktionalitäten, die eine Anbindung an den monoklonalen Antikörper ermöglichen. In einem der aussichtsreichsten ADCs der ersten Generation mit einem Doxorubicin als Toxin und einem Lewis Y-Antikörper lässt sich die Problematik sehr gut nachvollziehen. So waren in diesem Fall die zu geringe Zytoxizität des Doxorubicin, die zu geringe Stabilität des Linkers und die zu geringe Selektivität des Antiköpers für das Scheitern der Verbindung in den klinischen Untersuchungen verantwortlich. Neben den beiden zugelassenen Verbindungen, Adcetris und Kadcyla,. sind weitere Substanzen mit Calicheamicin, MMAE, DM1 und DM4 als Toxine in der klinischen Prüfung . Substanzen, die ein Duo- carmycin oder eine verwandte Verbindung enthalten, gehören nicht dazu. In der WO201 5023355 werden u.a. Konjugate mit bifunktionalen Duocarmycin- Analoga offenbart. Diese Verbindungen zeigen jedoch nur eine mäßige Wirksamkeit; dies ist vermutlich auf die hohe Toxizität des Konjugats und die vergleichsweise geringe Zytotoxität des verwendenden Toxins zurückzuführen, das durch die erfolgte Derivatisierung an Wirksamkeit verloren hat. The monoclonal antibody used should also not be attached to the Epithelium of normal cells bind. Further difficulties lie in the choice of linker, which on the one hand needs to be stable enough that the toxin is not released in the serum, but is labile enough that it is cleaved off in the cell after endocytosis of the conjugate. Another problem lies in the reduction of the cytotoxicity of the toxin used by introducing functionalities that allow a connection to the monoclonal antibody. In one of the most promising ADCs of the first generation with a doxorubicin as toxin and a Lewis Y antibody, the problem can be understood very well. In this case, too little cytotoxicity of doxorubicin, too low stability of the linker and the lack of selectivity of the antibody for the failure of the compound in the clinical investigations were responsible. In addition to the two approved compounds, Adcetris and Kadcyla ,. are further substances with calicheamicin, MMAE, DM1 and DM4 as toxins in the clinical trial. Substances that contain a duo-carmycin or a related compound are not included. In WO201 5023355, inter alia, conjugates with bifunctional duocarmycin analogs are disclosed. However, these compounds show only moderate activity; this is presumably due to the high toxicity of the conjugate and the comparatively low cytotoxicity of the toxin used, which has lost its effectiveness as a result of the derivatization carried out.
In der WO2007089149 werden Konjugate mit monofunktionalen Duocarmycin-Analoga offenbart. Im Vergleich zu den bifunktionalen Analoga haben diese Verbindungen den Nachteil der geringeren Zytotoxizität.  WO2007089149 discloses conjugates with monofunctional duocarmycin analogs. Compared to the bifunctional analogs, these compounds have the disadvantage of lower cytotoxicity.
Aus der DE 10 2009 051 799 A1 sind Verbindungen bekannt, die bifunk- tionale Alkylantien (Duocarmycin-Analoga) insbesondere zur Anwendung in der selektiven Tumortherapie darstellen. Die dort beschriebenen Verbindungen zeichnen sich dadurch aus, dass sie als Dimere zytotoxischer als die monomeren Prodrugs oder Drugs sind. Ein Nachteil dieser Verbindungen ist, dass sie keine geeigneten Verknüpfungen zu Antikörper-Verbindung-Konjugate bereit- stellen. Weiterhin erfolgt bei den dort beschriebenen Verbindungen die Umwandlung der Prodrugs zu Drugs (nur) mittels enzymatisch abspaltbaren Gruppen.  DE 10 2009 051 799 A1 discloses compounds which are bifunctional alkylating agents (duocarmycin analogues), in particular for use in selective tumor therapy. The compounds described therein are distinguished by the fact that they are more cytotoxic as dimers than the monomeric prodrugs or drugs. A disadvantage of these compounds is that they do not provide suitable linkages to antibody-compound conjugates. Furthermore, in the compounds described there, the conversion of the prodrugs to drugs (only) by means of enzymatically cleavable groups.
In der WO 2015/1 10935 A1 wird eine Vielzahl von bifunktionalen cytoto- xischen Mitteln beschreiben . Diese umfassen CPI-Prodrugs und CBI-Prodrugs.WO 2015/1 10935 A1 discloses a multiplicity of bifunctional cytotoxic describe xic means. These include CPI prodrugs and CBI prodrugs.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung neuer Verbindungen geeignet zur Herstellung von Konjugaten mit zum Beispiel Antikörpern, um die Verbindungen in Form von Prodrugs an die entsprechenden Therapie- ziele zu steuern, zum Beispiel den Zielzellen. Es besteht nach wie vor ein Bedarf an für Chemotherapeutika geeignete Drugs und Prodrugs, die zielgerichtet diese an die Zielgebiete, zum Beispiel die Zielzellen bringt. The object of the present invention is to provide novel compounds suitable for the preparation of conjugates with, for example, antibodies, in order to control the compounds in the form of prodrugs to the corresponding therapeutic targets, for example the target cells. There is still a need for chemotherapeutic drugs and prodrugs that will target them to the target areas, such as the target cells.
Beschreibung der Erfindung Description of the invention
Erfindungsgemäß werden neue Verbindungen bereitgestellt, die bifunkti- onale Alkylantien insbesondere zur Anwendung in einer selektiven Tumortherapie darstellen. Die hierin beschriebenen neuen Verbindungen zeichnen sich dadurch aus, dass diese neuen Dimere zytotoxischer als die monomeren Prodrugs oder Drugs sind. Üblicherweise ist der ICso-Wert der erfindungsgemäßen Verbindungen im pmol-Bereich. Des Weiteren wird ein viel größerer QICso-Wert erzielt. D.h ., der Quotient zwischen Zytotoxität des Drugs und der Zytotoxität des Prodrugs ist wesentlich größer. Damit kann eine bessere therapeutische Effektivität verbunden mit einer geringeren Zytotoxität des Prodrugs und damit geringeren Nebenwirkungen bei Applikationen bei den Patienten erreicht werden.  According to the invention, new compounds are provided which represent bifunctional alkylating agents in particular for use in a selective tumor therapy. The novel compounds described herein are characterized by the fact that these new dimers are more cytotoxic than the monomeric prodrugs or drugs. Usually, the IC 50 value of the compounds according to the invention is in the pmol range. Furthermore, a much larger QICso value is achieved. That is, the quotient between cytotoxicity of the drug and the cytotoxicity of the prodrug is much greater. Thus, a better therapeutic effectiveness associated with a lower cytotoxicity of the prodrug and thus lower side effects in applications in patients can be achieved.
In einem ersten Aspekt werden Verbindungen der allgemeinen Struktur In a first aspect, compounds of the general structure
A-L-B bereitgestellt, A-L-B provided,
wobei A und B unabhängig voneinander ausgebildet sind aus der Struktur I wherein A and B are formed independently of each other from the structure I.
R, R
G Struktur I G Structure I
worin Hai ein Halogenid ist ausgewählt aus F, Cl, Br, I; wherein Hal is a halide selected from F, Cl, Br, I;
R ist H oder eine gegebenenfalls substituierte Ci - C4 Alkylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Ci - C4 Alkoxygruppe, einen gegebenenfalls substitu- ierte Arylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Heteroarylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Ci - C4 Alkylcarboxy- Ci - C4 alkylgruppe, Hai, CN, eine gegebenenfalls subsituierte Ci - C4 Alkylsulfanylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Arylsulfanylgruppe, eine NRZ Gruppe wie unten definiert; R is H or an optionally substituted C 1 -C 4 -alkyl group, an optionally substituted C 1 -C 4 -alkoxy group, an optionally substituted aryl group, an optionally substituted heteroaryl group, an optionally substituted C 1 -C 4 -alkylcarboxy-C 1 -C 4 -alkyl group, halo, CN, a optionally subsituierte Ci - C4 alkylsulfanyl group, an optionally substituted Arylsulfanylgruppe, an NR group Z as defined below;
Ri ist H oder eine Ci - C4 Alkylgruppe oder eine Ci - C4 Alkoxygruppe; Ri is H or a Ci - C4 alkyl group or a Ci - C4 alkoxy group;
Xi ist O, S, N R5, wobei R5 ausgewählt ist aus H und gegebenenfalls substituierten Ci - C4 Alkyl; Xi is O, S, N R5, wherein R5 is selected from H and optionally substituted Ci - C4 alkyl;
R2 ist ausgewählt aus Wasserstoff oder einem abspaltbaren Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat;  R2 is selected from hydrogen or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate;
G ist unabhängig voneinander abwesend, Wasserstoff oder eine funktionale Gruppe, insbesondere ausgewählt aus einer Alkingruppe, einer Aminogruppe, einer Hydroxylgruppe, einer Thiolgruppe, einer Carboxylgruppe, einer Azid- gruppe oder einer Polyglycingruppe, wobei G als funktionale Gruppe mindestens einmal in der Verbindung A-L-B vorliegt; G is independently absent, hydrogen or a functional group, in particular selected from an alkyne group, an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, a carboxyl group, an azide group or a polyglycine group, wherein G is present as a functional group at least once in the compound ALB ;
L ist eine Verbindungsgruppe zur kovalenten Verbindung von A und B, wobei L die Struktur Z-Y-Z' aufweist;  L is a linking group to the covalent bond of A and B, where L has the structure Z-Y-Z ';
mit Z und Z' unabhängig voneinander ausgewählt aus C=O, OC=O, SO2, NRZ, NRzC=O, C=ON Rz, wobei jedes Rz unabhängig voneinander ausgewählt ist aus Wasserstoff und gegebenenfalls substituierten Ci - C4 Alkyl oder gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Acyl; with Z and Z 'independently selected from C = O, OC = O, SO 2, NR Z , NRzC = O, C = ON R z, wherein each Rz is independently selected from hydrogen and optionally substituted Ci - C4 alkyl or optionally substituted C1 - C4 acyl;
wobei Y ausgewählt ist aus einer Struktur gemäß Struktur II I oder Struktur IV; Struktur II I wherein Y is selected from a structure according to structure II I or structure IV; Structure II I
Struktur IV Structure IV
R4 R 4
G ^  G ^
wobei jedes RA unabhängig voneinander ausgewählt ist aus Wasserstoff oder gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Alkyl oder gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Acyl; wherein each RA is independently selected from hydrogen or optionally substituted C1 - C4 alkyl or optionally substituted C1 - C4 acyl;
o und p sind unabhängig voneinander ausgewählt aus einer ganzen Zahl von 1 bis 20; wobei o und p den gleichen Wert oder einen unterschiedlichen Wert annehmen können. o and p are independently selected from an integer of 1 to 20; where o and p can take the same value or a different value.
G ist wie oben definiert; G is as defined above;
X2 ist i) N oder S oder ii) eine Aryl- oder Heteroarylgruppe, wobei (CRA)O und (CRA)P in Metaposition an dieser Arylgruppe oder an dieser Heteroarylgruppe angeordnet sind,  X 2 is i) N or S or ii) an aryl or heteroaryl group, wherein (CRA) O and (CRA) P are arranged in metaposition on this aryl group or on this heteroaryl group,
R3 ist ausgewählt aus C1 - C10 Alkyl, wie C1 - C4 Alkyl; Co - C4 Alkylaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie Co - C4 Alkylaryl Co - C4 Alkylgruppe; Co - C4 Alkylhe- teroaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie Co - C4 Alkylheteroaryl Co - C4 Alkylgruppe; oder einem abspaltbaren Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat; oder ist nicht vorhanden; R3 is selected from C1 - C10 alkyl such as C1 - C4 alkyl; Co - C4 alkylaryl Co - C10 alkyl group such as Co - C4 alkylaryl Co - C4 alkyl group; Co - C4 Alkylhe- teroaryl Co - C10 alkyl group, such as Co - C4 alkylheteroaryl Co - C4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate; or is not present;
R4 ist i) abwesend oder eine C1 - C10 Alkylgruppe, wie eine C1 - C4 Alkylgrup- pe; eine Co - C4 Alkylaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie Co - C4 Alkylaryl Co - C4 Alkylgruppe; eine Co - C4 Alkylheteroaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie Co - C4 Alkylheteroaryl Co - C4 Alkylgruppe; oder ein abspaltbares Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat, wenn X2 N oder S ist, oder ii) R4 ist eine C1 - C10 Alkylgruppe, wie eine C1 - C4 Alkylgruppe; oder ein abspaltbares Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat; oder ist abwesend wenn X2 eine Aryl- oder Heteroa- rylgruppe ist;  R4 is i) absent or a C1 - C10 alkyl group, such as a C1 - C4 alkyl group; a Co - C4 alkylarylCo - C10 alkyl group such as Co - C4 alkylarylCo - C4 alkyl group; a Co - C4 alkylheteroaryl Co - C10 alkyl group, such as Co - C4 alkylheteroaryl Co - C4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a chemical cleavable substrate, when X 2 is N or S, or ii) R 4 is a C 1 -C 10 alkyl group, such as a C 1 -C 4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate; or is absent if X2 is an aryl or heteroaryl group;
und pharmazeutisch-annehmbare Salze oder pharmazeutisch-annehmbare Solvate hiervon. and pharmaceutically-acceptable salts or pharmaceutically-acceptable solvates thereof.
Vorliegend werden glykosidische Prodrugs von dimeren Duocarmycin eingesetzt, die selbst nur eine geringe Toxizität aufweisen, und deren Wirksamkeit nach Aufnahme in die Zelle durch Abspaltung der Zuckerkomponente entwickelt wird . Gleiches gilt für Prodrugs bei denen durch Umsetzung mit der phenolischen Hydroxylgruppe die Zytotoxizität herabgesetzt wird, z.B. durch eine Methylgruppe oder eine Benzylgruppe.  In the present case, glycosidic prodrugs of dimeric duocarmycin are used, which in themselves have only low toxicity, and whose activity after ingestion into the cell is developed by elimination of the sugar component. The same applies to prodrugs in which the cytotoxicity is reduced by reaction with the phenolic hydroxyl group, e.g. by a methyl group or a benzyl group.
Für die erfindungsgemäße Anknüpfung der Toxine und deren Vorstufen (Drugs und Prodrugs) mit monoklonalen Antikörpern gibt es mehrere Möglichkeiten.  There are several possibilities for the attachment according to the invention of the toxins and their precursors (drugs and prodrugs) with monoclonal antibodies.
Generell unterscheidet man zwei grundsätzliche Ansätze:  In general, one differentiates between two basic approaches:
1 . Verwendung von nicht spaltbaren Linkern. Hierbei geht man davon aus, dass nach Aufnahme des ADC in die Zelle und Transport in das Lysosom ein vollständiger Abbau des Antikörpers mit Hilfe von Proteinasen und verwandten Enzymen erfolgt. Es verbleibt das Toxin beziehungsweise dessen Prodrug mit einer funktionellen Gruppe, an die der Antikörper gebunden war.  1 . Use of non-cleavable linkers. It is believed that after uptake of the ADC into the cell and transport into the lysosome, complete degradation of the antibody occurs by means of proteinases and related enzymes. It remains the toxin or its prodrug with a functional group to which the antibody was bound.
2. Verwendung von spaltbaren Linkern, wobei eine Spaltung beispielsweise über eine säurekatalysierte Hydrolyse, eine enzymatische Transformation oder eine Glutathion induzierte Spaltung von Disulfiden erfolgen kann. So liegt der pH-Wert im Lysosom bei 4.8 während im Cytosol ein pH-Wert = 7.4 gefunden wird. Säurelabile Linker können Hydrazon-, Acetal-, Enolether- und Azome- thin-Funktionen enthalten. Für einen enzymatisch spaltbaren Linker kommen Verbindungen in Frage, die Zuckerkomponenten enthalten oder das Dipeptid Valine-Citrulline, das durch Cathepsin B gespalten werden kann, das intrazel- lulär stark exprimiert ist. Die Glutathion vermittelte reduktive Spaltung eines2. Use of cleavable linkers, wherein a cleavage can be carried out, for example, via an acid-catalyzed hydrolysis, an enzymatic transformation or a glutathione-induced cleavage of disulfides. Thus, the pH in the lysosome is 4.8 while in the cytosol a pH = 7.4 found becomes. Acid labile linkers can contain hydrazone, acetal, enol ether, and azomethine functions. For an enzymatically cleavable linker, compounds containing sugar components or the dipeptide valine-citrulline, which can be cleaved by cathepsin B, which is strongly expressed intracellularly are suitable. The glutathione mediated reductive cleavage of a
Disulfid-Linkers beruht auf dem Befund, dass Glutathion intrazellulär in weit höheren Konzentrationen vorkommt als extrazellulär. Disulfide linkers are based on the finding that glutathione occurs intracellularly in much higher concentrations than extracellularly.
Die erfindungsgemäße Anknüpfung von Antikörpern an den Linker kann über die Addition einer Lysin-Nh -Gruppe oder eine Cystein-SH-Gruppe an eine Ma- leimidocaproyl-, einer Maleimidomethylcyclohexanecaboxylate-, einer Ma- leimidodioxacaproyl-Funktion oder vergleichbarer Funktionalitäten erfolgen. Weitere Anbindungen sind über die Verknüpfung von zwei Aminofunktionalitä- ten mit Quadratsäurediethylester und vergleichbaren Funktionalitäten unter Bil- dung eines Diamids möglich. Auch die Addition von Nucleophilen an α,β- ungesättigte Carbonylverbindungen ist eingesetzt worden. Eine weitere Verknüpfungsmethode ist die 1 ,3-dipolare Cycloaddition von Linkern mit einer Alkin- bzw. einer Azid-Gruppe mit Antikörpern, die eine Azid- bzw. eine Alkin- Gruppe tragen. Schließlich kann auch eine enzymatisch induzierte Verknüp- fung von Polyglycin substituierten Toxinen beziehungsweise Vorstufen hiervon (Prodrug) mit Hilfe einer Sortase an einen Antikörper erfolgen . The attachment of antibodies according to the invention to the linker can be effected via the addition of a lysine-Nh group or a cysteine-SH group to a maleimidocaproyl, a maleimidomethylcyclohexanecarboxylate, a maleimidodioxacaproyl function or comparable functionalities. Further connections can be made by linking two amino functionalities with diethyl squarate and comparable functionalities to form a diamide. The addition of nucleophiles to α, β-unsaturated carbonyl compounds has also been used. Another linkage method is the 1, 3-dipolar cycloaddition of linkers with an alkyne or an azide group with antibodies that carry an azide or an alkyne group. Finally, an enzymatically induced linkage of polyglycine-substituted toxins or precursors thereof (prodrug) with the aid of a sortase to an antibody can also take place.
In einer Ausführungsform ist dabei R2, R3 und/oder R4 ausgewählt aus einem Substrat, das durch enzymatische Abspaltung, wie durch proteolytische, oxidative oder reduktive Enzyme, Plasmin, Cathepsin, Cathepsin B, beta- Glucuronidase, Galactosidase, Mannosidase, Glucosidase, Neuramidase, Sac- charosidase, Maltase, Fructosidase, Glycosylasen, Prostate-specific Antigen (PSA), urokinase-Typ Plasminogen-Aktivator (u-PA), Metalloproteinase, Cy- tochrom P450 oder ein Enzym, das gezielt mit Hilfe von gerichteter Enzym Prodrug Therapie, wie ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, oder PDEPT gespal- ten werden kann; oder ein Substituent, der unter hypoxischen Bedingungen oder durch Reduktion durch Nitroreduktase abgespalten oder transformiert werden kann, insbesondere ist R2, R3 und/oder R4 ausgewählt aus einem Monosaccharid, Disaccharid oder Oligosaccharid, insbesondere Hexosen, Pento- sen oder Heptosen gegebenenfalls als Desoxy-Derivat oder Amino-Derivat und gegebenenfalls substituiert mit Halogen, C1-8 Alkyl, C1-8 Acyl, C1-8 Heteroalkyl, C3-7 Cycloalkyl, C3-7 Heterocycloalkyl, C4-12 Aryl oder C4-12 Heteroaryl, Amino- oder Amidgruppen, oder mit Amino-, Amido- oder Carboxyleinheiten, die gege- benenfalls substituiert sein können mit Halogen, C1-8 Alkyl, C1-8 Acyl, C1-8 Heteroalkyl, C3-7 Cycloalkyl, C3-7 Heterocycloalkyl, C4-12 Aryl oder C4-12 Heteroaryl, Amino- oder Amidresten; Dextran, Dipeptid, Tripeptid, Tetrapeptid, Oligopeptid, Peptidomimetika, oder Kombinationen hiervon, oder ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat, wobei dieses eine Acetalgruppe, eine Benzylgruppe oder eine substituierte Benzylgruppe umfassen kann . In one embodiment, R 2 , R 3 and / or R 4 is selected from a substrate which is obtained by enzymatic cleavage, such as by proteolytic, oxidative or reductive enzymes, plasmin, cathepsin, cathepsin B, beta-glucuronidase, galactosidase, mannosidase, glucosidase, neuramidase , Saccharosidase, maltase, fructosidase, glycosylases, prostate-specific antigen (PSA), urokinase-type plasminogen activator (u-PA), metalloproteinase, cytochrome P450, or an enzyme targeted by enzyme-directed prodrug therapy how ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, or PDEPT can be split; or a substituent which can be split off or transformed under hypoxic conditions or by reduction by nitroreductase, in particular R2, R3 and / or R4 is selected from a monosaccharide, disaccharide or oligosaccharide, in particular hexoses, pento- optionally substituted with halogen, C1-8 alkyl, C1-8 acyl, C1-8 heteroalkyl, C3-7 cycloalkyl, C3-7 heterocycloalkyl, C4-12 aryl or C4-alkylene, or heptoses, optionally as the deoxy derivative or amino derivative and optionally 12 heteroaryl, amino or amide groups, or with amino, amido or carboxy units, which may optionally be substituted by halogen, C 1-8 alkyl, C 1-8 acyl, C 1-8 heteroalkyl, C 3-7 cycloalkyl, C 3-7 7 heterocycloalkyl, C4-12 aryl or C4-12 heteroaryl, amino or amide radicals; Dextran, dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, oligopeptide, peptidomimetics, or combinations thereof, or a chemical cleavable substrate, which may include an acetal group, a benzyl group, or a substituted benzyl group.
Unter dem Ausdruck„funktionale Gruppe" wird vorliegend ein Substituent verstanden, der mit einer weiteren Struktur, der Zielstruktur, insbesondere Proteine, insbesondere Antikörper oder Antikörperfragmente, eine, bevorzugt kovalente, Verbindung eingehen kann, um die erfindungsgemäßen Verbindun- gen an diese Zielstrukturen zu binden, insbesondere um erfindungsgemäße Antikörper-Verbindung-Konjugate herzustellen .  The term "functional group" is understood herein to mean a substituent which can undergo a further structure, the target structure, in particular proteins, in particular antibodies or antibody fragments, a preferably covalent compound in order to bind the compounds according to the invention to these target structures in particular to prepare antibody-compound conjugates according to the invention.
Diese funktionalen Gruppen können gleichzeitig auch nach Bindung Bestandteil eines spaltbaren Substrats ausbilden .  These functional groups can simultaneously form part of a scissile substrate even after binding.
Unter dem Ausdruck„spaltbares Substrat" bzw.„abspaltbares Substrat", wie es vorliegend verwendet wird, wird eine Struktur, wie der Zielstruktur, verstanden, die unter entsprechenden Bedingungen und/oder unter Verwendung entsprechender Moleküle von dem Prodrug und letztendlich dem aktiven Drug abgespalten wird. Wie ausgeführt kann eine entsprechende Abspaltung physikalisch oder chemisch, insbesondere enzymatisch erfolgen.  The term "cleavable substrate" or "cleavable substrate", as used herein, is understood to mean a structure, such as the target structure, which, under appropriate conditions and / or using appropriate molecules, cleaves off the prodrug and ultimately the active drug becomes. As stated, a corresponding cleavage can be effected physically or chemically, in particular enzymatically.
Unter Zielstrukturen fallen dabei neben den genannten Antikörpern und Target structures fall in addition to the above-mentioned antibodies and
Antikörperfragmenten auch Aptamere, Lektine, biologische Modifizierer einer Antwort, Enzyme, Vitamine, Wachstumsfaktoren, Steroide, Nährstoffe, Zuckerreste, Oligosaccharidreste, Hormone und Derivate und Kombinationen hiervon . Antibody fragments also include aptamers, lectins, biological modifiers of an answer, enzymes, vitamins, growth factors, steroids, nutrients, sugar residues, oligosaccharide residues, hormones and derivatives, and combinations thereof.
Unter dem Ausdruck„Antikörper" wird vorliegend ein natürlich vorkom- mender oder rekombinanter Antikörper aber auch Antikörperfragmente verstanden, in einer Ausführungsform handelt es sich bei den Antikörpern um humanisierte Antikörper oder Antikörperfragmente. Dem Fachmann sind geeignete Antikörper und Antikörperfragmente und deren Herstellung bekannt. Gege- benenfalls sind diese Antikörper oder Antikörperfragmente derart verändert, dass eine Bindung über die vorliegend beschriebene funktionale Gruppe an die erfindungsgemäßen Verbindungen erfolgen kann . The term "antibody" is understood here to mean a naturally occurring or recombinant antibody but also antibody fragments, in one embodiment the antibodies are humanized antibodies or antibody fragments. if appropriate, these antibodies or antibody fragments are modified in such a way that binding to the compounds according to the invention can take place via the functional group described herein.
Mithilfe der erfindungsgemäßen Antikörper-Verbindungs-Konjugate ist es möglich, die Konjugate zielgerichtet an die Zielzellen oder Zielstrukturen heranzuführen. In einer Ausführungsform sind die Antikörper gerichtet auf tumorassoziierte Antigene oder andere Zelloberflächenbestandteile der Zielstrukturen, so dass ein zielgesteuertes Einbringen der Prodrugs in die Zellen erfolgen kann.  With the aid of the antibody-compound conjugates according to the invention, it is possible to target the conjugates to the target cells or target structures. In one embodiment, the antibodies are directed to tumor-associated antigens or other cell surface components of the target structures so that target-directed delivery of the prodrugs into the cells can occur.
Unter dem Ausdruck „Antikörper-Verbindung-Konjugat" wird vorliegend ein Konjugat aus Antikörper und erfindungsgemäßer Verbindung verstanden. Die Verbindung ist dabei zum Beispiel ein Prodrug oder Drug Molekül . Entsprechend kann vorliegend auch von einem Antikörper-Prodrug-Konjugat oder Anti- körper-Drug-Konjugat gesprochen werden . Dieses Konjugat ist eine Form eines Zielstruktur-Verbindung-Konjugats, z.B. mit den oben genannten Zielstrukturen und den erfindungsgemäßen Verbindungen .  The term "antibody-conjugate conjugate" is understood here to mean a conjugate of antibody and compound according to the invention, in which case the compound is, for example, a prodrug or drug molecule This conjugate is a form of a target-structure-compound conjugate, eg with the above-mentioned target structures and the compounds according to the invention.
Die Verknüpfung der erfindungsgemäßen Verbindung mit dem Antikörper erfolgt über die funktionale Gruppe G, um den erfindungsgemäßen Antikörper einschließlich Antikörperfragmenten an die erfindungsgemäße Verbindung kovalent zu verbinden. Diese kovalente Bindung kann ggf. durch geeignete Mittel wieder gelöst werden.  The linkage of the compound according to the invention with the antibody takes place via the functional group G in order to covalently connect the antibody according to the invention, including antibody fragments, to the compound according to the invention. If necessary, this covalent bond can be redissolved by suitable means.
In einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist die Verbindung eine, wobei o und p gleich sein oder unabhängig voneinander eine ganze ungerade Zahl aus 1 , 3, 5, 7, 9, 1 1 , 13, 15, 17 und 19 sind, Z und Z' sind C=O und jedes RA ist unabhängig voneinander Wasserstoff oder Chb.  In another embodiment of the present invention, the compound is one wherein o and p are the same or independently an odd number of 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 and 19, Z and Z 'are C = O and each RA is independently hydrogen or Chb.
Weiterhin betrifft eine Ausführungsform eine Verbindung wobei R2 unabhängig voneinander ein Wasserstoff oder CH3 ist.  Furthermore, an embodiment relates to a compound wherein R2 is independently a hydrogen or CH3.
Erfindungsgemäß ist eine Verbindung eine, wobei Hai ein Cl ist und R1 ist H .  According to the invention, a compound is one wherein Hai is Cl and R1 is H.
Eine Ausführungsform betrifft eine Verbindung, wobei L eine Verbindung gemäß der truktur I I ist, Struktur II One embodiment relates to a compound, wherein L is a compound according to the structure II, Structure II
wobei Y wie oben definiert ist. where Y is as defined above.
Weiterhin ist eine erfindungsgemäße Ausführungsform eine mit einer Verbindung, wobei X2 eine Arylgruppe, insbesondere eine Benzylgruppe ist, Y ist eine Struktur IV, wobei R4 eine C1 - C4 Alkylgruppe ist und G ist eine funktionale Gruppe vorliegend definiert.  Further, an embodiment of the present invention is one having a compound wherein X 2 is an aryl group, especially a benzyl group, Y is a structure IV wherein R 4 is a C 1 -C 4 alkyl group, and G is a functional group defined herein.
Schließlich ist eine Ausführungsform eine Verbindung, wobei die funktionale Gruppe G nur am Rest R2 vorliegt.  Finally, one embodiment is a compound wherein the functional group G is present only on the radical R2.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigten in in vitro-Experimenten hervorragende Zytotoxitatswerte mit ICso-Werten im pmol-Bereich, teilweise unterhalb des pmol-Bereichs. Des Weiteren zeigten die Verbindungen einen hervorragenden Quotienten des IC50. Der QICso-Wert der getesteten Verbindungen lag über 1 000, besonders geeignete Verbindungen zeigten Werte über 1 00.000 auf.  The compounds of the invention showed in vitro experiments excellent cytotoxicity values with IC50 values in the pmol range, partially below the pmol range. Furthermore, the compounds showed an excellent quotient of the IC50. The QICso value of the tested compounds was over 1 000, especially suitable compounds showed values above 1 00 000.
D.h ., die vorliegend dargestellten Verbindungen, die neue dimere Pro- drugs und Drugs von CC-1065 Analoga darstellen, weisen als Drug eine sehr hohe Zytotoxität auf, während die Prodrugs nur eine geringere Zytotoxität aufzeigen. Dadurch sollten diese Verbindungen in der therapeutischen Anwendung wesentlich sicherer sein. Die erfindungsgemäßen Verbindungen aus Di- meren sind des Weiteren wesentlich zytotoxischer als die monomeren Prodrugs oder Drugs. Die Verbindungen zeigen sich also durch eine hohe Wirksamkeit bei geringeren Nebenwirkungen in der Anwendung aus.  That is, the compounds presented herein, which are new dimeric prodrugs and drugs of CC-1065 analogues, have a very high cytotoxicity as a drug, while the prodrugs show less cytotoxicity. Thus, these compounds should be much safer in therapeutic use. The compounds of diamines according to the invention are furthermore substantially more cytotoxic than the monomeric prodrugs or drugs. The compounds are thus characterized by a high efficacy with fewer side effects in the application.
Frühere bifunktionale CC-1065- und Duocarmycin-Analoga zeigten nur eine geringe Selektivität auf und auch die Zytotoxitätswerte waren ähnlich der monomeren Analoga, teilweise noch geringer.  Earlier bifunctional CC-1065 and duocarmycin analogues showed only low selectivity and also the cytotoxicity values were similar to the monomeric analogs, sometimes even lower.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeichnen sich dadurch aus, dass sie Zytotoxitätswerte im pmol-Bereich aufzeigen und einen sehr großen Quotienten der ICso-Werte des Drugs zum Prodrugs haben .  The compounds according to the invention are distinguished by the fact that they exhibit cytotoxicity values in the pmol range and have a very large quotient of the IC 50 values of the drug to the prodrug.
Der Ausdruck„substituiert", wie er hierin insbesondere in Bezug auf Al- kyl, Heteroalkyl, Cycloalkyl, Heterocycloalkyl, Aryl, Heteroaryl, Acyl verwendet wird, bezieht sich darauf, dass diese Gruppen ein oder mehrere Substituenten ausgewählt aus der Gruppe umfassend OH, =O, =S, =NRh, =N-ORh, Sh, NH2, NO2, NO, Ns, CFs, CN, OCN, SCN, NCO, NCS, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, Ha- logen, Rh, SRh, S(O)Rh, S(O)ORh, S(O)2Rh, S(O)2ORh, OS(O)Rh, OS(O)ORh, OS(O)2Rh, OS(O)2ORh, OPCOJiOR^iOR1), PiOXOR^OR1), ORh, NHR', N(Rh)R', +N(Rh)(R')Rj, Si(Rh)(R')Rj, Si(Rh)(R')(Rj), C(O)Rh, C(O)ORh, C(O)N(Ri)Rh, OC(O)Rh, OC(O)ORh, OCCOJNiR^R1, 1^)0(0)^, 1^)0(0)0^, N(R')C(O)N(Rj)Rh, und die Thioderivate dieser Substituenten, oder eine profanierte oder deprotonierte Form dieser Substituenten, wobei Rh, R', und Rj unabhängig voneinander ausgewählt sind aus H and gegebenenfalls substituierte C-i -15 Alkyl, C1 -15 Heteroalkyl, C3-15 Cycloalkyl, C3-15 Heterocycloalkyl, C4-15 Aryl, oder C4-15 Heteroaryl oder ein Kombination hiervon, zwei oder mehr von Rh, R', und Rj sind gegebenenfalls miteinander verbunden, um ein oder mehrere Kohlenstoffzyklen oder Heterozyklen auszubilden. The term "substituted" as used herein in particular with reference to alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, acyl refers to those groups having one or more substituents selected from the group comprising OH, = O, = S, = NR h , = N-OR h , S h , NH 2 , NO 2, NO, N s, CFs, CN, OCN, SCN, NCO, NCS, C (O) NH 2 , C (O) H , C (O) OH, lh, R h , SR h , S (O) R h , S (O) OR h , S (O) 2 R h , S (O) 2 OR h , OS (O) R h , OS (O) OR h , OS (O) 2 R h , OS (O) 2 OR h , OPCOJiOR ^ iOR 1 ), PiOXOR ^ OR 1 ), OR h , NHR ', N (R h ) R', + N (R h ) (R ') R j , Si (R h ) (R') R j , Si (R h ) (R ') (R j ), C (O) R h , C (O) OR h , C (O H ) N (R i ) R h , OC (O) R h , OC (O) OR h , OCCOJNiR ^ R 1 , 1 ^) 0 (0) ^, 1 ^) 0 (0) 0 ^, N (R ') C (O) N (R j ) R h , and the thio derivatives of these substituents, or a profaned or deprotonated form of these substituents, wherein R h , R', and R j are independently selected from H and optionally substituted Ci - 15 alkyl, C1 -15 heteroalkyl, C3-15 cycloalkyl, C3-15 heterocycloalkyl, C4-15 aryl, or C4-15 heteroaryl or a combination thereof, two or more of R h , R ', and R j are optionally joined together to form one or more carbon cycles or heterocycles.
Der Ausdruck„Alkyl", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf geradkettige oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Kohlenwasserstoff- Substituenten, Beispiele der Alkylgruppen schließen ein Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl, Hexyl, Octyl, Decyl, Isopropyl, sec-Butyl, Isobutyl, tert-Butyl, Iso- pentyl, Vinyl, Allyl, 1 -Butenyl, 2-Butenyl, Isobutenyl, Pentenyl und dergleichen .  The term "alkyl" as used herein refers to straight-chained or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon substituents, examples of the alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, octyl, decyl, isopropyl, sec Butyl, isobutyl, tert-butyl, isopentyl, vinyl, allyl, 1-butenyl, 2-butenyl, isobutenyl, pentenyl and the like.
Der Ausdruck „Cycloalkyl" oder „Kohlenstoffzyklen", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf gesättigte oder ungesättigte, nicht aromatische Kohlenwasserstoffzyklen, die aus eins, zwei oder mehr Ringen bestehen kön- nen. Beispiele hiervon schließen ein: Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclopentenyl, Cyclopentadienyl, Cyclohexyl, Cyclohexonyl, usw.  The term "cycloalkyl" or "carbon cycles" as used herein refers to saturated or unsaturated, non-aromatic hydrocarbon cycles which may consist of one, two or more rings. Examples thereof include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclopentadienyl, cyclohexyl, cyclohexonyl, etc.
Der Ausdruck „Heteroalkyl", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf geradkettige oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Kohlenwasser- stoff-Substituenten, in denen mindestens ein Kohlenstoff durch ein Heteroatom ersetzt ist. Die Heteroatome sind bevorzugt ausgewählt aus S, N, O, und P.  The term "heteroalkyl" as used herein refers to straight-chained or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon substituents in which at least one carbon has been replaced by a heteroatom The heteroatoms are preferably selected from S, N, O. , and P.
Der Ausdruck„Aryl", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf aromatische Substituenten, die aus ein oder mehreren miteinander fusionierten Ringen bestehen können. Beispiele für Aryl schließen ein: Phenyl, Naphtyl und Antracenyl.  The term "aryl" as used herein refers to aromatic substituents which may consist of one or more fused rings, and examples of aryl include phenyl, naphthyl and antracenyl.
Der Ausdruck„Heteroaryl", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf aromatische Substituenten, die aus ein oder mehreren miteinander fusionierten Ringen bestehen können . Hierbei ist mindestens ein Kohlenstoffatom der aromatischen Ringgruppe durch ein Heteroatom ersetzt. Beispiele für Heteroa- rylgruppen schließen ein: Pyridinyl, Furanyl, Pyrrolyl, Triazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Thiophenyl, Indolyl, Benzofuranyl, Benzimidazolyl, Indazolyl, Ben- zotriazolyl, Benzisoxazolyl, und Chinolinyl. The term "heteroaryl" as used herein refers to aromatic substituents which may consist of one or more fused rings, wherein at least one carbon atom of the aromatic ring group is replaced by a heteroatom. Ryl groups include pyridinyl, furanyl, pyrrolyl, triazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiophenyl, indolyl, benzofuranyl, benzimidazolyl, indazolyl, benzotriazolyl, benzisoxazolyl, and quinolinyl.
Der Ausdruck„Heterocycloalkyl" oder„Heterozyklen", wie er hierin ver- wendet wird, bezieht sich auf gesättigte oder ungesättigte, nicht aromatische zyklische Kohlenwasserstoff-Substituenten, die aus ein oder mehreren miteinander fusionierten Ringen bestehen können, dabei ist mindestens ein Kohlenstoff in einem der Ringe durch ein Heteroatom ersetzt. Beispiele für Heterocyc- loalkyle schließen ein: Tetrahydrofuranyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, 1 ,4-Dioxanyl, Morpholinyl, Piperazinyl, Oxyzolidinyl, Decahydrochinolinyl.  The term "heterocycloalkyl" or "heterocycles" as used herein refers to saturated or unsaturated, non-aromatic cyclic hydrocarbon substituents which may consist of one or more fused rings, with at least one carbon in one replaced by a heteroatom. Examples of heterocycloalkyls include: tetrahydrofuranyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, 1,4-dioxanyl, morpholinyl, piperazinyl, oxyzolidinyl, decahydroquinolinyl.
Der Ausdruck„Acyl", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf die funktionelle Gruppe mit der allgemeinen Struktur RAC-C H =O - wobei RAC einen gegebenenfalls substituierten Kohlen Stoffrest darstellt, insbesondere eine Kohlenwasserstoffkette mit Ci bis Cs Kohlenstoffatomen .  The term "acyl" as used herein refers to the functional group having the general structure RAC-C H = O - wherein RAC represents an optionally substituted carbon radical, in particular a hydrocarbon chain having Ci to Cs carbon atoms.
Wenn Ausdrücke wie „gegebenenfalls substituiert" verwendet werden, beziehen sich diese Ausdrücke auf alle sich anschließenden Reste solange nicht anders ausgeführt. D.h., der Ausdruck„gegenbenenfalls substituierte Al- kyl, Heteroalkyl, Aryl, Acyl" ist als„gegebenenfalls substituierte Alkyl, gegebenenfalls substituierte Heteroalkyl, gegebenenfalls substituierte Aryl, gegebe- nenfalls substituierte Acyl" zu lesen.  When terms such as "optionally substituted" are used, these terms refer to all subsequent radicals unless otherwise stated, ie, the term "optionally substituted alkyl, heteroalkyl, aryl, acyl" is referred to as "optionally substituted alkyl, optionally substituted Heteroalkyl, optionally substituted aryl, optionally substituted acyl "to read.
In Abhängigkeit der Substituenten, insbesondere in Abhängigkeit des Substituenten R2, R3 und/oder R4 und den über G konjugierten Antikörpern können die Verbindungen einfach und gerichtet in Zellen eingebracht werden. In einer Ausführungsform ist R2, R3 und/oder R4 bevorzugt Wasserstoff. Depending on the substituents, in particular in dependence of the substituents R2, R3 and / or R 4 and conjugated through G antibodies, the compounds can be incorporated easily and directed into cells. In one embodiment, R2, R3 and / or R 4 is preferably hydrogen.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform stellt R2, R3 und/oder R4 ein Substrat dar, das z.B. enzymatisch abspaltbar ist, um Prodrugs, die am Substituenten R2, R3 und/oder R4 ein spaltbares Produkt aufweisen, in Drugs umzuwandeln. In a further preferred embodiment, R 2, R 3 and / or R 4 represents a substrate which can be cleaved enzymatically, for example, to convert prodrugs which have a cleavable product on the substituent R 2, R 3 and / or R 4 into drugs.
D.h ., in einer bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem Substrat R2, R3 und/oder R4 um ein abspaltbares Produkt. Eine Abspaltung kann durch chemische Umsetzung erfolgen, zum Beispiel aufgrund einer Änderung der Umgebungsbedingungen, wie pH-Wert, Konzentration an bestimmten Ionen, etc. In einer bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem Substrat R2, R3 und/oder R4 um ein abspaltbares Substrat. Dieses abspaltbare Substrat ist bevorzugt eines, dass durch proteolytische Enzyme, Plasmin, Cathepsin, Cathepsin B, beta-Glucuronidase, Galactosidase, Mannosidase, Glucosidase, Neuramidase, Saccharosidase, Maltase, Fructosidase, Glycosylasen, Prostate- specific Antigen (PSA), urokinase-Typ Plasminogen-Aktivator (u-PA), Me- talloproteinase, oder ein Enzym, das gezielt mit Hilfe von gerichteter Enzym Prodrug Therapie, wie ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, oder PDEPT gespalten werden kann; oder ein Substituent, der unter hypoxischen Bedingungen oder durch Reduktion durch Nitroreduktase abgespalten oder transformiert werden kann. That is, in a preferred embodiment, the substrate R2, R3 and / or R 4 is a cleavable product. A cleavage can be done by chemical reaction, for example due to a change in environmental conditions, such as pH, concentration of certain ions, etc. In a preferred embodiment, the substrate R2, R3 and / or R 4 is a cleavable substrate. This cleavable substrate is preferably one obtained by proteolytic enzymes, plasmin, cathepsin, cathepsin B, beta-glucuronidase, galactosidase, mannosidase, glucosidase, neuramidase, sucrose, maltase, fructosidase, glycosylases, prostate specific antigen (PSA), urokinase type Plasminogen activator (u-PA), metalloproteinase, or an enzyme that can be specifically cleaved using targeted enzyme prodrug therapy, such as ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, or PDEPT; or a substituent which can be cleaved or transformed under hypoxic conditions or by reduction by nitroreductase.
Bevorzugt handelt es sich bei dem Rest R2, R3 und/oder R4 um einen ausgewählt aus der Gruppe umfassend Monosaccharid, Disaccharid oder Oligosaccharid, insbesondere Hexosen, Pentosen oder Heptosen gegebenenfalls als Desoxy-Derivat oder Amino-Derivat und gegebenenfalls substituiert mit Halogen, C1-8 Alkyl, C1-8 Acyl, C1-8 Heteroalkyl, C3-7 Cycloalkyl, C3-7 Heterocyc- loalkyl, C4-12 Aryl oder C4-12 Heteroaryl, Amino- oder Amidgruppen, oder mit Amino-, Amido- oder Carboxyleinheiten, die gegebenenfalls substituiert sein können mit Halogen, C1-8 Alkyl, C1-8 Acyl, C1-8 Heteroalkyl, C3-7 Cycloalkyl, C3-7 Heterocycloalkyl, C4-12 Aryl oder C4-12 Heteroaryl, Amino- oder Amidresten; Dextran, Dipeptid, Tripeptid, Tetrapeptid, Oligopeptid, Peptidomimetika, oder Kombinationen hiervon . The radical R 2, R 3 and / or R 4 is preferably one selected from the group comprising monosaccharide, disaccharide or oligosaccharide, in particular hexoses, pentoses or heptoses, optionally as the deoxy derivative or amino derivative and optionally substituted by halogen, C 1 -8 alkyl, C1-8 acyl, C1-8 heteroalkyl, C3-7 cycloalkyl, C3-7 heterocycloalkyl, C4-12 aryl or C4-12 heteroaryl, amino or amide groups, or with amino, amido or carboxy moieties which may optionally be substituted with halogen, C 1-8 alkyl, C 1-8 acyl, C 1-8 heteroalkyl, C 3-7 cycloalkyl, C 3-7 heterocycloalkyl, C 4-12 aryl or C 4-12 heteroaryl, amino or amide radicals; Dextran, dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, oligopeptide, peptidomimetics, or combinations thereof.
Darüber hinaus können bei bestimmten Umgebungsbedingungen labile Substituenten genutzt werden, wie Halbacetale und Acetale, Benzylgruppen und substituierte Benzylgruppen.  In addition, labile substituents can be used under certain environmental conditions, such as hemiacetals and acetals, benzyl groups and substituted benzyl groups.
Mit Hilfe des Substrats R2, R3 und/oder R4 kann ein Targeting der erfindungsgemäßen Verbindungen an Zielstrukturen möglich sein. D.h ., es ist ein zielgerichtetes Koppeln der erfindungsgemäßen Verbindungen an Zielstrukturen zum Targeting dieser Konjugate zum Beispiel in die Zielzellen oder Zielge- webe möglich, und ein entsprechendes Einbringen dieser erfindungsgemäßen Verbindungen in z.B. ausgewählte Zellen und Zellarten möglich. Die erfindungsgemäßen Verbindungen worin R2, R3 und/oder R4 ein Substrat außer H ist, weisen eine abspaltbare oder transformierbare Gruppe auf. Das Abspalten oder die Transformation der erfindungsgemäßen Verbindung mit R2, R3 und/oder R4 außer H kann durch chemische, photochemische, physikalische, biologische oder enzymatische Prozesse unter den entsprechenden Bedingungen erfolgen. Diese Bedingungen umfassen z.B. die Bereitstellung entspre- chender Enzyme, die Änderung des umgebenen Milieus, das Einwirken von z.B. Strahlung, wie UV-Licht usw. Dem Fachmann sind entsprechende Verfahren bekannt. Das Substrat ist entsprechend zugänglich für bekannte Verfahren wie ADEPT (Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy), PDEPT (Polymer- Directed Enzyme Prodrug Therapy) oder MDEPT (Macromolecular-Directed Enzyme Prodrug Therapy), VDEPT (Virus-Directed Enzyme Prodrug Therapy) oder GDEPT (Gen-Directed Enzyme Prodrug Therapy). With the aid of the substrate R2, R3 and / or R4, a targeting of the compounds according to the invention to target structures may be possible. That is, a targeted coupling of the compounds according to the invention to target structures for targeting these conjugates, for example into the target cells or target tissue, is possible, and a corresponding introduction of these compounds according to the invention into, for example, selected cells and cell types is possible. The compounds according to the invention in which R 2, R 3 and / or R 4 is a substrate other than H, have a cleavable or transformable group. The split off or the transformation of the compound of the invention with R2, R3 and / or R4 other than H may be carried out by chemical, photochemical, physical, biological or enzymatic processes under the appropriate conditions. These conditions include, for example, the provision of appropriate enzymes, the change of the surrounding environment, the action of, for example, radiation, such as UV light, etc. The skilled worker is aware of corresponding processes. The substrate is suitably accessible to known methods such as ADEPT (Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy), PDEPT (Polymer Directed Enzyme Prodrug Therapy) or MDEPT (Macromolecular-Directed Enzyme Prodrug Therapy), VDEPT (Virus-Directed Enzyme Prodrug Therapy) or GDEPT ( Gene-Directed Enzyme Prodrug Therapy).
Entsprechend richtet sich ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung auf ein Antikörper-Verbindung-Konjugat, wobei ein Antikörper über die funktionale Gruppe G mit der erfindungsgemäßen, oben definierten Verbindung ver- bunden ist.  Accordingly, another aspect of the present invention is directed to an antibody-conjugate conjugate wherein an antibody via the functional group G is linked to the compound of the invention as defined above.
In einer Ausführungsform dieses Antikörper-Verbindung-Konjugats ist das Konjugat eines, wobei der Antikörper gegen eine Tumorantigen oder ein Antigen, das auf eine Zielstruktur, wie einer Zelle, exprimiert wird, gerichtet ist.  In one embodiment of this antibody-compound conjugate, the conjugate is one wherein the antibody is directed against a tumor antigen or an antigen that is expressed on a target structure, such as a cell.
In einer weiteren Ausführungsform ist das Antikörper-Verbindung-Konjugat eines, wobei der Antikörper einer ist aus einem Antikörper, einem Antikörperfragment, wie F(ab' )2, F(ab'), Fab, Fv, sFv, scFv.  In another embodiment, the antibody-compound conjugate is one wherein the antibody is one of an antibody, an antibody fragment such as F (ab ') 2, F (ab'), Fab, Fv, sFv, scFv.
Weiterhin richtet sich die vorliegende Anmeldung auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen enthalten, gegebenenfalls mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern oder Verdünnern . Die erfindungsgemäßen Verbindungen können dabei in Form von pharmazeutisch annehmbaren Salzen oder Solvaten vorliegen . Das heißt, die pharmazeutische Zusammensetzung enthält eine erfindungsgemäße Verbindung oder ein erfindungsgemäßes Antikörper-Verbindung-Konjugat.  Furthermore, the present application is directed to pharmaceutical compositions containing the compounds of the invention, optionally with pharmaceutically acceptable carriers or diluents. The compounds according to the invention can be present in the form of pharmaceutically acceptable salts or solvates. That is, the pharmaceutical composition contains a compound of the present invention or an antibody-compound conjugate of the present invention.
Pharmazeutisch annehmbare Salze sind insbesondere Säureadditions- salze, die entsprechend an Amingruppen ausgebildet werden . Genauso sind Basenadditionssalze möglich oder entsprechende Zwitteradditionssalze.  Pharmaceutically acceptable salts are in particular acid addition salts which are formed correspondingly to amine groups. Likewise, base addition salts are possible or corresponding zwitter addition salts.
Der Ausdruck „pharmazeutisch annehmbare Solvate", bezieht sich auf die Assoziierung von ein oder mehreren Lösungsmittelmolekülen und einer er- findungsgemäßen Verbindung. Beispiele für solche Lösungsmittelmoleküle, die pharmazeutisch annehmbare Solvate ausbilden, schließen ein: Wasser, Isop- ropylalkohol, Ethanol, Methanol, DSMO, Ethylacetat und Essigsäure. The term "pharmaceutically acceptable solvates" refers to the association of one or more solvent molecules and a inventive compound. Examples of such solvent molecules which form pharmaceutically acceptable solvates include water, isopropyl alcohol, ethanol, methanol, DSMO, ethyl acetate and acetic acid.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich insbesondere zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen geeignet in der Tumortherapie. Monomere der erfindungsgemäßen bifunktionalen Verbindungen sind als zytotoxische Verbindungen geeignet zur Tumortherapie bekannt. Zur vorliegenden Erfindung gehören pharmazeutische Zusammensetzungen, die neben den üblichen Trägerstoffen oder Verdünnern die erfindungsgemäßen Verbindungen enthalten . Die Herstellung der oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen erfolgt in üblicher Weise nach bekannten Verfahren, z.B. durch Mischen des oder der Wirkstoffe oder Trägerstoffen .  The compounds of the invention are particularly suitable for the preparation of pharmaceutical compositions suitable in tumor therapy. Monomers of the bifunctional compounds of the invention are known as cytotoxic compounds suitable for tumor therapy. The present invention includes pharmaceutical compositions which contain the compounds according to the invention in addition to the customary carriers or diluents. The preparation of the pharmaceutical preparations listed above is carried out in a conventional manner by known methods, e.g. by mixing the agent or excipients.
Im Allgemeinen können die erfindungsgemäßen Verbindungen in Gesamtmengen von 0,5 bis etwa 500, vorzugsweise 1 bis 150 mg/kg Körperge- wicht je 24 Stunden, gegebenenfalls in Form mehrerer Einzelgaben, zur Erzielung der gewünschten Ergebnisse verabreicht werden. Dem Fachmann sind die Möglichkeiten zur Bestimmung der Dosismenge wohlbekannt. Diese kann in Abhängigkeit vom Alter, dem Körpergewicht, der Art und Schwere der Erkrankung des Patienten, der Art der Zubereitung und der Applikation des Arzneimit- tels sowie dem Zeitraum bzw. dem Intervall der Verabreichung erfolgen.  In general, the compounds according to the invention can be administered in total amounts of 0.5 to about 500, preferably 1 to 150 mg / kg of body weight per 24 hours, optionally in the form of several single doses, to obtain the desired results. The person skilled in the art knows the possibilities for determining the dose amount. This can be done depending on the age, the body weight, the type and severity of the disease of the patient, the type of preparation and the application of the drug and the period or the interval of administration.
Die vorliegend beschriebenen seco-Duocarmycin-Derivate tragen zum Beispiel Alkin-, Carboxyl-, Amino-, Azid-, Thiol- und Hydroxy-Gruppen also funktionale Gruppen G, die sehr einfach mit Hilfe der oben diskutierten Methoden mit Antikörpern verknüpft werden können.  The seco-duocarmycin derivatives described herein carry, for example, alkyne, carboxyl, amino, azide, thiol and hydroxy groups, ie functional groups G, which can be easily linked to antibodies using the methods discussed above.
Eine typische Vorgehensweise von vielen möglichen für die Anbindung eines Antikörpers an die bifunktionalen seco-Duocarmycin-Analoga ist in der Figur 5 gezeigt. Das dargestellte Verfahren beinhaltet sogar die Möglichkeit, dass man zwei unterschiedliche Antikörper einfügen kann und sich auf diese Weise unterschiedliche tumorassoziierte Antigene adressieren lassen.  A typical approach of many possible for the attachment of an antibody to the bifunctional seco-duocarmycin analogs is shown in FIG. The presented method even includes the possibility of inserting two different antibodies and thus of addressing different tumor-associated antigens.
Die Verwendung von Duocarmycin-Analoga für die Herstellung von ADCs hat den großen Vorteil ihrerhohen Zytoxizität, bei den mono-funktionalen Derivaten beträgt sie ca. ICso = 10 pM, während bei den bifuktionellen Verbindun- gen sogar Werte von IC50 = 150 fM errreicht werden können. Darüber hinaus lassen sich die Verbindungen sehr effizient durch Glykosidierung detoxifizieren mit Werten von ca. 6.000 bei den mono-funktionalen bzw. ca. 1 .000.000 bei den bifunktionalen Verbindungen . Ein derartiges Vorgehen ist bei anderen To- xinen nur sehr schwer möglich. Für die Ausbildung der ADCs können mehrere Wege begangen werden : The use of duocarmycin analogues for the production of ADCs has the great advantage of their high cytotoxicity, in the case of the monofunctional derivatives it is approximately IC 50 = 10 pM, while in the bifunctional compounds even values of IC50 = 150 fM can be achieved. In addition, the compounds can be very efficiently detoxified by glycosidation with values of about 6,000 for the monofunctional or about 1,000,000 for the bifunctional compounds. Such a procedure is very difficult with other toxins. There are several ways to train the ADCs:
1 . Bei den bifunktionalen Duocarmycin-Analoga können drei Wege beschritten werden  1 . The bifunctional duocarmycin analogues can be broken three ways
a) Einfügen einer Funktionalität an der Kette, die die beiden CPI-Einheiten miteinander verknüpft. Hierbei tritt allerdings eine gewisse Reduktion der a) Inserting a functionality on the chain that links the two CPI units together. Here, however, occurs a certain reduction of
Zytotoxizität auf. So hat die Verbindung 1 einen leicht erhöhten ICso - Wert von 60 pM. Zur Anbindung über einen spaltbaren Linker bekannter Art können funktionalisierte Benzol-1 ,3-diacetate verwendet werden. Cytotoxicity on. Thus compound 1 has a slightly increased IC 50 value of 60 pM. For attachment via a cleavable linker of known type, functionalized benzene-1,3-diacetates can be used.
IC60 = 60 pM IC 60 = 60 pM
1  1
wobei n eine ganze Zahl von 0 bis 10 und o und p eine ganze Zahl von 0 bis 5 ist, in den Ketten kann zusätzlich ein oder zwei Sauerstoffatome, ein oder zwei Stickstoffatome mit einer Alkyl oder Arylgruppe oder ein oder zwei Schwefela- tome enthalten sein. where n is an integer from 0 to 10 and o and p is an integer from 0 to 5, the chains may additionally contain one or two oxygen atoms, one or two nitrogen atoms with an alkyl or aryl group or one or two sulfur atoms ,
Auch andere bifunktionale CBI-Derivate z.B. mit einem N-Atom in der Kette, die die beiden CBI-Einheiten verbindet, können zur Einfügung von mo- noklonalen Antikörpern verwendet werden , Other bifunctional CBI derivatives, for example with an N atom in the chain connecting the two CBI units, can also be used for insertion of moieties. noclonal antibodies are used
wobei n eine ganze Zahl von 0 bis 1 0 und o und p eine ganze Zahl von 0 bis 5 ist, in den Ketten ()0 und ()P kann zusätzlich ein oder zwei Sauerstoffatome, ein oder zwei Stickstoffatonne mit einer Alkyl oder Arylgruppe oder ein oder zwei Schwefelatome enthalten sein . where n is an integer from 0 to 1 o and o and p is an integer from 0 to 5, in the chains () 0 and () P can additionally one or two oxygen atoms, one or two Stickstoffatonne with an alkyl or aryl group or contain one or two sulfur atoms.
Alle Verbindungen können z.B. durch Benzylierung oder Glykosidierung der phenolischen Hydroxygruppen detoxifiziert werden. Die Freisetzung des Toxins erfolgt dann im Lysosom durch oxidative Spaltung mit P 450 oder durch Umsetzung mit einer Glykohydrolase: b) Anknüpfung eines monoklonalen Antikörpers über den Benzolring eines Benzyl geschützten bifunktionalen Duocarmycin-Derivates. Dieser Ansatz hat den Vorteil, dass bei Abspaltung der Benzylgruppe mit dem Antikörper durch P450 im Lysosom die primäre Verbindung mit einer ICso = 150 fM (R=H, r=1 ) freigesetzt wird. Außerdem sind die Verbindungen im Serum stabil und die Konjugate zeigen eine sehr geringe Toxizität.  All compounds can e.g. be detoxified by benzylation or glycosidation of the phenolic hydroxyl groups. The release of the toxin then occurs in the lysosome by oxidative cleavage with P 450 or by reaction with a glycohydrolase: b) attachment of a monoclonal antibody via the benzene ring of a benzyl-protected bifunctional duocarmycin derivative. This approach has the advantage that when the benzyl group is split off with the antibody by P450 in the lysosome, the primary compound is released with an ICso = 150 fM (R = H, r = 1). In addition, the compounds are stable in serum and the conjugates show very low toxicity.
c) Anknüpfung eines monoklonalen Antikörper über ein säurelabiles Zu- ckeracetal eines glykolisierten bifunktionalen Duocarmycin-Derivates. Dieser Ansatz hat den Vorteil, dass bei säurekatalysierten Spaltung des Acetals mit dem Antikörper und der Abspaltung der Zuckerkomponente durch Glycohydrolasen im Lysosom die primäre Verbindung mit einer ICso = 150 fM freigesetzt wird. Außerdem sind die Verbindungen im Serum stabil und die Konjugate zeigen eine sehr geringe Toxizität. c) attachment of a monoclonal antibody via an acid-labile sugar acetal of a glycosylated bifunctional duocarmycin derivative. This approach has the advantage that when acid-catalyzed cleavage of the acetal with the antibody and the cleavage of the sugar component by glycohydrolases in the lysosome, the primary compound with an ICso = 150 fM is released. In addition, the compounds are stable in serum and the conjugates show very low toxicity.
In den Verbindungen kann r eine ganze Zahl von 0-5 sein, der Rest ()r kann zudem ein oder zwei Sauerstoffatome, ein oder zwei Schwefelatome oder ein oder zwei NRz-Gruppen enthalten, wobei Rz wie oben definiert ist. Alternativ kann der Rest ()r ein Rest Y sein, wie oben definiert. In the compounds, r may be an integer of 0-5, the radical () r may further contain one or two oxygen atoms, one or two sulfur atoms or one or two NRz groups, wherein Rz is as defined above. Alternatively, the group () r may be a group Y as defined above.
Um die Möglichkeit einer Anbindung der dimeren Duocarmycin-Derivate zu haben, wurden Dicarbonsäure-Komponenten entwickelt, die mittig eine Funktionalität tragen. Die Funktionalität kann eine Alkin-Gruppe, eine Amino- Gruppe, eine OH- Gruppe, eine SH-Gruppe oder eine Polyglycin-Gruppe sein. Es sind zahlreiche Methoden bekannt, um derartige Funktionalitäten an mon- klonale Antikörper anzuknüpfen.  In order to have the possibility of binding the dimeric duocarmycin derivatives, dicarboxylic acid components have been developed that carry functionality in the center. The functionality may be an alkyne group, an amino group, an OH group, an SH group or a polyglycine group. Numerous methods are known for linking such functionalities to monoclonal antibodies.
Die folgenden Substanzen sind für eine Anknüpfung an tumorspezifische monoklonale Antikörper geeignet: Darin kann R ein Alkyl mit 0 bis 5 Atomen, Halogen, OH, CO bis C5 Alkoxy, N-C0 bis C5 Alkyl und/oder S-C0 bis C5 Alkyl und/oder S-Aryl sein. The following substances are suitable for attachment to tumor-specific monoclonal antibodies: where R can be an alkyl having 0 to 5 atoms, halogen, OH, CO to C5 alkoxy, N-C0 to C5 alkyl and / or S-C0 to C5 alkyl and / or S-aryl.
R1 = H, o,p = 0-5 (1) R 1 = H, o, p = 0-5 (1)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal, o, p = 0-5 (2) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal, o, p = 0-5 (2)
R1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (3) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (3)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (4) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (4)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (9) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (9)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (10) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (10)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (11) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (11)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (12) R 1 = Sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal, n = 0-10, o, p = 0-5 (12)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (13) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (13)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (14) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (14)
R1 = H, n = 0-10, 0,p = 0-5: (17) R 1 = H, n = 0-10, 0, p = 0-5: (17)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (18) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (18)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (27) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (27)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (28) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (28)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (31) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (31)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-3, n1 = 0-3 (32) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-3, n 1 = 0-3 (32)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (35) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (35)
R1 = Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (36) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (36)
l, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (38) l, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (38)
R1= H, π = 0-10, ο,ρ = 0-5: (39) R 1 = H, π = 0-10, ο, ρ = 0-5: (39)
R1= Sugar, Benzyl, substituiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (40) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (40)
R1 = H, n = 0-10, o,p = 0-5: (41) R 1 = H, n = 0-10, o, p = 0-5: (41)
R1 = Sugar, Benzyl, substitutiertes Benzyl, Alkyl, Acetal: n = 0-10, o,p = 0-5 (42) R 1 = sugar, benzyl, substituted benzyl, alkyl, acetal: n = 0-10, o, p = 0-5 (42)
Schließlich wird die Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung oder eines erfindungsgemäßen Antiköper-Verbindung-Konjugats zur Behandlung von Tumorerkrankungen, insbesondere in Säugetieren beschrieben.  Finally, the use of a compound according to the invention or of an antibody-conjugate conjugate according to the invention for the treatment of tumor diseases, in particular in mammals, is described.
Erfindungsgemäß lassen sich die beschriebenen Verbindungen und Anti- körper-Verbindung-Konjugate nutzen, um die Prodrugs in die Zielzellen beziehungsweise das Zielgewebe einzubringen um dort eine Tumorbehandlung oder Vorstufen hiervon zu behandeln .  According to the invention, the described compounds and antibody-compound conjugates can be used in order to introduce the prodrugs into the target cells or the target tissue in order to treat a tumor treatment or precursors thereof.
Die Tumorerkrankungen schließen insbesondere solide Tumore ein . The tumors include in particular solid tumors.
Experimenteller Teil Experimental part
l^'-il^-Phen leneJbisil-i^-l-ichlorometh -S-h drox -l^-dih dro-SH- benzo[e]indol-3-yl)ethan-l-one) (2): l ^ '- il ^ -phenolene-bis-iil-i-dichlorometh -S-h drox-l ^ -dihydro-SH-benzo [e] indol-3-yl) ethane-l-one) (2):
4M HCl/EtOAc (12 mL) wurde zum CBI-Derivat 1 (100 mg, 300 μιηοΐ, 1.0 eq.) hinzugegeben und die Mischung bei Zimmertemperatur für 4 h gerührt, anschließend entfernte man den Überschuss an HCl/EtOAc durch Anlegen eines Hochvakuums für 1 h. Der Rückstand wurde in DMF (12 mL) und Pyridine (48 yL, 600 μιηοΐ, 2.0 eq.) gelöst, danach bei 0 °C mit 2,2'- (1 ,3-Phenylene)diacetyl chloride (34 mg, 150 μιηοΐ, 0.5 eq.) versetzt und die erhaltene Mischung bei Zimmertemperatur für 12h gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer im Vakuum entfernt und der Rückstand durch Chromatographie an Kieselgel (Me- OH/CH2CI2 1 : 19) gereinigt. Weitere Reinigung erfolgte durch präparative TLC (TLC (Me- OH/CH2CI2 1 :40) und präparative HPLC. Das gewünschte Produkt 2 konnte dabei als weißer Schaum erhalten werden (16 mg, 25.6 μιηοΐ, 17%). 4M HCl / EtOAc (12 mL) was added to CBI derivative 1 (100 mg, 300 μιηοΐ, 1.0 eq.) And the mixture was stirred at room temperature for 4 h, then the excess HCl / EtOAc was removed by applying a high vacuum for 1 h. The residue was dissolved in DMF (12 mL) and pyridines (48 yL, 600 μιηοΐ, 2.0 eq.), Then at 0 ° C with 2,2'- (1, 3-phenylenes) diacetyl chloride (34 mg, 150 μιηοΐ , 0.5 eq.) And the resulting mixture is stirred at room temperature for 12 h. The solvent was removed on a rotary evaporator under reduced pressure and the residue was purified by chromatography on silica gel (MeOH / CH 2 Cl 2 1:19). Further purification was carried out by preparative TLC (TLC (MeOH / CH 2 Cl 2 1:40) and preparative HPLC.) The desired product 2 could be obtained as a white foam (16 mg, 25.6 μmol, 17%).
Rf: 0.5 (MeOH/CH2Cl2 1 : 19). R f : 0.5 (MeOH / CH 2 Cl 2 1:19).
Drehwert: [a]D 20 = -22.0 (c 0.5, DMSO). Rotation: [a] D 20 = -22.0 (c 0.5, DMSO).
IR (KBr): v [cm 1] = 3182, 2360, 1635, 1584, 1421 , 1391 , 1250, 1 133, 857, 772, 754, 715. 'H-NMR (300 MHz, CDCI3) : δ [ppm] = 2.58 (t, J = 9.0 Hz, 2 H, 2'-Ha, 6'-Ha), 2.99 (t, J = 9.0 Hz, 2 H, 2'-Hb, 6'-Hb), 3.54 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 2 H, 2 x 10-Ha), 3.68 (t, J = 9.0 Hz, 2 H, 2 x 10-Hb), 3.75-4.04 (m, 6 H, 2 x 1 -H, 2 x 2-Ha, 2 x 2-Hb), 7.08 (d, J = 9.0 Hz, 2 H, 2 x 9-H), 7.28-7.37 (m, 4 H, 2 x 7-H, 2 x 15-H), 7.42-7.47 (m, 2 H, 2 x 8-H), 7.59 (t, J = 9.0 Hz, 1 H, 16-H), 7.93 (s, 3 H, 2 x 4-H, 14-H), 8.0 (d, J = 6.0 Hz, 2 H, 6-H), 9.91 (bs, 2 H, 2 x OH). "C-NMR (125 MHz, CDCI3) : δ [ppm] = 41.2 (2 x C-l ), 43.4 (2 x C-12), 46.4 (2 x C-10), 53.3 (2 x C-2), 100.2 (2 x C-4), 1 13.9 (2 x C-2), 122.1 (2 x C-9), 122.2 (2 x C-9b), 122.9 (2 x C-7), 123.2 (2 x C-6), 126.3 (2 x C-8), 128.7 (2 x C-15), 129.0 (C-16), 129.3 (2 x C-9a), 130.6 (C-14), 133.8 (2 x C-13), 140.6 (2 x C-3), 154.4 (2 x C-5), 170.3 (2 x C=0). IR (KBr): v [cm 1 ] = 3182, 2360, 1635, 1584, 1421, 1391, 1250, 1 133, 857, 772, 754, 715. 1 H-NMR (300 MHz, CDCl 3): δ [ppm ] = 2.58 (t, J = 9.0 Hz, 2 H, 2'-H a , 6'-H a ), 2.99 (t, J = 9.0 Hz, 2 H, 2'-H b , 6'-H b ), 3.54 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 2 H, 2 x 10-H a ), 3.68 (t, J = 9.0 Hz, 2 H, 2 x 10-Hb), 3.75-4.04 (m, 6 H, 2 x 1 H, 2 x 2-H a, 2 x 2-H b), 7:08 (d, J = 9.0 Hz, 2 H, 2 x 9-H), 7:28 to 7:37 (m, 4 H , 2 x 7-H, 2 x 15-H), 7.42-7.47 (m, 2H, 2 x 8-H), 7.59 (t, J = 9.0 Hz, 1H, 16-H), 7.93 (s , 3H, 2 x 4H, 14H), 8.0 (d, J = 6.0Hz, 2H, 6H), 9.91 (bs, 2H, 2 x OH). "C NMR (125 MHz, CDCl3): δ [ppm] = 41.2 (2 x Cl), 43.4 (2 x C-12), 46.4 (2 x C-10), 53.3 (2 x C-2), 100.2 (2 x C-4), 1 13.9 (2 x C-2), 122.1 (2 x C-9), 122.2 (2 x C- 9b ), 122.9 (2 x C-7), 123.2 (2 x C-6), 126.3 (2 x C-8), 128.7 (2 x C-15), 129.0 (C-16), 129.3 (2 x C-9 a ), 130.6 (C-14), 133.8 ( 2 x C-13), 140.6 (2 x C-3), 154.4 (2 x C-5), 170.3 (2 x C = 0).
MS (ESI): m/z (%) 647.2 [M+Na] + (100). MS (ESI): m / z (%) 647.2 [M + Na] + (100).
C36H30CI2N2O, (624.16) ber. : 623.1510  C36H30CI2N2O, (624.16) calcd.: 623.1510
gef. :623.1502, [M-H]" gef. : 623.1502, [MH] "
(ESI-HRMS). (ESI-HRMS).
HPLC (analytisch): HPLC (analytical):
Säule: Kromasil ® 100 C 18, 250 x 4 mm, 5 μιη  Column: Kromasil® 100 C 18, 250 × 4 mm, 5 μm
Laufmittel: 30/70 H20/MeOH Eluent: 30/70 H 2 0 / MeOH
Fluss: 0.8 mL min 1 Flow: 0.8 mL min 1
λ = 254 nm λ = 254 nm
t : 3.4 min ljS-bisi^-l-iChlorometh lJ-S-h drox -l^-dih dro-SH-benzoIelindol-S- lJ-S- phenylpentane-l,5-dion (3): t: 3.4 min 1-bis-bis-1-i-chlorometh-1-drox-1-di-dro-SH-benzo-1-indole-1-yl-S-phenylpentane-1,5-dione (3):
1 3  1 3
4M HCl/EtOAc (6 mL) wurde zum CBI-Derivat 1 (50 mg, 150 μιηοΐ, 1.0 eq.) hinzugegeben und die Mischung bei Zimmertemperatur für 4 h gerührt, anschließend entfernte man den 4M HCl / EtOAc (6 mL) was added to CBI derivative 1 (50 mg, 150 μιηοΐ, 1.0 eq.) And the mixture was stirred at room temperature for 4 h, then the mixture was removed
Überschuss an HCl/EtOAc durch Anlegen eines Hochvakuums für 1 h. Der Rückstand wurde in DMF (6 mL) und Pyridine (24 μΕ, 300 μιηοΐ, 2.0 eq.) gelöst, danach bei 0 °C mit 3- phenylpentanedioyl dichloride (15 mg, 60 μιηοΐ, 0.4 eq.) versetzt und die erhaltene Mischung bei Zimmertemperatur für 12h gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer imExcess HCl / EtOAc by applying a high vacuum for 1 h. The residue was dissolved in DMF (6 mL) and pyridines (24 μΕ, 300 μιηοΐ, 2.0 eq.), Then at 0 ° C with 3-phenylpentanedioyl dichloride (15 mg, 60 μιηοΐ, 0.4 eq.) And the resulting mixture stirred at room temperature for 12h. The solvent was on a rotary evaporator in
Vakuum entfernt und der Rückstand durch Chromatographie an Kieselgel (EtOAc/Hex 1:1) gereinigt. Weitere Reinigung erfolgte durch präparative HPLC. Das gewünschte Produkt 3 konnte dabei als weißer Schaum erhalten werden (30 mg, 47 μιηοΐ, 78%). Vacuum removed and the residue purified by chromatography on silica gel (EtOAc / Hex 1: 1). Further purification was carried out by preparative HPLC. The desired product 3 could be obtained as a white foam (30 mg, 47 μιηοΐ, 78%).
Rf: 0.6 (EtOAc/Hex 1:1). R f : 0.6 (EtOAc / Hex 1: 1).
Drehwert: [a]D 20 = -26.6 (c 0.82, DMSO). Rotation: [a] D 20 = -26.6 (c 0.82, DMSO).
IR (KBr): v [cm1] = 3122, 2360, 1630, 1583, 1422, 1392, 1255, 1132, 856, 756, 718, 700. 'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ [ppm] = 2.27-2.35 (bm, 0.5 Hminor, 12-Ha), 2.53-2.74 (bm, 1.5 H, 12-Ha) 2.81-3.17 (m, 4 H, 2 x 12-Hb, 2 x 1-H), 3.22-3.47 (m, 2 H, 2 x 10-Ha), 3.48-3.66 (m, 2 H, 2 x 10-Hb), 3.74-4.04 (m, 2 H, 2 x 2-Ha), 4.06-4.39 (m, 2 H, 2 x 2-Hb), 4.58 (t, J = 9.0 Hz, 0.3 Hminor, 13-H), 4.76 (t, J= 9.0 Hz, 0.7 H, 13-H), 6.74 (bd, J= 6.0 Hz, 1 H, 17-H), 6.87- 7.17 (m, 2 H, 2 x 16-H), 7.31-7.46 (m, 5 H, 2 x 7-H, 2 x 9-H, 8-H), 7.47-7.59 (bm, 3 H, 8-H, 2 x 15-H), 8.04-8.39 (m, 4 H, 2 x 4-H, 2 x 6-H), 10.23 (bs, 0.6 H, OH), 10.50 (bs, 0.4 Hminor, OH), 10.80 (bs, 0.2 Hminor, OH), 11.32 (bs, 0.8 H, OH). IR (KBr): v [cm 1 ] = 3122, 2360, 1630, 1583, 1422, 1392, 1255, 1132, 856, 756, 718, 700. 1 H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ): δ [ppm ] = 2.27-2.35 (bm, 0.5 H minor , 12-H a ), 2.53-2.74 (bm, 1.5 H, 12-H a ) 2.81-3.17 (m, 4 H, 2 x 12-H b , 2 x 1-H), 3.22-3.47 (m, 2 H, 2 x 10-H a ), 3.48-3.66 (m, 2 H, 2 x 10-Hb), 3.74-4.04 (m, 2 H, 2 x 2 -H a ), 4.06-4.39 (m, 2H, 2 x 2 -H b ), 4.58 (t, J = 9.0 Hz, 0.3 H minor , 13-H), 4.76 (t, J = 9.0 Hz, 0.7 H, 13-H), 6.74 (bd, J = 6.0 Hz, 1H, 17-H), 6.87-7.17 (m, 2H, 2 x 16-H), 7.31-7.46 (m, 5H, 2 x 7-H, 2 x 9-H, 8-H), 7.47-7.59 (bm, 3 H, 8-H, 2 x 15-H), 8.04-8.39 (m, 4 H, 2 x 4-H , 2 x 6-H), 10.23 (bs, 0.6 H, OH), 10.50 (bs, 0.4 H minor , OH), 10.80 (bs, 0.2 H minor , OH), 11.32 (bs, 0.8 H, OH).
"C-NMR (125 MHz, CDCI3): δ [ppm] = 35.7 (C-13), 40.6 (2 x C-lminor), 41.0 (2 x C-l), 41.3 (2 x C-l'), 45.8 (2 x C-12), 45.9 (2 x C-12minor), 46.3 (2 x C-12'), 46.7 (2 x C-10), 46.8 (2 x C-10minor), 47.0 (2 x C-10'), 53.4 (2 x C-2), 53.6 (2 x C-2minor), 53.9 (2 x C-2'), 54.1 (2 x C- 2'minor), 101.0 (2 x C-4minor), 101.3 (2 x C-4), 101.7 (2 x C-4'), 102.1 (2 x C-4'minor), 114. 1 (2 x C-2minor), 114.5 (2 x C-2), 114.6 (2 x C-2'), 115.2 (2 x C-2'minor), 121.9 (2 x C-9b mi„or), 122.1 (2 x C-9b), 122.3 (2 x C-7), 122.4 (2 x C-7'), 122.7 (2 x C-6), 122.9 (2 x C-6'), 123.0 (2 x C- 9), 123.3 (2 x C-9'), 126.3 (C-17), 126.4 (2 x C-15), 126.5 (2 x C-8), 127.2 (2 x C-16), 129.3 (2 x C-9a), 129.4 (2 x C-16'), 140.3 (2 x C-3), 140.6 (2 x C-3minor), 140.8 (2 x C-3'minor), 141.2 (2 x C-3'), 146.0 (C-14), 146.4 (C-14minor), 153.3 (2 x C-5), 153.6 (2 x C-5minor), 154.2 (2 x C- 5'minor), 154.6 (2 x C-5'), 169.5 (2 x 171.1 (2 x C=0), C-NMR (125 MHz, CDCl 3): δ [ppm] = 35.7 (C-13), 40.6 (2 x Cl min or), 41.0 (2 x Cl), 41.3 (2 x C-1 '), 45.8 (2 x C-12), 45.9 (2 x C-12 minor ), 46.3 (2 x C-12 '), 46.7 (2 x C-10), 46.8 (2 x C-10 mi nor), 47.0 ( 2 x C-10 '), 53.4 (2 x C-2), 53.6 (2 x C-2 minor ), 53.9 (2 x C-2'), 54.1 (2 x C-2 ' minor ), 101.0 ( 2 x C-4 minor ), 101.3 (2 x C-4), 101.7 (2 x C-4 '), 102.1 (2 x C-4' minor ), 114.1 (2 x C-2 minor ), 114.5 (2 x C-2), 114.6 (2 x C-2 '), 115.2 (2 x C-2' minor), 121.9 (2 x C-9 b mi "or), 122.1 (2 x C-9 b ), 122.3 (2 x C-7), 122.4 (2 x C-7 '), 122.7 (2 x C-6), 122.9 (2 x C-6'), 123.0 (2 x C-9), 123.3 (2 x C-9 '), 126.3 (C-17), 126.4 (2 x C-15), 126.5 (2 x C-8), 127.2 (2 x C-16), 129.3 (2 x C-8). 9 a ), 129.4 (2 x C-16 '), 140.3 (2 x C-3), 140.6 (2 x C-3 min or), 140.8 (2 x C-3' min or), 141.2 (2 x C-3 '), 146.0 (C-14), 146.4 (C-14 minor ), 153.3 (2 x C-5), 153.6 (2 x C-5 min or), 154.2 (2 x C-5' min or), 154.6 (2 x C-5 '), 169.5 (2 x 171.1 (2 x C = 0),
MS (ESI): m/z (%) 661.2 [M+Na] + (100). MS (ESI): m / z (%) 661.2 [M + Na] + (100).
C37H32Cl2N204 (661.2) ber. : 661.1637 C37H32Cl2N 2 0 4 (661.2) calc.: 661.1637
gef. :661.1618, [M+Na]+ (ESI-HRMS). gef. : 661.1618, [M + Na] + (ESI-HRMS).
HPLC (analytisch):  HPLC (analytical):
Säule: Kromasil® 100 C18, 250 x 4 mm, 5 μιη Column: Kromasil ® 100 C18, 250 x 4 mm, 5 μιη
Laufmittel: 30/70 H20/MeOH Eluent: 30/70 H 2 0 / MeOH
Fluss: 0.8 mL min" 1 Flow: 0.8 mL min "1
λ = 254 nm λ = 254 nm
tR: 21.1 min tR: 21.1 min
In den beigefügten Figuren 3 und 4 wird die Synthese einer Vorstufe von bifunktionalen seco-CBI-Glykosiden gezeigt. Dargestellt ist die Ausbildung der Acetale am Zucker und Ausbildung einer Triazolgruppe zum Schutz der Azid- gruppe, wobei die Azidgruppe geeignet ist später mit dem Antikörper ein entsprechendes Antikörper-Verbindung-Konjugat auszubilden .  The attached Figures 3 and 4 show the synthesis of a precursor of bifunctional seco-CBI glycosides. Shown is the formation of the acetals on the sugar and formation of a triazole group for the protection of the azide group, wherein the azide group is suitable later to form a corresponding antibody-conjugate conjugate with the antibody.
Die Figuren 6 und 7 zeigen die Beispiele erfindungsgemäßer Strukturen und deren in vitro Cytotoxicität in humanen Bronchialcarcinomzellen der Linie A549.  FIGS. 6 and 7 show the examples of structures according to the invention and their in vitro cytotoxicity in human bronchial carcinoma cells of the A549 line.
In der Figur 5 ist eine geeignete Struktur einer Antikörper-Verbindung- FIG. 5 shows a suitable structure of an antibody compound
Konjugats dargestellt. Hierbei wird durch MAB (1 ) beziehungsweise MAB (2) dargestellt, dass unterschiedliche Antikörper eingefügt werden können. Die Anbindung erfolgt dabei über eine Succinimidderivat. Conjugate shown. It is shown by MAB (1) or MAB (2) that different antibodies can be inserted. The connection takes place via a Succinimidderivat.
Diese Verbindung stellt ein Beispiel für geeignete Verknüpfung der erfindungs- gemäßen Verbindung über ein spaltbares Substrat mit einem Antikörper dar.  This compound represents an example of suitable linking of the compound according to the invention via a cleavable substrate with an antibody.
Allgemeine Verfahren  General procedure
Experimentelle Verfahren: Soweit nicht anders ausgeführt wurden die Reaktionen unter Schutzgasatmosphäre in flammengetrockneten Gefäßen durchgeführt und die Reaktionsstoffe wurden mittels Spritze oder Transferkanüle un- ter Argondruck eingebracht. Alle Lösungsmittel waren analysenrein und wurden über Molekularsieb gelagert. Alle aus kommerziellen Quellen erhaltenen Reagenzien wurden ohne weitere Aufreinigung verwendet. Langzeitkühlung wurde durchgeführt mittels Cryostat EK 90 von Haake. Dünnschicht Chromatographie wurde durchgeführt mittels vorbeschichteten Sil ikagelplatten Sl 60 F254 von Merck. Silikagel 60 (0.040 0.063 mm) von Merck wurde für die Flash- Chromatographie verwendet. Färbung wurde durchgeführt mittels Phosphomo- lybdänsäurehydrat von Sigma-Aldrich (in MeOH). Ausbeuten beziehen sich auf isolierte und aufgereinigte Verbindungen solange nicht anders ausgeführt. Experimental Procedures: Unless stated otherwise, the reactions were carried out under a protective gas atmosphere in flame-dried vessels and the reactants were introduced by means of a syringe or transfer cannula under argon pressure. All solvents were reagent grade and stored over molecular sieves. All reagents obtained from commercial sources were used without further purification. Long-term cooling was performed using Cryostat EK 90 from Haake. Thin layer chromatography was carried out by means of precoated silica gel sl 60 F254 from Merck. Silica gel 60 (0.040 0.063 mm) from Merck was used for flash chromatography. Staining was carried out using phosphomolybdic acid hydrate from Sigma-Aldrich (in MeOH). Yields refer to isolated and purified compounds unless otherwise stated.
NMR Spectroscopie: NMR Spectren wurden aufgezeichnet mittels Varian Mer- cury-300, Unity-300 und lnova-600 Spektrometer in CDCI3 oder CD3OD oder c/6-DMSO; chemische Verschiebungen sind angegeben in ppm relativ zu Tet- rametylsilan (TMS), Kopplungskonstanten J in Hertz. Die Laufmittelsignale wurden als Referenzen verwendet und die chemischen Verschiebungen in die TMS-Skalierung konvertiert (CHCIs: 5H = 7.26 ppm, 5c = 77.0 ppm; CDsOD: 5H = 3.34 ppm, 5c = 49.86 ppm and c/6-DMSO: 5H = 2.54 ppm, 5c = 40.45 ppm). Die Multiplizitäten der ersten Ordnung wurden bezeichnet als: s (Singlet), d (Doublet), t (Triplet), q (Quartett), dd (Doublet von Doubletten) usw. Signale höherer Ordnungen wurden bezeichnet als m (Multiplet). NMR Spectroscopy: NMR Spectra were recorded using Varian Mercury-300, Unity-300 and lnova-600 spectrometers in CDCl3 or CD3OD or c / 6 -DMSO; chemical shifts are reported in ppm relative to tetramethylsilane (TMS), coupling constants J in Hertz. The eluent signals were used as references and the chemical shifts were converted to TMS scaling (CHCIs: 5H = 7.26 ppm, 5c = 77.0 ppm, CDNOD: 5H = 3.34 ppm, 5c = 49.86 ppm and c / 6 -DMSO: 5H = 2.54 ppm, 5c = 40.45 ppm). The multiplicities of the first order were designated as: s (singlet), d (doublet), t (triplet), q (quartet), dd (doublet of doublets), etc. Higher order signals were referred to as m (multiplet).
IR Spectroscopie: IR Spectren wurden aufgezeichnet mittels Bruker Vektor 22 Spektrometer, UV Spektroskopie: UV Spectren wurden aufgezeichnet mittels JASCO V-630 Spektrometer, Massenspektrometrie: ESI-MS und ESI-HRMS Spektren wurden aufgezeichnet mittels Bruker Daltonik Apex IV. IR spectroscopy: IR spectrums were recorded using Bruker vector 22 spectrometer, UV spectroscopy: UV spectrums were recorded using JASCO V-630 spectrometer, mass spectrometry: ESI-MS and ESI-HRMS spectra were recorded using Bruker Daltonics Apex IV.
Weitere Synthesen: Further syntheses:
l^-Phenylenebisii^-l-ichloromethy^-S-hydroxy-l^-dihydro-S f-benzoIelindol-S-ylJmethanon)1-phenylenebis-1-dichloromethyl-3-hydroxy-1-dihydro-5-benzo-1-indole-5-yl-methanone
(51): (51):
51  51
4M HCI/EtOAc (12 mL) wurden zu fButoxycarbonylseco-CBI (50 mg, 1 50 μηηοΙ, 1 .0 eq .) bei Raumtemperatur hinzugefügt und für drei Stunden bei der gleichen Temperatur gerührt. Überschüssiges HCI/EtOAc wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und unter Vakuum für eine Stunde getrocknet. Der erhaltene Rest wurde in DMF (1 2 mL) gelöst und hierzu wurde bei 0°C Py- ridin (48 μΙ_, 600 μηηοΙ, 4.0 eq.) hinzugefügt gefolgt von Isophthaloyldichlorid (15 mg, 75 μηηοΙ, 0.5 eq.) und die Reaktionsmischung wurde für 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Evaporation des Lösungsmittels unter hohem Druck ergab ein Rohprodukt, das aufgereinigt wurde mittels Flash- Chromatographie (EtOAc:PE 2:3 zu EtOAc) um 51 zu erhalten (38 mg, 85%). 4M HCI / EtOAc (12 mL) were added to f-butoxycarbonylseco-CBI (50 mg, 1 50 μηηοΙ, 1 .0 eq.) At room temperature and stirred for three hours at the same temperature. Excess HCI / EtOAc was removed by evaporation under reduced pressure and dried under vacuum for one hour. The resulting residue was dissolved in DMF (12 mL) and to this was added at 0 ° C pyridine (48 μΙ_, 600 μηηοΙ, 4.0 eq.) Followed by isophthaloyl dichloride (15 mg, 75 μηηοΙ, 0.5 eq.) And the Reaction mixture was stirred for 16 hours at room temperature. Evaporation of the solvent under high pressure gave a crude product which was purified by flash chromatography (EtOAc: PE 2: 3 to EtOAc) to give 51 (38 mg, 85%).
Rf : 0.6 (EtOAc). Rf: 0.6 (EtOAc).
H PLC (analytisch): H PLC (analytical):
Säule: Kromosil® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη Column: Kromosil ® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη
Laufmittel: MeOH/THF (1 : 1 ) : H2O = 70 : 30 Eluent: MeOH / THF (1: 1): H 2 O = 70:30
Fluß: 0.8 mL min"1 Flow: 0.8 mL min -1
λ: 254 nm λ: 254 nm
fR: 9.6 min fR: 9.6 min
Drehwert: [a]D 20 = -35.0 (c 1 .0, DMSO). Rotation: [a] D 20 = -35.0 (c 1 .0, DMSO).
1 H -NM R (500 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): <5 [ppm] = 3.88 (dd, J = 1 1 .0, 7.4 Hz, 2H, 2 x 10-Ha), 3.98 (dd, J = 10.8, 3.1 Hz, 2H, 2 χ 10-Hb), 4.05 - 4.23 (m, 4H, 2 χ 1 -H, 2 x 2-Ha), 4.38 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 2H, 2 χ 2-Hb), 6.93 (d, J = 0.8 Hz, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.1 , 6.9, 1 .1 Hz, 2H, 2 χ 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1 .3 Hz, 2H, 2 x 8-H), 7.66 (brs, 1 H, 4-H), 7.72 - 7.77 (m, 1 H, 3'-H), 7.79 - 7.88 (m, 4H, 6'-H, 8'-H, 2 χ 9-H), 7.91 (t, J = 1 .6 Hz, 1 H, 4-H), 8.1 8 (d, J = 8.1 Hz, 2H, 2 x 6-H), 10.24 (s, 2H, 2 x 5-OH). 1 H-NMR R (500 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): <5 [ppm] = 3.88 (dd, J = 1 1 .0, 7.4 Hz, 2H, 2 x 10-Ha), 3.98 (dd, J = 10.8, 3.1 Hz, 2H, 2 χ 10-Hb), 4.05 - 4.23 (m, 4H, 2 χ 1 -H, 2 x 2-Ha), 4.38 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz , 2H, 2 χ 2-H b ), 6.93 (d, J = 0.8 Hz, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.1, 6.9, 1 .1 Hz, 2H, 2 χ 7 H), 7.55 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1 .3 Hz, 2H, 2 x 8-H), 7.66 (brs, 1 H, 4-H), 7.72 - 7.77 (m, 1 H, 3 ' -H), 7.79 - 7.88 (m, 4H, 6'-H, 8'-H, 2 χ 9-H), 7.91 (t, J = 1 .6 Hz, 1 H, 4-H), 8.1 8 (d, J = 8.1 Hz, 2H, 2 x 6-H), 10.24 (s, 2H, 2 x 5-OH).
13C-NM R (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ [ppm] = 41 .4 (2 χ C-1 ), 47.8 (2 χ C- 10), 55.9 (2 x C-2), 1 00.7 (C-4), 1 16.0 (2 χ C-5a), 122.9 (2 χ C-9b), 123.2 (2 χ C-9), 1 23.6 (2 x C-7), 123.8 (2 χ C-6), 1 25.4 (C-3'), 125.9 (C-4), 127.9 (2 χ C- 8), 129.3 (C-6', C-8'), 129.7 (C-7'), 1 30.6 (2 χ C-9a), 137.9 (C-2', C-4'), 142.1 (2 x C-3a), 154.8 (2 χ C-5), 167.7 (2 χ CON). HRMS (ESI): m/z berechnet für C34H26CI2N2O4 619.1 167 [M+Na]+, bestimmt 61 9.1 1 32. 13 C-NM R (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ [ppm] = 41.4 (2χC-1), 47.8 (2χC-10), 55.9 (2xC -2), 1 00.7 (C-4), 1 16.0 (2 χ C-5a), 122.9 (2 χ C-9b), 123.2 (2 χ C-9), 1 23.6 (2 x C-7), 123.8 (2χC-6), 1 25.4 (C-3 '), 125.9 (C-4), 127.9 (2χC-8), 129.3 (C-6', C-8 '), 129.7 (C -7 '), 1 30.6 (2 χ C-9a), 137.9 (C-2', C-4 '), 142.1 (2 x C-3a), 154.8 (2 χ C-5), 167.7 (2 χ CON). HRMS (ESI): m / z calculated for C34H26CI2N2O4 619.1 167 [M + Na] + , determined 61 9.1 1 32.
S-Nitro-l^-phenyleneJbisii^-l-ichloromethy^-S-hydroxy-l^-dihydro-S f-benzoIelindol-S- yl)methanon) (52): S-nitro-1-phenylenebis-1-l-dichloromethyl-8-hydroxy-1-dihydro-5-benzo-1-indole-5-yl) -methanone) (52):
52 4M HCI/EtOAc (6m L) wurden zu fButoxycarbonylseco-CBI (50 mg, 1 50 μηηοΙ, 1 .0 eq.) bei Raumtemperatur hinzugefügt und die erhaltene Lösung wurde bei der gleichen Temperatur für 3 Stunden gerührt. Überschüssiges HCI/EtOAc wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und der erhaltene Rest unter starkem Vakuum für 1 Stunde getrocknet. Das gebildete seco-CBI wurde in DMF( 6 mL) gelöst und hierzu wurde unter Rühren bei 0°C Pyridin (48 μΐ, 600 μΐηοΙ, 4.0 eq.) und 5-Nitroisophthaloyldichlorid (20 mg, 75 μηηοΙ, 0.5 eq .) hinzugefügt und das Rühren wurde für 1 6 Stunden bei Raumtemperatur fortgeführt. Evaporation des Lösungsmittels unter hohem Druck ergab das Rohprodukt welches mittels Flash-Chromatographie (EtOAc:PE 1 :1 ) aufgerei- nigt wurde, um 52 zu ergeben (44 mg, 88%).  52 4M HCI / EtOAc (6mL) were added to fButoxycarbonylseco-CBI (50mg, 150μηηοΙ, 1 eq.) At room temperature and the resulting solution was stirred at the same temperature for 3 hours. Excess HCI / EtOAc was removed by evaporation under reduced pressure and the residue obtained dried under high vacuum for 1 hour. The resulting seco-CBI was dissolved in DMF (6 mL) and to this was added pyridine (48 μΐ, 600 μΐηοΙ, 4.0 eq.) And 5-nitroisophthaloyl dichloride (20 mg, 75 μηηοΙ, 0.5 eq.) With stirring at 0 ° C and stirring was continued for 16 hours at room temperature. Evaporation of the solvent under high pressure gave the crude product, which was purified by flash chromatography (EtOAc: PE 1: 1) to give 52 (44 mg, 88%).
Rf : 0.5 (EtOAcPE = 1 : 1 ). Rf: 0.5 (EtOAcPE = 1: 1).
HPLC (analytisch): HPLC (analytical):
Säule: Kromosil® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη Column: Kromosil ® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη
Laufmittel: MeOH/THF (1 : 1 ) : H2O = 70 : 30 Eluent: MeOH / THF (1: 1): H 2 O = 70:30
Fluß: 0.8 mL min"1 Flow: 0.8 mL min -1
λ: 254 nm λ: 254 nm
fR: 10.7 min fR: 10.7 min
Drehwert: [a]D 20 = -6.6 (c 0.6, DMSO). 1 H -NM R (500 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): <5 [ppm] = 3.87 - 4.05 (m, 4H, 2 χ 10-Ha> 2 x 10-Hb), 4.07 - 4.27 (m, 4H, 2 χ 1 -H, 2 χ 2-Hb), 4.40 - 4.57 (m, 2H, 2 x 2- Ha), 7.41 (ddd, J = 8.1 , 6.7, 1 .1 Hz, 2H, 2 χ 7-H), 7.56 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1 .4 Hz, 3H, 2 x 8-H, 4-Hb), 7.76 - 7.97 (m, 3H, 2 χ 9-H, 3'-H), 8.18 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 2 x 6-H), 8.37 (s, 1 H, 4-Ha), 8.63 (d, J = 1 .5 Hz, 2H, 6'-H, 8'-H), 1 0.28 (s, 2H, 2 x 5-OH). Rotation: [a] D 20 = -6.6 (c 0.6, DMSO). 1 H-NMR R (500 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): <5 [ppm] = 3.87 - 4.05 (m, 4H, 2 χ 10-H a> 2 x 10-Hb), 4.07 - 4.27 (m, 4H, 2 χ 1 -H, 2 χ 2-Hb), 4.40 - 4.57 (m, 2H, 2 x 2-Ha), 7.41 (ddd, J = 8.1, 6.7, 1 .1 Hz, 2H , 2 χ 7-H), 7.56 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1 .4 Hz, 3H, 2 x 8-H, 4-H b ), 7.76 - 7.97 (m, 3H, 2 χ 9-H , 3'-H), 8.18 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 2 x 6-H), 8.37 (s, 1 H, 4-H a ), 8.63 (d, J = 1 .5 Hz, 2H , 6'-H, 8'-H), 1 0.28 (s, 2H, 2 x 5-OH).
13C-NM R (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ [ppm] = 41 .5 (2 χ C-1 ), 47.8 (2 χ C- 10), 55.7 (2 x C-2), 1 00.4 (C-4a), 1 16.3 (2 χ C-5a), 123.1 (2 χ C-9a), 123.3 (2 χ C-9), 1 23.8 (2 χ C-7), 123.9 (2 χ C-6), 1 24.1 (C-7'), 125.4 (C-4b), 128.0 (C-3'), 130.6 (2 x C-8), 131 .8 (2 χ C-9a), 139.4 (C-2', C-4'), 141 .6 (2 χ C-3a), 148.9 (C-6', C-8'), 1 54.9 (2 χ C-5), 165.4 (2 χ CON). 13 C-NM R (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ [ppm] = 41.5 (2 χ C-1), 47.8 (2 χ C-10), 55.7 (2 x C -2), 1 00.4 (C-4 a ), 1 16.3 (2 χ C-5a), 123.1 (2 χ C-9a), 123.3 (2 χ C-9), 1 23.8 (2 χ C-7) , 123.9 (2 χ C-6), 1 24.1 (C-7 '), 125.4 (C-4 B), 128.0 (C-3'), 130.6 (2 x C-8), 131 .8 (2 χ C-9a), 139.4 (C-2 ', C-4'), 141.6 (2χC-3a), 148.9 (C-6 ', C-8'), 1 54.9 (2χC-5 ), 165.4 (2 χ CON).
H RMS (ESI): m/z berechnet für C34H25CI2N3O6 640.1 042 [M-H]+, bestimmt 640.1022. H RMS (ESI): m / z calculated for C34H25CI2N3O6 640.1 042 [MH] + , determined 640.1022.
S-Amino-l^-phenyleneJbisii^-l-ichloromethy^-S-hydroxy-l^-dihydro-S f-benzoIelindol-S- yl)methanon) (53): S-amino-1-phenylenebis-1-dichloromethyl-3-hydroxy-1-dihydro-5-benzo-1-indole-5-yl) -methanone) (53):
53  53
Verbindung 52 ((18 mg, 28 μηηοΙ) wurde in THF (20 ml_) gelöst und zweimal über H-Cube 10%Pd/C System unter vollem H2 Modus bei Raumtemperatur geleitet. Nach Abschluss der Reaktion wurde das Lösungsmittel unter reduziertem Druck evaporiert um das Rohprodukt zu ergeben, das dann mittels Compound 52 ((18 mg, 28 μηηοΙ) was dissolved in THF (20 mL) and passed twice over H-Cube 10% Pd / C system under full H2 mode at room temperature After completion of the reaction, the solvent was evaporated under reduced pressure to give the crude product, then by means of
Blitzsäulenchromatographie aufgereinigt wurde (MeOH :CH2Cl2 1 :4) um 53 zu ergeben (1 3 mg, 76%). Rf : 0.4 (EtOAc). HPLC (analytisch): Flash column chromatography (MeOH: CH 2 Cl 2 1: 4) to give 53 (1 3 mg, 76%). Rf: 0.4 (EtOAc). HPLC (analytical):
Säule: Kromosil® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη Column: Kromosil ® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη
Laufmittel: MeOH/THF (1 : 1 ) : H2O = 62 : 38 Eluent: MeOH / THF (1: 1): H 2 O = 62: 38
Fluß: 0.8 ml_ min"1 Flow: 0.8 ml min. "1
λ: 254 nm λ: 254 nm
fR: 19.8 min f R : 19.8 min
Drehwert: [a]D 20 = -27.5 (c 0.4, DMSO). Rotation: [a] D 20 = -27.5 (c 0.4, DMSO).
1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c/e, 50 °C): <5 [ppm] = 3.46 - 4.26 (m, 8H, 2 χ 10-Ha, 2 x 10-Hb, 2 x 1 -H, 2 χ 2-Ha), 4.40 (s, 2H, 2 χ 2-Hb), 6.95 (s, 1 H, 3'-H), 6.92 (d, J = 1 .0 Hz, 2H, 6'-H, 8'-H), 6.57 (d, J = 1 .0 Hz, 2Hminor, 6'-H, 8'-H) 7.30 - 7.45 (m, 2H, 2 x 7-H), 7.47 - 7.61 (m, 2H, 2 χ 8-H), 7.62 - 8.07 (m, 4H, 2 χ 9-H, 2 χ 4-H), 8.08 - 8.28 (m, 2H, 2 χ 6-H), 1 0.35 (s, 2H, 2 χ 5-OH). 1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c / e, 50 ° C): <5 [ppm] = 3.46 - 4.26 (m, 8H, 2 χ 10-Ha, 2 x 10-Hb, 2 x 1 -H , 2 χ 2-H a ), 4.40 (s, 2H, 2 χ 2-H b ), 6.95 (s, 1 H, 3'-H), 6.92 (d, J = 1 .0 Hz, 2H, 6 '-H, 8'-H), 6.57 (d, J = 1 .0 Hz, 2Hminor, 6'-H, 8'-H) 7.30 - 7.45 (m, 2H, 2 x 7-H), 7.47 - 7.61 (m, 2H, 2 χ 8-H), 7.62 - 8.07 (m, 4H, 2 χ 9-H, 2 χ 4-H), 8.08 - 8.28 (m, 2H, 2 χ 6-H), 1 0.35 (s, 2H, 2 χ 5-OH).
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 50 °C): δ [ppm] = 40.9 (2 χ C-1 ), 48.1 (2 χ C- 10), 56.0 (2 x C-2), 1 00.8 (C-4), 1 14.5 (C-3'), 1 1 6.0 (2 χ C-5b), 122.9 (2 χ C- 9b), 123.4 (2 x C-7), 123.7 (C-6\ C-8'), 123.9 (2 χ C-9), 1 25.6 (2 χ C-6), 128.0 (2 x C-8), 128.7 (C-2', C-4'), 130.8 (2 χ C-9a), 139.9 (2 χ C-3a), 152.2 (C-7'), 154.9 (2 x C-5), 168.6 (2 χ CON). HRMS (ESI): m/z berechnet für C34H27CI2N3O4 634.1 276 [M+Na]+, bestimmt 13 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 50 ° C): δ [ppm] = 40.9 (2 χ C-1), 48.1 (2 χ C-10), 56.0 (2 × C-2) , 1 00.8 (C-4), 1 14.5 (C-3 '), 1 1 6.0 (2 χ C-5b), 122.9 (2 χ C-9b), 123.4 (2 x C-7), 123.7 (C -6 \ C-8 '), 123.9 (2χC-9), 1.25.6 (2χC-6), 128.0 (2 xC-8), 128.7 (C-2', C-4 '), 130.8 (2 χ C-9a), 139.9 (2 χ C-3a), 152.2 (C-7 '), 154.9 (2 x C-5), 168.6 (2 χ CON). HRMS (ESI): m / z calculated for C34H27CI2N3O4 634.1 276 [M + Na] + , determined
634.1 277. 634.1 277.
S-Iodo-l^-phenyleneJbisii^-l-ichloromethy^-S-hydroxy-l^-dihydro-S f-benzoIelindol-S- yl)methanon) (54): S-iodo-1-phenylenebis-1-yl-1-methyl-1-hydroxy-1-dihydro-5-benzo-1-indole-5-yl) -methanone) (54):
54  54
4M HCI/EtOAc (12 ml) wurden zu fButoxycarbonylseco-CBI (50 mg, 1 50 μηηοΙ, 1 .0 eq.) bei Raumtemperatur hinzugefügt und die Mischung wurde für 3 Stun- den bei der gleichen Temperatur gerührt. Überschüssiges HCI/EtOAc wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und unter starkem Vakuum für eine Stunde getrocknet. Der erhaltene Rest wurde in DMF (12 ml_) gelöst und es wurde unter Rühren bei 0°C Pyridin (48 μΙ_, 600 μηηοΙ, 4.0 eq.) und 5- lodoisophthaloyldichlorid (24 mg, 75 μηηοΙ, 0.5 eq.) hinzugefügt. Das Rühren wurde für 1 6 Stunden bei Raumtemperatur fortgeführt. Nach Evaporation des Lösungsmittels unter hohem Druck ergab dieses ein Rohprodukt welches mit Flash-Chromatographie aufgereinigt wurde (EtOAcPE 1 : 1 to EtOAc) um 54 zu ergeben (49 mg, 90%). 4M HCI / EtOAc (12 mL) was added to f-butoxycarbonylseco-CBI (50 mg, 50 μηηο, 1 eq.) At room temperature and the mixture was stirred for 3 hours. stirred at the same temperature. Excess HCI / EtOAc was removed by evaporation under reduced pressure and dried under high vacuum for one hour. The resulting residue was dissolved in DMF (12 mL) and pyridine (48 μΙ_, 600 μηηοΙ, 4.0 eq.) And 5-iodoisophthaloyl dichloride (24 mg, 75 μηηοΙ, 0.5 eq.) Were added with stirring at 0 ° C. Stirring was continued for 16 hours at room temperature. After evaporation of the solvent under high pressure, this gave a crude product which was purified by flash chromatography (EtOAcPE 1: 1 to EtOAc) to give 54 (49 mg, 90%).
Rf : 0.3 (EtOAcPE 1 : 1 ). Rf: 0.3 (EtOAcPE 1: 1).
HPLC (analytisch): HPLC (analytical):
Säule: Kromosil® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη Column: Kromosil ® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη
Laufmittel: MeOH/THF (1 : 1 ) : H2O = 70 : 30 Eluent: MeOH / THF (1: 1): H 2 O = 70:30
Fluß: 0.8 mL min"1 Flow: 0.8 mL min -1
λ: 254 nm λ: 254 nm
fR: 14.7 min fR: 14.7 min
Drehwert: [a]D 20 = -22.5 (c 0.8, DMSO). Rotation: [a] D 20 = -22.5 (c 0.8, DMSO).
1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): <5 [ppm] = 3.75 - 4.04 (m, 4H, 2 χ 10-Ha, 2 x 2-Hb), 4.05 - 4.34 (m, 4H, 2 χ 2-Hb, 2 χ 1 -H), 4.44 (t, J = 1 0.0 Hz, 2H, 2 χ 2-Ha), 6.93 (s, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.0, 7.0, 1 .0 Hz, 2H, 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1 .0 Hz, 2H, 8-H), 7.69 (brs, 1 H, 4-H), 7.84 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 2 x 9- H), 7.93 (s, 1 H, 4-H), 8.12 - 8.39 (m, 4H, 6'-H, 8'-H, 2 χ 6-H), 10.27 (s, 2H, 2 χ 5-OH). 1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): <5 [ppm] = 3.75 - 4.04 (m, 4H, 2 χ 10-Ha, 2 x 2-Hb), 4.05 - 4.34 ( m, 4H, 2 χ 2-Hb, 2 χ 1 -H), 4.44 (t, J = 1 0.0 Hz, 2H, 2 χ 2-Ha), 6.93 (s, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.0, 7.0, 1 .0 Hz, 2H, 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1 .0 Hz, 2H, 8-H), 7.69 (brs, 1 H, 4-H), 7.84 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 2 x 9-H), 7.93 (s, 1 H, 4-H), 8.12-8.39 (m, 4H, 6'-H, 8 ' -H, 2χ6-H), 10.27 (s, 2H, 2χ5-OH).
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ [ppm] = 40.8 (2 χ C-1 ), 47.8 (2 χ C- 10), 55.8 (2 x C-2), 95.4 (C-7'), 1 00.5 (2 χ C-4b), 1 1 6.1 (2 χ C-5a), 123.0 (2 χ C-9a), 123.3 (2 χ C-9), 1 23.7 (2 χ C-7), 123.8 (2 χ C-6), 1 25.1 (C-4a), 125.4 (C-3'), 127.9 (2 x C-8), 1 30.6 (2 χ C-9a), 137.7 (C-6', C-8'), 1 39.6 (C-2', C-4'), 141 .8, (2 x C-3a), 154.8 (2 χ C-5), 1 66.0 (2 χ CON). 13 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ [ppm] = 40.8 (2 χ C-1), 47.8 (2 χ C-10), 55.8 (2 × C-2) , 95.4 (C-7 '), 1 00.5 (2 χ C-4b), 1 1 6.1 (2 χ C-5a), 123.0 (2 χ C-9a), 123.3 (2 χ C-9), 1 23.7 (2 χ C-7), 123.8 (2 χ C-6), 1 25.1 (C-4a), 125.4 (C-3 '), 127.9 (2 x C-8), 1 30.6 (2 χ C-9a ), 137.7 (C-6 ', C-8'), 1 39.6 (C-2 ', C-4'), 141.8, (2 x C-3a), 154.8 (2χC-5), 1 66.0 (2 χ CON).
HRMS (ESI): m/z berechnet für C34H25CI2I N2O4 745.01 34 [M+Na]+, bestimmt 745.01 00. HRMS (ESI): m / z calculated for C34H25CI2I N2O4 745.01 34 [M + Na] + , determined 745.01 00.
S-iiTrimethylsilylJethyny^-l^-phenyleneJbisii^-l-ichloromethy^-S-hydroxy-l^-dihyd benzo[e]indol-3-yl)methanon) (55): S-iiTrimethylsilylJethynyl-1-phenylenebis-1-l-dichloromethyl-S-hydroxy-1-dihydbenzo [e] indol-3-yl) -methanone (55):
55  55
Zu einer Lösung von 54 (79 mg, 105 μηηοΙ, 1 .0 eq.) in Triethylamin (420 μί) wurde Tetrakis (Triphenylphosphin)palladium(O) ((6 mg, 5 μηηοΙ, 5 mol%), Kup- feriodid (2 mg, 1 0 μηηοΙ, 1 0 mol%), hinzugefügt und anschließend Ethinyltrime- thylsilan (22 μί, 1 58 μmol, 1 .5 eq.) bei Raumtemperatur hinzugefügt und das Rühren wurde für 1 6 Stunden bei der gleichen Temperatur fortgesetzt. Evapo- ration des Lösungsmittels unter hohem Druck ergab das Rohprodukt das dann mittels Flash-Chromatographie aufgereinigt wurde (EtOAcPE 2:3 zu EtOAc:PE 3:2) um 55 zu ergeben (61 mg, 88%). Tetrakis (triphenylphosphine) palladium (O) ((6 mg, 5 μmol, 5 mol%), copper iodide ( 2 mg, 10 μηηοΙ, 10 mol%), and then ethynyl trimethylsilane (22 μί, 1 58 μmol, 1 .5 eq.) Was added at room temperature, and stirring was continued for 16 hours at the same temperature. Evaporation of the solvent under high pressure gave the crude product, which was then purified by flash chromatography (EtOAcPE 2: 3 to EtOAc: PE 3: 2) to give 55 (61 mg, 88%).
Rf : 0.4 (EtOAcPE 1 : 1 ). Rf: 0.4 (EtOAcPE 1: 1).
Drehwert: [a]D 20 = -43.8 (c 0.73, DMSO). Rotation: [a] D 20 = -43.8 (c 0.73, DMSO).
1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): <5 [ppm] = 3.82 - 3.93 (m, 2H, 2 χ 10-Ha), 3.93 - 4.02 (m, 2H, 2 χ 10-Hb), 4.02 - 4.23 (m, 4H, 2 χ 2-Ha, 2 χ 1 -H), 4.44 (dd, J = 1 1 .2, 8.5 Hz, 2H, 2 χ 2-Hb), 6.44 (s, 1 Hminor, 3'-H) 6.93 (s, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.1 , 6.8, 1 .2 Hz, 2H, 2 χ 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .4 Hz, 2H, 2 x 8-H), 7.69 (brs, 1 H, 4-H), 7.80 - 8.02 (m, 5H, 4-H, 6'-H, 8'-H, 2 χ 9-H), 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 2H, 2 χ 6-H), 1 0.25 (s, 2H, 2 χ 5-OH). 1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): <5 [ppm] = 3.82 - 3.93 (m, 2H, 2 χ 10-Ha), 3.93 - 4.02 (m, 2H, 2 χ 10-Hb), 4.02 - 4.23 (m, 4H, 2 χ 2-H a , 2 χ 1 -H), 4.44 (dd, J = 1 1 .2, 8.5 Hz, 2H, 2 χ 2-H b ) , 6.44 (s, 1 Hminor, 3'-H) 6.93 (s, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.1, 6.8, 1 .2 Hz, 2H, 2 χ 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .4 Hz, 2H, 2 x 8-H), 7.69 (brs, 1 H, 4-H), 7.80 - 8.02 (m, 5H, 4-H, 6 ' -H, 8'-H, 2χ9-H), 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 2H, 2χ6-H), 1 0.25 (s, 2H, 2χ5-OH).
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ [ppm] = 0.3 (CHs), 41 .4 (2 χ C-1 ), 47.8 (2 x C-10), 55.7 (2 χ C-2), 97.2 (Si-C=), 1 00.5 (C-4), 1 04.2 (Ar-C=), 1 1 6.1 (2 x C-5a), 123.0 (2 χ C-9b), 123.3 (2 χ C-9), 123.7 (2 χ C-7), 1 23.8 (2 χ C-6), 124.0 (C-7'), 125.4 (C-3'), 1 26.0 (2 χ C-4), 127.9 (2 χ C-8), 1 30.6 (2 χ C-9a), 13 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ [ppm] = 0.3 (CHs), 41.4 (2 χ C-1), 47.8 (2 x C-10), 55.7 (2 χ C-2), 97.2 (Si-C =), 1 00.5 (C-4), 1 04.2 (Ar-C =), 1 1 6.1 (2 x C-5a), 123.0 (2 χ C-) 9b), 123.3 (2 χ C-9), 123.7 (2 χ C-7), 1 23.8 (2 χ C-6), 124.0 (C-7 '), 125.4 (C-3'), 1 26.0 (2χC-4), 127.9 (2χC-8), 1 30.6 (2χC-9a),
132.1 (C-6\ C-8'), 1 38.5 (C-2', C-4'), 1 39.6 (2 χ C-3a), 141 .8, 1 54.8 (2 χ C-5), 166.6 (2 x CON). HRMS (ESI): m/z berechnet für C39H34CI2N2O4S1 691 .1 587 [M-H]+, bestimmt 691 .1555. 132.1 (C-6 \ C-8 '), 1 38.5 (C-2', C-4 '), 1 39.6 (2χC-3a), 141.8, 1 54.8 (2χC-5), 166.6 (2 x CON). HRMS (ESI): m / z calcd for C39H34CI2N2O4S1 691 .1 587 [MH] + , determined 691 .1555.
S-Ethynyl-l^-phenyleneJbisii^-l-ichloromethy^-S-hydroxy-l^-dihydro-S f-benzoIelindol-S- yl)methanon) (56): S -ethynyl-1-phenylenebis-1-yl-1-methyl-1-hydroxy-1-dihydro-5-benzo-1-indole-5-yl) -methanone) (56):
56  56
Zu einer gerührten vorgekühlten (0°C) Lösung von 55 (61 mg, 881 μηηοΙ, 1 .0 eq .) in THF (2 ml_) wurde 70%-iges Wasserstofffluorid/Pyridin (63 μΙ_, 2.20 mmol, 25 eq .) hinzugefügt und das Rühren wurde bei 35°C für 1 2 Stunden fortgesetzt. Zusätzliches 70%-iges Wasserstofffluorid/Pyridin (63 μΙ_, 2.20 mmol, 25 eq.) wurde bei 0°C hinzugefügt und das Rühren bei 35°C für weitere 24 Stunden fortgesetzt. Das Abziehen des Lösungsmittels unter hohem Druck ergab das Rohprodukt was dann mittels Flash-Chromatographie (EtOAc:PE 2:3 zu EtOAcPE 1 :1 ) aufgereinigt wurde um 56 zu ergeben (39 mg, 71 %). Zurückgewonnenes Ausgangsmaterial (17 mg, 28%). To a stirred precooled (0 ° C) solution of 55 (61 mg, 881 μηηοΙ, 1 .0 eq.) In THF (2 mL) was added 70% hydrogen fluoride / pyridine (63 μΙ_, 2.20 mmol, 25 eq.). was added and stirring was continued at 35 ° C for 1 2 hours. Additional 70% hydrogen fluoride / pyridine (63 μΙ_, 2.20 mmol, 25 eq.) Was added at 0 ° C and stirring continued at 35 ° C for an additional 24 hours. Removal of the solvent under high pressure gave the crude product which was then purified by flash chromatography (EtOAc: PE 2: 3 to EtOAcPE 1: 1) to give 56 (39 mg, 71%). Recovered starting material (17 mg, 28%).
Rf : 0.3 (EtOAcPE 1 : 1 ). Rf: 0.3 (EtOAcPE 1: 1).
HPLC (analytisch): HPLC (analytical):
Säule: Kromosil® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη Column: Kromosil ® 100 C1 8, 250 χ 4 mm, 5 μηη
Laufmittel : MeOH/THF (1 :1 ) : H2O = 70 : 30  Eluent: MeOH / THF (1: 1): H2O = 70: 30
Fluß: 0.8 mL min"1 Flow: 0.8 mL min -1
λ: 254 nm λ: 254 nm
fR: 1 1 .0 min Drehwert: [a]D 20 = -15.2 (c 0.46, DMSO). fR: 1 1 .0 min Rotation: [a] D 20 = -15.2 (c 0.46, DMSO).
1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): <5 [ppm] = 3.90 (dd, J = 1 1 .0, 7.4 Hz, 2H, 2 x 10-Ha), 3.98 (d, J = 1 0.8 Hz, 2H, 2 χ 10-Hb), 4.04 - 4.1 9 (m, 4H, 2 χ 2-Ha, 2 x 1 -H), 4.33 (s, 1 H, =CH), 4.44 (dd, J = 1 1 .1 , 8.7 Hz, 2H, 2 χ 2-Hb), 6.93 (s, 1 H, 3'-H), 7.40 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .1 Hz, 2H, 2 χ 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .4 Hz, 2H, 2 x 8-H), 7.67 (s, 1 H, 4-Ha), 7.84 (d, J = 8.2 Hz, 2H, 2 χ 9-H), 7.88 - 7.98 (m, 3H, 4-Hb, 6'-H , 8'-H), 8.1 8 (d, J = 8.3 Hz, 2H, 2 χ 6-H), 1 0.26 (s, 2H, 2 x 5-OH). 1 H-NMR (500 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): <5 [ppm] = 3.90 (dd, J = 1 1 .0, 7.4 Hz, 2H, 2 x 10-Ha), 3.98 ( d, J = 1 0.8 Hz, 2H, 2 χ 10-Hb), 4.04 - 4.1 9 (m, 4H, 2 χ 2-H a , 2 x 1 -H), 4.33 (s, 1 H, = CH) , 4:44 (dd, J 1 = 1 .1, 8.7 Hz, 2H, 2 χ 2 H b), 6.93 (s, 1 H, 3'-H), 7:40 (ddd, J = 8.2, 6.8,. 1 1 Hz, 2H, 2 χ 7-H), 7.55 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .4 Hz, 2H, 2 x 8-H), 7.67 (s, 1 H, 4-H a ), 7.84 (d, J = 8.2 Hz, 2H, χ 2 9-H), 7.88 - 7.98 (m, 3H, 4-H b, 6'-H, 8'-H), 8.1 8 (d, J = 8.3 Hz , 2H, 2 χ 6-H), 1 0.26 (s, 2H, 2 x 5-OH).
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ [ppm] = 41 .4 (2 χ C-1 ), 47.8 (2 χ C- 10), 55.8 (2 x C-2), 82.7 (=CH), 83.0 (Ar-C=), 100.6 (C-4), 1 16.1 (2 χ C-5a), 123.0 (2 x C-9b), 123.3 (2 χ C-9), 123.5 (C-7'), 1 23.7 (2 χ C-7), 123.8 (2 χ C- 6), 125.4 (2 x C-3'), 126.2 (C-4), 127.9 (2 χ C-8), 1 30.6 (2 χ C-9a), 132.2 (C-6', C-8'), 138.5 (C-2', C-4'), 139.6 (2 χ C-3a), 154.9 (2 χ C-5), 1 66.6 (2 χ CON). 13 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ [ppm] = 41.4 (2 χ C-1), 47.8 (2 χ C-10), 55.8 (2 × C) 2), 82.7 (= CH), 83.0 (Ar-C =), 100.6 (C-4), 1 16.1 (2 χ C-5a), 123.0 (2 x C-9b), 123.3 (2 χ C-9 ), 123.5 (C-7 '), 1 23.7 (2 χ C-7), 123.8 (2 χ C-6), 125.4 (2 x C-3'), 126.2 (C-4), 127.9 (2 χ C-8), 1 30.6 (2 χ C-9a), 132.2 (C-6 ', C-8'), 138.5 (C-2 ', C-4'), 139.6 (2 χ C-3a), 154.9 (2 χ C-5), 1 66.6 (2 χ CON).
HRMS (ESI): m/z berechnet für C36H26CI2N2O4 621 .1 348 [M+H]+, bestimmt 621 .1324. (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(acetoxymethyl)-6-(((S)-l-(chloromethyl)-3-(3-((S)-l-(chloromethyl)-5- (((2R,3S,4R,5R,6S)-3,4,5-triacetoxy-6-(acetoxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2,3- dihydro-lH-benzo[e]indole-3-carbonyl)-5-nitrobenzoyl)-2,3-dihy(lro-lH-benzo [e]in(lol-5- yl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triyl triacetate (LT-SH016) (57) HRMS (ESI): m / z calculated for C36H26CI2N2O4 621 .1 348 [M + H] + , determined 621 .1324. (2R, 3S, 4S, 5R, 6S) -2- (acetoxymethyl) -6 - (((S) -l- (chloromethyl) -3- (3 - ((S) -l- (chloromethyl) -5- (((2R, 3S, 4R, 5R, 6S) -3,4,5-triacetoxy-6- (acetoxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2-yl) oxy) -2,3-dihydro-1H-benzo [ e] indole-3-carbonyl-5-nitrobenzoyl) -2,3-dihydro (1-hydroxy-1H-benzo [e] in (1-lol-5-yl) oxy) tetrahydro-2H-pyran-3,4,5- triyl triacetate (LT-SH016) (57)
57  57
Zu einer Lösung von fButoxycarbonylseco-CBI (0.336 mmol, 223 mg) in trockenem CH2CL2 (20 mL) unter Argonatmosphere wurde Molekularsieb (4 A) und 0-(2,3,4,6-Tetra-0-acetyl-/3-d-galactopyranosyl)-trichloracetimidat (1 70 mg, 0.344 mmol, 1 .05 eq.) hinzugefügt. Die Lösung wurde auf 0°C gekühlt und einer Lösung von Bortrifluoriddiethyletherat (0.504 mmol, 62 μί) in trockenem CH2CL2 (2 mL) wurde unter Rühren hinzugefügt. Die Reaktionsmischung konnte sich auf Raumtemperatur erwärmen und wurde für weitere 4 Stunden ge- rührt. Anschließend wurde die Mischung filtriert und unter reduziertem Druck einkonzentriert. 5-Nitroisophthaloyldichloridsäurechlorid (0.168 mmol, 42 mg) und trockenes DMF (4mL) wurde zu dem Rohmaterial unter Argonatmosphäre hinzugefügt. Die erhaltene Mischung wurde auf 0°C gekühlt und Pyridin (1 .344 mmol, 109 μί) wurde vorsichtig hinzugefügt. Die Reaktionmischung konnte sich langsam auf Raumtemperatur erwärmen und wurde über Nacht gerührt. Nach Beenden wurde die Mischung unter reduziertem Druck einkonzentriert und mittels Flash-Chromatographie gereinigt ((PET/EtOAc, 1 :0 zu 1 : 1 ) um das Dimer 57 als Orangenfeststoff zu ergeben (0,066 mmol, 86 mg), 39% Ausbeute. Rf 0.25 (PET/EtOAc, 6:4) To a solution of fButoxycarbonylseco-CBI (0.336 mmol, 223 mg) in dry CH 2 Cl 2 (20 mL) under an argon atmosphere was added molecular sieve (4 A) and O- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl- / 3- d-galactopyranosyl) -trichloroacetimidate (1 70 mg, 0.344 mmol, 1.05 eq.). The solution was cooled to 0 ° C and added to a solution of boron trifluoride diethyl etherate (0.504 mmol, 62 μί) in dry CH 2 Cl 2 (2 mL) with stirring. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and was stirred for an additional 4 hours. Subsequently, the mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. 5-Nitroisophthaloyl dichloride acid chloride (0.168 mmol, 42 mg) and dry DMF (4 mL) were added to the crude material under argon atmosphere. The resulting mixture was cooled to 0 ° C and pyridine (1344 mmol, 109 μί) was added cautiously. The reaction mixture was allowed to warm slowly to room temperature and was stirred overnight. Upon completion, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by flash chromatography ((PET / EtOAc, 1: 0 to 1: 1) to give the dimer 57 as orange solid (0.066 mmol, 86 mg), 39% yield 0.25 (PET / EtOAc, 6: 4)
Mp 172 °C Mp 172 ° C
Drehwert [a] 20 = Rotation value [a] 20 =
L J D LJ D
IR (film): v [cm"1] = IR (film): v [cm "1 ] =
UV (CHsCN): max (Ig ε) =  UV (CHsCN): max (Ig ε) =
1 H-NMR (600 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ 8.60 (d, J = 1 .5 Hz, 2H), 8.38 (s, 1 H), 8.18 (br s, 2H), 8.03 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.61 (m, 2H), 7.49 (m, 2H), 5.56 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.49-5.40 (m, 6H), 4.57-4.47 (m, 4H), 4.22 (m, 2H), 4.19-4.04 (m, 6H), 4.02-3.97 (m, 2H), 3.94 (dd, J =1 1 .0, 7.4 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H), 2.04 (s, 6H), 2.01 (s, 6H), 1 .98 (s, 6H). 1 H-NMR (600 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ 8.60 (d, J = 1 .5 Hz, 2H), 8.38 (s, 1H), 8.18 (br s, 2H), 8.03 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.61 (m, 2H), 7.49 (m, 2H), 5.56 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.49-5.40 (m, 6H), 4.57-4.47 (m, 4H), 4.22 (m, 2H), 4.19-4.04 (m, 6H), 4.02-3.97 (m, 2H), 3.94 (dd, J = 1 1 .0, 7.4 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H), 2.04 (s, 6H), 2.01 (s, 6H), 1 .98 (s, 6H).
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ 169.30, 1 69.24, 1 68.83, 1 68.70, 164.53, 152.57, 147.86, 140.44, 138.18, 130.38, 129.1 5, 127.36, 1 24.21 , 123.13, 122.67, 122.62, 121 .72, 1 1 9.48, 101 .88, 98.93, 70.47, 69.67, 68.48, 67.1 0, 61 .01 , 55.02, 46.71 , 40.82, 20.06, 19.91 , 1 9.90, 19.85. 1 3 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ 169.30, 1 69.24, 1 68.83, 1 68.70, 164.53, 152.57, 147.86, 140.44, 138.18, 130.38, 129.1 5, 127.36, 1 24.21, 123.13, 122.67, 122.62, 121.72, 1 1 9.48, 101.88, 98.93, 70.47, 69.67, 68.48, 67.1 0, 61.01, 55.02, 46.71, 40.82, 20.06, 19.91, 1 9.90, 19.85.
HRMS (ESI) m/z berechnet für C62H6iCl2N3NaO24 [M+Na]+: 1324.2914, be- stimmt 1324.2909 HRMS (ESI) m / z calcd for C62H6iCl2N 3 NaO24 [M + Na] + : 1324.2914, determined 1324.2909
(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(acetoxymethyl)-6-(((S)-3-(3-amino-5-((S)-l-(chloromethyl)-5- (((2R,3S,4R,5R,6S)-3,4,5-triacetoxy-6-(acetoxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2,3- dihydro-lH-benzo[e]indole-3-carbonyl)benzoyl)-l-(chloromethyl)-2,3-dihy(lro-lH-benzo[e]in(lol- 5-yl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triyl triacetat (LT-SH025) (58) (2R, 3S, 4S, 5R, 6S) -2- (acetoxymethyl) -6 - (((S) -3- (3-amino-5 - ((S) -l- (chloromethyl) -5- (((2R, 3S, 4R, 5R, 6S) -3,4,5-triacetoxy-6- (acetoxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2-yl) oxy) -2,3-dihydro-1H-benzo [ e] indole-3-carbonyl) benzoyl) -1- (chloromethyl) -2,3-dihy (1-lH-benzo [e] in (1 -ol-5-yl) oxy) tetrahydro-2H-pyran-3,4 , 5-triyl triacetate (LT-SH025) (58)
58  58
Das Dinner 57 (0,037 mmol, 48 mg) wurde in einer Mischung von MeOH/EtOAc (7:3, 5 mL) gelöst und über ein H-Cube System (PD/C 10%, voller H2 Modus, 1 mL/min, Raumtemperatur) zweimal durchgeführt. Die erhaltene Mischung wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und eine Flash-Chromatographie durchgeführt (Ch C /MeOH, 98:2) um das Amin 58 als weißen Feststoff (0,034 mmol, 43 mg) mit 92%-iger Ausbeute zu erhalten. Rf 0.17 (CH2CI2/MeOH, 96:4) The dinner 57 (0.037 mmol, 48 mg) was dissolved in a mixture of MeOH / EtOAc (7: 3, 5 mL) and passed through an H-cube system (PD / C 10%, full H2 mode, 1 mL / min, Room temperature) twice. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure and flash chromatographed (Ch C / MeOH, 98: 2) to afford amine 58 as a white solid (0.034 mmol, 43 mg) in 92% yield. Rf 0:17 (CH 2 CI 2 / MeOH, 96: 4)
Mp 96 °C Mp 96 ° C
1 H-NMR (600 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.00 (br s, 2H), 7.91 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.58 (m, 2H), 7.45 (m, 2H), 6.95 (m, 3H), 5.59- 5.48 (m, 4H), 5.48-5.36 (m, 6H), 4.49 (m, 2H), 4.42 (dd, J = 1 1 .0, 9.2 Hz, 2H), 4.21 -4.07 (m, 8H), 4.00 (dd, J = 1 1 .0, 2.8 Hz, 2H), 3.89 (dd, J = 1 1 .0, 7.1 Hz, 2H), 2.18 (s, 6H), 2.02 (s, 6H), 2.01 (s, 6H), 1 .98 (s, 6H). 1 H-NMR (600 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.00 (br s, 2H), 7.91 (d, J = 8.4 Hz, 2H ), 7.58 (m, 2H), 7.45 (m, 2H), 6.95 (m, 3H), 5.59-5.48 (m, 4H), 5.48-5.36 (m, 6H), 4.49 (m, 2H), 4.42 ( dd, J = 1 1 .0, 9.2 Hz, 2H), 4.21 -4.07 (m, 8H), 4.00 (dd, J = 1 1 .0, 2.8 Hz, 2H), 3.89 (dd, J = 1 1. 0, 7.1 Hz, 2H), 2.18 (s, 6H), 2.02 (s, 6H), 2.01 (s, 6H), 1.98 (s, 6H).
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ 169.55, 1 69.47, 1 69.06, 1 68.94, 167.65, 152.63, 149.06, 140.98, 137.42, 129.37, 127.38, 124.03, 1 22.65, 122.40, 121 .78, 1 1 9.17, 1 1 3.42, 1 1 1 .50, 101 .95, 98.97, 70.43, 69.73, 68.45, 67.1 1 , 60.98, 55.00, 46.89, 40.42, 20.05, 19.94, 1 9.92, 19.86. 1 3 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ 169.55, 1 69.47, 1 69.06, 1 68.94, 167.65, 152.63, 149.06, 140.98, 137.42, 129.37, 127.38, 124.03, 1 22.65 , 122.40, 121.78, 1 1 9.17, 11.13.42, 11.1.50, 101.95, 98.97, 70.43, 69.73, 68.45, 67.1.1, 60.98, 55.00, 46.89, 40.42, 20.05, 19.94, 1 9.92 , 19.86.
HRMS (ESI) m/z berechnet für C62H64CI2N3O22 [M+H]+: 1 272.3353, bestimmt 1272.3349 und m/z berechnet für C62H63Cl2N3NaO22 [M+Na]+: 1 294.3172, bestimmt 1294.31 69 HRMS (ESI) m / z calculated for C62H64CI2N3O22 [M + H] + : 1 272.3353, determined 1272.3349 and m / z calculated for C62H63Cl2N 3 NaO22 [M + Na] + : 1 294.3172, determined 1294.31 69
(3-Amino-5-((S)-l-(chloromethyl)-5-(((2R,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2,3-dihydro-lH-benzo[e]indole-3- carbonyl)phenyl)((S)-l-(chloromethyl)-5-(((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-l,2-dihydro-3H-benzo [e]indol-3-yl)methanon (59) (LT-SH032) (3-amino-5 - ((S) -l- (chloromethyl) -5 - (((2R, 3S, 4R, 5S, 6S) -3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2-yl) oxy) -2,3-dihydro-1H-benzo [e] indole-3-carbonyl) phenyl) ((S) -1- (chloromethyl) -5- ( ((2S, 3R, 4S, 5R, 6R) -3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2-yl) oxy) -l, 2-dihydro-3H-benzo [e ] indol-3-yl) methanone (59) (LT-SH032)
59  59
Anilin 58 (0,024 mmol, 31 mg) wurde in MeOH (10ml_) aufgenommen und NaOMe (5.4 M in MeOH, 1 8 μΙ_) wurde bei 0°C unter Rühren hinzugefügt. DieAniline 58 (0.024 mmol, 31 mg) was taken up in MeOH (10 mL) and NaOMe (5.4 M in MeOH, 18 μ l) was added at 0 ° C with stirring. The
Reaktionsmischung konnte sich auf Raumtemperatur erwärmen und wurde für weitere zwei Stunden gerührt. Anschließend wurde die Mischung mit H2O (1 ml_) verdünnt und neutralisiert (pH 7) durch tropfenweise Zugabe von 0,1 M wässriger HCL bei 0°C. Die erhaltene Mischung wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert, mit DMF (1 ,4 mL) aufgenommen und über eine präperativeReaction mixture was allowed to warm to room temperature and was stirred for a further two hours. The mixture was then diluted with H 2 O (1 mL) and neutralized (pH 7) by dropwise addition of 0.1 M aqueous HCL at 0 ° C. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure, taken up with DMF (1, 4 mL) and purified by pre-treatment
HPLC aufgereinigt um die oben genannte Verbindung als weißen Feststoff zu erhalten (0,0160 mmol, 15 mg) mit 66%-iger Ausbeute. HPLC to give the title compound as a white solid (0.0160 mmol, 15 mg) in 66% yield.
H PLC analytisch (Kromasil 100 C1 8, 250 χ 4.0 mm, 5 μηη) H PLC analytical (Kromasil 100 C1 8, 250 χ 4.0 mm, 5 μηη)
H2O/MeOH H 2 O / MeOH
0.8 mL/min 0.8 mL / min
0-65 min 40:60 to 0:1 00  0-65 min 40:60 to 0: 1 00
65-72 min 0: 100  65-72 min 0: 100
72-72 min 0: 100 to 40:60  72-72 min 0: 100 to 40:60
72-90 min 40:60  72-90 min 40:60
λ: 254 nm λ: 254 nm
te: 30.5 min te: 30.5 min
H PLC präperativ (Kromasil 100 C1 8, 50 χ 20 mm, 5 μηη + Kromasil 100 C18, 250 x 20 mm, 7 μηη) H PLC preparative (Kromasil 100 C1 8, 50 χ 20 mm, 5 μηη + Kromasil 100 C18, 250 × 20 mm, 7 μηη)
H2O/MeOH 16 mL/min H 2 O / MeOH 16 mL / min
0-75 min 40:60 to 0: 100  0-75 min 40:60 to 0: 100
75-82 min 0: 100 75-82 min 0: 100
82-83 min 0: 100 to 40:60 82-83 min 0: 100 to 40:60
83-100 min 40:60 83-100 min 40:60
λ: 254 nm λ: 254 nm
te: 31 .5 min te: 31 .5 min
1 H-NMR (600 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ 8.33 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.86 (br s, 2H), 7.55 (ddd. J = 8.3, 6.8, 1 .3 Hz, 2H), 7.41 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .1 Hz, 2H), 6.98-6.93 (m, 3H), 5.50 (s, 2H), 5.05 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.89 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 4.40 (dd, J = 1 1 .1 , 8.9 Hz, 2H), 4.37-4.30 (m, 4H), 4.1 8-4.09 (m, 4H), 3.99 (dd, J = 1 1 .1 , 2.5 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 1 1 .1 , 7.3 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 3.8 Hz, 2H), 3.79 (ddd, J = 9.4, 7.7, 5.3 Hz, 2H), 3.69-3.62 (m, 2H), 3.61 -3.55 (m, 4H), 3.55-3.49 (m, 2H), 1 H-NMR (600 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ 8.33 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.86 (br s, 2H ), 7.55 (ddd J = 8.3, 6.8, 1 .3 Hz, 2H), 7.41 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1 .1 Hz, 2H), 6.98-6.93 (m, 3H), 5.50 (s , 2H), 5.05 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.89 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 4.40 (dd, J = 1 1 .1 , 8.9 Hz, 2H), 4.37-4.30 (m, 4H), 4.1 8-4.09 (m, 4H), 3.99 (dd, J = 1 1 .1, 2.5 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 1 1 .1, 7.3 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 3.8 Hz, 2H), 3.79 (ddd, J = 9.4, 7.7, 5.3 Hz, 2H), 3.69-3.62 (m, 2H), 3.61 -3.55 (m, 4H), 3.55-3.49 (m, 2H),
13C-NMR (126 MHz, DMSO-c/e, 75 °C): δ 167.66, 1 53.60, 149.02, 141 .03, 137.52, 129.41 , 127.16, 123.42, 123.13, 122.87, 122.34, 1 18.00, 1 13.53, 1 1 1 .79, 102.09, 101 .52, 75.04, 73.10, 70.41 , 67.64, 59.73, 54.88, 46.97, 40.42. HRMS (ESI) m/z berechnet für C46H47Cl2KN3Oi4 [M+K]+: 974.2067, bestimmt 974.2059 1 3 C-NMR (126 MHz, DMSO-c / e, 75 ° C): δ 167.66, 1 53.60, 149.02, 141 .03, 137.52, 129.41, 127.16, 123.42, 123.13, 122.87, 122.34, 1 18.00, 1 13.53, 1 1 1 .79, 102.09, 101.52, 75.04, 73.10, 70.41, 67.64, 59.73, 54.88, 46.97, 40.42. HRMS (ESI) m / z calcd for C46H 4 7Cl2KN OI4 3 [M + K] +: 974.2067, 974.2059 determined
In Figuren 8 bis 14 werden die in vitro Zytotoxizität der oben genannten synthetisierten Verbindungen in humanen Bronchialkarzinomzellen der Linie A549 dargestellt. Deutlich ist die Wirksamkeit der beispielhaften Verbindungen zu erkennen, die IC50-Werte sind entsprechend dargestellt. Figures 8 to 14 show the in vitro cytotoxicity of the above-mentioned synthesized compounds in human bronchial carcinoma cells of the A549 line. The effectiveness of the exemplary compounds can be clearly seen, the IC 50 values are shown accordingly.

Claims

Patentansprüche: claims:
1 . Verbindungen der allgemeinen Struktur A-L-B, 1 . Compounds of the general structure A-L-B,
wobei A und B unabhängig voneinander ausgebildet sind aus der Struktur I Struktur I wherein A and B are formed independently from the structure I structure I.
worin Hai ein Halogenid ist ausgewählt aus F, Cl, Br, I; wherein Hal is a halide selected from F, Cl, Br, I;
R ist H oder eine gegebenenfalls substituierte Ci - C4 Alkylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Ci - C4 Alkoxygruppe, einen gegebenenfalls substitu- ierte Arylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Heteroarylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Ci - C4 Alkylcarboxy- Ci - C4 alkylgruppe, Hai, CN, eine gegebenenfalls subsituierte Ci - C4 Alkylsulfanylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Arylsulfanylgruppe, eine N RZ Gruppe wie unten definiert; R is H or an optionally substituted C 1 -C 4 -alkyl group, an optionally substituted C 1 -C 4 -alkoxy group, an optionally substituted aryl group, an optionally substituted heteroaryl group, an optionally substituted C 1 -C 4 -alkylcarboxy-C 1 -C 4 -alkyl group, halo, CN, a optionally subsituierte Ci - C4 alkylsulfanyl group, an optionally substituted Arylsulfanylgruppe, an NR group Z as defined below;
Ri ist H oder eine Ci - C4 Alkylgruppe oder eine Ci - C4 Alkoxygruppe; Ri is H or a Ci - C4 alkyl group or a Ci - C4 alkoxy group;
Xi ist O, S, N Rs, wobei R5 ausgewählt ist aus H und gegebenenfalls substituierten Ci - C4 Alkyl; Xi is O, S, N Rs, wherein R5 is selected from H and optionally substituted Ci - C4 alkyl;
R2 ist ausgewählt aus Wasserstoff oder einem abspaltbaren Substrat, insbesondere ein enzymatisch oder säurekatalysiert abspaltbares Substrat;  R2 is selected from hydrogen or a cleavable substrate, in particular an enzymatically or acid catalyzed cleavable substrate;
G ist unabhängig voneinander abwesend, Wasserstoff oder eine funktionale Gruppe, insbesondere ausgewählt aus einer Alkingruppe, einer Aminogruppe, einer Hydroxylgruppe, einer Thiolgruppe, einer Carboxylgruppe, einer Azid- gruppe oder einer Polyglycingruppe, wobei die funktionale Gruppe G mindes- tens einmal in der Verbindung A-L-B vorliegt; G is independently absent, hydrogen or a functional group, in particular selected from an alkyne group, an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, a carboxyl group, an azide group or a polyglycine group, where the functional group G is at least at least once in connection ALB;
L ist eine Verbindungsgruppe zur kovalenten Verbindung von A und B, wobei L die Struktur Z-Y-Z' aufweist;  L is a linking group to the covalent bond of A and B, where L has the structure Z-Y-Z ';
mit Z und Z' unabhängig voneinander ausgewählt aus C=O, OC=O, SO2, NRZ, NRzC=O, C=ON Rz, wobei jedes Rz unabhängig voneinander ausgewählt ist aus Wasserstoff und gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Alkyl oder gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Acyl; with Z and Z 'are independently selected from C = O, OC = O, SO2, NR Z, NRzC = O, C = ON R z, wherein each Rz is independently selected from hydrogen and optionally substituted C1 - C4 alkyl or optionally substituted C1-C4 acyl;
wobei Y ausgewählt ist aus einer Struktur gemäß Struktur II I oder Struktur IV; Struktur II I wherein Y is selected from a structure according to structure II I or structure IV; Structure II I
Struktur IV Structure IV
wobei jedes RA unabhängig voneinander ausgewählt ist aus Wasserstoff oder gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Alkyl oder gegebenenfalls substituierten C1 - C4 Acyl; wherein each RA is independently selected from hydrogen or optionally substituted C1 - C4 alkyl or optionally substituted C1 - C4 acyl;
o und p sind unabhängig voneinander ausgewählt aus einer ganzen Zahl von 1 bis 20; wobei o und p den gleichen Wert oder einen unterschiedlichen Wert annehmen können; o and p are independently selected from an integer of 1 to 20; where o and p may take the same value or a different value;
G ist wie oben definiert; G is as defined above;
X2 ist i) N oder S oder ii) eine Aryl- oder Heteroarylgruppe, wobei (CRA)O und (CRA)P in Metaposition an dieser Arylgruppe oder an dieser Heteroarylgruppe angeordnet sind, X 2 is i) N or S or ii) an aryl or heteroaryl group, wherein (CRA) O and (CRA) P are arranged in metaposition on this aryl group or on this heteroaryl group,
R3 ist ausgewählt aus C1 - C10 Alkyl, wie C1 - C4 Alkyl; Co - C4 Alkylaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie Co - C4 Alkylaryl Co - C4 Alkylgruppe; Co - C4 Alkylhe- teroaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie Co - C4 Alkylheteroaryl Co - C4 Alkylgruppe; oder einem abspaltbaren Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat; oder ist nicht vorhanden; R3 is selected from C1 - C10 alkyl such as C1 - C4 alkyl; Co - C4 Alkylaryl Co - C10 alkyl group, such as Co - C4 alkylaryl Co - C4 alkyl group; Co - C4 alkylheteroaryl Co - C10 alkyl group, such as Co - C4 alkylheteroaryl Co - C4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate; or is not present;
R4 ist i) abwesend oder eine C1 - C10 Alkylgruppe, wie eine C1 - C4 Alkylgruppe; eine Co - C4 Alkylaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie eine Co - C4 Alkylaryl Co - C4 Alkylgruppe; eine Co - C4 Alkylheteroaryl Co - C10 Alkylgruppe, wie eine Co - C4 Alkylheteroaryl Co - C4 Alkylgruppe; oder ein abspaltbares Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat, wenn X2 N oder S ist, oder ii) R4 ist eine C1 - C10 Alkylgruppe, wie C1 - C4 Alkylgruppe; oder ein abspaltbares Substrat, insbesondere ein durch chemische Umsetzung abspaltbares Substrat; oder ist abwesend wenn X2 eine Aryl- oder Heteroa- rylgruppe ist; R4 is i) absent or a C1 - C10 alkyl group such as a C1 - C4 alkyl group; a Co - C4 alkylarylCo - C10 alkyl group such as a Co - C4 alkylarylCo - C4 alkyl group; a Co - C4 alkylheteroarylCo - C10 alkyl group, such as a Co - C4 alkylheteroarylCo - C4 alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a substrate which can be split off by chemical reaction, if X 2 is N or S, or ii) R 4 is a C 1 -C 10 -alkyl group, such as C 1 -C 4 -alkyl group; or a cleavable substrate, in particular a cleavable by chemical reaction substrate; or is absent if X2 is an aryl or heteroaryl group;
und pharmazeutisch-annehmbare Salze oder pharmazeutisch-annehmbare Solvate hiervon.  and pharmaceutically-acceptable salts or pharmaceutically-acceptable solvates thereof.
2. Verbindung gemäß Anspruch 1 , wobei R2, R3 und/oder R4 ausgewählt ist aus einem Substrat, das durch proteolytische, oxidative oder reduktive Enzyme, Plasmin, Cathepsin, Cathepsin B, beta-Glucuronidase, Galactosidase, Mannosidase, Glucosidase, Neuramidase, Saccharosidase, Maltase, Fructo- sidase, Glycosylasen, Prostate-specific Antigen (PSA), urokinase-Typ Plasmi- nogen-Aktivator (u-PA), Metalloproteinase, Cytochrom P450 oder ein Enzym, das gezielt mit Hilfe von gerichteter Enzym Prodrug Therapie, wie ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, oder PDEPT gespalten werden kann; oder ein Sub- stituent, der unter hypoxischen Bedingungen oder durch Reduktion durch Nitro- reduktase abgespalten oder transformiert werden kann, insbesondere ist R2 ausgewählt aus einem Monosaccharid, Disaccharid oder Oligosaccharid, insbesondere Hexosen, Pentosen oder Heptosen gegebenenfalls als Desoxy- Derivat oder Amino-Derivat und gegebenenfalls substituiert mit Halogen, C1-8 Alkyl, C1-8 Acyl, C1-8 Heteroalkyl, C3-7 Cycloalkyl, C3-7 Heterocycloalkyl, C4-12 Aryl oder C4-12 Heteroaryl, Amino- oder Amidgruppen, oder mit Amino-, Amido- oder Carboxyleinheiten, die gegebenenfalls substituiert sein können mit Halogen, C1-8 Alkyl, C1-8 Acyl, C1-8 Heteroalkyl, C3-7 Cycloalkyl, C3-7 Heterocycloal- kyl, C4-12 Aryl oder C4-12 Heteroaryl, Amino- oder Amidresten; Dextran, Dipep- tid, Tripeptid, Tetrapeptid, Oligopeptid, Peptidominnetika, oder Kombinationen hiervon; oder ein (chemisch) abspaltbares Substrat mit einer chemischen Gruppe wobei diese eine Acetal-, Benzyl-, oder substituierte Benzyl-Gruppe umfassen kann . 2. A compound according to claim 1, wherein R2, R3 and / or R4 is selected from a substrate comprising proteolytic, oxidative or reductive enzymes, plasmin, cathepsin, cathepsin B, beta-glucuronidase, galactosidase, mannosidase, glucosidase, neuramidase, sucrosidase , Maltase, fructosidase, glycosylases, prostate-specific antigen (PSA), urokinase-type plasmogen activator (u-PA), metalloproteinase, cytochrome P450, or an enzyme targeted by enzyme-targeted prodrug therapy, such as ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, or PDEPT can be cleaved; or a substituent which can be eliminated or transformed under hypoxic conditions or by reduction by nitro reductase, in particular R2 is selected from a monosaccharide, disaccharide or oligosaccharide, in particular hexoses, pentoses or heptoses, optionally as the deoxy derivative or amino derivative and optionally substituted by halogen, C 1-8 alkyl, C 1-8 acyl, C 1-8 heteroalkyl, C 3-7 cycloalkyl, C 3-7 heterocycloalkyl, C 4-12 aryl or C 4-12 heteroaryl, amino or amide groups, or with amino , Amido or carboxy units, which may optionally be substituted by halogen, C 1-8 alkyl, C 1-8 acyl, C 1-8 heteroalkyl, C 3-7 cycloalkyl, C 3-7 heterocycloal kyl, C4-12 aryl or C4-12 heteroaryl, amino or amide radicals; Dextran, dipropid, tripeptide, tetrapeptide, oligopeptide, peptideominnetica, or combinations thereof; or a (chemically) cleavable substrate having a chemical group which may include an acetal, benzyl, or substituted benzyl group.
3. Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei o und p unabhängig voneinander eine ganze ungerade Zahl aus 1 , 3, 5, 7, 9, 1 1 , 13, 15, 17 und 19, Z und Z' sind C=O und jedes RA ist unabhängig voneinander Wasser- stoff oder CH3. 3. A compound according to any one of the preceding claims, wherein o and p are independently an integer odd number of 1, 3, 5, 7, 9, 1 1, 13, 15, 17 and 19, Z and Z 'are C = O and each RA is independently hydrogen or CH3.
4. Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei R2 unabhängig voneinander ein Wasserstoff oder CH3 ist. 4. A compound according to any one of the preceding claims, wherein R2 is independently a hydrogen or CH3.
5. Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei Hai ein Cl ist und R1 ist H. 5. A compound according to any one of the preceding claims, wherein Hal is a Cl and R1 is H.
6. Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei L eine Verbindung gemäß der Struktur I I ist, 6. A compound according to any one of the preceding claims, wherein L is a compound according to the structure II,
Struktur II  Structure II
wobei Y gemäß einem der vorherigen Ansprüche definiert ist. where Y is defined according to one of the preceding claims.
7. Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei X2 eine A- rylgruppe, insbesondere eine Benzylgruppe ist, Y ist eine Struktur IV wobei R4 eine C1 - C4 Alkylgruppe ist und G ist eine funktionale Gruppe wie in Anspruch 1 definiert. 7. A compound according to any one of the preceding claims, wherein X2 is an aryl group, especially a benzyl group, Y is a structure IV wherein R4 is a C1 - C4 alkyl group and G is a functional group as defined in claim 1.
8. Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, wobei die funktionale Gruppe G nur am Rest R2 vorliegt. 8. A compound according to any one of the preceding claims, wherein the functional group G is present only on the radical R2.
9. Antikörper-Verbindung-Konjugat, wobei ein Antikörper über die funktionale Gruppe G mit der Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 verbunden ist. 9. An antibody-compound conjugate, wherein an antibody is linked via the functional group G with the compound according to any one of claims 1 to 8.
10. Antikörper-Verbindung-Konjugat nach Anspruch 9, wobei der Antikörper gegen eine Tumorart oder ein Antigen das auf eine Zielstruktur, wie einer Zelle, exprimiert wird, gerichtet ist. The antibody-compound conjugate of claim 9, wherein the antibody is directed against a tumor type or an antigen expressed on a targeting structure, such as a cell.
1 1 . Antikörper-Verbindung-Konjugat nach Anspruch 9 oder 10, wobei der Antikörper einer ist aus einem Antikörper, einem Antikörperfragment, wie F(ab' )2, F(ab'), Fab, Fv, sFv, scFv. 1 1. An antibody-compound conjugate according to claim 9 or 10, wherein the antibody is one of an antibody, an antibody fragment such as F (ab ') 2, F (ab'), Fab, Fv, sFv, scFv.
12. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 oder ein Antikörper-Verbindung-Konjugat nach einem der Ansprüche 9 bis 1 1 . 12. A pharmaceutical composition containing a compound according to any one of claims 1 to 8 or an antibody-compound conjugate according to any one of claims 9 to 1 1.
13. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 oder eines Antiköper-Verbindung-Konjugats nach einem der Ansprüche 9 bis 1 1 zur Behandlung von Tumorerkrankungen, insbesondere in Säugetieren. 13. Use of a compound according to any one of claims 1 to 8 or an antibody-compound conjugate according to any one of claims 9 to 1 1 for the treatment of tumor diseases, in particular in mammals.
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