EP3154981A1 - Dérivés de 2h-pyrazolo [ 4,3-c ] quinolin-3-one et son utilisation (5h) - Google Patents

Dérivés de 2h-pyrazolo [ 4,3-c ] quinolin-3-one et son utilisation (5h)

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Publication number
EP3154981A1
EP3154981A1 EP15732863.4A EP15732863A EP3154981A1 EP 3154981 A1 EP3154981 A1 EP 3154981A1 EP 15732863 A EP15732863 A EP 15732863A EP 3154981 A1 EP3154981 A1 EP 3154981A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
quinolin
pyrazolo
compound
pentyl
diseases
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP15732863.4A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Régis MILLET
Philippe Chavatte
Pierre Desreumaux
Mathilde BODY
Jamal El Bakali
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universite Lille 2 Droit et Sante
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Centre Hospitalier Universitaire de Lille
Original Assignee
Universite Lille 2 Droit et Sante
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Centre Hospitalier Regional Universitaire de Lille CHRU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universite Lille 2 Droit et Sante, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM, Centre Hospitalier Regional Universitaire de Lille CHRU filed Critical Universite Lille 2 Droit et Sante
Publication of EP3154981A1 publication Critical patent/EP3154981A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to novel 2H-pyrazolo [4,3-c] quinolin-3 (5H) -one derivatives of Formula I and their use in the treatment and / or prevention of diseases or conditions associated with a modification (increased or decrease) in CB 2 receptor activity, especially autoimmune diseases.
  • the CB 2 receptor is mainly expressed in cells associated with the immune system, such as leukocytes, macrophages, B and T lymphocytes. This receptor is also present in the spleen, tonsils and prostate, and on the cells. glial (microglia, astrocytes).
  • CB 2 receptor The location of the CB 2 receptor at the level of the immune cells demonstrates the involvement of this receptor in the immunomodulatory effects induced by the cannabinoids.
  • the cannabinoid CB 2 receptor appears to be an important mediator of inflammatory cytokine release and several in vitro and in vivo studies indicate that CB 2 receptor ligands are potential therapeutic agents for diseases or conditions associated with modification (increase or decrease) CB 2 receptor activity, including autoimmune diseases causing chronic inflammation.
  • the CBi receptor is responsible for the psychotropic effects caused by cannabinoids and in particular by THC ( ⁇ -9-tetrahydrocannabinol), the main psychoactive compound found in cannabis.
  • CB 2 receptor suggests its important role in the control of the homeostasis of the immune system (production of pro and anti-inflammatory cytokines, migration, proliferation and activation of immune cells) [Recent advances in the development of selective CB (2) agonists as promising anti-inflammatory agents. Leleu-Chavain N, Body-Malapel M, Spencer J, Chavatte P, Desreumaux P, Millet R Curr Med Chem. 2012; 19 (21): 3457-74.]. The absence of cannabinoid-induced immunomodulation in mice lacking CB 2 receptors, highlights the role of CB 2 in many diseases such as inflammatory diseases, such as neurodegenerative diseases (MS, Alzheimer's disease, Parkinson's disease).
  • MS neurodegenerative diseases
  • 1,4 dihydropyridine and their use as modulator of the CB 2 receptor. Some of these compounds are indeed selective agonists of CB 2 .
  • the invention thus relates to compounds of Formula I, their pharmaceutically acceptable solvates as well as the use of these compounds, or their solvates or compositions containing them as CB 2 agonists.
  • the invention relates to compounds of Formula I:
  • R 1 is C 4 -C 6 linear alkyl, C 4 -C 6 linear haloalkyl or C 1 -C 2 tetrahydropyranylalkyl;
  • R is cycloalkyl, cycloalkylalkyl or C3-C6 alkyl.
  • the invention in another aspect, relates to pharmaceutical compositions comprising at least one compound according to the invention or one of its pharmaceutically acceptable solvates and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • the invention also relates to the use of the compounds according to the invention or a pharmaceutically acceptable solvate thereof as CB 2 agonists. Therefore, the compounds of the invention and their pharmaceutically acceptable solvates are useful in the treatment and / or prevention of diseases or conditions associated with a modification (increase or decrease) in CB 2 receptor activity.
  • the invention therefore also relates to the compounds according to the invention for use as a medicament, especially in the treatment and / or prevention of diseases or conditions mediated by CB 2 .
  • the invention relates to compounds of Formula I as well as their pharmaceutically acceptable solvates.
  • Compounds of Formula I and their preferred pharmaceutically acceptable solvates are those wherein R 1 and / or R 2 are defined as follows:
  • R 1 is C 4 to C 6 linear alkyl, C 3 to C 5 linear trifluoromethylalkyl or C 1 to C 2 tetrahydropyranylalkyl; preferably, R 1 is C 5 -C 6 linear alkyl (--pentyl and--hexyl), linear C 3 (1,1,1-trifluoro-n-butyl) trifluoromethylalkyl or C 1 (tetrahydropyranylmethyl) tetrahydropyranylalkyl; or R 1 is C 5 linear alkyl (w-pentyl), C 3 linear trifluoromethylalkyl (1,1,1-trifluoro-2-butyl) or C 1 to C 2 tetrahydropyranylalkyl, more preferably R 1 is C 5 linear alkyl (n pentyl); R is C 5 -C 6 alkyl, C 5 -C 12 cycloalkyl or C 3 -C 12 cycloalkyl-C 1
  • the compounds of Formula I and their pharmaceutically acceptable solvates are those wherein R 1 is as defined above and R is selected from the group consisting of w-pentyl, n-hexyl, cyclohexyl, cyclopropylmethyl cyclohexylmethyl, cyclohexylethyl, adamantylmethyl and adamantylethyl, preferably R is selected from the group consisting of--pentyl,--hexyl, cyclohexyl, cyclopropylmethyl, cyclohexylmethyl, cyclohexylethyl, adamant-1-ylmethyl and adamant-1-ylethyl.
  • the inventors believe that the selectivity of the compounds of the invention for CB 2 versus CBi is obtained thanks to the bulky hydrophobic group R. At the same time, this group allows a good affinity of the compounds of the invention for CB 2 .
  • the compounds of the invention have an affinity for the CB 2 receptor of the nanomolar order, in particular less than 100 nM, preferably less than 50 nM and more preferably still less than 30 nM.
  • Particularly preferred compounds of the invention are those listed in Table 1 below:
  • the compounds of Formula I can be prepared according to reactions known to those skilled in the art.
  • the reaction schemes described in the "Examples" section illustrate possible synthetic approaches.
  • the invention relates to the use of the compounds of the invention or their pharmaceutically acceptable solvates as CB 2 agonists.
  • the compounds of the invention are thus useful in the treatment and / or prevention of diseases or conditions associated with a modification (increase or decrease) in the activity of the CB 2 receptor.
  • the invention therefore also relates to the compounds according to the invention for use as a medicament, in particular for use in the treatment and / or prevention of diseases or conditions mediated by CB 2 .
  • diseases or conditions include autoimmune diseases, neurodegenerative diseases, inflammatory diseases, osteoporosis, pain and inflammatory cancers.
  • the diseases or conditions are selected from inflammatory bowel disease (IBD), multiple sclerosis (MS), lupus erythematosus, autoimmune thyroiditis, rheumatoid arthritis, spondyloarthritis. ankylosing, atopic dermatitis, hepatitis, Goujerot-Sjögren's syndrome, Alzheimer's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS, also called Charcot's disease), osteoporosis and pain.
  • Inflammatory chronic diseases of the intestine for their part include Crohn's disease and ulcerative colitis (UC).
  • the invention relates to the compounds of formula I as described above for use in the treatment of inflammatory bowel disease (IBD), more particularly Crohn's disease and / or ulcerative colitis (UC).
  • IBD inflammatory bowel disease
  • UC ulcerative colitis
  • the present invention concerns also a method of treating the diseases and conditions indicated above comprising administering to a patient an effective dose of a compound according to the invention, or a pharmaceutically acceptable solvate thereof.
  • the patient is a warm-blooded animal, more preferably a human.
  • the invention relates to a method for modulating the activity of the CB 2 receptor in a patient, preferably a warm-blooded animal, more preferably a human, in need, said method comprising the administration to this patient an effective dose of a compound according to the invention, or a pharmaceutically acceptable solvate thereof.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of Formula I or at least one pharmaceutically acceptable solvate of said compound and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • Said excipients are chosen according to the pharmaceutical form and the desired mode of administration, from the usual excipients which are known to those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be selected from pharmaceutical compositions for oral, sublingual, subcutaneous, intramuscular, intravenous, topical, local, intratracheal, intranasal, transdermal or rectal administration.
  • the active ingredient of Formula I above, or its pharmaceutically acceptable solvate may be administered in unit dosage form, in admixture with conventional pharmaceutical excipients, to animals and humans for treatment and / or the prevention of the diseases or conditions indicated above.
  • Suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, soft or hard capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, sublingual, oral, intratracheal, intraocular, intranasal forms of administration , by inhalation, topical, transdermal, subcutaneous, intramuscular or intravenous administration forms, rectal administration forms and implants.
  • the compounds according to the invention can be used in creams, gels, ointments or lotions.
  • it is a pharmaceutical composition for oral administration.
  • Such suitable administration forms which may be in solid, semi-solid or liquid form depending on the mode of administration, are generally known to those skilled in the art, reference being made to the last edition of the book "Remington's Pharmaceutical Sciences ".
  • the pharmaceutical composition according to the invention is a pharmaceutical composition for oral administration.
  • the compounds of the invention are, to the inventors' knowledge, the first agonists of CB 2 active orally in the context of the treatment of inflammatory bowel disease (IBD).
  • IBD inflammatory bowel disease
  • halo alone or as part of another moiety, refers to fluoro, chloro, bromo, or iodo.
  • the preferred halo groups are chloro and fluoro, fluoro being particularly preferred.
  • alkyl (e) denotes a hydrocarbon radical of formula C n H2 n + 1 in which n is an integer greater than or equal to 1.
  • haloalkyl (e) denotes an alkyl radical as defined above in which one or more hydrogen atoms are replaced by a halo group as defined herein. -above.
  • Preferred C 4 to C 6 linear haloalkyl radicals are 1,1,1-trifluoro-2-butyl, 1,1,1-trifluoro-3-pentyl and 1,1,1-trifluoro-2-hexyl, 1,1,1-trifluoro-2-butyl is particularly preferred.
  • cycloalkyl (e) refers to a saturated mono-, di- or tri-cyclic hydrocarbon radical having 3 to 12 carbon atoms, especially 5 to 10 carbon atoms. more particularly 6 to 10 carbon atoms.
  • Suitable cycloalkyl radicals include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, norbornyl, adamantyl, especially adamant-1-yl and adamant-2-yl, 1-decalinyl.
  • Preferred cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclohexyl, adamant-1-yl and adamant-2-yl.
  • the compounds of formula I may exist in the form of solvates, namely in the form of associations or combinations with one or more solvent molecules, such as, for example, ethanol or water.
  • solvent molecules such as, for example, ethanol or water.
  • the compounds of the invention are the compounds of Formula I and their solvates as defined above, including all their polymorphs and crystalline forms, their prodrugs and compounds or solvates bearing an isotopic label.
  • patient refers to a warm-blooded animal, preferably a human who is waiting for or receiving medical treatment.
  • human refers to subjects of both sexes and at any stage of development (ie neonatal, infantile, juvenile, adolescent and adult). In one embodiment, it is a teenager or an adult, preferably an adult.
  • treat and “treat” should be understood in their general meaning and thus include the improvement and repeal of a medical condition.
  • prevent refers to avoiding or delaying the onset of a disease or condition and related symptoms, thereby excluding a patient from developing a disease or condition or reducing a patient's risk. to develop a disease or condition.
  • terapéuticaally effective dose refers to the dose of active ingredient (compound of Formula I) which is sufficient to achieve the desired therapeutic or prophylactic result in the patient to whom it is administered.
  • pharmaceutically acceptable means that a compound or component is not harmful to the patient and that in the context of a pharmaceutical composition it is compatible with the other components.
  • agonist refers to a ligand that activates an intracellular response when it binds to a receptor and covers entire agonists as well as partial agonists.
  • Figure 1A Survival rate in a model of acute colitis in mice for compound 26 compared to a CB 2 agonist of the prior art.
  • Figure 1B Evaluation of body weight loss in a model of acute colitis in mice for compound 26 compared to a CB 2 agonist of the prior art.
  • Figure 2A-D Macroscopic Score (A), Histological Damage (B), TNF ⁇ and IL- ⁇ (C, D) in the Colon after TNBS-mediated Colitis and Treatment with Compound 26 or CB Agonist 2 of the prior art.
  • the purity of the synthesis products was monitored by thin layer chromatography on 60F254 silica gel plates 0.2 mm thick (5735 Merck) (UV: 254 and 366 nm) for the products with bonds conjugates, ninhydrin for amines, iodine in all cases, Dragendorff reagent for compounds having a heterocyclic nitrogen atom). Purifications by column chromatography were carried out on silica gel 60, particle size 0.040-0.063 mm (ref 9385.5000 Merck). The eluent was chosen to obtain a Rf between 0.20 and 0.25 on TLC plates. The melting points (Mp) were determined using a Buchi SMP 20 device and are not corrected. They are expressed in degrees Celsius (° C).
  • the infrared spectra were carried out on a Bruker Vector 22 Fourier Transform Spectrometer. The characteristic signals are marked by their wavenumber expressed in cm- 1 .
  • the 1 H NMR spectra were recorded at 300 MHz on a transform apparatus.
  • Fourier Bruker AC 300P, with TMS (trimethylsilane) as internal reference Each signal is identified by its chemical shift ( ⁇ in ppm), its intensity (number of H), its multiplicity (s, singlet, d, doublet; , triplet; q, quadruplet; m, massive or multiplet) and possibly its coupling constant (J in Hertz). In the case of massifs, this one is not measurable. All compounds were characterized by LC-MS.
  • the high performance liquid chromato graph (ODS column, mobile phase: water / acetonitrile / formic acid in gradient mode) is coupled to a UV detector and an APC type detector (chemical ionization at Atmospheric Pressure). The spectra were recorded on a Thermo Electron Surveyor MSQ device.
  • the ethyl 1-alkyl-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylate is solubilized in pyridine, and then the phosphorus pentasulfide is added.
  • the mixture is refluxed for 8 hours.
  • the reaction medium is poured into distilled water.
  • the sulfur product is extracted with ethyl acetate.
  • the organic phase is washed with 1N hydrochloric acid solution, then with water, dried over magnesium sulfate, filtered and taken to dryness under reduced pressure.
  • the red oil obtained is purified by chromatography on silica gel.
  • the ethyl 1-alkyl-4-thioxoquinoline-3-carboxylate is solubilized in absolute ethanol.
  • the hydrazine monohydrate is added and the medium is refluxed for 16 hours. After having evaporated the solvent under reduced pressure, the residue obtained is taken up in distilled water, drained, dried and recrystallized from absolute ethanol.
  • 5-alkyl-2H-pyrazolo [4,3-c] quinolin-3 (5H) -one is solubilized in anhydrous DMF.
  • the medium is placed under nitrogen at 0 ° C. and the sodium hydride is added in portions.
  • the medium is then left stirring for 30 min and then the brominated derivative is added.
  • the reaction is stirred at 90 ° C for 16h.
  • the reaction is poured into the distilled water.
  • the precipitate is filtered off, washed with water, dried and then purified by chromatography on silica gel followed by recrystallization from acetonitrile.
  • [3H] -CP-55,940 (0.5 nM) as radioligand chosen for human receptors CBi and CB2, is added to 6 .mu.g of membranes resuspended in 550 ⁇ ⁇ (final volume) of buffer (20 mM Hepes, 5 mM MgCl 2 , 1 mM EDTA, 0.3% bovine serum albumin, pH 7.4).
  • N-2 (R group) by an aromatic residue induces a drastic loss of activity (compounds 21, 24, 26 vs. 19).
  • Table 4 summarizes the functional activities of certain compounds of the invention for the cannabinoid hCB 2 receptor. Table 4: Functional Activities
  • compounds 16 and 24-26 are all agonists with an EC 50 ranging from 5.4 nM to 204 nM and an Emax around 150%. In vivo pharmacology.
  • the mice are anesthetized for 90-120 min by subcutaneous administration of zylasin-ketamine (50 mg / kg) diluted in physiological saline, and then administered intrarectally with TNBS (40 ⁇ M).
  • the new CB2 agonists are diluted in 0.5% carboxymethylcellulose (Sigma-Aldrich, Saint Quentin Fallavier, France) for a dose administered by gavage of 0.1, 1 and 10 mg / kg body weight / day.
  • JWH133 a known CB2 agonist
  • Kimball ES Schneider CR, Wallace NH, Hornby PJ, Agonists of cannabinoid receptor 1 and 2 inhibitory experimental colitis induced by oil of mustard and sodium dextran sulfate, Am J Physiol Gastrointest, Liver Physiol ., 2006, 291, G364-71.
  • the animals are euthanized 5 days after administration of TNBS.
  • the intensity of colitis at macroscopic and histological levels is evaluated in each colon by two blind investigators.
  • the scale of macroscopic lesion scores ranges from 0 to 10 according to characteristics reflecting inflammation, such as hyperemia, thickening of the intestinal wall, extent of ulcerations.
  • a colon biopsy located exactly 2 cm above the anal canal is used for histological analysis following a May-Grunwald Giemsa stain.
  • the histological score varies between 0 and 6 and takes into account the degree of inflammatory infiltrate, the presence of erosion, ulcerations or necrosis of the mucosa, and the level of extension of lesions in depth and on the surface affected.
  • Two other colon biopsies are frozen and used to analyze inflammatory cytokine mRNA levels by real-time PCR.
  • the total mRNAs of the colon are extracted using the Nucleospin RNAII kit (Macherey Nagel, Hoerdt, France) and then retro-transcripts using the high-capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, USA). Real-time PCR is performed with SYBR Green (Applied Biosystems, Foster City, USA). Specific primers for TNF alpha (TNF alpha F and TNF alpha R), IL-1 beta (IL1 beta F and IL 1 beta R) and POLR2A (POLR2A F and POLR2A R) as a reference gene were selected using Primer Express 2 software (Applied Biosystems, Foster City, USA).
  • Compound 26 was evaluated in mice in a model of TNBS-induced colitis according to a protocol described (Desreumaux, P., Dubuquoy, L., Nutten, S., Peuchmaur, M, Englaro, W., Schoonjans, K.
  • RXR Retinoid X Receptor
  • PPARgamma Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma
  • CMC carboxymethylcellulose
  • the data set shows that compound 26 is effective in mice against colitis in a dose-dependent manner after oral administration.

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Abstract

L'invention concerne des composés de Formule (I) ou leurs solvates pharmaceutiquement acceptables, ainsi que leur utilisation en tant que médicament.

Description

DERIVES DE 2H-PYRAZOLO[4,3-c]QUINOLIN-3(5H)-ONE ET LEUR
UTILISATION
La présente invention concerne de nouveaux dérivés de 2H- pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one de Formule I et leur utilisation dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2, notamment des maladies auto-immunes.
ETAT DE LA TECHNIQUE
Le récepteur CB2 est principalement exprimé dans les cellules associées au système immunitaire, comme les leucocytes, les macrophages, les lymphocytes B et T. Ce récepteur est également présent au niveau de la rate, des amygdales et de la prostate, et sur les cellules gliales (microglies, astrocytes).
La localisation du récepteur CB2 au niveau des cellules immunitaires met en évidence l'implication de ce récepteur dans les effets immunomodulateurs induits par les cannabinoïdes. Le récepteur cannabinoïde CB2 apparaît comme un médiateur important de la libération de cytokines inflammatoires et plusieurs études in vitro et in vivo soulignent que les ligands des récepteurs CB2 constituent des agents thérapeutiques potentiels des maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2, notamment des maladies auto-immunes entraînant une inflammation chronique. Le récepteur CBi est quant à lui responsable des effets psychotropes engendrés par les cannabinoïdes et notamment par le THC (Δ-9- tétrahydrocannabinol), principal composé psychoactif retrouvé dans le cannabis. Ainsi, la localisation du récepteur CB2 suggère son rôle important dans le contrôle de l'homéostasie du système immunitaire (production de cytokines pro- et anti- inflammatoires, migration, prolifération et activation de cellules immunitaires) [Récent advances in the development of sélective CB(2) agonists as promising anti-inflammatory agents. Leleu-Chavain N, Body-Malapel M, Spencer J, Chavatte P, Desreumaux P, Millet R. Curr Med Chem. 2012; 19(21):3457-74.] . L'absence d'immunomodulation induite par les cannabinoïdes chez des souris dépourvues de récepteurs CB2, souligne le rôle de CB2 dans de nombreuses maladies telles que les maladies inflammatoires, comme les maladies neurodégénératives (SEP, maladie d'Alzheimer, maladie de Parkinson ou troubles neurocognitifs associés au VIH- 1) ou les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), mais également dans l'athérosclérose, la douleur, les cancers, l'ostéoporose ou les maladies du foie par exemple [From cannabis to sélective CB2R agonists: molécules with numerous therapeutical virtues. Leleu-Chavain N, Biot C, Chavatte P, Millet R. Med Sci (Paris). 2013 May;29(5):523-8] .
Un grand nombre des agonistes de CB2 actuellement connus, ne sont pas sélectifs vis-à-vis du récepteur CBi et présentent donc des effets secondaires indésirables au niveau du système nerveux central, tels qu'euphorie, sédation, hypothermie et catalepsie. La demande de brevet WO 2010/133973 Al décrit des dérivés de
1,4 dihydropyridine et leur utilisation comme modulateur du récepteur CB2. Certains de ces composés sont en effet des agonistes sélectifs de CB2.
Manera et al. (Bioorg. Med. Chem. Lett. 17 (2007) 6505-6510) décrivent des 2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-ones. Ces composés montrent toutefois une faible affinité pour les récepteurs CBi et CB2.
La demande de brevet US 2012/0196845 décrit des 2H- pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-ones et leur utilisation comme modulateurs allostériques positifs du récepteur Ml, notamment dans le traitement de la maladie d'Alzheimer. II existe toutefois toujours un besoin de nouveaux agonistes de CB2 qui sont sélectifs vis-à-vis de CBi
RESUME DE L'INVENTION Les inventeurs ont maintenant réussi à mettre au point de nouveaux agonistes de CB2 qui sont sélectifs vis-à-vis de CBi. Ces agonistes présentent l'avantage de ne pas présenter les effets secondaires indésirables associés à l'activation du récepteur CB1; tels qu'euphorie, sédation, hypothermie et catalepsie.
L'invention concerne donc des composés de Formule I, leurs solvates pharmaceutiquement acceptables ainsi que l'utilisation de ces composés, ou leurs solvates ou compositions en contenant comme agonistes de CB2.
Dans un premier aspect, l'invention concerne des composés de Formule I :
I ou ses solvates pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, haloalkyle linéaire en C4 à C6 ou tetrahydropyranylalkyle en Cl à C2; et
R est cycloalkyle, cycloalkylalkyle ou alkyle en C3 à C6.
Dans un autre aspect, l'invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant au moins un composé selon l'invention ou un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
Comme indiqué plus haut, l'invention concerne également l'utilisation des composés selon l'invention ou un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables comme agonistes de CB2. Par conséquent, les composés de l'invention et leurs solvates pharmaceutiquement acceptables sont utiles dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2. L'invention concerne donc également les composés selon l'invention pour utilisation en tant que médicament, notamment dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections médiées par CB2.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Comme détaillé ci-dessus, l'invention concerne des composés de Formule I ainsi que leurs solvates pharmaceutiquement acceptables. Des composés de Formule I et leurs solvates pharmaceutiquement acceptables préférés sont ceux dans lesquels R 1 et/ou R 2 sont définis de la manière suivante :
R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, trifluorométhylalkyle linéaire en C3 à C5 ou tetrahydropyranylalkyle en Cl à C2; de préférence R1 est alkyle linéaire en C5 à C6 (w-pentyle et w-hexyle), trifluorométhylalkyle linéaire en C3 ( 1,1,1 -trifluoro-n- butyle) ou tetrahydropyranylalkyle en Cl (tetrahydropyranylméthyle) ; ou R1 est alkyle linéaire en C5 (w-pentyle), trifluorométhylalkyle linéaire en C3 (1,1,1- trifluoro-w-butyle) ou tetrahydropyranylalkyle en Cl à C2, plus préférentiellement R1 est alkyle linéaire en C5 (w-pentyle) ; R est alkyle en C5 à C6, cycloalkyle en C5 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12- alkyle linéaire en Cl à C3, de préférence R2 est w-pentyle, w-hexyle, cycloalkyle en C5 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12-méthyle ou cycloalkyle en C3 à Cl 2- éthyle ; plus préférentiellement R est w-pentyle, w-hexyle, cycloalkyle en C5 à CIO ou cycloalkyle en C6 à ClO-méthyle ou cycloalkyle en C6 à ClO-éthyle, plus préférentiellement encore R est w-pentyle, w-hexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamantylméthyle, notamment adamant- l-ylméthyle ou adamantyléthyle, notamment adamant- 1- yléthyle, plus préférentiellement encore R est adamantylméthyle ou adamantyléthyle, notamment adamant- l-ylméthyle et adamant-1 -yléthyle, et de manière tout à fait préférée R est adamantylméthyle, notamment adamant-l- ylméthyle.
Dans un mode de réalisation particulier, les composés de Formule I et leurs solvates pharmaceutiquement acceptables sont ceux dans lesquels R1 est tel que défini ci-dessus et R est choisi dans le groupe constitué par w-pentyle, n- hexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamantylméthyle et adamantyléthyle, de préférence R est choisi dans le groupe constitué par w-pentyle, w-hexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamant-l-ylméthyle et adamant- 1 - yléthyle.
En fait et sans vouloir être lié par une quelconque théorie, les inventeurs pensent que la sélectivité des composés de l'invention pour CB2 versus CBi est obtenue grâce au groupement encombrant hydrophobe R . En même temps, ce groupement permet une bonne affinité des composés de l'invention pour CB2. De manière avantageuse les composés de l'invention présentent une affinité pour le récepteur CB2 de l'ordre du nanomolaire, notamment inférieure à 100 nM, de préférence inférieure à 50 nM et plus préférentiellement encore inférieure à 30 nM. Des composés particulièrement préférés de l'invention sont ceux listés dans le Tableau 1 ci-dessous :
TABLEAU 1
Les composés de Formule I peuvent être préparés selon des réactions connues de l'Homme du métier. Les schémas réactionnels décrits dans la partie « Exemples » illustrent des approches de synthèse possibles.
Dans un deuxième aspect, l'invention concerne l'utilisation des composés de l'invention ou leurs solvates pharmaceutiquement acceptables comme agonistes de CB2.
Les composés de l'invention sont ainsi utiles dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2. L'invention concerne donc également les composés selon l'invention pour utilisation comme médicament, notamment pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections médiées par CB2.
Ces maladies ou affections comprennent les maladies auto- immunes, les maladies neurodégénératives, les maladies inflammatoires, l'ostéoporose, la douleur et les cancers d'origine inflammatoire. Dans un mode de réalisation particulier, les maladies ou affections sont choisies parmi les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), la sclérose en plaques (SEP), le lupus érythémateux, les thyroïdites auto-immunes, la polyarthrite rhumatoïde, la spondylarthrite ankylosante, la dermatite atopique, les hépatites, le syndrome de Goujerot-Sjôgren, la maladie d'Alzheimer, la sclérose latérale amyotrophique (SLA, également appelée maladie de Charcot), l'ostéoporose et la douleur. Les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin quant à elles regroupent la maladie de Crohn et la rectocolite hémorragique (RCH).
Dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne les composés de formule I tels que décrits ci-dessus pour utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), plus particulièrement de la maladie de Crohn et/ou de la rectocolite hémorragique (RCH).
La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des maladies et affections ci-dessus indiquées comprenant l'administration, à un patient, d'une dose efficace d'un composé selon l'invention, ou d'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables. De préférence, le patient est un animal à sang chaud, plus préférentiellement un humain.
Selon un autre aspect, l'invention porte sur une méthode de modulation de l'activité du récepteur CB2 chez un patient, de préférence un animal à sang chaud, plus préférentiellement un humain, en ayant besoin, ladite méthode comprenant l'administration à ce patient d'une dose efficace d'un composé selon l'invention, ou d'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables.
L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de Formule I ou au moins un solvate pharmaceutiquement acceptable dudit composé et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier.
La composition pharmaceutique de la présente invention peut être choisie parmi les compositions pharmaceutiques pour administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, topique, locale, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale. Dans ces compositions, le principe actif de Formule I ci-dessus, ou son solvate pharmaceutiquement acceptable, peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour le traitement et/ou la prévention des maladies ou affections ci- dessus indiquées. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions. Dans un mode de réalisation préféré, il s'agit d'une composition pharmaceutique pour administration orale. De telles formes d'administration appropriées qui peuvent se présenter sous forme solide, semi-solide ou liquide en fonction du mode d'administration, sont généralement connues de l'homme du métier, référence étant faite à la dernière édition de l'ouvrage « Remington's Pharmaceutical Sciences ».
Dans un mode de réalisation particulièrement intéressant, la composition pharmaceutique selon l'invention est une composition pharmaceutique pour administration orale. Les composés de l'invention sont en effet, à la connaissance des inventeurs les premiers agonistes de CB2 actifs par voie orale dans le cadre du traitement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI).
DEFINITIONS
Les définitions et explications ci-dessous concernent les termes et expressions telles qu'utilisés dans la présente demande, comprenant la description ainsi que les revendications.
Pour la description des composés de l'invention, les termes et expressions utilisées doivent, sauf indication contraire, être interprétés selon les définitions ci-après.
Le terme "halo", seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne fluoro, chloro, bromo, ou iodo. Les groupements halo préférés sont chloro et fluoro, fluoro étant particulièrement préféré.
Le terme « alkyl(e) », seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical hydrocarbure de formule CnH2n+i dans lequel n est un nombre entier supérieur ou égal à 1.
Le terme "haloalkyl(e)", seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical alkyle tel que défini ci-dessus dans lequel un ou plusieurs atomes d'hydrogène sont remplacés par un groupement halo tel que défini ci-dessus. Des radicaux haloalkyle linéaire en C4 à C6 préférés sont le 1,1,1-trifluoro-w-butyle, le 1, 1,1-trifluoro-w-pentyle et le 1,1, 1-trifluoro-w-héxyle, le 1, 1, 1-trifluoro-w-butyle étant particulièrement préféré.
Le terme « cycloalkyl(e) », seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical hydrocarbure mono-, di- ou tri-cyclique saturé ayant 3 à 12 atomes de carbone, notamment 5 à 10 atomes de carbone, plus particulièrement 6 à 10 atomes de carbone. Des radicaux cycloalkyl appropriés comprennent, sans y être limités, cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, norbornyle, adamantyle, notamment adamant- l-yle et adamant-2-yle, 1-décalinyle. Des groupements cycloalkyle préférés comprennent cyclopropyle, cyclohexyle, adamant-l-yle et adamant-2-yle.
Les composés de Formule I peuvent exister sous forme de solvates, à savoir sous forme d'associations ou de combinaisons avec une ou plusieurs molécules de solvant, tel que par exemple de l'éthanol ou de l'eau. Lorsque le solvant est de l'eau, on utilise le terme « hydrate ».
Toutes les références à des composés de Formule I désignent également les solvates de ceux-ci.
Les composés de l'invention sont les composés de Formule I et leurs solvates tels que défini ci-dessus, y compris tous leurs polymorphes et formes cristallines, leurs prodrogues et les composés ou solvates portant un label isotopique.
Le terme « patient » désigne un animal à sang chaud, de préférence un humain, qui attend ou reçoit un traitement médical.
Le terme « humain » désigne des sujets des deux sexes et à tout stade de développement (c'est-à-dire néonatal, infantile, juvénile, adolescent et adulte). Dans un mode de réalisation, il s'agit d'un adolescent ou d'un adulte, de préférence d'un adulte.
Les termes « traiter » et « traitement » doivent être entendus dans leur signification générale et comprennent ainsi l'amélioration et l'abrogation d'un état pathologique.
Les termes « prévenir » et « prévention » désignent le fait d'éviter ou de retarder l'apparition d'une maladie ou affection et des symptômes liés, ainsi excluant un patient de développer une maladie ou affection ou réduisant le risque d'un patient de développer une maladie ou affection.
Le terme « dose thérapeutiquement efficace » ou « dose efficace » désigne la dose de principe actif (composé de Formule I) qui est suffisant pour atteindre le résultat thérapeutique ou prophylactique désiré chez le patient auquel il est administré.
Le terme « pharmaceutiquement acceptable » désigne qu'un composé ou un composant n'est pas nocif pour le patient et que dans le cadre d'une composition pharmaceutique il est compatible avec les autres composants. Le terme « agoniste » désigne un ligand qui active une réponse intracellulaire lorsqu'il se lie à un récepteur et couvre les agonistes entier ainsi que les agonistes partiels.
La présente invention sera mieux comprise en référence aux exemples suivants. Ces exemples sont représentatifs de certains modes de réalisation de l'invention et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. Les figures servent à illustrer les résultats expérimentaux. FIGURES
Figure 1A : Taux de survie dans un modèle de colite aiguë chez la souris pour le composé 26 en comparaison à un agoniste de CB2 de l'art antérieur.
Figure 1B : Evaluation de la perte de poids corporel dans un modèle de colite aiguë chez la souris pour le composé 26 en comparaison à un agoniste de CB2 de l'art antérieur.
Figure 2A-D : Score macroscopique (A), dommages histologiques (B), taux de TNFa et IL-Ιβ (C,D) dans le colon après un colite causé par du TNBS et traitement avec le composé 26 ou un agoniste de CB2 de l'art antérieur. EXEMPLES
Appareillages et techniques d'analyse
La pureté des produits de synthèse a été contrôlée par chromatographie sur couche mince sur des plaques de gel de silice 60F254 d'épaisseur 0,2 mm (réf. 5735 Merck) (révélation : UV (254 et 366 nm) pour les produits avec liaisons conjuguées, ninhydrine pour les aminés, iode dans tous les cas, réactif de Dragendorff pour les composés comportant un atome d'azote hétérocyclique). Les purifications par chromatographie sur colonne ont été réalisées sur gel de silice 60, granulométrie 0,040-0,063 mm (réf. 9385.5000 Merck). L'éluant a été choisi de façon à obtenir un Rf compris entre 0,20 et 0,25 sur plaques de CCM. Les points de fusion (Mp) ont été déterminés à l'aide d'un appareil Buchi SMP 20 et ne sont pas corrigés. Ils sont exprimés en degrés Celsius (°C). Les spectres infrarouge ont été réalisés sur un spectromètre à transformée de Fourier Bruker Vector 22. Les signaux caractéristiques sont repérés par leur nombre d'onde exprimé en cm"1. Les spectres de RMN 1H ont été enregistrés à 300 MHz sur un appareil à transformée de Fourier Bruker AC 300P, avec le TMS (triméthylsilane) comme référence interne. Chaque signal est repéré par son déplacement chimique (δ en ppm), son intensité (nombre de H), sa multiplicité (s, singulet ; d, doublet ; t, triplet ; q, quadruplet ; m, massif ou multiplet) et éventuellement sa constante de couplage (J en Hertz). Dans le cas de massifs, celle-ci n'est pas mesurable. Tous les composés ont été caractérisés par LC-MS. Le chromato graphe liquide haute performance (colonne ODS, phase mobile: eau/acétonitrile/acide formique en mode gradient) est couplé à un détecteur UV et à un détecteur de masse de type APC^ (Ionisation Chimique à Pression Atmosphérique). Les spectres ont été enregistrés sur un appareil Thermo Electron Surveyor MSQ.
Synthèse chimique
A. Synthèse des composés finaux 16 et 21-27 et des composés comparatifs 8, 19
Schéma 1. Réactifs et conditions. ( ) Ethoxyméthylènemalonate de diéthyle, 100 °C, 1 h ; (II) Ph20, 240 °C, 2 h ; (iii) NaH, R'-Br, DMF, 90 °C, 16 h ; (iv) P4Si0, pyridine, reflux, 16 h ; (va) H2NNH2.H20, EtOH, reflux (vb) R2NHNH2.H20, EtOH, reflux, 16 h ; (vi) NaH bromure de cyclohexyle, DMF, 90 °C, 16 h.
Le 2-((phénylamino)méthylène)malonate de diéthyle (1), le 4-oxo-l,4- dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (2) et le 4-oxo-l-pentyl-l,4- dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (4) (R1= w-pentyle) ont déjà été décrits dans un précédent article (Stern, E., Muccioli, G. G.; Millet, R.; Goossens, J. F.; Farce, A.; Chavatte, P.; Poupaert, J. H.; Lambert, D. M.; Depreux, P.; Hénichart, J. P. Novel 4-Oxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxamide Derivatives as New CB2 Cannabinoid Receptors Agonists: Synthesis, Pharmacological Properties and Molecular Modeling. J. Med. Chem. 2006, 49, 70-79); les réactions de thionation intervenant dans la préparation du composé (6) ont également été décrits (Stem, E.; Muccioli, G. G.; Bosier, B.; Hamtiaux, L.; Millet, R.; Poupaert, J. H.; Hénichart, J. P.; Depreux, P.; Goossens, J. F.; Lambert, D. M. Pharmacomodulations Around the 4-Oxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxamides, a Class of Potent CB2-Selective Cannabinoid Receptor Ligands: Conséquences in Receptor Affinity and Functionality. J. Med. Chem. 2007, 50, 5471-5484).
Procédure générale pour la préparation des 2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 3(5H)-ones (8 et 16) à partir de la 4-thioxoquinoline (6).
Le composé 6 (1 équiv.) et l'hydrazine monohydrate ou mono substituée (3 équiv.) dans l'éthanol absolu sont mis à reflux pendant 14h. La di-ïso-propyléthylamine (DIPEA) (3.2 équiv.) est également ajouté dans le cas où les hydrazines monosubstituées sont sous forme chlorhydrate. Après retour à température ambiante, le solvant est évaporé et le résidu est partagé par un mélange dichlorométhane-H20. La phase organique est lavée avec une solution d'eau saturée en NaCl, séchée sur MgS04 et évaporée pour donner une huile jaune qui est purifiée par chromato graphie sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH 95:5, v/v). Les solides jaunes obtenues sont recristallisées dans l'acétonitrile.
5-Pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (8). Rendement : 90%. mp > 250 °C. IR (cm-1) 1610. 1H NMR (DMSO- 6) δ 11,42 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,14 (d, 1H, /= 7,9 Hz), 7,82 (d, 1H, / = 8,4 Hz), 7,66 (t, 1H, / = 7,3 Hz), 7,52 (t, 1H, / = 7,6 Hz), 4,38 (t, 2H, /= 7,3 Hz), 1,82-1,68 (m, 2H), 1,38-1,25 (m, 4H), 0,84 (t, 3H, /= 6,4 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 256.2 (MH+). 2-Cyclohexyl-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (16). Rendement : 77%. mp > 250 °C. IR (cm-1) 1634. 1H NMR (CDC13) δ 8.43 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 8.39 (s, 1H), 7,63-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 1.86-1.19 (m, 17H), 1.00 (t, 3H, J = 6.9 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 338.2 (MH+). Procédure générale pour la préparation des 2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 3(5H)-ones (19, 21-27) à partir du composé (8).
Le NaH (1.5 équiv., 60% dans l'huile minérale) est additionné par portions, à 0 °C, à une solution contenant le composé 8 (1 équiv.) dans du DMF anhydre (20 mL pour 1.2 mmol de 8 ou 9). Après 30 minutes, le dérivé halogéné approprié (1.5 équiv.) est ajouté et le mélange est chauffé à 90°C pendant 14h. Après retour à température ambiante, le milieu réactionnel est concentré sous vide, et le résidu est repris dans l'eau et extrait au CH2CI2. L'huile obtenue est ensuite purifiée par chromato graphie sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH 95:5, v/v) puis recristallisée dans l'acétonitrile. 2-Benzyl-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (19). Rendement : 74%. mp > 250 °C. IR (cm-1) 1644. 1H NMR (CDC13) δ 8,39 (s, 1H), 8,36 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,72 (t, 1H, J= 8,1 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,58-6,99 (m, 6H), 5,26 (s, 2H), 4,26 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 1,91-1,62 (m, 2H), 1,49-1,27 (m, 4H), 1,00 (t, 3H, J= 6,4 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 346.2 (MH+). 2,5-Dipentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (21). Rendement : 77%. mp 154 °C. IR (cm 1) 1630. 1H NMR (CDC13) δ 8.41 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J = 1.5 Hz), 8.25 (s, 1H), 7,59-7.51 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 4.06 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 1.91 (m, 4H), 1.38 (m, 8H), 0.90 (m, 6H). LC-MS (APCI+) m/z 326.2 (MH+).
2-Hexyl-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (22). Rendement : 73%. mp 157 °C. IR (cm-1) 1632. 1H NMR (CDC13) δ 8.40 (dd, 1H, J = 7,9 Hz, J = 1.2 Hz), 8.25 (s, 1H), 7,58-7.51 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 4.06 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91 (m, 4H), 1.38 (m, 10H), 0.90 (m, 6H). LC-MS (APCI+) m/z 340.3 (MH+). 2-(Cyclopropylméthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (23).
Rendement : 47%. mp 187 °C. IR (cm-1) 1632. 1H NMR (CDC13) δ 8.41 (dd, 1H, J = 7,6 Hz), 8.25 (s, 1H), 7,58-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 3.89 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91 (m, 2H), 1.39 (m, 5H), 0.92 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 0.47 (m, 4H). LC-MS (APCI+) m/z 310.1 (MH+).
2-(Cyclohexylméthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (24).
Rendement : 37%. mp 200 °C. IR (cm-1) 1631. 1H NMR (CDC13) δ 8.41 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 8.38 (s, 1H), 7,63-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 3.88 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91-1.19 (m, 17H), 0.92 (t, 3H, J = 7,0 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 352.2 (MH+).
2-(2-Cyclohexyléthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (25).
Rendement : 57%. mp 160 °C. IR (cm 1) 1621. 1H NMR (CDC13) δ 8.41 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 8.24 (s, 1H), 7,60-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 4.06 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91-1.19 (m, 17H), 0.92 (m, 5H). LC-MS (APCI+) m/z 366.2 (MH+). 2-(l-Adamantylméthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (26).
Rendement : 32%. mp 225 °C. IR (cm-1) 1629. 1H NMR (CDC13) δ 8.39 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 8.36 (s, 1H), 7.63-7.47 (m, 3H), 4.23 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.73 (s, 2H), 1.97-1.39 (m, 21H), 0.93 (t, 3H, J = 7.0 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 404.2 (MH+).
2-(l-Adamantyléthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (27). Rendement : 35%. mp 237 °C. IR (cm-1) 1625. 1H NMR (CDC13) δ 8.40 (d, 1H, J = 7.9 Hz), 8,26 (s, 1H), 7.63-7.47 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 4.06 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.01-1.33 (m, 23H), 0.93 (t, 3H, J = 7.0 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 418.2 (MH+).
B. Synthèse des 2-(cyclohexylméthyl)-5-alkyl-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)- ones (composés finaux 40-43)
hexyl, tetrahydropyranyl-4-methyl, 4,4,4-trifluorobutyl.
Schéma 2. Réactifs et conditions : (i) 100°C, lh ; (ii) réactif d' Eaton, 100°C, 3h ; (iii) NaH, RX, DMF, 90°C, 16h ; (iv) P4S10, pyridine, reflux, 8h ; (v) NH2NH2,H20, EtOH, reflux, 16h ; (vi) NaH, bromométhylcyclohexane, DMF, 90°C, 16h.
Le 2-((phénylamino)méthylène)malonate de diéthyle (1), et le 4-oxo-l,4- dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (2) ont été décrits dans un précédant article (Stern, E., Muccioli, G. G.; Millet, R.; Goossens, J. F.; Farce, A.; Chavatte, P.; Poupaert, J. H.; Lambert, D. M.; Depreux, P.; Hénichart, J. P. Novel 4-Oxo- l,4-dihydroquinoline-3-carboxamide Derivatives as New CB2 Cannabinoid Receptors Agonists: Synthesis, Pharmacological Properties and Molecular Modeling. J. Med. Chem. 2006, 49, 70-79).
Procédure générale pour la préparation des l-alkyl-4-oxo-l,4- dihydroquinoline-3-carboxylates d'éthyle (28-31). Dans un bicol de 100 mL, 3 g de quinoline 2 sont solubilisés dans 15 mL de DMF anhydre. Le milieu est placé dans un bain de glace et mis sous azote. L'hydrure de sodium (0.607 g ; 15.18 mmol ; 60% dans l'huile minérale) est ajouté par fractions. Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 min à 0°C. Le dérivé halogéné (20.70 mmol) est alors ajouté et la réaction est chauffée à 90°C pendant 16h. Le milieu est versé dans 150 mL d'eau distillée glacée : si le dérivé alkylé obtenu est solide, il est alors essoré, lavé à l'eau, séché puis recristallisé. Sinon il est extrait au dichlorométhane, lavé à l'eau, porté à sec par évaporation rotative puis purifié sur colonne de silice. l-Butyl-4-oxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (28). Solvant de recristallisation : Acétate d'éthyle. Rendement : 81%. mp = 123°C. IR (cm 1) 1642, 1600. 1H NMR (CDC13) S(ppm) 8.56 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8.49 (s, 1H), 7.69 (t, 1H, J = 8.4 Hz), 7.47-7.40 (m, 2H), 4.42 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4.19 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 1.92-1.88 (q, 2H), 1.50-1.41 (m, 5H), 1.01 (t, 3H, J = 7.3 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 270.12 (MH+). l-Hexyl-4-oxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (29). Solvant de cristallisation : cyclohexane. Rendement : 96%. mp = 67°C. IR (cm 1) 1710, 1606. 1H NMR (CDC13) < (ppm) 8.59-8.53 (m, 2H), 8.49 (s, 1H), 7.70 (t, 1H, J = 8.2 Hz), 7.49-7.43 (m, 2H), 4.42 (q, 1H, J = 7.0 Hz), 4.21 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 1.93- 1.89 (m, 2H), 1.46-1.26 (m, 9H), 0.90 (t, 3H, J = 6.8 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 338.16 (MH+). l-(Tetrahydro-2H-4-pyranylmethyl)-4-oxo-l,4-dihydroquinoline-3- carboxylate d'éthyle (30). Éluant de chromato graphie : dichlorométhane/méthanol 9: 1, v/v. Rendement : 58%. mp = 103°C. IR (cm-1) 1714, 1607, 1087. 1H NMR (CDC13) < (ppm) 8.56 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 8.43 (s, 1H), 7.71 (t, 1H, J = 8.6 Hz), 7.49-7.41 (m, 2H), 4.41 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4.07 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 4.03-4.99 (dd, 2H, J = 11.3 Hz, J2 = 3.2 Hz), 3.33 (Td, 2H, J, = 11.6 Hz, J2 = 2.3 Hz), 2.23-2.15 (m, 1H), 1.57-1.49 (m, 4H), 1.43 (t, 3H, J = 7.1 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 316.12 (MH+). l-4,4,4-Trifluorobutyl-4-oxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (31). Éluant de chromatographie : dichlorométhane/acétate d'éthyle 7:3, v/v. Rendement : 23%. mp = 132°C. IR (cm-1) 1670, 1641, 1607. 1H NMR (CDC13) δ (ppm) 8.55 (d, 1H, J = 8.07 Hz), 8.49 (s, 1H), 7.71 (t, 1H, J = 7.17 Hz), 7.50-7.40 (m, 2H), 4.40 (q, 2H, J = 7.11 Hz), 4.29 (t, 2H, J = 7.56 Hz), 2.29-2.18 (m, 2H), 1.43 (t, 3F, J = 7.11 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 296.11 (MH+).
Procédure générale pour la préparation des l-alkyl-4-thioxo-l,4- dihydroquinoline-3-carboxylates d'éthyle (32-35).
Dans un ballon, la l-alkyl-4-oxo- l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle est solubilisée dans la pyridine, puis le pentasulfure de phosphore est ajouté. Le mélange est mis à reflux pendant 8h. Après refroidissement à température ambiante, le milieu réactionnel est versé dans l'eau distillée. Le produit soufré est extrais à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par une solution d'acide chlorhydrique IN, puis par l'eau, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et portée à sec sous pression réduite. L'huile rouge obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice. l-Butyl-4-thioxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (32). Éluant de chromatographie : dichlorométhane/acétate d'éthyle 1 : 1, v/v. Rendement : 82%. mp = 116°C. IR (cm-1) 1718, 1596. 1H NMR (CDC13) < (ppm) 8.92 (s, 1H), 8.58 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 7.85 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 7.67 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.59 (t, 1H, J = 7.6 Hz), 4.50-4.48 (m, 4H), 1.93-1.92 (m, 2H), 1.50- 1.47 (m, 5H), 1.43 (t, 3H, J = 6.90 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 290.12 (MH+). l-Hexyl-4-thioxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (33). Éluant de chromatographie : dichlorométhane/acétate d'éthyle 1: 1, v/v. Rendement : 85%. mp = 92°C. IR (cm-1) 1720, 1598. 1H NMR (CDC13) < (ppm) 9.12 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.90 (s, 1H), 7.72 (t, 1H, J = 8.2 Hz), 7.52-7.46 (m, 2H), 4.43 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4.22 (t, 2H, J = 6.9 Hz), 1.93 (q, 2H, J = 7.2 Hz), 1.40 (t, 3H, J = 6.2 Hz), 1.37-1.26 (m, 6H), 0.91 (t, 3H, J = 6.80 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 318.16 (MH+). l-(Tetrahydro-2H-4-pyranylmethyl)-4-thioxo-l,4-dihydroquinoline-3- carboxylate d'éthyle (34). Éluant de chromato graphie : dichlorométhane/acétate d'éthyle 1 : 1, v/v. Rendement : 71%. mp = 140°C. IR (cm-1) 1717, 1596, 1014. 1H NMR (CDC13) ^(ppm) 9.43 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.94 (s, 1H), 7.74 (t, 1H, J = 7.0 Hz), 7.54-7.48 (m, 2H), 4.43 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4.12 (d, 2H, J = 1.1 Hz), 4.02 (dd, 2H, J, = 7.3 Hz, J2 = 3.1 Hz), 3.34 (Td, 2H, J, = 11.8 Hz, J2 = 2.2 Hz), 2.21- 2.17 (m, 1H), 1.55-1.45 (m, 4H), 1.41 (t, 3H, J = 7.2 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 332.08 (MH+). l-(4,4,4-Trifluorobutyl)-4-thioxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (35). Éluant de chromatographie : dichlorométhane/acétate d'éthyle 1 : 1, v/v. Rendement : 89%. mp = 85°C. IR (cm-1) 1718. 1H NMR (CDC13) < (ppm) 8.55 (d, 1H, J = 8.07 Hz), 8.49 (s, 1H), 7.91 (t, 1H, J = 7.17 Hz), 7.63-7.50 (m, 2H), 4.52 (q, 2H, J = 7.11 Hz), 4.29 (t, 2H, J = 7.56 Hz), 2.41-2.31 (m, 2H), 1.53 (t, 3F, J = 7.11 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 296.11 (MH+). Procédure générale pour la préparation des 5-alkyl-2H-pyrazolo[4,3- c]quinolin-3(5H)-ones (36-39).
Dans un ballon de 100 mL, la l-alkyl-4-thioxoquinoline-3-carboxylate d'éthyle est solubilisée dans l'éthanol absolu. L'hydrazine monohydrate est ajoutée et le milieu est porté à reflux pendant 16h. Après avoir évaporé le solvant sous pression réduite, le résidu obtenu est repris par de l'eau distillée, essoré, séché et recristallisé dans l'éthanol absolu.
5-Butyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (36). Rendement : 87%. mp > 250°C. IR (cm-1) 1627. 1H NMR (DMSO-d6) < (ppm) 11.37 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.14 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.82 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.66 (t, 1H, J = 7.0 Hz), 7.53 (t, 1H, J = 7.3 Hz), 4.39 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.75 (quint, 2H), 1.33 (sext, 2H), 0.92 (t, 3H, J = 6.30 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 242.14 (MH+).
5-Hexyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (37). Rendement : 85%. mp = 242°C. IR (cm-1) 1607. 1H NMR (CDC13) <? (ppm) 9.42 (s, 1H), 8.35 (d, 1H, J = 8.3 Hz), 8.32 (s, 1H), 7.63 (t, 1H, J = 9.0 Hz), 7.53 (m, 2H), 4.26 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 1.87 (m, 4H), 1.43-1.25 (m, 4H), 0.89 (t, 3H, J = 6.80 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 270.12 (MH+). 5-(Tetrahydro-2H-4-pyranylmethyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (38). Rendement : 82%. mp > 250°C. IR (cm-1) 1607, 1083. 1H NMR (CDC13) δ (ppm) 9.00 (s, 1H), 8.37 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 8.21 (s, 1H), 7.69-7.47 (m, 3H), 4.14 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 4.02 (Dd, 2H, Jl = 12.0 Hz, J2 = 4.0 Hz), 3.34 (Td, 2H, Jl = 11.6 Hz, J2 = 2.3 Hz), 2.22 (m, 1H), 1.63- 1.46 (m, 4H). LC-MS (ESI+) m/z 284.13 (MH+).
5-(4,4,4-Trifluorobutyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (39).
Rendement : 72%. mp > 250°C. IR (cm-1) 1627. 1H NMR (DMSO- 6) δ (ppm) 11.39 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.05 (d, 1H, J = 7.4 Hz), 8.86 (d, 1H, J = 8.3 Hz), 7.67 (t, 1H, J = 7.3 Hz), 7.52 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 4.45 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 2.45-2.36 (m, 2H), 2.02-1.99 (m, 2H), 1.40 (t, 3F, J = 7.11 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 321.30 (MH+).
Procédure générale pour la préparation des 2-(cyclohexylméthyl)-5-alkyl-2H- pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-ones (40-43).
Dans un bicol, la 5-alkyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one est solubilisée dans le DMF anhydre. Le milieu est placé sous azote, à 0°C et l'hydrure de sodium est ajouté par fractions. Le milieu est alors laissé sous agitation pendant 30 min puis le dérivé bromé est ajouté. La réaction est laissée sous agitation à 90°C pendant 16h. La réaction est versée dans l'eau distillée. Le précipité est essoré, lavé à l'eau, séché puis purifié par chromatographie sur gel de silice suivi d'une recristallisation dans l'acétonitrile.
2-(Cyclohexylméthyl)-5-butyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (40).
Éluant de chromatographie : acétate d'éthyle/éthanol 9: 1, v/v. Rendement : 30%. mp = 216 °C. IR (cm-1) 1628. 1H NMR (DMSO- 6) <? (ppm) 8.40 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 8.24 (s, 1H), 7.64-7.49 (m, 3H), 4.26 (t, 2H, J = 6.9 Hz), 3.88 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 1.93-1.10 (m, 15H), 1.00 (t, 3H, J = 7.40 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 338.16 (MH+). 2-(Cyclohexylméthyl)-5-hexyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (41).
Éluant de chromatographie : acétate d'éthyle/éthanol 9: 1, v/v. Rendement : 57%. mp = 193°C. IR (cm-1) 1631. 1H NMR (DMSO- 6) < (ppm) 8.73 (s, 1H), 8.15 (d, 1H, J = 1.9 Hz), 7.84 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.67 (t, 1H, J = 7.1 Hz), 7.52 (t, 1H, J = 7.8 Hz), 4.40 (t, 2H, J = 7.0 Hz), 3.68 (d, 2H, J = 1.1 Hz), 1.78-0.98 (m, 19H), 0.83 (t, 3H, J = 6.9 Hz). LC-MS (ESI+) m/z 366.26 (MH+).
2-(Cyclohexylméthyl)-5-(tetrahydro-2H-4-pyranylmethyl)-pyrazolo[4,3- c]quinolin-3(5H)-one (42). Éluant de chromatographie : acétate d'éthyle/éthanol 9: 1, v/v. Rendement : 12%. mp > 250°C. IR (cm-1) 1627, 1091. 1H NMR (DMSO- <k ) < (ppm) 8.69 (s, 1H), 8.15 (d, 1H, J = 1.9 Hz), 7.90 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.67 (t, 1H, J = 7.3 Hz), 7.53 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 4.31 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 3.81 (d, 2H, J = 11.2 Hz), 3.67 (d, 2H, J = 7.0 Hz), 3.18 (t, 2H, J = 9.2 Hz), 2.1-0.9 (m, 16H). LC-MS (ESI+) m/z 380.23 (MH+).
2-(Cyclohexylméthyl)-5-(4,4,4-trifluorobutyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 3(5H)-one (43). Éluant de chromatographie : dichlorométhane/méthanol 9: 1, v/v. Rendement : 15%. mp = 224°C. IR (cm-1) 1628. 1H NMR (DMSO- 6 ) < (ppm) 8.71 (s, 1H), 8.15 (d, 1H, J = 6.57 Hz), 7.90 (d, 1H, J = 8.52 Hz), 7.68 (t, 1H, J = 7.14 Hz), 7.53 (t, 1H, J = 7.02 Hz), 4.45 (t, 2H, J = 7.23 Hz), 3.66 (d, 2H, J = 7.02 Hz), 2.07-1.1 (m, 20H). LC-MS (ESI+) m/z 392.20 (MH+).
Etudes pharmacologiques in vitro
Mesure d'affinité. Les études de binding ont été réalisées selon les protocoles décrits par El Bakali et al. (El Bakali, J.; Muccioli, G. G.; Renault, N.; Pradal, D.; Body-Malapel, M.; Djouina, M.; Hamtiaux, L.; Andrzejak, V.; Desreumaux, P.; Chavatte, P.; Lambert, D. M.; Millet, R. 4-Oxo- l,4-Dihydropyridines as Sélective CB2 Cannabinoid Receptor Ligands: Structural Insights into the Design of a Novel Inverse Agonist Séries. J. Med. Chem. 2010, 53, 7918-7931) mais en appliquant une petite modification. Brièvement, le [3H]-CP-55,940 (0.5 nM) choisi comme radioligand pour les récepteurs humains CBi et CB2, est additionné à 6 μg de membranes resuspendues dans 550 μΐ^ (volume final) de tampon (20 mM Hepes, 5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 0.3% sérum albumine bovine, pH 7.4). Après 1 h à 30 °C, l'incubation est stoppée et la solution est rapidement filtrée sur Harvester, à travers le filtre « Unifilter 96 (PerkinElmer) » préalablement saturé avec du tampon de liaison (20 mM Hepes, 5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 0.3% sérum albumine bovine, pH 7.4). puis lavée 20 fois avec du tampon de liaison glacé sans albumine de sérum. La radioactivité des filtres a été mesurée à l'aide du « TopCount NXT Microplate Scintillation Counter (PerkinElmer) » après addition de 60 μΐ^ de liquide scintillant « MicroScint 40 (PerkinElmer) ». Les expériences ont été réalisées en « triplicate ». La liaison non spécifique a été déterminée en présence de 5 μΜ (R)-(+)-WIN 55,212-2 (Sigma).
35
Dosage du [ S]-GTPyS. Les études ont été réalisées à 30°C dans des tubes contenant 10 μg de protéine dans 0.5 mL (volume final) de tampon (20 mM Hepes, 10 mM MgCl2, 100 mM NaCl, 0.1% sérum albumine bovine, pH 7.4)
35 complétés avec 30 μΜ de GDP. Le dosage a été initié par l'addition de [ S]- GTPyS (0.1 nM, concentration finale). Après 1 h à 30 °C, l'incubation a été stoppée et la solution a été rapidement filtrée sur le filtre « Unifilter-96 GF/B» et lavée 20 fois avec du tampon de liaison glacé. La radioactivité sur les filtres a été comptée comme mentionné ci-dessus. La liaison non spécifique a été mesurée en présence de 100 μΜ de Gpp(NH)p. Les résultats ont été exprimés en EC50 (nM) et l'Emax (%).
Analyse des données. Les valeurs de Ki et EC50 ont été déterminées par régression non linéaire réalisée par le programme « GraphPad prism 5.0 program (GraphPad Software, San Diego). » L'analyse statistique des résultats du dosage [ S]-GTPyS a été effectuée grâce au test « Student
Les Tableaux 2 et 3 ci-dessous résument les affinités de liaison pour C i et CB2.
Tableau 2 : affinités de liaison
Affinité de liaison Affinité de liaison hC 2 ¾CBi
Composé R
Ki (nM) Ki (nM)
8 H > 3000 > 3000
21 n-CsHn 4.3 + 0.3 > 3000
22 w-C6H13 7.7 + 0.3 > 3000
Tableau 3 : affinités de liaison
Affinité de liaison Affinité de liaison hC 2 ¾CBi
Composé R1
Ki (nM) Ki (nM)
41 w-C6H13 31.1 > 10000
43 rc-C3H6CF3 6.17 1680
Les résultats obtenus pour le composé 19 qui constitue un exemple comparatif d'un composé de Formule I dans laquelle R est un groupement aromatique (benzyle) démontrent que la présence d'un groupement aliphatique hydrophobe non aromatique en position N-2 (groupement R ) est cruciale pour l'affinité pour CB2. En effet, contrairement au composé 19, les composés de l'invention qui présentent tous un groupement alkyle, cycloalkyle ou cycloalkylalkyle en position N-2 (groupement R ) sont tous actifs au niveau nanomolaire.
La comparaison des composés 16, 24 et 25 indique que, dans le cas d'un groupement cycloalkyle ou cycloalkylalkyle, le choix d'un groupement cycloalkylméthyle donne les meilleurs résultats au niveau de l'affinité pour CB2 tout en restant sélectif pour CB2 vis-à-vis de CBi. Cette observation est également confirmée pour les composés 26 (R =l-adamantylméthyl) et 27 (R =1- adamantyléthyl) . De plus, dans le cas de l'utilisation d'un groupement cycloalkyle ou cycloalkylalkyle en position N-2 (groupement R ), la taille du cycle semble également impacter l'affinité du composé pour CB2. Par exemple, la comparaison des composés 23, 24 et 26 indique que plus le cycle est grand (adamantyle > cyclohexyle > cyclopropyle), meilleure est l'affinité pour CB2. Des chaînes alkyles linéaires en position N-2 (groupement R ) résultent également dans des affinités élevées à un niveau nanomolaire pour CB2.
Il est également important de noter et comme indiqué ci-dessus, que le remplacement du groupement alkyle, cycloalkyle ou cycloalkylalkyle en position
N-2 (groupement R ) par un résidu aromatique (groupement benzyle) induit une perte drastique d'activité (composés 21, 24, 26 vs. 19).
De manière surprenante, aucun des composés, à l'exception des composés 42 et 43 ne possède une affinité pour CBi (hCBi ; Ki > 3000), démontrant que ces composés sont en effet très sélectifs (CB2 vs CB .
Les résultats soulignent également qu'il est possible de faire varier la longueur de la chaîne alkyle en R1.
Le Tableau 4 ci-dessous résume les activités fonctionnelles de certains composés de l'invention pour le récepteur cannabinoïde hCB2 Tableau 4 : activités fonctionnelles
16 204 ± 41 160 ±3
24 14.3 + 4.0 149 + 4
25 5.4 + 1.1 141 +3
26 64 + 10 163 + 4
En ce qui concerne les activités fonctionnelles, les composés 16 et 24-26 sont tous des agonistes avec un EC50 allant de 5.4 nM à 204 nM et un Emax aux environs de 150%. Pharmacologie in vivo.
Les souris mâles C57B16 (n=10 par groupe) ont un accès libre à la nourriture et à l'eau. Pour l'induction de la colite, les souris sont anesthésiées pour 90-120 min par administration sous-cutanée de zylasine-kétamine (50 mg/kg) diluées dans du sérum physiologique, puis reçoivent une administration intrarectale de TNBS (40 μΐ,, 150 mg/kg) dilué dans un mélange 1 : 1 de NaCl 0.9% et d'éthanol 100%. Les nouveaux agonistes CB2 sont dilués dans de la carboxyméthylcellulose 0.5% (Sigma-Aldrich, Saint Quentin Fallavier, France) pour une dose administrée par gavage de 0.1, 1 et 10 mg/kg poids corporel/j. Le JWH133, agoniste CB2 connu (Kimball ES, Schneider CR, Wallace NH, Hornby PJ. Agonists of cannabinoid receptor 1 and 2 inhibit expérimental colitis induced by oil of mustard and by dextran sulfate sodium. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 2006, 291, G364-71.), est administré par voie intrapéritonéale à la dose de 0.1 mg/kg pc/j. Les animaux sont euthanasiés 5 jours après l'administration de TNBS. L'intensité de la colite aux niveaux macroscopiques et histologiques est évaluée dans chaque colon à l'aveugle par 2 investigateurs. L'échelle des scores macroscopiques des lésions va de 0 à 10 selon des caractéristiques reflétant l'inflammation, telle que l'hyperémie, l'épaississement de la paroi intestinale, l'étendue des ulcérations. Une biopsie de colon localisée précisément 2 cm au-dessus du canal anal est utilisée pour l'analyse histologique suite à une coloration May-Grunwald Giemsa. Le score histologique varie entre 0 et 6 et prend en compte le degré d' infiltrat inflammatoire, la présence d'érosion, d'ulcérations ou de nécrose de la muqueuse, et le niveau d'extension des lésions en profondeur et en surface atteinte. Deux autres biopsies du côlon sont congelées et utilisées pour analyser les taux d'ARNm de cytokines inflammatoires par PCR en temps réel. Les ARNm totaux du côlon sont extraits en utilisant le kit Nucleospin RNAII (Macherey Nagel, Hoerdt, France) puis rétro-transcripts en utilisant le high-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, USA). La PCR en temps réel est réalisée avec du SYBR Green (Applied Biosystems, Foster City, USA). Les amorces spécifiques pour TNF alpha (TNF alpha F et TNF alpha R), IL- 1 beta (IL1 beta F et IL 1 beta R) et POLR2A (POLR2A F et POLR2A R) en tant que gène de référence ont été choisis en utilisant le logiciel Primer Express 2 (Applied Biosystems, Foster City, USA). Pour la représentation graphique des données quantitatives de PCR, les valeurs de Ct obtenues pour les gènes cibles sont rapportées à celles du gène de référence, en utilisant la méthode du AACt c'est-à- dire : AACt= (Ct du gène cible - Ct du gène de référence) souris traitée - (Ct du gène cible - Ct du gène de référence) souris non traitée, et les données finales sont dérivées du 2-AACt. Le composé 26 a été évalué chez la souris dans un modèle de colite induite au TNBS selon un protocole décrit (Desreumaux, P.; Dubuquoy, L.; Nutten, S.; Peuchmaur, M.; Englaro, W.; Schoonjans, K.; Derijard, B.; Desvergne, B.; Wahli, W.; Chambon, P.; Leibowitz, M. D.; Colombel, J. F.; Auwerx, J. Atténuation of Colon Inflammation Through Activators of the Retinoid X Receptor (RXR)/Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma (PPARgamma)
Heterodimer. A Basis for New Therapeutic Stratégies. J. Exp. Med. 2001, 193, 827-838). Ainsi, le composé 26 a été administré oralement dans de la carboxyméthylcellulose (CMC) chaque jour à la dose de 0.1, 1 et 10 mg/kg pendant sept jours, et deux jours avant l'induction de la colite. Un contrôle avec une administration de CMC seul a été effectué. Tout d'abord les taux de survie tout au long de l'étude ont été examinés et la perte de poids avant l'euthanasie des souris évaluée (cinq jours après l'administration du TNBS). Une diminution de la mortalité pour les souris traitées avec le composé 26 par rapport aux souris non traitées (Figure 1A) a été notée. De plus, le traitement journalier atténue de manière dose-dépendante la perte de poids généralement observée lors d'une colite induite au TNBS (Figure 2B).
Après l'euthanasie des différents groupes, les côlons de chaque groupe ont été examinés et les dommages ont été mesurés. Les résultats ont montré que le composé 26 diminue les scores macroscopiques (Figure 2A) de manière dose dépendante avec un effet puissant quand il est administré par voie orale à la dose de 10 mg/kg (1.7 vs 4.9). Cet effet protecteur a été confirmé par l'évaluation histologique. Ainsi, le composé 26 atténue les scores histologiques de 65% (figure 2B). Les niveaux de TNFa et d'11-ΐβ, deux cytokines largement impliquées dans la réponse inflammatoire ont également été quantifiés. Le composé 26.
Ainsi, l'ensemble des données montre que le composé 26 est efficace chez la souris contre la colite de manière dose dépendante après une administration par voie orale.

Claims

Revendications 1. Composé de Formule I:
I ou ses solvates pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle
R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, haloalkyle linéaire en C4 à C6 ou tetrahydropyranylalkyle en Cl à C2; et
R est cycloalkyle, cycloalkylalkyle ou alkyle en C3 à C6.
2. Composé ou solvate selon la revendication 1, dans lequel R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, trifluorométhylalkyle linéaire en C3 à C5 ou tetrahydropyranylalkyle en Cl à C2.
3. Composé ou solvate selon la revendication 1 ou 2, dans lequel R est alkyle en C5 à C6, cycloalkyle en C5 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12- alkyle linéaire en Cl à C3.
4. Composé ou solvate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel R est choisi dans le groupe constitué par w-pentyle, w-hexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamantylméthyle et adamantyléthyle.
5. Composé ou solvate selon la revendication 1 choisi parmi:
2-Cyclohexyl-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2,5-Dipentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-Hexyl-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-(Cyclopropylméthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-(Cyclohexylméthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-(2-Cyclohexyléthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-(l-Adamantylméthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-(l-Adamantyléthyl)-5-pentyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one;
2-(Cyclohexylméthyl)-5-butyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one
2-(Cyclohexylméthyl)-5-hexyl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one
2-(Cyclohexylméthyl)-5-(tetrahydro-2H-4-pyranylmethyl)-pyrazolo[4,3- c] quinolin-3 (5H)-one
2-(Cyclohexylméthyl)-5-(4,4,4-trifluorobutyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 3(5H)-one
6. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
7. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables pour utilisation en tant que médicament.
8. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections médiées par CB2.
9. Composé ou solvate pour utilisation selon la revendication 8 caractérisé en ce que les maladies ou affections médiées par CB2 sont choisies dans le groupe constitué par les maladies auto-immunes, les maladies neurodégénératives, les maladies inflammatoires, l'ostéoporose, la douleur et les cancers d'origine inflammatoire.
10. Composé ou solvate pour utilisation selon la revendication 9 en ce que les maladies ou affections sont choisies dans le groupe constitué par les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), la sclérose en plaques (SEP), le lupus érythémateux, les thyroïdites auto-immunes, la polyarthrite rhumatoïde, la spondylarthrite ankylosante, la dermatite atopique, les hépatites, le syndrome de Goujerot-Sjôgren, la maladie d'Alzheimer, la sclérose latérale amyotrophique (SLA, également appelée maladie de Charcot), l'ostéoporose et la douleur.
11. Composé ou solvate pour utilisation selon la revendication 10 caractérisé en ce que les maladies ou affections choisies parmi les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI).
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