EP2809361A1 - Pansement et procede de fabrication - Google Patents

Pansement et procede de fabrication

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Publication number
EP2809361A1
EP2809361A1 EP13707020.7A EP13707020A EP2809361A1 EP 2809361 A1 EP2809361 A1 EP 2809361A1 EP 13707020 A EP13707020 A EP 13707020A EP 2809361 A1 EP2809361 A1 EP 2809361A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
dressing
polymer
enzyme
nonwoven
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP13707020.7A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Sébastien GIRAUDIER
Sébastien Perrin
Julien Picard
Marie-Cécile Klak
Véronique LARRETA-GARDE
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
MAIA Woundcare SAS
Original Assignee
MAIA Woundcare SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by MAIA Woundcare SAS filed Critical MAIA Woundcare SAS
Priority to EP13707020.7A priority Critical patent/EP2809361A1/fr
Publication of EP2809361A1 publication Critical patent/EP2809361A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
    • A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
    • A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/38—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties

Definitions

  • the present invention relates to a dressing and a method of manufacturing said dressing.
  • the present invention finds application particularly in the human or veterinary medical field, for example to treat wounds.
  • the main objectives of dressings are to protect a wound and to prevent infection by ensuring, if necessary, disinfection of the wound, protect the skin from maceration and the irritating action of secretions, protect the wound from trauma and help healing.
  • Dressings are also intended to provide comfort to the patient, for example through the achievement of the above objectives, in particular by protecting the wound from trauma and by helping healing.
  • hydrogels hydrogels, tulles and interfaces, hydrocolloids, hydrocellulars, alginates and charcoal dressings.
  • hydrogels are particularly useful on superficial and deep chronic wounds, pressure ulcers, leg ulcers, reconstructive and reconstructive surgery, sluggish wounds, dermabrasion, severe sunburns, superficial and deep 2nd degree burns.
  • Such dressings are commercially available, for example Askina Gel marketed by B Braun, Duoderm Hydrogel marketed by Convatec, Hydrosorb sold by Hartmann, IntraSite Gel marketed by Smith & Nephew, Normgel sold by Mölnlycke, Purilon marketed by Coloplas and Urgo hydrogel marketed by Urgo.
  • Hydrocolloids are also frequently used on uninfected budding exudative wounds but are contraindicated, for example for 3rd degree burns, IV arteritis, fungal infections, superinfected wound, diabetic wounds.
  • Such dressings are commercially available, for example the Askina Hydro sold by the company B. Braun, the Algoplaque marketed by the company Urgo Comfeel marketed by the company Coloplast, the Duoderm marketed by the company Convatec and Hydrocoll marketed by the company Hartmann.
  • the known dressings applied to a oozing wound may stick to the wound and / or become embedded in the wound, thus hindering the healing and / or causing during removal a deterioration of the cicatrization.
  • the healing of a wound always operates from the edge to the center.
  • Many dressings dry and glue on the edges of the wound. Their withdrawal entails tearing of neoformed cells from the perilesional area, which slowed the healing process.
  • the present invention aims to overcome the disadvantages of the prior art by providing a dressing comprising a nonwoven support comprising on one of these faces, a biomaterial capable of making gel / solution transitions comprising an aqueous phase and a polymer network.
  • a biomaterial capable of making gel / solution transitions comprising an aqueous phase and a polymer network.
  • a biomaterial capable of making gel / solution transitions comprising an aqueous phase and a polymer network.
  • a biomaterial capable of making gel / solution transitions comprising an aqueous phase and a polymer network.
  • the biomaterial can be a biomaterial capable of making transitions solution / gel then gel solution in a controlled manner over time.
  • a dressing comprising a biomaterial capable of making solution / gel transitions then gel solution in a controlled manner over time, said biomaterial being in contact with the wound, advantageously makes it possible to absorb exudates of wounds while providing an environment similar to the extracellular matrix, thereby promoting healing.
  • the dressing according to the invention because of its ability to make gel-solution transitions, advantageously allows atraumatic removal of the dressing that peels off the wound once healed.
  • the protective gel formed on the wound at the break of the dressing can be adhesive to the perilesionel cells, once the transition is made, that is to say the state of the gel is transforms, becomes softer and releases a little liquid, which makes the dressing non-adhesive.
  • dressing means, for example, a device used in the human or veterinary medical field, for example a device that is applicable to a wound, for example a human or animal wound.
  • the wound may be a superficial wound or a deep wound. It can be for example a rupture and / or an attack of the cutaneous barrier, or a rupture of the different layers of the epidermis and / or the dermis until the total defect, that is to say to say until the absence of epidermis and / or dermis.
  • a wound located on any part of the body it may be for example a cutaneous wound, a wound of the eye, a wound to the thorax, a wound in the abdomen, a sore in the mouth.
  • the wound can be a chronic or acute wound.
  • the acute wound may be an injury, a bite, a laceration, a surgical wound, a burn.
  • the chronic wound may be an ulcer, an eschar, a wound of the diabetic, any wound resulting from dermatological pathology, a cancerous wound, for example muscitis, cancerous ulceration, arthéritic ulceration, ulcerated stromatitis, wound of herpetic origin, wound surgical, or from a transplant.
  • the dressing may be in any form, for example in a rectangular, circular, linear and / or adapted to the shape of the wound, and / or the position of the wound.
  • the dressing is in a rectangular shape without sharp edges.
  • the dressing may be for example a circular-shaped dressing, a polygon, for example a quadrilateral, a pentagon, a hexagon, a heptagon, a rectangle, a square, a parallelogram, a triangle, a diamond, an ellipse or any form adapted to the wound bed.
  • the dressing may be for example a rectangular shaped dressing, for example having a dimension of 5 X 5 mm, 250 x 250, 500 x 500, 1000 x 750, 1500 x 1000 mm. It can be for example a dimension of 65 x 100 mm.
  • the first enzyme may be chosen, for example from the group comprising the enzymes of the metalloproteinase family, the family of serine proteases, the family of cysteines and aspartate proteases, the ADAM family, glycosidases whose amylase cellulase, dextranase, pullulanase, pectinase, chitinase, xanthanase, chitosanase, hyaluronidase, and lyases including hydroxyacetyl lyase, chondroitinase, heparinase, alginate lyase.
  • the first enzyme is a collagenase.
  • the second enzyme may be chosen, for example, from the group comprising the enzymes of the family of transglutaminases, lysyl oxidases, disulfide isomerase proteins, sulphhydryl thiol oxidases, peroxidases, lipoxygenases, epimerases including alginates. epimerases, glucuronate isomerases, cellobiose epimerase and galactose-6-sulfurylases.
  • the second enzyme is a transglutaminase.
  • the protein polymer may be chosen for example from the group comprising fibrin, gliadin, myosin, globulin (7S and 11S), actin, myoglobin, collagen and its derivatives, proteins milk, soy protein, wheat protein, and egg yolk and egg white protein, pea protein, faba bean protein, flax protein, silk protein, fibronectin, laminin , elastin, vitronectin.
  • the polymer is gelatin.
  • the saccharide polymer is chosen, for example, from the group consisting of carrageenans, alginates, xanthan, chitosan, chitin, hyaluronic acid, sulphated glycosaminoglycans, glycogen, cellulose and its derivatives, and pectins. starch and its derivatives, dextrans and xylans.
  • the biomaterial may further comprise a cryoprotectant compound.
  • a cryoprotectant compound chosen from sorbitol, mannitol, glycerol, sorbitol, polyols, for example: Erythritol, Xylitol, Arabitol, Ribitol, Dulcitol or galactitol, Mannitol, Volemitol, Maltitol, Isomaltitol, Lactitol or lactositol, glycol and its derivative polymers for example polyethylene glycol (PEG).
  • the cryoprotectant is sorbitol.
  • the concentration of cryoprotectant in the polymer solution may be from 0.1 to 1 M, for example from 0.2 to 0.5 M, or from 2 to 10%, for example from 3 to 4% by weight. .
  • cryoprotectant advantageously allows the dressing of the invention to be more flexible and the freeze-dried biomaterial to be more flexible. Improving the flexibility / flexibility of the dressing advantageously allows better adaptation to the wound surface, for example, to ensure conformability to the wound.
  • the nonwoven may comprise meshes of 1 to 1000 ⁇ m, preferably 5 to 500 ⁇ m.
  • the size of the mesh of the nonwoven advantageously allows a strong adhesion of the biomaterial to said nonwoven.
  • the size of the mesh advantageously prevents the colonization of the dressing by the cells of the wound.
  • the size of the mesh of the nonwoven allows an impregnation of the biomaterial in said nonwoven while maintaining a thickness of biomaterial on the surface of the nonwoven sufficient.
  • the thickness of the nonwoven may be less than 10 ⁇ m, preferably less than 1 ⁇ m.
  • the nonwoven may be a nonwoven without polyurethane and without polyacrylate.
  • the nonwoven may be in any material known to those skilled in the art, for example, it may be in viscose, wadding, cellulose, synthetic or natural polymer, preferably the nonwoven is viscose.
  • the nonwoven may be for example a nonwoven marketed by Mankk, the nonwoven MA 60, MA 50 J, WSV 100, MA57 S, marketed by Mank (Germany), 71,100,001 marketed by Norafin (Germany).
  • the nonwoven allows the maintenance of the structure of the dressing and the biomaterial.
  • the nonwoven advantageously prevents any tearing of the dressing on the wound.
  • the nonwoven advantageously allows, during removal of the dressing, the preservation of the structure of the dressing and thus to avoid any tearing of the dressing during its removal, as well as any disintegration of the gel which may induce the presence of undesirable residues in the dressing. the wound.
  • the dressing may further comprise a substance active in the biomaterial and / or in the nonwoven.
  • active substance is intended to mean any substance or composition having a biological or biochemical activity on the surface of an organism (microorganism or multicellular organism, for example skin, bone, organ, etc.) or in an organism.
  • This active substance may have, for example, curative or preventive properties with regard to human or animal diseases.
  • It can be any product that can be administered to humans or animals in order to establish a medical diagnosis or to restore, correct or modify their organic functions.
  • It may be bacteriostatic and / or bactericidal substances, antibiotics, sanitizer, dyes, etc. It can be any molecule to reduce and / or eliminate pain, for example opioids, anti-inflammatory, nonsteroidal, etc.
  • the active substance can be chosen for example from the group comprising, bacteriostats, bactericides, vasodilators, dyes including eosin, dextran blue, methylene blue, azure, proteins, saccharides including hyaluronic acid and alginates, a liposome, a nanoparticle, a micelle, anti-acne, antiallergics, anxiolytics, anti-asthmatics, anti-cancer drugs, lipid-lowering agents, hormonal contraceptives, antidepressants, antidiabetics, analgesics opioids and their derivatives, for example morphine, antiasthenics, antihypertensives, antifungals, antibiotics, sleeping pills, hormonal treatments, anti-migraine drugs, overweight medications, antiparkinson drugs, neuroleptics, nonsteroidal anti-inflammatory drugs, ovulation inducers, bronchial thinners, antitussives, erection inducers and antiul
  • it can be an active substance alone or a mixture of active substances.
  • the amount of active substance may depend, for example, on factors such as its activity and the desired dose by the user.
  • the desired dose can be easily determined by those skilled in the art since they may be, for example, known doses for known products.
  • the biomaterial may be, for example, a biomaterial comprising an aqueous phase and a first polymer network consisting of a first protein or saccharide polymer or a mixture of first protein and / or saccharide polymers, in which the first polymer network and the aqueous phase form a first gel (A), the biomaterial comprising:
  • the aqueous phase, the first polymer network, the second polymer may be as defined in the application US12 / 742588 incorporated herein by reference.
  • aqueous phase is understood to mean an aqueous solution, for example water, for example still an aqueous buffered solution, for example at a desired pH, for example by means of a phosphate buffer or Tris or any suitable buffer known to those skilled in the art as a buffer. It may be, for example, a medium allowing the activity of the enzyme (s) present in the biomaterial.
  • the first polymer network may consist of a first protein polymer.
  • This first protein polymer may be chosen for example from the group comprising fibrin, gliadin, myosin, globulin (7S and 11S), actin, myoglobin, collagen and its derivatives, milk proteins , soy proteins, wheat proteins, and yolk and egg white proteins, pea proteins, faba bean proteins, flax proteins, silk proteins, fibronectin, laminin, elastin, vitronectin, or a mixture of these polymers.
  • This first polymer network may therefore consist of a single first protein polymer or a mixture of first protein polymers.
  • the first polymer network may consist of a first saccharide polymer.
  • This first saccharide polymer may be chosen for example from the group comprising carrageenans, alginates, xanthan, chitosan, chitin, hyaluronic acid, sulphated glycosaminoglycans, glycogen, cellulose and its derivatives, pectins, starch and its derivatives, dextrans and xylans, or a mixture thereof.
  • This first polymer network can therefore consist of a single first saccharide polymer or a mixture of first saccharide polymers.
  • the first polymer network may also consist of a mixture of first protein and saccharide polymers, chosen for example from the abovementioned groups of protein and saccharide polymers.
  • the first polymer network may be chosen for example from the group comprising gelatin, fibrin and alginate gels, it being understood that this first polymer network consists of polymers that are different from the second polymers.
  • the quantity of the first polymer network or mixture of first polymers may for example be between 0.1 and 20% by weight relative to the total weight of the biomaterial, preferably from 0.5 to 10% by weight. weight.
  • the second polymer is different from the polymer constituting the first polymer network.
  • This second polymer can be chosen for example in the group comprising fibrin, gliadin, myosin, globulin (7S and 11S), actin, myoglobin, collagen and its derivatives, milk proteins, soy proteins, proteins Wheat, and yolk and egg white protein, pea protein, faba bean protein, flax protein, silk protein, fibronectin, laminin, elastin, vitronectin, or mixture of these polymers.
  • This second polymer may therefore consist of a single protein polymer or a mixture of protein polymers.
  • the second polymer may be chosen, for example, from the group comprising, for example, carrageenans, alginates, xanthan, chitosan, chitin, hyaluronic acid, sulphated glycosaminoglycans, glycogen, cellulose and its derivatives, pectins, starch and its derivatives, dextrans and xylans, or a mixture thereof.
  • This second polymer may therefore consist of a single saccharide polymer or a mixture of saccharide polymers.
  • the second polymer may also consist of a mixture of second protein polymers and second saccharide polymers, for example chosen from the abovementioned groups of protein and saccharide polymers.
  • the second polymer may be chosen for example from the group comprising gelatin, fibrin, hyaluronic acid and alginate, it being understood that this second polymer is different from the first.
  • the amount of the second polymer or mixture of second polymers may be between 0.01 and 20% by weight relative to the total weight of the biomaterial, preferably from 0.1 to 10% by weight.
  • the second polymer may be crosslinked or not.
  • the second polymer may be in the form of gel, for example in the form of beads, in the form of a grated network or not, or forming a network interpenetrated with said first polymer.
  • the third enzyme may be chosen, for example, from the group comprising the enzymes of the family of metalloproteinases, the family of serine proteases, the family of cysteines and aspartate proteases, the ADAM family, glycosidases including amylase, cellulase, dextranase, pullulanase, pectinase, chitinase, xanthanase, chitosanase, hyaluronidase, and lyases including hydroxyacetyl lyase, chondroitinase, heparinase, alginate lyase.
  • the concentration in the biomaterial of the third enzyme can be between 2 ⁇ 10 -7 and 50 U / ml, preferably from 2 ⁇ 10 -6 to 20 U / ml.
  • the biomaterial may also comprise a first enzyme different from the third enzyme and capable of degrading the first polymer network, said first polymer network being capable of performing, under the action of said first polymer, a gel transition (A) / solution.
  • the first enzyme may be chosen, for example, from the group comprising the enzymes of the family of metalloproteinases, the family of serine proteases, the family of cysteines and aspartate proteases, the ADAM family. , glycosidases including amylase, cellulase, dextranase, pullulanase, pectinase, chitinase, xanthanase, chitosanase, hyaluronidase, and lyases including hydroxyacetyl lyase, chondroitinase, heparinase, and alginate lyase.
  • glycosidases including amylase, cellulase, dextranase, pullulanase, pectinase, chitinase, xanthanase, chitosanase, hyaluronidase, and ly
  • the concentration in the biomaterial of the first enzyme can be between 2 ⁇ 10 -7 and 50 U / ml, preferably from 2 ⁇ 10 -6 to 20 U / ml.
  • the biomaterial may further comprise a second enzyme different from the second and third enzymes and capable of inducing bonds between said first polymers or a mixture of first polymers, said second enzyme being capable of catalysing a solution / gel transition ( AT).
  • a second enzyme different from the second and third enzymes and capable of inducing bonds between said first polymers or a mixture of first polymers, said second enzyme being capable of catalysing a solution / gel transition ( AT).
  • the second enzyme may be chosen for example from the group comprising lysyl oxidase, transglutaminases, disulfide isomerase proteins, sulfhydriles thiol oxidases, peroxidases, lipoxygenases, epimerases including alginates epimerases, glucuronate isomerases, cellobiose epimerase and galactose-6-sulfurylases.
  • the concentration in the biomaterial of the second enzyme may be between 0.01 and 50 U / ml, preferably from 0.1 to 5 U / ml.
  • the biomaterial may further comprise a fourth enzyme different from the first, second and third enzymes and capable of inducing bonds between said second polymers or a mixture of second polymers, said fourth enzyme being capable of catalysing a solution / transition. gel (B).
  • the fourth enzyme may be chosen, for example, from the group comprising lysyl oxidase, transglutaminases, disulfide isomerase proteins, sulphhydryl thiol oxidases, peroxidases, lipoxygenases, epimerases including alginates epimerases and glucuronate isomerases. cellobiose epimerase and galactose-6-sulfurylases.
  • the concentration in the biomaterial of the fourth enzyme can be between 0.01 and 50 U / ml, preferably from 0.1 to 5 U / ml.
  • the first, second, third and fourth enzymes are enzymes that can be independently active or activatable
  • the biomaterial may be a biomaterial as defined in US Application Serial No. 12 / 74,288 incorporated by reference herein and / or US1 / 0720089 incorporated by reference herein.
  • the dressing may further comprise a substance in the biomaterial and / or in the nonwoven.
  • the substance may be an active or non-active substance as defined above.
  • the substance may be independently covalently or weakly bonded, e.g., ionic, or Van der Valt interactions, to the first polymer, or the second polymer, and / or to the aqueous phase of the biomaterial.
  • the kinetics of release of the substance can be modulated according to its interaction with the first polymer, the second polymer and / or the aqueous phase of the biomaterial.
  • the kinetics of release of the substance can be modified / controlled according to the presence in the biomaterial of the first and / or second, and / or third and / or fourth enzyme as defined above.
  • the present invention also relates to a method of manufacturing a dressing comprising the steps of:
  • step (c) vs. mixing the polymer solution and the enzyme solution, d. depositing the mixture of step (c) on one side of a nonwoven, e. gel crosslinking of the mixture of step (c) deposited on the nonwoven,
  • the step of preparing the polymer solution can be carried out by mixing by stirring, for example via a magnetic stirrer or by blades.
  • the preparation of the polymer solution can be carried out by stirring, for example at a speed of 1 to 2000 rpm (revolutions per minute), preferably from 160 to 200 rpm (revolutions per minute).
  • the step of preparing the polymer solution can be carried out at a temperature of 10 to 50 ° C, preferably 34 to 42 ° C.
  • the polymer used in step (a) in the process may be a protein polymer and / or a saccharide polymer as defined above.
  • the concentration of said polymer in the mixture in step (a) can be from 0.5 to 5% by weight, preferably from 2 to 4% by weight.
  • the polymer solution may further comprise a cryoprotectant selected from sorbitol of mannitol, glycerol, sorbitol, polyols, for example: erythritol, xylitol, arabitol, ribitol, dulcitol, galactitol, mannitol, volemitol, maltitol, isomaltitol, lactitol or lactositol, glycol and its derived polymers for example polyethylene glycol (PEG), preferably the cryoprotectant is sorbitol.
  • the concentration of cryoprotectant in the polymer solution may be from 0.1 to 1 M, for example from 0.2 to 0.5 M, or from 2 to 10%, for example from 3 to 4% by weight. .
  • the concentration of sorbitol in the polymer solution may be from 0.1 to 1 M, for example from 0.2 to 0.5 M, or from 2 to 10%, preferably from 3 to 4% by weight.
  • the step of preparing the enzyme solution can be carried out by stirring, for example by means of a magnetic stirrer, or by blades.
  • the preparation of the enzyme solution can be carried out by stirring, for example at a rate of from 1 to 2000 rpm, for example from 100 to 250 rpm, of a first and second enzyme in a buffer solution.
  • the step of preparing the enzyme solution can be carried out at a temperature of 10 to 50 ° C, for example 34 to 42 ° C.
  • the first and second enzyme used are as defined above.
  • the first enzyme may be a collagenase.
  • the second enzyme may be a transglutaminase.
  • the activity in the enzyme solution of the first enzyme can range from 2 ⁇ 10 -7 to 50 U / ml (unit / ml), for example from 10 -6 to 10 -5 U / ml; example of 2 to 3x10 "6 U / ml, for example 2.57x10 " 6 U / ml.
  • the activity of the first enzyme in the dressing may be in the range 10 "7-10" 4 units / g (U / g) of dressing, e.g. 25x10 "6 to 26x10" 6 U / g dressing, for example 25.7x10 "6 U / g dressing.
  • the concentration in the enzyme solution of the second enzyme may range from 2 ⁇ 10 -7 to 50 U / ml, for example from 0.1 to 1 U / ml, for example from 0.3 to 0.5 U. for example, 0.4 U / ml.
  • the activity of the second enzyme in the dressing may be from 0.5 to 10 Units / g (U / g) of dressing, for example 4 U / g of dressing.
  • the polymer concentration, first and second enzyme can be chosen according to the following formula corresponding to a study of the dynamic equilibrium of the extracellular matrix corresponding to a simplified mathematical model of a dynamic system in which two antagonistic enzymatic reactions are implemented.
  • One is catalyzed by an enzyme capable of making covalent bonds between the soluble monomers (s) to obtain a bonded monomer network (g).
  • the other is catalyzed by an enzyme (P) which hydrolyzes the bonded monomer network (g) to soluble monomers (s).
  • a third reaction also catalyzed by the enzyme (P) consists in the hydrolysis of the monomers soluble in degraded monomers (f) too small to participate in the network or which can no longer serve as a substrate for the enzyme binding soluble monomers (s) by covalent bonds (T).
  • This latter reaction which results in monomer leakage from the cycle, is also added to the model.
  • the model can simply be represented according to the following reaction scheme:
  • V P and V T represent the maximum speeds for the enzymes P and T respectively
  • K P and K T represent the Michaelis constants for the enzymes P and T respectively.
  • V P and V T are calculated according to the following equations:
  • the buffer solution of steps (a) or (b) may be a buffer solution selected from the group consisting of TRIS-HCI buffer, phosphate buffered saline (PBS), citrate buffer, borate buffer and / or any solution known to those skilled in the art that allows the maintenance of the pH between 5 and 9 despite the addition of small amounts of an acid or a base, or an aqueous dilution.
  • PBS phosphate buffered saline
  • borate buffer / or any solution known to those skilled in the art that allows the maintenance of the pH between 5 and 9 despite the addition of small amounts of an acid or a base, or an aqueous dilution.
  • the buffer solution may be a buffer solution with a pH of 6.5 to 8.
  • the step of mixing the enzyme solution and the polymer solution can be carried out by any method known to those skilled in the art.
  • the mixing can be carried out by pouring the enzyme solution into the stirred polymer solution, for example via a magnetic stirrer or blades, for example at a speed of 1 to 2000 rpm, preferably 100 to 250 rpm.
  • the step of mixing the enzyme solution and the polymer solution can be carried out at a temperature of 10 to 50 ° C, for example 34 to 42 ° C.
  • step (c) of the process the enzyme and polymer solutions can be mixed at a minimum ratio of 1/5 and stirred, for example with a magnetic stirrer or blades as described above.
  • the step of depositing the mixture of step (c) on one side of a nonwoven may be carried out by pouring said mixture.
  • the nonwoven may be placed on the bottom of a container, for example a steel, aluminum, stainless steel, teflon, silicone, PTFE, and any hydrophobic polymer, and then the mixture is poured into said container.
  • the mixing volume of step (c) deposited on one side of the nonwoven may be chosen so that said mixture covers the entire nonwoven.
  • the mixing volume of step (c) deposited on one side of the nonwoven may be from 10 to 40 ml / dressing, preferably 30 ml / dressing (pst).
  • the volume of mixture deposited makes it possible to cover one face of the nonwoven while impregnating it, thus allowing adhesion of the mixture of said face.
  • the adhesion of the mixture to said nonwoven advantageously allows, during removal of the wound dressing, the preservation of the biomaterial on said nonwoven, to prevent biomaterial remaining on the wound after removal of the dressing, and to prevent the biomaterial from torn apart.
  • the gel crosslinking of the mixture can be carried out by any method known to those skilled in the art.
  • the crosslinking can be carried out by heating, for example at a temperature of 20 to 50 ° C, preferably at a temperature of 35 to 42 ° C.
  • the crosslinking can be carried out in a humid atmosphere with a percentage of 60 to 100% of moisture.
  • the crosslinking can be carried out in an incubator with an atmosphere having a moisture content of from 60 to 100 percent moisture.
  • the incubator can be a commercially available incubator, for example an incubator marketed by the company Digitals, the company Binder or integrated with the lyophilizer.
  • the gel crosslinking of the mixture can be carried out for a period of 1 to 24 hours, for example from 1 to 6 hours.
  • the lyophilization step can be carried out under a pressure of 75 ⁇ 10 -3 Pa at 300 ⁇ 10 -3 Pa, for example 140 ⁇ 10 -3 Pa, and comprises, in addition to the freezing step, the following steps:
  • Sublimation step increase of the temperature of -45 to a temperature between 5 and 30 ° C, preferably between 10 and 20 ° C, at a rate of 0.005 to 0.1 ° C per minute, for example from 0.009 to 0.05 ° C per minute, for example 0.01 ° C per minute,
  • Desiccation step maintains the temperature obtained in the sublimation step for a period of 10 to 70 hours, preferably for 36 hours
  • the rate of increase of the temperature in step g of the process is suitable, for example, for a concentration of 0.2 to 0.5M and / or 3 to 4% by weight relative to the weight total cryoprotectant.
  • lyophilization can be carried out by any device known to those skilled in the art. It may be for example a lyophilizer marketed by the company Serail, the company Usifroid, martin Christ, GEA Niro or Labconco.
  • the freeze-drying step makes it possible to lyophilize the biomaterial while retaining its functional capacities, for example the possibility of making gel / solution transitions when it comes into contact with a liquid.
  • the lyophilized dressing can be advantageously cut before application. This cutting thus allows the dressing to be adapted most accurately to the wound, elements essential for good healing.
  • the lyophilization of the biomaterial advantageously makes it possible to preserve the entire biomaterial on the nonwoven and to avoid any loss of biomaterial during a possible contact of the dressing with a surface, for example a dry surface.
  • Freeze-drying also advantageously makes it possible to stop the liquefaction processes of the gel by inhibiting the activity of the enzymes. Freeze-drying also advantageously makes it possible to limit the bacterial proliferation in the dressing. Freeze-drying also advantageously makes it possible to increase the retention time of the dressing.
  • Lyophilization also advantageously allows the conservation of the structure and the integrity of the biomaterial on the nonwoven before any contact with the wound. Lyophilization advantageously makes it possible to impart to the biomaterial absorbent properties.
  • the method may also include a step of dressing the dressing.
  • the cutting step can be performed by any device known to those skilled in the art, for example by a cutter, a scalpel, scissors, a cutting press, a laser.
  • the dressing obtained can be, for example, a circular-shaped dressing, a polygon, for example a quadrilateral, a pentagon, a hexagon, a heptagon, a rectangle, a square, a parallelogram, a triangle, a rhombus, a ellipse or any form adapted to the bed of the wound.
  • a polygon for example a quadrilateral, a pentagon, a hexagon, a heptagon, a rectangle, a square, a parallelogram, a triangle, a rhombus, a ellipse or any form adapted to the bed of the wound.
  • the cutting of the dressing makes it possible to produce dressings whose shape is adapted to the wound.
  • the method may also include a step of wrapping the dressing.
  • the packaging step can be carried out by any method known to those skilled in the art.
  • the packaging can be made by vacuum association of two sheets.
  • the packaging step can be performed for example in an automated manner, for example by means of a thermal sealer, for example a sealer marketed by the multivac company.
  • the packaging may be a plastic packaging, for example with a polyethylene film or sheet, a metal packaging, for example with aluminum foils, packaging resistant to sterilization by ionization, packaging impermeable to liquids and / or gases, for example Oifol 48 and Oifoil 48 / Q15 sold by the company Oliver Tolas, Tekniplex, aluminum films, or polymer blisters.
  • a plastic packaging for example with a polyethylene film or sheet
  • a metal packaging for example with aluminum foils
  • packaging resistant to sterilization by ionization packaging impermeable to liquids and / or gases, for example Oifol 48 and Oifoil 48 / Q15 sold by the company Oliver Tolas, Tekniplex, aluminum films, or polymer blisters.
  • the packaging of the dressing makes it possible to protect and / or isolate said dressing from the outside environment.
  • the packaging advantageously avoids any external contamination of the biomaterial.
  • the method may further comprise a step of sterilizing the dressing.
  • the sterilization step can be carried out after the packaging step.
  • the sterilization step of the dressing may be carried out for example by ionization, by heating and / or by chemical treatment.
  • the sterilization is carried out by ionization with gamma or beta radiation, more preferably by beta radiation.
  • the amount of radiation absorbed is from 0.5 to 50 kGy, preferably from 1 to 27 kGy.
  • ionization sterilization makes it possible to sterilize the dressing in the package while preserving the properties of the biomaterial, in particular the possibility of successive gel / solution transition, while preserving the activity of the enzymes.
  • step a) of the method may further comprise:
  • the process of the invention can be carried out, for example, with second polymers or a mixture of second polymers included in the aqueous phase of the network of first polymers.
  • the second polymer in step a ') can be in solution or crosslinked.
  • the form of the second polymer, ie in solution or crosslinked may be a function of the presence or absence of the fourth enzyme capable of inducing bonds between said second polymers.
  • the fourth enzyme is as defined above.
  • the fourth amount of enzyme can be as defined above.
  • crosslinked is understood to mean, for example, the polymer in the form of a gel. It may be for example a single gel and / or one or more fragments of said polymer in gel form.
  • the process of the invention can be carried out with second polymers or a mixture of second polymers forming, for example, an array of second polymers included in the network of first polymers.
  • the method may further comprise in step b) the addition of a third enzyme.
  • the third is defined above. Its quantity is defined above.
  • the method may further comprise in step b) the addition of a fourth enzyme capable of inducing bonds between said second polymers.
  • the fourth enzyme is defined above. Its quantity is as defined above.
  • the method may further comprise a step of integrating an active substance into the enzyme solution and / or into the polymer solution and / or into the mixture obtained in step (c).
  • the active substance may be as defined above.
  • FIG. 1 represents the manufacturing diagram of the dressings
  • Figure 2 shows a diagram of the temperature curves of the collector, shelves and sample in degrees Celsius (ordered) versus time in hours during the lyophilization step.
  • Figure 3 shows photographs of the dressing obtained when the biomaterial comprises (with sorbitol) or not (without sorbitol) sorbitol.
  • Figure 4 shows photographs of dressings obtained as a function of the amount of sorbitol included in the biomaterial.
  • Figure 5 shows photographs of dressings as a function of the amount of biomaterial deposited on the nonwoven.
  • FIG. 6 represents photographs of manufacture of the dressing in a mold (A) then demoulding (B).
  • Figure 7A shows a diagram of a physical gelatin gel (biomaterial) versus time in minutes and the amount of beta ionization in kGy.
  • the curve with the points " ⁇ " correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy
  • the points" ⁇ correlate to the values of G 'obtained for an ionization of OkGy
  • the points" - correlate to the values of G 'obtained for an ionization of 30kGy
  • the points " ⁇ ” correspond to the values of G "obtained for an ionization of 30kGy
  • the points" x correlate to the values of G' obtained for an ionization of 40kGy
  • the points" " correspond to the values of G "obtained for an ionization of 40kGy
  • the points" ⁇ correlate to the values of G 'obtained for an ionization of 50kGy
  • the points" + correspond to the values of G' obtained for an
  • FIG. 7B shows the variation of G 'max ( ⁇ ) (maximum elasticity) and G "(A) measured in Pascal (Pa) of physical gelatin gels as a function of the amount of beta ionization in kGy.
  • FIG. 7C represents the gel time in minutes as a function of the amount of beta ionization in kGy.
  • FIG. 8A represents a diagram of the evolution of the elasticity G ', G "of a physical gelatin gel as a function of time in minutes and the amount of Gamma radiation in kGy.
  • points " ⁇ " correspond to the values of G 'obtained for an ionization of OkGy
  • the points " ⁇ ” correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy
  • the points " ⁇ " correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy
  • the points " ⁇ correspond to the values of G' obtained for an ionization of 15 kGy
  • the points "x” correspond to the values of G "obtained for an ionization of 15 kGy
  • the points" - correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 50 kGy
  • the points" ⁇ correlate to the values of G' obtained for an ionization of 50 kGy.
  • FIG. 8B shows the variation of G 'max ( ⁇ ) (maximum elasticity) and G "(.4) measured in Pascal (Pa) of physical gelatin gels as a function of the amount of Gamma radiation in kGy.
  • FIG. 8C represents the gel time in minutes as a function of the amount of Gamma radiation in kGy.
  • FIG. 9A represents a diagram of the evolution of the elasticity G ', G "of a gelatin chemical gel as a function of time in minutes and of the amount of beta ionization in kGy, in this figure the curve with the points " ⁇ " correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy, the points" ⁇ “correspond to the values of G 'obtained for an ionization of OkGy, the points” ⁇ “correspond to the values of G' obtained for an ionization of 30kGy, the points "x" correspond to the values of G "obtained for an ionization of 30kGy, the points” - “correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 40kGy, the points" + “correspond to the values of G” obtained for an ionization of 40 kGy, the points "x” correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 50 kGy, the
  • FIG. 9B A represents a diagram of the variation of G 'max ( ⁇ )
  • FIG. 9C represents the gel time in minutes as a function of the amount of beta ionization in kGy.
  • FIG. 10A represents a diagram of the evolution of the elasticity G '
  • G a gelatin chemical gel as a function of time in minutes and the amount of gamma radiation in kGy.
  • the curve with the points " ⁇ " correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy
  • the points" ⁇ correlate to the values of G 'obtained for an ionization of OkGy
  • the points" ⁇ correlate to the values of G 'obtained for an ionization of 15 kGy
  • the points "+” correspond to the values of G "obtained for an ionization of 15 kGy
  • the points" ⁇ correlate to the values of G' obtained for an ionization of 50 kGy
  • the points "x" correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 50 kGy.
  • Figure 10 B A shows a diagram of the variation of G 'max ( ⁇ ) (maximum elasticity) and G "(A) measured in Pascal (Pa) of the gelatin chemical gels as a function of the amount of gamma radiation in kGy.
  • FIG. 10C represents the gel time in minutes as a function of the amount of gamma radiation in kGy.
  • FIG. 11A represents a diagram of the evolution of the elasticity G ', G "of a gelatin biomaterial as a function of time in minutes and of the amount of beta ionization in kGy, in this figure the curve with the points " ⁇ " correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy, the points" ⁇ “correspond to the values of G 'obtained for an ionization of OkGy, the points” ⁇ “correspond to the values of G' obtained for a ionization of 30kGy, the points " ⁇ ” correspond to the values of G "obtained for an ionization of 30kGy, the points” - “correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 40kGy, the points" + “correspond to the values of G "obtained for an ionization of 40kGy, the points" x “correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 50kG
  • Figure 1 1 B the variation of G max ( ⁇ ) (maximum elasticity) measured in Pascal (Pa) of the biomaterials of gelatin as a function of the amount of beta ionization in kGy.
  • FIG. 11C represents the gel time in minutes ( ⁇ ) and the resolubilization time (*) of the gel as a function of the amount of beta ionization in kGy
  • Figure 12 A shows a diagram of the evolution of the elasticity G ', G "of a gelatin Enzgel as a function of time in minutes and the amount of gamma radiation in kGy, in this figure the curve with the points "-" correspond to the values of G 'obtained for an ionization of OkGy, the points "x" correspond to the values of G "obtained for an ionization of OkGy, the points" ⁇ “correspond to the values of G' obtained for an ionization of 15 kGy, the points "+” correspond to the values of G "obtained for an ionization of 15 kGy, the points" ⁇ “correspond to the values of G 'obtained for an ionization of 50 kGy, the points" ⁇ "correspond to
  • FIG. 12B shows a diagram of the variation of G max (maximum elasticity) of the gelatin biomaterials as a function of the amount of gamma radiation in kGy.
  • Figure 12C shows the gel time in minutes as a function of the amount of Gamma radiation in kGy.
  • the points " ⁇ " correspond to the values of freezing time and the points "4" correspond to the values of the melting time of the gel.
  • FIG. 13A represents the resolubilization time of the biomaterial as a function of the amount of enzyme (collagenase).
  • FIG. 13B represents a diagram representing the rate of drop of G 'in pascal per minute as a function of the amount of enzyme, that is to say the rate at which the biomaterial resolves (gel / soil transition) depending on the amount of enzyme (collagenase [GC]).
  • Fig. 14 shows photographs of dressings as a percentage of polymer before lyophilization (A) and after lyophilization (B)
  • Figure 15 shows photographs of dressings depending on the percentage of polymer after freezing.
  • Figure 16 shows photographs of dressings versus nonwoven.
  • FIG. 17 shows photographs of dressings according to the nonwoven.
  • Fig. 18 is a histogram showing the absorption capacity of the dressing as a function of the nonwoven incorporated in its matrix.
  • figure “1” corresponds to the results obtained with a lyofai nonwoven, "2" with a nonwoven MA 50 J, "3” with a nonwoven WSV 100, “4" with a nonwoven MA 57 S, "5 With a non-woven MA 50 + PE, "6” with a non-woven fabric 5-lg including polyethylene (Tissue 5-lg + PE), "7” with a non-woven MASP50 and “8” with a non-woven MASP50 P.
  • Nonwovens are commercial nonwovens marketed by Mankk.
  • Figure 19 is a histogram showing the rehydration rate of the dressing as a function of the nonwoven incorporated in its matrix.
  • Figure “1” corresponds to the results obtained with a nonwoven lyofai, "2" with a nonwoven MA 60, "3” with a nonwoven MA40W4, "4" with a nonwoven ZWHO "c" 12-lg, "5" with non-woven fabric MA 30, "6” with a non-woven MASP 50 P, "7” with a non woven MA 71 .08.
  • Nonwovens are commercial nonwovens marketed by Mankk
  • FIG. 20 is a histogram showing the WVTR (water vapor transmission rate) of the dressing as a function of the nonwoven incorporated in its matrix.
  • WVTR water vapor transmission rate
  • Figure 21 is a diagram showing the rehydration kinetics of the dressings as a function of the different nonwoven tested.
  • the curve with the points "+" correspond to the values with the nonwoven MA 60, the points
  • Figure 22 is a histogram showing the absorbency of the dressings as a function of the different nonwoven tested.
  • the figure “1” corresponds to the results obtained with a non-woven fabric ZWHO “C", "2” with a nonwoven Baumwell, "3” with a nonwoven MA936, “4" with a nonwoven MA 50 J, "5 With a nonwoven MA 60, “6” with a nonwoven MA 71.080 and “7” with a nonwoven MA71 10.
  • the nonwovens are commercial nonwoven sold by the company Mankk
  • FIG. 23 represents a diagram of the evolution of the elasticity G ', G "in Pa, as a function of the oscillation frequency of the mobile of the rheometer, in hertz, in this figure the curve with the" ⁇ "points correspond at the values of G “of the dressings containing the nonwoven ZWHO” C ", the points" ⁇ “correspond to the values of G 'of the dressings containing the nonwoven ZWHO” C ", the points correspond to the values of G “of the dressings containing the nonwoven Baumwell-Moltenl, the points" ⁇ “correspond to the values of G 'of the dressings containing the non-woven Baumwell-Molten 1, the points" ⁇ “correspond to the values of G” of the Dressings containing the Baumwell-Molten 2 nonwoven, the " ⁇ ” points correspond to the G 'values of the dressings containing the Baumwell-Molten 2 nonwoven, the "o” points correspond to the G "values of the dressings
  • Figure 24 shows photographs in environmental electron microscopy of freeze-dried dressing according to its hydration.
  • Figure 24A shows a photograph in electron microscopy of a dry lyophilized dressing.
  • Figure 24B shows an electron micrograph of a lyophilized dressing after hydration for 4 minutes.
  • the FIG. 24C shows an electron micrograph of a freeze-dried dressing after hydration for 20 minutes.
  • Figure 24D shows an electron micrograph of a lyophilized dressing after maximum hydration, i.e., for more than 12 hours.
  • FIG. 25 represents a diagram of the evolution of the elasticity G '
  • Figure 26 shows a bar chart of the integrated normal force (iNF) required to pull the dressing off the rheometer as a function of their elasticity.
  • iNF integrated normal force
  • FIG. 27 represents a diagram of the absorbency in gram of water per 100 cm 2 of the dressing as a function of time in hours.
  • ⁇ corresponds to the results obtained for the lyophilized dressing comprising the nonwoven
  • ⁇ corresponds to the results obtained with the gel alone non lyophilized.
  • FIG. 28 represents photographs of epidermal dermo-spinal wounds 5 ⁇ 5 cm long and 0.5 cm deep.
  • Fig. 28A is a photograph of the wound on the first day before applying the dressing of the invention
  • Fig. 28B is a photograph of the wound after 7 days of application of the dressing of the invention
  • Fig. 28 This is a photograph of the wound after 18 days of application of the dressing of the invention
  • Figure 28 D is a photograph of the wound after 30 days of application of the dressing of the invention.
  • Fig. 29 shows a wound exudate production chart as well as its retention by the dressing of the invention.
  • the abscissa represents the time in days and the ordinate represents the score estimated by the operator.
  • the " ⁇ " points correspond to the estimated retention score of the exudates by the dressing and the "0" points correspond to the estimated score of wound exudate production.
  • Figure 30 shows photographs of histological sections of healed wounds after application of the dressing of the invention.
  • Figure 30A shows a photograph of the low magnitude healing wound and
  • Figure 30B shows a photograph of the high magnitude wound wound.
  • Figure 31 shows a crosslinking scheme of a polymer.
  • Figure 32 shows photographs of dressings obtained when the biomaterial one or two polymers and comprises a third enzyme
  • Figure 32 A is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial with a polymer.
  • Figure 32B is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising two polymers, the second being in solution.
  • Figure 32C is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising two polymers, the second being crosslinked.
  • Figure 32D is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising two polymers, the second being in solution and a third enzyme: alginate lyase.
  • Figure 32 E is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising two polymers, the second being cross-linked in the form of beads and a third enzyme alginate lyase.
  • Figure 33 is a diagram showing the release kinetics of methylene blue versus dressing.
  • the "*" points represent the release from the dressing comprising a biomaterial with a polymer and two enzymes
  • the " ⁇ ” points represent the release from the dressing comprising a biomaterial with two polymers, the second being in solution and two enzymes
  • the points " ⁇ ” represent the release from the dressing comprising a biomaterial with two polymers, the second being in solution and three enzymes
  • the "x” points represent the release from the dressing comprising a biomaterial with two polymers, the second being crosslinked and two enzymes
  • the " ⁇ ” points represent the release from the dressing comprising a biomaterial with two polymers, the second being cross-linked and three enzymes.
  • a CT1 tank for the polymer mixture and a CT2 tank for the enzyme mixture were used for the preparation of the mixtures.
  • the CT1 tank used is a tank of 150 liters
  • the tank CT2 is a tank of 65 liters.
  • gelatin used came from the company Rouselot marketed under the reference LB8, the sorbitol from IMCD marketed under the reference sorbitol pyrogen free PF.
  • the buffer used is a buffer comprising distilled water, 50 mM TRIS and chloridic acid in an amount sufficient to obtain a pH of 7.75.
  • the polymer mixture was stirred at 187 rpm (round per minute) in a CT1 tank at 40 ° C.
  • a volume of 35 l of sanitized water were added: 1 g of buffer solution, 2 kg of gelatin polymer and 3 kg of sorbitol.
  • the final polymer concentration in the CT1 mixture is then 57 g / l and that of the sorbitol is 86 g / l.
  • the enzyme mixture was stirred at 187 rpm with an agitator in the CT2 tank at 40 ° C.
  • a volume of 35 liters of sanitized water were added 21 g of buffer, 0.22 units of the first enzyme and 30 units of the second.
  • the first enzyme was collagenase from the company Coger marketed under the reference NB6
  • the second enzyme was Transglutaminase from the company Ajinomoto sold under the reference Activa WM.
  • the entire mixture contained in the tanks CT1 and CT2 comprising the enzymes and the polymer obtained was then deposited by a flow meter on a non-woven previously cut into a form adapted to the size of the mold.
  • the mold used was aluminum, or rectangular shaped silicone (500x1000x140 mm) marketed by the company MAE and Sérail.
  • the nonwoven on which the mixture was deposited was placed in a lyophilizer marketed by the company Serail.
  • Figure 1 shows the lyophilization temperature curve in degrees Celsius (ordered) versus time in hours. d) Conditioning
  • the nonwoven was cut and the nonwoven side was marked with a cutting press at a size of 65 * 100 mm.
  • Example 2 Dressing in which the biomaterial comprises sorbitol
  • the dressings were prepared according to the method described in Example 1 in which the gelatin is 3% (30 mg / ml), and the final concentration of Sorbitol is 0.2 to 0.1 M, of the Transglutaminase at 4 mg / mL, 12 U / dressing, and collagenase to 2,2x10 "5 mg / mL or 8.5 x10" 5 U / dressing.
  • the products obtained in this example did not include a nonwoven support.
  • biomaterial is also referred to as biogel.
  • the buffer was previously placed at room temperature, that is to say between 15 and 30 ° C.
  • the three mixtures were made in parallel.
  • the gelatin powder (30 mg.l -1 final) and the sorbitol powder (0.2M to 1 M) were resuspended in a total volume of 500 ml of buffer solution.
  • Resolubilization was carried out with mechanical stirring with a magnetic bar for 30 min (maximum 10 h) at 40 ° C until there is no more gelatin grain in suspension.
  • the stirring was adapted to prevent the formation of foam, while ensuring a homogeneous mixture.
  • the lyophilizer used was the T ad model marketed by the company Labconco and was pre-frozen at a temperature of -45 ° C. The freezing rate of the gels does not affect the product.
  • the molds containing the "biogel” were deposited in the lyophilizer and the lyophilization cycle shown in Table 2 was applied.
  • the minimum concentration of sorbitol, below which the dressing has too much rigidity is 0.2M.
  • the dressing obtained had a homogeneous white appearance and was easily demolded after lyophilization but had a rigidity affecting its conformability.
  • the addition of sorbitol in the gelatin mixture has made it possible to obtain dressings whose greater flexibility allows optimum use. On the other hand, it possessed a surface heterogeneity (lyophilized part and fused part) and strongly adhered to the PVC mold.
  • a deposition volume of 30mL made it possible to avoid the surface heterogeneities that the 20mL dressings exhibited, in a random manner, whatever the amount of sorbitol used.
  • the silicone molds made it possible to avoid the adhesion phenomena of the dressing observed with the PVC mold. Thus the demolding of the bandages from silicone mold seems more feasible.
  • Example 3 Study of the effect of sterilization on the properties of the dressing.
  • Samples of gelatin powder, powdered transglutaminase and collagenase powder were sterilized by beta ionization or radiation gamma. Several doses for each type of radiation were tested: 30, 40 or 50 kGy.
  • the device used was a beta-type radiation produced by the lonisos company.
  • a magnetic bar was added and the pillbox was placed in a water bath preheated to 40 ° C.
  • the sterilized gelatin was resolubilized with stirring at 40 ° C for 30 min. 2 ml of solution was deposited on the rheometer, gelation was observed under oscillation at 1 Hz, with a temperature ramp of 40 ° C to 27 ° C at a speed of 0.5 ° C.min "1 .
  • Fig. 7A is a diagram of a gelatin physical gel
  • FIG. 7B represents the variation of G 'max (maximum elasticity) measured in Pascal (Pa) of the physical gelatin gels as a function of the amount of beta ionization in kGy. As shown in FIG. 7B, this degradation is linear with the dose of beta rays and influences only the elastic part of the network (G ').
  • FIG. 7C represents the gel time in minutes as a function of the amount of beta ionization in kGy. As shown in FIG. 7C, the gel time increases linearly with the radiation dose. Thus, it has been found that the degradation of gelatin is linear with the dose of beta radiation.
  • Figure 8A shows a diagram of the evolution of the elasticity G ', G "of a gelatin physical gel as a function of time in minutes and the amount of gamma radiation in kGy.
  • Figure 8C shows the gel time in minutes as a function of the amount of gamma radiation in kGy.
  • irradiation with gamma rays causes gelatin degradation as a function of dose. This degradation is not linear as a function of the gamma ray dose. In particular, a significant degradation threshold takes place above 15 kGy.
  • transglutaminase powder was subjected to different sterilization protocol: under gamma irradiation and under beta ionization, with for each of the conditions, three doses tested: 0, 30 and 50 kGy. Gels were then made according to the following protocol:
  • transglutaminase solution (repeatable for each condition): 225 mg of sterile transglutaminase (TGase) were weighed and placed in a microtube, 1.5 ml of Tris buffer was added using the micropipette and stirred to resolubilize the powder without foaming (the solution could contain a small, insoluble mass).
  • TGase sterile transglutaminase
  • ionization with beta-rays causes, as a function of dose, a decrease in the activity of transglutaminase (TG) and thus a decrease in the values of G 'and G ". This decrease is linear with the dose of beta rays as shown in FIGS. 9B and C.
  • the irradiation with gamma rays causes a decrease in the activity of transglutaminase (TG) as a function of the dose and thus a decrease in the values of G 'and G ".
  • This decrease is not linear with the dose of gamma rays as shown in Figures 9B and C. Effect on the characteristics of collagenase
  • collagenase powder was subjected to different sterilization protocol: under gamma irradiation and under beta ionization, with for each of the conditions, three doses tested: 0, 30 and 50 kGy. Gels were then made with this powder and the other non-treated constituents according to the process described below:
  • Mixture C 22 ⁇ l of collagenase at 0.01 mg / ml kept for 30 min at 40 ° C. Mixture C was put in Mixture B then in Mixture A and allowed to stir for 2 min. at 40 ° C. 2ml of the final solution were deposited on the rheometer, the evolution of the physical properties was observed at 40 ° C, under oscillation at 1 Hz.
  • the beta ionization causes, as a function of dose, a decrease in the collagenase activity shown in FIG. 11A, where it is observed that above 40 kGy, the G 'takes about 2.5 times longer than the other conditions, to reach a value of 1 Pa.
  • the value of 40 kGy was considered as an upper threshold dose from which the activity collagenase (CG) is affected by beta rays.
  • the gamma irradiation results, as a function of dose, in a decrease in the collagenase (CG) activity shown in FIG. 12A, where it is observed that above of 15 kGy, the G 'takes about 2.5 times longer than the other conditions, to reach a value of 1 Pa.
  • the value of 15 kGy was considered as an upper threshold dose from which the activity of collagenase (CG) is affected by gamma rays.
  • Mixture C 22 ⁇ l of different concentration of collagenase kept for 30 min at 40 ° C.
  • Mixture C was put in Mixture B then in Mixture A and let stir 2 min. at 40 ° C. 2ml of the final solution were deposited on the rheometer, the evolution of the physical properties was observed at 40 ° C, under oscillation at 1 Hz.
  • FIG. 13A represents the resolubilization time of the biomaterial as a function of the amount of enzyme (collagenase [CG]).
  • FIG. 13B represents the rate at which the biomaterial is resolubilized (gel / sol transition) as a function of the amount of enzyme (collagenase [CG]).
  • the resolubilization time and the falling speed of G ' are linear. It is therefore easy to extrapolate a resolubilization rate as a function of a given concentration of collagenase.
  • Gamma rays destroy the dressing from 28 kGy.
  • dressings comprising respectively 1, 2, 3 or 5%, 3U / ml of TG and a nonwoven, namely Lyophal, were incubated for 3 hours at 35 ° C. and 80% humidity, then lyophilized.
  • the lyophilization cycle was as follows:
  • FIG. 14A shows the dressings obtained after the freezing step as a function of the percentage of gelatin.
  • Figure 14B shows the dressings obtained after lyophilization as a function of the percentage of gelatin.
  • the dressings comprising 1 and 2% of gelatin solubilized because the low concentration of gelatin does not allow the formation of gel.
  • Dressings with 3 and 5% gelatin rehydrated and showed no degradation, no debris.
  • dressings comprising respectively 1, 2, 3 or 5% (w / v) of gelatin, 3U / ml of TG and a nonwoven (LyofaI), were incubated for 35 ° C and 80% of moisture, then lyophilized as follows:
  • Figure 15 shows the dressings obtained after the freezing step as a function of the percentage of gelatin.
  • Transglutaminase was also affected by radiation treatment (beta or gamma). A fall in enzymatic activity (and therefore a less rapid gelation) for both types of sterilization but more importantly with gamma rays was observed.
  • the relationship between the increase in freezing time and the sterilizing dose is linear, but an inverse exponential relationship relates the loss of activity to this sterilizing dose.
  • the concentration of gelatin plays on the rigidity of the lyophilized dressings.
  • the concentration of gelatin is important for obtaining a functional gel and having the required properties.
  • the lyophilization process and its implementation is also important for obtaining a functional gel.
  • the purpose of the test is to test nonwovens from Manck, according to their gel adhesion capacity, after and before lyophilization, and to the absorption characteristics and WVTR (water vapor transmission rate) that confers non woven to dressings.
  • Tissue 5-lg + PE marketed by Mankk under this reference catalog.
  • TG Transglutaminase 15mg / mL marketed by Ajinomoto under the reference Activa WM catalog.
  • the dressings were obtained according to the method described in Example 1 with different nonwoven at the bottom of the mold. Once lyophilized, the dressings were cut in four in order to perform rehydration and absorption tests with a distilled water solution containing 8.3 g / l of NaCl and 0.368 g / l of CaCl 2 as absorbent.
  • the absorption test was carried out as follows: The material used was Petri dishes 90 +/- 5 mm in diameter, a laboratory oven, with forced air circulation, able to maintain a temperature of 37 +/- 1 ° C), a solution A: 8.298 g of sodium chloride (NaCl) and 0.368 g of calcium chloride dihydrate (CaC, 2H 2 O) in deionized water and supplemented to constitute 1 liter of solution in a volumetric flask and a scale, capable of weighing 100 g to 0.0001 g.
  • a single 5x5cm or 0.2g dressing sample was placed in a petri dish, a 40x solution A amount greater than the weight of the dressing preheated to 37 ° C was placed and the sample was incubated for 30 min in a oven, with forced air circulation, heated to 37 ° C. The sample was weighed on the scale after hanging the sample with forceps.
  • the absorption capacity was expressed as the average mass of solution retained per 100 cm 2. The rate is expressed per gram of sample.
  • the WVTR test was performed as follows:
  • Test solution A as described at the beginning of the example, Calibrated test piece, Hygrometer, capable of detecting whether or not the limit of 20% relative humidity has been exceeded, of elastics a scale, capable of weighing 100 g to 0.0001 g near.
  • a circular sample was cut and affixed to the upper flange of a cylinder, the wound contact surface facing inward.
  • An elastic band was also affixed to maintain the sample
  • the sample was weighed, the value obtained was referenced as W1.
  • the sample and the elastic were then removed from the cylinder.
  • This process was repeated four times to prepare a total of five samples.
  • the cylinders obtained were then placed in an incubator at 37 ° C. for 24 hours. They were then removed from the incubator and left at room temperature for 30 minutes and weighed a third time. The value obtained has been referenced as W3.
  • the sample was then removed from the cylinder, the excess liquid in the cylinder was removed and the sample returned to the cylinder.
  • - W4-W1 represents the retention of water in the dressing if the difference is positive. If it is negative, the difference is the evaporation of the water present in the dressing.
  • - W2-W3 represents the water transmitted to the ambient air through the dressing.
  • WVTR is determined by: ((W2-W3) + (W4- W1)) / cm 2 of dressing.
  • W4-W1 If W4-W1 is positive the WVTR is determined by ((W2-W3) - (W4-W1)) / cm 2 of dressing.
  • the results are the average of three measurements.
  • Figures 16 and 17 show photographs of dressings according to the nonwoven.
  • the nonwovens do not absorb gelatin in the same way, so some tend to float on the surface of the protein solution which is a problem in the manufacture of the dressing. This phenomenon occurs with the following nonwovens:
  • the dressing has a face composed solely of gel, avoiding the direct contact between the wound and the nonwoven, and a face composed of the adhered nonwoven impregnated with gel.
  • PE nonwovens adhere to very little gel, leaving a good deal outside the dressing. Several dressings with cracked zones, this is the case for those consisting of WSV 100, MA 30 and MA40 W4.
  • the sample is more in the form of a compress soaked with gel than dressing.
  • the nonwoven MASP50 P has the particularity of having a colored face giving a dressing having a white face (gel side) and a blue face (compress side). On the other hand, one notices a heterogeneity of distribution of the gel on the blue face. The other nonwovens make it possible to obtain dressings whose appearance is close to the reference.
  • the characteristics of the nonwoven are important for obtaining a functional dressing.
  • Fig. 18 is a histogram showing the absorption capacity of the dressing as a function of the nonwoven incorporated in its matrix.
  • figure “1” corresponds to the results obtained with a lyofal nonwoven, "2” with a nonwoven MA 50 J, "3” with a nonwoven WSV 100, “4" with a nonwoven MA 57 S, "5 With a MA 50 + PE non-woven fabric comprising polyethylene, "6” with a non-woven Fabric 5-lg + PE comprising polyethylene, "7” with a non-woven fabric MASP50 and "8” with a non-woven fabric MASP50 P.
  • the dressings consisting of nonwoven formed of a polyethylene (PE) film, has a much lower absorption capacity than the reference, which can result from the low presence of gel within the dressing.
  • the other nonwovens make it possible to obtain dressings endowed with absorption capacity close to the Lyofal dressing.
  • FIG. 19 is a histogram representing the rate of rehydration of the dressing as a function of the nonwoven incorporated in its matrix.
  • “1" corresponds to the results obtained with a lyofal nonwoven, "2" with a nonwoven MA 60, "3” with a nonwoven MA40W4, "4" with a nonwoven
  • FIG. 20 is a histogram representing the WVTR (water vapor transmission rate) of the dressing as a function of the nonwoven incorporated in its matrix.
  • “1" corresponds to the results obtained with a non-woven lyofal, "2" with a nonwoven MA 50 J, "3" with a nonwoven
  • Nonwovens with a PE film seem less effective since they do not adhere enough gel.
  • Lyofal nonwoven has the best absorption characteristics, whether in capacity or rehydration rate.
  • MASP50 P Although less absorbent, MASP50 P has a colored face still visible after lyophilization and rehydration of the dressing. It would be interesting to consider the use of a Lyofal compress marked on one side, which would allow to obtain an application face on the MAIA dressing.
  • the aim has been to define the specifications of the raw material adapted.
  • the references of the nonwovens (NT) tested are: MA 60, MA 71 .080, ZWHO
  • the set of non-woven (compresses) come from the company Mankk
  • the composition of the dressing, the biomaterial is: gelatin 3%, sorbitol
  • transglutaminase 4g / L collagenase 2.5x10 ⁇ 5g / L (except MA 60 and MA 71.080 where there is no collagenase.
  • the lyophilization cycle was as follows:
  • the dressings were cut in a circular fashion with a diameter of 40 cm. They were then placed in "Falcon” tubes and dissolved in 30 ml of NaCl / CaC water for 2 hours at 35 ° C. After rehydration, the viscoelasticity of the dressings was determined in rheology by means of a frequency sweep.
  • the resulting mixture was placed at 121 ⁇ 1 ° C in an autoclave for 20 minutes.
  • the lid has been replaced on the boxes. They can be stored 24h at room temperature and 4 days at 4 ° C.
  • the agar plates were then contacted with both nonwoven phases and allowed to incubate for 72 hours at 37 ° C. The colony number was determined from this time.
  • the MA 60 is: flexible, homogeneous and white.
  • - MA 71 .080 is: flexible, homogeneous and white.
  • MA 936-80 is: supple, homogeneous and white.
  • MA 71 10 is: flexible, homogeneous and white.
  • FIG. 21 is a diagram showing the rehydration kinetics of the dressings as a function of the different nonwovens tested.
  • Fig. 22 is a diagram showing the absorbency of the dressings as a function of the different nonwovens tested.
  • the figure “1” corresponds to the results obtained with a non-woven fabric ZWHO "C", "2" with a nonwoven Baumwell, "3” with a nonwoven MA936, "4" with a nonwoven MA 50 J, "5 With a non-woven MA 71 10, "6” with a non-woven MA 71 .080 and "7” with a nonwoven MA60.
  • MA71 10 except for MA60 and MA71 .080, but remain in the required specifications (MW1) (15g water / 100 cm 2 ).
  • the appearance of the dressing comprising the nonwoven ZWHO "C" 12-LG and Baumwell-molten after rehydration had foam in contact with the absorbent; and the dressing comprising the nonwoven MA 50 J: the Non-woven material came off the gel indicating that it did not become impregnated in the gel during the manufacture of the dressing.
  • Fig. 23 is a diagram showing the G 'of the dressing (elastic properties) versus the nonwoven.
  • ZWHO "C" 12-LG and Baumwell-molten have no gelled state (G ' ⁇ G "), the other nonwovens have a dressing with a gel structure, the G' values of these gels meet to the requirements of MW1 (G '> 100Pa without sterilization).
  • the biocharge i.e., the number of colony-forming units (CFU) per dressing obtained is less than 100 CFU / dressing, and is therefore compatible with Beta ionization sterilization.
  • ZWHO "C" 12-LG and Baumwell-molten are not good candidates for the non-woven fabric of the MW1 dressing for the unacceptable reason that the dressings formed with these NTs do not exhibit a gelled state.
  • the MA 50 J is excluded since it does not imbibe gel during the manufacture of the dressing.
  • the other NTs comply with MW1 specifications.
  • the choice of the nonwoven will also depend on already established requirements such as 100% viscose composition or enzymage.
  • MA60 and MA71.080 are preferred for use in the manufacture of the dressing.
  • the dressing of the invention to have optimum functionality and adaptation to wounds of patients, particular characteristics, such as a bacterial load of less than 200 CFU / 70 cm 2 , the nonwoven must imbiber the biomaterial solution (Engel) without hindering the gelation or its conformability, the size of the mesh may be preferably between 50 and 500 ⁇ .
  • Test solution A 8.298 g of sodium chloride (NaCl) and 0.368 g of calcium chloride dihydrate (CaC, 2H 2 O) in deionized water and supplemented to constitute 1 liter of solution in a volumetric flask .
  • Porcine gelatin powder (Roussselot PS), (175 bloom).
  • Agar-agar powder (type 1 bacteriological agar).
  • Melag laboratory autoclave model melatronic 23 suitable for sterilization of liquids in closed containers.
  • Laboratory incubator Binder brand model BF 1 capable of maintaining a temperature of (25 +/- 2) ° C.
  • the container has been removed and allowed to cool to 60 +/- 5 ° C before use.
  • a sufficient amount of gelatin powder was added at 65.00 +/- 0.02 g of test solution A in a suitable wide-necked container to obtain a total mass of reagent of The container was sealed, stirred until the gelatin powder was dispersed, and then held at a temperature of 60 ° C for at least 12 hours but not more than 18 hours. At the end of this period, a check that the gelatin forms a clear and homogeneous solution was carried out.
  • the plunger of the syringe was raised up to 30mL graduation and 10g of gelatin or agar-agar was added into the syringe and butchered with Parafilm to avoid evaporation (perform 5x) for each type of substrate .
  • the syringes were placed vertically in an oven (or ambient conditions) at 25 ° C for 3h with Parafilm caps to prevent evaporation forming during thickening.
  • the syringes were capped with the same Parafilm and placed in an incubator at 25 ° C (or under ambient conditions) for 48 hours.
  • the syringes were weighed (W3 value).
  • the plunger was depressed to remove the dressing and the syringes were weighed (W4 value).
  • the dressing capacity to capture fluid was measured according to the following formula, W5:
  • W5 ⁇ ([W3-W4] - [W2-W1]) / (W2-W1) ⁇ x 100 Specification: Provide moisturizer> 21% (Low value of the average defines according to its standard deviation)
  • the dressing thus has the required characteristics namely a good flexibility including a freeze-dried biomaterial able to hydrate to obtain a gel and make transitions solution / gel / solution.
  • the dressing therefore has the required characteristics, namely a liquid absorption capacity with a saturation time suitable for wounds.
  • the dressing of the invention thus allows absorption of the exudates of a wound.
  • the dressing thus has the required characteristics namely a viscoelasticity allowing adaptation to any type of wounds and on any type of surface, whether horny, consisting of epidermis or not, epithelial phase or not.
  • the dressing of the invention makes it possible to preserve its structure, that is to say the biomaterial does not dissociate itself from the nonwoven and provides flexibility, fluid absorption, and flexibility properties with mammalian wounds.
  • the dressing of the invention also makes it possible to moisturize the wound and thus to promote healing and moist wound healing while managing / absorbing the exudates emitted by the wound.
  • the dressing of the invention makes it possible to make gel / solution / gel transitions promoting the healing of wounds. These transitions advantageously make it possible to absorb exudates from wounds.
  • the manufacturing method and the dressing obtained as described is validated and provides surprisingly physical characteristics and advantageous properties for healing wounds, because it allows both to absorb the exudates while ensuring wet healing. Its preserved resolubilization kinetics give it, in particular, non-adherence properties acquired over time and controlled during manufacture, making this dressing the first dynamic dressing ever created.
  • the dressings have advantageous properties of elasticity, absorption, resolubilization and hydration. These advantageous properties are especially necessary for the recovery of healing, while preserving the wound and its banks during removal of said dressing.
  • Example 7 Composition of a Dressing According to the Invention and Corresponding Physicochemical Characteristics
  • the dressing was fabricated according to the method described in Example 1 from the following: 3% gelatin (30mg / mL), 4.5% sorbitol (45mg / mL), 4mg transglutaminase / mL, collagenase at 2,2x10 "5 mg / mL and a non-woven 100% viscose marketed by Norafin under the trade reference 71 100.001, 100% viscose.
  • Table 19 describes the evolution of the dressing as a function of time and these properties during the solution / gel transitions of the biomaterial.
  • the dressings obtained by the process of the invention have advantageous properties of elasticity, absorption, resolubilization and hydration.
  • the dressings obtained are sterile, homogeneous.
  • the dressing of the invention retains its structure whatever the conditions and thus allows application and removal of the wound without loss of biomaterial, without tearing.
  • the dressing obtained by the process of the invention advantageously allows its removal without leaving a biomaterial on the wound healed without adhesion of the nonwoven to the wound thus improving the comfort of patients.
  • these features avoid a step of cleaning the wound and / or rehydration of the wound that could alter the healing / weaken the scar.
  • the dressing of the invention used consisted of the components and solutions described in Example 1 and whose characteristics are described in Example 7.
  • the dressing of the invention was manufactured according to the method described in Example 1 from the following elements: gelatin, sold by the company Rousselot, 3% (30 mg / ml), sorbitol, marketed by the company IMCD, at 4.5% (45 mg / ml), transglutaminase at 4 mg / ml, marketed by Ajinomoto, collagenase at 2.2 ⁇ 10 -5 mg / ml, marketed by Coger and a woven 100% viscose marketed by Norafin under the trade reference 71 .100.001, 100% viscose.
  • Samples of dressings according to the invention were lyophilized and rehydrated and then analyzed using a Philips XL ESEM-FEG microscope (Eindhoven, the Netherlands) at an acceleration voltage of 15 keV at a pressure of 5 Torr.
  • the rehydrated samples were obtained after incubating the dressing in 50 mM HCl Tris buffer (pH 7.4) for 4 minutes or 20 minutes and overnight, ie for more than 12 hours for up to 12 minutes. rehydration.
  • FIG. 24 represents the electron microscopy photographs of the dressings obtained after the different rehydration times.
  • the dry dressing (FIG. 24A) is composed of macropores that disappear as soon as 4 minutes of hydration (FIG. 24B) in the aforementioned saline solution. Then over time, the gel is reconstituted to form, after 20 minutes ( Figures C and D), a cohesive matrix without any pore.
  • Figure 25 shows a diagram of the evolution of the elasticity and storage of the dressing as a function of time.
  • the dressing of the invention was hydrated for 1 h 30 in a solution containing 142 mMol.L -1 NaCl at room temperature, ie 25 ° C, was observed in rheology with a MCR 301 rheometer sold by the company Anton Paar To avoid the modification of the mechanical properties of the dressing, a normal force of 0.2 N (Newton) was applied to the hydrated sample.
  • the conservation module G 'and loss module G “were observed in oscillation mode and recorded as a function of time at constant temperature (35 ° C).
  • the dressing of the invention in gel form has the gel-solution transition properties inherent in Enzgel technology.
  • each gel has its own elasticity.
  • the sticky properties of these gels are directly correlated to their elasticity.
  • the change in elasticity of the dressing of the invention over time advantageously allows a change in tackiness over time as demonstrated with the following experiment described in Figure 26.
  • the adhesion / sticky strength of the dressing has been studied.
  • the purpose of this experiment was to measure the force required to take off a dressing according to the invention.
  • the dressing according to the invention was hydrated for 1 h 30 in a solution containing 142 mMol.L -1 NaCl at room temperature, that is to say at 25 ° C.
  • the samples were deposited on the same rheometer as previously and a normal force of 0.2 N was applied by a plate. After 5 min at 35 ° C, a pressure of 10 N was applied and the plate was raised at a rate of 1 mm. s "1.
  • the normal force needed to tear off the dressing with the rheometer was followed and related to the gap between the plate and the rheometer. All of the normal force needed to be integrated (iNF) using the ORIGIN 7 (registered trademark) software marketed by OriginLab Corporation.
  • Figure 26 shows the results obtained from the integration as a function of the dressing.
  • the integration represented by the stick 1, FIG. 26, corresponds to a dressing which, when inflated, has a G 'of 35 Pa. This value corresponds to the elasticity of the dressing at the time of its placement on the wound.
  • the integration represented by the stick 3 Figure 26 corresponds to a dressing which, once inflated, has a G 'of 3 Pa, which corresponds to a dressing after 48 hours of contact with a model wound. As shown in Figure 26, it was observed that it takes 3 times less force to take off a dressing according to the invention after 48 hours of laying (-3 sN- 1 to -1 sN- 1 ).
  • the dressing according to the invention therefore advantageously has the adhesiveness necessary for easy installation.
  • the dressing advantageously loses its adhesion during wound interaction and time, which facilitates its removal and keeps the newly formed cells in the wound intact.
  • the freeze-dried gel put into the form of a dressing thanks to its association with the nonwoven, has advantageously acquired new unexpected properties.
  • the absorption capacity has, for example, been studied according to the protocol of Example 4, and represents in FIG. 27.
  • the dressing of the invention is advantageously capable of absorbing large amount of liquid up to 47g of water / 100cm 2 in 6 hours.
  • the inventors have demonstrated by scanning electron microscopy that the pores formed by lyophilization disappear during the hydration of the dressing.
  • the pores are filled with liquid; the freeze-dried gel absorbs this liquid and regains its integrity.
  • the pores created by lyophilization are filled with water and the gel is reformed, this is the rehydration stage of the lyophilisate, in a second time the kinetics becomes slower, c is the stage of swelling of the gel.
  • the dressing of the invention advantageously continues to absorb them, but if the secretion stops the dressing of the invention will not sore the wound and may even keep it wet, allowing advantageously to promote healing.
  • epidermal dermo-epidermal wounds 5 ⁇ 5 cm long and 0.5 cm deep have been made on Seghers-type pigs (Sus scrofa). Hybrid.
  • the pig was weighed and premedicated by intramuscular injection of atropine (Atropinum sulfuricum, Aguettant, in France, 0.05 mg.kg- 1 ) was performed Anesthesia was induced by intramuscular injection of tiletamine-zolazepam (Zoletil 100, Virbac, France) and the animals were sacrificed by a lethal injection of barbiturates (Dolethal ND, Vétoquinol, France).
  • atropine Atropinum sulfuricum, Aguettant, in France, 0.05 mg.kg- 1
  • Anesthesia was induced by intramuscular injection of tiletamine-zolazepam (Zoletil 100, Virbac, France) and the animals were sacrificed by a lethal injection of barbiturates (Dolethal ND, Vétoquinol, France).
  • Histological analysis was performed by sampling the wounds (approximately 3.5 x 3.5 cm). The samples were fixed in a 10% buffered formalin solution. After fixation, the samples were dehydrated in increasing concentration alcohol solutions, cleaned in xylene and embedded in paraffin. The fixed samples were cut into portions of 4 to 7 ⁇ using a microtome (MICROM (registered trademark), France). Two central sections per block were prepared, one stained with Masson trichrome and the other with a solution of hematoxylin-eosin-Saffron. Micrograph photos were taken in areas of interest for illustrative purposes only.
  • Figure 29 shows the absorption of exudate by a dressing according to the invention as a function of time and secretions of the wound.
  • the dressing advantageously adapts to the amount of wound exudate.
  • the dressing retains the exudates, but when there is little exudate, it retains little and thus keeps the wound moist.
  • a histological study was carried out according to the protocol described above, in order to qualify the healing quality of wounds treated with the dressing of the invention (FIG. 30), the samples were observed at low magnitude (inset A) or medium magnitude (box B).
  • Fig. 30 shows histological sectional photographs obtained and observed at low magnification (Fig. 30A), or at medium magnification (Fig. B).
  • the overall performance was very good, due to a thick and well vascularised granulation tissue, dominated by mature fibroblasts, with a light to moderate amount of inflammatory cells (lymphocytes and macrophages) as well as a marked deposition of collagen.
  • the dressing according to the invention is occlusive and allows, depending on the state of the wound, to absorb or give water to the wound in order to advantageously fulfill all the criteria for healing.
  • Winter Wood (Winter GD., Formation of the scab and the rate of epithelialization of superficial wounds in the skin of the young domestic pig, Nature 1962; 193,293-294 [1]).
  • the chronicity of a wound is induced by overexpression of inflammatory factors.
  • the dressing according to absorbs these factors according to two distinct kinetics. As shown, the first corresponds to a simple absorption while the second corresponds to the swelling of a gel.
  • the diffusion of a molecule is slower within a gel than a porous network: The molecules absorbed in the first phase are then retained when the dressing is gelled.
  • the dressing can absorb the overproduction of inflammatory factors without giving them back to the wound.
  • Gelatin the major component of the dressing according to the invention, is known to be a good substrate for matrix degrading enzymes such as MMPs. It therefore seems that the dressing during the absorption of exudates, advantageously immobilize these inflammatory factors within it and inhibit their action on the wound by an excess of reaction substrate.
  • the dressing according to the invention thus advantageously creates a favorable environment for healing by inhibiting only the excess of inflammatory factors.
  • the dressing of the invention is a biocompatible dressing, having sol-gel and then gel-sol transition properties, as well as its formulation in freeze-dried form associated with a nonwoven, make it possible to new and advantageous way to facilitate the healing of chronic wounds while retaining a functionality and a capacity of use adapted to all the different types of wounds.
  • a dressing according to the invention contains as support a nonwoven (NT) 100% viscose manufactured by Norafin.
  • a first enzyme collagenase from the company Coger sold under the reference NB6
  • a first network of protein polymer gelatin, manufactured by Rouselot and marketed under the reference LB8 were used.
  • a second enzyme Transglutaminase (TG) from the company Ajinomoto marketed under the reference Activa WM, was integrated in all cases to form the first polymer network (gelatin network).
  • TG Transglutaminase
  • alginate lyase supplied by Sigma under the reference Alginate lyase of Flavobacterium sp (A1603), was used to degrade a second saccharide-type polymer: the alginate supplied by Sigma under the reference Alginate low viscosity (A2158).
  • This second polymer integrated in the first network in two forms: crosslinked or not, by calcium chloride, provided by the company prolabo under the reference Calcium Chloride, normapur quality.
  • the various networks tested were formulated as a dressing with IMCD sorbitol, sold under the reference pyrogen-free sorbitol PF, as a cryoprotective compound.
  • an active ingredient was added to the dressing in order to be released into the environment outside the dressing in a controlled manner.
  • the active ingredient is methylene blue, provides for the company Fisher under the reference blue methylene number (126751000).
  • an alginate was used to modulate the release of methylene blue.
  • the alginate can be added in powder form to the rest of the mixture, it is then said “in solution”, or polymerized by calcium chloride before its addition to the rest of the mixture, it is then said "ball".
  • the active ingredient to be released has been added to the alginate before its ball polymerization, so that the active ingredient is enclosed in the ball.
  • the active ingredient from its characteristic blue color can be called dye or BM in figures or text.
  • a peristaltic pump to form Alginate beads by incorporating one end of a 2 mm diameter pipe into the Alginate solution and place a 10 ⁇ micropipette cone on the other end of the pipe.
  • the flow rate of the pump was set at 395 mL / min. Light the pump and drop the first formed balls.
  • the biomaterial may therefore comprise a first polymer: gelatin, a second polymer: alginate, which may be in solution or crosslinked in the aqueous phase of the first polymer, a degradation enzyme of the first polymer: collagenase, an enzyme capable of inducing the bonds between the first polymer: transglutaminase, and an enzyme capable of degrading the second polymer: alginate lyase.
  • solution (A) 1.5 L of solution (A) was prepared as follows: add 8.298 g of sodium chloride (NaCl) and 0.368 g of calcium chloride dihydrate (CaCl 2 , 2H 2 O) in water deionized and complete to make up 1 liter of solution in a volumetric flask. Each of the 5 full dressings were taken and added independently to glass petri dishes comprising 226 mL of solution (A) preheated to 37 ° C. Beforehand, 1 ml of the solution contained was then taken at different times in the tank of each Petri dish. The optical density (OD) at 495 nm (white) of said sample was then measured.
  • NaCl sodium chloride
  • CaCl 2 , 2H 2 O calcium chloride dihydrate
  • FIG. 32A is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial without alginate.
  • Figure 32B is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising alginate in solution.
  • Figure 32C is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising cross-linked alginate in the form of beads.
  • Figure 32D is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising solution alginate and alginate lyase.
  • Figure 32 E is a photograph of the dressing obtained with a biomaterial comprising cross-linked alginate beads and an alginate lyase.
  • the different dressings were immersed in the solution A described above.
  • the kinetics of the release of methylene blue in this solution is shown in FIG. 33, the method used is described above ("method for monitoring the release").
  • the release of the methylene blue after 24 hours of the dressing without alginate is 62.4%, for that with alginate in solution of 41.6%.
  • alginate lyase the salting pass was 46.8%.
  • the dressing of the invention makes it possible to release active principles, and also to control this release as a function of the composition of the biomaterial.
  • the addition of a second polymer to the dressing, the alginate in this example makes it possible to limit by half the diffusion of the active ingredient. This limitation is due, in particular to the interaction of the charges between the negatively charged alginate and the positively charged active (blue).
  • the addition of a third degradation enzyme of the second polymer (alginate lyase) has made it possible to modify the kinetics of release of the active ingredient and allows a fine control of the kinetics of release.

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Abstract

La présente invention se rapporte à un pansement comprenant un support non tissé comprenant sur une de ces faces, un biomatériau capable de faire des transitions gel/solution comprenant une phase aqueuse et un réseau de polymères une première enzyme de dégradation dudit polymère, et une seconde enzyme capable d'effectuer des liaisons covalentes entre des monomères issus du polymères. La présente invention se rapporte également à un procédé de fabrication dudit pansement. La présente invention trouve une application notamment dans le domaine médical et dans le domaine vétérinaire, par exemple pour soigner les plaies.

Description

PANSEMENT ET PROCEDE DE FABRICATION
DESCRIPTION Domaine technique
La présente invention se rapporte à un pansement ainsi qu'à un procédé de fabrication dudit pansement.
La présente invention trouve une application notamment dans le domaine médical humain ou vétérinaire, par exemple pour soigner les plaies.
Le contenu des demandes US12/742588 déposée le 13 novembre 2008 et
US1 1/720089 déposée le 25 novembre 2005 est incorporé par référence.
Etat de la technique
Il existe actuellement dans le commerce un grand nombre de type de pansements dont certains sont spécialement adapté à la plaie à soigner.
Les objectifs principaux des pansements sont de protéger une plaie et de prévenir une infection en assurant, le cas échéant une désinfection de la plaie, protéger la peau de la macération et de l'action irritante des sécrétions, protéger la plaie des traumatismes et aider à la cicatrisation.
Les pansements ont également pour objectif d'assurer le confort du patient, par exemple via la réalisation des objectifs précités, en particulier en protégeant la plaie des traumatismes et en aidant à la cicatrisation.
Il existe également dans le commerce des pansements « actifs » et/ou « spécialisées » capables respectivement de libérer des substances actives et/ou qui sont spécialement adaptés à différent type de plaie et permettent par exemple d'améliorer la cicatrisation et/ou le confort du patient.
Les principaux types de pansement actuellement commercialisés sont les hydrogels, les tulles et interfaces, les hydrocolloïdes, les hydrocellulaires, les alginates et les pansements au charbon.
Chaque type de pansement a des propriétés et applications particulières. Par exemple, les hydrogels sont particulièrement utiles sur des plaies chroniques superficielles et profondes, des escarres, des ulcères de jambe, chirurgie réparatrice et reconstructrice, les plaies atone, la dermabrasion, les coups de soleil sévères, les brûlures du 2ème degré superficiel et profond. De tels pansements sont disponibles dans le commerce, il s'agit par exemple de l'Askina Gel commercialisé par la société B Braun, le Duoderm Hydrogel commercialisé par la société Convatec, l'Hydrosorb commercialisé par la société Hartmann, l'IntraSite Gel commercialisé par la société Smith&Nephew, le Normgel commercialisé par la société Mölnlycke, le Purilon commercialisé par la société Coloplas et l'Urgo hydrogel commercialisé par la société Urgo.
Les hydrocolloïdes sont également fréquemment utilisés sur des plaies exsudatives bourgeonnantes non infectées mais sont contre indiqués, par exemple pour des brûlures du 3ème degré, des artérites IV, des mycoses, une plaie surinfectée, des plaies diabétiques. De tels pansements sont disponibles dans le commerce, par exemple le Askina Hydro commercialisé par la société B. Braun, l'Algoplaque commercialisé par la société Urgo le Comfeel commercialisé par la société Coloplast, le Duoderm commercialisé par la société Convatec et l'Hydrocoll commercialisé par la société Hartmann.
Toutefois, malgré le grand nombre de type de pansements, il n'existe pas dans l'état de la technique de pansement permettant un traitement efficace de plaies chroniques telles que les plaies du diabétique. En outre, les pansements actuellement disponibles posent des problèmes lors de leur retrait. En effet, il est souvent nécessaire, par exemple d'humidifier le pansement et/ou de protéger la zone environnante, afin de permettre le retrait, par exemple sans abimer la plaie cicatrisée et/ou sans laisser sur la plaie des morceaux de pansements.
En outre, les pansements connus appliqués sur une plaie suintante peuvent coller à la plaie et/ou s'incruster dans la plaie, gênant ainsi la cicatrisation et/ou provoquant lors de retrait une détérioration de la cicatrisation. En effet, la cicatrisation d'une plaie opère toujours du bord vers le centre. De nombreux pansements sèche et colle sur les bords de la plaie. Leur retrait entraîne l'arrachage des cellules néoformées de la zone périlésionnelle, ce qui ralenti le processus de cicatrisation.
Il existe donc un réel besoin dans l'état de la technique de trouver un nouveau pansement palliant ces défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, en particulier d'un pansement permettant, par exemple d'améliorer la cicatrisation de plaie avec une application simple et un retrait ne nécessitant pas de préparation/manipulation particulière.
Description de l'invention
La présente invention a pour but de surmonter les inconvénients de l'art antérieur en fournissant un pansement comprenant un support non tissé comprenant sur une de ces faces, un biomatériau capable de faire des transitions gel/solution comprenant une phase aqueuse et un réseau de polymères comprenant un polymère protéique ou saccharidique ou un mélange de polymères protéiques et saccharidiques, dans lequel le réseau de polymères et la phase aqueuse forment un gel, une première enzyme de dégradation dudit polymère, et préférentiellement une seconde enzyme capable d'effectuer des liaisons covalentes entre lesdits monomères, ledit biomatériau étant lyophilisé.
Dans la présente le biomatériau peut être un biomatériau capable de faire des transitions solution / gel puis gel solution de façon contrôlée dans le temps.
Les inventeurs ont découvert de manière surprenante qu'un pansement comprenant un biomatériau capable de faire des transitions solution / gel puis gel solution de façon contrôlée dans le temps, ledit biomatériau étant en contact avec la plaie, permet avantageusement, d'absorber des exsudais de plaies tout en fournissant un environnement similaire à la matrice extracellulaire permettant ainsi de favoriser la cicatrisation. En outre le pansement selon l'invention, de part sa capacité à faire des transitions gel-solution, permet avantageusement un retrait atraumatique du pansement qui se décolle de la plaie une fois cicatrisée. En effet, le gel protecteur formé sur la plaie à la pause du pansement peut être adhésif aux cellules périlésionelles, une fois la transition effectuée, c'est à dire l'état du gel se transforme, deviens plus mou et relargue un peu de liquide, qui rend le pansement non adhésif.
Dans la présente par pansement on entend, par exemple un dispositif utilisé dans le domaine médical humain ou vétérinaire, par exemple un dispositif applicable sur une plaie, par exemple une plaie humaine ou animale.
Dans la présente la plaie peut être une plaie superficielle ou une plaie profonde. Il peut s'agir par exemple d'une rupture et/ou d'une atteinte de la barrière cutanée, ou d'une rupture des différentes couches de l'épiderme et/ou du derme jusqu'au défaut total, c'est-à-dire jusqu'à l'absence de d'épiderme et/ou du derme.
II peut s'agir par exemple d'une plaie située sur n'importe quelle partie du corps, il peut s'agir par exemple d'une plaie cutanée, d'une plaie de l'œil, d'une plaie au thorax, d'une plaie à l'abdomen, d'une plaie à la bouche.
Dans la présente la plaie peut être une plaie chronique ou aigue. Par exemple, la plaie aigue peut être une blessure, une morsure, une lacération, une plaie chirurgicale, une brûlure. Par exemple la plaie chronique, peut être un ulcère, un escarre, une plaie du diabétique, toute plaie issue de pathologie dermatologiques, une plaie cancéreuse, par exemple muscites, ulcération cancéreuse, ulcération arthéritique, stromatite ulcérée, plaie d'origine herpétiques, plaie chirurgicale, ou issue d'une greffe.
II peut s'agir également d'une lésion, par exemple une lésion du corps provenant par exemple d'une blessure sanglante, d'une contusion, d'un accident physiologique.
Dans la présente, le pansement peut être sous toute forme, par exemple sous une forme rectangulaire, circulaire, linéaire et/ou adaptée à la forme de la plaie, et/ou à la position de la plaie. De préférence le pansement est sous une forme rectangulaire sans arrête vives.
Dans la présente, le pansement peut être par exemple un pansement de forme circulaire, un polygone, par exemple un quadrilatère, un pentagone, un hexagone, un heptagone, un rectangle, un carré, un parallélogramme, un triangle, un losange, une ellipse ou toute forme adaptée au lit de la plaie. Dans la présente, le pansement peut être par exemple un pansement de forme rectangulaire, par exemple ayant une dimension de 5 X 5 mm, de 250 x 250, de 500 x 500, de 1000 x 750, de 1500 x 1000 mm. Il peut s'agir par exemple une dimension de 65 x 100 mm.
Selon l'invention, la première enzyme peut être choisie, par exemple dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des métalloprotéinases, la famille des sérines protéases, la famille des cystéines et aspartate protéases, la famille ADAM, les glycosidases dont l'amylase, la cellulase, la dextranase, la pullulanase, la pectinase, la chitinase, la xanthanase, la chitosanase, la hyaluronidase, et les lyases dont l'hydroxyacétyle lyase, la chondroïtinase, l'héparinase, l'alginate lyase. De préférence, la première enzyme est une collagénase.
Selon l'invention, la seconde enzyme peut être choisie par exemple dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des transglutaminases, des lysyls oxydases, les protéines disulfide isomérases, les sulfhydriles thiol oxydases, les peroxidases, les lipoxygènases, les épimèrases dont les alginates épimèrases, les glucuronate isomérases, la cellobiose épimèrase et les galactose-6-sulfurylases. De préférence, la seconde enzyme est une transglutaminase.
Selon l'invention le polymère protéique peut être choisi par exemple dans le groupe comprenant la fibrine, la gliadine, la myosine, la globuline (7S et 1 1 S), l'actine, la myoglobine, le collagène et ses dérivés, les protéines du lait, les protéines du soja, les protéines du blé, et les protéines du jaune et du blanc d'œuf, les protéines du pois, les protéines de féverole, les protéines du lin, les protéines de soie, la fibronectine, la laminine, l'élastine, la vitronectine. De préférence, le polymère est de la gélatine.
Dans la présente, le polymère saccharidique est choisi par exemple dans le groupe comprenant les carraghénanes, les alginates, le xanthane, le chitosan, la chitine, l'acide hyaluronique, les glycosaminoglycanes sulfatés, le glycogène, la cellulose et ses dérivés, les pectines, l'amidon et ses dérivés, les dextrans et les xylanes.
Dans la présente, le biomatériau peut comprendre en outre un composé cryoprotecteur. Il peut s'agir par exemple d'un cryoprotecteur choisi parmi du sorbitol du mannitol le glycérol, le sorbitol, des polyols, par exemple : l'Erythritol, le Xylitol, l'Arabitol, le Ribitol, le Dulcitol ou galactitol, le Mannitol, le Volemitol, le Maltitol, l'Isomaltitol, le Lactitol ou lactositol, le glycol et ses polymères dérivés par exemple le polyéthylène glycol (PEG). De préférence le cryoprotecteur est le sorbitol.
La concentration de cryoprotecteur dans la solution de polymère peut être de 0,1 à 1 M, par exemple de 0,2 à 0,5 M, ou être de 2 à 10%, par exemple de 3 à 4% en poids. .
La présence du cryoprotecteur permet avantageusement que le pansement de l'invention soit plus souple et que le biomatériau lyophilisé soit plus flexible. L'amélioration de la flexibilité/souplesse du pansement permet avantageusement une meilleure adaptation à la surface de la plaie, par exemple, d'assurer une conformabilité à la plaie.
Dans la présente, le non tissé peut comprendre des mailles de 1 à 1000 μιτι, de préférence de 5 à 500 μιτι.
Avantageusement la taille des mailles du non-tissé permet avantageusement une forte adhésion du biomatériau sur ledit non tissé. En outre, la taille des mailles permet avantageusement d'éviter la colonisation du pansement par les cellules de la plaie.
Avantageusement, la dimension des mailles du non tissé permet une imprégnation du biomatériau dans ledit non tissé tout en conservant une épaisseur de biomatériau à la surface du non-tissé suffisante.
Dans la présente, l'épaisseur du non tissé peut être inférieure à 10μηη, de préférence inférieur à 1 μιτι.
Dans la présente, le non tissé peut être un non-tissé sans polyuréthane et sans polyacrylate.
Dans la présente, le non tissé peut être en toute matière connue de l'homme du métier, par exemple, il peut être en viscose, en ouate, en cellulose, en polymère synthétique ou naturel, de préférence le non tissé est en viscose.
Dans la présente, le non tissé peut être par exemple un non tissé commercialisé par la société Mankk, le non tissé MA 60, MA 50 J, WSV 100, MA57 S commercialisé par la société Mank (Allemagne), le 71 .100.001 commercialisé par la société Norafin (Allemagne).
Avantageusement, le non-tissé permet le maintien de la structure du pansement et du biomatériau. En d'autres termes, le non-tissé permet avantageusement d'éviter toute déchirure du pansement sur la plaie. En outre, le non tissé permet avantageusement lors du retrait du pansement la conservation de la structure du pansement et donc d'éviter une éventuelle déchirure du pansement lors de son retrait, ainsi que tout délitement du gel pouvant induire la présence de résidu non désirable dans la plaie.
Dans la présente, le pansement peut comprendre en outre une substance active dans le biomatériau et/ou dans le non tissé.
Dans la présente, par « substance active » on entend toute substance ou composition ayant une activité biologique ou biochimique à la surface d'un organisme (microorganisme ou organisme pluricellulaire, par exemple peau, os, organe, etc.) ou dans un organisme. Cette substance active peut posséder par exemple des propriétés curatives ou préventives à l'égard de maladies humaines ou animales. Il peut s'agir de tout produit pouvant être administré à l'homme ou à l'animal, en vue d'établir un diagnostic médical ou de restaurer, corriger ou modifier leurs fonctions organiques. Il peut s'agir de substances bactériostatiques et/ou bactéricides, d'antibiotiques, d'aseptisant, de colorants, etc. Il peut s'agir de toute molécules permettant de réduire et/ou supprimer la douleur, par exemple les opioïdes, les anti-inflamatoires, non stéroïdiens, etc ..
Dans la présente, la substance active peut être choisie par exemple dans le groupe comprenant, les bactériostatiques, les bactéricides, les vasodilatateurs, les colorants dont l'éosine, le bleu de dextran, le bleu de méthylène, le bleu azur, des protéines, des saccharides dont l'acide hyaluronique et les alginates, un liposome, une nanoparticule, une micelle, les antiacnéiques, les antiallergiques, les anxiolytiques, les antiasthmatiques, les anticancéreux, les hypolipémiants , les contraceptifs hormonaux, les antidépresseurs, les antidiabétiques, les antalgiques, les opioïdes et leurs dérivés, par exemple la morphine, les antiasthéniques, les antihypertenseurs, les antifongiques, les antibiotiques, les somnifères, les traitements hormonaux, les antimigraineux, les médicaments du surpoids, les antiparkinsoniens, les neuroleptiques, les anti-inflammatoires non stéroïdiens, les inducteurs d'ovulation, les fluidifiants bronchiques, les antitussifs, les inducteurs d'érection et les antiulcéreux.
Dans la présente, il peut s'agir d'une substance active seule ou d'un mélange de substances actives.
Dans la présente, la quantité de substance active peut dépendre, par exemple de facteurs tels que son activité et de la dose souhaitée par l'utilisateur. La dose souhaitée peut être aisément déterminée par l'homme du métier puisqu'il peut s'agir, par exemple de doses connues pour des produits connus.
Selon l'invention, le biomatériau peut être, par exemple, un biomatériau comprenant une phase aqueuse et un premier réseau de polymères constitué d'un premier polymère protéique ou saccharidique ou d'un mélange de premiers polymères protéiques et/ou saccharidiques, dans lequel le premier réseau de polymères et la phase aqueuse forment un premier gel (A), le biomatériau comprenant :
(i) un second polymère protéique ou saccharidique ou un mélange de seconds polymères protéiques ou saccharidiques, le second polymère étant différent du premier polymère, et étant inclus dans le gel (A) soit en solution dans la phase aqueuse du gel (A), soit sous la forme d'un second réseau de polymères constituant un gel (B),
(ii) une troisième enzyme de dégradation dudit second polymère.
Dans la présente, la phase aqueuse, le premier réseau de polymère, le second polymère peuvent être tels que définies dans la demande US12/742588 incorporée dans la présente par référence.
Dans la présente, par « phase aqueuse », il est entendu une solution aqueuse, par exemple de l'eau, par exemple encore une solution aqueuse tamponnée, par exemple à un pH souhaité, par exemple au moyen d'un tampon phosphate ou Tris ou tout tampon approprié connu de l'homme du métier comme tampon. Il peut s'agir, par exemple, d'un milieu permettant l'activité de la ou des enzymes présente(s) dans le biomatériau. Selon l'invention, le premier réseau de polymères peut être constitué d'un premier polymère protéique. Ce premier polymère protéique peut-être choisi par exemple dans le groupe comprenant la fibrine, la gliadine, la myosine, la globuline (7S et 1 1 S), l'actine, la myoglobine, le collagène et ses dérivés, les protéines du lait, les protéines du soja, les protéines du blé, et les protéines du jaune et du blanc d'œuf, les protéines du pois, les protéines de féverole, les protéines du lin, les protéines de soie, la fibronectine, la laminine, l'élastine, la vitronectine, ou un mélange de ces polymères. Ce premier réseau de polymères peut donc être constitué d'un seul premier polymère protéique ou d'un mélange de premiers polymères protéiques.
Selon l'invention, le premier réseau de polymères peut être constitué d'un premier polymère saccharidique. Ce premier polymère saccharidique peut- être choisi par exemple dans le groupe comprenant les carraghénanes, les alginates, le xanthane, le chitosan, la chitine, l'acide hyaluronique, les glycosaminoglycanes sulfatés, le glycogène, la cellulose et ses dérivés, les pectines, l'amidon et ses dérivés, les dextrans et les xylanes, ou un mélange de ceux-ci. Ce premier réseau de polymères peut donc être constitué d'un seul premier polymère saccharidique ou d'un mélange de premiers polymères saccharidiques.
Selon l'invention, le premier réseau de polymères peut également être constitué d'un mélange de premiers polymères protéiques et saccharidiques, choisi par exemple dans les groupes précités de polymères protéiques et saccharidiques.
Selon l'invention, le premier réseau de polymères peut être choisi par exemple dans le groupe comprenant les gels de gélatine, de fibrine et d'alginate, étant entendu que ce premier réseau de polymères est constitué de polymères différents des seconds polymères.
Selon l'invention, la quantité du premier réseau de polymères ou mélange de premiers polymères peut-être comprise par exemple entre 0,1 et 20% en poids par rapport au poids total du biomatériau, de préférence de 0,5 à 10% en poids.
Selon l'invention, le second polymère est différent du polymère constituant le premier réseau de polymères. Ce second polymère peut-être choisi par exemple dans le groupe comprenant la fibrine, la gliadine, la myosine, la globuline (7S et 1 1 S), l'actine, la myoglobine, le collagène et ses dérivés, les protéines du lait, les protéines du soja, les protéines du blé, et les protéines du jaune et du blanc d'œuf, les protéines du pois, les protéines de féverole, les protéines du lin, les protéines de soie, la fibronectine, la laminine, l'élastine, la vitronectine, ou un mélange de ces polymères. Ce second polymère peut donc être constitué d'un seul polymère protéique ou d'un mélange de polymères protéiques.
Selon l'invention, le second polymère peut-être choisi par exemple dans le groupe comprenant, par exemple, les carraghénanes, les alginates, le xanthane, le chitosan, la chitine, l'acide hyaluronique, les glycosaminoglycanes sulfatés, le glycogène, la cellulose et ses dérivés, les pectines, l'amidon et ses dérivés, les dextrans et les xylanes, ou un mélange de ceux-ci. Ce second polymère peut donc être constitué d'un seul polymère saccharidique ou d'un mélange de polymères saccharidiques.
Selon l'invention, le second polymère peut également être constitué d'un mélange de second polymères protéiques et second polymères saccharidiques, par exemple choisis dans les groupes précités de polymères protéiques et saccharidiques.
Selon l'invention, le second polymère peut être choisi par exemple dans le groupe comprenant la gélatine, la fibrine, l'acide hyaluronique et l'alginate, étant entendu que ce second polymère est différent du premier.
Selon l'invention, la quantité du second polymère ou mélange de seconds polymères peut être comprise entre 0,01 et 20% en poids par rapport au poids total du biomatériau, de préférence de 0,1 à 10 % en poids.
Selon l'invention, le second polymère peut être préalablement réticulé ou non. Par exemple, le second polymère peut être sous la forme la forme de gel, par exemple sous la forme de billes, sous la forme d'un réseau percolé ou non, ou formant un réseau interpénétré avec ledit premier polymère.
Selon l'invention, la troisième enzyme peut-être choisie par exemple dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des métalloprotéinases, la famille des sérines protéases, la famille des cystéines et aspartate protéases, la famille ADAM, les glycosidases dont l'amylase, la cellulase, la dextranase, la pullulanase, la pectinase, la chitinase, la xanthanase, la chitosanase, la hyaluronidase, et les lyases dont l'hydroxyacétyle lyase, la chondroïtinase, l'héparinase, l'alginate lyase.
Selon l'invention, la concentration dans le biomatériau de la troisième enzyme peut-être comprise entre 2x10"7 et 50 U/ml, de préférence de 2x 10"6 à 20 U/ml.
Selon l'invention, le biomatériau peut comprendre en outre une première enzyme différente de la troisième enzyme et capable de dégrader le premier réseau de polymères, ledit premier réseau de polymères étant susceptible d'effectuer, sous l'action de ladite première enzyme, une transition gel (A) /solution.
Selon l'invention, la première enzyme, différente de la troisième enzyme, peut-être choisie par exemple dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des métalloprotéinases, la famille des sérines protéases, la famille des cystéines et aspartate protéases, la famille ADAM, les glycosidases dont l'amylase, la cellulase, la dextranase, la pullulanase, la pectinase, la chitinase, la xanthanase, la chitosanase, la hyaluronidase, et les lyases dont l'hydroxyacétyle lyase, la chondroïtinase, l'héparinase, et l'alginate lyase.
Selon l'invention, la concentration dans le biomatériau de la première enzyme peut être comprise entre 2x10"7 et 50 U/ml, de préférence de 2x 10"6 à 20 U/ml.
Selon l'invention, le biomatériau peut comprendre en outre une seconde enzyme différente des deuxièmes et troisième enzymes et capable d'induire des liaisons entre lesdits premiers polymères ou mélange de premiers polymères, ladite seconde enzyme étant susceptible de catalyser une transition solution/gel (A).
Selon l'invention, la seconde enzyme peut-être choisie par exemple dans le groupe comprenant la lysyl oxydase, les transglutaminases, les protéines disulfide isomérases, les sulfhydriles thiol oxydases, les peroxidases, les lipoxygènases, les épimèrases dont les alginates épimèrases, les glucuronate isomérases, la cellobiose épimèrase et les galactose-6-sulfurylases. Selon l'invention, la concentration dans le biomatériau de la seconde enzyme peut-être comprise entre 0,01 et 50 U/ml, de préférence de 0,1 à 5 U/ml.
Selon l'invention, le biomatériau peut comprendre en outre une quatrième enzyme différente des première, deuxième et troisième enzymes et capable d'induire des liaisons entre lesdits seconds polymères ou mélange de seconds polymères, ladite quatrième enzyme étant susceptible de catalyser une transition solution/gel (B).
Selon l'invention, la quatrième enzyme peut être choisie par exemple dans le groupe comprenant la lysyl oxydase, les transglutaminases, les protéines disulfide isomérases, les sulfhydriles thiol oxydases, les peroxidases, les lipoxygènases, les épimèrases dont les alginates épimèrases, les glucuronate isomérases, la cellobiose épimèrase et les galactose-6-sulfurylases.
Selon l'invention, la concentration dans le biomatériau de la quatrième enzyme peut être comprise entre 0,01 et 50 U/ml, de préférence de 0,1 à 5 U/ml.
Selon l'invention, la première, deuxième, troisième et quatrième enzyme sont des enzymes pouvant être, indépendamment, actives ou pouvant être activées
Dans la présente, le biomatériau peut être un biomatériau tel que défini dans la demande US 12/742588 incorporé par référence dans la présente et/ou la demande US1 1/720089 incorporé par référence dans la présente.
Selon l'invention, le pansement peut comprendre en outre une substance dans le biomatériau et/ou dans le non tissé. La substance peut être une substance active ou non active telle que définie précédemment. La substance peut être indépendamment liée de manière covalence ou par liaisons faible, par exemple des interactions ioniques, ou de Van der Valt, au premier polymère, ou au second polymère et/ou introduit la phase aqueuse du biomatériau.
Avantageusement, la cinétique de libération de la substance peut être modulée en fonction de son interaction avec le premier polymère, le second polymère et/ou la phase aqueuse du biomatériau. Avantageusement encore, la cinétique de libération de la substance peut être modifier/contrôler en fonction de la présence dans le biomatériau de la première et/ou seconde, et/ou troisième et/ou quatrième enzyme telle que définie précédemment. La présente invention a également pour objet un procédé de fabrication d'un pansement comprenant les étapes de :
a. préparation d'une solution polymère comprenant un polymère protéique et/ou un polymère saccharidique par mélange dudit polymère dans une solution tampon,
b. préparation d'une solution enzyme comprenant la première et la seconde enzyme par mélange desdites enzymes dans une solution tampon,
c. mélange de la solution polymère et de la solution enzyme, d. dépôt du mélange de l'étape (c) sur une face d'un non-tissé, e. réticulation en gel du mélange de l'étape (c) déposé sur le non tissé,
f. lyophilisation du gel formé sur le non tissé,
Dans la présente, l'étape de préparation de la solution de polymères peut être réalisée par mélange par agitation, par exemple via un agitateur magnétique ou par des pales. La préparation de la solution de polymères peut être réalisée par agitation, par exemple à une vitesse de 1 à 2000 rpm (tours par minutes), de préférence de 160 à 200 rpm (tours par minutes).
Dans la présente, l'étape de préparation de la solution de polymères peut être réalisée à une température de 10 à 50°C, de préférence de 34 à 42°C.
Dans la présente, le polymère utilisé à l'étape (a) dans le procédé peut être un polymère protéique et/ou un polymère saccharidique tel que définie précédemment. La concentration dudit polymère dans le mélange l'étape (a) peut être comprise de 0,5 à 5 % en poids, de préférence de 2 à 4% en poids.
Dans la présente, la solution de polymère peut comprendre en outre un cryoprotecteur choisi parmi du sorbitol du mannitol le glycérol, le sorbitol, des polyols, par exemple : l'érythritol, le xylitol, l'arabitol, le ribitol, le dulcitol, le galactitol, le mannitol, le volemitol, le maltitol, l'isomaltitol, le lactitol ou lactositol, le glycol et ses polymères dérivés par exemple le polyéthylène glycol (PEG), de préférence le cryoprotecteur est le sorbitol. La concentration de cryoprotecteur dans la solution de polymère peut être de 0,1 à 1 M, par exemple de 0,2 à 0,5 M, ou être de 2 à 10%, par exemple de 3 à 4% en poids. .
Par exemple lorsque le cryoprotecteur est le sorbitol, la concentration de sorbitol dans la solution de polymère peut être de 0,1 à 1 M, par exemple de 0,2 à 0,5 M, ou être de 2 à 10%, de préférence de 3 à 4% en poids.
Dans la présente, l'étape de préparation de la solution d'enzyme peut être réalisée par mélange par agitation, par exemple via un agitateur magnétique, ou par des pales. La préparation de la solution d'enzymes peut être réalisée par agitation exemple à une vitesse de 1 à 2000 rpm par exemple de 100 à 250 rpm, d'une première et seconde enzyme dans une solution tampon.
Dans la présente, l'étape de préparation de la solution d'enzymes peut être réalisée à une température de 10 à 50°C, par exemple de 34 à 42°C.
Dans la présente, la première et la seconde enzyme utilisées sont telles que définies précédemment. Par exemple, la première enzyme peut être une collagénase. Par exemple la seconde enzyme peut être une transglutaminase.
Dans la présente, l'activité dans la solution d'enzyme de la première enzyme peut être comprise de 2x10"7 à 50 U/ml (unité/ml), par exemple de 10"6 à 10"5 U/ml ; par exemple de 2 à 3x10"6 U/ml, par exemple de 2,57x10"6 U/ml.
Dans la présente, l'activité de la première enzyme dans le pansement peut être comprise de 10"7 à 10"4 unités/g (U/g) de pansement, par exemple de 25x10"6 à 26x10"6 U/g de pansement, par exemple de 25,7x10"6 U/g de pansement.
Dans la présente, la concentration dans la solution enzyme de la seconde enzyme peut être comprise de 2x10"7 à 50 U/ml, par exemple de 0,1 à 1 U/ml, par exemple de 0,3 à 0,5 U/ml, par exemple de 0,4 U/ml.
Dans la présente, l'activité de la seconde enzyme dans le pansement peut être comprise de 0,5 à 10 Unités/g (U/g) de pansement, par exemple 4 U/g de pansement.
Dans la présente, la concentration de polymère, première et seconde enzyme peut être choisie en accord avec la formule suivante correspondant à une étude de l'équilibre dynamique de la matrice extracellulaire correspondant à un modèle mathématique simplifié d'un système dynamique dans lequel on met en œuvre deux réactions enzymatiques antagonistes. L'une est catalysée par une enzyme capable d'effectuer des liaisons covalentes entre les monomères solubles (s) pour obtenir un réseau de monomères liés (g). L'autre est catalysé par une enzyme (P) qui hydrolyse le réseau de monomères liés (g) en monomères solubles (s). Enfin, et dans certains cas, une troisième réaction aussi catalysée par l'enzyme (P) consiste en l'hydrolyse des monomères solubles en monomères dégradés (f) de taille trop faible pour participer au réseau ou qui ne peuvent plus servir de substrat à l'enzyme liant les monomères solubles (s) par des liaisons covalentes (T). Cette dernière réaction qui se traduit par une fuite de monomères du cycle est également ajoutée au modèle. Le modèle peut être simplement représenté selon le schéma réactionnel suivant :
Schéma I :
Ce mécanisme réactionnel peut être simplement décrit par les trois équations différentielles qui suivent, où les réactions enzymatiques sont assimilées à des réactions michaéliennes simples et par une quatrième équation de conservation de la masse.
L'équation différentielle permettant de décrire l'évolution du nombre de chaînes de monomères liés (g) en fonction du temps est la suivante:
L'équation différentielle permettant de décrire l'évolution du nombre de monomères en solution (s) en fonction du temps est la suivante:
L'équation différentielle permettant de décrire l'évolution du nombre de monomères dégradés (f) en fonction du temps est la suivante:
Enfin, l'équation de conservation de masse est la suivante:
Dans ces équations différentielles, VP et VT représentent les vitesses maximales pour les enzymes P et T respectivement, KP et KT représentent les constantes de Michaelis pour les enzymes P et T respectivement.
Dans ces équations, VP et VT sont calculées selon les équations suivantes :
Dans la transposition de cette équation à un système in vitro, les différentes valeurs de [P], [T], Vp, VT, KP et KT correspondent à des constantes.
Dans la présente, la solution tampon des étapes (a) ou (b) peut être une solution tampon choisie dans le groupe comprenant un Tampon TRIS - HCI, un tampon phosphate salin (PBS), Tampon citrate, Tampon borate et/ou toute solution connue de l'homme du métier qui permet le maintien du pH entre 5 et 9 malgré l'addition de petites quantités d'un acide ou d'une base, ou une dilution aqueuse.
Dans la présente, la solution tampon peut être une solution tampon avec un pH de 6,5 à 8.
Dans la présente l'étape de mélange de la solution d'enzymes et de la solution de polymères peut être réalisée par tout procédé connue de l'homme du métier. Par exemple, le mélange peut être réalisé en versant la solution d'enzyme dans la solution de polymères sous agitation, par exemple via un agitateur magnétique ou des pales, par exemple à une vitesse de 1 à 2000 rpm, de préférence de 100 à 250 rpm. Dans la présente, l'étape de mélange de la solution d'enzyme et de la solution de polymère peut être réalisée à une température de 10 à 50°C, par exemple de 34 à 42 °C.
Dans la présente, à l'étape (c) du procédé, les solutions enzyme et polymère peut être mélangées selon un rapport minimal de 1/5 et soumis à agitation, par exemple avec un agitateur magnétique ou des pales tel que décrit précédemment.
Dans la présente, l'étape de dépôt du mélange de l'étape (c) sur une face d'un non-tissé peut être réalisée par versement dudit mélange. Par exemple, le non tissé peut être disposé sur le fond d'un dans un récipient, par exemple un récipient en acier, en aluminium, en inox, en téflon, en silicone, en PTFE, et tout polymère hydrophobe, puis le mélange est versé dans ledit récipient.
Dans la présente, le volume de mélange de l'étape (c) déposé sur une face du non tissé peut être choisi afin que ledit mélange recouvre l'ensemble du non- tissé.
Dans la présente, le volume de mélange de l'étape (c) déposé sur une face du non tissé peut être compris de 10 à 40 ml/ pansement, de préférence de 30 ml / pansement (pst).
Avantageusement, le volume de mélange déposé permet de recouvrir une face du non-tissé tout en l'imprégnant permettant ainsi l'adhésion du mélange du ladite face. En outre, l'adhésion du mélange sur ledit non-tissé permet avantageusement lors du retrait du pansement de la plaie la conservation du biomatériau sur ledit non tissé, d'éviter qu'il reste du biomatériau sur la plaie après retrait du pansement, et d'empêcher que le biomatériau ne se déchire.
Dans la présente, la réticulation en gel du mélange peut être réalisée par tout procédé connu de l'homme du métier. Par exemple, la réticulation peut être réalisée par chauffage, par exemple à une température comprise de 20 à 50°C, de préférence à une température comprise de 35 à 42°C.
Dans la présente, la réticulation peut être réalisée dans une atmosphère humide avec un pourcentage de 60 à 100 d'humidité. Par exemple, la réticulation peut être réalisée dans un incubateur avec une atmosphère dont le pourcentage d'humidité est compris de 60 à 100 pourcent d'humidité. L'incubateur peut être un incubateur disponible dans le commerce, par exemple un incubateur commercialisé par la société Digitals, la société Binder ou intégré au lyophilsateur.
Dans la présente, la réticulation en gel du mélange peut être effectuée pendant un temps de 1 à 24 heures, par exemple de 1 à 6 heures.
Dans la présente, l'étape de lyophilisation peut être réalisée sous une pression 75x10"3 Pa à 300x10"3 Pa, par exemple de 140x10"3 Pa et comprend outre l'étape de congélation, les étapes suivantes:
g. Etape de sublimation : augmentation de la température de -45 à une température comprise entre 5 et 30 °C, de préférence entre 10 et 20°C, à une vitesse de 0,005 à 0,1 °C par minute, par exemple de 0,009 à 0,05°C par minute, par exemple de 0,01 °C par minute,
h. Etape de dessiccation : maintient de la température obtenue à l'étape de sublimation pendant un temps de 10 à 70 heures, de préférence pendant 36 heures
Selon l'invention, la vitesse d'augmentation de la température à l'étape g du procédé convient, par exemple, pour une concentration de 0,2 à 0,5M et/ou de 3 à 4% en poids par rapport au poids total de cryoprotecteur.
Dans la présente, la lyophilisation peut être réalisée par tout dispositif connue de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'un lyophilisateur commercialisé par la société Serail, par la société Usifroid, martin Christ, GEA Niro ou Labconco.
Avantageusement, l'étape de lyophilisation permet de lyophiliser le biomatériau tout en conservant ses capacités fonctionnelles, par exemple la possibilité de faire des transitions gel/solution lors de sa mise en contact avec un liquide. En outre, le pansement lyophilisé peut être avantageusement coupé avant application. Cette découpe permet ainsi que le pansement soit adapté le plus justement à la plaie, éléments indispensable à une bonne cicatrisation.
En outre, la lyophilisation du biomatériau permet avantageusement de conserver l'ensemble du biomatériau sur le non-tissé et d'éviter toute perte de biomatériau lors d'un éventuel contact du pansement avec une surface, par exemple une surface sèche. La lyophilisation permet en outre avantageusement d'arrêter les processus de liquéfaction du gel en inhibant l'activité des enzymes. La lyophilisation permet en outre avantageusement de limiter la prolifération bactérienne dans le pansement. La lyophilisation permet en outre avantageusement d'augmenter le temps de conservation du pansement.
La lyophilisation permet également avantageusement la conservation de la structure et de l'intégrité du biomatériau sur le non-tissé avant tout contact avec la plaie. La lyophilisation permet avantageusement de conférer au biomatériau des propriétés absorbantes.
Dans la présente, le procédé peut également comprendre une étape de découpe à façon du pansement.
Dans la présente, l'étape de découpe peut être réalisée par tout dispositif connue de l'homme du métier, par exemple par un massicot, un scalpel, des ciseaux, une presse coupante, un laser.
Dans la présente, le pansement obtenu peut être par exemple un pansement de forme circulaire, un polygone, par exemple un quadrilatère, un pentagone, un hexagone, un heptagone, un rectangle, un carré, un parallélogramme, un triangle, un losange, une ellipse ou toute forme adaptée au lit de la plaie.
Avantageusement, la découpe du pansement permet de produire des pansements dont la forme est adaptée à la plaie.
Dans la présente, le procédé peut également comprendre une étape d'emballage du pansement. Selon l'invention, l'étape d'emballage peut être réalisée par tout procédé connu de l'homme du métier. Par exemple l'emballage peut être réalisé par association sous vide de deux feuillets. L'étape d'emballage peut être réalisée par exemple de manière automatisée, comme par exemple grâce à une scelleuse thermique, par exemple une scelleuse commercialisée par la société multivac.
Selon l'invention, l'emballage peut être un emballage plastique, par exemple avec un film ou feuillet en polyéthylène, un emballage métallique, par exemple en avec des feuillets en aluminium, des emballages résistants aux stérilisations par ionisation, des emballages imperméables aux liquides et/ou aux gaz, par exemple l'Oifol 48 et l'Oifoil 48/Q15 commercialisé par la société Oliver Tolas, Tekniplex, des films aluminium, ou des blisters de polymères.
Avantageusement, l'emballage du pansement permet de protéger et/ou d'isoler ledit pansement de l'environnement extérieur. L'emballage permet avantageusement d'éviter toute contamination extérieure du biomatériau.
Dans la présente, le procédé peut comprendre en outre une étape de stérilisation du pansement.
Dans la présente, l'étape de stérilisation peut être réalisée après l'étape d'emballage.
L'étape de stérilisation du pansement peut être réalisée par exemple par ionisation, par chauffage et/ou par traitement chimique. De préférence, la stérilisation est réalisée par ionisation avec des rayonnements gamma ou béta, de manière plus préféré par rayonnement béta.
Dans la présente, lorsque la stérilisation est réalisée par ionisation, la quantité de rayonnement absorbé est comprise de 0,5 à 50 kGy, de préférence de1 à 27 kGy.
Avantageusement la stérilisation par ionisation permet de stériliser le pansement dans l'emballage tout en conservant les propriétés du biomatériau en particulier la possibilité de transition successive gel/solution, en préservant l'activité des enzymes.
Dans la présente, l'étape a) du procédé peut comprendre en outre :
a') l'addition d'un second polymère protéique ou saccharidique ou un mélange de seconds polymères protéiques ou saccharidiques, différent du premier polymère ou du mélange de premiers polymères.
Selon l'invention, le procédé de l'invention peut être réalisé, par exemple, avec des seconds polymères ou un mélange de seconds polymères inclus dans la phase aqueuse du réseau de premiers polymères.
Selon l'invention, le second polymère à l'étape a') peut être en solution ou réticulée. Avantageusement, la forme du second polymère, i.e en solution ou réticulé, peut être fonction de la présence ou non de la quatrième enzyme, capable d'induire des liaisons entre lesdits seconds polymères. La quatrième enzyme est telle que définie ci-dessus. La quantité quatrième enzyme peut être telle que définie ci- dessus.
Dans la présente, par réticulée on entend par exemple le polymère sous forme de gel. Il peut s'agir par exemple d'un gel unique et/ou d'un ou plusieurs fragments dudit polymère sous forme de gel.
Selon l'invention, le procédé de l'invention peut être réalisé avec des seconds polymères ou un mélange de seconds polymères formant, par exemple, un réseau de seconds polymères inclus dans le réseau de premiers polymères.
Selon l'invention, le procédé peut comprendre en outre à l'étape b) l'addition d'une troisième enzyme. La troisième est définie ci-dessus. Sa quantité est définie ci-dessus.
Selon l'invention, le procédé peut comprendre en outre à l'étape b) l'addition d'une quatrième enzyme capable d'induire des liaisons entre lesdits seconds polymères. La quatrième enzyme est définie ci-dessus. Sa quantité est telle que définie ci-dessus.
Dans la présente, le procédé peut comprendre en outre une étape d'intégration d'une substance active dans la solution d'enzyme et/ou dans la solution de polymère et/ou dans le mélange obtenu à l'étape (c). La substance active peut être telle que définie précédemment.
D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif.
Brève description des figures
La figure 1 représente le schéma de fabrication des pansements La figure 2 représente un diagramme des courbes de température du collecteur, des étagères et de l'échantillon en degré Celsius (ordonné) en fonction du temps en heures pendant l'étape de lyophilisation.
La figure 3 représente des photographies du pansement obtenu en lorsque le biomatériau comprend (avec sorbitol) ou pas (sans sorbitol) du sorbitol.
La figure 4 représente des photographies de pansements obtenus en fonction de la quantité de sorbitol compris dans le biomatériau.
La figure 5 représente des photographies de pansements en fonction de la quantité de biomatériau déposé sur le non tissé.
- La figure 6 représente des photographies de fabrication du pansement dans un moule (A) puis démoulage (B).
La figure 7 A représente un diagramme d'un gel physique de gélatine (biomatériau) en fonction du temps en minutes et de la quantité d'ionisation béta en kGy. Sur cette figure la courbe avec les points «▲ » correspondent aux valeurs de G" obtenue pour une ionisation de OkGy, les points «■ » correspondent aux valeurs de G' obtenue pour une ionisation de OkGy, les points «— » correspondent aux valeurs de G' obtenue pour une ionisation de 30kGy, les points «♦ » correspondent aux valeurs de G" obtenue pour une ionisation de 30kGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G' obtenue pour une ionisation de 40kGy, les points « » correspondent aux valeurs de G" obtenue pour une ionisation de 40kGy, les points « · » correspondent aux valeurs de G' obtenue pour une ionisation de 50kGy, les points « + » correspondent aux valeurs de G' obtenue pour une ionisation de 50kGy.
La figure 7 B représente la variation du G' max (■) (élasticité maximale) et de G" (À) mesurée en Pascal (Pa) des gels physiques de gélatine en fonction de la quantité de ionisation béta en kGy.
La figure 7 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité d'ionisation béta en kGy.
La figure 8 A représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G', G" d'un gel physique de gélatine en fonction du temps en minutes et de la quantité de rayonnement Gamma en kGy. Sur cette figure la courbe avec les points «■ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «♦ » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «▲ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 15 kGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 15 kGy, les points «— » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50 kGy, les points « · » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50 kGy.
La figure 8 B la variation du G' max (■) (élasticité maximale) et de G" ( .4 ) mesurée en Pascal (Pa) des gels physiques de gélatine en fonction de la quantité de rayonnements Gamma en kGy.
La figure 8 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité de rayonnements Gamma en kGy.
La figure 9 A représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G', G" un gel chimique de gélatine en fonction du temps en minutes et de la quantité d'ionisation béta en kGy. Sur cette figure la courbe avec les points «▲ » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «■ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «♦ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 30kGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 30kGy, les points «— » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 40kGy, les points « + » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 40kGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50kGy, les points « + » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50kGy.
- La figure 9 B A représente un diagramme de la variation du G' max (■)
(élasticité maximale) et de G" ( â ) mesurée en Pascal (Pa) des gels chimiques de gélatine en fonction de la quantité de ionisation béta en kGy.
La figure 9 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité d'ionisation béta en kGy.
- La figure 10 A représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G',
G" un gel chimique de gélatine en fonction du temps en minutes et de la quantité du rayonnement Gamma en kGy. Sur cette figure la courbe avec les points «▲ » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «■ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «♦ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 15 kGy, les points « + » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 15 kGy, les points « · » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50 kGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50 kGy.
La figure 10 B A représente un diagramme de la variation du G' max (■) (élasticité maximale) et de G" ( A ) mesurée en Pascal (Pa) des gels chimiques de gélatine en fonction de la quantité du rayonnement Gamma en kGy.
La figure 10 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité du rayonnement Gamma en kGy.
La figure 1 1 A représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G', G" d'un biomatériau de gélatine en fonction du temps en minutes et de la quantité d'ionisation béta en kGy. Sur cette figure la courbe avec les points «▲ » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «■ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «♦ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 30kGy, les points « · » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 30kGy, les points «— » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 40kGy, les points « + » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 40kGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50kGy, les points « * » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 50kGy
La figure 1 1 B la variation du G' max (■) (élasticité maximale) mesurée en Pascal (Pa) des biomatériaux de gélatine en fonction de la quantité de ionisation béta en kGy.
La figure 1 1 C représente le temps de gel en minutes (■) et le temps de resolubilisation ( * ) du gel en fonction de la quantité d'ionisation béta en kGy La figure 12 A représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G', G" d'un Enzgel de gélatine en fonction du temps en minutes et de la quantité du rayonnement Gamma en kGy. Sur cette figure la courbe avec les points «— » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de OkGy, les points « x » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de OkGy, les points «♦ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 15 kGy, les points « + » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 15 kGy, les points «■ » correspondent aux valeurs de G' obtenues pour une ionisation de 50 kGy, les points «▲ » correspondent aux valeurs de G" obtenues pour une ionisation de 50 kGy.
La figure 12 B représente un diagramme de la variation du G' max (élasticité maximale) des biomatériaux de gélatine en fonction de la quantité du rayonnement Gamma en kGy.
La figure 12 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité du rayonnement Gamma en kGy. Sur cette figure Sur cette figure les points «■ » correspondent aux valeurs de temps de gel et les points « 4 » correspondent aux valeurs de temps de fusion du gel.
La figure 13 A représente le temps de resolubilisation du biomatériau en fonction de la quantité d'enzyme (collagénase).
- La figure 13 B représente un diagramme représentant la vitesse de chute de G' en pascal par minute en fonction de la quantité d'enzyme, c'est-à-dire la vitesse à laquelle le biomatériau se resolubilise (transition gel/sol) en fonction de la quantité d'enzyme (collagénase [GC]).
La figure 14 représente des photographies de pansements en fonction du pourcentage de polymère avant lyophilisation (A) et après lyophilisation (B)
La figure 15 représente des photographies de pansements fonction du pourcentage de polymère après congélation.
La figure 16 représente des photographies de pansements en fonction du non tissé.
- La figure 17 représente des photographies de pansements en fonction du non tissé. La figure 18 est un histogramme représentant la capacité d'absorption du pansement en fonction du non tissé incorporé dans sa matrice. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé lyofai, « 2 » avec un non tissé MA 50 J, « 3 » avec un non tissé WSV 100, « 4 » avec un non tissé MA 57 S, « 5 » avec un non tissé MA 50 + PE, « 6 » avec un non tissé Tissue 5-lg comprenant du polyéthylène (Tissue 5-lg + PE), « 7 » avec un non tissé MASP50 et « 8 » avec un non tissé MASP50 P. Les non tissés sont des non tissés commerciaux commercialisés par la société Mankk.
La figure 19 est un histogramme représentant le taux de réhydratation du pansement en fonction du non tissé incorporé dans sa matrice. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé lyofai, « 2 » avec un non tissé MA 60, « 3 » avec un non tissé MA40W4, « 4 » avec un non tissé ZWHO"c" 12-lg, « 5 » avec un non tissé MA 30, « 6 » avec un non tissé MASP 50 P, « 7 » avec un non tissé MA 71 .08. Les non tissés sont des non tissés commerciaux commercialisés par la société Mankk
La figure 20 est un histogramme représentant la WVTR(water vapor transmission rate): du pansement en fonction du non tissé incorporé dans sa matrice. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé lyofai, « 2 » avec un non tissé MA 50 J, « 3 » avec un non tissé WSV 100, « 4 » avec un non tissé MA 57 S, « 5 » avec un non tissé MA 50 + PE, « 6 » avec un non tissé MASP 50, « 7 » avec un non tissé MASP 50 P. Les non tissés sont des non tissés commerciaux commercialisés par la société Mankk
La figure 21 est un diagramme représentant la cinétique de réhydratation des pansements en fonction des différent non tissé testé. Sur cette figure la courbe avec les points « + » correspondent aux valeurs avec le non tissé MA 60, les points
« x » correspondent aux valeurs avec le non tissé MA 50J, les points «♦ » correspondent aux valeurs avec le non tissé ZWHO "C", les points « · » correspondent aux valeurs avec le non tissé MA 71 .080, les points «■ » correspondent aux valeurs avec le non tissé Baumwell, les points «▲ » correspondent aux valeurs avec le non tissé MA936, les points correspondent aux valeurs avec le non tissé MA71 10. La figure 22 est un histogramme représentant la capacité d'absorption des pansements en fonction des différent non tissé testé. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé ZWHO "C", « 2 » avec un non tissé Baumwell, « 3 » avec un non tissé MA936, « 4 » avec un non tissé MA 50 J, « 5 » avec un non tissé MA 60, « 6 » avec un non tissé MA 71 .080 et « 7 » avec un non tissé MA71 10. Les non tissés sont des non tissés commerciaux commercialisés par la société Mankk
La figure 23 représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G', G" en Pa, en fonction de la fréquence d'oscillation du mobile du rhéomètre, en hertz. Sur cette figure la courbe avec les points «□ » correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé ZWHO"C", les points «■ » correspondent aux valeurs de G' des pansements contenant le non tissé ZWHO"C", les points correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé Baumwell-Moltenl , les points «♦ » correspondent aux valeurs de G' des pansements contenant le non tissé Baumwell-Molten 1 , les points «▲ » correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé Baumwell-Molten 2, les points « Δ » correspondent aux valeurs de G' des pansements contenant le non tissé Baumwell-Molten 2, les points « o » correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé MA936- 80, les points « · » correspondent aux valeurs de G' des pansements contenant le non tissé MA936-80, les points « V » correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé MA71 101 , les points « T » correspondent aux valeurs de G' des pansements contenant le non tissé MA71 101 , les points correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé MA950J1 , les points correspondent aux valeurs de G" des pansements contenant le non tissé MA950J1 .
La figure 24 représente des photographies en microscopie électronique environnementale de pansement lyophilisé en fonction de son hydratation. La figure 24 A représente une photographie en microscopie électronique d'un pansement lyophilisé sec. La figure 24 B représente une photographie en microscopie électronique d'un pansement lyophilisé après hydratation pendant 4 minutes. La figure 24 C représente une photographie en microscopie électronique d'un pansement lyophilisé après hydratation pendant 20 minutes. La figure 24 D représente une photographie en microscopie électronique d'un pansement lyophilisé après hydratation maximum, c'est-à-dire pendant plus de 12 heures.
- - La figure 25 représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G',
G" en PA d'un pansement réhydraté, en fonction du temps en heures. Sur cette figure la courbe avec les points correspondent aux valeurs de G", les points «■ » correspondent aux valeurs de G'.
La figure 26 représente un diagramme en bâton de la force normale intégrée (iNF) nécessaire à l'arrachage du pansement au rhéomètre en fonction de leur élasticité. Sur cette figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un pansement avec un G' égal à 35 Pascal (Pa), « 2 » correspond aux résultats obtenus avec un pansement avec un G' égal à 18 Pa, « 3 » correspond aux résultats obtenus avec un pansement avec un G' égal à 3.
- La figure 27 représente un diagramme de la capacité d'absorption en gramme d'eau par 100 cm2 du pansement en fonction du temps en heure. Sur cette figure «■ » correspond aux résultats obtenus pour le pansement lyophilisé comprenant le non-tissé, «▲ » correspond aux résultats obtenus avec le gel seul non lyophilisé..
- La figure 28 représente des photographies de plaies rachidiennes dermo épidermiques de 5x5 cm de longueur sur 0,5 cm de profondeur. La figure 28 A est une photographie de la plaie au premier jour avant l'application du pansement de l'invention, la figure 28 B est une photographie de la plaie après 7 jours d'application du pansement de l'invention, la figure 28 C est une photographie de la plaie après 18 jours d'application du pansement de l'invention, la figure 28 D est une photographie de la plaie après 30 jours d'application du pansement de l'invention.
La figure 29 représente un diagramme de production d'exsudat par une plaie ainsi que sa rétention par le pansement de l'invention. Sur cette figure l'abscisse représente le temps en jour et l'ordonné représente le score estimé par l'opérateur. En outre, les points «■ » correspondent au score estimé de rétention des exsudais par le pansement et les points « 0 » correspondent au score estimé de production d'exsudats par la plaie.
La figure 30 représente des photographies de coupes histologiques de plaies cicatrisées après application du pansement de l'invention. La figure 30 A représente une photographie de la plaie cicatrisée à faible magnitude et la figure 30 B une photographie de la plaie cicatrisée à forte magnitude.
La figure 31 représente un schéma de réticulation d'un polymère.
La figure 32 représente des photographies de pansements obtenus lorsque le biomatériau un ou deux polymères et comprend une troisième enzyme, la figure 32 A est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau avec un polymère. La figure 32 B est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant deux polymères, le deuxième étant en solution. La figure 32 C est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant deux polymères, le deuxième étant réticulé. La figure 32 D est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant deux polymères, le deuxième étant en solution et une troisième enzyme : l'alginate lyase. La figure 32 E est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant deux polymères, le deuxième étant réticulé sous forme de billes et une troisième enzyme alginate lyase.
La figure 33 est un diagramme représentant la cinétique de relargage du bleu de méthylène en fonction du pansement. Les points « * » représentent le relargage à partir du pansement comprenant un biomatériau avec un polymère et deux enzymes, les points «■ » représentent le relargage à partir du pansement comprenant un biomatériau avec deux polymères, le deuxième étant en solution et deux enzymes, les points «▲ » représentent le relargage à partir du pansement comprenant un biomatériau avec deux polymères, le deuxième étant en solution et trois enzymes, les points « x » représentent le relargage à partir du pansement comprenant un biomatériau avec deux polymères, le deuxième étant réticulé et deux enzymes, les points «♦ » représentent le relargage à partir du pansement comprenant un biomatériau avec deux polymères, le deuxième étant en réticulé et trois enzymes .
EXEMPLES
Exemple 1 : procédé de fabrication
a) Préparation des mélanges
Pour la préparation des mélanges deux cuves ont été utilisées. Une cuve CT1 pour le mélange de polymère et une cuve CT2 pour le mélange d'enzyme. La cuve CT1 utilisée est une cuve de 150 litres, la cuve CT2 est une cuve de 65 litres.
La gélatine utilisée provenait de la société Rouselot commercialisé sous la référence LB8, le sorbitol de la société IMCD commercialisé sous la référence sorbitol apyrogène PF.
Le tampon utilisé est un tampon comprenant de l'eau distillé, du TRIS 50 mM et de l'acide chloridrique en quantité suffisante pour obtenir un pH de 7,75.
Le mélange de polymère a été réalisé sous agitation à 187 tours par minutes (« round per minutes (rpm) ») dans une cuve CT1 à 40°C. Dans un volume de 35 I d'eau sanitisée ont été ajouté : 21 1 g de solution tampon, 2 kg de polymère de gélatine et 3 kg de sorbitol. La concentration finale de polymère dans le mélange CT1 est alors de 57 g/l.et celle du sorbitol est de 86 g/l.
Le mélange d'enzyme a été réalisé sous agitation à 187 rpm avec un agitateur dans la cuve CT2 à 40°C. Dans un volume de 35 litres d'eau sanitisée ont été ajouté : 21 1 g de tampon, 0,22 Unités de la première enzyme et 30 Unités de la seconde.
Dans cet exemple, la première enzyme était la collagénase provenant de la société Coger commercialisé sous la référence NB6, la seconde enzyme était la Transglutaminase provenant de la société Ajinomoto commercialisé sous la référence Activa WM.
Le contenu de la cuve CT2 obtenue a été ensuite transféré dans la cuve CT1 et mélangé sous agitation à 187 tours par minutes pendant au moins 5 minutes. b) Gélification
La totalité du mélange contenu dans les cuves CT1 et CT2 comprenant les enzymes et le polymère obtenu a été ensuite déposé par un débimètre sur un non- tissé préalablement découpé sous une forme adaptée à la taille du moule.
Le moule utilisé était en aluminium, ou en silicone de forme rectangulaire (500x1000x140 mm) commercialisé par la société MAE et Sérail.
Le moule a été ensuite déposé dans une étuve à 35°C et à au moins 60% d'humidité. Le moule est resté dans l'étuve pendant un temps compris de 1 h à 10h. c) Lyophilisation
Après dépôt, le non-tissé sur lequel le mélange a été déposé a été disposé dans un lyophilisateur commercialisé par la société Serail.
Le cycle de température appliqué ainsi que la pression sous laquelle a été réalisée la lyophilisation sont indiquées dans le tableau 1 ci-dessous.
Tableau 1 : cycle de température et de pressions appliquées pour la lyophilisation
La figure 1 représente la courbe de température de lyophilisation en degré Celsius (ordonné) en fonction du temps en heures. d) Conditionnement
Après lyophilisation, le non-tissé a été découpé et la face non tissé a été marquée à l'aide d'une presse coupante a une taille de 65 *100 mm
Le pansement ainsi formé a été alors ensaché. Le sachet a été ensuite soudé pendant 4 secondes sous un vide de 50 bar, grâce à une scelleuse de modèle C200N commercialisée par la société multivac. La figure 1 représente un schéma général de fabrication.
Exemple 2 : pansement dans lequel le biomatériau comprend du sorbitol
Dans cet exemple l'effet du sorbitol sur le pansement à été étudié.
Les pansements ont été préparés selon le procédé décrit dans l'exemple 1 dans lequel la gélatine est 3% (30mg/mL), et la concentration finale de Sorbitol est de 0,2 à 0,1 M, de la Transglutaminase à 4mg/mL, soit 12 U/pansement, et la collagénase à 2,2x10"5mg/mL soit 8,5 x10"5 U/pansement.
Les produits obtenus dans cet exemple ne comprenaient pas de support non-tissé.
La nature et les concentrations de la gélatine, des enzymes et de la solution tampon utilisées dans cet exemple étaient identiques à ceux de l'exemple 1
Dans cet exemple le biomatériau est également désigné par biogel.
RESOLUBILISATION ET MELANGE DES PRODUITS
Le tampon a été placé au préalable à température ambiante, c'est à dire entre 15 et 30°C. Les trois mélanges ont été effectués en parallèle.
- Dans le mélange (« Batch ») 1 (40°C) :
o la poudre de gélatine (30 mg.l"1 final) et la poudre de sorbitol (0,2M à 1 M) ont été resuspendue dans un volume total de 500mL de solution tampon.
o Une resolubilisation a été effectué sous agitation mécanique avec un barreau magnétique pendant 30min (maximum 10h) à 40°C jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de grain de gélatine en suspension. L'agitation a été adaptée, pour éviter la formation de mousse, tout en assurant un mélange homogène.
- Dans le mélange (« Batch ») 2 (40°C) : la poudre de transglutaminase (4mg. 1) a été ajoutée dans 480 mL de solution tampon et solubilisée sous agitation mécanique à 40°C pendant 30min (maximum 10h). - Dans le mélange (« Batch ») 3 (40°C) : 17mL de collagénase diluée dans du tampon ont été ajoutés, afin d'atteindre une concentration finale de 2,2x10"5 mg.ml"1, et agités à 40°C pendant 15min (maximum 1 heures).
FORMATION DU BIOGEL/BIOMATERIAU
Toute la solution de collagénase (Batch 3) a été ajoutée dans le mélange (« batch ») 2 contenant la solution de transglutaminase et mélangé pendant 3 min au maximum sous agitation magnétique.
Le contenu du mélange («batch») 2 a été versé dans le mélange («batch») 1 , contenant la solution de gélatine/sorbitol.
20 à 40mL de solution de mélange (gélatine/sorbitol + enzymes) ont été versés dans un moule hydrophobe en silicone ou aluminium contenant une compresse commercialisé par Mankk.
Les moules ont été mis à 35°C dans une étuve sous atmosphère humide (rHmin = 80%) pendant 3 heures minimum (maximum = 8h*).
LYOPHILISATION
Le lyophilisateur utilisé était le modèle T ad commercialisé par la société Labconco et a été pré-congeler à une température de -45°C. La vitesse de congélation des gels n'a pas d'incidence sur le produit. Les moules contenant le « biogel » ont été déposés dans le lyophilisateur et le cycle de lyophilisation indiqué dans le tableau 2 a été appliqué.
Résultats Les photographies des biomatériaux lyophilisés obtenues correspondent aux figures 3 à 6.
Comme montré dans la figure 3, la présence du sorbitol dans le biomatériau a un effet sur son aspect.
En particulier, comme représenté sur la figure 3, l'ajout de sorbitol à une concentration de 0,5M a permis d'amener/d'augmenter la souplesse au pansement. Toutefois, une hétérogénéité de surface et un aspect collant sont apparus.
En outre, comme le montre la figure 4, la concentration minimale de sorbitol, en dessous de laquelle le pansement présente une rigidité trop importante est de 0,2M. La concentration maximale au dessus de laquelle l'hétérogénéité de surface et l'aspect collant sont délétère pour le pansement était de 0,5M.
Les résultats montrent également, comme représenté sur la figure 5 que le dépôt d'un volume de 30 ml de gel, quelque soit la concentration en sorbitol, rend le produit obtenu plus homogène.
Les résultats montrent également, comme représenté sur la figure 6 que le moule en silicone permet d'éviter le phénomène d'adhérence au moule, mais les pansements ainsi produit sont moins déshydraté.
Enfin, l'effet des paramètres de lyophilisation appliqués à la troisième étape, la température et la durée, ont été étudiés et les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau 3 ci-dessous.
Conclusions:
Le pansement obtenu présentait un aspect blanc homogène et se démoulait facilement après lyophilisation mais présentait une rigidité affectant sa conformabilité. L'ajout de sorbitol dans le mélange de gélatine a permis d'obtenir des pansements dont la souplesse, plus grande, permet une utilisation optimum. Par contre, il possédait une hétérogénéité de surface (partie lyophilisée et partie fusionnée) et colle très fortement au moule PVC.
L'ajout de différentes concentrations de sorbitol dans le mélange ont permit d'établir une concentration d'utilisation, en dessous de laquelle le pansement est rigide et cassant. Cette concentration correspond à 0,2 M de sorbitol.
Un volume de dépôt de 30mL a permis d'éviter les hétérogénéités de surface que présentaient, de façon aléatoire, les pansements de 20mL, et cela quelle que soit la quantité de sorbitol utilisée.
Les moules en silicone ont permis d'éviter les phénomènes d'adhérence du pansement observé avec le moule en PVC. Ainsi le démoulage des pansements à partir de moule siliconé semble plus réalisable.
Plusieurs cycles de lyophilisation ont été testés. Celui constitué d'une phase de lyophilisation à 10°C pendant 5 heures a permis d'obtenir des pansements lyophilisés et souples.
Exemple 3: étude de l'effet de la stérilisation sur les propriétés du pansement.
Des échantillons de gélatine en poudre, de transglutaminase en poudre et de collagénase en poudre ont été stérilisés par ionisation béta ou rayonnement gamma. Plusieurs doses pour chaque type de rayonnement ont été testées : 30, 40 ou 50 kGy.
Pour ce faire, le dispositif utilisé était un rayonnement de type béta réalisé par la société lonisos.
Les échantillons de gélatine en poudre, de transglutaminase en poudre et de collagénase en poudre provenaient respectivement de la société Rousselot, Ajinomoto et Coger, commercialisés respectivement sous les références catalogues Gélatine LB8 pharma, transglutaminase Activa WM et collagénase NB4 I. Influence de la stérilisation sur les caractéristiques de qélification physique de la gélatine
L'effet de la stérilisation sur la gélification physique (baisse de T°C de 40°C à 27°C) de la gélatine a été observé.
Des gels on ensuite été réalisés selon le protocole suivant :
Préparation de la gélatine :
150mg de gélatine a été pesés pour chaque condition de stérilisation, placés les dans le pilulier et 4mL de tampon Tris a été ajouté.
Un barreau aimanté a été ajouté et le pilulier a été place dans un bain-marie préchauffé à 40°C. La gélatine stérilisée a été resolubilisée sous agitation à 40°C pendant 30min. 2ml de solution a été déposée sur le rhéomètre, la gélification a été observé sous oscillation à 1 Hz, avec une rampe de température de 40°C à 27°C à une vitesse de 0,5°C.min"1.
Les mesures des propriétés physiques de gélification ont été réalisées sur un rhéomètre Anton-Paar MR301
La figure 7 A représente un diagramme un gel physique de gélatine
(biomatériau) en fonction du temps en minutes et de la quantité d'ionisation béta en kGy. Comme représenté sur la figure 7 A, l'ionisation avec des rayons beta entraine en fonction de la dose une dégradation du gel de gélatine.
La figure 7 B représente la variation du G' max (élasticité maximale) mesurée en Pascal (Pa) des gels physiques de gélatine en fonction de la quantité d'ionisation béta en kGy. Comme représenté sur la figure 7 B, cette dégradation est linéaire avec la dose de rayons béta et n'influence que la partie élastique du réseau (G').
La figure 7 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité d'ionisation béta en kGy. Comme représenté sur la figures 7 C, le temps de gel augmente linéairement avec la dose de rayonnement. Ainsi on a constaté que la dégradation de la gélatine est linéaire avec la dose de rayonnement béta.
La figure 8 A représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité G', G" d'un gel physique de gélatine en fonction du temps en minutes et de la quantité de rayonnement Gamma en kGy. La figure 8 B la variation du G' max (élasticité maximale) des gels physique de gélatine en fonction de la quantité de rayonnements Gamma en kGy. La figure 8 C représente le temps de gel en minutes en fonction de la quantité de rayonnements Gamma en kGy.
Comme représenté sur les figures 8 A, B, C, l'irradiation avec des rayons gamma entraine en fonction de la dose une dégradation de la gélatine. Cette dégradation n'est pas linéaire en fonction de la dose de rayon gamma. En particulier, un seuil de dégradation important à lieu au dessus de 15 kGy .
II. influence de la stérilisation sur les caractéristiques de la transqlutaminase
L'effet de la stérilisation sur la gélification chimique, via l'ajout de 3 u/ml de transglutaminase stérilisée à 40°C, de la gélatine non stérilisée a été observé.
Pour ce faire de la poudre de transglutaminase à été soumis à différent protocole de stérilisation : sous irradiation gamma et sous ionisation béta, avec pour chacune des conditions, trois doses testées : 0, 30 et 50 kGy. Des gels ont été ensuite été réalisés selon le protocole suivant :
Préparation de la gélatine : 150 mg de gélatine non stérile ont été pesés, placés dans un pilulier et 4mL de tampon Tris a été ajouté. Un barreau aimanté a été ajouté et le pilulier a été placé dans un bain-marie préchauffé à 40°C. La gélatine a été resolubilisée sous agitation à 40°C pendant 30min.
Préparation de la solution de transglutaminase (à répéter pour chaque condition): 225 mg de transglutaminase (TGase) stérile ont été pesés et placés dans un microtube, 1 ,5ml_ de tampon Tris ont été ajoutés à l'aide de la micropipette et agités pour resolubiliser la poudre sans faire de mousse (la solution pouvait contenir de petite masse non soluble).
Préparation du mélange : 1 ml_ de TGase a été ajouté dans les 4ml de gélatine sous agitation pendant 1 min. 2ml de la solution obtenu ont été déposés sur un rhéomètre, la gélification a été observée à 40°C, sous oscillation à une fréquence de 1 Hz.
Les mesures des propriétés physiques de gélification ont été réalisées sur un rhéomètre Anton-Paar MR301
Comme représenté sur les figures 9, A, B, C, la ionisation avec des rayons beta entraine en fonction de la dose une diminution de l'activité de la transglutaminase (TG) et donc une diminution des valeurs de G' et G". Cette diminution est linéaire avec la dose de rayons béta comme représentée sur les figures 9 B et C.
Comme représenté sur les figures 10, A, B, C, l'irradiation avec des rayons gamma entraine en fonction de la dose une diminution de l'activité de la transglutaminase (TG) et donc une diminution des valeurs de G' et G". Cette diminution n'est pas linéaire avec la dose de rayons gamma comme représentée sur les figures 9 B et C. III. influence sur les caractéristiques de la collagénase
L'effet de la stérilisation sur double transition de la gélatine sol-gel, gel-sol induite par la présence de transglutaminase (TG) et de collagénase (CG) à 40°C a été observé.
Pour ce faire, de la poudre de collagénase à été soumis à différents protocole de stérilisation : sous irradiation gamma et sous ionisation béta, avec pour chacune des conditions, trois doses testées : 0, 30 et 50 kGy. Des gels ont ensuite été réalisés avec cette poudre et les autres constituants non traité selon le procédé décrit ensuite :
Préparation du Mélange A: 300 mg de gélatine non stérile ont été solubilisés avec 5 mL de tampon TRIS non stérile, puis ont été mis sous agitation 30 min. à Préparation du Mélange B: 40 mg de Transglutaminase non stérile ont été solubilisés avec 5 ml_ de tampon TRIS non stérile, puis ont été mis sous agitation 30 min. à 40°C
Mélange C: 22 μΙ_ de collagènase à 0.01 mg/mL conservés 30 min à 40°C Le Mélange C a été mis dans le Mélange B puis dans le Mélange A et laissés agiter 2 min. à 40°C. 2ml de la solution finale ont été déposés sur le rhéomètre, l'évolution des propriétés physiques a été observés à 40°C, sous oscillation à 1 Hz.
Les mesures des propriétés physiques ont été réalisées sur un rhéomètre Anton-Paar MR301
Comme représenté sur les figures 1 1 A, B, C, l'ionisation beta entraine en fonction de la dose une diminution de l'activité de la collagènase montré par la figure 1 1 A, où l'on observe qu'au dessus de 40 kGy, le G' met environ 2,5 fois plus de temps que les autres conditions, à atteindre une valeur de 1 Pa. Ainsi, la valeur de 40 kGy a été considérée comme une dose seuil supérieure à partir de laquelle l'activité de la collagènase (CG) est affectée par les rayons béta.
Comme représenté sur les figures 12 A, B, C, l'irradiation gamma entraine en fonction de la dose une diminution de l'activité de la collagènase (CG) montré par la figure 12 A, où l'on observe qu'au dessus de 15 kGy, le G' met environ 2,5 fois plus de temps que les autres conditions, à atteindre une valeur de 1 Pa. La valeur de 15 kGy a été considérée comme une dose seuil supérieure à partir de laquelle l'activité de la collagènase (CG) est affectée par les rayons gamma.
IV- Détermination de courbes références pour la détermination de l'activité de la collagènase
Une étude de l'importance de la concentration de la collagènase, dans le présent exemple la collagènase NB4, sur les caractéristiques des biomatériaux a été effectuée.
Pour ce faire des biomatériaux, également désignés enzgels ont été réalisés avec différentes concentrations de collagènase : 0,8 x10"4 U.ml"1, 1 x10"4 U.ml"1, 1 ,4 x10"4 U.ml"1 ou 1 ,8 x10"4 U.ml"1 selon le procédé décrit ci-dessous : Préparation du Mélange A: 300 mg de gélatine non stérile ont été solubilisés avec 5 mL de tampon TRIS non stérile. Puis l'ensemble a été mis sous agitation 30 min. à 40°C
Préparation du Mélange B: 40 mg de Transglutaminase non stérile ont été solubilisés avec 5 mL de tampon TRIS non stérile. Puis l'ensemble a été mis sous agitation 30 min. à 40°C
Mélange C: 22 μί de différente concentration de collagènase conservés 30 min à 40°C.
Le Mélange C a été mis dans le Mélange B puis dans le Mélange A et laisser agiter 2 min. à 40°C. 2ml de la solution finale ont été déposés sur le rhéomètre, l'évolution des propriétés physiques a été observée à 40°C, sous oscillation à 1 Hz.
Les mesures des propriétés physiques ont été réalisées sur un rhéomètre Anton-Paar MR301
Les résultats obtenus sont représentés sur la figure 13. La figure 13 A représente le temps de resolubilisation du biomatériau en fonction de la quantité d'enzyme (collagènase [CG]). La figure 13 B représente la vitesse à laquelle le biomatériau se resolubilise (transition gel/sol) en fonction de la quantité d'enzyme (collagènase [CG]).
Comme représenté sur ces figures, le temps de resolubilisation et la vitesse de chute du G' sont linéaires. Il est donc aisé d'extrapoler une vitesse de resolubilisation en fonction d'une concentration de collagènase donnée.
Ces courbes servent de référence pour calculer la concentration d'enzyme nécessaire à la fonte/solubilisation du pansement. V Test microbioloqique
Une analyse du développement bactérien des pansements traités par ionisation béta à 25 kGy a été réalisée.
Pour ce faire, 3 lots différents de pansement ont été testés selon le protocole suivant : Ensemencer 10 pansements dans un flacon de bouillon à l'hydrolysat de caséine et de soja et 10 pansements dans un flacon de bouillon au thioglycolate et résazurine.
Incuber 14 jours à 30-35°C le bouillon au thioglycolate et résazurine et à 25-25°C le bouillon à l'hydolysat de caséine et de soja.
Une observation visuelle a été réalisée toutes les 24 heures pendant 14 jours. Suivant ce protocole, aucun des lots de pansement n'a développé de colonie, montrant ainsi que dès 25 kGy les pansements de l'invention sont stériles.
Le même test à été réalisé sur des pansements ayant subi une irradiation gamma à 28 kGy. Tous les pansements traités se sont solubilisés dans les bouillons rendant impossible l'analyse.
Les rayons gamma détruisent le pansement dès 28 kGy.
VII Lyophilisation
Différents pansements ont été fabriqués selon le protocole de l'exemple 1 avec des concentrations de gélatine comprise entre 2 et 5% masse/volume (m/v) et des concentrations de seconde enzyme, la transglutaminase (TG) de 3 à 7 U/ml.
Différents cycles de lyophilisation ont été testés et varis en fonction des essais et sont décrit pour chaque résultat. Les pansements obtenus ont été photographiés et sont représentés sur les figures 14 et 15.
Dans un premier temps des pansements comprenant respectivement 1 , 2, 3 ou 5%, 3U/mL de TG et un non tissé, à savoir le Lyophal, ont été incubés pendant 3 heures à 35°C et 80 % d'humidité, puis lyophilisé.
Le cycle de lyophilisation était le suivant :
Pression : 150 bar
Pré-Congélation à -70°C pendant 3heures
Chauffage jusqu'à -55°C à une vitesse de 0,13°C/min et maintient pendant 150 min,
Chauffage jusqu'à 0°C à une vitesse de 0,073°C/min et maintient pendant 180min,
Chauffage à 30°C à une vitesse de 0,2°C/min et maintient pendant 1 140min La figure 14 A représente les pansements obtenus après l'étape de congélation en fonction du pourcentage de gélatine.
La figure 14 B représente les pansements obtenus après lyophilisation en fonction du pourcentage de gélatine.
Comme représenté sur ces figures on observe que tous les pansements se sont bien congelés, et se sont bien lyophilisés, même si les pansements dont le pourcentage de gélatine est inférieur à 2% (m/v) présente de nombreux débris.
En outre, l'efficacité de réhydrations des pansements lyophilisés a été testé en en plongeant pendant 4 heures chaque pansement dans une quantité importante (> 50 ml) de tampon Tris pH 7,4, à 35°C.
Lors de cette étape, les pansements comprenant 1 et 2% de gélatine se sont solubilisé, car la concentration faible en gélatine ne permet pas la formation de gel. Les pansement avec 3 et 5% de gélatine se sont réhydratés et ne présentaient aucune dégradation, aucun débris.
Dans un second temps des pansements comprenant respectivement 1 , 2, 3 ou 5% (m/v) de gélatine, 3U/mL de TG et un non tissé (LyofaI), ont été incubés pendant à 35°C et 80 % d'humidité, puis lyophilisé comme suit :
Pré-Congélation à -70°C pendant 3heures
Chauffage jusqu'à -55°C à une vitesse de 0,13°C/min et maintient pendant 150min,
Chauffage jusqu'à 0°C à une vitesse de 0,073°C/min et maintient pendant 180min,
Chauffage à 30°C à une vitesse de 0,2°C/min et maintient pendant 1 140 min.
La figure 15 représente les pansements obtenus après l'étape de congélation en fonction du pourcentage de gélatine.
Après lyophilisation, l'aspect des pansements était similaire à celui obtenu après l'étape de congélation.
Comme représenté sur ces figures il a été observe que tous les pansements se sont bien congelé, et se sont bien lyophilisés. En outre, l'efficacité de réhydrations des pansements lyophilisés a été testée en en plongeant pendant 4 heures chaque pansement dans une quantité importante, c'est-à-dire supérieur à 50 ml, de tampon Tris pH 7,4, à 35°C. Lors de cette étape, les pansements obtenus étaient comme suit :
1 % de gélatine : resolubilisation totale.
2% de gélatine : resolubilisation incomplète.
3% de gélatine : Formation d'un beau gel un peu craquelé, sans débris.
5% de gélatine : Formation d'un gel très rigide, craquelé mais sans débris.
Conclusions
L'effet des traitements stérilisants (rayons béta et gamma), sur les constituants des pansements, ont été évalués en rhéologie.
Pour la gélatine, une dégradation protéique ayant pour conséquence une chute de son pouvoir gélifiant (de type chimique) a été constatée. La dégradation se retrouve avec les rayonnements béta et gamma. Elle semble plus importante avec les gamma. La dégradation est linéaire avec la dose d'ionisation béta mais hétérogène au niveau de la poudre au vu de la reproductibilité des expériences.
La transglutaminase a été elle aussi affectée par un traitement aux rayons (béta ou gamma). Une chute de l'activité enzymatique (et donc à une gélification moins rapide) pour les deux types de stérilisation mais de manière plus importante avec les rayons gamma a été observé. La relation entre l'augmentation du temps de gel et la dose stérilisante est linéaire, mais une relation exponentielle inverse relie la perte d'activité et cette dose stérilisante.
L'activité de la collagénase a été aussi affectée par les rayonnements mais il semble exister, aussi bien pour les gamma que les béta, une dose critique avant laquelle l'activité protéolytique n'est pas modifiée. Comme pour les deux autres constituants, les gamma sont plus destructeurs que les béta.
Les expériences effectuées en microbiologie, sur les pansements stérilisés avec les rayons gamma ont montré que les pansements se dégradent sous leur action. L'ionisation béta à 25 kGy, a permis leur stérilisation
Les tests de lyophilisation ont apporté plusieurs conclusions :
- la concentration de gélatine joue sur la rigidité des pansements lyophilisés.
- une congélation instantanée des gels dans le lyophilisateur ne semble pas permettre une amélioration de la souplesse des pansements.
- le non tissé évite un craquelage trop important des gels.
Tel que démontré dans cet exemple, la concentration de gélatine est importante pour l'obtention d'un gel fonctionnel et présentant les propriétés requises.
En outre, le procédé de lyophilisation et sa mise en œuvre est également importante pour l'obtention d'un gel fonctionnel.
Exemple 4 : effet du non tissé
But de l'essai / exemple:
L'essai a pour but de tester des non tissés de la société Manck, en fonction de leur capacité d'adhérence au gel, après et avant lyophilisation, et aux caractéristiques d'absorption et de WVTR (water vapor transmission rate) que confèrent les non tissés aux pansements.
Descriptif de l'essai/ exemple :
Différents pansements ont été obtenus en lyophilisation et contenant chacun un non tissé propre.
Types de non tissé testé :
- Lyofal : la compresse est fournie par la société Lyofal et commercialisé par la société Norafin qui fera office de référence sous la référence catalogue 71 .100.001
- MA 50 J commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- WSV 100 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MA57 S commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue. - MA50 + PE commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- Tissue 5-lg + PE commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MASP 50 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MASP 50 P commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MAPPR 20 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MA30 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MA60 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MA40 W4 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- MA 71 .08 commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue.
- ZWHO "c" 12-lg commercialisé par la société Mankk sous cette référence catalogue- Quantités utilisées :
- Gélatine (Bloom 250) 3% commercialisé par la société Rousselot sous la référence catalogue 250 LB8
- Transglutaminase (TG) 15mg/mL commercialisé par la société Ajinomoto sous la référence catalogue Activa WM.
- Volume du gel : 20ml_
Les pansements ont été obtenus selon le procédé décrit dans l'exemple 1 avec différent non tissé au fond du moule. Une fois lyophilisé, les pansements ont été découpés en quatre afin d'effectuer des tests de réhydratation et d'absorption avec comme absorbât une solution d'eau distillée contenant 8,3g/L de NaCI et 0,368g/L de CaCl2.
Le test d'absorption à été réaliser comme suit :Le matériel utilisé était des boîtes de Pétri 90+/-5 mm de diamètre, un four de laboratoire, à circulation d'air forcée, pouvant maintenir une température de (37+/-1 °C), une solution A : 8,298 g de chlorure de sodium (NaCI) et 0,368 g de chlorure de calcium dihydrate (CaC , 2H2O) dans de l'eau désionisée et complétée jusqu'à constituer 1 litre de solution dans un flacon volumétrique et une balance, capable de peser 100 g à 0,0001 g près.
Protocole
Un seul échantillon de 5x5cm ou de 0,2g de pansement a été placé dans une boîte de Pétri, une quantité de solution A 40x supérieure au poids du pansement préchauffée à 37 °C a été placée et l'échantillon a été incubé 30min dans un four, à circulation d'air forcée, chauffé à 37°C. L'échantillon a été pesé sur la balance après avoir suspendu l'échantillon à l'aide d'une pince.
Chaque test suivant A été effectués sur neuf échantillons différents.
La capacité d'absorption a été exprimée comme étant la masse moyenne de solution retenue par 100 cm2. Le taux s'exprime par gramme d'échantillon.
Des tests de WVTR ont été effectués sur des pansements contenant les non tissés suivant :
- Lyofal
- MA50 J
- WSV 100
- MA57 S
- MA50 + PE
- MASP 50
- MASP 50 P
Le test de WVTR à été réaliser comme suit :
Matériels utilisés Cinq cylindres propres et secs en matériau inoxydable de 42+/-0,1 mm de diamètre intérieur équipés d'une bride à l'extrémité basse et pouvant contenir chacun 40 ml de solution d'essai. Un four ou incubateur, équipé d'un ventilateur brasseur d'air, pouvant maintenir une température de (37+/-1 ) °C et conçu pour répartir l'air uniformément dans le four ou l'incubateur de façon à maintenir une humidité relative inférieure à 20 % au cours de l'essai. Solution d'essai A comme décrit en début d'exemple, Eprouvette étalonnée, Hygromètre, pouvant détecter si la limite de 20 % d'humidité relative a été dépassée ou non, des élastiques une Balance, capable de peser 100 g à 0,0001 g près.
Protocole
Un échantillon circulaire a été découpé et apposé le sur la bride supérieure d'un cylindre, la surface de contact avec la plaie tournée vers l'intérieur. Un élastique a été également apposé afin de maintenir l'échantillon
L'échantillon, a été pesé, la valeur obtenue a été référencée comme W1 . L'échantillon et l'élastique ont été ensuite retirés du cylindre.
40 ml de solution A ont été ajoutés dans le cylindre et l'échantillon circulaire a été à nouveau apposé sur la bride supérieure du cylindre et fixé par un élastique. Le cylindre a été alors pesé une seconde fois. La valeur obtenue a été référencée comme W2.
Ce procédé a été répété quatre fois afin de préparer en tout cinq échantillons.
Les cylindres obtenus ont été ensuite déposés dans un incubateur à 37°C pendant 24 heures. Ils ont été ensuite retirés de l'incubateur et laissés à température ambiante pendant 30 minutes et pesées une troisième fois. La valeur obtenue a été référencée comme W3.
L'échantillon a été ensuite retiré du cylindre, l'excès de liquide contenu dans le cylindre a été éliminé puis l'échantillon replacé sur le cylindre.
Les cylindres obtenus ont été pesés une nouvelle fois. La valeur obtenue a été référencée comme W4.
Les étapes précitées ont été reproduites avec un temps d'incubation de 48 heures dans l'incubateur à 37 °C. La capacité de rétention des fluides par le pansement pour 24 h et 48 h a été calculée comme suit :
la masse de vapeur d'eau perdue au travers du pansement (W2 - W3) et la masse de fluide absorbée par le pansement (W4 - W1 ) pour les périodes de 24 h et de 48 h ont été calculées et sommées. La somme des deux masses représente la capacité de rétention.
Ainsi la détermination des différentes caractéristiques de WVTR sont réalisé comme suit:
- W4-W1 représente la rétention de l'eau dans le pansement si la différence est positive. Si elle est négative, la différence représente l'évaporation de l'eau présente dans le pansement.
- W2-W3 représente l'eau transmis à l'air ambiant à travers le pansement.
- Si W4-W1 est négative la WVTR se détermine par : ((W2-W3) + (W4- W1 ))/cm2 de pansement.
- Si W4-W1 est positive la WVTR se détermine par ((W2-W3) - (W4-W1 ))/cm2 de pansement.
Les résultats sont la moyenne de trois mesures.
Résultats :
Aspect des pansements après lyophilisation :
Les pansements obtenus sont représentés dans les figures 16 et 17.
Les figures 16 et 17 représentent des photographies de pansements en fonction du non tissé.
Comme montré sur les figures 16 et 17, les non tissés n'absorbent pas la gélatine de la même façon, ainsi certain ont tendance à flotter à la surface de la solution protéique ce qui pose problème dans la fabrication du pansement. Ce phénomène intervient dans avec les non tissés suivant :
- MA50 J
- MA 50 + PE
- Tissue 5-lg + PE
- MAPPR 20 A l'opposé, le pansement ZWHO "c" 12-lg possède un pouvoir trop absorbant puisque toute la gélatine s'est retrouvée au sein même du non tissé.
Ces deux critères sont éliminatoires puisqu'il est nécessaire que le pansement possède une face uniquement composé de gel, évitant le contact direct entre la plaie et le non tissé, et une face composé du non tissé adhéré imprégné de gel.
Les non tissés contenant un film de polyuréthane (PE) adhèrent à très peu de gel, laissant une bonne partie en dehors du pansement. Plusieurs pansements présentant des zones craquelées, c'est le cas pour ceux constitué de WSV 100, MA 30 et MA40 W4.
Avec ZWHO "c" 12-lg, l'échantillon se présente plus sous forme de compresse imbibée de gel que de pansement. Le non tissé MASP50 P possède la particularité d'avoir une face coloré donnant un pansement ayant une face blanche (coté gel) et une face bleu (coté compresse). Par contre, on remarque une hétérogénéité de répartition du gel sur la face bleu. Les autres non tissés permettent d'obtenir des pansements dont l'aspect est proche de la référence.
Tel que démontré dans cet exemple, les caractéristiques du non-tissé sont importantes pour l'obtention d'un pansement fonctionnel.
Caractéristiques d'absorption :
Certains pansements ont été caractérisés uniquement en fonction de leur capacité de réhydratation alors que d'autre uniquement en fonction de leur taux maximum de réhydratation. Dans les deux cas, les non tissés sont comparés ont la référence (non tissé Lyofal). Les résultats obtenus concernant les capacités d'absorption sont représentés sur la figure 18.
La figure 18 est un histogramme représentant la capacité d'absorption du pansement en fonction du non tissé incorporé dans sa matrice. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé lyofal, « 2 » avec un non tissé MA 50 J, « 3 » avec un non tissé WSV 100, « 4 » avec un non tissé MA 57 S, « 5 » avec un non tissé MA 50 + PE comprenant du polyéthylène, « 6 » avec un non tissé Tissue 5-lg + PE comprenant du polyéthylène, « 7 » avec un non tissé MASP50 et « 8 » avec un non tissé MASP50 P. Les pansements, étant constitués de non tissé formé d'un film de polyéthylène (PE) possède, une capacité d'absorption bien inférieure à la référence, pouvant résulter de la faible présence de gel au sein du pansement. Les autres non tissés permettent d'obtenir des pansements doués de capacité d'absorption proche du pansement Lyofal.
Taux de réhydratation :
Les résultats obtenus concernant le taux de réhydratation sont représentés sur la figure 19. La figure 19 est un histogramme représentant le taux de réhydratation du pansement en fonction du non tissé incorporé dans sa matrice. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé lyofal, « 2 » avec un non tissé MA 60, « 3 » avec un non tissé MA40W4, « 4 » avec un non tissé
ZWHO"c" 12-lg, « 5 » avec un non tissé MA 30, « 6 » avec un non tissé MASP 50
P, « 7 » avec un non tissé MA 71 .08.
Aucun pansement ne possède de taux de réhydratation supérieur à la référence.
Certain comme le MA60, le MA40 W4, le ZWHO se réhydratent légèrement plus faiblement que celui de Lyofal (figure 18). WVTR (water vapor transmission rate):
Les résultats obtenus concernant le WVTR (water vapor transmission rate) sont représentés dans la figure 20. La figure 20 est un histogramme représentant la WVTR (water vapor transmission rate): du pansement en fonction du non tissé incorporé dans sa matrice. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé lyofal, « 2 » avec un non tissé MA 50 J, « 3 » avec un non tissé
WSV 100, « 4 » avec un non tissé MA 57 S, « 5 » avec un non tissé MA 50 + PE comprenant du polyéthylène, « 6 » avec un non tissé MASP 50, « 7 » avec un non tissé MASP 50 P. II semble, à la lumière des résultats obtenus, que le pansement ayant une compresse doté d'un film polyéthylène laisse passer beaucoup plus de vapeur d'eau que les autres pansements (figure 19, colonne 5). Mais il faut prendre en compte que ce pansement contient moins de gel, qui est considéré comme le facteur limitant le plus la transmission d'eau sous forme de vapeur. Le MA50 J possède une WVTR supérieur à la référence (figure 20), mais au vu de l'écart type, cette caractéristique ne peut être prise en compte.
Conclusions de l'essai / exemple :
Les non tissés possédant un film PE semble moins performant puisqu'ils n'adhèrent pas suffisamment de gel.
Le non tissé Lyofal possède les meilleures caractéristiques d'absorption, que cela soit en capacité ou en taux de réhydratation.
Bien que moins absorbant, le MASP50 P possède une face coloré encore visible après la lyophilisation et la réhydratation du pansement. Il serait intéressant d'envisager l'utilisation d'une compresse Lyofal marquée d'un coté, ce qui permettrait l'obtention d'une face d'application sur le pansement MAIA.
Tel que démontré dans cet exemple, les caractéristiques du non-tissé sont importantes pour l'obtention d'un pansement fonctionnel. En effet, en fonction du non tissé, les propriétés du pansement et donc du biomatériau sont modifiés- Exemple 5 : Etude complémentaire sur l'effet du non tissé :
1 - But de l'essai :
L'étude a porté sur la caractérisation du pansement de l'invention (MW1 ) contenant différents types de compresses non-tissés. L'objectif a été de définir les spécifications de la matière première adaptées.
Les tests réalisés sont les suivants :
- Test de lyophilisation
- Test d'absorption
- Test rhéologique
- Test microbiologique
2- Descriptif de l'essai : Dans cet exemple, les produits et procédé mis en œuvre sont indiqués ci- dessous.
Les Références des non-tissés (NT) testés sont : MA 60, MA 71 .080, ZWHO
"C" 12-LG, Baumwell-molten, MA 936-80, MA 50 J MA 71 10
L'ensemble des non tissé (compresses) proviennent de la société Mankk La composition du pansement, du biomatériau est : gélatine 3%, sorbitol
4,5%, transglutaminase 4g/L, collagénase 2,5x10~5g/L (sauf MA 60 et MA 71 .080 où il n'y a pas de collagènase.
La préparation du pansement a été réalisée selon le procédé décrit dans l'exemple 1
Le cycle de lyophilisation était le suivant :
Pré-Congélation à -77°C pendant 3 heures
Chauffage jusqu'à -55°C à une vitesse de 0,17°C/min et maintient pendant 12 minutes
Chauffage jusqu'à 10°C à une vitesse de 0,05°C/min et maintient pendant 15 heures
L'absorption a été testée selon le procédé décrit dans l'exemple 4
- Test rhéologique :
Les pansements ont été découpés de façon circulaire avec un diamètre de 40 cm. Ils ont ensuite été placés dans des tubes "Falcon" et mis en solution dans 30mL d'eau NaCI/CaC pendant 2 heures à 35°C. Après la réhydratation, la viscoélasticité des pansements a été déterminée en rhéologie par le biais d'un balayage de fréquence.
Conditions rhéologiques :
- Force normale d'application : 0,2N
- Déformation : 5%
- Fréquence : de 100 à 0,1 Hz
- Température : 35°C
- Test microbiologique Des boîtes de Pétri contenant de l'Agar/TS ont été préparées selon le mode opératoire suivant :
- 1 ,5g (+/- 0,01g) de Agar-Agar et 3g (+/- 0,01 g) de poudre TS ont été introduites dans un Erlenmeyer de 250ml_.
- 100ml_ d'eau osmosée ont été ajoutées et bouchonné de façon adéquate pour l'autoclavage.
- Le mélange obtenu a été placé à 121 ± 1 °C dans un autoclave pendant 20 min.
- Les Erlenmeyers de l'autoclave ont été retirés.
- 30 mL de milieu TS-Agar ont été coulés dans chaque des boîtes de Pétri et
Laissées 2 heures au maximum à température ambiante pour la prise en masse sans recouvrir les boîtes de Pétri.
- Le couvercle a été replacé sur les boîtes. Elles peuvent être stockés 24h à température ambiante et 4 jours à 4°C.
Trois non-tissés ont été découpés à la surface du MA 60 : 38,5 cm2, le MA 71 .070 : 35 cm2 et MA 71 10 : 37,12cm2
Les géloses ont ensuite été mises en contact avec les deux phases des non- tissés et laissées à incuber 72 heures à 37°C. Le nombre de colonie a été déterminé à partir de ce temps.
3- Résultats :
Après la lyophilisation, l'aspect des pansements ainsi que leur poids ont été déterminés. Le tableau 4 ci-dessous présente le poids des pansements en fonction du non-tissé.
La différence de poids peut s'expliquer par la variation de masse des compresses. Selon leur aspect, il est apparu que tous les pansements étaient bien lyophilisés. De plus :
- Le MA 60 est : souple, homogène et blanc.
- MA 71 .080 est : souple, homogène et blanc.
- ZWHO "C" 12-LG est : rigide, présente les motifs du NT et des bulles en dessous du pansement.
- Baumwell-nnolten est : rigide, présente les motifs du NT et des bulles en dessous du pansement.
- MA 936-80 est : souple, homogène et blanc.
- MA 50 J est : souple, homogène, blanc et la phase NT est bien marquée.
- MA 71 10 est : souple, homogène et blanc.
Test d'absorption :
Les résultats sont représentés dans les figures 21 et 22 .La figure 21 est un schéma représentant la cinétique de réhydratation des pansements en fonction des différents non tissés testés. La figure 22 est un schéma représentant la capacité d'absorption des pansements en fonction des différents non tissés testés. Sur la figure « 1 » correspond aux résultats obtenus avec un non tissé ZWHO "C", « 2 » avec un non tissé Baumwell, « 3 » avec un non tissé MA936, « 4 » avec un non tissé MA 50 J, « 5 » avec un non tissé MA 71 10, « 6 » avec un non tissé MA 71 .080 et « 7 » avec un non tissé MA60.
Seuls le ZWHO "C" 12-LG et Baumwell-nnolten présentent une saturation d'absorption en moins de 4 heures (spécification MW1 > à 4h).
Les capacités d'absorption pour les non tissés sont inférieures à la référence
MA71 10, sauf pour le MA60 et le MA71 .080, mais restent dans les spécifications requises (du MW1 ) (15g eau/100 cm2).
Il est à remarquer que l'aspect du pansement comprenant le non-tissé ZWHO "C" 12-LG et Baumwell-molten après réhydratation présentait de la mousse au contact de l'absorbât ; et le pansement comprenant le non-tissé MA 50 J : le non-tissé s'est décroché du gel indiquant qu'il ne s'est pas imprégné dans le gel lors de la fabrication du pansement.
Test de rhéologie :
Les résultats sont représentés dans la figure 23. La figure 23 est un schéma représentant le G' du pansement (propriété élastiques) en fonction du non tissé. Le ZWHO "C" 12-LG et Baumwell-molten ne présentent pas d'état gélifié (G'<G"). Les autres non-tissés ont un pansement avec une structure de gel. Les valeurs de G' de ces gels répondent aux exigences du MW1 (G'>100Pa sans la stérilisation).
Test de microbiologie :
Les résultats sont représentés dans le tableau 4 ci-dessous :
Tel que démontré dans cet exemple, la biocharge, c'est-à-dire le nombre d'unité formant colonie (CFU) par pansement obtenue est inférieur à 100 CFU/pansement, et est donc compatible avec une stérilisation sous ionisation Béta.
Tel que démontré, l'ajout de compresse ne rajoute pas de charge bactérienne exogène rédhibitoire à la fabrication du pansement. 4- Conclusions de l'essai/exemple:
Le ZWHO "C" 12-LG et Baumwell-molten ne sont pas des bons candidats pour le non tissé du pansement MW1 pour la raison rédhibitoire que les pansements formés avec ces NT ne présentent pas d'état gélifié.
Le MA 50 J est exclu puisqu'il ne s'imbibe pas de gel lors de la fabrication du pansement. Les autres NT respectent les spécifications du MW1 . Le choix du non tissé dépendra aussi des exigences déjà établies comme la composition 100% viscose ou l'enzymage.
Dans ce cas le MA60 et le MA71 .080 sont préférés pour leur utilisation dans la fabrication du pansement.
Ainsi, tel que démontré dans cet exemple, le pansement de l'invention pour avoir une fonctionnalité optimum et une adaptation aux plaies des patients, des caractéristiques particulières, comme une charge bactérienne inférieure à 200 CFU/70 cm2, le non tissé doit imbiber la solution de biomatériau (d'Engel) sans gêner la gélification ni sa conformabilité, la taille des mailles peut être comprise de préférence entre 50 et 500μηη.
Exemple 6 : test des pansements de l'invention
1/ Protocoles et conditions
Dans cet exemple des tests de validation des pansements stérilisés de trois lots, identifiés Lot 1 1 MW101 , Lot 1 1 MW102 et Lot 1 1 MW103, ont été effectués. Il s'agit de pansement produit selon le procédé de l'invention décrit dans l'exemplel et comprenant un non-tissé commercialisé par la société Norafin sous la référence 71 .100.001 , 100% viscose.
Contrôles qualités effectués :
- Aspect des pansements
- Test d'absorption, comme décris dans l'exemple 4.
- Test de viscoélasticité, comme décris dans l'exemple 4.
- Test d'affinité.
- Test de resolubilisation.
Protocole :
- Aspect : pesées, photos éventuelles, évaluation de la souplesse et du cassant.
- Spécification : pas de zones de fusion, non lyophilisée et pas de plis, souple
(pas de cassure lorsque l'on rapproche les deux bords du pansement), stérile selon test de la pharmacopée, dose d'irradiation appliquée : comprise entre 30 et 25kGy, masse > 2,7g
-Test d'absorption :
Nombre d'échantillons testés : 20
Protocole :
- Découpe de 90 échantillons circulaires d'un diamètre de 12,56 cm2 avec un emporte pièce afin d'obtenir des échantillons
- Pesée des échantillons Pi
- Dépôt des échantillons de pansements dans des boîtes de Pétri
- Ajout dans chaque boîte de Pétri d'une solution A (NaCI 9% (m/v) - CaC 0,0368% (m/v) à une quantité d'au moins 40 x le poids de l'échantillon
- Incubation à 35°C
- Pesée des pansements après 0,5, 1 , 2, 4 et 6 heures d'incubation.
Spécification :
- . Capacité > 30g eau/100cm2
- . Temps de saturation > 4 heures (Valeur basse de la moyenne définit selon son écart type) - Test de viscoélasticité :
Nombre d'échantillons : 20
Protocole :
- Analyse de la viscoélasticité des pansements hydratés à 6 heures par le biais d'un balayage de fréquences.
- Conditions rhéologiques :
o . mode oscillatoire
o . gamma = 0,05
o . Fréquence = de 0,1 à 100Hz
o . Température = 35°C
Spécification : - . G' (0,1 Hz) > 100 Pa
- (Valeur basse de la moyenne définit selon son écart type)
- . Rapport G7G" > 10
- (Valeur basse de la moyenne définit selon son écart type)
- . Pente du G' compris entre -1 et 1
- (Valeur haute et basse de la moyenne définit selon son écart type)
- Concernant la pente du G', les résultats négatifs ne sont pas prise en compte dans le calcul des
- moyennes.
- Test d'Affinité :
Nombre d'échantillons : 20
Matériels utilisés :
Dix seringues graduées, d'une capacité nominale de 50 ml ou 60 ml et de 30+/-2 mm de diamètre intérieur, dont les canules ont été coupées et équipées de pistons de marque Terumo, modèle seringue 50 ml sans aiguille.
Solution d'essai A : 8,298 g de chlorure de sodium (NaCI) et 0,368 g de chlorure de calcium dihydrate (CaC , 2H2O) dans de l'eau déionisée et complétée jusqu'à constituer 1 litre de solution dans un flacon volumétrique.
Poudre de gélatine Porcine (Roussselot PS), (175 bloom).
Poudre d'agar-agar, (agar-agar bactériologique de type 1 ).
Autoclave de laboratoire de marque Melag modèle melatronic 23, adaptée à la stérilisation de liquides dans des récipients fermés.
- Parafilm.
Incubateur de laboratoire de marque Binder modèle BF 1 15, capable de maintenir une température de (25+/-2) °C.
Incubateur de laboratoire, capable de maintenir une température de (60 +/- 2) °C. Possibilité d'utiliser des bains maries.
- Balance, capable de peser 100 g à 0,0001 g près. Protocole
Une quantité de 2,00+/-0,01 g de poudre d'agar-agar a été pesée et mise dans un récipient approprié. Une quantité suffisante de solution d'essai A a été ajoutée afin d'obtenir une masse totale de réactif de 100,00 +/- 0,02 g. Le récipient a été fermé de manière étanche et placé à dans un autoclave pendant 20 min.
Le récipient a été retiré et le laisser refroidir jusqu'à 60+/-5°C avant utilisation. Une quantité suffisante de poudre de gélatine a été ajouté à 65,00 +/- 0,02 g de solution d'essai A dans un récipient à col large approprié pour obtenir une masse totale de réactif de Le récipient a été fermé de manière étanche, l'agité jusqu'à ce que la poudre de gélatine soit dispersée, puis maintenu à une température de 60°C pendant au moins 12 h mais sans dépasser 18 h. À l'issue de cette période, une vérification que la gélatine forme une solution limpide et homogène a été effectuée.
Le piston de la seringue a été remonté jusqu'à la graduation 30mL et 10g de gélatine ou de d'agar-agar ont été ajoutés dans la seringue et boucher avec du Parafilm pour éviter l'évaporation (effectuer 5x) pour chaque type de substrat.
Les seringues ont été mises verticalement dans une étuve (ou conditions ambiantes) à 25°C pendant 3h avec les bouchons de Parafilm pour éviter l'évaporation former pendant l'épaississement.
Chaque seringue a été pesée (valeur W1 ) avec le parafilm.
10 g de pansement, ont été ajoutés de façon uniforme à la surface de la gélatine. Les seringues ont été ensuite pesées (valeurs W2).
Les seringues ont été rebouchées avec le même Parafilm et placées dans un incubateur à 25°C (ou dans les conditions ambiantes), pendant 48h.
Les seringues ont été pesées (valeur W3). Le piston a été enfoncé pour retirer le pansement et les seringues ont été pesées (valeur W4).
La capacité du pansement à capter du fluide a été mesurée selon la formule suivante, W5 :
W5 = { ([W3-W4] - [W2-W1 ]) / (W2-W1 ) } x 100 Spécification : Pourvoir hydratant > 21 % (Valeur basse de la moyenne définit selon son écart type)
- Test de resolubilisation :
Nombre d'échantillons : 1
Protocole :
- Découpe d'un échantillon circulaire d'un diamètre de 12,56 cm
- Ajout dans chaque boîte de Pétri de la solution A (NaCI 9% - CaCI2 0,0368%) à une quantité d'au moins 40 x le poids de l'échantillon
- Incubation à 35°C pendant 1 h30
- Dépôt de l'échantillon sur le rhéomètre commercialisé par la société Anton- Paar référencé sous le nom MCR 301
- Conditions rhéologiques :
o mode oscillatoire
o g = 0,05
o Fréquence = 1 Hz
o Température = 35°C
Spécification : G' compris entre 1 et 7 Pa à 72h +/- 10% II- Résultats :
11. 1 Aspect des pansements :
Les résultats obtenus sont représentés dans les tableaux 6 à 8 ci-dessous. - Lot 1 1 MW101 :
- Lot 11MW102 :
Lot 11MW103 :
Le pansement présente donc les caractéristiques requises à savoir une bonne souplesse tout comprenant un biomatériau lyophilisé capable de s'hydrater pour obtenir un gel et faire des transitions solution/gel/solution.
11.2 Test d'absorption
Les résultats obtenus sont représentés dans les tableaux 9 à 11 ci- - Lot 11MW101 :
- Lot 11MW102 :
Tableau 10 : résultats d'absorptii
- Lot 1 1 MW103 :
Le pansement présente donc les caractéristiques requises à savoir une capacité d'absorption de liquide avec un temps de saturation adapté à des plaies. Le pansement de l'invention permet donc une absorption des exsudais d'une plaie.
11. 3 Tests de viscoélasticité
Les résultats obtenus sont représentés dans le tableau 12 ci-dessous
- Lot 1 1 MW103 :
Le pansement présente donc les caractéristiques requises à savoir une viscoélasticité permettant sont adaptation à tout type de plaies et sur tout type de surface, qu'elle soit cornée, constitué d'épiderme ou non, en phase d'épithéliation ou non.
Aucun des pansements testés et mis en solution ne se sont montrés dispersifs. A cette valeur le pansement hors spécification garde son intégrité.
Tel que démontré dans cet exemple, le pansement de l'invention permet de conserver sa structure, c'est-à-dire le biomatériau ne se dissocie pas du non tissé et permet d'avoir des propriétés de souplesse, d'absorption de liquides et de souplesse adapté avec les plaies de mammifères.
11. 4 Test d'hydratation :
Les résultats obtenus sont représentés dans les tableaux 13 à 15 ci-dessous.
- Lot 1 1 MW101 :
- Lot 1 1 MW102 :
- Lot 1 1 MW103 :
Tel que démontré dans cet exemple, le pansement de l'invention permet en outre d'hydrater la plaie et ainsi de favoriser la cicatrisation la cicatrisation humide tout en gérant/absorbant les exsudais émis par la plaie.
II. 4 Test de resolubilisation :
Les résultats obtenus sont représentés dans les tableaux 16 à 18 ci-dessous - Lot 1 1 MW101 :
Lot 1 1 MW102 :
Tableau 17 : résultats de resolubilisation
- Lot 1 1 MW103 :
Tel que démontré dans cet exemple, le pansement de l'invention permet de faire des transitions gel/solution/gel favorisant la cicatrisation de plaies. Ces transitions permettent avantageusement d'absorber des exsudais de plaies.
IV- Conclusions :
Le procédé de fabrication ainsi que le pansement obtenu tel qu'il a été décrit est donc validé et permet d'obtenir de façon surprenante des caractéristiques physiques et des propriétés avantageuses pour la cicatrisation des plaies, car il permet à la fois d'absorber les exsudais tout en assurant la cicatrisation humide. Sa cinétique de resolubilisation préservée lui confère, notamment, des propriétés de non adhérence acquises dans le temps et contrôlées à la fabrication, faisant de ce pansement, le premier pansement dynamique jamais créé.
Cet exemple montre bien que les pansements possèdent des propriétés avantageuses d'élasticité, absorption, resolubilisation et hydratation. Ces propriétés avantageuses sont notamment nécessaires à la relance de la cicatrisation, tout en préservant la plaie et ses berges lors du retrait dudit pansement.
Exemple 7 : composition d'un pansement selon l'invention et caractéristiques physicochimiques correspondantes.
Un exemple de pansement selon l'invention est décrit ci-dessous.
Les composants et solutions utilisés étaient ceux décrit dans l'exemple 1
Le pansement a été fabriqué selon le procédé décrit dans l'exemple 1 à partir des éléments suivants : de la gélatine à 3% (30mg/mL), du sorbitol à 4,5% (45mg/mL), de la transglutaminase à 4mg/mL, de la collagénase à 2,2x10"5mg/mL et un non tissé 100% viscose commercialisé par la société Norafin sous la référence commerciale 71 .100.001 , 100% viscose.
Les caractéristiques du pansement testées étaient les suivantes :
Absorption> 30 g/cm2
- Pouvoir hydratant > 21 %
- G'> 10 Pa (après 3h de réhydratation à 0,1 Hz)
- G' > 10 G" (après 3h de réhydratation à 0,1 Hz) ,et
- variation G'=fn(Fq) comprise entre -1 et 1
- un temps de saturation > 4h
- temps de resolubilisation égale à 72 h+/- 10% pansements stériles.
Les procédés utilisés afin de mesurer ces caractéristiques correspondent aux procédés décrits dans les exemples 4 et 6
Le tableau 19 ci-dessous décrit l'évolution du pansement en fonction du temps et ces propriétés lors des transitions solution/gel du biomatériau.
Cet exemple montre bien que les pansements obtenus par le procédé de l'invention présentent des propriétés avantageuses d'élasticité, absorption, resolubilisation et hydratation. En outre, les pansements obtenus sont stériles, homogènes.
En outre le pansement de l'invention conserve de sa structure quelque soit les conditions et ainsi permet une application et un retrait de la plaie sans perte de biomatériau, sans déchirure. Le pansement obtenu par le procédé de l'invention permet avantageusement son retrait sans laisser de biomatériau sur la plaie cicatrisée, sans adhésion du non tissé à la plaie améliorant ainsi le confort des patients. En outre ces caractéristiques évitent une étape de nettoyage de la plaie et/ou de réhydratation de la plaie qui pourrait altérer la cicatrisation/fragiliser la cicatrice. Exemple 8 : Tests in-vitro et in-vivo du pansement selon l'invention.
Pour toutes les expériences menées dans cette exemple le pansement de l'invention utilisé, étaient constitué des composants et solutions décrit dans l'exemple 1 et dont les caractéristiques sont décrites dans l'exemple 7. Ainsi, le pansement de l'invention a été fabriqué selon le procédé décrit dans l'exemple 1 à partir des éléments suivants : de la gélatine, commercialisée par la société Rousselot, à 3% (30mg/mL), du sorbitol, commercialisé par la société IMCD, à 4,5% (45mg/mL), de la transglutaminase à 4mg/mL, commercialisée par la société Ajinomoto, de la collagénase à 2,2x10"5mg/mL, commercialisée par la société Coger et un non tissé 100% viscose commercialisé par la société Norafin sous la référence commerciale 71 .100.001 , 100% viscose.
Il a été ensuite lyophilisé selon le protocole décrit dans l'exemple 1 .
Des échantillons de pansements selon l'invention ont été lyophilisés et réhydratés, puis ont été analysés à l'aide d'un microscope Philips XL 30 ESEM- FEG (Eindhoven, Pays-Bas) à une tension d'accélération de 15 keV à une pression de 5 Torr.
Les échantillons réhydratés ont été obtenus après incubation du pansement dans du tampon Tris 50 mM HCI (pH 7,4) pendant 4 minutes ou 20 minutes et durant la nuit, c'est-à-dire pendant plus de 12 heures pour un maximum de réhydratation.
La figure 24 représente les photographies en microscopie électronique des pansements obtenus après les différents temps de réhydratation. Comme montré sur la figure 24 : le pansement sec (figure 24 A) est composé de macropores qui disparaissent dès 4 minutes d'hydratation (figure 24 B) dans la solution saline précitées. Puis avec le temps, le gel se reconstitue jusqu'à former, après 20 minutes (figures C et D), une matrice cohésive sans aucun pore.
La figure 25 représente un diagramme de l'évolution de l'élasticité et du stockage du pansement en fonction du temps. Pour ce faire, le pansement de l'invention a été hydraté pendant 1 h30 dans une solution contenant 142 mMol.L"1 de NaCI à température ambiante, c'est-à-dire 25°C, a été observé en rhéologie avec un rhéomètre MCR 301 commercialisé par la société Anton Paar. Pour éviter la modification des propriétés mécaniques du pansement, une force normale de 0,2 N (Newton) a été appliquée sur l'échantillon hydraté. Le module de conservation G' et module de perte G" ont été observé en mode d'oscillation et enregistré en fonction du temps à température constante (35°C). Comme démontré sur la figure 25 le pansement de l'invention sous forme de gel possède les propriétés de transition gel-solution inhérente à la technologie Enzgel.
Le fait de garder ces capacités de transition de phase apporte des propriétés avantageuses pour un pansement. En effet, chaque gel possède une élasticité propre. Les propriétés collantes de ces gels sont corrélées directement à leur élasticité. Le changement d'élasticité du pansement de l'invention au court du temps, permet avantageusement un changement du pouvoir collant au cours du temps tel que démontré avec l'expérience suivante décrite sur la figure 26.
La capacité d'adhésion/force collante du pansement a été étudiée. Le but de cette expérience était de mesurer la force nécessaire pour décoller un pansement selon l'invention.
Le pansement selon l'invention a été hydraté pendant 1 h30 dans une solution contenant 142 mMol.L"1 de NaCI à température ambiante, c'est-à-dire à 25°c Les échantillons ont été déposés sur le même rhéomètre que précédemment et une force normale de 0,2 N à été appliquée par un plateau. Après 5 min à 35°C, une pression de 10 N a été appliquée et le plateau a été levé à une vitesse de 1 mm. s"1. La force normale nécessaire à l'arrachage du pansement au rhéomètre à été suivie et mis en rapport à l'écart entre le plateau et le rhéomètre. L'ensemble de la force normale nécessaire à été intégré (iNF) en utilisant le logiciel ORIGINE 7 (marque déposée) commercialisé par la société OriginLab Corporation.
La figure 26 représente les résultats obtenus de l'intégration en fonction du pansement. L'intégration représentée par le bâton 1 figure 26, correspond à un pansement qui, une fois gonflé, possède un G' de 35 Pa. Cette valeur correspond à l'élasticité du pansement au moment de sa pose sur la plaie. L'intégration représentée par la par le bâton 3 figure 26 correspond à un pansement qui, une fois gonflé, possède un G' de 3 Pa, ce qui correspond à un pansement après 48h de contact avec une plaie modèle. Tel que démontre sur la figure 26, il a été observé qu'il faut 3 fois moins de force pour décoller un pansement selon l'invention après 48h de pose (de -3 s.N"1 à -1 s.N"1). Ainsi, le pansement selon l'invention possède donc avantageusement, l'adhésivité nécessaire à une pose facile. En outre, le pansement perd avantageusement, son pouvoir d'adhésion au cours de l'interaction avec la plaie et du temps, ce qui facilite son retrait et permet de garder les cellules nouvellement formées dans la plaie intactes.
Outre les propriétés d'adhérences liées à la transition gel-sol, le gel lyophilisé, mis sous forme de pansement grâce à son association avec le non tissé, a acquis avantageusement de nouvelles propriétés inattendues.
La capacité d'absorption a, par exemple, été étudié selon le protocole de l'exemple 4, et représente sur la figure 27. Ainsi, tel que démontré sur cette figure, le pansement de l'invention est avantageusement capable d'absorber de grande quantité de liquide jusqu'à 47g d'eau/100cm2 en 6 heures.
En outre, les inventeurs ont démontré par microscopie électronique à balayage, que les pores formés par la lyophilisation disparaissent au cours de l'hydratation du pansement. Les pores se remplissent de liquide ; le gel lyophilisé absorbe ce liquide et retrouve son intégrité. Ce qui veut dire que, dans un premier temps, les pores créés par la lyophilisation se remplissent d'eau et le gel se reforme, c'est l'étape de réhydratation du lyophilisât, dans un second temps la cinétique devient plus lente, c'est l'étape de gonflement du gel.
Une fois gonflé, le gel atteint un équilibre d'échange aqueux. Ainsi, si la plaie secrète encore des exsudais, le pansement de l'invention continue avantageusement de les absorber, mais si la sécrétion s'arrête le pansement de l'invention n'asséchera pas la plaie et pourra même la garder humide, permettant ainsi avantageusement de favoriser la cicatrisation.
Afin de montrer que le pansement selon l'invention a des propriétés avantageuses sur la cicatrisation des plaies, des plaies rachidienne dermo épidermique de 5x5 cm de longueur sur 0,5 cm de profondeur ont été réalisées sur des Porc (Sus scrofa ) de type Seghers Hybrid .
La performance et la tolérance locale ont été évaluées grâce à des observations macroscopiques montrées en figure 28 et par une analyse histologique réalisée au cours des 30 jours qui suivent la création plaie. A chaque changement de pansement, chaque blessure a été nettoyée avec une solution saline NaCI 142 mMol.L"1, préalablement chauffée à 37°C, puis un examen macroscopique des pansements et des plaies a été réalisé. La capacité de rétention des exsudais par un pansement selon l'invention ainsi que la production d'exsudats par la plaie ont été évalué de 0 à 4 (absent, léger, modéré, marqué, sévère).
À la fin de l'étude (jour 39), le porc a été pesé et une prémédication par une injection intra-musculaire d'atropine (Atropinum sulfuricum, Aguettant, en France, 0,05 mg.kg"1) à été réalisée. L'anesthésie a été induite par une injection intramusculaire de tiletamine-zolazepam (Zoletil 100, Virbac, France) et les animaux ont été sacrifiés par une injection létale de barbituriques (Dolethal ND, Vétoquinol, France).
Une analyse histologique a été réalisée en échantillonnant les blessures (environ 3,5 x 3,5 cm). Les échantillons ont étés fixés dans une solution de 10% de formaline tamponnée. Après fixation, les échantillons ont été déshydratés dans des solutions d'alcool de concentrations croissantes, nettoyés dans le xylène et inclus dans de la paraffine. Les échantillons fixés ont été coupés en tranche de 4 à 7 μιτι en utilisant un microtome (MICROM (marque déposée), France). Deux sections centrales par bloc ont été préparés, l'une colorées avec du trichrome de Masson et l'autre avec une solution d'hématoxyline-éosine-Safran. Les photos de micrographies ont été prises dans les zones d'intérêt à des fins d'illustration seulement.
La production d'exsudat de la plaie ainsi que leur rétention par le pansement de l'invention ont été évalués selon le protocole cité précédemment dans l'exemple et exposé figure 29.
La figure 29 représente l'absorption de l'exsudat par un pansement selon l'invention en fonction du temps et des sécrétions de la plaie.
Tel que démontré sur la figure 29 que le pansement s'adapte avantageusement à la quantité d'exsudat de la plaie. Lorsque la plaie exsude beaucoup, le pansement retient les exsudais, mais lorsqu'il y a peu d'exsudat, il en retient peu et permet ainsi de garder la plaie humide. Une étude histologique a été réalisée selon le protocole décrit ci-dessus, afin de qualifier la qualité de la cicatrisation des plaies traitées par le pansement de l'invention (figure 30), les échantillons ont été observés à faible magnitude (encart A) ou à moyenne magnitude (encart B).
La figure 30 représente des photographies de coupe histologiques obtenues et observées à faible grossissement (figure 30 A), ou à moyen grossissement (figure 30 B).
La performances globale s'est révélée très bonne, en raison d'un tissu de granulation épais et bien vascularisé, dominé par les fibroblastes matures, avec une quantité légère à modérée de cellules inflammatoires (lymphocytes et macrophages) ainsi qu'un dépôt marqué de collagène.
En outre, l'épithélialisation complète constituée d'un épithélium de surface bien différencié a été obtenue. L'adhésion de l'épiderme pour le derme a été trouvée bonne dans tous les sites.
Tel que démontré dans cet exemple, le pansement selon l'invention est occlusif et permet en fonction de l'état de la plaie, d'absorber ou de donner de l'eau à la plaie afin de remplir avantageusement tous les critères de la cicatrisation humide décrit par Winter (Winter GD. Formation of the scab and the rate of epithelialisation of superficial wounds in the skin of the young domestic pig. Nature 1962; 193,293- 294 [1 ]).
La chronicité d'une plaie est induite par une surexpression de facteurs inflammatoires. Le pansement selon absorbe ces facteurs suivant deux cinétiques distinctes. Comme dé montré, la première correspond à une absorption simple alors que la seconde correspond au gonflement d'un gel. La diffusion d'une molécule est plus lente au sein d'un gel que d'un réseau poreux : Les molécules absorbées dans la première phase sont alors retenu lorsque le pansement est gélifié. Ainsi le pansement permet d'absorber la surproduction de facteurs inflammatoires sans les redonner à la plaie.
La gélatine, composant majoritaire du pansement selon l'invention, est connue pour être un bon substrat pour les enzymes de dégradation matricielle comme les MMP. Il semble donc que le pansement lors de l'absorption des exsudais, immobilisent avantageusement ces facteurs inflammatoires en son sein et inhibe leur action sur la plaie par un excès de substrat réactionnel.
Le pansement selon l'invention crée ainsi avantageusement un environnement favorable à la cicatrisation en inhibant seulement l'excès de facteurs inflammatoire.
En conclusion, il est clairement démontré dans cet exemple que le pansement de l'invention est un pansement biocompatible, possédant des propriétés de transition sol-gel puis gel-sol, ainsi que sa formulation sous forme lyophilisée associée à un non tissé, permettent de manière nouvelle et avantageuse de faciliter la cicatrisation des plaies chroniques tout en gardant une fonctionnalité et une capacité d'utilisation adaptée à l'ensemble des différents types de plaies.
Exemple 9 : Pansement selon l'invention libérant une molécule (actif) et modulation de la cinétique de libération.
Dans cet exemple un pansement selon l'invention contient comme support un non tissé (NT) 100% viscose fabriqué par la société Norafin.
Dans cet exemple, une première enzyme : la collagénase provenant de la société Coger commercialisée sous la référence NB6, est utilisée pour dégrader un premier réseau de polymère protéique: la gélatine, fabriquée par la société Rouselot et commercialisée sous la référence LB8 ont été utilisés.
Une seconde enzyme : la Transglutaminase (TG) provenant de la société Ajinomoto commercialisée sous la référence Activa WM, a été intégrée dans tous les cas pour former le réseau de premier polymère (réseau de gélatine).
Une troisième enzyme : l'alginate lyase, fournit par la société Sigma sous la référence Alginate lyase de Flavobacterium sp (A1603), a été utilisée pour dégrader un second polymère de type saccharidique: l'alginate fournit par le société Sigma sous la référence Alginate low viscosity (A2158). Ce second polymère a intégré au premier réseau sous deux formes: réticulé ou pas, par du chlorure de calcium, fournit par la société prolabo sous la référence Calcium Chloride, normapur quality. Dans cet exemple, les différents réseaux testés ont été formulés sous forme de pansement avec du sorbitol de la société IMCD, commercialisé sous la référence sorbitol apyrogène PF, comme composé cryoprotecteur.
Mais aussi un tampon comprenant de l'eau distillé, du TRIS 50 mM (T50) et de l'acide chloridrique en quantité suffisante pour obtenir un pH de 7,75.
Dans cet exemple un principe actif a été ajouté au pansement dans le but d'être libéré dans le milieu extérieur au pansement de manière contrôlé. Dans cet exemple le principe actif est le bleu de méthylène, fournit pour la société Fisher sous la référence bleu de méthylène numéro (126751000).
Dans cet exemple un alginate a été utilisé pour moduler la libération du bleu de méthylène. L'alginate peut être ajouté en poudre au reste du mélange, il est alors dit « en solution », ou polymérisé par du chlorure de calcium avant son ajout au reste du mélange, il est alors dit « en bille ». Dans ce cas le principe actif à libérer a été ajouté à l'alginate avant sa polymérisation en bille, de sorte que le principe actif soit enfermé dans la bille. Le principe actif de part sa couleur bleu caractéristique peut être appelé colorant ou BM dans les figures ou le texte.
Les procédés de fabrication des différents pansements sont décrits ci-dessous : a) Fabrication des billes d'Alginate :
Préparer une solution d'Alginate à 2 % dans du TRIS contenant du bleu de méthylène à 0,06 g/L
Préparer une solution de Chlorure de Calcium à 0,1 M (0,44 g dans 40 mL d'un mélange TRIS + bleu à 0,06 g/L)
Utiliser une pompe péristaltique pour la formation des billes d'Alginate en incorporant une extrémité d'un tuyau de diamètre 2 mm dans la solution d'Alginate et placer un cône de micropipette de 10 μί à l'autre extrémité du tuyau.
Faire en sorte que l'extrémité du cône ne plonge pas dans la solution de chlorure de calcium : à savoir à 2,5 cm de hauteur par rapport à la surface de liquide de la solution de CaC .
Le débit de la pompe a été réglé à 395 mL/min. Allumer la pompe et laisser tomber les premières billes formées.
Une fois que les billes ont été formées les laisser dans la solution de CaC précitée toute la nuit, à 4 °C. b) Fabrication des pansements :
5 pansements ont été fabriqués, le volume de gel utilisé était de 50 ml_ pour chaque pansement. Les concentrations des différents composants utilisées étaient les suivantes en pourcent en poids / volume: Gélatine (G) 3 %, Sorbitol (S) 4,5%, Alginate 2%, Transglutaminase (TG) 10 g/L, Collagénase (CG) 2,2x10-5 g/L, Alginate Lyase 7,5x10"3 U/mL et Non tissé (NT)
Dans cet exemple le biomatériau peut donc comprendre un premier polymère : la gélatine, un second polymère : l'alginate qui peut être en solution ou réticulé dans la phase aqueuse du premier polymère, une enzyme de dégradation du premier polymère : la collagénase, une enzyme capable d'induire les liaisons entre le premier polymère : la transglutaminase, et une enzyme capable de dégrader le second polymère : l'alginate lyase.
Le tableau 20 ci-dessous résume les compositions des 5 pansements produits et le procédé de fabrication :
Procédé de suivi du relargage
Le suivi du relargage du Bleu de Méthylène à partir du pansement a été effectué. Pour ce faire, 1 ,5 L de solution (A) a été préparée comme suit : ajouter 8,298 g de chlorure de sodium (NaCI) et 0,368 g de chlorure de calcium dihydrate (CaCl2, 2H2O) dans de l'eau désionisée et compléter jusqu'à constituer 1 litre de solution dans un flacon volumétrique. Chacun des 5 pansements entier ont été pris et ajouter indépendamment à des boites de pétri en verre comprenant 226 mL de solution(A) préchauffée à 37°C. Préalablement 1 mL de la solution contenue a été ensuite prélevée à différent temps dans la cuve de chaque boite de Pétri. La densité optique (DO) à 495 nm (blanc) dudit prélèvement a été ensuite mesurée. Après mesure de la DO, le 1 mL prélevé a été remis dans les boites de pétri. Les pansements ont été placés en entier dans les boites de pétri et couvert par du parafilm pour empêcher l'évaporation. 1 ml_ de solution contenue dans la cuve de chaque boite de Pétri a été prélevé et la DO mesurée aux temps suivants : 30min, 1 heure, 3h, 6h, 8h, 21 h, 24h, 27h, 30h, 32h, 45h, 48h. Chaque prélèvement a été remis les boites et afin de garder le même volume de solution dans chaque cuve entre chaque point/mesure. Par ailleurs, entre chaque point/mesure les boites de pétri ont été remise dans une étuve à 37°C. La courbe d'évolution de la Densité Optique en fonction du temps a été tracée pour chaque pansement. Une augmentation de la densité optique montrant un relargage du bleu de méthylène dans la solution. La figure 33 représente l'évolution du relargage du bleu de méthylène en fonction du temps.
Résultats
Différentes formulations de pansements ont été réalisées, des photos des pansements obtenus, sont représentées sur la Figure 32 (A,B,C,D,E). En particulier, la figure 32 A est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau sans alginate. La figure 32 B est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant de l'alginate en solution. La figure 32 C est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant de l'alginate réticulé sous la forme de billes. La figure 32 D est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant de l'alginate en solution et une alginate lyase. La figure 32 E est une photographie du pansement obtenu avec un biomatériau comprenant de l'alginate réticulé sous forme de billes et une alginate lyase. Les différents pansements ont été immergés dans la solution A décrite ci- dessus. La cinétique de relargage du bleu de méthylène dans cette solution est représentée figure 33, le procédé utilisé est décrit ci-dessus (« Procédé de suivi du relargage »).
Tel que montré sur la figure 33, le relargage du bleu de méthylène au bout de 24 heures du pansement sans alginate est de 62,4%, pour celui avec alginate en solution de 41 ,6%. Avec la présent d'une enzyme de dégradation de l'alginate
(alginate lyase) le relargage passe était de 46,8%. L'ajout de l'alginate sous la forme réticulée (billes) a permis un relargage plus important de 60,3% sans enzyme et qui est passé à 74,5% lorsque l'on ajoute la seconde enzyme : alginate lyase.
Ainsi, tel que démontré dans cet exemple, le pansement de l'invention permet de libérer des principes actifs, et également de contrôler cette libération en fonction de la composition du biomatériau. En particulier, l'ajout d'un second polymère au pansement, l'alginate dans cet exemple, permet de limiter de moitié la diffusion de l'actif. Cette limitation est due, notamment à l'interaction des charges entre l'alginate chargé négativement et l'actif (le bleu) chargé positivement. Par ailleurs, l'ajout d'une troisième enzyme de dégradation du second polymère (alginate lyase), a permis de modifier la cinétique de relargage de l'actif et permet une maîtrise fine de la cinétique de relargage. Par ailleurs, comme démontré dans cet exemple, lorsque le second polymère est polymérisé/réticulé, l'actif a été libéré de la même manière qu'avec le pansement sans second polymère. L'ajout d'une troisième enzyme au pansement comprenant un second polymère est polymérisé/réticulé a permis d'augmenter la quantité libérée de près de 12%.
Cet exemple démontre donc clairement que le pansement de l'invention permet en outre un relargage contrôlé de molécules, par exemple accélérer ou ralentir la quantité de molécule active délivrée dans le milieu extérieur au pansement. Références bibliographiques :
1 . Winter GD. Formation of the scab and the rate of epithelialisation of superficial wounds in the skin of the young domestic pig. Nature 1962; 193,293- 294

Claims

REVENDICATIONS
1 . Pansement comprenant un support comprenant sur une de ces faces, un biomatériau capable de faire des transitions gel/solution comprenant une phase aqueuse et un réseau de polymères comprenant un polymère protéique ou saccharidique ou un mélange de polymères protéiques et saccharidiques, dans lequel le réseau de polymères et la phase aqueuse forment un gel, une première enzyme de dégradation dudit polymère, et une seconde enzyme capable d'effectuer des liaisons covalentes entre lesdits monomères, ledit biomatériau étant lyophilisé, et ledit support étant un support non tissé.
2. Pansement selon la revendication 1 , dans lequel ladite première enzyme est choisie dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des métalloprotéinases, la famille des sérines protéases, la famille des cystéines et aspartate protéases, la famille ADAM, les glycosidases dont l'amylase, la cellulase, la dextranase, la pullulanase, la pectinase, la chitinase, la xanthanase, la chitosanase, la hyaluronidase, et les lyases dont l'hydroxyacétyle lyase, la chondroïtinase, l'héparinase, l'alginate lyase.
3. Pansement selon la revendication 2, dans lequel la première enzyme est une collagénase.
4. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ladite seconde enzyme est choisie dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des transglutaminases, des lysyls oxydases, les protéines disulfide isomérases, les sulfhydriles thiol oxydases, les peroxidases, les lipoxygènases, les épimèrases dont les alginates épimèrases, les glucuronate isomérases, la cellobiose épimèrase et les galactose-6-sulfurylases.
5. Pansement selon la revendication 4, dans lequel ladite seconde enzyme est une transglutaminase.
6. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le polymère protéique est choisi dans le groupe comprenant la fibrine, la gliadine, la myosine, la globuline (7S et 1 1 S), l'actine, la myoglobine, le collagène et ses dérivés, les protéines du lait, les protéines du soja, les protéines du blé, et les protéines du jaune et du blanc d'œuf, les protéines du pois, les protéines de féverole, les protéines du lin, les protéines de soie, la fibronectine, la laminine, l'élastine, la vitronectine.
7. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le polymère saccharidique est choisi dans le groupe comprenant les carraghénanes, les alginates, le xanthane, le chitosan, la chitine, l'acide hyaluronique, les glycosaminoglycanes sulfatés, le glycogène, la cellulose et ses dérivés, les pectines, l'amidon et ses dérivés, les dextrans et les xylanes.
8. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le polymère est de la gélatine.
9. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel, dans lequel le premier réseau de polymères et la phase aqueuse forment un premier gel (A), le biomatériau comprenant :
(i) un second polymère protéique ou saccharidique ou un mélange de seconds polymères protéiques ou saccharidiques, ledit second polymère étant différent du premier polymère, et étant inclus dans le gel (A) soit en solution dans la phase aqueuse du gel (A), soit sous la forme d'un second réseau de polymères constituant un gel (B),
(ii) une troisième enzyme de dégradation dudit second polymère.
10. Pansement selon la revendication 9 dans lequel la troisième enzyme est choisie dans le groupe comprenant les enzymes de la famille des métalloprotéinases, la famille des sérines protéases, la famille des cystéines et aspartate protéases, la famille ADAM, les glycosidases dont l'amylase, la cellulase, la dextranase, la pullulanase, la pectinase, la chitinase, la xanthanase, la chitosanase, la hyaluronidase, et les lyases dont l'hydroxyacétyle lyase, la chondroïtinase, l'héparinase, l'alginate lyase.
1 1 . Pansement selon la revendication 9 ou 10, dans lequel le biomatériau comprend une quatrième enzyme capable d'induire des liaisons entre lesdits seconds polymères ou mélange de seconds polymères choisie dans le groupe comprenant la lysyl oxydase, les transglutaminases, les protéines disulfide isomérases, les sulfhydrile thiol oxydases, les peroxidases, les lipoxygènases, les épimèrases dont les alginates épimèrases, les glucuronate isomérases, la cellobiose épimèrase et les galactose-6-sulfurylases.
12. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel, le biomatériau comprend en outre un composé cryoprotecteur choisi parmi des polyols, le glycérol, le sorbitol, le polyéthylène glycol (PEG), sorbitol glycérol, l'érythritol, le xylitol, l'arabitol, le ribitol, le dulcitol, le galactitol, le mannitol, le volemitol, le maltitol, l'isomaltitol, le lactitol ou lactositol, le glycol et ses polymères dérivés
13. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le diamètre des mailles du non-tissé est compris de 5 à 500 μηη .
14. Pansement selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le non tissé est en viscose.
15. Procédé de fabrication d'un pansement selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, comprenant les étapes de :
a. préparation d'une solution polymère comprenant un polymère protéique et/ou un polymère saccharidique par mélange dudit polymère dans une solution tampon, afin d'obtenir une solution de polymère
b. préparation d'une solution enzyme comprenant une première et une seconde enzyme par mélange desdites enzymes dans une solution tampon, afin d'obtenir une solution d'enzyme
c. mélange de la solution polymère et de la solution enzyme, d. dépôt du mélange de l'étape (c) sur une face d'un non-tissé, e. réticulation en gel du mélange de l'étape (c) déposé sur le non tissé, f. lyophilisation du gel formé sur le non tissé,
16. Procédé selon la revendication 15, comprenant en outre une étape de stérilisation du pansement.
17. Procédé selon la revendication 16 ou 17, dans lequel dans l'étape (a) le polymère est à une concentration comprise de 0,5 à 5 % en poids.
18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, dans lequel l'activité de la première enzyme dans la solution enzyme est comprise de 10"7 à 10"4 unités/g de pansement.
19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, dans lequel la de la seconde enzyme dans la solution enzyme est comprise de 0,5 à 10 Unités/g de pansement.
20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 19, dans lequel la solution tampon des étapes (a) ou (b) est une solution avec un pH compris de 6,5 à 8.
21 . Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 20, dans lequel la solution de polymère comprend en outre un cryoprotecteur.
22. Procédé selon la revendication 21 , dans lequel la concentration de cryoprotecteur est de 0,1 à 1 M, de préférence de 0,2 à 0,5 M.
23. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 22, dans lequel l'étape de stérilisation est réalisé par irradiation avec des rayonnements gamma ou béta.
24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel la quantité de rayonnement absorbé est comprise de 0,5 à 50 kGy.
25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 24, dans lequel à l'étape (c) les solutions enzyme et polymère sont mélangés selon un rapport minimal de 1/5 et soumis à agitation.
26. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 25, dans lequel l'étape f) de lyophilisation est effectuée sous une pression de 75x10"3 Pa à 300x10"3 Pa et comprend outre l'étape de congélation, les étapes suivantes:
g. Etape de sublimation : augmentation de la température de -45 °C à une température comprise entre 5 et 30 °C à une vitesse de 0,01 °C par minute,
h. Etape de dessiccation : maintient de la température obtenue à l'étape de sublimation pendant un temps de 10 à 70 heures.
27. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 26, dans lequel l'étape a) du procédé comprendre en outre :
a') l'addition d'un second polymère protéique ou saccharidique ou un mélange de seconds polymères protéiques ou saccharidiques, différent du premier polymère ou du mélange de premiers polymères.
EP13707020.7A 2012-02-03 2013-01-31 Pansement et procede de fabrication Withdrawn EP2809361A1 (fr)

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