EP2456462A2 - Vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia - Google Patents

Vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia

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EP2456462A2
EP2456462A2 EP10734996A EP10734996A EP2456462A2 EP 2456462 A2 EP2456462 A2 EP 2456462A2 EP 10734996 A EP10734996 A EP 10734996A EP 10734996 A EP10734996 A EP 10734996A EP 2456462 A2 EP2456462 A2 EP 2456462A2
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coxsackie
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virus
lymphoblastic leukemia
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Abstract

The invention relates to a coxsackie vaccine, more specifically a cocksackie B virus-based vaccine for preventing acute lymphoblastic leukemia (ALL) affecting especially children between the ages of 2 and 5.

Description

Impfstoff zur Prävention von akuter lymphoblastischer Leukämie  Vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia
Die vorliegende Erfindung betrifft einen auf Coxsackie-B-Viren beruhenden Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL). Diese Erkrankung tritt insbe- sondere bei Kindern in der Altersgruppe vom zweiten bis zum fünften Lebensjahr auf. The present invention relates to a coxsackie B virus-based vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia (ALL). This disease is especially common in children in the age group from the second to the fifth year of life.
Die Coxsackie- Viren gehören zu der Gattung der Enteroviren, zu denen auch die Polioviren und die Echoviren gehören. Coxsackie- Viren können unterteilt werden in zwei Untergruppen: Coxsackie- Viren von Typ A mit 23 Serotypen sowie Coxsackie- Viren vom Typ B mit 6 Serotypen. Coxsackie viruses belong to the genus Enteroviruses, which include polioviruses and echoviruses. Coxsackie viruses can be subdivided into two subgroups: Coxsackie virus of type A with 23 serotypes and coxsackie virus of type B with 6 serotypes.
Coxsackie- Viren wurde Ende der 1940er Jahre erstmals aus dem Stuhl von Kindern aus der US-amerikanischen Stadt Coxsackie isoliert, welche Lähmungserscheinungen zeigen. Anhand unterschiedlicher Wirkungen auf neugeborene Mäuse wurden die isolierten Viren in die zwei oben genannten Gruppen A und B eingeteilt. Während Coxsackie- Viren der Gruppe A generell entzündliche Reaktionen hervorrufen, infizieren Coxsackie- Viren vom Typ B eine Vielzahl von Geweben und Organen bei Mensch und Tier und können dabei zu einer raschen Destruktion des Gewebes führen. Sie führen bei einer Infektion von neugeborenen Mäusen in Tierversuche nach einigen Tagen zu einer Lähmung und dem Tod. Coxsackie virus was isolated for the first time in the late 1940s from the chair of children in the US city of Coxsackie, showing paralysis. Based on different effects on newborn mice, the isolated viruses were divided into the two groups A and B mentioned above. While group A coxsackie viruses generally cause inflammatory reactions, type B coxsackie viruses infect a variety of tissues and organs in humans and animals, and can lead to rapid destruction of the tissue. They lead in a infection of newborn mice in animal experiments after a few days to a paralysis and death.
Die Übertragung von Viren der Gattung Enterovirus erfolgt überwiegend fäko-oral oder z.B. in Form von Tröpfcheninfektionen. Es ist bekannt, dass Coxsackie- Viren beim Menschen meist harmlos verlaufende Infektionskrankheiten, wie gewöhnliche Erkältung, aber auch andere Erkrankungen wie die Hand-Fuß-Mund-Krankheit verursachen. Coxsackie-B- Viren können allerdings auch eine Meningitis, Pankreatitis oder Myokarditis, seltener auch Lähmungen, auslösen. Coxsackie- Viren vom Typ B sind weltweit verbreitet und bekannte Verursacher einer Reihe von Krankheiten beim Menschen. Coxsackie-B-Viren werden in der Literatur auch in Zusammenhang mit viral-induzierten Herzmuskelentzündungen (Myokarditis) und viral- induziertem Diabetes mellitus Typ I (IDDM) diskutiert. So stehen etwa Coxsackie-B4-Viren im Verdacht, Ursache einer viralen Myokarditis zu sein, welche mitunter auch tödlich verlaufen kann. The transmission of viruses of the genus Enterovirus is predominantly fäko-oral or eg in the form of droplet infections. It is known that coxsackie viruses in humans usually cause harmless infectious diseases, such as common cold, but also other diseases such as hand-foot-mouth disease. However, Coxsackie B viruses can also cause meningitis, pancreatitis or myocarditis, and more rarely paralysis. Type B coxsackie viruses are found worldwide and are known to cause a range of human diseases. Coxsackie B viruses are also discussed in the literature in connection with viral-induced heart muscle inflammation (myocarditis) and viral-induced type 1 diabetes mellitus (IDDM). For example, Coxsackie B4 viruses are suspected to be the cause of a viral myocarditis, which can sometimes be fatal.
Das RNA Genom sowie die Struktur des Kapselproteins von verschiedenen Coxsackie- Viren-Serotypen wurden bereits identifiziert und beschrieben. Es existieren auch bereits experimentelle Impfstoffe zu Coxsackie-B-Viren, z.B. auch auf Basis von cDNA- Immunisierungen, jedoch ist derzeit noch kein zugelassener Impfstoff auf dem Markt erhältlich. Die akute lymphoblastische Leukämie (ALL) ist eine seltene Erkrankung, sie stellt jedoch eine lebensbedrohliche Krebserkrankung im Kindesalter dar. Anhand von spezifischen Markern lassen sich vier Typen der ALL unterscheiden. Die ALL tritt insbesondere in den Industrieländern und zu 80 bis 90 % der Fälle bei Kindern in der Altersgruppe vom zweiten bis zum fünften Lebensjahr auf (Rossig et al. Radiation Protection Dosimetry, 2008, 132, 114-118). Diese Verteilung wird auch als„childhood peak" bezeichnet. In den Entwicklungsländern tritt die ALL insgesamt wesentlich seltener auf, der beschriebene „childhood peak" ist hier nicht ausgebildet. The RNA genome and the structure of the capsule protein of various coxsackie virus serotypes have already been identified and described. Experimental vaccines for coxsackie B viruses, e.g. also based on cDNA immunizations, however, no approved vaccine is currently available on the market. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a rare disease, but it is a life-threatening childhood cancer. Four types of ALL can be distinguished using specific markers. ALL occur in industrialized countries and in 80 to 90% of children in the age group 2-5 (Rossig et al., Radiation Protection Dosimetry, 2008, 132, 114-118). This distribution is also referred to as the "childhood peak." In the developing world, the ALL occurs much less frequently, the described "childhood peak" is not formed here.
An der akuten lymphoblastischen Leukämie des Kindesalters (ALL) erkranken in Deutsch- land jährlich ca. 800 Kindern bei mehr als 500.000 Geburten (Kaatsch et al., Radiation Protection Dosimetry, 2008, 132, 107-113) sowie in den USA ca. 3000 Kinder, wobei die meisten zwischen dem zweiten und fünften Lebensjahr erkranken. Durch eine zytostatische- und strahlentherapeutische Behandlung können durchschnittlich 80 % der an ALL- erkrankten Kindern primär geheilt werden. Diese strapaziösen und langwierigen herkömm- liehen Krebstherapien haben neben den relativ hohen Versagensquoten erhebliche Nebenwirkungen, zum Beispiel in Form von Störungen der Schilddrüsenfunktion und Schwächung neurokognitiver Fähigkeiten. Zudem erleidet ein Teil der ursprünglich geheilten Patienten später den Befall durch einen Zweittumor. Aus den oben dargelegten Gründen ergibt sich ein dringender Bedarf an neuen Methoden und Medikamenten zur Verhütung dieser Krankheit, die zudem einen großen medizinischen Fortschritt bedeuten würden. Da die Ursachen, die zu einer ALL-Krankheit führen (Ätiologie der ALL) trotz intensiver Forschung bislang noch unbekannt sind, existieren bislang keine Impfstoffe oder Arzneimittel, welche die Erkrankung ursächlich bekämpfen. Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, einen sicheren und gut verträglichen Impfstoff zur Vorbeugung von ALL bei Kindern bereitzustellen. Es wurde nun gefunden, dass Coxsackie-B-Viren ein verursachendes Agens für akute lymphoblastische Leukämie (ALL) bei Kindern darstellen und dass durch eine gezielte Immunisierung (Impfung) ge- gen Coxsackie-B-Viren eine Erkrankung an akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) verhindert werden kann. Approximately 800 children in Germany suffer from acute lymphoblastic leukemia of childhood (ALL) in more than 500,000 births per year (Kaatsch et al., Radiation Protection Dosimetry, 2008, 132, 107-113) and in the USA about 3,000 Children, most of them falling ill between the ages of two and five. By means of a cytostatic and radiotherapeutic treatment, an average of 80% of children with ALL disease can be cured primarily. In addition to the relatively high failure rates, these tedious and lengthy conventional cancer therapies have significant side effects, for example in the form of disorders of the thyroid function and weakening of neurocognitive abilities. In addition, part of the originally healed patients later suffers infestation by a second tumor. For the reasons set out above, there is an urgent need for new methods and medicines to prevent this disease, which would also mean great medical progress. Since the causes that lead to an ALL disease (aetiology of ALL) despite intensive research are still unknown, so far there are no vaccines or drugs that fight the cause causally. An object of the present invention is to provide a safe and well-tolerated vaccine for the prevention of ALL in children. It has now been found that Coxsackie B viruses are a causative agent for acute lymphoblastic leukemia (ALL) in children, and that a targeted immunization (vaccination) against Coxsackie B viruses causes a disease of acute lymphoblastic leukemia (ALL). can be prevented.
Gegenstand der Erfindung ist zudem die Anwendung eines Impfstoffes beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL). The invention also relates to the use of a vaccine based on Coxsackie B viruses for the prevention of acute lymphoblastic leukemia (ALL).
Es wurde gefunden, dass die Charakteristika der akuten lymphoblastischen Leukämie (ALL) mit den Merkmalen übereinstimmen, welche für Infektionen und Erkrankungen durch Coxsackie-B-Viren beschrieben sind. Zudem wurde ein zweistufiger Infektionsverlauf durch Coxsackie-B-Viren in Zusammenhang mit ALL-Erkrankungen deutlich. Eine zweimalige Infektion, erstens im Mutterleib, bevorzugt in der embryonalen Phase von der 3. bis 8. Schwangerschaftswoche und eine zweite Infektion nach dem ersten Lebensjahr mit dem identischen Serotyp, ist wie im Folgenden dargelegt wird, häufig für die Entstehung von ALL verantwortlich. Kommen Kinder, die bereits in der embryonalen Phase in Kontakt mit Coxsackie-B-Viren gekommen sind, beispielsweise im ersten Lebensjahr erneut mit Coxsackie- Viren in Kontakt, erfolgt keine Coxsackie-induzierte Erkrankung, wie ALL. Es besteht ein ausreichender, passiver Immunisierungsschutz durch die von der Mutter übertragenen Antikörper. Kommt jedoch ein Kind, welches im Embryonalstadium Kontakt mit einem Coxsackie-B- Virus hatte, nach dem ersten Lebensjahr mit dem identischen Coxsackie-B- Virus in Kontakt, mit dem seine Mutter Kontakt hatte, hat es eine deutlich erhöhte Chance an ALL zu erkranken. It has been found that the characteristics of acute lymphoblastic leukemia (ALL) are consistent with the features described for Coxsackie B virus infections and diseases. In addition, a two-stage course of infection by Coxsackie B viruses in connection with ALL disease was evident. A two-fold infection, firstly in the womb, preferably in the embryonic phase from the 3rd to the 8th week of pregnancy and a second infection after the first year of life with the identical serotype, is frequently responsible for the development of ALL, as explained below. If children who have come into contact with Coxsackie B viruses already in the embryonic phase, for example in the first year of life again with Coxsackie virus in contact, there is no coxsackie-induced disease, such as ALL. There is adequate passive immunization protection by the antibody transferred from the mother. However, if a child who has had contact with a coxsackie B virus at the embryonic stage comes into contact after the first year of life with the identical coxsackie B virus with which his mother had contact, it has a markedly increased chance of contracting ALL ,
Etwa 5 bis 10 % der Schwangeren in den Industrieländern erfahren eine klinisch unauffäl- lige Infektion mit Coxsackie-B-Viren. Da der Coxsackie-B-Virus die Plazentaschranke passieren kann, kann es auch zu einer Infektion des Embryos kommen. Diese führt auf Grund der Lymphocytotropie des Coxsackie-B-Virus zu einem vermehrten Auftreten von Chromosomenanomalien in den Vorstufen der reifen Lymphocyten beim Embryo. Der Teil derjenigen Kinder, die im ersten Lebensjahr mit Coxsackie-B- Virus in Kontakt kommen, erkranken beobachtungsgemäß nicht, denndie bei der Geburt passiv übertragenen Antikörper der Mutter stellen einen Schutz gegen Erkrankungen durch Coxsackie-B-Virus dar. Die im ersten Lebensjahr infizierten Kinder bilden zusätzliche neue Antikörper, die einen lang andauernden Schutz darstellen. About 5-10% of pregnant women in industrialized countries experience a clinically normal infection with Coxsackie B viruses. Since the Coxsackie B virus can pass through the placental barrier, infection of the embryo can also occur. This leads due to the lymphocytotropy of Coxsackie B virus to an increased incidence of chromosomal abnormalities in the precursors of mature lymphocytes in the embryo. The proportion of children who come into contact with Coxsackie B virus in their first year of life is not contracted because the mother's passively transferred antibodies provide protection against Coxsackie B virus diseases. Those infected in their first year of life Children form additional new antibodies that provide long-lasting protection.
Der Teil der Kinder, die nach dem ersten Lebensjahr mit dem Coxsackie-B-Virus vom gleichen Serotyp in Kontakt kommt, mit dem ihre Mutter Kontakt hatte, erkrankt verstärkt an ALL. Wie molekulargenetische Untersuchungen verdeutlichen, zeigen etwa 1% der Kinder, die eine in utero erlittene Chromosomenanomalie der Lymphozyten aufweisen, einen Übergang zu einer malignen Entartung der Lymphozyten (ALL-Erkrankung), dass heißt 1% von etwa 5%, was etwa 0,05% gleichkommt (Mori et al, Proc Natl Acad Sei USA, 2002, 99, 8242-8247). Es kann gezeigt werden, dass die Charakteristika der ALL in ursächlichem Zusammenhang mit den Charakteristika einer oben beschriebenen zweistufigen Infektion mit Coxsackie-B- Viren gebracht werden können. Insbesondere die folgenden Charakteristika der ALL können mit einer Coxsackie-B-Viren-Infektion korreliert werden, wobei ein ursächlicher Beitrag von Coxsackie-B-Viren belegt werden kann: The part of the children who came into contact with the coxsackie B virus of the same serotype at the age of one, with whom their mother had contact, is increasingly suffering from ALL. As demonstrated by molecular genetic studies, about 1% of children with uterine chromosomal abnormalities of lymphocytes show a transition to malignant lymphocyte degeneration (ALL disease), ie 1% of about 5%, which is about 0.05% % equals (Mori et al, Proc Natl Acad Sci USA, 2002, 99, 8242-8247). It can be shown that the characteristics of ALL can be causally related to the characteristics of a two-stage infection with Coxsackie B viruses described above. In particular, the following characteristics of ALL can be correlated with Coxsackie B virus infection, whereby a causative contribution of Coxsackie B viruses can be demonstrated:
• Allgemeine Seltenheit der ALL: • General rarity of the ALL:
Wie oben beschrieben ist die ALL eine seltene Erkrankung, was sich durch den oben beschriebenen speziellen zweistufigen Verlauf der ALL verursacht durch Coxsackie-B-Viren ergibt. Ein geringer Prozentsatz von 5-10% der Schwangeren in den Industrieländern erfährt eine meist klinisch unauffällige Infektion mit Coxsackie-B-Viren. Die Kinder, die im Embryonal-Stadium eine Infektion mit Coxsackie-B-Viren und damit eine Chromosomenanomalie der Lymphozyten erlitten haben, und erst nach dem ersten Lebensjahr mit Coxsackie-B-Virus vom identischen Serotyp in Kontakt kommen, können an ALL erkranken. As described above, ALL is a rare disease, as evidenced by the specific two-step nature of ALL caused by coxsackie B viruses described above. A low percentage of 5-10% of pregnant women in the industrialized countries experiences a mostly clinically normal infection with Coxsackie B viruses. Children who have been infected with Coxsackie B virus at embryonic stage and have a chromosomal abnormality of the lymphocytes, and who do not come into contact with Coxsackie B virus of the same serotype until the first year of life, may develop ALL.
• Besondere Seltenheit der ALL in Entwicklungsländern mit fehlendem „childhoodpeak": Die ALL tritt in Entwicklungsländern wesentlich seltener auf als in den Industrieländern, wobei in den Entwicklungsländern der so genannte„childhood-peak" fehlt. • Special rarity of the ALL in developing countries with missing "childhood peak": The ALL is much less common in developing countries than in the industrialized countries, with developing countries lacking the so-called "childhood peak".
In den Entwicklungsländern kommt es durch mangelnde Hygiene, insbesondere dem Fehlen von Wassertoilette und von Einmal- Windeln, bei dem überwiegenden Developing countries suffer from a lack of hygiene, in particular the lack of water toilets and disposable diapers
Anteil der Kinder zu einer Infektion mit Coxsackie-B- Viren im ersten Lebensjahr. Aufgrund des oben beschriebenen Passiv-Schutz durch mütterliche Antikörper und der erneuten Immunisierung kommt es nicht zu ALL Erkrankungen. tehung des„childhood peak nach dem ersten Weltkrieg in den Industrieländern: Percentage of children infected with coxsackie B virus in the first year of life. Due to the above-described passive protection by maternal antibodies and re-immunization, ALL diseases do not occur. Tide of the "childhood peak after the First World War in the industrialized countries:
Der oben beschriebene„childhood-peak" trat in England und bei der weißen Bevölkerung in den USA nach dem ersten Weltkrieg in Erscheinung. Bei der afroamerikanischen Bevölkerungsgruppe in den USA und in Japan konnte der „childhood-peak" erst nach dem zweiten Weltkrieg beobachtet werden. The "childhood peak" described above appeared in England and the white population in the US after World War I. For the African American population in the US and Japan, the "childhood peak" could only be observed after World War II ,
Dieses zeitliche Auftreten steht im Einklang mit der Verbreitung der Wassertoilette und der zunehmenden Hygiene in den genannten Ländern/Bevölkerungsgruppen. Diese zunehmende Hygiene verhindert einen Kontakt mit Coxsackie-B- Viren im ersten Lebensjahr. This temporal occurrence is consistent with the spread of the water toilet and the increasing hygiene in the mentioned countries / population groups. This increasing hygiene prevents contact with Coxsackie B viruses in the first year of life.
Die Untersuchung von Smith (Smith et al., Cancer causes and Control, 1998, 9, 285-298) zeigen die zeitliche Veränderungen in den Hepatitis- A- Virus (HAV) Infektionsraten, wobei das HAV-Infektionsmuster als Indikator für den fäkal-oralen Übertragungsweg dient, im Verhältnis zu den Veränderungen in der Mortalität und Inzidenz der kindlichen Leukämie in verschiedenen Ländern. Die Untersuchung kommt zu dem Schluss, dass verbesserte Bedingungen der öffentlichen Hygiene mit höheren Raten kindlicher Leukämie zusammengehen. Da Coxsackie- B-Viren vornehmlich durch fäkal-orale Wege übertragen werden, unterstützt diese Arbeit den in der vorliegenden Anmeldung beschriebenen zweistufigen Infektionsverlauf mit Coxsackie-B-Viren und den ursächlichen Zusammenhang von ALL und Coxsackie-B-Viren Infektionen. The Smith study (Smith et al., Cancer Causes and Control, 1998, 9, 285-298) shows the temporal changes in the hepatitis A virus (HAV) infection rates, using the HAV infection pattern as an indicator of the fecal oral transmission serves, in proportion to the changes in mortality and incidence of childhood leukemia in different countries. The study concludes that improved conditions of public hygiene coincide with higher rates of childhood leukemia. Since coxsackie B viruses are primarily transmitted by fecal-oral routes, this work supports the described in the present application two-stage course of infection with coxsackie B viruses and the causal relationship of ALL and coxsackie B virus infections.
In einer japanischen Studie (Watanabe et al., Kansenshogaku Zasshi, 1982, 56, 977-981) wird beispielsweise vorgestellt, dass im Zeitraum 1960-1962 noch 50% der Kinder unter einem Jahr Kontakt mit Coxsackie-B-Viren hatten. Dagegen hat- te im Zeitraum 1977-1980 keines der Kinder unter einem Jahr Kontakt zu Coxsackie-B-Viren. For example, in a Japanese study (Watanabe et al., Kansenshogaku Zasshi, 1982, 56, 977-981), it was suggested that between 1960 and 1962, 50% of children under one year had contact with coxsackie B viruses. In contrast, In the period 1977-1980, none of the children under the age of 1 had contact with Coxsackie B viruses.
• ALL als monoklonale Erkrankung der Lymphocyten:  • ALL as a monoclonal disease of lymphocytes:
Die ALL betrifft fast ausschließlich die Vorstufen der Lymphocyten, weshalb ein verursachendes Agens eine hohe Affinität zu Lymphocyten aufweisen muss. Der Coxsackie-B-Virus weist eine deutliche Lymphocytotropie auf. • Verringerung des ALL Risikos durch frühen Kindergartenbesuch: The ALL affects almost exclusively the precursors of the lymphocytes, which is why a causative agent must have a high affinity for lymphocytes. Coxsackie B virus has marked lymphocytotropy. • Reduction of ALL risk through early kindergarten visit:
Übersichtsarbeiten kommen zu dem Schluss, dass ein Zusammenhang zwischen dem Kindergartenbesuch und der Erkrankung an ALL besteht, und dass insbesondere ein früh beginnender Kindergartenbesuch, d.h. vor dem 3. Lebensmonat und zwischen dem 3. und 6. Lebensmonat, das Risiko der ALL-Erkrankung stärker vermindert als der späte Kindergartenbesuch (Ma et al., British Journal of Cancer, 2002, 86, 1419-1424 ; Urayama et al., Int J Epidemiol, 2010, 39, 718-32). Der Besuch in einer Gemeinschaftseinrichtung im ersten Jahr erhöht die Wahrscheinlichkeit eines Kontaktes und einer klinisch unbemerkten Infektion mit Coxsackie-B- Viren. Dies stellt nach dem oben beschriebenen zweistufigen Infektionsweg einenReview papers conclude that there is a link between the kindergarten visit and the illness at ALL, and that in particular an early beginning kindergarten visit, i. before the 3rd month of life and between the 3rd and 6th month of life, the risk of ALL disease is more reduced than the late kindergarten visit (Ma et al., British Journal of Cancer, 2002, 86, 1419-1424, Urayama et al. , Int J Epidemiol, 2010, 39, 718-32). Visiting a community facility in the first year increases the likelihood of contact and clinically unnoticed Coxsackie B virus infection. This sets one after the two-stage infection path described above
Schutz vor ALL-Erkrankung dar. Protection against ALL disease.
• Saisonaler Einfluss auf ALL: Die Autoren der Übersichtsarbeit (McNaIIy et al., Brit J Haematol, 2004, 127,• Seasonal impact on ALL: The authors of the review (McNaIIy et al., Brit J Haematol, 2004, 127,
243-263) stellen ein Zusammenhang zwischen dem Geburtsmonat und dem Auftreten von ALL-Erkrankungen dar. Von vier Studien über die Saisonalität des Geburtsmonats zeigen drei einen Gipfel im Februar bis April an. Lediglich eine gibt einen Gipfel im späten Sommer an. 243-263) show a relationship between the month of birth and the occurrence of ALL disease. Of four studies on the seasonality of the birth month, three indicate a peak in February to April. Only one indicates a peak in late summer.
In einer anderen Studie werden sämtliche Fälle von ALL in Nordengland zwischen 1968 und 2005 bezüglich Saisonalität der Geburt analysiert. Hier wird eine statistisch signifikante Häufung für den Geburtsmonat März für 1 bis 6 Jahre alte Kinder mit ALL aufgezeigt (Basta et al., Paediatr Perinat Epidemiol, 2010, 24, 309-18). Da in England und Dänemark die Coxsackie-B-Viren einen deutlichen Erkrankungsgipfel im dritten Quartal des Kalenderjahrs zeigen, entsprächen die ersten vier bis acht Embryonalwochen einer bezüglich des erhöhten ALL-Risikos sensiblen Phase. Dies steht in Übereinstimmung mit dem Zeitpunkt der besonderen Häu- figkeit des Auftretens von Vorstufen der Lymphopoese beim Embryo. In another study, all cases of ALL in Northern England between 1968 and 2005 were analyzed for seasonality of birth. Here a statistically significant accumulation for the month of birth March for 1 to 6 years old children with ALL is shown (Basta et al., Paediatr Perinat Epidemiol, 2010, 24, 309-18). Since Coxsackie B viruses show a clear peak in the third quarter of the calendar year in England and Denmark, the first four to eight embryonic weeks would be sensitive to the increased risk of ALL. This is consistent with the timing of the particular frequency of occurrence of precursors of lymphopoiesis in the embryo.
Des Weiteren stehen die Ergebnisse von Studien, welche die Saisonalität der ALL-Diagnosestellung beschreiben, in guter Übereinstimmung mit dem zeitlichen Gipfel von Coxsackie-B-Virus-Infektionen im dritten Quartal des Jahres. Furthermore, the results of studies describing the seasonality of the ALL diagnosis are in good agreement with the peak of coxsackie B virus infections in the third quarter of the year.
• Space-Time-Clustering von ALL Erkrankungen: Space-time clustering of ALL diseases:
Einige Untersuchungen betreffen die Frage nach einer signifikanten Häufung von ALL-Erkrankungen im Hinblick auf Raum und Zeit. In vielen Fällen weisen die Untersuchungen auf ein signifikantes so genanntes Space-Time-Clustering vonSome studies address the question of a significant accumulation of ALL diseases in terms of space and time. In many cases, the investigations point to a significant so-called space-time clustering of
ALL-Erkrankungen hin. Eine Übersichtsarbeit von McNaIIy (McNaIIy et al, Int . Cancer, 2009, 124, 449-455) kommt zu dem Schluss, dass die Ergebnisse des Space-Time-Clustering und des Spatial-Clusterings der ALL-Erkrankungen konsistent für eine Reihe von ALL-Infektionen insbesondere für den„childhood-peak" sind. Space-time-clustering ist auch für Krankheitsfälle durch Coxsackie-B-Viren beschrieben. ALL diseases. A review by McNaIIy (McNaIIy et al, International Cancer, 2009, 124, 449-455) concludes that the results of space-time clustering and spatial clustering of ALL diseases are consistent for a number of ALL Infections are especially for the "childhood peak." Space-time-clustering is also described for cases of illness by Coxsackie B viruses.
• Einfluss von vorausgegangenen Spontanaborten auf Erkrankung an ALL: Verschiedene Arbeiten (van Steensel-Moll et al., Int J Epidemiol, 1985, 14, 555-• Influence of previous spontaneous abortions on disease on ALL: Various studies (van Steensel-Moll et al., Int J Epidemiol, 1985, 14, 555-
559; Kaye et al., Cancer, 1991, 68, 1351-1355; Yeazel et al., Cancer, 1995, 75, 1718-1727) untersuchen die Frage, ob ein Spontanabort einen Einfluss darauf hat, ob das danach geborene Kind an ALL erkrankt. Die Arbeiten kommen zu dem Schluss, dass ein Spontanabort das Risiko erhöht, dass das nächstgeborenen Kind an ALL erkrankt. Der Zusammenhang von Spontanaborten und kürzlich durchgemachten Infektionen mit Coxsackie-B-Viren wird in einer schwedischen Studie gezeigt, Hinweise auf eine Infektion mit anderen Viren finden sich nicht (Frisk, G., Diderholm, H., J Infect, 1992, 24, 141-145; Axelsson et al., J Med Virology, 1993, 39, 282-285). 559; Kaye et al., Cancer, 1991, 68, 1351-1355; Yeazel et al., Cancer, 1995, 75, 1718-1727) investigate the question of whether spontaneous abortion has an influence on whether the subsequently born child suffers from ALL. The work concludes that spontaneous abortion increases the risk of the next-born child suffering from ALL. The association of spontaneous abortions and recent infections with coxsackie B viruses is shown in a Swedish study, but there is no evidence of infection with other viruses (Frisk, G., Diderholm, H., J Infect, 1992, 24, 141 Axelsson et al., J Med Virology, 1993, 39, 282-285).
• Einfluss von sozio-ökonomischen Lebensstandard und Erkrankung mit ALL: In der Übersichtsarbeit von McNaIIy (McNaIIy et al. (Brit J Haematology, 2004, 127, 243-263) wird eine positive Assoziation zwischen akuter Leukämie und höherem sozio-oekonomischen Lebensstandard festgestellt. • Influence of socio-economic standard of living and disease with ALL: The review by McNaIIy (McNaIIy et al., Brit J Haematology, 2004, 127, 243-263) found a positive association between acute leukemia and higher socio-economic living standards.
Der oben beschriebene zweistufige Infektionsprozess und die Tatsache, dass die Wahrscheinlichkeit des Kontaktes mit Coxsackie-B- Viren im ersten Lebensjahr bei Kindern mit hohem sozio-oekonomischen Lebensstandard gering ist, erklären eine gering höhere Rate an ALL-Erkrankungen bei Kindern mit hohem sozio- oekonomischen Lebensstandard. nische Unauffälligkeit des verursachenden Agens bei ALL-Erkrankungen: The two-stage infection process described above, and the fact that the likelihood of first-year exposure to coxsackie B viruses in children with a high socio-economic standard of living, explain a slightly higher rate of ALL in children with high socio-economic status standard of living. niche inconspicuousness of the causative agent in ALL diseases:
Da bisher kein Zusammenhang der ALL mit einer viralen Erkrankung erkannt wur- de, muss das die ALL verursachende Virus sowohl bei der Mutter als auch beimSince no association of ALL with a viral disease has been identified so far, the ALL-causing virus must be present in both the mother and the mother
Kind nach dem ersten Lebensjahr (welches dann später an ALL erkrankt) klinisch entweder überhaupt keine Symptome verursachen oder sich unter einem unspezifischen Krankheitsbild, wie etwa einer gewöhnlichen Erkältung („common cold") oder einen akuten Gastroenteritis, abspielen. Die Mehrzahl der Coxsackie-B- Infektionen verlaufen entweder klinisch stumm oder unter dem Krankheitsbild einer gewöhnlichen Erkältung („common cold") oder einen akuten Gastroenteritis. After the first year of life (which later on acquires ALL), the child either clinically causes no symptoms at all or appears under a nonspecific clinical picture, such as a common cold or acute gastroenteritis.The majority of Coxsackie-B - Infections are either clinically silent or under the clinical picture of a common cold or acute gastroenteritis.
In einer wissenschaftlichen Studie von Greaves und Büffler (Greaves, M., Büffler, P., A., Brit J Cancer, 2009, 100, 863), wird betont, dass im Gegensatz zu den Er- gebnissen von Cardwell (Cardwell et al., Brit J Cancer, 2008, 99, 1529-1533); welche keinen Hinweis auf die„delayed-infection"-Hypothese von Greaves ergaben, der Schutz durch Infektionen im ersten Lebensjahr durchaus durch klinisch stumme, d.h. asymptomatische Infektionen verursacht werden kann. Der in der vorliegenden Anmeldung beschriebene Schutz vor ALL durch eine Infektion mit Coxsackie-B- Viren im ersten Lebensjahr trifft mit der Vermutung von Greaves in sehr guter Weise zusammen, da eine Infektion mit Coxsackie-B-Viren in dem größten Teil der Fälle asymptomatisch verläuft (Danes et al., J Hy g Epidemiol Microbiol Immun, 1983, 27, 163-172). Einer, durch zytogenetische Untersuchungen belegten und allgemein akzeptierten Hypothese („double hit"-Theorie, Greaves loc. cit.) zufolge, führen mindestens zwei Ereignisse zur ALL: eine Infektion während der Schwangerschaft („first hit"), und eine folgende zweite postnatale Infekti- on („second hit"). Die oben dargelegte zweischrittige Infektion mit einem Coxsackie-B-Virus steht mit dieser„double hit"-Theorie in sehr guter Übereinstimmung. • Häufung von Missbildungen bei Kindern mit ALL: In a scientific study by Greaves and Buffalo (Greaves, M., Buffalo, P.A., Brit J Cancer, 2009, 100, 863), it is emphasized that in contrast to the results of Cardwell (Cardwell et al , Brit J Cancer, 2008, 99, 1529-1533); which gave no indication of the "delayed infection" hypothesis of Greaves, the protection by infections in the first year of life can certainly be caused by clinically dumb, ie asymptomatic infections The protection described against ALL in the present application by an infection with coxsackie B virus in the first year of life is in very good agreement with Greaves, as infection with Coxsackie B viruses is asymptomatic in the majority of cases (Danes et al., J Hyg Epidemiol Microbiol Immun, 1983, 27, 163-172.) According to a hypothesis ("double hit" theory, Greaves loc. Cit.) Which has been proven by cytogenetic studies, at least two events lead to ALL: an infection during pregnancy ("first hit"). ), and a subsequent second postnatal infectious on ("second hit") The two-step infection with a coxsackie B virus outlined above is in very good agreement with this "double hit" theory. • accumulation of malformations in children with ALL:
In den Arbeiten von Miller (Miller R., W., New Engl J Med, 1963, 268, 393-401) wird auf eine geringe, aber signifikante Häufung von Missbildungen bei Kindern mit ALL hingewiesen. In the work of Miller (Miller R., W., New England J Med, 1963, 268, 393-401), a small but significant accumulation of malformations in children with ALL is noted.
Es ist bekannt, dass Coxsackie-B-Viren, welche wie beschrieben die Plazentaschranke überwinden und den Embryo infizieren können, beim Menschen in seltenen Fällen Missbildungen verursachen können. • Einfluss von anderen Viruserkrankungen im ersten Lebensjahr: It is known that Coxsackie B viruses, which as described can overcome the placental barrier and infect the embryo, can cause malformations in humans in rare cases. • Influence of other viral diseases in the first year of life:
Es wurde gezeigt, dass Roseola-Infektionen, welche auch als Drei-Tage-Fieber {Roseola infantum) bekannt sind, und häufig im Säuglings- oder frühen Kleinkindalter auftreten, sowie Ohr-Infektionen, wie etwa Otitis media, im ersten Lebensjahr, das Risiko senken, an ALL zu erkranken. It has been shown that roseola infections, which are also known as three-day fever (Roseola infantum), and often occur in infancy or early infancy, as well as ear infections, such as otitis media, in the first year of life, the risk lower ALL.
Es ist bekannt, dass unter anderem auch Coxsackie-B-Viren eine Mittelohr- Entzündung {otitis media) auslösen können. Weiterhin wird beschrieben, dass Roseoloa-Infektionen {Roseoloa infantum, (normalerweise ausgelöst durch den Humanen Herpes Virus) Folge einer Coxsackie-Infektion sind. Gemäß dem oben beschriebenen zweistufigen Infektionsverlauf mit Coxsackie-B-Viren, stellt der Kontakt mit Coxsackie-B-Viren im ersten Lebensjahr einen Schutz gegen die ALL Erkrankung dar. • ALL-Epidemie Anfang der siebziger Jahre: It is well known that coxsackie B viruses, among others, can cause middle ear inflammation (otitis media). Furthermore, it is described that Roseoloa infections {Roseoloa infantum, (usually triggered by the human herpes virus) are the result of coxsackie infection. According to the two-stage course of infection with Coxsackie B viruses described above, contact with Coxsackie B viruses in the first year of life is a protection against ALL disease. • ALL epidemic in the early seventies:
Ende der sechziger Jahre bis Anfang der siebziger Jahre kommt es in den Industrieländern zu einem Anstieg der Fälle von ALL, der etwa Mitte der siebziger Jahre wieder verschwindet. Zwischen 1963 und 1969 kommt es zu einer ausgeprägten Coxsackie-B- Epidemie. Der Anstieg der Leukämiehäufigkeit im ersten Lebensjahr ist zwischen 1920 und 2000 gering, der Anstieg der Leukämiefälle zwischen dem zweiten und fünften Ge- burtstag ist jedoch stark. Der geringe Anstieg der Fälle von Leukämie im ersten Lebensjahr („infant leukemia") ist wahrscheinlich lediglich Ausdruck des verbesserten Zugangs zur Diagnose, während der starke Anstieg zwischen dem zweiten und fünften Geburtstag („childhood peak") ohne jeden Zweifel auf einem echten Anstieg beruht. Der de facto aus- gebliebene Anstieg der Fälle von„infant leukemia" im Gegensatz zum„childhood peak" unterstützt in sehr guter Weise die oben dargelegte Hypothese, dass es sich bei der zweischrittigen Infektion um eine Infektion mit dem identischen Serotyp handelt: Die Infektion während des ersten Lebensjahres mit dem identischen Coxsackie-B- Virus kann deshalb nicht zu einer Erkrankung führen, da der Säugling durch die passiv übertragenen Antikörper der Mutter während des ersten Lebensjahres gegen eine Infektion mit Coxsackie-B-Viren geschützt ist. Die bei der Geburt passiv übertragenen Antikörper sind gegen Ende des ersten Lebensjahres aus dem Kind verschwunden, das Kind ist nun empfänglich gegenüber einer erneuten Infektion mit dem Coxsackie-B-Virus, mit dem es zum ersten Mal während der Embryogenese Kontakt hatte. Dies erklärt, weshalb der„childhood peak" in allen Publikationen erst nach dem ersten Geburtstag beginnt. At the end of the sixties until the beginning of the seventies, there was an increase in the number of cases of ALL in the industrialized countries, which disappeared again in the middle of the seventies. Between 1963 and 1969 there was a pronounced Coxsackie B epidemic. The increase in leukemia frequency in the first year of life is small between 1920 and 2000, the increase in leukemia cases between the second and fifth But birthday is strong. The small increase in cases of leukemia in the first year of life ("infant leukemia") is probably only an expression of improved access to diagnosis, while the sharp rise between the second and fifth childhood ("childhood peak") is undoubtedly due to a real increase , The de facto increase in cases of "infant leukemia" as opposed to "childhood peak" very well supports the above-stated hypothesis that the two-step infection is an infection with the identical serotype: the infection during Therefore, the first year of life with the identical Coxsackie B virus can not lead to a disease because the infant is protected by the passively transferred antibodies of the mother during the first year of life against infection with coxsackie B viruses. The passively transferred antibodies at birth disappeared from the child at the end of their first year of life, and the child is now susceptible to re-infection with the coxsackie B virus with which it first had contact during embryogenesis. This explains why the "childhood peak" in all publications begins after the first birthday.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren als Arzneimittel zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL), insbesondere von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) bei Kindern. The present invention is a vaccine based on Coxsackie B viruses as a medicament for the prevention of acute lymphoblastic leukemia (ALL), especially of acute lymphoblastic leukemia (ALL) in children.
Insbesondere findet der Impfstoff Anwendung bei der Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie von Kindern, welche in der Altersgruppe vom zweiten bis zum fünften Lebensjahr auftritt. Unter Impfstoffen beruhend auf Coxsackie-B-Viren sind im Sinne der vorliegenden Anmeldung solche Zusammensetzungen zu verstehen, welche ein biologisch oder gentechnisch hergestelltes Coxsackie-B-Viren-spezifisches Antigen enthalten. Hierbei kommen abgetötete Coxsackie-B-Viren, Protein- und/oder Nukleinsäure-Fragmente (wie cDNA oder RNA) von Coxsackie-B-Viren und Coxsackie-B-Viren-spezifische Virengenome, denen eine Nukleotid- Sequenz codierend für Zytokine, wie Interferon-Gamma, eingefügt wurden, in Frage. Im Sinne der vorliegenden Erfindung können so genannte Tot- oder Le- bend-Impfstoffe zum Einsatz kommen. In particular, the vaccine is used in the prevention of childhood acute lymphoblastic leukemia, which occurs in the age group from the second to the fifth year of life. For the purposes of the present application, vaccines based on Coxsackie B viruses are to be understood as meaning those compositions which contain a biologically or genetically engineered Coxsackie B virus-specific antigen. These include killed coxsackie B viruses, protein and / or nucleic acid fragments (such as cDNA or RNA) of coxsackie B viruses and coxsackie B virus-specific viral genomes, which contain a nucleotide sequence encoding cytokines, such as interferon Gamma, in question. For the purposes of the present invention, so-called dead or live vaccines can be used.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der Impfstoff eine Zusammenset- zung beruhend auf Coxsackie-B-Viren und wird zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) bei Kindern als Tot-Impfstoff (z.B. inaktivierte Coxsackie-B-Viren) angewendet. In a preferred embodiment of the invention, the vaccine is a composition based on coxsackie B viruses and becomes more acute for the prevention of coxsackie B viruses lymphoblastic leukemia (ALL) in children as a dead vaccine (eg inactivated coxsackie B viruses).
Insbesondere sind Tot-Impfstoffe beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Auslösung einer spezifischen Immunantwort geeignet, ohne dabei eine Erkrankung durch Coxsackie-B- Viren hervorzurufen. In particular, dead vaccines based on coxsackie B viruses are suitable for eliciting a specific immune response without causing disease by coxsackie B viruses.
Unter der Attenuierung oder Virulenzverminderung versteht man die gezielte Verminderung der Virulenz, dass heißt der Krankheitsauslösenden Eigenschaften des Erregers, wo- bei seine Vermehrungsfähigkeit (lebend-attenuiert) und seine antigenen Eigenschaften weitgehend erhalten bleiben. Man unterscheidet im Allgemeinen kälte-adaptierte Stämme, die sich nur bei Temperaturen um 25 0C vermehren können, und temperatur-sensitive Stämme, die sich nur in einem Temperaturbereich von etwa 38-39 0C vermehren können. Tot-Impfstoffe enthalten in der Regel inaktivierte oder abgetötete Erreger, die nicht vermehrungsfähig sind. Es können z.B. die folgenden Tot-Impfstoff-Typen zum Einsatz kommen: By attenuation or virulence reduction is meant the targeted reduction of virulence, that is, the disease-causing properties of the pathogen, whereby its ability to reproduce (live-attenuated) and its antigenic properties are largely retained. A distinction is generally cold-adapted strains that can only multiply at temperatures around 25 0 C, and temperature-sensitive strains that can only multiply in a temperature range of about 38-39 0 C. Dead vaccines usually contain inactivated or killed pathogens that are not capable of reproduction. For example, the following dead vaccine types can be used:
• Inaktivierte Ganzpartikelimpfstoffe (Vollvirusimpfstoff): Inactivated whole particle vaccines (whole virus vaccine):
Die Inaktivierung (Abtötung) der Viren erfolgt mittels chemischen Stoffen oder Stoffkombinationen, z. B. Formaldehyd, beta-Propiolacton, Psoralen, wobei die Virushülle erhalten bleibt.  The inactivation (killing) of the viruses is carried out by means of chemical substances or substance combinations, eg. As formaldehyde, beta-propiolactone, psoralen, wherein the virus envelope is retained.
• (Inaktivierte) Teilpartikelimpfstoffe: • (Inactivated) Particle Particle Vaccines:
Es erfolgt eine Spaltung der Virushülle mit Detergentien oder organischen Lösungsmitteln und ggf. eine Inaktivierung mit chemischen Stoffen.  There is a cleavage of the virus envelope with detergents or organic solvents and possibly an inactivation with chemical substances.
• Untereinheit-Impfstoffe: • subunit vaccines:
Die Oberfläche der Viren wird vollständig aufgelöst und spezifische Protein- Komponenten isoliert. Untereinheit-Impfstoffe sind nur wenig immunogen, besitzen dafür aber geringe Nebenwirkungen.  The surface of the virus is completely dissolved and specific protein components are isolated. Subunit vaccines are poorly immunogenic but have few side effects.
Neben der Möglichkeit, vollständige abgetötete (inaktivierte) oder abgeschwächteIn addition to the possibility of complete killed (inactivated) or weakened
(attenuierte) Erreger als Antigene in einem Impfstoff einzusetzen, besteht auch die Mög- lichkeit, die gewünschte Immunantwort mit Nukleinsäure- oder Protein- Fragmenten der(attenuated) pathogens as antigens in a vaccine, it is also possible, the desired immune response with nucleic acid or protein fragments of the
Erreger auszulösen. So sind in den letzten Jahren Verfahren zur Herstellung von cDNA- Impfstoffen auf der Basis von viraler oder bakterieller cDNA in der Literatur beschreiben worden. Vorteil der so genannten cDNA-Impfung ist die weitgehende Vermeidung von Nebenwirkungen der üblichen Impfmethoden. In der Literatur unterscheidet man im Allgemeinen eine aktive Immunisierung (aktive Impfung, aktiver Impfstoff) und eine passive Immunisierung (passive Impfung, passiver Impfstoff). Bei der aktiven Impfung wird künstlich eine abgeschwächte Form der Erkrankung oder eine Immunantwort durch Gabe von vermehrungsfähigen oder nicht vermehrungsfähigen Erregern erzielt. Bei der Passiv-Impfung werden Immunoglobulin-Präparate oder das Serum von aktiv immunisierten Menschen oder Tieren verabreicht (parenteral, intravenös), wobei spezifische Antikörper zur Behandlung oder Vorbeugung von Infektionskrankheiten übertragen werden. Trigger pathogens. Thus, in recent years, methods for the production of cDNA Vaccines based on viral or bacterial cDNA have been described in the literature. Advantage of the so-called cDNA vaccine is the avoidance of side effects of the usual vaccination methods. The literature generally distinguishes between active immunization (active vaccination, active vaccine) and passive immunization (passive vaccination, passive vaccine). In active vaccination, an attenuated form of the disease or an immune response is achieved artificially by the administration of viable or non-viable pathogens. In passive vaccination, immunoglobulin preparations or serum are administered (parenterally, intravenously) to actively immunized humans or animals, with specific antibodies being used to treat or prevent infectious diseases.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren als Impfstoff bzw. Arzneimittel zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL), insbesondere von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) bei Kindern, wobei ein aktiver und/oder passiver Impfstoff eingesetzt werden kann. The present invention is a vaccine based on Coxsackie B viruses as a vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia (ALL), in particular of acute lymphoblastic leukemia (ALL) in children, using an active and / or passive vaccine can.
Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere einen Impfstoff beruhend auf Coxsackie- B-Viren und ein Arzneimittel zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL), insbesondere von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) bei Kindern, wobei ein aktiver Impfstoff Anwendung findet. Insbesondere enthält der Impfstoff ein oder mehrere Antigene ausgewählt aus abgetöteten Coxsackie-B-Viren, Protein- und/oder Nuklein- säure-Fragmenten (insbesondere cDNA-Fragmenten) von Coxsackie-B-Viren und Coxsackie-B-Viren-spezifischen Virengenomen, denen eine Nukleotid- Sequenz codierend für Zytokine, wie Interferon-Gamma, eingefügt wurde. In particular, the present invention relates to a vaccine based on coxsackie B viruses and a medicament for the prevention of acute lymphoblastic leukemia (ALL), especially of acute lymphoblastic leukemia (ALL) in children, using an active vaccine. In particular, the vaccine contains one or more antigens selected from killed coxsackie B viruses, protein and / or nucleic acid fragments (in particular cDNA fragments) of coxsackie B viruses and coxsackie B virus-specific viral genomes a nucleotide sequence coding for cytokines, such as interferon-gamma, has been inserted.
Der Zusammenhang zwischen dem Auftreten von ALL und dem oben beschriebenen zweistufigen Infektionsprozess mit Coxsackie-B-Viren (erst pränatal, dann nach dem ersten Lebensjahr) kann insbesondere unter Heranziehen von„Guthrie-Karten" belegt werden. Der Guthrie-Test gehört zu den weltweit angewandten Screening-Untersuchungen bei Neugeborenen, bei dem in der Regel um den 3. Lebenstag des Kindes eine Fersenblutent- nahme erfolgt. Mit diesem Blut wird dann eine Filterpapierkarte in vorgegebenen Feldern durchtränkt. Diese Trockenblutprobe wird dann hinsichtlich verschiedener Stoffwechsel- Störungen untersucht (wie etwa der Phenylketonurie). Häufig werden diese Filterpapierkarten in den Kliniken über viele Jahre hinweg aufbewahrt und können auch Jahre nach der Geburt noch für Blutuntersuchungen herangezogen werden. Es können auch Viren bzw. Viren-spezifische Antikörper in diesen getrockneten Blutproben von Neugeborenen nachgewiesen werden, wie beispielsweise der Cytomegalovirus. In Guthrie-Karten von ALL- Patienten finden sich dann gehäuft Hinweise auf eine während der Schwangerschaft durchgemachte Coxsackie-B-Viren Infektion der Mutter. The connection between the occurrence of ALL and the above-described two-stage infection process with Coxsackie B viruses (first prenatal, then after the first year of life) can be proven in particular by using "Guthrie cards." The Guthrie test is one of the worldwide Newborn screening tests are usually performed around the third day of life of the child and are then imbibed with a filter paper card in predefined fields, which is then tested for various metabolic disturbances (such as blood pressure) Often, these filter paper cards are stored in the clinics over many years and can also be years after the Birth can still be used for blood tests. It is also possible to detect viruses or virus-specific antibodies in these dried neonatal blood samples, such as cytomegalovirus. In Guthrie charts of ALL patients, there is much evidence of coxsackie B virus infection during pregnancy.
Das Auftreten von ALL bei Kindern steht in eindeutigem Zusammenhang mit dem Vorhandensein von Coxsacki-B-Viren bzw- Coxsackie-B-Viren spezifischen Antikörpern. Zudem kann hinsichtlich der verschiedenen Serotypen von Coxsackie-B-Viren unterschie- den werden. The occurrence of ALL in children is clearly related to the presence of Coxsacki B virus or Coxsackie B virus specific antibodies. In addition, a distinction can be made between the different serotypes of coxsackie B viruses.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung handelt es sich bei dem Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren (zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie) um einen Impfstoff enthaltend mindestens ein Coxsackie-B-Viren-spezifisches Anti- gen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus abgetöteten (inaktivierten) Coxsackie-B- Viren, Protein-Fragmenten von Coxsackie-B-Viren und Nukleinsäure-Fragmenten (insbesondere cDNA-Fragmenten) von Coxsackie-B-Viren. In a preferred embodiment of the invention, the vaccine based on coxsackie B viruses (for the prevention of acute lymphoblastic leukemia) is a vaccine containing at least one coxsackie B virus-specific antigen selected from the group consisting of killed ones (inactivated) coxsackie B viruses, coxsackie B virus protein fragments and nucleic acid fragments (especially cDNA fragments) from coxsackie B viruses.
Insbesondere kann der auf Coxsackie-B-Viren beruhende Impfstoff Coxsackie-B-Virus- spezifische Antigene, insbesondere abgetötete Coxsackie-B-Viren, von mindestens einem Serotyp ausgewählt aus der Gruppe Coxsackie-Bl -Viren, Coxsackie-B2-Viren, Coxsackie- B3 -Viren, Coxsackie-B4- Viren, Coxsackie-B5 -Viren und Coxsackie-B6- Viren enthalten. In particular, the vaccine based on coxsackie B viruses may contain coxsackie B virus specific antigens, in particular killed coxsackie B viruses, of at least one serotype selected from the group Coxsackie Bl viruses, coxsackie B2 viruses, coxsackie B3 viruses, coxsackie B4 viruses, coxsackie B5 viruses, and coxsackie B6 viruses.
Weiterhin bevorzugt ist eine Ausführungsform, bei welcher der auf Coxsackie-B-Viren beruhende Impfstoff spezifische Antigene, insbesondere abgetötete Coxsackie-B-Viren, von mindestens einem Serotyp ausgewählt aus der Gruppe Coxsackie-B2-Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie-B4-Viren und Coxsackie-B5 -Viren enthält. Also preferred is an embodiment in which the vaccine based on coxsackie B viruses contains specific antigens, in particular killed coxsackie B viruses, of at least one serotype selected from the group of coxsackie B2 viruses, coxsackie B3 viruses, coxsackie B4 viruses and Coxsackie B5 viruses.
Vorteilhaft kann es sein, wenn der Impfstoff eine Imunisierung gegen alle sechs bekannten Serotypen des Coxsackie-B-Virus bewirkt. Bevorzugt im Sinne der Erfindung ist daher auch ein Impfstoff enthaltend eine Kombination von zwei, drei, vier oder auch mehreren Antigenen, die jeweils für einen der Coxsackie-B-Virus- Serotypen Bl, B2, B3, B4, B5 und B6 spezifisch ist. In diesem Sinne ist eine bevorzugte Ausführung der Erfindung gerichtet auf einen, auf Coxsackie-B-Viren beruhenden Impfstoff, welcher Coxsackie-B- Viren- spezifische Antigene, insbesondere abgetötete Coxsackie-B-Viren, von den Serotypen Coxsackie-Bl -Viren, Coxsackie-B2-Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie- B4-Viren, Coxsackie-B5- Viren und Coxsackie-B6-Viren enthält. It may be advantageous if the vaccine effects an imunization against all six known serotypes of coxsackie B virus. For the purposes of the invention, therefore, a vaccine containing a combination of two, three, four or even several antigens, each of which is specific for one of the coxsackie B virus serotypes Bl, B2, B3, B4, B5 and B6, is also preferred. In this sense, a preferred embodiment of the invention is directed to a Coxsackie B virus-based vaccine comprising Coxsackie B virus-specific antigens, in particular killed Coxsackie B viruses, of the Serotypes Coxsackie Bl viruses, Coxsackie B2 viruses, Coxsackie B3 viruses, Coxsackie B4 viruses, Coxsackie B5 viruses and Coxsackie B6 viruses.
Bevorzugt enthält der oben beschriebene Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B- Viren Prote- in- und/oder Nukleotid-Fragmente von Coxsackie-B-Viren mindestens eines Serotyps ausgewählt aus der Gruppe Coxsackie-B2- Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie-B4- Viren und Coxsackie-B5 -Viren. The vaccine described above preferably contains, based on coxsackie B viruses, protein and / or nucleotide fragments of coxsackie B viruses of at least one serotype selected from the group of coxsackie B2 viruses, coxsackie B3 viruses, coxsackie B4 viruses and Coxsackie B5 viruses.
Der in der vorliegenden Anmeldung beschriebene Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie bei Kindern wird bei den Kindern bevorzugt vor Vollendung des ersten Lebensjahres, insbesondere vor Vollendung des sechsten Lebensmonats, verabreicht. Daher ist der beschriebene Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie zur Verabreichung bei Kindern vor Vollendung des ersten Lebensjahres, insbesondere vor Vollendung des sechsten Lebensmonats, geeignet. The vaccine described in the present application for the prevention of childhood acute lymphoblastic leukemia is preferably administered to children before the age of one, in particular before the sixth month of life. Therefore, the vaccine described for the prevention of acute lymphoblastic leukemia is suitable for administration to children before the age of one, especially before the age of six months.
Die Impfung erfolgt bevorzugt intramuskulär oder subkutan im 3., 4. und 5. Lebensmonat des Kindes, sowie in einer Auffrischungsimpfung im 11. und 18. Lebensjahr des Kindes. The vaccination is preferably intramuscularly or subcutaneously in the 3rd, 4th and 5th month of life of the child, as well as in a booster vaccination in the 11th and 18th year of the child.
Der in der vorliegenden Beschreibung offenbarte auf Coxsackie-B-Viren beruhende Impf- stoff kann in einer für Impfstoffe, insbesondere für aktive Impfstoffe bekannten Applikationsform verabreicht werden. Im Prinzip kann der erfindungsgemäße Impfstoff parenteral, wobei insbesondere intramuskuläre und subkutane Gaben in Frage kommen, verabreicht werden. Eine intramuskuläre Applikation des Impfstoffes ist bevorzugt. In einer weiterhin bevorzugten Ausführungsform ist der beschriebe auf Coxsackie-B-Viren beruhende Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie zur intramuskulären Verabreichung bei Kindern vor Vollendung des sechsten Lebensmonats geeignet. Die vorliegende Erfindung bezieht sich weiterhin auf die Verwendung eines Impfstoffes beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Herstellung einer Zusammensetzung zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie bei Kindern. The coxsackie B virus based vaccine disclosed in the present specification can be administered in a form of administration known for vaccines, especially for active vaccines. In principle, the vaccine according to the invention can be administered parenterally, in particular by intramuscular and subcutaneous administration. Intramuscular administration of the vaccine is preferred. In a further preferred embodiment, the described Coxsackie B virus based vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia is suitable for intramuscular administration in children before the age of six months. The present invention further relates to the use of a vaccine based on coxsackie B viruses for the preparation of a composition for the prevention of childhood acute lymphoblastic leukemia.
Die Methoden zur Herstellung eines auf Coxsackie-B-Viren beruhenden Impfstoffes sind dem Fachmann im Prinzip bekannt. Zur Herstellung von inaktivierten Coxsackie-B-Viren können beispielsweise Säugetier-Zellkulturen (beispielweise Affennierenzellen (z.B. Vero- Zellen), humane diploide Lungenzelllinien (WI-238, MRC5) gezüchtet und mit Coxsackieviren eines einzelnen (oder mehreren) Serotypen beimpft werden. Hierbei ist es erforderlich, auf eine strenge Standardisierung der Produktionsbedingungen (Zusammensetzung der Kulturmedien, Zelldichte, Alter der Kulturen bei Inokulation, Menge des pro Zelle überimpften Virus, Inkubationstemperatur und -dauer, Zahl der Vermehrungszyklen je Produktionsdurchgang etc.) zu achten. Insbesondere nach 48 bis 72 Stunden erfolgt die Virusernte durch Abnahme der Überstandsflüssigkeit unter sterilen Bedingungen. Diese können dann z.B. durch eine geringe Filterporengröße (z.B. von 0,22 Mikrometer) filtriert werden, um größere Zellrückstände zu entfernen. Gegebenenfalls kann das Flüssigkeitsvo- lumen der notwendigen Viruskonzentration angepasst, die Virussuspension bis zum Gebrauch eingefroren und/oder bei niedrigen Temperaturen (z.B. von etwa 4 0C) gelagert werden. The methods for producing a Coxsackie B virus based vaccine are known in the art in principle. For the production of inactivated coxsackie B viruses, for example, mammalian cell cultures (for example monkey kidney cells (eg, Cells), human diploid lung cell lines (WI-238, MRC5) and inoculated with coxsackieviruses of a single (or multiple) serotype. Hereby it is necessary to pay attention to a strict standardization of the production conditions (composition of culture media, cell density, age of cultures in inoculation, amount of virus inoculated per cell, incubation temperature and duration, number of propagation cycles per production run, etc.). In particular, after 48 to 72 hours, the virus harvest takes place by removing the supernatant fluid under sterile conditions. These can then be filtered eg by a small filter pore size (eg of 0.22 microns) to remove larger cell residues. Optionally, the Flüssigkeitsvo- lumen of the necessary concentration of virus adapted to the virus suspension frozen until use and / or stored at low temperatures (eg, from about 4 0 C).
Gegebenenfalls können die so erhaltenen Viren etwa durch Hitze oder Chemikalien abge- tötet werden, oder mit Hilfe gängiger Verfahren zur Virus- Attenuierung abgeschwächt werden. Die Inaktivierung der Coxsackie-B-Viren kann beispielsweise durch Behandlung mit Chemikalien wie Formaldehyd, durch energiereiche Strahlung oder Hitzebehandlung erfolgen. Eine andere Herstellungsmethode des Impfstoffes beruht auf der Einfügung der Kodierungssequenzen von Zytokinen (wie Interferon-Gamma) in das Virus-Genom des Coxsackie-B-Virus. Eine Impfung mit einem solcherart veränderten Coxsackie-B3-Stamm hat sich bei der tierexperimentellen Verhütung von Coxsackie-B3 -induzierten Myokarditi- den sehr wirkungsvoll erwiesen. Optionally, the viruses thus obtained can be killed, for example, by heat or chemicals, or attenuated using common virus attenuation techniques. The inactivation of Coxsackie B viruses can be carried out, for example, by treatment with chemicals such as formaldehyde, by high-energy radiation or heat treatment. Another method of preparation of the vaccine is based on the insertion of the coding sequences of cytokines (such as interferon-gamma) into the virus genome of coxsackie B virus. Vaccination with a coxsackie B3 strain modified in this way has proven to be very effective in the animal-experimental prevention of coxsackie B3-induced myocarditis.
Zur endgültigen Formulierung können Aliquots der Virussuspension mit einem geeigneten Stabilisator, insbesondere mit Sorbitol, vermischt werden, um die empfohlene Dosierung zu erzielen, wobei virale Bestandteile in einer Konzentration vorhanden sein sollten, die eine ausreichende Immunantwort im menschlichen Körper hervorrufen. Die Dosierung des Impfstoffes richtet sich nach der Applikationsform und ist dem Fachmann im Prinzip geläufig. For final formulation, aliquots of the virus suspension may be mixed with a suitable stabilizer, particularly sorbitol, to achieve the recommended dosage, with viral components present in a concentration that elicit a sufficient immune response in the human body. The dosage of the vaccine depends on the application form and is familiar to the skilled worker in principle.
Zusätzlich zu dem Coxsackie-B-Viren spezifischen Antigen, welches die gewünschte Immunantwort im menschlichen Körper auslöst, können die in der vorliegenden Anmeldung beschriebenen Impfstoffe pharmazeutisch verträgliche Träger und Hilfs- und Zusatzstoffe enthalten. Eingesetzt werden können etwa Phenoxyethanol, Magnesiumchlorid, Alumini- umsalze, Kohlenhydrate wie Saccharose, Konservierungsmittel wie Antibiotika, Thiomersal, Phenol, Formaldehyd. In addition to the Coxsackie B virus specific antigen which elicits the desired immune response in the human body, the vaccines described in the present application may contain pharmaceutically acceptable carriers and excipients and additives. Phenoxyethanol, magnesium chloride, aluminum, etc. can be used. salts, carbohydrates such as sucrose, preservatives such as antibiotics, thiomersal, phenol, formaldehyde.
Der anwendungsfertig formulierte Impfstoff kann beispielsweise in Ampullen abgefüllt und bis zum Gebrauch gelagert werden. For example, the ready-to-use formulated vaccine can be dispensed into ampoules and stored until use.
Die vorliegende Anmeldung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) bei Kindern, wobei Coxsackie-B-Viren ausgewählt aus mindestens einem Serotyp mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger vermischt werden. The present application further relates to a method of producing a vaccine based on coxsackie B viruses for the prevention of childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL), wherein coxsackie B viruses selected from at least one serotype are mixed with a pharmaceutically acceptable carrier.
Der Begriff „Chromosomenpräparation" wie in der vorliegenden Erfindung verwendet, bezieht sich auf die Darstellung von Chromosomen bzw. deren Aberrationen. Chromosomen können aus allen teilungsfähigen Geweben, dem so genannten Probenmaterial präpa- riert werden, z.B. peripheres Blut, Gewebe (Fibroblasten), Fruchtwasser, Chorionzotten, Knochenmark. Bevorzugt eignen sich zur Chromosomendarstellung Lymphozyten aus peripherem Blut, da die Entnahme von venösem Blut einfach und die Mitoseausbeute bei der Kultivierung sehr gut ist. Da sich die im Blut befindlichen Lymphozyten normalerweise aber nicht teilen, müssen sie in der Kultur durch ein Mitogen (bsp. Colchizin) zur Tei- lung stimuliert werden. Die Techniken der Chromosomenpräparation sind variabel und allgemein bekannt, basieren aber grundsätzlich auf den folgenden Schritten: ggf. Anlegen einer Kultur mit dem speziellen Kulturmedium und in einem dafür geeigneten Kulturbehältnis; ggf. Kulturdauer abwarten, ggf. Wechsel des Kulturmediums und Kontrolle der Mitosenanzahl; Stoppen des Wachstums mittels Colchizin (Spindelgift); Behandlung der vitalen Zellen mit hypotoner Lösung; Fixierung mit einem Essigsäure-Methanol-Gemisch; ggf. Aufbringen der Zellen auf einen Objektträger; Sichtbarmachung durch Färben der Präparate, oder Anregung von Fluoreszenz bei FISH. Um auch kryptogene Chromosomenaberrationen, wie beispielsweise Translokationen von Chromosom auf Chromosom zu erfassen (bei ALL Translokation von Chromosom 12 auf 21 verwendet man die Fluoreszenz- in-situ-Hybridisierung. The term "chromosome preparation" as used in the present invention refers to the representation of chromosomes or their aberrations.Chromosomes can be prepared from all dividable tissues, the so-called sample material, eg peripheral blood, tissue (fibroblasts), amniotic fluid It is preferable to use peripheral blood lymphocytes for chromosomal imaging, as the removal of venous blood is easy and the mitotic yield during cultivation is very good, but as the lymphocytes in the blood normally do not divide, they must pass through the culture The techniques of chromosome preparation are variable and generally known, but are fundamentally based on the following steps: if appropriate, application of a culture with the special culture medium and in a suitable culture container; Wait culture time, if necessary change of Ku lturmediums and control of the number of mites; Stopping growth by colchicine (spindle poison); Treatment of vital cells with hypotonic solution; Fixation with an acetic acid-methanol mixture; optionally applying the cells to a slide; Visualization by staining of the preparations, or excitation of fluorescence in FISH. In order to detect cryptogenic chromosome aberrations, such as translocations of chromosome on chromosome (in ALL translocation of chromosome 12 to 21, fluorescence in situ hybridization is used.
Der Begriff„Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung" (FISH), wie in der vorliegenden Erfindung verwendet, bezieht sich auf eine molekularbiologische Methode, um Nukleinsäuren, also RNA oder DNA, in Geweben, einzelnen Zellen oder auf Metaphase-Chromosomen mittels Fluoreszenz nachzuweisen. Dabei wird eine künstlich hergestellte Sonde aus einer Nukleinsäure eingesetzt, die über Basenpaarungen an die nachzuweisende Nukleinsäure hybridisiert, also bindet. Die Bezeichnung„in situ" wird verwendet, da der Nachweis direkt in der jeweiligen Struktur durchgeführt wird. Grundsätzlich kann die Anzahl, Lage und Aktivität von Genen bestimmt werden oder auch gesamte Chromosomen mittels chromosomaler- in-situ-Suppressions (CISS-) Hybridisierung markiert werden, sowie gesamtgenomische DNA als Sonde eingesetzt werden, genomische-in-situ-Hybridisierung (GISH). Der zugrunde liegenden Mechanismus von FISH lässt sich wie folgt beschreiben: DNA ist chemisch aufgebaut als linearer Polyester aus Desoxyribose und Phosphorsäure mit heterozyklischen Stickstoffbasen in der Seitenkette, so genannter Einzelstrang. Zwei solcher DNA-Einzelstränge können durch Wasserstoffbrückenbindungen eine Doppelhelix ausbilden. Wasserstoffbrücken der Doppelhelix können durch Erwärmung auf Temperaturen um ca. 800C oder durch Zugabe organischer Lösungsmittel wie Formamid in zwei Einzelstränge getrennt werden. Die Temperatur, bei der diese Separation des Doppelstranges stattfindet, wird als Schmelztemperatur bezeichnet. Nach einer Separation können zwei DNA Einzelstränge wieder spezifisch zum Doppelstrang rekombinieren, wenn die Basensequenz der Einzelstränge zueinander komplementär ist. Diese spezifische Rekombination von DNA-Einzelsträngen verschiedener Herkunft zum Doppelstrang nennt man Hybridisierung. The term "fluorescence in situ hybridization" (FISH), as used in the present invention, refers to a molecular biological method to detect nucleic acids, ie RNA or DNA, in tissues, single cells or on metaphase chromosomes by means of fluorescence In this case, an artificially prepared probe of a nucleic acid is used, which via base pairs to the nucleic acid to be detected hybridizes, so binds. The term "in situ" is used because the detection is carried out directly in the respective structure In principle, the number, location and activity of genes can be determined or even entire chromosomes can be labeled by means of chromosomal in situ suppression (CISS) hybridization genomic in situ hybridization (GISH) The underlying mechanism of FISH can be described as follows: DNA is chemically synthesized as a linear polyester from deoxyribose and phosphoric acid with heterocyclic nitrogen bases in the side chain Two single strands of DNA can form a double helix through hydrogen bonds, and hydrogen bonds in the double helix can be separated into two single strands by heating to temperatures of about 80 ° C. or adding organic solvents such as formamide Separation of Doppelstra takes place, is referred to as melting temperature. After separation, two DNA single strands can recombine specifically to the duplex once the base sequence of the single strands is complementary to each other. This specific recombination of DNA single strands of different origin to double strand is called hybridization.
Eine Hybridisierungsstelle kann dadurch nachgewiesen werden, dass man an ein DNA- Molekül einen Fluoreszenzfarbstoff anbindet und diesen nach erfolgter Hybridisierung durch eine geeignete Lichtquelle zur Fluoreszenz anregt. Setzt man als Ziel-DNA ein biologisches Präparat ein, so kann man durch diese spezifische Rekombination eine ganz bestimmte DNA-Sequenz z.B. in einem Chromosom oder in einem Zellkern nachweisen. Diese spezielle Hybridisierungsvariante wird Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) genannt.  A hybridization site can be detected by attaching a fluorescent dye to a DNA molecule and exciting it to fluorescence after hybridization by a suitable light source. If a biological preparation is used as target DNA, this specific recombination can be used to produce a specific DNA sequence, e.g. in a chromosome or in a nucleus. This particular hybridization variant is called fluorescence in situ hybridization (FISH).
Durch die nachfolgenden Beispiele wird die vorliegende Erfindung näher beschrieben. The following examples describe the present invention in more detail.
Beispiel 1 Herstellung eines auf inaktivierten Coxsackie-B-Viren beruhenden Impfstoffes Der Herstellungsprozess eines inaktivierten Coxsackie-B-Impfstoffes umfasst die folgenden Schritte: Example 1 Preparation of Inactivated Coxsackie B Virus Based Vaccine The manufacturing process of an inactivated coxsackie B vaccine comprises the following steps:
Herstellung von Säugetier-Zell-Kulturen; Production of mammalian cell cultures;
Virus- Saat/ Virus-Inokulation;  Virus seed / virus inoculation;
- Virus- Wachstum (inkubiert bei 37°C); - virus growth (incubated at 37 ° C);
Virus-Ernte; Klärung; Konzentrierung; Aufreinigung durch Gelpermeationschromatographie; und Ionenaustauschchromatographie;- Filtration; Virus harvest; Clarification; concentration; Purification by gel permeation chromatography; and ion exchange chromatography; - filtration;
Hinzufügen von Impfstoffe andere Serotypen;  Adding vaccines to other serotypes;
- endgültige Formulierung. - final formulation.
Das Coxsackie-B-Virus wird aus dem Stuhl eines frisch an ALL-erkrankten Kindes gewonnen und zum Beispiel in Vero-Zellen (normale Nierenzellen von der Grünen Meerkatze) vermehrt. Nach Mikrocarrier-Kulturen wird das Medium entfernt, die Zellen werden gewaschen und mit der Aussaat infiziert (multiplicity of infection, MOI). The Coxsackie B virus is obtained from the stool of a fresh ALL-ill child and, for example, in Vero cells (normal kidney cells from the Green Monkey) multiplied. After microcarrier cultures, the medium is removed, the cells are washed and infected with the seeds (multiplicity of infection, MOI).
Nach Beimpfung werden die Wirtszellen bei 37°C für 72 bis 96 Stunden inkubiert. Zur Ernte wird die Virus-Flüssigkeit von den Microcarrier entfernt (z.B. durch Sedimentierung oder durch ein Spezialfilter). Es folgt ein grober Reinigungsschritt, um die Mehrzahl der kontaminierenden Zellen zu entfernen. Anschließend erfolgt die Feinreinigung durch Chromatographie. Im ersten groben Reinigungsschritt wird als erstes die Virus-Flüssigkeit geklärt, um den groben Zell-Debris zu entfernen. Dabei wird eine Serie unterschiedlicher Filter benutzt, wobei der letzte Filter einen 0,2 μm Filter darstellt. Die so vorgeklärte Virussuspension wird dann durch Ultrafiltration (cut off von 100 kD) konzentriert, um das Volumen der Flüssigkeit zu reduzieren. After inoculation, the host cells are incubated at 37 ° C for 72 to 96 hours. For harvest, the virus fluid is removed from the microcarriers (e.g., by sedimentation or by a special filter). This is followed by a coarse cleaning step to remove the majority of the contaminating cells. Subsequently, the fine purification is carried out by chromatography. In the first rough cleaning step, the virus fluid is first clarified to remove the coarse cell debris. A series of different filters is used, with the last filter representing a 0.2 μm filter. The pre-clarified virus suspension is then concentrated by ultrafiltration (cut off of 100 kD) to reduce the volume of the liquid.
Bei der chromatographischen Aufreinigung können unterschiedliche Prinzipien angewendet und kombiniert werden; zum Beispiel eine Trennung beruhend auf dem Molekulargewicht des Materials durch Gelfiltration sowie eine Trennung beruhend auf der Ionenbela- düng durch Ionenaustausch-Chromatographie. Der Antigengehalt der Flüssigkeit wird überwacht. Dazu wird die Konzentration von kontaminierenden Proteinen nach jedem Schritt überwacht, um die Übereinstimmung des gereinigten Produktes zu überwachen. Da Zelllinien für die Produktion dieses Impfstoffes verwendet werden, ist die Eliminierung von Nukleinsäuren von besonderer Bedeutung. Der DNA-Clearance-Faktor nach dem letz- ten Reinigungsschritt muss 108 betragen, was bedeutet, dass das Endprodukt weniger als 10 pg DNA pro Dosis enthält. In chromatographic purification, different principles can be used and combined; for example, a separation based on the molecular weight of the material by gel filtration as well as a separation based on the ion loading by ion exchange chromatography. The antigen content of the liquid is monitored. To this end, the concentration of contaminating proteins is monitored after each step to monitor the consistency of the purified product. Since cell lines are used for the production of this vaccine, the elimination of nucleic acids is of particular importance. The DNA clearance factor after the final purification step must be 10 8 , which means that the final product contains less than 10 pg of DNA per dose.
Im nächsten Schritt erfolgt die Inaktivierung der gereinigten Virussuspension, wobei imIn the next step, the inactivation of the purified virus suspension takes place
Sinne von Qualität und Sicherheit des Impfstoffes sichergestellt sein muss, dass keine Ie- benden Viren im Endprodukt vorhanden sind. Gleichzeitig muss allerdings bei dem Inakti- vierungsprozess, zum Beispiel bei einem chemischen Inaktivierungsprozess, die Antigenität der Virus-Partikel aufrechterhalten werden. Die Inaktivierung findet am Ende des Reinigungsprozesses statt, um ein Crosslinking von Verunreinigungen mit dem Viruspartikeln zu vermeiden. Die chemische Inaktivierung kann beispielsweise mit Formaldehyd erfolgen, was etwa zur Inaktivierung von anderen Enteroviren wie etwa den Poliomye- litis- Viren gesetzt wird. In the interests of quality and safety of the vaccine, it must be ensured that no viruses are present in the end product. At the same time, however, during the inactivation process, for example in a chemical inactivation process, the Antigenicity of the virus particles are maintained. Inactivation takes place at the end of the purification process to avoid crosslinking of contaminants with the virus particle. The chemical inactivation can be carried out, for example, with formaldehyde, which is about to be inactivated by other enteroviruses such as the poliomyelitis virus.
Vor der chemischen Inaktivierung wird die gereinigte Virus-Suspension durch Filtration sterilisiert. Diese Filtrationssterilisierung wird nicht länger als 27 Stunden die zur Inaktivierung erforderliche Formaldehyd-Menge unter aseptischen Bedingungen zur gereinigten und sterilisierten Virus-Suspension hinzugefügt. Danach wird diese Mischung bei 37°C für 6 Tage inkubiert. Die Suspension wird dann ein zweites Mal gefiltert und erneut inkubiert (6 bis 9 Tage). Inaktivierungstemperatur: 37°C, Formaldehydkonzentration in Endverdünnung 1 : 4000, pH des Mediums 7.0. Vor der endgültigen Formulierung des Impfstoffes wird die inaktivierte Virus-Suspension bei 4°C gelagert. Während dieser Zeit werden Proben entnommen, um die komplette Vi- rusinaktivierung zu bestimmen. Die oben beschriebenen Herstellungsschritte werden für alle sechs Serotypen des Coxsackie-B-Virus in ähnlicher Weise durchgeführt. Nach der Überprüfung des Inaktivierungsschrittes werden die monovalenten Coxsackie-B- Impfstoffe der Serotypen gepoolt. Before the chemical inactivation, the purified virus suspension is sterilized by filtration. This filtration sterilization is not added for more than 27 hours to the amount of formaldehyde required for inactivation under aseptic conditions to the purified and sterilized virus suspension. Thereafter, this mixture is incubated at 37 ° C for 6 days. The suspension is then filtered a second time and incubated again (6 to 9 days). Inactivation temperature: 37 ° C, formaldehyde concentration in final dilution 1: 4000, pH of the medium 7.0. Before the final formulation of the vaccine, the inactivated virus suspension is stored at 4 ° C. During this time samples are taken to determine complete virus inactivation. The above-described preparation steps are carried out similarly for all six serotypes of coxsackie B virus. Following review of the inactivation step, the monovalent coxsackie B vaccines of the serotypes are pooled.
Beispiel 2: Tierexperimentelle Versuche Schwangere Mäuse werden inteaperitoneal mit einem bestimmten Coxsackie-B-Virus Stamm inokuliert und die Hälfte von deren Nachkommen mit dem identischen Stamm (erste Gruppe), die übrigen 50% werden mit einem Coxsackie-B-Virus Stamm inokuliert, der einem anderen Serotyp zugehörig ist (zweite Gruppe). Es kann gezeigt werden, dass in der ersten Gruppe eine lymphatische Leukämie auftritt, in der zweiten nicht. Example 2: Animal Experiments Pregnant mice are inoculated inteaperitoneally with a specific coxsackie B virus strain and half of their offspring are inoculated with the identical strain (first group), the remaining 50% are inoculated with a coxsackie B virus strain, the belongs to another serotype (second group). It can be shown that lymphocytic leukemia occurs in the first group, but not in the second group.
Beispiel 3 : Viroserologische Untersuchungen a) Virusserologie bei Müttern Example 3: Viroserological examinations a) Virusserologie in mothers
Mütter von ALL-Patienten und Kontroll-Müttern werden Blutproben entnommen und die Häufigkeiten von Coxsackie-B-Infektionen vergleichend bestimmt. Es kann gezeigt wer- den, dass der Anteil der Mütter mit Coxsackie-B-Viren Infektionen bei den Müttern von ALL-Patienten höher ist als in der Kontrollgruppe. b) Virusnachweis in Guthrie-Karten Mothers of ALL patients and control mothers are sampled and the frequencies of coxsackie B infections are compared. It can be shown that the proportion of mothers with Coxsackie B virus infections is higher in the mothers of ALL patients than in the control group. b) Virus detection in Guthrie cards
Es werden die Häufigkeiten von Coxsackie-B-Infektionen bei ALL-Patienten und in einer Kontrollgruppe anhand von Guthrie Karten bestimmt. Es kann nachgewiesen werden, dass IgM-Antikörper, die auf eine kürzlich durchgemachte Coxsackie-B-Infektion hinweisen, mit höherer Häufigkeit in Guthrie-Karten von ALL-Patienten zu finden sind. Dies unterstützt die Rolle der Coxsackie-B-Viren beim„ersten Schlag", d.h. in der ersten Stufe des beschriebenen zweistufigen Infektionsverlaufes. c) Virusserologie bei ALL-Patienten The frequencies of Coxsackie B infections in ALL patients and in a control group are determined by Guthrie charts. It can be shown that IgM antibodies indicative of a recent coxsackie B infection are found more frequently in Guthrie maps of ALL patients. This supports the role of coxsackie B viruses on the "first beat," i.e., in the first stage of the two-stage infectious pathway described c) virus serology in ALL patients
Es wird die Häufigkeit von Coxsackie-B-Infektionen, insbesondere durch den Nachweis von IgM-Antikörper, bei ALL-Patienten und in einer Kontrollgruppe bestimmt. Es kann nachgewiesen werden, dass IgM-Antikörper mit höherer Häufigkeit in ALL-Patienten zu finden sind. Dies unterstützt die Rolle der Coxsackie-B-Viren beim„zweiten Schlag", d.h. in der zweiten Stufe des beschriebenen zweistufigen Infektionsverlaufes. d) Virusserologie im Stuhl von ALL-Patienten  The frequency of Coxsackie B infections is determined, in particular by the detection of IgM antibodies, in ALL patients and in a control group. It can be shown that IgM antibodies are found more frequently in ALL patients. This supports the role of Coxsackie B viruses on the "second beat", i.e., the second stage of the two-stage infectious course described d) virus serology in stool of ALL patients
Es wird die Häufigkeit von Coxsackie-B-Viren im Stuhl von ALL-Patienten und in einer Kontrollgruppe bestimmt. Es kann nachgewiesen werden, dass Coxsackie-B-Viren mit größerer Häufigkeit in ALL-Patienten zu finden sind. Dies unterstützt die Rolle der Coxsackie-B-Viren beim„zweiten Schlag", d.h. in der zweiten Stufe des beschriebenen zweistufigen Infektionsverlaufes e) Virusnachweis im Lymphocyten von ALL-Patienten The frequency of coxsackie B viruses in the stool of ALL patients and in a control group is determined. It can be shown that coxsackie B viruses are more prevalent in ALL patients. This supports the role of Coxsackie B viruses in the "second beat", i.e. in the second stage of the two-stage infectious course described e) Virus detection in the lymphocyte of ALL patients
Nachweis von Coxsackie-B-Viren oder Teilen von diesen in den Lymphocyten von ALL- Patienten und von Kontrollkindern: In den Lymphocyten von ALL-Patienten kann mit einer größeren Häufigkeit der Nachweis für Coxsackie-B-Viren erbracht werden. Dies unterstützt die Rolle der Coxsackie-B-Viren beim„zweiten Schlag", d.h. in der zweiten Stufe des beschriebenen zweistufigen Infektionsverlaufes Beispiel 4: Biologische Evidenz Biologische Evidenz ergab die Testung, ob menschliche Lymphoblasten aus Nabelschnurblut gegenüber einer Exposition mit Coxsackie B-Viren in vitro mit solchen Chromosomenaberrationen reagieren, wie sie in der Routinediagnostik bei Patienten mit ALL des Kindes gefunden werden, und ob eine Exposition mit Coxsackie A- Viren nicht zu solchen für die Prädisposition zur ALL notwendigen Chromosomenaberrationen führt. Detection of coxsackie B viruses or parts of them in the lymphocytes of ALL patients and control children: In the lymphocytes of ALL patients, evidence of coxsackie B viruses can be obtained at a higher frequency. This supports the role of Coxsackie B viruses in the "second beat", ie in the second stage of the described two-stage infection process. Example 4: Biological evidence Biological evidence has been used to test whether human umbilical cord blood lymphoblasts respond to exposure to Coxsackie B virus in vitro to chromosome aberrations found in routine diagnostics in patients with ALL of the child, and whether exposure to Coxsackie A virus does not leads to those for the predisposition to ALL necessary chromosome aberrations.
Es wurden Proben von menschlichem Nabelschnurblut der Firma PromoCell, Heidelberg, verwendet. Die Proben wurden im Brutschrank bei 37 Grad Celsius und 5% CO2 kultiviert, dann mit einer bestimmten Menge Coxsackie B-Viren, respektive Coxsackie A- Viren be- impft und weiter kultiviert. Dann wurde mit PBS (Phosphat gepufferte Salzlösung) aufgefüllt und für 10 Minuten bei 778xg zentrifugiert. Der Buffy-Coat wurde abgenommen, die Zellen gewaschen und in den Kulturansatz mit Phythaemagglutinin gebracht. Samples of human umbilical cord blood from PromoCell, Heidelberg, were used. The samples were cultured in the incubator at 37 degrees Celsius and 5% CO 2 , then inoculated with a certain amount of Coxsackie B viruses, respectively Coxsackie A viruses, and further cultivated. Then, it was filled up with PBS (phosphate buffered saline) and centrifuged for 10 minutes at 778xg. The buffy coat was removed, the cells washed and brought into the culture mixture with phytohaemagglutinin.
A) Die Chromosomenpräparation basiert auf der Anreicherung von Metaphasezellen durch Arretierung der Zellen in der Mitose durch Zugabe des Spindelgiftes Colchizin. DurchA) The chromosome preparation is based on the accumulation of metaphase cells by arresting the cells in mitosis by adding the spindle toxin colchicine. By
Behandlung der noch vitalen Zellen mit hypotoner Lösung erfolgt eine durch Osmose bedingte Schwellung der Zellen, die im Anschluss mit einem Gemisch aus Methanol und Essig fixiert und auf den Objektträger aufgebracht werden. Dann erfolgt die Analyse der Chromosomen, bzw. deren Aberrationen. Treatment of the still vital cells with hypotonic solution is carried out by osmosis-induced swelling of the cells, which are then fixed with a mixture of methanol and vinegar and applied to the slide. Then the analysis of the chromosomes or their aberrations takes place.
Ergebnis zu A: etwa 70 % mit vorliegenden ALL spezifischen Chromosomenaberrationen wurden gefunden. Result to A: about 70% with present ALL specific chromosomal aberrations were found.
B) Zur Erfassung kryptogener Chromosomenaberrationen wurde die Fluoreszenz-in-situ- Hypbridisierung (FISH) erforderlich. Dies betrifft insbesondere die häufigste Chromosomenaberration der ALL, nämlich Translokation von Chromosom 12 auf 21. B) In order to detect cryptogenic chromosome aberrations, fluorescence in situ hybridization (FISH) was required. This applies in particular to the most common chromosome aberration of ALL, namely translocation from chromosome 12 to 21.
Ergebnis: Häufigkeit: in 15 % wurde Translokation von Chromosom 12 auf 21 gefunden. Result: Frequency: Translocation from chromosome 12 to 21 was found in 15%.

Claims

Patentansprüche claims
1. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) . 1. Vaccine based on coxsackie B viruses for the prevention of acute lymphoblastic leukemia (ALL).
2. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass es sich um die Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie von Kindern handelt, welche bei Kindern in der Altersgruppe vom zweiten bis zum fünften Lebensjahr auftritt. 2. A vaccine based on Coxsackie B viruses according to claim 1, characterized in that it is the prevention of acute lymphoblastic leukemia of children, which occurs in children in the age group from the second to the fifth year of life.
3. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um einen Impfstoff enthaltend mindestens ein Antigen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus abgetötete Coxsackie-B-Viren, Protein-Fragmenten von Coxsackie-B-Viren und cDNA-Fragmenten von Coxsackie- B-Viren handelt. 3. Vaccine based on Coxsackie B viruses according to one of claims 1 or 2, characterized in that it is a vaccine containing at least one antigen selected from the group consisting of killed Coxsackie B viruses, protein fragments of coxsackie B viruses and cDNA fragments of coxsackie B viruses.
4. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um einen Impfstoff enthaltend abgetötete Coxsackie-B-Viren von mindestens einem Serotyp ausgewählt aus der Gruppe Coxsackie-Bl -Viren, Coxsackie-B2- Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie-B4-4. Vaccine based on Coxsackie B viruses according to one of claims 1 to 3, characterized in that it is a vaccine containing killed Coxsackie B viruses of at least one serotype selected from the group Coxsackie Bl viruses, coxsackie B2 viruses, Coxsackie B3 viruses, Coxsackie B4
Viren, Coxsackie-B5- Viren und Coxsackie-B6-Viren handelt. Viruses, Coxsackie B5 viruses and Coxsackie B6 viruses.
5. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um einen Impfstoff enthaltend abgetötete Coxsackie-B-Viren von mindestens einem Serotyp ausgewählt aus der Gruppe5. Vaccine based on Coxsackie B viruses according to one of claims 1 to 4, characterized in that it is a vaccine containing killed Coxsackie B viruses of at least one serotype selected from the group
Coxsackie-B2- Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie-B4- Viren und Coxsackie-B5- Viren handelt. Coxsackie B2 viruses, Coxsackie B3 viruses, Coxsackie B4 viruses and Coxsackie B5 viruses.
6. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, da- durch gekennzeichnet, dass es sich um einen Impfstoff enthaltend abgeschwächte und/oder abgetötete Coxsackie-B-Viren von den Serotypen Coxsackie-Bl -Viren, Coxsackie-B2- Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie-B4- Viren, Coxsackie-B5- Viren und Coxsackie-B6-Viren handelt. 6. A vaccine based on Coxsackie B viruses according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it is a vaccine containing attenuated and / or killed Coxsackie B viruses of the serotypes Coxsackie Bl viruses, Coxsackie -B2 viruses, Coxsackie B3 viruses, Coxsackie B4 viruses, Coxsackie B5 viruses and Coxsackie B6 viruses.
7. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um einen Impfstoff enthaltend Protein- und/oder Nukleotid-Fragmente von mindestens einem Coxsackie-B-Viren-Serotyp ausgewählt aus der Gruppe Coxsackie-Bl -Viren, Coxsackie-B2- Viren, Coxsackie-B3 -Viren, Coxsackie-B4-Viren, Coxsackie-B5 -Viren und Coxsackie-B6-Viren handelt. 7. A vaccine based on Coxsackie B viruses according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it is a vaccine containing protein and / or nucleotide fragments of at least one Coxsackie B virus serotype selected from the group Coxsackie Bl viruses, Coxsackie B2 viruses, Coxsackie B3 viruses, Coxsackie B4 viruses, Coxsackie B5 viruses, and Coxsackie B6 viruses.
8. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass der Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie zur Verabreichung bei Kindern vor Vollendung des ers- ten Lebensjahres geeignet ist. 8. A vaccine based on Coxsackie B viruses according to any one of claims 1 to 7, characterized in that the vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia is suitable for administration in children before the age of one.
9. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass der Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie zur Verabreichung bei Kindern vor Vollendung des sechsten Lebensmonats geeignet ist. A vaccine based on coxsackie B viruses according to any one of claims 1 to 8, characterized in that the vaccine for the prevention of acute lymphoblastic leukemia is suitable for administration to children before the completion of the sixth month of life.
10. Impfstoff beruhend auf Coxsackie-B-Viren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei der Impfstoff zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie zur intramuskulären oder subkutanen Verabreichung bei Kindern vor Vollendung des sechsten Lebensmonats geeignet ist. 10. A vaccine based on Coxsackie B viruses according to any one of claims 1 to 9, wherein the vaccine is suitable for the prevention of acute lymphoblastic leukemia for intramuscular or subcutaneous administration in children before the completion of the sixth month of life.
11. Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffs beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie bei Kindern, wobei inaktivierte Coxsackie-B-Viren ausgewählt aus mindestens einem Serotyp mit einem pharmazeu- tisch verträglichen Träger gemischt werden. 11. A method of producing a vaccine based on coxsackie B viruses for the prevention of childhood acute lymphoblastic leukemia, wherein inactivated coxsackie B viruses selected from at least one serotype are mixed with a pharmaceutically acceptable carrier.
12. Verwendung eines Impfstoffes beruhend auf Coxsackie-B-Viren zur Herstellung einer Zusammensetzung zur Vorbeugung von akuter lymphoblastischer Leukämie bei Kindern. Use of a vaccine based on coxsackie B viruses for the manufacture of a composition for the prevention of acute lymphoblastic leukemia in children.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7090855B1 (en) * 1999-06-24 2006-08-15 Hyoety Heikki Prevention of Type 1 diabetes and other non-polio enterovirus diseases
US20030190329A1 (en) * 2000-03-27 2003-10-09 Tracy Steven M. Coxsackievirus vectors and their use in prevention and treatment of disease
CA2325666A1 (en) * 2000-12-01 2002-06-01 Institut Pasteur Immunogenic mutated peptides derived from r9m, polynucleotides, coding polynucleotides and their therapeutic uses
US7205112B2 (en) * 2001-06-27 2007-04-17 University Of South Florida Materials and methods for detection of enterovirus and norovirus
US20050239193A1 (en) * 2002-05-30 2005-10-27 Bioforce Nanosciences, Inc. Device and method of use for detection and characterization of microorganisms and microparticles
CA2621964A1 (en) * 2005-09-08 2007-03-15 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating picornavirus infection
FI20075861A0 (en) * 2007-11-30 2007-11-30 Vactech Oy Use of Enterovirus in Diagnosis, Treatment and Prevention of Disease
WO2010037402A1 (en) * 2008-10-02 2010-04-08 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
European Pharmacopeia, Seiten 815-817 *
HEMMINKI KARI ET AL: "Co-Morbidity between Early-Onset Leukemia and Type 1 Diabetes - Suggestive of a Shared Viral Etiology?", PLOS ONE, vol. 7, no. 6, June 2012 (2012-06-01), pages Article No.: e39523, ISSN: 1932-6203(print) *
See also references of WO2011009854A2 *
YEUNG WING-CHI G ET AL: "Enterovirus infection and type 1 diabetes mellitus: systematic review and meta-analysis of observational molecular studies", BMJ, vol. 342, February 2011 (2011-02-01), pages Article No.: d35, ISSN: 0959-535X(print) *

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