EP2448588A1 - Methods and compositions for treating cancer - Google Patents

Methods and compositions for treating cancer

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Publication number
EP2448588A1
EP2448588A1 EP10745377A EP10745377A EP2448588A1 EP 2448588 A1 EP2448588 A1 EP 2448588A1 EP 10745377 A EP10745377 A EP 10745377A EP 10745377 A EP10745377 A EP 10745377A EP 2448588 A1 EP2448588 A1 EP 2448588A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
alkyl
aryl
composition according
integer
atoms
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP10745377A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Michel Pfeffer
Christian Gaiddon
Claude Sirlin
Jean-Paul Collin
Jean-Philippe Loeffler
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite de Strasbourg
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite de Strasbourg
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Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM, Universite de Strasbourg filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP2448588A1 publication Critical patent/EP2448588A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the present invention relates to uses or methods for the treatment of proliferative pathologies, in particular cancers, using ruthenium compounds and compositions containing them.
  • Platinum complexes are known to have significant antitumor activity. The best known of these is cisplatin, which is commonly used for the clinical treatment of many cancers. The resistance of certain cancer cells and the intrinsic toxicity of platinum are some of the problems encountered when using this compound. Since the 1970s, research has intensified to find molecules that can replace cisplatin and in recent years ruthenium-containing compounds have emerged as an interesting alternative to those containing platinum. Some ruthenium complexes have already been described as being an alternative for cancer treatments.
  • the present invention thus describes ruthenium compounds which have particularly advantageous anti-tumor properties.
  • These compounds are organometallic compounds, ie they contain at least one covalent carbon-metal bond (CM, M being ruthenium).
  • CM covalent carbon-metal bond
  • N-Ru intramolecular nitrogen-ruthenium
  • ruthenium is therefore part of a cyclic entity and this class of compounds is commonly called by the chemists of the discipline the class of cyclometallic compounds.
  • the cyclic entity containing ruthenium is called a metallocycle.
  • the ruthenium is therefore bound to an organic ligand both by a covalent carbon-ruthenium bond and by two donor-acceptor bonds (acid-Lewis base, or coordination link) nitrogen-ruthenium.
  • the existence of such a metallocycle in an organometallic molecule gives it particular properties in terms of reactivity and thermodynamic stability.
  • Various types of carbon atoms aromatic, benzylic or aliphatic can be metallated and the nature of the bond between the donor atom (nitrogen) and the carbon atom can be varied in many ways.
  • the subject of the present invention is therefore a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable carrier, at least one ruthenium complex compound, of the following general formula:
  • Li, L 2 , L 3 which may be identical or different, each represent a donor ligand of 2 electrons by a nitrogen, oxygen, phosphorus or sulfur atom, or a halogen atom
  • Xi and X 2 different from each other, represent one, a nitrogen atom and the other, a carbon atom, between Xi and X 2 , represented by a curved line, there is a succession of atoms forming, with X 1 , X 2 and R 1 represented on the formula, a ring which consists of 5 to 8 atoms, and between N and X 1, represented by the other curved line, there is a succession of atoms forming with the nitrogen atom, Xi and Ru represented in the formula, a ring which consists of 5 to 8 atoms.
  • the term "pharmaceutically acceptable carrier” means substances such as excipients, vehicles, adjuvants, buffers which are conventionally used, in combination with the method (s) active (s), for the preparation of a medicament.
  • the choice of such supports depends essentially on the intended route of administration.
  • the compounds of the invention may be in the form of pharmaceutically acceptable salts, solvates and / or prodrugs.
  • the pro-drugs are variants of the compounds of the invention which can be converted in vivo into compounds of the general formula according to the invention.
  • halogen atom is meant a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom.
  • the halogen atom is a chlorine atom.
  • ligands for Li, L 2 and / or L 3 include, in particular, nitrile ligands, for example ligands of formula (d) alkylCN (in particular
  • CH 3 CN CH 3 CN
  • pyridine ligands optionally substituted on one or more carbon atoms of the pyridine rings, with a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl) or aryloxyl (O-aryl) radical.
  • primary amines C 1-6 alkyl NH 2 , such as methylamine or ethylamine.
  • Binding ligands of two electrons by a phosphorus atom include phosphine ligands.
  • they are of formula P (Ph) 3-x (alkyl) x , where x represents 0, 1 or 2, preferably x represents 2, and Ph represents the phenyl group.
  • P (Ph) (CH 3 ) 2 mention may especially be made of P (Ph) (CH 3 ) 2 .
  • alkyl denotes a linear or branched hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, advantageously having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, and the like.
  • alkyl groups may be substituted with an aryl group, in which case it is referred to as an arylalkyl group.
  • arylalkyl groups include benzyl and phenethyl.
  • the alkyl or arylalkyl groups may optionally have one or more substituents, chosen in particular from a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO) radical.
  • the "aryl" groups are mono-, bi- or tri-cyclic aromatic hydrocarbon systems, optionally interrupted by at least one heteroatom (in particular O, S or N).
  • the aryl groups include monocyclic or bicyclic aromatic hydrocarbon systems having from 6 to 18 carbon atoms, more preferably 6 carbon atoms. Mention may be made, for example, of phenyl, naphthyl and biphenyl groups.
  • the aryl groups include pyridyl, imidazoyl, pyrrolyl and furanyl rings.
  • the aryl groups may optionally have one or more substituents, chosen in particular from a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (C0 2 -alkyl) radical.
  • thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulphonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2- x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium ( N (alkyl or aryl) y H 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer which may be 1 or 2), hydrazine, azo (N N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-NH w (alkyl or aryl) 2-w where w is an integer which may be 0, 1 or 2) or cyano.
  • two or three of the groups Li, L 2 and L 3 may be connected to one another by at least one covalent bond.
  • the compounds of the invention have one, two or three Li, L 2 and L 3 groups representing a donor ligand of two electrons per nitrogen atom.
  • Li, L 2 , and / or L 3 can represent, taken alone, in pairs, or in threes, a pyridine, bipyridine, phenanthroline or terpyridine group, said groups being optionally substituted, in particular by at least one a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid , sulfonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl)
  • the compounds according to the invention are such that the groups Li, L 2 and L 3 together form a donor ligand of two electrons per nitrogen atom, for example the groups Li, L 2 , and L 3 may together form terpyridine or 2- (2-pyridyl) -1,10-phenanthroline, optionally substituted, on one or more carbon atoms of its pyridine rings, with at least one halogen atom, an alkyl radical , aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulfonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) y H 3 -
  • the substituent is an aryl radical, preferably phenyl, advantageously itself substituted by a methyl or methoxyl radical.
  • aryl radical preferably phenyl, advantageously itself substituted by a methyl or methoxyl radical.
  • phenanthroline preferably phenyl
  • terpyridine advantageously itself substituted by a methyl or methoxyl radical.
  • 2- (2-pyhdyl) -1,10-phenanthroline are as defined below, corresponding respectively to the ligands 5, 6, 7 and 8:
  • Y " in the compounds of the invention is a counterion and is only present in the compound when the ruthenium complex bears a positive charge.
  • Y " is preferably a weakly nucleophilic anion, such as for example BF 4 " , B (C 6 Hs) 4 “, PF 6", CF 3 SO 3 “, tosylate (p-tolylSO 3"), mesylate (MeSO 3 "), SO 4 2", CF 3 CO 2 “, CH 3 CO 2” , bicarbonate (HCO 3 " ), CIO 4 “ , or NO 3 “ , in particular PF 6 " .
  • the ligands Li, L 2 and L 3 are so-called ancillary ligands, the presence of which is only necessary to complete the coordination sphere of ruthenium. It seems that their nature does not affect in a significant way the biological activity of the claimed compounds, this being mainly related to the nature of the metallocycle (s).
  • m is equal to 1.
  • the curved line, with Xi, X 2 and Ru in the general formula, represents a cycle.
  • This ring generally consists of 5 to 8 atoms (including the atoms represented by X 1 , X 2 and Ru in formula (I)), preferably 5 to 6 atoms, and even more preferably 5 atoms.
  • the atoms of said ring (other than those represented in the general formula) are chosen from the atoms of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur.
  • these atoms are only carbon atoms.
  • Each of these atoms can independently of said cycle form linear or cyclic structures, saturated or not, for which there are no particular limitations.
  • the curved line, with Xi, N and Ru in the general formula, represents another cycle whose Ru-Xi bond is common to the first cycle.
  • This ring generally consists of 5 to 8 atoms (including the atoms represented by X-1, N and Ru in formula (I)), preferably from 5 to 6 atoms, and even more preferably 5 atoms.
  • the atoms of said ring (other than those represented in the general formula) are chosen from carbon, nitrogen, oxygen and sulfur atoms.
  • these atoms are only carbon atoms.
  • Each of these atoms can independently of said cycle form linear or cyclic structures, saturated or not, for which there are no particular limitations.
  • the compounds of the invention also include optical and geometric isomers, taken individually or as a mixture (especially racemates), of compounds of formula (I).
  • the composition according to the invention comprises at least one of the compounds (1) to (12).
  • the compounds (8) and (9) are synthesized by metallation of the ligands 2,6-bis (2'pyridyl) -4-carbomethoxybenzene and 2,6-bis (2'pyridyl) -4-methylbenzene respectively.
  • the invention also relates to a ruthenium compound, characterized in that it is chosen from compounds (8) and (9):
  • compositions according to the invention are particularly advantageous for treating diseases related to cellular hyperproliferation, in particular cancers.
  • Cancers include those with solid or liquid tumors.
  • the cancers correspond in particular to glioblastomas, neuroblastomas, promyelocytic leukemias, cancers of the prostate, ovaries, lungs, breasts, digestive tract, in particular of the liver, pancreas, head and neck, colon, non-Hodgkin's lymphoma and melanoma.
  • the subject of the present invention is also a compound of formula (I), as defined above, for use in the treatment of diseases related to cellular hyperproliferation, in particular cancers.
  • the subject of the present invention is also the use of at least one compound of formula (I), as defined above, in the context of the preparation of a pharmaceutical composition intended to treat diseases linked to cellular hyperproliferation. , especially cancers.
  • the compounds of the invention exhibit an antiproliferative effect against tumor cells. They are particularly useful for treating cancers by accumulation of tumor cells in G0 / G1 or G2 / M phase and possibly by inducing apoptosis or another type of cell death of tumor cells.
  • the compounds of the invention appear in particular capable of accumulating tumor cells in G0 / G1 or G2 / M phase and thus by blocking their cell cycle, but also seem capable of generating their death rapidly, especially when their concentration is increased, sign of a dose-dependent toxicity.
  • compositions according to the invention are particularly advantageous for treating tumors resistant to cisplatin or other anticancer drugs.
  • compositions according to the invention can be administered in different ways and in different forms.
  • they can be administered systemically, orally, by inhalation or by injection, for example intravenously, intramuscularly, subcutaneously, trans-dermally, intra-artery etc., the intravenous routes, intramuscular, subcutaneous, oral and inhalation being preferred.
  • the compositions are generally in the form of liquid suspensions, which can be injected by means of syringes or infusions, for example.
  • the compounds are generally dissolved in saline, physiological, isotonic, buffered, etc. solutions compatible with pharmaceutical use and known to those skilled in the art.
  • compositions according to the invention may contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, stabilizers, preservatives, etc.
  • Agents or vehicles that can be used in liquid and / or injectable formulations include methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, etc.
  • compositions may also be administered in the form of gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, aerosols, etc., possibly by means of dosage forms or devices providing sustained and / or delayed release.
  • an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
  • the injection rate and / or the injected dose may be adapted by those skilled in the art depending on the patient, the pathology concerned, the mode of administration, etc.
  • the compounds of the invention are administered at doses ranging between 0.1 ⁇ g and 100 mg / kg of body weight, more generally between 0.01 and 10 mg / kg, typically between 0.1 and 10 mg / kg. kg.
  • repeated injections can be performed.
  • sustained release and / or delayed release systems may be advantageous.
  • the invention also relates to a method for treating a pathology related to cellular hyperproliferation, in particular cancer, by administering to a subject afflicted with such a pathology a composition according to the invention.
  • benign tumors Among the other types of cell hyperproliferation whose treatment may be envisaged according to the invention may be mentioned benign tumors.
  • the term "treatment” refers to the preventive, curative and palliative treatment, as well as the management of the patients (reduction of the suffering, improvement of the lifespan, slowing of the progression of the disease , reduction of tumor growth, etc.).
  • the treatment may also be carried out in combination with other chemical or physical agents or treatments (chemotherapy, radiotherapy, gene therapy, etc.).
  • the treatments and medicaments of the invention are particularly intended for humans.
  • the compounds according to the invention can be advantageously used in combination with an anti-cancer treatment involving radiation, such as radiotherapy.
  • compositions according to the invention can be used with other chemical agents or therapeutic anticancer treatments, such as the following therapeutic chemical agents: cisplatin, carboplatin, taxotere or taxol, advantageously taxol.
  • therapeutic chemical agents such as the following therapeutic chemical agents: cisplatin, carboplatin, taxotere or taxol, advantageously taxol.
  • the compounds of the invention are preferably packaged and administered in a combined, separate or sequential manner with respect to other therapeutic agents or treatments.
  • the present invention also relates to a method for inhibiting the proliferation of tumor cells in vivo, in vitro or ex vivo, comprising contacting said tumor cells with a composition according to the invention.
  • the tumor cells can be in particular those of the pathologies specified above.
  • RDC means "compound derived from ruthenium (Ruthenium Derived Compound)”.
  • FIG. 1 Examples of compounds of formula (I)
  • FIGURE 2 MTT test results for A172 cells for compounds 1, 2 and 3.
  • the graphs are an average of 8 points with standard deviations over one out of four representative experiments performed.
  • the horizontal and thick line indicates the IC-50 for each chart.
  • FIG. 3 MTT test results for A172 cells for compounds 4 to 12: percentage of cell viability as a function of the concentration ( ⁇ M) of the compound in question. The horizontal and thick line indicates I 1 IC 5 O for each graph.
  • FIGURE 4 Cell cycle profile of HCT118 cells treated with compounds 8 and 9 at different concentrations.
  • FIG. 5 Expression of the CHOP Protein and Phosphorylation of the H2AX Histone at the Serine 137 Site for A172 Tumor Cells Treated with Compound 8 or Compound 9, and Comparison with Cells Treated with the Reference Compound
  • FIGURE 6 Graph showing tumor volume (in mm 3 ) as a function of the number of days of treatment with compound 9 of F10B16 tumor-bearing mice.
  • FIG. 7 Graph showing tumor volume (in mm 3 ) as a function of the number of days of treatment with compound 8 of F10B16 tumor-bearing mice.
  • the cyclometallic compounds are sensitive to oxygen in the air and acids, especially during the phase of metallation of the ligand by ruthenium. It is therefore advisable to carry out the manipulations in a controlled atmosphere (nitrogen or argon) using the schlenk tube technique.
  • the solvents are dried and distilled under nitrogen (or argon) before use.
  • Example 2 Analysis of the Cytostatic and Cytotoxic Effects of Derivatives of Ruthenium on Crops of Human Glioblastoma and Colon Carcinoma Cells
  • the first step in the characterization of the anticancer effects of ruthenium-derived compounds is to test their activity on lines maintained in culture and compare these effects on lines that have different characteristics of resistance to anticancer treatments.
  • a human glioblastoma line (A172) and a colon cancer line (HCT116) were used to test the cytostatic effects of the compounds according to the invention.
  • Cisplatin was chosen as a cytotoxic comparator.
  • an MTT assay was used to measure the activity of a mitochondhal enzyme, which gives an estimate of the number of cells.
  • MTT test The experiments are carried out under a vertical laminar flow hood.
  • Trypsin-EDTA 0.25% trypsin in 1 mM Na 4 (EDTA)
  • FCS are stored at -15 ° C and thawed before use.
  • MTT 4,5-dimethylthiazol-2-diphenyltetrazolium bromide
  • MTT 4,5-dimethylthiazol-2-diphenyltetrazolium bromide
  • MTT 4,5-dimethylthiazol-2-diphenyltetrazolium bromide
  • MTT 4,5-dimethylthiazol-2-diphenylt
  • HCT-116 or glial (A-172) cells were purchased from European Type Culture Collection, and placed in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator in round Petri dishes (diameter 10 cm) with 10 ml of medium. When they are quite numerous (70% confluence), they are washed with PBS at room temperature and then mixed with 1.5 ml of Trypsin-EDTA to unhook them from the petri dish. This cell suspension is placed in culture medium heated to 37 ° C., then this solution is spread in 96-well cell culture plates (100 ⁇ L / well) which is incubated for 24 to 48 hours, until reach a cell confluence of 50%.
  • the medium is renewed by cell medium containing different concentrations of RDCs and cisplatin at 37 ° C, which is incubated. After 48 hours, the medium is replaced by a solution at 37 ° C. of MTT in medium, which is placed in the incubator for at least one hour or until violet crystals resulting from the complexation of the MTT are formed quantitatively at the bottom of each well. Finally, this medium is replaced by 100 ⁇ l / well of a 0.04 M HCl / 1 PrOH solution at room temperature to dissolve the crystals. A reading of the optical density of the solutions obtained is made. The optical densities of the RDC or cisplatin treated wells are compared with those of untreated wells (controls).
  • One manipulation is to treat 4 plates (3 X RDC and cisplatin). Each plate contains a single product at different concentrations. 9 columns are treated at 50, 20, 15, 10, 7.5, 5, 2.5, 1 and 0.2 ⁇ M and 3 columns are left as controls. The control column located at each end of the plate is not taken into account. The third column control is taken into account for calculations.
  • A172 cells were cultured in 96-well plates in DMEM medium with 10% calf serum. At 50% confluency, the cells were treated for 48 hours with cisplatin (cisp) or the various compounds derived from ruthenium at the indicated concentrations (1, 5, 15, 50 ⁇ M). The quantity of cells present in the wells was evaluated by an MTT test (MTT, Sigma) whose reaction products are quantified with an Elisa plate reader (Metertech, USA) (490-650 nm). The results obtained were related to the values of the control condition (100% viability).
  • Example 3 Study of the Inhibition of the Proliferation of Cancer Lines by the Compounds According to the Invention
  • the ability of compounds 8 and 9 to inhibit the proliferation of cancer cells was studied using the MTT method described above, which gives an estimate the number of cells.
  • These studies were carried out on cancerous lines of various origins (see Table 2) under the culture conditions described above.
  • the IC 50 ( ⁇ M) were determined for each of the lines and compared to the values obtained with a ruthenium derivative of reference.
  • the two compounds according to the invention are more effective than the reference compound described in WO 2006/016069 and having the following formula:
  • the HCT116 cells were treated for 48 hours at the indicated doses (1 ⁇ M and 5 ⁇ M). After 48 hours of treatment, the cells were washed with PBS (phosphate buffered saline) three times and fixed with 90% ethanol. The cells were then labeled with propidium iodide / RNAse solution. The labeled cells (10,000 per sample) were then counted with a FACScan flow cytometer and CelIQuest software (Becton Dickinson) to determine the DNA content and the cell cycle profile.
  • PBS phosphate buffered saline
  • CHOP protein has pro-apoptotic properties (induction of cell death).
  • Phosphorylation of histone H2AX is a marker of DNA damage that leads to the activation of p53, a protein with pro-apoptotic properties or slowing of cell proliferation.
  • the A172 tumor cells were treated for 6 hours with the compounds at two concentrations (5 ⁇ M and 10 ⁇ M). After 6 hours of treatment, the cells were lysed and 30 .mu.g of soluble proteins were separated on 12% polyacrylamide gel. After migration, the proteins were transferred to nitrocellulose by the Western blot technique. The CHOP and H2AX proteins were then detected using specific primary antibodies, themselves recognized by corresponding secondary antibodies whose peroxidase activity was revealed using an ECL kit.
  • PB16 F1 cells (200,000 cells) were implanted subcutaneously in 8 weeks old black 6 mice. Groups of 6 mice per condition were made. The treatments started when the tumors were palpable with a volume of the order of 100 mm 3 .

Abstract

The present invention relates to uses or methods for treating proliferative diseases, in particular cancer, implementing ruthenium compounds, as well as to compositions containing same.

Description

METHODES ET COMPOSITIONS POUR LE TRAITEMENT DE CANCERS  METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCERS
La présente invention concerne des utilisations ou des méthodes pour le traitement de pathologies prolifératives, en particulier des cancers, mettant en œuvre des composés du ruthénium et des compositions les contenant. The present invention relates to uses or methods for the treatment of proliferative pathologies, in particular cancers, using ruthenium compounds and compositions containing them.
Il est connu que les complexes du platine présentent des activités antitumorales importantes. Le plus connu d'entre eux est le cisplatine, qui est couramment utilisé pour le traitement clinique de nombreux cancers. La résistance de certaines cellules cancéreuses et la toxicité intrinsèque du platine font partie des problèmes rencontrés lors de l'utilisation de ce composé. Depuis les années 70, les recherches s'intensifient pour trouver des molécules susceptibles de se substituer au cisplatine et depuis quelques années des composés contenant du ruthénium sont apparus comme pouvant être une alternative intéressante à ceux qui contiennent du platine. Certains complexes du ruthénium ont ainsi déjà été décrits comme pouvant être une alternative lors de traitements anticancéreux. Platinum complexes are known to have significant antitumor activity. The best known of these is cisplatin, which is commonly used for the clinical treatment of many cancers. The resistance of certain cancer cells and the intrinsic toxicity of platinum are some of the problems encountered when using this compound. Since the 1970s, research has intensified to find molecules that can replace cisplatin and in recent years ruthenium-containing compounds have emerged as an interesting alternative to those containing platinum. Some ruthenium complexes have already been described as being an alternative for cancer treatments.
Il existe donc un besoin de nouveaux agents anti-cancéreux qui pourraient être une alternative à ceux actuellement utilisés, et avantageusement plus efficaces, et/ou qui présenteraient des effets secondaires indésirables moindres. There is therefore a need for new anti-cancer agents which could be an alternative to those currently used, and advantageously more effective, and / or which would have less undesirable side effects.
La présente invention décrit ainsi des composés du ruthénium qui présentent des propriétés anti-tumorales particulièrement intéressantes. Ces composés sont des composés organométalliques, c'est-à-dire qu'ils contiennent au moins une liaison covalente Carbone-Métal (C-M, M étant le ruthénium). De plus, cette liaison C-Ru est stabilisée par deux autres liaisons intramoléculaires azote-ruthénium (N-Ru), les atomes d'azote étant des éléments de la partie organique liée au ruthénium par l'atome de carbone. Dans ce type d'arrangement d'atomes, le ruthénium fait donc partie d'une entité cyclique et cette classe de composés est communément appelée par les chimistes de la discipline la classe des composés cyclométallés. L'entité cyclique contenant le ruthénium est appelée un métallocycle. Dans un tel métallocycle, le ruthénium est donc lié à un ligand organique à la fois par une liaison covalente carbone- ruthénium et par deux liaisons de type donneur-accepteur (acide-base de Lewis, ou liaison de coordination) azote-ruthénium. L'existence d'un tel métallocycle dans une molécule organométallique confère à celle-ci des propriétés particulières en termes de réactivité et de stabilité thermodynamique. Divers types d'atomes de carbone (aromatiques, benzyliques ou aliphatiques) peuvent être métallés et la nature du lien entre l'atome donneur (l'azote) et l'atome de carbone peut être modifiée de multiples façons. The present invention thus describes ruthenium compounds which have particularly advantageous anti-tumor properties. These compounds are organometallic compounds, ie they contain at least one covalent carbon-metal bond (CM, M being ruthenium). In addition, this C-Ru bond is stabilized by two other intramolecular nitrogen-ruthenium (N-Ru) bonds, the nitrogen atoms being elements of the organic part bound to ruthenium by the carbon atom. In this type of arrangement of atoms, ruthenium is therefore part of a cyclic entity and this class of compounds is commonly called by the chemists of the discipline the class of cyclometallic compounds. The cyclic entity containing ruthenium is called a metallocycle. In such a metallocycle, the ruthenium is therefore bound to an organic ligand both by a covalent carbon-ruthenium bond and by two donor-acceptor bonds (acid-Lewis base, or coordination link) nitrogen-ruthenium. The existence of such a metallocycle in an organometallic molecule gives it particular properties in terms of reactivity and thermodynamic stability. Various types of carbon atoms (aromatic, benzylic or aliphatic) can be metallated and the nature of the bond between the donor atom (nitrogen) and the carbon atom can be varied in many ways.
Selon un premier aspect, la présente invention a donc pour objet une composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé complexe de ruthénium, de formule générale suivante : According to a first aspect, the subject of the present invention is therefore a pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable carrier, at least one ruthenium complex compound, of the following general formula:
(I),  (I)
formule (I) dans laquelle : formula (I) in which:
L-i, L2, L3, identiques ou différents, représentent chacun soit un ligand donneur de 2 électrons par un atome d'azote, d'oxygène, de phosphore ou de soufre, soit un atome d'halogène, Y" est un contre-ion (lorsque m = 1 ), m est 0 ou 1 , Xi et X2, différents l'un de l'autre, représentent l'un, un atome d'azote et l'autre, un atome de carbone, entre Xi et X2, représentée par une ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec Xi, X2 et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes, et entre N et Xi, représentée par l'autre ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec l'atome d'azote, Xi et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes. Li, L 2 , L 3 , which may be identical or different, each represent a donor ligand of 2 electrons by a nitrogen, oxygen, phosphorus or sulfur atom, or a halogen atom, Y " is a counter -ion (when m = 1), m is 0 or 1, Xi and X 2 , different from each other, represent one, a nitrogen atom and the other, a carbon atom, between Xi and X 2 , represented by a curved line, there is a succession of atoms forming, with X 1 , X 2 and R 1 represented on the formula, a ring which consists of 5 to 8 atoms, and between N and X 1, represented by the other curved line, there is a succession of atoms forming with the nitrogen atom, Xi and Ru represented in the formula, a ring which consists of 5 to 8 atoms.
Dans le contexte de l'invention, le terme « support acceptable sur le plan pharmaceutique » désigne des substances telles que les excipients, les véhicules, les adjuvants, les tampons qui sont classiquement utilisés, en combinaison avec le(s) phncipe(s) actif(s), pour la préparation d'un médicament. Le choix de tels supports dépend essentiellement de la voie d'administration envisagée. In the context of the invention, the term "pharmaceutically acceptable carrier" means substances such as excipients, vehicles, adjuvants, buffers which are conventionally used, in combination with the method (s) active (s), for the preparation of a medicament. The choice of such supports depends essentially on the intended route of administration.
Les composés de l'invention peuvent être sous forme de sels, solvates et/ou de pro-drogues pharmaceutiquement acceptables. Les pro-drogues sont des variants des composés de l'invention qui peuvent être transformés in vivo en composés de formule générale selon l'invention. The compounds of the invention may be in the form of pharmaceutically acceptable salts, solvates and / or prodrugs. The pro-drugs are variants of the compounds of the invention which can be converted in vivo into compounds of the general formula according to the invention.
Par « atome d'halogène », on entend un atome de fluor, de chlore, de brome ou d'iode. Avantageusement, l'atome d'halogène est un atome de chlore. Les ligands donneurs de deux électrons par un atome d'azote, d'oxygène ou de soufre incluent, par exemple, H2O, di((Ci-6)alkyl)O, di((Ci-6)alkyl)S, di((Ci- e)alkyl)S(O), (Ci-6)alkylSO3 ", di((Ci-6)alkyl)C=O, (d-6)alkylCO2 ". By "halogen atom" is meant a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom. Advantageously, the halogen atom is a chlorine atom. The two electron donor ligands by a nitrogen, oxygen or sulfur include, for example, H 2 O, di ((Ci -6) alkyl) O, di ((Ci -6) alkyl) S, di ((-C e) alkyl) S (O), (Ci -6) alkylSO 3 ", di ((Ci -6) alkyl) C = O, (d -6) alkylCO 2".
D'autres ligands possibles pour L-i, L2 et/ou L3 incluent notamment des ligands nitriles, comme par exemple des ligands de formule (d^alkylCN (en particulierOther possible ligands for Li, L 2 and / or L 3 include, in particular, nitrile ligands, for example ligands of formula (d) alkylCN (in particular
CH3CN) et des ligands pyridines, éventuellement substitués, sur un ou plusieurs atomes de carbone des cycles pyridines, par un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-x où x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y+ où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-NHw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. Les définitions des radicaux chimiques données dans ce paragraphe valent pour l'ensemble des utilisations de ces termes dans la présente demande. CH 3 CN) and pyridine ligands, optionally substituted on one or more carbon atoms of the pyridine rings, with a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl) or aryloxyl (O-aryl) radical. ), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulfonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer can be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) yH 3 y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer that may be 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-NH w (alkyl or aryl) 2-w where w is an integer which may be 0, 1 or 2) or cyano. The definitions of chemical radicals given in this paragraph apply to all uses of these terms in this application.
Parmi d'autres ligands, on peut notamment citer les aminés primaires (Ci- 6)alkylNH2, telles que la méthylamine ou l'éthylamine. Among other ligands, there may be mentioned primary amines (C 1-6 ) alkyl NH 2 , such as methylamine or ethylamine.
Les ligands donneurs de deux électrons par un atome de phosphore incluent les ligands de type phosphine. Avantageusement, ils sont de formule P(Ph)3-x(alkyle)x, avec x représentant 0, 1 ou 2, de préférence x représente 2, et Ph représentant le groupe phényle. Parmi ces ligands, on peut notamment citer P(Ph)(CH3)2. Selon l'invention, le terme « alkyle » désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, ayant avantageusement de 1 à 6 atomes de carbone, tel que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, te/t-butyle, pentyle, néopentyle, n-hexyle, etc. Les groupes ayant de 1 à 4 atomes de carbone sont préférés. Les groupes alkyles peuvent être substitués par un groupe aryle, auquel cas on parle de groupe arylalkyle. Des exemples de groupes arylalkyles sont notamment benzyle et phénéthyle. Les groupes alkyles ou arylalkyles peuvent éventuellement présenter un ou plusieurs substituants, choisis notamment parmi un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)χH2-x où x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y + où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-N Hw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. Les groupes « aryles » sont des systèmes hydrocarbonés aromatiques mono-, bi- ou tri-cycliques, éventuellement interrompus par au moins un hétéroatome (en particulier O, S ou N). Préférentiellement, les groupes aryles incluent les systèmes hydrocarbonés aromatiques monocycliques ou bi-cycliques ayant de 6 à 18 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 6 atomes de carbone. On peut citer par exemple les groupes phényle, naphtyle et bi-phényle. Lorsqu'ils sont interrompus par des hétératomes, les groupes aryles incluent les cycles pyridyle, imidazoyle, pyrrolyle et furanyle. Les groupes aryles peuvent éventuellement présenter un ou plusieurs substituants, choisis notamment parmi un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (Cθ2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-x où x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y + où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-NHw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. Binding ligands of two electrons by a phosphorus atom include phosphine ligands. Advantageously, they are of formula P (Ph) 3-x (alkyl) x , where x represents 0, 1 or 2, preferably x represents 2, and Ph represents the phenyl group. Among these ligands, mention may especially be made of P (Ph) (CH 3 ) 2 . According to the invention, the term "alkyl" denotes a linear or branched hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, advantageously having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, and the like. butyl, pentyl, neopentyl, n-hexyl, etc. Groups having 1 to 4 carbon atoms are preferred. The alkyl groups may be substituted with an aryl group, in which case it is referred to as an arylalkyl group. Examples of arylalkyl groups include benzyl and phenethyl. The alkyl or arylalkyl groups may optionally have one or more substituents, chosen in particular from a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO) radical. 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulphonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) χH 2 -x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) y H 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer may be 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-N H w (alkyl or aryl) 2-w where w is an integer which may be 0, 1 or 2) or cyano. The "aryl" groups are mono-, bi- or tri-cyclic aromatic hydrocarbon systems, optionally interrupted by at least one heteroatom (in particular O, S or N). Preferably, the aryl groups include monocyclic or bicyclic aromatic hydrocarbon systems having from 6 to 18 carbon atoms, more preferably 6 carbon atoms. Mention may be made, for example, of phenyl, naphthyl and biphenyl groups. When interrupted by hetero atoms, the aryl groups include pyridyl, imidazoyl, pyrrolyl and furanyl rings. The aryl groups may optionally have one or more substituents, chosen in particular from a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (C0 2 -alkyl) radical. ), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulphonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2- x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium ( N (alkyl or aryl) y H 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer which may be 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-NH w (alkyl or aryl) 2-w where w is an integer which may be 0, 1 or 2) or cyano.
Selon un mode particulier, deux ou trois des groupements L-i, L2, et L3 peuvent être reliés entre eux par au moins une liaison covalente. Dans ce cadre, on peut notamment citer les motifs bipyridine, phénanthroline ou terpyridine, éventuellement substitués, notamment par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-xoù x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y + où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-N Hw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. De manière préférentielle, les composés de l'invention présentent un, deux ou trois groupements L-i, L2, et L3 représentant un ligand donneur de deux électrons par atome d'azote. L-i, L2, et/ou L3, en particulier, peuvent représenter, pris seuls, deux à deux, ou par trois, un groupement pyridine, bipyridine, phénanthroline, ou terpyridine, lesdits groupements étant éventuellement substitués, en particulier par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O- aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-x où x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y + où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-N Hw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. According to one particular embodiment, two or three of the groups Li, L 2 and L 3 may be connected to one another by at least one covalent bond. In this context, mention may be made especially of the bipyridine, phenanthroline or terpyridine units, which are optionally substituted, in particular by at least one halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl) or aryloxyl (O-aryl) radical. carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulfonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) y H 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer being 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-N H w (alkyl or aryl) 2-w wherein w is an integer that can be 0, 1 or 2) or cyano. Preferably, the compounds of the invention have one, two or three Li, L 2 and L 3 groups representing a donor ligand of two electrons per nitrogen atom. Li, L 2 , and / or L 3 , in particular, can represent, taken alone, in pairs, or in threes, a pyridine, bipyridine, phenanthroline or terpyridine group, said groups being optionally substituted, in particular by at least one a halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid , sulfonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) y H 3-y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer which may be 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-N H w (alkyl or aryl) 2-w where w is an integer which may be 0, 1 or 2) or cyano.
De manière plus spécifique, les composés selon l'invention sont tels que les groupements L-i, L2, et L3 forment à eux trois un ligand donneur de deux électrons par atome d'azote, par exemple les groupements L-i, L2, et L3 peuvent former ensemble la terpyridine ou la 2-(2-pyridyle)-1 ,10-phénanthroline, éventuellement substituée, sur un ou plusieurs atomes de carbone de ses cycles pyridines, par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-xoù x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y + où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-N Hw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. De préférence, le substituant est un radical aryle, de préférence le phényle, avantageusement lui-même substitué par un radical méthyle ou méthoxyle. Selon l'invention, les termes « bipyridine », « phénanthroline », « terpyridine » et « 2-(2-pyhdyle)-1 ,10-phénanthroline » sont tels que définis ci-après, correspondant respectivement aux ligands 5, 6, 7 et 8 : More specifically, the compounds according to the invention are such that the groups Li, L 2 and L 3 together form a donor ligand of two electrons per nitrogen atom, for example the groups Li, L 2 , and L 3 may together form terpyridine or 2- (2-pyridyl) -1,10-phenanthroline, optionally substituted, on one or more carbon atoms of its pyridine rings, with at least one halogen atom, an alkyl radical , aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulfonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) y H 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1 , 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer which may be 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-N H w (alkyl or aryl) 2-w where w is an integer that can be 0, 1 or 2) or cyano. Preferably, the substituent is an aryl radical, preferably phenyl, advantageously itself substituted by a methyl or methoxyl radical. According to the invention, the terms "bipyridine", "phenanthroline", "terpyridine" and "2- (2-pyhdyl) -1,10-phenanthroline" are as defined below, corresponding respectively to the ligands 5, 6, 7 and 8:
(5) (6) (7) (8)  (5) (6) (7) (8)
Y" dans les composés de l'invention est un contre-ion et est seulement présent dans le composé lorsque le complexe du ruthénium porte une charge positive. Y" est de préférence un anion peu nucléophile, tel que par exemple BF4 ", B(C6Hs)4 ", PF6 ", CF3SO3 ", tosylate (p-tolylSO3 "), mésylate (MeSO3 "), SO4 2", CF3CO2 ", CH3CO2 ", bicarbonate (HCO3 "), CIO4 ", ou NO3 ", en particulier PF6 ". Y " in the compounds of the invention is a counterion and is only present in the compound when the ruthenium complex bears a positive charge.Y " is preferably a weakly nucleophilic anion, such as for example BF 4 " , B (C 6 Hs) 4 ", PF 6", CF 3 SO 3 ", tosylate (p-tolylSO 3"), mesylate (MeSO 3 "), SO 4 2", CF 3 CO 2 ", CH 3 CO 2" , bicarbonate (HCO 3 " ), CIO 4 " , or NO 3 " , in particular PF 6 " .
Les ligands L-i, L2 et L3 sont des ligands dits ancillaires, dont la présence n'est nécessaire que pour compléter la sphère de coordination du ruthénium. Il semble que leur nature n'influe pas de manière conséquente sur l'activité biologique des composés revendiqués, celle-ci étant principalement liée à la nature du ou des métallocycle(s). The ligands Li, L 2 and L 3 are so-called ancillary ligands, the presence of which is only necessary to complete the coordination sphere of ruthenium. It seems that their nature does not affect in a significant way the biological activity of the claimed compounds, this being mainly related to the nature of the metallocycle (s).
Selon un mode particulier de l'invention, m est égal à 1. According to a particular embodiment of the invention, m is equal to 1.
La ligne courbe, avec Xi, X2 et Ru dans la formule générale, représente un cycle. Ce cycle est généralement constitué de 5 à 8 atomes (incluant les atomes représentés par X1, X2 et Ru dans la formule (I)), de préférence de 5 à 6 atomes, et de manière encore plus préférée 5 atomes. Typiquement, les atomes dudit cycle (autres que ceux représentés dans la formule générale) sont choisis parmi les atomes de carbone, d'azote, d'oxygène et de soufre. De préférence, ces atomes ne sont que des atomes de carbone. Chacun de ces atomes peut indépendamment dudit cycle former des structures linéaires ou cycliques, saturées ou non, pour lesquelles il n'existe pas de limitations particulières. The curved line, with Xi, X 2 and Ru in the general formula, represents a cycle. This ring generally consists of 5 to 8 atoms (including the atoms represented by X 1 , X 2 and Ru in formula (I)), preferably 5 to 6 atoms, and even more preferably 5 atoms. Typically, the atoms of said ring (other than those represented in the general formula) are chosen from the atoms of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur. Preferably, these atoms are only carbon atoms. Each of these atoms can independently of said cycle form linear or cyclic structures, saturated or not, for which there are no particular limitations.
La ligne courbe, avec Xi, N et Ru dans la formule générale, représente un autre cycle dont la liaison Ru-Xi est commune au premier cycle. Ce cycle est généralement constitué de 5 à 8 atomes (incluant les atomes représentés par X-ι, N et Ru dans la formule (I)), de préférence de 5 à 6 atomes, et de manière encore plus préférée 5 atomes. Typiquement, les atomes dudit cycle (autres que ceux représentés dans la formule générale) sont choisis parmi les atomes de carbone, d'azote, d'oxygène et de soufre. De préférence, ces atomes ne sont que des atomes de carbone. Chacun de ces atomes peut indépendamment dudit cycle former des structures linéaires ou cycliques, saturées ou non, pour lesquelles il n'existe pas de limitations particulières. The curved line, with Xi, N and Ru in the general formula, represents another cycle whose Ru-Xi bond is common to the first cycle. This ring generally consists of 5 to 8 atoms (including the atoms represented by X-1, N and Ru in formula (I)), preferably from 5 to 6 atoms, and even more preferably 5 atoms. Typically, the atoms of said ring (other than those represented in the general formula) are chosen from carbon, nitrogen, oxygen and sulfur atoms. Preferably, these atoms are only carbon atoms. Each of these atoms can independently of said cycle form linear or cyclic structures, saturated or not, for which there are no particular limitations.
Ainsi, parmi les unités structurales incluant les deux lignes courbes, on peut notamment citer les deux groupements représentés ci-dessous: Thus, among the structural units including the two curved lines, there may be mentioned in particular the two groups represented below:
avec R = H et R1 = -OMe with R = H and R 1 = -OMe
ou R = -Ph(p-Me) et R1 = Me Les composés de l'invention incluent également les isomères optiques et géométriques, pris individuellement ou en mélange (notamment les racémates), des composés de formule (I). or R = -Ph (p-Me) and R 1 = Me The compounds of the invention also include optical and geometric isomers, taken individually or as a mixture (especially racemates), of compounds of formula (I).
Parmi les composés inclus dans la formule générale (I), on peut citer notamment les composés représentés à la figure 1 (composés numérotés (1 ) à (12)). Selon un aspect particulier, la composition selon l'invention comprend au moins un des composés (1 ) à (12). Among the compounds included in the general formula (I), mention may be made in particular of the compounds represented in FIG. 1 (compounds numbered (1) to (12)). According to a particular aspect, the composition according to the invention comprises at least one of the compounds (1) to (12).
Méthodes de préparation : Preparation methods:
II existe plusieurs méthodes de synthèse des composés de l'invention. La plus avantageuse est celle qui utilise la réaction dite d'activation CH intramoléculaire ou réaction de cyclométallation (cf. A. D. Ryabov, Chem. Rev. 1990, 90, 403-424) qui conduit directement à la formation d'une liaison C-Ru à partir d'une liaison C-H. Une autre méthode comprend la métallation préalable du carbone destiné à être lié au ruthénium, en faisant réagir, par exemple, le ligand correspondant avec une base forte, comme le n-BuLi, ce qui conduit à un organo-lithien, dont le lithium est ensuite substitué par le ruthénium. Cette deuxième voie de synthèse a été utilisée avec succès pour obtenir des composés analogues au composé (1 ) mais pour lesquels les groupements pyridiniques du ligand bis(2-pyridyl)-1 ,3-benzène ont été remplacés par une entité CH2NMe2 (voir Organometallics, 1996, 15, 941 -948). There are several methods of synthesis of the compounds of the invention. The most advantageous is that which uses the so-called intramolecular CH activation reaction or cyclometallation reaction (see AD Ryabov, Chem Rev. 1990, 90, 403-424) which leads directly to the formation of a C-Ru bond. from a CH link. Another method involves pre-metallizing the carbon to be bound to the ruthenium, by reacting, for example, the corresponding ligand with a strong base, such as n-BuLi, which leads to an organo-lithian, whose lithium is then substituted with ruthenium. This second synthesis route has been used successfully to obtain compounds analogous to compound (1) but for which the pyridine groups of bis (2-pyridyl) -1,3-benzene ligand have been replaced by a CH 2 NMe 2 entity. (see Organometallics, 1996, 15, 941-948).
Le composé (1) a été obtenu par la première voie d'après l'équation suivante : The compound (1) was obtained by the first route according to the following equation:
en suivant le protocole décrit dans les publications suivantes: J. Am. Chem. Soc. 1991 , 113, 8521 -8522 et Inorg. Chem. 1993, 32, 4539-4543. Les composés (2) et (3) ont également été synthétisés grâce à la première voie, en suivant le protocole décrit dans Eur. J. Inorg. Chem. 2000, 113-119. Les schémas réactionnels sont représentés ci-dessous : following the protocol described in the following publications: J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 8521-8522 and Inorg. Chem. 1993, 32, 4539-4543. Compounds (2) and (3) were also synthesized by the first route, following the protocol described in Eur. J. Inorg. Chem. 2000, 113-119. The reaction schemes are shown below:
(3), Ar = p-OMePh, Ar' = p-MePh  (3), Ar = p-OMePh, Ar '= p-MePh
Les composés (4) à (7) et (10) à (12) ont également été synthétisés selon une voie de synthèse analogue, décrite dans Inorg Chem 2009, 5685-5696. Compounds (4) to (7) and (10) to (12) were also synthesized according to a similar synthetic route, described in Inorg Chem 2009, 5685-5696.
Les composés (8) et (9) sont synthétisés par métallation respectivement des ligands 2,6-bis(2'pyridyl)-4-carbométhoxybenzène et 2,6-bis(2'pyridyl)-4- méthylbenzène. The compounds (8) and (9) are synthesized by metallation of the ligands 2,6-bis (2'pyridyl) -4-carbomethoxybenzene and 2,6-bis (2'pyridyl) -4-methylbenzene respectively.
L'invention concerne également un composé du ruthénium, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les composés (8) et (9) : The invention also relates to a ruthenium compound, characterized in that it is chosen from compounds (8) and (9):
Comme spécifié ci-dessus, les compositions selon l'invention sont particulièrement avantageuses pour traiter des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire, en particulier des cancers. Les cancers incluent ceux à tumeurs solides ou liquides. Les cancers correspondent notamment à des glioblastomes, des neuroblastomes, des leucémies promyélocytaires, les cancers de la prostate, des ovaires, des poumons, des seins, des voies digestives, en particulier du foie, du pancréas, de la tête et du cou, du colon, les lymphomes non-Hodgkiniens et les mélanomes. As specified above, the compositions according to the invention are particularly advantageous for treating diseases related to cellular hyperproliferation, in particular cancers. Cancers include those with solid or liquid tumors. The cancers correspond in particular to glioblastomas, neuroblastomas, promyelocytic leukemias, cancers of the prostate, ovaries, lungs, breasts, digestive tract, in particular of the liver, pancreas, head and neck, colon, non-Hodgkin's lymphoma and melanoma.
La présente invention a également pour objet un composé de formule (I), tel que défini ci-dessus, pour une utilisation dans le traitement des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire, en particulier des cancers. La présente invention a également pour objet l'utilisation d'au moins un composé de formule (I), tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à traiter des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire, en particulier des cancers. Les composés de l'invention présentent un effet antiprolifératif vis-à-vis de cellules tumorales. Ils sont particulièrement utiles pour traiter des cancers par accumulation des cellules tumorales en phase G0/G1 , ou G2/M et éventuellement par induction d'apoptose ou d'un autre type de mort cellulaire des cellules tumorales. En effet, sans vouloir se lier à une quelconque théorie de l'invention, les composés de l'invention semblent notamment capables d'accumuler les cellules tumorales en phase G0/G1 , ou G2/M et donc en bloquant leur cycle cellulaire, mais semblent également capables de générer leur mort rapidement, en particulier lorsque leur concentration est augmentée, signe d'une toxicité dose-dépendante. The subject of the present invention is also a compound of formula (I), as defined above, for use in the treatment of diseases related to cellular hyperproliferation, in particular cancers. The subject of the present invention is also the use of at least one compound of formula (I), as defined above, in the context of the preparation of a pharmaceutical composition intended to treat diseases linked to cellular hyperproliferation. , especially cancers. The compounds of the invention exhibit an antiproliferative effect against tumor cells. They are particularly useful for treating cancers by accumulation of tumor cells in G0 / G1 or G2 / M phase and possibly by inducing apoptosis or another type of cell death of tumor cells. Indeed, without wishing to be bound to any theory of the invention, the compounds of the invention appear in particular capable of accumulating tumor cells in G0 / G1 or G2 / M phase and thus by blocking their cell cycle, but also seem capable of generating their death rapidly, especially when their concentration is increased, sign of a dose-dependent toxicity.
En outre, les compositions selon l'invention sont particulièrement avantageuses pour traiter des tumeurs résistantes au cisplatine ou à d'autres drogues anticancéreuses. In addition, the compositions according to the invention are particularly advantageous for treating tumors resistant to cisplatin or other anticancer drugs.
Les compositions selon l'invention peuvent être administrées de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, elles peuvent être administrées de manière systémique, par voie orale, par inhalation ou par injection, comme par exemple par voie intraveineuse, intra-musculaire, sous-cutanée, trans-dermique, intra-artéhelle, etc., les voies intraveineuse, intra-musculaire, sous-cutanée, orale et par inhalation étant préférées. Pour les injections, les compositions sont généralement sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple. A cet égard, les composés sont généralement dissous dans des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Ainsi, les compositions selon l'invention peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations liquides et/ou injectables sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales, l'acacia, etc. The compositions according to the invention can be administered in different ways and in different forms. Thus, they can be administered systemically, orally, by inhalation or by injection, for example intravenously, intramuscularly, subcutaneously, trans-dermally, intra-artery etc., the intravenous routes, intramuscular, subcutaneous, oral and inhalation being preferred. For injections, the compositions are generally in the form of liquid suspensions, which can be injected by means of syringes or infusions, for example. In this respect, the compounds are generally dissolved in saline, physiological, isotonic, buffered, etc. solutions compatible with pharmaceutical use and known to those skilled in the art. Thus, the compositions according to the invention may contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, stabilizers, preservatives, etc. Agents or vehicles that can be used in liquid and / or injectable formulations include methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, etc.
Les compositions peuvent également être administrées sous forme de gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, aérosols, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que de la cellulose, des carbonates ou des amidons. II est entendu que le débit d'injection et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie concernée, du mode d'administration, etc. Typiquement, les composés de l'invention sont administrés à des doses pouvant varier entre 0,1 μg et 100 mg/kg de poids corporel, plus généralement entre 0,01 et 10 mg/kg, typiquement entre 0,1 et 10 mg/kg. En outre, des injections répétées peuvent être réalisées. D'autre part, pour des traitements chroniques, des systèmes à libération prolongée et/ou retardée peuvent être avantageux. The compositions may also be administered in the form of gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, aerosols, etc., possibly by means of dosage forms or devices providing sustained and / or delayed release. For this type of formulation, an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used. It is understood that the injection rate and / or the injected dose may be adapted by those skilled in the art depending on the patient, the pathology concerned, the mode of administration, etc. Typically, the compounds of the invention are administered at doses ranging between 0.1 μg and 100 mg / kg of body weight, more generally between 0.01 and 10 mg / kg, typically between 0.1 and 10 mg / kg. kg. In addition, repeated injections can be performed. On the other hand, for chronic treatments, sustained release and / or delayed release systems may be advantageous.
L'invention concerne également une méthode de traitement d'une pathologie liée à une hyperprolifération cellulaire, en particulier un cancer, par l'administration à un sujet atteint d'une telle pathologie d'une composition selon l'invention. The invention also relates to a method for treating a pathology related to cellular hyperproliferation, in particular cancer, by administering to a subject afflicted with such a pathology a composition according to the invention.
Parmi les autres types d'hyperprolifération cellulaire dont le traitement peut être envisagé selon l'invention peuvent être citées les tumeurs bénignes. Among the other types of cell hyperproliferation whose treatment may be envisaged according to the invention may be mentioned benign tumors.
Dans le contexte de l'invention, le terme « traitement » désigne le traitement préventif, curatif, palliatif, ainsi que la prise en charge des patients (réduction de la souffrance, amélioration de la durée de vie, ralentissement de la progression de la maladie, réduction de la croissance tumorale, etc.). Le traitement peut en outre être réalisé en combinaison avec d'autres agents ou traitements chimiques ou physiques (chimiothérapie, radiothérapie, thérapie génique, etc.). Les traitements et médicaments de l'invention sont tout particulièrement destinés aux humains. Ainsi, les composés selon l'invention peuvent être utilisés de manière avantageuse en combinaison avec un traitement anti-cancéreux mettant en œuvre des rayonnements, tel que la radiothérapie. Selon un autre aspect de l'invention, les compositions selon l'invention peuvent être utilisées avec d'autres agents chimiques ou traitements thérapeutiques anticancéreux, tel que les agents chimiques thérapeutiques suivants : le cisplatine, le carboplatine, le taxotère ou le taxol, avantageusement le taxol. Les composés de l'invention sont de préférence conditionnés et administrés de façon combinée, séparée ou séquentielle par rapport à d'autres agents ou traitements thérapeutiques. In the context of the invention, the term "treatment" refers to the preventive, curative and palliative treatment, as well as the management of the patients (reduction of the suffering, improvement of the lifespan, slowing of the progression of the disease , reduction of tumor growth, etc.). The treatment may also be carried out in combination with other chemical or physical agents or treatments (chemotherapy, radiotherapy, gene therapy, etc.). The treatments and medicaments of the invention are particularly intended for humans. Thus, the compounds according to the invention can be advantageously used in combination with an anti-cancer treatment involving radiation, such as radiotherapy. According to another aspect of the invention, the compositions according to the invention can be used with other chemical agents or therapeutic anticancer treatments, such as the following therapeutic chemical agents: cisplatin, carboplatin, taxotere or taxol, advantageously taxol. The compounds of the invention are preferably packaged and administered in a combined, separate or sequential manner with respect to other therapeutic agents or treatments.
La présente invention concerne aussi une méthode pour inhiber in vivo, in vitro ou ex vivo la prolifération de cellules tumorales, comprenant la mise en contact desdites cellules tumorales avec une composition selon l'invention. Les cellules tumorales peuvent être notamment celles des pathologies spécifiées ci-dessus. The present invention also relates to a method for inhibiting the proliferation of tumor cells in vivo, in vitro or ex vivo, comprising contacting said tumor cells with a composition according to the invention. The tumor cells can be in particular those of the pathologies specified above.
LEGENDE DES FIGURES Dans les figures et les exemples qui suivent, le terme « RDC» signifie « composé dérivé du ruthénium (Ruthénium Derived Compound)». LEGEND OF FIGURES In the figures and examples that follow, the term "RDC" means "compound derived from ruthenium (Ruthenium Derived Compound)".
FIGURE 1 : Exemples de composés de formule (I). FIG. 1: Examples of compounds of formula (I)
FIGURE 2 : Résultats du test MTT pour les cellules A172 pour les composés 1 , 2 et 3. Les graphiques sont une moyenne de 8 points avec les écarts-types sur une expérience représentative sur 4 effectuées. La ligne horizontale et épaisse indique l'IC-50 pour chaque graphique.  FIGURE 2: MTT test results for A172 cells for compounds 1, 2 and 3. The graphs are an average of 8 points with standard deviations over one out of four representative experiments performed. The horizontal and thick line indicates the IC-50 for each chart.
FIGURE 3 : Résultats du test MTT pour les cellules A172 pour les composés 4 à 12 : pourcentage de viabilité cellulaire en fonction de la concentration (μM) du composé concerné. La ligne horizontale et épaisse indique I1IC5O pour chaque graphique. FIGURE 4 : Profil du cycle cellulaire des cellules HCT118 traitées par les composés 8 et 9 à différentes concentrations. FIG. 3: MTT test results for A172 cells for compounds 4 to 12: percentage of cell viability as a function of the concentration (μM) of the compound in question. The horizontal and thick line indicates I 1 IC 5 O for each graph. FIGURE 4: Cell cycle profile of HCT118 cells treated with compounds 8 and 9 at different concentrations.
FIGURE 5 : Expression de la protéine CHOP et phosphorylation de l'histone H2AX sur le site serine 137 pour des cellules tumorales A172 traitées par le composé 8 ou le composé 9, et comparaison avec les cellules traitées par le composé de référence.  FIG. 5: Expression of the CHOP Protein and Phosphorylation of the H2AX Histone at the Serine 137 Site for A172 Tumor Cells Treated with Compound 8 or Compound 9, and Comparison with Cells Treated with the Reference Compound
FIGURE 6 : Graphe représentant le volume tumoral (en mm3) en fonction du nombre de jours de traitement avec le composé 9 de souris présentant une tumeur F10B16. FIGURE 6: Graph showing tumor volume (in mm 3 ) as a function of the number of days of treatment with compound 9 of F10B16 tumor-bearing mice.
FIGURE 7 : Graphe représentant le volume tumoral (en mm3) en fonction du nombre de jours de traitement avec le composé 8 de souris présentant une tumeur F10B16. FIG. 7: Graph showing tumor volume (in mm 3 ) as a function of the number of days of treatment with compound 8 of F10B16 tumor-bearing mice.
D'autres aspects et avantages de la présente demande apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Other aspects and advantages of the present application will appear on reading the examples which follow, which should be considered as illustrative and not limiting.
EXEMPLES Exemple 1 : Synthèse et caractérisation des composés 8 et 9 EXAMPLES Example 1 Synthesis and Characterization of Compounds 8 and 9
Les composés cyclométallés sont sensibles à l'oxygène de l'air et aux acides, surtout pendant la phase de métallation du ligand par le ruthénium. Il est donc conseillé d'effectuer les manipulations dans une atmosphère contrôlée (azote ou argon) en utilisant la technique des tubes de schlenks. Les solvants sont séchés et distillés sous azote (ou argon) avant leur utilisation.  The cyclometallic compounds are sensitive to oxygen in the air and acids, especially during the phase of metallation of the ligand by ruthenium. It is therefore advisable to carry out the manipulations in a controlled atmosphere (nitrogen or argon) using the schlenk tube technique. The solvents are dried and distilled under nitrogen (or argon) before use.
Synthèse du composé 8 : Synthesis of compound 8:
On ajoute dans un tube de schlenk, le 2,6-bis(2'pyridyl)-4-carbomethoxybenzène (L1H) (62 mg, 0,2 mmol), [RuCI2(H (eta)6-C6H6)]2 (52 mg, 0,1 mmol), KPF6 (80 mg, 0,4 mmol), NaOH en paillettes (8 mg, 0,2 mmol) dans 4 mL de MeCN. Ce mélange est chauffé à 45°C pendant 15h. La solution orange obtenue est filtrée sous atmosphère inerte sur une colonne d'alumine standardisée (longueur de la colonne : 15 cm dans un tube de 2 cm de diamètre) et cette solution est concentrée pour réduire son volume à 0,5 ml_. L'addition de 10 mL de Et2O produit la précipitation d'un produit orange qui répond à la formule brute [RuL1(MeCN)3]+PF6 " (rendement 91 mg, 69%). To a Schlenk tube, 2,6-bis (2'pyridyl) -4-carbomethoxybenzène (L 1 H) (62 mg, 0.2 mmol), [RuCl 2 (H (eta) 6 6 -C H 6 )] 2 (52 mg, 0.1 mmol), KPF 6 (80 mg, 0.4 mmol), flaked NaOH (8 mg, 0.2 mmol) in 4 mL of MeCN. This mixture is heated at 45 ° C for 15h. The orange solution obtained is filtered under an inert atmosphere on a standardized alumina column (length of the column: 15 cm in a tube 2 cm in diameter) and this solution is concentrated to reduce its volume to 0.5 ml. The addition of 10 mL of Et 2 O produces the precipitation of an orange product which corresponds to the crude formula [RuL 1 (MeCN) 3 ] + PF 6 " (yield 91 mg, 69%).
On chauffe une solution de [RuL1(MeCN)3]+PF6 "(18 mg, 0,027 mmol) et de 1 ,10- phénanthroline (5,4 mg, 0,027mmol) dans MeOH (2 mL) au reflux pendant 12h. Le solvant est alors éliminé sous vide, on obtient une poudre brun foncé. Celle-ci est dissoute dans 5 mL de MeCN et filtrée sur alumine standardisée (longueur de la colonne : 5 cm dans un tube de 2 cm de diamètre) en utilisant MeCN comme éluant. La fraction pourpre est recueillie et le solvant est évaporé sous vide. Le produit 8 est obtenu sous forme de cristaux pourpres foncés à partir d'une solution de la poudre précédente dans le volume minimum de CH2CI2 dans laquelle on fait diffuser lentement du pentane (rendement : 18 mg, 88%). A solution of [RuL 1 (MeCN) 3 ] + PF 6 - (18 mg, 0.027 mmol) and 1,10-phenanthroline (5.4 mg, 0.027 mmol) in MeOH (2 mL) was refluxed for 12 h. The solvent is then removed in vacuo to give a dark brown powder, which is dissolved in 5 mL of MeCN and filtered through standardized alumina (column length: 5 cm in a tube 2 cm in diameter) using MeCN as eluent The purple fraction is collected and the solvent is evaporated in vacuo The product 8 is obtained as dark purple crystals from a solution of the above powder in the minimum volume of CH 2 Cl 2 in which is slowly diffused pentane (yield: 18 mg, 88%).
MS (ES, m/z) :Calculé POUr C32H24F6O2Ru : 612.098 (M) ; trouvé : 612.109 MS (ES, m / z): Calculated for C 32 H 24 F 6 O 2 Ru: 612.098 (M); found: 612.109
IR (CtTT1) : 2264 (i/N≡C), 840 (vPF). IR (CtTT 1 ): 2264 (i / N + C), 840 (vPF).
1H NMR (400.13 MHz, CD3CN, 300K) : 10.02 (dd, 1 H, 3J=5.1 , 4J=1.8, H0), 8.81 (dd, 1 H, 3J=8.3, 4J=1.3, Hp), 8.62 (s, 2H, H5), 8.35 (dd, 1 H, 3J=8.1 , 4J=4.9, Hm), 8.21 (d, 1 H NMR (400.13 MHz, CD 3 CN, 300K): 10.02 (dd, 1H, 3 J = 5.1, 4 J = 1.8, H 0 ), 8.81 (dd, 1H, 3 J = 8.3, 4 J = 1.3, Hp), 8.62 (s, 2H, H 5 ), 8.35 (dd, 1H, 3 J = 8.1, 4 J = 4.9, H m ), 8.21 (d,
1 H, 3J=8.8, Hphen), 8.20 (d, 2H, 3J=8.0, H1), 8.06 (dd, 1 H, 3J=8.1 , 4J=1.2, H0), 7.991 H, 3 J = 8.8, H p h in), 8.20 (d, 2H, 3 J = 8.0, H 1 ), 8.06 (dd, 1H, 3 J = 8.1, 4 J = 1.2, H 0 ), 7.99
(d, 1 H, 3J=8.9, Hphen), 7.70 (td, 2H, 3J=7.6, 4J=I .7, H2), 7.57 (d, 2H, 3J=7.57, H3),(d, 1H, 3 J = 8.9, H ph in), 7.70 (td, 2H, 3 J = 7.6, 4 J = I.7, H 2 ), 7.57 (d, 2H, 3 J = 7.57, H 3 ),
7.32 (dd, 1 H, 3J=5.5, 4J=1.2, Hp), 7.11 (dd, 1 H, 3J=8.1 , 4J=4.9, Hm), 6.81 (td, 1 H,7.32 (dd, 1H, 3 J = 5.5, 4 J = 1.2, H p ), 7.11 (dd, 1H, 3 J = 8.1, 4 J = 4.9, H m ), 6.81 (td, 1H,
3J=6.6, 4J=1.3, H4), 4.05 (s, 3H, CH3), 2.10 (s, 3H, NCCH3). 3 J = 6.6, 4 J = 1.3, H 4 ), 4.05 (s, 3H, CH 3 ), 2.10 (s, 3H, NCCH 3 ).
13C NMR (100.62 MHz, CD3CN, 300K) : 169.2, 168.5, 155.3, 153.8, 151.2, 146.3,1 3 C NMR (100.62 MHz, CD 3 CN, 300K): 169.2, 168.5, 155.3, 153.8, 151.2, 146.3,
145.4, 137.1 , 136.1 , 134.8, 131.7, 131.1 , 128.7, 128.4, 127.0, 125.2, 124.4, 123.4,145.4, 137.1, 136.1, 134.8, 131.7, 131.1, 128.7, 128.4, 127.0, 125.2, 124.4, 123.4,
120.7. 120.7.
Anal, calculé : C32H24F6N5O2PRu : C, 50.80; H, 3.20; N, 9.26. trouvé: C, 50.02; H,Anal Calcd: C 32 H 24 F 6 N 5 O 2 PR: C, 50.80; H, 3.20; N, 9.26. found: C, 50.02; H
3.25; N, 9.26%. Synthèse du composé 9 : 3.25; N, 9.26%. Synthesis of compound 9:
Le procédé de synthèse est identique à celui utilisé pour obtenir 8, à La différence que le ligand de départ est cette fois le 2,6-bis(2'pyridyl)-4-methylbenzène (L2H). On obtient le composé 9 sous la forme de cristaux pourpres foncés avec un rendement analogue à celui observé pour 8. The synthesis method is identical to that used to obtain 8, except that the starting ligand is this time 2,6-bis (2'pyridyl) -4-methylbenzene (L 2 H). Compound 9 is obtained in the form of dark purple crystals with a yield similar to that observed for 8.
MS (ES, m/z) : Calculé : C31 H24F6Ru : 568.108 (M) ; Trouvé: 568.119 MS (ES, m / z): Calcd: C 31 H 24 F 6 Ru: 568.108 (M); Found: 568.119
IR (cm"1) : 2265 (médium, vN≡C), 841 (strong, vPF). IR (cm- 1 ): 2265 (medium, vN≡C), 841 (strong, vPF).
1H NMR (300 MHz, CD3CN, 300K) : 10.01 (dd, 1 H, 3J=5.0, 4J=1.3, H0), 8.76 (dd, 1 H, 3J=8.1 , 4J=L, Hp), 8.31 (dd, 1 H, 3J=8.1 , 4J=5.0, Hphen), 7.99-8.04 (m, 3H, H0+ Hi+ Hphen), 7.97 (s, 2H, H5), 7.65 (td, 2H, 3J=7.7, 4J=1.5, H2), 7.52 (m, 2H, H3), 7.37 (td, 1 H, 3J=5.5, 4J=1.3, Hp), 7.14 (dd, 2H, , 3J=5.4, 4J=2.7, Hm), 6.73 (td, 2H, 3J=6.6, 4J=I .3, H4), 2.66 (s, 3H, CH3), 2.09 (s, 3H, NCCH3 ). 1 H NMR (300 MHz, CD 3 CN, 300K): 10.01 (dd, 1H, 3 J = 5.0, 4 J = 1.3, H 0 ), 8.76 (dd, 1H, 3 J = 8.1, 4 J = L, Hp), 8.31 (dd, 1H, 3 J = 8.1, 4 J = 5.0, H phe n), 7.99-8.04 (m, 3H, H 0 + Hi + H ph), 7.97 (s, 2H, H 5 ), 7.65 (td, 2H, 3 J = 7.7, 4 J = 1.5, H 2 ), 7.52 (m, 2H, H 3 ), 7.37 (td, 1H, 3 J = 5.5, 4 J = 1.3 , Hp), 7.14 (dd, 2H,, 3 J = 5.4, 4 J = 2.7, H m ), 6.73 (td, 2H, 3 J = 6.6, 4 J = I.3, H 4 ), 2.66 (s). , 3H, CH 3 ), 2.09 (s, 3H, NCCH 3 ).
13C NMR (100.62 MHz, CD3CN, 300K) : 165.5, 155.4, 153.8, 151.1 , 145.0, 136.8, 135.4, 134.0, 131.7, 131.1 , 130.2, 128.7, 128.3, 126.9, 125.6, 124.9, 122.6, 120.1. Anal, calcd.for C3i H24F6N5PRu : 13 C NMR (100.62 MHz, 3 CN CD, 300K): 165.5, 155.4, 153.8, 151.1, 145.0, 136.8, 135.4, 134.0, 131.7, 131.1, 130.2, 128.7, 128.3, 126.9, 125.6, 124.9, 122.6, 120.1. Anal, calcd.for C 3 i H 24 F 6 N 5 PRu:
C, 52.25; H, 3.39; N, 9.83. Found: C, 50.87; H, 3.21 ; N, 9.70%. C, 52.25; H, 3.39; N, 9.83. Found: C, 50.87; H, 3.21; N, 9.70%.
Exemple 2 : Analyse des effets cytostatigues et cytotoxigues des composés dériyés du ruthénium sur des cultures de lignées cellulaires humaines de glioblastome et de cancer du colon La première étape dans la caractérisation des effets anticancéreux des composés dérivés du ruthénium consiste à tester leur activité sur des lignées tumorales maintenues en culture et de comparer ces effets sur des lignées qui présentent des caractéristiques différentes de résistance aux traitements anticancéreux. Une lignée de glioblastome humain (A172) et une lignée de cancer du colon (HCT116) ont été utilisées afin de tester les effets cytostatiques des composés selon l'invention. Le cisplatine a été choisi comme agent cytotoxique de comparaison. En première approche, un test MTT a été utilisé pour mesurer l'activité d'une enzyme mitochondhale, ce qui donne une estimation du nombre de cellules. Example 2 Analysis of the Cytostatic and Cytotoxic Effects of Derivatives of Ruthenium on Crops of Human Glioblastoma and Colon Carcinoma Cells The first step in the characterization of the anticancer effects of ruthenium-derived compounds is to test their activity on lines maintained in culture and compare these effects on lines that have different characteristics of resistance to anticancer treatments. A human glioblastoma line (A172) and a colon cancer line (HCT116) were used to test the cytostatic effects of the compounds according to the invention. Cisplatin was chosen as a cytotoxic comparator. At first glance, an MTT assay was used to measure the activity of a mitochondhal enzyme, which gives an estimate of the number of cells.
Résultats Results
Plusieurs composés dérivés du ruthénium diminuent le nombre de cellules tumorales sur une ou plusieurs des lignées testées, A172, HCT116. Pour les composés les plus actifs (composés (1 ) à (12)), cet effet est observé à une concentration similaire ou inférieure à celle du cisplatine. En se basant sur ces expériences, il a été estimé des valeurs d'ICso correspondant à la concentration nécessaire pour diminuer de moitié la quantité de cellules tumorales présentes par rapport à la condition contrôle. Ces résultats sont résumés dans le tableau 1. Several compounds derived from ruthenium decrease the number of tumor cells on one or more of the lines tested, A172, HCT116. For the most active compounds (compounds (1) to (12)), this effect is observed at a similar or lower concentration than that of cisplatin. Based on these experiments, IC 50 values were estimated corresponding to the concentration required to halve the amount of tumor cells present relative to the control condition. These results are summarized in Table 1.
Tableau 1 Table 1
Méthodes : test MTT Les expériences sont réalisées sous une hotte à flux laminaire vertical. Le milieu de croissance cellulaire est composé de DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Médium), HEPES, 10% FCS (Fetal CaIf Sérum), 5% PS (Pénicilline, Streptomycine) et est stocké à + 4 °C, ainsi que le PBS (Phosphate Buffer Saline, pH= 7,4). La Trypsine-EDTA (0,25 % trypsine dans 1 mM Na4(EDTA)) et le FCS sont stockés à -15 °C et décongelés avant utilisation. Le MTT (bromure de 4,5- diméthylthiazol-2-diphényltétrazolium) est un solide jaune produit par la marque Aldrich. Il est mis en solution aqueuse stérile à la concentration de 5 mg/mL et conservé à + 4°C. Il est dilué à 10% dans du milieu de culture cellulaire lors de son utilisation comme agent de coloration de cellules vivantes. Methods: MTT test The experiments are carried out under a vertical laminar flow hood. The cell growth medium is composed of DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), HEPES, 10% FCS (Fetal CaIf Serum), 5% PS (Penicillin, Streptomycin) and is stored at + 4 ° C, as well as PBS (Phosphate Saline buffer, pH = 7.4). Trypsin-EDTA (0.25% trypsin in 1 mM Na 4 (EDTA)) and FCS are stored at -15 ° C and thawed before use. MTT (4,5-dimethylthiazol-2-diphenyltetrazolium bromide) is a yellow solid produced by the Aldrich brand. It is placed in a sterile aqueous solution at a concentration of 5 mg / ml and stored at + 4 ° C. It is diluted to 10% in cell culture medium when used as a living cell staining agent.
Les cellules humaines cancéreuses du colon (HCT-116) ou gliales (A-172) ont été achetées auprès de European Type Culture Collection, et placées dans un incubateur à 37°C, 5% CO2 dans des boîtes de Pétri rondes (diamètre 10 cm) avec 10 mL de milieu. Quand elles sont assez nombreuses (confluence de 70%), elles sont lavées au PBS à température ambiante puis mélangées avec 1 ,5 mL de Trypsine-EDTA pour les décrocher de la boîte de Pétri. Cette suspension cellulaire est placée dans du milieu de culture chauffé à 37°C, puis cette solution est étalée dans des plaques de culture cellulaire de 96 puits (100 μL/puits) qu'on laisse incuber pendant 24 à 48 heures, jusqu'à atteindre une confluence cellulaire de 50 %. Le milieu est renouvelé par du milieu cellulaire contenant différentes concentrations de RDCs et cisplatine à 37°C, qu'on laisse incuber. Au bout de 48 heures, le milieu est remplacé par une solution à 37°C de MTT dans du milieu, qu'on place dans l'incubateur pendant au moins une heure ou jusqu'à ce que des cristaux violets issus de la complexation du MTT soient formés quantitativement au fond de chaque puits. Finalement, ce milieu est remplacé par 100 μL/puits d'une solution HCI/ 1PrOH 0,04 M à température ambiante pour dissoudre les cristaux. Une lecture de la densité optique des solutions obtenues est faite. On compare les densités optiques des puits traités aux RDCs ou cisplatine à celles des puits non traités (contrôles). Une manipulation consiste à traiter 4 plaques (3 X RDC et le cisplatine). Chaque plaque contient un seul produit à différentes concentrations. 9 colonnes sont traitées à 50, 20, 15, 10, 7,5, 5, 2,5, 1 et 0,2 μM et 3 colonnes sont laissées comme contrôles. La colonne contrôle située à chaque extrémité de la plaque n'est pas prise en compte. La troisième colonne contrôle est prise en compte pour les calculs. Human colon cancer (HCT-116) or glial (A-172) cells were purchased from European Type Culture Collection, and placed in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator in round Petri dishes (diameter 10 cm) with 10 ml of medium. When they are quite numerous (70% confluence), they are washed with PBS at room temperature and then mixed with 1.5 ml of Trypsin-EDTA to unhook them from the petri dish. This cell suspension is placed in culture medium heated to 37 ° C., then this solution is spread in 96-well cell culture plates (100 μL / well) which is incubated for 24 to 48 hours, until reach a cell confluence of 50%. The medium is renewed by cell medium containing different concentrations of RDCs and cisplatin at 37 ° C, which is incubated. After 48 hours, the medium is replaced by a solution at 37 ° C. of MTT in medium, which is placed in the incubator for at least one hour or until violet crystals resulting from the complexation of the MTT are formed quantitatively at the bottom of each well. Finally, this medium is replaced by 100 μl / well of a 0.04 M HCl / 1 PrOH solution at room temperature to dissolve the crystals. A reading of the optical density of the solutions obtained is made. The optical densities of the RDC or cisplatin treated wells are compared with those of untreated wells (controls). One manipulation is to treat 4 plates (3 X RDC and cisplatin). Each plate contains a single product at different concentrations. 9 columns are treated at 50, 20, 15, 10, 7.5, 5, 2.5, 1 and 0.2 μM and 3 columns are left as controls. The control column located at each end of the plate is not taken into account. The third column control is taken into account for calculations.
La détermination de NC50 et les tests statistiques de variance et Newmann-Keuls sont effectués à l'aide du logiciel Phsm GraphPad v. 4. Résultats des tests MTT:  The determination of NC50 and the statistical tests of variance and Newmann-Keuls are carried out using Phsm GraphPad v. 4. MTT test results:
Les résultats des tests MTT sont donnés sur les figures 2 et 3 pour les A172.  The MTT test results are given in Figures 2 and 3 for the A172.
Les cellules A172 ont été cultivées en plaques de 96 puits en milieu DMEM avec 10% de sérum de veau. A 50% de confluence, les cellules ont été traitées pendant 48 h avec le cisplatine (cisp) ou les divers composés dérivés du ruthénium aux concentrations indiquées (1 , 5, 15, 50 μM). La quantité de cellules présentes dans les puits a été évaluée par un test MTT (MTT, Sigma) dont les produits de la réaction sont quantifiés avec un lecteur de plaque Elisa (Metertech, USA) (490-650 nm). Les résultats obtenus ont été rapportés aux valeurs de la condition contrôle (100 % de viabilité). A172 cells were cultured in 96-well plates in DMEM medium with 10% calf serum. At 50% confluency, the cells were treated for 48 hours with cisplatin (cisp) or the various compounds derived from ruthenium at the indicated concentrations (1, 5, 15, 50 μM). The quantity of cells present in the wells was evaluated by an MTT test (MTT, Sigma) whose reaction products are quantified with an Elisa plate reader (Metertech, USA) (490-650 nm). The results obtained were related to the values of the control condition (100% viability).
Exemple 3 : Etude de l'inhibition de la prolifération de lignées cancéreuses par les composés selon l'invention La capacité des composés 8 et 9 à inhiber la prolifération de cellules cancéreuses a été étudiée en utilisant la méthode MTT précédemment décrite, laquelle donne une estimation du nombre de cellules. Ces études ont été réalisées sur des lignées cancéreuses de diverses origines (voir tableau 2) dans les conditions de culture précédemment décrites. Les IC50 (μM) ont été déterminées pour chacune des lignées et comparées aux valeurs obtenues avec un dérivé de ruthénium de référence. Dans l'ensemble des expériences effectuées, les deux composés selon l'invention sont plus efficaces que le composé de référence décrit dans WO 2006/016069 et répondant à la formule suivante : Example 3 Study of the Inhibition of the Proliferation of Cancer Lines by the Compounds According to the Invention The ability of compounds 8 and 9 to inhibit the proliferation of cancer cells was studied using the MTT method described above, which gives an estimate the number of cells. These studies were carried out on cancerous lines of various origins (see Table 2) under the culture conditions described above. The IC 50 (μM) were determined for each of the lines and compared to the values obtained with a ruthenium derivative of reference. In the set of experiments carried out, the two compounds according to the invention are more effective than the reference compound described in WO 2006/016069 and having the following formula:
Tableau 2 Table 2
Exemple 4 : Etude du profil du cycle cellulaire suite au traitement avec les composés selon l'invention L'effet des composés 8 et 9 sur le profil cellulaire a été étudié par la technique de FACS (Fluorescence Activated CeII Sorter, c'est-à-dire l'association d'un cytomètre de flux et d'un trieur de cellules) après avoir marqué les cellules à l'iodure de propidium pour visualiser la quantité d'ADN cellulaire. Ces analyses permettent de visualiser dans quelle phase du cycle cellulaire les cellules s'accumulent suite au traitement par les composés selon l'invention, et éventuellement si une mort cellulaire par apoptose est induite. Example 4 Study of the Profile of the Cell Cycle Following Treatment with the Compounds According to the Invention The effect of compounds 8 and 9 on the cell profile was studied by the technique of FACS (Fluorescence Activated CeII Sorter, ie the association of a flow cytometer and a cell sorter) after labeling the cells with iodide propidium to visualize the amount of cellular DNA. These analyzes make it possible to visualize in which phase of the cell cycle the cells accumulate following treatment with the compounds according to the invention, and possibly if apoptotic cell death is induced.
Les résultats montrent que, dans la lignée HCT116, les composés 8 et 9 induisent un arrêt du cycle cellulaire en phase G1 ou une mort cellulaire (caractérisée par la phase sub-G1 ) en fonction de la concentration de drogue utilisée (voir figure 4).The results show that, in the HCT116 line, the compounds 8 and 9 induce G1 phase cell cycle arrest or cell death (characterized by the sub-G1 phase) as a function of the drug concentration used (see FIG. 4). .
Dans cette expérience, les cellules HCT116 ont été traitées pendant 48h aux doses indiquées (1 μM et 5μM). Après 48 h de traitement, les cellules ont été lavées au PBS (tampon phosphate salin) trois fois et fixées à l'éthanol 90%. Les cellules ont ensuite été marquées avec une solution iodure de propidium/RNAse. Les cellules marquées (10 000 par échantillon) ont ensuite été comptées avec un FACScan flow cytometer and CelIQuest software (Becton Dickinson) afin de déterminer le contenu en ADN et le profil du cycle cellulaire. In this experiment, the HCT116 cells were treated for 48 hours at the indicated doses (1 μM and 5 μM). After 48 hours of treatment, the cells were washed with PBS (phosphate buffered saline) three times and fixed with 90% ethanol. The cells were then labeled with propidium iodide / RNAse solution. The labeled cells (10,000 per sample) were then counted with a FACScan flow cytometer and CelIQuest software (Becton Dickinson) to determine the DNA content and the cell cycle profile.
Exemple 5 : Etude de la toxicité aiguë de composés selon l'invention Example 5 Study of the Acute Toxicity of Compounds According to the Invention
La toxicité aiguë induite par les composés 8 et 9 a été étudiée chez la souris black 6 âgée de 8 semaines, après l'injection de doses uniques de produit à différentes concentrations (2, 7,5, 15, 30 et 60 μmol par kg). Les doses induisant 50 % de mortalité (DL50) ont été calculées et sont indiquées dans le tableau 3 ci-dessous. A titre de comparaison, la toxicité aiguë du composé de référence décrit ci-avant est indiquée. Cette expérience montre que le composé 8 à une toxicité supérieure (22,5μmol/Kg) à celle du composé de référence (57,5 μmol/Kg), alors que celle du composé 9 est inférieure (>60μmol/Kg). The acute toxicity induced by compounds 8 and 9 was studied in 8-week-old black 6 mice after injection of single doses of product at different concentrations (2, 7.5, 15, 30 and 60 μmol per kg). ). The doses inducing 50% mortality (LD50) were calculated and are shown in Table 3 below. For comparison, the acute toxicity of the reference compound described above is indicated. This experiment shows that compound 8 has a higher toxicity (22.5 μmol / kg) than that of the reference compound (57.5 μmol / kg), whereas that of compound 9 is lower (> 60 μmol / kg).
Dans cette expérience, les injections ont été réalisées de manière intrapéritonéale avec des groupes de 5 animaux par dose. Le poids et la survie des animaux ont été suivis sur 15 jours. In this experiment, the injections were performed intraperitoneally with groups of 5 animals per dose. Weight and survival of the animals were monitored over 15 days.
Tableau 3  Table 3
Exemple 6 : Etude des mécanismes d'action des composés selon l'invention Example 6 Study of the Mechanisms of Action of the Compounds According to the Invention
Afin de déterminer par quels mécanismes d'action les composés 8 et 9 pourraient conduire à un ralentissement de la prolifération cellulaire ou à une mort cellulaire, l'activation de deux marqueurs spécifiques, l'expression de la protéine CHOP et la phosphorylation de l'histone H2AX sur le site serine 137, a été suivie. La protéine CHOP a des propriétés pro-apoptotiques (induction de la mort cellulaire). La phosphorylation de l'histone H2AX est un marqueur de dommages à l'ADN qui conduisent à l'activation de p53, une protéine aux propriétés pro-apoptotiques ou de ralentissement de la prolifération cellulaire. In order to determine by which mechanisms of action compounds 8 and 9 could lead to a slowing down of cell proliferation or cell death, the activation of two specific markers, the expression of the CHOP protein and the phosphorylation of the histone H2AX at the serine 137 site, was followed. CHOP protein has pro-apoptotic properties (induction of cell death). Phosphorylation of histone H2AX is a marker of DNA damage that leads to the activation of p53, a protein with pro-apoptotic properties or slowing of cell proliferation.
Les résultats montrent que les composés 8 et 9 sont plus efficaces pour induire l'expression de la protéine CHOP et la phosphorylation de l'histone H2AX que le composé de référence (voir figure 5). The results show that compounds 8 and 9 are more effective at inducing CHOP expression and phosphorylation of histone H2AX than the reference compound (see Figure 5).
Dans ces expériences, les cellules tumorales A172 ont été traitées pendant 6 heures avec les composés à deux concentrations (5μM et 10μM). Après les 6 heures de traitement, les cellules ont été lysées et 30μg de protéines solubles ont été séparées sur gel de polyacrylamide 12%. Après migration, les protéines ont été transférées sur nitrocellulose par la technique de Western blot. Les protéines CHOP et H2AX ont ensuite été détectées à l'aide d'anticorps primaires spécifiques, reconnus eux-mêmes par des anticorps secondaires correspondants dont l'activité peroxydase a été révélée à l'aide d'un kit ECL. Exemple 7 : Etude de l'activité anti-tumorale de composés selon l'invention In these experiments, the A172 tumor cells were treated for 6 hours with the compounds at two concentrations (5 μM and 10 μM). After 6 hours of treatment, the cells were lysed and 30 .mu.g of soluble proteins were separated on 12% polyacrylamide gel. After migration, the proteins were transferred to nitrocellulose by the Western blot technique. The CHOP and H2AX proteins were then detected using specific primary antibodies, themselves recognized by corresponding secondary antibodies whose peroxidase activity was revealed using an ECL kit. Example 7 Study of the Anti-tumor Activity of Compounds According to the Invention
Afin de déterminer le potentiel anticancéreux de ces molécules, nous avons analysé les effets du composé 8 et du composé 9 sur la croissance tumorale en utilisant le modèle in vivo de mélanome F10B16 implanté chez la souris black 6. Ces effets ont été comparés à ceux du composé de référence. Les traitements chroniques (2 fois par semaine à 7,5 μmol/kg) des souris présentant des tumeurs ont abouti à une réduction de la croissance tumorale. Cette diminution de la croissance tumorale (volume tumeur traitée/volume tumeur non traitée; T/C) est de l'ordre de 80% pour le composé 8 et de 60% pour le composé 9 (voir tableau 4 et figures 6 et 7). To determine the anticancer potential of these molecules, we analyzed the effects of compound 8 and compound 9 on tumor growth using the in vivo model of F10B16 melanoma implanted in black 6 mice. These effects were compared to those of reference compound. Chronic treatments (twice weekly at 7.5 μmol / kg) of tumor-bearing mice resulted in a reduction in tumor growth. This decrease in tumor growth (treated tumor volume / untreated tumor volume, T / C) is of the order of 80% for compound 8 and 60% for compound 9 (see Table 4 and Figures 6 and 7) .
Dans ces expériences, les cellules F1 PB16 (200 000 cellules) ont été implantées en sous-cutané chez des souris black 6 âgées de 8 semaines. Des groupes de 6 souris par condition ont été réalisés. Les traitements ont commencé lorsque les tumeurs étaient palpables avec un volume de l'ordre de 100 mm3. In these experiments, PB16 F1 cells (200,000 cells) were implanted subcutaneously in 8 weeks old black 6 mice. Groups of 6 mice per condition were made. The treatments started when the tumors were palpable with a volume of the order of 100 mm 3 .

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé complexe de ruthénium de formule générale suivante : A pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable carrier, at least one ruthenium complex compound of the following general formula:
(I)  (I)
formule dans laquelle : formula in which:
l_i, l_2, L-3, identiques ou différents, représentent soit un ligand donneur de 2 électrons par un atome d'azote, d'oxygène, de phosphore ou de soufre, soit un atome d'halogène, l_i, l_ 2 , L-3, which may be identical or different, represent either a donor ligand of 2 electrons by a nitrogen, oxygen, phosphorus or sulfur atom or a halogen atom,
Y" est un contre-ion (lorsque m = 1 ), Y " is a counter-ion (when m = 1),
m est 0 ou 1 , m is 0 or 1,
Xi et X2, différents l'un de l'autre, représentent l'un, un atome d'azote et l'autre, un atome de carbone, Xi and X2, different from each other, represent one, a nitrogen atom and the other, a carbon atom,
entre Xi et X2, représentée par une ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec Xi, X2 et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué debetween X 1 and X 2 , represented by a curved line, there exists a succession of atoms forming, with X 1 , X 2 and R 1 represented on the formula, a ring which consists of
5 à 8 atomes, et 5 to 8 atoms, and
entre N et X1, représentée par l'autre ligne courbe, il existe une succession d'atomes formant, avec l'atome d'azote, X1 et Ru représentés sur la formule, un cycle qui est constitué de 5 à 8 atomes. between N and X 1 , represented by the other curved line, there is a succession of atoms forming, with the nitrogen atom, X1 and Ru represented on the formula, a ring which consists of 5 to 8 atoms.
2. Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce que L1, L2, et/ou L3 représentent un groupement pyridine, bipyridine, phénanthroline ou terpyridine, éventuellement substitué, en particulier par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O- aryle), acide carboxylique, ester (CO2-alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-x où x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y+ où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-N Hw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. 2. Composition according to Claim 1, characterized in that L 1 , L 2 and / or L 3 represent a pyridine, bipyridine or phenanthroline group. or terpyridine, optionally substituted, in particular with at least one halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl), aryloxyl (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl) radical, thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulphonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2- x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N ( alkyl or aryl) yH 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer which may be 1 or 2 ), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-N H w (alkyl or aryl) 2 -w where w is an integer which may be 0, 1 or 2) or cyano.
3. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les groupements L-i, L2, et L3 forment à eux trois un ligand donneur de deux électrons par atome d'azote, en particulier la terpyridine ou la 2-(2-pyridyle)-1 ,10- phénanthroline, éventuellement substituée sur un ou plusieurs atomes de carbone de ses cycles pyridines, par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, aryle, hydroxyle, alcoxyle (O-alkyle), aryloxyle (O-aryle), acide carboxylique, ester (CO2- alkyle), thiol, thioéther (S-alkyle), acide sulfinique, acide sulfonique, nitro, nitroxyle, aminé (N(alkyle ou aryle)xH2-x où x est un entier pouvant être 0, 1 ou 2), trialkylammonium (N(alkyle ou aryle)yH3-y + où y est un entier pouvant être 0, 1 , 2 ou 3), hydroxylamine (N(OH)z(alkyle ou aryle)2-z où z est un entier pouvant être 1 ou 2), hydrazine, azo (N=N-(alkyle ou aryle)), diazonium, amide (CO-N Hw(alkyle ou aryle)2-w où w est un entier pouvant être 0, 1 ou 2) ou cyano. 3. Composition according to one of the preceding claims, characterized in that the groups Li, L 2 and L 3 together form a ligand donor of two electrons per nitrogen atom, in particular terpyridine or 2- ( 2-pyridyl) -1,10-phenanthroline, optionally substituted on one or more carbon atoms of its pyridine rings, with at least one halogen atom, an alkyl, aryl, hydroxyl, alkoxyl (O-alkyl) or aryloxyl radical (O-aryl), carboxylic acid, ester (CO 2 -alkyl), thiol, thioether (S-alkyl), sulfinic acid, sulphonic acid, nitro, nitroxyl, amine (N (alkyl or aryl) x H 2-x where x is an integer which may be 0, 1 or 2), trialkylammonium (N (alkyl or aryl) y H 3 -y + where y is an integer which may be 0, 1, 2 or 3), hydroxylamine (N (OH) z (alkyl or aryl) 2-z where z is an integer which may be 1 or 2), hydrazine, azo (N = N- (alkyl or aryl)), diazonium, amide (CO-N H w (alkyl or aryl) 2 -w where w is an integer that can be 0, 1 or 2) or cyano.
4. Composition selon la revendication 3, caractérisé en ce que le substituant porté par la terpyridine ou la 2-(2-pyhdyle)-1 ,10-phénanthroline est un radical aryle, en particulier un phényle substitué par un méthyle ou un méthoxyle. 4. Composition according to Claim 3, characterized in that the substituent carried by terpyridine or 2- (2-pyhdyl) -1,10-phenanthroline is an aryl radical, in particular a phenyl substituted by a methyl or a methoxyl.
5. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que Y" est BF4 ", B(C6H5)4 ", PF6 ", CF3SO3 ", tosylate (p-tolylSO3 "), mésylate (MeSO3 "), SO4 2", CF3CO2 ", CH3CO2 ", bicarbonate (HCO3 "), CIO4 ", ou NO3 ". 5. Composition according to one of the preceding claims, characterized in that Y " is BF 4 " , B (C 6 H 5 ) 4 " , PF 6 " , CF 3 SO 3 " , tosylate (p-tolylSO 3 " ) mesylate (MeSO 3 " ), SO 4 2" , CF 3 CO 2 " , CH 3 CO 2 " , bicarbonate (HCO 3 " ), CIO 4 " , or NO 3 " .
6. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que m est égal à 1. 6. Composition according to one of the preceding claims, characterized in that m is equal to 1.
7. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la ligne courbe, avec Xi, X2 et Ru et/ou avec Xi, N et Ru dans la formule générale, représente un cycle constitué de 5 à 6 atomes. 7. Composition according to one of the preceding claims, characterized in that the curved line, with Xi, X 2 and Ru and / or with Xi, N and Ru in the general formula, represents a ring consisting of 5 to 6 atoms.
8. Composition selon la revendication 7, caractérisé en ce que les atomes du ou des cycles sont tous des atomes de carbone. 8. Composition according to claim 7, characterized in that the atoms of the ring or rings are all carbon atoms.
9. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'ensemble contenant les deux lignes courbes de la formule générale (I) représente l'une des unités structurales suivantes : 9. Composition according to one of the preceding claims, characterized in that the assembly containing the two curved lines of the general formula (I) represents one of the following structural units:
avec R = H et R1 = -OMe with R = H and R 1 = -OMe
ou R = -Ph(p-Me) et R1 = Me or R = -Ph (p-Me) and R 1 = Me
10. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi les complexes (1 ) à (12) suivants:10. Composition according to one of the preceding claims, characterized in that the compound is chosen from the following complexes (1) to (12):
(1) (2) (1) (2)
(3) (3)
11. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que le composé est le complexe de formule (1 ). 11. Composition according to claim 10, characterized in that the compound is the complex of formula (1).
12. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des maladies liées à une hyperprolifération cellulaire. 12. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating diseases related to cellular hyperproliferation.
13. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des cancers. 13. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating cancers.
14. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des glioblastomes, des leucémies promyélocytaires, des cancers de la prostate, des ovaires, des poumons, des seins, des voies digestives, en particulier du foie, du pancréas, de la tête et du cou, du colon, des lymphomes non-Hodgkiniens ou des mélanomes. 14. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating glioblastomas, promyelocytic leukemias, cancers of the prostate, ovaries, lungs, breasts, digestive tract, in particular the liver, pancreas, head and neck, colon, non-Hodgkin's lymphoma or melanoma.
15. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des cancers par accumulation des cellules tumorales en phase G0/G1 ou G2/M, et éventuellement par induction d'apoptose ou d'un autre type de mort cellulaire. 15. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating cancers by accumulation of tumor cells in G0 / G1 or G2 / M phase, and possibly by induction of apoptosis or another type of cell death.
16. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des tumeurs résistantes au cisplatine ou à d'autres drogues anticancéreuses. 16. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating tumors resistant to cisplatin or other anticancer drugs.
17. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des cancers en combinaison avec un traitement anti-cancéreux mettant en œuvre des rayonnements, tel que la radiothérapie. 17. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating cancers in combination with an anti-cancer treatment using radiation, such as radiotherapy.
18. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 , destinée à traiter des cancers en combinaison avec au moins un autre agent chimique anti-cancéreux, conditionné et administré de façon combinée, séparée ou séquentielle. 18. Composition according to one of claims 1 to 11, for treating cancers in combination with at least one other anti-cancer chemical agent, packaged and administered in a combined, separate or sequential manner.
19. Composé du ruthénium, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les composés (8) et (9) : 19. Compound of ruthenium, characterized in that it is chosen from compounds (8) and (9):
PF,PF
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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GB201116057D0 (en) 2011-09-16 2011-11-02 Univ York Synthesis and anticancer activity of ruthenium (II) cis-cis-1,3,5-triaminocyclohexane complexes
CN102503987A (en) * 2011-11-21 2012-06-20 广西师范学院 Compound with anti-tumor activity as well as preparation method and purpose thereof
ES2452719B1 (en) * 2012-10-01 2015-01-26 Universitat De Barcelona Ruthenium (II) anti-tumor compounds
CN102964387B (en) * 2012-11-30 2015-01-21 广西师范学院 Organic metal ruthenium ion pair compound and preparation method and application thereof
US10316050B2 (en) 2014-08-13 2019-06-11 The Board Of Regents Of The Nevada System Of Higher Education On Behalf Of The University Of Nevada, Las Vegas PT (IV) complexes containing 4,4′-disubstituted-2,2′-bipyridyl and their use in cancer therapy
CN108484924B (en) * 2018-03-28 2021-08-13 江西师范大学 Nickel coordination polymer for separating acetylene/ethylene mixed gas and preparation method thereof

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2873037B1 (en) 2004-07-13 2008-04-11 Univ Pasteur METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCERS

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