EP2120960A2 - NOVEL ß-LACTAM ANTIBIOTICS, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF, AND USE THEREOF - Google Patents

NOVEL ß-LACTAM ANTIBIOTICS, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF, AND USE THEREOF

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Publication number
EP2120960A2
EP2120960A2 EP08708525A EP08708525A EP2120960A2 EP 2120960 A2 EP2120960 A2 EP 2120960A2 EP 08708525 A EP08708525 A EP 08708525A EP 08708525 A EP08708525 A EP 08708525A EP 2120960 A2 EP2120960 A2 EP 2120960A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
formula
acid
bicarbonate
polyhexamethylene biguanide
cooch
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP08708525A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Wolf-Dieter Juelich
Ulrike Lindequist
Annett Mikolasch
Sabine Witt
Frieder Schauer
Roland Ohme
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dritte Patentportfolio Beteiligungs GmbH and Co KG
Original Assignee
Dritte Patentportfolio Beteiligungs GmbH and Co KG
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Filing date
Publication date
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Priority to EP08708525A priority Critical patent/EP2120960A2/en
Publication of EP2120960A2 publication Critical patent/EP2120960A2/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D501/00—Heterocyclic compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D501/14—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7
    • C07D501/16—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7 with a double bond between positions 2 and 3
    • C07D501/20—7-Acylaminocephalosporanic or substituted 7-acylaminocephalosporanic acids in which the acyl radicals are derived from carboxylic acids
    • C07D501/22—7-Acylaminocephalosporanic or substituted 7-acylaminocephalosporanic acids in which the acyl radicals are derived from carboxylic acids with radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached in position 3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/542—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/545—Compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins, cefaclor, or cephalexine
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • Novel ⁇ -lactam antibiotics process for their preparation and their use
  • the invention relates to novel antimicrobial agents based on ß-lactam derivatives and their use as antibiotics.
  • the ⁇ -lactam antibiotics are among the most widely used antibiotics.
  • the cephalosporins like the structurally closely related carbacephems and penicillins, inhibit bacterial cell wall synthesis and are bactericidal only in the growth phase of the bacteria.
  • the antibiotic group of cephalosporins has been intensively processed.
  • the clinically used derivatives are usually derived from the parent 7-aminocephalosporanic acid, with changes to the body as Rl substitution in position 7, as R2 substitution in position 3 and in the cephamycins by an additional methoxy group in position 7 were made.
  • cephalosporins and the carbacephems offer better possibilities for structural modification and effect optimization than penicillins, as evidenced by the high number of synthesized cephalo sporin derivatives (Gräfe U. Biochemistry of antibiotics.) Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg, Berlin, New York, 1992 ).
  • esterification of the carboxyl group of cephalosporins corresponds to the prior art, for example: M. Murakami; M. Hajima; Takami; M. Yoshioka (Heterocylces, 1990, 31, 2055-264).
  • the esterification leads u.a. to better absorbable derivatives.
  • enzymes can be used to enable a reaction under mild conditions. Lipases catalyze esterification with a wide variety of substrates (Ching et al., Angew Chem 101, 711-724, 1989).
  • Formula 1 is known as microbicid and has been introduced into the practice of disinfection and antiseptics under the names Vantocil IR, polihexanide, Lavasept R or PHMB-HCl, and is used especially as a wound antiseptic, as well as adjuvant for wound treatment in the surgical treatment of acute and chronic bones and soft tissue infections. It is a polymer mixture of different molecular weight ranges, the separation of which previously could only be detected by chromatography, but could not be carried out preparatively. The known microbieiden effects therefore always relate to the polymer mixture and are not optimized. In medicine, only mixtures of polymers having a different number of subunits than hydrochloride have hitherto been used. Common are polymers with 4 to 7 units and a molecular weight of 900 to 1300 g / mol. The recovery of pure polymer fractions has not been successful. The purification of the polymer mixture for the purposes of medical application is difficult and expensive.
  • the object of the present invention is therefore to provide new active ingredients.
  • the invention is in particular the object of the existing by the increasing development of bacteria resistance to conventional antibiotics needs in human and veterinary medicine by structural and effect modified antibiotics to be derived from clinically proven drugs.
  • the invention also relates to processes for the preparation of the ⁇ -lactam antibiotics according to the invention, including intermediates.
  • processes for the preparation of the ⁇ -lactam antibiotics according to the invention including intermediates.
  • ⁇ -lactam antibiotics according to formula 3 which consist of a derivative of 6-aminopenicillanic acid or 7-aminocephalosporanic acid as anionic component X " and derivatives of polyhexamethylene biguanide as cationic components, have proved to be highly effective Active ingredient according to the invention effects in all inhibited, even in the strains in which both the cationic active ingredient as the hydrochloride and the anion (ie the antibiotic without cationic component) are ineffective.
  • the active compounds of the invention according to formula 3 are therefore suitable for the anti-infective wound treatment of acute and chronic wounds including the use for irrigation-suction-drainage and anti-infective lavage of body cavities.
  • Formula 2 in a concentration of 0.01 to 0.03% particularly advantageous results in 0.02% is that the germ killing is limited to the suction pad. As a result, the classification as a medical device is not restricted despite antimicrobial equipment.
  • the hydroxy groups of the substrates of the polyphenol oxidases can be arranged in accordance with formula 6 and formula 9 para or o / t / zo-constantly.
  • Particularly preferred for the synthesis of the new drugs the amination of 2,5-dihydroxybenzoic acid derivatives with laccase EC 1-10.3.2. (Classification according to International Enzyme Nomenclature, Enzyme Nomenclature, Academic Press, Ine, 1192, pp. 24-154), which leads to broad possibilities of derivatization.
  • the amination with catechols according to the invention is limited to active compounds according to formula 8.
  • the active compounds according to the invention are characterized in that the new substituents change the application properties, without influencing functional groups.
  • the active compounds according to the invention therefore have advantages as previously known ⁇ -lactam antibiotics, namely high bactericidal activity with low toxicity.
  • the radicals required for the novel synthesis of the new active substances can be produced by biological, chemical and / or physical means. Particular preference is given to free radicals which are produced by using supernatants of ligninolytic fungi and / or from the supernatants of isolated radical-forming enzymes be generated.
  • Laccase from Trametes sp. be used for the synthesis of new drugs.
  • a process for the purification of polyhexamethylene biguanides is provided by the invention, which is characterized in that polyhexamethylene biguanide hydrochloride (formula image 1) is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitate is separated from the mother liquor and hydrochloric acid is returned to purified product according to formula image 1 back.
  • polyhexamethylene biguanide hydrochloride (formula image 1) is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitate is separated from the mother liquor and hydrochloric acid is returned to purified product according to formula image 1 back.
  • ß-lactam antibiotics according to formula 3, obtainable by salt formation from derivatives of 6-aminopenicillanic acid or 7-aminocephalosporanic acid as anionic
  • Component X and derivatives of polyhexamethylene biguanide as a cation provided for the first time.
  • ⁇ -lactam antibiotics according to formula image 4 obtainable from commercially available active compounds according to formula 5 by reaction with active ingredients by
  • a process for the separation of polyhexamethylene biguanide into molecular weight ranges is described, characterized in that polyhexamethylene biguanide hydrochloride is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitation taking place partially and stepwise, with fractionation into narrower molecular weight ranges of the polymer.
  • the active compounds according to formula image 3 are characterized in that Polyhexamethylenbiguanid hydrochloride is fractionated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate to Polyhexamethylenbiguanid hydrogen carbonate and the precipitated products with antibiotics which exceed the bicarbonate in their acidity, be implemented. It is also possible that the anionic component is an antimicrobial fatty acid.
  • the solubility and distribution behavior of the active ingredients can be varied by fractional precipitation of the cationic component.
  • the invention also provides a process for the purification of polyols. Hexamethylenbiguanid, characterized in that Polyhexamethylenbiguanid hydrochloride (formula image 1) is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitate separated from the mother liquor and transferred with hydrochloric acid in purified product of formula image 1 back.
  • new salts of polyhexamethylene biguanide are obtained by reacting the polyhexamethylene biguanide hydrogencarbonate with inorganic or organic acids.
  • a use according to the invention is an antimicrobial finishing of absorbent dressings, characterized in that the equipment with a sparingly soluble salt of Hexamethylenbiguanids by immersion and / or spraying, wherein a concentration is maintained, at which no significant diffusion of biguanide into the wound he follows.
  • R 4 CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , 3, C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 ,
  • R 5 CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOCH 2 CH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , CH 2 (CH 2 ) 0 . 20 CH 3, C (CH 3) 3, C 6 H 5, Cl, Br, OCH 3, O (CH 2) 20 CH 3 0 _
  • R 4 CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , 3, C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 ,
  • R 5 CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 ,
  • COOCH 2 CH 3 COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , CH 2 (CH 2 V 20 CH 3 , C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 , O (CH 2 ) 0 _ 20 CH 3
  • Example 36 The structural analysis and the tests for biological activity of Examples 1- Example 36 are based on the names of the structural elements and the substances corresponding to the formula 10.
  • FIG. 1 shows the storage stability of 7- ⁇ 2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino ⁇ -decetoxycephalosporanic acid 1 a.
  • the test bacteria Escherichia coli SBUG 1135 and Bacillus megaterium SBUG 1152 are grown overnight (17 hours at 37 ° C.) in 5 ml of nutrient broth II.
  • the incubation takes place in a shaking incubator (INFORS AG CH 4103, Bottmingen, Switzerland) at a shaking frequency of 180 rpm.
  • Escherichia coli has a cell density of approx. 2.4 ⁇ 10 10 cells / ml and Bacillus megaterium of approx 2, IxIO 8 cells / ml.
  • the seeding of the bacteria in the agar is chosen so that develop after the incubation dense, but not confluent single colonies.
  • Bacillus megaterium 0.1 ml of the undiluted overnight culture (overnight) in 10 ml
  • Nutrient agar corresponds to a cell number of 10 6 .
  • Escherichia coli the TS is diluted 1: 100 with saline, of which 0.1 ml is transferred to 10 ml of nutrient agar. That corresponds to a cell number of 10 6 .
  • the inoculated nutrient agar is placed in sterile petri dishes and dried to some
  • Test for antimicrobial activity The test substances are added in graduated quantities (10 ⁇ g, 50 ⁇ g, 100 ⁇ g)
  • Drug carrier (sensi-dics) applied.
  • the test substances are used in methanol or
  • Each inoculated plate is equipped with 3 test leaflets.
  • the Hemmhöfe can be measured to the individual test leaflets.
  • the Hemmhof can be measured to the individual test leaflets.
  • the Hemmhof is given in mm.
  • the bacteria are cultivated on Müller-Hinton Agar II plates.
  • McFarland 0.5 (which corresponds to a bacterial density of 15OxIO 6 germs) produced. With A small drop of the bacterial suspension is then placed on the Müller-Hinton agar plate on a sterile glass rod and streaked in three planes (vertical, horizontal and transverse). Thereafter, the sensi-disc are launched with the new semisynthetic test substances. The stocked plates are incubated for 18-20 hours at 37 ° C. After incubation, the inhibition zone diameters are read as a measure of the antimicrobial activity of the new semisynthetic test substances.
  • the active compounds according to formula 7 are effective against a broad spectrum of germs (Table 4).
  • the detection was carried out on the "mouse ear test" model: After killing the animals, the mouse ears are cut off and clamped in a special holding device The contamination of the ears is carried out with 5 ⁇ l of a 1:10 diluted suspension of the MRSA strain " North German epidemic strain "with an optical density corresponding to the McFarland standard 0.5. After incubation for 1.5 h at 30 ° C., the treatment with the active compounds according to the invention according to Example 6 takes place in half of the ears and the other half remains untreated. The evaluation of the growing bacterial colonies takes place after 24 h incubation at 37 ° C.
  • the lipids are heated to a temperature of 50 0 C and then the active ingredient used according to Example 1 dispersed therein. Separately, an aqueous emulsifier solution is heated to the appropriate temperature (5O 0 C). Thereafter, both phases are combined at the desired homogenization temperature. The mixture is then processed using an Ultra Turax T25 from Janke and Kunkel GmbH & Co KG (Staufen, Germany) in an emulsification process at 8000 revolutions per minute and a duration of 30 seconds.
  • the suspension is then reacted with a piston-gap high-pressure homogenizer Micron Lab 40 (APV-Gaulin, Lubeck) at a pressure of 500 bar and a temperature of 5O 0 C homogenised four times.
  • the resulting formulation was tested for antimicrobial efficacy when applied to the skin as described in Example 9.
  • Example 11 Antimicrobial Activity in vivo of the New Substances of Formula 4 (Example 1 - Example 4)
  • mice On day 0, at least 3 BALB / c mice per test substance (Tab. 8) or
  • a colony of the test germ is transferred from a covered agar plate (Mueller-Hinton agar, Beckton Dickinson) to a vial with 10 ml of CASO broth (C ASO-B., Soy peptone-casein peptone broth, SIFIN, 30 g / l) and cultivated overnight at 37 0 C and a shaking frequency of 250U / min.
  • C ASO-B. Soy peptone-casein peptone broth, SIFIN, 30 g / l
  • Vk the preculture (Vk) is 1:50 with CASO-B. diluted and cultivated for about 2 hours until an absorbance in the medium of 0.6 at a wavelength of 550 nm is reached. Then Ix is washed with PBS at room temperature and readjusted to an absorbance of 0.6.
  • At least 3 animals for a test substance or controls are infected with 10 .mu.l / g body weight germs of a bacterial suspension with extinction 0.6 (about 10 10 - 10 12 CFU, colony forming units) ip infected.
  • mice antibiotic solution in a volume of 200 ul PBS with 3% DMSO i.p. injected. 6 hours later, the second antibiotic injection takes place in the same concentration.
  • mice antibiotic solution in a volume of 200 ul PBS with 3% DMSO i.p. injected. Result
  • the distribution coefficient of the analyte can be determined from the
  • the new active ingredients have a strong antimicrobial effect (Table 7).
  • FIG. 2 shows the storage stability of the 3-chloro-7- ⁇ 2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa 1,4-dienylamino] -2-phenyl-acetylamino ⁇ -8-oxo-1-thia-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Ii.
  • FIG. 3 shows the storage stability of the 3-chloro-7- ⁇ 2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa], 4-dienylamino] -2-phenyl-acetylamino ⁇ -8-oxo-5 azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Im.
  • Example 33 Antimicrobial action of the novel compounds according to formula 4 (Example 29 - Example
  • the new active ingredients have a strong antimicrobial effect (Table 13). Tab. 13 Antimicrobial effect of the new active ingredients in up to Ip and 2d.
  • Example 35 Antimicrobial activity in vivo of the new substances according to formula 4 (Example 29 - Example 32)
  • Example 37 - Example 41 The structural analysis and the biological activity tests of Example 37 - Example 41 are based on the names of the structural elements and the substances corresponding to the formula 11.
  • a layer of the absorbent core was cut into 2 large pieces. These were soaked with differently concentrated suspensions of the active substance according to formula image 3 and tested for germ reduction in the agar test.
  • the microbial suspensions were plated out using the Whitley Automatic Spiral Plater (WASP) linear. This resulted in agar plates with a uniform bacterial growth.
  • WASP Whitley Automatic Spiral Plater
  • the areas to which the dressings were to be applied were marked and the control areas precisely determined. These areas were each pipetted with 25 ⁇ l saline. Uncoated compress material and wound dressings coated with the substances according to the invention were placed in these drops and lightly pressed on.
  • the plates were 15min to Pre-diffusion allowed to stand at room temperature until placed in the incubator (37 ° C).
  • the areas of the wound dressings were marked.
  • the bacteria were counted on the areas below the wound dressings and in the control areas, which had been treated only with saline.
  • the wound dressings were transferred to fresh agar to count any surviving germs.
  • FIG. 4 shows the schematic representation of the filter experimental setup
  • the active ingredient according to formula image 2 was treated with a mixture of different fatty acids (tetradecanoic acid, pentadecanoic acid, hexadecanoic acid, cis-9-hexadecenoic acid, octadecanoic acid, cis-9-octadecenoic acid, cis-9,12-octadecadienoic acid, obtained by n-hexane extraction from microalgae extractor DIONEX ASE 200). Suction compresses were coated with the resulting product at a concentration of 0.01%.
  • Example 46 incorporation into a cellulose gel methodology
  • mucous membranes formulation of the invention shows the best efficacy.

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Abstract

The invention relates to novel antimicrobial agents that are based on ß-lactam derivatives and are produced by reacting previously known ß-lactam derivatives with polyphenol oxidase substrates under the influence of free radicals and by forming salts of any ß-lactam derivatives with polyhexamethylene biguanide hydrogen carbonate. Said novel compounds are suitable as an antibiotic.

Description

Neue ß-Lactam- Antibiotika, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung Novel β-lactam antibiotics, process for their preparation and their use
Beschreibungdescription
[0001] Die Erfindung betrifft neue antimikrobielle Wirkstoffe auf der Basis von ß-Lactam- Derivaten und deren Verwendung als Antibiotikum.The invention relates to novel antimicrobial agents based on ß-lactam derivatives and their use as antibiotics.
Stand der TechnikState of the art
[0002] Die ß-Lactam- Antibiotika, insbesondere die Cephalosporine, gehören zu den am meisten angewandten Antibiotika. Die Cephalosporine hemmen wie die strukturell eng verwandten Carbacepheme und die Penicilline die Synthese der Bakterienzellwand und wirken nur in der Wachstumsphase der Bakterien bakterizid. Die Antibiotika-Gruppe der Cephalosporine ist intensiv bearbeitet worden. Die klinisch eingesetzten Derivate leiten sich in der Regel vom Grundkörper 7-Aminocephalosporansäure ab, wobei Veränderungen am Grundkörper als Rl -Substitution in Position 7, als R2-Substitution in Position 3 sowie bei den Cephamycinen durch eine zusätzliche Methoxygruppe in Position 7 vorgenommen wurden. [0003] Die Cephalosporine und die Carbacepheme bieten bessere Möglichkeiten zur strukturellen Modifikation und Wirkungsoptimierung als die Penicilline, wie die hohe Zahl der synthetisierten Cephalo sporin-Derivate beweist (Gräfe U. Biochemie der Antibiotika. Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg, Berlin, New York, 1992).The β-lactam antibiotics, especially cephalosporins, are among the most widely used antibiotics. The cephalosporins, like the structurally closely related carbacephems and penicillins, inhibit bacterial cell wall synthesis and are bactericidal only in the growth phase of the bacteria. The antibiotic group of cephalosporins has been intensively processed. The clinically used derivatives are usually derived from the parent 7-aminocephalosporanic acid, with changes to the body as Rl substitution in position 7, as R2 substitution in position 3 and in the cephamycins by an additional methoxy group in position 7 were made. The cephalosporins and the carbacephems offer better possibilities for structural modification and effect optimization than penicillins, as evidenced by the high number of synthesized cephalo sporin derivatives (Gräfe U. Biochemistry of antibiotics.) Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg, Berlin, New York, 1992 ).
[0004] In jeder Gruppe der ß-Lactam- Antibiotika gibt es bewährte Substanzen, die aufgrund ihres Wirkungsspektrums und ihrer pharmakokinetischen Eigenschaften für bestimmte Indikationen zu bevorzugen sind.In each group of ß-lactam antibiotics there are proven substances that are preferred for certain indications due to their spectrum of activity and their pharmacokinetic properties.
[0005] Kein einziges ß-Lactam-Derivat kann bisher als universell einsetzbar betrachtet werden. Deshalb ist ein vielseitiges Moleküldesign unverzichtbar, um zu für den beabsichtigten Einsatz geeigneten Derivaten zu kommen.No single beta-lactam derivative can be considered universally applicable. Therefore, a versatile molecular design is indispensable to arrive at suitable derivatives for the intended use.
[0006] Aber auch gegenüber diesen zunächst wirksamen Antibiotika haben sich Resistenzen insbesondere bei Staphylokokken (methicillin resistente S.-aureus-Stämme = MRSA) herausgebildet. Der Anteil der resistenten Stämme an den klinischen Isolaten wächst in allen hochindustrialisierten Ländern ständig, in den USA, Japan und China beträgt er z.Z. über 70 %. Hospitalinfektionen mit multiresistenten Staphylokokken sind bei Patienten mit geschwächter Immunantwort zunehmend schwerer beherrschbar. Deshalb ist die Entwicklung von Antibiotika mit Wirksamkeit gegen multiresistente Staphylokokken von großer Bedeutung.But also against these initially effective antibiotics, resistances in particular in staphylococci (methicillin resistant S. aureus strains = MRSA) have emerged. The proportion of resistant strains on clinical isolates is growing steadily in all highly industrialized countries and currently exceeds 70% in the USA, Japan and China. Hospital infections with multidrug-resistant staphylococci are increasingly difficult to control in patients with a weakened immune response. That's why the development of antibiotics with efficacy against multidrug resistant staphylococci of great importance.
[0007] Eine Veresterung der Carboxylgruppe der Cephalosporine entspricht dem Stand der Technik, z.B.: M. Murakami; M. Hajima; F. Takami; M. Yoshioka (Heterocylces, 1990, 31, 2055-264). Die Veresterung fuhrt u.a. zu besser resorbierbaren Derivaten. Dabei können Enzyme genutzt werden, um eine Umsetzung unter schonenden Bedingungen zu ermöglichen. Lipasen katalysieren die Veresterung mit einer breiten Palette von Substraten (Ching et al., Angew. Chem. 101, 711-724, 1989).An esterification of the carboxyl group of cephalosporins corresponds to the prior art, for example: M. Murakami; M. Hajima; Takami; M. Yoshioka (Heterocylces, 1990, 31, 2055-264). The esterification leads u.a. to better absorbable derivatives. In this case, enzymes can be used to enable a reaction under mild conditions. Lipases catalyze esterification with a wide variety of substrates (Ching et al., Angew Chem 101, 711-724, 1989).
[0008] Poly-hexamethylen-biguanid-Hydrochlorid Formel 1 uPoly-hexamethylene biguanide hydrochloride Formula 1 u
Formel 1 ist als Microbicid bekannt und unter den Namen Vantocil IR ,Polihexanid , Lavasept R oder PHMB-HCl in die Praxis der Desinfektion und Antiseptik eingeführt und wird speziell als Wundantiseptikum verwendet, ferner als Adjuvans zur Wundbehandlung bei der chirurgischen Versorgung von akuten und chronischen Knochen- und Weichteilinfektionen. Es handelt sich um ein Polymerengemisch verschiedener Molgewichtsbereiche, dessen Auftrennung bisher nur chromatographisch nachgewiesen, aber präparativ nicht durchgeführt werden konnte. Die bekannten microbieiden Wirkungen beziehen sich daher immer auf das Polymerengemisch und sind nicht optimiert. In der Medizin werden bis jetzt ausschließlich Mischungen aus Polymeren mit einer unterschiedlichen Zahl von Untereinheiten als Hydrochlorid verwendet. Üblich sind Polymere mit 4 bis 7 Einheiten und einem Molekulargewicht von 900 bis 1300 g/mol. Die Gewinnung reiner Polymerfraktionen ist bisher nicht gelungen. Die Reinigung des Polymerengemischs für Zwecke der medizinischen Anwendung ist schwierig und aufwendig. Formula 1 is known as microbicid and has been introduced into the practice of disinfection and antiseptics under the names Vantocil IR, polihexanide, Lavasept R or PHMB-HCl, and is used especially as a wound antiseptic, as well as adjuvant for wound treatment in the surgical treatment of acute and chronic bones and soft tissue infections. It is a polymer mixture of different molecular weight ranges, the separation of which previously could only be detected by chromatography, but could not be carried out preparatively. The known microbieiden effects therefore always relate to the polymer mixture and are not optimized. In medicine, only mixtures of polymers having a different number of subunits than hydrochloride have hitherto been used. Common are polymers with 4 to 7 units and a molecular weight of 900 to 1300 g / mol. The recovery of pure polymer fractions has not been successful. The purification of the polymer mixture for the purposes of medical application is difficult and expensive.
[0009] Eine Kombination von ß-Lactam-Antibiotika und Polyhexamethylen-biguaniden ist bisher nicht bekannt.A combination of ß-lactam antibiotics and polyhexamethylene biguanides is not yet known.
[0010] Zusammenfassend lässt sich somit feststellen, dass der wichtigste Nachteil der ß- Lactam-Antibiotika deren zunehmende Wirkungseinschränkung durch Resistenzbildung der zu bekämpfenden Bakterien ist. Auch in der Veterinärmedizin werden Infektionen von Nutztieren mit multiresistenten Staphylokokken immer häufiger.In summary, it can thus be stated that the most important disadvantage of the .beta.-lactam antibiotics whose increasing effect restriction by resistance of the is to fight bacteria. Also in veterinary medicine, infections of farm animals with multidrug-resistant staphylococci are becoming more common.
[0011] Durch die zunehmende Resistenzproblematik besteht ein großer Bedarf an neuen antibiotischen Wirkstoffen, der durch die bekannten Wirkstoffe nicht gedeckt wird.Due to the increasing problem of resistance there is a great need for new antibiotic agents that is not covered by the known agents.
Aufgabe der ErfindungObject of the invention
[0012] Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue Wirkstoffe bereitzustellen. Der Erfindung liegt insbesondere die Aufgabe zugrunde, den durch die zunehmende Resistenzentwicklung von Bakterien gegenüber herkömmlichen Antibiotika bestehenden Bedarf in der Human- und Veterinärmedizin durch struktur- und wirkungsveränderte Antibiotika zu decken, die sich von klinisch bewährten Wirkstoffen ableiten.The object of the present invention is therefore to provide new active ingredients. The invention is in particular the object of the existing by the increasing development of bacteria resistance to conventional antibiotics needs in human and veterinary medicine by structural and effect modified antibiotics to be derived from clinically proven drugs.
Lösung der AufgabeSolution of the task
[0013] Die Aufgabe wurde gemäß den Merkmalen der Patentansprüche gelöst. Erfindungsgemäß wurden neue, bisher unbekannte Wirkstoffe aus der Gruppe der ß-Lactam- Antibiotika, bereitgestellt. Außerdem wurden durch Salzbildung von ß-Lactam-Antibiotika mit Kationen, die selbst einen Wirkstoffcharakter haben, sowie durch Weiterentwicklung dieser Wirkstoffe durch anschließende chemische Umsetzungen, neue Verbindungen hergestellt.The object has been solved according to the features of the claims. According to the invention, new, hitherto unknown active compounds from the group of β-lactam antibiotics were provided. In addition, by salt formation of ß-lactam antibiotics with cations, which themselves have a drug character, as well as by further development of these drugs by subsequent chemical reactions, new compounds produced.
[0014] In den Formelbildern 4, 7 und 8 sind die neuen erfindungsgemäßen Wirkstoffe abgebildet.In the formula pictures 4, 7 and 8, the new active compounds according to the invention are shown.
[0015] Gegenstand der Erfindung sind auch Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen ß-Lactam-Antibiotika, einschließlich von Zwischenprodukten. Zur Lösung der Aufgabe wurden 2 unterschiedliche Wege eingeschlagen, die erfϊndungsgemäß vorteilhaft kombiniert werden können.The invention also relates to processes for the preparation of the β-lactam antibiotics according to the invention, including intermediates. To solve the problem, two different approaches have been taken, which can be advantageously combined erfϊndungsgemäß.
Wee l : [0016] Überraschend erwiesen sich ß-Lactam-Antibiotika nach Formelbild 3, die aus einem Derivat der 6-Aminopenicillansäure oder der 7-Aminocephalosporansäure als anionischer Komponente X" und Derivaten des Polyhexamethylenbiguanids als kationischer Komponenten bestehen, als hoch wirksam. Der erfindungsgemäße Wirkstoff bewirkt bei allen geprüften multiresistenten Bakterienstämmen eine Hemmung, auch bei den Stämmen bei denen sowohl der kationische Wirkstoff als Hydrochlorid als auch das Anion (d.h. das Antibiotikum ohne kationische Komponente) unwirksam sind.Wee 1: Surprisingly, β-lactam antibiotics according to formula 3, which consist of a derivative of 6-aminopenicillanic acid or 7-aminocephalosporanic acid as anionic component X " and derivatives of polyhexamethylene biguanide as cationic components, have proved to be highly effective Active ingredient according to the invention effects in all inhibited, even in the strains in which both the cationic active ingredient as the hydrochloride and the anion (ie the antibiotic without cationic component) are ineffective.
[0017] In mikrobiologischen Untersuchungen konnte gezeigt werden, dass sogar die sehr schwer zu bekämpfenden und in der Klinik oft Probleme bereitenden MRSA-Keime durch die neuen Wirkstoffe inaktiviert werden. Die erfindungsgemäßen Wirkstoffe nach Formel 3 sind deshalb zur antiinfektiven Wundbehandlung akuter und chronischer Wunden einschließlich der Anwendung zur Spül-Saug-Drainage und zur antiinfektiven Lavage von Körperhöhlen geeignet.Microbiological investigations have shown that even the MRSA germs, which are very difficult to treat and often cause problems in the clinic, are inactivated by the new active ingredients. The active compounds of the invention according to formula 3 are therefore suitable for the anti-infective wound treatment of acute and chronic wounds including the use for irrigation-suction-drainage and anti-infective lavage of body cavities.
[0018] Bei diesen bisher unbekannten Verbindungen nach Formelbild 3 oder 7 werden die hervorragenden microbiciden Eigenschaften der ß-Lactam- Antibiotika mit weiteren, für die Praxis hochinteressanten Wirkungen kombiniert. Die Formeln 4 bis 9, sowie die Reaktionsgleichungen 10 und 11 mit den Formeln befinden sich vor den Ausführungsbeispielen. Durch die Kombination mit dem oberflächenaktiven Kation werden Erreger an besonders schwer zugänglichen Stellen erreicht. In den erfindungsgemäßen Verbindungen nach Formel 7 stehen hydrophile Guanid- und ß-Lactam-Gruppen lipophilen Kohlenwaserstoffketten gegenüber und erklären die tensidischen Eigenschaften der neuen Wirkstoffe. Auf Grund dieser tensidischen Eigenschaften können die erfindungsgemäßen Verbindungen auch in Bio filmen wirken.In these hitherto unknown compounds according to formula image 3 or 7, the outstanding microbicidal properties of the β-lactam antibiotics are combined with other, for the practice highly interesting effects. The formulas 4 to 9, as well as the reaction equations 10 and 11 with the formulas are prior to the embodiments. By combining with the surface-active cation pathogens are reached in particularly difficult to reach places. In the compounds according to the invention of formula 7, hydrophilic guanide and β-lactam groups are opposite lipophilic hydrocarbon chains and explain the surfactant properties of the new active ingredients. Due to these surfactant properties, the compounds of the invention can also act in biofilms.
[0019] Verbindungen dieses Types sind aus bisher nicht beschriebenen Hydrogencarbonaten des Polyhexamethylenbiguanids nach Formelbild 2 erhältlich. Dabei wird ausgenutzt, dass das Hydrogencarbonat weitaus schwerer in Wasser löslich ist als das handelsübliche Hydrochlorid. Dabei wird zunächst Polyhexamethylenbiguanid-hydrochlorid in wässriger Lösung mit Alkalihydrogencarbonat zu Po lyhexamethylenbiguanid- hydrogencarbonat gemäßCompounds of this type are available from previously not described bicarbonates of Polyhexamethylenbiguanids according to formula image 2. It is exploited that the hydrogen carbonate is far more soluble in water than the commercial hydrochloride. In this case, first polyhexamethylene biguanide hydrochloride in aqueous solution with alkali metal hydrogen carbonate to Po lyhexamethylenbiguanid- hydrogencarbonate according to
Formel 2 der Formel 2 umgesetzt und daraus mit einer Säure ein Polyhexamethylenbiguanid-Derivat gemäß der Formel 3 gebildet: Formel 3 Formula 2 of the formula 2 and formed therefrom with an acid a Polyhexamethylenbiguanid derivative according to the formula 3: Formula 3
[0020] Führt man diese Fällung allmählich durch partielle Zugabe von Carbonat oder Hydrogencarbonat aus, fallen die höhermolekularen Fraktionen zuerst aus. Dieses Prinzip führt einerseits zu einem Verfahren zur Trennung von Biguaniden in Molgewichtsbereiche, für das mit dieser Patentschrift ebenfalls Schutz beantragt wird. Die Trennung des Polymerengemisches in Fraktionen verschiedener Molgewichtsbereiche ist für viele Anwendungsbereiche von Vorteil. [0021] Insbesondere ist dieses Prinzip vorteilhaft nutzbar bei der Herstellung von neuen bisher nicht beschriebenen Derivaten der ß-Lactam- Antibiotika. Durch die fraktionierte Ausfällung mit Natriumhydrogencarbonat einerseits und die Substitution der ß-Lactame andererseits kann das entstehende Produkt den Erfordernissen verschiedener Anwendungen angepasst werden, insbesondere kann das Verteilungsverhalten systematisch variiert werden. Durch die Substitution der ß-Laktame ändert sich das Verteilungsverhalten und damit der logP-Wert. Die Einführung eines parachinoiden Substituenten (logP-Werte < oder > 0) in Antibiotika (logP-Werte < 0) entsprechend den Anwendungsbeispielen ist mit einer Vergrößerung des des Verteilungskoeffizienten (logP-Wertes > O)) verbunden.Carrying out this precipitation gradually by partial addition of carbonate or bicarbonate, the higher molecular weight fractions fall out first. On the one hand, this principle leads to a process for the separation of biguanides into molecular weight ranges, for which protection is also sought with this patent. The separation of the polymer mixture into fractions of different molecular weight ranges is advantageous for many applications. In particular, this principle is advantageously used in the preparation of new derivatives of β-lactam antibiotics not previously described. By fractional precipitation with sodium bicarbonate on the one hand and the substitution of ß-lactams on the other hand, the resulting product can be adapted to the requirements of various applications, in particular, the distribution behavior can be varied systematically. The substitution of ß-lactams changes the distribution behavior and thus the logP value. The introduction of a parachinoid substituent (logP values <or> 0) in antibiotics (logP values <0) according to the application examples is associated with an increase in the distribution coefficient (logP value> 0)).
[0022] Eine vorteilhafte Anwendung des schwerlöslichen Hydrogencarbonats nach Formelbild 2 und /oder der daraus erhaltenen Salze nach Formelbild 3 mit antimikrobiell wirksamen Fettsäure-Derivaten und/oder ß-Lactam-Antibiotika als Anion nach Anspruch ergibt sich bei der antimikrobiellen Ausrüstung des Saugkerns von Wundauflagen. Der besondere Vorteil, der sich bei einer Ausrüstung des Saugkerns mit einer Substanz nachAn advantageous application of the sparingly soluble hydrogen carbonate according to formula image 2 and / or the resulting salts of formula 3 with antimicrobial fatty acid derivatives and / or ß-lactam antibiotics as anion according to claim in the antimicrobial finishing of the absorbent core of wound dressings , The particular advantage that arises when the absorbent core is equipped with a substance
Formelbild 2 in einer Konzentration von 0,01 bis 0,03 % besonders vorteilhaft 0,02% ergibt, ist, dass die Keimtötung auf die Saugauflage beschränkt ist. Dadurch wird trotz antimikrobieller Ausrüstung die Einstufung als Medizinprodukt nicht eingeschränkt.Formula 2 in a concentration of 0.01 to 0.03% particularly advantageous results in 0.02%, is that the germ killing is limited to the suction pad. As a result, the classification as a medical device is not restricted despite antimicrobial equipment.
[0023] Es wird eine vollständige Unterdrückung eines Keimwachstums in und unter derIt is a complete suppression of a germ growth in and under the
Wundauflage erreicht, auf Grund der Schwerlöslichkeit der bisher nicht beschriebenenWound dressing achieved, due to the poor solubility of the previously not described
Substanz nach Formelbild 2 unterbleibt aber eine Diffusion in die Wunde. Es wurde aber nur ein Hemmhof von 0,93 + 0,73mm (n = 7) beobachtet, d. h. die Diffusion in Bereiche um die Wundauflage war minimal. Eine stärkere Diffusion in die Wunde beginnt erst bei Konzentrationen > 0,04 %.Substance according to formula 2, however, prevents diffusion into the wound. However, only one inhibition zone of 0.93 + 0.73 mm (n = 7) was observed, ie the diffusion into regions around the Wound dressing was minimal. Greater diffusion into the wound only begins at concentrations> 0.04%.
[0024] Damit wird ein Problem gelöst, dass bei unbeschichteten saugfähigen Wundauflagen und bei Wundkompressen mit einem Saugkern auftritt. In den Wundauflagen und insbesondere im Saugkern kommt es zu einer starken Keimvermehrung, die einerseits den Heilungsprozess gefährden und andererseits zu einer Keimverschleppung führen kann.This solves a problem that occurs with uncoated absorbent wound dressings and wound compressions with a absorbent core. In the wound dressings and especially in the absorbent core, there is a strong proliferation of germs, which on the one hand endanger the healing process and on the other hand can lead to germ transmission.
[0025] Durch Umsetzung des Polyhexamethylenbiguanid-hydrogencarbonats mit Derivaten der 6-Aminopenicillansäure oder der 7-Aminocephalosporansäure werden erfindungsgemäß viele bisher unbekannte Salze des Hexamethylenbiguanids mit antimikrobiell hoch wirksamen Anionen präparativ in einfacher Weise zugänglich. Dabei werden vielfältig einsetzbare antimikrobielle Verbindungen erhalten. Weg 2: [0026] Andererseits werden neue ß-Lactam- Antibiotika gemäß der allgemeinen 4 oder 8 (Anspruch 1) erhalten, wenn Substrate von Polyphenoloxidasen, insbesondere vorteilhaft Substrate gemäß Formel 6 oder Formel 9, unter dem Einfluss freier Radikale mit ß-Lactam- Antibiotika, insbesondere vorteilhaft mit Derivaten gemäß Formel 5 verbunden werden. Die Hydroxygruppen der Substrate der Polyphenoloxidasen können gemäß Formel 6 und Formel 9 para- oder o/t/zo-ständig angeordnet sein. [0027] Insbesondere bevorzugt ist für die Synthese der neuen Wirkstoffe die Amination von 2,5-Dihydroxybenzoesäure-Derivaten mit Laccase EC 1-10.3.2. (Klassifizierung gemäß Internationaler Enzym-Nomenklatur; Enzym Nomenclature, academic Press, Ine, 1192, S.24- 154), die zu breiten Derivatisationsmöglichkeiten führt. [0028] Die Amination mit Catecholen ist erfindungsgemäß begrenzt auf Wirkstoffe gemäß Formel 8.By reacting the polyhexamethylene biguanide hydrogencarbonate with derivatives of 6-aminopenicillanic acid or 7-aminocephalosporanic acid, many hitherto unknown salts of the hexamethylene biguanide with antimicrobially highly effective anions can be prepared in a simple manner in a preparative manner. In this case, variously usable antimicrobial compounds are obtained. Route 2: On the other hand, new β-lactam antibiotics according to general 4 or 8 (claim 1) are obtained when substrates of polyphenol oxidases, particularly advantageously substrates according to formula 6 or formula 9, under the influence of free radicals with β-lactam - Antibiotics, particularly advantageous to be connected with derivatives according to formula 5. The hydroxy groups of the substrates of the polyphenol oxidases can be arranged in accordance with formula 6 and formula 9 para or o / t / zo-constantly. Particularly preferred for the synthesis of the new drugs, the amination of 2,5-dihydroxybenzoic acid derivatives with laccase EC 1-10.3.2. (Classification according to International Enzyme Nomenclature, Enzyme Nomenclature, Academic Press, Ine, 1192, pp. 24-154), which leads to broad possibilities of derivatization. The amination with catechols according to the invention is limited to active compounds according to formula 8.
[0029] Die erfindungsgemäßen Wirkstoffe sind dadurch gekennzeichnet, dass die neuen Substituenten die Anwendungseigenschaften verändern, ohne funktionelle Gruppen zu beeinflussen. Die erfindungsgemäßen Wirkstoffe weisen deshalb Vorteile auf wie bislang bekannte ß-Lactam- Antibiotika, nämlich hohe bakterizide Wirkung bei geringer Toxizität.The active compounds according to the invention are characterized in that the new substituents change the application properties, without influencing functional groups. The active compounds according to the invention therefore have advantages as previously known β-lactam antibiotics, namely high bactericidal activity with low toxicity.
[0030] Die für die erfindungsgemäße Synthese der neuen Wirkstoffe benötigten Radikale können auf biologischem, chemischem und/oder physikalischem Wege erzeugt werden. Besonders bevorzugt werden Radikale, die durch Verwendung von Überständen ligninolytischer Pilze und/oder aus den Überständen isolierter radikalbildender Enzyme erzeugt werden. Vorzugsweise werden radikalbildende Enzyme der Klassifikation E C 1.10.3.2. und Peroxidasen der Klassifikation EC 1.11.17, Monophenol monooxygenase EC 114.99.1 und/oder Ascorbat-Oxidase EC 1.10.3.3verwendet. Beispielhaft kann Laccase von Trametes sp. für die Synthese der neuen Wirkstoffe eingesetzt werden. [0031] Ausgehend von den neuen Wirkstoffen nach Formel 4 und 8 lassen sich weitere neue Antibiotika durch eine aus dem Stand der Technik bekannte Veresterung der Carboxylgruppe erhalten. Dabei können Enzyme genutzt werden (z.B. Lipasen), um eine Umsetzung unter schonenden Bedingungen (niedrige Temperaturen, Normaldruck) zu ermöglichen.The radicals required for the novel synthesis of the new active substances can be produced by biological, chemical and / or physical means. Particular preference is given to free radicals which are produced by using supernatants of ligninolytic fungi and / or from the supernatants of isolated radical-forming enzymes be generated. Preferably, radical-forming enzymes of the classification EC 1.10.3.2. and peroxidases of classification EC 1.11.17, monophenol monooxygenase EC 114.99.1 and / or ascorbate oxidase EC 1.10.3.3. By way of example, Laccase from Trametes sp. be used for the synthesis of new drugs. Starting from the new active compounds according to formulas 4 and 8, further new antibiotics can be obtained by a known from the prior art esterification of the carboxyl group. In this case, enzymes can be used (eg lipases) to allow a reaction under mild conditions (low temperatures, atmospheric pressure).
[0032] Besonders überraschend ist die protektive Wirkung der neuen Wirkstoffe nach Formelbild 4 und 8 im S. aureus Sepsis Maus-Modell. Im Überlebensversuch nach i.p. Infektion von Mäusen versterben ohne effektive Behandlung 100% der Tiere. Die zweimalige Applikation der erfindungsgemäßen Wirkstoffe nach 30 min und 6 h führte dagegen zu einer vollständigen Gesundung der Tiere ohne bleibende erkennbare Schädigungen. Ein gleicher Therapieerfolg wird erreicht, wenn das erfindungsgemäße Antibiotikum nach 6 und 20 h verabreicht wird. Durch die erfindungsgemäßen neuen Wirkstoffe werden die Therapiemöglichkeiten bei der Behandlung bakterieller Infektionen erweitert, da auch eine Wirksamkeit gegen multiresistent gewordene Keime nachgewiesen werden konnte. [0033] Die Wirkstoffe der allgemeinen Formel 3, 4, und 8 können sowohl allein als auch in Kombination mit anderen Wirkstoffen eingesetzt werden.Particularly surprising is the protective effect of the new drugs according to formula image 4 and 8 in the S. aureus sepsis mouse model. In survival attempt after i.p. Infection of mice die without effective treatment 100% of the animals. The two-time application of the active compounds according to the invention after 30 min and 6 h, however, led to a complete recovery of the animals without permanent recognizable damage. An equal therapeutic success is achieved when the antibiotic according to the invention is administered after 6 and 20 h. By means of the new active compounds according to the invention, the therapeutic options in the treatment of bacterial infections are expanded, since it was also possible to demonstrate efficacy against mutant-resistant germs. The active compounds of the general formula 3, 4, and 8 can be used both alone and in combination with other active ingredients.
[0034] Besondere Vorteile werden erreicht, wenn man die neuen Wirkstoffe der allgemeinen Formel 7 verwendet, da in diesem Fall gegen multiresistente Keime sehr wirksame Verbindungen erhalten werden.Particular advantages are achieved when using the new active compounds of the general formula 7, since very effective compounds are obtained in this case against multidrug-resistant bacteria.
[0035] Darüber hinaus wird durch die Erfindung ein Verfahren zur Reinigung von Polyhexamethylenbiguaniden zur Verfügung gestellt, das dadurch gekennzeichnet ist, dass Polyhexamethylenbiguanid-Hydrochlorid (Formelbild 1) in wässriger Lösung mit Alkalihydrogencarbonat ausgefällt wird, die Fällung von der Mutterlauge getrennt wird und mit Salzsäure in gereinigtes Produkt nach Formelbild 1 zurück überführt wird.In addition, a process for the purification of polyhexamethylene biguanides is provided by the invention, which is characterized in that polyhexamethylene biguanide hydrochloride (formula image 1) is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitate is separated from the mother liquor and hydrochloric acid is returned to purified product according to formula image 1 back.
[0036] Zur Herstellung weiterer neuer Salze des Polyhexamethylenbiguanids sind praktisch alle anorganischen und organischen Säuren geeignet, deren Säurestärke die des Hydrogencarbonats übertrifft. Damit werden weitere Anwendungen erschlossen. [0037] Die Anwendung der Wirkstoffe nach Formelbild 3 mit antimikrobiell wirksamen Fettsäure-Derivaten und/oder ß-Lactam- Antibiotika als Anion führt zu besonderen Vorteilen bei der lokalen Anwendung. Insbesondere vorteilhaft ist eine Anwendung am Euter zur Mastitisprophylaxe bei Rindern. Durch Verwendung in Zubereitungen für Anwendungen am Euter kann eine Mastitis therapiert und/oder die Übertragung von Staphylokokkeninfektionen verhindert und damit eine Kontamination der Milch vermieden werden.For the preparation of other new salts of Polyhexamethylenbiguanids virtually all inorganic and organic acids are suitable whose acidity exceeds that of the bicarbonate. This will open up further applications. The application of the active ingredients according to formula 3 with antimicrobial fatty acid derivatives and / or ß-lactam antibiotics as anion leads to special advantages in local application. Particularly advantageous is an application to the udder for mastitis prophylaxis in cattle. By use in preparations for applications on the udder mastitis can be treated and / or prevented the transmission of staphylococcal infections and thus avoid contamination of the milk.
[0038] Weitere für lokale Anwendungen geeignete Zubereitungen werden erhalten, wenn die neuen ß-Lactam- Antibiotika mit Lipiden vermischt und durch Hochdruckspalthomogenisation in Mikro- und Nanopartikel überführt werden.Further preparations suitable for local applications are obtained when the novel β-lactam antibiotics are mixed with lipids and converted into microparticles and nanoparticles by high-pressure gap homogenization.
[0039] Zusammenfassend soll die Erfindung noch einmal kurz dargestellt werden:In summary, the invention will be briefly shown again:
[0040] Es wurden ß-Lactam- Antibiotika nach Formelbild 3, erhältlich durch Salzbildung aus Derivaten der 6-Aminopenicillansäure oder der 7-Aminocephalosporansäure als anionischerThere were ß-lactam antibiotics according to formula 3, obtainable by salt formation from derivatives of 6-aminopenicillanic acid or 7-aminocephalosporanic acid as anionic
Komponente X und Derivaten des Polyhexamethylenbiguanids als Kation, erstmals bereitgestellt. Außerdem wurden ß-Lactam-Antibiotika nach Formelbild 4, erhältlich aus handelsüblichen Wirkstoffen nach Formelbild 5 durch Umsetzung mit Wirkstoffen nachComponent X and derivatives of polyhexamethylene biguanide as a cation, provided for the first time. In addition, β-lactam antibiotics according to formula image 4, obtainable from commercially available active compounds according to formula 5 by reaction with active ingredients by
Formelbild 6, hergestellt. Weiterhin sind ß-Lactam-Antibiotika nach Formelbild 8, erhältlich aus handelsüblichen Wirkstoffen nach Formelbild 5 durch Umsetzung mit Wirkstoffen nachFormula picture 6, made. Furthermore, β-lactam antibiotics according to formula image 8, obtainable from commercially available active compounds according to formula 5 by reaction with active ingredients
Formelbild 9, Gegenstand der vorliegenden Erfindung.Formula 9, subject of the present invention.
[0041] Es wird ein Verfahren zur Trennung von Polyhexamethylenbiguanid in Molgewichtsbereiche beschrieben, dadurch gekennzeichnet, dass Polyhexamethylenbiguanid- hydrochlorid in wässriger Lösung mit Alkalihydrogencarbonat ausgefällt wird, wobei die Fällung partiell und schrittweise erfolgt und dabei eine Fraktionierung in engere Molgewichtsbereiche des Polymeren erfolgt. Die Wirkstoffe nach Formelbild 3 sind dadurch gekennzeichnet, dass Polyhexamethylenbiguanid-Hydrochlorid in wässriger Lösung mit Alkalihydrogencarbonat zu Polyhexamethylenbiguanid-Hydrogencarbonat fraktioniert gefällt wird und die Fällungsprodukte mit Antibiotika, die in ihrer Säurestärke das Hydrogencarbonat übertreffen, umgesetzt werden. Es ist auch möglich, dass die anionische Komponente eine antimikrobiell wirksame Fettsäure ist. Das Löslichkeits- und Verteilungsverhalten der Wirkstoffe kann durch fraktionierte Fällung der kationischen Komponente variiert werden. Gegenstand der Erfindung ist auch ein Verfahren zur Reinigung von PoIy- hexamethylenbiguanid, dadurch gekennzeichnet, dass Polyhexamethylenbiguanid- Hydrochlorid (Formelbild 1) in wässriger Lösung mit Alkalihydrogencarbonat ausgefällt, die Fällung von der Mutterlauge getrennt und mit Salzsäure in gereinigtes Produkt nach Formelbild 1 zurück überführt wird. Damit werden neue Salze des Polyhexamethylenbiguanids durch Umsetzung des Polyhexamethylenbiguanid- hydrogencarbonats mit anorganischen oder organischen Säuren, erhalten.A process for the separation of polyhexamethylene biguanide into molecular weight ranges is described, characterized in that polyhexamethylene biguanide hydrochloride is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitation taking place partially and stepwise, with fractionation into narrower molecular weight ranges of the polymer. The active compounds according to formula image 3 are characterized in that Polyhexamethylenbiguanid hydrochloride is fractionated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate to Polyhexamethylenbiguanid hydrogen carbonate and the precipitated products with antibiotics which exceed the bicarbonate in their acidity, be implemented. It is also possible that the anionic component is an antimicrobial fatty acid. The solubility and distribution behavior of the active ingredients can be varied by fractional precipitation of the cationic component. The invention also provides a process for the purification of polyols. Hexamethylenbiguanid, characterized in that Polyhexamethylenbiguanid hydrochloride (formula image 1) is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, the precipitate separated from the mother liquor and transferred with hydrochloric acid in purified product of formula image 1 back. Thus, new salts of polyhexamethylene biguanide are obtained by reacting the polyhexamethylene biguanide hydrogencarbonate with inorganic or organic acids.
[0042] Eine erfindungsgemäße Verwendung ist eine antimikrobiellen Ausrüstung von saugfähigen Wundauflagen, dadurch gekennzeichnet, dass die Ausrüstung mit einem schwerlöslichen Salz des Hexamethylenbiguanids durch Tauchen und/oder Aufsprühen erfolgt, wobei eine Konzentration eingehalten wird, bei der keine nennenswerte Diffusion des Biguanids in die Wunde erfolgt.A use according to the invention is an antimicrobial finishing of absorbent dressings, characterized in that the equipment with a sparingly soluble salt of Hexamethylenbiguanids by immersion and / or spraying, wherein a concentration is maintained, at which no significant diffusion of biguanide into the wound he follows.
[0043] Die Erfindung soll anhand von Strukturformeln und Beispielen näher erläutert werden, ohne die Erfindung auf diese Beispiele zu reduzieren.The invention will be explained in more detail with reference to structural formulas and examples, without reducing the invention to these examples.
Formel 4:Formula 4:
X = S5 CH2 X = S 5 CH 2
COOC2H5, CH2OCOC(CH3)3 COOC 2 H 5 , CH 2 OCOC (CH 3 ) 3
Formel 6: Formula 6:
R4 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3, COOH, COCH3, CHO, CH3, 3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , 3, C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 ,
Formel 7:Formula 7:
, , , ,,,
Formel 8:Formula 8:
, , , ,,,
R5 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3, COOCH2CH3, COOH, COCH3, CHO, CH3, CH2(CH2)0.20CH3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, O(CH2)0_20CH3 R 5 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOCH 2 CH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , CH 2 (CH 2 ) 0 . 20 CH 3, C (CH 3) 3, C 6 H 5, Cl, Br, OCH 3, O (CH 2) 20 CH 3 0 _
X = S5 CH2 Formel 9:X = S 5 CH 2 Formula 9:
R4 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3, COOH, COCH3, CHO, CH3, 3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , 3, C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 ,
R5 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3,R 5 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 ,
COOCH2CH3, COOH, COCH3, CHO, CH3, CH2(CH2V20CH3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, O(CH2)0_20CH3 COOCH 2 CH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , CH 2 (CH 2 V 20 CH 3 , C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 , O (CH 2 ) 0 _ 20 CH 3
Formel 10:Formula 10:
3a - 3d 2a - 2d 1a - 1p3a-3d 2a-2d 1a-1p
R1 R2 R3 R4 XR1 R2 R3 R4 X
1a OH H CH3 S1a OH H CH 3 S
1e H H CH3 T '8" 9" 10" S1e HH CH 3 T ' 8 " 9 " 10 " S
1i H H Cl CO NH CH2CH2OH S1i HH Cl CO NH CH 2 CH 2 OH S
1m H H Cl CH2 1m HH Cl CH 2
1b OH H CH3 S1b OH H CH 3 S
1f H H CH3 7" 8" S1f HH CH 3 7 " 8 " S
1j H H Cl CO NH2 S1j HH Cl CO NH 2 S
1n H H Cl CH2 1n HH Cl CH 2
1c OH H CH3 S ig H H CH3 1" 8" S1c OH H CH 3 Sig HH CH 3 1 " 8 " S
1k H H Cl COO CH3 S1k HH Cl COO CH 3 S
1o H H Cl CH2 1o HH Cl CH 2
1d OH H CH3 S1d OH H CH 3 S
1h H H CH3 7" 8" 9" S1h HH CH 3 7 " 8 " 9 " S
11 H H Cl COO CH2 CH3 S11 HH Cl COO CH 2 CH 3 S
1p H H Cl CH2 Formel 11 :1p HH Cl CH 2 Formula 11:
Rl R2 R3 R4 R5 X iq OH H CH3 H CH3 SRl R2 R3 R4 R5 X iq OH H CH 3 H CH 3 S
Ir OH H CH3 CH3 H SIr OH H CH 3 CH 3 HS
Is H H Cl H CH3 CH2 Is HH Cl H CH 3 CH 2
BeispieleExamples
Allgemeines:General:
[0044] Der Strukturanalytik und der Testungen auf biologische Aktivität der Beispiele 1- Beispiel 36 liegen die Bezeichnungen der Strukturelemente sowie der Substanzen entsprechend der Formel 10 zugrunde.The structural analysis and the tests for biological activity of Examples 1- Example 36 are based on the names of the structural elements and the substances corresponding to the formula 10.
Beispiel 1example 1
7- {2- [2-(2-Hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa- 1 ,4-dienylamino] -2-(4- hydroxyphenylj-acetylaminoj-desacetoxycephalosporansäure Ia7- {2- [2- (2-Hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2- (4-hydroxyphenylj-acetylamino) -deacetoxycephalosporanic acid Ia
[0045] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONHCH2CH2OH) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH).
Strukturanalytik :Structural analysis:
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) und 75 MHz (13C and DEPT- 135) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.19 (d, J = 18.3 Hz, IH, H-2), 3.37 (m, J = 5.7 Hz, 2H, H-9"), 3.43 (d, J = 18.3 Hz, IH, H-2), 3.57 (t, J = 5.5 Hz, 2H, H-IO"), 4.89 (d, J = 4.7 Hz, IH, H-6), 5.65 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.9 Hz, IH, H-7), 5.87 (d, J = 6.5 Hz, IH, H- 13), 6.56 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.67 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-3', H-5 '), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-2', H-6'), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, IH, H-I l), 9.77 (t, IH, H-8"), 13.12 (d, IH, J = 6.2 Hz, H-14). 13C NMR δ 19.91 (C-IO), 30.34 (C-2), 42.10 (C-9"), 57.97 (C-6), 59.82 (C-7), 61.52 (C-IO"), 62.95 (C-13), 101.39 (C-I "), 116.65 (C-3', C-5 '), 123,15 (C-4), 129.83 (C-I '), 129.96 (C-2', C-6'), 132,41 (C-3), 133.33 (C-4"), 141.34 (C- 5"), 153.46 (C-2"), 158.46 (C-4'), 164.01 (C-8), 165.05 (C-9), 170.12 (C7"), 171.96 (C-12), 184.60 (C-6"), 185.52 (C-3"). LC/MS mlz 557.5 ([M+H]+, 597.5 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) and 75 MHz ( 13 C and DEPT-135) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.19 (d, J = 18.3 Hz, IH, H-2), 3.37 (m, J = 5.7 Hz, 2H, H-9 " ), 3.43 ( d, J = 18.3Hz, IH, H-2), 3.57 (t, J = 5.5Hz, 2H, H-IO " ), 4.89 (d, J = 4.7Hz, IH, H-6), 5.65 (dd , J = 4.7 Hz, J = 8.9 Hz, IH, H-7), 5.87 (d, J = 6.5 Hz, IH, H-13), 6.56 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 ") , 6.67 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5 "), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-3 ', H-5'), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-2 ', H-6'), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, IH, HI l), 9.77 ( t, IH, H-8 "), 13.12 (d, IH, J = 6.2 Hz, H-14) 13 C NMR δ 19.91 (C-IO), 30.34 (C-2), 42.10 (C-9") ), 57.97 (C-6), 59.82 (C-7), 61.52 (C-IO "), 62.95 (C-13), 101.39 (CI"), 116.65 (C-3 ', C-5'), 123.15 (C-4), 129.83 (CI '), 129.96 (C-2', C-6 '), 132.41 (C-3), 133.33 (C-4 "), 141.34 (C-5 "), 153.46 (C-2"), 158.46 (C-4 '), 164.01 (C-8), 165.05 (C-9), 170.12 (C7 "), 171.96 (C-12), 184.60 (C-8). 6 "), 185.52 (C-3"). LC / MS mlz 557.5 ([M + H] + , 597.5 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Nachweis der Stabilität [0046] Der neue Wirkstoff erwies sich über einen Zeitraum > 60 Tage als lagerstabil. Figur 1 zeigt die Lagerstabilität von 7-{2-[2-(2-Hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa-l,4- dienylamino]-2-(4-hydroxyphenyl)-acetylamino} -desacetoxycephalosporansäure 1 a.Evidence of Stability The new drug proved to be storage stable for> 60 days. FIG. 1 shows the storage stability of 7- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino} -decetoxycephalosporanic acid 1 a.
Beispiel 2Example 2
7-[2-(2-Carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)- acetylamino] -desacetoxycephalosporansäure Ib7- [2- (2-Carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino] -decetoxycephalosporanic acid Ib
[0047] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONH2) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONH 2 ).
Strukturanalytik :Structural analysis:
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-10), 3.15 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.44 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 4.89 (d, J = 4.7 Hz,lH, H-6), 5.65 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 5.89 (d, J = 6.9 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-4"), 6.69 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-5"), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-3', H-5'), 7.30 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H-2', H-6'), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, IH, H- 11), 9.07 (s, 2H, H-8"), 13.13 (d, IH, J = 6.8 Hz, H-14). LC/MS m/z 515.1 ([M+H]+, 535.1 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-10), 3.15 (d, J = 18.4Hz, IH, H-2), 3.44 (d, J = 18.4Hz, IH, H-2), 4.89 (d, J = 4.7 Hz, 1H, H-6), 5.65 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 5.89 (d, J = 6.9 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-4 "), 6.69 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-5"), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-3 ', H -7 '), 7.30 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H-2', H-6 '), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, IH, H-11), 9.07 (s, 2H, H -13 "), 13.13 (d, IH, J = 6.8 Hz, H-14) LC / MS m / z 515.1 ([M + H] + , 535.1 [M + Na] + API-ES pos. Mode) ,
Beispiel 3Example 3
7-[2-(4-Hydroxyphenyl)-2-(2-methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)- acetylamino] -desacetoxycephalosporansäure 1 c [0048] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH3) erhalten.7- [2- (4-Hydroxyphenyl) -2- (2-methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) acetylamino] desacetoxycephalosporanic acid 1c The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 3 ).
Strukturanalytik :Structural analysis:
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.99 (s, 3H, H-IO), 3.12 (d, J = 18.1 Hz, IH, H-2), 3.42 (d, J = 18.1 Hz, IH, H-2), 3.64 (br s, 3H, H-8"), 4.86 (d, J = 4.6 Hz,lH, H-6), 5.63 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H- 7), 5.89 (d, J = 6.9 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.0 Hz, IH, H-4"), 6.67 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-3', H-5 '), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-2', H-6'), 7.52 (d, J = 8.7 Hz, IH, H-I l), 13.17 (d, IH, J = 6.8 Hz, H-14). LC/MS m/z 528.3 ([M+H]+, 550.1 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 1.99 (s, 3H, H-IO), 3.12 (d, J = 18.1 Hz, IH, H-2), 3.42 (d, J = 18.1 Hz, IH, H-2), 3.64 (br , 3H, H-8 "), 4.86 (d, J = 4.6 Hz, lH, H-6), 5.63 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 5.89 (d, J = 6.9 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.0 Hz, IH, H-4 "), 6.67 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5 " ), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-3 ' , H-5 ' ), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-2 ' , H-6 ' ), 7.52 (d, J = 8.7 Hz, IH , HI l), 13.17 (d, IH, J = 6.8 Hz, H-14) LC / MS m / z 528.3 ([M + H] + , 550.1 [M + Na] + API-ES pos. Mode) ,
Beispiel 4Example 4
7-[2-(2-Ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)- acetylamino] -desacetoxycephalosporansäure 1 d7- [2- (2-Ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino] -decetoxycephalosporanic acid 1 d
[0049] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH2CH3) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 2 CH 3 ).
Strukturanalytik :Structural analysis:
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.14 (br, 3H, H-9"), 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.14 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.43 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 4.08 (br, 2H, H-8"), 4.87 (d, J = 4.7 Hz,lH, H-6), 5.66 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 5.89 (d, J = 6.9 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.68 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-3', H-5 '), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-2', H-6'), 7.55 (d, J = 8.7 Hz, IH, H-I l), 13.17 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC/MS m/z 543.9 ([M+H]+, 564.0 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1H NMR δ 1.14 (br, 3H, H-9 "), 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.14 (d, J = 18.4Hz, IH, H-2), 3.43 (d, J = 18.4Hz , IH, H-2), 4.08 (br, 2H, H-8 "), 4.87 (d, J = 4.7 Hz, lH, H-6), 5.66 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 5.89 (d, J = 6.9 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.68 (d, J = 10.2 Hz, IH , H-5 "), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-3 ', H-5'), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-2 ', H-6') , 7.55 (d, J = 8.7 Hz, IH, HI l), 13.17 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC / MS m / z 543.9 ([M + H] + , 564.0 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 5Example 5
Antimikrobielle Wirkung der neuen Verbindungen nach Formel 4 in vitro Methoden :Antimicrobial effect of the novel compounds according to formula 4 in vitro Methods:
Testsystem I (antimikrobielle Wirkung) Vorkultur:Test system I (antimicrobial effect) preculture:
[0050] Die Testkeime Escherichia coli SBUG 1135 und Bacillus megaterium SBUG 1152 werden über Nacht (17 Stunden bei 37°C) in 5 ml Nährbouillion II angezogen. Die Inkubation erfolgt in einem Schüttelinkubator (INFORS AG CH 4103, Bottmingen, Schweiz) bei einer Schüttelfrequenz von 180 rpm. [0051] Nach 17 h Inkubationszeit hat Escherichia coli eine Zelldichte von ca. 2,4xlO10 Zellen/ml und Bacillus megaterium von ca. 2,IxIO8 Zellen/ml erreicht.The test bacteria Escherichia coli SBUG 1135 and Bacillus megaterium SBUG 1152 are grown overnight (17 hours at 37 ° C.) in 5 ml of nutrient broth II. The incubation takes place in a shaking incubator (INFORS AG CH 4103, Bottmingen, Switzerland) at a shaking frequency of 180 rpm. After 17 h of incubation time Escherichia coli has a cell density of approx. 2.4 × 10 10 cells / ml and Bacillus megaterium of approx 2, IxIO 8 cells / ml.
Beimpfung von Nähragar:Inoculation of nutrient agar:
[0052] Die Einsaat der Bakterien in den Agar wird so gewählt, dass sich nach der Bebrütung dicht stehende, jedoch nicht konfluierende Einzelkolonien entwickeln.The seeding of the bacteria in the agar is chosen so that develop after the incubation dense, but not confluent single colonies.
[0053] Folgende Mengen werden eingesetzt:The following quantities are used:
[0054] Bacillus megaterium: 0,1 ml der unverdünnten Übernachtkultur (ÜN) in 10 mlBacillus megaterium: 0.1 ml of the undiluted overnight culture (overnight) in 10 ml
Nähragar entspricht einer Zellzahl von 106.Nutrient agar corresponds to a cell number of 10 6 .
[0055] Escherichia coli: die ÜN wird 1 :100 mit physiologischer Kochsalzlösung verdünnt, davon werden 0,1 ml in 10 ml Nähragar überführt. Das entspricht einer Zellzahl von 106.Escherichia coli: the TS is diluted 1: 100 with saline, of which 0.1 ml is transferred to 10 ml of nutrient agar. That corresponds to a cell number of 10 6 .
[0056] Der beimpfte Nähragar wird in sterile Petrischalen gegeben und zum Trocknen einigeThe inoculated nutrient agar is placed in sterile petri dishes and dried to some
Minuten stehen gelassen.Minutes left.
Test auf antimikrobielle Wirkung: [0057] Die Prüfsubstanzen werden in abgestuften Mengen (10 μg, 50 μg, 100 μg) aufTest for antimicrobial activity: The test substances are added in graduated quantities (10 μg, 50 μg, 100 μg)
Wirkstoffträger (sensi-dics) aufgebracht. Die Prüfsubstanzen werden dafür in Methanol oderDrug carrier (sensi-dics) applied. The test substances are used in methanol or
A. dest., je nach ihrer Löslichkeit, gelöst. Jede beimpfte Platte wird mit 3 Testblättchen bestückt.At least, depending on their solubility, dissolved. Each inoculated plate is equipped with 3 test leaflets.
[0058] Nach einer 20-stündigen Bebrütung bei 37°C können die Hemmhöfe um die einzelnen Testblättchen ausgemessen werden. Der Hemmhofdurchmesser wird in mm angegeben.After a 20-hour incubation at 37 ° C, the Hemmhöfe can be measured to the individual test leaflets. The Hemmhofdurchmesser is given in mm.
Testsystem II (Wirkung gegen multiresistente Keime)Test system II (action against multi-resistant germs)
[0059] Die Bakterien werden dazu auf Müller-Hinton- Agar II-Platten kultiviert.The bacteria are cultivated on Müller-Hinton Agar II plates.
[0060] Mit 1-1,5 ml physiologischer Kochsalzlösung wird eine BakteriensuspensionWith 1-1.5 ml of physiological saline is a bacterial suspension
McFarland 0,5 (das entspricht einer Bakteriendichte von 15OxIO6 Keimen) hergestellt. Mit einem sterilen Glasstab wird dann ein kleiner Tropfen der Bakteriensuspension auf die Müller-Hinton-Agarplatte gegeben und in drei Ebenen (senkrecht, waagerecht und quer) ausgestrichen. Danach werden die sensi-disc mit den neuen halbsynthetischen Prüfsubstanzen aufgelegt. Die bestückten Platten werden für 18-20 Stunden bei 37°C bebrütet. Nach der Inkubation werden die Hemmhofdurchmesser als Maß für die antimikrobielle Aktivität der neuen halbsynthetischen Prüfsubstanzen abgelesen.McFarland 0.5 (which corresponds to a bacterial density of 15OxIO 6 germs) produced. With A small drop of the bacterial suspension is then placed on the Müller-Hinton agar plate on a sterile glass rod and streaked in three planes (vertical, horizontal and transverse). Thereafter, the sensi-disc are launched with the new semisynthetic test substances. The stocked plates are incubated for 18-20 hours at 37 ° C. After incubation, the inhibition zone diameters are read as a measure of the antimicrobial activity of the new semisynthetic test substances.
Ergebnisse: Die neuen Wirkstoffe wirken stark antimikrobiell (Tabelle 1).Results: The new active ingredients have a strong antimicrobial effect (Table 1).
Beispiel 6Example 6
Anpassung der kationischen Komponente der Wirkstoffe nach Formel 2 an biologische Erfordernisse, z.B. antimikrobielle Wirkung durch fraktionierte FällungAdaptation of the cationic component of the active compounds of formula 2 to biological requirements, e.g. antimicrobial effect by fractional precipitation
[0061] Durch fraktionierte Fällung von kommerziell erhältlichem Polyhexanid (Fa. Dr. Trippen GmbH, Freiburg) mit Natriumhydrogencarbonat wurde eine Aufspaltung der Polymermischung in einzelne Fraktionen erreicht, die sich in ihrer Löslichkeit und in ihrem Verteilungsverhalten Lipid- Wasser deutlich von einander unterscheiden.By fractional precipitation of commercially available polyhexanide (Dr. Trippen GmbH, Freiburg) with sodium bicarbonate, a splitting of the polymer mixture was achieved in individual fractions, which differ significantly in their solubility and in their distribution behavior lipid water from each other.
Methode entsprechend der ErfindungMethod according to the invention
[0062] Antimikrobielle Wirksamkeit von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 2 bei der das Anion Amoxicillin darstellt.Antimicrobial activity of active compounds of the general formula 2 in which the anion is amoxicillin.
Methoden vgl. Beispiel 5Methods cf. Example 5
Ergebnisse: Der neue Wirkstoff übertrifft die Wirksamkeit des Handelsproduktes Lavasept® (Desomed AG) beträchtlich (Tabelle 2). Results: The new active substance considerably exceeds the efficacy of the commercial product Lavasept® (Desomed AG) (Table 2).
Hemmhofdurchmesser in mm 2 r = resistent (kein nachweisbarer Hemmhof)Hemmhofdurchmesser in mm 2 r = resistant (no detectable Hemmhof)
Tab. 2Tab. 2
Antimikrobielle Wirkung von Verbindungen nach Formel 2 mit X" = Amoxicillinanion gegen multiresitente Bakterien im Vergleich zu Lavasept (Stoffmenge 0,09 μmol)Antimicrobial action of compounds of formula 2 with X " = amoxicillin anion against multiresitent bacteria compared to lava-sept (amount of substance 0.09 μmol)
Hemmhofdurchmesser in mm, r = resistent (kein nachweisbarer Hemmhof)Hemmhof diameter in mm, r = resistant (no detectable Hemmhof)
Tab. 3Tab. 3
Antimikrobielle Wirkung von Verbindungen nach Formel 3 mit X" = 6-{2-[2-(2- hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino]-2-(4-hydroxyphenyl)- acetylamino}-penicillanat gegen multiresistente Bakterien im Vergleich zu 6-{2-[2-(2- hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino]-2-(4-hydroxyphenyl)- acetylamino}-penicillansäure (Stoffmenge 0,09 μmol)Antimicrobial action of compounds of formula 3 with X " = 6- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2- (4-hydroxyphenyl) acetylamino} -penicillanate against multidrug-resistant bacteria compared to 6- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino} -penicillanic acid (amount by weight 0.09 .mu.mol)
r = resistent (kein nachweisbarer Hemmhof) [0063] Der neue Wirkstoff bewirkt bei allen geprüften multiresistenten Bakterienstämmen eine Hemmung, auch bei den Stämmen bei denen sowohl das Kation als auch das Antibiotikum ohne kationische Komponente unwirksam sind (Tabelle 3). r = resistant (no detectable inhibition zone) The new drug causes in all tested multidrug-resistant bacterial strains inhibition, even in the strains in which both the cation and the antibiotic without cationic component are ineffective (Table 3).
Beispiel 7Example 7
Herstellung von neuen Cephalosporinen durch Salzbildung mit Kationen, die selbst einen Wirkstoffcharakter habenProduction of new cephalosporins by salification with cations, which themselves have a drug character
[0064] Die Fraktionen nach Beispiel 6 wurden mit 7-Aminocephalosporinsäure sowie mit Wirkstoffen nach Formel 4 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, R4 = CONHCH2CH2OH, X = S) und mit Wirkstoffen nach Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) umgesetzt. Dabei wurden stark antimikrobiell wirkende Produkte erhalten.The fractions according to Example 6 were reacted with 7-aminocephalosporinic acid and with active compounds of formula 4 (R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, X = S) and with active compounds of the formula 5 (Rl = OH, R2 H, R3 = CH 3, X = S =) implemented. Strongly antimicrobial products were obtained.
Beispiel 8Example 8
Antimikrobielle Wirkung in vitro der Stoffe nach Formel 7 (Beispiel 7)Antimicrobial action in vitro of the substances according to formula 7 (example 7)
Methodemethod
[0065] Es wurde ein Reihenverdünnungstest durchgeführt. Die Konzentration in Gewichts- Prozent, die eine absolute Wachstumshemmung bewirkt (Minimale Hemmkonzentration, MHK), wurde bestimmt.A serial dilution test was carried out. The concentration in weight percent causing absolute growth inhibition (Minimum Inhibitory Concentration, MIC) was determined.
ErgebnisseResults
Die Wirkstoffe nach Formel 7 sind gegen ein breites Keimspektrum wirksam (Tab. 4). The active compounds according to formula 7 are effective against a broad spectrum of germs (Table 4).
Tab. 4 MHK von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 7 in μmol/1Tab. 4 MIC of active compounds of the general formula 7 in μmol / 1
Beispiel 9Example 9
Nachweis der antimikrobiellen Wirkung der Verbindungen nach Beispiel 6 bei lokaler AnwendungDetection of the antimicrobial action of the compounds according to Example 6 when applied locally
Methodemethod
[0066] Der Nachweis erfolgte am Modell „Mäuseohr-Test": [0067] Nach Tötung der Tiere werden die Mäuseohren abgeschnitten und in eine spezielle Haltevorrichtung eingespannt. Die Kontamination der Ohren erfolgt mit 5μl einer 1 :10 verdünnten Suspension des MRSA-Stammes „Norddeutscher Epidemie Stamm" mit einer optischen Dichte entsprechend dem McFarlandstandard 0,5. Nach einer Bebrütung von 1,5 h bei 300C erfolgt bei der Hälfte der Ohren die Behandlung mit den erfindungsgemäßen Wirkstoffen nach Beispiel 6, die andere Hälfte bleibt unbehandelt. Die Auswertung der wachsenden Bakterienkolonien erfolgt nach 24 h Bebrütung bei 37°C.The detection was carried out on the "mouse ear test" model: After killing the animals, the mouse ears are cut off and clamped in a special holding device The contamination of the ears is carried out with 5 μl of a 1:10 diluted suspension of the MRSA strain " North German epidemic strain "with an optical density corresponding to the McFarland standard 0.5. After incubation for 1.5 h at 30 ° C., the treatment with the active compounds according to the invention according to Example 6 takes place in half of the ears and the other half remains untreated. The evaluation of the growing bacterial colonies takes place after 24 h incubation at 37 ° C.
ErgebnisseResults
[0068] Bei den unbehandelten Ohren wurden Keimzahlen zwischen 1.000 und 10.000 beobachtet. Dagegen war bei den untersuchten Wirkstoffen nach Beispiel 6 das Keimwachstum vollständig gehemmt.Germ numbers between 1,000 and 10,000 were observed in the untreated ears. In contrast, in the investigated compounds according to Example 6, the germ growth was completely inhibited.
Beispiel 10Example 10
Einarbeitung der Wirkstoffe in Lipide und Herstellung von Mikro- und NanopartikelnIncorporation of the active ingredients in lipids and production of micro- and nanoparticles
Methodemethod
Rezeptur recipe
[0069] Die Lipide werden auf eine Temperatur von 500C erwärmt und anschließend der verwendete Wirkstoff nach Beispiel 1 darin dispergiert. Davon getrennt wird eine wässrige Emulgatorlösung auf die entsprechende Temperatur (5O0C) erwärmt. Danach werden beide Phasen bei der gewünschten Homogenisierungstemperatur vereint. Anschließend wird das Gemisch mit Hilfe eines Ultra Turax T25 der Fa. Janke und Kunkel GmbH & Co KG (Staufen, Deutschland) in einem Emulgierungsprozess bei 8000 Umdrehungen pro Minute und einer Dauer von 30 Sekunden verarbeitet.The lipids are heated to a temperature of 50 0 C and then the active ingredient used according to Example 1 dispersed therein. Separately, an aqueous emulsifier solution is heated to the appropriate temperature (5O 0 C). Thereafter, both phases are combined at the desired homogenization temperature. The mixture is then processed using an Ultra Turax T25 from Janke and Kunkel GmbH & Co KG (Staufen, Germany) in an emulsification process at 8000 revolutions per minute and a duration of 30 seconds.
[0070] Die Suspension wird danach mit einem Kolbenspalt-Hochdruckhomogenisator Micron Lab 40 (APV-Gaulin, Lübeck) bei einem Druck von 500 bar und einer Temperatur von 5O0C viermal homogenisiert. Die entstehende Formulierung wurde wie im Beispiel 9 beschrieben auf antimikrobielle Wirksamkeit bei Einsatz auf der Haut geprüft.[0070] The suspension is then reacted with a piston-gap high-pressure homogenizer Micron Lab 40 (APV-Gaulin, Lubeck) at a pressure of 500 bar and a temperature of 5O 0 C homogenised four times. The resulting formulation was tested for antimicrobial efficacy when applied to the skin as described in Example 9.
ErgebnisResult
[0071] Auf der behandelten Haut wurde das Keimwachstum vollständig gehemmt.On the treated skin, germ growth was completely inhibited.
Beispiel 11 Antimikrobielle Wirksamkeit in vivo der neuen Stoffe nach Formel 4 (Beispiel 1 - Beispiel 4)Example 11 Antimicrobial Activity in vivo of the New Substances of Formula 4 (Example 1 - Example 4)
Methode zur Wirksamkeit in vivo mit dem Modell Staphylococcus aureus infizierte MausMethod of in vivo efficacy with the model Staphylococcus aureus infected mouse
Vorbehandlung der Mäuse:Pretreatment of the mice:
[0072] Am Tag 0 werden mindestens 3 BALB/c Mäuse pro Testsubstanz (Tab. 8) bzw.On day 0, at least 3 BALB / c mice per test substance (Tab. 8) or
Kontrollen mit Cyclophosphamid (250mg/kg) in 250 μl PBS inta peritoneal (i.p.) vorbehandelt.Controls with cyclophosphamide (250 mg / kg) in 250 ul PBS inta peritoneally (i.p.) pretreated.
[0073] Am Tag 2 erhalten die Tiere nochmals 100 mg/kg i.p. Bakterienvorkultur:On day 2, the animals receive another 100 mg / kg ip Bakterienvorkultur:
[0074] Am Tag 2 wird eine Kolonie des Testkeims von einer bewachsenen Agarplatte (Müller-Hinton- Agar, Beckton Dickinson) in ein Kölbchen mit 10 ml CASO Bouillon (C ASO-B., Sojapepton-Caseinpepton-Bouillon, SIFIN, 30 g/l) überfuhrt und über Nacht bei 370C und einer Schüttelfrequenz von 250U/min kultiviert.On day 2, a colony of the test germ is transferred from a covered agar plate (Mueller-Hinton agar, Beckton Dickinson) to a vial with 10 ml of CASO broth (C ASO-B., Soy peptone-casein peptone broth, SIFIN, 30 g / l) and cultivated overnight at 37 0 C and a shaking frequency of 250U / min.
[0075] Am Tag 3 wird die Vorkultur (Vk) 1 :50 mit CASO-B. verdünnt und ca. 2 Stunden weiterkultiviert bis eine Extinktion im Medium von 0,6 bei einer Wellenlänge von 550 nm erreicht ist. Dann wird Ix mit PBS bei Raumtemperatur gewaschen und erneut auf eine Extinktion von 0,6 eingestellt. Infektion:On day 3, the preculture (Vk) is 1:50 with CASO-B. diluted and cultivated for about 2 hours until an absorbance in the medium of 0.6 at a wavelength of 550 nm is reached. Then Ix is washed with PBS at room temperature and readjusted to an absorbance of 0.6. Infection:
[0076] Mindestens 3 Tiere für eine Testsubstanz bzw. Kontrollen werden mit 10 μl/g Körpergewicht gewaschenen Keimen einer Bakteriensuspension mit der Extinktion 0,6 (ca.1010 - 1012 CFU, Colony forming units) i.p. infiziert.At least 3 animals for a test substance or controls are infected with 10 .mu.l / g body weight germs of a bacterial suspension with extinction 0.6 (about 10 10 - 10 12 CFU, colony forming units) ip infected.
Testsubstanzen: Variante 1 :Test substances: Variant 1:
[0077] Nach ca. 30 Minuten wird den Mäusen Antibiotikumlösung in einem Volumen von 200 μl PBS mit 3% DMSO i.p. injiziert. 6 Stunden später erfolgt die zweite Antibiotikuminjektion in der gleichen Konzentration.After about 30 minutes the mice antibiotic solution in a volume of 200 ul PBS with 3% DMSO i.p. injected. 6 hours later, the second antibiotic injection takes place in the same concentration.
Variante 2:Variant 2:
[0078] Nach 6 und 20 Std wird den Mäusen Antibiotikumlösung in einem Volumen von 200 μl PBS mit 3% DMSO i.p. injiziert. ErgebnisAfter 6 and 20 hours the mice antibiotic solution in a volume of 200 ul PBS with 3% DMSO i.p. injected. Result
[0079] Im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus" sterben die Tiere ohne wirksame Behandlung zu 100 %. Nach Therapie mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff nach Formel 4 überleben alle Tiere (Tabelle 5).In the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus", the animals die 100% without effective treatment After treatment with the active compound according to formula 4 according to the invention, all animals survive (Table 5).
Tab. 5Tab. 5
Effektivität von in vitro aktiven Wirkstoffen im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus" Effectiveness of in vitro active substances in the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus"
Beispiel 12Example 12
Gezielte Erhöhung der Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Cefadroxil (Formel 5, Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) durch radikalvermittelte Einführung neuer SubstituentenTargeted increase in the lipophilicity of the commercially available antibiotic cefadroxil (formula 5, R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) by radical-mediated introduction of new substituents
[0080] Um eine ausreichende Fixierung auf einer lipophilen Oberfläche zu erreichen, sollte die Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Cefadroxil (Formel 5, Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) durch radikalvermittelte Einführung paradihydroxylierter Substituenten gezielt erhöht werden. Zunächst wurde das Verteilungsverhalten von Cefadroxil zwischen einer wässrigen und einer lipophilen Phase nach folgender Methode bestimmt.In order to achieve sufficient fixation on a lipophilic surface, the lipophilicity of the commercially available antibiotic cefadroxil (formula 5, R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) should be specifically increased by radical-mediated introduction of paradihydroxylierter substituents , First, the distribution behavior of cefadroxil between an aqueous and a lipophilic phase was determined by the following method.
Methodemethod
[0081] Bestimmung des Verteilungsverhaltens durch Ermittlung des logP- Wertes nach der Methode von Donovan et al., (Journal of Chromatography A, 952, 2002, 47-61) mittels HPLC.Determination of the distribution behavior by determination of the logP value by the method of Donovan et al., (Journal of Chromatography A, 952, 2002, 47-61) by means of HPLC.
Chromatographie-Bedingungen:Chromatographic conditions:
• Betriebstemperatur 18-24 0C• Operating temperature 18-24 0 C
• Fluss 1,5 mL/min• Flow 1.5 mL / min
• Linearer Gradient (Methanol / 0,1% Phosphorsäure pH 2) von 10% auf 100% Methanol in 9,4 min, Equilibrierzeit zwischen 2 Läufen 6 min• Linear gradient (methanol / 0.1% phosphoric acid pH 2) from 10% to 100% methanol in 9.4 min, equilibration time between 2 runs 6 min
Probenbereitung: [0082] Zu 0,5 ml einer Standardlösung (440 mg Methylphenylsulfon und 380 μL Toluol inSample preparation: To 0.5 ml of a standard solution (440 mg of methyl phenyl sulfone and 380 μL of toluene in
150 mL Methanol) werden ca. 0,5 mg des Analyten gegeben. 2 μL dieser Probenlösung werden injiziert.150 ml of methanol), about 0.5 mg of the analyte is added. 2 μL of this sample solution is injected.
Berechnung:Calculation:
[0083] Da die Verteilungskoeffizienten der beiden Standards, die bei jedem Versuch mitlaufen, bekannt sind, lässt sich der Verteilungskoeffizient des Analyten aus denSince the distribution coefficients of the two standards involved in each experiment are known, the distribution coefficient of the analyte can be determined from the
Verhältnissen der Retentionszeiten Analyt/Standard ermitteln.Determine ratios of the retention times analyte / standard.
Ergebnis: [0084] Der bestimmte logP-Wert des handelsüblichen Antibiotikums Cefadroxil (Formel 5, Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) beträgt -3,50. Um eine ausreichende Bindung an eine lipophile tragende Matrix zu erreichen, sollte die Lipophilie gezielt erhöht werden. [0085] Die Aufgabe wurde erfindungsgemäß durch radikalvermittelte Umsetzungen entsprechend dem Beispiel 1 mit 2,5-Dihydroxy-N-(2-hydroxyethyl)benzamid (logP-Wert = - 1,21; Formel 6, R4 = CONHCH2CH2OH), entsprechend dem Beispiel 2 mit 2,5- Dihydroxybenzamid (logP-Wert = -0,4; Formel 6, R4 = CONH2), und entsprechend dem Beispiel 4 mit 2,5-Dihydroxybenzoesäureethylester (logP-Wert = 2,65; Formel 6, R4 = COOCH2CH3) gelöst. [0086] Es wurden Antibiotika mit deutlich höherer Lipophilie (Tabelle 6) bei Erhaltung der antimikrobiellen Aktivität (Tabelle 1) gewonnen.Result: The determined logP value of the commercial antibiotic cefadroxil (formula 5, R 1 = OH, R 2 = H, R 3 = CH 3, X = S) is -3.50. In order to achieve sufficient binding to a lipophilic load-bearing matrix, the lipophilicity should be increased in a targeted manner. The object was achieved according to the invention by radical-mediated reactions according to Example 1 with 2,5-dihydroxy-N- (2-hydroxyethyl) benzamide (logP value = - 1.21, formula 6, R4 = CONHCH 2 CH 2 OH) corresponding to Example 2 with 2,5-dihydroxybenzamide (logP value = -0.4, Formula 6, R4 = CONH 2 ), and according to Example 4 with 2,5-dihydroxybenzoic acid ethyl ester (logP value = 2.65; Formula 6, R4 = COOCH 2 CH 3 ). Antibiotics were obtained with significantly higher lipophilicity (Table 6) while maintaining the antimicrobial activity (Table 1).
Tab. 6 logP-WerteTab. 6 logP values
Beispiel 13 Example 13
7- {2- [2-(2-Hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa- 1 ,4-dienylamino] -2-phenyl- acetylaminoj-desacetoxycephalosporansäure Ie [0087] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONHCH2CH2OH) erhalten. Strukturanalytik7- {2- [2- (2-Hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2-phenylacetylaminoj-desacetoxycephalosporanic acid Ie The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH). structural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) und 75 MHz (13C and DEPT- 135) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.15 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.37 (m, J = 5.7 Hz, 2H, H-9"), 3.44 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H, H-IO"), 4.90 (d, J = 4.7 Hz, IH, H-6), 5.69 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.9 Hz, IH, H-7), 6.00 (d, J = 6.5 Hz, IH, H-13), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.71 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 7.46 (m, 6H, H-2', H-3', H-4', H-5 ', H-6', H-I l), 9.79 (t, IH, H-8"), 13.29 (d, IH, J = 6.2 Hz, H-14). 13C NMR δ 19.93 (C-IO), 30.35 (C-2), 42.10 (C-9"), 57.95 (C-6), 59.81 (C-7), 61.50 (C-IO"), 63.15 (C-13), 101.42 (C-I "), 123,15 (C-4), 128.41 (C-2', C-6'), 129.84 (C-4'), 130.09 (C-3 ', C-5 '), 132,41 (C-3), 133.33 (C-4"), 138.36 (C-I '), 141.34 (C-5"), 153.39 (C-2"), 161.46 (C-8), 165.01 (C-9), 170.12 (C7"), 171.96 (C-12), 184.60 (C-6"), 185.52 (C-3"). LC/MS mlz 543.1 ([M+H]+, 563.0 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) and 75 MHz ( 13 C and DEPT-135) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.15 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.37 (m, J = 5.7 Hz, 2H, H-9 "), 3.44 ( d, J = 18.4Hz, IH, H-2), 3.57 (t, J = 5.6Hz, 2H, H-IO "), 4.90 (d, J = 4.7Hz, IH, H-6), 5.69 (dd , J = 4.6 Hz, J = 8.9 Hz, IH, H-7), 6.00 (d, J = 6.5 Hz, IH, H-13), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 ") , 6.71 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5 "), 7.46 (m, 6H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 ', HI l), 9.79 (t, IH, H-8 "), 13.29 (d, IH, J = 6.2 Hz, H-14) 13 C NMR δ 19.93 (C-IO), 30.35 (C-2), 42.10 (C-9 "), 57.95 (C-6), 59.81 (C-7), 61.50 (C-IO"), 63.15 (C-13), 101.42 (CI "), 123.15 (C-4) , 128.41 (C-2 ', C-6'), 129.84 (C-4 '), 130.09 (C-3', C-5 '), 132.41 (C-3), 133.33 (C-4 " ), 138.36 (CI '), 141.34 (C-5 "), 153.39 (C-2"), 161.46 (C-8), 165.01 (C-9), 170.12 (C7 "), 171.96 (C-12) , 184.60 (C-6 "), 185.52 (C-3"). LC / MS mlz 543.1 ([M + H] + , 563.0 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 14Example 14
7-[2-(2-Carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl-acetylamino]- desacetoxycephalosporansäure If7- [2- (2-Carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] - desacetoxycephalosporanic acid If
[0088] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONH2) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONH 2 ).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 2.02 (s, 3H, H-10), 3.15 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.44 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 4.90 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.69 (dd, J = 4.5 Hz, J = 8.5 Hz, IH, H-7), 6.00 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.71 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.46 (m, 5H, H- 2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, IH, H-I l), 9.09 (s, 2H, H-8"), 13.29 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC/MS mlz 497.0 ([M+H]+, 519.0 [M+Na]+ API-ES pos. mode). Beispiel 15NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1H NMR δ 2.02 (s, 3H, H-10), 3.15 (d, J = 18.4Hz, IH, H-2), 3.44 (d, J = 18.4Hz, IH, H-2), 4.90 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.69 (dd, J = 4.5 Hz, J = 8.5 Hz, IH, H-7), 6.00 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.71 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.46 (m, 5H, H-2 ', H-3', H -4 ', H-5', H-6 '), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, IH, HI l), 9.09 (s, 2H, H-8 "), 13.29 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14) LC / MS mlz 497.0 ([M + H] + , 519.0 [M + Na] + API-ES pos. Mode). Example 15
7-[2-(2-Methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl-acetylamino]- desacetoxycephalosporansäure Ig7- [2- (2-Methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] - desacetoxycephalosporanic acid Ig
[0089] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH3) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 3 ).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.14 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.43 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.65 (br s, 3H, H-8"), 4.88 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.65 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H- 7), 5.92 (d, J = 6.8 Hz, IH, H-13), 6.57 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.69 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 7.47 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, IH, H-I l), 13.18 (d, IH, J = 6.8 Hz, H-14). LC/MS mlz 510.0 ([M-H]" API-ES neg. mode), 534.0 ([M+Na]+ API- ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1H NMR δ 2.01 (s, 3H, H-IO), 3.14 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.43 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.65 (br , 3H, H-8 "), 4.88 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.65 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 5.92 (d, J = 6.8 Hz, IH, H-13), 6.57 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.69 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 7.47 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 '), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, IH, HI 1), 13.18 (d, IH, J = 6.8 Hz, H-14) LC / MS mlz 510.0 ([MH] " API-ES neg. Mode), 534.0 ([M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 16Example 16
7-[2-(2-Ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl-acetylamino]- desacetoxycephalosporansäure Ih7- [2- (2-Ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] - desacetoxycephalosporanic acid Ih
[0090] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH2CH3) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 2 CH 3 ).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen.NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 .
1U NMR δ 1.12 (br, 3H, H-9"), 2.01 (s, 3H, H-10), 3.12 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.40 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.99 (br, 2H, H-8"), 4.86 (d, J = 4.7 Hz,lH, H-6), 5.67 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.7 Hz, IH, H-7), 6.19 (d, J = 8.4 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-4"), 6.68 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.37 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.46 (d, J = 8.7 Hz, IH, H-I l). LC/MS m/z 426.3 ([M+H]+, 548.1 [M+Na]+ API-ES pos. mode). Beispiel 17 1 U NMR δ 1.12 (br, 3H, H-9 "), 2.01 (s, 3H, H-10), 3.12 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.40 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.99 (br, 2H, H-8 "), 4.86 (d, J = 4.7 Hz, lH, H-6), 5.67 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.7 Hz , IH, H-7), 6.19 (d, J = 8.4 Hz, IH, H-13), 6.58 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-4 "), 6.68 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5 "), 7.37 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 '), 7.46 (d, J = 8.7 Hz, IH , HI l). LC / MS m / z 426.3 ([M + H] + , 548.1 [M + Na] + API-ES pos. Mode). Example 17
Antimikrobielle Wirkung der neuen Verbindungen nach Formel 4 (Beispiel 13 - BeispielAntimicrobial action of the novel compounds of formula 4 (Example 13 - Example
16) in vitro16) in vitro
Methoden vgl Beispiel 5Methods see example 5
Ergebnisse:Results:
[0091] Die neuen Wirkstoffe wirken stark antimikrobiell (Tabelle 7).The new active ingredients have a strong antimicrobial effect (Table 7).
Beispiel 18Example 18
Herstellung von neuen Cephalosporinen durch Salzbildung mit Kationen, die selbst einen Wirkstoffcharakter habenProduction of new cephalosporins by salification with cations, which themselves have a drug character
[0092] Die Fraktionen nach Beispiel 6 wurden mit 7-Aminocephalosporinsäure sowie mit Wirkstoffen nach Formel 4 (Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, R4 = CONHCH2CH2OH, X = S) und mit Wirkstoffen nach Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) umgesetzt. Dabei wurden stark antimikrobiell wirkende Produkte erhalten.The fractions according to Example 6 were reacted with 7-aminocephalosporinic acid and with active compounds of formula 4 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, X = S) and with active compounds of the formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S). Strongly antimicrobial products were obtained.
Beispiel 19Example 19
Antimikrobielle Wirksamkeit in vivo der neuen Stoffe nach Formel 4 (Beispiel 13, Beispiel 14)Antimicrobial activity in vivo of the new substances according to formula 4 (example 13, example 14)
Methoden vgl. Beispiel 11 ErgebnisMethods cf. Example 11 Result
[0093] Im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus" sterben die Tiere ohne wirksame Behandlung zu 100 %. Nach Therapie mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff nach Formel 3 überleben alle Tiere (Tabelle 8). In the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus", the animals die 100% without effective treatment After treatment with the active compound according to the invention according to formula 3, all animals survive (Table 8).
Hemmhofdurchmesser in mm; r = resistent (kein nachweisbarer Hemmhof) Tab. 8Hemmhofdurchmesser in mm; r = resistant (no detectable inhibition zone) Tab. 8
Effektivität von in vitro aktiven Wirkstoffen im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus"Effectiveness of in vitro active substances in the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus"
Beispiel 20Example 20
Gezielte Erhöhung der Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Cefalexin (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) durch radikalvermittelte Einführung neuer Substi- tuentenTargeted increasing the lipophilicity of the commercially available antibiotic cephalexin (Formula 5, R = H, R2 = H, R3 = CH 3, X = S) tuenten by radical-mediated introduction of new substi-
[0094] Um eine ausreichende Fixierung auf einer lipophilen Oberfläche zu erreichen, sollte die Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Cefalexin (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) durch radikalvermittelte Einführung paradihydroxylierter Substituenten gezielt erhöht werden. Zunächst wurde das Verteilungsverhalten von Cefadroxil zwischen einer wässrigen und einer lipophilen Phase bestimmt.In order to achieve sufficient fixation on a lipophilic surface, the lipophilicity of the commercial antibiotic cefalexin (formula 5, R 1 = H, R 2 = H, R 3 = CH 3 , X = S) should be specifically increased by radical-mediated introduction of paradihydroxylierter substituents , First, the distribution behavior of cefadroxil between an aqueous and a lipophilic phase was determined.
Methode vgl. Beispiel 12Method cf. Example 12
Ergebnis:Result:
[0095] Der bestimmte logP-Wert des handelsüblichen Antibiotikums Cefalexin (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = CH3, X = S) beträgt -2,63. Um eine ausreichende Bindung an eine lipophile tragende Matrix zu erreichen, sollte die Lipophilie gezielt erhöht werden. [0096] Die Aufgabe wurde erfindungsgemäß durch radikalvermittelte Umsetzung entsprechend dem Beispiel 13 mit 2,5-Dihydroxy-N-(2-hydroxyethyl)benzamid (logP-Wert = -1,21; Formel 6, R4 = CONHCH2CH2OH) gelöst. [0097] Es wurde ein Antibiotikum mit deutlich höherer Lipophilie (Tabelle 9) bei Erhaltung der antimikrobiellen Aktivität (Tabelle 7) gewonnen.[0095] The determined logP value of the commercially available antibiotic cephalexin (Formula 5, R = H, R2 = H, R3 = CH 3, X = S) is -2.63. In order to achieve sufficient binding to a lipophilic load-bearing matrix, the lipophilicity should be increased in a targeted manner. The object was achieved according to the invention by radical-mediated reaction in accordance with Example 13 with 2,5-dihydroxy-N- (2-hydroxyethyl) benzamide (logP value = -1.21, formula 6, R4 = CONHCH 2 CH 2 OH) solved. An antibiotic with significantly higher lipophilicity (Table 9) was obtained while maintaining the antimicrobial activity (Table 7).
Tab. 9 logP-WertTab. 9 logP value
Beispiel 21Example 21
3-Chlor-7-{2-[2-(2-hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino]-2- phenyl-acetylamino}-8-oxo-l-thia-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-en-4-carbonsäure Ii3-Chloro-7- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2-phenylacetylamino} -8-oxo-1-thia-5-azabicyclo [ 4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Ii
[0098] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONHCH2CH2OH) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) und 75 MHz (13C and DEPT- 135) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 3.36 (m, J = 5.7 Hz, 2H, H-9"), 3.38 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H, H-IO"), 3.75 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 4.99 (d, J = 4.9 Hz, IH, H-6), 5.72 (dd, J = 4.8 Hz, J = 9.0 Hz, IH, H-7), 5.94 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.56 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-4"), 6.71 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 7.42 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.66 (d, J = 8.9 Hz, IH, H-I l), 9.76 (t, IH, H-8"), 13.25 (d, IH, J = 6.2 Hz, H-14). 13C NMR δ 31.27 (C-2), 42.11 (C-9"), 58.09 (C-6), 60.04 (C-7), 61.48 (C-IO"), 63.48 (C-13), 101.40 (C-I "), 124.60 (C-4), 128.41 (C-2', C-6'), 129.13 (C-3), 129.84 (C-4'), 130.09 (C-3', C-5 '), 133.36 (C-4"), 138.69 (C-I '), 141.89 (C-5"), 153.55 (C-2"), 162.30 (C-8), 165.83 (C- 9), 170.10 (C7"), 171.37 (C-12), 184.75 (C-6"), 185.51 (C-3"). LC/MS m/z 562.2 ([M+H]+, 584.1 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) and 75 MHz ( 13 C and DEPT-135) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 3.36 (m, J = 5.7 Hz, 2H, H-9 "), 3.38 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H, H IO "), 3.75 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 4.99 (d, J = 4.9 Hz, IH, H-6), 5.72 (dd, J = 4.8 Hz, J = 9.0 Hz, IH, H-7), 5.94 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.56 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-4 "), 6.71 (d, J = 10.1 Hz, IH , H-5 "), 7.42 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 '), 7.66 (d, J = 8.9 Hz, IH, HI 1), 9.76 (t, IH, H-8 "), 13.25 (d, IH, J = 6.2 Hz, H-14) 13 C NMR δ 31.27 (C-2), 42.11 (C-9") , 58.09 (C-6), 60.04 (C-7), 61.48 (C-IO "), 63.48 (C-13), 101.40 (CI"), 124.60 (C-4), 128.41 (C-2 ', C-6 '), 129.13 (C-3), 129.84 (C-4'), 130.09 (C-3 ', C-5'), 133.36 (C-4 "), 138.69 (CI '), 141.89 ( C-5 "), 153.55 (C-2"), 162.30 (C-8), 165.83 (C-9), 170.10 (C7 "), 171.37 (C-12), 184.75 (C-6"), 185.51 (C-3 "). LC / MS m / z 562.2 ([M + H] + , 584.1 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Nachweis der Stabilität [0099] Der neue Wirkstoff erwies sich über einen Zeitraum > 60 Tage als lagerstabil. Figur 2 zeigt die Lagerstabilität der 3-Chlor-7-{2-[2-(2-hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa- 1 ,4-dienylamino]-2-phenyl-acetylamino} -8-oxo- 1 -thia-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-en-4- carbonsäure Ii.Evidence of Stability The new drug proved to be storage stable for> 60 days. FIG. 2 shows the storage stability of the 3-chloro-7- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa 1,4-dienylamino] -2-phenyl-acetylamino} -8-oxo-1-thia-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Ii.
Beispiel 22Example 22
3-Chlor-7-[2-(2-carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl-acetylamino]- 8-oxo-l-thia-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-en-4-carbonsäure Ij3-Chloro-7- [2- (2-carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenyl-acetylamino] - 8-oxo-1-thia-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Ij
[0100] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONH2) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONH 2 ).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen.NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 .
1H NMR δ 3.41 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.77 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 5.01 (d, J = 4.9 Hz, IH, H-6), 5.74 (dd, J = 4.9 Hz, J = 8.5 Hz, IH, H-7), 5.96 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.60 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-4"), 6.71 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-5"), 7.45 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.61 (d, J = 8.5 Hz, IH, H-I l), 9.09 (s, 2H, H-8"), 13.27 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC/MS mlz 518.2 ([M+H]+, 540.0 [M+Na]+ API-ES pos. mode). 1 H NMR δ 3.41 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.77 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 5.01 (d, J = 4.9 Hz, IH, H-6 ), 5.74 (dd, J = 4.9 Hz, J = 8.5 Hz, IH, H-7), 5.96 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.60 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-4 "), 6.71 (d, J = 10.3 Hz, IH, H-5"), 7.45 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H -6 '), 7.61 (d, J = 8.5 Hz, IH, HI 1), 9.09 (s, 2H, H-8 "), 13.27 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). MS mlz 518.2 ([M + H] + , 540.0 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 23Example 23
3-Chlor-7-[2-(2-methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl- acetylamino]-8-oxo-l-thia-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-en-4-carbonsäure Ik3-Chloro-7- [2- (2-methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] -8-oxo-1-thia-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Ik
[0101] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH3) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 3 ).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen 1H NMR δ 3.23 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.38 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.83 (br s, 3H, H-8"), 4.92 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.65 (dd, J = 4.6 Hz, J = 7.5 Hz, IH, H-7), 5.96 (d, J = 6.7 Hz, IH, H- 13), 6.68 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.74 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 7.42 (m, 5H, H-2', H- 3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.61 (d, J = 7.5 Hz, IH, H-I l), 13.27 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC/MS mlz 532.5 ([M+H]+, 554.5 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 1 H NMR δ 3.23 (d, J = 18.4 Hz, IH, H-2), 3.38 (d, J = 18.4 Hz, IH, H). 2), 3.83 (br s, 3H, H-8 "), 4.92 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.65 (dd, J = 4.6 Hz, J = 7.5 Hz, IH, H-7), 5.96 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.68 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.74 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-5"), 7.42 (m, 5H, H-2 ', H-3', H -4 ', H-5', H-6 '), 7.61 (d, J = 7.5 Hz, IH, HI 1), 13.27 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC / MS mlz 532.5 ([M + H] + , 554.5 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 24Example 24
3-Chlor-7-[2-(2-ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl- acetylamino]-8-oxo-l-thia-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-en-4-carbonsäure 113-Chloro-7- [2- (2-ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] -8-oxo-1-thia-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid 11
[0102] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH2CH3) erhalten. StrukturanalytikThe active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 2 CH 3 ). structural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.14 (br, 3H, H-9"), 3.35 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.73 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 4.16 (br, 2H, H-8"), 4.95 (d, J = 4.6 Hz, IH, H-6), 5.69 (dd, J = 4.6 Hz, J = 8.8 Hz, IH, H-7), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.70 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.38 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.55 (d, J = 8.7 Hz, IH, H-I l). LC/MS mlz 547.0 ([M+H]+, 569.0 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 1.14 (br, 3H, H-9 "), 3.35 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 3.73 (d, J = 18.2 Hz, IH, H-2), 4.16 ( br, 2H, H-8 "), 4.95 (d, J = 4.6Hz, IH, H-6), 5.69 (dd, J = 4.6Hz, J = 8.8Hz, IH, H-7), 6.59 (i.e. , J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.70 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.38 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 '), 7.55 (d, J = 8.7 Hz, IH, HI l). LC / MS mlz 547.0 ([M + H] + , 569.0 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 25Example 25
Antimikrobielle Wirkung der neuen Verbindungen nach Formel 4 (Beispiel 21 - Beispiel 24) in vitroAntimicrobial action of the novel compounds according to formula 4 (Example 21 - Example 24) in vitro
Methoden vgl Beispiel 5Methods see example 5
Ergebnisse: [0103] Die neuen Wirkstoffe wirken stark antimikrobiell (Tabelle 10). Beispiel 26Results: The new active compounds have a strong antimicrobial effect (Table 10). Example 26
Herstellung von neuen Cephalosporinen durch Salzbildung mit Kationen, die selbst einen Wirkstoffcharakter haben [0104] Die Fraktionen nach Beispiel 6 wurden mit 7-Aminocephalosporinsäure sowie mit Wirkstoffen nach Formel 4 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, R4 = CONHCH2CH2OH, X = S) und mit Wirkstoffen nach Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) umgesetzt. Dabei wurden stark antimikrobiell wirkende Produkte erhalten.Production of new cephalosporins by salification with cations, which themselves have a drug character The fractions according to Example 6 were reacted with 7-aminocephalosporinic acid and with active compounds of formula 4 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, X = S) and with active compounds according to formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S). Strongly antimicrobial products were obtained.
Beispiel 27Example 27
Antimikrobielle Wirksamkeit in vivo der neuen Stoffe nach Formel 4 (Beispiel 21 - Beispiel 24)Antimicrobial activity in vivo of the new substances according to formula 4 (Example 21 - Example 24)
Methoden vgl. Beispiel 11 ErgebnisMethods cf. Example 11 Result
[0105] Im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus" sterben die Tiere ohne wirksame Behandlung zu 100 %. Nach Therapie mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff nach Formel 4 überleben alle Tiere (Tabelle 11).In the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus" the animals die 100% without effective treatment After treatment with the active compound according to formula 4 according to the invention all animals survive (Table 11).
Tab. 10 Antimikrobielle Wirkung der neuen Wirkstoffe Ii bis 11 und 2c.Tab. 10 Antimicrobial effect of the new active ingredients Ii to 11 and 2c.
Hemmhofdurchnnesser in mm; r = resistent (kein nachweisbarer Hemmhof) Tab. 11Hemmhofdurchnnesser in mm; r = resistant (no detectable inhibition zone) Tab. 11
Effektivität von in vitro aktiven Wirkstoffen im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus"Effectiveness of in vitro active substances in the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus"
Beispiel 28Example 28
Gezielte Erhöhung der Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Cefaclor (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) durch radikalvermittelte Einführung neuer Substi- tuentenTargeted increase in the lipophilicity of the commercially available antibiotic cefaclor (formula 5, R1 = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) by radical-mediated introduction of new substituents
[0106] Um eine ausreichende Fixierung auf einer lipophilen Oberfläche zu erreichen, sollte die Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Cefaclor (Formel 5 , Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) durch radikalvermittelte Einführung paradihydroxylierter Substituenten gezielt erhöht werden. Zunächst wurde das Verteilungsverhalten von Cefaclor zwischen einer wässrigen und einer lipophilen Phase bestimmt.In order to achieve sufficient fixation on a lipophilic surface, the lipophilicity of the commercially available antibiotic cefaclor (formula 5, R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S) should be specifically increased by radical-mediated introduction paradihydroxylierter substituents. First, the distribution behavior of cefaclor between an aqueous and a lipophilic phase was determined.
Methode vgl. Beispiel 12Method cf. Example 12
Ergebnis:Result:
[0107] Der bestimmte logP-Wert des handelsüblichen Antibiotikums Cefaclor (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = S) beträgt -3,28. Um eine ausreichende Bindung an eine lipophile tragende Matrix zu erreichen, sollte die Lipophilie gezielt erhöht werden. [0108] Die Aufgabe wurde erfindungsgemäß durch radikalvermittelte Umsetzung entsprechend dem Beispiel 21 mit 2,5-Dihydroxy-N-(2-hydroxyethyl)benzamid (logP-Wert = -1,21; Formel 5, R4 = CONHCH2CH2OH) gelöst. [0109] Es wurde ein Antibiotikum mit deutlich höherer Lipophilie (Tabelle 12) bei Erhaltung der antimikrobiellen Aktivität (Tabelle 10) gewonnen.The specific logP value of the commercially available antibiotic cefaclor (formula 5, R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = S) is -3.28. In order to achieve sufficient binding to a lipophilic load-bearing matrix, the lipophilicity should be increased in a targeted manner. The object was achieved according to the invention by radical-mediated reaction according to Example 21 with 2,5-dihydroxy-N- (2-hydroxyethyl) benzamide (logP value = -1.21, formula 5, R4 = CONHCH 2 CH 2 OH) solved. An antibiotic with significantly higher lipophilicity (Table 12) was obtained while maintaining the antimicrobial activity (Table 10).
Tab. 12 logP-WertTab. 12 logP value
Beispiel 29Example 29
3-Chlor-7-{2-[2-(2-hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino]-2- phenyl-acetylamino}-8-oxo-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-ene-4-carbonsäure Im3-Chloro-7- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino] -2-phenylacetylamino} -8-oxo-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Im
[0110] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONHCH2CH2OH) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) und 75 MHz (13C and DEPT- 135) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.33 (m, 2H, H-I), 2.40 (m, 2H, H-2), 3.37 (m, J = 5.6 Hz, 2H, H- 9"), 3.58 (t, J = 5.5 Hz, 2H, H-10"), 3.74 (m, J = 5.0 Hz, IH, H-6), 5.31 (m, J = 5.0 Hz, J = 8.3 Hz, IH, H-7), 5.90 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.55 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.66 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.41 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.54 (d, J = 7.9 Hz, IH, H-I l), 9.76 (t, IH, H-8"), 13.23 (d, IH, J = 6.3 Hz, H-14). 13C NMR δ 22.19 (C-I), 31.70 (C- 2), 42.12 (C-9"), 53.13 (C-6), 59.24 (C-7), 61.51 (C-IO"), 63.62 (C-13), 101.65 (C-I "), 124.74 (C-4), 128.33 (C-2', C-6'), 129.03 (C-3), 129.79 (C-4'), 130.07 (C-3', C-5'), 133.34 (C-4"), 138.96 (C-I '), 141.92 (C-5"), 153.47 (C-2"), 162.22 (C-8), 165.73 (C-9), 170.09 (C7"), 171.37 (C-12), 184.69 (C-6"), 185.49 (C-3"). LC/MS mlz 544.2 ([M+H]+, 566.1 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) and 75 MHz ( 13 C and DEPT-135) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 1.33 (m, 2H, HI), 2.40 (m, 2H, H-2), 3.37 (m, J = 5.6 Hz, 2H, H-9 "), 3.58 (t, J = 5.5 Hz, 2H, H-10 "), 3.74 (m, J = 5.0 Hz, IH, H-6), 5.31 (m, J = 5.0 Hz, J = 8.3 Hz, IH, H-7), 5.90 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.55 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.66 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.41 (m, 5H , H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 '), 7.54 (d, J = 7.9 Hz, IH, HI l), 9.76 (t, IH, H- 8 "), 13.23 (d, IH, J = 6.3 Hz, H-14) 13 C NMR δ 22.19 (CI), 31.70 (C-2), 42.12 (C-9"), 53.13 (C-6) , 59.24 (C-7), 61.51 (C-IO "), 63.62 (C-13), 101.65 (CI"), 124.74 (C-4), 128.33 (C-2 ', C-6'), 129.03 (C-3), 129.79 (C-4 '), 130.07 (C-3', C-5 '), 133.34 (C-4 "), 138.96 (CI'), 141.92 (C-5"), 153.47 (C-2 "), 162.22 (C-8), 165.73 (C-9), 170.09 (C7"), 171.37 (C-12), 184.69 (C-6 "), 185.49 (C-3"). LC / MS mlz 544.2 ([M + H] + , 566.1 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Nachweis der Stabilität [Olli] Der neue Wirkstoff erwies sich über einen Zeitraum > 60 Tage als lagerstabil. Figur 3 zeigt die Lagerstablität der 3-Chlor-7-{2-[2-(2-hydroxyethylcarbamoyl)-3,6-dioxocyclohexa- l,4-dienylamino]-2-phenyl-acetylamino}-8-oxo-5-azabicyclo[4.2.0]oct-3-ene-4-carbonsäure Im.Proof of stability [Olli] The new compound proved to be storage stable for> 60 days. FIG. 3 shows the storage stability of the 3-chloro-7- {2- [2- (2-hydroxyethylcarbamoyl) -3,6-dioxocyclohexa], 4-dienylamino] -2-phenyl-acetylamino} -8-oxo-5 azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carboxylic acid Im.
Beispiel 30Example 30
3-Chlor-7-[2-(2-carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl-acetylamino]- 8-oxo-5-aza-bicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carbonsäure In3-Chloro-7- [2- (2-carbamoyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] - 8-oxo-5-aza-bicyclo [4.2.0] octane 3-ene-4-carboxylic acid In
[0112] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = CONH2) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) with substances of the general formula 6 (R 4 = CONH 2 ).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.34 (m, 2H, H-I), 2.40 (m, 2H, H-2), 3.72 (m, J = 4.8 Hz, IH, H-6), 5.35 (m, J = 4.8 Hz, J = 8.3 Hz, IH, H-7), 5.90 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.55 (d, J = 10.2 Hz, IH, H- 4"), 6.66 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5"), 7.41 (m, 5H, H-2', H-3', H-4', H-5 ', H-6'), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, IH, H-I l), 9.07 (s, 2H, H-8"), 13.14 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14). LC/MS m/z 500.3 ([M+H]+, 521.1 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1H NMR δ 1.34 (m, 2H, HI), 2.40 (m, 2H, H-2), 3.72 (m, J = 4.8 Hz, IH, H-6), 5.35 (m, J = 4.8 Hz, J = 8.3 Hz, IH, H-7), 5.90 (d, J = 6.7 Hz, IH, H-13), 6.55 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 " ), 6.66 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-5 " ), 7.41 (m, 5H, H-2 ' , H-3 ' , H-4 ' , H-5 ' , H-6 ' ), 7.54 (d, J = 8.4 Hz , IH, HI l), 9.07 (s, 2H, H-8 "), 13.14 (d, IH, J = 6.7 Hz, H-14) LC / MS m / z 500.3 ([M + H] + , 521.1 [M + Na] + API-ES pos mode).
Beispiel 31Example 31
3-Chlor-7-[2-(2-methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl- acetylamino]-8-oxo-5-aza-bicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carbonsäure Io3-Chloro-7- [2- (2-methoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenylacetylamino] -8-oxo-5-aza-bicyclo [4.2.0] octane 3-ene-4-carboxylic acid Io
[0113] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH3) erhalten.The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 3 ).
Strukturanalytik NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.34 (m, 2H, H-I), 2.42 (m, 2H, H-2), 3.63 (br s, 3H, H-8"), 3.71 (m, J = 4.9 Hz, IH, H-6), 5.32 (m, J = 4.9 Hz, J = 8.3 Hz, IH, H-7), 6.57 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-4"), 6.67 (d, J = 10.0 Hz, IH, H-5"), 7.34 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5', H-6'), 7.91 (br d, IH, H-I l). LC/MS mlz 5 514.7 ([M+H]+, 535.9 [M+Na]+ API-ES pos. mode).structural analysis NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 1.34 (m, 2H, HI), 2.42 (m, 2H, H-2), 3.63 (br s, 3H, H-8 "), 3.71 (m, J = 4.9 Hz, IH, H 6), 5.32 (m, J = 4.9 Hz, J = 8.3 Hz, IH, H-7), 6.57 (d, J = 10.1 Hz, IH, H-4 "), 6.67 (d, J = 10.0 Hz, IH, H-5 "), 7.34 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 '), 7.91 (br d, IH, HI l) LC / MS mlz 5 514.7 ([M + H] + , 535.9 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 32Example 32
3-Chlor-7-[2-(2-ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-l,4-dienylamino)-2-phenyl-o acetylamino]-8-oxo-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carbonsäure Ip3-Chloro-7- [2- (2-ethoxycarbonyl-3,6-dioxocyclohexa-1,4-dienylamino) -2-phenyl-o-acetylamino] -8-oxo-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3 -ene-4-carboxylic acid Ip
[0114] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) mit Stoffen der allgemeinen Formel 6 (R4 = COOCH2CH3) erhalten. 5The active ingredient was obtained by reacting active compounds of the general formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) with substances of the general formula 6 (R 4 = COOCH 2 CH 3 ). 5
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz (1H) in Acetonitril-d3 aufgenommen. 1H NMR δ 1.13 (br, 3H, H-9"), 1.33 (m, 2H, H-I), 2.46 (m, 2H, H-2), 3.75 (m, J = 5.1 Hz, IH, H-6), 4.02 (br,0 2H, H-8"), 5.34 (m, J = 5.1 Hz, J = 8.4 Hz, IH, H-7), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4"), 6.70 (d, J = 10.0 Hz, IH, H-5"), 7.38 (m, 5H, H-2', H-3 ', H-4', H-5 ', H-6'), 7.61 (br d, IH, H-I l). LC/MS mlz 529.8 ([M+H]+, 550.2 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz ( 1 H) in acetonitrile-d 3 . 1 H NMR δ 1.13 (br, 3H, H-9 "), 1.33 (m, 2H, HI), 2.46 (m, 2H, H-2), 3.75 (m, J = 5.1 Hz, IH, H-6 ), 4.02 (br, 0 2H, H-8 "), 5.34 (m, J = 5.1 Hz, J = 8.4 Hz, IH, H-7), 6.59 (d, J = 10.2 Hz, IH, H-4 "), 6.70 (d, J = 10.0 Hz, IH, H-5"), 7.38 (m, 5H, H-2 ', H-3', H-4 ', H-5', H-6 ' ), 7.61 (br d, IH, HI l). LC / MS mlz 529.8 ([M + H] + , 550.2 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 33 5 Antimikrobielle Wirkung der neuen Verbindungen nach Formel 4 (Beispiel 29 - BeispielExample 33 Antimicrobial action of the novel compounds according to formula 4 (Example 29 - Example
32) in vitro32) in vitro
Methoden vgl Beispiel 5 o Ergebnisse:Methods see Example 5 o Results:
[0115] Die neuen Wirkstoffe wirken stark antimikrobiell (Tabelle 13). Tab. 13 Antimikrobielle Wirkung der neuen Wirkstoffe Im bis Ip und 2d.The new active ingredients have a strong antimicrobial effect (Table 13). Tab. 13 Antimicrobial effect of the new active ingredients in up to Ip and 2d.
Beispiel 34Example 34
Herstellung von neuen Cephalosporinen durch Salzbildung mit Kationen, die selbst einen Wirkstoffcharakter habenProduction of new cephalosporins by salification with cations, which themselves have a drug character
[0116] Die Fraktionen nach Beispiel 6 wurden mit 7-Aminocephalosporinsäure sowie mit Wirkstoffen nach Formel 4 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, R4 = CONHCH2CH2OH, X = CH2) und mit Wirkstoffen nach Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) umgesetzt. Dabei wurden stark antimikrobiell wirkende Produkte erhalten.The fractions according to Example 6 were reacted with 7-aminocephalosporinic acid and with active compounds of formula 4 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, X = CH 2 ) and with active compounds of the formula 5 (R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ). Strongly antimicrobial products were obtained.
Beispiel 35 Antimikrobielle Wirksamkeit in vivo der neuen Stoffe nach Formel 4 (Beispiel 29 - Beispiel 32)Example 35 Antimicrobial activity in vivo of the new substances according to formula 4 (Example 29 - Example 32)
Methoden vgl. Beispiel 11 ErgebnisMethods cf. Example 11 Result
[0117] Im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus" sterben die Tiere ohne wirksame Behandlung zu 100 %. Nach Therapie mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff nach Formel 4 überleben alle Tiere (Tabelle 14).In the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus", the animals die 100% without effective treatment After treatment with the active compound according to formula 4 according to the invention, all animals survive (Table 14).
Tab. 14Tab. 14
Effektivität von in vitro aktiven Wirkstoffen im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus"Effectiveness of in vitro active substances in the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus"
Beispiel 36Example 36
Gezielte Erhöhung der Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Loracarbef £For- mel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) durch radikalvermittelte Einführung neuer SubstituentenTargeted increase in the lipophilicity of the commercially available antibiotic loracarbef for formula 5, R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) by radical-mediated introduction of new substituents
[0118] Um eine ausreichende Fixierung auf einer lipophilen Oberfläche zu erreichen, sollte die Lipophilie des handelsüblichen Antibiotikums Loracarbef (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) durch radikalvermittelte Einführung paradihydroxylierter Substituenten gezielt erhöht werden. Zunächst wurde das Verteilungsverhalten von Loracarbef zwischen einer wässrigen und einer lipophilen Phase bestimmt.In order to achieve sufficient fixation on a lipophilic surface, the lipophilicity of the commercially available antibiotic loracarbef (formula 5, R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) should be specifically increased by radical-mediated introduction of paradihydroxylierter substituents , First, the distribution behavior of Loracarbef between an aqueous and a lipophilic phase was determined.
Methode vgl. Beispiel 12Method cf. Example 12
Ergebnis: [0119] Der bestimmte logP-Wert des handelsüblichen Antibiotikums Loracarbef (Formel 5, Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) beträgt -3,13. Um eine ausreichende Bindung an eine lipophile tragende Matrix zu erreichen, sollte die Lipophilie gezielt erhöht werden. [0120] Die Aufgabe wurde erfindungsgemäß durch radikalvermittelte Umsetzung entsprechend dem Beispiel 29 mit 2,5-Dihydroxy-N-(2-hydroxyethyl)benzamid (logP-Wert = -1,21; Formel 6, R4 = CONHCH2CH2OH) gelöst.Result: The specific logP value of the commercial antibiotic loracarbef (formula 5, R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl, X = CH 2 ) is -3.13. In order to achieve sufficient binding to a lipophilic load-bearing matrix, the lipophilicity should be increased in a targeted manner. The object was achieved according to the invention by radical-mediated reaction according to Example 29 with 2,5-dihydroxy-N- (2-hydroxyethyl) benzamide (logP value = -1.21; formula 6, R4 = CONHCH 2 CH 2 OH) solved.
[0121] Es wurde ein Antibiotikum mit deutlich höherer Lipophilie (Tabelle 12) bei Erhaltung der antimikrobiellen Aktivität (Tabelle 15) gewonnen.An antibiotic with significantly higher lipophilicity (Table 12) was obtained while maintaining antimicrobial activity (Table 15).
Tab. 15 logP-WertTab. 15 logP value
[0122] Der Strukturanalytik und der Testungen auf biologische Aktivität der Beispiel 37 - Beispiel 41 liegen die Bezeichnungen der Strukturelemente sowie der Substanzen entsprechend der Formel 11 zugrunde.The structural analysis and the biological activity tests of Example 37 - Example 41 are based on the names of the structural elements and the substances corresponding to the formula 11.
Beispiel 37Example 37
7-[2-(5-Methyl-3,4-dioxocyclohexa-l,5-dienylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)-acetylamino]- cephalosporansäure Iq7- [2- (5-Methyl-3,4-dioxocyclohexa-l, 5-dienylamino) -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino] cephalosporanic acid Iq
[0123] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 9 (R4 = H, R5 = CH3) erhalten.[0123] The active ingredient was prepared by reacting active compounds of the general formula 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH 3, X = S) with substances of general Formula 9 (R4 = H, R5 = CH 3) was obtained.
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz 1H und HMBC und HSQC in DMSO-d6 aufgenommen.NMR spectra were recorded at 300 MHz 1 H and HMBC and HSQC in DMSO-d 6 .
1H NMR δ (DMSO-de) 1.86 (s, 3H, H7"), 1-99 (s, 3H, HlO), 3.29 (d, J = 18.4 Hz, IH, H2), 3.49 (d, J = 18.4 Hz, IH, H2), 4.89 (d, J = 4.4 Hz,lH, H6), 5.19 (d(s), J = 1.5 Hz, IH, H2"), 1 H NMR δ (DMSO-de) 1.86 (s, 3H, H7 "), 1-99 (s, 3H, H10), 3.29 (d, J = 18.4 Hz, IH, H2), 3.49 (d, J = 18.4 Hz, IH, H2), 4.89 (d, J = 4.4 Hz, lH, H6), 5.19 (d (s), J = 1.5 Hz, IH, H2 "),
5.31 (d, J = 7.0 Hz, IH, H13), 5.65 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.1 Hz, IH, H7), 6.76 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H3\ H5'), 7.14 (d(s), J = 1.5 Hz, IH, H6"), 7.27 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H2', H6'), 8.71 (d, J = 7.1 Hz, IH, H14), 9.29 (d, J = 8.3 Hz, IH, HI l). 13C NMR δ (DMSO-d6) 15.6 (C7"), 19.7 (ClO), 29.1 (C2), 57.1 (C6), 58.8 (C7), 59.5 (C13), 95.1 (C2"), 115.7 (C3', C5'), 122.9 (C4), 126.8 (Cl '), 128.9 (C2', C6'), 129.6 (C3), 133.7 (C6"), 140.0 (C5"), 155.2 (Cl "), 157.8 5 (C4'), 163.8 (C9), 164.1 (C8), 170.0 (C12), 174.7 (C3"), 183.6 (C4"). LC/MS mlz 483.4 ([M]+, 504.8 [M+Na]+ API-ES pos. mode)5.31 (d, J = 7.0 Hz, IH, H13), 5.65 (dd, J = 4.7 Hz, J = 8.1 Hz, IH, H7), 6.76 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H3 \ H5 '), 7.14 (d (s), J = 1.5 Hz, IH, H6 "), 7.27 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H2', H6 '), 8.71 (d, J = 7.1 Hz, IH, H14), 9.29 (d, J = 8.3 Hz, IH, HI 1) 13 C NMR δ (DMSO-d 6 ) 15.6 (C7 "), 19.7 (ClO), 29.1 (C2), 57.1 (C6), 58.8 (C7), 59.5 (C13), 95.1 (C2 "), 115.7 (C3 ', C5'), 122.9 (C4), 126.8 (C1 '), 128.9 (C2', C6 '), 129.6 (C3), 133.7 (C6 "), 140.0 (C5"), 155.2 (Cl "), 157.8 5 (C4 '), 163.8 (C9), 164.1 (C8), 170.0 (C12), 174.7 (C3"), 183.6 (C4 "). LC / MS mlz 483.4 ([M] + , 504.8 [M + Na] + API-ES pos. Mode)
Beispiel 38Example 38
l o 7- [2-(6-Methyl-3,4-dioxocyclohexa- 1 ,5-dienylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)-acetylamino] - cephalosporansäure Irl o 7- [2- (6-Methyl-3,4-dioxocyclohexa-1, 5-dienylamino) -2- (4-hydroxyphenyl) -acetylamino] cephalosporanic acid Ir
[0124] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = OH, R2 = H, R3 = CH3, X = S) mit Stoffen der allgemeinen Formel 9 (R4 = CH3, R5 = 15 H) erhalten.[0124] The active ingredient was prepared by reacting active compounds of the general formula 5 (Rl = OH, R2 = R3 = H, CH 3, X = S) (= R 4 CH 3, R5 = 15 H) obtained with materials of the general formula 9 ,
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz 1H und HMBC und HSQC in DMSO-d6 aufgenommen.NMR spectra were recorded at 300 MHz 1 H and HMBC and HSQC in DMSO-d 6 .
20 1H NMR δ (DMSO-de) 1.99 (s, 3H, HlO), 2.32 (s, 3H, H8"), 3.29 (d, J = 18.1 Hz, IH, H2), 3.48 (d, J = 18.4 Hz, IH, H2), 4.99 (d, J = 4.4 Hz,lH, H6), 5.12 (s, IH, H2"), 5.25 (d, J = 6.1 Hz, IH, H13), 5.69 (dd, J = 4.9 Hz, J = 7.8 Hz, IH, H7), 6.32 (s, IH, H5"), 6.76 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H3\ H5'), 7.11 (d, J = 6.1 Hz, IH, H14), 7.34 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H2', H6'), 9.29 (d, J = 8.4 Hz, IH, HI l). 13C NMR δ (DMSO-d6) 17.5 (C7"), 19.5 (ClO), 28.6 (C2), 56.8 (C6),20 1 H NMR δ (DMSO-de) 1.99 (s, 3H, H10), 2.32 (s, 3H, H8 "), 3.29 (d, J = 18.1 Hz, IH, H2), 3.48 (d, J = 18.4 Hz, IH, H2), 4.99 (d, J = 4.4 Hz, lH, H6), 5.12 (s, IH, H2 "), 5.25 (d, J = 6.1 Hz, IH, H13), 5.69 (dd, J = 4.9 Hz, J = 7.8 Hz, IH, H7), 6.32 (s, IH, H5 "), 6.76 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H3 \ H5 '), 7.11 (d, J = 6.1 Hz, IH, H14), 7.34 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H2 ', H6'), 9.29 (d, J = 8.4 Hz, IH, HI 1) 13 C NMR δ (DMSO-d 6 ) 17.5 ( C7 "), 19.5 (ClO), 28.6 (C2), 56.8 (C6),
25 58.8 (C7), 59.5 (C13), 97.7 (C2"), 115.9 (C3\ C5'), 123.0 (C4), 126.7 (Cl '), 128.7 (CT, C6'), 129.4 (C5"), 129.6 (C3), 147.2 (C6"), 154.3 (Cl "), 158.0 (C4'), 163.6 (C9), 163.9 (C8), 170.2 (C12), 175.6 (C3"), 182.8 (C4"). LC/MS m/z 483.4 ([M]+, 504.9 [M+Na]+ API- ES pos. mode).25 58.8 (C7), 59.5 (C13), 97.7 (C2 "), 115.9 (C3 \ C5 '), 123.0 (C4), 126.7 (Cl'), 128.7 (CT, C6 '), 129.4 (C5"), 129.6 (C3), 147.2 (C6 "), 154.3 (Cl"), 158.0 (C4 '), 163.6 (C9), 163.9 (C8), 170.2 (C12), 175.6 (C3 "), 182.8 (C4"). LC / MS m / z 483.4 ([M] + , 504.9 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
30 Beispiel 3930 Example 39
3-Chlor-7-[2-(5-methyl-3,4-dioxocyclohexa-l,5-dienylamino)-2-phenyl-acetylamino}-8- oxo-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-ene-4-carbonsäure Is [0125] Der Wirkstoff wurde durch Umsetzung von Wirkstoffen der allgemeinen Formel 5 (Rl = H, R2 = H, R3 = Cl, X = CH2) mit Stoffen der allgemeinen Formel 9 (R4 = CH3, R5 = H) erhalten.3-chloro-7- [2- (5-methyl-3,4-dioxocyclohexa-l, 5-dienylamino) -2-phenyl-acetylamino} -8-oxo-5-azabicyclo [4.2.0] oct-3-yl ene-4-carboxylic acid Is [0125] The active ingredient was prepared by reacting active compounds of the general formula 5 (Rl = H, R2, X 2 = H, R3 = Cl = CH) obtained with materials of the general Formula 9 (R4 = CH3, R5 = H).
Strukturanalytikstructural analysis
NMR-Spektren wurden bei 300 MHz 1H und HMBC und HSQC in DMSO-d6 aufgenommen. 1U NMR δ (DMSO-de) 1.35 (m, 2H, Hl), 1.86 (s, 3H, H7"), 2.48 (m, 2H, H2), 3.72 (m, J = 7.8 Hz, IH, H6), 5.16 (s, IH, H2"), 5.25 (dd, J = 7.9 Hz, J = 5.6 Hz, IH, H7), 5.33 (s, IH, H13), 7.19 (s, IH, H6"), 7.35 (dd, J = 7.4 Hz, IH, H4'), 7.40 (dd, J = 7.4 Hz, 2H, H3', H5'), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 2H, H2\ H6'), 8.88 (broad, IH, H14), 9.39 (d, J = 8.0 Hz, IH, HI l). 13C NMR δ (DMSO-de) 21.5 (Cl), 28.0 (C2), 51.4 (C6), 57.7 (C7), 60.1 (C13), 95.0 (C2"), 120.2 (C4), 127.2 (C4'), 127.6 (CT, C6'), 128.5 (C3), 128.7 (C3\ C5'), 133.5 (C6"), 136.5 (Cl '), 163.9 (C8), 169.1 (C12), 183.0 (C4"). LC/MS m/z 469.5 ([M]+, 491.3 [M+Na]+ API-ES pos. mode).NMR spectra were recorded at 300 MHz 1 H and HMBC and HSQC in DMSO-d 6 . 1 U NMR δ (DMSO-de) 1.35 (m, 2H, HI), 1.86 (s, 3H, H7 "), 2.48 (m, 2H, H2), 3.72 (m, J = 7.8 Hz, IH, H6) , 5.16 (s, IH, H2 "), 5.25 (dd, J = 7.9 Hz, J = 5.6 Hz, IH, H7), 5.33 (s, IH, H13), 7.19 (s, IH, H6"), 7.35 (dd, J = 7.4 Hz, IH, H4 '), 7.40 (dd, J = 7.4 Hz, 2H, H3', H5 '), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 2H, H2 \ H6'), 8.88 (broad, IH, H14), 9.39 (d, J = 8.0 Hz, IH, HI 1) 13 C NMR δ (DMSO-de) 21.5 (Cl), 28.0 (C2), 51.4 (C6), 57.7 (C7 ), 60.1 (C13), 95.0 (C2 "), 120.2 (C4), 127.2 (C4 '), 127.6 (CT, C6'), 128.5 (C3), 128.7 (C3 \ C5 '), 133.5 (C6") , 136.5 (Cl '), 163.9 (C8), 169.1 (C12), 183.0 (C4 "). LC / MS m / z 469.5 ([M] +, 491.3 [M + Na] + API-ES pos. Mode).
Beispiel 40Example 40
Antimikrobielle Wirkung der neuen Verbindungen nach Formel 8 (Beispiel 37 - BeispielAntimicrobial action of the novel compounds of formula 8 (Example 37 - Example
39) in vitro39) in vitro
Methoden vgl Beispiel 5Methods see example 5
Ergebnisse: Die neuen Wirkstoffe wirken stark antimikrobie 11 (Tabelle 16). Results: The new drugs strongly antimicrobial 11 (Table 16).
Tab. 16 Antimikrobielle Wirkung der neuen Wirkstoffe Iq bis Ir, 2a, 2b und 4a, 4b.Tab. 16 Antimicrobial action of the new active compounds Iq to Ir, 2a, 2b and 4a, 4b.
r = resistent (kein nachweisbarer Hemmhof) Hemmhofdurchmesser in mm r = resistant (no detectable inhibition zone) Hemmhofdurchmesser in mm
Beispiel 41Example 41
Antimikrobielle Wirksamkeit in vivo der neuen Stoffe nach Formel 8 (Beispiel 37)Antimicrobial activity in vivo of the new substances according to formula 8 (example 37)
Methoden vgl. Beispiel 11Methods cf. Example 11
ErgebnisResult
[0126] Im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus" sterben die Tiere ohne wirksame Behandlung zu 100 %. Nach Therapie mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff nach Formel 8 überleben mindestens 50% der Tiere (Tabelle 17).In the "Staphylococcus aureus infected mouse" infection model, the animals die 100% without effective treatment, and at least 50% of the animals survive after therapy with the compound of formula 8 according to the invention (Table 17).
Tab. 17Tab. 17
Effektivität von in vitro aktiven Wirkstoffen im Infektionsmodell „mit Staphylococcus aureus infizierte Maus"Effectiveness of in vitro active substances in the infection model "mouse infected with Staphylococcus aureus"
Beispiel 42 Example 42
Ausrüstung des hydrophilen Saugkerns einer Wundauflage mit Wirkstoffen nach Formelbild 3Equipment of the hydrophilic absorbent core of a wound dressing with active ingredients according to formula image 3
[0127] Eine Schicht des Saugkerns wurde in lern2 große Stücke zerschnitten. Diese wurden mit unterschiedlich konzentrierten Suspensionen des Wirkstoffes nach Formelbild 3 getränkt und im Agartest auf Keimminderung überprüft. Dazu wurde die Keimsuspensionen mit Hilfe des Whitley Automatic Spiral-Plater (WASP) linear ausplattiert. So ergaben sich Agarplatten mit einem gleichmäßigen Bakterienbewuchs. Nach 30min wurden die Bereiche, auf die die Wundauflagen aufgebracht werden sollten, markiert und die Kontrollflächen genau festgelegt. Diese Bereiche wurden mit jeweils 25μl Kochsalzlösung betropft. In diese Tropfen wurden unbeschichtetes Kompressenmaterial und mit den erfmdungsgemäßen Substanzen beschichteten Wundauflagen gelegt und leicht angedrückt. Die Platten wurden 15min zur Vordiffusion bei Raumtemperatur stehen gelassen, bis sie in den Brutschrank (37°C) gestellt wurden. Nach 24h wurden die Flächen der Wundauflagen markiert. Es erfolgte eine Auszählung der Bakterien auf den Flächen unterhalb der Wundauflagen und in den Kontrollbereichen, die nur mit Kochsalzlösung versetzt worden waren. Die Wundauflagen wurden auf frischen Agar überführt, um eventuell überlebende Keime auszuzählen.A layer of the absorbent core was cut into 2 large pieces. These were soaked with differently concentrated suspensions of the active substance according to formula image 3 and tested for germ reduction in the agar test. For this purpose, the microbial suspensions were plated out using the Whitley Automatic Spiral Plater (WASP) linear. This resulted in agar plates with a uniform bacterial growth. After 30 minutes, the areas to which the dressings were to be applied were marked and the control areas precisely determined. These areas were each pipetted with 25 μl saline. Uncoated compress material and wound dressings coated with the substances according to the invention were placed in these drops and lightly pressed on. The plates were 15min to Pre-diffusion allowed to stand at room temperature until placed in the incubator (37 ° C). After 24 hours, the areas of the wound dressings were marked. The bacteria were counted on the areas below the wound dressings and in the control areas, which had been treated only with saline. The wound dressings were transferred to fresh agar to count any surviving germs.
[0128] Bei Auslegen des Saugkerns auf eine unbeimpfte Agarplatte. Bei diesen geringen Keimzahlen war die Besiedlung nur durch statistische Verfahren zu berechnen. Unter Annahme einer Poisson- Verteilung errechnete sich die im Mittel zu erwartende Zahl überlebender Keime m nach der Formel m = -In p/p0 When placing the absorbent core on an uninoculated agar plate. With these low numbers of bacteria colonization was only to be calculated by statistical methods. Assuming a Poisson distribution, the average number of surviving germs m was calculated according to the formula m = -In p / p 0
(p = Anzahl der Versuche ohne Keimnachweis, p0 = Gesamtzahl der Versuche).(p = number of experiments without germ detection, p 0 = total number of experiments).
ErgebnisseResults
[0129] Bei unbeschichteten Wundauflagen kommt es, wie zu erwarten zu einer starken Keimvermehrung .In the case of uncoated wound dressings, as is to be expected, there is a strong proliferation of germs.
[0130] Dagegen wurde bei den mit dem Wirkstoffe nach Formelbild 3 beschichten Wundauflagen in einer Konzentration von 0,02 % das Bakterienwachstum unter der Auflage vollständig unterdrückt. Es wurde aber nur ein Hemmhof von 0,93 + 0,73mm (n = 7) um die Wundauflage herum beobachtet, d. h. die Diffusion in Bereiche um die Wundauflage war minimal.In contrast, in the case of the wound dressings coated with the active ingredient according to Formula 3 in a concentration of 0.02%, bacterial growth under the overlay was completely suppressed. However, only a 0.93 + 0.73mm (n = 7) inhibition zone was observed around the dressing, i. H. Diffusion into areas around the wound dressing was minimal.
Nach Überführung auf frischen Agar in 3 Fällen wurde ein geringes und in 7 Fällen kein Bakterienwachstum beobachtet, d.h. es waren im Mittel nur 0,35 überlebende Keime bei dieser Konzentration des neuen Polyhexanid- Wirkstoffes nach Formelbild 3 zu erwarten. [0131] Bei einer Verringerung der Konzentration des Wirkstoffs auf 0,01 % waren im statistischen Mittel 0,2KBE unter den Wundauflagen zu erwarten (n = 5). Nach dem Ausbringen des Saugkerns auf unbeimpften Agar wurde in 2 Fällen geringes und in 3 Fällen starkes Wachstum beobachtet, d.h. bei dieser Konzentration wurde nur eine Bakteriostase und kein bakterizider Effekt erreicht. [0132] Bei einer Erhöhung der Konzentration auf 0,04 % trat erwartungsgemäß unter der Wundauflage kein Wachstum auf. Bei Übertragung auf unbeimpften Agar wurde im statistischen Mittel eine Keimzahl von 0,22 (n = 5) beobachtet. Der Hemmhof um den Saugkern stieg aber auf 3 mm, d.h. bei dieser Konzentration begann eine Diffusion in das umgebende Medium. Beispiel 43After conversion to fresh agar in 3 cases, a slight and in 7 cases no bacterial growth was observed, ie, on average only 0.35 surviving germs were to be expected at this concentration of the new polyhexanide active ingredient according to formula 3. When the concentration of the active ingredient was reduced to 0.01%, on average 0.2 KBE among the wound dressings was to be expected (n = 5). After application of the absorbent core to unincorporated agar, slight growth was observed in 2 cases and strong growth in 3 cases, ie at this concentration only bacteriostasis and no bactericidal effect was achieved. As expected, when the concentration increased to 0.04%, no growth occurred under the wound dressing. When transferred to unvaccinated agar, a bacterial count of 0.22 (n = 5) was observed on a statistical average. However, the inhibition zone around the absorbent core increased to 3 mm, ie at this concentration, diffusion into the surrounding medium began. Example 43
Prüfung der mit Wirkstoffen nach Formelbild 2 oder 3 beschichteten Wundauflage im FilterversuchTesting of the wound dressing coated with active ingredients according to formula 2 or 3 in the filter test
[0133] Verschieden große Stücke der unterschiedlichen Wundauflagen wurden in einen Trichter gegeben und die Keimsuspension (200 000 KbE/ml) mit einer Geschwindigkeit von etwa 20 Tropfen/min aufgetropft (Abb.). Die ersten 2ml des Filtrates wurden aufgefangen. Im Filtrat wurde nach dem Verdünnen die Keimzahl mit dem Spiralplater WASP bestimmt und mit der Ausgangskeimzahl verglichen. Die Verdünnung wurde dabei jeweils der Ausgangskeimzahl angepasst.Various sized pieces of the different wound dressings were placed in a funnel and the germ suspension (200,000 cfu / ml) was dropped at a rate of about 20 drops / min (Fig.). The first 2 ml of the filtrate were collected. After dilution, the bacterial count in the filtrate was determined using the spiral plate WASP and compared with the starting bacterial count. The dilution was adjusted in each case to the starting bacterial count.
[0134] Figur 4 zeigt die schematische Darstellung des Filter- VersuchsaufbausFIG. 4 shows the schematic representation of the filter experimental setup
ErgebnisResult
[0135] Bei unbeschichteten Wundauflagen werden die Keime fast vollständig wiedergefunden. Dagegen waren bei den mit dem Wirkstoff nach Formelbild 2 oder 3 beschichteten Wundauflagen alle Keime inaktiviert, in dem aufgefangenen Filtrat lies sich kein Keimwachstum nachweisenWith uncoated wound dressings, the germs are almost completely recovered. In contrast, in the wound dressings coated with the active ingredient according to formula 2 or 3, all the germs were inactivated, no germ growth could be detected in the collected filtrate
Beispiel 44Example 44
[0136] Der Wirkstoff nach Formelbild 2 wurde mit einem Gemisch verschiedener Fettsäuren (Tetradecansäure, Pentadecansäure, Hexadecansäure, cis-9-Hexadecensäure, Octadecansäure, cis-9-Octadecensäure, cis-9,12-Octadecadiensäure, erhalten durch n-Hexan-Extraktion aus Mikroalgen Extraktor DIONEX ASE 200) versetzt. Mit dem erhaltenen Produkt wurden Saugkompressen mit einer Konzentration von 0,01 % beschichtet.The active ingredient according to formula image 2 was treated with a mixture of different fatty acids (tetradecanoic acid, pentadecanoic acid, hexadecanoic acid, cis-9-hexadecenoic acid, octadecanoic acid, cis-9-octadecenoic acid, cis-9,12-octadecadienoic acid, obtained by n-hexane extraction from microalgae extractor DIONEX ASE 200). Suction compresses were coated with the resulting product at a concentration of 0.01%.
ErgebnisseResults
[0137] Das Keimwachstum konnte vollständig unterbunden werden. Mischungen natürlicher Fettsäuren können gemäß Anspruch 11 als Säuren bei der Umwandlung der Substanz nach Formelbild 2 eingesetzt werden. Das erhaltene Produkt zeichnet sich durch eine starke antimikrobielle Wirksamkeit aus. Beispiel 45 Prüfung auf der Schweinehaut MethodikThe germ growth could be completely prevented. Mixtures of natural fatty acids can be used according to claim 11 as acids in the conversion of the substance according to formula 2. The product obtained is characterized by a strong antimicrobial activity. Example 45 Testing on the pigskin methodology
In eine W/O-Emulsionsgrundlage wurden der handelsübliche Wirkstoff nach Formelbild 1 , Amoxicillin und das Salz gemäß Anspruch 2 mit Amoxicillin als Anion, jeweils in Konzentration 1 % eingearbeitet.In a W / O emulsion base, the commercial active ingredient according to formula 1, amoxicillin and the salt according to claim 2 with amoxicillin as anion, in each case in concentration 1% were incorporated.
Die Untersuchungen mit diesen Formulierungen wurden an der Haut von einem vietnamesischen Hängebauchschwein sofort nach der Schlachtung durchgeführt. Die Haut wurde mit Staph. aureus (Norddeuscher Epidemiestamm kolonisiert. Danach wurden die Salben mit den entsprechenden Wirkstoffen auf gekennzeichnete Hautaureale aufgetragen. Nach 24 h wurden die entsprechenden Hautareale abgespült und die Keimzahl in der Spüllösung bestimmt. ErgebnisseExaminations with these formulations were performed on the skin of a Vietnamese potbelly immediately after slaughter. The skin was staph with. Subsequently, the ointments with the corresponding active ingredients were applied to designated skin aurae After 24 h, the corresponding skin areas were rinsed off and the germ count in the rinsing solution was determined
Während bei beiden Einzelsubstanzen noch Keime nachweisbar waren, führte das erfindungsgemäße Produkt zu einer vollständigen Inaktivierung der Keime. Tab. 18While germs were still detectable in both individual substances, the product according to the invention led to a complete inactivation of the germs. Tab. 18
Beispiel 46 Einarbeitung in ein Cellulose-Gel MethodikExample 46 incorporation into a cellulose gel methodology
In ein alkoholfreies Cellulose-Gel wurden der handelsübliche Wirkstoff nach Formelbild 1, Amoxicillin und das Salz gemäß Anspruch 2 mit Amoxicillin als Anion, jeweils in Konzentration von 0, 1 und 1 % eingearbeitet. Die Prüfung erfolgte gemäß Beispiel 45In an alcohol-free cellulose gel, the commercial active ingredient according to formula 1, amoxicillin and the salt according to claim 2 with amoxicillin as anion, in each case in a concentration of 0, 1 and 1% were incorporated. The test was carried out according to Example 45
Ergebnisse Die Erfmdungsgemäßen Formulierungen sind stabil.Results The formulations according to the invention are stable.
Im Gegensatz zu den Einzelsubstanzen lässt sich mit der erfindungsgemäßen Formulierung eine vollständige Inaktivierung des multiresistenten Staph. aureus -Stammes erreichen Tab. 19In contrast to the individual substances, a complete inactivation of the multiresistant Staph. reach aureus strain Tab. 19
Beispiel 47Example 47
Prüfungen der Formulierungen nach Beispiel 46 an der Mundschleimhaut MethodikTests of the formulations according to Example 46 on the oral mucosa methodology
S.Beispiel 45, jedoch wurde Mund- und Rachenschleimhaut verwendet.S.Example 45, however mouth and throat mucosa was used.
ErgebnisseResults
Auch auf Schleimhäuten zeigt die erfindungsgemäße Formulierung die beste Wirksamkeit.Also on mucous membranes formulation of the invention shows the best efficacy.
Tab. 20Tab. 20

Claims

Patentansprüche claims
1. ß-Lactam-Derivate der allgemeinen Formel1. ß-lactam derivatives of the general formula
mit: With:
Rl = H, OHR1 = H, OH
R2 = H, Na, CH2OH, CHCH3OCOOC2H5,R 2 = H, Na, CH 2 OH, CHCH 3 OCOOC 2 H 5 ,
CHCH3OCOOCH(CHS)2, CH2OCOC(CH3)3 R3 = CH3, Cl R4 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3, COOCH2CH3, COOH, COCH3, CHO, CH3,CHCH 3 OCOOCH (CHS) 2 , CH 2 OCOC (CH 3 ) 3 R 3 = CH 3 , Cl R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOCH 2 CH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 .
CH2(CH2V20CH3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, O(CH2)0-20CH3 R5 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3, COOCH2CH3, COOH, COCH3, CHO, CH3,CH 2 (CH 2 V 20 CH 3, C (CH 3) 3, C 6 H 5, Cl, Br, OCH 3, O (CH 2) 0-20 CH 3 R 5 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2, COOCH 3 , COOCH 2 CH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 ,
CH2(CH2V20CH3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, O(CH2)0.20CH3 X = S, CH2.CH 2 (CH 2 V 20 CH 3, C (CH 3) 3, C 6 H 5, Cl, Br, OCH 3, O (CH 2) 0th 20 CH 3 X = S, CH. 2
2. Salze, deren anionische Komponente aus einem a) ß-Lactam-Derivat nach Anspruch 1 oder b) handelsüblichen ß-Lactam-Derivat oder c) Derivat von 6-Aminopenicillansäure oder d) Derivat von 7-Aminocephalosporansäure stammt und deren kationische Komponente Polyhexamethylenbiguanid ist.2. Salts whose anionic component is derived from an a) β-lactam derivative according to claim 1 or b) commercial β-lactam derivative or c) derivative of 6-aminopenicillanic acid or d) derivative of 7-aminocephalosporanic acid and its cationic component polyhexamethylene biguanide is.
3. Salze nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um Substanzen der allgemeinen Formel 3. Salts according to claim 2, characterized in that they are substances of the general formula
R4 = CONHCH2CH2OH, CONH2, COOCH3, COOCH2CH3, COOH, COCH3, CHO, CH3, CH2(CH2V20CH3, C(CH3)3, C6H5, Cl, Br, OCH3, O(CH2)0-20CH3 R 4 = CONHCH 2 CH 2 OH, CONH 2 , COOCH 3 , COOCH 2 CH 3 , COOH, COCH 3 , CHO, CH 3 , CH 2 (CH 2 V 20 CH 3 , C (CH 3 ) 3 , C 6 H 5 , Cl, Br, OCH 3 , O (CH 2 ) 0 - 20 CH 3
4. Salze nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass n = 2-5 ist.4. Salts according to claim 2 or 3, characterized in that n = 2-5.
5. Polyhexamethylenbiguanid-Hydrogencarbonat als Zwischenprodukt bei der Herstellung der Polyhexamethylenbiguanid-Salze gemäß Anspruch 2 oder 3.5. polyhexamethylene biguanide bicarbonate as an intermediate in the preparation of the polyhexamethylene biguanide salts according to claim 2 or 3.
6. Verfahren zur Herstellung von ß-Lactam-Derivaten gemäß Anspruch 1, gekennzeichnet dadurch, dass ß-Lactam- Antibiotika mit einer freien Aminogruppe gemäß Formel 5 mit Substraten von Polyphenoloxidasen, deren Hydroxygruppen ortho-ständig angeordnet sind, unter dem Einfluss von a) Enzymen der Klassifikation EC 1.10.3.2. und / oder b) Peroxidasen der Klassifikation EC 1.11.17 und/oder c) Monophenolmonooxygenasen EC 114.99.1 und/oder d) Ascorbat-Oxidasen EC 1.10.3.3 an der Aminogruppe substituiert werden 6. A process for the preparation of ß-lactam derivatives according to claim 1, characterized in that ß-lactam antibiotics having a free amino group according to formula 5 with substrates of Polyphenoloxidasen whose hydroxy groups are arranged ortho-constantly, under the influence of a) Enzymes of classification EC 1.10.3.2. and / or b) peroxidases of the classification EC 1.11.17 and / or c) monophenol monooxygenases EC 114.99.1 and / or d) ascorbate oxidases EC 1.10.3.3 are substituted at the amino group
7. Verfahren zur Herstellung von ß-Lactam-Derivaten gemäß Anspruch 1, gekennzeichnet dadurch, dass Cephalosporine mit einer freien Aminogruppe gemäß Formel 5 mit Substraten von Polyphenoloxidasen unter dem Einfluss von a) Enzymen der Klassifikation EC 1.10.3.2. und / oder b) Peroxidasen der Klassifikation EC 1.11.17 und/oder c) Monophenolmonooxygenasen EC 114.99.1 und/oder d) Ascorbat-Oxidasen EC 1.10.3.3 an der Aminogruppe substituiert werden7. A process for the preparation of ß-lactam derivatives according to claim 1, characterized in that cephalosporins having a free amino group according to formula 5 with substrates of Polyphenoloxidasen under the influence of a) enzymes of the classification EC 1.10.3.2. and / or b) peroxidases of the classification EC 1.11.17 and / or c) monophenol monooxygenases EC 114.99.1 and / or d) ascorbate oxidases EC 1.10.3.3 are substituted at the amino group
8. Verfahren zur Herstellung von Salzen nach Anspruch 2, gekennzeichnet durch folgende Schritte:8. Process for the preparation of salts according to claim 2, characterized by the following steps:
• Umsetzung eines löslichen Salzes von Polyhexamethylenbiguanid mit einem Alkalioder Ammoniumhydrogencarbonat, wobei Polyhexamethylenbiguanid- Hydrogencarbonat ausfälltReacting a soluble salt of polyhexamethylene biguanide with an alkali metal or ammonium bicarbonate, wherein polyhexamethylene biguanide bicarbonate precipitates
• Umsetzung des Polyhexamethylenbiguanid-Hydrogencarbonat mit einem ß-Lactam- Derivat gemäß Anspruch 2a) bis 2d).Reaction of the polyhexamethylene biguanide bicarbonate with a β-lactam derivative according to claims 2a) to 2d).
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, die Ausfällung des Polyhexa- methylenbiguanid-Hydrogencarbonat fraktioniert erfolgt und so Polyhexamethylenbigu- anid-Hydrogencarbonat unterschiedlicher Molgewichtsbereiche erhalten werden.9. The method according to claim 8, characterized in that the precipitation of the Polyhexa- methylenbiguanid bicarbonate fractionated and so polyhexamethylenebigu- are obtained bicarbonate of different molecular weight ranges.
10. Verfahren zur Herstellung von Polyhexamethylenbiguanid-Hydrogencarbonat als Zwischenprodukt und dessen Trennung in Molgewichtsbereiche, dadurch gekennzeichnet, dass Polyhexamethylenbiguanid-hydrochlorid in wässriger Lösung mit Alkalihydrogen- carbonat ausgefällt wird, wobei die Fällung partiell und schrittweise erfolgt und dabei eine Fraktionierung in enge Molgewichtsbereiche des Polymeren erfolgt.10. A process for the preparation of polyhexamethylene biguanide bicarbonate as an intermediate and its separation into molecular weight ranges, characterized in that polyhexamethylene biguanide hydrochloride is precipitated in aqueous solution with alkali metal bicarbonate, wherein the precipitation takes place partially and stepwise and thereby a fractionation into narrow molecular weight ranges of the polymer he follows.
11. Verfahren zur Herstellung von antimikrobiell wirksamen Fettsäure-Derivaten, gekenn- zeichnet durch Umsetzung von Polyhexamethylenbiguanid-Hydrogencarbonat mit Fettsäuren.11. A process for the preparation of antimicrobially active fatty acid derivatives, characterized by reacting polyhexamethylene biguanide bicarbonate with fatty acids.
12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass als Fettsäuren a) Tetradecansäure und / oder b) Pentadecansäure und / oder c) Hexadecansäure und / oder d) cis-9-Hexadecensäure und / oder e) Octadecansäure und / oder f) cis-9-Octadecensäure und / oder g) cis-9,12-Octadecadiensäure eingesetzt werden.12. The method according to claim 11, characterized in that the fatty acids a) tetradecanoic acid and / or b) pentadecanoic acid and / or c) hexadecanoic acid and / or d) cis-9-hexadecenoic acid and / or e) octadecanoic acid and / or f) cis-9-octadecenoic acid and / or g) cis-9,12-octadecadienoic acid are used.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Fettsäuren durch n- Hexan-Extraktion aus Mikroalgen gewonnen werden.13. The method according to claim 12, characterized in that the fatty acids are obtained by n-hexane extraction from microalgae.
14. Mikro- und Nanopartikel, die aus mindestens einem der ß-Lactam-Derivate gemäß An- spruch 1 oder mindestens einem Salz gemäß einem der Ansprüche 2 bis 5 hergestellt wurden.14. Micro- and nanoparticles which have been prepared from at least one of the .beta.-lactam derivatives according to claim 1 or at least one salt according to one of claims 2 to 5.
15. Saugfähige Wundauflagen, die mindestens ein Salz gemäß einem der Ansprüche 2 bis 5 enthalten.Absorbent wound dressings containing at least one salt according to one of claims 2 to 5.
16. Pharmazeutische Zusammensetzung, die als wirksame Komponente ein oder mehrere ß- Lactam-Derivate gemäß Anspruch 1 und/oder ein oder mehrere Salze gemäß einem der Ansprüche 2 bis 5 enthält.16. A pharmaceutical composition containing as active component one or more β-lactam derivatives according to claim 1 and / or one or more salts according to any one of claims 2 to 5.
17. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich pharmazeutisch verträgliche Hilfs- und/oder Trägerstoffe enthält.17. A pharmaceutical composition according to claim 16, characterized in that it additionally contains pharmaceutically acceptable excipients and / or carriers.
18. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 16oder 17 in Form eines Gels, einer Salbe, einer Creme, einer Tinktur, eines Fluids, einer Tablette, eines Pulvers, einer Kap- sei oder einer Wundspüllösung.18. Pharmaceutical composition according to claim 16 or 17 in the form of a gel, an ointment, a cream, a tincture, a fluid, a tablet, a powder, a capsule or a wound irrigation solution.
19. Verwendung der pharmazeutischen Zusammensetzungen nach den Ansprüchen 16 bis 18 zur Prophylaxe und Therapie der Mastitis.19. Use of the pharmaceutical compositions according to claims 16 to 18 for the prophylaxis and therapy of mastitis.
20. Arzneimittel, die einen oder mehrere der Wirkstoffe gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 umfassen.20. Medicaments comprising one or more of the active substances according to one of claims 1 to 5.
21. Verwendung der Arzneimittel gemäß Anspruch 20 zur Prophylaxe und/oder zur lokalen und/oder systemischen Behandlung von Infektionen in der Human- und Veterinärmedi- zin. 21. Use of the medicaments according to claim 20 for the prophylaxis and / or for the local and / or systemic treatment of infections in human and veterinary medicine.
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