EP0688788A1 - Boronic acid peptide derivatives having protease inhibiting activity, process for preparation thereof and pharmaceutical compositions comprising them - Google Patents

Boronic acid peptide derivatives having protease inhibiting activity, process for preparation thereof and pharmaceutical compositions comprising them Download PDF

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EP0688788A1
EP0688788A1 EP95401462A EP95401462A EP0688788A1 EP 0688788 A1 EP0688788 A1 EP 0688788A1 EP 95401462 A EP95401462 A EP 95401462A EP 95401462 A EP95401462 A EP 95401462A EP 0688788 A1 EP0688788 A1 EP 0688788A1
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EP
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formula
branched
linear
compound
group
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EP95401462A
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Guillaume De Nanteuil
Christine Lila
Philippe Gloanec
Michel Laubie
Tony Verbeuren
Serge Simonet
Alain Rupin
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ADIR SARL
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to peptide derivatives of boronic acid, their preparation process, the pharmaceutical compositions containing them as well as their use as inhibitors of trypsin-like serine proteases.
  • thrombin is the key coagulation enzyme and plays a central role in the pathology of venous and arterial thrombosis as shown by F. Toti et al. (Sang, Thrombose, Vaisseaux, 4, 483-494, 1992) and T.M. REILLY et al. (Blood Coagulation and Fibrinolysis, 3, 513-517, 1992).
  • Anti-thrombotic approaches are more effective and risk-free compared to current treatments.
  • Direct thrombin inhibitors currently in clinical development, have a variety of advantages over heparin. But these substances, hirudin and hirulog-1 have the disadvantage of not being active orally.
  • hydrochloric hydrobromic, sulfuric, phosphonic, acetic, trifluoroacetic, lactic, pyruvic, malonic, succinic, glutaric, fumaric, tartaric, maleic, citric, ascorbic, methane sulfonic acids. camphoric, oxalic, etc ...
  • the compounds of formula (VII) can be obtained from the compound of formula (IX) obtained according to the method described by MW RATHKE et al. (J. Organomet .. Chem., 122 , 145-149, 1976): in which R'4 and R'5 are as defined above, which are reacted on an organomagnesium of formula (X): R'3MgCl (X) in which R'3 has the same meaning as before, to lead to the compound of formula (XI): in which R'3, R'4 and R'5 are as defined above, which are reacted with 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazane (HMDS) in the presence of n-butyllithium to lead, after treatment in an acid medium, to the compound of formula (VII).
  • HMDS 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazane
  • the compound of formula (XI) can also be obtained according to the method described by DS MATTESON et al. (Organometallics, 3 , 1284-1288, 1984) and W. RATHKE et al. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990).
  • the compounds of the present invention in addition to the fact that they are new, exhibit particularly advantageous pharmacological properties.
  • They can also be used in therapeutic association with a thrombolytic.
  • the invention also extends to pharmaceutical compositions containing as active principle at least one compound of formula (I) with one or more inert, non-toxic and suitable excipients.
  • the pharmaceutical compositions thus obtained can be presented in various forms, the most advantageous being tablets, dragees, capsules, suppositories, oral suspensions, etc.
  • the useful dosage is adaptable according to the nature and severity of the disease, the route of administration as well as according to the age and weight of the patient. This dosage varies from 1 to 500 mg per day in one or more doses.
  • the starting materials used are known starting materials or prepared according to known procedures.
  • Preparation A leads to a synthetic intermediate useful in the preparation of the compounds of the invention.
  • Stage B H- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OBz
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 1, replacing (N-cyclopentyl) Gly-OBz in stage A with (N-cyclohexyl) Gly-OBz and Boc- (R) Phe-OH with Boc- (R, S) Phe-OH.
  • the expected product is obtained according to the method described in Example 1, replacing in step A the (N-cyclopentyl) Gly-OBz with the (N-cyclohexyl) Gly-OBz.
  • Stages A to F are identical to stages A to F of Example 1.
  • the expected product is obtained by reaction of the compound described in the preceding stage with cyanamide according to the process described in Example 2 of patent EP 615978.
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 7 using as starting material (N-cyclohexyl) Gly-OBz.
  • 3-nitrophenylalanine hydrochloride is obtained by reacting 3-nitrobenzyl bromide with ethyl acetamidomalonate in anhydrous ethanol medium then by hydrolyzing the diethyl malonate formed by 6N hydrochloric acid in the presence of acetic acid.
  • the product obtained in the previous stage is deprotected in dioxane medium in the presence of piperidine.
  • the product obtained in the previous stage is conventionally protected in the presence of di.t.butylcarbonate.
  • the expected product is obtained according to the process described in stage A of Example 1 from the product obtained in the preceding stage.
  • Stages F to M The products expected at these stages are obtained according to the methods described in stages B to J of Example 7.
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 7 by replacing, in stage A, Boc- (R) Phe-OH with morpholinosulfonyl- (R) -Phe-OH described in J. Med. Chem. (Vol. 34, No. 7, p. 1937, 1991).
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 13.
  • Stages A to H These stages are identical to stages A to H of Example 7.
  • the expected product is obtained by reacting ethyl formimidate hydrochloride on the product obtained in the preceding stage according to the process described in patent PCT / US94 / 04058.
  • Stages A to I These stages are identical to stages A to I of Example 7.
  • the expected product is obtained according to the method described in stage I of example 15 starting from the compound described in the preceding stage.
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example A.
  • the expected product is obtained according to the method described in Example 1, replacing thiourea in stage G with 1-trityl-2-aminoimidazole and then carrying out acid hydrolysis.
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 19.
  • Stages A to F are identical to stages A to F of Example 1.
  • the expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 21.
  • Example 23 Anticoagulant activity, measurement of thrombin and prothrombin times in humans
  • thrombin time thrombin time
  • TP prothrombin time
  • the thrombin time is carried out with the Thrombin Perst reagent (Stago) and the prothrombin time with the Neoplastin reagent (Stago). They are determined automatically using an ST4 coagulometer (Stago).
  • the antagonist or the solvent (10 ⁇ l) is added to the plasma (90 ⁇ l), then incubated for 2 minutes at 37 ° C. 100 ⁇ l of thrombin or 200 ⁇ l of thromboplastin calcium are added by starting the stopwatch. Under these conditions, the TT obtained in the control plasma is of the order of 20 seconds in humans, and the TP of the order of 12 seconds.
  • the activity of an inhibitor is evaluated by its capacity to prolong these times compared to the control.
  • the compounds of the invention allow an extension of the thrombin time and the prothrombin time by 50 times and more.
  • the effect of the inhibitors is measured and the concentration which doubles the clotting time (CTT2 for the thrombin time and CTP2 for the prothrombin time) is determined.
  • Example 24 Inhibition of thrombin and serine proteases from coagulation and fibrinolysis
  • Inhibitors, enzymes and substrates are diluted in the same buffer (0.01 mM phosphate buffer, pH 7.4, containing 0.12 M of sodium chloride and 0.05% bovine serum albumin) then distributed in a polystyrene microplate in a volume of 50 ⁇ l.
  • the fibrin formed by thrombin or paranitronilide released by the action of the serine protease are measured spectrophotometrically at 405 nm after respectively 5 or 30 minutes of reaction at 20 ° C.
  • the table below gives the concentration of compound inhibiting 50% of the enzymatic activity (IC50) in the presence of the reference product (DUP 714) and the compound of Example 2 compared to the control without product.
  • the results demonstrate that the compound of Example 2 inhibits thrombin as powerfully as DUP 714 but much less inhibits the other serine proteases of coagulation and fibrinolysis than DUP 714.
  • the compounds of Examples 2. 6 and 8 are therefore much more selective inhibitors of thrombin than DUP 714 .
  • Example 25 Measurement of anti-coagulant activity ex vivo.
  • Example 26 Measurement of anti-coagulant activity ex vivo.
  • DUP 714 at 0.25 mg / kg caused an increase in TCA comparable to that obtained with Example 2 at 0.5 mg / kg. This effect of DUP 714 was accompanied by 20% thrombocytopenia.
  • Example 27 Measurement of anti-coagulant activity ex vivo.
  • the products After taking a blood sample, the products are administered orally. At defined times after treatment, blood is drawn intravenously. The plasma is prepared, the platelets are counted and the thrombin time test is performed.
  • the table shows that the product of Example 2 at 2.5 mg / kg caused increases in TT without modifying the number of platelets.
  • the activity is sustainable (4 hours).
  • Preparation formula for 1000 tablets dosed at 10 mg Composed of Example 2 10 g Hydroxypropylcellulose 2 g Wheat starch 10 g Lactose 100g Magnesium stearate 3 g Talc 3 g

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Abstract

Boronic acid peptide derivs. of formula (I) R1NH-C(R2)(R2')-CO-A-CO-NH-CH(R3)-B(OR4)(OR5) and their enantiomers, diastereomers and epimers and their addn. salts are new. In (I), R1 is e.g. H, 1-6C acyl, 2-7C alkoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, etc.; R2 is e.g. H, Ph, thienylmethyl, (pyridinyl) methyl, diphenylmethyl, fluoroenyl, naphthylmethyl etc.; R2' is H or benzyl; or R2+R2' is CHPh; R3 is e.g. (CH2)mSC(=NH)NHR, (CH2)mN(R)CH=NH or gp. of formula (a) etc.; m =1-6; R is H or 1-6C alkyl; X is S or amino; R4 and R5 are H or 1-6C alkyl; or B(OR4)(OR5) is pinanediol boronic ester; A is N(A2)(CH2)n; n = 1-2; A2 is e.g. Ph, indanyl, 3-7C cycloalkyl (opt. ring substd. by 1-6C alkyl), 3-7C cycloalkenyl, bicyclo(2.1.1)hexyl etc..

Description

La présente invention concerne des dérivés peptidiques d'acide boronique, leur procédé de préparation, les compositions pharmaceutiques qui les contiennent ainsi que leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de trypsine-like serine proteases.The present invention relates to peptide derivatives of boronic acid, their preparation process, the pharmaceutical compositions containing them as well as their use as inhibitors of trypsin-like serine proteases.

L'une de ces serine proteases, la thrombine, est l'enzyme clé de la coagulation et joue un rôle central dans la pathologie des thromboses veineuses et artérielles comme l'ont montré F. Toti et coll. (Sang, Thrombose, Vaisseaux, 4, 483-494, 1992) et T.M. REILLY et coll. (Blood Coagulation and Fibrinolysis, 3, 513-517, 1992).One of these serine proteases, thrombin, is the key coagulation enzyme and plays a central role in the pathology of venous and arterial thrombosis as shown by F. Toti et al. (Sang, Thrombose, Vaisseaux, 4, 483-494, 1992) and T.M. REILLY et al. (Blood Coagulation and Fibrinolysis, 3, 513-517, 1992).

Les approches anti-thrombotiques sont plus efficaces et sans risque par rapport aux traitements actuels. Des inhibiteurs directs de la thrombine, actuellement en développement clinique, présentent toute une série d'avantages sur l'héparine. Mais ces substances, l'hirudine et l'hirulog-1 ont le désavantage de ne pas être actives par voie orale.Anti-thrombotic approaches are more effective and risk-free compared to current treatments. Direct thrombin inhibitors, currently in clinical development, have a variety of advantages over heparin. But these substances, hirudin and hirulog-1 have the disadvantage of not being active orally.

D'autre part, il est connu que des peptides contenant la séquence (D)Phe-Pro-Arg sont des inhibiteurs du site catalytique de la thrombine (C. KETTNER et coll., J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990).On the other hand, it is known that peptides containing the sequence (D) Phe-Pro-Arg are inhibitors of the catalytic site of thrombin (C. KETTNER et al., J. Biol. Chem., 265 (30) , 18289-18297, 1990).

Des dérivés peptidiques de l'acide boronique, présentant une activité anti-thrombotique, ont déjà été décrits dans la littérature. C'est le cas plus particulièrement des composés décrits dans les brevets EP 293881 et EP 471651. M.A. HUSSAIN et coll. ont d'ailleurs démontré que l'acide Ac-(D)Phe-Pro-Arg boronique (DUP 714) est un inhibiteur de la thrombine (Peptides, 12, 1153-1154, 1991).Peptide derivatives of boronic acid, exhibiting anti-thrombotic activity, have already been described in the literature. This is the case more particularly of the compounds described in patents EP 293881 and EP 471651. M.A. HUSSAIN et al. have also demonstrated that Ac- (D) Phe-Pro-Arg boronic acid (DUP 714) is a thrombin inhibitor (Peptides, 12, 1153-1154, 1991).

Il était donc particulièrement intéressant de synthétiser de nouveaux inhibiteurs de serine proteases afin d'augmenter la puissance, la selectivité ainsi que l'activité par voie orale des composés déjà décrits dans la littérature.It was therefore particularly interesting to synthesize new serine protease inhibitors in order to increase the potency, the selectivity as well as the oral activity of the compounds already described in the literature.

Plus spécifiquement, la présente invention concerne les composés de formule (I) :

Figure imgb0001

dans laquelle :

R₁
représente un atome d'hydrogène, un groupement acyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, alkoxycarbonyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle, phénoxycarbonyle, alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié (substitué ou non par un ou plusieurs groupements phényle, carboxy, alkoxycarbonyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, phénoxycarbonyle, benzyloxycarbonyle ou morpholinosulfonyle) ou un groupement R₆SO₂- dans lequel R₆ représente un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, naphtyle, phényle, benzyle, morpholine (chacun des groupements naphtyle, phényle ou benzyle étant lui-même éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, alkoxy (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, trihalogénométhyle, amino, alkylamino ou dialkylamino),
R₂
représente un atome d'hydrogène ou un groupement :
  • phényle,
  • benzyle (substitué ou non sur le noyau phényle par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, alkoxy (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, hydroxy, amino, nitro ou carboxy),
  • thiénylméthyle,
  • (pyridinyl)méthyle,
  • diphénylméthyle,
  • fluorényle,
  • naphtylméthyle,
  • benzocyclobutyle,
  • (dicyclopropylméthyl)méthyle,
  • indanyle,
  • ou, cycloalkyl (C₃-C₇) méthyle,
R'₂
représente un atome d'hydrogène

ou bien
R₂
et R'₂ représentent ensemble C₆H₅-CH=,
R₃
représente l'un quelconque des groupements suivants :
Figure imgb0002
Figure imgb0003
 dans lesquels :
1 ≦ m ≦ 6,
R représente un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
R' représente un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
X représente un atome de soufre ou un groupement amino,
R₄
et R₅ représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
   ou
Figure imgb0004
    forme un ester boronique de pinanediol,
A
représente le groupement suivant :
Figure imgb0005
 dans lequel :
n représente 1 ou 2,
A₂  représente un groupement phényle, indanyle, cycloalkyle (C₃-C₇) (substitué ou non par un ou plusieurs groupements alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié) cycloalkényle (C₃-C₇), bicyclo[2.1.1]hexyl, bicyclo[2.2.1]heptyl ou un groupement :
Figure imgb0006
 dans lequel
X et Y différents représentent un atome d'oxygène, de soufre, un groupement NH ou CH₂,

leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.More specifically, the present invention relates to the compounds of formula (I):
Figure imgb0001
in which :
R₁
represents a hydrogen atom, a linear or branched acyl (C₁-C₆) group, linear or branched (C₁-C₆) alkoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, phenoxycarbonyl, linear or branched (C₁-C₆) alkyl (substituted or not by one or more phenyl, carboxy, linear or branched (C₁-C₆) alkoxycarbonyl, phenoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl or morpholinosulfonyl) or an R₆SO₂- group in which R₆ represents a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group, naphthyl, phenyl, benzyl, morpholine (each of the naphthyl, phenyl or benzyl groups is itself optionally substituted by one or more halogen atoms or alkyl groups (C₁-C₆ ) linear or branched, alkoxy (C₁-C₆) linear or branched, trihalomethyl, amino, alkylamino or dialkylamino),
R₂
represents a hydrogen atom or a group:
  • phenyl,
  • benzyl (substituted or not substituted on the phenyl ring by one or more halogen atoms or linear or branched (C₁-C₆) alkyl, linear or branched (C₁-C₆) alkoxy, hydroxy, amino, nitro or carboxy),
  • thienylmethyl,
  • (pyridinyl) methyl,
  • diphenylmethyl,
  • fluorenyl,
  • naphthylmethyl,
  • benzocyclobutyl,
  • (dicyclopropylmethyl) methyl,
  • indanyl,
  • or, cycloalkyl (C₃-C₇) methyl,
R'₂
represents a hydrogen atom

or
R₂
and R'₂ together represent C₆H₅-CH =,
R₃
represents any of the following groupings:
Figure imgb0002
Figure imgb0003
 wherein :
1 ≦ m ≦ 6,
R represents a hydrogen atom or a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
R ′ represents a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
X represents a sulfur atom or an amino group,
R₄
and R₅ each represent a hydrogen atom or a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
or
Figure imgb0004
 forms a boronic ester of pinanediol,
AT
represents the following group:
Figure imgb0005
 in which :
n represents 1 or 2,
A₂ represents a phenyl, indanyl, cycloalkyl (C₃-C₇) group (substituted or not by one or more linear or branched (C₁-C₆) alkyl groups) cycloalkenyl (C₃-C₇), bicyclo [2.1.1] hexyl, bicyclo [ 2.2.1] heptyl or a group:
Figure imgb0006
 in which
X and Y different represent an oxygen or sulfur atom, an NH or CH₂ group,

their enantiomers, diastereoisomers and epimers as well as their addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base.

L'invention concerne également le procédé de préparation des dérivés de formule (I) caractérisé en ce que l'on fait réagir un amino-acide protégé de formule (II), dont on a éventuellement séparé les isomères par une technique classique de séparation :

Figure imgb0007

dans laquelle :

R'₁
représente un groupement acyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle,
R₂ et R'₂
ont la même signification que dans la formule (I),

que l'on fait réagir selon la technique de couplage peptidique décrite par W. KONIG et R. GEIGER (Ber., 103, 788, 1970), avec un deuxième amino-acide protégé de formule (III) dont on a éventuellement séparé les isomères selon une technique classique de séparation,

        HA - CO₂CH₂C₆H₅   (III)


dans laquelle A a la même signification que dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (IV) :
Figure imgb0008
dans laquelle R'₁, R₂, R'₂ et A ont la même signification que précédemment,
dont on déprotège la fonction acide par hydrogénation catalytique ou saponification, pour conduire au composé de formule (V) :
Figure imgb0009
dans laquelle R'₁, R₂, R'₂ et A ont la même signification que précédemment,
que l'on met en réaction avec du N-hydroxysuccinimide en présence de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide en milieu anhydre, pour conduire au composé de formule (VI) :
Figure imgb0010
dans laquelle R'₁, R₂, R'₂ et A ont la même signification que précédemment et Suc représente un radical succinimido,
que l'on met en réaction en milieu basique avec un composé de formule (VII) :
Figure imgb0011
dans laquelle :
R'₃ représente le groupement Br-(CH₂)m- dans lequel m a la même signification que dans la formule (I),
R'₄ et R'₅ représente chacun un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
   ou
Figure imgb0012
   forme un ester boronique de pinanediol,
pour conduire au composé de formule (VIII) :
Figure imgb0013
dans laquelle R'₁, R₂, R'₂, R'₃, A, R'₄ et R'₅ ont la même signification que précédemment, que l'on fait réagir avec de la thiourée éventuellement substituée ou un composé permettant d'accéder au dérivé aminé convenablement substitué,
pour conduire au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I),
Figure imgb0014
dans laquelle R'₁, R₂, R₃, R'₂, A, R'₄, R'₅, R et m ont la même signification que précédemment,
composé de formule (I/a) dont on déprotège, si on le souhaite, la fonction amine terminale et que l'on transforme, en milieu inerte, à l'aide de trichlorure de bore, en acide boronique de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgb0015
dans laquelle R₁, R₂, R'₂, A et R₃ ont la même signification que dans la formule (I),
composé de formule (I/a) ou (I/b) :
  • que l'on purifie éventuellement selon une technique classique de purification,
  • dont on sépare, si on le souhaite, les énantiomères selon une technique classique de séparation

et que l'on transforme, le cas échéant, en ses sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable.The invention also relates to the process for the preparation of the derivatives of formula (I) characterized in that a protected amino acid of formula (II) is reacted, from which the isomers have optionally been separated by a conventional separation technique:
Figure imgb0007
in which :
R'₁
represents a linear or branched acyl (C₁-C₆), benzyl, linear or branched alkoxycarbonyl (C alk-C₆), benzyloxycarbonyl or phenoxycarbonyl group,
R₂ and R'₂
have the same meaning as in formula (I),

which is reacted according to the peptide coupling technique described by W. KONIG and R. GEIGER ( Ber ., 103 , 788, 1970), with a second protected amino acid of formula (III) from which the isomers according to a conventional separation technique,

HA - CO₂CH₂C₆H₅ (III)


in which A has the same meaning as in formula (I), to lead to the compound of formula (IV):
Figure imgb0008
in which R'₁, R₂, R'₂ and A have the same meaning as before,
whose acid function is deprotected by catalytic hydrogenation or saponification, to yield the compound of formula (V):
Figure imgb0009
in which R'₁, R₂, R'₂ and A have the same meaning as before,
which is reacted with N-hydroxysuccinimide in the presence of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide in an anhydrous medium, to yield the compound of formula (VI):
Figure imgb0010
in which R'₁, R₂, R'₂ and A have the same meaning as before and Suc represents a succinimido radical,
which is reacted in basic medium with a compound of formula (VII):
Figure imgb0011
in which :
R'₃ represents the group Br- (CH₂) m - in which m has the same meaning as in formula (I),
R'₄ and R'₅ each represents a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
or
Figure imgb0012
forms a boronic ester of pinanediol,
to lead to the compound of formula (VIII):
Figure imgb0013
in which R'₁, R₂, R'₂, R'₃, A, R'₄ and R'₅ have the same meaning as above, which is reacted with optionally substituted thiourea or a compound allowing access the appropriately substituted amino derivative,
to lead to the compound of formula (I / a), special case of the compounds of formula (I),
Figure imgb0014
in which R'₁, R₂, R₃, R'₂, A, R'₄, R'₅, R and m have the same meaning as before,
compound of formula (I / a) which is deprotected, if desired, the terminal amine function and which is transformed, in an inert medium, using boron trichloride, into boronic acid of formula (I / b ), special case of the compounds of formula (I):
Figure imgb0015
in which R₁, R₂, R'₂, A and R₃ have the same meaning as in formula (I),
compound of formula (I / a) or (I / b):
  • which is optionally purified using a conventional purification technique,
  • from which, if desired, the enantiomers are separated according to a conventional separation technique

and which, if necessary, is converted into its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base.

Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique, trifluoroacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléique, citrique, ascorbique, méthane sulfonique, camphorique, oxalique, etc...Among the pharmaceutically acceptable acids, non-limiting mention may be made of hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, phosphonic, acetic, trifluoroacetic, lactic, pyruvic, malonic, succinic, glutaric, fumaric, tartaric, maleic, citric, ascorbic, methane sulfonic acids. camphoric, oxalic, etc ...

Parmi les bases pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, le bicarbonate de sodium, etc...Among the pharmaceutically acceptable bases, non-limiting mention may be made of sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium bicarbonate, etc.

Les composés de formule (VII) peuvent être obtenus à partir du composé de formule (IX) obtenu selon le procédé décrit par M.W. RATHKE et coll. (J. Organomet.. Chem., 122, 145-149, 1976) :

Figure imgb0016

dans laquelle R'₄ et R'₅ sont tels que définis plus haut,
que l'on fait réagir sur un organomagnésien de formule (X) :

        R'₃MgCl   (X)


   dans laquelle R'₃ a la même signification que précédemment,
pour conduire au composé de formule (XI) :
Figure imgb0017
   dans laquelle R'₃, R'₄ et R'₅ sont tels que définis précédemment, que l'on met en réaction avec le 1,1,1,3,3,3-hexaméthyldisilazane (HMDS) en présence de n-butyllithium pour conduire, après traitement en milieu acide, au composé de formule (VII).The compounds of formula (VII) can be obtained from the compound of formula (IX) obtained according to the method described by MW RATHKE et al. (J. Organomet .. Chem., 122 , 145-149, 1976):
Figure imgb0016
in which R'₄ and R'₅ are as defined above,
which are reacted on an organomagnesium of formula (X):

R'₃MgCl (X)


in which R'₃ has the same meaning as before,
to lead to the compound of formula (XI):
Figure imgb0017
in which R'₃, R'₄ and R'₅ are as defined above, which are reacted with 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazane (HMDS) in the presence of n-butyllithium to lead, after treatment in an acid medium, to the compound of formula (VII).

Le composé de formule (XI) peut également être obtenu selon le procédé décrit par D.S. MATTESON et coll. (Organometallics, 3, 1284-1288, 1984) et W. RATHKE et coll. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990).The compound of formula (XI) can also be obtained according to the method described by DS MATTESON et al. (Organometallics, 3 , 1284-1288, 1984) and W. RATHKE et al. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990).

Les composés de la présente invention, outre le fait qu'ils soient nouveaux, présentent des propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes.The compounds of the present invention, in addition to the fact that they are new, exhibit particularly advantageous pharmacological properties.

Ce sont de puissants inhibiteurs de trypsine-like serine proteases qui présentent une importante selectivité vis-à-vis de la thrombine par rapport à d'autres serine proteases de la coagulation. Ils possèdent d'autre part une meilleure activité par voie orale que le composé de référence DUP 714.These are potent inhibitors of trypsin-like serine proteases which exhibit significant selectivity towards thrombin compared to other coagulation serine proteases. They also have better oral activity than the reference compound DUP 714.

Ces propriétés les rendent donc utiles dans le traitement des angines stables ou non, des maladies d'origine thrombotique et/ou donnant lieu à des complications thrombotiques ainsi que dans le traitement ou la prévention de l'infarctus du myocarde et des thromboses veineuses ou artérielles.These properties therefore make them useful in the treatment of angina, stable or not, of diseases of thrombotic origin and / or giving rise to thrombotic complications, as well as in the treatment or prevention of myocardial infarction and of venous or arterial thromboses. .

Ils peuvent également être utilisés en association thérapeutique avec un thrombolytique.They can also be used in therapeutic association with a thrombolytic.

L'invention s'étend aussi aux compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (I) avec un ou plusieurs excipients inertes, non toxiques et appropriés. Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues pourront être présentées sous diverses formes, les plus avantageuses étant les comprimés, les dragées, les gélules, suppositoires, suspensions buvables, etc...The invention also extends to pharmaceutical compositions containing as active principle at least one compound of formula (I) with one or more inert, non-toxic and suitable excipients. The pharmaceutical compositions thus obtained can be presented in various forms, the most advantageous being tablets, dragees, capsules, suppositories, oral suspensions, etc.

La posologie utile est adaptable selon la nature et la sévérité de l'affection, la voie d'administration ainsi que selon l'âge et le poids du patient. Cette posologie varie de 1 à 500 mg par jour en une ou plusieurs prises.The useful dosage is adaptable according to the nature and severity of the disease, the route of administration as well as according to the age and weight of the patient. This dosage varies from 1 to 500 mg per day in one or more doses.

Les exemples suivants illustrent l'invention mais ne la limitent en aucune façon.The following examples illustrate the invention but do not limit it in any way.

Les produits de départ utilisés sont des produits de départ connus ou préparés selon des modes opératoires connus.The starting materials used are known starting materials or prepared according to known procedures.

La préparation A conduit à un intermédiaire de synthèse utile dans la préparation des composés de l'invention.Preparation A leads to a synthetic intermediate useful in the preparation of the compounds of the invention.

Les structures des composés décrits dans les exemples et celles de leurs intermédiaires ont été confirmées par les techniques spectroscopiques usuelles.The structures of the compounds described in the examples and those of their intermediates were confirmed by the usual spectroscopic techniques.

Préparation APreparation A : (R)-1-Amino-4-bromobutylboronate de (+)α-pinanediol, chlorhydrate: (R) -1-Amino-4-bromobutylboronate of (+) α-pinanediol, hydrochloride

Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit par C. KETTNER et coll. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990) par réaction du bromure d'allyle sur le catécholborane, suivie d'une transestérification avec du (+)α-pinanediol puis d'une réaction d'homologation en présence de dichlorométhyllithium et enfin de la réaction avec de l'hexaméthyl-disilazane.
Point de fusion : 160°C
Pouvoir rotatoire : [α]D²⁵ = + 16,5° (c = 1 %, éthanol) Microanalyse élémentaire : C % H % N % Cl % calculé 45,88 7,15 3,82 9,67 trouvé 45,82 7,09 4,13 9,85 This compound was obtained according to the method described by C. KETTNER et al. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990) by reaction of allyl bromide on catecholborane, followed by transesterification with (+) α-pinanediol then a reaction of approval in the presence of dichloromethyllithium and finally of the reaction with hexamethyl-disilazane.
Melting point : 160 ° C
Rotatory power : [α] D ²⁵ = + 16.5 ° (c = 1%, ethanol) Elementary microanalysis : VS % H% NOT % Cl% calculated 45.88 7.15 3.82 9.67 find 45.82 7.09 4.13 9.85

Les abréviations utilisées dans les exemples sont les suivantes :

Ac
représente acétyl,
Fmoc
représente 9-fluorénylméthoxycarbonyl,
Bz
représente benzyl,
Suc
représente le groupement succinimido,

(R)Phe représente le résidu (R)-phénylalanyl,
Gly
représente le résidu glycyl,
Boc
représente t.butoxycarbonyl.
The abbreviations used in the examples are as follows:
Ac
represents acetyl,
Fmoc
represents 9-fluorenylmethoxycarbonyl,
Bz
represents benzyl,
Juice
represents the succinimido group,

(R) Phe represents the residue (R) -phenylalanyl,
Gly
represents the glycyl residue,
Boc
represents t.butoxycarbonyl.

Exemple 1Example 1 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo) butylboronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (isothiouréïdo) butylboronate de (+) α-pinanediol

Stade A : Boc-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz Stage A : Boc- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OBz

En utilisant la technique de couplage peptidique (DCC/HOBT) décrite par W.KONIG et R.GEIGER (Ber., 103, 788, 1970) et le diméthylformamide anhydre comme solvant, le produit attendu est préparé à partir de 73 mmoles de (N-cyclopentyl)Gly-OBz et de Boc-(R)Phe-OH et est purifié par chromatographie sur colonne de silice en utilisant comme éluant un mélange dichlorométhane/éthanol (97/3).
Rendement : 76 %Using the peptide coupling technique (DCC / HOBT) described by W. KONIG and R.GEIGER (Ber., 103 , 788, 1970) and anhydrous dimethylformamide as solvent, the expected product is prepared from 73 mmol of (N-cyclopentyl) Gly-OBz and Boc- (R) Phe-OH and is purified by chromatography on a silica column using a dichloromethane / ethanol mixture as eluent (97/3 ).
Efficiency : 76%

Stade B : H-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz Stage B : H- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OBz

Le produit obtenu au stade précédent est déprotégé par dissolution de 31 mmoles dans 150 ml d'acétate d'éthyle anhydre refroidi dans un bain eau-glace en réalisant un barbotage d'acide chlorhydrique gaz pendant une heure. Après retour à température ambiante et agitation pendant une heure, le mélange est évaporé. Le résidu est repris à l'éther et à nouveau évaporé.
Rendement : 99 %The product obtained in the preceding stage is deprotected by dissolving 31 mmol in 150 ml of anhydrous ethyl acetate cooled in an ice-water bath by bubbling hydrochloric acid gas for one hour. After returning to room temperature and stirring for one hour, the mixture is evaporated. The residue is taken up in ether and again evaporated.
Efficiency : 99%

Stade C : Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz Stage C : Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OBz

5 mmoles du composé obtenu au stade précédent dans un mélange contenant 10 ml de dioxane, 5 ml d'eau, 24 ml d'anhydride acétique et 25 mmoles de bicarbonate de sodium sont agitées pendant 3 heures à température ambiante. Après évaporation, le résidu est repris par un mélange eau/acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'eau, puis par une solution saturée de chlorure de sodium. Après séchage et évaporation, on obtient le produit attendu.
Rendement : 89 %5 mmol of the compound obtained in the preceding stage in a mixture containing 10 ml of dioxane, 5 ml of water, 24 ml of acetic anhydride and 25 mmol of sodium bicarbonate are stirred for 3 hours at room temperature. After evaporation, the residue is taken up in a water / ethyl acetate mixture. The organic phase is washed with water, then with a saturated solution of sodium chloride. After drying and evaporation, the expected product is obtained.
Efficiency : 89%

Stade D : Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OH Stage D : Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OH

5 mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 25 ml de méthanol sont hydrogénées sous une pression d'hydrogène de 4 kg pendant 12 h en présence de 150 mg de palladium/C à 10 % anhydre. Après filtration du catalyseur, le produit attendu est obtenu après évaporation du solvant.5 mmol of the product obtained in the preceding stage in 25 ml of methanol are hydrogenated under a hydrogen pressure of 4 kg for 12 h in the presence of 150 mg of anhydrous palladium / C at 10%. After filtration of the catalyst, the expected product is obtained after evaporation of the solvent.

Stade E : Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OSuc Stage E : Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OSuc

A 4,46 mmoles de N-hydroxysuccinimide dans 50 ml de dichlorométhane anhydre, sont ajoutées 4,46 mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 20 ml de dichlorométhane anhydre puis 4,46 mmoles de dicyclohexylcarbodiimide dissous dans du dichlorométhane. L'ensemble est agité 12 heures à température ambiante. Après filtration de la dicyclohexylurée formée, le produit attendu est obtenu après évaporation.To 4.46 mmol of N-hydroxysuccinimide in 50 ml of anhydrous dichloromethane are added 4.46 mmol of the product obtained in the preceding stage in 20 ml of anhydrous dichloromethane and then 4.46 mmol of dicyclohexylcarbodiimide dissolved in dichloromethane. The whole is stirred for 12 hours at room temperature. After filtration of the dicyclohexylurea formed, the expected product is obtained after evaporation.

Stade F : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-bromobutylboronate de (+)α-pinanediol Stage F : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4-bromobutylboronate from (+) α-pinanediol

4 mmoles du composé obtenu dans la préparation A dans 10 ml de dichlorométhane anhydre et 4 mmoles du composé obtenu au stade précédent sont placées sous atmosphère d'argon à -20°C. 56 ml de triéthylamine sont alors ajoutés goutte à goutte et l'ensemble est maintenu 30 minutes à -20°C. Après retour à température ambiante, le mélange est agité une nuit sous atmosphère d'argon. Après reprise par de l'acétate d'éthyle, lavage à l'eau, au bicarbonate de sodium, à l'eau, à l'acide chlorhydrique 0,2N et enfin à l'eau, la phase organique est séchée et évaporée. Le produit attendu est obtenu après purification sur résine "Sephadex®".
Rendement : 90 %4 mmol of the compound obtained in preparation A in 10 ml of anhydrous dichloromethane and 4 mmol of the compound obtained in the preceding stage are placed under an argon atmosphere at -20 ° C. 56 ml of triethylamine are then added dropwise and the whole is maintained for 30 minutes at -20 ° C. After returning to ambient temperature, the mixture is stirred overnight under an argon atmosphere. After taking up in ethyl acetate, washing with water, sodium bicarbonate, water, 0.2N hydrochloric acid and finally with water, the organic phase is dried and evaporated. The expected product is obtained after purification on "Sephadex®" resin.
Efficiency : 90%

Stade G : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo) butylboronate de (+)α-pinanediol Stage G : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (isothioureido) butylboronate of (+) α-pinanediol

2,4 mmoles du composé obtenu au stade précédent et 7,3 mmoles de thiourée dans 6 ml d'éthanol sont agitées 60 heures à température ambiante. Après évaporation du solvant, le produit attendu est obtenu après purification par passage sur résine "Sephadex®" en utilisant le méthanol comme éluant.
Rendement : 85 %2.4 mmol of the compound obtained in the preceding stage and 7.3 mmol of thiourea in 6 ml of ethanol are stirred for 60 hours at room temperature. After evaporation of the solvent, the expected product is obtained after purification by passage over "Sephadex®" resin using methanol as eluent.
Efficiency : 85%

Exemple 2Example 2 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cydopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo)butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cydopentyl) Gly] amino} -4- (isothioureido) butyl boronic, acetate

2 mmoles du composé obtenu dans l'exemple 1 dans 25 ml de dichlorométhane anhydre sont refroidies à -78°C sous atmosphère d'argon. 8 mmoles de trichlorure de bore sont alors additionnées goutte à goutte en 30 minutes. La température est amenée à 0°C et l'ensemble agité 30 minutes. 10 ml d'eau glacée sont alors ajoutés et après 15 minutes d'agitation, le mélange est amené à température ambiante. La phase organique est décantée, extraite par 10 ml d'un mélange eau/acide acétique (90/10). La phase aqueuse restante est lavée à l'éther et les phases aqueuses réunies sont évaporées. Le résidu est purifié sur Bio-gel en utilisant comme éluant un mélange eau/acide acétique (90/10) et conduit au produit attendu qui est lyophilisé. L'analyse physicochimique du produit est compatible avec la structure attendue.
Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 5612 mmol of the compound obtained in Example 1 in 25 ml of anhydrous dichloromethane are cooled to -78 ° C under an argon atmosphere. 8 mmol of boron trichloride are then added dropwise over 30 minutes. The temperature is brought to 0 ° C. and the whole stirred for 30 minutes. 10 ml of ice water are then added and after 15 minutes of stirring, the mixture is brought to room temperature. The organic phase is decanted, extracted with 10 ml of a water / acetic acid mixture (90/10). The remaining aqueous phase is washed with ether and the combined aqueous phases are evaporated. The residue is purified on Bio-gel using a water / acetic acid mixture (90/10) as eluent and leads to the expected product which is lyophilized. The physicochemical analysis of the product is compatible with the expected structure.
Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 561

Exemple 3Example 3 : 1-(R)-{[Ac-(R,S)Phe-(N-cyclohexyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo)butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R, S) Phe- (N-cyclohexyl) Gly] amino} -4- (isothioureido) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en remplaçant au stade A la (N-cyclopentyl)Gly-OBz par la (N-cyclohexyl)Gly-OBz et la Boc-(R)Phe-OH par la Boc-(R,S)Phe-OH.The expected product is obtained according to the process described in Example 1, replacing (N-cyclopentyl) Gly-OBz in stage A with (N-cyclohexyl) Gly-OBz and Boc- (R) Phe-OH with Boc- (R, S) Phe-OH.

Exemple 4 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R,S)Phe-(N-cyclohexyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo) butylboronique, acétate Example 4 : Acid 1- (R) - { [Ac- (R, S) Phe- (N-cyclohexyl) Gly] amino } -4- (isothiouréïdo) butylboronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 3.
Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 576The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 3.
Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 576

Exemple 5 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclohexyl)Glylamino}-4-(isothiouréïdo)butyl boronate de (+)α-pinanediol Example 5 : 1- (R) - { [Ac- (R) Phe- (N-cyclohexyl) Glylamino } -4- (isothiouréïdo) butyl boronate de (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en remplaçant au stade A la (N-cyclopentyl)Gly-OBz par la (N-cyclohexyl)Gly-OBz.The expected product is obtained according to the method described in Example 1, replacing in step A the (N-cyclopentyl) Gly-OBz with the (N-cyclohexyl) Gly-OBz.

Exemple 6Example 6 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclohexyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo)butylboronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclohexyl) Gly] amino} -4- (isothioureido) butylboronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 5.
Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 576The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 5.
Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 576

Exemple 7 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Glylamino}-4-(1N-méthylguanidino) butyl boronate de (+)α-pinanediol Example 7 : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Glylamino } -4- (1N-methylguanidino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Stades A à F : Ces stades sont identiques aux stades A à F de l'exemple 1. Stages A to F : These stages are identical to stages A to F of Example 1.

Stade G : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-azidobutyl boronate de (+)α-pinanediol Stage G : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4-azidobutyl boronate of (+) α-pinanediol

Stade H : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-aminobutyl boronate de (+)α-pinanediol Stage H : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4-aminobutyl boronate from (+) α-pinanediol

Les produits attendus aux stades G et H sont obtenus selon les procédés décrits dans le brevet EP 615978.The products expected in stages G and H are obtained according to the methods described in patent EP 615978.

Stade I : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(N-méthylamino)butyl boronate de (+)α-pinanediol, benzène sulfonate Stage I : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (N-methylamino) butyl boronate of (+) α-pinanediol, benzene sulfonate

A 1 mmole du composé obtenu au stade précédent dans 20 ml d'éthanol anhydre sont ajoutés 5,7 g de tamis moléculaire 3Å et 3,75 ml d'une solution aqueuse de formaldéhyde à 40 %. L'ensemble est agité une nuit à température ambiante. Après filtration, 1 mmole d'acide benzène sulfonique est ajoutée aux phases éthanoliques et l'ensemble est hydrogéné en présence de 100 mg de Pd/C à 10 % comme catalyseur pendant une nuit à température ambiante et pression atmosphérique. Le produit attendu est obtenu après filtration du catalyseur et purification sur résine séphadex®.To 1 mmol of the compound obtained in the preceding stage in 20 ml of anhydrous ethanol are added 5.7 g of 3Å molecular sieve and 3.75 ml of a 40% aqueous formaldehyde solution. The whole is stirred overnight at room temperature. After filtration, 1 mmol of benzene sulfonic acid is added to the ethanolic phases and the whole is hydrogenated in the presence of 100 mg of Pd / C at 10% as catalyst overnight at room temperature and atmospheric pressure. The expected product is obtained after filtration of the catalyst and purification on Sephadex® resin.

Stade J : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronate de (+)α-pinanediol Stage J : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu par réaction du composé décrit au stade précédent avec du cyanamide selon le procédé décrit dans l'exemple 2 du brevet EP 615978.The expected product is obtained by reaction of the compound described in the preceding stage with cyanamide according to the process described in Example 2 of patent EP 615978.

Exemple 8 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronique, acétate EXAMPLE 8 Acid 1- (R) - {[ Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino } -4- (1N-methylguanidino) butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 7.
Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 559The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 7.
Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 559

Exemple 9Example 9 :1-(R){[Ac-(R)Phe-(N-cyclohexyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino) butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) {[Ac- (R) Phe- (N-cyclohexyl) Gly] amino} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 7 en utilisant comme produit de départ la (N-cyclohexyl)Gly-OBz.The expected product is obtained according to the process described in Example 7 using as starting material (N-cyclohexyl) Gly-OBz.

Exemple 10 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclohexyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronique, acétate Example 10 Acid 1- (R) - { [Ac- (R) Phe- (N-cyclohexyl) Gly] amino } -4- (1N-methylguanidino) butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 9.
Spectre de masse : FAB⁺ : [I⁺] : [M+H]⁺ : m/z = 516The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 9.
Mass spectrum : FAB⁺: [I⁺]: [M + H] ⁺: m / z = 516

Exemple 11Example 11 : 1-(R)-{[Ac-(R)(3-amino)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amimo}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R) (3-amino) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amimo} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Stade A : (R,S) (3-Nitro)Phe-OH, chlorhydrate Stage A : (R, S) (3-Nitro) Phe-OH, hydrochloride

Le chlorhydrate de 3-nitrophénylalanine est obtenu en faisant réagir le bromure de 3-nitrobenzyle avec l'acétamidomalonate d'éthyle en milieu éthanol anhydre puis en hydrolysant le malonate de diéthyle formé par de l'acide chlorhydrique 6N en présence d'acide acétique.3-nitrophenylalanine hydrochloride is obtained by reacting 3-nitrobenzyl bromide with ethyl acetamidomalonate in anhydrous ethanol medium then by hydrolyzing the diethyl malonate formed by 6N hydrochloric acid in the presence of acetic acid.

Stade B : Fmoc-(R)(3-nitro)Phe-OH Stage B : Fmoc- (R) (3-nitro) Phe-OH

A 4 mmoles du composé obtenu au stade précédent dissoutes dans 14,4 ml d'une solution aqueuse de carbonate de sodium à 10 % sont ajoutées après refroidissement 4 mmoles de Fmoc-Cl. Après retour à température ambiante, l'ensemble est agité une nuit puis versé sur 250 ml d'eau. La phase aqueuse est lavée à l'éther et acidifiée par de l'acide chlorhydrique concentré jusqu'à pH 1. Le produit attendu sous forme racémique est filtré, séché et les isomères sont séparés par HPLC sur colonne préparative DAICEL OD en utilisant comme éluant un mélange heptane/isopropanol/acide trifluoroacétique (650/350/0,5).4 mmol of Fmoc-Cl are added to 4 mmol of the compound obtained in the preceding stage dissolved in 14.4 ml of an aqueous 10% sodium carbonate solution. After returning to ambient temperature, the whole is stirred overnight and then poured into 250 ml of water. The aqueous phase is washed with ether and acidified with concentrated hydrochloric acid to pH 1. The expected product in racemic form is filtered, dried and the isomers are separated by HPLC on a DAICEL OD preparative column using as eluent a heptane / isopropanol / trifluoroacetic acid mixture (650/350 / 0.5).

Stade C : (R)(3-Nitro)Phe-OH Stage C : (R) (3-Nitro) Phe-OH

Le produit obtenu au stade précédent est déprotégé en milieu dioxane en présence de pipéridine.The product obtained in the previous stage is deprotected in dioxane medium in the presence of piperidine.

Stade D : Boc-(R)(3-nitro)Phe-OH Stage D : Boc- (R) (3-nitro) Phe-OH

Le produit obtenu au stade précédent est protégé classiquement en présence de di.t.butylcarbonate.The product obtained in the previous stage is conventionally protected in the presence of di.t.butylcarbonate.

Stade E : Boc-(R)(3-nitro)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz Stage E : Boc- (R) (3-nitro) Phe- (N-cyclopentyl) Gly-OBz

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit au stade A de l'exemple 1 à partir du produit obtenu au stade précédent.The expected product is obtained according to the process described in stage A of Example 1 from the product obtained in the preceding stage.

Stades F à M : Les produits attendus à ces stades sont obtenus selon les procédés décrits aux stades B à J de l'exemple 7. Stages F to M : The products expected at these stages are obtained according to the methods described in stages B to J of Example 7.

Exemple 12Example 12 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)(3-amino)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) (3-amino) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 11.
Spectre de masse : FAB⁺ : [I⁺] : [M+M]⁺ : m/z = 517The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 11.
Mass spectrum : FAB⁺: [I⁺]: [M + M] ⁺: m / z = 517

Exemple 13Example 13 : 1-(R)-{[Morpholinosulfonyl-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Morpholinosulfonyl- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 7 en remplaçant au stade A la Boc-(R)Phe-OH par la morpholinosulfonyl-(R)-Phe-OH décrite dans J. Med. Chem. (Vol. 34, n° 7, p. 1937, 1991).The expected product is obtained according to the process described in Example 7 by replacing, in stage A, Boc- (R) Phe-OH with morpholinosulfonyl- (R) -Phe-OH described in J. Med. Chem. (Vol. 34, No. 7, p. 1937, 1991).

Exemple 14Example 14 : Acide 1-(R)-{[Morpholinosulfonyl-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Morpholinosulfonyl- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 13.The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 13.

Exemple 15Example 15 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(formimidoylamino)butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (formimidoylamino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Stades A à H : Ces stades sont identiques aux stades A à H de l'exemple 7.Stages A to H: These stages are identical to stages A to H of Example 7.

Stade I : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(formimidoylamino)butyl boronate de (+)α-pinanediol Stage I : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (formimidoylamino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu en faisant réagir le chlorhydrate d'éthyl formimidate sur le produit obtenu au stade précédent selon le procédé décrit dans le brevet PCT/US94/04058.The expected product is obtained by reacting ethyl formimidate hydrochloride on the product obtained in the preceding stage according to the process described in patent PCT / US94 / 04058.

Exemple 16Example 16 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(formimidoylamino)butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (formimidoylamino) butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 15.
Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 544The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 15.
Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 544

Exemple 17Example 17 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(N-méthyl-N-formimidoylamino)butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (N-methyl-N-formimidoylamino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Stades A à I : Ces stades sont identiques aux stades A à I de l'exemple 7.Stages A to I: These stages are identical to stages A to I of Example 7.

Stade J : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(N-méthyl-N-formimidoylamino)butyl boronate de (+)α-pinanediol Stage J : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (N-methyl-N-formimidoylamino) butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit au stade I de l'exemple 15 à partir du composé décrit au stade précédent.The expected product is obtained according to the method described in stage I of example 15 starting from the compound described in the preceding stage.

Exemple 18Example 18 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(formimidoyl amino)butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (formimidoyl amino) butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple A.The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example A.

Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 545 Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 545

Exemple 19Example 19 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-[(imidazol-2-yl)amino] butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4 - [(imidazol-2-yl) amino] butyl boronate of (+) α-pinanediol

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en remplaçant au stade G la thiourée par le 1-trityl-2-aminoimidazole et en réalisant ensuite une hydrolyse acide.The expected product is obtained according to the method described in Example 1, replacing thiourea in stage G with 1-trityl-2-aminoimidazole and then carrying out acid hydrolysis.

Exemple 20Example 20 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-[(imidazol-2-yl)amino}butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4 - [(imidazol-2-yl) amino} butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 19.The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 19.

Spectre de masse : FAB⁺ : [M+glycérol-2H₂O+H⁺] : m/z = 555 Mass spectrum : FAB⁺: [M + glycerol-2H₂O + H⁺]: m / z = 555

Exemple 21Example 21 : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-[(1-méthylimidazol-2-yl)thio]butyl boronate de (+)α-pinanediol: 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4 - [(1-methylimidazol-2-yl) thio] butyl boronate of (+) α-pinanediol

Stades A à F : Ces stades sont identiques aux stades A à F de l'exemple 1. Stages A to F : These stages are identical to stages A to F of Example 1.

Stade G : 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-[(1-méthylimidazol-2-yl)thio]butyl boronate de (+)α-pinanediol Stage G : 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4 - [(1-methylimidazol-2-yl) thio] butyl boronate from (+) α- pinanediol

A une solution refroidie à 0°C contenant 2 mmoles d'hydrure de sodium et 2 mmoles de 1-méthyl-2-mercaptoimidazole dans 10 ml de diméthylformamide sont ajoutées 2 mmoles du dérivé bromé obtenu au stade F. Après retour à température ambiante, addition d'eau, extraction à l'acétate d'éthyle, on obtient, après séchage et évaporation le produit attendu.To a solution cooled to 0 ° C. containing 2 mmol of sodium hydride and 2 mmol of 1-methyl-2-mercaptoimidazole in 10 ml of dimethylformamide are added 2 mmol of the brominated derivative obtained in stage F. After returning to ambient temperature, addition of water, extraction with ethyl acetate, the expected product is obtained after drying and evaporation.

Exemple 22Example 22 : Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cydopentyl)Gly]amino}-4-[(1-méthylimidazol-2-yl)thio]butyl boronique, acétate: Acid 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cydopentyl) Gly] amino} -4 - [(1-methylimidazol-2-yl) thio] butyl boronic, acetate

Le produit attendu est obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2 à partir du composé décrit dans l'exemple 21.The expected product is obtained according to the process described in Example 2 from the compound described in Example 21.

Etude pharmacologique des composés de l'inventionPharmacological study of the compounds of the invention Exemple 23Example 23 : Activité anti-coagulante, mesure des temps de thrombine et de prothrombine chez l'homme: Anticoagulant activity, measurement of thrombin and prothrombin times in humans

En présence d'une quantité standard de thrombine ou de thromboplastine calcique, un plasma normal coagule en un temps défini et constant, appelé respectivement temps de thrombine (TT) et temps de prothrombine (TP). Au pli du coude, le sang veineux est recueilli dans une solution de citrate trisodique (0.109 M). Un plasma pauvre en plaquettes est obtenu par centrifugation des échantillons sanguins (3000 g, 15 minutes).In the presence of a standard amount of thrombin or calcium thromboplastin, normal plasma coagulates in a defined and constant time, called respectively thrombin time (TT) and prothrombin time (TP). At the bend of the elbow, the venous blood is collected in a solution of trisodium citrate (0.109 M). Platelet-poor plasma is obtained by centrifuging blood samples (3000 g, 15 minutes).

Le temps de thrombine est réalisé avec le réactif Thrombin Prest (Stago) et le temps de prothrombine avec le réactif Néoplastine (Stago). Ils sont déterminés automatiquement en utilisant un coagulomètre ST4 (Stago). L'antagoniste ou le solvant (10 µl) est additionné au plasma (90 µl), puis incubé 2 minutes à 37°C. 100 µl de thrombine ou 200 µl de thromboplastine calcique sont ajoutés en déclenchant le chronomètre. Dans ces conditions, le TT obtenu dans le plasma témoin est de l'ordre de 20 secondes chez l'homme, et le TP de l'ordre de 12 secondes. L'activité d'un inhibiteur est évaluée par sa capacité à prolonger ces temps par rapport au témoin. Dans ces conditions, les composés de l'invention permettent une prolongation du temps de thrombine et du temps de prothrombine de 50 fois et plus. L'effet des inhibiteurs est mesuré et la concentration qui multiplie par 2 le temps de coagulation (CTT₂ pour le temps de thrombine et CTP₂ pour le temps de prothrombine) est déterminée.The thrombin time is carried out with the Thrombin Perst reagent (Stago) and the prothrombin time with the Neoplastin reagent (Stago). They are determined automatically using an ST4 coagulometer (Stago). The antagonist or the solvent (10 μl) is added to the plasma (90 μl), then incubated for 2 minutes at 37 ° C. 100 µl of thrombin or 200 µl of thromboplastin calcium are added by starting the stopwatch. Under these conditions, the TT obtained in the control plasma is of the order of 20 seconds in humans, and the TP of the order of 12 seconds. The activity of an inhibitor is evaluated by its capacity to prolong these times compared to the control. Under these conditions, the compounds of the invention allow an extension of the thrombin time and the prothrombin time by 50 times and more. The effect of the inhibitors is measured and the concentration which doubles the clotting time (CTT₂ for the thrombin time and CTP₂ for the prothrombin time) is determined.

Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant : Produits CTP₂ (µM) CTT₂ (µM) Exemple 2 2.29 0.20 Exemple 4 2.44 0.34 Exemple 6 2.92 0.29 Exemple 8 3.06 0.30 Réf. : DUP 714 2.63 0.18 The results are shown in the following table: Products CTP₂ (µM) CTT₂ (µM) Example 2 2.29 0.20 Example 4 2.44 0.34 Example 6 2.92 0.29 Example 8 3.06 0.30 Ref. : DUP 714 2.63 0.18

Exemple 24Example 24 : Inhibition de la thrombine et des sérines protéases de la coagulation et la fibrinolyse: Inhibition of thrombin and serine proteases from coagulation and fibrinolysis

Pour évaluer in vitro l'activité inhibitrice des produits boro-Arginiques sur la thrombine humaine (Sigma, activité spécifique 3220 UNIH/mg), le fibrinogène humain purifié (6 µM, Enzyme Research Laboratories) a été ajouté à une quantité donnée de thrombine (0.7 nM) préalablement incubée avec ou sans l'inhibiteur à tester (20°C, 10 minutes).To evaluate the inhibitory activity of boro-Arginic products on human thrombin in vitro (Sigma, specific activity 3220 UNIH / mg), purified human fibrinogen (6 μM, Enzyme Research Laboratories) was added to a given quantity of thrombin ( 0.7 nM) previously incubated with or without the inhibitor to be tested (20 ° C, 10 minutes).

Pour évaluer in vitro la sélectivité de ces produits vis-à-vis de différentes sérines protéases de la fibrinolyse et la coagulation, le même protocole a été appliqué à la plasmine humaine purifiée (2 nM, Stago), à la protéine C activée humaine purifiée (2 nM, Stago), au facteur X activé humain purifié (2 nM, Calbiochem), à l'activateur tissulaire du plasminnogène (2 nM, Calbiochem), à l'urokinase humaine purifiée (2 nM, Choay), à la kallikreine plasmatique humaine purifiée (2 nM, Calbiochem) en utilisant pour substrats différents peptides paranitroanilidés : <Glu-Phe-Lys-pNA (0.50 mM, S 2403, Kabi) pour la plasmine, N-Cbo-Arg-Gly-Arg-pNA (0.39 mM, S 2765, Kabi) pour le facteur Xa, <Glu-Pro-Arg-pNA (0.52 mM, S 2366, Kabi) pour la protéine C activée, H-D-Pro-Phe-Arg-pNA (0.45 mM, S 2302, Kabi) pour la kallikreine, H-(D)-Ile-Pro-Arg-pNA (0.48 mM, S 2288, Kabi) pour l'activateur tissulaire du plasminogène et <Glu-Gly-Arg-pNA (0.56 mM, S 2444, Kabi) pour l'urokinase.To assess in vitro the selectivity of these products vis-à-vis different serine proteases of fibrinolysis and coagulation, the same protocol was applied to purified human plasmin (2 nM, Stago), to purified human activated protein C (2 nM, Stago), purified human activated factor X (2 nM, Calbiochem), tissue plasminnogen activator (2 nM, Calbiochem), purified human urokinase (2 nM, Choay), kallikrein purified human plasma (2 nM, Calbiochem) using different paranitroanilid peptides as substrates: <Glu-Phe-Lys-pNA (0.50 mM, S 2403, Kabi) for plasmin, N-Cbo-Arg-Gly-Arg-pNA ( 0.39 mM, S 2765, Kabi) for factor Xa, <Glu-Pro-Arg-pNA (0.52 mM, S 2366, Kabi) for activated protein C, HD-Pro-Phe-Arg-pNA (0.45 mM, S 2302, Kabi) for kallikrein, H- (D) -Ile-Pro-Arg-pNA (0.48 mM, S 2288, Kabi) for tissue plasminogen activator and <Glu-Gly-Arg-pNA (0.56 mM, S 2444, Kabi) for the urook inase.

Inhibiteurs, enzymes et substrats sont dilués dans le même tampon (tampon phosphate 0.01 mM, pH 7.4, contenant 0.12 M de chlorure de sodium et 0.05 % de sérum albumine bovine) puis distribués dans une microplaque en polystyrène sous un volume de 50 µl.Inhibitors, enzymes and substrates are diluted in the same buffer (0.01 mM phosphate buffer, pH 7.4, containing 0.12 M of sodium chloride and 0.05% bovine serum albumin) then distributed in a polystyrene microplate in a volume of 50 μl.

La fibrine formée par la thrombine ou le paranitronilide libérée par l'action de la sérine protéase sont mesurés spectrophotométriquement à 405 nm après respectivement 5 ou 30 minutes de réaction à 20°C.The fibrin formed by thrombin or paranitronilide released by the action of the serine protease are measured spectrophotometrically at 405 nm after respectively 5 or 30 minutes of reaction at 20 ° C.

Le tableau ci-dessous donne la concentration de composé inhibant 50 % de l'activité enzymatique (CI50) en présence du produit de référence (DUP 714) et du composé de l'exemple 2 par rapport au contrôle sans produit. Les résultats démontrent que le composé de l'exemple 2 inhibe aussi puissamment la thrombine que le DUP 714 mais inhibe beaucoup moins les autres sérine-protéases de la coagulation et de la fibrinolyse que le DUP 714. Les composés des exemples 2. 6 et 8 sont donc des inhibiteurs beaucoup plus sélectifs de la thrombine que le DUP 714.

Figure imgb0018
The table below gives the concentration of compound inhibiting 50% of the enzymatic activity (IC50) in the presence of the reference product (DUP 714) and the compound of Example 2 compared to the control without product. The results demonstrate that the compound of Example 2 inhibits thrombin as powerfully as DUP 714 but much less inhibits the other serine proteases of coagulation and fibrinolysis than DUP 714. The compounds of Examples 2. 6 and 8 are therefore much more selective inhibitors of thrombin than DUP 714 .
Figure imgb0018

Exemple 25Example 25 : Mesure de l'activité anti-coagulante ex vivo.: Measurement of anti-coagulant activity ex vivo.

   Administration des produits par voie intraveineuse (i.v.) chez le rat Intravenous (iv) product administration in rats

Les rats OFA, à jeun ou non, sont anesthésiés au pentobarbital (60 mg/kg, i.p.). L'artère carotide et la veine jugulaire sont dégagées et cathétérisées. Les cathéters sont purgés avec du sérum physiologique citraté (1/40). Après installation des cathéters, un prélèvement de 1.5 cm³ de sang artériel est effectué sur citrate 0.109 M (1/9).

  • 30 minutes après, le produit à tester est administré sous un volume de 1 ml en i.v.
  • Des prélèvements artériels (1.5 ml) sont alors effectués à 1 minute 30, 5, 15, 30 et 60 minutes.
  • A chaque prélèvement, 1.5 ml de sérum physiologique citraté est réinjecté à l'animal via la carotide.
  • Les tubes de sang sont centrifugés 5 minutes à 3000 g (préparation du plasma).
  • 100 µl de plasma sont incubés avec 100 µl de céphaline activée. Le temps d'apparition du phénomène de coagulation est mesuré, après addition de 100 µl de calcium.
  • Les composés de l'invention, testés à la dose de 0.25 mg/kg augmentent de façon durable le temps de céphaline activée (TCA). Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant et montrent les indices d'augmentation du temps de coagulation.
Figure imgb0019
 OFA rats, fasting or not, are anesthetized with pentobarbital (60 mg / kg, ip). The carotid artery and the jugular vein are cleared and catheterized. The catheters are purged with citrated physiological serum (1/40). After installation of the catheters, a 1.5 cm³ sample of arterial blood is taken on 0.109 M citrate (1/9).
  • 30 minutes later, the product to be tested is administered in a volume of 1 ml in iv
  • Arterial samples (1.5 ml) are then taken at 1 minute 30, 5, 15, 30 and 60 minutes.
  • With each sample, 1.5 ml of citrated physiological saline is reinjected into the animal via the carotid.
  • The blood tubes are centrifuged for 5 minutes at 3000 g (preparation of the plasma).
  • 100 µl of plasma are incubated with 100 µl of activated cephalin. The time of appearance of the coagulation phenomenon is measured, after addition of 100 μl of calcium.
  • The compounds of the invention, tested at a dose of 0.25 mg / kg durably increase the time for activated partial thromboplastin (TCA). The results are reproduced in the following table and show the indices of increase in the coagulation time.
Figure imgb0019

Exemple 26Example 26 : Mesure de l'activité anti-coagulante ex vivo.: Measurement of anti-coagulant activity ex vivo.

   Administration des produits par voie intraveineuse (i.v.) chez le chien. Administration of intravenous (iv) products in dogs.

Les chiens à jeun sont anesthésiés au pentobarbital (30 mg/kg, i.v.). Une artère fémorale et une veine saphène sont dégagées et cathétérisées. Les chiens sont laissés en respiration libre. Les procédures de prélèvements sanguins sont identiques à celles décrites précédemment chez le rat dans l'exemple 5. Les composés de l'invention, testés à la dose de 0.5 mg/kg augmentent de façon durable le temps de céphaline activée (TCA). L'augmentation du TCA notée avec les composés de l'invention est toujours significative 60 minutes après leur administration et n'est pas accompagnée par une thrombopénie (voir tableau). Produit (dose) Temps (minutes) Indice d'augmentation TCA Variation du nombre de plaquettes (% du contrôle) Exemple 2 (0.5 mg/kg) 1.5 9.6 -3 5 3.6 -2 15 1.9 0 30 1.4 0 60 1.1 0 Fasting dogs are anesthetized with pentobarbital (30 mg / kg, iv). A femoral artery and a saphenous vein are cleared and catheterized. Dogs are left breathing freely. The blood sampling procedures are identical to those described above in rats in Example 5. The compounds of the invention, tested at a dose of 0.5 mg / kg permanently increase the time for activated partial thromboplastin (TCA). The increase in TCA noted with the compounds of the invention is always significant 60 minutes after their administration and is not accompanied by thrombocytopenia (see table). Product (dose) Time (minutes) TCA increase index Variation in number of platelets (% of control) Example 2 (0.5 mg / kg) 1.5 9.6 -3 5 3.6 -2 15 1.9 0 30 1.4 0 60 1.1 0

Le DUP 714 à 0.25 mg/kg a provoqué une augmentation du TCA comparable à celle obtenue avec l'exemple 2 à 0.5 mg/kg. Cet effet du DUP 714 était accompagné d'une thrombopénie de 20%.DUP 714 at 0.25 mg / kg caused an increase in TCA comparable to that obtained with Example 2 at 0.5 mg / kg. This effect of DUP 714 was accompanied by 20% thrombocytopenia.

Exemple 27Example 27 : Mesure de l'activité anti-coagulante ex vivo.: Measurement of anti-coagulant activity ex vivo.

   Administration des produits par voie orale chez le chien. Administration of oral products in dogs.

Après prélèvement d'un échantillon de sang, les produits sont administrés par voie orale. A des temps définis après le traitement, le sang est prélevé par voie intraveineuse. Le plasma est préparé, les plaquettes sont comptées et le test de temps de thrombine est pratiqué.After taking a blood sample, the products are administered orally. At defined times after treatment, blood is drawn intravenously. The plasma is prepared, the platelets are counted and the thrombin time test is performed.

Le tableau démontre que le produit de l'exemple 2 à 2.5 mg/kg a provoqué des augmentations du TT sans modification du nombre de plaquettes. L'activité est durable (4 heures).

Figure imgb0020
The table shows that the product of Example 2 at 2.5 mg / kg caused increases in TT without modifying the number of platelets. The activity is sustainable (4 hours).
Figure imgb0020

Exemple 28Example 28 : Composition pharmaceutique: Pharmaceutical composition

Formule de préparation pour 1000 comprimés dosés à 10 mg :Preparation formula for 1000 tablets dosed at 10 mg: Composé de l'exemple 2Composed of Example 2 10 g10 g HydroxypropylcelluloseHydroxypropylcellulose 2 g2 g Amidon de bléWheat starch 10 g10 g LactoseLactose 100 g100g Stéarate de magnésiumMagnesium stearate 3 g3 g TalcTalc 3 g3 g

Claims (12)

Composés de formule (I) :
Figure imgb0021
 dans laquelle : R₁   représente un atome d'hydrogène, un groupement acyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, alkoxycarbonyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle, phénoxycarbonyle, alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié (substitué ou non par un ou plusieurs groupements phényle, carboxy, alkoxycarbonyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, phénoxycarbonyle, benzyloxycarbonyle ou morpholinosulfonyle) ou un groupement R₆SO₂- dans lequel R₆ représente un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, naphtyle, phényle, benzyle, morpholine (chacun des groupements naphtyle, phényle ou benzyle étant lui-même éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, alkoxy (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, trihalogénométhyle, amino, alkylamino ou dialkylamino), R₂   représente un atome d'hydrogène ou un groupement : - phényle, - benzyle (substitué ou non sur le noyau phényle par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, alkoxy (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, hydroxy, amino, nitro ou carboxy), - thiénylméthyle, - (pyridinyl)méthyle, - diphénylméthyle, - fluorényle, - naphtylméthyle, - benzocyclobutyle, - (dicyclopropylméthyl)méthyle, - indanyle, - ou, cycloalkyl (C₃-C₇)méthyle, R'₂   représente un atome d'hydrogène ou un groupement benzyle ou bien R₂ et R'₂   représentent ensemble C₆H₅-CH=, R₃   représente l'un quelconque des groupements suivants :
Figure imgb0022
Figure imgb0023
 dans lesquels :
1 ≦ m ≦ 6,
R représente un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
R' représente un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
X représente un atome de soufre ou un groupement amino, R₄ et R₅   représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
ou
Figure imgb0024
 forme un ester boronique de pinanediol, A   représente le groupement suivant:
Figure imgb0025
 dans lequel :
n représente 1 ou 2,
A₂ représente un groupement phényle, indanyle, cycloalkyle (C₃-C₇) (substitué ou non par un ou plusieurs groupements alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié) cycloalkényle (C₃-C₇), bicyclo[2.1.1]hexyl, bicyclo[2.2.1]heptyl ou un groupement :
Figure imgb0026
 dans lequel
X et Y différents représentent un atome d'oxygène, de soufre, un groupement NH ou CH₂-, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.Compounds of formula (I):
Figure imgb0021
 in which : R₁ represents a hydrogen atom, a linear or branched acyl (C₁-C₆) group, linear or branched (C₁-C₆) alkoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, phenoxycarbonyl, linear or branched (C₁-C₆) alkyl (substituted or not by one or several phenyl, carboxy, alkoxycarbonyl (C₁-C₆) linear or branched, phenoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl or morpholinosulfonyl) groups or an R₆SO₂- group in which R₆ represents a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group, naphthyl, phenyl, benzyl, morpholine (each of the naphthyl, phenyl or benzyl groups itself being optionally substituted by one or more halogen atoms or linear or branched (C₁-C₆) alkyl, linear or branched (C₁-C₆) alkoxy, trihalomethyl, amino, alkylamino or dialkylamino), R₂ represents a hydrogen atom or a group: - phenyl, - benzyl (substituted or not substituted on the phenyl ring by one or more halogen atoms or linear or branched (C₁-C₆) alkyl, linear or branched (C₁-C₆) alkoxy, hydroxy, amino, nitro or carboxy), - thienylmethyl, - (pyridinyl) methyl, - diphenylmethyl, - fluorenyl, - naphthylmethyl, - benzocyclobutyl, - (dicyclopropylmethyl) methyl, - indanyl, - or, cycloalkyl (C₃-C₇) methyl, R'₂ represents a hydrogen atom or a benzyl group or R₂ and R'₂ together represent C₆H₅-CH =, R₃ represents any one of the following groups:
Figure imgb0022
Figure imgb0023
 wherein :
1 ≦ m ≦ 6,
R represents a hydrogen atom or a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
R ′ represents a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
X represents a sulfur atom or an amino group, R₄ and R₅ each represent a hydrogen atom or a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
or
Figure imgb0024
 forms a boronic ester of pinanediol, A represents the following grouping:
Figure imgb0025
 in which :
n represents 1 or 2,
A₂ represents a phenyl, indanyl, cycloalkyl (C₃-C₇) group (substituted or not by one or more linear or branched (C₁-C₆) alkyl groups) cycloalkenyl (C₃-C₇), bicyclo [2.1.1] hexyl, bicyclo [ 2.2.1] heptyl or a group:
Figure imgb0026
 in which
X and Y different represent an oxygen or sulfur atom, an NH or CH₂- group, their enantiomers, diastereoisomers and epimers as well as their addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R₁ représente un groupement acétyl, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.Compounds of formula (I) according to claim 1 in which R₁ represents an acetyl group, their enantiomers, diastereoisomers and epimers as well as their addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R₂ représente un groupement benzyl, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.Compounds of formula (I) according to claim 1 in which R₂ represents a benzyl group, their enantiomers, diastereoisomers and epimers as well as their addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle A représente un groupement
Figure imgb0027
 tels que défini dans la revendication 1, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.Compounds of formula (I) according to claim 1 in which A represents a group
Figure imgb0027
 as defined in claim 1, their enantiomers, diastereoisomers and epimers as well as their addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R₃ représente un groupement 3-(isothiouréïdo)propyle, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.Compounds of formula (I) according to claim 1 in which R₃ represents a 3- (isothioureido) propyl group, their enantiomers, diastereoisomers and epimers as well as their addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composé de formule (I) selon la revendication 1 qui est l'acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo)butyl boronique, Ac représentant acétyl, (R)Phe représentant (R)-phénylalanyl, Gly représentant glycyl, ses isomères ainsi que ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.Compound of formula (I) according to claim 1 which is 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (isothioureido) butyl boronic acid, Ac representing acetyl, (R) Phe representing (R) -phenylalanyl, Gly representing glycyl, its isomers and its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composé de formule (I) selon la revendication 1 qui est l'acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclohexyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo)butylboronique, ses isomères ainsi que ses sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable.Compound of formula (I) according to claim 1 which is 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclohexyl) Gly] amino} -4- (isothioureido) butylboronic acid, its isomers as well as its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Composé de formule (I) selon la revendication 1 qui est l'acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(1N-méthylguanidino)butyl boronique, ses isomères ainsi que ses sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable.Compound of formula (I) according to claim 1 which is 1- (R) - {[Ac- (R) Phe- (N-cyclopentyl) Gly] amino} -4- (1N-methylguanidino) butyl boronic acid, its isomers as well as its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir un amino-acide protégé de formule (II), dont on a éventuellement séparé les isomères par une technique classique de séparation :
Figure imgb0028
 dans laquelle : R'₁   représente un groupement acyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, et    R₂   et R'₂ ont la même signification que dans la formule (I), que l'on fait réagir selon une technique de couplage peptidique avec un deuxième amino-acide protégé de formule (III) dont on a éventuellement séparé les isomères selon une technique classique de séparation,

        HA-CO₂CH₂C₆H₅   (III)

dans laquelle A a la même signification que dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (IV) :
Figure imgb0029
 dans laquelle R'₁, R₂, R'₂ et A ont la même signification que précédemment, dont on déprotège la fonction acide par hydrogénation catalytique ou saponification,
pour conduire au composé de formule (V) :
Figure imgb0030
 dans laquelle R'₁, R₂, R'₂ et A ont la même signification que précédemment,
que l'on met en réaction avec du N-hydroxysuccinimide en présence de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide en milieu anhydre, pour conduire au composé de formule (VI) :
Figure imgb0031
 dans laquelle R'₁, R₂, R'₂ et A ont la même signification que précédemment et Suc représente un radical succinimido,
que l'on met en réaction en milieu basique avec un composé de formule (VII) :
Figure imgb0032
 dans laquelle : R'₃   représente le groupement Br-(CH₂)m- dans lequel m a la même signification que dans la formule (I), R'₄   et R'₅ représente chacun un groupement alkyle (C₁-C₆) linéaire ou ramifié,
ou
Figure imgb0033
 forme un ester boronique de pinanediol, pour conduire au composé de formule (VIII) :
Figure imgb0034
 dans laquelle R'₁, R₂, R'₂, R'₃, A, R'₄ et R'₅ ont la même signification que précédemment,
que l'on fait réagir avec de la thiourée éventuellement substituée ou un composé permettant d'accéder au dérivé aminé convenablement substitué,
pour conduire au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I),
Figure imgb0035
 dans laquelle R'₁, R₂, R₃, R'₂, A, R'₄, R'₅, R et m ont la même signification que précédemment,
composé de formule (I/a) dont on déprotège, si on le souhaite, la fonction amine terminale et que l'on transforme, en milieu inerte, à l'aide de trichlorure de bore, en acide boronique de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgb0036
 dans laquelle R₁, R₂, R'₂, A et R₃ ont la même signification que dans la formule (I),
composé de formule (I/a) ou (I/b) : - que l'on purifie éventuellement selon une technique classique de purification, - dont on sépare, si on le souhaite, les énantiomères selon une technique classique de séparation et que l'on transforme, le cas échéant, en ses sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable.Process for the preparation of the compounds of formula (I) according to claim 1, characterized in that a protected amino acid of formula (II) is reacted, from which the isomers have optionally been separated by a conventional separation technique:
Figure imgb0028
 in which : R'₁ represents a linear or branched acyl (C₁-C₆), benzyl, linear or branched alkoxycarbonyl (C₁-C₆), benzyloxycarbonyl or phenoxycarbonyl group, and R₂ and R'₂ have the same meaning as in formula (I), which is reacted according to a peptide coupling technique with a second protected amino acid of formula (III) from which the isomers have optionally been separated according to a conventional separation technique,

HA-CO₂CH₂C₆H₅ (III)

in which A has the same meaning as in formula (I), to lead to the compound of formula (IV):
Figure imgb0029
 in which R'₁, R₂, R'₂ and A have the same meaning as above, whose acid function is deprotected by catalytic hydrogenation or saponification,
to lead to the compound of formula (V):
Figure imgb0030
 in which R'₁, R₂, R'₂ and A have the same meaning as before,
which is reacted with N-hydroxysuccinimide in the presence of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide in an anhydrous medium, to yield the compound of formula (VI):
Figure imgb0031
 in which R'₁, R₂, R'₂ and A have the same meaning as before and Suc represents a succinimido radical,
which is reacted in basic medium with a compound of formula (VII):
Figure imgb0032
 in which : R'₃ represents the group Br- (CH₂) m - in which m has the same meaning as in formula (I), R'₄ and R'₅ each represents a linear or branched (C₁-C₆) alkyl group,
or
Figure imgb0033
 forms a boronic ester of pinanediol, to lead to the compound of formula (VIII):
Figure imgb0034
 in which R'₁, R₂, R'₂, R'₃, A, R'₄ and R'₅ have the same meaning as before,
which is reacted with optionally substituted thiourea or a compound allowing access to the suitably substituted amino derivative,
to lead to the compound of formula (I / a), special case of the compounds of formula (I),
Figure imgb0035
 in which R'₁, R₂, R₃, R'₂, A, R'₄, R'₅, R and m have the same meaning as before,
compound of formula (I / a) which is deprotected, if desired, the terminal amine function and which is transformed, in an inert medium, using boron trichloride, into boronic acid of formula (I / b ), special case of the compounds of formula (I):
Figure imgb0036
 in which R₁, R₂, R'₂, A and R₃ have the same meaning as in formula (I),
compound of formula (I / a) or (I / b): - which is optionally purified using a conventional purification technique, - from which the enantiomers are separated, if desired, according to a conventional separation technique and which, if necessary, is converted into its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base. Compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif au moins un composé selon l'une quelconques des revendications 1 à 8, seul ou en combinaison avec un ou plusieurs véhicules inertes, non toxiques pharmaceutiquement acceptables.Pharmaceutical compositions containing as active ingredient at least one compound according to any one of Claims 1 to 8, alone or in combination with one or more inert, non-toxic pharmaceutically acceptable vehicles. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10 utiles en tant qu'inhibiteurs de trypsine-like serine proteases.Pharmaceutical compositions according to claim 10 useful as inhibitors of trypsin-like serine proteases. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10 utiles en tant qu'inhibiteurs de thrombine.Pharmaceutical compositions according to claim 10 useful as thrombin inhibitors.
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ZA (1) ZA955176B (en)

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6100234A (en) * 1997-05-07 2000-08-08 Tufts University Treatment of HIV
US6133256A (en) * 1997-04-14 2000-10-17 Cor Therapeutics Inc Selective factor Xa inhibitors
US6194435B1 (en) 1996-10-11 2001-02-27 Cor Therapeutics, Inc. Lactams as selective factor Xa inhibitors
US6204268B1 (en) 1997-04-14 2001-03-20 Cor Therapeutics, Inc Selective factor Xa inhibitors
US6218382B1 (en) 1997-08-11 2001-04-17 Cor Therapeutics, Inc Selective factor Xa inhibitors
US6228854B1 (en) 1997-08-11 2001-05-08 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6258597B1 (en) 1997-09-29 2001-07-10 Point Therapeutics, Inc. Stimulation of hematopoietic cells in vitro
US6262047B1 (en) 1996-10-11 2001-07-17 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6300314B1 (en) 1998-05-04 2001-10-09 Point Therapeutics, Inc. Hematopoietic stimulation
US6333321B1 (en) 1997-08-11 2001-12-25 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6369080B2 (en) 1996-10-11 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6369063B1 (en) 1997-04-14 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6525076B1 (en) 1996-10-11 2003-02-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6692753B2 (en) 1997-05-07 2004-02-17 Trustees Of Tufts College Potentiation of the immune response
US6825169B1 (en) 1991-10-22 2004-11-30 Trustees Of Tufts College Inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase type IV
US6875737B1 (en) 1996-06-28 2005-04-05 Trustees Of Tufts College Multivalent compounds for crosslinking receptors and uses thereof
US6890904B1 (en) 1999-05-25 2005-05-10 Point Therapeutics, Inc. Anti-tumor agents

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
CA2143533A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-05 Kenneth D. Kurz Antithrombotic agents
US5885967A (en) * 1994-03-04 1999-03-23 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5602101A (en) * 1994-03-04 1997-02-11 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
ZA951618B (en) * 1994-03-04 1996-08-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5914319A (en) * 1995-02-27 1999-06-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5811402A (en) * 1996-03-22 1998-09-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic diamides
PT1399468E (en) * 2001-05-30 2006-05-31 Novartis Ag 2 - {[N- (2-AMINO-3- (HETEROARIL OR ARIL) PROPIONYL) -AMINOACYL] -AMINO} -ALQUILBORONIC ACID DERIVATIVES
US20060084592A1 (en) * 2002-09-09 2006-04-20 Trigen Limited Peptide boronic acid inhibitors
MXPA05002662A (en) 2002-09-09 2005-09-20 Trigen Ltd Multivalent metal salts of boronic acids for treating thrombosis.
US20050282757A1 (en) * 2002-09-09 2005-12-22 Trigen Limited Peptide boronic acid compounds useful in anticoagulation
US20050176651A1 (en) * 2002-09-09 2005-08-11 Trigen Limited Peptide boronic acids useful in making salts thereof
US20050119226A1 (en) * 2003-09-09 2005-06-02 Trigen Limited Methods for synthesizing organoboronic compounds and products thereof
US7371729B2 (en) * 2002-09-09 2008-05-13 Trigen Limited Boronic acid salts useful in parenteral formulations
GB0405272D0 (en) * 2004-03-09 2004-04-21 Trigen Ltd Compounds
GB0507577D0 (en) 2005-04-14 2005-05-18 Novartis Ag Organic compounds

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0293881A2 (en) * 1987-06-05 1988-12-07 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
EP0471651A2 (en) * 1990-08-13 1992-02-19 Sandoz Ltd. Peptide boronic acid derivatives having protease inhibiting activity
WO1992007869A1 (en) * 1990-11-06 1992-05-14 Thrombosis Research Institute Inhibitors and substrates of thrombin
EP0615978A1 (en) * 1993-02-24 1994-09-21 Adir Et Compagnie Peptide derivatives of the boronic acid having protease inhibiting activity, process for their production and pharmaceutical compositions comprising them
WO1994025049A1 (en) * 1993-04-27 1994-11-10 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Amidino and guanidino substituted boronic acid inhibitors of trypsin-like enzymes
WO1995009634A1 (en) * 1993-10-07 1995-04-13 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Electrophilic peptide analogs as inhibitors of trypsin-like enzymes

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5288707A (en) * 1990-08-13 1994-02-22 Sandoz Ltd. Borolysine peptidomimetics

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0293881A2 (en) * 1987-06-05 1988-12-07 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
EP0471651A2 (en) * 1990-08-13 1992-02-19 Sandoz Ltd. Peptide boronic acid derivatives having protease inhibiting activity
WO1992007869A1 (en) * 1990-11-06 1992-05-14 Thrombosis Research Institute Inhibitors and substrates of thrombin
EP0615978A1 (en) * 1993-02-24 1994-09-21 Adir Et Compagnie Peptide derivatives of the boronic acid having protease inhibiting activity, process for their production and pharmaceutical compositions comprising them
WO1994025049A1 (en) * 1993-04-27 1994-11-10 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Amidino and guanidino substituted boronic acid inhibitors of trypsin-like enzymes
WO1995009634A1 (en) * 1993-10-07 1995-04-13 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Electrophilic peptide analogs as inhibitors of trypsin-like enzymes

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELGENDY, SAID ET AL: "New peptide boronic acid inhibitors of thrombin", TETRAHEDRON LETT. (1992), 33(29), 4209-12 CODEN: TELEAY;ISSN: 0040-4039 *
LIM, MARGUERITA S. L. ET AL: "The solution conformation of (D)Phe-Pro-containing peptides: implications on the activity of Ac-(D)Phe-Pro-boroArg-OH, a potent thrombin inhibitor", J. MED. CHEM. (1993), 36(13), 1831-8 CODEN: JMCMAR;ISSN: 0022-2623 *

Cited By (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7230074B2 (en) 1991-10-22 2007-06-12 Trustees Of Tufts College Inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase type IV
US6825169B1 (en) 1991-10-22 2004-11-30 Trustees Of Tufts College Inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase type IV
US6875737B1 (en) 1996-06-28 2005-04-05 Trustees Of Tufts College Multivalent compounds for crosslinking receptors and uses thereof
US6262047B1 (en) 1996-10-11 2001-07-17 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6369080B2 (en) 1996-10-11 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6194435B1 (en) 1996-10-11 2001-02-27 Cor Therapeutics, Inc. Lactams as selective factor Xa inhibitors
US6525076B1 (en) 1996-10-11 2003-02-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6204268B1 (en) 1997-04-14 2001-03-20 Cor Therapeutics, Inc Selective factor Xa inhibitors
US6133256A (en) * 1997-04-14 2000-10-17 Cor Therapeutics Inc Selective factor Xa inhibitors
US6369063B1 (en) 1997-04-14 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6100234A (en) * 1997-05-07 2000-08-08 Tufts University Treatment of HIV
US6692753B2 (en) 1997-05-07 2004-02-17 Trustees Of Tufts College Potentiation of the immune response
US6503882B2 (en) 1997-05-07 2003-01-07 Trustees Of Tufts College Treatment of HIV
US6228854B1 (en) 1997-08-11 2001-05-08 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6333321B1 (en) 1997-08-11 2001-12-25 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6218382B1 (en) 1997-08-11 2001-04-17 Cor Therapeutics, Inc Selective factor Xa inhibitors
US6703238B2 (en) 1997-09-29 2004-03-09 Point Therapeutics, Inc. Methods for expanding antigen-specific T cells
US6258597B1 (en) 1997-09-29 2001-07-10 Point Therapeutics, Inc. Stimulation of hematopoietic cells in vitro
US6770628B2 (en) 1998-05-04 2004-08-03 Point Therapeutics, Inc. Hematopoietic stimulation
US6300314B1 (en) 1998-05-04 2001-10-09 Point Therapeutics, Inc. Hematopoietic stimulation
US7067489B2 (en) 1998-05-04 2006-06-27 Point Therapeutics, Inc. Hematopoietic stimulation
US6890904B1 (en) 1999-05-25 2005-05-10 Point Therapeutics, Inc. Anti-tumor agents
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