EP0472711A1 - Procede de preparation d'une solution concentree de facteur viii - Google Patents

Procede de preparation d'une solution concentree de facteur viii

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EP0472711A1
EP0472711A1 EP19910906628 EP91906628A EP0472711A1 EP 0472711 A1 EP0472711 A1 EP 0472711A1 EP 19910906628 EP19910906628 EP 19910906628 EP 91906628 A EP91906628 A EP 91906628A EP 0472711 A1 EP0472711 A1 EP 0472711A1
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EP
European Patent Office
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factor viii
solution
precipitation
supernatant
cryoprecipite
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EP19910906628
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Inventor
Abdessatar Chtourou
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FONDATION NATIONALE DE TRANSFUSION SANGUINE
Original Assignee
FONDATION NATIONALE DE TRANSFUSION SANGUINE
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)

Definitions

  • the subject of the invention is a process for the preparation of a concentrated solution of Factor VIII of intermediate purity from a cryoprecipite.
  • Factor VIII of intermediate purity is meant a Factor VIII whose specific activity is around 1 U / mg.
  • 10 VIII obtained is therefore in the form of a precipitate and has a specific activity generally greater than 2 U / mg.
  • the fibrinogen and fibronectin are precipitated by the addition of sulfated polysaccharide (SPS), more particularly highly concentrated heparin. This high amount can reach 80 U / ml, and is preferably from 70 to 140 U / ml.
  • SPS sulfated polysaccharide
  • Factor VIII obtained after precipitation in a single step with a high concentration of heparin is not reproducible from a standard cryoprecipite as used by the Applicant.
  • the invention aims in particular to remedy these drawbacks.
  • the invention aims to provide, unlike known methods, a concentrated solution of Factor VIII of intermediate purity. It therefore aims "more particularly to provide, from a cryoprecipite, a Factor VIII solution whose specific activity is relatively weak, that is to say of the order of 1 U / mg, and this with a very satisfactory operating yield, of the order of 75 to 90%.
  • the invention also aims to provide a Factor VIII solution well suited to the subsequent implementation of other purification steps, in particular by ion exchange chromatography, or by gel filtration.
  • the inventors have found that this object is achieved when a cryoprecipite is subjected to a double precipitation controlled as regards the quantities of precipitating agents, as regards temperature and as regards pH, so as to eliminate undesirable proteins in two stages. , and to recover the VIN Factor with a high yield in the form of a clarified solution.
  • the subject of the invention is a process for the preparation of a concentrated solution of Factor VIII of intermediate purity which comprises the following stages: a) a cryoprecipite is solubilized; b) the solution obtained is subjected to a first precipitation by adding a sulfated polysaccharide (SPS) under temperature and concentration conditions capable of preventing the precipitation of factor VIII, and essentially allowing the precipitation of fibrinogen and fibronectin while leaving factor VIII in solution.
  • SPS sulfated polysaccharide
  • step b) is preferably carried out with a pH of between 6.7 and 7.3.
  • a small amount of sulfated polysaccharide is combined during the first precipitation, making it possible to eliminate mainly fibrinogen and fibronectin, and a second precipitation in the presence of aluminum hydroxide gel which makes it possible to eliminate the majority of the dependent vitamin K factors and of the other protein contaminants.
  • SPS sulfated polysaccharides
  • a polysulfated mucopolysaccharide pentosan polysulfate, chondroitin sulfate, dextran sulfate, heparin.
  • heparin Preferably use heparin.
  • step a) a cryoprecipite is added to
  • the pH is adjusted to 7.1 in step b).
  • the SPS is added in an amount between 5 and 40 U / ml, preferably from 5 to 25 U / ml of solution, and the temperature is included between 5 and 25 ° C.
  • the SPS is added in an amount equal to 24 U / ml and the temperature is 20 ° C, however it is possible to use temperatures between 10 to 16 ° C.
  • the pH will preferably be adjusted to 6.
  • the method is characterized by obtaining a factor VIII whose specific activity is lower at 1.5 IU / mg.
  • the concentrated solution thus obtained can be easily stored, for example to be used then directly. It will then undergo the conventional treatments of subsequent concentration by uitra-filtration, lyophilization and conditioning.
  • factor VIII solution may be subjected to a viral inactivation step.
  • a viral inactivation step can for example be carried out by the implementation of the process designated under the name SD process and described for example in US patents 4,481,189 and 4,540,573. The detailed implementation of the process according to the invention will be better understood with the aid of the following examples illustrated by FIGS. 1 and 2, which represent:
  • Figure 1 a diagram showing the relationship between the level of residual proteins in solution (mg / ml) and the pH value during the second precipitation.
  • FIG. 2 a diagram showing the evolution of the residual heparin level (mg / ml) as a function of the heparin concentration (U / ml) _
  • EXAMPLE 1 Preparation of the Cryoprecipitate Human blood collected is centrifuged in the presence of sodium citrate, in order to eliminate the cell fraction. The plasma obtained is frozen at -40 ° C in plastic bags. We then proceed in three successive stages to obtain the cryoprecipite: - plasma pre-thawing: it is gradually reheated so that its temperature drops from -40 ° C to -1 1 ° C in 8 hours;
  • the temperature of the solution obtained is maintained between 0 and 0.5 ° C;
  • the suspension is centrifuged at a temperature between 1 and 4 ° C.
  • cryoprecipite is analyzed below: the values are reported relative to 1 1 of plasma, ie 6.5 g of cryoprecipite:
  • Example 2 Preparation of a concentrated Factor VIII solution 1
  • Protocol 20 g of cryoprecipite are taken up in four times its volume by weight of a 20 mM Tris-HCl buffer at pH 7.0. The pH is then adjusted to 7.1 with 0.5 N acetic acid. Standard heparin sold by the company LEO France is then added at a concentration of 24 U / ml of solution, and the temperature of the medium is fixed at 20 ° C. To recover the supernatant, centrifugation is carried out at 4000 rpm for 15 minutes. A quantity of AL (OH). Is added to the supernatant, corresponding to 110 g / kg of starting cryoprecipite and the pH is adjusted to 6.0 with 0.5 N acetic acid.
  • AL AL
  • Test methods a) determination of the amount of Factor VIII.c: by chromogenic assay after neutralization of the excess heparin; b) determination of the total amount of protein: using reagents marketed by Biorad; c) determination of the quantity of fibrinogen: by reagents from the company Behring (simple radial immunodiffusion); d) determination of the quantity of fibronectin: by the reagents of the company Behring (simple radial immunodiffusion); e) determination of the amount of heparin: by chromogenic assay.

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Abstract

L'invention concerne un procédé de préparation d'une solution concentrée de Facteur VIII de pureté intermédiaire qui comprend les étapes suivantes: a) on solubilise un cryoprécipité; b) on soumet la solution obtenue à une première précipitation en ajoutant un polysaccharide sulfate (SPS) dans des conditions de température et de concentration aptes à prévenir la précipitation du facteur VIII, et permettant essentiellement la précipitation du fibrinogène et de la fibronectine tout en laissant le facteur VIII en solution; c) on sépare le culot du surnageant; d) on soumet le surnageant à une seconde précipitation en ajoutant un gel d'hydroxyde d'aluminium de façon à précipiter essentiellement les facteurs vitamine K dépendants et les autres contaminants protéiques tout en laissant le facteur VIII en solution; e) on sépare le culot du surnageant; f) on récupère le surnageant qui est une solution concentrée de Facteur VIII.

Description

PROCEDE DE PREPARATION D 'UNE SOLUTION
CONCENTREE DE FACTEUR VIII
L'invention a pour objet un procédé de préparation d'une solution concentrée de Facteur VIII de pureté intermédiaire à partir d'un cryoprecipite.
De nombreux procédés ont déjà été décrits, visant à préparer une forme purifiée de Facteur VIII humain, en raison de l'importance industrielle de ce facteur pour les hémophiles et surtout, de la nécessité de disposer de Facteur VIII dépourvu de contaminants, tels que les autres protéines du sang (fibrinogene, fibronectine, immunoglobulines etc.).
Il n'est pas toujours nécessaire de viser de très hauts niveaux de pureté. Dans certains cas, il est intéressant de disposer d'un concentré de pureté intermédiaire, soit pour l'utiliser tel quel dans certaines applications où il n'est pas nécessaire d'avoir du Facteur VIII de très haute pureté, soit pour l'utiliser comme produit de départ pour une ou plusieurs étapes ultérieures de purification.
On entend par Facteur VIII de pureté intermédiaire, un Facteur VIII dont l'activité spécifique est aux environs de 1 U/mg.
Des techniques de précipitation sélective des protéines contami- nantes conduisant à l'obtention de concentrés de Facteur VIII ayant une activité spécifique de 0,6 à 1 U/mg ont déjà été mises au point. On peut citer par exemple l'adsorption sur gel d'alumine, décrite dans le brevet US 170 639, mais cette technique ne permet pas une élimination suffisante des protéines indésirables. Le brevet US 3 652 530 décrit une précipitation au poiyéthylène glycol suivie d'une adsorption sur gel d'alumine, mais la présence de poiyéthylène glycol résiduel rend difficile la mise en oeuvre d'une étape ultérieure d'ultrafiltration.
Depuis 1987, le développement des techniques chromatographiques a permis la préparation de Facteur VIII hautement purifié. Cependant, la mise en oeuvre satisfaisante de ces techniques dépend nécessairement de la qualité de la matière première contenant le Facteur VIII soumise à la purification. Ainsi, un cryoprecipite standard remis en solution contient habituellement un taux de fibrinogene et de fibronectine correspondant à 80 % environ des protéines totales. A cette quantité importante de protéines, correspond une solution adhésive, ayant tendance à colmater, difficilement filtrable et donc mal adaptée aux techniques de chromatographie.
D'autre part, il est déjà connu, à partir d'un cryoprecipite, de mettre en oeuvre une étape de précipitation, notamment à l'héparine, afin d'éliminer certaines des protéines contaminantes.
On peut citer par exemple le document de brevet WO/86051 0 qui décrit la précipitation à l'héparine de protéines contaminantes à partir d'un cryoprecipite, suivie d'une précipitation finale de Facteur VIII. Le Facteur
10 VIII obtenu se trouve donc sous forme de précipité et présente une activité spécifique généralement supérieure à 2 U/mg.
Les conditions dans lesquelles le Facteur VIII est obtenu selon ce document sont les suivantes :
. On précipite le fibrinogene et la fibronectine par addition de 15 polysaccharide sulfatée (SPS), plus particulièrement de l'héparine fortement concentrée. Cette quantité élevée peut atteindre 80 U/ml, et est de préférence de 70 à 140 U/ml.
. On associe à cette forte concentration d'héparine une température supérieure à 15°C. 20 . Eventuellement, on précipite ensuite le Facteur VIII restant dans le surnageant en présence de sels forts concentrés.
Les conditions indiquées dans ce document présentent un certain nombre d'inconvénients.
Tout d'abord, on a constaté que, contrairement à ce qui est indiqué
25 dans la publication de brevet sus-mentionnée, le rendement élevé de
Facteur VIII obtenu après précipitation en une seule étape avec une forte concentration d'héparine n'est pas reproductible à partir d'un cryoprecipite standard tel qu'utilisé par la Demanderesse.
Ensuite, l'utilisation de fortes concentrations de sels pour ™ précipiter le Facteur VIII pourrait conduire à une altération de sa structure moléculaire et contribuer ainsi à la perte de rendement.
L'invention vise notamment, à remédier à ces inconvénients.
L'invention vise à fournir, à la différence des procédés connus, une solution concentrée de Facteur VIII de pureté intermédiaire. Elle vise " donc plus particulièrement à fournir, à partir d'un cryoprecipite, une solution de Facteur VIII dont l'activité spécifique est relativement faible, c'est-à-dire de l'ordre de 1 U/mg, et ce avec un rendement opératoire très satisfaisant, de l'ordre de 75 à 90 %.
L'invention vise également à fournir une solution de Facteur VIII bien adaptée à la mise en oeuvre ultérieure d'autres étapes de purification, notamment par chromatographie d'échange d'ions, ou par gel filtration.
Les inventeurs ont trouvé que ce but est atteint, lorsque l'on soumet un cryoprecipite à une double précipitation contrôlée quant aux quantités d'agents de précipitation, quant à la température et quant au pH, de façon à éliminer en deux étapes les protéines indésirables, et à récupérer le Facteur VIN avec un haut rendement sous forme de solution clarifiée.
C'est pourquoi, l'invention a pour objet un procédé de préparation d'une solution concentrée de Facteur VIII de pureté intermédiaire qui comprend les étapes suivantes : a) on solubilise un cryoprecipite ; b) on soumet la solution obtenue à une première précipitation en ajoutant un polysaccharide sulfaté (SPS) dans des conditions de température et de concentration aptes à prévenir la précipitation du facteur VIII, et permettant essentiellement la précipitation du fibrinogene et de la fibronectine tout en laissant le facteur VIII en solution. ; c) on sépare le culot du surnageant ; d) on soumet le surnageant à une seconde précipitation en ajoutant un gel d'hydroxyde d'aluminium de préférence en quantité comprise entre 100 et 200 g/kg de cryoprecipite de départ, en ajustant le pH à une valeur comprise entre 5.8 et 6.3, de façon à précipiter essentiellement les facteurs vitamine K dépendants et les autres contaminants protéiques tout en laissant le facteur VIII en solution ; e) on sépare le culot du surnageant ; f) on récupère le surnageant qui est une solution concentrée de
Facteur VIII.
Dans ce procédé, l'étape b) est de préférence effectuée avec un pH compris entre 6,7 et 7,3.
Selon le procédé préféré de l'invention, on associe une faible quantité de polysaccharide sulfaté lors de la première précipitation, permettant d'éliminer surtout le fibrinogene et la fibronectine, et une deuxième précipitation en présence du gel d'hydroxyde d'aluminium permettant d'éliminer la majorité des facteurs vitamine K dépendants et des autres contaminants protéiques.
Parmi les polysaccharides sulfatés (SPS) utilisables, on peut citer par exemple un mucopolysaccharide polysulfaté, le pentosan polysulfate, le chondroitin sulfate, le dextran sulfate, l'héparine. On utilisera de préférence l'héparine.
Suivant un mode de réalisation avantageux du procédé conforme à l'invention, pour mettre en oeuvre l'étape a), on ajoute au cryoprecipite un
10 volume de solution tampon correspondant à 4 à 8 fois le poids du cryoprecipite.
Dans ces conditions, on minimise le risque de précipitation du Facteur VIII avec le fibrinogene et la fibronectine et on favorise l'obtention d'un rendement élevé en Facteur VIII dans la solution lorsque -5 les différentes étapes du procédé ont été mises en oeuvre.
A cette fin, on peut utiliser les solutions tampons couramment employées, telles que par exemple un tampon Tris-HCl, imidazole, citrate etc.
En ce qui concerne le pH, il est préférable d'opérer le plus près 2^ possible de la neutralité pour favoriser l'action de la SPS sans risquer de précipiter le Facteur VIII. C'est pourquoi, suivant un mode de réalisation avantageux de l'invention, on ajuste le pH à 7.1 dans l'étape b).
Dans le cas où la solution concentrée de Facteur VIII finalement obtenue doit être soumise à une étape ultérieure de purification, en
2 particulier une chromatographie d'échange d'ions, il est particulièrement intéressant que la précipitation soit effectuée avec une quantité d'héparine suffisamment faible. En effet, dans ces conditions, le faible taux d'héparine résiduel dans la solution concentrée de Facteur VIII ne risque pas d'interférer avec la fixation du Facteur VIII sur le support de chromatogra-
™ phie. On pourra donc utiliser directement la solution concentrée. Dans les procédés connus qui comprennent une étape de type a), celle-ci est effectuée à température ambiante. Suivant un mode de réalisation avantageux de l'invention, à l'étape b), le SPS est ajouté en quantité comprise entre 5 et 40 U/ml, de préférence de 5 à 25 U/ml de solution, et la température est comprise entre 5 et 25°C. De façon préférée, le SPS est ajouté en quantité égale à 24 U/ml et la température est de 20°C, toutefois il est possible d'utiliser des températures comprises entre 10 à 16°C.
Enfin, en ce qui concerne l'étape d), on ajustera de préférence le pH à 6. Suivant une caractéristique supplémentaire de l'invention, le procédé est caractérisé par l'obtention d'un facteur VIII dont l'activité spécifique est inférieure à 1,5 Ul/mg.
La solution concentrée ainsi obtenue peut être facilement stockée, par exemple pour être utilisée ensuite directement. Elle subira alors les traitements classiques de concentration ultérieure par uitra-filtration, de lyophilisation et de conditionnement.
Elle pourra également servir comme matière première pour des étapes de purification ultérieure, par immunopurification, par chromato- graphie d'échange d'ions, par gel filtration, par interaction hydrophobe... Généralement, avant d'être soumise à ces étapes de purification ultérieure, la solution de Facteur VIII pourra être soumise à une étape d'inactivation virale. Une telle étape peut par exemple être réalisée par la mise en oeuvre du procédé désigné sous l'appellation procédé SD et décrit par exemple dans les brevets US 4 481 189 et 4 540 573. La mise en oeuvre détaillée du procédé conforme à l'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples suivants illustrés par les figures 1 et 2, lesquelles représentent :
- Figure 1 : un diagramme montrant la relation entre le taux de protéines résiduelles en solution (mg/ml) et la valeur du pH lors de la deuxième précipitation.
- Figure 2 : un diagramme montrant l'évolution du taux d'héparine résiduelle (mg/ml) en fonction de la concentration en héparine (U/ml)_
Exemple 1 - Préparation du cryoprecipite On centrifuge du sang humain collecté en présence de citrate de sodium, afin d'éliminer la fraction cellulaire. Le plasma obtenu est congelé à -40°C dans des poches plastiques. On procède ensuite en trois étapes successives pour obtenir le cryoprecipite : - prédécongélation du plasma : il est réchauffé progressive¬ ment de manière à ce que sa température passe de -40°C à -1 1°C en 8 heures ;
- décongélation du plasma : on élimine les poches plastiques puis on place le plasma congelé dans un broyeur pendant environ 2 minutes.
On maintient la température de la solution obtenue entre 0 et 0,5°C ;
- séparation du cryoprecipite : on centrifuge la suspension à une température comprise entre 1 et 4°C.
Le cryoprecipite est analysé ci-après : les valeurs sont rapportées par rapport à 1 1 de plasma, soit 6.5 g de cryoprecipite :
Avant précipitation à l'héparine
Exemple 2 - Préparation d'une solution concentrée de Facteur VIII 1) Protocole 20 g de cryoprecipite sont repris dans quatre fois son volume en poids d'un tampon Tris-HCl 20 mM à pH 7.0. Le pH est ensuite ajusté à 7.1 avec de l'acide acétique 0.5 N. On ajoute ensuite de l'héparine standard commercialisée par la société LEO France à une concentration de 24 U/ml de solution, et on fixe la température du milieu à 20°C. Pour récupérer le surnageant, on procède à une centrifugation à 4000 t/mn pendant 15 minutes. On ajoute au surnageant une quantité d'AL(OH)., correspondant à 110 g/kg de cryoprecipite de départ et on ajuste le pH à 6,0 avec de l'acide acétique 0.5 N. Comme précédemment, on procède à une centrifugation à 4000 t/mn pendant 15 minutes pour récupérer le surnageant. 2) Inactivation virale de la solution concentrée de Facteur VIII On ajoute 1 mM de CaCl_ dans la solution concentrée obtenue puis on ajuste le pH jusqu'à une valeur de 7 avec NaOH 0, 1 N. Ensuite, on ajoute à la solution un mélange d'inactivation virale de façon à atteindre une concentration finale de 1 % de Tween 80 et 0,3 % de TnBP (volume/vo¬ lume). La solution est incubée pendant pendant 6 heures à 24°C.
3) Méthodes d'essais a) détermination de la quantité de Facteur VIII.c : par dosage chromogénique après neutralisation de l'héparine en excès ; b) détermination de la quantité totale de protéines : à l'aide des réactifs commercialisés par Biorad ; c) détermination de la quantité de fibrinogene : par les réactifs de la société Behring (immunodiffusion radiale simple) ; d) détermination de la quantité de fibronectine : par les réactifs de la société Behring (immunodiffusion radiale simple) ; e) détermination de la quantité d'héparine : par dosage chromogénique.
On obtient les résultats suivants rapportés dans le tableau ci-après :

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation d'une solution concentrée de facteur VIII de pureté intermédiaire, comprenant les étapes suivantes : a) on solubilise un cryoprecipite, b) on soumet la solution obtenue à une première précipitation en ajoutant un polysaccharide sulfate (SPS) dans des conditions de température et de concentration aptes à prévenir la précipitation du facteur VIII, et permettant essentiellement la précipitation du fibrinogene et de la fibronectine tout en laissant le facteur VIII en solution ; c) on sépare le culot du surnageant ; d) on soumet le surnageant à une seconde précipitation en ajoutant un gel d'hydroxyde d'aluminium, de façon à précipiter essentielle¬ ment les facteurs vitamine K dépendants et les autres contaminants protéiques tout en laissant le facteur VIII en solution ; e) on sépare le culot du surnageant ; f) on récupère le surnageant qui est une solution concentrée de Facteur VIII.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le pH de l'étape b) est compris entre 6,7 et 7,3 et en ce que dans l'étape d) on ajoute l'hydroxyde d'aluminium en quantité comprise entre 100 et 200 g/kg de cryoprecipite de départ en ajustant le pH à une valeur comprise entre 5,8 et 6,3.
3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le SPS est l'héparine.
4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que pour mettre en oeuvre l'étape a), on ajoute au cryoprecipite un volume de solution tampon correspondant à 4 à 8 fois le poids du cryoprecipite.
5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que dans l'étape b) on ajuste le pH à 7.1.
6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que à l'étape b), le SPS est ajouté en quantité comprise entre 5 et 40 U/ml de solution et la température est comprise entre 5 et 25°C.
7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le SPS est ajouté en quantité égale à 24 U/ml et la température est de 20°C.
8. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que dans l'étape d) on ajuste le pH à 6.
9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que après l'étape f) on soumet le surnageant à une étape d'inactivation virale.
10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le facteur VIII obtenu a une activité spécifique inférieure à 1,5 Ul/mg.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT379510B (de) * 1983-05-20 1986-01-27 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf) -haeltigen praeparation
EP0238701B1 (fr) * 1986-03-27 1992-03-18 Octapharma AG Procédé de production d'un facteur anti-hémophilique hautement purifié
EP0343275B1 (fr) * 1988-05-27 1993-02-03 Centre Regional De Transfusion Sanguine De Lille Procédé de préparation d'un facteur antihémophilique hautement purifié exempt de virus au moyen de chromatographie

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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