EP0471820A1 - Diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid, process for their preparation and use in the synthesis of diastereoisomers 6s and 6r of reduced folates - Google Patents

Diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid, process for their preparation and use in the synthesis of diastereoisomers 6s and 6r of reduced folates

Info

Publication number
EP0471820A1
EP0471820A1 EP91905831A EP91905831A EP0471820A1 EP 0471820 A1 EP0471820 A1 EP 0471820A1 EP 91905831 A EP91905831 A EP 91905831A EP 91905831 A EP91905831 A EP 91905831A EP 0471820 A1 EP0471820 A1 EP 0471820A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
acid
formula
tetrahydrofolic
compound
salts
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP91905831A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Fabrizio Marazza
Attilio Melera
René Viterbo
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sapec Fine Chemicals SA
Original Assignee
Sapec Fine Chemicals SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sapec Fine Chemicals SA filed Critical Sapec Fine Chemicals SA
Publication of EP0471820A1 publication Critical patent/EP0471820A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
    • C07D475/02—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4
    • C07D475/04—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4 with a nitrogen atom directly attached in position 2

Definitions

  • the present invention relates to a new process for the preparation of diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid.
  • These compounds include as industrial products (i) the mixture of diastereoisomers 6P and 6Q as defined below (and probably corresponding to formulas III and respectively IV given below), in the molar ratio 6P / 6Q of approximately 7 / 3, (ii) the pure 6P diastereomer and (iii) the pure 6Q diastereomer.
  • the invention also relates to the use of said diastereoisomers 6P and 6Q in the synthesis of diastereoisomers 6S and 6R of reduced folates such as in particular 5-CHO- (6S) -THF acids,
  • ( ⁇ RS) -folinic acid 5-CHO- (6RS) -THF is generally and commonly used, with its calcium salt, as a therapeutic means of "relief” in patients subjected to anti-cancer chemotherapy based on methotrexate and as a means increasing the inhibition of thymidylate synthetase by anti-cancer agents such as 5-fluorouracil and 5-fluoro-2'-deoxyuridine.
  • Method II comprises the following steps: first (according to Example 5.1 of EP-A-0 348 641), (a) solubilizing said aforementioned complex salt, of formula • vs. -
  • a new technical solution which allows the synthesis of diastereoisomers 6R and 6S of reduced folates to meet the aforementioned needs.
  • This new technical solution differs from method II of EP-A-0 348 641 mentioned above in particular by the fact that the treatment with the anion exchange resin and then the AcOH / MeOH mixture is replaced by the reaction of 5- CHO- (6RS) -THF or [5,10- CH + - (6RS) -THF] X " with HCOOH acid at a pH in the range of 2.0 to 2.6.
  • This new technical solution leads to the production of diastereoisomerically pure compounds, defined below, of configuration 6P and 6Q and very probably corresponding to formulas III and IV respectively given below.
  • This technical solution constitutes a new source of access to reduced folates, since it allows in particular the preparation of dias- tereoisomerically pure such as (6S) - and ( ⁇ R) -folinic acids, (6S) - and (6R) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8- tetrahydrofolic, (6S) - and ( 6R) -N 5 -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolics and their salts, starting from the so-called stereoisomers of formulas III and IV.
  • a process for the preparation of a compound derived from tetrahydrofolic acid and its diastereoisomers is recommended, said process being characterized in that it comprises:
  • R represents the p-benzoyl- (L) -glutamic residue of formula:
  • A is H; and its salts, and (ii) N 5 , N 10 -methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofoli ⁇ acid of the formula
  • X " is an anion and R is defined as above; with HCOOH at a pH in the range of 2.0 to 2.6; and
  • diastereoisomer 6Q separation, from said precipitate, of a first pure diastereoisomer belonging to the series of non-natural configuration, hereinafter called diastereoisomer 6Q, and most likely corresponding to formula IV, by fractional recrystallization;
  • the dotted bond connecting the nitrogen atoms N and N ⁇ has the purpose of signaling 1st that the positive charge is delocalized on the atoms N 5 , C 11 and N 10 .
  • diastereoisomers 6Q, 6P and their mixtures in particular the aforementioned molar mixture 7/3.
  • the 6P diastereoisomer belongs to the so-called natural series in that it leads to diastereoisomers of reduced folates such as 5-CHO- (6S) -THF, 5,10-CH- (6R) -THF,, 10-CH 2 - (6R) -THF and 5-Me- (6S) -THF, and their salts.
  • the 6Q diastereoisomer belongs to the so-called unnatural series in the sense that it leads to diastereoisomers of reduced folates such as 5-CHO- (6R) -THF, ' 5,10-CH- (6S) -THF, 5 , 10-CH 2 - (6S) -THF and -Me- (6R) -THF, and their salts.
  • the use of said 6P and 6Q diastereoisomers is recommended for obtaining diastereoisomerically pure reduced folates from the natural and non-natural series.
  • the diastereoisomers according to the invention have been designated 6P and 6Q for convenience, since it has not been possible to directly determine their configuration. There are, however, serious reasons to assume that compound 6P is of configuration 6R and that compound 6Q is of configuration 6S; there are also serious reasons to think that these diastereoisomers are compounds of the orthoamide type and correspond to formulas III and IV, (even if in the current state of knowledge there would be hypotheses which do not link the Applicant). As indicated above, the 6P diastereoisomer belonging to the natural series very likely corresponds to the formula: H
  • the R or S rating changes within each series with regard to the nomenclature rules; in the series of natural configuration we pass from the diastereoisomer 6S [for example 5- CH0- (6S) -THF or 5-Me- (6S) -THF] to the diastereoisomer 6R [for example, 10-CH- (6R) -THF or 5,10-CH 2 - (6R) -THF] when the bicyclic skeleton of the pteridinyl rest becomes tricyclic.
  • the pH of the reaction medium is adjusted between 2.0 and 2.6. The adjustment of the pH within this range will advantageously be carried out by addition of NH 2 or NH 4 OH.
  • the pH of the reaction medium will be between 2.2 and 2.4 and more advantageously on the order of 2.30-2.35.
  • stage 1 ° the reaction of stage 1 ° will be carried out for at least 0.25 h, at a temperature of 40 to 65 ° C, and better still at a temperature of 45-60 ° C.
  • stage 1) according to the invention will be implemented in two different ways:
  • route (b) I> III + IV.
  • ammonia is directly incorporated into the II + H 2 O / HCOOH mixture to regulate the pH, the reaction being carried out at a temperature of 55-65 ° C, for at least 0.25 h.
  • route (b) compound I is reacted with an H 2 O / HC00H mixture at 60-65 ° C for at least 1 hour, the resulting reaction medium is cooled to 40-45 ° C, then the ammonia, the reaction then continuing at 40-45 ° C for at least 0.25 h.
  • reaction mixture gives, on cooling to RT, a crystalline precipitate of a bright yellow color which is practically insoluble in the usual solvents.
  • the crystallizations fractioned from stages 3 °) and 4 °) can be replaced by column chromatography for chiral separation.
  • the anion X ⁇ of the compound of formula II will be an appropriate anion, and may in particular be chosen from the group consisting of the ions F “ , Cl “ , Br ⁇ , I “ , NO " , I / 2SO 2" , I / 3PO4 3 “” , oxalate, p-toluenesulfonate, maleate, benzenesulfonate, methanesulfonate, trifluoroacetate, and trichloroacetate.
  • the orthoamides of formulas III and respectively IV can also be used for the preparation of the diastereoisomerically pure acids 5,10-CH2- (6R) -THF of formula VIII and respectively 5,10-CH 2 - (6S) -THF of formula X , and their salts, by conversion of III and IV into VII and respectively IX, then treatment with NaBH ⁇ in an aprotic solvent containing pyridine, then purification according to the teaching of Swiss patent application No. 02 736/89 of the Applicant:
  • the orthoamides of formulas III and respectively IV can be used for the preparation of diastereomerically pure acids 5-Me- (6S) - THF of formula XI and respectively 5-Me- (6R) -THF of formula XII, and of their salts, by conversion to VII and respectively IX, followed by reduction with NaB ⁇ CN in an aprotic solvent:
  • the salts of the diastereoisomers of natural configuration of formulas V, VIII and XI, on the one hand, and of non-natural configuration of formulas VI, X and XII, on the other hand, comprise according to the invention (i) the metal salts , especially those of alkali metals and alka- lino-earthy, such as Na, K, Ca and Mg, and (ii) the addition salts obtained with organic bases, such as in particular ethylamine, 2- (N, N-dimethylamino) ethanol, 2 - (N, N-diethylamino) ethanol, morpholine, piperidine and the like.
  • the metal salts especially those of alkali metals and alka- lino-earthy, such as Na, K, Ca and Mg
  • organic bases such as in particular ethylamine, 2- (N, N-dimethylamino) ethanol, 2 - (N, N-diethylamino
  • Recrystallization of this mixture is carried out as follows: to a mixture of 252 ml of water and 57 ml of HCOOH with stirring, at RT and under an inert atmosphere, a sufficient quantity of NH 2 OH is added to adjust the pH to 2.3; bringing the resulting mixture to the temperature of 60 ° C and then adding said mixture III / IV 96/4; shake until complete dissolution; the resulting reaction medium is then filtered hot on Btlchner, and the filtrate is left to stand at RT for 8 h and then at 4 ° C for 60 h; the brilliant yellow solid which has precipitated is isolated by filtration, washed with water and then with acetonitrile and dried under reduced pressure for 1 h at 50 ° C.
  • the resulting medium is brought to reflux for 4.5 h; 3.3 g of carbon black are added to the hot solution and the stirring is continued for 1 h while the said medium is cooled to RT.
  • 87 ml of a 2M aqueous CaCl solution are added to the fitrat and the resulting solution is slowly diluted with 3.6 liters of EtOH (94%). Said solution thus diluted is kept overnight at 0 ° C., the precipitate formed is collected by filtration, washed with EtOH (94%) then MeCOMe.
  • EtOH EtOH
  • This product has a purity of 96% by HPLC; by repeated recrystallization using H 2 0 and drying under reduced pressure at 50 ° C, 43.5 g (rende ⁇ ment: 48.5%) of pure ( ⁇ S) -folinate are obtained. Analyzes
  • This crude product is added per portion to 80 ml of water containing traces of NaOH with stirring at 0 ° C. under an inert atmosphere: during this operation the pH is maintained at approximately 9.0 by addition of NaOH IN when the time comes. 6.0 ml of a 2M aqueous MgCl solution are added to the resulting solution, which brings the pH to 8.4. The small amount of insoluble material is removed by filtration on celite. The resulting filtrate is stirred at 0 ° C while being diluted dropwise with 105 ml of acetone; after stirring for another 45 minutes at 0 ° C., the precipitate is collected by filtration, washed (twice) with acetone and dried under reduced pressure at 50 ° C for 1 h. 3.9 g of the expected magnesium salt of formula X are obtained.
  • This crude product is suspended in a mixture of 37 ml of water and 0.25 ml of 2-mercaptoethanol.
  • the resulting mixture is stirred at RT under an inert atmosphere and a sufficient amount of IN NaOH is added to obtain complete dissolution.
  • the filtrate is filtered and acidified by adding IN HCl drop by drop to reach a pH of 3.5. After stirring the resulting suspension for 1 h at 0 ° C, centrifuging, resuspending the solid first in water, then in ethanol and finally in acetone. After drying under reduced pressure at 50 ° C for 1 h, 636 mg of the expected acid of formula XI is obtained.
  • N 5 , N 10 -methylene- (6S) -5,6,7,8-tetrahydro-folic acid of formula X and its salts are diastereoisomerically pure products, belonging to the series of reduced folates of non-natural configuration, and useful in therapy. It has been found that they inhibit thymidylate synthetase and are advantageously intended for cytostatic use in therapy, in particular against cancer.
  • a diastereoisomerically pure substance chosen from the group consisting of 5,10-CH 2 - (6S) -THF acid, its non-toxic salts and their mixtures, for obtaining d 'a drug inhibiting thymidylate synthetase intended for cytostatic use in therapy, in particular against cancer.
  • said diastereoisomerically pure substance chosen from the group consisting of 5,10-CH2- (6S) -THF acid, its non-toxic salts and their mixtures is associated with (2) an antineoplasmic agent chosen in particular from 5-fluorouracil, 5-fluoro-2'- deoxyuridine, methotrexate, cisplatin and mixtures thereof.
  • said substance (1) and said agent (2) are advantageously presented in the form of a composition in association with a physiologically acceptable excipient.
  • the combination (1) + (2) offers the advantage of having synergistic effects.
  • a diastereoisomerically pure substance chosen from the group consisting of (6R) - 5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 5- CHO- (6R) - THF, its non-toxic salts and their mixtures, for obtaining a cytostatic medicament intended for use in therapy with regard to neoplastic diseases, in particular cancer.
  • each active ingredient will come at a therapeutically effective dose.
  • a composition containing, in association with a physiologically acceptable excipient, a cytostatically effective amount of an active ingredient chosen.
  • a composition containing, in association with a physiologically acceptable excipient, a cytostatically effective amount of an active ingredient chosen.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

La présente invention à trait à un nouveau procédé de préparation de diastéréoisomères dérivant de l'acide tétrahydrofolique. Par réaction de (i) l'acide (6RS)-folinique ou de l'un de ses sels, ou (ii) de l'acide 5,10-méthényl-5,6,7,8-tétrahydrofolique, avec HCOOH à pH 2,0-2,6 on obtient un précipité constitué par un mélange de deux diastéréoisomères de structure orthoamide et de formules: (III) et (IV) où R représente le reste p-benzoyl-(L)-glutamique, dans un rapport molaire (IV/III) d'environ 7/3, le composé (III) étant de configuration dite naturelle et le composé (IV) de configuration dite non-naturelle. On isole le composé (IV) pur dudit précipité, et le composé (III) pur du filtrat correspondant. A partir du composé (III) et respectivement (IV) on prépare les diastéréoisomères des folates réduits et de leurs sels de configuration naturelle, et respectivement non-naturelle.The present invention relates to a new process for the preparation of diastereoisomers derived from tetrahydrofolic acid. By reaction of (i) (6RS) -folinic acid or one of its salts, or (ii) 5,10-methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, with HCOOH at pH 2.0-2.6 a precipitate is obtained consisting of a mixture of two diastereoisomers of orthoamide structure and of formulas: (III) and (IV) where R represents the p-benzoyl- (L) -glutamic residue, in a molar ratio (IV / III) of approximately 7/3, the compound (III) being of so-called natural configuration and the compound (IV) of so-called non-natural configuration. The pure compound (IV) is isolated from said precipitate, and the pure compound (III) from the corresponding filtrate. From the compound (III) and respectively (IV), the diastereoisomers of the reduced folates and of their salts of natural and non-natural configuration are prepared.

Description

COMPOSES DIASTEREOISOMERES DERIVANT DE L'ACIDE TETRAHYDROFOLIQUE, PROCEDE DE PREPARATION ET UTILISATION DANS LA SYNTHESE DE DIASTEREOISOMERES 6S ET 6R DE FOLATES DIASTEREOISOMERIC COMPOUNDS DERIVED FROM TETRAHYDROFOLIC ACID, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND USE IN THE SYNTHESIS OF DIASTEREOISOMERS 6S AND 6R OF FOLATES
REDUITSREDUCED
DOMAINE DE L'INVENTIONFIELD OF THE INVENTION
La présente invention concerne un nouveau procé¬ dé de préparation de composés diastéréoisomères dérivant de l'acide tétrahydrofolique. Ces composés comprennent en tant que produits industriels (i) le mélange de diastéréoisomères 6P et 6Q tels que définis ci-après (et répondant vraisemblablement aux formules III et respectivement IV données plus loin), dans le rapport molaire 6P/6Q d'environ 7/3, (ii) le diastéréoisomère 6P pur et (iii) le diastéréoisomère 6Q pur.The present invention relates to a new process for the preparation of diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid. These compounds include as industrial products (i) the mixture of diastereoisomers 6P and 6Q as defined below (and probably corresponding to formulas III and respectively IV given below), in the molar ratio 6P / 6Q of approximately 7 / 3, (ii) the pure 6P diastereomer and (iii) the pure 6Q diastereomer.
L'invention concerne également l'utilisation desdits diastéréoisomères 6P et 6Q dans la synthèse de diastéréoisomères 6S et 6R de folates réduits tels que notamment les acides 5-CHO-(6S)-THF,The invention also relates to the use of said diastereoisomers 6P and 6Q in the synthesis of diastereoisomers 6S and 6R of reduced folates such as in particular 5-CHO- (6S) -THF acids,
5-CHO-(6R)-THF, 5-Me-(6S)-THF, 5-Me-(6R)-THF, 5,10-CH+-(6R)-THF, 5,10-CH+-(6S)-THF, et leurs sels. ABREVIATIONS5-CHO- (6R) -THF, 5-Me- (6S) -THF, 5-Me- (6R) -THF, 5,10-CH + - (6R) -THF, 5,10-CH + - (6S) -THF, and their salts. ABBREVIATIONS
Dans la présente description on a utilisé par commodité les abréviations suivantes : a) pour les folates réduits 5 THF = acide 5,6,7,8-tétrahydrofoliqueIn the present description, the following abbreviations have been used for convenience: a) for reduced folates 5 THF = 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid
5-CHϋ-(6RS)-THF = acide (6RS)-5-formyl-5,6,7,8- tétrahydrofolique (ou acide folinique) 5-CHO-(6S)-THF = acide (6S)-5-formyl-5,6,7,8-té- -- trahydrofolique (ou facteur de croissance du Leuconostoc citro- vorum) , appartenant à la série de configuration dite "naturel¬ le",le sel de calcium de cet !5 acide étant connu sous le nom de5-CHϋ- (6RS) -THF = acid (6RS) -5-formyl-5,6,7,8- tetrahydrofolic (or folinic acid) 5-CHO- (6S) -THF = acid (6S) -5- formyl-5,6,7,8-té - trahydrofolic (or growth factor of Leuconostoc citravorum), belonging to the configuration series called "natural¬ the", the calcium salt of this ! 5 acid being known as
"leucovorine" 5-CHO-(6R)-THF = diastéréoisomère 6R de l'acide folinique, appartenant à la série de configuration dite 20 "non-naturelle""Leucovorin" 5-CHO- (6R) -THF = diastereoisomer 6R folinic acid, belonging to said series of configuration 2 0 "unnatural"
5-Me-(6RS)-THF = acide (6RS)-5-méthyl-5,6,7,8- tétrahydrofolique 5-Me-(6S)-THF = acide (6S)-5-méthyl-5,6,7,8-té- trahydrofolique,appartenant à la 25 série de configuration dite5-Me- (6RS) -THF = acid (6RS) -5-methyl-5,6,7,8- tetrahydrofolic 5-Me- (6S) -THF = acid (6S) -5-methyl-5,6 , 7,8-te- trahydrofolique belonging to series 25 of known configuration
"naturelle" 5-Me-(6R)-THF = acide (6R)-5-méthyl-5,6,7,8- tétrahydrofolique appartenant à la série de configuration dite 30 "non-naturelle""natural" 5-Me- (6R) -THF = (6R) -5-methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid from the series of configuration known as 30 "non-natural"
[5,10-CH+-(6RS)-THF]X" [5,10-CH + - (6RS) -THF] X "
= sel de l'acide (6RS)-N5,N10- méthényl-5,6,7,8-tétrahydro- folique (ou "anhydro-leucovori- 35 ne") avec l'anion X~ [ 5 , 10-CH+- ( 6R ) -THF ] X= acid salt (6RS) -N 5 , N 10 - methenyl-5,6,7,8-tetrahydro-folic (or "anhydro-leukovorin 35") with the anion X ~ [5, 10-CH + - (6R) -THF] X
= sel de l'acide (6R)-N5,N10- méthényl-5,6,7,8-tétrahydrofo- lique avec l'anion X~, apparte- z- nant à la série de configuration dite "naturelle" [5,10-CH+-(6S)-THF]X~= acid salt (6R) -N 5 , N 10 - methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic with the anion X ~, belonging to the series of configuration called "natural" [5,10-CH + - (6S) -THF] X ~
= sel de l'acide (6S)-N5,N10- méthényl-5,6,7,8-tétrahydrofoli- Q que avec l'anion X~, appartenant à la série de configuration dite "non-naturelle" [5,10-CH+-(6RS)-THF]X",HX= acid salt (6S) -N 5 , N 10 - methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofoli- Q only with the anion X ~, belonging to the series of configuration known as "non-natural" [ 5.10-CH + - (6RS) -THF] X " , HX
= sel de l'acide (6RS)-N5,N10- 5 méthényl-5,6,7,8-tétrahydrofo- lique avec l'anion X" et l'acide HX [5,10-CH+-(6S)-THF]X",HX= salt of (6RS) -N 5 , N 10 - 5 methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid with anion X " and HX acid [5,10-CH + - ( 6S) -THF] X " , HX
= sel de l'acide (6S)-N5,N10- 0 méthényl-5,6,7,8-tétrahydrofo- lique avec l'anion X~ et l'acide HX 5,10-CH2-(6RS)-THF = acide (6RS)-N5,N10-méthylène-= salt of (6S) -N 5 , N 10 - 0 methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid with the anion X ~ and HX acid 5,10-CH 2 - (6RS ) -THF = acid (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-
5,6,7,8-tétrahydrofolique 5 5,10-CH2-(6R)-THF = acide (6R)-N5,N10-méthylène-5,6,7,8-tetrahydrofolic 5 5,10-CH 2 - (6R) -THF = acid (6R) -N 5 , N 10 -methylene-
5,6,7,8-tétrahydrofolique appar¬ tenant à la série de configura¬ tion dite "naturelle" 5,10-CH2-(6S)-THF ≈ acide (6S)-N5,N10-méthylène- 0 5,6,7,8-tétrahydrofolique appar¬ tenant à la série de configura¬ tion dite "non-naturelle" b) pour les autres abréviations DMSO = diméthylsulfoxyde FAB = bombardement atomique rapide (de l'anglais: "fast atomic bombard- ment")5,6,7,8-tetrahydrofolic belonging to the so-called "natural" configuration series 5,10-CH 2 - (6S) -THF ≈ acid (6S) -N 5 , N 10 -methylene- 0 5,6,7,8-tetrahydrofolic belonging to the so-called "unnatural" configuration series b) for the other abbreviations DMSO = dimethyl sulfoxide FAB = fast atomic bombardment (French: "fast atomic bombardement")
HPLC = chromatographie liquide haute performanceHPLC = high performance liquid chromatography
H-TSA = acide p-toluènesulfonique MS = spectrométrie de masseH-TSA = p-toluenesulfonic acid MS = mass spectrometry
MS(FAB) = spectrométrie de masse avec dis¬ positif de bombardement atomique rapide Py = pyridineMS (FAB) = mass spectrometry with rapid atomic bombardment device Py = pyridine
RT ' = température ambiante (15-20°C) TSA~ = ion p-toluènesulfonateRT ' = room temperature (15-20 ° C) TSA ~ = p-toluenesulfonate ion
ART ANTERIEURPRIOR ART
On sait que l'acide folinique commercial [ou 5- CH0-(6RS)-THF] , qui répond aux nomenclatures d'acide (6RS)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofolique et d'acide (6RS)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydroptéroyl-L-glutamique et qui est notamment préparé avec son sel de calcium à partir de l'acide folique ou de l'acide N^,N^^-méthényl- ,6,7,8-tétrahydrofolique [voir par exemple les brevets CH-A-496 012 et GB-A-1 560 372], est un mélange molaire 1/1 de deux diastéréoisomères qui diffèrent l'un de l'autre par leur configuration en C° (atome de carbone en position 6 du cycle ptéridinyle).We know that commercial folinic acid [or 5-CH0- (6RS) -THF], which corresponds to the nomenclatures of acid (6RS) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid and ( 6RS) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydropteroyoyl-L-glutamic acid and which is especially prepared with its calcium salt from folic acid or N ^, N ^^ - methenyl acid -, 6,7,8-tetrahydrofolic [see for example the patents CH-A-496,012 and GB-A-1,560,372], is a 1/1 molar mixture of two diastereoisomers which differ from each other by their configuration in C ° (carbon atom in position 6 of the pteridinyl ring).
On sait que le brevet britannique GB-A-1 560 372 envisage dans sa description (voir page 2, lignes 4-6) l'utilisation d'un complexe, sel interne ou zwitterion, de l'anhydro-leucovorine (composé de formule [5,10-CH+ -(6RS)-THF]X~) dans lequel l'un des ions carboxylate C00" du reste R-p-benzoyl-(L)-glutamique a réagi avec la char¬ ge positive délocalisée sur les atomes N-, C - et N10 comme matière première dans la synthèse de l'acide (6RS)- folinique et de son sel de calcium. On sait de l'article de J.C. FONTECILLA-CAMPS et. al., J. Am. Chem. Soc, 101, 614 (1979) que le diastéréo¬ isomère biologiquement actif de l'acide folinique est de configuration 6S. Il est rappelé que ce diastéréoisomère a été dénommé dans le passé "isomère naturel" par commodité en raison de son activité biologique, d'une part, et "acide (1,L)-folinique" où le terme "1" se réfère à la configuration en C° et le terme "L" à la configuration de la chaîne latérale acide glutamique, d'autre part.We know that the British patent GB-A-1 560 372 envisages in its description (see page 2, lines 4-6) the use of a complex, internal salt or zwitterion, of anhydro-leucovorin (compound of formula [5,10-CH + - (6RS) -THF] X ~ ) in which one of the carboxylate ions C00 " of the Rp-benzoyl- (L) -glutamic residue reacted with the positive charge delocalized on the atoms N-, C - and N 10 as raw material in the synthesis of (6RS) - folinic acid and its calcium salt. We know from the article by JC FONTECILLA-CAMPS and. al., J. Am. Chem. Soc, 101, 614 (1979) that the biologically active diastereoisomer of folinic acid has the 6S configuration. It is recalled that this diastereoisomer has been called in the past "natural isomer" for convenience due to its biological activity, on the one hand, and "(1, L) -folinic acid" where the term "1" refers to the C ° configuration and the term "L" to the configuration of the glutamic acid side chain, on the other hand.
L'acide (ôRS)-folinique 5-CHO-(6RS)-THF est généralement et communément utilisé, avec son sel de cal¬ cium, en tant que moyen thérapeutique de "secours" chez les patients soumis à une chimiothérapie anti-cancer à base de méthotréxate et en tant que moyen augmentant l'inhibition de la thymidylate synthétase par les agents anti-cancéreux tels que les 5-fluorouracil et 5-fluoro- 2'-désoxyuridine.(ÔRS) -folinic acid 5-CHO- (6RS) -THF is generally and commonly used, with its calcium salt, as a therapeutic means of "relief" in patients subjected to anti-cancer chemotherapy based on methotrexate and as a means increasing the inhibition of thymidylate synthetase by anti-cancer agents such as 5-fluorouracil and 5-fluoro-2'-deoxyuridine.
On a longtemps pensé que le diastéréoisomère 6R de l'acide folinique, dénommé par commodité "isomère non- naturel" (par opposition au 6S biologiquement actif) était inactif; cependant il a été signalé [voir. F.M. SIROTNAK et al., Biochem. Pharm. , _28, 2993 (1979); et J.K. SATO et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., ,25, 312 (1984)] que ledit diastéréoisomère 6R est susceptible d'interférer avec le transport ou la polyglumatation du diastéréoisomère 6S actif.It has long been thought that the 6R diastereomer of folinic acid, conveniently referred to as an "unnatural isomer" (as opposed to the biologically active 6S) is inactive; however it has been reported [see. FM SIROTNAK et al., Biochem. Pharm. , _28, 2993 (1979); and JK SATO et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 25, 312 (1984)] that said diastereoisomer 6R may interfere with the transport or polyglumatation 6S diastereoisomer active.
Il existe en conséquence un besoin de mettre au point, en ce qui concerne l'acide folinique, une techni- que d'obtention du diastéréoisomère 6S pur par séparation du mélange (6RS) ou par synthèse stéréospécifique.There is therefore a need to develop, as regards folinic acid, a technique for obtaining the pure 6S diastereoisomer by separation of the mixture (6RS) or by stereospecific synthesis.
Il se trouve que les techniques décrites par D.B. COSULICH et al., J. Am. Chem. Soc, l , 4215 (1952) [pro¬ posant la séparation des stéréoisomères de l'acide folinique par cristallisation fractionnée de leurs sels de calcium dans l'eau], d'une part, et par C. TEMPLE et - D'¬It turns out that the techniques described by DB COSULICH et al., J. Am. Chem. Soc, l, 4215 (1952) [proposing the separation of the stereoisomers of folinic acid by fractional crystallization of their calcium salts in water], on the one hand, and by C. TEMPLE and - D'¬
aï., Cancer Treatment Reports, 6_5_, 1117 (1981) [proposant la séparation de l'acide (6S)-folinique à partir du mélange (6RS) par solubilisation différentielle des sels de calcium dans l'eau], d'autre part, sont inefficaces dès lors qu'elles conduisent à un mélange de 6S et 6R dans le rapport molaire 1/1.aï., Cancer Treatment Reports, 6_5_, 1117 (1981) [proposing the separation of (6S) -folinic acid from the mixture (6RS) by differential solubilization of calcium salts in water], on the other hand , are ineffective since they lead to a mixture of 6S and 6R in the molar ratio 1/1.
Pour isoler le (6S)-folinate de calcium à partir du mélange (6RS) une autre méthode a été préconisée dans la demande internationale PCT publiée WO-A-8808844 (EPROVA) qui est fondée sur la cristallisation préféren¬ tielle du (6S)-folinate de calcium à partir d'un milieu alcalin aqueux contenant Ca2+ en excès.To isolate calcium (6S) -folinate from the mixture (6RS) another method was recommended in the international PCT application published WO-A-8808844 (EPROVA) which is based on the preferential crystallization of (6S) - calcium folinate from an aqueous alkaline medium containing excess Ca 2+ .
On sait par ailleurs que d'autres folates réduits ont été obtenus sous une forme diastéréoisomériquement pure, soit à partir d'acides (6S)- et (6R)-tétrahydrofo- liques préparés par voie enzymatique [voir notamment F.M. SIROTNAK et al., Biochem. Pharm. , 2J3, 2993 (1979) pré¬ cité; H.C.S. 00D et al., Chem. and Biol. of Pteridines, 533 (1983); P.L. CHELLO et al., Biochem. Pharm., _31, 1527 (1982)], soit encore par d'autres méthodes chimiques et chromatographiques longues et fastidieuses [voir notamment B.T. KAUFMAN et al., J. Biol. Chem., 238, 1498 (1963); S.B. HORWITZ et al., J. Med. Chem., _12, 49 (1969); B.V. RAMASASTRY et al., J. Biochem. Biophys. Res. Com . , .12, 478 (1963); J.C. HITE et al., Chem. and Biol. of Pteridines, 625 (1979); et J. FEENEY et al., Biochemistry, 2 , 1837 (1981)]; or il se trouve que toutes ces méthodes, qui conduisent à l'obtention de très petites quantités (de l'ordre du milligramme) de pro- duits qui n'ont pas été isolés sous forme de solides cristallisés ou qui ont été obtenus sous forme de poudre lyophilisée de pureté toujours inférieure ou égale à 80 %, ne sont pas satisfaisantes.We also know that other reduced folates have been obtained in a diastereoisomerically pure form, ie from (6S) - and (6R) -tetrahydrofolic acids prepared by the enzymatic route [see in particular FM SIROTNAK et al., Biochem. Pharm. , 2J3, 2993 (1979) cited above; H.C.S. 00D et al., Chem. and Biol. of Pteridines, 533 (1983); P.L. CHELLO et al., Biochem. Pharm., _31, 1527 (1982)], or even by other long and tedious chemical and chromatographic methods [see in particular B.T. KAUFMAN et al., J. Biol. Chem., 238, 1498 (1963); S.B. HORWITZ et al., J. Med. Chem., _12, 49 (1969); B.V. RAMASASTRY et al., J. Biochem. Biophys. Res. Com. , .12, 478 (1963); J.C. HITE et al., Chem. and Biol. of Pteridines, 625 (1979); and J. FEENEY et al., Biochemistry, 2, 1837 (1981)]; however it turns out that all these methods, which lead to obtaining very small quantities (of the order of a milligram) of products which have not been isolated in the form of crystallized solids or which have been obtained in the form lyophilized powder with a purity always less than or equal to 80%, are not satisfactory.
De plus, il se trouve que les tentatives de réduire asymétriquement l'acide dihydrofolique par voie chimique n'ont jamais été couronnées de succès [voir L. REES et al., Tetrahedron, .42, 117 (1986)].In addition, it turns out that attempts to asymmetrically reduce dihydrofolic acid by have never been successful [see L. REES et al., Tetrahedron, .42, 117 (1986)].
Le fait de disposer de quantités importantes de folates réduits diastéréoisomériquement purs permettrait de comparer et apprécier de façon claire les activités enzymatiques, biologiques et/ou thérapeutiques de chaque diastéréoisomère. En effet, jusqu'à présent la plupart des expérimentations qui ont été entreprises ont été réalisées soit avec le mélange molaire 1/1 des diastéréoisomères soit avec le diastéréoisomère dit "naturel", les activités du diastéréoisomère dit "non- naturel" étant extrapolées à partir des valeurs obtenues à partir dudit mélange molaire 1/1 et dudit diastéréoisomère naturel [voir notamment J.A. STRA et al., Cancer Research, 41_, 3936 (1981)]. A la connaissance de la Demanderesse, les seuls isomères foliniques "non- naturels" avec lesquels des expérimentations ont été effectuées sont ceux de l'acide folinique et de l'acide N5-méthyl-5,6,7,8-tétrahydrofolique, qui ont été obtenus in situ par déplétion (i.e. élimination ou inhibition) enzymatique de l'isomère "naturel" correspondant [.voir notamment J.K. SATO précité].Having large quantities of diastereomerically pure reduced folates would make it possible to compare and clearly assess the enzymatic, biological and / or therapeutic activities of each diastereoisomer. Indeed, until now most of the experiments which have been undertaken have been carried out either with the 1/1 molar mixture of the diastereoisomers or with the so-called "natural" diastereoisomer, the activities of the so-called "non-natural" diastereomer being extrapolated to from the values obtained from said 1/1 molar mixture and from said natural diastereoisomer [see in particular JA STRA et al., Cancer Research, 41_, 3936 (1981)]. To the knowledge of the Applicant, the only "unnatural" folinic isomers with which experiments have been carried out are those of folinic acid and of N 5 -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, which have been obtained in situ by enzymatic depletion (ie elimination or inhibition) of the corresponding "natural" isomer [see especially JK SATO above].
On connait enfin de EP-A-0 348 641 (date de pu¬ blication : 3 janvier 1990), deux méthodes (I et II) d'accès aux folates réduits ayant la configuration de la série dite "naturelle". Selon la méthode I, on traite le sel complexe dénommé "(acide (6RS)-5,10-méthényl-5,6,7,8- tétrahydofolique) chlorure, chlorhydrate, dihydrate" de formule abrégée : [5,10-CH+-(6RS)-THF]C1",HC1,2H20 au moyen d'un mélange HC00H/HC1 2N pour obtenir par cristal¬ lisation le diastéréoisomère naturel répondant à la formule [5,10-CH+-(6R)-THF]C1",HC1.We finally know from EP-A-0 348 641 (publication date: January 3, 1990), two methods (I and II) of access to reduced folates having the configuration of the so-called "natural" series. According to method I, the complex salt called "(acid (6RS) -5.10-methenyl-5,6,7,8- tetrahydofolic) chloride, hydrochloride, dihydrate" is treated with the abbreviated formula: [5.10-CH + - (6RS) -THF] C1 " , HC1,2H 2 0 by means of a mixture HC00H / HC1 2N to obtain by crystallization the natural diastereoisomer corresponding to the formula [5,10-CH + - (6R) -THF] C1 " , HC1.
La méthode II, comprend les étapes suivantes : en premier lieu (selon l'exemple 5.1 de EP-A-0 348 641), (a) on solubilise ledit sel complexe précité, de formule • c. -Method II comprises the following steps: first (according to Example 5.1 of EP-A-0 348 641), (a) solubilizing said aforementioned complex salt, of formula • vs. -
[5,10-CH+-(6RS)-THF]C1",HC1,2H20, dans l'acide HCOOH, (b) on traite la solution résultante avec une résine échan- geuse d'anions [AMBERLITER IRA-68], (c) on évapore sous pression réduite l'éluat qui a été recueilli, puis (d) on traite le résidu d'évaporation, ainsi obtenu, avec AcOH et MeOH, pour précipiter un produit dénommé sel interne de l'acide 5,10-CH-(6RS)-THF, puis en second lieu (selon l'exemple 11 de EP-A-0 348 641), on fait réagir ledit sel interne avec une solution aqueuse de HCOOH à 20°C sous agitation, il se forme un précipité et, par filtration, on recueille le sel interne de l'acide 5,10-CH-(6S)-THF avec une teneur en diastéréoisomère de forme 6S de 73%, (en répétant l'opération de précipitation on augmente la teneur en diastéréoisomère de forme 6S jusqu'à 90%); et, pa traitement des filtrats combinés au moyen d'acétone, on précipite le sel interne de l'acide 5,10-CH-(6R)-THF à 75 % de pureté.[5,10-CH + - (6RS) -THF] C1 " , HC1,2H 2 0, in HCOOH acid, (b) the resulting solution is treated with an anion exchange resin [AMBERLITE R IRA -68], (c) the eluate which has been collected is evaporated under reduced pressure, then (d) the evaporation residue thus obtained is treated with AcOH and MeOH, to precipitate a product called internal salt of the 5,10-CH- (6RS) -THF acid, then secondly (according to Example 11 of EP-A-0 348 641), said internal salt is reacted with an aqueous solution of HCOOH at 20 ° C. stirring, a precipitate is formed and, by filtration, the internal salt of the acid 5,10-CH- (6S) -THF is collected with a diastereomer content of the 6S form of 73%, (by repeating the operation the content of the 6S diastereoisomer up to 90% is increased by precipitation; and, by treating the combined filtrates with acetone, the internal salt of the acid 5,10-CH- (6R) - is precipitated THF at 75% purity.
BUT DE L'INVENTIONPURPOSE OF THE INVENTION
Selon l'invention on propose une nouvelle solu- tion technique permettant la synthèse des diastéréoiso¬ mères 6R et 6S de folates réduits pour satisfaire les besoins précités. Cette nouvelle solution technique se différencie de la méthode II de EP-A-0 348 641 rappelée ci-dessus notamment par le fait que le traitement avec la résine échangeuse d'anions puis le mélange AcOH/MeOH est remplacé par la réaction de 5-CHO-(6RS)-THF ou de [5,10- CH+-(6RS)-THF]X" avec l'acide HCOOH à un pH se situant dans la gamme de 2,0 à 2,6.According to the invention, a new technical solution is proposed which allows the synthesis of diastereoisomers 6R and 6S of reduced folates to meet the aforementioned needs. This new technical solution differs from method II of EP-A-0 348 641 mentioned above in particular by the fact that the treatment with the anion exchange resin and then the AcOH / MeOH mixture is replaced by the reaction of 5- CHO- (6RS) -THF or [5,10- CH + - (6RS) -THF] X " with HCOOH acid at a pH in the range of 2.0 to 2.6.
Cette nouvelle solution technique conduit à 1'ob- tention de composés diastéréoisomériquement purs, définis ci-après, de configuration 6P et 6Q et répondant très vraisemblablement aux formules III et respectivement IV données ci-après. Cette solution technique constitue une nouvelle source d'accès aux folates réduits, dès lors qu'elle permet notamment la préparation de composés dias- téréoisomériquement purs tels que les acides (6S)- et (όR)-foliniques, (6S)- et (6R)-N5,N10-méthylène-5,6,7,8- tétrahydrofoliques, (6S)- et (6R)-N5-méthyl-5,6,7,8-té- trahydrofoliques et leurs sels, à partir des dits dia¬ stéréoisomères de formules III et IV.This new technical solution leads to the production of diastereoisomerically pure compounds, defined below, of configuration 6P and 6Q and very probably corresponding to formulas III and IV respectively given below. This technical solution constitutes a new source of access to reduced folates, since it allows in particular the preparation of dias- tereoisomerically pure such as (6S) - and (όR) -folinic acids, (6S) - and (6R) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8- tetrahydrofolic, (6S) - and ( 6R) -N 5 -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolics and their salts, starting from the so-called stereoisomers of formulas III and IV.
OBJET DE L'INVENTIONOBJECT OF THE INVENTION
Selon l'un des aspects de l'invention, on préco¬ nise un procédé de préparation d'un composé dérivant de l'acide tétrahydrofolique et de ses diastéréoisomères, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend :According to one aspect of the invention, a process for the preparation of a compound derived from tetrahydrofolic acid and its diastereoisomers is recommended, said process being characterized in that it comprises:
1°) la réaction d'un composé tétrahydrofolique choisi parmi l'ensemble constitué par1) the reaction of a tetrahydrofolic compound chosen from the group consisting of
(i) l'acide (6RS)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofolique de formule(i) (6RS) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula
dans laquelle R représente le reste p-benzoyl-(L)-gluta- mique de formule :in which R represents the p-benzoyl- (L) -glutamic residue of formula:
où A est H; et ses sels, et (ii) l' acide N5, N10-méthényl-5,6,7,8-tétrahydrofoli¬ que de formule where A is H; and its salts, and (ii) N 5 , N 10 -methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofoli¬ acid of the formula
dans laquelle X" est un anion et R est défini comme ci- dessus; avec HCOOH à un pH se situant dans la gamme de 2,0 à 2,6; etwherein X " is an anion and R is defined as above; with HCOOH at a pH in the range of 2.0 to 2.6; and
2°) la récupération du précipité, qui s'est for¬ mé, par filtration, d'une part, et du filtrat correspon¬ dant, d'autre part;2) recovery of the precipitate, which has formed, by filtration, on the one hand, and of the corresponding filtrate, on the other hand;
3°) la séparation, à partir dudit précipité, d'un premier diastéréoisomère pur appartenant à la série de configuration non-naturelle, dénommé ci-après diastéréo¬ isomère 6Q, et répondant très vraisemblablement à la formule IV, par recristallisation fractionnée; et,3) separation, from said precipitate, of a first pure diastereoisomer belonging to the series of non-natural configuration, hereinafter called diastereoisomer 6Q, and most likely corresponding to formula IV, by fractional recrystallization; and,
4°) si nécessaire, la séparation, à partir dudit filtrat, obtenu selon le stade 2°) et/ou des filtrats de recristallisation selon le stade 3°), d'un second dia¬ stéréoisomère pur appartenant à la série de configuration naturelle, dénommé ci-après diastéréoisomère 6P, et répondant très vraisemblablement à la formule III.4 °) if necessary, the separation, from said filtrate, obtained according to stage 2 °) and / or recrystallization filtrates according to stage 3 °), from a second pure dia¬ stereoisomer belonging to the series of natural configuration , hereinafter referred to as 6P diastereoisomer, and most likely having the formula III.
Selon ce procédé, on obtient au stade 2°) un précipité de diastéréoisomères 6Q et 6P dans un rapport molaire 6Q/6P d'environ 7/3.According to this process, a precipitate of 6Q and 6P diastereoisomers is obtained in stage 2 °) in a 6Q / 6P molar ratio of approximately 7/3.
Dans la formule II, la liaison en pointillés reliant les atomes d'azote N et N^ a pour but de signa- ler que la charge positive est délocalisée sur les atomes N5, C11 et N10.In formula II, the dotted bond connecting the nitrogen atoms N and N ^ has the purpose of signaling 1st that the positive charge is delocalized on the atoms N 5 , C 11 and N 10 .
Suivant un autre aspect de l'invention, on propo¬ se en tant que produits industriels nouveaux lesdits diastéréoisomères 6Q, 6P et leurs mélanges, notamment le mélange molaire 7/3 précité. Le diastéréoisomère 6P appartient à la série dite naturelle en ce sens qu'il conduit aux diastéréoisomères de folates réduits tels que les 5-CHO-(6S)-THF, 5,10-CH-(6R)-THF, ,10-CH2-(6R)-THF et 5-Me-(6S)-THF, et à leurs sels. Le diastéréoisomère 6Q appartient à la série dite non-naturelle en ce sens qu'il conduit aux diastéréoisomères de folates réduits tels que les 5-CHO-(6R)-THF,' 5,10-CH-(6S)-THF, 5,10-CH2-(6S)-THF et -Me-(6R)-THF, et à leurs sels. Suivant encore un autre aspect de l'invention, on préconise l'utilisation desdits diastéréoisomères 6P et 6Q pour l'obtention des folates réduits diastéréoisoméri- quement purs des séries naturelle et non-naturelle. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les diastéréoisomères selon l'invention ont été désignés 6P et 6Q par commodité, car il n'a pas été possible de déterminer de façon directe leur configura¬ tion. On a néanmoins de sérieuses raisons de présumer que le composé 6P est de configuration 6R et que le composé 6Q est de configuration 6S; on a également de sérieuses raisons de penser que ces diastéréoisomères sont des com¬ posés du type orthoamide et répondent aux formules III et IV, (même si dans l'état actuel des connaissances il s'a¬ girait d'hypothèses ne liant pas la Demanderesse). Comme indiqué ci-dessus, le diastéréoisomère 6P appartenant à la série naturelle répond très vraisembla¬ blement à la formule : HAccording to another aspect of the invention, there are proposed as new industrial products said diastereoisomers 6Q, 6P and their mixtures, in particular the aforementioned molar mixture 7/3. The 6P diastereoisomer belongs to the so-called natural series in that it leads to diastereoisomers of reduced folates such as 5-CHO- (6S) -THF, 5,10-CH- (6R) -THF,, 10-CH 2 - (6R) -THF and 5-Me- (6S) -THF, and their salts. The 6Q diastereoisomer belongs to the so-called unnatural series in the sense that it leads to diastereoisomers of reduced folates such as 5-CHO- (6R) -THF, ' 5,10-CH- (6S) -THF, 5 , 10-CH 2 - (6S) -THF and -Me- (6R) -THF, and their salts. According to yet another aspect of the invention, the use of said 6P and 6Q diastereoisomers is recommended for obtaining diastereoisomerically pure reduced folates from the natural and non-natural series. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The diastereoisomers according to the invention have been designated 6P and 6Q for convenience, since it has not been possible to directly determine their configuration. There are, however, serious reasons to assume that compound 6P is of configuration 6R and that compound 6Q is of configuration 6S; there are also serious reasons to think that these diastereoisomers are compounds of the orthoamide type and correspond to formulas III and IV, (even if in the current state of knowledge there would be hypotheses which do not link the Applicant). As indicated above, the 6P diastereoisomer belonging to the natural series very likely corresponds to the formula: H
et le diastéréoisomère 6Q répond très vraisemblablement à la formule :and the 6Q diastereoisomer most likely meets the formula:
La transformation des dérivés orthoa ides 6P et 6Q en 5-CHO-THF, 5-Me-THF et 5,10-CH2-THF, n'affecte pas la stéréochimie du centre C . Ainsi les diastéréoisomères appartenant à la série de configuration naturelle présentent une configuration spatiale en C° telle qu'illustrée notamment par les formules V, VII, VIII, et XI ci-après, d'une part, et les diastéréoisomères appartenant à la série de configuration non-naturelle présentent une configuration spatiale en C° telle qu'illustrée notamment par les formules VI, IX, X, et XII ci-après, d'autre part. En revanche, la notation R ou S change à l'intérieur de chaque série eu égard aux règles de nommenclature; dans la série de configuration naturelle on passe du diastéréoisomère 6S [par exemple 5- CH0-(6S)-THF ou 5-Me-(6S)-THF] au diastéréoisomère 6R [par exemple ,10-CH-(6R)-THF ou 5,10-CH2-(6R)-THF] quand le squelette bicyclique du reste ptéridinyle devient tricyclique. II est important que lors de la mise en oeuvre du stade 1°) le pH du milieu réactionnel soit ajusté entre 2,0 et 2,6. Le réglage du pH à l'intérieur de cette gamme sera avantageusement effectué par addition de NHo ou NH^OH. De préférence, au stade 1°), le pH du milieu réac- tionnel sera compris entre 2,2 et 2,4 et plus avantageu¬ sement de l'ordre de 2,30-2,35.The transformation of ortho derivatives 6P and 6Q into 5-CHO-THF, 5-Me-THF and 5,10-CH 2 -THF, does not affect the stereochemistry of the C center. Thus the diastereoisomers belonging to the series of natural configuration have a spatial configuration in C ° as illustrated in particular by the formulas V, VII, VIII, and XI below, on the one hand, and the diastereomers belonging to the series of non-natural configuration have a spatial configuration in C ° as illustrated in particular by the formulas VI, IX, X, and XII below, on the other hand. However, the R or S rating changes within each series with regard to the nomenclature rules; in the series of natural configuration we pass from the diastereoisomer 6S [for example 5- CH0- (6S) -THF or 5-Me- (6S) -THF] to the diastereoisomer 6R [for example, 10-CH- (6R) -THF or 5,10-CH 2 - (6R) -THF] when the bicyclic skeleton of the pteridinyl rest becomes tricyclic. It is important that during the implementation of stage 1 °) the pH of the reaction medium is adjusted between 2.0 and 2.6. The adjustment of the pH within this range will advantageously be carried out by addition of NH 2 or NH 4 OH. Preferably, at stage 1), the pH of the reaction medium will be between 2.2 and 2.4 and more advantageously on the order of 2.30-2.35.
De façon également avantageuse, la réaction du stade 1°) sera effectuée pendant au moins 0,25 h, à une température de 40 à 65°C, et mieux à une température de 45-60°C.Also advantageously, the reaction of stage 1 °) will be carried out for at least 0.25 h, at a temperature of 40 to 65 ° C, and better still at a temperature of 45-60 ° C.
De façon pratique, le stade 1°) selon l'invention sera mis en oeuvre suivant deux voies différentes :In practical terms, stage 1) according to the invention will be implemented in two different ways:
(a) II > III + IV(a) II> III + IV
(b) I > III + IV. Dans la voie (a), on incorpore directement l'ammoniac dans le mélange II + H20/ HCOOH pour réguler le pH, la réaction étant effectuée à une température de 55-65°C, pendant au moins 0,25 h. Dans la voie (b), l'on fait réagir le composé I avec un mélange H20/HC00H à 60- 65°C pendant au moins lh, refroidit le milieu réactionnel résultant à 40-45°C, puis introduit l'ammoniac, la réac¬ tion se poursuivant ensuite à 40-45°C pendant au moins 0,25 h.(b) I> III + IV. In route (a), ammonia is directly incorporated into the II + H 2 O / HCOOH mixture to regulate the pH, the reaction being carried out at a temperature of 55-65 ° C, for at least 0.25 h. In route (b), compound I is reacted with an H 2 O / HC00H mixture at 60-65 ° C for at least 1 hour, the resulting reaction medium is cooled to 40-45 ° C, then the ammonia, the reaction then continuing at 40-45 ° C for at least 0.25 h.
Dans les deux voies, le mélange réactionnel donne par refroidissement à RT un précipité cristallin de couleur jaune brillant qui est pratiquement insoluble dans les solvants usuels.In both routes, the reaction mixture gives, on cooling to RT, a crystalline precipitate of a bright yellow color which is practically insoluble in the usual solvents.
L'analyse élémentaire de ce précipité est en accord avec les structures III et IV; il s'agit d'un mélange d'orthoamides résultant (i) de 1'énolisation du groupe oxo exocyclique (en position C^ du squelette ptéridinyle) de la fonction lactame et (ii) d'une cyclisation par formation d'une liaison entre l'oxanion et l'atome de carbone en C11 de la formule II. La structure orthoamide des composés de formulesThe elementary analysis of this precipitate is in agreement with structures III and IV; it is a mixture of orthoamides resulting (i) from the enolization of the exocyclic oxo group (in position C ^ of the pteridinyl skeleton) of the lactam function and (ii) of a cyclization by formation of a bond between the oxanion and the C 11 carbon atom of formula II. The orthoamide structure of the compounds of formulas
III et IV est également confirmé par les faits suivants :III and IV is also confirmed by the following facts:
- l'analyse par spectrométrie de masse SM(FAB) des com¬ posés de formules III et IV donne un spectre pratiquement identique à celle du précurseur de formule II et indique que la réaction II = III/IV traduit une conversion du type protonation/déprotonation;- the analysis by mass spectrometry SM (FAB) of the compounds of formulas III and IV gives a spectrum practically identical to that of the precursor of formula II and indicates that the reaction II = III / IV translates a conversion of the protonation type / deprotonation;
- un échantillon du produit III/IV traité avec un excès d'acide p-toluènesulfonique ne se distingue pas du produit de formule II (ou du couple VII/IX) par analyse HPLC (sur colonne non-chirale) .- a sample of product III / IV treated with an excess of p-toluenesulfonic acid is not distinguished from the product of formula II (or of the couple VII / IX) by HPLC analysis (on a non-chiral column).
Selon l'invention, les cristallisations fraction¬ nées des stades 3°) et 4°) peuvent être remplacées par une chromatographie sur colonne pour séparation chirale. En pratique on préfère enrichir les teneurs respectives en diastéréoisomères de configuration naturelle et respectivement de configuration non-naturelle des compo¬ sés III et respectivement IV par cristallisation frac¬ tionnée, puis, si nécessaire, purifier chaque produit par HPLC sur colonne chirale • Pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention, l'anion X~ du composé de formule II sera un anion approprié, et pourra notamment être choisi parmi l'ensemble constitué par les ions F", Cl", Br~, I", NO ", I/2SO 2", I/3PO43"", oxalate, p-toluènesulfonate, maléate, benzènesulfonate, méthanesulfonate, trifluoroacétate, et trichloroacétate.According to the invention, the crystallizations fractioned from stages 3 °) and 4 °) can be replaced by column chromatography for chiral separation. In practice, it is preferred to enrich the respective contents of diastereoisomers of natural configuration and respectively of non-natural configuration of compounds III and IV respectively by fractional crystallization, then, if necessary, purifying each product by HPLC on a chiral column. implementation of the process of the invention, the anion X ~ of the compound of formula II will be an appropriate anion, and may in particular be chosen from the group consisting of the ions F " , Cl " , Br ~, I " , NO " , I / 2SO 2" , I / 3PO4 3 "" , oxalate, p-toluenesulfonate, maleate, benzenesulfonate, methanesulfonate, trifluoroacetate, and trichloroacetate.
Les orthoamides de formules III et respectivementThe orthoamides of formulas III and respectively
IV peuvent être convertis en composés V et respectivement VI par hydrolyse à 100°C à pH 7 et en leurs sels : IV can be converted into compounds V and respectively VI by hydrolysis at 100 ° C at pH 7 and their salts:
etand
Les orthoamides de formules III et respectivement IV peuvent être également utilisés pour la préparation des acides diastéréoisomériquement purs 5,10-CH2-(6R)-THF de formule VIII et respectivement 5,10-CH2-(6S)-THF de formule X, et de leurs sels, par conversion de III et IV en VII et respectivement IX, traitement ensuite avec NaBH^ dans un solvant aprotique contenant de la pyridine, puis purification suivant l'enseignement de la demande de brevet suisse No 02 736/89 de la Demanderesse :The orthoamides of formulas III and respectively IV can also be used for the preparation of the diastereoisomerically pure acids 5,10-CH2- (6R) -THF of formula VIII and respectively 5,10-CH 2 - (6S) -THF of formula X , and their salts, by conversion of III and IV into VII and respectively IX, then treatment with NaBH ^ in an aprotic solvent containing pyridine, then purification according to the teaching of Swiss patent application No. 02 736/89 of the Applicant:
(VII)(VII)
ic et here and
d'une part,Firstly,
etand
d'autre part. Dans la synthèse des composés de formules VIII et X, (ou encore de formules XI et XII), on peut, si cela est nécessaire, isoler les composés intermédiaires VII et respectivement IX. Toutefois, une telle opération n'est pas essentielle, et la suite de la synthèse est générale¬ ment effectuée sans isoler ledit composé VII ou respecti¬ vement IX.on the other hand. In the synthesis of the compounds of formulas VIII and X, (or also of formulas XI and XII), it is possible, if necessary, to isolate the intermediate compounds VII and respectively IX. However, such an operation is not essential, and the rest of the synthesis is generally carried out without isolating said compound VII or respectively IX.
De même les orthoamides de formules III et respectivement IV peuvent être utilisés pour la prépara- ration des acides diastéréoisomériquement purs 5-Me-(6S)- THF de formule XI et respectivement 5-Me-(6R)-THF de formule XII, et de leurs sels, par conversion en VII et respectivement IX, suivie d'une réduction avec NaB^CN dans un solvant aprotique :Similarly, the orthoamides of formulas III and respectively IV can be used for the preparation of diastereomerically pure acids 5-Me- (6S) - THF of formula XI and respectively 5-Me- (6R) -THF of formula XII, and of their salts, by conversion to VII and respectively IX, followed by reduction with NaB ^ CN in an aprotic solvent:
etand
Les sels des diastéréoisomères de configuration naturelle de formules V, VIII et XI, d'une part, et de configuration non-naturelle de formules VI, X et XII, d'autre part, comprennent selon l'invention (i) les sels métalliques, notamment ceux des métaux alcalins et alca- lino-terreux, tels que Na, K, Ca et Mg, et (ii) les sels d'addition obtenus avec les bases organiques, telles que en particulier les éthylamine, 2-(N,N-diméthylamino)étha- nol, 2-(N,N-diéthylamino)éthanol, morpholine, pipéridine et analogues.The salts of the diastereoisomers of natural configuration of formulas V, VIII and XI, on the one hand, and of non-natural configuration of formulas VI, X and XII, on the other hand, comprise according to the invention (i) the metal salts , especially those of alkali metals and alka- lino-earthy, such as Na, K, Ca and Mg, and (ii) the addition salts obtained with organic bases, such as in particular ethylamine, 2- (N, N-dimethylamino) ethanol, 2 - (N, N-diethylamino) ethanol, morpholine, piperidine and the like.
Le meilleur mode de mise en oeuvre de l'invention est illustré par les schémas réactionnels suivants. SCHEMA 1The best mode of carrying out the invention is illustrated by the following reaction schemes. DIAGRAM 1
(a) (b)(a) (b)
/H20/Λ/ H 2 0 / Λ
1 Q 1 Q
où le groupe A intervenant dans le reste R de la formule I est l/2Ca2+, le groupe A intervenant dans le reste R des formules II, III et IV est H, et le groupe X" intervenant dans la formule II est Cl".where the group A intervening in the remainder R of formula I is l / 2Ca 2+ , the group A intervening in the remainder R of formulas II, III and IV is H, and the group X " intervening in formula II is Cl " .
SCHEMA 2DIAGRAM 2
CHOCHO
III CH2—HH—R (V)III CH 2 —HH — R (V)
H H
où le groupe A intervenant dans le reste R des formules V et VI est l^Ca^ ,1e groupe A intervenant dans le reste R des formules III et IV est H. where the group A intervening in the remainder R of formulas V and VI is l ^ Ca ^, the first group A intervening in the remainder R of formulas III and IV is H.
SCHEMA 3DIAGRAM 3
I I
Py/NaBH4/DMSOPy / NaBH 4 / DMSO
Mg2+ purif./cristall,Mg 2+ purif./cristall,
purif./cristall, purif./cristall,
où le groupe A intervenant dans le reste R des formules VIII et X est l/2Mg2+,le groupe A intervenant dans le reste R des formules III, IV, VII et IX est H, et le groupe X" intervenant dans les formules VII et IX est l'ion p-toluènesulfonate (TSA~). SCHEMA 4where the group A intervening in the remainder R of formulas VIII and X is 1 / 2Mg 2+ , the group A intervening in the remainder R of formulas III, IV, VII and IX is H, and the group X " involved in formulas VII and IX is the p-toluenesulfonate ion (TSA ~). FIGURE 4
XIIXII
où le groupe A intervenant dans le reste R des formules VII, IX, XI et XII est H, et le groupe X" intervenant dans les formules VII et IX est l'ion p-toluènesulfonate. D'autre avantages et caractéristiques de l'inven¬ tion seront mieux compris à la lecture qui va suivre d'exemples de préparation nullement limitatifs mais donnés à titre d'illustration. PREPARATION Iwhere the group A intervening in the rest R of formulas VII, IX, XI and XII is H, and the group X " intervening in formulas VII and IX is the p-toluenesulfonate ion. Other advantages and characteristics of the The invention will be better understood on reading the following examples of preparation which are in no way limiting but which are given by way of illustration.
Obtention de 1Orthoamide de formule III (exemple 1) et de l'orthoamide de formule IV (exemple 2)Obtaining of 1 Orthoamide of Formula III (Example 1) and of Orthoamide of Formula IV (Example 2)
Dans un mélange de 1200 ml d'eau et 270 ml d'acide formique, sous agitation à RT et sous atmosphère inerte (azote ou argon), on ajoute une quantité suffisan¬ te d'ammoniaque pour arriver à un pH de 2,3. On chauffe la solution résultante à 60°C et ajoute 15,41 g de [5,10- CH+-(6RS)-THF]X" de formule II (où X = Cl obtenu selon le procédé décrit par C. TEMPLE et al., J. Med. Chem., 22, 731, (1979). On maintient l'agitation jusqu'à dissolution totale des matières solides. On filtre le milieu réactionnel et laisse reposer le filtrat à RT pendant 48 h. Le précipité volumineux de couleur jaune brillant qui s'est formé est recueilli par filtration sur Buchner et lavé avec de l'eau puis de l'acétonitrile (les filtrats sont recueillis pour traitement ultérieur) et séché pendant 1 h sous pression réduite à 50°C. On obtient 7,76 g (rendement : 54 %) du mélange d'orthoamides de formules III et IV.Sufficient ammonia is added to a pH of 2.3 in a mixture of 1200 ml of water and 270 ml of formic acid, with stirring at RT and under an inert atmosphere (nitrogen or argon) . The resulting solution is heated to 60 ° C and added 15.41 g of [5,10-CH + - (6RS) -THF] X " of formula II (where X = Cl obtained according to the process described by C. TEMPLE and al., J. Med. Chem., 22, 731, (1979) Stirring is continued until dissolved. total solids. The reaction medium is filtered and the filtrate is left to stand at RT for 48 h. The voluminous precipitate of bright yellow color which has formed is collected by filtration on Buchner and washed with water then with acetonitrile (the filtrates are collected for further treatment) and dried for 1 h under reduced pressure at 50 °. vs. 7.76 g are obtained (yield: 54%) of the mixture of orthoamides of formulas III and IV.
Pour déterminer le rapport molaire des deux dia¬ stéréoisomères, un échantillon du mélange ainsi obtenu est transformé en un mélange d'acides N5-méthyl- tétrahydrofolique de formules XI et XII puis analysé par HPLC au moyen d'une colonne chirale RES0LV0SILR selon l'enseignement de K.E.CHOI et al. Anal. Bioch. ,168,pages 398-404 (1988). Dans ce but, 11 mg du mélange III/IV qui a été obtenu est mis en supension dans 1,5 ml d'une solution aqueuse d'acide p-toluènesulfonique à 18 g/1; on ajoute 6 mg de NaBHβCN en solution dans une faible quantité d'eau et agite le mélange résultant pendant 0,25 h à RT; on dilue ce mélange avec 7,5 volumes d'eau avant introduction dans le système HPLC. On déduit (du rapport des diastéréoisomères XII/XI) que, dans ledit mélange, III/IV les deux diastéréoisomères sont dans un rapport molaire IV/III de 7/3.To determine the molar ratio of the two stereoisomers, a sample of the mixture thus obtained is transformed into a mixture of N 5 -methyl-tetrahydrofolic acids of formulas XI and XII then analyzed by HPLC using a chiral column RES0LV0SIL R according to the teaching of KECHOI et al. Anal. Bioch. , 168, pages 398-404 (1988). For this purpose, 11 mg of the III / IV mixture which has been obtained is suspended in 1.5 ml of an aqueous solution of p-toluenesulfonic acid at 18 g / 1; 6 mg of NaBH β CN are added in solution in a small amount of water and the resulting mixture is stirred for 0.25 h at RT; this mixture is diluted with 7.5 volumes of water before introduction into the HPLC system. It is deduced (from the ratio of the diastereoisomers XII / XI) that, in said mixture, III / IV the two diastereoisomers are in a molar ratio IV / III of 7/3.
Par recristallisation répétée dudit mélange III/IV au moyen de H20/HC00H 6/1 v/v, on obtient 1,1 g (rendement : 15,4 %) d'orthoamide de formule IV diasté- réoisométriquement pur.By repeated recrystallization of said mixture III / IV using H 2 O / HC00H 6/1 v / v, 1.1 g (yield: 15.4%) of orthoamide of formula IV diastereoisometrically pure is obtained.
On combine les liqueurs mères de la préparation du composé IV, les traite avec 190 ml d'eau et les laisse reposer à 4°C pendant 62 h. On obtient un précipité jaune brillant que l'on isole par filtration, lave avec H20 puis avec de l'acétonitrile, sèche sous pression réduite pendant 1 h à 50°C. On obtient ainsi 2,2 g d'un produit qui est constitué (selon analyse HPLC sur colonne RES0LV0SILR) d'un mélange III/IV dans un rapport molaire 96/4. La recristallisation de ce mélange est réalisée 5 comme suit : à un mélange de 252 ml d'eau et de 57 ml de HCOOH sous agitation, à RT et sous atmosphère inerte, on ajoute une quantité suffisante de NH^OH pour ajuster le pH à 2,3; on porte le mélange résultant à la température de 60°C puis ajoute ledit mélange III/IV 96/4 ; on agite ° jusqu'à dissolution complète; le milieu réactionnel résultant est ensuite filtré à chaud sur Btlchner, et on laisse le filtrat reposer à RT pendant 8 h puis à 4°C pendant 60 h; le solide jaune brillant qui a précipité est isolé par filtration, lavé avec de l'eau puis de 5 1'acétonitrile et séché sous pression réduite pendant 1 h à 50°C pour donner 1,41 g (rendement : 20 %) de l'ortho¬ amide de formule III diastéréoisométriquement pur, comme cela est confirmé par analyse sur colonne RESOLVOSILR. PREPARATION II 0 Obtention de l'orthoamide de formule III (exempleThe mother liquors of the preparation of compound IV are combined, treated with 190 ml of water and left to stand at 4 ° C for 62 h. A bright yellow precipitate is obtained which is isolated by filtration, washed with H 2 0 and then with acetonitrile, dried under reduced pressure for 1 h at 50 ° C. 2.2 g of a product are thus obtained which (according to HPLC analysis on a RES0LV0SIL R column) consists of a III / IV mixture in a 96/4 molar ratio. Recrystallization of this mixture is carried out as follows: to a mixture of 252 ml of water and 57 ml of HCOOH with stirring, at RT and under an inert atmosphere, a sufficient quantity of NH 2 OH is added to adjust the pH to 2.3; bringing the resulting mixture to the temperature of 60 ° C and then adding said mixture III / IV 96/4; shake until complete dissolution; the resulting reaction medium is then filtered hot on Btlchner, and the filtrate is left to stand at RT for 8 h and then at 4 ° C for 60 h; the brilliant yellow solid which has precipitated is isolated by filtration, washed with water and then with acetonitrile and dried under reduced pressure for 1 h at 50 ° C. to give 1.41 g (yield: 20%) of 1 ortho¬ amide of formula III diastereometrically pure, as confirmed by analysis on a RESOLVOSIL R column. PREPARATION II 0 Obtaining the orthoamide of formula III (example
1) et de l'orthoamide de formule IV (exemple 2) à.partir du sel de calcium de l'acide (6RS)-folinique1) and orthoamide of formula IV (example 2) to . from the calcium salt of (6RS) -folinic acid
Dans un mélange de 464 ml d'eau et de 136 ml de HCOOH sous agitation à 55-60°C et sous atmosphère inerte 5 dans un réacteur pourvu d'une électrode de pH, on introduit 18,9 g de folinate de calcium pentahydraté de formule I, et agite le mélange résultant à 55-60°C pendant 1 h. On refroidit ledit mélange à 4 °C, ajuste le pH (apparent) à 2,35 en ajoutant goutte à goutte la 0 quantité appropriée d'ammoniaque concentrée, et agite pendant une nuit à RT. Le précipité jaune qui s'est formé est isolé par filtration, lavage à l'eau puis à l'acétone. Par séchage sous pression réduite à 50°C pendant 1 h, on obtient 8,81 g d'un mélange IV/III dans 5 un rapport molaire de 7/3 selon l'analyse sur colonne RES0LV0SILR précitée.18.9 g of calcium folinate pentahydrate are introduced into a mixture of 464 ml of water and 136 ml of HCOOH with stirring at 55-60 ° C and under an inert atmosphere 5 in a reactor equipped with a pH electrode of formula I, and stir the resulting mixture at 55-60 ° C for 1 h. Cooling said mixture to 4 ° C, adjusted to pH (apparent) to 2.35 by adding dropwise the 0 appropriate amount of concentrated ammonia, and stirred overnight at RT. The yellow precipitate which has formed is isolated by filtration, washing with water and then with acetone. By drying under reduced pressure at 50 ° C for 1 h, 8.81 g of a mixture IV / III in 5 is obtained in a molar ratio of 7/3 according to the column analysis RES0LV0SIL R above.
Par recristallisation répétée de ce mélange au moyen de H20/HCOOH 6/1 on obtient 1,32 g (rendement : 18,4 %) dOrthoamide de formule IV diastéréoisoméri¬ quement pur (confirmation par analyse HPLC comme indiqué ci-dessus).By repeated recrystallization of this mixture using H 2 O / HCOOH 6/1, 1.32 g (yield: 18.4%) of orthoamide of formula IV diastereoisomerically pure is obtained (confirmation by HPLC analysis as indicated above) .
Analyse élémentaire pour C QH2^NyOg,4H20 théorie : C = 45,55% ; H = 5,54% ; N = 18,59% trouvé : C = 45,91% ; H = 5,27% ; N = 18,45% Spectre de masse MS(FAB)Elementary analysis for C Q H 2 ^ NyOg, 4H 2 0 theory: C = 45.55%; H = 5.54%; N = 18.59% found: C = 45.91%; H = 5.27%; N = 18.45% MS mass spectrum (FAB)
(matrice rïhioglycérine; 8 keV) : 456(m+,100), 412(7,5), 410(9,1), 326(10), 311(7,0), 283(11,6), 282(21,2) On combine les liqueurs mères et les dilue avec 80 ml d'eau. On refroidit à 0°C et agite à cette température sous atmosphère inerte pendant 24 h. On recueille le précipité formé par filtration sur Btlchner, lave avec de l'eau puis de l'acétone et sèche sous pression réduite à 50°C. On obtient 2,67 g d'un produit constitué de III/IV dans un rapport molaire de 98/2, selon l'analyse HPLC sur colonne RES0LV0SILR précitée. Par recristallisation selon le mode opératoire donné à la préparation I ci-dessus (pour l'obtention du composé III), on recueille 1,91 g (rendement : 23,9%) du produit de formule III diastéréoisométriquement pur (confirmation par HPLC sur colonne RES0LV0SILR précitée.) Analyse élémentaire pour C^H^ yO^,HCOOH,1/2H20 théorie : C = 49,42% ; H = 4,74% ; N = 19,21% trouvé : C = 49,45% ; H = 4,70% ; N = 19,45%(rhioglycerin matrix; 8 keV): 456 (m + , 100), 412 (7.5), 410 (9.1), 326 (10), 311 (7.0), 283 (11.6), 282 (21,2) The mother liquors are combined and diluted with 80 ml of water. It is cooled to 0 ° C. and stirred at this temperature under an inert atmosphere for 24 h. The precipitate formed is collected by filtration on Btlchner, washed with water and then acetone and dried under reduced pressure at 50 ° C. 2.67 g of a product consisting of III / IV are obtained in a molar ratio of 98/2, according to the HPLC analysis on the above-mentioned column RES0LV0SIL R. By recrystallization according to the procedure given in Preparation I above (to obtain compound III), 1.91 g (yield: 23.9%) of the product of formula III diastereoisometrically pure are collected (confirmation by HPLC on column RES0LV0SIL R above.) Elemental analysis for C ^ H ^ yO ^, HCOOH, 1 / 2H 2 0 theory: C = 49.42%; H = 4.74%; N = 19.21% found: C = 49.45%; H = 4.70%; N = 19.45%
Spectre de masse MS(FAB)MS mass spectrum (FAB)
(matrice :thioglycérine; 8 keV) : 456(m+,100), 412(13,3), 410(10,8), 326(13,3), 311(10,4), 283(13,7), 282(24,1), 232(39,4) PREPARATION III(matrix: thioglycerin; 8 keV): 456 (m + , 100), 412 (13.3), 410 (10.8), 326 (13.3), 311 (10.4), 283 (13.7 ), 282 (24.1), 232 (39.4) PREPARATION III
Obtention du sel de calcium de 5-CHO-(6S)-THF (exemple 3 ; formule V)Obtaining the calcium salt of 5-CHO- (6S) -THF (Example 3; Formula V)
Dans un mélange dégazé de 2 litres d'eau et de 20 ml de 2-mercaptoéthanol maintenu sous agitation à RT sous une atmosphère inerte dans un réacteur pourvu d'un condenseur de reflux et d'une électrode de pH, on introduit 80 g du diastéréoisomère III pur obtenu selon la préparation II ci-dessus, puis 100 ml d'une solution aqueuse de tris(hydroxyméthylamino)méthane 2M. On chauffe le mélange résultant à 45-50°C et maintient le pH à 7,3 par addition de la quantité nécessaire de la solution de tris(hydroxyméthylamino)méthane jusqu'à dissolution com¬ plète de la matière solide. Le milieu résultant est porté au reflux pendant 4,5 h; on ajoute 3,3 g de noir de carbone à la solution chaude et poursuit l'agitation pendant 1 h tandis que l'on refroidit ledit milieu à RT. Après filtration du milieu réactionnel sur celite, on ajoute au fitrat 87 ml d'une solution aqueuse de CaCl 2M et dilue lentement la solution résultante avec 3,6 litres de EtOH (à 94 %). On conserve ladite solution ainsi diluée pendant une nuit à 0°C, on recueille par filtration le précipité formé, le lave avec EtOH (à 94%) puis MeCOMe. Par séchage sous pression réduite à 50°C pendant 2 h, on obtient 79 g de (6S)-folinate de calcium brut. Ce produit présente par HPLC une pureté de 96 %; par recristallisation répétée au moyen de H20 et séchage sous pression réduite à 50°C, on obtient 43,5 g (rende¬ ment : 48,5 %) de (όS)-folinate de calcium pur. AnalysesIn a degassed mixture of 2 liters of water and 20 ml of 2-mercaptoethanol maintained under stirring at RT under an inert atmosphere in a reactor provided with a reflux condenser and a pH electrode, 80 g of the pure diastereoisomer III obtained according to preparation II above, then 100 ml of a 2M aqueous solution of tris (hydroxymethylamino) methane. The resulting mixture is heated to 45-50 ° C. and the pH is maintained at 7.3 by adding the necessary quantity of the solution of tris (hydroxymethylamino) methane until complete dissolution of the solid material. The resulting medium is brought to reflux for 4.5 h; 3.3 g of carbon black are added to the hot solution and the stirring is continued for 1 h while the said medium is cooled to RT. After filtration of the reaction medium on celite, 87 ml of a 2M aqueous CaCl solution are added to the fitrat and the resulting solution is slowly diluted with 3.6 liters of EtOH (94%). Said solution thus diluted is kept overnight at 0 ° C., the precipitate formed is collected by filtration, washed with EtOH (94%) then MeCOMe. By drying under reduced pressure at 50 ° C for 2 h, 79 g of crude calcium (6S) -folinate are obtained. This product has a purity of 96% by HPLC; by repeated recrystallization using H 2 0 and drying under reduced pressure at 50 ° C, 43.5 g (rende¬ ment: 48.5%) of pure (όS) -folinate are obtained. Analyzes
- teneur en H20 (selon FISCHER) : 15 %- H 2 0 content (according to FISCHER): 15%
- teneur en Ca : 8,11 % (théorie : 7,84 %)- Ca content: 8.11% (theory: 7.84%)
- pureté HPLC : 100 %- HPLC purity: 100%
- test HPLC [ contre l'étalon (6RS) de la phama- copée US] : 99,5 % - pureté diastéréoisomérique (évaluée sur colonne chirale) : 100 %- HPLC test [against the standard (6RS) of the US pharmacopoeia]: 99.5% - diastereoisomeric purity (evaluated on a chiral column): 100%
- spectre UV (20 mg/1 dans NaOH 0,01N) : λmax = 282 nm (£ = 30 060) λ in = 242 nm rapport des 2 pic d'adsorption A-^/A2 = 4,96- UV spectrum (20 mg / 1 in 0.01N NaOH): λ max = 282 nm (£ = 30,060) λ in = 242 nm ratio of the 2 adsorption peaks A - ^ / A 2 = 4.96
- [oi]D = -14,6° ( c = 1 dans H20) PREPARATION IV- [oi] D = -14.6 ° (c = 1 in H 2 0) PREPARATION IV
Obtention du sel de calcium de 5-CHO-(6R)-THF (exemple 4 ; formule VI)Obtaining the calcium salt of 5-CHO- (6R) -THF (Example 4; Formula VI)
En procédant selon les modalités opératoires décrites à la préparation III ci-dessus, mais en remplaçant le diastéréoisomère de formule III par le diastéréoisomère de formule IV, on obtient le produit attendu.By proceeding according to the operating methods described in preparation III above, but by replacing the diastereoisomer of formula III by the diastereoisomer of formula IV, the expected product is obtained.
AnalysesAnalyzes
- teneur en H20 (selon FISCHER) : 10,2 %- H 2 0 content (according to FISCHER): 10.2%
- pureté HPLC : 99 %- HPLC purity: 99%
- test HPLC [ contre l'étalon (6RS) de la phama- copée US] : 95 %- HPLC test [against the standard (6RS) of the US pharmacopoeia): 95%
- pureté diastéréoisomérique (évaluée sur colonne chirale) : supérieure à 98 %- diastereoisomeric purity (evaluated on a chiral column): greater than 98%
- spectre UV (20 mg/1 dans NaOH 0,01N) : max = 282 nm ( €=28 350) min = 242 nm rapport des 2 pic d'adsorption A^/A2 = 4,25- UV spectrum (20 mg / 1 in 0.01N NaOH): max = 282 nm (€ = 28,350) min = 242 nm ratio of the 2 adsorption peak A ^ / A 2 = 4.25
- [oGD ≈ +39,8° ( c = 1 dans H20) PREPARATION V- [oG D ≈ + 39.8 ° (c = 1 in H 2 0) PREPARATION V
Obtention du sel de magnésium de 5,10-CH2~(6S)-THF (exemple 5 ; formule X)Obtaining the magnesium salt of 5.10-CH 2 ~ (6S) -THF (Example 5; formula X)
On met en suspension 10 g du diastéréoisomère orthoamide de formule IV dans une solution de 4,18 g de10 g of the orthoamide diastereoisomer of formula IV are suspended in a solution of 4.18 g of
H-TSA dans 130 ml de DMSO sec et agite à RT sous atmosphère inerte jusqu'à dissolution complète. On ajoute à RT 44 ml de pyridine puis on ajoute lentement (pendant 10 minutes) une solution de 880 mg de aBH^ dans 44 ml de DMSO. Après avoir agité le mélange résultant à RT pendant une durée de 10 minutes on refroidit le milieu réactionnel au moyen d'un bain de glace et on le dilue goutte à goutte avec un litre de méthyléthylcétone. On agite pendant 20 minutes à 0° C et recueille le précipité jaune formé par filtration ; on lave ce précipité avec de l'acétone (2 fois) et le sèche sous pression réduite à 50° C pendant 1 h pour obtenir 6,14 grammes de 5,10-CH9~ (6S)-THF brut (probablement sous forme d'un sel mixte de Na+/pyridinium). Ce produit a une pureté apparente par HPLC de 87,2 % et contient environ 11 % de 5-Me-THF.H-TSA in 130 ml of dry DMSO and stirred at RT under an inert atmosphere until complete dissolution. 44 ml of pyridine are added to RT and then added slowly (during 10 minutes) a solution of 880 mg of aBH ^ in 44 ml of DMSO. After having stirred the resulting mixture at RT for a period of 10 minutes, the reaction medium is cooled using an ice bath and diluted dropwise with one liter of methyl ethyl ketone. The mixture is stirred for 20 minutes at 0 ° C. and the yellow precipitate formed is collected by filtration; this precipitate is washed with acetone (2 times) and dried under reduced pressure at 50 ° C for 1 h to obtain 6.14 grams of crude 5.10-CH 9 ~ (6S) -THF (probably in the form of a mixed Na + / pyridinium salt). This product has an apparent purity by HPLC of 87.2% and contains approximately 11% of 5-Me-THF.
On ajoute par portion ce produit brut à 80 ml d'eau contenant des traces de NaOH sous agitation à 0° C sous atmosphère inerte : pendant cette opération le pH est maintenu à environ 9,0 par addition le moment venu de NaOH IN. On ajoute à la solution résultante 6,0 ml d'une solution aqueuse de MgCl 2M, ce qui amène le pH à 8,4. On élimine la petite quantité d'insoluble par filtration sur celite. Le filtrat résultant est agité à 0° C tout en étant dilué goutte à goutte avec 105 ml d'acétone ; après agitation pendant 45 autres minutes à 0° C on recueille le précipité par filtration, le lave (2 fois) à l'acétone et le sèche sous pression réduite à 50° C pendant 1 h. On obtient 3,9 g du sel de magnésium attendu de formule X.This crude product is added per portion to 80 ml of water containing traces of NaOH with stirring at 0 ° C. under an inert atmosphere: during this operation the pH is maintained at approximately 9.0 by addition of NaOH IN when the time comes. 6.0 ml of a 2M aqueous MgCl solution are added to the resulting solution, which brings the pH to 8.4. The small amount of insoluble material is removed by filtration on celite. The resulting filtrate is stirred at 0 ° C while being diluted dropwise with 105 ml of acetone; after stirring for another 45 minutes at 0 ° C., the precipitate is collected by filtration, washed (twice) with acetone and dried under reduced pressure at 50 ° C for 1 h. 3.9 g of the expected magnesium salt of formula X are obtained.
AnalysesAnalyzes
- teneur en H20 (selon FISCHER) : 14 %- H 2 0 content (according to FISCHER): 14%
- pureté HPLC : 92,3 %- HPLC purity: 92.3%
(le produit contient 6 % de 5-Me-(6R)-THF) - pureté diastéréoisomérique (évaluée sur colonne chirale) : supérieure ou égale à 98 %(the product contains 6% of 5-Me- (6R) -THF) - diastereoisomeric purity (evaluated on a chiral column): greater than or equal to 98%
- spectre UV (20 mg/1 dans NaOH 0,01N) : λmaχ ≈ 296 nm (ε =28 300)- UV spectrum (20 mg / 1 in 0.01N NaOH): λ maχ ≈ 296 nm (ε = 28 300)
*min " 244'5 n rapport des 2 pic d'adsorption A^/A = 3,68 - [*]D = -88,7° ( c = 1 dans H20) PREPARATION VI* min " 244 ' 5 n ratio of the 2 adsorption peak A ^ / A = 3.68 - [*] D = -88.7 ° (c = 1 in H 2 0) PREPARATION VI
Obtention du sel de magnésium de 5,10-CH2-(6R)-THF (Exemple 6 ; formule VIII) Ce produit est obtenu selon des modalités opératoires analogues à celles décrites dans la préparation V à partir du diastéréoisomère orthoamide de formule III.Obtaining the magnesium salt of 5.10-CH 2 - (6R) -THF (Example 6; formula VIII) This product is obtained according to operating methods analogous to those described in preparation V from the orthoamide diastereomer of formula III.
Analyses - teneur en H20 (selon FISCHER) : 14,0 %Analysis - H 2 0 content (according to FISCHER): 14.0%
- pureté HPLC : 95,7 %- HPLC purity: 95.7%
(le produit contient 3,6 % de 5-Me-(6S)-THF)(the product contains 3.6% 5-Me- (6S) -THF)
- pureté diastéréoisomérique (évaluée sur colonne chirale) : égale à 99 % - spectre UV (20 mg/1 dans NaOH 0,01N) : λmax = 296 n (£ =28 300) min = 245 n* rapport des 2 pic d'adsorption A^/A2 = 4,11- diastereoisomeric purity (evaluated on a chiral column): equal to 99% - UV spectrum (20 mg / 1 in 0.01N NaOH): λ max = 296 n (£ = 28,300) min = 245 n * ratio of the 2 peaks d adsorption A ^ / A 2 = 4.11
- [*]D " +123,9° ( c = 1 dans H20) PREPARATION VII- [*] D "+ 123.9 ° (c = 1 in H 2 0) PREPARATION VII
Obtention de l'acide 5-Me-(6S)-THFObtaining 5-Me- (6S) -THF Acid
(Exemple 7 ; formule XI)(Example 7; formula XI)
A une solution de 910 mg de H-TSA dans 53 ml d'eau, sous agitation à RT et sous atmosphère inerte, on ajoute 1,0 g du diastéréoisomère orthoamide de formule III. On ajoute ensuite goutte à goutte une solution de 500 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 1 ml d'eau puis agite le mélange résultant pendant 5 h à RT ; il se forme un précipité blanc que l'on isole par filtration, lave avec de l'eau froide, de l'éthanol puis de l'acétone, sèche sous pression réduite à 50° C pendant 1 h. On obtient 923 mg de l'acide brut de formule XI.To a solution of 910 mg of H-TSA in 53 ml of water, with stirring at RT and under an inert atmosphere, 1.0 g of the orthoamide diastereomer of formula III is added. A solution of 500 mg of sodium cyanoborohydride in 1 ml of water is then added dropwise, then the resulting mixture is stirred for 5 h at RT; a white precipitate is formed which is isolated by filtration, washed with cold water, ethanol and then acetone, dried under reduced pressure at 50 ° C for 1 h. 923 mg of the crude acid of formula XI are obtained.
Ce produit brut est mis en suspension dans un mélange de 37 ml d'eau et 0,25 ml de 2-mercaptoéthanol. Le mélange résultant est agité à RT sous atmosphère inerte et on ajoute une quantité suffisante de NaOH IN pour obtenir une dissolution complète. On filtre et acidifie le filtrat en ajoutant goutte à goutte HCl IN pour atteindre un pH de 3,5. Après agitation de la suspension résultante pendant 1 h à 0° C , on centrifuge, remet en suspension le solide d'abord dans de l'eau, puis dans de l'éthanol et enfin dans de l'acétone. Après séchage sous pression réduite à 50° C pendant 1 h, on obtient 636 mg de l'acide de formule XI attendu.This crude product is suspended in a mixture of 37 ml of water and 0.25 ml of 2-mercaptoethanol. The resulting mixture is stirred at RT under an inert atmosphere and a sufficient amount of IN NaOH is added to obtain complete dissolution. The filtrate is filtered and acidified by adding IN HCl drop by drop to reach a pH of 3.5. After stirring the resulting suspension for 1 h at 0 ° C, centrifuging, resuspending the solid first in water, then in ethanol and finally in acetone. After drying under reduced pressure at 50 ° C for 1 h, 636 mg of the expected acid of formula XI is obtained.
AnalysesAnalyzes
- teneur en H20 (selon FISCHER) : 10 %- H 2 0 content (according to FISCHER): 10%
- pureté HPLC : 96,0 %- HPLC purity: 96.0%
- pureté diastéréoisomérique (évaluée sur colonne chirale) : égale à 100 %- diastereoisomeric purity (evaluated on a chiral column): equal to 100%
- spectre UV- UV spectrum
(20 mg/1 dans tampon phosphate 0,1 M; pH 6,5) •: Λmaχ = 290 n (£ =32 100) min = 245 nm rapport des 2 pic d'adsorption A^/A2 = 3,65(20 mg / 1 in 0.1 M phosphate buffer; pH 6.5) •: Λ maχ = 290 n (£ = 32,100) min = 245 nm ratio of the 2 adsorption peak A ^ / A 2 = 3, 65
- [ ]p = +38,0° ( c = 0,5 dans tampon phosphate- [] p = + 38.0 ° (c = 0.5 in phosphate buffer
0,1M ; pH 6,5) PREPARATION VIII0.1M; pH 6.5) PREPARATION VIII
Obtention de l'acide 5-Me-(6R)-THF (Exemple 8 ; formule XII)Obtaining 5-Me- (6R) -THF Acid (Example 8; Formula XII)
En procédant selon les modalités opératoires décrites à la préparation VII, mais en remplaçant le diastéréoisomère de formule III par le diastéréoisomère de formule IV, on obtient l'acide attendu de configu- ration non-naturelle.By proceeding according to the operating methods described in preparation VII, but by replacing the diastereoisomer of formula III with the diastereoisomer of formula IV, the expected acid of non-natural configuration is obtained.
AnalysesAnalyzes
- teneur en H20 (selon FISCHER) : 11,5 %- H 2 0 content (according to FISCHER): 11.5%
- pureté HPLC : 96,3%- HPLC purity: 96.3%
- pureté diastéréoisomérique (évaluée sur colonne chirale) : égale à 100 % - spectre UV- diastereoisomeric purity (evaluated on a chiral column): equal to 100% - UV spectrum
(20 mg/1 dans tampon phosphate 0,1 M; pH 6,5) : >. maχ = 290 nm ( =32 500) rapport des 2 pic d'adsorption A-^/A = 3,74(20 mg / 1 in 0.1 M phosphate buffer; pH 6.5):>. maχ = 290 nm (= 32,500) ratio of the 2 adsorption peaks A - ^ / A = 3.74
- MT) = "9,2° ( c = 0,5 dans tampon phosphate- M T) = "9.2 ° (c = 0.5 in phosphate buffer
0,1M ; pH 6,5) UTILISATION THERAPEUTIQUE0.1M; pH 6.5) THERAPEUTIC USE
L'acide N5,N10-méthylène-(6S)-5,6,7,8-tétrahydro- folique de formule X et ses sels (notamment le sel de magnésium obtenu selon le procédé de la préparation V ci- dessus) sont des produits diastéréoisomériquement purs, appartenant à la série des folates réduits de configuration non-naturelle, et utiles en thérapeutique. On a trouvé qu'ils inhibent la thymidylate synthétase et sont avantageusement destinés à un usage cytostatique en thérapeutique, notamment contre le cancer.N 5 , N 10 -methylene- (6S) -5,6,7,8-tetrahydro-folic acid of formula X and its salts (in particular the magnesium salt obtained according to the process of preparation V above) are diastereoisomerically pure products, belonging to the series of reduced folates of non-natural configuration, and useful in therapy. It has been found that they inhibit thymidylate synthetase and are advantageously intended for cytostatic use in therapy, in particular against cancer.
Selon l'invention, on préconise donc en tant que produits industriels nouveaux, l'acide 5,10-CH2-(6S)-THF diastéréoisomériquement pur et ses sels diastéréoisoméri¬ quement purs.According to the invention, therefore, as new industrial products, 5,10-CH 2 - (6S) -THF diastereoisomerically pure acid and its diastereoisomerically pure salts are recommended.
On préconise également l'utilisation d'une substance diastéréoisomériquement pure, choisie parmi l'ensemble constitué par l'acide 5,10-CH2-(6S)-THF, ses sels non-toxiques et leurs mélanges, pour l'obtention d'un médicament inhibant la thymidylate synthétase destinée à un usage cytostatique en thérapeutique, notamment contre le cancer.We also recommend the use of a diastereoisomerically pure substance, chosen from the group consisting of 5,10-CH 2 - (6S) -THF acid, its non-toxic salts and their mixtures, for obtaining d 'a drug inhibiting thymidylate synthetase intended for cytostatic use in therapy, in particular against cancer.
En variante, on préconise également l'utilisa- tion dans laquelle (1) ladite substance diastéréoisoméri¬ quement pure, choisie parmi l'ensemble constitué par l'acide 5,10-CH2-(6S)-THF, ses sels non-toxiques et leurs mélanges est associée avec (2) un agent antinéoplasme notamment choisi parmi le 5-fluorouracil, la 5-fluoro-2'- désoxyuridine, le méthotréxate, le cisplatine et leurs mélanges.As a variant, use is also recommended in which (1) said diastereoisomerically pure substance, chosen from the group consisting of 5,10-CH2- (6S) -THF acid, its non-toxic salts and their mixtures is associated with (2) an antineoplasmic agent chosen in particular from 5-fluorouracil, 5-fluoro-2'- deoxyuridine, methotrexate, cisplatin and mixtures thereof.
Dans cette dernière utilisation, ladite substance (1) et ledit agent (2) sont avantageusement présentés sous la forme d'une composition en association avec un excipient physiologiquement acceptable. L'association (1) + (2) offre l'avantage de présenter des effets syner- gétiques.In the latter use, said substance (1) and said agent (2) are advantageously presented in the form of a composition in association with a physiologically acceptable excipient. The combination (1) + (2) offers the advantage of having synergistic effects.
Par ailleurs, on vient de trouver que le diasté- réoisomère de la série dite de configuration non- naturelle 5-CHO-(6R)-THF et ses sels présentent des pro¬ priétés cytostatiques intéressantes en thérapeutique. Le fait d'avoir pu déceler ces propriétés cytostatiques est (i) surprenant en ce sens que le 5-CHO-(6S)-THF de la série dite de configuration naturelle, l'acide folinique commercial de formule 5-CHO-(6RS)-THF et leurs sels ont été utilisés jusqu'à présent pour limiter les effets des agents cytostatiques tels que le méthotréxate, et (ii) bénéfique en ce sens que le 5-CHO-(6R)-THF et ses sels, qui sont peu toxiques, peuvent avantageusement remplacer, en totalité ou en partie, les agents cytostatiques ou antinéoplasmes de référence réputés très toxiques ou néfastes vis-à-vis de la cellule, tels que le métho¬ tréxate. Dans l'état actuel des connaissances, la Demande¬ resse présume que l'effet cytostatique qu'elle a décelé pour le 5-CHO-(6R)-THF et ses sels serait dû à une action bénéfique de ces produits sur un ou plusieurs enzymes essentiels des cellules; cependant, la Demanderesse n'est nullement liée par cet aspect théorique.Furthermore, we have just found that the diastereoisomer of the series known as of non-natural configuration 5-CHO- (6R) -THF and its salts have cytostatic properties which are interesting in therapy. The fact of having been able to detect these cytostatic properties is (i) surprising in the sense that 5-CHO- (6S) -THF of the series known as of natural configuration, the commercial folinic acid of formula 5-CHO- (6RS ) -THF and their salts have been used up to now to limit the effects of cytostatic agents such as methotrexate, and (ii) beneficial in the sense that 5-CHO- (6R) -THF and its salts, which are not very toxic, can advantageously replace, in whole or in part, the reference cytostatic agents or antineoplasms reputed to be very toxic or harmful to the cell, such as metho¬ trexate. In the current state of knowledge, the Application assumes that the cytostatic effect it has detected for 5-CHO- (6R) -THF and its salts would be due to a beneficial action of these products on one or more essential cell enzymes; however, the Applicant is in no way bound by this theoretical aspect.
Ainsi selon l'invention, on préconise une nouvel¬ le utilisation d'une substance diastéréoisomériquement pure choisie parmi l'ensemble constitué par l'acide (6R)- 5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofolique de formule 5-CHO-(6R)- THF, ses sels non toxiques et leurs mélanges, pour l'obtention d'un médicament cytostatique destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis des maladies néopla- siques, notamment le cancer.Thus according to the invention, it is recommended a new use of a diastereoisomerically pure substance chosen from the group consisting of (6R) - 5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 5- CHO- (6R) - THF, its non-toxic salts and their mixtures, for obtaining a cytostatic medicament intended for use in therapy with regard to neoplastic diseases, in particular cancer.
Bien entendu, selon l'invention, dans le cadre de la nouvelle utilisation des 5,10-CH2-(6S)-THF, 5-CH0- (6R)-THF et de leurs sels non toxiques en tant que prin¬ cipes actifs cytostatiques, chaque principe actif inter¬ viendra à une dose thérapeutiquement efficace. Dans cette optique, on fera appel à une composition renfermant, en association avec un excipient physiologiquement accepta¬ ble, une quantité cytostatiquement efficace d'un ingré¬ dient actif choisi .parmi (a) le composé 5,10-CH2~(6S)- THF, ses sels non toxiques et leurs mélanges, et (b) le composé 5-CHO-(6R)-THF, ses sels non-toxiques et leurs mélanges. Of course, according to the invention, in the context of the new use of 5,10-CH 2 - (6S) -THF, 5-CH0- (6R) -THF and their non-toxic salts as principles cytostatic active ingredients, each active ingredient will come at a therapeutically effective dose. In this context, use will be made of a composition containing, in association with a physiologically acceptable excipient, a cytostatically effective amount of an active ingredient chosen. Among (a) the compound 5,10-CH 2 ~ (6S ) - THF, its non-toxic salts and their mixtures, and (b) the compound 5-CHO- (6R) -THF, its non-toxic salts and their mixtures.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation d'un composé dérivant de l'acide tétrahydrofolique et de ses diastéréoisomères, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend :1. Process for the preparation of a compound derived from tetrahydrofolic acid and its diastereoisomers, said process being characterized in that it comprises:
1°) la réaction d'un composé tétrahydrofolique choisi parmi l'ensemble constitué par1) the reaction of a tetrahydrofolic compound chosen from the group consisting of
(i) l'acide (6RS)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofolique de formule(i) (6RS) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula
dans laquelle R représente le reste p-benzoyl-(L)-gluta- mique de formule :in which R represents the p-benzoyl- (L) -glutamic residue of formula:
où A est H; et ses sels, et (ii) le composé acide N , N10-méthényl-5,6,7,8-tétra- hydrofolique de formule where A is H; and its salts, and (ii) the N, N 10 -methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid compound of formula
dans laquelle X" est un anion et R est défini comme ci- dessus; avec HCOOH, ladite réaction comportant la régulation du pH dans la gamme de 2,0 à 2,6; et wherein X " is an anion and R is defined as above; with HCOOH, said reaction comprising regulating the pH in the range of 2.0 to 2.6; and
2°) la récupération du précipité, qui s'est for¬ mé, par filtration, d'une part, et du filtrat correspon¬ dant, d'autre part;2) recovery of the precipitate, which has formed, by filtration, on the one hand, and of the corresponding filtrate, on the other hand;
3°) la séparation, à partir dudit précipité, d'un premier diastéréoisomère pur appartenant à la série de configuration non-naturelle; et,3) separation, from said precipitate, of a first pure diastereoisomer belonging to the series of non-natural configuration; and,
4°) si nécessaire, la séparation, à partir dudit filtrat, obtenu selon le stade 2°) d'un second diastéré¬ oisomère pur appartenant à la série de configuration naturelle.4) if necessary, the separation, from said filtrate, obtained according to stage 2) of a second pure isomer diastereomer belonging to the series of natural configuration.
2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le stade 1°) comporte : (a) la réaction du composé de formule I ou de l'un de ses sels avec un mélange H 0/HC00H, pendant au moins lh, à une température de 55- 65°C, (b) le refroidissement du mélange résultant à 40- 45°C, et (c) la poursuite de la réaction à 40-45°C, pen¬ dant au moins 0,25 h, à un pH régulé à 2,0- 2,6.2. Method according to claim 1, characterized in that stage 1 °) comprises: (a) reacting the compound of formula I or one of its salts with a mixture H 0 / HC00H, for at least 1 h, at a temperature of 55-65 ° C, (b) cooling the resulting mixture to 40-45 ° C, and (c) the continuation of the reaction at 40-45 ° C, for at least 0.25 h, at a pH regulated at 2.0-2.6.
3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le stade 1°) comporte : la réaction du composé de formule II avec un mélange H20/HCOOH, pendant au moins 0,25 h, à une température de 55-65°C, à un pH régulé à 2,0-2,6.3. Method according to claim 1, characterized in that stage 1 °) comprises: the reaction of the compound of formula II with an H 2 O / HCOOH mixture, for at least 0.25 h, at a temperature of 55-65 ° C, at a pH regulated at 2.0-2.6.
4. Procédé suivant l'une quelconque des revendica¬ tions 1, 2 et 3, caractérisé en ce que au, stade 1°), le pH du milieu réactionnel est ajusté entre 2,0 et 2,6 par addition d'ammoniaque.4. Method according to any one of claims 1, 2 and 3, characterized in that at stage 1 °), the pH of the reaction medium is adjusted between 2.0 and 2.6 by addition of ammonia.
5. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que au, stade 1°), le pH du milieu réactionnel est ajusté entre 2,2 et 2,4.5. Method according to claim 4, characterized in that at stage 1 °), the pH of the reaction medium is adjusted between 2.2 and 2.4.
6. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les séparations des stades 3°) et 4°) comportent des cristallisations fractionnées.6. Method according to claim 1, characterized in that the separations of stages 3 °) and 4 °) comprise fractional crystallizations.
7. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le produit obtenu au stade 2°) est un mélange dudit premier diastéréoisomère et dudit second diastéréo¬ isomère dans un rapport molaire d'environ 7/3.7. Method according to claim 1, characterized in that the product obtained in stage 2) is a mixture of said first diastereoisomer and said second diastereoisomer in a molar ratio of approximately 7/3.
8. Composé tétrahydrofolique caractérisé en ce qu'il est obtenu selon le procédé du stade 4°) de la revendica¬ tion 1, appartient à la série de configuration naturelle et répond à la formule orthoamide suivante : H8. Tetrahydrofolic compound characterized in that it is obtained according to the process of stage 4 °) of claim 1, belongs to the series of natural configuration and corresponds to the following orthoamide formula: H
9. Composé tétrahydrofolique caractérisé en ce qu'il est obtenu selon le procédé du stade 3°) de la revendica¬ tion 1, appartient à la série de configuration non- naturelle et répond à la formule orthoamide suivante :9. Tetrahydrofolic compound, characterized in that it is obtained according to the process of stage 3 °) of claim 1, belongs to the series of non-natural configuration and corresponds to the following orthoamide formula:
HH
10. Utilisation d'un composé tétrahydrofolique dias¬ téréoisomère selon l'une quelconque des revendications 8 et 9 pour l'obtention de folates réduits 6S et 6R diastéréoisomériquement purs.10. Use of a tetrahydrofolic compound dias¬ tereoisomer according to any one of claims 8 and 9 for obtaining reduced folates 6S and 6R diastereoisomerically pure.
11. Utilisation selon la revendication 10 pour l'ob¬ tention, à partir du diastéréoisomère de formule III, d'un composé choisi parmi l'ensemble constitué par11. Use according to claim 10 for obtaining, from the diastereoisomer of formula III, a compound chosen from the group consisting of
(a) l'acide (6S)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofoli¬ que,(a) (6S) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofoli¬ acid,
(b) l'acide (6S)-N5-méthyl-5,6,7,8-tétrahydrofo- lique, (c) l'acide (6R)-N5,N10-méthylène-5,6,7,8-tétra- hydrofolique, et(b) (6S) -N 5 -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, (c) (6R) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, and
(d) leurs sels.(d) their salts.
12. Utilisation selon la revendication 10 pour l'ob¬ tention, à partir du diastéréoisomère de formule IV, d'un composé choisi parmi l'ensemble constitué par12. Use according to claim 10 for obtaining, from the diastereoisomer of formula IV, a compound chosen from the group consisting of
(a) l'acide (6R)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofoli¬ que,(a) (6R) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofoli¬ acid,
(b) l'acide (6R)-N5-méthyl-5,6,7,8-tétrahydrofo- lique,(b) (6R) -N 5 -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid,
(c) l'acide' (6S)-N5,N10-méthylène-5,6,7,8-tétra- hydrofolique, et(c) '(6S) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, and
(d) leurs sels.(d) their salts.
13. Acide N5,N10-méthylène-(6S)-5,6,7,8-tétrahydrofo- lique et ses sels d'addition diastéréoisomériquement purs.13. N 5 , N 10 -methylene- (6S) -5,6,7,8-tetrahydrofolic acid and its diastereoisomerically pure addition salts.
1 • Utilisation d'une substance diastéréoisomérique¬ ment pure choisie parmi l'ensemble constitué par l'acide N5,N10-méthylène-(6S)-5,6,7,8-tétrahydrofolique, ses sels non-toxiques et leurs mélanges, pour l'obtention d'un médicament inhibant la thymidylate synthétase et destiné à un usage cytostatique en thérapeutique notamment contre le cancer.1 • Use of a pure diastereoisomeric substance chosen from the group consisting of N 5 , N 10 -methylene- (6S) -5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, its non-toxic salts and their mixtures, for obtaining a drug inhibiting thymidylate synthetase and intended for cytostatic use in therapy, in particular against cancer.
15. Utilisation selon la revendication 14, caractéri¬ sée en ce que (1) ladite substance diastéréoisomérique- ment pure choisie parmi l'ensemble constitué par l'acide N5,N10-méthylène-(6S)-5,6,7,8-tétrahydrofolique, ses sels non-toxiques et leurs mélanges, est associée avec (2) un agent anti-néoplasme, notamment choisi parmi l'ensemble comprenant le 5-fluorouracil, la 5-fluoro-2'-désoxy- uridine, le méthotréxate, le cisplatine et leurs mélanges.15. Use according to claim 14, characterized in that (1) said diastereoisomerically pure substance chosen from the group consisting of acid N 5 , N 10 -methylene- (6S) -5,6,7 , 8-tetrahydrofolic, its non-toxic salts and their mixtures, is associated with (2) an anti-neoplasm agent, in particular chosen from the group including 5-fluorouracil, 5-fluoro-2'-deoxyuridine, methotrexate, cisplatin and mixtures thereof.
16. Utilisation d'une substance diastéréoisomérique¬ ment pure choisie parmi l'ensemble constitué par l'acide (6R)-5-formyl-5,6,7,8-tétrahydrofolique, ses sels non toxiques et leurs mélanges, pour l'obtention d'un médica¬ ment cytostatique destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis des maladies néoplasiques. 16. Use of a pure diastereoisomeric substance chosen from the group consisting of (6R) -5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, its non-toxic salts and their mixtures, for the obtaining a cytostatic medicament intended for use in therapy with regard to neoplastic diseases.
EP91905831A 1990-03-09 1991-03-08 Diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid, process for their preparation and use in the synthesis of diastereoisomers 6s and 6r of reduced folates Withdrawn EP0471820A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9003032 1990-03-09
FR9003032A FR2659330B1 (en) 1990-03-09 1990-03-09 DIASTEREOISOMERIC COMPOUNDS DERIVED FROM TETRAHYDROFOLIC ACID, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND USE IN THE SYNTHESIS OF 6S AND 6R DIASTEREOMERS OF REDUCED FOLATES.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP0471820A1 true EP0471820A1 (en) 1992-02-26

Family

ID=9394574

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP91905831A Withdrawn EP0471820A1 (en) 1990-03-09 1991-03-08 Diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid, process for their preparation and use in the synthesis of diastereoisomers 6s and 6r of reduced folates

Country Status (8)

Country Link
US (1) US5239074A (en)
EP (1) EP0471820A1 (en)
JP (1) JPH04507103A (en)
AU (1) AU7492591A (en)
CA (1) CA2056433A1 (en)
FI (1) FI915254A0 (en)
FR (1) FR2659330B1 (en)
WO (1) WO1991013890A2 (en)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH680731A5 (en) * 1990-04-12 1992-10-30 Sapec Fine Chemicals
CH684270A5 (en) * 1991-10-04 1994-08-15 Sapec Fine Chemicals A process for preparing alkaline earth metal salts of (6R) -N (10) formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid.
DE4136921A1 (en) * 1991-11-11 1993-05-13 Knoll Ag METHOD FOR SEPARATING 5-METHYL-TETRAHYDROFOLIC ACID
CH683690A5 (en) * 1991-12-21 1994-04-29 Sapec Fine Chemicals A process for preparing diastereoisomerenreinen tetrahydrofolates.
CH683262A5 (en) * 1992-01-22 1994-02-15 Applied Pharma Res Process for the separation of diastereomers of the calcium salt of (6 (R, S) -N-formiltetraidrofolico).
IT1254635B (en) * 1992-02-20 1995-09-28 Bracco Spa PROCESS FOR SEPARATION OF FOLINIC ACID STEREOISOMERS
GB9223352D0 (en) * 1992-11-06 1992-12-23 Ici Plc Tricyclic compounds
US5698693A (en) * 1992-11-16 1997-12-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Process of separating the diastereomers of (6R,6S) -5,6,7,8-tetrahydrofolic acid derivatives
CH686672A5 (en) * 1992-12-01 1996-05-31 Cerbios Pharma Sa Process for the preparation of (6S) -5,6,7,8-tetrahydrofolic acid.
AU690579B2 (en) * 1993-09-14 1998-04-30 Merrell Pharmaceuticals Inc. 5-(1-fluoro-vinyl)-1H-pyrimidine-2,4-dione derivatives useful as antineoplastic agents
GB9408936D0 (en) * 1994-05-05 1994-06-22 Cancer Res Inst Anti-cancer compounds
US5710271A (en) * 1994-06-08 1998-01-20 Dibra S.P.A. Process for the preparation and separation of diastereomeric salts of folinic acid
CN107304212A (en) * 2016-04-21 2017-10-31 常州爱诺新睿医药技术有限公司 A kind of unformed L-5- methyl tetrahydrofolates amino-acid salt and preparation method thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4148999A (en) * 1977-08-22 1979-04-10 The Government Of The United States Of America Preparation and purification of citrovorum factor
GB8621268D0 (en) * 1986-09-03 1986-10-08 Univ Strathclyde Separation of substances
DE3821875C1 (en) * 1988-06-29 1990-02-15 Eprova Ag, Forschungsinstitut, Schaffhausen, Ch
CA2021042A1 (en) * 1989-07-21 1991-01-22 Fabrizio Marazza Salts of n ,n -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO9113890A2 *

Also Published As

Publication number Publication date
FR2659330B1 (en) 1994-02-11
US5239074A (en) 1993-08-24
AU7492591A (en) 1991-10-10
CA2056433A1 (en) 1991-09-10
FR2659330A1 (en) 1991-09-13
WO1991013890A2 (en) 1991-09-19
WO1991013890A3 (en) 1991-11-14
FI915254A0 (en) 1991-11-07
JPH04507103A (en) 1992-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA1287349C (en) Rebeccamycin analogs
US6348458B1 (en) Polymorphic forms of olanzapine
WO1991013890A2 (en) Diastereoisomeric compounds derived from tetrahydrofolic acid, process for their preparation and use in the synthesis of diastereoisomers 6s and 6r of reduced folates
FI91157C (en) Method for the separation of (6R, S) -folinates
JPH0248577A (en) Production of tetrahydrofolic acids
JP2000136135A (en) Composition using optically active compound
BR112016004979B1 (en) PHTHALAZINONE DERIVATIVE COMPOUNDS, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND USE OF THE COMPOUND
HUT60741A (en) Process for producing ammonium salts of n5-methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, for separating (6rs)-diastereoisomer mixtures and for producing (6r)- and (6s)-alkali metal and alkali-earth metal salts
US4057548A (en) Process for preparing methotrexate or an N-substituted derivative thereof and/or a di (lower) alkyl ester thereof and precursor therefor
FR2511003A1 (en) EROPOPTIDIC ALACALOIDS, THEIR PREPARATION AND THEIR USE AS MEDICAMENTS
US4067867A (en) Process for preparing pyrazine precursor of methotrexate or an N-substituted derivative thereof and/or a di(lower)alkyl ester thereof
AU2020273443A1 (en) Pyrrolopyrimidine inhibitors of wild-type and mutant forms of LRRK2
EP1246827B1 (en) New polymorphic forms of olanzapine
FR2483929A1 (en) NOVEL N6-SUBSTITUTED ADENOSINS USEFUL AS ANTIHYPERTENSIVE DRUGS, THERAPEUTIC COMPOSITIONS AND PHARMACEUTICAL FORMS CONTAINING THEM, AND PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF
CZ242094A3 (en) Process for preparing pure oxytetracycline and intermediate for the preparation thereof
NZ223805A (en) Preparation of optically active oxo-isoindolinyl derivatives, and pharmaceutical compositions containing them
WO1992020646A1 (en) Novel quaternary ammonium salts, process for obtaining same and pharmaceutical compositions containing them
EP1033362B1 (en) Crystals of [s,s]-ethylenediamine-n,n'-disuccinic acid with high bulk density and method of obtaining the same
US2568971A (en) Preparation of substituted
US2470490A (en) Process of purifying pteroylglutamic acid and related compounds
US7220866B2 (en) Imidazolic compounds and use thereof as alpha-2-adrenergic receptors
CN115697976A (en) Preparation method of chlorinated compound
FR2867780A1 (en) NOVEL 4-OXO-4,6,7,8-TETRAHYDROPYRROLO (1,2-A) PYRAZINE-6-CARBOXAMIDE DERIVATIVES, PROCESS FOR PREPARING THEM AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THE SAME
NZ528520A (en) New polymorphic forms of olanzapine

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 19911029

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IT LI LU NL SE

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION HAS BEEN WITHDRAWN

17Q First examination report despatched

Effective date: 19940117

18W Application withdrawn

Withdrawal date: 19940209