EA046422B1 - ANTIBODIES AGAINST FOLATE 1 RECEPTOR AND THEIR APPLICATIONS - Google Patents
ANTIBODIES AGAINST FOLATE 1 RECEPTOR AND THEIR APPLICATIONS Download PDFInfo
- Publication number
- EA046422B1 EA046422B1 EA202092125 EA046422B1 EA 046422 B1 EA046422 B1 EA 046422B1 EA 202092125 EA202092125 EA 202092125 EA 046422 B1 EA046422 B1 EA 046422B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- chain variable
- variable region
- polypeptide sequence
- light chain
- Prior art date
Links
- 229940014144 folate Drugs 0.000 title description 3
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 title description 3
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 title description 3
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 338
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 336
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 335
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 162
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 162
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 162
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 150
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 19
- 101001023230 Homo sapiens Folate receptor alpha Proteins 0.000 claims description 17
- 102000053180 human FOLR1 Human genes 0.000 claims description 16
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100035139 Folate receptor alpha Human genes 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 102000010451 Folate receptor alpha Human genes 0.000 description 77
- 108050001931 Folate receptor alpha Proteins 0.000 description 77
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 description 46
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 39
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 34
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 23
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 12
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- -1 imidomerea Chemical compound 0.000 description 5
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 4
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 101001039269 Rattus norvegicus Glycine N-methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- ZNOVTXRBGFNYRX-ABLWVSNPSA-N levomefolic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 ZNOVTXRBGFNYRX-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 3
- 235000007635 levomefolic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011578 levomefolic acid Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 2
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000018746 Apelin Human genes 0.000 description 2
- 108010052412 Apelin Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 2
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100036221 Tax1-binding protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 101710193790 Tax1-binding protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- BWVPHIKGXQBZPV-QKFDDRBGSA-N apelin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(O)=O)CCC1 BWVPHIKGXQBZPV-QKFDDRBGSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 208000023747 urothelial carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N (S)-chlorphenesin Chemical compound OC[C@H](O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035437 1,3-propanediol Drugs 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 240000008564 Boehmeria nivea Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 1
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102100036466 Delta-like protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003114 HPC-L Polymers 0.000 description 1
- 229920003115 HPC-SL Polymers 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000928513 Homo sapiens Delta-like protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940126528 Immuno-Oncology Drug Drugs 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002463 Sveinsson chorioretinal atrophy Diseases 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039127 Tyrosine-protein kinase receptor TYRO3 Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N benzenecarboximidamide;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(=[NH2+])C1=CC=CC=C1 LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960002242 chlorocresol Drugs 0.000 description 1
- 229960003993 chlorphenesin Drugs 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940127276 delta-like ligand 3 Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- HXQVQGWHFRNKMS-UHFFFAOYSA-M ethylmercurithiosalicylic acid Chemical compound CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C(O)=O HXQVQGWHFRNKMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- OJTDGPLHRSZIAV-UHFFFAOYSA-N propane-1,2-diol Chemical compound CC(O)CO.CC(O)CO OJTDGPLHRSZIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000011524 similarity measure Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000006076 specific stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 229920003176 water-insoluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявкиCross reference to related applications
По настоящей заявке испрашивается приоритет Предварительной патентной заявки США No. 62/642213, поданной 13 марта 2018 г., полное содержание описания которой приведено в настоящем документе в качестве ссылки.This application claims priority to U.S. Provisional Patent Application No. 62/642213, filed March 13, 2018, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference.
Область техники, к которой относится изобретениеField of technology to which the invention relates
Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам против рецептора фолата 1 (FOLR1), к нуклеиновым кислотам и экспрессирующим векторам, кодирующим антитела, к рекомбинантным клеткам, содержащим векторы, и к композициям, содержащим антитела. Настоящее изобретение относится также к способам получения антител и к способам применения антител для лечения заболеваний, включая злокачественные опухоли.The present invention relates to monoclonal antibodies against folate receptor 1 (FOLR1), to nucleic acids and expression vectors encoding antibodies, to recombinant cells containing vectors, and to compositions containing antibodies. The present invention also relates to methods for producing antibodies and to methods of using antibodies for the treatment of diseases, including malignant tumors.
Ссылка на список последовательностей, принятый в электронной формеLink to sequence list accepted in electronic form
Настоящая заявка содержит список последовательностей, принятый в электронной форме через EFS-Web как список последовательностей в формате ASCII с наименованием файла 689204-11WO Sequence Listing и датой создания 6 марта 2019 г. и имеющий размер 64 кБ. Список последовательностей, принятый через EFS-Web, составляет часть описания, и его полное содержание приведено в настоящем описании в качестве ссылки.This application contains a sequence listing received electronically via EFS-Web as a sequence listing in ASCII format with file name 689204-11WO Sequence Listing and creation date March 6, 2019 and having a size of 64 kB. The sequence listing received via EFS-Web forms part of the specification and its entire contents are incorporated herein by reference.
Уровень техники для изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION
Рецептор фолата 1 (FOLR1), также известный как рецептор фолата α (FRa) или связывающий фолат белок (FBP), представляет собой заякоренный гликофосфатидилинозитолом (GPI) мембранный белок на клеточной поверхности, который имеет высокую аффинность для активной формы фолата, 5метилтетрагидрофолата (5-MTF), и транспортирует ее и ее производные в клетки (Salazar and Ratnam, Cancer Metastasis Rev 2007; 26:141-52). FOLR1 стал мишенью в онкологии, поскольку он имеет сверхэкспрессию на конкретных солидных опухолях, например, яичника, легкого и молочной железы (Toffoli et al., Int J Cancer 1997; 74:193-198 и Boogerd et al., Oncotarget 2016; 7:17442-17454), но его экспрессия находится на низких уровнях в ограниченном количестве нормальных тканей человека (Weitman, et al., Cancer Res 1992; 52:3396-3401). В соответствии с этим наблюдением, клинические исследования фазы 1, проведенные до настоящего времени с нацеленными на FOLR1 малыми и крупными молекулами, выявили хорошую переносимость лекарственного средства (Cheung et al., Oncotarget 2016; 7:52553-52574). Таким образом, FOLR1 является опухолеассоциированным/опухолеспецифическим антигеном, и моноклональные антитела (rnAb) против FOLR1 можно использовать в качестве потенциальных противораковых терапевтических средств.Folate receptor 1 (FOLR1), also known as folate receptor α (FRa) or folate binding protein (FBP), is a glycophosphatidylinositol (GPI)-anchored cell surface membrane protein that has high affinity for the active form of folate, 5-methyltetrahydrofolate (5- MTF), and transports it and its derivatives into cells (Salazar and Ratnam, Cancer Metastasis Rev 2007;26:141-52). FOLR1 has become a target in oncology because it is overexpressed in specific solid tumors, such as ovary, lung, and breast (Toffoli et al., Int J Cancer 1997;74:193-198 and Boogerd et al., Oncotarget 2016;7: 17442-17454), but its expression is at low levels in a limited number of normal human tissues (Weitman, et al., Cancer Res 1992; 52:3396-3401). Consistent with this observation, phase 1 clinical studies conducted to date with FOLR1-targeted small and large molecules have found the drug to be well tolerated (Cheung et al., Oncotarget 2016;7:52553-52574). Thus, FOLR1 is a tumor-associated/tumor-specific antigen, and monoclonal antibodies (rnAbs) against FOLR1 can be used as potential anticancer therapeutics.
Краткое изложение сущности изобретенияSummary of the invention
В одном общем аспекте, изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связывают FOLR1.In one general aspect, the invention provides isolated monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof that specifically bind FOLR1.
Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:The present invention relates to isolated monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof containing heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), LCDR2 and LCDR3, having polypeptide sequences of:
a) SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно;a) SEQ ID NO: 38, 39, 40, 62, 63 and 64, respectively;
b) SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно;b) SEQ ID NO: 17, 18, 19, 41, 42 and 43, respectively;
c) SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно;c) SEQ ID NO: 20, 21, 22, 44, 45 and 46, respectively;
d) SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно;d) SEQ ID NO: 23, 24, 25, 47, 48 and 49, respectively;
e) SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно;e) SEQ ID NO: 26, 27, 28, 50, 51 and 52, respectively;
f) SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно;f) SEQ ID NO: 29, 30, 31, 53, 54 and 55, respectively;
g) SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно; илиg) SEQ ID NO: 32, 33, 34, 56, 57 and 58, respectively; or
h) SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно;h) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 59, 60 and 61, respectively;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.wherein the antibody or antigen binding fragment thereof specifically binds FOLR1, preferably human FOLR1.
Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:The present invention relates to isolated monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof containing heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), LCDR2 and LCDR3, having polypeptide sequences of:
a) SEQ ID NO:86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно;a) SEQ ID NO: 86, 87, 88, 110, 111 and 112, respectively;
b) SEQ ID NO:65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно;b) SEQ ID NO: 65, 66, 67, 89, 90 and 91, respectively;
c) SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно;c) SEQ ID NO: 68, 69, 70, 92, 93 and 94, respectively;
d) SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно;d) SEQ ID NO: 71, 72, 73, 95, 96 and 97, respectively;
e) SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно;e) SEQ ID NO: 74, 75, 76, 98, 99 and 100, respectively;
f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно;f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 and 103, respectively;
g) SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно; илиg) SEQ ID NO: 80, 81, 82, 104, 105 and 106, respectively; or
h) SEQ ID NO: 83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно;h) SEQ ID NO: 83, 84, 85, 107, 108 and 109, respectively;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.wherein the antibody or antigen binding fragment thereof specifically binds FOLR1, preferably human FOLR1.
- 1 046422- 1 046422
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, или вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO:16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14.In specific embodiments, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 or 13, or a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 95%, at least 96% , at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 or 14.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:In specific embodiments, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises:
a) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16;a) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:15, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:16;
b) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2;b) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:1, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:2;
c) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4;c) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:3, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:4;
d) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6;d) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:5, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:6;
e) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8;e) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:7, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8;
f) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10;f) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:9, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:10;
g) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12; илиg) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:11, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:12; or
h) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.h) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:13, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:14.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным.In certain embodiments, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof is chimeric.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является человеческим или гуманизированным. В конкретных вариантах осуществления, гуманизированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:In specific embodiments, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof is human or humanized. In specific embodiments, the humanized monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises:
(1) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(1) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:113, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(2) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(2) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:113 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(3) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(3) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:114 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(4) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(4) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:114 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(5) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(5) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:115, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(6) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(6) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:115, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(7) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(7) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:116 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(8) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(8) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:116 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
- 2 046422 (9) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;- 2 046422 (9) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:121;
(10) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;(10) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:122;
(11) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;(11) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:123;
(12) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;(12) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:121;
(13) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;(13) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:122;
(14) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;(14) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:123;
(15) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:126;(15) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:124 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:126;
(16) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:127;(16) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:124 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:127;
(17) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(17) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(18) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(18) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(19) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;(19) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133;
(20) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;(20) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134;
(21) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(21) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(22) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(22) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(23) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;(23) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133;
(24) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;(24) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134;
(25) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(25) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(26) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(26) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(27) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133; или (28) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134.(27) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133; or (28) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает FOLR1 и является способным индуцировать опосредованный эффектоIn specific embodiments, the isolated monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof binds FOLR1 and is capable of inducing an indirect effect.
- 3 046422 рами лизис клеток опухоли.- 3 046422 ramie lysis of tumor cells.
Настоящее изобретение относится также к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению.The present invention also relates to isolated nucleic acids encoding monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof according to the invention.
Настоящее изобретение относится также к векторам, содержащим выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению.The present invention also relates to vectors containing isolated nucleic acids encoding monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof according to the invention.
Настоящее изобретение относится также к клеткам-хозяевам, содержащим векторы, содержащие выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению.The present invention also relates to host cells containing vectors containing isolated nucleic acids encoding monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof according to the invention.
В конкретных вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.In specific embodiments, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
Настоящее изобретение относится также к способам лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающим введение субъекту фармацевтической композиции по изобретению. Злокачественная опухоль может представлять собой любую жидкую или солидную злокачественную опухоль, например, она может быть выбрана, но без ограничения, из рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, печеночноклеточной карциномы, почечноклеточной карциномы, уротелиальной карциномы мочевого пузыря, метастазирующей меланомы, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака поджелудочной железы, глиомы, глиобластомы и других солидных опухолей, и неходжскинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического миелогенного лейкоза (CML), множественной миеломы (ММ), острого миелоидного лейкоза (AML) и других жидких опухолей.The present invention also relates to methods of treating a malignant tumor in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a pharmaceutical composition of the invention. The malignant tumor may be any liquid or solid malignant tumor, for example, it may be selected from, but not limited to, lung cancer, gastric cancer, colon cancer, hepatic cell carcinoma, renal cell carcinoma, urothelial carcinoma of the bladder, metastatic melanoma, breast cancer gland cancer, ovarian cancer, cervical cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, glioma, glioblastoma and other solid tumors, and non-Hodgkin lymphoma (NHL), acute lymphocytic leukemia (ALL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), chronic myelogenous leukemia (CML), multiple myeloma (MM), acute myeloid leukemia (AML) and other liquid tumors.
Настоящее изобретение относится также к способам получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению.The present invention also relates to methods for producing a monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention.
Способы включают культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, в условиях для продукции моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры.The methods include culturing a cell containing a nucleic acid encoding a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof under conditions for producing the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof, and isolating the antibody or an antigen-binding fragment thereof from the cell or culture.
Настоящее изобретение относится также к способам получения фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Способы включают объединение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем для получения фармацевтической композиции.The present invention also relates to methods for preparing a pharmaceutical composition containing a monoclonal antibody or antigen binding fragment according to the invention. The methods include combining a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof with a pharmaceutically acceptable carrier to obtain a pharmaceutical composition.
Настоящее изобретение относится также к способам определения уровня FOLR1 у субъекта.The present invention also provides methods for determining the level of FOLR1 in a subject.
Способы включают (а) получение образца от субъекта; (b) приведение образца в контакт с выделенным моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по изобретению; и (с) определение уровня FOLR1 у субъекта.The methods include (a) obtaining a sample from a subject; (b) contacting the sample with an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention; and (c) determining the level of FOLR1 in the subject.
Образец может, например, представлять собой образец ткани или образец крови. Образец ткани может, например, представлять собой образец ткани злокачественной опухоли.The sample may, for example, be a tissue sample or a blood sample. The tissue sample may, for example, be a cancer tissue sample.
Краткое описание чертежейBrief description of drawings
Приведенное выше краткое изложение сущности изобретения, так же как следующее подробное описание предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения, станет лучше понятным при чтении в сочетании с прилагаемыми чертежами. Следует понимать, однако, что изобретение не ограничено точными вариантами осуществления, показанными на чертежах.The foregoing summary of the invention, as well as the following detailed description of preferred embodiments of the present invention, will be better understood when read in conjunction with the accompanying drawings. It should be understood, however, that the invention is not limited to the exact embodiments shown in the drawings.
На фиг. 1А-1В показано связывание очищенных мышиных mAb против FOLR1 с клетками СНО, стабильно экспрессирующими FOLR1 человека, как показано посредством анализа FACS.In fig. 1A-1B show the binding of purified mouse anti-FOLR1 mAbs to CHO cells stably expressing human FOLR1 as determined by FACS analysis.
На фиг. 2А-2С показаны результаты для зависимого от дозы связывания химерных mAb против FOLR1 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.In fig. 2A-2C show the results for dose-dependent binding of chimeric anti-FOLR1 mAbs to the immobilized extracellular domain of FOLR1 in an ELISA assay.
На фиг. 3A-3D показаны результаты для зависимого от дозы связывания химерных mAb против FOLR1 с клетками SK-OV-3 в анализе FACS.In fig. 3A-3D show results for dose-dependent binding of chimeric anti-FOLR1 mAbs to SK-OV-3 cells in a FACS assay.
На фиг. 4А-4С показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F5 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.In fig. 4A-4C show the results for dose-dependent binding of humanized mAb F5 to the immobilized extracellular domain of FOLR1 in an ELISA assay.
На фиг. 5А-5В показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F10 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.In fig. 5A-5B show results for dose-dependent binding of humanized mAb F10 to the immobilized extracellular domain of FOLR1 in an ELISA assay.
На фиг. 6А-6В показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F17 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.In fig. 6A-6B show results for dose-dependent binding of humanized mAb F17 to the immobilized extracellular domain of FOLR1 in an ELISA assay.
На фиг. 7A-7D показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F20 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.In fig. 7A-7D show results for dose-dependent binding of humanized mAb F20 to the immobilized extracellular domain of FOLR1 in an ELISA assay.
На фиг. 8A-8J показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb с клетками SK-OV-3. Фиг. 8А, данные для гуманизированных mAb F5; фиг. 8B-8D, данные для гуманизированных mAb F10; фиг. 8Е, данные для гуманизированного mAb F17 mAb; фиг. 8F-8J, данные для гуманизированных mAb F20.In fig. 8A-8J show results for dose-dependent binding of humanized mAbs to SK-OV-3 cells. Fig. 8A, data for humanized mAb F5; fig. 8B-8D, data for humanized mAb F10; fig. 8E, data for humanized mAb F17 mAb; fig. 8F-8J, data for humanized mAb F20.
На фиг. 9 показаны результаты для активности антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) четырех гуманизированных mAb против FOLR1.In fig. 9 shows results for antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) activity of four humanized anti-FOLR1 mAbs.
- 4 046422- 4 046422
Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention
Различные публикации, статьи и патенты процитированы или описаны в разделе уровень техники и на протяжении описания; полное содержание каждой из этих ссылок приведено в настоящем описании в качестве ссылки. Обсуждение документов, актов, материалов, устройств, изделий или т.п., которое включено в настоящее описание, приведено с целью предоставления контекста по изобретению. Такое обсуждение не является признанием того, что любой или все из этих объектов составляют часть предшествующего уровня техники, применительно к любым описанным или заявленным изобретениям.Various publications, articles and patents are cited or described in the prior art section and throughout the description; the entire contents of each of these references are incorporated herein by reference. The discussion of documents, acts, materials, devices, articles, or the like that are included herein is provided for the purpose of providing context on the invention. Such discussion is not an admission that any or all of this subject matter constitutes part of the prior art with respect to any inventions described or claimed.
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое является общепринятым для специалиста в области, к которой относится настоящее изобретение. В ином случае, конкретные термины, используемые в настоящем описании, имеют значения, как указано в описании.Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used in this specification have the same meaning as commonly understood by one skilled in the art to which the present invention relates. Otherwise, specific terms used in this specification have the meanings as defined in the specification.
Следует отметить, что, как используют в настоящем описании и в прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают объекты ссылки множественного числа, если контекст явно не требует иного.It should be noted that, as used in the present specification and in the accompanying claims, the singular forms include the plural entities of a reference unless the context clearly requires otherwise.
Если не указано иное, любые числовые значения, такие как концентрация или диапазон концентраций, описанные в настоящем описании, следует понимать, как модифицированные во всех случаях термином приблизительно. Таким образом, числовое значение, как правило, включает ±10% от указанного значения. Например, концентрация 1 мг/мл включает 0,9-1,1 мг/мл. Подобным образом, диапазон концентраций 1-10% (мас./об.) включает 0,9-11% (мас./об.). В рамках изобретения, использование числового значения явно включает все возможные поддиапазоны, все индивидуальные числовые значения в пределах этого диапазона, включая целые числа в пределах таких диапазонов и дроби значений, если контекст явно не указывает на иное.Unless otherwise indicated, any numerical values, such as concentration or concentration range, described herein are to be understood as modified in all cases by the term approximately. Thus, the numerical value typically includes ±10% of the specified value. For example, a concentration of 1 mg/ml includes 0.9-1.1 mg/ml. Likewise, the concentration range of 1-10% (w/v) includes 0.9-11% (w/v). For the purposes of the invention, the use of a numeric value expressly includes all possible subranges, all individual numeric values within that range, including integers within such ranges and fractions of values, unless the context clearly indicates otherwise.
Если не указано иное, термин по меньшей мере, предшествующий сериям элементов, следует понимать как относящийся к каждому элементу в сериях. Специалисту в данной области известно, или он является способным определить с использованием не более, чем общепринятых экспериментов, множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных в настоящем описании. Такие эквиваленты предназначены для включения в изобретение.Unless otherwise specified, the term at least preceding a series of elements should be understood to refer to each element in the series. One skilled in the art will know, or be able to determine, using no more than routine experimentation, many equivalents to the specific embodiments described herein. Such equivalents are intended to be included in the invention.
В рамках изобретения, термины содержит, содержащий, включает, включая, имеет, имеющий, содержит или содержащий, или любые другие их варианты, понимают как подразумевающие включение указанного целого или группы целых, но не как исключение любого другого целого или группы целых, и они предназначены, чтобы является неисключительными или неограничивающими. Например, композиция, смесь, процесс, способ, изделие или устройство, которые включают список элементов, не обязательно ограничены только этими элементами, но могут включать другие элементы, явно не перечисленные или не присущие таким композиции, смеси, процессу, способу, изделию или устройству. Кроме того, если явно не указано обратное, или относится к включительному или, а не к исключительному или. Например, условие А или В удовлетворено посредством любого из следующего: А является истинным (или присутствует) и В является ложным (или не присутствует), А является ложным (или не присутствует) и В является истинным (или присутствует), и А и В оба являются истинными (или присутствуют).For the purposes of the invention, the terms contains, contains, includes, includes, has, has, contains or contains, or any other variations thereof, are understood to imply the inclusion of the specified whole or group of wholes, but not as the exclusion of any other whole or group of wholes, and they are intended to be non-exclusive or non-limiting. For example, a composition, mixture, process, method, article or device that includes a list of elements is not necessarily limited to only those elements, but may include other elements not expressly listed or inherent in such composition, mixture, process, method, article or device . Also, unless expressly stated to the contrary, or refers to the inclusive or rather than the exclusive or. For example, condition A or B is satisfied by any of the following: A is true (or present) and B is false (or not present), A is false (or not present) and B is true (or present), and A and B both are true (or present).
В рамках изобретения, соединительный термин и/или между множеством перечисленных элементов понимают как включающий как индивидуальные, так и объединенные варианты. Например, когда два элемента соединены посредством и/или, первый вариант относится к применимости первого элемента в отсутствие второго. Второй вариант относится к применимости второго элемента в отсутствие первого. Третий вариант относится к применимости первого и второго элементов совместно. Любой из этих вариантов понимают как включенный в значение, и таким образом, удовлетворяющий требованию термина и/или, в рамках изобретения. Одновременную применимость более одного из вариантов также понимают как включенную в значение, и таким образом, удовлетворяющую требованию термина и/или.Within the scope of the invention, the connecting term and/or between a plurality of listed elements is understood to include both individual and combined variants. For example, when two elements are connected by and/or, the first option refers to the applicability of the first element in the absence of the second. The second option refers to the applicability of the second element in the absence of the first. The third option relates to the applicability of the first and second elements together. Any of these options is understood to be included in the meaning, and thus satisfy the requirement of the term and/or, within the scope of the invention. The simultaneous applicability of more than one of the options is also understood to be included in the meaning, and thus satisfy the requirement of the term and/or.
В рамках изобретения, термин состоит из или его варианты, такие как состоят из или состоящий из, как используют на протяжении описания и формулы изобретения, указывает на включение любого из указанного целого или группы целых, однако на то, что никакие дополнительные целое или группа целых не могут быть добавлены к указанному способу, структуре или композиции.As used throughout the specification and claims, the term consists of, or variations thereof such as consist of or consisting of, as used throughout the specification and claims, indicates the inclusion of any of the specified integer or group of integers, but that no additional integer or group of integers cannot be added to the specified method, structure or composition.
В рамках изобретения, термин в основном состоит из или варианты, такие как в основном состоят из или в основном состоящий из, как используют на протяжении описания и формулы изобретения, указывает на включение любого из указанного целого или группы целых, и необязательное включение любого из указанного целого или группы целых, которые существенно не изменяют основные или новые свойства указанного способа, структуры или композиции. См. М.Р.Е.Р. § 2111.03.As used throughout the specification and claims, the term primarily consists of, or variations such as primarily consists of, or essentially consists of, as used throughout the specification and claims, indicates the inclusion of any of the specified integer or group of integers, and the optional inclusion of any of the specified a whole or group of wholes that do not significantly change the basic or novel properties of the specified method, structure or composition. See M.R.E.R. § 2111.03.
В рамках изобретения, субъект обозначает любое животное, предпочтительно, млекопитающее, наиболее предпочтительно, человека. Термин млекопитающее, в рамках изобретения, включает любое млекопитающее. Примеры млекопитающих включают, но без ограничения, коров, лошадей, овец, свиней, кошек, собак, мышей, крыс, кроликов, морских свинок, обезьян, человека и т.д., более предпочтительно, человека.For purposes of the invention, subject is any animal, preferably a mammal, most preferably a human. The term mammal, as used herein, includes any mammal. Examples of mammals include, but are not limited to, cows, horses, sheep, pigs, cats, dogs, mice, rats, rabbits, guinea pigs, monkeys, humans, etc., more preferably humans.
- 5 046422- 5 046422
Термины справа, слева, ниже и выше обозначают направления на чертежах, на которые сделана ссылка.The terms right, left, below and above indicate directions in the drawings referred to.
Следует также понимать, что термины приблизительно, около, как правило, по существу и подобные термины, используемые в настоящем описании, применительно к измерению или характеристике компонента предпочтительного изобретения, указывают на то, что описанное измерение/характеристика не является точной границей или параметром, и не исключают незначительных отклонений от них, которые являются функционально одинаковыми или сходными, как понятно специалисту в данной области. Как минимум, такие ссылки, включающие числовой параметр, включают отклонения, которые, с использованием математических и промышленных принципов, принятых в данной области (например, округления, ошибок измерения или других систематических ошибок, технологических допусков и т.д.), не изменяют наименьшую значащую цифру.It should also be understood that the terms approximately, approximately, generally, substantially and similar terms used herein when applied to a measurement or characteristic of a component of a preferred invention indicate that the described measurement/characteristic is not an exact boundary or parameter, and do not exclude minor deviations from them, which are functionally the same or similar, as understood by one skilled in the art. At a minimum, such references involving a numerical parameter include variations that, using mathematical and industrial principles accepted in the art (e.g., rounding, measurement or other systematic errors, manufacturing tolerances, etc.), do not change the smallest significant figure.
Термины идентичный или процент идентичности, в контексте двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей (например, антитела против FOLR1 и кодирующие их полинуклеотиды, полипептиды FOLR1 и кодирующие их полинуклеотиды FOLR1), относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или имеют указанный процент аминокислотных остатков или нуклеотидов, которые являются одинаковыми, при сравнении и выравнивании для максимального соответствия, как измерено с использованием одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей, или посредством визуальной проверки.The terms identical or percentage identity, in the context of two or more nucleic acid sequences or polypeptide sequences (eg, anti-FOLR1 antibodies and polynucleotides encoding them, FOLR1 polypeptides and FOLR1 polynucleotides encoding them), refer to two or more sequences or subsequences that are the same or have a specified percentage of amino acid residues or nucleotides that are the same, when compared and aligned for maximum consistency, as measured using one of the following sequence comparison algorithms, or by visual inspection.
Для сравнения последовательностей, как правило, одна последовательность служит в качестве эталонной последовательности, с которой сравнивают тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей, тестируемые и эталонные последовательности вводят в компьютер, назначают координаты подпоследовательности, при необходимости, и назначают параметры алгоритма программы сравнения последовательностей. Затем алгоритм сравнения последовательностей рассчитывает процентную идентичность последовательностей для тестируемой последовательности(последовательностей), относительно эталонной последовательности, на основании назначенных параметров программы.For sequence comparisons, typically one sequence serves as a reference sequence to which the test sequences are compared. When using a sequence comparison algorithm, test and reference sequences are entered into the computer, subsequence coordinates are assigned, if necessary, and the algorithm parameters of the sequence comparison program are assigned. The sequence comparison algorithm then calculates the percentage sequence identity for the test sequence(s), relative to the reference sequence, based on the assigned program parameters.
Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, посредством алгоритма локальной гомологии Смита и Уотермана, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), посредством алгоритма выравнивания областей гомологии Нидлмана и Вунша, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), посредством способа поиска сходства Пирсона и Липмана, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), посредством компьютеризированных осуществлений этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) или посредством визуальной проверки (см., в общем, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)).Optimal alignment of sequences for comparison can be achieved, for example, using the local homology algorithm of Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), through the homology region alignment algorithm of Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), through the Pearson and Lipman similarity search method, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), through computerized implementations of these algorithms (GAP, BESTFIT, FASTA and TFASTA in the Wisconsin Genetics software package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) or through visual inspection (see, in In general, Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)).
Примерами алгоритмов, пригодных для определения процентной идентичности последовательностей и сходства последовательностей, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, описанные в Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, соответственно. Программное обеспечение для проведения анализов BLAST является публично доступным через Национальный центр биотехнологической информации. Этот алгоритм включает сначала идентификацию пар последовательностей с высоким показателем сходства (HSP) посредством идентификации коротких слов длиной W в запрашиваемой последовательности, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторому положительному пороговому показателю Т при выравнивании со словом такой же длины в последовательности из базы данных. Т обозначает пороговую оценку сходства соседних слов (Altschul et al, выше). Эти исходные попадания в соседнее слово действуют в качестве затравок для инициации поисков с целью найти более длинные HSP, содержащие их. Попадания в слова затем расширяют в обоих направлениях вдоль каждой последовательности, пока кумулятивный показатель выравнивания может увеличиваться.Examples of algorithms suitable for determining percent sequence identity and sequence similarity are the BLAST and BLAST 2.0 algorithms described in Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 and Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, respectively. BLAST analysis software is publicly available through the National Center for Biotechnology Information. This algorithm involves first identifying high similarity score sequence pairs (HSPs) by identifying short words of length W in the query sequence that either match or satisfy some positive threshold score T when aligned with a word of the same length in the database sequence. T denotes the threshold score for the similarity of neighboring words (Altschul et al, supra). These initial adjacent word hits act as seeds to initiate searches to find longer HSPs containing them. Word hits are then expanded in both directions along each sequence until the cumulative alignment score can increase.
Кумулятивные показатели рассчитывают с использованием, для нуклеотидных последовательностей, параметров М (показатель вознаграждения за пару совпадающих остатков; всегда >0) и N (показатель штрафа за несовпадающие остатки; всегда <0). Для аминокислотных последовательностей, оценочную матрицу используют для расчета кумулятивного показателя. Расширение попадания в слова в каждом направлении прекращают, когда: кумулятивный показатель выравнивания уменьшается на значение X от его максимально достигнутого значения; кумулятивный показатель стремится к нулю или ниже, изза накопления одного или нескольких отрицательно оцениваемых выравниваний остатков; или достигнут конец какой-либо из последовательностей. Параметры алгоритма BLAST W, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) используют по умолчанию длину слова (W) 11, ожидание (Е) 10, М=5, N=-4 и сравнение обеих цепей. Для аминокислотных последовательностей, в программе BLASTP используют по умолчанию длину слова (W) 3 и ожидание (Е) 10, и оценочную матрицу BLOSUM62 (см. Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)).Cumulative scores are calculated using, for nucleotide sequences, the parameters M (reward for a pair of matching residues; always >0) and N (penalty for mismatched residues; always <0). For amino acid sequences, the scoring matrix is used to calculate the cumulative score. Word hit expansion in each direction stops when: the cumulative alignment score decreases by an X value from its maximum achieved value; the cumulative score tends to zero or lower due to the accumulation of one or more negatively valued residual alignments; or the end of any of the sequences has been reached. The BLAST algorithm parameters W, T and X determine the sensitivity and speed of alignment. The BLASTN program (for nucleotide sequences) uses a default word length (W) of 11, expectation (E) of 10, M=5, N=-4, and comparison of both strands. For amino acid sequences, BLASTP uses a default word length (W) of 3 and expectation (E) of 10, and a BLOSUM62 scoring matrix (see Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)) .
- 6 046422- 6 046422
В дополнение к расчету процента идентичности последовательностей, алгоритм BLAST осуществляет также статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)). Одним из измерений сходства, предоставленных алгоритмом BLAST, является наименьшая сумма вероятностей (P(N)), которая указывает на вероятность, с которой совпадение двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей может происходить случайно. Например, нуклеиновую кислоту считают сходной с эталонной последовательностью, если наименьшая сумма вероятностей при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой составляет менее приблизительно 0,1, более предпочтительно, менее приблизительно 0,01 и наиболее предпочтительно, менее приблизительно 0,001.In addition to calculating percent sequence identity, the BLAST algorithm also performs statistical analysis of the similarity between two sequences (see, for example, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)). One of the similarity measures provided by the BLAST algorithm is the least probability sum (P(N)), which indicates the probability with which a match between two nucleotide or amino acid sequences could occur by chance. For example, a nucleic acid is considered similar to a reference sequence if the smallest sum of probabilities when comparing the test nucleic acid to the reference nucleic acid is less than about 0.1, more preferably less than about 0.01, and most preferably less than about 0.001.
Дополнительным указанием на то, что две последовательности нуклеиновой кислоты или два полипептида являются в основном идентичными, является то, что полипептид, кодируемый первой нуклеиновой кислотой, обладает иммунологической перекрестной реакционной способностью по отношению к антителам, образованным против полипептида, кодированного второй нуклеиновой кислотой, как описано ниже. Таким образом, полипептид, как правило, является в основном идентичным второму полипептиду, например, когда два пептида отличаются только консервативными заменами. Другим указанием на то, что две последовательности нуклеиновой кислоты являются в основном идентичными, является то, что эти две молекулы гибридизуются друг с другом в строгих условиях.A further indication that two nucleic acid sequences or two polypeptides are substantially identical is that the polypeptide encoded by the first nucleic acid is immunologically cross-reactive with antibodies raised against the polypeptide encoded by the second nucleic acid, as described below. Thus, the polypeptide is typically substantially identical to the second polypeptide, for example when the two peptides differ only by conservative substitutions. Another indication that two nucleic acid sequences are essentially identical is that the two molecules hybridize to each other under stringent conditions.
Антитела.Antibodies.
Изобретение, в общем, относится к выделенным антителам против FOLR1, нуклеиновым кислотам и экспрессирующим векторам, кодирующим антитела, к рекомбинантным клеткам, содержащим векторы, и к композициям, содержащим антитела. Изобретение также относится к способам получения антител и способам применения антител для лечения заболеваний, включая злокачественную опухоль. Антитела по изобретению обладают одним или несколькими желательными функциональными свойствами, включая, но без ограничения, высоко аффинное связывание с FOLR1, высокую специфичность для FOLR1 и способность ингибировать рост опухоли у нуждающихся в этом субъектов и в моделях на животных, при введении отдельно или в комбинации с другими видами противораковой терапии.The invention generally relates to isolated anti-FOLR1 antibodies, nucleic acids and expression vectors encoding the antibodies, recombinant cells containing the vectors, and compositions containing the antibodies. The invention also relates to methods for producing antibodies and methods of using antibodies for the treatment of diseases, including cancer. Antibodies of the invention have one or more desirable functional properties, including, but not limited to, high affinity binding to FOLR1, high specificity for FOLR1, and the ability to inhibit tumor growth in patients in need and in animal models, when administered alone or in combination with other types of anticancer therapy.
В общем аспекте, изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связывают FOLR1.In a General aspect, the invention relates to isolated monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof that specifically bind FOLR1.
В рамках изобретения, термин антитело используют в широком смысле, и он включает молекулы иммуноглобулина или антитела, включая человеческие, гуманизированные, композитные и химерные антитела и фрагменты антител, которые являются моноклональными или поликлональными. Как правило, антитела представляют собой белковые или пептидные цепи, имеющие специфичность связывания для специфического антигена. Структуры антител хорошо известны. Иммуноглобулины можно приписать к пяти главным классам (т.е. IgA, IgD, IgE, IgG и IgM), в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелой цепи. IgA и IgG далее подклассифицируют как изотипы IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Соответственно, антитела по изобретению могут принадлежать к любому из пяти главных классов или соответствующих подклассов. Предпочтительно, антитела по изобретению представляют собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Легкие цепи антител из видов позвоночных можно приписать к одному из двух явно отличающихся типов, а именно каппа и лямбда, на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов. Соответственно, антитела по изобретению могут содержать константный домен легкой цепи каппа или лямбда. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, антитела по изобретению включают константные области тяжелой и/или легкой цепи из крысиных или человеческих антител. В дополнение к тяжелым и легким константным доменам, антитела содержит антигенсвязывающую область, состоящую из вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи, каждая из которых содержит три домена (т.е. определяющие комплементарность области 1-3; CDR1, CDR2 и CDR3). Домены вариабельной области легкой цепи, альтернативно обозначены как LCDR1, LCDR2 и LCDR3, и домены вариабельной области тяжелой цепи альтернативно обозначены как HCDR1, HCDR2 и HCDR3.As used herein, the term antibody is used in a broad sense to include immunoglobulin molecules or antibodies, including human, humanized, composite and chimeric antibodies and antibody fragments that are monoclonal or polyclonal. Typically, antibodies are protein or peptide chains that have binding specificity for a specific antigen. The structures of antibodies are well known. Immunoglobulins can be classified into five major classes (ie, IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM), depending on the amino acid sequence of the heavy chain constant domain. IgA and IgG are further subclassified as isotypes IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4. Accordingly, the antibodies of the invention may belong to any of the five main classes or corresponding subclasses. Preferably, the antibodies of the invention are IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4. Antibody light chains from vertebrate species can be assigned to one of two distinct types, namely kappa and lambda, based on the amino acid sequences of their constant domains. Accordingly, the antibodies of the invention may contain a kappa or lambda light chain constant domain. In accordance with specific embodiments, the antibodies of the invention include heavy and/or light chain constant regions from rat or human antibodies. In addition to the heavy and light constant domains, antibodies contain an antigen binding region consisting of a light chain variable region and a heavy chain variable region, each containing three domains (i.e., complementarity determining regions 1-3; CDR1, CDR2 and CDR3) . The light chain variable region domains are alternatively designated LCDR1, LCDR2, and LCDR3, and the heavy chain variable region domains are alternatively designated HCDR1, HCDR2, and HCDR3.
В рамках изобретения, термин выделенное антитело относится к антителу, которое является в основном свободным от других антител, имеющих другую антигенную специфичность (например, выделенное антитело, которое специфически связывает FOLR1, является в основном свободным от антител, которые не связывают FOLR1). Кроме того, выделенное антитело является в основном свободным от другого клеточного материала и/или химических веществ.As used herein, the term isolated antibody refers to an antibody that is substantially free of other antibodies having a different antigenic specificity (eg, an isolated antibody that specifically binds FOLR1 is substantially free of antibodies that do not bind FOLR1). In addition, the isolated antibody is substantially free of other cellular material and/or chemicals.
В рамках изобретения, термин моноклональное антитело относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела по изобретению можно получать посредством способа гибридомы, технологии фагового дисплея, технологии клонирования генов из отдельных лимфоцитов или способов рекомбинантной ДНК. Например, моноклональные антитела можно получать посредством гибридомы, включающей В-клетку, полученную из трансгенного не относящегося к человеку животного, такого как трансгенная мышь или крыса, имеющего геном, содержащий человеческий трансген тяжелой цепи и трансген легкой цепи.As used herein, the term monoclonal antibody refers to an antibody derived from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e. The individual antibodies that make up the population are identical, except for possible natural mutations that may be present in minute quantities. The monoclonal antibodies of the invention can be produced by the hybridoma method, phage display technology, gene cloning technology from individual lymphocytes, or recombinant DNA methods. For example, monoclonal antibodies can be produced by a hybridoma comprising a B cell derived from a transgenic non-human animal, such as a transgenic mouse or rat, having a genome comprising a human heavy chain transgene and a light chain transgene.
- 7 046422- 7 046422
В рамках изобретения, термин антигенсвязывающий фрагмент относится к фрагменту антитела, например, такому как диатело, Fab, Fab', F(ab')2, фрагмент Fv, стабилизированный дисульфидным мостиком фрагмент Fv (dsFv), (dsFv)2, биспецифический dsFv (dsFv-dsFv'), стабилизированное дисульфидным мостиком диатело (ds диатело), одноцепочечная молекула антитела (scFv), однодоменное антитело (sdab), димер scFv (двухвалентное диатело), мультиспецифическое антитело, образованное из части антитела, содержащей одну или несколько CDR, камелизированное однодоменное антитело, наноантитело, доменное антитело, двухвалентное доменное антитело, или любой другой фрагмент антитела, который связывается с антигеном, но не содержит полную структуру антитела. Антигенсвязывающий фрагмент является способным связываться с тем же самым антигеном, с которым связывается исходное антитело или фрагмент исходного антитела. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, константную область легкой цепи и фрагмент Fd тяжелой цепи. В соответствии с другими конкретными вариантами осуществления, антигенсвязывающий фрагмент содержит Fab и F(ab').As used herein, the term antigen-binding fragment refers to an antibody fragment, such as a diabody, Fab, Fab', F(ab') 2 , Fv fragment, disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv), (dsFv) 2 , bispecific dsFv ( dsFv-dsFv'), disulfide bridge-stabilized diabody (ds diabody), single chain antibody molecule (scFv), single domain antibody (sdab), scFv dimer (divalent diabody), multispecific antibody formed from a portion of an antibody containing one or more CDRs, camelized single domain antibody, nanoantibody, domain antibody, divalent domain antibody, or any other antibody fragment that binds to an antigen but does not contain the complete antibody structure. An antigen-binding fragment is capable of binding to the same antigen that the parent antibody or parent antibody fragment binds to. In certain embodiments, the antigen binding fragment comprises a light chain variable region, a light chain constant region, and a heavy chain Fd fragment. In accordance with other specific embodiments, the antigen binding fragment comprises Fab and F(ab').
В рамках изобретения, термин одноцепочечное антитело относится к общепринятому в данной области одноцепочечному антителу, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соединенные коротким пептидом из от приблизительно 15 до приблизительно 20 аминокислот. В рамках изобретения, термин однодоменное антитело относится к общепринятому в данной области однодоменному антителу, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, или которое содержит только вариабельную область тяжелой цепи.As used herein, the term single chain antibody refers to a single chain antibody conventional in the art that comprises a heavy chain variable region and a light chain variable region linked by a short peptide of about 15 to about 20 amino acids. As used herein, the term single-domain antibody refers to a single-domain antibody conventional in the art that contains a heavy chain variable region and a heavy chain constant region, or that contains only a heavy chain variable region.
В рамках изобретения, термин человеческое антитело относится к антителу, продуцируемому человеком, или к антителу, имеющему аминокислотную последовательность, соответствующую антителу, продуцируемому человеком, полученному с использованием любого способа, известного в данной области. Это определение человеческого антитела включает интактные или полноразмерные антитела, их фрагменты и/или антитела, содержащие по меньшей мере один полипептид человеческой тяжелой и/или легкой цепи.As used herein, the term human antibody refers to an antibody produced by a human, or an antibody having an amino acid sequence corresponding to an antibody produced by a human, produced using any method known in the art. This definition of human antibody includes intact or full-length antibodies, fragments thereof, and/or antibodies containing at least one human heavy and/or light chain polypeptide.
В рамках изобретения, термин гуманизированное антитело относится к не относящемуся к человеку антителу, модифицированному для увеличения гомологии последовательности с последовательностью человеческого антитела, таким образом, чтобы антигенсвязывающие свойства антитела сохранялись, но его антигенность в организме человека уменьшалась.As used herein, the term humanized antibody refers to a non-human antibody modified to increase sequence homology to that of a human antibody such that the antigen-binding properties of the antibody are maintained but its antigenicity in the human body is reduced.
В рамках изобретения, термин химерное антитело относится к антителу, где аминокислотная последовательность молекулы иммуноглобулина происходит из двух или более видов. Вариабельная область как легкой, так и тяжелой цепей, часто соответствует вариабельной области антитела, происходящего из одного вида млекопитающего (например, мыши, крысы, кролика и т.д.), имеющего желательную специфичность, аффинность и емкость, в то время как константные области соответствуют последовательностям антитела, происходящим из другого вида животного (например, человека), чтобы исключить вызов иммунного ответа у этого вида.As used herein, the term chimeric antibody refers to an antibody where the amino acid sequence of the immunoglobulin molecule is derived from two or more species. The variable region of both the light and heavy chains often corresponds to the variable region of an antibody derived from a single mammalian species (eg, mouse, rat, rabbit, etc.) having the desired specificity, affinity, and capacity, while the constant regions match antibody sequences originating from another animal species (such as a human) to avoid eliciting an immune response in that species.
В рамках изобретения, термин мультиспецифическое антитело относится к антителу, содержащему множество последовательностей вариабельного домена иммуноглобулина, где последовательность первого вариабельного домена иммуноглобулина из множества имеет специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина из множества имеет специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на одном и том же антигене, например, на одном и том же белке (или субъединице мультимерного белка). В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы перекрываются или в основном перекрываются. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы не перекрываются или в основном не перекрываются. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на различных антигенах, например, на различных белках (или на различных субъединицах мультимерного белка). В одном варианте осуществления, мультиспецифическое антитело содержит третий, четвертый или пятый вариабельный домен иммуноглобулина. В одном варианте осуществления, мультиспецифическое антитело представляет собой молекулу биспецифического антитела, молекулу триспецифического антитела, или молекулу тетраспецифического антитела.As used herein, the term multispecific antibody refers to an antibody comprising a plurality of immunoglobulin variable domain sequences, wherein the sequence of a first immunoglobulin variable domain of the plurality has binding specificity for a first epitope, and the sequence of a second immunoglobulin variable domain of the plurality has binding specificity for a second epitope. In one embodiment, the first and second epitopes are on the same antigen, for example, on the same protein (or subunit of a multimeric protein). In one embodiment, the first and second epitopes overlap or are substantially overlapped. In one embodiment, the first and second epitopes do not overlap or are substantially non-overlapping. In one embodiment, the first and second epitopes are on different antigens, for example, on different proteins (or on different subunits of a multimeric protein). In one embodiment, the multispecific antibody comprises a third, fourth, or fifth immunoglobulin variable domain. In one embodiment, the multispecific antibody is a bispecific antibody molecule, a trispecific antibody molecule, or a tetraspecific antibody molecule.
В рамках изобретения, термин биспецифическое антитело относится к мультиспецифическому антителу, связывающему не более двух эпитопов или двух антигенов. Биспецифическое антитело характеризуется последовательностью первого вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательностью второго вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на одном и том же антигене, например, на одном и том же белке (или субъединице мультимерного белка). В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы перекрываются или в основном перекрываются. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на различных антигенах, например, на различных белках (или на различных субъединицах мультимерного белка). В одном варианте осуществления, биспецифическое антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи и последовательность вариабельного домена легAs used herein, the term bispecific antibody refers to a multispecific antibody that binds no more than two epitopes or two antigens. The bispecific antibody is characterized by a first immunoglobulin variable domain sequence having binding specificity for a first epitope and a second immunoglobulin variable domain sequence having binding specificity for a second epitope. In one embodiment, the first and second epitopes are on the same antigen, for example, on the same protein (or subunit of a multimeric protein). In one embodiment, the first and second epitopes overlap or are substantially overlapped. In one embodiment, the first and second epitopes are on different antigens, for example, on different proteins (or on different subunits of a multimeric protein). In one embodiment, the bispecific antibody comprises a heavy chain variable domain sequence and a leg variable domain sequence.
- 8 046422 кой цепи, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательность вариабельного домена тяжелой цепи и последовательность вариабельного домена легкой цепи, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, биспецифическое антитело содержит полуантитело или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и полуантитело или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, биспецифическое антитело содержит scFv или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и scFv или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, первый эпитоп локализован на FOLR1, и второй эпитоп локализован на PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD47, CD73, апелине, DLL3, клаудине 18.2, TIP-1, CD3 и/или других опухолеассоциированных иммуносупрессорах или поверхностных антигенах.- 8 046422 chain having binding specificity for the first epitope, and a heavy chain variable domain sequence and a light chain variable domain sequence having binding specificity for the second epitope. In one embodiment, the bispecific antibody comprises a half-antibody or fragment thereof having binding specificity for a first epitope and a half-antibody or fragment thereof having binding specificity for a second epitope. In one embodiment, the bispecific antibody comprises a scFv or fragment thereof having binding specificity for a first epitope, and a scFv or fragment thereof having binding specificity for a second epitope. In one embodiment, the first epitope is located on FOLR1, and the second epitope is located on PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD47, CD73, apelin, DLL3, claudin 18.2, TIP-1, CD3 and/or other tumor-associated immunosuppressive or surface antigens.
Как применяют в настоящем документе, термин FOLR1 относится к рецептору фолата 1 (FOLR1), также известному как рецептор фолата α (FRa) или связывающий фолат белок (FBP), представляющий собой заякоренный гликофосфатидилинозитолом (GPI) мембранный белок на клеточной поверхности, который имеет высокую аффинность для активной формы фолата, 5-метилтетрагидрофолата (5-MTF), и транспортирует ее и ее производные в клетки (Salazar and Ratnam, Cancer Metastasis Rev 2007; 26:141-52). FOLR1 стал мишенью в онкологии, поскольку он имеет сверхэкспрессию на конкретных солидных опухолях, например, яичника, легкого и молочной железы (Toffoli et al., Int J Cancer 1997; 74:193-198 и Boogerd et al., Oncotarget 2016; 7:17442-17454), но его экспрессия находится на низких уровнях в ограниченном количестве нормальных тканей человека (Weitman, et al., Cancer Res 1992; 52:3396-3401). В соответствии с этим наблюдением, клинические исследования фазы 1, проведенные до настоящего времени с нацеленными на FOLR1 малыми и крупными молекулами, выявили хорошую переносимость лекарственного средства (Cheung et al., Oncotarget 2016; 7:52553-52574). Таким образом, FOLR1 является опухолеассоциированным/опухолеспецифическим антигеном, и моноклональные антитела (mAb) против FOLR1 могут являться потенциальными противораковыми терапевтическими средствами. Кроме того, FOLR1 можно использовать для специфического нацеливания терапевтических молекул на клетки злокачественных опухолей. Иллюстративная аминокислотная последовательность FOLR1 человека представлена посредством No. доступа в GenBank NP_057937 (SEQ ID NO:135).As used herein, the term FOLR1 refers to folate receptor 1 (FOLR1), also known as folate receptor α (FRa) or folate binding protein (FBP), which is a glycophosphatidylinositol (GPI)-anchored cell surface membrane protein that has high affinity for the active form of folate, 5-methyltetrahydrofolate (5-MTF), and transports it and its derivatives into cells (Salazar and Ratnam, Cancer Metastasis Rev 2007;26:141-52). FOLR1 has become a target in oncology because it is overexpressed in specific solid tumors, such as ovary, lung, and breast (Toffoli et al., Int J Cancer 1997;74:193-198 and Boogerd et al., Oncotarget 2016;7: 17442-17454), but its expression is at low levels in a limited number of normal human tissues (Weitman, et al., Cancer Res 1992; 52:3396-3401). Consistent with this observation, phase 1 clinical studies conducted to date with FOLR1-targeted small and large molecules have shown the drug to be well tolerated (Cheung et al., Oncotarget 2016;7:52553-52574). Thus, FOLR1 is a tumor-associated/tumor-specific antigen, and monoclonal antibodies (mAbs) against FOLR1 may be potential anticancer therapeutics. In addition, FOLR1 can be used to specifically target therapeutic molecules to malignant tumor cells. An exemplary amino acid sequence of human FOLR1 is represented by No. GenBank accession NP_057937 (SEQ ID NO:135).
В рамках изобретения, антитело, которое специфически связывает FOLR1 относится к антителу, которое связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека, с KD 1 х 10-7 М или менее, предпочтительно, 1х 10-8 М или менее, более предпочтительно, 5х10-9 М или менее, 1х10-9 М или менее, 5х10-10 М или менее или 1х 10-10 М или менее. Термин KD относится к константе диссоциации, которая получена из отношения Kd к Ка (т.е. Kd/Ka) и выражена как молярная концентрация (М). Значения KD для антитела можно определять с использованием принятых в данной области способов, в свете настоящего описания. Например, KD антитела можно определять с использованием поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием системы биосенсора, например, системы Biacore®, или с использованием технологии интерферометрии биослоя, например, системы Octet RED96.Within the scope of the invention, an antibody that specifically binds FOLR1 refers to an antibody that binds FOLR1, preferably human FOLR1, with a KD of 1 x 10 -7 M or less, preferably 1 x 10 -8 M or less, more preferably 5 x 10 -9 M or less, 1x10 -9 M or less, 5x10 -10 M or less, or 1x 10 -10 M or less. The term KD refers to the dissociation constant, which is derived from the ratio of Kd to Ka (ie Kd/Ka) and expressed as molar concentration (M). KD values for antibodies can be determined using methods accepted in the art, in light of the present disclosure. For example, the KD of antibodies can be determined using surface plasmon resonance, for example, using a biosensor system, such as the Biacore® system, or using biolayer interferometry technology, such as the Octet RED96 system.
Чем меньше значение KD антитела, тем выше аффинность, с которой антитело связывается с антигеном-мишенью.The lower the KD value of an antibody, the higher the affinity with which the antibody binds to the target antigen.
В соответствии с конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:In accordance with a specific aspect, the invention relates to an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), LCDR2 and LCDR3, having polypeptide sequences from :
a) SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно;a) SEQ ID NO: 38, 39, 40, 62, 63 and 64, respectively;
b) SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно;b) SEQ ID NO: 17, 18, 19, 41, 42 and 43, respectively;
c) SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно;c) SEQ ID NO: 20, 21, 22, 44, 45 and 46, respectively;
d) SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно;d) SEQ ID NO: 23, 24, 25, 47, 48 and 49, respectively;
e) SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно;e) SEQ ID NO: 26, 27, 28, 50, 51 and 52, respectively;
f) SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно;f) SEQ ID NO: 29, 30, 31, 53, 54 and 55, respectively;
g) SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно; илиg) SEQ ID NO: 32, 33, 34, 56, 57 and 58, respectively; or
h) SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно;h) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 59, 60 and 61, respectively;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.wherein the antibody or antigen binding fragment thereof specifically binds FOLR1, preferably human FOLR1.
В соответствии с конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:In accordance with a specific aspect, the invention relates to an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), LCDR2 and LCDR3, having polypeptide sequences from :
a) SEQ ID NO:86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно;a) SEQ ID NO: 86, 87, 88, 110, 111 and 112, respectively;
b) SEQ ID NO:65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно;b) SEQ ID NO: 65, 66, 67, 89, 90 and 91, respectively;
c) SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно;c) SEQ ID NO: 68, 69, 70, 92, 93 and 94, respectively;
d) SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно;d) SEQ ID NO: 71, 72, 73, 95, 96 and 97, respectively;
- 9 046422- 9 046422
e) SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно;e) SEQ ID NO: 74, 75, 76, 98, 99 and 100, respectively;
f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно;f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 and 103, respectively;
g) SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно; илиg) SEQ ID NO: 80, 81, 82, 104, 105 and 106, respectively; or
h) SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно;h) SEQ ID NO: 83, 84, 85, 107, 108 and 109, respectively;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.wherein the antibody or antigen binding fragment thereof specifically binds FOLR1, preferably human FOLR1.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную одной из SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, или вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную одной из SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14. В соответствии с одним предпочтительным вариантом осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14, соответственно.According to another specific aspect, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example, 95, 96, 97, 98 or 99% identical to one of SEQ ID NO: 15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 or 13, or a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96, 97, 98 or 99% identical to one of SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 or 14. According to one preferred embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the invention comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example, 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO: 15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 or 13, and a light chain variable region having a polypeptide sequence, at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:16, 2, 4, 6, 8 , 10, 12 or 14, respectively.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту по изобретению, содержащему:In accordance with another specific aspect, the invention relates to an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention, comprising:
a) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16;a) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:15, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:16;
b) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2;b) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:1, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:2;
c) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4;c) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:3, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:4;
d) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6;d) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:5, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:6;
e) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8;e) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:7, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8;
f) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10;f) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:9, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:10;
g) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12; илиg) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:11, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:12; or
h) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.h) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:13, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:14.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:16. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 38, 39, 40, 62, 63 and 64, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:15, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:16. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:15; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:16.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 иIn one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and
- 10 046422- 10 046422
LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:2. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO: 1; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2.LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 17, 18, 19, 41, 42 and 43, respectively. In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:1, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:2. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO: 1; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:2.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:4. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 and 46, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:3, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:4. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:3; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:4.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:6. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 23, 24, 25, 47, 48 and 49, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:5, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:6. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:5; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:6.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:8. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 26, 27, 28, 50, 51 and 52, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:7, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:8. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:7; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:10. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ IDIn one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 29, 30, 31, 53, 54 and 55, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:9, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:10. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:9; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID
- 11 046422- 11 046422
NO:10.NO:10.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:12. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 32, 33, 34, 56, 57 and 58, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:11, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:12. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:11; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:12.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:14. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 35, 36, 37, 59, 60 and 61, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:13, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:14. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:13; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:14.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO: 86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:16. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NOs: 86, 87, 88, 110, 111 and 112, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:15, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:16. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:15; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:16.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO: 65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:2. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NOs: 65, 66, 67, 89, 90 and 91, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:1, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:2. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:1; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:2.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ IDIn one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 68, 69, 70, 92, 93 and 94, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:3, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID
- 12 046422- 12 046422
NO:4. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4.NO:4. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:3; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:4.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:6. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 71, 72, 73, 95, 96 and 97, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:5, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:6. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:5; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:6.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:8. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO: 74, 75, 76, 98, 99 and 100, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:7, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:8. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:7; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:10. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 and 103, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:9, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:10. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:9; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:10.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:12. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12.In one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 and 106, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96 , 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:11, and a light chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, e.g. 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:12. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:11; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:12.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% илиIn one embodiment, the invention provides an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 and LCDR3 having the polypeptide sequences of SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 and 109, respectively . In another embodiment, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or
- 13 046422 более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:14. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.- 13 046422 more, for example, 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:13, and a light chain variable region having a polypeptide sequence that is at least 85%, preferably 90%, more preferably 95% or more, for example 95, 96, 97, 98 or 99% identical to SEQ ID NO:14. Preferably, the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:13; and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:14.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным.According to another specific aspect, the invention relates to an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof is chimeric.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является человеческим или гуманизированным.According to another specific aspect, the invention relates to an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof is human or humanized.
В соответствии с другим конкретным аспектом, гуманизированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:According to another specific aspect, the humanized monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises:
(1) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(1) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:113, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(2) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(2) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:113, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(3) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(3) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:114, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(4) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(4) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:114 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(5) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(5) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:115, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(6) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(6) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:115, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(7) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(7) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:116 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(8) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(8) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:116 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(9) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;(9) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:121;
(10) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;(10) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:122;
(11) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;(11) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:123;
(12) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;(12) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:121;
(13) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;(13) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:122;
(14) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;(14) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:123;
(15) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:126;(15) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:124 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:126;
(16) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID(16) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:124, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID
- 14 046422- 14 046422
NO:127;NO:127;
(17) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(17) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(18) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(18) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(19) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;(19) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133;
(20) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;(20) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134;
(21) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(21) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(22) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(22) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(23) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;(23) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133;
(24) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;(24) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134;
(25) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(25) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(26) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(26) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(27) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133; или (28) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134.(27) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133; or (28) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134.
В другом общем аспекте, изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Специалисту в данной области понятно, что кодирующую последовательность белка можно изменять (например, заменять, делетировать, вставлять и т.д.) без изменения аминокислотной последовательности белка. Соответственно, специалисту в данной области понятно, что последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению, можно изменять без изменения аминокислотных последовательностей белков.In another general aspect, the invention relates to an isolated nucleic acid encoding a monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention. One skilled in the art will appreciate that the coding sequence of a protein can be changed (eg, replaced, deleted, inserted, etc.) without changing the amino acid sequence of the protein. Accordingly, one skilled in the art will appreciate that the nucleic acid sequences encoding the monoclonal antibodies or antigen binding fragments thereof of the invention can be altered without changing the amino acid sequences of the proteins.
В другом общем аспекте, изобретение относится к вектору, содержащему выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Можно использовать любой вектор, известный специалисту в данной области в свете настоящего описания, такой как плазмида, космида, фаговый вектор или вирусный вектор. В некоторых вариантах осуществления, вектор представляет собой рекомбинантный экспрессирующий вектор, такой как плазмида. Вектор может включать любой элемент для осуществления общепринятой функции экспрессирующего вектора, например, промотор, элемент для связывания рибосомы, терминатор, энхансер, селективный маркер и точку начала репликации. Промотор может представлять собой конститутивный, индуцируемый или репрессируемый промотор. Ряд экспрессирующих векторов, способных к доставке нуклеиновых кислот в клетку, известны в данной области и могут быть использованы в настоящем описании для продукции антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в клетке. Общепринятые способы клонирования или искусственный синтез генов можно использовать для получения рекомбинантного экспрессирующего вектора в соответствии с вариантами осуществления изобретения. Такие способы хорошо известны специалисту в данной области в свете настоящего описания.In another general aspect, the invention relates to a vector containing an isolated nucleic acid encoding a monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention. Any vector known to one skilled in the art in light of the present disclosure may be used, such as a plasmid, cosmid, phage vector, or viral vector. In some embodiments, the vector is a recombinant expression vector, such as a plasmid. The vector may include any element to perform the conventional function of an expression vector, such as a promoter, a ribosome binding element, a terminator, an enhancer, a selectable marker, and an origin of replication. The promoter may be a constitutive, inducible or repressible promoter. A number of expression vectors capable of delivering nucleic acids into a cell are known in the art and can be used herein to produce an antibody or antigen binding fragment thereof in a cell. Conventional cloning techniques or artificial gene synthesis can be used to produce a recombinant expression vector in accordance with embodiments of the invention. Such methods are well known to one skilled in the art in light of the present disclosure.
В другом общем аспекте, изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Любую клетку-хозяина, известную специалисту в данной области в свете настоящего описания, можно использовать для рекомбинантной экспрессии антител или их антигенсвязывающих фрагIn another general aspect, the invention relates to a host cell containing an isolated nucleic acid encoding a monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the invention. Any host cell known to one skilled in the art in light of the present disclosure can be used for recombinant expression of antibodies or antigen-binding fragments thereof.
- 15 046422 ментов по изобретению. В некоторых вариантах осуществления, клетки-хозяева представляют собой клетки Е. coli TGI или BL21 (для экспрессии, например, scFv или Fab антитела), клетки CHO-DG44 или СНО-К1, или НЕК293 (для экспрессии, например, полноразмерного антитела IgG). В соответствии с конкретными вариантами осуществления, рекомбинантным экспрессирующим вектором трансформируют клетки-хозяева общепринятыми способами, такими как химическая трансфекция, тепловой шок или электропорация, где он стабильно интегрирует в геном клетки-хозяина, таким образом, чтобы рекомбинантная нуклеиновая кислота эффективно экспрессировалась.- 15 046422 invention notes. In some embodiments, the host cells are E. coli TGI or BL21 cells (for expression, for example, scFv or Fab antibodies), CHO-DG44 or CHO-K1 cells, or HEK293 cells (for expression, for example, full-length IgG antibodies) . In certain embodiments, the recombinant expression vector is transformed into host cells by conventional methods, such as chemical transfection, heat shock, or electroporation, where it is stably integrated into the genome of the host cell such that the recombinant nucleic acid is efficiently expressed.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, включающему культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, в условиях для продукции моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры клеток (например, из супернатанта). Экспрессированные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты можно собирать из клеток и очищать в соответствии с общепринятыми способами, известными в данной области, и как описано в настоящем описании.In another general aspect, the invention relates to a method for producing a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof according to the invention, comprising culturing a cell containing a nucleic acid encoding a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof under conditions for producing a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof according to the invention, and isolating an antibody or an antigen-binding fragment thereof from a cell or cell culture (for example, from a supernatant). The expressed antibodies or antigen binding fragments thereof can be collected from cells and purified according to conventional methods known in the art and as described herein.
Фармацевтические композиции.Pharmaceutical compositions.
В другом общем аспекте, изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Термин фармацевтическая композиция, в рамках изобретения обозначает продукт, содержащий антитело по изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Антитела по изобретению и содержащие их композиции также можно использовать в изготовлении лекарственного средства для терапевтических применений, упомянутых в настоящем описании.In another general aspect, the invention relates to a pharmaceutical composition containing an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention and a pharmaceutically acceptable carrier. The term pharmaceutical composition, as used herein, means a product containing an antibody of the invention together with a pharmaceutically acceptable carrier. The antibodies of the invention and compositions containing them can also be used in the manufacture of a medicament for the therapeutic uses mentioned herein.
В рамках изобретения, термин носитель относится к любому расширителю, разбавителю, наполнителю, соли, буферу, стабилизатору, солюбилизатору, маслу, липиду, содержащей липид везикуле, микросфере, липосомной инкапсуляции или другому материалу, хорошо известному в данной области для использования в фармацевтических составах. Понятно, что характеристики носителя, наполнителя или разбавителя могут зависеть от способа введения для конкретного применения. В рамках изобретения, термин фармацевтически приемлемый носитель относится к нетоксичному материалу, который не создает помех для эффективности композиции по изобретению или для биологической активности композиции по изобретению. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, в свете настоящего описания, любой фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для использования в фармацевтической композиции антитела, можно использовать по изобретению.As used herein, the term carrier refers to any extender, diluent, excipient, salt, buffer, stabilizer, solubilizer, oil, lipid, lipid-containing vesicle, microsphere, liposome encapsulation or other material well known in the art for use in pharmaceutical formulations. It will be understood that the characteristics of the carrier, excipient or diluent may depend on the route of administration for a particular application. As used herein, the term pharmaceutically acceptable carrier refers to a non-toxic material that does not interfere with the effectiveness of the composition of the invention or the biological activity of the composition of the invention. In accordance with specific embodiments, in light of the present description, any pharmaceutically acceptable carrier suitable for use in a pharmaceutical antibody composition can be used in the invention.
Получение состава фармацевтически активных ингредиентов с фармацевтически приемлемыми носителями известно в данной области, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (например, 21st edition (2005), и любые более поздние издания). Неограничивающие примеры дополнительных ингредиентов включают: буферы, разбавители, растворители, регулирующие тоничность средства, консерванты, стабилизаторы и хелатирующие агенты. Один или несколько фармацевтически приемлемых носителей можно использовать в составлении фармацевтических композиций по изобретению.Formulation of pharmaceutically active ingredients with pharmaceutically acceptable carriers is known in the art, for example, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (eg, 21st edition (2005), and any later editions). Non-limiting examples of additional ingredients include: buffers, diluents, solvents, tonicity agents, preservatives, stabilizers and chelating agents. One or more pharmaceutically acceptable carriers can be used in the formulation of the pharmaceutical compositions of the invention.
В одном варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция представляет собой жидкий состав. Предпочтительным примером жидкого состава является водный состав, т.е. состав, содержащий воду. Жидкий состав может содержать раствор, суспензию, эмульсию, микроэмульсию, гель и т.п. Водный состав, как правило, содержит по меньшей мере 50% мас./мас. воды или по меньшей мере 60, 70, 75, 80, 85, 90, или по меньшей мере 95% мас./мас. воды.In one embodiment of the invention, the pharmaceutical composition is a liquid formulation. A preferred example of a liquid composition is an aqueous composition, i.e. composition containing water. The liquid composition may comprise a solution, suspension, emulsion, microemulsion, gel, or the like. The aqueous composition typically contains at least 50% wt./wt. water or at least 60, 70, 75, 80, 85, 90, or at least 95% wt./wt. water.
В одном варианте осуществления, фармацевтическую композицию можно составлять в инъецируемой форме, которую можно инъецировать, например, посредством устройства для инъекции (например, шприца или инфузионного насоса). Инъекцию можно вводить, например, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, в стекловидное тело или внутривенно.In one embodiment, the pharmaceutical composition can be formulated in an injectable form that can be injected, for example, through an injection device (eg, a syringe or infusion pump). The injection can be administered, for example, subcutaneously, intramuscularly, intraperitoneally, intravitreally or intravenously.
В другом варианте осуществления, фармацевтическая композиция представляет собой твердый состав, например, лиофилизированную или высушенную распылением композицию, которую можно использовать как есть, или в которую терапевт или пациент добавляет растворители и/или разбавители перед использованием. Твердые лекарственные формы могут включать таблетки, такие как прессованные таблетки, и/или покрытые таблетки, и капсулы (например, твердые или мягкие желатиновые капсулы). Фармацевтическая композиция может также находиться в форме, например, саше, драже, порошков, гранул, пастилок или порошков для разведения.In another embodiment, the pharmaceutical composition is a solid composition, such as a lyophilized or spray-dried composition, that can be used as is or to which the physician or patient adds solvents and/or diluents prior to use. Solid dosage forms may include tablets, such as compressed tablets and/or coated tablets, and capsules (eg, hard or soft gelatin capsules). The pharmaceutical composition may also be in the form of, for example, sachets, dragees, powders, granules, lozenges or powders for reconstitution.
Лекарственные формы могут иметь немедленное высвобождение, в этом случае, они могут содержать водорастворимый или диспергируемый носитель, или они могут иметь отсроченное высвобождение, замедленное высвобождение или модифицированное высвобождение, в этом случае, они могут содержать нерастворимые в воде полимеры, которые регулируют скорость растворения лекарственной формы в желудочно-кишечном тракте или под кожей.Dosage forms may be immediate release, in which case they may contain a water-soluble or dispersible carrier, or they may be delayed release, sustained release, or modified release, in which case they may contain water-insoluble polymers that control the rate of dissolution of the dosage form. in the gastrointestinal tract or under the skin.
В других вариантах осуществления, фармацевтическую композицию можно доставлять интраназально, интрабуккально или подъязычно.In other embodiments, the pharmaceutical composition can be delivered intranasally, intrabuccally, or sublingually.
рН в водном составе может составлять между рН 3 и рН 10. В одном варианте осуществления изоThe pH in the aqueous composition may be between pH 3 and pH 10. In one embodiment, the iso
- 16 046422 бретения, рН состава составляет от приблизительно 7,0 до приблизительно 9,5. В другом варианте осуществления изобретения, рН состава составляет от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,0.- 16 046422 shaving, the pH of the composition is from about 7.0 to about 9.5. In another embodiment of the invention, the pH of the composition is from about 3.0 to about 7.0.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит буфер. Неограничивающие примеры буферов включают: аргинин, аспарагиновую кислоту, бицин, цитрат, гидрофосфат динатрия, фумаровую кислоту, глицин, глицилглицин, гистидин, лизин, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, ацетат натрия, карбонат натрия, дигидрофосфат натрия, фосфат натрия, сукцинат, виннокаменную кислоту, трицин и трис(гидроксиметил)аминометан, и их смеси. Буфер может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных буферов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains a buffer. Non-limiting examples of buffers include: arginine, aspartic acid, bicine, citrate, disodium hydrogen phosphate, fumaric acid, glycine, glycylglycine, histidine, lysine, maleic acid, malic acid, sodium acetate, sodium carbonate, sodium dihydrogen phosphate, sodium phosphate, succinate, tartaric acid , tricine and tris(hydroxymethyl)aminomethane, and mixtures thereof. The buffer may be provided individually or in combination, at a concentration of from about 0.01 mg/ml to about 50 mg/ml, for example, from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific buffers constitute alternative embodiments of the invention.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит консервант. Неограничивающие примеры консервантов включают: хлорид бензэтония, бензойную кислоту, бензиловый спирт, бронопол, бутил-4-гидроксибензоат, хлорбутанол, хлоркрезол, хлоргексидин, хлорфенезин, о-крезол, м-крезол, п-крезол, этил-4-гидроксибензоат, имидомочевину, метил-4гидроксибензоат, фенол, 2-феноксиэтанол, 2-фенилэтанол, пропил-4-гидроксибензоат, дегидроацетат натрия, тиомеросал и их смеси. Консервант может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных консервантов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains a preservative. Non-limiting examples of preservatives include: benzethonium chloride, benzoic acid, benzyl alcohol, bronopol, butyl 4-hydroxybenzoate, chlorobutanol, chlorocresol, chlorhexidine, chlorphenesin, o-cresol, m-cresol, p-cresol, ethyl 4-hydroxybenzoate, imidomerea, methyl 4-hydroxybenzoate, phenol, 2-phenoxyethanol, 2-phenylethanol, propyl 4-hydroxybenzoate, sodium dehydroacetate, thiomerosal and mixtures thereof. The preservative may be present alone or in combination, at a concentration of from about 0.01 mg/ml to about 50 mg/ml, for example, from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific preservatives constitute alternative embodiments of the invention.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит изотоническое средство. Неограничивающие примеры варианта осуществления включают соль (такую как хлорид натрия), аминокислоту (такую как глицин, гистидин, аргинин, лизин, изолейцин, аспарагиновая кислота, триптофан и треонин), альдит (такой как глицерин, 1,2-пропандиол пропиленгликоль), 1,3пропандиол и 1,3-бутандиол), полиэтиленгликоль (например, PEG400) и их смеси. Другой пример изотонического средства включает сахар. Неограничивающие примеры сахаров могут представлять собой моно-, ди- или полисахариды, или водорастворимые глюканы, включая, например, фруктозу, глюкозу, маннозу, сорбозу, ксилозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, трегалозу, декстран, пуллулан, декстрин, циклодекстрин, альфа и бета-HPCD, растворимый крахмал, гидроксиэтилкрахмал и карбоксиметилцеллюлозу натрия. Другим примером изотонического средства является сахарный спирт, где термин сахарный спирт определяют как С(4-8)углеводород, имеющий по меньшей мере одну -ОН-группу. Неограничивающие примеры сахарных спиртов включают маннит, сорбит, инозитол, галактит, дульцит, ксилит и арабит. Изотоническое средство может быть представлено индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждое из этих конкретных изотонических средств, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains an isotonic agent. Non-limiting examples of the embodiment include salt (such as sodium chloride), amino acid (such as glycine, histidine, arginine, lysine, isoleucine, aspartic acid, tryptophan and threonine), alditol (such as glycerol, 1,2-propanediol propylene glycol), 1 ,3propanediol and 1,3-butanediol), polyethylene glycol (eg PEG400) and mixtures thereof. Another example of an isotonic agent includes sugar. Non-limiting examples of sugars may be mono-, di- or polysaccharides, or water-soluble glucans, including, for example, fructose, glucose, mannose, sorbose, xylose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, dextran, pullulan, dextrin, cyclodextrin, alpha and beta-HPCD, soluble starch, hydroxyethyl starch and sodium carboxymethylcellulose. Another example of an isotonic agent is a sugar alcohol, where the term sugar alcohol is defined as a C(4-8) hydrocarbon having at least one -OH group. Non-limiting examples of sugar alcohols include mannitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xylitol and arabitol. The isotonic agent may be presented alone or in combination, at a concentration of from about 0.01 mg/ml to about 50 mg/ml, for example, from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific isotonic agents constitute alternative embodiments of the invention.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит хелатирующий агент. Неограничивающие примеры хелатирующих агентов включают лимонную кислоту, аспарагиновую кислоту, соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и их смеси. Хелатирующий агент может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных хелатирующих агентов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains a chelating agent. Non-limiting examples of chelating agents include citric acid, aspartic acid, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) salts, and mixtures thereof. The chelating agent may be present alone or in combination, at a concentration of from about 0.01 mg/ml to about 50 mg/ml, for example, from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific chelating agents constitute alternative embodiments of the invention.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит стабилизатор. Неограничивающие примеры стабилизаторов включают один или несколько ингибиторов агрегации, один или несколько ингибиторов окисления, одно или несколько поверхностно-активных веществ, и/или один или несколько ингибиторов протеаз.In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains a stabilizer. Non-limiting examples of stabilizers include one or more aggregation inhibitors, one or more oxidation inhibitors, one or more surfactants, and/or one or more protease inhibitors.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит стабилизатор, где указанный стабилизатор представляет собой карбокси-/гидроксицеллюлозу и ее производные (такие как НРС, HPC-SL, HPC-L и НРМС), циклодекстрины, 2-метилтиоэтанол, полиэтиленгликоль (такие как PEG 3350), поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон, соли (такие как хлорид натрия), содержащие серу вещества, такие как монотиоглицерин) или тиогликолевая кислота. Стабилизатор может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных стабилизаторов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains a stabilizer, wherein said stabilizer is carboxy-/hydroxycellulose and its derivatives (such as HPC, HPC-SL, HPC-L and HPMC), cyclodextrins, 2-methylthioethanol, polyethylene glycol (such as PEG 3350), polyvinyl alcohol (PVA), polyvinylpyrrolidone, salts (such as sodium chloride), sulfur-containing substances such as monothioglycerol) or thioglycolic acid. The stabilizer may be provided individually or in combination, at a concentration of from about 0.01 mg/ml to about 50 mg/ml, for example, from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific stabilizers constitute alternative embodiments of the invention.
В следующих вариантах осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит одно или несколько поверхностно-активных веществ, предпочтительно, поверхностно-активное вещество, по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество или два различных поверхностно-активных вещества. Термин поверхностно-активное вещество относится к любым молекулам или ионам, состоящим из водорастворимой (гидрофильной) части и жирорастворимой (липофильной) части. Поверхностноактивное вещество может, например, быть выбрано из группы, состоящей из анионных поверхностноIn further embodiments of the invention, the pharmaceutical composition contains one or more surfactants, preferably a surfactant, at least one surfactant or two different surfactants. The term surfactant refers to any molecules or ions consisting of a water-soluble (hydrophilic) part and a fat-soluble (lipophilic) part. The surfactant may, for example, be selected from the group consisting of anionic surfactants
- 17 046422 активных веществ, катионных поверхностно-активных веществ, неионных поверхностно-активных веществ и/или цвиттерионных поверхностно-активных веществ. Поверхностно-активное вещество может быть представлено индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждое из этих конкретных поверхностно-активных веществ, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.- 17 046422 active substances, cationic surfactants, nonionic surfactants and/or zwitterionic surfactants. The surfactant may be present alone or in combination, at a concentration of from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific surfactants constitute alternative embodiments of the invention.
В следующем варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит один или несколько ингибиторов протеаз, например, таких как ЭДТА и/или соль бензамидина и соляной кислоты (HCl). Ингибитор протеазы может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных ингибиторов протеаз, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.In a further embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains one or more protease inhibitors, such as EDTA and/or benzamidine hydrochloric acid (HCl). The protease inhibitor may be present alone or in combination, at a concentration of from about 0.1 mg/ml to about 20 mg/ml. Pharmaceutical compositions containing each of these specific protease inhibitors constitute alternative embodiments of the invention.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению, включающему объединение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем для получения фармацевтической композиции.In another general aspect, the invention relates to a method for preparing a pharmaceutical composition containing a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof according to the invention, comprising combining the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof with a pharmaceutically acceptable carrier to obtain a pharmaceutical composition.
Способы применения.Methods of application.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу нацеливания на FOLR1 на поверхности клетки злокачественной опухоли у субъекта, включающему введение субъекту выделенного моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, специфически связывающего FOLR1, или фармацевтической композиции по изобретению. Связывание моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с FOLR1 может опосредовать комплементзависимую цитотоксичность (CDC), антителозависимый фагоцитоз (ADPC) и/или антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), или другие эффекты, приводящие к гибели подвергаемой нацеливанию клетки злокачественной опухоли. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может, например, служить для привлечения конъюгированных лекарственных средств и/или может формировать биспецифическое антитело с другим моноклональным антителом, чтобы опосредовать гибель подвергаемой нацеливанию клетки злокачественной опухоли.In another general aspect, the invention relates to a method of targeting FOLR1 on the surface of a cancer cell in a subject, comprising administering to the subject an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds FOLR1, or a pharmaceutical composition of the invention. Binding of a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof to FOLR1 may mediate complement-dependent cytotoxicity (CDC), antibody-dependent phagocytosis (ADPC), and/or antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), or other effects leading to the death of the targeted cancer cell. A monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof may, for example, serve to attract conjugated drugs and/or may form a bispecific antibody with another monoclonal antibody to mediate the death of the targeted cancer cell.
Функциональную активность антител и их антигенсвязывающих фрагментов, связывающих FOLR1, можно характеризовать посредством способов, известных в данной области, и как описано в настоящем описании. Способы характеризации антител и их антигенсвязывающих фрагментов, связывающих FOLR1, включают, но без ограничения, анализы аффинности и специфичности, включая анализы Biacore, ELISA и OctetRed; анализы связывания для детекции связывания антител с FOLR1 на клетках злокачественных опухолей или клетках, рекомбинантным способом экспрессирующих FOLR1, посредством FACS. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, способы характеризации антител и их антигенсвязывающих фрагментов, связывающих FOLR1, включают способы, описанные ниже.The functional activity of antibodies and antigen-binding fragments thereof that bind FOLR1 can be characterized by methods known in the art and as described herein. Methods for characterizing antibodies and antigen-binding fragments thereof that bind FOLR1 include, but are not limited to, affinity and specificity assays, including Biacore, ELISA and OctetRed assays; binding assays to detect antibody binding to FOLR1 on cancer cells or cells recombinantly expressing FOLR1 by FACS. In accordance with specific embodiments, methods for characterizing antibodies and antigen binding fragments thereof that bind FOLR1 include the methods described below.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающему введение субъекту выделенного моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, специфически связывающего FOLR1, или фармацевтической композиции по изобретению. Злокачественная опухоль может, например, быть выбрана, но без ограничения, из рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, печеночноклеточной карциномы, почечноклеточной карциномы, уротелиальной карциномы мочевого пузыря, метастазирующей меланомы, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака поджелудочной железы, глиомы, глиобластомы и других солидных опухолей, и неходжскинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического миелогенного лейкоза (CML), множественной миеломы (ММ), острого миелоидного лейкоза (AML) и других жидких опухолей.In another general aspect, the invention relates to a method of treating a cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds FOLR1, or a pharmaceutical composition of the invention. The malignant tumor may, for example, be selected from, but not limited to, lung cancer, gastric cancer, colon cancer, hepatocellular carcinoma, renal cell carcinoma, urothelial carcinoma of the bladder, metastatic melanoma, breast cancer, ovarian cancer, cervical cancer, cancer head and neck, pancreatic cancer, glioma, glioblastoma and other solid tumors, and non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphocytic leukemia (ALL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), chronic myelogenous leukemia (CML), multiple myeloma (MM), acute myeloid leukemia (AML) and other liquid tumors.
В соответствии с вариантами осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество антитела против FOLR1 или его антигенсвязывающего фрагмента. В рамках изобретения, термин терапевтически эффективное количество относится к количеству активного ингредиента или компонента, вызывающему желательный биологический или медицинский ответ у субъекта. Терапевтически эффективное количество можно определять эмпирически и общепринятым образом, применительно к поставленной цели.In accordance with embodiments of the invention, the pharmaceutical composition contains a therapeutically effective amount of an anti-FOLR1 antibody or antigen-binding fragment thereof. As used herein, the term therapeutically effective amount refers to the amount of an active ingredient or component that produces a desired biological or medical response in a subject. The therapeutically effective amount can be determined empirically and in a generally accepted manner in relation to the intended purpose.
В рамках изобретения, применительно к антителам против FOLR1 или их антигенсвязывающим фрагментам, терапевтически эффективное количество обозначает количество антитела против FOLR1 или его антигенсвязывающего фрагмента, модулирующее иммунный ответ у нуждающегося в этом субъекта.As used herein, in relation to anti-FOLR1 antibodies or antigen-binding fragments thereof, a therapeutically effective amount refers to the amount of an anti-FOLR1 antibody or antigen-binding fragment thereof that modulates the immune response in a subject in need thereof.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления, терапевтически эффективное количество относится к количеству лекарственного средства, которое является достаточным для достижения одного, двух, трех, четырех или более из следующих эффектов: (i) уменьшение или облегчение тяжести заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (ii) уменьшение длительности заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (iii) предотвращение прогрессирования заболевания, нарушения или соIn accordance with specific embodiments, a therapeutically effective amount refers to an amount of drug that is sufficient to achieve one, two, three, four or more of the following effects: (i) reducing or alleviating the severity of the disease, disorder or condition being treated, or associated symptom; (ii) reducing the duration of the disease, disorder or condition being treated, or the symptom associated therewith; (iii) preventing the progression of a disease, disorder or associated
- 18 046422 стояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (iv) вызов регрессии заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (v) предотвращение развития или начала заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (vi) предотвращение рецидива заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (vii) уменьшение случаев госпитализации субъекта, имеющего заболевание, нарушение или состояние, подлежащее лечению, или ассоциированный с ним симптом; (viii) уменьшение длительности госпитализации субъекта, имеющего заболевание, нарушение или состояние, подлежащее лечению, или ассоциированный с ним симптом; (ix) увеличение выживаемости субъекта с заболеванием, нарушением или состоянием, подлежащим лечению, или ассоциированным с ним симптомом; (xi) ингибирование или уменьшение заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома у субъекта; и/или (xii) усиление или улучшение профилактического или терапевтического эффекта(эффектов) другой терапии.- 18 046422 standing to be treated, or a symptom associated with it; (iv) causing regression of the disease, disorder or condition being treated, or its associated symptom; (v) preventing the development or onset of a disease, disorder or condition being treated, or a symptom associated therewith; (vi) preventing recurrence of the disease, disorder or condition being treated, or the symptom associated therewith; (vii) reducing the incidence of hospitalization of a subject having a disease, disorder or condition being treated, or a symptom associated therewith; (viii) reducing the length of hospitalization of a subject having a disease, disorder or condition being treated, or a symptom associated therewith; (ix) increasing the survival rate of a subject with the disease, disorder or condition being treated, or an associated symptom; (xi) inhibiting or reducing the disease, disorder or condition being treated, or an associated symptom in a subject; and/or (xii) enhancing or improving the prophylactic or therapeutic effect(s) of another therapy.
Терапевтически эффективное количество или дозу можно менять, в соответствии с различными факторами, такими как заболевание, нарушение или состояние, подлежащее лечению, способы введения, участок-мишень, физиологическое состояние субъекта (включая, например, возраст, массу тела, общее состояние здоровья), является ли субъект человеком или животным, другие вводимые лекарственные средства, и то, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Дозы для лечения оптимально титруют для оптимизации безопасности и эффективности.The therapeutically effective amount or dose may be varied according to various factors such as the disease, disorder or condition being treated, routes of administration, target site, physiological condition of the subject (including, for example, age, body weight, general health), whether the subject is human or animal, other drugs administered, and whether the treatment is prophylactic or therapeutic. Treatment doses are optimally titrated to optimize safety and effectiveness.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления, композиции, описанные в настоящем описании, составляют, чтобы они являлись пригодными для намеченного способа введения субъекту. Например, композиции, описанные в настоящем описании, можно составлять, чтобы они являлись пригодными для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения.In accordance with specific embodiments, the compositions described herein are formulated to be suitable for the intended route of administration to a subject. For example, the compositions described herein can be formulated to be suitable for intravenous, subcutaneous or intramuscular administration.
В рамках изобретения, термины лечить, лечение и обработка все предназначены для обозначения облегчения или обращения по меньшей мере одного поддающегося измерению физического параметра, относящегося к злокачественной опухоли, который, необязательно, является различимым у субъекта, но может являться различимым у субъекта. Термины лечить, лечение и обработка, могут также относится к вызову регрессии, предотвращению прогрессирования или по меньшей мере замедлению прогрессирования заболевания, нарушения или состояния. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к облегчению, предотвращению развития или начала, или уменьшению длительности одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием, нарушением или состоянием, таким как опухоль или более предпочтительно, злокачественная опухоль. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к предотвращению заболевания, нарушения или состояния. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к увеличению выживаемости субъекта, имеющего заболевание, нарушение или состояние. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к прекращению заболевания, нарушения или состояния у субъекта.As used herein, the terms treat, treatment, and treatment are all intended to refer to the alleviation or reversal of at least one measurable physical parameter related to a cancer that is not necessarily detectable in the subject, but may be detectable in the subject. The terms treat, treat, and treat may also refer to causing regression, preventing progression, or at least slowing the progression of a disease, disorder, or condition. In a specific embodiment, treat, treatment and treatment refer to alleviating, preventing the development or onset of, or reducing the duration of one or more symptoms associated with a disease, disorder or condition, such as a tumor or more preferably, a malignant tumor. In a specific embodiment, treat, treatment and treatment refer to the prevention of a disease, disorder or condition. In a specific embodiment, treat, treatment and treatment refer to increasing the survival of a subject having a disease, disorder or condition. In a specific embodiment, treat, treatment and treatment refer to the cessation of a disease, disorder or condition in a subject.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления, настоящее изобретение относится к композициям, используемым для лечения злокачественной опухоли. Для терапии злокачественной опухоли, представленные композиции можно использовать в комбинации с другим лечением, включая, но без ограничения, химиотерапию, mAb против CD20, mAb против CD47, mAb против TIM-3, mAb против LAG-3, mAb против CD73, mAb против апелина, mAb против CTLA-4, mAb против PD-L1, mAb против PD-1, терапию PD-1/PD-L1, другие иммуноонкологические лекарственные средства, антиангиогенное средство, радиотерапию, конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), направленную терапию или другие противораковые лекарственные средства. Антитела против FOLR1 можно использовать для конструирования биспецифических антител с партнерами - mAb против PD-1, PD-L1, LAG3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD73, CD47, CD3, апелина, DLL-3, TIP-1, CLDN18.2 и/или других антигенов поверхности опухолей, для лечения злокачественных опухолей/опухолей, экспрессирующих как FOLR1, так и специфический опухолеассоциированный антиген.In accordance with specific embodiments, the present invention relates to compositions used for the treatment of cancer. For the treatment of cancer, the present compositions can be used in combination with other treatments, including, but not limited to, chemotherapy, anti-CD20 mAb, anti-CD47 mAb, anti-TIM-3 mAb, anti-LAG-3 mAb, anti-CD73 mAb, anti-apelin mAb , anti-CTLA-4 mAb, anti-PD-L1 mAb, anti-PD-1 mAb, PD-1/PD-L1 therapy, other immuno-oncology drugs, antiangiogenic agent, radiotherapy, antibody-drug conjugate (ADC), targeted therapy, or other anticancer drugs. Antibodies against FOLR1 can be used to construct bispecific antibodies with partners - mAbs against PD-1, PD-L1, LAG3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD73, CD47, CD3, apelin, DLL-3, TIP-1, CLDN18.2 and/or other tumor surface antigens, for the treatment of malignancies/tumors expressing both FOLR1 and specific tumor-associated antigen.
В рамках изобретения, термин в комбинации, в контексте введения двух или более терапевтических средств субъекту, относится к использованию более одного терапевтического средства. Использование термина в комбинации не ограничивает порядок, в котором терапевтические средства вводят субъекту. Например, первое терапевтическое средство (например, композицию, описанную в настоящем описании) можно вводить до (например, за 5, 15, 30, 45 мин, 1, 2, 4, 6, 12, 16, 24, 48, 72, 96 ч, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 или 12 недель до), одновременно или после (например, через 5, 15, 30, 45 мин, 1, 2, 4, 6, 12, 16, 24, 48, 72, 96 ч, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 или 12 недель после) введения второго терапевтического средства субъекту.As used herein, the term combination, in the context of administering two or more therapeutic agents to a subject, refers to the use of more than one therapeutic agent. Use of the term in combination does not limit the order in which the therapeutic agents are administered to a subject. For example, the first therapeutic agent (e.g., a composition described herein) may be administered before (e.g., 5, 15, 30, 45 minutes, 1, 2, 4, 6, 12, 16, 24, 48, 72, 96 h, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, or 12 weeks before, simultaneously, or after (e.g., 5, 15, 30, 45 min, 1, 2, 4, 6, 12, 16, 24 48, 72, 96 hours, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, or 12 weeks after) administration of the second therapeutic agent to the subject.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу определения уровня FOLR1 у субъекта. Способы включают (а) получение образца от субъекта; (b) приведение образца в контакт с моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по изобретению; и (с) определение уровня FOLR1 у субъекта.In another general aspect, the invention relates to a method for determining the level of FOLR1 in a subject. The methods include (a) obtaining a sample from a subject; (b) contacting the sample with a monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof according to the invention; and (c) determining the level of FOLR1 in the subject.
В рамках изобретения, образец относится к биологическому образцу, выделенному от субъекта, и может включать, но без ограничения, цельную кровь, сыворотку, плазму, клетки крови, эндотелиальные клетки, биоптаты ткани (например, ткани злокачественной опухоли), лимфатическую жидкость, асцитAs used herein, a sample refers to a biological sample isolated from a subject and may include, but is not limited to, whole blood, serum, plasma, blood cells, endothelial cells, tissue biopsies (eg, cancer tissue), lymph fluid, ascites
- 19 046422 ную жидкость, интерстициальную жидкость, костный мозг, спинномозговую жидкость, слюну, слизь, мокроту, пот, мочу или любой другой продукт секреции, экскреции, или другие физиологические жидкости. Образец крови относится к цельной крови или любой ее фракции, включая клетки крови, сыворотку и плазму.- 19 046422 new fluid, interstitial fluid, bone marrow, cerebrospinal fluid, saliva, mucus, sputum, sweat, urine or any other product of secretion, excretion, or other physiological fluids. A blood sample refers to whole blood or any fraction of it, including blood cells, serum and plasma.
В конкретных вариантах осуществления, уровень FOLR1 у субъекта можно определять с использованием анализов, выбранных, но без ограничения, из анализа Вестерн-блоттинга, анализа ELISA и/или иммуногистохимии (IHC). Относительные уровни белка можно определять с использованием анализа Вестерн-блоттинга и иммуногистохимии (IHC), и абсолютные уровни белка можно определять с использованием анализа ELISA. При определении относительных уровней FOLR1, уровни FOLR1 можно определять в сравнении между по меньшей мере двумя образцами, например, между образцами от одного и того же субъекта в различных временных точках, между образцами из различных тканей одного и того же субъекта и/или между образцами от различных субъектов. Альтернативно, при определении абсолютных уровней FOLR1, например, посредством анализа ELISA, абсолютный уровень FOLR1 в образце можно определять посредством получения стандарта для анализа ELISA до тестирования образца. Специалисту в данной области понятно, какие аналитические способы использовать для определения уровня FOLR1 в образце от субъекта с использованием антител или их антигенсвязывающих фрагментов по изобретению.In specific embodiments, the level of FOLR1 in a subject can be determined using assays selected from, but not limited to, Western blot analysis, ELISA analysis, and/or immunohistochemistry (IHC). Relative protein levels can be determined using Western blot analysis and immunohistochemistry (IHC), and absolute protein levels can be determined using ELISA analysis. When determining relative levels of FOLR1, FOLR1 levels can be determined in comparison between at least two samples, for example, between samples from the same subject at different time points, between samples from different tissues of the same subject, and/or between samples from various subjects. Alternatively, when determining absolute levels of FOLR1, for example, through an ELISA assay, the absolute level of FOLR1 in a sample can be determined by obtaining an ELISA assay standard prior to testing the sample. One skilled in the art will understand which analytical methods to use to determine the level of FOLR1 in a sample from a subject using the antibodies or antigen binding fragments thereof of the invention.
Использование способов определения уровня FOLR1 в образце от субъекта может приводить к диагностике аномальных (увеличенных, уменьшенных или недостаточных) уровней FOLR1 при заболевании и к принятию соответствующих терапевтических решений. Такое заболевание может включать, например, злокачественную опухоль. Кроме того, посредством мониторирования уровней FOLR1 у субъекта, риск развития заболевания, как указано выше, можно определять на основании знаний об уровне FOLR1 при конкретном заболевании и/или в ходе прогрессирования конкретного заболевания.The use of methods for determining the level of FOLR1 in a sample from a subject can lead to the diagnosis of abnormal (increased, decreased or deficient) levels of FOLR1 in a disease and to making appropriate therapeutic decisions. Such a disease may include, for example, a malignant tumor. In addition, by monitoring FOLR1 levels in a subject, the risk of developing a disease as described above can be determined based on knowledge of FOLR1 levels in a particular disease and/or during the progression of a particular disease.
Варианты осуществленияEmbodiments
Это изобретение относится к следующим неограничивающим вариантам осуществления.This invention relates to the following non-limiting embodiments.
Вариант осуществления 1 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:Embodiment 1 is an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), LCDR2 and LCDR3, having the polypeptide sequences of:
a) SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно;a) SEQ ID NO: 38, 39, 40, 62, 63 and 64, respectively;
b) SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно;b) SEQ ID NO: 17, 18, 19, 41, 42 and 43, respectively;
c) SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно;c) SEQ ID NO: 20, 21, 22, 44, 45 and 46, respectively;
d) SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно;d) SEQ ID NO: 23, 24, 25, 47, 48 and 49, respectively;
e) SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно;e) SEQ ID NO: 26, 27, 28, 50, 51 and 52, respectively;
f) SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно;f) SEQ ID NO: 29, 30, 31, 53, 54 and 55, respectively;
g) SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно; илиg) SEQ ID NO: 32, 33, 34, 56, 57 and 58, respectively; or
h) SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно;h) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 59, 60 and 61, respectively;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.wherein the antibody or antigen binding fragment thereof specifically binds FOLR1, preferably human FOLR1.
Вариант осуществления 2 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:Embodiment 2 is an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprising heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), LCDR2 and LCDR3, having the polypeptide sequences of:
a) SEQ ID NO:86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно;a) SEQ ID NO: 86, 87, 88, 110, 111 and 112, respectively;
b) SEQ ID NO:65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно;b) SEQ ID NO: 65, 66, 67, 89, 90 and 91, respectively;
c) SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно;c) SEQ ID NO: 68, 69, 70, 92, 93 and 94, respectively;
d) SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно;d) SEQ ID NO: 71, 72, 73, 95, 96 and 97, respectively;
e) SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно;e) SEQ ID NO: 74, 75, 76, 98, 99 and 100, respectively;
f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно;f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 and 103, respectively;
g) SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно; илиg) SEQ ID NO: 80, 81, 82, 104, 105 and 106, respectively; or
h) SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно;h) SEQ ID NO: 83, 84, 85, 107, 108 and 109, respectively;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.wherein the antibody or antigen binding fragment thereof specifically binds FOLR1, preferably human FOLR1.
Вариант осуществления 3 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из варианта осуществления 1 или 2, содержащие вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, или вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14.Embodiment 3 is an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof from Embodiment 1 or 2, comprising a heavy chain variable region having a polypeptide sequence of at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98% identical or at least 99% identical to SEQ ID NO: 15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 or 13, or a light chain variable region having a polypeptide sequence that is at least 95% identical , at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 or 14.
Вариант осуществления 4 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из вариантов осуществления 1-3, содержащие:Embodiment 4 is an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof from Embodiments 1-3, comprising:
- 20 046422- 20 046422
а) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16;a) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:15, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:16;
b) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2;b) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:1, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:2;
c) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4;c) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:3, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:4;
d) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6;d) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:5, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:6;
e) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8;e) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:7, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8;
f) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10;f) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:9, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:10;
g) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQIDg) a heavy chain variable region having a polypeptide sequence from SEQID
NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQIDNO:11, and a light chain variable region having the polypeptide sequence from SEQID
NO:12; илиNO:12; or
h) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQIDh) a heavy chain variable region having a polypeptide sequence from SEQID
NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQIDNO:13, and a light chain variable region having the polypeptide sequence from SEQID
NO:14.NO:14.
Вариант осуществления 5 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-4, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным.Embodiment 5 is an isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof from any of embodiments 1-4, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof is chimeric.
Вариант осуществления 6 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-5, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является человеческим или гуманизированным.Embodiment 6 is an isolated monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof from any of Embodiments 1-5, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is human or humanized.
Вариант осуществления 7 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 6, где гуманизированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:Embodiment 7 is the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof from any of embodiment 6, wherein the humanized monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof comprises:
(1) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(1) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:113, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(2) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(2) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:113, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(3) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(3) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:114, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(4) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(4) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:114 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(5) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(5) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:115, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(6) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(6) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:115, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(7) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;(7) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:116 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:117;
(8) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;(8) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:116 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:118;
(9) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;(9) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:121;
(10) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID(10) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID
- 21 046422- 21 046422
NO:122;NO:122;
(11) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;(11) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:119, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:123;
(12) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;(12) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:121;
(13) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;(13) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:122;
(14) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;(14) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:120 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:123;
(15) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:126;(15) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:124 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:126;
(16) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:127;(16) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:124 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:127;
(17) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(17) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(18) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(18) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(19) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;(19) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133;
(20) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;(20) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:128 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134;
(21) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(21) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(22) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(22) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(23) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;(23) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133;
(24) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;(24) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:129 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134;
(25) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;(25) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:131;
(26) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;(26) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:132;
(27) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133; или (28) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134.(27) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130 and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:133; or (28) a heavy chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:130, and a light chain variable region having the polypeptide sequence of SEQ ID NO:134.
Вариант осуществления 8 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-7, где моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является способным связывать FOLR1 и индуцировать опосредованный эффекторами лизис клеток опухоли.Embodiment 8 is an isolated monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof from any of embodiments 1-7, wherein the monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof is capable of binding FOLR1 and inducing effector-mediated lysis of tumor cells.
Вариант осуществления 9 представляет собой выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-8.Embodiment 9 is an isolated nucleic acid encoding a monoclonal antibody or an antigen binding fragment thereof from any of embodiments 1-8.
- 22 046422- 22 046422
Вариант осуществления 10 представляет собой вектор, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту из варианта осуществления 9.Embodiment 10 is a vector containing the isolated nucleic acid from Embodiment 9.
Вариант осуществления 11 представляет собой клетку-хозяина, содержащую вектор из варианта осуществления 10.Embodiment 11 is a host cell containing the vector from Embodiment 10.
Вариант осуществления 12 представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.Embodiment 12 is a pharmaceutical composition comprising the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof from any of embodiments 1-8 and a pharmaceutically acceptable carrier.
Вариант осуществления 13 представляет собой способ лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции из варианта осуществления 12.Embodiment 13 is a method of treating a cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject the pharmaceutical composition of Embodiment 12.
Вариант осуществления 14 представляет собой способ нацеливания на FOLR1 на поверхности клетки злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции из варианта осуществления 12.Embodiment 14 is a method of targeting FOLR1 on the surface of a cancer cell in a subject in need thereof, comprising administering to the subject the pharmaceutical composition of Embodiment 12.
Вариант осуществления 15 представляет собой способ получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из любого из вариантов осуществления 1-8, включающий культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, в условиях для продукции моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры.Embodiment 15 is a method of producing a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof from any of embodiments 1 to 8, comprising culturing a cell containing a nucleic acid encoding the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof under conditions for producing the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof, and isolation of an antibody or its antigen-binding fragment from a cell or culture.
Вариант осуществления 16 представляет собой способ получения фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-8, включающий объединение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем для получения фармацевтической композиции.Embodiment 16 is a method of preparing a pharmaceutical composition containing a monoclonal antibody or antigen binding fragment from any of embodiments 1-8, comprising combining the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof with a pharmaceutically acceptable carrier to form a pharmaceutical composition.
Вариант осуществления 17 представляет собой способ определения уровня FOLR1 у субъекта, включающий:Embodiment 17 is a method of determining the level of FOLR1 in a subject, comprising:
a) получение образца от субъекта;a) obtaining a sample from the subject;
b) приведение образца в контакт с выделенным моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом из любого из вариантов осуществления 1-8; иb) contacting the sample with the isolated monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof from any of embodiments 1-8; And
c) определение уровня FOLR1 у субъекта.c) determining the subject's FOLR1 level.
Вариант осуществления 18 представляет собой способ из варианта осуществления 17, где образец представляет собой образец ткани.Embodiment 18 is the method of Embodiment 17, where the sample is a tissue sample.
Вариант осуществления 19 представляет собой способ из варианта осуществления 18, где образец ткани представляет собой образец ткани злокачественной опухоли.Embodiment 19 is the method of Embodiment 18, where the tissue sample is a cancer tissue sample.
Вариант осуществления 20 представляет собой способ из варианта осуществления 17, где образец представляет собой образец крови.Embodiment 20 is the method of Embodiment 17, where the sample is a blood sample.
ПримерыExamples
Пример 1: идентификация моноклональных антител против FOLR1.Example 1: Identification of monoclonal antibodies against FOLR1.
Мышей иммунизировали слитым белком, содержащим FOLR1 человека (от Arg25 до Met233), слитый на С-конце с Fc человека (huFOLR1-huFc). Титр в плазме определяли посредством ELISA. После эвтаназии, лимфатические узлы и селезенку собирали для получения гибридом. Гибридомы выращивали в 96-луночных культуральных планшетах, и супернатанты из индивидуальных лунок подвергали скринингу посредством ELISA и FACS с использованием клеток СНО, стабильно экспрессирующих полноразмерный FOLR1 человека. Наилучшие положительные клоны выделяли и секвенировали.Mice were immunized with a fusion protein containing human FOLR1 (Arg25 to Met233) fused C-terminally to human Fc (huFOLR1-huFc). Plasma titer was determined by ELISA. After euthanasia, lymph nodes and spleens were collected to obtain hybridomas. Hybridomas were grown in 96-well culture plates, and supernatants from individual wells were screened by ELISA and FACS using CHO cells stably expressing full-length human FOLR1. The best positive clones were isolated and sequenced.
Последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепи для моноклональных антител против FOLR1 представлены в таблицах 1 и 2, и области CDR для моноклональных антител против FOLR1 представлены в таблицах 3-6.The heavy and light chain variable region sequences for anti-FOLR1 monoclonal antibodies are presented in Tables 1 and 2, and the CDR regions for anti-FOLR1 monoclonal antibodies are presented in Tables 3-6.
Таблица 1Table 1
Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи для mAb против FOLR1Heavy chain variable region sequences for anti-FOLR1 mAbs
- 23 046422- 23 046422
VH: вариабельная область тяжелой цепи; ID: SEQ ID NO.VH: variable heavy chain region; ID: SEQ ID NO.
Таблица 2table 2
Последовательности вариабельных областей легкой цепи для mAb против FOLR1Light chain variable region sequences for anti-FOLR1 mAbs
VL: вариабельная область легкой цепи; ID: SEQ ID NO.VL: variable light chain region; ID: SEQ ID NO.
Таблица 3Table 3
Области CDR 1-3 тяжелой цепи для mAb против FOLR1Heavy chain CDR regions 1-3 for anti-FOLR1 mAb
НС: тяжелая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO.HC: heavy chain; CDR: complementarity determining region; ID: SEQ ID NO.
НС CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).The HC CDR for the anti-FOLR1 mAb was determined using the IMGT method (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
- 24 046422- 24 046422
Таблица 4Table 4
Области CDR 1-3 легкой цепи для mAb против FOLR1Light chain CDR regions 1-3 for anti-FOLR1 mAb
LC: легкая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO LC CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).LC: light chain; CDR: complementarity determining region; ID: SEQ ID NO LC CDR for mAb against FOLR1 was determined using the IMGT method (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
Таблица 5Table 5
Области CDR 1-3 тяжелой цепи для mAb против FOLR1Heavy chain CDR regions 1-3 for anti-FOLR1 mAb
НС: тяжелая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO.HC: heavy chain; CDR: complementarity determining region; ID: SEQ ID NO.
НС CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)).The HC CDR for the anti-FOLR1 mAb was determined using the method of Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)).
Т аблица 6Table 6
Области CDR 1-3 легкой цепи для mAb поотив FOLR1Light chain CDR regions 1-3 for anti-FOLR1 mAbs
LC: легкая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO.LC: light chain; CDR: complementarity determining region; ID: SEQ ID NO.
LC CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)).The LC CDR for the anti-FOLR1 mAb was determined using the method of Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)).
Пример 2: продукция и очистка mAb из супернатантов гибридомы.Example 2: mAb production and purification from hybridoma supernatants.
Мышиные mAb против FOLR1 очищали из сред/супернатантов гибридомы из положительных клонов с использованием аффинной хроматографии с белком А.Mouse anti-FOLR1 mAbs were purified from hybridoma media/supernatants from positive clones using protein A affinity chromatography.
Пример 3: анализ FACS связывания очищенных мышиных антител против FOLR1.Example 3: FACS binding analysis of purified mouse anti-FOLR1 antibodies.
Клетки СНО, стабильно трансфицированные полноразмерным FOLR1 человека, переносили в 96луночный планшет при 200000 клеток/лунку, промывали один раз с использованием буфера для FACS (1xPBS, pH6,8+2% FBS) и инкубировали с очищенными мышиными mAb против FOLR1 из супернатантов гибридомы в различных концентрациях в течение 15 мин на льду. Затем клетки центрифугировали при 1000 об./мин в течение 5 мин и промывали с использованием буфера для FACS три раза. Клетки инкубировали с конъюгированными с РЕ поликлональными антителами козы против IgG мыши и инкубировали на льду в течение следующих 15 мин. Затем клетки промывали с использованием буфера для FACS три раза, и затем ресуспендировали в буфере для FACS, содержащем 0,1 мкг/мл PI (иодида пропидия) для отбора по живым/мертвым клеткам. Затем клетки обрабатывали посредством устройства FACS Caliber, и данные анализировали посредством программного обеспечения Flowjo. Результаты связывания очищенных мышиных mAb против FOLR1 с клетками СНО, стабильно экспрессирующими FOLR1 человека, показаны на фиг. 1А-1В. MFI, средняя интенсивность флуоресценции.CHO cells stably transfected with full-length human FOLR1 were transferred to a 96-well plate at 200,000 cells/well, washed once with FACS buffer (1xPBS, pH6.8+2% FBS) and incubated with purified mouse anti-FOLR1 mAb from hybridoma supernatants. various concentrations for 15 min on ice. Cells were then centrifuged at 1000 rpm for 5 min and washed with FACS buffer three times. Cells were incubated with PE-conjugated polyclonal goat anti-mouse IgG antibodies and incubated on ice for a further 15 min. Cells were then washed using FACS buffer three times, and then resuspended in FACS buffer containing 0.1 μg/ml PI (propidium iodide) for live/dead cell selection. Cells were then processed using a FACS Caliber device and data were analyzed using Flowjo software. The binding results of purified mouse anti-FOLR1 mAbs to CHO cells stably expressing human FOLR1 are shown in FIG. 1A-1B. MFI, mean fluorescence intensity.
Пример 4: продукция и очистка химерных mAb против FOLR1 из культуральных сред от трансфицированных клеток 293Е.Example 4: Production and purification of chimeric anti-FOLR1 mAbs from culture media from transfected 293E cells.
Для получения рекомбинантных химерных mAb против FOLR1, экспрессирующими векторами, соTo produce recombinant chimeric mAbs against FOLR1 using expression vectors,
- 25 046422 держащими мышиные вариабельные области (VH и VL), слитые с константными областями тяжелой цепи IgG1 и легкой цепи каппа человека, соответственно, временно трансфицировали клетки 293Е. Рекомбинантные антитела, продуцированные в суспензии трансфицированных клеток, очищали с использованием аффинной хроматографии с белком А.- 25 046422 containing murine variable regions (VH and VL) fused to human IgG1 heavy chain and human kappa light chain constant regions, respectively, were transiently transfected into 293E cells. Recombinant antibodies produced in the transfected cell suspension were purified using protein A affinity chromatography.
Пример 5: анализ ELISA связывания очищенных химерных mAb против FOLR1.Example 5: Binding ELISA assay of purified anti-FOLR1 chimeric mAbs.
Очищенные химерные mAb тестировали в анализе ELISA по их способности связываться с иммобилизованным FOLR1 человека. Рекомбинантным внеклеточным доменом FOLR1 человека (Novoprotein, кат.#: С784) в карбонатном буфере для покрытия покрывали 96-луночный планшет при комнатной температуре в течение 1 ч. Планшет блокировали посредством 5% BSA в TBST в течение 1 ч при комнатной температуре. В каждой лунке индивидуального планшета, mAb в различных концентрациях инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали, и связывание с FOLR1 детектировали посредством антитела против IgG человека, конъюгированного с пероксидазой хрена (hIgG-HRP) (ThermoFisher Scientific, кат.#: Н10007), с инкубацией в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем, после промывки, ELISA проявляли с использованием раствора для одностадийной детекции (ThermoFisher Scientific, кат.#: 34028) и измеряли как оптическую плотность при 450 нм. Результаты показаны на фиг. 2А2С.Purified chimeric mAbs were tested in an ELISA assay for their ability to bind to immobilized human FOLR1. Recombinant human FOLR1 extracellular domain (Novoprotein, cat#: C784) in carbonate coating buffer was coated onto a 96-well plate at room temperature for 1 hour. The plate was blocked with 5% BSA in TBST for 1 hour at room temperature. In each well of an individual plate, mAbs at various concentrations were incubated for 1 hour at room temperature. The plate was washed and binding to FOLR1 was detected using horseradish peroxidase-conjugated anti-human IgG (hIgG-HRP) (ThermoFisher Scientific, cat#: H10007) with incubation for 1 hour at room temperature. Then, after washing, the ELISA was developed using a one-step detection solution (ThermoFisher Scientific, Cat#: 34028) and measured as absorbance at 450 nm. The results are shown in Fig. 2A2S.
Пример 6: анализ FACS связывания очищенных химерных mAb против FOLR1.Example 6: FACS binding analysis of purified anti-FOLR1 chimeric mAbs.
Для оценки связывания химерных mAb против FOLR1 с клетками, как известно, экспрессирующими FOLR1, клетки SK-OV-3 (АТСС® НТВ-77™) рассевали при 80000 клеток на лунку в 96-луночный не связывающий планшет с U-образным дном (Greiner Bio-One, кат.#: 650901). В некоторых экспериментах, использовали 90000 клеток на лунку. Клетки инкубировали в 50 мкл буфера для FACS (HBSS с 0,1% BSA и 0,05% азидом натрия), содержащего mAb в различных концентрациях, на льду в течение 15 мин. После промывки, клетки инкубировали в 50 мкл буфера для FACS, содержащего 3,5 мкг/мл F(ab')2 козы против Fc IgG человека, конъюгированного с Alexa Fluor® 488 (Invitrogen, кат.#: Н10120), на льду в течение 15 мин в темноте и снова промывали. Клетки анализировали с использованием проточного цитометра Attune NxT. Результаты связывания химерных mAb против FOLR1 с клетками SK-OV-3 показаны на фиг. 3A-3D. MFI, средняя интенсивность флуоресценции.To assess the binding of chimeric anti-FOLR1 mAbs to cells known to express FOLR1, SK-OV-3 cells (ATCC® HTV-77™) were plated at 80,000 cells per well in a 96-well non-binding U-bottom plate (Greiner Bio-One, cat.#: 650901). In some experiments, 90,000 cells per well were used. Cells were incubated in 50 μl of FACS buffer (HBSS with 0.1% BSA and 0.05% sodium azide) containing various concentrations of mAb on ice for 15 min. After washing, cells were incubated in 50 μl FACS buffer containing 3.5 μg/ml goat anti-human Fc IgG conjugated to Alexa Fluor® 488 (Invitrogen, cat#: H10120) on ice in for 15 minutes in the dark and washed again. Cells were analyzed using an Attune NxT flow cytometer. The binding results of the chimeric anti-FOLR1 mAb to SK-OV-3 cells are shown in FIG. 3A-3D. MFI, mean fluorescence intensity.
Пример 7: анализ Biacore с использованием химерных mAb против FOLR1.Example 7: Biacore assay using anti-FOLR1 chimeric mAbs.
Взаимодействие химерных mAb против FOLR1 и FOLR1 измеряли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (Biacore 8k, GE Healthcare). Кратко, mAb против FOLR1 иммобилизовали на сенсорном чипе с белком A (GE Healthcare, кат.#: 29-1275-56) в буфере HBS-P (0,01 М HEPES рН 7,4, 0,15 М NaCl, 0,05% об./об. поверхностно-активное вещество Р20) со скоростью потока при инъекции 10 мкл/мл. Рекомбинантный FOLR1 (Novoprotein, кат.#: С784) при вариантах концентрации загружали при скорости потока 30 мкл/мин в буфере HBS-P. После загрузки антигена, поверхность регенерировали с использованием 10 мМ глицин-HCl (рН 1,5). Сенсограммы приводили в соответствие с моделью связывания 1:1 с использованием программного обеспечения для оценки Biacore 8k (GE Healthcare). Результаты для аффинности связывания mAb против FOLR1 показаны в таблице 7.The interaction of chimeric mAbs against FOLR1 and FOLR1 was measured by surface plasmon resonance (SPR) (Biacore 8k, GE Healthcare). Briefly, anti-FOLR1 mAb was immobilized on a Protein A sensor chip (GE Healthcare, Cat#: 29-1275-56) in HBS-P buffer (0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0. 05% v/v surfactant P20) with an injection flow rate of 10 µl/ml. Recombinant FOLR1 (Novoprotein, cat.#: C784) at different concentrations was loaded at a flow rate of 30 μl/min in HBS-P buffer. After antigen loading, the surface was regenerated using 10 mM glycine-HCl (pH 1.5). Sensograms were fit to a 1:1 binding model using Biacore 8k evaluation software (GE Healthcare). The results for the binding affinity of the anti-FOLR1 mAb are shown in Table 7.
Таблица 7 _________Значения KD для mAb против FOLR1 из анализа Biacore_________Table 7 _________KD values for anti-FOLR1 mAbs from the Biacore assay_________
Пример 8: гуманизация mAb против FOLR1.Example 8: Humanization of anti-FOLR1 mAb.
Мышиные mAb против FOLR1 гуманизировали для уменьшения потенциала иммуногенности при использовании у пациентов-людей. Последовательности вариабельных областей тяжелых и легких цепей (VH и VL) сравнивали с последовательностями человеческого антитела в базе данных Protein Data Bank (PDB) и строили модели гомологии. CDR как в тяжелых, так и в легких цепях мышиных mAb прививали в человеческие каркасы, имеющие наивысшую возможность поддержания надлежащей структуры, вероятно, необходимой для связывания антигена. Обратные мутации от человеческих остатков до мышиного остатка или другие мутации разрабатывали при необходимости. Последовательности гуманизированных областях VH и VL показаны в табл. 8. Гуманизированные области VH и VL сливали с константными областями тяжелой цепи IgG1 и легкой цепи каппа человека, соответственно. Конструкции, соответствующие последовательностям mAb, использовали для временной трансфекции в клетках СНО, и очищенные mAb анализировали по их способности связываться с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в ELISA. Контроль изотипа тестировали в анализах для подтверждения отсутствия неспецифичеMurine anti-FOLR1 mAbs have been humanized to reduce the potential for immunogenicity when used in human patients. The sequences of the heavy and light chain variable regions (VH and VL) were compared with human antibody sequences in the Protein Data Bank (PDB) and homology models were constructed. CDRs in both the heavy and light chains of murine mAbs were grafted into human scaffolds having the highest ability to maintain the proper structure likely required for antigen binding. Back mutations from human residues to murine residues or other mutations were developed as necessary. The sequences of the humanized VH and VL regions are shown in table. 8. The humanized VH and VL regions were fused to the human IgG1 heavy chain and human kappa light chain constant regions, respectively. Constructs corresponding to mAb sequences were used for transient transfection in CHO cells, and purified mAbs were analyzed for their ability to bind to the immobilized extracellular domain of FOLR1 in an ELISA. Isotype controls were tested in assays to confirm the absence of nonspecific
- 26 046422 ского связывания выше фона анализа. Результаты для гуманизированных клонов F5 показаны на фиг. 4А-4С; результаты для гуманизированных клонов F10 показаны на фиг. 5А-5В; результаты для гуманизированных клонов F17 показаны на фиг. 6А-6В; результаты для гуманизированных клонов F20 показаны на фиг. 7A-7D.- 26 046422 sky binding above the background of the analysis. The results for the humanized F5 clones are shown in FIG. 4A-4C; results for the humanized F10 clones are shown in FIG. 5A-5B; results for the humanized F17 clones are shown in FIG. 6A-6B; results for the humanized F20 clones are shown in FIG. 7A-7D.
Гуманизированные mAb против FOLR1 тестировали по их способности связываться с клетками SKOV-3 с использованием анализа FACS. Данные показаны на фиг. 8A-8J.Humanized anti-FOLR1 mAbs were tested for their ability to bind to SKOV-3 cells using FACS analysis. The data is shown in Fig. 8A-8J.
Антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) mAb измеряли с использованием набора ADCC Reporter Bioassay Core Kit (Promega, кат. # G7010), в соответствии с протоколом, представленным производителем. Кратко, приблизительно 12500 клеток SK-OV-3 на лунку смешивали с различными концентрациями тестируемых антител в буфере для анализа ADCC в 96-луночном микропланшете с половинным объемом лунок (Corning-Costar, кат. #3696). Затем, приблизительно 37500 на лунку клеток ADCC Bioassay Effector cells добавляли до конечного объема 37,5 мкл и перемешивали. Планшет инкубировали при 37°С в течение 6 ч без встряхивания. Для измерения активности люциферазы, 12,5 мкл смеси для анализа удаляли из каждой лунки и добавляли 25 мкл реагента для анализа люциферазы BioGlo. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин с встряхиванием. 30 мкл смеси на лунку переносили в белый планшет (BRAND, кат. #781621) для измерения люминесценции в многорежимном считывателе для планшетов EnVision 2102. Результаты для активности ADCC 4 гуманизированных mAb показаны на фиг. 9. RLU, относительные световые единицы.Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) of the mAb was measured using the ADCC Reporter Bioassay Core Kit (Promega, cat. #G7010), according to the protocol provided by the manufacturer. Briefly, approximately 12,500 SK-OV-3 cells per well were mixed with various concentrations of test antibodies in ADCC assay buffer in a 96-well, half-well microplate (Corning-Costar, cat. #3696). Then, approximately 37,500 ADCC Bioassay Effector cells per well were added to a final volume of 37.5 μl and mixed. The plate was incubated at 37°C for 6 hours without shaking. To measure luciferase activity, 12.5 μL of assay mixture was removed from each well and 25 μL of BioGlo Luciferase Assay Reagent was added. The plates were incubated at room temperature for 10 min with shaking. 30 μl of the mixture per well was transferred to a white plate (BRAND, cat. #781621) for luminescence measurement in an EnVision 2102 multimode plate reader. Results for ADCC activity of the 4 humanized mAbs are shown in FIG. 9. RLU, relative light units.
Таблица 8 Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи гуманизированных mAb против FOLR1Table 8 Heavy chain and light chain variable region sequences of humanized anti-FOLR1 mAbs
--
Claims (6)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/642,213 | 2018-03-13 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA046422B1 true EA046422B1 (en) | 2024-03-13 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11555070B2 (en) | Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof | |
US11401329B2 (en) | Anti-CD47 antibodies and uses thereof | |
CN111867628A (en) | anti-CD 73 antibodies and uses thereof | |
US11873335B2 (en) | Anti-folate receptor 1 antibodies and uses thereof | |
US12037391B2 (en) | Anti-DLL3 antibodies and uses thereof | |
US11214615B2 (en) | Anti-TIM-3 antibodies and uses thereof | |
US11306151B2 (en) | Anti-TIP-1 antibodies and uses thereof | |
EA046422B1 (en) | ANTIBODIES AGAINST FOLATE 1 RECEPTOR AND THEIR APPLICATIONS | |
EA041922B1 (en) | ANTIBODIES AGAINST CLAUDIN 18.2 AND THEIR USES | |
EA046808B1 (en) | ANTI-DLL3 ANTIBODIES AND THEIR APPLICATIONS | |
EA043281B1 (en) | ANTI-CD47 ANTIBODIES AND THEIR USE | |
EA043284B1 (en) | ANTIBODIES AGAINST CD73 AND THEIR APPLICATIONS | |
EA041205B1 (en) | ANTIBODIES AGAINST TIP-1 AND THEIR USES |