EA046276B1 - Электрохимическое измерение d-лактата для диагностики и прогнозирования инфекционного заболевания - Google Patents
Электрохимическое измерение d-лактата для диагностики и прогнозирования инфекционного заболевания Download PDFInfo
- Publication number
- EA046276B1 EA046276B1 EA202192954 EA046276B1 EA 046276 B1 EA046276 B1 EA 046276B1 EA 202192954 EA202192954 EA 202192954 EA 046276 B1 EA046276 B1 EA 046276B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- lactate
- sample
- infection
- vitro method
- electrochemical
- Prior art date
Links
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 134
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 title claims description 55
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 33
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 title description 16
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N D-lactic acid Chemical compound C[C@@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N 0.000 title description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-M (R)-lactate Chemical compound C[C@@H](O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-M 0.000 claims description 267
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 claims description 112
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 97
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 90
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 49
- 102100023319 Dihydrolipoyl dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 45
- 108010001539 D-lactate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 44
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 41
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 40
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 33
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 30
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 27
- 206010060968 Arthritis infective Diseases 0.000 claims description 26
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 25
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 24
- 230000005669 field effect Effects 0.000 claims description 22
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 21
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 16
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 16
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 14
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 13
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 13
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 11
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 11
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 11
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 claims description 11
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 11
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 11
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 11
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 10
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 9
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 9
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 claims description 9
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims description 7
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 7
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 7
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 6
- 208000037815 bloodstream infection Diseases 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 claims description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005228 Pericardial Effusion Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004912 pericardial fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 claims description 4
- 210000003281 pleural cavity Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 4
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 121
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 48
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 37
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 35
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 35
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 35
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 35
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 34
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 23
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 22
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 22
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 19
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 18
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical class CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 16
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 14
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 14
- 238000004082 amperometric method Methods 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 13
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 12
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 11
- 238000004313 potentiometry Methods 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- -1 IL-1e Proteins 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- 238000000835 electrochemical detection Methods 0.000 description 10
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 9
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 9
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 9
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 8
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 7
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 7
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 7
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 7
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 229940116871 l-lactate Drugs 0.000 description 7
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 6
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 6
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 6
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 6
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 description 6
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 6
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 5
- 206010069135 Periprosthetic fracture Diseases 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 5
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011882 arthroplasty Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000004832 voltammetry Methods 0.000 description 5
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 4
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 4
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 4
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 4
- 229930182843 D-Lactic acid Natural products 0.000 description 4
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- 102100028965 Proteoglycan 4 Human genes 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 4
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 4
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 4
- 238000000970 chrono-amperometry Methods 0.000 description 4
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940022769 d- lactic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- LZCLXQDLBQLTDK-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-hydroxypropanoate Chemical compound CCOC(=O)C(C)O LZCLXQDLBQLTDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 4
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 4
- 244000005714 skin microbiome Species 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 3
- 241000606124 Bacteroides fragilis Species 0.000 description 3
- 206010005940 Bone and joint infections Diseases 0.000 description 3
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000033809 Suppuration Diseases 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 3
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000003869 coulometry Methods 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 3
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000009593 lumbar puncture Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 3
- 229920002120 photoresistant polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012123 point-of-care testing Methods 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- NGSFWBMYFKHRBD-HSHFZTNMSA-M sodium;(2r)-2-hydroxypropanoate Chemical compound [Na+].C[C@@H](O)C([O-])=O NGSFWBMYFKHRBD-HSHFZTNMSA-M 0.000 description 3
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-M (S)-lactate Chemical compound C[C@H](O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-M 0.000 description 2
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 2
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 2
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 2
- 208000014912 Central Nervous System Infections Diseases 0.000 description 2
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 2
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 2
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 2
- 241000928573 Cutibacterium Species 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N Emtricitabine Chemical compound C1=C(F)C(N)=NC(=O)N1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N 0.000 description 2
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 2
- 108010069316 Leukocyte L1 Antigen Complex Proteins 0.000 description 2
- 102000001109 Leukocyte L1 Antigen Complex Human genes 0.000 description 2
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 2
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 2
- 101710127913 Proteoglycan 4 Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- 238000012952 Resampling Methods 0.000 description 2
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000191984 Staphylococcus haemolyticus Species 0.000 description 2
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 2
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N Valacyclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCOC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 241000607477 Yersinia pseudotuberculosis Species 0.000 description 2
- 102000018568 alpha-Defensin Human genes 0.000 description 2
- 108050007802 alpha-defensin Proteins 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 210000000576 arachnoid Anatomy 0.000 description 2
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 2
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 2
- 230000037358 bacterial metabolism Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 229940041011 carbapenems Drugs 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 210000002987 choroid plexus Anatomy 0.000 description 2
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- WHBIGIKBNXZKFE-UHFFFAOYSA-N delavirdine Chemical compound CC(C)NC1=CC=CN=C1N1CCN(C(=O)C=2NC3=CC=C(NS(C)(=O)=O)C=C3C=2)CC1 WHBIGIKBNXZKFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- NOPFSRXAKWQILS-UHFFFAOYSA-N docosan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO NOPFSRXAKWQILS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 description 2
- 239000007772 electrode material Substances 0.000 description 2
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 2
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229910021389 graphene Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 210000000281 joint capsule Anatomy 0.000 description 2
- 150000003893 lactate salts Chemical class 0.000 description 2
- 208000006443 lactic acidosis Diseases 0.000 description 2
- 108010000849 leukocyte esterase Proteins 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- GKQWYZBANWAFMQ-HSHFZTNMSA-M lithium;(2r)-2-hydroxypropanoate Chemical compound [Li+].C[C@@H](O)C([O-])=O GKQWYZBANWAFMQ-HSHFZTNMSA-M 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 2
- 239000002082 metal nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N nevirapine Chemical compound C12=NC=CC=C2C(=O)NC=2C(C)=CC=NC=2N1C1CC1 NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- ZJAOAACCNHFJAH-UHFFFAOYSA-N phosphonoformic acid Chemical compound OC(=O)P(O)(O)=O ZJAOAACCNHFJAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001205 potentiostatic coulometry Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 150000007660 quinolones Chemical class 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000001359 rheumatologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 208000018316 severe headache Diseases 0.000 description 2
- 229940037649 staphylococcus haemolyticus Drugs 0.000 description 2
- 210000002330 subarachnoid space Anatomy 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- LFQCEHFDDXELDD-UHFFFAOYSA-N tetramethyl orthosilicate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)OC LFQCEHFDDXELDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 2
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N voriconazole Chemical compound C1([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=NC=C1F BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N 0.000 description 2
- 229960004740 voriconazole Drugs 0.000 description 2
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- CNPVJJQCETWNEU-CYFREDJKSA-N (4,6-dimethyl-5-pyrimidinyl)-[4-[(3S)-4-[(1R)-2-methoxy-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]ethyl]-3-methyl-1-piperazinyl]-4-methyl-1-piperidinyl]methanone Chemical compound N([C@@H](COC)C=1C=CC(=CC=1)C(F)(F)F)([C@H](C1)C)CCN1C(CC1)(C)CCN1C(=O)C1=C(C)N=CN=C1C CNPVJJQCETWNEU-CYFREDJKSA-N 0.000 description 1
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L (R)-2-Hydroxy-3-(phosphonooxy)-propanal Natural products O=C[C@H](O)COP([O-])([O-])=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- XUBOMFCQGDBHNK-JTQLQIEISA-N (S)-gatifloxacin Chemical compound FC1=CC(C(C(C(O)=O)=CN2C3CC3)=O)=C2C(OC)=C1N1CCN[C@@H](C)C1 XUBOMFCQGDBHNK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWVGIHKZDCUPEU-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OC)(OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 KWVGIHKZDCUPEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 description 1
- LJQLQCAXBUHEAZ-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceroyl dihydrogen phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)C(=O)OP(O)(O)=O LJQLQCAXBUHEAZ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical group C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLDCUKJMEKGGFI-QCSRICIXSA-N 4-acetamidobenzoic acid;9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purin-6-one;1-(dimethylamino)propan-2-ol Chemical compound CC(O)CN(C)C.CC(O)CN(C)C.CC(O)CN(C)C.CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1.CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1.CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1.O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 YLDCUKJMEKGGFI-QCSRICIXSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 241000607516 Aeromonas caviae Species 0.000 description 1
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 1
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 206010002515 Animal bite Diseases 0.000 description 1
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228193 Aspergillus clavatus Species 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 1
- AXRYRYVKAWYZBR-UHFFFAOYSA-N Atazanavir Natural products C=1C=C(C=2N=CC=CC=2)C=CC=1CN(NC(=O)C(NC(=O)OC)C(C)(C)C)CC(O)C(NC(=O)C(NC(=O)OC)C(C)(C)C)CC1=CC=CC=C1 AXRYRYVKAWYZBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010019625 Atazanavir Sulfate Proteins 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 1
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 1
- 241001509299 Brucella canis Species 0.000 description 1
- 241001148106 Brucella melitensis Species 0.000 description 1
- 241001148111 Brucella suis Species 0.000 description 1
- 241000589513 Burkholderia cepacia Species 0.000 description 1
- MRABAEUHTLLEML-UHFFFAOYSA-N Butyl lactate Chemical group CCCCOC(=O)C(C)O MRABAEUHTLLEML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N CPD000469186 Natural products CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)NC(C(O)CN1C(CC2CCCCC2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000144583 Candida dubliniensis Species 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241001135194 Capnocytophaga canimorsus Species 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 201000005019 Chlamydia pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 241000580513 Citrobacter braakii Species 0.000 description 1
- 241000588919 Citrobacter freundii Species 0.000 description 1
- HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N Clavulanic acid Natural products OC(=O)C1C(=CCO)OC2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 241001517041 Corynebacterium jeikeium Species 0.000 description 1
- 241001135265 Cronobacter sakazakii Species 0.000 description 1
- 241001522864 Cryptococcus gattii VGI Species 0.000 description 1
- 241000186427 Cutibacterium acnes Species 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 1
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=C[C@H](O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N Didanosine Chemical compound O1[C@H](CO)CC[C@@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 101710144432 Dihydrolipoyl dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 108010049047 Echinocandins Proteins 0.000 description 1
- XPOQHMRABVBWPR-UHFFFAOYSA-N Efavirenz Natural products O1C(=O)NC2=CC=C(Cl)C=C2C1(C(F)(F)F)C#CC1CC1 XPOQHMRABVBWPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 description 1
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- 206010016717 Fistula Diseases 0.000 description 1
- 241000589601 Francisella Species 0.000 description 1
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 1
- 241000193814 Gemella haemolysans Species 0.000 description 1
- 241001147749 Gemella morbillorum Species 0.000 description 1
- 241000589236 Gluconobacter Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 1
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 1
- 201000002563 Histoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 101001123332 Homo sapiens Proteoglycan 4 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 206010023215 Joint effusion Diseases 0.000 description 1
- KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N 0.000 description 1
- 241000589014 Kingella kingae Species 0.000 description 1
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 1
- 241000588749 Klebsiella oxytoca Species 0.000 description 1
- 241001112724 Lactobacillales Species 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 241000589929 Leptospira interrogans Species 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 241000588772 Morganella morganii Species 0.000 description 1
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 241000187917 Mycobacterium ulcerans Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- KJHOZAZQWVKILO-UHFFFAOYSA-N N-(diaminomethylidene)-4-morpholinecarboximidamide Chemical compound NC(N)=NC(=N)N1CCOCC1 KJHOZAZQWVKILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001443590 Naganishia albida Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010030302 Oliguria Diseases 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000222051 Papiliotrema laurentii Species 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N Penciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(CCC(CO)CO)C=N2 JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 241000142787 Pneumocystis jirovecii Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 206010067268 Post procedural infection Diseases 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000588777 Providencia rettgeri Species 0.000 description 1
- 206010037569 Purulent discharge Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606583 Rodentibacter pneumotropicus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 101001004672 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) Probable L-lactate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000607717 Serratia liquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 206010049416 Short-bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 241001279364 Stachybotrys chartarum Species 0.000 description 1
- 241000192087 Staphylococcus hominis Species 0.000 description 1
- 241001464905 Staphylococcus saccharolyticus Species 0.000 description 1
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 description 1
- 241000192086 Staphylococcus warneri Species 0.000 description 1
- XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N Stavudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1C=C[C@@H](CO)O1 XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- 241000122973 Stenotrophomonas maltophilia Species 0.000 description 1
- 241000194008 Streptococcus anginosus Species 0.000 description 1
- 241001291896 Streptococcus constellatus Species 0.000 description 1
- 241000194042 Streptococcus dysgalactiae Species 0.000 description 1
- 241000194049 Streptococcus equinus Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 201000005010 Streptococcus pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000194024 Streptococcus salivarius Species 0.000 description 1
- 241000194023 Streptococcus sanguinis Species 0.000 description 1
- 241000194021 Streptococcus suis Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKDDRNSBRWANNC-UHFFFAOYSA-N Thienamycin Natural products C1C(SCCN)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(C(O)C)C21 WKDDRNSBRWANNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- SUJUHGSWHZTSEU-UHFFFAOYSA-N Tipranavir Natural products C1C(O)=C(C(CC)C=2C=C(NS(=O)(=O)C=3N=CC(=CC=3)C(F)(F)F)C=CC=2)C(=O)OC1(CCC)CCC1=CC=CC=C1 SUJUHGSWHZTSEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 1
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPVFJKSGQUFQAP-GKAPJAKFSA-N Valcyte Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COC(CO)COC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 WPVFJKSGQUFQAP-GKAPJAKFSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000607265 Vibrio vulnificus Species 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N Zalcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)CC1 WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N 0.000 description 1
- 241000588902 Zymomonas mobilis Species 0.000 description 1
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 1
- GLWHPRRGGYLLRV-XLPZGREQSA-N [[(2s,3s,5r)-3-azido-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 GLWHPRRGGYLLRV-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 229960004748 abacavir Drugs 0.000 description 1
- MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N abacavir Chemical compound C=12N=CN([C@H]3C=C[C@@H](CO)C3)C2=NC(N)=NC=1NC1CC1 MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- YQNQNVDNTFHQSW-UHFFFAOYSA-N acetic acid [2-[[(5-nitro-2-thiazolyl)amino]-oxomethyl]phenyl] ester Chemical class CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(=O)NC1=NC=C([N+]([O-])=O)S1 YQNQNVDNTFHQSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 description 1
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 229960001997 adefovir Drugs 0.000 description 1
- WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N adefovir depivoxil Chemical compound N1=CN=C2N(CCOCP(=O)(OCOC(=O)C(C)(C)C)OCOC(=O)C(C)(C)C)C=NC2=C1N WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N amprenavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1COCC1)C1=CC=CC=C1 YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N 0.000 description 1
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011203 antimicrobial therapy Methods 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229960003277 atazanavir Drugs 0.000 description 1
- AXRYRYVKAWYZBR-GASGPIRDSA-N atazanavir Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)(C)C)[C@@H](O)CN(CC=1C=CC(=CC=1)C=1N=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 AXRYRYVKAWYZBR-GASGPIRDSA-N 0.000 description 1
- 229940068561 atripla Drugs 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N aztreonam Chemical compound O=C1N(S([O-])(=O)=O)[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)\C1=CSC([NH3+])=N1 WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000003592 biomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002977 biomimetic material Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 description 1
- 229940038698 brucella melitensis Drugs 0.000 description 1
- 238000006758 bulk electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001191 butyl (2R)-2-hydroxypropanoate Substances 0.000 description 1
- PPKJUHVNTMYXOD-PZGPJMECSA-N c49ws9n75l Chemical compound O=C([C@@H]1N(C2=O)CC[C@H]1S(=O)(=O)CCN(CC)CC)O[C@H](C(C)C)[C@H](C)\C=C\C(=O)NC\C=C\C(\C)=C\[C@@H](O)CC(=O)CC1=NC2=CO1.N([C@@H]1C(=O)N[C@@H](C(N2CCC[C@H]2C(=O)N(C)[C@@H](CC=2C=CC(=CC=2)N(C)C)C(=O)N2C[C@@H](CS[C@H]3C4CCN(CC4)C3)C(=O)C[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@@H]1C)C=1C=CC=CC=1)=O)CC)C(=O)C1=NC=CC=C1O PPKJUHVNTMYXOD-PZGPJMECSA-N 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000484 ceftazidime Drugs 0.000 description 1
- NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N ceftazidime pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1=CC=CC=C1 NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N 0.000 description 1
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 1
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000003728 cerebral autoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 1
- 210000004289 cerebral ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-YOPQJBRCSA-N chembl1332716 Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O\C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)/C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C(O)=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CCN(C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-YOPQJBRCSA-N 0.000 description 1
- 238000009614 chemical analysis method Methods 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 239000007330 chocolate agar Substances 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004769 chrono-potentiometry Methods 0.000 description 1
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 description 1
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 1
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 1
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 1
- 229940090805 clavulanate Drugs 0.000 description 1
- HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N clavulanic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 1
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 1
- 210000001014 cochlear aqueduct Anatomy 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 description 1
- 229940014461 combivir Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005443 coulometric titration Methods 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 208000037329 crystal arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 229960005107 darunavir Drugs 0.000 description 1
- CJBJHOAVZSMMDJ-HEXNFIEUSA-N darunavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1[C@@H]2CCO[C@@H]2OC1)C1=CC=CC=C1 CJBJHOAVZSMMDJ-HEXNFIEUSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 229960005319 delavirdine Drugs 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000012774 diagnostic algorithm Methods 0.000 description 1
- 238000007435 diagnostic evaluation Methods 0.000 description 1
- YFAGHNZHGGCZAX-JKIFEVAISA-N dicloxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=C(Cl)C=CC=C1Cl YFAGHNZHGGCZAX-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 229960001585 dicloxacillin Drugs 0.000 description 1
- 229960002656 didanosine Drugs 0.000 description 1
- 239000003989 dielectric material Substances 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960000735 docosanol Drugs 0.000 description 1
- 229960002542 dolutegravir Drugs 0.000 description 1
- RHWKPHLQXYSBKR-BMIGLBTASA-N dolutegravir Chemical compound C([C@@H]1OCC[C@H](N1C(=O)C1=C(O)C2=O)C)N1C=C2C(=O)NCC1=CC=C(F)C=C1F RHWKPHLQXYSBKR-BMIGLBTASA-N 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- XACKNLSZYYIACO-DJLDLDEBSA-N edoxudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(CC)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 XACKNLSZYYIACO-DJLDLDEBSA-N 0.000 description 1
- XPOQHMRABVBWPR-ZDUSSCGKSA-N efavirenz Chemical compound C([C@]1(C2=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)O1)C(F)(F)F)#CC1CC1 XPOQHMRABVBWPR-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 229960003804 efavirenz Drugs 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000000840 electrochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005518 electrochemistry Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000005441 electronic device fabrication Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960000366 emtricitabine Drugs 0.000 description 1
- 229960002062 enfuvirtide Drugs 0.000 description 1
- PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N enfuvirtide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(C)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N 0.000 description 1
- 229960000980 entecavir Drugs 0.000 description 1
- YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N entecavir hydrate Chemical compound O.C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)C1=C YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N 0.000 description 1
- 229940092559 enterobacter aerogenes Drugs 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N epipodophyllotoxin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 229940116333 ethyl lactate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960004396 famciclovir Drugs 0.000 description 1
- GGXKWVWZWMLJEH-UHFFFAOYSA-N famcyclovir Chemical compound N1=C(N)N=C2N(CCC(COC(=O)C)COC(C)=O)C=NC2=C1 GGXKWVWZWMLJEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000003890 fistula Effects 0.000 description 1
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 1
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 1
- 229960001447 fomivirsen Drugs 0.000 description 1
- XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N fomivirsen Chemical compound C1C(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC(CO)C1OP(O)(=S)OCC1OC(N(C)C(=O)\N=C(\N)C=C)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC(C(C1)OP(S)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)OC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004186 food analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003142 fosamprenavir Drugs 0.000 description 1
- MLBVMOWEQCZNCC-OEMFJLHTSA-N fosamprenavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](OP(O)(O)=O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1COCC1)C1=CC=CC=C1 MLBVMOWEQCZNCC-OEMFJLHTSA-N 0.000 description 1
- 229960005102 foscarnet Drugs 0.000 description 1
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 1
- 229940125777 fusion inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003923 gatifloxacin Drugs 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229960000374 ibacitabine Drugs 0.000 description 1
- WEVJJMPVVFNAHZ-RRKCRQDMSA-N ibacitabine Chemical compound C1=C(I)C(N)=NC(=O)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 WEVJJMPVVFNAHZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 229960004716 idoxuridine Drugs 0.000 description 1
- 229960002182 imipenem Drugs 0.000 description 1
- ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N imipenem Chemical compound C1C(SCC\N=C\N)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@H]([C@H](O)C)[C@H]21 ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N 0.000 description 1
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 1
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229960001936 indinavir Drugs 0.000 description 1
- CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N indinavir Chemical compound C([C@H](N(CC1)C[C@@H](O)C[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H]2C3=CC=CC=C3C[C@H]2O)C(=O)NC(C)(C)C)N1CC1=CC=CN=C1 CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 239000012212 insulator Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940124524 integrase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002850 integrase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 108010018844 interferon type III Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000797 iron chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229940075525 iron chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 description 1
- 210000005067 joint tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000003903 lactic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 1
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229940115932 legionella pneumophila Drugs 0.000 description 1
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 229960003907 linezolid Drugs 0.000 description 1
- TYZROVQLWOKYKF-ZDUSSCGKSA-N linezolid Chemical compound O=C1O[C@@H](CNC(=O)C)CN1C(C=C1F)=CC=C1N1CCOCC1 TYZROVQLWOKYKF-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960004525 lopinavir Drugs 0.000 description 1
- 229950006243 loviride Drugs 0.000 description 1
- CJPLEFFCVDQQFZ-UHFFFAOYSA-N loviride Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(C)C=C1NC(C(N)=O)C1=C(Cl)C=CC=C1Cl CJPLEFFCVDQQFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005461 lubrication Methods 0.000 description 1
- 108010009030 lubricin Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004710 maraviroc Drugs 0.000 description 1
- GSNHKUDZZFZSJB-QYOOZWMWSA-N maraviroc Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1[C@@H]1C[C@H](N2CC[C@H](NC(=O)C3CCC(F)(F)CC3)C=3C=CC=CC=3)CC[C@H]2C1 GSNHKUDZZFZSJB-QYOOZWMWSA-N 0.000 description 1
- 238000010339 medical test Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 229940041009 monobactams Drugs 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229940076266 morganella morganii Drugs 0.000 description 1
- 229960005389 moroxydine Drugs 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- FABPRXSRWADJSP-MEDUHNTESA-N moxifloxacin Chemical compound COC1=C(N2C[C@H]3NCCC[C@H]3C2)C(F)=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C1N2C1CC1 FABPRXSRWADJSP-MEDUHNTESA-N 0.000 description 1
- 229960003702 moxifloxacin Drugs 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960000884 nelfinavir Drugs 0.000 description 1
- QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N nelfinavir Chemical compound CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)N[C@H]([C@H](O)CN1[C@@H](C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N 0.000 description 1
- 229910052605 nesosilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000689 nevirapine Drugs 0.000 description 1
- 229940101771 nexavir Drugs 0.000 description 1
- 229960002480 nitazoxanide Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Chemical class 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 description 1
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 1
- 229940127249 oral antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 150000004762 orthosilicates Chemical class 0.000 description 1
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 1
- NENPYTRHICXVCS-YNEHKIRRSA-N oseltamivir acid Chemical compound CCC(CC)O[C@@H]1C=C(C(O)=O)C[C@H](N)[C@H]1NC(C)=O NENPYTRHICXVCS-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 1
- PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N oseltamivir phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N 0.000 description 1
- UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N oxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1 UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 229960001019 oxacillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000008289 pathophysiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960001179 penciclovir Drugs 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 229960001084 peramivir Drugs 0.000 description 1
- XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N peramivir Chemical compound CCC(CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)C[C@H]1NC(N)=N XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 210000004049 perilymph Anatomy 0.000 description 1
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L peroxydisulfate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000003446 pia mater Anatomy 0.000 description 1
- 229960002292 piperacillin Drugs 0.000 description 1
- WCMIIGXFCMNQDS-IDYPWDAWSA-M piperacillin sodium Chemical compound [Na+].O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C([O-])=O)C(C)(C)S[C@@H]21 WCMIIGXFCMNQDS-IDYPWDAWSA-M 0.000 description 1
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000471 pleconaril Drugs 0.000 description 1
- KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N pleconaril Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCOC1=C(C)C=C(C=2N=C(ON=2)C(F)(F)F)C=C1C KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030773 pneumonia caused by chlamydia Diseases 0.000 description 1
- 229960001237 podophyllotoxin Drugs 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 1
- YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N podophyllotoxin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 238000003969 polarography Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000767 polyaniline Polymers 0.000 description 1
- 150000004291 polyenes Chemical class 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229960001589 posaconazole Drugs 0.000 description 1
- RAGOYPUPXAKGKH-XAKZXMRKSA-N posaconazole Chemical compound O=C1N([C@H]([C@H](C)O)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@H]3C[C@@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(F)=CC=3)F)=CC=2)C=C1 RAGOYPUPXAKGKH-XAKZXMRKSA-N 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 description 1
- 208000030279 prolonged fever Diseases 0.000 description 1
- 229940055019 propionibacterium acne Drugs 0.000 description 1
- 238000004730 pulsed amperometry Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 108010071077 quinupristin-dalfopristin Proteins 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000007870 radical polymerization initiator Substances 0.000 description 1
- 229960004742 raltegravir Drugs 0.000 description 1
- CZFFBEXEKNGXKS-UHFFFAOYSA-N raltegravir Chemical compound O1C(C)=NN=C1C(=O)NC(C)(C)C1=NC(C(=O)NCC=2C=CC(F)=CC=2)=C(O)C(=O)N1C CZFFBEXEKNGXKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012124 rapid diagnostic test Methods 0.000 description 1
- OPAHEYNNJWPQPX-RCDICMHDSA-N ravuconazole Chemical compound C=1SC([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=1C1=CC=C(C#N)C=C1 OPAHEYNNJWPQPX-RCDICMHDSA-N 0.000 description 1
- 229950004154 ravuconazole Drugs 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 description 1
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 description 1
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229960001852 saquinavir Drugs 0.000 description 1
- QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N saquinavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN1C[C@H]2CCCC[C@H]2C[C@H]1C(=O)NC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)C=1N=C2C=CC=CC2=CC=1)C1=CC=CC=C1 QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N 0.000 description 1
- 238000007650 screen-printing Methods 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- FZHAPNGMFPVSLP-UHFFFAOYSA-N silanamine Chemical compound [SiH3]N FZHAPNGMFPVSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002063 sofosbuvir Drugs 0.000 description 1
- TTZHDVOVKQGIBA-IQWMDFIBSA-N sofosbuvir Chemical compound N1([C@@H]2O[C@@H]([C@H]([C@]2(F)C)O)CO[P@@](=O)(N[C@@H](C)C(=O)OC(C)C)OC=2C=CC=CC=2)C=CC(=O)NC1=O TTZHDVOVKQGIBA-IQWMDFIBSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000004365 square wave voltammetry Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 229960001203 stavudine Drugs 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229940115920 streptococcus dysgalactiae Drugs 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229940020707 synercid Drugs 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005222 synovial tissue Anatomy 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229940061367 tamiflu Drugs 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229950006081 taribavirin Drugs 0.000 description 1
- NHKZSTHOYNWEEZ-AFCXAGJDSA-N taribavirin Chemical compound N1=C(C(=N)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NHKZSTHOYNWEEZ-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- LPQZKKCYTLCDGQ-WEDXCCLWSA-N tazobactam Chemical compound C([C@]1(C)S([C@H]2N(C(C2)=O)[C@H]1C(O)=O)(=O)=O)N1C=CN=N1 LPQZKKCYTLCDGQ-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 229960003865 tazobactam Drugs 0.000 description 1
- 229960002935 telaprevir Drugs 0.000 description 1
- BBAWEDCPNXPBQM-GDEBMMAJSA-N telaprevir Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@@H]2CCC[C@@H]2[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC)C(=O)C(=O)NC1CC1)C(C)(C)C)C1CCCCC1)C(=O)C1=CN=CC=N1 BBAWEDCPNXPBQM-GDEBMMAJSA-N 0.000 description 1
- 108010017101 telaprevir Proteins 0.000 description 1
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 1
- SGOIRFVFHAKUTI-ZCFIWIBFSA-N tenofovir (anhydrous) Chemical compound N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(O)(O)=O)C=NC2=C1N SGOIRFVFHAKUTI-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 229960001355 tenofovir disoproxil Drugs 0.000 description 1
- JFVZFKDSXNQEJW-CQSZACIVSA-N tenofovir disoproxil Chemical compound N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N JFVZFKDSXNQEJW-CQSZACIVSA-N 0.000 description 1
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 1
- OHKOGUYZJXTSFX-KZFFXBSXSA-N ticarcillin Chemical compound C=1([C@@H](C(O)=O)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)C=CSC=1 OHKOGUYZJXTSFX-KZFFXBSXSA-N 0.000 description 1
- 229960004659 ticarcillin Drugs 0.000 description 1
- 229960000838 tipranavir Drugs 0.000 description 1
- SUJUHGSWHZTSEU-FYBSXPHGSA-N tipranavir Chemical compound C([C@@]1(CCC)OC(=O)C([C@H](CC)C=2C=C(NS(=O)(=O)C=3N=CC(=CC=3)C(F)(F)F)C=CC=2)=C(O)C1)CC1=CC=CC=C1 SUJUHGSWHZTSEU-FYBSXPHGSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 229960003962 trifluridine Drugs 0.000 description 1
- VSQQQLOSPVPRAZ-RRKCRQDMSA-N trifluridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C(F)(F)F)=C1 VSQQQLOSPVPRAZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 229940111527 trizivir Drugs 0.000 description 1
- 229960000832 tromantadine Drugs 0.000 description 1
- UXQDWARBDDDTKG-UHFFFAOYSA-N tromantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(NC(=O)COCCN(C)C)C3 UXQDWARBDDDTKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940008349 truvada Drugs 0.000 description 1
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229960004626 umifenovir Drugs 0.000 description 1
- KCFYEAOKVJSACF-UHFFFAOYSA-N umifenovir Chemical compound CN1C2=CC(Br)=C(O)C(CN(C)C)=C2C(C(=O)OCC)=C1CSC1=CC=CC=C1 KCFYEAOKVJSACF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940093257 valacyclovir Drugs 0.000 description 1
- 229960002149 valganciclovir Drugs 0.000 description 1
- 229940108442 valtrex Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229950009860 vicriviroc Drugs 0.000 description 1
- 229960003636 vidarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 229960000523 zalcitabine Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 1
Description
Настоящее изобретение относится к in vitro способу диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания, включающему (a) обеспечение образца субъекта, проявляющего клинические симптомы инфекции и/или подозреваемого на наличие инфекции, (b) определение уровня D-лактата в указанном образце, (c) при этом уровень D-лактата указывает на наличие инфекционного заболевания, отличающемуся тем, что (d) уровень D-лактата в указанном образце определяют с помощью электрохимической сенсорной системы (биосенсора). Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит потенциометрический или амперометрический сенсор. Предпочтительно электрохимическая система содержит связывающую D-лактат молекулу, которая предпочтительно иммобилизована на электроде определения (рабочем). Согласно вариантам осуществления электрод определения с иммобилизованной связывающей D-лактат молекулой состоит из (одноразовой) тест-полоски для вставки в портативное устройство считывания.
Уровень техники изобретения
Инфекции протезных суставов представляют собой серьезное осложнение, связанное со значительной смертностью и заболеваемостью (1, 2). Своевременный и точный диагноз инфекции имеет решающее значение для планирования адекватного лечения, включающего артроскопическое или открытое хирургическое вмешательство. В протезных суставах низкий уровень воспаления и слабовыраженные клинические симптомы могут препятствовать диагностике инфекции протезного сустава (PJI (от англ. prosthetic joint infection)), которая обычно возникает через несколько месяцев или лет после артропластики.
Кроме того, инфекционные заболевания в целом представляют собой важную проблему для здоровья, и срочно необходима ранняя и надежная диагностика с использованием быстрых и последовательных способов тестирования для улучшения терапевтического вмешательства у пациентов с подозрением на инфекционное заболевание или с диагностированным инфекционным заболеванием.
Используемые в настоящее время диагностические тесты синовиальной жидкости не обладают высокой чувствительностью и высокой специфичностью в отношении инфекции. Для посева синовиальной жидкости требуется время, пока не начнется рост микробов, и он характеризуется ограниченной чувствительностью и специфичностью, особенно при хронической PJI легкой степени (3-5). Количество лейкоцитов в синовиальной жидкости и отдельных видов лейкоцитов (т.е. процент гранулоцитов) имеет высокую чувствительность (6), но может быть повышено без инфекции в случае вывихов, перипротезного перелома или в течение первых 6 недель после хирургического вмешательства из-за физиологического воспалительного процесса заживления. Новые биомаркеры в синовиальной жидкости, такие как альфадефензин, лейкоцитарная эстераза и кальпротектин (7-9), в большом количестве присутствуют в нейтрофилах, поэтому не могут быть применимы для диагностики PJI у пациентов с асептическими состояниями, связанными с высоким количеством лейкоцитов в синовиальной жидкости.
Перипротезная инфекция сустава (PJI (от англ. - periprosthetic joint infection)) представляет собой тяжелое осложнение после артропластики, которое связано со значительной заболеваемостью и смертностью. Точный диагноз инфекции имеет решающее значение для планирования адекватного лечения. Инфекция является причиной повторного хирургического вмешательства более чем в 25% случаев в эпоху ортопедических имплантатов, таких как эндопротезы суставов (26). Используемые в настоящее время диагностические тесты синовиальной жидкости не обладают как высокой чувствительностью, так и высокой специфичностью в отношении инфекции (27). Для посева синовиальной жидкости требуется время, и он характеризуется ограниченной чувствительностью и специфичностью при хронической PJI легкой степени (28-30). Низкий уровень воспаления и слабовыраженные клинические симптомы могут затруднить диагностику PJI, которая может возникать через несколько месяцев или лет после артропластики. Диагноз также затруднен в раннем послеоперационном периоде, когда количество лейкоцитов, Cреактивный белок и клинические признаки затрудняют надежный диагноз из-за местного воспаления тканей (31-33).
Было предпринято несколько попыток исследовать различные биомаркеры, такие как альфа-2макроглоблулин, аденозиндезаминаза, прокальцитонин, IL-1, IL-6, IL-1e и альфа-дефензин, которые могут помочь отличить PJI от асептической патологии (34-36).
D-лактат представляет собой специфический в отношении патогена метаболит, используемый для диагностики бактериальной инфекции в первую очередь в стерильных жидкостях организма (10). L- и Dвращающие изомеры лактата являются продуктами внутриклеточного метаболизма. Однако клетки млекопитающих содержат только фермент L-лактатдегидрогеназу (LDH (от англ. -lactate dehydrogenase)) и могут продуцировать почти исключительно L-лактат. Концентрация D-лактата в сыворотке крови человека чрезвычайно низка, в диапазоне от наномолярного до микромолярного, поскольку это второстепенный побочный путь гликолиза.
Напротив, виды бактерий обладают как D-LDH, так и L-LDH и, следовательно, продуцируют как Dлактат, так и L-лактат. В результате при бактериальных инфекциях концентрация D-лактата увеличивается до миллимолярного диапазона (13, 14). Поэтому в предыдущих отчетах предполагалось, что определение D-лактата в синовиальной жидкости может быть применимо для ранней диагностики септического артрита, особенно по сравнению с окрашиванием по Граму и культивированием (11, 12).
- 1 046276
Еще в 1990-х годах было проведено несколько исследований по измерению концентрации Dлактата в некоторых первичных стерильных жидкостях организма, чтобы отличить инфекцию от асептического воспаления (40-42). Было показано, что D-лактат является многообещающим маркером для диагностики инфекций в различных жидкостях организма, например, при бактериальном менингите и септическом артрите (41, 43), в том числе у пациентов, получающих противомикробную терапию (40).
Однако установленные тесты для диагностики инфекционных заболеваний и, в частности, PJI характеризуются относительно низкой специфичностью. Это также оказалось верным при измерении концентрации D-лактата в образце с использованием общепринятых анализов D-лактата, в частности, спектрофотометрических анализов.
В области химического и биологического определения наблюдается тенденция к применению многоцелевых устройств, которые не требуют или почти не требуют обучения пользователя. Существует множество вариантов преобразователей для преобразования сигнала химического распознавания в электрический сигнал: оптические, массовые, тепловые и электрохимические сенсоры. Среди химических сенсоров электрохимические сенсоры не требуют внешних компонентов, таких как громоздкие оптические линзы или источники света, и обеспечивают высокий уровень интеграции и, во многих случаях, низкий предел обнаружения. Более того, доступен широкий ряд готовых компонентов, что делает электрохимические сенсоры особенно привлекательными в условиях, когда ценятся портативность и низкая стоимость. Эти сенсоры обычно бывают амперометрическими, импедиметрическими или потенциометрическими и успешно используются в качестве химических и биологических сенсоров (58, 59). Исходя из этого, потенциометрия обеспечивает эффективный, но простой способ обнаружения нескольких типов аналитов, таких как нуклеиновые кислоты, антигены и следовые металлы. Возможные области применения включают диагностику по месту оказания медицинской помощи и персонифицированную медицину. Среди потенциометрических способов сенсоры на основе транзисторов представляют хорошую альтернативу одноразовым сенсорам при низкой стоимости и при надежности. Если такими сенсорами можно управлять с помощью недорогого и простого в использовании измерительного оборудования, то сенсоры можно будет использовать в широком диапазоне условий, особенно в удаленных и бедных ресурсами местах, с минимальным обучением пользователя.
Кроме того, совершенно неясно, может ли электрохимический сенсор для D-лактата обеспечивать надежные и воспроизводимые результаты для определения уровня D-лактата в образце, которые можно использовать в контексте in vitro способа диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания.
Соответственно, в данной области существует потребность в надежном in vitro способе диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания, который преодолевает ограничения известных способов. В частности, срочно необходим диагностический способ с высокой чувствительностью, а также специфичностью. Предпочтительно, такие способы должны предусматривать электрохимическую сенсорную систему, которая позволяет выполнять простой тест, обеспечивая воспроизводимые результаты.
Краткое описание изобретения
В свете предшествующего уровня техники техническая проблема, лежащая в основе настоящего изобретения, заключается в обеспечении улучшенного in vitro способа диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания.
Эта проблема решается с помощью признаков независимых пунктов формулы изобретения. Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения представлены в зависимых пунктах формулы изобретения.
Следовательно, согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к in vitro способу диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания, включающему
a) обеспечение образца субъекта, проявляющего клинические симптомы и/или подозреваемого на наличие инфекции,
b) определение уровня D-лактата в указанном образце,
c) при этом уровень D-лактата указывает на наличие инфекционного заболевания, отличающийся тем, что
d) уровень D-лактата в указанном образце определяют с помощью электрохимической сенсорной системы (биосенсора).
Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии того, что измерение D-лактата с помощью электрохимической сенсорной системы (биосенсора) для определения уровня D-лактата в образце согласно способу в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает тест, который характеризуется удивительно высокой специфичностью по сравнению с аналогичными способами, в которых используются другие средства для определения уровня D-лактата, например, спектрофотометрические измерения.
Большим преимуществом способа в соответствии с настоящим изобретением является то, что час
- 2 046276 тота ложноположительных событий может быть резко снижена по сравнению с известными тестами с использованием спектрофотометрических измерений. Неожиданно обнаружили, что количество эритроцитов, а также концентрация гемоглобина в образце, выделенном от субъекта, проявляющего клинические симптомы и/или подозреваемого на наличие инфекции, коррелировали с уровнем D-лактата, определенным с помощью спектрофотометрического измерения. Вероятно, это связано с тем, что гемоглобин и D-лактат имеют интерферирующие длины волн поглощения, т.е. 540 нм для гемоглобина и 570 нм для D-лактата. Следовательно, контаминация крови образца может привести к ложноположительному результату в способе с использованием спектрофотометрического измерения. Напротив, обнаружили, что на электрохимическое измерение, используемое в контексте настоящего изобретения, не влияет наличие эритроцитов, а частота ложноположительных результатов и специфичность теста были существенно улучшены по сравнению с известными способами. Важно отметить, что чувствительность способа в соответствии с настоящим изобретением приблизительно равна очень высоким чувствительностям известных способов, в которых используют спектрофотометрические измерения D-лактата, например, для диагностики PJI.
Согласно предпочтительным вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система в соответствии с настоящим изобретением является высокоспецифической в отношении обнаружения Dлактата, тогда как присутствие L-лактата не определяется и не влияет на определение уровня D-лактата. Определение D-лактата полностью не зависит от присутствия L-лактата, поскольку L-лактат не распознается электрохимической сенсорной системой, специфической для D-лактата.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения электрохимическая сенсорная система содержит потенциометрический сенсор, предпочтительно потенциометрический сенсор на основе транзистора.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит ионночувствительный полевой транзистор (ISFET от англ. - ion sensitive field-effect transistor). ISFET представляет собой потенциометрический сенсор на основе потенциометрического транзистора.
Согласно следующим вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит амперометрический сенсор.
Согласно вариантам осуществления сенсор электрохимической сенсорной системы представляет собой потенциометрический сенсор. Согласно альтернативному варианту осуществления сенсор электрохимической сенсорной системы представляет собой амперометрический сенсор.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит связывающую D-лактат молекулу, такую как, например, D-LDH. Связывающая D-лактат молекула присутствует в электрохимической ячейке электрохимической сенсорной системы. Связывающая D-лактат молекула может быть иммобилизована на подложке электрохимического сенсора, предпочтительно на электроде определения. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения связывающая D-лактат молекула, такая как D-LDH, может быть обеспечена в растворе, например, в буфере, который добавляют в электрохимическую систему для измерения, например, путем разбавления в нем образца, выделенного у пациента.
В случае применения связывающего D-лактат фермента электрохимическая ячейка и/или буфер для образца в соответствии с настоящим изобретением могут содержать дополнительные компоненты, необходимые для выполнения химической реакции, катализируемой связывающим D-лактат ферментом. В случае D-LDH электрохимическая система может содержать никотинамидадениндинуклеотид НАД.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения электрохимическая сенсорная система содержит тест-полоску или чип с соответствующими электродами на их поверхности для осуществления электрохимического обнаружения D-лактата, предпочтительно с использованием потенциометрического или амперометрического сенсора. Согласно вариантам осуществления тест-полоска или чип являются одноразовыми. Согласно следующим вариантам осуществления тест-полоска или чип являются многоразовыми.
Согласно предпочтительным вариантам осуществления тест-полоску или чип электрохимической сенсорной системы можно использовать путем вставки в подходящее устройство считывания, такое как переносное компактное устройство считывания, которое может питаться от батареи. Являющиеся компактными переносные устройства считывания, обеспечивающие мобильное применение и использующие электрохимические тест-полоски, известны в уровне техники для других аналитов, таких как глюкоза. Такие устройства обладают преимуществом, поскольку измерение и определение уровня соответствующего аналита могут быть обеспечены мгновенно на месте выделения образца. Примером такого устройства является система мониторинга уровня глюкозы и β-кетона в крови Freestyle Precision Pro.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит предпочтительно одноразовую тест-полоску (чип) для электрохимического определения уровня D-лактата, при этом тест-полоска содержит электрод определения с иммобилизованной связывающей D-лактат молекулой и предпочтительно также противоэлектрод и/или электрод сравнения.
Согласно вариантам осуществления измерение или определение уровня D-лактата происходит в устройстве считывания, предпочтительно питающемся от батареи переносном компактном устройстве считывания. Согласно вариантам осуществления одноразовая тест-полоска может быть помещена в
- 3 046276 предпочтительно питающееся от батареи переносное компактное устройство считывания для осуществления измерения D-лактата. Согласно вариантам осуществления устройство считывания является не переносным устройством, а настольным устройством считывания.
Согласно предпочтительным вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система основана по меньшей мере на одном из амперометрии, потенциометрии и полевого транзистора.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит связывающую D-лактат молекулу, предпочтительно D-лактатдегидрогеназу (D-LDH).
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит электрод определения (рабочий), предпочтительно включающий поверхность из углерода или золота.
Согласно предпочтительным вариантам осуществления связывающая D-лактат молекула, предпочтительно D-LDH, иммобилизована на электроде определения.
Согласно следующим вариантам осуществления настоящего изобретения электрохимическая сенсорная система содержит электрод определения (рабочий), предпочтительно включающий поверхность из углерода или золота, при этом связывающая D-лактат молекула, предпочтительно связывающий Dлактат фермент, более предпочтительно D-лактатдегидрогеназа (D-LDH), иммобилизована на поверхности электрода определения (рабочего).
Согласно предпочтительным вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит электрод определения, включающий иммобилизованную связывающую лактат молекулу. Согласно предпочтительным вариантам осуществления связывающая лактат молекула представляет собой D-LDH.
Согласно вариантам осуществления иммобилизация связывающей D-лактат молекулы, такой как DLDH, на поверхности электрода определения достигается любым из адсорбции, ковалентного связывания, захвата, инкапсуляции, сшивания или взаимодействия тиол-золото, предпочтительно сшивания или взаимодействия тиол-золото.
Предпочтительным является применение связывающего D-лактат фермента, катализирующего химическую реакцию, приводящую к образованию восстановленного никотинамидадениндинуклеотида НАДН. Поэтому применение D-LDH является благоприятным, поскольку она катализирует обратимую реакцию D-лактата в присутствии НАД' до пирувата и НАДН. Фермент D-LDH, подлежащий применению для иммобилизации на электроде определения (рабочем) электрохимической сенсорной системы, может представлять собой коммерчески доступную D-LDH.
Согласно вариантам осуществления предпочтительным является осуществление некоторых модификаций электрода перед связыванием D-LDH на поверхности электрода, таких как покрытие наночастицами металла и/или другие конструкции электрода, такие как графеновые электроды с использованием полученных собственными силами чипов, для чувствительности в правильном диапазоне концентраций D-лактата.
НАДН, высвобождаемый в результате химической реакции, катализируемой D-LDH (Dлактат+НАД+^пируват+НАДН), разлагается на НАД++Н+ и 2e- под действием приложенного напряжения. 2e- (электроны) могут быть обнаружены электродом определения (рабочим), который может находиться на поверхности тест-полоски (чипа), а электрохимический сигнал может быть измерен устройством считывания, находящимся в контакте с электродом определения, например, устройством считывания, в которое вставляется тест-полоска. Такое устройство считывания может представлять собой питающееся от батареи переносное компактное устройство считывания. Согласно предпочтительным вариантам осуществления в таком устройстве считывания используется амперометрия. Кроме того, в контексте настоящего изобретения можно использовать устройство считывания, в котором используется потенциометрия.
В контексте настоящего изобретения можно пересчитать электрический сигнал в молярную концентрацию. Например, электрохимическая сенсорная система может быть откалибрована с использованием тестовых образцов, имеющих известные концентрации D-LDH, в подходящей среде, такой как подходящий буфер. Электрохимическая сенсорная система может быть предварительно откалибрована. Согласно вариантам осуществления система в соответствии с настоящим изобретением может предусматривать различные режимы определения, соответствующие различным условиям образца, например, соответствующие измерениям различных физиологических жидкостей.
В контексте настоящего изобретения иммобилизация D-LDH на поверхности электрода определения может быть достигнута любым из адсорбции, ковалентного связывания, захвата, инкапсуляции или предпочтительно сшивания или посредством взаимодействия тиол-золото. Согласно вариантам осуществления могут быть использованы другие методики иммобилизации, известные специалисту в данной области.
Для адсорбции может быть обеспечено прилипание ферментов к поверхностям электрода со слабым взаимодействием, чтобы избежать денатурации фермента. Это оказалось особенно успешным, когда поверхность электрода была ионизирована сначала плазменной или кислотной обработкой, ковалентной модификацией поверхности, такой как аминирование, или осаждением ионного полимера посредством электрополимеризации или покрытия методом литья каплями/центрифугирования.
- 4 046276
Сшивание является часто используемым способом, при котором диальдегиды (глутаральдегид) часто реагируют с аминогруппами ферментов и аминогруппами на аминированных поверхностях. Другим способом является взаимодействие тиол-золото, при котором к ферменту добавляют тиоловую группу (или применяют цистеины в ферменте), что позволяет ферменту связываться с поверхностью путем тиолирования золота.
Инкапсуляция является еще одним очень распространенным способом иммобилизации, известным специалисту. Способы инкапсуляции включают электрохимическую полимеризацию или сшивание тонкой сетки полимера поверх фермента на поверхности. Таким образом, фермент не может покинуть поверхность, но по-прежнему обеспечивает доступ молекул субстрата для ферментативной реакции.
Согласно вариантам осуществления электрод определения модифицируют, предпочтительно перед иммобилизацией связывающей D-лактат молекулы, для точной настройки характеристик обнаружения и повышения и/или регулировки чувствительности биосенсора в подходящем диапазоне концентраций Dлактата.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит электрод определения, покрытый наночастицами металла.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит электрод определения, содержащий графен или состоящий из графена.
Кроме того, согласно вариантам осуществления система позволяет параллельно определять уровни D-лактата более чем в одном образце. Большим преимуществом настоящего изобретения является то, что оно позволяет мультиплексировать несколько образцов, которые можно измерять параллельно.
Согласно вариантам осуществления инфекционное заболевание в соответствии с настоящим изобретением представляет собой микробную бактериальную и/или грибковую инфекцию, предпочтительно по меньшей мере с одним инфекционным возбудителем, выбранным из группы, состоящей из Staphylococcus aureus, коагулазонегативных стафилококков, Streptococcus spp., Enterococcus spp., анаэробов, грамотрицательных бактерий и Candida spp.
В контексте настоящего изобретения инфекционное заболевание может представлять собой инфекцию сустава, инфекцию протезного сустава (PJI), менингит, перитонит, инфекцию плевральной полости, инфекцию перикардиального пространства и/или инфекцию кровотока.
Особенно предпочтительным является применение настоящего изобретения для диагностики менингита. Неожиданно обнаружили, что электрохимическое определение D-лактата в спинномозговой жидкости является особенно благоприятным по сравнению с другими способами обнаружения Dлактата, поскольку образцы спинномозговой жидкости часто контаминируются кровью во время процедуры выделения образца.
Кроме того, настоящее изобретение особенно применимо для определения D-лактата в образцах крови, которые нельзя использовать в спектрофотометрических измерениях из-за большого количества красных кровяных телец и гемоглобина. Следовательно, образцы сыворотки или плазмы крови должны быть взяты из крови или образцов крови для обнаружения циркуляции D-лактата. Настоящее изобретение позволяет определять уровни D-лактата в образце крови сразу после выделения, что делает ненужным стадию получения сыворотки или плазмы крови.
Если инфекционное заболевание представляет собой инфекцию суставов, в качестве образца можно использовать синовиальную жидкость. В этом контексте измерение D-лактата с использованием электрохимической сенсорной системы особенно выгодно по сравнению со спектрофотометрическими измерениями, поскольку суставные аспираты часто контаминированы кровью. Кроме того, синовиальная жидкость протезных суставов часто контаминирована кровью, особенно после хирургического вмешательства. Соответственно, присутствие красных кровяных телец (RBC (от англ. - red blood cell)) или гемоглобина из лизированных RBC контаминирует образцы, полученные из образцов, содержащих кровь, и, следовательно, наблюдается тенденция к ложным результатам при измерении спектрофотометрическими способами.
Если инфекционное заболевание представляет собой перитонит, то в качестве образца можно использовать асциты, выделенные с перитонеальным катетером или без него. Если инфекционное заболевание представляет собой инфекцию плевральной полости, то в качестве образца можно использовать плевральную жидкость.
Если инфекционное заболевание представляет собой инфекцию перикардиального пространства или перикардит, то в качестве образца можно использовать перикардиальную жидкость.
В случае инфекции кровотока или сепсиса кровь или полученный из крови материал можно использовать в качестве образца, при этом кровь может быть выделена с помощью внутрисосудистого катетера или без него.
Согласно вариантам осуществления повышенный уровень D-лактата, определяемый электрохимической сенсорной системой в указанном образце, по сравнению с соответствующим контролем, таким как образец от здорового субъекта, указывает на наличие инфекционного заболевания.
Согласно следующему варианту осуществления настоящего изобретения измерение тока или напряжения с помощью электрохимической сенсорной системы, соответствующего уровню D-лактата в
- 5 046276 указанном образце, равному или превышающему 1,2 ммоль/л, указывает на наличие инфекционного заболевания.
Согласно следующим вариантам осуществления измерение тока или напряжения с помощью электрохимической сенсорной системы, соответствующее уровню D-лактата в указанном образце, равному или превышающему 0,4 ммоль/л, предпочтительно 0,5 ммоль/л, более предпочтительно равному или превышающему 1,0 ммоль/л, наиболее предпочтительно равному или превышающему 1,2 ммоль/л, указывает на наличие инфекционного заболевания.
Кроме того, способ в соответствии с настоящим изобретением может быть охарактеризован тем фактом, что измерение тока или напряжения с помощью электрохимической сенсорной системы, соответствующее уровню D-лактата в указанном образце, равному или превышающему 0,5 ммоль/л, предпочтительно равному или превышающему 1,0 ммоль/л, более предпочтительно равному или превышающему 1,2 ммоль/л, указывает на то, что требуется начало или изменение лечения антибиотиком.
Кроме того, возможные пороговые уровни в соответствии с настоящим изобретением составляют 0,4, 0,45, 0,5, 0,55, 0,6, 0,65, 0,7, 0,75, 0,8, 0,85, 0,9, 0,95, 1, 1,05, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0 ммоль/л. Диапазоны, охватывающие любую комбинацию значений, раскрываемых в настоящем документе в качестве пределов, считаются представляющими раскрываемые варианты осуществления настоящего изобретения.
Раскрываемые в настоящем документе пороговые уровни предпочтительно относятся к измерениям D-лактата в образце синовиальной жидкости, полученном от пациента с помощью диагностического набора D-Lactam®, предоставленного Sivital (Витебск, Беларусь), полученного от VL-Diagnostics (Лейпциг) и используемого в контексте примеров настоящего изобретения. Соответственно, раскрываемые в настоящем документе значения могут до некоторой степени варьировать в зависимости от используемой системы или набора обнаружения/измерения, и раскрываемые в настоящем документе конкретные значения предназначены также для считывания соответствующих значений, определенных другими системой или наборами для измерения. Например, сравнение спектрофотометрических измерений D-лактата с использованием двух разных тестовых наборов (предоставленных Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США) и VL-Diagnostics (Лейпциг, Германия), соответственно) показало, что специально определенные значения отсечки также зависят от тестового набора и способа определения уровня D-лактата (Karbysheva et al. Performance of synovial fluid D-lactate for the diagnosis of acute and chronic/low-grade PJI; Abstract at EFORT Conference 2018, Barcelona, Spain).
Соответственно, согласно вариантам осуществления настоящего изобретения значения отсечки, которые должны использоваться в контексте электрохимического измерения, такого как амперометрия или потенциометрия, могут соответствовать различным концентрациям D-лактата по сравнению с пороговыми концентрациями D-лактата, которые были определены спектрофотометрическими измерениями с использованием специального тестового набора.
Считывания данных электрохимических измерений включают обнаружение токов и напряжений. Обнаруженные значения зависят от конфигурации электрохимической сенсорной системы. Модификации различных компонентов системы или способа в соответствии с настоящим изобретением (например, образца) влияют на обнаруживаемые токи или напряжения, соответственно. Следовательно, невозможно обеспечить общее значение отсечки или пороговое значение для электрохимического измерения. Однако, поскольку согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система в соответствии с настоящим изобретением требует калибровки эталонными образцами с предварительно определенными известными концентрациями D-лактата, можно обеспечить любую заданную электрохимическую систему, подходящую для определения значений отсечки/пороговых значений уровня D-лактата, которые соответствуют конкретной концентрации D-лактата, что, как было показано, указывает на инфекционное заболевание и необязательно на начало лечения антибиотиками для определенного вида образца.
Согласно предпочтительным вариантам осуществления настоящего изобретения образец разбавляют фосфатным буфером. Согласно вариантам осуществления pH указанного фосфатного буфера составляет 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10. Диапазоны, охватывающие любую комбинацию раскрываемых значений как пределов представляют собой раскрываемые варианты осуществления настоящего изобретения. Буфер или раствор образцов с pH приблизительно 7,5-9,5 является предпочтительным, при этом Ph приблизительно 8-9 является более предпочтительным, а pH 8,5 является особенно предпочтительным. Было показано, что связывающие D-лактат молекулы и, в частности, D-LDH работают очень эффективно в обнаружении D-лактата в контексте электрохимической сенсорной системы при pH 8,5. Возможным буферным раствором для разбавления образца, такого как физиологическая жидкость, например, синовиальная жидкость, является фосфатный буфер.
Согласно вариантам осуществления электрохимическую сенсорную систему калибруют с использованием одного или нескольких калибровочных образцов с определенной концентрацией D-лактата перед определением уровня D-лактата в указанном образце. Например, коммерчески доступный D-лактат, разбавленный до известной концентрации подходящим буферным раствором, который может быть таким же, как буферный раствор, используемый для определения уровня D-лактата в указанном образце, может быть использован для определения напряжения, соответствующего конкретной концентрации D-лактата
- 6 046276 в образце.
Согласно некоторым вариантам осуществления, включающим потенциометрический сенсор, напряжение приблизительно 85 мВ соответствует уровню D-лактата 1,2 ммоль/л и может указывать на наличие инфекционного заболевания. Измерение напряжения электрохимической сенсорной системой может варьировать в зависимости от точной настройки системы и типа сенсора.
Согласно некоторым вариантам осуществления, включающим амперометрический сенсор, ток приблизительно 422 нА соответствует уровню D-лактата приблизительно 1,2 ммоль/л и может указывать на наличие инфекционного заболевания. Измерение тока электрохимической сенсорной системой может варьировать в зависимости от точной настройки системы и типа сенсора.
Способ in vitro по любому из предыдущих пунктов, при котором измерение тока или напряжения с помощью электрохимической сенсорной системы, соответствующее уровню D-лактата в указанном образце, равному или превышающему 1,2 ммоль/л, указывает на то, что требуется начало или изменение лечения антибиотиком.
Однако ток или напряжение, соответствующие уровню D-лактата 1,2 ммоль/л, могут представлять собой предпочтительное значение отсечки в контексте настоящего изобретения, в частности, в случае образцов синовиальной жидкости, которые можно использовать для обнаружения инфекций суставов.
Предпочтительно уровень D-лактата, определяемый с помощью электрохимической сенсорной системы в контексте способа в соответствии с настоящим изобретением, не зависит от количества эритроцитов и/или гемоглобина, присутствующих в указанном образце.
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения образец выбирают из группы, включающей образец физиологической жидкости, образец гомогенизированной ткани, образец крови, образец сыворотки крови, образец плазмы, образец мочи, суставной аспират, образец синовиальной жидкости, образец асцита, образец перитонеальной жидкости, образец плевральной жидкости, образец перикардиальной жидкости и/или образец спинномозговой жидкости.
Согласно следующему аспекту настоящее изобретение относится к электрохимической сенсорной системе (биосенсору) для определения уровня D-лактата в образце. Электрохимическая сенсорная система в соответствии с настоящим изобретением представляет собой систему, раскрываемую в контексте способа и набора в соответствии с настоящим изобретением.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение также относится к набору для осуществления способа в соответствии с настоящим изобретением, включающему электрохимическую сенсорную систему для определения уровня D-лактата в образце, эталонные данные, такие как эталонный уровень, предпочтительно соответствующий уровню Dлактата в указанном образце, равному или превышающему 1,2 ммоль/л, при этом указанные эталонные данные необязательно хранятся на машиночитаемом носителе и/или используются в форме исполняемого компьютером кода, сконфигурированного для сравнения определенных уровней D-лактата с указанными эталонными данными, и необязательно реагенты для калибровки электрохимической сенсорной системы.
Настоящее изобретение также относится к набору для осуществления способа в соответствии с настоящим изобретением, включающего электрохимическую сенсорную систему для определения уровня D-лактата в образце, предпочтительно включающую тест-полоску (чип) с соответствующими электродами на поверхности или сенсор на основе транзистора для электрохимического обнаружения, при этом электрохимический сигнал измеряют с помощью устройства считывания, предпочтительно питающегося от батареи переносного компактного устройства считывания, эталонные данные, такие как эталонный уровень, предпочтительно соответствующий уровню Dлактата в указанном образце, равному или превышающему 1,2 ммоль/л, при этом указанные эталонные данные необязательно хранятся на машиночитаемом носителе и/или используются в форме исполняемого компьютером кода, сконфигурированного для сравнения определенных уровней D-лактата с указанными эталонными данными, и необязательно реагенты для калибровки электрохимической сенсорной системы.
Кроме того, настоящее изобретение относится к набору для осуществления способа в соответствии с настоящим изобретением, включающему:
электрохимическую сенсорную систему для определения уровня D-лактата в образце, при этом электрохимическая сенсорная система предпочтительно содержит:
i. тест-полоску (чип) для электрохимического определения уровня D-лактата, при этом тест-полоска содержит электрод определения с иммобилизованной связывающей D-лактат молекулой и предпочтительно также противоэлектрод и/или электрод сравнения, ii. и необязательно переносное компактное устройство считывания для вставки тест-полоски и выполнения измерения D-лактата, эталонные данные, такие как эталонный уровень, предпочтительно соответствующий уровню Dлактата в указанном образце, равному или превышающему 1,2 ммоль/л, при этом указанные эталонные данные необязательно хранятся на машиночитаемом носителе и/или используются в форме исполняемо
- 7 046276 го компьютером кода, сконфигурированного для сравнения определенных уровней D-лактата с указанными эталонными данными, и необязательно реагенты для калибровки электрохимической сенсорной системы.
Наборы в соответствии с настоящим изобретением могут также содержать инструкции по применению. Значения отсечки, предоставляемые набором, могут варьировать в зависимости от инфекционного заболевания и образцов, подлежащих использованию для осуществления способа в соответствии с настоящим изобретением. Набор может обеспечивать перечень подходящих значений отсечки для перечня инфекционных заболеваний и/или образцов, подлежащих использованию.
Реагенты для калибровки электрохимической системы могут содержать D-лактат и подходящие буферные растворы для создания подходящих калибровочных образцов. Такие образцы могут быть предоставлены в готовом виде, или основной материал и реагенты для создания таких образцов могут быть предоставлены набором, чтобы пользователь мог создавать специальные калибровочные образцы для конкретного применения набора, выполняемого соответствующим пользователем.
Согласно следующему аспекту настоящее изобретение относится к электрохимической сенсорной системе (биосенсору) для определения уровня D-лактата в образце. Варианты осуществления электрохимической сенсорной системы в соответствии с настоящим изобретением раскрываются в контексте способа и набора в соответствии с настоящим изобретением. Согласно предпочтительному варианту осуществления электрохимическая сенсорная система для определения уровня D-лактата в образце содержит D-LDH в качестве компонента распознавания D-лактата, иммобилизованного на тест-полоске для вставки в переносное устройство считывания.
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система в соответствии с настоящим изобретением содержит потенциометрический сенсор и/или амперометрический сенсор. Система предпочтительно содержит электрод определения (рабочий) с иммобилизованной на поверхности электрода связывающей D-лактат молекулой, предпочтительно D-LDH. Согласно предпочтительным вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит (предпочтительно одноразовую) тест-полоску, которая содержит электрод определения с иммобилизованной связывающей D-лактат молекулой и предпочтительно также противоэлектрод и/или электроды сравнения. Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система также содержит устройство считывания, предпочтительно портативное переносное устройство считывания, подходящее для вставки тест-полоски и для измерения D-лактата в образце.
Все признаки, которые были раскрыты в контексте способа в соответствии с настоящим изобретением, наряду с этим также раскрываются в контексте набора и электрохимической сенсорной системы в соответствии с настоящим изобретением и наоборот. Соответственно, признаки вариантов осуществления способа в соответствии с настоящим изобретением также могут быть признаками вариантов осуществления набора и электрохимической сенсорной системы в соответствии с настоящим изобретением и наоборот.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к in vitro способу диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания, включающему (a) обеспечение образца субъекта, проявляющего клинические симптомы инфекции и/или подозреваемого в наличии инфекции, (b) определение уровня D-лактата в указанном образце, (c) при этом уровень D-лактата указывает на наличие инфекционного заболевания, отличающемуся тем, что (d) уровень D-лактата в указанном образце определяют с помощью электрохимической сенсорной системы (биосенсора).
Используемый в настоящем документе термин диагностика в контексте настоящего изобретения относится к распознаванию и (раннему) обнаружению клинического состояния субъекта, связанного с инфекционным заболеванием. Также термин диагностика может охватывать оценивание тяжести инфекционного заболевания. Термин прогнозирование относится к предсказанию исхода или конкретного риска для субъекта на основании инфекционного заболевания. Это также может включать оценку шанса восстановления или шанса неблагоприятного исхода для указанного субъекта.
Термин оценка риска и, возможно, последующая стратификация пациентов относится к группированию субъектов в различные группы риска в соответствии с их прогнозом. Оценка риска также относится к стратификации для применения превентивных и/или терапевтических мер. Кроме того, способы в соответствии с настоящим изобретением можно использовать для стратификации терапии, при этом термин стратификация терапии, в частности, относится к группировке или классификации пациентов в различные группы, такие как группы риска или получающие терапию группы, которые получают определенные дифференцированные терапевтические меры в зависимости от их классификации. Термин стратификация терапии также относится к группировке или классификации пациентов с инфекциями или с симптомами инфекционного заболевания в группу, которая не нуждается в получении определенных терапевтических мер, таких как лечение антибиотиками.
Способы в соответствии с настоящим изобретением также можно использовать для мониторинга. Термин мониторинг в контексте способа в соответствии с настоящим изобретением, касающегося ин
- 8 046276 фекционных заболеваний, относится к отслеживанию уже диагностированного инфекционного заболевания, нарушения, осложнения или риска, например, для анализа прогрессирования заболевания или влияния конкретных лечения или терапии на прогрессирование заболевания у тяжелобольного пациента или инфекционного заболевания у пациента. Термины мониторинг терапии и терапевтический контроль в контексте настоящего изобретения относятся к мониторингу и/или корректировке терапевтического лечения указанного субъекта, например, путем получения обратной связи, информирующей об эффективности терапии. Используемый в настоящем документе термин терапевтическое ведение относится к применению определенных терапевтических средств, терапевтических действий или медицинских вмешательств на основании уровня D-лактата, определенного в контексте настоящего изобретения. Это включает корректировку терапии или прекращение терапии.
Термин инфекционное заболевание предусматривает и включает все заболевания или нарушения, которые связаны с инфекцией и/или вызваны инфекцией, такой как, в частности, бактериальная, вирусная и/или грибковая инфекция. Используемый в настоящем документе термин инфекция относится к патологическому процессу, вызванному инвазией в обычно стерильную ткань или жидкость патогенных или потенциально патогенных возбудителей/патогенов, организмов и/или микроорганизмов, и предпочтительно относится к инфекции(ям), вызываемой (вызываемым) бактериями, вирусами, грибками и/или паразитами. Соответственно, инфекция может представлять собой бактериальную инфекцию, вирусную инфекцию и/или грибковую инфекцию. Инфекция может быть местной или системной инфекцией. Для целей настоящего изобретения вирусная инфекция может рассматриваться как инфекция, вызванная микроорганизмом.
Настоящее изобретение охватывает нозокомиальные инфекции. Нозокомиальные инфекции также называют внутрибольничными инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи, поскольку инфекции могут быть переданы в больнице, доме престарелых, реабилитационном учреждении, амбулаторной клинике или других клинических или медицинских учреждениях. Нозокомиальная инфекция может передаваться восприимчивому пациенту в клинических условиях различными способами. Инфекцию может распространять медицинский персонал в дополнение зараженному оборудованию, постельному белью или воздушно-капельной среде. Инфекция может происходить из внешней среды, другого инфицированного пациента, персонала, который может быть инфицирован, или, в некоторых случаях, источник инфекции не может быть определен. В некоторых случаях микроорганизм происходит из собственной микробиоты кожи пациента, становясь условно-патогенным после хирургического вмешательства или других процедур, нарушающих защитный кожный барьер. Хотя пациент мог заразиться инфекцией через собственную кожу, инфекция по-прежнему считается нозокомиальной, поскольку развивается в медицинском учреждении.
Согласно вариантам осуществления субъект, страдающий инфекцией, может одновременно страдать от более чем одного источника инфекции. Например, субъект может страдать бактериальной инфекцией и вирусной инфекцией; вирусной инфекцией и грибковой инфекцией; бактериальной и грибковой инфекцией, а также бактериальной инфекцией, грибковой инфекцией и вирусной инфекцией, или может страдать смешанной инфекцией, включающей одну или несколько инфекций, перечисленных в настоящем документе, включая потенциально суперинфекцию, например, одну или несколько бактериальных инфекций в дополнение к одной или нескольким вирусным инфекциям и/или к одной или нескольким грибковым инфекциям.
В контексте настоящего изобретения инфекционное заболевание предпочтительно связано с бактериальной и/или грибковой инфекцией, предпочтительно по меньшей мере с одним инфекционным возбудителем, выбранным из группы, включающей Staphylococcus aureus, коагулазонегативные стафилококки, Streptococcus spp., Enterococcus spp., анаэробы, грамотрицательные бактерии и Candida spp.
Согласно одному варианту осуществления инфекция, подлежащая обнаружению или подлежащая тестированию, может быть выбрана из видов Bordetella, таких как Bordetella pertussis, Borrelia, таких как Borrelia burgdorferi, Brucella, таких как Brucella abortus, Brucella canis, Brucella melitensis или Brucella suis, Campylobacter, таких как Campylobacter jejuni, Chlamydia и Chlamydophila, таких как Chlamydia pneumonia, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila psittaci, Clostridium, таких как Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Corynebacterium, таких как Corynebacterium diphtheria, Enterococcus, таких как Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Escherichia, таких как Escherichia coli, Francisella, таких как Francisella tularensis, Haemophilus, таких как Haemophilus influenza, Helicobacter, таких как Helicobacter pylori, Legionella, таких как Legionella pneumophila, Leptospira, таких как Leptospira interrogans, Listeria, таких как Listeria monocytogenes, Mycobacterium, таких как Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycoplasma, таких как Mycoplasma pneumonia, Neisseria, таких как Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitides, Pseudomonas, таких как Pseudomonas aeruginosa, Rickettsia, таких как Rickettsia rickettsia, Salmonella, таких как Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Shigella, таких как Shigella sonnei, Staphylococcus, таких как Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus, таких как Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes, Treponema, таких как Treponema pallidum, Vibrio, таких как Vibrio cholera, Yersinia, таких как Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica или Yersinia pseudotuberculosis.
- 9 046276
Патогенные грибки представляют собой грибки, которые вызывают заболевание у людей или других организмов. Виды Candida являются важными патогенами человека, которые, как хорошо известно, вызывают оппортунистские инфекции у хозяев с ослабленным иммунитетом (например, у перенесших трансплантацию пациентов, страдающих синдромом приобретенного иммунодефицита СПИДом, больных раком пациентов). Инфекции трудно поддаются лечению и могут быть очень тяжелыми: 30-40% системных инфекций приводят к смерти. Аспергиллез вызывается еще одним потенциальным грибковым патогеном. Aspergillus может вызывать заболевание тремя основными способами: через продуцирование микотоксинов; за счет индуцирования аллергических реакций и через локализованные или системные инфекции. В отношении последних двух категорий иммунный статус хозяина имеет решающее значение. Наиболее распространенными патогенными видами являются Aspergillus fumigatus и Aspergillus flavus. Aspergillus flavus продуцирует афлатоксин, который является одновременно токсином и канцерогеном и потенциально может загрязнять пищевые продукты. Aspergillus fumigatus и Aspergillus clavatus могут вызывать заболевание. Cryptococcus neoformans может вызывать заболевание у людей. Cryptococcus neoformans является основным патогеном человека и животных. Известно, что Cryptococcus laurentii и Cryptococcus albidus иногда вызывают заболевания средней и тяжелой степени у людей с ослабленным иммунитетом. Cryptococcus gattii является эндемиком тропических частей континента Африки и Австралии и может вызывать заболевание. Histoplasma capsulatum может вызывать гистоплазмоз у людей, собак и кошек. Pneumocystis jirovecii (или Pneumocystis carinii) может вызывать форму пневмонии у людей с ослабленной иммунной системой, таких как недоношенные дети, пожилые люди и пациенты со СПИДом. Stachybotrys chartarum или черная плесень может вызывать поражение дыхательных путей и сильные головные боли.
Согласно одному варианту осуществления инфекция, подлежащая обнаружению или подлежащая тестированию, может быть выбрана из инфекции, вызываемой Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter Iwoffii, Listeria monocytogenes, Aeromonas caviae, Morganella morganii, Aeromonas hydrophila, Neisseria gonorrhoeae, Aspergillus flavus, Neisseria meningitidis, Aspergillus nidulans, Pasteurella multocida, Aspergillus niger, Pasteurella pneumotropica, Aspergillus terreus, Propionibacterium acnes, Bacillus anthracis, Proteus mirabillis, Bacillus cereus, Providencia rettgeri, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Bacteroides fragilis, Salmonella choleraesuis, Brucella melitensis, Serratia liquefaciens, Burkholderia cepacia, Serratia marcescens, Candida albicans, Staphylococcus aureus, Candida dubliniensis, Staphylococcus epidermidis, Candida glabrata, Staphylococcus haemolyticus, Candida krusei, Staphylococcus hominis, Candida parapsilosis, Staphylococcus saccharolyticus, Candida tropicalis, Staphylococcus warneri, Capnocytophaga canimorsus, Stenotrophomonas maltophilia, Citrobacter braakii, Streptococcus agalactiae, Citrobacter freundii, Streptococcus anginosus, Clostridium perfringens, Streptococcus bovis, Corynebacterium jeikeium, Streptococcus constellatus, Enterobacter aerogenes, Streptococcus dysgalactiae, Enterobacter cloacae, Streptococcus mutans, Enterobacter sakazakii, Streptococcus pneumoniae, Enterococcus faecas, liStreptococcus pyogenes, Enterococcus faecium, Streptococcus salivarius, Escherichia coli, Streptococcus sanguinis, Shigella spp., Streptococcus suis, Gemella haemolysans, Vibrio vulnificus, Gemella morbillorum, Yersinia enterocolitica, Haemophilus influenzae, Yersinia pestis, Kingella kingae, Yersinia pseudotuberculosis и Klebsiella oxytoca.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения инфекционное заболевание представляет собой инфекцию сустава, инфекцию протезного сустава (PJI), инфекцию центральной нервной системы, менингит, перитонит, инфекцию плевральной полости, инфекцию перикардиального пространства и/или инфекцию кровотока.
В контексте вариантов осуществления настоящего изобретения образец предпочтительно соответствует физиологической жидкости, которая находится в контакте с тканью или органом, которые предположительно инфицированы. Например, в случае инфекции центральной нервной системы ЦНС или менингита предпочтительно можно использовать образец спинномозговой жидкости СМЖ.
Менингит представляет собой острое воспаление защитных оболочек головного мозга и спинного мозга, известных под общим названием мозговые оболочки. Наиболее частыми симптомами являются жар, головная боль и скованность шеи. Другие симптомы включают спутанность сознания или измененное сознание, рвоту и неспособность переносить свет или громкие звуки. Маленькие дети часто проявляют только неспецифические симптомы, такие как раздражительность, сонливость или плохой аппетит. Если присутствует сыпь, это может указывать на конкретную причину менингита; например, менингит, вызванный менингококковыми бактериями, может сопровождаться характерной сыпью. Воспаление может быть вызвано инфицированием вирусами, бактериями или другими микроорганизмами, реже - некоторыми лекарственными средствами. Менингит может быть опасным для жизни из-за близости воспаления к головному мозгу и спинному мозгу; следовательно, состояние классифицируется как требующее срочной медицинской помощи. Менингит можно диагностировать или исключать по люмбальной пункции, при которой в позвоночный канал вводится игла для взятия образца спинномозговой жидкости (СМЖ).
Используемый в настоящем документе термин инфекция крови может включать в системную инфекцию кровотока, сепсис, тяжелый сепсис и/или септический шок.
Инфекция сустава, также известная как септический артрит или инфекционный артрит, представля
- 10 046276 ет собой инвазию сустава инфекционным возбудителем, что приводит к воспалению сустава. Симптомы обычно включают покраснение, жар и боль в одном суставе, связанные со снижением способности сустава двигаться. Начало обычно быстрое. Другие симптомы могут включать жар, слабость и головную боль. Иногда может быть затронуто более одного сустава. Причины включают бактерии, вирусы, грибки и паразиты. Факторы риска включают искусственный/протезный сустав, перенесенный артрит, диабет и плохую иммунную функцию. Чаще всего суставы инфицируются через кровь, но могут также инфицироваться через травму или инфекцию вокруг сустава. Диагностика обычно основывается на аспирации суставной жидкости и ее культивировании. Начальное лечение обычно включает антибиотики, такие как ванкомицин, цефтриаксон или цефтазидим. Также может быть проведено хирургическое вмешательство по очистке сустава. Без раннего лечения могут возникать долговременные проблемы с суставами. Септический артрит ежегодно встречается у приблизительно 5 человек на 100000. Чаще встречается у пожилых людей. При лечении умирают приблизительно 15% людей, а без лечения умирают 66%.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения способ в соответствии с настоящим изобретением может включать стадию лечения в случае, если электрохимическое определение D-лактата указывает на наличие инфекционного заболевания. На такой стадии лечения для соответствующего пациента могут быть применены одна или несколько терапевтических мер, раскрываемых в настоящем документе.
В контексте настоящего изобретения термин медицинское лечение или лечение включает различные виды лечения и терапевтические стратегии, в частности, виды лечения, которые известны квалифицированному специалисту для соответствующего диагностированного инфекционного заболевания. В контексте настоящего изобретения лечение может включать лечение антибиотиками, такими как внутривенный антибиотик, пероральные антибиотики или антибиотики для местного применения. Медицинское лечение в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой лечение антибиотиками, при котором можно вводить один или несколько антибиотиков или антибиотических средств, если диагностирована инфекция или определены симптомы инфекционного заболевания.
Антибиотики или антибиотические средства в соответствии с настоящим изобретением также потенциально охватывают противогрибковые или противовирусные соединения, используемые для лечения диагностированной инфекции или сепсиса. Антибиотические средства, обычно применяемые при лечении любой данной инфекции, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, с разделением на классы по патогенам, включают спектр действия - грамположительные: пенициллины (ампициллин, амоксициллин), устойчивые к пенициллиназе (диклоксациллин, оксациллин), цефалоспорины (1-го и 2-го поколения), макролиды (эритромицин, кларитромицин, азитромицин), хинолоны (гатифлоксацин, моксифлоксацин, левофлоксацин), ванкомицин, сульфонамид/триметоприм, клиндамицин, тетрациклины, хлорамфеникол, линезолид, синерцид; спектр действия - грамотрицательные: пенициллины широкого спектра действия (тикарциллин, клавуланат, пиперациллин, тазобактам), цефалоспорины (2-го, 3-го и 4-го поколения), аминогликозиды, макролиды, азитромицин, хинолоны (ципрофлоксацин), монобактамы (азетреонам), сульфонамид/триметоприм, карбапенемы (имипенем), хлорамфеникол; спектр действия - Pseudomonas: ципрофлоксацин, аминогликозиды, некоторые цефалоспорины 3-го поколения, цефалоспорины 4-го поколения, пенициллины широкого спектра действия, карбапенемы;
противогрибковые виды лечения: аллиамины, амфотерицин В, флуконазол и другие азолы, итраконазол, вориконазол, позаконазол, равуконазол, эхинокандины, флуцитозин, сордарины, ингибиторы хитинсинтетазы, ингибиторы топоизомеразы, липопептиды, прадимицины, липосомальный нистатин, вориконазол, эхиноканидины, имидазол, триазол, тиазол, полиен;
противовирусные виды лечения: абакавир, ацикловир (Aciclovir), олигомеризер активированной каспазы, адефовир, амантадин, ампренавир (Agenerase), амплиген, арбидол, атазанавир, атрипла, балавир, цидофовир, комбивир, долутегравир, дарунавир, делавирдин, диданозин, двухнитевая рибонуклеиновая кислота РНК, докозанол, эдоксудин, эфавиренц, эмтрицитабин, энфувиртид, энтекавир, эколиевер, фамцикловир, комбинация с фиксированной дозой (противоретровирусная), фомивирсен, фосампренавир, фоскарнет, фосфонет, ингибитор слияния, ганцикловир, ибацитабин, имуновир, идоксуридин, имиквимод, индинавир, инозин, ингибитор интегразы, интерферон III типа, интерферон II типа, интерферон I типа, интерферон, ламивудин, лопинавир, ловирид, маравирок, мороксидин, метизазон, морфолинос, нельфинавир, невирапин, нексавир, нитазоксанид, аналоги нуклеозидов, новир, осельтамивир (тамифлю), пегинтерферон альфа-/;·!, пенцикловир, перамивир, плеконарил, подофиллотоксин, ингибитор протеазы (фармакология), ралтегравир, ингибитор обратной транскриптазы, рибавирин, рибозимы, рифампицин, римантадин, ритонавир, РНКаза H, ингибиторы протеазы, пирамидин, саквинавир, софосбувир, ставудин, синергетический усилитель (противоретровирусный), телапревир, тенофовир, тенофовир дизопроксил, типранавир, трифлуридин, тризивир, тромантадин, трувада, валацикловир (Valtrex), валганцикловир викривирок, видарабин, вирамидин, зальцитабин, занамивир (Relenza), зидовудин.
Кроме того, антибиотические средства включают бактериофаги для лечения бактериальных инфекций, можно использовать синтетические противомикробные пептиды или антагонисты железа/хелатирующее железо средство. Также терапевтические антитела или антагонист против патогенных
- 11 046276 структур, такие как антитела против VAP (от англ. - vascular adhesion protein - сосудистый адгезивный белок), вакцинация против устойчивых клонов, введение иммунных клеток, таких как in vitro примированные или модулированные эффекторные T-клетки, представляют собой антибиотические средства, которые являются вариантами лечения в контексте настоящего изобретения. Дополнительные антибиотические средства/виды лечения или терапевтические стратегии против инфекции или для предотвращения новых инфекций включают применение антисептических средств, обеззараживающих продуктов, противовирулентных средств, таких как липосомы, санитарные меры, уход за раной, хирургическое вмешательство.
Также можно комбинировать несколько вышеупомянутых антибиотических средств или стратегий лечения.
Согласно вариантам осуществления настоящее изобретение включает введение антибиотика, подходящего для лечения, на основе информации, полученной раскрываемым в настоящем документе способом.
Способы в соответствии с настоящим изобретением особенно выгодны, поскольку электрохимическое измерение D-лактата в образцах пациентов, как оказалось, позволяет проводить диагностические тесты с очень высокой специфичностью и чувствительностью по сравнению с известными способами, которые являются неоптимальными в отношении по меньшей мере одного из этих тестовых свойств.
Чувствительность и специфичность представляют собой статистические показатели эффективности бинарного классификационного теста, также известного в статистике как классификационная функция, что широко используется в медицине. Чувствительность (также называемая показателем истинных положительных результатов, отзывом или вероятностью обнаружения в некоторых областях) измеряет долю фактических положительных результатов, которые правильно идентифицированы как таковые (например, процент больных людей, у которых правильно идентифицировано наличие состояния). Специфичность (также называемая показателем истинных отрицательных результатов) измеряет долю фактических отрицательных результатов, которые правильно идентифицированы как таковые (например, процент здоровых людей, у которых правильно идентифицировано отсутствие состояния). Во многих тестах, включая диагностические медицинские тесты, чувствительность представляет собой степень, в которой не игнорируются фактические положительные результаты (поэтому ложных отрицательных результатов не много), а специфичность представляет собой степень, в которой классифицируются фактические отрицательные результаты как таковые (поэтому ложных положительных результатов не много). Таким образом, высокочувствительный тест редко игнорирует действительный положительный результат (например, показывает ничего неблагоприятного, несмотря на наличие чего-то неблагоприятного); высокоспецифичный тест редко регистрирует положительную классификацию чего-либо, что не является целью тестирования (например, обнаружение одного вида бактерий и принятие его за другой, близкородственный, который является истинной целью).
Используемые в настоящем документе чувствительность и специфичность диагностического и/или прогностического теста зависят не только от аналитического качества теста, они также зависят от определения того, что является аномальным результатом. На практике кривые операционной характеристики приемника (кривые ROC (от англ. - Receiver Operating Characteristic - операционная характеристика приемника)) обычно рассчитывают путем построения графика зависимости значения переменной от ее относительной частоты у нормальных (т.е. очевидно здоровых индивидуумов, не имеющих инфекции, и у больных популяций, например, у субъектов с инфекцией). В случае настоящего изобретения распределение уровней D-лактата для субъектов с заболеванием/состоянием и без такового, вероятно, будет перекрываться. В таких условиях тест не позволяет абсолютно отличить нормальное состояние от заболевания со 100% точностью, а область перекрывания может указывать на то, где тест не может отличить нормальное состояние от заболевания. Выбирают порог, ниже которого тест не считается нормальным, а выше которого тест считается нормальным или ниже или выше которого тест указывает на конкретное состояние, например, инфекцию. Площадь под кривой ROC является мерой вероятности того, что воспринимаемое измерение позволит правильно идентифицировать состояние. Кривые ROC можно использовать, даже если результаты теста не обязательно дают точное число. При условии, что можно ранжировать результаты, можно построить кривую ROC. Например, результаты теста на образцах заболевания могут быть ранжированы по степени (например, 1 - низкая, 2 - нормальная и 3 - высокая). Это ранжирование можно сопоставлять с результатами в нормальной популяции и создать кривую ROC. Эти способы хорошо известны в уровне техники; см., например, Hanley et al. 1982. Radiology 143: 29-36. Предпочтительно порог выбирают так, чтобы обеспечить площадь кривой ROC более приблизительно 0,5, более предпочтительно более приблизительно 0,7, еще более предпочтительно более приблизительно 0,8, еще более предпочтительно более приблизительно 0,85 и наиболее предпочтительно более приблизительно 0,9. Термин приблизительно в данном контексте относится к плюс/минус 5% данного измерения.
Горизонтальная ось кривой ROC представляет (1 - специфичность), которая увеличивается с увеличением частоты ложных положительных результатов. Вертикальная ось кривой представляет чувствительность, которая увеличивается с частотой истинных положительных результатов. Таким образом, для
- 12 046276 конкретной выбранной отсечки может быть определено значение (1 - специфичность), и может быть получена соответствующая чувствительность. Площадь под кривой ROC является мерой вероятности того, что измеренный уровень маркера позволит правильно идентифицировать заболевание или состояние. Таким образом, площадь под кривой ROC может быть использована для определения эффективности теста.
Используемый в настоящем документе термин пациент или субъект может представлять собой позвоночное. В контексте настоящего изобретения термин субъект включает как людей, так и животных, в частности, млекопитающих, и другие организмы.
В соответствии с настоящим изобретением пациент, проявляющий симптомы инфекционного заболевания, представляет собой субъекта, у которого наблюдается без ограничения одно или несколько из лихорадки, диареи, усталости, мышечных болей, кашля, укуса животным, наличия затрудненного дыхания, сильной головной боли с лихорадкой, сыпи или отека, необъяснимой или продолжительной лихорадки или проблем со зрением. Другими симптомами могут быть жар и озноб, очень низкая температура тела, олигурия, учащенный пульс, учащенное дыхание, тошнота и рвота. Согласно вариантам осуществления симптомами инфекционного заболевания являются лихорадка, диарея, усталость, мышечные боли, учащенный пульс, учащенное дыхание, тошнота, рвота и/или кашель.
Используемый в настоящем документе термин образец означает биологический образец, полученный или выделенный у пациента или субъекта. Термин образец, используемый в настоящем документе, может, например, относиться к образцу физиологической жидкости, образцу гомогенизированной ткани, образцу крови, образцу сыворотки крови, образцу плазмы, образцу мочи, суставному аспирату, образцу синовиальной жидкости, образцу асцита, образцу перитонеальной жидкости, образцу плевральной жидкости, образцу перикардиальной жидкости и/или образцу спинномозговой жидкости. Образец предпочтительно выделяют или получают с целью диагностики, прогнозирования или оценивания представляющего интерес субъекта, такого как пациент. Образец в соответствии с настоящим изобретением может быть образцом физиологической жидкости, такой как кровь, сыворотка крови, плазма, спинномозговая жидкость, моча, слюна, мокрота, плевральный выпот, клетки, клеточный экстракт, образец ткани, биоптат ткани, образец стула и т.п. В частности, образец представляет собой кровь, плазму крови, сыворотку крови или мочу.
Используемый в настоящем документе образец крови представляет собой образец цельной крови, который не обрабатывается с целью изменения состава. В частности, образец крови содержит клетки крови. Образцы сыворотки крови и плазмы получают из крови. Термин плазма в контексте настоящего изобретения представляет собой практически бесклеточную надосадочную жидкость крови, содержащую антикоагулянт, полученную после центрифугирования. Иллюстративные антикоагулянты включают соединения, связывающие ионы кальция, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота ЭДТК или цитрат, и ингибиторы тромбина, такие как гепаринаты или гирудин. Бесклеточную плазму можно получить центрифугированием антикоагулированной крови (например, обработанной цитратом, ЭДТК или гепаринизированной крови), например, в течение по меньшей мере 15 минут при 2000-3000 д. Термин сыворотка крови в контексте настоящего изобретения представляет собой жидкую фракцию цельной крови, которую собирают после того, как обеспечивают крови возможность свернуться. При центрифугировании коагулированной крови (свернувшейся крови) сыворотка крови может быть получена в виде надосадочной жидкости.
Образцы спинномозговой жидкости (СМЖ) собирают путем пункции полостей тела, заполненных СМЖ, также называемой ликвором. СМЖ в основном собирают при люмбальной пункции центрального канала спинного мозга. Спинномозговая жидкость (СМЖ) представляет собой прозрачную бесцветную жидкость организма, находящуюся в головном мозге и спинном мозге. Она продуцируется специализированными эпендимными клетками сосудистых сплетений желудочков головного мозга и абсорбируется арахноидальными грануляциями. Одновременно содержится приблизительно 125 мл СМЖ, а у взрослых людей ежедневно вырабатывается приблизительно 500 мл. СМЖ действует как подушка или буфер, обеспечивая базовую механическую и иммунологическую защиту головного мозга внутри черепа. СМЖ также выполняет жизненно важную функцию в церебральной ауторегуляции церебрального кровотока. СМЖ занимает субарахноидальное пространство (между арахноидальной оболочкой и мягкой мозговой оболочкой) и желудочковую систему вокруг и внутри головного мозга и спинного мозга. Она заполняет желудочки головного мозга, цистерны и борозды, а также центральный канал спинного мозга. Существует также соединение субарахноидального пространства с костным лабиринтом внутреннего уха через перилимфатический проток, где перилимфа сообщается со спинномозговой жидкостью. Эпендимные клетки сосудистых сплетений имеют несколько подвижных ресничек на их апикальных поверхностях, которые колеблются, чтобы перемещать СМЖ через желудочки. Образец СМЖ можно забирать с помощью люмбальной пункции. Это может выявить внутричерепное давление, а также указать на заболевания, включая инфекции головного мозга или окружающих его мозговых оболочек.
Образцы синовиальной жидкости особенно предпочтительны в контексте настоящего изобретения для диагностики инфекций суставов, в частности, в случае инфекций протезных суставов. Синовиальная жидкость, также называемая синовия, представляет собой вязкую неньютоновскую жидкость, обнаружи
- 13 046276 ваемую в полостях синовиальных суставов. Основная роль синовиальной жидкости заключается в уменьшении трения между суставными хрящами синовиальных суставов во время движения. Синовиальная жидкость представляет собой небольшой компонент трансцеллюлярной жидкости, входящей в состав внеклеточной жидкости. Внутренняя оболочка синовиальных суставов называется синовиальной оболочкой и выделяет синовиальную жидкость в полость сустава. Синовиальная жидкость представляет собой ультрафильтрат из плазмы и содержит полученные из плазмы крови белки и белки, которые продуцируются клетками в тканях суставов. Жидкость содержит гиалуронан, секретируемый фибробластоподобными клетками синовиальной оболочки, лубрицин (протеогликан 4; PRG4 (от англ. - proteoglycan 4)), секретируемый поверхностными хондроцитами суставного хряща, и интерстициальную жидкость, отфильтрованную из плазмы крови. Жидкость образует тонкий слой (примерно 50 мкм) на поверхности хряща, а также просачивается в микрополости и неровности на поверхности суставного хряща, заполняя все пустое пространство. Жидкость суставного хряща эффективно служит резервом синовиальной жидкости. Во время движения синовиальная жидкость, удерживаемая в хряще, механически выдавливается, чтобы поддерживать слой жидкости на поверхности хряща (так называемая просачивающаяся смазка). Функции синовиальной жидкости включают, в частности, уменьшение трения в суставе, амортизацию, транспортировку питательных веществ и отходов. Синовиальная ткань стерильна и состоит из васкуляризированной соединительной ткани, у которой отсутствует базальная мембрана. Синовиальную жидкость можно собрать шприцем в ходе процедуры, называемой артроцентезом, также известной как суставная аспирация.
Синовиальная жидкость может быть классифицирована на нормальную, невоспалительную, воспалительную, септическую и геморрагическую, при этом оцениваемые параметры могут включать вязкость, прозрачность, цвет и количество лейкоцитов. Такие параметры можно оценивать в дополнение к уровню D-лактата в контексте определенных вариантов осуществления настоящего изобретения.
Выражение определение уровня D-лактата относится к количественному измерению или обнаружению D-лактата. Уровень D-лактата можно определять с использованием различных измеряемых параметров, таких как напряжение или ток, которые соответствуют определенной концентрации D-лактата в контексте электрохимического измерения. При спектрофотометрических измерениях можно определить светопоглощение химического вещества, чтобы определить количество соответствующего вещества.
Лактаты представляют собой соли и сложные эфиры молочной кислоты. Молочная кислота встречается в двух энантиомерных формах, поэтому существуют также две соответствующие формы ее аниона лактата, которые обычно называют D- и L-формами в соответствии с их ориентацией в проекции Фишера. Молочная кислота представляет собой сильную карбоновую кислоту, которая в высокой степени диссоциируется в физиологических условиях. Анион имеет структурную формулу CH3-CHOH-COO- и называется лактатом. Лактат, образующийся в организме человека, присутствует исключительно в L(+)форме с вращением по часовой стрелке.
Сложные эфиры молочной кислоты (CH3-CHOH-COOR) также называют лактатами. Этиллактат (сложный этиловый эфир молочной кислоты) является наиболее важным представителем этих сложных эфиров и используется, среди прочего, в качестве растворителя. Другим представителем является бутиллактат (сложный бутиловый эфир молочной кислоты).
Самым распространенным лактатом, находящимся в организме человека, является лактат натрия. В основном он продуцируется в скелетных мышцах. Когда глюкоза или гликоген расщепляется до пирувата при гликолизе, кофермент НАД+ восстанавливается до НАДН/И+. Чтобы гликолиз происходил, он должен присутствовать в окисленной форме, такой как НАД+. Только тогда он может действовать как акцептор электронов при окислении глицеральдегид-3-фосфата до 1,3-бисфосфоглицерата глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой. Поскольку в мышечных волокнах, бедных митохондриями, не весь НАДН/И+ может так быстро окисляться при увеличении нагрузки, организм помогает себе сам, восстанавливая пируват до лактата. В процессе НАДН/И+ повторно окисляется до НАД+. Восстановление глюкозы до лактата также известно как гомоферментативная ферментация молочной кислоты. В медицине L-лактат используют в качестве маркера ишемии, поскольку он образуется в ткани при недостатке кислорода.
Микроорганизмы также продуцируют лактат во время ферментации молочной кислоты. В отличие от людей, они также могут образовывать D-изомер с помощью D-лактатдегидрогеназы.
Лактатдегидрогеназа (LDH или LD (от англ. - lactate dehydrogenase)) представляет собой фермент, находящийся почти во всех живых клетках. LDH катализирует превращение лактата в пируват и обратно, поскольку он превращает НАД+ в НАДН и обратно. Дегидрогеназа представляет собой фермент, который переносит гидрид от одной молекулы к другой.
D-лактатдегидрогеназа (дегидрогеназа D-молочной кислоты, D-LDH, D-специфическая лактатдегидрогеназа, D-(-)-лактатдегидрогеназа (НАД+), D-дегидрогеназа молочной кислоты, Dлактатдегидрогеназа) представляет собой фермент с систематическим названием ^)-лактат: НАД+оксидоредуктаза. Этот фермент катализирует следующую химическую реакцию: (R)лактат+НАД+ #пируват+НАДН. D-LDH представляет собой предпочтительную связывающую D-лактат молекулу в соответствии с настоящим изобретением. Предпочтительной D-LDH является D-LDH Staphy
- 14 046276 lococcus epidermidis.
В контексте настоящего изобретения связывающая D-лактат молекула представляет собой молекулу любого типа, которая специфически связывается с D-лактатом, но не с L-лактатом или другими молекулами, структурно родственными D-лактату. Согласно предпочтительным вариантам осуществления связывающая D-лактат молекула представляет собой фермент, который связывается с D-лактатом, чтобы катализировать реакцию, которая включает D-лактат в качестве субстрата. Наиболее предпочтительно связывающая D-лактат молекула представляет собой D-LDH.
Дополнительные связывающие D-лактат молекулы, подлежащие использованию в контексте настоящего изобретения, включают без ограничения D-LDH, такую как D-LDH микробного происхождения, например, D-LDH из Staphylococcus epidermidis; D-лактатоксидазу, такую как D-лактатоксидазу микробного происхождения, например, D-лактатоксидазу из Gluconobacter или Zymomonas mobilis.
В контексте способа в соответствии с настоящим изобретением определенный уровень D-лактата может указывать на наличие инфекционного заболевания. С его помощью можно сравнивать определенный уровень с соответствующим контролем, таким как контрольный образец или множественный образец из контрольной группы, такой как здоровые индивидуумы, или с эталонным значением, таким как пороговое значение или значение отсечки, при этом концентрация, превышающая таковую в контрольном образце, или равная эталонному значению, или превышающая эталонное значение, может указывать на инфекционное заболевание или обеспечивать прогностическое значение в отношении прогрессирования инфекционного заболевания.
В случае определения PJI контрольной группой могут служить пациенты с протезными суставами, не страдающие PJI. На основании сравнения определенных уровней D-лактата в образце индивидуума, страдающего соответствующим представляющим интерес инфекционным заболеванием, и уровней, определенных для соответствующей контрольной группы, можно получить подходящие эталонные значения, такие как значение отсечки или пороговое значение, при этом уровни, равные уровням D-лактата или превышающие уровни D-лактата, указывают на наличие соответствующего инфекционного заболевания.
В контексте настоящего изобретения можно использовать контрольные значения/образец или стандарты, которые обеспечивают образцы с D-лактатом или представляют его контрольные количества, уже полученные из предыдущих аналитических тестов. Можно использовать контрольные значения, полученные в результате тестирования когорт или других больших количеств субъектов, страдающих какимлибо данным инфекционным заболеванием, или контрольной группы. Соответствующие статистические средства для анализа и сравнения таких наборов данных известны специалистам в данной области. Контрольные образцы для положительных контролей (например, от больных) или отрицательных контролей (от здоровых субъектов) могут быть использованы для эталонных значений при одновременном или неодновременном сравнении.
Используемый в настоящем документе термин электрохимическая сенсорная система, которую также можно называть биосенсором, относится к аналитическому устройству, используемому для обнаружения вещества/аналита, в данном случае D-лактата, которое объединяет биологический компонент с электрохимическим детектором. Сенсор содержит чувствительный биологический элемент, например, ткань, микроорганизмы, органеллы, молекулу, клеточные рецепторы, ферменты, антитела, нуклеиновые кислоты и т.д., который представляет собой биологически полученный материал или биомиметический компонент, который взаимодействует с представляющим интерес химическим аналитом, связывается с ним или распознает его. Биологически чувствительные элементы также могут быть созданы с помощью биологической инженерии.
Биосенсор дополнительно содержит преобразователь или детекторный элемент, который преобразует сигнал в электрохимический сигнал в результате взаимодействия аналита с биологическим элементом. На основе этого преобразования сигнала можно легко измерить и количественно определить уровни аналита в образце.
Электрохимическая система может содержать или может быть подключена к устройству считывания биосенсора, которое имеет связанные с ним электронные устройства или процессоры сигналов для соединения с трансформатором. Такие устройства считывания предпочтительно отвечают за отображение результатов в удобном для пользователя виде.
Биосенсор в соответствии с настоящим изобретением может содержать участок биораспознавания, компонент биопреобразователя и предпочтительно электронную систему, которая включает один или несколько из усилителя сигнала, процессора и дисплея. Компонент распознавания, часто называемый биорецептором, использует биомолекулы из организмов или рецепторы, смоделированные по биологическим системам, для взаимодействия с представляющим интерес аналитом. Это взаимодействие измеряется биопреобразователем, который выдает измеряемый сигнал, пропорциональный присутствию целевого аналита в образце. Общая цель конструкции биосенсора состоит в обеспечении быстрого и удобного тестирования в месте оказания медицинской помощи (POC (от англ. - point of concern or care)), где был взят образец.
Биорецептор предназначен для взаимодействия с конкретным представляющим интерес аналитом
- 15 046276 для получения измеряемого преобразователем эффекта. Высокая селективность в отношении аналита среди матрицы других химических или биологических компонентов является ключевым требованием к биорецептору. Хотя тип используемой биомолекулы может широко варьировать, биосенсоры можно классифицировать в соответствии с общими типами взаимодействий биорецепторов, включая антитело/антиген, ферменты/лиганды, нуклеиновые кислоты/дезоксирибонуклеиновая кислота ДНК, клеточные структуры/клетки или биомиметические материалы. В контексте настоящего изобретения биорецептор представляет собой связывающие D-LDH молекулы, такие как предпочтительно D-LDH. Соответственно, биосенсор/электрохимическая сенсорная система в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно предусматривает взаимодействие фермент/лиганд.
Способности к специфическому связыванию и каталитическая активность ферментов делают их популярными биорецепторами, которые обладают преимуществом по нескольким причинам, включающим пригодность для нескольких разных способов трансдукции при обнаружении аналита. Следует отметить, что, поскольку ферменты не расходуются в реакциях, биосенсор можно легко использовать непрерывно. Каталитическая активность ферментов также обеспечивает более низкие пределы обнаружения по сравнению с обычными методиками связывания.
Предпочтительно, в контексте биосенсора/электрохимической сенсорной системы биологические элементы, в данном случае связывающая D-лактат молекула, такая как D-LDH, присоединяется к поверхности сенсора, который может быть металлом, полимером или стеклом, например. Самый простой способ заключается в функционализировании поверхности, чтобы покрыть ее биологическими элементами. Это можно сделать с помощью полилизина, аминосилана, эпоксисилана или нитроцеллюлозы в случае кремниевых чипов/кварцевого стекла. Впоследствии связанный биологический агент может быть, например, зафиксирован послойным осаждением противоположно заряженных полимерных покрытий. В качестве альтернативы, можно использовать трехмерные решетки (гидрогель/ксерогель) для химического или физического захвата их (при этом под химическим захватом подразумевается, что биологический элемент удерживается на месте прочной связью, при этом физически он удерживается на месте, не имея возможности проходить через поры гелевой матрицы). Наиболее широко используемым гидрогелем является золь-гель, стеклообразный диоксид кремния, образованный полимеризацией силикатных мономеров (добавленных в виде тетраалкилортосиликатов, таких как TMOS (от англ. - tetramethoxysilane - тетраметоксисилан) или TEOS (от англ. - tetraethoxysilane - тетраэтоксисилан)) в присутствии биологических элементов (наряду с другими стабилизирующими полимерами, такими как полиэтиленгликоль ПЭГ) в случае физического захвата. Другую группу гидрогелей, которые затвердевают в условиях, подходящих для клеток или белка, составляет акрилатный гидрогель, который полимеризуется при инициировании радикалами. Одним из типов инициатора радикальной полимеризации является пероксидный радикал, обычно образующийся путем объединения персульфата с TEMED (от англ. - tetramethylethylenediamine - тетраметилэтилендиамин) (полиакриламидный гель также обычно используют для электрофореза белков); в качестве альтернативы можно использовать свет в сочетании с фотоинициатором, таким как ДМФА (2,2-диметокси-2-фенилацетофенон).
Электрохимические биосенсоры обычно основаны на ферментативном катализе реакции, которая продуцирует или потребляет электроны (такие ферменты справедливо называются окислительновосстановительными ферментами). Подложка сенсора обычно содержит три электрода: электрод сравнения, рабочий/электрод определения и противоэлектрод. Целевой аналит участвует в реакции, которая происходит на активной поверхности электрода, и реакция может либо вызвать перенос электронов через двойной слой (создавая ток), либо способствовать потенциалу двойного слоя (создавая напряжение).
Соответственно, можно либо измерить ток (скорость потока электронов теперь пропорциональна концентрации аналита) при фиксированном потенциале, либо можно измерить потенциал при нулевом токе (это дает логарифмический отклик). Следует отметить, что потенциал рабочего/детектирующего/активного электрода чувствителен к пространственному заряду, и это часто используется.
Потенциометрический биосенсор (потенциал, создаваемый при нулевом токе) дает логарифмический отклик с высоким динамическим диапазоном. Такие биосенсоры часто изготавливают путем трафаретной печати рисунков электродов на пластиковой подложке, покрытой проводящим полимером, а затем прикрепляют фермент/биосенсор. У них всего два электрода, и они чрезвычайно чувствительны и надежны. Они позволяют обнаруживать аналиты на уровнях, ранее достижимых только с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ и жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии ЖХ/МС и без тщательной подготовки образцов.
Все биосенсоры обычно предусматривают минимальную подготовку образца, так как биологический чувствительный компонент высокоселективен в отношении рассматриваемого аналита. Сигнал создается электрохимическими и физическими изменениями в слое проводящего полимера из-за изменений, происходящих на поверхности сенсора. Такие изменения могут быть связаны с ионной силой, pH, гидратацией и окислительно-восстановительными реакциями, последние из-за того, что ферментная метка переключает субстрат. Полевые транзисторы, в которых область затвора была модифицирована ферментом/биосенсором, также могут обнаруживать очень низкие концентрации различных аналитов, поскольку связывание аналита с областью затвора FET (от англ. - field effect transistor - полевой транзистор) вы
- 16 046276 зывает изменение тока от стока к истоку.
Электрохимические биосенсоры в соответствии с настоящим изобретением используют для in vitro измерений D-лактата в образце. Измерение биосенсором может происходить в тестовой пробирке, культуральной чашке, микротитровальном планшете или в другом месте за пределами живого организма. В сенсоре используется биорецептор и преобразователь, раскрываемые выше. Предпочтительным является то, что настоящее изобретение может быть использовано в качестве теста в месте оказания медицинской помощи (POCT (от англ. - point-of-care test))), т.е. в том месте, где требуется тест. Соответственно, предпочтительно, чтобы биосенсор в соответствии с настоящим изобретением был переносным или портативным, предпочтительно переносным биосенсором. Устранение необходимости лабораторного тестирования может сэкономить время и деньги. Биосенсор POCT можно отправить прямо на место и можно использовать быстрый и простой тест.
Способы электрохимического определения в соответствии с настоящим изобретением включают методики аналитической химии, которые исследуют аналит путем измерения потенциала (вольт) и/или тока (амперов), предпочтительно в электрохимической ячейке, содержащей аналит. Эти способы можно разбить на несколько категорий в зависимости от того, какие аспекты ячейки контролируются, а какие измеряются. К трем основным категориям относятся потенциометрия (измеряется разность электродных потенциалов), кулонометрия (измеряется ток ячейки во времени) и амперометрия, в том числе вольтамперометрия (измеряется ток ячейки при активном изменении потенциала ячейки).
Потенциометрия пассивно измеряет потенциал раствора между двумя электродами, в очень незначительной степени влияя на раствор в процессе. Один электрод называется электродом сравнения и имеет постоянный потенциал, тогда как другой является электродом определения или рабочим электродом, потенциал которого изменяется в зависимости от состава образца. Следовательно, разность потенциалов между двумя электродами дает оценку состава образца. Фактически, поскольку потенциометрическое измерение является неразрушающим измерением, при условии, что электрод находится в равновесии с раствором, измеряется потенциал раствора. В потенциометрии обычно используются электроды определения, выполненные селективно чувствительными к представляющему интерес иону, например, к фториду в селективных в отношении фторида электродах, так что потенциал зависит исключительно от активности этого представляющего интерес иона. Время, необходимое электроду для установления равновесия с раствором, будет влиять на чувствительность или точность измерения. В водных средах часто используют платину из-за ее высоких кинетических показателей переноса электронов, хотя можно использовать электрод, сделанный из нескольких металлов, для улучшения кинетических показателей переноса электронов. Самым распространенным потенциометрическим электродом на сегодняшний день является электрод со стеклянной мембраной, используемый в pH-метре. Одним из вариантов потенциометрии является хронопотенциометрия, которая заключается в использовании постоянного тока и измерении потенциала как функции времени.
Потенциометрический сенсор представляет собой тип химического сенсора, который может быть использован для определения аналитической концентрации аналита, содержащегося в образце. Эти сенсоры измеряют электрический потенциал электрода при отсутствии тока. Сигнал измеряется как разность потенциалов (напряжение) между электродом определения/рабочим электродом и электродом сравнения. Потенциал рабочего электрода должен зависеть от концентрации аналита в образце. Электрод сравнения необходим для обеспечения определенного эталонного потенциала.
Среди различных потенциометрических методик определение на основе полевых транзисторов (FET) привлекло значительное внимание из-за его потенциала для миниатюризации, параллельного определения, короткого времени отклика и бесшовной интеграции в процессах изготовления электронных устройств, например, комплементарных металлооксидных полупроводников (CMOS (от англ. - complementary metal-oxide semiconductor)). Полевой транзистор (FET) представляет собой тип транзистора, в котором используется электрическое поле для управления потоком тока.
Концепция ионочувствительного FET (ISFET (от англ. - ion-sensitive field-effect transistor - ионочувствительный полевой транзистор)) была представлена в начале 1970-х годов и основана на полевом транзисторе с металлооксидным полупроводником (MOSFET (от англ. - metal oxide semiconductor field effect transistor)). Ионно-чувствительный полевой транзистор (ISFET) представляет собой полевой транзистор, используемый для измерения концентрации ионов в растворе; при изменении концентрации ионов (например, H+, см. шкалу pH) ток через транзистор соответственно изменится. В данном случае раствор используется в качестве электрода затвора. Напряжение между подложкой и оксидными поверхностями возникает из-за ионной оболочки. Он представляет собой особый тип MOSFET (полевого транзистора с металлооксидным полупроводником), имеющий ту же базовую структуру, но с металлическим затвором, замененным ионочувствительной мембраной, раствором электролита и электродом сравнения. ISFET был первым FET биосенсора (BioFET (от англ. - biosensor field-effect transistor - полевой транзистор биосенсора)).
Биосенсор на основе полевого транзистора представляет собой специальный потенциометрический сенсор, также известный как полевой транзистор биосенсора (Bio-FET или BioFET), полевой биосенсор (FEB (от англ. - field-effect biosensor)) или MOSFET биосенсора, является полевым транзистором (на ос
- 17 046276 нове структуры MOSFET), который управляется изменениями поверхностного потенциала, индуцированными связыванием молекул. Когда заряженные молекулы, такие как биомолекулы, связываются с затвором полевого транзистора FET, который обычно представляет собой диэлектрический материал, они могут изменять распределение заряда лежащего в основании полупроводникового материала, что приводит к изменению проводимости канала FET. Bio-FET состоит из двух основных компартментов: один представляет собой элемент биологического распознавания, а другой является полевым транзистором. Структура BioFET в значительной степени основана на ионочувствительном полевом транзисторе (ISFET), типе полевого транзистора с металлооксидным полупроводником (MOSFET), в котором металлический затвор заменен ионочувствительной мембраной, раствором электролита и электродом сравнения.
Bio-FET соединяют транзисторное устройство с биочувствительным слоем, который может специфически обнаруживать биологически релевантные молекулы, такие как субстраты ферментов, нуклеиновые кислоты и белки. Система Bio-FET состоит из полупроводникового полевого транзистора, который действует как преобразователь, отделенный слоем изолятора (например, SiO2) от биологического элемента распознавания (например, фермента, рецепторов или молекулярных зондов), который является селективным по отношению к целевой молекуле, называемой аналитом. Как только аналит связывается с элементом распознавания, распределение заряда на поверхности изменяется с соответствующим изменением электростатического поверхностного потенциала полупроводника. Это изменение поверхностного потенциала полупроводника действует так же, как напряжение затвора в традиционном MOSFET, т.е. изменяет величину тока, который может протекать между электродами истока и стока. Это изменение тока (или проводимости) можно измерить, таким образом, можно обнаружить связывание аналита. Точное соотношение между током и концентрацией аналита зависит от области работы транзистора. Изготовление системы Bio-FET включает несколько стадий, таких как, например, следующие: 1. поиск подложки, подходящей для использования в качестве места для FET, и формирование FET на подложке; 2. экспонирование активного участка FET с подложки; 3. обеспечение слоя чувствительной пленки на активном участке FET; 4. обеспечение рецептора на слое чувствительной пленки для использования при обнаружении ионов; 5. удаление полупроводникового слоя и утончение диэлектрического слоя; 6. травление оставшейся части диэлектрического слоя для экспонирования активного участка FET; 7. удаление фоторезиста и нанесение слоя чувствительной пленки с последующим формированием рисунка фоторезиста на чувствительной пленке; 8. травление незащищенной части слоя чувствительной пленки и удаление фоторезиста. Сенсоры BioFET и лежащие в их основе принципы известны специалисту, например, из публикации Kaisti M, 2017 (Biosensors and Bioelectronics Volume 98, 15 December 2017, Pages 437-448).
Электрохимические сенсорные системы (биосенсоры) и, в частности, Bio-FET, могут быть использованы для обнаружения в областях, таких как медицинская диагностика, биологические исследования, защита окружающей среды и анализ пищевых продуктов. Обычные измерения, такие как оптические и спектрометрические измерения, также могут быть использованы для анализа биологических молекул. Тем не менее, эти традиционные способы относительно трудоемки и дороги, включают многостадийные процессы, а также несовместимы с мониторингом в режиме реального времени. Напротив, биосенсоры, такие как Bio-FET, имеют небольшую массу, низкую стоимость массового производства, небольшие размеры и совместимы с коммерческими планарными процессами для крупномасштабных схем. Их можно легко интегрировать в цифровые микрожидкостные устройства для лаборатории на чипе, например, микрожидкостное устройство, которое управляет переносом капель образца, позволяя обнаруживать биомолекулы, обрабатывать сигналы и передавать данные с использованием универсального чипа. Кроме того, их можно использовать в переносных устройствах POC. В способах в соответствии с настоящим изобретением не требуется никакой стадии маркировки и просто используются определенные молекулярные свойства сенсора, предпочтительно сенсорной поверхности, для обеспечения селективности.
Кулонометрия представляет собой еще одну методику электрохимического определения, которую можно использовать в контексте системы в соответствии с настоящим изобретением. Она использует приложенный ток или потенциал для полного преобразования аналита из одного состояния окисления в другое. В ней прямо или опосредованно измеряется полный прошедший ток для определения количества прошедших электронов. Информация о количестве прошедших электронов может указывать на концентрацию аналита или, если концентрация известна, количество электронов, перенесенных в окислительновосстановительной реакции. Общие формы кулонометрии включают электролиз в объеме, также известный как потенциостатическая кулонометрия или кулонометрия с контролируемым потенциалом, а также различные кулонометрические титрования.
Амперометрические сенсоры являются дополнительными предпочтительными электрохимическими системами в соответствии с настоящим изобретением. Амперометрия является термином, обозначающим все электрохимические методики, в которых ток измеряется как функция независимой переменной, которой обычно являются время или потенциал электрода. Хроноамперометрия представляет собой методику, при которой ток измеряется при фиксированном потенциале в разные моменты времени с момента начала поляризации. Хроноамперометрию обычно проводят в растворе без перемешивания и на фиксированном электроде, т.е. в экспериментальных условиях, избегая конвекции как переноса массы к
- 18 046276 электроду. С другой стороны, вольтамперометрия является подклассом амперометрии, в которой ток измеряется путем изменения потенциала, приложенного к электроду. В зависимости от формы волны, описывающей способ изменения потенциала как функцию от времени, определяются различные методики вольтамперометрии.
В однопотенциальной амперометрии любой аналит, который может окисляться или восстанавливаться, является кандидатом для амперометрического обнаружения. Самой простой формой амперометрического обнаружения является амперометрия с одним потенциалом или постоянным током (DC (от англ. - direct current)). Напряжение (потенциал) прикладывается между двумя электродами, расположенными в эффлюенте колонки. Измеренный ток изменяется по мере того, как электроактивный аналит окисляется на аноде или восстанавливается на катоде. Однопотенциальную амперометрию использовали для обнаружения анионов слабых кислот, таких как цианид и сульфид, которые проблематичны для кондуктометрических способов. Еще одно, возможно, более важное преимущество амперометрии перед другими способами обнаружения заключается в специфичности. Приложенный потенциал можно отрегулировать, чтобы максимизировать отклик для представляющего интерес аналита при минимизации отклика для мешающих аналитов.
Расширением однопотенциальной амперометрии является импульсная амперометрия, наиболее часто используемая для аналитов, которые имеют тенденцию загрязнять электроды. Аналиты, загрязняющие электроды, уменьшают сигнал при каждом анализе и требуют очистки электрода. При импульсном амперометрическом обнаружении (PAD (от англ. - pulsed amperometric detection)) рабочий потенциал прикладывается в течение короткого времени (обычно несколько сотен миллисекунд), за которым следуют более высокие или более низкие потенциалы, используемые для очистки электрода. Ток измеряется только при приложении рабочего потенциала, затем последовательные измерения тока обрабатываются детектором для получения плавного выходного сигнала. PAD чаще всего используют для обнаружения углеводов после анионообменного разделения, но дальнейшее развитие соответствующих методик показывает многообещающие результаты для аминов, восстановленных соединений серы и других электроактивных соединений.
Согласно следующим вариантам осуществления настоящего изобретения электрохимическая сенсорная система представляет собой вольтамперометрическую систему. При вольтамперометрии прикладывается постоянный и/или переменный потенциал на поверхность электрода и измеряется полученный ток с помощью трехэлектродной системы. Этот способ может выявить восстановительный потенциал аналита и его электрохимическую реактивность. Этот способ с практической точки зрения является неразрушающим, поскольку только очень небольшое количество аналита расходуется на двумерной поверхности рабочего/электрода определения и вспомогательного электрода. На практике растворы аналита обычно отбрасывают, поскольку трудно отделить аналит от основного электролита, и для эксперимента требуется небольшое количество аналита. Обычный эксперимент может включать 1-10 мл раствора с концентрацией аналита от 1 до 10 ммоль/л. Химически модифицированные электроды используются для анализа органических и неорганических образцов. Полярография представляет собой подкласс вольтамперометрии, в котором в качестве рабочего электрода используется падающий ртутный электрод.
Электрохимическая сенсорная система в соответствии с настоящим изобретением может потребовать калибровки, чтобы обеспечить концентрацию D-лактата в качестве результата измерения. Например, система может быть откалибрована либо на полосе, в которой каждый тестовый прогон калибруется по отклику, генерируемому стандартным образцом, находящимся в капиллярной камере для образца, или, например, на заводе перед отправкой. Стандартные образцы, используемые для калибровки, содержат определенную и известную концентрацию аналита, в данном случае D-лактата. Кроме того, согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система может представлять собой систему, не требующую калибровки. Такие системы известны в уровне техники, например, системы, использующие двухчастотный подход для достижения работы электрохимических биосенсоров без калибровки, которые генерируют выходной сигнал с использованием квадратно-волновой вольтамперометрии для отслеживания вызванных связыванием изменений кинетических показателей переноса электронов.
Установки электродов, необходимые для различных электрохимических сенсорных систем, которые могут использоваться в контексте настоящего изобретения, описаны в уровне техники и известны специалистам. Они также включают предпочтительные электродные материалы и модификацию поверхности, а также возможный способ иммобилизации молекул на поверхности электродов (см., например, Comprehensive Nanoscience and Nanotechnology (Second Edition), Volume 3, 2019, в частности, Agnieszka A.Zuber et al., 3.06 - Biosensing, Pages 105-126; Handbook of Electrochemistry, 2007, в частности, Grant A. Edwards et al., 8 - Chemically Modified Electrodes, pages 295-327; Kenneth L. Brown, Electrochemical Preparation and Characterization of Chemically Modified Electrodes, DOI: 10.5772/intechopen.81752). Выбор соответствующего материала электрода, модификаций электродов и/или возможностей иммобилизации или прикрепления молекул на электроде зависит от соответствующего применения и ожидаемого диапазона концентраций, подлежащих обнаружению.
- 19 046276
Согласно вариантам осуществления электрохимическая сенсорная система содержит тест-полоску или чип для электрохимического обнаружения D-лактата. Тест-полоска может содержать или состоять из сенсора на бумажной основе для применения в устройстве для оказания медицинской помощи, таком как переносное устройство считывания. Тест-полоску можно комбинировать с электрохимическим обнаружением с помощью небольших портативных электронных устройств. Кроме того, тест-полоска или чип могут представлять собой или содержать гибкий материал, такой как бумага, пластик или текстиль, в качестве подложки для биосенсорной платформы, которая может использоваться в контексте микрожидкостного устройства, биосенсорного устройства лаборатории на чипе (LOC (от англ. - lab-on-a-chip)) или устройства POC.
Электрохимические сенсорные системы в соответствии с настоящим изобретением могут быть сконфигурированы для параллельного обнаружения уровней D-лактата в нескольких образцах за счет обеспечения нескольких электрохимических ячеек, что делает возможным мультиплексирование.
Графические материалы
Далее настоящее изобретение раскрывается с помощью следующих графических материалов. Они не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения и представляют собой предпочтительные варианты осуществления аспектов настоящего изобретения, представленных для более наглядной иллюстрации настоящего изобретения, раскрываемого в настоящем документе.
Описание графических материалов
Фиг. 1. Распределение лейкоцитов (A), процентное содержание гранулоцитов (B) и D-лактата (C) в синовиальной жидкости (левые панели) с соответствующими кривыми операционных характеристик приемника (ROC) (правые панели). AF (от англ. - aseptic failure) представляет собой асептическое поражение; PJI представляет собой перипротезную инфекцию сустава; AUC (от англ. - area under the curve) представляет собой площадь под кривой.
Фиг. 2. Концентрация D-лактата в синовиальной жидкости, стратифицированная по патогену.
Фиг. 3. Кривая ROC биомаркеров синовиальной жидкости для PJI. AUC D-лактата, количество лейкоцитов и процент гранулоцитов составляют 0,903, 0,910 и 0,861, соответственно.
Фиг. 4. Распределение D-лактата (A), количества лейкоцитов (B) и процента гранулоцитов (C) у пациентов с асептическим поражением и PJI. Двенадцать случаев с основными воспалительными состояниями и повышенным количеством лейкоцитов или процентом гранулоцитов выше порогового значения представлены темно-серыми точками.
Фиг. 5. Эффективность теста D-лактата синовиальной жидкости и количества лейкоцитов при раннем послеоперационном PJI (A) и отсроченном или позднем PJI (B). Различия при раннем PJI были значимыми (p=0,027), тогда как при отсроченном/позднем PJI - нет (p=0,572).
Фиг. 6. Корреляция между эритроцитами синовиальной жидкости и концентрацией D-лактата у пациентов с асептическим поражением и PJI. Примечание: p - корреляция Пирсона.
Фиг. 7. Электрохимическое измерение D-лактата с использованием потенциометрии. Разная концентрация D-лактата (монолитиевой соли) в качестве стандартного калибратора и соответствующее напряжение. Показаны средние значения, планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение.
Фиг. 8. Электрохимическое измерение D-лактата с использованием амперометрии. Различные концентрации D-лактата (D-лактата натрия) в качестве стандартного калибратора в фосфатном буфере с pH 6,5 и соответствующим током. Показаны средние значения, планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение.
Фиг. 9. Электрохимическое измерение D-лактата с использованием амперометрии. Различные концентрации D-лактата (D-лактата натрия) в качестве стандартного калибратора в фосфатном буфере с pH 8,5 и соответствующим током. Показаны средние значения, планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение.
Примеры
Далее настоящее изобретение раскрывается с помощью примеров и сравнительных примеров. Они не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения и представляют собой предпочтительные варианты осуществления аспектов настоящего изобретения, представленных для более наглядной иллюстрации настоящего изобретения, раскрываемого в настоящем документе.
Пример 1. D-лактат синовиальной жидкости в качестве специфического в отношении патогена биомаркера для точного и быстрого обнаружения перипротезной инфекции сустава.
Материалы и способы примера 1.
Схема исследования и популяция. Проспективно включали последовательно поступивших пациентов возрастом более или равного 18 лет, которым в период с июля 2016 года по июнь 2018 года была выполнена диагностическая суставная аспирация протеза бедра, колена и плеча. Аспирирование болезненных суставов проводили как часть стандартной диагностической процедуры в отделении неотложной помощи, амбулатории или перед разрезом суставной капсулы в операционной. Исключали пациентов, у которых аспирированная синовиальная жидкость была разбавлена путем инстилляции жидкости. Получали одобрение институционального наблюдательного совета и регистрировали в публичном реестре
- 20 046276 клинических испытаний www.clinicaltrials.gov (NCT02530229). Пациенты давали письменное информированное согласие на включение в исследование. Результаты по D-лактату не были сообщены лечащим врачам и не влияли на решения о лечении.
Определения. Диагностировали PJI в соответствии с рабочими критериями Европейского общества инфекций костей и суставов (EBJIS (от англ. - European Bone and Joint Infection Society)), как это было сделано в нескольких исследованиях (5, 7, 15-20). Соответственно, PJI диагностировали при соблюдении одного или нескольких из следующих критериев: (i) наличие синусового тракта или макроскопического нагноения; (ii) положительная по воспалению гистопатология в перипротезной ткани, определяемая как больше или равно 23 гранулоцитов на 10 полей зрения при большом увеличении (т.е. тип II или III согласно Krenn et al. (21); (iii) повышенное количество лейкоцитов в синовиальной жидкости, определяемое как больше 2х103/мкл, или процент нейтрофилов больше 70% (6); (iv) положительный посев синовиальной жидкости, перипротезной ткани или обработанной ультразвуком жидкости. Посев обработанной ультразвуком жидкости считали положительным, если обнаруживали больше или равно 50 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл, за исключением Staphylococcus aureus, стрептококков и грамотрицательных палочек, для которых любой рост (т.е. больший или равный 1 КОЕ/мл) считали положительным (22). Следует отметить, что количество лейкоцитов в синовиальной жидкости не считали диагностическим критерием в пределах первых 6 недель после хирургического вмешательства при воспалительном заболевании суставов и в случае перипротезного перелома или вывиха. В этих ситуациях количество лейкоцитов могло повышаться даже при отсутствии инфекции (19).
Сбор образцов. Суставные аспирации выполнялись хирургами-ортопедами в соответствии со стандартной асептической техникой в отделении неотложной помощи, амбулаторно-поликлиническом отделении и/или во время операции во время ревизии. Перед суставной аспирацией ни один пациент не получал противомикробное лечение.
Традиционные микробиологические тесты. Каждый образец синовиальной жидкости инокулировали аликвотами по 0,1 мл в триптический соевый агар с 5% овечьей крови, шоколадный агар, тиогликолятный бульон. Кроме того, каждый образец инокулировали в педиатрические бутыли для посева крови VersaTREK, TREK Diagnostic Systems, Кливленд, Огайо, США, в первом центре и с использованием BacTec PedsPlus/F, Beckton Dickinson and Co., Шеннон, графство Клэр, Ирландия, во втором центре. Все культуральные среды инкубировали при 35°C в течение 14 суток. Идентификацию и тестирование чувствительности выделенных микроорганизмов проводили с использованием автоматического бактериологического анализатора WalkAway 96 Plus, Beckman Coulter, Брея, Калифорния, США) в первом центре и с использованием автоматизированной системы VITEK 2 (bioMerieux, Марси-л'Этуаль, Франция) во втором центре.
Определение количества и формулы лейкоцитов в синовиальной жидкости. Для определения количества лейкоцитов и процента гранулоцитов 1 мл синовиальной жидкости переносили во флакон, содержащий этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТК). Свернувшиеся пробы обрабатывали 10 мкл гиалуронидазы (Sigma-Aldrich Chemie, Тауфкирхен, Германия) в течение 10 минут при комнатной температуре. Тест проводили с помощью проточной цитометрии с использованием автоматического гематологического анализатора (XE-2100, Sysmex, Нордерштедт, Германия).
Измерение D-лактата синовиальной жидкости. Объем образца 0,5-1 мл помещали в стерильный пластиковый необработанный флакон для определения концентрации D-лактата спектрофотометрическим способом с использованием коммерческого набора (диагностического набора D-Lactam, Sivital, Витебск, Республика Беларусь). Для каждого пациента анализировали реакционную смесь, содержащую 0,025 мл ранее обработанных образцов, 0,08 мл смеси субстратов и 0,045 мл смеси ферментов, и холостую пробу, содержащую только смесь образца и субстрата. Калибровочную кривую с растворами Dлактата (монолитиевой соли) в воде обрабатывали в каждой партии. Смесь инкубировали при 37°C в течение 30 минут и определяли оптическую плотность при 570 нм с помощью Microplate Absorbance Reader, DYNEX Technologies MRX, Шантильи, Вирджиния, США. Оптическая плотность каждого образца служила мерой концентрации D-лактата.
Статистический анализ. Уровень значимости во всех процедурах проверки гипотез предварительно определяли при p менее 0,05. Количественные данные представляли в виде медианы (диапазон) или среднего значения и стандартного отклонения (SD (от англ. - standard deviation)), в зависимости от ситуации. Для анализа количественных переменных применяли критерий Манна-Уитни и корреляцию Спирмена. Оптимальное значение отсечки рассчитывали путем максимизации чувствительности и специфичности. J-статистику Юдена использовали для определения оптимального значения отсечки Dлактата на кривой операционной характеристики приемника (ROC). Кривые ROC рассчитывали для определения параметров с наивысшим диагностическим потенциалом; оценивали площади под кривыми ROC. Все статистические анализы выполняли с использованием MedCalc 16.4.3. (MedCalc Software bvba, Остенде, Бельгия). Для графики использовали программу Prism (версия 7.03; GraphPad, Ла-Хойя, Калифорния, США).
Результаты примера 1.
Демографические данные пациента и характеристики инфекции. Из 224 включенных пациентов у
- 21 046276 диагностировали PJI, а 137 с асептическим поражением протеза относили к контрольным группам. Демографические данные и пораженные суставы из протезированных суставов, разделенные на группу с асептическим поражением и группу с инфекцией, показаны в табл. 1. Бедра были инфицированы чаще, чем колени.
Микробиология синовиальной жидкости. Из 87 пациентов с PJI у 61 (70%) в посеве синовиальной жидкости рос микроорганизм возбудителя (табл. 2). Из 137 пациентов с асептическим поражением у 9 пациентов с протезами (6,6%) посевы синовиальной жидкости были положительными, что считали контаминациями из-за незначительного роста.
Количество и формула лейкоцитов в синовиальной жидкости. Абсолютное количество лейкоцитов в синовиальной жидкости показало чувствительность 87,5% и специфичность 95,7%. Процент гранулоцитов характеризовался чувствительностью 80,4% и специфичностью 99,2% (табл. 3).
D-лактат синовиальной жидкости. Оптимальное значение отсечки для D-лактата составляло 1,2 ммоль/л. Значительно более высокую среднюю (плюс/минус SD) концентрацию D-лактата обнаруживали в синовиальной жидкости пациентов с PJI по сравнению с пациентами с асептическим поражением (2,33 плюс/минус 0,63 ммоль/л по сравнению с 0,77 плюс/минус 0,56 ммоль/л), p менее 0,001, фиг. 1). Чувствительность в тесте с D-лактатом составляла 97,7%, а специфичность составляла 83,9% (табл. 3).
У пациентов с асептическим поражением концентрация D-лактата повышалась выше значения отсечки у 20 пациентов. В 8 ложноположительных образцах синовиальной жидкости от пациентов с асептическим поражением регистрировали контаминацию патогеном кожной флоры, поскольку количество лейкоцитов было нормальным (варьировало от 127/мкл до 1237/мкл).
У 2 пациентов с PJI концентрация D-лактата была ложноотрицательной. У одного пациента с PJI диагноз был основан на положительном посеве синовиальной жидкости (Staphylococcus haemolyticus) в сочетании с повышенным количеством лейкоцитов в синовиальной жидкости, у второго пациента с PJI на наличии подтвержденной инфекции синусового тракта.
Концентрация D-лактата в синовиальной жидкости в зависимости от патогена. У высоковирулентных бактерий (S. aureus и Streptococcus spp.) средняя концентрация D-лактата была значительно выше, чем у коагулазонегативных стафилококков, типичных низковирулентных патогенов (p равно 0,019 и p равно 0,004, соответственно, см. фиг. 2). Не наблюдали значимых различий в концентрации D-лактата при сравнении концентрации D-лактата при инфекциях с отрицательным посевом и инфекциях, вызванных низковирулентными микроорганизмами (т.е. коагулазонегативными стафилококками) (p равно 0,531). У одного пациента с PJI, вызванным Candida parapsilosis, концентрация D-лактата была выше значения отсечки (2,7 ммоль/л).
Обсуждение примера 1.
Предыдущие сообщения продемонстрировали, что D-лактат в синовиальной жидкости был высокочувствительным и специфическим для диагностики септического артрита (11, 12), но этот биомаркер еще не исследовали при PJI. В исследовании авторов настоящего изобретения D-лактат синовиальной жидкости показал более высокую чувствительность, чем количество лейкоцитов в синовиальной жидкости и процент гранулоцитов, но более низкую специфичность для диагностики PJI. Gratacos et al. сообщали о высокой диагностической эффективности D-лактата в синовиальной жидкости (AUC 0,90), высокой чувствительности (86%), специфичности (96%) и высокой отрицательной прогностической ценности (97%) при использовании значения отсечки 0,05 ммоль/л (11). Kortekangas et al. показали, что средняя концентрация D-лактата была значительно выше в образцах синовиальной жидкости с положительным посевом по сравнению с образцами синовиальной жидкости с отрицательным посевом от пациентов с внесуставной инфекцией (p=0,006) (12).
В исследовании авторов настоящего изобретения оптимальное значение отсечки D-лактата синовиальной жидкости для диагностики PJI составляло 1,2 ммоль/л. У высоковирулентных бактерий (таких как S. aureus и Streptococcus spp.) уровень D-лактата был статистически выше по сравнению с низковирулентными патогенами (такими как коагулазонегативные стафилококки), и никаких различий не наблюдали в последней группе с PJI и при инфекциях с отрицательным посевом. Концентрация D-лактата, вероятно, отражает вирулентность данного вида бактерий и его микробную нагрузку, что объясняет наблюдаемые различия.
Интересно отметить, что у одного пациента с PJI, вызванным Candida parapsilosis, наблюдали явно повышенную концентрацию D-лактата (2,7 ммоль/л). Это необычное наблюдение можно объяснить сочетанной инфекцией с неидентифицированной дополнительной бактерией. В качестве альтернативы, локальное ограничение кислорода может привести к спиртовому брожению дрожжей, в ходе которого вырабатываются глицерин, пируват и D-лактат в качестве основных продуктов брожения (23). Рост грибковых патогенов в средах с высоким содержанием глюкозы может привести к увеличению продуцирования D-лактата и общей более низкой эффективности использования глюкозы, как сообщалось для Saccharomyces cerevisiae (24).
Кроме того, важно распознавать необычные нарушения, которые вызывают D-лактат-ацидоз и повышают уровень D-лактата в крови и жидкостях организма, а именно при синдроме короткого кишечника и, в частности, при высокоуглеводной диете у детей. Сопутствующий тяжелый неконтролируемый
- 22 046276 сахарный диабет с дефицитом инсулина также может вызывать повышение уровня D-лактата в плазме и моче (25). Дальнейшие исследования должны изучить основные условия, потенциально влияющие на концентрацию D-лактата, которые могут прояснить ограниченную специфичность теста.
D-лактат синовиальной жидкости показал хорошую диагностическую эффективность для диагностики PJI, которая была сопоставима с эффективностью подсчета или формулой лейкоцитов в синовиальной жидкости. Преимущества теста на D-лактат заключаются в низком необходимом объеме синовиальной жидкости (50 мкл), коротком времени выполнения (45 минут) и невысокой стоимости. В частности, высокая чувствительность и быстрая доступность результатов делают тест особенно применимым в качестве инструмента скрининга PJI. Для повышения специфичности подтверждающий диагностический тест синовиальной жидкости может быть включен в диагностический алгоритм PJI.
Пример 2. Эффективность D-лактата синовиальной жидкости для диагностики перипротезной инфекции сустава: проспективное обсервационное исследование.
Материал, пациенты и способы примера 2.
Схема исследования и популяция. Проспективное диагностическое исследование когорт включало последовательно поступивших пациентов возрастом 18 лет или старше, которых оценивали на предмет болезненного протезного сустава бедра, колена и плеча и которых подвергали диагностической суставной аспирации перед ревизионной артропластикой для оценивания инфекции в период с мая 2016 года по март 2017 года. Брали только один (первый собранный) образец синовиальной жидкости на пациента.
Исключали пациентов с разбавленной синовиальной жидкостью после суставной инстилляции, недостаточным объемом синовиальной жидкости (менее 3 мл), или у которых анализ синовиальной жидкости был выполнен более чем через 48 часов после аспирации. Для сбора анамнеза пациента, демографических, клинических, радиологических, микробиологических, гистопатологических и лабораторных данных использовали стандартизированную индивидуальную регистрационную карту. Каждого пациента обследовала междисциплинарная команда, состоящая из хирургов-ортопедов, инфекционистов и терапевтов. Результаты теста D-лактата синовиальной жидкости не передавали лечащим хирургамортопедам. Исследование выполняли в соответствии с Хельсинкской декларацией.
Диагностика инфекции перипротезного сустава. PJI определяли в соответствии с рабочими критериями Европейского общества инфекций костей и суставов (EBJIS) (44), кратко изложенными в табл. 4. Острую инфекцию диагностировали, если инфекция происходила в течение 4 недель после хирургического вмешательства, или если пациент сообщал о возникновении новых симптомов, продолжающихся не более 4 недель. Инфекции, которые возникли более чем через 4 недели после последнего хирургического вмешательства и были симптоматическими более 4 недель, определяли как хронические инфекции. Кроме того, на основании интервала между последним ревизионным хирургическим вмешательством или первичной имплантацией и временем аспирации все инфекции классифицировали на ранние (т.е. менее 3 месяцев) и отсроченные или поздние (т.е. более 3 мес.) инфекции (45).
Получение и исследование синовиальной жидкости, перипротезной ткани и имплантатов. Синовиальную жидкость аспирировали в стерильных условиях перед хирургическим вмешательством в амбулаторном отделении или во время ревизионного хирургического вмешательства перед вскрытием суставной капсулы. Один мл синовиальной жидкости инокулировали в педиатрическую бутылку для посева крови (BacTec PedsPlus/F, Beckton Dickinson and Co), один мл вводили в необработанный флакон для аэробных и анаэробных культур (0,1 мл каждый), а оставшуюся жидкость инокулировали в тиогликолятный бульон для накопления. Педиатрическую бутылку с посевом крови инкубировали при 36 плюс/минус 1°C в течение 14 суток или до обнаружения роста. Аэробные культуры инкубировали при 37°C и проверяли ежедневно в течение 7 суток, а анаэробные культуры инкубировали в течение 14 суток. Идентифицировали морфологию колоний микроорганизмов с помощью стандартных микробиологических способов с использованием автоматизированной системы VITEK 2 (bioMerieux, Марси-л'Этуаль, Франция). Для обнаружения кристаллов урата и пирофосфата аликвоту объемом 1 мл отправляли патологу для исследования синовиальной жидкости с помощью поляризационной микроскопии.
Кроме того, 3-5 образцов перипротезной ткани собирали во время хирургического вмешательства на границе имплантат и кости или цемента и кости для микробиологического и гистопатологического анализа, если выполняли ревизионное хирургическое вмешательство. Посев перипротезной ткани считали положительным, если высоковирулентный организм рос в более или равной 1 пробе синовиальной жидкости, перипротезной ткани или обработанной ультразвуком (Staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, Streptococcus spp., Candida spp), или если средне- или низковирулентный организм рос в более или равной 2 пробах (коагулазонегативные стафилококки, энтерококки, виды Cutibacterium [ранее известные как Propionibacterium] и другие бактерии микробиома кожи).
Извлеченные простетические компоненты отправляли на обработку ультразвуком, как описано ранее (46). Обработку ультразвуком считали положительной, если в обработанной ультразвуком жидкости росло более или равное 1 КОЕ/мл высоковирулентного организма или более 50 КОЕ/мл низковирулентного организма (47).
Определение количества лейкоцитов в синовиальной жидкости и процент гранулоцитов. Один мл синовиальной жидкости переносили во флакон, содержащий этилендиаминтетрауксусную кислоту
- 23 046276 (ЭДТК). Количество лейкоцитов определяли с помощью проточной цитометрии с использованием автоматического гематологического анализатора (XE-2100, Sysmex, Нордерштедт, Германия). Свернувшиеся пробы обрабатывали 10 мкл гиалуронидазы (Sigma-Aldrich Chemie, Тауфкирхен, Германия) в течение 10 минут при комнатной температуре.
Определение D-лактата синовиальной жидкости. D-лактат определяли спектрофотометрически по оптической плотности приготовленного образца. Одну аликвоту объемом 1 мл переносили в необработанный флакон для определения D-лактата с использованием коммерческого набора (D-lactam Kit; VLDiagnostics, Лейпциг, Германия). Аликвоты для определения D-лактата хранили при 4°C плюс/минус 1°C и анализировали в течение 48 часов после аспирации. Тесты проводили в соответствии с инструкциями производителя. Определение основано на спектрофотометрическом способе со стандартным устройством считывания в микропланшетах поглощения при 570 нм, требующим 50 мкл синовиальной жидкости. В анализе D-лактатдегидрогеназа (D-LDH) катализирует окисление D-молочной кислоты до пирувата, наряду с сопутствующим восстановлением никотинамидадениндинуклеотида (НАД') до НАДН. НАДН реагирует с флуоресцентным субстратом с получением окрашивания смеси (48).
Набор D-lactam для анализа содержит стандарт D-лактата лития для построения калибровочной кривой, которую обрабатывали для каждой партии. Реакционная смесь содержала 0,025 мл образца синовиальной жидкости, 0,08 мл смеси субстратов и 0,045 мл ферментативной смеси. Смесь для контроля мутности содержала 0,025 мл образца синовиальной жидкости, 0,08 мл смеси субстратов и 0,045 мл очищенной воды. Реагенты вносили в 96-луночный планшет с плоским дном, инкубировали при 37°C в течение 30 минут, а затем считывали при 570 нм с помощью Microplate Absorbance Reader (DYNEX Technologies MRX, Шантильи, Вирджиния, США).
Статистический анализ. J-статистику Юдена использовали для определения значения отсечки Dлактата на кривой ROC. Площадь под кривой ROC (AUC) использовали для оценки диагностической эффективности теста D-лактата, количества лейкоцитов и процента гранулоцитов. Для оценки статистической значимости средней концентрации D-лактата между группами применяли двусторонний tкритерий Стьюдента для независимой выборки. Расчет размера выборки был основан на предположении, что чувствительность D-лактата составляет 90% по сравнению с 80% для радиационных диагностических тестов, включая подсчет лейкоцитов, гистопатологию перипротезных тканей и культуру, т.е. различие в 10% (мощность 80%). Тест Делонга для двух коррелированных кривых ROC использовали для определения того, является ли различие между AUC статистически значимым. Для всех выполненных статистических тестов выбирали уровень значимости а 0,05. Доверительный интервал (CI (от англ. - confidence interval) 95% для AUC оценивали с помощью способа Делонга, и CI 95% для других показателей эффективности оценивали с использованием бутстраповской повторной выборки с 10000 повторов (табл. 6). Тест на две независимые медианы, /2-критерий и точный критерий Фишера использовали для оценки pзначений в табл. 5. Для оценки p-значений между чувствительностям и на фиг. 3 выполняли бутстраповскую повторную выборку с 10000 повторов. Корреляцию между концентрацией эритроцитов и D-лактата оценивали с помощью коэффициента Пирсона (ρ). Для всех статистических анализов использовали IBM SPSS 22.0 (Statistical package for the Social Sciences Corporation, Чикаго, Иллинойс, США). ROC и другие графики создавали с помощью вычислительной среды R (49).
Результаты примера 2.
Демографические данные пациента. В табл. 5 кратко описаны характеристики 148 пациентов, в том числе 103 (70%) с протезным суставом колена, 43 (29%) с протезным суставом бедра и 2 (1%) с протезным суставом плеча. У сорока четырех пациентов (30%) диагностировали PJI, а у 104 (70%) асептическое поражение протезного суства. Большинство пациентов (n=102, 69%) подвергались ревизионному хирургическому вмешательству, 62 из них с асептическими поражениями и 40 с PJI.
Эффективность традиционных тестов и микробиологического исследования. Результаты диагностических тестов показаны в табл. 6. Количество лейкоцитов в синовиальной жидкости показало чувствительность 80%. Однако у 12 пациентов абсолютное или относительное количество лейкоцитов было повышено из-за асептических состояний, в том числе ревматологического заболевания суставов (n равно 3), рецидивирующего вывиха (и=равно 2), раннего послеоперационного состояния (n равно 2), травмы (n равно 2)), кристаллической артропатии (n равно 1), перипротезного перелома (n равно 1) и металлоза с кристаллами (n равно 1). Отмечали 21 случай (48%) PJI с отрицательным посевом. Значительный рост микробов регистрировали у 23 пациентов с PJI (52%), тогда как формальную контаминацию (т.е. незначительный рост) обнаруживали в 8 случаях PJI и в 19 случаях асептического поражения. В табл. 7 представлены возбудители PJI. Всего 23 PJI с положительным посевом были вызваны низковирулентными патогенами в 10 эпизодах (43%) и высоковирулентными патогенами в 13 эпизодах (57%).
Эффективность D-лактата синовиальной жидкости. Рассчитывали оптимальное значение отсечки для D-лактата 1,263 ммоль/л. Чувствительность и специфичность теста D-лактата составляли 86,4% и 81,7%, соответственно (табл. 6). В 19 случаях асептического поражения концентрация D-лактата была выше значения отсечки, включая 12 случаев асептического поражения с количеством и формулой лейкоцитов ниже порогового значения и 7 случаев с неинтерпретируемым количеством клеток из-за основного
- 24 046276 воспалительного состояния. В 2 случаях ложноположительных образцов D-лактата регистрировали контаминацию патогеном кожной флоры. D-лактат показывал отрицательный результат у 6 пациентов с диагнозом PJI в соответствии с применяемыми критериями определения. При этом в 2 случаях диагноз PJI был основан только на одном имеющемся критерии (повышенное количество лейкоцитов в синовиальной жидкости или положительная гистопатология); в остальных 4 случаях диагноз PJI был основан на нескольких выполненных критериях, включая один случай с синусовым трактом. Средняя концентрация D-лактата была значительно ниже при асептических поражениях, чем в случаях PJI (р менее 0,001). Для коммерческого набора для тестирования D-лактата требовалось 50 мкл синовиальной жидкости. Время обработки в обоих тестах составляло 30-45 минут.
Сравнение D-лактата синовиальной жидкости и количества лейкоцитов. Не наблюдали значительных различий при любых попарных сравнениях AUC между исследованными биомаркерами синовиальной жидкости (AUC D-лактат против AUCWBC (от англ. - White Blood Cell - лейкоцит) p=0,8; фиг. 3). Распределение D-лактата и количества лейкоцитов при PJI и асептических поражениях показано на фиг. 4. В 12 случаях асептического поражения с недиагностическим повышением количества лейкоцитов из-за основных воспалительных состояний, в 7 случаях наблюдали положительный результат в отношении Dлактата, и в 5 случаях - отрицательный результат в отношении D-лактата. Из этих 12 пациентов 11 подвергали ревизионному хирургическому вмешательству, и в конечном итоге в 6 из 12 случаев выполняли полное диагностическое оценивание, подтверждающее асептическую патологию.
При остром PJI чувствительность D-лактата и количества лейкоцитов составляла 100%, тогда как при хроническом PJI чувствительность снижалась до 81% и 72%, соответственно (p=0,268). Эффективность D-лактата и количества лейкоцитов при ранних и отсроченных/поздних инфекциях показаны на фиг. 5. В то время как D-лактат показал более высокую чувствительность по сравнению с количеством лейкоцитов, количество лейкоцитов было более специфичным для обеих групп. У пациентов, поступивших в ранний срок после хирургического вмешательства, тесты показывали аналогичную чувствительность (67% по сравнению с 58%; p равно 0,572), тогда как в отсроченных/поздних ситуациях D-лактат был более чувствительным (94% по сравнению с 84%; p равно 0,027).
Концентрация D-лактата синовиальной жидкости и микробиологическое исследование. При PJI с отрицательным посевом средняя концентрация D-лактата была значительно ниже, чем при PJI с положительным посевом (0,915 ммоль/л по сравнению с 2,421 ммоль/л; p равно 0,004). Средняя концентрация Dлактата при PJI с отрицательным посевом была значительно выше, чем в случаях с асептической контаминацией (0,915 ммоль/л по сравнению с 1,40 ммоль/л; p менее 0,001). Не наблюдали значимого различия в концентрации D-лактата при сравнении PJI, вызванного низковирулентными и высоковирулентными микроорганизмами (2,047 ммоль/л по сравнению с 2,586 ммоль/л; p равно 0,074) или ранними и отсроченными, или поздними инфекциями (1,459 ммоль/л по сравнению с 1,217 ммоль/л); p равно 0,196).
Корреляция между эритроцитами в синовиальной жидкости и концентрацией D-лактата. Наблюдали положительную корреляцию между эритроцитами и D-лактатом в целом (р равно 0,185, p равно 0,02), а также в подгруппе с асептическими поражениями (р равно 0,339, p менее 0,01). В подгруппе с PJI обнаруживали отрицательную корреляцию, однако она не достигла значимости (р равно -0,199, p равно 0,195) (фиг. 6). Различие между подгруппами с асептическим поражением и PJI было значимым (р менее 0,01).
Обсуждение примера 2.
В последние годы исследовали несколько биомаркеров в качестве диагностического теста для PJI (34, 35, 50). Однако ни один из них не оценивали исключительно на предмет их способности обнаруживать инфекции низкой степени и ранние послеоперационные инфекции, которые сложно отличить от асептических состояний. Эффективность диагностических тестов сильно зависит от применяемых критериев определения инфекции. В большинстве исследований использовали критерии определения MSIS (от англ. - Musculoskeletal Infection Society - Общество костно-мышечных инфекционных заболеваний) (51), которые пропускали несколько случаев инфекции низкой степени из-за высокого порога подтверждения инфекции (44). В этом исследовании авторы настоящего изобретения использовали критерии с более низким порогом для диагностики PJI с обнаружением также PJI низкой степени (44, 52). В отличие от критериев MSIS C-реактивный белок СРБ и скорость оседания эритроцитов СОЭ не считали диагностическими критериями PJI, поскольку они малоэффективны при инфекциях низкой степени и не специфичны для PJI (33). Кроме того, эстеразу лейкоцитов не включали, поскольку она дает надежные результаты только в образцах, не контаминированных кровью (50).
Известно, что отсроченные инфекции вызывают лишь слабовыраженные клинические признаки и симптомы, скорее всего, из-за низкой микробной нагрузки. При том, что метаболизм бактерий снижается по мере созревания биопленки, продуцируется все еще определяемое количество D-лактата. Наблюдали статистически значимое различие в концентрации D-лактата при PJI с отрицательным посевом и в случаях асептического поражения, что подтверждает септическую этиологию в образцах с отрицательным посевом. Кроме того, концентрация D-лактата, по-видимому, зависит от количества бактерий, поскольку концентрация D-лактата была выше при PJI с положительным посевом, чем с отрицательным посевом.
В исследовании авторов настоящего изобретения у 6 пациентов с хроническим PJI наблюдали ложноотрицательный тест на D-лактат синовиальной жидкости, у двух из которых был положительный ре
- 25 046276 зультат (1 полимикробная инфекция с синусовым трактом и коагулазонегативные стафилококки в синовиальной жидкости). У четырех из них количество лейкоцитов в синовиальной жидкости также было нормальным, а у 3 из них инфекция была подтверждена только положительным результатом гистопатологического исследования перипротезной ткани. Остается неясным, являются ли эти случаи действительно PJI, или они представляют собой гипердиагностированные случаи PJI. В одном случае присутствовал синусовый тракт, который, как было описано ранее, изменял диагностические маркеры в синовиальной жидкости из-за постоянного дренирования воспаления. В то время как продуцирование D-лактата описывали для нескольких видов бактерий, включая Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae и Bacteroides fragilis, a также для Lactobacillales и микробиоты кишечника (40, 42, 53), данные о продуцировании D-лактата другими бактериями в жидкостях организма ограничены. Влияние вирулентности бактерий на концентрацию D-лактата невозможно оценить по данным в соответствии с настоящим изобретением и данным литературы (41).
Концентрация D-лактата была выше значения отсечки у 19 пациентов с асептическим поражением. На основании положительной корреляции между эритроцитами и D-лактатом в группе с асептическим поражением, авторы настоящего изобретения предположили, что гемоглобин может вызывать ложноположительный результат теста на D-лактат из-за подобных длин волн поглощения, т.е. 540 нм для гемоглобина и 570 нм для D-лактата (54). У пациентов с PJI слегка отрицательная корреляция может быть объяснена значительным источником D-лактата из метаболизма бактерий, при этом другие факторы не могут влиять на концентрацию. Авторы настоящего изобретения не оценивали, может ли центрифугирование образца синовиальной жидкости потенциально улучшить специфичность теста на D-лактат.
В заключение, D-лактат синовиальной жидкости является точным диагностическим тестом для диагностики PJI, сравнимым с количеством лейкоцитов в синовиальной жидкости. Для него требуется всего 50 мкл синовиальной жидкости, он характеризуется коротким временем обработки и является недорогим. Модификации теста могут потенциально улучшить его специфичность или могут быть объединены с подтверждающим тестом с более высокой специфичностью.
Пример 3. Измерение D-лактат с использованием потенциометрического электрохимического сенсора.
Материал и способы примера 3.
Изготовление биосенсора. Использовали потенциометрическую электрохимическую сенсорную систему. Систему конструировали с тремя электродами: рабочий/электрод определения (золотой электрод, приобретенный у Genefluidic (Калифорния, США) с сенсором 0 2,5 мм), платиновая проволока в качестве противоэлектрода и Ag/AgCl электрод (BASi) в качестве электрода сравнения.
Подготовку чувствительных слоев рабочих электродов выполняли, как раскрывалось ранее (A polyaniline based ultrasensitive potentiometric immunosensor for cardiac troponin complex detection. Qi Zhang a, n, Alok Prabhu a, Avdar San a, Jafar F. Al-Sharab b, Kalle Levon, Biosensors and Bioelectronics 72 (2015) 100106). Рабочие электроды покрывали 20 мкл 1,5 мас.% PANI (от англ. - polyaniline -полианилин)/DNNSA (от англ. - dinonylnaphthalene sulfonic acid динонилнафталинсульфоновая кислота), растворенных в хлороформе, и сушили в печи при 60°C в течение 2 часов. Покрытые PANI/DNNSA электроды погружали в буфер CP с 2,5 мас.% глутаральдегида (GA (от англ. - glutaraldehyde)) в качестве реагента сшивания (Sigma-Aldrich, Миссури, США) при комнатной температуре на 1,5 часа с последующей тщательной промывкой деионизированной водой.
Иммобилизация фермента. Использовали коммерчески доступный набор для определения Dмолочной кислоты. Реагент 1 (16 мл) содержит D-лактатдегидрогеназу более или равно 60 кЕ/л плюс буфер, pH 9,0, а реагент 2 (4,5 мл) содержит НАД' более или равно 20 ммоль/л. 50 мкл смеси реагентов помещали на рабочий электрод, предварительно обработанный, как раскрывалось ранее, в течение ночи при 4°C для иммобилизации фермента.
Приготовление калибровочных образцов D-лактата. Лиофилизированный D-лактат лития (SigmaAldrich, Миссури, США) разбавляли деионизированной водой до различных концентраций (0, 25, 50, 75 и 100%).
Электрохимические измерения. Помещали 100 мкл образцов, содержащих различные концентрации D-лактата, на поверхность рабочего электрода и измеряли напряжение, соответствующее определенной концентрации D-лактата в калиброванном образце, при комнатной температуре. Потенциометрию разомкнутой цепи (OCP (от англ. - open circuit potentiometry)) выполняли с использованием электрохимической рабочей станции CHI 660d (CH Instruments).
Результаты примера 3.
Измеренные концентрации и соответствующие напряжения в двух независимых экспериментах показаны на фиг. 7 и в табл. 8. При использовании D-лактата с концентрацией ниже 1,2 мМ напряжение было ниже 85 мВ (интерпретировали как отрицательный результат), тогда как концентрации выше этого значения отсечки, что было определено спектрофотометрическими измерениями, стабильно показывали измерения напряжения выше 85 мВ.
Обсуждение примера 3.
Эффект зависимости ответа от дозы способа на основе потенциометрического электрохимического
- 26 046276 сенсора демонстрирует доказательство концепции независимого от спектрофотометрии измерения, которое не зависит от других компонентов биологических образцов (например, синовиальной жидкости), таких как эритроциты, которые могут давать ложноположительные результаты спектрофотометрических способов из-за того, что длина волны поглощения подобна длине волны гемоглобина. Следовательно, специфичность способа на основе потенциометрического электрохимического сенсора в соответствии с настоящим изобретением будет выше, чем специфичность других доступных на данный момент способов. Этот признак нового теста важен, поскольку ложноположительные результаты могут привести к избыточному противомикробному и хирургическому лечению с негативными последствиями для пациента.
Пример 4. Измерение D-лактата с использованием амперометрического электрохимического сенсора.
Материал и способы примера 4.
Авторы настоящего изобретения выполняли исследование с использованием амперометрического электрохимического сенсора, который содержит тест-полоску (чип) с рабочим электродом, противоэлектродом и электродами сравнения на поверхности для электрохимического обнаружения и электрохимический потенциостат для измерения электрического сигнала. Тест-полоску можно комбинировать с небольшими портативными электронными устройствами для электрохимического обнаружения.
Приготовление калибровочных образцов D-лактата. Коммерчески доступный лиофилизированный D-лактат натрия (Sigma-Aldrich, Миссури, США) восстанавливали из лиофилизата путем добавления необходимого количества деионизированной воды для достижения конечной концентрации 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10,0 и 30,0 мМ.
Приготовление ферментной смеси. Коммерчески доступную лиофилизированную Dлактатдегидрогеназу из Staphylococcus epidermidis (Sigma-Aldrich, Миссури, США) разбавляли фосфатным буфером до достижения конечной концентрации 100 Е/мл. Коммерчески доступную лиофилизированную не содержащую НАД кислоту (Sigma-Aldrich, Миссури, США) разбавляли до конечной концентрации 20 ммоль/л. Реагенты растворяли в фосфатном буфере с двумя различными концентрациями pH (pH 6,5 и pH 8,5).
Электрохимические измерения. Выполняли два эксперимента с использованием фосфатного буфера с различным pH (pH 6,5 и pH 8,5). На поверхность чипа помещали 100 мкл смеси, содержащей фосфатный буфер (pH 6,5 или pH 8,5), 10 единиц D-LDH, 20 ммоль/л НАД и различные концентрации Dлактата. Измерение силы тока, соответствующего определенной концентрации D-лактата в калиброванном образце, проводили при комнатной температуре с использованием хроноамперометрии со стандартным потенциостатом (CompactStat.h-Standard, Ivium Technologies, Эйндховен, Нидерланды).
Результаты примера 4.
Измеренные концентрации D-лактата в фосфатном буфере с pH 6,5 и соответствующий ток показаны на фиг. 8 и в табл. 9. Измеренные концентрации D-лактата в фосфатном буфере с pH 8,5 и соответствующий ток показаны на рисунке 9 и в табл. 10. При использовании D-лактата с концентрацией ниже 1,2 мМ ток был ниже 422 нА (интерпретировали как отрицательный результат), тогда как концентрации выше этого значения отсечки, которое определяли спектрофотометрическими измерениями, всякий раз демонстрировали измерения тока выше 422 нА.
Обсуждение примера 4.
Амперометрический электрохимический сенсор показывал эффект зависимости ответа от дозы при измерении различных концентраций D-лактата независимо от pH используемого буфера, что демонстрирует доказательство концепции независимого от спектрофотометрии измерения D-лактата. Более того, с использованием фосфатного буфера с pH 8,5 авторы настоящего изобретения смогли определить концентрацию D-лактата с более высоким током, что обеспечивает лучшую чувствительность биосенсора для определения концентрации D-лактата в неизвестных образцах.
Пример 5. Измерение D-лактата в образцах синовиальной жидкости с использованием электрохимического сенсора.
Материал и способы примера 5.
Авторы настоящего изобретения выполняли исследование с использованием амперометрического электрохимического сенсора (биосенсора), включающего тест-полоску (чип) с рабочим электродом, противоэлектродом и электродами сравнения на поверхности для электрохимического обнаружения и электрохимический потенциостат для измерения электрического сигнала.
Образцы синовиальной жидкости. В данном исследовании авторы настоящего изобретения использовали образцы синовиальной жидкости из примера 2. В когорте в соответствии с настоящим изобретением 10 пациентов имели инфекцию протезного сустава (PJI). У 30 пациентов диагностировали асептическое поражение (AF) протезного сустава, у 20 из которых тестировали ложноположительный результат в предыдущем исследовании с использованием спектрофотометрических способов.
Приготовление ферментной смеси. Коммерчески доступную лиофилизированную Dлактатдегидрогеназу из Staphylococcus epidermidis (Sigma-Aldrich, Миссури, США) разбавляли фосфатным буфером (pH 8,5) до достижения конечной концентрации 100 Е/мл. Коммерчески доступную лио
- 27 046276 филизированную не содержащую НАД кислоту (Sigma-Aldrich, Миссури, США) разбавляли фосфатным буфером (pH 8,5) до конечной концентрации 20 ммоль/л.
Электрохимические измерения. На поверхность чипа помещали 90 мкл смеси, содержащей фосфатный буфер (pH 8,5), 10 единиц D-LDH, 20 ммоль/л НАД и 10 мкл образцов синовиальной жидкости. Измерение тока проводили при комнатной температуре с использованием хроноамперометрии со стандартным потенциостатом (CompactStat.h-Standard, Ivium Technologies, Эйндховен, Нидерланды).
Результаты примера 5.
Используя электрохимическое измерение D-лактата, как раскрывается в настоящем документе, можно было идентифицировать всех пациентов с AF и отличить их от пациентов с PJI. Для всех пациентов с AF наблюдали более низкие измерения тока, чем для пациентов с PJI. Следовательно, можно применять подходящее значение отсечки (тока), что обеспечивает идентификацию PJI с очень высокой специфичностью и чувствительностью.
Обсуждение примера 5.
Амперометрический электрохимический сенсор демонстрирует превосходную чувствительность и специфичность в диагностике PJI, что обеспечивает доказательство концепции независимого от спектрофотометрии измерения. Этот способ не зависит от компонентов биологических образцов (например, синовиальной жидкости), таких как эритроциты, которые могут давать ложноположительные результаты при спектрофотометрических способах из-за длин волн поглощения, подобных таковым у гемоглобина. Следовательно, специфичность электрохимического способа в соответствии с настоящим изобретением будет выше, чем у других доступных на данный момент способов. Этот признак нового теста важен, поскольку ложноположительные результаты могут привести к избыточному противомикробному и хирургическому лечению с негативными последствиями для пациента.
Согласно запланированным вариантам осуществления обнаружение электрического сигнала будет осуществляться с использованием питающегося от батареи переносного компактного устройства считывания, подобного глюкометру (Freestyle Precision Pro, Abbott, Норт-Чикаго, Иллинойс, США), который используется для получения количественной информации об аналите.
Таблицы.
Таблицы примера 1.
Таблица 1 Демографические данные и характеристики 224 пациентов с перипротезными суставами, стратифициро________ванных по асептической . и инфекционной патологии________
Характеристики | PJI | AF | рзначение |
Протезы суставов (п = 224), (%) | 137 (61) | 87 (39) | |
Возраст, медиана (диапазон), годы | 67 (33-94) | 64 (30-89) | 0,578 |
Пол, число мужчин (%) | 51 (37) | 49 (63) | 0,356 |
Тип пораженного сустава, число (%) | |||
Колено Бедро | 83 (61) 54 (39) | 41 (47) 47 (54) | 0,054 |
Время от первичной имплантации протеза до аспирации, медиана (диапазон), месяцы | 67 (6-240) | 34 (0,2-180) | 0,001 |
PJI - перипротезная инфекция сустава, AF - асептическое поражение.
Таблица 2
Микробиологическое исследование инфекции протезных суставов
Патоген | Инфекция протезного сустава (п = 87)2 |
S. aureus | 16 (18) |
Коагулазонегативные стафилококки | 27 (31) |
Streptococcus spp. | 6(6) |
Enterococcus spp. | 4(5) |
Анаэробы | 4(5) |
Грамотрицательные бактерии | 3(3) |
Другие1 | 2(2) |
Отрицательный посев | 26 (30) |
1 Candida parapsilosis (n=1), Corynebacterium spp. (n=1).
2 Один пациент с PJI имел смешанную инфекцию S. aureus и S. pyogenes.
- 28 046276
Таблица 3
Аналитическая эффективность тестов синовиальной жидкости
Тесты | Отсечка | PJI | AF | AUC | Чувствительност ь, % | Специфичность, % | PPV, % | NPV, % |
(95% CI) | ||||||||
D-лактат, ммоль/л | > 1,2 | 76/78 | 20/137 | (95% CI) | 97,7 (91,9-99,7) | 83,9 (76,7-89,7) | 79,4 (70,5-86,6) | 98,3 (93,9-99,3) |
Лейкоциты, х 103/мкл | >2 | 70/78 | 5/137 | 0,96 (0,93-0,98) | 87,5 (78,7-93,6) | 95,7 (91,0-98,4) | 92,8 (84,9-97,3) | 92,5 (86,9-96,2) |
Процент гранулоцитов, % | > 70 | 63/78 | 2/137 | 0,96 (0,93-0,98) | 80,4 (70,6-88,2) | 99,2 (96,1-99,9) | 98,6 (92,4-99,8) | 89,2 (83,2-93,6) |
Положительн ый посев | - | 61/78 | 9/137 | - | 78,2 (67,4-86,8) | 93,4 (87,9-97,0) | 87,1 (78,1-92,8) | 88,3 (83,2-92,0) |
PJI - перипротезная инфекция сустава, AF - асептическое поражение, AUC - площадь под кривой, PPV (от англ. - positive predictive value) - прогностическая ценность положительного результата, NPV (от англ. negative predictive value) - прогностическая ценность отрицательного результата, CI - доверительный интервал.
Таблицы примера 2.
Таблица 4 В соответствии с рабочими критериями Европейского общества инфекций костей и суставов (EBJIS) перипротезную инфекцию сустава определяют при выполнении критерия более или равного 1
Тест | Критерии |
Клинические признаки | Синусовый тракт (фистула) или видимые гнойные выделения вокруг протеза |
Г истология | Острое воспаление в перипротезной ткани1 |
Количество клеток в 2 суставном аспирате | более 2000/мкг лейкоцитов или более 70% гранулоцитов |
Микробиологическое исследование | Рост микробов в • синовиальной жидкости, или • более или равен 2 образцах ткани3, или • обработанной ультразвуком жидкости (более или равен 50 КОЕ/мл)4 |
1 Острое воспаление определяют как более или равное 23 гранулоцитам на поле при большом увеличении, что соответствует типу II или III по Кренну и Моравицу (56).
2 Значения отсечки лейкоцитов не считают диагностическими в пределах 6 недель после хирургического вмешательства, при активном ревматическом заболевании суставов, перипротезном переломе, травме сустава или вывихе.
3 Посев перипротезной ткани считали положительным, если высоковирулентный организм вырос в более или равном 1 образце (Staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, Streptococcus spp., Candida spp.), или низковирулентный организм вырос в более или равном 2 образцах (коагулазонегативные стафилококки, энтерококки, Cutibacterium [ранее известная как Propionibacterium] spp. и другие бактерии микробиома кожи).
4 Обработку ультразвуком считали положительной, если в обработанной ультразвуком жидкости выросло более или равное 1 КОЕ/мл высоковирулентного организма или более 50 КОЕ/мл низковирулентного организма (47).
- 29 046276
Таблица 5
Характеристики пациентов
Все пациенты (п = 148) | Пациенты с PJI (п = 44) | Пациенты с асептическим поражением (п = 104) | рзначение | |
Медиана (диапазон) возраста пациентов (годы) | 69,5 (29-93) | 69,0 (41-89) | 69,5 (29-93) | 0,857 |
Пол, число (%) | 0,032 | |||
мужчин | 81 (55) | 30 (68) | 51 (49) | |
Сустав, число (%) | 0,006 | |||
Колена | 103 (70) | 24 (55) | 79 (76) | |
Бедра | 43 (29) | 18 (41) | 25 (24) | |
Плеча | 2(1) | 2(4) | 0(0) | |
Пациенты, подвергшиеся ревизионному хирургическому вмешательству, число (%) | 102 (69) | 40 (91) | 62 (60) | <0,001 |
Срок проведения суставной аспирации после первичного хирургического вмешательства, число (%) | 0,765 | |||
Ранний (менее 3 месяцев) | 19/138 (14) | 7/43 (16) | 12/95 (13) | |
Отсроченный (3-24 месяца) | 55/138 (40) | 16/43 (37) | 39/95 (41) | |
Поздний (более 24 месяцев) | 64/138 (46) | 20/43 (47) | 44/95 (46) |
Таблица 6
Показатели немикробиологических и микробиологических тестов в соответствии с предложенными кри____________________________________териями EPJIC____________________________________
Положительные результаты | Асептическое поражение (п= 104) | РЛ* (п = 44) | AUC (%) (95% CI) | Чувствитель ность (%) (95% CI) | Специфич ность (%) (95% CI) | PPV (%) (95% CI) | NPV (%) Ί (95% CI) С | очность %) 95% CI) |
Немикробиологические тесты | ||||||||
Клинические признаки1 | 0 | 19 | - | 43,2 (29,5-56,8) | 100 | 100 | 80,6 (77,0-84,6) | 83,1 (79,1-87,2) |
D-лактат синовиальной жидкости более 1,263 ммоль/л | 19 | 38 | 90,3 (85,7-95,0) | 86,4 (75,0-95,5) | 81,7 (74,0-88,5) | 66,7 (57,8-76,6) | 93,5 (88,7-97,5) | 83,1 (77,0-89,1) |
Количество лейкоцитов в | 9 | 35 | 91,0 (85,1-96,8) | 79,5 (68,2-90,9) | 91,3 (85,6-96,2) | 80,0 (69,4-90,2) | 91,4 (86,8-96,0) | 87,8 |
синовиальной жидкости более 2000/мкл2 | (82,4-92,6) | |||||||
Процент гранулоцитов в | 8 | 25 | 86,1 (79,4-92,9) | 56,8 (40,9-70,5) | 92,3 (86,5-97,1) | 75,9 (62,9-88,9) | 83,5 (78,8-88,3) | 81,8 |
синовиальной жидкости более 70%2 | (75,7- 87,2) | |||||||
Количество лейкоцитов или процент гранулоцитов3 | 9 | 35 | Ξ | 79,5 (68,2-90,9) | 89,4 (83,7-95,2) | 76,2 (66,0-87,2) | 91,3 (86,5-95,9) | 86,5 (81,1-91,9) |
Гистопатология перипротезной ткани | 0/43 | 25/34 | - | 73,5 (58,8-88,2) | 100 | 100 | 82,7 (75,4-91,5) | 88,3 (81,8-94,8) |
Микробиологические тесты | ||||||||
Посев синовиальной жидкости Посев перипротезной ткани4 Посев обработанной ультразвуком жидкости4 | 8 7/63 5/49 | 20 17/41 17/39 | - | 45,5 (31,8-61,4) 41,5 (26,8-56,1) 43,6 (28,2-59,0) | 100 100 100 | 100 100 100 | 81,2 (77,6-86,0) 72,4 (68,8-77,8) 69,0 (63,6-75,4) | 83,8 (79,785,5) 76,9 (71,2-82,7) 75,0 (68,2-81,8) |
Образец любого посева | 19 | 23 | - | 52,3 (38,6-65,9) | 100 | 100 | 83,2 (79,4-87,4) | 85,8 (81,8-89,9) |
- 30 046276
Примечание. Если показан знаменатель, тест проводили не у всех пациентов. * PJI подтверждали, когда присутствовал по меньшей мере один из следующих критериев: клинические признаки (т.е. макроскопический гной в синовиальной жидкости или в окружении протеза, или наличие синусового тракта, повышенное количество лейкоцитов в синовиальной жидкости (более 2000 лейкоцитов/мкл или более 70% гранулоцитов)), гистопатологическое свидетельство воспаления в перипротезной ткани при положительном в значительной степени микробиологическом исследовании. 1 У одиннадцати пациентов имелся видимый гной в синовиальной жидкости, у 1 пациента имелся синусовый тракт, а у 7 пациентов наблюдали и то, и другое. 2 У 12 из 148 пациентов количество лейкоцитов (n равно 9) или процент гранулоцитов (n равно 8) были повышены, но не были диагностическими для PJI из-за сопутствующей кристаллической артропатии (n равно 1), рецидивирующего вывиха (n равно 2), ревматологического заболевания суставов (n равно 3), раннего послеоперационного состояния (n равно 2), травмы (n равно 2), перипротезного перелома (n равно 1) или металлоза с кристаллами (n равно 1). 3 Ложноположительные результаты интерпретировали как положительные для оценивания эффективности. В 3 случаях количество лейкоцитов и процент гранулоцитов не превышали значение отсечки, хотя определялись как не интерпретируемые. 4 Роста низковирулентного микроорганизма только в одном образце было недостаточно для диагностики PJI.
Таблица 7
Выделенные микроорганизмы у 23 пациентов с PJI с положительным посевом
Патоген | Количество (%) |
Коагулазонегативные стафилококки1 | 11 (48) |
Staphylococcus aureus | 5(22) |
Streptococcus spp.2 | 3 (13) |
Грамотрицательные палочки3 | 3 (13) |
Enterococcus spp. | 1 (4) |
Bacteroides fragilis | 1 (4) |
Таблица 8
Таблица примера 3.
Концен трация Dлактата | Соответ ствующи й ID- лактат (мМ) | Контрол ь | Пример 1 | Пример 2 | Среднее напряже ние (мВ) | Интерпрета ция* |
0% | 0,0 | 0 | 0 | 0 | 0 | Отрицатель ный |
25% | 0,9 | 0 | 41 | 71 | 56 | Отрицатель ный |
30% | 1,2 | 0 | - | - | 85 | Положитель ный (значение отсечки) |
50% | 1,8 | 0 | 273 | 155 | 214 | Положитель ный |
75% | 2,7 | 0 | 217 | 141 | 179 | Положитель ный |
100% | 3,7 | 0 | 276 | 159 | 218 | Положитель ный |
Среднее напряжение (cB) вычисляли из 2 экспериментов. * На основании значения отсечки, определенного с помощью спектрофотометрии.
- 31 046276
Таблицы примера 4.
Таблица 9
Амперометрическое измерение при pH 6,5
Соответствующий D-лактат (мМ) | Контрол ь | Пример 1 | Пример 2 | Средний ток (нА) | Интерпретаци я* |
ο,ο | 0 | 0 | 0 | 0 | Отрицательн ый |
0,01 | 0 | 7 | 5 | 6 | Отрицательн ый |
0,03 | 0 | 11 | 11 | 11 | Отрицательн ый |
0,1 | 0 | 35 | 25 | 30 | Отрицательн ый |
0,3 | 0 | 42 | 65 | 53,5 | Отрицательн ый |
1,2 | 0 | 108 | 114 | 111 | Положительн ый (значение отсечки) |
3,0 | 0 | 156 | 161 | 158,5 | Положительн ый |
10,0 | 0 | 288 | 270 | 279 | Положительн ый |
30,0 | 0 | 490 | 510 | 500 | Положительн ый |
Средний ток (нА) вычисляли из 2 экспериментов.
* На основании значения отсечки, определенного с помощью спектрофотометрии.
Таблица 10
Амперометрическое измерение при pH 8,5
Соответствующий D-лактат (мМ) | Контрол ь | Пример 1 | Приме Р2 | Средний ток (нА) | Интерпретаци я* |
0,0 | 0 | 0 | 0 | 0 | Отрицательн ый |
0,01 | 0 | 16 | 20 | 18 | Отрицательн ый |
0,03 | 0 | 44 | 50 | 47 | Отрицательн ый |
0,1 | 0 | 90 | 106 | 98 | Отрицательн ый |
0,3 | 0 | 184 | 223 | 204 | Отрицательн ый |
1,2 | 0 | 439 | 405 | 422 | Положительн ый (значение отсечки) |
3,0 | 0 | 740 | 843 | 792 | Положительн ый |
10,0 | 0 | 1386 | 1803 | 1595 | Положительн ый |
30,0 | 0 | 2455 | 2600 | 2528 | Положительн ый |
Средний ток (нА) вычисляли из 2 экспериментов.
* На основании значения отсечки, определенного с помощью спектрофотометрии. Ссылки.
1. Kaandorp CJ, Dinant HJ, van de Laar MA, Moens HJ, Prins AP, Dijkmans BA. Incidence and sources of native and prosthetic joint infection: a community based prospective survey. Annals of the rheumatic diseases. 1997;56(8):470-5.
2. Geirsson AJ, Statkevicius S, Vikingsson A. Septic arthritis in Iceland 1990-2002: increasing incidence due to iatrogenic infections. Annals of the rheumatic diseases. 2008;67(5):638-43.
3. Corvee S, Portillo ME, Pasticci BM, Borens O, TrampuzA. Epidemiology and new developments in the diagnosis of prosthetic joint infection. Int J Artif Organs. 2012;35(10):923-34.
4. Zimmerli W, Trampuz A, Ochsner PE. Prosthetic-joint infections. The New England journal of medicine. 2004;351(16):1645-54.
- 32 046276
5. Morgenstern C, Cabric S, Perka C, Trampuz A, Renz N. Synovial fluid multiplex PCR is superior to culture for detection of low-virulent pathogens causing peri prosthetic joint infection. Diagnostic microbiology and infectious disease. 2018;90(2): 115-9.
6. Trampuz A, Hanssen AD, Osmon DR, Mandrekar J, Steckelberg JM, Patel R. Synovial fluid leukocyte count and differential for the diagnosis of prosthetic knee infection. The American journal of medicine. 2004; 117(8):556-62.
7. Renz N, Yermak K., Perka C., Trampuz A. Alpha defensin lateral flow test for diagnosis of periprosthetic joint infection. Not a screening but a confirmatory test. . J Bone Joint Surg Am. 2018(100(9)):742-50.
8. Wouthuyzen-Bakker M, Ploegmakers JJW, Ottink K, Kampinga GA, Wagenmakers-Huizenga L, Jutte PC, et al. Synovial Calprotectin: An Inexpensive Biomarker to Exclude a Chronic Prosthetic Joint Infection. J Arthroplasty. 2018;33(4):1149-53.
9. Shafafy R, McClatchie W, Chettiar K, Gill K, Hargrove R, Sturridge S, et al. Use of leucocyte esterase reagent strips in the diagnosis or exclusion of prosthetic joint infection. The bone & joint journal. 2015;97-b(9): 1232-6.
10. Marcos MA, Vila J, Gratacos J, Brancos MA, Jimenez de Anta MT. Determination of D-lactate concentration for rapid diagnosis of bacterial infections of body fluids. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1991 ;10(11):966-9.
11. Gratacos J, Vila J, Moya F, Marcos MA, Collado A, Sanmarti R, et al. Dlactic acid in synovial fluid. A rapid diagnostic test for bacterial synovitis. The Journal of rheumatology. 1995;22(8): 1504-8.
12. Kortekangas P, Peltola O, Toivanen A, Aro HT. Synovial-fluid D-lactic acid in bacterial and other acute joint effusions. Scandinavian journal of rheumatology. 1994;23(4):203-5.
13. Uribarri J, Oh MS, Carroll HJ. D-lactic acidosis. A review of clinical presentation, biochemical features, and pathophysiologic mechanisms. Medicine (Baltimore). 1998;77(2):73-82.
14. Ewaschuk JB, Naylor JM, Zello GA. D-lactate in human and ruminant metabolism. The Journal of nutrition. 2005;135(7):1619-25.
15. Karbysheva S, Grigoricheva L, Golnik V, Popov S, Renz N, Trampuz A. Influence of retrieved hip- and knee-prosthesis biomaterials on microbial detection by sonication. European cells & materials. 2019;37:16-22.
16. Akgun D, Perka C, Trampuz A, Renz N. Outcome of hip and knee periprosthetic joint infections caused by pathogens resistant to biofilm-active
- 33 046276 antibiotics: results from a prospective cohort study. Archives of orthopaedic and trauma surgery. 2018; 138(5):635-42.
17. Akgun D, Trampuz A, Perka C, Renz N. High failure rates in treatment of streptococcal periprosthetic joint infection: results from a seven-year retrospective cohort study. The bone & joint journal. 2017;99-b(5):653-9.
18. Renz N, Feihl S, Cabric S, Trampuz A. Performance of automated multiplex PCR using sonication fluid for diagnosis of periprosthetic joint infection: a prospective cohort. Infection. 2017;45(6):877-84.
19. Renz N, Mudrovcic S, Perka C, Trampuz A. Orthopedic implantassociated infections caused by Cutibacterium spp. - A remaining diagnostic challenge. PloS one. 2018;13(8):e0202639.
20. Sigmund IK, Yermak K, Perka C, Trampuz A, Renz N. Is the Enzymelinked Immunosorbent Assay More Accurate Than the Lateral Flow Alpha Defensin Test for Diagnosing Periprosthetic Joint Infection? Clinical orthopaedics and related research. 2018;476(8): 1645-54.
21. Krenn V, Morawietz L, Perino G, Kienapfel H, Ascherl R, Hassenpflug GJ, et al. Revised histopathological consensus classification of joint implant related pathology. Pathology, research and practice. 2014;210(12):779-86.
22. Trampuz A, Piper KE, Jacobson MJ, Hanssen AD, Unni KK, Osmon DR, et al. Sonication of removed hip and knee prostheses for diagnosis of infection. The New England journal of medicine. 2007;357(7):654-63.
23. Kaliterna J, Weusthuis RA, Castrillo JI, Van Dijken JP, Pronk JT. Transient responses of Candida utilis to oxygen limitation: regulation of the Kluyver effect for maltose. Yeast (Chichester, England). 1995;11(4):317-25.
24. Stewart BJ, Navid A, Kulp KS, Knaack JL, Bench G. D-Lactate production as a function of glucose metabolism in Saccharomyces cerevisiae. Yeast (Chichester, England). 2013;30(2):81-91.
25. Scheijen JL, Hanssen NM, van de Waarenburg MP, Jonkers DM, Stehouwer CD, Schalkwijk CG. L(+) and D(-) lactate are increased in plasma and urine samples of type 2 diabetes as measured by a simultaneous quantification of L(+) and D(-) lactate by reversed-phase liquid chromatography tandem mass spectrometry. Exp Diabetes Res. 2012;2012:234812.
26. Kapadia BH, Berg RA, Daley JA, Fritz J, Bhave A, Mont MA. Periprosthetic joint infection. The Lancet. 2016;387(10016):386-94.
27. Smith G, Chetter I. Infection in prosthetic material. Surgery (Oxford). 2015;33(11):559-64.
- 34 046276
28. Corvee S, Portillo ME, Pasticci BM, Borens O, Trampuz A. Epidemiology and new developments in the diagnosis of prosthetic joint infection. Int J Artif Organs. 2012;35(10):923-34.
29. Zimmerli W, Trampuz A, Ochsner PE. Prosthetic-joint infections. The New England journal of medicine. 2004;351 (16):1645-54.
30. Morgenstern C, Cabric S, Perka C, Trampuz A, Renz N. Synovial fluid multiplex PCR is superior to culture for detection of low-virulent pathogens causing periprosthetic joint infection. Diagnostic microbiology and infectious disease. 2017;(in press).
31. Del Pozo JL, Patel R. Infection associated with prosthetic joints. New England Journal of Medicine. 2009;361 (8):787-94.
32. Piper KE, Fernandez-Sampedro M, Steckelberg KE, Mandrekar JN, Karau MJ, Steckelberg JM, et al. C-reactive protein, erythrocyte sedimentation rate and orthopedic implant infection. PloS one. 2010;5(2):e9358.
33. Perez-Prieto D, Portillo ME, Puig-Verdie L, Alier A, Martinez S, Sorli L, et al. C-reactive protein may misdiagnose prosthetic joint infections, particularly chronic and low-grade infections. International orthopaedics. 2017;41(7):1315-9.
34. Sousa R, Serrano P, Dias JG, Oliveira J, Oliveira A. Improving the accuracy of synovial fluid analysis in the diagnosis of prosthetic joint infection with simple and inexpensive biomarkers. Bone Joint J. 2017;99(3):351-7.
35. Bottner F, Wegner A, Winkelmann W, Becker K, Erren M, Gotze C. Interleukin-6, procalcitonin and TNF-α: markers of peri-prosthetic infection following total joint replacement. The Journal of bone and joint surgery British volume. 2007;89(1):94-9.
36. Deirmengian C, Hallab N, Tarabishy A, Della Valle C, Jacobs J J, Lonner J, et al. Synovial fluid biomarkers for periprosthetic infection. Clinical Orthopaedics and Related Research®. 2010;468(8):2017-23.
37. Ewaschuk JB, Naylor JM, Zello GA. D-lactate in human and ruminant metabolism. The Journal of nutrition. 2005; 135(7): 1619-25.
38. Ewaschuk JB, Zello GA, Naylor JM, Brocks DR. Metabolic acidosis: separation methods and biological relevance of organic acids and lactic acid enantiomers. Journal of Chromatography B. 2002;781 (1-2):39-56.
39. Maessen DE, Stehouwer CD, Schalkwijk CG. The role of methylglyoxal and the glyoxalase system in diabetes and other age-related diseases. Clinical science. 2015;128(12):839-61.
40. Smith S, Eng R, Campos J, Chmel H. D-lactic acid measurements in the diagnosis of bacterial infections. Journal of clinical microbiology. 1989;27(3):385-8.
- 35 046276
41. Marcos M, Vila J, Gratacos J, Brancos M, De Anta MJ. Determination of D-lactate concentration for rapid diagnosis of bacterial infections of body fluids. European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. 1991;10(11):966-9.
42. Kortekangas P, Peltola O, Toivanen A, Aro H. Synovial-fluid D-lactic acid in bacterial and other acute joint effusions. Scandinavian journal of rheumatology. 1994;23(4):203-5.
43. Chen Z, Wang Y, Zeng A, Chen L, Wu R, Chen B, et al. The clinical diagnostic significance of cerebrospinal fluid d-lactate for bacterial meningitis. Clinica chimica acta. 2012;413(19):1512-5.
44. Renz N, Yermak К, Perka C, Trampuz A. Alpha defensin lateral flow test for diagnosis of periprosthetic joint infection: a screening or confirmatory test? (in press). JBJS. 2018.
45. Tande AJ, Patel R. Prosthetic joint infection. Clinical microbiology reviews. 2014;27(2):302-45.
46. Trampuz A, Piper KE, Jacobson MJ, Hanssen AD, Unni KK, Osmon DR, et al. Sonication of removed hip and knee prostheses for diagnosis of infection. New England Journal of Medicine. 2007;357(7):654-63.
47. Portillo ME, Salvado M, Trampuz A, Plasencia V, Rodriguez-Villasante M, Sorli L, et al. Sonication versus vortexing of implants for diagnosis of prosthetic joint infection. J Clin Microbiol. 2013;51 (2):591-4.
48. McLellan A, Phillips S, Thornalley P. Fluorimetric assay of D-lactate. Analytical biochemistry. 1992;206(1):12-6.
49. Team R. A language and environment for statistical computing. 2017. 2017.
50. Deirmengian C, Kardos K, Kilmartin P, Cameron A, Schiller K, Booth RE, et al. The alpha-defensin test for periprosthetic joint infection outperforms the leukocyte esterase test strip. Clinical Orthopaedics and Related Research®. 2015;473(1):198-203.
51. Parvizi J, Gehrke T. International Consensus Group on Periprosthetic Joint I (2014) Definition of periprosthetic joint infection. J Arthroplasty.29(7):1331.
52. Karbysheva S, Grigoricheva L, Golnik V, Popov S, Renz N, Trampuz A. Influence of retrieved hip-and knee-prosthesis biomaterials on microbial detection by sonication. European cells & materials. 2019;37:16-22.
53. MayeurC, Gratadoux J-J, Bridonneau C, Chegdani F, Larroque B, Kapel N, et al. Faecal D/L lactate ratio is a metabolic signature of microbiota imbalance in patients with short bowel syndrome. PLoS One. 2013;8(1):e54335.
54. Prestes AdS, dos Santos MM, Ecker A, Zanini D, Schetinger MRC, Rosemberg DB, et al. Evaluation of methylglyoxal toxicity in human erythrocytes, leukocytes and platelets. Toxicology mechanisms and methods. 2017;27(4):307-17.
56. Morawietz L, Tiddens O, Mueller M, Tohtz S, Gansukh T, Schroeder JH, et al. Twenty-three neutrophil granulocytes in 10 high-power fields is the best histopathological threshold to differentiate between aseptic and septic endoprosthesis loosening. Histopathology. 2009;54(7):847-53.
57. Matti Kaisti, Zhanna Boeva, Juho Koskinen, Sami Nieminen, Johan Bobacka, and Kalle Levon. Hand-Held Transistor Based Electrical and Multiplexed Chemical Sensing System. ACS Sens. 2016, 1, 1423-1431. DOI: 10.1021 /acssensors.6b00520.
58. Janata, J. Principles of Chemical Sensors, 2nd ed.; Springer Publishing Company, Incorporated, 2009.
59. Ronkainen, N. J.; Halsall, Η. B.; Heineman, W. R. Electro-chemical biosensors. Chern. Soc. Rev. 2010, 39, 1747-1763.
-
Claims (18)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. In vitro способ диагностики, прогнозирования, оценки риска, мониторинга, терапевтического ведения и/или терапевтического контроля инфекционного заболевания, включающий:a) обеспечение образца субъекта, проявляющего клинические симптомы и/или подозреваемого на наличие инфекции,b) определение уровня D-лактата в указанном образце,c) при этом уровень D-лактата указывает на наличие инфекционного заболевания, отличающийся тем, чтоd) уровень D-лактата в указанном образце определяют с помощью электрохимической сенсорной системы (биосенсора).
- 2. In vitro способ по п.1, где электрохимическая сенсорная система содержит потенциометрический сенсор, предпочтительно потенциометрический сенсор на основе транзистора.
- 3. In vitro способ по п.1 или 2, где электрохимическая сенсорная система содержит ионночувствительный полевой транзистор (ISFET).
- 4. In vitro способ по любому из пп.1-3, где электрохимическая сенсорная система содержит амперометрический сенсор.
- 5. In vitro способ по любому из пп.1-4, где электрохимическая сенсорная система содержит связывающую D-лактат молекулу, предпочтительно D-лактатдегидрогеназу (D-LDH).
- 6. In vitro способ по любому из пп.1-5, где электрохимическая сенсорная система содержит электрод определения (рабочий), предпочтительно включающий поверхность из углерода или золота.
- 7. In vitro способ по п.5, где связывающая D-лактат молекула иммобилизована на электроде определения.
- 8. In vitro способ по любому из пп.1-7, где электрохимическая сенсорная система содержит предпочтительно одноразовую тест-полоску (чип) для электрохимического определения уровня D-лактата, при этом тест-полоска содержит электрод определения с иммобилизованной связывающей D-лактат молекулой и предпочтительно также противоэлектрод и/или электрод сравнения.
- 9. In vitro способ по любому из пп.1-8, где используется одноразовая тест-полоска, которая помещается в предпочтительно питающееся от батареи переносное компактное устройство считывания для осуществления измерения D-лактата.
- 10. In vitro способ по любому из пп.1-9, где иммобилизация связывающей D-лактат молекулы, представляющей собой D-LDH, на поверхности электрода определения биосенсора достигается с помощью любого из адсорбции, ковалентного связывания, захвата, инкапсуляции, сшивания или взаимодействия тиол-золото, предпочтительно сшивания или взаимодействия тиол-золото.
- 11. In vitro способ по любому из пп.1-10, где система дает возможность параллельного определения уровней D-лактата в более чем одном образце.
- 12. In vitro способ по любому из пп.1-11, где инфекционное заболевание представляет собой микробную бактериальную и/или грибковую инфекцию, предпочтительно вызванную по меньшей мере одним инфекционным возбудителем, выбранным из группы, включающей Staphylococcus aureus, коагулазонегативные стафилококки, Streptococcus spp., Enterococcus spp., анаэробы, грамотрицательные бактерии и Candida spp.
- 13. In vitro способ по любому из пп.1-12, где инфекционное заболевание представляет собой инфекцию сустава, инфекцию протезного сустава (PJI), менингит, перитонит, инфекцию плевральной полости, инфекцию перикардиального пространства и/или инфекцию кровотока.
- 14. In vitro способ по любому из пп.1-13, где повышенный уровень D-лактата, определяемый с помощью электрохимической сенсорной системы в указанном образце по сравнению с соответствующим контролем, таким как образец от здорового субъекта, указывает на наличие инфекционного заболевания.
- 15. In vitro способ по любому из пп.1-14, где измерение тока или напряжения с помощью электрохимической сенсорной системы, соответствующее уровню D-лактата в указанном образце, равному или превышающему 1,2 ммоль/л, указывает на наличие инфекционного заболевания и/или указывает на необходимость начала или изменения лечения антибиотиком.
- 16. In vitro способ по любому из пп.1-15, где электрохимическую сенсорную систему калибруют с использованием одного или нескольких калибровочных образцов с определенной концентрацией Dлактата перед определением уровня D-лактата в указанном образце.
- 17. In vitro способ по любому из пп.1-16, где уровень D-лактата, определенный посредством электрохимической сенсорной системы, не зависит от количества эритроцитов и/или гемоглобина, присутствующих в указанном образце.
- 18. In vitro способ по любому из пп.1-17, где образец выбран из группы, включающей образец физиологической жидкости, образец гомогенизированной ткани, образец крови, образец сыворотки крови, образец плазмы, образец мочи, суставной аспират, образец синовиальной жидкости, образец асцита, образец перитонеальной жидкости, образец плевральной жидкости, образец перикардиальной жидкости и/или образец спинномозговой жидкости.-
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP19171761.0 | 2019-04-30 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA046276B1 true EA046276B1 (ru) | 2024-02-21 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220206009A1 (en) | Electrochemical d-lactate measurement for diagnosis and prognosis of an infectious disease | |
Wouthuyzen-Bakker et al. | Synovial calprotectin: an inexpensive biomarker to exclude a chronic prosthetic joint infection | |
Haahr et al. | Abnormal vaginal microbiota may be associated with poor reproductive outcomes: a prospective study in IVF patients | |
Puttaswamy et al. | A comprehensive review of the present and future antibiotic susceptibility testing (AST) systems | |
US10316348B2 (en) | Diagnostic system and process for rapid bacterial infection diagnosis | |
Yermak et al. | Performance of synovial fluid D-lactate for the diagnosis of periprosthetic joint infection: A prospective observational study | |
De Vecchi et al. | Leucocyte esterase, glucose and C-reactive protein in the diagnosis of prosthetic joint infections: a prospective study | |
Pruski et al. | Medical swab analysis using desorption electrospray ionization mass spectrometry: a noninvasive approach for mucosal diagnostics | |
Karbysheva et al. | Synovial fluid d-lactate—a novel pathogen-specific biomarker for the diagnosis of periprosthetic joint infection | |
US20150160210A1 (en) | Compositions and methods for assessing gastrointestinal health | |
Chao et al. | Urinary nitrite/nitrate ratio measured by isotope-dilution LC–MS/MS as a tool to screen for urinary tract infections | |
Misdraji et al. | Urinalysis: when—and when not—to order | |
US20040029205A1 (en) | Diagnostic system for differentiating sputum from saliva | |
EA046276B1 (ru) | Электрохимическое измерение d-лактата для диагностики и прогнозирования инфекционного заболевания | |
Sharma et al. | Effect of different anticoagulants on HBA1C estimation and its stability | |
EP4357778A1 (en) | Treatment of microbial infections diagnosed using the biomarker d-lactate | |
Sun et al. | Amino acid profiling as a screening and prognostic biomarker in active tuberculosis patients | |
Ebid et al. | The role of procalcitonin as an early biomarker in diagnosis of sepsis | |
El-Shimy et al. | Serum neopterin level in cases of pulmonary tuberculosis and pneumonia | |
Akinjogunla et al. | Asymptomatic Candiduria among Type 1 and 2 Diabetes Mellitus Patients: Risk and Sociodemographic Factors, Prevalence, Virulence Markers and Antifungal Susceptibility | |
Shrestha et al. | In-vitro evaluation of biofilm and hemolysis activity of candida albicans isolated from oral cavity | |
Kakars | Clinical, Molecular Biological, and Microbiological Integrated Investigation in the Case of Paediatric Acute Complicated and Uncomplicated Appendicitis. Doctoral Thesis | |
KR102096662B1 (ko) | 아시네토박터 바우마니 유사 그람음성세균 선별검사용 시약 및 이를 이용한 아시네토박터 바우마니 유사 그람음성세균 선별검사방법 | |
CN108303545A (zh) | 肺结核病强化治疗后疗效评价和预后评估试剂盒及其用途 | |
Abu Shabana et al. | Presepsin as a Diagnostic Marker in Central Line Associated Blood Stream Infection in Intensive Care Unit Patients |