EA045780B1 - САМОРЕГУЛИРУЕМЫЕ ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ AAV ДЛЯ БЕЗОПАСНОЙ ЭКСПРЕССИИ MeCP2 ПРИ СИНДРОМЕ PETTA - Google Patents
САМОРЕГУЛИРУЕМЫЕ ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ AAV ДЛЯ БЕЗОПАСНОЙ ЭКСПРЕССИИ MeCP2 ПРИ СИНДРОМЕ PETTA Download PDFInfo
- Publication number
- EA045780B1 EA045780B1 EA201992882 EA045780B1 EA 045780 B1 EA045780 B1 EA 045780B1 EA 201992882 EA201992882 EA 201992882 EA 045780 B1 EA045780 B1 EA 045780B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- mir
- hsa
- mecp2
- nucleic acid
- expression
- Prior art date
Links
- 108010072388 Methyl-CpG-Binding Protein 2 Proteins 0.000 title claims description 136
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims description 135
- 102000006890 Methyl-CpG-Binding Protein 2 Human genes 0.000 title claims description 126
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 77
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 title 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 109
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 108
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 87
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 69
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 69
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 34
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 34
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 30
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 30
- 108091028080 MiR-132 Proteins 0.000 claims description 27
- 208000006289 Rett Syndrome Diseases 0.000 claims description 25
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 24
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 24
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 22
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 21
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 18
- 108091007780 MiR-122 Proteins 0.000 claims description 18
- 108091051828 miR-122 stem-loop Proteins 0.000 claims description 16
- 108091028606 miR-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 14
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 13
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000004777 loss-of-function mutation Effects 0.000 claims description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 10
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 claims description 8
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 8
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims description 7
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims description 7
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 6
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 claims description 6
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 claims description 6
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 claims description 5
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 claims description 5
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 claims description 4
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 claims description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 4
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims description 3
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 3
- 101001033726 Homo sapiens Methyl-CpG-binding protein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000049101 human MECP2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 claims 2
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 109
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 79
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 77
- -1 RNA transcript Chemical class 0.000 description 62
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 53
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 38
- 208000002267 Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis Diseases 0.000 description 36
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 18
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 14
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 14
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 13
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 13
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 11
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 11
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 8
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 6
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 5
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 4
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 4
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 4
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710087964 Forkhead box protein G1 Proteins 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 3
- 108091070377 Homo sapiens miR-93 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 101150083522 MECP2 gene Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000003618 cortical neuron Anatomy 0.000 description 3
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102100033647 Activity-regulated cytoskeleton-associated protein Human genes 0.000 description 2
- 208000031277 Amaurotic familial idiocy Diseases 0.000 description 2
- 102100032948 Aspartoacylase Human genes 0.000 description 2
- 102100025218 B-cell differentiation antigen CD72 Human genes 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 2
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- 101000934359 Homo sapiens B-cell differentiation antigen CD72 Proteins 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 2
- 101001092197 Homo sapiens RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 2
- 108091070514 Homo sapiens let-7b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070511 Homo sapiens let-7c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070512 Homo sapiens let-7d stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069046 Homo sapiens let-7g stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068853 Homo sapiens miR-100 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069016 Homo sapiens miR-122 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091060466 Homo sapiens miR-1224 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091044923 Homo sapiens miR-1226 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091044953 Homo sapiens miR-1228 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069004 Homo sapiens miR-125a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069085 Homo sapiens miR-126 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069024 Homo sapiens miR-132 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069102 Homo sapiens miR-136 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067617 Homo sapiens miR-139 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068991 Homo sapiens miR-141 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068993 Homo sapiens miR-142 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068992 Homo sapiens miR-143 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068999 Homo sapiens miR-144 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069002 Homo sapiens miR-145 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092238 Homo sapiens miR-146b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069090 Homo sapiens miR-149 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069088 Homo sapiens miR-150 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068955 Homo sapiens miR-154 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091065981 Homo sapiens miR-155 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070489 Homo sapiens miR-17 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067627 Homo sapiens miR-182 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067605 Homo sapiens miR-183 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068954 Homo sapiens miR-185 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068956 Homo sapiens miR-186 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067635 Homo sapiens miR-187 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069033 Homo sapiens miR-188 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068998 Homo sapiens miR-191 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067995 Homo sapiens miR-192 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069034 Homo sapiens miR-193a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068960 Homo sapiens miR-195 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067692 Homo sapiens miR-199a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067467 Homo sapiens miR-199a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092296 Homo sapiens miR-202 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070493 Homo sapiens miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067580 Homo sapiens miR-214 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070494 Homo sapiens miR-22 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067572 Homo sapiens miR-221 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067573 Homo sapiens miR-222 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069527 Homo sapiens miR-223 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070371 Homo sapiens miR-25 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070395 Homo sapiens miR-31 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070383 Homo sapiens miR-32 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067007 Homo sapiens miR-324 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091066902 Homo sapiens miR-330 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091066896 Homo sapiens miR-331 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091066985 Homo sapiens miR-335 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067013 Homo sapiens miR-337 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067010 Homo sapiens miR-338 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091066993 Homo sapiens miR-339 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091066899 Homo sapiens miR-340 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067008 Homo sapiens miR-342 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091065456 Homo sapiens miR-34c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067258 Homo sapiens miR-361 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067259 Homo sapiens miR-362 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067286 Homo sapiens miR-363 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067254 Homo sapiens miR-367 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067253 Homo sapiens miR-369 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067564 Homo sapiens miR-373 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067243 Homo sapiens miR-377 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067552 Homo sapiens miR-379 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067557 Homo sapiens miR-380 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061676 Homo sapiens miR-411 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032109 Homo sapiens miR-423 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032108 Homo sapiens miR-424 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032103 Homo sapiens miR-425 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032638 Homo sapiens miR-431 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092306 Homo sapiens miR-432 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086503 Homo sapiens miR-450b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032542 Homo sapiens miR-452 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091062137 Homo sapiens miR-454 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091053841 Homo sapiens miR-483 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091053855 Homo sapiens miR-485 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092234 Homo sapiens miR-488 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092305 Homo sapiens miR-493 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092303 Homo sapiens miR-497 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064365 Homo sapiens miR-505 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064366 Homo sapiens miR-513a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064370 Homo sapiens miR-513a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064511 Homo sapiens miR-516a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064512 Homo sapiens miR-516a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064420 Homo sapiens miR-518a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064422 Homo sapiens miR-518a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064417 Homo sapiens miR-518d stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092281 Homo sapiens miR-520a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064446 Homo sapiens miR-520d stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063565 Homo sapiens miR-532 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086504 Homo sapiens miR-541 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063807 Homo sapiens miR-545 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061687 Homo sapiens miR-548a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063777 Homo sapiens miR-548b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061641 Homo sapiens miR-548c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061614 Homo sapiens miR-548d-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061568 Homo sapiens miR-548d-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063772 Homo sapiens miR-589 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061599 Homo sapiens miR-593 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061779 Homo sapiens miR-616 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061644 Homo sapiens miR-624 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061649 Homo sapiens miR-625 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091061631 Homo sapiens miR-629 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086460 Homo sapiens miR-708 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086454 Homo sapiens miR-744 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086647 Homo sapiens miR-877 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086506 Homo sapiens miR-888 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070376 Homo sapiens miR-96 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 2
- 102100033448 Lysosomal alpha-glucosidase Human genes 0.000 description 2
- 108091007773 MIR100 Proteins 0.000 description 2
- 108091008065 MIR21 Proteins 0.000 description 2
- 108091007685 MIR541 Proteins 0.000 description 2
- 108091007772 MIRLET7C Proteins 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 108091046841 MiR-150 Proteins 0.000 description 2
- 108091033773 MiR-155 Proteins 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- 108091028049 Mir-221 microRNA Proteins 0.000 description 2
- 108091062140 Mir-223 Proteins 0.000 description 2
- 108091060585 Mir-31 Proteins 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 2
- 208000002537 Neuronal Ceroid-Lipofuscinoses Diseases 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 102100026844 Pancreatic prohormone Human genes 0.000 description 2
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 2
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035530 RNA binding protein fox-1 homolog 3 Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 2
- 102000002248 Thyroxine-Binding Globulin Human genes 0.000 description 2
- 108010000259 Thyroxine-Binding Globulin Proteins 0.000 description 2
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 2
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CBOQJANXLMLOSS-UHFFFAOYSA-N ethyl vanillin Chemical compound CCOC1=CC(C=O)=CC=C1O CBOQJANXLMLOSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000009097 homeostatic mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940068935 insulin-like growth factor 2 Drugs 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 208000017476 juvenile neuronal ceroid lipofuscinosis Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 108091064157 miR-106a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091044988 miR-125a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049513 miR-125a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091040046 miR-125a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032320 miR-146 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091024530 miR-146a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091074057 miR-16-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091091751 miR-17 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069239 miR-17-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091041042 miR-18 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091031103 miR-181a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091046591 miR-181a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049627 miR-181a-5 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091062221 miR-18a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091050874 miR-19a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086850 miR-19a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091088468 miR-19a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028067 miR-19b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049679 miR-20a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091062762 miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091041631 miR-21-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091044442 miR-21-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091088477 miR-29a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029716 miR-29a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092089 miR-29a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091066559 miR-29a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063344 miR-30b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029119 miR-34a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091030938 miR-424 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028159 miR-92a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 201000007607 neuronal ceroid lipofuscinosis 3 Diseases 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 210000002243 primary neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000440 toxicity profile Toxicity 0.000 description 2
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 2
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 2
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical group NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102100022146 Arylsulfatase A Human genes 0.000 description 1
- 102100031491 Arylsulfatase B Human genes 0.000 description 1
- 108700023155 Aspartoacylases Proteins 0.000 description 1
- 108010023546 Aspartylglucosylaminase Proteins 0.000 description 1
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 description 1
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 101710124976 Beta-hexosaminidase A Proteins 0.000 description 1
- 101710124978 Beta-hexosaminidase B Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022526 Canavan disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010059081 Cathepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000005572 Cathepsin A Human genes 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108010036867 Cerebroside-Sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 208000036166 Classic glucose transporter type 1 deficiency syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102100034746 Cyclin-dependent kinase-like 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100027816 Cytotoxic and regulatory T-cell molecule Human genes 0.000 description 1
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N Ecdysone Natural products O=C1[C@H]2[C@@](C)([C@@H]3C([C@@]4(O)[C@@](C)([C@H]([C@H]([C@@H](O)CCC(O)(C)C)C)CC4)CC3)=C1)C[C@H](O)[C@H](O)C2 UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 101150026630 FOXG1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000033331 FOXG1 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000024720 Fabry Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 102100020871 Forkhead box protein G1 Human genes 0.000 description 1
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 201000008892 GM1 Gangliosidosis Diseases 0.000 description 1
- 102100024405 GPI-linked NAD(P)(+)-arginine ADP-ribosyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100028496 Galactocerebrosidase Human genes 0.000 description 1
- 208000017462 Galactosialidosis Diseases 0.000 description 1
- 108010042681 Galactosylceramidase Proteins 0.000 description 1
- 102100021260 Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010055 Globoid Cell Leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 108700006771 Glut1 Deficiency Syndrome Proteins 0.000 description 1
- 208000032007 Glycogen storage disease due to acid maltase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010053185 Glycogen storage disease type II Diseases 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001080179 Homo sapiens 60S ribosomal protein L26 Proteins 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000945692 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase-like 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 1
- 101000981252 Homo sapiens GPI-linked NAD(P)(+)-arginine ADP-ribosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000894906 Homo sapiens Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000979333 Homo sapiens Neurofilament light polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 101000574648 Homo sapiens Retinoid-inducible serine carboxypeptidase Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108091070508 Homo sapiens let-7e stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070526 Homo sapiens let-7f-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069047 Homo sapiens let-7i stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068928 Homo sapiens miR-107 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045832 Homo sapiens miR-1178 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045833 Homo sapiens miR-1179 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045823 Homo sapiens miR-1180 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045825 Homo sapiens miR-1181 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045827 Homo sapiens miR-1182 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045829 Homo sapiens miR-1183 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045820 Homo sapiens miR-1184-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034012 Homo sapiens miR-1184-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034015 Homo sapiens miR-1184-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045229 Homo sapiens miR-1197 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044910 Homo sapiens miR-1200 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044902 Homo sapiens miR-1202 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044911 Homo sapiens miR-1203 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044907 Homo sapiens miR-1204 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044908 Homo sapiens miR-1205 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044909 Homo sapiens miR-1206 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044803 Homo sapiens miR-1207 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044804 Homo sapiens miR-1208 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044926 Homo sapiens miR-1227 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044954 Homo sapiens miR-1229 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044940 Homo sapiens miR-1231 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044903 Homo sapiens miR-1234 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044936 Homo sapiens miR-1236 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044937 Homo sapiens miR-1237 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044938 Homo sapiens miR-1238 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044971 Homo sapiens miR-1243 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044979 Homo sapiens miR-1244-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034013 Homo sapiens miR-1244-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034014 Homo sapiens miR-1244-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045543 Homo sapiens miR-1244-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044881 Homo sapiens miR-1246 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044882 Homo sapiens miR-1247 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044695 Homo sapiens miR-1248 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044697 Homo sapiens miR-1249 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044886 Homo sapiens miR-1250 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044878 Homo sapiens miR-1251 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044588 Homo sapiens miR-1252 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044693 Homo sapiens miR-1253 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044694 Homo sapiens miR-1255a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044870 Homo sapiens miR-1256 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044871 Homo sapiens miR-1257 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044872 Homo sapiens miR-1258 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069006 Homo sapiens miR-125b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069087 Homo sapiens miR-125b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044875 Homo sapiens miR-1261 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044868 Homo sapiens miR-1262 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044860 Homo sapiens miR-1263 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060475 Homo sapiens miR-1264 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044761 Homo sapiens miR-1265 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044767 Homo sapiens miR-1266 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044758 Homo sapiens miR-1267 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069086 Homo sapiens miR-127 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044764 Homo sapiens miR-1270 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062150 Homo sapiens miR-1271 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044765 Homo sapiens miR-1272 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044777 Homo sapiens miR-1275 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044768 Homo sapiens miR-1276 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044774 Homo sapiens miR-1277 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044612 Homo sapiens miR-1278 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044613 Homo sapiens miR-1279 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044608 Homo sapiens miR-1281 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044609 Homo sapiens miR-1282 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062097 Homo sapiens miR-1283-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044589 Homo sapiens miR-1283-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044584 Homo sapiens miR-1284 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044829 Homo sapiens miR-1286 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044798 Homo sapiens miR-1287 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044585 Homo sapiens miR-1288 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067642 Homo sapiens miR-129-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069093 Homo sapiens miR-129-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044796 Homo sapiens miR-1290 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044797 Homo sapiens miR-1291 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044586 Homo sapiens miR-1292 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044790 Homo sapiens miR-1293 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044792 Homo sapiens miR-1294 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060453 Homo sapiens miR-1296 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044816 Homo sapiens miR-1297 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061957 Homo sapiens miR-1298 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044817 Homo sapiens miR-1299 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062151 Homo sapiens miR-1301 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044964 Homo sapiens miR-1302-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091033925 Homo sapiens miR-1302-10 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091033832 Homo sapiens miR-1302-11 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044965 Homo sapiens miR-1302-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044966 Homo sapiens miR-1302-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044969 Homo sapiens miR-1302-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044970 Homo sapiens miR-1302-5 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044961 Homo sapiens miR-1302-6 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044962 Homo sapiens miR-1302-7 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044968 Homo sapiens miR-1302-8 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091033923 Homo sapiens miR-1302-9 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044974 Homo sapiens miR-1303 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044975 Homo sapiens miR-1304 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044980 Homo sapiens miR-1305 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044603 Homo sapiens miR-1306 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044678 Homo sapiens miR-1307 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045232 Homo sapiens miR-1321 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045233 Homo sapiens miR-1322 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060456 Homo sapiens miR-1323 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045230 Homo sapiens miR-1324 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091066990 Homo sapiens miR-133b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069094 Homo sapiens miR-134 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068985 Homo sapiens miR-137 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069092 Homo sapiens miR-138-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069015 Homo sapiens miR-138-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069017 Homo sapiens miR-140 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068997 Homo sapiens miR-152 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070491 Homo sapiens miR-16-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068927 Homo sapiens miR-16-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067618 Homo sapiens miR-181a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078084 Homo sapiens miR-1825 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078047 Homo sapiens miR-1827 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068958 Homo sapiens miR-184 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067982 Homo sapiens miR-197 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067677 Homo sapiens miR-198 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067484 Homo sapiens miR-199b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070495 Homo sapiens miR-19b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067470 Homo sapiens miR-204 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067482 Homo sapiens miR-205 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069013 Homo sapiens miR-206 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067468 Homo sapiens miR-210 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067471 Homo sapiens miR-211 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067466 Homo sapiens miR-212 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067578 Homo sapiens miR-215 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067465 Homo sapiens miR-217 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067464 Homo sapiens miR-218-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067463 Homo sapiens miR-218-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069517 Homo sapiens miR-224 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070373 Homo sapiens miR-24-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070374 Homo sapiens miR-24-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065428 Homo sapiens miR-26a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070397 Homo sapiens miR-28 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065453 Homo sapiens miR-296 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086975 Homo sapiens miR-297 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086636 Homo sapiens miR-298 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065449 Homo sapiens miR-299 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068837 Homo sapiens miR-29b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068845 Homo sapiens miR-29b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086634 Homo sapiens miR-300 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044772 Homo sapiens miR-302e stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044773 Homo sapiens miR-302f stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067641 Homo sapiens miR-30c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060457 Homo sapiens miR-320b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062096 Homo sapiens miR-320b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060471 Homo sapiens miR-320c-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078079 Homo sapiens miR-320c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078081 Homo sapiens miR-320d-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078082 Homo sapiens miR-320d-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091066988 Homo sapiens miR-325 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067011 Homo sapiens miR-326 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067005 Homo sapiens miR-328 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091066987 Homo sapiens miR-345 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091066970 Homo sapiens miR-346 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067267 Homo sapiens miR-370 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067570 Homo sapiens miR-372 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067535 Homo sapiens miR-375 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067554 Homo sapiens miR-381 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067543 Homo sapiens miR-382 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067545 Homo sapiens miR-383 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091033149 Homo sapiens miR-384 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032537 Homo sapiens miR-409 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053847 Homo sapiens miR-410 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053842 Homo sapiens miR-412 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061665 Homo sapiens miR-421 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032930 Homo sapiens miR-429 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032636 Homo sapiens miR-433 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032861 Homo sapiens miR-448 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032929 Homo sapiens miR-449a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063813 Homo sapiens miR-455 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053854 Homo sapiens miR-484 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053840 Homo sapiens miR-486 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091059229 Homo sapiens miR-486-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092227 Homo sapiens miR-489 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092228 Homo sapiens miR-490 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092229 Homo sapiens miR-491 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092304 Homo sapiens miR-492 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092307 Homo sapiens miR-494 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092297 Homo sapiens miR-495 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092282 Homo sapiens miR-498 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064508 Homo sapiens miR-501 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064509 Homo sapiens miR-502 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064515 Homo sapiens miR-503 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064516 Homo sapiens miR-504 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064363 Homo sapiens miR-506 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064364 Homo sapiens miR-507 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064362 Homo sapiens miR-508 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064367 Homo sapiens miR-509-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086508 Homo sapiens miR-509-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087072 Homo sapiens miR-509-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064371 Homo sapiens miR-510 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092230 Homo sapiens miR-511 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092274 Homo sapiens miR-512-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092275 Homo sapiens miR-512-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092284 Homo sapiens miR-515-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092278 Homo sapiens miR-515-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064474 Homo sapiens miR-519b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092280 Homo sapiens miR-519c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064467 Homo sapiens miR-520c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064423 Homo sapiens miR-520h stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064429 Homo sapiens miR-521-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064455 Homo sapiens miR-521-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064426 Homo sapiens miR-522 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064465 Homo sapiens miR-523 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064441 Homo sapiens miR-524 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064471 Homo sapiens miR-525 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063810 Homo sapiens miR-539 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061666 Homo sapiens miR-542 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086476 Homo sapiens miR-543 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063773 Homo sapiens miR-548a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063768 Homo sapiens miR-548a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044615 Homo sapiens miR-548i-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044616 Homo sapiens miR-548i-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044617 Homo sapiens miR-548i-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044611 Homo sapiens miR-548i-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044789 Homo sapiens miR-548k stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044760 Homo sapiens miR-548m stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044614 Homo sapiens miR-548p stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063755 Homo sapiens miR-552 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063758 Homo sapiens miR-553 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063756 Homo sapiens miR-554 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063741 Homo sapiens miR-555 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063734 Homo sapiens miR-556 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063735 Homo sapiens miR-557 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063736 Homo sapiens miR-558 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063737 Homo sapiens miR-559 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063743 Homo sapiens miR-561 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063744 Homo sapiens miR-562 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063748 Homo sapiens miR-563 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063727 Homo sapiens miR-564 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063731 Homo sapiens miR-567 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063725 Homo sapiens miR-568 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063732 Homo sapiens miR-569 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063733 Homo sapiens miR-570 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063730 Homo sapiens miR-571 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063726 Homo sapiens miR-572 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063804 Homo sapiens miR-573 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063808 Homo sapiens miR-574 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063720 Homo sapiens miR-575 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063721 Homo sapiens miR-576 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063716 Homo sapiens miR-577 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063717 Homo sapiens miR-578 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063718 Homo sapiens miR-579 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063719 Homo sapiens miR-580 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063722 Homo sapiens miR-581 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063723 Homo sapiens miR-582 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063764 Homo sapiens miR-583 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063765 Homo sapiens miR-584 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063769 Homo sapiens miR-585 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063771 Homo sapiens miR-586 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063776 Homo sapiens miR-587 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063767 Homo sapiens miR-588 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061594 Homo sapiens miR-590 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061591 Homo sapiens miR-591 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061592 Homo sapiens miR-592 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061597 Homo sapiens miR-595 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061598 Homo sapiens miR-596 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061785 Homo sapiens miR-597 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061783 Homo sapiens miR-598 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061784 Homo sapiens miR-599 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061688 Homo sapiens miR-600 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061683 Homo sapiens miR-601 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061684 Homo sapiens miR-602 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061789 Homo sapiens miR-603 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061787 Homo sapiens miR-604 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061689 Homo sapiens miR-605 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061690 Homo sapiens miR-606 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061774 Homo sapiens miR-607 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061775 Homo sapiens miR-608 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061772 Homo sapiens miR-609 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061776 Homo sapiens miR-610 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061777 Homo sapiens miR-611 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061780 Homo sapiens miR-612 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061781 Homo sapiens miR-613 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061773 Homo sapiens miR-614 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061778 Homo sapiens miR-615 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061642 Homo sapiens miR-617 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061645 Homo sapiens miR-618 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061646 Homo sapiens miR-619 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061650 Homo sapiens miR-620 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061647 Homo sapiens miR-621 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061648 Homo sapiens miR-622 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061653 Homo sapiens miR-623 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061633 Homo sapiens miR-626 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061621 Homo sapiens miR-627 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061622 Homo sapiens miR-628 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061636 Homo sapiens miR-630 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061639 Homo sapiens miR-631 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061637 Homo sapiens miR-632 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061638 Homo sapiens miR-633 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061634 Homo sapiens miR-634 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061626 Homo sapiens miR-635 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061623 Homo sapiens miR-636 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061618 Homo sapiens miR-637 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061613 Homo sapiens miR-638 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061611 Homo sapiens miR-639 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061625 Homo sapiens miR-640 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061624 Homo sapiens miR-641 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061630 Homo sapiens miR-643 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061604 Homo sapiens miR-645 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061601 Homo sapiens miR-646 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061602 Homo sapiens miR-647 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061609 Homo sapiens miR-648 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061610 Homo sapiens miR-649 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061608 Homo sapiens miR-650 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061603 Homo sapiens miR-651 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061616 Homo sapiens miR-652 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061679 Homo sapiens miR-653 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061677 Homo sapiens miR-654 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061680 Homo sapiens miR-655 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061564 Homo sapiens miR-656 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061671 Homo sapiens miR-657 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061674 Homo sapiens miR-658 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061675 Homo sapiens miR-659 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061672 Homo sapiens miR-660 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061615 Homo sapiens miR-661 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061570 Homo sapiens miR-662 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044906 Homo sapiens miR-663b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086478 Homo sapiens miR-665 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060464 Homo sapiens miR-668 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060463 Homo sapiens miR-671 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086709 Homo sapiens miR-675 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067625 Homo sapiens miR-7-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067630 Homo sapiens miR-7-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060481 Homo sapiens miR-758 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086475 Homo sapiens miR-760 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087855 Homo sapiens miR-765 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062099 Homo sapiens miR-766 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060465 Homo sapiens miR-767 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062100 Homo sapiens miR-769 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087853 Homo sapiens miR-770 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061966 Homo sapiens miR-802 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086477 Homo sapiens miR-873 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086502 Homo sapiens miR-874 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086462 Homo sapiens miR-875 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086461 Homo sapiens miR-876 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086652 Homo sapiens miR-885 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086472 Homo sapiens miR-887 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086467 Homo sapiens miR-889 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086511 Homo sapiens miR-890 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086505 Homo sapiens miR-892b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087068 Homo sapiens miR-920 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087065 Homo sapiens miR-921 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087064 Homo sapiens miR-922 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087063 Homo sapiens miR-924 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070381 Homo sapiens miR-92a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087086 Homo sapiens miR-933 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087085 Homo sapiens miR-934 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087084 Homo sapiens miR-935 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087083 Homo sapiens miR-936 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087082 Homo sapiens miR-937 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087105 Homo sapiens miR-939 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087110 Homo sapiens miR-940 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087109 Homo sapiens miR-941-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087114 Homo sapiens miR-941-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087113 Homo sapiens miR-941-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087111 Homo sapiens miR-941-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045521 Homo sapiens miR-941-5 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087115 Homo sapiens miR-942 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087118 Homo sapiens miR-943 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091087117 Homo sapiens miR-944 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070375 Homo sapiens miR-95 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068856 Homo sapiens miR-98 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 102000004627 Iduronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010003381 Iduronidase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102000016921 Integrin-Binding Sialoprotein Human genes 0.000 description 1
- 108010028750 Integrin-Binding Sialoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 1
- 102100020873 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000028226 Krabbe disease Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 101150022930 M17 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091007774 MIR107 Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 206010027374 Mental impairment Diseases 0.000 description 1
- 201000011442 Metachromatic leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000044689 Methyl-CpG binding protein MeCP2 Human genes 0.000 description 1
- 108700036642 Methyl-CpG binding protein MeCP2 Proteins 0.000 description 1
- 108091028066 Mir-126 Proteins 0.000 description 1
- 208000002678 Mucopolysaccharidoses Diseases 0.000 description 1
- 206010056886 Mucopolysaccharidosis I Diseases 0.000 description 1
- 206010056893 Mucopolysaccharidosis VII Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100121460 Mus musculus Gcsam gene Proteins 0.000 description 1
- 101100351020 Mus musculus Pax5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100021003 N(4)-(beta-N-acetylglucosaminyl)-L-asparaginase Human genes 0.000 description 1
- 108010027520 N-Acetylgalactosamine-4-Sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004230 Neurotrophin 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000003683 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000099 Neurotrophin-4 Proteins 0.000 description 1
- 208000014060 Niemann-Pick disease Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 1
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 108050007154 PWWP domain-containing DNA repair factor 3A Proteins 0.000 description 1
- 102100034640 PWWP domain-containing DNA repair factor 3A Human genes 0.000 description 1
- 102100037504 Paired box protein Pax-5 Human genes 0.000 description 1
- 101710149067 Paired box protein Pax-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000005327 Palmitoyl protein thioesterase Human genes 0.000 description 1
- 108020002591 Palmitoyl protein thioesterase Proteins 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 102100025483 Retinoid-inducible serine carboxypeptidase Human genes 0.000 description 1
- 101710111169 Retinoschisin Proteins 0.000 description 1
- 102100039507 Retinoschisin Human genes 0.000 description 1
- 208000021811 Sandhoff disease Diseases 0.000 description 1
- 101710184528 Scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 201000001828 Sly syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000012167 Small RNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 108010061312 Sphingomyelin Phosphodiesterase Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 1
- 102000017299 Synapsin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108050005241 Synapsin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000022292 Tay-Sachs disease Diseases 0.000 description 1
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 1
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 108020004417 Untranslated RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000039634 Untranslated RNA Human genes 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 101150004676 VGF gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010051583 Ventricular Myosins Proteins 0.000 description 1
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 108700029631 X-Linked Genes Proteins 0.000 description 1
- 101100351021 Xenopus laevis pax5 gene Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 108010070626 acid beta-galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000010126 acid sphingomyelin phosphodiesterase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012637 allosteric effector Substances 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N alpha-Ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C(O)CCC(C)(C)O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000019199 alpha-Mannosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010012864 alpha-Mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006707 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087408 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 201000008333 alpha-mannosidosis Diseases 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 208000008784 apnea Diseases 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000010455 autoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 108010072917 class-I restricted T cell-associated molecule Proteins 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000001609 comparable effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N ecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@H]([C@H](O)CCC(C)(C)O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N 0.000 description 1
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 208000026663 encephalopathy due to GLUT1 deficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 229940073505 ethyl vanillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 201000008049 fucosidosis Diseases 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 208000017533 genetic nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 201000004502 glycogen storage disease II Diseases 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000000370 laser capture micro-dissection Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 108091042844 let-7i stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 108010092763 macromolecular insoluble cold globulin Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108091091360 miR-125b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091079658 miR-142-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091071830 miR-142-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089860 miR-148 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037426 miR-152 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091051988 miR-216b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061917 miR-221 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063489 miR-221-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091055391 miR-221-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091031076 miR-221-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080321 miR-222 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091007432 miR-29b Proteins 0.000 description 1
- 108091047189 miR-29c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091054490 miR-29c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091050195 miR-302b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047175 miR-374a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044445 miR-518f stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091036604 miR-518f-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080798 miR-518f-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091057017 miR-551b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010028093 mucopolysaccharidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000000690 mucopolysaccharidosis VI Diseases 0.000 description 1
- 208000025919 mucopolysaccharidosis type 7 Diseases 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008271 nervous system development Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 229940032018 neurotrophin 3 Drugs 0.000 description 1
- 229940097998 neurotrophin 4 Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 238000012346 open field test Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940090668 parachlorophenol Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000771 poly (alkylcyanoacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003997 social interaction Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229940044609 sulfur dioxide Drugs 0.000 description 1
- 235000010269 sulphur dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000027912 synapse maturation Effects 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000011820 transgenic animal model Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 201000011296 tyrosinemia Diseases 0.000 description 1
- 239000011882 ultra-fine particle Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Description
Родственные заявки
Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с §119(е) раздела 35 Кодекса законов США по дате подачи предварительной заявки на патент США с серийным номером 62/516060, поданной 6 июня 2017 г., полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
Синдром Ретта представляет собой неврологическое заболевание, вызванное мутациями с потерей функции в гене МеСР2. Наблюдали, что восстановление экспрессии МеСР2 в постнатальный период является эффективным в обращении развития некоторых из фенотипов, присутствующих у МеСР2 мышей, но остаются вопросы в отношении безопасности. Кроме того, в исследованиях, оценивающих терапевтическую эффективность определенных векторов с МеСР2, кодирующих изоформу e1, наблюдали только частичное избавление от фенотипов, характерных для синдрома Ретта. Эти исследования, как правило, сосредоточивались на внутрисосудистой (IV) или интрацеребровентрикулярной (ICV) доставке в неонатальный период и в некоторых случаях столкнулись с летальной печеночной токсичностью и поджатием задней конечности.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
Аспекты настоящего раскрытия относятся к открытию, что определенные комбинации регуляторных элементов для miRNA (MRE), например, сайтов связывания miRNA, ассоциированных с петлями отрицательной обратной связи для экспрессии гена, и сайтов связывания miRNA, которые нарушают нацеливание экспрессии трансгена на нецелевые ткани, обеспечивают возможность настраиваемой экспрессии трансгена в пределах узкого диапазона, совместимого с нормальным функционированием белка и избежанием нецелевой токсичности трансгена. Вследствие этого в соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции и способы, описанные в настоящем раскрытии, являются пригодными для лечения заболеваний и нарушений, ассоциированных с мутациями с потерей функции, например синдрома Ретта, который ассоциирован с мутациями с потерей функции в гене МЕСР2.
Соответственно в соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к способу конструирования трансгена, при этом способ предусматривает выбор первого гена, кодирующего первый продукт в клетке; выбор второго гена, кодирующего второй продукт в клетке; определение того, что экспрессия второго продукта положительно регулируется первым продуктом в клетке; выбор miRNA; определение того, что экспрессия miRNA положительно регулируется вторым продуктом в клетке; и конструирование трансгена для экспрессии в клетке транскрипта, имеющего кодирующий участок, который кодирует первый продукт, и имеющего один или несколько сайтов связывания для miRNA.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к способу конструирования трансгена, при этом способ предусматривает выбор первого гена, кодирующего первый продукт в клетке; выбор miRNA, экспрессия которой положительно регулируется первым продуктом в клетке; и конструирование трансгена, который экспрессирует транскрипт, имеющий кодирующий участок, который кодирует первый продукт, и 3'-некодирующий участок, содержащий один или несколько сайтов связывания для miRNA.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к способу конструирования трансгена, при этом способ предусматривает выбор первого гена, кодирующего первый продукт в клетке; выбор второго гена, кодирующего второй продукт в клетке; определение того, что экспрессия второго продукта положительно регулируется первым продуктом в клетке; выбор miRNA; определение того, что экспрессия miRNA положительно регулируется вторым продуктом в клетке; и конструирование трансгена для экспрессии в клетке транскрипта, имеющего кодирующий участок, который кодирует первый продукт, и 3'-некодирующий участок, содержащий один или несколько сайтов связывания для miRNA.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, кодирующей транскрипт, имеющий i) кодирующий участок, который кодирует белок, и ii) два или больше сайтов связывания miRNA, при этом два или больше сайтов связывания miRNA содержат по меньшей мере один первый сайт связывания miRNA, специфический в отношении первой miRNA, которая положительно регулируется экспрессией белка в клетке целевой ткани; и по меньшей мере один второй сайт связывания miRNA, специфический в отношении второй miRNA, которая экспрессируется независимо от экспрессии белка в клетках нецелевой ткани.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, кодирующей транскрипт, имеющий кодирующий участок, который кодирует белок человеческого МеСР2 или его функциональный фрагмент, и 3'-некодирующий участок, содержащий один или несколько сайтов связывания miRNA, при этом один или несколько сайтов связывания miRNA содержат по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая отрицательно регулирует экспрессию транскрипта; и по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая ингибирует экспрессию транскрипта в нецелевой ткани.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, кодирующей транскрипт, имеющий кодирующий участок, который кодирует человеческий МеСР2 или его функциональный фрагмент, и 3'-некодирующий участок, содержащий один или несколько сайтов связывания miRNA, при этом транскрипт фланкирован инвертированными концевыми
- 1 045780 повторами (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ITR AAV представляет собой ITR AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 или AAV6. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ITR AAV представляют собой ITR AAV2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ITR представляют собой искусственные последовательности, которые заменяют функцию ITR, например, которые раскрыты в международной заявке WO/2016/172008.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к вирусному вектору, содержащему рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая описана в настоящем раскрытии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусный вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), аденовирусный вектор, лентивирусный вектор, вектор на основе вируса герпеса или вектор на основе бакуловируса.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к рекомбинантному аденоассоциированному вирусу (rAAV), содержащему рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая описана в настоящем раскрытии; по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) и белок капсида.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к вектору на основе рекомбинантного AAV (rAAV) для саморегулируемой экспрессии белка, при этом вектор на основе rAAV содержит нуклеиновую кислоту, сконструированную для экспрессии в клетке целевой ткани транскрипта, кодирующего белок, при этом транскрипт содержит по меньшей мере один первый сайт связывания miRNA, специфический в отношении первой miRNA, причем экспрессия первой miRNA положительно регулируется экспрессией белка в клетке.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к композиции, содержащей рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая описана в настоящем раскрытии, или rAAV, который описан в настоящем раскрытии, и фармацевтически приемлемое вспомогательное средство. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция составлена для инъекции, например, системной инъекции (например, внутривенной инъекции) или интратекальной инъекции.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первый продукт представляет собой белок. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белок представляет собой МеСР2, например, изоформу el MeCP2 или изоформу е2 МеСР2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первый продукт представляет собой miRNA или длинную некодирующую РНК.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления второй продукт представляет собой белок или нуклеиновую кислоту. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления второй продукт представляет собой нейротрофический фактор кости (BDNF). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления нуклеиновая кислота представляет собой miRNA (например, miR-132). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первая miRNA представляет собой miR-132.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая отрицательно регулирует экспрессию транскрипта, содержит сайт связывания miR-132, например, два или три сайта связывания miR-132.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая ингибирует экспрессию транскрипта в нецелевой ткани, содержит сайт связывания miR-1, сайт связывания mir-122 или сайт связывания miR-1 и miR-122. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая ингибирует экспрессию транскрипта в нецелевой ткани, содержит три сайта связывания miR-1 (например, 3х-miR-1) и три сайта связывания miR-122 (например, 3х-miR-122).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления способы, описанные в настоящем раскрытии, дополнительно предусматривают стадию конструирования 3'-некодирующего участка транскрипта, чтобы он содержал один или несколько сайтов связывания для одной или нескольких нарушающих нацеливание miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления одна или несколько нарушающих нацеливание miRNA ингибируют экспрессию трансгена в печени, сердце, легком, мышце, поджелудочной железе или иммунных (например, антиген-презентирующих) клетках. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления одна или несколько нарушающих нацеливание miRNA представляют собой miR-122, miR-1 или miR-122 и miR-1. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления одна или несколько нарушающих нацеливание miRNA ингибируют экспрессию трансгена в иммунных клетках, таких как антиген-презентирующие клетки (например, дендритные клетки, макрофаги и т.д.). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления одна или несколько нарушающих нацеливание miRNA представляют собой miR-15a, miR-16-1, miR-17, miR-18a, miR-19a, miR-20a, miR-19b-1, miR-21, miR-29a, miR-29b, miR-29c, miR-30b, miR-31, miR-34a, miR-92a-1, miR-106a, miR-125a, miR-125b, miR-126, miR-142-3р, miR-146a, miR-150, miR-155, miR-181a, miR-223 или miR-424.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления сайт связывания miRNA или сайты связывания miRNA расположены между последним кодоном кодирующего участка и поли-А-хвостом транскрипта.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления способов, описанных в настоящем рас- 2 045780 крытии, стадия конструирования трансгена предусматривает вставку трансгена в вектор. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вектор представляет собой клонирующий вектор, экспрессионный вектор, плазмидный или вирусный вектор.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления рекомбинантная нуклеиновая кислота дополнительно содержит промотор, например, промотор мышиного МеСР2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления промотор мышиного МеСР2 содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 3.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления рекомбинантная нуклеиновая кислота расположена на плазмиде.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белок капсида представляет собой белок капсида, который способствует пересечению rAAV гематоэнцефалического барьера субъекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белок капсида имеет серотип, выбранный из группы, состоящей из AAV-РНР.В, AAV1, AAV2, AAV2i8, AAV2.5, AAV5, AAV6, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAVrh10, AAV-B1, AAV9.45A-String (например, AAV9.45-AS), AAV9.45Angiopep, AAV9.47-Angiopep, и AAV9.47-AS, AAV5, AAVrh39, AAVrh43, CAM130, и AAV9HR. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белок капсида имеет серотип, который описан в международной заявке WO 2015/127128, WO 2016/054554, WO 2016/054557 или WO 2016/065001. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белок капсида содержит или состоит из последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 14 или 15 (например, AAV-PHP.B или AAV9).
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к способу лечения синдрома Ретта у субъекта, при этом способ предусматривает введение субъекту с синдромом Ретта или с подозрением на синдром Ретта эффективного количества: рекомбинантной нуклеиновой кислоты, которая описана в настоящем раскрытии; rAAV, который описан в настоящем раскрытии; или композиции, которая описана в настоящем раскрытии.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект представляет собой субъектачеловека. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект имеет возраст менее одного года. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект характеризуется мутацией по меньшей мере в одной копии гена МеСР2, например мутацией с потерей функции.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления рекомбинантную нуклеиновую кислоту, rAAV или композицию, которые описаны в настоящем раскрытии, вводят посредством инъекции, например, системной инъекции (например, внутривенной инъекции) или интратекальной инъекции. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления введение приводит в результате к пересечению эффективным количеством рекомбинантной нуклеиновой кислоты, rAAV или композиции гематоэнцефалического барьера субъекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления введение приводит в результате к нетоксичному уровню экспрессии МеСР2 в головном мозге субъекта.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А, 1В представлена характеристика новых векторов AAV-MeCP2 для безопасной и эффективной генной терапии при синдроме Ретта. На фиг. 1А представлено схематическое изображение гомеостатического механизма ауторегуляции МеСР2. На фиг. 1В представлено схематическое изображение структуры саморегулируемых векторов AAV-MeCP2, кодирующих человеческий МеСР2-е1 с меткой myc под управлением промотора мышиного МеСР2 (с -223 по +56) и различными элементами, распознаваемыми микроРНК (например, miR-122/1T; miR-132T).
На фиг. 2А-2С представлена эффективная экспрессия AAV2-MeCP2 в клетках HEK293T. На фиг. 2А представлена экспрессия МеСР2, измеренная с помощью Вестерн-блоттинга. На фиг. 2В представлена экспрессия МеСР2, измеренная с помощью нормализованного анализа экспрессии белка (фиг. 2В). На фиг. 2С представлен профиль токсичности у клеток 293Т, трансдуцированных AAV2-MeCP2, в течение четырех суток при дозе 30000 gc(копий генома)/клетка.
На фиг. 3А-3С представлена экспрессия AAV2-MeCP2 в нейронах коры головного мозга мыши. На фиг. 3А представлены результаты для первичных нейронов коры головного мозга мышей, которых трансдуцировали дозами вектора на основе AAV в диапазоне от 1Е3-1Е5 vg(вирусных геномов)/клетка, в том числе AAV-GFP в качестве контроля. На фиг. 3В представлены результаты анализа экспрессии hMeCP2-myc методом Вестерн-блоттинга в нейронах через 5 суток после инфицирования 3Е4 геномов вектора (доза)/клетка. На фиг. 3С представлена экспрессия miR-132 в ответ на повторную доставку AAV2-MeCP2.
На фиг. 4А-4С представлены репрезентативные данные, полученные в результате in vivo экспериментов на мышах. На фиг. 4А представлены данные для мышей дикого типа, которым вводили инъекцией через лицевую вену в 1 сутки после рождения AAV, который кодирует изоформу e1 человеческого МеСР2, содержащий 0, 1, 2 или 3 последовательности-мишени miR-132. Животных дикого типа умерщвляли через 3 месяца после инъекции и целый головной мозг, ткань сердца и печени подвергали экстракции общей РНК, синтезу кДНК и qRT-PCR (количественная ПЦР с обратной транскрипцией) с применением праймеров, специфических в отношении изоформы e1 человеческого МеСР2. Данные нормализовали к AAV-MeCP2, содержащему 3 последовательности-мишени miR-132, который принимали за 1. На
- 3 045780 фиг. 4В представлен анализ экспрессии гена изоформы el человеческого МеСР2 в головном мозге мышей дикого типа после внутричерепной инъекции AAV-MeCP2. На фиг. 4С представлен анализ экспрессии гена изоформы e1 человеческого МеСР2 в головном мозге мышей дикого типа после внутричерепной инъекции AAV-MeCP2.
На фиг. 5 представлена экспрессия МеСР2, запускаемая конструкциями, описанными в настоящем раскрытии, которые эффективно нарушают нацеливание на сердце и печень.
Подробное раскрытие настоящего изобретения
Аспекты настоящего раскрытии относятся, отчасти, к векторам на основе AAV, способным к саморегуляции уровней экспрессии трансгена (например, МеСР2), для предупреждения токсичности, связанной со сверхэкспрессией. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления механизм саморегуляции основывается на присутствии нескольких копий регуляторного элемента для miRNA (например, одного или нескольких сайтов связывания miR-132) в 3'UTR кассеты с трансгеном. Как дополнительно описано в разделе Примеры, векторы на основе AAV, способные к саморегуляции экспрессии трансгена, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления характеризуются улучшенной эффективностью и профилем безопасности по сравнению с другими векторами на основе AAV, например, векторами на основе AAV, содержащими только нативные промоторы трансгена. Следует понимать, что наблюдения, описанные в разделе Примеры в контексте конструкций miR-132/MeCP2, являются применимыми к другим конструкциям для экспрессии трансгена, содержащим сайты связывания других miR, которые регулируют экспрессию белка (например, посредством петли отрицательной обратной связи).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления пути доставки, которые наиболее вероятно опосредуют повсеместную доставку гена в ЦНС (например, системная инъекция и интратекальная инъекция), вероятно, приводят в результате к высокому уровню трансдукции периферических органов, в которых экспрессия трансгена (например, МеСР2) может становится токсичной. Настоящее раскрытие основывается, отчасти, на понимании, что объединение регуляторных элементов для miRNA (MRE), таких как сайты связывания miRNA (например, сайты связывания miR-122 и сайты связывания miR-1), с MRE, ассоциированными с петлями отрицательной обратной связи, регулирующими экспрессию белка (например, сайты связывания miR-132 в случае МеСР2), одновременно регулирует уровни экспрессии трансгена и нарушает нацеливание экспрессии трансгена на периферические органы.
Соответственно в соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к способу конструирования трансгена, при этом способ предусматривает выбор первого гена, кодирующего первый продукт в клетке; выбор miRNA, экспрессия которой положительно регулируется первым продуктом в клетке; и конструирование трансгена, который экспрессирует транскрипт, имеющий кодирующий участок, который кодирует первый продукт, и один или несколько сайтов связывания для miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько сайтов связывания для miRNA расположены в 3'-некодирующем участке транскрипта.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к способу конструирования трансгена, при этом способ предусматривает выбор первого гена, кодирующего первый продукт в клетке; выбор второго гена, кодирующего второй продукт в клетке; определение того, что экспрессия второго продукта положительно регулируется первым продуктом в клетке; выбор miRNA; определение того, что экспрессия miRNA положительно регулируется вторым продуктом в клетке; и конструирование трансгена для экспрессии в клетке транскрипта, имеющего кодирующий участок, который кодирует первый продукт, и один или несколько сайтов связывания для miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько сайтов связывания для miRNA расположены в 3'некодирующем участке транскрипта.
В контексте данного документа конструирование трансгена относится к получению (например, синтезу) рекомбинантной нуклеиновой кислоты с применением методик клонирования гена, таких как полимеразная цепная реакция (ПНР), расщепление рестрикционными ферментами и лигирование нуклеиновой кислоты in vitro, например, как описано в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N. Y.
В контексте данного документа продукт или продукт гена относится к нуклеиновой кислоте (например, РНК транскрипту, дцРНК, miRNA и т.д.), пептиду, белку или полипептиду, которые транскрибируются и/или транслируются с последовательности нуклеиновой кислоты (например, ДНК или РНК). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления продукт представляет собой РНК транскрипт, содержащий кодирующий белок участок. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления кодирующий белок участок кодирует белок, ассоциированный с заболеванием, вызванным мутацией с потерей функции (например, МеСР2). Дополнительные примеры белков, ассоциированных с заболеванием, вызванным мутацией с потерей функции, включают в себя без ограничения тирозиназу (тирозинемия), лизосомальную кислую бета-галактозидазу (GM1-ганглиозидоз), бета-гексозаминидазу А и В (болезнь Тея-Сакса и Сандхоффа), аспартоацилазу (ASPA; болезнь Канавана), аспартилглюкозаминидазу (апартилглюкозаминурия), пальмитоил-протеинтиоэстеразу (детская форма болезни Баттена), трипептидил-пептидазу (поздняя детская форма болезни Баттена), α-галактозидазу (болезнь Фабри), α-фукозидазу
- 4 045780 (фукозидоз), защитный белок/катепсин А (галактосиалидоз), β-глюкозидазу (болезнь Гоше), галактозилцерамидазу (глобоидно-клеточная лейкодистрофия), α-маннозидазу (α-маннозидоз), арилсульфатазу А (метахроматическая лейкодистрофия), a-L-идуронидазу (мукополисахаридоз I), α-Nацетилглюкозаминидазу (мукополисахаридоз IIIB), арилсульфатазу В (мукополисахаридоз VI), β-глюкуронидазу (мукополисахаридоз VII), кислую сфингомиелиназу (болезнь Ниманна-Пика), α-глюкозидазу (болезнь Помпе) и кислую липазу (болезнь Вольмана), FOXG1 (синдром FOXG1), CDKL5, N-GlyI, Glut-1 (болезнь де Виво) и т.д.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления продукт представляет собой интерферирующую нуклеиновую кислоту, например, miRNA, которая регулирует экспрессию или активность продукта гена.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один продукт регулирует экспрессию гена или экспрессию белка второго продукта. Регуляция экспрессии или трансляции продукта гена может быть положительной или отрицательной. Положительная регуляция относится к повышению экспрессии или активности гена (например, в результате экспрессии или активности продукта другого гена). Отрицательная регуляция относится к снижению или ингибированию экспрессии или активности гена (например, в результате экспрессии или активности продукта другого гена посредством петли обратной связи).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления продукты гена, такие как факторы роста, транскрипционные факторы (например, как описано в Wang et al., Nucleic Acids Res., 2010 Jan, 38 (номер в базе данных): Dl 19-D122) и т.д., являются способными к регуляции экспрессии или активности трансгена в клетке или у субъекта. Примеры факторов роста включают в себя нейротрофины, такие как нейротрофический фактор головного мозга (BDNF), фактор роста нервов (NGF), нейротрофин 3, нейротрофин 4, глиальный нейротрофический фактор (GDNF), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), фактор роста фибробластов (FGF1-23), нейротурин, инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-1), инсулиноподобный фактор роста 2 (IGF-2) и т.д.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансгены, которые описаны в настоящем раскрытии, сконструированы таким образом, чтобы содержать по меньшей мере один регуляторный элемент для miRNA (например, сайт связывания miRNA), который ассоциирован с регуляторной петлей экспрессии гена (например, петлями отрицательной обратной связи, петлями положительной обратной связи и т.д.). В целом, регуляторные петли экспрессии гена могут быть эндогенными по отношению к клетке или искусственными (например, один или несколько элементов петли обратной связи обеспечивают вместе с трансгеном). В одном примере петли отрицательной обратной связи экспрессия МеСР2 в клетке вызывает повышение содержания нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) в клетке, который, в свою очередь, повышает экспрессию miR-132, которая, в свою очередь, регулирует экспрессию МеСР2 (фиг. 1). Следует понимать, что в соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие относится к петлям положительной обратной связи, которые можно применять для усиления экспрессии трансгена.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансгены, которые описаны в настоящем раскрытии, сконструированы таким образом, чтобы содержать по меньшей мере один регуляторный элемент для miRNA (например, сайт связывания miRNA), который нарушает нацеливание экспрессии трансгена на одну или несколько нецелевых тканей. В контексте данного документа нецелевая ткань относится к ткани (например, клеткам ткани), в которой экспрессия трансгена является нежелательной. Например, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления сверхэкспрессия МеСР2 в клетке приводит в результате к цитотоксичности в печени; в этом контексте ткань печени (например, клетки печени) является нецелевой тканью. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления нецелевая ткань представляет собой печень (например, клетки печени), сердце (например, клетки сердца), поджелудочную железу (например, клетки поджелудочной железы), мышцу (например, мышечные клетки), иммунную клетку (например, антиген-презентирующую клетку и т.д.) или любую их комбинацию.
В контексте данного документа целевая ткань относится к ткани (например, клеткам ткани), в которой экспрессия трансгена является предпочтительной по сравнению с другими тканями, такими как нецелевые ткани. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления целевая ткань представляет собой ткань ЦНС (например, клетки ЦНС, такие как нейроны). Неограничивающие примеры ткани ЦНС включают в себя ткань головного мозга (например, нейроны, глиальные клетки и т.д.) и ткань спинного мозга.
Обычно один или несколько сайтов связывания miRNA в транскрипте, кодируемом трансгеном, расположены в 3'-нетранслируемом участке (3'UTR) транскрипта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько сайтов связывания miRNA расположены между последним кодоном кодирующего участка транскрипта и поли-А-хвостом транскрипта. Тем не менее следует понимать, что в соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько сайтов связывания miRNA расположены в участке, отличном от 3'UTR транскрипта, например, в интроне на 5'-конце транскрипта. Число сайтов связывания miRNA, встроенных посредством конструирования в трансген,
- 5 045780 который описан в настоящем раскрытии, будет варьировать в зависимости от продукта гена, кодируемого трансгеном, и может быть определено эмпирически квалифицированным специалистом без чрезмерного количества экспериментов. Например, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген, который описан в настоящем раскрытии, содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 сайтов связывания miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген, который описан в настоящем раскрытии, содержит более 10 (например, любое целое число от 11 до 100) сайтов связывания miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген, который описан в настоящем раскрытии, содержит 3, 4 или 5 сайтов связывания miRNA. Каждый из одного или нескольких сайтов связывания miRNA может связываться с одной и той же miRNA или отличной miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген, который описан в настоящем раскрытии, содержит один или несколько (например, 3) сайтов связывания miR-122, один или несколько (например, 3) сайтов связывания miR-1 и три сайта связывания miR-132.
Рекомбинантные нуклеиновые кислоты.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген, который описан в настоящем раскрытии, кодируется рекомбинантной нуклеиновой кислотой. Последовательность нуклеиновой кислоты относится к последовательностям ДНК или РНК. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белки и нуклеиновые кислоты согласно настоящему раскрытию являются выделенными. В контексте данного документа термин выделенный означает полученный искусственно. В контексте данного документа применительно к нуклеиновым кислотам термин выделенный означает (i) амплифицированный in vitro, например, с помощью полимеразной цепной реакции (ПНР); (ii) полученный рекомбинантно с помощью клонирования; (iii) очищенный посредством расщепления и разделения на геле; или (iv) синтезированный, например, с помощью химического синтеза. Выделенная нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, которая легко поддается манипуляции с помощью методик с использованием рекомбинантной ДНК, хорошо известных в уровне техники. Таким образом, нуклеотидная последовательность, которая содержится в векторе, в котором 5' и 3' сайты рестрикции являются известными, или для которой были раскрыты последовательности праймеров для полимеразной цепной реакции (ПЦР), считается выделенной, но последовательность нуклеиновой кислоты, существующая в своем нативном состоянии в своем естественном хозяине не считается таковой. Выделенная нуклеиновая кислота может быть, по существу, очищенной, но не обязательно является таковой. Например, нуклеиновая кислота, которая является выделенной в клонирующем или экспрессионном векторе, не является чистой в том смысле, что она может составлять только малый процент материала в клетке, в которой она находится. Тем не менее такая нуклеиновая кислота является выделенной в контексте термина, используемого в данном документе, поскольку она легко поддается манипуляции с помощью стандартных методик, известных квалифицированным специалистам в данной области техники. При использовании в данном документе применительно к белкам или пептидам термин выделенный относится к белку или пептиду, который был выделен из своего естественного окружения или получен искусственно (например, с помощью химического синтеза, с помощью технологии с использованием рекомбинантной ДНК и т.д.).
Квалифицированному специалисту также будет понятно, что консервативные аминокислотные замены могут быть выполнены для того, чтобы обеспечить функционально эквивалентные варианты или гомологи белков капсида. В соответствии с некоторыми аспектами настоящим раскрытием охвачены изменения последовательности, которые приводят в результате к консервативным аминокислотным заменам. В контексте данного документа консервативная аминокислотная замена относится к аминокислотной замене, которая не изменяет характеристики относительного заряда или размера белка, в котором выполнена аминокислотная замена. Варианты могут быть получены в соответствии со способами изменения полипептидной последовательности, известными квалифицированному специалисту в данной области техники, такими как находящиеся в источниках, в которых собраны такие способы, например, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, J. Sambrook et al., eds., Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989; или Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., New York. Консервативные замены аминокислот включают в себя замены, производимые между аминокислотами в составе следующих групп: (а) М, I, L, V; (b) F, Y, W; (с) K, R, H; (d) A, G; (e) S, T; (f) Q, N и (g) E, D. Таким образом, можно произвести консервативные аминокислотные замены в аминокислотной последовательности белков и полипептидов, раскрытых в данном документе.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления нуклеиновая кислота, которая описана в настоящем раскрытии, содержится в векторе. В контексте данного документа термин вектор включает в себя любой генетический элемент, такой как плазмида, фаг, транспозон, космида, хромосома, искусственная хромосома, вирус, вирион и т.д., который является способным к репликации, когда он ассоциирован с соответствующими управляющими элементами, и который может переносить последовательности генов между клетками. Таким образом, термин включает в себя средства для клонирования и экспрессии, а также вирусные векторы. Примеры вирусных векторов включают в себя аденовирусный вектор, вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), лентивирусные векторы, векторы на основе вируса герпеса, векторы на основе бакуловируса и т.д.
- 6 045780
МеСР2.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к композициям и способам для экспрессии белка МеСР2 в клетке или у субъекта. МеСР2 относится к метил-CpGсвязывающему белку 2, который кодируется геном МеСР2 и играет важные роли (например, функционирует в качестве транскрипционного репрессора или транскрипционного активатора) в нервных клетках, таких как зрелые нейроны. Один пример гена МеСР2 представлен под номером доступа в GenBank NM_001110792 (МеСР2-e1). Другой пример гена МеСР2 представлен под номером доступа в GenBank NM_001110792 (МеСР2-е2). Ген МеСР2 кодирует две изоформы белка МеСР2, называемые изоформой e1 MeCP2 и изоформой е2 МеСР2, которые отличаются длиной их N-конца. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изоформа e1 MeCP2 представлена последовательностью, изложенной в SEQ ID NO: 1. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изоформа е2 МеСР2 представлена последовательностью, изложенной в SEQ ID NO: 2.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген (например, рекомбинантная нуклеиновая кислота) кодирует функциональный фрагмент белка МеСР2 (например, фрагмент изоформы e1 или изоформы е2). Функциональный фрагмент МеСР2 представляет собой усеченный белок МеСР2, который сохраняет естественную функцию (например, транскрипционный активатор или транскрипционный репрессор) белка МеСР2 дикого типа (например, полноразмерного белка). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления функциональный фрагмент МеСР2 содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более усечений аминокислот по сравнению с полноразмерным белком МеСР2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления функциональный фрагмент МеСР2 содержит приблизительно от 1 до 10, от 5 до 50, от 20 до 100 усечений аминокислот по сравнению с полноразмерным белком МеСР2.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген (например, рекомбинантная нуклеиновая кислота) кодирует вариант белка МеСР2 (например, вариант изоформы e1 или изоформы е2). Вариант белка МеСР2 может характеризоваться идентичностью, составляющей от приблизительно 50% до приблизительно 99,9%, с белком МеСР2 дикого типа (например, SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вариант МеСР2 является приблизительно на 50%, приблизительно на 60%, приблизительно на 70%, приблизительно на 80%, приблизительно на 90%, приблизительно на 95% или приблизительно на 99% идентичным белку МеСР2 дикого типа (например, SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2).
miRNA и сайты связывания miRNA.
Настоящее раскрытие основывается, отчасти, на понимании, что объединение регуляторных элементов для miRNA (MRE), таких как сайты связывания miRNA (например, сайты связывания miR-122 и сайты связывания miR-1), с MRE, ассоциированными с петлями отрицательной обратной связи, регулирующими экспрессию белка (например, сайты связывания miR-132 в случае МеСР2), одновременно регулирует уровни экспрессии трансгена и нарушает нацеливание экспрессии трансгена на периферические органы.
miRNA и другие малые интерферирующие нуклеиновые кислоты регулируют экспрессию гена посредством расщепления/разрушения РНК транскрипта-мишени или трансляционной репрессии информационной РНК(мРНК)-мишени. miRNA экспрессируются в нативном состоянии, как правило, в виде конечных 19-25 нетранслируемых РНК-продуктов. miRNA проявляют свою активность посредством последовательность-специфических взаимодействий с 3'-нетранслируемыми участками (UTR) мРНКмишеней. Эти эндогенно экспрессирующиеся miRNA образуют шпилечные предшественники, которые затем подвергаются процессингу в дуплекс miRNA, а в дальнейшем в зрелую одноцепочечную молекулу miRNA. Эта зрелая miRNA управляет мультибелковым комплексом, miRISC, который идентифицирует целевой сайт, например, в участках 3' UTR, в мРНК-мишени на основании их комплементарности зрелой miRNA.
Следующий неограничивающий перечень генов miRNA и их гомологи являются пригодными в способах и композициях согласно настоящему раскрытию (например, для опосредования саморегулируемой экспрессии или нарушения нацеливания трансгена).
hsa-let-7a, hsa-let-7a*, hsa-let-7b, hsa-let-7b*, hsa-let-7c, hsa-let-7c*, hsa-let-7d, hsa-let-7d*, hsa-let7e, hsa-let-7e*, hsa-let-7f, hsa-let-7f-l*, hsa-let-7f-2*, hsa-let-7g, hsa-let-7g*, hsa-let-7i, hsa-let7i*, hsa-miR-1, hsa-miR-100, hsa-miR-100*, hsa-miR-101, hsa-miR-101*, hsa-miR-103, hsamiR-105, hsa-miR-105*, hsa-miR-106a, hsa-miR-106a*, hsa-miR-106b, hsa-miR-106b*, hsamiR-107, hsa-miR-lOa, hsa-miR-10a*, hsa-miR-lOb, hsa-miR-10b*, hsa-miR-1178, hsa-miR1179, hsa-miR-1180, hsa-miR-1181, hsa-miR-1182, hsa-miR-1183, hsa-miR-1184, hsa-miR- 7 045780
1185, hsa-miR-1197, hsa-miR-1200, hsa-miR-1201, hsa-miR-1202, hsa-miR-1203, hsa-miR1204, hsa-miR-1205, hsa-miR-1206, hsa-miR-1207-Зр, hsa-miR-1207-5p, hsa-miR-1208, hsamiR-122, hsa-miR-122*, hsa-miR-1224-3p, hsa-miR-1224-5p, hsa-miR-1225-Зр, hsa-miR-12255p, hsa-miR-1226, hsa-miR-1226*, hsa-miR-1227, hsa-miR-1228, hsa-miR-1228*, hsa-miR1229, hsa-miR-1231, hsa-miR-1233, hsa-miR-1234, hsa-miR-1236, hsa-miR-1237, hsa-miR1238, hsa-miR-124, hsa-miR-124*, hsa-miR-1243, hsa-miR-1244, hsa-miR-1245, hsa-miR-1246, hsa-miR-1247, hsa-miR-1248, hsa-miR-1249, hsa-miR-1250, hsa-miR-1251, hsa-miR-1252, hsamiR-1253, hsa-miR-1254, hsa-miR-1255a, hsa-miR-1255b, hsa-miR-1256, hsa-miR-1257, hsamiR-1258, hsa-miR-1259, hsa-miR-125a-3p, hsa-miR-125a-5p, hsa-miR-125b, hsa-miR-125b1*, hsa-miR-125b-2*, hsa-miR-126, hsa-miR-126*, hsa-miR-1260, hsa-miR-1261, hsa-miR1262, hsa-miR-1263, hsa-miR-1264, hsa-miR-1265, hsa-miR-1266, hsa-miR-1267, hsa-miR1268, hsa-miR-1269, hsa-miR-1270, hsa-miR-1271, hsa-miR-1272, hsa-miR-1273, hsa-miR-1273p, hsa-miR-1274a, hsa-miR-1274b, hsa-miR-1275, hsa-miR-127-5p, hsa-miR-1276, hsa-miR1277, hsa-miR-1278, hsa-miR-1279, hsa-miR-128, hsa-miR-1280, hsa-miR-1281, hsa-miR-1282, hsa-miR-1283, hsa-miR-1284, hsa-miR-1285, hsa-miR-1286, hsa-miR-1287, hsa-miR-1288, hsamiR-1289, hsa-miR-129*, hsa-miR-1290, hsa-miR-1291, hsa-miR-1292, hsa-miR-1293, hsamiR-129-Зр, hsa-miR-1294, hsa-miR-1295, hsa-miR-129-5p, hsa-miR-1296, hsa-miR-1297, hsamiR-1298, hsa-miR-1299, hsa-miR-1300, hsa-miR-1301, hsa-miR-1302, hsa-miR-1303, hsamiR-1304, hsa-miR-1305, hsa-miR-1306, hsa-miR-1307, hsa-miR-1308, hsa-miR-130a, hsa-miR130a*, hsa-miR-130b, hsa-miR-130b*, hsa-miR-132, hsa-miR-132*, hsa-miR-1321, hsa-miR1322, hsa-miR-1323, hsa-miR-1324, hsa-miR-133a, hsa-miR-133b, hsa-miR-134, hsa-miR-135a, hsa-miR-135a*, hsa-miR-135b, hsa-miR-135b*, hsa-miR-136, hsa-miR-136*, hsa-miR-137, hsamiR-138, hsa-miR-138-1*, hsa-miR-138-2*, hsa-miR-139-3p, hsa-miR-139-5p, hsa-miR-140-Зр, hsa-miR-140-5p, hsa-miR-141, hsa-miR-141*, hsa-miR-142-3p, hsa-miR-142-5p, hsa-miR-143, hsa-miR-143*, hsa-miR-144, hsa-miR-144*, hsa-miR-145, hsa-miR-145*, hsa-miR-146a, hsamiR-146a*, hsa-miR-146b-3p, hsa-miR-146b-5p, hsa-miR-147, hsa-miR-147b, hsa-miR-148a, hsa-miR-148a*, hsa-miR-148b, hsa-miR-148b*, hsa-miR-149, hsa-miR-149*, hsa-miR-150, hsamiR-150*, hsa-miR-15l-3p, hsa-miR-15l-5p, hsa-miR-152, hsa-miR-153, hsa-miR-154, hsamiR-154*, hsa-miR-155, hsa-miR-155*, hsa-miR-15a, hsa-miR-15a*, hsa-miR-15b, hsa-miR15b*, hsa-miR-16, hsa-miR-16-1*, hsa-miR-16-2*, hsa-miR-17, hsa-miR-17*, hsa-miR-181a, hsa-miR-181a*, hsa-miR-181a-2*, hsa-miR-181b, hsa-miR-181c, hsa-miR-181c*, hsa-miR-181d, hsa-miR-182, hsa-miR-182*, hsa-miR-1825, hsa-miR-1826, hsa-miR-1827, hsa-miR-183, hsamiR-183*, hsa-miR-184, hsa-miR-185, hsa-miR-185*, hsa-miR-186, hsa-miR-186*, hsa-miR187, hsa-miR-187*, hsa-miR-188-3p, hsa-miR-188-5p, hsa-miR-18a, hsa-miR-18a*, hsa-miR18b, hsa-miR-18b*, hsa-miR-190, hsa-miR-190b, hsa-miR-191, hsa-miR-191*, hsa-miR-192, hsa-miR-192*, hsa-miR-193a-3p, hsa-miR-193a-5p, hsa-miR-193b, hsa-miR-193b*, hsa-miR194, hsa-miR-194*, hsa-miR-195, hsa-miR-195*, hsa-miR-196a, hsa-miR-196a*, hsa-miR-196b, hsa-miR-197, hsa-miR-198, hsa-miR-199a-3p, hsa-miR-199a-5p, hsa-miR-199b-5p, hsa-miR19a, hsa-miR-19a*, hsa-miR-19b, hsa-miR-19b-l*, hsa-miR-19b-2*, hsa-miR-200a, hsa-miR200a*, hsa-miR-200b, hsa-miR-200b*, hsa-miR-200c, hsa-miR-200c*, hsa-miR-202, hsa-miR202*, hsa-miR-203, hsa-miR-204, hsa-miR-205, hsa-miR-206, hsa-miR-208a, hsa-miR-208b, hsa-miR-20a, hsa-miR-20a*, hsa-miR-20b, hsa-miR-20b*, hsa-miR-21, hsa-miR-21*, hsa-miR210, hsa-miR-211, hsa-miR-212, hsa-miR-214, hsa-miR-214*, hsa-miR-215, hsa-miR-216a, hsa
- 8 045780 miR-216b, hsa-miR-217, hsa-miR-218, hsa-miR-218-1*, hsa-miR-218-2*, hsa-miR-219-l-3p, hsa-miR-219-2-3p, hsa-miR-219-5p, hsa-miR-22, hsa-miR-22*, hsa-miR-220a, hsa-miR-220b, hsa-miR-220c, hsa-miR-221, hsa-miR-221*, hsa-miR-222, hsa-miR-222*, hsa-miR-223, hsamiR-223*, hsa-miR-224, hsa-miR-23a, hsa-miR-23a*, hsa-miR-23b, hsa-miR-23b*, hsa-miR-24, hsa-miR-24-1*, hsa-miR-24-2*, hsa-miR-25, hsa-miR-25*, hsa-miR-26a, hsa-miR-26a-l*, hsamiR-26a-2*, hsa-miR-26b, hsa-miR-26b*, hsa-miR-27a, hsa-miR-27a*, hsa-miR-27b, hsa-miR27b*, hsa-miR-28-Зр, hsa-miR-28-5p, hsa-miR-296-Зр, hsa-miR-296-5p, hsa-miR-297, hsa-miR298, hsa-miR-299-Зр, hsa-miR-299-5p, hsa-miR-29a, hsa-miR-29a*, hsa-miR-29b, hsa-miR-29b1*, hsa-miR-29b-2*, hsa-miR-29c, hsa-miR-29c*, hsa-miR-300, hsa-miR-301a, hsa-miR-301b, hsa-miR-302a, hsa-miR-302a*, hsa-miR-302b, hsa-miR-302b*, hsa-miR-302c, hsa-miR-302c*, hsa-miR-302d, hsa-miR-302d*, hsa-miR-302e, hsa-miR-302f, hsa-miR-30a, hsa-miR-30a*, hsamiR-30b, hsa-miR-30b*, hsa-miR-30c, hsa-miR-30c-l*, hsa-miR-30c-2*, hsa-miR-30d, hsamiR-30d*, hsa-miR-30e, hsa-miR-30e*, hsa-miR-31, hsa-miR-31*, hsa-miR-32, hsa-miR-32*, hsa-miR-320a, hsa-miR-320b, hsa-miR-320c, hsa-miR-320d, hsa-miR-323-3p, hsa-miR-323-5p, hsa-miR-324-3p, hsa-miR-324-5p, hsa-miR-325, hsa-miR-326, hsa-miR-328, hsa-miR-329, hsamiR-330-3p, hsa-miR-330-5p, hsa-miR-331-3p, hsa-miR-331-5p, hsa-miR-335, hsa-miR-335*, hsa-miR-337-3p, hsa-miR-337-5p, hsa-miR-338-3p, hsa-miR-338-5p, hsa-miR-339-3p, hsa-miR339-5p, hsa-miR-33a, hsa-miR-33a*, hsa-miR-33b, hsa-miR-33b*, hsa-miR-340, hsa-miR-340*, hsa-miR-342-3p, hsa-miR-342-5p, hsa-miR-345, hsa-miR-346, hsa-miR-34a, hsa-miR-34a*, hsamiR-34b, hsa-miR-34b*, hsa-miR-34c-3p, hsa-miR-34c-5p, hsa-miR-361-3p, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-362-3p, hsa-miR-362-5p, hsa-miR-363, hsa-miR-363*, hsa-miR-365, hsa-miR-367, hsamiR-367*, hsa-miR-369-3p, hsa-miR-369-5p, hsa-miR-370, hsa-miR-371-3p, hsa-miR-371-5p, hsa-miR-372, hsa-miR-373, hsa-miR-373*, hsa-miR-374a, hsa-miR-374a*, hsa-miR-374b, hsamiR-374b*, hsa-miR-375, hsa-miR-376a, hsa-miR-376a*, hsa-miR-376b, hsa-miR-376c, hsamiR-377, hsa-miR-377*, hsa-miR-378, hsa-miR-378*, hsa-miR-379, hsa-miR-379*, hsa-miR380, hsa-miR-380*, hsa-miR-381, hsa-miR-382, hsa-miR-383, hsa-miR-384, hsa-miR-409-Зр, hsa-miR-409-5p, hsa-miR-410, hsa-miR-411, hsa-miR-411*, hsa-miR-412, hsa-miR-421, hsamiR-422a, hsa-miR-423-3p, hsa-miR-423-5p, hsa-miR-424, hsa-miR-424*, hsa-miR-425, hsamiR-425*, hsa-miR-429, hsa-miR-431, hsa-miR-431*, hsa-miR-432, hsa-miR-432*, hsa-miR433, hsa-miR-448, hsa-miR-449a, hsa-miR-449b, hsa-miR-450a, hsa-miR-450b-3p, hsa-miR450b-5p, hsa-miR-451, hsa-miR-452, hsa-miR-452*, hsa-miR-453, hsa-miR-454, hsa-miR-454*, hsa-miR-455-Зр, hsa-miR-455-5p, hsa-miR-483-3p, hsa-miR-483-5p, hsa-miR-484, hsa-miR485-3p, hsa-miR-485-5p, hsa-miR-486-Зр, hsa-miR-486-5p, hsa-miR-487a, hsa-miR-487b, hsamiR-488, hsa-miR-488*, hsa-miR-489, hsa-miR-490-Зр, hsa-miR-490-5p, hsa-miR-491-Зр, hsamiR-491-5p, hsa-miR-492, hsa-miR-493, hsa-miR-493*, hsa-miR-494, hsa-miR-495, hsa-miR
- 9 045780
496, hsa-miR-497, hsa-miR-497*, hsa-miR-498, hsa-miR-499-Зр, hsa-miR-499-5p, hsa-miR-500, hsa-miR-500*, hsa-miR-501-Зр, hsa-miR-501-5p, hsa-miR-502-Зр, hsa-miR-502-5p, hsa-miR503, hsa-miR-504, hsa-miR-505, hsa-miR-505*, hsa-miR-506, hsa-miR-507, hsa-miR-508-Зр, hsa-miR-508-5p, hsa-miR-509-3-5p, hsa-miR-509-Зр, hsa-miR-509-5p, hsa-miR-510, hsa-miR511, hsa-miR-512-Зр, hsa-miR-512-5p, hsa-miR-513a-3p, hsa-miR-513a-5p, hsa-miR-513b, hsamiR-513c, hsa-miR-514, hsa-miR-515-Зр, hsa-miR-515-5p, hsa-miR-516a-3p, hsa-miR-516a-5p, hsa-miR-516b, hsa-miR-517*, hsa-miR-517a, hsa-miR-517b, hsa-miR-517c, hsa-miR-518a-3p, hsa-miR-518a-5p, hsa-miR-518b, hsa-miR-518c, hsa-miR-518c*, hsa-miR-518d-3p, hsa-miR518d-5p, hsa-miR-518e, hsa-miR-518e*, hsa-miR-518f, hsa-miR-518f*, hsa-miR-519a, hsa-miR519b-3p, hsa-miR-519c-3p, hsa-miR-519d, hsa-miR-519e, hsa-miR-519e*, hsa-miR-520a-3p, hsa-miR-520a-5p, hsa-miR-520b, hsa-miR-520c-3p, hsa-miR-520d-3p, hsa-miR-520d-5p, hsamiR-520e, hsa-miR-520f, hsa-miR-520g, hsa-miR-520h, hsa-miR-521, hsa-miR-522, hsa-miR523, hsa-miR-524-Зр, hsa-miR-524-5p, hsa-miR-525-Зр, hsa-miR-525-5p, hsa-miR-526b, hsamiR-526b*, hsa-miR-532-3p, hsa-miR-532-5p, hsa-miR-539, hsa-miR-541, hsa-miR-541*, hsamiR-542-Зр, hsa-miR-542-5p, hsa-miR-543, hsa-miR-544, hsa-miR-545, hsa-miR-545*, hsamiR-548a-3p, hsa-miR-548a-5p, hsa-miR-548b-3p, hsa-miR-548b-5p, hsa-miR-548c-3p, hsamiR-548c-5p, hsa-miR-548d-3p, hsa-miR-548d-5p, hsa-miR-548e, hsa-miR-548f, hsa-miR-548g, hsa-miR-548h, hsa-miR-548i, hsa-miR-548j, hsa-miR-548k, hsa-miR-5481, hsa-miR-548m, hsamiR-548n, hsa-miR-548o, hsa-miR-548p, hsa-miR-549, hsa-miR-550, hsa-miR-550*, hsa-miR551a, hsa-miR-551b, hsa-miR-551b*, hsa-miR-552, hsa-miR-553, hsa-miR-554, hsa-miR-555, hsa-miR-556-Зр, hsa-miR-556-5p, hsa-miR-557, hsa-miR-558, hsa-miR-559, hsa-miR-561, hsamiR-562, hsa-miR-563, hsa-miR-564, hsa-miR-566, hsa-miR-567, hsa-miR-568, hsa-miR-569, hsa-miR-570, hsa-miR-571, hsa-miR-572, hsa-miR-573, hsa-miR-574-Зр, hsa-miR-574-5p, hsamiR-575, hsa-miR-576-Зр, hsa-miR-576-5p, hsa-miR-577, hsa-miR-578, hsa-miR-579, hsa-miR580, hsa-miR-581, hsa-miR-582-Зр, hsa-miR-582-5p, hsa-miR-583, hsa-miR-584, hsa-miR-585, hsa-miR-586, hsa-miR-587, hsa-miR-588, hsa-miR-589, hsa-miR-589*, hsa-miR-590-Зр, hsamiR-590-5p, hsa-miR-591, hsa-miR-592, hsa-miR-593, hsa-miR-593*, hsa-miR-595, hsa-miR596, hsa-miR-597, hsa-miR-598, hsa-miR-599, hsa-miR-600, hsa-miR-601, hsa-miR-602, hsamiR-603, hsa-miR-604, hsa-miR-605, hsa-miR-606, hsa-miR-607, hsa-miR-608, hsa-miR-609, hsa-miR-610, hsa-miR-611, hsa-miR-612, hsa-miR-613, hsa-miR-614, hsa-miR-615-Зр, hsamiR-615-5p, hsa-miR-616, hsa-miR-616*, hsa-miR-617, hsa-miR-618, hsa-miR-619, hsa-miR620, hsa-miR-621, hsa-miR-622, hsa-miR-623, hsa-miR-624, hsa-miR-624*, hsa-miR-625, hsamiR-625*, hsa-miR-626, hsa-miR-627, hsa-miR-628-Зр, hsa-miR-628-5p, hsa-miR-629, hsamiR-629*, hsa-miR-630, hsa-miR-631, hsa-miR-632, hsa-miR-633, hsa-miR-634, hsa-miR-635, hsa-miR-636, hsa-miR-637, hsa-miR-638, hsa-miR-639, hsa-miR-640, hsa-miR-641, hsa-miR
- 10 045780
642, hsa-miR-643, hsa-miR-644, hsa-miR-645, hsa-miR-646, hsa-miR-647, hsa-miR-648, hsamiR-649, hsa-miR-650, hsa-miR-651, hsa-miR-652, hsa-miR-653, hsa-miR-654-Зр, hsa-miR654-5p, hsa-miR-655, hsa-miR-656, hsa-miR-657, hsa-miR-658, hsa-miR-659, hsa-miR-660, hsamiR-661, hsa-miR-662, hsa-miR-663, hsa-miR-663b, hsa-miR-664, hsa-miR-664*, hsa-miR-665, hsa-miR-668, hsa-miR-671-Зр, hsa-miR-671-5p, hsa-miR-675, hsa-miR-7, hsa-miR-708, hsamiR-708*, hsa-miR-7-1*, hsa-miR-7-2*, hsa-miR-720, hsa-miR-744, hsa-miR-744*, hsa-miR758, hsa-miR-760, hsa-miR-765, hsa-miR-766, hsa-miR-767-Зр, hsa-miR-767-5p, hsa-miR-7683p, hsa-miR-768-5p, hsa-miR-769-Зр, hsa-miR-769-5p, hsa-miR-770-5p, hsa-miR-802, hsa-miR873, hsa-miR-874, hsa-miR-875-Зр, hsa-miR-875-5p, hsa-miR-876-Зр, hsa-miR-876-5p, hsamiR-877, hsa-miR-877*, hsa-miR-885-Зр, hsa-miR-885-5p, hsa-miR-886-Зр, hsa-miR-886-5p, hsa-miR-887, hsa-miR-888, hsa-miR-888*, hsa-miR-889, hsa-miR-890, hsa-miR-891a, hsa-miR891b, hsa-miR-892a, hsa-miR-892b, hsa-miR-9, hsa-miR-9*, hsa-miR-920, hsa-miR-921, hsamiR-922, hsa-miR-923, hsa-miR-924, hsa-miR-92a, hsa-miR-92a-l*, hsa-miR-92a-2*, hsa-miR92b, hsa-miR-92b*, hsa-miR-93, hsa-miR-93*, hsa-miR-933, hsa-miR-934, hsa-miR-935, hsamiR-936, hsa-miR-937, hsa-miR-93 8, hsa-miR-939, hsa-miR-940, hsa-miR-941, hsa-miR-942, hsa-miR-943, hsa-miR-944, hsa-miR-95, hsa-miR-96, hsa-miR-96*, hsa-miR-98, hsa-miR-99a, hsa-miR-99a*, hsa-miR-99b и hsa-miR-99b*.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько сайтов связывания в конструкции, которая описана в настоящем раскрытии (например, рекомбинантная нуклеиновая кислота, вектор на основе AAV, rAAV и т.д.), нарушают нацеливание экспрессии трансгена на клетку иммунной системы (например, антиген-презентирующую клетку (АРС)). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления miRNA, которая нарушает нацеливание экспрессии трансгена на иммунную клетку (например, антиген-презентирующую клетку), называется ассоциированной с иммунными клетками miRNA. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ассоциированная с иммунными клетками miRNA представляет собой miRNA, экспрессирующуюся в иммунных клетках, которая проявляет по меньшей мере 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-кратно более высокий уровень экспрессии в иммунной клетке по сравнению клеткой, отличной от иммунной клетки (например, контрольной клеткой, такой как клетка HeLa, клетка HEK293, мезенхимальная клетка и т.д.). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления клетка иммунной системы (иммунная клетка), в которой экспрессируется ассоциированная с иммунными клетками miRNA, представляет собой В-клетку, Т-клетку, Т-киллерную клетку, Т-хелперную клетку, γδ Т-клетку, дендритную клетку, макрофаг, моноцит, клетку сосудистого эндотелия или другую иммунную клетку. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления клетка иммунной системы представляет собой В-клетку, экспрессирующую один или несколько из следующих маркеров: В220, BLAST-2 (EBVCS), Bu-1, CD 19, CD20 (L26), CD22, CD24, CD27, CD57, CD72, CD79a, CD79b, CD86, chB6, D8/17, FMC7, L26, M17, MUM-1, Pax-5 (BSAP) и РС47Н. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления клетка иммунной системы представляет собой Т-клетку, экспрессирующую один или несколько из следующих маркеров: ART2, CD1a, CD1d, CD11b (Mac-1), CD134 (OX40), CD150, CD2, CD25 (альфа-рецептор интерлейкина 2), CD3, CD38, CD4, CD45RO, CD5, CD7, CD72, CD8, CRTAM, FOXP3, FT2, GPCA, HLA-DR, HML-1, НТ23А, Leu-22, Ly-2, Ly-m22, MICG, MRC OX8, MRC OX-22, OX40, PD-1 (белок 1 программируемой гибели клетки), RT6, TCR (Т-клеточный рецептор), Thy-1 (CD90) и TSA-2 (общий тимусный Ag-2). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ассоциированная с иммунными клетками miRNA является выбранной из miR-15a, miR-16-1, miR-17, miR-18a, miR-19a, miR-19b-1, miR-20a, miR-21, miR-29a/b/c, miR-30b, miR-31, miR-34a, miR-92a-1, miR-106a, miR125a/b, miR-142-3р, miR-146a, miR-150, miR-155, miR-181a, miR-223 и miR-424, miR-221, miR-222, let-7i, miR-148 и miR-152.
Векторы на основе рекомбинантного AAV (векторы на основе rAAV) Векторы на основе рекомбинантного AAV (rAAV) согласно настоящему раскрытию, как правило, состоят, как минимум, из трансгена и его регуляторных последовательностей, а также 5' и 3' инвертированных концевых повторов (ITR) AAV. Он представляет собой вектор на основе рекомбинантного AAV, который упакован в белок капсида и который доставляют в выбранную целевую клетку. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления трансген представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, гетерологичную по отношению к последовательностям вектора, которая кодирует полипептид, белок, функциональную молекулу РНК (например, gRNA) или другой продукт гена, представляющий интерес. Кодирующая последовательность нуклеиновой кислоты является функционально связанной с регуляторными компонентами таким образом, который обеспечивает возможность транскрипции, трансляции и/или экспрессии транс
- 11 045780 гена в клетке целевой ткани.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие относится к вектору на основе рекомбинантного AAV (rAAV), содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, включающую в себя промотор, функционально связанный с трансгеном, при этом трансген кодирует белок МеСР2 (например, изоформу е1 МеСР2). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вектор на основе rAAV дополнительно содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие одну или несколько последовательностей инвертированных концевых повторов (ITR) AAV, например, ITR AAV2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вектор на основе rAAV дополнительно содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие один или несколько ITR AAV, выбранных из группы, состоящей из AAV3, AAV4, AAV5 и AAV6. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ITR представляют собой искусственные последовательности, которые заменяют функцию ITR, например, которые раскрыты в международной заявке WO/2016/172008.
Последовательности AAV в векторе, как правило, содержат цис-действующие последовательности 5' и 3' инвертированных концевых повторов (см., например, B.J. Carter, Handbook of Parvoviruses, ed., P. Tijsser, CRC Press, p. 155-168 (1990)). Последовательности ITR имеют длину приблизительно 145 п.о. Предпочтительно в молекуле применяют по существу полные последовательности, кодирующие ITR, хотя допустимой является некоторая степень незначительной модификации этих последовательностей. Способность к модификации этих последовательностей ITR находится в рамках квалификации специалиста в данной области техники, (см., например, тексты, такие как Sambrook et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); и K. Fisher et al., J Virol., 70:520 532 (1996)). Примером такой молекулы, используемой в настоящем раскрытии, является цисдействующая плазмида, содержащая трансген, в которой последовательность выбранного трансгена и ассоциированные регуляторные элементы являются фланкированными последовательностями 5' и 3' ITR AAV. Последовательности ITR AAV можно получить из любого известного AAV, в том числе идентифицированных в настоящее время типов AAV млекопитающих (например, последовательности ITR AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 или AAV6).
Дополнительно к главным элементам, идентифицированным выше для вектора на основе рекомбинантного AAV, вектор также включает в себя необходимые управляющие элементы, которые являются функционально связанными с трансгеном таким образом, который обеспечивает возможность его транскрипции, трансляции и/или экспрессии в клетке, трансфицированной плазмидным вектором или инфицированной вирусом, полученным в соответствии с настоящим раскрытием. В контексте данного документа функционально связанные последовательности включают в себя как управляющие экспрессией последовательности, которые являются смежными с геном, представляющим интерес, так и управляющие экспрессией последовательности, которые действуют удаленно или на расстоянии, управляя геном, представляющим интерес.
Управляющие экспрессией последовательности включают в себя соответствующие последовательности для инициации, терминации транскрипции, промоторные и энхансерные последовательности; сигналы для эффективного процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования (полиА); последовательности, которые стабилизируют цитоплазматическую мРНК; последовательности, которые повышают эффективность трансляции (т.е. консенсусную последовательность Козак); последовательности, которые повышают стабильность белка; и, если это желательно, последовательности, которые усиливают секрецию кодируемого продукта. В уровне техники являются известными и могут использоваться большое число управляющих экспрессией последовательностей, в том числе промоторы, которые являются нативными, конститутивными, индуцируемыми и/или тканеспецифическими.
В контексте данного документа последовательность нуклеиновой кислоты (например, кодирующая последовательность) и регуляторные последовательности считаются функционально связанными, когда они являются ковалентно связанными таким образом, чтобы поместить экспрессию или транскрипцию последовательности нуклеиновой кислоты под влияние или управление регуляторных последовательностей. Если желательно, чтобы последовательности нуклеиновой кислоты транслировались в функциональный белок, две последовательности ДНК считаются функционально связанными, если индукция промотора в 5' регуляторных последовательностях приводит в результате к транскрипции кодирующей последовательности, и если природа связи между двумя последовательностями ДНК (1) не приводит в результате к введению мутации со сдвигом рамки считывания, (2) не препятствует способности промоторного участка управлять транскрипцией кодирующих последовательностей, или (3) не препятствует способности соответствующего РНК транскрипта транслироваться в белок. Следовательно, промоторный участок будет являться функционально связанным с последовательностью нуклеиновой кислоты, если промоторный участок способен к осуществлению транскрипции этой последовательности ДНК таким образом, чтобы образующийся в результате транскрипт мог транслироваться в желаемый белок или полипептид. Аналогично, два или больше кодирующих участков являются функционально связанными, когда они связаны таким образом, чтобы их транскрипция с общего промотора приводила в результате к экспрессии двух или более белков, которые подверглись трансляции в одной рамке считывания. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления функционально связанные кодирующие последова- 12 045780 тельности дают на выходе гибридный белок. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления функционально связанные кодирующие последовательности дают на выходе функциональную РНК (например, gRNA, miRNA).
В случае нуклеиновых кислот, кодирующих белок, последовательность полиаденилирования обычно вставляют после последовательностей трансгена и перед последовательностью 3' ITR AAV. Конструкция на основе rAAV, пригодная в настоящем раскрытии, также может содержать интрон, который желательно расположен между промоторной/энхансерной последовательностью и трансгеном. Одна возможная интронная последовательность получена из SV-40 и называется последовательностью Т интрона SV-40. Еще один элемент вектора, который можно применять, представляет собой участок внутренней посадки рибосомы (IRES). Последовательность IRES применяют для получения более чем одного полипептида из одного транскрипта гена. Последовательность IRES будут применять для получения белка, который содержит более чем одну полипептидную цепь. Выбор этих и/или других элементов вектора можно осуществлять в случае необходимости, и доступны многие такие последовательности (см., например, Sambrook et al., и источники, цитируемые там, например, на страницах 3.18 3.26 и 16.17 16.27, и Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, 1989). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления последовательность 2А-пептида из вируса ящура включают в полипротеин; он представляет собой небольшой пептид (примерно 18 аминокислот в длину), который, как было показано, опосредует расщепление полипротеинов (Ryan, M.D. et al., EMBO, 1994; 4:928-933; Mattion, N.M. et al., J. Virology, November 1996, p. 8124-8127; Furler, S. et al., Gene Therapy, 2001, 8:864-873; и Halpin, С. et al., The Plant Journal, 1999, 4:453-459). Расщепляющая активность последовательности 2A-пептида была ранее продемонстрирована в искусственных системах, в том числе в плазмидах и векторах для генной терапии (AAV и ретровирусы) (Ryan, M.D. et al., EMBO, 1994, 4:928-933; Mattion, N.M. et al., J. Virology, November 1996, p. 8124-8127; Furler, S. et al., Gene Therapy, 2001, 8:864-873; и Halpin, С. et al., The Plant Journal, 1999, 4:453-459; de Felipe, P. et al., Gene Therapy, 1999, 6:198-208; de Felipe, P. et al., Human Gene Therapy, 2000; 11:1921-1931; и Klump, H. et al., Gene Therapy, 2001; 8:811-817).
Точная природа регуляторных последовательностей, необходимых для экспрессии гена в клеткаххозяевах, может варьировать в зависимости от видов, тканей или типов клеток, но они обычно будут включать в себя, если необходимо, 5'-нетранскрибируемые и 5'-нетранслируемые последовательности, вовлеченные в инициацию транскрипции и трансляции, соответственно, такие как ТАТА-бокс, кэпирующая последовательность, последовательность СААТ, энхансерные элементы и т.п. В особенности, такие 5'-нетранскрибируемые регуляторные последовательности, будут включать в себя промоторный участок, который включает в себя промоторную последовательность для управления транскрипцией функционально связанного гена. Регуляторные последовательности также могут включать в себя энхансерные последовательности или вышележащие активирующие последовательности, если необходимо. Векторы согласно настоящему раскрытию необязательно могут включать в себя 5' лидерные или сигнальные последовательности. Выбор и конструирование соответствующего вектора находится в рамках способностей и усмотрения квалифицированного специалиста в данной области техники.
Примеры конститутивных промоторов включают в себя, без ограничения, ретровирусный промотор LTR вируса саркомы Рауса (RSV) (необязательно с энхансером RSV), промотор цитомегаловируса (CMV) (необязательно с энхансером CMV) [см., например, Boshart et al., Cell, 41:521-530 (1985)], промотор SV40, промотор дигидрофолат-редуктазы, промотор β-актина, промотор фосфоглицерат-киназы (PGK) и промотор EF1 α [Invitrogen]. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления промотор представляет собой промотор куриного β-актина с энхансером.
Индуцируемые промоторы обеспечивают возможность регуляции экспрессии гена и могут регулироваться под действием поступающих извне соединений, факторов окружающей среды, таких как температура, или присутствия конкретного физиологического состояния, например, острой фазы, конкретного состояния дифференцировки клетки или активны только в делящихся клетках. Индуцируемые промоторы и индуцируемые системы доступны из ряда коммерческих источников, в том числе, без ограничения, Invitrogen, Clontech и Ariad. Было описано много других систем, и они могут быть легко выбраны специалистом в данной области техники. Примеры индуцируемых промоторов, регулируемых под действием поступающих извне соединений, включают в себя индуцируемый цинком промотор металлотионеина (МТ) овцы, индуцируемый дексаметазоном (Dex) промотор вируса опухоли молочной железы мышей (MMTV), промоторную систему полимеразы Т7 (международная заявка WO 98/10088); экдизоновый промотор насекомых (No et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:3346-3351 (1996)), репрессируемую тетрациклином систему (Gossen et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 89:5547-5551 (1992)), индуцируемую тетрациклином систему (Gossen et al., Science, 268:1766-1769 (1995), см. также Harvey et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 2:512-518 (1998)), индуцируемую RU486 систему (Wang et al., Nat. Biotech., 15:239-243 (1997); и Wang et al., Gene Then, 4:432-441 (1997)) и индуцируемую рапамицином систему (Magari et al., J. Clin. Invest., 100:2865-2872 (1997)). Другие типы индуцируемых промоторов, которые могут быть пригодными в этом контексте, представляют собой промоторы, которые регулируются конкретным физиологическим состоянием, например, температурой, острой фазой, конкретным состоянием дифференцировки клетки
- 13 045780 или активны только в делящихся клетках.
В соответствии с еще одним вариантом осуществления для трансгена будут применять нативный промотор. Нативный промотор может быть предпочтительным, когда желательно, чтобы экспрессия трансгена имитировала нативную экспрессию. Нативный промотор можно применять, когда экспрессия трансгена должна регулироваться в зависимости от времени или стадии развития, или тканеспецифическим образом, или в ответ на специфические транскрипционные стимулы. Например, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления нативный промотор представляет собой промотор МеСР2, такой как промотор мышиного МеСР2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления промотор мышиного МеСР2 представлен последовательностью, изложенной в SEQ ID NO: 3. В соответствии с дополнительным вариантом осуществления другие нативные элементы для управления экспрессией, такие как энхансерные элементы, сайты полиаденилирования или консенсусные последовательности Козак, также можно применять для того, чтобы имитировать нативную экспрессию.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления регуляторные последовательности придают свойства тканеспецифической экспрессии гена. В некоторых случаях тканеспецифические регуляторные последовательности связывают тканеспецифические транскрипционные факторы, которые индуцируют транскрипцию тканеспецифическим образом. Такие тканеспецифические регуляторные последовательности (например, промоторы, энхансеры и т.д.) являются хорошо известными в уровне техники. Иллюстративные тканеспецифические регуляторные последовательности включают в себя, без ограничения, следующие тканеспецифические промоторы: специфический для глаза промотор ретиношизина или промотор K12, специфический для печени промотор тироксин-связывающего глобулина (TBG), инсулиновый промотор, глюкагоновый промотор, соматостатиновый промотор, промотор панкреатического полипептида (PPY), промотор синапсина-1 (Syn), промотор креатин-киназы (МСК), промотор десмина млекопитающего (DES), промотор тяжелой цепи а-миозина (а-МНС) или промотор сердечного тропонина Т (cTnT). Другие иллюстративные промоторы включают в себя промотор бета-актина, коровый промотор вируса гепатита В, Sandig et al., Gene Then, 3:1002-9 (1996); промотор альфа-фетопротеина (AFP), Arbuthnot et al., Hum. Gene Then, 7:1503-14 (1996)), промотор костного остеокальцина (Stein et al., Mol. Biol. Rep., 24:185-96 (1997)); промотор костного сиалопротеина (Chen et al., J. Bone Miner. Res., 11:654-64 (1996)), промотор CD2 (Hansal et al., J. Immunol., 161:1063-8 (1998); промотор тяжелой цепи иммуноглобулина; промотор α-цепи Т-клеточного рецептора, специфический для нейронов промотор, такой как промотор нейрон-специфической енолазы (NSE) (Andersen et al., Cell. Mol. Neurobiol., 13:503-15 (1993)), промотор гена легкой цепи нейрофиламента (Piccioli et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 88:5611-5 (1991)) и нейрон-специфический промотор гена vgf (Piccioli et al., Neuron, 15:373-84 (1995)), среди прочих, которые будут известны квалифицированному специалисту.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько сайтов связывания для одной или нескольких miRNA встроены в трансген в векторе на основе rAAV для того, чтобы ингибировать экспрессию трансгена в одной или нескольких тканях субъекта, несущего трансген. Квалифицированному специалисту будет понятно, что можно выбрать сайты связывания для управления экспрессией трансгена тканеспецифическим образом. Например, сайты связывания для специфической для печени miR-122 могут быть включены в трансген для ингибирования экспрессии этого трансгена в печени. Сайты-мишени в мРНК могут находиться в 5' UTR, 3' UTR или в кодирующем участке. Как правило, сайт-мишень находится в 3' UTR мРНК. Более того, трансген может быть сконструирован таким образом, чтобы несколько miRNA регулировали мРНК посредством распознавания одного и того же или нескольких сайтов. Наличие нескольких сайтов связывания miRNA может приводить в результате к согласованному действию нескольких RISC и обеспечивать высокоэффективное ингибирование экспрессии. Последовательность сайта-мишени может содержать в общей сложности 5-100, 10-60 или больше нуклеотидов. Последовательность сайта-мишени может содержать по меньшей мере 5 нуклеотидов последовательности сайта связывания в целевом гене.
Рекомбинантные аденоассоциированные вирусы (rAAV).
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к выделенным AAV. В контексте данного документа применительно к AAV термин выделенный относится к AAV, который был искусственно продуцирован или получен. Выделенные AAV могут быть получены с применением способов на основе рекомбинации. Такие AAV называются в данном документе рекомбинантными AAV. Рекомбинантные AAV (rAAV) предпочтительно обладают способностью к тканеспецифическому нацеливанию, в результате чего нуклеаза и/или трансген в rAAV будут доставляться специфически в одну или несколько предварительно определенных тканей. Капсид AAV является важным элементом в определении этих способностей к тканеспецифическому нацеливанию. Таким образом, можно выбрать rAAV, имеющий капсид, подходящий для ткани, которая является целевой.
Способы получения рекомбинантных AAV, имеющих желаемый белок капсида, являются хорошо известными в уровне техники (см., например, заявку на патент США US 2003/0138772), содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Как правило, способы включают культивирование клетки-хозяина, которая содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок капсида AAV; функциональный ген rep; вектор на основе рекомбинантного
- 14 045780
AAV, состоящий из инвертированных концевых повторов AAV (ITR) и трансгена; а также достаточные функциональные элементы помощника, чтобы обеспечить возможность упаковки вектора на основе рекомбинантного AAV в белки капсида AAV. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белки капсида представляют собой структурные белки, кодируемые геном cap в AAV. AAV содержат три белка капсида, вирионные белки 1-3 (называемые VP1, VP2 и VP3), все из которых транскрибируются с одного гена cap посредством альтернативного сплайсинга. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления молекулярные массы VP1, VP2 и VP3 составляют приблизительно 87 кДа, приблизительно 72 кДа и приблизительно 62 кДа, соответственно. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления после трансляции белки капсида образуют сферическую оболочку из 60 мономерных белковых единиц вокруг вирусного генома. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления функции белков капсида заключаются в защите вирусного генома, доставке генома и взаимодействии с хозяином. В соответствии с некоторыми аспектами белки капсида доставляют вирусный геном хозяину тканеспецифическим образом.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления rAAV, описанный в настоящем раскрытии, содержит один или несколько белков капсида, способных к пересечению гематоэнцефалического барьера. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по меньшей мере один белок капсида имеет серотип, выбранный из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV2i8, AAV2.5, AAV6, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAVrh10, AAV-B1, AAV9.45A-String (например, AAV9.45-AS), AAV9.45Angiopep, AAV9.47-Angiopep и AAV9.47-AS. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по меньшей мере один белок капсида имеет серотип AAV-PHP.B, например, как описано в патенте США № 9585971. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления белок капсида имеет серотип, который описан в международной заявке WO 2015/127128, WO 2016/054554, WO 2016/054557 или WO 2016/065001.
Компоненты, подлежащие культивированию в клетке-хозяине для упаковки вектора на основе rAAV в капсид AAV, могут быть обеспечены клетке-хозяину in trans (удаленно). В качестве альтернативы, любой один или несколько из требующихся компонентов (например, вектор на основе рекомбинантного AAV, последовательности rep, последовательности cap и/или функциональные элементы помощника) могут быть обеспечены стабильной клеткой-хозяином, которая была подвергнута воздействию методов генной инженерии таким образом, чтобы она содержала один или несколько из требующихся компонентов, с применением способов, известных специалисту в данной области техники. В наиболее подходящем случае такая стабильная клетка-хозяин будет содержать требующий(ие)ся компонент(ы) под управлением индуцируемого промотора. Тем не менее требующий(ие)ся компонент(ы) могут находиться под управлением конститутивного промотора. Примеры подходящих индуцируемых и конститутивных промоторов представлены в данном документе в обсуждении регуляторных элементов, подходящих для применения с трансгеном. В качестве еще одной альтернативы выбранная стабильная клетка-хозяин может содержать выбранный(ые) компонент(ы) под управлением конститутивного промотора и другой(ие) выбранный(ые) компонент(ы) под управлением одного или нескольких индуцируемых промоторов. Например, может быть создана стабильная клетка-хозяин, которая получена из клеток 293 (которые содержат функциональные элементы помощника Е1 под управлением конститутивного промотора), но которая содержит белки rep и/или cap под управлением индуцируемых промоторов. Другие стабильные клетки-хозяева могут быть получены специалистом в данной области техники.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие относится к клеткехозяину, содержащей нуклеиновую кислоту, которая содержит кодирующую последовательность, которая кодирует белок (например, белок МеСР2, такой как изоформа el MeCP2). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие относится к композиции, содержащей клеткухозяина, которая описана выше. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция, содержащая описанную выше клетку-хозяина, дополнительно содержит криопротектор.
Вектор на основе рекомбинантного AAV, последовательности rep, последовательности cap и функциональные элементы помощника, требующиеся для продуцирования rAAV согласно настоящему раскрытию, могут быть доставлены в пакующую клетку-хозяин с применением любого подходящего генетического элемента (вектора). Выбранный генетический элемент можно доставлять можно доставлять с помощью любого подходящего способа, в том числе с помощью способов, описанных в данном документе. Способы, применяемые для конструирования любого варианта осуществления согласно настоящему раскрытию, являются известными специалистам, обладающим навыками манипуляций с нуклеиновыми кислотами, и включают в себя методы генной инженерии, конструирование с использованием методик на основе рекомбинации и методики синтеза (см., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.). Аналогично способы получения вирионов rAAV являются хорошо известными, и выбор подходящего способа не является ограничением в отношении настоящего раскрытия (см., например, K. Fisher et al., J. Virol., 70:520-532 (1993); и патент США № 5478745).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления рекомбинантные AAV можно получать с применением способа тройной трансфекции (подробно описанного в патенте США № 6001650). Как правило, рекомбинантные AAV получают посредством трансфекции клетки-хозяина вектором на основе
- 15 045780 рекомбинантного AAV (содержащим трансген), который должен быть упакован в частицы AAV, вектором, обеспечивающим функциональные элементы помощника AAV, и вектором, обеспечивающим вспомогательные функциональные элементы. Вектор, обеспечивающий функциональные элементы помощника AAV, кодирует последовательности функциональных элементов помощника AAV (т.е. rep и cap), которые функционируют in trans (удаленно) для продуктивной репликации AAV и заключения его в капсид. Предпочтительно, вектор, обеспечивающий функциональные элементы помощника AAV, поддерживает эффективное продуцирование вектора на основе AAV без образования каких-либо выявляемых вирионов AAV дикого типа (т.е. вирионов AAV, содержащих функциональные гены rep и cap). Неограничивающие примеры векторов, подходящих для применения с настоящим раскрытием, включают в себя pHLP19, описанный в патенте США № 6001650, и вектор pRep6cap6, описанный в патенте США № 6156303, при этом полное содержание обоих этих источников включено в данный документ посредством ссылки. Вектор, обеспечивающий вспомогательные функциональные элементы, кодирует нуклеотидные последовательности для вирусных и/или клеточных функциональных элементов, не происходящих из AAV, от которых зависит репликация AAV (т.е. вспомогательные функциональные элементы). Вспомогательные функциональные элементы включают в себя те функциональные элементы, которые требуются для репликации AAV, в том числе без ограничения те фрагменты, которые вовлечены в активацию транскрипции генов AAV, специфический для стадии развития AAV сплайсинг мРНК, репликацию ДНК AAV, синтез продуктов экспрессии гена cap и сборку капсида AAV. Вспомогательные функциональные элементы на основе вирусов могут быть получены из любого из известных вирусовпомощников, таких как аденовирус, вирус герпеса (отличный от вируса простого герпеса 1 типа) и вирус коровьей оспы.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к трансфицированным клеткам-хозяевам. Термин трансфекция используют применительно к поглощению чужеродной ДНК клеткой, и клетка была трансфицирована, если экзогенная ДНК была введена внутрь клеточной мембраны. В целом в уровне техники известен ряд методик трансфекции. См., например, Graham et al. (1973), Virology, 52:456; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning, a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York; Davis et al. (1986), Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier; и Chu et al. (1981), Gene, 13:197. Такие методики можно применять для введения одной или нескольких экзогенных нуклеиновых кислот, таких как интегрирующий вектор и другие молекулы нуклеиновой кислоты, в подходящие клетки-хозяева.
Клетка-хозяин относится к любой клетке, которая вмещает или способна вмещать вещество, представляющее интерес. Часто клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего. Клеткухозяин можно применять в качестве реципиента конструкции-помощника AAV, плазмиды с минигеном AAV, вектора, обеспечивающего вспомогательные функциональные элементы, или другой переносимой ДНК, ассоциированной с продуцированием рекомбинантных AAV. Термин включает в себя потомство исходной клетки, которая подверглась трансфекции. Таким образом, термин клетка-хозяин в контексте данного документа может относиться к клетке, которая подверглась трансфекции экзогенной последовательностью ДНК. Понятно, что потомство одной родительской клетки не обязательно может быть полностью идентичным по морфологии или соответствовать по геномной или общей ДНК исходной родительской клетке вследствие природной, случайной или преднамеренной мутации.
В контексте данного документе термин клеточная линия относится к популяции клеток, способных к непрерывному или длительному росту и делению in vitro. Клеточные линии часто представляют собой клональные популяции, полученные из одной клетки-предшественника. Кроме того, в уровне техники известно, что спонтанные или индуцированные изменения могут происходить в кариотипе во время хранения или переноса таких клональных популяций. Таким образом, клетки, полученные из упомянутой клеточной линии, не обязательно могут быть в точности идентичными предковым клеткам или культурам, и упомянутая клеточная линия включает в себя такие варианты.
В контексте данного документа термин рекомбинантная клетка относится к клетке, в которую был введен экзогенный сегмент ДНК, такой как сегмент ДНК, который приводит к транскрипции биологически активного полипептида или продуцированию биологически активной нуклеиновой кислоты, такой как РНК.
В контексте данного документа термин вектор включает в себя любой генетический элемент, такой как плазмида, фаг, транспозон, космида, хромосома, искусственная хромосома, вирус, вирион и т.д., который является способным к репликации, когда он ассоциирован с соответствующими управляющими элементами, и который может переносить последовательности генов между клетками. Таким образом, термин включает в себя средства для клонирования и экспрессии, а также вирусные векторы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что пригодные векторы представляют собой те векторы, в которых сегмент нуклеиновой кислоты, подлежащий транскрипции, расположен под транскрипционным управлением промотора. Термин промотор относится к последовательности ДНК, которая распознается синтетическим аппаратом клетки или введенным синтетическим аппаратом и требуется для инициации специфической транскрипции гена. Фразы расположенный в функциональной связи, под управлением или под транскрипционным управлением означают, что промотор находит
- 16 045780 ся в правильном положении и ориентации относительно нуклеиновой кислоты для управления запуском РНК-полимеразы и экспрессией гена. Термин экспрессионный вектор или конструкция означает любой тип генетической конструкции, которая содержит нуклеиновую кислоту, и в которой способна транскрибироваться часть кодирующей последовательности нуклеиновой кислоты или она вся. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления экспрессия включает в себя транскрипцию нуклеиновой кислоты, например, с образованием биологически активного полипептида-продукта или функциональной РНК (например, гидовой РНК), с транскрибируемого гена.
Не предполагается, что вышеуказанные способы упаковки рекомбинантных векторов в желаемые капсиды AAV с получением rAAV согласно настоящему раскрытию являются ограничивающими, и другие подходящие способы будут очевидны квалифицированному специалисту.
Способы введения.
Композиции, описанные в настоящем раскрытии (например, рекомбинантные нуклеиновые кислоты, rAAV, фармацевтические композиции и т.д.) можно доставлять субъекту согласно любым подходящим способам, известным в уровне техники. Композиции (например, рекомбинантные нуклеиновые кислоты, rAAV, фармацевтические композиции и т.д.), предпочтительно, суспендированные в физиологически совместимом носителе (т.е. в композиции), можно вводить субъекту, т.е. животному-хозяину, такому как человек, мышь, крыса, кошка, собака, овца, кролик, лошадь, корова, коза, свинья, морская свинка, хомяк, курица, индейка или отличный от человека примат (например, макак). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животное-хозяин не включает в себя человека. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект представляет собой человека. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект имеет возраст менее года, например, имеет возраст 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 месяцев.
Доставку композиций субъекту-млекопитающему можно осуществлять, например, с помощью системной инъекции (например, внутривенной инъекции) или интратекальной инъекции. Также можно применять дополнительные способы введения композиций в ЦНС субъекта, например, внутричерепную инъекцию, инъекцию в полосатое тело и т.д. Также можно применять комбинации способов введения (например, местного введения и интрастромальной инъекции).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции согласно настоящему раскрытию могут содержать rAAV отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими вирусами (например, вторым rAAV, кодирующим один или несколько отличных трансгенов). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более отличающихся rAAV, каждый из которых имеет один или несколько отличающихся трансгенов.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель. Подходящие носители могут быть легко выбраны специалистом в данной области техники с учетом показаний, на которые направлена композиция. Например, один подходящий носитель включает в себя солевой раствор, который может быть составлен с рядом буферных растворов (например, фосфатно-буферный солевой раствор). Другие иллюстративные носители включают в себя стерильный солевой раствор, лактозу, сахарозу, фосфат кальция, желатин, декстран, агар, пектин, арахисовое масло, кунжутное масло и воду. Выбор носителя не является ограничением настоящего раскрытия.
Необязательно композиции согласно настоящему раскрытию могут содержать дополнительно к рекомбинантной нуклеиновой кислоте или rAAV и носителю(носителям) другие фармацевтические ингредиенты, такие как консерванты или химические стабилизаторы. Подходящие иллюстративные консерванты включают в себя хлорбутанол, сорбат калия, сорбиновую кислоту, диоксид серы, пропилгаллат, парабены, этилванилин, глицерин, фенол и парахлорфенол. Подходящие химические стабилизаторы включают в себя желатин и альбумин.
Композиции вводят в достаточных количествах для трансфекции клеток желаемой ткани (например, ткани ЦНС) и для обеспечения достаточных уровней переноса и экспрессии генов без неоправданных неблагоприятных эффектов. Примеры фармацевтически приемлемых путей введения включают в себя, без ограничения, непосредственную доставку в выбранный орган (например, интрастромальную доставку в глаз), пероральное, ингаляционное введение (в том числе интраназальную и интратрахеальную доставку), внутриглазное, внутривенное, внутримышечное, подкожное, интрадермальное, внутриопухолевое введение и другие парентеральные пути введения. Пути введения можно комбинировать, если это является желательным.
Доза вирионов rAAV, требующаяся для достижения конкретного терапевтического эффекта, например, единицы дозы в копиях генома на килограмм массы тела (gc/кг) будут варьировать в зависимости от нескольких факторов, в том числе без ограничения пути введения вириона rAAV, уровня экспрессии гена или РНК, требующегося для достижения терапевтического эффекта, конкретного заболевания или нарушения, лечение которого осуществляют, и стабильности продукта гена или РНК-продукта. Специалист в данной области техники может легко определить диапазон дозы вириона rAAV для лечения пациента, имеющего конкретное заболевание или нарушение, с учетом вышеупомянутых факторов, а также других факторов.
- 17 045780
Эффективное количество композиции (например, рекомбинантной нуклеиновой кислоты, rAAV, фармацевтической композиции и т.д.) представляет собой количество, достаточное для целенаправленного инфицирования животного, целенаправленного воздействия на желаемую ткань. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления эффективное количество rAAV представляет собой количество, достаточное для получения стабильной соматической трансгенной животной модели. Эффективное количество, преимущественно, будет зависеть от таких факторов, таких как вид, возраст, масса, состояние здоровья субъекта и ткань, подлежащая целенаправленному воздействию, и, следовательно, может варьировать между животными и тканями. Например, эффективное количество rAAV обычно находится в диапазоне от приблизительно 1 мл до приблизительно 100 мл раствора, содержащего от приблизительно 109 до 1016 копий генома. В некоторых случаях подходящей является дозировка от приблизительно 1011 до 1013 копий генома rAAV. В соответствии с определенными вариантами осуществления 1010 или 1011 копий генома rAAV являются эффективными для целенаправленного воздействия на ткань ЦНС (например, ткань роговицы). В некоторых случаях стабильных трансгенных животных получают под действием нескольких доз rAAV.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в календарные сутки (например, 24-часовой период). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в 2, 3, 4, 5, 6 или 7 календарных суток. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в календарную неделю (например, 7 календарных суток). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в две недели (например, один раз за период двух календарных недель). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в календарный месяц (например, один раз в 30 календарных суток). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в шесть календарных месяцев. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления дозу композиции вводят субъекту не более чем один раз в календарный год (например, 365 суток или 366 суток в високосный год).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции составляют для снижения агрегации частиц AAV в композиции, в особенности, в случае, когда присутствуют высокие концентрации rAAV (например, ~1013 gc/мл или более). Можно применять подходящие способы для снижения агрегации, в том числе, например, добавление поверхностно-активных веществ, регулирование рН, регулирование концентрации соли и т.д. (см., например, Wright F.R. et al., Molecular Therapy (2005), 12, 171-178, при этом содержание данного источника включено в данный документ посредством ссылки).
Получение составов с фармацевтически приемлемыми вспомогательными средствами и растворами-носителями является хорошо известным специалистам в данной области техники, как и разработка подходящих схем дозирования и лечения для применения конкретных композиций, описанных в данном документе, в ряде схем лечения. Как правило, эти составы могут содержать по меньшей мере приблизительно 0,1% активного соединения или большее количество, хотя процентное содержание активного(активных) ингредиента(ингредиентов) может, конечно, варьировать и может условно составлять от приблизительно 1 или 2% до приблизительно 70 или 80% массы или объема всего состава или больше. Естественно, количество активного соединения в каждой пригодной с терапевтической точки зрения композиции может быть приготовлено таким образом, что подходящая дозировка будет получена при любой заданной стандартной дозе соединения. Такие факторы, как растворимость, биологическая доступность, биологический период полувыведения, путь введения, срок хранения продукта, а также другие фармакологические особенности, будут учитываться специалистом в области приготовления таких фармацевтических составов, и в связи с этим может быть желателен ряд дозировок и схем лечения.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции (например, рекомбинантные нуклеиновые кислоты, rAAV, фармацевтические композиции и т.д.) в подходящим образом составленных фармацевтических композициях, раскрытых в данном документе, доставляют напрямую в целевую ткань, например, напрямую в ткань ЦНС (например, головной мозг, спинной мозг и т.д.). Тем не менее в определенных обстоятельствах желательной может быть раздельная доставка или дополнительная доставка композиций посредством другого пути, например, подкожно, внутрь поджелудочной железы, интраназально, парентерально, внутривенно, внутримышечно, интратекально или перорально, внутрибрюшинно или посредством ингаляции. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления способы введения, которые описаны в патентах США № 5543158; 5641515; и 5399363 (каждый из которых специально включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте), можно применять для доставки rAAV. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предпочтительным способом введения является внутривенная инъекция.
Фармацевтические формы, подходящие для применения в виде инъекционного раствора, включают в себя стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий непосредственно перед введением. Дисперсии также могут быть приготовлены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях, а также в маслах. При обычных условиях хранения и применения эти препараты содержат консервант для предотвращения роста
- 18 045780 микроорганизмов. Во многих случаях форма является стерильной и текучей настолько, насколько это обеспечивает возможность легкого введения с помощью шприца. Она должна быть стабильной при условиях производства и хранения и должна быть защищена от контаминирующего воздействия микроорганизмов, таких как бактерии и грибки. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие смеси и/или растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, за счет применения покрытия, такого как лецитин, за счет поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и за счет применения поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечивать за счет различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях предпочтительным будет включение изотоничных средств, например, сахаров или хлорида натрия. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может быть обусловлена применением в композициях средств, которые задерживают абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.
Например, в случае введения инъекционного водного раствора раствор может быть подходящим образом стабилизирован буфером, если необходимо, и жидкий разбавитель вначале делают изотоничным с использованием достаточного количества солевого раствора или глюкозы. Эти конкретные водные растворы являются особенно подходящими для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В этом контексте можно использовать подходящую стерильную водную среду. Например, одну дозу можно растворить в 1 мл изотоничного раствора NaCl и либо добавить к 1000 мл жидкости для подкожной инфузии, либо вводить в предполагаемое место инфузии (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th edition, с. 1035-1038 и 1570-1580). Некоторое изменение дозировки обязательно будет возникать в зависимости от состояния хозяина. В этом случае лицо, ответственное за введение, будет определять подходящую дозу для отдельного хозяина.
Стерильные инъекционные растворы готовят посредством включения композиций (например, рекомбинантных нуклеиновых кислот, rAAV, фармацевтических композиций и т.д.) в требуемом количестве в соответствующий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными в данном документе, если это необходимо, с последующей стерилизацией фильтрованием. Обычно дисперсии готовят посредством включения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильную среду, которая содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из числа перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами получения являются методики вакуумной сушки и сублимационной сушки, которые дают на выходе порошок активного ингредиента, а также любого дополнительного желаемого ингредиента из их раствора, ранее подвергнутого стерилизации фильтрованием.
Композиции (например, рекомбинантные нуклеиновые кислоты, rAAV, фармацевтические композиции и т.д.), раскрытые в данном документе, также могут быть составлены в нейтральной или солевой форме. Фармацевтически приемлемые соли включают в себя соли присоединения кислоты (образованные со свободными аминогруппами в белке), которые образуются с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или с такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и т.п. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, также могут быть получены с неорганическими основаниями, такими как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или трехвалентного железа, и такими органическими основаниями, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и т.п. После составления растворы будут вводить способом, совместимым с дозируемым составом, и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Составы можно легко вводить в ряде лекарственных форм, таких как инъекционные растворы, капсулы для высвобождения лекарственного средства и т.п.
В контексте данного документа термин носитель включает в себя любые и все растворители, дисперсионные среды, среды, покрытия, разбавители, антибактериальные и противогрибковые средства, изотоничные средства и средства, задерживающие абсорбцию, буферы, растворы-носители, суспензии, коллоиды и т.п. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных субстратов хорошо известно в уровне техники. В композиции также могут быть включены дополнительные активные ингредиенты. Фраза фармацевтически приемлемый относится к молекулам и композициям, которые не вызывают аллергическую или подобную нежелательную реакцию при введении хозяину.
Среды для доставки, такие как липосомы, нанокапсулы, микрочастицы, микросферы, липидные частицы, пузырьки и т.п., можно применять для введения композиций согласно настоящему изобретению в подходящие клетки-хозяева. В частности, доставляемые вектором на основе rAAV трансгены могут быть составлены для доставки инкапсулированными в любом из липидной частицы, липосомы, пузырька, наносферы или наночастицы или в подобном.
Такие составы могут быть предпочтительными для введения фармацевтически приемлемых составов нуклеиновых кислот или конструкций на основе rAAV, раскрытых в данном документе. Образование и применение липосом, в целом, является известным специалистам в данной области техники. Недавно были разработаны липосомы с улучшенной стабильностью в сыворотке крови и периодами полужизни в
- 19 045780 сыворотке крови (патент США № 5741516). Кроме того, были описаны различные способы получения липосом и липосомоподобных препаратов в качестве потенциальных носителей лекарственных средств (патенты США № 5567434; 5552157; 5565213; 5738868; и 5795587).
Липосомы успешно применялись с рядом типов клеток, которые в норме являются устойчивыми к трансфекции с помощью других процедур. Кроме того, липосомы свободны от ограничений по длине ДНК, которые являются типичными для систем доставки на основе вирусов. Липосомы эффективно применялись для введения генов, лекарственных средств, радиотерапевтических средств, вирусов, транскрипционных факторов и аллостерических эффекторов в ряд культивируемых клеточных линий и животных. Кроме того, завершились несколько успешных клинических испытаний, оценивающих эффективность опосредуемой липосомами доставки лекарственного средства.
Липосомы образуются из фосфолипидов, которые диспергированы в водной среде и спонтанно образуют многослойные концентрические пузырьки из бислоев (также называемые многослойными пузырьками (MLV). MLV обычно имеют диаметры от 25 нм до 4 мкм. Ультразвуковая обработка MLV приводит в результате к образованию небольших однослойных пузырьков (SUV) с диаметрами в диапазоне от 200 до 500 Ангстрем, содержащих водный раствор во внутренней части.
В качестве альтернативы можно применять составы нанокапсул с rAAV. Нанокапсулы обычно могут стабильно и воспроизводимо захватывать вещества. Во избежание побочных эффектов вследствие внутриклеточной перегрузки полимерами, такие ультратонкодисперсные частицы (с размером около 0,1 мкм) следует конструировать с применением полимеров, которые способны разлагаться in vivo. Для применения предусматриваются биоразлагаемые полиалкил-цианоакрилатные наночастицы, которые соответствуют этим требованиям.
Способы лечения синдрома Ретта.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее раскрытие относится к композициям и способам для лечения синдрома Ретта. Синдром Ретта представляет собой генетическое неврологическое нарушение, вызванное одной или несколькими мутациями с потерей функции в гене МеСР2, например, как описано в Suter et al., J. Autism Dev. Disord., 2014 Mar, 44(3):703-711. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект, имеющий синдром Ретта, имеет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше мутаций с потерей функции в гене МеСР2.
В контексте данного документа термины лечение, осуществление лечения и терапия относятся к терапевтическому лечению, а также к профилактическим или превентивным манипуляциям. Термины дополнительно включают в себя ослабление существующих симптомов, предупреждение дополнительных симптомов, ослабление или предупреждение первопричин симптомов, предупреждение или обращение развития причин симптомов, например, симптомов, ассоциированных с заболеванием, вызванным мутацией с потерей функции, например синдрома Ретта. Таким образом, термины обозначают, что благоприятный результат был достигнут у субъекта с нарушением (например, синдромом Ретта) или у субъекта с потенциалом к развитию такого нарушения. Более того, термин лечение определен как применение или введение средства (например, терапевтического средства или терапевтической композиции) субъекту или в выделенную ткань или клеточную линию от субъекта, который может иметь заболевание, симптом заболевания или предрасположенность к заболеванию, с целью излечения, заживления, облегчения, смягчения, изменения, устранения, ослабления, улучшения или воздействия на заболевание, симптомы заболевания или предрасположенность к заболеванию.
Терапевтические средства или терапевтические композиции могут включать в себя соединение в фармацевтически приемлемой форме, которая предупреждает и/или уменьшает симптомы конкретного заболевания (например синдрома Ретта). Например, терапевтическая композиция может представлять собой фармацевтическую композицию, которая предупреждает и/или уменьшает симптомы синдрома Ретта. Предполагается, что терапевтическая композиция согласно настоящему изобретению будет обеспечена в любой подходящей форме. Форма терапевтической композиции будет зависеть от ряда факторов, в том числе от способа введения, как описано в данном документе. Терапевтическая композиция может содержать разбавители, вспомогательные вещества и вспомогательные средства в числе прочих ингредиентов, которые описаны в данном документе.
Примеры
Пример 1. Анализ экспрессии гена изоформы e1 человеческого МеСР2 in vitro.
Примерно 80% случаев синдрома Ретта вызваны мутациями в сцепленном с X-хромосомой гене, кодирующем метил-CpG-связывающий белок 2 (МеСР2), экспрессирующийся в широком спектре тканей эпигенетический регулятор, который экспрессируется на высоких уровнях в зрелых нейронах. Большинство пациентов с синдромом Ретта несут нормальный и мутантный аллель МеСР2. Заболевание является результатом случайной инактивации Х-хромосомы, при которой ~50% нейронов имеют недостаточность МеСР2 вследствие инактивации нормального аллеля, в то время как в других ~50% нейронов мутантный аллель подвергается сайленсингу, и сохраняется нормальная экспрессия МеСР2 дикого типа. Неоднородность недостаточности МеСР2 в ЦНС имеет важные последствия для разработки подходов к генной терапии для синдрома Ретта. В моделях синдрома Ретта на мышах наблюдали возможность обращения развития неврологических фенотипов после восстановления нормальной экспрессии МеСР2 у взрослых.
- 20 045780
В этих экспериментах на трансгенных животных восстановленную экспрессию МеСР2 запускали с его нативного геномного локуса, и активация достигалась в большинстве клеток в головном мозге. Тем не менее перенос гена в соматические клетки еще не повторил ни одного из этих успехов.
Обычно МеСР2 характеризуется очень узким окном безопасных уровней экспрессии, поскольку у пациентов с дупликацией локуса МеСР2, как правило, присутствует задержка развития двигательных и когнитивных функций, а также тяжелое умственное расстройство. Эксперименты в моделях на трансгенных мышах подтверждают это утверждение, поскольку эктопическая экспрессия МеСР2 является токсичной у животных дикого типа, но безопасной и отчасти эффективной в ослаблении фенотипов заболевания у мышей с недостаточностью МеСР2, когда экспрессия трансгена начинается в ходе эмбрионального развития. Примечательно, что ген МеСР2 подвергается альтернативному сплайсингу с образованием двух белков с отличающимися N-концами, обозначенными как МеСР2-е1 и МеСР2-е2. У пациентов с дупликацией локуса МеСР2 сверхэкспрессируются обе изоформы МеСР2. Таким образом, симптомы у пациентов с дупликацией локуса МеСР2 и результаты на трансгенных мышах могут объясняться сверхэкспрессией изоформы МеСР2-е2 и временным паттерном экспрессии трансгена в ходе развития.
Предшествующие терапевтические эксперименты с AAV9-MeCP2-e1 сосредоточивались на внутрисосудистой (IV) или интрацеребровентрикулярной (ICV) доставке в неонатальный период, и в некоторых случаях они столкнулись с летальной печеночной токсичностью и поджатием задней конечности. Более того, возраст мышей, получавших обработку в таких экспериментах, не обязательно соответствует тому, в котором, вероятно, должно осуществляться лечение в случае большинства пациентов с синдромом Ретта, которые предположительно будут получать лечение после появления симптомов (6-18 месяцев). У людей начальная фаза синаптогенеза происходит в первые 2 года и совпадает с быстрым повышением не-CG-метилирования ДНК в нейронах, а также появлением симптомов у пациентов с синдромом Ретта. У мышей синаптогенез происходит в возрасте от 2 до 4 недель. Таким образом, критически важной является оценка эффективности и возможной токсичности доставки гена AAV-MeCP2 на соответствующих стадиях развития после 0-1 суток после рождения. Кроме того, важным ограничением для использования системной доставки гена AAV для лечения нарушений ЦНС является трансдукция органов, отличных от головного мозга, таких как печень, которая является органом с наиболее высоким тропизмом для AAV в организме.
Был сконструирован ряд новых векторов AAV-MeCP2, которые исключают экспрессию гена в периферических органах, а также обеспечивают саморегуляцию экспрессии МеСР2. Обычно мРНК МеСР2 несет либо короткий (1,8 кбаз), либо длинный (~10 кбаз) 3'UTR, при этом последний является преимущественной изоформой, экспрессирующейся в головном мозге. Конструкции мРНК МеСР2, описанные в этом примере, содержат кодирующую последовательность белка изоформы МеСР2-е1 и несколько регуляторных элементов для miRNA (MRE). Наблюдали, что трансляция МеСР2 в ЦНС регулируется miR-132 посредством гомеостатического механизма, включающего изменения уровней нейротрофического фактора головного мозга (BNDF) в ответ на экспрессию МеСР2 (фиг. 1А). Исходя из этого механизма в ряде векторов AAV-MeCP2 увеличенные количества MRE для miR-132 (например, сайтов связывания miR-132) сочетаются с фиксированным количеством MRE для miR-1 и miR-122 (например, сайтов связывания 3х-miR-1 и 3x-mir-122) для нарушения нацеливания экспрессии генов AAV на скелетные мышцы и печень (фиг. 1В).
Осуществляли серию экспериментов in vitro. Кратко клетки HEK293T трансфицировали AAV2MeCP2 в дозе 30000 gc/клетка в течение четырех суток. На фиг. 2А, 2В представлена эффективная экспрессия AAV2-MeCP2 в клетках HEK293T, измеренная методом Вестерн-блоттинга (фиг. 2А) и с помощью нормализованного анализа экспрессии белка (фиг. 2В). На фиг. 2С представлен профиль токсичности у клеток 293Т, трансдуцированных AAV2-MeCP2, в течение четырех суток при дозе 30000 gc(копий генома)/клетка.
Исследование зависимости доза-ответ в первичных нейронах коры головного мозга демонстрировало сравнимые эффекты в отношении выживаемости клеток в случае векторов AAV-GFP и AAV-MeCP2 (фиг. 3А), указывающие на то, что экспрессия меченого myc человеческого МеСР2 с короткого мышиного промотора МеСР2 (от -223 до +56) является нетоксичной для первичных нейронов в культуре. Кроме того, наблюдали, что уровни белка МеСР2-myc были обратно пропорциональными числу MRE для miR-132 (например, сайтов связывания miR-132), присутствующих в транскрипте МеСР2-myc (фиг. 3В). На фиг. 3С представлена экспрессия miR-132 в ответ на AAV2-MeCP2 через пять суток после инфицирования AAV.
Пример 2. Анализ экспрессии гена изоформы e1 человеческого МеСР2 у мышей дикого типа после системной доставки AAV-МеСР2.
Чтобы расширить наблюдения in vitro, демонстрирующие возможность регулирования уровней МеСР2 посредством вставки последовательностей-мишеней miR-132, описанных в примере 1, мышам дикого типа в 1 сутки после рождения вводили инъекцией через лицевую вену (например, внутричерепная инъекция) AAV, кодирующий изоформу e1 человеческого МеСР2 и содержащий 0, 1, 2 или 3 последовательности-мишени miR-132. Анализ экспрессии гена в ткани головного мозга показал, что уровни МеСР2 являются обратно пропорциональными числу последовательностей-мишеней miR132 (фиг. 4А-4С).
- 21 045780
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления системное введение некоторых серотипов AAV может трансдуцировать ткани за пределами центральной нервной системы, и наблюдали, что повышенная экспрессия МеСР2 в тканях печени, сердца и скелета является ассоциированной с вредными физиологическими последствиями. Для сведения к минимуму трансдукции МеСР2 сердца и печени векторы AAV-MeCP2, описанные в настоящем раскрытии, содержат по меньшей мере одну последовательность-мишень miR-1 (например, 3х-miR-1) и по меньшей мере одну последовательность-мишень miR-122 (например, 3х-miR-l22) (например, сайты связывания) для нарушения нацеливания экспрессии МеСР2 на сердце и печень, соответственно. Осуществляли анализ методом qRT-PCR с применением праймеров для изоформы е2 человеческого МеСР2 (которая не выявлялась) и для изоформ e1 и е2 мышиного МеСР2 (уровень экспрессии которых не изменялся). Анализ экспрессии гена в ткани сердца и печени от животных дикого типа указывал на то, что нацеливание экспрессии МеСР2 на сердце и печень эффективно нарушалось, о чем свидетельствует существенно сниженный уровень экспрессии по сравнению с головным мозгом (фиг. 4А и 5).
Пример 3. Терапевтическая эффективность и безопасность саморегулирующихся векторов AAVМеСР2.
Терапевтическую эффективность и безопасность векторов AAV-MeCP2-e1 оценивают у мышей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления применяют белок капсида AAV-PHP.B, поскольку этот капсид характеризуется улучшенной эффективностью трансдукции нейронов. Нулевые по Меср2 мыши (Mecp2tm1.1Bird/J; самцы-/у и самки+/-) в возрасте 4 недели получают обработку посредством системного введения векторов AAV-PHP.B-MeCP2-e1, несущих различные кассеты с MRE (например, в дозах вектора, составляющих 1Е11, 3Е11, 1Е12 vg/мышь), и массы тела и фенотипические оценки отслеживают каждые две недели. В качестве контролей используют MeCP2/Mecp2tmUBird мышей, которым вводят инъекцией среду, и мышей дикого типа. Подгруппу мышей в каждой когорте (n=8; 4 самца и 4 самки) умерщвляют через 8 недель после инъекции и экспрессию МеСР2 количественно определяют методом Вестерн-блоттинга и сравнивают в группах. Эффективность трансдукции в головном мозге оценивают посредством двойного иммунофлуоресцентного окрашивания в отношении МеСР2 и нейронов (с применением нейронного маркера NeuN) и осуществляют количественное определение трансдуцированных нейронов (МеСР2+, NeuN+) в коре головного мозга, полосатом теле, таламусе, гиппокампе и мозжечке. Уровни PSD-95 оценивают с помощью анализа методом Вестерн-блоттинга и иммуноокрашивания срезов головного мозга; PSD-95 представляет собой ключевой каркасный белок в созревании синапсов, уровни которого являются пониженными в головном мозге от нулевых по МеСР2 мышей.
Для осуществления анализа биологического распределения вектора геномную ДНК выделяют из различных областей ЦНС и периферических органов и анализируют с помощью цифровой ПНР. Другую подгруппу животных в каждой когорте (n=16; 8 самцов и 8 самок) используют для анализа выживаемости и продольного анализа поведенческих характеристик (например, тест открытое поле; социальное взаимодействие) и двигательной активности (например, тест способности удерживаться на вращающемся барабане, тест ходьбы по решетке), а также для плетизмографии всего тела для оценки характера дыхания и характеристик апноэ у нулевых по МеСР2 мышей. Исследования конечных показателей являются такими же, как и через 8 недель после обработки. Безопасность векторов также оценивают на мышах дикого типа в исследовании с увеличением дозы при использовании доз, идентичных указанным выше, с получением конечных результатов через 7, 30, 90 и 180 суток для оценки ЦНС и периферических тканей в отношении признаков токсичности. Также оценивают биологическое распределение вектора на основе AAV и экспрессию МеСР2.
Пример 4. Характеристика изменений в геноме/транскриптоме трансдуцированных нейронов после переноса AAV-МеСР2 гена на различных стадиях развития нервной системы.
Ключевой аспект в разработке подхода для безопасной и эффективной генной терапии синдрома Ретта заключается в подробной характеристике воздействия de novo экспрессии МеСР2 на эпигенетический ландшафт и транскриптомный профиль трансдуцированных нейронов. Для этой цели получают векторы AAV-PHP.B-MeCP2-e1, которые несут кассету IRES-GFP и обеспечивают возможность выделения трансдуцированных GFP+ клеток из головного мозга, мозжечка и спинного мозга либо с помощью метода FACS, либо с помощью лазерной захватывающей микродиссекции с последующим бисульфитным секвенированием всего генома (Methy1-Seq), секвенированием малых РНК (микроРНК) и секвенированием РНК (мРНК и некодирующих РНК). Самцы МеСР2-/у, самки МеСР2-/+ и контроли дикого типа (самцы и самки) получают системную инъекцию AAV-PHP.B-MeCP2-e1-IRES-GFP, контрольного вектора (без к ДНК МеСР2) и среды в день 1, 7, 14 и 28, а также в возрасте 12 недель в оптимальной дозе.
Мышей (n=8; 4 самца и 4 самки) умерщвляют через 1 или 3 месяца после инъекции для оценки параметров, указанных выше. Информацию о микроРНК, которые сверхэкспрессируются в ответ на экспрессию МеСР2, используют для установления дополнительных уровней регуляции экспрессии генов помимо тех, которые в основе которых лежит miR-132.
Пример 5. Вклад изоформ МеСР2 в успех терапии или появление неврологических симптомов в зависимости от вмешательства на разных стадиях развития.
Наблюдали, что экспрессия МеСР2, которая 1,6-6-кратно превышает физиологически нормальные
- 22 045780 уровни, вызывает неврологические симптомы как у пациентов с дупликацией локуса МеСР2 (~2-кратно выше нормального уровня), так и в моделях на трансгенных мышах. Другим сходством между пациентами и моделями на трансгенным мышах является то, что и у тех, и у других сверхэкспрессируется изоформа МеСР2-е2, которая, в отличие от изоформы e1, оказывается токсичной для первичных нейронов в культуре. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления этот токсический эффект устраняется при коэкспрессии FoxG1, который представляет собой другой ген, мутации в котором ассоциированы с синдромом Ретта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления коэкспрессия FoxGl с МеСР2 представляет собой дополнительный механизм для контроля побочных эффектов, ассоциированных со сверхэкспрессией МеСР2. Эксперименты по изучению терапевтических свойств, безопасности и эпигеномных/транскриптомых характеристик с использованием векторов на основе AAV-PHP.B, кодирующих МеСР-e1, МеСР2-е2, МеСР2-е2 и FoxG1 или FoxG1 отдельно, проводят на самцах МеСР2-/у, самках МеСР2+/- и контролях дикого типа, соответствующих по возрасту.
Последовательности >SEQ Ш NO: 1; аминокислотная последовательность изоформы el человеческого МеСР2 (NM_001110792)
MAAAAAAAPSGGGGGGEEERLEEKSEDQDLQGLKDKPLKFKKVKKDKKEEKEGKHEP VQPSAHHSAEPAEAGKAETSEGSGSAPAVPEASASPKQRRSIIRDRGPMYDDPTLPEGWT RKLKQRKSGRSAGKYDVYLINPQGKAFRSKVELIAYFEKVGDTSLDPNDFDFTVTGRGS PSRREQKPPKKPKSPKAPGTGRGRGRPKGSGTTRPKAATSEGVQVKRVLEKSPGKLLVK MPFQTSPGGKAEGGGATTSTQVMVIKRPGRKRKAEADPQAIPKKRGRKPGSVVAAAAA EAKKKAVKESSIRSVQETVLPIKKRKTRETVSIEVKEVVKPLLVSTLGEKSGKGLKTCKS PGRKSKESSPKGRSSSASSPPKKEHHHHHHHSESPKAPVPLLPPLPPPPPEPESSEDPTSPP
EPQDLS S S VCKEEKMPRGGSLESDGCPKEPAKTQP AVATAATAAEKYKHRGEGERKDI VSSSMPRPNREEPVDSRTPVTERVS > SEQ ID NO: 2; аминокислотная последовательность изоформы e2 человеческого MeCP2 (NM_004992)
MVAGMLGLREEKSEDQDLQGLKDKPLKFKKVKKDKKEEKEGKHEPVQPSAHHSAEPA EAGKAETSEGSGSAPAVPEASASPKQRRSIIRDRGPMYDDPTLPEGWTRKLKQRKSGRS AGKYDVYLINPQGKAFRSKVELIAYFEKVGDTSLDPNDFDFTVTGRGSPSRREQKPPKK PKSPKAPGTGRGRGRPKGSGTTRPKAATSEGVQVKRVLEKSPGKLLVKMPFQTSPGGK AEGGGATTSTQVMVIKRPGRKRKAEADPQAIPKKRGRKPGSVVAAAAAEAKKKAVKE SSIRSVQETVLPIKKRKTRETVSIEVKEVVKPLLVSTLGEKSGKGLKTCKSPGRKSKESSP KGRS S S AS SPPKKEHHHHHHHSESPK AP VPLLPPLPPPPPEPES SEDPT SPPEPQDLS S S VC KEEKMPRGGSLESDGCPKEP AKTQP AV AT A AT AAEK YKHRGEGERKDIVS S SMPRPNR EEPVDSRTPVTERVS >SEQ ID NO: 3; последовательность ДНК промотора мышиного МеСР2
AATTGAGGGCGTCACCGCTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAA GGGTAATCTCGACAAAGAGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCA CACAGGCTGGTCGGGAGGGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCG GTT >SEQ ID NO: 4; последовательность ДНК сайта связывания miR-122
ACAAACACCATTGTCACACTCCA
- 23 045780 > SEQ ID NO: 5; последовательность ДНК сайта связывания miR-1 АТАСАТАСТТСТТТАСАТТССА > SEQ ID NO: 6; последовательность ДНК сайта связывания miR-132 CGACCATGGCTGTAGACTGTTA > SEQ ID NO: 7; последовательность нуклеиновой кислоты конструкции с МеСР2 для экспрессии in vitro (плазмида scAAV-Mec229-hMeCP2-miR132(lx)miR122-l(3x))
CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGAC CTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCAT GCTCTAGGAAGATCAATTCGGTACAATTCACGCGTCGACAATTGAGGGCGTCACCG CTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAAGGGTAATCTCGACAAAG AGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCACACAGGCTGGTCGGGAG GGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCGGTTGCGCGCGCGCTCCC TCCTCTCGGAGAGAGGGCTGTGGTAAAACCCGTCCGGAAAATGGCTGCAGCCGCTG CCGCAGCGCCGAGCGGCGGAGGTGGCGGTGGCGAGGAGGAGAGACTGGAAGAAAA GTCAGAAGACCAGGACCTCCAGGGCCTCAAGGACAAACCCCTCAAGTTTAAAAAGG TGAAGAAAGATAAGAAAGAAGAGAAAGAGGGCAAGCATGAGCCCGTGCAGCCATC AGCCCACCACTCTGCTGAGCCCGCAGAGGCAGGCAAAGCAGAGACATCAGAAGGGT CAGGCTCCGCCCCGGCTGTGCCGGAAGCTTCTGCCTCCCCCAAACAGCGGCGCTCCA TCATCCGTGACCGGGGACCCATGTATGATGACCCCACCCTGCCTGAAGGCTGGACAC GGAAGCTTAAGCAAAGGAAATCTGGACGCTCTGCTGGGAAGTATGATGTGTATTTG ATCAATCCCCAGGGAAAAGCCTTTCGCTCTAAAGTGGAGTTGATTGCGTACTTCGAA AAGGTAGGCGACACATCCCTGGACCCTAATGATTTTGACTTCACGGTAACTGGGAG AGGGAGCCCCTCCCGGCGAGAGCAGAAACCACCTAAGAAGCCCAAATCTCCCAAAG CTCCAGGAACTGGCAGAGGTCGGGGACGCCCCAAAGGGAGCGGCACCACGAGACC CAAGGCAGCTACGTCAGAGGGTGTGCAGGTGAAAAGGGTCCTGGAGAAAAGTCCTG GGAAGCTCCTTGTCAAGATGCCTTTTCAAACTTCGCCAGGGGGCAAGGCTGAGGGG GGTGGGGCCACCACATCCACCCAGGTCATGGTGATCAAACGCCCCGGCAGGAAGCG AAAAGCTGAGGCAGACCCTCAGGCCATTCCCAAGAAACGGGGTCGAAAGCCGGGG AGTGTGGTGGCAGCCGCTGCCGCCGAGGCCAAAAAGAAAGCCGTGAAGGAGTCTTC TATCCGATCTGTGCAGGAGACCGTACTCCCCATCAAGAAGCGCAAGACCCGGGAGA CGGTCAGCATCGAGGTCAAGGAAGTGGTGAAGCCCCTGCTGGTGTCCACCCTCGGT GAGAAGAGCGGGAAAGGACTGAAGACCTGTAAGAGCCCTGGGCGGAAAAGCAAGG AGAGCAGCCCCAAGGGGCGCAGCAGCAGCGCCTCCTCACCCCCCAAGAAGGAGCAC
- 24 045780
CACCACCATCACCACCACTCAGAGTCCCCAAAGGCCCCCGTGCCACTGCTCCCACCC CTGCCCCCACCTCCACCTGAGCCCGAGAGCTCCGAGGACCCCACCAGCCCCCCTGAG CCCCAGGACTTGAGCAGCAGCGTCTGCAAAGAGGAGAAGATGCCCAGAGGAGGCTC ACTGGAGAGCGACGGCTGCCCCAAGGAGCCAGCTAAGACTCAGCCCGCGGTTGCCA CCGCCGCCACGGCCGCAGAAAAGTACAAACACCGAGGGGAGGGAGAGCGCAAAGA CATTGTTTCATCCTCCATGCCAAGGCCAAACAGAGAGGAGCCTGTGGACAGCCGGA CGCCCGTGACCGAGAGAGTTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCAGAGGAGGACCTGTGA CGACCATGGCTGTAGACTGTTACTCGAGATACATACTTCTTTACATTCCAATACATA CTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCCACCATGGACTAGTACAAACACC ATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACT CCAGCGGCCGCTTCGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCAT GAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAAT AGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCG GGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGC GCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTT GCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCCTTAATTAACCTAATTCACT GGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCG CCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGA TCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCG GCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCC AGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCG GCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTT ACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCAT CGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGG ACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTA TAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAA TTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGCTTACAATTTAGGTGGCACTTTTCGGG GAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCC GCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTA TGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCT GTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGG TGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTT TCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGC GGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTC TCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCAT
- 25 045780
GACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCA ACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACA TGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATA CCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAA ACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGAT GGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTT TATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACT GGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGG CAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAG CATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTC ATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAA TCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAG GATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACC ACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAA GGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTA GTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAAT CCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTC AAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCA CACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAG CTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAG CGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGG TATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGAT GCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGG TTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTC TGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAAC GACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAA CCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCC GACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTA GGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAG CGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAGATTTAATTA AGGCCTTAATTAGG
- 26 045780 >SEQ ID NO: 8; последовательность нуклеиновой кислоты конструкции с МеСР2 для экспрессии in vitro (плазмида scAAV-Mec229-hMeCP2-miR132(2x)miR122-l(3x))
CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGAC CTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCAT GCTCTAGGAAGATCAATTCGGTACAATTCACGCGTCGACAATTGAGGGCGTCACCG CTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAAGGGTAATCTCGACAAAG AGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCACACAGGCTGGTCGGGAG GGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCGGTTGCGCGCGCGCTCCC TCCTCTCGGAGAGAGGGCTGTGGTAAAACCCGTCCGGAAAATGGCTGCAGCCGCTG CCGCAGCGCCGAGCGGCGGAGGTGGCGGTGGCGAGGAGGAGAGACTGGAAGAAAA GTCAGAAGACCAGGACCTCCAGGGCCTCAAGGACAAACCCCTCAAGTTTAAAAAGG TGAAGAAAGATAAGAAAGAAGAGAAAGAGGGCAAGCATGAGCCCGTGCAGCCATC AGCCCACCACTCTGCTGAGCCCGCAGAGGCAGGCAAAGCAGAGACATCAGAAGGGT CAGGCTCCGCCCCGGCTGTGCCGGAAGCTTCTGCCTCCCCCAAACAGCGGCGCTCCA TCATCCGTGACCGGGGACCCATGTATGATGACCCCACCCTGCCTGAAGGCTGGACAC GGAAGCTTAAGCAAAGGAAATCTGGACGCTCTGCTGGGAAGTATGATGTGTATTTG ATCAATCCCCAGGGAAAAGCCTTTCGCTCTAAAGTGGAGTTGATTGCGTACTTCGAA AAGGTAGGCGACACATCCCTGGACCCTAATGATTTTGACTTCACGGTAACTGGGAG AGGGAGCCCCTCCCGGCGAGAGCAGAAACCACCTAAGAAGCCCAAATCTCCCAAAG CTCCAGGAACTGGCAGAGGTCGGGGACGCCCCAAAGGGAGCGGCACCACGAGACC CAAGGCAGCTACGTCAGAGGGTGTGCAGGTGAAAAGGGTCCTGGAGAAAAGTCCTG GGAAGCTCCTTGTCAAGATGCCTTTTCAAACTTCGCCAGGGGGCAAGGCTGAGGGG GGTGGGGCCACCACATCCACCCAGGTCATGGTGATCAAACGCCCCGGCAGGAAGCG AAAAGCTGAGGCAGACCCTCAGGCCATTCCCAAGAAACGGGGTCGAAAGCCGGGG AGTGTGGTGGCAGCCGCTGCCGCCGAGGCCAAAAAGAAAGCCGTGAAGGAGTCTTC TATCCGATCTGTGCAGGAGACCGTACTCCCCATCAAGAAGCGCAAGACCCGGGAGA CGGTCAGCATCGAGGTCAAGGAAGTGGTGAAGCCCCTGCTGGTGTCCACCCTCGGT GAGAAGAGCGGGAAAGGACTGAAGACCTGTAAGAGCCCTGGGCGGAAAAGCAAGG AGAGCAGCCCCAAGGGGCGCAGCAGCAGCGCCTCCTCACCCCCCAAGAAGGAGCAC CACCACCATCACCACCACTCAGAGTCCCCAAAGGCCCCCGTGCCACTGCTCCCACCC CTGCCCCCACCTCCACCTGAGCCCGAGAGCTCCGAGGACCCCACCAGCCCCCCTGAG CCCCAGGACTTGAGCAGCAGCGTCTGCAAAGAGGAGAAGATGCCCAGAGGAGGCTC ACTGGAGAGCGACGGCTGCCCCAAGGAGCCAGCTAAGACTCAGCCCGCGGTTGCCA CCGCCGCCACGGCCGCAGAAAAGTACAAACACCGAGGGGAGGGAGAGCGCAAAGA CATTGTTTCATCCTCCATGCCAAGGCCAAACAGAGAGGAGCCTGTGGACAGCCGGA
- 27 045780
CGCCCGTGACCGAGAGAGTTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCAGAGGAGGACCTGTGA CGACCATGGCTGTAGACTGTTACGACCATGGCTGTAGACTGTTACTCGAGATACATA CTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCCA CCATGGACTAGTACAAACACCATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACTCC AACAAACACCATTGTCACACTCCAGCGGCCGCTTCGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCC AAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAG GAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTA GGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGG AGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGG TCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGC CTTAATTAACCTAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCT GGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAAT AGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGA ATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCA GCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTC CTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTA GGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGAT GGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAG TCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCT CGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAA TGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGCTTACAAT TTAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAA TACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAAT ATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTT TGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGA TGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCG GTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTA AAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCG GTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAA AGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATG AGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCT AACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACC GGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAA TGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGC AACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCG
- 28 045780
GCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCT CGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATC TACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGAT AGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACT TTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTT GATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGAC CCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCT GCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAG CTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACT GTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCT ACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCG TGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGG CTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAAC TGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAG GCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGC TTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGAC TTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCC AGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCT TTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGA TACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCG GAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGC AGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAA TGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGT ATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCA TGATTACGCCAGATTTAATTAAGGCCTTAATTAGG >SEQ ID NO: 9; последовательность нуклеиновой кислоты конструкции с МеСР2 для экспрессии in vitro (плазмида scAAV-Mec229-hMeCP2-miR132(3x) miR122-l(3x))
CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGAC CTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCAT GCTCTAGGAAGATCAATTCGGTACAATTCACGCGTCGACAATTGAGGGCGTCACCG CTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAAGGGTAATCTCGACAAAG AGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCACACAGGCTGGTCGGGAG GGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCGGTTGCGCGCGCGCTCCC TCCTCTCGGAGAGAGGGCTGTGGTAAAACCCGTCCGGAAAATGGCTGCAGCCGCTG
- 29 045780
CCGCAGCGCCGAGCGGCGGAGGTGGCGGTGGCGAGGAGGAGAGACTGGAAGAAAA GTCAGAAGACCAGGACCTCCAGGGCCTCAAGGACAAACCCCTCAAGTTTAAAAAGG TGAAGAAAGATAAGAAAGAAGAGAAAGAGGGCAAGCATGAGCCCGTGCAGCCATC AGCCCACCACTCTGCTGAGCCCGCAGAGGCAGGCAAAGCAGAGACATCAGAAGGGT CAGGCTCCGCCCCGGCTGTGCCGGAAGCTTCTGCCTCCCCCAAACAGCGGCGCTCCA TCATCCGTGACCGGGGACCCATGTATGATGACCCCACCCTGCCTGAAGGCTGGACAC GGAAGCTTAAGCAAAGGAAATCTGGACGCTCTGCTGGGAAGTATGATGTGTATTTG ATCAATCCCCAGGGAAAAGCCTTTCGCTCTAAAGTGGAGTTGATTGCGTACTTCGAA AAGGTAGGCGACACATCCCTGGACCCTAATGATTTTGACTTCACGGTAACTGGGAG AGGGAGCCCCTCCCGGCGAGAGCAGAAACCACCTAAGAAGCCCAAATCTCCCAAAG CTCCAGGAACTGGCAGAGGTCGGGGACGCCCCAAAGGGAGCGGCACCACGAGACC CAAGGCAGCTACGTCAGAGGGTGTGCAGGTGAAAAGGGTCCTGGAGAAAAGTCCTG GGAAGCTCCTTGTCAAGATGCCTTTTCAAACTTCGCCAGGGGGCAAGGCTGAGGGG GGTGGGGCCACCACATCCACCCAGGTCATGGTGATCAAACGCCCCGGCAGGAAGCG AAAAGCTGAGGCAGACCCTCAGGCCATTCCCAAGAAACGGGGTCGAAAGCCGGGG AGTGTGGTGGCAGCCGCTGCCGCCGAGGCCAAAAAGAAAGCCGTGAAGGAGTCTTC TATCCGATCTGTGCAGGAGACCGTACTCCCCATCAAGAAGCGCAAGACCCGGGAGA CGGTCAGCATCGAGGTCAAGGAAGTGGTGAAGCCCCTGCTGGTGTCCACCCTCGGT GAGAAGAGCGGGAAAGGACTGAAGACCTGTAAGAGCCCTGGGCGGAAAAGCAAGG AGAGCAGCCCCAAGGGGCGCAGCAGCAGCGCCTCCTCACCCCCCAAGAAGGAGCAC CACCACCATCACCACCACTCAGAGTCCCCAAAGGCCCCCGTGCCACTGCTCCCACCC CTGCCCCCACCTCCACCTGAGCCCGAGAGCTCCGAGGACCCCACCAGCCCCCCTGAG CCCCAGGACTTGAGCAGCAGCGTCTGCAAAGAGGAGAAGATGCCCAGAGGAGGCTC ACTGGAGAGCGACGGCTGCCCCAAGGAGCCAGCTAAGACTCAGCCCGCGGTTGCCA CCGCCGCCACGGCCGCAGAAAAGTACAAACACCGAGGGGAGGGAGAGCGCAAAGA CATTGTTTCATCCTCCATGCCAAGGCCAAACAGAGAGGAGCCTGTGGACAGCCGGA CGCCCGTGACCGAGAGAGTTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCAGAGGAGGACCTGTGA CGACCATGGCTGTAGACTGTTACGACCATGGCTGTAGACTGTTACGACCATGGCTGT AGACTGTTACTCGAGATACATACTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCC AATACATACTTCTTTACATTCCACCATGGACTAGTACAAACACCATTGTCACACTCC AACAAACACCATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACTCCAGCGGCCGCTT CGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAG CATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATT TTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAAC TACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC
- 30 045780
ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTC AGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCCTTAATTAACCTAATTCACTGGCCGTCGTTTTACA ACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCC CCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACA GTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGG CGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCG CTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCT CTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCC AAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTT TTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTG GAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGAT TTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAA CAAAATATTAACGCTTACAATTTAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACC CCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAAC CCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCC GTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAA ACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACAT CGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTT TCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGA CGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGA GTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTAT GCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGA TCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACT CGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGA CACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAAC TACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTG CAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTG GAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAG CCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACG AAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAG ACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAG GATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTT TTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCC tttttttctgcgcgtAAtctgctgcttgcAAAcAAAAAAAccAccgctAccAgcggt GGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAG
- 31 045780
CAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTT CAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGC TGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACC GGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGG AGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCC ACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAA CAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCT GTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGG CGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGC TGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTA TTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGC GAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGC GCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGG GCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTT TACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTC ACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAGATTTAATTAAGGCCTTAATTAG G >SEQ ID NO: 10; последовательность нуклеиновой кислоты конструкции с МеСР2 для экспрессии in vivo (геном вектора scAAV-Mec229-hMeCP2-miR132(lx)miR122-l(3x)) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGAC CTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCAT GCTCTAGGAAGATCAATTCGGTACAATTCACGCGTCGACAATTGAGGGCGTCACCG CTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAAGGGTAATCTCGACAAAG AGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCACACAGGCTGGTCGGGAG GGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCGGTTGCGCGCGCGCTCCC TCCTCTCGGAGAGAGGGCTGTGGTAAAACCCGTCCGGAAAATGGCTGCAGCCGCTG CCGCAGCGCCGAGCGGCGGAGGTGGCGGTGGCGAGGAGGAGAGACTGGAAGAAAA GTCAGAAGACCAGGACCTCCAGGGCCTCAAGGACAAACCCCTCAAGTTTAAAAAGG TGAAGAAAGATAAGAAAGAAGAGAAAGAGGGCAAGCATGAGCCCGTGCAGCCATC AGCCCACCACTCTGCTGAGCCCGCAGAGGCAGGCAAAGCAGAGACATCAGAAGGGT CAGGCTCCGCCCCGGCTGTGCCGGAAGCTTCTGCCTCCCCCAAACAGCGGCGCTCCA TCATCCGTGACCGGGGACCCATGTATGATGACCCCACCCTGCCTGAAGGCTGGACAC GGAAGCTTAAGCAAAGGAAATCTGGACGCTCTGCTGGGAAGTATGATGTGTATTTG ATCAATCCCCAGGGAAAAGCCTTTCGCTCTAAAGTGGAGTTGATTGCGTACTTCGAA
- 32 045780
AAGGTAGGCGACACATCCCTGGACCCTAATGATTTTGACTTCACGGTAACTGGGAG AGGGAGCCCCTCCCGGCGAGAGCAGAAACCACCTAAGAAGCCCAAATCTCCCAAAG CTCCAGGAACTGGCAGAGGTCGGGGACGCCCCAAAGGGAGCGGCACCACGAGACC CAAGGCAGCTACGTCAGAGGGTGTGCAGGTGAAAAGGGTCCTGGAGAAAAGTCCTG GGAAGCTCCTTGTCAAGATGCCTTTTCAAACTTCGCCAGGGGGCAAGGCTGAGGGG GGTGGGGCCACCACATCCACCCAGGTCATGGTGATCAAACGCCCCGGCAGGAAGCG AAAAGCTGAGGCAGACCCTCAGGCCATTCCCAAGAAACGGGGTCGAAAGCCGGGG AGTGTGGTGGCAGCCGCTGCCGCCGAGGCCAAAAAGAAAGCCGTGAAGGAGTCTTC TATCCGATCTGTGCAGGAGACCGTACTCCCCATCAAGAAGCGCAAGACCCGGGAGA CGGTCAGCATCGAGGTCAAGGAAGTGGTGAAGCCCCTGCTGGTGTCCACCCTCGGT GAGAAGAGCGGGAAAGGACTGAAGACCTGTAAGAGCCCTGGGCGGAAAAGCAAGG AGAGCAGCCCCAAGGGGCGCAGCAGCAGCGCCTCCTCACCCCCCAAGAAGGAGCAC CACCACCATCACCACCACTCAGAGTCCCCAAAGGCCCCCGTGCCACTGCTCCCACCC CTGCCCCCACCTCCACCTGAGCCCGAGAGCTCCGAGGACCCCACCAGCCCCCCTGAG CCCCAGGACTTGAGCAGCAGCGTCTGCAAAGAGGAGAAGATGCCCAGAGGAGGCTC ACTGGAGAGCGACGGCTGCCCCAAGGAGCCAGCTAAGACTCAGCCCGCGGTTGCCA CCGCCGCCACGGCCGCAGAAAAGTACAAACACCGAGGGGAGGGAGAGCGCAAAGA CATTGTTTCATCCTCCATGCCAAGGCCAAACAGAGAGGAGCCTGTGGACAGCCGGA CGCCCGTGACCGAGAGAGTTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCAGAGGAGGACCTGTGA CGACCATGGCTGTAGACTGTTACTCGAGATACATACTTCTTTACATTCCAATACATA CTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCCACCATGGACTAGTACAAACACC ATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACT CCAGCGGCCGCTTCGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCAT GAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAAT AGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCG GGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGC GCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTT GCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG >SEQ ID NO: 11; последовательность нуклеиновой кислоты конструкции с МеСР2 для экспрессии in vivo (геном вектора scAAV-Mec229-hMeCP2-miR132(2x)miR122-l(3x)) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGAC CTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCAT GCTCTAGGAAGATCAATTCGGTACAATTCACGCGTCGACAATTGAGGGCGTCACCG CTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAAGGGTAATCTCGACAAAG
- 33 045780
AGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCACACAGGCTGGTCGGGAG GGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCGGTTGCGCGCGCGCTCCC TCCTCTCGGAGAGAGGGCTGTGGTAAAACCCGTCCGGAAAATGGCTGCAGCCGCTG CCGCAGCGCCGAGCGGCGGAGGTGGCGGTGGCGAGGAGGAGAGACTGGAAGAAAA GTCAGAAGACCAGGACCTCCAGGGCCTCAAGGACAAACCCCTCAAGTTTAAAAAGG TGAAGAAAGATAAGAAAGAAGAGAAAGAGGGCAAGCATGAGCCCGTGCAGCCATC AGCCCACCACTCTGCTGAGCCCGCAGAGGCAGGCAAAGCAGAGACATCAGAAGGGT CAGGCTCCGCCCCGGCTGTGCCGGAAGCTTCTGCCTCCCCCAAACAGCGGCGCTCCA TCATCCGTGACCGGGGACCCATGTATGATGACCCCACCCTGCCTGAAGGCTGGACAC GGAAGCTTAAGCAAAGGAAATCTGGACGCTCTGCTGGGAAGTATGATGTGTATTTG ATCAATCCCCAGGGAAAAGCCTTTCGCTCTAAAGTGGAGTTGATTGCGTACTTCGAA AAGGTAGGCGACACATCCCTGGACCCTAATGATTTTGACTTCACGGTAACTGGGAG AGGGAGCCCCTCCCGGCGAGAGCAGAAACCACCTAAGAAGCCCAAATCTCCCAAAG CTCCAGGAACTGGCAGAGGTCGGGGACGCCCCAAAGGGAGCGGCACCACGAGACC CAAGGCAGCTACGTCAGAGGGTGTGCAGGTGAAAAGGGTCCTGGAGAAAAGTCCTG GGAAGCTCCTTGTCAAGATGCCTTTTCAAACTTCGCCAGGGGGCAAGGCTGAGGGG GGTGGGGCCACCACATCCACCCAGGTCATGGTGATCAAACGCCCCGGCAGGAAGCG AAAAGCTGAGGCAGACCCTCAGGCCATTCCCAAGAAACGGGGTCGAAAGCCGGGG AGTGTGGTGGCAGCCGCTGCCGCCGAGGCCAAAAAGAAAGCCGTGAAGGAGTCTTC TATCCGATCTGTGCAGGAGACCGTACTCCCCATCAAGAAGCGCAAGACCCGGGAGA CGGTCAGCATCGAGGTCAAGGAAGTGGTGAAGCCCCTGCTGGTGTCCACCCTCGGT GAGAAGAGCGGGAAAGGACTGAAGACCTGTAAGAGCCCTGGGCGGAAAAGCAAGG AGAGCAGCCCCAAGGGGCGCAGCAGCAGCGCCTCCTCACCCCCCAAGAAGGAGCAC CACCACCATCACCACCACTCAGAGTCCCCAAAGGCCCCCGTGCCACTGCTCCCACCC CTGCCCCCACCTCCACCTGAGCCCGAGAGCTCCGAGGACCCCACCAGCCCCCCTGAG CCCCAGGACTTGAGCAGCAGCGTCTGCAAAGAGGAGAAGATGCCCAGAGGAGGCTC ACTGGAGAGCGACGGCTGCCCCAAGGAGCCAGCTAAGACTCAGCCCGCGGTTGCCA CCGCCGCCACGGCCGCAGAAAAGTACAAACACCGAGGGGAGGGAGAGCGCAAAGA CATTGTTTCATCCTCCATGCCAAGGCCAAACAGAGAGGAGCCTGTGGACAGCCGGA CGCCCGTGACCGAGAGAGTTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCAGAGGAGGACCTGTGA CGACCATGGCTGTAGACTGTTACGACCATGGCTGTAGACTGTTACTCGAGATACATA CTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCCA CCATGGACTAGTACAAACACCATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACTCC AACAAACACCATTGTCACACTCCAGCGGCCGCTTCGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCC AAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAG
- 34 045780
GAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTA GGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGG AGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGG TCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG >SEQ ID NO: 12; последовательность нуклеиновой кислоты конструкции с МеСР2 для экспрессии in vivo (геном вектора scAAV-Mec229-hMeCP2-miR132(3x) miR122-l(3x)) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGAC CTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCAT GCTCTAGGAAGATCAATTCGGTACAATTCACGCGTCGACAATTGAGGGCGTCACCG
CTAAGGCTCCGCCCCAGCCTGGGCTCCACAACCAATGAAGGGTAATCTCGACAAAG AGCAAGGGGTGGGGCGCGGGCGCGCAGGTGCAGCAGCACACAGGCTGGTCGGGAG GGCGGGGCGCGACGTCTGCCGTGCGGGGTCCCGGCATCGGTTGCGCGCGCGCTCCC TCCTCTCGGAGAGAGGGCTGTGGTAAAACCCGTCCGGAAAATGGCTGCAGCCGCTG CCGCAGCGCCGAGCGGCGGAGGTGGCGGTGGCGAGGAGGAGAGACTGGAAGAAAA GTCAGAAGACCAGGACCTCCAGGGCCTCAAGGACAAACCCCTCAAGTTTAAAAAGG TGAAGAAAGATAAGAAAGAAGAGAAAGAGGGCAAGCATGAGCCCGTGCAGCCATC AGCCCACCACTCTGCTGAGCCCGCAGAGGCAGGCAAAGCAGAGACATCAGAAGGGT CAGGCTCCGCCCCGGCTGTGCCGGAAGCTTCTGCCTCCCCCAAACAGCGGCGCTCCA TCATCCGTGACCGGGGACCCATGTATGATGACCCCACCCTGCCTGAAGGCTGGACAC GGAAGCTTAAGCAAAGGAAATCTGGACGCTCTGCTGGGAAGTATGATGTGTATTTG ATCAATCCCCAGGGAAAAGCCTTTCGCTCTAAAGTGGAGTTGATTGCGTACTTCGAA AAGGTAGGCGACACATCCCTGGACCCTAATGATTTTGACTTCACGGTAACTGGGAG AGGGAGCCCCTCCCGGCGAGAGCAGAAACCACCTAAGAAGCCCAAATCTCCCAAAG CTCCAGGAACTGGCAGAGGTCGGGGACGCCCCAAAGGGAGCGGCACCACGAGACC CAAGGCAGCTACGTCAGAGGGTGTGCAGGTGAAAAGGGTCCTGGAGAAAAGTCCTG GGAAGCTCCTTGTCAAGATGCCTTTTCAAACTTCGCCAGGGGGCAAGGCTGAGGGG GGTGGGGCCACCACATCCACCCAGGTCATGGTGATCAAACGCCCCGGCAGGAAGCG AAAAGCTGAGGCAGACCCTCAGGCCATTCCCAAGAAACGGGGTCGAAAGCCGGGG AGTGTGGTGGCAGCCGCTGCCGCCGAGGCCAAAAAGAAAGCCGTGAAGGAGTCTTC TATCCGATCTGTGCAGGAGACCGTACTCCCCATCAAGAAGCGCAAGACCCGGGAGA CGGTCAGCATCGAGGTCAAGGAAGTGGTGAAGCCCCTGCTGGTGTCCACCCTCGGT GAGAAGAGCGGGAAAGGACTGAAGACCTGTAAGAGCCCTGGGCGGAAAAGCAAGG AGAGCAGCCCCAAGGGGCGCAGCAGCAGCGCCTCCTCACCCCCCAAGAAGGAGCAC CACCACCATCACCACCACTCAGAGTCCCCAAAGGCCCCCGTGCCACTGCTCCCACCC
- 35 045780
CTGCCCCCACCTCCACCTGAGCCCGAGAGCTCCGAGGACCCCACCAGCCCCCCTGAG CCCCAGGACTTGAGCAGCAGCGTCTGCAAAGAGGAGAAGATGCCCAGAGGAGGCTC ACTGGAGAGCGACGGCTGCCCCAAGGAGCCAGCTAAGACTCAGCCCGCGGTTGCCA CCGCCGCCACGGCCGCAGAAAAGTACAAACACCGAGGGGAGGGAGAGCGCAAAGA CATTGTTTCATCCTCCATGCCAAGGCCAAACAGAGAGGAGCCTGTGGACAGCCGGA CGCCCGTGACCGAGAGAGTTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCAGAGGAGGACCTGTGA CGACCATGGCTGTAGACTGTTACGACCATGGCTGTAGACTGTTACGACCATGGCTGT AGACTGTTACTCGAGATACATACTTCTTTACATTCCAATACATACTTCTTTACATTCC AATACATACTTCTTTACATTCCACCATGGACTAGTACAAACACCATTGTCACACTCC AACAAACACCATTGTCACACTCCAACAAACACCATTGTCACACTCCAGCGGCCGCTT CGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAG CATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATT TTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAAC TACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTC AGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG > SEQ ID NO: 13; аминокислотная последовательность капсида AAV2
MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNG LDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLG RAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFG QTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCD STWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHC HFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEY QLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTG NNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAG ASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAM ASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNL QRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLK HPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTS NYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL > SEQ ID NO: 14; аминокислотная последовательность капсида AAV9
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPG NGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGG
- 36 045780
NLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRL NFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWH CDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFN RFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFT DSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQML RTGNNFQFS YEFENVPFHS S YAHSQ SLDRLMNPLIDQ YLYYLSKTINGSGQNQQTLKF S V AGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGP AMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVA TNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGF GMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPE IQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL > SEQ ID NO: 15; аминокислотная последовательность капсида AAV-PHP.B
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPG NGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGG NLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRL NFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWH CDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFN RFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFT DSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQML RTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTINGSGQNQQTLKFSV AGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGP AMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVA TNHQSAQTLAVPFKAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHP SPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKEN SKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
Claims (26)
1. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая транскрипт, содержащий кодирующий участок, который кодирует белок человеческого МеСР2 или его функциональный фрагмент, и 3'-некодирующий участок, содержащий два или больше сайтов связывания miRNA, причем два или больше сайтов связывания miRNA содержат (a) по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая отрицательно регулирует экспрессию транскрипта, где по меньшей мере один сайт связывания miRNA содержит сайт связывания miR-132; и (b) по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая ингибирует экспрессию транскрипта в клетке нецелевой ткани, где по меньшей мере один сайт связывания содержит сайт связывания miR-1 и/или сайт связывания mir-122.
2. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п.1, причем кодирующий участок кодирует изоформу e1 MeCP2 или изоформу е2 МеСР2.
3. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п.1 или 2, причем человеческий МеСР2 содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 1 или в SEQ ID NO: 2.
4. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-3, причем по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая отрицательно регулирует экспрессию транскрипта, содержит два или три сайта связывания miR-132.
5. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-4, причем по меньшей мере один сайт связывания miRNA, специфический в отношении miRNA, которая ингибирует экспрессию транскрипта в нецелевой ткани, содержит сайт связывания miR-1 и сайт связывания miR-122.
6. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-5, дополнительно содержащая поли-Ахвост, причем каждый из одного или нескольких сайтов связывания miRNA расположен между последним кодоном кодирующего участка и поли-А-хвостом транскрипта.
- 37 045780
7. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-6, дополнительно содержащая промотор, необязательно промотор мышиного МеСР2.
8. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п.7, причем промотор мышиного МеСР2 содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 3.
9. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8, причем рекомбинантная нуклеиновая кислота расположена на плазмиде.
10. Вирусный вектор, содержащий рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-8, необязательно причем вирусный вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), аденовирусный вектор, лентивирусный вектор, вектор на основе вируса герпеса или вектор на основе бакуловируса.
11. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус (rAAV), содержащий капсид, вмещающий рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-8.
12. rAAV по п.11, причем нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере один ITR, выбранный из ITR AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 или AAV6.
13. rAAV по п.11 или 12, причем капсид содержит белок капсида, который способствует прохождению rAAV через гематоэнцефалический барьер.
14. rAAV по п.13, причем белок капсида имеет серотип, выбранный из группы, состоящей из AAV-PHP.B, AAV1, AAV2, AAV2i8, AAV2.5, AAV5, AAV6, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAVrh10, AAV-B1, AAV9.45A-String (например, AAV9.45-AS), AAV9.45Angiopep, AAV9.47-Angiopep, AAV9.47-AS, AAV-CAM130 и AAV9HR.
15. rAAV по любому из пп.11-14, причем белок капсида содержит или состоит из последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 14 или 15 (AAV-PHP.B, AAV9).
16. Композиция для повышения экспрессии МеСР2 в целевой клетке или целевой ткани, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-8 или rAAV по любому из пп.11-15 и фармацевтически приемлемое вспомогательное средство.
17. Композиция по п.16, причем композиция составлена для инъекции, необязательно при этом инъекция представляет собой системную инъекцию, необязательно внутривенную инъекцию или интратекальную инъекцию.
18. Способ лечения синдрома Ретта у субъекта, причем способ предусматривает введение субъекту с синдромом Ретта или подозрением на синдром Ретта эффективного количества (a) рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-8;
(b) rAAV по любому из пп.11-15; или (c) композиции по п.16 или 17.
19. Способ по п.18, причем субъект представляет собой субъекта-человека, необязательно при этом субъект имеет возраст менее одного года.
20. Способ по п.18 или 19, причем субъект характеризуется мутацией по меньшей мере в одной копии гена МеСР2, необязательно при этом мутация представляет собой мутацию с потерей функции.
21. Способ по любому из пп.18-20, причем введение представляет собой инъекцию, необязательно системную инъекцию, необязательно внутривенную инъекцию или интратекальную инъекцию.
22. Способ по любому из пп.18-21, причем введение приводит в результате к пересечению эффективным количеством (а), (b) или (с) гематоэнцефалического барьера субъекта.
23. Способ по любому из пп.18-22, причем введение приводит в результате к нетоксичному уровню экспрессии МеСР2 в головном мозге субъекта.
24. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п.1, дополнительно содержащая кодирующую область, кодирующую нейротрофический фактор головного мозга (BDNF).
25. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8, в которой по меньшей мере один сайт связывания miRNA для miR-132 содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 6.
26. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8 или 25, причем по меньшей мере один сайт связывания miRNA для miR-122 содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 4, и/или по меньшей мере один сайт связывания miRNA для miR-1 содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 5.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/516,060 | 2017-06-06 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045780B1 true EA045780B1 (ru) | 2023-12-26 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230416779A1 (en) | Self-regulating aav vectors for safe expression of mecp2 in rett syndrome | |
US20240139340A1 (en) | Method to enhance the efficiency of systemic aav gene delivery to the central nervous system | |
US12054715B2 (en) | Modified AAV constructs and uses thereof | |
US10894949B2 (en) | Recombinant AAVS having useful transcytosis properties | |
CN107073051B (zh) | 重组aav变体及其用途 | |
US20180265863A1 (en) | Novel high efficiency library-identified aav vectors | |
US20230348914A1 (en) | Compositions and methods for treatment of acute liver failure | |
EP4110931A1 (en) | Inducible single aav system and uses thereof | |
EA045780B1 (ru) | САМОРЕГУЛИРУЕМЫЕ ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ AAV ДЛЯ БЕЗОПАСНОЙ ЭКСПРЕССИИ MeCP2 ПРИ СИНДРОМЕ PETTA | |
US20240207441A1 (en) | Capsid variants and uses thereof | |
US11926842B2 (en) | Use of inverted terminal repeats (ITRS) from adeno-associated virus serotypes 8 and RH.39 in gene therapy vectors | |
US20220033824A1 (en) | Modulation of sptlc1 via recombinant adeno-associated vectors | |
US20240243975A1 (en) | Use of inverted terminal repeats (itrs) from adeno-associated virus serotypes 8 and rh.39 in gene therapy vectors | |
CA3098448A1 (en) | Aav capsids identified by in vivo library selection |