EA045742B1 - CD73 INHIBITOR CRYSTAL FORMS - Google Patents
CD73 INHIBITOR CRYSTAL FORMS Download PDFInfo
- Publication number
- EA045742B1 EA045742B1 EA202290395 EA045742B1 EA 045742 B1 EA045742 B1 EA 045742B1 EA 202290395 EA202290395 EA 202290395 EA 045742 B1 EA045742 B1 EA 045742B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- crystalline form
- composition
- ppm
- another preferred
- compound
- Prior art date
Links
- 239000013078 crystal Substances 0.000 title description 11
- 229940127272 CD73 inhibitor Drugs 0.000 title description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 82
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 77
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N adamantane Chemical compound C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 16
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 13
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 claims description 11
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 45
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 37
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 33
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 33
- WHRUIISQCORGKK-KOLCDFICSA-N 5-[6-methyl-5-[(1S,2R)-2-propan-2-ylcyclopropyl]pyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C(C)(C)[C@@H]1[C@H](C1)C=1C=C(N=NC=1C)C=1C(NC(NC=1)=O)=O WHRUIISQCORGKK-KOLCDFICSA-N 0.000 description 32
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 28
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 22
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 13
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N Formic acid Chemical compound OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- -1 oral Chemical class 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- WHRUIISQCORGKK-UHFFFAOYSA-N 5-[6-methyl-5-(2-propan-2-ylcyclopropyl)pyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound N1=NC(=C(C=C1C1=CNC(=O)NC1=O)C1CC1C(C)C)C WHRUIISQCORGKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical class CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 8
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229950001573 abemaciclib Drugs 0.000 description 7
- UZWDCWONPYILKI-UHFFFAOYSA-N n-[5-[(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl]pyridin-2-yl]-5-fluoro-4-(7-fluoro-2-methyl-3-propan-2-ylbenzimidazol-5-yl)pyrimidin-2-amine Chemical compound C1CN(CC)CCN1CC(C=N1)=CC=C1NC1=NC=C(F)C(C=2C=C3N(C(C)C)C(C)=NC3=C(F)C=2)=N1 UZWDCWONPYILKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 7
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- NXQGGXCHGDYOHB-UHFFFAOYSA-L cyclopenta-1,4-dien-1-yl(diphenyl)phosphane;dichloropalladium;iron(2+) Chemical compound [Fe+2].Cl[Pd]Cl.[CH-]1C=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1.[CH-]1C=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 NXQGGXCHGDYOHB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940045207 immuno-oncology agent Drugs 0.000 description 6
- 239000002584 immunological anticancer agent Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 5
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 102000045309 human NT5E Human genes 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910016523 CuKa Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 4
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- CSJLBAMHHLJAAS-UHFFFAOYSA-N diethylaminosulfur trifluoride Chemical compound CCN(CC)S(F)(F)F CSJLBAMHHLJAAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 4
- LKGKUACPLXCVOF-UHFFFAOYSA-N (2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)boronic acid Chemical compound COC1=NC=C(B(O)O)C(OC)=N1 LKGKUACPLXCVOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KLNQXUGBWGMCRP-YPMHNXCESA-N 2,4-dimethoxy-5-[6-methyl-5-[(1S,2R)-2-propan-2-ylcyclopropyl]pyridazin-3-yl]pyrimidine Chemical compound C(C)(C)[C@@H]1[C@H](C1)C=1C=C(N=NC=1C)C=1C(=NC(=NC=1)OC)OC KLNQXUGBWGMCRP-YPMHNXCESA-N 0.000 description 3
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical class C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SWLRTVHQASOVRZ-UHFFFAOYSA-N 4,6-dichloro-3-methylpyridazine Chemical compound CC1=NN=C(Cl)C=C1Cl SWLRTVHQASOVRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZJJNMXUSBPHRDY-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-6-(2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)-3-methylpyridazine Chemical compound ClC1=C(N=NC(=C1)C=1C(=NC(=NC=1)OC)OC)C ZJJNMXUSBPHRDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 3
- GGUBFICZYGKNTD-UHFFFAOYSA-N triethyl phosphonoacetate Chemical compound CCOC(=O)CP(=O)(OCC)OCC GGUBFICZYGKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 description 3
- REYZXWIIUPKFTI-YFKPBYRVSA-N (2r)-2-propan-2-yloxirane Chemical compound CC(C)[C@@H]1CO1 REYZXWIIUPKFTI-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- OJRHUICOVVSGSY-RXMQYKEDSA-N (2s)-2-chloro-3-methylbutan-1-ol Chemical compound CC(C)[C@H](Cl)CO OJRHUICOVVSGSY-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- DDTJFSPKEIAZAM-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-chloro-3-methylbutanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](Cl)C(O)=O DDTJFSPKEIAZAM-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBYCKISMJZSUDJ-UHFFFAOYSA-N 2-propan-2-ylcyclopropane-1-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C1CC1C(O)=O HBYCKISMJZSUDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGLRCSLJXJGKHV-ZJUUUORDSA-N 4,4,5,5-tetramethyl-2-[(1S,2S)-2-propan-2-ylcyclopropyl]-1,3,2-dioxaborolane Chemical compound CC(C)[C@H]1C[C@@H]1B1OC(C)(C)C(C)(C)O1 NGLRCSLJXJGKHV-ZJUUUORDSA-N 0.000 description 2
- MOLDCQXBYNONGT-BQYQJAHWSA-N 4,4,5,5-tetramethyl-2-[(e)-3-methylbut-1-enyl]-1,3,2-dioxaborolane Chemical compound CC(C)\C=C\B1OC(C)(C)C(C)(C)O1 MOLDCQXBYNONGT-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 102000004008 5'-Nucleotidase Human genes 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940125431 BRAF inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000006069 Suzuki reaction reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- DCQLZTSRKLWEAB-UHFFFAOYSA-N ac1ndudu Chemical compound O1C(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(OCC(C)O)C2OCC(C)O)C(COCC(O)C)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC2C(OCC(C)O)C(OCC(C)O)C1OC2COCC(C)O DCQLZTSRKLWEAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005388 cross polarization Methods 0.000 description 2
- 238000005888 cyclopropanation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 2
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 2
- YQPYKYQROJHYBV-SFYZADRCSA-N ethyl (1S,2R)-2-propan-2-ylcyclopropane-1-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)[C@H]1C[C@@H]1C(C)C YQPYKYQROJHYBV-SFYZADRCSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 2
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 2
- 229960003278 osimertinib Drugs 0.000 description 2
- DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N osimertinib Chemical group COC1=CC(N(C)CCN(C)C)=C(NC(=O)C=C)C=C1NC1=NC=CC(C=2C3=CC=CC=C3N(C)C=2)=N1 DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 108010008268 transforming growth factor type e Proteins 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 2
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 1
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 1
- YXTKHLHCVFUPPT-YYFJYKOTSA-N (2s)-2-[[4-[(2-amino-5-formyl-4-oxo-1,6,7,8-tetrahydropteridin-6-yl)methylamino]benzoyl]amino]pentanedioic acid;(1r,2r)-1,2-dimethanidylcyclohexane;5-fluoro-1h-pyrimidine-2,4-dione;oxalic acid;platinum(2+) Chemical compound [Pt+2].OC(=O)C(O)=O.[CH2-][C@@H]1CCCC[C@H]1[CH2-].FC1=CNC(=O)NC1=O.C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 YXTKHLHCVFUPPT-YYFJYKOTSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 1-n-(4-chlorophenyl)-6-methyl-5-n-[3-(7h-purin-6-yl)pyridin-2-yl]isoquinoline-1,5-diamine Chemical compound N=1C=CC2=C(NC=3C(=CC=CN=3)C=3C=4N=CNC=4N=CN=3)C(C)=CC=C2C=1NC1=CC=C(Cl)C=C1 KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLNQXUGBWGMCRP-WCQYABFASA-N 2,4-dimethoxy-5-[6-methyl-5-[(1R,2S)-2-propan-2-ylcyclopropyl]pyridazin-3-yl]pyrimidine Chemical class C(C)(C)[C@H]1[C@@H](C1)C=1C=C(N=NC=1C)C=1C(=NC(=NC=1)OC)OC KLNQXUGBWGMCRP-WCQYABFASA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USCSRAJGJYMJFZ-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-1-butyne Chemical compound CC(C)C#C USCSRAJGJYMJFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZPWAYBEOJRFAX-UHFFFAOYSA-N 4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2$l^{2}-dioxaborolane Chemical compound CC1(C)O[B]OC1(C)C LZPWAYBEOJRFAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQTHEAQKKVAXGV-UHFFFAOYSA-N 4-ditert-butylphosphanyl-n,n-dimethylaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=C(P(C(C)(C)C)C(C)(C)C)C=C1 IQTHEAQKKVAXGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700004024 5'-Nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- SXVLKJCZFKIBAV-WPRPVWTQSA-N 5-[5-[(1S,2S)-2-ethylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C(C)[C@@H]1[C@H](C1)C=1C=C(N=NC=1C)C=1C(NC(NC=1)=O)=O SXVLKJCZFKIBAV-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000009346 Adenosine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108050000203 Adenosine receptors Proteins 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGLRCSLJXJGKHV-VHSXEESVSA-N C(C)(C)[C@H]1[C@@H](C1)B1OC(C(O1)(C)C)(C)C Chemical compound C(C)(C)[C@H]1[C@@H](C1)B1OC(C(O1)(C)C)(C)C NGLRCSLJXJGKHV-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- CQJUCJWBMVRGTI-NHYWBVRUSA-N CC(C)[C@@H]1C[C@]1(C(=O)O)N2C(=O)C3=CC=CC=C3C2=O Chemical compound CC(C)[C@@H]1C[C@]1(C(=O)O)N2C(=O)C3=CC=CC=C3C2=O CQJUCJWBMVRGTI-NHYWBVRUSA-N 0.000 description 1
- CQJUCJWBMVRGTI-ABAIWWIYSA-N CC(C)[C@H]1C[C@]1(C(=O)O)N2C(=O)C3=CC=CC=C3C2=O Chemical compound CC(C)[C@H]1C[C@]1(C(=O)O)N2C(=O)C3=CC=CC=C3C2=O CQJUCJWBMVRGTI-ABAIWWIYSA-N 0.000 description 1
- 229940116741 CD137 agonist Drugs 0.000 description 1
- 229940124297 CDK 4/6 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 1
- 239000012824 ERK inhibitor Substances 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 238000006546 Horner-Wadsworth-Emmons reaction Methods 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 229940113303 Indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010069755 K-ras gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 1
- IVRXNBXKWIJUQB-UHFFFAOYSA-N LY-2157299 Chemical compound CC1=CC=CC(C=2C(=C3CCCN3N=2)C=2C3=CC(=CC=C3N=CC=2)C(N)=O)=N1 IVRXNBXKWIJUQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 238000005004 MAS NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100381978 Mus musculus Braf gene Proteins 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 238000006932 Simmons-Smith cyclopropanation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000033749 Small cell carcinoma of the bladder Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000006161 Suzuki-Miyaura coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 150000001500 aryl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- IPWKHHSGDUIRAH-UHFFFAOYSA-N bis(pinacolato)diboron Chemical compound O1C(C)(C)C(C)(C)OB1B1OC(C)(C)C(C)(C)O1 IPWKHHSGDUIRAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- ZADPBFCGQRWHPN-UHFFFAOYSA-N boronic acid Chemical compound OBO ZADPBFCGQRWHPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006795 borylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 1
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229960002465 dabrafenib Drugs 0.000 description 1
- BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N dabrafenib Chemical compound S1C(C(C)(C)C)=NC(C=2C(=C(NS(=O)(=O)C=3C(=CC=CC=3F)F)C=CC=2)F)=C1C1=CC=NC(N)=N1 BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000008049 diazo compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- ZOCHARZZJNPSEU-UHFFFAOYSA-N diboron Chemical compound B#B ZOCHARZZJNPSEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 1
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 229960003649 eribulin Drugs 0.000 description 1
- UFNVPOGXISZXJD-XJPMSQCNSA-N eribulin Chemical compound C([C@H]1CC[C@@H]2O[C@@H]3[C@H]4O[C@H]5C[C@](O[C@H]4[C@H]2O1)(O[C@@H]53)CC[C@@H]1O[C@H](C(C1)=C)CC1)C(=O)C[C@@H]2[C@@H](OC)[C@@H](C[C@H](O)CN)O[C@H]2C[C@@H]2C(=C)[C@H](C)C[C@H]1O2 UFNVPOGXISZXJD-XJPMSQCNSA-N 0.000 description 1
- MCRPKBUFXAKDKI-UHFFFAOYSA-N ethyl pyridine-4-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=NC=C1 MCRPKBUFXAKDKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010228 ex vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- JYEFSHLLTQIXIO-SMNQTINBSA-N folfiri regimen Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O.C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1.C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 JYEFSHLLTQIXIO-SMNQTINBSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 229950000456 galunisertib Drugs 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 1
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229910000856 hastalloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006197 hydroboration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012135 ice-cold extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- FABUFPQFXZVHFB-CFWQTKTJSA-N ixabepilone Chemical compound C/C([C@@H]1C[C@@H]2O[C@]2(C)CCC[C@@H]([C@@H]([C@H](C)C(=O)C(C)(C)[C@H](O)CC(=O)N1)O)C)=C\C1=CSC(C)=N1 FABUFPQFXZVHFB-CFWQTKTJSA-N 0.000 description 1
- 229960002014 ixabepilone Drugs 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 229950011263 lirilumab Drugs 0.000 description 1
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052987 metal hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004681 metal hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940086322 navelbine Drugs 0.000 description 1
- 229960000513 necitumumab Drugs 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007339 nucleophilic aromatic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 229950008516 olaratumab Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N p-toluenesulfonic acid Substances CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L palladium(II) chloride Chemical compound Cl[Pd]Cl PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960005079 pemetrexed Drugs 0.000 description 1
- QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N pemetrexed Chemical compound C1=N[C]2NC(N)=NC(=O)C2=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 229960002633 ramucirumab Drugs 0.000 description 1
- 108091006082 receptor inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000000371 solid-state nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012799 strong cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004481 total suppression of sideband Methods 0.000 description 1
- 229960004066 trametinib Drugs 0.000 description 1
- LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N trametinib Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC(N2C(N(C3CC3)C(=O)C3=C(NC=4C(=CC(I)=CC=4)F)N(C)C(=O)C(C)=C32)=O)=C1 LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000006276 transfer reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000404 tripotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019798 tripotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 description 1
- 201000007710 urinary bladder small cell neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- CILBMBUYJCWATM-PYGJLNRPSA-N vinorelbine ditartrate Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC CILBMBUYJCWATM-PYGJLNRPSA-N 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229910052726 zirconium Inorganic materials 0.000 description 1
Description
Настоящее изобретение относится к кристаллическим формам 5-[5-[2-изопропилциклопропил]-6метилпиридазин-3-ил]-1Н-пиримидин-2,4-диона и содержащим их фармацевтическим композициям, которые ингибируют активность CD73 и применимы для лечения рака.The present invention relates to crystalline forms of 5-[5-[2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione and pharmaceutical compositions containing them, which inhibit CD73 activity and are useful for the treatment of cancer.
CD73, также известный как 5'-нуклеотидаза или экто-5'-нуклеотидаза (EC 3.1.3.5), представляет собой фермент, который превращает 5'-мононуклеотиды в нуклеозиды. CD73 экспрессируется во многих тканях и активируется в раковых тканях, а путь CD73 промотирует рост опухоли вследствие лимитирования противоопухолевого T-клеточного иммунитета посредством передачи сигналов через аденозиновый рецептор (Zhang B., Cancer Research, 2010, 70:6407-6411; Antonioli L. et al., Drug Discovery Today, 2017, 22:1686-1696). У мышей с дефицитом CD73 повышен противоопухолевый иммунитет, и они резистентны к экспериментальному метастазу (Stagg J. et al., Cancer Research, 2011, 71:2892-2900). Внеклеточный аденозин, выработанный опухолевым CD73, накапливается в микроокружении опухоли, нарушает противоопухолевый T-клеточный иммунитет (Zhang B., Antonioli L.) и связан с ускользанием опухолей от иммунного ответа, пролиферацией, миграцией, неоваскуляризацией, метастазом и химиорезистентностью опухолевых клеток (Inoue Y et al., Oncotarget, 2017, 8:8738-8751). Также сообщалось, что повышенная экспрессия CD73 связана с повышенной иммуносупрессией (Jin D. et al., Cancer Res., 70:2245-2255 (2010)).CD73, also known as 5'-nucleotidase or ecto-5'-nucleotidase (EC 3.1.3.5), is an enzyme that converts 5'-mononucleotides into nucleosides. CD73 is expressed in many tissues and is activated in cancerous tissues, and the CD73 pathway promotes tumor growth by limiting antitumor T-cell immunity through adenosine receptor signaling (Zhang B., Cancer Research, 2010, 70:6407-6411; Antonioli L. et al. al., Drug Discovery Today, 2017, 22:1686-1696). CD73-deficient mice have enhanced antitumor immunity and are resistant to experimental metastasis (Stagg J. et al., Cancer Research, 2011, 71:2892-2900). Extracellular adenosine produced by tumor CD73 accumulates in the tumor microenvironment, disrupts antitumor T-cell immunity (Zhang B., Antonioli L.) and is associated with tumor immune evasion, proliferation, migration, neovascularization, metastasis and chemoresistance of tumor cells (Inoue Y et al., Oncotarget, 2017, 8:8738-8751). It has also been reported that increased CD73 expression is associated with increased immunosuppression (Jin D. et al., Cancer Res., 70:2245-2255 (2010)).
Таким образом, путь CD73 оказывает иммуносупрессивное действие, и сделано предположение, что блокирование пути CD73 может быть пригодно для лечения рака (Allard D. et al., Immunotherapy, 2016, 8:145-163). Ингибиторы CD73 проходят клинические испытания на лечение рака (Hay C.M. et al., Oncoimmunol., 2016, 5(8):e1208875, Allard D).Thus, the CD73 pathway has immunosuppressive effects, and it has been suggested that blocking the CD73 pathway may be useful for treating cancer (Allard D. et al., Immunotherapy, 2016, 8:145-163). CD73 inhibitors are being tested in clinical trials for cancer treatment (Hay C.M. et al., Oncoimmunol., 2016, 5(8):e1208875, Allard D).
Заявка США № 16/481146, озаглавленная Ингибиторы CD73, представляет собой национальную фазу США международной заявки № PCT/US2019/019074 и раскрывает определенные молекулыингибиторы CD73, включая соединениеUS Application No. 16/481146, entitled CD73 Inhibitors, is the US national phase of International Application No. PCT/US2019/019074 and discloses certain CD73 inhibitor molecules, including the compound
Н ,? / \N,? /\
N—N = N Η (формула I, которая представляет собой 5-[5-[2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]1 Н-пиримидин-2,4-дион).N—N = N Η (formula I, which is 5-[5-[2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]1H-pyrimidin-2,4-dione).
Соответственно настоящее изобретение предусматривает кристаллические формы соединенияAccordingly, the present invention provides crystalline forms of the compound
Н 7° / \Н 7° / \
Ν—У Ν = ΝΝ—У Ν = Ν
Н (5-[5-[2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона).H (5-[5-[2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione).
В предпочтительном варианте реализации кристаллическая форма представляет собой форму соединенияIn a preferred embodiment, the crystalline form is the compound form
(5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил] -6-метилпиридазин-3 -ил] -1 H-пиримидин-2,4-диона.(5-[5-[(1 S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1 H-pyrimidin-2,4-dione.
Настоящее изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую кристаллическую форму соединения 5-[5-[2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин2,4-диона, и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей. В предпочтительном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит кристаллическую форму 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.The present invention also provides a pharmaceutical composition containing a crystalline form of the compound 5-[5-[2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine2,4-dione, and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients . In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition contains a crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or fillers.
Кристаллическая форма 1.Crystal form 1.
В одном предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую по меньшей мере 500 г безводной кристаллической формы соединения формулыIn one preferred embodiment, the present invention provides a composition containing at least 500 g of an anhydrous crystalline form of a compound of the formula
(5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил] -6-метилпиридазин-3 -ил] -1 H-пиримидин-2,4-диона).(5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione).
В другом предпочтительном варианте реализации безводная кристаллическая форма в композиции характеризуется по меньшей мере одним изIn another preferred embodiment, the anhydrous crystalline form in the composition is characterized by at least one of
- 1 045742 (a) пиком на рентгенограмме при угле дифракции 2-тета 4,7° в сочетании с одним или более пиками при 11,7, 15,8, 16,0, 26,8 и 27,2°; с допуском на углы дифракции 0,2°; и (b) спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает пики, отнесенные относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 25,4, 28,9, 43,1, 109,3, 124,4, 128,2 и 160,7 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).- 1 045742 (a) a peak in the X-ray diffraction pattern at a 2-theta diffraction angle of 4.7° in combination with one or more peaks at 11.7, 15.8, 16.0, 26.8 and 27.2°; with a tolerance for diffraction angles of 0.2°; and (b) a solid-phase 13 C NMR spectrum, which includes peaks assigned to the high-field resonance of adamantane (δ=29.5 ppm) at 25.4, 28.9, 43.1, 109.3, 124 .4, 128.2 and 160.7 ppm. (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации безводная кристаллическая форма дополнительно характеризуется спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает один или более пиков, отнесенных относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 16,6, 18,3, 20,7, 22,1, 23,9, 26,6, 27,6, 28,1, 30,2, 31,2, 32,2, 38,6, 39,7, 41,2, 111,0, 112,0, 130,7, 145,1, 146,3, 150,1, 151,0, 153,4, 156,7, 157,6, 158,6, 159,3, 160,7, 163,4, 165,9, 169,4 и 170,2 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the anhydrous crystalline form is further characterized by a solid phase 13 C NMR spectrum that includes one or more peaks assigned to the high field resonance of adamantane (δ=29.5 ppm) at 16.6, 18.3, 20.7, 22.1, 23.9, 26.6, 27.6, 28.1, 30.2, 31.2, 32.2, 38.6, 39.7, 41.2, 111, 0, 112.0, 130.7, 145.1, 146.3, 150.1, 151.0, 153.4, 156.7, 157.6, 158.6, 159.3, 160.7, 163.4, 165.9, 169.4 and 170.2 ppm. (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации безводная кристаллическая форма характеризуется спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает пики, отнесенные относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 16,6, 18,3, 20,7, 22,1, 23,9, 25,4, 26,6, 27,6, 28,1, 28,9, 30,2, 31,2, 32,2, 38,6, 39,7, 41,2, 43,1, 109,3, 111,0, 112,0, 124,4, 128,2, 130,7, 145,1, 146,3, 150,1, 151,0, 153,4, 156,7, 157,6, 158,6, 159,3, 160,7, 163,4, 165,9, 167,0, 169,4 и 170,2 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the anhydrous crystalline form is characterized by a solid phase 13 C NMR spectrum that includes peaks assigned to the adamantane high field resonance (δ=29.5 ppm) at 16.6, 18.3, 20.7, 22.1, 23.9, 25.4, 26.6, 27.6, 28.1, 28.9, 30.2, 31.2, 32.2, 38.6, 39.7, 41, 2, 43.1, 109.3, 111.0, 112.0, 124.4, 128.2, 130.7, 145.1, 146.3, 150.1, 151.0, 153.4, 156.7, 157.6, 158.6, 159.3, 160.7, 163.4, 165.9, 167.0, 169.4 and 170.2 ppm. (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации безводная кристаллическая форма в композиции представляет собой соединение 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-дион.In another preferred embodiment, the anhydrous crystalline form in the composition is the compound 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione.
В другом предпочтительном варианте реализации композиция по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации композиция по меньшей мере на 95% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации композиция по меньшей мере на 96% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации композиция по меньшей мере на 97% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации композиция по меньшей мере на 98% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации композиция по меньшей мере на 99% свободна от примесей.In another preferred embodiment, the composition is at least 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 or 100% free from impurities. In another preferred embodiment, the composition is at least 95% free from impurities. In another preferred embodiment, the composition is at least 96% free from impurities. In another preferred embodiment, the composition is at least 97% free from impurities. In another preferred embodiment, the composition is at least 98% free from impurities. In another preferred embodiment, the composition is at least 99% free from impurities.
В другом предпочтительном варианте реализации композиция представляет собой гранулированную композицию. В другом предпочтительном варианте реализации гранулированная композиция представляет собой влажную гранулированную композицию. В другом предпочтительном варианте реализации гранулированная композиция представляет собой сухую гранулированную композицию.In another preferred embodiment, the composition is a granular composition. In another preferred embodiment, the granular composition is a wet granular composition. In another preferred embodiment, the granular composition is a dry granular composition.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственную тару, содержащую по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 кг композиции. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственную тару, содержащую по меньшей мере 1 кг композиции. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственный контейнер, содержащий по меньшей мере 5 кг композиции.In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 , 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 or 1000 kg of composition. In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 1 kg of the composition. In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 5 kg of the composition.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую композицию и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.In another preferred embodiment, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising the composition and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
Кристаллическая форма 2.Crystal form 2.
В другом предпочтительном варианте реализации кристаллическая форма представляет собой десольватированную (безводную) кристаллическую форму соединения формулы (5-[5-[(1 S,2R)-2-изоnропилциклоnропил] -6-метилпиридазин-3 -ил] -1 Н-пиримидин-2,4-дион) , который характеризуется по меньшей мере одним из (a) пиком на рентгенограмме при угле дифракции 2-тета 4,3-5,5° в сочетании с одним или более пиками при 6,4, 9,6, 11,0 и 11,6°; с допуском на углы дифракции 0,2°; и (b) спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает пики, отнесенные относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 17,2, 28,7, 122,0, 126,1, 143,6 и 155,5 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the crystalline form is the desolvated (anhydrous) crystalline form of the compound of the formula (5-[5-[(1S,2R)-2-isonropylcyclonropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin- 2,4-dione) which is characterized by at least one of (a) an X-ray diffraction peak at a 2-theta diffraction angle of 4.3-5.5° in combination with one or more peaks at 6.4, 9.6, 11.0 and 11.6°; with a tolerance for diffraction angles of 0.2°; and (b) a solid-phase 13 C NMR spectrum, which includes peaks assigned to the high-field resonance of adamantane (δ=29.5 ppm) at 17.2, 28.7, 122.0, 126.1, 143 .6 and 155.5 ppm (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации пик на рентгенограмме при угле дифракции 2-тета 4,3-5,5° находится при угле дифракции 2-тета 4,3°.In another preferred embodiment, the peak in the x-ray diffraction pattern at a 2-theta diffraction angle of 4.3-5.5° is at a 2-theta diffraction angle of 4.3°.
В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма дополнительно характеризуется спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает один или более пиков, отнесенных относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 18,9, 21,1, 22,5, 24,4, 26,7, 27,8, 29,7, 39,7, 41,3, 45,5, 50,1, 110,7, 111,7, 112,4, 125,0, 129,1, 144,8, 146,2, 147,2, 149,9, 151,1, 153,0, 155,5, 157,2, 159,0, 160,6, 161,4, 162,7, 164,8, 167,0, 168,3 и 170,4 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is further characterized by a solid phase 13 C NMR spectrum that includes one or more peaks assigned to the high field resonance of adamantane (δ=29.5 ppm) at 18.9, 21 ,1, 22.5, 24.4, 26.7, 27.8, 29.7, 39.7, 41.3, 45.5, 50.1, 110.7, 111.7, 112.4 , 125.0, 129.1, 144.8, 146.2, 147.2, 149.9, 151.1, 153.0, 155.5, 157.2, 159.0, 160.6, 161 .4, 162.7, 164.8, 167.0, 168.3 and 170.4 ppm. (±0.2 ppm respectively).
- 2 045742- 2 045742
В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма характеризуется спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает пики, отнесенные относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 17,2, 18,9, 21,1, 22,5, 24,4, 26,7, 27,8, 28,7, 29,7, 39,7, 41,3, 45,5, 50,1, 110,7, 111,7, 112,4, 122,0, 125,0, 126,1, 129,1, 143,6, 144,8, 146,2, 147,2, 149,9, 151,1, 153,0, 155,5, 157,2, 159,0, 160,6, 161,4, 162,7, 164,8, 167,0, 168,3 и 170,4 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is characterized by a solid phase 13 C NMR spectrum that includes peaks assigned to the adamantane upfield resonance (δ=29.5 ppm) at 17.2, 18.9, 21 ,1, 22.5, 24.4, 26.7, 27.8, 28.7, 29.7, 39.7, 41.3, 45.5, 50.1, 110.7, 111.7 , 112.4, 122.0, 125.0, 126.1, 129.1, 143.6, 144.8, 146.2, 147.2, 149.9, 151.1, 153.0, 155 .5, 157.2, 159.0, 160.6, 161.4, 162.7, 164.8, 167.0, 168.3 and 170.4 ppm. (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма по меньшей мере на 95% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма по меньшей мере на 96% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма по меньшей мере на 97% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма по меньшей мере на 98% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации десольватированная (безводная) кристаллическая форма по меньшей мере на 99% свободна от примесей.In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% free from impurities. In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is at least 95% free of impurities. In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is at least 96% free from impurities. In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is at least 97% free from impurities. In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is at least 98% free of impurities. In another preferred embodiment, the desolvated (anhydrous) crystalline form is at least 99% free of impurities.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую по меньшей мере 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 г десольватированной (безводной) кристаллической формы. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую по меньшей мере 100 г десольватированной (безводной) кристаллической формы. В другом предпочтительном варианте реализации композиция представляет собой гранулированную композицию. В другом предпочтительном варианте реализации гранулированная композиция представляет собой влажную гранулированную композицию. В другом предпочтительном варианте реализации гранулированная композиция представляет собой сухую гранулированную композицию.In another preferred embodiment, the present invention provides a composition containing at least 100, 200, 300, 400, 500 or 1000 g of desolvated (anhydrous) crystalline form. In another preferred embodiment, the present invention provides a composition containing at least 100 g of a desolvated (anhydrous) crystalline form. In another preferred embodiment, the composition is a granular composition. In another preferred embodiment, the granular composition is a wet granular composition. In another preferred embodiment, the granular composition is a dry granular composition.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственную тару, содержащую по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 кг десольватированной (безводной) кристаллической формы. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственную тару, содержащую по меньшей мере 1 кг десольватированной (безводной) кристаллической формы. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую десольватированную (безводную) кристаллическую форму и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 , 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 or 1000 kg of desolvated (anhydrous) crystalline form. In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 1 kg of the desolvated (anhydrous) crystalline form. In another preferred embodiment, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a desolvated (anhydrous) crystalline form and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
Кристаллическая форма 3.Crystal form 3.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящая заявка обеспечивает полугидратную кристаллическую форму соединения формулы (5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил] -1 H-пиримидин-2,4-диона).In another preferred embodiment, the present application provides a hemihydrate crystalline form of the compound of the formula (5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4- dione).
В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма характеризуется по меньшей мере одним из (a) пиком на рентгенограмме при угле дифракции 2-тета 5,0° в сочетании с одним или более пиками при 16,4, 17,8 и 26,6°; с допуском на углы дифракции 0,2°; и (b) спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает пики, отнесенные относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 23,5, 34,6, 110,2, 124,1, 126,8 и 166,2 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is characterized by at least one of (a) an X-ray diffraction peak at a 2-theta diffraction angle of 5.0° in combination with one or more peaks at 16.4, 17.8 and 26.6° ; with a tolerance for diffraction angles of 0.2°; and (b) a solid phase 13 C NMR spectrum, which includes peaks assigned to the high field resonance of adamantane (δ=29.5 ppm) at 23.5, 34.6, 110.2, 124.1, 126 .8 and 166.2 ppm (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма дополнительно характеризуется спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает один или более пиков, отнесенных относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 16,5, 18,9, 19,6, 20,4, 22,6, 24,4, 26,0, 27,4, 28,3, 30,0, 30,9, 38,4, 40,5, 110,8, 130,4, 131,2, 146,0, 147,1, 150,4, 151,2, 153,4, 157,1, 157,7, 158,3, 159,6, 163,1 и 169,7 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is further characterized by a 13 C solid phase NMR spectrum that includes one or more peaks assigned to the high field resonance of adamantane (δ=29.5 ppm) at 16.5, 18.9, 19.6, 20.4, 22.6, 24.4, 26.0, 27.4, 28.3, 30.0, 30.9, 38.4, 40.5, 110.8, 130, 4, 131.2, 146.0, 147.1, 150.4, 151.2, 153.4, 157.1, 157.7, 158.3, 159.6, 163.1 and 169.7 m .d. (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма характеризуется спектром твердофазного ЯМР 13C, который включает пики, отнесенные относительно резонанса адамантана в сильном поле (δ=29,5 м.д.) при 16,5, 18,9, 19,6, 20,4, 22,6, 23,5, 24,4, 26,0, 27,4, 28,3, 30,0, 30,9, 34,6, 38,4, 40,5, 110,2, 110,8, 124,1, 126,8, 130,4, 131,2, 146,0, 147,1, 150,4, 151,2, 153,4, 157,1, 157,7, 158,3, 159,6, 163,1, 166,2 и 169,7 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is characterized by a 13 C solid phase NMR spectrum that includes peaks assigned to the adamantane upfield resonance (δ=29.5 ppm) at 16.5, 18.9, 19.6, 20.4, 22.6, 23.5, 24.4, 26.0, 27.4, 28.3, 30.0, 30.9, 34.6, 38.4, 40.5, 110, 2, 110.8, 124.1, 126.8, 130.4, 131.2, 146.0, 147.1, 150.4, 151.2, 153.4, 157.1, 157.7, 158.3, 159.6, 163.1, 166.2 and 169.7 ppm. (±0.2 ppm respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма по меньшей мере на 95% свободнаIn another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% free from impurities. In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is at least 95% free
- 3 045742 от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма по меньшей мере на 96% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма по меньшей мере на 97% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма по меньшей мере на 98% свободна от примесей. В другом предпочтительном варианте реализации полугидратная кристаллическая форма по меньшей мере на 99% свободна от примесей.- 3 045742 from impurities. In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is at least 96% free from impurities. In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is at least 97% free from impurities. In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is at least 98% free from impurities. In another preferred embodiment, the hemihydrate crystalline form is at least 99% free from impurities.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую по меньшей мере 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 г полугидратной кристаллической формы. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую по меньшей мере 100 г полугидратной кристаллической формы.In another preferred embodiment, the present invention provides a composition containing at least 100, 200, 300, 400, 500 or 1000 g of the hemihydrate crystalline form. In another preferred embodiment, the present invention provides a composition containing at least 100 g of the hemihydrate crystalline form.
В другом предпочтительном варианте реализации композиция представляет собой гранулированную композицию. В другом предпочтительном варианте реализации гранулированная композиция представляет собой влажную гранулированную композицию. В другом предпочтительном варианте реализации гранулированная композиция представляет собой сухую гранулированную композицию.In another preferred embodiment, the composition is a granular composition. In another preferred embodiment, the granular composition is a wet granular composition. In another preferred embodiment, the granular composition is a dry granular composition.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственную тару, содержащую по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 кг полугидратной кристаллической формы. В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает производственную тару, содержащую по меньшей мере 1 кг полугидратной кристаллической формы.In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 , 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 or 1000 kg hemihydrate crystalline form. In another preferred embodiment, the present invention provides a production container containing at least 1 kg of the hemihydrate crystalline form.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую полугидратную кристаллическую форму и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.In another preferred embodiment, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a hemihydrate crystalline form and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
Методы лечения.Treatment methods.
В настоящем изобретении предложен способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества кристаллической формы соединения 5-[5-[2изопропилциклопропил] -6-метилпиридазин-3-ил] - 1H-пиримидин-2,4-диона.The present invention provides a method of treating cancer comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of a crystalline form of the compound 5-[5-[2isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione.
В другом предпочтительном варианте реализации рак представляет собой рак мочевого пузыря, рак молочной железы, холангиокарциному, рак толстой и прямой кишок, рак толстой кишки, рак желудка, рак желчного пузыря, глиобластому, рак головы и шеи, рак печени, рак легких, лимфому, медуллобластому, меланому, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы или рак почек. В одном варианте реализации рак молочной железы представляет собой трижды негативный рак молочной железы. В другом варианте реализации рак легких представляет собой немелкоклеточный рак легких.In another preferred embodiment, the cancer is bladder cancer, breast cancer, cholangiocarcinoma, colorectal cancer, colon cancer, stomach cancer, gallbladder cancer, glioblastoma, head and neck cancer, liver cancer, lung cancer, lymphoma, medulloblastoma, melanoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer or kidney cancer. In one embodiment, the breast cancer is triple negative breast cancer. In another embodiment, the lung cancer is non-small cell lung cancer.
Настоящее изобретение также обеспечивает кристаллическую форму соединения 5-[5-[2изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона для применения в терапии.The present invention also provides a crystalline form of the compound 5-[5-[2isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione for use in therapy.
Настоящее изобретение также обеспечивает кристаллическую форму соединения 5-[5-[2изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона для применения в лечении рака. В предпочтительном варианте реализации кристаллическая форма представляет собой форму соединения 5-[5-[(1 S,2S)-2-этилциклопропил] -6-метилпиридазин-3-ил] - 1H-пиримидин-2,4-диона.The present invention also provides a crystalline form of the compound 5-[5-[2isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione for use in the treatment of cancer. In a preferred embodiment, the crystalline form is that of the compound 5-[5-[(1S,2S)-2-ethylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione.
Настоящее изобретение также обеспечивает кристаллическую форму соединения 5-[5-[2изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона при производстве лекарств для лечения рака.The present invention also provides a crystalline form of the compound 5-[5-[2isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione in the production of drugs for the treatment of cancer.
Субъекты, для которых лечение ингибитором CD73 является эффективным, включают субъектов с опухолями, резистентными или невосприимчивыми к анти-PD1/PDL-1 ингибиторам, такими как немелкоклеточный рак легких, рак мочевого пузыря и меланома; субъектов с раковыми заболеваниями с мутацией EGFR/BRAF/Kras, такими как немелкоклеточный рак легких, рак мочевого пузыря, меланома, рак толстой кишки и поджелудочной железы; субъектов с раком, отрицательным (-) по эстрогеновому рецептору, таким как трижды негативный рак молочной железы; субъектов с высоким уровнем экспрессии CD73, например с раком поджелудочной железы и раком толстой и прямой кишок. При необходимости такой субъект может быть выбран для терапии с применением соединения, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, на основании наличия высоких уровней экспрессии CD73 в их опухолях, по результатам иммуногистохимического (ИГХ) анализа; или на основании наличия мутаций EGFR и BRAF в их опухолях, обнаруженных в анализе ПЦР-РВ; или на основании потери эстрогенового рецептора в их опухолях, по результатам ИГХ или ПЦР-РВ анализа; или на основании наличия высоких уровней аденозина и АМФ в их опухолях или в плазме, по результатам ЖХ-МС анализа. Для фармакодинамической оценки можно использовать ex vivo анализ на основе ЖХ-МС, описанный в данном документе, для измерения влияния ингибитора CD73 на превращение АМФ в аденозин в крови.Subjects for whom CD73 inhibitor treatment is effective include subjects with tumors resistant or refractory to anti-PD1/PDL-1 inhibitors, such as non-small cell lung cancer, bladder cancer and melanoma; subjects with EGFR/BRAF/Kras mutation cancers such as non-small cell lung cancer, bladder cancer, melanoma, colon and pancreatic cancer; subjects with estrogen receptor negative (-) cancer, such as triple negative breast cancer; subjects with high levels of CD73 expression, such as pancreatic cancer and colorectal cancer. If necessary, such a subject may be selected for therapy with a compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, based on the presence of high levels of CD73 expression in their tumors, as determined by immunohistochemical (IHC) analysis; or based on the presence of EGFR and BRAF mutations in their tumors detected in RT-PCR analysis; or based on loss of estrogen receptor in their tumors, as determined by IHC or RT-PCR analysis; or based on the presence of high levels of adenosine and AMP in their tumors or plasma, as determined by LC-MS analysis. For pharmacodynamic evaluation, the ex vivo LC-MS assay described herein can be used to measure the effect of a CD73 inhibitor on the conversion of AMP to adenosine in the blood.
В предпочтительном варианте реализации пациентом является пациент, у которого определена активность CD73 в сыворотке. В одном предпочтительном варианте реализации определение активности CD73 означает определение факта наличия активности CD73. Способы определения уровня экспрессии CD73 или активности CD73 известны специалистам в данной области техники, например, см. S Morello et al., J. Trans. Med., 2017, 15:244. В другом предпочтительном варианте реализации определение активности CD73 означает количественное определение степени превращения АМФ в аденозин под действием CD73, и вIn a preferred embodiment, the patient is a patient whose serum CD73 activity has been determined. In one preferred embodiment, determining CD73 activity means determining whether CD73 activity is present. Methods for determining the level of CD73 expression or CD73 activity are known to those skilled in the art, for example, see S Morello et al., J. Trans. Med., 2017, 15:244. In another preferred embodiment, determining CD73 activity means quantifying the degree of conversion of AMP to adenosine by CD73, and
- 4 045742 данном документе предложен анализ на основе ЖХ-МС, облегчающий количественное определение уровня активности CD73.- 4 045742 This document proposes an LC-MS based assay to facilitate the quantification of CD73 activity levels.
В другом предпочтительном варианте реализации пациентом является пациент, у которого определена экспрессия CD73 в ткани. В другом варианте реализации ткань представляет собой опухолевую ткань. Способы определения уровня экспрессии CD73 в ткани известны специалистам в данной области техники, например, с применением вестерн-блоттинга или иммуногистохимии (X-RWu et al., J. Surg. Oncol., 2012, 106:130-137).In another preferred embodiment, the patient is a patient whose tissue expression of CD73 is determined. In another embodiment, the tissue is tumor tissue. Methods for determining the level of CD73 expression in tissue are known to those skilled in the art, for example, using Western blotting or immunohistochemistry (X-RWu et al., J. Surg. Oncol., 2012, 106:130-137).
В одном варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения рака, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с одним или более противоопухолевыми агентами. Неограничивающие примеры противоопухолевых агентов включают рамуцирумаб, нецитумумаб, оларатумаб, гемцитабин, пеметрексед, галунисертиб, абемациклиб, гефитиниб, вемурафениб, дабрафениб, траметиниб, цисплатин, карбоплатин, дакарбазин, липосомный доксорубицин, доцетаксел, циклофосфамид и доксорубицин, навельбин, эрибулин, паклитаксел, частицы связанного с белком паклитаксела для инъекционной суспензии, иксабепилон, капецитабин, FOLFOX (лейковорин, фторурацил и оксалиплатин), FOLFIRI (лейковорин, фторурацил и иринотекан), цетуксимаб и ингибитор EGFR, ингибитор Raf, ингибитор B-Raf, ингибитор ERK, ингибитор CDK4/6, ингибитор индоламин-2,3-диоксигеназы, ингибитор TGFe и ингибитор рецептора TGFe.In one embodiment, the present invention provides a method of treating cancer comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate or sequential combination with one or more antineoplastic agents. Non-limiting examples of antineoplastic agents include ramucirumab, necitumumab, olaratumab, gemcitabine, pemetrexed, galunisertib, abemaciclib, gefitinib, vemurafenib, dabrafenib, trametinib, cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxora bicine, navelbine, eribulin, paclitaxel, bound particles with paclitaxel protein for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), cetuximab and EGFR inhibitor, Raf inhibitor, B-Raf inhibitor, ERK inhibitor, CDK4/6 inhibitor, indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitor, TGFe inhibitor and TGFe receptor inhibitor.
В другом варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения рака, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с одним или более иммуноонкологическими агентами. В одном предпочтительном варианте реализации иммуноонкологический агент представляет собой анти-PD-1 антитело, анти-PD-L1 антитело, антителоагонист анти-CD137 или анти-CTLA4 антитело. Неограничивающие примеры иммуноонкологических агентов включают ниволумаб, ипилимумаб, пидилизумаб, пембролизумаб, тремелимумаб, урелумаб, лирилумаб, атезолизумаб, дурвалумаб и анти-PD-L1 антитело LY3300054 (последовательности тяжелой и легкой цепей которого описаны в WO 2017/034916 и US 2017/0058033 как SEQ ID NO: 10 и 11 соответственно). В одном предпочтительном варианте реализации иммуноонкологический агент представляет собой анти-PD-1 антитело. В другом предпочтительном варианте реализации иммуноонкологический агент представляет собой анти-PD-L1 антитело. В другом предпочтительном варианте реализации предложенное соединение представляет собой 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциkлопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-дион, а иммуноонкологический агент представляет собой LY3300054.In another embodiment, the present invention provides a method of treating cancer comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate or sequential combination with one or more immuno-oncology agents. In one preferred embodiment, the immuno-oncology agent is an anti-PD-1 antibody, an anti-PD-L1 antibody, an anti-CD137 agonist antibody, or an anti-CTLA4 antibody. Non-limiting examples of immuno-oncology agents include nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, urelumab, lirilumab, atezolizumab, durvalumab and the anti-PD-L1 antibody LY3300054 (the heavy and light chain sequences of which are described in WO 2017/034916 and US 2017/005803 3 as SEQ ID NO: 10 and 11 respectively). In one preferred embodiment, the immuno-oncology agent is an anti-PD-1 antibody. In another preferred embodiment, the immuno-oncology agent is an anti-PD-L1 antibody. In another preferred embodiment, the compound of the invention is 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione and the immuno-oncology agent is LY3300054.
В одном варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения немелкоклеточного рака легких, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с другим агентом. В одном предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой осимертиниб, цетуксимаб или абемациклиб. В другом предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой осимертиниб. В другом предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой цетуксимаб. В другом предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой абемациклиб.In one embodiment, the present invention provides a method of treating non-small cell lung cancer, comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate, or sequential combination with another agent. In one preferred embodiment, the other agent is osimertinib, cetuximab, or abemaciclib. In another preferred embodiment, the other agent is osimertinib. In another preferred embodiment, the other agent is cetuximab. In another preferred embodiment, the other agent is abemaciclib.
В другом предпочтительном варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения меланомы, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с другим агентом. В одном предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой ингибитор BRAF, анти-PD-1 антитело или анти-PD-L1 антитело. В другом предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой ингибитор BRAF. В другом предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой анти-PD-1 антитело. В другом предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой анти-PD-L1 антитело. В другом предпочтительном варианте реализации антитело против PD-L1 представляет собой LY3300054 (последовательности тяжелой и легкой цепей которого представлены в WO 2017/034916 и US 2017/0058033 как SEQ ID NO: 10 и 11 соответственно).In another preferred embodiment, the present invention provides a method of treating melanoma, comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate or sequential combination with another agent. In one preferred embodiment, the other agent is a BRAF inhibitor, an anti-PD-1 antibody, or an anti-PD-L1 antibody. In another preferred embodiment, the other agent is a BRAF inhibitor. In another preferred embodiment, the other agent is an anti-PD-1 antibody. In another preferred embodiment, the other agent is an anti-PD-L1 antibody. In another preferred embodiment, the anti-PD-L1 antibody is LY3300054 (the heavy and light chain sequences of which are provided in WO 2017/034916 and US 2017/0058033 as SEQ ID NO: 10 and 11, respectively).
В другом предпочтительном варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения рака толстой и прямой кишок, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с другим агентом. В одном предпочтительном варианте реализации другой агент представляет собой абемациклиб. В другом предпочтительном варианте реализации предложенное соединение представляет собой 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциkлопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]Ш-пиримидин-2,4-дион, а другой агент представляет собой абемациклиб.In another preferred embodiment, the present invention provides a method of treating colorectal cancer comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate or sequential combination with another agent. In one preferred embodiment, the other agent is abemaciclib. In another preferred embodiment, the compound of the invention is 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]N-pyrimidin-2,4-dione and the other agent is abemaciclib .
В другом предпочтительном варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения рака поджелудочной железы, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с другим агентом. В одном предпочтительном варианте реализа- 5 045742 ции другой агент представляет собой абемациклиб. В другом предпочтительном варианте реализации предложенное соединение представляет собой 5-[5-[(1S,2R)-2-изоnропилциклоnропил]-6-метилпиридазин3-ил]-Ш-пиримидин-2,4-дион, а другой агент представляет собой абемациклиб.In another preferred embodiment, the present invention provides a method of treating pancreatic cancer comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate or sequential combination with another agent. In one preferred embodiment, the other agent is abemaciclib. In another preferred embodiment, the compound of the invention is 5-[5-[(1S,2R)-2-isonropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin3-yl]-N-pyrimidin-2,4-dione and the other agent is abemaciclib.
В другом предпочтительном варианте реализации данного изобретения предложен способ лечения трижды негативного рака молочной железы, включающий введение эффективного количества соединения формулы I, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с другим агентом. В одном предпочтительном варианте реализации предложенное соединение представляет собой 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклоnропил]-6метилпиридазин-3 -ил] -1 Н-пиримидин-2,4-дион.In another preferred embodiment, the present invention provides a method of treating triple-negative breast cancer, comprising administering an effective amount of a compound of formula I described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in simultaneous, separate, or sequential combination with another agent. In one preferred embodiment, the compound of the invention is 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione.
Следует понимать, что следующие термины, упомянутые выше и во всем описании данного изобретения, если не указано иное, имеют следующие значения.It should be understood that the following terms mentioned above and throughout the specification of this invention, unless otherwise specified, have the following meanings.
Фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество представляет собой среду, общепринятую в данной области техники для доставки биологически активных агентов млекопитающим, например людям.A pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient is a medium conventional in the art for delivering biologically active agents to mammals, such as humans.
Термины лечение, лечить, лечащий и т.п. включают замедление или реверсирование прогрессирования расстройства. Указанные термины включают также облегчение, улучшение, снижение, исключение или ослабление одного или более симптомов расстройства или патологического состояния, даже если указанное расстройство или патологическое состояние фактически не исключено и даже если прогрессирование расстройства или патологического состояния само по себе не замедлено или не реверсировано.Terms treatment, treat, treating, etc. include slowing or reversing the progression of the disorder. These terms also include alleviation, amelioration, reduction, elimination or attenuation of one or more symptoms of a disorder or condition, even if the disorder or condition is not actually eliminated and even if the progression of the disorder or condition is not itself slowed or reversed.
Эффективное количество означает такое количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по данному изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение или его фармацевтически приемлемую соль по данному изобретению, которое вызывает биологический или медицинский ответ или требуемый терапевтический эффект у пациента, наблюдаемый лечащим клиницистом. В одном варианте реализации предложенное соединение или его фармацевтически приемлемая соль ингибирует превращение АМФ в аденозин в анализе фермента CD73 in vitro или ex vivo. В другом варианте реализации предложенное соединение или его фармацевтически приемлемая соль ингибирует превращение АМФ в аденозин в цельной крови мышей, полученной от животных, которым введены различные дозы указанного соединения.An effective amount means that amount of a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof of this invention or a pharmaceutical composition containing a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof of this invention that produces a biological or medical response or desired therapeutic effect in a patient as observed by a treating clinician. In one embodiment, the present compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof inhibits the conversion of AMP to adenosine in an in vitro or ex vivo CD73 enzyme assay. In another embodiment, the present compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof inhibits the conversion of AMP to adenosine in whole blood of mice obtained from animals administered various doses of the compound.
В данном контексте термин пациент относится к человеку.In this context, the term patient refers to a person.
Эффективное количество может быть без труда установлено лечащим врачом-диагностом как специалистом в данной области техники, с использованием известных технологий и посредством наблюдения результатов, полученных при аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного для пациента количества наблюдающий врач-диагностик учитывает множество факторов, включая, но не ограничиваясь ими: биологический вид пациента; его размер, возраст и общее состояние здоровья; конкретное вовлеченное заболевание или расстройство; степень вовлеченности или тяжесть заболевания или расстройства; реакция отдельного пациента; конкретное введенное соединение; способ введения; характеристики биодоступности введенного препарата; выбранная схема лечения; применение сопутствующих лекарственных препаратов; и другие релевантные обстоятельства.An effective amount can be readily determined by a physician skilled in the art using known techniques and by observing results obtained under similar circumstances. When determining the amount effective for a patient, the observing diagnostician considers many factors, including, but not limited to: the patient's biological species; its size, age and general health; the specific disease or disorder involved; degree of involvement or severity of disease or disorder; individual patient response; the specific compound administered; method of administration; characteristics of the bioavailability of the administered drug; chosen treatment regimen; use of concomitant medications; and other relevant circumstances.
Соединения по данному изобретению предпочтительно составляют в фармацевтические композиции, которые вводят любым способом, обеспечивающим биодоступность соединения, включая пероральный, внутривенный и трансдермальный способы. Наиболее предпочтительно, указанные композиции предназначены для перорального введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. (См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, ред., 21-е издание, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006)).The compounds of this invention are preferably formulated into pharmaceutical compositions that are administered by any route that provides bioavailability of the compound, including oral, intravenous and transdermal routes. Most preferably, said compositions are for oral administration. Such pharmaceutical compositions and methods for their preparation are well known in the art. (See, for example, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, ed., 21st edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006)).
Специалистам в данной области техники понятно, что соединения по данному изобретению могут образовывать соли. Соединения по данному изобретению содержат основные гетероциклы и, соответственно, вступают в реакцию с любыми из множества неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот. Такие фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и общие методики их получения известны в данной области техники. См., например, P. Stahl et al., Handbook of pharmaceutical salts: properties, selection and use (VCHA/Wiley-VCH, 2008).Those skilled in the art will appreciate that the compounds of this invention may form salts. The compounds of this invention contain basic heterocycles and accordingly react with any of a variety of inorganic and organic acids to form pharmaceutically acceptable acid addition salts. Such pharmaceutically acceptable acid addition salts and general procedures for their preparation are known in the art. See, for example, P. Stahl et al., Handbook of pharmaceutical salts: properties, selection and use (VCHA/Wiley-VCH, 2008).
Используемый здесь термин фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемая соль относится к относительно нетоксичной неорганической и органической соли и солям соединения по данному изобретению (S.M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, Journal of Pharmaceutical Sciences, том 66, № 1, январь, 1977).As used herein, the term pharmaceutically acceptable salts or pharmaceutically acceptable salt refers to the relatively non-toxic inorganic and organic salts and salts of the compounds of this invention (S. M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January, 1977).
Используемый здесь термин гранулированная композиция относится к композиции в гранулированной форме, которая в процессе фармацевтического производства является композициейпредшественником фармацевтической композиции.As used herein, the term granular composition refers to a composition in granular form that, in the pharmaceutical manufacturing process, is a precursor composition to a pharmaceutical composition.
Используемый здесь термин производственная тара относится к таре, которая используется при производстве фармацевтической тары, но не в лаборатории медицинской химии. Примеры производственной тары включают, но не ограничиваются ими, бункерный коллектор, поддон, поддон для сушки,As used herein, the term production container refers to containers that are used in the production of pharmaceutical containers, but not in a medicinal chemistry laboratory. Examples of production containers include, but are not limited to, hopper, pallet, drying tray,
- 6 045742 поддон для гранулятора, лоток для сушки, ковш для гранулятора и чашу для смешивания.- 6 045742 tray for granulator, drying tray, ladle for granulator and mixing bowl.
Соединения формулы I могут быть получены синтетическими способами, хорошо известными и признанными в данной области техники. Пригодные условия реакций для различных стадий указанных реакций известны в данной области техники, и соответствующие замены растворителей и совместных реагентов общеизвестны в данной области техники. Также специалистам в данной области техники понятно, что синтетические промежуточные соединения могут быть выделены и/или очищены различными известными технологиями, по необходимости или по желанию, и что часто можно использовать различные промежуточные соединения на следующих стадиях синтеза напрямую, с незначительной очисткой или без очистки. Кроме того, специалистам в данной области техники понятно, что в некоторых случаях порядок введения фрагментов не является критичным. Конкретный порядок стадий, необходимых для получения соединений по данному изобретению, зависит от конкретного синтезируемого соединения, исходного соединения и относительной подвижности замещенных фрагментов, как это хорошо известно опытным химикам. Все заместители, если не указано иное, являются такими, как описано выше, и все реагенты являются общеизвестными и общепризнанными в данной области техники.The compounds of formula I can be prepared by synthetic methods well known and recognized in the art. Suitable reaction conditions for the various steps of these reactions are known in the art, and appropriate substitutions of solvents and co-reagents are well known in the art. It will also be appreciated by those skilled in the art that synthetic intermediates can be isolated and/or purified by various known techniques as needed or desired, and that the various intermediates can often be used directly in subsequent synthetic steps with little or no purification. In addition, those skilled in the art will understand that in some cases the order in which the fragments are introduced is not critical. The specific order of steps required to prepare the compounds of this invention depends on the particular compound being synthesized, the starting compound, and the relative mobility of the substituted moieties, as is well known to skilled chemists. All substituents, unless otherwise indicated, are as described above, and all reagents are well known and generally accepted in the art.
В данном контексте следующие термины имеют следующие указанные значения: ACN относится к ацетонитрилу; DAST относится к трифториду диэтиламиносеры; DCM относится к дихлорметану; DMAP относится к 4-диметиламинопиридину; ДМСО или дмсо относится к диметилсульфоксиду; э.и. относится к энантиомерному избытку; ЭР/МС относится к масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением; EtOAc относится к этилацетату; Et2O относится к диэтиловому эфиру; FBS относится к эмбриональной бычьей сыворотке; ГХ-МС относится к газовой хроматомасс-спектрометрии; HBSS относится к сбалансированному солевому раствору Хэнкса; IC50 относится к полумаксимальной ингибирующей концентрации; LAH относится к алюмогидриду лития; ЖХ-ЭР/МС относится к жидкостной хроматомасс-спектрометрии с ионизацией электроспреем; МС относится к масс-спектрометрии; MeOH относится к метанолу; МТБЭ относится к метил-трет-бутиловому эфиру; nBuLi относится к н-бутиллитию; нм относится к нанометру или нанометрам; ЯМР относится к ядерному магнитному резонансу; OAc относится к ацетату; фунт/кв. дюйм относится к фунтам на квадратный дюйм; комн. т-ра относится к комнатной температуре или к температуре окружающей среды; СКО относится к сильному катионообмену; СЖХ относится к сверхкритической жидкостной хроматографии; SNAr относится к нуклеофильному ароматическому замещению; ТЭА относится к триэтиламину; ТГФ относится к тетрагидрофурану; tR относится к времени удерживания; и мас./мас. относится к масса/массовым отношениям в растворе.As used herein, the following terms have the following specified meanings: ACN refers to acetonitrile; DAST refers to diethylaminosulfur trifluoride; DCM refers to dichloromethane; DMAP refers to 4-dimethylaminopyridine; DMSO or DMSO refers to dimethyl sulfoxide; e.i. refers to enantiomeric excess; ER/MS refers to electrospray ionization mass spectrometry; EtOAc refers to ethyl acetate; Et2O refers to diethyl ether; FBS refers to fetal bovine serum; GC-MS refers to gas chromatography-mass spectrometry; HBSS refers to Hanks' balanced salt solution; IC50 refers to the half-maximal inhibitory concentration; LAH refers to lithium aluminum hydride; LC-ES/MS refers to liquid chromatography-mass spectrometry with electrospray ionization; MS refers to mass spectrometry; MeOH refers to methanol; MTBE refers to methyl tert-butyl ether; nBuLi refers to n-butyllithium; nm refers to nanometer or nanometers; NMR refers to nuclear magnetic resonance; OAc refers to acetate; psi inch refers to pounds per square inch; room t-ra refers to room temperature or ambient temperature; MSD refers to strong cation exchange; SLC refers to supercritical liquid chromatography; SNAr refers to nucleophilic aromatic substitution; TEA refers to triethylamine; THF refers to tetrahydrofuran; t R refers to retention time; and w/w refers to the mass/mass ratios in solution.
Соединения формулы I можно синтезировать так, как показано на следующих схемах.The compounds of formula I can be synthesized as shown in the following schemes.
Схема 1Scheme 1
На схеме 1 показано получение соединений формулы I. Используя общеизвестные условия реакции Сузуки, доступную в продаже (2,4-диметоксипиримидин-5-ил)бороновую кислоту 1 можно конденсировать с 4,6-дихлор-3-метилпиридазином. Можно выполнить следующее сочетание Сузуки хлор-фрагмента соединения 3 с транс-циклопропилборонатом, замещенным соответствующим образом, с получением соединения 4. Опытным специалистам понятно, что энантиомеры соединения 4 можно разделить с помощью технологий хирального разделения, известных в данной области техники. Соединения формулы I могут быть получены посредством снятия защитных метокси-групп в соединении 4 в ряде условий деметилирования, подробно описанных в известном уровне техники.Scheme 1 shows the preparation of compounds of formula I. Using well known Suzuki reaction conditions, commercially available (2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)boronic acid 1 can be condensed with 4,6-dichloro-3-methylpyridazine. The Suzuki coupling of the chlorine moiety of compound 3 with an appropriately substituted trans-cyclopropylboronate can be performed to give compound 4. Those skilled in the art will appreciate that the enantiomers of compound 4 can be separated using chiral resolution techniques known in the art. Compounds of formula I can be prepared by deprotecting the methoxy groups in compound 4 under a number of demethylation conditions described in detail in the prior art.
6 76 7
Формула IIFormula II
Схема 2Scheme 2
- 7 045742- 7 045742
На схеме 2 показаны обязательные циклопропилбороновые сложные эфиры, необходимые для получения соединений формулы II. Специалистам в данной области техники понятно, что гидроборирование соответствующим образом замещенного алкина 5 может быть осуществлено в ряде условий, в частности, в присутствии катализатора на основе переходного металла, такого как Cu или Zr, с получением алкенилбороната 6. Алкенилборонат можно подвергать циклопропанированию в условиях получения стабилизированных карбеноидов, известных в данной области техники, например, циклопропанирования Симмонса-Смита, реакции Кори-Чайковского и способа циклопопанирования с диазометаном (или диазосоединениями), как с катализаторами на основе переходных металлов (например, Cu, Pd или Ni), так и без них (например, термически или фотохимически), с получением соответствующим образом замещенного транс-циклопропилбороната 7. Специалистам в данной области техники понятно, что термодинамически благоприятный продукт циклопропанирования представляет собой смесь транс-энантиомеров в соединении 7.Scheme 2 shows the essential cyclopropylboronic esters required to prepare the compounds of formula II. Those skilled in the art will appreciate that hydroboration of an appropriately substituted alkyne 5 can be carried out under a number of conditions, particularly in the presence of a transition metal catalyst such as Cu or Zr, to yield alkenyl boronate 6. The alkenyl boronate can be cyclopropanated under the preparation conditions stabilized carbenoids known in the art, for example, the Simmons-Smith cyclopropanation, the Corey-Tchaikovsky reaction and the cyclopropanation method with diazomethane (or diazo compounds), both with and without transition metal catalysts (for example, Cu, Pd or Ni) them (e.g., thermally or photochemically), to obtain the appropriately substituted trans-cyclopropylboronate 7. Those skilled in the art will understand that the thermodynamically favorable cyclopropanation product is a mixture of trans-enantiomers in compound 7.
Схема 3Scheme 3
На схеме 3 показан хиральный синтез соединений формулы III. Диазотирование соответствующим образом замещенной аминокислоты 8 в модифицированных условиях Зандмейера (радикальное SNAr), приводящее к образованию соединения 9, известно в данное области техники. Последующее восстановление до спирта 10 можно провести с использованием ряда восстановительных агентов, известных в данной области техники, включая гидриды алюминия и диборан в качестве восстановительных агентов. Циклизация до хирального эпоксида 11 в щелочных условиях подробно описана в известном уровне техники. Можно использовать стереоселективную реакцию Хорнера-Вадсворта-Эммонса с обработкой хирального эпоксида 11 пригодным фосфонатным сложным эфиром (например, этил-2-диэтоксифосфорилацетатом или триэтилфосфоноацетатом) и пригодным основанием (например, алкиллитием, алкоксидами металлов или гидридами металлов) для получения транс-циклопропанового производного 12 (см., например, L. Delhaye, A. Merschaert, P. Delbeke, W. Brione, Org. Proc. Res. & Dev., 2007, 11, 689-692). Гидролиз соединения 12 до соответствующей кислоты 13 можно осуществлять в широком диапазоне основных условий, подробно описанных в данной области техники. Последующее связывание кислоты 13 с соответствующим образом замещенным N-гидроксифталимидом подробно описано в данной области техники с применением пригодного агента для активации кислоты, например карбонилдиимидазола, в присутствии слабого ненуклеофильного основания, с получением соединения 14. Декарбоксилирующее борилирование N-гидроксифталимидного сложного эфира 14 можно осуществлять в различных условиях, известных в данной области техники, в том числе в присутствии катализатора на основе переходного металла (например, по реакции Сузуки-Мияура), в фотолитических условиях, или посредством реакций с переносом одного электрона, включая, например, образование комплекса N-гидроксифталимидного сложного эфира с дибором по реакции радикальной конденсации, ускоряемой радикалом пиридин-бора, с получением транс-циклопропанбороната 15 (см., например, W.-M. Cheng, S. Rui, B. Zhao, W.-L. Xing, Y. Fu., Org. Lett., 2017, 19, 4291-4294). Связывание бороната 15 с арилхлоридом 4 и последующее деметилирование можно осуществлять таким же образом, как описано на схеме 1, с получением типов хиральных соединений формулы III.Scheme 3 shows the chiral synthesis of compounds of formula III. Diazotization of the appropriately substituted amino acid 8 under modified Sandmeyer conditions (radical SNAr), resulting in the formation of compound 9, is known in the art. Subsequent reduction to alcohol 10 can be accomplished using a number of reducing agents known in the art, including aluminum hydrides and diborane as reducing agents. Cyclization to chiral epoxide 11 under alkaline conditions is described in detail in the prior art. The stereoselective Horner-Wadsworth-Emmons reaction can be used by treating the chiral epoxide 11 with a suitable phosphonate ester (e.g. ethyl 2-diethoxyphosphorylacetate or triethylphosphonoacetate) and a suitable base (e.g. alkyllithium, metal alkoxides or metal hydrides) to obtain the trans-cyclopropane derivative 12 (See, for example, L. Delhaye, A. Merschaert, P. Delbeke, W. Brione, Org. Proc. Res. & Dev., 2007, 11, 689-692). Hydrolysis of compound 12 to the corresponding acid 13 can be accomplished under a wide range of basic conditions, which are described in detail in the art. Subsequent coupling of acid 13 with an appropriately substituted N-hydroxyphthalimide is described in detail in the art using a suitable acid activating agent, for example carbonyldiimidazole, in the presence of a weak non-nucleophilic base, to obtain compound 14. Decarboxylation borylation of N-hydroxyphthalimide ester 14 can be carried out in various conditions known in the art, including in the presence of a transition metal catalyst (for example, the Suzuki-Miyaura reaction), under photolytic conditions, or through single electron transfer reactions, including, for example, the formation of an N-hydroxyphthalimide complex ester with diboron by a radical condensation reaction accelerated by a pyridine-boron radical to give trans-cyclopropaneboronate 15 (see, for example, W.-M. Cheng, S. Rui, B. Zhao, W.-L. Xing, Y Fu., Org. Lett., 2017, 19, 4291-4294). Coupling of boronate 15 with aryl chloride 4 and subsequent demethylation can be carried out in the same manner as described in Scheme 1 to produce the types of chiral compounds of formula III.
Способы получения и примерыMethods of obtaining and examples
Следующие способы получения и примеры дополнительно иллюстрируют данное изобретение и представляют типичные способы синтеза соединений по данному изобретению, но их никоим образом не следует толковать как ограничение объема данного изобретения. Реагенты и исходные материалы безThe following preparation methods and examples further illustrate the present invention and represent typical methods for synthesizing the compounds of this invention, but should in no way be construed as limiting the scope of the present invention. Reagents and starting materials without
- 8 045742 труда доступны или могут быть легко синтезированы специалистами в данной области техники. Следует понимать, что приведенные ниже способы получения и примеры представлены с целью иллюстрации, но не ограничения, и что специалисты в данной области техники могут делать различные модификации.- 8 045742 works are available or can be easily synthesized by specialists in the art. It should be understood that the following preparation methods and examples are presented for purposes of illustration and not limitation, and that various modifications may be made by those skilled in the art.
ЖХ-ЭР/МС проводили на жидкостной хроматографической системе Agilent HP1100. Измерения масс-спектрометрии с электрораспылением (записанные в положительном и/или отрицательном режиме) проводили на квадрупольном масс-спектрометре с масс-селективным детектором, подключенном к системе ВЭЖХ PH 1100.LC-ES/MS was performed on an Agilent HP1100 liquid chromatography system. Electrospray mass spectrometry measurements (recorded in positive and/or negative mode) were performed on a quadrupole mass spectrometer with a mass selective detector connected to a PH 1100 HPLC system.
Условия для ЖХ-МС (низкий pH): колонка: PHENOMENEX® GEMINI® NX C-18 2,1x50 мм, 3,0 мкм; градиент: 5-100% B за 3 мин, затем 100% B в течение 0,75 мин, температура колонки: 50±10°C; скорость потока: 1,2 мл/мин; растворитель A: деионизированная вода с 0,1% HCOOH, растворитель B: ACN с 0,1% муравьиной кислоты; длина волны 214 нм. Альтернативные условия для ЖХ-МС (высокий pH): колонка: колонки WATERSTM XTERRA® MS C-18, 2,1x50 мм, 3,5 мкм; градиент: 5% растворителя A в течение 0,25 мин, градиент от 5 до 100% растворителя B за 3 мин и 100% растворителя B в течение 0,5 мин или от 10 до 100% растворителя B за 3 мин и при 100% растворителя B в течение 0,75 мин; температура колонки: 50±10°C; скорость потока: 1,2 мл/мин; растворитель A: 10 мМ NH4HCO3 pH 9; растворитель B: ACN; длина волны: 214 нм.LC-MS conditions (low pH): column: PHENOMENEX® GEMINI® NX C-18 2.1x50 mm, 3.0 µm; gradient: 5-100% B over 3 min, then 100% B over 0.75 min, column temperature: 50±10°C; flow rate: 1.2 ml/min; solvent A: deionized water with 0.1% HCOOH, solvent B: ACN with 0.1% formic acid; wavelength 214 nm. Alternative LC-MS conditions (high pH): Column: WATERSTM XTERRA® MS C-18 columns, 2.1x50 mm, 3.5 µm; gradient: 5% solvent A in 0.25 min, gradient from 5 to 100% solvent B in 3 min and 100% solvent B in 0.5 min, or from 10 to 100% solvent B in 3 min and at 100% solvent B for 0.75 min; column temperature: 50±10°C; flow rate: 1.2 ml/min; solvent A: 10 mM NH4HCO3 pH 9; solvent B: ACN; wavelength: 214 nm.
Препаративную обращенно-фазовую хроматографию проводили на системе ЖХ-ЭР/МС Agilent 1200, оснащенной масс-спектрометром с масс-селективным детектором и автоматическим пробоотборником Leap. Методы при высоком pH осуществляли на колонке 75x30 мм PHENOMENEX® GEMINI®NX с размером частиц 5 мкм с защитой 10x20 мм. Скорость потока 85 мл/мин. В качестве элюента использовали 10 мМ бикарбонат аммония (pH 10) в ACN.Preparative reverse phase chromatography was performed on an Agilent 1200 LC-ER/MS system equipped with a mass spectrometer with a mass selective detector and a Leap autosampler. High pH methods were performed on a 75x30 mm PHENOMENEX® GEMINI®NX 5 µm particle size column with 10x20 mm guard. Flow rate 85 ml/min. The eluent used was 10 mM ammonium bicarbonate (pH 10) in ACN.
Спектры ЯМР записывали на ЯМР спектрометре Bruker AVIII HD при 400 МГ ц, образцы получали в виде растворов в CDCl3 или (CD3)2SO, результаты записывали в м.д., используя остаточный растворитель [CDCl3, 7,26 м.д.; (CD3)2SO, 2,50 м.д.] в качестве эталонного стандарта. При записи мультиплетности пиков могут быть использованы следующие сокращения: с (синглет), д (дублет), т (триплет), к (квартет), м (мультиплет), шс (широкий синглет), дд (дублет дублетов), дт (дублет триплетов). Константы спин-спинового взаимодействия (J), в случае их указания, записаны в герцах (Гц).NMR spectra were recorded on a Bruker AVIII HD NMR spectrometer at 400 MHz, samples were prepared as solutions in CDCl 3 or (CD 3 ) 2 SO, the results were recorded in ppm using the residual solvent [CDCl 3 , 7.26 m. d.; (CD 3 ) 2 SO, 2.50 ppm] as the reference standard. When recording multiplicity of peaks, the following abbreviations can be used: s (singlet), d (doublet), t (triplet), k (quartet), m (multiplet), shs (wide singlet), dd (doublet of doublets), dt (doublet triplets). Spin-spin coupling constants (J), when indicated, are written in hertz (Hz).
Способ получения 1. 4,4,5,5-Тетраметил-2-[(E)-3-метилбут-1-енил]-1,3,2-диоксаборолан.Preparation method 1. 4,4,5,5-Tetramethyl-2-[(E)-3-methylbut-1-enyl]-1,3,2-dioxaborolane.
В течение 5 мин по каплям добавляли пинаколборан (9,5 мл, 64 ммоль) к ледяному 3-метилбут-1ину (4,91 г, 72,0 ммоль). Закрывали емкость для работы под давлением, нагревали до комнатной температуры и перемешивали 18 ч. Добавляли хлорид-гидрид бис(циклопентадиенил)циркония (IV) (2,0 г, 7,4 ммоль) и ТЭА (1,1 мл, 7,9 ммоль). Закрывали емкость для работы под давлением, помещали на масляную баню при 60°C и перемешивали 10 мин. Охлаждали полученный красный раствор до комнатной температуры в течение 2,5 ч. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл), промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (100 мл), насыщенным водным раствором NaCl (50 мл), сушили над MgSO4, фильтровали через слой силикагеля (150 мл), промывали силикагель ДХМ (700 мл) и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (11,5 г, 82%).Pinacolborane (9.5 mL, 64 mmol) was added dropwise to ice-cold 3-methylbut-1yne (4.91 g, 72.0 mmol) over 5 min. Cap the pressure vessel, warm to room temperature, and stir for 18 hours. Add bis(cyclopentadienyl)zirconium(IV) chloride hydride (2.0 g, 7.4 mmol) and TEA (1.1 mL, 7.9 mmol). The pressure vessel was sealed, placed in an oil bath at 60°C and stirred for 10 minutes. Cool the resulting red solution to room temperature over 2.5 hours. The reaction mixture was diluted with DCM (200 ml), washed with saturated aqueous NaHCO 3 (100 ml), saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered through layer of silica gel (150 ml), washed silica gel with DCM (700 ml) and concentrated in vacuo to give the title compound (11.5 g, 82%).
ЭР/МС (m/z): 196 (M+H).ER/MS (m/z): 196 (M+H).
1H ЯМР (CDCl3) δ 1,03 (д, J= 6,7 Гц, 6H), 1,29 (с, 12H), 2,37 (м, 1H), 5,40 (дд, 1H), 6,64 (дд, 1H). 1H NMR ( CDCl3 ) δ 1.03 (d, J= 6.7 Hz, 6H), 1.29 (s, 12H), 2.37 (m, 1H), 5.40 (dd, 1H) , 6.64 (dd, 1H).
Способ получения 2. Рац-транс-2-[2-изопропилциклопропил]-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан.Preparation method 2. Rac-trans-2-[2-isopropylcyclopropyl]-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane.
'в / о'v/o
По частям добавляли N-нитрозо-N-метилмочевину к ледяной двухфазной смеси Et2O (70 мл) и водного раствора KOH (30,5 г, 435 ммоль, 70 мл H2O). Перемешивали до растворения твердого вещества (<5 мин). Пипеткой переносили полученный раствор диазометана в быстро перемешиваемую ледяную суспензию Pd(OAc)2 (237 мг, 1,05 ммоль) и 4,4,5,5-теmраметил-2-[(E)-3-метилбут-1-енил]-1,3,2-диоксαборолана (4,00 г, 20,4 ммоль) в Et2O (70 мл). После завершения добавления нагревали реакционную смесь до комнатной температуры, фильтровали через диатомовую землю и концентрировали фильтрат в вакууме. Растворяли полученный остаток в ДХМ, фильтровали через слой силикагеля (25 г) и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (4,32 г, >99%).N-nitroso-N-methylurea was added piecemeal to an ice-cold two-phase mixture of Et 2 O (70 ml) and aqueous KOH (30.5 g, 435 mmol, 70 ml H 2 O). Stir until solid dissolves (<5 min). The resulting diazomethane solution was pipetted into a rapidly stirred ice-cold suspension of Pd(OAc) 2 (237 mg, 1.05 mmol) and 4,4,5,5-tetramethyl-2-[(E)-3-methylbut-1-enyl] -1,3,2-dioxaborolane (4.00 g, 20.4 mmol) in Et 2 O (70 ml). After addition was complete, warm the reaction mixture to room temperature, filter through diatomaceous earth, and concentrate the filtrate in vacuo. Dissolve the resulting residue in DCM, filter through a pad of silica gel (25 g) and concentrate in vacuo to give the title compound (4.32 g, >99%).
ЭР/МС (m/z): 210 (M+H).ER/MS (m/z): 210 (M+H).
1H ЯМР (CDCl3) δ -0,35 (м, 1H), 0,45 (м, 1H), 0,65 (м, 1H), 0,78 (м, 1H), 0,98 (м, 7H), 1,23 (с, 12H). 1H NMR ( CDCl3 ) δ -0.35 (m, 1H), 0.45 (m, 1H), 0.65 (m, 1H), 0.78 (m, 1H), 0.98 (m , 7H), 1.23 (s, 12H).
Способ получения 3. 4-Хлор-6-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-3-метилпиридазин.Method of preparation 3. 4-Chloro-6-(2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)-3-methylpyridazine.
- 9 045742 \- 9 045742\
О Cl N=<О Cl N=<
/ N—N=N/ N—N=N
В колбе для работы под давлением смешивали 2,4-диметокси-5-пиримидинилбороновую кислоту (6,75 г, 36,7 ммоль), 4,6-дихлор-3-метилпиридазин (5,98 г, 36,7 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (0,55 г, 0,73 ммоль), Cs2CO3 (29,9 г, 91,8 ммоль) в 4:1 смеси 1,4-диоксан/H2O (151 мл). Откачивали воздух и закачивали N2. Закрывали емкость и нагревали при 70°C в течение 3 ч. Фильтровали остаток через диатомовую землю и промывали EtOAc. Промывали органическую смесь водой, затем насыщенным водным раствором NaCl, сушили над MgSO4 и выпаривали досуха. Очищали полученный черный остаток хроматографией на силикагеле, используя 330 г колонку REDISEP® с градиентом 0-30% ДХМ/(33% MeOH в ДХМ) за 15 мин при скорости потока 200 мл/мин. с получением указанного в заголовке соединения (6,2 г, 63%) после выпаривания хроматографических фракций.Mix 2,4-dimethoxy-5-pyrimidinylboronic acid (6.75 g, 36.7 mmol), 4,6-dichloro-3-methylpyridazine (5.98 g, 36.7 mmol) in a pressure flask. [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium (II) (0.55 g, 0.73 mmol), Cs 2 CO 3 (29.9 g, 91.8 mmol) in 4:1 mixture 1, 4-dioxane/H 2 O (151 ml). The air was pumped out and N2 was pumped in. Cap the container and heat at 70°C for 3 hours. Filter the residue through diatomaceous earth and wash with EtOAc. The organic mixture was washed with water, then with a saturated aqueous NaCl solution, dried over MgSO 4 and evaporated to dryness. Purify the resulting black residue by chromatography on silica gel using a 330 g REDISEP® column with a 0-30% DCM/(33% MeOH in DCM) gradient over 15 min at a flow rate of 200 ml/min. to obtain the title compound (6.2 g, 63%) after evaporation of the chromatographic fractions.
ЭР/МС (m/z) (35Cl/37Cl) 267/269 [M+1]+.ER/MS (m/z) ( 35 Cl/ 37 Cl) 267/269 [M+1]+.
H ЯМР (d6-ДМСО δ 2,74 (с, 3H), 4,00 (с, 3H), 4,03 (с, 3H), 8,20 (с, 1H), 8,87 (с, 1H).H NMR (d 6 -DMSO δ 2.74 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.03 (s, 3H), 8.20 (s, 1H), 8.87 (s, 1H).
Альтернативная методика для способа получения 3.Alternative procedure for production method 3.
Поток азота пропускали через смесь (2,4-диметоксипиримидин-5-ил)бороновой кислоты (85 г, 439 ммоль), 4,6-дихлор-3-метилпиридазина (75 г, 437 ммоль) и Cs2CO3 (358 г, 1099 ммоль) в 1,4-диоксане (1175 мл) и H2O (340 мл) в течение 5 мин. Добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (6,6 г, 8,7 ммоль) и перемешивали полученную смесь при 75°C в течение 16 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры, фильтровали смесь через диатомовую землю и промывали осадок на фильтре EtOAc. Разделяли полученные слои и дважды промывали органическую фазу насыщенным водным раствором NaCl, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. К полученному остатку добавляли воду (500 мл), перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре и отфильтровывали полученное твердое вещество. Промывали собранное твердое вещество H2O и сушили под вакуумом в течение 16 ч с получением требуемого соединения (70 г, 54%) в виде коричневого твердого вещества.A nitrogen stream was passed through a mixture of (2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)boronic acid (85 g, 439 mmol), 4,6-dichloro-3-methylpyridazine (75 g, 437 mmol) and Cs 2 CO 3 (358 g , 1099 mmol) in 1,4-dioxane (1175 ml) and H2O (340 ml) for 5 min. Add [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium (II) (6.6 g, 8.7 mmol) and stir the resulting mixture at 75°C for 16 hours. Cool the reaction mixture to room temperature, filter the mixture through diatomaceous earth and washed the precipitate on a filter with EtOAc. The resulting layers were separated and the organic phase was washed twice with a saturated aqueous NaCl solution, dried over MgSO4, filtered and concentrated in vacuo. Water (500 ml) was added to the resulting residue, stirred for 16 hours at room temperature, and the resulting solid was filtered. Wash the collected solid with H 2 O and dry under vacuum for 16 hours to obtain the desired compound (70 g, 54%) as a brown solid.
ЭР/МС (m/z) (35Cl/37Cl) 267/269 [M+1]+.ER/MS (m/z) (35Cl/37Cl) 267/269 [M+1] + .
Способ получения 4. транс-5-[2-Изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-2,4-диметоксипиримидин.Preparation method 4. trans-5-[2-Isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-2,4-dimethoxypyrimidine.
/ N—N=N/ N—N=N
Объединяли 4-хлор-6-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-3-метилпиридазин (1,97 г, 7,39 ммоль), рацтранс-2-[2-изопропилциклопропил]-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан (3,32 г, 15,8 ммоль), бис(дитрет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлорпалладий (II) (1,35 г, 1,85 ммоль), 1,4-диоксан (37 мл) и 1 М водный раствор Na2CO3 (18 мл, 18 ммоль). Продували реакционную емкость N2 и нагревали до 90°C в течение 18 ч. Охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (150 мл) и разделяли слои. Органический слой последовательно промывали 1 М водным раствором Na2CO3, насыщенным водным раствором NaCl, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали фильтрат в вакууме. Полученный остаток очищали хроматографией на диоксиде кремния, элюируя градиентом 60-100% EtOAc/ДХМ, с получением указанного в заголовке соединения в виде по существу рацемической смеси изомеров (1,48 г, 64%) после выпаривания хроматографических фракций.Combine 4-chloro-6-(2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)-3-methylpyridazine (1.97 g, 7.39 mmol), ractrans-2-[2-isopropylcyclopropyl]-4,4,5, 5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane (3.32 g, 15.8 mmol), bis(ditert-butyl(4-dimethylaminophenyl)phosphine)dichloropalladium (II) (1.35 g, 1.85 mmol) , 1,4-dioxane (37 ml) and 1 M aqueous Na2CO3 solution (18 ml, 18 mmol). Purge the reaction vessel with N2 and heat to 90°C for 18 hours. Cool to room temperature, dilute with EtOAc (150 ml) and separate the layers. The organic layer was washed successively with a 1 M aqueous solution of Na 2 CO 3 , a saturated aqueous solution of NaCl, dried over MgSO 4 , filtered, and the filtrate was concentrated in vacuo. The resulting residue was purified by chromatography on silica, eluting with a gradient of 60-100% EtOAc/DCM, to obtain the title compound as an essentially racemic mixture of isomers (1.48 g, 64%) after evaporation of the chromatographic fractions.
Изомеры подвергали очистке СЖХ (колонка: PHENOMENEX® LUX® Cellulose-4, 4,6x150 мм; изократическое элюирование 40% MeOH/CO2; скорость потока: 5 мл/мин, УФ 250 нм) с получением 647 мг изомера 1: tR=2,56 мин и 647 мг изомера 2: tR=3,75 мин.The isomers were purified by SLC (column: PHENOMENEX® LUX® Cellulose-4, 4.6x150 mm; isocratic elution 40% MeOH/CO 2 ; flow rate: 5 ml/min, UV 250 nm) to obtain 647 mg of isomer 1: t R =2.56 min and 647 mg of isomer 2: t R =3.75 min.
ЭР/МС (m/z): 315 (M+H).ER/MS (m/z): 315 (M+H).
Способ получения 5. (2S)-2-Хлор-3-метилбутановая кислота.Preparation method 5. (2S)-2-Chloro-3-methylbutanoic acid.
I 0 ciI 0 ci
Охлаждали раствор L-валина (286 г, 2,44 моль) и 5 М водного раствора HCl (3,25 л, 16,3 моль) при 0°C. По каплям добавляли 4 М водный раствор NaNO2 (1 л, 4 моль) за 2 ч, поддерживая внутреннюю температуру ниже 5°C. Перемешивали реакционную смесь в течение 2 ч, нагревая до комнатной температуры, и перемешивали еще 16 ч при комнатной температуре. В течение 30 мин по частям добавляли Na2CO3 (242 г, 2,28 моль). Полученный раствор экстрагировали МТБЭ (3x1000 мл), промывали объединенные органические экстракты насыщенным водным раствором NaCl (500 мл), органические экстракты сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали вакуумной перегонкой (15 мбар (1,5 кПа)/140°C) с получением указанного в заголовке соединения (248 г, 68%) в виде масляниCool a solution of L-valine (286 g, 2.44 mol) and 5 M aqueous HCl solution (3.25 L, 16.3 mol) at 0°C. 4 M aqueous NaNO2 solution (1 L, 4 mol) was added dropwise over 2 h, maintaining the internal temperature below 5°C. The reaction mixture was stirred for 2 hours, warming to room temperature, and stirred for another 16 hours at room temperature. Na 2 CO 3 (242 g, 2.28 mol) was added piecemeal over 30 minutes. The resulting solution was extracted with MTBE (3x1000 ml), the combined organic extracts were washed with saturated aqueous NaCl (500 ml), the organic extracts were dried over MgSO 4 and concentrated in vacuo. The resulting residue was purified by vacuum distillation (15 mbar (1.5 kPa)/140°C) to give the title compound (248 g, 68%) as an oil
- 10 045742 стого вещества.- 10 045742 total substance.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ 1,1 (дт, J=6,6, 2,6 Гц, 6H), 2,34-2,42 (м, 1H), 4,19-4,23 (м, 1H), 10,0-12,0 (шс, 1H). 1 H NMR (400 MHz, CDCl·,) δ 1.1 (dt, J=6.6, 2.6 Hz, 6H), 2.34-2.42 (m, 1H), 4.19-4 .23 (m, 1H), 10.0-12.0 (shs, 1H).
Способ получения 6. (2S)-2-Хлор-3-метилбутан-1-ол.Preparation method 6. (2S)-2-Chloro-3-methylbutan-1-ol.
Охлаждали раствор (2S)-2-хлор-3-метилбутановой кислоты (137 г, 1 моль) в 2-метилтетрагидрофуране (500 мл) до 0°C. По каплям добавляли 2,3 М раствор LAH в метилтетрагидрофуране (480 мл, 1,1 моль) в течение 2,5 ч, поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°C. Нагревали до комнатной температуры и перемешивали смесь 1 ч при комнатной температуре и 1 ч при 50°C. Охлаждали реакционную смесь до 0°C и последовательно и медленно добавляли H2O (1,48 мл), 15% водный раствор NaOH (1,48 мл) и H2O (4,46 мл). Оставляли смесь нагреваться до комнатной температуры, фильтровали через слой диатомовой земли и выпаривали растворитель в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (110 г, 81%) в виде бесцветного маслянистого вещества.Cool a solution of (2S)-2-chloro-3-methylbutanoic acid (137 g, 1 mol) in 2-methyltetrahydrofuran (500 ml) to 0°C. A 2.3 M solution of LAH in methyltetrahydrofuran (480 mL, 1.1 mol) was added dropwise over 2.5 h while maintaining the internal temperature below 10°C. The mixture was heated to room temperature and stirred for 1 hour at room temperature and 1 hour at 50°C. Cool the reaction mixture to 0°C and sequentially and slowly add H 2 O (1.48 ml), 15% aqueous NaOH (1.48 ml) and H2O (4.46 ml). Allow the mixture to warm to room temperature, filter through a pad of diatomaceous earth and evaporate the solvent in vacuo to give the title compound (110 g, 81%) as a colorless oil.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,97- 1,1 (м, 6H), 1,94-2,18 (м, 1H), 2,60-3,09 (шс, 1H), 3,71-3,78 (м, 1H), 3,80-3,85 (м, 1H), 3,90-3,96 (м, 1H).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.97-1.1 (m, 6H), 1.94-2.18 (m, 1H), 2.60-3.09 (brs, 1H), 3, 71-3.78 (m, 1H), 3.80-3.85 (m, 1H), 3.90-3.96 (m, 1H).
Способ получения 7. (2R)-2-Изопропилоксиран.Preparation method 7. (2R)-2-Isopropyloxirane.
Охлаждали раствор KOH (195 г, 3,48 моль) в H2O (195 мл) до 0°C и в течение 20 мин добавляли неразбавленный (2S)-2-хлор-3-метилбутан-1-ол (110 г, 801 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру ниже 5°C. Оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь очищали вакуумной перегонкой при 100 мбар (10 кПа), нагревая с 23 до 50°C, с получением указанного в заголовке соединения (47 г, 64%) в виде бесцветного маслянистого вещества.Cool a solution of KOH (195 g, 3.48 mol) in H2O (195 ml) to 0°C and add undiluted (2S)-2-chloro-3-methylbutan-1-ol (110 g, 801 mmol) over 20 min ), maintaining the internal temperature below 5°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature. The reaction mixture was purified by vacuum distillation at 100 mbar (10 kPa), heating from 23 to 50°C, to obtain the title compound (47 g, 64%) as a colorless oil.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,98 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,05 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,51 (о, J=6,9 Гц, 1H), 2,52-2,54 (м, 1H), 2,70-2,75 (м, 2H). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.98 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.05 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.51 (o, J= 6.9 Hz, 1H), 2.52-2.54 (m, 1H), 2.70-2.75 (m, 2H).
Способ получения 8. Этил-(1S,2R)-2-изопропилциклопропанкарбоксилат.Preparation method 8. Ethyl (1S,2R)-2-isopropylcyclopropanecarboxylate.
2,5 М Раствор nBuLi в гексанах (310 мл, 780 ммоль) по каплям в течение 25 мин добавляли к раствору этил-2-диэтоксифосфорилацетата (153 мл, 772 ммоль) в 1,4-диоксане (870 мл), охлажденному на ледяной бане (внутренняя температура: 8°C). Нагревали до комнатной температуры и перемешивали 40 мин. Через канюлю переносили раствор в колбу для работы под давлением объемом 3 л и добавляли (2R)-2-изопропилоксиран (70 г, 772 ммоль) в 1,4-диоксане (180 мл). Перемешивали реакционную смесь при 150°C при давлении 50 фунт/кв. дюйм (345 кПа) в течение 14 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и добавляли H2O (700 мл). Разделяли слои и повторно экстрагировали водную фазу МТБЭ (2x500 мл). Объединяли органические фазы, промывали насыщенным водным раствором NaCl (2x350 мл), сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (107,7 г, >99%) в виде желтого маслянистого вещества, пригодного для дальнейшего использования без дополнительной очистки.A 2.5 M solution of nBuLi in hexanes (310 ml, 780 mmol) was added dropwise over 25 min to a solution of ethyl 2-diethoxyphosphorylacetate (153 ml, 772 mmol) in 1,4-dioxane (870 ml), cooled in ice sauna (internal temperature: 8°C). Heated to room temperature and stirred for 40 minutes. The solution was transferred via cannula into a 3 L pressure flask and (2R)-2-isopropyloxirane (70 g, 772 mmol) in 1,4-dioxane (180 ml) was added. The reaction mixture was stirred at 150°C at 50 psi. inch (345 kPa) for 14 hours. Cool the reaction mixture to room temperature and add H 2 O (700 ml). The layers were separated and the aqueous phase was re-extracted with MTBE (2x500 ml). Combine the organic phases, wash with saturated aqueous NaCl (2x350 ml), dry over MgSO 4 and concentrate in vacuo to give the crude title compound (107.7 g, >99%) as a yellow oil, suitable for further use without additional cleaning.
ГХ-МС (m/z): 156 (M+).GC-MS (m/z): 156 (M+).
Способ получения 9. (1S,2R)-2-Изопропилциклопропанкарбоновαя кислота.Preparation method 9. (1S,2R)-2-Isopropylcyclopropanecarboxylic acid.
I ОНI HE
Перемешивали смесь этил-(1S,2R)-2-изопропилциклопропанкарбоксилата (107,7 г, 482,6 ммоль) в 1,4-диоксане (800 мл), содержащем 25% водный раствор NaOH (800 мл), при 100°C в течение 7 ч. Охлаждали смесь до комнатной температуры, добавляли воду (300 мл), экстрагировали МТБЭ (2x500 мл) и удаляли органическую фазу. Водную фазу подкисляли 37% водным раствором HCl (приблизительно 500 мл) до pH~1-2.Stir a mixture of ethyl (1S,2R)-2-isopropylcyclopropanecarboxylate (107.7 g, 482.6 mmol) in 1,4-dioxane (800 ml) containing 25% aqueous NaOH (800 ml) at 100°C for 7 hours. Cool the mixture to room temperature, add water (300 ml), extract with MTBE (2x500 ml) and remove the organic phase. The aqueous phase was acidified with 37% aqueous HCl solution (approximately 500 ml) to pH ~ 1-2.
Подкисленную водную смесь экстрагировали МТБЭ (2x600 мл), органический слой промывали насыщенным водным раствором NaCl, сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (54,2 г, 75%) в виде маслянистого вещества янтарного цвета.The acidified aqueous mixture was extracted with MTBE (2x600 ml), the organic layer was washed with saturated aqueous NaCl, dried over MgSO4 and concentrated in vacuo to give the title compound (54.2 g, 75%) as an amber oil.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,81-0,86 (м, 1H), 1,01 (дд, J=5,9, 3,7 Гц, 6H), 1,04-1,13 (м, 1H), 1,20-1,24 (м, 1H), 1,28-1,37 (м, 1H), 1,39-1,44 (м, 1H). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 0.81-0.86 (m, 1H), 1.01 (dd, J=5.9, 3.7 Hz, 6H), 1.04-1, 13 (m, 1H), 1.20-1.24 (m, 1H), 1.28-1.37 (m, 1H), 1.39-1.44 (m, 1H).
Способ получения 10. (1,3-Диоксоизоиндолин-2-ил)-(1S,2R)-2-изопропилциклопропанкарбоксилат.Preparation method 10. (1,3-Dioxoisoindolin-2-yl)-(1S,2R)-2-isopropylcyclopropanecarboxylate.
- 11 045742- 11 045742
Перемешивали суспензию (1S,2R)-2-изопропилциклопропанкарбоновой кислоты (54,2 г, 359 ммоль), 2-гидроксиизоиндолин-1,3-диона (59,8 г, 359 ммоль) и DMAP (4,44 г, 35,9 ммоль) в ДХМ (690 мл) при 0°C. По каплям добавляли N,N'-диизопропилкарбодиимид (50,4 г, 395 ммоль), нагревали до комнатной температуры и перемешивали полученную реакционную смесь в течение 2 ч при комнатной температуре. Добавляли H2O (600 мл) и разделяли фазы. Водную фазу экстрагировали ДХМ (2x300 мл), объединяли органические фазы, сушили над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Полученный твердый остаток очищали хроматографией на силикагеле, элюируя 100% ДХМ, с получением указанного в заголовке соединения (96 г, 88%) в виде бледно-желтого твердого вещества после выпаривания хроматографических фракций.A suspension of (1S,2R)-2-isopropylcyclopropanecarboxylic acid (54.2 g, 359 mmol), 2-hydroxyisoindoline-1,3-dione (59.8 g, 359 mmol) and DMAP (4.44 g, 35 mmol) was stirred. 9 mmol) in DCM (690 ml) at 0°C. N,N'-diisopropylcarbodiimide (50.4 g, 395 mmol) was added dropwise, the mixture was warmed to room temperature, and the resulting reaction mixture was stirred for 2 hours at room temperature. H 2 O (600 ml) was added and the phases were separated. The aqueous phase was extracted with DCM (2x300 ml), the organic phases were combined, dried over MgSO 4 , filtered and evaporated. The resulting solid was purified by chromatography on silica gel, eluting with 100% DCM, to give the title compound (96 g, 88%) as a pale yellow solid after evaporation of the chromatography fractions.
ЭР/МС (m/z): 274 (M+1).ER/MS (m/z): 274 (M+1).
Способ получения 11. 2-[(1S,2S)-2-Изопропилциклопропил]-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан. у+у.Preparation method 11. 2-[(1S,2S)-2-Isopropylcyclopropyl]-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane. y+y.
Пропускали поток азота через раствор (1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-(1S,2S)-2изопропилциклопропанкарбоксилата (96 г, 316 ммоль) и бис(пинаколато)дибора (160 г, 630 ммоль) в EtOAc (480 мл) в течение 15 мин. Перемешивали смесь при 85°C и по каплям добавляли этилизоникотинат (24,38 г, 157 ммоль) за 10 мин. Полученную смесь перемешивали при 85°C в течение 16 ч. Полученную суспензию охлаждали, фильтровали и удаляли твердое вещество, и выпаривали коричневый фильтрат при пониженном давлении. Неочищенный остаток фильтровали через слой силикагеля, элюируя 2% смесью EtOAc/гексаны. Из фильтрата удаляли растворитель и повторно очищали полученный остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 3% смесью EtOAc/гексаны, с получением указанного в заголовке соединения (25,3 г, 38%) в виде бесцветного маслянистого вещества после удаления растворителя из хроматографических фракций.Pass a stream of nitrogen through a solution of (1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-(1S,2S)-2isopropylcyclopropanecarboxylate (96 g, 316 mmol) and bis(pinacolato)diboron (160 g, 630 mmol) in EtOAc (480 ml) within 15 min. Stir the mixture at 85°C and add ethyl isonicotinate (24.38 g, 157 mmol) dropwise over 10 minutes. The resulting mixture was stirred at 85°C for 16 hours. The resulting suspension was cooled, filtered and the solid was removed, and the brown filtrate was evaporated under reduced pressure. The crude residue was filtered through a pad of silica gel, eluting with 2% EtOAc/hexanes. The solvent was removed from the filtrate and the resulting residue was purified again by chromatography on silica gel, eluting with 3% EtOAc/hexanes, to give the title compound (25.3 g, 38%) as a colorless oil after removal of the solvent from the chromatography fractions.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ -0,33-(-0,38) (м, 1H), 0,42-0,47 (м, 1H), 0,63-0,67 (м, 1H), 0,75-0,82 (м, 1H), 0,89-1,02 (м, 1H), 0,98 (м, 6H), 1,24 (с, 12H).1H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ -0.33-(-0.38) (m, 1H), 0.42-0.47 (m, 1H), 0.63-0.67 (m, 1H), 0.75-0.82 (m, 1H), 0.89-1.02 (m, 1H), 0.98 (m, 6H), 1.24 (s, 12H).
Способ получения 12. 5-[5-[(1S,2R)-2-Изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-2,4-диметоксипиримидин.Preparation method 12. 5-[5-[(1S,2R)-2-Isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-2,4-dimethoxypyrimidine.
Смешивали 4-хлор-6-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-3-метилпиридазин (19,1 г, 70,6 ммоль), K3PO4 (45,9 г, 212 ммоль), 1,4-диоксан (300 мл) и H2O (75 мл) и дегазировали смесь с помощью N2 в течение 10 мин. Добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (7,98 г, 10,6 ммоль). Еще 2 мин пропускали газообразный азот и одной порцией добавляли 2-[(1S,2S)-2-изопропилциклопропил]4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан (22,2 г, 106 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли H2O и экстрагировали EtOAc. Органический слой отделяли, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на диоксиде кремния, элюируя 85% смесью гексаны/EtOAc, с выделением указанного в заголовке соединения (21,5 г, 92%) в виде маслянистого вещества янтарного цвета после удаления растворителя из хроматографической фракции. Маслянистое вещество затвердевало при выстаивании при комнатной температуре до грязновато-белого твердого вещества.Mixed 4-chloro-6-(2,4-dimethoxypyrimidin-5-yl)-3-methylpyridazine (19.1 g, 70.6 mmol), K3PO4 (45.9 g, 212 mmol), 1,4-dioxane (300 ml) and H 2 O (75 ml) and degassed the mixture with N 2 for 10 minutes. [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (7.98 g, 10.6 mmol) was added. Nitrogen gas was passed through for another 2 min and 2-[(1S,2S)-2-isopropylcyclopropyl]4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane (22.2 g, 106 mmol) was added in one portion. The resulting mixture was stirred at 80°C for 16 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, H2O was added and extracted with EtOAc. The organic layer was separated, dried over anhydrous MgSO 4 and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by chromatography on silica, eluting with 85% hexanes/EtOAc to isolate the title compound (21.5 g, 92%) as an amber oil upon removal of the solvent from the chromatography fraction. The oily substance solidified upon standing at room temperature to an off-white solid.
ЭР/MC (m/z): 315 (M+1).ER/MC (m/z): 315 (M+1).
Пример. 5-[5-[(1S,2R)-2-Изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-дион.Example. 5-[5-[(1S,2R)-2-Isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione.
Изомер 1 транс-5-[5-[2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-2,4-диметоксипиримидина (628 мг, 2,00 ммоль) растворяли в MeOH (3 мл). Добавляли 1 М водный раствор HCl (5 мл) и нагревали до 70°C в течение 3 ч. Охлаждали до комнатной температуры, загружали реакционную смесь на СКО колонку, промытую MeOH (20 г, Silicycle SILIABOND-п-толуолсульфоновая кислота), промывали СКО колонку MeOH (140 мл) и элюировали требуемый продукт, используя 2 М NH3/MeOH (140 мл).Trans-5-[5-[2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-2,4-dimethoxypyrimidine isomer 1 (628 mg, 2.00 mmol) was dissolved in MeOH (3 ml). Add a 1 M aqueous solution of HCl (5 ml) and heat to 70°C for 3 hours. Cool to room temperature, load the reaction mixture onto an SKO column washed with MeOH (20 g, Silicycle SILIABOND-p-toluenesulfonic acid), wash with SKO MeOH column (140 ml) and eluted the desired product using 2 M NH 3 /MeOH (140 ml).
- 12 045742- 12 045742
Концентрировали фракции NH3/MeOH с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества кремового цвета (546 мг, 95%).Concentrate the NH3/MeOH fractions to give the title compound as a cream solid (546 mg, 95%).
ЭР/МС (m/z): 287 (M+H).ER/MS (m/z): 287 (M+H).
1H ЯМР (d6-DMSO) δ 0,99 (м, 9H), 1,24 (м, 1H), 1,81 (м, 1H), 2,72 (с, 3H), 7,67 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 11,43 (шс, 2H).1H NMR ( d6 -DMSO) δ 0.99 (m, 9H), 1.24 (m, 1H), 1.81 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 7.67 (s , 1H), 8.23 (s, 1H), 11.43 (shs, 2H).
Рентгеновская порошковая дифракция кристаллических форм.X-ray powder diffraction of crystalline forms.
Соединение в виде свободного основания растворяли в метаноле, перемешивали при 50°C в течение 1 ч и оставляли остывать до комнатной температуры, при этом происходила его кристаллизация из раствора. Затем твердое вещество выделяли вакуумной фильтрацией и недолго сушили под вакуумом при 70°C.The free base compound was dissolved in methanol, stirred at 50°C for 1 hour and allowed to cool to room temperature while it crystallized from solution. The solid was then isolated by vacuum filtration and briefly dried under vacuum at 70°C.
Диаграммы РПД кристаллических веществ снимали на рентгеновском порошковом дифрактометре Bruker D4 Endeavor, оснащенном источником излучения CuKa, λ=1,54060 А) и датчиком Vantec, работающем при 35 кВ и 50 мА. Образец сканировали от 4 до 40° 2Θ с шагом 0,008° 2Θ и скоростью сканирования 0,5 с/шаг и с дивергенцией 0,6 мм, фиксированной противорассеивающей щелью 5,28 мм и щелью детектора 9,5 мм. Сухой порошок выкладывали на кварцевый держатель образца и при помощи предметного стекла обеспечивали гладкую поверхность. Дифрактограммы кристаллической формы снимали при температуре и относительной влажности окружающей среды. В области кристаллографии хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы относительные интенсивности дифракционных пиков могут варьироваться вследствие предпочтительной ориентации, обусловленной такими факторами, как морфология и структура кристалла. При наличии эффекта предпочтительной ориентации, интенсивности пиков являются переменными, но положения характеристических пиков полиморфа не меняются. См., например, Фармакопею США № 23, национальный формуляр № 18, с. 1843-1844, 1995. Дополнительно, в области кристаллографии также хорошо известно, что для любой данной формы кристалла угловые положения пиков могут незначительно изменяться. Например, положения пиков смещаются из-за изменения температуры или влажности, при которой анализируется образец, смещения образца или наличия или отсутствия внутреннего стандарта. В данном случае изменчивость положения пика в ±0,2 2Θ учитывает эти потенциальные изменения, не мешая однозначной идентификации указанной кристаллической формы. Подтверждение кристаллической формы может быть сделано на основе любой уникальной комбинации отличительных пиков (в единицах ° 2Θ), как правило, более выраженных пиков. Диаграммы дифракции кристаллической формы, записанные при температуре и относительной влажности окружающей среды, корректировали по стандартным пикам NIST 675 при 8,853 и 26,774° 2Θ.RPD diagrams of crystalline substances were recorded on a Bruker D4 Endeavor X-ray powder diffractometer equipped with a CuKa radiation source, λ=1.54060 A) and a Vantec sensor operating at 35 kV and 50 mA. The sample was scanned from 4 to 40° 2Θ with a step of 0.008° 2Θ and a scanning speed of 0.5 s/step and with a divergence of 0.6 mm, a fixed anti-scatter slit of 5.28 mm and a detector slit of 9.5 mm. The dry powder was placed on a quartz sample holder and a glass slide was used to ensure a smooth surface. X-ray diffraction patterns of the crystalline form were recorded at ambient temperature and relative humidity. It is well known in the field of crystallography that for any given crystal form, the relative intensities of the diffraction peaks can vary due to preferred orientation caused by factors such as morphology and crystal structure. In the presence of a preferred orientation effect, the peak intensities are variable, but the positions of the polymorph's characteristic peaks do not change. See, for example, USP No. 23, National Formulary No. 18, p. 1843-1844, 1995. Additionally, it is also well known in the field of crystallography that for any given crystal shape the angular positions of the peaks may vary slightly. For example, peak positions shift due to changes in the temperature or humidity at which the sample is analyzed, sample drift, or the presence or absence of an internal standard. In this case, the peak position variability of ±0.2 2Θ accounts for these potential changes without interfering with the unambiguous identification of the indicated crystalline form. Confirmation of the crystal form can be made based on any unique combination of distinctive peaks (in units of °2Θ), typically the more prominent peaks. Crystal form diffraction patterns recorded at ambient temperature and relative humidity were corrected to NIST 675 standard peaks at 8.853 and 26.774° 2Θ.
Твердофазный 13C ЯМР (13C ssNMR).Solid phase 13 C NMR ( 13 C ssNMR).
13C Спектры ЯМР с кросс-поляризацией/вращением под магическим углом (твердотельный ЯМР или ssNMR) получены с использованием ЯМР-спектрометра Bruker Avance II 400 МГц, работающего на частоте углерода 100,622 МГц и частоте протонов 400,131 МГц и оборудованного 4-миллиметровым двойным резонансным датчиком Bruker. Подавление боковой полосы TOSS используется вместе с перекрестной поляризацией с использованием развязки SPINAL64 и импульса CP H-ядра в форме RAMP 100. Параметры сбора данных следующие: ширина импульса протонного радиочастотного излучения под углом 90° 2,6 мкс, время контакта 2,0 мс, время повторения импульсов 3 с, частота MAS 10 кГц, ширина спектра 30 кГц, время сбора данных 34 мс и количество сканов 18661. Химические сдвиги соотносили с адамантаном (δ=29,5 м.д.) в отдельном эксперименте. 13 C Cross-polarization/magic angle spinning NMR spectra (solid-state NMR or ssNMR) obtained using a Bruker Avance II 400 MHz NMR spectrometer operating at a carbon frequency of 100.622 MHz and a proton frequency of 400.131 MHz and equipped with a 4 mm dual resonant probe Bruker. TOSS sideband suppression is used in conjunction with cross polarization using SPINAL64 decoupling and an H-core CP pulse in the form of RAMP 100. Data acquisition parameters are as follows: 90° proton RF pulse width 2.6 μs, contact time 2.0 ms, pulse repetition time 3 s, MAS frequency 10 kHz, spectral width 30 kHz, acquisition time 34 ms and number of scans 18661. Chemical shifts were correlated with adamantane (δ=29.5 ppm) in a separate experiment.
Способ получения 13.Method of obtaining 13.
Кристаллическая форма 1: 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-дион (безводный).Crystalline Form 1: 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione (anhydrous).
Перемешивали суспензию 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-2,4диметоксипиримидина (21,5 г, 65,6 ммоль) и 1 М водного раствора HCl (165 мл, 135 ммоль) при 45°C в течение 16 ч. Охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали МТБЭ. Удаляли органическую фазу, а к водной фазе добавляли 2 М водный раствор K2HPO4 до pH~6 (приблизительно 150 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Отфильтровывали и собирали полученное твердое вещество, промывали водой и сушили в вакуумной печи при 45°C в течение 16 ч с получением указанного в заголовке соединения (14,3 г, 76%) в виде белого твердого вещества.A suspension of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-2,4dimethoxypyrimidine (21.5 g, 65.6 mmol) and 1 M aqueous HCl (165 ml, 135 mmol) at 45°C for 16 hours. Cool to room temperature and extract with MTBE. The organic phase was removed and a 2M aqueous solution of K 2 HPO 4 was added to the aqueous phase to pH~6 (approximately 150 ml). The resulting mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The resulting solid was filtered and collected, washed with water and dried in a vacuum oven at 45°C for 16 hours to obtain the title compound (14.3 g, 76%) as white solid.
ЭР/МС (m/z): 287 (M+1).ER/MS (m/z): 287 (M+1).
Полученный образец безводной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона (форма 1) характеризуется рентгеновской дифрактограммой при использовании излучения CuKa, имеющей дифракционные пики (значения 2-тета), описанные в табл. 1 ниже. В частности, диаграмма содержала пик при 4,7° в комбинации с одним или более пи- 13 045742 ками, выбранными из группы, состоящей из 11,7, 15,8 и 16,0° с допуском для углов дифракции 0,2°.The obtained sample of the anhydrous crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 1) is characterized by an X-ray diffraction pattern using CuKa radiation, having diffraction peaks (2-theta values) described in table. 1 below. Specifically, the pattern contained a peak at 4.7° in combination with one or more peaks selected from the group consisting of 11.7, 15.8 and 16.0° with a tolerance for diffraction angles of 0.2° .
Таблица 1Table 1
Пики рентгеновской порошковой дифракции безводной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6метилпиридазин-3-ил]-1 Н-пиримидин-2,4-диона (форма 1)X-ray powder diffraction peaks of the anhydrous crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 1)
Репрезентативные резонансы 13C ssNMR для безводной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона (форма 1) включают 16,6, 18,3, 20,7, 22,1, 23,9, 25,4, 26,6, 27,6, 28,1, 28,9, 30,2, 31,2, 32,2, 38,6, 39,7, 41,2, 43,1, 109,3, 111,0, 112,0, 124,4, 128,2, 130,7, 145,1, 146,3, 150,1, 151,0, 153,4, 156,7, 157,6, 158,6, 159,3, 160,7, 163,4, 165,9, 167,0, 169,4 и 170,2 м.д. (±0,2 м.д. соответственно).Representative 13C ssNMR resonances for the anhydrous crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 1) include 16.6 , 18.3, 20.7, 22.1, 23.9, 25.4, 26.6, 27.6, 28.1, 28.9, 30.2, 31.2, 32.2, 38 ,6, 39.7, 41.2, 43.1, 109.3, 111.0, 112.0, 124.4, 128.2, 130.7, 145.1, 146.3, 150.1 , 151.0, 153.4, 156.7, 157.6, 158.6, 159.3, 160.7, 163.4, 165.9, 167.0, 169.4 and 170.2 m. d. (±0.2 ppm respectively).
Способ получения 14.Method of obtaining 14.
Кристаллическая форма 2: 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-дион (десольватированный/безводный).Crystalline Form 2: 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione (desolvated/anhydrous).
Добавляли кристаллическую форму 1, 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин3-ил]-1Н-пиримидин-2,4-дион (15,4 кг, 53,8 моль), к воде (770 л) в реакторе из хастеллоя объемом 3500 л при комнатной температуре. Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч. Отфильтровывали и собирали полученное твердое вещество, промывали водой и сушили в вакуумной печи при 40°C в течение 3 дней с получением указанного в заголовке соединения (13,8 кг, 89%) в виде белого твердого вещества. Чистота по ВЭЖХ: 99,8%.Crystalline form of 1,5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (15.4 kg, 53.8 mol) was added. to water (770 L) in a 3500 L Hastelloy reactor at room temperature. The resulting suspension was stirred at room temperature for 19 hours. The resulting solid was filtered and collected, washed with water and dried in a vacuum oven at 40°C for 3 days to obtain the title compound (13.8 kg, 89%) as white solid. Purity by HPLC: 99.8%.
Наблюдали семейство родственных кристаллических форм, полученных из образца десольватированной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-диона (форма 2). Один из членов семейства характеризуется рентгеновской дифрактограммой при использовании излучения CuKa, имеющей дифракционные пики (значения 2-тета), описанные в табл. 2 ниже.A family of related crystalline forms obtained from a sample of the desolvated crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione (Form 2) was observed. One member of the family is characterized by an X-ray diffraction pattern using CuKa radiation having diffraction peaks (2-theta values) described in Table. 2 below.
Таблица 2table 2
Пики рентгеновской порошковой дифракции десольватированной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]6-метилпиридазин-3 -ил] -1 Н-пиримидин-2,4-диона (форма 2)X-ray powder diffraction peaks of the desolvated crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 2)
Репрезентативные резонансы 13С ssNMR для десольватированной (безводной) кристаллической формы 5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1 Н-пиримидин-2,4-диона (форма 2) включают 17,2, 18,9, 21,1, 22,5, 24,4, 26,7, 27,8, 28,7, 29,7, 39,7, 41,3, 45,5, 50,1, 110,7, 111,7, 112,4, 122,0, 125,0, 126,1, 129,1, 143,6, 144,8, 146,2, 147,2, 149,9, 151,1, 153,0, 155,5, 157,2, 159,0, 160,6, 161,4, 162,7, 164,8, 167,0, 168,3 и 170,4 м.д. (± 0,2 м.д. соответственно).Representative 13C ssNMR resonances for the desolvated (anhydrous) crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione ( form 2) include 17.2, 18.9, 21.1, 22.5, 24.4, 26.7, 27.8, 28.7, 29.7, 39.7, 41.3, 45, 5, 50.1, 110.7, 111.7, 112.4, 122.0, 125.0, 126.1, 129.1, 143.6, 144.8, 146.2, 147.2, 149.9, 151.1, 153.0, 155.5, 157.2, 159.0, 160.6, 161.4, 162.7, 164.8, 167.0, 168.3 and 170, 4 ppm (± 0.2 ppm respectively).
Другие члены семейства характеризуются рентгеновской дифрактограммой с использованием излучения CuKa, имеющей дифракционные пики (значения 2-тета) при более 4,3 и до 5,5° в сочетании с одним или более пиками 4,7, 6,4, 9,3, 11,0, 11,6, 18,4 и 27,9° с допуском на углы дифракции 0,2°.Other members of the family are characterized by an X-ray diffraction pattern using CuKa radiation having diffraction peaks (2-theta values) at greater than 4.3 and up to 5.5° in combination with one or more peaks at 4.7, 6.4, 9.3, 11.0, 11.6, 18.4 and 27.9° with a diffraction angle tolerance of 0.2°.
- 14 045742- 14 045742
Способ получения 15.Method of obtaining 15.
Кристаллическая форма 3: 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-дион (полугидрат).Crystalline Form 3: 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione (hemihydrate).
Добавляли 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-2,4-диметоксипиримидин (316 г, 0,92 моль) к 1 М водному раствору HCl (2,6 л, 2,6 моль) в 5-литровой колбе при комнатной температуре. Полученную суспензию нагревали до 45°C и перемешивали при этой температуре в течение 16 ч. Охлаждали до комнатной температуры и добавляли 2 М водный раствор K2HPO4 до pH~6. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Отфильтровывали и собирали полученное твердое вещество, сушили в вакуумной печи при 40°C в течение 3 дней с получением указанного в заголовке соединения (250 г, 92%) в виде белого твердого вещества. Чистота по ВЭЖХ: 99%.Add 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-2,4-dimethoxypyrimidine (316 g, 0.92 mol) to a 1 M aqueous solution of HCl (2, 6 L, 2.6 mol) in a 5 L flask at room temperature. The resulting suspension was heated to 45°C and stirred at this temperature for 16 hours. Cooled to room temperature and a 2 M aqueous solution of K 2 HPO 4 was added to pH~6. The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The resulting solid was filtered and collected, dried in a vacuum oven at 40°C for 3 days to obtain the title compound (250 g, 92%) as a white solid. Purity by HPLC: 99%.
Полученный образец полугидратной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона (Форма 3) характеризуется рентгеновской дифрактограммой при использовании излучения CuKa, имеющей дифракционные пики (значения 2-тета), описанные в табл. 3 ниже. В частности, диаграмма содержала пик при 5,0° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 16,4, 17,8 и 26,6° с допуском для углов дифракции 0,2°.The resulting sample of the hemihydrate crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 3) is characterized by an X-ray diffraction pattern using CuKa radiation , having diffraction peaks (2-theta values) described in table. 3 below. Specifically, the pattern contained a peak at 5.0° in combination with one or more peaks selected from the group consisting of 16.4, 17.8 and 26.6° with a tolerance for diffraction angles of 0.2°.
Таблица 3Table 3
Пики рентгеновской порошковой дифракции полугидратной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6метилпиридазин-3 -ил] -1 H-пиримидин-2,4-диона (форма 3)X-ray powder diffraction peaks of the hemihydrate crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 3)
Репрезентативные резонансы 13C ssNMR для полугидратной кристаллической формы 5-[5-[(1S,2R)2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона (форма 3) включают 16,5, 18,9, 19,6, 20,4, 22,6, 23,5, 24,4, 26,0, 27,4, 28,3, 30,0, 30,9, 34,6, 38,4, 40,5, 110,2, 110,8, 124,1, 126,8, 130,4, 131,2, 146,0, 147,1, 150,4, 151,2, 153,4, 157,1, 157,7, 158,3, 159,6, 163,1, 166,2 и 169,7 и м.д. (±0,2 м.д. соответственно).Representative 13C ssNMR resonances for the hemihydrate crystalline form of 5-[5-[(1S,2R)2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (Form 3) include 16. 5, 18.9, 19.6, 20.4, 22.6, 23.5, 24.4, 26.0, 27.4, 28.3, 30.0, 30.9, 34.6, 38.4, 40.5, 110.2, 110.8, 124.1, 126.8, 130.4, 131.2, 146.0, 147.1, 150.4, 151.2, 153, 4, 157.1, 157.7, 158.3, 159.6, 163.1, 166.2 and 169.7, etc. (±0.2 ppm respectively).
Способ получения 16.Method of obtaining 16.
Преобразование кристаллической формы 2 в кристаллическую форму 1.Conversion of crystal form 2 to crystal form 1.
Добавляли кристаллическую форму 2, 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин3-ил]-1Н-пиримидин-2,4-дион (5,0 кг, 17,4 моль) к смеси ТГФ (100 л) и воды (10 л). Полученный раствор концентрировали до 10-15 л при пониженном давлении ниже 50°C. Загружали ТГФ (5 л) и воду (60 л), нагревали до 50-60°C и перемешивали в течение 2-4 ч. Охлаждали до 20-25°C и перемешивали в течение 1-2 ч. Фильтровали и собирали полученное твердое вещество, промывали водой (10 л) и сушили с получением указанного в заголовке соединения (4,2 кг, 84%) в виде грязно-белого твердого вещества. Чистота по ВЭЖХ: 99,4%.Add crystalline form of 2,5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione (5.0 kg, 17.4 mol) to a mixture of THF (100 l) and water (10 l). The resulting solution was concentrated to 10-15 L under reduced pressure below 50°C. THF (5 L) and water (60 L) were loaded, heated to 50-60°C and stirred for 2-4 hours. Cooled to 20-25°C and stirred for 1-2 hours. The resulting solid was filtered and collected. the material was washed with water (10 L) and dried to obtain the title compound (4.2 kg, 84%) as an off-white solid. HPLC purity: 99.4%.
Масс-спектроскопия для определения аденозина и очистка аденозина.Mass spectroscopy for determination of adenosine and purification of adenosine.
Использовали автоматизированную систему экстракции Agilent 300 RapidFire (Agilent, Санта-Клара, штат Калифорния) с тремя ВЭЖХ насосами для четырехкомпонентных смесей, подключенную к трехквадрупольному масс-спектрометру Sciex 6500 (AB Sciex, Фремингем, штат Массачусетс) с поверхностным источником электрораспылительной ионизации (ИЭР). В систему масс-спектрометра RapidFire устанавливали многоразовый картридж (G9203-80109) для твердофазной экстракции (SPE) RapidFire HILIC (H1).An Agilent 300 RapidFire automated extraction system (Agilent, Santa Clara, CA) with three quaternary HPLC pumps coupled to a Sciex 6500 triple quadrupole mass spectrometer (AB Sciex, Framingham, MA) with a surface electrospray ionization (ESI) source was used. . The RapidFire mass spectrometer system was equipped with a reusable RapidFire HILIC solid phase extraction (SPE) cartridge (G9203-80109) (H1).
Растворитель A, использованный для загрузки и промывания образцов, представлял собой 50 мМ формиат аммония с pH 4,0, содержащий 5% (об./об.) ACN. Растворитель B, использованный для элюирования образцов, представлял собой 0,3% раствор муравьиной кислоты +2% гидроксида аммония в смеси 70% ACN/30% MeOH. Образцы последовательно анализировали посредством отбора 10 мкл на заборную петлю под вакуумом непосредственно из многолуночных планшетов. Загружали 10 мкл образца на картридж HILIC и промывали с помощью насоса 1 для четырехкомпонентных смесей, используя растворитель A при скорости потока 1,25 мл/мин в течение 3000 мс. Задержанный аналит элюировали в массспектрометр с помощью насоса 3 для четырехкомпонентных смесей, используя растворитель В при скорости потока 1,25 мл/мин. в течение 3000 мс. Систему повторно уравновешивали с помощью насоса 1 для четырехкомпонентных смесей, используя растворитель A при скорости потока 1,25 мл/мин в течениеSolvent A used to load and wash samples was 50 mM ammonium formate pH 4.0 containing 5% (v/v) ACN. Solvent B used to elute the samples was 0.3% formic acid + 2% ammonium hydroxide in 70% ACN/30% MeOH. Samples were analyzed sequentially by withdrawing 10 μL per sampling loop under vacuum directly from the multiwell plates. Load 10 μL of sample onto the HILIC cartridge and wash with quaternary pump 1 using solvent A at a flow rate of 1.25 mL/min for 3000 ms. The retained analyte was eluted into the mass spectrometer using quaternary pump 3 using solvent B at a flow rate of 1.25 mL/min. for 3000 ms. The system was re-equilibrated using quaternary pump 1 using solvent A at a flow rate of 1.25 mL/min for
- 15 045742- 15 045742
3000 мс.3000 ms.
Трехквадрупольный масс-спектрометр оснащали источником электрораспылительной ионизации (ИЭР) и изучали аналиты, используя контроль селективных реакций (SRM) в положительном режиме (M+H)+. Регистрировали аденозин при m/z 268,05/136,0 и аденозинмонофосфат при m/z 348,1/136,0. Рассчитывали значения отношения площадей для аденозина и аденозинмонофосфата, используя 13C5-аденозин и 15Ν5-ΑΜΦ в качестве внутренних стандартов соответственно.A triple quadrupole mass spectrometer was equipped with an electrospray ionization (ESI) source and the analytes were studied using selective reaction monitoring (SRM) in positive mode (M+H)+. Adenosine was recorded at m/z 268.05/136.0 and adenosine monophosphate at m/z 348.1/136.0. Area ratio values for adenosine and adenosine monophosphate were calculated using 13C5-adenosine and 15Ν5-ΑΜΦ as internal standards, respectively.
Биохимический анализ человеческого CD73.Biochemical analysis of human CD73.
Целью данного анализа является идентификация и характеристика активности 5-[5-[(1S,2R)-2изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона против фермента CD73. Добавляли реакционные смеси (20 мкл), содержащие 2 мкМ аденозинмонофосфата (Sigma, № 01930), 10 мМ Tris pH 7,5, 100 мМ NaCl, 0,01% BSA, 0,2 мМ октилглюкозид и 50 пМ белок CD73, в 384-луночный планшет (Nunc, №264573). Через 30 мин инкубации при комнатной температуре останавливали реакцию посредством добавления 20 мкл стоп-раствора, содержащего 2% муравьиной кислоты и 10 мкМ 13C5-аденозина (рибозы с меткой 13C5) (Cambridge Isotope Laboratories, №CLM-3678-0), затем добавляли 40 мкл dH2O. Уровни аденозин- и аденозинрибозы-13C5 (внутреннего стандарта) определяли с помощью масс-спектрометрии, как описано выше. Для количественной оценки каждой реакции использовали отношение сигналов (интегрирование пика аденозина/интегрирование пика внутреннего стандарта аденозина). Процентное ингибирование рассчитывали по уравнению % ингибирование=100χ[1-(XMIN)/(MAX- MIN)]}, где X равен отношению сигналов в лунке, MAX равен среднему отношению сигналов контрольного образца с ДМСО, a MIN равен отношению сигналов активности фермента в присутствии >10X IC50 известного конкурентного ингибитора. Для проведения скрининга каждое соединение испытывали в концентрации 50 мкМ в 1% ДМСО. Определяли IC50 для 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона, испытывая каждое соединение в 10 концентрациях от 0,0025 до 50 мкМ (используя схему разбавления 1:3).The purpose of this assay is to identify and characterize the activity of 5-[5-[(1S,2R)-2isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione against the CD73 enzyme. Reaction mixtures (20 μl) containing 2 μM adenosine monophosphate (Sigma, no. 01930), 10 mM Tris pH 7.5, 100 mM NaCl, 0.01% BSA, 0.2 mM octyl glucoside and 50 pM CD73 protein were added to 384 -well plate (Nunc, No. 264573). After 30 min of incubation at room temperature, the reaction was stopped by adding 20 μl of a stop solution containing 2% formic acid and 10 μM 13 C5-adenosine (ribose labeled 13 C5) (Cambridge Isotope Laboratories, No. CLM-3678-0), then 40 µl dH2O was added. Levels of adenosine and adenosine ribose- 13C5 (internal standard) were determined using mass spectrometry as described above. The signal ratio (adenosine peak integration/adenosine internal standard peak integration) was used to quantify each reaction. Percent inhibition was calculated using the equation % inhibition=100χ[1-(XMIN)/(MAX-MIN)]}, where X is equal to the ratio of signals in the well, MAX is equal to the average ratio of signals of the DMSO control sample, and MIN is equal to the ratio of enzyme activity signals in presence of >10X IC50 of a known competitive inhibitor. For screening, each compound was tested at a concentration of 50 μM in 1% DMSO. The IC 50 for 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione was determined by testing each compound at 10 concentrations from 0.0025 to 50 µM (using a 1:3 dilution scheme).
IC50 для 5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил] -6-метилпиридазин-3-ил] - 1H-пиримидин-2,4-диона составила 0,028 мкМ.The IC 50 for 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione was 0.028 µM.
Анализ механизма мышиного CD73.Mechanistic analysis of mouse CD73.
Целью данного анализа является оценка 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3ил]-1H-пиримидин-2,4-диона в отношении подавления ими активности мышиного фермента CD73. Анализ проводили так, как описано выше для биохимического анализа человеческого CD73, за исключением того, что использовали 3 мкМ АМФ и 50 пМ мышиный фермент CD73.The purpose of this assay is to evaluate 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione for inhibition of murine CD73 enzyme activity. The assay was performed as described above for the human CD73 biochemical assay, except that 3 μM AMP and 50 pM mouse CD73 enzyme were used.
IC50 для 5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил] -6-метилпиридазин-3-ил] - 1H-пиримидин-2,4-диона составила 0,175 мкМ.The IC 50 for 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione was 0.175 μM.
Анализ человеческих клеток Calu6.Analysis of human Calu6 cells.
Целью данного анализа является испытание 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона против CD73 в клеточном анализе. Клетки Calu6 (1500 клеток/лунка) выращивали в 96-луночном планшете, покрытом поли-О-лизином (BD, № 356640), содержащем 100 мкл среды (MEM (Gibco, № 11095-072)+1% пирувата натрия (Gibco, № 11360-070)+1% NEAA (Gibco, № 11140-050)+10% FBS (Hyclone, №SH30071). Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем инкубировали в течение ночи при 37°C/5% CO2. Клетки дважды промывали аналитическим буфером (10 мМ Tris-HCl pH 7,2, 10 мМ D-глюкозы, 1 мМ KCl, 125 мМ NaCl, 2 мМ MgCl2) (90 мкл/лунка). Затем в каждую лунку добавляли 90 мкл аналитического буфера, затем добавляли 10 мкл на лунку АМФ и предварительной смеси соединения (50 мкМ АМФ, различные концентрации 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона в 1% ДМСО). Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин. Затем удаляли 10 мкл надосадочного раствора из каждой лунки и помещали в новый планшет, затем добавляли 20 мкл стоп-раствора (2% муравьиной кислоты, 1,2 мкМ аденозинрибозы-13С5 (Cambridge Isotope Laboratories, № CLM-3678-0) и 90 мкл ddH2O для масс-спектроскопического анализа. Уровни аденозин- и аденозинрибозы-13С5 (внутреннего стандарта) определяли с помощью масс-спектрометрии (Agilent RapidFire), как описано выше для биохимического анализа человеческого CD73. Процентное ингибирование также рассчитывали так, как описано выше.The purpose of this assay is to test 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione against CD73 in a cell-based assay. Calu6 cells (1500 cells/well) were grown in a 96-well poly-O-lysine-coated plate (BD, no. 356640) containing 100 μl MEM (Gibco, no. 11095-072) + 1% sodium pyruvate (Gibco, #11360-070)+1% NEAA (Gibco, #11140-050)+10% FBS (Hyclone, #SH30071) Plates were incubated at room temperature for 30 min, then incubated overnight at 37°C/5% CO2 Cells were washed twice with assay buffer (10 mM Tris-HCl pH 7.2, 10 mM D-glucose, 1 mM KCl, 125 mM NaCl, 2 mM MgCl 2 ) (90 μl/well). Then 90 μl of assay buffer, then 10 μl per well of AMP and compound premix (50 μM AMP, various concentrations of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H- pyrimidine-2,4-dione in 1% DMSO) The plates were incubated at room temperature for 60 min. Then 10 μl of the supernatant solution was removed from each well and placed in a new plate, then 20 μl of stop solution (2% formic acid) was added , 1.2 µM adenosine ribose- 13 C5 (Cambridge Isotope Laboratories, No. CLM-3678-0) and 90 µl ddH 2 O for mass spectroscopic analysis. Levels of adenosine and adenosine ribose- 13C5 (internal standard) were determined using mass spectrometry (Agilent RapidFire) as described above for biochemical analysis of human CD73. Percent inhibition was also calculated as described above.
IC50 для 5-[5-[(1 S,2R)-2-изопропилциклопропил] -6-метилпиридазин-3-ил] - 1H-пиримидин-2,4-диона составила 0,0073 мкМ (соединение из примера 2).IC 50 for 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione was 0.0073 μM (compound of Example 2) .
Ex vivo анализ ингибирования мишени.Ex vivo target inhibition assay.
Целью данного анализа является испытание 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона против мышиного CD73 в крови мышей в ex vivo анализе. Животным (6 на группу) перорально вводили дозу каждого соединения, составленного в 20% HPBCD (2-гидроксипропил-в-циклодекстрин), pH 2, по достижении объема опухоли приблизительно 400 мм3. После лечения собирали кровь в гепариновые пробирки и использовали для ex vivo анализа превращения 13C10-15N5-AMP в меченый аденозин, инозин и гипоксантин, как описано для ex vivo анализа, с использованием цельной крови, взятой у животных, подверженных лечению посредством перорального введе- 16 045742 ния дозы соединения.The purpose of this assay is to test 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin3-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione against murine CD73 in mouse blood in an ex vivo assay. Animals (6 per group) were orally dosed with each compound formulated in 20% HPBCD (2-hydroxypropyl-b-cyclodextrin), pH 2, when the tumor volume reached approximately 400 mm 3 . After treatment, blood was collected in heparin tubes and used for ex vivo analysis of the conversion of 13 C10-15 N5-AMP to labeled adenosine, inosine and hypoxanthine as described for the ex vivo analysis, using whole blood collected from animals treated by oral administration. - 16 045742 dose of the compound.
5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-дион ингибировал превращение АМФ в аденозин, инозин и гипоксантин в цельной крови мышей, взятой у животных, которым вводили различные дозы указанного соединения, как показано в табл. 4.5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione inhibited the conversion of AMP to adenosine, inosine and hypoxanthine in mouse whole blood collected in animals that were administered various doses of the specified compound, as shown in table. 4.
Таблица 4Table 4
Ингибирование превращения АМФ в аденозинInhibition of the conversion of AMP to adenosine
IC50 для 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона составила 0,0073 мкМ.The IC 50 for 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione was 0.0073 µM.
In vivo анализ ингибирования человеческого CD73 в опухоли Calu6.In vivo analysis of human CD73 inhibition in Calu6 tumor.
Целью данного анализа является испытание 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-диона против человеческого CD73 в ксенотрансплантатных опухолях, полученных из раковых клеток Calu6 человека в анализе in vivo ингибирования мишени. Клетки Calu6 (ATCC) выращивали в среде HBSS с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Собирали субконфлюэнтные клетки с помощью трипсина и дважды промывали питательной средой без сыворотки. Инициировали рост подкожной опухоли посредством инъекции 5х106 клеток в 1:1 смеси HBSS и MATRIGEL® (BD Biosciences, Франклин Лэйкс, штат Нью-Джерси) в заднюю боковую область голых мышей (The Harlon Laboratory). По достижении среднего объема опухоли приблизительно 400-500 мм3, животных случайным образом разделяли по размеру опухоли и массе тела и помещали в соответствующие указанные экспериментальные группы. После лечения собирали образцы опухоли (50-80 мг каждая) и перерабатывали в 1 мл ледяного экстракционного буфера, содержащего внутренние стандарты, как описано ниже.The purpose of this assay is to test 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione against human CD73 in xenograft tumors derived from Calu6 cancer cells human in vivo target inhibition assay. Calu6 cells (ATCC) were grown in HBSS supplemented with 10% fetal bovine serum. Subconfluent cells were collected using trypsin and washed twice with serum-free culture medium. Subcutaneous tumor growth was initiated by injecting 5 x 10 6 cells in a 1:1 mixture of HBSS and MATRIGEL® (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) into the posterior flank of nude mice (The Harlon Laboratory). Once the average tumor volume reached approximately 400-500 mm 3 , animals were randomly assigned to tumor size and body weight and assigned to their respective designated experimental groups. After treatment, tumor samples (50-80 mg each) were collected and processed in 1 ml of ice-cold extraction buffer containing internal standards as described below.
В ступку для предварительного охлаждения добавляли полоску фольги и жидкий N2. Каплю опухолевой ткани помещали на полоску фольги и добавляли жидкий N2. Другую полоску фольги помещали поверх опухолевой ткани и отбивали пестиком до полного измельчения опухоли. 50-100 мг опухолевой ткани помещали в пробирки (Fishers Scientific, кат. № 02-681-302) и ставили на сухой лед. В пробирки добавляли одну гранулу металла (Qiagen, кат. № 69989) и 1 мл 80% метанола, содержащего внутренние стандарты 13C5-аденозина, 13С5-АМФ, 15Ν5-ΓΤΦ, 15N4-инозин-5'-монофосфата и 13C-15N-гипоксантина (Cambridge Isotope Lab и Cayman Chemical), и хранили образцы при -80°C до использования для анализа ЖХ/МС.A strip of foil and liquid N2 were added to the mortar for pre-cooling. A drop of tumor tissue was placed on a strip of foil and liquid N2 was added. Another strip of foil was placed on top of the tumor tissue and beaten with a pestle until the tumor was completely crushed. 50-100 mg of tumor tissue was placed in tubes (Fishers Scientific, cat. no. 02-681-302) and placed on dry ice. One metal bead (Qiagen, cat. no. 69989) and 1 ml of 80% methanol containing internal standards 13 C5-adenosine, 13 C5-AMP, 15 Ν5-ΓΤΦ, 15 N4-inosine-5'-monophosphate and 13 were added to the tubes. C- 15 N-hypoxanthine (Cambridge Isotope Lab and Cayman Chemical), and stored samples at -80°C until used for LC/MS analysis.
Также собирали кровь в гепариновые пробирки и использовали для ex vivo анализа превращения 13C5-15N5-АМФ в меченый аденозин, инозин и гипоксантин, как описано для ex vivo анализа, с использованием цельной крови, взятой у животных, подверженных лечению посредством перорального введения дозы соединения.Blood was also collected in heparin tubes and used for ex vivo analysis of the conversion of 13 C5- 15 N5-AMP to labeled adenosine, inosine and hypoxanthine as described for the ex vivo analysis, using whole blood collected from animals exposed to oral dosing. connections.
Как показано в табл. 5, 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1Hпиримидин-2,4-дион ингибировал превращение АМФ в аденозин в опухолях Calu6, обработанных различными дозами соединения.As shown in table. 5, 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1Hpyrimidin-2,4-dione inhibited the conversion of AMP to adenosine in Calu6 tumors treated with different doses of the compound.
Таблица 5Table 5
Ингибирование превращения АМФ в аденозинInhibition of the conversion of AMP to adenosine
* Статистическая значимость.* Statistical significance.
ЖХ/МС анализ для измерения активности CD73 в сыворотке человека Свежую кровь здорового че- 17 045742 ловека центрифугировали при 1500 g в течение 15 мин при комнатной температуре и собирали верхнюю фракцию, содержащую сыворотку. Собранную сыворотку (25 мкл/лунка) переносили в 96-луночный планшет с глубокими лунками (DWP, Analytical Sales & Services Inc., кат. № 968820), содержащими различные концентрации 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциkлопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин2,4-диона и фиксированную концентрацию левамизола (1500 мкМ). После инкубации на льду в течение 60 мин в каждую лунку на планшете добавляли 13C5-15N5-АМФ (50 мкМ) и инкубировали планшет при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем планшет ставили на сухой лед с добавлением 200 мкл на лунку 17,3 TCA, после чего встряхивали при 26 к/с в течение 3 мин на приборе для встряхивания планшетов (Qiagen). Затем планшет центрифугировали при 2940 g в течение 20 мин при 4°C. После центрифугирования переносили 100 мкл на лунку надосадочного раствора из каждого раствора в новый 96-луночный планшет с глубокими лунками и смешивали с 18,4 мкл на лунку 2,5 М Na2CO3 на льду, затем добавляли 200 мкл экстракционного раствора, содержащего внутренний стандарт (внутр. ст.: 13С5-АМФ, 13C5-аденозин, 13С5-гипоксантин и 15N4-uho3uh). После дополнительного центрифугирования при 2940 g в течение 20 мин при 4°C использовали 200 мкл на лунку надосадочного раствора для анализа 13C10-15N5-аденозина, 13C10-15N5-инозинα и 15Х5-гипоксантина с помощью ЖХ/МС, как описано выше. Для расчета EC50 делали поправку концентраций 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3ил]-1H-пиримидин-2,4-диона в сыворотке на несвязанную фракцию (%), полученную в компьютерных моделях или экспериментально.LC/MS Assay to Measure CD73 Activity in Human Serum Fresh blood from a healthy subject was centrifuged at 1500 g for 15 min at room temperature and the upper fraction containing serum was collected. The collected serum (25 μl/well) was transferred into a 96-well deep well plate (DWP, Analytical Sales & Services Inc., cat. no. 968820) containing various concentrations of 5-[5-[(1S,2R)-2- isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidine2,4-dione and a fixed concentration of levamisole (1500 μM). After incubation on ice for 60 min, 13 C5-15 N5-AMP (50 μM) was added to each well on the plate and the plate was incubated at room temperature for 15 min. The plate was then placed on dry ice with 200 μl per well of 17.3 TCA added, followed by shaking at 26 rps for 3 min on a plate shaker (Qiagen). The plate was then centrifuged at 2940 g for 20 min at 4°C. After centrifugation, transfer 100 µl per well of the supernatant solution from each solution to a new 96-well deep well plate and mix with 18.4 µl per well of 2.5 M Na 2 CO 3 on ice, then add 200 µl of the extraction solution containing the internal standard (internal st.: 13 C5-AMP, 13 C5-adenosine, 13 C5-hypoxanthine and 15 N4-uho3uh). After further centrifugation at 2940 g for 20 min at 4°C, 200 µl per well of the supernatant was used to analyze 13 C10- 15 N5-adenosine, 13 C10- 15 N5-inosineα and 15 X5-hypoxanthine by LC/MS as described above. To calculate EC50, serum concentrations of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3yl]-1H-pyrimidin-2,4-dione were corrected for the unbound fraction (%) obtained in computer models or experimentally.
В табл. 6 представлены данные об ингибировании активности CD73 в сыворотке человека под действием 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-uл]-1H-пиримидин-2,4-диона.In table Figure 6 presents data on the inhibition of CD73 activity in human serum under the influence of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-ul]-1H-pyrimidine-2,4-dione.
Таблица 6Table 6
Модели in vivo.In vivo models.
При необходимости можно осуществить доклиническое моделирование ингибирующего действия 5-[5-[(1S,2R)-2-изопропилциклопропил]-6-метилпиридазин-3-ил]-1H-пиримидин-2,4-дионα или его фармацевтически приемлемой соли в отношении CD73, например, в соответствии со способами, описанными в данной области техники, например в публикации Rongvaux A. et al., Annual Rev. Immunology, 2013, 31:635-74, и в литературных источниках, цитированных в указанном документе; Sanmamed M.F. et al., Annals of Oncology, 2016, 27:1190-1198, и в литературных источниках, цитированных в указанном документе.If necessary, preclinical modeling of the inhibitory effect of 5-[5-[(1S,2R)-2-isopropylcyclopropyl]-6-methylpyridazin-3-yl]-1H-pyrimidin-2,4-dioneα or its pharmaceutically acceptable salt on CD73, for example, in accordance with methods described in the art, for example in the publication Rongvaux A. et al., Annual Rev. Immunology, 2013, 31:635-74, and in the literature cited therein; Sanmamed M.F. et al., Annals of Oncology, 2016, 27:1190-1198, and in the literature cited therein.
Claims (15)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP19382733.4 | 2019-08-29 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045742B1 true EA045742B1 (en) | 2023-12-21 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP4021902B1 (en) | Crystalline forms of a cd73 inhibitor | |
AU2019228473B2 (en) | CD73 inhibitors | |
EP3444251B1 (en) | Biaryl compounds useful for the treatment of human diseases in oncology, neurology and immunology | |
EP4112606A1 (en) | Aromatic compound and use thereof in preparing antineoplastic drugs | |
EP3371171B1 (en) | Inhibitors of ret | |
EP3442977B1 (en) | Inhibitors of activin receptor-like kinase | |
CA2761256C (en) | Hydrochloride salt of ((1s,2s,4r)-4-{4-[(1s)-2,3-dihydro-1h-inden-1-ylamino]-7h-pyrrolo [2,3-d]pyrimidin-7-yl}-2-hydroxycyclopentyl)methyl sulfamate | |
HUE033482T2 (en) | Cdc7 inhibitors | |
CN107250137B (en) | The hexa-atomic saturation heterolipid ring class of substituted amino as long-acting DPP-IV inhibitor | |
CN112920201A (en) | Macrocyclic compound and composition containing same | |
EA045742B1 (en) | CD73 INHIBITOR CRYSTAL FORMS | |
EP3697786B1 (en) | Substituted pyrrolopyridines as inhibitors of activin receptor-like kinase | |
KR20170015848A (en) | Novel compound having tumor diagnosis or tumor growth inhibitory activity on EGFR mutant and medical uses comprising the same | |
CN115433179A (en) | Benzopyrimidine compounds and medical application thereof | |
EA041789B1 (en) | CD73 INHIBITORS |