EA045730B1 - Анти-muc16 (mucin16) антитела - Google Patents
Анти-muc16 (mucin16) антитела Download PDFInfo
- Publication number
- EA045730B1 EA045730B1 EA201990784 EA045730B1 EA 045730 B1 EA045730 B1 EA 045730B1 EA 201990784 EA201990784 EA 201990784 EA 045730 B1 EA045730 B1 EA 045730B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- muc16
- antigen
- amino acid
- antigen binding
- Prior art date
Links
- 108010008629 CA-125 Antigen Proteins 0.000 title description 175
- 102000007269 CA-125 Antigen Human genes 0.000 title 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 704
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 542
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 542
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 542
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 239
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 224
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 183
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 153
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 93
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 91
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 90
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 73
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 63
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 60
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 58
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 43
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 43
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims description 42
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 claims description 42
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 38
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 33
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 31
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 29
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 29
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 27
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 27
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 18
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 17
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 12
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 10
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 claims description 6
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 6
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 claims description 5
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 claims description 5
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 claims description 4
- AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N dolastatin Chemical class CC(C)C(N(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N(C)C(C(C)C)C(OC)CC(=O)N1CCCC1C(OC)C(C)C(=O)NC(C=1SC=CN=1)CC1=CC=CC=C1 AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004561 lacrimal apparatus Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 241
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 240
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 64
- 102000055862 human MUC16 Human genes 0.000 description 59
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 58
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 55
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 51
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 43
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 38
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 38
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 38
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 36
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 36
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 35
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 34
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 34
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 32
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 29
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 25
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 23
- 230000008859 change Effects 0.000 description 22
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 22
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 21
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 21
- -1 phosphoryl groups Chemical group 0.000 description 21
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 19
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 18
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 16
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 16
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 16
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 14
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 14
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 11
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 11
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 11
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 11
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 10
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 10
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 10
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 10
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 10
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 10
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 9
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 9
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 8
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 8
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 6
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 6
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 6
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 6
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 6
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 6
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 5
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 5
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 5
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 5
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 5
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 5
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 5
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 5
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 108010059074 monomethylauristatin F Proteins 0.000 description 5
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 5
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010001197 Adenocarcinoma of the cervix Diseases 0.000 description 4
- 208000034246 Adenocarcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037807 GATOR complex protein MIOS Human genes 0.000 description 4
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 4
- 101000950705 Homo sapiens GATOR complex protein MIOS Proteins 0.000 description 4
- 101150000378 IML1 gene Proteins 0.000 description 4
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 4
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 101100263989 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) MTC5 gene Proteins 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 201000006662 cervical adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 201000007450 intrahepatic cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010093470 monomethyl auristatin E Proteins 0.000 description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100041193 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) RTC1 gene Proteins 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000021375 Xenogenes Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021190 leftovers Nutrition 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 108700028426 mouse MUC16 Proteins 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 102220117530 rs112626848 Human genes 0.000 description 3
- 102220238658 rs1468529365 Human genes 0.000 description 3
- 102220268018 rs201210997 Human genes 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UGCWVVMCHYLGBO-DQZFIDPSSA-N (2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid;(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UGCWVVMCHYLGBO-DQZFIDPSSA-N 0.000 description 2
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 1-n-(4-chlorophenyl)-6-methyl-5-n-[3-(7h-purin-6-yl)pyridin-2-yl]isoquinoline-1,5-diamine Chemical compound N=1C=CC2=C(NC=3C(=CC=CN=3)C=3C=4N=CNC=4N=CN=3)C(C)=CC=C2C=1NC1=CC=C(Cl)C=C1 KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZUBHJJEYNHYFU-DKWTVANSSA-N 2-aminoacetic acid;(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O FZUBHJJEYNHYFU-DKWTVANSSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 6alpha-methylprednisolone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 0.000 description 2
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108090000369 Glutamate Carboxypeptidase II Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000924533 Homo sapiens Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000576802 Homo sapiens Mesothelin Proteins 0.000 description 2
- 101000628547 Homo sapiens Metalloreductase STEAP1 Proteins 0.000 description 2
- 101000628535 Homo sapiens Metalloreductase STEAP2 Proteins 0.000 description 2
- 101001123448 Homo sapiens Prolactin receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000638154 Homo sapiens Transmembrane protease serine 2 Proteins 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 2
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102100025096 Mesothelin Human genes 0.000 description 2
- 102100026712 Metalloreductase STEAP1 Human genes 0.000 description 2
- 102100026711 Metalloreductase STEAP2 Human genes 0.000 description 2
- 101100381978 Mus musculus Braf gene Proteins 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051742 Platelet-Derived Growth Factor beta Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 description 2
- 101710148465 Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 description 2
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 2
- 102100029000 Prolactin receptor Human genes 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031989 Transmembrane protease serine 2 Human genes 0.000 description 2
- VGQOVCHZGQWAOI-UHFFFAOYSA-N UNPD55612 Natural products N1C(O)C2CC(C=CC(N)=O)=CN2C(=O)C2=CC=C(C)C(O)=C12 VGQOVCHZGQWAOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012349 Uroplakins Human genes 0.000 description 2
- 108010061861 Uroplakins Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- VGQOVCHZGQWAOI-HYUHUPJXSA-N anthramycin Chemical compound N1[C@@H](O)[C@@H]2CC(\C=C\C(N)=O)=CN2C(=O)C2=CC=C(C)C(O)=C12 VGQOVCHZGQWAOI-HYUHUPJXSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone phosphate Chemical compound OCC(=O)COP(O)(O)=O GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229960000752 etoposide phosphate Drugs 0.000 description 2
- LIQODXNTTZAGID-OCBXBXKTSA-N etoposide phosphate Chemical compound COC1=C(OP(O)(O)=O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 LIQODXNTTZAGID-OCBXBXKTSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 125000005549 heteroarylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M phenethicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)C(C)OC1=CC=CC=C1 ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M 0.000 description 2
- 229940063179 platinol Drugs 0.000 description 2
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 102200148758 rs116840795 Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940035307 toposar Drugs 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- PVBORIXVWRTHOZ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl cyclohexanecarboxylate Chemical compound C1CCCCC1C(=O)OCN1C(=O)C=CC1=O PVBORIXVWRTHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NDDSIUHFLJACFT-VWURTLBMSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NDDSIUHFLJACFT-VWURTLBMSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- YGLMVCVJLXREAK-MTVMDMGHSA-N 1,1-dimethyl-3-[(1S,2R,6R,7S,8R)-8-tricyclo[5.2.1.02,6]decanyl]urea Chemical compound C([C@H]12)CC[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](NC(=O)N(C)C)[C@H]2C1 YGLMVCVJLXREAK-MTVMDMGHSA-N 0.000 description 1
- OWODMVTTWPVWQA-UHFFFAOYSA-N 10,11-dihydroxy-9-(hydroxymethyl)-2,6a,6b,9,12a-pentamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-2,4a-dicarboxylic acid Chemical compound C12CC=C3C4CC(C)(C(O)=O)CCC4(C(O)=O)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CC(O)C(O)C1(CO)C OWODMVTTWPVWQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- AFZIRBOYYNKYFJ-UHFFFAOYSA-N 4-pyridin-2-ylsulfanylpentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(C)SC1=CC=CC=N1 AFZIRBOYYNKYFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150079978 AGRN gene Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000036832 Adenocarcinoma of ovary Diseases 0.000 description 1
- 102100040026 Agrin Human genes 0.000 description 1
- 108700019743 Agrin Proteins 0.000 description 1
- OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010027164 Amanitins Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 206010004992 Bladder adenocarcinoma stage unspecified Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101000914947 Bungarus multicinctus Long neurotoxin homolog TA-bm16 Proteins 0.000 description 1
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101100420946 Caenorhabditis elegans sea-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100033620 Calponin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010052360 Colorectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102100021906 Cyclin-O Human genes 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 102100033553 Delta-like protein 4 Human genes 0.000 description 1
- AUGQEEXBDZWUJY-ZLJUKNTDSA-N Diacetoxyscirpenol Chemical compound C([C@]12[C@]3(C)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C)CC[C@@]13COC(=O)C)O2 AUGQEEXBDZWUJY-ZLJUKNTDSA-N 0.000 description 1
- AUGQEEXBDZWUJY-UHFFFAOYSA-N Diacetoxyscirpenol Natural products CC(=O)OCC12CCC(C)=CC1OC1C(O)C(OC(C)=O)C2(C)C11CO1 AUGQEEXBDZWUJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 229940122558 EGFR antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 1
- MBYXEBXZARTUSS-QLWBXOBMSA-N Emetamine Natural products O(C)c1c(OC)cc2c(c(C[C@@H]3[C@H](CC)CN4[C@H](c5c(cc(OC)c(OC)c5)CC4)C3)ncc2)c1 MBYXEBXZARTUSS-QLWBXOBMSA-N 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 206010073064 Epithelioid mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEZZLWQELQORIU-RELWKKBWSA-N GDC-0879 Chemical compound N=1N(CCO)C=C(C=2C=C3CCC(/C3=CC=2)=N\O)C=1C1=CC=NC=C1 DEZZLWQELQORIU-RELWKKBWSA-N 0.000 description 1
- 241000699694 Gerbillinae Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 108010068250 Herpes Simplex Virus Protein Vmw65 Proteins 0.000 description 1
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000910338 Homo sapiens Carbonic anhydrase 9 Proteins 0.000 description 1
- 101000897441 Homo sapiens Cyclin-O Proteins 0.000 description 1
- 101000872077 Homo sapiens Delta-like protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001037144 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 1
- 101000662009 Homo sapiens UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 102100040234 Immunoglobulin heavy variable 3-9 Human genes 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 1
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 1
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 1
- 239000003798 L01XE11 - Pazopanib Substances 0.000 description 1
- 229930190887 Leptomycin Natural products 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- VFKZTMPDYBFSTM-KVTDHHQDSA-N Mitobronitol Chemical compound BrC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CBr VFKZTMPDYBFSTM-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- FONIWJIDLJEJTL-UHFFFAOYSA-N N(8)-acetylspermidine Chemical compound CC(=O)NCCCCNCCCN FONIWJIDLJEJTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 1
- UGJBHEZMOKVTIM-UHFFFAOYSA-N N-formylglycine Chemical compound OC(=O)CNC=O UGJBHEZMOKVTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010061328 Ovarian epithelial cancer Diseases 0.000 description 1
- YZDJQTHVDDOVHR-UHFFFAOYSA-N PLX-4720 Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(Cl)=CN=C3NC=2)=C1F YZDJQTHVDDOVHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000233805 Phoenix Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- ZJBMQVPEJHVSQA-OCYVVMCSSA-N Pyrromycin Chemical compound O([C@H]1C[C@]([C@@H](C2=CC=3C(=O)C4=C(O)C=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)C(=O)OC)(O)CC)[C@H]1C[C@H](N(C)C)[C@H](O)[C@H](C)O1 ZJBMQVPEJHVSQA-OCYVVMCSSA-N 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- AUVVAXYIELKVAI-UHFFFAOYSA-N SJ000285215 Natural products N1CCC2=CC(OC)=C(OC)C=C2C1CC1CC2C3=CC(OC)=C(OC)C=C3CCN2CC1CC AUVVAXYIELKVAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084592 Saporins Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 1
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100037921 UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Human genes 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N UNPD149280 Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- HSRXSKHRSXRCFC-WDSKDSINSA-N Val-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSRXSKHRSXRCFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000012084 abdominal surgery Methods 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- RUDNHCHNENLLKM-UHFFFAOYSA-N ac1mj1v6 Chemical compound O=C1NC(CC(O)=O)C(=O)N2CC(O)CC2C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)NC(C2)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC1CSC1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 RUDNHCHNENLLKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000009167 androgen deprivation therapy Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 201000006587 bladder adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- RSIHSRDYCUFFLA-DYKIIFRCSA-N boldenone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RSIHSRDYCUFFLA-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 1
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 1
- 102220349284 c.287A>T Human genes 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 229930188550 carminomycin Natural products 0.000 description 1
- XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N carminomycin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N 0.000 description 1
- XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N carminomycin I Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229950001725 carubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 150000004814 combretastatins Chemical class 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011254 conventional chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N cytochalasin B Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)CCC[C@@H](O)/C=C/C(=O)O[C@@]23C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N cytochalasin B Natural products C[C@H]1CCC[C@@H](O)C=CC(=O)O[C@@]23[C@H](C=CC1)[C@H](O)C(=C)[C@@H](C)[C@@H]2[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940026692 decadron Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229960000958 deferoxamine Drugs 0.000 description 1
- RSIHSRDYCUFFLA-UHFFFAOYSA-N dehydrotestosterone Natural products O=C1C=CC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CCC2=C1 RSIHSRDYCUFFLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-UHFFFAOYSA-N deoliosyl-3C-alpha-L-digitoxosyl-MTM Natural products CC=1C(O)=C2C(O)=C3C(=O)C(OC4OC(C)C(O)C(OC5OC(C)C(O)C(OC6OC(C)C(O)C(C)(O)C6)C5)C4)C(C(OC)C(=O)C(O)C(C)O)CC3=CC2=CC=1OC(OC(C)C1O)CC1OC1CC(O)C(O)C(C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 229930187817 disorazole Natural products 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N duocarmycin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3C4=CC(=O)C5=C([C@@]64C[C@@H]6C3)C=C(N5)C(=O)OC)=CC2=C1 VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N 0.000 description 1
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 1
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 1
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- AUVVAXYIELKVAI-CKBKHPSWSA-N emetine Chemical compound N1CCC2=CC(OC)=C(OC)C=C2[C@H]1C[C@H]1C[C@H]2C3=CC(OC)=C(OC)C=C3CCN2C[C@@H]1CC AUVVAXYIELKVAI-CKBKHPSWSA-N 0.000 description 1
- 229960002694 emetine Drugs 0.000 description 1
- AUVVAXYIELKVAI-UWBTVBNJSA-N emetine Natural products N1CCC2=CC(OC)=C(OC)C=C2[C@H]1C[C@H]1C[C@H]2C3=CC(OC)=C(OC)C=C3CCN2C[C@H]1CC AUVVAXYIELKVAI-UWBTVBNJSA-N 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 201000003908 endometrial adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029382 endometrium adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229950001752 enoticumab Drugs 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940015979 epipen Drugs 0.000 description 1
- 229930013356 epothilone Natural products 0.000 description 1
- HESCAJZNRMSMJG-KKQRBIROSA-N epothilone A Chemical class C/C([C@@H]1C[C@@H]2O[C@@H]2CCC[C@@H]([C@@H]([C@@H](C)C(=O)C(C)(C)[C@@H](O)CC(=O)O1)O)C)=C\C1=CSC(C)=N1 HESCAJZNRMSMJG-KKQRBIROSA-N 0.000 description 1
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 1
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 1
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930182480 glucuronide Natural products 0.000 description 1
- 150000008134 glucuronides Chemical class 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960004905 gramicidin Drugs 0.000 description 1
- ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N gramicidina Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000004404 heteroalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N humalog Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N 0.000 description 1
- 229940038661 humalog Drugs 0.000 description 1
- 229940062714 humalog mix Drugs 0.000 description 1
- 238000013415 human tumor xenograft model Methods 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229940090411 ifex Drugs 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006674 lysosomal degradation Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000014699 malignant epithelioid mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940064748 medrol Drugs 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N mithramycin Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@H]1O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1C)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O)[C@@](C)(O)C3)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@H]1C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N 0.000 description 1
- 229960005485 mitobronitol Drugs 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 231100000150 mutagenicity / genotoxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229950007283 oregovomab Drugs 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 208000013371 ovarian adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006588 ovary adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- KLAKIAVEMQMVBT-UHFFFAOYSA-N p-hydroxy-phenacyl alcohol Natural products OCC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 KLAKIAVEMQMVBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000639 pazopanib Drugs 0.000 description 1
- CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N pazopanib Chemical compound C1=CC2=C(C)N(C)N=C2C=C1N(C)C(N=1)=CC=NC=1NC1=CC=C(C)C(S(N)(=O)=O)=C1 CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001175 peptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229960003171 plicamycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 150000003195 pteridines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 102220210869 rs1057524586 Human genes 0.000 description 1
- 102220220520 rs1060503090 Human genes 0.000 description 1
- 102220206698 rs142514490 Human genes 0.000 description 1
- 102220325921 rs1555376589 Human genes 0.000 description 1
- 102220142694 rs192332456 Human genes 0.000 description 1
- 102200164344 rs63751661 Human genes 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 229960002372 tetracaine Drugs 0.000 description 1
- GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N tetracaine Chemical compound CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Description
Ссылка на список последовательностей
Данная заявка включает в себя в виде ссылки список последовательностей, представленный в машиночитаемой форме в виде файла 10295WO02-Sequence.txt, созданного 22 сентября 2017 г. и содержащего 893983 байта. 1
Область техники
Данное изобретение относится к антителам, и их антигенсвязывающим фрагментам, которые являются специфичными к муцину 16 (MUC16), и к способам их применения. Данное изобретение также относится к биспецифичным антигенсвязывающим молекулам, которые связывают MUC16 и CD3, и способам их применения. Данное изобретение также относится к конъюгатам антитело-лекарственное средство, содержащим анти-MUC16 антитело или его фрагмент и терапевтический агент (например, цитотоксический агент).
Уровень техники
Муцин 16 (MUC16), также известный как раковый антиген 125, карциномный антиген 125, углеводный антиген 125 или СА-125, представляет собой сильно гликозилированный интегральный мембранный гликопротеин с одним трансмембранным доменом, который экспрессируется на высоком уровне при раке яичников. MUC16 состоит из трех основных доменов: внеклеточного N-концевого домена, большого домена тандемных повторов, который прерывается доменами белка спермы морского ежа, энтерокиназы, и агрина (SEA), и карбоксильного концевого домена, который содержит сегмент трансмембранного участка и короткий цитоплазматический хвост. Протеолитическое расщепление приводит к отходу большей части внеклеточного участка MUC16 в кровоток. MUC16 сверхэкспрессируется при раке, включая рак яичников, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого, внутрипеченочную холангиокарциному массообразующего типа, аденокарциному шейки матки и аденокарциному желудочного тракта, а также при заболеваниях и состояниях, в том числе воспалительных заболеваниях кишечника, циррозе печени, сердечной недостаточности, инфекции брюшины и абдоминальной хирургии. (Haridas, D. et al., 2014, FASEB J., 28: 4183-4199). Показано, что экспрессия на раковых клетках защищает опухолевые клетки от иммунной системы. (Felder, M. et al., 2014, Molecular Cancer, 13: 129). Были исследованы способы лечения рака яичников с использованием антител к MUC16. Ореговомаб и абговомаб являются анти-MUC16 антителами, которые имеют ограниченный успех. (Felder, выше, Das, S. and Batra, SK 2015, Cancer Res. 75: 4660-4674.)
CD3 представляет собой гомодимерный или гетеродимерный антиген, экспрессированный на Тклетках в сочетании с комплексом Т-клеточного рецептора (TCR), и требуется для активации Т-клеток. Функциональный CD3 образуется из димерной ассоциации двух из четырех различных цепей: эпсилон, зета, дельта и гамма. Димерные схемы CD3 включают гамма/эпсилон, дельта/эпсилон и зета/зета. Было показано, что антитела против CD3 кластеризуют CD3 на Т-клетках, вызывая тем самым активацию Тклеток способом, сходным с вовлечением TCR молекулами МНС, нагруженными пептидом. Таким образом, анти-CD3 антитела были предложены для терапевтических целей, включающих активацию Тклеток. Кроме того, биспецифичные антитела, которые способны связывать CD3 и антиген-мишень, были предложены для терапевтического применения, включающего нацеливание иммунных ответов Тклеток на ткани и клетки, экспрессирующие антиген-мишень.
Антигенсвязывающие молекулы, которые нацелены на MUC16, в том числе конъюгаты антителолекарственное средство, а также биспецифичные антиген-связывающие молекулы, которые связываются как с MUC16, так и с CD3, будут полезны в терапевтических условиях, в которых специфическое нацеливание и Т-клеточное уничтожение клеток, которые экспрессируют MUC16, является желательным.
Краткое описание сущности изобретения
В первом аспекте, данное изобретение относится к антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с человеческим MUC16. Антитела согласно этому аспекту изобретения полезны, в частности, для нацеливания на клетки, экспрессирующие MUC16. Данное изобретение также относится к биспецифичным антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые связывают MUC16 человека и CD3 человека. Биспецифичные антитела в соответствии с этим аспектом изобретения полезны, в частности, для нацеливания Т-клеток, экспрессирующих CD3, и для стимуляции активации Тклеток, например, в условиях, когда опосредованное Т-клетками уничтожение клеток, экспрессирующих MUC16, является полезным или желательным. Например, биспецифичные антитела могут направлять CD3-опосредованную активацию Т-клеток на специфические MUC16-экспрессирующие клетки, такие как опухолевые клетки яичника.
Иллюстративные анти-MUC16 антитела по данному изобретению перечислены в табл. 1 и 2 данного документа. В табл. 1 приведены идентификаторы аминокислотных последовательностей вариабельных участков тяжелой цепи (HCVR) и вариабельных участков легкой цепи (LCVR), а также участков, определяющих комплементарность тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и участков, определяющих комплементарность легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3) типовых анти-MUC16 антител. В табл. 2 приведены идентификаторы последовательностей молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3 типовых анти-MUC16 антител.
Данное изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим
- 1 045730
HCVR, содержащем аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1, или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим LCVR, содержащем аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1, или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим парную аминокислотную последовательность HCVR и LCVR (HCVR/LCVR), содержащую любую из аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1, в паре с любой из аминокислотных последовательностей LCVR перечисленных в табл. 1. В соответствии с некоторыми вариантами реализации данное изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим парную аминокислотную последовательность HCVR/LCVR, содержащуюся в любом из типовых анти-MUC16 антител, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения, пара аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR имеет последовательность SEQ ID NO: 18/26 (например, Н1Н8767Р).
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим CDR1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей HCDR1, перечисленных в табл. 1 или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим CDR2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей HCDR2, перечисленных в табл. 1 или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим CDR3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей HCDR3, перечисленных в табл. 1 или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим CDR1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей LCDR1, перечисленных в табл. 1 или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим CDR2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей LCDR2, перечисленных в табл. 1 или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим CDR3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей LCDR3, перечисленных в табл. 1 или по существу подобную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим парную аминокислотную последовательность HCDR3 и LCDR3 (HCDR3/LCDR3), содержащую любую из аминокислотных последовательностей HCDR3, перечисленных в табл. 1, в паре с любой из аминокислотных последовательностей LCDR3 перечисленных в табл. 1. В соответствии с некоторыми вариантами реализации данное изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим парную аминокислотную последовательность HCDR3/LCDR3, содержащуюся в любом из типовых анти-MUC16 антител, перечисленных в табл. 1.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, пара аминокислотных последовательностей HCDR3/LCDR3 имеет последовательность SEQ ID NO: 24/32 (например, Н1Н8767Р).
Данное изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим набор из шести CDR (то есть HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3) содержащихся в любом из типовых анти-MUC16 антител, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения, набор аминокислотных последовательностей HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2LCDR3 выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 20-22-24-28-30-32 (например, Н1Н8767Р).
- 2 045730
В сходном варианте реализации данное изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим набор из шести CDR (то есть HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1LCDR2-LCDR3), содержащихся в парной аминокислотной последовательности HCVR/LCVR, как определенно любым из типовых анти-MUC16 антител, перечисленных в табл. 1. Например, данное изобретение включает антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие набор аминокислотных последовательностей HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3, содержащийся в паре аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, последовательности SEQ ID NO: 18/26 (например, Н1Н8767Р). Способы и технологии идентификации CDR в аминокислотных последовательностях HCVR и LCVR хорошо известны в данной области техники и могут быть применены для идентификации CDR в указанных аминокислотных последовательностях HCVR и/или LCVR, описанных в данном документе. Типовые соглашения, которые могут быть применены для определения границ CDR, включают, например, определение по Кабату, определение по Чотиа и определение АтМ. В общем случае определение по Кабату основано на вариабельности последовательности, определение по Чотии основано на местоположении структурных петлевых областей, а определение по АтМ является компромиссом между подходами по Кабату и Чотии; см., например, Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Бетесда, штат Мэриленд. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:921-948 (1997); и Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9212 (1989). Публичные базы данных также доступны для идентификации последовательностей CDR в антителе.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим антиMUC16 антитела или их части. Например, данное изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей HCDR1, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCDR1, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей HCDR2, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCDR2, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей HCDR3, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCDR3, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей LCDR1, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCDR1, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей LCDR2, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCDR2, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
- 3 045730
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любую из аминокислотных последовательностей LCDR3, перечисленных в табл. 1; в определенных вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCDR3, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим HCVR, при этом HCVR содержит набор из трех CDR (то есть HCDR1-HCDR2-HCDR3), при этом набор аминокислотных последовательностей HCDR1-HCDR2-HCDR3 является таким, как определено любыми типовыми анти-MUC16 антителами, перечисленными в табл. 1.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим LCVR, при этом LCVR содержит набор из трех CDR (то есть LCDR1-LCDR2-LCDR3), при этом набор аминокислотных последовательностей LCDR1-LCDR2-LCDR3 является таким, как определено любыми типовыми анти-MUC16 антителами, перечисленными в табл. 1.
Данное изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим как HCVR, так и LCVR, при этом HCVR содержит аминокислотную последовательность любой из аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1, и при этом LCVR содержит аминокислотную последовательность любой из аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах реализации данного изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную ей последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% и полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу подобную последовательность, имеющую последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%. В некоторых вариантах реализации данного изобретения в соответствии с этим аспектом изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует HCVR и LCVR, при этом HCVR и LCVR оба получены из того же анти-MUC16 антитела, указанного в табл. 1.
Данное изобретение также относится к рекомбинантным экспрессирующим векторам, способным к экспрессии полипептида, содержащего вариабельный участок тяжелой или легкой цепи анти-MUC16 антитела. Например, данное изобретение включает рекомбинантные экспрессионные векторы, содержащие любую из упомянутых выше молекул нуклеиновой кислоты, то есть молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, как указано в табл. 1. Также в объем данного изобретения включены клетки-хозяева, в которые вводили такие векторы, а также способы получения антител или их частей путем культивирования клеток-хозяев в условиях, позволяющих продуцировать антитела или фрагменты антител, и восстановление антител и фрагментов антител, полученных таким образом.
Данное изобретение включает анти-MUC16 антитела, имеющие модифицированный профиль гликозилирования. В некоторых вариантах реализации данного изобретения модификация для удаления нежелательных сайтов гликозилирования может быть полезна или антитело, лишенное фукозного фрагмента, присутствующего в олигосахаридной цепи, например, для усиления функции антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) (см. Shield et al. (2002) JBC 277:26733). В других применениях, модификация галактозилирования может быть сделана с целью изменения комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ).
В другом аспекте данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей рекомбинантное человеческое антитело или его фрагмент, который специфически связывает MUC16 и фармацевтически приемлемый носитель. В связанном аспекте данное изобретение относится к композиции, которая представляет собой комбинацию анти-MUC16 антитела и второго терапевтического агента. В одном варианте реализации данного изобретения вторым терапевтическим агентом является любой агент, который преимущественно соединяется с анти-MUC16 антителом. Дополнительные комбинированные терапии и комбинированные составы, включающие анти-MUC16 антитела по данному изобретению, описаны в данном документе в другом месте.
В другом аспекте данное изобретение относится к терапевтическим способам для нацеливания на/уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих MUC16 с использованием анти-MUC16 антитела по данному изобретению, в котором терапевтические способы включают введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей анти-MUC16 антитело по данному изобретению субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых случаях анти-MUC16 антитела (или их антигенсвязывающие фрагменты) могут быть использованы для лечения рака (например, рака яичников) или могут быть модифицированы для придания им большей цитотоксичности способами, включая, но не ограничиваясь ими, модифицированные Fc-домены чтобы увеличить АЗКЦ (см., например, Shield et al. (2002) JBC 277: 26733), радиоиммунотерапию, конъюгаты антитело-лекарственное средство или другие способы повышения эффективности абляции опухоли.
- 4 045730
Данное изобретение также включает использование анти-МиС16 антитела по данному изобретению в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства (например, рака), связанных с MUC16-экспрессирующими клетками, или вызванных ими. В одном аспекте данное изобретение относится к соединению, содержащему анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или биспецифичному антителу MUC16xCD3, как описано в данном документе, для применения в медицине. В одном аспекте данное изобретение относится к соединению, содержащему конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), как описано в данном документе, для применения в медицине.
В еще одном аспекте, данное изобретение относится к моноспецифическим анти-MUC16 антителам для диагностических применений, таким как, например, реагенты для визуализации.
В еще одном аспекте данное изобретение относится к терапевтическим способам стимуляции активации Т-клеток с использованием анти-CD3 антитела или антигенсвязывающей части антитела по данному изобретению, причем терапевтические способы включают введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело.
В другом аспекте данное изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывает человеческий муцин 16 (MUC16) с константой равновесия диссоциации связывания (KD) менее чем около 53 нМ, как измерено в анализе поверхностного плазмонного резонанса при 25°С. В еще одном аспекте данное изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывает человеческий MUC16 с периодом диссоциативного полураспада (t1/2), большим чем около 15 минут, как измерено в анализе поверхностного плазмонного резонанса при 25°С.
Данное изобретение также относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту, который конкурирует за связывание с MUC16 человека с эталонным антителом, содержащим пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, как указано в табл. 1. В другом аспекте данное изобретение относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту, который конкурирует за связывание с MUC16 человека с эталонным антителом, содержащим пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранную из группы, состоящей из SEQ iD NO: 2/10; 18/26; 34/42; 50/58, 66/74; 82/90; 98/106; 114/122; 130/138; 146/154; 162/170; 178/186; 194/394; 202/210; 218/226, 234/242; 250/1936; 258/266; 274/1936; 282/290; 298/306; 314/322; 330/338; 346/354; 362/370; и 378/386.
Кроме того, изобретение относится к антителу или антигенсвязывающему фрагменту, причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же эпитопом на MUC16 человека, что и эталонное антитело, содержащее пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, как указано в табл. 1. В другом аспекте антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же эпитопом на MUC16 человека, что и эталонное антитело, содержащее пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2/10; 18/26; 34/42; 50/58, 66/74; 82/90; 98/106; 114/122; 130/138; 146/154; 162/170; 178/186; 194/394; 202/210; 218/226, 234/242; 250/1936; 258/266; 274/1936; 282/290; 298/306; 314/322; 330/338; 346/354; 362/370; и 378/386.
Данное изобретение также относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое связывает MUC16 человека, причем антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит: определяющие комплементарность участки (CDR) вариабельного участка тяжелой цепи (HCVR), имеющего аминокислотную последовательность, указанную в табл. 1; и CDR вариабельного участка легкой цепи (LCVR), имеющего аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1. В другом аспекте выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR тяжелой и легкой цепи пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранной из группы, состоящей из: 2/10; 18/26; 34/42; 50/58, 66/74; 82/90; 98/106; 114/122; 130/138; 146/154; 162/170; 178/186; 194/394; 202/210; 218/226, 234/242; 250/1936; 258/266; 274/1936; 282/290; 298/306; 314/322; 330/338; 346/354; 362/370; и 378/386. В еще одном аспекте выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домены HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 соответственно, выбранные из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4-6-8-12-14-16; 20-22-24-28-30-32; 36-38-40-44-46-48; 52-54-56-60-62-64; 68-70-72-76-78-80; 84-86-88-92-94-96; 100-102-104-108-110-112; 116-118-120-124-12 6-128; 132-134-13 6140-142-144; 148-150-152-156-158-160; 164-166-168-172-174-176; 180-182-184-188-190-192; 196-198-200396-398-400; 204-206-208-212-214-216; 220-222-224-228-230-232; 236-238-240-244-246-248; 252-254-2561938-1940-1942; 260-262-264-268-270-272; 276-278-280-1938-1940-1942; 284-286-288-292-294-296; 300302-304-308-310-312; 316-318-320-324-326-328; 332-334-336-340-342-344; 348-350-352-356-358-360; 364366-368-372-374-376; и 380-382-384-388-390-392.
В другом аспекте данное изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое связывает MUC16 человека, причем антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит: (а) вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 202, 218, 234, 250, 258, 274, 282, 298, 314, 330, 346, 362 и 378; и (b) вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10; 26; 42; 58, 74; 90; 106; 122; 138; 154; 170; 186; 210; 226, 242; 266; 290; 306; 322; 338; 354; 370; 386; 1936 и 394. В дополнительном аспекте выделенное антитело или антигенсвязывающий
- 5 045730 фрагмент по п.10, в котрых антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержат пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2/10; 18/26; 34/42; 50/58, 66/74; 82/90; 98/106; 114/122; 130/138; 146/154; 162/170; 178/186; 194/394; 202/210; 218/226, 234/242; 250/1936; 258/266; 274/1936; 282/290; 298/306; 314/322; 330/338; 346/354; 362/370 и 378/386.
Данное изобретение также относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое связывается с MUC16 человека в эпитопе в диапазоне от остатка 428 до остатка 481 SEQ ID NO: 1902. В некоторых случаях выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент взаимодействует с аминокислотными остатками 428-434, 429-434, 453-467, 459-467, 460-467 и/или 474481 SEQ ID NO: 1902. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент взаимодействует с аминокислотными остатками 428-434, 429-434, 453-467, 459-467, 460-467 и 474-481 SEQ ID NO: 1902. Данное изобретение дополнительно относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывается с MUC16 человека в эпитопе в диапазоне от остатка 126 до остатка 138 SEQ ID NO: 1902. В некоторых случаях выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент взаимодействует с аминокислотными остатками 126-131, 127-131 и/или 132-138 SEQ ID NO: 1902. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент взаимодействует с аминокислотными остатками 12 6-131, 127-131 и 132138 SEQ ID NO: 1902. Данное изобретение, кроме того, относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое связывается с MUC16 человека в эпитопе в диапазоне от остатка 357 до остатка 369 SEQ ID NO: 1902. В некоторых случаях выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент взаимодействует с аминокислотными остатками 357-369, 358-366, 358-369 и/или 361369 SEQ ID NO: 1902. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент взаимодействует с аминокислотными остатками 357-369, 358-366, 358-369 и 361369 SEQ ID NO: 1902. Данное изобретение, кроме того, относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое связывается с MUC16 человека в одном или более из пяти мембранно-проксимальных доменов SEA MUC 16 человека (SEQ ID NO: 1899). Пять мембраннопроксимальных доменов SEA соответствуют остаткам 13791-14451 SEQ ID NO: 1899. В некоторых случаях антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с KD менее чем около 60 нМ, как измерено в анализе поверхностного плазмонного резонанса при 25°С. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается в остатках с 14237 по 14290 SEQ ID NO: 1899. В одном варианте осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR пары HCVR/LCVR, содержащей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 18/26. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается в остатках с 13935 по 13947 SEQ ID NO: 1899. В одном варианте осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR пары HCVR/LCVR, содержащей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 82/858. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается в остатках с 14165 по 14178 SEQ ID NO: 1899. В одном варианте осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR пары HCVR/LCVR, содержащей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 98/170.
В одном аспекте данное изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с одним из нескольких доменов SEA MUC16. В различных вариантах осуществления изобретения, анти-MUC16 антитела или антигенсвязывающие фрагменты связываются с любым одним из нескольких из SEA1, SEA2, SEA3, SEA4, SEA5, SEA6, SEA7, SEA8, SEA9, SEA10, SEA11, SEA12, SEA13, SEA14, SEA15 или SEA16. В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA1 (остатки от 12074 до 12229 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA2 (остатки от 12230 до 12387 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA3 (остатки от 12388 до 12543 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA4 (остатки от 12544 до 12698 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA5 (остатки от 12699 до 12854 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA6 (остатки от 12855 до 13010 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA7 (остатки от 13011 до 13166 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA8 (остатки от 13167 до 13323 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA9 (остатки от 13324 до 13478 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA10 (остатки от 13479 до 13634 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA11 (остатки от 13635 до 13790 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA12 (остатки от 13791 до 13923 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16
- 6 045730 антитело или его фрагмент связывается в SEA13 (остатки от 13924 до 14074 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA14 (остатки от 14075 до 14227 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, αнти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA15 (остатки от 14228 до 14320 SEQ ID NO: 1899). В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его фрагмент связывается в SEA16 (остатки от 14321 до 14464 SEQ ID NO: 1899).
В соответствии с другим аспектом данное изобретение относится к конъюгатам антителолекарственное средство, содержащим анти-MUC16 антитело или антигенсвязывающий фрагмент, и терапевтический агент (например, цитотоксический агент). В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и цитотоксический агент ковалентно связаны через линкер, как обсуждается в настоящем документе. В различных вариантах осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может быть любым из анти-MUC16 антител или фрагментов, описанных в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент выбран из ауристатина, майтансиноида, тубулисина, производного томаймицина, или производного доластатина. В некоторых случаях цитотоксический агент представляет собой ауристатин, выбранный из ММАЕ или MMAF, или майтансиноид, выбранный из DM1 или DM4. В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент представляет собой майтансиноид, имеющий структуру формулы (I) или формулы (II), как обсуждается в настоящем документе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент представляет собой майтансиноид, имеющий структуру:
о сн3
В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент представляет собой майтансиноид, имеющий структуру:
о сн3
В некоторых вариантах осуществления изобретения, конъюгат антитело-лекарственное средство содержит анти-MUC16 антитело или его фрагмент, и
Где « представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, конъюгат антитело-лекарственное средство содержит анти-MUC16 антитело или его фрагмент, и
- 7 045730 где « представляет собой связь с анти-МиС16 антителом или его фрагментом.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, конъюгат антитело-лекарственное средство содержит анти-MUC16 антитело или его фрагмент, и
где < представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, связь контактирует с антителом или его фраг ментом через серную составляющую остатка цистеина.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, конъюгат антитело-лекарственное средство содержит анти-MUC16 антитело или его фрагмент, и
о или
о или их смесь, где г представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, связь контактирует с антителом или его фрагментом через азотную составляющую остатка лизина.
В любом из различных вариантов осуществления конъюгатов антитело-лекарственное средство, описанных выше или в данном документе, конъюгат антитело-лекарственное средство может содержать от 1 до 4 цитотоксических агентов на анти-MUC16 антитело или его фрагмент.
В соответствии с другим аспектом данное изобретение обеспечивает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы (например, антитела), которые связываются с MUC16 и CD3. Такие биспецифичные антигенсвязывающие молекулы также обозначаются в данном документе как биспецифичные молекулы анти-MUC16/анти-CD3, биспецифичные молекулы анти-CD3/анти-MUC16 или бсАт MUC16xCD3. Часть анти-MUC16 анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичной молекулы полезна для нацеливания на клетки (например, опухолевые клетки), которые экспрессируют MUC16 (например, опухоли яичников), а анти-CD3 часть биспецифичной молекулы полезна для активации Т-клеток. Одновременное связывание с MUC16 на опухолевой клетке и CD3 на Т-клетке облегчает направленное уничтожение (лизис клеток) целевой опухолевой клетки, активированной Т-клеткой. Следовательно, биспецифичные молекулы антиMUC16/анти-CD3 по данному изобретению, следовательно, полезны, среди прочего, для лечения заболеваний и расстройств, связанных с или вызываемых MUC16-экспрессирующими опухолями (например, раком яичников).
Биспецифичные антигенсвязывающие молекулы в соответствии с этим аспектом данного изобретения, содержат первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16. Данное изобретение включает биспецифичные молекулы анти-MUC16/αнти-CD3 (например, биспецифичные антитела), в
- 8 045730 которых каждый антигенсвязывающий домен содержит вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), спаренный с вариабельным участком легкой цепи (LCVR). В некоторых иллюстративных вариантах осуществления изобретения, антигенсвязывающий домен анти-CD3 и антигенсвязывающий домен антиMUC16, каждый, содержат разные, отличные HCVR, спаренные с общим LCVR. Например, как показано в примере 3 в данном документе, были сконструированы биспецифичные антитела, содержащие первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, причем первый антигенсвязывающий домен содержит HCVR, полученный из анти-CD3 антитела, спаренный с LCVR, полученный из анти-MUC16 антитела (например, тот же LCVR, который включен в антигенсвязывающий домен антиMUC16); и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, причем второй антигенсвязывающий домен содержит HCVR/LCVR, полученный из анти-MUC16 антитела. Другими словами, в иллюстративных молекулах, описанных в данном документе, спаривание HCVR из антиCD3 антитела с LCVR из анти-MUC16 антитела создает антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3 (но не связывается с MUC16). В таких вариантах осуществления изобретения, первый и второй антигенсвязывающие домены содержат различные HCVR анти-CD3 и анти-MUC16, но имеют общий LCVR анти-MUC16. В других вариантах осуществления изобретения, биспецифичные антигенсвязывающие молекулы содержат различные HCVR анти-CD3 и анти-MUC16, но имеют общий LCVR. Аминокислотная последовательность этого LCVR. показана, например, в SEQ ID NO: 18 90, и аминокислотные последовательности соответствующих CDR (то есть LCDR1-LCDR2-LCDR3) показаны в SEQ ID NO: 1892, 1894 и 1896 соответственно. Генетически модифицированные мыши могут быть использованы для получения полностью человеческих биспецифичных антигенсвязывающих молекул, содержащих две разные тяжелые цепи, которые связаны с идентичной легкой цепью, которая содержит вариабельный домен, полученный из одного из двух различных генных сегментов вариабельного участка легкой цепи человека. Альтернативно, вариабельные тяжелые цепи могут быть спарены с одной общей легкой цепью и экспрессироваться рекомбинантно в клетках-хозяевах. Таким образом, антитела по данному изобретению могут содержать тяжелые цепи иммуноглобулина, связанные с одной перестроенной легкой цепью. В некоторых вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит вариабельный домен, полученный из генного сегмента Vk1-39 человека или генного сегмента Vk3-20. В других вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит вариабельный домен, полученный из генного сегмента Vk1-39 человека, перестроенного с генным сегментом Jk5 человека или генным сегментом Jk1 человека.
Данное изобретение обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит любую из аминокислотных последовательностей HCVR, любую из аминокислотных последовательностей LCVR, любую из пар аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, любую из аминокислотных последовательностей CDR1-CDR2-CDR3 тяжелой цепи или любую из аминокислотных последовательностей CDR1-CDR2-CDR3 легкой цепи, как указано в публикации США 2014/0088295 опубликованной 27 марта 2014 г., и PCT/US2016/044732, поданной 29 июля 2016 г.
Кроме того, данное изобретение обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит любую из аминокислотных последовательностей HCVR, как указано в табл. 16, 18 и 22 в данном документе. Первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, может также содержать любую из аминокислотных последовательностей LCVR, как указано в табл. 1, 16, 19 и 23 в данном документе. Согласно определенным вариантам осуществления изобретения, первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит любую из пар аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, как указано в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе. Данное изобретение также относится к биспецифичным молекулам анти-CD3/анти-MUC16, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит любую из аминокислотных последовательностей CDR1-CDR2-CDR3 тяжелой цепи, как указано в табл. 16, 18, и 22 в данном документе, и/или любой из аминокислотных последовательностей CDR1-CDR2-CDR3 легкой цепи, как указано в табл. 1, 16, 19 и 23 в данном документе.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR) имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 16, 18 и 22 в данном документе, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR) имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1, 6, 19 и 23 в данном документе, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
- 9 045730
Данное изобретение также обеспечивает aHTu-CD3/aHTu-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR и LCVR (HCVR/LCVR), как указано в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит домен CDR3 тяжелой цепи (HCDR3), имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 16, 18 и 22 в настоящем документе, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен CDR3 (LCDR3) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1, 16, 19 и 23 в данном документе, или его по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3 содержит пару аминокислотных последовательностей HCDR3/LCDR3, как указано в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, в которых первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержит домен CDR1 тяжелой цепи (HCDR1), имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 16, 18 и 22 в данном документе, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR2 (HCDR2) тяжелой цепи, имеющий аминокислоту, как указано в табл. 16, 18 и 22, или его по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR3 (HCDR3) тяжелой цепи, имеющий аминокислоту, как указано в табл. 16, 18 и 22, или его по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR1 (LCDR1) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1, 16, 19 и 23 в данном документе, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR2 (LCDR2) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1, 16, 19 и 23 в настоящем документе, или по существу аналогичную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен CDR3 (LCDR3) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1, 16, 19 и 23 в настоящем документе, или по существу аналогичную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Некоторые не ограничивающие, иллюстративные анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению включают в себя первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержащим HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2LCDR3 домены, соответственно, имеющие аминокислотные последовательности, как указано в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе.
Данное изобретение также обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим CD3, содержит определяющие комплементарность участки тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) из вариабельного участка тяжелой цепи (HCVR), содержащего аминокислотную последовательность, как указано в табл. 16, табл. 18, или табл. 22, и определяющие комплементарность участки легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3) из вариабельного участка легкой цепи (LCVR), содержащего аминокислотную последовательность, как указано в табл. 1, табл. 16, табл. 19 или табл. 23.
В другом аспекте данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим CD3, содержит определяющие комплементарность участки тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) из вариабельного участка тяжелой цепи (HCVR), выбранного из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1730, 17 62, 1778, 1786 и 1866, и определяющие комплементарность участки легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3) из вариабельного участка легкой цепи (LCVR), содержащая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
Кроме того, изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим CD3, содержит три определяющих комплементарность участка тяжелой цепи (A1-HCDR1, A1-HCDR2 и A1-HCDR3) и три определяющих комплементарность участка легкой цепи (A1-LCDR1, A1-LCDR2 и A1-LCDR3), причем A1-HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1732, 1764, 1780 1788 и 1868; A1-HCDR2 содержит аминокислотную последовательность,
- 10 045730 выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1734, 1766, 1782, 1790 и 1870; A1-HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1736, 1768, 1784, 17 92 и 1872; A1-LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; A1-LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; и A1-LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32.
В еще одном аспекте, данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим CD3, содержит CDR тяжелой и легкой цепи пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1730/26, 1762/26, 1778/26, 1786/26 и 1866/26.
В другом аспекте данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим CD3, содержит три определяющих комплементарность участка тяжелой цепи (A1-HCDR1, A1-HCDR2 и A1-HCDR3) и три определяющих комплементарность участка легкой цепи (A1-LCDR1, A1-LCDR2 и A1LCDR3), и причем второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывает MUC16 человека, содержит три определяющих комплементарность участка тяжелой цепи A2-HCDR1, A2-HCDR2 и A2-HCDR3) и три определяющих комплементарность участка легкой цепи (A2-LCDR1, A2-LCDR2 и A2LCDR3); причем A1-HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1732, 1764, 1780, 1788 и 1868; A1-HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1734, 1766, 1782, 1790 и 1870; A1-HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1736, 1768, 1784, 1792 и 1872; A1-LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; A1LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; и A1-LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; и причем A2-HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; A2-HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; A2-HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 24; A2-LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; A2-LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; и A2-LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32.
Некоторые не ограничивающие, иллюстративные анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению включают в себя первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3, содержащим тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен каркасных участков, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из FR1 (SEQ ID NO: 1903), FR2 (SEQ ID NO: 1904), FR3 (SEQ ID NO: 1905) и FR4 (SEQ ID NO: 1906).
В нескольких вариантах осуществления изобретения, иллюстративные анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению включают в себя биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим CD3, содержит HCVR, содержащий HCDR1-HCDR2-HCDR3, имеющий аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1907-1908-1909.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержит вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 202, 218, 234, 250, 258, 274, 282, 298, 314, 330, 346, 362 и 378 или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10; 26; 42; 58, 74; 90; 106; 122; 138; 154; 170; 186; 210; 226, 242; 266; 290; 306; 322; 338; 354; 370; 386; 1936; и 394, или его по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR и LCVR (HCVR/LCVR), выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18/26.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные молекулы, в которых второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержит домен CDR3 тяжелой цепи (HCDR3), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 208, 224, 240, 256, 264, 280, 288, 304, 320, 336, 352, 368 и 384, или, по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентич
- 11 045730 ности последовательности; и домен CDR3 (LCDR3) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 216, 232, 248, 272, 296, 312, 328, 344, 360, 376, 392, 400 и 1942, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16 содержит пару аминокислотных последовательностей HCDR3/LCDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24/32.
Данное изобретение также обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, в которых второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержит домен CDR1 тяжелой цепи (HCDR1), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 204, 220, 236, 252, 260, 276, 284, 300, 316, 332, 348, 364 и 380, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR2 (HCDR2) тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 206, 222, 238, 254, 262, 278, 286, 302, 318, 334, 350, 366 и 382, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR3 (HCDR3) тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 208, 224, 240, 256, 264, 280, 304, 320, 336, 352, 368 и 384, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR1 (LCDR1) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SeQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 396, 212, 228, 244, 396, 268, 396, 292, 308, 324, 340, 356, 372, 1938 и 388, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен легкой цепи CDR2 (LCDR2), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 398, 214, 230, 246, 398, 270, 398, 294, 310, 326, 342, 358, 374, 1940 и 390, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен CDR3 (LCDR3) легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 400, 216, 232, 248, 400, 272, 400, 296, 312, 328, 344, 360, 376, 1942 и 392, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Некоторые не ограничивающие, иллюстративные анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению включают в себя второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержащим HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2LCDR3 домены, соответственно, имеющие аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 20-22-24-28-30-32.
В родственном варианте осуществления данное изобретение включает в себя анти-CD3/антиMUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, в которых второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16, содержит CDR домены тяжелой и легкой цепи, содержащиеся в последовательностях вариабельного участка тяжелой и легкой цепи (HCVR/LCVR), выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18/26.
В одном варианте осуществления данное изобретение обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичное антитело, содержащее плечо, связывающее анти-MUC16, которое содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1959, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1960, и плечо, связывающее анти-CD3, которое содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1961, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1960. В другом варианте осуществления данное изобретение обеспечивает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичное антитело, содержащее плечо, связывающее анти-MUC16, которое содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1959, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1960, и плечо, связывающее анти-CD3, которое содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1962, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1960.
В другом аспекте данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, содержащую первый антигенсвязывающий домен, который связывается с CD3 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который связывается с MUC16 человека, в котором второй антигенсвязы
- 12 045730 вающий домен происходит от антитела или антигенсвязывающего фрагмента любого из анти-МиС16 антител по данному изобретению. В дополнительном аспекте данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, содержащую первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с MUC16 человека.
Кроме того, изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, которая связывается с клеткой человека, экспрессирующей CD3 человека, и клеткой яванского макака, экспрессирующей CD3 яванского макака. В другом аспекте биспецифичная антигенсвязывающая молекула связывается с клетками человека, экспрессирующими MUC16 человека.
В другом аспекте данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, которая ингибирует рост опухоли у мышей с иммунной недостаточностью, несущей ксенотрансплантаты рака яичника человека. Данное изобретение, кроме того, относится к биспецифичной антигенсвязывающей молекуле, которая подавляет рост опухолей прижившихся опухолей у мышей с ослабленным иммунитетом, несущих ксенотрансплантаты рака яичника человека.
В другом аспекте данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, содержащую: i) первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с эффекторной клеткой со значением ЕС50 более чем около 4 нМ и, и ii) второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с целевой клеткой опухоли яичника человека со значением ЕС50 менее чем 3 нМ, причем такое значение связывания ЕС50 измеряют в in vitro FACS анализе связывания.
В одном варианте осуществления изобретения, биспецифичная антигенсвязывающая молекула может включать второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с целевой клеткой опухоли яичника со значением ЕС50 менее чем около 2 нМ. В некоторых случаях первый антигенсвязывающий домен специфически связывается с каждым из CD3 человека и CD3 яванского макака со значением ЕС50 более чем около 40 нМ, более чем около 100 нМ, более чем около 200 нМ, более чем около 300 нМ, более чем около 400 нМ, более чем около 500 нМ или более чем около 1 мкМ. В некоторых случаях первый антигенсвязывающий домен специфически связывается с каждым из CD3 человека и CD3 яванского макака со слабым или не измеримым связыванием или аффинностью связывания.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, антигенсвязывающая молекула индуцирует Тклеточное уничтожение опухолевых клеток со значением ЕС50 менее чем около 31 пМ, как измерено в анализе in vitro Т-клеточного уничтожения опухолевых клеток, например, где опухолевые клетки представляют собой клетки OVCAR3.
В некоторых применениях, первый антигенсвязывающий домен связывается с CD3 человека со значением KD более чем около 11 нМ, как измерено в in vitro поверхностно-плазмонном резонансе анализа связывания. В некоторых случаях первый антигенсвязывающий домен связывается с каждым из CD3 человека и CD3 яванского макака со значением KD, более чем около 15 нМ, более чем около 30 нМ, более чем около 60 нМ, более чем около 120 нМ, более чем около 300 нМ или более чем около 500 нМ, как измерено в in vitro поверхностно-плазмонном резонансе анализа связывания.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, анти-CD3 антитела по данному изобретению, антигенсвязывающие фрагменты и их биспецифичные антитела были сделаны путем замены аминокислотных остатков родительского ступенчатым образом на основе различий между последовательностью зародышевой линии и последовательностью родительского антитела.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с MUC16 человека с эталонным антигенсвязывающим белком, содержащим три определяющих комплементарность участка тяжелой цепи (A2-HCDR1, A2-HCDR2 и A2-HCDR3) и три определяющих комплементарность участка легкой цепи (A2-LCDR1, A2-LCDR2 и A2-LCDR3), где A2-HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 0; A2-HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; A2-HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; A2-LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; A2-LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; и A2-LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с MUC16 человека с эталонным антигенсвязывающим белком, содержащим вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с эталонным антигенсвязывающим белком, содержащим три определяющих комплементарность участка тяжелой цепи (A1-HCDR1, A1-HCDR2 и A1-HCDR3) и три определяющих комплементарность участка легкой цепи (A1-LCDR1, A1-LCDR2 и A1-LCDR3), A1-HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1732, 1764, 1780, 1788 и 1868;
- 13 045730
A1-HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1734, 1766, 1782, 1790 и 1870; A1-HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1736, 1768, 1784, 17 92 и 1872; A1-LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; A1-LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; и A1-LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с эталонным антигенсвязывающим белком, содержащим вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1730, 1762, 1778, 1786 и 1866, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, в которой первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 человека с эталонным антигенсвязывающим белком, содержащим вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1730, 1762, 1778, 1786 и 1866, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и в которой второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с MUC16 человека с эталонным антигенсвязывающим белком, содержащим вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
В одном аспекте данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей анtu-MUC16 антигенсвязывающую молекулу или анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичную антигенсвязывающую молекулу и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Данное изобретение дополнительно относится к способу лечения рака у субъекта, включающему введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей анти-MUC16 антигенсвязывающую молекулу или анти-MUC16/антиCD3 биспецифичную антигенсвязывающую молекулу и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. В некоторых вариантах осуществления изобретения, рак выбран из группы, включающей рак, включающий рак яичников, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого, внутрипеченочную холангиокарциному массообразующего типа, аденокарциному шейки матки и аденокарциному желудочного тракта. В некоторых случаях рак представляет собой рак яичников.
В другом аспекте, данное изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим любую из последовательностей HCVR, LCVR или CDR анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичных антигенсвязывающих молекул описанных в данном документе, включая молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие полинуклеотидные последовательности, как указано в табл. 2, 17, 20, 21, 23 и 25 в данном документе, а также молекулы нуклеиновой кислоты, включающие две или более полинуклеотидных последовательностей, как указано в табл. 2, 17, 20, 21, 23 и 2 5 в любой их функциональной комбинации или расположении. Рекомбинантные векторы экспрессии, несущие нуклеиновые кислоты по данному изобретению, и клетки-хозяева, в которые такие векторы были введены, также включены в изобретение, как и способы получения антител путем культивирования клеток-хозяев в условиях, позволяющих продуцировать антитела, и восстанавливать произведенные антитела.
Данное изобретение включает в себя анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, в которых любой из указанных выше антигенсвязывающих доменов, которые специфически связываются с CD3, объединены, соединены или иным образом связаны с любым из вышеупомянутых антигенсвязывающих доменов, которые специфически связываются с MUC16 с образованием биспецифичной антигенсвязывающей молекулы, которая связывается с CD3 и MUC16.
Данное изобретение включает в себя анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, имеющие модифицированную схему гликозилирования. В некоторых применениях, модификация для удаления нежелательных сайтов гликозилирования может быть полезна, или антитело, лишенное фукозного фрагмента, присутствующего в олигосахаридной цепи, например, для увеличения функции антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) (см. Shield et al. (2002) JBC 277:26733). В других применениях, модификация галактозилирования может быть сделана с целью изменения комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ).
В другом аспекте данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, как описано в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В связанном аспекте данное изобретение относится к композиции, которая представляет собой комбинацию анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичной антигенсвязывающей молекулы и второго терапевтического агента. В одном варианте осуществления второй терапевтический агент представляет собой любой агент, который преимущественно комбинируют с антиCD3/анти-MUC16 биспецифичной антигенсвязывающей молекулой. Иллюстративные агенты, которые могут быть преимущественно комбинированы с анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичной антигенсвязы
- 14 045730 вающей молекулой, подробно обсуждаются в другом месте данного документа.
В еще одном аспекте данное изобретение относится к терапевтическим способам для нацеливания/уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих MUC16, с использованием анти-CD3/антиMUC16 биспецифичной антигенсвязывающей молекулы по данному изобретению, в котором терапевтические способы включают введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичную антигенсвязывающую молекулу по данному изобретению, субъекту, нуждающемуся в этом.
Данное изобретение также включает использование анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичной антигенсвязывающей молекулы по данному изобретению в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства связанного или вызванного MUC16-экспрессирующими клетками.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу обнаружения MUC16 в биологическом образце, включающему: получение биологического образца от субъекта, и обнаружение того присутствует ли MUC16 в биологическом образце путем приведения в контакт биологического образца с антиMUC16 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом и выявления связывания между MUC16 и анти-MUC16 антителом или антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых случаях биологический образец представляет собой образец ткани или жидкости, выбранный из плазмы, сыворотки, асцита, яичника, матки, шейки матки, печени, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой или толстой кишки, желчного пузыря, молочной железы, легких, почек, слюны, и слезных желез, или любое их эпителиоидное злокачественное образование. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывает человеческий MUC16 в одном или более из пяти мембранно-проксимальных доменов SEA человеческого MUC16, соответствующих остаткам 1379114451 SEQ ID NO: 1899. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывают человеческий MUC16 в остатках 13810-14451 SEQ ID NO: 1899. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с любым из нескольких SEA1, SeA2, SEA3, SEA4, SEA5, SEA6, SEA7, SEA8, SEA9, SEA10, SEA11, SEA12, SEA13, SEA14, SEA15 или SEA16 MUC16 человека.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу обнаружения MUC16 у пациента, включающему: получение образца ткани от пациента; и обнаружение наличия MUC16 в образце ткани путем приведения в контакт образца ткани с анти-MUC16 антителом и обнаружения связывания между MUC16 и анти-MUC16 антителом. В некоторых случаях способ дополнительно включает диагностику пациента больного раком, когда обнаружено присутствие MUC16 в образце ткани. В одном варианте осуществления изобретения, образец ткани представляет собой ткань яичника. В некоторых случаях анти-MUC16 антитело является специфичным для эпитопа в остатках 12783-13467 SEQ ID NO: 1899. В одном варианте осуществления изобретения, анти-MUC16 антитело содержит CDR пары HCVR/LCVR, содержащей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 202/210. В некоторых случаях анти-МиС16 антитело является специфическим для эпитопа в остатках 1381014451 SEQ ID NO: 1899. В одном варианте осуществления изобретения, анти-МиС16 антитело содержит CDR пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 250/1936, 258/266, 314/322 и 1944/1952.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу обнаружения MUC16 у пациента, включающему: получение образца плазмы от пациента; и обнаружение наличия MUC16 в образце плазмы путем приведения в контакт образца плазмы с анти-МиС16 антителом, содержащим CDR пары HCVR/LCVR, содержащей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 202/210, и обнаружение связывания между MUC16 и анти-МиС16 антитела. В некоторых случаях способ дополнительно включает диагностику пациента больного раком, когда обнаружено присутствие MUC16 в образце плазмы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, способ дополнительно включает введение эффективного количества биспецифичного анти-CD3xMUC16 антитела диагностированному пациенту. В некоторых вариантах осуществления изобретения, способ дополнительно включает введение эффективного количества ADC, содержащего анти-МиС16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и цитотоксического агента для диагностированного пациента.
В другом аспекте данное изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывается с MUC16, причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 202/210, 250/1936, 258/266, 314/322, 82/858, 98/170 и 1944/1952. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домены HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 соответственно, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 204-206-208-212-214-216; 252-254-256-1938-1940-1942; 260-262-264-268-270-272; 316-318-320-324-326-328; 84-86-88-1892-1894-1896; 100-102-104-172-174-176; и 1946-1948-1950-19541956-1958. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит парную аминокислотную последовательность HCVR/LCVR, выбранную из группы, состоящей из 202/210, 250/1936, 258/266, 314/322, 82/858, 98/170, и 1944/1952.
Другие варианты реализации данного изобретения станут очевидными из обзора последующего подробного описания.
- 15 045730
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1-3 иллюстрируют фармакокинетические профили анти-МиС16 х CD3 биспецифичных антител у мышей дикого типа (фиг. 1), гуманизированных CD3 мышей (фиг. 2) или гуманизированных MUC16 х CD3 мышей (фиг. 3).
На фиг. 4 продемонстрированы результаты исследования 1 модели OVCAR-3 (средн. излучение [ф/с/см2/ср] в день 6). Все группы имели одинаковую опухолевую нагрузку, как оценивали с помощью BLI до начала дозирования. Показанные данные представляют собой опухолевую нагрузку, оцененную с помощью BLI на 6 день после имплантации опухоли. Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических t-критериев Манна-Уитни. Не было значительного различия в опухолевой нагрузке между группами.
На фиг. 5 продемонстрированы результаты исследования 1 модели OVCAR-3 (средн. излучение [ф/с/см2/ср] в день 20). BSMUC16/CD3-001 значительно снижает опухолевую нагрузку при 0,1 и 0,5 мг/кг. Мышам NSG, которым имплантировали человеческие Т-клетки, имплантировали клетки OVCAR3/Luc человека. Лечение началось через б дней после имплантации опухоли. Мышей обрабатывали в дни 6, 10, 13, 16 и 21 0,01, 0,1 или 0,5 мг/кг BSMUC16/CD3-001, которые вводили внутрибрюшинно, или обрабатывали контролем CD3-связывания или контролем без связывания (0,5 мг/кг внутрибрюшинно). Показанные данные представляют собой опухолевую нагрузку, оцененную с помощью BLI на 20-й день после имплантации опухоли. Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических t-критериев Манна-Уитни. Лечение с помощью BSMUC16/CD3-001 сравнивалось с контролем без связывания (** р <0,01 для 0,5 мг/кг, # р <0,05 для 0,1 мг/кг BSMUC16/CD3-001).
На фиг. 6 продемонстрированы результаты исследования 1 модели OVCAR-3 (кратность изменения в BLI-доказанных опухолях между D6 и D20). BSMUC16/CD3-001 значительно уменьшает кратность изменения опухолевой нагрузки при 0,01, 0,1 и 0,5 мг/кг. Мышам NSG, которым имплантировали человеческие Т-клетки, имплантировали клетки OVCAR-3/Luc человека. Мышей обрабатывали в дни 6, 10, 13, 16 и 21 0,01, 0,1 или 0,5 мг/кг BSMUC16/CD3-001, которые вводили внутрибрюшинно, или обрабатывали контролем CD3-связывания или контролем без связывания (0,5 мг/кг внутрибрюшинно). Показанные данные представляют собой кратность изменения в опухолевой нагрузке от первого измерения (взятого до начала лечения) и на 20-й день в конце исследования. Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических t-критериев Манна-Уитни. Лечение с помощью BSMUC16/CD3-001 сравнивалось с контролем без связывания (** р <0,01 для 0,5 мг/кг, # р<0,05 для 0,1 мг/кг, $ р<0,05 для 0,01 мг/кг BSMUC16/CD3-001).
На фиг. 7 продемонстрированы результаты исследования 2 модели OVCAR-3 (средн. излучение [ф/с/см2/ср] в день 4). Все группы имели одинаковую опухолевую нагрузку, как оценивали с помощью BLI до начала дозирования. Показанные данные представляют собой опухолевую нагрузку, оцененную с помощью BLI на 4-й день после имплантации опухоли. Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических t-критериев Манна-Уитни. Не было значительного различия в опухолевой нагрузке в день 4 между группами.
На фиг. 8 продемонстрированы результаты исследования 2 модели OVCAR-3 (средн. излучение [ф/с/см2/ср] в день 25). BSMUC16/CD3-005 значительно снижает опухолевую нагрузку при 0,5, 1 и 5 мг/кг. Мышам NSG, которым имплантировали человеческие Т-клетки, имплантировали клетки OVCAR3/Luc человека. Лечение началось через 5 дней после имплантации опухоли. Мышей лечили в дни 5, 8, 12, 15, 19 и 22 с 0,1, 0,5, 1 или 5 мг/кг REGN4019, которые вводили в/в, или вводили контроль CD3связывания или контроль без связывания (5 мг/кг в/в). Показанные данные представляют собой опухолевую нагрузку, оцененную с помощью BLI на 25-й день после имплантации опухоли. Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических t-критериев Манна-Уитни. Лечение с помощью BSMUC16/CD3-005 сравнивалось с контролем без связывания (** р <0,01 для 5 мг/кг, ## р<0,01 для 1 мг/кг, $$ р<0,01 для 0,5 мг/кг BSMUC16/CD3-005).
На фиг. 9 продемонстрированы результаты исследования 2 модели OVCAR-3 (кратность изменения в BLI-доказанных опухолях между D4 и D25). BSMUC16/CD3-005 значительно снижает рост опухоли при 0,5, 1 и 5 мг/кг. Мышам NSG, которым имплантировали человеческие Т-клетки, имплантировали клетки OVCAR-3/Luc человека. Мышей лечили в дни 5, 8, 12, 15, 19 и 22 с 0,1, 0,5, 1 или 5 мг/кг REGN4019, которые вводили в/в, или обрабатывали CD3-связывающим контролем или контролем без связывания (5 мг/кг в/в). Показанные данные представляют собой кратность изменения в опухолевой нагрузке от первого измерения (взятого за день до начала лечения) и на 25-й день в конце исследования Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических t-критериев Манна-Уитни. Лечение с помощью BSMUC16/CD3-005 сравнивалось с контролем без связывания (** р <0,01 для 5 мг/кг, ## р<0,01 для 1 мг/кг, $$ р<0,01 при 0,5 мг/кг REGN4019).
На фиг. 10 приведены результаты модели ID8-VEGF/huMUC16. Размер опухоли на 4 7й день после имплантации BSMUC16/CD3-001 значительно уменьшает рост опухоли в сингенной модели, когда лечение начинается либо в день имплантации, либо через 10 дней после имплантации опухоли Мышам, экспрессирующим CD3 человека вместо мышиного CD3, и химерную молекулу MUC16 имплантировали
- 16 045730 линию опухоли мышиного яичника, экспрессирующую часть человеческого MUC16. Мышам вводили BSMUC16/CD3-001 (100 мкг внутрибрюшинно) в день имплантации или 10 дней после имплантации или вводили CD3-связывающий контроль (100 мкг внутрибрюшинно) в день имплантации. Мышей лечили в дни 0, 4, 7, 10, 13, 17, 20 или 2 4 для групп экстренного лечения и в дни 10, 13, 17, 20 и 24 для группы, где дозирование началось на Д10. Показанные данные представляют собой объем опухоли на 47 день после имплантации. Статистическую значимость определяли с использованием непарных непараметрических tкритериев Манна-Уитни. Лечение с помощью BSMUC16/CD3-001 сравнивалось с контролем связывания CD3 (** р<0,01, начиная с Д0, * р<0,05, начиная с Д10).
Фиг. 11А-11С иллюстрируют результаты анализа проточной цитометрии (или FACS) связывания выбранных биспецифичных антител с РЕО-1, OVCAR3-Luc, клетками Jurkat, и Т-клетками яванского макака. Анализ титрования проводили путем тестирования ряда серийных разведений каждого антитела: либо биспецифичных антител MUC16xCD3 BSMUC16/CD3-001, BSMUC16/CD3-002, либо BSMUC16/CD3-003, либо первого или второго антитела изотипического контроля (не имеющего перекрестной реактивности к CD3 или MUC16).
Фиг. 12А и 12В изображают примеры уничтожения клеток РЕО-1 (фиг. 12А) или OVCAR3-Luc (фиг. 12В) в анализе 48 ч цитотоксичности следующим анти-MUC16 х анти-CD3 лечением в присутствии человеческих РВМС.
Подробное описание сущности изобретения
Перед описанием данного изобретения следует понимать, что данное изобретение не ограничивается конкретными описанными способами и описанными экспериментальными условиями, поскольку такие способы и условия могут варьироваться. Также следует понимать, что употребляемая в данном документе терминология предназначена исключительно для описания конкретных вариантов реализации данного изобретения и не является ограничивающей, так как объем данного изобретения ограничен только прилагаемой формулой изобретения.
Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют то же значение, что обычно понимается специалистом в данной области техники, к которой относится данное изобретение. Используемый в данном документе термин около при использовании в отношении конкретного приведенного числового значения означает, что значение может отличаться от приведенного значения не более чем на 1%. Например, как используется в данном документе, выражение около 100 включает в себя 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).
Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в данном документе, могут быть применены на практике или при испытании данного изобретения, теперь описаны предпочтительные способы и материалы. Все патенты, заявки и не патентные публикации, упомянутые в этом описании, включены в данный документ путем ссылки во всей их полноте.
Определения
Выражение CD3, используемое в данном документе, относится к антигену, который экспрессируется на Т-клетках в составе мультимолекулярного Т-клеточного рецептора (TCR), и который состоит из гомодимера или гетеродимера, образованного из ассоциации двух из четырех цепей рецептора: CD3эпсилон, CD3-дельта, CD3-зета и CD3-гамма. CD3-эпсилон человека содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18 97; CD3-дельта человека содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1898. Все ссылки на белки, полипептиды и фрагменты белка в настоящем документе предназначены для ссылки на человеческую версию соответствующего белка, полипептида или фрагмента белка, если явно не указано, что он относится к виду, отличному от человека. Таким образом, выражение CD3 означает CD3 человека, если не указано, что он относится к нечеловеческому виду, например, CD3 мыши, CD3 обезьяны и т.д.
Используемый в данном документе термин антитело, которое связывается с CD3 или анти-CD3 антитело включает в себя антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически распознают одну CD3 субъединицу (например, эпсилон, дельта, гамма или зета), а также антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически распознают димерный комплекс двух субъединиц CD3 (например, димеры гамма/эпсилон, дельта/эпсилон и зета/зета CD3). Антитела и антигенсвязывающие фрагменты по данному изобретению могут связывать растворимый CD3 и/или экспрессируемый на клеточной поверхности CD3. Растворимый CD3 включает природные белки CD3, а также варианты рекомбинантных белков CD3, такие как, например, мономерные и димерные конструкты CD3, которые не имеют трансмембранного домена или иным образом не связаны с мембраной клетки.
Как используется в данном документе, выражение CD3, экспрессируемый на поверхности клеток означает один или более CD3 белка(ов), который/которые экспрессированы на поверхности клетки in vitro или in vivo таким образом, что по меньшей мере часть белка CD3 экспонируется на внеклеточной стороне клеточной мембраны и доступна для антигенсвязывающей части антитела. CD3, экспрессируемый на клеточной поверхности включает в себя белки CD3, содержащиеся в контексте функционального Т-клеточного рецептора в мембране клетки. Выражение CD3, экспрессируемый на клеточной поверхности включает белок CD3, экспрессируемый как часть гомодимера или гетеродимера на поверхности клетки (например, димеры гамма/эпсилон, дельта/эпсилон и зета/зета CD3). Выражение CD3, экс
- 17 045730 прессируемый на клеточной поверхности также включает цепь CD3 (например, CD3-эпсилон, CD3дельта или CD3-гамма), которая экспрессируется сама по себе, без других типов цепи CD3, на поверхности клетки. CD3, экспрессируемый на клеточной поверхности может включать или состоять из белка CD3, экспрессируемого на поверхности клетки, которая обычно экспрессирует белок CD3. Альтернативно, CD3, экспрессируемый на клеточной поверхности может включать или состоять из белка CD3, экспрессируемого на поверхности клетки, которая обычно не экспрессирует человеческий CD3 на своей поверхности, но была сконструирована искусственно для экспрессии CD3 на ее поверхности.
Выражение MUC16, используемое в данном документе, относится к муцину 16. MUC16 представляет собой одиночный трансмембранный домен сильно гликозилированного интегрального мембранного гликопротеина, высоко экспрессирующийся при раке яичников. Аминокислотная последовательность человеческого MUC16 приведена в SEQ ID NO: 1899.
Используемый в данном документе термин антитело, которое связывает MUC16 или антиMUC16 антитело включает в себя антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически распознают MUC16.
Термин антигенсвязывающая молекула включает в себя антитела и антигенсвязывающие фрагменты антител, в том числе, например, биспецифичные антитела.
Термин антитело, используемый в данном документе, означает любую антигенсвязывающую молекулу или молекулярный комплекс, содержащий по меньшей мере один участок, определяющий комплементарность (CDR), который специфически связывается с или взаимодействует с конкретным антигеном (например, MUC16 или CD3). Термин антитело включает молекулы иммуноглобулина, содержащие четыре полипептидные цепи, две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными связями, а также их мультимеры (например, IgM). Каждая тяжелая цепь содержит вариабельный участок тяжелой цепи (сокращенно обозначенный в данном документе как HCVR или VH) и константный участок тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи содержит три домена: CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельный участок легкой цепи (сокращенно обозначенный в данном документе как LCVR или VL) и константный участок легкой цепи (CL). Константный участок легкой цепи содержит один домен (CL1). Участки VH и VL могут быть далее подразделены на участки гипервариабельности, которые называются участками, определяющими комплементарность (CDR), которые чередуются с более консервативными участками, называемыми каркасными участками (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В различных вариантах осуществления изобретения, FR анти-MUC16 антитела или анти-CD3 антитела (или их антигенсвязывающей части) могут быть идентичны последовательностям зародышевой линии человека, или могут быть природно или искусственно модифицированы. Консенсусная аминокислотная последовательность может быть определена на основе параллельного анализа двух или более CDR.
Термин антитело, используемый в данном документе, также включает антигенсвязывающие фрагменты полных молекул антител. Термины антигенсвязывающая часть антитела, антигенсвязывающий фрагмент антитела и тому подобное, как используется в данном документе, включают в себя любой встречающийся в природе, получаемый ферментативным путем, синтетический или генетически модифицированный полипептид или гликопротеин, который специфически связывает антиген с целью образования комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из полноразмерных молекул антител с применением любых подходящих стандартных методов, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантные методы генетической инженерии, включающие манипулирование и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и необязательно константные домены антитела. Такая ДНК известна и/или легко доступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (включая, например, библиотеки фаговых антител), или может быть синтезирована. ДНК может быть секвенирована и обработана химически или с применением методов молекулярной биологии, например, для организации одного или более вариабельных и/или константных доменов в подходящую конфигурацию или для введения кодонов, создания остатков цистеина, модификации, добавления или удаления аминокислот и тому подобного.
Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) фрагменты Fab; (ii) фрагменты F(ab')2; (iii) фрагменты Fd; (iv) фрагменты Fv; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) фрагменты дАт; и (vii) минимальные единицы распознавания, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельный участок антитела (например, выделенный участок, определяющий комплементарность (CDR), такой как пептид CDR3) или пептид с ограниченной конформационной свободой FR3-CDR3-FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфические антитела, однодоменные антитела, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, миниантитела, нанотела (например, моновалентные нанотела, двухвалентные нанотела и тому подобное), иммунофармацевтические средства на основе модульного белка малого размера (SMIP) и вариабельные домены IgNAR акулы, также охватываются выражением антигенсвязывающий фрагмент, как применяется в данном документе.
Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно содержит по меньшей мере один вариабельный
- 18 045730 домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или аминокислотный состав и, как правило, содержать по меньшей мере один CDR, который находится рядом или в рамке считывания с одной или более последовательностями каркаса. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих домен VH, ассоциированный с доменом VL, домены VH и VL могут быть расположены относительно друг друга в любом подходящем порядке. Например, вариабельный участок может быть димерным и содержать димеры VH-VH, VH-VL или VL-VL. В альтернативном варианте, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен VH или VL.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный с по меньшей мере одним константным доменом. Неограничивающие иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые могут быть обнаружены в антигенсвязывающем фрагменте антитела по данному изобретению, включают: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) Vh-Ch2-Ch3; (vii) Vh-Cl; (viii) Vl-Ch1; (ix) Vl-Ch2; (x) Vl-Ch3; (xi) Vl-Ch1-Ch2; (xii) Vl-Ch1-Ch2-Ch3; (xiii) Vl-Ch2-Ch3; и (xiv) VL-CL. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любую из приведенных выше типовых конфигураций, вариабельные и константные домены могут быть либо напрямую связаны друг с другом, либо могут быть связаны полноразмерным или частичным шарнирным, или линкерным участком. Шарнирный участок может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, что приводит к гибкой или полугибкой связи между соседними вариабельными и/или константными доменами в одной молекуле полипептида. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела по данному изобретению может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) любой из конфигураций вариабельных и константных доменов, перечисленных выше, в нековалентной связи друг с другом и/или с одним или более мономерными доменами VH или VL (например, дисульфидной связью(ами)).
Как и в случае полных молекул антител, антигенсвязывающие фрагменты могут быть моноспецифичными или мультиспецифичными (например, биспецифичными). Мультиспецифичный антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно будет содержать по меньшей мере два разных вариабельных домена, при этом каждый вариабельный домен способен специфически связываться с отдельным антигеном или с другим эпитопом на том же самом антигене. Любой формат мультиспецифичных антител, включая описанные в данном документе типовые биспецифичные форматы антител, может быть адаптирован для применения в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела по данному изобретению с применением обычных методов, доступных в данной области техники.
Антитела согласно данному изобретению могут функционировать посредством комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ) или антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (АЗКЦ). Комплементзависимая цитотоксичность (КЗЦ) относится к лизису антиген-экспрессирующих клеток антителом по данному изобретению в присутствии комплемента. Антитело-зависимая клеточноопосредованная цитотоксичность (АЗКЦ) относится к клеточно-опосредованной реакции, в которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют Fc-рецепторы (FcR) (например, клетки натуральные киллеры (НК), нейтрофилы и макрофаги), распознают связанные антитела на клеткемишени и тем самым приводят к лизису клетки-мишени. КЗЦ и АЗКЦ могут быть измерены с использованием анализов, которые хорошо известны и доступны в данной области. (См., например, патенты США № 5500362 и 5821337 и Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (США) 95:652-656). Константный участок антитела важен для способности антитела фиксировать комплемент и опосредовать клеточнозависимую цитотоксичность. Таким образом, изотип антитела может быть выбран на основе того, желательно ли для антитела опосредовать цитотоксичность.
В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, анти-MUC16 моноспецифичные антитела или анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичные антитела по данному изобретению представляют собой человеческие антитела. Применяемый в данном документе термин человеческое антитело предполагает антитела, имеющие вариабельные и константные участки, полученные из последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Человеческие антитела по данному изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулина человеческой зародышевой линии (например, мутации, вводимые случайным или сайт специфическим мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo), например, в CDR и, в частности, CDR3. Однако термин человеческое антитело, как применяется в данном документе, не предназначен для включения антител, в котором последовательности CDR, происходящие из зародышевой линии других видов млекопитающих, таких как мышь, были присоединены к каркасным последовательностям человека.
Антитела по данному изобретению могут, в некоторых вариантах осуществления изобретения, будут рекомбинантными человеческими антителами. Термин рекомбинантное человеческое антитело, как используется в данном документе, предназначен для включения всех человеческих антител, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантными способами, такими как антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессирующего вектора, трансфицированного в клетку-хозяина (описано дополнительно ниже), антитела, выделенные из рекомбинантной, комбинаторной библиотеки антител человека (описанной дополнительно ниже), антитела, выделенные из животного
- 19 045730 (например, мыши), которое трансгенно для генов человеческого иммуноглобулина (см., например, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295), или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любым другим способом, который включает в себя сплайсинг последовательностей гена иммуноглобулина человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные и константные участки, полученные из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Однако в некоторых вариантах осуществления изобретения, такие рекомбинантные человеческие антитела подвергаются мутагенезу in vitro (или, когда используется трансгенное для последовательностей человеческих Ig животное, соматическому мутагенезу in vivo) и, таким образом, аминокислотные последовательности участков VH и VL рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и получены из последовательностей VH и VL зародышевой линии человека и связаны с ними, в естественных условиях не могут существовать в репертуаре зародышевой линии человеческого антитела in vivo.
Человеческие антитела могут существовать в двух формах, которые связаны с шарнирной гетерогенностью. В одной форме молекула иммуноглобулина содержит стабильный четырехцепочечный конструкт приблизительно 150-160 кДа, в которой димеры удерживаются вместе межцепочечной дисульфидной связью тяжелой цепи. Во второй форме димеры не связаны через межцепочечные дисульфидные связи, и образуется молекула около 75-80 кДа, состоящая из ковалентно связанных легкой и тяжелой цепи (полуантитела). Эти формы чрезвычайно трудно разделить, даже после аффинной очистки.
Частота появления второй формы в различных изотипах интактных IgG обусловлено, но не ограничиваясь этим, структурными различиями, связанными с шарнирным участком изотипа антитела. Одна аминокислотная замена в шарнирном участке шарнира человеческого IgG4 может значительно уменьшить появление второй формы (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105) до уровней, обычно наблюдаемых с использованием шарнира человеческого IgG1. Данное изобретение охватывает антитела, имеющие одну или более мутаций в шарнире, CH2 или CH3 участке, которые могут быть желательны, например, при производстве, для улучшения выхода желаемой формы антитела.
Антитела по данному изобретению могут быть выделенными антителами. Выделенное антитело, как используется в данном документе, означает антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено по меньшей мере из одного компонента его естественной среды. Например, антитело, которое было отделено или удалено по меньшей мере из одного компонента организма, или из ткани, или клетки, в которой антитело существует в природе или продуцируется естественным путем, является выделенным антителом для целей данного изобретения. Выделенное антитело также включает антитело in situ в рекомбинантной клетке. Выделенные антитела представляют собой антитела, которые были подвергнуты по меньшей мере одной стадии очистки или выделения. Согласно определенным вариантам осуществления изобретения, выделенное антитело может быть по существу не содержащим другого клеточного материала и/или химических веществ.
Данное изобретение также включает в себя антитела с одним плечом, которые связываются MUC16. Используемый в данном документе термин антитело с одним плечом означает антигенсвязывающую молекулу, содержащую тяжелую цепь одного антитела и легкую цепь одного антитела. Антитела с одним плечом по данному изобретению могут содержать любую из аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR или CDR, как указано в табл. 1.
Ahtu-MUC16 или анти-MUC16/анти-CD3 антитела, описанные в данном документе, могут содержать одну или более аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных участках и/или участках CDR вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых были получены антитела. Такие мутации могут быть легко обнаружены путем сравнения описанных в данном документе аминокислотных последовательностей с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из баз данных общедоступных антител. Данное изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые получены из любой из аминокислотных последовательностей, описанных в данном документе, при этом одна или более аминокислот в одном или более каркасных участках и/или участках CDR мутированы с соответствующим остатком(ами) последовательности зародышевой линии, из которой было получено антитело, или с соответствующем остатком(ами) другой последовательности зародышевой линии человека или с консервативной аминокислотной заменой соответствующего зародышевого остатка(ов) (такие изменения последовательности упоминаются в данном документе совместно как зародышевые мутации). Специалист в данной области техники, начиная с описанных в данном документе последовательностей вариабельного участка тяжелой и легкой цепей, может легко продуцировать многочисленные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или более отдельных зародышевых мутаций или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления изобретения все каркасные остатки и/или остатки CDR в доменах VH и/или VL мутируют обратно к остаткам, обнаруженным в исходной последовательности зародышевой линии, из которой было получено антитело. В других вариантах осуществления изобретения только определенные остатки мутируют обратно к исходной последовательности зародышевой линии, например, только мутированные остатки, обнаруженные в первых 8 аминокислотах FR1 или в последних 8 аминокислотах FR4, или только мутированные остатки, обнаруженные в CDR1, CDR2 или
- 20 045730
CDR3. В других вариантах осуществления изобретения один или более каркасный остаток(ов) и/или остаток(ки) CDR мутируют с соответствующим остатком(ами) другой последовательности зародышевой линии (то есть последовательностью зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой антитело было изначально получено). Кроме того, антитела по данному изобретению могут содержать любую комбинацию двух или более мутаций зародышевой линии в рамках каркасных участков и/или участков CDR, например, при этом определенные отдельные остатки мутируются к соответствующему остатку определенной последовательности зародышевой линии, в то время как определенные другие остатки, которые отличаются от исходной последовательности зародышевой линии сохраняются или мутируются с соответствующим остатком другой последовательности зародышевой линии. После получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или более мутаций зародышевой линии, могут быть легко протестированы на одно или более желательных свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, улучшенное связывание (например, измеренное титрованием связывания клеток или связыванием FACS) или аффинность связывания, улучшенные или усиленные антагонистические или агонистические биологические свойства (в зависимости от обстоятельств), уменьшенную иммуногенность и тому подобное. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные с помощью этого общего способа, охватываются данным изобретением.
Данное изобретение также включает анти-MUC16 или анти-MUC16/анти-CD3 антитела, содержащие варианты любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, описанных в данном документе, имеющих одну или более консервативных замен. Например, данное изобретение включает анти-MUC16 или анти-MUC16/анти-CD3 антитела, имеющие аминокислотные последовательности HCVR, LCVR и/или CDR с, например, 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и тому подобное консервативных аминокислотных замен по отношению к любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в табл. 1 в данном документе или в соответствии с описанием в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе.
Термин эпитоп относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим сайтом в вариабельном участке молекулы антитела, известной как паратоп. Один антиген может иметь более одного эпитопа. Таким образом, различные антитела могут связываться с различными областями на антигене и могут иметь различные биологические эффекты. Эпитопы могут быть конформационными или линейными. Конформационный эпитоп продуцируется пространственно сопоставленными аминокислотами из разных сегментов линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп представляет собой эпитоп, продуцируемый соседними аминокислотными остатками в полипептидной цепи. В определенных обстоятельствах эпитоп может включать фрагменты сахаридов, фосфорильных групп или сульфонильных групп на антигене.
Термин существенная идентичность или по существу идентичный, когда речь идет о нуклеиновой кислоте или ее фрагменте, указывает, что при оптимальном выравнивании с соответствующими нуклеотидными вставками или делециями с другой нуклеиновой кислотой (или ее комплементарной цепью) присутствует идентичность нуклеотидной последовательности по меньшей мере, в количестве около 95% и более предпочтительно по меньшей мере около 96%, 97%, 98% или 99% нуклеотидных оснований, как измерено любым известным алгоритмом идентичности последовательностей, таким как FASTA, BLAST или Gap, как обсуждается ниже. Молекула нуклеиновой кислоты, имеющая существенную идентичность с эталонной молекулой нуклеиновой кислоты, в некоторых случаях может кодировать полипептид, имеющий такую же или по существу подобную аминокислотную последовательность, что и полипептид, кодируемый эталонной молекулой нуклеиновой кислоты.
Применительно к полипептидам термин существенное сходство или по существу аналогичный означает, что две последовательности пептидов при оптимальном выравнивании, например с помощью программ GAP или BESTFIT с применением стандартных штрафов за открытие гэпа, имеют последовательность идентичную на по меньшей мере 95%, еще более предпочтительно, последовательность идентичную на по меньшей мере 98% или 99%. Предпочтительно, положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами. Консервативная замена аминокислоты представляет собой аминокислотную замену, в которой аминокислотный остаток замещен другим аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь (R-группу) с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В общем, консервативная аминокислотная замена не будет существенно изменять функциональные свойства белка. В случаях, когда две или более аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными заменами, процентная идентичность последовательности или степень сходства могут быть скорректированы в большую сторону, чтобы исправить консервативный характер замены. Средства для осуществления этой корректировки хорошо известны специалистам в данной области техники; см., например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331, включенной в данный документ в качестве ссылки. Примеры групп аминокислот с боковыми цепями с аналогичными химическими свойствами включают: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатически-гидроксильные боковые цепи: серин и треонин; 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислотные боко
- 21 045730 вые цепи: аспартат и глутамат и 7) серосодержащие боковые цепи - цистеин и метионин. Предпочтительными группами консервативных аминокислотных замен являются: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. В альтернативном варианте, консервативная замена представляет собой любое изменение, имеющее положительное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ250, описанной в Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445, включенной в данный документ в качестве ссылки. Умеренно консервативной заменой является любое изменение, имеющее неотрицательное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ250.
Сходство последовательностей для полипептидов, которые также упоминаются как идентичность последовательности, как правило, измеряются с помощью программного обеспечения для анализа последовательностей. Программное обеспечение для анализа белка подбирает аналогичные последовательности, применяя измерения сходства, присвоенные различным заменам, делециям и другим модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение GCG содержит такие программы, как Gap и Bestfit, которые могут применяться с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательности или идентичности последовательности между родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды из разных видов организмов или между белком дикого типа и его мутеином; см., например, GCG версии 6.1. Полипептидные последовательности также могут сравниваться, используя FASTA со стандартными или рекомендованными параметрами; программа в GCG версии 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает идентичность выравнивания и процент последовательности областей наилучшего перекрытия между запрашиваемой последовательностью и последовательностью поиска (Pearson (2000 год) выше). Другим предпочтительным алгоритмом при сравнении последовательности по данному изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей от разных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно BLASTP или TBLASTN, с применением параметров по умолчанию; см., например, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-402, каждый из которых включен в данный документ в качестве ссылки.
Мутации зародышевой линии.
Ahtu-CD3 антитела, описанные в данном документе, содержат одну или более аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных и/или CDR-участках вариабельных доменов тяжелой цепи по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых были получены антитела.
Данное изобретение также включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые получены из любой из аминокислотных последовательностей, описанных в данном документе, при этом одна или более аминокислот в одном или более каркасных участках и/или участках CDR мутированы с соответствующим остатком(ами) последовательности зародышевой линии, из которой было получено антитело, или с соответствующем остатком(ами) другой последовательности зародышевой линии человека или с консервативной аминокислотной заменой соответствующего зародышевого остатка(ов) (такие изменения последовательности упоминаются в данном документе совместно как зародышевые мутации) и имеющие слабое или не обнаруживаемое связывание с антигеном CD3. Несколько таких типичных антител, которые распознают CD3, описаны в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе.
Кроме того, антитела по данному изобретению могут содержать любую комбинацию двух или более мутаций зародышевой линии в рамках каркасных участков и/или участков CDR, например, при этом определенные отдельные остатки мутируются к соответствующему остатку определенной последовательности зародышевой линии, в то время как определенные другие остатки, которые отличаются от исходной последовательности зародышевой линии сохраняются или мутируются с соответствующим остатком другой последовательности зародышевой линии. После получения антитела и антигенсвязывающих фрагментов, которые содержат одну или более мутаций зародышевой линии, можно тестировать на одно или более желаемых свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, слабое или пониженное связывание или аффинность связывания, улучшенные или увеличенные фармакокинетические свойства, пониженная иммуногенность и т.д. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные этим общим способом с учетом руководства по данному изобретению, включены в данное изобретение.
Данное изобретение также включает анти-CD3 антитела, содержащие варианты любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, описанных в данном документе, имеющих одну или более консервативных замен. Например, данное изобретение включает анти-CD3 антитела, имеющие аминокислотные последовательности HCVR, LCVR и/или CDR с, например, 10 или менее, 8 или менее, б или менее, 4 или менее и тому подобное консервативных аминокислотных замен по отношению к любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в табл. 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе. Антитела и биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению содержат одну или более аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных и/или CDR-участках вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых индивидуальные антигенсвязывающие домены были получены при сохранении или улучшении желаемого слабого или не детектируемого свя
- 22 045730 зывания с антигеном CD3. Консервативная замена аминокислоты представляет собой аминокислотную замену, в которой аминокислотный остаток замещен другим аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь (R-группу) с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В целом, консервативная аминокислотная замена не будет существенно изменять функциональные свойства белка, то есть аминокислотная замена поддерживает или улучшает желаемую слабую или не обнаруживаемое связывание или аффинность связывания в случае анти-CD3 связывающих молекул. Примеры групп аминокислот с боковыми цепями с аналогичными химическими свойствами включают: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатическигидроксильные боковые цепи: серин и треонин; 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислотные боковые цепи: аспартат и глутамат и 7) серосодержащие боковые цепи - цистеин и метионин. Предпочтительными группами консервативных аминокислотных замен являются: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутаматаспартат и аспарагин-глутамин. В альтернативном варианте, консервативная замена представляет собой любое изменение, имеющее положительное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ250, описанной в Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445. Умеренно консервативной заменой является любое изменение, имеющее неотрицательное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ250.
Данное изобретение также включает антигенсвязывающие молекулы, содержащие антигенсвязывающий домен с HCVR и/или аминокислотной последовательностью CDR, которая по существу идентична любой из HCVR и/или CDR аминокислотных последовательностей, описанных в данном документе, при сохранении или улучшении желаемой слабой аффинности к антигену CD3. Термин существенная идентичность или по существу идентичный, когда он относится к аминокислотной последовательности, означает, что две аминокислотные последовательности, когда они оптимально выровнены, например, с помощью программ GAP или BESTFIT, использующих веса гэпов по умолчанию, имеют общую по меньшей мере 95% идентичность последовательности, еще более предпочтительно по меньшей мере 98% или 99% идентичности последовательности. Предпочтительно, положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами. В случаях, когда две или более аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными заменами, процентная идентичность последовательности или степень сходства могут быть скорректированы в большую сторону, чтобы исправить консервативный характер замены. Средства для осуществления этой корректировки хорошо известны специалистам в данной области техники; см., например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331.
Сходство последовательностей для полипептидов, которое также называют идентичностью последовательностей, обычно измеряют с использованием программного обеспечения для анализа последовательностей.152 Программное обеспечение для анализа белка подбирает аналогичные последовательности, применяя измерения сходства, присвоенные различным заменам, делециям и другим модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение GCG содержит такие программы, как Gap и Bestfit, которые могут применяться с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательности или идентичности последовательности между родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды из разных видов организмов или между белком дикого типа и его мутеином; см., например, GCG версии 6.1. Полипептидные последовательности также могут сравниваться, используя FASTA со стандартными или рекомендованными параметрами; программа в GCG версии 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает идентичность выравнивания и процент последовательности областей наилучшего перекрытия между запрашиваемой последовательностью и последовательностью поиска (Pearson (2000 год) выше). Другим предпочтительным алгоритмом при сравнении последовательности по данному изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей от разных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно BLASTP или TBLASTN, с применением параметров по умолчанию; см., например, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-402.
После того, как получены его антигенсвязывающие домены, которые содержат один или более зародышевых мутации были протестированы на пониженное связывание или аффинность связывания с использованием одного или более анализов in vitro. Хотя антитела, которые распознают конкретный антиген, обычно подвергают скринингу по назначению путем тестирования на высокое (то есть сильную) связывание или аффинность связывания с антигеном, антитела по данному изобретению демонстрируют слабое связывание или не обнаруживают связывания. Биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие один или более антигенсвязывающих доменов, полученных таким общим способом, также включены в данное изобретение и, как было обнаружено, являются предпочтительными в качестве терапии опухолей, обусловленной авидностью.
Неожиданные преимущества, например, улучшенные фармакокинетические свойства и низкая токсичность для пациента могут быть реализованы из способов, описанных в данном документе.
- 23 045730
Связывающие свойства антител.
Как использовано в данном документе, термин связывание в контексте связывания антитела, иммуноглобулин, антигенсвязывающий фрагмент, или Fc-содержащий белок, либо, например, заранее определенный антиген, такой как белок клеточной поверхности или его фрагмент, обычно относится к взаимодействию или ассоциации между минимумом двух объектов или молекулярных структур, таким как взаимодействие антитело-антиген.
Например, аффинность связывания, как правило, соответствует значению KD около 10-7 М или менее, например, около 10-8 М или менее, например около 10-9 М или менее, когда определяется, например, с помощью технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в приборе BIAcore 3000 с использованием антигена в качестве лиганда и антитела, Ig, антителосвязывающего фрагмента или Fcсодержащего белка в качестве аналита (или антилиганда). Клеточные стратегии связывания, такие как флуоресцентно-активируемая сортировка клеток (FACS), также обычно используются, и данные FACS хорошо коррелируют с другими способами, такими как конкурентное связывание радиолиганда и SPR (Benedict, CA, J. Immunol Methods. 1997, 201 (2): 223-31; Geuijen, CA, et al. J Immunol Methods. 2005, 302 (1-2): 68-77).
Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий белок по данному изобретению связывается с заранее определенным антигеном или молекулой клеточной поверхности (рецептора), имеющего сродство, соответствующее значению KD, которая по меньшей мере в десять раз ниже, чем его сродство к связыванию с неспецифическим антигеном (например, BSA, казеин). В соответствии с данным изобретением аффинность антитела, соответствующего значению KD, которое равно или менее чем в десять раз меньше, чем у неспецифического антигена, можно рассматривать как не обнаружимое связывание, однако такое антитело может быть спарено со вторым антигенсвязывающим плечом для получения биспецифичного антитела по данному изобретению.
Термин KD (M) относится к диссоциации равновесной константы конкретного взаимодействия антиген-антитело, или диссоциации равновесной константы антитела или антителосвязывающего фрагмента связывания с антигеном. Существует обратная зависимость между KD и аффинностью связывания, поэтому чем меньше значение KD, тем выше, то есть сильнее, аффинность. Таким образом, термины более высокая аффинность или более сильная аффинность относятся к более высокой способности образовывать взаимодействие и, следовательно, к меньшему значению KD, и наоборот, термины более низкая аффинность или более слабая аффинность относятся к более низкой способности образовывать взаимодействие и, следовательно, большему значению KD. В некоторых обстоятельствах более высокая аффинность связывания (или KD) конкретной молекулы (например, антитела) с ее интерактивной молекулой-партнером (например, антигеном X) по сравнению с аффинностью связывания молекулы (например, антитела) с другой интерактивной молекулой-партнером (например, антигеном Y) может быть выражена как отношение связывания, определяемое путем деления большего значения KD (более низкая или более слабая аффинность) на меньшее значение KD (более высокая или более сильная аффинность), например, выраженная как 5-кратная или 10-кратная большая аффинность связывания, в зависимости от обстоятельств.
Термин Kd (с -1 или 1/с) относится к константе скорости диссоциации конкретного взаимодействия антиген-антитело, или константы скорости диссоциации антитела или антителосвязывающего фрагмента. Указанное значение также называется значением kf.
Термин ka (M-1 х сек-1 или 1/М) относится к константе скорости ассоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген, или константе скорости ассоциации антитела или антителосвязывающего фрагмента.
Термин Ka (М-1 или 1/М), относится к ассоциации константы равновесия конкретного взаимодействия антитело-антиген, или ассоциации константы равновесия антитела или антителосвязывающего фрагмента. Константа равновесия ассоциации получается путем деления ka на kd.
Термин ЕС50 или ЕС50 относится к половине максимальной эффективной концентрации, которая включает в себя концентрацию антитела, которое индуцирует ответ на полпути между базовой линией и максимумом после того, как указано время воздействия. ЕС50 по существу представляет собой концентрацию антитела, при которой наблюдается 50% его максимального эффекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения, значение ЕС50 равно концентрации антитела по данному изобретению, которая дает половинное максимальное связывание с клетками, экспрессирующими CD3 или антигена, ассоциированного с опухолью, как определено, например, с помощью анализа связывания FACS. Таким образом, пониженное или более слабое связывание наблюдается при увеличении ЕС50 или половине значения максимальной эффективной концентрации.
В одном варианте осуществления изобретения, уменьшение связывания может быть определено как увеличение концентрации ЕС50 антитела, которое дает возможность связывания с полумаксимальным количеством клеток-мишеней.
В другом варианте осуществления изобретения, значение ЕС50 представляет собой концентрацию антитела по данному изобретению, которое вызывает половину максимального истощения клетокмишеней с помощью Т-клеточной цитотоксической активности. Таким образом, повышенная цитотокси
- 24 045730 ческая активность (например, опосредованная Т-клетками гибель опухолевых клеток) наблюдается при сниженном значении ЕС50 или половине значения максимальной эффективной концентрации.
Биспецифичные антигенсвязывающие молекулы.
Антитела по данному изобретению могут быть моноспецифичными, биспецифичными или мультиспецифичными.
Мультиспецифичные антитела могут быть специфичными для разных эпитопов одного целевого полипептида или могут содержать антигенсвязывающие домены, специфичные для более чем одного целевого полипептида; см., например, Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244. Моноспецифичные анти-MUC16 антитела или биспецифичные антиMUC16/анти-CD3 антитела по данному изобретению могут быть связаны или коэкспрессированы с другой функциональной молекулой, например, другим пептидом или белком. Например, антитело или его фрагмент могут быть функционально связаны (например, путем химического связывания, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) с одним или более другими молекулярными объектами, такими как другое антитело или фрагмент антитела, для получения биспецифичного или мультиспецифическое антитела со второй или дополнительной специфичностью связывания.
Использование выражения анти-CD3 антитело или анти-MUC16 антитело в данном документе предназначено для включения как моноспецифичного анти-CD3 или анти-MUC16 антител, а также биспецифичных антител, содержащих CD3-связывающее плечо и MUC16-связывающее плечо. Таким образом, данное изобретение включает биспецифичные антитела, в которых одно плечо иммуноглобулина связывается с CD3 человека, а другое плечо иммуноглобулина является специфичным для MUC16 человека. CD3-связывающее плечо может содержать любую из аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR или CDR, как указано в табл. 1, 16, 18, 19, 22 и 23 в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, CD3-связывающее плечо связывается с CD3 человека и вызывает активацию Т-клеток человека. В некоторых вариантах осуществления изобретения, CD3-связывающее плечо слабо связывается с CD3 человека и индуцирует активацию Т-клеток человека. В других вариантах осуществления изобретения, CD3-связывающее плечо слабо связывается с CD3 человека и индуцирует уничтожение ассоциированных с опухолью антиген-экспрессирующих клеток в контексте биспецифичного или мультиспецифичного антитела. В других вариантах осуществления изобретения, CD3-связывающее плечо связывается или слабо связывается с CD3 человека и яванского макака (обезьяны), однако взаимодействие связывания не выявляется с помощью анализов in vitro, известных в данной области. MUC16-связывающее плечо может содержать любую из аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR или CDR, как указано в табл. 1 в данном документе.
Согласно некоторым иллюстративным вариантам осуществления изобретения, данное изобретение включает биспецифичные антиген-связывающие молекулы, которые специфически связываются с CD3 и MUC16. Такие молекулы могут упоминаться в данном документе как, например, биспецифичные молекулы анти-CD3/анти-MUC16, анти-CD3xMUC16 или CD3xMUC16 или другая подобная терминология (например, анти-MUC16/анти-CD3). Данное изобретение обеспечивает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, сконструированные с первым антигенсвязывающим плечом, которое связывается с MUC16, и вторым антигенсвязывающим плечом, которое связывается с CD3. В некоторых вариантах осуществления изобретения, анти-CD3 плечо содержит тяжелую цепь, происходящую от IGHV3-9*01, IGHJ6*02, IGHD5-12*01. В других вариантах осуществления изобретения, биспецифичная антигенсвязывающая молекула активирует клетки РВМС человека и/или индуцирует цитотоксическую активность на опухолевых антиген-экспрессирующих клеточных линиях.
Термин MUC16, используемый в данном описании, относится к белку MUC16 человека, если не указано, что он относится к виду отличному от человека (например, MUC16 мыши, MUC16 обезьяны и т.д.). Белок MUC16 человека имеет аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 18 99.
Вышеупомянутые биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, которые специфически связываются с CD3 и MUC16 могут содержать анти-CD3 антигенсвязывающую молекулу, которая связывается с CD3 со слабой аффинностью связывания, таким как экспонирование KD более чем около 40 нМ, как измерено анализом аффинного связывания in vitro. Вышеупомянутые биспецифичные антигенсвязывающие молекулы могут содержать анти-CD3 антигенсвязывающую молекулу, которая связывается с CD3 и демонстрирует ЕС50 более чем около 100 нМ, как измерено анализом титрования FACS. Вышеупомянутые биспецифичные антигенсвязывающие молекулы могут содержать анти-CD3 антигенсвязывающую молекулу, которая не проявляет измеримого или наблюдаемого связывания с CD3, как измерено с помощью анализа аффинности связывания in vitro или анализа титрования FACS, но сохраняет способность активировать клетки РВМС человека и/или индуцируют цитотоксическую активность в отношении линий опухолевых антиген-экспрессирующих клеток.
Как используется в данном документе, выражение антигенсвязывающая молекула означает белок, полипептид или молекулярный комплекс содержащий или состоящий по меньшей мере из одного определяющего комплементарность участка (CDR), который по отдельности или в комбинации с одним или более дополнительными CDR и/или каркасными участками (FR), специфически связывается с конкрет
- 25 045730 ным антигеном. В определенных вариантах осуществления изобретения, антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело или фрагмент антитела, как эти термины определены в другом месте данного документа.
Как используется в данном документе, выражение биспецифичная антигенсвязывающая молекула означает белок, полипептид или молекулярный комплекс, содержащий по меньшей мере первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен. Каждый антигенсвязывающий домен в биспецифичной антигенсвязывающей молекуле содержит по меньшей мере один CDR, который по отдельности или в комбинации с одним или более дополнительными CDR и/или FR, специфически связывается с конкретным антигеном. В контексте данного изобретения первый антигенсвязывающий домен специфически связывает первый антиген (например, CD3), а второй антигенсвязывающий домен специфически связывает второй отличный антиген (например, MUC16).
В некоторых иллюстративных вариантах осуществления данного изобретения биспецифичная антигенсвязывающая молекула представляет собой биспецифичное антитело. Каждый антигенсвязывающий домен биспецифичного антитела содержит вариабельный домен тяжелой цепи (HCVR) и вариабельный домен легкой цепи (LCVR). В контексте биспецифичной антигенсвязывающей молекулы, содержащей первый и второй антигенсвязывающий домен (например, биспецифичное антитело), CDR первого антигенсвязывающего домена могут обозначаться с префиксом А1, и CDR второго антигенсвязывающего домена могут обозначаться префиксом А2. Таким образом, CDR первого антигенсвязывающего домена могут упоминаться в данном документе как A1-HCDR1, A1-HCDR2 и A1-HCDR3; и CDR второго антигенсвязывающего домена могут обозначаться в данном документе как A2-HCDR1, A2-HCDR2 и А2HCDR3.
Первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен могут быть непосредственно или косвенно соединены друг с другом с образованием биспецифичной связывающей антигенмолекулы данного изобретения. Альтернативно, первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен, каждый, могут быть связаны с отдельным мультимеризирующим доменом. Ассоциация одного мультимеризующего домена с другим мультимеризирующим доменом облегчает ассоциацию между двумя антигенсвязывающими доменами, тем самым образуя биспецифичную антигенсвязывающую молекулу. Используемый в данном документе термин мультимеризующий домен представляет собой любую макромолекулу, белок, полипептид, пептид или аминокислоту, которая обладает способностью связываться со вторым мультимеризующим доменом той же или сходной структуры, или конституции. Например, мультимеризующий домен может представлять собой полипептид, содержащий домен CH3 иммуноглобулина. Неограничивающим примером мультимеризирующего компонента является Fc-часть иммуноглобулина (содержащая домен CH2-CH3), например, Fc-домен IgG, выбранный из изотипов IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а также любой аллотип в каждой группе изотипов.
Биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению, как правило, содержат два мультимеризующих домена, например, два Fc домена, каждый из которых по отдельности является частью отдельной тяжелой цепи антитела. Первый и второй мультимеризирующие домены могут иметь один и тот же изотип IgG, такой как, например, IgG1/IgG1, IgG2/IgG2, IgG4/IgG4.
Альтернативно, первый и второй мультимеризующие домены могут иметь разные изотипы IgG, такие как, например, IgGl/IgG2, IgG1/IgG4, IgG2/IgG4 и т.д.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, мультимеризующий домен представляет собой Fc фрагмент или аминокислотную последовательность, содержащую от 1 до около 200 аминокислот в длину, содержащую по меньшей мере один остаток цистеина. В других вариантах осуществления изобретения, мультимеризующий домен представляет собой остаток цистеина или короткий цистеинсодержащий пептид. Другие мультимеризирующие домены включают пептиды или полипептиды, содержащие или состоящие из лейциновой молнии, мотива со спиральной петлей или мотива со спиральной катушкой.
Любой формат биспецифичного антитела или технологии может быть использован, чтобы создать биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению. Например, антитело или его фрагмент, имеющий первую антигенсвязывающую специфичность, может быть функционально связано (например, путем химического связывания, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) с одним или более другими молекулярными объектами, такими как другое антитело или фрагмент антитела, имеющий вторую антигенсвязывающую специфичность для получения биспецифичной антигенсвязывающей молекулы. Конкретные иллюстративные биспецифичные форматы, которые могут быть применены в контексте данного изобретения, включают, без ограничения, например, биспецифичные форматы на основе scFv или диател, слияния IgG-scFv, двойной вариабельный домен (DVD)-Ig, Квадрому, выступы-во-впадины, общую легкую цепь (например, обычную легкую цепь с выступами-вовпадины и тому подобное), CrossMab, CrossFab, (SEED) тело, лейциновую молнию, Duobody, IgGl/IgG2, Fab (DAF)-IgG двойного действия и Mab2 (см., например, Klein et al. 2012, mAbs 4:6, 1-11, и ссылки, цитируемые в них, для обзора вышеупомянутых форматов).
В контексте биспецифичных антигенсвязывающих молекул по данному изобретению, в мультимеризующие домены, например, Fc домены, могут включать одно или более аминокислотных изменений
- 26 045730 (например, инсерции, делеции или замены) по сравнению с диким типом, природно возникающей версией Fc-домена. Например, изобретение включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие одну или более модификаций в Fc-домене, что приводит к тому, что модифицированный Fcдомен имеет модифицированное связывающее взаимодействие (например, усиленное или уменьшенное) между Fc и FcRn. В одном варианте осуществления изобретения, биспецифичная антигенсвязывающая молекула содержит модификацию в участке CH2 или CH3, причем эта модификация увеличивает аффинность Fc-домена к FcRn в кислой среде (например, в эндосоме, где рН варьируется от около 5,5 до около 6,0). Неограничивающие примеры таких модификаций Fc включают, например, модификацию в положении 250 (например, Е или Q); 250 и 428 (например, L или F); 252 (например, L/Y/F/W или Т), 254 (например, S или Т) и 256 (например, S/R/Q/E/D или Т); или модификация в положении 428 и/или 433 (например, L/R/S/P/Q или K) и/или 434 (например, H/F или Y); или модификацию в положении 250 и/или 428; или модификацию в положении 307 или 308 (например, 308F, V308F) и 434. В одном варианте осуществления изобретения, модификация содержит модификацию 428L (например, M428L) и 434S (например, N434S); модификацию 428L, 259I (например, V259I) и 308F (например, V308F); модификацию 433K (например, Н43зК) и 434 (например, 434Y); модификацию 252, 254 и 256 (например, 252Y, 254Т и 256е); модификацию 250Q и 428L (например, T250Q и M428L); и модификацию 307 и/или 308 (например, 308F или з08Р).
Данное изобретение также включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие первый домен CH3 и второй домен Ig3 CH3, причем первый и второй домены CH3 Ig отличаются друг от друга по меньшей мере на одну аминокислоту, и причем разница в по меньшей мере одну аминокислоту снижает связывание биспецифичного антитела с белком А по сравнению с биспецифичным антителом, в котором отсутствует аминокислотная разница. 180 В одном варианте осуществления изобретения первый домен СН3 Ig связывается с белком А, а второй домен СН3 Ig содержит мутацию, которая уменьшает или отменяет связывание с белком А, такое как при модификации H95R (согласно нумерации экзонов IMGT, H435R согласно нумерации ЕС). Второй СН3 может дополнительно содержать модификацию Y96F (согласно IMGT; Y436F согласно ЕС); см., например, патент США № 8586713. Другие модификации, которые могут быть найдены во втором CH3, включают D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (согласно IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M и V422I согласно ЕС) в случае антител IgG1; N44S, K52N и V82I (согласно IMGT; N384S, K392N и V422I согласно ЕС) в случае антител IgG2; и Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q и V82I (согласно IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q и V422I согласно ЕС) в случае антител IgG4.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, Fc домен может быть химерным, сочетающим в себе Fc последовательности, полученные из более чем одного изотипа иммуноглобулина. Например, химерный Fc домен может содержать часть или всю последовательность СН2, полученную из участка СН2 человеческого IgG1, человеческого IgG2 или человеческого IgG4, и часть или всю последовательность СН3, полученную из человеческого IgGl, человеческого IgG2 или человеческого IgG4. Химерный Fc домен также может содержать химерный шарнирный участок. Например, химерный шарнир может содержать последовательность верхнего шарнира, полученную из человеческого IgGl, человеческого IgG2 или шарнирного участка человеческого IgG4, в сочетании с последовательностью нижнего шарнира, полученной из человеческого IgGl, человеческого IgG2 или шарнирного участка человеческого IgG4. Конкретный пример химерного Fc домена, который может быть включен в любую из антигенсвязывающих молекул, изложенных в данном документе, содержит от N- до С-конца: [IgG4 CH1] - [верхний шарнир IgG4] - [нижний шарнир IgG2] [IgG4 CH2] - [IgG4 CH3]. Другой пример химерного Fc домена, который может быть включен в любую из антигенсвязывающих молекул, изложенных в данном документе, содержит от N- до С-конца: [IgGl СН1] - [верхний шарнир IgGl] - [нижний шарнир IgG2] [IgG4 CH2] [IgG1 СН3]. Эти и другие примеры химерных Fc-доменов, которые могут быть включены в любую из антигенсвязывающих молекул по данному изобретению, описаны в публикации США 2014/0243504, опубликованной 28 августа 2014 г., которая полностью включена в настоящий документ. Химерные Fcдомены, имеющие эти общие структурные расположения и их варианты, могут иметь измененное связывание с Fc-рецептором, что, в свою очередь, влияет на эффекторную функцию Fc.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к тяжелой цепи антитела, в которой участок константного участка тяжелой цепи (СН) содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% идентичную любой из SEQ ID NO: 1911, SEQ ID NO: 1912, SEQ ID NO: 1913, SEQ ID NO: 1914, SEQ ID NO: 1915, SEQ ID NO: 1916, SEQ ID NO: 1917, SEQ ID NO: 1918, SEQ ID NO: 1919 или SEQ ID NO: 1920. В некоторых вариантах осуществления изобретения, участок константного участка (СН) тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 1911, SEQ ID N0: 1912, SEQ ID NO: 1913, SEQ ID NO: 1914, SEQ ID NO: 1915, SEQ ID NO: 1916, SEQ ID NO: 1917, SEQ ID NO: 1918, SEQ ID NO: 1919 и SEQ ID NO: 1920.
В других вариантах осуществления данное изобретение относится к тяжелой цепи антитела, в которой Fc домен содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 9 6%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% идентичную лю
- 27 045730 бой из SEQ ID NO: 1921, SEQ ID NO: 1922, SEQ ID NO: 1923 SEQ ID NO: 1924 SEQ ID NO: 1925, SEQ ID NO: 1926, SEQ ID NO: 1927, SEQ ID NO: 1928, SEQ ID NO: 1929 или SEQ ID NO: 1930. В некоторых вариантах осуществления изобретения, Fc домен содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1921, SEQ ID NO: 1922, SEQ ID NO: 1923 SEQ ID NO: 1924 SEQ ID NO: 1925, SEQ ID NO: 1926, SEQ ID NO: 1927, SEQ ID NO: 1928, SEQ ID NO: 1929 и SEQ ID NO: 1930.
Варианты последовательности.
Антитела и биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению могут содержать одну или более аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных и/или CDR-участках вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых индивидуальные антигенсвязывающие домены были получены. Такие мутации могут быть легко обнаружены путем сравнения описанных в данном документе аминокислотных последовательностей с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из баз данных общедоступных антител. Антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению могут содержать антигенсвязывающие домены, которые происходят от любой из иллюстративных аминокислотных последовательностей, описанных в данном документе, при этом одна или более аминокислот в одном или более каркасных участках и/или участках CDR мутированы с соответствующим остатком (ами) последовательности зародышевой линии, из которой было получено антитело, или с соответствующем остатком(ами) другой последовательности зародышевой линии человека или с консервативной аминокислотной заменой соответствующего зародышевого остатка(ов) (такие изменения последовательности упоминаются в данном документе совместно как зародышевые мутации). Специалист в данной области техники, начиная с описанных в данном документе последовательностей вариабельного участка тяжелой и легкой цепей, может легко продуцировать многочисленные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или более отдельных зародышевых мутаций или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления изобретения все каркасные остатки и/или остатки CDR в доменах VH и/или VL мутируют обратно к остаткам, обнаруженным в исходной последовательности зародышевой линии, из которой первоначально был получен антигенсвязывающий домен. В других вариантах осуществления изобретения только определенные остатки мутируют обратно к исходной последовательности зародышевой линии, например, только мутированные остатки, обнаруженные в первых 8 аминокислотах FR1 или в последних 8 аминокислотах FR4, или только мутированные остатки, обнаруженные в CDR1, CDR2 или CDR3. В других вариантах осуществления изобретения, один или более каркасный остаток(ов) и/или остаток(ки) CDR мутируют с соответствующим остатком(ами) другой последовательности зародышевой линии (то есть последовательностью зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой антигенсвязывающий домен было изначально получен). Кроме того, антигенсвязывающие домены могут содержать любую комбинацию двух или более мутаций зародышевой линии в рамках каркасных участков и/или участков CDR, например, при этом определенные отдельные остатки мутируются к соответствующему остатку определенной последовательности зародышевой линии, в то время как определенные другие остатки, которые отличаются от исходной последовательности зародышевой линии сохраняются или мутируются с соответствующим остатком другой последовательности зародышевой линии. После получения антигенсвязывающие домены, которые содержат одну или более мутаций зародышевой линии, могут быть легко протестированы на одно или более желаемых свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, повышенное связывание или аффинность связывания, улучшенные или усиленные антагонистические или агонистические биологические свойства (в зависимости от обстоятельств), пониженная иммуногенность и т.д. Биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие один или более антигенсвязывающих доменов, полученных таким общим способом, охватываются данным изобретением.
Данное изобретение также включает антигенсвязывающие молекулы, причем один или оба антигенсвязывающих домена содержат варианты любой из описанных в данном документе аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, имеющих одну или более консервативных замен. Например, данное изобретение включает антигенсвязывающие молекулы, содержащие антигенсвязывающий домен, имеющий аминокислотные последовательности HCVR, LCVR и/или CDR с, например, 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и тому подобное консервативных аминокислотных замен по отношению к любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, описанных в данном документе. Консервативная замена аминокислоты представляет собой аминокислотную замену, в которой аминокислотный остаток замещен другим аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь (R-группу) с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В общем, консервативная аминокислотная замена не будет существенно изменять функциональные свойства белка. Примеры групп аминокислот с боковыми цепями с аналогичными химическими свойствами включают: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатически-гидроксильные боковые цепи: серин и треонин; 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислотные боковые цепи: аспартат и глутамат и 7) серосодер
- 28 045730 жащие боковые цепи - цистеин и метионин. Предпочтительными группами консервативных аминокислотных замен являются: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. В альтернативном варианте, консервативная замена представляет собой любое изменение, имеющее положительное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ250, описанной в Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445, включенной в данный документ в качестве ссылки. Умеренно консервативной заменой является любое изменение, имеющее неотрицательное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ250.
Данное изобретение также включает антигенсвязывающие молекулы, содержащие антигенсвязывающий домен с аминокислотной последовательностью HCVR, LCVR, и/или CDR, которая по существу идентична любой из HCVR, LCVR и/или CDR аминокислотных последовательностей, описанных в данном документе. Термин существенная идентичность или по существу идентичный, когда он относится к аминокислотной последовательности, означает, что две аминокислотные последовательности, когда они оптимально выровнены, например, с помощью программ GAP или BESTFIT, использующих веса гэпов по умолчанию, имеют общую по меньшей мере 95% идентичность последовательности, еще более предпочтительно по меньшей мере 98% или 99% идентичности последовательности. Предпочтительно, положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами. В случаях, когда две или более аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными заменами, процентная идентичность последовательности или степень сходства могут быть скорректированы в большую сторону, чтобы исправить консервативный характер замены. Средства для осуществления этой корректировки хорошо известны специалистам в данной области техники; см., например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 3 07-331, включенной в данный документ в качестве ссылки.
Сходство последовательностей для полипептидов, которое также называют идентичностью последовательностей, обычно измеряют с использованием программного обеспечения для анализа последовательностей. Программное обеспечение для анализа белка подбирает аналогичные последовательности, применяя измерения сходства, присвоенные различным заменам, делециям и другим модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение GCG содержит такие программы, как Gap и Bestfit, которые могут применяться с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательности или идентичности последовательности между родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды из разных видов организмов или между белком дикого типа и его мутеином; см., например, GCG версии 6.1. Полипептидные последовательности также могут сравниваться, используя FASTA со стандартными или рекомендованными параметрами; программа в GCG версии 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает идентичность выравнивания и процент последовательности областей наилучшего перекрытия между запрашиваемой последовательностью и последовательностью поиска (Pearson (2000 год) выше). Другим предпочтительным алгоритмом при сравнении последовательности по данному изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей от разных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно BLASTP или TBLASTN, с применением параметров по умолчанию; см., например, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-402, каждый из которых включен в данный документ в качестве ссылки.
рН-зависимое связывание.
Данное изобретение включает в себя анти-MUC16 антитела и анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, с рН-зависимыми характеристиками связывания. Например, антиMUC16 антитело по данному изобретению может проявлять пониженное связывание с MUC16 при кислым рН по сравнению с нейтральным рН. Альтернативно, анти-MUC16 антитела по данному изобретению могут проявлять усиленное связывание с MUC16 при кислом рН по сравнению с нейтральным рН. Выражение кислое рН включает значения рН менее чем около 6,2, например, около 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или менее. Используемое в данном документе выражение нейтральное рН означает рН от около 7,0 до около 7,4. Выражение нейтральное рН включает значения рН около 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.
В некоторых случаях, уменьшенное связывание... при кислом рН, по сравнению с нейтральным рН выражается в терминах соотношения величины KD связывания антитела со своим антигеном при кислом рН до значения KD антитела, связывающегося с его антигеном, при нейтральном рН (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно рассматривать как демонстрирующие пониженное связывание с MUC16 при кислом рН по сравнению с нейтральным рН для целей данного изобретения, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент имеют кислый/нейтральный коэффициент KD около 3,0 или более. В некоторых примерных вариантах осуществления изобретения, кислый/нейтральный коэффициент KD для антитела или антигенсвязывающий фрагмент по данному изобретению может составлять около 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или более.
Антитела с рН-зависимыми характеристиками связывания могут быть получены, например, путем скрининга популяции антител для снижения (или усиления) связывания с конкретным антигеном при
- 29 045730 кислом рН, по сравнению с нейтральным рН. Кроме того, модификации антигенсвязывающего домена на уровне аминокислот могут давать антитела с рН-зависимыми характеристиками. Например, путем замены одной или более аминокислот антигенсвязывающего домена (например, в CDR) остатком гистидина может быть получено антитело с пониженным антигенсвязыванием при кислом рН относительно нейтрального рН.
Антитела, содержащие варианты Fc.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления данного изобретения, анти-MUC16 антитела, и анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, которые при условии, что содержащий Fc-домен, содержащий одну или более мутации, которые усиливают или уменьшают связывание антитела с рецептором FcRn, например, при кислом рН по сравнению с нейтральным рН. Например, данное изобретение включает антитела, содержащие мутацию в участке СН2 или СН3 Fcдомена, причем мутация(и) увеличивает аффинность Fc-домена к FcRn в кислой среде (например, в эндосоме, где рН колеблется от около 5,5 до около 6,0). Такие мутации могут приводить к увеличению периода полужизни антитела из сыворотки при введении животному. Неограничивающие примеры таких модификаций Fc включают, например, модификацию в положении 2 50 (например, Е или Q); 250 и 428 (например, L или F); 252 (например, L/Y/F/W или Т), 254 (например, S или Т) и 256 (например, S/R/Q/E/D или Т); или модификация в положении 428 и/или 433 (например, H/L/R/S/P/Q или K) и/или 434 (например, H/F или Y); или модификация в позиции 250 и/или 428; или модификация в позиции 307 или 308 (например, 308F, V308F) и 434. В одном варианте осуществления изобретения, модификация содержит модификацию 428L (например, M428L) и 434S (например, N434S); модификацию 428L, 259I (например, V259I) и 308F (например, V308F); модификацию 433K (например, Н433К) и 434 (например, 434Y); модификацию 252, 254 и 256 (например, 252Y, 254Т и 256Е); модификацию 250Q и 428L (например, T250Q и M428L); и модификацию 307 и/или 308 (например, 308F или 308Р).
Например, данное изобретение включает в себя анти-MUC16 антитела и анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие Fc-домен, содержащий одну или более пар или групп мутации, выбранные из группы, состоящей из: 250Q и 248L (например, T250Q и M248L); 252Y, 254Т и 256Е (например, M252Y, S254T и Т256Е); 428L и 434S (например, M428L и N434S); и 433K и 434F (например, Н433К и N434F). Все возможные комбинации вышеупомянутых мутаций Fc-домена и других мутаций в вариабельных доменах антитела, описанных в данном документе, рассматриваются в объеме данного изобретения.
Биологическая характеристика антител и биспецифичных антигенсвязывающих молекул.
Данное изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с MUC16 человека с высокой аффинностью (например, субнаномолярные значения KD).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, данное изобретение включает в себя антитела и антигенсвязывающие фрагменты антител, которые связываются с человеческим MUC16 (например, при 25°С ) с KD менее, чем около 60 нМ, как измеряется поверхностным плазмонным резонансом, например, с использованием формата анализа, как определено в примере 4 в данном документе. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитела или антигенсвязывающие фрагменты по данному изобретению связываются с MUC16 с KD менее чем около 60 нМ, менее чем около 40 нМ, менее чем около 20 нМ, менее чем около 10 нМ, менее чем около 8 нМ, менее чем около 7 нМ, менее чем около 6 нМ, менее чем около 5 нМ, менее чем около 4 нМ, менее чем около 3 нМ, менее чем около 2 нМ, менее чем около 1 нМ, менее чем около 800 пМ, менее чем чем около 700 пМ, менее чем около 500 пМ, менее чем около 400 пМ или менее чем около 300 пМ, как измерено поверхностным плазмонным резонансом, например, с использованием формата анализа, как определено в примере 4 в данном документе (например, захват мАт или формат захвата антигена), или по существу аналогичный анализ. Данное изобретение включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы (например, биспецифичные антитела, которые связываются с MUC16 с KD менее чем около 7 нМ, как измерено поверхностным плазмонным резонансом, например, с использованием формата анализа, как определено в примере 4 в данном документе (например, формат захвата мАт или захвата антигена), или по существу аналогичного анализа.
Данное изобретение также включает в себя антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с MUC16 с диссоциирующей полужизнью (t1/2) более чем около 10 минут или более, чем около 125 минут, как измерено с помощью поверхностного плазмонного резонанса при 25°С, например, с использованием формата анализа, как определено в примере 4 в данном документе, или по существу аналогичного анализа. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антитела или антигенсвязывающие фрагменты по данному изобретению связываются с MUC16 с t1/2 более чем около 10 минут, более чем около 20 минут, более чем около 30 минут, более чем около 40 минут, более чем около 50 минут более чем около 60 минут, более чем около 70 минут, более чем около 80 минут, более чем около 90 минут, более чем около 100 минут, более чем около 110 минут или более чем около 120 минут, измеренных с помощью поверхностного плазмонного резонанса при 25°С, например, с использованием формата анализа, как определено в примере 4 в данном документе (например, захвата мАт или формата захвата антигена), или по существу аналогичного анализа. Данное изобретение включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы (например, биспецифичные антитела, которые связываются с MUC16 с более чем
- 30 045730 около 10 минут или более чем около 20 минут, как измерено поверхностным плазмонным резонансом при 25°С, например, с использованием формата анализа, как определено в примере 4 в данном документе, или по существу аналогичным анализом.
Данное изобретение также включает в себя антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с линиями клеток человека, которые экспрессируют эндогенный MUC16 (например, OVCAR-3), как определено анализом обнаружения на основе электрохемолюминисценции, как описано в примере 2, или по существу аналогичным анализом.
Данное изобретение также включает в себя анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, которые обладают одной или более характеристик, выбранных из группы, состоящей из: (а) ингибирования роста опухоли у мышей с ослабленным иммунитетом, несущих ксенотрансплантаты рака яичника человека; и (b) подавления роста опухоли у установленных опухолей у мышей с ослабленным иммунитетом, несущих ксенотрансплантаты рака яичника человека (см., например, пример 8).
Данное изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с CD3 человека с высокой аффинностью. Данное изобретение также включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с CD3 человека со средней или низкой аффинностью, в зависимости от терапевтического контекста и конкретных желательных целевых свойств. В некоторых случаях низкая аффинность включает в себя антитела, которые связываются с CD3 с KD или ЕС50 (например, как измерено в анализе поверхностного плазмонного резонанса), более чем 300 нМ, более чем 500 нМ или более чем 1 мкМ. Данное изобретение также включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с CD3 человека без измеримой аффинности. Например, в контексте биспецифичной антигенсвязывающей молекулы, в которой одно плечо связывается с CD3, а другое плечо связывается с целевым антигеном (например, MUC16), может быть желательно, чтобы целевое антигенсвязывающее плечо связывалось с целевым антигеном с высокой аффинностью, в то время как антиCD3 плечо связывается с CD3 только с умеренной или низкой аффинностью или без аффинности. Таким образом, может быть достигнуто предпочтительное нацеливание антигенсвязывающей молекулы на клетки, экспрессирующие антиген-мишень, при этом избегая общего/нецелевого связывания с CD3 и связанных с ним побочных эффектов.
Данное изобретение включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы (например, биспецифичные антитела), которые способны одновременно связываться с CD3 человека и MUC16 человека. Плечо связывания, которое взаимодействует с клетками, которые экспрессируют CD3, может иметь слабое или не обнаруживаемое связывание, как измерено в подходящем анализе связывания in vitro. Степень, до которой биспецифичная антигенсвязывающая молекула связывает клетки, которые экспрессируют CD3 и/или MUC16, может быть оценена с помощью флуоресцентно-активированной сортировки клеток (FACS), как показано в примере 5 в данном документе.
Например, данное изобретение включает в себя антитело, антигенсвязывающие фрагменты и их биспецифичные антитела, которые специфически связывают линии Т-клетки человека, которые экспрессируют CD3, но не экспрессируют MUC16 (например, Jurkat), Т-клетки приматов (например, мононуклеарные клетки периферической крови яванского макака [РВМС]) и/или клетки, экспрессирующие MUC16.
Данное изобретение включает в себя антитело, антигенсвязывающие фрагменты, и их биспецифичные антитела, которые связываются с CD3 человека со слабой (то есть низкой) или даже без обнаруживаемого связывания или аффинности связывания.
Данное изобретение включает в себя антитело, антигенсвязывающие фрагменты, и их биспецифичные антитела, которые связываются с CD3 обезьяны (т.е. яванского макака) со слабой (т.е. низким) или даже без заметного связывания или аффинности связывания.
Данное изобретение включает в себя антитело, антигенсвязывающие фрагменты, и их биспецифичные антитела, которые связываются с CD3 человека и индуцирует активацию Т-клетки.
Данное изобретение включает в себя анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичных антигенсвязывающих молекул, которые способны к разрушению опухолевой антиген-экспрессирующей клетки у субъекта (см., например, пример 8, в биолюминесцентном анализе изображений или по существу аналогичном анализе). Например, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, предлагаются анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, в которых однократное введение 10 мкг биспецифичной антигенсвязывающей молекулы субъекту вызывает уменьшение количества MUC16-экспрессирующих клеток у субъекта (например, рост опухоли у субъекта подавляется или ингибируется). Если не указано иное, биолюминесцентное излучение относится к [ф/с/см2/ср].
Данное изобретение также включает конъюгаты анти-MUC16 антитела с лекарственным препаратом, которые ингибируют рост опухоли в in vivo MUC16-позитивных моделях ксенотрансплантата рака яичника (см., например, пример 10, в анализе биолюминесцентной визуализации или по существу аналогичном анализе). В некоторых вариантах осуществления изобретения, предоставлены конъюгаты антиMUC16 антитела с лекарственным препаратом с соединением 7, в которых четыре дозы один раз в неделю, вводимые в дозе 85 мкг/кг, ингибируют внутрибрюшинный рост опухоли OVCAR3/luc in vivo. В некоторых вариантах осуществления изобретения, предоставлены конъюгаты анти-MUC16 антитела с лекарственным препаратом с соединением 7, в которых четыре дозы один раз в неделю, вводимые в дозе 85
- 31 045730 мкг/кг, ингибируют подкожный рост опухоли OVCAR3/luc in vivo. В некоторых вариантах осуществления изобретения, предоставлены конъюгаты анти-MUC16 антитела с лекарственным препаратом с соединением 10, в которых однократная доза в дозе 85 мкг/кг, 170 мкг/кг или 340 мкг/кг ингибирует внутрибрюшинный рост опухоли OVCAR3/luc in vivo. Если не указано иное, биолюминесцентное излучение относится к [ф/с/см2/ср].
Данное изобретение также включает анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, которые демонстрируют фармакокинетические профили у гуманизированных мышей MUC16 х CD3 (мышей, гомозиготных по экспрессии MUC16 и CD3 человека, MUC16 hu/hu x CD3 hu/hu) гуманизированных мышей CD3 (мышей, гомозиготных по экспрессии CD3 человека, CD3 hu/hu) и мышей дикого типа, подобранных по линии (ДТ) (75% C57BL, 25% 129Sv), как описано в примере 7 и показано на фиг. 1, 2 и 3.
Картирование эпитопов и связанные с ним технологии.
Эпитоп на CD3 и/или MUC16, с которым связываются антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению, может состоять из одной непрерывной последовательности из 3 или более (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более) аминокислот CD3 или белка MUC16. В альтернативном варианте, эпитоп может состоять из множества несмежных аминокислот (или аминокислотных последовательностей) CD3 или MUC16. Антитела по данному изобретению могут взаимодействовать с аминокислотами, содержащимися в одной цепи CD3 (например, CD3-эпсилон, CD3-дельта или CD3-гамма), или могут взаимодействовать с аминокислотами в двух или более различных цепях CD3. Используемый в данном документе термин эпитоп относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим сайтом в вариабельном участке молекулы антитела, известной как паратоп. Один антиген может иметь более одного эпитопа. Таким образом, различные антитела могут связываться с различными областями на антигене и могут иметь различные биологические эффекты. Эпитопы могут быть конформационными или линейными. Конформационный эпитоп продуцируется пространственно сопоставленными аминокислотами из разных сегментов линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп представляет собой эпитоп, продуцируемый соседними аминокислотными остатками в полипептидной цепи. В определенных обстоятельствах эпитоп может включать фрагменты сахаридов, фосфорильных групп или сульфонильных групп на антигене.
Различные методы, известные специалистам в данной области техники, могут быть применены для определения того, взаимодействует ли антигенсвязывающий домен антитела с одной или более аминокислотами внутри полипептида или белка.
Иллюстративные способы включают, например, рутинный анализ перекрестной блокировки, такой как описанные антитела, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., Нью-Йорк), мутационный анализ с аланиновым сканированием, анализ пептидных блотов (Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248: 443-463) и анализ расщепления пептидов. Кроме того, могут быть применены такие способы, как удаление эпитопа, экстракция эпитопа и химическая модификация антигенов (Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496). Другим способом, который может быть применен для идентификации аминокислот в пределах полипептида, с которым взаимодействует антигенсвязывающий домен антитела, является водород/дейтериевый обмен, обнаруживаемый с помощью масс-спектрометрии. В общем, способ водород/дейтериевого обмена включает в себя мечение дейтерием белка интереса с последующим связыванием антитела с меченым дейтерием белком. Затем комплекс белок/антитело переносят в воду, чтобы обеспечить обмен водород-дейтерия по всем остаткам, кроме остатков, защищенных антителом (которые остаются меченными дейтерием). После диссоциации антитела целевой белок подвергают расщеплению протеазой и анализу с помощью масс-спектрометрии, тем самым выявляя меченые дейтерием остатки, которые соответствуют конкретным аминокислотам, с которыми взаимодействует антитело; см., например, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 13: 256A265A. Рентгеновская кристаллография комплекса антиген/антитело может также использоваться для картирования эпитопов.
Данное изобретение дополнительно включает в себя анти-MUC16 антитела, которые связываются с тем же эпитопом, что и любой из конкретных иллюстративных антител, описанных в данном документе (например, антитела, содержащие любую из аминокислотных последовательностей, указанных в табл. 1 в данном документе). Аналогичным образом, данное изобретение также включает анти-MUC16 антитела, которые конкурируют за связывание с MUC16 с любым из конкретных иллюстративных антител, описанных в данном документе (например, антитела, содержащие любую из аминокислотных последовательностей, как указано в табл. 1 в данном документе).
Данное изобретение также включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3 человека и/или CD3 яванского макака с низким или отсутствующим связыванием или аффинностью связывания, и второй антигенсвязывающий домен, в котором специфически связывается с MUC16 человека, причем первый антигенсвязывающий домен связывается с тем же эпитопом на CD3, что и любой из конкретных иллюстративных CD3-специфических антигенсвязывающих доменов, описанных в данном документе, и/или в котором второй антигенсвязывающий домен связывается с тем же эпитопом на MUC16, что и любой из
- 32 045730 конкретных иллюстративных МиС16-специфических антигенсвязывающих доменов, описанных в данном документе.
Кроме того, данное изобретение также включает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие первый антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с CD3 человека, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с человеческим MUC16, в котором первый антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с CD3 с любым из конкретных иллюстративных CD3-специфических антигенсвязывающих доменов, описанных в настоящем документе, и/или в котором второй антигенсвязывающий домен конкурирует за связывание с MUC16 с любым из конкретных иллюстративных MUC16-специфических антигенсвязывающих доменов, описанных в настоящем документе.
Можно легко определить, связывается ли конкретная антигенсвязывающая молекула (например, антитело) или ее антигенсвязывающий домен с тем же эпитопом, или конкурирует за связывание с эталонной антигенсвязывающей молекулой по данному изобретению, используя рутинные способы, известные в данной области техники. Например, чтобы определить, связывается ли тестируемое антитело с тем же эпитопом на MUC16 (или CD3), что и эталонная биспецифичная антигенсвязывающая молекула по данному изобретению, эталонной биспецифичной молекуле сначала разрешается связываться с белком MUC16 (или белком CD3). Затем оценивают способность тестируемого антитела связываться с молекулой MUC16 (или CD3). Если тестируемое антитело способно связываться с MUC16 (или CD3) после связывания насыщением с эталонной биспецифичной антигенсвязывающей молекулой, можно сделать вывод, что тестируемое антитело связывается с другим эпитопом MUC16 (или CD3), чем эталонная биспецифичная антигенсвязывающая молекула. С другой стороны, если тестируемое антитело не способно связываться с молекулой MUC16 (или CD3) после связывания насыщением с эталонной биспецифичной антигенсвязывающей молекулой, тогда тестируемое антитело может связываться с тем же эпитопом MUC16 (или CD3) в качестве эпитопа, связанного эталонной биспецифичной антигенсвязывающей молекулой по данному изобретению. Затем может быть проведено дополнительное обычное исследование (например, пептидная мутация и анализ связывания), для подтверждения, является ли наблюдаемое недостаточное связывание тестируемого антитела на самом деле связанным со связыванием с тем же эпитопом, что и эталонная биспецифичная антигенсвязывающая молекула, или является ли пространственное блокирование (или другое явление) ответственным за отсутствие наблюдаемого связывания. Эксперименты такого типа могут быть выполнены с применением ИФА, РИА (радиоиммунологического анализа), Biacore, проточной цитометрии или любого другого количественного или качественного анализа связывания антитела, доступного в данной области техники. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления данного изобретения два антигенсвязывающих белка связываются с одним и тем же (или перекрывающимся) эпитопом, если, например, 1-, 5-, 10-, 20- или 100-кратный избыток одного антигенсвязывающего белок ингибирует связывание другого по меньшей мере на 50%, но предпочтительно на 75%, 90% или даже на 99%, как измерено в конкурентном анализе связывания (см., например, Junghans et al., Cancer Res. 1990: 50: 1495-1502). Альтернативно, считается, что два антигенсвязывающих белка связываются с одним и тем же эпитопом, если по существу все аминокислотные мутации в антигене, которые уменьшают или устраняют связывание одного антигенсвязывающего белка, уменьшают или устраняют связывание другого. Считается, что два антигенсвязывающих белка имеют перекрывающиеся эпитопы, если только подмножество аминокислотных мутаций, которые уменьшают или устраняют связывание одного антигенсвязывающего белка, уменьшают или устраняют связывание другого.
Чтобы определить, конкурирует ли антитело или его антигенсвязывающий домен за связывание с эталонной антигенсвязывающей молекулой, описанная выше методика связывания выполняется в двух ориентациях: в первой ориентации эталонной антигенсвязывающей молекуле позволено связывать белок MUC16 (или белок CD3) в условиях насыщения с последующей оценкой связывания тестируемого антитела с молекулой MUC16 (или CD3). Во второй ориентации тестируемому антителу позволяют связываться с молекулой MUC16 (или CD3) в условиях насыщения с последующей оценкой связывания эталонной антигенсвязывающей молекулы с молекулой MUC16 (или CD3). Если в обеих ориентациях только первая (насыщающая) антигенсвязывающая молекула способна связываться с молекулой MUC16 (или CD3), то делается вывод, что тестируемое антитело и эталонная антигенсвязывающая молекула конкурируют за связывание с MUC16 (или CD3). Как будет понятно специалисту в данной области техники, антитело, которое конкурирует за связывание с эталонной антигенсвязывающей молекулой, необязательно может связываться с тем же эпитопом, что и эталонное антитело, но может стерически блокировать связывание эталонного антитела путем связывание перекрывающегося или смежного эпитопа.
Получение антигенсвязывающих доменов и конструирование биспецифичных молекул.
Антигенсвязывающие домены, специфичные для конкретных антигенов, могут быть получены с помощью любой технологии генерирования антител, известной в данной области техники. После получения, два разных антигенсвязывающих домена, специфичных для двух разных антигенов (например, CD3 и MUC16), могут быть соответствующим образом расположены относительно друг друга для получения биспецифичной антигенсвязывающей молекулы по данному изобретению с использованием рутинных способов. (Обсуждение иллюстративных форматов биспецифичных антител, которые можно
- 33 045730 использовать для конструирования биспецифичных антигенсвязывающих молекул по данному изобретению, приводится в другом месте данного документа). В определенных вариантах осуществления изобретения, один или более отдельных компонентов (например, тяжелых и легких цепей) мультиспецифичных антигенсвязывающих молекул по данному изобретению получены из химерных, гуманизированных или полностью человеческих антител. Способы получения таких антител хорошо известны в данной области техники. Например, одну или более тяжелых и/или легких цепей биспецифичных антигенсвязывающих молекул по данному изобретению можно получить с использованием технологии VELOCIMMUNE™. С использованием технологии VELOCIMMUNE™ (или любой другой технологии, генерирующей человеческие антитела) химерные антитела с высоким сродством к конкретному антигену (например, CD3 или MUC16) первоначально выделяют, имея вариабельный участок человека и константный участок мыши. Антитела характеризуются и отбираются по желаемым характеристикам, включая аффинность, селективность, эпитоп и т.д. Константные участки мыши заменяются желаемым константным участком человека для генерации полностью человеческих тяжелых и/или легких цепей, которые могут быть включены в биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению.
Генетически сконструированные животные могут быть использованы для получения человеческих биспецифичных антигенсвязывающих молекул. Например, может быть использована генетически модифицированная мышь, которая не способна реорганизовывать и экспрессировать вариабельную последовательность легкой цепи эндогенного иммуноглобулина мыши, причем мышь экспрессирует только один или два вариабельных домена легкой цепи человека, кодируемых последовательностями иммуноглобулина человека, функционально связанными с константным геном каппа мыши в эндогенном локусе каппа мыши. Такие генетически модифицированные мыши могут быть использованы для получения полностью человеческих биспецифичных антигенсвязывающих молекул, содержащих две разные тяжелые цепи, которые связаны с идентичной легкой цепью, которая содержит вариабельный домен, полученный из одного из двух различных генных сегментов вариабельного участка легкой цепи человека. (См., например, US 2011/0195454). Термин полностью человеческий относится к антителу, или антигенсвязывающему фрагменту, или его домену иммуноглобулина, содержащему аминокислотную последовательность, кодируемую ДНК, полученной из человеческой последовательности, по всей длине каждого полипептида антитела или антигенсвязывающего фрагмента или домена его иммуноглобулина. В некоторых случаях полностью человеческая последовательность происходит из белка, эндогенного для человека. В других случаях полностью человеческий белок или белковая последовательность содержит химерную последовательность, причем каждая компонентная последовательность получена из человеческой последовательности. Не будучи связанными какой-либо одной теорией, химерные белки или химерные последовательности обычно предназначены для минимизации образования иммуногенных эпитопов в соединениях последовательностей компонентов, например, по сравнению с любыми участками или доменами человеческого иммуноглобулина дикого типа.
Биоэквиваленты.
Данное изобретение охватывает антигенсвязывающие молекулы, имеющие аминокислотные последовательности, которые отличаются от последовательностей описанных в данном документе иллюстративных молекул, но которые сохраняют способность связывать CD3 и/или MUC16. Такие вариантные молекулы могут содержать одну или более вставок, делеций или замен аминокислот по сравнению с исходной последовательностью, но проявляют биологическую активность, которая по существу эквивалентна активности описанных биспецифичных антигенсвязывающих молекул.
Данное изобретение включает антигенсвязывающие молекулы, которые являются биоэквивалентными любым из приведенных в качестве примера антигенсвязывающих молекулам, описанных в данном документе. Два антигенсвязывающих белка или антитела считаются биоэквивалентными, если, например, они представляют собой фармацевтические эквиваленты или фармацевтические альтернативы, чья скорость и степень абсорбции не проявляют существенной разницы при введении в той же молярной дозе в аналогичных экспериментальных условиях, как в разовой дозе, так и многократной дозе. Некоторые антигенсвязывающие белки будут считаться эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, если они эквивалентны по степени их абсорбции, но не по скорости их абсорбции, и все же могут считаться биоэквивалентными, поскольку такие различия в скорости абсорбции являются преднамеренными и отражаются в маркировке, являются не существенными для достижения эффективных концентраций лекарственного средства, например, при хроническом применении, и считаются с медицинской точки зрения незначимыми для конкретного исследуемого лекарственного продукта.
В одном варианте реализации данного изобретения два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентными, если не существует клинически значимых различий в их безопасности, чистоте и эффективности.
В одном варианте осуществления изобретения два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентными, если пациент может переключаться один или более раз между эталонным препаратом и биологическим препаратом без ожидаемого увеличения риска неблагоприятных эффектов, включая клинически значимое изменение иммуногенности или уменьшенную эффективность по сравнению с про
- 34 045730 должающейся терапией без такого переключения.
В одном варианте осуществления изобретения два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентными, если оба они действуют по общему механизму или механизмам действия для условия или условий применения в той мере, в которой такие механизмы известны.
Биоэквивалентность может быть продемонстрирована способами in vivo и in vitro. Измерения биоэквивалентности включают, например, (а) тест in vivo у людей или других млекопитающих, в котором концентрация антитела или его метаболитов измеряется в крови, плазме, сыворотке или другой биологической жидкости как функция времени; (b) тест in vitro, который был коррелирован с данными и достоверно прогнозирует данные биодоступности у человека in vivo; (с) тест in vivo у людей или других млекопитающих, у которых соответствующий острый фармакологический эффект антитела (или его цели) измеряется как функция времени; и (d) в хорошо контролируемом клиническом исследовании, которое устанавливает безопасность, эффективность или биодоступность или биоэквивалентность антигенсвязывающего белка.
Биоэквивалентные варианты иллюстративных биспецифичных антигенсвязывающих молекул, изложенных в настоящем документе, могут быть сконструированы, например, путем осуществления различных замен остатков или последовательностей или удаления концевых или внутренних остатков или последовательностей, не необходимых для биологической активности. Например, остатки цистеина, которые не являются существенными для биологической активности, могут быть удалены или заменены другими аминокислотами, с целью предотвращения образования ненужных или некорректных внутримолекулярных дисульфидных мостиков при ренатурации. В других контекстах биоэквивалентные антигенсвязывающие белки могут включать варианты иллюстративных биспецифичных антигенсвязывающих молекул, изложенных в данном документе, содержащие аминокислотные замены, которые модифицируют характеристики гликозилирования молекул, например, мутации, которые устраняют или удаляют гликозилирование.
Селективность видов и перекрестная реактивность видов В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, предложены антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с CD3 человека, но не с CD3 от других видов. Также предоставлены антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с MUC16 человека. Данное изобретение также включает антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с CD3 человека и с CD3 одного или более видов, отличных от человека; и/или антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с MUC16 человека.
В соответствии с некоторыми иллюстративными вариантами осуществления изобретения, предложены антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с CD3 человека и/или MUC16 человека и могут связываться или не связываться, в зависимости от обстоятельств, с одним или более CD3 и/или MUC16 мыши, крысы, морской свинки, хомяка, песчанки, свиньи, кошки, собаки, кролика, козы, овцы, коровы, лошади, верблюда, яванского макака, мартышки, резуса или шимпанзе. Например, в конкретном примере осуществления данного изобретения предложены биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, содержащие первый антигенсвязывающий домен, который связывает CD3 человека и CD3 яванского макака, и второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывает MUC16 человека.
Конгьюгаты антитело-лекарственное средство (ADC).
Данное изобретение обеспечивает конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC), содержащие анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, конъюгированное с терапевтической молекулой, такой как цитотоксический агент, химиотерапевтический препарат, иммунодепрессант или радиоизотоп. В общих чертах, ADC содержит: А - [L - Р]у, где А представляет собой антигенсвязывающую молекулу, например, анти-MUC16 антитело или его фрагмент (например, фрагмент, содержащий по меньшей мере HCDR3, выбранный из любой из аминокислотных последовательностей HCDR3, перечисленных в табл. 1), L представляет собой линкер, Р представляет собой полезную нагрузку или терапевтическую часть (например, цитотоксический агент), а у представляет собой целое число от 1 до 30. В различных вариантах осуществления изобретения, ADC содержит анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит CDR HCVR и LCVR, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO (например, SEQ ID NO: 2 и 10) перечисленные в табл. 1, или конкретные пары HCVR/LCVR (например, SEQ ID NO: 2/10). В некоторых случаях анти-MUC16 антитело или его фрагмент содержит CDR с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO (например, SEQ ID NO: 4-68-12-14-16), приведенными в табл. 1. В некоторых случаях анти-MUC16 антитело или его фрагмент содержит HCVR и LCVR, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO (например, SEQ ID NO: 2 и 10), представленные в табл. 1, или пары конкретных аминокислотных последовательностей (например, SEQ ID NO: 2/10). В некоторых случаях анти-MUC16 антитело представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с MUC16 человека в одном или более из пяти мембранно-проксимальных доменов SEA MUC16 человека, соответствующих остаткам 13791-14451 SEQ ID NO: 1899. В некоторых случаях анти-MUC16 антитело представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с MUC16 человека в остатках 13810-14451 SEQ ID NO: 1899. В некоторых случаях анти-MUC16 антитело представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с любым из нескольких SEA1, SEA2, SEA3, SEA4, SEA5, SEA6, SEA7, SEA8,
- 35 045730
SEA9, SEA10, SEA11, SEA12, SEA13, SEA14, SEA15 или SEA16 MUC16 человека.
Цитотоксические агенты включают любой агент, который является вредным для роста, жизнеспособности или размножения клеток. Антигенсвязывающие молекулы или антитела по данному изобретению доставляют эти цитотоксические агенты, называемые в данном документе полезными нагрузками, в клетки-мишени. Примеры подходящих цитотоксических агентов и химиотерапевтических агентов для образования ADC известны в данной области техники.
Примеры подходящих цитотоксических агентов и химиотерапевтических агентов, которые могут быть конъюгированы с анти-MUC16 антителами в соответствии с этим аспектом данного изобретения, включают, например, 1-(2-хлорэтил)-1,2 диметансульфонилгидразид, 1,8-дигидроксибицикло[7.3.1]тридека-4,9-диен-2,6-диен-13-он, 1-дегидротестостерон, 5-фторурацил, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, 9-амин-камптотецин, актиномицин D, аманитины, аминоптерин, ангуидин, антрациклин, антрамицин (АМС), ауристатины (монометиловый ауристатин Е или монометил ауристатин F), блеомицин, бисульфан, масляную кислоту, калихеамицины, камптотецин, карминомицин, кармустин, кемадотины, цисплатин, колхицин, комбретастатины, циклофосфамид, цитарабин, цитохалазин В, дактиномицин, даунорубицин, декарбазин, диацетоксипентилдоксорубицин, дибромоманнитол, дигидрокси антрацин диона, дисоразолы, доластатин, доксорубицин, дуокармицин, эхиномицины, элеутеробины, эметин, эпотилоны, эсперамицин, эстрамустины, бромид этидия, этопозид, фторурацилы, гелданамицины, грамицидин D, глюкокортикоиды, иринотеканы, лептомицины, лейрозины, лидокаин, ломустин (CCNU), майтансиноиды, мехлорэтамин, мелфалан, меркатопурины, метоптерины, метотрексат, митрамицин, митомицин, митоксантрон, N8-ацетил спермидин, подофиллотоксины, прокаин, пропранолол, птеридины, пиромицин, ризоксины, стрептозотоцин, таллисомицины, таксол, тенопозид, тетракаин, тиоэпа хлорамбуцил, томаймицины, топотеканы, тубулизин, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбины, и производные любого из вышеперечисленного.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, цитотоксический агент, который конъюгирован с анmи-MUC16 антителом является ауристатином, таким как монометиловый Ауристатин Е (ММАЕ) или монометиловый Ауристатин F (MMAF), тубулизином, таким как TUB-OH или TUB-ОМОМ, производным томаймицина, производным доластатина или мейтансиноида, таким как DM1 или DM4. В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент представляет собой мейтансиноид, имеющий структуру формулы (I), включая стереоизомеры соединений формулы (I):
О СН3 (Формула I) где А представляет собой арилен или гетероарилен.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, А представляет собой двухвалентный радикал бензола, пиридина, нафталина или хинолона, которые необязательно замещены.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, А представляет собой арилен.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, А представляет собой:
где R1 независимо представляет собой в каждом случае алкил, алкенил, алкинил, арил, алкарил, аралкил, галоген, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро,
или азидо, где RA представляет собой алкил или гетероалкил;
n представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и q представляет собой целое число от 0 до 5.
- 36 045730
В некоторых вариантах осуществления данного изобретения соединение формулы I выбирают из группы, состоящей из:
- 37 045730
- 38 045730
- 39 045730
В некоторых вариантах осуществления изобретения, мейтансиноид формулы (I) конъюгируют с анTU-MUC16 антителом или антигенсвязывающем фрагментом через линкер, как показано в формуле (IA), ниже:
(Формула IA) где А представляет собой арилен или гетероарилен, как обсуждалось выше в связи с формулой (I); L представляет собой линкер;
ВА представляет собой анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
k представляет собой целое число от 1 до 30.
В различных вариантах осуществления изобретения, L представляет собой:
А
4-8Ρ-ΑΑ1-ΑΑ2ψ где SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или более связей с анти-MUC16 антителом или его фрагментом;
АА1 представляет собой аминокислоту; и АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, АА1-АА2 представляет собой: валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, аспарагин-треонин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланинаспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин или аспарагиналанин.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, SP представляет собой:
Н S
N~(CH2)b-N— или
где представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом; b представляет собой целое число от 2 до 8.
В других вариантах осуществления изобретения, L представляет собой:
где представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом; b представляет собой целое число от 2 до 8.
- 40 045730
В одном варианте осуществления изобретения, соединение формулы (IA), включая линкер, который связывается с анти-MUC16 антителом или его антигенсвязывающий фрагмент, представляет собой:
где 5 представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом. В некоторых случаях этот фрагмент называют Соединением 10.
В одном варианте осуществления изобретения, соединение формулы (IA), включая линкер, который связывается с анти-MUC16 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, представляет собой:
где * представляет собой связь с анmи-MUC16 антителом или его фрагментом. В некоторых случаях этот фрагмент называют Соединением 60.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент представляет собой мейтансиноид, имеющий структуру формулы (II), включая стереоизомеры соединений формулы (II):
° сн3 (Формула II) где Asa представляет собой аминокислоту, пептид, имеющий 2-20 аминокислот, алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, -CR5R6-, -О-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -О-С(=О)-О-, -С(=О)-(СИХ)Р1-, -С(=О)-О-(СИХ)Р1-, -(СНХ)Р1-С(=О)-, -(СНх)Р1-С(=О)-О-, -(О-(СН2)р2-)р3-, ((СН2)р2-О-)р3-, -C(=S)-, -C(=S)-S-, -C(=S)-NH-, -S-C(=S)-, -S-C(=S)-S-, -S-, -SO-, -SO2-, -NR4-, -N(R4)-C(=O)-N(R8)-, -N(R4)-C(=O)O-, -N(R4)-C(=O)-, -С(=O)-N(R4)-, -C(=O)-N(R4)-C(=O)- или -O-C(=O)-NR4-, где алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены; и pl, р2 и р3, каждый независимо, равен 0 или целому числу от 1 до 100;
х равен 0, 1 или 2;
R4, R5, R6 и R8, каждый независимо, представляют собой Н или замещенный или незамещенный: ал кил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил или гетероциклил; и
R4a представляет собой замещенный или незамещенный: алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил или гетероциклил.
- 41 045730
В некоторых вариантах осуществления данного изобретения соединение формулы (II) выбирают из группы, состоящей из:
В одном варианте осуществления изобретения, соединение формулы (II), представляет собой:
В некоторых вариантах осуществления изобретения, мейтансиноид формулы (II), конъюгируют с анти-MUC16 антителом или антигенсвязывающим фрагментом через линкер, как показано в формуле (IIA), ниже:
(Формула НА) где ВА представляет собой анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
а представляет собой целое число от 1 до 30;
Z2 представляет собой следующую структурную формулу: -Z2A-Z2B-Z2C-Z2D, где в каждом Z2A, Z2B, Z2C и Z2D независимо отсутствуют, аминокислота, пептид, имеющий 2-20 аминокислот, алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, -CR5R6-, -O-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -О-С(=О)-О-, -С(=О)-(СНх)р1, -C(=O)-O-(CHx)pi, -(СНх)р1-С(=О)-, -(СНх)р1-С(=О)-О-, -(О-(СН2)р2-)р3-, -((СН2)р2-О-)р3-, -C(=S)-, -C(=S)-S-, -C(=S)-NH-, -S-C(=S)-, -S-C(=S)-S-, -S-, -SO-, -SO2-, -NR4-, -N(R4)-C(=O)-N(R8)-, -N(R4)-C(=O)O-, -N(R4)-C(=O)-, -C(=O)-N(R4)-, -C(=O)-N(R4)-C(=O)-, -O-C(=O)-N(R4), -O-C(=S)-N(R4)-, -C(=S)-N(R4)-, -N=C=S, -N=C=O,
- 42 045730
А представляет собой природную или неприродную аминокислоту или пептид, содержащий 2-20 аминокислот;
W представляет собой -O-, -S-, -CR5R6 - или -NR4-;
X представляет собой арил, гетероарил, циклоалкил или гетероциклил, где арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклил необязательно замещены;
где A1, А3 и R1, каждый независимо, представляют собой аминокислоту, пептид, имеющий 2-20 аминокислот, алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, -CR5R6-, -O-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -О-С(=О)-О-, -С(=О)-(СНх)р1-, -C(=O)-O-(CHx)p1-, -(СНх)р1-С(=О)-, -(СНх)р1-С(=О)-О-, -(О-(СН2)р2-)р3-, -((СН2)р2-О-)р3-, -C(=S)-, -C(=S)-S-, -S-C(=S)-, -C(=S)-NH-, -S-C(=S)-S-, -S-, -so-, -SO2-, -NR4-, -N(R4)-C(=O)-N(R8)-, -N(R4)-C(=O)O-, -N(R4)-C(=O)-, -C(=O)-N(R4)-, -C(=O)-N(R4)-C(=O) - или -O-C(=O)-NR4-, где алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены;
R17 выбран из группы, состоящей из О, S, NR18 и CR5R6;
R18 выбран из группы, состоящей из Н, алкила, алкинила, алкенила, циклоалкила, арила, гетероари ла, гетероциклила и ацила, где алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил и ацил необязательно замещены;
R4, R5, R6 и R8, каждый независимо, представляют собой Н или замещенный или незамещенный: ал кил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил или гетероциклил;
R4a является замещенным или незамещенным: алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил или гете роциклил;
p1, р2 и р3, каждый независимо, равен 0 или целому числу от 1 до 100; и х равен 0, 1 или 2.
В некоторых вариантах осуществления формулы (IIA), А представляет собой пептид, выбранный из группы, состоящей из валина-цитруллина, цитруллина-валина, лизина-фенилаланина, фенилаланина лизина, валина-аспарагина, аспарагина-валина, треонина-аспарагина, аспарагина-треонина, серинааспарагина, аспарагина-серина, фенилаланина-аспарагина, аспарагина-фенилаланина, лейцинааспарагина, аспарагина-лейцина, изолейцина-аспарагина, аспарагина-изолейцина, глицина-аспарагина, аспарагина-глицина, глутаминовой кислоты-аспарагина, аспарагина-глутаминовой кислоты, цитруллинааспарагина, аспарагина-цитруллина, аланина-аспарагина и аспарагина-аланина.
В одном варианте осуществления изобретения, соединение формулы (IIA), которая связывается с анти-MUC16 антителом или антигенсвязывающим фрагментом является следующим:
где « представляет собой связь с анти-MUC16 антителом или его фрагментом. В некоторых случаях этот фрагмент называют Соединением 7.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент, который конъюгируют с анти-MUC16 антителом или его фрагментом является чистым, или по существу чистым, диастереомером DM1:
о сн3 (DM1) и у представляет собой целое число от 1 до 0.
В другом варианте осуществления изобретения, ADC содержит А - [L - Р]у структуру, в которой А представляет собой анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и [L -Р] представляет собой:
- 43 045730 о сн3 или их смесь, и где у представляет собой целое число от 1 до 30, и « представляет собой связь с анти-МиС16 антителом или его фрагментом.
Другие производные майтансиноида описаны в WO 2014/145090, WO2016/160615, WO 2015/031396 и, каждый из которых включен в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, цитотоксический агент, который конъюгирует с анти-MUC16 антителом или его фрагментом является ММАЕМ или MMAF.
Другие цитотоксические агенты, известные в данной области техники в пределах объема данного изобретения, в том числе, например, белковые токсины, такие как рицин, токсин С. difficile, экзотоксин Pseudomonas, дифтерийный токсин, ботулинический токсин, бриодин, сапорин, токсины лаконоса (то есть фитолаккатоксин и фитолакцигенин) и другие, такие как те, которые описаны в Sapra et al., Pharmacol. & Therapeutics, 2013, 138: 452-469.
Цитотоксические агенты (полезные нагрузки) могут быть связаны с анти-MUC16 антигенсвязывающей молекулой или антителом по данному изобретению через химический линкер, который ковалентно связывает соединение полезной нагрузки с молекулой белка (т.е. антителом). Иллюстративные варианты осуществления конкретных линкеров обсуждаются выше. В более общем смысле и используемый в данном документе термин линкер относится к любой двухвалентной группе или фрагменту, который связывает, соединяет или связывает связывающий агент (например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент) с указанным соединением полезной нагрузки в данном документе. Как правило, подходящие линкеры связывающего агента для конъюгатов антител, описанных в данном документе, представляют собой те, которые являются достаточно стабильными, чтобы использовать циркулирующий период полужизни антитела, и в то же время способны высвобождать его полезную нагрузку после антиген-опосредованной интернализации конъюгата. Линкеры могут быть расщепляемыми или нерасщепляемыми. Расщепляемые линкеры представляют собой линкеры, которые расщепляются посредством внутриклеточного метаболизма после интернализации, например, расщепления посредством гидролиза, восстановления или ферментативной реакции. Нерасщепляемые линкеры представляют собой линкеры, которые высвобождают присоединенную полезную нагрузку посредством лизосомальной деградации антитела после интернализации. Подходящие линкеры включают, но не ограничиваются ими, кислотно-лабильные линкеры, гидролизно-лабильные линкеры, ферментативно расщепляемые линкеры, восстанавливающие лабильные линкеры, саморасщепляющиеся линкеры и нерасщепляемые линкеры. Подходящие линкеры также включают, но не ограничиваются ими, те, которые являются ими или содержат пептиды, глюкурониды, сукцинимид-тиоэфиры, полиэтиленгликолевые (ПЭГ) единицы, гидразоны, маль-капроильные единицы, дипептидные единицы, валин-цитруллиновые единицы и парааминобензил (РАВ) единицы. В некоторых случаях линкер способен связываться с антителом или антигенсвязывающим фрагментом через остаток лизина или остаток цистеина (например, посредством расщепления дисульфидной группы антитела или фрагмента, или через остаток цистеина, встроенный в антитело или фрагмент). В некоторых случаях линкер способен связываться с антителом или фрагментом через остаток глутамина, в том числе полученный трансглутаминаз-опосредованной конъюгацией.
Иллюстративные линкеры, которые могут быть использованы в контексте данного изобретения, включают линкеры, которые содержат или состоят из, например, МС (6-малеимидокапроил), МСС (малеимидометил циклогексан-1-карбоксилат), МР (малеимидопропаноил), val-cit (валин-цитруллин), val-ala (валин-аланин), ala-phe (аланин-фенилаланин), phe-lys (фенилаланин-лизин), сайт дипептида в расщеп
- 44 045730 ляемом протеазой линкере, РАВ (п-аминобензилоксикарбонил), SPP (N-сукцинимидил 4-(2пиридилтио)пентаноат), SMCC(N-сукцинимидил 4-(N-малеимидометил) циклогексан-1-карбоксилат), SIAB (N-сукцинимидил (4-йод-ацетил)аминобензоат) и их варианты и комбинации.
Дополнительные примеры линкеров, которые можно использовать в контексте данного изобретения, описаны, например, в патенте США № 7754681 и в Ducry, Bioconjugate Chem., 2010, 21: 5-13, и цитированных там ссылках, содержание которых полностью включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте. В некоторых случаях линкер представляет собой или содержит саморасщепляющийся спейсер, такой как обсуждаемые в Jin, et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2012, 20: 34653469, и Wu, et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2016, 24: 2697-2706.
Полезная нагрузка может быть связана с анти-MUC16 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом с помощью вложений в конкретных аминокислотах в пределах антитела или антигенсвязывающей молекулы. Иллюстративные аминокислотные присоединения, которые можно использовать в контексте этого аспекта изобретения, включают, например, лизин (см., например, патент США № 5208202; US 2010/0129314; Hollander et al., Bioconjugate Chem., 2008)., 19: 358-361; WO 2005/089808; патент США № 5714586; US 2013/0101546 и US 2012/0585592), цистеин (см., например, US 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546; и патент США № 7750116), селеноцистеин (см., например, WO 2008/122039; и Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105: 12451-12456), формилглицин (см., например, Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3: 321-322; Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., США, 2013, 110: 46-51, и Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10: 1052-1067), неприродные аминокислоты (см., например, WO 2013/068874 и WO 2012/166559) и кислые аминокислоты (см., например, WO 2012/05982). Линкеры также могут быть конъюгированы с антигенсвязывающим белком посредством присоединения к углеводам (см., например, US 2008/0305497 и Ryan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13: 127-130) и дисульфидным линкерам (см., например, WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611 и Shaunak et al., Nat. Chem. Biol., 2006, 2: 312-313).
Отношение лекарственное средство-антитело (DAR) представляет собой среднее число лекарственных средств, конъюгированных с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, которое оказывает важное влияние на эффективность, активность и фармакокинетику ADC. В различных вариантах осуществления изобретения, DAR составляет от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 молекул лекарственного средства на антитело. В некоторых вариантах осуществления изобретения, DAR составляет от 1 до 4. В определенных вариантах осуществления изобретения, DAR составляет от 2 до 4. В некоторых случаях DAR составляет от 2 до 3. В некоторых случаях DAR составляет от 3 до 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения, DAR составляет от 1 до 10, от 1 до 20 или от 1 до 30 (то есть от 1 до 30 молекул лекарственного средства на антитело или его антигенсвязывающий фрагмент).
Терапевтическая формула и введение.
Данное изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению. Фармацевтические композиции по данному изобретению составляют с подходящими носителями, наполнителями и другими агентами, которые обеспечивают улучшенный перенос, доставку, переносимость и тому подобное. Множество подходящих составов можно найти в рецептурном формуляре, известном всем фармацевтическим химикам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Истон, штат Пенсильвания. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, липид (катионный или анионный), содержащий везикулы (такие как LIPOFECTIN™ Life Technologies, Карлсбад, Калифорния), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсии типа масло в воде или вода в масле, эмульсии на основе карбовакса (полиэтиленгликоли с разной молекулярной массой), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс; см., также Powell et al. Compendium of excipients for parenteral formulations PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
Доза антигенсвязывающей молекулы, вводимая пациенту, может варьироваться в зависимости от возраста и размера пациента, целевого заболевания, состояний, пути введения и тому подобного. Предпочтительная доза обычно рассчитывается в зависимости от массы тела или площади поверхности тела. Когда биспецифичная антигенсвязывающая молекула по данному изобретению используется в терапевтических целях у взрослого пациента, может быть выгодно внутривенно вводить биспецифичную антигенсвязывающую молекулу по данному изобретению обычно в однократной дозе от около 0,01 до около 20 мг/кг массы тела, более предпочтительно от около 0,02 до около 7, от около 0,03 до около 5 или от около 0,05 до около 3 мг/кг массы тела. В зависимости от тяжести состояния, частота и длительность лечения могут быть скорректированы. Эффективные дозы и схемы введения биспецифичной антигенсвязывающей молекулы могут быть определены опытным путем; например, прогресс пациента может контролироваться путем периодической оценки, и доза корректируется соответствующим образом. Кроме того, межвидовое масштабирование доз может быть выполнено с использованием хорошо известных в данной области способов (например, Mordenti et al., 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351).
Различные системы доставки известны и могут быть применены для введения фармацевтической композиции по данному изобретению, например, инкапсулирования в липосомы, микрочастицы, микро
- 45 045730 капсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, опосредованный рецепторами эндоцитоз (см., например, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Способы введения включают, но без ограничения, внутрикожные, внутримышечные, внутрибрюшинные, внутривенные, подкожные, интраназальные, эпидуральные и оральные пути введения. Композицию можно вводить любым удобным путем, например, путем инфузии или болюсной инъекции, путем абсорбции через эпителиальные или слизистые выстилки (например, слизистую оболочку полости рта, ректальную и кишечную слизистую оболочку и тому подобное) и можно вводить вместе с другими биологически активными агентами. Введение может быть системным или локальным.
Фармацевтическая композиция по данному изобретению может быть доставлена подкожно или внутривенно стандартной иглой и шприцем. Кроме того, в отношении подкожной доставки шприц-ручка для доставки легко может иметь применение для доставки фармацевтической композиции по данному изобретению. Такая шприц-ручка может быть многоразовой или одноразовой. Многоразовая шприцручка обычно использует сменный картридж, который содержит фармацевтическую композицию. Как только вся фармацевтическая композиция, содержащаяся в картридже, была введена и картридж становится пустым, пустой картридж можно легко выбросить и заменить новым картриджем, который содержит фармацевтическую композицию. Затем шприц-ручка может быть повторно использована. В одноразовой шприц-ручке нет сменного картриджа. Скорее, одноразовая шприц-ручка заполняется фармацевтической композицией, удерживаемой в резервуаре внутри устройства. Как только резервуар опустеет от фармацевтической композиции, все устройство выбрасывается.
Многочисленные повторно используемые шприц-ручки и шприц-тюбики имеют применение для подкожной доставки фармацевтической композиции по данному изобретению. Примеры включают, но без ограничений, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Вудсток, Великобритания), шприц-ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Бургдорф, Швейцария), шприц-ручку HUMALOG MIX 75/25™, шприц-ручку HUMALOG™, шприц-ручку HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly and Co., Индианаполис, штат Индиана), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), шприц-ручку BD™ (Becton Dickinson, Франклин Лейкс, штат Нью-Джерси), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ и OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Франкфурт, Германия), и это лишь некоторые из них. Примеры одноразовых шприц-ручек, которые применяются для подкожной доставки фармацевтической композиции по данному изобретению, включают, но без ограничений, шприц-ручку SOLOSTAR™ (Sanofi-Aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), шприц-тюбик SURECLICK™ (Amgen, Таузанд-Окс, Калифорния), PENLET™ (Haselmeier, Штутгарт, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и шприц-ручку HUMIRA™ (Abbott Labs, Абботт Парк, Иллинойс), и это лишь некоторые из них.
В определенных ситуациях фармацевтическая композиция может поставляться в системе контролируемого высвобождения. В одном варианте осуществления изобретения, может использоваться насос (см. Langer, выше; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201). В другом варианте осуществления изобретения, могут быть использованы полимерные материалы; см. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Бока-Ратон, Флорида. В еще одном варианте осуществления изобретения, система контролируемого высвобождения может быть расположена вблизи мишени композиции, таким образом требуется лишь доля системной дозы (см., например, Goodson, 1984, в Medical Applications of Controlled Release, выше, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы с контролируемым высвобождением обсуждаются в обзоре Langer, 1990, Science 249: 1527-1533.
Инъекционные формы могут включать лекарственные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и тому подобного. Эти инъекционные формы могут быть получены общеизвестными способами. Например, инъекционные формы, могут быть получены, например, путем растворения, суспендирования или эмульгирования антитела или его соли, описанных выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно применяемой для инъекций. В качестве водной среды для инъекций существуют, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства и тому подобное, которые могут быть применены в комбинации с соответствующим солюбилизирующим агентом, таким как спирт (например, этанол), полиспирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, НСО-50 (полиоксиэтилен (50 моль) аддукт гидрированного касторового масла] и тому подобное. В качестве маслянистой среды применяют, например, кунжутное масло, соевое масло и тому подобное, которые могут быть применены в комбинации со солюбилизирующим агентом, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и тому подобное. Инъекцию, полученную таким образом, предпочтительно, заполняют в соответствующую ампулу.
Преимущественно фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, готовят в лекарственной форме в единичной дозе, подходящей для дозы активных ингредиентов. Такие лекарственные формы в единичной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекции (ампулы), суппозитории и тому подобное. Количество содержащегося вышеупомянутого антитела обычно составляет от 5 до 500 мг на лекарственную форму в единичной дозе; особенно в
- 46 045730 форме инъекции, предпочтительно, чтобы вышеупомянутое антитело содержалось в количестве от около 5 до около 100 мг и от около 10 до около 250 мг для других лекарственных форм.
Терапевтическое использование антигенсвязывающих молекул.
Данное изобретение включает в себя способы, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом терапевтической композиции, содержащей анти-MUC16 антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, которые специфически связываются с CD3 и MUC16. Терапевтическая композиция может содержать любое из антител или биспецифичных антигенсвязывающих молекул, как описано в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Используемое в данном документе, выражение субъект, нуждающийся в этом означает человека или животное, отличное от человека, которые проявляют один или более симптомов или признаков рака (например, субъект, экспрессирующий опухоль или страдающий от любого из видов рака, упомянутых в данном документе ниже), или кому в противном случае было бы полезно ингибирование или снижение активности MUC16 или истощении клеток MUC16+ (например, клеток рака яичников).
Антитела и биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению (и терапевтические композиции, содержащие то же) полезны, в частности, для лечения любого заболевания или расстройства, при которых стимуляция, активация и/или нацеливание иммунного ответа было бы полезным. В частности, анти-MUC16 антитела или анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичные антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению могут быть использованы для лечения, профилактики и/или улучшения любого заболевания или расстройства, связанных или опосредованных экспрессией MUC16 или активностью, или пролиферацией клеток MUC16+. Механизм действия, с помощью которого достигаются терапевтические способы по данному изобретению, включает уничтожение клеток, экспрессирующих MUC16, в присутствии эффекторных клеток, например, посредством КЗЦ, апоптоза, АЗКЦ, фагоцитоза или путем комбинации двух или более из этих механизмов. Клетки, экспрессирующие MUC16, которые можно ингибировать или уничтожать с использованием биспецифичных антигенсвязывающих молекул по данному изобретению, включают, например, клетки рака яичника.
Антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению могут быть использованы для лечения заболевания или расстройства, ассоциированных с экспрессией MUC16, включая, например, рак, включающий рак яичника, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого, внутрипеченочную холангиокарциному массообразующего типа, аденокарциному шейки матки и аденокарциному желудочного тракта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления данного изобретения анти-MUC16 антитела или анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичные антитела полезны для лечения пациента, страдающего раком яичника. Согласно другим связанным вариантам осуществления изобретения предложены способы, включающие введение анти-MUC16 антитела или анти-CD3/антиMUC16 биспецифичной антигенсвязывающей молекулы, как описано в данном документе, пациенту, страдающему раком яичника.
Аналитические/диагностические способы, известные в данной области, такие как сканирование опухоли и т.д., могут быть использованы для определения того, имеет ли пациент опухоль яичника.
Данное изобретение также относится к способам лечения остаточного рака у субъекта. Используемый в данном документе термин остаточный рак означает наличие или персистенцию одной или более раковых клеток у субъекта после лечения противораковой терапией.
В соответствии с некоторыми аспектами, данное изобретение относится к способам лечения заболевания или расстройства, связанного с экспрессией MUC16 (например, рака яичника), включающим введение одной или более из анти-MUC16 или биспецифичных антигенсвязывающих молекул, описанных в другом месте данного документа субъекту после того, как было определено, что субъект имеет рак предстательной железы. Например, данное изобретение включает способы лечения рака яичника, включающие введение анти-MUC16 антитела или анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичной антигенсвязывающей молекулы пациенту через 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделю, 2 недели, 3 недели или 4 недели, 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 1 год или более после того, как субъект получил гормональную терапию (например, антиандрогенную терапию).
Комбинированная терапия и составы.
Данное изобретение относится к способам, которые включают в себя введение фармацевтической композиции, содержащей любое из приведенных в качестве примера антител и биспецифичных антигенсвязывающих молекул, описанных в данном документе, в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами. Иллюстративные дополнительные терапевтические агенты, которые можно комбинировать или вводить в комбинации с антигенсвязывающей молекулой по данному изобретению, включают, например, антагонист EGFR (например, анти-EGFR антитело [например, цетуксимаб или панитумумаб] или низкомолекулярный ингибитор EGFR [например, гефитиниб или эрлотиниб]), антагонист другого члена семейства EGFR, такого как Her2/ErbB2, ErbB3 или ErbB4 (например, антиErbB2, анти-ErbB3 или анти-ErbB4 антитело или низкомолекулярный ингибитор активности ErbB2, ErbB3 или ErbB4), антагонист EGFRvIII (например, антитело, которое специфически связывает EGFRvIII), антагонист сМЕТ (например, анти-сМЕТ антитело), антагонист IGF1R (например, анти-IGFlR
- 47 045730 антитело), B-raf ингибитор (например, вемурафениб, сорафениб, GDC-0879, PLX-4720), ингибитор PDGFR-α (например, анти-PDGFR-a антитело), ингибитор PDGFR-β (например, анти-PDGFR-e антитело), антагонист VEGF (например, VEGF-ловушка, см., например, US 7087411, (также называемый в данном документе VEGF-ингибирующий слитый белок), анти-VEGF антитело (например, бевацизумаб), низкомолекулярный ингибитор киназы рецептора VEGF (например, сунитиниб, сорафениб или пазопаниб)), антагонист DLL4 (например, анти-DLL4 антитело, описанное в US 2009/0142354 такой как REGN421), антагонист Ang2 (например, анти-Ang2 антитело, описанное в US 2011/0027286, такое как Н1Н685Р), антагонист FOLH1 (PSMA), антагонист PRLR (например, анти-PRLR антитело), антагонист STEAP1 или STEAP2 (например, анти-STEAP1 антитело или анти-STEAP2 антитело), антагонист TMPRSS2 (например, анти-TMPRSS2 антитело), антагонист MSLN (например, анти-MSLN антитело), антагонист СА9 (например, анти-СА9 антитело), антагонист уроплакина (например, анти-уроплакин антитело) и др. Другие агенты, которые можно выгодно вводить в комбинации с антигенсвязывающими молекулами по данному изобретению, включают ингибиторы цитокинов, включая низкомолекулярные ингибиторы цитокинов и антитела, которые связываются с цитокинами, такими как ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-9, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-17, ИЛ-18 или их соответствующими рецепторами. Фармацевтические композиции по данному изобретению (например, фармацевтические композиции, содержащие анти-CD3/анти-MUC16 биспецифичную антигенсвязывающую молекулу, как описано в настоящем документе) также можно вводить как часть терапевтического режима, содержащего одну или более терапевтических комбинаций, выбранных из ICE: ифосфамид (например, Ifex®), карбоплатин (например, Paraplatin®), этопозид (например, Etopophos®, Toposar®, VePesid®, VP-16); DHAP: дексаметазон (например, Decadron®), цитарабин (например, Cytosar-U®, цитозинарабинозид, ara-С), цисплатин (например, Platinol®-AQ); и ESHAP: этопозид (например, Etopophos®, Toposar®, VePesid®, VP16), метилпреднизолон (например, Medrol®), высокие дозы цитарабина, цисплатин (например, Platinol®AQ).
Данное изобретение также включает терапевтические комбинации, содержащие любую из антигенсвязывающих молекул, упомянутых в данном документе и ингибитор одного или более из VEGF, Ang2, D114, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, EGFRvIII, cMet, IGF1R, B-raf, PDGFR-α, PDGFR-β, FOLH1 (PSMA), PRLR, STEAP1, STEAP2, TMPRSS2, MSLN, CA9, уроплакин или любой из вышеупомянутых цитокинов, причем ингибитор представляет собой аптамер, антисмысловую молекулу, рибозим, миРНК, пептидное тело, нанотело или фрагмент антитела (например, фрагмент Fab; фрагмент F(ab')2; фрагмент Fd; фрагмент Fv; scFv; фрагмент дАт) или другие сконструированные молекулы, например, диатела, триантела, тетрабела, минитела и минимальные единицы распознавания). Антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению также можно вводить и/или совместно составлять в комбинации с противовирусными средствами, антибиотиками, анальгетиками, кортикостероидами и/или NSAID. Антигенсвязывающие молекулы по данному изобретению также можно вводить как часть схемы лечения, которая также включает лучевую терапию и/или обычную химиотерапию.
Дополнительный терапевтически активный компонент(ы) можно вводить непосредственно перед, одновременно или вскоре после введения антигенсвязывающей молекулы по данному изобретению; (для целей данного изобретения такие схемы введения считаются введением антигенсвязывающей молекулы в сочетании с дополнительным терапевтически активным компонентом).
Данное изобретение включает в себя фармацевтические композиции, в которых антигенсвязывающая молекула по данному изобретению совместно составляется с одним или более дополнительными терапевтически активным компонентом(ами), как описано в данном документе в другом месте.
Схемы введения.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления данного изобретения, несколько доз антигенсвязывающей молекулы (например, анти-MUC16 антитело или биспецифичная антигенсвязывающая молекула, которая специфически связывается с MUC16 и CD3) может вводится субъекту в течение определенного периода времени. Способы по этому аспекту изобретения включают последовательное введение субъекту нескольких доз антигенсвязывающей молекулы по данному изобретению. Применяемый в данном документе термин последовательное введение означает, что каждая доза антигенсвязывающей молекулы вводится субъекту в разный момент времени, например, в разные дни, разделенные заданным интервалом (например, часы, дни, недели или месяцы). Данное изобретение включает способы, которые включают в себя последовательное введение пациенту единственной начальной дозы антигенсвязывающей молекулы, за которой следуют одна или более вторичных доз антигенсвязывающей молекулы, и необязательно сопровождаемая одной или более третичными дозами антигенсвязывающей молекулы.
Термины начальная доза, вторичные дозы и третичные дозы относятся к временной последовательности введения антигенсвязывающей молекулы по данному изобретению. Таким образом, начальная доза представляет собой дозу, которая вводится в начале курса лечения (также называемая исходной дозой); вторичные дозы представляют собой дозы, вводимые после начальной дозы; а третичные дозы представляют собой дозы, вводимые после вторичных доз. Начальные, вторичные и третичные дозы могут содержать одно и то же количество антигенсвязывающей молекулы, но обычно могут
- 48 045730 отличаться друг от друга с точки зрения частоты введения. Однако в определенных вариантах реализации данного изобретения количество антигенсвязывающей молекулы, содержащейся в начальных, вторичных и/или третичных дозах, отличается друг от друга (например, скорректировано вверх или вниз по мере необходимости) в ходе лечения. В некоторых вариантах осуществления изобретения две или более (например, 2, 3, 4 или 5) дозы вводят в начале курса лечения в качестве насыщающих доз с последующими дозами, которые вводятся менее часто (например, поддерживающие дозы).
В одном иллюстративном варианте реализации данного изобретения каждую вторичную и/или третью дозу вводят через от 1 до 26 недель (например, 1, 11/2 2, 21/2, 3, 31/2, 4, 41/2, 5, 51/2, 6, 61/2, 7, 71/2, 8, 81/2, 9, 91/2, 10, 101/2, 11, 111/2, 12, 121/2, 13, 131/2, 14, 141/2, 15, 151/2, 16, 161/2, 17, 171/2, 18, 181/2, 19, 191/2, 20, 201/2, 21, 211/2, 22, 221/2, 23, 231/2, 24, 241/2, 25, 251/2, 26, 261/2 и более) после непосредственно предшествующей дозы. Фраза непосредственно предшествующая доза, как она применяется в данном документе, означает, в последовательности множественных введений, дозу антигенсвязывающей молекулы, которую вводят пациенту до введения следующей дозы в последовательности без промежуточных доз.
Способы согласно этому аспекту изобретения могут включать введение пациенту любого количества вторичных и/или третичных доз антигенсвязывающей молекулы (например, анти-МиС16 антитела или биспецифичной антигенсвязывающей молекулы, которая специфически связывается с MUC16 и CD3). Например, в определенных вариантах осуществления изобретения пациенту вводится только одна вторичная доза. В других вариантах осуществления изобретения пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных доз. Аналогичным образом, в определенных вариантах осуществления изобретения пациенту вводится только одна третичная доза. В других вариантах осуществления изобретения пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз.
В вариантах осуществления с участием нескольких вторичных доз, каждая вторичная доза может быть введена в той же частоте, что и другие вторичные дозы. Например, каждая вторичная доза может вводиться пациенту через 1-2 недели после непосредственно предшествующей дозы. Аналогично, в вариантах осуществления изобретения, включающих множество третичных доз, каждая третичная доза может вводиться с той же частотой, что и другие третичные дозы. Например, каждая третичная доза может вводиться пациенту через 2-4 недели после непосредственно предшествующей дозы. Альтернативно, частота, с которой вторичные и/или третичные дозы вводятся пациенту, может изменяться в течение курса лечения. Частота введения может также регулироваться в ходе курса лечения лечащим врачом в зависимости от потребностей отдельного пациента после клинического обследования.
Диагностическое применение антител.
Анти-МиС16 антитела по данному изобретению также могут быть использованы для обнаружения и/или измерения MUC16 или МиС16-экспрессирующих клеток в образце, например, биологическом образце в диагностических целях. Например, анти-МиС16 антитело или его фрагмент можно использовать для диагностики состояния или заболевания, характеризующегося аберрантной экспрессией (например, избыточной экспрессией, недостаточной экспрессией, отсутствием экспрессии и т.д.) MUC16. Иллюстративные диагностические анализы для MUC16 могут включать, например, приведение в контакт образца, полученного от пациента, с анти-МиС16 антителом по данному изобретению, причем анти-МиС16 антитело мечено обнаруживаемой меткой или репортерной молекулой. В альтернативном варианте, немеченое анти-МиС16 антитело может применяться в диагностических применениях в сочетании со вторичным антителом, которое само по себе является меченым для детекции. Детектируемая метка или репортерная молекула могут представлять собой радиоизотоп, такой как 3Н, 14С, 32Р, 35S, или 125I; флуоресцентный или хемилюминесцентный фрагмент, такой как флуоресцеинизотиоцианат или родамин; или фермент, такой как щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза, пероксидаза хрена или люцифераза. Другое иллюстративное диагностическое применение анти-МиС16 антител по данному изобретению включает 89Zr-меченное, такое как 89Zr-десферриоксамин-меченное, антитело с целью не инвазивной идентификации и отслеживания опухолевых клеток у субъекта [например, визуализация позитронно-эмиссионной томографии (PET) (см., например, Tavare, R. et al. Cancer Res 2016 1 января; 76 (1):.. 73-82, и Azad, В.В. et al. Oncotarget. 2016 Mar 15; 7(11) :12344-58). Конкретные типовые анализы, которые могут быть применены для обнаружения или измерения MUC16 в образце, включают в себя иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммуноанализ (РИА) и сортировку флуоресцентно-активированных клеток (FACS - fluorescence-activated cell sorting).
Образцы, которые могут применяться в MUC16 диагностических анализах в соответствии с данным изобретением, включают в себя любой образец ткани или жидкости, который можно получить от пациента, который содержит определяемые количества белка MUC16 или его фрагментов в нормальных или патологических условиях. Как правило, уровни MUC16 в конкретном образце, полученном от здорового пациента (например, пациента, не страдающего заболеванием или состоянием, связанным с аномальными уровнями или активностью MUC16) будут измеряться с целью первоначального установления исходного уровня или стандартного уровня MUC16. Этот базовый уровень MUC16 можно затем сравнить с уровнями MUC16, измеренными в образцах, полученных от индивидуумов, подозреваемых в наличии заболевания, связанного с MUC16 (например, опухоли, содержащей клетки, экспрессирующие MUC16) или состояния.
- 49 045730
Примеры образцов ткани или жидкости включают, но не ограничиваются ими, плазму, сыворотку, асцит, яичник, матку, шейку матки, печень, мочевой пузырь, поджелудочную железу, желудок, тонкую или толстую кишку, желчный пузырь, грудь, легкое, почку, слюнные железы, и слезные железы или любое их злокачественное эпителиоидное образование. Дополнительные примеры ткани или образцов жидкости, включают, но не ограничиваются ими папиллярный серозный рак шейки матки, аденокарциному эндометрия, светлоклеточную аденокарциному мочевого пузыря, карциному семенных пузырьков, карциному желудка, колоректальную аденокарциному и эпителиоидную мезотелиому. Предполагается, что любой образец жидкости или ткани, который содержит обнаруживаемые количества белка MUC16 или его фрагментов, может быть подвергнут способам обнаружения, описанным в данном документе. Описанные способы могут использоваться для мониторинга развития и прогрессирования злокачественных заболеваний или для различения нормальных и болезненных состояний. Как таковые, описанные способы могут быть использованы для выявления или мониторинга раковых заболеваний, таких как рак яичников, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого, внутрипеченочную холангиокарциному массообразующего типа, аденокарциному шейки матки, и аденокарциному желудочного тракта.
Примеры
Следующие примеры приведены с тем, чтобы предоставить специалистам в данной области техники полное раскрытие и описание того, как производить и применять способы и композиции изобретения, и не предназначены для ограничения объема изобретения, которое авторы изобретения считают своим изобретением. Были предприняты усилия для обеспечения точности в отношении применяемых чисел (например, количеств, температуры и тому подобное), однако необходимо учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, части представляют собой части по массе, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура представлена в градусах Цельсия, и давление находится на уровне или около атмосферного.
Пример 1. Получение анти-MUC16 антител.
Ahtu-MUC16 антитела получают путем иммунизации генетически модифицированной мыши с человеческим антигеном MUC16 или иммунизации сконструированной мыши, содержащей ДНК, кодирующей человеческий иммуноглобулин тяжелой и каппы легкой цепи вариабельных участков с человеческим антигеном MUC16.
Генетически модифицированные мыши были иммунизированы hMUC16.nub (усеченный формат, охватывающий последние пять SEA доменов муцина-1б (SEQ ID: 1902)), либо иммунизированы hMUC16-экспрессирующей клеточной линией, такой как клетки OVCAR-3. SEQ ID NO: 1902 содержит остатки 13810-14451 SEQ ID NO: 1899, а также С-концевые метки. После иммунизации спленоциты собирали у каждой мыши и (1) сливали с клетками миеломы мыши для сохранения их жизнеспособности и формирования клеток гибридомы и скринировали на специфичность к MUC16, или (2) отсортировали Вклетки (как описано в US 2007/0280945A1) используя фрагмент MUC16 человека в качестве сортирующего реагента, который связывает и идентифицирует реактивные антитела (антиген-позитивные Вклетки).
Химерные антитела к MUC16 первоначально были изолированы, имели вариабельный участок человека и константный участок мыши. Антитела были охарактеризованы и отобраны по желаемым характеристикам, включая аффинность, селективность и т.д. При необходимости константные участки мыши были заменены желаемым константным участком человека, например, константным участком дикого типа или модифицированного IgG1 или IgG4, для генерации полностью человеческого анти-MUC16 антитела. Несмотря на то, что выбранный константный участок может варьироваться в зависимости от конкретного применения, вариабельный участок обеспечивает высокоаффинные антигенсвязывающие и специфичные к цели характеристики. Обозначения названий антител, такие как Н1Н8755Р и H1M7129N, обозначают полностью человеческие антитела ШН или химерные вариабельный человека/константный мыши участки антител H1M. Антитела, идентифицированные гибридомным способом, обозначены идентификационными номерами антител, заканчивающимися на N или N2. Антитела, идентифицированные способом сортировки В-клеток, обозначены идентификационными номерами антител, заканчивающимися на Р или Р2.
Некоторые биологические свойства иллюстративных анти-MUC16 антител, полученных в соответствии со способами этого примера, подробно описаны в примерах, приведенных ниже.
Последовательности аминокислот и нуклеиновых кислот вариабельного участка тяжелой и легкой цепей анти-MUC16 антител.
В табл. 1 приведены идентификаторы аминокислотной последовательности вариабельных участков и CDR тяжелой и легкой цепи выбранных анти-MUC16 антител по данному изобретению. Соответствующие идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты приведены в табл. 2.
- 50 045730
Таблица 1
Идентификаторы аминокислотной последовательности
SEQ ID NO: | ||||||||
Обозначение антитела | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
Н1Н8755Р | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | 16 |
Н1Н8767Р | 18 | 20 | 22 | 24 | 26 | 28 | 30 | 32 |
Н1Н8770Р | 34 | 36 | 38 | 40 | 42 | 44 | 46 | 48 |
Н1Н8783Р | 50 | 52 | 54 | 56 | 58 | 60 | 62 | 64 |
Н1Н8790Р | 66 | 68 | 70 | 72 | 74 | 76 | 78 | 80 |
Н1Н8794Р | 82 | 84 | 86 | 88 | 90 | 92 | 94 | 96 |
Н1Н8794Р2 | 82 | 84 | 86 | 88 | 858 | 860 | 862 | 864 |
Н1Н8799Р | 98 | 100 | 102 | 104 | 106 | 108 | 110 | 112 |
Н1Н8799Р2 | 98 | 100 | 102 | 104 | 170 | 172 | 174 | 176 |
Н1Н8804Р | 114 | 116 | 118 | 120 | 122 | 124 | 126 | 128 |
Н1Н8808Р | 130 | 132 | 134 | 136 | 138 | 140 | 142 | 144 |
Н1Н8810Р | 146 | 148 | 150 | 152 | 154 | 156 | 158 | 160 |
Н1Н8813Р | 162 | 164 | 166 | 168 | 170 | 172 | 174 | 176 |
H1M7129N | 178 | 180 | 182 | 184 | 186 | 188 | 190 | 192 |
H1M7137N | 194 | 196 | 198 | 200 | 394 | 396 | 398 | 400 |
H1M9519N | 202 | 204 | 206 | 208 | 210 | 212 | 214 | 216 |
H1M9521N | 218 | 220 | 222 | 224 | 226 | 228 | 230 | 232 |
H1M9528N | 234 | 236 | 238 | 240 | 242 | 244 | 246 | 248 |
H2M7128N | 250 | 252 | 254 | 256 | 1936 | 1938 | 1940 | 1942 |
H1M7130N | 1944 | 1946 | 1948 | 1950 | 1952 | 1954 | 1956 | 1958 |
H2M7131N | 258 | 260 | 262 | 264 | 266 | 268 | 270 | 272 |
H2M7133N | 274 | 276 | 278 | 280 | 1936 | 1938 | 1940 | 1942 |
H2M7134N | 282 | 284 | 286 | 288 | 290 | 292 | 294 | 296 |
H2M7135N | 298 | 300 | 302 | 304 | 306 | 308 | 310 | 312 |
H2M7138N | 314 | 316 | 318 | 320 | 322 | 324 | 326 | 328 |
H2M9538N | 330 | 332 | 334 | 336 | 338 | 340 | 342 | 344 |
H3M9524N | 346 | 348 | 350 | 352 | 354 | 356 | 358 | 360 |
H3M9525N | 362 | 364 | 366 | 368 | 370 | 372 | 374 | 376 |
H3M9529N | 378 | 380 | 382 | 384 | 386 | 388 | 390 | 392 |
- 51 045730
Таблица 2
Идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты
SEQ ID NO: | ||||||||
Обозначение антитела | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
Н1Н8755Р | 1 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 |
Н1Н8767Р | 17 | 19 | 21 | 23 | 25 | 27 | 29 | 31 |
Н1Н8770Р | 33 | 35 | 37 | 39 | 41 | 43 | 45 | 47 |
Н1Н8783Р | 49 | 51 | 53 | 55 | 57 | 59 | 61 | 63 |
Н1Н8790Р | 65 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 77 | 79 |
Н1Н8794Р | 81 | 83 | 85 | 87 | 89 | 91 | 93 | 95 |
Н1Н8794Р2 | 81 | 83 | 85 | 87 | 857 | 859 | 861 | 863 |
Н1Н8799Р | 97 | 99 | 101 | 103 | 105 | 107 | 109 | 111 |
Н1Н8799Р2 | 97 | 99 | 101 | 103 | 169 | 171 | 173 | 175 |
Н1Н8804Р | 113 | 115 | 117 | 119 | 121 | 123 | 125 | 127 |
Н1Н8808Р | 129 | 131 | 133 | 135 | 137 | 139 | 141 | 143 |
Н1Н8810Р | 145 | 147 | 149 | 151 | 153 | 155 | 157 | 159 |
Н1Н8813Р | 161 | 163 | 165 | 167 | 169 | 171 | 173 | 175 |
H1M7129N | 177 | 179 | 181 | 183 | 185 | 187 | 189 | 191 |
H1M7137N | 193 | 195 | 197 | 199 | 393 | 395 | 397 | 399 |
H1M9519N | 201 | 203 | 205 | 207 | 209 | 211 | 213 | 215 |
H1M9521N | 217 | 219 | 221 | 223 | 225 | 227 | 229 | 231 |
H1M9528N | 233 | 235 | 237 | 239 | 241 | 243 | 245 | 247 |
H2M7128N | 249 | 251 | 253 | 255 | 1935 | 1937 | 1939 | 1941 |
H1M7130N | 1943 | 1945 | 1947 | 1949 | 1951 | 1953 | 1955 | 1957 |
H2M7131N | 257 | 259 | 261 | 263 | 265 | 267 | 269 | 271 |
H2M7133N | 273 | 275 | 277 | 279 | 1935 | 1937 | 1939 | 1941 |
H2M7134N | 281 | 283 | 285 | 287 | 289 | 291 | 293 | 295 |
H2M7135N | 297 | 299 | 301 | 303 | 305 | 307 | 309 | 311 |
H2M7138N | 313 | 315 | 317 | 319 | 321 | 323 | 325 | 327 |
H2M9538N | 329 | 331 | 333 | 335 | 337 | 339 | 341 | 343 |
H3M9524N | 345 | 347 | 349 | 351 | 353 | 355 | 357 | 359 |
H3M9525N | 361 | 363 | 365 | 367 | 369 | 371 | 373 | 375 |
H3M9529N | 377 | 379 | 381 | 383 | 385 | 387 | 389 | 391 |
Пример 2. Ahtu-MUC16 антитела специфически связываются с эндогенно экспрессируемым hMUC16 на клеточной линии OVCAR-3.
Способность анти-MUC16 антител связываться специфически с эндогенно экспрессирующимися MUC16 на линии клеток карциномы яичников человека (OVCAR-3) оценивали с помощью анализа обнаружения на основе электрохемилюминесценции (Мезо Шкала обнаружения (MSD), Роквилль, Мэриленд).
Вкратце, OVCAR-3 и контрольную клеточную линию аденокарциномы яичника, SK-OV-3, которая не имеет детектируемой экспрессии hMUC16, промывали в 1xPBS с добавлением Са2+/Mg2+ (Irvine Scientific, Санта Ана, Калифорния), а затем инкубировали в буфере диссоциации клеток без ферментов (Millipore, Биллерика, Массачусетс) в течение 10 минут при 37°С. Отделенные клетки затем промывали один раз в 1xPBS с добавлением Са2+/Mg2+ и подсчитывали (счетчик клеток Cellometer Auto T4, Nexcelom Bioscience, Лоуренс, Массачусетс). Приблизительно 1,0x104 клеток высевали в MULTI-ARRAY 96луночные планшеты с угольными электродами (MSD) и инкубировали в течение 1 часа при 37°С. Затем неспецифические сайты связывания блокировали с помощью 2% БСА (мас./об.) в PBS в течение 1 часа
- 52 045730 при комнатной температуре. Затем серийные разведения анти-МиС16 или контрольных антител (0,85 пМ - 50 нМ) и буферных контролей без антител добавляли к клеткам, связанным с планшетами, и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре (КТ). Планшеты затем промывали для удаления несвязанных антител с применением устройства отмывки иммунологических планшетов AquaMax2000 (MDS Analytical Technologies, Саннивиль, Калифорния). Антитела, связанные с пластиной, детектировали с помощью антитела, конъюгированного с SULFO-TAG™ анти-человеческой каппа легкой цепи (Regeneron), или антитела, конъюгированного с SULFO-TAG™ анти-мышиного IgG (Jackson Immunoresearch, Вест Гров, Пенсильвания), в течение 1 ч при КТ. После промывки планшеты проявляли с помощью буфера считывания (MSD) в соответствии с протоколом производителя, а люминесцентные сигналы регистрировали с помощью прибора SECTOR Imager 6000 (MSD).
Интенсивность люминесценции, измеренная в относительных световых единицах (RLU), для двух клеточных линий была записана для указания интенсивности связывания каждого антитела. Отношение сигнала, обнаруженного при связывании 1,9 нМ или 16,7 нМ анти-MUC16 антитела с OVCAR-3, по сравнению с SK-OV-3 сообщалось как показатель специфичности и эффективности связывания (табл. 3).
- 53 045730
Таблица 3
Соотношение связывания клетками анти-Мис16 антител к эндогенной экспрессии hMUC16 OVCAR-3 по сравнению с hMUC16-негативными клеточными линиями SK-OV-3
Соотношение: анти-миС16 связывание OVCAR-3/SK-OV3
Идентификатор антитела | [Ат]: 1,9 нМ | [Ат]: 16,7 нМ |
Гибридома анти-Мис16 антител (HIM, Н2М, НЗМ) | ||
H2M7128N | 59 | 31 |
H1M7129N | 68 | 19 |
H2M7131N | 86 | 37 |
H2M7133N | 69 | 33 |
H2M7134N | 68 | 29 |
H2M7135N | 30 | 5 |
H1M7137N | 77 | 29 |
H2M7138N | 82 | 50 |
H3M7132N | 89 | 38 |
H1M9519N | 109 | 78 |
H1M9521N | 132 | 107 |
H3M9524N | 81 | 57 |
H3M9525N | 137 | 51 |
H1M9528N | 153 | 120 |
H3M9529N | 143 | 99 |
H2M9538N | 89 | 26 |
Человеческие Fc анти-миС16 антител (Н1Н) | ||
Н1Н8755Р | 13 | 5 |
Н1Н8767Р | 4 | NS |
Н1Н8770Р | 9 | 3 |
Н1Н8783Р | 11 | 4 |
Н1Н8790Р | 8 | 3 |
Н1Н8794Р | 8 | 3 |
Н1Н8794Р2 | 5 | NS |
Н1Н8799Р | 10 | 4 |
Н1Н8799Р2 | 10 | 4 |
Н1Н8804Р | 8 | 3 |
Н1Н8808Р | 4 | NS |
Н1Н8810Р | 8 | 3 |
Н1Н8813Р | 11 | 5 |
- 54 045730
H1H9519N | 41 | 30 |
H1H9521N | 30 | 28 |
H1H9524N | 20 | 48 |
H1H9525N | 4 | 21 |
H1H9528N | 41 | 18 |
H1H9529N | 109 | 74 |
H1H9538N | 12 | 13 |
Контроли | ||
Антитело изотипического контроля mlgGl | NS | NS |
Антитело изотипического контроля m!gG2a | NS | NS |
Антитело изотипического контроля hlgGl | NS | NS |
NS=несnецифическое - соотношение при 1,9 нМ или 16,7 нМ <2,5кратное.
Изотипы: Н1Н: hIgG1; HIM: mIgG1; H2M: mIgG2; H3M: mIgG3.
Примечание: изменение в связывании соотношения интенсивности между одним и тем же антителом, экспрессируемым с Fc мыши и Fc человека, обусловлены использованием различных реагентов вторичного обнаружения SULFO-TAG.
Как видно из результатов в табл. 3, большинство анти-MUC16 антител данного изобретения связаны специфически с OVCAR-3 при обоих высокой (16,7 нМ) и низкой (1,9 нМ) концентрации антител. Антитела изотипического контроля mIgG1, mIgG2a и hIgG1 не показали специфического связывания ни с клеточной линией OVCAR-3, ни с SK-OV-3. Кроме того, существуют доказательства того, что способ является чувствительным, поскольку некоторые антитела, которые не проявляли связывания с растворимым мономерным белком MUC16 человека в анализе связывания поверхностного плазмонного резонанса (см. пример 4 ниже), продемонстрировали специфическое связывание с эндогенным человеческим MUC16, экспрессированным на клетках OVCAR-3 в этом анализе связывания на основе клеток.
Пример 3. Получение биспецифичных антител, которые связываются с клеточно-специфичными (MUC16) и CD3 яичника.
Данное изобретение обеспечивает биспецифичные антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с CD3 и MUC16; такие биспецифичные антигенсвязывающие молекулы также обозначаются в данном документе как биспецифичные анти-MUC16/анти-CD3 или анти-MUC16xCD3 молекулы. АнтиMUC16 часть биспецифичной анти-MUC16/анти-CD3 молекулы полезна для нацеливания на опухолевые клетки которые экспрессируют MUC16 (также известные как СА-125), и анти-CD3 часть биспецифичной молекулы полезна для активации Т-клеток. Одновременное связывание с MUC16 на опухолевой клетке и CD3 на Т-клетке облегчает направленное уничтожение (лизис клеток) целевой опухолевой клетки активированной Т-клеткой.
Биспецифичные антитела, содержащие анти-MUC16-специфический связывающий домен и антиCD3-сnецифический связывающий домен, были сконструированы с использованием стандартных методик, причем анти-MUC16 антиген-связывающий домен и анти-CD3 антигенсвязывающий домен каждый содержит разные, отличающиеся HCVR, спаренные с общим LCVR. В приведенных в качестве примера биспецифичных антителах, молекулы были сконструированы с использованием тяжелой цепи из антиCD3 антитела, тяжелой цепи из анти-MUC16 антитела и общей легкой цепи из αнти-MUC16 антитела. В других случаях биспецифичные антитела могут быть сконструированы с использованием тяжелой цепи из анти-CD3 антитела, тяжелой цепи из анти-MUC16 антитела и легкой цепи из анти-CD3 антитела или легкой цепи антитела, о которой известно, что она является разнородной или эффективно спарена с различными плечами тяжелой цепи.
Полученные биспецифичные антитела, описанные в следующих примерах, состоят из анти-CD3 связывающих плечей, имеющих различные аффинности связывания человеческого растворимого гетеродимерного hCD3 ε/δ белка (как описано в примере 15, в данном документе); и MUC16 человека (см. примеры 1-2 выше). Проиллюстрированные примерами биспецифичные антитела были изготовлены, имеющими домен Fc IgG1 (BSMUC16/CD3-001, -002, 003, и -004) или модифицированный (химерный) домен
- 55 045730
Fc IgG4 (BSMUC16/CD3-005), как изложено в публикации заявки на патент США № US20140243504A1, опубликованной 28 августа 2014 г.
Краткое описание составных частей антигенсвязывающих доменов различных анти-MUC16xCD3 биспецифичных антител, сконструированных изложено в табл. 4.
Таблица 4
Краткая информация о частях компонентов выбранных биспецифичных анти-MUC16xCD3 антител
Идентификатор биспецифичного антитела | Анти-МиС16 | Ahth-CD3 | Общий Вариабельный участок легкой цепи |
Антигенсвязываю щий домен | Антигенсвязывающ ий домен | ||
Вариабельный участок тяжелой цепи | Вариабельный участок тяжелой цепи | ||
BSMUC16/CD3-001 | Н1Н8767Р (SEQIDNO: 18) | CD3-VH-G (SEQIDNO: 1730) | Н1Н8767Р (SEQ Ш NO: 26) |
BSMUC16/CD3-002 | Н1Н8767Р (SEQIDNO: 18) | CD3-VH-G5 (SEQIDNO: 1762) | Н1Н8767Р (SEQ Ш NO: 26) |
BSMUC16/CD3-003 | Н1Н8767Р (SEQIDNO: 18) | CD3-VH-G9 (SEQIDNO: 1778) | Н1Н8767Р (SEQ Ш NO: 26) |
BSMUC16/CD3-004 | Н1Н8767Р (SEQIDNO: 18) | CD3-VH-G10 (SEQIDNO: 1786) | Н1Н8767Р (SEQ Ш NO: 26) |
BSMUC16/CD3-005 | Н1Н8767Р (SEQIDNO: 18) | CD3-VH-G20 (SEQIDNO: 1866) | Н1Н8767Р (SEQ Ш NO: 26) |
Легкие цепи, перечисленные в табл. 4, были общими как для CD3, так и MUC16 плечей нацеливания биспецифичных антител. В табл. 1 и 2 приведены идентификаторы последовательности аминокислот и нуклеиновых кислот, соответственно, для различных вариабельных участков тяжелой цепи и их соответствующих CDR, плечей антu-MUC16 биспецифичных антител этого примера. В табл. 23 и 23 приведены идентификаторы последовательности аминокислот и нуклеиновых кислот, соответственно, для различных вариабельных участков тяжелой цепи и их соответствующих CDR, плечей анти-CD3 биспецифичных антител этого примера.
Пример 4. Аффинность связывания и кинетические константы поверхностного плазмонного резонансного происхождения на основе человеческих моноклональных анти-MUC16 моноспецифичных и анти-MUC16xCD3 биспецифичных антител.
Аффинности связывания и кинетические константы человеческих анти-MUC16 антител были определены с помощью поверхностного плазмонного резонанса реального времени (SPR; Biacore 4000 или Biacore T-200, GE Healthcare Life Sciences, Питтсбург, Пенсильвания) при 25°С. Ahtu-MUC16 антитела, протестированные в этом примере, представляли собой двухвалентные моноспецифичные связующие вещества с MUC16 (экспрессируемые с константным участком hIgG1 (H1H), mIgG1 (HIM), mIgG2 (H2M) или mIgG3 (Н3М)) или биспецифичные антитела, состоящие из анти-MUC16 связывающего домена и анти-CD связывающего домена. Антитела захватывали на поверхности сенсора СМ4 или СМ5 Biacore (GE Healthcare Life Sciences), дериватизированного путем аминного связывания с моноклональным антителом против человеческого Fc (GE, # BR-1008-39) или моноклональным антителом против мышиного Fc (GE, № BR-1008-38). Различные концентрации растворимого мономерного человеческого MUC16 в усеченном формате, охватывающем последние пять доменов SEA Муцина-16 (hMUC16.mmh или MUC16 nub, SEQ ID: 1902), инъектировали поверх анти-MUC16 антитело захватывающей поверхности при скорость потока 50 мкл/мин (Biacore T-200) или 30 мкл/мин (Biacore 4000). Ассоциация антитело-реагент контролировалась в течение 4 минут, а диссоциация - в течение 6-10 минут. Все исследования связывания проводили в буфере HBS-ET (0,01 М HEPES, рН 7,4, 0,15 М NaCl, 0,05% об./об. ПАВ Р20).
Кинетические константы скорости ассоциации (ka) и диссоциации (kd) определяли путем подгонки сенсограмм в реальном времени к модели связывания 1:1 с применением программного обеспечения для подгонки кривых Scrubber 2.0с. Константы равновесия диссоциации связывания (KD) и диссоциативные периоды полураспада (1%) рассчитывались по кинетическим константам скорости как:
kd Zn(2)
К D (Μ) = — , и t4 (мин) = ——— ка 60 * kd
- 56 045730
Кинетические параметры связывания для моноспецифичных анти-МиС16 антител с мономерным фрагментом белка MUC16 человека, показаны ниже в табл. 5А и 5В. Кинетические параметры связывания анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичных антител с мономерным человеческим белком MUC16 показаны ниже в табл. 6.
Таблица 5А
Аффинность связывания Biacore гибридомы анти-MUC16 антител (H1M, H2M и Н3М) с hMUC16 фрагментом при 25°С
Идентификатор антитела | ка (1/Мс) | kd (1/с) | KD (М) | t 1/2 (мин) |
H2M7128N | 1.89Е+05 | 6.40Е-04 | 3.39Е-09 | 18 |
H1M7129N | 5.31Е+04 | 1.04Е-04 | 1.97Е-09 | 111 |
H2M7131N | 6.47Е+04 | 1.62Е-04 | 2.51Е-09 | 71 |
H3M7132N | 2.57Е+04 | 1.96Е-04 | 7.62Е-09 | 59 |
H2M7133N | 1.67Е+05 | 3.77Е-04 | 2.26Е-09 | 31 |
H2M7134N | 6.55Е+04 | 1.62Е-04 | 2.47Е-09 | 71 |
H2M7135N | 5.10Е+04 | 2.18Е-04 | 4.27Е-09 | 53 |
H1M7137N | 5.30Е+04 | 9.09Е-05 | 1.72Е-09 | 127 |
H2M7138N | 7.41Е+04 | 9.25Е-05 | 1.25Е-09 | 125 |
H1M9519N | ОС | ОС | ОС | ОС |
H1M9521N | ОС | ОС | ОС | ОС |
H3M9524N | ОС | ОС | ОС | ОС |
H3M9525N | ОС | ОС | ОС | ОС |
H1M9528N | ОС | ОС | ОС | ОС |
H3M9529N | ОС | ОС | ОС | ОС |
ОС: отсутствует связывание.
Таблица 5В
Аффинность связывания Biacore Fc человека антu-MUC16 антител (Н1Н) с hMUC16 фрагментом при 25°С
Идентификатор антитела | ка (1/Мс) | kd (1/с) | KD (М) | ti/2 (мин) |
Н1Н8755Р | 5.22Е+05 | 1.49Е-04 | 2.86Е-10 | 77 |
Н1Н8767Р | 1.17Е+05 | 4.18Е-04 | 3.58Е-09 | 28 |
Н1Н8770Р | 2.47Е+05 | 3.08Е-04 | 1.25Е-09 | 38 |
Н1Н8783Р | 1.74Е+05 | 1.07Е-04 | 6.14Е-10 | 108 |
Н1Н8790Р | 1.01Е+05 | 7.61Е-04 | 7.53Е-09 | 15 |
Н1Н8794Р | 3.62Е+05 | 2.79Е-04 | 7.71Е-10 | 41 |
Н1Н8799Р | 7.90Е+04 | 3.66Е-04 | 4.63Е-09 | 32 |
Н1Н8799Р2 | 7.58Е+04 | 3.73Е-04 | 4.92Е-09 | 31 |
Н1Н8804Р | 4.94Е+04 | 6.07Е-04 | 1.23Е-08 | 19 |
Н1Н8808Р | 4.12Е+03 | 2.16Е-04 | 5.24Е-08 | 54 |
Н1Н8810Р | 5.77Е+04 | 3.16Е-04 | 5.48Е-09 | 37 |
Н1Н8813Р | 5.32Е+04 | 2.32Е-04 | 4.35Е-09 | 50 |
- 57 045730
Таблица 6
Аффинность связывания Biacore анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичных антител с hMUC16 фрагмента при 25°С
Идентификатор биспецифичного антитела | ka (1/Mc) | kd (1/c) | KD (M) | t 1/2 (мин) |
BSMUC16/CD3-001 | 9.48E+04 | 5.86E-04 | 6,18E-09 | 20 |
BSMUC16/CD3-005 | 9.41E+04 | 5.64E-04 | 6.00E-09 | 21 |
Как показывают результаты, большинство анти-MUC16 антител по данному изобретению связаны с растворимым человеческим белком MUC16, некоторые отображают суб-наномолярную аффинность. Несколько антител (H1M9519N, H1M9521N, H3M9524N, H3M9525N, H1M9528N, H3M9529N) не показали связывания с усеченным форматом, охватывающим последние пять доменов SEA, посредством поверхностного плазмонного резонанса, однако продемонстрировали специфическое связывание с эндогенным человеческим MUC16, экспрессируемым на клетках OVCAR-3 в основанном на клетках анализе связывания. Ahtu-MUC16xCD3 биспецифичные антитела по данному изобретению также связывались с растворимым усеченным человеческим белком MUC16, проявляющим наномолярную аффинность в этом анализе.
Пример 5. Дополнительные свойства связывания, активации Т-клеток и цитотоксичности иллюстративных биспецифичных антител.
В этом примере способность MUC16xCD3 биспецифичных антител связываться с CD3экспрессирующими (Т-клетки человека) клеточными линиями человека, по сравнению со связыванием с мишень-специфической (MUC16-специфической) клеточной линией, была определена посредством FACS. Кроме того, способность этих биспецифичных антител активировать мишень-специфические линии клеток (MUC16-специфические), также сравнивали в аналогичном анализе.
Титрование связывания иллюстративных биспецифичных антител, измеренное с помощвю анализа FACS А. Вкратце, анализ проточной цитометрии (т.е. активированной флуоресценцией сортировкой клеток, или FACS) использовали для определения связывания биспецифичных антител с клетками Jurkat или клетками, экспрессирующими MUC16 человека, с последующим обнаружение с помощью меченного фикоэритрином (РЕ) или меченного АРС антитела против человеческого IgG. Вкратце, 2х105 клеток/лунка инкубировали в течение 30 минут при 4°С с серийным разведением в диапазоне от 1,33Е-07М до 8,03Е-12М каждого тестируемого антитела или изотипического контроля (антитела того же изотипа, который связывает другой антиген с отсутствующей перекрестной реактивностью к MUC16 или CD3). После инкубации клетки дважды промывали холодным PBS, содержащим 1% фильтрованный FBS, и к клеткам добавляли РЕ-конъюгированное или АРС-конъюгированное вторичное анти-человеческое антитело и инкубировали в течение дополнительных 30 минут. Лунки, не содержащие антител или только вторичные, также использовали в качестве контролей. После инкубации клетки промывали, ресуспендировали в 200 мкл холодного PBS, содержащего 1% фильтрованный FBS, и анализировали проточной цитометрией на BD FACS Canto II; см. табл. 7А.
В. В отдельных экспериментах с условиями аналогичными описанным выше, анализ методом проточной цитометрии (или FACS) использовали для определения связывания выбранных биспецифичных антител с клетками Jurkat, РЕО-1, OVCAR3-Luc и Т-клетками яванского макака. Для анализа титрования - серийное разведение выбранных биспецифичных антител MUC16xCD3, первого антитела изотипического контроля (человеческое химерное антитело IgG4, которое связывает нерелевантный человеческий антиген без перекрестной реактивности с CD3 человека или яванского макака) и второго антитела изотипического контроля (человеческое химерное антитело IgG4, которое связывает нерелевантный человеческий антиген без перекрестной реактивности с человеческим MUC16), в диапазоне от 66, 6 нМ до 0,001 нМ; см. табл. 7В и фиг. 11А-11С.
Для FACS анализа, клетки были стробированы по высоте переднего рассеяния по сравнению с областью прямого разброса для выбора отдельных событий, а затем в стороны и прямым разбросом. ЕС50 для титрования связывания клеток определяли с использованием программного обеспечения PRISM™ (GraphPad Software, Inc., Ла-Холья, Калифорния). Значения были рассчитаны с использованием 4параметрического нелинейного регрессионного анализа. (Liu, J., et al. 2005, Biotechnol Letters 27: 18211827). Значение ЕС50 представляет концентрацию тестируемого антитела, при которой наблюдается 50% его максимального связывания.
- 58 045730
Таблица 7А
Связывание FACS на CD3 и МиС16-специфичных клеточных линиях
Идентификатор биспецифичного антитела | Анти-CD3 связывающее плечо | Титрование связывания FACS ЕС50 [М] | |
[01] | [01] | Jurkat | OVCAR3 (MUC16+) |
BSMUC16/CD3-001 | CD3-VH-G | 3.21Е-09 | 1.20Е-09 |
BSMUC16/CD3-002 | CD3-VH-G5 | Очень слабо | 2.69Е-09 |
Таблица 7В
Связывание FACS на CD3 и MUC16-специфических клеточных линиях
Идентификатор биспецифичного антитела | Ahth-CD3 связывающе е плечо | Титрование связывания FACS ес50 [М] | |||
РЕО-1 (MUC16+) | OVCAR3-Luc (MUC16+) | Jurkat | Т-клетки яванского макака | ||
BSMUC16/CD3-001 | CD3-VH-G | 3.02Е-09 | 1.32Е-09 | 6.44Е-09 | 1.56Е-08 |
BSMUC16/CD3-002 | CD3-VH-G5 | 3.13Е-09 | Не тестировано | 3.01Е-07 | Без связывания |
BSMUC16/CD3- 005 | CD3-VH-G20 | 2.63Е-09 | 1.47Е-09 | 6.26Е-08 | 1.17Е-06 |
Как показано в табл. 7А и 7В, CD3 связывающие плечи каждого MUC16 биспецифичного антитела отображают диапазон связывания клеток с CD3-эксnрессирующими Т-клетками человека и обезьяны (например, от 3,2 нМ ЕС50 до очень слабого связывания). Биспецифичное антитело BSMUC16/CD3-001 показало высокое измерение связывания с CD3-экспрессирующими клетками (т.е. <7 нМ), тогда как биспецифичное антитело BSMUC16/CD3-002 показало слабое связывание или отсутствие связывания с CD3экспрессирующими клетками человека и обезьяны. Неизмеримое связывание или отсутствие измеримого связывания в анализе FACS или эквивалентном анализе относится к взаимодействию связывания между антителом и его антигеном-мишенью, которое находится за пределами предела обнаружения анализа (например, при или выше 1 мкМ). Тестируемые биспецифичные антитела демонстрировали сходное связывание клеток на линиях клеток, экспрессирующих MUC16, подтверждая, что биспецифичное спаривание с отдельными плечами CD3, демонстрирующее высокие или слабые (или не поддающиеся измерению) взаимодействия с CD3, не влияло или не уменьшало специфичное для мишени связывание (MUC16-специфичное связывание было меньше или равно 3 нМ (высокая степень связывания) в этих примерах. Первое контрольное антитело не связывалось с клетками CD3+, а второе контрольное антитело не связывалось с клетками MUC16+; см. также фиг. 11А-11С.
Антитела, проявляющие слабое или отсутствие детектируемого связывания с CD3 человека, попрежнему считаются полезными для биспецифичного спаривания, обусловленного авидностью, и дополнительно тестировались на цитотоксичность in vitro (см. ниже) и in vivo (пример 8).
Активация Т-клеток и опухолеспецифическая цитотоксичность, проявляемая биспецифичными антителами при измерении in vitro А. Специфичное уничтожение MUC16-экспрессирующих клетокмишеней опухоли в присутствии CD3 на основе биспецифичных антител контролировали с помощью проточной цитометрии. Как сообщалось ранее, биспецифичные антитела проявляли способность к дифференциальному связыванию с белком CD3 и клеточными линиями, экспрессирующими CD3 (т.е. очень слабое или сильное связывание). Эти те же биспецифичные антитела были протестированы на способность индуцировать наивные человеческие Т-клетки для перенаправления уничтожения на клетки, экспрессирующие мишень.
Вкратце, MUC16-экспрессирующие (OVCAR3) клеточные линии были мечены с 1 мкМ флуоресцентного красителя отслеживания Violet Cell Tracker. После мечения клетки высевали в течение ночи при 37°С. Отдельно РВМС человека высевали в среду RPMI с добавлением 1 х 106 клеток/мл и инкубировали в течение ночи при 37°С для обогащения лимфоцитов путем истощения прилипших макрофагов, дендритных клеток и некоторых моноцитов. На следующий день клетки-мишени совместно инкубировали с прикрепленными клеточно-истощенными нестимулированными РВМС (соотношение эффектор/клетка-мишень 4:1) и серийным разведением соответствующих биспецифичных антител или изоти
- 59 045730 пического контроля (диапазон концентраций: от бб,7 нМ до 0,25 пМ) в течение 4 8 часов при 37°С. Клетки извлекали из планшетов для культивирования клеток с использованием буфера для диссоциации клеток без ферментов и анализировали с помощью FACS. Смотрите результаты, представленные в табл. 8А.
В. В аналогичных исследованиях, MUC16-экспрессирующие (РЕО-1 или OVCAR3-Luc) клеточные линии были мечены, их высевали и инкубировали в течение ночи, как описано. Последовательные разведения биспецифичных антител MUC16xCD3 или изотипического контроля были совместно инкубированы; см. результаты, изображенные в табл. 8В и 8С и на фиг. 12А-12В.
Для FACS анализа, клетки окрашивали мертвыми/живыми дальним красным трекером клетки (Invitrogen). 5x105 гранул для подсчета добавляли в каждую лунку непосредственно перед анализом FACS. 1x104 гранул были собраны для каждого образца. Для оценки специфичности уничтожения клетки были стробированы на живых популяциях, помеченных фиолетовым. Процент живой популяции был записан и использован для расчета нормированной выживаемости.
Активацию Т-клеток оценивали путем инкубации клеток с непосредственно конъюгированными антителами к CD2, CD69 и/или CD25, и сообщая процент ранних активированных (CD69+) Т-клеток и/или в конце активированных (CD25+) Т-клеток из общего количества Т-клеток (CD2+).
Как показывают результаты в табл. 8А-8С, истощение MUC16-экспрессирующих клеток наблюдалось с биспецифичными анmи-MUC16xCD3. Все протестированные биспецифичные антитела активировали и направляли человеческие Т-клетки на истощение клеток-мишеней с ЕС50 в пикомолярном диапазоне. Кроме того, наблюдаемый лизис клеток-мишеней (истощение) был связан с повышающей регуляцией CD69 (или CD25) на CD2+ Т-клетках, также с пикомолярным (пМ) ЕС50.
Важно отметить, что результаты этого примера также показывают, что биспецифичное антитело, сконструированное со связывающим плечами CD3, которые проявляли слабое или не измеримое связывания с белком CD3 или CD3-экспрессирующими клетками (т.е. CD3-VH-G5), все еще сохраняли способность активировать Т-клетки и проявляли сильную цитотоксичность опухолевых антигенэкспрессирующих клеток.
Таблица 8А
Цитотоксичность и свойства активации Т-клеток выбранных MUC16xCD3 биспецифичных антител
Идентификатор биспецифичного антитела | Ahth-CD3 связывающее плечо | OVCAR3 истощение клеток ЕС50 [М] | Активация Тклеток (положительная регуляция CD69) ЕС50 [М] |
BSMUC16/CD3-001 | CD3-VH-G | 2.24Е-11 | 5.88Е-12 |
BSMUC16/CD3-002 | CD3-VH-G5 | 3.06Е-11 | 1.01Е-11 |
Таблица 8В
Цитотоксичность и свойства активации Т-клеток выбранных MUC16xCD3 биспецифичных антител
Идентификатор биспецифичного антитела | РЕО-1 истощение клеток ЕС50 [М] | Активация Тклеток (Положительная регуляция CD69) ЕС50 [М] | Активация Т-клеток (Положительная регуляция CD25) ЕС50 [М] |
BSMUC16/CD3-001 | 2.56Е-11 | 8.34Е-12 | 3.90Е-11 |
BSMUC16/CD3-002 | 6.75Е-11 | 1.34Е-11 | 8.89Е-11 |
BSMUC16/CD3-005 | 7.74Е-11 | 1.72Е-11 | 1.06Е-10 |
- 60 045730
Таблица 8С
Цитотоксичность и свойства активации Т-клеток выбранных MUC16xCD3 биспецифичных антител
Идентификатор биспецифичного антитела | OVCAR3-Luc истощение клеток ЕС50 [М] | Активация Тклеток (положительная регуляция CD69) ЕС50 [М] | Активация Тклеток (положительная регуляция CD25) ЕС50 [М] |
BSMUC16/CD3-001 | 1.54Е-11 | 2.98Е-12 | 3.06Е-11 |
BSMUC16/CD3-005 | 5.16Е-11 | 1.54Е-11 | 1.17Е-10 |
Пример 6. Эпитопное картирование на основе водородного/дейтериевого (H/D) обмена анти-Muc16 антител H4sH8767P, H1H8794P2 и Н1Н8799Р2, связывающихся с частью С-концевого домена hMUC16.
Эксперименты проводились с целью определения остатков аминокислоты MUC16 в пределах пяти С-концевых SEA доменов (SEQ ID NO: 1902, далее именуемая как hMUC16.nub), с которыми антиMUC16 антитела H4sH8767P, H1H8794P2 и Н1Н8799Р2 взаимодействуют. Для этой цели использовали картирование эпитопа водород/дейтерий (H/D) с масс-спектрометрией (HDX-MS). Общее описание способа обмена H/D изложено в Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267 (2):252-259; и Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A.
Эксперименты HDX-MS были выполнены на единой платформе Waters HDX/MS, состоящей из системы PAL Leaptec HDX для маркировки дейтерия, Waters Acquity М-класса (вспомогательный менеджер растворителя) для переваривание и загрузки образца, Waters Acquity М-класса (μBinary менеджер растворителя) для градиента аналитической колонки и масс-спектрометр Synapt G2-Si для измерения пептической массы пептида.
Маркировочный раствор готовили в 10 мМ буфера PBS в D2O при pD 7,0. Для мечения дейтерием, инкубировали 3,8 мкл hMUC16.nub (12 пмоль/мкл) или hMUC16.nub, предварительно смешанных с антиMUC16 антителом H4sH8767P, H1H8794P2 или Н1Н8799Р2 в молярном соотношении 2:1, с 56,2 мкл. Раствор D2O для маркировки в различные моменты времени (например: недейтерированный контроль=0 с; маркировка дейтерием: 1 мин и 20 мин). Дейтерирование гасили путем переноса 50 мкл образца в 50 мкл предварительно охлажденного буфера гашения (0,2 М ТСЕР, 6 М гуанидинхлорида в 100 мМ фосфатного буфера, рН 2,5) и смешанный образец инкубировали при 1,0°С в течение двух минут. Затем погашенный образец вводили в Waters HDX Manager для онлайн-расщепления пепсином/протеазой XIII. Расщепленные пептиды были захвачены на ACQUITY UPLC ВЕН С18 1,7 мкм, предварительной колонке VanGuard 2,1x5 мм при 0°С и элюированы в аналитическую колонку ACQUITY UPLC ВЕН С18 (1,7 мкм, 1,0x50 мм) для 9 минутного градиентного разделения 5%-40% В (подвижная фаза А: 0,1% муравьиная кислота в воде, подвижная фаза В: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле). Масс-спектрометр использовал напряжение в конусе 37 В, время сканирования 0,5 с и диапазон масса/заряд 50-1700 Тн.
Для идентификации пептидных остатков hMUC16.nub, с которыми H4sH8767P, H1H8794P2 и Н1Н8799Р2 взаимодействуют, LC-MSE данные из недейтерированного образца были обработаны и был проведен поиск по базе данных, которая включает последовательности для hMUC16.nub, пепсина и рандомизированной последовательности с использованием программного обеспечения Waters ProteinLynx Global Server (PLGS). Идентифицированные пептиды были импортированы в программное обеспечение DynamX и отфильтрованы по двум критериям: 1) минимальное количество продуктов на аминокислоту: 0,25 и 2) порог файла репликации: 2. Программное обеспечение DynamX затем автоматически определяло поглощение дейтерия каждым пептидом на основе времени удерживания и высокой точности массы (<10 миллионных долей) в нескольких временных точках с 3 повторностями в каждый раз.
При использовании онлайн пепсин/протеазы XIII колонки в сочетании с получением данных MSE, в общей сложности 109 пептидов из hMUC16.nub были идентифицированы в отсутствие или в присутствии H4sH8767P, что составляет 64% покрытия последовательности. Шесть пептидов значительно снизили поглощение дейтерирования (значения дельты центроида >0,5 дальтон по меньшей мере из одной временной точки с р-значениями < 0,05) при связывании с H4sH8767P и проиллюстрированы в табл. 9А. Записанная масса пептида соответствует среднему значению массы МН+ центроида из трех повторностей. Эти пептиды, соответствующие аминокислотам 428-434, 453-467 и 474-481 hMucl6.nub, имели более низкие скорости дейтерирования при связывании с H4sH87 67P. Эти идентифицированные остатки также соответствуют остаткам 14237-14243, 14262-14276 и 14283-14290 hMUC16, как определено в записи Uniprot Q8WXI7 (MUC16_HUMAN), SEQ ID NO: 1899.
- 61 045730
Таблица 9А
Пептиды hMUC16.nub с измененными скоростями дейтерирования при связывании H4sH8767P
Остатки SEQ ID NO: 1902 | 1 мин. дейтерирования | 20 мин. дейтерирования | |||||
Аминокисло тная последовате льность | hMUC 16. nub | hMUC 16.nub +H4sH8767P | Δ | hMUC 16. nub | hMUC 16.nub +H4sH8767P | Δ | |
428-434 | LYKGSQL | 809,97 ± 0,03 | 809,07 ± 0,06 | -0,26 | 811,05 ±0,16 | 810,17 ±0,01 | -0,88 |
429-434 | YKGSQL | 697,10 ± 0,00 | 696,74 ± 0,00 | -0,35 | 698,13 ±0,02 | 697,60 ± 0,03 | -0,52 |
453-467 | VTVKALFS SNLDPSL | 1595,35 ± 0,08 | 1593,97 ±0,2 | -1,38 | 1596,01 ±0,08 | 1595,33 ± 0,03 | -0,68 |
459-467 | FSSNLDPSL | 983,19 ± 0,01 | 981,57 ±0,08 | -1,62 | 983,51 ±0,03 | 982,76 ± 0,07 | -0,75 |
460-467 | SSNLDPSL | 835,44 ± 0,01 | 834,01 ±0,00 | -1,43 | 835,89 ±0,01 | 835,12 ±0,15 | -0,74 |
474-481 | DKTLNASF | 899,76 ± 0,00 | 899,25 ± 0,06 | -0,51 | 900,63 ±0,00 | 900,10 ±0,03 | -0,54 |
При использовании онлайн пепсин/протеаза XIII колонки в сочетании с получением данных MSE, в общей сложности 109 пептидов из hMUC16.nub были идентифицированы в отсутствие или в присутствии Н1Н8794Р2, что составляет 64% покрытия последовательности. Три пептида значительно снизили поглощение дейтерирования (значения дельты центроида >0,5 Да по меньшей мере из одной временной точки с р-значениями <0,05) при связывании с Н1Н8794Р2 и проиллюстрированы в табл. 9В. Записанная масса пептида соответствует среднему значению массы МН+ центроида из трех повторностей. Эти пептиды, соответствующие аминокислотам 126-131, 127-131 и 132-138 hMucl6.nub, имели более низкие скорости дейтерирования при связывании с Н1Н8794Р2. Эти идентифицированные остатки также соответствуют остаткам 13935-13940, 13936-13940 и 13941-13947 hMUC16, как определено в записи Uniprot Q8WXI7 (MUC16_HUMAN), SEQ ID NO: 1899.
Таблица 9В
Пептиды hMUC16.nub с измененными скоростями дейтерирования при связывании Н1Н8794Р2
Остатки SEQ ID NO: 1902 | 1 мин. дейтерирования | 20 мин. дейтерирования | |||||
Аминокисло тная последовате льность | hMUC 16. nub | hMUC 16.nub ±H1H8794P 2 | Δ | hMUC 16. nub | hMUC 16.nub +H1H8794P2 | Δ | |
126-131 | LRYMAD | 771,41 ± 0,01 | 770,60 ± 0,04 | -0,81 | 771,91 ±0,04 | 770,76 ± 0,02 | -1,15 |
127-131 | RYMAD | 658,03 ± 0,02 | 657,32 ±0,01 | -0,71 | 657,89 ±0,01 | 657,27 ±0,01 | -0,6 |
132-138 | MGQPGSL | 692,55 ± 0,02 | 691,42 ±0,15 | -1,13 | 692,61 ±0,01 | 691,58 ±0,02 | -1,03 |
При использовании онлайн пепсин/протеаза XIII колонки в сочетании с получением данных MSE, в общей сложности 109 пептидов из hMUC16.nub были идентифицированы в отсутствие или в присутствии Н1Н8799Р2, что составляет 64% покрытия последовательности. Четыре пептида значительно снизили поглощение дейтерирования (значения дельты центроида >0,5 Да по меньшей мере из одной временной точки с р-значениями <0,05) при связывании с Н1Н8799Р2 и проиллюстрированы в табл. 9С. Записанная масса пептида соответствует среднему значению массы МН+ центроида из трех повторностей. Эти пептиды, соответствующие аминокислотам 357-369, 358-366, 358-369 и 361-369 hMucl6.nub, имели более низкие скорости дейтерирования при связывании с Н1Н8799Р2. Эти идентифицированные остатки также соответствуют остаткам 14165-14178, 14166-14176, 14166-14178 и 14170-14178 hMUC16, как оп
- 62 045730 ределено в записи Uniprot Q8WXI7 (MUC16_HUMAN), SEQ ID NO: 1899.
Таблица 9С
Пептиды hMUC16.nub с измененными скоростями дейтерирования при связывании Н1Н8799Р2
Остатки SEQ ID NO: 1902 | 1 мин. дейтерирования | 20 мин. дейтерирования | |||||
Аминокисло тная последовате льность | hMUC 16. nub | hMUC 16.nub +Н1Н8799Р 2 | Δ | hMUC 16. nub | hMUC 16.nub +H1H8799P2 | Δ | |
357-369 | LSQLTHGV TQLGF | 1404,15 ± 0,03 | 1403,41 ± 0,09 | -0,74 | 1406,14 ±0,15 | 1404,26 ± 0,02 | -2,H |
358-366 | SQLTHGVT QL | 972,37 ± 0,10 | 972,04 ±0,10 | -0,33 | 973,94 ±0,03 | 972,56 ± 0,00 | -1,38 |
358-369 | SQLTHGVT QLGF | 1291,23 ± 0,02 | 1290,20 ± 0,00 | -1,03 | 1291,34 ±0,02 | 1291,05 ± 0,06 | -2,27 |
361-369 | THGVTQLG F | 1404,15 ± 0,03 | 1403,42 ± 0,05 | -0,73 | 1406,14 ±0,14 | 1404,03 ± 0,02 | -2,11 |
Пример 7. Фармакокинетическая оценка биспецифичных анти-MUC16χCD3 антител.
Оценка фармакокинетики анти-MUC16xCD3 биспецифичных антител BSMUC16/CD3-001 и BSMUC16/CD3-005 и изотипического контроля была проведена в гуманизированном MUC16xCD3 мышей (мыши, гомозиготные для экспрессии человеческого MUC16 и CD3, MUC16hu/hu x CD3hu/hu), гуманизированном CD3 мышей (мыши, гомозиготные для экспрессии человеческого CD3, CD3hu/hu) и мышей дикого типа, подобранных по линии (ДТ) (75% C57BL, 25% 129Sv). Когорты содержали 4-5 мышей на тестируемое антитело и на линию мыши. Все мыши получали одну внутрибрюшинную (в/б) дозу 0,4 мг/кг. Образцы крови собирали через 3 и 6 часов, 1, 3, 7, 14 и 28 дней после введения дозы. Кровь была обработана в сыворотку и заморожена при -80°С до анализа
Циркулирующие концентрации антител определяли с помощью общего анализа человеческого антитела IgG с использованием GyroLab Xplore™ (Gyros, Уппсала, Швеция). Вкратце, биотинилированное козье поликлональное анти-IgG антитело человека (Jackson ImmunoResearch, Вест Гров, Пенсильвания) захватывалось на покрытые стрептавидином шарики на Gyrolab Bioaffy 200 CD (Gyros) для захвата человеческого IgG, присутствующего в сыворотке. После захвата аффинной колонкой связанное человеческое антитело IgG в образцах детектировали с помощью козьего анти-человеческого IgG, меченного А1еха-647 (Jackson ImmunoResearch). Флуоресцентный сигнал на колонке, позволяющий обнаружить связанный IgG, и единицы ответа (RU) считывались прибором. Концентрации образцов определяли путем интерполяции по стандартной кривой, которая была подобрана с использованием подбора кривой с 5 параметрами с использованием программного обеспечения Gyrolab Evaluator.
Параметры ФК определялись некомпартментным анализом (NCA) с использованием программного обеспечения Phoenix® WinNonlin® версии 6.3 (Certara, LP, Принстон, Нью-Джерси) и внесосудистой моделью дозирования. Используя соответствующие средние значения концентрации для каждого антитела, все параметры ФК, включая наблюдаемую максимальную концентрацию в сыворотке (Cmax), оцененный наблюдаемый период полураспада (t1/2) и площадь под кривой концентрации в зависимости от времени до последней измеряемой концентрации (AUC-nоследний) были определены с использованием линейного правила трапеции с линейной интерполяцией и равномерным взвешиванием.
После внутрибрюшинного введения антител мышам ДТ, общая концентрация-временные профили IgG BSMUC16/CD3-001, BSMUC16/CD3-005 и изотипического контроля все были похожи, характеризовались первым кратким распределением лекарств, за которым следовала одна фаза выведения лекарств в течение оставшейся части исследования. Максимальные сывороточные концентрации (Cmax) и расчетное воздействие лекарственного средства (AUC-nослеДнИй) для трех антител были сопоставимы (в 1,3 раза друг от друга).
После внутрибрюшинного введения антител CD3hu/hu мышам, BSMUC16/CD3-001, BSMUC16/CD3005 и изотипический контроль имели сопоставимые концентрации Cmax (4,6, 3,6 и 4,1 мкг/мл соответственно). BSMUC16/CD3-005 и изотипический контроль демонстрировали сходные кривые элиминации лекарственного средства, в то время как BSMUC16/CD3-001 демонстрировал более резкую элиминацию лекарственного средства, чем оба, предполагая, что связывание мишени CD3 человека вызывает клиренс. Концевая концентрация антител для BSMUC16/CD3-001 составила 0,03 мкг/мл, что около в 28 раз меньше, чем концевые концентрации антител, определенные для изотипического контроля (0,85 мкг/мл), и в 22 раза меньше, чем BSMUC16/CD3-005 (0,66 мкг/мл) сывороточные концентрации.
- 63 045730
У MUC16 hu/hu х CD3 hu//hu дважды гуманизированных мышей, биспецифичные Muc16xCD3 и антитела изотипического контроля имели сопоставимые концентрации Cmax (Cmax диапазон: 4,5-6,9 мкг/мл). Оба биспецифичных антитела продемонстрировали более высокую элиминацию лекарственного средства, чем изотипический контроль, что предполагает мишень-опосредованный эффект. Концевые концентрации антител для BSMUC16/CD3-001 и BSMUC16/CD3-005 были около в 29 раз и в 2,9 раз меньше, соответственно, чем концевые концентрации антител, определенные для изотипического контроля (0,86 мкг/мл).
Краткое изложение данных по общей концентрации анти-MUC16 х CD3 биспецифичных антител и антител изотипического контроля приведены в табл. 10. Средние параметры ФК описаны в табл. 11А и 11В. Средние общие концентрации антител в зависимости от времени показаны на фиг. 1, 2 и 3. В заключение следует отметить, что биспецифичные MUC16xCD3 антитела демонстрировали сходные кривые Cmax и элиминации лекарственного средства у мышей ДТ, но BSMUC16/CD3-001 демонстрировали более высокие показатели элиминации, чем BSMUC16/CD3-005 и изотипического контроля у CD3 единожды гуманизированных мышей и MUC16/CD3 дважды гуманизированных мышей. Поскольку биспецифичные антитела, вводимые в этом исследовании ФК, состоят из одного и того же анти-MUC16связывающего плеча, результаты показывают, что сила связывания CD3-нацеливающего плеча может играть роль в уровнях воздействия лекарственных средств (AUC.nослеgнuй) и скорости элиминации лекарственных средств. Ни BSMUC16/CD3-001, ни BSMUC16/CD3-005 не связывают MUC16 мыши или CD3 мыши.
- 64 045730
Таблица 10
Средние концентрации общего IgG в сыворотке после однократной внутрибрюшинной инъекции 0,4 мг/кг BSMUC16/CD3-001, BSMUC16/CD3-005 и антител изотипического контроля у мышей ДТ, гуманизированных мышей CD3 и гуманизированных мышей MUC16 х CD3
Антитело | Время (Д) | Общая концентрация мАт в мышиной сыворотке | |||||
ДТ | CD3hu/hu | MUC16hu/hux CD3hu/hu | |||||
Среднее (мкг/мл) | +/- SD | Средне е (мкг/мл ) | +/- SD | Среднее (мкг/мл) | +/- SD | ||
BSMUC16/CD3- 001 | 0,13 | 5,39 | 0,34 | 4,30 | 0,29 | 6,77 | 1,52 |
0,25 | 5,80 | 0,36 | 4,26 | 1,07 | 6,63 | 1,06 | |
1,00 | 4,13 | 0,43 | 2,87 | 0,71 | 4,89 | 0,53 | |
3,00 | 3,19 | 0,53 | 1,44 | 0,27 | 2,50 | 0,22 | |
7,00 | 2,61 | 0,73 | 0,72 | 0,13 | 1,20 | 0,22 | |
14,00 | 1,44 | 0,69 | 0,18 | 0,05 | 0,28 | 0,08 | |
21,00 | 0,93 | Не обнаружено | 0,07 | 0,02 | 0,06 | 0,05 | |
28,00 | 0,60 | Не обнаружено | 0,04 | 0,01 | 0,03 | 0,02 | |
BSMUC16/CD3- 005 | 0,13 | 4,23 | 0,62 | 3,35 | 1,15 | 4,35 | 0,24 |
0,25 | 4,53 | 0,55 | 3,40 | 0,96 | 4,45 | 0,49 | |
1,00 | 3,47 | 0,32 | 2,72 | 0,42 | 3,00 | 0,61 | |
3,00 | 2,51 | 0,13 | 1,95 | 0,37 | 1,98 | 0,41 | |
7,00 | 2,02 | 0,24 | 2,31 | 0,67 | 1,58 | 0,36 | |
14,00 | 1Д9 | 0,17 | 1,01 | 0,23 | 0,78 | 0,26 | |
21,00 | 1,19 | 0,29 | 1,19 | 0,11 | 0,66 | 0,29 | |
28,00 | 0,71 | 0,20 | 0,66 | 0,28 | 0,30 | 0,22 | |
Изотипиче ский контроль | 0,13 | 5,07 | 1,16 | 5,43 | 1,30 | 6,56 | 0,70 |
0,25 | 5,91 | 1,10 | 5,67 | 1,91 | 6,48 | 0,90 | |
1,00 | 2,64 | 0,24 | 2,98 | 1,14 | 2,82 | 0,30 | |
3,00 | 2,05 | 0,06 | 2,29 | 0,83 | 1,57 | 0,37 | |
7,00 | 1,80 | 0,25 | 2,14 | 0,85 | 1,96 | 0,37 | |
14,00 | 1,22 | 0,28 | 1,48 | 0,66 | 1,34 | 0,37 | |
21,00 | 1,20 | 0,58 | 1,43 | 0,72 | 1,24 | 0,44 | |
28,00 | 0,73 | 0,24 | 0,85 | 0,29 | 0,86 | 0,41 |
Время: (ч, если отмечено)=время в часах после однократного введения; Д=день обучения; 30=стандартное отклонение; НО=не обнаружено из-за исключения мышей с клирингом лекарственных препаратов титрами анти-лекарственных препаратов.
- 65 045730
Таблица 11А
Краткое содержание фармакокинетических параметров: CD3hu/hu гуманизированных мышей
Параметр | Единицы | Мыши ДТ | CD3hu/hu мышей | ||||
Изотипич еский контроль | BSMUC16 /CD3-001 | BSMUC16 /CD3-005 | Изотипич еский контроль | BSMUC16 /CD3-001 | BSMUC16/ CD3-005 | ||
с ^тах | мкг/мл | 5±3 | 6 ±0,4 | 5 ±0,5 | 4,1 ±3 | 4,6 ±0,8 | 3,5 ± 1 |
Τι/2 | д | 11 ±4 | 7±3 | 12 ±2 | 14 ±0,5 | 3,9 ±0,6 | 11 ±5 |
A U Споследний | д · мкг/мл | 35 ±18 | 40 ± 11 | 45 ±5 | 49 ±20 | 16 ±3 | 36 ± 13 |
Стах=пиковая концентрация; AUC=площадь под кривой концентрация-время; AUC-nоследнuй=AUC, вычисленное с момента нуля до времени последней положительной концентрации; Т]/2=ожидаемый период полураспада.
Таблица 11В Краткое содержание фармакокинетических параметров:
_____________MUC16hu/hu х CD3hu/hu дважды гуманизированной мыши_____________
Параметр | Единицы | Мыши ДТ | MUC16hu/hu х CD3hu/hu мышей | ||||
Изотипич еский контроль | BSMUC16 /CD3-001 | BSMUC16 /CD3-005 | Изотипич еский контроль | BSMUC16 /CD3-001 | BSMUC16/ CD3-005 | ||
с ^тах | мкг/мл | 5±3 | 6 ±0,4 | 5 ±0,5 | 6,7 ±0,7 | 6,9 ±1 | 4,5 ±4 |
Τι/2 | д | 11 ±4 | 7±3 | 12 ±2 | 12,9 ±4 | 3,3 ±0,8 | 8,2 ±4 |
A U Споследний | Д □ мкг/мл | 35 ±18 | 40 ± 11 | 45 ±5 | 46 ± 10 | 27 ±3 | 34 ± 11 |
Cmax=пиковaя концентрация; AUC=nлощадь под кривой концентрация-время; AUC-nоследнuй=AUC, вычисленное с момента нуля до времени последней положительной концентрации; Т]/2=ожидаемый период полураспада.
Пример 8. Анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичные антитела проявляют сильную противоопухолевую эффективность in vivo.
Для того чтобы определить эффективность in vivo иллюстративного анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичных антител, идентифицированных как имеющие слабое или отсутствующее детектируемое связывание для человека и яванского макака CD3, исследования были проведены у мыши с ослабленным иммунитетом, несущей ксенотрансплантаты рака простаты человека. Эффективность выбранных биспецифичных антител была протестирована как на моделях немедленного лечения, так и на моделях терапевтического дозированого лечения.
Эффективность анти-MUC16/анти-CD3 биспецифичных антител на моделях ксенотрансплантата опухоли человека.
Чтобы оценить in vivo эффективность биспецифичных анти-MUC16/анти-CD3 в исследованиях ксенотрансплантатов опухолей человека, NOD scid гамма (NSG) мышам (Jackson Laboratories, Бар Харбор, Мэн) предварительно имплантировали мононуклеарные клетки периферической крови человека (PBMCs; ReachBio LLC., Сиэтл, Вашингтон), а затем им дают асцитные клетки из линии клеток рака яичника человека OVCAR-3 (American Type Tissue Culture, Манассас, Виргиния), трансдуцированные люциферазой (OVCAR-3/Luc). Клетки OVCAR-3 эндогенно экспрессируют MUC-16.
Вкратце, NSG мышам вводили внутрибрюшинно (в/б) с 5,0 х106 РВМСА человека. 8 дней спустя 1,5 х 106 асцитных клеток из клеточной линии OVCAR-3/Luc, ранее пассажированных in vivo, вводили внутрибрюшинно мышам NSG, которым имплантировали РВМС. В группе немедленного лечения мышей лечили внутрибрюшинно в день имплантации клеток OVCAR-3/Luc биспецифичными MUC16/CD3 антителами BSMUC16/CD3-001 или BSMUC16/CD3-005 или изотипическим контролем в дозе 10 мкг/мышь (N=5 мышей/группа лечения). В модели терапевтической дозы мышам вводили внутрибрюшинно. 7 дней после имплантации опухоли биспецифичными MUC16/CD3 или контрольными антителами, описанными выше, в дозе 10 мкг/мышь (N=5/груππа лечения).
Во всех исследованиях, рост опухоли контролировали с помощью биолюминесцентной томографии (BLI). Мышам вводили внутрибрюшинно субстрат люциферазы D-люциферин, суспендированный в PBS (150 мг/кг), и визуализировали под анестезией изофлураном через 10 минут. BLI выполняли с использованием системы Xenogen IVIS (Perkin Elmer, Хопкинтон, Массачусетс), а сигналы BLI извлекали с использованием программного обеспечения Living Image (Xenogen/Perkin Elmer). Области интереса были нарисованы вокруг каждой клеточной массы, и интенсивности фотонов были записаны как фотоны(ф)/сек(с)/см2/стерадиан(ср). Для группы немедленного лечения данные представлены в виде уровней BLI через 26 дней после имплантации опухоли (табл. 12А). Для группы, получавшей терапевтическое
- 66 045730 лечение, данные представлены как кратность изменения BLI между 6-м днем (1 день до лечения) и конечной точкой исследования (26-й день после имплантации опухоли; табл. 12В).
Как показывают результаты, как BSMUC16/CD3-001, так и BSMUC16/CD3-005 показали одинаковую эффективность в подавлении роста опухоли по сравнению с изотипическим контролем, когда BLI была измерена в день 26 в модели немедленного дозирования. Оба биспецифичных анти-MUC16/αнтиCD3 антитела также подавляли рост установленных опухолей при введении через 7 дней после имплантации опухоли по сравнению с контролем. Таким образом, биспецифичные анти-MUC16/анти-CD3 антитела данного изобретения демонстрируют сильную противоопухолевую эффективность в нескольких моделях.
Таблица 12А
Эффективность биспецифичных анти-MUC16/анти-CD3 антител в модели ксенотрансплантата с ослабленным иммунитетом: немедленное дозирование
Модель опухоли/мышин ая линия/Доза | Идентификатор биспецифичного антитела | N | Ср. биолюминесцентное излучение (фотоны/сек/см2/стерадиан) 26 день (среднее значение ± SD) |
OVCAR-3/Luc/ NSG/ 10 мкг/мышь | BSMUC16/CD3-001 | 5 | 1,4х103 ± 3,5х102 |
[01] | BSMUC16/CD3-005 | 5 | 1,5х103 ± 9,7х102 |
[01] | Изотипический контроль | 5 | 2, OxiO7 ± 1, ОхЮ6 |
Таблица 12В
Эффективность биспецифичных анти-Muc16/анти-CD3 антител в модели ксенотрансплантата с ослабленным иммунитетом: терапевтическое лечение
Модель опухоли/мышиная линия/Доза | Идентификатор биспецифичного антитела | N | Кратность изменения в Ср. биолюминесцентное излучение (ф/сек/см2/ст) на 26 день относительно 6 дня (среднее значение ± SD) |
OVCAR-3/Luc/ NSG/ 10 мкг/мышь | BSMUC16/CD3-001 | 5 | 2,0 + 5,0 |
[01] | BSMUC16/CD3-005 | 5 | 0,01 + 0,02 |
[01] | Изотипический контроль | 5 | 21,0 ± 8,0 |
В дальнейших экспериментах, эффективность in vivo биспецифичного анти-MUC16/анти-CD3 антитела была оценена в ксеногенных и сингенных моделях опухолей. Для первой ксеногенной модели, мышам NSG внутрибрюшинно (в/б) инъектировали клетки OVCAR-3/Luc, предварительно пассажированные in vivo (день 0), через одиннадцать дней после приживления человеческих РВМС. Мышам вводили внутрибрюшинно 0,01, 0,1 или 0,5 мг/кг BSMUC16/CD3-001 или вводили 0,5 мг/кг несвязывающего контроля или CD3-связывающего контроля в дни 6, 10, 13, 16 и 21. Опухолевую массу оценивали с помощью BLI на 6, 14 и 20 дни после имплантации опухоли. Лечение с помощью 0,1 или 0,5 мг/кг BSMUC16/CD3-001 приводило к значительной противоопухолевой эффективности, как определено измерениями BLI на 20-й день, как показано в табл. 13А-С и на фиг. 4-6. Для второй ксеногенной модели, мышам NSG инъектировали клетки OVCAR-3/Luc, предварительно пассажированные in vivo (день 0), через тринадцать дней после приживления человеческих РВМС, и в день 4 переносили вторую группу РВМС. Мышей лечили внутривенно (в/в) с 0,1, 0,5, 1 или 5 мг/кг BSMUC16/CD3-005 или вводили 5 мг/кг несвязывающего контроля или CD3-связывающего контроля в дни 5, 8, 12, 15, 19 и 22. Опухолевую массу оценивали с помощью BLI на дни 4, 11, 18 и 25. Лечение 0,5, 1 или 5 мг/кг BSMUC16/CD3-005 приво
- 67 045730 дило к значительной противоопухолевой эффективности, как показано измерениями и кратностью изменения BLI (табл. 13D-F и фиг. 7-9). Чтобы исследовать эффективность в иммунокомпетентной модели, мышиный ген CD3 был заменен человеческим CD3, а часть мышиного гена MUC16 была заменена человеческой последовательностью. Замена привела к мыши, чьи Т-клетки экспрессируют человеческий CD3 и которая экспрессирует химерную молекулу MUC16, содержащую часть человеческого MUC16, где связывается биспецифичное BSMUC16/CD3-001 антитело. Для модели сингенной опухоли использовали клеточные линии ID8-VEGF, сконструированные для экспрессии части человеческого MUC16. Мышам имплантировали клетки ID8-VEGF/huMUC16 подкожно и обрабатывали 100 мкг BSMUC16/CD3-001 либо в день имплантации, либо через десять дней после имплантации, когда были обнаружены опухоли. Обработка со 100 мкг BSMUC16/CD3-001 привела к значительной противоопухолевой эффективности, как показано в табл. 13G и на фиг. 10.
Имплантация и измерение ксенотрансплантатов опухолей: асцитные клетки из OVCAR-3/Luc клеточной линии, ранее пассажированные in vivo, вводили внутрибрюшинно мышам NSG которым ранее имплантировали человеческие РВМС. BLI измеряли как показание роста опухоли через несколько дней после имплантации OVCAR-3/Luc и несколько раз во время исследования. После первоначального измерения BLI для когортирования, мышей разделили на группы по 4-6 животных в каждой и вводили биспецифичные MUC16xCD3 или контрольные антитела дважды в неделю в течение всего исследования.
Расчет роста и ингибирования опухоли.
ксенотрансплантата: Для измерения опухолевой массы использовали биолюминесцентную визуализацию. Мышам вводили внутрибрюшинно 150 мг/кг (как определено по массе тела в начале эксперимента) субстрата люциферазы D-люциферина, суспендированного в PBS. Через десять минут после введения дозы выполняли визуализацию BLI у мышей под изофлурановым наркозом с использованием системы Xenogen IVIS. Получение изображения осуществляли с полем зрения в D, высотой объекта 1,5 см и средним уровнем биннинга в течение 0,5 мин времени экспозиции. BLI сигналы были получены с использованием программного обеспечения Living Image. Области интереса были нарисованы вокруг каждой опухолевой массы, и интенсивности фотонов были записаны как ф/с/см2/ср. Статистический анализ был выполнен с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (версия 6). Статистическую значимость результатов BLI определяли с использованием непарного непараметрического t-критерия Манна-Уитни. Кратность изменения рассчитывали по формуле: (День 20-День 6)/День 6 для исследования 1 и (День 25-День 4)/День 4 для исследования 2.
Имплантация и измерение сингенных опухолей: мышам, экспрессирующим CD3 человека и человек-мышиную химеру MUC16 в соответствующих локусах мышей, имплантировали 10e6 ID8VEGF/huMUC16 клеток подкожно (п/к). Мышам вводили BSMUC16/CD3-001 или CD3-связывающий контроль в/б, два раза в неделю в течение исследования. Лечение началось в день 0 или день 10 после имплантации. Рост опухоли измеряли штангенциркулем два раза в неделю. Мышей умерщвляли через 47 дней после имплантации опухоли.
Расчет роста и ингибирования сингенной опухоли: Для определения объема опухоли с помощью внешнего штангенциркуля были определены наибольший продольный диаметр (длина) и наибольший поперечный диаметр (ширина). Объем опухоли на основе измерений штангенциркулем были рассчитаны по формуле: объем=(длина х ширина2)/2. Статистическую значимость определяли с использованием непарного непараметрического t-критерия Манна-Уитни.
Противоопухолевая эффективность биспецифичного BSMUC16/CD3-001 антитела в ксеногенной и сингенной in vivo моделях опухолей показана в табл. 13A-D, ниже.
Таблица 13А
Модельное исследование 1 OVCAR-3. Уровень биолюминесценции на 6 день после имплантации опухоли
Антитело (мг/кг) | Ср. излучение [ф/сек/см2/ст] 6 дней после имплантации (медиана ± SEM) | |||
не связывающий контроль (0,5) | 8,15е+05 | ± | 7,88 е + 04 | |
CD3-связывающий контроль (0,5) | 6,3 9е + 05 | ± | 8,67е+04 | |
BSMUC16/CD3-001 | (0,5) | 7,64е+05 | ± | 1,19 е + 05 |
BSMUC16/CD3-001 | (0,1) | 6,31е+05 | ± | 1,10 е+05 |
BSMUC16/CD3-001 | (0,01) | 8,77е+05 | ± | 7,91 е+04 |
- 68 045730
Таблица 13В
Модельное исследование 1 OVCAR-3. Уровень биолюминесценции на 20 день после имплантации опухоли
Антитело (мг/кг) | Ср. излучение [ф/сек/см2/ст] 20 дней после имплантации (медиана ± SEM) | |||
не связывающий контроль (0,5) | 8,63е+0 6 | + | 1,45 е + 06 | |
CD3-связывающий контроль (0,5) | 9,94е + 0 6 | ± | 1,08е+06 | |
BSMUC16/CD3-001 | (0,5) | 9,37е+02 | ± | 9,62 е+02 |
BSMUC16/CD3-001 | (0,1) | 2,36е+04 | ± | 1,28 е+06 |
BSMUC16/CD3-001 | (0,01) | 6,51е+06 | ± | 1,60 е + 06 |
Таблица 13С
Модельное исследование 1 OVCAR-3. Кратность изменения в BLI между 6 и 20 днями после имплантации опухоли
Антитело (мг/кг) | Кратность изменения в ср. излучении [ф/сек/см2/ст] с 6 дня до 20 дней | |
после имплантации | (среднее ± SD) | |
не связывающий контроль (0,5) | 9,5 ± | 1, 9 |
CD3-связывающий контроль (0,5) | 15, 6 ± | 6,7 |
BSMUC16/CD3-001 (0,5) | -1,00 ± | 0,00 |
BSMUC16/CD3-001 (0,1) | 1,2 ± | 4,7 |
BSMUC16/CD3-001 (0,01) | 5, 6 ± | 4,2 |
Таблица 13D
Модельное исследование 2 OVCAR-3. Уровень биолюминесценции на 4 день после имплантации опухоли
Антитело (мг/кг) | Ср. излучение [ф/сек/см2/ст] 4 дней после имплантации (медиана + SEM) | |||
не связывающий контроль (5) | 1,54е+05 | ± | 9,93е+03 | |
CD3-связывающий контроль (5) | 1,34е+05 | ± | 1,55е+04 | |
BSMUC16/CD3-005 | (5) | 1,54е+05 | ± | 1,03е+04 |
BSMUC16/CD3-005 | (1) | 1,38е+05 | ± | 4,65е+03 |
BSMUC16/CD3-005 | (0,5) | 1,31е+05 | ± | 4,03е+03 |
BSMUC16/CD3-005 | (0,1) | 1,53е+05 | ± | 1,93е+04 |
- 69 045730
Таблица 13Е
Модельное исследование 2 OVCAR-3. Уровень биолюминесценции на 25 день после имплантации опухоли
Антитело (мг/кг) | Ср. излучение [ф/сек/см2/ст] 25 дней после имплантации (медиана ± SEM) |
не связывающий контроль (5) | 7,20е+06 ± 8,91е+05 |
CD3-связывающий контроль (5) | 6,15е+06 ± 7,26е+05 |
BSMUC16/CD3-005 (5) | 1,52е+03 ± 4,86е+05 |
BSMUC16/CD3-005 (1) | 6,99е+03 ± 6,23е+03 |
BSMUC16/CD3-005 (0,5) | 2,23е+03 ± 2,35е+05 |
BSMUC16/CD3-005 (0,1) | 7,бЗе+06 ± 1,83е+06 |
Таблица 13F
Модельное исследование 2 OVCAR-3. Кратность изменения в BLI между 4 и 25 днями после имплантации опухоли
Антитело (мг/кг) | Кратность изменения в ср. излучении [ф/сек/см2/ст] с 4 дня до 25 дней после имплантации (среднее ± SD) |
не связывающий контроль (5) | 46,8 ± 20,6 |
CD3-связывающий контроль (5) | 55,0 ± 14,7 |
BSMUC16/CD3-005 (5) | 2,5 ± 8,5 |
BSMUC16/CD3-005 (1) | -0,9 ± 0,1 |
BSMUC16/CD3-005 (0,5) | 0,7 + 3,6 |
BSMUC16/CD3-005 (0,1) | 45,4 ± 35,7 |
Таблица 13G
Модель ID8-VEGF/huMUC16. Размер опухоли (мм3) на 47 день
Начало лечения | Антитело (мкг) | Размер опухоли (мм3) в день 47 (среднее значение ± SEM) |
День 0 | CD3-связывающий контроль (100) | 827,5 ± 223,5 |
День 0 | BSMUC16/CD3-001 (100) | 51,2 ± 51,2 |
День 10 | BSMUC16/CD3-001 (100) | 273,8 ± 92,36 |
Пример 9. Получение и характеристика конъюгата.
Все моноклональные антитела были экспрессированы в клетках СНО и очищены белком А. Изотипический контроль также был приготовлен аналогичным образом. Не связывающее антитело изотипического контроля получали из иммунологического антигена, не имеющего отношения к онкологии.
Антитело (10 мг/мл) в 50 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,5 обрабатывали 1 мМ дитиотреитолом при 37°С в течение 30 мин. После гель-фильтрации (G-25, рН 4,5 ацетат натрия) к производному ДМСО (10 мг/мл) добавляли один из малеимидо линкерных производных полезной нагрузки Соединения 7 или Соединения 10 (см. табл. 14) (1,2 эквивалента/SH группы) в ДМСО (10 мг/мл) для снижения содержания антител, и смесь доводят до рН 7,0 с помощью 1 М HEPES (рН 7,4). Соединение 7 и соединение 10, а также способы получения соединений описаны в публикации РСТ № WO2014/145090, опубликованной 18 сентября 2014 г., и публикации РСТ № WO2016/160615, опубликованной б октября 2016 г., соответственно, каждый из который полностью включен в настоящее описание в качестве ссылки. Через 1 ч реакцию гасили избытком N-этилмалеимида. Конъюгаты очищали методом эксклюзионной хроматографии
- 70 045730 размеров и стерильно фильтровали. Концентрации белка и линкера определяли с помощью УФспектрального анализа. Эксклюзионная ВЭЖХ установила, что все используемые конъюгаты были >95% мономерными. Выходы приведены в табл. 14 на основе определения белка. Все конъюгированные антитела анализировали УФ-излучением на значения нагрузки полезной нагрузки линкера согласно Hamblett et al., Cancer Res 2004 10 7063. Результаты суммированы в табл. 14.
Конъюгат, содержащий соединение 60 может быть получен с использованием аналогичного способа. Соединение 60 и способы получения соединения описаны в публикации РСТ № WO2016/160615 (пример 20), опубликованной 6 октября 2016 г., которая полностью включена в настоящий документ в качестве ссылки. Соединение 60 представляет собой майтансин-N-метил-L-аланин-(3-метокси-4амино)бензамидо-Cit-Val-Cap-Mal.
Таблица 14
Краткая информация о параметрах полезной нагрузки (хемотоксическое лекарственное средство) и антитело-лекарственное средство-конъюгат
Соединение | ε252 нм (см-1 М1 ) | ε280 нм (см-1 М1 ) |
7 [Maйτaнcин-3-N-мeτил-L-(S) -аланин-пропанамидил-3-N- метил-N- [4- (амино-цитруллин-валин- гексанамид-6- малеимидил)бензил]карбамата] | 50600 | 8100 |
10[Maйτaнcин-N-мeτил-Lаланин-4-аминобензамидцитруллин-валин-капролил-6малеимидил] | 45990 | 20600 |
Антитело | ε252 нм (см-1 М1 ) | ε280 нм (см-1 М1 ) |
H1H9519N | 83995 | 235280 |
H1H9521N | 85564 | 232050 |
Изотипический контроль | 75113 | 218360 |
Конъюгат антитела | Полезная нагрузка: антитело (УФ) | Продуктивность % |
H1H9519N-7 | 3,5 | 40 |
H1H9521N-7 | 3,6 | 40 |
H1H9521N-1O | 3,0 | 40 |
Изотипический контроль-7 | 3,0 | 60 |
Изотипический контроль-10 | 3,4 | 60 |
Пример 10. Конгьюгаты лекарственного средства с анти-MUC16 антителом являются мощными ингибиторами роста опухоли на моделях ксенотрансплантата рака простаты in vivo, положительных по MUC16.
Для того чтобы определить эффективность in vivo анти-MUC16 антител, конъюгированных с соединением 7 и соединение 10, были проведены исследования мышей с ослабленным иммунитетом, несущих MUC16 положительные ксенотрансплантаты рака яичников.
Для этих исследований, самкам SCID мышей (Taconic, Хадсон, Нью-Йорк) были имплантированы OVCAR3 [NIH:OVCAR3 (OVCAR3, АТСС НТВ-161)] клетки, трансфицированные люциферазой (OVCAR3/luc), которые эндогенно экспрессируют MUC16. Для внутрибрюшинных (в/б) опухолей, мышей рандомизировали на группы лечения и им вводили либо анти-MUC16 антитела, конъюгированные с лекарственным препаратом (см. пример 9), не связывающееся конъюгированное антитело, либо носитель после обнаружения люминесцентного сигнала опухоли. Для подкожных (п/к) ксенотрансплантатов, после того как опухоли достигли среднего объема 200 мм3 (~ 16 день), мышей рандомизировали в группы лечения, и им вводили либо анти-MUC16 антитела, конъюгированные с лекарственным препаратом, не связывающееся конъюгированное антитело, либо носитель. В этих исследованиях in vivo антитела вво
- 71 045730 дили, а опухоли затем отслеживали до развития асцита или достижения среднего размера опухоли приблизительно 1200 мм3 в группе, получавшей только носитель. В этот момент было рассчитано ингибирование роста опухоли.
В начальном внутрибрюшинном исследовании (в/б), в качестве примера анти-MUC16 антитела, конъюгированные с соединением 7 были исследованы на эффективность в снижении OVCAR3/luc сигнала люминесценции. Мыши получали четыре дозы анти-MUC16 и контрольных ADC один раз в неделю в дозе 85 мкг/кг лекарственного эквивалента на основе соотношения ADC лекарственное средство:антитело. Как показано в табл. 15А, Н1Н9519N-соединение 7 и Н1Н9521N-соединение-7 сильно ингибируют асцитный рост опухоли. Эти анти-MUC16 ADC эффективно уменьшали размер опухоли с уменьшением свечения опухоли на 100% по сравнению с контролем носителя. Контрольный ADC не опосредовал какого-либо ингибирования с помощью OVCAR/luc роста асцитных опухолевых клеток.
Дальнейшее исследование оценки эффективности анти-MUC16 ADC против подкожной (п/к) OVCAR3/luc опухоли суммировано в табл. 15В. Мыши получали четыре дозы анти-MUC16 и контрольных ADC один раз в неделю в дозе 85 мкг/кг лекарственного эквивалента на основе соотношения ADC лекарственное средство:антитело. При конъюгировании с соединением 7, MUC16 ADC H1H9519NСоединение 7 и H1H9521N-Соединение 7 снова оказывали значительное противоопухолевое действие; на этот раз против подкожных OVCAR3/luc опухолей. Соответственно, эти ADC опосредовали 100% и 109% ингибирование роста опухоли соответственно. Контрольный ADC не опосредовал какого-либо ингибирования роста подкожной опухоли OVCAR/luc.
В третьем исследовании, эффективность H1H9521N анти-МиС16 антитела, конъюгированного с линкером лекарственного средства соединения 10, оценивали во в/б модели OVCAR3/luc опухоли. Мыши получали однократные дозы анти-МиС16 и контрольные ADC в дозе 85 мкг/кг, 170 мкг/кг и 340 мкг/кг в эквиваленте лекарственного средства в зависимости от соотношения лекарственное средство ADC:антитело. Как показано в табл. 15С, H1H9519N-10 сильно ингибирует асцитный рост опухоли. Дозы Н1Н9519N-соединение 10 привели к 99-100% ингибированию свечения опухоли относительно контроля носителя. Некоторое ингибирование наблюдалось для контрольного ADC с использованием соединения 10, хотя оно было более умеренным, чем то, которое наблюдалось после анти-МиС16 Н1Н9519N-соединение 10.
Таблица 15А
Ингибирование в/б роста опухоли OVCAR3/luc на 49 день у мышей SCID, обработанных анти-MUC16 антителами, конъюгированными с соединением 7
Группа лечения | Среднее конечное излучение опухоли | Среднее ингибирование роста опухоли (%) |
(среднее ± SEM) | ||
Носитель | 16469750 ± 10679335 | 0 |
Контроль-соединение 7 85 мкг/кг | 16813750 ± 4026065 | -2 |
H1H9519N- Соединение 7 85 мкг/кг | 111254 ± 187288 | 100 |
H1H9521N- Соединение 7 85 мкг/кг | 110413 ± 161353 | 100 |
- 72 045730
Таблица 15В
Ингибирование п/к роста опухоли OVCAR3/luc на 37 день у мышей SCID, обработанных анти-MUC16 антителами, конъюгированными с соединением 7
Группа лечения | Конечный объем опухоли (среднее ± SEM) | Среднее ингибирование роста опухоли (%) |
Носитель | 1210 ± 426 | 0 |
Контроль-Соединение 7 85 мкг/кг | 1737 ± 391 | -51 |
H1H9519N- Соединение 7 85 мкг/кг | 187 ± 269 | 100 |
H1H9521N- Соединение 7 85 мкг/кг | 89 ± 97 | 109 |
Таблица 15С
Ингибирование в/б роста опухоли OVCAR3/luc на 49 день у мышей SCID, обработанных анти-MUC16 антителами, конъюгированными с соединением 10
Группа лечения | Конечное излучение опухоли (среднее ± SEM) | Среднее ингибирование роста опухоли (%) |
Носитель | 29211000 ± 23504780 | 0 |
Контроль-Соединение 10 85 мкг/кг | 17332625 ± 14346694 | 41 |
Контроль-Соединение 10 170 мкг/кг | 32075000 ± 15623403 | -10 |
Контроль-Соединение 10 340 мкг/кг | 22882350 ± 18771913 | 22 |
H1H9521N- Соединение 10 85 мкг/кг | 574285 ± 306844 | 99 |
H1H9521N- Соединение 10 170 мкг/кг | 236037 ± 226948 | 100 |
H1H9521N- Соединение 10 340 мкг/кг | 26472 ± 25079 | 101 |
Пример 11. Получение анти-CD3 антител.
Ahtu-CD3 антитела получают иммунизацией сконструированной мыши, содержащей ДНК, кодирующую человеческий иммуноглобулин тяжелой и каппа легкой цепи вариабельных участков с клетками, экспрессирующих CD3, или с ДНК, кодирующей CD3. Иммунный ответ антител наблюдали с помощью CD3-специфического иммуноанализа. Когда желаемый иммунный ответ был достигнут, спленоциты собирали и сливали с клетками миеломы мыши, чтобы сохранить их жизнеспособность и образовать линии клеток гибридомы. Линии клеток гибридомы подвергали скринингу и отбирали для идентификации линий клеток, которые продуцируют CD3-специфические антитела. Используя эту методику, было получено несколько химерных анти-CD3 антител (то есть антител, обладающих человеческими вариабельными доменами и константными доменами мыши). Кроме того, несколько полностью человеческих анти-CD3 антител были выделены непосредственно из антиген-позитивных В-клеток без слияния с клетками миеломы, как описано в US 2007/0280945A1.
Некоторые биологические свойства иллюстративных анти-MUC16 антител, полученных в соответствии со способами этого примера, подробно описаны в примерах, приведенных в данном документе.
Пример 12. Последовательности аминокислот и нуклеиновых кислот вариабельного участка тяжелой и легкой цепей.
В табл. 16 приведены идентификаторы аминокислотной последовательности вариабельных участков и CDR тяжелой и легкой цепи выбранных анти-MUC16 антител по данному изобретению. Соответ
- 73 045730 ствующие идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты приведены в табл. 17. Способы получения анти-CD3 антител, описанных в данном документе, также можно найти в публикации США 2014/0088295.
Таблица 16 Идентификаторы аминокислотной последовательности
SEQ ID NO: | ||||||||
Обозначение антитела | HCVR | HCDR1 | HCDR3 | LCVR | LCDR11 | LCDR2 | LCDR3 | |
H1H2712N | 402 | 404 | 406 | 408 | 410 | 412 | 414 | 416 |
H1M2692N | 418 | 420 | 422 | 424 | 426 | 428 | 430 | 432 |
H1M3542N | 434 | 436 | 438 | 440 | 442 | 444 | 446 | 448 |
H1M3544N | 450 | 452 | 454 | 456 | 458 | 4 60 | 4 62 | 4 64 |
H1M3549N | 466 | 4 68 | 470 | 472 | 474 | 476 | 478 | 480 |
H1M3613N | 482 | 484 | 486 | 488 | 490 | 492 | 494 | 496 |
H2M2689N | 498 | 500 | 502 | 504 | 506 | 508 | 510 | 512 |
H2M2690N | 514 | 516 | 518 | 520 | 522 | 524 | 52 6 | 528 |
H2M2691N | 530 | 532 | 534 | 53 6 | 538 | 540 | 542 | 544 |
H2M2704N | 546 | 548 | 550 | 552 | 554 | 556 | 558 | 560 |
H2M2705N | 562 | 564 | 566 | 568 | 570 | 572 | 574 | 576 |
H2M2706N | 578 | 580 | 582 | 584 | 586 | 588 | 590 | 592 |
H2M2707N | 594 | 596 | 598 | 600 | 602 | 604 | 60 6 | 608 |
H2M2708N | 610 | 612 | 614 | 616 | 618 | 620 | 622 | 624 |
H2M2709N | 62 6 | 628 | 630 | 632 | 634 | 636 | 638 | 64 0 |
H2M2710N | 642 | 64 4 | 64 6 | 648 | 650 | 652 | 654 | 65 6 |
H2M2711N | 658 | 660 | 662 | 664 | 666 | 668 | 670 | 672 |
H2M2774N | 67 4 | 676 | 678 | 680 | 682 | 684 | 68 6 | 688 |
H2M2775N | 690 | 692 | 694 | 69 6 | 698 | 700 | 702 | 704 |
H2M2776N | 706 | 708 | 710 | 712 | 714 | 716 | 718 | 720 |
H2M2777N | 722 | 724 | 726 | 728 | 730 | 732 | 734 | 73 6 |
H2M2778N | 738 | 740 | 742 | 744 | 746 | 748 | 750 | 752 |
H2M2779N | 754 | 75 6 | 758 | 760 | 762 | 764 | 766 | 768 |
H2M2789N | 770 | 772 | 774 | 776 | 7 78 | 780 | 782 | 784 |
H2M2862N | 78 6 | 788 | 790 | 792 | 794 | 796 | 798 | 800 |
H2M2885N | 802 | 804 | 806 | 808 | 810 | 812 | 814 | 816 |
H2M2886N | 818 | 820 | 822 | 824 | 826 | 828 | 830 | 832 |
H2M3540N | 834 | 836 | 838 | 840 | 842 | 844 | 846 | 848 |
H2M3541N | 850 | 852 | 854 | 856 | 858 | 8 60 | 8 62 | 8 64 |
H2M3543N | 866 | 8 68 | 870 | 872 | 874 | 876 | 878 | 880 |
H2M3547N | 882 | 884 | 886 | 888 | 890 | 892 | 894 | 896 |
H2M3548N | 898 | 900 | 902 | 904 | 906 | 908 | 910 | 912 |
H2M3563N | 914 | 916 | 918 | 920 | 922 | 924 | 92 6 | 928 |
Н1Н5751Р | 930 | 932 | 934 | 93 6 | 938 | 940 | 942 | 944 |
- 74 045730
H1H5752P | 946 | 948 | 950 | 952 | 954 | 956 | 958 | 960 |
H1H5753B | 962 | 964 | 966 | 968 | 970 | 972 | 974 | 976 |
H1H5754B | 978 | 980 | 982 | 984 | 986 | 988 | 990 | 992 |
H1H5755B | 994 | 996 | 998 | 1000 | 1002 | 1004 | 1006 | 1008 |
H1H5756B | 1010 | 1012 | 1014 | 1016 | 1018 | 1020 | 1022 | 1024 |
H1H5757B | 102 6 | 1028 | 1030 | 1032 | 1034 | 103 6 | 1038 | 1040 |
H1H5758B | 1042 | 1044 | 1046 | 1048 | 1050 | 1052 | 1054 | 1056 |
H1H5761P | 1058 | 10 60 | 1062 | 1064 | 1066 | 1068 | 1070 | 10 72 |
H1H5763P | 1074 | 1076 | 1078 | 1080 | 1082 | 1084 | 1086 | 1088 |
H1H5764P | 1090 | 1092 | 1094 | 1096 | 1098 | 1100 | 1102 | 1104 |
H1H5769P | 1106 | 1108 | 1110 | 1112 | 1114 | 1116 | 1118 | 1120 |
H1H5771P | 1122 | 1124 | 1126 | 1128 | ИЗО | 1132 | 1134 | 1136 |
H1H5772P | 1138 | 1140 | 1142 | 1144 | 1146 | 1148 | 1150 | 1152 |
H1H5777P | 1154 | 1156 | 1158 | 1160 | 1162 | 1164 | 1166 | 1168 |
H1H5778P | 1170 | 1172 | 1174 | 1176 | 1178 | 1180 | 1182 | 1184 |
H1H5780P | 1186 | 1188 | 1190 | 1192 | 1194 | 1196 | 1198 | 1200 |
H1H5781P | 1202 | 1204 | 1206 | 1208 | 1210 | 1212 | 1214 | 1216 |
H1H5782P | 1218 | 1220 | 1222 | 1224 | 1226 | 1228 | 1230 | 1232 |
H1H5785B | 1234 | 1236 | 1238 | 1240 | 1242 | 1244 | 1246 | 1248 |
H1H5786B | 1250 | 1252 | 1254 | 1256 | 1258 | 1260 | 1262 | 1264 |
H1H5788P | 1266 | 12 68 | 1270 | 1272 | 1274 | 1276 | 1278 | 1280 |
H1H5790B | 1282 | 1284 | 1286 | 1288 | 1290 | 1292 | 1294 | 1296 |
H1H5791B | 1298 | 1300 | 1302 | 1304 | 1306 | 1308 | 1310 | 1312 |
H1H5792B | 1314 | 1316 | 1318 | 1320 | 1322 | 1324 | 1326 | 1328 |
H1H5793B | 1330 | 1332 | 1334 | 1336 | 1338 | 1340 | 1342 | 1344 |
H1H5795B | 1346 | 1348 | 1350 | 1352 | 1354 | 1356 | 1358 | 1360 |
H1H5796B | 1362 | 1364 | 1366 | 1368 | 1370 | 1372 | 1374 | 1376 |
H1H5797B | 1378 | 1380 | 1382 | 1384 | 1386 | 1388 | 1390 | 1392 |
H1H5798B | 1394 | 1396 | 1398 | 1400 | 1402 | 1404 | 1406 | 1408 |
H1H5799P | 1410 | 1412 | 1414 | 1416 | 1418 | 1420 | 1422 | 1424 |
H1H5801B | 1426 | 1428 | 1430 | 1432 | 1434 | 1436 | 1438 | 1440 |
H1H7194B | 1442 | 1444 | 1446 | 1448 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1H7195B | 1450 | 1452 | 1454 | 1456 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1H7196B | 1458 | 14 60 | 14 62 | 14 64 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1H7198B | 1466 | 14 68 | 1470 | 1472 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1H7203B | 1474 | 1476 | 1478 | 1480 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1H7204B | 1482 | 1484 | 1486 | 1488 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
- 75 045730
Н1Н7208В | 1490 | 1492 | 1494 | 1496 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7211В | 1498 | 1500 | 1502 | 1504 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7221В | 1506 | 1508 | 1510 | 1512 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7223В | 1514 | 1516 | 1518 | 1520 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7226В | 1522 | 1524 | 1526 | 1528 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7232В | 1530 | 1532 | 1534 | 1536 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7233В | 1538 | 1540 | 1542 | 1544 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7241В | 1546 | 1548 | 1550 | 1552 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7242В | 1554 | 1556 | 1558 | 1560 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7250В | 1562 | 1564 | 1566 | 1568 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7251В | 1570 | 1572 | 1574 | 1576 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7254В | 1578 | 1580 | 1582 | 1584 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7258В | 1586 | 1588 | 1590 | 1592 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7269В | 1594 | 1596 | 1598 | 1600 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Н1Н7279В | 1602 | 1604 | 160 6 | 1608 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1XH7221G | 1610 | 1612 | 1614 | 1616 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1XH7221G3 | 1618 | 1620 | 1622 | 1624 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
H1XH7221G5 | 162 6 | 1628 | 1630 | 1632 | 1634 | 163 6 | 1638 | 1640 |
Таблица 17
Идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты
SEQ ID NO: | ||||||||
Обозначение антитела | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
H1H2712N | 401 | 403 | 405 | 407 | 409 | 411 | 413 | 415 |
H1M2692N | 41 7 | 419 | 421 | 423 | 425 | 427 | 429 | 431 |
H1M3542N | 433 | 435 | 437 | 439 | 441 | 443 | 445 | 447 |
H1M3544N | 449 | 451 | 453 | 455 | 457 | 459 | 4 61 | 4 63 |
H1M3549N | 4 65 | 467 | 4 69 | 471 | 473 | 475 | 477 | 479 |
H1M3613N | 481 | 483 | 485 | 487 | 489 | 491 | 493 | 495 |
H2M2689N | 497 | 499 | 501 | 503 | 505 | 507 | 509 | 511 |
H2M2690N | 513 | 515 | 517 | 519 | 521 | 523 | 525 | 527 |
H2M2691N | 529 | 531 | 533 | 535 | 537 | 539 | 541 | 543 |
H2M2704N | 545 | 547 | 549 | 551 | 553 | 555 | 557 | 559 |
H2M2705N | 561 | 563 | 5 65 | 567 | 5 69 | 571 | 573 | 575 |
H2M2706N | 577 | 579 | 581 | 583 | 585 | 587 | 589 | 591 |
H2M2707N | 593 | 595 | 597 | 599 | 601 | 603 | 605 | 60 7 |
- 76 045730
H2M2708N | 609 | 611 | 613 | 615 | 617 | 619 | 621 | 623 |
H2M2709N | 625 | 627 | 629 | 631 | 633 | 635 | 63 7 | 639 |
H2M2710N | 641 | 643 | 645 | 647 | 649 | 651 | 653 | 655 |
H2M2711N | 65 7 | 659 | 661 | 663 | 665 | 667 | 669 | 671 |
H2M2774N | 673 | 675 | 677 | 679 | 681 | 683 | 685 | 68 7 |
H2M2775N | 689 | 691 | 693 | 695 | 697 | 699 | 701 | 703 |
H2M2776N | 705 | 707 | 709 | 711 | 713 | 715 | 717 | 719 |
H2M2777N | 721 | 723 | 725 | 727 | 729 | 731 | 733 | 735 |
H2M2778N | 737 | 739 | 741 | 743 | 745 | 747 | 749 | 751 |
H2M2779N | 753 | 755 | 757 | 759 | 761 | 763 | 765 | 767 |
H2M2789N | 769 | 771 | 773 | 7 75 | 777 | 779 | 781 | 783 |
H2M2862N | 785 | 787 | 789 | 791 | 793 | 795 | 797 | 799 |
H2M2885N | 801 | 803 | 805 | 807 | 809 | 811 | 813 | 815 |
H2M2886N | 81 7 | 819 | 821 | 823 | 825 | 827 | 829 | 831 |
H2M3540N | 833 | 835 | 837 | 839 | 841 | 843 | 845 | 847 |
H2M3541N | 849 | 851 | 853 | 855 | 857 | 859 | 8 61 | 8 63 |
H2M3543N | 865 | 867 | 8 69 | 871 | 873 | 875 | 877 | 879 |
H2M3547N | 881 | 883 | 885 | 887 | 889 | 891 | 893 | 895 |
H2M3548N | 897 | 899 | 901 | 903 | 905 | 907 | 909 | 911 |
H2M3563N | 913 | 915 | 917 | 919 | 921 | 923 | 925 | 927 |
H1H5751P | 929 | 931 | 933 | 935 | 937 | 939 | 941 | 943 |
H1H5752P | 945 | 947 | 949 | 951 | 953 | 955 | 957 | 959 |
H1H5753B | 961 | 963 | 9 65 | 967 | 9 69 | 971 | 973 | 975 |
H1H5754B | 977 | 979 | 981 | 983 | 985 | 987 | 989 | 991 |
H1H5755B | 993 | 995 | 997 | 999 | 1001 | 1003 | 1005 | 1007 |
H1H5756B | 1009 | 1011 | 1013 | 1015 | 1017 | 1019 | 1021 | 1023 |
H1H5757B | 1025 | 1027 | 1029 | 1031 | 1033 | 1035 | 1037 | 1039 |
H1H5758B | 1041 | 1043 | 1045 | 1047 | 1049 | 1051 | 1053 | 1055 |
H1H5761P | 1057 | 1059 | 10 61 | 10 63 | 1065 | 1067 | 10 69 | 1071 |
H1H5763P | 1073 | 1075 | 1077 | 10 79 | 1081 | 1083 | 1085 | 1087 |
H1H5764P | 1089 | 1091 | 1093 | 1095 | 1097 | 1099 | 1101 | 1103 |
H1H5769P | 1105 | 1107 | 1109 | 1111 | 1113 | 1115 | 1117 | 1119 |
H1H5771P | 1121 | 1123 | 1125 | 1127 | 1129 | 1131 | 1133 | 1135 |
H1H5772P | 1137 | 1139 | 1141 | 1143 | 1145 | 1147 | 1149 | 1151 |
- 77 045730
H1H5777P | 1153 | 1155 | 1157 | 1159 | 1161 | 1163 | 1165 | 1167 |
H1H5778P | 1169 | 11 71 | 1173 | 1175 | 1177 | 1179 | 1181 | 1183 |
H1H5780P | 1185 | 1187 | 1189 | 1191 | 1193 | 1195 | 1197 | 1199 |
H1H5781P | 1201 | 1203 | 1205 | 1207 | 1209 | 1211 | 1213 | 1215 |
H1H5782P | 121 7 | 1219 | 1221 | 1223 | 1225 | 1227 | 1229 | 1231 |
H1H5785B | 1233 | 1235 | 1237 | 1239 | 1241 | 1243 | 1245 | 1247 |
H1H5786B | 1249 | 1251 | 1253 | 1255 | 1257 | 1259 | 1261 | 1263 |
H1H5788P | 1265 | 1267 | 12 69 | 1271 | 1273 | 1275 | 1277 | 1279 |
H1H5790B | 1281 | 1283 | 1285 | 1287 | 1289 | 1291 | 1293 | 1295 |
H1H5791B | 1297 | 1299 | 1301 | 1303 | 1305 | 1307 | 1309 | 1311 |
H1H5792B | 1313 | 1315 | 1317 | 1319 | 1321 | 1323 | 1325 | 1327 |
H1H5793B | 1329 | 1331 | 1333 | 1335 | 1337 | 1339 | 1341 | 1343 |
H1H5795B | 1345 | 1347 | 1349 | 1351 | 1353 | 1355 | 1357 | 1359 |
H1H5796B | 1361 | 1363 | 13 65 | 1367 | 1369 | 1371 | 1373 | 1375 |
H1H5797B | 1377 | 1379 | 1381 | 1383 | 1385 | 1387 | 1389 | 1391 |
H1H5798B | 1393 | 1395 | 1397 | 1399 | 1401 | 14 03 | 14 05 | 1407 |
H1H5799P | 1409 | 1411 | 1413 | 1415 | 1417 | 1419 | 1421 | 1423 |
H1H5801B | 1425 | 1427 | 1429 | 1431 | 1433 | 1435 | 1437 | 1439 |
H1H7194B | 1441 | 1443 | 1445 | 1447 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7195B | 1449 | 1451 | 1453 | 1455 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7196B | 1457 | 1459 | 14 61 | 14 63 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7198B | 14 65 | 1467 | 14 69 | 1471 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7203B | 1473 | 1475 | 1477 | 1479 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7204B | 1481 | 1483 | 1485 | 1487 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7208B | 1489 | 1491 | 1493 | 1495 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7211B | 1497 | 1499 | 1501 | 1503 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7221B | 1505 | 1507 | 1509 | 1511 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7223B | 1513 | 1515 | 1517 | 1519 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7226B | 1521 | 1523 | 1525 | 1527 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7232B | 1529 | 1531 | 1533 | 1535 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7233B | 1537 | 1539 | 1541 | 1543 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7241B | 1545 | 1547 | 1549 | 1551 | 1633 | 1635 | 1637 | 1639 |
H1H7242B | 1553 | 1555 | 1557 | 1559 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7250B | 1561 | 1563 | 15 65 | 1567 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7251B | 1569 | 1571 | 1573 | 1575 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7254B | 1577 | 1579 | 1581 | 1583 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7258B | 1585 | 1587 | 1589 | 1591 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7269B | 1593 | 1595 | 1597 | 1599 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1H7279B | 1601 | 1603 | 1605 | 160 7 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1XH7221G | 1609 | 1611 | 1613 | 1615 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1XH7221G3 | 1617 | 1619 | 1621 | 1623 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
H1XH7221G5 | 1625 | 162 7 | 1629 | 1631 | 1633 | 1635 | 163 7 | 1639 |
- 78 045730
Антитела обычно упоминаются в данном документе в соответствии со следующей номенклатурой: префикс Fc (например, Н1Н, H1M, H2M и т.д.), за которым следует числовой идентификатор (например, 2712, 2692 и т.д., как показано в табл. 1), за которым следует суффикс Р, N, или В. Таким образом, согласно этой номенклатуре, антитело может упоминаться в данном документе, например, как H1H2712N, H1M2692N, H2M2689N и т.д. Префиксы Н1Н, H1M и Н2М в обозначениях антител, используемых в данном документе, указывают конкретный Fc участок изотипа антитела. Например, антитело Н1Н имеет Fc человеческого IgG1, антитело H1M имеет Fc мышиного IgG1, a антитело Н2М имеет Fc мышиного IgG2 (все вариабельные участки полностью человеческие, как обозначено первым 'Н' в обозначении антител). Как будет понятно специалисту в данной области техники, антитело, имеющее конкретный изотип Fc, может быть превращено в антитело с другим изотипом Fc (например, антитело с Fc IgG1 мыши может быть превращено в антитело с человеческим IgG4 и тому подобное), но в любом случае, вариабельные домены (включая CDR), - которые обозначены численными идентификаторами, приведенными в табл. 1, останутся неизменными, и ожидается, что свойства связывания будут идентичными или практически одинаковыми независимо от природы домена Fc.
Табл. 18 и 19 изложены идентификаторы аминокислотной последовательности вариабельных участков тяжелой цепи (табл. 18) и вариабельных участков легкой цепи (табл. 19), и соответствующие им CDR, дополнительные HCVR и LCVR анти-CD3, полезные в анти-MUC16х анти-CD3 биспецифичных антителах по данному изобретению.
Таблица 18
Аминокислотные последовательности вариабельного участка тяжелой цепи
SEQ ID NO: | ||||
Идентификатор тяжелой цепи | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 |
CD3-VH-AA | 1642 | 1644 | 164 6 | 1648 |
CD3-VH-B | 1658 | 1660 | 1662 | 1664 |
CD3-VH-C | 1674 | 1676 | 1678 | 1680 |
CD3-VH-D | 1690 | 1692 | 1694 | 1696 |
CD3-VH-E | 1 706 | 1 708 | 1710 | 1 712 |
CD3-VH-F* | 1721 | 1722 | 1723 | 1724 |
Таблица 19
Аминокислотные последовательности вариабельного участка легкой цепи
SEQ ID NO: | ||||
Идентификатор легкой цепи | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
CD3-VL-AA | 1650 | 1652 | 1654 | 1656 |
CD3-VL-B | 1666 | 1668 | 1670 | 1672 |
CD3-VL-C | 1682 | 1684 | 1686 | 1688 |
CD3-VL-D | 1698 | 1 700 | 1 702 | 1 704 |
CD3-VL-E | 1714 | 1716 | 1718 | 1 720 |
CD3-VL-F* | 1 725 | 1 726 | 1727 | 1 728 |
Вариабельные участки тяжелой и легкой цепей CD3-VH-F и CD3-VL-F были получены из bhtu-CD3 антитела, обозначенного L2K, как указано в WO 2004/106380.
Кроме того, в табл. 20 и 21 изложены идентификаторы последовательностей для нуклеотидных последовательностей, кодирующих вариабельные участки тяжелой цепи (табл. 20) и вариабельные участки легкой цепи (табл. 21), и их соответствующие CDR, дополнительные HCVR и LCVR анти-CD3, полезные в анти-MUC16 х анти-CD3 биспецифичных антителах по данному изобретению.
- 79 045730
Таблица 20
Нуклеотидные последовательности, кодирующие последовательности вариабельного участка тяжелой цепи
SEQ ID NO: | ||||
Идентификатор тяжелой цепи | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 |
CD3-VH-AA | 1641 | 1643 | 1645 | 1647 |
CD3-VH-B | 1657 | 1659 | 1661 | 1663 |
CD3-VH-C | 1673 | 1675 | 1677 | 1679 |
CD3-VH-D | 1689 | 1691 | 1693 | 1695 |
CD3-VH-E | 1705 | 1707 | 1709 | 1711 |
Таблица 21
Нуклеотидные последовательности, кодирующие последовательности вариабельного участка легкой цепи
SEQ ID NO: | ||||
Идентификатор легкой цепи | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
CD3-VL-AA | 1649 | 1651 | 1653 | 1655 |
CD3-VL-B | 1665 | 1667 | 1669 | 1671 |
CD3-VL-C | 1681 | 1683 | 1685 | 1687 |
CD3-VL-D | 1697 | 1699 | 1 701 | 1 703 |
CD3-VL-E | 1 713 | 1 715 | 1717 | 1719 |
Контрольные конструкты, используемые в следующих примерах.
Различные контрольные конструкты (анти-CD3 антитела), были включены в следующие эксперименты для сравнительных целей: ОКТ-3, мышиные моноклональные антитела против антигенов Тклеточной поверхности человека можно получить от Американской коллекции типовых культур (АТСС) по каталогу №. CRL-8001; и SP34, коммерчески доступное мышиное моноклональное антитело, получено от, например, Biolegend, Сан-Диего, Калифорния (Кат. № 302914) или BD Pharmagen, Cat. 55052, реагирует против эпсилон-цепи комплекса Т3 на клетках Т-лимфоцитов человека.
Пример 13. Получение дополнительных анти-CD3 антител.
Следующие процедуры были предназначены для определения антител, которые специфически распознают CD3 (ко-рецептор Т-клетки) в качестве антигена.
Пул анти-CD3 антител был получен от генетически модифицированной мыши. Вкратце, мышей иммунизировали антигеном CD3 и генерировали В-клетки, которые содержали множество перестроек VH человека, чтобы экспрессировать разнообразный репертуар высокоаффинных антигенспецифических антител.
Антитела, описанные в табл. 22-25, имеют одинаковую последовательность легкой цепи VK1-39JK5 (LCVR представлены в SEQ ID NO: 1890).
Г енерируемые антитела были протестированы на связывание с антигеном CD3 человека и обезьяны яванского макака в in vitro анализе связывания, и, например, было идентифицировано одно CD3антитело: обозначенное CD3-VH-P (HCVR, представленное в SEQ ID NO: 1882), среди нескольких других, которые, как было обнаружено, связываются как с CD3 человека, так и яванского макака, имеющими связывание ЕС50 между 1 и 40 нМ (или титрование связывания клеток), как определено в титровании FACS клеток Jurkat и Т-клеток яванского макака соответственно; см. также, например, эксперименты по связыванию FACS, описанные в примере 15 и в PCT/US2016/044732, поданной 29 июля 2016 г.
Затем были идентифицированы аминокислотные остатки зародышевой линии CD3-VH-P (перегруппировка V-D-J для CD3-VH-P представляет собой IGHV3-9*01, IGHJ6*02, IGHD5-12*01) и антитело, обозначенное CD3-VH-G, было разработано, чтобы содержать только каркасы зародышевой линии. Другие производные антител были разработаны с помощью хорошо известных методов молекулярного клонирования для замены аминокислотных остатков ступенчатым образом на основе различий между последовательностью зародышевой линии и последовательностью CD3-VH-P. Каждому производному антитела дается CD3-VH-G номер обозначения; см. табл. 18.
В то время как CD3-VH-G и некоторые другие сконструированные антитела сохраняют их связывание, как показано в FACS анализах, несколько анти-CD3 антител не связанных с CD3 человека или яван
- 80 045730 ского макака in vitro со слабым или не измеримым связыванием, например, 40 нМ ЕС50. Аффинность связывания, кинетика связывания и другие биологические свойства для выяснения токсичности и фармакокинетические (фК) профили были впоследствии исследованы для биспецифичных антител, содержащих иллюстративные анти-CD3 антитела, полученные в соответствии со способами этого примера, подробно описанные в примерах, приведенных в данном документе.
Пример 14. Вариабельные участки тяжелой и легкой цепей (аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновой кислоты CDR).
В табл. 22 приведены идентификаторы аминокислотной последовательности вариабельных участков и CDR тяжелой цепи выбранных анти-MUC16 антител по данному изобретению. Соответствующие идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты приведены в табл. 23.
Последовательности аминокислот и нуклеиновых кислот определяли для каждой последовательности тяжелой цепи антитела.
Каждой тяжелой цепи антитела, полученная из последовательности зародышевой линии (SEQ ID NO: 1910), было присвоено обозначение G для последовательной номенклатуры. В табл. 22 приведены идентификаторы аминокислотных последовательностей вариабельных участков тяжелой цепи и CDR сконструированных анти-CD3 антител по данному изобретению. Соответствующие идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты приведены в табл. 23. Идентификаторы последовательности аминокислоты и нуклеиновой кислоты вариабельного участка легкой цепи и CDR также указаны ниже в табл. 24 и 25 соответственно.
Таблица 22 Идентификаторы аминокислотных последовательностей тяжелой цепи
Обозначение CD3-VH Антитела | SEQ ID NO: | |||
HCVR | CDR1 | CDR2 | CDR3 | |
CD3-VH-G | 1 730 | 1 732 | 1 734 | 1 736 |
CD3-VH-G2 | 1 738 | 1 740 | 1 742 | 1 744 |
CD3-VH-G3 | 1 746 | 1 748 | 1 750 | 1 752 |
CD3-VH-G4 | 1 754 | 1 756 | 1 758 | 1 760 |
CD3-VH-G5 | 1 762 | 1 764 | 1 766 | 1 768 |
CD3-VH-G8 | 1 770 | 1 772 | 1 774 | 1 776 |
CD3-VH-G9 | 1 778 | 1 780 | 1 782 | 1 784 |
CD3-VH-G10 | 1 786 | 1 788 | 1 790 | 1 792 |
CD3-VH-G11 | 1 794 | 1 796 | 1 798 | 1800 |
CD3-VH-G12 | 1802 | 1804 | 1806 | 1808 |
CD3-VH-G13 | 1810 | 1812 | 1814 | 1816 |
CD3-VH-G14 | 1818 | 1820 | 1822 | 1824 |
CD3-VH-G15 | 1826 | 1828 | 1830 | 1832 |
CD3-VH-G16 | 1834 | 1836 | 1838 | 1840 |
CD3-VH-G17 | 1842 | 1844 | 1846 | 1848 |
CD3-VH-G18 | 1850 | 1852 | 1854 | 1856 |
CD3-VH-G19 | 1858 | 1860 | 1862 | 1864 |
CD3-VH-G20 | 1866 | 1868 | 1870 | 1872 |
CD3-VH-G21 | 1874 | 1876 | 1878 | 1880 |
CD3-VH-P | 1882 | 1884 | 1886 | 1888 |
- 81 045730
Таблица 23
Идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи
Обозначение CD3-VH Антитела | SEQ ID NO: | |||
HCVR | CDR1 | CDR2 | CDR3 | |
CD3-VH-G | 1 729 | 1 731 | 1 733 | 1 735 |
CD3-VH-G2 | 1737 | 1 739 | 1 741 | 1 743 |
CD3-VH-G3 | 1 745 | 1747 | 1 749 | 1 751 |
CD3-VH-G4 | 1 753 | 1 755 | 1757 | 1 759 |
CD3-VH-G5 | 1761 | 1763 | 1765 | 1767 |
CD3-VH-G8 | 1 769 | 1 771 | 1 773 | 1 775 |
CD3-VH-G9 | 1 777 | 1 779 | 1 781 | 1 783 |
CD3-VH-G10 | 1785 | 1787 | 1789 | 1791 |
CD3-VH-G11 | 1 793 | 1 795 | 1 797 | 1 799 |
CD3-VH-G12 | 1801 | 1803 | 1805 | 1807 |
CD3-VH-G13 | 1809 | 1811 | 1813 | 1815 |
CD3-VH-G14 | 1817 | 1819 | 1821 | 1823 |
CD3-VH-G15 | 1825 | 182 7 | 1829 | 1831 |
CD3-VH-G16 | 1833 | 1835 | 1837 | 1839 |
CD3-VH-G17 | 1841 | 1843 | 1845 | 1847 |
CD3-VH-G18 | 1849 | 1851 | 1853 | 1855 |
CD3-VH-G19 | 1857 | 1859 | 1861 | 1863 |
CD3-VH-G20 | 1865 | 1867 | 1869 | 1871 |
CD3-VH-G21 | 1873 | 1875 | 1877 | 1879 |
CD3-VH-P | 1881 | 1883 | 1885 | 1887 |
Таблица 24
Идентификаторы аминокислотной последовательности легкой цепи
Обозначение Антитела | SEQ ID NO: | |||
LCVR | CDR1 | CDR2 | CDR3 | |
VK1-39JK5 | 1890 | 1892 | 1894 | 1896 |
Таблица 25
Идентификаторы последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи
Обозначение Антитела | SEQ ID NO: | |||
LCVR | CDR1 | CDR2 | CDR3 | |
VK1-39JK5 | 1889 | 1891 | 1893 | 1895 |
Антитело контроля 1, обозначенное CD3-L2K, было сконструировано на основе известного антиCD3 антитела (то есть анти-CD3 антитела L2K, как указано в WO 2004/106380).
Антитело изотипического контроля, упомянутое в приведенных в данном документе примерах, представляет собой изотип соответствующий (модифицированный IgG4) антителу, которое взаимодействует с посторонним антигеном, т.е. антигеном FelD1.
Пример 15. Исследования in vitro и in vivo на человеческих моноклональных анти-CD3 антителах.
Исследования in vivo и in vitro человеческих моноклональных анти-CD3 антител проводили, как описано в публикации США 2014/0088295, опубликованной 27 марта 2014 г., и в PCT/US2016/044732, поданной 29 июля 2016 г., которые тем самым включены в качестве ссылки.
Некоторые человеческие моноклональные анти-CD3 антитела по данному изобретению связывают растворимый гетеродимерный белок CD3 либо в антитело-захват или антиген-захват форматах, с высокой аффинностью. Растворимый гетеродимерный белок CD3 (hCD3-эпсилон/hCD3-дельта; SEQ ID NO: 1900/1901) получали либо с меткой Fc человека (hFcΔAdp/hFc; SEQ ID NO: 1931/1932), либо с меткой Fc мыши (mFcΔAdp/mfc; SEQ ID NO: 1933/1934). Гетеродимерный белок CD3 очищали с использованием
- 82 045730 способа, описанного в Davis et al. (US2010/0331527).
Некоторые человеческие моноклональные анти-CD3 антитела по данному изобретению связывали с Т-клетками человека и индуцируют пролиферацию Т-клеток. Некоторые человеческие моноклональные анти-CD3 антитела по данному изобретению связывали с CD2+CD4+ Т-клетками обезьяны и индуцировали их пролиферацию. Некоторые человеческие моноклональные анти-CD3 антитела поддерживали перенаправленное опосредованное Т-клетками уничтожение посредством взаимодействия Fc/FcR в анализе уничтожения U937 на основе кальцеина. Наблюдаемое уничтожение, которое, как полагают, зависит от взаимодействия Fc антитела с рецептором Fc на клетках U937, приводящего к кластеризации CD3 на соседних Т-клетках, подавляли путем добавления неспецифического человеческого IgG (данные не показаны). Активируется широкий спектр биспецифичных антител, сконструированных с использованием вариантов анти-CD3 плеча, описанных в данном документе (в частности, анти-CD3 плечи, основанные на тяжелой цепи CD3-VH-P, полученной из IGHV3-9*01, IGHJ6*02, IGHD5-12*01) клеток РВМС человека и РВМС обезьяны, и проявляют цитотоксическую активность в линиях клеток, экспрессирующих опухолевый антиген.
Пример 16. Скрининг и идентификация моноклональных анти-MUC16 антител, пригодных для иммуногистохимии (IHC), на образцах, фиксированных формалином и залитых парафином.
Линии опухолевых клеток человека с известными уровнями экспрессии MUC16 были идентифицированы, зафиксированы в 10% нейтральном забуференном формалине и залиты в парафин. Эти линии были использованы для скрининга различных анти-MUC16 антител для выявления кандидатов для исследований IHC.
Клеточные линии включают следующие MUC16.
Отрицательные линии клеток: НТ29 (толстая кишка) и РС3/АТСС родительский (простата); клеточные линии поджелудочной железы с низким или нулевым уровнем MUC16: Capanl (аденокарцинома поджелудочной железы), НРАС (аденокарцинома поджелудочной железы). Эндогенно MUC16экспрессирующие клеточные линии включают: OVCAR3 (яичник) и РЕО-1 (серозный рак яичника).
Трансфицированные клеточные линии были сконструированы следующим образом: РС3/АТСС (родительская линия рака простаты) клетки трансфицировали для создания PC3/MUC16 коротких и PC3/MUC16 высоких клеточных линий. Оба конструкта содержат С-концевой домен MUC16 из аминокислот 13810-14507 (из SEQ ID NO: 1899), и это содержит часть домена SEA12, SEA13, SEA14, SEA15, SEA16, С-концевой не-SEA участок, трансмембранный участок и цитоплазматический домен. Кроме того, клетки с высоким уровнем PC3/MUC имеют дополнительные N-концевые аминокислоты 12783-13467 (из SEQ ID NO: 1899), которые включают SEA5 (частичное) через SEA9 и короткий линкер между доменом SEA9 и началом короткого MUC16 конструкта. Это позволяет дифференцировать анти-MUC16 антитела, которые связываются в участке повтора, и антитела, которые связываются с nub частью MUC16, примыкающей к мембране, после ферментативного расщепления и высвобождения участков повтора (аналогично части СА125 в MUC16).
Все окрашивание выполнялось на автоокрашивающем устройстве Ventana Discovery XT с использованием стандартных протоколов. Осадок клеток депарафинизировали, оптимизировали извлечение эпитопа, индуцированного нагреванием, блокировали эндогенный биотин и проводили блокирование белка. Антитела наносили вручную в начальной концентрации 10 мкг/мл и также титровали для обеспечения специфичности сигнала. Было проведено сравнение с коммерчески доступным анти-MUC16 антителом (ОС-125), которое специфично для повторных участков СА-125 (Roche, Ventana Catalogue# 7602610), и с отрицательным контролем (отсутствие первичного антитела). Детекцию проводили с использованием ослиного анти-мышиного биотина, а затем пероксидазы стрептавидин-хрена. Конверсия субстрата, диамино-бензидина (DAB) наблюдалась в виде коричневого окрашивания. Образцы контрастировали с гематоксилином для визуализации ядер. Результаты экспериментов с окрашиванием представлены в табл. 26 ниже.
- 83 045730
Таблица 26
Связывание анти-МиС16 антител с МиС16-негативными клетками и клетками, экспрессирующими MUC16, или мембранно-проксимальными частями MUC16
Клеточная линия: | НТ29 | Capanl | НРАС | OVCAR3 | PEO1 | РСЗ/ ATCC родитель СКИЙ | РСЗ/ MUC16 короткий | РСЗ/ MUC16 высокий |
H1M7130N | - | - | - | +++ | ++ | - | +++ | +++ |
H2aM7128N | - | - | + | +++ | ++ | - | +++ | +++ |
H2aM7131N | - | - | - | +++ | ++ | - | +++ | +++ |
H2aM7133N | - | - | - | +++ | ++ | - | - | - |
H2aM7138N | - | - | + | +++ | ++ | - | +++ | +++ |
H1M9519N | - | NT | NT | +++ | +++ | NT | - | +++ |
H3M9525N | - | NT | NT | - | - | NT | - | - |
ОС-125 | - | - | + | +++ | ++ | - | - | +++ |
Отрицательны й контроль | - | - | - | - | - | - | - | - |
NT - не тестировано.
Четыре из тестируемых антител (H1M7130N, H2aM7128N, H2aM7131N и H2aM7138N) показали положительное связывание с клетками, экспрессирующими nub часть MUC16 без повторных участков (PC3/MUC16 короткие). Эти антитела идентифицированы как nub-связующие. Одно из протестированных антител (H1M9519N) показало положительное связывание с клетками, экспрессирующими повторные участки MUC16 (PC3/MUC16 высокий), но отрицательное связывание с клетками, экспрессирующими только nub часть MUC16 (PC3/MUC16 короткий). Это антитело идентифицируется как повторное связующее, аналогичное коммерчески доступному антителу ОС-125. Ожидается, что тестируемые антитела связывают ткани или клетки различного происхождения, имеющие экспрессированные белки и/или белковые фрагменты, как описано в данном документе.
Данное изобретение не должно быть ограничено в объеме конкретными вариантами осуществления изобретения, описанными в данном документе. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые описаны в данном документе, станут очевидными для специалистов в данной области техники из предшествующего описания. Такие модификации предназначены для попадания в объем прилагаемой формулы изобретения.
Claims (27)
1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается в одном или более из пяти мембранно-проксимальных доменов SEA MUC 16 человека (SEQ ID NO: 1899), где выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается в пределах остатков 14237-14290 последовательности SEQ ID NO: 1899 и содержит определяющие комплементарность участки HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 20, 22, 24, 28, 30 и 32 соответственно.
2. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
3. Конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC) для лечения экспрессирующего MUC16 рака, содержащий анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2 и цитотоксический агент, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и цитотоксический агент ковалентно связаны через линкер.
4. ADC по п.3, где цитотоксический агент выбран из ауристатина, майтансиноида, тубулисина, производного томаймицина или производного доластатина.
5. ADC по п.3 или 4, где цитотоксический агент представляет собой ауристатин, выбранный из ММАЕ или MMAF, или майтансиноид, выбранный из DM1 или DM4.
- 84 045730
6. ADC по п.3 или 4, где цитотоксический агент представляет собой майтансиноид, имеющий структуру
О СН3 (Формула I), где А представляет собой арилен или гереоарилен; или
(Формула II), где А3а представляет собой аминокислоту, пептид, имеющий 2-20 аминокислот, алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетроарил, гетероциклил, -CR5R6-, -О-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -O-C(=O)-O-, -C(=O)-(CHx)pi-, -С(=О)-О-(СНх)р1-, -(СНх)р1-С(=О)-, -(СНх)рГС(=О)-О-, ЧО-ССН^·, -((СН^^-, -C(=S)-, -C(=S)-S-, -C(=S)-NH-, -S-C(=S)-, -S-C(=S)-S- -S-, -so-, -SO2-, -NR4-, -N(R4)-C(=O)-N(R8)-, -N(R4)-C(=O)O-, -N(R4)-C(=O)-, -C(=O)-N(R4)-, -C(=O)-N(R4)-C(=O)- или -O-C(=O)-NR4-, где алкил, алкинил, алкенил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены; и p1, р2 и р3, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 100;
х представляет собой 0, 1 или 2;
R4, R5, R6 и R8, каждый независимо, представляют собой Н или является замещенным или незаме щенным алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, гетероарилом или гетероциклилом; и
R4a является замещенным или незамещенным алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, гетероари лом или гетероциклилом.
7. ADC по п.6, где майтансиноид представляет собой
НОН.РСН3 9Нз
О СН3
8. ADC по п.6, где майтансиноид представляет собой
О СН3
- 85 045730
9. ADC по п.6, где майтансиноид представляет собой
10. ADC по п.3 или 4, содержащий анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и
где * является связью с анти-MUC16 антителом или с его антигенсвязывающим фрагментом.
11. ADC по п.3 или 4, содержащий анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и
где « является связью с анти-MUC16 антителом или с его антигенсвязывающим фрагментом.
12. ADC по п.3 или 4, содержащий анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и
где г является связью с анти-MUC16 антителом или с его антигенсвязывающим фрагментом.
13. ADC по любому из пп.10-12, где связь контактирует с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом через серную составляющую остатка цистеина.
- 86 045730
14. ADC по п.3 или 4, содержащий анти-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и
о или
о , или их смесь, где является связью с анти-MUC16 антителом или с его антигенсвязывающим фрагментом.
15. ADC по п.14, где связь контактирует с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом через азотную составляющую остатка лизина.
16. ADC по любому из пп.3-15, где ADC содержит от 1 до 4 цитотоксических агентов на антиMUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
17. Способ обнаружения MUC16 в биологическом образце, который был получен от субъекта, включающий обнаружение присутствия MUC16 в биологическом образце путем приведения в контакт указанного биологического образца с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по п. 1 или 2 и обнаружения связывания между MUC16 и антителом или антигенсвязывающим фрагментом, где биологический образец представляет собой образец ткани или образец жидкости.
18. Способ по п.17, в котором образец ткани или образец жидкости выбран из плазмы крови, сыворотки крови, асцита, яичника, матки, шейки матки, печени, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкого или толстого кишечника, желчного пузыря, молочной железы, легкого, почки, слюнных и слезных желез или любого их злокачественного эпителиоидного образования.
19. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2.
20. Комбинация молекул нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидные последовательности, соответственно кодирующие вариабельную область тяжелой цепи антитела или антигенсвязывающего фрагмента, и вариабельную область легкой цепи антитела или антигенсвязывающего фрагмента по п.1 или 2.
21. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.19.
22. Комбинация экспрессионных векторов, содержащих соответственно комбинацию молекул нуклеиновой кислоты по п.20.
23. Клетка-хозяин, содержащая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, молекулу нуклеиновой кислоты по п.19, комбинацию молекул нуклеиновой кислоты по п.20, экспрессионный вектор по п.21 или комбинацию экспрессионных векторов по п.22.
24. Способ получения анти-MUC16 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по п.23 в условиях, позволяющих получить антитело или антигенсвязывающий фрагмент, и выделение антитела или антигенсвязывающего фрагмента.
25. Способ по п.24, где клетка-хозяин представляет собой клетку яичника китайского хомячка.
26. Способ по п.24 или 25, дополнительно включающий получение состава в качестве фармацевтической композиции, содержащего антитело или антигенсвязывающий фрагмент и подходящий носитель, где фармацевтическую композицию используют для лечения экспрессирующего MUC16 рака.
27. Ahtu-MUC16 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое может быть получено способом по п.24 или 25.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/399,249 | 2016-09-23 | ||
US62/558,711 | 2017-09-14 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045730B1 true EA045730B1 (ru) | 2023-12-20 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11485793B2 (en) | Anti-MUC16 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind MUC16 and CD3, and uses thereof | |
US11633501B2 (en) | Anti-STEAP2 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind STEAP2 and CD3, and uses thereof | |
JP6632984B2 (ja) | 抗EGFRvIII抗体およびその使用 | |
EA045730B1 (ru) | Анти-muc16 (mucin16) антитела | |
EA039842B1 (ru) | Биспецифичные анти-muc16-cd3 антитела и конъюгаты анти-muc16-лекарственное средство | |
EA044194B1 (ru) | Анти-steap2 антитела, конъюгаты антитело-лекарственное средство и биспецифические антигенсвязывающие молекулы, которые связывают steap2 и cd3, и их применение |