EA045552B1 - Кристаллические формы фармацевтического соединения - Google Patents
Кристаллические формы фармацевтического соединения Download PDFInfo
- Publication number
- EA045552B1 EA045552B1 EA202391012 EA045552B1 EA 045552 B1 EA045552 B1 EA 045552B1 EA 202391012 EA202391012 EA 202391012 EA 045552 B1 EA045552 B1 EA 045552B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- compound
- crystalline form
- mice
- pharmaceutical composition
- npc
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 262
- 239000013078 crystal Substances 0.000 title claims description 10
- 208000010577 Niemann-Pick disease type C Diseases 0.000 claims description 73
- 208000007930 Type C Niemann-Pick Disease Diseases 0.000 claims description 73
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 70
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 64
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 62
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 claims description 59
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 57
- 150000002305 glucosylceramides Chemical class 0.000 claims description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 34
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 34
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 31
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 claims description 30
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 28
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 28
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 claims description 25
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 22
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- 201000000788 Niemann-Pick disease type C1 Diseases 0.000 claims description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 12
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 210000000449 purkinje cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 102000016838 Calbindin 1 Human genes 0.000 claims description 8
- 108010028310 Calbindin 1 Proteins 0.000 claims description 8
- 208000021811 Sandhoff disease Diseases 0.000 claims description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 5
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010008096 Cerebral atrophy Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 claims description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 claims description 2
- 101150071246 Hexb gene Proteins 0.000 claims 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims 2
- 101100282794 Caenorhabditis elegans gba-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- 208000035977 Rare disease Diseases 0.000 claims 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 claims 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 claims 1
- 230000031154 cholesterol homeostasis Effects 0.000 claims 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 96
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 38
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 31
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 14
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 13
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 101001124388 Homo sapiens NPC intracellular cholesterol transporter 1 Proteins 0.000 description 9
- 102100029565 NPC intracellular cholesterol transporter 1 Human genes 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 102000044956 Ceramide glucosyltransferases Human genes 0.000 description 8
- 108091000114 ceramide glucosyltransferase Proteins 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001907 polarising light microscopy Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 102100033342 Lysosomal acid glucosylceramidase Human genes 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 6
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 6
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 6
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 description 6
- 102100022548 Beta-hexosaminidase subunit alpha Human genes 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010017544 Glucosylceramidase Proteins 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 5
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 4
- 208000001905 GM2 Gangliosidoses Diseases 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000022292 Tay-Sachs disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- -1 compound (I) Chemical class 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- DQYBDCGIPTYXML-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;hydrate Chemical compound O.CCOCC DQYBDCGIPTYXML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 3
- 208000009796 Gangliosidoses Diseases 0.000 description 3
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 3
- IBAQFPQHRJAVAV-ULAWRXDQSA-N Miglitol Chemical compound OCCN1C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1CO IBAQFPQHRJAVAV-ULAWRXDQSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003570 air Substances 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 3
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical class OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 description 3
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 3
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229960001110 miglitol Drugs 0.000 description 3
- UQRORFVVSGFNRO-UTINFBMNSA-N miglustat Chemical compound CCCCN1C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1CO UQRORFVVSGFNRO-UTINFBMNSA-N 0.000 description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 3
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 3
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 3
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 206010010947 Coordination abnormal Diseases 0.000 description 2
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024720 Fabry Disease Diseases 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000997662 Homo sapiens Lysosomal acid glucosylceramidase Proteins 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 2
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 2
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000008955 Mucolipidoses Diseases 0.000 description 2
- 206010072927 Mucolipidosis type I Diseases 0.000 description 2
- 208000002033 Myoclonus Diseases 0.000 description 2
- 101150007813 NIH gene Proteins 0.000 description 2
- 102100027814 Non-lysosomal glucosylceramidase Human genes 0.000 description 2
- 101710083785 Non-lysosomal glucosylceramidase Proteins 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102000011971 Sphingomyelin Phosphodiesterase Human genes 0.000 description 2
- 108010061312 Sphingomyelin Phosphodiesterase Proteins 0.000 description 2
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 210000000877 corpus callosum Anatomy 0.000 description 2
- 210000001653 corpus striatum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- LXBIFEVIBLOUGU-JGWLITMVSA-N duvoglustat Chemical class OC[C@H]1NC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LXBIFEVIBLOUGU-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229960005219 gentisic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 201000008977 glycoproteinosis Diseases 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000016290 incoordination Diseases 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N mandelic acid Chemical compound OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 229960001512 miglustat Drugs 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 101150049361 npc-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150107867 npc-2 gene Proteins 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030761 polycystic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000013102 re-test Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 208000011985 sialidosis Diseases 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- IWYDHOAUDWTVEP-SSDOTTSWSA-N (R)-mandelic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- OVXWHHYDMKASOR-UHFFFAOYSA-N 1-methylcyclohexa-2,4-diene-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1(C)CC=CC=C1 OVXWHHYDMKASOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XASWYPVFCVEQSU-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;potassium Chemical compound [K].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O XASWYPVFCVEQSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 101100059544 Arabidopsis thaliana CDC5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 208000024806 Brain atrophy Diseases 0.000 description 1
- 101150061009 C1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002483 Cu Ka Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 201000008892 GM1 Gangliosidosis Diseases 0.000 description 1
- 201000008905 GM2 gangliosidosis Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010018168 Genital prolapse Diseases 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101001045440 Homo sapiens Beta-hexosaminidase subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001109579 Homo sapiens NPC intracellular cholesterol transporter 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101150115300 MAC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000014060 Niemann-Pick disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000785 Niemann-Pick disease type C2 Diseases 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 102000016679 alpha-Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125708 antidiabetic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 210000002376 aorta thoracic Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003705 background correction Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 239000011093 chipboard Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007416 differential thermogravimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000001029 dorsal striatum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229940125436 dual inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005429 filling process Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002546 full scan Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 125000002519 galactosyl group Chemical class C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000443 hydrochloric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 229940116298 l- malic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000006724 microglial activation Effects 0.000 description 1
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- ZWLPBLYKEWSWPD-UHFFFAOYSA-N o-toluic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1C(O)=O ZWLPBLYKEWSWPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000002997 ophthalmic solution Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000013105 post hoc analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 238000001144 powder X-ray diffraction data Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 201000010727 rectal prolapse Diseases 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- 230000028527 righting reflex Effects 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 238000002336 sorption--desorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 238000002411 thermogravimetry Methods 0.000 description 1
- 239000012749 thinning agent Substances 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- 238000004846 x-ray emission Methods 0.000 description 1
- 229940099072 zavesca Drugs 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I),
Настоящее изобретение также относится к способу получения кристаллической формы соединения (I), и к фармацевтическим композициям, содержащим кристаллическую форму соединения (I). Кроме того, настоящее изобретение относится к способам применения этой кристаллической формы соединения (I) в качестве лекарственного средства и к способам применения ее при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
Кристаллическая форма соединения может быть важна, когда это соединение используется в фармацевтических целях. Это связано с тем, что морфология, размер частиц, полиморфизм, сольватация или гидратация кристаллической формы соединения могут влиять на фильтрацию, текучесть, таблетирование, растворимость и биодоступность фармацевтического агента.
Производные дезоксиноджиримицина представляют собой важный класс соединений в медицинской химии и разработке лекарств. N-(гидроксиэтил)-дезоксиноджиримицин представлен в продаже как миглитол, и он применяется в качестве антидиабетического средства для лечения диабета типа 2. Миглитол также действует как ингибитор широкого спектра действия нескольких кишечных гликозидаз (мальтазы, сахаразы и лактазы) (Hillebrand et al, Diabetes, 1986, Vol. 35, A93-A93; Scott and Spencer, Drugs, 2000, Vol. 59, 521-549).
N-бутилдезоксиноджиримицин (миглустат, Zavesca®) был разработан как ингибитор глюкозилцерамидсинтазы (также называемой церамидглюкозилтрансферазой, ЕС 2.4.1.80, код UniProt: Q16739), и он используется в клиниках для лечения пациентов с лизосомной болезнью накопления, болезнью Гоше (Platt et al., J. Biol. Chem., 1994, Vol. 269, 8362-8365; Cox et al., Lancet, 2000, Vol. 355, 1481-1485) и болезнью Нимана-Пика типа С (Pineda et al. Orphanet J. Rare Dis., 2018, Vol. 13, 140).
В публикации WO 2015/147639 A1 описаны новые производные дезоксиноджиримицина, включая соединение (I),
которые эффективны при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями цитозольного или лизосомального глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов. Соединение (I) является мощным двойным ингибитором глюкозилцерамидсинтазы и нелизосомальной глюкозилцерамидазы (GBA2, код UniProt: Q9HCG7).
Терапевтические соединения, полезные для лечения аномальных уровней глюкозилцерамида и/или повышенных уровней гликосфинголипидов, часто вводят в форме таблеток. При приготовлении фармацевтических композиций и препаратов, применяемых в виде таблеток, весьма желательно иметь кристаллическую форму терапевтического соединения, имеющую низкий уровень гигроскопичности и/или низкий уровень поглощения влаги из воздуха, приводящий к расплыванию, что позволяет прессовать соединение в желаемую форму с соответствующим размером.
Кроме того, относительно высокая температура плавления (обычно выше приблизительно 80°С) терапевтического соединения способствует его устойчивости к разложению, облегчая тем самым хранение и увеличивая срок годности терапевтического соединения, что является желательным для любого фармацевтического средства.
Также особенно выгодно, чтобы терапевтическое соединение было негигроскопичным или по существу негигроскопичным с точки зрения обращения с ним, производства и хранения фармацевтического средства. Если фармацевтическое средство проявляет гигроскопические свойства, то может возникнуть множество проблем, например, таких как:
сложность измельчения материала на мелкие частицы или в порошок при его дроблении;
наличие нежелательной влаги, которая способствует протеканию желательных реакций, и приводящая к образованию нежелательных конечных продуктов, что приводит к низкому качеству продукта и сокращению его срока годности;
образование мягких таблеток при изготовлении или попадание влаги внутрь упаковки;
- 1 045552 прилипание порошка к конвейерному оборудованию может влиять на процесс наполнения.
Таким образом, желательно иметь кристаллическую форму терапевтического соединения, которая является негигроскопичной или по существу негигроскопичной.
Ранее не сообщалось о кристаллических формах соединения (I). Соответственно, существует потребность в стабильных и/или нерасплывающихся кристаллических формах соединения (I), которые предпочтительно являются по существу негигроскопичными и/или которые имеют относительно высокие температуры плавления.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
В первом аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I)
Каждый аспект или вариант осуществления настоящего изобретения, как определено в настоящем документе, может быть объединен с любым другим аспектом(ами) или вариантом(ами) осуществления, если явно не указано иное. В частности, любой признак, указанный как предпочтительный или выгодный, может быть объединен с любым другим признаком или признаками, указанными как предпочтительные или выгодные.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей кристаллическую форму соединения (I), описанную в настоящем документе.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения в терапии.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения в качестве лекарственного средства.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения при лечении заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения при лечении болезни Ниманна-Пика типа С.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов у людей или животных, где способ предусматривает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества кристаллической формы соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения болезни Ниманна-Пика типа С у людей или животных, где способ предусматривает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества кристаллической формы соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической формы соединения (I), описанной в настоящем документе, где способ предусматривает приведение образца соединения (I) в контакт с растворителем.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), полученной путем осуществления описанного здесь способа.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению свободного основания соединения (I) для получения кристаллической формы соединения (I).
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической формы соединения (I), где способ предусматривает кристаллизацию свободного основания соединения (I).
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), полученной способом получения кристаллической формы соединения (I), где способ предусматривает кристаллизацию свободного основания соединения (I).
Другие предпочтительные варианты осуществления изобретения описаны в настоящем документе, и, в частности, в примерах.
Авторы настоящего изобретения неожиданно получили кристаллическую форму соединения (I), которая является стабильной и нерасплывающейся. Настоящее изобретение обеспечило дополнительные полезные свойства этого соединения, такие как существенное отсутствие гигроскопичности и относительно высокая температура плавления кристаллической формы соединения (I).
- 2 045552
Авторы настоящего изобретения неожиданно получили кристаллическую форму соединения (I), которая дополнительно показала хорошую растворимость в воде. Эти свойства делают кристаллические формы по изобретению особенно подходящими для использования их в составе фармацевтической композиции.
Кристаллизация терапевтических соединений часто включает использование различных солей. Как правило, соли легко подвергаются кристаллизации, и полученный материал облегчает последующую кристаллизацию терапевтических соединений. По этой причине использование соли часто является предпочтительным методом кристаллизации терапевтического соединения. Поэтому очень удивительно, что авторы настоящего изобретения смогли получить кристаллическую форму свободного основания соединения (I).
Поскольку кристаллическая форма любого терапевтического соединения в виде свободного основания не требует присутствия противоиона, то концентрация терапевтического соединения в порошке кристаллической формы в виде свободного основания обычно выше, чем в форме соответствующей соли, что очень полезно, поскольку снижает стоимость производства лекарственного препарата.
Не желая быть связанными какой-либо теорией, считается, что кристаллические формы по изобретению проявляют благоприятные эффекты, описанные выше, благодаря их кристаллической структуре.
Краткое описание фигур
Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут дополнительно описаны со ссылкой на прилагаемые фигуры, на которых показано следующее:
На фиг. 1 представлены иллюстративные изображения, полученные с помощью микроскопии в поляризованном свете, кристаллической формы соединения (I), названной формой 2, полученной путем уравновешивания с ацетонитрилом; слева: в виде сухого порошка, справа: в парафиновом масле.
На фиг. 2 показана порошковая рентгенограмма формы 2, полученной путем уравновешивания с ацетонитрилом.
На фиг. 3А показана термограмма TG-FTIR формы 2, полученной путем уравновешивания с ацетонитрилом.
На фиг. 3В показана термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) формы 2, полученной путем уравновешивания с ацетонитрилом.
На фиг. 4А показана изотерма динамической сорбции паров (ДСП) формы 2, полученной уравновешиванием с ацетонитрилом: изменение содержания воды (красная кривая) и относительной влажности (синяя кривая) в зависимости от времени.
На фиг. 4В показана изотерма ДСП формы 2, полученная уравновешиванием с ацетонитрилом: изменение содержания воды в зависимости от относительной влажности.
На фиг. 5 представлены иллюстративные изображения, полученные с помощью микроскопии в поляризованном свете, кристаллической формы соединения (I), названной формой 3, полученной уравновешиванием с ацетонитрилом, анизолом или этилацетатом соответственно.
На фиг. 6А показана порошковая рентгенограмма формы 3, полученной уравновешиванием с ацетонитрилом.
На фиг. 6В показано наложение порошковых рентгенограмм форм 3, полученных путем уравновешивания с ТВМЕ, водой, изопропанолом, этилацетатом, ацетонитрилом или анизолом, соответственно.
На фиг. 7 показано наложение порошковых рентгенограмм двух кристаллических форм соединения (I), полученных уравновешиванием с ацетонитрилом:
1) форма 3 (пример 3) и
2) форма 2 (пример 2).
На фиг. 8А показана термограмма TG-FTIR формы 3, полученной уравновешиванием с этилацетатом.
На фиг. 8В показана термограмма TG-FTIR формы 3, полученной уравновешиванием с изопропанолом.
На фиг. 8С показана термограмма ДСК формы 3, полученной уравновешиванием с этилацетатом.
На фиг. 9А показана изотерма ДСП формы 3, полученной уравновешиванием с этилацетатом: изменение содержания воды (красная кривая) и относительной влажности (синяя кривая) в зависимости от времени.
На фиг. 9В показана изотерма ДСП формы 3, полученной уравновешиванием с этилацетатом: изменение содержания воды в зависимости от относительной влажности.
На фиг. 10 показаны приблизительные медио-сагиттальные уровни, полученные в соответствии с протоколом сечений, согласно Paxinos & Franklin The Mouse Brain Atlas, 2nd edition, с указанием стереотаксических координат.
На фиг. 11 показано процентное изменение массы тела мышей между 11-м днем после рождения (PND) и 9-й неделей жизни.
На фиг. 12 показаны уровни глюкозилцерамидов С16:0 и С18:0 после регулярного перорального введения мышам из группы в возрасте PND 11-70.
На фиг. 13 показана оценка клинических признаков у мышей NPC(-/-) из группы в возрасте PND 56- 3 045552
70, получавших носитель и AZ-3102.
На фиг. 14 показаны показатели оценки тремора у мышей NPC(-/-) из группы PND 56-70, получавших носитель и AZ-3102.
На фиг. 15 показано определение областей интереса (ROI). На изображении показаны контуры ROI мозжечка (cerebellum), образования гиппокампа (hippocampus), мозолистого тела (corpus callosum )и полосатого тела (дорсального стриатума, caudate-putamen).
На фиг. 16 показана иммуногистохимия головного мозга: мечение кальбиндином-D28k у мышей NCP(-/-) и NPC(+/-), получавших носитель, по сравнению с мышами NPC(+/+, мыши дикого типа) и NPC(-/-), получавшими AZ-3102.
На фиг. 17 показан обобщенный механизм действия кристаллической формы соединения (I) (AZ3102).
Подробное раскрытие настоящего изобретения
Если не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, имеют смысловые значения, которые обычно понимают специалисты в данной области. Значение и определения используемых терминов должны быть ясны, однако в случае любой скрытой двусмысленности, приведенные здесь определения имеют приоритет над любым словарным или сторонним определением.
Следует понимать, что выражения, представленные в единственном числе, часто используются для удобства, однако все выражения и определения, представленные в единственном числе, предназначены для охвата вариантов во множественном числе, если явно не указано иное или не следует из контекста. Термины содержащий, включающий и имеющий предназначены для включения и они подразумевают, что могут быть дополнительные элементы, отличные от перечисленных. Кроме того, следует понимать, что все ссылки, включая журнальные статьи, книги, патенты, техническую литературу и т.п., упомянутые в данном документе, включены в настоящий документ во всей своей полноте и для всех целей посредством ссылки.
Термин приблизительно, используемый здесь для числовых показателей, относится к их значению в пределах 10% от основного параметра (т. е. плюс или минус 10%), а термин приблизительно, используемый в начале строки числовых показателей, относится к каждому значению (т.е. выражение приблизительно 1, 2 и 3 эквивалентно выражению приблизительно 1, приблизительно 2 и приблизительно 3). Например, температура, указанная как приблизительно 85°С, может включать температуры в диапазоне от 75 до 95°С.
Термин температура плавления хорошо известен в данной области техники. Термин относительно высокая температура плавления, как он используется в данном документе, предназначен для описания кристаллических форм, которые достаточно стабильны, чтобы использовать их для изготовления фармацевтических композиций. Предпочтительно, когда термин относительно высокая температура плавления описывает температуру плавления, превышающую приблизительно 65°С. Еще более предпочтительно - когда температура плавления выше приблизительно 80°С.
Термин композиция, используемый в данном документе, охватывает продукт, содержащий указанные ингредиенты в указанных количествах, а также любой продукт, который прямо или косвенно является результатом комбинации указанных ингредиентов в указанных количествах. Предполагается, что такой термин в отношении фармацевтической композиции включает продукт, содержащий кристаллическую форму соединения (I), и, необязательно, дополнительные ингредиенты, входящие в состав носителя, а также любой продукт, который прямо или косвенно является результатом комбинации, комплексообразования или агрегации любых двух или более ингредиентов, или диссоциации одного или более ингредиентов, или других типов реакций или взаимодействий одного или более ингредиентов. Соответственно, фармацевтические композиции настоящего изобретения охватывают любую композицию, содержащую кристаллическую форму по изобретению и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель. Под фармацевтически приемлемым подразумевается, что носитель, разбавитель или эксципиент должны быть совместимы с другими ингредиентами композиции, и при этом не оказывать вредного воздействия на реципиента.
Термин терапевтически эффективное количество означает количество кристаллической формы или фармацевтической композиции, которое при введении пациенту с целью лечения заболевания достаточно для осуществления такого лечения заболевания. Терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от заболевания и его тяжести, а также от возраста и массы тела пациента, подлежащего лечению. Термин пациент (или субъект) включает, но без ограничения, животных, таких как, например, млекопитающие. Предпочтительно, когда пациент является человеком.
Настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I)
- 4 045552
(i).
Кристаллическая форма соединения (I) может находиться в любом кристаллическом состоянии. Кристаллическая форма соединения (I) может представлять собой кристаллическую соль или кристаллическое свободное основание (в неионизированной форме). Предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) представляет собой кристаллическое свободное основание. Кроме того, соединение (I) может образовывать сокристаллы.
Если кристаллическая форма соединения (I) представляет собой кристаллическую соль, то молекулярная структура указанного выше соединения (I) включает протонированный атом азота.
Настоящее изобретение не ограничивается монокристаллической формой соединения (I). Твердые материалы могут существовать более чем в одной кристаллической форме. Эти альтернативные кристаллические формы называются полиморфами. Каждый полиморф имеет различную ориентацию и/или конформацию молекул в кристаллической решетке. Каждое кристаллическое состояние, или полиморф, обладает уникальным набором физико-химических свойств из-за различий в кристаллической структуре.
Полиморфные формы могут иметь различные механические свойства, такие как текучесть и прессуемость порошка, которые влияют на технологические свойства соединения. Стабильность и продолжительность хранения соединения также могут зависеть от конкретного типа полиморфа.
Полиморфы можно отличать друг от друга по-разному. Полиморфы ярко проявляют спектроскопические свойства, и их можно определить, например, с помощью инфракрасной спектроскопии, спектроскопии комбинационного рассеяния и спектроскопии 13С-ЯМР. Ввиду того факта, что каждая кристаллическая форма преломляет рентгеновские лучи по-разному, то для характеристики полиморфов также может использоваться метод порошковой рентгеновской дифракции (ПРД). Кроме того, тепловые методы, такие как дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) и термогравиметрический анализ (ТТА), также могут предоставить уникальную информацию о конкретном полиморфе.
Как хорошо известно в области порошковой рентгеновской дифракции, относительные высоты пиков порошковых рентгеновских дифракционных спектров могут использоваться для описания различных кристаллических форм. Соответственно, в одном аспекте, касающемся формы 3, настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), характеризующейся отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме, указанным как значение 2θ, при 17,8±0,2°, где отражение при 17,8±0,2° является одним из четырех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Предпочтительно, когда отражение при 17,8±0,2° является одним из трех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме, или отражение при 17,8±0,2° является одним из двух самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Более предпочтительно, когда отражение при 17,8±0,2° является самым сильным отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Еще более предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) характеризуется отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме, указанным как значение 2θ, при 17,8±0,1°, где отражение при 17,8±0,1° является одним из четырех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Предпочтительно, когда отражение при 17,8 ±0,1° является одним из трех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме, или отражение при 17,8±0,1° является одним из двух самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Более предпочтительно, когда отражение при 17,8±0,1° является самым сильным отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
Термин наиболее сильное отражение описывает самый высокий пик порошковой рентгеновской дифрактограммы. Высота пика на порошковой рентгеновской дифрактограмме определяется по интенсивности рентгеновского излучения (в единицах импульсов или импульсов/сек). Таким образом, самым сильным отражением является отражение, которое показывает наибольшую интенсивность рентгеновского излучения на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Например, самым сильным отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме, показанной на фиг. 6А, является отражение, указанное как значение 2θ, при 17,8±0,2°.
Если прямо не указано иное, то все порошковые рентгеновские дифрактограммы получены с использованием К-альфа-излучения меди при температуре приблизительно 25°С.
Предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) дополнительно характеризуется одним или более отражений, выраженных как значение 2θ, при одном или более углов из 4,1±0,2°, 8,3±0,2°, 12,4±0,2°, 13,6±0,2°, 14,5±0,2°, 14,9±0,2°, 15,2±0,2°, 17,2±0,2°, 19,3±0,2°, 21,2±0,2°, 22,4±0,2°, 22,9± 0,2° и 23,3±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
- 5 045552
Еще более предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) дополнительно характеризуется одним или несколькими отражениями, выраженными как значение 2θ, при одном или более углов из 4,1±0,1°, 8,3±0,1°, 12,4+0,1°, 13,6+0,1°, 14,5+0,1°, 14,9+0,1°,
15,2+0,1°, 17,2+0,1°, 19,3+0,1°, 21,2+0,1°, 22,4 ±0,1°, 22,9±0,1° и 23,3±0,1° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
Положения пиков на порошковой рентгеновской дифрактограмме относительно нечувствительны к деталям эксперимента. Таким образом, кристаллические соединения по изобретению могут быть охарактеризованы порошковой рентгеновской дифрактограммой с определенными положениями пиков. Соответственно, в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) предпочтительно характеризуется отражениями, выраженными как значение 2θ, при 17,2+0,2°, 17,8+0,2°, 21,2+0,2° и 22,4±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Более предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) характеризуется отражениями, выраженными как значение 2θ, при 4,1±0,2°, 8,3±0,2°, 12,4+0,2°, 13,6+0,2°, 14,5+0,2°, 14,9+0,1°, 15,2+0,2°, 17,2+0,2°, 17,8+0,2°, 19,3+0,2°, 21,2+0,2°, 22,4±0,2°, 22,9±0,2° и 23,3±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Еще более предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) характеризуется отражениями, выраженными как значение 2θ, при 17,2±0,1°, 17,8+0,1°, 21,2+0,1° и 22,4±0,1° на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Наиболее предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) характеризуется отражениями, выраженными как значение 2θ, при 4,1±0,1°, 8,3±0,1°, 12,4+0,1°, 13,6+0,1°, 14,5+0,1°, 14,9+0,1°, 15,2+0,1°, 17,2+0,1°, 17,8+0,1°, 19,3+0,1°, 21,2+0,1°, 22,4+0,1°, 22,9+0,1° и 23,3+0,1° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
Кристаллические формы соединения можно охарактеризовать с помощью термограммы дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Таким образом, кристаллическая форма соединения (I) в аспекте, касающемся формы 3 предпочтительно характеризуется термограммой ДСК, которая показывает начало эндотермического теплового потока приблизительно при 87°С и/или температуру плавления равную приблизительно 92,4°С, как показано на фиг. 8С. Соответственно, предпочтительно, когда в аспекте, касающемся формы 3, кристаллическая форма соединения (I) имеет температуру плавления от 89 до 96°С, определенную методом ДСК. Предпочтительно, когда кристаллическая форма в аспекте, касающемся формы 3, имеет температуру плавления от 90 до 95°С, определенную методом ДСК. Еще более предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) в аспекте, касающемся формы 3, имеет температуру плавления от 91 до 94°С, определенную методом ДСК. Наиболее предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) в аспекте, касающемся формы 3, имеет температуру плавления от 92 до 93°С, определенную методом ДСК.
Кристаллические формы соединения можно охарактеризовать по их гигроскопичности. Гигроскопичность продукта отражает увеличение или уменьшение содержания в нем воды в зависимости от относительной влажности при определенной температуре. По существу негигроскопичные продукты показывают или характеризуются лишь незначительным изменением содержания воды в результате изменений относительной влажности. В сильно гигроскопичных продуктах содержание воды может варьироваться в широких пределах. Соответственно, предпочтительно, чтобы кристаллическая форма соединения (I) была по существу негигроскопичной.
Кристаллические формы соединения можно охарактеризовать по их термогравиметрическому показателям. Таким образом, кристаллическую форму соединения (I) предпочтительно можно охарактеризовать по ее термогравиметрическим показателям. В одном варианте осуществления кристалл соединения (I) характеризуется термогравиметрическими показателями, представленными на фиг. 8А или 8В.
Кристаллические формы соединения также могут быть охарактеризованы профилем динамической сорбции паров (ДСП). Соответственно, кристаллическую форму соединения (I) предпочтительно можно охарактеризовать по профилю ДСП, представленному на фиг. 9А и 9В. Предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) имеет обратимый профиль сорбции/десорбции. Предпочтительно, когда профиль ДСП показывает по существу негигроскопичную природу кристаллической формы.
По существу негигроскопичные вещества имеют водопоглощение менее приблизительно 2% при относительной влажности приблизительно 95%, измеренной при температуре приблизительно 25°С. Предпочтительно, когда водопоглощение составляет менее приблизительно 1% при относительной влажности приблизительно 95%, измеренной при температуре приблизительно 25°С. Значения водопоглощения получают путем измерения прироста массы испытуемой кристаллической формы по отношению к исходной массе при относительной влажности приблизительно 95% и температуре приблизительно 25°С.
Соответственно, кристаллическая форма соединения (I) предпочтительно поглощает от 0 до 2% воды при относительной влажности приблизительно 95% при температуре приблизительно 25°С. Еще более предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) поглощает от 0 до 1,5% воды при относительной влажности приблизительно 95% при температуре приблизительно 25°С. Наиболее предпоч- 6 045552 тительно, когда кристаллическая форма соединения (I) поглощает от 0% до 1% воды при относительной влажности приблизительно 95% при температуре приблизительно 25°С.
Кроме того, кристаллическая форма по изобретению предпочтительно является стабильной. Например, продолжительная инкубация в этилацетате (в течение 1 недели) при температуре приблизительно 25°С привела к получению кристаллических форм соединения (I) хорошего качества, как показано на фиг. 5.
В одном аспекте, касающемся формы 2, настоящее изобретение относится к дополнительной кристаллической форме соединения (I). Эта кристаллическая форма (форма 2) характеризуется отражением, выраженным как значение 2θ, при 16,9±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме, где отражение при 16,9±0,2° является одним из четырех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Предпочтительно, когда отражение при 16,9±0,2° является одним из трех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме, или отражение при 16,9±0,2° является одним из двух самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Более предпочтительно, когда отражение при 16,9±0,2° является самым сильным отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Еще более предпочтительно, когда кристаллическая форма в аспекте, касающемся формы 2, характеризуется отражением, выраженным как значение 2θ, при 16,9 ± 0,1° на порошковой рентгеновской дифрактограмме, где отражение при 16,9±0,1° является одним из четырех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Предпочтительно, когда отражение при 16,9±0,1° является одним из трех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме, или отражение при 16,9±0,1° является одним из двух самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Более предпочтительно, когда отражение при 16,9±0,1° является самым сильным отражением на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
Предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, характеризуется одним или несколькими отражениями, выраженными как значение 2θ, при одном или более углов из 15,2±0,2°, 16,1±0,2°, 16,5±0,2°, 18,9±0,2°, 23,1 ± 0,2°, 25,5±0,2°, 27,7±0,2° и 28,5±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Еще более предпочтительно, когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) характеризуется одним или несколькими отражениями, выраженными как значение 2θ, при одном или более углов из 15,2±0,1°, 16,1±0,1°, 16,5±0,1°, 18,9±0,1°, 23,1±0,1°, 25,5±0,1°, 27,7±0,1° и 28,5±0,1°.
В аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, эта кристаллическая форма соединения (I) также может характеризоваться отражениями, выраженными как значение 2θ, при 16,1±0,2°, 16,5±0,2°, 16,9±0,2°, 18,9±0,2° и 23,1±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме. Предпочтительно когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) также может характеризоваться отражениями, выраженными как значение 2θ, при 16,1±0,1°, 16,5±0,1°, 16,9±0,1°, 18,9±0,1° и 23,1±0,1° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
В аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) может быть охарактеризована с помощью термограммы ДСК, которая показывает начало эндотермического теплового потока приблизительно при 58°С и температуру плавления приблизительно 70°С, как показано на фиг. 3В. Соответственно, в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) имеет температуру плавления от 67 до 74°С. Предпочтительно, когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) имеет температуру плавления от 68 до 73°С. Еще более предпочтительно, когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) имеет температуру плавления от 69 до 72°С. Наиболее предпочтительно, когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) имеет температуру плавления от 69 до 71 °С.
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что в аспекте, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) особенно растворима в воде. Соответственно, в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) имеет растворимость в воде от приблизительно 75 мг/мл до приблизительно 85 мг/мл, измеренную приблизительно при 25°С. Более предпочтительно, когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма имеет растворимость в воде от приблизительно 78 мг/мл до приблизительно 82 мг/мл, измеренную при температуре приблизительно 25°С. Наиболее предпочтительно, когда в аспекте настоящего изобретения, касающемся формы 2, кристаллическая форма соединения (I) имеет растворимость в воде приблизительно 80 мг/мл, измеренную приблизительно при 25°С.
Способы измерения растворимости известны в данной области техники; например, метод со встряхиванием колбы, метод с обработкой ультразвуком, метод элюирования с колонки и метод ультрафиолетовой или видимой спектроскопии. Если прямо не указано иное, то растворимость в воде определяют с помощью метода со встряхиванием колбы и/или методом с обработкой ультразвуком.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей кристаллическую форму соединения (I), описанной в настоящем документе.
- 7 045552
Обычно кристаллическую форму соединения (I) вводят пациенту в виде фармацевтической композиции или препарата. Такие фармацевтические композиции можно вводить пациенту любым приемлемым способом введения, включая, но без ограничения, пероральный, местный (включая трансдермальный) и парентеральный способы введения.
Фармацевтические композиции по изобретению обычно готовят с использованием фармацевтически приемлемого носителя и одного или нескольких необязательных ингредиентов. При необходимости или желании полученная однородно смешанная смесь может быть затем сформована или загружена в таблетки, капсулы, пилюли, емкости, картриджи, дозаторы и т.п. с использованием обычных процедур и оборудования.
Фармацевтические композиции по изобретению, предназначенные для перорального введения в виде твердой лекарственной формы (т.е. в виде капсул, таблеток, пилюль и т.п.), обычно содержат кристаллическую форму соединения (I) в качестве активного ингредиента. Предпочтительно, когда фармацевтическая композиция по изобретению содержит кристаллическую форму соединения (I), и при этом она не содержит других активных ингредиентов. Предпочтительно, когда фармацевтическая композиция по изобретению содержится в капсуле. Предпочтительно, когда фармацевтическая композиция по изобретению содержится в капсуле без какого-либо другого активного ингредиента. Капсула может представлять собой желатиновую капсулу или капсулу из гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ). Альтернативно, фармацевтическая композиция по изобретению может содержать кристаллическую форму соединения (I) в качестве активного ингредиента и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей. Подходящие фармацевтически приемлемые носители известны специалистам в данной области, и они представляют собой, например, жиры, воду, физиологический раствор, спирт (например, этанол), глицерин, полиолы, водный раствор глюкозы, разжижающий агент, дезинтегрирующий агент, связующее, смазывающее вещество, смачивающий агент, стабилизатор, эмульгатор, диспергатор, консервант, подсластитель, краситель, вкусовую добавку или ароматизатор, концентрирующий агент, разбавитель, буферное вещество, растворитель или солюбилизирующий агент, химическое соединение для эффективного хранения, соль для изменения осмотического давления, покрывающий агент или антиоксидант, сахариды, такие как лактоза или глюкоза; крахмал кукурузный, пшеничный или рисовый; жирные кислоты, такие как стеариновая кислота; неорганические соли, такие как алюминат метасиликата магния или безводный фосфат кальция; синтетические полимеры, такие как поливинилпирролидон или полиалкиленгликоль; спирты, такие как стеариловый спирт или бензиловый спирт; синтетические производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза; а также другие обычно используемые добавки, такие как желатин, тальк, растительное масло и гуммиарабик.
Фармацевтическую композицию, содержащую кристаллические формы соединения (I), также можно вводить трансдермально или трансмукозально с использованием известных систем доставки и эксципиентов. Например, фармацевтическая композиция может быть смешана с усилителями проницаемости, такими как пропиленгликоль, монолаурат полиэтиленгликоля, азациклоалкан-2-он и т.п., и она может быть включена в пластырь или подобную систему доставки. Также могут быть использованы дополнительные эксципиенты, включая гелеобразующие агенты, эмульгаторы и буферы.
Препараты для инъекций, предназначенные для парентерального введения, включают стерильные водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Водные растворители включают, например, дистиллированную воду для инъекций и/или физиологический раствор. Примеры неводных растворителей включают спирты, такие как этанол.
Предпочтительно, когда фармацевтическая композиция содержит один или несколько дополнительных фармацевтически активных агентов. Такая комбинированная терапия предусматривает использование кристаллической формы соединения (I) в сочетании с одним или несколькими дополнительными фармацевтически активными агентами, либо представленными вместе (например, приготовленными вместе в составе одного препарата), либо представленными отдельно (например, упакованными в виде отдельных единичных дозированных лекарственных форм).
У здорового человека основной гликосфинголипид, такой как глюкозилцерамид, гидролизуется в лизосомах кислой глюкозилцерамидазой (также называемой глюкоцереброзидазой или GBA1, ЕС 3.2.1.45, код UniProt: P04062). Кроме того, нелизосомальная глюкозилцерамидаза (GBA2, код UniProt: Q9HCG7), находящаяся в цитоплазме, также способна процессировать глюкозилцерамид. В результате, как GBA1, так и GBA2, участвуют в нейропатологических эффектах, наблюдаемых при некоторых лизосомных болезнях накопления.
У пациентов с лизосомной болезнью накопления возникают дефекты биосинтеза или деградации гликосфинголипидов, что приводит к аномальным уровням глюкозилцерамида и/или других гликосфинголипидов.
Ранее в публикации WO 2015/147639 А1 было показано, что соединение (I) эффективно при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями цитозольного или лизосомального глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов. Поскольку биодоступность кристаллических форм соединения (I) сравнима с биодоступностью аморфного соединения (I), то кристаллические
- 8 045552 формы соединения (I) также эффективны при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями клеточного глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов. В частности, кристаллические формы соединения (I) эффективны при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями цитозольного или лизосомального глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов.
Как показано в Примере 4, кристаллическая форма соединения (I) (форма 3) эффективна при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями цитозольного или лизосомального глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов. В частности, показано, что форма 3 улучшает клинические признаки у мышей с болезнью Ниманна-Пика типа С.
Соответственно, настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения в терапии.
Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме, описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения в качестве лекарственного средства.
Предпочтительно, когда настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения при лечении заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов. Предпочтительно, когда заболевание, сопровождающееся аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или повышенными уровнями гликосфинголипидов, представляет собой лизосомную болезнь накопления, такую как болезнь Гоше (типа 1, 2 и 3), болезнь Фабри, ганглиозидозы GM1, ганглиозидозы GM2 (такие как болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа и вариант АВ), сиалидоз, болезнь Ниманна-Пика типа С и синдром миоклонуса движенияпочечной недостаточности, или симптом одного из заболеваний, в совокупности классифицируемых как метаболический синдром, например ожирение, резистентность к инсулину, гиперлипидемия, гиперхолестеринемия, поликистозная болезнь почек, диабет типа II и хроническое воспаление, или нейродегенеративное заболевание, такое как болезнь Паркинсона или деменция с тельцами Леви, или атеросклероз. Еще более предпочтительно, когда кристаллическая форма соединения (I) или фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическую форму соединения (I), применяется для лечения ганглиозидозов GM1 и/или ганглиозидозов GM2 (таких как болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа и вариант АВ).
Еще более предпочтительно, когда настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанного в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения при лечении болезни Ниманна-Пика типа С.
Настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения при лечении болезни Сандхоффа.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов у людей или животных, где способ предусматривает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества кристаллической формы соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
Настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения для облегчения симптомов заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов.
Настоящее изобретение еще более предпочтительно относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения для облегчения симптомов болезни Ниманна-Пика типа С.
Настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I), описанной в настоящем документе, или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, для применения для облегчения симптомов болезни Сандхоффа.
Настоящее изобретение также относится к способу облегчения симптомов заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов у пациентов-людей или животных, где способ предусматривает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества кристаллической формы соединения (I), описанной в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
Кристаллическая форма соединения (I) (например, форма 3) может быть использована для улучшения различных клинических симптомов, например, таких как:
1) потеря массы тела, связанная с заболеванием;
2) тремор; и/или
3) атаксическая походка.
Как показано в Примере 4, кристаллическая форма соединения (I) (например, форма 3) эффективно
- 9 045552 проникает в головной мозг. Таким образом, кристаллическая форма соединения (I) (например, форма 3) может быть использована для лечения или облегчения заболевания или симптомов заболевания, возникающих в головном мозге. Например, кристаллическая форма соединения (I) (например, форма 3) может быть использована для предотвращения или уменьшения потери клеток Пуркинье в мозжечке. Кристаллическая форма соединения (I) (например, форма 3) может быть использована для предотвращения или уменьшения гибели нейронов. Кристаллическая форма соединения (I) (например, форма 3) может быть использована для предотвращения или уменьшения церебральной атрофии.
Считается, что высокая эффективность кристаллической формы соединения (I) при лечении заболеваний, связанных с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов, является результатом высокой активности кристаллической формы соединения (I) в отношении глюкозилцерамидсинтазы (GCS) и нелизосомальной глюкозилцереброзидазы (GBA2).
Описанные здесь способы могут быть способами in vitro или in vivo.
Введение может быть осуществлено либо перорально, с использованием таблеток, пилюль, капсул, гранул, порошков, растворов и т.п., либо путем парентерального введения, такого как инъекции, включая внутрисуставные, внутривенные и внутримышечные инъекции, путем введения с использованием суппозиториев, офтальмологических растворов, глазных мазей или средств для наружного применения, таких как трансдермальные жидкие препараты, мази, трансдермальные пластыри, трансмукозальные жидкие препараты, трансмукозальные пластыри, ингаляторы и т.п.
При пероральном введении суточная доза обычно составляет приблизительно от 0,0001 до 10 мг/кг, предпочтительно от 0,001 до 1 мг/кг или от 0,005 до 5 мг/кг, и более предпочтительно - от 0,01 до 0,5 мг/кг массы тела, и суточную дозу можно вводить одной дозой или 2-4 отдельными дозами. Например, для человека массой 70 кг оптимальная суточная доза для перорального введения составляет приблизительно 0,01-30 мг/день. В случае внутривенного введения суточную дозу целесообразно вводить из расчета приблизительно от 0,00001 до 10 мг/кг массы тела один раз в день или два или более раз в день. Кроме того, трансмукозальное средство вводят в дозе приблизительно от 0,0001 до 10 мг/кг массы тела один раз в день или два или более раз в день. Дозу подбирают соответствующим образом в зависимости от конкретного случая, принимая во внимание симптомы, возраст, пол и т.п.
Поскольку эффективность кристаллической формы соединения (I) при лечении заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов (например, такого как болезнь Нимана-Пика типа С), очень высока, а требуемая доза относительно низка, то кристаллическая форма соединения (I) вызывает меньше побочных эффектов, чем известные соединения, используемые для лечения таких заболеваний, в частности, например, миглитол (его доза составляет 1200 мг/кг/день).
Настоящее изобретение также относится к способу получения кристаллической формы, описанной в настоящем документе, где способ предусматривает приведение в контакт образца соединения (I) с растворителем. Растворитель предпочтительно выбирают из ацетонитрила, этилацетата, изопропанола, анизола, воды и трет-бутилметилового эфира (ТВМЕ). Еще более предпочтительно, когда растворителем является этилацетат, ацетонитрил или изопропанол. Предпочтительно, когда перед контактированием образца соединения (I) с растворителем образец соединения (I) очищают для удаления эфиров борной кислоты. Предпочтительно, когда образец соединения (I) очищают с помощью хроматографии. Еще более предпочтительно, когда образец соединения (I) очищают с использованием хроматографической колонки с силикагелем. Дополнительно и/или альтернативно образец соединения (I) очищают перегонкой с метанолом.
Кристаллическую форму формы 3 соединения (I) можно получить любым из следующих иллюстративных способов:
1) перемешиванием смеси приблизительно 74 мг соединения (I) и 2,0 мл ацетонитрила в течение трех дней при температуре от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I);
2) перемешиванием смеси приблизительно 74 мг соединения (I) и 2,0 мл анизола в течение трех дней при температуре в диапазоне от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I);
3) перемешиванием смеси приблизительно 82 мг соединения (I) и 1,0 мл этилацетата в течение трех дней при температуре от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I);
4) перемешиванием смеси приблизительно 82 мг соединения (I) и 1,0 мл изопропанола в течение трех дней при температуре от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I);
5) перемешиванием смеси приблизительно 45 мг соединения (I) и 1,0 мл воды в течение трех дней при температуре от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I);
6) перемешиванием смеси приблизительно 100 мг соединения (I) и 3,0 мл ТВМЕ в течение трех
- 10 045552 дней при температуре в диапазоне от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I).
Предпочтительно, когда перед смешиванием соединения (I) с растворителем образец соединения (I) очищают для удаления эфиров борной кислоты. Предпочтительно, когда образец соединения (I) очищают с помощью хроматографии. Еще более предпочтительно, когда образец соединения (I) очищают с использованием хроматографической колонки с силикагелем. Дополнительно и/или альтернативно образец соединения (I) очищают перегонкой с метанолом.
Способы фильтрации известны специалистам в данной области техники, и они включают, но без ограничения, фильтрацию с использованием бумажного фильтра и фильтрацию с использованием фильтра из пористого стекла.
Способы получения формы 3 соединения (I), описанные в настоящем документе, можно осуществлять в более крупном масштабе, поддерживая аналогичное соотношение используемых реагентов. Например, кристаллическую форму формы 3 соединения (I) можно получить путем перемешивания смеси соединения (I) с этилацетатом в соотношении 0,05-1 г на 1 мл [соединение (I):этилацетат] в течение трех дней при температуре от 20 до 30°С, например, при приблизительно 25°С, с последующим фильтрованием, с получением кристаллической формы соединения (I).
Описанные здесь способы получения формы 3 соединения (I) очень эффективны. Выход способов, описанных в данном документе, обычно превышает 70% (выраженное как массовое отношение количества полученной формы 3 к первоначально использованному количеству соединения (I)). Предпочтительно, когда для описанных здесь способов выход превышает 75%.
Предпочтительно, когда кристаллическая форма 2 образуется в качестве промежуточного продукта перед образованием кристаллической формы 3.
Предпочтительно, когда кристаллическая форма 2, характеризующаяся отражениями, выраженными как значение 2θ, при 16,1±0,2°, 16,5±0,2°, 16,9±0,2°, 18,9±0,2° и 23,1±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме, образуется в качестве промежуточного продукта перед образованием кристаллической формы 3, характеризующейся отражениями, выраженными как значение 2θ, при 17,2±0,2°, 17,8±0,2°, 21,2±0,2° и 22,4±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме соединения (I), полученной путем осуществления описанного здесь способа.
Настоящее изобретение также относится к применению свободного основания соединения (I) для получения кристаллической формы соединения (I).
Настоящее изобретение также относится к способу получения кристаллической формы соединения (I), где способ предусматривает кристаллизацию свободного основания соединения (I).
Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме соединения (I), полученной способом получения кристаллической формы соединения (I), где указанный способ предусматривает кристаллизацию свободного основания соединения (I).
Считается, что помимо других преимуществ настоящего изобретения, образование кристаллической формы соединения (I) полезно для очистки соединения (I). Например, кристаллическая форма соединения (I), полученная описанными здесь способами, имеет чистоту более 90%, а обычно более 95%.
Предшествующее подробное описание было представлено с целью пояснения и иллюстрации настоящего изобретения, и оно не предназначено для ограничения объема притязаний, определяемого прилагаемой формулой изобретения. Многие варианты предпочтительных осуществлений настоящего изобретения, проиллюстрированных здесь, будут очевидны специалистам в данной области техники, и этим варианты находятся в пределах объема притязаний, определенных прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентов.
Настоящее изобретение может быть дополнительно охарактеризовано определениями, представленными в следующих пунктах.
1. Кристаллическая форма соединения (I),
2. Кристаллическая форма по пункту 1, где кристаллическая форма представляет собой кристаллическое свободное основание.
3. Кристаллическая форма по пункту 1 или 2, где кристаллическая форма характеризуется отражением, выраженным как значение 2θ, при 17,8±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме, при этом отражение при 17,8±0,2° является одним из четырех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
- 11 045552
4. Кристаллическая форма по пункту 3, дополнительно характеризующаяся одним или несколькими отражениями, выраженными как значение 2θ, при одном или более углах из 4,1±0,2°, 8,3±0,2°, 12,4±0,2°,
13,6±0,2°, 14,5±0,2°, 14,9±0,2°, 15,2±0,2°, 17,2±0,2°, 19,3±0,2°, 21,2±0,2°, 22,4±0,2°, 22,9±0,2° и 23,3±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
5. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-4, характеризующаяся отражениями, выраженными как значение 2θ, при углах 17,2±0,2°, 17,8±0,2°, 21,2±0,2° и 22,4±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
6. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-5, имеющая температуру плавления от 89°С до 96°С.
7. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-6, имеющая температуру плавления от 92°С до 93°С.
8. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-7, где кристаллическая форма является по существу негигроскопичной.
9. Кристаллическая форма по пункту 1 или пункту 2, где кристаллическая форма характеризуется отражением, выраженным как значение 2θ, при угле 16,9±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме, при этом отражение при 16,9±0,2° является одним из четырех самых сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
10. Кристаллическая форма по пункту 9, дополнительно характеризующаяся одним или несколькими отражениями, выраженными как значение 2θ, при одном или более углах из 15,2±0,2°, 16,1±0,2°, 16,5±0,2°, 18,9±0,2°, 23,1±0,2°, 25,5±0,2°, 27,7±0,2° и 28,5±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
11. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1, 2, 9 или 10, характеризующаяся отражениями, выраженными как значение 2θ, при углах 16,1±0,2°, 16,5±0,2°, 16,9±0,2°, 18,9±0,2° и 23,1±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.
12. Кристаллическая форма по любому из пунктов 9-11, имеющая температуру плавления от 67 до 74°С.
13. Кристаллическая форма по любому из пунктов 9-12, имеющая температуру плавления от 69 до 71°С.
14. Кристаллическая форма по любому из пунктов 9-13, имеющая растворимость в воде от 75 мг/мл до 85 мг/ мл.
15. Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическую форму по любому из пунктов 114.
16. Фармацевтическая композиция по пункту 15, где фармацевтическая композиция содержится в капсуле.
17. Фармацевтическая композиция по пункту 16, где фармацевтическая композиция содержится в капсуле без какого-либо другого ингредиента.
18. Фармацевтическая композиция по пункту 15 или 16, содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
19. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-14 или фармацевтическая композиция по любому из пунктов 15-18 для применения в терапии.
20. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-14 или фармацевтическая композиция по любому из пунктов 15-18 для применения в качестве лекарственного средства.
21. Кристаллическая форма по любому из пунктов 1-14 или фармацевтическая композиция по любому из пунктов 15-18 для применения при лечении заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов.
22. Кристаллическая форма или фармацевтическая композиция для применения по пункту 21, где заболевание, связанное с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов, представляет собой лизосомную болезнь накопления, такую как болезнь Гоше, болезнь Фабри, ганглиозидозы GM1, ганглиозидозы GM2 (такие как болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа и вариант АВ), сиалидоз, болезнь Ниманна-Пика типа С и синдром миоклонуса движенияпочечной недостаточности, или симптом одного из заболеваний, которые в совокупности классифицируются как метаболический синдром, например, ожирение, резистентность к инсулину, гиперлипидемия, гиперхолестеринемия, поликистоз почек, диабет типа II и хроническое воспаление или нейродегенеративное заболевание, такое как болезнь Паркинсона или деменция с тельцами Леви, или атеросклероз.
23. Кристаллическая форма или фармацевтическая композиция для применения по пункту 21 или 22, где заболевание представляет собой ганглиозидозы GM1 или ганглиозидозы GM2 (такие как болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа или вариант АВ).
24. Способ лечения заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или с повышенными уровнями гликосфинголипидов у пациентов-людей или у животных, где способ предусматривает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества кристаллической формы по любому из пунктов 1-14, или фармацевтическая композиция по любому из пунк-
- 12 045552 тов 15-18.
25. Способ получения кристаллической формы по любому из пунктов 1-8, где способ предусматривает приведение в контакт образца соединения (I) с растворителем.
26. Способ по пункту 25, в котором растворитель выбирают из ацетонитрила, этилацетата, изопропанола, анизола, воды и трет-бутилметилового эфира (TBME).
27. Способ по пункту 25 или 26, в котором образец соединения (I) очищают перед приведением в контакт образца соединения (I) с растворителем.
28. Способ по пункту 27, в котором образец соединения (I) очищают с помощью хроматографии.
29. Способ по пункту 28, в котором образец соединения (I) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле.
30. Способ по любому из пунктов 27-29, в котором образец соединения (I) после очистки не содержит боратных эфиров.
31. Способ по любому из пунктов 25-30, в котором кристаллическая форма по любому из пунктов 9-14 образуется в качестве промежуточного продукта перед образованием кристаллической формы по любому из пунктов 1-8.
32. Кристаллическая форма соединения (I), полученная в результате осуществления способа по любому из пунктов 25-31.
33. Применение свободного основания соединения (I) для получения кристаллической формы.
34. Способ получения кристаллической формы соединения (I), где способ предусматривает кристаллизацию свободного основания соединения (I).
35. Кристаллическая форма соединения (I), полученная способом по пункту 34.
36. Способ получения кристаллической формы соединения (I), где способ предусматривает выполнение следующих стадий:
i) добавление соединения (I) в колонку для очистки, с получением очищенного образца соединения (I);
ii) добавление растворителя к очищенному образцу соединения (I), с получением суспензии соединения (I) в растворителе;
iii) перемешивание суспензии соединения (I) в растворителе, с получением кристаллической формы соединения (I); и iv) отделение кристаллической формы соединения (I), с получением чистого образца кристаллической формы соединения (I).
37. Способ по пункту 36, в котором очищенный образец соединения (I) не содержит боратных эфиров.
38. Способ по пункту 36 или 37, в котором растворитель выбирают из ацетонитрила, этилацетата, изопропанола, анизола, воды и трет-бутилметилового эфира (ТВМЕ).
39. Способ по любому из пунктов 36-38, в котором стадию ii проводят при температуре 25-35°С.
40. Способ по любому из пунктов 36-39, в котором перемешивание на стадии (iii) проводят при температуре 20-35°С.
41. Способ по любому из пунктов 36-40, в котором перемешивание на стадии (iii) проводят в течение по меньшей мере 1 ч.
42. Способ по пункту 41, в котором перемешивание на стадии (iii) проводят в течение по меньшей мере 16 ч.
Экспериментальный раздел
Анализы методом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) выполняли на приборе ТА Instruments Q2000 (использовали закрытую алюминиевую кювету или алюминиевую кювету с точечным отверстием в крышке, скорость нагрева 20 град/мин). Под температурой плавления принимали максимум пика.
Анализы методом динамической сорбцией паров (ДСП) выполняли на приборе SPS11-100n Sorptions Prufsystem от ProUmid (ранее Projekt Messtechnik), August-Nagel-Str. 23, 89079, Ульм (Германия). В алюминиевую кювету для образцов помещали от 5 до 20 мг образца. Использовали скорость изменения влажности 5% в час. Программа измерений может быть описана следующим образом:
Образец помещали на алюминиевый или платиновый держатель сверху микровесов, и давали ему уравновеситься при относительной влажности (RH) 50% перед запуском предварительно заданных программ изменения влажности:
(1) 2 ч при относительной влажности 50%;
(2) 50 ^ 0% относительной влажности (5%/ч); 5 ч при 0% относительной влажности;
(3) 0 ^ 95% относительной влажности (5%/ч); 5 ч при относительной влажности 95%;
(4) 95 ^ 0% относительной влажности (5%/ч); 5 ч при 0% относительной влажности;
(5) 0 ^ 95% относительной влажности (5%/ч); 5 ч при относительной влажности 95%;
(6) 95 ^ 50% относительной влажности (5%/ч); 2 ч при относительной влажности 50%.
Анализы методом порошковой рентгеновской дифракции выполняли на дифрактометре Stoe Stadi P
- 13 045552 с детектором MythenlK, работающим на излучении Cu-Ka1. Измерения на этом приборе проводили при напряжении на трубке 40 кВ и силе тока 40 мА. Измерения проводили с использованием изогнутого Ge монохроматора для излучения Cu-Ka1. На дифрактометре устанавливали режим со следующими параметрами: шаг 0,02° 2θ, время шага 12 с, диапазон сканирования 1,5-50,5° 2θ, и шаг детектора 1° 2Θ (режим детектирования при пошаговом сканировании). Для типичной пробоподготовки приблизительно 10 мг образца помещали между двумя ацетатными пленками, и образец устанавливали в держатель для образцов дифрактометра Stoe. Во время измерения образец вращался. Всю подготовку образцов и измерения проводили в атмосфере окружающего воздуха (приблизительно 25 °С).
Приблизительную растворимость определяли путем постепенного добавления растворителя приблизительно к 10 мг соединения, с последующим встряхиванием и/или обработкой ультразвуком в течение короткого периода времени. Если вещество не растворилось при добавлении в общей сложности не менее 10 мл растворителя, то растворимость указывали как <1 мг/мл. Эксперименты проводили при температуре приблизительно 25°С.
Термогравиметрические измерения, выполненные путем совместного анализа методами термогравиметрии и инфракрасной спектроскопии (TG-FTIR), проводили с помощью Netzsch ThermoMicrobalance TG 209, соединенного со спектрометром Bruker FTIR Spectrometer Vector 22 (использовали чашки для образцов с точечным отверстием, атмосфера N2, скорость нагрева 10°С/мин).
Примеры.
Следующие неограничивающие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.
Пример 1. Образование кристаллической соли
Исследования по программе высокопроизводительного скрининга солей соединения (I) выполняли с использованием 16 различных солеобразователей, указанных в табл. 1, при попытке получения кристаллической формы соединения (I) в шести различных условиях.
Первоначальные эксперименты по скринингу проводили путем добавления 0,05 М раствора соединения (I) в ацетоне в каждую лунку кварцевого 96-микротитрационного планшета, с последующим добавлением маточных растворов солеобразователя в концентрации 0,1 М. Растворители выпаривали из каждой лунки под током азота при комнатной температуре. Твердые остатки в лунках исследовали с помощью микроскопии в поляризованном свете.
Таблица 1
Кислоты, выбранные для исследования по программе скрининга солей
| Солеобразователь | Молекулярная масса | Класс по Шталю |
| Адипиновая кислота | 146,14 | 1 |
| Бензолсульфоновая кислота | 158,17 | 2 |
| Бензойная кислота | 122,12 | 2 |
| Лимонная кислота | 192,12 | 1 |
| Фумаровая кислота | 116.07 | 1 |
| Г ентизиновая кислота | 154,12 | 2 |
| Хлористоводородная кислота | 36,46 | 1 |
| L-молочная кислота, | 90,08 | 1 |
| Малеиновая кислота | 116,07 | 1 |
| L-яблочная кислота | 134,09 | 1 |
| DL-миндальная кислота | 152,15 | 1 |
| Фосфорная кислота | 97,99 | 1 |
| Янтарная кислота | 118,09 | 1 |
| Серная кислота | 98,08 | 1 |
| L-винная кислота | 150,09 | 1 |
| Толуолсульфоновая кислота | 190,22 | 2 |
Хотя целью этих первоначальных экспериментов было получение соотношения 1: 1 соединения (I) к солеобразователю, исследования с помощью световой микроскопии выявили некоторые экспериментальные условия, подходящие для образования кристаллической формы. Например, при смешивании соединения (I) с бензолсульфоновой кислотой, соляной кислотой, DL-миндальной кислотой, L-винной кислотой, фосфорной кислотой и серной кислотой происходило образование кристаллических остатков.
В другом эксперименте по скринингу были выбраны шесть систем растворителей, а именно ацетон, ацетонитрил, этилацетат, этанол, смесь изопропанол/вода (3:1) и смесь ацетон/вода (9:1). К остатку в каждую лунку добавляли 200 мкл растворителя для уравновешивания суспензии. Подготовленный таким
- 14 045552 образом микротитровальный планшет встряхивали при 400 об/мин в течение одного дня при комнатной температуре (приблизительно 25°С). Затем растворители упаривали в токе азота, и полученные твердые остатки исследовали с помощью микроскопии в поляризованном свете.
На основании исследований с помощью световой микроскопии были обнаружены признаки возможного образования солей при использовании бензолсульфоновой кислоты, гентизиновой кислоты, соляной кислоты, L-молочной кислоты, D-миндальной кислоты, фосфорной кислоты, L-винной кислоты и толуолсульфоновой кислоты. Некоторые из наиболее многообещающих образцов были отобраны для последующих экспериментов в масштабе от 50 до 200 мг (эксперименты с увеличенным масштабом).
Эксперименты с увеличенным масштабом для всех испытанных условий привели к образованию аморфных форм соединения (I) или жидкокристаллических солей соединения (I). Хотя микроскопическое исследование часто выявляло двойное лучепреломление, однако фильтрация полученных смесей была невозможна, и ни в одном из экспериментов не удалось выделить твердый материал.
Подводя итог, можно отметить, что во всех экспериментах с солеобразователями не удалось получить кристаллическую форму соединения (I).
Пример 2. Кристаллическая форма формы 2.
Поскольку эксперименты, описанные в примере 1, не привели к получению полезного кристаллического материала, то была исследована кристаллическая форма свободного основания соединения (I).
Соединение (I) очищали с использованием колонки с силикагелем для удаления эфиров борной кислоты, с последующим кратковременным уравновешиванием с ацетонитрилом (в течение приблизительно 1-5 мин). Установлено, что растворимость очищенного соединения (I) в ацетонитриле составила от 5 до 8 мг/мл. Также была исследована растворимость очищенного соединения (I) в других растворителях, и результаты представлены в табл. 2. Эти значения определяли путем добавления небольших аликвот растворителя к ~10 мг твердого соединения (I) и последующего встряхивания или путем обработки ультразвуком в течение короткого периода времени при комнатной температуре (приблизительно при 25°С).
Таблица 2
Приблизительные значения растворимости очищенного соединения (I)
| Растворитель | Растворимость S [мг/мл] | Растворитель | Растворимость S [мг/мл] |
| Уксусная кислота | S > 120 | МЕК | 40 < S < 50 |
| Ацетон | 55 < S < 73 | Метанол | S > 160 |
| Ацетонитрил | 5<S<8 | 1 -пропанол | 13 < S < 15 |
| DCM | S > 160 | 2-пропанол | 19<S<20 |
| Этиловый спирт | 40 < S < 53 | THF | S >200 |
| Этил ацетат | 12 < S < 13 | Вода | S ~ 80 |
Кристаллическую форму формы 2 соединения (I), полученную в результате короткого (приблизительно 1-5 мин) уравновешивания с ацетонитрилом, исследовали с помощью микроскопии в поляризованном свете, экспериментов с использованием методов порошковой рентгеновской дифракции (ПРД), TG-FTIR, дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и динамической сорбции паров (ДСП).
Результаты исследования микроскопии в поляризованном свете представлены на фиг. 1, а дифрактограмма, полученная с помощью ПРД, показана на фиг. 2. Эта кристаллическая форма 2 соединения (I) показала самые сильные отражения при значениях 2θ, равных 16,1 ±0,2°, 16,5±0,2°, 16,9±0,2°, 18,9±0,2° и 23,1±0,2°.
Результаты термоаналитической оценки характеристик кристаллической формы 2 соединения (I), полученной в результате короткого уравновешивания с ацетонитрилом (термограммы TG-FTIR), представлены на фиг. 3А, а результаты, полученные с помощью ДСК, показаны на фиг. 3В. Результаты показывают, что образец содержал приблизительно 0,5% воды, которая высвобождается при нагревании приблизительно до 120°С. При более высоких температурах наблюдали термическое разложение. Анализ с помощью ДСК выявил два значительных эндотермических события. За первым сильным эндотермом с пиковой температурой приблизительно 70°С и энтальпией приблизительно 54 Дж/г, следовал более слабый сигнал при 81 °С и энтальпией приблизительно 3 Дж/г.
Кроме того, было исследовано поведение кристаллического образца свободного основания при различных давлениях водяного пара. При высокой относительной влажности образец поглощал приблизительно 18% воды; однако большая часть абсорбированной воды высвобождалась, когда относительная влажность возвращалась к относительной влажности на уровне 50%. Результаты измерений, полученных с помощью метода ДСП, представлены на фиг. 4А и 4В.
Обобщенные показатели, характеризующие кристаллическую форму соединения (I), полученную в рамках примера 2, представлены в табл. 3.
- 15 045552
Таблица 3
Обобщенные показатели, характеризующие кристаллическую форму 2 соединения (I)
| Показатель | Значение/описание показателя |
| Температура плавления | ~ 70°С |
| Г игроскопичность | 18% при относительной влажности 95%; гигроскопичная форма |
| Растворимость в воде | ~ 80 мг/мл |
Полученная кристаллическая форма 2 соединения (I) имеет низкую стабильность, и она в дальнейшем переходит в кристаллическую форму 3 соединения (I) при воздействии повышенной температуры (более приблизительно 30°С) в течение приблизительно 1-5 мин. Альтернативно, форма 2 переходит в форму 3 при уравновешивании с растворителем (например, ацетоном) в течение времени более 5 мин при температуре приблизительно 25°С. Эта кристаллическая форма 3 свободного основания соединения (I) обладала лучшей стабильностью и уникальным набором физико-химических свойств.
Пример 3. Форма 3.
Стабильную кристаллическую форму соединения (I) получали в результате независимых экспериментов по уравновешиванию суспензии очищенного соединения (I) с различными соответствующими растворителями, например, с ацетонитрилом, этилацетатом, изопропанолом, анизолом, водой или ТВМЕ, соответственно, при комнатной температуре (приблизительно при 25°С).
В частности, кристаллическую форму формы 3 соединения (I) получали с помощью следующих экспериментальных методов:
1) приблизительно 74 мг соединения (I) добавляли к 2,0 мл ацетонитрила, и суспензию перемешивали в течение трех дней при комнатной температуре (приблизительно 25°С), а затем ее отфильтровывали;
2) приблизительно 74 мг соединения (I) добавляли к 2,0 мл анизола, и суспензию перемешивали в течение трех дней при комнатной температуре (приблизительно 25°С), а затем ее отфильтровывали;
3) приблизительно 82 мг соединение (I) добавляли к 1,0 мл этилацетата, и суспензию перемешивали в течение трех дней при комнатной температуре (приблизительно 25°С), а затем ее отфильтровывали;
4) приблизительно 82 мг соединения (I) добавляли к 1,0 мл изопропанола, и суспензию перемешивали в течение трех дней при комнатной температуре (приблизительно 25°С), а затем ее отфильтровывали;
5) приблизительно 45 мг соединения (I) добавляли к 1,0 мл воды, и суспензию перемешивали в течение трех дней при комнатной температуре (приблизительно 25°С), а затем ее отфильтровывали;
6) приблизительно 100 мг соединения (I) добавляли к 3,0 мл ТВМЕ, и суспензию перемешивали в течение трех дней при комнатной температуре (приблизительно 25°С), а затем ее отфильтровывали.
Перед добавлением растворителя соединение (I) очищали для удаления эфиров борной кислоты с использованием колонки с силикагелем.
Полученную кристаллическую форму соединения (I) охарактеризовывали с помощью методов микроскопии в поляризованном свете, порошковой рентгеновской дифракции, TG-FTIR, ДСК и ДСП.
Результаты исследования методом микроскопии в поляризованном свете для выбранных растворителей представлены на фиг. 5.
Дифрактограмма, полученная методом ПРД для кристаллической формы 3 соединения (I), полученной в результате экспериментов по уравновешиванию суспензии с ацетонитрилом, показана на фиг. 6А. Наложение дирактограмм ПРД кристаллических форм 3 соединения (I), полученных в результате экспериментов по уравновешиванию суспензии с другими растворителями, показано на фиг. 6В. Эта кристаллическая форма соединения (I) показывает самые сильные отражения при значении 2Θ равных 17,2±0,2°, 17,8±0,2°, 21,2±0,2° и 22,4±0,2°. Эти результаты согласуются между собой, несмотря на то, что для получения кристаллической формы соединения (I) использовались разные растворители.
Для сравнения, на фиг. 7 показано наложение дифрактограммы ПРД для кристаллической формы, полученной в Примере 2 (форма 2), и кристаллической формы, полученной в рамках настоящего Примера (форма 3). Две кристаллические формы имеют разные дирактограммы ПРД.
Результаты типичных экспериментов по определению характеристик методом TG-FTIR для кристаллической формы 3 соединения (I), показаны на фиг. 8А (этилацетат) и фиг. 8В (изопропанол).
На фиг. 8А показано, что образец кристаллической формы 3 соединения (I), полученной уравновешиванием с этилацетатом, содержит приблизительно 0,7% этилацетата, несмотря на сушку в вакууме при 40°С в течение нескольких дней. Этилацетат высвобождается при температуре приблизительно от 100°С до 200°С. При более высоких температурах наблюдается термическое разложение.
Образец формы 3, полученной в результате образования суспензии соединения (I) в изопропаноле (IPA) и сушки на воздухе при комнатной температуре, неожиданно показал, что начальное содержание
- 16 045552 изопропанола составляет менее 0,5% (см. фиг. 8В).
Типичные результаты измерений методом ДСК для образца кристаллической формы 3 соединения (I), полученной путем уравновешивания с этилацетатом, представлены на фиг. 8С; при этом показан острый эндотермический пик плавления приблизительно при 92°С, связанный с энтальпией, составляющей приблизительно 103 Дж/г. Таким образом, кристаллическая форма формы 3 соединения (I), полученная в рамках этого Примера, имеет более высокую температуру плавления, чем кристаллическая форма по Примеру 2 (форма 2).
Кроме того, исследовали поведение образца кристаллической формы 3 соединения (I), полученной уравновешиванием с этилацетатом, при различных давлениях водяного пара. При самой высокой относительной влажности, равной 95%, образец поглощал приблизительно 1,2% воды, которая высвобождалась, когда относительная влажность возвращалась к 50% относительной влажности. Результаты измерения методом ДСП показаны на фиг. 9А и фиг. 9В. Количество поглощенной воды оказалось незначительным, и сорбция воды была обратимой. Таким образом, эта кристаллическая форма формы 3 соединения (I) является негигроскопичной или по существу негигроскопичной.
Обобщенные показатели, характеризующие кристаллическую форму 3 соединения (I), полученную в рамках примера 3, представлены в табл. 4.
Таблица 4
Обобщенные показатели, характеризующие кристаллическую форму 3 соединения (I)
| Показатель | Значение/описание показателя |
| Температура плавления | ~ 92,5°С |
| Г игроскопичность | ~1% при относительной влажности 95%; по существу негигроскопичная форма |
| Растворимость в воде | не измеряли |
Пример 4. Эффект от введения кристаллической формы соединения (I) мышам, страдающим болезнью Ниманна-Пика типа С (NPC).
В этом примере AZ-3102-00 представляет собой название формы 3 соединения (I).
Цель исследования.
Цель исследования состояла в том, чтобы оценить эффективность лечения молодых мышей NPC1 (NPC(-/-) (возраст Р11-Р70)) прогнозируемой фармакологически активной дозой AZ-3102-00 с использованием перорального зонда, а также оценить ФК и гистологические маркеры для характеристики невропатологии, которая может возникнуть.
Схема исследования.
В это исследование было включено 38 мышей, из них: 30 мышей NPC(-/-) с нокаутом (KO), 4 гетерозиготных мыши NPC(+/-) и 4 мыши NPC(+/+) дикого типа (мыши WT, Balb/c). Мыши NPC1(-/-) имеют преждевременное усечение белка с делецией 11 трансмембранных доменов из 13, при этом первые два трансмембранных домена остаются без изменений. Мыши NPC1 (-/-), гомозиготные по рецессивному аллелю гена NIH Нимана Пика типа C1 (Npc1m1N), характеризуются двойным дефицитом активности сфингомиелиназы и глюкоцереброзидазы (JAX# 003092). Животные были выведены из линии мышей BALB/c OlaHsd.
мышам NPC1(-/-)через пероральный желудочный зонд вводили AZ-3102-00 с 11-го дня после рождения (Р11) до 70-го дня после рождения (Р70). Контрольные мыши того же возраста включали 6 мышей NPC(-/-) и 4 мыши NPC(+/-), получавших носитель, а также 4 мыши NPC(+/+), получавших AZ3102-00. После последней обработки в день Р70 мышей NPC(-/-) (n=4 для каждого момента времени) подвергали эвтаназии путем внутрибрюшинной инъекцией 600 мг/кг пентобарбитала в следующие моменты времени: 30 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч и 24 ч. После последней обработки также умерщвляли контрольных мышей (не критично по времени). Терминальную кровь собирали путем пункции сердца в пробирки, покрытые ЭДТА. Плазму крови собирали центрифугированием (3000xg в течение 10 мин при комнатной температуре), и аликвоты 50 мкл плазмы переносили в пробирки объемом 1,5 мл, замораживали на сухом льду и хранили при -80°С.
После транскардиальной перфузии извлекали мозг и его рассекали пополам. Правое полушарие мозга постфиксировали и помещали в криоформы для дальнейшего иммуногистохимического анализа. Левое полушарие мозга замораживали на сухом льду для дальнейшего анализа.
Мозг подвергали криотомии (12 уровней по 5 срезов для каждого). Затем использовали по 5 срезов от одного животного для количественного иммунофлуоресцентного мечения микроглии (МАС1) и астроцитов (GFAP) в двух областях мозга.
Тестовая система и обоснование тестовой системы.
Болезнь Ниманна-Пика типа С (NPC) представляет собой аутосомно-рецессивное нейродегенеративное заболевание, связанное с мутациями в генах NPC1 и NPC2, и она характеризуется накоплением неэтерифицированного холестерина и гликосфинголипидов (GSL). Приблизительно 95% случаев болезни
- 17 045552
Ниманна-Пика типа С вызваны генетическими мутациями в гене NPC1, и называемыми болезнью Ниманна-Пика типа С1; 5% вызваны мутациями в гене NPC2, и называемыми болезнью Ниманна-Пика типа С2. Клинические проявления болезни Ниманна-Пика типов С1 и С2 сходны, поскольку оба соответствующих гена участвуют в выходе липидов, особенно холестерина, из поздних эндосом или лизосом. Ген NPC1 кодирует белок, расположенный в мембранах внутри клетки, и он участвует в перемещении холестерина и липидов внутри клеток. Дефицит этого белка приводит к аномальному накоплению липидов и холестерина в клеточных мембранах. Ген NPC2 кодирует белок, который связывает и транспортирует холестерин. Мыши, гомозиготные по рецессивному аллелю гена NIH с болезнью Нимана-Пика типа С1, обнаруживают двойной дефицит активности сфингомиелиназы и глюкоцереброзидазы. Мутантные мыши начинают терять вес и проявляют тремор и атаксическую походку приблизительно в возрасте 7 недель. Потеря веса продолжается, а тремор и атаксия становятся более тяжелыми, и продолжаются до самой смерти в возрасте приблизительно 12-14 недель. Печень и селезенка также увеличены, а клетки Пуркинье в мозжечке сильно истощены. Некоторые из этих признаков у мышей напоминают признаки болезни Ниманна-Пика типа С у людей.
Таблица 5
Сведения об элементах теста
| Элемент теста | Определение/значение |
| Название тестируемого соединения | AZ-3102-00 |
| Номер партии тестируемого соединения | CR-20-02149 |
| Товарное наименование | Неприменимо |
| Стабильность | Дата повторного тестирования - апрель 2021 года |
| Состав | Неприменимо |
| Чистота | 99,4% |
| Молекулярная масса | 433,5 г/моль |
| Дата истечения срока действия | Дата повторного тестирования - апрель 2021 года |
| Условия хранения (для рецептуры) | Хранение и стабильность в носителе: стабильно хранится в атмосфере азота при комнатной температуре в защищенном от света месте не менее 24 часов; хранится в атмосфере азота в холодильнике (28°С) не менее 8 дней; хранится в атмосфере азота в замороженном состоянии в морозильной камере (< -15°С) по меньшей мере в течение 21 дня (3 недели) |
| Носитель | Подкисленная вода |
| Лечебные дозы | 1,5 мг/кг (для Pl 1-Р25) и 3 мг/кг (для Р26-Р70) |
| Путь введения и объем | Через пероральный желудочный зонд, 10 мл/кг |
| Частота введения | Ежедневное введение в течение 60 дней |
Подготовка соединений.
Дозированные препараты разделяли на аликвоты, где это требовалось, чтобы их можно было дозировать в каждом случае введения.
- 18 045552
Таблица 6
Сведения о препаратах
| Дозируемый препарат | Форма препарата для введения | Процедура | Частота приготовления препаратов | Установленные условия хранения |
| Тестируемое соединение | Раствор | Препараты (мас./мас.) готовили путем растворения тестируемого соединения в воде Ampuwa в атмосфере азота | Не реже одного раза в неделю или два раза в неделю, если во время растворения нельзя использовать атмосферу азота | 2-8°С в защищенном от света месте |
Требуемое количество тестируемого соединения взвешивали и растворяли в воде Elix (мас./мас.), и рН доводили до кислого значения. Дополнительные вспомогательные вещества не добавляли.
Не делали никаких поправок на удельный вес испытуемого соединения или чистоту/состав тестируемого соединения.
После приготовления каждой дозы оставшуюся часть раствора замораживали для ее анализа в конце исследования.
Анализы в отношении стабильности, выполненные ранее в связи с разработкой и проверкой метода, показали, что испытуемое соединение стабильно в носителе при приготовлении и хранении в тех же условиях при концентрациях, граничащих с теми, которые использовались в этом исследовании, по меньшей мере в течение 24 ч при комнатной температуре в защищенном от света месте; по меньшей мере в течение 8 дней в холодильнике (2-8°С) и по меньшей мере в течение 3 недель в морозильной камере (< 15°С) при концентрациях, близких к тем, которые использовались в настоящем исследовании (от 0,01 до 2 мг/мл).
Обращение с животными.
Размещение животных.
Животных содержали в индивидуальных вентилируемых клетках на стандартных подстилках для грызунов, поставляемых Rettenmaier. В каждой клетке содержали не более пяти мышей. Температуру в виварии поддерживали в интервале от 20 до 24°С, а относительную влажность поддерживали в интервале от 45% до 65%. Животных содержали при постоянном световом цикле (12 ч свет/темнота). У животных был неограниченный доступ к сухому гранулированному стандартному корму для грызунов (Altromin), а также к обычной водопроводной воде. Влажный корм давали животным под руководством лечащего ветеринара.
Идентификация животных.
Животных нумеровали последовательно классическими обозначениями.
Каждую клетку идентифицировали цветной карточкой с указанием номера исследования, пола, индивидуальных регистрационных номеров (ИРН) животных, даты рождения, а также распределения по группам лечения. Генотип (трансгенный или дикий тип) каждого животного определяли с помощью ГЩР, специфичной для трансгенной конструкции. Каждая мышь была генотипирована с использованием ДНК, выделенной из биопсии уха до начала исследования.
Распределение по группам.
В исследование включали животных только с удовлетворительным состоянием здоровья. Рандомизацию распределения по группам проводили для каждой клетки. Животных распределяли по разным исходным группам (когортам), включая животных в группах, получающих лечение. Количество животных в стартовой группе было ограничено, чтобы обеспечить одинаковый возраст животных и одинаковые условия содержания.
Состояние здоровья и наблюдения за клетками с животными.
Перед включением животных в исследование оценивали состояние здоровья каждого отдельного животного. Во время исследования проводили ежедневные наблюдения, и регистрировали любые замечания в отношении поведения животных в клетках, о чем немедленно сообщались руководителю исследования и лечащему ветеринару, которые принимали решение о дальнейших действиях (например, об эвтаназии).
- 19 045552
Массу тела и состояние здоровья животных регистрировали ежедневно в течение первой недели, а затем один раз в неделю.
Преждевременное прекращение эксперимента и гуманные конечные точки
Ни одно животное не было подвергнуто преждевременной эвтаназии.
Материалы и методы
Животные.
| Линия мышей | NPC(-/-) |
| Поставщик: | QPS Austria GmbH, Грамбах, Австрия |
| Возраст на момент начала эксперимента: | От 11-го дня после рождения (Pl 1) до 70-го дня после рождения (Р70) |
| Пол: | Смешанный |
| Количество животных: | 30 NPC(-/-); 4 NPC(+/-); 4 NPC(+/+) |
Уход за животными.
мыши NPC1(-/-) (группы D - I) получали AZ-3102-00 через пероральный желудочный зонд (10 мл/кг) с 11-го дня после рождения (Р11) до 70-го дня после рождения (Р70). Дозировка начиналась с 1,5 мг/кг в период с Р11 по Р25, а затем в период с Р26 до Р70 вводили 3 мг/кг. Контрольные мыши включали: 6 мышей NPC1(-/-) и 4 мыши NPC(+/-), получавших носитель, и 4 мыши NPC (+/+), получавших AZ3102-00 (группы А-С).
После последнего введения в день Р70 мышей NPC(-/-) (n=4 для каждого момента времени; группы D-I) подвергали эвтаназии внутрибрюшинной инъекцией 600 мг/кг пентобарбитала в следующие моменты времени: 30 мин, 1 час, 2 ч, 4 ч, 8 ч и 24 ч. Контрольных мышей (группы А, В и С) также умерщвляли после последнего дозирования (не критично по времени).
Таблица 7
Описание групп животных, получавших лечения
| Группа | Животные | Пол в группе | Путь введения | Вводимое соединение | Концентрация (a) | η |
| А | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | Носитель | NA | 6 |
| В | NPC(+/-) | Смешанный | П/О | Носитель | NA | 4 |
| С | NPC(+/+) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| D | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| Е | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| F | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| G | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| Н | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| I | NPC(-/-) | Смешанный | П/О | AZ-3102-00 | Доза 1 и 3 мг/кг | 4 |
| мыши получали 1 мг/кг в течение Р11-Р25, а затем 3 мг/кг в течение Р26-Р70 П/О - пероральное введение NA - неприменимо |
Отбор проб тканей.
После последнего введения в день Р70 мышей подвергали эвтаназии внутрибрюшинной инъекцией: через 30 мин (группа D), через 1 ч (+/- 5 мин, группа Е), через 2 ч (+/- 5 мин, группа F), через 4 ч (+/- 5 мин, группа G), через 8 ч (+/- 5 мин, группа Н) и через 24 ч (+/- 5 мин, группа I) (все времена критичны).
мышей NPC1(-/-) из группы А, 4 мыши NPC(+/-) из группы В и 4 мыши NPC(+/+) из группы С
- 20 045552 служили в качестве контроля, и они также были подвергнуты эвтаназии в день Р70 (приблизительно через 2 ч после последнего введения).
Мышей перед эвтаназией анестезировали внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала (600 мг/кг, доза 10 мкл/грамм массы тела).
Отбор проб крови.
Вскрывали грудную клетку мышей и собирали кровь путем пункции сердца иглой 23 калибра. Иглу удаляли, и кровь переносили в пробирку для проб (MiniCollect® K2EDTA (калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты)). Пробирку тщательно переворачивали, чтобы облегчить равномерное распределение ЭДТА и предотвратить свертывание. Образцы крови центрифугировали при 3000 g в течение 10 мин при комнатной температуре (22°С). Аликвоты плазмы объемом 50 мкл переносили в предварительно меченые LoBind 1,5-мл пробирки Эппендорфа, замороженные на сухом льду, и хранили при -80°С.
Перфузия.
Затем животных подвергали транскардиальной перфузии с использованием 0,9% физиологического раствора. С этой целью иглу 23-го калибра, соединенную с флаконом с 0,9% физиологическим раствором, вводили в левый желудочек. Грудную аорту между легкими и печенью пережимали кровоостанавливающими щипцами, чтобы блокировать кровоток от сердца к брюшной полости, но позволяя крови течь к мозгу. Правый желудочек вскрывали ножницами. Поддерживали постоянное давление перфузионного раствора от 100 до 120 мм рт. ст. путем подсоединения флакона с раствором к воздушному компрессору с манометрическим управлением. Перфузию продолжали до тех пор, пока поверхность черепа не становилась белой, и из правого желудочка выходил только перфузионный раствор вместо крови.
Отбор проб мозга.
После перфузии вскрывали череп, осторожно удаляли мозг и рассекали его пополам на охлажденной поверхности. Левое полушарие взвешивали, быстро замораживали на сухом льду и хранили при 80°С. Правое полушарие фиксировали погружением в 4% раствор параформальдегида в фосфатном буфере (рН 7,4) на 2 ч при комнатной температуре.
Гистология.
Подготовка ткани.
Правое полушарие мозга мышей фиксировали погружением в свежеприготовленный 4% раствор параформальдегида в РВ (рН 7,4) на два ч при комнатной температуре. После этого полушария переносили в 15% раствор сахарозы/PBS и хранили при 4°С до погружения в среду для криозащиты. Затем блоки ткани обрезали по мере необходимости, переносили в криоформы, заливали среду ОСТ, замораживали в изопентане, охлаждаемом сухим льдом, и хранили в морозильной камере сверхглубокого охлаждения (целевая температура -80°С).
Получение срезов.
На криотоме Leica получали пять последовательных криосрезов толщиной 10 мкм в сагиттальном направлении. Следующие 25 срезов для каждого уровня отбрасывали. Эту схему получения срезов повторяли для 12 уровней, и она могла быть изменена для получения срезов с правильных уровней, например, если мозг был меньше из-за молодого возраста или генотипа. Всего получали 12x5 = 60 срезов. Уровни для срезов выбирали в соответствии с атласом мозга (Paxinos and Franklin The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates, 2nd edition, 2001). Сбор срезов начинали на уровне ~0,2 мм латеральнее средней линии и затем продолжали через полушарие, чтобы обеспечить систематическую случайную выборку, охватывающую целевые области (см. фиг. 10 и фиг. 15). Срезы хранили при -20°С. В результаты были получены срезы почти всего головного мозга, и после сбора всех срезов блок остаточной ткани утилизировали.
Иммунофлуоресценция Ехр353 (кальбиндин-В28k).
Для каждой инкубации отбирали однородный систематический случайный набор из пяти срезов от одной мыши (по одному срезу на уровнях 2, 4, 6, 8, 10); для получения информации о систематической случайной выборке см. ссылку: http://www.stereology.info/sampling/.
Все указанные ниже стадии выполняли в забуференном фосфатом физиологическом растворе Дульбекко с рН 7,2-7,8 (PBS) при комнатной температуре, если не указано иное:
1) криосрезы высушивали на воздухе в течение 45 мин и промывали в PBS 10 мин;
2) неспецифическое связывание блокировали за счет 10% нормальной ослиной сыворотки (Jackson Immuno Research) в 0,1% растворе TritonX-100/PBS в течение 60 мин во влажной камере;
3) каждый срез промывали 3x5 мин в PBS;
4) срезы инкубировали с первичными антителами в 1% нормальной ослиной сыворотке/PBS в течение ночи при 4°С во влажной камере; использовали поликлональное антитело морской свинки к Calbindin-D28k (Synaptic Systems, 214005) в разведении 1:1000;
5) каждый срез промывали 3x5 мин в PBS;
6) срезы инкубировали с вторичными антителами в 1% нормальной ослиной сыворотке/PBS в течение 60 мин во влажной камере (с защитой от света); использовали Cy3-конъюгированное вторичное ослиное антитело к антителам морской свинки (H+L), (Jackson ImmunoResearch, 706-165-148) в разведении
- 21 045552
1:500;
7) каждый срез промывали 3x5 мин в PBS (с защитой от света);
8) срезы инкубировали с рабочим раствором DAPI в течение 15 мин (с защитой от света)
9) срезы промывали 2x5 мин в PBS (с защитой от света);
10) срезы промывали 5 мин в ddH2O (с защитой от света);
11) срезы покрывали слоем Mowiol и покровными стеклами (с защитой от света).
Визуализация.
Полные сканы окрашенных срезов регистрировали с помощью автоматического микроскопа Zeiss AxioScan Z1 с объективами с высокой апертурой, оснащенного монохромной камерой Zeiss Axiocam 506 и камерой Hitachi 3CCD HV-F202SCL, и с использованием программного обеспечения Zeiss ZEN 2.3.
Количественная оценка.
Анализ изображений выполняли с помощью программного обеспечения Image Pro 10 (Media Cybernetics). В начале на изображениях определяли целевые области (мозжечок и гиппокамп или мозолистое тело и полосатое тело) путем обрисовки областей интереса (ROI). Дополнительно из ROI исключали морщины, пузырьки воздуха или любые другие артефакты, мешающие измерению. После этого количественно оценивали иммунофлуоресценцию в пределах идентифицированных участков.
Для количественного определения при необходимости использовали коррекцию фона и выявляли иммунореактивные объекты с помощью адекватной пороговой и морфологической фильтрации (по размеру и форме). Затем количественно определяли различные характеристики объекта, включая процент совокупной площади объекта на основе размера ROI (иммунореактивная площадь - это наиболее полный параметр, указывающий на наличие различий в иммунореактивности), количество объектов, нормализованных к размеру ROI (плотность объектов), среднюю интенсивность сигнала выявленных объектов (средняя интенсивность указывает на наличие различий в уровне клеточной экспрессии белков-мишеней) и размеры надпороговых объектов. После того как определены параметры целевых объектов в тестовом прогоне, то количественный анализ изображения запускается автоматически, поэтому результаты не зависят от оператора и они полностью воспроизводимы.
Необработанные данные систематизировали с использованием программы Excel, a затем их анализировали с помощью программного обеспечения GraphPad Prism для статистического анализа и подготовки графиков. Графики, полученные с использованием программного обеспечения GraphPad Prism, являются частью отчета об исследовании, а таблицы с необработанными данными прилагаются к окончательному отчету после выполнения проверок качества.
Измерение AZ-3102 и глюкозилцерамида в плазме и мозговой ткани мышей.
Сначала из образцов плазмы осаждали белки раствором ацетонитрил/ультрачистая вода/метанол (90:5:5), содержащим 500 нМ внутреннего стандарта глюкозилцерамида С17:0 (GlcCer C17:0) и 0,1% муравьиной кислоты. После перемешивания в течение 5 мин при комнатной температуре образцы центрифугировали (5 мин, 13000 об/мин, 20°С), и 50 мкл супернатантов переносили в силиконизированный 96луночный планшет МТР.
Ткани головного мозга гомогенизировали в растворе ультрачистой воды с метанолом (1:1) с добавкой 0,1% муравьиной кислоты (4 мл на каждый грамм ткани) с использованием гомогенизатора FastPrep 24™ Microtube. Затем для осаждения белка гомогенаты тканей смешивали с раствором ацетонитрил/ультрачистая вода/метанол (90:5:5), содержащим 500 нМ GlcCer С17:0 и 0,1% муравьиной кислоты. После инкубации в течение 5 мин при комнатной температуре образцы центрифугировали (5 мин, 13000 об/мин, 20°С), и 50 мкл супернатантов переносили в силиконизированный 96-луночный планшет МТР.
Измерения AZ-3102.
Сначала для осаждения белка смешивали образцы плазмы с раствором ацетонитрила, содержащим 50 нг /мл AZ-3101 (внутренний стандарт). После инкубации в течение 5 мин при комнатной температуре образцы центрифугировали (5 мин, 13000 об/мин, 4°С), и супернатанты разбавляли в 10 раз ультрачистой водой с 0,1% муравьиной кислоты.
Ткани головного мозга гомогенизировали в растворе ультрачистой воды с метанолом (1:1) с добавкой 0,1% муравьиной кислоты (4 мл на каждый грамм ткани) с использованием гомогенизатора FastPrep 24™ Microtube (MP Biomedicals, США). Для осаждения белков гомогенаты мозга смешивали с раствором ацетонитрила, содержащим 10 нг /мл AZ-3101 (внутренний стандарт). После инкубации в течение 5 мин при комнатной температуре образцы центрифугировали (5 мин, 13000 об/мин, 4°С), и супернатанты разбавляли в 10 раз ультрачистой водой с 0,1% муравьиной кислоты.
Разбавленные супернатанты плазмы и ткани головного мозга вводили в систему жидкостной хроматографии Agilent LC (Agilent, США) с помощью автоматического инъектора образцов (SIL-30, Shimadzu, США). Аналиты разделяли методом жидкостной хроматографии с использованием линейного градиента подвижной фазы В при скорости потока 0,800 мл/мин на обращенно-фазовой колонке XBridge ВЕН С8 (2,1*50 мм, размер частиц 2,5 мкм; Waters, США) при температуре 40°С. Подвижная фаза А состояла из ультрачистой воды с добавкой 0,1% муравьиной кислоты. Подвижная фаза В представляла собой ацетонитрил с добавкой 0,1% муравьиной кислоты.
- 22 045552
Регистрацию осуществляли в режиме положительной ионизации с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра API 5500 (АВ Sciex, США), оснащенного интерфейсом Turbo Ion Spray.
Данные нормировали и количественно оценивали с использованием программного обеспечения для анализа данных Analyst™ (AB Sciex, версия 1.6.3). Нижний предел количественного обнаружения (LLOQ) для AZ-3102 составил 0,2 нг/мл в образцах плазмы и 2 нг/г ткани головного мозга, соответственно.
Измерение глюкозилцерамида
Сначала из образцов плазмы осаждали белок раствором ацетонитрил/ультрачистая вода/метанол (90:5:5), содержащим в качестве внутреннего стандарта 500 нМ глюкозилцерамида С17:0 (GlcCer С17:0) и 0,1% муравьиной кислоты. После перемешивания в течение 5 мин при комнатной температуре образцы центрифугировали (5 мин, 13000 об/мин, 20°С), и 50 мкл супернатантов переносили в силиконизированный 96-луночный планшет МТР.
Ткани головного мозга гомогенизировали в растворе ультрачистая вода/метанол (1:1) с добавкой 0,1% муравьиной кислоты (4 мл на каждый грамм ткани) с использованием гомогенизатора FastPrep 24™ Microtube. Затем для осаждения белка гомогенаты тканей смешивали с раствором ацетонитрил/ультрачистая вода/метанол (90:5:5), содержащим 500 нМ GlcCer С17:0 и 0,1% муравьиной кислоты. После инкубации в течение 5 мин при комнатной температуре образцы центрифугировали (5 мин, 13000 об/мин, 20°С), и 50 мкл супернатантов переносили в силиконизированный 96-луночный планшет МТР.
Концентрации глюкозилцерамида С16:0 (GlcCer С16:0), глюкозилцерамида С18:0 (GlcCer С18:0) и глюкозилцерамида C24:1 (GlcCer C24:1) в образцах головного мозга количественно определяли с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (MRM). Супернатанты анализировали с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС с использованием колонки HALO HILIC (150*4,6 мм, 2,7 мкм) от Advanced Materials Technology для различения изомеров галактозил- и глюкозил-церамидов. Данные МС/МС получали в режиме положительной ионизации с использованием тройного квадруполя API 4000 (Applied Biosystems, США), с интерфейсом Turbo Ion Spray. Анализ GlcCer С 16:0 и GlcCer C18:0 проводили с использованием градиента с подвижной фазой А: 5 мМ ацетата аммония в растворе 94,5% ацетонитрила, 2,5% метанола, 2,5% ультрачистой воды и 0,5% муравьиной кислоты, и с подвижной фазой В: сверхчистая вода и 0,1% муравьиной кислоты. LLOQ в образцах головного мозга для GlcCer 16:0, GlcCer 18:0 и GlcCer 24:1 составлял 25,1, 250 и 381,5 пмоль на грамм ткани, соответственно.
Статистика.
Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 9. Данные представляли в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего (SEM) или среднего значения + стандартная ошибка среднего.
Данные in vivo: Различия между группами проверяли с помощью двустороннего анализа ANOVA для повторных измерений с последующим апостериорным анализом Бонферрони или Даннетта.
Гистология: Распределение данных нельзя было проверить из-за низкого значения n, и поэтому предполагали наличие нормального распределения. Различия между группами проверяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным анализом Даннетта. Группу А (мыши NPC-/-, получавшие носитель) использовали в качестве контрольной группы для попарных сравнений.
Полученные результаты.
Масса тела.
На фиг. 11 показано процентное изменение массы тела между днем PND 11 и 9-ой неделей. График представляет изменение массы тела [г] в каждой группе, при ежедневных измерениях в течение первой недели лечения, а затем один раз в неделю.
Полученные результаты показывают, что общее состояние здоровья животных, о чем свидетельствует средний процент прироста массы тела, не ухудшалось под действием AZ-3102, и мыши NPC(-/-) обоих полов, получавших AZ-3102, прибавляли в весе больше, чем мыши NPC(-/-) не получавшие лечения.
Фармакокинетика.
Таблица 8
Соотношения при действии AZ-3102 на мозг: показатели в плазме после регулярного перорального введения в дни PND 11-70
| Параметр | Мозг: показатели в плазме | |
| Самцы | Самки | |
| AUCo-24 | 0,95 | 1,37 |
| Стах | 0,26 | 0,41 |
Уровни глюкозилцерамида.
На фиг. 12 показаны уровни глюкозилцерамида С16:0 и С18:0 после регулярного перорального введения в дни PND 11-70.
У мышей, получавших AZ-3102, наблюдали повышенные уровни глюкозилцерамида С16:0 и С18:0в
- 23 045552 головном мозге.
Клинические признаки.
Определения клинических показателей и гуманных конечных точек.
Клинические признаки отслеживали ежедневно, начиная с дня Р45 до конца исследования (в соответствии со схемой, приведенной ниже в табл. 9). Регистрировали параметры потеря массы тела, общее состояние здоровья, клинические данные и линия поведения, и их оценивали по бальной шкале. Для общей оценки использовали сумму баллов.
Таблица 9
Таблица оценки клинических признаков
Экспериментатор (имя/инициалы):
Линия поведения
Параметр
Эксперимент№: I Линия: NPC1 | Дата?
Время:
Клинические данные
| * Отметка в разделе «Примечания» (отклонения ог следующих критериев клинического обследования или симптомов) | ||||
| а: потеря массы тела | с: подвижность | е: поверхность мсха/кожи | g; живот | i: поведение /активность |
| Ь: осанка | d: глаза | f: обезвоживание | h: дыхание | к: температура |
| т:тремор | о: выпадение прямой кишки | р: пролапс половых орунов | s: конкретное исследовал не |
| Оценка, результат | Сумма баллов |
| Уровень стресса 0 = нет стресса | 0 |
| Уровень стресса 1 = легкий уровень стресса, за которым следует внимательно следить | 1-9 |
| Уровень стресса 2 = средний уровень cipecca, ветеринар должен быть проинформирован | 10-19 |
| Уровень стресса 3 = высокий уровень стресса, ветеринарный врач и руководитель исследования должны быть проинформированы, ветеринарная помощь или даже эвтаназия, если требуется | 20 или больше |
- 24 045552
Таблица 10
Оценка тремора
| Оценка тремора | Описание (Тремор у животного наблюдается при ручном наклоне клетки и/или при открытии клетки под рабочим столом) |
| Индивидуальная оценка линии поведения = 1 «небольшое нарушение координации, легкийумеренный тремор»: | Животное еще может ходить по прямой линии. У животного легкие нарушения походки (шатающаяся походка и легкий тремор). |
| Индивидуальная оценка линии поведения = 5 «высокий уровень тремора, некоординированные движения»: | Животное часто не может ходить по прямой линии при перемещении по клетке и имеет более отчетливое нарушение походки, чем при оценке = 1. Из-за сильного тремора и потери координации животное иногда падает. |
| Индивидуальная оценка линии поведения =10 «снижение рефлекса восстановления»: | У животного проявляются те же симптомы, которые описаны для оценки = 5. Кроме того, животному требуется несколько секунд (приблизительно не менее 2-3 секунд), чтобы принять лежачее положение на груди после того, как исследователь перевернул его на спину. |
На фиг. 13 показаны обобщенные результаты общих оценок клинических признаков для каждой мыши в период PND 56-70 по всем группам показателей и для всех групп животных NPC(-/-), получавших носитель и AZ-3102. Слева: общие баллы для животных и по группам лечения, визуализированные с помощью градиента: более низкие баллы отмечены зеленым цветом, а более высокие баллы отмечены красным цветом. Правая сторона: баллы, выраженные численными показателями. Пороговые баллы, превышающие значение 7, редко встречаются в группах животных, получавших лечение; тем не менее, группы, не получавшие лечение, имели более высокие общие баллы в ходе исследования.
Результаты показывают, что у мышей NPC(-/-), получавших носитель, наблюдали ухудшение (большие баллы) общих клинических признаков по сравнению с животными NPC(-/-), получавшими AZ3102. Это также показано на фиг. 13: правая сторона, на которой баллы, например, превышающие 8, чаще наблюдались в группе животных NPC(-/-), получавших носитель, по сравнению с животными NPC(-/-), получавшими AZ-3102. Исследуя эти показатели, авторы изобретения установили, что появление, продолжительность и интенсивность тремора также уменьшались при лечении животных с использованием AZ-3102 (фиг. 14). Высокий уровень тремора наблюдали у всех животных NPC(-/-), получавших носитель, кроме одной мыши, тогда как AZ-3102 по существу устранил этот высокий уровень тремора у всех животных, кроме одной мыши, из 24 протестированных животных.
На фиг. 14 показана оценка тремора в дни 56-70 после рождения (PND 56-70) у мышей NPC(-/-), получавших носитель и AZ-3102. Розовые (=светло-серые) столбцы отражают появление и продолжительность сильного тремора (5 баллов); тогда как зеленые (= темно-серые) столбцы отражают появление и продолжительность легкого или умеренного тремора. За исключением одной мыши в группе, не получавшей лечения, все остальные животные показали высокий уровень тремора (у 4 из 5 мышей). Напротив, только у одной мыши в группе, получавшей AZ-3102, был высокий уровень тремора (у 1 из 24). Оценки тремора: 0: нет тремора; 1: легкое нарушение координации, легкий-умеренный тремор; 5: высокий уровень тремора, некоординированные движения; 10: снижение рефлекса восстановления (такой оценки не было ни у одного животного).
Гистологические результаты.
Определение целевых областей.
Целевые области отмечали вручную, определяя область интереса (ROI) для последующего количественного анализа с флуоресцентным мечением.
Показатели для количественного анализа.
В таблице, приведенной ниже, представлены четыре стандартных показателя.
Размер области [мм2]: этот показатель характеризует среднюю площадь участка мозга, охватывае- 25 045552 мого целевой областью. Этот показатель важен для проверки правильности отбора проб. Также полезно идентифицировать атрофию головного мозга, которая является частью фенотипа некоторых животных моделей.
Иммунореактивная область [%]: процент области интереса, которая покрыта надпороговыми иммунореактивными объектами (например: соматы клеток, нейриты, бляшки); это наиболее полный показатель, указывающий на наличие общих различий в иммунореактивности.
Плотность объектов [количество объектов на мм2]: количество надпороговых иммунореактивных объектов, нормированное к размеру целевой области; этот показатель особенно полезен для обнаружения изменений в плотности нейронов.
Яркость объекта [а.u.]: средняя яркость пикселей надпороговых иммунореактивных объектов; этот показатель указывает на наличие различий в уровне клеточной экспрессии белков-мишеней.
Размер объекта [мкм2]: размер надпороговых иммунореактивных объектов; этот показатель полезен для обнаружения различий в активации микроглии или роста бляшек.
Кальбиндин-В28k.
Иммунофлуоресценцию кальбиндина-D28k регистрировали с помощью поликлональных антител морской свинки, и сигнал количественно определяли в мозжечке и гиппокампе. Мыши NCP(-/-) показали значительно сниженные уровни кальбиндина-D28k по сравнению с мышами NCP(+/-) и NPC(+/+). Лечение тестируемым соединением значительно увеличивало уровни кальбиндина-D28k в мозжечке во всех группах. Все эффекты являются регион-специфическими, поскольку в гиппокампе мышей в различных группах не было обнаружено существенных различий.
На фиг. 16 показаны результаты иммуногистохимии головного мозга: мечение кальбиндином-D28k у мышей NCP(-/-) и NPC(+/-), получавших носитель, по сравнению с мышами NPC(+/+, мыши дикого типа) и NPC(-/-), получавшими лечение. На графиках представлены средние значения иммунофлуоресцентного сигнала, измеренного в пределах ROI в 5 срезах мозга мыши (n=2-4 на группу). Данные анализировали с помощью однофакторного анализа ANOVA и апостериорного критерия Даннета. Интервалы на гистограмме представляют собой средние показания для группы + SEM. * значение Р:<0,001.
Применяя иммуногистологические методы с использованием кальбиндин-D28k в качестве маркера для клеток Пуркинье, авторы изобретения обнаружили, что обработка AZ-3102, по сравнению с мышами NPC(-/-), получавшими носитель, значительно ограничивала потерю клеток Пуркинье в мозжечке (фиг. 16).
Выводы.
AZ-3102 представляет собой новое низкомолекулярное соединение для перорального применения, разработанное для лечения различных лизосомных нарушений накопления. Уникальный механизм действия AZ-3102 заключается в его высокой эффективности в отношении глюкозилцерамидсинтазы (GCS), нелизосомальной глюкозилцереброзидазы (GbA2), а также в отношении ее свойств по прониканию в мозг свойства. AZ-3102 исследовали на мышиной модели болезни Нимана-Пика типа С [1, 2] в которой мыши NPC, гомозиготные по рецессивному аллелю гена NIH, начинают терять массу тела, проявляют тремор и атаксическую походку приблизительно в возрасте 7 недель [3]. Тяжесть заболевания связана со значительной потерей мозжечком клеток Пуркинье, и клинические признаки ухудшаются до тех пор, пока не будет достигнута гуманная конечная точка (обычно в возрасте 12-14 недель) [3]. В этом исследовании авторы настоящего изобретения исследовали эффективность ежедневного перорального введения AZ-3102 с 11-го по 70-й день после рождения (PND) для мышей NPC(-/-), NPC(-/+) и WT (NPC(+/+); Balb/c) для оценки фармакокинетических (ФК) свойств AZ-3102, его способности модулировать глюкозилцерамид (GlcCer C16:0, GlcCer C18:0) и улучшать клинические признаки заболевания. Кроме того, авторы настоящего изобретения также исследовали влияние лечения на иммуногистохимический маркер клеток Пуркинье, которые коррелируют с тяжестью невропатологии. После регулярного ежедневного перорального введения AZ-3102 в дни PND 11-70 общее состояние здоровья животных не ухудшалось, о чем свидетельствует средний процент прироста массы тела, и мыши NPC(-/-) обоих полов, получавших AZ-3102, прибавляли в весе больше, чем животные NPC(-/-), не получавшие лечения (фиг. 11). AZ-3102 оказал высокое воздействие на мозг: см. показатели для плазмы (табл. 8). В соответствии с целевым воздействием AZ-3102, имело место увеличение количества видов GlcCer, измеренное в гомогенатах цельного мозга, по сравнению с животными, получавшими носитель: более чем в 2 раза для GlcCer 16:0 и приблизительно в 9 раз для GlcCer 18:0. Эти два вида GlcCer, вероятно, являются представителями других видов GlcCer, которые также будут реагировать на действие AZ-3102. Чтобы оценить, достигает ли AZ-3102 достаточных концентраций в мозге, чтобы воздействовать на более специфические признаки, характеризующие общее состояние здоровья и невропатологии, оценивали различные клинические признаки (табл. 9). Баллы, суммированные за весь период наблюдения, дают картину состояния здоровья в период PND 56-70. На фиг. 13 представлено графическое изображение результатов оценки состояния каждого животного в наблюдаемой когорте в течение времени. На этой фигуре видно, что у мышей NPC(-/-), получавших носитель, наблюдалось ухудшение общих клинических признаков (большие баллы) по сравнению с животными NPC(-/-), получавшими AZ-3102. Количественная оценка дополнительно иллюстрирует (фиг. 13: правая сторона), что более высокие баллы, например, более 8, чаще наблюдались
-
Claims (9)
- в группе мышей NPC(-/-), получавших носитель, по сравнению с группой мышей NPC(-/-), получавших AZ-3102. Исследуя эти показатели, авторы настоящего изобретения установили, что возникновение, продолжительность, а также интенсивность тремора также уменьшались при лечении AZ-3102 (Фиг. 14). Высокий уровень тремора наблюдался у всех животных NPC(-/-), получавших носитель, кроме одной мыши; тогда как AZ-3102 по существу устранил этот высокий уровень тремора у всех из 24 протестированных животных, кроме одной мыши. Применяя иммуногистологические методы с использованием кальбиндина-D28k, маркера для клеток Пуркинье, авторы настоящего изобретения установили, что обработка AZ-3102 по сравнению с мышами NPC(-/-), получавшими носитель, значительно ограничивала потерю клеток Пуркинье в мозжечке (фиг. 16). Это открытие имеет отношение к клинике болезни Ниманна-Пика типа С у человека, поскольку гибель нейронов и, в частности, клеток Пуркинье, а также церебральная атрофия являются отличительными признаками этого заболевания [4]. Поскольку функция мозжечка важна для движения, то улучшение клинических признаков и значительное снижение высокого уровня тремора являются, вероятно, результатом выживания клеток Пуркинье в мозжечке.Таким образом, AZ-3102, перорально доступный высокоэффективный ингибитор (на уровне нМ) GCS и GbA2, способен проникать в мозг животных NPC(-/-) и дикого типа. Кроме того, AZ-3102 ингибировал эти ферменты в головном мозге, что ясно следует из результатов модуляции видов GlcCer, улучшая клинические признаки, значительно снижая высокий уровень тремора и ограничивая потерю клеток Пуркинье в мозжечке, по сравнению с животными, получавшими носитель.1. Loftus, S.K., et al, Murine model of Niemann-Pick С disease: mutation in a cholesterol homeostasis gene. Science, 1997. 277(5323): p. 232-5.
- 2. Zervas, M., K. Dobrenis, and S.U. Walkley, Neurons in Niemann-Pick disease type С accumulate gangliosides as well as unesterified cholesterol and undergo dendritic and axonal alterations. J Neuropathol Exp Neurol, 2001. 60(1): p. 49-64.
- 3. Santiago-Mujica, E., et al., Hepatic and neuronal phenotype of NPC1-/- mice. Heliyon, 2019. 5(3).
- 4. Vanier, M.T., Niemann-Pick disease type С. Orphanet Journal of Rare Diseases, 2010. 5(1): p. 16.Пример 5. Эффект введения кристаллической формы соединения (I) мышам, страдающим болезнью Сандхоффа (нарушение гена Hexb у мышей [Hexb(-/-)] посредством мутаций).Мышам с болезнью Сандхоффа вводили терапевтически эффективное количество соединения AZ3102. Полученные первичные результаты показывают, что, как и в случае лечения болезни НиманнаПика типа С, клинические признаки у больных животных улучшились.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Кристаллическая форма соединения (I),где кристаллическая форма характеризуется отражением, выраженным как значение 2θ, при 17,8±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме, при этом отражение при 17,8±0,2° является одним из четырех наиболее сильных отражений на порошковой рентгеновской дифрактограмме.2. Кристаллическая форма по п.1, дополнительно характеризующаяся одним или более отражений, выраженных как значение 2θ, при одном или более углов из 4,1±0,2°, 8,3±0,2°, 12,4±0,2°, 13,6±0,2°, 14,5±0,2°, 14,9±0,2°, 15,2±0,2°, 17,2±0,2°, 19,3±0,2°, 21,2±0,2°, 22,4±0,2°, 22,9±0,2° и 23,3±0,2° на порошковой рентгеновской дифрактограмме.3. Кристаллическая форма по п.1 или 2:(а) имеющая температуру плавления от 89 до 96°С; и/или (b) кристаллическая форма практически негигроскопична.4. Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическую форму по любому из пп.1-3.
- 5. Фармацевтическая композиция по п.4, где фармацевтическая композиция содержится в капсуле.
- 6. Фармацевтическая композиция по п.5, где фармацевтическая композиция содержится в капсуле:(a) без каких-либо других ингредиентов; или (b) по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем.
- 7. Применение кристаллической формы по любому из пп.1-3 или фармацевтической композиции по любому из пп.4-6 в терапии.
- 8. Применение кристаллической формы по любому из пп.1-3 или фармацевтической композиции по любому из пп.4-6 в качестве лекарственного средства.
- 9. Применение кристаллической формы по любому из пп.1-3 или фармацевтической композиции по любому из пп.4-6 при лечении заболевания, связанного с аномальными уровнями глюкозилцерамида и/или повышенными уровнями гликосфинголипидов.-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP20199934.9 | 2020-10-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA045552B1 true EA045552B1 (ru) | 2023-12-05 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2020189873A (ja) | グルコシルセラミドシンターゼの阻害剤としての非晶質及び結晶型のｇｅｎｚ１１２６３８ヘミ酒石酸塩 | |
| AU2022291486A1 (en) | Crystalline forms of a pharmaceutical compound | |
| EA019819B1 (ru) | Кристаллическая полиморфная форма с ингибитора белка, активирующего 5-липоксигеназу, фармацевтическая композиция на ее основе и применение в лечении | |
| US20210198236A1 (en) | Crystals of cyclic amine derivative and pharmaceutical use thereof | |
| US9259403B2 (en) | Crystalline forms of (1S,2R)-2-(amino methyl)-N,N-diethyl-1-phenyl cyclopropane carboxamide | |
| US20110200687A1 (en) | Bifeprunox mesylate maintenance dose compositions and methods for using the same | |
| EA045552B1 (ru) | Кристаллические формы фармацевтического соединения | |
| NZ798892B2 (en) | Crystalline forms of a pharmaceutical compound | |
| US11891350B2 (en) | Compounds for use in the treatment or prophylaxis of pain, inflammation and/or autoimmunity | |
| KR20150120386A (ko) | 벤조티아졸론 화합물을 포함하는 제제 | |
| Lahiri et al. | Differential effects of two hexahydropyrroloindole carbamate-based anticholinesterase drugs on the amyloid beta protein pathway involved in Alzheimer disease | |
| US20240216352A1 (en) | Lpa1 antagonists for treating interstitial lung disease | |
| EP3906927B1 (en) | Use of dopamine d3 partial agonists for treating central nervous system disorders | |
| WO2023131720A1 (en) | Treatment of gm2 gangliosidosis | |
| WO2023057896A1 (en) | Modulators of the beta-3 adrenergic receptor useful for the treatment or prevention of disorders related thereto |