EA045371B1 - DOMINIKIA SP. STRAIN, COMPOSITIONS CONTAINING IT AND APPLICATION OPTIONS - Google Patents
DOMINIKIA SP. STRAIN, COMPOSITIONS CONTAINING IT AND APPLICATION OPTIONS Download PDFInfo
- Publication number
- EA045371B1 EA045371B1 EA202190525 EA045371B1 EA 045371 B1 EA045371 B1 EA 045371B1 EA 202190525 EA202190525 EA 202190525 EA 045371 B1 EA045371 B1 EA 045371B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- dominikia
- composition
- mycorrhizal
- soil
- strain
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 127
- 241001158850 Dominikia sp. Species 0.000 title claims description 65
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 83
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 52
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 52
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 48
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 46
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 37
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 35
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 23
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 21
- 241001609260 Dominikia Species 0.000 claims description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 14
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 12
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 10
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 6
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000005645 nematicide Substances 0.000 claims description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 38
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 29
- 238000011161 development Methods 0.000 description 28
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 28
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 24
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 22
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 21
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 19
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 19
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 19
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 19
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 18
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 18
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 15
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 15
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 15
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 14
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 14
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 14
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 13
- 229910021647 smectite Inorganic materials 0.000 description 13
- 241000894007 species Species 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 12
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 11
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 10
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 10
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 10
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 9
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 9
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 9
- 241000045080 Dominikia minuta Species 0.000 description 8
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 7
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 7
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 7
- 241000209082 Lolium Species 0.000 description 6
- 240000004296 Lolium perenne Species 0.000 description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 6
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241001583499 Glomeromycotina Species 0.000 description 5
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 5
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 5
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241001609258 Dominikia aurea Species 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 4
- 235000007264 Triticum durum Nutrition 0.000 description 4
- 241000209143 Triticum turgidum subsp. durum Species 0.000 description 4
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 4
- 235000021231 nutrient uptake Nutrition 0.000 description 4
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 4
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 4
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 4
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 241000773655 Ambispora fennica Species 0.000 description 3
- 241000045073 Dominikia indica Species 0.000 description 3
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 3
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 3
- -1 Metalaxil-Ridomil Chemical compound 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001354220 Rhizophagus iranicus Species 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 3
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 3
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N (+)-Abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\[C@@]1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N 0.000 description 2
- HZJKXKUJVSEEFU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)hexanenitrile Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C(CCCC)(C#N)CN1C=NC=N1 HZJKXKUJVSEEFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFNOUKDBUJZYDE-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)-3-cyclopropyl-1-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)butan-2-ol Chemical compound C1=NC=NN1CC(O)(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C(C)C1CC1 UFNOUKDBUJZYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005747 Chlorothalonil Substances 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005757 Cyproconazole Substances 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 241000045082 Dominikia iranica Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000005811 Myclobutanil Substances 0.000 description 2
- 235000011205 Ocimum Nutrition 0.000 description 2
- 241001529734 Ocimum Species 0.000 description 2
- 235000010120 Ocimum sp Nutrition 0.000 description 2
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N chlorothalonil Chemical compound ClC1=C(Cl)C(C#N)=C(Cl)C(C#N)=C1Cl CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000003926 complexometric titration Methods 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000005048 flame photometry Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 235000021073 macronutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 2
- 230000005541 medical transmission Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 2
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 238000013021 overheating Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- NHOWDZOIZKMVAI-UHFFFAOYSA-N (2-chlorophenyl)(4-chlorophenyl)pyrimidin-5-ylmethanol Chemical compound C=1N=CN=CC=1C(C=1C(=CC=CC=1)Cl)(O)C1=CC=C(Cl)C=C1 NHOWDZOIZKMVAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N (3ar,7as)-2-(trichloromethylsulfanyl)-3a,4,7,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@H]2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)[C@H]21 LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N 0.000 description 1
- 239000001707 (E,7R,11R)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-en-1-ol Substances 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- OFMRACCIIIDSDN-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-trichloro-3,5-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC(Cl)=C(Cl)C([N+]([O-])=O)=C1Cl OFMRACCIIIDSDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- MNHVNIJQQRJYDH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(1-chlorocyclopropyl)-3-(2-chlorophenyl)-2-hydroxypropyl]-1,2-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione Chemical compound N1=CNC(=S)N1CC(C1(Cl)CC1)(O)CC1=CC=CC=C1Cl MNHVNIJQQRJYDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMZRZEXRYJUHEB-UHFFFAOYSA-N 2-carbamothioylsulfanylethyl carbamodithioate;zinc Chemical compound [Zn].NC(=S)SCCSC(N)=S JMZRZEXRYJUHEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSCWZHGZWWDELK-UHFFFAOYSA-N 3-(3,5-dichlorophenyl)-5-ethenyl-5-methyl-2,4-oxazolidinedione Chemical compound O=C1C(C)(C=C)OC(=O)N1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 FSCWZHGZWWDELK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-[(4-methyl-2-nitrophenyl)diazenyl]-N-(3-nitrophenyl)naphthalene-2-carboxamide Chemical compound Cc1ccc(N=Nc2c(O)c(cc3ccccc23)C(=O)Nc2cccc(c2)[N+]([O-])=O)c(c1)[N+]([O-])=O MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000016626 Agrimonia eupatoria Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 239000005730 Azoxystrobin Substances 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000827797 Beauveria sp. Species 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589173 Bradyrhizobium Species 0.000 description 1
- 101100298222 Caenorhabditis elegans pot-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100298225 Caenorhabditis elegans pot-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005745 Captan Substances 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005746 Carboxin Substances 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000941525 Chromobacterium sp. Species 0.000 description 1
- 241000317178 Claroideoglomus etunicatum Species 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000045065 Dominikia achra Species 0.000 description 1
- 238000010159 Duncan test Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000235494 Endogonaceae Species 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005769 Etridiazole Substances 0.000 description 1
- IWDQPCIQCXRBQP-UHFFFAOYSA-M Fenaminosulf Chemical compound [Na+].CN(C)C1=CC=C(N=NS([O-])(=O)=O)C=C1 IWDQPCIQCXRBQP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005786 Flutolanil Substances 0.000 description 1
- 239000005789 Folpet Substances 0.000 description 1
- 241001123597 Funneliformis mosseae Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000235500 Gigaspora Species 0.000 description 1
- 241001508576 Glomerales Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000976924 Inca Species 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 239000005867 Iprodione Substances 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 235000019738 Limestone Nutrition 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 239000005802 Mancozeb Substances 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196323 Marchantiophyta Species 0.000 description 1
- 238000007476 Maximum Likelihood Methods 0.000 description 1
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 description 1
- 241000488289 Metarhizium sp. Species 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000887182 Paraphaeosphaeria minitans Species 0.000 description 1
- 241001668579 Pasteuria Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N Phytol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C=CO BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000005821 Propamocarb Substances 0.000 description 1
- 239000005825 Prothioconazole Substances 0.000 description 1
- 241000131360 Pythium oligandrum Species 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofarnesol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)=CCO HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005842 Thiophanate-methyl Substances 0.000 description 1
- 239000005843 Thiram Substances 0.000 description 1
- 241000592342 Tracheophyta Species 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 240000000359 Triticum dicoccon Species 0.000 description 1
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 1
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 1
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N all-rac-phytol Natural products CC(C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)=CCO BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N 0.000 description 1
- 239000011717 all-trans-retinol Substances 0.000 description 1
- 235000019169 all-trans-retinol Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 229960000892 attapulgite Drugs 0.000 description 1
- WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N azoxystrobin Chemical compound CO\C=C(\C(=O)OC)C1=CC=CC=C1OC1=CC(OC=2C(=CC=CC=2)C#N)=NC=N1 WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- OIPMQULDKWSNGX-UHFFFAOYSA-N bis[[ethoxy(oxo)phosphaniumyl]oxy]alumanyloxy-ethoxy-oxophosphanium Chemical compound [Al+3].CCO[P+]([O-])=O.CCO[P+]([O-])=O.CCO[P+]([O-])=O OIPMQULDKWSNGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001647 brassinosteroids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940117949 captan Drugs 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- GYSSRZJIHXQEHQ-UHFFFAOYSA-N carboxin Chemical compound S1CCOC(C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 GYSSRZJIHXQEHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011247 coating layer Substances 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N desoxyabscisic acid Natural products OC(=O)C=C(C)C=CC1C(C)=CC(=O)CC1(C)C FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000008641 drought stress Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- KQTVWCSONPJJPE-UHFFFAOYSA-N etridiazole Chemical compound CCOC1=NC(C(Cl)(Cl)Cl)=NS1 KQTVWCSONPJJPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N flutolanil Chemical compound CC(C)OC1=CC=CC(NC(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(F)(F)F)=C1 PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKIOYBQGHSTUDB-UHFFFAOYSA-N folpet Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)C2=C1 HKIOYBQGHSTUDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000001295 genetical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 229910021473 hassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N iprodione Chemical compound O=C1N(C(=O)NC(C)C)CC(=O)N1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003621 irrigation water Substances 0.000 description 1
- 239000006028 limestone Substances 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000003050 macronutrient Effects 0.000 description 1
- YKSNLCVSTHTHJA-UHFFFAOYSA-L maneb Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S YKSNLCVSTHTHJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000940 maneb Polymers 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052625 palygorskite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024241 parasitism Effects 0.000 description 1
- LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N pentachloronitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 229930195732 phytohormone Natural products 0.000 description 1
- BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N phytol Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCC\C(C)=C\CO BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N 0.000 description 1
- 230000001863 plant nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 235000020004 porter Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- WZZLDXDUQPOXNW-UHFFFAOYSA-N propamocarb Chemical compound CCCOC(=O)NCCCN(C)C WZZLDXDUQPOXNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000035040 seed growth Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- JBQYATWDVHIOAR-UHFFFAOYSA-N tellanylidenegermanium Chemical compound [Te]=[Ge] JBQYATWDVHIOAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N thiophanate-methyl Chemical compound COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N thiram Chemical compound CN(C)C(=S)SSC(=S)N(C)C KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002447 thiram Drugs 0.000 description 1
- 238000003971 tillage Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- RROQIUMZODEXOR-UHFFFAOYSA-N triforine Chemical compound O=CNC(C(Cl)(Cl)Cl)N1CCN(C(NC=O)C(Cl)(Cl)Cl)CC1 RROQIUMZODEXOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009966 trimming Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
- 235000014692 zinc oxide Nutrition 0.000 description 1
Description
Область, к которой относится изобретениеField to which the invention relates
Настоящее изобретение относится к агрономической сфере. В частности, оно касается штаммаThe present invention relates to the agronomic field. In particular, it concerns the strain
Dominikia sp, композиций, содержащих его, и применения этих композиций в качестве биостимулятора и бионематоцида. Было обнаружено, что композиции, содержащие штамм Dominikia sp., особенно полезны для зерновых культур.Dominikia sp, compositions containing it, and the use of these compositions as a biostimulant and bionematicide. Compositions containing the Dominikia sp. strain have been found to be particularly beneficial for cereal crops.
Уровень техникиState of the art
В настоящее время в классе Glomeromycota описано около 300 видов из 30 родов. Тем не менее исследования биоразнообразия на основе нуклеиновой кислоты (ДНК, РНК) указывают на гораздо более высокое разнообразие в Glomeromycota и недавно были описаны несколько новых видов и родов.Currently, about 300 species from 30 genera are described in the class Glomeromycota. However, nucleic acid (DNA, RNA)-based biodiversity studies indicate much higher diversity in the Glomeromycota and several new species and genera have recently been described.
Большинство Glomeromycota являются арбускулярными микоризными грибами (АМГ), которые являются мутуалистическими симбионтами примерно 80% всех сосудистых растений. Поглощение питательных веществ (нутриентов) растениями, колонизируемыми АМГ, происходит непосредственно через эпидермис корней и корневые волоски, а также через взаимодействие гриб-корень, которое имеет характерную форму арбускул или интрарадикальных клубков гиф. Помимо их роли в повышении поглощения нутриентов хозяином, АМГ играют важную роль в агрегации почвы и защите растений от стресса, вызываемого засухой, и почвенных патогенов. Из-за этой чрезвычайно полезной особенности в технике известны несколько микоризных композиций, которые были разработаны, чтобы обеспечить благотворное воздействие на сельскохозяйственные культуры, которыми их обрабатывают.Most Glomeromycota are arbuscular mycorrhizal fungi (AMFs), which are mutualistic symbionts of approximately 80% of all vascular plants. Nutrient uptake by plants colonized by AMF occurs directly through the root epidermis and root hairs, as well as through fungal-root interactions, which have the characteristic form of arbuscules or intraradical hyphal tangles. In addition to their role in enhancing host nutrient uptake, AMF play an important role in soil aggregation and plant protection from drought stress and soil pathogens. Because of this extremely beneficial feature, several mycorrhizal compositions are known in the art that have been developed to provide beneficial effects on the crops with which they are treated.
В WO 2015/000612 и WO 2015/000613 раскрыты композиции, содержащие штамм Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. и их применение.WO 2015/000612 and WO 2015/000613 disclose compositions containing the strain Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. and their application.
В частности, в WO 2015/000612 раскрыта композиция, содержащая штамм Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. и смектитовые глины в соотношении 2:1. Раскрыто, что композиция WO 2015/000612 оказывает положительное влияние на урожайность сельскохозяйственных культур, т.е. композиция может применяться в качестве биостимулятора культур салата.In particular, WO 2015/000612 discloses a composition containing the strain Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. and smectite clays in a ratio of 2:1. It has been revealed that the composition WO 2015/000612 has a positive effect on crop yields, i.e. the composition can be used as a biostimulator for lettuce crops.
Аналогичным образом в WO 2015/000613 раскрыта композиция, содержащая штамм Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. и смектитовые глины в соотношении 2:1, ионы металлов и хитин. В WO 2015/000613 раскрыто, что эта композиция действует как бионематоцид для культур томатов.Similarly, WO 2015/000613 discloses a composition containing the strain Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. and smectite clays in a ratio of 2:1, metal ions and chitin. WO 2015/000613 discloses that this composition acts as a bionematicide for tomato crops.
Однако ранее раскрытые композиции не обеспечивают приемлемого положительного воздействия на зерновые культуры как в качестве биостимуляторов, так и в отношении бионематоцидного эффекта.However, the previously disclosed compositions do not provide an acceptable positive effect on crops, both as biostimulants and in terms of bionematicidal effect.
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
Таким образом, целью настоящего изобретения является обеспечение штамма гриба, который подходит для включения в композиции, а именно композиции, подходящие для обеспечения положительного воздействия на сельскохозяйственные культуры, в частности на зерновые культуры.It is therefore an object of the present invention to provide a strain of fungus that is suitable for inclusion in compositions, namely compositions suitable for providing a beneficial effect on agricultural crops, in particular cereal crops.
Другой целью изобретения является обеспечение композиции, которая эффективна в качестве биостимулятора для зерновых культур.Another object of the invention is to provide a composition that is effective as a biostimulant for cereal crops.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение композиции, которая эффективна в качестве бионематоцида для зерновых культур.Another object of the present invention is to provide a composition that is effective as a bionematicide for cereal crops.
Другая цель настоящего изобретения - предложить способ получения композиций.Another object of the present invention is to provide a method for preparing compositions.
Подробное описаниеDetailed description
Таким образом, объектом настоящего изобретения является штамм Glomeromycota, a именно штамм Dominikia sp., депонированный под регистрационным номером MUCL 57072. Штамм согласно изобретению был выделен из очень гидроморфного, сильно уплотненного натрий-засоленного типа почв (солонцовый глей) с большим количеством отложений соли на поверхности, в области Фортуна, Мурсия (Испания).Thus, the object of the present invention is a strain of Glomeromycota, namely a strain of Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072. The strain according to the invention was isolated from a very hydromorphic, highly compacted sodium-saline type of soil (solonetz gley) with a large amount of salt deposits on surface, in the region of Fortuna, Murcia (Spain).
Штамм Dominikia sp. согласно изобретению депонирован 21.032018 в Международный депозитарный орган Бельгийские скоординированные коллекции микроорганизмов (ВССМ), Католический университет Лувена, Mycothequeque de l'Universite catholique de Louvain (MUCL), Croix du Sud 2, box L7.05,06, 1348 Louvain-la-Neuve, Belgium, by Symborg S.L., по адресу Campus de Espinardo, 7, edificio CEEIM, 30100 Murcia, Spain.Strain Dominikia sp. according to the invention, deposited on 03/21/2018 in the International Depository Body Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM), Catholic University of Louvain, Mycothequeque de l'Universite catholique de Louvain (MUCL), Croix du Sud 2, box L7.05,06, 1348 Louvain-la-Neuve , Belgium, by Symborg S.L., at Campus de Espinardo, 7, edificio CEEIM, 30100 Murcia, Spain.
Штамму Dominikia sp. согласно изобретению депозитором был присвоен идентифицирующий референс SMB01, а международным депозитарием был присвоен депозитный номер MUCL 57072.The strain Dominikia sp. according to the invention, the depositor was assigned the identifying reference SMB01, and the international depository was assigned the deposit number MUCL 57072.
Спорокарпы штамма изобретения неизвестны. У штамма изобретения споры в почве встречаются рыхлыми скоплениями и могут быть терминальными или интеркалярными; споры могут также образовываться в корнях. Споры от прозрачных до светло-охряных, от округлого до шаровидного строения (редко неправильные), относительно маленькие, т.е. от 24,0 до 42 мкм в диаметре, в среднем 30,7±3,7 мкм в диаметре. Споры имеют сложную трехслойную споровую стенку (толщиной 1-4 мкм). В частности, можно распознать внешний слой, средний слой и внутренний слой.The sporocarps of the strain of the invention are unknown. In the strain of the invention, spores in the soil occur in loose clusters and can be terminal or intercalary; spores may also form in the roots. The spores are transparent to light ocher, round to spherical in structure (rarely irregular), relatively small, i.e. from 24.0 to 42 µm in diameter, with an average of 30.7 ± 3.7 µm in diameter. The spores have a complex three-layer spore wall (1-4 µm thick). In particular, an outer layer, a middle layer and an inner layer can be recognized.
Внешний слой стенки споры довольно слизистый и недолговечный; это придает молодым спорам шероховатый внешний вид, в то время как более старые споры кажутся немного лохматыми. Внешний слой стенки споры при окрашивании реагентом Мельцера демонстрирует декстриноидную реакцию, придавая молодым спорам коричнево-красный цвет. Средний слой стенки споры довольно постоянный и имеет толщину 0,5-2,0 мкм.The outer layer of the spore wall is quite slimy and short-lived; this gives young spores a rough appearance, while older spores appear a little shaggy. The outer layer of the spore wall exhibits a dextrinoid reaction when stained with Meltzer's reagent, giving young spores a brownish-red color. The middle layer of the spore wall is quite constant and has a thickness of 0.5-2.0 microns.
- 1 045371- 1 045371
Внутренний слой стенки споры по существу ламинарный, толщиной 0,5-1,5 мкм. Содержимое спор имеет бледный, пятнистый вид. Гифы, удерживающие споры, от прозрачных до бледно-охряного цвета, прямые или волнистые, диаметром 2,5-4,5 мкм (в среднем 3,0 мкм). Гифа имеет цилиндрическую или слегка воронкообразную форму, которая соединяется с открыто-пористыми слоями стенки споры, по меньшей мере в зрелых спорах. Прорастающая структура содержит ростовую трубку, которая растет и развивается через место прикрепления гифы к споре. Она образует везикулярную арбускулярную микоризу.The inner layer of the spore wall is essentially laminar, 0.5-1.5 µm thick. The contents of the spores have a pale, spotted appearance. The hyphae holding the spores are transparent to pale ocher in color, straight or wavy, with a diameter of 2.5-4.5 µm (average 3.0 µm). The hypha is cylindrical or slightly funnel-shaped, which is connected to the open-porous layers of the spore wall, at least in mature spores. The germinating structure contains a growth tube that grows and develops through the attachment of the hypha to the spore. It forms vesicular arbuscular mycorrhiza.
Экстрарадикальный мицелий образует обширную сеть.Extraradical mycelium forms an extensive network.
Заявитель был произведен филогенетический анализ последовательностей 134 18S рДНК, включая последовательности образцов из окружающей среды и референсных последовательностей. Для большинства видов Dominikia не было доступно совсем или были доступны относительно короткие частичные последовательности 18S. Последовательности Dominikia indica и D. iranica могут быть включены в этот филогенетический анализ. Последовательности этих двух видов были короче, чем остальные последовательности в наборе данных. Обрезка набора данных до длины этих последовательностей привела к довольно неполно разрешенным деревьям. Использование последовательности полной длины сделало возможным получение деревьев с ветвями, представляющими более высокие таксономические уровни. Однако с этим набором данных не удалось создать надежную монофилетическую кладу, состоящую из последовательностей Dominikia spp. Dominikia sp. образует одну, хорошо подкрепленную кладу вместе с Dominikia iranica и анонимными последовательностями Glomerales из окружающей среды, из различных растений хозяев из различных мест.The applicant has performed phylogenetic analysis of 134 18S rDNA sequences, including sequences from environmental samples and reference sequences. For most Dominikia species, no or relatively short partial 18S sequences were available. Sequences of Dominikia indica and D. iranica can be included in this phylogenetic analysis. The sequences of these two species were shorter than the rest of the sequences in the data set. Trimming the dataset to the length of these sequences resulted in rather incompletely resolved trees. The use of full-length sequences made it possible to obtain trees with branches representing higher taxonomic levels. However, with this data set it was not possible to construct a robust monophyletic clade consisting of sequences from Dominikia spp. Dominicia sp. forms a single, well-supported clade together with Dominikia iranica and anonymous Glomerales sequences from the environment, from a variety of host plants from various locations.
Филогенетический анализ набора данных SSU-ITS1, включающего последовательности большинства описанных видов Dominikia, указывает на то, что ветвь Dominikia sp. близка к D. aurea.Phylogenetic analysis of the SSU-ITS1 dataset, which includes sequences from most described Dominikia species, indicates that the clade Dominikia sp. close to D. aurea.
Для рода Dominikia характерны небольшие споры (до 65-70 мкм в диаметре), обычно агрегированные в рыхлые или компактные кластеры. Стенка спор представителей рода Dominikia состоит из двух или трех слоев. Внешний слой, образующий поверхность спор, является слизистым, недолговечным, окрашивается реагентом Мельцера или является цельным (не разделенным на подслои), постоянным и не реагирует с реагентом Мельцера. Гифы, удерживающие споры, цилиндрические или воронкообразные с порой, которая может быть открыта или перегорожена перегородкой. Dominikia minuta (Basidionym: Glomus minutum) была выбрана как типовой вид. Штамм согласно изобретению, т.е. Dominikia sp. имеет прозрачные споры примерно такого же размера, как у Dominikia minuta, но в отличие от Dominikia sp. пора G. minutum (т.е. Dominikia minuta) перекрывается перегородкой. D. sp. также отличается от Dominikia minuta трехслойной стенкой споры в отличие от двухслойной стенки споры у D. minuta, а также наличием декстриноидной реакции, которая отсутствует у Dominikia minuta.The genus Dominikia is characterized by small spores (up to 65-70 µm in diameter), usually aggregated into loose or compact clusters. The spore wall of representatives of the genus Dominikia consists of two or three layers. The outer layer forming the surface of the spores is slimy, short-lived, stains with Meltzer's reagent or is solid (not divided into sublayers), permanent, and does not react with Meltzer's reagent. The hyphae that hold the spores are cylindrical or funnel-shaped with a pore that may be open or blocked by a septum. Dominikia minuta (Basidionym: Glomus minutum) was selected as the type species. The strain according to the invention, i.e. Dominicia sp. has transparent spores about the same size as Dominikia minuta, but unlike Dominikia sp. the pore of G. minutum (i.e. Dominikia minuta) is blocked by a septum. D. sp. also differs from Dominikia minuta in having a three-layer spore wall, as opposed to the two-layer spore wall of D. minuta, as well as in the presence of a dextrinoid reaction, which is absent in Dominikia minuta.
Dominikia sp. также отличается от других описанных видов и штаммов Dominikia. Внешний и внутренний слой спор Dominikia achra окрашиваются в глубоко красный в реагенте Мельцера, в то время как у Dominikia sp. только внешний слой демонстрирует декстриноидную реакцию. Dominikia indica отличается от Dominikia sp. образованием небольших прозрачных спор в гипогеозных агрегатах. Стенка спор D. Indica состоит из двух гиалиновых слоев: тонкого, короткоживущего слизистого внешнего слоя, окрашиваемого в реагенте Мельцера в розоватый или розовый цвет, и ламинарного, гладкого, постоянного внутреннего слоя, более толстого по сравнению с тремя слоями в Dominikia sp.Dominicia sp. also differs from other described Dominikia species and strains. The outer and inner layers of Dominikia achra spores stain deep red in Meltzer's reagent, while Dominikia sp. only the outer layer exhibits a dextrinoid reaction. Dominikia indica is different from Dominikia sp. the formation of small transparent spores in hypogeous aggregates. The spore wall of D. indica consists of two hyaline layers: a thin, short-lived mucoid outer layer, stained pinkish or pink in Melzer's reagent, and a laminar, smooth, permanent inner layer, thicker than the three layers in Dominikia sp.
Основываясь на филогенетике 18S-ITS1, Dominikia aurea является ближайшим родственником штамма Dominikia sp. Согласно изобретению два вида различаются по многим морфологическим характеристикам (см. табл. 1), наиболее очевидное различие заключается в преимущественно яйцевидных спорах Dominikia aurea, которые аггрегированы в неправильные спорокарпы.Based on 18S-ITS1 phylogeny, Dominikia aurea is the closest relative of the Dominikia sp. According to the invention, the two species differ in many morphological characteristics (see Table 1), the most obvious difference being the predominantly ovoid spores of Dominikia aurea, which are aggregated into irregular sporocarps.
Таблица 1Table 1
- 2 045371- 2 045371
Много последовательностей с высокой степенью близости на последовательности изобретения Dominikia sp. может быть обнаружено с использованием поиска BLAST по банку генов (е-значение 0,00, идентичность 99%). Эти последовательности происходят из широкого круга различных хозяев (например, печеночники, однодольные) из разных стран и континентов, что свидетельствует об их всемирном распространении. Эти результаты показывают, что Dominikia sp. широко распространен.Many sequences with high similarity to the invention sequence of Dominikia sp. can be discovered using a BLAST search against the gene bank (e-value 0.00, 99% identity). These sequences originate from a wide range of different hosts (e.g., liverworts, monocots) from different countries and continents, indicating their worldwide distribution. These results indicate that Dominikia sp. widely spread.
Как упоминалось выше, было обнаружено, что особенно полезно включать Dominikia sp. в композиции, в частности в композиции, применяемые для зерновых культур.As mentioned above, it has been found to be particularly useful to include Dominikia sp. in compositions, in particular in compositions used for cereals.
Как упоминалось выше, другим объектом изобретения является композиция, содержащая Dominikia sp., депонированный 21/03/2018 под регистрационным номером MUCL 57072.As mentioned above, another object of the invention is a composition containing Dominikia sp., deposited on 03/21/2018 under registration number MUCL 57072.
Без привязки к конкретному научному объяснению было неожиданно обнаружено, что Dominikia sp. и композиция, содержащая его, особенно эффективны в обеспечении благотворного воздействия на сельскохозяйственные культуры, в частности на зерновые культуры.Without being tied to a specific scientific explanation, it was unexpectedly discovered that Dominikia sp. and a composition containing it are particularly effective in providing beneficial effects on agricultural crops, in particular cereal crops.
В частности, было обнаружено, что применение композиции, содержащей Dominikia sp., для зерновой культуры (например, кукурузы, пшеницы, ячменя или риса), позволяет получить увеличение поглощения нутриентов и повышение урожайности зерновых культур по сравнению с культурами, которые не были обработаны Dominikia sp.In particular, it has been found that application of a composition containing Dominikia sp. to a cereal crop (eg corn, wheat, barley or rice) results in increased nutrient uptake and yield of the cereal crop compared to crops that have not been treated with Dominikia sp.
Предпочтительно, чтобы концентрация Dominikia sp. в композиции была от 4,0 до 1,0% по весу, предпочтительно от 3,0 до 2,0% по весу, еще более предпочтительно от 2,5 до 2,3% по весу.It is preferable that the concentration of Dominikia sp. in the composition was from 4.0 to 1.0% by weight, preferably from 3.0 to 2.0% by weight, even more preferably from 2.5 to 2.3% by weight.
В соответствии с вариантами осуществления композиция по изобретению представляет собой жидкую, твердую или гелевую композицию.In accordance with embodiments, the composition of the invention is a liquid, solid or gel composition.
Предпочтительно композиция согласно изобретению является твердой композицией.Preferably, the composition according to the invention is a solid composition.
В соответствии с вариантами осуществления композиция по изобретению может быть в форме порошка, эмульгируемого концентрата, гранул или микрогранул.In accordance with embodiments, the composition of the invention may be in the form of a powder, an emulsifiable concentrate, granules or microgranules.
Композиция по изобретению является твердой, и концентрация пропагул Dominikia sp. в композиции измеряется в соответствии с методом наиболее вероятного числа (Porter, Aust. J. Soil Res., 1979, 17, 515-19) от 180 до 120 пропагул на грамм композиции, предпочтительно от 150 до 120 пропагул на грамм композиции, еще более предпочтительно от 125 до 120 пропагул на грамм композиции.The composition according to the invention is solid, and the concentration of propagules of Dominikia sp. in the composition is measured according to the most probable number method (Porter, Aust. J. Soil Res., 1979, 17, 515-19) from 180 to 120 propagules per gram of composition, preferably from 150 to 120 propagules per gram of composition, even more preferably 125 to 120 propagules per gram of composition.
- 3 045371- 3 045371
Концентрация пропагул означает концентрацию пропагул в конечном продукте.Propagule concentration refers to the concentration of propagules in the final product.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления композиция по изобретению выполнена в виде микрогранул.According to a preferred embodiment, the composition of the invention is in the form of microgranules.
В соответствии с вариантами осуществления указанные микрогранулы имеют размер отIn accordance with embodiments, said microgranules have a size between
500 до 2000 мкм, предпочтительно от 800 до 1500 мкм, еще более предпочтительно от 900 до 1200 мкм.500 to 2000 µm, preferably 800 to 1500 µm, even more preferably 900 to 1200 µm.
Полезно, что концентрация Dominikia sp. в композиции по изобретению, а также форма, в которой представлена композиции, например микрогранулы, могут быть выбраны в соответствии с предопределенным конечным применением.Helpfully, the concentration of Dominikia sp. in the composition of the invention, as well as the form in which the composition is presented, for example microgranules, can be selected in accordance with the predetermined end use.
В соответствии с вариантами осуществления композиция по изобретению дополнительно содержит по меньшей мере один фунгицид, и/или по меньшей мере один биофунгицид, и/или по меньшей мере один инсектицид, и/или по меньшей мере один биоинсектицид, и/или по крайней мере один нематоцид, и/или по меньшей мере один биостимулятор.In accordance with embodiments, the composition of the invention further comprises at least one fungicide, and/or at least one biofungicide, and/or at least one insecticide, and/or at least one bioinsecticide, and/or at least one nematicide, and/or at least one biostimulant.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления композиция по изобретению выполнена в форме для покрытия для семян.According to a preferred embodiment, the composition of the invention is formulated as a seed coating.
Например, указанный фунгицид выбран из группы, состоящей из Манеба, Манкоцеба, Металаксила-Ридомила, Миклобутанила, Ольпизана, Пропамокарба, Квинтозена, Стрептомицина, Сульфура, Тиофанат-метила, Тирама, Трифорина, Винклозолина, Цинковых белил, Цинеба, Цирама, Бенорада, связанной меди, Хлороталонила, Каптана, Хлоронеба, Ципроконазола, Цинка этилена бисдитиокарбамата, этридиазола, фенаминосулфа, фенаримола, флутоланила, фолпета, фосэтил-AL и Ипродиона.For example, said fungicide is selected from the group consisting of Maneb, Mancozeb, Metalaxil-Ridomil, Myclobutanil, Olpizan, Propamocarb, Quintozen, Streptomycin, Sulfur, Thiophanate-methyl, Thiram, Triforin, Vinclozolin, Zinc white, Zineb, Cyram, Benorad, associated copper, Chlorothalonil, Captan, Chloroneba, Cyproconazole, Zinc ethylene bisdithiocarbamate, etridiazole, fenaminosulf, fenarimol, flutolanil, folpet, fosetyl-AL and Iprodione.
Примерами биофунгицидов являются: Trichodermas sp, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus amyloliquefaciens, Streptomyces sp, Coniothyrium minitans и Pythium oligandrum.Examples of biofungicides are: Trichodermas sp, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus amyloliquefaciens, Streptomyces sp, Coniothyrium minitans and Pythium oligandrum.
В соответствии с вариантами осуществления инсектицид выбирают из группы, состоящей из органофосфатов, карбаматов и неоникотиноидов.In accordance with embodiments, the insecticide is selected from the group consisting of organophosphates, carbamates, and neonicotinoids.
В соответствии с вариантами осуществления указанный биоинсектицид выбирают из группы, состоящей из Bacillus sp., Chromobacterium sp., Beauveria sp. и Metarhizium sp.In accordance with embodiments, said bioinsecticide is selected from the group consisting of Bacillus sp., Chromobacterium sp., Beauveria sp. and Metarhizium sp.
В соответствии с вариантами осуществления указанный нематоцид является органофосфатом или карбаматом.In accordance with embodiments, said nematicide is an organophosphate or carbamate.
В соответствии с вариантами осуществления указанный бионематоцид представляет собой Pasteuria sp.In accordance with embodiments, said bionematicide is Pasteuria sp.
Другим объектом настоящего изобретения является способ получения композиции, содержащей штамм изобретения Dominikia sp.Another object of the present invention is a method for producing a composition containing a strain of the invention, Dominikia sp.
Способ согласно изобретению композиции включает следующие этапы:The method according to the composition invention includes the following steps:
a) обеспечение субстрата;a) providing a substrate;
b) введение в указанный субстрат семян растения-хозяина и штамма Dominikia sp., депонированного под регистрационным номером MUCL 57072;b) introducing into the specified substrate the seeds of the host plant and the Dominikia sp. strain deposited under registration number MUCL 57072;
c) культивирование указанного растения-хозяина и полив для поддержания уровня влажности указанного субстрата не менее 75% от естественной влагоемкости;c) cultivating the specified host plant and watering to maintain the moisture level of the specified substrate at least 75% of the natural moisture capacity;
d) прекращение полива на срок не менее 7 дней;d) cessation of watering for a period of at least 7 days;
e) удаление надземной части растения-хозяина и субстрата;e) removal of the aboveground part of the host plant and substrate;
f) сушка удаленного субстрата;f) drying the removed substrate;
g) измельчение высушенного субстрата с получением гранул с размером частиц менее 100 мкм.g) grinding the dried substrate to obtain granules with a particle size of less than 100 microns.
Предпочтительно, чтобы субстрат содержал глину.Preferably, the substrate contains clay.
В соответствии с вариантами осуществления Dominikia sp. вводимый на этапе b), представляет собой инокулят, содержащий пропагулы Dominikia sp. В предпочтительном варианте указанный инокулят получают путем обеспечения в корневой системе растения-хозяина практически чистого Dominikia sp, культивирования указанного растения-хозяина на субстрате, предпочтительно содержащем глину (предпочтительно стерильную смектитовую глину), предпочтительно на протяжении жизненного цикла и затем извлечения корневой системы с получением инокулята. В этом случае инокулят содержит некоторое количество субстрата, корешков и пропагул Dominikia sp.In accordance with embodiments of Dominikia sp. introduced in step b) is an inoculum containing propagules of Dominikia sp. In a preferred embodiment, said inoculum is obtained by providing substantially pure Dominikia sp to the root system of a host plant, cultivating said host plant on a substrate preferably containing clay (preferably sterile smectite clay), preferably throughout its life cycle, and then extracting the root system to obtain the inoculum . In this case, the inoculum contains a certain amount of substrate, roots and propagules of Dominikia sp.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления способ согласно изобретению дополнительно включает этап микрогрануляции h1).According to a preferred embodiment, the method according to the invention further comprises a microgranulation step h1).
Предпочтительно в результате грануляции получают композицию, содержащую штамм Dominikia sp согласно изобретению, в форме микрогранул.Preferably, as a result of granulation, a composition containing the Dominikia sp strain according to the invention is obtained in the form of microgranules.
Как упоминалось выше, указанные микрогранулы имеют размер от 500 до 2000 мкм, предпочтительно от 800 до 1500 мкм, еще более предпочтительно от 900 до 1200 мкм.As mentioned above, said microgranules have a size of from 500 to 2000 μm, preferably from 800 to 1500 μm, even more preferably from 900 to 1200 μm.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления способ согласно изобретению дополнительно включает этап h2) приготовления концентрированного биологического инокулята для покрытия семян зерновых культур, а именно концентрированного биологического инокулята для покрытия семян зерновых культур из измельченного продукта, полученного в соответствии с этапом g). Следует отметить, что в этом контексте этап h2) концентрирования биологического инокулята для покрытия семян зерновых культур означает этап, на котором повышают концентрацию Dominikia sp. (например, пропагул Dominikia sp.) в композиции.According to a preferred embodiment, the method according to the invention further comprises step h2) of preparing a concentrated biological inoculum for cereal seed coating, namely a concentrated biological inoculum for coating cereal seeds from the ground product obtained in accordance with step g). It should be noted that in this context, step h2) of concentrating the biological inoculum for coating cereal seeds means the step in which the concentration of Dominikia sp. is increased. (e.g. propagule Dominikia sp.) in the composition.
Например, указанный этап концентрирования h2) можно осуществлять путем просеивания измель- 4 045371 ченного продукта, полученного в соответствии с этапом g), для отделения гранул, имеющих размер частиц выше заданного значения, например выше 35 мкм.For example, said concentration step h2) can be carried out by sieving the ground product obtained in accordance with step g) to separate granules having a particle size above a predetermined value, for example above 35 μm.
Полезно, что этап концентрирования h2) позволяет увеличить концентрацию Dominikia sp. (например, пропагул Dominikia sp.) до 10-кратной начальной концентрации, предпочтительно до 50-кратной начальной концентрации (т.е. концентрации Dominikia sp. в продукте перед этапом h2.), еще более предпочтительно до 100-кратной начальной концентрации, т.е. в 100 раз относительно концентрации композиции перед этапом h2).It is useful that the concentration step h2) allows you to increase the concentration of Dominikia sp. (e.g. Dominikia sp. propagules) up to 10 times the initial concentration, preferably up to 50 times the initial concentration (i.e. the concentration of Dominikia sp. in the product before step h2.), even more preferably up to 100 times the initial concentration, i.e. .e. 100 times relative to the concentration of the composition before step h2).
В соответствии с вариантами осуществления возможно увеличение концентрации Dominikia sp. (например, пропагул Dominikia sp.) более чем в 100 раз относительно исходной концентрации (т.е. концентрации Dominikia sp. в продукте до этапа h2).In accordance with embodiments, it is possible to increase the concentration of Dominikia sp. (e.g. propagule Dominikia sp.) more than 100 times the initial concentration (i.e. the concentration of Dominikia sp. in the product before step h2).
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления способ согласно изобретению дополнительно включает этап покрытия семян i), а именно покрытия семян концентрированным продуктом, полученным в соответствии с этапом h2).According to a preferred embodiment, the method according to the invention further comprises the step of coating the seeds i), namely coating the seeds with the concentrated product obtained in accordance with step h2).
Указанный этап покрытия семян i) включает следующие этапы:Said seed coating step i) includes the following steps:
i1) покрытие семян адгезивным веществом;i1) coating the seeds with an adhesive substance;
i2) добавление указанного концентрированного биологического инокулята;i2) adding said concentrated biological inoculum;
i3) опциональное проведение одной или более совместимых обработок:i3) optionally carrying out one or more compatible treatments:
i3.1) обработка фунгицидами, инсектицидами и/или гербицидами, совместимыми с грибами, образующими микоризу;i3.1) treatment with fungicides, insecticides and/or herbicides compatible with mycorrhizal fungi;
i3.2) обработка полезными микроорганизмами, i3.3) обработка макро- и/или микронутриентами, i3.4) обработка стимуляторами, i3.5) обработка красящими пигментами, совместимыми с микоризными грибами;i3.2) treatment with beneficial microorganisms, i3.3) treatment with macro- and/or micronutrients, i3.4) treatment with stimulants, i3.5) treatment with coloring pigments compatible with mycorrhizal fungi;
i4) сушка семян.i4) drying seeds.
Другим объектом настоящего изобретения является применение композиции, содержащей Dominikia sp., депонированный под регистрационным номером MUCL 57072, в качестве биостимулятора.Another object of the present invention is the use of a composition containing Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072, as a biostimulant.
Используемый здесь термин биостимуляция относится к стимуляции, которую композиция согласно настоящему изобретению оказывает на растения, которое обрабатывают указанной композицией.As used herein, the term biostimulation refers to the stimulation that the composition of the present invention provides to plants that are treated with said composition.
Без привязки к конкретному научному объяснению можно предположить, что штамм изобретения Dominikia sp. выполняет функцию перемещения нутриентов, забирая их из почвы или субстрата и используя в своей метаболической системе. Он перемещает указанные нутриенты из сети своего мицелия и впоследствии обменивает их в клетках корня.Without reference to a specific scientific explanation, it can be assumed that the invention strain Dominikia sp. performs the function of moving nutrients, taking them from the soil or substrate and using them in its metabolic system. It moves said nutrients from the network of its mycelium and subsequently exchanges them in the root cells.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления композицию по настоящему изобретению применяют в качестве биостимулятора для зерновых культур.According to a preferred embodiment, the composition of the present invention is used as a biostimulant for cereal crops.
Другим объектом настоящего изобретения является применение композиции, содержащей Dominikia sp., депонированный под регистрационным номером MUCL 57072, в качестве бионематоцида.Another object of the present invention is the use of a composition containing Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072, as a bionematicide.
Другими словами, композицию по настоящему изобретению можно применять для защиты растений от нематод.In other words, the composition of the present invention can be used to protect plants from nematodes.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления композицию согласно настоящему изобретению применяют в качестве бионематоцидного средства для зерновых культур.According to a preferred embodiment, the composition of the present invention is used as a bionematicide for cereal crops.
Полезно, что композиция по композицией можно обрабатывать растения, т.е. культуру, например зерновую культуру, несколькими способами.It is useful that the composition can be treated with the composition of plants, i.e. crop, such as a grain crop, in several ways.
В соответствии с вариантами осуществления композицией по настоящему изобретению можно обрабатывать растение путем обработки семян (т.е. покрытия семян), обработки корней, погружения корней в эмульсию, добавления в воду для ирригации, путем ирригации, нанесения порошка на корневую систему или применения путем впрыскивания эмульсии в корневую систему.In embodiments, the composition of the present invention can be applied to a plant by seed treatment (i.e., seed coating), root treatment, root emulsion, addition to irrigation water, irrigation, powder application to the root system, or injection application. emulsions into the root system.
Предпочтительно, в частности, что, когда ею необходимо обработать зерновые культуры, композицию по изобретению применяют путем покрытия семян, или объединения с семенами во время посева, или в форме микрогранулята и объединения с семенами во время посева.It is preferred, in particular, that when it is to be applied to cereal crops, the composition according to the invention is applied by coating the seeds, or by combining with the seeds at the time of sowing, or in the form of a microgranulate and combining with the seeds at the time of sowing.
Краткое описание чертежейBrief description of drawings
На фиг. 1 показана динамика образования спор и заселения грибом у растений, выражающегося в виде высокой оптической плотности (%), обработанных Dominikia sp.In fig. Figure 1 shows the dynamics of spore formation and fungal colonization in plants, expressed as high optical density (%), treated with Dominikia sp.
На фиг. 2 показано поведение арбускулярного внешнего мицелия и арбускулярного эндофита при обработке Dominikia sp.In fig. Figure 2 shows the behavior of arbuscular external mycelium and arbuscular endophyte when treated with Dominikia sp.
На фиг. 3 показана взаимосвязь между внешним арбускулярным мицелием и арбускулярным эндофитом при обработке Dominikia sp.In fig. Figure 3 shows the relationship between external arbuscular mycelium and arbuscular endophyte when treated with Dominikia sp.
Экспериментальная частьexperimental part
Пример 1. Молекулярный анализ.Example 1. Molecular analysis.
Экстракция ДНК.DNA extraction.
Выделенные гифы и споры переносили в 1,5 мл пробирки Эппендорф с 0,2 г стеклянных гранул (диаметром 2 мм) и 100 мкл ЦТАБ-буфера (2% ЦТАБ=цетилтриметиламмонийбромид, 1,4 М NaCl, 0,1 М трис-HCl, рН 7,5, 0,2 М Na-ЭДТА). Эту смесь гомогенизировали с использованием шаровой мельницыIsolated hyphae and spores were transferred into 1.5 ml Eppendorf tubes with 0.2 g glass beads (2 mm diameter) and 100 μl CTAB buffer (2% CTAB = cetyltrimethylammonium bromide, 1.4 M NaCl, 0.1 M Tris-HCl , pH 7.5, 0.2 M Na-EDTA). This mixture was homogenized using a ball mill
- 5 045371- 5 045371
Retsch MM 301 при 50 Гц в течение 30 с. Добавляли еще 400 мкл ЦТАБ-буфера, смесь инкубировали при 65°С в течение 1 ч. К суспензии добавляли 400 мкл смеси холроформ-изоамилол (24:1) и перемешивали, переворачивая реакционные пробирки, а затем центрифугировали в течение 5 мин при 15000xg и верхний слой собирали в чистую пробирку Эппендорф. Этот этап повторяли дважды. К этой суспензии добавляли 200 мкл 5 М ацетата аммония; смесь инкубировали при 4°С в течение по меньшей мере 30 мин с последующим 20-минутным центрифугированием при 4°С и 15000xg. ДНК осаждали 700 мкл изопропанола при - 20°С в течение ночи. Осадок ДНК, полученный после осаждения изопропанолом, промывали ледяным 70% этанолом, сушили на воздухе и повторно растворяли в 50 мкл буфера ТЕ (10 мМ Трис, 10 мМ ЭДТА, рН 8)+4,5 ед. РНКазы/мл.Retsch MM 301 at 50 Hz for 30 s. Another 400 μl of CTAB buffer was added, the mixture was incubated at 65°C for 1 hour. 400 μl of a mixture of cholroform-isoamylol (24:1) was added to the suspension and mixed by inverting the reaction tubes, and then centrifuged for 5 min at 15000xg and the top layer was collected in a clean Eppendorf tube. This step was repeated twice. To this suspension was added 200 μl of 5 M ammonium acetate; the mixture was incubated at 4°C for at least 30 minutes, followed by 20 minutes of centrifugation at 4°C and 15,000xg. DNA was precipitated with 700 μl of isopropanol at -20°C overnight. The DNA precipitate obtained after precipitation with isopropanol was washed with ice-cold 70% ethanol, air-dried and redissolved in 50 μl of TE buffer (10 mM Tris, 10 mM EDTA, pH 8) + 4.5 units. RNase/ml.
Условия ПЦР.PCR conditions.
18S рДНК амплифицировали с использованием праймеров GEOA2, GEO11 (Schwarzott D., Schussler A. (2001), A simple and reliable method for SSU rRNA gene DNA extraction, amplification, and cloning from single AM fungal spores, Mycorrhiza, 10:203-207). Праймерами, используемыми для ПЦР-амплификации и для секвенирования внутренней транскрибируемой спейсерной области 18S рДНК, были Glom1310 и ITS4i (Redecker D. (2000), Specific PCR primers to identify arbuscular mycorrhizal fungi within colonized roots, Mycorrhiza, 10:73-80). Амплификацию проводили в 0,2 мМ dNTP-смеси, 1 мМ каждого праймера, 10% реакционного буфера для ПЦР и стерильной воды молекулярной степени чистоты. ДНК-полимеразу GoTaq® (Promega, Mannheim, Germany) добавляли в количестве 4 ед./100 мкл реакционной смеси; 2 мкл матрицы геномной ДНК использовали на каждые 20 мкл реакции. Амплификацию проводили в термоциклере Primus 96 advanced (peqLab Biotechnology) в реакционных пробирках по 200 мкл с использованием следующих условий ПЦР: 96°С, начальная денатурация 180 с; с последующими 35 циклами: 96°С - 30 с, 58°С - 30 с, 72°С - 90 с; и окончательное удлинение при 72°С в течение 10 мин.18S rDNA was amplified using primers GEOA2, GEO11 (Schwarzott D., Schussler A. (2001), A simple and reliable method for SSU rRNA gene DNA extraction, amplification, and cloning from single AM fungal spores, Mycorrhiza, 10:203-207 ). The primers used for PCR amplification and for sequencing the internal transcribed spacer region of 18S rDNA were Glom1310 and ITS4i (Redecker D. (2000), Specific PCR primers to identify arbuscular mycorrhizal fungi within colonized roots, Mycorrhiza, 10:73-80). Amplification was performed in 0.2 mM dNTP mixture, 1 mM of each primer, 10% PCR reaction buffer, and sterile molecular grade water. GoTaq® DNA polymerase (Promega, Mannheim, Germany) was added in an amount of 4 units/100 μl of the reaction mixture; 2 μl of genomic DNA template was used for every 20 μl reaction. Amplification was carried out in a Primus 96 advanced thermal cycler (peqLab Biotechnology) in 200 μl reaction tubes using the following PCR conditions: 96°C, initial denaturation 180 s; followed by 35 cycles: 96°C - 30 s, 58°C - 30 s, 72°C - 90 s; and final extension at 72°C for 10 min.
Данные о последовательностях и таксономия Glomeromycota.Sequence data and taxonomy of Glomeromycota.
В качестве основы для филогении 18S было использовано референсное выравнивание, опубликованное Kruger et al. (Kruger M., Kruger С., Walker С., Stockinger H., Schйβler A. (2012), Phylogenetic reference data for systematics and phylotaxonomy of arbuscular mycorrhizal fungi from phylum to species level, New Phytol., 193:970-984; downloadable at www.amf-phylogeny.com). Для идентификации сходных последовательностей образцов из окружающей среды последовательность Dominikia sp. анализировали через поиск BLAST в GenBank, и очень похожие последовательности включали в выравнивание, составляющее основу 18S-дерева. Для филогении Dominikia применяли опубликованные частичные 18S-ITS1 - частичные 5.8S последовательности.The reference alignment published by Kruger et al. was used as the basis for the 18S phylogeny. (Kruger M., Kruger S., Walker S., Stockinger H., Schеβler A. (2012), Phylogenetic reference data for systematics and phylotaxonomy of arbuscular mycorrhizal fungi from phylum to species level, New Phytol., 193:970-984 ; downloadable at www.amf-phylogeny.com). To identify sequence similarities among environmental samples, the sequence of Dominikia sp. were analyzed through a BLAST search in GenBank, and highly similar sequences were included in the alignment forming the basis of the 18S tree. Published partial 18S-ITS1 - partial 5.8S sequences were used for the Dominikia phylogeny.
Анализ данных.Data analysis.
Первоначальные выравнивания были выполнены Clustal W. Филогенетический анализ максимального правдоподобия был проведен через веб-портал CIPRES (Miller M.A., Pfeiffer W., Schwartz Т. (2010), Creating the CIPRES Science Gateway for inference of large phylogenetic tres. In Proceedings of the Gateway Computing Environments Workshop (GCE), 14 Nov. 2010, New Orleans, LA, с. 1-8, http://www.phylo.org/) с RAxML версия 8.0 (Stamatakis и др., 2014) с использованием 100 реплик начальной загрузки и модель GTRGAMMA. Байесовское консенсусное дерево было построено с использованием MrBayes версии 2.0.5. Два отдельных прогона МС3 со случайно сгенерированными стартовыми деревьями были выполнены для 2 М поколений, каждое с одной холодной и тремя горячими цепями, с использованием модели GTR+I. Все параметры оценивались по данным. Деревья отбирались каждые 1000 поколений. 200000 поколений были отброшены как burn-in и консенсусные деревья, конструировались на основе возвращаемой выборки.Initial alignments were performed by Clustal W. Maximum likelihood phylogenetic analyzes were conducted via the CIPRES web portal (Miller M.A., Pfeiffer W., Schwartz T. (2010), Creating the CIPRES Science Gateway for inference of large phylogenetic tres. In Proceedings of the Gateway Computing Environments Workshop (GCE), 14 Nov. 2010, New Orleans, LA, pp. 1-8, http://www.phylo.org/) with RAxML version 8.0 (Stamatakis et al., 2014) using 100 replicas bootstrap and GTRGAMMA model. The Bayesian consensus tree was constructed using MrBayes version 2.0.5. Two separate MS3 runs with randomly generated starting trees were performed for 2 M generations, each with one cold chain and three hot chains, using the GTR+I model. All parameters were estimated from the data. Trees were selected every 1000 generations. 200,000 generations were discarded as burn-in and consensus trees were constructed from the returned sample.
Пример 2. Методика получения варианта композиции по изобретению - концентрированной композиции для покрытия семян.Example 2. Method for obtaining a variant of the composition according to the invention - a concentrated composition for coating seeds.
Первая фаза - тепличные условия.The first phase is greenhouse conditions.
Субстрат. В качестве субстрата выбраны смектитовые глины с рН от 7,8 до 8, и перед применением их стерилизуют чередующимися циклами по 3 дня.Substrate. Smectite clays with a pH of 7.8 to 8 were chosen as the substrate, and before use they were sterilized in alternating cycles of 3 days.
Штамм АМГ. В качестве исходного инокулята используют пропагулы Dominikia sp. в чистых условиях. Этот тип инокулята всегда находится в непрерывном воспроизведении циклами по 90-180 дней либо в камере для выращивания, либо в теплицах с контролируемыми условиями для растений-хозяев. Различные растения используются для воспроизводства инокулята в последовательных циклах, чтобы избежать передачи болезни в одном и том же хозяине.AMG strain. Dominikia sp. propagules are used as the initial inoculum. in clean conditions. This type of inoculum is always maintained in continuous cycles of 90-180 days in either a growth chamber or controlled host plant greenhouses. Different plants are used to reproduce the inoculum in successive cycles to avoid disease transmission in the same host.
Лето-осень. Sorghum vulgare и Ocimum sp.Summer autumn. Sorghum vulgare and Ocimum sp.
Зима-весна: Lolium perenne.Winter-spring: Lolium perenne.
Культуральные горшки. Используются горшки объемом 15 л.Culture pots. 15 liter pots are used.
Условия выращивания растений-хозяев.Growing conditions for host plants.
Выращивание в камере для выращивания или в теплице начинается с прямой инокуляции корневой системы растения-хозяина чистым инокулятом отобранного штамма арбускулярно-микоризного гриба (Dominikia sp.) в стерильном субстрате смектитовой глины. Растения выращивают на протяжении полного жизненного цикла в соответствии с типом растения, который занимает от 90 до 180 дней. РастенияCultivation in a growth chamber or greenhouse begins with direct inoculation of the host plant's root system with a pure inoculum of a selected strain of arbuscular mycorrhizal fungus (Dominikia sp.) in a sterile smectite clay substrate. Plants are grown for a full life cycle according to plant type, which takes from 90 to 180 days. Plants
- 6 045371 всегда поддерживают в хорошо увлажненном состоянии с ежедневным орошением (стерильной водой) при температуре от 25 до 28°С и относительной влажности 65%. После завершения корневую систему, содержащую смектитовый субстрат, корешки и чистые отростки АМГ, извлекают, и впоследствии применяют для масштабирования на втором этапе.- 6 045371 is always kept well hydrated with daily irrigation (sterile water) at a temperature of 25 to 28°C and a relative humidity of 65%. Once completed, the root system containing the smectite substrate, rootlets and pure AMG shoots is removed and subsequently used for scaling in the second stage.
Для определения качества инокулята используются следующие минимальные спецификации:The following minimum specifications are used to determine inoculum quality:
общее количество спор: 50-225 спор/г;total number of spores: 50-225 spores/g;
экстраматрикальный мицелий: >70 мг/кг субстрата;extramatric mycelium: >70 mg/kg substrate;
процент колонизации корней: Sorghum >50%, Lolium >45%, Ocimum >40%;percentage of root colonization: Sorghum >50%, Lolium >45%, Ocimum >40%;
концентрация MPN: >1х104 пропагул на 100 мл субстрата.MPN concentration: >1x10 4 propagules per 100 ml of substrate.
Вторая фаза - увеличение масштаба.The second phase is scaling up.
Этап 1: подготовка грядок.Stage 1: preparing the beds.
Грядки делают с прокладочным материалом из пластика, так что грядка изолирована от окружающей почвы; грядки делают предпочтительно с пластиковым покрытием таким образом, чтобы происходил дренаж и предотвращался рост нежелательной растительности.The beds are made with plastic cushioning material, so that the bed is isolated from the surrounding soil; The beds are preferably made with a plastic covering so that drainage occurs and the growth of unwanted vegetation is prevented.
Грядки следует заполнить отобранной смектитовой глиной (Arcilla Roja Galve). Влажность глины должна составлять примерно 15%, чтобы облегчить работу с ней при заполнении грядки. После заполнения следует обеспечить полив до насыщения для улучшения структуры.The beds should be filled with selected smectite clay (Arcilla Roja Galve). The moisture content of the clay should be approximately 15% to make it easier to work with when filling the bed. After filling, watering should be provided until saturated to improve the structure.
Грядки располагаются на хорошо дренированных участках.The beds are located in well-drained areas.
Грядки могут иметь любые размеры с учетом доступа, необходимого для облегчения передвижения людей и оборудования, необходимого для ухода.Beds can be of any size, allowing for access to facilitate the movement of people and equipment needed for maintenance.
Грядки имеют систему орошения в соответствии с местными потребностями. Предпочтительной системой может быть капельное орошение или разбрызгиватель, которые должны быть автоматизированы, и обеспечивать независимый полив выбранных участков грядки.The beds have an irrigation system according to local needs. The preferred system may be drip irrigation or a sprinkler, which should be automated and provide independent watering to selected areas of the bed.
Этап 2: виды растений-хозяев.Stage 2: host species.
Определение видов растений-хозяев и микоризных грибов, которые могут использоваться в системе: выбор и идентификация растения-хозяина и видов грибов будут соответствовать конкретным условиям участка и целям производства. Используют райграсс (Lolium perenne) и АМГ, ранее произведенные на первом этапе.Determination of host plant species and mycorrhizal fungi that can be used in the system: The selection and identification of host plant and fungal species will be tailored to the specific site conditions and production goals. Ryegrass (Lolium perenne) and AMG previously produced in the first stage are used.
Этап 3: посев растения-хозяина и инокуляция.Step 3: Host plant seeding and inoculation.
Перед посадкой растения-хозяина проверяют всхожесть семян. По результатам этого теста определяют подходящую норму высева. В случае многолетнего райграса семена высевают в разброс из расчета 80 кг/га с использованием предварительно проверенных дражированных семян. Также вместе с семенами непосредственно на смектитовую глину наносятся 20 г инокулята АМГ на м2 грядки.Before planting the host plant, the germination of seeds is checked. Based on the results of this test, the appropriate seeding rate is determined. For perennial ryegrass, seed is broadcast at 80 kg/ha using pre-tested pelleted seed. Also, together with the seeds, 20 g of AMF inoculum per m2 of bed is applied directly to the smectite clay.
Сразу после посева применяют орошение в виде мелкодисперсного распыления для предотвращения перераспределения посевного материала и инокулята.Immediately after sowing, fine spray irrigation is used to prevent redistribution of seed and inoculum.
Вода, используемая для полива, предпочтительно должна иметь следующие характеристики:Water used for irrigation should preferably have the following characteristics:
значения рН от >6 до <7,5;pH values from >6 to <7.5;
электропроводность: <1,6 мСм/м;electrical conductivity: <1.6 mS/m;
общее количество растворимых солей: <1000 ppm;total soluble salts: <1000 ppm;
содержание обменного натрия (SAR) <10;exchangeable sodium content (SAR) <10;
без тяжелых элементов и патогенов; предпочтительно, чтобы вода, используемая для орошения, была питьевой.without heavy elements and pathogens; It is preferable that the water used for irrigation be potable.
Этап 4: культивирование и ирригация.Stage 4: Cultivation and Irrigation.
Применяемого орошения должно хватить для достижения 100% естественной влагоемкости, но нужно избегать полива слишком большим количеством воды с ее накоплением или застаиванием. Грядки следует снова поливать, когда влажность глины упадет до 75-80% от естественной влагоемкости.The irrigation applied should be sufficient to achieve 100% of natural water capacity, but avoid watering with too much water and causing it to accumulate or stagnate. The beds should be watered again when the clay moisture content drops to 75-80% of its natural moisture holding capacity.
Этап 5: управление установлением микоризного симбиоза и исследование динамики развития колонизации микоризного гриба.Stage 5: management of the establishment of mycorrhizal symbiosis and study of the dynamics of the development of mycorrhizal fungal colonization.
Во время роста и развития растения-хозяина происходит колонизация корней АМГ и устанавливается симбиоз между растением и грибом. Чтобы оценить развитие этих отношений, проводят периодический отбор образцов корневой системы для оценки развития микоризы. Методы, используемые для оценки колонизации, включают Gerdeman & Nicolson (1963) (Gerdemann J.W., Nicolson Т.Н., 1963, Spores of mycorrhizal endogen species extracted from soil by wet sieving and decanting, Transactions of the British Mycological Society, 46(2):235-44); McGonigle (1990) (McGonigle, T.P., Miller M.H., Evans D.G., Fairchild G.L., Swan J.A., 1990, A new method which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular arbuscular mycorrhizal fungi, New Phytologist, 115(3):495-501); и Phillips & Hayman (1970) (Phillips, J.M., Hayman D.S., 1970, Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Transactions of the British Mycological Society, 55:158-161).During the growth and development of the host plant, AMF colonizes the roots and establishes a symbiosis between the plant and the fungus. To assess the development of this relationship, periodic sampling of the root system is carried out to assess mycorrhizal development. Methods used to assess colonization include Gerdeman & Nicolson (1963) (Gerdemann J.W., Nicolson T.N., 1963, Spores of mycorrhizal endogenous species extracted from soil by wet sieving and decanting, Transactions of the British Mycological Society, 46(2) ):235-44); McGonigle (1990) (McGonigle, T.P., Miller M.H., Evans D.G., Fairchild G.L., Swan J.A., 1990, A new method which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular arbuscular mycorrhizal fungi, New Phytologist, 115(3):495 -501); and Phillips & Hayman (1970) (Phillips, J.M., Hayman D.S., 1970, Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Transactions of the British Mycological Society, 55:158-161).
Отбор проб начинаются через два месяца после посадки и продолжаются ежемесячно до конца вегетационного периода. По информации, полученной по этим образцам, можно определить динамику развития микоризного симбиоза внутри инокулята.Sampling begins two months after planting and continues monthly until the end of the growing season. Based on the information obtained from these samples, it is possible to determine the dynamics of the development of mycorrhizal symbiosis within the inoculum.
- 7 045371- 7 045371
Оценка производственного способа основана на колонизации корней микоризой, экстраматрикальной концентрации мицелия и периодическом отборе образцов глины, содержащих споры.Evaluation of the production method is based on mycorrhizal colonization of roots, extramatric mycelium concentration and periodic sampling of clay containing spores.
Знание динамики развития продукции микоризы позволяет определить оптимальное время сбора урожая и максимально использовать процесс симбиоза растения-хозяина и микоризного гриба.Knowledge of the dynamics of development of mycorrhizal products allows us to determine the optimal harvest time and make the most of the process of symbiosis between the host plant and mycorrhizal fungus.
Этап 6: сбор урожая.Stage 6: Harvest.
Если в качестве растения-хозяина используется многолетний Lolium, то оптимальное время сбора урожая обычно наступает между 6 и 7 месяцами после посева, потому что в этот период растения созревают, завершают свой жизненный цикл, проявляют тенденцию к потере жизнеспособности и желтеют.If perennial Lolium is used as a host plant, the optimal harvest time is usually between 6 and 7 months after sowing because during this period the plants mature, complete their life cycle, tend to lose vigor and turn yellow.
За пятнадцать дней до запланированной даты сбора урожая прекращают полив, а опавшую листву сохраняются, чтобы глина медленно теряла влагу, обеспечивая завершение процесса инокуляции. Если это операция совпадает с сезоном дождей, будет необходимо защитить грядку от дождя, чтобы она могла своевременно высохнуть, накрыв ее водонепроницаемым пластиком.Fifteen days before the scheduled harvest date, watering is stopped and leaf litter is stored to allow the clay to slowly lose moisture, ensuring the inoculation process is completed. If this operation coincides with the rainy season, it will be necessary to protect the bed from rain so that it can dry in time by covering it with waterproof plastic.
Сначала вручную удаляют надземную листву с растений-хозяев. Сбор урожая производят путем удаления глины с грядки. Субстрат удаляют путем разделения массы глины на как можно более тонкие части, чтобы облегчить перемешивание их содержимого по всей глубине профиля, и помещают в мешки для транспортировки.First, above-ground foliage is removed from the host plants by hand. Harvesting is done by removing clay from the bed. The substrate is removed by dividing the clay mass into as thin parts as possible to facilitate mixing of their contents throughout the depth of the profile, and placed in bags for transport.
Этап 7: сушка и измельчение инокулятаStep 7: Drying and grinding the inoculum
Сушка. Собранный субстрат и пропагулы микоризы подвергают воздействию солнечных лучей и термической дезинфекции в течение 30 дней при 50°С. Период сушки может быть увеличен до содержания влаги ниже 5% для облегчения измельчения.Drying. The collected substrate and mycorrhizal propagules are exposed to sunlight and thermal disinfection for 30 days at 50°C. The drying period can be extended to a moisture content below 5% to facilitate grinding.
Измельчение. Продукт измельчают в промышленной мельнице, охлаждают до 2°С, чтобы предотвратить перегрев микоризных пропагул. Измельчение продолжают до размера частиц менее 100 микрон.Grinding. The product is ground in an industrial mill and cooled to 2°C to prevent overheating of the mycorrhizal propagules. Grinding is continued until the particle size is less than 100 microns.
Третья фаза - концентрирование.The third phase is concentration.
После этапа 7 измельченная биомассу доводят до концентрации продукта с помощью сита в 35 микрон. Частицы ниже этого значения (60-70% исходного продукта) выбрасывают, а 25-30% ультраконцентрированного продукта не проходит через этот размер и в конечном итоге будет концентрированным продуктом. С использованием этой технологии мы перешли от 1,2x104 пропагул на 100 мл до 1,2x106 пропагул на 100 мл.After step 7, the crushed biomass is brought to product concentration using a 35 micron sieve. Particles below this size (60-70% of the original product) are discarded, and 25-30% of the ultra-concentrated product does not pass through this size and will end up as concentrated product. Using this technology we went from 1.2 x 104 propagules per 100 ml to 1.2 x 106 propagules per 100 ml.
Относительная влажность продукта на выходе ниже 5%.The relative humidity of the product at the outlet is below 5%.
Контроль качества. Чистоту и концентрацию конечного продукта определяют с помощью метода наиболее вероятных чисел Портера (1979) (Porter, W.M., 1979, The most probable number method for enumerating infective propagules of vesicular arbuscular mycorrhizal fungi in soils, Aust. J. Soil Res., 17:515-519).Quality control. Purity and concentration of the final product are determined using Porter, W.M., 1979, The most probable number method for enumerating infective propagules of vesicular arbuscular mycorrhizal fungi in soils, Aust. J. Soil Res., 17: 515-519).
Упаковка. Готовую продукцию упаковывают и маркируют для транспортировки. Конечная концентрация концентратной композиции составляет: Концентрация MPN: >1,2x106 пропагул на 100 мл продукта.Package. Finished products are packaged and labeled for transportation. The final concentration of the concentrate composition is: MPN concentration: >1.2x106 propagules per 100 ml of product.
Четвертая фаза - покрытие семян.The fourth phase is seed coating.
Покрытие семян инокулятом микоризы можно производить в специальной машине для покрытия семян, в обычной бетономешалке или вручную в смесителе. Указанное покрытие требует различных этапов, которые описаны ниже в порядке их выполнения.Coating the seeds with mycorrhizal inoculum can be done in a special seed coating machine, in a conventional concrete mixer, or by hand in a mixer. This coating requires various steps, which are described below in the order in which they are performed.
1. На начальном этапе семена покрывают адгезивным веществом. Адгезивные вещества, которые можно использовать в дополнение к воде, включают органические адгезивы (желатин, этилцеллюлозу, пропиленгликоль и т.д.) и неорганические адгезивы (минеральные масла, поливинилы, пластичные полимеры и т.д.). Предпочтительно используемые адгезивы являются полимерами или сополимерами поливиниловой группы, такими как поливинилпирролидон и поливинилацетат. Адгезив добавляют к водному или спиртовому раствору до его оптимальной растворимости, варьируя количество используемого адгезива от 0,1 до 15%, предпочтительно от 0,5 до 10% и еще более предпочтительно от 1,0 до 5% от общей массы покрываемых семян. Количество используемого адгезива будет зависеть от его химических свойств, а также от типа обрабатываемых семян. Время обработки семян адгезивом может варьировать от 1 до 60 с, предпочтительно от 5 до 50 с и еще более предпочтительно от 10 до 40 с на 100 кг используемых семян.1. At the initial stage, the seeds are coated with an adhesive substance. Adhesives that can be used in addition to water include organic adhesives (gelatin, ethylcellulose, propylene glycol, etc.) and inorganic adhesives (mineral oils, polyvinyls, plastic polymers, etc.). Preferably, the adhesives used are polymers or copolymers of the polyvinyl group, such as polyvinylpyrrolidone and polyvinyl acetate. The adhesive is added to the aqueous or alcoholic solution until its optimal solubility, varying the amount of adhesive used from 0.1 to 15%, preferably from 0.5 to 10% and even more preferably from 1.0 to 5% of the total weight of the seeds to be coated. The amount of adhesive used will depend on its chemical properties as well as the type of seed being treated. The time for treating the seeds with the adhesive can vary from 1 to 60 seconds, preferably from 5 to 50 seconds and even more preferably from 10 to 40 seconds per 100 kg of seeds used.
2. После нанесения адгезива добавляется инокулят микоризы. Доля инокулята, добавляемого к семенам, может быть выбрана в диапазоне от 0,1 до 15%, предпочтительно от 0,5 до 10% и еще более предпочтительно от 1 до 5% от веса семян, что будет зависеть от типа и разновидности. Время обработки семян инокулятом микоризы может варьировать от 1 до 50 с, предпочтительно от 5 до 40 с и еще более предпочтительно от 10 до 30 с на 100 кг используемых семян.2. After applying the adhesive, mycorrhizal inoculum is added. The proportion of inoculum added to the seeds can be selected in the range of 0.1 to 15%, preferably 0.5 to 10% and even more preferably 1 to 5% by weight of the seeds, which will depend on the type and variety. The time of treatment of seeds with mycorrhizal inoculum can vary from 1 to 50 seconds, preferably from 5 to 40 seconds and even more preferably from 10 to 30 seconds per 100 kg of seeds used.
Обработку микоризой можно комбинировать с другими видами обработки, которые описаны в разделах 2а-2е. Эти обработки также можно выполнять независимо от обработки инокулятом микоризы с получением многослойного покрытия. Этапы, которые необходимо выполнить при нанесении каждого слоя покрытия, такие же, как и в случае инокулята микоризы. Эти слои можно разделить, покрывая семена безвредными веществами известкового происхождения (карбонат кальция и тому подобное), глиной или полимером. Гранулирующее или образующее корку вещество не должно превышать 50%, пред- 8 045371 почтительно 40% и еще более предпочтительно 30% от веса семян, и его добавляют к семенам вместе с адгезивным веществом, как указано в разделе 1.Mycorrhiza treatments can be combined with other treatments, which are described in sections 2a-2e. These treatments can also be performed independently of the mycorrhizal inoculum treatment to produce a multi-layer coating. The steps required to apply each coating layer are the same as for mycorrhizal inoculum. These layers can be separated by covering the seeds with harmless substances of calcareous origin (calcium carbonate and the like), clay or polymer. The granulating or crusting agent should not exceed 50%, preferably 40% and even more preferably 30% of the weight of the seeds and is added to the seeds along with the adhesive as specified in section 1.
2а. Обработка фунгицидами, инсектицидами и/или гербицидами, совместимыми с микоризными грибами. В целом, все коммерческие гербициды и инсектициды совместимы с грибами, образующими микоризу. Однако не все фунгициды совместимы с выживаемостью микоризных грибов. Основные используемые фунгициды включают азоксистробин, карбоксин, ципроконазол, хлороталонил, металаксил, миклобутанил и протиоконазол. Количество используемого пестицида будет зависеть от рекомендаций производителя, разнообразие используемых пестицидов зависит от потребностей.2a. Treatment with fungicides, insecticides and/or herbicides compatible with mycorrhizal fungi. In general, all commercial herbicides and insecticides are compatible with mycorrhizal fungi. However, not all fungicides are compatible with the survival of mycorrhizal fungi. The main fungicides used include azoxystrobin, carboxin, cyproconazole, chlorothalonil, metalaxyl, myclobutanil and prothioconazole. The amount of pesticide used will depend on the manufacturer's recommendations, the variety of pesticides used depends on the needs.
2b. Обработка полезными микроорганизмами, включая Trichoderma spp., Бактерии Rhizobium и/или комбинацию микроорганизмов, полезных для ризосферы, таких как Aspergillus, Penicillium и азотфиксирующие бактерии.2b. Treatment with beneficial microorganisms including Trichoderma spp., Rhizobium bacteria and/or a combination of microorganisms beneficial to the rhizosphere such as Aspergillus, Penicillium and nitrogen-fixing bacteria.
2с. Обработка макро- и/или микронутриентами, в которых азот (N), фосфор (Р), калий (K), кальций (Са), магний (Mg) и сера (S) являются основными макронутриентами, а железо (Fe), цинк (Zn), марганец (Mn), бор (В), медь (Cu), молибден (Мо) и хлор (Cl) являются основными микронутриентами. Доза нутриентов для покрытия может варьироваться от 0,01 до 15%, предпочтительно от 0,05 до 10% и еще более предпочтительно от 0,1 до 5% от общей массы семян, на которые наносится покрытие.2s. Treatment with macro- and/or micronutrients, in which nitrogen (N), phosphorus (P), potassium (K), calcium (Ca), magnesium (Mg) and sulfur (S) are the main macronutrients, and iron (Fe), zinc (Zn), manganese (Mn), boron (B), copper (Cu), molybdenum (Mo) and chlorine (Cl) are the main micronutrients. The dose of nutrients for coating may vary from 0.01 to 15%, preferably from 0.05 to 10% and even more preferably from 0.1 to 5% of the total weight of the seeds to be coated.
2d. Обработка стимуляторами. Покрытие семян стимуляторами, которые индуцируют прорастание и рост семян, а также защиту растений, споруляцию и рост микоризных грибов. Стимуляторами могут быть фитогормоны (абсцизовая кислота, стриголактоны, брассиностероиды и др.) и их индукторы и производные, вторичные метаболиты (флавоноиды, терпеноиды и др.), кофакторы (ионы металлов и др.).2d. Treatment with stimulants. Coating seeds with stimulants that induce seed germination and growth, as well as plant protection, sporulation and growth of mycorrhizal fungi. Stimulants can be phytohormones (abscisic acid, strigolactones, brassinosteroids, etc.) and their inducers and derivatives, secondary metabolites (flavonoids, terpenoids, etc.), cofactors (metal ions, etc.).
2е. Обработка красящими пигментами: эти пигменты должны быть совместимы с выживанием микоризного гриба и делать четко различимыми обработанные и необработанные семена.2e. Treatment with coloring pigments: These pigments must be compatible with the survival of the mycorrhizal fungus and provide a clear distinction between treated and untreated seeds.
3. Этапы 1 и 2 означают, что полное покрытие микоризным инокулятом посредством адгезива выполняется за время от 1 до 40 с, предпочтительно от 5 до 30 с и еще более предпочтительно от 10 до 20 с, выполняя полное покрытие микоризным инокулятом посредством адгезивного вещества.3. Steps 1 and 2 mean that complete coverage of the mycorrhizal inoculum by the adhesive is achieved in 1 to 40 seconds, preferably 5 to 30 seconds, and even more preferably 10 to 20 seconds, complete coverage of the mycorrhizal inoculum by the adhesive is achieved.
4. После проведения обработки микоризой семена сушат в течение времени, которое может варьироваться от 1 до 50 с, предпочтительно от 5 до 40 с, а еще более предпочтительно от 10 до 30 с. Этот этап можно выполнить после этапа 5.4. After the mycorrhizal treatment, the seeds are dried for a time that may vary from 1 to 50 seconds, preferably from 5 to 40 seconds, and even more preferably from 10 to 30 seconds. This step can be completed after step 5.
5. Наконец покрытые семена погружают в контейнеры из компонента покрытия. Продолжительность погрузки может варьироваться от 5 до 30 с, предпочтительно от 10 до 25 с и еще более предпочтительно от 15 до 20 с.5. Finally, the coated seeds are immersed in the coating component containers. The loading duration may vary from 5 to 30 seconds, preferably from 10 to 25 seconds and even more preferably from 15 to 20 seconds.
Пример 3. Методика получения варианта композиции по изобретению микрогранулированной композиции.Example 3. Method for obtaining a variant of the composition according to the invention of a microgranular composition.
Первая фаза - тепличные условия.The first phase is greenhouse conditions.
Субстрат. В качестве субстрата выбирают смектитовые глины с рН от 7,8 до 8 и перед использованием стерилизуют чередующимися циклами по 3 дня.Substrate. Smectite clays with a pH of 7.8 to 8 are chosen as a substrate and sterilized before use in alternating cycles of 3 days.
Штамм АМГ. В качестве исходного инокулята используют пропагулы Dominikia sp. в чистых условиях. Этот тип инокулята всегда находится в непрерывном воспроизведении циклами по 90-180 дней либо в камере для выращивания, либо в теплицах с контролируемыми условиями для растений-хозяев. Различные растения используют для воспроизводства инокулята в последовательных циклах, чтобы избежать передачи болезни в одном и том же хозяине.AMG strain. Dominikia sp. propagules are used as the initial inoculum. in clean conditions. This type of inoculum is always maintained in continuous cycles of 90-180 days in either a growth chamber or controlled host plant greenhouses. Different plants are used to reproduce the inoculum in successive cycles to avoid disease transmission in the same host.
Лето-осень. Sorghum vulgare и Ocimum sp.Summer autumn. Sorghum vulgare and Ocimum sp.
Зима-весна. Lolium perenne.Winter spring. Lolium perenne.
Культуральные горшки. Используют горшки объемом 15 л.Culture pots. Use 15 liter pots.
Условия выращивания растений-хозяев.Growing conditions for host plants.
Выращивание в камере для выращивания или в теплице начинают с прямой инокуляции корневой системы растения-хозяина чистым инокулятом отобранного штамма арбускулярно-микоризного гриба (Dominikia sp.) в стерильном субстрате смектитовой глины. Растения выращивают на протяжении полного жизненного цикла, в соответствии с типом растения, который занимает от 90 до 180 дней. Растения всегда поддерживают в хорошо увлажненном состоянии, с ежедневным орошением (стерильной водой) при температуре от 25 до 28°С и относительной влажности 65%. После завершения корневая система, содержащая смектитовый субстрат, корешки и чистые отростки АМГ, извлекаютси впоследствии используют для масштабирования на втором этапе.Cultivation in a growth chamber or greenhouse begins with direct inoculation of the host plant's root system with a pure inoculum of a selected strain of arbuscular mycorrhizal fungus (Dominikia sp.) in a sterile smectite clay substrate. Plants are grown for a full life cycle, according to the plant type, which takes from 90 to 180 days. Plants are always kept well hydrated, with daily irrigation (sterile water) at a temperature of 25 to 28°C and a relative humidity of 65%. Once completed, the root system containing the smectite substrate, rootlets and pure AMG shoots is removed and subsequently used for scaling in the second stage.
Для определения качества инокулята используют следующие минимальные спецификации:The following minimum specifications are used to determine inoculum quality:
общее количество спор: 50-225 спор/г;total number of spores: 50-225 spores/g;
экстраматрикальный мицелий: >70 мг/кг субстрата;extramatric mycelium: >70 mg/kg substrate;
процент колонизации корней: Sorghum >50%, Lolium >45%, Ocimum >40%;percentage of root colonization: Sorghum >50%, Lolium >45%, Ocimum >40%;
концентрация MPN: >1х104 пропагул на 100 мл субстрата.MPN concentration: >1x10 4 propagules per 100 ml of substrate.
Вторая фаза - увеличение масштаба.The second phase is scaling up.
Этап 1: подготовка грядок.Stage 1: preparing the beds.
Грядки делают с прокладочным материалом из пластика, так что грядка изолирована от окружаю- 9 045371 щей почвы; грядки сконструированы предпочтительно с пластиковым покрытием таким образом, чтобы происходил дренаж и предотвращался рост нежелательной растительности.The beds are made with plastic cushioning material, so that the bed is isolated from the surrounding soil; The beds are constructed, preferably with a plastic cover, so that drainage occurs and the growth of unwanted vegetation is prevented.
Грядки следует заполнить выбранной смектитовой глиной (Arcilla Roja Galve). Влажность глины должна составлять примерно 15%, чтобы облегчить работу с ней при заполнении грядки. После заполнения следует обеспечить полив до насыщения для улучшения структуры.The beds should be filled with the selected smectite clay (Arcilla Roja Galve). The moisture content of the clay should be approximately 15% to make it easier to work with when filling the bed. After filling, water until saturated to improve the structure.
Грядки располагают на хорошо дренированных участках.The beds are located in well-drained areas.
Грядки могут иметь любые размеры с учетом доступа, необходимого для облегчения передвижения людей и оборудования, необходимого для ухода.Beds can be of any size, allowing for access to facilitate the movement of people and equipment needed for maintenance.
Грядки имеют систему орошения в соответствии с местными потребностями. Предпочтительной системой может быть капельное орошение или разбрызгиватель, которые должны быть автоматизированы, и обеспечивать независимый полив выбранных участков грядки.The beds have an irrigation system according to local needs. The preferred system may be drip irrigation or a sprinkler, which should be automated and provide independent watering to selected areas of the bed.
Этап 2: виды растений-хозяев.Stage 2: host species.
Определение видов растений-хозяев и микоризных грибов, которые можно использовать в системе: выбор и идентификация растения-хозяина и видов грибов будут соответствовать конкретным условиям участка и целям производства. Использовался райграсс (Lolium perenne) и АМГ, ранее произведенные на первом этапе.Determination of host plant species and mycorrhizal fungi that can be used in the system: The selection and identification of host plant and fungal species will be tailored to the specific site conditions and production goals. Ryegrass (Lolium perenne) and AMG previously produced in the first stage were used.
Этап 3: посев растения-хозяина и инокуляция.Step 3: Host plant seeding and inoculation.
Перед посадкой растения-хозяина проверяют всхожесть семян. По результатам этого теста определяется подходящая норма высева. В случае многолетнего райграса семена высевают в разброс из расчета 80 кг/га с использованием предварительно проверенных дражированных семян. Также вместе с семенами непосредственно на смектитовую глину наносят 20 г инокулята АМГ на м2 грядки.Before planting the host plant, the germination of seeds is checked. The results of this test determine the appropriate seeding rate. For perennial ryegrass, seed is broadcast at 80 kg/ha using pre-tested pelleted seed. Also, together with the seeds, 20 g of AMF inoculum per m2 of bed is applied directly to the smectite clay.
Сразу после посева применяют орошение в виде мелкодисперсного распыления для предотвращения перераспределения посевного материала и инокулята.Immediately after sowing, fine spray irrigation is used to prevent redistribution of seed and inoculum.
Вода, используемая для полива, предпочтительно должна иметь следующие характеристики:Water used for irrigation should preferably have the following characteristics:
значения рН от >6 до <7,5;pH values from >6 to <7.5;
электропроводность: <1,6 мСм/м;electrical conductivity: <1.6 mS/m;
общее количество растворимых солей: <1000 ppm;total soluble salts: <1000 ppm;
содержание обменного натрия (SAR) <10;exchangeable sodium content (SAR) <10;
без тяжелых элементов и патогенов; предпочтительно, чтобы вода, используемая для орошения, была питьевой.without heavy elements and pathogens; It is preferable that the water used for irrigation be potable.
Этап 4: культивирование и ирригация.Stage 4: Cultivation and Irrigation.
Применяемого орошения должно хватить для достижения 100% естественной влагоемкости, но нужно избегать полива слишком большим количеством воды с ее накоплением или застаиванием. Грядки следует снова поливать, когда влажность глины упадет до 75-80% от естественной влагоемкости.The irrigation applied should be sufficient to achieve 100% of natural water capacity, but avoid watering with too much water and causing it to accumulate or stagnate. The beds should be watered again when the clay moisture content drops to 75-80% of its natural moisture holding capacity.
Этап 5: управление установлением микоризного симбиоза и изучение динамики развития колонизации микоризного гриба.Stage 5: managing the establishment of mycorrhizal symbiosis and studying the dynamics of the development of mycorrhizal fungal colonization.
Во время роста и развития растения-хозяина происходит колонизация корней АМГ и устанавливается симбиоз между растением и грибом. Чтобы оценить развитие этих отношений, проводят периодический отбор образцов корневой системы для оценки развития микоризы. Методы, используемые для оценки колонизации, включают Gerdeman & Nicolson (1963) (Gerdemann J.W., Nicolson Т.Н., 1963, Spores of mycorrhizal endogen species extracted from soil by wet sieving and decanting, Transactions of the British Mycological Society, 46(2):235-44.); McGonigle (1990) (McGonigle, T.P., Miller M.H., Evans D.G., Fairchild G.L., Swan J.A, 1990, A new method which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular arbuscular mycorrhizal fungi, New Phytologist, 115(3):495-501); и Phillips & Hayman (1970) (Phillips, J.M., Hayman D.S., 1970, Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Transactions of the British Mycological Society, 55:158-161).During the growth and development of the host plant, AMF colonizes the roots and establishes a symbiosis between the plant and the fungus. To assess the development of this relationship, periodic sampling of the root system is carried out to assess mycorrhizal development. Methods used to assess colonization include Gerdeman & Nicolson (1963) (Gerdemann J.W., Nicolson T.N., 1963, Spores of mycorrhizal endogenous species extracted from soil by wet sieving and decanting, Transactions of the British Mycological Society, 46(2) ):235-44.); McGonigle (1990) (McGonigle, T.P., Miller M.H., Evans D.G., Fairchild G.L., Swan J.A., 1990, A new method which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular arbuscular mycorrhizal fungi, New Phytologist, 115(3):495 -501); and Phillips & Hayman (1970) (Phillips, J.M., Hayman D.S., 1970, Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Transactions of the British Mycological Society, 55:158-161).
Отбор проб начинают через два месяца после посадки и продолжают ежемесячно до конца вегетационного периода. По информации, полученной по этим образцам, можно определить динамику развития микоризного симбиоза внутри инокулята.Sampling begins two months after planting and continues monthly until the end of the growing season. Based on the information obtained from these samples, it is possible to determine the dynamics of the development of mycorrhizal symbiosis within the inoculum.
Оценка производственного способа основывается на колонизации корней микоризой, экстраматрикальной концентрации мицелия и периодическом отборе образцов глины, содержащих споры.Evaluation of the production method is based on mycorrhizal colonization of roots, extramatric mycelial concentration and periodic sampling of clay containing spores.
Знание динамики развития продукции микоризы позволяет определить оптимальное время сбора урожая и максимально использовать процесс симбиоза растения-хозяина и микоризного гриба.Knowledge of the dynamics of development of mycorrhizal products allows us to determine the optimal harvest time and make the most of the process of symbiosis between the host plant and mycorrhizal fungus.
Этап 6: сбор урожая.Stage 6: Harvest.
Сбор урожая - это наиболее критический этап в производственном процессе. Если в качестве растения-хозяина используют многолетний Lolium, то оптимальное время сбора урожая обычно наступает между 6 и 7 месяцами после посева, потому что в этот период растения созревают, завершают свой жизненный цикл, проявляют тенденцию к потере жизнеспособности и желтеют.Harvesting is the most critical stage in the production process. If perennial Lolium is used as a host plant, the optimal harvest time is usually between 6 and 7 months after sowing because during this period the plants mature, complete their life cycle, tend to lose viability and turn yellow.
За пятнадцать дней до запланированной даты сбора урожая прекращается полив, а опавшую листву сохраняют, чтобы глина медленно теряла влагу, обеспечивая завершение способа инокуляции. Если это мероприятие совпадает с сезоном дождей, будет необходимо защитить грядку от дождя, чтобы она могла своевременно высохнуть, накрыв ее водонепроницаемым пластиком.Fifteen days before the scheduled harvest date, watering is stopped and the fallen leaves are stored so that the clay slowly loses moisture, ensuring the completion of the inoculation method. If this activity coincides with the rainy season, it will be necessary to protect the bed from rain so that it can dry in time by covering it with waterproof plastic.
- 10 045371- 10 045371
Сначала вручную удаляют надземную листву с растений-хозяев. Сбор урожая производят путем удаления глины с грядки. Субстрат удаляется путем разделения массы глины на как можно более тонкие порции, чтобы облегчить перемешивание их содержимого по всей глубине профиля, и помещают в мешки для транспортировки.First, above-ground foliage is removed from the host plants by hand. Harvesting is done by removing clay from the bed. The substrate is removed by dividing the mass of clay into the thinnest possible portions to facilitate mixing of their contents throughout the depth of the profile, and placed in bags for transport.
Этап 7: сушка и измельчение инокулята.Step 7: Drying and grinding the inoculum.
Сушка. Собранный субстрат и пропагулы микоризы подвергают воздействию солнечных лучей и термической дезинфекции в течение 30 дней при 50°С. Период сушки может быть увеличен до содержания влаги ниже 5% для облегчения измельчения.Drying. The collected substrate and mycorrhizal propagules are exposed to sunlight and thermal disinfection for 30 days at 50°C. The drying period can be extended to a moisture content below 5% to facilitate grinding.
Измельчение. Продукт измельчают в промышленной мельнице, охлаждают до 2°С, чтобы предотвратить перегрев микоризных пропагул. Измельчение продолжается до размера частиц менее 100 микрон.Grinding. The product is ground in an industrial mill and cooled to 2°C to prevent overheating of the mycorrhizal propagules. Grinding continues to a particle size of less than 100 microns.
Третья фаза - микрогрануляция.The third phase is microgranulation.
Способ микрогранулирования делится на три этапа.The microgranulation method is divided into three stages.
Добавление зернистого носителя во вращающийся биконический смеситель. Для изготовления носителя использовали смесь слюды, аттапульгита и известняка в диапазоне от 40 до 90 мас.%, более предпочтительно от 50 до 80 мас.%, еще более предпочтительно от 60 до 70 мас.%.Adding granular media to the rotating biconical mixer. A mixture of mica, attapulgite and limestone in the range of 40 to 90 wt%, more preferably 50 to 80 wt%, even more preferably 60 to 70 wt%, was used to prepare the support.
Добавление микоризы (арбускулярный микоризный гриб) внутрь вращающегося биконического смесителя: АМГ дозируют в пределах от 10 до 60 мас.%, более предпочтительно от 20 до 50 мас.%, еще более предпочтительно от 30 до 40 мас.% ранее произведенной Dominikia sp. (этап 7) вместе со связующим (воск, льняное масло, гуммиарабик, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, поливиниловый спирт, тапиоковая мука, лактоза, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, порошок лактозы, порошок сахарозы, крахмал тапиоки (мука из маниоки) и микрокристаллическая целлюлоза, камеди или белок, такой как яичный белок или казеин) в диапазоне от 1 до 25% по весу, более предпочтительно от 5 до 20% по весу, более предпочтительно от 10 до 15% по весу. Во время этой операции смеситель продолжает двигаться до полной гомогенизации гранул.Addition of mycorrhiza (arbuscular mycorrhizal fungus) inside the rotating biconical mixer: AMH is dosed in the range of 10 to 60 wt.%, more preferably 20 to 50 wt.%, even more preferably 30 to 40 wt.% of previously produced Dominikia sp. (step 7) together with a binder (wax, linseed oil, gum arabic, gum tragacanth, methylcellulose, polyvinyl alcohol, tapioca flour, lactose, sucrose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, lactose powder, sucrose powder, tapioca starch (cassava flour) and microcrystalline cellulose, gum or protein such as egg white or casein) in the range of 1 to 25% by weight, more preferably 5 to 20% by weight, more preferably 10 to 15% by weight. During this operation, the mixer continues to move until the granules are completely homogenized.
Упаковка. После полной гомогенизации приготовленный продукт выгружают на сито для удаления комков и образовавшейся пыли. Наконец, продукт собирают в упаковочный бункер, из которого он автоматически переходит к наполнению соответствующих контейнеров.Package. After complete homogenization, the prepared product is discharged onto a sieve to remove lumps and formed dust. Finally, the product is collected into a packaging hopper, from which it automatically proceeds to filling the appropriate containers.
Контроль качества и упаковка.Quality control and packaging.
Контроль качества. Чистоту и концентрацию конечного продукта определяют с помощью метода наиболее вероятных чисел Портера (1979) (Porter, W.M., 1979, The most probable number method for enumerating infective propagules of vesicular arbuscular mycorrhizal fungi in soils, Aust. J. Soil Res., 17:515-519).Quality control. Purity and concentration of the final product are determined using Porter, W.M., 1979, The most probable number method for enumerating infective propagules of vesicular arbuscular mycorrhizal fungi in soils, Aust. J. Soil Res., 17: 515-519).
Упаковка. Готовую продукцию упаковывают и маркируют для транспортировки.Package. Finished products are packaged and labeled for transportation.
Конечная концентрация микрогранулированной композиции составляет концентрация MPN: >1x104 пропагул на 100 мл продукта.The final concentration of the microgranular composition is MPN concentration: >1x10 4 propagules per 100 ml of product.
Пример 4. Влияние композиции по изобретению на развитие пшеницы (Triticum durum).Example 4. Effect of the composition according to the invention on the development of wheat (Triticum durum).
Чтобы продемонстрировать эффективность композиции по настоящему изобретению, которая включает арбускулярный микоризный гриб (АМГ) Dominikia sp., депонированный под регистрационным номером MUCL 57072 на пшенице, было проведено испытание на экспериментальном поле Tres caminos, принадлежащем CEBAS-CSIC в Мурсии.To demonstrate the effectiveness of the composition of the present invention, which includes the arbuscular mycorrhizal fungus (AMF) Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072 on wheat, a test was carried out in the Tres caminos experimental field belonging to CEBAS-CSIC in Murcia.
План эксперимента представлял собой рандомизированный блок с четырьмя повторами. Опытные участки имели длину 3 м и ширину 4,2 м.The experimental design was a randomized block with four replicates. The experimental plots were 3 m long and 4.2 m wide.
Применяли следующие методы обработки.The following processing methods were used.
Контроль: без применения химических удобрений и грибов.Control: without the use of chemical fertilizers and mushrooms.
Композиция по изобретению. Предлагается в микрогранулированной форме с нормой 10 кг/га в сочетании с химическим удобрением (Guerra, B.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiologico en la Agricultura sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, т. 21, № 1, с. 191-201).Composition according to the invention. Available in microgranular form at a rate of 10 kg/ha in combination with chemical fertilizer (Guerra, B.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiologico en la Agricultura sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, vol. 21, no. 1, pp. 191-201).
Стандартный продукт: химическое удобрение (Guerra, B.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiologico en la Agricultura sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, т. 21, № 1, с. 191-201): 150 кг/га азота, 54 кг фосфора/га, калия 100 кг/га, кальция 15 кг/га, магния 15 кг/га, серы 23 кг/га и других микроэлементов.Standard product: chemical fertilizer (Guerra, B.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiologico en la Agricultura sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, vol. 21, no. 1, pp. 191-201): 150 kg/ha nitrogen, 54 kg phosphorus/ ha, potassium 100 kg/ha, calcium 15 kg/ha, magnesium 15 kg/ha, sulfur 23 kg/ha and other trace elements.
Посадку осуществляли 1 ноября 2013 г., а сбор урожая - 1 июня 2014 г., в общей сложности 240 дней. Используемый тип посева и инокуляции был механическим и производился прохождением зерновой сеялки, а композицию микрогранулята по изобретению вносили в дозе 10 кг/га вместе с семенами.Planting took place on November 1, 2013, and harvesting took place on June 1, 2014, for a total of 240 days. The type of sowing and inoculation used was mechanical and was carried out by passing a grain seeder, and the microgranulate composition according to the invention was applied at a dose of 10 kg/ha along with the seeds.
Используемая почва была классифицирована как Нитисоли (IUSS Working Group. WRB. World reference base for soil resources, 2006, World Soil Resources Reports, Rome: FAO, 2006). Для химической характеристики почвы использовали следующие аналитические методы:The soil used was classified as Nitisols (IUSS Working Group. WRB. World reference base for soil resources, 2006, World Soil Resources Reports, Rome: FAO, 2006). For the chemical characteristics of the soil, the following analytical methods were used:
рН: отношение почвы к раствору 1: 2,5;pH: soil to solution ratio 1: 2.5;
органические вещества (ОВ): Уокли и Блэк.organic matter (OM): Walkley and Black.
Р2О5: Ониани;R 2 O 5 : Oniani;
обменные катионы: экстракция NH4 АС, 1 моль/л, рН 7 и комплексонометрическое титрование (Са и Mg) и пламенная фотометрия (Na и K).exchangeable cations: NH 4 AC extraction, 1 mol/l, pH 7 and complexometric titration (Ca and Mg) and flame photometry (Na and K).
- 11 045371- 11 045371
Эти методы описаны в руководстве по аналитическим методам анализа почвы, листвы, органических удобрений и химических удобрений (Institute National de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicasThese methods are described in the manual on analytical methods for the analysis of soil, foliage, organic fertilizers and chemical fertilizers (Institute National de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas
Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos у Ferizantes quimicos: La Habana, 1989).Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos y Ferizantes quimicos: La Habana, 1989).
Результаты химических характеристик почвы (табл. 2) показывают плодородие от среднего до высокого, отмечая среднее содержание органических веществ, которое соответствует описанному для этого типа почвы (Hernandez, A., Morell, F., Ascanio, М.О., Borges, Y., Morales, M., у Yong, A., Cambios globales de los suelos Ferraliticos Rojos Lixiviados (Nitisoles R0dicos Eutricos) de la provincia La Habana, Cultivos Tropicales, 2006, том 27, № 2, с. 41- 50).The results of soil chemical characteristics (Table 2) show medium to high fertility, noting an average organic matter content that is consistent with that described for this soil type (Hernandez, A., Morell, F., Ascanio, M.O., Borges, Y ., Morales, M., y Yong, A., Cambios globales de los suelos Ferraliticos Rojos Lixiviados (Nitisoles R0dicos Eutricos) de la provincia La Habana, Cultivos Tropicales, 2006, vol. 27, no. 2, pp. 41-50).
Таблица 2table 2
Химические характеристики почвыSoil chemical characteristics
Штамм гриба изобретения Dominikia sp. был выделен из засоленной почвы, гриб устойчив к высоким концентрациям солей.Fungus strain of invention Dominikia sp. was isolated from saline soil, the fungus is resistant to high salt concentrations.
Анализируемыми параметрами были: количество спор АМГ на грамм ризосферы (Gederman, J.W., у Trappe, J.M., The endogonaceae in the pacific northwest, Mycologia Memoir, № 5, The New York Botanic Garden, 1974, № 5), процент колонизации микоризой с помощью техники окрашивания корней (Phillips, J.M., у Hayman, D.S., Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Tranfer. Britanic: Mycology Society, 1970, т. 55, с. 158-161) процент визуальной плотности с помощью метода отрезков (Giovannetti, M., у Mosse, В., An evaluation of techniques to measure vesicular-arbuscular infection in roots, New Phytology, 1980, т. 84, с. 489-500) и общее содержание гломалина (гликопротеина), которое было получено методом варки под давлением (Wright, S.E., Nichols, К.А., у Schmidt, W.F., Comparison of efficacy of three extractants to solubilize glomalin on hyphae and in soil, Chemosphere, 2006, т. 64, № 7, с. 1219-1224).The analyzed parameters were: the number of AMF spores per gram of rhizosphere (Gederman, J.W., in Trappe, J.M., The endogonaceae in the pacific northwest, Mycologia Memoir, No. 5, The New York Botanic Garden, 1974, No. 5), the percentage of mycorrhizal colonization using root staining techniques (Phillips, J.M., in Hayman, D.S., Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Tranfer. Britanic: Mycology Society, 1970, vol. 55, pp. 158-161 ) percentage of visual density using the method of segments (Giovannetti, M., in Mosse, V., An evaluation of techniques to measure vesicular-arbuscular infection in roots, New Phytology, 1980, vol. 84, pp. 489-500) and general glomalin (glycoprotein) content, which was obtained by pressure cooking (Wright, S.E., Nichols, K.A., in Schmidt, W.F., Comparison of efficacy of three extractants to solubilize glomalin on hyphae and in soil, Chemosphere, 2006, t 64, No. 7, pp. 1219-1224).
Содержание нутриентов в листьях (% N, Р и K) и общее содержание белка определяли методами, описанными в лабораторном руководстве по аналитическим методам INCA (Instituto Nacional de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos у fertilizantes quimicos: La Habana, 1989).Leaf nutrient content (% N, P and K) and total protein content were determined by the methods described in the INCA laboratory manual of analytical methods (Instituto Nacional de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos y fertilizantes quimicos : La Habana, 1989).
Урожайность оценивали следующим образом: оценивали количество зерен на колосе; количество колосьев на м2; массу на 1000 зерен и урожайность (т/га).Productivity was assessed as follows: the number of grains per ear was assessed; number of ears per m2 ; weight per 1000 grains and yield (t/ha).
Статистическая обработка экспериментальных результатов проводилась путем анализа однофакторного дисперсионного анализа, использования теста Дункана (Duncan, D.B., Multiple range and multiple F tests. Biometrics, 1955, т. 11, № 1), а там, где были различия между обрабатываемыми значениями во всех случаях использовался статистический процессор SPSS 11,5.Statistical processing of the experimental results was carried out by analyzing one-way analysis of variance, using the Duncan test (Duncan, D.B., Multiple range and multiple F tests. Biometrics, 1955, vol. 11, No. 1), and where there were differences between the processed values in all cases statistical processor SPSS 11.5 was used.
Результаты и обсуждение.Results and discussion.
В табл. 3 показаны результаты различных обработок параметров микоризы. Эти значения ясно показывают возрастание количества спор там, где применяли композицию по настоящему изобретению по сравнению с контролем (без химического удобрения) и стандартным продуктом.In table Figure 3 shows the results of various treatments of mycorrhizal parameters. These values clearly show an increase in the number of spores where the composition of the present invention was applied compared to the control (without chemical fertilizer) and the standard product.
Таблица 3Table 3
Влияние обработок на изучаемые параметры микоризы.The influence of treatments on the studied parameters of mycorrhiza.
* Различные буквы в одном столбце значимо различаются при р <0,05.*Different letters in the same column are significantly different at p < 0.05.
- 12 045371- 12 045371
Вышеуказанное может быть связано с сильной колонизационной активностью, затрудняющей колонизацию корней другими видами арбускулярных микоризных грибов. С другой стороны, это показывает, что колонизация микоризой также была более эффективна при применении композиции по изобретению, что отражают более высокие значения по сравнению с другими видами обработки.The above may be due to strong colonization activity, which makes it difficult for other species of arbuscular mycorrhizal fungi to colonize roots. On the other hand, this shows that mycorrhizal colonization was also more effective with the composition of the invention, as reflected by higher values compared to other treatments.
Следует отметить, что нативные штаммы в почве показали низкие значения колонизации. Наблюдение за значениями визуальной плотности (переменная, являющаяся мерой интенсивности микоризной колонизации) показывает, что самый высокий процент был получен с композицией по изобретению.It should be noted that native strains in soil showed low colonization values. Observation of visual density values (a variable that is a measure of the intensity of mycorrhizal colonization) shows that the highest percentage was obtained with the composition of the invention.
Другой переменной, которую следует выделить, было общее содержание гликопротеинов, которое было выше с композицией по изобретению. Это явление подтверждает больший симбиоз микоризы при применении композиции по изобретению и возможное влияние инокулята на усиление образования агрегатов в почве. Более того, обработки, при которых инокулят микоризы не применялся, имели низкие значения этого параметра, что может быть связано с низкой эффективностью нативной микоризы.Another variable that should be highlighted was the total glycoprotein content, which was higher with the composition of the invention. This phenomenon confirms the greater symbiosis of mycorrhizae when using the composition according to the invention and the possible influence of the inoculum on increasing the formation of aggregates in the soil. Moreover, treatments in which no mycorrhizal inoculum was used had low values for this parameter, which may be due to the low efficiency of native mycorrhiza.
В табл. 4 показано содержание минеральных веществ в листьях при каждой обработке. Для азота и фосфора содержание было выше при применении композиции по изобретению, в то время как содержание натрия было выше при внесении химических удобрений.In table Figure 4 shows the mineral content in the leaves for each treatment. For nitrogen and phosphorus, the content was higher when using the composition according to the invention, while the sodium content was higher when applying chemical fertilizers.
Таблица 4Table 4
Листовой азот, фосфор, калий и общий белокLeaf nitrogen, phosphorus, potassium and total protein
* Различные буквы в одном столбце значисо различаются при р <0,05.*Different letters in the same column are significantly different at p < 0.05.
Следует отметить, что заявленные значения (L0pez-Bellido, L., Cultivos herbaceos. Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991. с. 151-158) для этого параметра (% N листвы) выше критического индекса урожайности пшеницы между 4 и 5 т/га.It should be noted that the stated values (L0pez-Bellido, L., Cultivos herbaceos. Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991. pp. 151-158) for this parameter (% foliage N) are above the critical wheat yield index between 4 and 5 t/ha.
Аналогичные результаты (Cornejo, P., Borie, F., Rubio, R., у Azcon, R., Influence of nitrogen source on the viability, functionality and persistence of Glomus etunicatum fungal propagules in an Andisol, Applied Soil Ecology, 2007, т. 35, № 2, с. 423-431; Echeverria, E., у Stiddert, G.A., El contenido de nitrogeno en la hoja bandera del trigo como predictivo del incremento de proteina en el grano por aplicaciones de nitrogeno en la espigazon (The nitrogen content in the wheat flag leaf as predictive of the increase in protein in the grain by nitrogen applications to the ear), Revista de la Facultad de Agronomia, 1998, т. 103, № 1, с. 10) указывают на присутствие этого нутриента в ткани листа из-за процесса микоризного симбиоза, который позволяет абсорбировать и транспортировать нутриенты через мицелий. Не было показано значительных отличий в содержании фосфора ни для одной из обработок, что может быть связано с содержанием в почве этого элемента (табл. 4), который поглощается растениями из почвенного раствора в этом конкретном случае через корневую систему по механизму трехстороннего взаимодействия между растением, арбускулярной микоризой (микоризный симбиоз) и почвой, указано более высокое значение этого нутриента, чем критический индекс в листьях твердой пшеницы (Lopez-Bellido, L. Cultivos herbaceos. Cereales., ed. MundiPrensa, 1991, с. 151-158) и отмечено хорошее развитие культуры. Кроме того, это значение отклонялось больше там, где применялась композиция по изобретению.Similar results (Cornejo, P., Borie, F., Rubio, R., in Azcon, R., Influence of nitrogen source on the viability, functionality and persistence of Glomus etunicatum fungal propagules in an Andisol, Applied Soil Ecology, 2007, vol. 35, no. 2, pp. 423-431; Echeverria, E., in Stiddert, G. A., El contenido de nitrogeno en la hoja bandera del trigo como predictivo del incremento de proteina en el grano por aplicaciones de nitrogeno en la espigazon ( The nitrogen content in the wheat flag leaf as predictive of the increase in protein in the grain by nitrogen applications to the ear), Revista de la Facultad de Agronomia, 1998, vol. 103, no. 1, p. 10) indicate the presence of this nutrients in leaf tissue due to the process of mycorrhizal symbiosis, which allows the absorption and transport of nutrients through the mycelium. There were no significant differences in phosphorus content for any of the treatments, which may be due to the content of this element in the soil (Table 4), which is absorbed by plants from the soil solution in this particular case through the root system through the mechanism of three-way interaction between the plant, arbuscular mycorrhiza (mycorrhizal symbiosis) and soil, a higher value of this nutrient is indicated than the critical index in durum wheat leaves (Lopez-Bellido, L. Cultivos herbaceos. Cereales., ed. MundiPrensa, 1991, pp. 151-158) and noted good cultural development. In addition, this value deviated more where the composition according to the invention was used.
Другим важным параметром является содержание белка в листьях, которое выше при обработке композицией по изобретению (даже выше, чем при обработке химическим удобрением). Наконец, контрольная обработка имела значительно более низкое процентное содержание.Another important parameter is the protein content of the leaves, which is higher when treated with the composition according to the invention (even higher than when treated with a chemical fertilizer). Finally, the control treatment had a significantly lower percentage.
Результаты урожайности и ее компонентов (табл. 4) четко отражают реакцию твердой пшеницы на применение композиции по изобретению и стандартного продукта, в равной мере с высоким содержанием N°.The results of yield and its components (Table 4) clearly reflect the response of durum wheat to the application of the composition according to the invention and the standard product, equally with a high N° content.
- 13 045371- 13 045371
Таблица 5Table 5
Влияние обработок на урожайность и ее параметрыThe influence of treatments on yield and its parameters
* Различные буквы в одном столбце значимо различаются при р <0,05.*Different letters in the same column are significantly different at p < 0.05.
Обработка композицией по изобретению и стандартным продуктом дала наивысшие значения по каждому параметру по сравнению с контролем. Это можно объяснить большей эффективностью твердого инокулята и применением высоких доз азота.Treatment with the composition of the invention and the standard product gave the highest values for each parameter compared to the control. This can be explained by the greater efficiency of solid inoculum and the use of high doses of nitrogen.
Следует отметить, что выращивание пшеницы в комбинации с композицией по изобретению позволило достичь адекватной продуктивности с удовлетворительными показателями воздействия микоризы не только на улучшение биологической активности почвы, но и способствовало значительному увеличению урожайности на 8,8% по сравнению с контролем и стандартным продуктом.It should be noted that growing wheat in combination with the composition according to the invention made it possible to achieve adequate productivity with satisfactory indicators of the impact of mycorrhiza not only on improving the biological activity of the soil, but also contributed to a significant increase in yield by 8.8% compared to the control and standard product.
Пример 5. Влияние композиции по изобретению на развитие кукурузы (Zea mays).Example 5. Effect of the composition according to the invention on the development of corn (Zea mays).
Чтобы продемонстрировать эффективность композиции по настоящему изобретению, которая включает арбускулярный микоризный гриб (АМГ) Dominikia sp., депонированный под регистрационным номером MUCL 57072, на кукурузе, было проведено испытание на поле недалеко от города Эгеа-де-лос Кабальерос. Была протестирована микрогранулированная форма композиции по настоящему изобретению. Стандартный продукт использовали для сравнения влияния обоих продуктов на выращивание кукурузы, вар DKC 6717, Monsanto; на почвах группы Камбисоли.To demonstrate the effectiveness of the composition of the present invention, which includes the arbuscular mycorrhizal fungus (AMF) Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072, on maize, a field trial was carried out near the city of Egea de los Caballeros. A microgranular form of the composition of the present invention was tested. A standard product was used to compare the effects of both products on corn production, var DKC 6717, Monsanto; on soils of the Cambisol group.
Посадка была произведена 12 апреля, а сбор урожая -14 декабря 2014 г., в общей сложности 230 дней. Используемый тип посева и инокуляции был механическим и осуществлялся прохождением зерновой сеялки, а композиция микрогранулята изобретения вносилась в дозе 10 кг/га вместе с семенами. Используемая распылительная система имела размер 18x18 м.Planting took place on April 12 and harvesting took place on December 14, 2014, for a total of 230 days. The type of sowing and inoculation used was mechanical and was carried out by passing a grain seeder, and the microgranulate composition of the invention was applied at a dose of 10 kg/ha along with the seeds. The spray system used was 18 x 18 m in size.
Проект эксперимента представлял собой рандомизированный блок с тремя повторами. Экспериментальные участки были 20 м в длину и 20 м в ширину.The experimental design was a randomized block with three replicates. The experimental plots were 20 m long and 20 m wide.
Применялись следующие методы обработки.The following processing methods were used.
Композиция по изобретению: вносили из расчета 10 кг/га и химическое удобрение (Guerra, В.Е., Micorriza arbuscular. Recurso microbiol0gico en la Agriculture sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, т. 21, № 1, с. 191-201).Composition according to the invention: applied at the rate of 10 kg/ha and chemical fertilizer (Guerra, V.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiol0gico en la Agriculture sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, v. 21, no. 1, pp. 191-201 ).
Стандартный продукт: химическое удобрение (Guerra, B.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiologico en la Agricultura sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, т. 21, № 1, с. 191-201): 325 кг/га азота, 80 кг фосфора/га и калия 200 кг/га, при первоначальном внесении органики в виде навозной жижи 10 т/га.Standard product: chemical fertilizer (Guerra, B.E., Micorriza arbuscular. Recurso microbiologico en la Agricultura sostenible, Tecnologia en Marcha, 2008, vol. 21, no. 1, pp. 191-201): 325 kg/ha nitrogen, 80 kg phosphorus/ ha and potassium 200 kg/ha, with the initial application of organic matter in the form of slurry 10 t/ha.
Используемая почва была классифицирована как Камбисоль (IUSS Working Group. WRB. World reference base for soil resources 2006. World Soil Resources Reports. Rome: FAO, 2006). Для химической характеристики почвы использовались следующие аналитические методы:The soil used was classified as Cambisol (IUSS Working Group. WRB. World reference base for soil resources 2006. World Soil Resources Reports. Rome: FAO, 2006). The following analytical methods were used for the chemical characterization of the soil:
рН: отношение почвы к раствору 1:2,5;pH: soil to solution ratio 1:2.5;
органические вещества (ОВ): Уокли и Блэк;organic matter (OM): Walkley and Black;
Р2О5: Ониани.R 2 O 5 : Oniani.
обменные катионы: экстракция NH4 АС, 1 моль/л, рН 7 и комплексонометрическое титрование (Са и Mg) и пламенная фотометрия (Na и K).exchange cations: NH4 extraction AC, 1 mol/l, pH 7 and complexometric titration (Ca and Mg) and flame photometry (Na and K).
Эти методы описаны в руководстве по аналитическим методам анализа почвы, листвы, органических и химических удобрений (Instituto Nacional de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos у Ferizantes quimicos: La Habana, 1989).These methods are described in the manual on analytical methods for the analysis of soil, foliage, organic and chemical fertilizers (Instituto Nacional de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos y Ferizantes quimicos: La Habana, 1989).
Результаты химических характеристик почвы (табл. 6) показывают плодородие от среднего до высокого, отмечается среднее содержание органического вещества, которое соответствует описанному для этого типа почвы (Hernandez, A., Morell, F., Ascanio, М.О., Borges, Y., Morales, M., у Yong, A., Cambios globales de los suelos Ferraliticos Rojos Lixiviados (Nitisoles R0dicos Eutricos) de la provincia La Habana, Cultivos Tropicales, 2006, том 27, № 2, с. 41- 50).The results of the chemical characteristics of the soil (Table 6) show medium to high fertility, there is an average content of organic matter, which corresponds to that described for this type of soil (Hernandez, A., Morell, F., Ascanio, M.O., Borges, Y ., Morales, M., y Yong, A., Cambios globales de los suelos Ferraliticos Rojos Lixiviados (Nitisoles R0dicos Eutricos) de la provincia La Habana, Cultivos Tropicales, 2006, vol. 27, no. 2, pp. 41-50).
- 14 045371- 14 045371
Таблица 6Table 6
Химические характеристики почвыSoil chemical characteristics
Штамм гриба Dominikia sp. по изобретению выделяли из засоленной почвы; этот гриб устойчив к высоким концентрациям солей.Fungus strain Dominikia sp. according to the invention was isolated from saline soil; this mushroom is resistant to high salt concentrations.
Анализируемыми параметрами были: процент колонизации микоризой с помощью техники окрашивания корней (Phillips, J.M., у Hayman, D.S., Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesiculararbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Tranfer. Britanic: Mycology Society, 1970, т. 55, с. 158-161) и процент визуальной плотности (ВП) с помощью метода отрезков (Giovannetti, M., у Mosse, В., An evaluation of techniques to measure vesicular-arbuscular infection in roots, New Phytology, 1980, т. 84, с. 489-500). Содержание нутриентов в листьях (% N, Р и K) определяли методами, описанными в лабораторном руководстве по аналитическим методам (Institute National de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos у Ferizantes quimicos: La Habana, 1989 г.).The parameters analyzed were: percentage of mycorrhizal colonization using the root staining technique (Phillips, J.M., in Hayman, D.S., Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesiculararbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Tranfer. Britanic: Mycology Society, 1970, t 55, pp. 158-161) and percent visual density (VP) using the intercept method (Giovannetti, M., in Mosse, V., An evaluation of techniques to measure vesicular-arbuscular infection in roots, New Phytology, 1980, vol. 84, pp. 489-500). Leaf nutrient content (% N, P and K) was determined by the methods described in the laboratory manual on analytical methods (Institute National de Ciencias Agricolas, Manual de tecnicas Analiticas para analisis de suelo, foliar, abonos organicos y Ferizantes quimicos: La Habana, 1989 G.).
Урожайность оценивали следующим образом: оценивали количество зерен на колос; количество колосьев на квадратный метр; масса на 1000 зерен и урожайность (т/га).Productivity was assessed as follows: the number of grains per ear was assessed; number of ears per square meter; weight per 1000 grains and yield (t/ha).
Статистическая обработка экспериментальных результатов проводилась с помощью однофакторного дисперсионного анализа и теста Дункана (Duncan, D.B., Multiple range and multi range and test of Duncan), когда были различия между средствами обработки, во всех случаях использовался статистический процессор SPSS 11.5.Statistical processing of experimental results was carried out using one-way analysis of variance and Duncan's test (Duncan, D.B., Multiple range and multi range and test of Duncan), when there were differences between processing tools, in all cases the statistical processor SPSS 11.5 was used.
Результаты и обсуждение.Results and discussion.
В табл. 7 показаны результаты развития микоризной активности через 45 и 120 дней после посадки. Эти значения четко показали повышенную активность там, где применялась композиция по изобретению, достижение не только большего процента колонизации микоризой, но также большей интенсивности колонизации, что отразилось через более высокую визуальную плотность.In table Figure 7 shows the results of the development of mycorrhizal activity 45 and 120 days after planting. These values clearly showed increased activity where the composition of the invention was applied, achieving not only a greater percentage of mycorrhizal colonization, but also a greater intensity of colonization, as reflected through a higher visual density.
Таблица 7Table 7
Влияние обработки на изученные параметры микоризыEffect of treatment on the studied parameters of mycorrhiza
* Различные буквы в одном столбце значимо различаются при р <0,05.*Different letters in the same column are significantly different at p < 0.05.
Этот анализ показал, что наиболее эффективным инокулятом была композиция по изобретению, на что указывают более высокие значения по сравнению с другими видами обработки.This analysis showed that the most effective inoculum was the composition according to the invention, as indicated by higher values compared to other treatments.
Значения визуальной плотности (параметр, который измеряет интенсивность колонизации микоризой) показывают, что самый высокий процент также был связан с композицией по изобретению и тесно связан с эффективностью.Visual density values (a parameter that measures the intensity of mycorrhizal colonization) show that the highest percentage was also associated with the composition of the invention and is closely related to effectiveness.
Измеряли минеральное содержимое листьев (табл. 8). Результаты не показали значимых различий между обеими обработками, композицией по изобретению и стандартным продуктом. Однако наблюдалась тенденция к увеличению запаса нутриентов, особенно в случае содержания азота в присутствии Dominikia sp. (композиция по изобретению).The mineral content of the leaves was measured (Table 8). The results showed no significant differences between both treatments, the composition according to the invention and the standard product. However, there was a tendency for nutrient supply to increase, especially in the case of nitrogen in the presence of Dominikia sp. (composition according to the invention).
- 15 045371- 15 045371
Таблица 8Table 8
Азот листьев, фосфор, калий через 120 дней в кукурузеLeaf nitrogen, phosphorus, potassium after 120 days in corn
* Различные буквы в одном столбце значимо различаются при р <0,05.*Different letters in the same column are significantly different at p < 0.05.
Следует отметить, что значения содержания азота, полученные при обработке композицией по изобретению, выше критического индекса пшеницы для урожайности между 4 до 5 т/га (L0pez-Bellido, L., Cultivos herbaceos, Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991, с. 151-158).It should be noted that the nitrogen content values obtained when treated with the composition according to the invention are higher than the critical wheat index for yields between 4 and 5 t/ha (L0pez-Bellido, L., Cultivos herbaceos, Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991, p. . 151-158).
He было показано значимых отличий в содержании фосфора в листьях ни для одной из обработок, что может быть связано с содержанием в почве этого элемента (табл. 8), который поглощается растениями из почвенного раствора в этом конкретном случае через корневую систему с помощью трехстороннего взаимодействия между растением, арбускулярной микоризой (микоризный симбиоз) и почвой, указано более высокое значение этого нутриента, чем критический индекс в листьях твердой пшеницы (Lopez-Bellido, L., Cultivos herbaceos, Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991. с. 151-158) и отмечено хорошее развитие культуры. Кроме того, это значение отклонялось больше там, где применялась композиция по изобретению.There were no significant differences in the phosphorus content in the leaves for any of the treatments, which may be due to the content of this element in the soil (Table 8), which is absorbed by plants from the soil solution in this particular case through the root system using a three-way interaction between plant, arbuscular mycorrhiza (mycorrhizal symbiosis) and soil, a higher value of this nutrient is indicated than the critical index in durum wheat leaves (Lopez-Bellido, L., Cultivos herbaceos, Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991. p. 151- 158) and good cultural development was noted. In addition, this value deviated more where the composition according to the invention was used.
Аналогичные результаты для пшеницы и кукурузы демонстрируют влияние минеральных удобрений на процент длины колонизированных корней там, где были внесены низкие дозы фосфора. Это подтверждает важность и полезность композиции по изобретению для кукурузы и пшеницы в отношении увеличения абсорбции фосфора из почвы как в присутствии, так и в отсутствие азота и фосфора, что позволяет минимизировать применяемые дозы удобрений.Similar results for wheat and corn demonstrate the effect of mineral fertilizers on the percentage of colonized root length where low doses of phosphorus were applied. This confirms the importance and usefulness of the composition according to the invention for corn and wheat in terms of increasing the absorption of phosphorus from the soil, both in the presence and absence of nitrogen and phosphorus, thereby minimizing the applied doses of fertilizers.
Содержание калия в листьях было близким для разных исследованных обработок, показывая удовлетворительные уровни для этой культуры, которые сопоставимы с данными по зерновым об этом макроэлементе (Lopez-Bellido, L., Cultivos herbaceos, Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991, с. 151-158). Более того, высокие концентрации этого элемента обнаружены как в растениях с микоризой, так и без нее (Bolleta, А., у Krugger, H., Fertilizacion e inoculacion con hongos micorrizicos arbusculares en trigo, Buenos Aires: Institute Nacional de Tecnologia Agropecuaria, 2004.; Saleque, M.A., Timsina, J., Panaullah, G.M., Ishaque, M., Pathan, D.J., Saha, P.K., Quayyum, M.A., Humphreys, Е..ю у Meisner, C.A., Nutrient uptake and apparent balances for rice-wheat sequences. II. Phosphorus. Journal of Plant Nutrition, 2006, т. 29, № 1, с. 157-172), что может быть связано с тем, что этот элемент легче перемещается в почвенном растворе.Leaf potassium content was similar among the treatments tested, showing satisfactory levels for this crop that are comparable to cereal data for this macronutrient (Lopez-Bellido, L., Cultivos herbaceos, Cereales, ed. Mundi-Prensa, 1991, p. 151-158). Moreover, high concentrations of this element are found both in plants with and without mycorrhiza (Bolleta, A., in Krugger, H., Fertilizacion e inoculacion con hongos micorrizicos arbusculares en trigo, Buenos Aires: Institute Nacional de Tecnologia Agropecuaria, 2004 .; Saleque, M.A., Timsina, J., Panaullah, G.M., Ishaque, M., Pathan, D.J., Saha, P.K., Quayyum, M.A., Humphreys, E.yu Meisner, C.A., Nutrient uptake and apparent balances for rice -wheat sequences. II. Phosphorus. Journal of Plant Nutrition, 2006, vol. 29, no. 1, pp. 157-172), which may be due to the fact that this element moves more easily in the soil solution.
В таблице ниже собраны полученные результаты (табл. 9), которые четко отражают реакцию кукурузы на применение композиции по изобретению и стандартного продукта.The table below summarizes the results obtained (Table 9), which clearly reflect the response of corn to the use of the composition according to the invention and the standard product.
Таблица 9Table 9
* Различные буквы в одном столбце значимо различаются при р<0,05.*Different letters in the same column are significantly different at p<0.05.
Растения, обработанные композицией по изобретению, достигли наивысших значений по сравнению со стандартным продуктом, что можно объяснить большей эффективностью твердого инокулята для установления симбиоза с растением и, таким образом, лучшего усвоения высоких доз азота.Plants treated with the composition of the invention achieved the highest values compared to the standard product, which can be explained by the greater efficiency of the solid inoculum in establishing symbiosis with the plant and thus better uptake of high doses of nitrogen.
Наконец, в заключение следует отметить, что выращивание кукурузы, в комбинации с композицией по изобретению, позволило достичь положительного влияния на продуктивность с точки зрения эффек- 16 045371 тивности, достигнув увеличения урожайности на 9,18% по сравнению с внесением минеральных удобрений. Кроме того, показатели нутриентов показали более высокую динамику, а использование арбускулярного микоризного гриба по изобретению не только улучшило биологическую активность почвы, но и способствовало значительному росту продуктивности на основе более устойчивого управления.Finally, in conclusion, it should be noted that the cultivation of corn, in combination with the composition according to the invention, made it possible to achieve a positive effect on productivity in terms of efficiency, achieving an increase in yield by 9.18% compared to the application of mineral fertilizers. In addition, nutrient values showed higher dynamics, and the use of the arbuscular mycorrhizal fungus according to the invention not only improved the biological activity of the soil, but also contributed to a significant increase in productivity based on more sustainable management.
Пример 6. Эффективность покрытия семян кукурузы Dominikia sp. и адгезивным веществом для микоризной активности.Example 6 Effectiveness of corn seed coating with Dominikia sp. and an adhesive agent for mycorrhizal activity.
Цель: исследовать эффективность покрытия кукурузы Dominikia sp. и адгезивным веществом для активности микоризы.Objective: To investigate the effectiveness of maize coating with Dominikia sp. and an adhesive substance for mycorrhizal activity.
Для достижения этой цели три горшка (каждый считался повтором) были засеяны семенами кукурузы, покрытыми Dominikia sp. депонированным под регистрационным номером MUCL 57072 и адгезивным веществом.To achieve this goal, three pots (each considered a replicate) were sown with maize seeds coated with Dominikia sp. deposited under registration number MUCL 57072 and adhesive.
Семена были посажены 3 августа 2016 г., и через 21 и 35 дней после посадки были проведены тесты на колонизацию микоризой корня с использованием метода окрашивания Филипса и Хеймана (Phillips and Hayman, 1970).Seeds were planted on August 3, 2016, and mycorrhizal root colonization tests were performed 21 and 35 days after planting using the Phillips and Hayman staining method (Phillips and Hayman, 1970).
Таблица 10Table 10
Процент колонизации микоризой (% КМ) корешков семян кукурузы из зерна покрытого комбинацией Dominikia sp. и адгезивного вещества через 21 и 35 дней после посадки (дпп) соответственноPercentage of mycorrhizal colonization (% CM) of corn seed roots from grain coated with a combination of Dominikia sp. and adhesive substance 21 and 35 days after planting (dpp), respectively
Табл. 10 показывает, что в каждом из исследованных образцов был положительный процент колонизации микоризой, который увеличивался по мере роста растений. На этом этапе были обнаружены только начальные точки колонизации кукурузы, образованные сетью экстраматрикального мицелия, который только начал формироваться.Table Figure 10 shows that each of the samples examined had a positive percentage of mycorrhizal colonization, which increased as the plants grew. At this stage, only the initial points of maize colonization were discovered, formed by a network of extramatric mycelium that had just begun to form.
Выводы.Conclusions.
Покрытие семян кукурузы концентратом инокулята, содержащим Dominikia sp. и адгезивное вещество было эффективным, потому что оно создавало микоризные структуры в корне в виде экстраматрикального мицелия на первых стадиях развития растения. Были обнаружены проросшие споры, которые образовали внутреннюю сеть прорастания и колонизации. Также показаны значения колонизации в зависимости от времени роста кукурузы.Coating corn seeds with an inoculum concentrate containing Dominikia sp. and the adhesive was effective because it created mycorrhizal structures in the root as extramatric mycelium during the early stages of plant development. Germinated spores were found to form an internal network of germination and colonization. Colonization values as a function of corn growth time are also shown.
Пример 7. Результаты, полученные в полевых условиях с применением композиции по изобретению в микрогранулированной форме на пшенице и ячмене.Example 7. Results obtained in the field using the composition according to the invention in microgranular form on wheat and barley.
Результаты, полученные в полевых условиях с применением композиции по изобретению, содержащей Dominikia sp. депонированный под регистрационным номером MUCL 57072, в микрогранулированной форме на пшенице и ячмене, представлены в следующей табл. 11.Results obtained in the field using the composition according to the invention containing Dominikia sp. deposited under registration number MUCL 57072, in microgranular form on wheat and barley, are presented in the following table. eleven.
Таблица 11Table 11
- 17045371- 17045371
Пример 8. Результаты, полученные в полевых условиях при применении композиции по изобретению в микрогранулированной форме на кукурузе.Example 8. Results obtained in the field when using the composition according to the invention in microgranular form on corn.
Результаты, полученные в полевых условиях с применением композиции по изобретению, содержащей Dominikia sp. депонированный под регистрационным номером MUCL 57072, в микрогранулированной форме на кукурузе, представлены в следующей табл. 12.Results obtained in the field using the composition according to the invention containing Dominikia sp. deposited under registration number MUCL 57072, in microgranular form on corn, are presented in the following table. 12.
Таблица 12Table 12
Пример 9. Микоризная активность Dominikia sp. при выращивании риса (Oriza sativa) на пойменной почве.Example 9. Mycorrhizal activity of Dominikia sp. when growing rice (Oriza sativa) on floodplain soil.
Был проведен эксперимент для определения микоризной активности композиции по настоящему изобретению, содержащей Dominikia sp., депонированный под регистрационным номером MUCL 57072, в концентрированной форме, в условиях засоленной пойменной почвы. Используемая композиция имела концентрацию между 1-4x106 пропагул/г субстрата. С другой стороны, в соответствии с вариантами осуществления концентрация композиции может составлять 1-2x104, предпочтительно 1,2-1,8x104 пропагул/г субстрата.An experiment was conducted to determine the mycorrhizal activity of the composition of the present invention containing Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072, in concentrated form, in saline floodplain soil conditions. The composition used had a concentration of between 1-4x106 propagules/g substrate. On the other hand, in accordance with embodiments, the concentration of the composition may be 1-2x104, preferably 1.2-1.8x104 propagules/g substrate.
Материалы и методы.Materials and methods.
Эксперимент проводился на экспериментальной ферме Трес Каминос, принадлежащей CEBASCSIC и расположенной в районе Матанса, муниципалитет Сантомера (Мурсия). Растения выращивали в однослойной экспериментальной теплице туннельного типа приблизительной площадью 60 м2, покрытой поликарбонатом с верхним окном, защищенным противоскользящей сеткой. Она была оборудована системой охлаждения и системой алюминированных притеняющих экранов. Испытание проводилось с растениями риса (Oriza sativa) сорта J 104, подвергнутыми двум обработкам микоризным инокулятом, и соответствующим контролем без обработки микоризой. Обработка микоризой осуществлялась композицией по изобретению, содержащей Dominikia sp., депонированной под регистрационным номером MUCL 57072, в форме концентрата в дозе 1 кг/га покрытием семян риса.The experiment was carried out at the Tres Caminos experimental farm, owned by CEBASCSIC and located in the Matanza area, municipality of Santomera (Murcia). Plants were grown in a single-layer experimental tunnel-type greenhouse with an approximate area of 60 m 2 covered with polycarbonate with a top window protected by an anti-slip mesh. It was equipped with a cooling system and a system of aluminized shading screens. The test was carried out on rice (Oriza sativa) cultivar J 104 plants subjected to two mycorrhizal inoculum treatments and a corresponding control without mycorrhizal inoculum treatment. The mycorrhizal treatment was carried out with a composition according to the invention containing Dominikia sp., deposited under registration number MUCL 57072, in the form of a concentrate at a dose of 1 kg/ha, coated with rice seeds.
Когда была обеспечена инокуляция на отдельных побегах, через 15 дней после прорастания, растения были пересажены с густотой 10 растений на бетонный канал, площадью 2 м2, с использованием почвы Hidrom0rfico Gley Nodular Salinizado в соответствии с классификацией почв ЮНЕСКО (Hernadez, A., Perez, J.M., Bosch, D., Rivero, L., Nueva Version de Clasificaci0n Genetica de los Suelos de Cuba, Soil Institute, AGRINFOR, La Habana, 1999, с. 64) в качестве субстрата в обоих контейнерах. Основные характеристики показаны в табл. 1. Была проведена работа по выращиванию, слой воды был добавлен через 18 дней после посева семян во всех вариантах обработки.Once inoculation was ensured on individual shoots, 15 days after germination, the plants were transplanted at a density of 10 plants per 2 m 2 concrete channel using Hidrom0rfico Gley Nodular Salinizado soil according to the UNESCO soil classification (Hernadez, A., Perez , JM, Bosch, D., Rivero, L., Nueva Version de Clasificaci0n Genetica de los Suelos de Cuba, Soil Institute, AGRINFOR, La Habana, 1999, p. 64) as substrate in both containers. The main characteristics are shown in table. 1. Growing work was carried out, a layer of water was added 18 days after sowing the seeds in all treatment options.
Таблица 13Table 13
Некоторые химические свойства и количество спор в 50 г почвы-1 Some chemical properties and number of spores in 50 g of soil -1
1 В эксперименте использовалась почва Hidrom0rfico Gley Nodular Salinizado 1 The soil used in the experiment was Hidrom0rfico Gley Nodular Salinizado
- 18 045371- 18 045371
Характеристики композиции по изобретению в концентрированной форме.Characteristics of the composition according to the invention in concentrated form.
В данном примере композиция по изобретению в концентрированной форме с инокулятом микоризы содержит арбускулярный микоризный гриб Dominikia sp. депонирован под регистрационным номером MUCL 57072. Используемая композиция имела концентрацию между 1-4x106 пропагул/г субстрата.In this example, the composition according to the invention in concentrated form with a mycorrhizal inoculum contains the arbuscular mycorrhizal fungus Dominikia sp. deposited under registration number MUCL 57072. The composition used had a concentration of between 1-4x106 propagules/g substrate.
Выполненные определения.Completed definitions.
Определяли динамику роста в течение 90 дней после пересадки (дпп), где измеряли высоту растений и глубину корневой системы, а также урожайность и некоторые ее компоненты.Growth dynamics were determined during 90 days after transplantation (dpp), where plant height and root system depth were measured, as well as yield and some of its components.
Активность микоризы определяли в процессе развития сельскохозяйственных культур путем измерения процента колонизации (%), визуальной плотности (%), арбускулярного экстраматрикального мицелия и арбускулярных эндофитов с использованием стереомикроскопа (Zeiss, West Germany -5-) и биологического микроскопа Axiostar (Zeiss, West Germany -5-). Рассчитывали соотношение между арбускулярным внешним и эндофитным мицелием (МЭА:ЭА).Mycorrhizal activity was determined during crop development by measuring percent colonization (%), visual density (%), arbuscular extramatric mycelium and arbuscular endophytes using a stereomicroscope (Zeiss, West Germany -5-) and an Axiostar biological microscope (Zeiss, West Germany - 5-). The ratio between arbuscular external and endophytic mycelium (MEA:EA) was calculated.
Микоризную оценку образцов проводили с использованием техники окрашивания корней (Phillips, D.M., Hayman, D.S., Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Trans. Br. Mycol. Soc., 55, 158-161, 1970), а процент колонизации определяли методом отрезков (Giovannetti, M., Mosse, В. (1980), An evaluation of techniques to measure vesicular-arbuscular infection in roots, New Phytology., 84:489-500). Математический расчет визуальной плотности, арбускулярных эндофитов и микоризной активности проводился в соответствии с предложенными протоколами (Trouvelot, A., Kough, J., Gianinazzi Pearson, V. (1986), Mesure du Taux de Mycorhization VA d'un Systeme Radiculaire. Recherche de Methodes d'Estimation ayant une Signification Fonctionnelle, Proceedings of the 1st European Symposium on Mycorrhizae: Physiological and Genetical Aspects of Mycorrhizae, Dij0n, 15 July, 1985. (eds. V. Gianinazzi Pearson and S. Gianinazzi). INRA, Paris, с. 217-222; Herrera-Peraza, R., Eduardo Furrazola, Roberto L. Ferrer, Rigel Fernandez Valle and Yamir Torres Arias, 2004, Functional strategies of root hairs and arbuscular mycorrhizae in an evergreen tropical forest, Sierra del Rosario, Cuba. Revista CENIC Ciencias Biol0gicas, т. 35, № 2, 2004). Также определялась общая численность спор, г почвы-1.Mycorrhizal assessment of samples was performed using a root staining technique (Phillips, DM, Hayman, DS, Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection, Trans. Br. Mycol. Soc., 55, 158- 161, 1970), and the percentage of colonization was determined by the intercept method (Giovannetti, M., Mosse, V. (1980), An evaluation of techniques to measure vesicular-arbuscular infection in roots, New Phytology., 84:489-500). Mathematical calculation of visual density, arbuscular endophytes and mycorrhizal activity was carried out in accordance with the proposed protocols (Trouvelot, A., Kough, J., Gianinazzi Pearson, V. (1986), Mesure du Taux de Mycorhization VA d'un Systeme Radiculaire. Recherche de Methodes d'Estimation ayant une Signification Fonctionnelle, Proceedings of the 1st European Symposium on Mycorrhizae: Physiological and Genetical Aspects of Mycorrhizae, Dij0n, 15 July, 1985. (eds. V. Gianinazzi Pearson and S. Gianinazzi). INRA, Paris, p. 217-222; Herrera-Peraza, R., Eduardo Furrazola, Roberto L. Ferrer, Rigel Fernandez Valle and Yamir Torres Arias, 2004, Functional strategies of root hairs and arbuscular mycorrhizae in an evergreen tropical forest, Sierra del Rosario, Cuba. Revista CENIC Ciencias Biolgicas, vol. 35, no. 2, 2004). The total number of spores was also determined, g soil -1 .
Статистический анализ.Statistical analysis.
Статистическую обработку результатов проводили путем простого дисперсионного анализа классификации и критерия Тьюки при наличии значимых различий между средними значениями с использованием программы Statgraphics® Plus, 4.1. Для построения графиков (т.е. рисунков 1, 2 и 3) использовалась программа SigmaPlot 4.Statistical processing of the results was carried out by simple analysis of variance classification and Tukey's test in the presence of significant differences between the mean values using the Statgraphics® Plus, 4.1 program. SigmaPlot 4 software was used to generate the graphs (i.e., Figures 1, 2, and 3).
Процентные значения колонизации микоризой преобразовывали с использованием выражения 2arcsen^x.Percent mycorrhizal colonization values were converted using the expression 2arcsen^x.
Результаты и обсуждение.Results and discussion.
В приведенной выше табл. 13 показаны некоторые химические свойства почвы, использованной в эксперименте. Почва имела слабощелочной рН, средний уровень содержания органических веществ, Р и Са2+ порядка 10 смоль/кг. Что касается засоления, то содержание Na было высоким, была высокой и электропроводность, что указывало на сильное засоление, хотя плодородие было приемлем для развития риса.In the table above. Figure 13 shows some of the chemical properties of the soil used in the experiment. The soil had a slightly alkaline pH, the average level of organic matter, P and Ca 2+ was about 10 cmol/kg. Regarding salinity, Na content was high and electrical conductivity was high, indicating severe salinity, although fertility was acceptable for rice development.
Количество спор, выявленных в этом субстрате, было очень низким, что характерно для интенсивно используемых сельскохозяйственных почв, где разнообразие и интенсивность арбускулярных микоризных грибов (АМГ) снижены из-за интенсивной обработки почвы, чрезмерной эксплуатации и типичных процессов химизации и засоления etc. (Rao, D.L.N., 1998, Biological amelioration of salt-affected soils, in: Microbial Interactions in Agriculture and Forestry, vol. 1, Science Publishers, Enfield, USA, с. 21-238).The number of spores detected in this substrate was very low, which is typical for intensively used agricultural soils where the diversity and intensity of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) are reduced due to intensive tillage, over-exploitation and typical processes of chemicalization and salinization etc. (Rao, D.L.N., 1998, Biological amelioration of salt-affected soils, in: Microbial Interactions in Agriculture and Forestry, vol. 1, Science Publishers, Enfield, USA, pp. 21-238).
Анализ динамики роста риса в этих условиях показал отличное поведение изучаемых параметров при обработке. Высота растений постоянно увеличивалась, ускоряя развитие после 27-го дня (табл. 14).Analysis of the dynamics of rice growth under these conditions showed excellent behavior of the studied parameters during processing. Plant height constantly increased, accelerating development after the 27th day (Table 14).
- 19 045371- 19 045371
Таблица 14Table 14
Высота (см), глубина корневой системы (см) и микоризная колонизация (% МК) у растений, обработанных Dominikia sp. (D. t) и контрольные (K) растения в течение 90 дней ДПО в условиях засоленной почвыHeight (cm), root system depth (cm) and mycorrhizal colonization (%MC) of plants treated with Dominikia sp. (D. t) and control (K) plants for 90 days DPO in saline soil conditions
ГКК: глубина корневой системы;RKK: depth of the root system;
ДПО: дни после обработки;DPO: days after treatment;
СО: стандартное отклонение.SD: standard deviation.
Одинаковые буквы в одном столбце не различаются достоверно при р<0,05.Identical letters in the same column are not significantly different at p<0.05.
Оба метода обработки показывают значительную разницу в процессе роста. Наивысшие значения были получены при контрольной обработке до 18 дней, после чего произошло изменение поведения, и самые высокие значения для высоты растений были получены обработкой инокулятом грибом арбускулярной микоризы.Both treatment methods show a significant difference in the growth process. The highest values were obtained from the control treatment until 18 days, after which a change in behavior occurred, and the highest values for plant height were obtained from the arbuscular mycorrhizal fungus inoculum treatment.
Анализ динамики роста растений риса в этих условиях выявил различное поведение переменных при обработке. Высота растений неуклонно увеличивалась, ускоряя их рост после 27-го дня.Analysis of the growth dynamics of rice plants under these conditions revealed different behavior of the variables during treatment. The height of the plants increased steadily, accelerating their growth after the 27th day.
Оба метода обработки показывают значительную разницу в процессе роста. Самые высокие значения были получены при контрольной обработке до 18 дней, после чего произошло изменение поведения, и самые высокие значения высоты растений были получены при инокуляции эффективным грибом арбускулярной микоризы.Both treatment methods show a significant difference in the growth process. The highest values were obtained with the control treatment up to 18 days, after which a change in behavior occurred, and the highest plant height values were obtained with inoculation with the effective arbuscular mycorrhizal fungus.
Подобное поведение параметра высоты наблюдалось в глубине корневой системы, которая былаA similar behavior of the height parameter was observed deep in the root system, which was
- 20 045371 больше у обработанных, чем у контрольных растений, после 32 ДПО. В этом случае поведение было выделено, потому что это та часть растения, на которой развивается гриб.- 20 045371 more in treated than in control plants after 32 DPO. In this case, the behavior was highlighted because it is the part of the plant on which the fungus develops.
Исследование микоризной колонизации показало поведение, отличное от того, которое было обнаружено при ранее проанализированных параметрах. В этом случае и в обоих вариантах обработки колонизация была прогрессивной и всегда достигала наивысших значений при инокулярной обработке по сравнению с контрольной обработкой, которая, хотя и не была инокулирована, показывала естественные уровни микоризной колонизации, типичный результат экспериментов, проводимых в естественных условиях.The mycorrhizal colonization study showed different behavior than that found under previously analyzed parameters. In this case and in both treatments, colonization was progressive and always reached the highest values in the inoculated treatment compared to the control treatment, which, although not inoculated, showed natural levels of mycorrhizal colonization, a typical result of experiments conducted in natural conditions.
Развитие было хорошо выражено в случае инокулярной обработки АМГ, достигая высоких значений, если учесть, что эксперимент проводился в условиях затопления или со слоем воды через 20 дней. В конце культивирования колонизация корня достигла значения 44%, что считается высоким по сравнению с другими исследованиями микоризы риса, где максимумы колонизации не превышают 25% при посеве на твердую основу (Fernandez, F., Ortiz, R., Martinez, M.A., Costales, A., Llonin, D., The effect of commercial arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) inoculants on rice (Oryza sativa) in different types of soils, Cultivos Tropicales, 18(1):5-9, 1997).The development was well expressed in the case of inocular treatment with AMF, reaching high values considering that the experiment was carried out under flooding conditions or with a layer of water after 20 days. At the end of cultivation, root colonization reached a value of 44%, which is considered high compared to other studies of rice mycorrhiza, where colonization maximums do not exceed 25% when sown on solid ground (Fernandez, F., Ortiz, R., Martinez, M.A., Costales, A., Llonin, D., The effect of commercial arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) inoculants on rice (Oryza sativa) in different types of soils, Cultivos Tropicales, 18(1):5-9, 1997).
На фиг. 1 показано развитие двух очень важных параметра микоризной активности гриба при обработке инокулятом композицией по изобретению в концентрированной форме - популяции спор и заселения грибами, выраженных через процент визуальной плотности, который представляет собой не что иное, как интенсивность, с которой мицелий заселяет внутренность корня.In fig. 1 shows the development of two very important parameters of mycorrhizal activity of a fungus when treated with an inoculum of the composition according to the invention in concentrated form - spore population and fungal colonization, expressed through the percentage of visual density, which is nothing more than the intensity with which the mycelium colonizes the interior of the root.
Визуальная плотность показывала типичное микробное поведение с четко определенной латентной фазой, когда гриб медленно колонизировал внутреннюю часть корня от 0 до 20 дней, а затем демонстрировал экспоненциальный рост до 40 дней, время, когда он достигал стационарной фазы и конца выращивания.Visual density showed typical microbial behavior with a well-defined latent phase where the fungus slowly colonized the interior of the root from 0 to 20 days and then showed exponential growth until 40 days, the time when it reached the stationary phase and the end of growth.
В случае популяции спор, они определялисб в почве в первые дни с момента инокуляции (вплоть до 15 дней в стеблях), затем со временем постепенно исчезали; продукт прорастания в благоприятных условиях влажности и высокой температуры, детектировался до тех пор, пока популяция спор в почве не упала. Через 30 дней началось образование новых спор в результате развития внешней биомассы грибов и развития симбиоза с растением. В этом случае популяция продолжала расти до значений, близких к 12 спорам, г-1 почвы.In the case of a spore population, they were detected in the soil in the first days after inoculation (up to 15 days in the stems), then gradually disappeared over time; the product of germination under favorable conditions of humidity and high temperature was detected until the spore population in the soil fell. After 30 days, the formation of new spores began as a result of the development of external biomass of fungi and the development of symbiosis with the plant. In this case, the population continued to grow to values close to 12 spores g -1 soil.
Анализ арбускулярного внешнего мицелия и параметров арбускулярных эндофитов (фиг. 2) очень интересен, поскольку он показывает, как происходит внутреннее и внешнее поведение микоризного симбионта по мере развития симбиоза в ежегодных циклах культивирования.The analysis of the arbuscular external mycelium and the parameters of the arbuscular endophytes (Fig. 2) is very interesting because it shows how the internal and external behavior of the mycorrhizal symbiont occurs as the symbiosis develops in annual culture cycles.
В этом случае высокие значения внешнего мицелия наблюдались на первых этапах развития симбиоза, вызванного ростом грибов за счет роста растения, выразившись через несколько лет (Bethlenfalvay, G.J., Brown, M.S., Franson, R.L., Mihara, K.L., 1989, The glycine-glomus-bradyrhizobium symbiosis. IX. Nutritional, morphological and physiological response of nodulated soybean to geographic isolates of the mycorrhizal fungus of Glomus mosseae, Physiol. Plant., 76, 226-232), в явный паразитический процесс, возникающий в результате бурного роста мицелия на ранних стадиях микоризной колонизации растений (часы) в стадии низкого фотосинтеза и высоких метаболических затрат. В развитии арбускулярных эндофитов наблюдается обратная тенденция. В течение первых нескольких дней показатели были очень низкими, значительный рост наблюдался только через 25 дней роста, стадии, считающейся переходной в симбиозе арбускулярной микоризы.In this case, high values of external mycelium were observed in the early stages of the development of symbiosis caused by fungal growth due to plant growth, expressed after a few years (Bethlenfavay, G.J., Brown, M.S., Franson, R.L., Mihara, K.L., 1989, The glycine-glomus- bradyrhizobium symbiosis. IX. Nutritional, morphological and physiological response of nodulated soybean to geographic isolates of the mycorrhizal fungus of Glomus mosseae, Physiol. Plant., 76, 226-232), into a clear parasitic process resulting from rapid growth of the mycelium in early stages of mycorrhizal colonization of plants (hours) in the stage of low photosynthesis and high metabolic costs. The opposite trend is observed in the development of arbuscular endophytes. During the first few days, rates were very low, with significant growth only observed after 25 days of growth, a stage considered transitional in the arbuscular mycorrhizal symbiosis.
Через 30 дней наблюдается уменьшение и стабилизация внешнего мицелия и постепенное увеличение эндофита, связанное с ростом растений и развитием симбиоза.After 30 days, a decrease and stabilization of the external mycelium and a gradual increase in the endophyte are observed, associated with plant growth and the development of symbiosis.
На фиг. 3 показана взаимосвязь, установленная между микоризными компонентами в посевах риса (соотношение между арбускулярным внешним мицелием и эндофитным мицелием (МЭА:ЭА)). Это соответствие между двумя основными компонентами симбиоза, внешним мицелием и эндофитом, выражает активность этой ассоциации, которая проходит разные стадии развития. (Hirrel, M.C., 1981, The effect of sodium and chloride salts on the germination of Gigaspora margaria, Mycology, 43, 610-617). Начальная стадия, когда высокие значения внешнего мицелия соответствуют очень низким значениям эндофитов, которая уравновешивает явный паразитизм, выражающийся не только в этих параметрах, но также в снижении роста растений по сравнению с неинокулированным или неэффективно заселенным микоризой контролем, который не вызывает существенных изменений в развитии растений (табл. 2).In fig. Figure 3 shows the relationship established between mycorrhizal components in rice crops (ratio between arbuscular external mycelium and endophytic mycelium (MEA:EA)). This correspondence between the two main components of the symbiosis, the external mycelium and the endophyte, expresses the activity of this association, which passes through different stages of development. (Hirrel, M.C., 1981, The effect of sodium and chloride salts on the germination of Gigaspora margaria, Mycology, 43, 610-617). The initial stage, when high values of external mycelium correspond to very low values of endophytes, which balances overt parasitism, expressed not only in these parameters, but also in a decrease in plant growth compared to an uninoculated or ineffectively mycorrhizal control that does not cause significant changes in plant development (Table 2).
Промежуточная или переходная фаза, когда обе части начинают балансировать, и мутуалистическая фаза обмена, когда компоненты уравновешиваются со значением 1 и даже меньше, так что внутри корня наблюдается заметный рост, обеспечивающий надлежащий обмен нутриентов на уровне арбускул внутри клеток.An intermediate or transitional phase, when both parts begin to balance, and a mutualistic exchange phase, when the components balance at a value of 1 or even less, so that there is marked growth within the root, allowing for proper exchange of nutrients at the arbuscule level within the cells.
В частности, для этой культуры можно четко выделить две фазы; начальная фаза переходного периода, до 20-25 дней и мутуалистическая фаза после этого времени. Параллельно с этим анализ высоты растений показывает увеличение роста растений по сравнению с неинокулированным контролем через 27 дней посева, что совпадает с мутуалистической фазой микоризного симбиоза в этих условиях засоления.In particular, two phases can be clearly distinguished for this crop; the initial phase of the transition period, up to 20-25 days and the mutualistic phase after this time. In parallel, plant height analysis shows an increase in plant growth compared to the uninoculated control after 27 days of sowing, which coincides with the mutualistic phase of mycorrhizal symbiosis under these salinity conditions.
--
Claims (13)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP18382653.6 | 2018-09-12 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045371B1 true EA045371B1 (en) | 2023-11-21 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bouamri et al. | Arbuscular mycorrhizal fungi species associated with rhizosphere of Phoenix dactylifera L. in Morocco | |
Louis et al. | Spore density and root colonization of vesicular-arbuscular mycorrhizas in tropical soil | |
US10470465B2 (en) | Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. strain and use thereof as biostimulant | |
Abdel-Monaim et al. | Efficacy of rhizobacteria and humic acid for controlling Fusarium wilt disease and improvement of plant growth, quantitative and qualitative parameters in tomato | |
Dilbo et al. | Integrated management of garlic white rot (Sclerotium cepivorum Berk) using some fungicides and antifungal Trichoderma species | |
Fernández et al. | Physiological and growth responses of young tomato seedlings to drip-irrigation containing two low doses of the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus iranicum var. tenuihypharum sp. nova | |
Susila et al. | Exploration and morphology identification of spores asbuscular mycorrhizal fungi from horticultural plantation | |
Porras-Alfaro et al. | Fungal diversity, community structure and their functional roles in desert soils | |
EA045371B1 (en) | DOMINIKIA SP. STRAIN, COMPOSITIONS CONTAINING IT AND APPLICATION OPTIONS | |
US11896013B2 (en) | Dominikia sp. strain, compositions comprising it and uses | |
Gaston et al. | Impact of previous legumes on millet mycorrhization and yields in sandy soil of West African Sahel | |
CA2934162C (en) | Method for increasing the production of flowers, seeds and/or fruits in a plant | |
OA20372A (en) | Dominikia Sp. strain, compositions comprising it and uses. | |
Khan et al. | Efficacy of organic matter and some bio-inoculants for the management of root-knot nematode infesting tomato | |
Ebrahim | Role of arbuscular mycorrhizal fungi in fighting soil salinity | |
Soumaila et al. | Arbuscular mycorrizal fungi associated with Theobroma cacao L. in the region of Yamoussoukro (Cote d’Ivoire) | |
Khade et al. | Spatial variations in arbuscular mycorrhizal (AM) fungi associated with Carica papaya L. in a tropical agro-based ecosystem | |
JP6384087B2 (en) | Plant cultivation method | |
Abdel-Salam et al. | Water deficit stress alleviation by bio-formulated native mycorrhizal species for wheat grown in a saline calcareous soil | |
Widiastuti et al. | Exploration and culture of arbuscular mycorrhizal fungi from wild sago | |
Htay et al. | Multiplication of mycorrhiza and its effect on Zea mays L. in pot and bag experiment | |
Rizvi et al. | Comparative efficacy of different arbuscular-mycorrhizal fungal spp.(AMF) on tomato (Lycopersicon esculentum Mill.). | |
Singh et al. | ARBUSCULAR MYCORRHIZAL FUNGI IN TROPICAL FOREST ECOSYSTEMS–POTENTIALS AND APPLICATIONS | |
Wells | Managing nutrients & soil water use in orchard soils | |
Kleinjans | Soil P Buffer Capacity Effects on Leucaena leucocephala Response to VA Mycorrhizae |