EA045364B1

EA045364B1 - Спиробициклические ингибиторы взаимодействия менин-mll

Info

Publication number: EA045364B1
Application number: EA201990699
Authority: EA
Inventors: Патрик Рене Анжибо; Винет Панде; Барбара Херкерт; Дэниел Джейсон Кроски; Оливье Алексис Жорж Керолль; Изабелль Ноэлль Констанс Пилатт; Аарон Натаниэль Патрик
Original assignee: Янссен Фармацевтика Нв
Priority date: 2016-09-14
Filing date: 2017-09-13
Publication date: 2023-11-20

Description

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим средствам, пригодным для терапии и/или профилактики у млекопитающего, и, в частности, к спиробициклическим соединениям, фармацевтической композиции, содержащей такие соединения, и к их применению в качестве ингибиторов белокбелковых взаимодействий менин-MLL, пригодных для лечения заболеваний, таких как рак, миелодиспластический синдром (MDS) и диабет.

Уровень техники изобретения

Хромосомные перегруппировки, влияющие на ген, ассоциированный с лейкозом смешанного происхождения (MLL; MLL1; KMT2A), приводят в результате к агрессивным видам острого лейкоза среди всех возрастных групп, и все еще представляют собой практически неизлечимые заболевания, что подчеркивает срочную необходимость в новых терапевтических подходах. Виды острого лейкоза, предусматривающие такие хромосомные транслокации MLL, представляют собой лимфоидное, миелоидное или бифенотипное заболевание и составляют от 5 до 10% видов острого лейкоза у взрослых людей и примерно 70% у детей (Marschalek, Br J Haematol 2011. 152(2), 141-54; Tomizawa et al., Pediatr Blood Cancer 2007. 49(2), 127-32).

MLL представляет собой гистон-метилтрансферазу, которая метилирует гистон H3 по лизину 4 (H3K4) и выполняет функции в мультибелковых комплексах. Применение индуцибельных аллелей с потерей функции Mll1 продемонстрировало, что Mll1 играет важную роль в поддержании гемопоэтических стволовых клеток (HSC) и развитии B-клеток, хотя его гистон-метилтрансферазная активность является не существенной для кроветворения (Mishra et al., Cell Rep 2011. 7(4), 1239-47).

На сегодняшний день сообщалось о слиянии MLL с более 60 различными партнерами, и оно было ассоциировано с образованием/прогрессированием лейкоза (Meyer et al., Leukemia 2013. 27, 2165-2176). Интересно, что домен SET (Su(var)3-9, энхансер zeste и trithorax) MLL не сохраняется в химерных белках, но заменяется партнером по слиянию (Thiel et al., Bioessays 2012. 34, 771-80). Рекрутирование ферментов, модифицирующих хроматин, таких как Dot1L и/или комплекс pTEFb, партнером по слиянию приводит к усиленной транскрипции и транскрипционной элонгации генов-мишеней MLL, в том числе генов HOXA (например, HOXA9) и кофактора HOX MEIS1, как наиболее значимых. Аберрантная экспрессия данных генов, в свою очередь, блокирует дифференциацию гемопоэтических клеток и усиливает пролиферацию.

Менин, который кодируется геном, ассоциированным с множественной эндокринной неоплазией 1 типа (MEN1), экспрессируется повсеместно и преимущественно локализуется в ядре. Было показано, что он взаимодействует с многочисленными белками и, следовательно, вовлекается во множество клеточных процессов. Наиболее изученной функцией менина является его роль в качестве онкогенного кофактора белков слияния на основе MLL. Менин взаимодействует с двумя мотивами в N-концевом фрагменте MLL, который сохраняется во всех белках слияния, MBM1 (связывающий менин мотив 1) и MBM2 (Thiel et al., Bioessays 2012. 34, 771-80). Взаимодействие менин-MLL приводит к образованию новой поверхности взаимодействия для фактора роста эпителия хрусталика глаза (LEDGF). Хотя MLL непосредственно связывается с LEDGF, присутствие менина является обязательным для стабильного взаимодействия между MLL и LEDGF и ген-специфичного рекрутирования на хроматин комплекса MLL посредством домена PWWP LEDGF (Cermakova et al., Cancer Res 2014. 15, 5139-51; Yokoyama & Cleary, Cancer Cell 2008. 8, 36-46). Кроме того, многочисленные генетические исследования показали, что менин явно необходим для онкогенной трансформации с помощью белков слияния на основе MLL, что указывает на взаимодействие менин-MLL как на привлекательную терапевтическую мишень. Например, условная делеция Men1 предупреждает лейкомогенез в клетках-предшественниках костного мозга, эктопически экспрессирующих продукты слияния MLL (Chen et al., Proc Natl Acad Sci 2006. 103, 1018-23). Подобным образом, генетическое нарушение взаимодействия менин-продукт слияния MLL посредством мутаций с потерей функции подавляет онкогенные свойства белков слияния на основе MLL, блокирует развитие лейкоза in vivo и снимает блок дифференциации MLL-трансформированных лейкозных бластных клеток. Данные исследования также показали, что менин необходим для поддержания экспрессии гена HOX с помощью белков слияния на основе MLL (Yokoyama et al., Cell 2005. 123, 207-18). Кроме того, были разработаны низкомолекулярные ингибиторы взаимодействия менин-MLL, демонстрирующие, что данное белок-белковое взаимодействие является применимым в качестве мишени лекарственного средства, а также была продемонстрирована эффективность в доклинических моделях AML (Borkin et al., Cancer Cell 2015. 27, 589-602; Cierpicki and Grembecka, Future Med Chem 2014. 6, 447-462). Вместе с наблюдением, что менин не является необходимым кофактором MLL1 во время нормального кроветворения (Li et al., Blood 2013. 122, 2039-2046), такие данные обосновывают нарушение взаимодействия менин-MLL как перспективный новый терапевтический подход для лечения лейкоза с перестройкой MLL и других видов рака с активным профилем экспрессии гена HOX/MEIS1. Например, внутренняя частичная тандемная дупликация (PTD) в 5'-области гена MLL представляет собой другую основную аберрацию, которую обнаруживают преимущественно de novo и при вторичном AML, а также миелодиспластических синдромах. Хотя молекулярный механизм и биологическая функция MLL-PTD недостаточно хорошо понятны, новые терапевтические стратегии целенаправленного воздействия, влияющие на взаимодействие менин

- 1 045364

MLL также могут оказаться эффективными в лечении связанных с MLL-PTD видов лейкоза. Кроме того, было показано, что кастрационно-резистентный рак предстательной железы зависит от взаимодействия менин-MLL (Malik et al., Nat Med 2015. 21, 344-52).

В нескольких литературных источниках описаны ингибиторы, целенаправленно воздействующие на взаимодействие менин-MLL: WO2011029054, J Med Chem 2016, 59, 892-913 тиенопиримидина и бензодиазепина; в WO2014164543 описаны производные тиенопиримидина и тиенапиридина; в Nature Chemical Biology March 2012, 8, 277-284 и Ren, J.; et al. Bioorg Med Chem Lett (2016), http://dx.doi.Org/10.1016/j.bmcl.2016.07.074 описаны производные тиенопиримидина; в J Med Chem 2014, 57, 1543-1556 описаны производные гидрокси- и аминометилпиперидина; и в Future Med Chem 2014, 6, 447-462 рассмотрены низкомолекулярные и пептидомиметические соединения. В WO2017112768 описаны ингибиторы взаимодействия менин-MLL.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к новым соединениям формулы (I):

и к их таутомерам и стереоизомерным формам, где

R¹ представляет собой CF3;

R² выбран из группы, состоящей из водорода и CH3;

L¹ представляет собой 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, при условии, что она связана по N с тиенопиримидиниловым гетероциклом;

и

-L²-R³ выбран из (a), (b), (c), (d), (f) или (g), где (a) L² выбран из группы, состоящей из >CR^4aR^4b и -CHR^4aCHR⁵-; где

L² связан с атомом азота L¹; R^4a выбран из группы, состоящей из водорода; -C(=O)NR^7aR^7b;

C_1-4алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR⁸ и -NR^9aR^9b; и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода; -OR⁶ и C_1-4алкила;

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; или R^4a и R^4b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют C_3-5циклоалкил или связанный по C 4-6-членный гетероциклил, содержащий атом кислорода; где каждый из R⁶, R^7a, R^7b, R⁸, R^9a и R^9b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C_2-4алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Het² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) L² представляет собой >RC^4cR^4d, где R^4c и R^4d представляют собой водород; и R^

R³ представляет собой ^R ’ где R^12a, R^12b и R^12c представляет собой C_1-6алкил; или (c) -L2-R³ представляет собой C_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; или (d) L² представляет собой O, и R³ представляет собой -CH₂-Ar; или (f) --L2-R³ представляет собой , где

R¹⁸ выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила; R^18a выбран из группы, состоящей из водорода и фтора;

R^18b выбран из группы, состоящей из фтора, -OC_1-4алкила и C_1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой атом фтора; или

R^18a и R^18b связаны с одним и тем же атомом углерода и вместе образуют C_3-5циклоалкил; или

(g) --L2-R³ представляет собой

- 2 045364

Ar представляет собой фенил, который может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, 4или 5-тиазолила, изотиазолила и изоксазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из индолила, имидазопиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN и C1.4алкила, необязательно замещенного -OR²⁶; где каждый из R²⁴, R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; C1.₄алкила и C₂.₄алкила, замещенного -NR^28aR^28b; где

R^28a и R^28b представляют собой водород;

и его фармацевтически приемлемым солям;

при условии, что исключены следующие соединения и их фармацевтически приемлемые соли присоединения:

- 3 045364

- 4 045364

- 5 045364

- 6 045364

Следует понимать, что вышеуказанное условие применимо ко всем вариантам осуществления настоящего изобретения, описанным далее в настоящем документе.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвата и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

Кроме того, настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвату для применения в качестве лекарственного препарата и к соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвату для применения в лечении или предупреждении рака, миелодиспластического синдрома (MDS) и диабета.

В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвату для применения в лечении или в предупреждении рака.

В конкретном варианте осуществления указанный рак выбран из видов лейкоза, миеломы или рака, представляющего собой солидную опухоль (например, рака предстательной железы, рака легкого, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака толстой кишки, рак печени, меланомы и глиобластомы и т.д.). В некоторых вариантах осуществления виды лейкоза включают виды острого лейкоза, виды хронического лейкоза, виды миелоидного лейкоза, виды миелогенного лейкоза, виды лимфобластного лейкоза, виды лимфоцитарного лейкоза, виды острого миелогенного лейкоза (AML), виды хронического миелогенного лейкоза (CML), виды острого лимфобластного лейкоза (ALL), виды хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), виды T-клеточного пролимфоцитарного лейкоза (T-PLL), лейкоз из больших гранулярных лимфоцитов, волосатоклеточный лейкоз (HCL), виды лейкоза с перестройкой MLL, виды лейкоза, ассоциированные с MLL-PTD, виды лейкоза с амплификацией MLL, виды MLL-положительного лейкоза, виды лейкоза, характеризующиеся профилями экспрессии генов HOX/MEIS1 и т.д.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвата в комбинации с дополнительным фармацевтическим средством для применения в лечении или предупреждении рака, миелодиспластического синдрома (MDS) и диабета.

Дополнительно, настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, который характеризуется тем, что фармацевтически приемлемый носитель тщательно перемешивают с терапевтически эффективным количеством соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

- 7 045364

Настоящее изобретение также относится к продукту, содержащему соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или сольват и дополнительное фармацевтическое средство, в виде объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении или предупреждении рака, миелодиспластического синдрома (MDS) и диабета.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения или предупреждения заболевания, обусловленного пролиферацией клеток, у теплокровного животного, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, определенных в данном документе, или фармацевтической композиции или комбинации, определенных в данном документе.

Подробное описание изобретения

Термины галогено или галоген, применяемые в данном документе, означают фтор, хлор, бром и йод.

Приставка C_x-y (где x и y представляют собой целые числа), применяемая в данном документе, относится к числу атомов углерода в данной группе. Таким образом, C_1-6αлкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода, C_3-6циклоαлкильная группа содержит от 3 до 6 атомов углерода и т.п. Термин C1₄алкил, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил и т.п.

Термин С_2-4алкил, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 2 до 4 атомов углерода, такой как этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил и т.п.

Термин C_1-6αлкил, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, такой как группы, определенные для C_1-4aлкила, и н-пентил, н-гексил, 2-метилбутил и т.п.

Термин C_3-6aлкил, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 3 до 6 атомов углерода, такой как н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил, 2метилбутил и т.п.

Термин C_3-5циклоалкил, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает насыщенный циклический углеводородный радикал, содержащий от 3 до 5 атомов углерода, такой как циклопропил, циклобутил и циклопентил.

Термин спиробициклический, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает циклические системы, где два цикла соединены при одном атоме. Примерами этих систем являются 7-10-членные насыщенные спирогетеробициклические системы, содержащие один или два атома N, где один из атомов азота всегда связан с тиенопиримидиниловым гетероциклом в соединениях формулы (I), определенных в данном документе. Такие спироциклические системы включают без ограничения системы, образующиеся в результате объединения, например, пиперидинового, пирролидинового, азетидинового и циклобутанового колец. Примеры таких систем включают без ограничения (a), (b), (c), (d), (e), (f) и (g) ниже и т.п.

где а означает положение связывания с тиенопиримидиниловым гетероциклом. Специалисту в данной области техники будет понятно, что в этих конкретных примерах, варианты --L²-R³, определенные в данном документе, если L² связан с атомом азота L¹, применимы к примерам (a)-(f); при этом варианты --L²-R³, определенные в данном документе, если L² связан с атомом углерода L¹, применимы к примеру ⁽g).

- 8 045364

Примеры 7-10-членных насыщенных спироскарбобициклических систем включают без ограничения

и т.п.

В целом, во всех случаях применения в настоящем изобретении термин замещенный предназначен для обозначения, если не указано иное или четко не следует из контекста, что один или несколько атомов водорода, в частности, от 1 до 4 атомов водорода, более конкретно от 1 до 3 атомов водорода, предпочтительно 1 или 2 атома водорода, более предпочтительно 1 атом водорода, на атоме или радикале, обозначенном выражением с применением замещенный, заменены выбранным из указанной группы, при условии, что не превышается нормальная валентность, и что в результате замещения образуется химически стабильное соединение, т.е. соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение до пригодной степени чистоты из реакционной смеси.

Комбинации заместителей и/или переменных допустимы только в случае, если такие комбинации приводят в результате к получению химически стабильных соединений. Подразумевается, что стабильное соединение означает соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение до пригодной степени чистоты из реакционной смеси.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что если атом или радикал замещен заместителем, то подразумевается, что указанные атом или радикал замещены одним заместителем, выбранным из указанной группы.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что термин необязательно замещенный означает, что атом или радикал, обозначенные с использованием выражения необязательно замещенный, могут быть замещены или не замещены (это означает соответственно замещенный или незамещенный).

Если при фрагменте находятся два или более заместителей, то они могут, если возможно и если не указано иное или четко не следует из контекста, замещать атомы водорода при одном и том же атоме или они могут замещать атомы водорода при разных атомах во фрагменте.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что, если иное не указано или четко не следует из контекста, то заместитель при гетероциклильной группе может замещать любой атом водорода при атоме углерода кольца или при гетероатоме кольца.

В контексте настоящего изобретения насыщенный означает полностью насыщенный, если не указано иное.

Неароматическая группа охватывает ненасыщенные кольцевые системы не ароматического характера, частично насыщенные и полностью насыщенные карбоциклические и гетероциклические кольцевые системы. Термин частично насыщенный относится к кольцам, где кольцевая(кольцевые) структура(структуры) содержит(содержат) по меньшей мере одну кратную связь, например, связь C=C, N=C. Термин полностью насыщенный относится к кольцам, где кратные связи между атомами кольца отсутствуют. Таким образом, неароматический гетероциклил представляет собой неароматическую моноциклическую или бициклическую систему, если не указано иное, содержащую, например, 3-12 членов кольца, в более типичном случае 5-10 членов кольца. Примерами моноциклических групп являются группы, содержащие 4-7 членов кольца, в более типичном случае 5 или 6 членов кольца. Примерами бициклических групп являются группы, содержащие 8-12, в более типичном случае 9 или 10 членов кольца.

Неограничивающие примеры моноциклических гетероциклильных систем, содержащих по меньшей мере один гетероатом, выбранный из азота, кислорода или серы (N, O, S), включают без ограничения 4-7-членные гетероциклильные системы, такие как азетидинил, оксетанил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, пиперазинил, пиранил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, морфолинил, тиоморфолинил и тетрагидро-2H-тиопиранил-1,1-диоксид, в частности азетидинил, оксетанил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, пиперазинил, пиранил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, морфолинил и тиоморфолинил. Неограничивающие примеры бициклических гетероциклильных систем, содержащих по меньшей мере один гетероатом, выбранный из азота, кислорода или серы (N, O, S),

- 9 045364

включают без ограничения октагидро-1Н-индолил, индолинил, ' Если не указано иное, каждый может быть связан с остальной частью молекулы формулы (I) посредством любого доступного атома углерода в кольце (связанный по C) или атома азота (связанный по N), и необязательно они могут быть замещены, если возможно, по атомам углерода и/или азота в соответствии с вариантами осуществления.

Примеры связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота, включают без ограничения азетидинил, пирролидинил и пиперидинил, связанные с остальной частью молекулы посредством доступного атома углерода.

Термин связанный по C 4-6-членный гетероциклил, содержащий атом кислорода, применяемый в данном документе отдельно или в качестве части другой группы, означает насыщенный циклический углеводородный радикал, содержащий атом кислорода, который содержит от 4 до 6 членов кольца, такой как оксетанил, тетрагидрофуранил и тетрагидропиранил.

Во всех случаях, когда заместители представлены химической структурой, — означает связь для присоединения к остатку молекулы формулы (I).

Линии (такие как —), проведенные к кольцевым системам, указывают на то, что связь может быть присоединена к любому из подходящих атомов кольца.

Het¹ и Het² могут быть присоединены к остальной части молекулы формулы (I) посредством любого доступного атома углерода или азота кольца, при необходимости, если не указано иное.

Будет очевидно, что насыщенный циклический фрагмент, если возможно, может содержать заместители как при атомах углерода, так и N, если не указано иное или четко не следует из контекста.

Будет очевидно, что если L² представляет собой >SO₂, то это эквивалентно тому, что L² представляет собой -SO2-. Будет очевидно, что если L² представляет собой >CR^4aR^4b, то это эквивалентно тому, что ^r4\ s

L представляет собой ·

Например, в соединении 1 L² представляет собой >CR^4aR^4b, где как R^4a, так и R^4b представляют собой водород.

Аналогично, будет очевидно, что если L² представляет собой >CR^4cR^4d, то это эквивалентно тому, R⁴^ _zR^4d что L представляет собой .

Если какая-либо переменная встречается более одного раза в любой составной части, то каждая определяется независимо.

Если какая-либо переменная встречается более одного раза в любой формуле (например, формуле (I)), то каждая определяется независимо.

Термин субъект, применяемый в данном документе, относится к животному, предпочтительно млекопитающему (например кошке, собаке, примату или человеку), более предпочтительно к человеку, которое является или являлось объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Термин терапевтически эффективное количество, применяемый в данном документе, означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский ответ в системе тканей у животного или человека, который стремится получить исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, который включает облегчение или купирование симптомов заболевания или нарушения, подлежащего лечению.

Предполагается, что термин композиция охватывает продукт, содержащий определенные ингредиенты в определенных количествах, а также любой продукт, который получают, непосредственно или опосредованно, из комбинаций определенных ингредиентов в определенных количествах.

Предполагается, что термин лечение, применяемый в данном документе, обозначает все способы, которые могут предусматривать замедление, нарушение, подавление или прекращение развития заболевания, но необязательно означает полное устранение всех симптомов.

Подразумевается, что термины соединение(соединения) по (настоящему) изобретению или соединение(соединения) в соответствии с (настоящим) изобретением, применяемые в данном документе, включают соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Любая химическая формула, применяемая в данном документе, связи в которой показаны только в виде сплошных линий, а не в виде сплошных клиновидных или пунктирных клиновидных связей, или иным образом показанная как имеющая конкретную конфигурацию (например, R, S) возле одного или нескольких атомов, предусматривает каждый возможный стереоизомер или смесь двух или более стереоизомеров.

Выше и ниже в данном документе подразумевается, что термин соединение(соединения) формулы

- 10 045364 (I) включает его(их) таутомеры и его(их) стереоизомерные формы.

Термины стереоизомеры, стереоизомерные формы или стереохимически изомерные формы выше или ниже в данном документе применяются взаимозаменяемо.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединений по настоящему изобретению либо в виде чистого стереоизомера, либо в виде смеси двух или более стереоизомеров.

Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые являются не совпадающими при наложении зеркальными отображениями друг друга. Смесь 1: 1 пары энантиомеров представляет собой рацемат или рацемическую смесь.

Атропизомеры (или атропоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые имеют конкретную пространственную конфигурацию, образованную в результате ограниченного вращения вокруг одинарной связи вследствие значительного стерического затруднения. Предполагается, что все атропизомерные формы соединений формулы (I) включены в объем настоящего изобретения.

Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не представляют собой энантиомеры, т.е. они не соотносятся как зеркальные отображения. Если соединение содержит двойную связь, то заместители могут находиться в E- или Z-конфигурации.

Заместители при двухвалентных циклических насыщенных или частично насыщенных радикалах могут находиться либо в цис-, либо в трансконфигурации; например, если соединение содержит двузамещенную циклоалкильную группу, то заместители могут находиться в цис- или трансконфигурации.

Таким образом, настоящее изобретение включает энантиомеры, атропизомеры, диастереомеры, рацематы, E-изомеры, Z-изомеры, цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси, в случаях, когда это возможно с химической точки зрения.

Значения всех этих терминов, т.е. энантиомеров, атропизомеров, диастереомеров, рацематов, E-изомеров, Z-изомеров, цис-изомеров, трансизомеров и их смесей, известны специалисту в данной области техники.

Абсолютную конфигурацию определяют в соответствии с системой Кана-Ингольда-Прелога. Конфигурацию при асимметрическом атоме определяют либо как R, либо как S. Выделенные стереоизомеры, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут обозначаться как (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскость поляризации света. Например, выделенные энантиомеры, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут обозначаться как (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскость поляризации света.

Если идентифицирован конкретный стереоизомер, это означает, что указанный стереоизомер практически не содержит других стереоизомеров, т.е. связан с менее 50%, предпочтительно с менее 20%, более предпочтительно с менее 10%, еще более предпочтительно с менее 5%, в частности, с менее 2% и наиболее предпочтительно с менее 1% других стереоизомеров. Таким образом, если соединение формулы (I), например, указано как (R), то это означает, что соединение практически не содержит (S)-изомера; если соединение формулы (I), например, указано как E, то это означает, что соединение практически не содержит Z-изомера; если соединение формулы (I), например, указано как цис-, то это означает, что соединение практически не содержит транс-изомера.

Некоторые соединения в соответствии с формулой (I) также могут существовать в их таутомерной форме. Предполагается, что такие формы, ввиду того, что они могут существовать, хотя явно и не показаны в вышеприведенной формуле (I), включены в объем настоящего изобретения. Из этого следует, что одно соединение может существовать как в стереоизомерной, так и в таутомерной форме.

Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты и соли присоединения основания. Такие соли можно получать с помощью традиционных способов, например, при реакции формы свободной кислоты или свободного основания с одним или несколькими экв.ми соответствующего основания или кислоты, необязательно в растворителе или в среде, в которой соль является нерастворимой, с последующим удалением указанного растворителя или указанной среды с применением стандартных методик (например, in vacuo, с помощью сублимационной сушки или фильтрации). Соли также можно получать путем обмена противоиона соединения по настоящему изобретению в форме соли с другим противоионом, например, с применением подходящей ионообменной смолы.

Предполагается, что фармацевтически приемлемые соли, упоминаемые выше или ниже в данном документе, включают терапевтически активные нетоксичные формы солей с кислотами и основаниями, которые могут образовывать соединения формулы (I) и их сольваты.

Соответствующие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например, хлористоводородная или бромистоводородная кислота, серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая (т.е. этандиовая), малоновая, янтарная (т.е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и подобные кислоты. И наоборот, указанные формы солей можно превращать путем обработки соответствующим основанием в форму свободного основания.

Соединения формулы (I) и их сольваты, содержащие кислотный протон, также можно превращать в формы их нетоксичных солей с металлами или аминами путем обработки соответствующими органиче

- 11 045364 скими и неорганическими основаниями.

Соответствующие основные формы солей включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например, соли лития, натрия, калия, цезия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например, первичными, вторичными и третичными алифатическими и ароматическими аминами, такими как метиламин, этиламин, пропиламин, изопропиламин, четыре изомера бутиламина, диметиламин, диэтиламин, диэтаноламин, дипропиламин, диизопропиламин, ди-нбутиламин, пирролидин, пиперидин, морфолин, триметиламин, триэтиламин, трипропиламин, хинуклидин, пиридин, хинолин и изохинолин; соли бензатина, К-метилЮ-глюкамина, гидрабамина и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и т.п. И наоборот, форму соли можно превращать путем обработки кислотой в форму свободной кислоты.

Термин сольват включает формы присоединения растворителя, а также их соли, которые могут образовывать соединения формулы (I). Примерами таких форм присоединения растворителя являются, например, гидраты, алкоголяты и т.п.

Соединения по настоящему изобретению, полученные в описанных ниже способах, можно синтезировать в виде смесей энантиомеров, в частности, рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить друг от друга, следуя известным из уровня техники процедурам разделения. Способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов включает жидкостную хроматографию с применением хиральной неподвижной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также можно получать из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных веществ при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Если необходим конкретный стереоизомер, то предпочтительно, чтобы указанное соединение синтезировали с помощью стереоспецифических способов получения. В данных способах будут преимущественно применять энантиомерно чистые исходные вещества.

Настоящее изобретение также охватывает меченные изотопами соединения по настоящему изобретению, которые идентичны приведенным в данном документе, за исключением того, что один или несколько атомов заменены атомом с атомной массой или массовым числом, отличными от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе (или наиболее распространенных из встречающихся в природе).

Все изотопы и изотопные смеси любого конкретного атома или элемента, как определено в данном документе, рассматриваются в рамках соединений по настоящему изобретению, как встречающиеся в природе, так и полученные синтетическим путем, как с природным изотопным составом, так и в изотопно-обогащенной форме. Иллюстративные изотопы, которые могут быть включены в соединения по настоящему изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора и йода, такие как ²H, ³H, ⁿC, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸О, ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²²I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br и ⁸²Br. Предпочтительно радиоактивный изотоп выбран из группы, состоящей из ²H, ³H, 11C и ¹⁸F. Более предпочтительно, радиоактивный изотоп представляет собой ²H. В частности, предполагается, что дейтерированные соединения включены в объем настоящего изобретения.

Определенные меченные изотопами соединения по настоящему изобретению (например, меченные ³H и ¹⁴C) могут быть пригодными, например, в анализах распределения субстрата в тканях. Изотопы тритий (³H) и углерод-14 (¹⁴C) являются пригодными благодаря простоте их получения и возможности выявления. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е. H), может обеспечивать определенные терапевтические преимущества вследствие более высокой метаболической стабильности (например, увеличение периода полувыведения in vivo или уменьшение необходимой дозы) и, следовательно, могут быть предпочтительными в некоторых случаях. Таким образом, в конкретном варианте осуществления настоящего изобретения R² выбран из водорода или дейтерия, в частности дейтерия. В другом варианте осуществления L² может представлять собой >C(²H)₂. Позитронно-активные изотопы, такие как ¹⁵O, ¹³N, 11C и ¹⁸F, пригодны для исследований с помощью позитронно-эмиссионной томографии (PET). Визуализация посредством PET при раке находит применимость, помогая локализовать и идентифицировать опухоли, стадию заболевания и определять подходящее лечение. Раковые клетки человека сверхэкспрессируют множество рецепторов или белков, которые являются потенциальными молекулярными мишенями для конкретного заболевания. Меченные радиоактивным изотопом метки, которые связываются с высокой аффинностью и специфичностью с такими рецепторами или белками на опухолевых клетках, обладают большим потенциалом для диагностической визуализации и целенаправленной радионуклидной терапии (Charron, Carlie L. et al. Tetrahedron Lett. 2016, 57(37), 4119-4127). Дополнительно, мишень-специфические радиоактивные метки для PET можно применять в качестве биомаркеров для изучения и оценки патологии, например, посредством измерения экспрессии мишени и ответа на лечение (Austin R. et al. Cancer Letters (2016), doi: 10.1016/j.canlet.2016.05.008).

В частности, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из вариантов осуществления, где также исключены следующее соединение и его фармацевтически приемлемые соли присоединения:

- 12 045364 он

В частности, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из вариантов осуществления, где исключены промежуточные соединения и соединения, описанные в WO2017/112768, в той мере, в которой они охватываются настоящим изобретением.

В частности, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), определенным в данном документе, и к их таутомерам и стереоизомерным формам, где:

(a) L² выбран из группы, состоящей из >CR^4aR^4b и -CHR^4aCHR⁵-; где

L² связан с атомом азота L¹, R^4a выбран из группы, состоящей из водорода; -C(=O)NR^7aR^7b; C_{b 4}алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR⁸ и -NR^9aR^9b; и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода; -OR⁶; -NR^7aR^7b и C_1-4алкила;

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; или R^4a и R^4b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют C_3-5циклоалкил или связанный по C 4-6-членный гетероциклил, содержащий атом кислорода; где каждый из R⁶, R^7a, R^7b, R⁸, R^9a и R^9b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C₂₄алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Het² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобицикли ческой системы; или (b) L² представляет собой >CR^4cR^4d, где каждый из R^4c и R^4d представляет собой водород; и

R^12a .Ge^_Ri2b '' \ 12с

R³ представляет собой ’ где каждый из R^12a, R^12b и R^12c представляет собой C_1-6алкил; или (c) --L²-R³ представляет собой C_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя за местителями, представляющими собой атом фтора; или (d) L² представляет собой O, и R³ представляет собой -CH₂-Ar; или

(e) --L²-R³ представляет собой ^R ’ где

R¹⁸ представляет собой водород; или

(f) --L²-R³ представляет собой ’ и где

Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C_1-4алкила, необязательно замещенного -OR²⁶;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пири дила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, 4или 5-тиазолила, изотиазолила и изоксазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN и C_1-4алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из азетидинила, пирролидини ла и пиперидинила; где каждый из R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила; и их фармацевтически приемлемым солям.

- 13 045364

В частности, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), определенным в данном документе, и к их таутомерам и стереоизомерным формам, где

R¹ представляет собой CF3;

(a) L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

R^4a выбран из группы, состоящей из водорода; -C(=O)NR^7aR^7b; C₁.₄алкила и связанного по C 4-7членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота; и

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; где каждый из R^7a и R^7b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; C₁.₄алкила и C₂.₄алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C₁.₄алкила; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Het² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) L² представляет собой >CR^4cR^4d, где R^4c и R^4d представляют собой водород; и

R^12a ,Ge^._Ri2b \ 12с

R³ представляет собой ^R j где R^12a, R^12b и R^12c представляет собой C₁.₆алкил; или (c) --L²-R³ представляет собой C₁.₆алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; или (d) L² представляет собой O, и R³ представляет собой -CH₂-Ar; или

(f) --L²-R³ представляет собой ^RR¹⁸ представляет собой водород; или

N— (g) --L2-R³ представляет собой

Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный заместителем, представляющим собой атом галогена;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила и 4или 5-тиазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C_1-4αлкилα, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из азетидинила, пирролидинила и пиперидинила; где каждый из R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C₁.₄алкила;

и их фармацевтически приемлемым солям.

R¹ представляет собой CF₃;

L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (a), (b), (c), (d), (e), (f) и ⁽g^):

где а представляет собой положение связывания с тиенопиримидиниловым гетероциклом;

(a) L² представляет собой >CH₂; и R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹ и 7-10-членной на

- 14 045364 сыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) --L2-R³ представляет собой C₁.₆алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; и где

Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный заместителем, представляющим собой атом галогена; и

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 4-, 5или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила и 4- или 5тиазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и Аралкила;

и их фармацевтически приемлемым солям.

R¹ представляет собой CF₃;

R² представляет собой водород;

L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (a), (b), (c), (d), (e), (f) и (g):

где a представляет собой положение связывания с тиенопиримидиниловым гетероциклом;

(a) L² представляет собой >CH₂; и R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹ и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) --L²-R³ представляет собой C₁.₆алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; и где

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 4-, 5или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила и имидазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C₁.₄алкила;

и их фармацевтически приемлемым солям.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где применяется одно или несколько из следующих ограничений:

(a) R¹ представляет собой CF3;

(b) R² представляет собой водород;

(c) L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (a), (b), (c), (d), (e), (f) и (g), определенных в данном документе;

(d) L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (a), (b), (c), (d), (e) и (f), определенных в данном документе;

(e) L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (c) и (e);

(f) L² представляет собой >CH₂;

(g) L² представляет собой >CH₂; и R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹ и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы;

(h) --L²-R³ выбран из группы, состоящей из

- 15 045364

(i) Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или двумя независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;

(j) Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный одним заместителем, представляющим собой атом галогена;

(k) Ar представляет собой фенил;

(l) Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиразолила, имидазолила, пирролила, 4- или 5-тиазолила, пиридила, пиридазинила, 4-, 5- или 6пиримидинила и пиразинила; или представляет собой бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C1-4αлкилα, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁵ и -NR^26aR^26b; где каждый из R²⁵, R^26a и R^26b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C1.₄алкила;

(m) Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиразолила, имидазолила, пирролила, 4- или 5-тиазолила, пиридила, пиридазинила, 4-, 5- или 6пиримидинила и пиразинила; или представляет собой бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C1-4αлкилα, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁵ и -NR^26aR^26b; где каждый из R²⁵, R^26a и R^26b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C1.₄алкила;

(n) Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиразолила, имидазолила, пирролила, пиридазинила, 4-, 5- или 6-пиримидинила и пиразинила; или представляет собой бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C₁.₄алкила;

(o) Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридазинила, 4-, 5- или 6-пиримидинила и пиразинила, каждый из которых может быть необязательно замещен заместителем, представляющим собой атом галогена;

(p) Het¹ представляет собой бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинил-6-ила или имидазо[ 1,2-a]пиридинил-2-ила;

(q) 7-10-членная насыщенная спирокарбобициклическая система представляет собой, в частности,

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где R¹ представляет собой CF3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где R¹ представляет собой CF3, и при этом R² представляет собой водород.

- 16 045364

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный в соответствии с любым из других вариантов осуществления.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где L² связан с атомом углерода L¹.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L2-R³ соответствует (a).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (b).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (c).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (d).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (e).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (f).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (g).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a); (b), (d), (e) или (f); и R^4a является отличным от водорода. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a) или (f); и R^4a является отличным от водорода. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a); и R^4a является отличным от водорода.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a); и если L² связан с атомом азота L¹, то R^4aявляется отличным от водорода.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a) или (f); и если L² связан с атомом азота L¹, то R^4a является отличным от водорода.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a), (b), (d), (e) или (f); и если L² связан с атомом азота L¹, то R^4a является отличным от водорода.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где L¹ представляет собой

N I

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a); R³ представляет собой Het¹ или Het².

- 17 045364

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L2-R³ соответствует (a); R³ представляет собой Het¹.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a); R³ представляет собой Het¹; и Het¹ представляет собой азетидинил, необязательно замещенный, как определено в любом другом варианте осуществления.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ соответствует (a); R³ представляет собой Het¹ или Het²; Het¹представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила и имидазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и Ю^алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила и пиперидинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где Ar представляет собой фенил, который может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, фуранила, тиенила, пирролила, пиразолила, имидазолила, 4- или 5-тиазолила, изотиазолила, тиадиазолила и изоксазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой моноциклический неароматический гетероциклил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где

--L²-R³ соответствует (a), где

L² выбран из группы, состоящей из >CR^4aR^4b и -CHR^4aCHR⁵-; где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4a выбран из группы, состоящей из -C(=O)NR^7aR^7b и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота, кислорода или серы;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода; -OR⁶;

-NR^7aR^7b;

-C(=O)NR^7aR^7b; C₁.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из фтора, -CN, -OR⁸ и -NR^9aR^9b;

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Het² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы.

--L²-R³ соответствует (a), где

L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4b представляет собой водород; и

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из

- 18 045364 других вариантов осуществления, где

--L2-R³ соответствует (а), где

L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4b представляет собой водород; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar и Het².

- -L²-R³ соответствует (a), где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4a представляет собой -C(=O)NR^7aR^7b;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода; -OR⁶; -NR^7aR^7b;

- C(=O)NR^7aR^7b; C₁.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из фтора, -CN, -OR⁸ и

- NR^9aR^9b;

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Her² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы.

- -L²-R³ соответствует (a), где

L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4a представляет собой -C(=O)NR^7aR^7b;

R^4b представляет собой водород; и

- -L²-R³ соответствует (a), где

L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4a представляет собой -C(=O)NR^7aR^7b;

R^4b представляет собой водород; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar и Het².

- -L²-R³ соответствует (a), где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4a представляет собой связанный по C 4-7-членный неароматический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота, кислорода или серы;

- NR^9aR^9b;

- -L²-R³ соответствует (a), где

L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

L² связан с атомом азота L¹;

- 19 045364

R^4b представляет собой водород; и

--L²-R³ соответствует (a), где

L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

L² связан с атомом азота L¹;

R^4b представляет собой водород; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar и Het².

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где L² связан с атомом азота L¹.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где --L²-R³ выбран из группы, состоящей из

где R¹⁸ представляет собой водород или метил.

L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g), (h) и (i):

- 20 045364

где а означает положение связывания с тиенопиримидиниловым гетероциклом.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где Het² представляет собой моноциклический гетероциклил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, описанными в других вариантах осуществ ления.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из азетидинила, оксетанила, тетрагидрофуранила, пиперидинила, тетрагидропиранила, тетрагидро2H-тиопиранил-1,1 -диоксида, α-,Ά /^но / - И ', каждый из которых необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, описанными в других вариантах осуществления.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к таким соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям или какой-либо их подгруппе, указанным в каком-либо из других вариантов осуществления, где Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из

каждый из которых необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, описанными в других вариантах осуществления.

Конкретные соединения формулы (I) представляют собой соединения 82, 84, 273 и 274, в том числе их стереоизомерные формы, фармацевтически приемлемые соли, в частности их хлористоводородные соли.

Конкретные соединения формулы (I) представляют собой соединения 82, 84, 273 и 274.

В одном варианте осуществления соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из любых приведенных в качестве примера соединений и их свободных оснований, фармацевтически приемлемых солей присоединения.

Предполагается, что все возможные комбинации вышеуказанных вариантов осуществления попадают в объем настоящего изобретения.

- 21 045364

Способы получения соединений формулы (I).

В этом разделе, как и во всех других разделах, если контекст не указывает на иное, ссылки к формуле (I) также включают все другие подгруппы и их примеры, как определено в данном документе.

Общие способы получения некоторых типичных примеров соединений формулы (I) описаны в данном документе и в конкретных примерах, и, как правило, их получают из исходных веществ, являющихся либо коммерчески доступными, либо получаемыми с помощью стандартных способов синтеза, обычно применяемых специалистами в данной области техники. Подразумевается, что следующие схемы только представляют примеры настоящего изобретения и ни в коей мере не ограничивают настоящее изобретение.

В качестве альтернативы, соединения по настоящему изобретению можно также получать с помощью протоколов реакций, аналогичных описанным на общих схемах, приведенных ниже, в комбинации со стандартными способами синтеза, обычно применяемыми специалистами в области органической химии.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что в реакциях, описанных на схемах, хотя это не всегда явно показано, может потребоваться защита реакционноспособных функциональных групп (например гидрокси-, амино- или карбоксигрупп), если они необходимы в конечном продукте, для того, чтобы избежать их нежелательного участия в реакциях. Например, на схеме 1, фрагмент NH на L¹ связанной по N 7-10-членной насыщенной спирогетеробициклической системы, содержащей один или два атома N, можно защищать с помощью трет-бутоксикарбонильной защитной группы. В целом, можно применять традиционные защитные группы в соответствии со стандартной практикой. Защитные группы можно удалять на подходящей последующей стадии с применением способов, известных из уровня техники. Это проиллюстрировано в конкретных примерах.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что в реакциях, описанных на схемах, возможно будет целесообразно или необходимо проводить реакцию в инертной атмосфере, такой как, например, в атмосфере газообразного N2.

Специалисту в данной области техники будет очевидно, что, возможно, будет необходимо охладить реакционную смесь перед обработкой продукта реакции (касается ряда манипуляций, необходимых для выделения и очистки продукта(продуктов) химической реакции, таких как, например, гашение, колоночная хроматография, экстракция).

Специалисту в данной области техники будет понятно, что нагревание реакционной смеси при перемешивании может увеличить выход реакции. В некоторых реакциях можно применять нагревание с помощью микроволнового излучения вместо традиционного нагревания для сокращения общего времени реакции.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что другая последовательность химических реакций, показанная на схемах ниже, может также обеспечивать в результате необходимое соединение формулы (I).

Специалисту в данной области техники будет понятно, что промежуточные соединения и конечные соединения, показанные на схемах ниже, можно дополнительно функционализировать в соответствии со способами, хорошо известными специалисту в данной области техники. Промежуточные соединения и соединения, описанные в данном документе, можно выделять в свободной форме или в виде соли.

Схема 1.

В целом, соединения формулы (I), где все переменные определены в соответствии с объемом настоящего изобретения, можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 1. На схеме 1 X—-ЬЬ означает L¹ в виде 7-10-членной насыщенной спирогетеробициклической системы, содержащей два атома N, и которая связана по N с тиенопиримидиниловым гетероциклом, каждый из LG¹ и LG² представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген или метансульфонил; PG¹ представляет собой подходящую защитную группу, такую как, например, третбутилоксикарбонил; R^3a-PG² представляет собой R³, определенный в формуле (I), с соответствующей защитной группой, такой как, например, трет-бутилоксикарбонил, если заместитель R³ содержит аминогруппу. X в формуле (XI) представляет собой CH или N (в формуле (XI) L2 может быть связан с углеродом или атомом N). Все остальные переменные на схеме 1 определены в соответствии с объемом настоящего изобретения.

- 22 045364

На схеме 1 применены следующие условия реакции:

1: при подходящей температуре, как, например, в диапазоне от к.т. до 90°C, в присутствии подходящего основания, такого как, например, диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как, например, ацетонитрил, или изопропанол, или этанол;

2: при подходящей температуре, находящейся в диапазоне, таком как, например, от 0°C до комнатной температуры, в присутствии подходящих условий расщепления, таких как, например, кислота, такая как HCl или трифторуксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил или дихлорметан, если PG¹ представляет собой трет-бутилоксикарбонил.

В качестве альтернативы, при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура, в подходящем растворителе, таком как уксусная кислота.

3: при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура или температура образования флегмы, в присутствии подходящего основания, такого как, например, карбонат калия или 1,8диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, в подходящем растворителе, таком как, например, ацетонитрил или DMSO;

4: при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура или 90°C, в присутствии подходящего основания, такого как, например, карбонат калия или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7ен, в подходящем растворителе, таком как, например, ацетонитрил или DMSO;

5: при подходящей температуре, находящейся в диапазоне, таком как, например, от 0°C до комнатной температуры, в присутствии подходящих условий расщепления, таких как, например, кислота, такая как HCl или трифторуксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил или дихлорметан, если PG² представляет собой трет-бутилоксикарбонил;

6: при подходящей температуре, такой как, например, при комнатной температуре, далее в присутствии подходящего основания, такого как, например, триметиламин, или подходящей кислоты, такой как, например, уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как, например, безводный дихлорметан, дихлорэтан или тетрагидропиран;

7: при подходящей температуре, например комнатной температуре, в присутствии подходящего восстановителя, такого как, например, NaBH(OAc)₃, в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, дихлорэтан или тетрагидропиран; с получением соединения формулы (I), где L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую два атома N, и L² представляет собой CH₂.

Стадии 6 и 7 можно легко осуществлять посредством процедуры, осуществляемой в одном реакторе.

В качестве альтернативы, стадию 6 и 7 можно осуществлять в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, уксусная кислота, подходящего катализатора, такого как оксид платины, в подходящем растворителе, таком как, например, этанол, при подходящей температуре, такой как, например, 60°C;

8: при подходящей температуре, такой как, например, при 90°C, в присутствии подходящего основания, такого как, например, диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как, например, ацетонитрил или изопропанол. На стадии 8 в реагенте формулы (XI) X представляет собой CH или N, и L² и R³ определены в соответствии с объемом настоящего изобретения. Реагенты формулы (XI) либо являются коммерчески доступными, либо их можно получать посредством способов, известных специалисту в данной области техники, из коммерчески доступных исходных веществ, например, путем соответствующих стадий введения защитной группы/удаления защитной группы и взаимопревращения функ

- 23 045364 циональных групп, из исходных веществ, таких как 2-азаспиро[3.3]гептан-6-ол (CAS[1256352-97-2]).

Схема 2.

Промежуточные соединения формулы (II), где R² представляет собой метил, можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 2, где LG¹ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген или метансульфонил. Все остальные переменные на схеме 2 определены в соответствии с объемом настоящего изобретения.

На схеме 2 применены следующие условия реакции:

1: при подходящей температуре, такой как, например, температура образования флегмы, в присутствии уксусного ангидрида и подходящего основания, такого как, например, триметиламин, в подходящем растворителе, таком как, например, толуол;

2: при подходящей температуре, такой как, например, температура образования флегмы, в присут ствии подходящего основания, такого как гидроксид калия, в подходящем растворителе, таком как, на пример, этанол;

3: в подходящих условиях реакции для образования уходящей группы, такой как, например, хлор, например, посредством проведения реакции с трихлоридом фосфора при подходящей температуре, такой как 110°C.

Схема 3.

В целом, соединения формулы (I-a), где переменные определены в соответствии с объемом настоящего изобретения, но где L² ограничен L^2a (варианты, которые можно получать с помощью этой схемы), можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 3. Все остальные переменные на схеме 3 определены в соответствии с объемом настоящего изобретения или определены выше.

На схеме 3 применены следующие условия реакции:

- 24 045364

1: при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура или 45°C, в присутствии этоксида титана(IV) или изопропоксида титана(IV), в подходящем растворителе, таком как, напри мер, тетрагидропиран, дихлорэтан или смесь дихлорэтана и метанола;

В качестве альтернативы, при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура, с подходящей кислотой или без нее, такой как, например, трифторуксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как, например, тетрагидропиран;

2: при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура, в присутствии подходящего восстановителя, такого как, например, борогидрид натрия, триацетоксиборогидрид натрия или цианоборогидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как, например, тетрагидропиран, дихлорэтан или смесь дихлорэтана и метанола;

Стадии 1 и 2 можно осуществлять посредством процедуры, осуществляемой в одном реакторе.

Схема 4.

В целом, соединения формулы (I-b), где R^4a ограничен R^4a1, представляющим собой C_1-4алкил или связанный по C 4-7-членный неароматический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота, кислорода или серы, можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 4. На схеме 4 галоген означает бром, хлор или йод. Все остальные переменные на схеме 4 определены в соответствии с объемом настоящего изобретения или определены выше.

На схеме 4 применены следующие условия реакции:

1: при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура или 45°C, в присутствии этоксида титана(IV) или изопропоксида титана(IV), в подходящем растворителе, таком как, например, тетрагидропиран;

2: при подходящей температуре, находящейся в диапазоне от 0°C до комнатной температуры, в подходящем растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран.

Схема 5.

В целом, соединения формулы (Ic), где R³ ограничен R^3c, представляющим собой

можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 5. Все остальные переменные на схеме 5 определены в соответствии с объемом настоящего изобретения или определены выше. На схеме 5 L² связан с атомом N L¹.

На схеме 5 применены следующие условия реакции:

1: при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура, в присутствии подходящего средства для кислотного сочетания, такого как, например, 1-[бис-(диметиламино)метилен]-1Hбензотриазолийгексафторфосфат(1-)3-оксид (HBTU) или 1-[бис-(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3триазоло[4,5-Ь]пиридиний-3-оксида гексафторфосфат (HATU), в присутствии подходящего основания,

- 25 045364 такого как, например, N-этил-N-(1-метилэтил)-2-пропанамин (DIPEA), в подходящем растворителе, таком как N,N-диметилформамид (DMF);

Схема 6.

В целом, соединения формулы (Id), где L² ограничен SO2, можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 6. Все остальные переменные на схеме 6 определены в соответствии с объемом настоящего изобретения или определены выше. На схеме 6 L² (>SO2 на схеме 6) связан с атомом N L¹.

На схеме 6 применены следующие условия реакции:

1: при подходящей температуре, например, комнатной температуре, в присутствии подходящего основания, такого как, например, карбонат калия, в подходящем растворителе, таком как, например, аце тонитрил.

Схема 7.

В целом, соединения формулы (Ie) и (If) можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 7. Как в (Ie), так и в (If) часть молекулы L² связана с атомом азота L¹. Все остальные переменные определены в соответствии с объемом настоящего изобретения или определены выше.

На схеме 7 применены следующие условия реакции:

1: при подходящей температуре, такой как, например, 60°C, в подходящем растворителе, таком как, например, этанол.

Следует понимать, что если имеются соответствующие функциональные группы, соединения различных формул или какие-либо промежуточные соединения, используемые для их получения, можно дополнительно дериватизировать с помощью одного или нескольких стандартных способов синтеза с применением реакций конденсации, замещения, окисления, восстановления или расщепления. Определенные подходы относительно замещения включают традиционные процедуры алкилирования, арилирования, гетероарилирования, ацилирования, сульфонилирования, галогенирования, нитрования, формилирования и сочетания.

Соединения формулы (I) можно синтезировать в виде рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить друг от друга, следуя известным из уровня техники процедурам разделения. Рацемические соединения формулы (I), содержащие основный атом азота, можно превращать в соответствующие формы диастереомерных солей посредством реакции с подходящей хиральной кислотой. Указанные формы диастереомерных солей затем разделяют, например, с помощью селективной или фракционной кристаллизации, а энантиомеры выделяют оттуда с помощью щелочи. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает жидкостную хроматографию с применением хиральной неподвижной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также можно получать из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных веществ при условии, что реакция протекает стереоспецифически.

При получении соединений по настоящему изобретению может быть необходимым обеспечение защиты удаленной функциональной группы (например, первичного или вторичного амина) промежуточных соединений. Потребность в обеспечении такой защиты будет изменяться в зависимости от природы отдельной функциональной группы и от условий способов получения. Подходящие защитные группы для аминогруппы (NHPg) включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (CBz) и 9флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Необходимость такой защиты легко определит специалист в данной области техники. Для общего описания защитных групп и их применения см. T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th ed., Wiley, Hoboken, New Jersey, 2007.

- 26 045364

Фармакология.

Было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению блокируют взаимодействие менина с белками MLL и онкогенными белками слияния на основе MLL. Следовательно, соединения в соответствии с настоящим изобретением и фармацевтические композиции, содержащие данные соединения, могут быть пригодными для лечения или предупреждения, в частности лечения, заболеваний, таких как рак, миелодиспластический синдром (MDS) и диабет.

В частности, соединения в соответствии с настоящим изобретением и фармацевтические композиции на их основе могут быть пригодными в лечении или предупреждении рака. В соответствии с одним вариантом осуществления виды рака, для которых лечение с помощью ингибиторов менин-MLL по настоящему изобретению может быть целесообразным, включают виды лейкоза, миелому или рак, представляющий собой солидную опухоль (например, рак предстательной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак толстой кишки, рак печени, меланому и глиобластому и т.д.). В некоторых вариантах осуществления виды лейкоза включают виды острого лейкоза, виды хронического лейкоза, виды миелоидного лейкоза, виды миелогенного лейкоза, виды лимфобластного лейкоза, виды лимфоцитарного лейкоза, виды острого миелогенного лейкоза (AML), виды хронического миелогенного лейкоза (CML), виды острого лимфобластного лейкоза (ALL), виды хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), виды T-клеточного пролимфоцитарного лейкоза (T-PLL), лейкоз из больших гранулярных лимфоцитов, волосатоклеточный лейкоз (HCL), виды лейкоза с перестройкой MLL, виды лейкоза, ассоциированные с MLL-PTD, виды лейкоза с амплификацией MLL, виды MLL-положительного лейкоза, виды лейкоза, характеризующиеся профилями экспрессии генов HOX/MEIS1 и т.д.

Следовательно, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), их таутомерам и стереоизомерным формам, а также к их фармацевтически приемлемым солям и сольватам для применения в качестве лекарственного препарата.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I), его таутомера или стереоизомерной формы, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для изготовления лекарственного препарата.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I), его таутомеру или стереоизомерной форме, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвату, или к фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для применения в лечении, предупреждении, уменьшении интенсивности, контроле или снижении риска развития нарушений, ассоциированных с взаимодействием менина с белками MLL и онкогенными белками слияния на основе MLL, у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которых зависит от блокирования взаимодействия менина с белками MLL и онкогенными белками слияния на основе MLL или облегчается им.

Также, настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I), его таутомера или стереоизомерной формы, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для изготовления лекарственного препарата для лечения, предупреждения, уменьшения интенсивности, контроля или снижения риска развития нарушений, ассоциированных с взаимодействием менина с белками MLL и онкогенных белков слияния на основе MLL, у млекопитающего, в том числе человека, лечение или предупреждение которых зависит от блокирования взаимодействия менина с белками MLL и онкогенными белками на основе MLL или облегчается им.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I), его таутомеру или стереоизомерной форме или к его фармацевтически приемлемой соли или сольвату для применения в лечении или предупреждении какого-либо из заболеваний, упомянутых в данном документе выше.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I), его таутомера или стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата для изготовления лекарственного препарата для лечения или предупреждения какого-либо из болезненных состояний, упомянутых в данном документе выше.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить млекопитающим, предпочтительно людям, для лечения или предупреждения любого из заболеваний, упомянутых выше в данном документе.

С учетом применимости соединений формулы (I), их таутомеров и стереоизомерных форм и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов, предусмотрен способ лечения теплокровных животных, в том числе людей, страдающих каким-либо из заболеваний, упомянутых выше в данном документе.

Указанный способ включает введение, т.е. системное или местное введение, предпочтительно пероральное введение, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), его таутомера или стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата теплокровным животным, в том числе людям.

Вследствие этого настоящее изобретение также относится к способу лечения или предупреждения какого-либо из заболеваний, упомянутых в данном документе выше, включающему введение терапевти

- 27 045364 чески эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в этом пациенту.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что терапевтически эффективным количеством соединений по настоящему изобретению является количество, достаточное для обладания терапевтической активностью, и что это количество изменяется inter alias в зависимости от типа заболевания, концентрации соединения в терапевтическом составе и состояния пациента. Как правило, количество соединения по настоящему изобретению, подлежащего введению в качестве терапевтического средства для лечения нарушений, указанных в данном документе, будет определяться в каждом конкретном случае лечащим врачом.

Специалисты в области лечения таких заболеваний смогут определить эффективное терапевтическое суточное количество из результатов испытаний, представленных ниже в данном документе. Эффективное суточное терапевтическое количество будет составлять от приблизительно 0,005 мг/кг до 100 мг/кг, в частности, от 0,005 мг/кг до 50 мг/кг, в частности, от 0,01 мг/кг до 50 мг/кг веса тела, более конкретно от 0,01 мг/кг до 25 мг/кг веса тела, предпочтительно от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг, более предпочтительно от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, еще более предпочтительно от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 1 мг/кг, наиболее предпочтительно от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 1 мг/кг веса тела. Конкретное эффективное суточное терапевтическое количество может составлять 1 мг/кг веса тела, 2 мг/кг веса тела, 4 мг/кг веса тела или 8 мг/кг веса тела. Количество соединения в соответствии с настоящим изобретением, также называемого в данном документе как активный ингредиент, которое необходимо для достижения терапевтического эффекта, может изменяться в каждом конкретном случае, например, для определенного соединения, пути введения, возраста и состояния реципиента, а также конкретного нарушения или заболевания, подлежащего лечению. Способ лечения может также включать введение активного ингредиента согласно схеме от одного до четырех введений в сутки. В данных способах лечения соединения в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно составляют перед введением. Как описано в данном документе ниже, подходящие фармацевтические составы получают с помощью известных процедур с применением хорошо известных и общедоступных ингредиентов.

В настоящем изобретении также предусмотрены композиции для предупреждения или лечения нарушений, указанных в настоящем документе. Указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения формулы (I), его таутомера или стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Хотя активный ингредиент можно вводить отдельно, предпочтительно, если он представлен в виде фармацевтической композиции. Следовательно, в настоящем изобретении дополнительно предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая соединение в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должны быть приемлемыми с точки зрения совместимости с остальными ингредиентами композиции и не должны являться вредными для получающих их пациентов.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно получать любыми способами, хорошо известными в области фармации, например с помощью таких способов, как описанные в Gennaro et al. Remington's Pharmaceutical Sciences (18^th ed., Mack Publishing Company, 1990, см. в особенности Part 8: Pharmaceutical preparations and their Manufacture). Терапевтически эффективное количество конкретного соединения, в форме основания или в форме соли, в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, который может принимать ряд форм в зависимости от формы препарата, необходимого для введения. Желательно, чтобы данные фармацевтические композиции находились в стандартной лекарственной форме, предпочтительно подходящей для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как, например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня и т.п. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения можно использовать любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, настойки и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественные стандартные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального введения носитель обычно будет содержать стерильную воду, по меньшей мере в значительной степени, хотя может включать и другие ингредиенты, например, для улучшения растворимости. Например, можно получать растворы для инъекций, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, улучшающее проникновение, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно в

- 28 045364 комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают никаких существенных вредных воздействий на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение в кожу и/или могут быть полезными для получения требуемых композиций. Данные композиции можно вводить различными путями, например, посредством трансдермального пластыря, путем точечного нанесения или в виде мази.

Особенно преимущественно для простоты введения и однородности дозирования составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в виде стандартной лекарственной формы. Стандартные лекарственные формы в контексте данного описания и формулы изобретения относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения необходимого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т.п., а также их отдельные кратные количества.

Соединения по настоящему изобретению можно применять для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как, например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня или т.п. Соединения предпочтительно вводят перорально. Точная доза и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, массы, пола, степени тяжести нарушения и общего физического состояния конкретного пациента, а также от другого медикаментозного лечения, которое индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить сами по себе или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Комбинированная терапия включает введение единого дозированного фармацевтического состава, который содержит соединение в соответствии с настоящим изобретением и одно или несколько дополнительных терапевтических средств, а также введение соединения в соответствии с настоящим изобретением и каждого дополнительного терапевтического средства в своем собственном отдельном дозированном фармацевтическом составе. Например, соединение в соответствии с настоящим изобретением и терапевтическое средство можно вводить пациенту вместе, в единой пероральной дозированной композиции, такой как таблетка или капсула, или каждое средство можно вводить по отдельности в дозированных составах для перорального введения.

Следовательно, вариант осуществления настоящего изобретения относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента соединение в соответствии с настоящим изобретением, а в качестве дополнительного активного ингредиента - одно или несколько противораковых средств, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пациентов, страдающих раком.

Одно или несколько других медицинских средств и соединение в соответствии с настоящим изобретением можно вводить одновременно (например, в отдельных или единичных композициях) или последовательно в произвольном порядке. В последнем случае, два или более соединений будут введены на протяжении периода и в количестве и способом, которые являются достаточными для гарантирования того, что достигнут преимущественный или синергический эффект. Следует понимать, что предпочтительный способ и порядок введения и соответствующие величины доз и режимы для каждого компонента комбинации будут зависеть от конкретного другого медицинского средства и соединения по настоящему изобретению, подлежащих введению, их пути введения, конкретного состояния, в частности опухоли, подлежащего лечению, и конкретного хозяина, подлежащего лечению. Оптимальный способ и порядок введения, а также величины доз и схема могут быть легко определены специалистами в данной области техники с применением стандартных способов и с учетом информации, изложенной в данном документе.

Весовое соотношение соединения в соответствии с настоящим изобретением и одного противоракового средства или нескольких других противораковых средств, вводимых в виде комбинации, может быть определено специалистом в данной области техники. Указанное соотношение, точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения в соответствии с настоящим изобретением и другого противоракового(противораковых) средства(средств), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, массы тела, пола, рациона, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также от другого медикаментозного лечения, которые индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что эффективное суточное количество можно уменьшать или

- 29 045364 увеличивать в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки лечащего врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Конкретное весовое соотношение для данного соединения формулы (I) и другого противоракового средства может находиться в диапазоне от 1/10 до 10/1, более конкретно, от 1/5 до 5/1, еще более конкретно, от 1/3 до 3/1.

Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.

Примеры

Некоторые способы получения соединений по настоящему изобретению проиллюстрированы в следующих примерах. Если не указано иное, то все исходные вещества получали от коммерческих поставщиков и применяли без дополнительной очистки.

Далее в данном документе термины: ACN или MeCN означает ацетонитрил, DCM означает дихлорметан, DIPEA означает N,N-диизопропилэтиламин, DIPE или DiPE означает диизопропиловый эфир, ч. означает час(часы), мин означает минуту(минуты), DMF означает диметилформамид, DSC означает дифференциальную сканирующую калориметрию, TEA или Et₃N означает триэтиламин, Et2O означает диэтиловый эфир, EtOAc или EA означает этилацетат, EtOH означает этанол, HPLC означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, iPrOH означает изопропиловый спирт, LC/MS означает жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, MeOH означает метанол, ЯМР означает ядерный магнитный резонанс, к.т. или КТ означает комнатную температуру, SFC означает сверхкритическую флюидную хроматографию, OR означает оптическое вращение, насыщ. водн. означает насыщенный водный. AcCl означает ацетилхлорид, AcOH или HOAc означает уксусную кислоту, BOC или Boc означает трет-бутилоксикарбонил, Celite® означает диатомовую землю, CH3COONH4 означает ацетат аммония, COMU® означает (1-циано-2-этокси-2оксоэтилиденаминоокси)диметиламиноморфолинокарбения гексафторфосфат, CO2 означает диоксид углерода, DCE означает дихлорэтан, DMAP означает диметиламинопиридин, DMSO означает диметилсульфоксид, DBU означает 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундецен-7, EDCI.HCl означает 1-(3диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид, ee означает энантиомерный избыток, экв. или эквив. означает эквивалент(эквиваленты), EtMgBr означает бромэтилмагний, EtOAc означает диэтиловый эфир, EtOAc означает этилацетат, Et₃N или TEA означает триэтиламин, EtOH означает этанол, ч. означает час(часы), HATU означает O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N,Nтетраметилурония гексафторфосфат, HCl означает хлористоводородную кислоту, HOBT означает Nгидроксибензотризола моногидрат, H₂O означает воду, iPrMgCl означает хлорид изопропилмагния, iPrNH₂ означает изопропиламин, K2CO3 означает карбонат калия, Me-THF означает 2метилтетрагидрофуран, MeMgBr или CH₃MgBr означает бромид метилмагния, MeOH означает метанол, MgSO₄ означает сульфат магния, мин означает минуту(минуты), NaBH(OAc)₃ означает триацетоксиборогидрид натрия, NaBH₃CN означает цианоборогидрид натрия, Na₂CO₃ означает карбонат натрия, NaH означает гидрид натрия, NaHCO₃ означает гидрокарбонат натрия, NaOH означает гидроксид калия, Na₂SO₄ означает сульфат натрия, NH₄Cl означает хлорид аммония, NH4HCO3 означает бикарбонат аммония, NH4OH означает 30% водный раствор аммиака, колич. или количеств. означает количественный, R_t означает время удерживания, SFC означает сверхкритическую флюидную хроматографию, T означает температуру, TBAF означает фторид тетрабутиламмония, TBDMS или SMDBT означает трет-бутилдиметилсилил, TFA или CF3COOH означает трифторуксусную кислоту, THF означает тетрагидрофуран, Ti(OEt)₄ означает этоксид титана, Ti(OiPr)₄ означает изопропоксид титана, об. означает объем, F3C или CF3 означает трифторметил, HBTU означает 1-[бис(диметиламино)метилен] -1 H-бензотриазолийгексафторфосфат( 1 -)3-оксид.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения, синтезируемые с использованием указанных протоколов, могут существовать в виде сольвата, например, гидрата, и/или могут содержать остаточный растворитель или незначительные примеси. Соединения, выделенные в форме соли, могут иметь целочисленную стехиометрию, т.е. моно- или дисоли, или промежуточную стехиометрию.

Стереохимическую конфигурацию для центров в некоторых соединениях можно обозначать R или S, если смесь(смеси) разделяли; для некоторых соединений стереохимическая конфигурация при указанных центрах была обозначена как *R (элюированное первым из колонки в случае описанных в протоколе синтеза условий для колонки и если присутствует только один стереоцентр) или *S (элюированное вторым из колонки в случае описанных в протоколе синтеза условий для колонки и если присутствует только один стереоцентр), если абсолютная стереохимия не определена (даже если связи нарисованы стереоспецифично), хотя соединение само по себе было выделено в виде одного стереоизомера и является энантиомерно чистым.

- 30 045364

Например, будет понятно, что соединение 179 представляет собой

Соединения, характеризующиеся двумя стереоцентрами, у которых только одна стереохимическая конфигурация одного стереоцентра указана с помощью * (например, *R или *S) (см., например, соединение 186 или 281), следуют аналогичному правилу, указанному выше. Это означает, что абсолютная стереохимическая конфигурация стереоцентра, указанная с помощью *, не определена (даже если связи нарисованы стереоспецифично), хотя соединение является энантиомерно чистым при указанном центре.

Для соединений, таких как 188, 189, 190, 191, 235, 236, 237 и 238, где стереохимическая конфигурация двух стереоцентров указана с помощью * (например, *R или *S), абсолютная стереохимия стереоцентров не определена (даже если связи нарисованы стереоспецифично), хотя соединение само по себе было выделено в виде одного стереоизомера и является энантиомерно чистым. В данном случае конфигурация первого стереоцентра не зависит от конфигурации второго стереоцентра в том же соединении.

Например, для соединения 188

это означает, что соединение представляет собой

Абзацы выше про стереохимические конфигурации также применимы к промежуточным соединениям.

Термин энантиомерно чистый, применяемый в данном документе, означает, что продукт содержит по меньшей мере 80% по весу одного энантиомера и 20% по весу или меньше другого энантиомера. Предпочтительно продукт содержит по меньшей мере 90% по весу одного энантиомера и 10% по весу или меньше другого энантиомера. В наиболее предпочтительном варианте осуществления термин энантиомерно чистый означает, что композиция содержит по меньшей мере 99% по весу одного энантиомера и 1% или меньше другого энантиомера.

- 31 045364

Если промежуточное соединение или соединение в экспериментальной части ниже указано как соль HCl, соль HCOOH или соль TFA без указания числа эквивалентов HCl или TFA, это означает, что число эквивалентов HCl или TFA не определяли.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что, даже если это не указано явно в экспериментальных протоколах ниже, как правило, после очистки посредством колоночной хроматографии необходимые фракции собирали и растворитель выпаривали.

В случае, если не указывается стереохимия для спироцикла, обозначаемого как L1, то это означает смесь стереоизомеров, если не указано иное или четко не следует из контекста.

Если стереоцентр обозначается RS, то это означает, что получали рацемическую смесь при указанном центре, если не указано иное.

A. Получение промежуточных соединений.

Получение промежуточного соединения 1

Смесь 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-d]пиримидина (525 мг, 2,08 ммоль), полученного как описано в Journal of Medicinal Chemistry (2016), 59(3), 892-913, трет-бутил-2,7-диазаспиро[4.5]декан-2карбоксилата (550 мг, 2,29 ммоль) и DIPEA (1,43 мл, 8,3 ммоль) в ACN (12 мл) нагревали при 80°C в течение ночи. Раствор охлаждали и смесь выливали в охлажденную воду, продукт экстрагировали с помощью EtOAc, органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: частицы неправильной формы, 15-40 мкм, 50 г, подвижная фаза: DCM/MeOH: градиент от 100/0 до 99/1). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 770 мг (выход 81%) промежуточного соединения 1.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 1, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 32 045364

Номер промежуточного соединения	Структура	Количество (мг)	Выход (%)
Промежуточное соединение 2 (из CAS[336191-17-4] и [1628317-85-0])	F₃C S-^_N^	350	100
Промежуточное соединение 3 (из CAS[885270-84-8] и [1628317-85-0])	И О LL?	200	73
Промежуточное соединение 4 (из CAS[885270-86-0] и [1628317-85-0])	F₃C	660	78
Промежуточное соединение 5 (из CAS[885268-42-8] и промежуточное соединение 15)	F₃C S^-_NY\	355	57

Получение промежуточного соединения 3

Раствор 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-d]пиримидина (11,4 г; 44,96 ммоль), трет-бутил-2,6диазаспиро[3.4]октан-2-карбоксилата (10,5 г; 49,46 ммоль) и DIPEA (15,5 мл; 89,93 ммоль) в iPrOH (183 мл) нагревали при 90°C в течение ночи. Раствор охлаждали до к.т. и раствор выливали в воду, затем экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и отфильтровывали.

Осадок (в водном слое) отфильтровывали, промывали с помощью небольших количеств DCM и объединяли с предыдущим фильтратом. Растворитель выпаривали с получением 19,9 г коричневого твердого вещества. Остаток поглощали диэтиловым эфиром, осадок фильтровали и высушивали с получением 18,5 г бледно-коричневого твердого вещества, представляющего собой промежуточное соединение 3 (96%).

Альтернативное получение промежуточного соединения 3.

К смеси 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-d]пиримидина (3,00 г, 11,9 ммоль) и трет-бутил-2,6диазаспиро[3.4]октан-2-карбоксилата (2,5 г, 11,8 ммоль) в EtOH (50 мл) одной порцией добавляли DIPEA (2 г, 15,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь выпаривали и остаток растворяли в EA (200 мл). Раствор промывали водой (100 млх2), высушивали над Na₂SO₄, филь

- 33 045364 тровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 3 (5,10 г, 11,9 ммоль, выход 100%) в виде коричневого масла.

Получение промежуточного соединения 6

Смесь промежуточного соединения 1 (770 мг, 1,69 ммоль) и раствора 4 н. HCl в диоксане (4,22 мл, 16,9 ммоль) в ACN (45 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Смесь выливали в ледяную воду, повышали ее основность с помощью 3 н. NaOH, продукт экстрагировали с помощью DCM, органический слой высушивали над MgSO₄, выпаривали до сухого состояния с получением 670 мг промежуточного соединения 6, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 6, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер промежуточного соединения	Структура	Количеств о (мг)	Выход (%)
Промежуточное соединение 7 (из промежуточного соединения 2)	Н 8 ^F ₃c Соль НС1	320
Промежуточное соединение 8 (из промежуточного соединения 4)	н 7 xrS F₃C Соль HCl	582

Получение промежуточного соединения 9

В герметично закрытой пробирке 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-d]пиримидин (0,6 г, 2,37 ммоль), полученный как описано в Journal of Medicinal Chemistry (2016), 59(3), 892-913, трет-бутил-2,6диазаспиро[3.3]гептан-2-карбоксилат (0,57 г, 2,85 ммоль), DIPEA (0,82 мл, 4,75 ммоль) в iPrOH (15 мл) нагревали при 90°C в течение 2 ч. Раствор охлаждали до к.т. и реакционную смесь выливали в воду, затем экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт кристаллизовали из Et₂O с получением 0,6 г (выход 61%) промежуточного соединения 9.

- 34 045364

Получение промежуточного соединения 10

Смесь промежуточного соединения 9 (4,43 г; 10,69 ммоль) в муравьиной кислоте (24 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь выпаривали. Остаток дважды поглощали с помощью Et₂O и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы; 80 г; подвижная фаза: 90% DCM, 10% MeOH, 1% NH4OH). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 3,34 г (99%) промежуточного соединения 10.

Получение промежуточного соединения 10b

Смесь промежуточного соединения 9 (0,55 г, 1,33 ммоль) в муравьиной кислоте (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 20 ч. Смесь выпаривали в вакууме с получением остатка, который дважды поглощали с помощью Et₂O и выпаривали до сухого состояния с получением 0,4 г (выход 96%) промежуточного соединения 10b (соль муравьиной кислоты). Неочищенный продукт использовали без какой-либо дополнительной очистки на следующей стадии.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 10b, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер промежуточного соединения

Промежуточное соединение 12 промежуточного соединения 5)

Получение промежуточного соединения 11

Смесь промежуточного соединения 3 (8,57 г; 20 ммоль) в муравьиной кислоте (51 мл) перемешивали при к.т. в течение 20 ч. Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение выходных. Смесь выпаривали и остаток охлаждали до 5°C, поглощали с помощью DCM и нейтрализовали с помощью 3 н. водного раствора NaOH. Органический слой промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (7,63 г оранжевого масла) очищали посредством хроматографии на силикагеле (немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 120 г, подвижная фаза: 1% NH4OH, 85% DCM, 15% MeOH). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 3,65 г желтого масла, представляющего собой промежуточное соединение 11 (56%).

- 35 045364

Альтернативное получение промежуточного соединения 11.

TFA (17,9 мл; 233,38 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 3 (5 г; 11,67 ммоль) в DCM (130 мл) при 5°C и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли с помощью гептана и выпаривали до сухого состояния (3х) с получением 10,7 г коричневого масла. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 40 мкм; 220 г, подвижная фаза: 1% NH₄OH, 90% DCM, 10% MeOH). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали. Остаток (4 г) солюбилизировали с помощью DCM и продукт кристаллизовали. Смесь выпаривали и несколько раз поглощали с помощью ACN и растворитель выпаривали с получением 4 г бледно-желтого твердого вещества, представляющего собой промежуточное соединение 11.

Получение промежуточного соединения 11b

TFA (2,2 мл; 28 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 3 (600 мг; 1,4 ммоль) в DCM (13 мл) при 0°C, затем реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния с получением 1,26 г промежуточного соединения 11b в виде соли TFA. Продукт непосредственно применяли без какой-либо дополнительной очистки.

Получение промежуточного соединения 11c

Раствор 4 М HCl в диоксане (150 мл) добавляли к промежуточному соединению 3 (6,5 г; 15,17 ммоль) при к.т. Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Смесь выпаривали под вакуумом с получением 5,7 г желтого твердого вещества, представляющего собой промежуточное соединение 11c в виде соли HCl. Продукт применяли без очистки для следующей стадии.

Получение промежуточного соединения 13

Уксусный ангидрид (1 мл, 10,7 ммоль) по каплям добавляли при к.т. к раствору 2-амино-5-(2,2,2трифторэтил)тиофен-3-карбоксамида (2 г, 8,92 ммоль) в толуоле (50 мл) и триметиламина (6,2 мл, 44,6 ммоль). Раствор нагревали с обратным холодильником в течение 5 ч, выливали в воду, экстрагиро вали с помощью EtOAc и промывали солевым раствором (х2). Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния, неочищенный продукт поглощали с помощью EtOAc и осадок фильтровали с получением 1,5 г промежуточного соединения 13 (выход 63%/коричневое твердое вещество).

Получение промежуточного соединения 14

ОН αίΛι F₃C

К раствору промежуточного соединения 13 (1,5 г, 5,63 ммоль) в EtOH (70 мл) при к.т. по каплям добавляли 1 М раствор KOH. Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 30 мин, затем смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т., затем выливали в ледяную воду, подкисляли с помощью 3 н. HCl, экстрагировали с помощью DCM и декантировали. Объединенные органические слои промывали солевым раствором и высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток кристаллизовали из Et₂O с получением 0,7 г проме

- 36 045364 жуточного соединения 14 (выход 50%), которое использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

Получение промежуточного соединения 15

Промежуточное соединение 14 (0,7 г, 2,82 ммоль) и трихлорид фосфора (5 мл) нагревали при 110°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т., затем выпаривали до сухого состояния. Остаток осторожно поглощали с помощью льда и DCM, повышали его основность с помощью водного раствора K₂CO₃ (10%) и органический слой промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,75 г (выход 99%) промежуточного соединения 15, которое использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

Получение промежуточного соединения 16

Спиро[3.3]гептан-2-илметилметансульфонат.

К раствору спиро[3.3]гептан-2-илметанола (153 мг, 1,08 ммоль) в 4 мл DCM добавляли TEA (0,464 мл, 3,2 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до 0°C. Затем по каплям добавляли метилсульфонилхлорид (0,184 г, 1,605 ммоль), обеспечивали нагревание смеси до к.т. и перемешивали в течение 2 ч. Добавляли водный насыщенный раствор NaHCO₃ (30 мл) и DCM (30 мл). Смесь разделяли, органический слой собирали, промывали солевым раствором (10 мл), высушивали над Na₂SO₄ и выпаривали с получением 300 мг промежуточного соединения 16 в виде желтого масла, которое использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

Получение промежуточного соединения 17

В потоке N2 к раствору промежуточного соединения 11c (400 мг) и TEA (0,38 мл, 2,76 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли 1-[2-(ацетилокси)этил]-1H-nиррол-2-карбоксальдегид (200 мг, 1,11 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Добавляли NaBH(OAc)₃ (390 мг, 1,84 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 48 ч. Затем ее выливали в ледяную воду, и смесь разделяли, и водный слой экстрагировали с помощью DCM. Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO4 и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: DCM/MeOH: 97/3). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом с получением 180 мг промежуточного соединения 17.

Получение промежуточного соединения 35.

¹H-Пиразол-4-карбальдегид (0,5 г; 5,2 ммоль) и карбонат цезия (3,39 г; 10,4 ммоль) разбавляли в ACN (10 мл). Затем добавляли 2-бромэтилметиловый эфир (0,636 мл; 6,77 ммоль) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь разделяли между насыщенным раствором NaHCO₃ и EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и концентрировали.

Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiO₂ с частицами неправильной формы, 120 г, DCM/MeOH: от 100/0 до 95/5). Фракции, содержащие продукт, смешивали и концентрировали

- 37 045364 с получением 439 мг (55%) промежуточного соединения 35.

Получение промежуточного соединения 20

Промежуточное соединение 11 (150 мг, 0,46 ммоль), (+/-)-метил-альфа-бромфенилацетат (0,08 мл, 0,50 ммоль) и K₂CO₃ (127 мг; 0,92 ммоль) в DMF (10 мл) перемешивали при к.т. в течение 5 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду и добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: DCM/MeOH (+10% NH4OH): градиент от 97/3 до 95/5). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 162 мг (выход 74%) промежуточного соединения 20.

Получение промежуточного соединения 32

Моногидрат гидроксида лития (71 мг; 1,7 ммоль) добавляли при к.т. к раствору промежуточного соединения 20 (162 мг; 0,34 ммоль) в THF (3 мл) и воде (3 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали и подкисляли с помощью водного раствора 3 н. HCl (рН 2-4). Осадок фильтровали и высушивали с получением 33 мг (21%) промежуточного соединения 32 (чистота 90% на основании данных LC/MS). Исходный слой выпаривали до сухого состояния с получением 243 мг неочищенной фракции с промежуточным соединением 32.

Получение промежуточного соединения 54

Промежуточное соединение 11c (333 мг), метил-2-формилбензоат (148,5 мг; 0,905 ммоль), NaBH(OAc)₃ (872 мг; 4,11 ммоль) и триметиламин (250 мг; 2,47 ммоль) смешивали в дихлорэтане (16 мл) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем добавляли водный раствор NaHCO₃(1 мл) и смесь экстрагировали с помощью DCM (4x15 мл). Органические слои отделяли, смешивали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и концентрировали с получением 450 мг промежуточного соединения 54 в виде белого твердого вещества.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 54, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 38 045364

Номер промежуточного соединения	Структура	Количест во (мг)	Выход (%)
Промежуточное соединение 44 (из промежуточного соединения Ис и промежуточного соединения 52)	% М сс м \\ // 1 / хТ	340

Получение промежуточного соединения 47

Смесь промежуточного соединения 10b (150 мг), 1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4карбоксальдегида (225 мг; 1,249 ммоль) и AcOH (24 мкл; 0,416 ммоль) в дихлорэтане (4,5 мл) перемешивали при 50°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли NaBH(OAc)₃ (265 мг; 1,249 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% MeOH, 100% DCM до 10% MeOH, 90% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 150 мг промежуточного соединения 47.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 47, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер промежуточного соединения	Структура	Количест во (мг)	Выход (%)
Промежуточное соединение 48 (из промежуточного соединения 10b и 1(оксан-2-ил)пиразол-3 карбальдегида)	Д¹о 6	158

Получение промежуточного соединения 25

Смесь (4S)-1-Boc-4-метил-L-пролина (174 мг, 0,761 ммоль), HBTU (288 мг, 0,761 ммоль) и DIPEA (0,65 мл, 3,804 ммоль) в DMF (7,5 мл) перемешивали в течение 1 ч. Затем добавляли раствор промежуточного соединения 10 (250 мг, 0,761 ммоль) в DMF (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, повышали ее основность с помощью 10% водного раствора K₂CO₃ и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали водой, за

- 39 045364 тем солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (490 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: 0,5/95/5). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 330 мг (выход 82%) промежуточного соединения 25.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 25, начиная с соответствующих исходных веществ.

Количест

Получение промежуточного соединения 104

Номер соединения

Промежуточное соединение промежуточного соединения 10b и

2S,4S)-4фторпирролидин-2карбоновои кислоты)

Промежуточное соединение промежуточного соединения 11

Вос-азаспиро| 2.41 гептан 6-карбоновой кислоты)

DIPEA (0,48 мл; 2,775 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 10b (200 мг), 3карбоксибензальдегида (100 мг; 0,666 ммоль) и HATU (317 мг; 0,833 ммоль) в DMF (10 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой декантировали, промывали водой, затем солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% MeOH, 100% DCM до 10% MeOH, 90% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 62 мг промежуточного соединения 104.

Получение промежуточного соединения 41

В потоке N2 при к.т. к раствору промежуточного соединения 11 (250 мг, 0,76 ммоль) в DCM (12 мл) добавляли промежуточное соединение 42 (246 мг, 0,91 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной

- 40 045364 температуре в течение 3 ч. Смесь охлаждали до 5°C, добавляли NaBH(OAc)₃ (323 мг, 1,52 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем ее выливали в ледяную воду и слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью DCM. Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, выпаривали. Остаток кристаллизовали из Et₂O и пентана. Белый осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 55 мг (выход 100%) промежуточного соединения 41.

Получение промежуточного соединения 43

Промежуточное соединение 11 (500 мг, 1,52 ммоль), сложный 2-(хлорметил)-1,1-диметилэтиловый эфир 1H-пиррол-1-карбоновой кислоты (493 мг, 2,28 ммоль) и K2CO3 (1,05 г, 7,61 ммоль) в ACN (12 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду и добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: градиент от 0,1/97/3 до 0,1/95/5). Очищенные фракции смешивали и выпаривали с получением 100 мг (выход 14%) промежуточного соединения 43.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 43, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 41 045364

Номер промежуточного соединения	Структура	Количест во (мг)	Выход (%)
Промежуточное соединение 51 (из 1Н-пиррол-4- карбоксальдегида и 3бромпропионитрила)		157	66 При 60°С в качестве температур ы реакции
		1000	71
			При
Промежуточное соединение 42 (из 1Н-пиррол-4- карбоксальдегида и N-(2бромэтил)фталимида)			температур е образовани я флегмы в качестве температур ы реакции
Промежуточное соединение 52 (из 3- гидроксибензальдегида и 3(Вос-амино)пропилбромида)		340	99 При 75°С в качестве температур ы реакции
		1563	65
Промежуточное соединение 53 (из 1Н-пиразол-4- карбальдегида и 2- бромэтокси-третбутилдиметилсилана)			При температур е образовани я флегмы в качестве температур ы реакции

Получение промежуточного соединения 50

В потоке N2 к раствору промежуточного соединения 11 (202 мг, 0,62 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли трет-бутил-4-формил-1Н-пиразол-1-карбоксилат (133 мг, 0,68 ммоль) и AcOH (35 мкл, 0,62 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли NaBH(OAc)3 (521 мг, 2,46 ммоль), и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи, выливали в ледяную воду, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью DCM. Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, выпаривали. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: DCM/MeOH (+10% NH4OH): 97/3). Очищенные фракции смешивали и выпаривали с получением 145 мг (выход 46%) промежуточного соединения 50.

- 42 045364

Получение промежуточного соединения 55

В герметично закрытой пробирке в потоке N2 промежуточное соединение 53 (349 мг, 1,37 ммоль) и Ti(OiPr)₄ (436 мкл, 1,83 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (300 мг, 0,914 ммоль) в THF (6 мл). Раствор перемешивали при 50°C в течение 5 часов, затем при к.т. в течение ночи.

Реакционную смесь охлаждали до 5°C и по каплям добавляли 2 н. iPrMgCl в THF (2,28 мл, 4,57 ммоль). Обеспечивали медленное нагревание реакционной смеси до к.т. и ее перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и выливали в 10% водный раствор K₂CO₃. Нерастворимое вещество удаляли посредством фильтрации через Celite®. Органический слой декантировали, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: MeOH/DCM: градиент от 0/100 до 10/90). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,3 г (выход 54%) промежуточного соединения 55.

Получение промежуточного соединения 63 и промежуточного соединения

промежуточного соединения 63 a

Раствор трет-бутил-3-ацетилазетидин-1-карбоксилата (364 мг; 1,83 ммоль), промежуточного соединения 11 (400 мг; 1,22 ммоль), изопропоксида титана(IV) (725 мкл; 2,44 ммоль) в этаноле (2 мл) перемешивали при 45°C в течение 30 мин (раствор становился темно-желтым). Добавляли этанол (12 мл) и NaBH4 (138 мг; 3,66 ммоль) и раствор становился бледно-желтым. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем ее выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и DCM.

- 43 045364

Нерастворимое вещество фильтровали через подушку из Celite®. Органический слой декантировали, фильтровали через Chromabond® и растворитель выпаривали 624 мг бледно-желтого масла, которое очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiO₂; 25 г; подвижная фаза: градиент от 98% DCM, 2% MeOH до 96% DCM, 4% MeOH). Фракции, содержащие продукт, собирали и растворитель выпаривали с получением 223 мг (36%) промежуточного соединения 63 в виде белой пены.

Промежуточное соединение 63 очищали с помощью хиральной SFC (неподвижная фаза: CHIRALCEL OJ-H, 5 мкм, 250x20 мм, подвижная фаза: 92% CO₂, 8% MeOH (0,3% iPrNH₂)). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 83 мг (13%) промежуточного соединения 63a в виде бесцветного масла и 90 мг (14%) промежуточного соединения 63b.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 63, начиная с соответствующих исходных веществ._______________________________________________

Номер промежуточного соединения	Структура	Количес тво	Выход
Промежуточное соединение 60 (из промежуточного соединения 11 и N-Boc-4ацетилпиперидина)	j Я Т ω 1	600 мг	52%
Промежуточное соединение 60а и промежуточное соединение 60b из разделения посредством хиральной SFC промежуточного	Промежуточное соединение 60а	221 мг	20%
соединения 60: (Chiralpak AD-H 5 мкм 250*30 мм; подвижная фаза: 75% СО₂, 25% iPrOH (0,3% iPrNH₂)). Промежуточное соединение 109 (из промежуточного соединения 11 и промежуточного соединения 108)	F₃C S-^_N^ Промежуточное соединение 60b ;--------- λ—фэ '—< о—4— ъ ^S—	229 мг 324 мг	20% 33%

- 44 045364

Получение промежуточного соединения 68 промежуточного соединения

промежуточного соединения 68a и соединения 61

Раствор промежуточного соединения 113 (1,67 г; 6,54 ммоль) в THF (15 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (1,4 г; 4,36 ммоль) и TFA (2 мл; 26,16 ммоль) в THF (30 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем порциями добавляли NaBH(OAc)₃ (2,77 г; 13,08 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 10 дней. Раствор выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и добавляли EtOAc. Смесь экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (2,9 г; желтое масло) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiO₂; 40 г; элюент: от 97% DCM, 3% MeOH, 0,3% NH4OH до 90% DCM, 10% MeOH, 1% NH4OH). Необходимые фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 266 мг бесцветного масла, представляющего собой промежуточное соединение 68, и 215 мг бесцветного масла, представляющего собой фракцию 1.

Промежуточное соединение 68 очищали с помощью хиральной SFC (Lux-cellulose-25 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 50% CO2, 50% MeOH (0,3% iPrNH₂)). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 114 мг (5%) бесцветного масла, представляющего собой промежуточное соединение 68a, и 109 мг (4%) бесцветного масла, представляющего собой промежуточное соединение 68b.

Фракцию 1 очищали с помощью обращенной фазы (YMC-actus Triart C18 10 мкм, 30x150 мм, подвижная фаза: градиент от 65% NH4HCO3 0,2%, 35% ACN до 25% NH4HCO3 0,2%, 75% ACN). Фракции, содержащие продукт, собирали и растворитель выпаривали. Остаток (160 мг; бесцветное масло) лиофи

- 45 045364 лизировали со смесью вода-ACN с получением 90 мг (6%) белого твердого вещества, представляющего собой соединение 61.

Получение промежуточного соединения 69 промежуточного соединения и промежуточного соединения

Раствор 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-d]пиримидина (5,07 г; 20,08 ммоль), 2-BOC-2,7диазаспиро[4.4]нонана (5 г; 22,09 ммоль) и DIPEA (6,9 мл; 40,17 ммоль) в iPrOH (80 мл) нагревали при 90°C в течение ночи. Раствор охлаждали до к.т. и раствор выливали в воду, затем экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и растворитель выпаривали до сухого состояния. Остаток (9 г, бледно-коричневое твердое вещество) поглощали диэтиловым эфиром, осадок фильтровали и высушивали с получением 8,4 г промежуточного соединения 69 (95%, грязно-белое твердое вещество).

Промежуточное соединение 69 очищали с помощью хиральной SFC (Chiralpak IG 5 мкм, 250x20 мм, подвижная фаза: 65% CO₂, 35% iPrOH (0,3% iPrNH₂)). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 4,07 г промежуточного соединения 69a (46%, желтая пена) и 4,29 г промежуточного соединения 69b (48%, желтая пена).

Получение промежуточного соединения 70a

Промежуточное соединение 70a получали посредством применения способа, аналогичного описанному для альтернативного получения промежуточного соединения 11, начиная с соответствующего исходного вещества, представляющего собой промежуточное соединение 69a.

Промежуточное соединение, приведенное в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для альтернативного получения промежуточного соединения 11, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 46 045364

Номер промежуточного соединения	Структура	Количес тво	Выхо д
Промежуточное соединение 70b (из промежуточного соединения 69b)	/ \ ³ >70 F₃C	3,4 г	Колич

Получение промежуточного соединения 71 промежуточного соединения 71a и промежуточного соединения

Способ A.

Смесь промежуточного соединения 11b (4,2 г) и промежуточного соединения 72 (1,6 г; 7 ммоль) в THF (50 мл) перемешивали при к.т. течение ночи. Затем порциями добавляли NaBH(OAc)₃ (3 г; 14 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор выливали в холодную воду, повышали его основность с помощью 3 н. водного раствора NaOH и добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 80 г, подвижная фаза: градиент от 98% DCM, 2% MeOH (+10% NH4OH) до 95% DCM, 5% MeOH (+10% NH4OH)). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 852 мг промежуточного соединения 71. Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (CHIRALCEL OD-H 5 мкм, 250x30 мм; подвижная фаза: 70% CO2, 30% EtOH). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 294 мг промежуточного соединения 71a и 303 мг промежуточного соединения 71b.

- 47 045364

Способ B.

Эксперимент выполняли 6 раз с одинаковым количеством (640 мг; 1,95 ммоль). Ti(OEt)₄ (0,8 мл; 3,9 ммоль) добавляли при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 11 (640 мг; 1,95 ммоль) и промежуточного соединения 72 (665 мг; 2,92 ммоль) в DCE (20 мл) и MeOH (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч, охлаждали до 10°C, затем порциями добавляли NaBH₃CN (367 мг; 5,84 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 дней. Растворы собирали для обработки: выливали в холодную воду, повышали их основность с помощью порошка K₂CO₃ и экстрагировали с помощью DCM. Суспензию фильтровали через подушку из Celite®. Фильтрат декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния.

Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: градиент от 100% DCM, 0% MeOH до 97% DCM, 3% MeOH, 0,1% NH4OH). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 1,7 г (28%) промежуточного соединения 71.

Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (Chiralcel OD-H 5 мкм, 250x30 мм; подвижная фаза: 70% CO2, 30% EtOH (0,3% iPrNH2)). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 697 мг (11%) промежуточного соединения 71a и 727 мг (12%) промежуточного соединения 71b.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали согласно способу A, описанному для получения промежуточного соединения 71, 71a и 71b, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 48 045364

	промежуточного соединения 89
Промежуточное соединение 82,	ВОС \ /^^F)—\^RS Из промежуточного соединения 11b и промежуточного соединения 83 ВОС 1 N	40 мг
промежуточное	\ R*/ ^F
соединение 82а и	ъ Υ/ώ F₃C S-^_N^ ВОС γ
промежуточное соединение 82b	ъ Из разделения посредством хиральной SFC промежуточного соединения 82 (неподвижная фаза: CHIRALPAK ADН 5 мкм, 250*30 мм, подвижная фаза: 70% СО2, 30% iPOH (0,3% iPrNH₂))

Получение промежуточного соединения 77

- 49 045364 промежуточного соединения 77 a и промежуточного соединения 77b

Реакционная смесь 1. В герметично закрытой пробирке раствор промежуточного соединения 78 (2 экв.), промежуточного соединения 11 (100 мг; 0,305 ммоль) и Ti(OiPr)₄ (6 эквивалентов) в EtOH (0,2 мл) нагревали при 45°C в течение 1 часа. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли с помощью EtOH (3 мл) и добавляли NaBH₄ (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов с образованием, согласно результатам LC/MS, 60% промежуточного единения 77.

Реакционные смеси 2 и 3. Реакцию осуществляли дважды с тем же количеством. В герметично крытой пробирке раствор промежуточного соединения 78 (2 экв.), промежуточного соединения соза11 (450 мг; 1,37 ммоль) и Ti(OiPr)₄ (6 эквивалентов) в EtOH (0,9 мл) нагревали при 45°C в течение 1 часа. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли с помощью EtOH (13 мл) и добавляли NaBH4 (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов.

Три реакционные смеси разбавляли с помощью EtOAc и выливали в смесь 10% K₂CO₃ и солевого раствора. Суспензию подвергали воздействию ультразвука в течение 30 мин и фильтровали через подушку из Celite®. Органический слой декантировали, промывали с помощью 10% водного K₂CO₃, затем солевого раствора, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (2,6 г) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 50 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 0,7% NH4OH, 7% MeOH, 93% DCM).

Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (1,5 г; 89%) очищали второй раз посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: 60% гептана, 35% EtOAc, 5% MeOH (+10% NH4OH)). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 980 мг (58%; 82% чистоты на основании данных LC/MS) промежуточного соединения 77.

Неочищенную фракцию с промежуточным соединением 77 дополнительно очищали с помощью ахиральной SFC (диэтиламинопропил, 5 мкм, 150x30 мм; подвижная фаза: 90% CO2, 10% MeOH). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 620 мг (37%) промежуточного соединения 77.

Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (Lux Cellulose-25 мкм, 250x30 мм; подвижная фаза: 50% CO2, 50% MeOH (0,3% iPrNH2)). Фракции, содержащие продукты, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 276 мг (16%) промежуточного соединения 77a и 269 мг (16%) промежуточного соединения 77b.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 77, 77a и 77b, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 50 045364

Номер промежуточное о соединения	Структура	Количество	Выход
Промежуточно е соединение 80	ВОС 4 ъ F₃C S^_N·^ Из промежуточного соединения 11 и трет-бутил-3 -пропаноилазетидин-1 карбоксилата	240 мг	57%

Получение промежуточного соединения 72

В атмосфере N₂ при 5°C 2 М iPrMgCl в THF (19 мл; 38,33 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 73 (4,6 г; 18,83 ммоль) в THF (70 мл). Раствор перемешивали при 5°C в течение 30 мин, обеспечивали медленное повышение его температуры до к.т., перемешивали в течение 1 ч, затем нагревали при 40°C в течение 5 ч.

Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в смесь ледяной воды и насыщенного водного раствора NH₄Cl и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением 4,7 г промежуточного соединения 72 (количественный).

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 72, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 51 045364

Номер промежуточног о соединения	Структура	Количеств о	Выход
Промежуточно е соединение 75	о \ О М О-- Из промежуточного соединения 73 и 0,5 бромида циклопропилмагния в THF	25 г	Колич.
Промежуточно е соединение 78	Ад ^N—1 ° / Из промежуточного соединения 73 и 0,4 М бромида изобутилмагния	19 г	96%
Промежуточно е соединение 83	—( 'ϊ θ о⁷ О-- Из промежуточного соединения 84 и 2 М хлорида изопропилмагния в THF	137 мг	49%
Промежуточно е соединение 105	\ /^° /SY Из А-метокси-N- метилтетрагидрофуран-3 карбоксамида и 2 М хлорида изопропилмагния в THF	71 мг	16%

- 52 045364

Промежуточно е соединение 108	О Из А-метил-Х-метокси-1-(трет- бутоксикарбонил)пиперидин-4ацетамида и 2 М хлорида изопропилмагния в THF	710 мг	26%
Промежуточно е соединение 111	О л о ⁰ \ Из промежуточного соединения 73 и хлор[(4-метилфенил)метил]магния	770 мг	40%
Промежуточно е соединение ИЗ	----( 7 \ О V--\ ^N--/ о⁷ '—⁷ О—4— Из сложного 1,1 -диметилэтилового эфира 4-[(А-метокси-А- метиламино)карбонил] -1 пиперидинкарбоновой кислоты и 2 М хлорида изопропилмагния в THF	1230 мг	33%

Получение промежуточного соединения 73

1-Вос-азетидин-З-карбоновую кислоту (5 г; 24,9 ммоль) и гидрохлорид N,O-диметилгидроксиламина (3,64 г; 37,3 ммоль) помещали в круглодонную колбу в атмосфере N2. Добавляли DCM (75 мл) с последующим добавлением EDCI.HCl (7,15 г; 37,3 ммоль), DMAP (155 мг; 1,27 ммоль) и DIPEA (6,5 мл, 37,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч и разбавляли с помощью DCM (100 мл). Органический слой промывали с помощью водного 1 М раствора HCl (2x50 мл), насыщ. раствора NaHCO₃ (50 мл) и солевого раствора (50 мл). Органическую фазу декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением 6,04 г (99%) промежуточного соединения 73.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 73, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 53 045364

В атмосфере N2 раствор промежуточного соединения 11 (204 мг; 0,62 ммоль), промежуточного соединения 86 (217 мг; 0,81 ммоль) и Ti(OEt)₄ (0,26 мл; 1,24 ммоль) в DCE (7 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли NaBH₃CN (129 мг; 2 ммоль) и раствор перемешивали в течение 4 дней. Добавляли по каплям воду, затем раствор фильтровали через подушку из Celite®. Фильтрат разделяли. Органический слой промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 97% DCM, 3% MeOH (+10% NH4OH) до 95% DCM, 5% MeOH (+10% NH₄OH)). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 209 мг (80%) промежуточного соединения 85.

Промежуточное соединение, приведенное в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 85, начиная с соответствующих исходных веществ.

Из промежуточного соединения 11 и сложного 1,1-диметилэтилового эфира 4[(1 -метил-1 Н-пиразол-4-ил)карбонил] -1 пиперидинкарбоновой кислоты

Номер промежуточног о соединения Промежуточно е соединение 87

- 54 045364

Получение промежуточного соединения 86

2-Бром-1-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)этанон (0,5 г; 2,46 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли к фталимиду калия (0,46 г; 2,46 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 5 ч, выливали в ледяную воду и добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г; подвижная фаза: 97% DCM, 3% MeOH (+10% NH₄OH)). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 460 мг (69%) промежуточного соединения 86.

Получение промежуточного соединения 89

В атмосфере N2 при -70°C к раствору 4-йод-1-метил-1H-пиразола (1,7 г; 8,17 ммоль) в THF (35 мл) добавляли 1,6 М n-BuLi в гексане (6,2 мл; 9,92 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение 1 часа, затем по каплям добавляли раствор промежуточного соединения 73 (2 г; 8,19 ммоль) в THF (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение 2 часов, обеспечивали ее нагревание до комнатной температуры и ее перемешивали в течение ночи. Раствор выливали в смесь ледяной воды и насыщенного раствора NH₄Cl, затем добавляли EtOAc. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 50 г; подвижная фаза: градиент от 100% DCM, 0% MeOH до 98% DCM, 2% MeOH, 0,1% NH4OH). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 320 мг (15%) промежуточного соединения 89.

Получение промежуточного соединения 92

В атмосфере N2 HBTU (210 мг; 0,555 ммоль) добавляли к раствору BOC-L-пролина (119 мг; 0,555 ммоль) и DIPEA (0,48 мл; 2,775 ммоль) в DMF (10 мл). Раствор перемешивали в течение 30 мин, затем добавляли промежуточное соединение 10b (200 мг) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение выходных. Затем реакционную смесь выливали в ледяную воду, повышали ее основность с помощью 10% водного раствора K2CO3 и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0,5% NH4OH, 5% MeOH, 95% DCM до 1% NH4OH, 10% MeOH, 90% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 168 мг промежуточного соединения 92.

Промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения промежуточного соединения 92, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 55 045364

Номер промежуточног о соединения	Структура	Количест во	Выход
Промежуточно е соединение 93	А? и ^s \ ,1 вое Ли F₃C S Из промежуточного соединения 10b и (28,4К)-М-Ьос-4-метилпирролидин-2карбоновой кислоты	510 мг
Промежуточно е соединение 101	ύ П ^s \ rll BOC AO F₃C S-^_N^ Из промежуточного соединения 10b и (2S,4R)-1 -(трет-бутоксикарбонил)-4фторпирролидин-2-карбоновой кислоты	150 мг
Промежуточно е соединение 96	A\^S ^Т ^s \ i вое F₃C S' Из промежуточного соединения 10 и цис-1 -М-Вос-4-метокси-Ь-пролина	283 мг	94%
Промежуточно е соединение 102	Я 1 вос oVj F₃C Из промежуточного соединения 10b и (8)-5-Вос-5-азаспиро[2.4]гептан-6карбоновой кислоты	200 мг

-56045364

Промежуточно е соединение 103	⁰ г? вос L / Q жяо F₃C Из промежуточного соединения 11 с и (8)-5-(трет-бутоксикарбонил)-5азаспиро[2.4] гептан-6-карбоновой кислоты	160 мг
Промежуточно е соединение 98	о ' J ВОС аСО F₃C Β-ΆμΑ Из промежуточного соединения 10b и (К)-5-(трет-бутоксикарбонил)-5азаспиро[2.4] гептан-6-карбоновой кислоты	348 мг
Промежуточно е соединение 99	о Л Ί ' ,1 вос F₃C Из промежуточного соединения 10 и (2S,4R)-1 -(трет-бутоксикарбонил)-4метоксипирролидин-2-карбоновой	389 мг	75%

- 57 045364

Получение промежуточного соединения 107

В атмосфере азота раствор промежуточного соединения 11 (250 мг; 0,761 ммоль), N-Boc-4 формилпиперидина (195 мг; 0,914 ммоль) в THF (7 мл) перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Добавляли NaBH(OAc)₃ (323 мг; 1,52 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли 10% водный раствор K2CO3 и DCM. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 100% DCM 0% MeOH (0%NH₄OH) до 90% DCM 10% MeOH (10%NH₄OH)). Фракции, содержащие продукт, смешивали и выпаривали до сухого состояния с получением 383 мг (96%) промежуточного соединения 107.

Получение промежуточного соединения 110

Добавляли DIPEA (0,45 мл, 3,24 ммоль) к охлажденному льдом раствору 2-(4-фторфенил)пропанола (CAS[59667-20-8]) (0,25 г, 1,62 ммоль) в DCM (1,4 мл) с последующим добавлением метансульфонилхлорида (0,155 мл, 1,95 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при к.т. Смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл) и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Раствор высушивали над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 0,377 г промежуточного соединения 110. Данный продукт использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

- 58 045364

Получение промежуточного соединения 112

Раствор промежуточного соединения 111 (607 мг, 2,1 ммоль) и изопропоксида титана (1,25 мл, 1,37 ммоль) в EtOH (4,6 мл) по каплям добавляли при комнатной температуре (на протяжении периода от 5 до 10 мин) к смеси промежуточного соединения 11 (459 мг, 1,4 ммоль) и NaBH₃CN (264 мг, 4,2 ммоль) в EtOH (9,2 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч. при к.т. Реакционную смесь разбавляли с помощью

DCM и выливали в 10% водный раствор K₂CO₃. Суспензию фильтровали через подушку из Celite®. Органический слой декантировали, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: DCM/MeOH: градиент от 100/0 до 90/10). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,521 г (62%) промежуточного соединения 112 (62%).

B. Получение соединений.

Пример B1.

Получение соединения 1

TEA (88,5 мг, 0,875 ммоль) и бензальдегид (46,4 мг, 0,44 ммоль) последовательно добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (190 мг, 0,44 ммоль) в безводном DCM (4 мл) и смесь перемешивали при к.т. в течение 30 мин. Затем добавляли NaBH(OAc)₃ (185,4 мг, 0,875 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли насыщ. водн. раствор NaHCO₃ (10 мл) и DCM (10 мл) и смесь декантировали. Водный слой дважды экстрагировали с помощью DCM (10 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (10 мл), высушивали над Na₂SO₄ и выпаривали с получением желтого масла. Неочищенный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (колонка Gemini 150x25, 5 мкм, подвижная фаза: вода (0,05% гидроксида аммония, o6./o6.)/ACN: градиент от 55/45 до 25/75). Затем остаток лиофилизировали с получением 65 мг соединения 1 (выход 35%) в виде желтого твердого вещества.

Пример B2.

Получение соединения 2

Промежуточное соединение 11 (100 мг, 0,3 ммоль), 3,3,3-трифторпропаналь (51 мг, 0,46 ммоль) в сухом DCM (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 1 ч, затем добавляли NaBH(OAc)₃ (129 мг, 0,61 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Смесь выливали в воду, затем экстрагирова

- 59 045364 ли с помощью DCM, органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: 0,1/97/3). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 58 мг (45%) соединения 2, которое лиофилизировали со смесью 20/80 ACN/вода с получением 45 мг соединения 2.

Получение соединения 13

Смесь промежуточного соединения 11c (600 мг), изобутиральдегида (160 мг; 2,221 ммоль),

NaBH(OAc)₃ (1,57 г; 7,405 ммоль) и Et₃N (0,64 мл; 4,443 ммоль) в DCE (12 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO₃ (20 мл) и DCM (20 мл). Органический слой декантировали и водный слой экстрагировали с помощью DCM (20 млх2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (подвижная фаза: градиент от петролейного эфира/EtOAc от 100/0 до 0/100, затем EtOAc/MeOH от 100/0 до 85/15). Очищенные фракции собирали, выпаривали до сухого состояния и лиофилизировали с получением 320 мг соединения 13.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 2, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количеств о (мг)	Выход (%)
Соединение 3 (из промежуточного соединения 7)	1 11 F₃C S-^\|sK в виде хлористоводородной соли	80
Соединение 4 (из промежуточного соединения 11)	о ω % \=_ζ 1	126	47

- 60 045364

Соединение 5 (из промежуточного соединения 11)	о AYj F₃C	75	43
Соединение 6 (из промежуточного соединения 11)	Z^N p N—_ yC0 F₃C	55	26
Соединение 7 (из промежуточного соединения 11)	ex r N—-. Aj0 F₃C	55	31

- 61 045364

Соединение 8	(из		Cl N—< О \=N		75	43
промежуточного соединения И)			N-	⁴N
		F₃C	s-
			€	N 7		75	39
Соединение 9 промежуточного соединения 11)	(из		г N-	=N	'N
		F₃C	s-J
			N— c	%		40	29
Соединение 10 промежуточного соединения 11)	(из		< N-	⁴N^Z	'N
		F₃C	sJ

- 62 045364

Соединение 11 (из промежуточного соединения 11)	N—х // y-ci \==N N—_ F₃C	65	37
Соединение 12 (из промежуточного соединения 11)	Ν—x о V=N Ν—_ F₃C	80	41
Соединение 13 (из промежуточного соединения И)	F₃C	80	54

- 63 045364

			70	18
Соединение 23 (из промежуточного соединения 11 и 1метил-1 Н-имид азол5-карбоксальдегида)		ъ ϊ
	f₃c	\ ji J
Соединение 35 (из промежуточного соединения 11 и 1метил-1 Н-пиразол-3 карбальдегида)		\ у г -ZXl i	155	40
	F₃C	\ JI J
Соединение 69 (из промежуточного соединения 11 и фенилацетальдегида (CAS[122-78-l]))	F₃C	. -Ό0	60	22

Пример B3.

Получение соединения 14

Промежуточное соединение 10b (0,42 г), бензилбромид (0,19 мл, 1,6 ммоль) и K₂CO₃ (0,55 г, 4,0 ммоль) в ACN (20 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Смесь выливали в воду, экстрагировали с помощью EtOAc, органический слой промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 40 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: 0,1/97/3). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 170 мг (31%) соединения 14, которое кристаллизовали из DIPE, фильтровали и высушивали с получением 103 мг соединения 14.

Соединения и промежуточные соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 14, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 64 045364

Номер соединения	Структура	Количество (мг)	Выход (%)
Соединение 15 (из пр омежуточного соединения 11)	r-^N (Г y-ci \==N N—_ F₃C S-^_N>	65	37
Соединение 16 (из пр омежуточного соединения 8)	N F₃C в виде хлористоводородной соли (1,7НС1. 1,9Н₂О)	57
Соединение 17 (из промежуточного соединения 11) (пром. соед. 11 вводили в реакцию с 1628318-10-4 с последующим расщеплением с помощью TFA)	N III N-_ F₃C S-^_N^	60	32

- 65 045364

Соединение 18 (из промежуточного соединения 6)	лЧ) π^Ν '— [ Rsfxz F₃C	130	49
Соединение 19 (из промежуточного соединения 12)	L«	45	12
Соединение 30 (из промежуточного соединения 11 и хлорметилтриметилг ермана)	LL?	28	13
Соединение 31 (из промежуточного соединения 11 и хлорметилтриметилг ермана)	w¹О Ύ / н	36	21

Пример В4.

Получение соединения 20

Смесь 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-й]пиримидина (150 мг, 0,59 ммоль), полученного как описано в Journal of Medicinal Chemistry (2016), 59(3), 892-913, 2-бензил-2,7-диазаспиро-[4.4]нонана (CAS[885275-27-4]) (129 мг, 0,59 ммоль) и DIPEA (0,31 мл, 1,78 ммоль) в ACN (15 мл) нагревали при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждали и выливали в охлажденную воду, продукт экстрагировали с помощью EtOAc, органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 24 г, подвижная фаза: DCM/MeOH/NH₄OH: 97/3/0,1). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 200 мг (выход 78%) соединения 20 (рацемическая смесь).

- 66 045364

Получение энантиомеров: 20a.

и 20b

Энантиомеры разделяли посредством хиральной SFC (неподвижная фаза: Lux Cellulose-45 мкм,

250x21,2 мм, подвижная фаза: CO₂/MeOH (0,3% iPrNH₂): 70/30). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 80 мг (выход 31%) первой элюированной фракции F1 и 81 мг (выход 31%) второй элюированной фракции F2.

F1 (80 мг; 0,185 ммоль) растворяли в ацетоне при 10°C и добавляли 4 н. HCl в диоксане (2 экв., 0,37 ммоль, 93 мкл) с последующим добавлением EtOAc. Смесь выпаривали до сухого состояния и поглощали с помощью Et₂O, осадок фильтровали и высушивали с получением 65 мг (выход 20%) соединения 20a в виде хлористоводородной соли (1,95 HCl, 1,25 H₂O, 0,19 диоксан, 0,06 Et₂O).

F2 (81 мг, 0,187 ммоль) растворяли в ацетоне при 10°C и добавляли 4 н. HCl в диоксане (2 экв., 0,37 ммоль, 93 мкл) с последующим добавлением EtOAc. Смесь выпаривали до сухого состояния, поглощали с помощью EtOAc, осадок фильтровали и высушивали с получением 49 мг (выход 15%) соединения 20b в виде хлористоводородной соли (2,0 HCl. 1,8 H₂O).

Пример B5.

Получение соединения 18

Смесь промежуточного соединения 6 (222 мг, 0,63 ммоль), бензилбромида (82 мкл, 0,685 ммоль) и K2CO3 (430 мг, 3,11 ммоль) в ACN (20 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Раствор выливали в охлажденную воду, продукт экстрагировали с помощью EtOAc, органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: частицы неправильной формы 15-40 мкм, 30 г, подвижная фаза: DCM/MeOH/NH₄OH: градиент от 100/0/0 до 97/3/0,1). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 170 мг (выход 61%) соединения 18 (рацемическая смесь).

- 67 045364

Получение энантиомеров, представляющих собой соединение 21a

и соединение 21b

Соединение 18 разделяли на его энантиомеры посредством хиральной SFC (неподвижная фаза: Lux

Cellulose-25 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: CO₂/MeOH: 75/25). Содержащие продукт фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 72 мг (выход 26%) первой элюированной фракции F1 и 76 мг (выход 27%) второй элюированной фракции F2.

F1 растворяли в ацетоне (3 мл), при 10°C по каплям добавляли раствор 4 н. HCl в диоксане (2 экв., 80 мкл, 0,32 ммоль), добавляли Et₂O и через 30 мин осадок фильтровали и высушивали с получением 54 мг (выход 16%) соединения 21a в виде хлористоводородной соли (1,8 HCl. 1,9 H₂O).

F2 растворяли в ацетоне (3 мл), при 10°C по каплям добавляли раствор 4 н. HCl в диоксане (2 экв., 85 мкл, 0,34 ммоль), добавляли Et₂O и через 30 мин осадок фильтровали и высушивали с получением 34 мг (выход 10%) соединения 21b в виде хлористоводородной соли (1,8 HCl. 2,1 H₂O).

Пример B6.

Получение соединения 22

К раствору промежуточного соединения 11 (200 мг, 0,51 ммоль) в ACN (5 мл) добавляли промежуточное соединение 16 (220 мг, 1,08 ммоль) и K2CO3 (221,4 мг, 1,53 ммоль). Смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду (10 мл) и DCM (10 мл). Органическую фазу отделяли, водный слой экстрагировали с помощью DCM (10 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (10 мл), выпаривали с получением остатка, который очищали посредством хроматографии на силикагеле (колонка: Gemini 150x25 5 мкм; подвижная фаза: вода (0,05% гидроксида аммония, o6./o6.)/CH₃CN: градиент от 42/58 до 12/88, время градиентного элюирования: (мин): 10; время удерживания 100% В (мин): 2; скорость потока (мл/мин): 25).

Необходимые фракции собирали и высушивали под вакуумом с получением остатка. Остаток лиофилизировали с получением 65 мг (выход 28%) соединения 22 в виде светло-желтого твердого вещества.

- 68 045364

Пример B7.

Получение соединения 24

Промежуточное соединение 17 (180 мг, 0,36 ммоль) и 3 н. NaOH (0,61 мл, 1,82 ммоль) в MeOH (10 мл) перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Смесь охлаждали до к.т., выливали в воду и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 130 мг соединения 24 (выход 79%).

Пример B8.

Получение соединения 25

При 5°C к раствору промежуточного соединения 43 (100 мг, 0,2 ммоль) в DCM (10 мл) по каплям добавляли 4 н. HCl в диоксане (246 мкл, 0,99 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 15 ч. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния. Затем остаток поглощали с помощью DCM, промывали с помощью NaHCO₃. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH градиент от 0,5/95/5 до 1/90/10). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 25 мг соединения 25 (выход 31%).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 25, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 69 045364

Номер соединения	Структура	Количес тво (мг)	Выход (%)
Соединение 37 (из промежуточного соединения 44)	h₂n ⁴ \—о Ϊ¹ F₃C	250	84
Соединение 112 (из промежуточного соединения 27)	Η О Г ,_1 /й\ F₃C S	35	17

Пример В9.

Получение соединения 26

В герметично закрытой пробирке 4-хлор-6-(2,2,2-трифторэтил)тиено[2,3-й]пиримидин (0,15 г, 0,594 ммоль), 6-(фенилметокси)-2-азаспиро[3.3]гептан (0,145 г, 0,713 ммоль) и DIPEA (0,205 мл, 1,19 ммоль) в изопропаноле (2 мл) нагревали при 90°С в течение ночи. Раствор охлаждали до к.т. и выливали в воду, затем экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния.

Неочищенный продукт кристаллизовали из Et₂O и высушивали. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 24 г, элюент: гептан/EtOAc: от 80/20 до 20/80). Очищенные фракции смешивали и растворитель выпаривали. Остаток поглощали с помощью Et₂O, фильтровали и высушивали с получением 0,111 г соединения 26 (выход 45%).

-70045364

Пример B10.

Получение соединения 28

Смесь промежуточного соединения 10b (200 мг), 1-метил-1Н-пиразол-4-карбоксальдегида (183 мг; 1,66 ммоль) и AcOH (32 мкл; 0,555 ммоль) в DCE (6 мл) перемешивали при 50°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли NaBH(OAc)₃ (353 мг; 1,665 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, выливали в 10% водный раствор K2CO3 и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 1% NH4OH, 10% MeOH, 90% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 165 мг соединения 28 в виде масла (73%). Соединение 28 растворяли в ACN и добавляли HCl (4 н. в диоксане) (277 мкл; 1,11 ммоль). Соль HCl фильтровали, при этом была выявлена ее слишком высокая гидроскопичность. Затем остаток растворяли в DCM/MeOH и органический слой промывали с помощью 10% водного раствора K2CO3, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Полученный в результате осадок растворяли в ACN, и добавляли фумаровую кислоту (47 мг; 0,404 ммоль; 1 экв.), и обеспечивали отстаивание раствора до его кристаллизации (в течение ночи). Осадок фильтровали, промывали с помощью ACN, затем EtOAc и высушивали с получением 188 мг соединения 28 в виде фумаратной соли (1 эквивалент исходя из данных 1H ЯМР).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 28, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количес тво (мг)	Выход (%)
Соединение 34 (из промежуточного соединения 10b и 1 -метил- 1Н-пиразол-3 карбоксальдегида)	LL?	147
Соединение 44 (из промежуточного соединения 10b и изобутиральдегида)	F₃C	80

- 71 045364

Пример B11.

Получение соединения 29

При 10°C 4 н. HCl в диоксане (0,7 мл; 2,85 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 50 (145 мг; 0,28 ммоль) в ACN (7 мл). Раствор перемешивали при к.т. в течение ночи. Раствор выпаривали до сухого состояния. Остаток поглощали ледяной водой, повышали его основность с помощью NH₄OH и добавляли DCM. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 12 г, подвижная фаза: DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/10). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 0,050 г (выход 43%) соединения 29.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 29, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количест во (мг)	Выход (%)
Соединение 40 (из промежуточного соединения 47)	н N__. N F₃C 2,68HC1 2,1H₂O	102	61
Соединение 41 (из промежуточного соединения 48)	h N-N Vk N F F₃C	72	55

- 72 045364

Пример B12.

Получение соединения 36

F₃C

В потоке N₂ к раствору промежуточного соединения 11 (287 мг, 0,87 ммоль) в DCM (14 мл) добав ляли 1-изопропил-1Н-пиразол-4-карбальдегид (133 мг, 0,68 ммоль) и AcOH (51 мкл, 0,87 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Добавляли NaBH(OAc)₃ (742 мг, 3,5 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Смесь выливали в ледяную воду и разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 24 г, подвижная фаза: DCM/MeOH (+10% NH4OH): градиент от 97/3 до 90/10. Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали со смесью ацетонитрил/вода: 20/80 с получением 0,057 г (выход 15%) соединения 36.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 36, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количество (мг)	Выход (%)
Соединение 76 (из промежуточного соединения 11 и промежуточного соединения 51)	LL?	73	33

- 73 045364

Пример B13.

Получение соединения 45

К раствору промежуточного соединения 11c (200 мг) в дихлорэтане (10 мл) добавляли 2метилбензальдегид (59 мг; 0,494 ммоль), NaBH(OAc)₃ (523 мг; 2,47 ммоль) и триэтиламин (150 мг; 1,48 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем добавляли насыщенный водный раствор NaHCO₃ (10 мл) и DCM (10 мл). Смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью DCM (10 млх2).

Органические слои объединяли, промывали водой (10 мл), высушивали над Na₂SO₄, выпаривали с получением 300 мг желтого масла, которое очищали с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (колонка: Kromasil 150x25 ммх10 мкм; условия:

A: вода (0,05% гидроксида аммония, об./об.), B: MeCN, в начале: A (52%) и B (48%), в конце: A: (22%) и B (78%), время градиентного элюирования: (мин) 8; скорость потока (мл/мин) 30.

Фракции, содержащие продукт, собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Водный слой лиофилизировали до сухого состояния с получением 150 мг (70%) соединения 45 в виде белого твердого вещества.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 45, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количес тво (мг)	Выход (%)
Соединение 46 (из промежуточного соединения 11с и мтолуилового альдегида)	Р 5 /Х F3C ^Ν соль на	190
Соединение 47 (из промежуточного соединения 11с и 2метокси-5метилбензальдегида)	νΛ- ъ /Л F₃C	120

- 74 045364

	F	150
	F—
Соединение 48 (из
промежуточного	N__
соединения 11с и 2,4-	□
дифторбензальдегида)


	F₃C
	/	160
	О
Соединение 49 (из	г
промежуточного
соединения 11с и и-	о
толуилового альдегида)
	ϊ
	^F3^C
		155

Соединение 50 (из
промежуточного
соединения 11с и 2,4-
диметилбензальдегида)	V
	/—/Afi
	F₃C S-A_KJ
	^N Соль HC1
		166
	\ — -* /
Соединение 54 (из
промежуточного
соединения 11с и 2-
фторбензальдегида)
	Ϊ
	^F3^{C S} _CojIbHC1
	F A=\	150
Соединение 56 (из	Г
промежуточного	\
соединения 11с и 3-	ςς
фторбензальдегида)	О
	/-ΖΎι
	/ \ II I
	^N Соль HC1

- 75 045364

Пример B14.

Получение соединения 108

Смесь (S)-5-метил-5-азаспиро[2.4]гептан-6-карбоновой кислоты (94 мг; 0,61 ммоль), HBTU (231 мг; 0,61 ммоль) и DIPEA (0,52 мл; 3,04 ммоль) в DMF (5 мл) перемешивали в течение 1 часа. Затем добавляли раствор промежуточного соединения 10b (200 мг) в DMF (5 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, повышали ее основность с помощью 10% водного раствора K2CO3 и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали с помощью H2O, затем солевого раствора, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: градиент от 3% MeOH, 97% DCM до 10% MeOH, 90% DCM). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 144 мг неочищенной фракции 1. Выполняли вторую очистку (SiOH с частицами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: 0,5% NH4OH, 95% DCM, 5% MeOH). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 43 мг неочищенной фракции 2.

Фракцию 2 снова очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: градиент от 3% MeOH, 97% DCM до 10% MeOH, 90% DCM). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния. Полученный в результате осадок поглощали с помощью диизопропилового эфира. Твердое вещество фильтровали и высушивали с получением 17 мг соединения 108.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 108, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количеств о (мг)	Выход (%)
Соединение 74 (из промежуточного соединения 32 и Nизопропилэтилендиам ина)	^NH HN у=° АА— ⁴ Ν—. ъ F₃C S	10	7
Соединение 75 (из промежуточного соединения 32 и 2аминоэтанола)	ОН HN Y=o (A ъ αΛ f₃c	22	13

- 76 045364

Пример B18

Получение соединения 57

LiAlH₄ (66 мг, 1,73 ммоль) добавляли к промежуточному соединению 54 (450 мг, 0,693 ммоль) в THF (12 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 1,5 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NH₄Cl, экстрагировали с помощью DCM и концентрировали с получением белого твердого вещества. Данное твердое вещество очищали с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (колонка: Xtimate C18 150x25 ммх10 мкм, условия: вода (0,05% гидроксида аммония, o6./o6.)/ACN: градиент от 52/48 до 42/58). К водному слою добавляли 0,1 мл 1 н. HCl. Раствор лиофилизировали с получением 30 мг соединения 57 в виде желтого твердого вещества (соли HCl).

Пример B19.

Получение соединения 58

К раствору промежуточного соединения 8 (200 мг, 0,5 ммоль) в THF (10 мл) добавляли изобутиральдегид (70 мкл, 0,77 ммоль) и TEA (0,37 мл, 2,63 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Добавляли NaBH(OAc)₃ (317 мг, 1,5 ммоль) и раствор перемешивали при к.т. в течение ночи. Раствор выливали в охлажденную воду и повышали его основность с помощью порошкообразного K2CO3. Продукт экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 40 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: 0,2/98/2). Остаток растворяли в 5 мл ACN, при 10°C по каплям добавляли 2 экв. 4 н. HCl в диоксане (117 мкл; 0,47 ммоль).

Добавляли Et₂O и через 30 мин раствор выпаривали до сухого состояния, добавляли Et₂O и осадок фильтровали и высушивали с получением 38 мг соединения 58 (соль HCl).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 58, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количест во (мг)	Выход (%)
Соединение 59 (из промежуточного соединения 8 и 1метил-1 Н-пиразол-4карбальдегида)	§ хЛ ^F’^{C S N} Соль HCl	73

- 77 045364

Пример B21.

Получение соединения 62

М TBAF в THF (0,815 мл, 0,815 ммоль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения 55 (0,248 г, 0,407 ммоль) в Me-THF (8 мл) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали с помощью 10% водного раствора K₂CO₃ (30 мл), воды (30 мл) и солевого раствора (30 мл), высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (80 г, 15-40 мкм, элюент: DCM/MeOH: от 97/3 до 88/12). Очищенные фракции смешивали и растворитель выпаривали с получением 0,043 г соединения 62 (выход 21%).

Пример B22.

Получение соединения 63

2,2-Диметилтетрагидропиран-4-карбальдегид (87 мг; 0,609 ммоль) и NaBH(OAc)₃ (645 мг; 3,045 ммоль) добавляли при к.т. к раствору промежуточного соединения 11 (200 мг; 0,609 ммоль) в DCE (4 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и выливали в 10% водный раствор K₂CO₃. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: NH₄OH/MeOH/DCM: градиент от 0/0/100 до 0,7/7/93). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 155 мг соединения 63 (выход 56%).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 63, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количество (мг)	Выход (%)
Соединение 65 (из промежуточного соединения И и 3метилоксетан-3 карбальдегида)	О zk Г—О ^ω у / \ / /—'^ζ 1— ζ λ—ζ 1 \—_ζ Ν—	71	60

- 78 045364

Пример B23.

Получение соединения 64

Смесь промежуточного соединения

(150 мг, 0,457 ммоль), 2,2,2-трифторэтил трифторметансульфоната (69 мкл, 0,502 ммоль) и DBU (CAS[6674-22-2]) (136 мкл, 0,914 ммоль) в DMSO (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали несколько раз водой, затем солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: NH4OH/MeOH/DCM градиент от 0/0/100 до 0,7/7/93). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали второй раз посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: EtOAc/гептан: градиент от 60/40 до 80/20). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток кристаллизовали из DIPE с получением после высушивания под вакуумом при 50°C 100 мг соединения 64 (выход 53%).

Пример B24.

Получение соединения 67

В атмосфере N₂ в раствор промежуточного соединения 11 (100 мг; 0,31 ммоль), 2-(тетрагидро-2Hпиран-4-ил))ацетальдегида (48 мкл; 0,37 ммоль) в THF (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Добавляли NaBH(OAc)₃ (129 мг; 0,61 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли 10% водный раствор K₂CO₃ и EtOAc. Смесь экстрагировали с помощью EtOAc (х3). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (136 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiO₂, 4 г; градиент: от 95% DCM, 5% MeOH, 0,5% NH4OH до 90% DCM, 10% MeOH, 1% NH4OH). Фракции, содержащие продукт, собирали и растворитель выпаривали с получением 90 мг бесцветного масла, которое перекристаллизовывали с помощью диизопропилового эфира. Осадок фильтровали и высушивали с получением 45 мг (34%) соединения 67 в виде белого твердого вещества.

- 79 045364

Пример B25.

Получение соединения 71

В герметично закрытой пробирке в атмосфере N2 промежуточное соединение 35 (211 мг; 1,37 ммоль) и Ti(OiPr)₄ (436 мкл; 1,83 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (300 мг; 0,914 ммоль) в THF (6 мл). Раствор перемешивали при 50°C в течение 5 часов, затем при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 5°C и по каплям добавляли 2 М хлорид изопропилмагния в THF (2,28 мл; 4,57 ммоль). Обеспечивали медленное нагревание реакционной смеси до к.т. и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и выливали в 10% водный раствор K2CO3. Осадок удаляли посредством фильтрации через Celite®. Органический слой декантировали, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: градиент от 0% MeOH, 100% DCM до 10% MeOH, 90% DCM). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,337 г остатка, представляющего собой промежуточное соединение, который снова очищали посредством хроматографии с обращенной фазой (неподвижная фаза: YMC-actus Triart C18 10 мкм, 30x150 мм, подвижная фаза: градиент от 55% NH4HCO3 0,2%, 45% ACN до 0% NH4HCO3 0,2%, 100% ACN). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 120 мг (26%) соединения 71.

Пример B26.

Получение соединения 77

Гидразин (36 мкл, 0,92 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 41 (110 мг, 0,18 ммоль) в этаноле (5 мл). Раствор нагревали при 70°C в течение 1 ч 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до к.т., затем выливали в воду и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 40 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: 1/85/15).

Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток растворяли в 2 мл ACN, при 10°C по каплям добавляли 3 экв. 6 н. HCl в iPrOH. Добавляли Et₂O и через 30 мин осадок фильтровали и высушивали с получением 83 мг соединения 77 (выход 37%).

- 80 045364

Пример B28.

Получение соединения 82

TFA (1,5 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения 25 (300 мг, 0,571 ммоль) в DCM (15 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой декантировали, фильтровали через Chromabond® и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: NH4OH/MeOH/DCM: градиент от 0,3/3/97 до 1,5/15/85). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток кристаллизовали из DIPE и высушивали с получением 118 мг соединения 82 (выход 48%).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 82, начиная с соответствующих исходных веществ.

Соединение 315 (из промежуточного соединения 109)	\ /--\ ^NH\—/rs \' ' N— Λ	140	52
Соединение 318 (из промежуточного соединения 112 и при Т = 0°С)	н /---\^RSг-----( N-___ / 'ГТ 1 соль НС1 F₃C	200

- 81 045364

Пример B29.

Получение соединения 84

Промежуточное соединение 11b (198 мг) и 4-фторфенилацетон (68 мкл, 0,51 ммоль) в THF (5 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем порциями добавляли NaBH(OAc)₃ (161 мг, 0,76 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч. Раствор выливали в охлажденную воду и повышали его основность с помощью раствора 3 н. NaOH, добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 40 г, подвижная фаза: NH₄OH/DCM/MeOH: 0,1/97/3). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 30 мг соединения 84.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 84, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количество (мг)	Выход (%)
Соединение 307 (из промежуточного соединения 11b и 1-(4фторфенил)-3метилбутан-2-она)	F Ул * '---(RS ъ F₃C	46

Пример B32.

Получение соединения 133

- 82 045364 соединения 137 и соединения 138

Ti(OEt)₄ (251 мкл; 1,2 ммоль) добавляли при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 11 (200 мг; 0,6 ммоль) и 2,5,6,7-тетрагидро-2-метил-4H-индазол-4-она (120 мг; 0,8 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) и MeOH (1,5 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 часов, затем порциями добавляли NaBH₃CN (127 мг; 2 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Раствор выливали в охлажденную воду и добавляли DCM. Повышали основность смеси с помощью порошкообразного K₂CO₃, фильтровали через подушку из Celite®. Продукт экстрагировали с помощью DCM. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния.

Остаток (361 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 40 г, подвижная фаза: 0,5% NH4OH, 95% DCM, 5% MeOH). Фракцию, содержащую продукт, смешивали и концентрировали с получением 120 мг (43%) соединения 133.

Хиральное разделение соединения 133 выполняли посредством хиральной SFC (неподвижная фаза: Chiralpak AD-H, 5 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 70% CO2, 30% MeOH (0,3% iPrNH₂)). Фракции, содержащие продукты, смешивали и концентрировали с получением мг фракции 1, которую лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 40 мг (43%) соединения 137 в виде белого порошка.

мг фракции 2, которую лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 42 мг (46%) соединения 138 в виде белого порошка.

Пример B33.

Получение соединения 145

- 83 045364 соединения 154 и соединения 155

Раствор 1-тетрагидро-2Н-пиран-4-илэтанона (351 мг; 2,74 ммоль), промежуточного соединения 11 (600 мг; 1,83 ммоль), Ti(OiPr)₄ (870 мкл; 2,92 ммоль) в EtOH (3 мл) перемешивали в течение 2 часов при 45°C. Добавляли дополнительное количество EtOH (18 мл) и NaBH₄ (138 мг; 3,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и выливали в 10% водный раствор K₂CO₃. Нерастворимое вещество удаляли посредством фильтрации через Celite®. Органический слой отделяли, промывали водой, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 1% NH₄Oh, 10% MeOH, 90% DCM). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 487 мг (60%) соединения 145. Энантиомеры соединения 145 разделяли с помощью хиральной SFC (CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250x30 мм; подвижная фаза: 70% CO2, 30% смеси 50/50 EtOH/iPrOH, об./об.). Фракции, содержащие продукты, собирали и выпаривали до сухого состояния. Остатки лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 171 мг (21%) соединения 154 и 178 мг (22%) соединения 155.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 145, начиная с соответствующих исходных веществ. Наиболее значимые небольшие отклонения указаны в столбце Номер соединения.

- 84 045364

Номер соединения	Структура	Количес тво	Выхо Д
Соединение 279 (из промежуточного соединения 11 и 1 -(3 -метилоксетан-3 ил)этенона [136338104-7]). С 6 экв. Ti(iPrO)4 и 2 экв. NaBH4	^rsG σ F₃C	243 мг	37%
Соединение 158 и соединение 159. Из очистки посредством SFC промежуточного соединения 158 (CHIRACEL OJ-H 5 мкм, 250*30 мм, подвижная фаза: 80% СО₂, 20% EtOH (0,3% iPrNH₂))	Λϋ __Ν 1—о rYTj F₃C Соединение 158	77 мг	12%

- 85 045364

	YA F₃C Соединение 159	80 мг	12%
Соединение 192 (из промежуточного соединения 11 и 1(тетрагидро-2,6диметил-2//-пиран-4ил)-1 -пропанона) С 1,6 экв. Ti(iPrO)4 и 2 экв. NaBH₄	\___ ιΥγ -A3 co L«	76 мг	14%
Соединение 280 (из промежуточного соединения 11b и 3метил-1 -(тетрагидро2//-пиран-4-ил)-1 бутанона). С 6 экв. Ti(iPrO)4 и 2 экв. NaBH₄	/—\ ° J RS LJ A F₃C	195 мг
Соединение 179 и соединение 180. Из очистки посредством SFC соединения 280 (CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250*30 мм; подвижная фаза: 75% СО₂, 25% МеОН (0,3% iPrNH₂))	Yo __N ^R '---/ $ Yj F₃C S-^_N^ Соединение 179	70 мг	10%

- 86 045364

	/—Л ° НрЛ” F₃C S-^_N^ Соединение 180	69 мг	10%
Соединение 250 С 6 экв. Ti(iPrO)4 и 2 экв. NaBH₄ Соединение 163 и	о .— ---б RS N— Yo F₃C Соединение 250 Из промежуточного соединения И и 1-(1,1диоксотетрагидро-2Нтиопиран-4-ил)этенона о ......р ъ ΗΊΟ F₃C ^S^N^ Соединение 163	369 мг 123 мг	62% 21%

- 87 045364

соединение 164	о V° —/s А F₃C Соединение 164 Из хиральной SFC соединения 250: CHIRACEL OJ-H 5 мкм, 25030 мм; подвижная фаза: 70% СО₂, 30% MeOH (0,3% iPrNH₂)	123 мг	21%
Соединение 314 (из промежуточного соединения 11 и 4цианоф енил ацетона)	X А F₃C	105 мг	15%

Получение соединения 312 (диастереоизомер A (смесь 2 соединений (RR и SS) или (RS и SR)) и соединения 313 (диастереоизомер B (смесь 2 соединений (RS и SR) или (RR и SS)).

Соединение 312. Диастереомер A (RR и SS) или (RS и SR).

Реакционная смесь 1. Раствор 3-метил-1-(6-оксаспиро[4.5]дец-9-ил)-1-бутанона (1,5 экв.), промежуточного соединения 11 (100 мг; 0,285 ммоль), Ti(OiPr)₄ (1,6 экв.) в этаноле (0,25 мл) перемешивали в течение 2 часов при 45°C. Добавляли этанол (3 мл) и добавляли NaBH₄ (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов.

Реакционная смесь 2. Раствор 3-метил-1-(6-оксаспиро[4.5]дец-9-ил)-1-бутанона (546 мг; 2,436 ммоль; 2 экв.), промежуточного соединения 11 (400 мг; 1,22 ммоль), Ti(OiPr)4 (580 мкл; 1,95 ммоль) в этаноле (1 мл) перемешивали в течение 2 часов при 45°C. Добавляли этанол (12 мл) и добавляли NaBH₄(92 мг; 2,436 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов.

Две реакционные смеси собирали и разбавляли с помощью EtOAc, выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и фильтровали через подушку из Celite®. Органический слой декантировали, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 0,9% NH4OH, 9% MeOH, 91% DCM). Необходимые фракции собирали и выпаривали до сухого состояния.

- 88 045364

Остаток (280 мг) дополнительно разделяли посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: 67% гептан, 33% EtOAc (+ 5% MeOH, содержащий 10% NH₄OH)). Необходимые фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением:

100 мг (12%) соединения 312 (элюированного первым; не достаточно чистого), которое дополнительно очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH₄Oh, 0% MeOH, 100% DCM до 0,5% NH4OH, 5% MeOH, 95% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Очищенные фракции лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 80 мг (10%) соединения 312.

110 мг (13%) соединения 313 (элюированного вторым; не достаточно чистого), которое дополнительно очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 0,5% NH4OH, 5% MeOH, 95% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Очищенные фракции лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 70 мг (9%) соединения 313.

Пример B34.

Получение соединения 147

Смесь промежуточного соединения 60a (216 мг; 0,4 ммоль) и TFA (1 мл; 13,067 ммоль) в DCM (10 мл) перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и повышали ее основность с помощью 10% водного раствора K₂CO₃. Органический слой декантировали, промывали водой, фильтровали через Chromabond® и выпаривали до сухого состояния. Остаток (200 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: 85% DCM, 14% MeOH, 1% NH4OH). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 136 мг соединения 147 (77%).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 147, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 89 045364

Номер соединения	Структура	Количест BO	Выхо Д
Соединение 146 (из промежуточного соединения 60b)	/—\ '^NH % F₃C	130 мг	71%
Соединение 150 (из промежуточного соединения 63 а)	)--\ ^NHif F₃C	29 мг	45%
Соединение 148 (из промежуточного соединения 68)	/—\ ^NH V RS \--/ I соль TFA HTj F₃C	50 мг
Соединение 168 (из промежуточного соединения 68а)	_7 }---( NH 7 >20	45 мг	50%
Соединение 169 (из промежуточного соединения 68b)	/---\ '^NH о+о F₃C	50 мг	58%

Пример B35.

Получение соединения 156

- 90 045364 соединения 193 соединения 162 и соединения 157

Раствор 2-метил-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1-пропанона (1,66 г; 10,63 ммоль) в THF (30 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (2,33 г; 7,08 ммоль) и TFA (3,3 мл; 42,5 ммоль) в THF (45 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем порциями добавляли NaBH(OAc)₃ (4,5 г; 21,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 7 дней.

Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 3 дней. Раствор выливали в 10% водный раствор K₂CO₃, добавляли EtOAc. Смесь экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (3,9 г; желтое масло) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiO₂; 40 г; элюент: от 97% DCM, 3% MeOH, 0,3% NH4OH до 90% DCM, 10% MeOH, 1%NH4OH). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 666 мг бледно-коричневого твердого вещества, представляющего собой соединение 156.

Соединение 156 очищали с помощью обращенной фазы (YMC-actus Triart C18 10 мкм, 30x150 мм, подвижная фаза: градиент от 50% NH4HCO3 0,2%, 50% ACN до 0% NH4HCO3 0,2%, 100% ACN). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 66 мг соединения 157 (бесцветное масло) и 264 мг соединения 156 (8%; бесцветное масло).

мг соединения 156 лиофилизировали со смесью вода-ACN с получением 47 мг соединения 156 (белое твердое вещество).

Соединение 157 лиофилизировали со смесью вода-ACN с получением 53 мг соединения 157 (2%, белое твердое вещество).

Соединение 156 (214 мг) очищали с помощью хиральной SFC (CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 75% CO2, 25% EtOH (0,3% iPrNH₂)). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 82 мг соединения 193 (бесцветное масло) и 82 мг соединения 162 (бесцветное масло).

Соединение 193 лиофилизировали со смесью вода-ACN с получением 72 мг соединения 193 (2%, белое твердое вещество).

- 91 045364

Соединение 162 лиофилизировали со смесью вода-ACN с получением 77 мг соединения 162 (2%, белое твердое вещество).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 193, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количест во	Выхо д
Соединение 309 в виде смеси 4 диастереоизомеров (соотношение: 65/35) (из промежуточного соединения 11 и 105)	\ RS/ -о rs)—< 1 Λ F₃C	10 мг	7%

Пример B36.

Получение соединения 161

соединения 166 и соединения 167

В герметично закрытой пробирке в атмосфере N₂ 1,3-диметил-1H-пиразол-4-карбальдегид (284 мг; 2,28 ммоль) и Ti(iPrO)₄ (727 мкл; 3,05 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (500 мг; 1,52 ммоль) в THF (10 мл). Раствор перемешивали при 50°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до 5°C и по каплям добавляли iPrMgCl (3,8 мл; 7,61 ммоль). Обеспечивали медленное нагревание реакционной смеси до к.т. и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали в 10%

- 92 045364 водный раствор K₂CO₃ и EtOAc. Нерастворимое вещество фильтровали через подушку из Celite®, затем органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (866 мг, коричневое масло) очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiO2; 40 г; элюент: от 96% DCM, 4% MeOH, 0,4% NH4OH до 93% DCM, 7% MeOH, 0,7% NH4OH). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали досуха. Остаток (496 мг, желтое масло) перекристаллизовывали с помощью диэтилового эфира. Осадок фильтровали и высушивали с получением 324 мг соединения 161(45%, белое твердое вещество).

270 мг соединения 161 (очищали с помощью хиральной SFC (CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 70% CO2, 30% iPOH (0,3% iPrNH2)). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 128 мг соединения 166 (18%, бесцветное масло) и 131 мг соединения 167 (18%, бесцветное масло).

Соединение 166 лиофилизировали со смесью вода-ACN с получением 110 мг соединения 166 (15%, белое твердое вещество).

Соединение 167 лиофилизировали со смесью вода-ACN с получением 115 мг соединения 167 (16%, белое твердое вещество).

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 161, начиная с соответствующих исходных веществ. Наиболее значимые небольшие отклонения указаны в столбце Выход.

Номер соединения	Структура	Количест BO	Выход
Соединение 172 (из промежуточного соединения 11 и 1,5диметил-1Н-пиразол4-карбальдегида)	\ )—С । / RS \^N σ' xrS F₃C	26 мг	4%
Соединение 173 и соединение 174. Из очистки посредством SFC соединения 172 (CHIRALCEL OD-H 5 мкм, 250*30 мм, подвижная фаза: 80% СО₂, 20% EtOH (0,3% iPrNH₂))	/.......h Vn XiS F₃C Соединение 173 )-¾ Г AIj F₃C S-Y_nA Соединение 174	109 мг 105 мг	15% 14%
Соединение 186 (из промежуточного соединения 70b и 1метил- 1//-пиразол-4карбоксальдегида)	/%—\ \ / RS \=\ !—/ N /V^s %^z Xi F₃C S-A_nA	31 мг	9%

- 93 045364

	\ / *^R	53 мг	15%
Соединение 188 и соединение 189. Из очистки посредством SFC соединения 186 (CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250*30 мм, подвижная фаза: 85% СО₂, 15% EtOH (0,3% iPrNH₂))	/—V^-' L N / V^s %^z F₃C Соединение 188 /—L N / \ *^s %^z F₃C Соединение 189	74 мг	21%
Соединение 281 Из промежуточного соединения 70а и 1метил- 17/-пиразол-4карбоксальдегида	КГ F₃C	250	71% В синтезе применя ли Ti(OEt)₄.
Соединение 190 и соединение 191.	N	77 мг	22%
Из очистки посредством SFC соединения 281 (CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250*30 мм, подвижная фаза: 85% СО₂, 15% EtOH (0,3% iPrNH₂))	HTj F₃C Соединение 190 ΙΨ F₃C	61 мг	17%
	Соединение 191

Пример B38.

Получение соединения 170

F

Промежуточное соединение 11b (198 мг) и 1-(3,5-дифторфенил)пропан-2-он) (86 мг; 0,51 ммоль) в THF (5 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем порциями добавляли NaBH(OAc)₃ (161 мг; 0,76 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч. Раствор выливали в охлажденную воду,

- 94 045364 повышали его основность с помощью раствора 3 н. NaOH, добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (141 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 40 г, подвижная фаза: 0,1% NH4OH, 97% DCM, 3% MeOH). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали. Остаток (50 мг) лиофилизировали со смесью 20/80 ACN/вода с получением 16 мг соединения 170.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 170, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количест BO	Выхо Д
Соединение 171 (из промежуточного соединения 11b и 2метоксифенилацетона)	1 (т 1 « 1^α о ^w	35 мг
Соединение 183 (из промежуточного соединения 11b и 3фторфенилацетона) Соединение 182 (из промежуточного соединения 11b и 3метил-1 -фенил-2бутанона) Соединение 185 (из промежуточного соединения 70а и тетрагидропиран-4карбальдегида [5067518-8])	F Р 1 соль НС1 hTjⁿ F₃C и F₃C О O'^R F₃C	38 мг 55 мг 143 мг	56%

- 95 045364

Пример B39.

Получение соединения 184

Смесь промежуточного соединения 70a (250 мг; 0,73 ммоль), изобутиральдегида (200 мкл; 2,19 ммоль) и AcOH (42 мкл; 0,73 ммоль) в DCE (8 мл) перемешивали при 50°C в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т. и добавляли NaBH(OAc)₃ (464 мг; 2,19 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи, выливали в 10% водный раствор K2CO3 и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 100% DCM до 10% MeOH (+10%NH₄OH), 90% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Получали хлористоводородную соль. Остаток (110 мг, 38%) растворяли в ACN и добавляли 4 н. HCl в 1,4-диоксане (2 экв.). Раствор выпаривали до сухого состояния и несколько раз поглощали с помощью ACN. Остаток кристаллизовали из Et₂O с получением 120 мг соединения 184 (соль HCl).

Соединение, приведенное в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 184, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 96 045364

Пример B40.

Получение соединения 289

Раствор промежуточного соединения 70a (100 мг; 0,29 ммоль), п-толуилового альдегида (50 мкл; 0,35 ммоль) в дихлорэтане (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Добавляли NaBH(OAc)₃ (124 мг; 0,58 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли 10% водный раствор K₂CO₃ и DCM. Органический слой декантировали, фильтровали через Chromabond® и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH₄OH, 0% MeOH, 100% DCM до 0,5% NH₄OH, 5% MeOH, 95% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 73 мг (56%) соединения 289.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 289, начиная с соответствующих исходных веществ. Наиболее значимые небольшие отклонения указаны в столбце Выход.

- 97 045364

Номер соединения	Структура	Количест во	Выход
Соединение 290 (из промежуточного соединения 70b и птолуилового альдегида)	ζ^ ^z—λ ^ζ—\ '^ζ ω	85 мг	65
Соединение 291 (из промежуточного соединения 70b и 4фторбензальдегида)	F Ο A	89 мг	68% THF в качеств е раствор ителя
Соединение 292 (из промежуточного соединения 70а и 4фторбензальдегида)	hr	86 мг	65% THF в качеств е раствор ителя

- 98 045364

Соединение 293 (из промежуточного соединения 70а и 3метилбутиральдегида)	Λ Ν Λ	68 мг	56% THF в качеств e раствор ителя
Соединение 294 (из промежуточного соединения 70b и 3метилбутиральдегида)	F f'	Z^N— \s* / 'f	72	ΜΓ	60% THF в качеств е раствор ителя
Соединение 295 (из промежуточного соединения 70а и 1метил-1 Н-пиразол-4карбальдегида)	F F	Z^\ I Λ \ __, z---< &	50	ΜΓ	39% THF в качеств е раствор ителя
Соединение 296 (из промежуточного соединения 70а и фенилацетальдегида)	F / F	z.___ XS ^w	50	ΜΓ	38% THF в качеств е раствор ителя

- 99 045364

Соединение 297 (из промежуточного соединения 70b и фенилацетальдегида)	ω ху ^zCV\	iq 'N / 1,8НСО,Н	18 мг	11% THF в качеств е раствор ителя
Соединение 298 (из		VV^F	20	мг	14%
промежуточного	Ду
соединения 70а и 2-(4-	О
фторфенил)ацетальдег
ида)	r /—\ JL J
		N О	74	мг	58%
Соединение 299 (из		у
промежуточного		/S /			THF в
соединения 70b и 1-	ЧЁ				качеств
метил-1 Н-пиразол-4-					е
карбальдегида)	_____// \|\|	>N			раствор
	х \ Д Λ				ителя

Пример B41.

Получение соединения 273 соединения 200

- 100 045364 и соединения 222

Смесь промежуточного соединения 71 (546 мг; 1,01 ммоль) и TFA (1,5 мл; 19,6 ммоль) в DCM (15 мл) перемешивали при к.т. в течение 4 часов. Смесь выпаривали до сухого состояния.

Остаток поглощали с помощью DCM и H₂O, затем повышали его основность с помощью водного 3 н. NaOH. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением 400 мг (90%) соединения 222.

Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (Chiralpak AD-H 5 мкм, 250x30 мм; подвижная фаза: 50% CO2, 50% EtOH (0,3% iPrNH₂)). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 106 мг (24%) соединения 273 и 130 мг (29%) соединения 200.

Соединение 273 также можно получать из промежуточного соединения 71a с применением такой же процедуры.

Соединение 200 также можно получать из промежуточного соединения 71b с применением такой же процедуры.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 273, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 101 045364

Номер соединения	Структура	Количество	Выход
Соединение 211	н ъ A Из промежуточного соединения 77а	125 мг	56%
Соединение 213	н '---CS ъ F₃C Из промежуточного соединения 77b	123 мг	55%
Соединение 259	н /—\ ^RSъ F₃C Из промежуточного соединения 80	96 мг	49%

- 102 045364

Пример B42.

Получение соединения 274

- 103 045364 и соединения 203

В атмосфере N2 при к.т. 1-метил-1H-пиразол-4-карбαльдегид (100 мг; 0,913 ммоль) и Ti(OEt)₄ (0,25 мл; 1,233 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (200 мг; 0,609 ммоль) в THF (3 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Реакционную смесь охлаждали до 5°C и по каплям добавляли 2 М iPrMgCl в THF (1,5 мл; 3,045 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при 5°C, обеспечивали медленное нагревание до к.т. на протяжении 6 часов и выливали в холодный водный раствор K2CO3. Добавляли DCM и реакционную смесь фильтровали через подушку из Celite®. Нерастворимый материал промывали несколько раз с помощью DCM. Органический слой декантировали, фильтровали через Chromabond® и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 0,8% NH4OH, 8% MeOH, 92% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 195 мг (69%) рацемического соединения. Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (Lux Cellulose-25 мкм, 250x30 мм; подвижная фаза: 55% CO2, 45% MeOH (0,3% iPrNH₂)). Две фракции лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 12 мл) с получением 80 мг (28%) соединения 274 и 82 мг (29%) соединения 203.

Пример B43.

Получение соединения 197

соединения 198 и соединения 199

В атмосфере N2 при к.т. 1-метил-1Н-пиразол-4-карбальдегид (99 мг; 0,9 ммоль) и Ti(OEt)₄ (0,25 мл; 1,2 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 11 (197 мг; 0,6 ммоль) в THF (3 мл), рас

- 104 045364 твор перемешивали при к.т. в течение 20 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли CH₃MgBr (3 М в EtOAc; 1 мл; 3 ммоль). Раствор перемешивали в течение 30 мин при 0°C и обеспечивали медленное повышение его температуры до к.т. в течение 6 часов. Раствор выливали в смесь холодной воды и водного насыщенного раствора NH₄Cl, затем добавляли EtOAc. Смесь фильтровали через подушку из Celite® и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 0,5% NH4OH, 5% MeOH, 95% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 130 мг (50%) соединения 197. Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (Lux Cellulose-4 5 мкм 250x21,2 мм; подвижная фаза: 60% CO2, 40% MeOH (+0,3% iPrNH2)). Очищенные фракции собирали, выпаривали и лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20) с получением 46 мг (17%) соединения 198 и 45 мг (17%) соединения 199.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 274, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количеств 0	Выхо д
Соединение 214	7% Λ/Ο F₃C S Из промежуточного соединения 11, 1изопропил-1Н-пиразол-4-карбальдегида и 2 М iPrMgCl в THF	19 мг	13%
Соединение 283,	ъ F₃C Соединение 283 Из промежуточного соединения метил-1 Н-пиразол-4-карбальдегида EtMgBr в THF	11, 1и 1 M	143 мг	52%
соединение 220	/ I ?—< _n rCu F₃C		58 мг	21%

- 105 045364

и	Соединение 220	61 мг	22%
соединение 221	ъ F₃C Соединение 221 Из очистки соединения 283 с помощью хиральной SFC: CHIRALPAK IC 5 мкм, 250*21,2 мм; подвижная фаза: 60% СОг, 40% EtOH (0,3% iPrNH₂)
Соединение 223	Η Ν О — F₃C Из промежуточного соединения 11, трет- бутил-4-формил- 1Н-пиразол-1 карбоксилата и 3 М MeMgBr в Et₂O	28 мг	20%
Соединение 228	S 0 —<RS ъ F₃C Из промежуточного соединения 11, изотиазол-4-карбальдегида и 3 М	77 мг	57%

- 106 045364

	MeMgBr в Et₂O
Соединение 230,	MiA. / ъ F₃C S Соединение 230 Из промежуточного соединения И, 1метил-1Н-пиразол-4-карбальдегида и 2 М бромида изобутилмагния в Et₂O / ^{1 R}	343 мг	78%
соединение 247	' η ΥΠ F₃C Соединение 247 n^\ / к.	118 мг	27%
и соединение 248	ь F₃C S-^_N^ Соединение 248 Из очистки соединения 230 с помощью хиральной SFC: Lux Cellulose-2 5 мкм, 250*30 мм; подвижная фаза: 55% СО₂, 45% МеОН (0,3% iPrNH₂)	114 мг	26%

- 107 045364

Соединение 231	о О —( RS F₃C Из промежуточного соединения 11, изоксазол-4-карбальдегида и 3 М MeMgBr в Et₂O	25 мг	19%
Соединение 233	<PW^rsN=/ N—, ъ F₃C Из промежуточного соединения 11, пиридин-3-карбоксальдегида и 3 М MeMgBr в Et₂O	26 мг	19%
Соединение 235, и соединение 236,	r\_ N^\ / 1 />—(R ъ F₃C S Соединение 235 _ s\....... / 1 />.......<s я F₃C S-\_N·^ Соединение 236	23 мг 17 мг	8% 6%

- 108 045364

и соединение 237, и соединение 238

n^\ / 1 />.......<*s ъ AYO F₃C Соединение 237 ъ aYO F₃C Соединение 238 Из промежуточного соединения 11, 1метил-1 Н-пиразол-4-карбальдегида и хлорида втор-бутилмагния, 25% по весу, в THF Очистка хиральной SFC: CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250*30 мм; подвижная фаза: 80% СО₂, 20% iPrOH (0,6% iPrNH₂). Соединения 237 и 238 получали после осуществления дополнительной хиральной SFC: CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250*30 мм; подвижная фаза: 80% СО₂, 20% iPrOH (0,6% iPrNH₂), затем хиральной SFC: Chiralcel OD-H 5 мкм, 250x21,2 мм;

27 мг 29 мг

9% 10%

- 109 045364

	подвижная фаза: 82% СО₂, 18% iPrOH (0,3% iPrNH₂).
Соединение 284,	Ν^\ / I /)—(^RS	174 мг	50%



	/ \ II J F₃C S-^V_NV
	Соединение 284
	Из промежуточного соединения 11, 1метил-1Н-пиразол-4-карбальдегида и 2 М хлорида н-бутилмагния в THF	58 мг	20%
соединение 243	nV\ / 1 />......<*R Ν // \ А

	Yr!
	/ \ II J F₃C
	Соединение 243
и	ΝΓ\ /	64 мг	22%
	ДА
соединение 244	ъ
	Ar i
	/ \ II J F₃C
	Соединение 244
	Из разделения посредством хиральной SFC соединения 384: CHIRALPAK IC 5 мкм, 250*30 мм; подвижная фаза: 60%

- 110 045364

	СО₂, 40% EtOH (0,3% iPrNH₂).
Соединение 285,	N^\ / 1 //—<RS \ P F₃C Соединение 285 Из промежуточного соединения И, третбутил-4-формил- 1Н-пиразол-1 карбоксилата и 2 М iPrMgCl в THF	75 мг	22%
соединение 245 и	ϊΥ......6 ^ΗΝ^ \\| ъ F₃C Соединение 245	25 мг	7%
соединение 246	/ ъ F₃C S Соединение 246 Из разделения посредством хиральной SFC соединения 285: CHIRALPAK AD-H 5 мкм, 250*30 мм; подвижная фаза: 70% СО₂, 30% EtOH (0,3% iPrNH₂)	24 мг	7%

- 111 045364

Соединение 286

Соединение 254

Из промежуточного соединения 11,

CAS3 9021-62-0 и 3 М MeMgBr в Et₂O

Из разделения посредством хиральной

SFC соединения 286: Chiralcel OD-H

СО₂, 30% MeOH (0,3% iPrNH₂)) метил-1 Н-имид азол-5 -карбальдегида мкм, 250x21,2 мм; подвижная фаза: 70%

- 112 045364

Пример B44.

Получение соединения 195 h₂n

Моногидрат гидразина (34 мкл; 0,86 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 85 (100 мг; 0,17 ммоль) в EtOH (4 мл). Раствор нагревали при 50°C в течение 2 ч. 30 минут. Реакционную смесь выливали в ледяную воду и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 12 г; подвижная фаза: 90% DCM, 10% MeOH (+10% NH₄OH)). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток поглощали с помощью Et₂O и выпаривали до сухого состояния с получением 35 мг (45%) соединения 195.

Пример B45.

Получение соединения 287 соединения 201

- 113 045364 и соединения 202

Смесь промежуточного соединения 87 (145 мг; 0,24 ммоль) и TFA (0,7 мл; 9,15 ммоль) в DCM (7 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь выпаривали досуха. Остаток разбавляли с помощью DCM и H₂O, затем повышали его основность с помощью водного 3 н. NaOH. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением 100 мг (83%) соединения 287.

Энантиомеры разделяли с помощью хиральной SFC (CHIRALPAK IC 5 мкм, 250x20 мм; подвижная фаза: 50% CO2, 50% MeOH (+2% iPrNH2)). Фракции, содержащие каждый энантиомер, собирали, выпаривали до сухого состояния и очищали посредством хроматографии с обращенной фазой (YMC-actus Triart-C18 10 мкм, 30x150 мм; подвижная фаза: градиент от 75% NH4HCO₃ 0,2%, 25% ACN до 35% NH4HCO3 0,2%, 65% ACN). Очищенные фракции собирали, выпаривали до сухого состояния и лиофилизировали из смеси ACN/вода (20/80) с получением 21 мг (17%) соединения 201 и 23 мг (19%) соединения 202.

Пример B46.

Получение соединения 224

соединения 251

- 114 045364 и соединения 252

В атмосфере N2 смесь промежуточного соединения 11b (1 г) и 5-ацетил-1-метилпиразола (168 мг; 1,35 ммоль) в THF (15 мл) перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем порциями добавляли NaBH(OAc)₃ (718 мг; 3,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, выливали в холодную воду, повышали ее основность с помощью порошка К₂СОз и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 12 г; подвижная фаза: градиент от 100% DCM, 0% MeOH до 95% DCM, 5% MeOH, 0,3% NH4OH). Фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (300 мг) очищали второй раз посредством хроматографии с обращенной фазой (YMC-actus Triart C18 10 мкм, 30x150 мм; подвижная фаза: градиент от 65% NH4HCO3 0,2% водн., 35% ACN до 25% NH4HCO3 0,2% водн., 75% ACN). Очищенные фракции собирали, выпаривали до сухого состояния с получением 104 мг соединения 224.

Соединение 224 подвергали разделению посредством хиральной SFC ((неподвижная фаза: Chiralcel

OD-H 5 мкм, 250x21,2 мм, подвижная фаза: 70% CO2, 30% EtOH (0,3% iPrNH₂)).

Фракции, содержащие продукт, смешивали, концентрировали и лиофилизировали (ACN/вода: 80/20) с получением 48 мг соединения 251 и 46 мг соединения 252.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 224, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количест во	Выход
Соединение 232	zyv \=/ Rs\ ъ F₃C Из промежуточного соединения 11b и 4ацетилпиридина	63 мг
Соединение 258	XV/ \=/х хСО F₃C Из промежуточного соединения 11b и 5ацетилпиримидина	45 мг

- 115 045364

Пример B47.

Получение соединения 234 н

Смесь промежуточного соединения 88 (130 мг; 0,225 ммоль) и 4М HCl в 1,4-диоксане (0,7 мл; 2,8 ммоль) в MeOH (7 мл) перемешивали при к.т. в течение 24 часов. Раствор охлаждали при 5°C и добавляли EtOAc. Осадок фильтровали и высушивали с получением 111 мг соединения 234 (соль HCl).

Пример B48.

Получение соединения 270

и соединения 271

Смесь промежуточного соединения 11 (300 мг; 0,854 ммоль) и оксида (R)-стирола (293 мкл; 2,563 ммоль) в EtOH (6 мл) перемешивали при 60°C в течение 4 часов. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 12 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH₄OH, 0% MeOH, 100% DCM до 1% NH₄OH, 10% MeOH, 90% DCM). Фракции, содержащие продукты, собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 157 мг остатка, представляющего собой промежуточное соединение, которое очищали посредством хроматографии с обращенной фазой (YMC-actus Triart C18 10 мкм, 30x150 мм; подвижная фаза: градиент от 60% NH₄HcO₃ 0,2% водн., 40% ACN до 40% NH₄HCO₃ 0,2% водн., 60% ACN). Фракции, содержащие продукты, собирали, выпаривали до сухого состояния и лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 58 мг (15%) соединения 270 и 62 мг (16%) соединения 271.

- 116 045364

Пример B50

Получение соединения 105

N

TFA (2,5 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения 93 (500 мг; 0,95 ммоль) в DCM (25 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов. Реакционную смесь выливали в 10% водный раствор K₂CO₃ и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой отделяли, фильтровали через Chromabond® и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г; подвижная фаза: 0,7% NH₄OH, 7% MeOH, 93% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток кристаллизовали из диизопропилэтилового эфира и высушивали с получением 120 мг (29%) соединения 105.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 105, начиная с соответствующих исходных веществ.

Соединение или номер	Структура	Количест во	Выход
Соединение 110	Js б .-об Из промежуточного соединения 96	78 мг	34%
Соединение 109	п в 1 / Ί ^н F₃C Из промежуточного соединения 98	117 мг	41%
Соединение 111	if	47 мг	15%

- 117 045364

Пример B51.

Получение соединения 89

н. HCl в 1,4-диоксане (0,708 мл; 2,833 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 101 (150 мг; 0,283 ммоль) в ACN (7,5 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливали в 10% водный раствор K2CO3 и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой декантировали, фильтровали через Chromabond® и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 12 г; подвижная фаза: градиент от 0% MeOH, 100% DCM до 15% MeOH, 85% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток поглощали несколько раз с помощью Et₂O с получением 30 мг (25%) соединения 89.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 89, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 118 045364

Номер соединения	Структура	Количест во	Выход
Соединение 87	% Ν F₃C S Из промежуточного соединения 102	47 мг	29%
Соединение 86	/\__, о 1__/s\ N—, ъ нэо F₃C Из промежуточного соединения 102	55 мг	42%
Соединение 311	HN / \ \__/ N— F₃C S Из промежуточного соединения 107	181 мг	58%

Пример В56.

Получение соединения 317

Промежуточное соединение И (266 мг, 0,812 ммоль), промежуточное соединение 110 (377 мг, 1,62 ммоль) и К₂СО₃ в ACN (8 мл) перемешивали в течение ночи при 90°С. Смесь выливали в воду, затем экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: SiOH с частицами неправильной формы, 15-40 мкм, 40 г, подвижная фаза: DCM/MeOH: градиент от 100/0 до 92/8). Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле с обращенной фазой (неподвижная фаза: YMC-actus Triart-C18 10 мкм, 30x150 мм, подвижная фаза: 0,2% NH₄HCO3/ACN: градиент от 60/40 до 0/100). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния. Полученный в результате осадок солюбилизировали в ACN и добавляли 2 экв. 4 н. раствора НС1 в диоксане. Смесь концентрировали и затем лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 0,091 г соединения 317 (соль НС1).

- 119045364

Пример B57

Получение соединения 320

К раствору промежуточного соединения 11b (200 мг) в этаноле (5 мл) добавляли 1-(3 метоксифенил)пропан-2-он (200 мг, 1,218 ммоль), PtO₂ (20 мг) и AcOH (2 капли). После перемешивания при 60°C в течение ночи в атмосфере H2 реакционную смесь концентрировали с получением остатка, который очищали посредством препаративной HPLC (колонка: SunFire, 19x250 мм, 10 мкм, подвижная фаза A: 0,1% TFA/H2O, B: ACN) с получением 35 мг (12%) соединения 320 в виде желтого твердого ве щества.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 320, начиная с соответствующих исходных веществ.

- 120 045364

- 121 045364

	Из промежуточного соединения 11b и 2фторфенилацетона
Соединение 323	НО — N— / > , соль TFA Из промежуточного соединения 11b и 4гидроксифенилацетона	36 мг
Соединение 324	— N—. р.^хЬ / F F , соль TFA Из промежуточного соединения 11b и 1(п-толил)пропан-2-она	40 мг

Пример B57.

Соединение 61 синтезировали вместе с промежуточным соединением 68, 68a и 68b. См. протокол синтеза для промежуточного соединения 68, 68a и 68b.

- 122 045364

Превращение.

Превращение C1.

Получение соединения 196

Раствор соединения 273 (106 мг; 0,24 ммоль), 37% вес./вес. водного формальдегида (110 мкл; 1,48 ммоль) и MgSO₄ (580 мг; 4,83 ммоль) в DCM (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 1 часа. Добавляли NaBH(OAc)₃ (614 мг; 2,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 15 часов. Раствор выливали в ледяную воду, повышали ее основность с помощью K₂CO₃ и экстрагировали с помощью DCM (х2). Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 10 г, подвижная фаза: градиент от 100% DCM, 0% MeOH, 0% NH₄OH до 90% DCM, 10% MeOH, 0,5% NH₄OH). Очищенные фракции собирали, выпаривали до сухого состояния и остаток лиофилизировали из смеси ACN/вода (20/80) с получением 70 мг (64%) соединения 196.

Соединения, приведенные в таблице ниже, получали посредством применения способа, аналогичного описанному для получения соединения 196, начиная с соответствующих исходных веществ.

Номер соединения	Структура	Количест во	Выход
Соединение 304а	5-+- Ли F₃C Из соединения 269а	50 мг	28%
Соединение 304b	__/ F )—— / s* \/ σ гШ F₃C	52 мг	30%
	Из соединения 269b

- 123 045364

Превращение C2.

Получение соединения 216

Раствор соединения 200 (110 мг; 0,25 ммоль) и 37% вес./вес. водного раствора формальдегида (19 мкл; 0,25 ммоль) в MeOH (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 3 часов. Добавляли NaBH4 (19 мг; 0,5 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 15 часов, выливали в ледяную воду, повышали ее основность с помощью K₂CO₃ и экстрагировали с помощью DCM (x2). Органический слой промывали солевым раствором, затем высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 300 г; подвижная фаза: градиент от 0,1% NH4OH, 5% MeOH, 95% DCM до 1% NH4OH, 10% MeOH, 90% DCM). Очищенные фракции собирали, выпаривали до сухого состояния и лиофилизировали из смеси 20/80 ACN/вода с получением 15 мг (13%) соединения 216.

Превращение C3.

Получение соединения 303

В атмосфере N2 при 10°C к раствору соединения 222 (150 мг; 0,34 ммоль) и DIPEA (207 мкл; 1,2 ммоль) в THF (3 мл) добавляли этилбромид (45 мкл; 0,6 ммоль). Раствор перемешивали при к.т. в течение ночи, затем выливали в охлажденную воду. Продукт экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (164 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: немодифицированный диоксид кремния с частицами неправильной формы, 12 г, подвижная фаза: градиент от 100% DCM, 0% MeOH (+10% NH4OH) до 90% DCM, 10% MeOH (+10% NH4OH)). Фракции, содержащие продукт, смешивали и концентрировали с получением 77 мг фракции с промежуточным соединением, которую дополнительно очищали с использованием обращенной фазы (неподвижная фаза: YMC-actus Triart C18 10 мкм, 30x150 мм, подвижная фаза: градиент от 65% NH4HCO3 0,2%, 35% ACN до 25% NH4HCO3 0,2%, 75% ACN). Фракции, содержащие продукт, смешивали и концентрировали с получением 40 мг остатка, который лиофилизировали со смесью 20/80 ацетонитрил/вода с получением 34 мг (21%) соединения 303 в виде белого порошка.

- 124 045364

Превращение C4.

Получение соединения 316

Раствор соединения 315 (114 мг; 0,237 ммоль), 37% формальдегида в воде (106 мкл; 1,42 ммоль) и MgSO₄ (568 мг) в DCM (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 1 часа. Затем добавляли NaBH(OAc)₃ (602 мг; 2,84 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и повышали ее основность с помощью 10% водного раствора K2CO3. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (SiOH с частицами неправильной формы, 12 г; подвижная фаза: градиент от 0% NH4OH, 0% MeOH, 100% DCM до 1% NH4OH, 10% MeOH, 90% DCM). Фракции, содержащие продукт, собирали, выпаривали до сухого состояния и лиофилизировали из смеси вода/ACN (80/20; 10 мл) с получением 110 мг (94%) соединения 316.

Аналитическая часть.

LCMS (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия).

Общая процедура.

Измерения в ходе высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) осуществляли с применением насоса для LC, детектора на диодной матрице (DAD) или УФ-детектора и колонки, как описано в соответствующих способах. При необходимости включали дополнительные детекторы (см. приведенную ниже таблицу способов).

Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (МС), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т.п.) с целью получения ионов, позволяющих определить номинальную моноизотопную молекулярную массу (MW) соединения. Сбор данных осуществляли с помощью соответствующего программного обеспечения.

Соединения описывали по их значениям экспериментального времени удерживания (Rt) и ионам. Если в таблице данных не указано иное, то указанный молекулярный ион соответствует [M+H] (протонированной молекуле) и/или [M-H]^- (депротонированной молекуле). В случае, если соединение не было непосредственно способно к ионизации, указывали тип аддукта (т.е. [M+NH4]⁺, [M+HCOO]^- и т.д.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (Br, Cl и т.п.) указанное значение является таким значением, которое получено для наименьшей массы изотопа. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с применяемым способом.

Далее в данном документе SQD означает одиночный квадрупольный детектор, к.т. означает комнатную температуру, BEH означает мостиковый гибрид этилсилоксана/диоксида кремния, HSS означает диоксид кремния повышенной прочности, DAD означает детектор на диодной матрице. Все другие используемые сокращения определены ранее.

- 125 045364

Таблица 1a

Коды способов LCMS (скорость потока выражена в 1 мл/мин;

температура колонки (T) в °C; время анализа в минутах)

Код способ а	Прибор	Колонка	Подвижная фаза	Градиент	Скорост ь потока Т колонки	Вре мя ана лиз а
				От 90% А в
1	Agilent: 1200 - DAD и MSD6110	Phenomen ex: LunaC18 (5 мкм, 2x50 мм)	A: 0,1% CF3COOH в воде, В: 0,05% CF3COOH В CH3CN	течение 0,8 мин. до 20% А за 3,7 мин., выдерживание в течение 3 мин., обратно до 90% А за 2 мин.	0,8 50	10
	Agilent:	Phenomen	А: 0,1%	От 100% А в	0,8
2	1200 -	ex: Luna-	CF3COOH	течение 1 мин.	—	10
	DAD и	C18	в воде, В:	до 40% А за	50

- 126 045364

	MSD6110	(5 мкм, 2x50 mm)	0,05% CF₃COOH в CH₃CN	4 мин., до 15% А за 2,5 мин., обратно до 100% А за 2 мин.
3	Waters: Acquity UPLC® - DAD и Quattro Micro™	Waters: ВЕН C18 (1,7 мкм, 2,1 x 100 mm)	A: 95% CH3COON H₄, 7 mM/5% CH₃CN, B: CH₃CN	От 84,2% А в течение 0,49 мин. до 10,5% А за 2,18 мин., удерживание в течение 1,94 мин., обратно до 84,2% А за 0,73 мин., удерживание в течение 0,73 мин.	0,343 40	6,2
4	Waters: Acquity® H-Class - DAD и SQD2™	Waters: ВЕН C18 (1,7 мкм, 2,1 x 100 mm)	A: 95% CH3COON H₄, 7 mM/5% CH₃CN, B: CH₃CN	От 84,2% А до 10,5% А за 2,18 мин., удерживание в течение 1,96 мин., обратно до 84,2% А за 0,73 мин., удерживание в течение 0,73 мин.	0,343 40	6,1
5	Shimadzu: LC- MS2020 -	SunFire C18, 5 мкм,	A: 0,1% HCOOH в воде, В:	От 70% А в течение 0,4 мин. до 5% А за	2,0	2,6

- 127 045364

	SPD- М20А и Alltech 3300 ELSD	50 * 4,6 м M	0,1% HCOOH в CH₃CN	1,2 мин., до 1% А за 1,0 мин.	40
6	Waters UPLCQDa PDAдетектор	ACQUIT YUPLC BEHC18, 1,7 мкм, 2,1 * 50 м M	A: 0,1% HCOOH в воде, В: 0,1% HCOOH в CH₃CN	От 90% А в течение 0,1 мин. до 5% А за 1,1 мин., удерживание при 5% А в течение 0,8 мин.	0,6 50	2,0
7	Waters UPLCQDa PDA- детектор	ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 мкм, 2,1 * 100 м m	A: 0,1% HCOOH в воде, В: 0,1% HCOOH в CH₃CN	От 80% А в течение 1,0 мин. до 5% А за 7,0 мин., удерживание при 5% А в течение 1,0 мин.	0,4 50	9,0

Таблица 1b

Данные LCMS. № соед. означает номер соединения; Rt означает время удерживания в мин

№ с оед.	Rt (мин.)	[М+Н]⁺	Аддукт/ [М-Н]	Способ LCMS
1	2,725	419,2	-	1
2	2,88	425,1	483,4 [М+СНзСОО]’	3
3	2,9	447,2	-	1
4	2,26	421,1	479,4 [М+СНзСОО]'	3
5	3,314	459	-	2

- 128 045364

6	3,176	459	-	2
7	3,129	459	-	2
8	3,71	454,9	-	2
9	3,333	421	-	2
10	3,269	421	-	2
11	3,652	454,9	-	2
12	3,409	421	-	2
13	2,498	385	-	1
14	2,76	405	463,4 [М+СНзСОО]'	3
15	3,516	455	-	2
16	2,88	419,5	463,3 [М+СНзСОО]'	4
17	3,074	482,9	-	1
18	2,94	447	-	1
19	3,92	461,2	519,7 [М+СНзСОО]'	3
20a	3,15	433,1	491,4 [М+СНзСОО]'	3
20b	3,15	433,1	491,4 [М+СНзСОО]'	3
21a	3,66	447,4	445,4	3
21b	3,65	447,3	445,3	3
22	3,104	437	-	1
23	2,11	423,5	481,3 [М+СНзСОО]'	4
24	2,46	452,5	510,3 [М+СНзСОО]'	4
25	2,43	-	466,3 [М+СНзСОО]'	3
26	3,28	420,1	-	3
28	2,08	409,1	-	3
29	2,09	409,1	-	3
30	2,17	423,2	481,4 [М+СНзСОО]'	3

- 129045364

31	2,67	461	519,3 [М+СНзСОО]·	3
34	2,16	409,1	467,4 [М+СНзСОО]'	3
35	2,26	423,2	481,4 [М+СНзСОО]'	3
36	2,39	451,2	509,5 [М+СНзСОО]'	3
37	2,375	492	-	1
40	1,98	395,1	-	3
41	1,95	395,4	-	4
44	2,31	371,5	429,2 [М+СНзСОО]'	4
45	2,936	433	-	1
46	2,871	433	-	1
47	3,05	463	-	1
48	2,79	545,9	-	1
49	2,901	433	-	1
50	3,019	447	-	1
54	2,66	436,9	-	1
56	2,731	436,9	-	1
57	3,604	449	-	2
58	2,67	385	443,2 [М+СНзСОО]'	3
59	2,2	423	481,2 [М+СНзСОО]'	3
61	2,11	357	415,1 [М+СНзСОО]'	3
62	2,45	495,2	-	3
63	2,55	455,2	513,4 [М+СНзСОО]'	3
64	2,92	411	469,1 [М+СНзСОО]'	3
65	2,46	413,1	471,2 [М+СНзСОО]'	3
66	2,31	427,1	485,2 [М+СНзСОО]'	3
67	2,25	441,5	499,4 [М+СНзСОО]'	4

- 130 045364

69	2,89	433,1	491,3 [М+СНзСОО]·	3
71	2,75	509,2	-	3
74	2,54	547,4	605,7 [М+СНзСОО]'	3
75	2,56	506,3	564,5 [М+СНзСОО]'	3
76	2,23	462,2	520,4 [М+СНзСОО]'	3
77	2,01	452,1	520,5 [М+СНзСОО]'	3
82	1,95	426,4	484,2 [М+СНзСОО]'	4
84	3,05	465,1	523,3 [М+СНзСОО]'	3
88	2,13	488,4	546,3 [М+СНзСОО]'	3
112	2,24	452,1	510,4 [М+СНзСОО]'	3
86	2,20	452,2	510,5 [М+СНзСОО-]	3
87	2,13	438,2	496,6[М+СНзСОО-]	3
89	2,14	430,1	488,3 [М+СНзСОО-]	3
90	2,32	448,1	506,4[М+СН₃СОО-]	3
105	1,96	426,4	484,3 [М+СНзСОО-]	4
108	2,34	452,2	5Ю,4[М+СН₃СОО-]	3
109	2,13	438,1	496,4[М+СН₃СОО-]	3
110	1,93	442,5	500,2[М+СН₃СОО-]	4
111	1,90	442,5	500,3 [М+СНзСОО-]	4
163	2,42	489,1	547,4[М+СН₃СОО-]	3
164	2,43	489,2	547,4[М+СН₃СОО-]	3
195	1,90	452,5	510,3 [М+СНзСОО-]	4
196	2,35	454,2	512,4[М+СН₃СОО-]	3
197	2,29	437,2	495,5[М+СН₃СОО-]	3
198	2,25	437,2	495,4[М+СН₃СОО-]	3

- 131 045364

199	2,25	437,2	495,5[M+CH₃COO-]	3
200	2,28	440,1	498,3 [М+СНзСОО-]	3
201	1,92	506,5	564,4[М+СН₃СОО-]	4
202	1,89	506,5	564,5[М+СН₃СОО-]	4
203	2,70	465,2	523,4[М+СН₃СОО-]	3
211	2,40	454,1	512,3 [М+СНзСОО-]	3
213	2,38	454,1	512,3 [М+СНзСОО-]	3
214	2,98	493,3	551,5 [М+СНзСОО-]	3
220	2,43	451,1	509,3 [М+СНзСОО-]	3
221	2,44	451,1	509,3 [М+СНзСОО-]	3
222	2,31	440,1	498,3 [М+СНзСОО-]	3
223	2,20	423,0	421,1	3
224	2,51	437,1	495,3 [М+СНзСОО-]	3
228	2,68	440,0	498,2[М+СН₃СОО-]	3
230	2,70	479,2	537,4[М+СН₃СОО-]	3
231	2,59	424,1	482,3 [М+СНзСОО-]	3
232	2,58	434,1	492,3 [М+СНзСОО-]	3
233	2,56	434,1	492,3 [М+СНзСОО-]	3
234	2,03	478,2	536,4[М+СН₃СОО-]	3
235	2,91	479,2	537,4[М+СН₃СОО-]	3
236	2,91	479,2	537,4[М+СН₃СОО-]	3
237	2,89	479,3	537,5[М+СН₃СОО-]	3
238	2,89	479,2	537,5[М+СН₃СОО-]	3
243	2,75	479,2	537,4[М+СН₃СОО-]	3
244	2,75	479,2	537,4[М+СН₃СОО-]	3
245	2,54	451,1	449,2	3

- 132 045364

246	2,53	451,1	449,2	3
247	2,69	479,2	537,4[M+CH₃COO-]	3
248	2,69	479,2	537,4[М+СН₃СОО-]	3
249	2,59	440,0	498,2[М+СН₃СОО-]	3
250	2,42	489,1	547,3 [М+СНзСОО-]	3
251	2,50	437,1	495,3 [М+СНзСОО-]	3
252	2,50	437,1	495,3 [М+СНзСОО-]	3
253	2,34	437,1	495,4[М+СН₃СОО-]	3
254	2,34	437,1	495,3 [М+СНзСОО-]	3
258	2,42	435,1	493,2[М+СН₃СОО-]	3
259	2,16	426,1	484,3 [М+СНзСОО-]	3
269	2,34	458,4	516,4[М+СН₃СОО-]	4
270	2,52	449,4	507,4[М+СН₃СОО-]	4
271	2,48	449,4	507,4[М+СН₃СОО-]	4
273	2,29	440,2	498,5[М+СН₃СОО-]	3
274	2,71	465,2	523,4[М+СН₃СОО-]	3
133	2,36	463,2	521,5 [М+СНзСОО]'	3
137	2,26	463,5	521,4 [М+СНзСОО]'	4
138	2,27	463,5	521,4 [М+СНзСОО]'	4
145	2,42	441,1	499,4 [М+СНзСОО]'	3
147	2,11	440,1	498,2 [М+СНзСОО]'	3
146	2,10	440,1	498,2 [М+СНзСОО]'	3
148	2,35	468,2	466,4	3
154	2,46	441,1	499,4 [М+СНзСОО]'	3
155	2,44	441,1	499,3 [М+СНзСОО]'	3
150	2,05	412,0	470,2 [М+СНзСОО]'; 410,0	3
193	2,96	469,2	527,5 [М+СНзСОО]'; 467,8	3

- 133 045364

162	2,96	469,2	527,5 [М+СНзСОО]·; 467,8	3
156	2,96	469,2	527,4 [М+СНзСОО]'; 467,2	3
157	2,81	469,2	527,4 [М+СНзСОО]'; 467,2	3
158	2,60	427,1	485,3 [М+СНзСОО]'	3
159	2,60	427,1	485,3 [М+СНзСОО]'	3
161	2,76	479,2	537,4 [М+СНзСОО]'; 477,2	3
166	2,76	479,2	537,3 [М+СНзСОО]'; 477,2	3
167	2,75	479,2	537,3 [М+СНзСОО]'; 477,1	3
172	2,75	479,2	537,4 [М+СНзСОО]'; 477,4	3
173	2,76	479,2	537,4 [М+СНзСОО]'; 477,3	3
174	2,75	479,2	537,4 [М+СНзСОО]'; 477,2	3
168	2,40	468,2	526,4 [М+СНзСОО]'; 466,3	3
169	2,39	468,2	526,4 [М+СНзСОО]'; 466,3	3
170	3,20	483,1	541,3 [М+СНзСОО]'	3
171	2,93	477,2	535,4 [М+СНзСОО]'	3
183	3,09	465,1	523,4 [М+СНзСОО]'	3
182	3,48	475,2	533,4 [М+СНзСОО]'	3
192	2,90	483,5	541,4 [М+СНзСОО]'	4
179	3,03	483,2	541,5 [М+СНзСОО]'	3
180	3,04	483,3	541,5 [М+СНзСОО]'	3
184	2,73	399,4	457,3 [М+СНзСОО]’	4

- 134 045364

288	2,74	399,1	457,2 [М+СНзСОО]·; 397,1	3
185	2,48	441,5	499,4 [М+СНзСОО]'	4
187	2,42	441,1	499,3 [М+СНзСОО]'; 439,4	3
186	2,87	479,2	537,5 [М+СНзСОО]'; 477,2	3
188	2,80	479,5	537,4 [М+СНзСОО]'; 523,4 [М+НСОО]'	4
189	2,78	479,5	537,4 [М+СНзСОО]'; 523,2 [М+НСОО]'	4
190	2,80	479,5	537,4 [М+СНзСОО]'	4
191	2,79	479,5	537,4 [М+СНзСОО]'	4
289	3,32	447	505 [М+СНзСОО]'	3
290	3,33	447	505 [М+СНзСОО]'	3
291	3,25	451	509 [М+СНзСОО]'	3
292	3,25	451	509 [М+СНзСОО]'	3
293	2,78	413	471 [М+СНзСОО]'	3
294	2,77	413	471 [М+СНзСОО]'	3
295	2,24	437	495 [М+СНзСОО]'	3
296	3,07	447	505 [М+СНзСОО]'	3
297	3,07	447	505 [М+СНзСОО]'	3
298	3,H	465	523 [М+СНзСОО]'	3
299	2,25	437	495 [М+СНзСОО]'	3
303	2,42	468	526 [М+СНзСОО]'	3
304a	2,69	472	530 [М+СНзСОО]'	3
304b	2,70	472	530 [М+СНзСОО]'	3
307	3,51	493	551 [М+СНзСОО]'	3
309	2,92 и	455	513 [М+СНзСОО]'	3

- 135 045364

	3,02
311	1,99	426	484 [М+СНзСОО]'	3
312	3,76	537	595 [М+СНзСОО]'	3
313	3,76	537	595 [М+СНзСОО]'	3
314	2,90	472	530 [М+СНзСОО]'	3
315	2,22	482	540 [М+СНзСОО]'	3
316	2,30	496	554 [М+СНзСОО]'	3
317	3,14	465	-	3
318	2,57	502	-	3
320	0,893	477,2	-	5
321	1,300	477,4	-	6
322	6,213	465,3	-	7
323	1,203	463,3	-	6
324	0,692	461,2	-	5

Способы SFCMS.

Общая процедура для способов SFC-MS.

Измерения в ходе SFC проводили с применением аналитической системы для сверхкритической жидкостной хроматографии (SFC), укомплектованной насосом для двухкомпонентных смесей для доставки диоксида углерода (CO2) и модификатора, автоматическим дозатором, термостатом для колонок, детектором на диодной матрице, оснащенным проточной кюветой для работы под высоким давлением, выдерживающей значения до 400 бар. В случае оснащения масс-спектрометром (MS) поток из колонки направлялся в (MS). В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т.п.) с целью получения ионов, позволяющих определить номинальную моноизотопную молекулярную массу (MW) соединения. Сбор данных осуществляли с помощью соответствующего программного обеспечения.

- 136 045364

Таблица 2 a

Аналитические способы SFC-MS (скорость потока выражена в 1 мл/мин; температура колонки (T) в °C; время анализа в минутах; противодавление (BPR) в барах; все другие используемые сокращения, приведенные __________________в таблице ниже, определены ранее) ________________

Код способа	Колонка	Подвижная фаза	Градиент	Скор ость поток а Т кол.	Время анализа
BPR
1	Колонка Phenomenex Lux Cellulose-4 (3 мкм, 100 х 4,6 мм)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	30% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
2	Колонка Phenomenex Lux Cellulose-2 (3 мкм, 100 х 4,6 мм)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	25% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
3	Daicel Chiralpak® AD-3 (3 мкм, 100 x 4,6 мм)	A: CO₂ B: 50/50 EtOH/iPrOH (0,3% iPrNH₂)	30% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
4	Daicel Chiralpak® AD-3 (3 мкм, 100 x 4,6 мм)	A: CO₂ B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	25% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
5	Daicel Chiralpak® AD-3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	30% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103

- 137 045364

7	Daicel Chiralpak® AD3 (3 mkm, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: EtOH	50% B, удерживай	3,5	4
	(0,3% iPrNH₂)	ие 4 мин.	35	103
8	Daicel Chiralpak® AD3 (3 mkm, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: iPrOH (0,3% iPrNH₂)	20% В, удерживая ие 6 мин.	3,5 35	6 103
9	Daicel Chiralpak® AD3 (3 mkm, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: iPrOH (0,3% iPrNH₂)	30% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
10	Daicel Chiralpak® AD3 (3 mkm, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: iPrOH (0,3% iPrNH₂)	40% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
И	Daicel Chiralpak® AD-3 (3 mkm, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	25% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103

- 138 045364

12	Daicel Chiralpak® AD-3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (+0,3% iPrNH₂)	30% B, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
16	Phenomenex Lux cellulose 2 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	40% В, удерживая ие 6 мин.	3,5	6
35	103
17	Phenomenex Lux cellulose 2 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	50% В, удерживая ие 10 мин.	3,5	10
35	103
18	Daicel Chiralpak® IC3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	40% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
20	Daicel Chiralcel® OD3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	20% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103
21	Daicel Chiralcel® OD3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	30% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
35	103

- 139 045364

22	Daicel Chiralcel® OD3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: iPrOH (0,3% iPrNH₂)	20% B, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
23	Daicel Chiralcel® OD3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH2)	30% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
24	Daicel Chiralcel® OJ3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	15% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
25	Daicel Chiralcel® OJ3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	10% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
26	Daicel Chiralcel® OJ3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: MeOH (0,3% iPrNH₂)	30% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
37	Daicel Chiralpak® IC3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	A: CO₂ B: iPrOH (0,3% iPrNH₂)	40% В, удерживая	3,5	3
	ие 3 мин.	35	103
38	Daicel Chiralpak® IC3 (3 мкм,	A: CO₂ B: MeOH	20% В, удерживая ие 6 мин.	3,5	6

	100 x 4,6 mm)	(0,3% iPrNH₂)		35	103
39	Daicel Chiralcel® OD-	A: CO₂	15% В, удерживая	3,5	3
	3 (3 мкм, 100 x 4,6 mm)	B: MeOH (0,3% iPrNH2)
	ие 3 мин.	35	103
40	Phenomenex Lux cellulose 2	A: CO₂	40% В, удерживая ие 3 мин.	3,5	3
	(3 мкм, 100 x 4,6 mm)	B: EtOH (0,3% iPrNH₂)	35	103

- 140 045364

Таблица 2b

Данные SFC-MS (Элюирование изомеров в порядке A происходит до элюирования в порядке B при описываемых условиях)

№ соед.	R_t (мин.)	% площади УФ	Порядок элюирования изомеров	Способ SFCMS
20а	2,62	100	А	1
20b	3,00	99,71	В	1
21а	2,66	98,09	А	2
21b	3,01	96,93	В	2
82	1,49	99,72	А	5
105	1,65	97,6	В	5
110	1,32	97,6	А	12

- 141 045364

111	2,27	100	В	12
163	0,94	100	A	26
164	1,44	100	В	26
198	1,54	100	A	1
199	2,29	100	В	1
273	0,75	99,6	A	7
200	1,19	99,6	В	7
274	1,29	100	A	2
203	2,04	100	В	2
211	1,58	100	A	12
213	2,22	99,05	В	12
220	1,29	100	A	18
221	1,90	100	В	18
235*	2,81	100	A	8
236*	3,46	100	В	8
237*	1,97	100	A	22
238*	2,43	100	В	22
243	1,26	100	A	18
244	1,80	99,6	В	18
245	2,02	100	A	4
246	2,54	99,5	В	4
247	1,11	99,95	A	16
248	3,20	100	В	16
251	0,78	100	A	21

- 142 045364

252	1,23	99,95	В	21
253	0,99	100	А	23
254	1,82	99,2	В	23
137	0,98	100	А	12
138	1,33	99,81	В	12
147	1,99	100	В	5
146	1,46	99,18	А	5
154	1,15	100	А	3
155	1,35	99,14	В	3
193	1,16	100	А	4
162	1,44	99,04	В	4
158	1,16	100	А	24
159	1,66	100	В	24
166	1,07	100	А	9
167	1,31	99,03	В	9
173	1,22	100	А	20
174	1,81	100	В	20
168	2,15	99,17	В	10
169	1,21	100	А	10
179	0,90	100	А	И
180	1,29	99,58	В	И
184	1,20	100	А	37
288	1,40	98,50	В	37
185	1,34	100	А	25
187	1,58	100	В	25
295	1,04	100	А	5
299	1,29	98,11	В	5

- 143 045364

296	1,40	100	А	9
297	1,88	100	В	9
290	1,42	100	А	37
289	1,57	100	В	37
291	3,50	99,92	А	38
292	3,79	100	В	38
293	1,24	100	А	39
294	1,58	100	В	39
304а	1,40	100	А	40
304b	1,92	99,02	В	40

* Порядок элюирования изомеров соед. № 235 относительно соед. № 236; соед. № 237 относительно соед. № 238.

SFC-MS также измеряли для соединений 188, 189, 190 и 191 при тех же условиях SFCMS. Результаты показаны в табл. 2c. (Элюирование изомеров в порядке A происходит до B, B происходит до C, C происходит до D.)_________________________________________________

№ соед.	Rt (мин.)	% площади УФ	Порядок элюирования изомеров	Способ SFCMS
188	2,78	100	В	8
189	3,02	96,66	С	8
190	2,40	100	А	8
191	3,21	99,15	D	8

Оптическое вращение (OR).

Величину оптического вращения измеряли с помощью поляриметра Perkin Elmer 341. Поляризованный свет пропускали через образец при длине пробега 1 дециметр и концентрации образца 0,2-0,4 г на 100 мл. Взвешивали 2-4 мг продукта в сосуде, затем растворяли в 1-1,2 мл растворителя для спектроскопии (например, DMF). Кювету наполняли раствором и помещали в поляриметр при температуре 20°C. Величину OR считывали с точностью до 0,004°.

Расчет концентрации: вес в граммах х 100/объем в 1 мл.

Удельное вращение (OR): [α] d²⁰: (считанная величина вращения х 100)/(1,000 дм х концентрация).

^d означает D-линию натрия (589 нм).

- 144 045364

Таблица 3

Данные в отношении OR: длина волны: 589 нм (конкретно указано, если отличается); растворитель: DMF (конкретно указано, если отличается);

температура: 20°C; конц. означает концентрацию (г/100 мл);

________________OR означает оптическое вращение__________________

№ соед.	OR (°)	Конц.	Длина волны (нм)	Растворитель
20а	-31,43	0,28	589	DMF
20b	+26,25	0,32	589	DMF
21а	-38,48	0,33	589	DMF
21b	+42,02	0,326	589	DMF
112	+23,11	0,251	589	DMF
86	-29,55	0,264	589	DMF
87	-26,22	0,267	589	DMF
108	-29,61	0,206	589	DMF
109	+25,37	0,272	589	DMF
198	-28,25	0,308	589	DMF
199	+20,91	0,263	589	DMF
196	+8,92	0,269	589	DMF
200	-11,54	0,26	589	DMF
201	+7,81	0,269	589	DMF
202	-5,38	0,26	589	DMF
203	-6,22	0,225	365	DMF

- 145 045364

211	+5,65	0,248	589	DMF
213	-9,89	0,263	589	DMF
216	-19,57	0,281	589	DMF
220	-22,63	0,243	589	DMF
221	+11,58	0,259	589	DMF
235	-12,02	0,258	589	DMF
236	+8,58	0,233	589	DMF
237	+31,58	0,228	365	DMF
238	-32,09	0,215	365	DMF
243	-30,12	0,332	365	DMF
244	+20,94	0,277	365	DMF
245	-17,12	0,292	589	DMF
247	-17,25	0,255	365	DMF
248	+5,86	0,239	365	DMF
251	-20,6	0,267	589	DMF
252	+12	0,275	589	DMF
253	-25,4	0,252	589	DMF
254	+17,92	0,318	589	DMF
273	+10,38	0,26	589	DMF
274	-5,41	0,222	589	DMF
137	+29,32	0,249	589	DMF
138	-24,9	0,261	589	DMF
147	+8,06	0,273	589	DMF
146	-12,65	0,245	589	DMF
154	-8,59	0,256	589	DMF

- 146 045364

155	+6,64	0,241	589	DMF
150	+14,1	0,234	365	DMF
193	-8,62	0,232	365	DMF
162	-5,45	0,275	589	DMF
158	+16,54	0,26	365	DMF
159	-22,31	0,251	365	DMF
166	-12,6	0,254	589	DMF
167	+7,97	0,276	589	DMF
173	+17,92	0,279	365	DMF
174	-21,99	0,282	365	DMF
168	-4,59	0,283	365	DMF
179	+20,19	0,208	365	DMF
180	-93,02	0,215	365	DMF
184	+17,31	0,219	589	DMF
288	-26,63	0,338	589	MeOH
185	+32,45	0,256	589	DMF
187	-32,45	0,228	589	DMF
289	+36,73	0,245	589	DMF
290	-41,87	0,246	589	DMF
291	-37,05	0,278	589	DMF
292	+32,39	0,247	589	DMF
293	+29,15	0,295	589	DMF
294	-30,83	0,253	589	DMF
295	+27,38	0,263	589	DMF
296	+50,44	0,113	589	DMF
297	-32,45	0,265	589	DMF
299	-33,79	0,29	589	DMF
304а	+8,42	0,285	589	DMF
304b	-6,49	0,385	589	DMF

ЯМР.

ЯМР-эксперименты выполняли с применением спектрометра Bruker Avance 500, оснащенного головкой датчика BBFO Bruker на 5 мм с z-градиентами и работающего при 500 МГц для протонов и 125 МГц для атомов углерода, или с применением спектрометра Bruker Avance DRX 400, использующего внутренний дейтериевый лок и оснащенного головкой датчика обратного двойного резонанса (1H, ¹³C, SEI) с z-градиентами и работающего при 400 МГц для протонов и 100 МГц для атомов углерода. Химические сдвиги (δ) указаны в частях на миллион (ppm). Величины J выражены в Гц.

В качестве альтернативы некоторые ЯМР-эксперименты выполняли с применением спектрометра Bruker Avance III 400 при температуре окружающей среды (298,6 K), использующего внутренний дейтериевый лок, оснащенного головкой датчика PABBO BB на 5 мм с z-градиентами и работающего при 400 МГц для протонов и 100 МГц для атомов углерода. Химические сдвиги (δ) указаны в частях на мил- 147 045364 лион (ppm). Величины J выражены в Гц.

Соединение 13.

1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm 8,42 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 3,95 (br s, 2H), 3,83 (br t, J=6,6

Гц, 2H), 3,63 (q, J=10,1 Гц, 2H), 3,27 (br s, 4H), 2,32 (d, J=6,8 Гц, 2H), 2,28 - 2,18 (m, 2H), 1,69 - 1,57 (m,

1H), 0,90 (d, J=6,6 Гц, 6H).

Соединение 20b.

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ ppm 11,64 (br s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,67 (br d, J=3,8 Гц, 2H), 7,35 - 7,51 (m, 3H), 4,32 - 4,48 (m, 2H), 4,03 - 4,18 (m, 2H), 3,91 (br s, 4H), 3,17 - 3,61 (m, 4H), 2,00 2,32 (m, 4H).

Соединение 82.

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ ppm 8,35 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 4,28 - 4,77 (m, 6H), 4,01 - 4,19 (m, 4H), 3,62 (br t, J=7,9 Гц, 1H), 2,88 (dd, J=9,9, 6,8 Гц, 1H), 2,45 (br dd, J=9,9, 7,7 Гц, 1H), 2,00 - 2,21 (m, 2H), 1,17 - 1,28 (m, 1H), 0,95 (d, J=6,3 Гц, 3H).

Соединение 84.

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ ppm 8,33 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,22 (dd, J=8,4, 5,8 Гц, 2H), 7,09 (t, J=9,0 Гц, 2H), 4,08 (q, J=11,0 Гц, 2H), 3,66 - 3,96 (m, 4H), 3,17 (s, 4H), 2,65 - 2,73 (m, 1H), 2,38 - 2,45 (m, 1H), 2,27 (dd, J=12,9, 8,5 Гц, 1H), 2,14 (br s, 2H), 0,72 (d, J=6,3 Гц, 3H).

Соединение 193.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm 8,32 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 4,07 (q, J=11,1 Гц, 2H), 3,65 - 3,91 (m, 6H), 3,07 - 3,30 (m, 6H), 2,14 (br s, 2H), 1,85 (br s, 1H), 1,70 - 1,82 (m, 1H), 1,63 (br s, 1H), 1,28 - 1,52 (m, 4H), 0,88 (dd, J=9,6, 7,1 Гц, 6H).

Соединение 196.

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ ppm 8,32 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 4,07 (q, J=10,9 Гц, 2H), 3,52 - 3,97 (m, 4H), 3,34 - 3,43 (m, 2H), 3,02 - 3,22 (m, 4H), 2,72 (dd, J=8,5, 6,3 Гц, 1H), 2,58 (dd, J=8,8, 6,6 Гц, 1H), 2,51 2,53 (m, 1H), 2,28 - 2,35 (m, 1H), 2,19 (dd, J=9,5, 2,2 Гц, 1H), 2,12 (s, 4H), 1,58 (td, J=7,1, 2,2 Гц, 1H), 0,79 (dd, J=14,8, 6,9 Гц, 6H).

Соединение 273.

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ ppm 8,32 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 4,03 (q, J=11,0 Гц, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,79 (t, J=6,9 Гц, 2H), 3,61 (br t, J=7,6 Гц, 1H), 3,46 (br t, J=7,9 Гц, 1H), 3,12 - 3,34 (m, 7H), 2,66 - 2,77 (m, 1H), 2,28 (dd, J=9,1, 2,2 Гц, 1H), 2,15 (t, J=6,9 Гц, 2H), 1,62 (td, J=6,9, 2,2 Гц, 1H), 0,82 (dd, J=14,2, 6,9 Гц, 6H)

Соединение 274

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ ppm 8,31 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 4,07 (q, J=10,9 Гц, 2H), 3,58 - 3,93 (m, 7H), 2,97 - 3,08 (m, 4H), 2,52 - 2,55 (m, 1H), 2,12 (br s, 2H), 1,7 (td, J=6,6, 4,4 Гц, 1H), 0,70 (dd, J=12,6, 6,6 Гц, 6H).

Соединение 320.

1HNMR (400 МГц, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,28 (t, J=8,8 Гц, 1H), 6,87-6,86 (m, 3H), 4,304,18 (m, 5H), 4,08-3,93 (m, 3H), 3,91-3,88 (m, 2H), 3,88-3,85 (s, 3H), 3,72-3,70 (m, 1H), 3,06 (dd, J=5,2 Гц, J=13,6 Гц, 1H), 2,64 (dd, J=9,2 Гц, J=13,6 Гц, 1H), 2,47-2,385 (m, 2H), 1,19-1,18 (d, J=6,8 Гц 3H).

Соединение 321.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 8,38 (d, J=5,2 Гц, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,21 (d, J=8,4 Гц, 2H), 6,92 (d, J=8,4 Гц, 2H), 3,75-4,33 (m, 11H), 3,74 (s, 3H), 3,61 (s, 1H), 2,93 (dd, J=3,6 Гц, 12,8 Гц, 1H), 2,27-2,36 (m, 2H), 1,03 (d, J=5,6 Гц, 3H).

Соединение 322.

1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,40 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,38-7,34 (m, 2H), 7,22-1,13 (m, 2H), 4,37-4,26 (m, 5H), 4,13 (s, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,91 (q, J=10,4 Гц, 2H), 3,74-3,69 (m, 1H), 2,98 (dd, J=3,6 Гц, 13,2 Гц, 1H), 2,68 (dd, J=9,6 Гц, 13,2 Гц, 1Н), 2,47 (s, 2H), 1,20 (d, J=6,4 Гц, 3H).

Соединение 323.

1HNMR (400 МГц, CD3OD) δ 8,38 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,10 (d, J= 8,4 Гц, 2H), 6,78 (d, J=8,4 Гц, 2H), 3,86-7,27 (m, 10H), 3,60-6,62 (m, 1H), 2,96 (dd, J=4,8 Гц, 14,0 Гц, 1H), 2,60 (dd, J=4,8 Гц, 14,0 Гц 1H), 2,372,46 (m, 2H), 1,18 (d, J=6,8 Гц, 3H).

Соединение 324.

1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,36 (s, 1H),7,62 (s, 1H), 7,19-7,15 (m, 4H), 4,28-4,16 (m, 5H), 4,14-3,98 (m, 4H), 3,93-3,87 (m, 2H), 3,66-3,64 (m, 1H), 3,04 (dd, J=4,8 Гц, J=13,6 Гц, 1H), 2,63 (dd, J=9,2 Гц, J=13,6 Гц 1H), 2,46-2,32 (m, 5H), 1,18 (d, J=6,4 Гц, 3H).

Фармакологическая часть.

1) Флуоресцентный поляризационный анализ взаимодействия менин-MLL.

В черный 384-луночный титрационный микропланшет с несвязывающей поверхностью добавляли 50 нл 160X тестируемого соединения в DMSO и 4 мкл 2X менина в аналитическом буфере (40 мМ ТрисHCl, рН 7,5, 50 мМ NaCl, 1 мМ DTT и 0,001% Tween 20). После инкубирования тестируемого соединения и менина в течение 10 мин при температуре окружающей среды добавляли 4 мкл 2X пептида MBM1,

- 148 045364 меченного FITC (FITC-e-aHTu-SARWRFPARPGT-NH₂), в аналитическом буфере, титрационный микропланшет центрифугировали при 1000 об/мин в течение 1 мин, и анализируемые смеси инкубировали в течение 15 мин при температуре окружающей среды. Относительное количество комплекса менин-FITCMBM1, присутствующего в анализируемой смеси, определяли путем измерения поляризации флуоресценции (FP) FITC-метки с помощью планшет-ридера BMG PHERAstar (возбуждение при 485 нм/испускание при 520 нм) при температуре окружающей среды. Конечные концентрации реагентов в анализе связывания составляют 100 нМ менина, 5 нМ пептида MBM1, меченного FITC, и 0,625% DMSO в аналитическом буфере. Процедуры титрования тестируемых соединений для исследования их дозозависимого эффекта проводили с использованием схемы трехкратных серийных разведений с 11 точками, начиная с 31 мкМ.

Действенность соединений определяли путем первоначального расчета % ингибирования для каждой концентрации соединения в соответствии с уравнением 1 % ингибирования = ((НС - LC) - (рр^{соединение} - LC)) / (НС - LC)) * 100 (уравн. 1), где LC и НС представляют собой значения FP в анализе в присутствии или в отсутствие насыщающей концентрации соединения, которое конкурирует с FITC-MBM1 за связывание с менином, и FP соединение представляет собой измеренное значение FP в присутствии тестируемого соединения. Значения FP HC и LC представляют собой средние значения для по меньшей мере 16 повторностей на планшет. Для каждого тестируемого соединения значения % ингибирования откладывали на графике в зависимости от логарифма концентрации тестируемого соединения, и значение IC₅₀ получали в результате аппроксимации этих данных в соответствии с уравнением 2 % ингибирования = нижнее + (верхнее-нижнее)/(1+10^Л((1о^С5о-1од[соед.])*А)) (уравн. 2);

где нижнее и верхнее представляют собой соответственно нижнюю и верхнюю асимптоты кривой зависимости доза-эффект, IC₅₀ представляет собой концентрацию соединения, которая дает 50% ингибирование сигнала, и h представляет собой коэффициент Хилла.

2) Анализ пролиферации.

Антипролиферативный эффект тестируемых соединений, ингибирующих белок-белковое взаимодействие менин-MLL, оценивали в линиях лейкозных клеток человека. Линии клеток MV-4-11 и MOLM14 содержат транслокации MLL и экспрессируют слитые белки на основе MLL MLL-AF4 и MLLAF9 соответственно, а также белок дикого типа со второго аллеля. Следовательно, линии клеток MV-411 и MOLM14 с перестройкой MLL характеризуются профилями экспрессии генов HOXA/MEIS1, сходными с таковыми в стволовых клетках. K562 и KG1 применяли в качестве контрольных линий клеток, содержащих два аллеля MLL дикого типа, с целью исключения соединений, демонстрирующих общие цитотоксические эффекты.

MV-4-11 и MOLM14 культивировали в RPMI-1640 (Sigma Aldrich), дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (HyClone), 2 мМ L-глутамина (Sigma Aldrich) и 50 мкг/мл гентамицина (Gibco). K562 размножали в RPMI-1640 (Sigma Aldrich), дополненной 20% фетальной бычьей сывороткой (HyClone), 2 мМ L-глутамина (Sigma Aldrich) и 50 мкг/мл гентамицина (Gibco). KG1 культивировали в MDM Искова (Gibco), дополненной 20% фетальной бычьей сывороткой (HyClone), 2 мМ L-глутамина (Sigma Aldrich) и 50 мкг/мл гентамицина (Gibco). Клетки поддерживали при 0,3-2,5 миллиона клеток на мл во время культивирования, и количество пассажей не превышало 25.

С целью оценки антипролиферативных эффектов 1500 клеток MV-4-11, 300 клеток MOLM14, 750 клеток K562 или 1300 клеток KG1 высевали в 200 мкл среды на лунку в 96-луночные круглодонные планшеты со сверхнизкой адгезией (Costar, номер по каталогу 7007). Количество клеток для посева выбирали с учетом кривых роста для обеспечения линейного роста на протяжении эксперимента. Добавляли тестируемые соединения в различных концентрациях, и содержание DMSO нормализовали до 0,3%. Клетки инкубировали в течение 8 дней при 37°C и 5% CO2. Рост сфероидоподобных структур отслеживали в режиме реального времени путем визуализации живых клеток (IncuCyteZOOM, Essenbio, объектив с увеличением 4x) с получением одного изображения каждые четыре часа в течение 8 дней. Конфлюэнтность (%) в качестве показателя размера сфероидов определяли с помощью инструмента комплексного анализа.

С целью определения кумулятивного эффекта тестируемых соединений с течением времени рассчитывали площадь под кривой (AUC) на графике зависимости конфлюэнтности от времени. Конфлюэнтность в начале эксперимента (t = 0) использовали в качестве исходного уровня для расчета AUC.

Абсолютные значения IC₅₀ рассчитывали в соответствии со следующей процедурой:

% от контроля = (AUC образца/AUC контроля) х 100,

AUC контроля = среднее значение AUC для контрольных образцов (клетки без соединения/с DMSO в качестве контроля растворителя).

В отношении графика зависимости % от контроля от концентрации соединения применяли подбор

- 149 045364 нелинейной кривой, используя для подбора (обычный) метод наименьших квадратов. На основании этого рассчитывали абсолютное значение IC₅₀ (полумаксимальную ингибирующую концентрацию тестируемого соединения, обуславливающую 50% антипролиферативный эффект относительно контроля растворителя).

3) Анализ взаимодействия менин-MLL методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF).

В необработанный белый 384-луночный титрационный микропланшет добавляли 40 нл 200X тестируемого соединения в DMSO и 4 мкл 2X менина, меченного хелатом тербия (см. ниже получение), в аналитическом буфере (40 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 50 мМ NaCl, 1 мМ DTT и 0,05% Pluronic F-127). После инкубирования тестируемого соединения и менина, меченного хелатом тербия, в течение 5 мин при температуре окружающей среды добавляли 4 мкл 2X пептида MBM1, меченного FITC (FITC-в-аланинSARWRFPARPGT-NH2), в аналитическом буфере, титрационный микропланшет центрифугировали при 1000 об/мин в течение 1 мин, и анализируемые смеси инкубировали в течение 15 мин при температуре окружающей среды. Относительное количество комплекса менин FITC-MBM1, присутствующего в анализируемой смеси, определяли путем измерения гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF) для донорно-акцепторной пары флуорофоров тербий/FITC с помощью планшет-ридера BMG PHERAstar (возбуждение при 337 нм/испускание тербия при 490 нм/испускание FITC при 520 нм) при температуре окружающей среды. Степень резонансного переноса энергии флуоресценции (значение HTRF) выражается в виде соотношения значений интенсивности испускания флуоресценции для флуорофоров FITC и тербия (F^em 520 нм/Р™ 490 нм). Конечные концентрации реагентов в анализе связывания составляют 100 пМ менина, меченного хелатом тербия, 75 нМ пептида MBM1, меченного FITC, и 0,5% DMSO в аналитическом буфере. Процедуры титрования тестируемых соединений для исследования их дозозависимого эффекта проводили с использованием схемы трехкратных серийных разведений с 11 точками, начиная с 31 мкМ.

Действенность соединений определяли путем первоначального расчета % ингибирования для каждой концентрации соединения в соответствии с уравнением 1:

% ингибирования = ((НС - LC) - (HTRF^coe№“ - LC)) / (НС - LC)) * 100 (уравн. 7);

где LC и HC представляют собой значения HTRF в анализе в присутствии или в отсутствие насыщающей концентрации соединения, которое конкурирует с FITC-MBM1 за связывание с менином, и HTRF^оe^сдинeниe представляет собой измеренное значение HTRF в присутствии тестируемого соединения. Значения HTRF HC и LC представляют собой средние значения для по меньшей мере 16 повторностей на планшет. Для каждого тестируемого соединения значения % ингибирования откладывали на графике в зависимости от логарифма концентрации тестируемого соединения, и значение IC₅₀ получали в результате аппроксимации этих данных в соответствии с уравнением 2 % ингибирования = нижнее + (вepxнee-нижнee)/(l+10^Λ((log/C5o-log[coeд.])*/2)) (уравн. 2);

Получение менина, меченного криптатом тербия. Менин (аминокислоты 1-610-6xHis-метка) метили криптатом тербия следующим образом. Буфер для 2 мг менина заменяли на 1х фосфатно-солевой буферный раствор. Инкубировали 16 мкМ менина с NHS-криптат тербия (Cisbio Bioassays, Бедфорд, Массачусетс) в 4-кратном молярном избытке в течение 2 часов при комнатной температуре. Меченый белок очищали от свободной метки путем прогона реакционной смеси через колонку Superdex 200 Increase 10/300 GL при 0,75 мл/мин. Пиковые фракции собирали, разделяли на аликвоты и замораживали при 80°C.

- 150 045364

Последовательность белка менина (SEQ IC NO: 1)

MGLKAAQKTLFPLRSroDVVRLFAAELGREEPDLVLLSLVLGFVEHFLAVNRVI PTNVPELTFQPSPAPDPPGGLTYFPVADLSIIAALYARFTAQIRGAVDLSLYPRE GGVSSRELVKKVSDVIWNSLSRSYFKDRAHIQSLFSFITGTKLDSSGVAFAVVG ACQALGLRDVHLALSEDHAWVVFGPNGEQTAEVTWHGKGNEDRRGQTVNA GVAERSWLYLKGSYMRCDRKMEVAFMVCAINPSIDLHTDSLELLQLQQKLLW LLYDLGHLERYPMALGNLADLEELEPTPGRPDPLTLYHKGIASAKTYYRDEHI YPYMYLAGYHCRNRNVREALQAWADTATVIQDYNYCREDEEIYKEFFEVAN DVIPNLLKEAASLLEAGEERPGEQSQGTQSQGSALQDPECFAHLLRFYDGICKW EEGSPTPVLHVGWATFLVQSLGRFEGQVRQKVRIVSREAEAAEAEEPWGEEAR EGRRRGPRRESKPEEPPPPKKPALDKGLGTGQGAVSGPPRKPPGTVAGTARGPE GGSTAQVPAPAASPPPEGPVLTFQSEKMKGMKELLVATKINSSAIKLQLTAQSQ VQMKKQKVSTPSDYTLSFLKRQRKGLHHHHHH

- 151 045364

Таблица 4

Биологические данные из анализа поляризации флуоресценции (FP) менина (1), анализа взаимодействия менин-MLL методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF) (3) и анализа пролиферации (2). № соед. означает номер соединения. Значения в табл. 4 представляют собой усредненные значения для всех измерений

№ соед.	(1) Анализ FP менина (1С₅₀(мкМ))	(3) Анализ HTRF менина (1С₅₀(нМ))	(2) Анализ сфероидов MV-4-11 (1С₅₀(мкМ))	(2) Анализ сфероидов MOLM14 (1С₅₀(мкМ))	(2) Анализ сфероидов К562 (1С₅₀(мкМ))	(2) Анализ сфероидов KG1 (1С₅₀(мкМ))
18	0,14	227	3,9	7,7	>15
1	0,056	144	3,7	4,6	>15
3	0,10	216	3,8	5,6	~15
14	о,и	178	2,2	4,9
20а	0,076	13	0,96	5	>15
21а	0,49	745	6,9	12,1	>15
21b	0,13	389	4,2	4,6	>15
19	0,81	1960
5	0,67	600	6,4	30,6	>15
12	0,63	2247	>15	>15	>15
13	0,042	39	0,73	4,2	>15
И	0,76	2374
10	2,31
9	0,84	1579
8	0,79	2525
6	0,24	339	2,4	10,1	>15
7	0,73	1216
4	0,73	3164
2	0,39	706	4,9	14,6	>15
15	0,57	471	14,0	>15	>15
22	0,069	12	0,55	2,0	>15
23	0,95	1208
24	0,49	1486	9,1	>15

- 152 045364

25	0,31	1465	3,8	7,2
26	0,16	143	10,4	>15
197	0,30	541	7,3	>15
86	0,092	102	2,6	11,3	>15
133	0,12	385	2,1	>15
30	0,53	839	9,2	>15
88	0,32	486	>15	>15
89	0,045	31	1,3	10,5
90	ο,ιι	288	11,1	>15
74	0,12	211	2,0	6,1
75	2,36
34	0,72	902
198	0,14	178	5,1	12,4
199	0,41	1196	12,9	>15
35	0,99	2375
36	0,4	777
37	0,17	177	1,5	3,1
76	0,68	901
40	0,84	1465
195	1,07	1536
41	0,63	950
273	0,021	8	0,08	0,86	10,3	12
200	ο,ιι	190	3,4	10,3

- 153 045364

201	1075	12,7	>15
202	490	>15
137	1097	ЮЛ	>15
44	344	4,1	>15
82	9	0,38	1,8	>15	>15
105	15	0,67	3,4	>15
108	753	>15
109	571	8,1
45	330	3,4
46	448	4,1
47	669
48	483	2,0
49	310	2,1
50	665
110	236	4,0
111	394	9,3
77	191	12,1
54	342	3,7
56	304	4,9
112	1540
274	7	0,36	2,3	>15	>15
203	422	7,2
145	37	1,7	7,3

- 154 045364

146	46	2,4
147	341	8,2
57	179	4,2	8,6
148	5	0,33
211	13	0,68	3,5		12,5
213	149	1,9
214	17	0,76	1,4		>15
150	60	2,0
220	75	0,65	4,7	>15	>15
221	1157
222	4	0,2
223	496	6,1
228	238
58	185	2,7
59	1245
230	44
231	107
232	914
233	782
234	1045
235	23	0,71
236	1041
237	52	1,2

- 155 045364

238	659
154	328
155	69	0,7	1,2		>15
243	249
244	848
245	10	0,32	2		>15
246	284
247	19	0,45	2,1	>15	>15
248	549
61	513
249	912
250	190
251	1660
252	1007
253	323
254	861
156	21	0,79
157	101
158	281
159	1174
62	28	0,64	4		>15
161	187	4,2
258	3083

- 156 045364

193	25	0,65	1,7	>15	>15
162	77	3,1
63	201
196	4	о,з	1,1	>15	>15
163	277
164	1125
259	20	1,3
64	1139
65	65	3,2
166	79	2,4
167	1126
168	3	0,19	0,86	11,9	15
169	176	3,5
170	138	4,3
84	20	0,58	1,5		>15
171	159	3,1
66	26	0,95	0,69		>15
172	124	2,9
173	96	3,2
174	1386
67	108	4,9
179	95	1,3
180	130	1,9

- 157 045364

69	186	1,2
182	61	0,78	1,9	>15
183	103	1,3
71	48	1,1
184	73	0,97		>15
186	91	1,3
187	72	1,4
269	8	0,67	4,6	>15
188	115	1,5
189	108	0,92		>15
270	499
271	623
190	524
191	1263
192	619
312	339
313	159	3,6
315	21	0,32	1,5	>15
316	20	θ,4	0,96	>3,7
288	68	1,4
289	6	0,21	1,3
290	25	0,47	1,2
291	13	0,66	1,2	>15

- 158 045364

292		12	0,29	1,5	>15
294		82	1,83
293		81	1,67
307		11	0,28	1,5	10,7
299		57	3,18
295		34	1,16	6,7
303		6	0,32	1,02
296		200	4,89
309		16	0,74	1,6
297		242
304b		440
304a		15	0,44	1,3	>15
317		248	0,77		>15
318		72	1,09
298		122	4,23
314		25	0,73
320		259	1,37
321		210	1,1
322		200	1,7
323		47	0,75
324		143	1,9
31	0,087	116	1,3	9,8
224		2365
185		161	1,3
311		85	2,4

- 159 045364

Таблица 5 Биологические данные из анализа поляризации флуоресценции (FP) менина (1), анализа взаимодействия менин-MLL методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF) (3) и анализа пролиферации (2). № соед. означает номер соединения. Значения в табл. 5 представляют собой значения для отдельных измерений (не усредненные): в случае, если значение определяли более 1 раза, каждое ________________ значение указано, отдельно в табл. 5_____________________

№ соед.	(1) Анализ FP менина (1С₅₀(мкМ))	(3) Анализ HTRF менина (1С₅₀(нМ))	(2) Анализ сфероидов MV-4-11 (1С₅₀(мкМ))	(2) Анализ сфероидов MOLM14 (1С₅₀(мкМ))	(2) Анализ сфероидов К562 (1С₅₀(мкМ))	(2) Анализ сфероидов KG1 (1С₅₀(мкМ))
20b	0,038	7	0,51	>15 2,5	>15	>15
16	0,134	63	4,7 >15	9,3 8,7	>15
17	0,054	14	4,9 0,76 0,84	3,4 2,3		И
28	0,517	1262	0,5 10,8 10,9	3,2 >15
29	0,346	1438	1,8	10,8
			>15 9,9	>15
87	0,048	28	4,1 0,63 0,58 0,63 0,68 0,52	8,0 2,8 4,6	>15
138		62	-15,4 1,0 1,4	7

Claims

1. Соединение формулы (I)

или его таутомер или стереоизомерная форма, где

R¹ представляет собой CF3;

и

--L²-R³ выбран из (a), (b), (c), (d), (f) или (g), где (a) L² выбран из группы, состоящей из >CR^4aR^4b и -CHR^4aCHR⁵-; где

L² связан с атомом азота L¹; R^4a выбран из группы, состоящей из водорода; -C(=O)NR^7aR^7b; C_1-4алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR⁸ и -NR^9aR^9b; и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода; -OR⁶ и C_1-4αлкила;

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; или R^4a и R^4b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют C_3-5циклоαлкил или связанный по С 4-6-членный гетероциклил, содержащий атом кислорода; где каждый из R⁶, R^7a, R^7b, R⁸, R^9a и R^9b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С_2-4алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-4алкила; и

- 162 045364 r12> ^e^izb

3 tl^12C · 12a 12b 12

R³ представляет собой ' где R^12a, R^12b и R^12c представляет собой С_1-6алкил; или (c) --L2-R³ представляет собой Cl_-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; или (d) L² представляет собой O, и R³ представляет собой -CH₂-Ar; или

R^1B“ _z0 (f) --L2-R³ представляет собой ' где

R¹⁸ выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4 алкила;

R^18a выбран из группы, состоящей из водорода и фтора;

R^18b выбран из группы, состоящей из фтора, -OC₁.₄алкила и C₁.₄алкила, необязательно замещенного

1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой атом фтора; или

R^18a и R^18b связаны с одним и тем же атомом углерода и вместе образуют C₃.₅циклоалкил; или

(g) --L²-R³ представляет собой ' и где

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пири дила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, 4или 5-тиазолила, изотиазолила и изоксазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из индолила, имидазопиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и C₁.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN и C₁.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶; где каждый из R²⁴, R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; C₁.₄алкила и C₂.₄алкила, замещенного -NR^28aR^28b; где

R^28a и R^28b представляют собой водород; или его фармацевтически приемлемая соль,

- 163 045364 при условии, что исключены следующие соединения и их фармацевтически приемлемые соли присоединения:

- 164 045364

- 165 045364

- 166 045364

- 167 045364

2. Соединение по п.1, где:

Аралкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR⁸ и

- 168 045364

-NR^9aR^9b; и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода; -OR⁶ и C₁.₄алкила;

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; или R^4a и R^4b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют C₃.₅цuклоалкил или связанный по С 4-6-членный гетероциклил, содержащий атом кислорода; где каждый из R⁶, R^7a, R^7b, R⁸, R^9a и R^9b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С2.₄алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C₁.₄αлкила; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Het² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) L² представляет собой >CR^4cR^4d, где каждый из R^4c и R^4d представляет собой водород; и _R«_a

3 12 12b 12

R³ представляет собой / где каждый из R^12a, R^12b и R^12c представляет собой C₁.₆алкил;

или (c) --L2-R³ представляет собой C₁.₆алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; или (d) L² представляет собой O и R³ представляет собой -CH2-Ar; или

2 3 ' (f) --L2-R³ представляет собой ' где

R¹⁸ представляет собой водород; или _ , 2 .· ¹ , (g) --L -R представляет собой ' и где

Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и С1.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, 4или 5-тиазолила, изотиазолила и изоксазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN и С1.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из азетидинила, пирролидини ла и пиперидинила; где каждый из R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С1.₄алкила.

3. Соединение по п.1 или 2, где

R¹ представляет собой CF3;

(a) L² представляет собой >CR^4aR^4b; где

R^4a выбран из группы, состоящей из водорода; -C(=O)NR^7aR^7b; С1.₄алкила и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота; и

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; где каждый из R^7a и R^7b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; С1.₄алкила и С₂.₄алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С1.₄алкила; и

R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹, Het² и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) L² представляет собой >CR^4cR^4d, где R^4c и R^4d представляет собой водород; и _R12_B ίΐ' ·

R³ представляет собой ' где R^12a, R^12b и R^12c представляет собой С1.₆алкил; или

- 169 045364 (c) --L2-R³ представляет собой С_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; или (d) L² представляет собой O и R³ представляет собой -CH₂-Ar; или (f) --L2-R³ представляет собой ' где

R¹⁸ представляет собой водород; или (g) --L²-R³ представляет собой ' и где

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила и 4- или 5-тиазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C_1-4алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из азетидинила, пирролидини ла и пиперидинила; где каждый из R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила.

4. Соединение по любому из пп.1-3, где

R¹ представляет собой CF₃;

(a) L² представляет собой >CH₂ и R³ выбран из группы, состоящей из Ar, Het¹ и 7-10-членной насыщенной спирокарбобициклической системы; или (b) --L²-R³ представляет собой C_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, представляющими собой атом фтора; и где

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила и 4- или 5-тиазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C_1-4алкила.

5. Соединение по любому из пп.1-4, где

R¹ представляет собой CF₃;

R² представляет собой водород;

L¹ представляет собой связанную по N 7-10-членную насыщенную спирогетеробициклическую систему, содержащую один или два атома N, выбранную из группы, состоящей из (a), (b), (c), (d), (e), (f) и (g)

- 170 045364

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 4-, 5или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила и имидазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из имидазопиридинила, в частности имидазо[1,2-a]пиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C_1-4алкила.

6. Соединение по п.1, где

R¹ представляет собой CF₃;

R² выбран из группы, состоящей из водорода и CH₃;

--L²-R³ выбран из (a), (b), (d), (e) или (f), где:

L² связан с атомом азота L¹; R^4a выбран из группы, состоящей из -C(=O) NR^7aR^7b; C_1-4алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR⁸ и -NR^9aR^9b; и связанного по C 4-7-членного неароматического гетероциклила, содержащего по меньшей мере один атом азота;

R^4b выбран из группы, состоящей из водорода и метила; или R^4a и R^4b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют C_3-5циклоалкил или связанный по С 4-6-членный гетероциклил, содержащий атом кислорода; где каждый из R⁶, R^7a, R^7b, R⁸, R^9a и R^9b независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С_2-4алкила, замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -OR¹¹ и -NR^10aR^10b; где каждый из R^10a, R^10b и R¹¹ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила; и

R¹²⁰ * k^12c ·

R³ представляет собой ' где R^12a, R^12b и R^12c представляет собой C_1-6алкил; или (d) L² представляет собой O и R³ представляет собой -CH₂-Ar; или _r ¹⁸?Y \ _ZO (f) --L2-R³ представляет собой > где

R¹⁸ выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4алкила; и

R^18a и R^18b связаны с одним и тем же атомом углерода и вместе образуют C_3-5циклоалкил; и где

Ar представляет собой фенил, который может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -OR²⁴ и C_1-4алкила, необязательно замещенного -OR²⁶;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, 4- или 5-тиазолила,

- 171 045364 изотиазолила и изоксазолила; или бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из индолила и имидазопиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и С^алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN и С1.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶; где каждый из R²⁴, R²⁶, R^27a и R^27b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; С1.₄алкила и Сг^алкила, замещенного -NR^28aR^28b; где

R и R представляет собой водород.

7. Соединение по п.1, где —L²-R³ представляет собой (а);

R³ представляет собой Het¹ или Het²;

Het¹ представляет собой моноциклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, 4-, 5- или 6-пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, пирролила, пиразолила и имидазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, -OR²⁴ и С1.₄алкила, необязательно замещенного заместителем, выбранным из группы, состоящей из -CN, -OR²⁶ и -NR^27aR^27b; и

Het² представляет собой неароматический гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила и пиперидинила; каждый из которых может быть необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN и С1.₄алкила, необязательно замещенного -OR²⁶.

8. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-7 в качестве ингибитора белок-белковых взаимодействий менин-MLL, где MLL представляет собой гистон-метилтрансферазу, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

9. Способ получения фармацевтической композиции по п.8, включающий смешивание фармацевтически приемлемого носителя с терапевтически эффективным количеством соединения по любому из пп. 1 -7.

10. Применение соединения по любому из пп.1-7 в качестве лекарственного препарата для лечения, предупреждения, уменьшения интенсивности, контроля или снижения риска развития нарушений, ассоциированных с взаимодействием менина с белками MLL и онкогенными белками слияния на основе MLL.

11. Применение соединения по любому из пп.1-7 для предупреждения или лечения рака, миелодиспластического синдрома (MDS) и диабета.

12. Применение по п.11, где рак выбран из видов лейкоза, миеломы или рака, представляющего собой солидную опухоль, такого как рак предстательной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак толстой кишки, рак печени, меланома и глиобластома.

13. Применение по п.12, где лейкоз выбран из видов острого лейкоза, видов хронического лейкоза, видов миелоидного лейкоза, видов миелогенного лейкоза, видов лимфобластного лейкоза, видов лимфоцитарного лейкоза, видов острого миелогенного лейкоза (AML), видов хронического миелогенного лейкоза (CML), видов острого лимфобластного лейкоза (ALL), видов хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), видов Т-клеточного пролимфоцитарного лейкоза (T-PLL), лейкоза из больших гранулярных лимфоцитов, волосатоклеточного лейкоза (HCL), видов лейкоза с перестройкой MLL, видов лейкоза, ассоциированных с MLL-PTD, видов лейкоза с амплификацией MLL, видов MLL-положительного лейкоза и видов лейкоза, характеризующихся профилями экспрессии генов HOX/MEIS1.

14. Способ лечения или предупреждения нарушения, выбранного из рака, миелодиспластического синдрома (MDS) и диабета, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-7 или фармацевтической композиции по п.8.

15. Способ по п.14, где нарушение представляет собой рак.

16. Способ по п.15, где рак выбран из видов лейкоза, миеломы или рака, представляющего собой солидную опухоль, такого как рак предстательной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак толстой кишки, рак печени, меланома и глиобластома.

17. Способ по п.15 или 16, где лейкоз выбран из видов острого лейкоза, видов хронического лейкоза, видов миелоидного лейкоза, видов миелогенного лейкоза, видов лимфобластного лейкоза, видов лимфоцитарного лейкоза, видов острого миелогенного лейкоза (AML), видов хронического миелогенного лейкоза (CML), видов острого лимфобластного лейкоза (ALL), видов хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), видов Т-клеточного пролимфоцитарного лейкоза (T-PLL), лейкоза из больших гранулярных лимфоцитов, волосатоклеточного лейкоза (HCL), видов лейкоза с перестройкой MLL, видов лейкоза, ассоциированных с MLL-PTD, видов лейкоза с амплификацией MLL, видов MLL-положительного лейкоза и видов лейкоза, характеризующихся профилями экспрессии генов HOX/MEIS1.