EA045206B1 - Способы и композиции для лечения аллергических заболеваний глаз - Google Patents
Способы и композиции для лечения аллергических заболеваний глаз Download PDFInfo
- Publication number
- EA045206B1 EA045206B1 EA201992626 EA045206B1 EA 045206 B1 EA045206 B1 EA 045206B1 EA 201992626 EA201992626 EA 201992626 EA 045206 B1 EA045206 B1 EA 045206B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- amino acid
- acid sequence
- siglec
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 73
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 title claims description 63
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 title claims description 59
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 title claims description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 105
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 371
- 101000863884 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 8 Proteins 0.000 claims description 165
- 102000051056 human SIGLEC8 Human genes 0.000 claims description 107
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 83
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 49
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 claims description 49
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 48
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 43
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 42
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 39
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 claims description 38
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 30
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 29
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 claims description 26
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 22
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 22
- 229930182474 N-glycoside Natural products 0.000 claims description 21
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 208000018464 vernal keratoconjunctivitis Diseases 0.000 claims description 19
- 206010069664 atopic keratoconjunctivitis Diseases 0.000 claims description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 16
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 12
- -1 bepostatin Chemical compound 0.000 claims description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 11
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 10
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 9
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 8
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 8
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 claims description 8
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 claims description 7
- 230000007803 itching Effects 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 claims description 6
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 claims description 6
- 238000007790 scraping Methods 0.000 claims description 6
- 206010051625 Conjunctival hyperaemia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010010726 Conjunctival oedema Diseases 0.000 claims description 5
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 206010023644 Lacrimation increased Diseases 0.000 claims description 5
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000004317 lacrimation Effects 0.000 claims description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 5
- MBUVEWMHONZEQD-UHFFFAOYSA-N Azeptin Chemical compound C1CN(C)CCCC1N1C(=O)C2=CC=CC=C2C(CC=2C=CC(Cl)=CC=2)=N1 MBUVEWMHONZEQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 claims description 4
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 claims description 4
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 4
- ZCVMWBYGMWKGHF-UHFFFAOYSA-N Ketotifene Chemical compound C1CN(C)CCC1=C1C2=CC=CC=C2CC(=O)C2=C1C=CS2 ZCVMWBYGMWKGHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010051235 Madarosis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010042736 Symblepharon Diseases 0.000 claims description 4
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 claims description 4
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 claims description 4
- 229960004574 azelastine Drugs 0.000 claims description 4
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 claims description 4
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 claims description 4
- 229960003449 epinastine Drugs 0.000 claims description 4
- WHWZLSFABNNENI-UHFFFAOYSA-N epinastine Chemical compound C1C2=CC=CC=C2C2CN=C(N)N2C2=CC=CC=C21 WHWZLSFABNNENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 4
- 229960004958 ketotifen Drugs 0.000 claims description 4
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 claims description 4
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 134
- 102100031755 Pre-mRNA 3'-end-processing factor FIP1 Human genes 0.000 description 74
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 70
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 65
- 102100029964 Sialic acid-binding Ig-like lectin 8 Human genes 0.000 description 57
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 51
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 50
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 50
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 46
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 43
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 42
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 36
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 33
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 32
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 31
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 31
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 29
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 28
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 28
- 206010018258 Giant papillary conjunctivitis Diseases 0.000 description 25
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 25
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 22
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 20
- 206010057380 Allergic keratitis Diseases 0.000 description 19
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 18
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 17
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 17
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 16
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 13
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 12
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 12
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 10
- 102100038341 Blood group Rh(CE) polypeptide Human genes 0.000 description 10
- 101100194643 Rhodosporidium toruloides RHA2 gene Proteins 0.000 description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 9
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 8
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 8
- 101150065732 tir gene Proteins 0.000 description 8
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 7
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 7
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 6
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 6
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000035478 Interatrial communication Diseases 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 6
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 6
- 206010003664 atrial septal defect Diseases 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 238000000322 laser mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 5
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 5
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 5
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 5
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 5
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 5
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 5
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 4
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 4
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 4
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- 244000036975 Ambrosia artemisiifolia Species 0.000 description 3
- 235000003129 Ambrosia artemisiifolia var elatior Nutrition 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 3
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 3
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 3
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 235000003484 annual ragweed Nutrition 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 235000006263 bur ragweed Nutrition 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000003488 common ragweed Nutrition 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 3
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 3
- 239000003316 glycosidase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 3
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 3
- 235000009736 ragweed Nutrition 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 229940083542 sodium Drugs 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002849 thermal shift Methods 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 101710154825 Aminoglycoside 3'-phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 2
- 101000666856 Homo sapiens Vasoactive intestinal polypeptide receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 2
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100038388 Vasoactive intestinal polypeptide receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 2
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 2
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 229960004436 budesonide Drugs 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000008267 fucoses Chemical class 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 201000005111 ocular hyperemia Diseases 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 2
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 2
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N (2s)-5-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC1CC[C@@H](C(O)=O)N1 KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N 0.000 description 1
- ZNOVTXRBGFNYRX-STQMWFEESA-N (6S)-5-methyltetrahydrofolic acid Chemical compound C([C@@H]1N(C=2C(=O)N=C(N)NC=2NC1)C)NC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 ZNOVTXRBGFNYRX-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGPLTODNUVGFL-ZWAKLXPCSA-N 11-epi-prostaglandin F2alpha Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O PXGPLTODNUVGFL-ZWAKLXPCSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- HTCSFFGLRQDZDE-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-2-phenylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)(C)C1=CC=CC=C1 HTCSFFGLRQDZDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229940086568 Alpha mannosidase I inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 241000713842 Avian sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 101000959414 Bacillus thermoamyloliquefaciens Alpha-glucosidase 2 Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000009458 Carcinoma in Situ Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- BYMMIQCVDHHYGG-UHFFFAOYSA-N Cl.OP(O)(O)=O Chemical compound Cl.OP(O)(O)=O BYMMIQCVDHHYGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 206010010736 Conjunctival ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 241000238740 Dermatophagoides pteronyssinus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 101100409165 Escherichia coli (strain K12) prc gene Proteins 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 206010015958 Eye pain Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 241000700662 Fowlpox virus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 241000699694 Gerbillinae Species 0.000 description 1
- YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N Glu-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 229940122069 Glycosidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101100508941 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) ppa gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- YINZYTTZHLPWBO-UHFFFAOYSA-N Kifunensine Natural products COC1C(O)C(O)C(O)C2NC(=O)C(=O)N12 YINZYTTZHLPWBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100407828 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) ptr-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010079246 OMPA outer membrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021079 Ornithine decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241000282516 Papio anubis Species 0.000 description 1
- 241001057811 Paracoccus <mealybug> Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 108090000316 Pitrilysin Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001363 Polidocanol Polymers 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 229920002701 Polyoxyl 40 Stearate Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 241000677647 Proba Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710127332 Protease I Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000496314 Pyrrhobryum medium Species 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000612182 Rexea solandri Species 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N Stachyose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)O1 UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Natural products C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710137710 Thioesterase 1/protease 1/lysophospholipase L1 Proteins 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N Tyr-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N)C(=O)O KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 244000000188 Vaccinium ovalifolium Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 241000863000 Vitreoscilla Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 239000013572 airborne allergen Substances 0.000 description 1
- 230000009285 allergic inflammation Effects 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N alpha-Lipoic acid Natural products OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019199 alpha-Mannosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010012864 alpha-Mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940126574 aminoglycoside antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960001716 benzalkonium Drugs 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007478 beta-N-Acetylhexosaminidases Human genes 0.000 description 1
- 108010085377 beta-N-Acetylhexosaminidases Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000005460 biophysical method Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940046731 calcineurin inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003999 cyclitols Chemical class 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical compound CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000000850 decongestant Substances 0.000 description 1
- 229940124581 decongestants Drugs 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- PIZLBWGMERQCOC-UHFFFAOYSA-N dibenzyl carbonate Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PIZLBWGMERQCOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L disodium;2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCC(C([O-])=O)(C(C([O-])=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 229950003468 dupilumab Drugs 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCO SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 208000027993 eye symptom Diseases 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 101150023212 fut8 gene Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 108010050669 glucosidase I Proteins 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 210000005256 gram-negative cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006698 hydrazinolysis reaction Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940125369 inhaled corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007925 intracardiac injection Substances 0.000 description 1
- 230000008863 intramolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229940126602 investigational medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- OIURYJWYVIAOCW-VFUOTHLCSA-N kifunensine Chemical compound OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]2NC(=O)C(=O)N12 OIURYJWYVIAOCW-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- 229950006462 lauromacrogol 400 Drugs 0.000 description 1
- 229960001828 levocabastine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000012976 mRNA stabilization Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 208000008585 mastocytosis Diseases 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229960004114 olopatadine Drugs 0.000 description 1
- JBIMVDZLSHOPLA-LSCVHKIXSA-N olopatadine Chemical compound C1OC2=CC=C(CC(O)=O)C=C2C(=C/CCN(C)C)\C2=CC=CC=C21 JBIMVDZLSHOPLA-LSCVHKIXSA-N 0.000 description 1
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099429 polyoxyl 40 stearate Drugs 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 108010043383 protease V Proteins 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007391 self-medication Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 1
- 201000008261 skin carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical group [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008137 solubility enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N stachyose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)O1 UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical class CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 101150057627 trxB gene Proteins 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229940045136 urea Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
- 230000007332 vesicle formation Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N vinyl-ethylene Natural products C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Description
Перекрестные ссылки на родственные заявки
По данной заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/502479, поданной 5 мая 2017 г., раскрытие которой включено в настоящее описание во всей своей полноте в качестве ссылки.
Представление списка последовательности в текстовом файле ASCII
Содержание следующего представления в текстовом файле ASCII полностью включено в настоящее описание в виде ссылки: машиночитаемая форма (CRF) списка последовательностей (имя файла 701712000740SEQLIST.TXT:, дата записи: 3 мая 2018 г., размер: 115 КБ).
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам лечения аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) путем введения антител, которые связываются с человеческим сиглеком-8, и композиций, содержащих указанные антитела.
Уровень техники
Аллергические заболевания глаз входят в число наиболее распространенных заболеваний глаз. В течение последних десятилетий количество людей с аллергическими заболеваниями глаз возросло, и предполагается, что в настоящее время этими заболеваниями страдают по меньшей мере 15-20% населения (La Rosa, M. et al. (2013) Ital. J. Pediatr. 39:18). Симптомы варьируют по степени тяжести: от раздражения, покраснения и отека конъюнктивы до катаракты и потери зрения.
Аллергические заболевания глаз охватывают ряд специфических клинических образований с различными механизмами действия. Предполагается, что задействованы механизмы, опосредованные IgE и не опосредованные IgE, а также многочисленные цитокины, хемокины и сигнальные пути (La Rosa, M, et al. (2013) Ital. J. Pediatr. 39:18). При некоторых формах аллергического заболевания глаз, таких как атопический кератоконъюнктивит (Morgan, S. J. et al. (1991) Eye 5:729-735), который может привести к развитию катаракты и потере зрения, наблюдается гиперплазия тучных клеток и наличие эозинофилов.
Сохраняется потребность в новых терапевтических подходах, которые направлены на лечение воспаления, лежащего в основе аллергических заболеваний глаз.
Все ссылки, цитируемые в настоящем описании, включая заявки на патенты, публикации патентов и научную литературу, включены в настоящее описание во всей их полноте в виде ссылки, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и отдельно указана как включенная в качестве ссылки.
Сущность изобретения
Для удовлетворения этой и других потребностей в настоящем изобретении предлагаются, помимо прочего, способы лечения или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) путем введения антител, которые связываются с человеческим сиглеком-8, и/или композиций, содержащих указанные антитела.
Соответственно, некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к способам лечения или профилактики аллергического заболевания глаз у индивидуума, включающим введение индивидууму эффективного количества антитела, которое связывается с человеческим сиглеком-8.
Другие аспекты настоящего изобретения относятся к способам лечения или профилактики аллергического заболевания глаз у индивидуума, включающим введение индивидууму эффективного количества композиции, содержащей антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум страдает аллергическим конъюнктивитом. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума сезонный аллергический конъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума круглогодичный аллергический конъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума атопический кератоконъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума весенний кератоконъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума гигантский папиллярный конъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления индивидуум использует контактные линзы. В некоторых вариантах осуществления индивидуум имеет увеличенное воспаление по меньшей мере в части конъюнктивы по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз. В некоторых вариантах осуществления индивидуум имеет увеличенное количество тучных клеток, нейтрофилов, эозинофилов и/или лимфоцитов по меньшей мере в части конъюнктивы по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз. В некоторых вариантах осуществления соскоб с конъюнктивы, полученный от индивидуума, содержит эозинофилы. В некоторых вариантах осуществления образец сыворотки или образец слезы, полученный от индивидуума, имеет повышенный уровень IgE по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз. В некоторых вариантах осуществления аппликационный накожный или внутрикожный тест на аллергию, выполняемый путем введения индивидууму аллергена, приводит к аллергической реакции. В некоторых вариантах осуществления один или более симптомов у индивидуума снижены по сравнению с исходным уровнем до введения композиции или антитела. В некоторых вариантах осуществления одно или более из следующего: зуда конъюнктивы, покраснения конъюнктивы, отека конъюнктивы, выделения из глаз, изъязвления, слезотечения, гипертрофии век, коркообразования, симблефарона, периокулярной экземы,
- 1 045206 мадароза, фотофобии, кератита, гигантских папиллом и катаракты у индивидуума, уменьшается по сравнению с исходным уровнем до введения композиции или антитела. В некоторых вариантах осуществления композицию или антитело вводят путем внутривенной инфузии. В некоторых вариантах осуществления композицию или антитело вводят подкожной инъекцией.
В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в настоящей заявке (см., например, выше), антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i), HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и/или причем вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16 или 21. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит Fc-область тяжелой цепи, содержащую Fc-область человеческого IgG. В некоторых вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG содержит человеческий IgG1. В некоторых вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG содержит человеческий IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75; и/или легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 76 или 77. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит: (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 67-70; и/или причем вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 11-14; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 23-24. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-14; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16-24. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-10; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16-22. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: (1) HC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 26-29; (2) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; (3) HC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 31-36; (4) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; (5) HC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 38-43; (6) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и (7) HC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45-46, и/или (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую: (1) LC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 48-49; (2) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; (3) LC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51-53; (4) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65; (5) LC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 55-58; (6) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; и (7) LC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: (1) HC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; (2) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; (3) HC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; (4) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; (5) HC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (6) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и (7) HC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45; и/или (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую: (1) LC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; (2) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; (3) LC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51; (4) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65; (5) LC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55; (6) HVR-L3, содержащую аминокислотную последователь
- 2 045206 ность SEQ ID NO: 66; и (7) LC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: (1) HC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; (2) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; (3) HC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; (4) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; (5) HC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (6) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и (7) HC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45; и/или (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую: (1) LC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; (2) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; (3) LC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51; (4) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65; (5) LC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58; (6) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; и (7) LC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91 и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 и (iii) HVRH3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90, (ii) HVRH2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93 и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110; или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В некоторых вариантах осуществления антитело разработано для улучшения активности антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену в Fc-области, которая улучшает активность ADCC. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна или две тяжелые цепи антитела являются нефукозилированными. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит фрагмент антитела, выбранный из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab'-SH, Fv, scFv и (Fab')2.
В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в настоящей заявке (см., например, выше), антитело содержит Fc-область и N-гликозид-связанные углеводные цепи, связанные с Fcобластью, причем менее 50% N-гликозид-связанных углеводных цепей антитела в композиции содержат остаток фукозы. В некоторых вариантах осуществления практически ни одна из N-гликозид-связанных углеводных цепей антитела в композиции не содержит остатка фукозы. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком. В некоторых вариантах осуществления примат, не являющийся человеком, представляет собой павиана. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с эпитопом в домене 1 человеческого сиглека-8, причем домен 1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с эпитопом в домене 3 человеческого сиглека-8, причем домен 3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело 4F11. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с эпитопом в домене 2 или домене 3 человеческого сиглека-8. В некоторых вариантах осуществления домен 2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID
- 3 045206
NO: 113. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело 1C3. В некоторых вариантах осуществления домен 3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело 1Н10. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с эпитопом в домене 1 человеческого сиглека-8 и конкурирует с антителом 4F11 за связывание с сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления антитело не конкурирует с антителом 2Е2 за связывание с сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления антитело не является антителом 2Е2. В некоторых вариантах осуществления домен 1 содержит аминокислотную последовательность: 112. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит Fc-область тяжелой цепи, содержащую Fc-область человеческого IgG.
В некоторых вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG содержит Fc-область человеческого IgG1. В некоторых вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG1 является нефукозилированной. В некоторых вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG содержит Fc-область человеческого IgG4. В некоторых вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG4 содержит аминокислотную замену S228P, причем аминокислотные остатки пронумерованы в соответствии с индексом EU, как у Кабат. В некоторых вариантах осуществления антитело приводит к истощению эозинофилов в крови и/или ингибирует активацию тучных клеток.
В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в настоящей заявке (см., например, выше), композицию или антитело вводят в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами для лечения или профилактики аллергического заболевания глаз. В некоторых вариантах осуществления один или более дополнительных терапевтических агентов выбирают из группы, состоящей из кортикостероида, антигистамина, кетотифена, азеластина, эпинастина, бепостатина, циклоспорина и нестероидного противовоспалительного средства (НПВС, NSAID).
В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в настоящей заявке (см., например, выше), индивидуум представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления антитело находится в фармацевтической композиции, содержащей антитело и фармацевтически приемлемый носитель.
Другие аспекты настоящего изобретения относятся к изделию, содержащему лекарственное средство, содержащее композицию, содержащую антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению лекарственного средства нуждающемуся в этом индивидууму в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления.
Следует иметь в виду, что одно, некоторые или все свойства различных вариантов осуществления, описанные в настоящем описании, могут быть объединены с образованием других вариантов осуществления настоящего изобретения. Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут очевидными для специалиста в данной области техники. Эти и другие варианты осуществления настоящего изобретения дополнительно описаны путем подробного описания, которое следует ниже.
Подробное описание изобретения
I. Определения
Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными композициями или биологическими системами, которые, безусловно, могут меняться. Также следует понимать, что используемая в настоящей заявке терминология предназначена исключительно для описания конкретных вариантов осуществления изобретения и не должна рассматривается как ограничивающая. В настоящем описании и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают также множественное число, если из контекста в явном виде не следует иное. Таким образом, например, ссылка на молекулу необязательно включает комбинацию двух или более таких молекул и т.п.
Используемый в настоящем описании термин примерно относится к обычному диапазону ошибок для соответствующего значения, который специалист в данной области техники легко определит. При указании примерно значение или параметр в настоящем описании включает (и описывает) варианты осуществления, которые направлены на это значение или параметр как таковые.
Понятно, что аспекты и варианты осуществления изобретения включают содержащий, состоящий и состоящий по существу из аспектов и вариантов осуществления.
Термин антитело включает поликлональные антитела, моноклональные антитела (включая полноразмерные антитела, которые имеют Fc-область иммуноглобулина), композиции антител с полиэпитопной специфичностью, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела, диатела и одноцепочечные молекулы), а также фрагменты антител (например, Fab, F(ab')2 и Fv). Термин иммуноглобулин (Ig) используется в настоящем описании взаимозаменяемо с антителом.
Основная единица 4-цепочечного антитела представляет собой гетеротетрамерный гликопротеин, состоящий из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (Н) цепей. Антитело IgM состоит из 5 основных гетеротетрамерных звеньев вместе с дополнительным полипептидом, называемым J-цепью, и содержит 10 антигенсвязывающих участков, тогда как IgA-антитела содержат от 2 до 5 основных 4-цепочечных звеньев, которые могут полимеризоваться с образованием поливалентных комплексов в комбинации с J-цепью. В случае IgG 4-цепочечная единица обычно составляет примерно 150000 Да. Каждая L-цепь связана с Н-цепью одной ковалентной дисульфидной связью, тогда как две Нцепи связаны друг с другом одной или более дисульфидными связями в зависимости от изотипа Н-цепи.
- 4 045206
Каждая из Н- и L-цепей имеют регулярно расположенные межцепочечные дисульфидные мостики. Каждая Н-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (VH), за которым следуют три константных домена (CH) для каждой из а и у цепей и четыре домена CH для и изотипов μ и ε. Каждая L-цепь имеет на Nконце вариабельный домен (VL), за которым следует константный домен, расположенный на другом конце. VL выровнен с VH, a CL выровнен с первым константным доменом тяжелой цепи (CH1). Определенные аминокислотные остатки, как полагают, образуют стык между вариабельными доменами легкой цепи и тяжелой цепи. Пара VH и VL вместе образует один антигенсвязывающий участок. Структуру и свойства различных классов антител см., например, в Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appieton & Lange, Norwaik, CT, 1994, page 71 and Chapter 6.
L-цепь любого из вида позвоночных может быть отнесена к одному из двух четко различимых типов, названных каппа и лямбда, на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов. Иммуноглобулины могут быть отнесены к разным классам или изотипам в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей (CH). Существует пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, тяжелые цепи которых обозначаются как α, δ, ε, γ и μ, соответственно. Классы γ и α дополнительно делятся на подклассы на основе относительно незначительных различий в последовательности и функции CH, например, у человека экспрессируются следующие подклассы: IgG1, lgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Антитела IgG1 могут существовать в многочисленных полиморфных вариантах, называемых аллотипами (рассмотренные в Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4, 1-7), любой из которых является подходящим для использования в настоящем изобретении. Распространенными аллотипными вариантами в популяциях людей являются аллотипы, обозначенные буквами a, f, n, z.
Выделенное антитело представляет собой антитело, которое идентифицировано, отделено и/или извлечено из компонента среды его продуцирования (например, в естественном виде или рекомбинантном). В некоторых вариантах осуществления выделенный полипептид не связан со всеми другими компонентами среды его продуцирования. Загрязняющие компоненты среды продуцирования, такие как компоненты, происходящие из рекомбинантных трансфицированных клеток, представляют собой материалы, которые обычно мешают исследованию, диагностике или терапевтическому использованию антитела, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В некоторых вариантах осуществления полипептид очищают: (1) до более 95 мас.% антитела, согласно оценке измерения, например, методом Лоури, и в некоторых вариантах осуществления до более 99 мас.%; (1) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-терминальной или внутренней аминокислотной последовательности с помощью секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до гомогенности согласно оценке с помощью SDS-PAGE в нередуцирующих или редуцирующих условиях с окраской кумасси синим или серебром. Выделенное антитело включает антитело in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по меньшей мере один компонент естественной среды антитела не будет присутствовать. Однако обычно выделенный полипептид или антитело получают после по меньшей мере одной стадии очистки.
Используемый в настоящем описании термин моноклональное антитело относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций и/или пост-трансляционных модификаций (например, изомеризации, амидирования), которые могут присутствовать в незначительных количествах. В некоторых вариантах осуществления в моноклональных антителах происходит отщепление С-конца тяжелой цепи и/или легкой цепи. Например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных остатков отщепляются от С-конца тяжелой цепи и/или легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления при отщеплении С-конца происходит удаление С-концевого лизина из тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления в моноклональных антителах происходит отщепление Nконца тяжелой цепи и/или легкой цепи. Например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных остатков отщепляются от N-конца тяжелой цепи и/или легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены на один антигенный участок. В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены на несколько антигенных участков (такие как биспецифическое антитело или полиспецифическое антитело). Модификатор моноклональный указывает на характер антитела, получаемого из, по существу, гомогенной популяции антител, и его не следует толковать как требующий получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, используемые в соответствии с настоящим изобретением, могут быть получены различными способами, включая, например, метод гибридомы, методы рекомбинантной ДНК, методы фагового дисплея и методы продуцирования животными человеческих или человекоподобных антител, которые имеют части или все локусы человеческого иммуноглобулина или гены, кодирующие последовательности человеческого иммуноглобулина.
Термин голое антитело относится к антителу, которое не конъюгировано с цитотоксическим фрагментом или радиоактивной меткой.
Термины полноразмерное антитело, интактное антитело или цельное антитело используются
- 5 045206 взаимозаменяемо для обозначения антитела в его по существу интактной форме, в отличие от фрагмента антитела. В частности, цельные антитела включают антитела с тяжелыми и легкими цепями, включая Fcобласть. Константные домены могут представлять собой константные домены с нативной последовательностью (например, константные домены с человеческой нативной последовательностью) или варианты их аминокислотной последовательности. В некоторых случаях интактное антитело может иметь одну или более эффекторных функций.
Фрагмент антитела включает часть интактного антитела, антигенсвязывающую и/или вариабельную область интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv; дитела; линейные антитела (см. патент США № 5641870, пример 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]); молекулы одноцепочечных антител и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.
Расщепление антител папаином приводит к образованию двух идентичных антигенсвязывающих фрагментов, называемых фрагментами Fab, и оставшемуся фрагменту Fc, обозначение которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Fab-фрагмент состоит из полной L-цепи вместе с доменом вариабельной области Н-цепи (VH) И первым константным доменом одной тяжелой цепи (CH1). Каждый Fab-фрагмент является одновалентным в отношении связывания антигена, т.е. имеет один антигенсвязывающий участок. Обработка антитела пепсином дает один большой фрагмент F(ab')2, который соответствует примерно двум Fab-фрагментам, связанным дисульфидными связями, имеющим различные антигенсвязывающие активности, и все еще способные к перекрестному связыванию антигена. Fab'фрагменты отличаются от Fab-фрагментов наличием нескольких дополнительных остатков на карбоксильном конце домена CH1, включая один или более цистеинов из шарнирной области антитела. Fab'-SH в настоящем описании означает Fab', в котором остаток(и) цистеина в константных доменах несут свободную тиольную группу. F(ab')2 фрагменты антитела изначально получают в виде пар Fab' фрагментов с цистеинами шарнирной области между ними. Также известны другие химические сочетания фрагментов антител.
Fc-фрагмент содержит карбоксильные концевые участки обеих Н-цепей, которые удерживаются вместе дисульфидными связями. Эффекторные функции антител определяются последовательностями в Fc-области, областью, которая также распознается Fc-рецепторами (FcR), находящимися на клетках определенных типов.
Fv представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный антигенраспознающий и антигенсвязывающий участок. Этот фрагмент состоит из димера одного домена вариабельной области тяжелой и одного домена вариабельной области легкой цепи, которые находятся в тесной нековалентной ассоциации. В результате укладки этих двух доменов образуются шесть гипервариабельных петель (по 3 петли в каждой из цепей Н и L), которые предоставляют аминокислотные остатки для связывания антигена и наделяют антитело антигенсвязывающей специфичностью. Однако даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащего только три антиген-специфические HVR) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с более низким сродством, чем полный связывающий участок.
Одноцепочечный Fv, также сокращенно обозначаемый как sFv или scFv, представляет собой фрагмент антитела, который содержит домены VH и VL антитела, связанные в одну полипептидную цепи. В некоторых вариантах осуществления полипептид sFv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, который позволяет sFv формировать нужную структуру для связывания антигена. Для обзора sFv, см. Pluckthim in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
Функциональные фрагменты антител по настоящему изобретению содержат часть интактного антитела, обычно включающую антигенсвязывающую или вариабельную область интактного антитела или Fv-область антитела, которая сохраняет или имеет модифицированную способность связывать FcR. Примеры фрагментов антител включают молекулы линейного антитела, одноцепочечного антитела и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.
Моноклональные антитела по изобретению включают, в частности, химерные антитела (иммуноглобулины), в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, полученных из конкретного вида или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, тогда как остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, полученных из другого вида или принадлежащих другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют нужную биологическую активность (патент США № 4816567; Morrison et al., Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Представляющие интерес химерные антитела по изобретению включают антитела PRIMATIZED®, в которых антигенсвязывающий участок антитела происходит из антитела, полученного, например, путем иммунизации макак представляющим интерес антигеном. Используемый в настоящем описании термин гуманизированное антитело используется в качестве подгруппы химерных антител.
Гуманизированные формы нечеловеческих (например, мышиных) антител представляют собой
- 6 045206 химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. В одном из вариантов осуществления гуманизированное антитело представляет собой человеческий иммуноглобулин (реципиентное антитело), в котором остатки из HVR реципиента заменены остатками из HVR не относящегося к человеку вида (донорское антитело), такого как мышь, крыса, кролик или не относящийся к человеку примат, с нужной специфичностью, сродством и/или способностью. В некоторых случаях FR остатки человеческого иммуноглобулина заменяют соответствующими остатками, не относящимися к человеческим. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые отсутствуют в реципиентном антителе или в донорском антителе. Эти модификации могут быть сделаны для дальнейшего улучшения характеристик антител, таких как сродство связывания. Как правило, гуманизированное антитело обычно содержит, по существу, все из по меньшей мере одного, и обычно двух вариабельных доменов, в которых все или, по существу, все гипервариабельные петли соответствуют петлям последовательности иммуноглобулина, отличающегося от человеческого, и все или, по существу, все FR-области представляют собой области из последовательности человеческого иммуноглобулина, хотя FR-области могут включать одну или более отдельные замены остатков в FR, которые улучшают характеристики антител, такие как сродство связывания, изомеризация, иммуногенность и т.д. В некоторых вариантах осуществления количество этих аминокислотных замен в FR составляет не более 6 в Н-цепи и не более 3 в L-цепи. Гуманизированное антитело также необязательно содержит по меньшей мере часть константной области (Fc) иммуноглобулина, обычно области человеческого иммуноглобулина. Для получения дополнительной информации см., например, Jones ei al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). См., например, также, Vaswam and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); и патенты США №№ 6982321 и 7087409. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела направлены на один антигенный участок. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела направлены на несколько антигенных участков. Альтернативный способ гуманизации описан в патенте США № 7981143 и публикации заявки на патент США № 2006/0134098.
Вариабельная область или вариабельный домен антитела относится к аминоконцевым доменам тяжелой или легкой цепи антитела. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи обычно обозначают как VH и VL, соответственно. Эти домены обычно являются наиболее вариабельными частями антитела (относительно других антител того же класса) и содержат антигенсвязывающие участки.
Термин гипервариабельная область, HVR или HV в контексте настоящего изобретения относится к областям вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными в последовательности и/или образуют петли определенной структуры. Обычно антитела содержат шесть HVR; три в VH (Hl, Н2, НЗ) и три в VL (LI, L2, L3). В нативных антителах НЗ и L3 демонстрируют наибольшее разнообразие из шести HVR, и, в частности, считается, что НЗ играет уникальную роль в придании антителам уникальной специфичности. См., например, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wit, Methods в Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)). Действительно, встречающиеся в природе антитела верблюдов, состоящие только из тяжелой цепи, являются функциональными и стабильными несмотря на отсутствие легкой цепи. См., например, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993) и Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996).
Используется несколько определений HVR, которые включены в настоящее описание. HVR, которые являются определяющими комплементарность областями (CDR) по Кабат, основаны на вариабельности последовательности и являются наиболее часто используемыми (Kabat et al., Sequences of Proteins oflmmunological Interest, 5IX Ed. Public Health Sendee, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)). При этом, HVR по Чотиа относятся к расположению структурных петель (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987). Контактные HVR основаны на анализе доступных сложных кристаллических структур. Остатки каждого из этих HVR указаны ниже. ________________________
Петля | Кабат | Чотиа | Контакт |
L1 | L24-L34 | L26-L34 | L30-L36 |
L2 | L50-L56 | L50-L56 | L46-L55 |
L3 | L89-L97 | L91-L96 | L89-L96 |
Н1 | H31-H35B | Н26-Н32 | H3O-H35B (нумерация по Кабат) |
Н1 | Н31-Н35 | Н26-Н32 | H3O-H35 (нумерация по Чотиа) |
Н2 | Н50-Н65 | Н53-Н56 | Н47-Н58 |
НЗ | Н95-Н102 | Н95-Н102 | Н93-Н101 |
Если не указано иное, остатки вариабельного домена (остатки HVR и остатки каркасного участка) пронумерованы в соответствии с Kabat et al., см. выше.
Остатки каркасного или FR участка представляют собой остатки вариабельного домена, отличные от остатков HVR, как определено в настоящем описании.
Выражение нумерация остатков вариабельного домена по Кабат или нумерация положений аминокислот по Кабат и их варианты, относится к системе нумерации, используемой для вариабельных до
-7 045206 менов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи сборки антител согласно Kabat et al., см. выше. При применении этой системы нумерации, фактическая линейная аминокислотная последовательность может включать меньше или дополнительные аминокислоты, соответствующие удалению или вставке в FR или HVR вариабельного домена. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать одну аминокислотную вставку (остаток 52а по Кабат) после остатка 52 Н2 и встроенные остатки (например, остатки 82а, 82b и 82с и т.д. по Кабат) после остатка 82 в FR тяжелой цепи. Нумерация остатков по Кабат может быть определена для заданного антитела путем выравнивания областей гомологии последовательности антитела относительно стандартной последовательности, пронумерованной по Кабат.
Человеческий акцепторный каркасный участок, в контексте настоящего изобретения, представляет собой каркасный участок, содержащий аминокислотную последовательность каркасного участка VL или VH, полученного из каркасного участка человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркасного участка. Человеческий акцепторный каркасный участок, полученный из каркасного участка человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркасного участка, может содержать такую же аминокислотную последовательность или может содержать ранее существовавшие замены в аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления количество ранее существовавших замен в аминокислотной последовательности составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее или 2 или менее.
Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности, относительно эталонной полипептидной последовательности определяется в виде процента аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной эталонной полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и при необходимости введения зазоров (гэпов) для достижения максимального процента идентичности последовательностей, без учета любых консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые находятся в пределах компетенции специалиста уровня техники, например с помощью доступных компьютерных программ, таких как BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить подходящие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Например, % идентичности аминокислотной последовательности заданной аминокислотной последовательности А относительно, с или по сравнению с заданной аминокислотной последовательностью В (или говоря иным способом, заданная аминокислотная последовательность А имеет или содержит определенный % идентичности аминокислотной последовательности относительно, с или по сравнению с заданной аминокислотной последовательностью В) рассчитывается следующим образом:
100хдоля X/Y где X представляет собой количество аминокислотных остатков, оцененных как идентичные совпадения последовательностей при выравнивании А и В с помощью программы, и где Y представляет собой общее количество аминокислотных остатков в В. Понятно, что если длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности В, % идентичности аминокислотной последовательности А с В не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности В с А.
Антитело, которое связывается, специфически связывается или является специфическим к конкретному полипептиду или эпитопу на конкретном полипептиде, представляет собой антитело, которое связывается с этим конкретным полипептидом или эпитопом на конкретном полипептиде и при этом практически не связывается с любым другим полипептидом или эпитопом на этом полипептиде. В некоторых вариантах осуществления связывание описанного в настоящей заявке антитела к сиглеку-8 (например, антитела, которое связывается с человеческим сиглеком-8) с неродственным полипептидом, не относящимся к сиглеку-8, составляет менее чем примерно 10% от связывания антитела с сиглеком-8, измеренного способами, известными в данной области (например, иммуноферментным анализом (ELISA)). В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывается с сиглеком-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8), имеет константу диссоциации (Kd) <1 мкМ, <100 нМ, <10 нМ, <2 нМ, <1 нМ, <0,7 нМ, <0,6 нМ, <0,5 нМ, <0,1 нМ, <0,01 нМ или <0,001 нМ (например, 10-8 М или менее, например, от 10-8 М до 10-13 М, например, от 10-9 М до 10-13 М).
Термин антитело к сиглеку-8 или антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 относится к антителу, которое связывается с полипептидом или эпитопом человеческого сиглека-8, при этом не демонстрируя существенного связывания с любым другим полипептидом или эпитопом неродственного полипептида, не являющегося сиглеком-8.
Используемый в настоящем описании термин сиглек-8 относится к человеческому белку сиглек-8. Термин также включает встречающиеся в природе варианты сиглека-8, включая варианты сплайсинга или аллельные варианты. Аминокислотная последовательность типичного человеческого сиглека-8 показана в SEQ ID NO: 72. Аминокислотная последовательность другого типичного человеческого сиглека-8
- 8 045206 показана в SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления человеческий белок сиглек-8 содержит внеклеточный домен человеческого сиглека-8, слитого с Fc-областью иммуноглобулина. Аминокислотная последовательность приведенного в качестве примера внеклеточного домена человеческого сиглека-8, слитого с Fc-областью иммуноглобулина, показана в SEQ ID NO: 74. Аминокислотная последовательность, подчеркнутая в SEQ ID NO: 74, означает аминокислотную последовательность слитого белка Fc-сиглек-8.
Аминокислотная последовательность человеческого сиглека-8 GYLLQVQELVTVQEGLCVHVPCSFSYPQDGWTDSDPVHGYWFRAGDRPYQDAPVATN NPDREVQAETQGRFQLLGDIWSNDCSLSIRDARKRDKGSYFFRLERGSMKWSYKSQLN YKTKQLSVFVTAL1BRPDILILG'H.ESGHSRNLTCSVPWACKQGTPPMISWIGASVSSPG PTTARSSVLTLTPKPQDHGTSL.TCQVTLPGTGVTTTSTVRI.DVSYPPWNLTMTVFQGDA TASTALGNGSSLSVLEGQSLRLVCAVNSNPPARLSWTRGSLTLCPSRSSNPGLLELPRVH VRDEGEFTCRAQNAQGSQHlSLSLSLQNEGTG'rSRPVSQVTLAAVGGAGATALAFLSFC IIFIIVRSCRKKSARPAAGVGDTGMEDAKAIRGSASQGPLTESWKDGNPLKKPPPAVAPS SGEEGELHYATLSFHKVKPQDPQGQEATDSEYSEIKIHKRETAETQACLRNHNPSSKEV RG (SEQ ID NO:72)
Аминокислотная последовательность человеческого сиглека-8
GYLLQVQELVTVQEGLCVHVPCSFSYPQDGWTDSDPVHGYWFRAGDRPYQDAPVATN NPDREVQAETQGRFQLLGD1WSNDCSLS1RDARKRDKGSYFFRLERGSMKWSYKSQLN YKTKQLSVFVTALTHRPDILILGTLESGHPRNLTCSVPWACKQGTPPMISWIGASVSSPG PTTARSSVLTLTPKPQDHGTSLTCQVTLPGTGVTTTSTVRLDVSYPPWNLTMTVFQGDA TASTALGNGSSLSVLEGQSLRLVCAVNSNPPARLSWTRGSLTLCPSRSSNPGLLELPRVH VRDEGEETCRAQNAQGSQHISLSLSLQNEGTGTSRPVSQVTLAAVGGAGATALAFLSFC HFIIVRSCRKKSARPAAGVGDTGMEDAKA1RGSASQGPLTESWKDGNPLKKPPPAVAPS SGEEGELHYATLSFHKVKPQDPQGQEATDSEYSEIKIHKRETAETQACLRNHNPSSKEV RG (SEQ ID NO 73)
Аминокислотная последовательность слитого белка Fc-сиглек-8 GYLLQVQELVTVQEGLCVHVPCSFSYPQDGWTDSDPVHGYWFRAGDRPYQDAPVATN NPDREVQAETQGRFQLLGDIWSNDCSLSIRDARKRDKGSYFFRLERGSMKWSYKSQLN YKTKQLSVFVTALTHRPDILILGTLESGHSRNLTCSVPWACKQGTPPMISWIGASVSSPG PTTARSSVLTLTPKPQDHGTSLTCQVTLPGTGVTTTSTVRLDVSYPPWNLTMTVFQGD,\ TASTALGNGSSLSVLEGQSLRLVCAVNSNPPARLSWTRGSLTLCPSRSSNPGLLELPRVH VRDEGEH’CRAONAOGSOHISLSLSLONEGTGTSRPVSOVTLAAVGGIEGRSDKTHTCPP CPAPELL·GGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNUΎVDGVEVHNA KTKPREEOYNS'FYRVVSVLIVLHODWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK'FISKAKGOPRE POVYTLPPSREEMTKNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGOPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWOOGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK (SEQ ID NO:74)
Антитела, которые индуцируют апоптоз или являются апоптотическими, представляют собой антитела, которые индуцируют запрограммированную гибель клеток, определенную стандартным анализом апоптоза, таким как связывание аннексина V, фрагментацию ДНК, уменьшение размера клеток, дилатацию эндоплазматического ретикулума, фрагментацию клеток и/или образование мембранных везикул (называемых апоптотическими телами). Например, апоптотическая активность антител к сиглеку-8 (например, антитела, которое связывается с человеческим сиглеком-8) по настоящему изобретению может быть продемонстрирована путем окрашивания клеток аннексином V.
Эффекторные функции антитела относятся к видам биологической активности, свойственных Fcобласти (Fc-области с нативной последовательностью или вариантной Fc-области аминокислотной последовательности) антитела, и изменяются в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и комплемент-зависимую цитотоксичность; связывание с Fc-рецептором; антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; подавление рецепторов клеточной поверхности (например, рецепторов В-клеток); и активацию В-клеток.
Антителозависимая клеточная цитотоксичность или ADCC относится к форме цитотоксичности, при которой секретированный Ig связывается с Fc-рецепторами (FcR), присутствующими на определенных цитотоксических клетках (например, клетках -естественных киллерах (NK), нейтрофилах и макрофагах), позволяя этим цитотоксическим эффекторным клеткам специфически связываться с несущей антиген клеткой-мишенью и впоследствии убивать эту клетку-мишень с помощью цитотоксинов. Антитела приводят в действие, цитотоксические клетки, необходимые для уничтожения клетки-мишени, с помощью этого механизма. Основные опосредующие ADCC клетки, NK-клетки, экспрессируют только
- 9 045206
FcyRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcyRI, FcyRII и FcyRIII. Экспрессия Fc на гемопоэтических клетках суммирована в табл. 3 на стр. 464 у Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8), описанное в настоящей заявке, усиливает ADCC. Для оценки активности ADCC представляющей интерес молекулы может быть выполнен анализ ADCC in vitro, такой как описано в патенте США № 5500362 или 5821337. Пригодные эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и естественные киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно, ADCC активность представляющей интерес молекулы может быть оценена in vivo, например, на животной модели, такой как раскрыто у Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998). Другие варианты Fc, которые изменяют ADCC активность и другие свойства антител, включают варианты, описанные у Ghetie et al., Nat Biotech, 15:637-40, 1997; Duncan et al., Nature 332:563-564, 1988; Lund et al., J. Immunol. 147:2657-2662, 1991; Lund et al., Mol Immunol. 29:53-59, 1992; Alegre et al., Transplantation 57:1537-1543, 1994; Hutchins et al., Proc Natl, Acad Sci USA 92:11980-11984, 1995; Jefferis et al., Immunol Lett. 44:111-117, 1995; Lund et al., FASEB J9:115-119, 1995; Jefferis et al., Immunol Lett 54:101-104, 1996; Lund et al., J. Immunol. 157:4963-4969, 1996; Armor et al., Eur. J Immunol. 29:2613-2624, 1999; Idusogie et al., J. Immunol. 164:4178-4184, 200; Reddy et al., J. Immunol. 164:1925-1933, 2000; Xu et al., Cell Immunol 200:16-26, 2000; Idusogie et al., J. Immunol. 166:2571-2575, 2001; Shields et al., J Biol Chem 276:6591-6604, 2001; Jefferis et al., Immunol Lett 82:57-65, 2002; Presta et al., Biochem Soc Trans 30:487-490, 2002; Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010, 2006; патентах США №№ 5624821; 5885573; 5677425; 6165745; 6277375; 5869046; 6121022; 5624821; 5648260; 6194551; 6737056; 6821505; 6277375; 7335742 и 7317091.
Термин Fc-область в контексте настоящего изобретения используется для определения Сконцевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, включая Fc-области нативной последовательности и вариантные Fc-области. Хотя границы Fc-области тяжелой цепи иммуноглобулина могут меняться, Fcобласть тяжелой цепи человеческого IgG обычно определяют как отрезок от остатка аминокислоты в положении Cys226 или Pro230 до ее карбоксильного конца. Fc-области нативной последовательности, подходящие для использования в антителах по настоящему изобретению, включают человеческие IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Для устранения гетерогенности, наблюдаемой у рекомбинантного антитела IgG4, может быть введена замена одной аминокислоты (S228P по нумерации Кабат; обозначенная IgG4Pro). См. Angal, S. et al. (1993) Mol Immunol. 30, 105-108.
Нефукозилированное или фукоза-дефицитное антитело относится к варианту гликозилированного антитела, содержащему Fc-область, в котором углеводная структура, присоединенная к Fc-области, имеет сниженный уровень фукозы или не содержит фукозу. В некоторых вариантах осуществления антитело со сниженным уровнем фукозы или без фукозы имеет улучшенную функцию ADCC. Нефукозилированные или фукоза-дефицитные антитела имеют сниженный уровень фукозы относительно количества фукозы в том же антителе, продуцированном в клеточной линии. В некоторых вариантах осуществления композиция нефукозилированного или фукоза-дефицитного антитела в контексте настоящего изобретения представляет собой композицию, в которой менее чем примерно 50% N-связанных гликанов, прикрепленных к Fc-области антител в композиции, содержат фукозу.
Термины фукозилирование или фукозилированный относятся к наличию остатков фукозы в олигосахаридах, присоединенных к пептидному остову антитела. В частности, фукозилированное антитело содержит а(1,6)-связанную фукозу во внутреннем остатке N-ацетилглюкозамина (GlcNAc) в одном или обоих из N-связанных олигосахаридах, присоединенных к Fc-области антитела, например, в положении Asn297 Fc-домена человеческого IgG1 (EU нумерация остатков Fc-области). Asn297 также может быть расположен на примерно +3 аминокислоты выше или ниже от положения 297, т.е. между положениями 294 и 300, из-за незначительных изменений в последовательностях иммуноглобулинов.
Степень фукозилирования представляет собой процент фукозилированных олигосахаридов относительно всех олигосахаридов, идентифицированных способами, известными в данной области, например, в композиции антител, обработанных N-гликозидазой F, измеренный времяпролетной массспектрометрией с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF MS). В композиции полностью фукозилированного антитела по существу все олигосахариды содержат остатки фукозы, т.е. являются фукозилированными. В некоторых вариантах осуществления композиция полностью фукозилированного антитела имеет степень фукозилирования по меньшей мере примерно 90%. Соответственно, отдельное антитело в такой композиции обычно содержит остатки фукозы в каждом из двух N-связанных олигосахаридов в Fc-области. И наоборот, в композиции полностью нефукозилированного антитела практически ни один из олигосахаридов не является фукозилированным, и отдельное антитело в такой композиции не содержит остатков фукозы ни в одном из двух N-связанных олигосахаридов в Fc-области. В некоторых вариантах осуществления композиция полностью нефукозилированного антитела имеет степень фукозилирования менее чем примерно 10%. В композиции частично фукозилированного антитела только часть олигосахаридов содержит фукозу. Отдельное антитело в такой композиции может не содержать остатки фукозы ни в одном, содержать остатки фукозы в одном или в обоих
- 10 045206
N-связанных олигосахаридах в Fc-области, при условии, что такая композиция по существу не содержит ни одного отдельного антитела, у которого отсутствуют остатки фукозы в N-связанных олигосахаридах в Fc-области, или по существу не содержит ни одного отдельного антитела, которое содержит остатки фукозы в обоих N-связанных олигосахаридах в Fc-области. В одном из вариантов осуществления композиция частично фукозилированного антитела имеет степень фукозилирования от примерно 10% до примерно 80% (например, от примерно 50% до примерно 80%, от примерно 60% до примерно 80% или от примерно 70% до примерно 80%).
Термин сродство связывания в контексте настоящего изобретения относится к силе нековалентных взаимодействий между одним связывающим участком молекулы (например, антителом) и его партнером по связыванию (например, антигеном). В некоторых вариантах осуществления сродство связывания антитела с сиглеком-8 (который может представлять собой димер, такой как слитый белок сиглек-8Fc, описанный в настоящей заявке) как правило может быть представлено константой диссоциации (Kd). Сродство может быть измерено общепринятыми способами, известными в данной области техники, в том числе описанными в настоящей заявке.
Термин авидность связывания в контексте настоящего изобретения относится к силе связывания нескольких участков связывания молекулы (например, антитела) с ее партнером по связыванию (например, антигеном).
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитела по изобретению, представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая идентифицирована и отделена по меньшей мере от одной загрязняющей молекулы нуклеиновой кислоты, с которой она обычно связана в среде, в которой была продуцирована. В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота не связана ни с одним из компонентов, ассоциированных со средой продуцирования. Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды и антитела, в контексте настоящего изобретения находятся в форме, отличной от той формы или окружающей среды, в которой они встречаются в природе. Поэтому выделенные молекулы нуклеиновой кислоты отличаются от нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептиды и антитела по изобретению, присутствующие в клетках в естественных условиях.
Термин фармацевтический состав относится к препарату, находящемуся в такой форме, которая обеспечивает биологическую активность активного ингредиента, и не содержащему дополнительные компоненты, которые являются неприемлемо токсичными для индивидуума, которому вводится этот состав. Такие составы являются стерильными.
Термин носители в контексте настоящего изобретения включает фармацевтически приемлемые носители, наполнители или стабилизаторы, которые являются нетоксичными для клетки или млекопитающего, подвергающегося воздействию этих веществ в используемых дозировках и концентрациях. Часто физиологически приемлемый носитель представляет собой водный pH-буферный раствор. Примеры физиологически приемлемых носителей включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту; низкомолекулярный (менее чем примерно 10 остатков) полипептид; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахарные спирты, такие как маннит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; и/или неионогенные поверхностноактивные вещества, такие как TWEEN™, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и PLURONICS™.
Используемый в настоящем описании термин лечение относится к клиническому вмешательству, предназначенному для изменения естественного развития индивидуума или клетки, подвергаемой лечению при наличии клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают снижение скорости прогрессирования заболевания, облегчение или смягчение болезненного состояния, и ремиссию или улучшение прогноза. Лечение индивидуума является успешным, например в случае смягчения или устранения одного или более симптомов, связанных с заболеванием (например, аллергическим заболеванием глаз). Например, лечение индивидуума является успешным, если оно приводит к повышению качества жизни человека, страдающего от заболевания, уменьшению дозы других лекарств, необходимых для лечения заболевания, уменьшению частоты рецидивов заболевания, уменьшению тяжести заболевания, задержке развития или прогрессирования заболевания и/или повышению выживания индивидуума.
Используемый в настоящем описании термин в сочетании с или в комбинации с относится к назначению одного способа лечения в дополнение к другому способу лечения. Как таковое, в сочетании с или в комбинации с относится к получению индивидуумом одного способа лечения до, во время или после получения другого способа лечения.
Используемый в настоящем описании термин профилактика или предотвращение включает профилактику возникновения или рецидива заболевания у индивидуума. Индивидуум, который еще не диагностирован как имеющий заболевание, может иметь предрасположенность к развитию этого заболевания, быть чувствительным к заболеванию или подверженным риску развития заболевания. В некоторых вариантах осуществления антитела к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с челове
- 11 045206 ческим сиглеком-8), описанные в настоящей заявке, используются для задержки развития заболевания (например, аллергического заболевания глаз).
В контексте настоящего изобретения индивидуум, подверженный риску развития заболевания (например, аллергического заболевания глаз), может иметь или не иметь детектируемое заболевание или симптомы заболевания и может иметь или не иметь детектируемое заболевание или симптомы заболевания до применения описанных в настоящей заявке методов лечения. В группе риска означает, что индивидуум имеет один или более факторов риска, которые являются измеримыми параметрами, коррелирующими с развитием заболевания (например, аллергического заболевания глаз), известными в данной области. Индивидуум, имеющий один или более из этих факторов риска, имеет более высокую вероятность развития заболевания, чем индивидуум, не имеющий одного или более этих факторов риска.
Термин эффективное количество относится, по меньшей мере, к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения нужного или указанного эффекта, включая терапевтический или профилактический результат. Эффективное количество может быть введено за одно или более введений. Терапевтически эффективное количество представляет собой по меньшей мере минимальную концентрацию, требуемую для достижения ощутимого улучшения при лечении конкретного заболевания. Терапевтически эффективное количество в контексте настоящего изобретения может варьировать в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и вес пациента и способность антитела вызывать нужный ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также может быть таким, при котором терапевтически полезные эффекты антитела перевешивают любые токсические или вредные эффекты. Профилактически эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Поскольку профилактическую дозу вводят индивидууму до развития заболевания или на более ранней стадии заболевания, то, как правило, но не обязательно, профилактически эффективное количество может быть меньше терапевтически эффективного количества.
Хроническое введение относится к введению лекарственного средства(средств) в непрерывном, в отличие от острого режима, с целью поддержания первоначального терапевтического эффекта (активности) в течение продолжительного периода времени. Прерывистое введение относится к лечению, которое не предполагает постоянного режима введения без перерыва, и скорее является циклическим.
Термин вкладыш в упаковку относится к инструкциям, обычно вкладываемые в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию относительно показаний, способов применения, дозировки, введения, комбинированной терапии, противопоказаний и/или предупреждений, касающихся применения таких терапевтических продуктов.
Используемый в настоящем описании термин индивидуум или субъект представляет собой млекопитающее. Млекопитающее для целей лечения включает людей, домашних и сельскохозяйственных животных, и животных, содержащихся в зоопарках, используемых в спортивных состязаниях, или домашних питомцев, таких как собаки, лошади, кролики, крупный рогатый скот, свиньи, хомяки, песчанки, мыши, хорьки, крысы, кошки и т.д. В некоторых вариантах осуществления индивидуум или субъект представляет собой человека.
II. Способы
Настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) у индивидуума, включающим введение индивидууму эффективного количества антитела по настоящему изобретению, которое связывается с человеческим сиглеком-8 (например, антитело к сиглеку-8), или композиции, содержащей указанные антитела. В некоторых вариантах осуществления антитело находится в фармацевтической композиции, содержащей антитело и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления индивидуумом является человек.
А. Аллергические заболевания глаз
Некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к индивидуумам с аллергическим заболеванием глаз (например, аллергическим конъюнктивитом, кератоконъюнктивитом или гигантским папиллярным конъюнктивитом). В некоторых вариантах осуществления у индивидуума аллергический конъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума атопический кератоконъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума весенний кератоконъюнктивит. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума гигантский папиллярный конъюнктивит.
В некоторых вариантах осуществления индивидууму поставлен диагноз аллергического конъюнктивита. В некоторых вариантах осуществления индивидуум подвержен риску развития аллергического конъюнктивита. Аллергический конъюнктивит относится к ряду аллергических заболеваний глаз, характеризующихся аллергической реакцией гиперчувствительности I типа (т.е., опосредованной IgE) конъюнктивы. Известны как сезонные, так и круглогодичные формы, включая сезонный аллергический конъюнктивит, круглогодичный аллергический конъюнктивит (например, атопический конъюнктивит или атопический кератоконъюнктивит) и весенний кератоконъюнктивит.
В некоторых вариантах осуществления индивидууму поставлен диагноз атопического или весеннего кератоконъюнктивита или у него имеется риск развития атопического или весеннего кератоконъюнк
- 12 045206 тивита. Обе формы кератоконъюнктивита характеризуются аллергическим воспалением глазной поверхности, включая зуд, покраснение, отек и выделения. У людей с весенним кератоконъюнктивитом обычно также присутствуют гигантские папилломы в тарзальной части конъюнктивы, тогда как при атопическом кератоконъюнктивите гигантские папилломы могут присутствовать или нет (La Rosa, M, et al. (2013) Ital. J. Pediatr. 39:18). В то время как весенний кератоконъюнктивит наблюдается только в теплую погоду, атопический кератоконъюнктивит может наблюдаться практически без сезонных колебаний.
В некоторых вариантах осуществления индивидууму поставлен диагноз гигантского папиллярного конъюнктивита или у него имеется риск развития гигантского папиллярного конъюнктивита. Гигантский папиллярный конъюнктивит характеризуется папиллярной гипертрофией (например, верхней тарзальной части конъюнктивы). Часто раздражение и продуцирование IgE вызваны использованием контактных линз, например, из-за накопления белка и/или механического раздражения.
Симптомы аллергических заболеваний глаз могут включать, без ограничения, зуд конъюнктивы, покраснение конъюнктивы, отек конъюнктивы, выделения из глаз, изъязвление (например, изъязвление конъюнктивы), слезотечение, гипертрофию век, коркообразование, симблефарон, экзему в периокулярной области, мадароз, фотофобию, кератит, гигантские папилломы, боль в глазах, ощущение инородного тела и катаракту.
Термины эталон или эталонное значение, используемые в настоящем описании взаимозаменяемо, могут относиться к измерению или характеристике значения или симптома у индивидуума без аллергического заболевания глаз (или в группе таких индивидуумов). Эталонное значение может быть абсолютным значением; относительным значением; значением, которое имеет верхний и/или нижний предел; диапазоном значений; средним значением; медианным значением; средним геометрическим значением; или значением, по сравнению с исходным значением. Аналогично, базовое значение может быть абсолютным значением; относительным значением; значением, которое имеет верхний и/или нижний предел; диапазоном значений; средним значением; медианным значением; средним геометрическим значением; или значением по сравнению с эталонным значением. Эталонное значение может быть получено для одного индивидуума, двух разных индивидуумов или группы индивидов (например, группы из двух, трех, четырех, пяти или более индивидуумов). В некоторых вариантах осуществления эталонное значение относится к стандартному значению или опорному показателю в данной области. В некоторых вариантах осуществления эталонное значение относится к значению, рассчитанному de novo для одного или более индивидуумов (например, без аллергического заболевания глаз).
В некоторых вариантах осуществления соскоб с конъюнктивы, полученный от индивидуума, содержит эозинофилы. Анализ соскоба конъюнктивы на наличие эозинофилов можно использовать для диагностики аллергического заболевания глаз (например, весеннего кератоконъюнктивита, как описано в Bonim, S. et al. (2004) Eye 18:345-351); однако инфильтрация эозинофилов может иметь место в более глубоких тканях конъюнктивы, которые не доступны для поверхностного соскоба (см. Abelson, М.В. et al. (1983) Arch. Ophthalmol. 101:555-556).
В некоторых вариантах осуществления образец сыворотки, полученный от индивидуума, имеет повышенный уровень IgE по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз. В некоторых вариантах осуществления образец слезы, полученный от индивидуума, имеет повышенный уровень IgE по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз. Методы измерения уровней IgE в образце слезы известны в данной области; см., например, иммунохроматографический тест Allerwatch® для определения общего уровня IgE в слезной жидкости (Hitachi Chemical Co.). Методы измерения уровней IgE в образце сыворотки также известны в данной области (например, сэндвичрадиоиммуноанализ), и описаны нормальные диапазоны для средней концентрации IgE в образце сыворотки, полученном от пациентов разного возраста (см. Homburger НА: Allergic diseases. In Clinical Diagnosis and Management by Laboratory-Methods. 21st edition. New York, WB Saunders Company, 2007, pp. 961971).
В некоторых вариантах осуществления аппликационный накожный или внутрикожный тест на аллергию, выполняемый путем введения индивидууму аллергена, приводит к аллергической реакции. Способы выполнения аппликационного накожного (например, прик-теста, скарификации, пункции или применение пластыря) и внутрикожного (например, внутридермального) теста на аллергию известны в данной области. Как правило, небольшое количество одного или более аллергенов вводят в небольшую область кожи (например, аппликационным или внутрикожным способом, таким как укол иглой или инъекция), после чего врач осуществляет наблюдение на наличие аллергической реакции (например, покраснения, отека, зуда, образования волдырей и т.д.). В некоторых вариантах осуществления аллергическая реакция указывает на IgE-опосредованную реакцию. При аллергических заболеваниях глаз аппликационный накожный или внутрикожный тест на аллергию можно выполнять для оценки гиперчувствительности к содержащимся в воздухе аллергенам, включая, без ограничения, пылевых клещей, перхоти домашних животных и пыльцу.
В. Реакция на лечение
В некоторых вариантах осуществления введение индивидууму, как описано в настоящем документе (например, индивидууму с аллергическим заболеванием глаз), эффективного количества описанного в
- 13 045206 настоящей заявке антитела, которое связывается человеческим с сиглеком-8 (например, антитела к сиглеку-8), уменьшает один или более (например, один или более, два или более, три или более, четыре или более и т.д.) симптомов у индивидуума по сравнению с исходным уровнем до введения антитела.
Термины базовый уровень или базовое значение, взаимозаменяемо используемые в настоящем документе, могут относиться к измерению или характеристике симптома перед введением терапии (например, антитела к сиглеку-8) или в начале введения терапия. Исходное значение можно сравнить с эталонным значением для определения уменьшения или облегчения симптома аллергического заболевания глаз, рассматриваемого в настоящем документе. Эталонное значение и/или исходное значение могут быть получены от одного человека, от двух разных людей или от группы людей (например, группы из двух, трех, четырех, пяти или более индивидуумов).
Реакцию на лечение у индивидуумов с аллергическим заболеванием глаз можно оценить способами, известными в данной области. Например, реакция на лечение у индивидуума с аллергическим заболеванием глаз (например, аллергическим конъюнктивитом, кератоконъюнктивитом или гигантским папиллярным конъюнктивитом) может представлять собой уменьшение или ослабление любого из описанных в настоящей заявке симптомов. Симптомы аллергического заболевания глаз могут включать, без ограничения, зуд конъюнктивы, покраснение конъюнктивы, отек конъюнктивы, выделения из глаз, изъязвление, слезотечение, гипертрофию век, коркообразование, симблефарон, экзему в периокулярной области, мадароз, фотофобию, кератит, гигантские папилломы и катаракту. Реакция на лечение может привести к полной ремиссии (CR), частичной ремиссии (PR) или клиническому улучшению (CI) аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) у индивидуума.
В данной области техники известны способы измерения реакции на лечение аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита). Например, способы измерения реакции на лечение могут включать, без ограничения, уменьшение одного или более клинических симптомов (например, описанных выше), взятие соскоба конъюнктивы (например, для детектирования эозинофилов) и тестирование уровня IgE в образцах сыворотки и/или слезной жидкости. В некоторых вариантах осуществления для оценки симптомов, связанных с аллергическим заболеванием глаз (например, аллергическим конъюнктивитом, кератоконъюнктивитом или гигантским папиллярным конъюнктивитом) используется опросник на наличие симптомов аллергического конъюнктивита (ACS).
С. Введение
Для профилактики или лечения заболевания соответствующая доза активного агента будет зависеть от типа заболевания, подлежащего лечению, как определено выше, тяжести и течения заболевания, от того, вводится ли агент для профилактической или терапевтической цели, предшествующей терапии, истории болезни пациента и реакции на препарат, и от усмотрения лечащего врача. Агент соответственно вводят индивидууму за один раз или в течение нескольких процедур. В некоторых вариантах осуществления интервал между введениями описанного в настоящей заявке антитела к сиглеку-8 (например, антитела, которое связывается с человеческим сиглеком-8) составляет примерно один месяц или более. В некоторых вариантах осуществления интервал между введениями составляет примерно два месяца, примерно три месяца, примерно четыре месяца, примерно пять месяцев, примерно шесть месяцев или более. Используемый в контексте настоящего изобретения интервал между введениями относится к периоду времени между одним введением антитела и следующим введением антитела. Используемый в контексте настоящего изобретения интервал, составляющий примерно один месяц, включает четыре недели. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления интервал между введениями составляет примерно четыре недели, примерно пять недель, примерно шесть недель, примерно семь недель, примерно восемь недель, примерно девять недель, примерно десять недель, примерно одиннадцать недель, примерно двенадцать недель, примерно шестнадцать недель, примерно двадцать недель, примерно двадцать четыре недели или более. В некоторых вариантах осуществления лечение включает несколько введений антитела, причем интервал между введениями может варьировать. Например, интервал между первым введением и вторым введением составляет примерно один месяц, а интервалы между последующими введениями составляют примерно три месяца. В некоторых вариантах осуществления интервал между первым введением и вторым введением составляет примерно один месяц, интервал между вторым введением и третьим введением составляет примерно два месяца, а интервалы между последующими введениями составляют примерно три месяца. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят в фиксированной дозе. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе от примерно 0,1 до примерно 1800 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе, равной примерно любой из следующих доз: 0,1 мг, 0,5 мг, 1 мг, 5 мг, 10 мг, 20 мг, 30 мг, 40 мг, 50 мг, 60 мг, 70 мг, 80 мг, 90 мг, 100 мг, 150 мг, 200 мг, 250 мг, 300 мг, 350 мг, 400 мг, 450 мг, 500 мг, 550 мг, 600 мг, 650 мг, 700 мг, 750 мг, 800 мг, 850 мг, 900 мг, 950 мг, 1000 мг, 1100 мг, 1200 мг, 1300 мг, 1400
- 14 045206 мг, 1500 мг, 1600 мг, 1700 мг и 1800 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе от примерно 150 до примерно 450 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе, равной примерно любой из следующих доз: 150 мг, 200 мг, 250 мг, 300 мг, 350 мг, 400 мг и 450 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе от примерно 0,1 до примерно 20 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе от примерно 0,01 мг/кг до примерно 10 мг/кг на дозу. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8, (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму в дозе от примерно 0,1 до примерно 10 мг/кг или от примерно 1,0 до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 вводят индивидууму в дозе, примерно равной любой из следующих доз: 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1,0 мг/кг, 1,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 2,5 мг/кг, 3,0 мг/кг, 3,5 мг/кг, 4,0 мг/кг, 4,5 мг/кг, 5,0 мг/кг, 5,5 мг/кг, 6,0 мг/кг, 6,5 мг/кг, 7,0 мг/кг, 7,5 мг/кг, 8,0 мг/кг, 8,5 мг/кг, 9,0 мг/кг, 9,5 мг/кг или 10,0 мг/кг. Может быть использована любая из описанных выше частот дозирования. В способах или применениях композиций, описанных в настоящей заявке, можно использовать любую описанную выше частоту дозирования. Эффективность лечения описанным в настоящей заявке антителом (например, антителом, которое связывается с человеческим сиглеком-8) можно оценить с помощью любого описанного в настоящей заявке метода или анализа, выполняемого с интервалами от недели до трех месяцев. В некоторых вариантах осуществления эффективность лечения (например, уменьшение или облегчение одного или более симптомов) оценивают примерно один раз в месяц, примерно каждые два месяца, примерно каждые три месяца, примерно каждые четыре месяца, примерно каждые пять месяцев, примерно каждые шесть месяцев или более после введения антитела, которое связывается с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления эффективность лечения (например, уменьшение или облегчение одного или более симптомов) оценивают примерно каждую неделю, примерно каждые две недели, примерно каждые три недели, примерно каждые четыре недели, примерно каждые пять недель, примерно каждые шесть недель, примерно каждые семь недель, примерно каждые восемь недель, примерно каждые девять недель, примерно каждые десять недель, примерно каждые одиннадцать недель, примерно каждые двенадцать недель, примерно каждые шестнадцать недель, примерно каждые двадцать недель, примерно каждые двадцать четыре недели или более.
В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму ежемесячно в дозе до 3,0 мг/кг путем внутривенной инфузии. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму ежемесячно в дозе до 3,0 мг/кг путем подкожной инъекции. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму каждые четыре недели в дозе до 3,0 мг/кг путем внутривенной инфузии. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8) вводят индивидууму каждые четыре недели в дозе до 3,0 мг/кг путем подкожной инъекции.
Описанные в настоящей заявке антитела, которые связываются с человеческим сиглеком-8, могут быть использованы по отдельности или в комбинации с другими агентами в описанных в настоящей заявке способах. Например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8, можно вводить вместе с одним или более (например, одним или более, двумя или более, тремя или более, четырьмя или более и т.д.) дополнительными терапевтическими агентами для лечения и/или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита). Рассматриваемые в настоящей заявке терапевтические агенты включают, без ограничения, кортикостероид (например, будесонид, дексаметазон, гидрокортизон, метилпреднизолон, преднизолон или предизон), антигистаминное средство (например, левокабастина гидрохлорид или олопатадин), кетотифен, азеластин, эпинастин, бепостатин, циклоспорин и нестероидное противовоспалительное средство (НПВП, NSAID).
Такие указанные выше виды комбинированной терапии включают комбинированное введение (при котором два или более терапевтических агента включены в один и тот же или отдельные составы) и раздельное введение, при котором введение антитела по настоящему изобретению может происходить до, одновременно и/или после введения одного или более дополнительных терапевтических агентов. В некоторых вариантах осуществления введение описанного в настоящей заявке антитела к сиглеку-8 и введение одного или более дополнительных терапевтических агентов происходит в пределах примерно одного месяца, примерно двух месяцев, примерно трех месяцев, примерно четырех месяцев, примерно пяти месяцев или примерно шести месяцев. В некоторых вариантах осуществления введение описанного в настоящей заявке антитела к сиглеку-8 и введение одного или более дополнительных терапевтических
- 15 045206 агентов происходит в пределах примерно одной недели, примерно двух недель или примерно трех недель. В некоторых вариантах осуществления введение описанного в настоящей заявке антитела к сиглеку-8 и введение одного или более дополнительных терапевтических агентов происходит в пределах примерно одного дня, примерно двух дней, примерно трех дней, примерно четырех дней, примерно пяти дней или примерно шести дней.
Антитела к сиглеку-8 и/или один или более дополнительных терапевтических агентов можно вводить любым подходящим способом введения, известным в данной области, включая, без ограничения, пероральное введение, подъязычное введение, трансбуккальное введение, топическое введение, ректальное введение, ингаляционное введение, трансдермальное введение, подкожную инъекцию, внутрикожную инъекцию, внутривенную (IV) инъекцию, внутриартериальную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутрисердечную инъекцию, внутрикостную инъекцию, внутрибрюшинную инъекцию, трансмукозальное введение, вагинальное введение, внутривенное введение, внутрисуставное введение, периартикулярное введение, локальное введение, аппликационное накожное введение или любые их комбинации.
D. Антитела
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к выделенным антителам, которые связываются с человеческим сиглеком-8 (например, антителам-агонистам, которое связываются с человеческим сиглеком-8). В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 имеет одну или более из следующих характеристик: (1) связывается с человеческим сиглеком-8; (2) связывается с внеклеточным доменом человеческого сиглека-8; (3) связывается с человеческим сиглеком-8 с более высоким сродством, чем мышиное антитело 2Е2 и/или мышиное антитело 2С4; (4) связывается с человеческим сиглеком-8 с более высокой авидностью, чем мышиное антитело 2Е2 и/или мышиное антитело 2С4; (5) согласно результатам анализа термического сдвига имеет Tm примерно 7072°С или выше; (6) имеет пониженную степень фукозилирования или является нефукозилированным; (7) связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на эозинофилах и индуцирует апоптоз эозинофилов; (8) связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках и истощает или уменьшает количество тучных клеток; (9) связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках, и ингибирует FcεRI-зависимую активность тучных клеток (например, высвобождение гистамина, высвобождение PGD2, приток Са2+ и/или высвобождение β-гексозаминидазы и т.д.); (10) сконструировано для улучшения активности ADCC; (11) связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках, и убивает тучные клетки за счет активности ADCC (in vitro и/или in vivo); (12) связывается с сиглеком-8 человека и примата, не являющегося человеком; (13) связывается с доменом 1, доменом 2 и/или доменом 3 человеческого сиглека-8 или связывается с полипептидом сиглека-8, содержащим домен 1, домен 2 и/или домен 3 человеческого сиглека-8 (например, описанными в настоящей заявке слитыми белками); и (14) истощает активированные эозинофилы с ЕС50, меньшим по сравнению с ЕС50 мышиного антитела 2Е2 или 2С4. Любое из антител, описанных в патенте США № 9546215 и/или WO 2015089117 могут найти применение в способах, композициях и наборах, представленных в настоящем изобретении.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителам, которые связываются с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческий сиглек-8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления человеческий сиглек-8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках, и истощает или уменьшает количество тучных клеток. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках, и ингибирует опосредованную тучными клетками активность.
В одном из аспектов изобретение относится к антителам, которые связываются с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления человеческий сиглек-8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления человеческий сиглек-8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 1 человеческого сиглека-8, причем домен 1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 2 человеческого сиглека-8, причем домен 2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 3 человеческого сиглека-8, причем домен 3 содержит аминокислоту последовательность SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 116, но не связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 117, но не связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ
- 16 045206
ID NO: 117, но не связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 116. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с линейным эпитопом во внеклеточном домене человеческого сиглека-8. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с конформационным эпитопом во внеклеточном домене человеческого сиглека-8. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на эозинофилах, и индуцирует апоптоз эозинофилов. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках, и истощает тучные клетки. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком8, экспрессируемым на тучных клетках, и ингибирует опосредованную тучными клетками активность. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком-8, экспрессируемым на тучных клетках, и убивает тучные клетки за счет активности ADCC. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело истощает тучные клетки и ингибирует активацию тучных клеток. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело истощает активированные эозинофилы и ингибирует активацию тучных клеток. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело (например, нефукозилированное антитело к сиглеку-8) истощает эозинофилы в крови и ингибирует активацию тучных клеток.
Настоящее изобретение относится к выделенному антителу к сиглеку-8, которое связывается с сиглеком-8 человека и примата, не относящегося к человеку. Идентификация антител с кроссреактивностью в отношении приматов была бы полезной для доклинического тестирования антител к сиглеку-8 у приматов, не относящихся к человеку. В одном из аспектов изобретение относится к антителам, которые связываются с сиглеком-8 примата, не относящегося к человеку. В одном из аспектов изобретение относится к антителам, которые связываются с сиглеком-8 человека и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком. В некоторых вариантах осуществления сиглек-8 примата, не являющегося человеком, содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118 или ее часть. В некоторых вариантах осуществления сиглек-8 примата, не являющегося человеком, содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119 или ее часть. В некоторых вариантах осуществления примат, не являющийся человеком, представляет собой павиана (например, Papio Anubis). В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком, связывается с эпитопом в домене 1 человеческого сиглека-8. В дополнительном варианте осуществления домен 1 человеческого сиглека-8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком, связывается с эпитопом в домене 3 человеческого сиглека-8. В дополнительном варианте осуществления домен 3 человеческого сиглека-8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком, представляет собой гуманизированное антитело, химерное антитело или человеческое антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком, представляет собой мышиное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком, представляет собой человеческое антитело IgG1.
В одном из аспектов описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 представляет собой моноклональное антитело. В одном из аспектов описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 представляет собой фрагмент антитела (включая антигенсвязывающий фрагмент), например, фрагмент Fab, Fab'SH, Fv, scFv или (Fab')2. В одном из аспектов описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 содержит фрагмент антитела (включая антигенсвязывающий фрагмент), например, фрагмент Fab, Fab'-SH, Fv, scFv или (Fab')2. В одном из аспектов описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 представляет собой химерное, гуманизированное антитело или человеческое антитело. В одном из аспектов любое из описанных в настоящей заявке антител к сиглеку-8 является очищенным.
В одном из аспектов представлены антитела к сиглеку-8, которые конкурируют с мышиным антителом 2Е2 и мышиным антителом 2С4, связывающимися с сиглеком-8. Также представлены антитела к сиглеку-8, которые связываются с тем же эпитопом, что и мышиные антитела 2Е2 и 2С4. Мышиные антитела к сиглеку-8, 2Е2 и 2С4, описаны в патенте США № 8207305; патенте США № 8197111, патенте США. 7871612 и патенте США № 7557191.
В одном из аспектов представлены антитела к сиглеку-8, которые конкурируют с любым описанным в настоящей заявке антителом к сиглеку-8 (например, HEKA, HEKF, 1C3, 1Н10, 4F11, 2С4, 2Е2) за связывание с сиглеком-8. Также представлены антитела к сиглеку-8, которые связываются с тем же эпитопом, что и любое из описанных в настоящей заявке антител к сиглека-8 (например, FLEKA, FLEKF, 1C3, 1Н10, 4F11.2C4, 2Е2).
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим антитела к сиглеку-8. В некоторых вариантах осуществления представлены векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие антитела к сиглеку-8. В некоторых вариантах осуществления представлены клетки
- 17 045206 хозяева, содержащие такие векторы. В другом аспекте настоящее изобретение относится к композициям, содержащим антитела к сиглеку-8 или полинуклеотиды, кодирующие антитела к сиглеку-8. В некоторых вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию для лечения аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита). В некоторых вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию для профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита).
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей HVR мышиного антитела 2С4. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей HVR мышиного антитела 2Е2. В некоторых вариантах осуществления HVR представляет собой CDR по Кабат или CDR по Чотиа.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей HVR мышиного антитела 1C3. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей HVR мышиного антитела 4F11. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей HVR мышиного антитела 1Н10. В некоторых вариантах осуществления HVR представляет собой CDR по Кабат или CDR по Чотиа.
В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 1 человеческого сиглека-8, причем домен 1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 2 человеческого сиглека-8, причем домен 2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 3 человеческого сиглека-8, причем домен 3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114.
В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 116, но не связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту с SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 117, но не связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 117, но не связывается со слитым белком, содержащим аминокислоту SEQ ID NO: 116.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94; и/или вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100, и (iii) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 2 человеческого сиглека-8, причем домен 2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95; и/или вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101, и (iii) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с эпитопом в домене 3 человеческого сиглека-8, причем домен 3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; и/или вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102 и (iii) HVR-L3, содержащую амино
- 18 045206 кислотную последовательность SEQ ID NO: 105. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с эпитопом в домене 1 человеческого сиглека-8, причем домен 1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с человеческим сиглеком-8 и сиглеком-8 примата, не являющегося человеком.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и/или причем вариабельная область легкой цепи содержит: (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVRL2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 67-70; и/или причем вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и/или причем вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVRL2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 67-70; и/или причем вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94; и/или вариабельную область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95; и/или вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; и/или вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105.
Описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 может содержать любую подходящую последовательность каркасного участка вариабельного домена при условии, что антитело сохраняет способ
- 19 045206 ность связываться с человеческим сиглеком-8. Используемые в настоящем описании каркасные участки тяжелой цепи обозначены как HC-FR1-FR4, а каркасные участки легкой цепи обозначены как LC-FR1FR4. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит последовательность каркасного участка вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO: 26, 34, 38 и 45 (НС-Fri, HC-FR2, HC-FR3 и HC-FR4, соответственно). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит последовательность каркасного участка вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO: 48, 51, 55 и 60 (LCFR1, LC-FR2, LC-FR3 и LC-FR4, соответственно). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит последовательность каркасного участка вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO: 48, 51, 58 и 60 (LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3 и LC-FR4, соответственно).
В одном из вариантов осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность каркасного участка и гипервариабельные области, причем последовательность каркасного участка содержит последовательности HC-FR1-HC-FR4 SEQ ID NO: 26-29 (HC-FR1), SEQ ID NO: 31-36 (HC-FR2), SEQ ID NO: 38-43 (HC-FR3) и SEQ ID NO: 45 или 46 (HC-FR4), соответственно; HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; и HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63. В одном из вариантов осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность каркасного участка и гипервариабельные области, причем последовательность каркасного участка содержит последовательности HCFR1-HC-FR4 SEQ ID NO: 26-29 (HC-FR1), SEQ ID NO: 31-36 (HC-FR2), SEQ ID NO: 38-43 (HC-FR3) и SEQ ID NO: 45 или 46 (HC-FR4), соответственно; HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; и HVRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 67-70. В одном из вариантов осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность каркасного участка и гипервариабельные области, причем последовательность каркасного участка содержит последовательности LC-FR1-LC-FR4 SEQ ID NO: 48 или 49 (LC-FR1), SEQ ID NO: 51-53 (LC-FR2), SEQ ID NO: 55-58 (LC-FR3) и SEQ ID NO: 60 (LC-FR4), соответственно; HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65; и HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66. В одном из вариантов осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность каркасного участка области и гипервариабельные области, причем последовательность каркасного участка содержит последовательности LC-FR1-LC-FR4 SEQ ID NO: 48 или 49 (LC-FR1), SEQ ID NO: 51-53 (LC-FR2), SEQ ID NO: 55-58 (LC-FR3) и SEQ ID NO: 60 (LC-FR4), соответственно; HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65; и HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71. В одном из вариантов осуществления этих антител вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-10, и вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16-22. В одном из вариантов осуществления этих антител вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-10, а вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 23 или 24. В одном из вариантов осуществления этих антител вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 11-14, и вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16-22. В одном из вариантов осуществления этих антител вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 11-14, и вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 23 или 24. В одном из вариантов осуществления этих антител вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. В одном из вариантов осуществления этих антител вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления последовательности HVR тяжелой цепи содержат:
a) HVR-H1 (IYGAH (SEQ ГО NO: 61));
b) HVR-H2 (VIWAGGSTNYNSALMS (SEQ ID NO: 62)); и
с) HVR-H3 (DGSSPYYYSMEY (SEQ ID NO: 63); DGSSPYYYGMEY (SEQ ID NO: 67); DGSSPYYYSMDY (SEQ ID NO: 68); DGSSPYYYSMEV (SEQ ГО NO: 69); или DGSSPYYYGMDV (SEQ ID NO: 70).
В некоторых вариантах осуществления последовательности HVR тяжелой цепи содержат:
- 20 045206
a) HVR-H1 (SYAMS (SEQ ID NO: 88); DYYMY (SEQ ID NO: 89); или SSWMN (SEQ ID NO: 90));
b) HVR-H2 (IISSGGSYTYYSDSVKG (SEQ ID NO: 91); RIAPEDGDTEYAPKFQG (SEQ ID NO: 92); или QIYPGDDYINYNGKFKG (SEQ ID NO: 93)); и c) HVR-H3 (HETAQAAWFAY (SEQ ID NO: 94); EGNYYGSSILDY (SEQ ID NO: 95); или LGPYGPFAD (SEQ ID NO: 96)).
В некоторых вариантах осуществления последовательности FR тяжелой цепи содержат:
a) HC-FRl (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLT (SEQ ГО NO: 26);
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLT (SEQ ГО NO: 27);
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS (SEQ ГО NO: 28); или QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLT (SEQ ГО NO: 29));
b) HC-FR2 (WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ГО NO: 31); WVRQAPGKGLEWLG (SEQ ГО NO: 32); WVRQAPGKGLEWLS (SEQ ГО NO: 33); WVRQAPGKGLEWVG (SEQ ГО NO: 34); WIRQPPGKGLEWIG (SEQ ГО NO: 35); или WVRQPPGKGLEWLG (SEQ IDNO: 36));
с) HC-FR3 (RFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ГО NO: 38);
RLSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ГО NO: 39);
RLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ГО NO: 40);
RFSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ГО NO: 41);
RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR (SEQ ID NO: 42); или RLSISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCAR (SEQ ГО NO: 43)); и d) HC-FR4 (WGQGTTVTVSS (SEQ ГО NO: 45); или WGQGTLVTVSS (SEQ ГО NO: 46)).
В некоторых вариантах осуществления последовательности HVR легкой цепи содержат:
a) HVR-L1 (SATSSVSYMH (SEQ ID NO: 64));
b) HVR-L2 (STSNLAS (SEQ ID NO: 65); и
c) HVR-L3 (QQRSSYPFT (SEQ ID NO: 66); или QQRSSYPYT (SEQ ID NO: 71).
В некоторых вариантах осуществления последовательности HVR тяжелой цепи содержат:
a) HVR-Ll (SASSSVSYMH (SEQ ГО NO: 97); RASQDITNYLN (SEQ ГО NO: 98); или SASSSVSYMY (SEQ ГО NO: 99));
b) HVR-L2 (DTSKLAY (SEQ ГО NO: 100); FTSRLHS (SEQ ГО NO: 101); или
DTSSLAS (SEQ ID NO: 102)); и
с) HVR-L3 (QQWSSNPPT (SEQ ГО NO: 103); QQGNTLPWT (SEQ ГО NO: 104); или QQWNSDPYT (SEQ ID NO: 105)).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, (ii) HVRH2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91 и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93 и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102 и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105.
В некоторых вариантах осуществления последовательности FR легкой цепи содержат:
a) LC-FR1 (EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ ГО NO: 48); или
EIILTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 49);
b) LC-FR2 (WFQQKPGQAPRLLIY (SEQ ГО NO: 51); WFQQKPGQAPRLWIY (SEQ
ID NO: 52); или WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 53));
с) LC-FR3 (GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 55);
GV PARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 56);
GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 57); или GIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ IDNO: 58)); и d) LC-FR4 (FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60).
- 21 045206
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8 (например, гуманизированному антителу к сиглеку-8), которое связывается с человеческим сиглеком-8, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, при этом антитело содержит:
(a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий:
(1) HC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 26-29;
(2) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61;
(3) HC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 31-36;
(4) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;
(5) HC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 38-43;
(6) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и (7) HC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45-46, и/или (b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий:
(1) LC-FR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 48-49;
(2) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64;
(3) LC-FR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51-53;
(4) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;
(5) LC-FR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 55-58;
(6) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; и (7) LC-FR4, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 2-10, и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 16-22. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 2-14, и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 16-24. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 2-10, и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 23 или 24. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 11-14, и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 16-22. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 11-14, и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 23 или 24. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 6; и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 16 или 21.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 106-108, и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 109-111. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 106 и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 109. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 107 и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 110. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 108 и/или содержащему вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 111.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 2-14. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 106-108. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности, содержит замены, вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но антитело, содержащее такую аминокислотную последовательность, сохраняет способность связываться с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции (например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот) происходят в областях за пределами HVR (т.е. в FR). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 106-108.
- 22 045206
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 16-24. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 109-111. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность, имеющая 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности, содержит замены, вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но антитело, содержащее такую аминокислотную последовательность, сохраняет способность связываться с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции (например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот) происходят в областях за пределами HVR (т.е. в FR). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 или 21. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 109-111.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему (а) одну, две или три HVR VH, выбранные из представленных в табл. 1, и/или (b) одну, две или три HVR VL, выбранные из представленных в табл. 1.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему (а) одну, две или три HVR VH, выбранные из представленных в табл. 2, и/или (b) одну, две или три HVR VL, выбранные из представленных в табл. 2.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему: (а) одну, две, три или четыре FR VH, выбранные из представленных в табл. 3, и/или (b) одну, две, три или четыре FR VL, выбранные из представленных в табл. 3.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи и/или вариабельный домен легкой цепи антитела, приведенный в табл. 4, например, антитела HAKA, антитела HAKB, антитела HAKC и т.д.
Таблица 1. Аминокислотные последовательности HVR антител
Цепь антитела | HVR1 | HVR2 | HVR3 |
Антитело 2Е2 |
- 23 045206
Тяжелая цепь | IYGAH SEQIDNO: 61 | VIWAGGSTNYNSA LMS SEQ ID NO: 62 | DGSSPYYYSMEY SEQ ID NO: 63 |
Легкая цепь | SATSSVSYMH SEQ ID NO: 64 | STSNLAS SEQ ID NO: 65 | QQRSSYPFT SEQ ID NO: 66 |
Гуманизированные варианты тяжелых цепей RHA 2Е2, RHB 2Е2, RHC 2Е2, RHD 2Е2, RHE 2Е2, RHF 2Е2, RHG 2Е2, RH4 2 2Е2, и RHB2 2Е2 | |||
Тяжелая цепь | IYGAH SEQIDNO: 61 | VIWAGGSTNYNSA LMS SEQ ID NO: 62 | DGSSPYYYSMEY SEQ ID NO: 63 |
Гуманизированные варианты легкой цепей RKA 2Е2, RKB 2Е2, RKC 2Е2, RKD 2Е2, RKE 2Е2, RKF 2Е2 и RKG 2Е2 | |||
Легкая цепь | SATSSVSYMH SEQ ID NO: 64 | STSNLAS SEQ ID NO: 65 | QQRSSYPFT SEQ ID NO: 66 |
Гуманизированные варианты тяжелых цепей RHE S G 2Е2, RHE Е D 2Е2, RHE Y-V 2Е2 и тройного мутанта RHE 2Е2 | |||
RHE S-G 2Е2 | IYGAH SEQIDNO: 61 | VIWAGGSTNYNSA LMS SEQ ID NO: 62 | DGSSPYYYGMEY SEQ ID NO: 67 |
RHE E-D 2Е2 | IYGAH SEQIDNO: 61 | VIWAGGSTNYNSA LMS SEQ ID NO: 62 | DGSSPYYYSMDY SEQ ID NO: 68 |
RHE Y-V 2Е2 | IYGAH SEQIDNO: 61 | VIWAGGSTNYNSA LMS SEQ ID NO: 62 | DGSSPYYYSMEV SEQ ID NO: 69 |
Три RHE 2Е2 | IYGAH SEQIDNO:61 | VIWAGGSTNYNSA LMS SEQ ID NO: 62 | DGSSPYYYGMDV SEQ ID NO: 70 |
Гуманизированные варианты легких цепей RKA F-Y 2Е2 и RKFFY2Е2 | |||
RKA F-Y 2Е2 | SATSSVSYMH SEQ ID NO: 64 | STSNLAS SEQ ID NO: 65 | QQRSSYPYT SEQ ID NO: 71 |
RKF F-Y 2Е2 | SATSSVSYMH SEQ ID NO: 64 | STSNLAS SEQ ID NO: 65 | QQRSSYPYT SEQ ID NO: 71 |
Таблица 2. Аминокислотные последовательности HVR мышиных антител 1C3, 1H10 И 4F11
Антитело | Цепь | HVR1 | HVR2 | HVR3 |
1C3 | Тяжелая цепь | SYAMS SEQ ID NO: 88 | IISSGGSYTYYSD SVKG SEQIDNO: 91 | HETAQAAWFA Y SEQ ID NO: 94 |
1H10 | Тяжелая цепь | DYYMY SEQ ID NO: 89 | RIAPEDGDTEYAP KFQG SEQ Ш NO: 92 | EGNYYGSSILD Y SEQ ID NO: 95 |
4F11 | Тяжелая цепь | SSWMN SEQ ID NO: 90 | QIYPGDDYTNYN GKFKG SEQ ID NO: 93 | LGPYGPFAD SEQ ID NO: 96 |
1C3 | Легкая цепь | SASSSVSYMH SEQ ID NO: 97 | DTSKLAY SEQ Ш NO: 100 | QQWSSNPPT SEQ ID NO: 103 |
1H10 | Легкая цепь | RASQDITNYL N SEQ ID NO: 98 | FTSRLHS SEQIDNO: 101 | QQGNTLPWT SEQ ID NO: 104 |
4F11 | Легкая цепь | SASSSVSYMY SEQ ID NO: 99 | DTSSLAS SEQ Ш NO: 102 | QQWNSDPYT SEQ ID NO: 105 |
- 24 045206
Таблица 3. Аминокислотные последовательности FR антител
Тяжела я цепь | FR1 | FR2 | FR3 | FR4 |
2Е2 | QVQLKESGPGL VA PSQSLSITCTVSG FS LT (SEQ ID NO: 25) | WVRQPPGKGLE W LG (SEQ ID NO:30) | RLSISKDNSKSQ VF LKINSLQTDDTA L YYCAR (SEQ ID NO: 37) | WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 44) |
RHA 2Е2 | EVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAAS GF SLT (SEQ ID NO: 26) | WVRQAPGKGLE W VS (SEQ ID NO: 31) | RFTISKDNSKNT VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO:38) | WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 45) |
RHB 2Е2 | EVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAVS GF SLT (SEQ ID NO: 27) | WVRQAPGKGLE W LG (SEQ ID NO: 32) | RLSISKDNSKNT VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO: 39) | WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 45) |
RHC | EVQLVESGGGL | WVRQAPGKGLE | RFTISKDNSKNT | WGQGTTVTVSS |
- 25 045206
2E2 | VQ PGGSLRLSCAVS GF SLT (SEQ ID NO: 27) | W VS (SEQ ID NO: 31) | VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO: 38) | (SEQ ID NO: 45) |
RHD | EVQLVESGGGL | WVRQAPGKGLE | RFTISKDNSKNT | WGQGTTVTVSS |
2E2 | VQ | W | VY | (SEQ ID NO: 45) |
PGGSLRLSCAAS | LS | LQMNSLRAEDT | ||
GF | (SEQ ID NO: 33) | AV | ||
SLT | YYCAR | |||
(SEQ ID NO: 26) | (SEQ ID NO: 38) | |||
RHE | EVQLVESGGGL | WVRQAPGKGLE | RFTISKDNSKNT | WGQGTTVTVSS |
2E2 | VQ | W | VY | (SEQ ID NO: 45) |
PGGSLRLSCAAS | VG | LQMNSLRAEDT | ||
GF | (SEQ ID NO: 34) | AV | ||
SLT | YYCAR | |||
(SEQ ID NO: 26) | (SEQ ID NO: 38) | |||
RHF | EVQLVESGGGL | WVRQAPGKGLE | RLTISKDNSKNT | WGQGTTVTVSS |
2E2 | VQ | W | V | (SEQ ID NO: 45) |
PGGSLRLSCAAS | VS | YLQMNSLRAED | ||
GF | (SEQ ID NO: 31) | TA | ||
SLT | VYYCAR | |||
(SEQ ID NO: 26) | (SEQ ID NO: 40) | |||
RHG | EVQLVESGGGL | WVRQAPGKGLE | RFSISKDNSKNT | WGQGTTVTVSS |
2E2 | VQ | W | VY | (SEQ ID NO: 45) |
PGGSLRLSCAAS | VS | LQMNSLRAEDT | ||
GF | (SEQ ID NO: 31) | AV | ||
SLT | YYCAR | |||
(SEQ ID NO: 26) | (SEQ ID NO: 41) | |||
RHA2 | QVQLQESGPGL | WIRQPPGKGLE | RVTISVDTSKNQ | WGQGTLVTVSS |
2E2 | VK | WI | FS | (SEQ ID NO: 46) |
PSETLSLTCTVS | G | LKLSSVTAADT | ||
GG | (SEQ ID NO: 35) | AV | ||
SIS | YYCAR | |||
(SEQ ID NO: 28) | (SEQ ID NO: 42) |
- 26 045206
2E2 RHB2 | QVQLQESGPGL VK PSETLSLTCTVS GF SLT (SEQ SD NO: 29) | WVRQPPGKGLE W LG (SEQ ID NO: 36) | RLSISKDNSKNQ VS LKLSSVTAADT AV YYCAR (SEQ ID NO: 43) | WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 46) |
RHE S- G2E2 | EVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAAS GF SLT (SEQ ID NO: 26) | WVRQAPGKGLE W VG (SEQ ID NO: 34) | RFTISKDNSKNT VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO: 38) | WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 45) |
RHE E- D2E2 | EVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAAS GF SLT (SEQ ID NO: 26) | WVRQAPGKGLE W VG (SEQ ID NO: 34) | RFTISKDNSKNT VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO: 38) | WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 45) |
RHE Y- V2E2 | EVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAAS GF SLT (SEQ ID NO: 26) | WVRQAPGKGLE W VG (SEQ ID NO: 34) | RFTISKDNSKNT VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO: 38) | WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 45) |
Тройно Й мутант RHE 2E2 | EVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAAS GF SLT (SEQ ID NO: 26) | WVRQAPGKGLE W VG (SEQ ID NO: 34) | RFTISKDNSKNT VY LQMNSLRAEDT AV YYCAR (SEQ ID NO: 38) | WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 45) |
Легкая цепь | FR1 | FR2 | FR3 | FR4 |
2E2 | QIILTQSPAIMSA SP GEKVSITC | WFQQKPGTSPK LW IY | GVPVRFSGSGSG TS YSLTISRMEAED | FGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 59) |
- 27 045206
(SEQ ID NO: 47) | (SEQ ID NO: 50) | A ATYYC (SEQ ID NO: 54) | ||
RKA | EIVLTQSPATLS LSP GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | WFQQKPGQAPR LL IY (SEQ ID NO: 51) | GIPARFSGSGSG TD FTLTISSLEPEDF AV YYC (SEQ ID NO: 55) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKB | EIILTQSPATLSL SP GERATLSC (SEQ ID NO: 49) | WFQQKPGQAPR L WIY (SEQ ID NO: 52) | GVPARFSGSGSG T DYTLTISSLEPE DF AVYYC (SEQ ID NO: 56) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKC | EIILTQSPATLSL SP GERATLSC (SEQ ID NO: 49) | WFQQKPGQAPR LL IY (SEQ ID NO: 51) | GIPARFSGSGSG TD FTLTISSLEPEDF AV YYC (SEQ ID NO: 55) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKD | EIVLTQSPATLS LSP GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | WFQQKPGQAPR L WIY (SEQ ID NO: 52) | GIPARFSGSGSG TD FTLTISSLEPEDF AV YYC (SEQ ID NO: 55) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKE | EIVLTQSPATLS LSP GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | WFQQKPGQAPR LL IY (SEQ ID NO: 51) | GVPARFSGSGSG T DFTLTISSLEPED FA VYYC (SEQ ID NO: 57) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKF | EIVLTQSPATLS LSP | WFQQKPGQAPR LL | GIPARFSGSGSG TD | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
- 28 045206
GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | IY (SEQ ID NO: 51) | YTLTISSLEPEDF A VYYC (SEQ ID NO: 58) | ||
RKG | EIVLTQSPATLS LSP GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | WYQQKPGQAP RL LIY (SEQ ID NO: 53) | GIPARFSGSGSG TD FTLTISSLEPEDF AV YYC (SEQ ID NO: 55) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKA F- Y2E2 | EIVLTQSPATLS LSP GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | WFQQKPGQAPR LL IY (SEQ ID NO: 51) | GIPARFSGSGSG TD FTLTISSLEPEDF AV YYC (SEQ ID NO: 55) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
RKF F- Y2E2 | EIVLTQSPATLS LSP GERATLSC (SEQ ID NO: 48) | WFQQKPGQAPR LL IY (SEQ ID NO: 51) | GIPARFSGSGSG TD YTLTISSLEPEDF A VYYC (SEQ ID NO: 58) | FGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 60) |
Таблица 4. Аминокислотные последовательности вариабельных областей антител
Название антитела | Вариабельная последовательность тяжелой цепи | Вариабельная последовательность легкой цепи |
ch2C4 | ch2C4 VH | ch2C4 VK |
ch2E2 | ch2E2 VH (SEQ ID NO: 1) | ch2E2 VK (SEQ ID NO: 15) |
cVHKA | ch2E2 VH (SEQ ID NO: 1) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
cVHKB | ch2E2 VH (SEQ ID NO: 1) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HAcVK | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | ch2E2 VK (SEQ ID NO: 15) |
HBcVK | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | ch2E2 VK (SEQ ID NO: 15) |
HAKA | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
HAKB | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HAKC | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
-29045206
HAKD | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HAKE | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HAKF | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HAKG | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HBKA | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
HBKB | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HBKC | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HBKD | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HBKE | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HBKF | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HBKG | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HCKA | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKA (SEQ ED NO: 16) |
HCKB | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HCKC | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HCKD | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HCKE | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HCKF | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HCKG | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HDKA | 2E2 RHD (SEQ ED NO: 5) | 2E2 RKA (SEQ ED NO: 16) |
HDKB | 2E2 RHD (SEQ ID NO: 5) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HDKC | 2E2 RHD (SEQ ED NO: 5) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HDKD | 2E2 RHD (SEQ ID NO: 5) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HDKE | 2E2 RHD (SEQ ID NO: 5) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HDKF | 2E2 RHD (SEQ ID NO: 5) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HDKG | 2E2 RHD (SEQ ID NO: 5) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HEKA | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKA (SEQ ED NO: 16) |
HEKB | 2E2 RHE (SEQ ED NO: 6) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HEKC | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HEKD | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HEKE | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HEKF | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HEKG | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HFKA | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
HFKB | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
- 30 045206
HFKC | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HFKD | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HFKE | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HFKF | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HFKG | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HGKA | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
HGKB | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HGKC | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HGKD | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HGKE | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HGKF | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HGHG | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HA2KA | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
HA2KB | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HB2KA | 2E2 RHB2 (SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
HB2KB | 2E2 RHB2 (SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
HA2KF | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HB2KF | 2E2 RHB2 (SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HA2KC | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HA2KD | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HA2KE | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HA2KF | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
HA2KG | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
HB2KC | 2E2RHB2 {SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
HB2KD | 2E2 RHB2 (SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
HB2KE | 2E2RHB2 {SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
HA2KFmu t | 2E2 RHA2 (SEQ ID NO: 9) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HB2KFmut | 2E2 RHB2 (SEQ ID NO: 10) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HEKAmut | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKA F-Y mut (SEQ ID NO: 23) |
HEKFmut | 2E2 RHE (SEQ ID NO: 6) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HAKFmut | 2E2 RHA (SEQ ID NO: 2) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HBKFmut | 2E2 RHB (SEQ ID NO: 3) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HCKFmut | 2E2 RHC (SEQ ID NO: 4) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
- 31 045206
HDKFmut | 2E2 RHD (SEQ ID NO: 5) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HFKFmut | 2E2 RHF (SEQ ID NO: 7) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
HGKFmut | 2E2 RHG (SEQ ID NO: 8) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
RHE Y- VKA | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
RHE Y- VKB | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
RHE Y- VKC | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
RHE Y- VKD | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
RHE Y- VKE | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
RHE Y- VKF | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
RHE Y- VKG | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
RHE E- DKA | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
RHE E- DKB | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
RHE E- DKC | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
RHE E- DKD | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
RHE E- DKE | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
RHE E- DKF | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
RHE E- DKG | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
RHE E- DKFmut | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
RHE S- GKA | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
RHE S- | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
- 32 045206
GKB | ||
RHE S- GKC | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
RHE S- GKD | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
RHE S- GKE | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
RHE S- GKF | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
RHE S- GKG | 2E2 RHE S-G (SEQ ID NO: 11) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
RHE Triple-KA | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKA (SEQ ID NO: 16) |
RHE Triple-КВ | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKB (SEQ ID NO: 17) |
RHE Triple-КС | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKC (SEQ ID NO: 18) |
RHE Triple-KD | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKD (SEQ ID NO: 19) |
RHE Triple-KE | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKE (SEQ ID NO: 20) |
RHE Triple-KF | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKF (SEQ ID NO: 21) |
RHE Triple-KG | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKG (SEQ ID NO: 22) |
RHE TripleKFmut | Тройной мутант RHE 2E2 (SEQ ID NO: 14) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
RHE Y- VKFmut | 2E2 RHE Y-V (SEQ ID NO: 13) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
RHE E- DKFmut | 2E2 RHE E-D (SEQ ID NO: 12) | 2E2 RKF F-Y mut (SEQ ID NO: 24) |
Существуют пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, имеющих тяжелые цепи, обозначенные как α, β, ε, γ, и μ, соответственно. Классы γ и α дополнительно подразделяются на подклассы, например, у людей выделяют следующие подклассы: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Антитела IgG1 могут существовать в многочисленных полиморфных вариантах, называемых аллотипами (см. Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol. 1 Issue 4 1-7), любой из которых подходит для использования в некоторых из вариантов осуществления настоящего изобретения. Распространенными аллотипными вариантами в популяциях человека являются те, которые обозначены буквами a, f, n, z или их комбинации. В любом из вариантов осуществления настоящего изобретения антитело может содержать Fc-область тяжелой цепи, содержащую Fc-область человеческого IgG. В других вариантах осуществления Fc-область человеческого IgG содержит человеческий IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG4. В некоторых вариантах осуществления человеческий IgG4 содержит аминокислотную замену S228P, причем аминокислотные остатки пронумерованы в соответствии с EU индексом, как у Кабат. В некоторых вариантах осуществления человеческий IgG1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления человеческий IgG4 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к антителу к сиглеку-8, содержащему тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75; и/или легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 76 или 77. В некоторых вариантах осуществления антитело может содержать тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87; и/или легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 индуцирует апоптоз активированных эозинофилов. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 индуцирует апоптоз эозинофилов, находящихся в покое. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 истощает активированные эозинофилы и ингибирует активацию тучных клеток. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 истощает или уменьшает количество тучных клеток и ингибирует активацию тучных клеток. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 истощает или уменьшает количество тучных клеток. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 вызывает гибель тучных клеток благодаря активности ADCC. В некоторых вариантах осуществления антитело истощает или уменьшает в ткани количество тучных клеток, экспрессирующих сиглек-8. В некоторых вариантах осуществления антитело истощает или уменьшает в биологической жидкости количество тучных клеток, экспрессирующих сиглек-8.
1. Сродство антитела
В некоторых аспектах антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, связывается с человеческим сиглеком-8 с примерно таким же или более высоким сродством и/или более высокой авидностью по сравнению с мышиным антителом 2Е2 и/или мышиным антителом 2С4. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, представленное в настоящем описании, имеет константу диссоциации
- 33 045206 (Kd) <1 мкМ, <150 нМ, <100 нМ, <50 нМ, <10 нМ, <1 нМ, <0,1 нМ, <0,01 нМ или <0,001 нМ (например, 10-8 М или менее, например, от 10-8 М до 10-13 М, например, от 10-9 Мт до 10-13 М). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, связывается с человеческим сиглеком-8 со сродством, примерно в 1,5 раза, примерно в 2 раза, примерно в 3 раза, примерно в 4 раза, примерно в 5 раз, примерно в 6 раз, примерно в 7 раз, примерно в 8 раз, примерно в 9 раз или примерно в 10 раз превышающим сродство мышиного антитела 2Е2 и/или мышиного антитела 2С4. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16 или 21.
В одном из вариантов осуществления сродство связывания антитела к сиглеку-8 можно определить с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса. Например, Kd или значение Kd может быть измерено с помощью BIAcore™-2000 или BIAcore™-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) при 25°С с использованием чипов с иммобилизованным антигеном СМ5 при ~10 единиц ответа (RU). Вкратце, биосенсорные чипы с карбоксиметилированным декстраном (СМ5, BIAcore® Inc.) активируют гидрохлоридом N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антитела для захвата (например, античеловеческий Fc) разбавляют 10 мМ ацетата натрия, рН 4,8 перед инъекцией, проводимой со скоростью потока 30 мкл/мин, и дополнительно иммобилизуют антитела к сиглеку-8. Для измерения кинетических параметров двукратные серийные разведения димерного сиглека-8 вводят в PBS с 0,05% Твин 20 (PBST) при 25°С со скоростью потока примерно 25 мкл/мм. Скорости ассоциации (kon) и скорости диссоциации (koff) вычисляют с помощью модели Ленгмюра, модели простого связывания 1:1 (BIAcore® Evaluation Software version 3.2), путем одновременного подбора сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (Kd) вычисляют как отношение koff/kon, см., например, Chen Y. et al. (1999) J. Mol. Biol. 293:865881.
В другом варианте осуществления для определения сродства связывания антител к сиглеку-8 с сиглеком-8 можно использовать биослойную интерферометрию. В одном из примеров анализа сиглек-8-Fc меченый белок иммобилизуют на датчиках захвата античеловеческих фрагментов и инкубируют с увеличивающимися концентрациями мышиных, химерных или гуманизированных Fab-фрагментов к сиглеку-8 для измерения сродства с помощью инструмента, например, такого как система Octet Red 384 (ForteBio).
Сродство связывания антитела к сиглеку-8 также может быть определено, например, с помощью анализа Скэтчарда, описанного в Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980), с использованием стандартных методов, хорошо известных в соответствующей области. См. также Scatchard, G., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660 (1947).
2. Авидность антител
В некоторых вариантах авидность связывания антитела к сиглеку-8 можно определить с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса. Например, Kd или значение Kd можно измерить с помощью BIAcore T100. Антитело для захвата (например, козий античеловеческий-Fc и козий антимышиный-Fc) иммобилизуют на чипе CMS. На поверхности проточных кювет могут быть иммобилизованы античеловеческие или антимышиные антитела. Анализ проводят при определенной температуре и скорости потока, например, при 25°С и скорости потока 30 мкл/мин. Димерный сиглек-8 разводят в буфере для анализа в различных концентрациях, например, в концентрации от 15 нМ до 1,88 пМ. Антитела захватывают и выполняют высокоэффективные инъекции с последующей диссоциацией. Проточные кюветы регенерируют с помощью буфера, например 50 мМ глицина, рН 1,5. Получают результаты для холостых проб с пустой эталонной ячейкой и многократными инъекциями буфера для анализа и анализируют, используя глобальные параметры соответствия 1:1.
3. Конкурентный анализ
Конкурентные анализы можно использовать для определения того, связываются ли два антитела с одним и тем же эпитопом путем распознавания идентичных или стерически перекрывающихся эпитопов, или одно антитело конкурентно ингибирует связывание другого антитела с антигеном. Эти анализы известны в данной области. Обычно антиген или клетки, экспрессирующие антиген, иммобилизуют на поверхности многолуночного планшета и измеряют способность немеченых антител блокировать связывание меченых антител. Обычными метками в таких конкурентных анализах являются радиоактивные метки или ферментные метки. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, конкурирует с описанным в настоящей заявке антителом 2Е2 за связывание с эпитопом, присутствующим на клеточной поверхности (например, тучной клетки). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, конкурирует с антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, за связывание с эпитопом, присутствующим на клеточной поверхности (например, тучной клетки). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, конкурирует с описанным в настоящей заявке антителом 2С4 за связывание с эпитопом, присутствующим на клеточной
- 34 045206 поверхности (например, тучной клетки). В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 конкурирует с антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 (как описано в патенте США № 8207305), и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 (как описано в патенте США № 8207305), за связывание с эпитопом, присутствующим на клеточной поверхности (например, тучной клетки).
4. Термическая стабильность
В некоторых аспектах антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, имеет температуру плавления (Tm), согласно результатам анализа термического сдвига, равную по меньшей мере примерно 70°С, по меньшей мере примерно 71°С или по меньшей мере примерно 72°С. В одном из примеров анализа термического сдвига образцы, содержащие гуманизированное антитело к сиглеку-8, инкубируют с флуоресцентным красителем (Sypro Orange) в течение 71 цикла с увеличением температуры на 1°С за цикл в кПЦР термоциклере для определения Tm. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 имеет сходную или более высокую Tm по сравнению с мышиным антителом 2Е2 и/или мышиным антителом 2С4. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16 или 21. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 имеет такую же или более высокую Tm по сравнению с химерным антителом 2С4. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8 имеет такую же или более высокую Tm по сравнению с антителом, имеющим тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.
5. Анализ биологической активности
В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 истощает тучные клетки. Анализы для оценки апоптоза клеток хорошо известны в настоящей области, например, окрашивание аннексином V и анализ TUNNEL.
В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 индуцирует активность ADCC. В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 убивает тучные клетки, экспрессирующие сигек-8, благодаря активности ADCC. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит нефукозилированные (т.е. афукозилированные) антитела к сиглеку-8. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая описанные в настоящей заявке нефукозилированные антитела к сиглеку-8, усиливает активность ADCC по сравнению с композицией, содержащей частично фукозилированные антитела к сиглеку-8. Анализы для оценки активности ADCC хорошо известны в данной области и описаны в настоящей заявке. В типичном анализе измерения активности ADCC используются эффекторные клетки и клетки-мишени. Примеры эффекторных клеток включают клетки естественных киллеров (NK), большие гранулярные лимфоциты (LGL), лимфокин-активированные киллеры (LAK) и РВМС, содержащие NK и LGL, или лейкоциты, имеющие Fc-рецепторы на клеточных поверхностях, такие как нейтрофилы, эозинофилы и макрофаги. Эффекторные клетки могут быть выделены из любого источника, включая индивидуумов с представляющим интерес заболеванием (например, аллергическим заболеванием глаз). Клеткой-мишенью является любая клетка, которая экспрессирует на клеточной поверхности антигены, которые могут распознаваться антителами, подлежащими оценке. Примером такой клетки-мишени являются тучные клетки, который экспрессирует сиглек-8 на своей поверхности. Другим примером такой клетки-мишени является клеточная линия (например, клеточная линия Ramos), которая экспрессирует сиглек-8 на клеточной поверхности (например, Ramos 2C10)). Клетки-мишени могут быть мечены реагентом, который позволяет обнаружить цитолиз. Примеры реагентов для мечения включают радиоактивное вещество, такое как хромат натрия (Na2 51CrO4). См., например, Immunology, 14, 181 (1968); J. Immunol. Methods., 172, 227 (1994); J. Immunol. Methods., 184, 29 (1995).
В другом типичном анализе для оценки ADCC и апоптотической активности антител к сиглеку-8 в отношении тучных клеток, человеческие тучные клетки выделяют из человеческих тканей или биологических жидкостей в соответствии с опубликованными протоколами (Guhl et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 2011, 75:382-384; Kuika et al., In Current Protocols in Immunology, 2001, (John Wiley & Sons, Inc.)) или осуществляют их дифференцировку из человеческих гематопоэтических стволовых клеток, например, как описано Yokoi et al., J. Allergy Clin Immunol., 2008, 121:499-505. Очищенные тучные клетки ресуспендируют в среде Complete RPMI в стерильном 96-луночном планшете с U-дном и инкубируют в присутствии или отсутствии антител к сиглеку-8 в течение 30 мин в концентрациях в диапазоне от 0,0001 нг/мл до 10 мкг/мл. Образцы инкубируют в течение еще 4-48 ч с очищенными естественными киллерами (NK) или без них или со свежеприготовленными PBL и без них, чтобы индуцировать ADCC. Уничтожение клеток путем апоптоза или ADCC анализируют с помощью проточной цитометрии, используя флуоресцентные конъюгированные антитела для обнаружения тучных клеток (CD117 и FcεRI) и аннексин-V и 7AAD для возможности отличить живые клетки от мертвых или умирающих клеток. Окрашивание аннексином-V и 7AAD выполняют в соответствии с инструкциями производителя.
- 35 045206
В некоторых аспектах описанное в настоящей заявке антитело к сиглеку-8 ингибирует опосредованную тучными клетками активность. Триптазу тучных клеток используют в качестве биомаркера для общего количества тучных клеток и их активации. Например, для оценки уменьшения количества тучных клеток в крови или моче могут быть измерены общая и активная триптаза, а также гистамин, Nметил гистамин и 11-бета-простагландин F2. См., например, публикацию заявки на патент США № 20110293631, где описан пример анализа активности тучных клеток.
Е. Получение антител.
Антитело, описанное в настоящей заявке (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8), получают методами, доступными в данной области для получения антител, примеры которых более подробно описаны в приведенных ниже разделах.
1. Фрагменты антител.
Настоящее изобретение включает фрагменты антител. Фрагменты антител могут быть получены традиционными способами, такими как ферментативное расщепление, или рекомбинантными методами. В определенных обстоятельствах преимущество дает использование фрагментов антител, а не целых антител. Для обзора некоторых фрагментов антител см. Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134.
Разработаны различные способы получения фрагментов антител. Традиционно такие фрагменты получают в результате протеолитического расщепления интактных антител (см., например, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); и Brennan et al., Science, 229:81 (1985))). Однако сегодня эти фрагменты могут быть продуцированы непосредственно рекомбинантными клетками-хозяевами. Все фрагменты антител Fab, Fv и ScFv можно экспрессировать в E.coli и секретировать из них, что позволяет легко продуцировать большие количества этих фрагментов. Фрагменты антител могут быть выделены из упомянутых выше фаговых библиотек антител. Альтернативно, фрагменты Fab'-SH могут быть извлечены непосредственно из E.coli и химически связаны с образованием F(ab')2 фрагментов (Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). Согласно другому подходу F(ab')2 фрагменты могут быть выделены непосредственно из культуры рекомбинантных клеток-хозяев. Фрагменты Fab и F(ab')2 с увеличенным периодом полувыведения in vivo, содержащие остатки эпитопа, связывающего рецептор спасения, описан в патенте США № 5869046. Другие способы получения фрагментов антител также очевидны специалисту в данной области. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой одноцепочечный фрагмент Fv (scFv). См. WO 93/16185; патенты США №№ 5571894 и 5587458. Fv и scFv являются единственными видами с интактными антигенсвязывающими участками, которые лишены константных областей; таким образом, они могут быть пригодны для снижения неспецифического связывания при использовании in vivo. Слитые белки scFv могут быть сконструированы для получения слитого эффекторного белка либо по амино-, либо по карбоксиконцу scFv. См. Antibody Engineering, изд. Borrebaeck, выше. Фрагмент антитела также может представлять собой линейное антитело, например, как описано в патенте США № 5643870. Такие линейные антитела могут быть моноспецифическими или биспецифическими.
2. Гуманизированные антитела.
Настоящее изобретение включает гуманизированные антитела. В данной области известны различные способы гуманизации нечеловеческих антител. Например, гуманизированное антитело может иметь один или более аминокислотных остатков, введенных в него из источника, который не является человеком. Эти нечеловеческие аминокислотные остатки часто называют импортируемыми остатками, которые обычно берут из импортируемого вариабельного домена. По существу, гуманизация может быть выполнена по методу Винтера (Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536) путем замены последовательности гипервариабельной области соответствующими последовательностями человеческого антитела. Соответственно такими гуманизированными антителами являются химерные антитела (патент США № 4816567), в которых по существу участок, более короткий, чем интактный человеческий вариабельный домен, замещен соответствующей последовательностью из нечеловеческого вида. На практике гуманизированные антитела обычно представляют собой человеческие антитела, в которых некоторые остатки гипервариабельной области и, возможно, некоторые остатки FR замещены остатками из аналогичных участков антител грызунов.
Выбор человеческих вариабельных доменов, как легких, так и тяжелых, для использования при получении гуманизированных антител может быть важным для уменьшения антигенности. В соответствии с так называемым методом наилучшего соответствия осуществляют скрининг всей библиотеки известных человеческих последовательностей вариабельных доменов относительно последовательности вариабельного домена антитела грызуна (например, мыши). Затем человеческую последовательность, которая наиболее близка к последовательности грызуна, принимают в качестве человеческой основы для гуманизированного антитела (Sims et al. (1993), J. Immunol. 151:2296; Chothiaetal. (1987) J. Mol. Biol. 196:901). В другом методе используется конкретный каркас, полученный из консенсусной последовательности всех человеческих антител определенной подгруппы легких или тяжелых цепей. Такой же каркас можно использовать для нескольких различных гуманизированных антител (Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta et al. (1993) J. Immunol. 151:2623).
- 36 045206
Кроме того, желательно, чтобы антитела были гуманизированы с сохранением высокого сродства к антигену и других благоприятных биологических свойств. Для достижения этой цели, согласно одному из способов, гуманизированные антитела получают с помощью анализа родительских последовательностей и различных концептуальных гуманизированных продуктов с использованием трехмерных моделей родительских и гуманизированных последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулинов являются общедоступными и знакомы специалистам в данной области. Имеются компьютерные программы, которые иллюстрируют и отображают возможные трехмерные конформационные структуры выбранных последовательностей иммуноглобулина-кандидата. Изучение этих дисплеев позволяет проанализировать вероятную роль остатков в функционировании последовательности иммуноглобулина-кандидата, т.е. выполнить анализ остатков, которые влияют на способность иммуноглобулина-кандидата связываться со своим антигеном. Таким образом, для достижения требуемых характеристик антитела, таких как повышенное сродство к целевому антигену(ам), могут быть отобраны и объединены остатки FR из реципиентных и импортируемых последовательностей. Как правило, остатки гипервариабельной области непосредственно и существенным образом влияют на связывание антигена.
3. Человеческие антитела
Человеческие антитела к сиглеку-8 по настоящему изобретению могут быть сконструированы путем объединения последовательности(ей) вариабельного домена клона Fv, выбранной из библиотек фагового дисплея человека, с известной последовательностью(ями) человеческого константного домена. Альтернативно, человеческие моноклональные антитела к сиглеку-8 по настоящему изобретению могут быть получены способом гибридомы. Клеточные линии человеческой миеломы и мышиной гетеромиеломы для продуцирования человеческих моноклональных антител описаны, например, в Kozbor. J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 5163 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); и Boerner et al., J. Immunol., 147:86 (1991).
Можно получить трансгенных животных (например, мышей), которые способны после иммунизации продуцировать полный репертуар человеческих антител, не продуцируя при этом эндогенный иммуноглобулин. Например, описано, что гомозиготная делеция гена в шарнирной области (JH) тяжелой цепи антитела у химерных мышей и мышей с мутантной зародышевой линией приводит к полному ингибированию продуцирования эндогенных антител. Перенос массива генов человеческого иммуноглобулина зародышевой линии в такую мышь с мутантной зародышевой линией приведет к выработке человеческих антител после заражения антигеном. См., например, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255 (1993); Bruggermann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993).
Также можно использовать перестановку генов для получения человеческих антител из антител, не относящихся к человеку (например, грызунов), причем человеческое антитело имеет сходство и специфичность исходного нечеловеческого антитела. Согласно этому способу, который также называют импринтингом эпитопа, вариабельную область тяжелой или легкой цепи фрагмента нечеловеческого антитела, полученного методами фагового дисплея, описанными в настоящей заявке, заменяют набором генов человеческого V-домена, создавая популяцию scFv или Fab химер нечеловеческих цепей/человеческих цепей. Выбор с помощью антигена приводит к выделению scFv или Fab химер нечеловеческих цепей/человеческих цепей, в которых человеческая цепь восстанавливает антигенсвязывающий участок, разрушенный при удалении соответствующей нечеловеческой цепи в первичном клоне фагового дисплея, т.е. эпитоп управляет выбором человеческой цепочки-партнера. Когда процесс повторяют для замены оставшейся нечеловеческой цепи, получают человеческое антитело (см. PCT WO 93/06213, опубликованную 1 апреля 1993 г.). В отличие от традиционной гуманизации нечеловеческих антител с помощью трансплантации CDR, этот метод обеспечивает полностью человеческие антитела, которые не имеют остатков FR или CDR нечеловеческого происхождения.
4. Биспецифические антитела.
Биспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела, которые обладают специфичностью связывания по меньшей мере по отношению к двум разным антигенам. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела представляют собой человеческие или гуманизированные антитела. В некоторых вариантах осуществления одна из специфичностей связывания относится к сиглеку-8, а другая относится к любому другому антигену. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела могут связываться с двумя разными эпитопами сиглека-8. Биспецифические антитела также можно использовать для локализации цитотоксических агентов в клетках, которые экспрессируют сиглек-8. Биспецифические антитела могут быть получены в виде полноразмерных антител или фрагментов антител (например, F(ab')2-биспецифические антитела).
Способы получения биспецифических антител известны в данной области. См. Milstein and Cuello, Nature, 305:537 (1983), WO 93/08829, опубликованную 13 мая 1993 г., и Traunecker et al., EMBO J., 10:3655 (1991). Более детальную информацию о получении биспецифических антител см., например, Suresh et al. Methods в Enzymology, 121:210 (1986). Биспецифические антитела включают сшитые или гетероконъюгатные антитела. Например, одно из антител в гетероконъюгате может быть связано с авидином, другое с биотином. Гетероконъюгатные антитела могут быть получены любым удобным методом сшивания. Подходящие сшивающие агенты хорошо известны в данной области и раскрыты в патенте
- 37 045206
США № 4676980, наряду с другими методами сшивания.
5. Однодоменные антитела.
В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению представляет собой однодоменное антитело. Однодоменное антитело представляет собой единственную полипептидную цепь, включающую весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи или весь или часть вариабельного домена легкой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления изобретения однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (Domantis, Inc., Waltham, Mass.; см., например, патент США № 6248516 В1). В одном из вариантов осуществления однодоменное антитело состоит из полного или части вариабельного домена тяжелой цепи антитела.
6. Варианты антител
В некоторых вариантах осуществления предлагаются модификация(ии) аминокислотной последовательности описанных в настоящей заявке антител. Например, может появиться потребность в улучшении сродства связывания и/или других биологических свойств антитела. Варианты аминокислотной последовательности антитела могут быть получены путем внесения соответствующих изменений в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или путем пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции и/или вставки и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Для получения конечной конструкции возможно использование любой комбинации делеций, вставок и замен при условии, что конечная конструкция имеет требуемые характеристики. В процессе получения заявленного антитела в аминокислотную последовательность могут быть введены аминокислотные замены.
Полезный способ идентификации определенных остатков или областей антитела, которые являются предпочтительными местами для мутагенеза, называется аланин-сканирующим мутагенезом, описанный Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. В этом случае, остаток или группу целевых остатков идентифицируют (например, заряженные остатки, такие как arg, asp, his, lys и glu) и заменяют нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином), с целью оказания влияния на взаимодействие аминокислоты с антигеном. Те аминокислотные положения, которые демонстрируют функциональную чувствительность к заменам, затем уточняют путем введения дополнительных или других вариантов в участки замены или для других участков замены. Таким образом, хотя участок для введения варианта аминокислотной последовательности предопределен, природа мутации как таковой не обязательно является предопределенной. Например, чтобы проанализировать эффективность мутации на заданном участке, в целевом кодоне или области выполняют alaсканирование или используют случайный мутагенез, и экспрессированные иммуноглобулины подвергают скринингу на наличие требуемой активности.
Вставки аминокислотной последовательности включают слияния амино-и/или карбоксильного конца длиной от одного остатка до полипептидов длиной сто или более остатков, а также вставки внутри последовательности из одного или нескольких аминокислотных остатков. Примеры концевых вставок включают антитело с N-концевым метионильным остатком. Другие варианты молекулы антитела со вставкой включают слияние с N- или С-концом антитела с ферментом или полипептидом, который увеличивает период полувыведения антитела из сыворотки.
В некоторых вариантах осуществления в моноклональных антителах происходит отщепление Сконца тяжелой цепи и/или легкой цепи. Например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных остатков отщепляются от С-конца тяжелой цепи и/или легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления при отщеплении С-конца происходит удаление С-концевого лизина из тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления в моноклональных антителах происходит отщепление N-конца тяжелой цепи и/или легкой цепи. Например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных остатков отщепляются от N-конца тяжелой цепи и/или легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления усеченные формы моноклональных антител могут быть получены рекомбинантными методами.
В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению изменяют для увеличения или уменьшения степени гликозилирования антитела. Гликозилирование полипептидов обычно является либо N-связанным, либо О-связанным. N-связанное гликозилирование относится к присоединению углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где X представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, представляют собой последовательности распознавания для ферментативного присоединения углеводного фрагмента к боковой цепи аспарагина. Таким образом, присутствие любой из этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из Сахаров N-ацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы, к гидроксиаминокислоте, чаще всего серину или треонину, хотя также может быть использован 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин.
Добавление или удаление сайтов гликозилирования в антителе удобно осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности так, чтобы происходило формирование или удаление одной или более из описанных выше трипептидных последовательностей (для N-связанных сайтов гликозилирования). Изменение также можно осуществлять путем добавления, делеции или замены одного или бо
- 38 045206 лее остатков серина или треонина в последовательности исходного антитела (для О-связанных сайтов гликозилирования).
Если антитело содержит Fc-область, может быть изменен присоединенный к нему углевод. Например, антитела со зрелой углеводной структурой, в которой отсутствует фукоза, присоединенная к Fcобласти антитела, описаны в заявке на патент США № 2003/0157108 (Presta, L.). См. также US 2004/0093621 (KyowaHakko Kogyo Co., Ltd). Антитела с биссекторным N-ацетилглюкозамином (GlcNAc) в углеводе, присоединенном к Fc-области антитела, упоминаются в WO 2003/011878, Jean-Mairet et al. и патенте США № 6602684, Umana et al. Антитела с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к Fc-области антитела, описаны в WO 1997/30087, Patel et al. См. также WO 1998/58964 (Raju, S.) и WO 1999/22764 (Raju, S.), касающиеся антител с измененным углеводом, присоединенным к его Fc-области. См. также заявку на патент США № 2005/0123546 (Umana et al.), относящуюся к антигенсвязывающим молекулам с модифицированным гликозилированием.
В некоторых вариантах осуществления вариант гликозилирования содержит Fc-область, в котором углеводная структура, присоединенная к Fc-области, лишена фукозы. Такие варианты имеют улучшенную функцию ADCC. Необязательно, Fc-область дополнительно содержит одну или более аминокислотных замен, которые дополнительно улучшают ADCC, например, замены в положениях 298, 333 и/или 334 Fc-области (Eu нумерация остатков). Примеры публикаций, относящихся к дефукозилированным или фукозо-дефицитным антителам, включают US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004). Примеры клеточных линий, продуцирующих дефукозилированные антитела, включают клетки Lee 13 СНО, дефицитные по фукозилированию белка (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявка на патент США № 2003/0157108 Al, Presta, L. и WO 2004/056312 A1, Adams et al., см, в частности пример 11), и клеточные линии с нокаутом гена, таким как ген альфа-1,6фукозитрансферазы, FUT8, нокаутные клетки СНО (Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004)) и клетки сверхэкспрессирующие β1,4-N-ацетилгликозинилтрансферазу III (GnT-III) и μ-маннозидазу Гольджи II (ManII).
Настоящее изобретение относится к антителам, которые имеют пониженный уровень фукозы относительно количества фукозы в том же антителе, которое продуцирует клетка СНО дикого типа. Например, антитело имеет меньшее количество фукозы, чем если бы оно продуцировалось нативными клетками СНО (например, клеткой СНО с нативным паттерном гликозилирования, например клеткой СНО, содержащей нативный ген FUT8). В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, представленное в настоящем описании, представляет собой антитело, в котором менее чем примерно 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% или 1% N-связанных гликанов содержат фукозу. В некоторых вариантах осуществления антитело к сиглеку-8, представленное в настоящем описании, представляет собой антитело, в котором ни один из N-связанных гликанов не содержит фукозы, т.е. в которых антитело полностью не содержит фукозы, или не имеет фукозы, или не является фукозилированным, или является афукозилированным. Количество фукозы может быть определено путем вычисления среднего количества фукозы в сахарной цепи в Asn297 по отношению к сумме всех гликоструктур, связанных с Asn297 (например, сложных, гибридных и высокоманнозных структур), измеренных с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF, как описано в WO 2008/077546, например, Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному примерно в положении 297 в Fc-области (Eu нумерация остатков в Fc-области); однако Asn297 также может быть расположен на примерно ±3 аминокислоты выше или ниже от положения 297, т.е. между положениями 294 и 300, из-за незначительных изменений последовательности антител. В некоторых вариантах по меньшей мере одна или две тяжелые цепи антитела не являются фукозилированными.
В одном из вариантов осуществления антитело изменяют для улучшения его периода полувыведения из сыворотки. Чтобы увеличить период полувыведения антитела из сыворотки, в антитело (особенно фрагмент антитела) можно включить эпитоп, связывающий рецептор спасения, как описано, например, в патенте США № 5739277. Используемый в настоящем описании термин эпитоп, связывающий рецептор спасения относится к эпитопу Fc-области молекулы IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), который отвечает за увеличение периода полувыведения молекулы IgG из сыворотки in vivo (заявка на патент США 2003/0190311, патент США № 6821505; патент США № 616745; патент США № 5624821; патент США № 5648260; патент США № 6166545; патент США № 5834597).
Другим типом варианта является вариант аминокислотной замены. Эти варианты имеют по меньшей мере один аминокислотный остаток в молекуле антитела, замененный другим остатком. Участки, представляющие интерес для заместительного мутагенеза, включают гипервариабельные области, но также рассматриваются замены в FR. Консервативные замены показаны в табл. 5 под заголовком предпочтительные замены. Если такие замены приводят к желаемому изменению биологической активности, то могут быть введены более существенные замены, обозначенные примерами замен в табл. 5 или как описано ниже в отношении классов аминокислот, а продукты подвергнуты скринингу.
- 39 045206
Таблица 5
Исходные остатки | Примеры замен | Предпочтительные замены |
Ala (А) | Val, Leu, lie | Val |
Arg (R) | Lys, Gin, Asn | Lys |
Asn (N) | Gin, His, Asp, Lys, Arg | Gin |
Asp (D) | Glu, Asn | Glu |
Cys (C) | Ser, Ala | Ser |
Gin (Q) | Asn, Glu | Asn |
Glu (E) | Asp, Gin | Asp |
Gly (G) | Ala | Ala |
His (H) | Asn, Gin, Lys, Arg | Arg |
He (I) | Leu, Val, Met, Ala, Phe, норлейцин | Leu |
Leu (L) | норлейцин, He, Val, Met, Ala, Phe | lie |
Lys (K) | Arg, Gin, Asn | Arg |
Met (M) | Leu, Phe, lie | Leu |
Phe (F) | Trp, Leu, Val, He, Ala, Tyr | Tyr |
Pro (P) | Ala | Ala |
Ser (S) | Thr | Thr |
Thr (T) | Val, Ser | Ser |
Trp (W) | Tyr, Phe | Tyr |
Tyr(Y) | Trp, Phe, Thr, Ser | Phe |
Val (V) | He, Leu, Met, Phe, Ala, норлейцин | Leu |
Существенные модификации в биологических свойствах антитела достигаются путем выбора замен, которые значительно различаются по своему воздействию на сохранение: (а) структуры полипептидного остова в области замены, например, в виде листовой или спиральной конформации, (b) заряда или гидрофобности молекулы в целевом участке, или с) объема боковой цепи. Аминокислоты могут быть сгруппированы по сходству свойств их боковых цепей (A.L. Lehninger, Biochemistiy, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)):
(1) неполярные: Ala (A), Val (V), Leu (L), He (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M) (2) незаряженные, полярные: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (С), Tyr (Y), Asn (N), Gin (Q) (3) кислотные: Asp (D), Glu (E) (4) щелочные: Lys (K), Arg (R), His (H)
Альтернативно, встречающиеся в природе остатки могут быть разделены на группы на основе общих свойств боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gin;
(3) кислотные: Asp, Glu;
(4) щелочные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
Неконсервативные замены повлекут за собой замену члена одного из этих классов членом другого класса. Такие замещенные остатки также могут быть введены в консервативные участки замещения или в оставшиеся (неконсервативные) участки.
Один тип заместительного варианта включает замену одного или более остатков гипервариабельной области родительского антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). Обычно полученный вариант(ы), выбранный для дальнейшей разработки, будет иметь модифицированные (например, улучшенные) биологические свойства по сравнению с родительским антителом, из которого они получены. Удобный способ генерирования таких заместительных вариантов включает созревание сродства с использованием фагового дисплея. Вкратце, несколько участков гипервариабельной области (например, 6-7 участков) подвергают мутации для генерации всех возможных аминокислотных замен в каждом участке. Полученные таким образом антитела воспроизводят из частиц нитчатого фага в виде слияний, по меньшей мере, с частью белка оболочки фага (например, продукта гена III M13), упакованного внутри каждой частицы. Затем отображенные с помощью фага варианты подвергают скринингу относительно их биологической активности (например, сродства связывания). Для идентификации участков гипервариабельной области, которые являются кандидатами для модификации, может быть выполнен сканирующий мутагенез (например, аланиновое сканирование), чтобы идентифицировать остатки гипервариабельной области, вносящие значительный вклад в связывание антигена. Альтернативно или дополнительно, полезно проанализировать кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело,
- 40 045206 чтобы идентифицировать точки контакта между антителом и антигеном. Такие контактные остатки и соседние остатки являются кандидатами на замещение в соответствии с методами, известными в данной области техники, включая методы, разработанные в настоящем изобретении. После создания таких вариантов панель вариантов подвергают скринингу с помощью методов, известных в данной области, включая методы, описанные в настоящей заявке, что позволит по результатам одного или более соответствующих анализов выбрать антитела с превосходными свойствами для дальнейшей разработки.
Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие варианты аминокислотной последовательности антитела, получают различными способами, известными в данной области. Эти способы включают, без ограничения, выделение из природного источника (в случае встречающихся в природе вариантов аминокислотной последовательности) или получение с помощью олигонуклеотид-опосредованного (или сайтнаправленного) мутагенеза, ПЦР-мутагенеза и кассетного мутагенеза ранее приготовленного варианта или невариантной версии антитела.
Может потребоваться ввести одну или более модификаций аминокислот в Fc-области антител по настоящему изобретению, тем самым генерируя вариант Fc-области. Вариант Fc-области может содержать последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-область человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) в одном или более аминокислотных положениях, в том числе цистеина шарнирной области. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области содержит Fc-область человеческого IgG4. В дополнительном варианте осуществления Fc-область человеческого IgG4 содержит аминокислотную замену S228P, причем аминокислотные остатки пронумерованы в соответствии с индексом EU, как в Кабат.
В соответствии с настоящим описанием и информацией из уровня техники предполагается, что в некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению может содержать одно или более изменений по сравнению с аналогичным антителом дикого типа, например, в Fc-области. Тем не менее, эти антитела, по существу, сохраняют такие же необходимые для терапевтического применения характеристики, что и их аналоги дикого типа. Например, предполагается, что в Fc-области могут быть сделаны некоторые изменения, которые привели бы к измененному (т.е. либо улучшенному, либо уменьшенному) связыванию C1q и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC), например, как описано в WO 99/51642. См. также Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988); Патент США № 5648260; Патент США № 5624821; и WO 94/29351, в которых описаны другие примеры вариантов Fc-области. В WO 00/42072 (Presta) и WO 2004/056312 (Lowman) описаны варианты антител, демонстрирующие улучшенное или уменьшенное связывание FcR. Содержание этих патентных публикаций специально включено в настоящее описание в виде ссылки. См. также Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001). Антитела с увеличенным периодом полувыведения и улучшенным связыванием с неонатальным Fcрецептором (FcRn), ответственным за перенос материнских IgG к плоду (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) и Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), описаны в US 2005/0014934A1 (Hinton et al.). Эти антитела содержат Fc-область с одной или более заменами, которые улучшают связывание Fc-области с FcRn. Варианты полипептида с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области и повышенной или пониженной способностью связывать C1q описаны в патенте США № 6194515161, WO 99/51642. Содержание этих патентных публикаций специально включено в настоящее описание в виде ссылки. См. также Idusogie et al. J. Immunol. 164:4178-4184 (2000).
7. Векторы.
Клетки-хозяева и рекомбинантные способы
Для рекомбинантного продуцирования антитела по настоящему изобретению выделяют кодирующую это антитело нуклеиновую кислоту, которую встраивают в реплицируемый вектор для дальнейшего клонирования (амплификации ДНК) или экспрессии. ДНК, кодирующую антитело, можно легко выделить и секвенировать с помощью традиционных процедур (например, с помощью олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела). Доступны многие векторы. Выбор вектора частично зависит от используемой клетки-хозяина. Обычно клетки-хозяева являются либо прокариотическими, либо эукариотическими (обычно клетками млекопитающих). Понятно, что для этой цели можно использовать константные области любого изотипа, включая константные области IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, и что такие константные области могут быть получены из человека или животного любого вида.
Генерация антител с помощью прокариотических клеток-хозяев:
а) Конструирование вектора
Полинуклеотидные последовательности, кодирующие полипептидные компоненты антитела по настоящему изобретению, могут быть получены с помощью стандартных рекомбинантных методов. Нужные полинуклеотидные последовательности могут быть выделены и секвенированы из продуцирующих антитело клеток, таких как клетки гибридомы. Альтернативно, полинуклеотиды могут быть подвергнуты анализу методами синтеза нуклеотидов или ПЦР. После получения последовательности, кодирующие полипептиды, встраивают в рекомбинантный вектор, способный реплицироваться и экспрессировать гетерологичные полинуклеотиды в прокариотных хозяевах. Для целей настоящего изобретения можно использовать многие векторы, которые доступны и известны в данной области техники. Выбор подхо
- 41 045206 дящего вектора будет зависеть главным образом от размера нуклеиновых кислот, вставленных в вектор, и конкретной клетки-хозяина, которая должна быть трансформирована с помощью этого вектора. Каждый вектор содержит различные компоненты в зависимости от его функции (амплификации или экспрессии гетерологичного полинуклеотида или обоих) и его совместимости с конкретной клеткой-хозяином, в которой он находится. Компоненты вектора обычно включают, без ограничения: точку начала репликации, ген-маркер для селекции, промотор, сайт связывания рибосомы (RBS), сигнальную последовательность, вставку гетерологичной нуклеиновой кислоты и последовательность терминации транскрипции.
Обычно плазмидные векторы, содержащие репликон и контрольные последовательности, которые получены из видов, совместимых с клеткой-хозяином, используются вместе с этими хозяевами. Вектор обычно содержит сайт репликации, а также последовательности-маркеры, которые способны обеспечить фенотипический отбор в трансформированных клетках. Например, E.coli обычно трансформируют, используя плазмиду pBR322, полученную из вида Е.coli. pBR322 содержит гены, кодирующие устойчивость к ампициллину (Amp) и тетрациклину (Tet), таким образом, обеспечивая простые средства для идентификации трансформированных клеток. pBR322, его производные или другие плазмиды микробов или бактериофагов также могут содержать или могут быть модифицированы таким образом, чтобы они содержали промоторы, которые могут использоваться микроорганизмом для экспрессии эндогенных белков. Примеры производных pBR322, используемых для экспрессии конкретных антител, подробно описаны в Carter et al., патент США № 5648237.
Кроме того, фаговые векторы, содержащие репликон и контрольные последовательности, совместимые с микроорганизмом-хозяином, можно использовать в качестве трансформирующих векторов по отношению к этим хозяевам. Например, для создания рекомбинантного вектора, который можно использовать для трансформации чувствительных клеток-хозяев, таких как E.coli LE392, можно использовать бактериофаг, такой как XGEM-11.
Вектор экспрессии по настоящему изобретению может содержать две или более пары промоторцистрон, кодирующие каждый из полипептидных компонентов. Промотор представляет собой нетранслируемую регуляторную последовательность, расположенную выше (5') по отношению к цистрону, которая модулирует его экспрессию. Прокариотические промоторы обычно делятся на два класса, индуцибельные и конститутивные. Индуцибельный промотор представляет собой промотор, который инициирует повышенные уровни транскрипции цистрона под своим контролем в ответ на изменения условий культивирования, например наличие или отсутствие питательного вещества или изменение температуры.
Хорошо известно большое количество промоторов, распознаваемых различными потенциальными клетками-хозяевами. Выбранный промотор может быть функционально связан с цистронной ДНК, кодирующей легкую или тяжелую цепь, путем удаления промотора из исходной ДНК в результате расщепления рестриктазой и вставки выделенной промоторной последовательности в вектор по настоящему изобретению. Как нативная промоторная последовательность, так и многие гетерологичные промоторы могут быть использованы для прямой амплификации и/или экспрессии целевых генов. В некоторых вариантах осуществления используются гетерологичные промоторы, поскольку, как правило, они обеспечивают высокий уровень транскрипции и более высокий выход экспрессируемого целевого гена по сравнению с нативным полипептидным целевым промотором.
Промоторы, подходящие для использования с прокариотическими хозяевами, включают промотор PhoA, β-галактамазную и лактозную промоторные системы, триптофановую (trp) промоторную систему и гибридные промоторы, такие как промотор tac или trc. Однако подходящими также являются и другие промоторы, которые функционируют в бактериях (например, другие известные бактериальные или фаговые промоторы). Их нуклеотидные последовательности были опубликованы, что позволяет квалифицированному специалисту выполнить функциональное лигирование этих промоторов с цистронами, кодирующими целевую легкую и тяжелую цепи (Siebenlist et al. (1980) Cell 20:269), используя линкеры или адаптеры для обеспечения любых необходимых сайтов рестрикции.
В одном из аспектов настоящего изобретения каждый цистрон в рекомбинантном векторе содержит секреторную сигнальную последовательность, которая направляет транслокацию экспрессированных полипептидов через мембрану. Как правило, сигнальная последовательность может быть компонентом вектора или может быть частью целевого ДНК-полипептида, встроенного в вектор. Сигнальная последовательность, выбранная для целей настоящего изобретения, должна быть узнаваемой и процессируемой (т.е. расщепляемой сигнальной пептидазой) клеткой-хозяином. Для прокариотических клеток-хозяев, которые не распознают и не процессируют сигнальные последовательности, присущие гетерологичным полипептидам, сигнальную последовательность заменяют прокариотической сигнальной последовательностью, выбранной, например, из группы, состоящей из щелочной фосфатазы, пенициллиназы, Ipp или лидерных последовательностей термостабильного энтеротоксина II (STII), LamB, PhoE, PeIB, OmpA и MBP. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения сигнальные последовательности, используемые в обоих цистронах системы экспрессии, представляют собой сигнальные последовательности STII или их варианты.
В другом аспекте продуцирование иммуноглобулинов в соответствии с настоящим изобретением может происходить в цитоплазме клетки-хозяина и, следовательно, не требовать наличия сигнальных
- 42 045206 последовательностей для секреции в каждом цистроне. В этом случае экспрессия, укладка и сборка легких и тяжелых цепей иммуноглобулина с образованием функциональных иммуноглобулинов происходит в цитоплазме. Некоторые штаммы-хозяева (например, штаммы trxB E.coil) обеспечивают условия в цитоплазме, которые являются благоприятными для образования дисульфидных связей, тем самым обеспечивая надлежащую укладку и сборку экспрессированных белковых субъединиц. Proba and Pluckthun Gene, 159:203 (1995).
Антитела по настоящему изобретению также могут быть получены с помощью системы экспрессии, в которой количественное соотношение экспрессируемых полипептидных компонентов можно модулировать для получения максимального выхода секретируемых и правильно собранных антител по настоящему изобретению. Такая модуляция достигается, по меньшей мере, отчасти путем одновременной модуляции силы трансляции полипептидных компонентов.
Один из методов модуляции силы трансляции раскрыт Simmons et al., в патенте США № 5840523. В этом документе используются варианты сайта инициации трансляции (TIR) внутри цистрона. Для этого сайта TIR может быть создан ряд вариантов аминокислотных последовательностей или последовательностей нуклеиновых кислот с диапазоном сил трансляции, обеспечивая тем самым удобное средство для получения нужного уровня экспрессии конкретной цепи путем подбора этого фактора. Варианты TIR могут быть получены с помощью хорошо известных методов мутагенеза, в результате которых происходит замена кодонов, которая может привести к изменению аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления замены в нуклеотидной последовательности являются молчащими. Замены в TIR могут включать, например, замены в количестве или расположении последовательностей Шайн-Дальгарно, а также замены в сигнальной последовательности. Одним из способов создания мутантных сигнальных последовательностей является создание банка кодонов в начале кодирующей последовательности, которые не изменяют аминокислотную последовательность сигнальной последовательности (т.е. замены являются молчащими). Это может быть достигнуто путем замены третьего нуклеотида в каждом кодоне, к тому же, некоторые аминокислоты, такие как лейцин, серии и аргинин, имеют различные нуклеотиды в первом и втором положениях, что добавляет сложность в создании банка. Этот метод мутагенеза подробно описан в Yansura et al. (1992) METHODS: A companion to methods in Enzymol. метод в Enzymol. 4:151-158.
В одном из вариантов осуществления создают набор векторов с диапазоном сил TIR для каждого находящегося в нем цистрона. Этот ограниченный набор позволяет осуществить сравнение уровней экспрессии каждой цепи, а также выход нужных продуктов антител при различных комбинациях силы TIR. Сила TIR может быть определена путем количественного определения уровня экспрессии репортерного гена, как подробно описано Simmons et al. в патенте США № 5840523. По результатам сравнения силы трансляции выбирают нужные отдельные TIR, которые объединяют в экспрессирующие векторные конструкциях по настоящему изобретению.
Прокариотические клетки-хозяева, подходящие для экспрессии антител по настоящему изобретению, включают Archaebacteria и Eubacteria, такие как грамотрицательные или грамположительные организмы. Примеры пригодных бактерий включают Escherichia (например, E.coli), Bacilli (например, B.subtilis), энтеробактерии, виды Pseudomoiias (например, P.aeruginosa), Salmonella typhimurium, Serratia marcescans, Klebsiella, Proteus, Shigella, Rhizobia, Vitreoscilla или Paracoccus. В одном из вариантов осуществления используются грамотрицательные клетки. В одном из вариантов осуществления в качестве хозяев по настоящему изобретению используются клетки E.coli. Примеры штаммов E.coli включают штамм W3110 (Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, DC: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219; депозит в АТСС № 27325) и его производные, включая штамм 33D3, имеющий генотип W3110 AfhuA (AtonA) ptr3 lac Iq lacL8 AompTA(nmpc-fepE) degP41 kanR (патент США № 5639635). Другие штаммы и их производные, такие как 294 E.coli (АТСС 31446), E.coli В, E.coliλ, 1776 (АТСС 31537) и RV308 E.coli (АТСС 31608), также являются подходящими. Эти примеры являются скорее иллюстративными, чем ограничивающими. Способы конструирования производных любой из вышеупомянутых бактерий, имеющих определенные генотипы, известны в данной области и описаны, например, Bass et al. Proteins, 8:309-314 (1990). Как правило, необходимо выбрать подходящие бактерии, принимая во внимание способность репликона к репликации в бактериальных клетках. Например, виды E.coli, Serratia или Salmonella могут подходить в качестве хозяина, когда для доставки репликона используются хорошо известные плазмиды, такие как pBR322, pBR325, pACYC177 или pKN410. Обычно требуется, чтобы клетка-хозяин секретировала минимальные количества протеолитических ферментов, и желательно, чтобы в клеточную культуру были включены дополнительные ингибиторы протеаз.
b) Получение антител
Клетки-хозяева трансформируют описанными выше векторами экспрессии и культивируют в обычных питательных средах, модифицированных таким образом, чтобы они подходили для индукции промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих нужные последовательности.
Трансформация означает введение ДНК в прокариотического хозяина, таким образом, чтобы ДНК была реплицируемой либо в виде внехромосомного элемента, либо в виде части хромосомы. В зависимо
- 43 045206 сти от используемой клетки-хозяина, трансформацию выполняют с помощью стандартных методов, подходящих для таких клеток. Обработка кальцием с использованием хлорида кальция обычно используется для бактериальных клеток, которые имеют прочные барьеры в виде клеточной стенки. В другом методе трансформации используется полиэтиленгликоль/ДМСО. Еще одним используемым методом является электропорация.
Прокариотические клетки, используемые для получения полипептидов по настоящему изобретению, выращивают в средах, известных в данной области техники и подходящих для культивирования выбранных клеток-хозяев. Примеры подходящих сред включают бульон Лурия (LB) плюс необходимые питательные добавки. В некоторых вариантах осуществления носитель также содержит селективный агент, выбранный на основе конструкции вектора экспрессии, для обеспечения селективного роста прокариотических клеток, содержащих вектор экспрессии. Например, ампициллин добавляют в среду для роста клеток, экспрессирующих ген устойчивости к ампициллину.
Любые необходимые добавки, помимо источников углерода, азота и неорганического фосфата, также могут быть включены в соответствующих концентрациях, и могут вводиться отдельно или в виде смеси с другой добавкой или средой, такой как комплексный источник азота. Необязательно культуральная среда может содержать один или более восстанавливающих агентов, выбранных из группы, состоящей из глутатиона, цистеина, цистамина, тиогликоллата, дитиоэритрита и дитиотреитола.
Прокариотические клетки-хозяева культивируют при подходящих температурах. В некоторых вариантах осуществления для роста E.coli температура находится в пределах от примерно 20 до примерно 39°С; от примерно 25 до примерно 37°С или составляет примерно 30°С. рН среды может принимать любое значение в диапазоне от примерно 5 до примерно 9, в зависимости, главным образом, от организмахозяина. В некоторых вариантах осуществления рН для E.coli составляет от примерно 6,8 до примерно 7,4 или примерно 7,0.
Если в векторе экспрессии по настоящему изобретению используется индуцибельный промотор, экспрессия белка индуцируется в условиях, подходящих для активации этого промотора. В одном из аспектов настоящего изобретения для контроля транскрипции полипептидов используются промоторы PhoA. Соответственно, трансформированные клетки-хозяева культивируют для индукции в среде с ограниченным количеством фосфата. В некоторых вариантах осуществления изобретения средой с ограниченным количеством фосфата является среда C.R.A.P. (см., например, Simmons et al., J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147). В соответствии с используемой векторной конструкцией можно использовать множество других индукторов, известных в данной области.
В одном из вариантов осуществления экспрессированные полипептиды по настоящему изобретению секретируют и извлекают из периплазмы клеток-хозяев. Извлечение белка обычно включает разрушение микроорганизма, как правило, такими средствами, как осмотический шок, обработка ультразвуком или лизис. После разрушения клетки клеточный дебрис или цельные клетки могут быть удалены путем центрифугирования или фильтрации. Белки могут быть дополнительно очищены, например, с помощью аффинной хроматографии на смоле. Альтернативно, белки могут быть транспортированы в культуральную среду и выделен из нее. Клетки могут быть удалены из культуры, а культуральный супернатант отфильтрован и сконцентрирован для дальнейшей очистки полученных белков. Экспрессированные полипептиды могут быть дополнительно выделены и идентифицированы с помощью общеизвестных способов, таких как электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE) и Вестерн-блот анализ.
В одном из аспектов настоящего изобретения антитела получают в большом количестве с помощью ферментационного процесса. Для получения рекомбинантных белков доступны различные крупномасштабные ферментационные процессы с периодической подпиткой. Крупномасштабные ферментационные процессы можно осуществлять в емкостях по меньшей мере 1000 л, а в некоторых вариантах от 1000 до 100000 л. В таких ферментерах используются лопастные мешалки для распределения кислорода и питательных веществ, особенно глюкозы. Мелкомасштабные ферментационные процессы обычно выполняют в ферментерах, объемная емкость которых составляет не более примерно 100 л, и может варьировать от примерно 1 до примерно 100 л.
В ферментационном процессе экспрессию белка обычно инициируют после достижения нужной плотности в процессе выращивания клеток в подходящих условиях, например значения OD550 примерно 180-220, при котором клетки находятся в ранней стационарной фазе. Множество индукторов, известных в данной области и описанных выше, можно использовать в зависимости от используемой векторной конструкции. До индукции клетки могут выращиваться в течение более коротких периодов времени. Клетки обычно индуцируют в течение примерно 12-50 ч, хотя можно использовать более длительное или более короткое время индукции.
Для улучшения выхода и качества полипептидов по настоящему изобретению различные условия ферментации могут быть модифицированы. Например, для улучшения правильной сборки и укладки секретируемых полипептидов антител, можно использовать дополнительные векторы, сверхэкспрессирующие белки-шапероны, такие как белки Dsb (DsbA, DsbB, DsbC, DsbD и или DsbG) или FkpA (циспептидилпролил, транс-изомераза с активностью шаперона) для совместной трансформации прокариотических клеток-хозяина. Было показано, что белки-шапероны способствуют правильной укладке и нуж
- 44 045206 ной растворимости гетерологичных белков, продуцируемых в бактериальных клетках-хозяевах. Chen et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:19601-19605; Georgiou et al., патент США № 6083715; Georgiou et al., патент США № 6027888; Bothmann and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105: Ramm and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113; Arie et al. (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210.
Для минимизации протеолиза экспрессированных гетерологичных белков (особенно белков, чувствительных к протеолизу), в настоящем изобретении могут быть использованы определенные штаммыхозяева, дефицитные по протеолитическим ферментам. Например, штаммы клеток-хозяев могут быть модифицированы для введения генетической мутации(ий) в гены, кодирующие известные бактериальные протеазы, такие как протеаза III, QrnpT, DegP, Tsp, протеаза I, протеаза Mi, протеаза V, протеаза VI и их комбинации. Некоторые штаммы E.coli с дефицитом протеаз доступны и описаны, например, Joly et al. (1998), см. выше; Georgiou et al., патент США № 5264365; Georgiou et al., патент США № 5508192; Hara et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996).
В одном из вариантов осуществления в качестве клеток-хозяев в системе экспрессии по настоящему изобретению используют штаммы E.coli, дефицитные по протеолитическим ферментам и трансформированные плазмидами, сверхэкспрессирующими один или более белков-шаперонов.
с) Очистка антител.
В одном из вариантов осуществления антитело, полученное по настоящему изобретению, дополнительно очищают для получения препаратов, которые являются по существу гомогенными, для дальнейших анализов и применений. Могут быть использованы стандартные способы очистки белка, известные в данной области. Следующие процедуры являются примерами подходящих процедур очистки: фракционирование на иммуноаффинных или ионообменных колонках, осаждение этанолом, обращеннофазовая ВЭЖХ, хроматография на диоксиде кремния или на катионообменной смоле, такой как DEAE, хроматофокусирование, SDS-PAGE, осаждение сульфатом аммония, и гель-фильтрация с использованием, например, Sephadex G-75.
В одном из аспектов для иммуноаффинной очистки продуктов антител по настоящему изобретению используется белок А, иммобилизованный на твердой фазе. Белок А представляет собой клеточный белок размером 41 кДа из Staphylococcus aureas, который связывается с высоким сродством с Fc-областью антител. Lindmark et al. (1983) J. Immunol. Мет. 62:1-13. Твердая фаза, на которую иммобилизован белок А, может представлять собой колонку со стеклянным носителем или носителем из диоксида кремния или колонку со стеклянным носителем с контролируемыми порами или колонку с носителем из кремниевой кислоты. В некоторых применениях колонка покрыта реагентом, таким как глицерин для предотвращения неспецифического связывания с загрязняющими веществами.
В качестве первой стадии очистки полученный из культуры клеток препарат, как описано выше, можно наносить на твердую фазу с иммобилизованным белком А для обеспечения специфического связывания представляющего интерес антитела с белком А. Затем твердую фазу промывают для удаления загрязнений, не имеющих специфического связывания с твердой фазой. Наконец, представляющее интерес антитело выделяют из твердой фазы элюированием.
Генерация антител с помощью эукариотических клеток-хозяев
Вектор для использования в эукариотической клетке-хозяине обычно включает, без ограничения, один или более из следующих компонентов: сигнальную последовательность, точку начала репликации, один или более генов-маркеров, энхансерный элемент, промотор и последовательность терминации транскрипции.
a) Сигнальная последовательность
Вектор для применения в эукариотической клетке-хозяине также может содержать сигнальную последовательность или другой полипептид, имеющий специфический сайт расщепления на N-конце представляющего интерес зрелого белка или полипептида. Выбранной гетерологичной сигнальной последовательностью может быть последовательность, которая является узнаваемой и процессируемой (т.е. которая расщепляется сигнальной пептидазой) клеткой-хозяином. При экспрессии клеток млекопитающих можно использовать сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные секреторные лидерные последовательности, например gD-сигнал простого герпеса. ДНК для такой областипредшественника лигируют с кодирующей антитело ДНК с сохранением рамки считывания.
b) Точка начала репликации
Обычно для векторов экспрессии млекопитающих точка начала репликации не нужна. Например, как правило, может быть использована точка начала репликации SV40 только потому, что он содержит ранний промотор.
в) Селективный ген
Векторы экспрессии и клонирования могут содержать селективный ген, также называемый селективным маркером. Типичные селективные гены кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например, ампициллину, неомицину, метотрексату или тетрациклину, (b) восполняют питательные вещества, не синтезируемые ауксотрофами, где это актуально, или (с) поставляют необходимые питательные вещества, недоступные в сложных средах.
В одном из примеров схемы отбора используется лекарственное средство для остановки роста клет
- 45 045206 ки-хозяина. Те клетки, которые успешно трансформированы гетерологичным геном, продуцируют белок, придающий устойчивость к лекарственному веществу, и, таким образом, выживают в режиме отбора. В примерах такой доминантной селекции используют такие лекарственные вещества, как неомицин, микофеноловая кислота и гигромицин.
Другим примером подходящих селективных маркеров для клеток млекопитающих являются маркеры, позволяющие идентифицировать клетки, способные поглощать кодирующую антитело нуклеиновую кислоту, такую как DHFR, тимидинкиназа, металлотионеин-I и -II, металлотионеиновые гены приматов, аденозиндеаминаза, орнитин декарбоксилаза и др.
В некоторых вариантах осуществления, например, клетки, трансформированные селекционным геном DHFR, сначала идентифицируют путем культивирования всех трансформантов в культуральной среде, которая содержит метотрексат (Mtx), конкурентный антагонист DHFR. В некоторых вариантах осуществления подходящей клеткой-хозяином, когда используется DHFR дикого типа, является клеточная линия яичника китайского хомячка (СНО), дефицитная по активности DHFR (например, АТСС CRL9096).
Альтернативно, клетки-хозяева (в частности, хозяева дикого типа, которые содержат эндогенный DHFR), трансформированные или ко-трансформированные последовательностями ДНК, кодирующими антитело, белок DHFR дикого типа и другой селективный маркер, такой как аминогликозид-3'фосфотрансфераза (АРН), могут быть отобраны путем выращивания клеток в среде, содержащей селективный агент для селективного маркера, такого как аминогликозидный антибиотик, например, канамицин, неомицин или G418. См. патент США № 4965199. Клетки-хозяева могут включать NS0, СНОК1, CHOKISV или их производные, включая клеточные линии, дефицитные по глютаминсинтетазе (GS). Способы использования GS в качестве селективного маркера для клеток млекопитающих описаны в патенте США № 5122464 и патенте США № 5891693.
d) Промоторный компонент
Векторы для экспрессии и клонирования обычно содержат промотор, который является узнаваемым организмом-хозяином и функционально связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей представляющий интерес полипептид (например, антитело). Промоторные последовательности известны для эукариот. Например, в действительности, все эукариотические гены имеют АТ-богатый участок, расположенный примерно на 25-30 оснований выше сайта начала транскрипции. Другая последовательность, обнаруженная у многих генов на 70-80 оснований выше от начала транскрипции, представляет собой область CNCAAT, где N может быть любым нуклеотидом. На 3'-конце большинства эукариотических генов находится последовательность ААТААА, которая может служить сигналом для добавления полиА-хвоста к 3'-концу кодирующей последовательности. В некоторых вариантах осуществления любая из этих последовательностей может быть вставлена подходящим образом в эукариотические экспрессирующие векторы.
Транскрипция из векторов в клетках-хозяевах млекопитающих контролируется, например, промоторами, полученными из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы птиц, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В и вирус обезьян 40 (SV40), из гетерологичных промоторов млекопитающих, например, актинового промотора или иммуноглобулинового промотора, из промоторов белков теплового шока, если такие промоторы являются совместимыми с системами клеток-хозяев.
Ранние и поздние промоторы вируса SV40 удобно получать в виде рестрикционного фрагмента SV40, который также содержит точку начала репликации вируса SV40. Немедленно-ранний промотор человеческого цитомегаловируса удобно получать в виде рестрикционного фрагмента HindIII Е. Система для экспрессии ДНК в клетках-хозяевах млекопитающих с использованием вируса бычьей папилломы в качестве вектора раскрыта в патенте США № 4419446. Модификация этой системы описана в патенте США № 4601978. См. также Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982), где описана экспрессия кДНК βинтерферона человека в мышиных клетках под контролем промотора тимидинкиназы из вируса простого герпеса. Альтернативно, в качестве промотора может быть использован длинный концевой повтор вируса саркомы Рауса.
e) Энхансерный компонент
Транскрипция ДНК, кодирующей антитело по настоящему изобретению высшими эукариотами, часто увеличивается в результате вставки в вектор энхансерной последовательности. Сегодня известно много энхансерных последовательностей, полученных из генов млекопитающих (глобина, эластазы, альбуминв, α-фетопротеина и инсулина). Однако, как правило, используется энхансер, получаемый из вируса эукариотических клеток. Примеры включают энхансер SV40 в поздней области от точки начала репликации (п.о. 100-270), энхансер раннего промотора цитомегаловируса человека, энхансер раннего промотора цитомегаловируса мыши, энхансер полиомы в поздней области от точки начала репликации и энхансеры аденовируса. См. также Yaniv, Nature 297:17-18 (1982), где описаны энхансерные элементы для активации эукариотических промоторов. Энхансер может быть встроен в вектор в положении 5' или 3' относительно последовательности, кодирующей полипептид антитела, но обычно расположен на уча
- 46 045206 стке 5' от промотора.
f) Компонент терминации транскрипции
Векторы экспрессии, используемые в эукариотических клетках-хозяевах, также могут содержать последовательности, необходимые для терминации транскрипции и для стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно получают из 5', а иногда и из 3', нетранслируемых областей эукариотических или вирусных ДНК или кДНК Эти области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибируемые как полиаденилированные фрагменты в нетранслируемой части мРНК, кодирующей антитело. Одним из полезных компонентов терминации транскрипции является область полиаденилирования бычьего гормона роста. См. WO 94/11026 и вектор экспрессии, раскрытый в нем.
g) Трансформация и отбор клеток-хозяев
Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии ДНК в векторах по настоящему изобретению включают клетки высших эукариот, описанные в настоящей заявке, включая клетки-хозяева позвоночных. Размножение клеток позвоночных в культуре (культуре ткани) стало рутинной процедурой. Примерами полезных линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия CV1 почки обезьяны, трансформированная SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); линия почки эмбриона человека (клетки 293 или 293, субклонированные для роста в суспензионной культуре, Graham et al., J. Gen Virol. 36-59 (1997)); клетки почки новорожденного хомячка (ВНК, ATCC CCL 10); клетки яичников китайского хомячка, дефицитных по DHFR (CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); клетки сертоли мыши (ТМ4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251. (1980)); клетки почки мартышки (CV1 АТСС CCL 70); клетки почки африканской зеленой обезьяны (VERO-76, АТСС CRL-1587); клетки цервикальной карциномы человека (HELA, АТСС CCL 2); клетки почки собаки (MDCK, АТСС CCL 34), клетки печени буйвола (BRL 3А, АТСС CRL 1442), клетки легкого человека (W138, АТСС CCL 75), клетки печени человека (Hep G2, НВ 8065), опухоль мышиной молочной железы (ММТ 060562, АТСС CCL51); клетки TRI (Mather et al. Annals NY Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); клетки MRC 5; клетки FS4; клетки CHOK1, клетки или производные CHOK1SV и линия гепатомы человека (Hep G2).
Клетки-хозяева трансформируют вышеописанными векторами экспрессии или клонирования для продуцирования антител и культивируют в обычных питательных средах, модифицированных для индукции промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих нужные последовательности.
h) Культивирование клеток-хозяев
Клетки-хозяева, используемые для получения антитела по настоящему изобретению, можно культивировать в различных средах. Коммерчески доступные среды, такие как Ham F10 (Sigma), минимальная питательная среда (Minimal Essential Medium ((MEM), Sigma), RPMI-1640 (Sigma)) и модифицированная по способу Дульбекко среда Игла ((DMEM), Sigma), подходят для культивирования клетокхозяев. Кроме того, в качестве культуральной среды для клеток-хозяев можно использовать любую из сред, описанных в Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al. Anal. Biochem. 102:255 (1980), патентах США № 4767704; 4657866; 4927762; 4560655; или 5122469; WO 90/03430; WO 87/00195; или патенте США 30985. Любая из этих сред при необходимости может быть дополнена гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальция, магния и фосфата), буферами (такими как HEPES), нуклеотидами (такими как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как препарат GENTAMYCIN™), микроэлементами (определяемыми как неорганические соединения, обычно присутствующие в конечных концентрациях в микромолярном диапазоне) и глюкозой или эквивалентным источником энергии. Любые другие добавки, известные специалистам в данной области, также могут быть включены в соответствующих концентрациях. Условия культивирования, такие как температура, рН и т.п., соответствуют значениям, которые использовались ранее для клетки-хозяина, выбранной для экспрессии, и являются очевидными для специалиста в данной области техники.
i) Очистка антитела.
При использовании рекомбинантных методов антитело может продуцироваться внутриклеточно или секретироваться непосредственно в среду. Если антитело продуцируется внутриклеточно, на первом этапе твердый дебрис либо клетки-хозяева, либо лизированные фрагменты могут быть удалены, например, центрифугированием или ультрафильтрацией. Когда антитело секретируется в среду, супернатанты из таких систем экспрессии могут быть сначала сконцентрированы с помощью коммерчески доступного фильтра для концентрации белка, например, с помощью ультрафильтрационной установки Amicon или Milhpore Pellicon. Ингибитор протеазы, такой как PMSF, может быть включен на любом из вышеуказанных этапов для ингибирования протеолиза, а для предотвращения роста случайных загрязнителей могут быть включены антибиотики.
Композиция антител, полученная из клеток, может быть очищена с помощью, например, гидроксилапатитовой хроматографии, гель-электрофореза, диализа и аффинной хроматографии, причем удобным методом является аффинная хроматография. Пригодность белка А в качестве аффинного лиганда зависит от вида и изотипа Fc-домена иммуноглобулина, который присутствует в антителе. Белок А может быть
- 47 045206 использован для очистки антител, основанных на человеческих γ1, γ2 или γ4 тяжелых цепях (Lindmark et al., J. Immunol. Methods 62:1-13 (1983)). Белок G рекомендован для всех изотипов мышей и человеческого γ3 (Guss et al., EMBO J. 5: 15671575 (1986)). Матрица, к которой присоединен аффинный лиганд, может быть агарозой, но могут быть использованы и другие матрицы. Механически стабильные матрицы, такие как стекло с контролируемыми порами или поли(стиролдивинил)бензол, обеспечивают более высокие скорости потока и более короткое время обработки, достигаемое в случае агарозы. Когда антитело содержит домен СН3, для очистки пригодна смола Bakerbond АВХ™ (J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.). Другие методы очистки белков, такие как фракционирование на ионообменной колонке, осаждение этанолом, обращенно-фазовая ВЭЖХ, хроматография на силикагеле, хроматография с использованием гепаринSEPHARQSE™, хроматография на анионно- или катионообменной смоле (такой как колонка с полиаспарагиновой кислотой), хроматофокусирование, SDS-PAGE и осаждение сульфатом аммония также доступны в зависимости от извлекаемого антитела.
После любого этапа(ов) предварительной очистки смесь, содержащая представляющее интерес антитело и загрязняющие вещества, может быть подвергнута дальнейшей очистке, например, с помощью хроматографии гидрофобных взаимодействий при низком рН с использованием элюирующего буфера с рН примерно 2,5-4,5, которая проводится в условиях низкий концентраций солей (например, от 0 до 0,25 М соли).
В целом, в данной области техники хорошо известны различные методы для получения антител с целью их применения в исследованиях, испытаниях и в клинике, которые согласуются с вышеописанными методами и/или которые по мнению специалиста в данной области являются подходящими для конкретного представляющего интерес антитела.
Получение нефукозилированных антител
Настоящее изобретение относится к способам получения антител с пониженной степенью фукозилирования. Например, способы, рассматриваемые в настоящем описании, включают, без ограничения, использование клеточных линий, дефицитных по фукозилированию белков (например, клетки Lee 13 СНО, клетки СНО, нокаутные по гену альфа-1,6-фукозилтрансферазы, клетки, сверхэкспрессирующие β1,4-N-ацетилглюкозамин-трансферазу III и также сверхэкспрессирующие фермент Гольджи γманнозидазу II и т.д.) и добавление аналога(ов) фукозы в среду для культивирования клеток, используемую для получения антител. См. Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявку на патент США № 2003/0157108 A1, Presta, L; WO 2004/056312 A1; Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004) и патент США № 8574907. Дополнительные способы уменьшения содержания фукозы в антителах включают метод Glymaxx, описанный в публикации заявки на патент США № 2012/0214975. Дополнительные способы уменьшения содержания фукозы в антителах также включают добавление одного или более ингибиторов гликозидазы в среду для культивирования клеток, используемую для продуцирования антител. Ингибиторы гликозидазы включают α-глюкозидазу I, α-глюкозидазу II и α-маннозидазу I. В некоторых вариантах осуществления ингибитор гликозидазы представляет собой ингибитор αманнозидазы I (например, кифунензин).
Используемый в настоящем описании термин фукозилирование ядра относится к добавлению фукозы (фукозилированию) к N-ацетилглюкозамину (GIcNAc) на восстанавливающем конце Nсвязанного гликана. Также предоставлены антитела, полученные такими способами, и их композиции.
В некоторых вариантах осуществления снижен уровень фукозилирования сложных N-гликозидсвязанных сахарных цепей, связанных с Fc-областью (или доменом). Используемая в настоящем описании сложная N-гликозид-связанная сахарная цепь обычно связана с аспарагином 297 (согласно нумерации Кабат), тем не менее сложная N-гликозидсвязанная сахарная цепь также может быть связана с другими остатками аспарагина. Сложная N-гликозидсвязанная сахарная цепь исключает сахарную цепь с высоким содержанием маннозы, в которой невосстанавливающий конец ядерной структуры включает только маннозу, но включает: 1) сложный тип, в котором невосстанавливающий конец ядерной структуры имеет одну или более ветвей галактозо-N-ацетилглюкозамина (также называемого gal-GlcNAc), и невосстанавливающий конец gal-GlcNAc также содержит сиаловую кислоту, биссекторный Nацетилглюкозамин или т.п.; 2) гибридный тип, в котором невосстанавливающий конец ядерной структуры имеет как ветви N-гликозид-связанной сахарной цепи с высоким содержанием маннозы, так и сложную N-гликозидсвязанную сахарную цепь.
В некоторых вариантах осуществления сложная N-гликозид-связанная сахарная цепь включает сложный тип, в котором невосстанавливающй конец ядерной структуры не имеет, имеет одну или более ветвей галактозо-N-ацетилглюкозамина (также называемого gal-GlcNAc), а невосстанавливающий конец Gal-GlcNAc необязательно дополнительно имеет структуру, такую как сиаловая кислота, биссекторный N-ацетилглюкозамин или т.п.
В соответствии со способами по изобретению обычно только незначительное количество фукозы включено в сложную N-гликозид-связанную сахарную цепь(и). Например, в различных вариантах осуществления менее примерно 60%, менее примерно 50%, менее примерно 40%, менее примерно 30%, менее примерно 20%, менее примерно 15%, менее примерно 10%, менее примерно 5% или менее примерно
- 48 045206
1% антитела имеет фукозилированное фукозой ядро в композиции. В некоторых вариантах осуществления, по существу, ни одно (т.е. менее чем примерно 0,5%) антитело не имеет фукозилированное фукозой ядро в композиции. В некоторых вариантах осуществления более примерно 40%, более примерно 50%, более примерно 60%, более примерно 70%, более примерно 80%, более примерно 90%, более примерно 91%, более примерно 92%, более примерно 93%, более примерно 94%, более примерно 95%, более примерно 96%, более примерно 97%, более примерно 98% или более примерно 99% антител в композиции являются нефукозилированными.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу, в котором практически ни одна (т.е. менее чем примерно 0,5%) N-гликозид-связанная углеводная цепь не содержит остатка фукозы. В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе представлено антитело, в котором по меньшей мере одна или две тяжелые цепи антитела не являются фукозилированными.
Как описано выше, для экспрессии антитела могут быть использованы различные векторные системы экспрессии хозяина млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления питательная среда не содержит фукозы. В некоторых вариантах осуществления в культуральную среду добавляют эффективное количество аналога фукозы. В контексте настоящего изобретения эффективное количество относится к количеству аналога, которое является достаточным для уменьшения включения фукозы в сложную N-гликозидсвязанную сахарную цепь антитела по меньшей мере на примерно 10%, по меньшей мере на примерно 20%, по меньшей мере на примерно 30%, по меньшей мере на примерно 40% или по меньшей мере на примерно 50%. В некоторых вариантах осуществления антитела, продуцируемые способами по настоящему изобретению, включают по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 40% или по меньшей мере примерно 50% неядерного фукозилированного белка (например, не содержащего фукозилирование ядра) по сравнению с антителами, продуцируемыми из клеток-хозяев, культивируемых в отсутствие аналога фукозы.
Содержание (например, соотношение) сахарных цепей, в которых фукоза не связана с Nацетилглюкозамином на восстанавливающем конце сахарной цепи, по сравнению с сахарными цепями, в которых фукоза связана с N-ацетилглюкозамином на восстановительном конце сахарной цепи, может быть определено, например, как описано в примерах. Другие методы включают гидразинолиз или расщепление ферментами (см., например, Biochemical Experimentation Methods 23: Method for Studying: Glycoprotein Sugar Chain (Japan Scientific Societies Press), под редакцией Reiko Takahashi (1989)), мечение флуоресцентной меткой или радиоизотопом высвобождаемой сахарной цепи и затем выделение меченой сахарной цепи с помощью хроматографии. Кроме того, составы высвобождаемых сахарных цепей могут быть определены с помощью анализа цепей методом HPAEC-PAD (см., например, J. Liq Chromatogr. 6:1557 (1983)). (См. публикацию заявки на патент США № 2004/0110282).
III. Композиции
В некоторых аспектах настоящее изобретение также относится к композициям (например, фармацевтическим композициям), содержащим любое из антител к сиглеку-8, представленных в настоящей заявке (например, антитело, которое связывается с сиглеком-8). В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, причем антитело содержит Fc-область и N-гликозид-связанные углеводные цепи, связанные с Fc-областью, при этом менее примерно 50% N-гликозид-связанных углеводных цепей содержат остаток фукозы. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит Fc-область и N-гликозид-связанные углеводные цепи, связанные с Fc-областью, причем менее примерно 45%, примерно 40%, примерно 35%, примерно 30%, примерно 25%, примерно 20% или примерно 15% N-гликозид-связанных углеводных цепей содержат остаток фукозы. В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке, причем антитело содержит Fc-область и Nгликозид-связанные углеводные цепи, связанные с Fc-областью, причем по существу ни одна из Nгликозид-связанных углеводных цепей не содержит остаток фукозы.
Терапевтические составы готовят для хранения путем смешивания активного ингредиента с требуемой степенью чистоты с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или стабилизаторами (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Lippincott Williams & Wiklins, Pub., Gennaro Ed., Philadelphia, PA. 2000). Приемлемые носители, наполнители или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту, метионин, витамин Е, метабисульфит натрия; консерванты, агенты тоничности, стабилизаторы, комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); хелатообразующие агенты, такие как ЭДТА и/или неионные поверхностно-активные вещества.
Буферы могут быть использованы для контроля рН в диапазоне, который оптимизирует терапевтическую эффективность, особенно если стабильность зависит от рН. Буферы могут присутствовать в концентрациях от примерно 50 мМ до примерно 250 мМ. Подходящие буферные агенты для использования в настоящем изобретении включают как органические, так и неорганические кислоты и их соли, например, цитрат, фосфат, сукцинат, тартрат, фумарат, глюконат, оксалат, лактат, ацетат. Кроме того, буферы могут состоять из солей гистидина и триметиламина, таких как трис.
Для предотвращения роста микробов могут быть добавлены консерванты, которые обычно присут
- 49 045206 ствуют в количестве от примерно 0,2 до 1,0% (мас./об.). Подходящие для использования по настоящему изобретению консерванты включают октадецилдиметилбензиламмоний хлорид; гексаметоний хлорид; галогениды бензалкония (например, хлорид, бромид, йодид), хлорид бензетония; тимеросал, фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол, 3-пентанол и м-крезол.
Могут присутствовать агенты тоничности, иногда известные как стабилизаторы, для регулирования или поддержания тоничности жидкости в композиции. При использовании с большими заряженными биомолекулами, такими как белки и антитела, их часто называют стабилизаторами, потому что они могут взаимодействовать с заряженными группами боковых цепей аминокислот, тем самым уменьшая потенциал для меж- и внутримолекулярных взаимодействий. Агенты тоничность могут присутствовать в любом количестве от примерно 0,1 до примерно 25 мас.% или от примерно 1 до примерно 5 мас.%, принимая во внимание относительные количества других ингредиентов. В некоторых вариантах осуществления агенты тоничности включают многоатомные сахарные спирты, трехатомные или высшие сахарные спирты, такие как глицерин, эритрит, арабит, ксилит, сорбит и маннит.
Дополнительные наполнители включают агенты, которые могут служить в качестве одного или более из следующего: (1) наполнителей, (2) усилителей растворимости, (3) стабилизаторов и (4) и агентов, предотвращающих денатурацию или прилипание к стенке контейнера. Такие вспомогательные вещества включают: многоатомные сахарные спирты (перечисленные выше); аминокислоты, такие как аланин, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин, лизин, орнитин, лейцин, 2-фенилаланин, глутаминовая кислота, треонин и т.д.; органические сахара или сахарные спирты, такие как сахароза, лактоза, лактит, трегалоза, стахиоз, манноза, сорбоза, ксилоза, рибоза, рибит, миоинизитоз, миоинизит, галактоза, галактит, глицерин, циклитолы (например, инозит), полиэтиленгликоль, серосодержащие восстанавливающий агенты, такие как мочевина, глутатион, тиоктовая кислота, тиогликолат натрия, тиоглицерин, αмонотиоглицерин и тиосульфат натрия; низкомолекулярные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, бычий сывороточный альбумин, желатин или другие иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; моносахариды (например, ксилоза, манноза, фруктоза, глюкоза; дисахариды (например, лактоза, мальтоза, сахароза); трисахариды, такие как рафиноза; и полисахариды, такие как декстрин или декстран.
Могут присутствовать неионогенные поверхностно-активные вещества или детергенты (также известные как смачивающие агенты) для облегчения растворения терапевтического агента, а также для защиты терапевтического белка от вызванной встряхиванием агрегации, подвергая при этом состав воздействию поверхностного напряжения сдвига, не вызывая денатурации активного терапевтического белка или антитела. Неионные поверхностно-активные вещества присутствуют в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 1,0 мг/мл или от примерно 0,07 до примерно 0,2 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления неионогенные поверхностно-активные вещества присутствуют в диапазоне от примерно 0,001% до примерно 0,1 мас./об.% или от примерно 0,01% до примерно 0,1 мас./об.%, или от примерно 0,01% до примерно 0,025 мас./об.%.
Подходящие неионные поверхностно-активные вещества включают полисорбаты (20, 40, 60, 65, 80 и т.д.), полоксамеры (184, 188 и т.д.), полиолы PLURONIC®, TRITON®, моноэфиры полиоксиэтиленсорбитана (TWEEN®-20, TWEEN®-80 и др.), лауромакрогол 400, полиоксил 40 стеарат, полиоксиэтилен гидрогенизированное касторовое масло 10, 50 и 60, моностеарат глицерина, эфир сахарозы и жирных кислот, метилцеллюлозу и карбоксиметилцеллюлозу. Анионные детергенты, которые можно использовать, включают лаурилсульфат натрия, диоктилсульфосукцинат натрия и диоктилсульфонат натрия. Катионные детергенты включают бензалкония хлорид или бензетония хлорид.
Чтобы составы можно было использовать для введения in vivo, они должны быть стерильными. Составы можно сделать стерильными с помощью фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны. Терапевтические композиции по изобретению обычно помещают в контейнер, имеющий стерильное входное отверстие, например, мешок для внутривенного раствора или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожных инъекций.
Путь введения соответствует известным и принятым способам, таким как однократное или многократное болюсное введение или инфузия в течение длительного периода времени подходящим способом, например в виде инъекции или инфузии путем подкожного, внутривенного, внутрибрюшинного, внутримышечного, внутриартериального, внутриочагового или внутрисуставного, местного введения, путем ингаляции или в виде средства с замедленным или пролонгированным высвобождением.
Состав по настоящему изобретению также может содержать более одного активного соединения, необходимого для лечения конкретного показания, предпочтительно, с активностями, которые не оказывают вредного влияния друг на друга. Такие активные соединения присутствуют в подходящей комбинации в количествах, которые эффективны для предполагаемой цели.
IV. Изделия или наборы
В другом аспекте предложено изделие или набор, который содержит антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8). Изделие
- 50 045206 или набор может дополнительно содержать инструкции по применению антитела в способах по настоящему изобретению. Таким образом, в определенных вариантах осуществления изделие или набор содержит инструкции по применению антитела к сиглеку-8, которое связывается с человеческим сиглеком-8, в способах лечения и/или предотвращения аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) у индивидуума, включающих введение индивидууму эффективного количества антитела к сиглеку-8, которое связывается с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления изделие содержит лекарственное средство, содержащее антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению лекарственного средства нуждающемуся в этом индивидууму для лечения и/или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита). В некоторых вариантах осуществления во вкладыше в упаковку дополнительно указано, что лечение является эффективным для уменьшения одного или более симптомов у индивидуума с аллергическим заболеванием глаз (например, аллергическим конъюнктивитом, кератоконъюнктивитом или гигантским папиллярным конъюнктивитом) по сравнению с исходным уровнем до введения лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления индивидууму поставлен диагноз аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) до введения лекарственного средства, содержащего антитело. В некоторых вариантах осуществления индивидуум представляет собой человека.
Изделие или набор могут дополнительно содержать контейнер. Подходящие контейнеры включают, например, бутыли, флаконы (например, двухкамерные флаконы), шприцы (такие как однокамерные или двухкамерные шприцы) и пробирки. Контейнер может быть изготовлен из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит состав.
Изделие или набор может дополнительно содержать этикетку или вкладыш в упаковку, который находится на контейнере или связан с контейнером, и может содержать указания о том, как восстанавливать и/или использовать препарат. Этикетка или вкладыш в упаковку могут дополнительно содержать указания о пользе состава или о его назначении для подкожного, внутривенного или других способов введения для лечения и/или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) у индивидуума. Контейнер, содержащий состав, может представлять собой флакон одноразового использования или флакон многоразового использования, который позволяет осуществлять повторные введения восстановленного состава. Изделие или набор может дополнительно содержать второй контейнер, содержащий подходящий разбавитель. Изделие или набор может дополнительно включать другие материалы, необходимые с коммерческой, терапевтической и пользовательской точки зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и вкладыши в упаковку с инструкциями по применению.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к набору для единичного введения дозы. Такие наборы содержат контейнер с водным составом терапевтического антитела, включающий как однокамерные, так и многокамерные предварительно заполненные шприцы. Типичные предварительно заполненные шприцы доступны от Vetter GmbH, Равенсбург, Германия.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к изделию или набору, содержащему составы, описанные в настоящей заявке, для введения в автоинжекторное устройство. Автоинжектор может быть описан как инъекционное устройство, которое после активации доставляет свое содержимое без дополнительных необходимых действий со стороны пациента или администратора. Они особенно подходят для самолечения с помощью терапевтических составов, когда скорость доставки должна быть постоянной, а время доставки превышает несколько мгновений.
В другом аспекте предложено изделие или набор, который содержит антитело к сиглеку-8, описанное в настоящем описании (например, антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8). Изделие или набор может дополнительно содержать инструкции по применению антитела в способах по настоящему изобретению. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изделие или набор содержит инструкции по применению антитела к сиглеку-8, которое связывается с человеческим сиглеком8, в способах лечения или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита, или гигантский папиллярный конъюнктивит) у индивидуума, включающих введение индивидууму эффективного количества антитела к сиглеку-8, которое связывается с человеческим сиглеком-8. В некоторых вариантах осуществления изделие или набор содержит лекарственное средство, содержащее антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8, и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции для введения лекарственного средства нуждающемуся в этом индивидууму для лечения и/или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита).
Настоящее изобретение также отночится к изделию или набору, который содержит антитело к сиглеку-8, описанное в настоящей заявке (например, человеческое антитело, которое связывается с сиглеком-8) в комбинации с одним или более дополнительными лекарственными средствами (например, вторым лекарственным средством) для лечения или профилактики аллергического заболевания глаз (напри
- 51 045206 мер, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) у индивидуума. Изделие или набор может дополнительно содержать инструкции по применению антитела в комбинации с одним или более дополнительными лекарственными средствами в способах по настоящему изобретению. Например, изделие или набор по изобретению необязательно дополнительно содержит контейнер, содержащий второе лекарственное средство, причем антитело к сиглеку-8 представляет собой первое лекарственное средство, при этом изделие или набор дополнительно содержит инструкции, представленные на этикетке или на вкладыше в упаковку, для лечения индивидуума с помощью второго лекарственного средства в эффективном количестве. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изделие или набор содержит инструкции по применению антитела к сиглеку-8, которое связывается с человеческим сиглеком-8, в комбинации с одним или более дополнительными лекарственными средствами в способах лечения или профилактики аллергического заболевания глаз (например, аллергического конъюнктивита, кератоконъюнктивита или гигантского папиллярного конъюнктивита) у человека. В некоторых вариантах осуществления изделие или набор содержит лекарственное средство, содержащее антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8 (например, первым лекарственным средством), одно или более дополнительных лекарственных средств и вкладыш в упаковку, содержащий инструкции по введению первого лекарственного средства в комбинации с одним или более дополнительных лекарственных средств (например, вторым лекарственным средством). В некоторых вариантах осуществления один или более дополнительных терапевтических агентов могут включать, без ограничения, кортикостероид (например, будесонид, дексаметазон, гидрокортизон, метилпреднизолон, преднизолон или предизон), антигистамин (например, гидрохлорид левоабастина или олопататин), кетотифен азеластин, эпинастин, бепостатин, циклоспорин и нестероидное противовоспалительное средство (НПВС).
Очевидно, что аспекты и варианты осуществления, описанные в настоящей заявке, предназначены только с целью иллюстрации и что специалистам в данной области техники могут быть предложены различные модификации или изменения, не изменяющие сущность изобретения и входящие в сферу применения настоящей заявки и объем прилагаемой формулы изобретения.
Примеры
Настоящее изобретение станет более понятым со ссылкой на приведенные ниже примеры. Однако приведенные ниже примеры не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Понятно, что примеры и варианты осуществления, описанные в настоящей заявке, предназначены исключительно для иллюстрации и что специалистам в данной области техники могут быть предложены различные модификации или изменения, не изменяющие сущность изобретения и входящие в сферу применения настоящей заявки и объем прилагаемой формулы изобретения.
Пример 1. Оценка антител к сиглеку-8 с использованием мышиной модели аллергического конъюнктивита in vivo.
Для изучения различных аллергических заболеваний глаз создавали животные модели (см., например, Groneberg, DA et al. (2003) Allergy 58:1101-1113), включая мышиную модель аллергического конъюнктивита (Giavina-Bianchi, P. et al. (2008) Ada Ophthalmol. 86:670-675). Для оценки действия антител к сиглеку-8 на мышиных моделях аллергического конъюнктивита мышей, трансгенных по гену сиглек-8, сенсибилизировали системным введением аллергена, а затем подвергали стимуляции глазным аллергеном с последующим выполнением клинической оценки конъюнктивита во временном интервале от 15 до 24 ч после заражения путем наблюдения ранней и поздней фазы воспалительных реакций.
Модель Der р у мышей С57В1/6, описанную Giavina-Bianchi, P. et al. (2008) Acta Opkthalmol. 86:670-675 получали следующим образом. Мышей иммунизировали растворами, приготовленными из экстрактов D. pteronyssinus (Der p) в день 0. Через 10 дней осуществляли провокационную глазную инъекцию, чтобы вызвать аллергический конъюнктивит.
Клинический анализ и сбор материала для лабораторных анализов выполняли через 20 мин и в течение 24 ч после провокационной глазной инъекции. В частности, мышам подкожно вводили раствор для иммунизации, содержащий 5-500 мкг аллергена в основание обеих задних ног и в нижнюю часть живота.
Одну четвертую дозы вводили в каждую заднюю ногу, а оставшуюся половину вводили в брюшную полость. Через десять дней после сенсибилизации мышей заражали двумя каплями раствора аллергена (4-5 мкг/мкл), вводимыми в каждый глаз. Через 20 мин и 24 ч после заражения мышей обследовали на отек конъюнктивы; отек глазного дна; гиперемии конъюнктивы и слезотечение. Ткани и выделения анализировали на наличие цитокинов и наличие воспалительных клеток, включая тучные клетки и эозинофилы. Для оценки активности антитела к сиглеку-8, указанное антитело или контрольный изотип вводили в дозе 0,1-5,0 мг/кг путем внутрибрюшинного введения за один или 3 дня до заражения глаз или вводили два раза в неделю с момента сенсибилизации.
Для индуцированного овальбумином конъюнктивита трансгенных по гену сиглек-8 мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1 мг овальбумина с 1 мг адъюванта (гидроксид алюминия) и 0,3 мг коклюшного токсина с дополнительной подкожной инъекцией овальбумина на 4 день (50 мкг) и введением провокационной глазной инъекции, состоящей из 0,75 мг овальбумина, в день 17 в соответствии с методом, описанным Izushi, К. et al. (2002) Enr. J. Pharmacol. 440:79-82. Лечение антителами
- 52 045206 к сиглеку-8, клинические анализы и лабораторные анализы выполняли, как описано выше.
Для конъюнктивита, вызванного амброзией, трансгенных по гену сиглек-8 мышей сенсибилизировали путем подкожного введения 50 мкг экстракта амброзии и 5 мг гидроксида алюминия в день 0, и провокационную глазную инъекцию осуществляли с использованием 1,25 мг экстракта амброзии в день 9, как описано Магоне, МТ et al. (1998) Clin. Immunol. Immunopathol. 87(1):75-84. Лечение антителами к сиглеку-8, клинические анализы и лабораторные анализы выполняли, как описано выше.
Пример 2. Структура открытого пилотного исследования для оценки эффективности и безопасности лечения с помощью антител к сиглеку-8 пациентов с атопическим кератоконъюнктивитом (AKC), весенним кератоконъюнктивитом (VKC) и круглогодичным аллергическим конъюнктивитом (РАС)
В течение последних десятилетий количество людей с аллергическими заболеваниями глаз возросло, и предполагается, что в настоящее время этими заболеваниями страдают по меньшей мере 15-20% населения (La Rosa, M. et al. (2013) Ital, J. Pediatr. 39:18). Аллергические заболевания глаз охватывают ряд специфических клинических образований с различными механизмами действия. Настоящее исследование предназначено для проверки безопасности и эффективности лечения пациентов с AKC, VKC или РАС с помощью антителом к сиглеку-8.
В общей сложности приблизительно 30 пациентам вводят 6 доз антитела HEKA к сиглеку-8 (нефукозилированного IgG1) в виде ежемесячной внутривенной инфузии), при этом доза составляет не более 3 мг/кг. Клинические лабораторные параметры и нежелательные явления оценивают с помощью общих терминологических критериев нежелательных явлений (СТСАЕ), версии 4.03. Регистрацию нежелательных явлений начинают с момента первой инфузии тестируемого лекарственного вещества и заканчивают в день 309 (±7 дней) или во время визита врача в связи с ранним прекращением (ЕТ) лечения. Абсолютные показатели эозинофилов и базофилов в периферической крови измеряют, начиная в день -1 до введения дозы и заканчивая днем 309 или визитом ЕТ. Для оценки симптомов, связанных с AKC, VKC или РАС, используют анкету для выявления симптомов аллергического конъюнктивита (ACS), которая заполняется каждым субъектом ежедневно на протяжении всего периода исследования от момента скрининга до дня 309 или визита ЕТ.
Критерии включения включают:
(a) возраст (>18 и <80 лет);
(b) подтвержденный диагноз AKC, VKC или РАС и по меньшей мере один из следующих симптомов, причем средний балл симптомов >3, рассчитанный по всем дневным опросникам ACS, заполненным во время периода скрининга (должно быть заполнено минимум 14 дневных опросников ACS):
1) зуд;
2) светобоязнь;
3) боль в глазах;
4) ощущение инородного тела;
5) выделения из глаз;
(c) историю применения топических кортикостероидов и/или системных кортикостероидов для лечения аллергического конъюнктивита (AKC, VKC или РАС);
(d) стабильную дозу(ы) разрешенных препаратов для лечения AKC, VKC или РАС в течение 14 дней до скрининга и в течение всего периода скрининга; и обязательство по сохранению приема такой же дозы(доз) препаратов AKC, VKC или РАС в течение всего периода участия в исследовании (если изменение дозы не связано с непредвиденной медицинской необходимостью):
(e) отрицательный результат скрининга на наличие яйцеклеток и паразитов; и (f) отрицательный результат теста на беременность (для женщин).
Критерии исключения включают:
(a) анамнез злокачественных новообразований, за исключением карциномы in situ в шейке матки, ранней стадии рака предстательной железы или немеланомного рака кожи;
(b) использование контактных линз в течение 48 ч до введения первой дозы антитела;
(c) участие в параллельном интервенционном исследовании с последним вмешательством, имевшим место в течение 30 дней до введения исследуемого лекарственного вещества (или 90 дней или 5 периодов полураспада, в зависимости от того, что дольше для биологических продуктов);
(d) лечение химиотерапией или лучевой терапией в предшествующие 6 месяцев;
(e) лечение клинически значимой глистной паразитарной инфекции в течение 6 месяцев после скрининга;
(f) использование в течение 30 дней до скрининга (или 5 периодов полураспада, в зависимости от того, что больше) или использование в течение периода скрининга топических противоотечных средств, топических вазоконстрикторов, топических ингибиторов кальциневрина, топических кортикостероидов, омализумаба, дупилумаба, системных иммунодепрессантов или системных кортикостероидов с суточной дозой >10 мг преднизона или эквивалентного препарата (допускается применение топических кортикостероидов для лечения атопического дерматита, кортикостероидных назальных спреев при рините и ингаляционных кортикостероидов при аллергической астме);
- 53 045206 (g) вакцинация живыми ослабленными вакцинами в течение 30 дней до начала лечения в исследовании, во время лечения, или вакцинация, ожидаемая в течение 5 периодов полувыведения (4 месяца) после введения исследуемого лекарственного средства;
(h) положительные результаты серологического теста на гепатит при скрининге, за исключением вакцинированных пациентов или пациентов, перенесших гепатит; и (i) положительные результаты серологического теста на ВИЧ при скрининге.
Первичным критерием оценки является безопасность и переносимость лечения антителами, исходя из оценки клинических лабораторных параметров и нежелательных явлений, определенных с помощью общих терминологических критериев нежелательных явлений (СТСАЕ), версии 4.03,
Вторичные результаты включают:
(a) изменения относительно исходного уровня в абсолютных показателях эозинофилов и базофилов в периферической крови (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ); и (b) изменения относительно исходных симптомов, связанных с AKC, VKC или РАС, которые измеряют ежедневно с помощью опросника, применяемого к пациенту с конкретным заболеванием, опросника по симптомам аллергического конъюнктивита (ACS) (на протяжении всего исследования, начиная с момента скрининга до дня 309 или визита ЕТ).
Дополнительные вторичные показатели включают:
(a) изменения относительно исходного качества жизни, измеренные с помощью опросника-25 по функционированию зрительного анализатора Национального института глаз (NEI VFQ 25) (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ);
(b) изменения относительно исходных показателей зрительного анализатора (включая точечное окрашивание роговицы) на цветной фотографии с щелевой лампой, определяемых централизованным центром считывания изображений (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ);
(c) изменения относительно результатов первичной офтальмологической оценки балла глазных симптомов, определенного исследователем или ассистентом (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ);
(d) изменения относительно исходной концентрации медиаторов воспаления и концентрации антитела HEKA к сиглеку-8 (нефукозилированного IgG1), измеренной в необязательно полученных образцах слезной жидкости (слеза) (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ);
(e) изменения относительно исходных результатов гистопатологического исследования эозинофилов и тучных клеток в необязательно полученных образцах биопсии конъюнктивы (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ);
(f) изменения относительно исходных признаков и симптомов, измеряемых по баллам проявления симптомов, выставляемого ежедневно по опроснику для конкретного заболевания ACS, для 5 разных симптомов (начиная со дня -1 до введения дозы до дня 309 или визита ЕТ);
(g) изменения относительно исходных признаков и симптомов, измеряемых с помощью опросника по качеству жизни, опросника-25 по функционированию зрительного анализатора Национального института глаз (NEI VFQ 25); и (h) изменения относительно исходных признаков и симптомов, измеренных путем оценки сопутствующих атопических состояний (атопический дерматит, аллергическая астма, аллергический ринит).
Последовательности
Все полипептидные последовательности представлены в направлении от N-конца к С-концу, если не указано иное. Все последовательности нуклеиновых кислот представлены в направлении от 5' к 3', если не указано иное,
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного 2Е2
QVQLKESGPGLVAPSQSLS1TCT\^SGFSLT1YGAHWVRQPPGKGLEWLGV1WAGGSTNY
NSALMSRLSlSKDNSKSQVFLKlNSLQTDDTALYYCARDGSSPYYASNiEYWGQGTSVT
VSS (SEQ IDNO D
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного 2Е2 RHA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWTRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTN
YNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTT
VTVSS (SEQ ID NO:2)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи RHB мышиного 2Е2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLTIYGAHWVRQAPGK.GLEWLGVIWAGGSTN
YNSALMSRLSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTT
VTVSS (SEQ ID N03)
- 54 045206
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи RHC мышиного 2Е2 Е VQ L V ESGGGLVQPGG SL R LSCA VSGFSL П YGAHW V RQ APG KGLE W VS VIW AGG SIN
YNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTT
VTVSS (SEQ ID NO 4)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
RHD мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWLSVIWAGGSTN
YNISALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTT
VTVSS (SEQ ID NO:5)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи RHE мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSL'nYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGST
Ν YN SALM SRFTISKDNS KNTVY LQM NSLRAEDTA VYYC ARDGSS PY YY SMEY WGQGT
TVTVSS (SEQ ID NO:6)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи RHF мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTN
YN SA LMSRLTISKDN SKNTVYLQMNSLRAEDTA VYYC ARDGSS PYYYS ME YWGQGTT
VWSS (SEQ ID NOT)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
RHG мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTN
YNSALMSRFSISKDNSKNWYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTT
VTVSS (SEQ ID NO:8)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного 2Е2
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGS1SIYGAHWIRQPPGKGLEWIGVIWAGGSTNYN SA LMSR VTISV DIS KN Q FS LK LSS VIA A DTAVYY C ARDGSSP Y Y Y S Μ EYWGQGTLVTV SS (SEQ ID NO:9)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
RHB2 мышиного 2Е2
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTIYGAHWVRQPPGKGLEWLGVIWAGGSTN
YNSALMSRLSISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTL
VTVSS (SEQ ID NO: 10)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
RHE S-G мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGST
NYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYGMEY WGQGT
TVTVSS (SEQ ID NOJI)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
E-D мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTTYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGST
N YN SALM SRFTI SKDNS KNWY LQMNSLRA EDTA V YYC A RDGSSPY YY SMDY WGQGT
TVTVSS (SEQ ID NO: 12)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи RHE Y-V мышиного 2Е2
E VQLVESGGGLVQPGGS LRLSCA ASGFSLT1YGA H W V RQ A PGKGLEWVGVIW AGGST
NYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRA EDTA VYYC ARDGSSPYYYSMEVWGQGT
TVTVSS (SEQIDN0J3)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи тройного мутанта RHE мышиного 2Е2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTrtOAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGST NYNSALMSRFTISKDNSKNTV'YLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYGMDVWGQG TIVI VSS (SEQ ID NO: 14)
- 55 045206
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи мышиного 2Е2 QIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRF
SGSGSGTSYSLUSRMEAEDAAFYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 15)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи RKA мышиного 2Е2 El VLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLUYSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLF.PEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 16)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи RKB мышиного 2Е2
EHLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSY MHWFQQKPGQAPRLW1YSTSNLASGVPARF
SGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFFFGPGTKLDJK (SEQ ID NO 17)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи RKC мышиного 2Е2 EULTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNILASGIPARFS
GSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK (SEQ ID NO: 18)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи RKD мышиного 2Е2 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLWIYSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDFTLT1SSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLD1K (SEQ ID NO: 19)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
RICE мышиного 2Е2
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMIIWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPAR
FSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK (SEQ ID NO 20)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи RKF мышиного 2Е2
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLL1YSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFT FGPGTKLDIK (SEQ ID NO 21)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи RKG мышиного 2Е2
E1VLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPF TFGPGTKLDIK (SEQ ID NO:22)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
RKA F-Y мышиного 2Е2
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPYTFGPGTKLDIK (SEQ ID NO 23)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
RKF F-Y мышиного 2Е2
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPYTFGPGTKLDIK (SEQ ID ΝΌ 24)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи HEKA и легкой цепи HEKF
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGST
NYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGT
TVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP
AVLQSSGLYSLSSVVWPSSSLGTQTYICNVNHKPSNl’KVDKRVEPKSCDKIHrCPPCPA
PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT
KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQ
VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL
YSKLWDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO75)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи HEKA
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS
KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECiSEQ ID NO:76)
- 56 045206
Аминокислотная последовательность легкой цепи HEKF
El VLTQSPATLSLS PG ERATLSCSATSSVSYMHW FQQKPGQAPRL LI YSTS N LASG1PARF
SGSGSGTDYTl RSSLEPEDFA VYYCQQRSSYPFTFGPGTKLD1KRJVA APS VFIFPPSDEQ
IXSGTASVVCl±NNFYPREAKVOWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSτΎSL·SSTLTLS
KADYEKIIKVYA(TVTHQCjLSSPVTKSFNRGE(? (SEQ ID NO:77)
Аминокислотная последовательность константной области тяжелой цепи IgG1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
IGLYSLSSVVTVTSSSLGTQn'lCNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNS’FYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD
KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO. 78)
Аминокислотная последовательность константной области тяжелой цепи IgG4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVWPSSSLGTKIYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV
FLFPPKPKDTLMISRIPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST
YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVTTLPPSQEEM
TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRW
QEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 79)
Аминокислотная последовательность константной области легкой цепи каппа Ig
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ
DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ Ш NO 80)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи мышиных 2С4 и 2Е2 IgG1
QVQLKRASGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTIYGAHWVRQPPGKGLEWLGV1WAGGSTN
YYSALMSRLSISKDNSKSQVFLKINSLQTDDTALYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTSV
TV'SSAKTTPPSWPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTV'TWTMSGSLSSGVHTFPA
VLESDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCNVAHPASSTKVDKKI\TRDCGCKPCICTVPEVSS
VFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNST
FRSVSEIPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQWTIPPPKEQMA
KDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSN
WEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG (SEQ ID NOS I)
Аминокислотная последовательность легкой цепи каппа мышиного 2С4
EULTQSPAIMSASPGEKVSiTCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRF
SGSGSGTSYSL'nSRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLElKADAAHVSIFPPSSEQ
LTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLT
KDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO.82)
Аминокислотная последовательность легкой цепи каппа мышиного 2Е2
QHLTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRF
SGSGSG rSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSG TKLElKADAAPTVSiFPPSSEQ
L TSGG AS V VCFLN N FY P KDl N VK W KI DGSE RQNG V LN SWTDQDS К DSTYS MSSTLJTT
KDEYERHNSYTCEATHKTSTSPTVKSFNRNEC (SEQ ID NO;83)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи химерных 2С4 и 2Е2 IgG1
QVQLKRASGPGLVAPSQSLSITCIVSGFSI ..TIYGAHWVRQPPGKGLEWLGV1WAGGSTN
YNSALAISRLSISKDNSKSQVFLKINSLQTDDTAIATCARDGSSPYYYSMEYWGQGTSV
ITVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSVVNSGALTSGVHTFPAV
LQSSGLYSLSSVVTVPSSSlOTQ'mCNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE
UOGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP
REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY
TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS
KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:84)
-
Claims (11)
- Аминокислотная последовательность легкой цепи каппа химерного 2С4EIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWTQQKPGTSPKLWTYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSrYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVFKSFNRGEC (SEQ ID NO 85)Аминокислотная последовательность легкой цепи каппа химерного 2Е2QlILTQSPAlMSASPGEKVSnCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTS YS LBS R MEAED AATYYCQQRSSYPFTFGSGTK LEI К RTV A APS V FI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEG (SEQ ID NO:8fi)Аминокислотная последовательность тяжелой цепи HEKA IgG4 (IgG4 содержит мутацию S228P)EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKN TVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTIVWSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAAl-GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR HEQF\SrYRWSVLTVLHQDWl.NGKEYKCKVSNKGLPSSlEKilSKAK(iQP[<EPQVYrL PPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRI..TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO;87)Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного 1C3 (подчеркнутые остатки содержат CDR H1 и Н2 согласно нумерации по Чотиа) EVQVVESGGDLVKSGGSLKLSCAASGFPFSSYAMSWWRQTPDKRLEWVAIISSGGSYTYYSDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARHETAQAAWFAYWGQGTLVTV SA (SEQ ID NO 106)Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного 1Н10 (подчеркнутые остатки содержат CDR H1 и Н2 согласно нумерации по Чотиа)EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNn^YYMYWVKQRPEQGLEWIGRIAPEDGDT EYAPKFQGKATVTADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCTTEGNYYGSSILDYWGQGTT L1VSS (SEQ ID NO: 107)Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного 4F11 (подчеркнутые остатки содержат CDR H1 и Н2 согласно нумерации по Чотиа)QV QLQQSG AEL VKPG ASVKISCKA SGYAFRSSWMNWVKQRPGKGLEWIGQIYPGDDYITNYNGKFKGKVTLTADRSSSTAY'MQLSSLTSEDSAWFCARLGPYGPFADWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 108)Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи мышиного 1C3 IQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLAYGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPPTFGGGIKLEIK (SEQ ID NO: 109)Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи мышиного 1Н10 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDITNYLNWYQQKPDGTVKLLIYFTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIAIYFCQQGNTLPWTFGGGIKLEIK (SEQ ID NO: 110)Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи мышиного 4F11QIVLTQSPA1VSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQRPGSSPRLLIYDTSSLASGVPVRFSGSGSGTSYSLnSRlESEDAANYYCQQWNSDPYTFGGGTKLEIK(SEQ И) NO 111)ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение композиции, содержащей антитело, которое связывается с человеческим сиглеком-8, для лечения или профилактики аллергического заболевания глаз у индивидуума, где индивидуум имеет круглогодичный аллергический конъюнктивит, атопический кератоконъюнктивит или весенний кератоконъюнктивит, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где вариабельная область тяжелой цепи содержит:(i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, (ii ) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и- 58 045206 (ii i) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и где вариабельная область легкой цепи содержит (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, и (iii) HVR- L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66.
- 2. Применение по п.1, где индивидуум имеет повышенное воспаление по меньшей мере в части конъюнктивы по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз, и где необязательно индивидуум имеет увеличенное количество тучных клеток, нейтрофилов, эозинофилов и/или лимфоцитов по меньшей мере в части конъюнктивы по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз.
- 3. Применение по любому из пп.1-2, где:(а) соскоб с конъюнктивы, полученный от индивидуума, содержит эозинофилы;(Ь) образец сыворотки или слезы, полученный от индивидуума, имеет повышенное содержание IgE по сравнению с индивидуумом без аллергического заболевания глаз; или (с) аппликационный накожный или внутрикожный тест на аллергию, применяемый к индивидууму с использованием аллергена, приводит к аллергической реакции.
- 4. Применение по любому из пп.1-3, где:(а) один или более симптомов у индивидуума снижены по сравнению с исходным уровнем до введения композиции или (Ь) один или более из следующего: зуда конъюнктивы, покраснения конъюнктивы, отека конъюнктивы, выделения из глаз, изъязвления, слезотечения, гипертрофии век, коркообразования, симблефарона, периокулярной экземы, мадароза, фотофобии, кератита, гигантских папилл и катаракты у индивидуума снижены по сравнению с исходным уровнем до введения композиции.
- 5. Применение по любому из пп.1-4, где антитело содержит Fc-область и N-гликозидсвязанные углеводные цепи, связанные с Fc-областью, причем менее 50% N-гликозидсвязанных углеводных цепей антитела в композиции содержат остаток фукозы, причем по существу ни одна из N-гликозидсвязанных углеводных цепей антитела в композиции не содержит остатка фукозы.
- 6. Применение по любому из пп.1-5, где:(а) антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 или 21; или (Ь) антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 или 77.
- 7. Применение по п.6, где антитело является гуманизированным антителом или химерным антителом; или где антитело сконструировано для улучшения активности антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC).
- 8. Применение по п.6 или 7, где:(а) антитело истощает эозинофилы крови и ингибирует активацию тучных клеток;(Ь) антитело содержит Fc-область тяжелой цепи, содержащую Fc-область человеческого IgG, необязательно Fc-область человеческого IgGl, которая не является фукозилированной, Fc-область человеческого IgG4, содержащую аминокислотную замену S228P, причем аминокислотные остатки пронумерованы в соответствии с индексом EU, как у Кабат;(с) по меньшей мере одна или две тяжелые цепи антитела не являются фукозилированными и/или (d) антитело является моноклональным антителом.
- 9. Применение по любому из пп.1-8, где композиция предназначена для введения в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами для лечения или профилактики аллергического заболевания глаз; причем необязательно один или более дополнительных терапевтических агентов выбирают из группы, состоящей из кортикостероида, антигистаминного средства, кетотифена, азеластина, эпинастина, бепостатина, циклоспорина и нестероидного противовоспалительного средства (НПВС, NSAID).
- 10. Применение по любому из пп.1-9, где индивидуум представляет собой человека.
- 11. Применение по любому из пп. 1 -10, где композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую антитело и фармацевтически приемлемый носитель.Евразийская патентная организация, ЕАПВРоссия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/502,479 | 2017-05-05 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045206B1 true EA045206B1 (ru) | 2023-11-01 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220331412A1 (en) | Anti-siglec-8 antibodies and methods of use thereof | |
JP2017501744A5 (ru) | ||
US11203638B2 (en) | Methods and compositions for treating perennial allergic conjunctivitis and keratoconjunctivitis | |
CN113747918A (zh) | 治疗肥大细胞胃炎、肥大细胞食管炎、肥大细胞肠炎、肥大细胞十二指肠炎和/或肥大细胞胃肠炎的方法和组合物 | |
JP2024045612A (ja) | 慢性蕁麻疹を処置するための方法および組成物 | |
US20190338027A1 (en) | Methods and compositions for treating chronic obstructive pulmonary disorder | |
CA3149484A1 (en) | Methods of administering anti-siglec-8 antibodies and corticosteroids | |
US20220380460A1 (en) | Methods and compositions for treating irritable bowel syndrome and functional dyspepsia | |
EA045206B1 (ru) | Способы и композиции для лечения аллергических заболеваний глаз | |
WO2024043940A1 (en) | Methods and compositions for treating atopic dermatitis | |
EA046789B1 (ru) | Способы и композиции для лечения воспалительных расстройств желудочно-кишечного тракта |