EA045070B1 - Cd3-связывающие молекулы, способные связаться с cd3 человека и cd3, не являющимся человеческим - Google Patents
Cd3-связывающие молекулы, способные связаться с cd3 человека и cd3, не являющимся человеческим Download PDFInfo
- Publication number
- EA045070B1 EA045070B1 EA201991724 EA045070B1 EA 045070 B1 EA045070 B1 EA 045070B1 EA 201991724 EA201991724 EA 201991724 EA 045070 B1 EA045070 B1 EA 045070B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- mab2
- binding
- seq
- antibody
- domain
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 318
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims description 186
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 312
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 208
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 203
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 203
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 137
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 117
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 117
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 111
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 99
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 94
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 81
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 79
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 79
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 65
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 56
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 50
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 50
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 37
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 36
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 35
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 32
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 31
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 31
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 31
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 29
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 26
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 26
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 23
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 23
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 22
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 21
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 claims description 18
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 18
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 17
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 16
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 16
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 16
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims description 15
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 14
- 102200123491 rs72555390 Human genes 0.000 claims description 14
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 13
- -1 A33 Proteins 0.000 claims description 12
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 claims description 12
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 12
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 claims description 11
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 11
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 10
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 10
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 10
- 102200074783 rs144422014 Human genes 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 9
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 8
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 8
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 claims description 8
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 claims description 7
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 claims description 7
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 7
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 7
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 claims description 6
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims description 6
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 102220053806 rs121918461 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220005411 rs35873730 Human genes 0.000 claims description 6
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 5
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 claims description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 4
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 claims description 4
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 4
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 claims description 4
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 claims description 4
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 4
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 claims description 3
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000008006 pharynx cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 claims description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 2
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 2
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims 4
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims 4
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 claims 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims 2
- 241000223205 Coccidioides immitis Species 0.000 claims 1
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 claims 1
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 claims 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims 1
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims 1
- 102220623752 Phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase_Y58F_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 claims 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 claims 1
- 230000028956 calcium-mediated signaling Effects 0.000 claims 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 claims 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 claims 1
- 201000003486 coccidioidomycosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 1
- 201000004962 larynx cancer Diseases 0.000 claims 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims 1
- 102220223311 rs139642328 Human genes 0.000 claims 1
- 102200024594 rs9657963 Human genes 0.000 claims 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 claims 1
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 description 98
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 60
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 54
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 54
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 44
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 44
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 44
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 30
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 30
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 24
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 24
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 22
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 20
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 19
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 18
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 16
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 16
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 16
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 14
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 14
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 14
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 14
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 12
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 11
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 description 11
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 11
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 11
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 10
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 10
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 10
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 10
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 9
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 7
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 7
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 7
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 7
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 6
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 6
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 6
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 5
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 5
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 5
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 5
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 5
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 239000012893 effector ligand Substances 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 4
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 4
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N L-alanyl-L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 4
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 4
- 229940122985 Peptide agonist Drugs 0.000 description 4
- 229940083963 Peptide antagonist Drugs 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Chemical group OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 4
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 4
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 108010056243 alanylalanine Proteins 0.000 description 4
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 4
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 230000000263 nonmitogenic effect Effects 0.000 description 4
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 4
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 4
- 229950010127 teplizumab Drugs 0.000 description 4
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 102220545661 Dual specificity protein phosphatase 1_A56T_mutation Human genes 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 3
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 3
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 3
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 description 3
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 3
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 description 3
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 3
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 description 3
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 3
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 3
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 3
- 102100022964 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Human genes 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 3
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 3
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 3
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 3
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 3
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 2
- WOWDZACBATWTAU-FEFUEGSOSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(dimethylamino)-3-methylbutanoyl]amino]-n-[(3r,4s,5s)-1-[(2s)-2-[(1r,2r)-3-[[(1s,2r)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-n,3-dimethylbutanamide Chemical compound CC(C)[C@H](N(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)C1=CC=CC=C1 WOWDZACBATWTAU-FEFUEGSOSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040149 Adenylyl-sulfate kinase Human genes 0.000 description 2
- 108010054404 Adenylyl-sulfate kinase Proteins 0.000 description 2
- 206010001889 Alveolitis Diseases 0.000 description 2
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 108010008629 CA-125 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000007269 CA-125 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 2
- 206010008469 Chest discomfort Diseases 0.000 description 2
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 2
- 108010044226 Class 8 Receptor-Like Protein Tyrosine Phosphatases Proteins 0.000 description 2
- 102000006449 Class 8 Receptor-Like Protein Tyrosine Phosphatases Human genes 0.000 description 2
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 2
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 2
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 2
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 2
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 101000798109 Homo sapiens Melanotransferrin Proteins 0.000 description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 2
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 208000008454 Hyperhidrosis Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 2
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 2
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 2
- 102000049772 Interleukin-16 Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 2
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 2
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 description 2
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 2
- 102100032239 Melanotransferrin Human genes 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027260 Meningitis viral Diseases 0.000 description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 2
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 2
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 2
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 2
- 102100029527 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 ligand 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 2
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 2
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 2
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 2
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 2
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 2
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 2
- 208000006257 Rinderpest Diseases 0.000 description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 2
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033540 T cell apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 2
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 2
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 2
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 2
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 2
- CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N beta-D-GalpNAc-(1->4)-[alpha-Neup5Ac-(2->8)-alpha-Neup5Ac-(2->3)]-beta-D-Galp-(1->4)-beta-D-Glcp-(1<->1')-Cer(d18:1/18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000036471 bradycardia Effects 0.000 description 2
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 201000001155 extrinsic allergic alveolitis Diseases 0.000 description 2
- SXXHYAMKYMNIHI-UHFFFAOYSA-N fluoroimino(sulfanylidene)methane Chemical compound FN=C=S SXXHYAMKYMNIHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 2
- GIVLTTJNORAZON-HDBOBKCLSA-N ganglioside GM2 (18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 GIVLTTJNORAZON-HDBOBKCLSA-N 0.000 description 2
- PFJKOHUKELZMLE-VEUXDRLPSA-N ganglioside GM3 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@@H]([C@H](O)/C=C/CCCCCCCCCCCCC)NC(=O)CCCCCCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 PFJKOHUKELZMLE-VEUXDRLPSA-N 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 2
- 208000022098 hypersensitivity pneumonitis Diseases 0.000 description 2
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 2
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 2
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 2
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 108010059074 monomethylauristatin F Proteins 0.000 description 2
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 2
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 2
- SIXSYDAISGFNSX-NJFSPNSNSA-N scandium-47 Chemical compound [47Sc] SIXSYDAISGFNSX-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 2
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 2
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 229940124676 vascular endothelial growth factor receptor Drugs 0.000 description 2
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 201000010044 viral meningitis Diseases 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-NJFSPNSNSA-N 188Re Chemical compound [188Re] WUAPFZMCVAUBPE-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 206010066728 Acute interstitial pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010069002 Autoimmune pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 108010012919 B-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000019260 B-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 229940122738 CD3 agonist Drugs 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- 102000004178 Cathepsin E Human genes 0.000 description 1
- 108090000611 Cathepsin E Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102100034428 Dual specificity protein phosphatase 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- 101710114816 Gene 41 protein Proteins 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036243 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010067148 HLA-DQbeta antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000031071 Hamman-Rich Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101710123026 High molecular weight antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282418 Hominidae Species 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000996823 Homo sapiens Cell surface A33 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101100334515 Homo sapiens FCGR3A gene Proteins 0.000 description 1
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 1
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 208000005446 Lupus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 208000030984 MIRAGE syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710127797 Macrophage colony-stimulating factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710175243 Major antigen Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 101000884277 Mus musculus CD276 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000913071 Mus musculus Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II Proteins 0.000 description 1
- 101000850928 Mycobacterium phage L5 Gene 37 protein Proteins 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010038910 Retinitis Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 101150081243 STA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 108010029180 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000001555 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 3 Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 102220499347 Synaptotagmin-like protein 5_L43A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical compound [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102100021125 Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010075974 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Chemical group 0.000 description 1
- 102000012088 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 108010046882 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 201000004073 acute interstitial pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000000676 anti-immunogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 208000010928 autoimmune thyroid disease Diseases 0.000 description 1
- 229940003504 avonex Drugs 0.000 description 1
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940021459 betaseron Drugs 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- OZVBMTJYIDMWIL-AYFBDAFISA-N bromocriptine Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@]2(C(=O)N3[C@H](C(N4CCC[C@H]4[C@]3(O)O2)=O)CC(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=C(Br)NC3=C1 OZVBMTJYIDMWIL-AYFBDAFISA-N 0.000 description 1
- 229960002802 bromocriptine Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011281 clinical therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 108010018927 conglutinin Proteins 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-IGMARMGPSA-N copper-64 Chemical compound [64Cu] RYGMFSIKBFXOCR-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 239000000430 cytokine receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- QCUFYOBGGZSFHY-UHFFFAOYSA-N depsidomycin Chemical compound O=C1C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(NC=O)C(C)CC)C(C)OC(=O)C2CCCNN2C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C2CCCNN21 QCUFYOBGGZSFHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 229960000520 diphenhydramine Drugs 0.000 description 1
- PCHPORCSPXIHLZ-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine hydrochloride Chemical compound [Cl-].C=1C=CC=CC=1C(OCC[NH+](C)C)C1=CC=CC=C1 PCHPORCSPXIHLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009786 epithelial differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940082789 erbitux Drugs 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009231 family therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- KJZYNXUDTRRSPN-OUBTZVSYSA-N holmium-166 Chemical compound [166Ho] KJZYNXUDTRRSPN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 102000054366 human GPA33 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000011501 immunologic monitoring Methods 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000005732 intercellular adhesion Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- OHSVLFRHMCKCQY-NJFSPNSNSA-N lutetium-177 Chemical compound [177Lu] OHSVLFRHMCKCQY-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000004784 molecular pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- TVLSRXXIMLFWEO-UHFFFAOYSA-N prochloraz Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N(CCC)CCOC1=C(Cl)C=C(Cl)C=C1Cl TVLSRXXIMLFWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 229940038850 rebif Drugs 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 229940051173 recombinant immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 208000030925 respiratory syncytial virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-IGMARMGPSA-N rhenium-186 Chemical compound [186Re] WUAPFZMCVAUBPE-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 102200000898 rs104894496 Human genes 0.000 description 1
- 102200015453 rs121912293 Human genes 0.000 description 1
- 102220065979 rs150401144 Human genes 0.000 description 1
- 102200077960 rs1555897088 Human genes 0.000 description 1
- 102220044897 rs587781661 Human genes 0.000 description 1
- 102200163548 rs63751094 Human genes 0.000 description 1
- 102220188005 rs886053373 Human genes 0.000 description 1
- 229940102127 rubidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 231100000279 safety data Toxicity 0.000 description 1
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 1
- KZUNJOHGWZRPMI-AKLPVKDBSA-N samarium-153 Chemical compound [153Sm] KZUNJOHGWZRPMI-AKLPVKDBSA-N 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000002333 serotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005737 synergistic response Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 1
- 229940056501 technetium 99m Drugs 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 208000029584 urinary system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Description
По настоящей заявке испрашивается приоритет заявки на патент США № 61/488716 (поданной 21 мая 2011 г.; находящейся на рассмотрении) и заявки на патент США № 61/530353 (поданной 1 сентября
2011 г.; находящейся на рассмотрении), каждая из которых включена в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
Ссылка на список последовательностей
Заявка включает один или более списков последовательностей в соответствии в § 1.821 и далее раздела 37 Свода федеральных правил, которые представлены как на бумажном носителе, так и на машиночитаемом носителе, и эти представления на бумажном и машиночитаемом носителях включены в настоящее описание в качестве ссылки в их полном объеме.
Предпосылки создания изобретения
Область техники
Настоящее изобретение относится к CD3-связывающим молекулам, способным связываться с CD3 человека и CD3, не являющимся человеческим, и, в частности, к таким молекулам, которые обладают перекрестной реактивностью с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака). Настоящее изобретение также относится к применению таких антител и антигенсвязывающих фрагментов для лечения злокачественных новообразований, аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний и других состояний.
Описание области техники
Иммунная система организма служит защитой ряда состояний, в том числе, например, повреждения, инфекции и неоплазии, и ее медиаторами являются две отдельные, но взаимосвязанные системы: клеточная и гуморальная иммунные системы. В общем, медиаторами гуморальной системы являются растворимые продукты (антитела или иммуноглобулины), которые обладают способностью к объединению с продуктами, распознаваемыми этой системой как чужеродные для организма, и к их нейтрализации. Напротив, клеточная иммунная система включает активацию определенных клеток, названных Тклетками, которые исполняют ряд терапевтических ролей. Т-клетки представляют собой лимфоциты, которые происходят из вилочковой железы и циркулируют между тканями, лимфатической системой и сердечнососудистой системой. Они действуют против, или в ответ на, ряд (а) чужеродных структур (антигенов). Во многих случаях эти чужеродные антигены представлены на клетках-хозяевах в результате неоплазии или инфекции. Хотя сами Т-клетки не секретируют антитела, они обычно требуются для секреции антител вторым классом лимфоцитов, В-клетками (которые происходят из костного мозга). Немаловажно, что Т-клетки проявляют исключительную иммунологическую специфичность, чтобы быть способными отличить один антиген от другого.
Не подвергнутая воздействию Т-клетка, например, Т-клетка, которая еще не столкнулась со специфическим для нее антигеном, активируется, когда она впервые сталкивается с комплексом специфический пептид:МНС на антигенпрезентирующей клетке. Антигенпрезентирующей клеткой может быть Вклетка, макрофаг или дендритная клетка. Когда не подвергнутая воздействию Т-клетка сталкивается с комплексом специфический пептид:МНС на антигенпрезентирующей клетке, через Т-клеточный рецептор доставляется сигнал, который приводит к изменению конформации молекул связанных с функционированием лимфоцитов -Т-клеток антигенов (LFA) и увеличивает их сродство к молекулам межклеточной адгезии (ICAM), присутствующим на поверхности антигенпрезентирующей клетки. Сигнал, порождаемый при взаимодействии Т-клетки с антигенпрезентирующей клеткой, является необходимым, но недостаточным, для активации не подвергнутой воздействию Т-клетки. Необходим второй костимулирующий сигнал. Не подвергнутую воздействию Т-клетку может активировать только антигенпрезентирующая клетка, несущая как комплекс специфический пептид:МНС, так и костимулирующую молекулу на своей поверхности. Распознавание антигена не подвергнутой воздействию Т-клеткой в отсутствие костимуляции приводит к тому, что Т-клетка становится анергической. Необходимость двух сигналов для активации Т-клеток и В-клеток, так что они достигают адаптивных иммунных ответов, может обеспечить механизм избегания реакций на аутоантигены, которые могут присутствовать на антигенпрезентирующей клетке в местах в системе, в которых она может быть распознана Т-клеткой. Если контактирование Т-клетки с антигенпрезентирующей клеткой приводит к порождению лишь одного из двух необходимых сигналов, Т-клетка не становится активированной, и адаптивный иммунный ответ не имеет место.
Эффективность, с которой у людей и других млекопитающих развивается иммунологическая реакция на патогены и чужеродные вещества, зависит от двух характеристик: высокой специфичности иммунной реакции в отношении распознавания антигена и иммунологической памяти, которая создает возможность для более быстрых и более сильных ответов после повторной активации с помощью того же антигена (Portoles, P. et al. (2009) The TCR/CD3 Complex: Opening the Gate to Successful Vaccination, Current Pharmaceutical Design 15: 3290-3300; Guy, C.S. et al. (2009) Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR: CD3 Complex, Immunol Rev. 232(1): 7-21). Специфичность реакции Т-клеток опосредуется распознаванием антигена (представленного на антигенпрезентирующих клетках (АРС)) молекулярным комплексом, включающим Т-клеточный рецептор (TCR) и лиганд рецептора клеточной поверхности, CD3. TCR представляет собой ковалентно связанный гетеродимер из α- и β-цепей (TCRae). Эти
- 1 045070 цепи являются мембранными полипептидами класса I длиной 259 (α) и 296 (β) аминокислот. Молекула CD3 представляет собой комплекс, содержащий γ-цепь CD3, δ-цепь CD3 и две ε-цепи CD3, связанных в виде трех димеров (εγ, εδ, ζζ,) (Guy, C.S. et al. (2009) Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex, Immunol Rev. 232(1): 7-21; Call, M.E. et al. (2007) Common Themes In The Assembly And Architecture Of Activating Immune Receptors, Nat. Rev. Immunol. 7: 841-850; Weiss, A. (1993) T Cell Antigen Receptor Signal Transduction: A Tale Of Tails And Cytoplasmic Protein-Tyrosine Kinases, Cell 73: 209-212). Комплекс TCR и CD3, наряду с дзета-цепью - ζ-цепью CD3 (также известной как дзета-цепь Тклеточного рецептора Т3 или CD247), включает TCR-комплекс (van der Merwe, P.A. etc. (epub Dec. 3, 2010) Mechanisms For T Cell Receptor Triggering, Nat. Rev. Immunol. 11: 47-55; Wucherpfennig, K.W. et al. (2010) Structural Biology of the T-cell Receptor: Insights into Receptor Assembly, Ligand Recognition, and Initiation of Signaling, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:a005140). Этот комплекс особенно важен, поскольку он содержит большое число (десять) иммунорецепторных тирозиновых активирующих мотивов (ITAM).
В случае зрелых Т-клеток активация TCR/CD3 с помощью чужеродных антигенных пептидов, связанных с молекулами собственного МНС, является первой стадией, необходимой для размножения антигенспецифических Т-клеток и их дифференциации в эффекторные Т-лимфоциты или Т-клетки памяти. Эти процессы включают фосфорилирование иммунорецепторных тирозиновых активирующих мотивов (ITAM) TCR-комплекса. Поскольку TCR-комплекс содержит такое большое число ITAM (всего 10), и эти ITAM расположены последовательно один за другим (благодаря димеризации являющихся составными частями цепей), фосфорилирование соответствующих остатков тирозина в результате лигирования TCR создает спаренные места присоединения белков, которые содержат домены, гомологичные участкам Srcбелка 2 (SH2), таких как связанный с ζ-цепью белок с М.м. 70 кДа (ZAP-70), и тем самым инициирует усилительный каскад передачи сигналов, который приводит к активации Т-клеток и их дифференциации (Guy, C.S. et al. (2009) Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex, Immunol Rev. 232 (1) : 7-21).
Результат этих процессов регулируется интенсивностью и качеством антигенного стимула, а также природой сопроводительных сигналов, передаваемых корецептором и костимулирующими поверхностными молекулами, или рецепторами цитокинов (Portoles, P. et al. (2009) The TCR/CD3 Complex: Opening the Gate to Successful Vaccination, Current Pharmaceutical Design 15: 3290-3300; Riha, P. et al. (2010) CD28 Co-Signaling In The Adaptive Immune Response, Self/Nonself 1(3): 231-240). Хотя стимуляция TCR является необходимым условиям для активации Т-клеток, общепризнано, что вхождение в контакт с костимулирующими молекулами, такими как CD28, необходимо для полной активации Т-клеток и их дифференциации (Guy, C.S. et al. (2009) Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex, Immunol Rev. 232 (1) : 7-21).
Вследствие фундаментальности CD3 в инициации ответов на антигены были предложены моноклональные антитела против этого рецептора, которые способны к блокированию или по крайней мере модулированию иммунного процесса, и, таким образом, в качестве средств для лечения воспалительного и/или аутоиммунного заболевания. В самом деле, антитела против CD3 были первым антителом, разрешенным для лечения людей (St. Clair E.W. (2009) Novel Targeted Therapies for Autoimmunity, Curr. Opin. Immunol. 21(6): 648-657). Антитело против CD3 (продаваемое Janssen-Cilag как ORTHOCLONE™ ОКТ3™) вводили для уменьшения острого отторжения у пациентов с трансплантатами органов и в качестве лечения лимфобластного лейкоза (Cosimi, А.В. et al. (1981) Use Of Monoclonal Antibodies To T-Cell Subsets For Immunologic Monitoring And Treatment In Recipients Of Renal Allografts, N. Engl. J. Med. 305: 308-314; Rung, P. et al. (1979) Monoclonal antibodies defining distinctive human T cell surface antigens, Science 206: 347-349; Vigeral, P. et al. (1986) Prophylactic Use Of OKT3 Monoclonal Antibody In Cadaver Kidney Recipients. Utilization Of OKT3 As The Sole Immunosuppressive Agent, Transplantation 41: 730-733; Midtvedt, K. et al. (2003) Individualized T Cell Monitored Administration Of ATG Versus OKT3 In SteroidResistant Kidney Graft Rejection, Clin. Transplant. 17(1): 69-74; Gramatzki, M. et al. (1995) Therapy With OKT3 Monoclonal Antibody In Refractory T Cell Acute Lymphoblastic Leukemia Induces Interleukin-2 Responsiveness, Leukemia 9(3): 382-390; Herold, K.C. et al. (2002) Anti-CD3 Monoclonal Antibody In NewOnset Type I Diabetes Mellitus, N. Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Cole, M.S. et al. (1997) Human IgG2 Variants Of Chimeric Anti-CD3 Are Nonmitogenic to T cells, J. Immunol. 159(7): 3613-3621; Cole, M.S. et al. (1999) Hum291, A Humanized Anti-CD3 Antibody, Is Immunosuppressive To T Cells While Exhibiting Reduced Mitogenicity in vitro, Transplantation 68: 563-571; патенты США №№ 6491916, 5585097 и 6706265).
Однако лечение такими антителами против CD3 не было признано в достаточной степени специфическим во избежание побочных эффектов (Ludvigsson, J. (2009) The Role of Immunomodulation Therapy in Autoimmune Diabetes, J. Diabetes Sci. Technol. 3(2) : 320-330). Многократное ежедневное введение ОКТЗ приводит к сильной иммуносупрессии и обеспечивает эффективное лечение отторжения после трансплантации почки. In vivo введение ОКТЗ приводит как к активации Т-клеток, так и к подавлению иммунных ответов. Однако применению ОКТЗ препятствовал синдром реакции на первую токсическую дозу, который связан с событиями первоначальной активации Т-клеток и с обеспечением выброса цито
- 2 045070 кинов, который имеет место до иммуносупресии Т-клеточных реакций. Описанные в литературе побочные эффекты, которые следует за первой, а иногда второй инъекцией этого мышиного моноклонального антитела, включают гриппоподобный синдром, состоящий из высокой температуры, озноба, головной боли и желудочно-кишечных симптомов (рвоты и диареи), а в тяжелых случаях отмечается отек легких в пределах часов лечения (Thistlethwaite, J.R. Jr. et al. (1988) Complications and Monitoring of ОКТЗ Therapy, Am. J. Kidney Dis. 11: 112-119). Этот синдром, как полагают, служит отражением ОКТЗопосредуемого перекрестного сшивания комплекса TCR/CD3 на поверхности Т-клеток и результирующего выброса цитокинов (например, фактора альфа некроза опухолей (TNFa), интерферона-γ, интерлейкинов IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-10 и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (Masharani, U.B. et al. (2010) Teplizumab Therapy For Type I Diabetes, Expert Opin. Biol. Ther. 10(3): 459465; Abramowicz, D. et al. (1989) Release Of Tumor Necrosis Factor, Interleukin-2, And Gamma-Interferon In Serum After Injection Of OKT3 Monoclonal Antibody In Kidney Transplant Recipients, Transplantation 47: 606-608; Ferran, C. et al. (1990) Cytokine-Related Syndrome Following Injection Of Anti-CD3 Monoclonal Antibody: Further Evidence For Transient In Vivo T Cell Activation, Eur. J. Immunol. 20: 509-515; Hirsch, R. et al. (12989) Effects Of In Vivo Administration Of Anti-CD3 Monoclonal Antibody On T Cell Function In Mice. II. In Vivo Activation Of T Cells, J. Immunol. 142: 737-743)). Применение антител против CD3 описано в патентах США №№ 7883703, 7728114, 7635472, 7575923 и 7381903 и в публикациях заявок на патенты США №№ 2010/0150918, 2010/0209437, 2010/0183554, 2010/0015142, 2008/0095766, 2007/0077246 и публикации РСТ-заявки № WO 2008/119567.
Особым недостатком прежних антител является их специфичность в отношении только CD3 человека. Этот недостаток является значительной помехой в разработке таких антител, как терапевтические средства для лечения заболеваний у человека. Для получения разрешения на сбыт любое новое лекарственное средство-кандидат должно пройти тщательную проверку. Эту проверку можно подразделить на преклиническую и клиническую фазы. Тогда как клиническую проверку, дополнительно подразделяемую на общеизвестные клинические фазы I, II и III, выполняют на являющихся людьми пациентах, преклиническую проверку выполняют на животных. Целью преклинической проверки является подтверждение того, что лекарственное средство-кандидат обладает желаемой активностью и, самое важное, является безопасным. Только в случае установления при преклинической проверке безопасности для животных и возможной эффективности лекарственного средства-кандидата соответствующим регулирующим органом будет разрешена клиническая проверка на людях этого лекарственного средствакандидата. Безопасность лекарственных средств-кандидатов может быть проверена на животных тремя следующими путями: (i) на релевантном виде, т.е. виде, в котором лекарственные средства-кандидаты могут распознать ортологичные антигены, (ii) на трансгенном животном, содержащем антигены человека, и (iii) посредством использования заменителя лекарственного средства-кандидата, который может связываться с ортологичными антигенами, присутствующими у животного. Недостатками трансгенных животных является то, что эта технология типично приурочена к грызунам. Однако грызуны и люди имеют значительные различия в физиологии, которые могут затруднять экстраполяцию полученных на грызунах данных, относящихся к безопасности, для предсказания безопасности для людей. Недостатками заменителя лекарственного средства-кандидата является отличное химическое соединение по сравнению с фактическим лекарственным средством-кандидатом, и часто используемыми животными являются грызуны с обсуждавшимися выше недостатками. Следовательно, преклинические данные, полученные на грызунах, обладают ограниченной прогнозирующей способностью, что касается лекарственного средства-кандидата. Предпочтительным подходом к проверке безопасности является использование релевантного вида, предпочтительно низшего примата. Теперь недостатком CD3-связывающих молекул, подходящих для терапевтического воздействия на человека, описанных в данной области техники, является то, что релевантными видами являются высшие приматы, в частности, яванские макаки. Соответственно, в высокой степени желательным является антитело против CD3, способное связываться как с CD3 человека, так и CD3 примата. Такие антитела описаны в публикации заявки на патент США с № 20100150918 и в публикации РСТ-заявки с № WO2008/119567.
Несмотря на такие успехи, сохраняется потребность в антителах против CD3 человека и их антигенсвязывающих фрагментах, которые способны перекрестно реагировать с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака). Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность и потребность в улучшенных терапевтических средствах от злокачественного новообразования, аутоиммунных и воспалительных заболеваний.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к CD3-связывающим молекулам, способным к связыванию с CD3 человека и CD3, не являющимся человеческим, и, в частности, к таким молекулам, которые обладают перекрестной реактивностью с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака). Настоящее изобретение также имеет отношение к применениям таких антител и антигенсвязывающих фрагментов для лечения злокачественных новообразований, аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний и других состояний.
Подробно настоящим изобретением обеспечивается CD3-связывающая молекула, включающая ан- 3 045070 тигенсвязывающии фрагмент антитела, причем антигенсвязывающии фрагмент включает CD3специфический VL-домен антитела и CD3-специфический VH-домен антитела, причем CD3специфический VL-домен и CD3-специфический VH-домен образуют антигенсвязывающий домен, способный к иммуноспецифическому связыванию как с эпитопом CD3 человека, так и с эпитопом CD3 млекопитающего, не являющегося человеком, причем:
(I) CD3-специфический VL-домен выбирают из группы, состоящей из VL-1 h-mab2 (SEQ ID NO: 16), VL-2 h-mab2 (SEQ ID NO:18), VL-3 h-mab2 (SEQ ID NO: 20), VL-4 h-mab2 (SEQ ID NO:22), VL-5 hmab2 (SEQ ID NO:24), VL-6 h-mab2 (SEQ ID NO:26), VL-7 h-mab2 (SEQ ID NO: 28), VL-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 30), VL-9 h-mab2 (SEQ ID NO:32) и VL-10 h-mab2 (SEQ ID NO:34), а указанный CD3специфический VH-домен выбирают из группы, состоящей из VH-1 h-mab2 (SEQ ID NO: 36), VH-2 hmab2 (SEQ ID NO: 38), VH-3 h-mab2 (SEQ ID NO: 40), VH-4 h-mab2 (SEQ ID NO: 42), VH-5 h-mab2 (SEQ ID NO: 44), VH-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 46), VH-6L h-mab2 (SEQ ID NO: 54), VH-7 h-mab2 (SEQ ID NO: 48), VH-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 50), VH-8L h-mab2 (SEQ ID NO: 55), VH-8 di-1 h-mab2 (SEQ ID NO:56), VH-8 di-2 h-mab2 (SEQ ID NO: 57), VH-6M h-mab2 (SEQ ID NO: 72), VH-8M h-mab2 (SEQ ID NO: 74), VH-2k h-mab2 (SEQ ID NO: 87) и VH-5k h-mab2 (SEQ ID NO: 88); или (II) CD3-специфический VL-домен выбирают из группы, состоящей из VL-1 h-mab1 (SEQ ID NO: 10) и VL-2 h-mab1 (SEQ ID NO: 12), а CD3-специфическим VH-доменом является VH h-mabl SEQ ID NO: 14).
Настоящее изобретение, в частности, имеет отношение к варианту осуществления описанной выше CD3-связывающей молекулы, в котором CD3-специфическим VL-доменом является VL-6 h-mab2 (SEQ ID NO:26).
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанной выше CD3-связывающей молекулы, в котором CD3-специфическим VH-доменом является VH-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 50), VH-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 46) или VH-2k h-mab2 (SEQ ID NO: 87).
Настоящее изобретение, в частности, имеет отношение к варианту осуществления описанной выше CD3-связывающей молекулы, в котором молекулой является антитело и, в частности, в котором в антителе отсутствует Fc-область, или оно включает Fc-область, которая:
(A) испытывает недостаток эффекторной функции или обладает уменьшенной эффекторной функцией; или (B) подвергнута модифицированию, которое ослабляет способность Fc-области антитела к связыванию с Fc-рецептором; причем уменьшение эффекторной функции и ослабление связывающей способности имеет место относительно таковой Fc-области дикого типа.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул, в котором молекулой является CD3-связывающее диатело, которое включает первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, при этом цепи ковалентно связаны друг с другом, причем:
I. первая полипептидная цепь включает аминоконец и карбоксильный конец и от N-конца к Сконцу:
(i) домен (А), включающий CD3-специфический VL-домен;
(ii) домен (В), включающий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи второго иммуноглобулина (VH2); и (iii) домен (С);
причем домены (А) и (В) не ассоциируются друг с другом с образованием эпитопсвязывающего сайта; и (II) вторая полипептидная цепь включает амино-конец и карбоксильный конец и от N-конца к Сконцу:
(iv) домен (D), включающий связывающую область вариабельного домена легкой цепи второго иммуноглобулина (VL2);
(v) домен (Е), включающий CD3-специфический VH-домен; и (vi) домен (F);
причем домены (D) и (Е) не ассоциируются друг с другом с образованием эпитопсвязывающего сайта; и причем:
(1) домены (А) и (Е) ассоциируются с образованием антигенсвязывающего домена, который способен к иммуноспецифическому связыванию как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком;
(2) домены (В) и (D) ассоциируются с образованием сайта связывания, который иммуноспецифически связывается со вторым эпитопом, при этом второй эпитоп отличен от эпитопа CD3, с которым связывается антигенсвязывающий домен, образованный вследствие ассоциации доменов (А) и (Е); и (3) домены (С) и (F) ковалентно связаны вместе.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3- связывающих молекул, в котором вторым эпитопом не является эпитоп CD3.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше
- 4 045070
CD3-связывающих молекул, в котором вторым эпитопом является эпитоп CD3, который отличен от эпитопа CD3, с которым связывается антигенсвязывающий домен, образованный вследствие ассоциации доменов (А) и (Е).
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул или антител или диател, в котором такая молекула является гуманизированной.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул или антител или диател, в котором такая молекула способна к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и флуоресцеином.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул или диател, в котором такая молекула способна к иммуноспецифическому связыванию как с (i) CD3, так и с (п)(а) опухолеспецифическим антигеном, или (ii)(b) антигеном клеточной поверхности, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул или диател, в котором молекула или диатело способны к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и опухолеспецифическим антигеном, представленным на опухолевой клетке, причем опухолевой клеткой является клетка злокачественного новообразования, выбираемого из группы, состоящей из рака молочной железы, рака предстательной железы, рака желудка, рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, рака прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака печени, рака яичника, рака ротовой полости, рака глотки, рака пищевода, рака гортани, рака кости, рака кожи, меланомы, рака матки, рака яичек, рака мочевого пузыря, рака почки, рака головного мозга, глиобластомы, рака щитовидной железы, лимфомы, миеломы и лейкоза.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул или диател, в котором молекула или диатело способны к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и антигеном клеточной поверхности, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности, причем антигеном клеточной поверхности, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности является HER2/neu, B7-H3, CD20, PSMA, IGF-1R, Ер-САМ, или является молекула, которая вовлечена в ассоциацию Т-клетки с В-клеткой, которая приводит к активации Т-клетки или В-клетки в ходе адаптивного иммунного ответа.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к варианту осуществления описанных выше CD3-связывающих молекул или диател, в котором молекула или диатело способны к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и с молекулой, которая вовлечена в ассоциацию Т-клетки с В-клеткой, и молекулу, которая вовлечена в ассоциацию Т-клетки с В-клеткой, выбирают из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD32B, CD38, CD40, CD79a, CD79b, CD80, CD86, LFA-I, LFA-3 и CFA-I.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к фармацевтической композиции, включающей любую из описанных выше CD3-связывающих молекул, антител или диател и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к описанной выше фармацевтической композиции для применения для лечения злокачественного новообразования или аутоиммунного или воспалительного заболевания.
Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к описанной выше фармацевтической композиции для применения для лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания, выбираемого из группы, состоящей из инсулинозависимого диабета типа I, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, злокачественной миастении, глютеновой болезни, синдрома Гужеро-Шегрена, болезни Грейвса, болезни Крона, аутоиммунного гепатита, псориаза, псориатического артрита, астмы, аллергического ринита, эффектов вследствие трансплантации органа или гомологичной болезни (GVHD). Настоящее изобретение, в частности, имеет отношение к описанной выше фармацевтической композиции для применения для лечения инсулинозависимого диабета типа I.
Краткое описание фигур
На фиг. 1А-1В представлены результаты ELISA с захватом, в случае которого способность антитела против CD3 mAB1 (фиг. 1А) или химерного производного антитела mABl (ch-mAb1) (фиг. 1B) оценивали, используя растворимый CD3 человека (shCD3).
На фиг. 2А-2В представлены результаты ELISA с захватом, в случае которого способность антитела против CD3 mAB2 (фиг. 2А) или химерного производного антитела mAB2 (ch-mAb2) (фиг. 2В) оценивали, используя растворимый CD3 человека (shCD3) или растворимый CD3 яванского макака (scCD3).
На фиг. 3 представлены результаты анализов для определения эффекта вариаций пронумерованных согласно Kabat остатков 41-46 каркасных областей легкой цепи mAb2.
На фиг. 4 представлены результаты анализов для определения эффекта вариаций пронумерованных согласно Kabat остатков 36, 38, 44 и 46 каркасных областей легкой цепи mAb2.
На фиг. 5 представлены результаты анализов для определения эффекта вариаций пронумерованных согласно Kabat остатков 36, 38 и 46 каркасных областей легкой цепи mAb2.
- 5 045070
На фиг. 6 представлены результаты анализов для определения эффекта вариаций пронумерованных согласно Kabat остатков 30, 49 и 93 каркасных областей тяжелой цепи mAb2.
На фиг. 7 представлены результаты дополнительных анализов, проведенных для определения эффекта вариаций пронумерованных согласно Kabat остатков 30, 49 и 93 каркасных областей тяжелой цепи mAb2.
На фиг. 8А-8В представлены результаты анализов, проведенных для определения способности химерного и гуманизированного mAb2 к связыванию с CD3, не являющимся человеческим.
На фиг. 9A-9D представлены записи сенсограмм анализов BIACORE™, выполненных для определения кинетики связывания ch-mAB2 или h-mAb2 с scCD3 или scCD3.
На фиг. 10A-10D представлены результаты ELISA с захватом, выполненных на диателах DART™, содержащих способный к связыванию с CD3 первый эпитопсвязывающий сайт и второй эпитопсвязывающий сайт, который связывается с или Her2/neu, или CD19, или EGFR, или В7-Н3.
На фиг. 11А-11В показана способность В7Н3 х CD3-биспецифических диател DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих В7НЗ.
На фиг. 12А-12Е показана способность А33 х CD3-биспецифических диател DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих А33.
На фиг. 13А и 13В представлены результаты сравнения способности диатела DART™ CD19-hmAb2 и CD19 х CD3-биспецифического диатела к вызову перенаправленного, опосредованного Тклетками уничтожения. Диатело DART™ CD19-h-mAb2 проявляет специфичность в отношении CD3 человека, а также CD3, не являющимся человеческим; CD19 х CD3-биспецифическое диатело DART проявляет специфичность в отношении только CD3 человека. Фиг. 13А: перенаправленное уничтожение клеток В-клеточной лимфомы человека Raji; фиг. 13В: перенаправленное уничтожение клеток лимфомы из клеток ткани JeKo-1.
На фиг. 14А и 14В показано, что диатело DART™ CD19-h-mAb2 по настоящему изобретению было способно к опосредованию цитолиза в присутствии Т-клеток-эффекторов или человека, или яванского макака.
На фиг. 15А и 15В показана способность диатела DART™ ERBITUX™-h-mAb2 по настоящему изобретению или (ERBITUX™-Т-клеточный рецептор)-биспецифического диатела DART™ к опосредованию увеличения MFI CD69 после инкубации с CD4+ или CD8+ Т-клетками. Контрольное диатело ERBITUX™-CD3 FN18 DART™ (способное к связыванию с EGFR и с CD3 яванского макака) не вызывало увеличение MFI CD69.
На фиг. 16A-16D представлены результаты исследований в отношении связывания или диатела DART™ ERBITUX™-h-mAb2, диатела DART™ ERBITUX™-m-mAb2, или диатела DART™ 4420-h-mAb2 (в качестве отрицательно контроля) или контрольного второго антитела с клетками А498 или А431 (фиг. 16А и 16С, соответственно) и в отношении опосредования перенаправленного уничтожения таких клеток (фиг. 16В и 16D, соответственно).
Подробное описание настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам против CD3 человека и их антигенсвязывающим фрагментам и, в частности, к таким антителам, которые обладают перекрестной реактивностью с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака). Настоящее изобретение также имеет отношение к применениям таких антител и антигенсвязывающих фрагментов для лечения злокачественных новообразований, аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний и других состояний.
I. Определения
Используемый здесь термин CD3-связывающая молекула означает молекулу, способную к иммуноспецифическому связыванию как CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком, благодаря по крайней мере одному сайту распознавания антигена (например, антигенсвязывающему домену антитела), находящемуся в вариабельной области молекулы. Как здесь используется, такая способность к иммуноспецифическому связыванию как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком, как предполагается, не означает способность одного антигенсвязывающего домена к одновременному связыванию обеих таких молекул CD3, а точнее означает, что такой антигенсвязывающий домен проявляет перекрестную реактивность, так что он будет иммуноспецифически связываться с CD3 человека при инкубации в присутствии CD3 человека и будет иммуноспецифически связываться с CD3 не являющегося человеком млекопитающего при инкубации в присутствии такого CD3 не являющегося человеком млекопитающего.
Используемый здесь термин CD3-связывающая молекула охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также их фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')2Fv), одиночную цепь (ScFv), их мутанты, встречающиеся в природе варианты, слитые белки, включающие часть белка с сайтом распознавания антигена требуемой специфичности, гуманизированные антитела, химерные антитела, BiTE®, молекулы диател DART™ и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая включает сайт распознавания антигена требуемой специфич- 6 045070 ности. Термин BiTE (биспецифические рекрутеры Т-клеток) относится к одноцепочечной полипептидной молекуле, которая имеет два антигенсвязывающих домена, один из которых связывается с Тклеточным антигеном, а второй из которых связывается с антигеном, присутствующим на поверхности мишени (WO 05/061547; Baeuerle, P. et al. (2008) BiTE®: A New Class Of Antibodies That Recruit T Cells, Drugs of the Future 33: 137-147; Bargou, et al. 2008) Tumor Regression in Cancer Patients by Very Low Doses of a T Cell-Engaging Antibody Science 321: 974-977).
Термин диатело DART™ (перенаправляющий реагент с двумя аффинностями) относится к молекуле иммуноглобулина, которая включает по крайней мере две полипептидных цепи, которые ассоциируются (главным образом посредством ковалентной взаимосвязи) с образованием по крайней мере двух эпитопсвязывающих сайтов, которые могут распознавать один и тот же эпитоп или отличные эпитопы. Каждая из полипептидных цепей диатела DART™ включает вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина и вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, но эти области не взаимодействуют с образованием эпитопсвязывающего сайта. Точнее, вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина одной (например, первой) из полипептидных цепей диатела DART™ взаимодействует с вариабельной областью легкой цепи иммуноглобулина отличной (например, второй) полипептидной цепи DART™ с образованием эпитопсвязывающего сайта. Аналогично, вариабельная область легкой цепи иммуноглобулина одной (например, первой) из полипептидных цепей диатела DART™ взаимодействует с вариабельной областью тяжелой цепи иммуноглобулина отличной (например, второй) полипептидной цепи DART™ с образованием эпитопсвязывающего сайта. Диатела DART™ могут быть моноспецифическими, биспецифическими, триспецифическими и т.д., таким образом, обладая способностью к одновременному связыванию одного, двух, трех или более различных эпитопов (которые могут быть из одинаковых или различных антигенов). Диатела DART™ могут быть, кроме того, одновалентными, двухвалентными, трехвалентными, четырехвалентными, пятивалентными, шестивалентными и т.д., таким образом, обладая способностью к одновременному связыванию одного, двух, трех, четырех, пяти, шести или более молекул. Эти две характеристики диател DART™ (т.е. степень специфичности и валентности) могут быть объединены, например, с получение биспецифических антител (т.е. способных к связыванию двух эпитопов), которые являются четырехвалентными (т.е. способными к связыванию четырех рядов эпитопов), и т.д. Молекулы диател DART™ описаны в публикациях РСТ-заявок №№ WO 2006/113665, WO 2008/157379 и WO 2010/080538.
Биспецифические (или триспецифические, или полиспецифические) молекулы по настоящему изобретению будут способны к связыванию как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака), а также со вторым (или дополнительным) и отличным антигеном(ами) и эпитопом(ами). Вторым антигеном или эпитопом предпочтительно является опухолеспецифический антиген, представленный на опухолевой клетке. Такие опухолевые клетки могут быть из злокачественных новообразований, например, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака желудка, рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, рака прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака печени, рака яичника, рака ротовой полости, рака глотки, рака пищевода, рака гортани, рака кости, рака кожи, меланомы, рака матки, рака яичек, рака мочевого пузыря, рака почки, рака головного мозга, глиобластомы, рака щитовидной железы, лимфомы, миеломы или лейкоза. Дополнительными антигенами или эпитопами предпочтительно являются опухолеспецифические антигены или эпитопы на клеточной поверхности (такие как 17-1А, А33, основной антиген I эндодермального происхождения на эритроцитах взрослого человека, альфа-фетопротеин, антиген оболочки РНК-вируса опухоли, онкоэмбриональный антиген, специфический для опухоли мочевого пузыря, В7-Н1, В7-Н2, В7-Н3, В7-Н4, В7Н5, В7-Н6, специфический для лимфомы Беркитта антиген-38.13, СА125, CD18, CD19, специфический для В-клеточной лимфомы человека антиген-CD20, CD22, CD33, CD44, CD52, СЕА, СО17-1А, СТА-1, CTLA-4, рецептор эпидермального фактора роста, Ер-САМ, EphA2, антиген I на эритроцитах новорожденного, антиген фибросаркомы, ганглиозид GD2, ганглиозид GD3, ганглиозид GM2, ганглиозид GM3, GICA 19-9, gp IIIb/IIIa, gp72, HER1, HER-2/neu, HER3, HER4, специфический для меланомы антиген с большой молекулярной массой, антиген HLA-DR, специфический для лейкоза человека Т-клеточный антиген-Gp37, специфический для карциномы легкого человека антиген L20, специфический для карциномы легкого человека антиген L6, антиген в виде глобулярной частицы молочного жира человека, IgE, специфический для карциномы KS 1/4 pan антиген, LEA, специфический для аденокарциномы антиген F3, специфический для злокачественных лимфоцитов человека антиген-АРО-1, специфический для меланомы антиген gp75, связанный с меланомой антиген р97, неогликопротеин, nuC242, специфический для полиморфного эпителия антиген муцинового типа, специфический для предстательной железы антиген, специфический для предстательной железы мембранный антиген, специфический для предстательной железы кислый фосфат, антиген SK-1, TAG-72, Т-антиген, опухолеспецифический антиген СА125, опухолеспецифический антиген MUC1, опухолеспецифический трансплантационный антиген клеточной поверхности, фактор роста сосудистого эндотелия, рецептор фактора роста сосудистого эндотелия и ανβ3). Альтернативно, такие дополнительные антигены или эпитопы могут быть связаны с патогеном, таким как вирус гепатита типа А, вирус гепатита типа В, вирус гепатита типа С, вирус гриппа, вирус вет
- 7 045070 ряной оспы, аденовирус, вирус простого герпеса типа I (HSV-I), вирус простого герпеса типа II (HSV-II), возбудитель чумы рогатого скота, риновирус, ЕСНО-вирус, ротавирус, респираторно-синцитиальный вирус, папилломавирус, паповавирус, цитомегаловирус, эхиновирус, арбовирус, хантавирус, коксакивирус, вирус эпидемического паротита, вирус кори, вирус краснухи, полиовирус, возбудитель натуральной оспы, вирус Эпштейна-Барра, вирус иммунодефицита человека типа I (HIV-I), вирус иммунодефицита человека типа II (HIV-II), возбудитель вирусного менингита, возбудитель вирусного энцефалита, возбудитель денге, возбудитель натуральной оспы; микобактерии, рикеттсии, микоплазма, нейссерии, S. pneumonia, Borrelia burgdorferi, Bacillus anthracis, Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, возбудитель столбняка, возбудитель коклюша, возбудитель холеры, возбудитель чумы, возбудитель дифтерии, хламидии и легионеллы; лейшмания, возбудитель кокцидиоза, трипаносома или возбудитель малярии; хламидии и рикеттсии.
Термин моноклональное антитело относится к гомогенной совокупности антител, причем моноклональное антитело состоит из аминокислот (встречающихся в природе и не встречающихся в природе), которые участвуют в избирательном связывании антигена. Моноклональные антитела являются в высокой степени специфическими, будучи направленными против одной области детерминанты. Термин моноклональное антитело охватывает не только интактные моноклональные антитела и полноразмерные моноклональные антитела, но также их фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')2 Fv), одиночную цепь (ScFv), их мутанты, слитые белки, включающие часть антитела, гуманизированные моноклональные антитела, химерные моноклональные антитела и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая включает сайт распознавания антигена требуемой специфичности и со способностью связываться с антигеном. Оно, как предполагается, не ограничивается источником антитела или способом, которым его получают (например, с использованием гибридомы, отбора фагов, экспрессии рекомбинантных молекул, трансгенных животных и т.д.). Термин включает полные иммуноглобулины, а также фрагменты и т.д., описанные выше при определении антитела.
Термин гуманизированное антитело относится к химерной молекуле, обычно приготовленной, используя методы с использованием рекомбинантных ДНК, имеющей антигенсвязывающий сайт, происходящий из иммуноглобулина не являющегося человеком вида, а остальная структура молекулы иммуноглобулина основана на структуре и/или последовательности иммуноглобулина человека. Антигенсвязывающий сайт может включать или целые вариабельные домены, вставленные в константные домены, или лишь определяющие комплементарность участки (CDR), пересаженные в соответствующие каркасные области вариабельных доменов. Антигенсвязывающие сайты могут быть дикого типа или быть модифицированными в результате одной или более аминокислотных замен. Это исключает функционирование константной области в качестве иммуногена у являющихся людьми индивидуумов, но сохраняется возможность иммунного ответа на чужеродную вариабельную область (LoBuglio, A.F. et al. (1989) Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86: 4220-4224). Другой подход сосредоточен не только на обеспечении происходящих от человека константных областей, но также на модификации вариабельных областей, чтобы придать им новую форму, по возможности близкую к человеческой форме. Известно, что вариабельные области как тяжелой, так и легкой цепей содержат три определяющих комплементарность участка (CDR), которые варьируют в ответ на соответствующие антигены и определяют способность к связыванию, фланкированных четырьмя каркасными областями (FR), которые являются относительно консервативными у конкретного вида и которые предположительно обеспечивают каркас для CDR. При приготовлении нечеловеческих антител к конкретному антигену вариабельным областям можно придать новую форму или подвергнуть их гуманизации посредством пересадки CDR, происходящих из нечеловеческого антитела, в FR, присутствующие в антителе человека, которые модифицируют. О применении этого подхода к различным антителам было сообщено в Sato, K. et al. (1993) Cancer Res 53: 851-856; Riechmann, L. et al. (1988) Reshaping Human Antibodies for Therapy, Nature 332: 323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity, Science 239: 1534-1536; Kettleborough, C.A. et al. (1991) Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation, Protein Engineering 4: 773-3783; Maeda, H. et al. (1991) Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity, Human Antibodies Hybridoma 2: 124-134; Gorman, S.D. et al. (1991) Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88: 41814185; Tempest, P.R. et al. (1991) Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo, Bio/Technology 9: 266-271; Co, M.S. et al. (1991) Humanized Antibodies For Antiviral Therapy, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88: 2869-2873; Carter, P. et al. (1992) Humanization Of An Anti-pl85her2 Antibody For Human Cancer Therapy, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89: 4285-4289; и Со, M.S. et al. (1992) Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen, J. Immunol. 148: 1149-1154.
В некоторых вариантах осуществления в гуманизированных антителах сохранены все последовательности CDR (например, в гуманизированном мышином антителе, которое содержит все шесть CDR из мышиных антител). В других вариантах осуществления гуманизированные антитела содержат один или более CDR (один, два, три, четыре, пять, шесть), которые изменены относительно исходного антитела,
- 8 045070 которые также называют одним или более CDR, происходящих от одного или более CDR исходного антитела. Как описано ниже, предпочтительные антитела по настоящему изобретению содержат специфические идентифицированные CDR. В настоящем изобретении, однако, предусматриваются эквивалентные антитела, содержащие измененные CDR.
Говорят, что антитело или полипептид, как здесь используется, иммуноспецифически или, что эквивалентно, специфически связывается с участком другой молекулы (т.е. эпитопом), если оно реагирует или ассоциируются более часто, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с этим эпитопом, чем с альтернативными эпитопами. Например, антителом, которое специфически связывается с эпитопом CD3, является антитело, которое связывается с этим эпитопом CD3 с большей аффинностью, авидностью, быстрее и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами CD3 или не относящимися к CD3 эпитопами. Под интерпретацией этого определения также подразумевается, что, например, антитело (или составляющая или эпитоп), которое иммуноспецифически связывается с первой мишенью, может связываться или может не связываться специфически или предпочтительно со второй мишенью. По существу, иммуноспецифическое связывание не подразумевает обязательно (хотя оно может включать) исключительное связывание. Как правило, но необязательно, ссылка на связывание означает иммуноспецифическое связывание.
Используемый здесь термин иммунологически активный в отношении эпитопа, являющегося или остающегося иммунологически активным, относится к способности антитела (например, антитела против CD3) к связыванию с эпитопом в различных условиях, например, после подвергания эпитопа воздействию восстанавливающих и денатурирующих условий. Например, если антитело больше не способно связываться с денатурированным эпитопом, говорят, что этот эпитоп сделался иммунологически неактивным.
Различные биологические функции связаны с антителами против CD3 по настоящему изобретению, и такие антитела могут проявлять любое или все из следующих характерных свойств, или могут испытывать недостаток одного, двух, трех или более таких характерных свойств: способность к специфическому связыванию с CD3 человека, который эндогенно представлен на поверхности нормальной Т-клетки человека; способность к специфическому связыванию с CD3 человека, который эндогенно представлен на поверхности лейкозной Т-клетки человека; способность к специфическому связыванию с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака), который эндогенно представлен на поверхности нормальной Т-клетки не являющегося человеком млекопитающего; способность к специфическому связыванию с CD3, не являющимся человеческим, который эндогенно представлен на поверхности нормальной нечеловеческой Т-клетки; способность к специфическому связыванию с CD3, не являющимся человеческим, который эндогенно представлен на поверхности нечеловеческой лейкозной Т-клетки; способность нейтрализовать (т.е. блокировать или препятствовать связыванию) образование комплекса с CD3; способность нейтрализовать образование комплекса с TCR; способность к модулированию (или антагонистически, или агонистически) передачи сигнала TCR-комплексом; способность к связыванию с Fc-рецептором; способность к конкурентному ингибированию предпочтительного связывания известного антитела против CD3 с CD3, включая способность к предпочтительному связыванию с тем же эпитопом CD3, с которым предпочтительно связывается исходное антитело; способность к связыванию с частью CD3, которая представлена на поверхности живой клетки in vitro или in vivo; способность к связыванию с частью CD3, которая представлена на поверхности живой раковой клетки; способность к доставке химиотерапевтического средства в раковую Т-клетку; и/или способность к доставке терапевтического средства, токсина или выявляемого маркера в Т-клетку. Как здесь обсуждалось, полипептиды (в том числе антитела) по настоящему изобретению могут обладать любым одним или более из этих характерных свойств.
Используемый здесь термин средство (агент) относится к биологическому, фармацевтическому или химическому соединению. Неограничивающие примеры включают простую или сложную органическую или неорганическую молекулу, пептид, белок, олигонуклеотид, антитело, производное антитела, фрагмент антитела, производное витамина, углевод, токсин или химиотерапевтическое соединение. Можно синтезировать различные соединения, например, небольшие молекулы и олигомеры (например, олигопептиды и олигонуклеотиды), и синтетические органические соединения, основанные на различных базовых структурах. Кроме того, различные природные источники, такие как экстракты из растений или животных и т.п., могут предоставить соединения для отбора. Агенты, используемые в способах по этому изобретению, могут быть отобраны случайно или отобраны рационально или сконструированы. Говорят, что агент, как здесь используется, отобран случайно, если агент выбран без предварительного рассмотрения специфических аминокислотных или других химических составляющих, участвующих в ассоциации молекулы с ее природным партнером(ами) по связыванию или известными антителами, или без знания о них. Примером случайно отобранного агента является агент, который идентифицирован благодаря использованию химической библиотеки или пептидной комбинаторной библиотеки или ее скринингу. Говорят, что агент, как здесь используется, отобран рационально или сконструирован, если агент выбран на неслучайной основе, учитывающей последовательность центра мишени и/или его конформацию в связи с действием этого агента. Агент можно отобрать рационально или сконструировать
- 9 045070 рационально посредством использования пептидных последовательностей, которые образуют места контактов в комплексе рецептор/лиганд и/или CD3/антитело против CD3. Например, рационально отобранным агентом в виде пептида может быть пептид, аминокислотная последовательность которого идентична эпитопу, появляющемуся в CD3, когда он выставлен на поверхности живой клетки в ее природном окружении. Такой агент будет уменьшать или блокировать ассоциацию антитела против CD3 с CD3, или ассоциацию CD3 с его природным лигандом, по желанию, при связывании с антителом против CD3 или с его природным лигандом.
Используемый здесь термин меченое, что касается антитела, как предполагается, охватывает прямое мечение антитела посредством соединения (т.е. физической связи) выявляемого вещества, такого как радиоактивный агент или флуорофор (например, фикоэритрин (РЕ) или флуоресцеин изотиоцианат (также известный как фторизотиоцианат или FITC) с антителом, а также непрямое мечение зонда или антитела в результате реактивности с выявляемым веществом.
Используемый здесь термин ассоциация, что касается антитела, включает ковалентное или нековалентное присоединение или связывание агента (например, химиотерапевтического средства) к (с) антителу(ом). Ассоциацию антитела с агентом (например, химиотерапевтическим средством) можно осуществить посредством прямого связывания или непрямого связывания через присоединение к общей платформе, так что антитело определяет локализацию агента в раковой клетке, с которой связывается антитело, и причем антитело и агент не подвергаются в значительной степени диссоциации при физиологических условиях, так что агент не направлен на ту же раковую клетку, с которой связывается антитело, или так что эффективность агента не уменьшается.
Термин биологический образец охватывает множество типов образцов, которые получают от индивидуума и могут использоваться в исследовании с целью диагностики или контроля. Определение охватывает слюну, кровь и другие жидкие образцы биологического происхождения, твердые образцы тканей, такие как биопсийный образец, или культуры тканей или клетки, происходящие из них, и их потомство, например, клетки, полученные из образца ткани, взятого у индивидуума с подозрением на наличие у него рака, в предпочтительных вариантах осуществления ткани яичника, легкого, предстательной железы, поджелудочной железы, ободочной кишки и молочной железы. Определение также включает образцы, которыми манипулировали после их получения любым образом, например, посредством обработки реагентами, солюбилизации или обогащения в отношении определенных компонентов, таких как белки или полинуклеотиды, или заделки в полутвердую или твердую матрицу с целью изготовления срезов. Термин биологический образец охватывает клинический образец, а также включает клетки в культуре, клеточные супернатанты, клеточные лизаты, сыворотку, плазму, биологическую жидкость и образцы тканей.
Термин клетка-хозяин включает отдельную клетку или культуру клеток, которая может быть или была реципиентом вектора(ов) для включения полинуклеотидных вставок. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и это потомство может необязательно быть полностью идентичным (по морфологии или набору геномных ДНК) исходной родительской клетке вследствие природной, случайной или неслучайной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом(ами) по этому изобретению.
Как здесь используется, эффективное количество фармацевтической композиции, в одном варианте осуществления, является количеством, достаточным для обеспечения благотворных или желательных результатов, включающих, но без ограничения, клинические результаты, такие как уменьшение размера или скорости роста опухоли, отсрочка или ослабление воспалительной реакции, улучшение качества жизни тех, кто страдает заболеванием, уменьшение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения такого заболевания, усиление эффекта другого лекарственного средства, например, посредством направленной доставки и/или интернализации, отсрочка прогрессирования заболевания и/или увеличение продолжительности жизни индивидуумов. Такое эффективное количество может вводиться при одном или более введений. Применительно к целям этого изобретения, эффективным количеством лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции является количество, достаточное для улучшения клинического наблюдаемого состояния.
В некоторых вариантах осуществления эффективного количества лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции можно достичь или можно не достичь вместе с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, эффективное количество может рассматриваться в рамках введения одного или более дополнительных средств, и можно считать, что одно средство назначено в эффективном количестве, если, вместе с одним или более других средств, может быть достигнут или достигается желаемый результат. Хотя индивидуальные потребности варьируют, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств каждого соединения является частью профессиональных знаний данной области техники. Типичная доза, вводимая пациенту, обычно составляет от 0,0001 мг/кг до 100 мг/кг веса тела пациента. Предпочтительно, вводимая пациенту доза находится между 0,0001 мг/кг и 20 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 10 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 5 мг/кг, 0,0001 и 2 мг/кг, 0,0001 и 1 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 0,7 5 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 0,5 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 0.25 мг/кг, 0,0001 и 0,15 мг/кг, 0,0001 и 0,10 мг/кг, 0,001 и 0,5 мг/кг, 0,01 и 0,25 мг/кг или 0,01 и 0,10 мг/кг веса
- 10 045070 тела пациента. Дозу и частоту введения молекул по настоящему изобретению можно уменьшить или изменить с помощью увеличения поглощения и проникновения в ткани молекул по настоящему изобретению посредством модификаций, таких как, например, липидизация.
Говорят, что молекула нуклеиновой кислоты или агент, антитело, композиция или клетка и т.д., как здесь используется, является выделенной, если эта молекула нуклеиновой кислоты, агент, антитело, композиция или клетка и т.д. отделена в значительной степени от примесных молекул нуклеиновых кислот, антител, агентов, композиций или клеток и т.д., которые присутствуют в природе в ее первоначальном источнике.
Термин индивидуум относится к позвоночному животному, предпочтительно млекопитающему. Млекопитающие включают, но без ограничения, людей, сельскохозяйственных животных, животных для спортивных мероприятий, любимых домашних животных, приматов, мышей и крыс. В наиболее предпочтительном варианте осуществления термин индивидуум означает человека.
Термины полипептид, олигопептид, пептид и белок используются здесь взаимозаменяемо для ссылки на полимеры из аминокислот любой длины. Полимер может быть неразветвленным или разветвленным, он может включать модифицированные аминокислоты, и он может прерываться не аминокислотами. Термины также охватывают полимер из аминокислот, который был модифицирован в природе или в результате вмешательства, например, образования дисульфидных связей, гликозилирования, липидизации, ацетилирования, фосфорилирования или любой другой манипуляции или модификации, такой как конъюгация с компонентом-меткой. В это определение также включены, например, полипептиды, содержащие один или более аналогов аминокислоты (включая, например, неприродные аминокислоты и т.д.), а также другие модификации, известные в данной области техники. Понятно, что, поскольку полипептиды по этому изобретению основаны на антителе, могут встречаться полипептиды в виде одиночных цепей или в виде соединенных цепей.
Используемый здесь термин в значительной степени чистый относится к материалу с по крайней мере 50% степенью чистоты (т.е. без примесей), более предпочтительно с по крайней мере 90% степенью чистоты, более предпочтительно с по крайней мере 95% степенью чистоты, более предпочтительно с по крайней мере 98% степенью чистоты, более предпочтительно с по крайней мере 99% степенью чистоты и наиболее предпочтительно с превышающей 99% степенью чистоты.
Используемый здесь термин токсин относится к любому веществу, которое обеспечивает отрицательную реакцию в клетке. Например, токсин, направленный на раковую клетку, будет оказывать отрицательное, иногда вредное воздействие на раковую клетку. Примеры токсинов включают, но без ограничения, таксан, майтансиноид, ауристатин (например, монометилауристатин (ММАЕ), монометилауристатин F (MMAF), ауристатин Е (АЕ) и т.д.) (например, те, которые описаны в патентах США №№ 5208020, 5416064, 6333410, 6340701, 6372738, 6436931, 6441163, 6596757, 7276497, 7585857 или 7851432), калихеамицин, антрациклин (например, доксорубицин), аналог СС-1065, доцетаксел, катепсин В или Е, рицин, гелонин, Pseudomonas экзотоксин, дифтерийный токсин и РНКазу; меченные радиоактивными изотопами антитела (например, конъюгированные с тиуксетаном или меченные токсичным радиоизотопом (например, 90Y; 13I,177Lu,1 6Re, 188Re, 211At, 212Bi, 213Bi, 225Ac и т.д. ) ).
Используемый здесь термин лечение означает способ получения благотворного или желаемого результата, в том числе и предпочтительно благотворного или желаемого клинического результата. Такие благотворные или желаемые клинические результаты включают, но без ограничения, одно или более из следующего: уменьшение воспаления или аутоиммунной реакции, уменьшение пролиферации (или уничтожение) раковых клеток или других нездоровых клеток, уменьшение метастазирования раковых клеток, обнаруживаемого при злокачественных новообразованиях, сокращение размера опухоли, ослабление симптомов, являющихся следствием заболевания, улучшение качества жизни тех, кто страдает этим заболеванием, уменьшение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения этого заболевания, отсрочку прогрессирования заболевания и/или увеличение продолжительности жизни индивидуумов.
II. Способы создания антител и полипептидов по настоящему изобретению
Способы создания моноклональных антител известны в данной области техники. Одним способом, который может использоваться, является способ Kohler, G. и др. ((1975) Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity, Nature 256: 495-497) или его модификация. Типично моноклональные антитела создают в не являющихся людьми видах, таких как мыши. Обычно мышь или крысу используют для иммунизации, но могут также использоваться другие животные. Антитела вырабатываются при иммунизации мышей иммуногенным количеством клеток, клеточных экстрактов или белковых препаратов, которые содержат CD3 человека. Иммуногеном могут быть, но без ограничения, эмбриональные клетки, линии культивируемых клеток, раковые клетки, нуклеиновые кислоты или ткань.
В одном варианте осуществления моноклональные антитела, которые связываются с CD3, получают, используя клетки-хозяева, которые сверхэкспрессируют CD3, в качестве иммуногена. Такие клетки включают, в качестве примера, а не ограничения, Т-клетки человека.
Для контролирования образования антител небольшой биологический образец (например, кровь) может быть получен от животного и проверен в отношении титра антител против иммуногена. Селезенка
- 11 045070 и/или несколько больших лимфатических узлов могут быть извлечены и подвергнуты диссоциации до отдельных клеток. Если желательно, клетки селезенки могут быть подвергнуты скринингу (после удаления несп ецифически присоединенных клеток) посредством внесения клеточной суспензии в планшет или лунку, покрытый(ую) антигеном. В-клетки, экспрессирующие связанный с мембраной иммуноглобулин, специфический в отношении антигена, будут связываться с планшетом и не смываются вместе с остальной частью суспензии. Получаемые в результате В-клетки, или все диссоциированные клетки селезенки, можно затем слить с миеломными клетками (например, X63-Ag8.653 и клетками из Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, CA). Полиэтиленгликоль (ПЭГ) может использоваться для слияния клеток селезенки или лимфоцитов с миеломными клетками для образования гибридомы. Затем гибридому подвергают культивированию в селективной среде (например, содержащей гипоксантин, аминоптерин, тимидин среде, по-другому известной как среда HAT). Получающиеся гибридомы затем высевают методом серийных разведений и исследуют в отношении продукции антител, которые специфически связываются с иммуногеном, используя, например, FACS (клеточный сортинг с возбуждением флуоресценции) или отбор с использованием иммуногистохимического исследования (IHC). Отобранные гибридомы, секретирующие моноклональные антитела, затем культивируют или in vitro (например, в матрасах для культур тканей или половолоконных реакторах), или in vivo (например, в виде асцитических жидкостей у мышей).
В качестве другой альтернативы методу слияния клеток, могут использоваться В-клетки, иммортализованные с помощью вируса Эпштейна-Барра (EBV), для продукции моноклональных антител по рассматриваемому изобретению. Гибридомы наращивают и субклонируют, если желательно, и супернатанты исследуют в отношении антииммуногенной активности с помощью обычных процедур исследования (например, FACS, IHC, радиоиммуноанализа, иммуноферментного анализа, флуоресцентного иммуноанализа и т.д.).
В случае другой альтернативы, моноклональное антитело против CD3 или любые другие эквивалентные антитела можно секвенировать и продуцировать рекомбинантно с помощью любого способа, известного в данной области техники (например, гуманизации, использования трансгенных мышей для продуцирования полностью человеческих антител, технологии фагового дисплея и т.д.). В одном варианте осуществления моноклональное антитело против CD3 секвенируют, а затем полинуклеотидную последовательность клонируют в вектор для экспрессии или наращивания. Последовательность, кодирующая представляющее интерес антитело, может сохраняться в векторе в клетке-хозяине, и клетку-хозяина можно затем нарастить и заморозить для дальнейшего использования.
Полинуклеотидная последовательность моноклонального антитела против CD3 и любых других эквивалентных антител может использоваться для генетической манипуляции с целью создания гуманизированного антитела, увеличения аффинности или улучшения других характеристик антитела. Общий принцип при гуманизации антитела включает в себя сохранение основной последовательности антигенсвязывающей части антитела, при замене нечеловеческой оставшейся части антитела последовательностями антитела человека. Существуют четыре общих стадии с целью гуманизации моноклонального антитела. Этими стадиями являются: (1) определение нуклеотидной и предсказываемой аминокислотной последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей исходного антитела;
(2) конструирование гуманизированного антитела, т.е. решение, какую каркасную область антитела использовать во время процесса гуманизации; (3) методологии/методы фактической гуманизации; и (4) трансфекция и экспрессия гуманизированного антитела. Смотрите, например, патенты США №№ 4816567, 5807715, 5866692 и 6331415.
Был описан ряд молекул гуманизированных антител, включающих антигенсвязывающий сайт, происходящий из нечеловеческого иммуноглобулина, в том числе химерные антитела, содержащие происходящие от грызунов или модифицированные, происходящие от грызунов V-области и связанные с ними определяющие комплементарность участки (CDR), слитые с константными доменами человека (смотрите, например, Winter et al. (1991) Man-made Antibodies, Nature 349: 293-299; Lobuglio et al. (1989) Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86: 4220-4224 (1989), Shaw et al. (1987) Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody (17-1A) To A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen, J. Immunol. 138: 4534-4538, и Brown et al. (1987) Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody, Cancer Res. 47: 3577-3583). В других ссылочных документах описываются происходящие от грызунов CDR, пересаженные в человеческую поддерживающую каркасную область (FR) до слияния с соответствующим константным доменом антитела человека (смотрите, например, Riechmann, L. et al. (1988) Reshaping Human Antibodies for Therapy, Nature 332: 323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity, Science 239: 1534-1536; и Jones et al. (1986) Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse, Nature 321: 522525). В другом ссылочном документе описываются происходящие от грызунов CDR, поддерживаемые рекомбинантно венированными каркасными областями, происходящими от грызунов. Смотрите, например, публикацию Европейского патента № 519596. Эти гуманизированные молекулы разработаны для минимизации нежелательной иммунологической реакции по отношению к молекулам античеловеческих
- 12 045070 антител грызунов, которая ограничивает продолжительность и эффективность терапевтических применений этих составляющих у являющихся людьми реципиентов. Другие способы гуманизации антител, которые также могут использоваться, описаны в Daugherty et al. (1991) Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, CDR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18 Component Of Leukocyte Integrins, Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 и в патентах США №№ 6180377,6054297, 5997867 и 5866692.
Настоящим изобретением также охватываются одноцепочечные Fv-фрагменты (scFv) антител по этому изобретению, такие как мышиный анти-CD3. Одноцепочечные Fv- фрагменты создают посредством связывания вариабельных областей легкой и/или тяжелой цепи, используя короткий пептид-линкер. Bird и др. ((1988) Single-Chain Antigen-Binding Proteins, Science 242: 423-426) приводят пример пептидов-линкеров, которые образуют перемычку размером приблизительно 3,5 нм между карбоксильным концом одной вариабельной области и амино-концом другой вариабельной области. Были разработаны и использовались линкеры с другими последовательностями (Bird et al. (1988) Single-Chain AntigenBinding Proteins, Science 242: 423-426). Линкеры могут быть в свою очередь модифицированы ради дополнительных функций, таких как присоединение лекарственных средств или присоединение к твердым подложкам. Одноцепочечные варианты можно продуцировать или рекомбинантно, или синтетически. Для синтетического получения scFv может использоваться автоматический синтезатор. Для рекомбинантной продукции scFv подходящая плазмида, содержащая полинуклеотид, который кодирует scFv, может быть введена в подходящую клетку-хозяина, или эукариотическую, такую как дрожжи, клетки растений, насекомых или млекопитающих, или прокариотическую, такую как Е. coli. Полинуклеотиды, кодирующие представляющий интерес scFv, можно создать с помощью обычных манипуляций, таких как лигирование полинуклеотидов. Результирующий scFv можно выделить, используя стандартные методы очистки белков, известные в данной области техники.
Настоящее изобретение включает модификации по отношению к антителам против CD3 и их связывающим фрагментам. Модифицирование полипептидов является обычной практической деятельностью в данной области техники, и его подробное описание здесь не требуется. Примеры модифицированных полипептидов включают полипептиды с консервативными заменами аминокислотных остатков, одной или более делеций или добавлений аминокислот, которые не приводят в значительной степени к вредным изменениям функциональной активности, или использованием химическим аналогов. Аминокислотные остатки, которые могут быть консервативно заменены один другим, включают, но без ограничения: глицин/аланин; валин/изолейцин/лейцин; аспарагин/глютамин; аспарагиновую кислоту/глютаминовую кислоту; серин/треонин; лизин/аргинин и фенилаланин/тирозин. Эти полипептиды также включают гликозилированные и негликозилированные полипептиды, а также полипептиды с другими посттрансляционными модификациями, такими как, например, гликозилирование с использованием различных Сахаров, ацетилирование и фосфорилирование. Предпочтительно, если бы аминокислотные замены были консервативными, т.е. замененная аминокислота обладала бы химическими свойствами, схожими с таковыми исходной аминокислоты. Такие консервативные замены известны в данной области техники, и выше представлены примеры. Аминокислотные модификации могут простираться от изменения или модификации одной или более аминокислот до полной реконструкции области, такой как вариабельная область. Изменения вариабельной области могут привести к изменению аффинности и/или специфичности. Другие способы модифицирования включают использование методов соединения, известных в данной области техники, включающих, но без ограничения, ферментативный способ, окислительное замещение и хелатирование. Модификации могут использоваться, например, для присоединения меток в случае иммуноанализа, например, присоединения радиоактивных составляющих в случае радиоиммуноанализа. Модифицированные полипептиды создают, используя процедуры, широко известные в данной области техники, и могут быть подвергнуты скринингу, используя стандартные исследования, известные в данной области техники.
То обстоятельство, что изменение одного аминокислотного остатка в CDR может привести к утрате функционального связывания (Rudikoff, S. etc. (1982) Single Amino Acid Substitution Altering AntigenBinding Specificity, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 79(6): 1979-1983), обеспечивает способ методичной идентификации альтернативных функциональных последовательностей CDR. В одном предпочтительном способе получения таких вариантов CDR, полинуклеотид, кодирующий CDR, мутируют (например, посредством неспецифического мутагенеза или метода сайт-специфического мутагенеза (например, амплификации с использованием полимеразной цепной реакции, используя праймеры, которые кодируют мутированный локус)) для получения CDR, содержащего замещенный аминокислотный остаток. Посредством сравнения идентификатора соответствующего остатка в исходной (функциональной) последовательности CDR с идентификатором варианта последовательности CDR с заменой (нефункциональной, можно определить бальную оценку этой замены BLOSUM62.iij. Система BLOSUM обеспечивает матрицу аминокислотных замен, созданную в результате анализа базы данных, касающихся последовательностей, ради надежных совмещений (Eddy, S.R. (2004) Where Did The BLOSUM62 Alignment Score Matrix Come From?, Nature Biotech. 22(8): 1035-1036; Henikoff, J.G. (1992) Amino acid substitution matrices from protein blocks, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89: 10915-10919; Karlin, S. et al. (1990) Methods For Assessing
- 13 045070
The Statistical Significance Of Molecular Sequence Features By Using General Scoring Schemes, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 87: 2264-2268; Altschul, S.F. (1991) Amino Acid Substitution Matrices From An Information Theoretic Perspective, J. Mol. Biol. 219, 555-565). В настоящее время самой развитой базой данных BLOSUM является база данных BLOSUM62 (BLOSUM62.iij). В таблице 1 представлены бальные оценки замен BLOSUM62.iij (чем выше бальная оценка, тем более консервативной является замена, и, соответственно, более вероятно, что замена не будет оказывать влияние на функцию). Если антигенсвязывающий фрагмент, включающий результирующий CDR, не связывается с CD3, то считают, что бальная оценка замены BLOSUM62.iij является недостаточно консервативной, и выбирают и осуществляют новую возможную замену, имеющую более высокую бальную оценку. Таким образом, например, если исходным остатком был глютамат (Е), а нефункциональным замещающим остатком был гистидин (Н), то бальная оценка замены BLOSUM62.iij будет равна 0, и предпочтительными являются более консервативные замены (например, на аспартат, аспарагин, глютамин или лизин).
Таблица 1 | ||||||||||||||||||||
А | R | N | D | С | Q | Е | G | И | I | L | к | м | г | Р | S | Т | W | Y | V | |
А | В4й | -1 | _9 | _9 | 0 | -1 | -1 | 0 | -2 | -1 | -1 | -1 | -1 | -2 | -1 | +1 | 0 | -3 | -2 | 0 |
R | -1 | 0 | _9 | -3 | +1 | 0 | -2 | 0 | -3 | -2 | +2 | -1 | -3 | -2 | -1 | -1 | -3 | -2 | -3 | |
N | _2 | 0 | +6 | +1 | -3 | 0 | 0 | 0 | +1 | -3 | -3 | 0 | -2 | -3 | -2 | +1 | 0 | -4 | -2 | -3 |
D | _2 | _2 | +1 | +6 | -3 | 0 | +2 | -1 | -1 | -3 | -4 | -1 | -3 | -3 | -1 | 0 | -1 | -4 | -3 | -3 |
С | 0 | -3 | -3 | -3 | +9 | -3 | -4 | -3 | -3 | -1 | -1 | -3 | -1 | _9 | -3 | -1 | -1 | _9 | _9 | -1 |
О | -1 | +1 | 0 | 0 | -3 | +5 | +2 | 0 | -3 | -2 | +1 | 0 | -3 | -1 | 0 | -1 | -2 | -1 | -2 | |
Е | -1 | 0 | 0 | +2 | -4 | +2 | +5 | 0 | -3 | -3 | +1 | -2 | -3 | -1 | 0 | -1 | -3 | -2 | -2 | |
G | 0 | -2 | 0 | -1 | -3 | _2 | +6 | -4 | -4 | -2 | -3 | -3 | -2 | 0 | -2 | -2 | -3 | -3 | ||
Н | -2 | 0 | +1 | -1 | -3 | 0 | 0 | _9 | +8 | -3 | -3 | -1 | -2 | -1 | -2 | -1 | -2 | -2 | +2 | -3 |
I | -1 | -3 | -3 | -3 | -1 | -3 | -3 | -4 | -3 | +2 | -3 | +1 | 0 | -3 | -2 | -1 | -3 | -1 | +3 | |
L | -1 | -2 | -3 | -4 | -1 | -2 | -3 | -4 | -3 | +2 | +2 | 0 | -3 | -2 | -1 | -2 | -1 | +1 | ||
К | -1 | +2 | 0 | -1 | -3 | +1 | +1 | -2 | -1 | -3 | NTS® | -1 | -3 | -1 | 0 | -1 | -3 | -2 | -2 | |
М | -1 | -1 | -2 | -3 | -1 | 0 | -2 | -3 | -2 | +1 | +2 | -1 | 0 | _9 | -1 | -1 | -1 | -1 | +1 | |
F | -2 | -3 | -3 | -3 | -2 | -3 | -3 | -3 | -1 | 0 | 0 | -3 | 0 | +6 | -4 | _9 | -2 | +1 | +3 | -1 |
Р | -1 | -2 | -2 | -1 | -3 | -1 | -1 | -2 | -2 | -3 | -3 | -1 | _9 | -4 | -1 | -1 | -4 | -3 | -2 | |
S | +1 | -1 | +1 | 0 | -1 | 0 | 0 | 0 | -1 | _9 | _9 | 0 | -1 | _9 | -1 | й+4й | +1 | -3 | _9 | -2 |
т | 0 | -1 | 0 | -1 | -1 | -1 | -1 | -2 | -2 | -1 | -1 | -1 | -1 | -2 | -1 | +1 | _9 | _9 | 0 | |
W | -3 | -3 | -4 | -4 | -2 | -2 | -3 | -2 | -2 | -3 | -2 | -3 | -1 | +1 | -4 | -3 | _9 | Bit® | +2 | -3 |
Y | -2 | -2 | -2 | -3 | -2 | -1 | -2 | -3 | +2 | -1 | -1 | -2 | -1 | +3 | -3 | -2 | _9 | +2 | -1 | |
V | 0 | -3 | -3 | -3 | -1 | -2 | -2 | -3 | -3 | +3 | +1 | -2 | +1 | -1 | -2 | -2 | 0 | -3 | -1 | (Т42 |
Таким образом, в настоящем изобретении предусматривается использование неспецифического мутагенеза для идентификации улучшенных CDR. Альтернативно, для увеличения (или уменьшения) аффинности CDR может использоваться технология фагового дисплея. В случае этой технологии, называемой созреванием аффинности, используется мутагенез или прогулка по CDR, а при повторном отборе используется антиген-мишень или его антигенный фрагмент для идентификации антител, содержащих CDR, которые связываются с большей (или меньшей) аффинностью с антигеном, чем исходное или родительское антитело (смотрите, например, Glaser et al. (1992) J. Immunology 149: 3903). Мутирование целых кодонов, а не отдельных нуклеотидов приводит к получению полуслучайного набора мутаций аминокислот. Можно создать библиотеки, состоящие из совокупности вариантов клонов, каждый из которых отличается изменением одной аминокислоты в одном CDR, и содержащие варианты, отражающие каждую возможную аминокислотную замену для каждого остатка CDR. Мутанты с увеличенной (или уменьшенной) аффинностью к антигену можно отобрать посредством приведения подвергнутых иммобилизации мутантов в контакт с меченым антигеном. Любой способ скрининга, известный в данной области техники, может использоваться для идентификации мутантных антител с увеличенной или уменьшенной аффинностью к антигену (например, ELISA) (смотрите Wu et al. 1998, Proc Natl. Acad Sci. USA 95: 6037; Yelton et al., 1995, J. Immunology 155: 1994). Можно использовать прогулку по CDR, в случае которой случайный характер придается легкой цепи (смотрите Schier et al., 1996, J. Mol. Bio. 263: 551).
Способы осуществления такого созревания аффинности описаны, например, в
- 14 045070
Krause, J.C. et al. (2011) An
Insertion Mutation That Distorts Antibody Binding Site Architecture Enhances Function Of A Human Antibody, MBio. 2(1) pii: e00345-10. doi: 10.1128/mBio.00345-10; Kuan, C.T. et al.
(2010) Affinity-Matured Anti-Glycoprotein NMB Recombinant Immunotoxins Targeting Malignant Gliomas And Melanomas, Int. J. Cancer 10.1002/ijc.25645; Hackel, B.J. et al. (2010) Stability And CDR Composition Biases Enrich Binder Functionality Landscapes, J. Mol. Biol. 401(1): 84-96; Montgomery, D.L. et al. (2009) Affinity Maturation And Characterization Of A Human Monoclonal Antibody Against HIV-1 gp41, MAbs 1(5): 462-474; Gustchina, E. et al. (2009) Affinity Maturation By Targeted Diversification Of The CDR-H2 Loop Of A Monoclonal Fab Derived From A Synthetic Naive Human Antibody Library And Directed Against The Internal Trimeric Coiled-Coil Of Gp41 Yields A Set Of Fabs With Improved HIV-1 Neutralization Potency And Breadth, Virology 393(1): 112-119; Finlay, W.J. et al. (2009) Affinity Maturation Of A Humanized Rat Antibody For Anti-RAGE Therapy: Comprehensive Mutagenesis Reveals A High Level Of Mutational Plasticity Both Inside And Outside The Complementarity-Determining Regions, J. Mol. Biol. 388(3): 541-558; Bostrom, J. et al. (2009) Improving Antibody Binding Affinity And Specificity For Therapeutic Development, Methods Mol. Biol. 525: 353-376; Steidl, S. et al. (2008) In Vitro Affinity Maturation Of Human GM-CSF Antibodies By Targeted CDR-Diversification, Mol. Immunol. 46(1): 135-144; и Barderas, R. et al. (2008) Affinity maturation of antibodies assisted by in silico modeling, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA)
105(26) : 9029-9034 .
В предпочтительном варианте осуществления многолуночные планшеты можно покрыть выбранным антителом против CD3 (например, 100 нг/лунку в карбонатном буфере при комнатной температуре в течение 2 ч) и впоследствии инкубировать с растворимым CD3, добавляемым в разведении 1/10, и инкубировать при комнатной температуре в течение 16 ч, или развести до концентрации 50 нг/мл в PBS-TBSA (0,05 мл добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение по крайней мере 2 ч при комнатной температуре). Затем планшет промывают, и разведения рекомбинантных антител, начиная с 0,5 мкг/мл в PBS-T-BSA, затем добавляют и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Связывание рекомбинантных антител с захваченным антигеном затем измеряют, используя, например, конъюгат античеловеческий IgG-HRP и субстрат ТМВ. После остановки развития окраски, используя разбавленную серную кислоту, планшет считывают при 450 нм, и идентифицируют антитела с большей аффинностью (смотрите, например, патент США № 7351803).
Настоящее изобретение включает полипептиды, включающие аминокислотную последовательность антител по этому изобретению. Полипептиды по этому изобретению можно создать с помощью процедур, известных в данной области техники. Полипептиды можно получить посредством протеолитического или иного расщепления антител, с помощью способов с использованием рекомбинантных молекул (т.е. отдельные или слитые полипептиды), как описано выше, или с помощью химического синтеза. С помощью химического синтеза без труда создают полипептиды антител, особенно более короткие полипептиды вплоть до приблизительно 50 аминокислот. Способы химического синтеза известны в данной области техники и имеются на рынке. Например, полипептид против CD3 можно было получить с помощью автоматического синтезатора полипептидов, используя твердофазный метод.
Настоящее изобретение также включает слитые белки, включающие один или более фрагментов или районов из полипептидов и антител по этому изобретению. В одном варианте осуществления обеспечивается слитый полипептид, включающий по крайней мере 10 следующих друг за другом аминокислот вариабельной области легкой цепи и по крайней мере 10 аминокислот вариабельной области тяжелой цепи. В другом варианте осуществления слитый полипептид содержит гетерологичную константную область иммуноглобулина. В другом варианте осуществления слитый полипептид содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи антитела, продуцируемого депонированной с открытым использованием гибридомой. Применительно к целям этого изобретения являющийся антителом слитый белок содержит один или более полипептидных доменов, которые специфически
- 15 045070 связываются с CD3, и другую аминокислотную последовательность, к которой он не присоединен в природной молекуле, например, гетерологичную последовательность или гомологичную последовательность из другого района.
Ahtu-CD3 полипептиды и другие агонисты, антагонисты и модуляторы CD3 можно создать с помощью способов, известных в данной области техники, например, синтетически или рекомбинантно. Один способ получения таких молекул включает химический синтез полипептида с последующей обработкой в условиях окисления, подходящих для получения природной конформации, т.е. соответствующих соединений с помощью дисульфидных связей. Это можно осуществить, используя методологии, хорошо известные квалифицированным в данной области техники специалистам (смотрите, например, Kelley, R.F. et al. (1990) In: GENETIC ENGINEERING PRINCIPLES AND METHODS, Setlow, J.K. Ed., Plenum Press, N.Y., vol. 12, pp 1-19; Stewart, J.M. et al. (1984) SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; смотрите также патенты США №№ 4105603, 3972859, 3842067 и 3862925).
Полипептиды по настоящему изобретению можно без труда приготовить, используя твердофазный синтез пептидов (Merrifield, В. (1986) Solid Phase Synthesis, Science 232(4748): 341-347; Houghten, R.A. (1985) General Method For The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large Numbers Of Peptides: Specificity Of Antigen-Antibody Interaction At The Level Of Individual Amino Acids, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 82(15): 5131-5135; Ganesan, A. (2006) Solid-Phase Synthesis In The Twenty-First Century, Mini Rev. Med. Chem. 6(1): 3-10).
Тем не менее, в другом варианте полностью человеческие антитела можно получить посредством использования имеющихся в продаже мышей, которые были созданы для экспрессии белков - специфических иммуноглобулинов человека. Трансгенных животных, которых создают для вызова более желательного (например, образования полностью человеческих антител) или более сильного иммунного ответа, можно также использовать для выработки гуманизированных или человеческих антител. Примерами такой технологии являются XENOMOUSE™ (Abgenix, Inc., Fremont, СА) и HUMAB-MOUSE (R) и ТС MOUSE™ (обе от Medarex, Inc., Princeton, NJ).
В варианте антитела можно создать рекомбинатно и экспрессировать, используя любой способ, известный в данной области техники. Антитела можно создать рекомбинантно посредством сначала выделения выработанных антител из животных-хозяев, получения последовательности гена и использования последовательности гена для экспрессии антитела рекомбинантно в клетках-хозяевах (например, клетках СНО). Другим способом, который может использоваться, является экспрессия последовательности антитела в растениях (например, табаке) или трансгенном молоке. Подходящие способы экспрессии антител рекомбинантно в растениях или молоке были описаны (смотрите, например, Peeters et al. (2001) Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants, Vaccine 19: 2756; Lonberg, N. et al. (1995) Human Antibodies From Transgenic Mice, Int. Rev. Immunol 13: 65-93; и Pollock et al. (1999) Transgenic Milk As A Method For The Production Of Recombinant Antibodies, J. Immunol Methods 231: 147-157). Подходящие способы получения производных антител, например, гуманизированных, одноцепочечных и т.д., известны в данной области техники. В другом варианте антитела можно создать рекомбинантно с помощью технологии фагового дисплея (смотрите, например, патенты США №№ 5565332, 5580717, 5733743, 6265150, и Winter, G. et al. (1994) Making Antibodies By Phage Display Technology, Annu. Rev. Immunol. 12: 433-455).
Представляющие интерес антитела или белок можно подвергнуть секвенированию посредством расщепления белков по Эдману, которое хорошо известно квалифицированным в данной области техники специалистам. Информацию о пептидах, полученную от масс-спектрометрии или расщепления белков по Эдману, можно использовать для конструирования зондов или праймеров, которые используются для клонирования представляющего интерес белка.
Альтернативный способ клонирования представляющего интерес белка осуществляют с помощью пэннинга, используя очищенный CD3 или его части для клеток, экспрессирующих представляющее интерес антитело или белок. Процедуру пэннинга можно проводить посредством получения библиотеки кДНК на основе тканей или клеток, которые экспрессируют CD3, сверхэкспрессии кДНК во втором типе клеток и скрининга трансфицированных клеток второго типа клеток в отношении специфического связывания с CD3. Подробные описания способов, используемых при клонировании генов млекопитающих, кодирующих белки клеточной поверхности, с помощью пэннинга, можно найти в данной области техники (смотрите, например, Aruffo, A. et al. (1987) Molecular Cloning Of A CD28 cDNA By A HighEfficiency COS Cell Expression System, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 84: 8573-8577 и Stephan, J. et al. (1999) Selective Cloning Of Cell Surface Proteins Involved In Organ Development: Epithelial Glycoprotein Is Involved In Normal Epithelial Differentiation, Endocrinol. 140: 5841-5854).
кДНК, кодирующие антитела против CD3 и другие пептидные агонисты, антагонисты и модуляторы CD3 можно получить посредством обратного транскрибирования мРНК из конкретного типа клеток в соответствии со стандартными способами в данной области техники. В частности, мРНК можно выделить, используя различные литические ферменты или химические растворы в соответствии с процедурами, изложенными, например, в MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Third Edition
- 16 045070 (Sambrook et al. Eds., 2001) Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY), или экстрагировать, используя имеющиеся в продаже связывающие нуклеиновые кислоты смолы, следуя сопроводительным инструкциям, предоставляемым производителями (например, Qiagen, Invitrogen, Promega). Синтезированные кДНК можно затем встроить в экспрессионный вектор для продукции представляющего интерес антитела или белка в клетках второго типа. Предполагается, что экспрессионный вектор должен быть реплицируемым в клетках-хозяевах или в виде эписомы, или в виде интегральной части хромосомной ДНК. Подходящие экспрессионные векторы включают, но без ограничения, плазмиды, вирусные векторы, в том числе аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, ретровирусы, и космиды.
Векторы, содержащие представляющие интерес полинуклеотиды, можно ввести в клетку-хозяина с помощью любого из ряда соответствующих способов, включая электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; бомбардировку микрочастицами; липофекцию и инфицирование (например, если вектором является инфекционный агент, такой как вирус коровьей оспы). Выбор введения векторов или полинуклеотидов будет часто зависеть от особенностей клетки-хозяина.
Любые клетки-хозяева, способные к сверхэкспрессии гетерологичных ДНК, можно использовать с целью выделения генов, кодирующих представляющее интерес антитело, полипептид или белок. Неограничивающие примеры подходящих клеток млекопитающих-хозяев включают, но без ограничения, клетки COS, HeLa и СНО. Предпочтительно, когда клетки-хозяева экспрессируют кДНК на уровне, который выше приблизительно в 5 раз, более предпочтительно выше в 10 раз, даже более предпочтительно выше в 20 раз такового соответствующего эндогенного антитела или белка, представляющего интерес, в случае его наличия, в клетках-хозяевах. Скрининг клеток-хозяев в отношении специфического связывания с CD3 осуществляют с помощью иммуноанализа или FACS. Клетку, сверхэкспрессирующую представляющее интерес антитело или белок, можно идентифицировать.
III. Способы скрининга полипептидов и моноклональных антител
Несколько способов могут использоваться для скрининга полипептидов и моноклональных антител, которые связываются с CD3. Понятно, что связывание относится к биологически или иммунологически соответствующему специфическому связыванию и не относится к неспецифическому связыванию, которое может иметь место, например, при использовании иммуноглобулина в очень высокой концентрации против неспецифической мишени. В одном варианте осуществления моноклональные антитела подвергают скринингу на предмет связывания с CD3, используя стандартные методы скрининга. Таким образом можно получить моноклональное антитело против CD3. Предпочтительными гибридомами по настоящему изобретению являются те, которые продуцируют антитела mAb1 и mAb2, или их химерные или гуманизированные производные. Однако можно идентифицировать дополнительные моноклональные антитела, которые связываются с CD3. С этой целью моноклональные антитела подвергают скринингу на предмет их дифференциальной способности к связыванию с CD3 человека, а также CD3 примата.
Любую из нескольких различных систем детектирования можно использовать для обнаружения связывания антител со срезом ткани. Типично иммуногистохимическое исследование включает связывание первого антитела с тканью, а затем второго антитела, направленного против вида, от которого первое антитело было получено, и конъюгированного с обнаруживаемым маркером (например, пероксидазой хрена (HRP) или диаминобензидином (DAB)). Одним альтернативным способом, который может использоваться, являются поликлональные, являющиеся зеркальным отображением антигенной структуры антитела или polyMICA™ (поликлональные Mirror Image Complementary Antibodies; The Binding Site Limited, Birmingham, UK; Mangham, D.C. et al. (1999) A Novel Immunohistochemical Detection System Using Mirror Image Complementary Antibodies (MICA), Histopathology 35(2): 129-33). Способ PolyMICA™ может использоваться для проверки связывания первых антител (например, антител против CD3) с нормальной и раковой тканью. В продаже имеется несколько видов наборов для детектирования polyMICA™: продукт № HK004.D является набором для детектирования polyMICA™, в котором используется хромоген DAB; продукт № НК004.А является набором для детектирования polyMICA™, в котором используется хромоген АЕС. Альтернативно, первое антитело можно непосредственно пометить обнаруживаемым маркером.
IV. Способы получения характеристик антител против CD3
Любой из нескольких способов может использоваться для получения характеристик антител против CD3. Одним способом является идентификация эпитопа, с которым оно связывается. Картирование эпитопов имеется на рынке от различных поставщиков, например, Pepscan Systems (Lelystad, Нидерланды). Картирование эпитопов может использоваться для определения последовательности, с которой связывается антитело против CD3. Эпитоп может быть линейным эпитопом, т.е. содержащимся в одном фрагменте аминокислот, или конформационным эпитопом, образованным в результате пространственного взаимодействия аминокислот, которые могут необязательно содержаться в одном фрагменте.
Пептиды различных длин (например, предпочтительно длиной по крайней мере 4-6 аминокислот) можно выделить или синтезировать (например, рекомбинантно) и использовать для анализов связывания
- 17 045070 с антителом против CD3. Эпитоп, с которым связывается антитело против CD3, можно определить при методичном скрининге, используя перекрывающиеся пептиды, происходящие из экстраклеточной последовательности и определяя связывание антителом против CD3.
Тем не менее, другим способом, который может использоваться для получения характеристик антитела против CD3, является использование анализов конкуренции с другими антителами, которые, как известно, связываются с тем же антигеном, т.е. CD3, для определения того, связываются ли антитела против CD3 с тем же эпитопом, что и другие антитела. Примеры имеющихся в продаже антител против CD3 могут иметься в распоряжении и могут быть идентифицированы, используя анализы связывания, изложенные здесь. Анализы конкуренции хорошо известны квалифицированным в данной области техники специалистам, и такие процедуры и пояснительные данные детализированы далее в разделе Примеры. Антитела против CD3 можно, кроме того, охарактеризовать в соответствии с тканями, типом рака или типом опухоли, с которым они связываются.
V. Предпочтительные композиции по настоящему изобретению
Настоящим изобретением охватываются композиции, в том числе фармацевтические композиции, включающие антитела против CD3, полипептиды, происходящие из антител против CD3, полинуклеотиды, включающие последовательность, кодирующую антитела против CD3, и другие агенты, описываемые здесь. В настоящем изобретении, кроме того, предусматриваются конъюгаты любого пептидного агониста, антагониста или модулятора CD3 и дополнительных химических структур, которые реализуют предполагаемую функцию или функции конкретного пептидного агониста, антагониста или модулятора CD3. Эти конъюгаты включают пептидный агонист, антагонист или модулятор CD3, ковалентно связанный с макромолекулой, такой как любая нерастворимая, являющаяся твердой подложкой матрица, используемая в способах диагностирования, скрининга или очистки, обсуждаемых здесь. Подходящие материалы матрицы включают любое вещество, которое является химически инертным, характеризуется высокой степенью пористости и имеет большое число функциональных групп, способных к образованию ковалентных связей с пептидными лигандами. Примеры материалов матриц и способов приготовления конъюгатов матрица-лиганд приведены в Dean et al. (Eds) AFFINITY CHROMATOGRAPHY: A PRACTICAL APPROACH, IRL Press (1985); Lowe, An Introduction to Affinity Chromatography, in Work et al. (eds) LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 7, Part II, NorthHolland (1979); Porath et al., Biospecific Affinity Chromatography, in Neurath, H. et al. (eds), THE PROTEINS, 3rd ed., Vol. 1, pp. 95-178 (1975); и Schott, H. AFFINITY CHROMATOGRAPHY, Macel Dekker, Inc. NY (1984).
Здесь также обеспечиваются конъюгаты пептидного агониста, антагониста или модулятора CD3 и любой репортерной составляющей, используемой в диагностических процедурах, описываемых здесь. Являющиеся пептидными агонистами, антагонистами или модуляторами CD3 агенты, полипептиды и белки по этому изобретению, в том числе антитела против CD3, кроме того, идентифицируют и характеризуют в соответствии с любым (одним или более) из следующих критериев:
(1) способность к специфическому связыванию с CD3 человека, который эндогенно представлен на поверхности нормальной Т-клетки человека;
(2) способность к специфическому связыванию с CD3 человека, который эндогенно представлен на поверхности лейкозной Т-клетки человека;
(3) способность к специфическому связыванию с CD3, не являющимся человеческим (например, CD3 яванского макака), который эндогенно представлен на поверхности нормальной нечеловеческой Тклетки;
(4) способность к специфическому связыванию с CD3, не являющимся человеческим, который эндогенно представлен на поверхности нечеловеческой лейкозной Т-клетки;
(5) способность нейтрализовать (т.е. блокировать или препятствовать связыванию) образование комплекса с CD3; способность нейтрализовать образование комплекса с TCR;
(6) способность к модулированию (или антагонистически, или агонистически) передачи сигнала T CR-комплексом;
(7) способность к связыванию с Fc-рецептором;
(8) способность к конкурентному ингибированию предпочтительного связывания известного антитела против CD3 с CD3, включая способность к предпочтительному связыванию с тем же эпитопом CD3, с которым предпочтительно связывается исходное антитело;
(9) способность к связыванию с частью CD3, которая представлена на поверхности живой клетки in vitro или in vivo; способностью к связыванию с частью CD3, которая представлена на поверхности живой раковой клетки;
(10) способность к доставке химиотерапевтического средства в раковую Т-клетку; и/или (11) способность к доставке терапевтического средства, токсина или выявляемого маркера в Тклетку.
Предпочтительное антитело по настоящему изобретению будет демонстрировать дифференциальное IHC окрашивание опухолевой ткани по отношению к нормальной, нераковой ткани и будет, кроме того, способно к проверке в моделях на примате (и особенно яванском макаке) эффективности антитела.
- 18 045070
Предпочтительные антитела по настоящему изобретению будут, кроме того, проявлять желаемые уровни аффинности и антигенной специфичности. Предпочтительные антитела по настоящему изобретению будут, кроме того, проявлять желаемые уровни иммуномодулирующей активности и интернализации в клетки.
В некоторых вариантах осуществления антителом по настоящему изобретению является антитело, которое продуцирует гибридома mAb1 или гибридома mAb2, которые соответственно экспрессируют мышиное антитело mAb1 и мышиное антитело mAb2, или ее потомство. Настоящим изобретением также охватываются различные препараты антител, продуцируемых этими гибридомами, и эквивалентные антитела или полипептидные фрагменты (например, Fab, Fab', F(ab')2 Fv, Fc и т.д.), химерные антитела, одиночная цепь (ScFv), их мутанты, слитые белки, включающие часть антитела, гуманизированные антитела и любая другая модифицированная конфигурация любого из этих или эквивалентных антител, которая включает сайт распознавания антигена (CD3) требуемой специфичности. Настоящим изобретением также обеспечиваются антитела человека, демонстрирующие одну или более из биологических характеристик члена анти-CD3 семейства. Эквивалентные антитела анти-CD3 семейства (в том числе гуманизированные антитела и антитела человека), полипептидные фрагменты и полипептиды, включающие любой из этих фрагментов, идентифицируют и характеризуют в соответствии с любым (одним или более) из описанных выше критериев.
Соответственно, настоящим изобретением обеспечивается любое из следующего (или композиции, в том числе фармацевтические композиции, включающие любое из следующего): (а) антитело, продуцированное клеткой-хозяином или ее потомством; (b) гуманизированная форма такого антитела; (с) антитело, включающее одну или более вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи такого антитела; (d) химерное антитело, включающее вариабельные области, гомологичные вариабельным областям тяжелой цепи и легкой цепи такого антитела или происходящие от них, и константные области, гомологичные константным областям тяжелой цепи и легкой цепи антитела человека или происходящие от них; (е) антитело, включающее один или более CDR (по крайней мере один, два, три, четыре, пять или шесть) легкой цепи и/или тяжелой цепи такого антитела; (f) антитело, включающее тяжелую и/или легкую цепь такого антитела; (g) антитело человека, которое эквивалентно такому антителу. Гуманизированная форма антитела может содержать или может не содержать CDR, идентичные таковым исходного антитела, или антитела, продуцированного клеткой-хозяином, определенного выше. Определение CDR-участков полностью является частью профессиональных знаний данной области техники. Другие варианты осуществления включают антитела, которые содержат по крайней мере два, три, четыре, пять или шесть CDR, которые в значительной степени гомологичны по крайней мере двум, трем, четырем, пяти или шести CDR антитела, продуцируемого депонированной гибридомой, определенной здесь, или происходят из такого антитела. Понятно, что в контексте этого изобретения специфичность связывания и/или общая активность, как правило, сохраняется, хотя степень активности может отличаться по сравнению с антителом, продуцируемым депонированной гибридомой (может быть выше или ниже). Настоящим изобретением также обеспечиваются способы создания любых их этих антител. Способы создания антител известны в данной области техники и описаны здесь.
Настоящим изобретением также обеспечиваются полипептиды, включающие аминокислотную последовательность антител по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления полипептиды включают одну или более вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления полипептиды включают один или более CDR легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления полипептиды включают три CDR легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления полипептид включает аминокислотную последовательность антитела, которая содержит любое из следующего: по крайней мере 5 следующих друг за другом аминокислот последовательности исходного антитела, по крайней мере 8 следующих друг за другом аминокислот, по крайней мере приблизительно 10 следующих друг за другом аминокислот, по крайней мере приблизительно 15 следующих друг за другом аминокислот, по крайней мере приблизительно 20 следующих друг за другом аминокислот, по крайней мере приблизительно 25 следующих друг за другом аминокислот, по крайней мере приблизительно 30 следующих друг за другом аминокислот, причем по крайней мере 3 из аминокислот происходят из вариабельной области антитела. В одном варианте осуществления вариабельная область происходит из легкой цепи исходного антитела. В другом варианте осуществления вариабельная область происходит из тяжелой цепи антитела. В другом варианте осуществления 5 (или более) следующих друг за другом аминокислот происходят из определяющего комплементарность участка (CDR) антитела.
В некоторых вариантах осуществления этого изобретения клетки по этому изобретению, которые экспрессируют CD3, часть CD3, антитела против CD3 и другие CD3-связывающие полипептиды по этому изобретению, вводят непосредственно индивидууму для модулирования in vivo биологической активности CD3.
Предпочтительными антителами против CD3 по настоящему изобретению являются mAb1 и mAb2, и их гуманизированные или химерные производные и антигенсвязывающие фрагменты, которые реагируют с молекулой CD3 человека и яванского макака. Ниже представлены аминокислотные последова- 19 045070 тельности вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи мышиных антител mAbl и mAb2 и кодирующие их полинуклеотидные последовательности. Последовательности CDR приводимых в качестве примера антител (mAb1 и mAb2) начертаны полужирно и подчеркнуты.
А. Последовательности вариабельных областей мышиного моноклонального антитела mAb1
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела mAb1 (SEQ ID NO: 1):
QWLTQSPAI MSAFPGEKVT MTCSASSSVS YMNWYQQKSG TSPKRWIYDS SKLASGVPAR FSGSGSGTSY SLTISSMETE DAATYYCQQW SRNPPTFGGG TKLQITR
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи мышиного моноклонального антитела mAb1 (SEQ ID NO: 2):
caggtggtgc tgacccagtc ccccgccatc atgtccgcct tccccggcga gaaagtgaca atgacctgct ccgcctcctc ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaagtccggc acctccccca agcggtggat ctacgactcc tccaagctgg cctccggcgt gcccgccaga ttctctggct ccggctccgg caccagctac tccctgacca tctcctccat ggaaaccgag gacgccgcca cctactactg ccagcagtgg tcccggaacc cccctacctt cggcggaggc accaagctgc agatcaccag a
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb1 (SEQ ID NO: 3):
QVQLQQSGAE LARPGASVKM SCKASGYTFT RSTMHWVKQR PGQGLEWIGY INPSSAYTNY NQKFKDKATL TADKSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCASPQ VHYDYNGFPY WGQGTLVTVS S
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb1 (SEQ ID NO: 4):
caggtgcagc tgcagcagtc tggcgccgag ctggccagac ctggcgcctc cgtgaagatg tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc cggtccacca tgcactgggt gaaacagcgg cctggacagg gcctggaatg gatcggctac atcaacccct ccagcgccta caccaactac aaccagaagt tcaaggacaa ggccaccctg accgccgaca agtcctccag caccgcctac atgcagctgt cctccctgac ctccgaggac tccgccgtgt actactgcgc ctccccccag gtgcactacg actacaacgg cttcccctac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc tcc
В. Последовательности вариабельных областей мышиного моноклонального антитела mAb2
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 5):
IQAVVTQESAL TTSPGETVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQE KPDHLFTGLI GGTNKRAPGV PARFSGSLIG DKAALTITGA QTEDEAIYFC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 6):
caggccgtgg tgacacagga gtcagctctg accacatccc caggcgaaac agtgactctg acctgcagat ccagcactgg agcagtgact acctctaact acgctaattg ggtgcaggag aagcccgacc acctgttcac tgggctgatc ggcggaacca acaaaagggc acccggtgtg cctgcccggt tttctggcag tctgatcgga gacaaggccg ctctgacaat tactggcgcc cagacagagg atgaagctat ttacttctgt gcactgtggt atagcaatct gtgggtgttt gggggtggca ccaaactgac agtgctggga
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 7):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 8): gaggtgaagc tgctggaaag cggcggagga ctggtgcagc caaagggatc actgaaactg tcctgcgccg cctccggctt cacctttaac acatacgcta tgaattgggt gcgacaggca cctggcaagg gcctggagtg ggtggcaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actctgtgaa ggatagattc acaatcagtc gcgacgattc ccagagcatt ctgtatctgc agatgaacaa tctgaaaact gaagacaccg ccatgtacta ttgtgtgcgg cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg gtgactgtgt cttcc
Положение 40 тяжелой цепи является положением якорного остатка связывающего пептида с высокой аффинностью класса II МНС. Положения 44, 48, 54, 94, 99 и 108 тяжелой цепи являются положениями якорных остатков связывающего пептида со средней аффинностью класса II МНС. Положение 69 легкой цепи является положением якорного остатка связывающего пептида с высокой аффинностью
- 20 045070 класса II МНС. Положение 59 легкой цепи является положением якорного остатка связывающего пептида со средней аффинностью класса II МНС. Эти остатки можно заменить, используя стандартные методы молекулярной биологии, на какой-либо остаток для ослабления или исключения сайта распознавания
МНС класса II.
С. Антитела против CD3 со сконструированным Fc
При обычном функционировании иммунной системы взаимодействие комплексов антитело-антиген с клетками иммунной системы приводит к широкому ряду реакций, распространяющихся от эффекторных функций, таких как антителозависимая цитотоксичность, дегрануляция тучных клеток и фагоцитоз, до иммуномодулирующих сигналов, таких как пролиферация регулирующих лимфоцитов и секреция антител. Любые из этих взаимодействий инициируются благодаря связыванию Fc-домена антител или иммунных комплексов со специализированными рецепторами клеточной поверхности гемопоэтических клеток. Разнообразие клеточных реакций, запускаемых антителами и иммунными комплексами, является следствием структурной гетерогенности трех Fc-рецепторов: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) и FcyRIII (CD16). FcyRI (CD64), FcyRIIA (CD32A) и FcyRI11 (CD16) являются активирующими (т.е. усиливающими иммунную систему) рецепторами; FcyRIIB (CD32B) является ингибирующим (т.е. успокаивающим иммунную систему) рецептором. Аминокислотная последовательность Fc-области IgG1 представлена ниже (как SEQ ID NO:9, с нумерацией в соответствии с Kabat и др. (SEQUENCE OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, NIH, MD (1991), который включен в настоящее описание в словесной форме посредством ссылки, ниже называемой Kabat EU). Остатки 230-341 являются СН2-областью Fc. Остатки 342-447 являются СН3-областью Fc.
SEQ ID NO :9
PAPELLGGPS 230 | VFLFPPKPKD 240 | TLMISRTPEV 250 | TCVVVDVSHE 260 | DPEVKFNWYV 270 |
DGVEVHNAKT 280 | KPREEQYNST 290 | YRVVSVLTVL 300 | HQDWLNGKEY 310 | KCKVSNKALP 320 |
APIEKTISKA 330 | KGQPREPQVY 340 | TLPPSREEMT 350 | KNQVSLTCLV 360 | KGFYPSDIAV 370 |
EWESNGQPEN 380 | NYKTTPPVLD 390 | SDGSFFLYSK 400 | LTVDKSRWQQ 410 | GNVFSCSVMH 420 |
EALHNHYTQK SLSLSPGK 430 440
Поскольку не связывающиеся с Fc-рецептором (FcR) CD3-специфические антитела являются в минимальной степени истощающими, было выдвинуто предположение, что они могут изменять сигналы от TCR так, что могла бы индуцироваться иммунологическая толерантность (St. Clair E.W. (2009) Novel Targeted Therapies for Autoimmunity, Curr. Opin. Immunol. 21(6): 648-657). Таким образом, такая терапия имеет потенциальное применение при лечении аутоиммунного заболевания и отторжения вследствие реакции хозяин против трансплантата. Не связывающиеся с FcR CD3-специфические антитела, как также было постулировано, индуцируют толерантность в виде ремиссии сахарного диабета типа 1 (St. Clair E.W. (2009) Novel Targeted Therapies for Autoimmunity, Curr. Opin. Immunol. 21(6): 648-657; Masharani, U.B. et al. (2010) Teplizumab Therapy For Type 1 Diabetes, Expert Opin. Biol. Ther. 10(3): 459-465).
Таким образом, настоящее изобретение включает специфически связывающиеся с CD3 антитела, которые включают вариант Fc-области, имеющие Fc-области, которые модифицированы (например, содержат замены, делеции, вставки в одной или более частей), чтобы быть неспособными или менее способными к связыванию с Fc-рецептором (по сравнению с антителом, содержащим те же CDR, но Fcобласть дикого типа).
В одном варианте осуществления такие антитела будут неспособны к связыванию с любым Fcрецептором. Альтернативно, Fc-область антитела будет модифицирована так, чтобы дать ей возможность связываться с такими Fc-рецепторами, как FcyRIIB, которые являются ингибиторными, но не с такими Fc-рецепторами, как FcyRIIA, FcyRIIIA или FcyRIIIB, которые стимулируют активацию иммунной системы.
Предпочтительно, способности к связыванию молекул по настоящему изобретению определяют с помощью in vitro функциональных анализов для определения одной или более FcyR-опосредуемых функций клеток-эффекторов. Аффинности и способности к связыванию молекул, например антител, по настоящему изобретению к (с) FcyR можно определить, используя in vitro анализы (биохимические или иммунологические анализы), известные в данной области техники для определения взаимодействий антитело-антиген или Fc-FcyR, т.е. специфического связывания антигена с антителом или специфического связывания Fc-области с FcyR, соответственно, включающие, но без ограничения, анализ ELISA, анализ с использованием поверхностного плазмонного резонанса, анализ методом иммунопреципитации. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления молекулы по настоящему изобретению обладают способностями к связыванию в in vivo моделях (таких как те, которые описаны и раскрыты здесь), схожими с таковыми в in vitro анализах. Однако настоящее изобретение не исключает молекулы по настоя- 21 045070 щему изобретению, которые не демонстрируют желаемый фенотип в in vitro анализах, но демонстрируют желаемый фенотип in vivo.
В некоторых вариантах осуществления молекулы по настоящему изобретению, включающие вариант Fc-области, включают по крайней мере одну модификацию аминокислоты (например, имея 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более модификаций аминокислот) в СНЗ-домене Fc-области, который определяют как домен, расположенный от аминокислоты 342 до аминокислоты 447. В других вариантах осуществления молекулы по настоящему изобретению, включающие вариант Fc-области, включают по крайней мере одну модификацию аминокислоты (например, имея 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более модификаций аминокислот) в СН2-домене Fc-области, который определяют как домен, расположенный от аминокислоты 231 до аминокислоты 341. В некоторых вариантах осуществления молекулы по настоящему изобретению включают по крайней мере две модификации аминокислот (например, имея 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более модификаций аминокислот), причем по крайней мере одна такая модификация находится в СН3области, и по крайней мере одна такая модификация находится в СН2-области. Настоящим изобретением, кроме того, охватывается модификация аминокислоты в шарнирной области. В отдельном варианте осуществления настоящим изобретением охватывается модификация аминокислоты в СН1-домене Fcобласти, который определяют как домен, расположенный от аминокислоты 216 до аминокислоты 230.
В особенно предпочтительных вариантах осуществления настоящим изобретением охватываются молекулы, включающие вариант Fc-области, причем указанный вариант придает им уменьшенную ADCC активность и/или уменьшенное связывание с FcyRIIA (CD32A) или обладает ими, как определено, используя способы, известные квалифицированному в данной области техники специалисту и приведенные здесь в качестве примера. Анализы ADCC, используемые в соответствии со способами по настоящему изобретению, могут быть NK-зависимыми или макрофагозависимыми.
В особенно предпочтительных вариантах осуществления настоящим изобретением охватываются молекулы, включающие вариант Fc-области, причем указанный вариант придает им уменьшенную ADCC активность и/или уменьшенное связывание с FcyRIIIA (CD16A) или обладает ими, как определено, используя способы, известные квалифицированному в данной области техники специалисту и приведенные здесь в качестве примера. Анализы ADCC, используемые в соответствии со способами по настоящему изобретению, могут быть NK-зависимыми или макрофагозависимыми.
Варианты Fc по настоящему изобретению могут быть в комбинации с другими модификациями Fc, такие как те, которые описаны в патентах США №№ 7632497, 7521542, 7425619, 7416727, 7371826, 7355008, 7335742, 7332581, 7183387, 7122637 и 6737056; в публикациях РСТ-заявок с № WO 2008/105886; WO 2008/002933; WO 2007/021841; WO 2007/106707; WO 06/088494; WO 05/115452; WO 05/110474; WO 04/1032269 и WO 04/063351; и в Presta, L.G. et al. (2002) Engineering therapeutic antibodies for improved function, Biochem. Soc. Trans. 30(4): 487-490; Shields, R.L. et al. (2002) Lack of fucose on human IgG1 N-linked oligosaccharide improves binding to human FcgammaRIII and antibody-dependent cellular toxicity, J. Biol. Chem. 26; 277(30): 26733-26740, и Shields, R.L. et al. (2001) High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for Fc gamma RI, Fc gamma RII, Fc gamma RIII, and FcRn and design of IgGl variants with improved binding to the Fc gamma R, J. Biol. Chem. 276(9) : 6591-6604). Настоящим изобретением охватывается комбинация варианта Fc по настоящему изобретению с другими модификациями Fc для придания модифицированному антителу аддитивных, синергетических или новых свойств.
В других вариантах осуществления настоящим изобретением охватывается использование любого варианта Fc, известного в данной области техники, такого как те, которые описаны в
- 22 045070
Jefferis, В.J. et al. (2002) Interaction Sites On Human IgG-Fc For FcgammaR: Current Models, Immunol. Lett. 82: 57-65; Presta, L.G. et al. (2002) Engineering Therapeutic Antibodies For Improved Function, Biochem. Soc. Trans. 30: 487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) Engineered Antibodies With Increased Activity To Recruit Complement, J. Immunol. 166: 2571-75; Shields, R.L. et al. (2001) High Resolution Mapping Of The Binding Site On Human IgGl For Fc Gamma RI, Fc Gamma RI I, Fc Gamma RIII, And FcRn And Design Of IgGl Variants With Improved Binding To The Fc gamma R, J. Biol. Chem. 27 6: 6591-6604; Idusogie, E.E. et al. (2000) Mapping Of The Clq Binding Site On Rituxan, A Chimeric Antibody With A Human IgG Fc, J. Immunol. 164: 4178-84; Reddy, M.P. et al. (2000) Elimination Of Fc Receptor-Dependent Effector Functions Of A Modified IgG4 Monoclonal Antibody To Human CD4, J. Immunol. 164: 1925-1933; Xu, D. et al. (2000) In Vitro Characterization of Five Humanized OKT3 Effector Function Variant Antibodies, Cell. Immunol. 200: 16-26; Armour, K.L. et al. (1999)
Recombinant human IgG Molecules Lacking Fcgamma Receptor I Binding And Monocyte Triggering Activities, Eur. J. Immunol. 29: 2613-24; Jefferis, R. et al. (1996) Modulation Of
Fc(Gamma)R And Human Complement Activation By IgG3-Core Oligosaccharide Interactions, Immunol. Lett. 54: 101-04; Lund, J. et al. (1996) Multiple Interactions Of IgG With Its Core Oligosaccharide Can Modulate Recognition By Complement And Human Fc Gamma Receptor I And Influence The Synthesis Of Its Oligosaccharide Chains, J. Immunol. 157: 4963-4969; Hutchins et al. (1995) Improved Biodistribution, Tumor Targeting, And Reduced Immunogenicity In Mice With A Gamma 4 Variant Of Campath-1H, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 92: 11980-84;
Jefferis, R. et al. (1995) Recognition Sites On Human IgG For Fc Gamma Receptors: The Role Of Glycosylation, Immunol. Lett. 44: 111-17; Lund, J. et al. (1995) Oligosaccharide-Protein
Interactions In IgG Can Modulate Recognition By Fc Gamma Receptors, FASEB J. 9: 115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) A Non-Activating Humanized Anti-CD3 Monoclonal Antibody Retains Immunosuppressive Properties In Vivo, Transplantation 57: 1537-1543; Lund et al. (1992) Multiple Binding Sites On The CH2 Domain Of IgG For Mouse Fc Gamma RII, Mol. Immunol. 29: 53-59; Lund et al. (1991) Human Fc Gamma RI And Fc Gamma RII Interact With Distinct But Overlapping Sites On Human IgG, J. Immunol. 147: 2657-2662; Duncan, A.R. et al. (1988)
Localization Of The Binding Site For The Human High-Affinity Fc Receptor On IgG, Nature 332: 563-564;
в патентах США №№ 5624821, 5885573, 6194551, 7276586 и 7317091; и публикациях РСТ-заявок с № WO 00/42072 и WO 99/58572.
В некоторых вариантах осуществления антитело настоящего изобретения включает вариант Fcобласти (в том числе Fc, происходящую из любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и Y) Ig или класса (например, IgGp IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подкласса иммуноглобулинов человека), причем указанный вариант Fc-области включает по крайней мере одну модификацию аминокислоты по сравнению с Fc-областью дикого типа, который (вариант Fc-области) демонстрирует уменьшенное или
- 23 045070 аннулированное связывание с одним или более лигандов-эффекторов, как определено с помощью стандартных исследований, известных в данной области техники и описанных здесь, относительно сравнимой молекулы, включающей Fc-область дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fcдомена антитела по настоящему изобретению включает модификацию аминокислоты (т.е. вставку, замену, делецию) в одном или более из положений остатков 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 270, 2 97, 2 98, 299. В конкретном варианте осуществления одной или более модификаций аминокислот, которые уменьшают или аннулируют связывание с одним или более лигандов-эффекторов, является замена фенилаланином или пролином в положении 233; замена аланином в положении 234; замена аланином или глютаминовой кислотой в положении 235; замена аланином в положении 236, замена аланином в положении 237, замена аргинином в положении 238; замена аланином или глютаминовой кислотой в положении 265; замена аланином или аспарагином в положении 270; замена аланином или глютамином в положении 297; замена фенилаланином, аспарагином или пролином в положении 298; замена любой аминокислотой, отличной от серина или треонина, в положении 299 или комбинация из двух или более вышеперечисленных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc-домен, содержащий замену аланином в положении 265 и в положении 297; замену аланином в положении 265 и глютамином в положении 297; замену глютаминовой кислотой в положении 265 и аланином в положении 297; или замену глютаминовой кислотой в положении 265 и глютамином в положении 297. В предпочтительных вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc-домен, содержащий модификацию (например, замену, вставку, делецию) в положении 234 и в положении 235 Fc-области. В конкретном примере в соответствии с этим вариантом осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc-домен, содержащий замену аланином в положении 234 и замену глютаминовой кислотой в положении 235. Тем не менее, в более предпочтительном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc, содержащий замену аланином в положении 234 и замену аланином в положении 235.
В других вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению включает вариант Fcобласти, который демонстрирует уменьшенное или аннулированное связывание с одним или более лигандами-эффекторами, как определено с помощью стандартных исследований, известных в данной области техники и описанных здесь, относительно сравнимой контрольной молекулы. В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению имеет Fc-область, демонстрирующую уменьшенное или аннулированное связывание с одним или более лигандами-эффекторами, которая включает фенилаланин или пролин в положении 233; аланин в положении 234; аланин или глютаминовую кислоту в положении 235; аланин в положении 236, аланин в положении 237, аргинин в положении 238; аланин или глютаминовую кислоту в положении 265; аланин или аспарагин в положении 270; аланин или глютамин в положении 297; фенилаланин, аспарагин или пролин в положении 298; любую аминокислоту, отличную от серина или треонина, в положении 299 или комбинацию из двух или более вышеперечисленных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc-домен, содержащий аланин в положении 265 и в положении 297; аланин в положении 265 и глютамин в положении 297; глютаминовую кислоту в положении 265 и аланин в положении 297; или глютаминовую кислоту в положении 265 и глютамин в положении 297. В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc-домен, содержащий аланин в положении 234 и глютаминовую кислоту в положении 235. В предпочтительных вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению включает Fc, содержащий аланин в положении 234 и аланин в положении 235.
Антитела по настоящему изобретению, которые включают Fc-домен, содержащий аланин в положениях, соответствующих 234 и 235 согласно системе нумерации по Kabat, известны как ala-ala антитела. В некоторых вариантах осуществления использование ala-ala Fc-доменов и/или других комбинаций из комбинаций аминокислот, описываемых здесь (в том числе комбинаций, включающих ala-ala Fc-домены), может аннулировать связывание Fc-домена со всеми FcyR. Связывание Fc-домена с одним или более FcyR можно определить с помощью любого способа, описанного здесь и/или известного в данной области техники.
В некоторых вариантах осуществления одна или более модификаций аминокислот, которые аннулируют связывание со всеми FcyR или уменьшают или аннулируют связывание с одним или более лигандами-эффекторами, включают комбинации модификаций, перечисленные здесь, или комбинации модификаций, перечисленные здесь, с любой из тех, которые могут обеспечить связывание нулевого порядка с любым FcR (например, FcyRIIIA, FcyRIIIB, FcyRIIA), как определено с помощью способов, описанных здесь или известных квалифицированному в данной области техники специалисту. Как это будет без труда понятно квалифицированному в данной области техники специалисту, такие антитела по настоящему изобретению могут найти конкретное применение при лечении аутоиммунного заболевания, в случае которого антитела против CD3 и антигенсвязывающие фрагменты служат для модулирования функции иммунной системы без связанной реакции на первую дозу, характерной для антител против иммуноцитов.
В некоторых вариантах осуществления антитела против CD3 и антигенсвязывающие фрагменты по
- 24 045070 настоящему изобретению, или их антигенсвязывающие фрагменты, характеризуются уменьшенным (например, но без ограничения, меньше 50%, меньше 40%, меньше 30%, меньше 20%, меньше 10%, меньше 5% или меньше 1% по сравнению со связыванием белком, включающим контрольный Fc-домен) или, более предпочтительно, не обнаруживаемым связыванием с одним или более из любых FcyR (например, FcyRI, FcyRII или FcyRIII) благодаря своему Fc-домену, как определено с помощью обычных в данной области техники анализов. Дополнительно или альтернативно, антитела против CD3 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению, или их антигенсвязывающие фрагменты, могут характеризоваться уменьшенным (например, но без ограничения, меньше 50%, меньше 40%, меньше 30%, меньше 20%, меньше 10%, меньше 5% или меньше 1% по сравнению со связыванием контрольным белком, включающим контрольный Fc-домен) или, более предпочтительно, не обнаруживаемым связыванием с любыми рецепторами комплемента, такими как Clq, как определено в обычно используемых анализах. В отдельных вариантах осуществления антитело является негликозилированным. В других вариантах осуществления в антителе отсутствует Fc-домен (например, оно представляет собой Fab-фрагмент, F(ab')2 или одноцепочечное антитело).
Таким образом, антитела по настоящему изобретению являются, в частности, полезными, поскольку они характеризуются уменьшенной in vivo токсичностью, причиной которой является продукция лимфокинов или выброс цитокинов, или ее отсутствием. Способы определения продукции лимфокинов и выброса цитокинов известны и являются обычными в данной области техники и включены в настоящее описание. Например, выброс цитокинов можно определить посредством измерения секреции цитокинов, включающих, но без ограничения, интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-б (IL-6), интерлейкин-12 (IL-12), интерлейкин-16 (IL-16), PDGF, TGF-α, TGF-β, TNF-α, TNF-β, GCSF, GM-CSF, MCSF, IFN-α, IFN-β, TFN-y, IGF-I, IGF-II. Например, смотрите Isaacs et al., 2001, Rheumatology, 40: 724738; Soubrane et al., 1993, Blood, 81(1): 15-19; все из которых включены сюда посредством ссылки в их полном объеме.
D. CD3-специфические диатела DART™
Как обсуждалось выше, настоящим изобретением, кроме того, охватываются биспецифические, триспецифические и полиспецифические антитела. Особенно предпочтительный пример таких антител включает молекулы диател DART™, которые включают по крайней мере две полипептидных цепи, которые образуют по крайней мере два эпитопсвязывающих сайта, по крайней мере один из которых специфически связывается с CD3. Приводимые в качестве примера молекулы диател DART™ представлены в US 20100174053, US 20090060910, US 20070004909, ЕР 2158221, ЕР 1868650, WO 2010080538, WO 2008157379 и WO 2006113665.
В предпочтительных вариантах осуществления первая полипептидная цепь диатела DART™ включает:
(i) домен (А), включающий связывающую область вариабельного домена легкой цепи первого иммуноглобулина (VL1), специфическую в отношении эпитопа (1);
(ii) домен (В), включающий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи второго иммуноглобулина (VH2), специфическую в отношении эпитопа (2); и (iii) домен (С).
Вторая полипептидная цепь диатела DART™ включает:
(iv) домен (D), включающий связывающую область вариабельного домена легкой цепи второго иммуноглобулина (VL2), специфическую в отношении эпитопа (2);
(v) домен (Е), включающий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи первого иммуноглобулина (VH1), специфическую в отношении эпитопа (1); и (vi) домен (F).
Домены (А) и (В) диатела DART™ не ассоциируются друг с другом с образованием эпитопсвязывающего сайта. Так же домены (D) и (Е) диатела DART™ не ассоциируются друг с другом с образованием эпитопсвязывающего сайта. Точнее, домены (А) и (Е) диатела DART™ ассоциируются с образованием связывающего сайта, который связывает эпитоп (1); указанные домены (В) и (D) диатела DART™ ассоциируются с образованием связывающего сайта, который связывает указанный эпитоп (2). Домены (С) и (F) ковалентно связаны вместе.
Каждая полипептидная цепь молекулы диатела DART™ включает VL-домен и VH-домен, которые ковалентно связаны, так что самосборка доменов затруднена. Взаимодействие двух из полипептидных цепей будет приводить к двум спариваниям VL-VH, образуя два эпитопсвязывающих сайта, т.е. двухвалентную молекулу. Ни VH-домен, ни VL-домен не ограничивается каким-либо положением в полипептидной цепи, т.е. не ограничивается амино (N) концом или карбоксильным (С) концом, также домены не ограничиваются их положениями относительно друг друга, т.е. VL-домен может быть N-концевым по отношению к VH-домену и наоборот. Единственным ограничением является то, чтобы в распоряжении имелась комплементарная полипептидная цепь для образования функциональных диател DART™ . Если VL- и VH-домены происходят из одного и того же антитела, две комплементарных полипептидных цепи могут быть идентичными. Например, если связывающие домены происходят из антитела, специфическо
- 25 045070 го в отношении эпитопа А (т.е. связывающий домен образован, исходя из взаимодействия VLA-VHA), каждый полипептид будет включать VHA и VLA. Гомодимеризация двух полипептидных цепей антитела будет приводить к образованию двух связывающих сайтов VLA-VHA, приводя к двухвалентному моноспецифическому антителу. Если VL- и VH-домены происходят из антител, специфических в отношении различных антигенов, для образования функционального биспецифического диатела DART™ требуется взаимодействие двух различных полипептидных цепей, т.е. образование гетеродимера. Например, в случае биспецифического диатела DART™, одна полипептидная цепь будет включать VLA и VLB; гомодимеризация указанной цепи будет приводить к образованию двух связывающих сайтов VLA-VHB, или не связывающих, или непредсказуемо связывающих. В отличие от этого, если две отличающихся полипептидных цепи могут взаимодействовать, например, в рекомбинантной экспрессионной системе, одна, включающая VLA и VHB, а другая, включающая VLB и VHA, будут образовываться два отличающихся связывающих сайта: VLA-VHA и VLB-VHB. В случае всех пар полипептидных цепей диател DART™ существует вероятность неправильного совмещения или неправильного связывания двух цепей, т.е. взаимодействие доменов VL-VL или VH-VH; однако легко осуществить очистку функциональных антител на основе иммуноспецифичности правильно димеризованных связывающих сайтов, используя любой аффинный способ, известный в данной области техники или приведенный здесь в качестве примера, например, аффинную хроматографию.
Одна или более из полипептидных цепей диатела DART™ может необязательно включать Fc-домен или его часть (например, СН2-домен или СН3-домен). Fc-домен или его часть может происходить из любого изотипа или аллотипа иммуноглобулинов, в том числе, но без ограничения, IgA, IgD, IgG, IgE и IgM. В предпочтительных вариантах осуществления Fc-домен (или его часть) происходит из IgG. В конкретных вариантах осуществления изотипом IgG является IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его аллотип. В одном варианте осуществления молекула диатела включает Fc-домен, включающий СН2-домен и СН3домен, которые независимо выбирают из любого изотипа иммуноглобулинов (т.е. Fc-домен, включающий СН2-домен, происходящий из IgG, и СН3-домен, происходящий из IgE, или СН2-домен, происходящий из IgG1, и СН3-домен, происходящий из IgG2, и т.д.). Fc-домен можно спроектировать в полипептидной цепи, включающей молекулу диатела по настоящему изобретению, в любом положении относительно других доменов или частей указанной полипептидной цепи (например, Fc-домен, или его часть, может быть С-концевым по отношению к обоим VL- и VH-доменам полипептидной цепи; может быть Nконцевым по отношению к обоим VL- и VH-доменам; или может быть N-концевым по отношению к одному домену и С-концевым по отношению к другому (т.е. находиться между двумя доменами полипептидной цепи)).
Fc-домены в полипептидных цепях молекул диател DART™ предпочтительно подвергаются димеризации, приводящей к образованию молекулы DART™, которая демонстрирует свойства, подобные таковым иммуноглобулинов, например, взаимодействия Fc-Fcy. Fc-включающие диатела могут быть димерами, например, состоящими из двух полипептидных цепей, каждая из которых включает VH-домен, VL-домен и Fc-домен. Димеризация указанных полипептидных цепей приводит к образованию двухвалентного диатела DART™, включающего Fc-домен, хоть и со структурой, отличной от таковой не модифицированного двухвалентного антитела. Такие молекулы диател DART™ будут проявлять измененные фенотипы по сравнению с иммуноглобулином дикого типа, например, измененный полупериод существования в сыворотке, способности к связыванию и т.д. В других вариантах осуществления молекулы диател DART™, включающие Fc-домены, могут быть тетрамерами. Такие тетрамеры включают две более тяжелые полипептидные цепи, т.е. полипептидную цепь, включающую VL, VH и Fc-домен, и две более легкие полипептидные цепи, т.е. полипептидную цепь, включающую VL и VH. Более легкие и более тяжелые цепи взаимодействуют с образованием мономера, и указанные мономеры взаимодействуют благодаря их неспаренным Fc-доменам с образованием Ig-подобной молекулы. Такое Ig-подобное диатело DART™ является четырехвалентным и может быть моноспецифическим, биспецифическим или тетраспецифическим.
VI. Терапевтические способы применения антител против CD3 по настоящему изобретению
Антитела против CD3 по настоящему изобретению и их антигенсвязывающие фрагменты, в частности, применимы для лечения злокачественных новообразований, связанных с экспрессией CD3, и для лечения аутоиммунного заболевания и других воспалительных нарушений.
Эти применения могут приводить к образованию комплекса между CD3 и антителом, которое специфически связывается с CD3. Примеры таких антител включают, но без ограничения, моноклональные антитела против CD3 mAb1 и mAb2 или, более предпочтительно, их гуманизированные производные. Образование такого комплекса может происходить in vitro или in vivo. Без ограничения этой теорией, антитело против CD3 может связываться с CD3 благодаря экстраклеточному домену CD3 и может затем подвергаться интернализации в живую нормальную или раковую клетку.
А. Лечение рака
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с CD3, присутствующим на поверхности Т-клеток. Антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению
- 26 045070 могут использоваться в случае биспецифической (или триспецифической, или полиспецифической) молекулы, такой как молекула DART или BiTE, для перенаправления Т-клеток на опухолевую клетку. Тклетка может затем уничтожать опухолевую клетку. Биспецифические (или триспецифические, или полиспецифические) молекулы по настоящему изобретению способны к связыванию как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком (например, яванского макака), а также со вторым (или дополнительным) и отличным антигеном(ами) и эпитопом(ами). Вторым антигеном или эпитопом предпочтительно является опухолеспецифический антиген, представленный на опухолевой клетке. Такие опухолевые клетки могут быть из злокачественных новообразований, например, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака желудка, рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, рака прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака печени, рака яичника, рака ротовой полости, рака глотки, рака пищевода, рака гортани, рака кости, рака кожи, меланомы, рака матки, рака яичек, рака мочевого пузыря, рака почки, рака головного мозга, глиобластомы, рака щитовидной железы, лимфомы, миеломы и лейкоза. Такими дополнительными антигенами или эпитопами предпочтительно являются опухолеспецифические антигены или эпитопы на клеточной поверхности (такие как 17-1А, А33, основной антиген I эндодермального происхождения на эритроцитах взрослого человека, альфа-фетопротеин, антиген оболочки РНК-вируса опухоли, онкоэмбриональный антиген, специфический для опухоли мочевого пузыря, В7-Н1, В7-Н2, В7-Н3, В7-Н4, В7-Н5, В7-Н6, специфический для лимфомы Беркитта антиген-38.13, СА125, CD18, CD19, специфический для В-клеточной лимфомы человека антиген-CD20, CD22, CD33, CD44, CD52, СЕА, СО17-1А, СТА-1, CTLA-4, рецептор эпидермального фактора роста, ЕрСАМ, EphA2, антиген I на эритроцитах новорожденного, антиген фибросаркомы, ганглиозид GD2, ганглиозид Gd3, ганглиозид GM2, ганглиозид GM3, GICA 19-9, gp IIIb/IIIa, gp72, HER1, HER-2/neu, HER3, HER4, специфический для меланомы антиген с большой молекулярной массой, антиген HLA-DR, специфический для лейкоза человека Т-клеточный антиген-Gp37, специфический для карциномы легкого человека антиген L20, специфический для карциномы легкого человека антиген L6, антиген в виде глобулярной частицы молочного жира человека, IgE, специфический для карциномы KS 1/4 pan антиген, LEA, специфический для аденокарциномы антиген F3, специфический для злокачественных лимфоцитов человека антиген-АРО-1, специфический для меланомы антиген gp75, связанный с меланомой антиген р97, неогликопротеин, nuC242, специфический для полиморфного эпителия антиген муцинового типа, специфический для предстательной железы антиген, специфический для предстательной железы мембранный антиген, специфический для предстательной железы кислый фосфат, антиген SK-1, TAG-72, Тантиген, опухолеспецифический антиген СА125, опухолеспецифический антиген MUC1, опухолеспецифический трансплантационный антиген клеточной поверхности, фактор роста сосудистого эндотелия, рецептор фактора роста сосудистого эндотелия и ανβ3). Альтернативно, такие дополнительные антигены или эпитопы могут быть связаны с патогеном (таким как: вирус гепатита типа А, вирус гепатита типа В, вирус гепатита типа С, вирус гриппа, вирус ветряной оспы, аденовирус, вирус простого герпеса типа I (HSV-I), вирус простого герпеса типа II (HSV-II), возбудитель чумы рогатого скота, риновирус, ЕСНОвирус, ротавирус, респираторно-синцитиальный вирус, папилломавирус, паповавирус, цитомегаловирус, эхиновирус, арбовирус, хантавирус, коксаки-вирус, вирус эпидемического паротита, вирус кори, вирус краснухи, полиовирус, возбудитель натуральной оспы, вирус Эпштейна-Барра, вирус иммунодефицита человека типа I (HIV-I), вирус иммунодефицита человека типа II (HIV-II), возбудитель вирусного менингита, возбудитель вирусного энцефалита, возбудитель денге, возбудитель натуральной оспы; микобактерии, рикеттсии, микоплазма, нейссерии, S. pneumonia, Borrelia burgdorferi, Bacillus anthracis, Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, возбудитель столбняка, возбудитель коклюша, возбудитель холеры, возбудитель чумы, возбудитель дифтерии, хламидии и легионеллы; лейшмания, возбудитель кокцидиоза, трипаносома или возбудитель малярии; хламидии и рикеттсии).
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с CD3, присутствующим на поверхности Т-клеток. Используя обычные способы, такие антитела можно пометить флуоресцеином, как описано выше. При инкубации таких меченых молекул в присутствии биспецифической молекулы (такой как, например, диатело UDART™, содержащее эпитопсвязывающий домен, который связывается с Т-клеточным рецептором, и эпитопсвязывающий домен, который связывается с флуоресцеином (TCR-UDART™)), они могут связываться с меткой -флуоресцеином - и таким образом сами локализоваться на поверхности клеток, которые экспрессируют CD3, и приводить к перенаправленному уничтожению таких клеток.
В альтернативном варианте осуществления CD19 может использоваться в качестве второго эпитопа, так что биспецифическое антитело, или более предпочтительно, диатело DART™, распознающее CD3 и CD19, используется для уничтожения В-клеточной лимфомы благодаря вхождению в контакт и со специфическим для В-клеток антигеном (CD19), и с комплексом Т-клеточный рецептор/CD3 на Тклетках-эффекторах. Как обсуждалось в Moore, P.A. et al. (2011) Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma, Blood 2011 blood-2010-09306449, CD3/CD19-специфическое диатело DART™ использовалось для уничтожения В-клеточной лимфомы благодаря вхождению в контакт и со специфическим для В-клеток антигеном (CD19), и с комплек- 27 045070 сом Т-клеточный рецептор/CD3 на Т-клетках-эффекторах. В результате сравнения бок о бок с одноцепочечным биспецифическим антителом, содержащим последовательности Fv антитела против CD 19 и CD3, выявлено, что DART является более эффективным в наведении на лизис В-клеток. Увеличенная активность при использовании CD19χCD3-биспецифического DART отмечалась в отношении всех CD19экспрессирующих В-клеток-мишеней при оценке, используя покоящиеся и предварительно подвергнутые стимуляции РВМС человека или очищенные популяции Т-клеток-эффекторов. В результате определения характеристик CD19χTCR-биспецифического DART выявлена эффективность, эквивалентная таковой CD19xCD3 DART, что указывает на гибкость структуры DART в поддержании ассоциаций Тклетка/В-клетка в случае применений для перенаправленного, опосредуемого Т-клетками уничтожения. Важно отметить, что увеличенный уровень уничтожения, опосредуемого молекулами DART, не сопровождался каким-либо увеличением активации неспецифических Т-клеток или лизиса негативных по CD19 клеток. Исследования клеточных ассоциаций указывают на то, что структура DART хорошо подходит для сохранения межклеточных контактов, несомненно, вносящих вклад в высокий уровень уничтожения клеток-мишеней. Наконец, способность CD19xTCR-биспецифического DART к ингибированию В-клеточной лимфомы у мышей NOD/SCID при совместном введении с РВМС человека, кроме того, демонстрирует ценность молекул DART для лечения В-клеточных злокачественностей. Обладающие перекрестной реактивностью антитела против CD3 по настоящему изобретению могли бы использоваться таким же образом, как антитела против CD3 Moore, P. А. и др. Таким образом, настоящим изобретением обеспечивается терапия для раков (особенно лимфом и лейкозов), включающих CD3экспрессирующие раковые клетки.
Биспецифические (или триспецифические, или полиспецифические) молекулы по настоящему изобретению предпочтительно вводят пациенту в одной или более стандартных доз, типично составляющих от 0,0001 мг/кг до 100 мг/кг веса тела пациента. Предпочтительно, когда вводимая пациенту доза находится между 0,0001 мг/кг и 20 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 10 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 5 мг/кг, 0,0001 и 2 мг/кг, 0,0001 и 1 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 0,7 5 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 0,5 мг/кг, 0,0001 мг/кг и 0,25 мг/кг, 0,0001 и 0,15 мг/кг, 0,0001 и 0,10 мг/кг, 0,001 и 0,5 мг/кг, 0,01 и 0,25 мг/кг или 0,01 и 0,10 мг/кг веса тела пациента.
В. Лечение аутоиммунного заболевания и воспаления
Настоящим изобретением также обеспечиваются способы лечения, предотвращения, замедления прогрессирования и/или уменьшение интенсивности симптомов опосредованных Т-клетками заболеваний или нарушений, включающих отторжение трансплантата, гомологичную болезнь, нежелательные реакции гиперчувствительности замедленного типа (такие как аллергические реакции замедленного типа), опосредованные Т-клетками заболевания легких и аутоиммунные заболевания. Опосредованные Тклетками заболевания легких включают саркоидоз, аллергический альвеолит, острый интерстициальный пневмонит, альвеолит, фиброз легких, идиопатический фиброз легких и другие заболевания, характеризующиеся воспалительным поражением легких. Опосредованные Т-клетками аутоиммунные заболевания включают рассеянный склероз, неврит, полимиозит, псориаз, витилиго, синдром Гужеро-Шегрена, ревматоидный артрит, диабет типа I, аутоиммунный панкреатит, воспалительные заболевания кишечника (например, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит), глютеновую болезнь, гломерулонефрит, склеродермию, саркоидоз, аутоиммунные заболевания щитовидной железы (например, зоб Хасимото и болезнь Грейвса), злокачественную миастению, болезнь Аддисона, аутоиммунный увеоретинит, обыкновенную пузырчатку, первичный билиарный цирроз, злокачественную анемию и системную красную волчанку (в частности, кожную форму), эффекты вследствие трансплантации органа, гомологичную болезнь (GVHD) и т.д. В частности, способы по настоящему изобретению полезны для субъектов с заболеванием на ранней стадии для замедления или уменьшения нарушения вследствие аутоиммунитета и сохранения высокого уровня функционирования и/или уменьшения необходимости в другой терапии (например, при лечении или профилактике сахарного диабета типа I способы настоящего изобретения могут уменьшить необходимость во введении экзогенного инсулина у субъекта). Кроме того, способы по настоящему изобретению могут преимущественно уменьшить частоту или привести к отсутствию частоты случаев синдрома выброса цитокинов, ранее связанного с введением терапевтических антител и, в частности, антиТ-клеточного антитела (например, против CD3) или антигенсвязывающих фрагментов.
В некоторых вариантах осуществления курс лечения антителом против CD3 или антигенсвязывающими фрагментами в соответствии со способами по настоящему изобретению повторяют с интервалами в 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 12 месяцев, 15 месяцев, 18 месяцев, 24 месяца, 30 месяцев или 36 месяцев. В конкретных вариантах осуществления эффективность лечения антителом против CD3 или антигенсвязывающими фрагментами по настоящему изобретению определяют, как описано здесь или как известно в данной области техники, через 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев, 15 месяцев, 18 месяцев, 24 месяца, 30 месяцев или 36 месяцев после предшествующего лечения.
В другом варианте осуществления субъекту вводят одну или более стандартных доз, составляющих приблизительно 0,5-50 мкг/кг, приблизительно 0,5-40 мкг/кг, приблизительно 0,5-30 мкг/кг, приблизительно 0,5-20 мкг/кг, приблизительно 0,5-15 мкг/кг, приблизительно 0,5-10 мкг/кг, приблизительно 0,5-5
- 28 045070 мкг/кг, приблизительно 1-5 мкг/кг, приблизительно 1-10 мкг/кг, приблизительно 20-40 мкг/кг, приблизительно 20-30 мкг/кг, приблизительно 22-28 мкг/кг или приблизительно 25-26 мкг/кг одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Т-клеточной злокачественности. В другом варианте осуществления субъекту вводят одну или более стандартных доз, составляющих 200 мкг/кг, 178 мкг/кг, 180 мкг/кг, 128 мкг/кг, 100 мкг/кг, 95 мкг/кг, 90 мкг/кг, 85 мкг/кг, 80 мкг/кг, 75 мкг/кг, 70 мкг/кг, 65 мкг/кг, 60 мкг/кг, 55 мкг/кг, 50 мкг/кг, 45 мкг/кг, 40 мкг/кг, 35 мкг/кг, 30 мкг/кг, 26 мкг/кг, 25 мкг/кг, 20 мкг/кг, 15 мкг/кг, 13 мкг/кг, 10 мкг/кг, 6,5 мкг/кг, 5 мкг/кг, 3,2 мкг/кг, 3 мкг/кг, 2,5 мкг/кг, 2 мкг/кг, 1,6 мкг/кг, 1,5 мкг/кг, 1 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 0,25 мкг/кг, 0,1 мкг/кг или 0,05 мкг/кг одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Т-клеточной злокачественности.
В одном варианте осуществления субъекту вводят одну или более доз, составляющих 200 мкг/кг или меньше, 175 мкг/кг или меньше, 150 мкг/кг или меньше, 128 мкг/кг или меньше, 100 мкг/кг или меньше, 95 мкг/кг или меньше, 90 мкг/кг или меньше, 85 мкг/кг или меньше, 80 мкг/кг или меньше, 75 мкг/кг или меньше, 70 мкг/кг или меньше, 65 мкг/кг или меньше, 60 мкг/кг или меньше, 55 мкг/кг или меньше, 50 мкг/кг или меньше, 45 мкг/кг или меньше, 40 мкг/кг или меньше, 35 мкг/кг или меньше, 30 мкг/кг или меньше, 25 мкг/кг или меньше, 20 мкг/кг или меньше, 15 мкг/кг или меньше, 10 мкг/кг или меньше, 5 мкг/кг или меньше, 2,5 мкг/кг или меньше, 2 мкг/кг или меньше, 1,5 мкг/кг или меньше, 1 мкг/кг или меньше, 0,5 мкг/кг или меньше, 0,25 мкг/кг или меньше, 0,1 мкг/кг или меньше или 0,05 мкг/кг или меньше одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Т-клеточной злокачественности.
В отдельных вариантах осуществления субъекту вводят одну или более доз, составляющих приблизительно 5-1200 мкг/м2, предпочтительно 51-826 мкг/м2. В другом варианте осуществления субъекту вводят одну или более стандартных доз, составляющих 1200 мкг/м2, 1150 мкг/м2, 1100 мкг/м2, 1050 мкг/м2, 1000 мкг/м2, 950 мкг/м2, 900 мкг/м2, 850 мкг/м2, 800 мкг/м2, 750 мкг/м2, 700 мкг/м2, 650 мкг/м2, 600 мкг/м2, 550 мкг/м2, 500 мкг/м2, 450 мкг/м2, 400 мкг/м2, 350 мкг/м2, 300 мкг/м2, 250 мкг/м2, 200 мкг/м2, 150 мкг/м2, 100 мкг/м2, 50 мкг/м2, 40 мкг/м2, 30 мкг/м2, 20 мкг/м2, 15 мкг/м2, 10 мкг/м2 или 5 мкг/м2 одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения, замедления прогрессирования, отсрочки возникновения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Т-клеточной злокачественности.
В другом варианте осуществления субъекту назначают схему лечения, включающую одну или более доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, причем курс лечения осуществляют в течение 2 дней, 3 дней, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней или 14 дней. В одном варианте осуществления схема лечения включает введение доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов каждый день, через день, каждый третий день или каждый четвертый день. В некоторых вариантах осуществления схема лечения включает введение доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов в понедельник, вторник, среду, четверг конкретной недели и не введение доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов в пятницу, субботу или воскресенье той же недели, пока не будет введено 14 доз, 13 доз, 12 доз, 11 доз, 10 доз, 9 доз или 8 доз. В некоторых вариантах осуществления вводимая доза является одинаковой каждый день схемы. В некоторых вариантах осуществления субъекту назначают схему лечения, включающую одну или более доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, причем профилактически или терапевтически эффективное количество составляет 200 мкг/кг/день, 175 мкг/кг/день, 150 мкг/кг/день, 125 мкг/кг/день, 100 мкг/кг/день, 95 мкг/кг/день, 90 мкг/кг/день, 85 мкг/кг/день, 80 мкг/кг/день, 75 мкг/кг/день, 70 мкг/кг/день, 65 мкг/кг/день, 60 мкг/кг/день, 55 мкг/кг/день, 50 мкг/кг/день, 45 мкг/кг/день, 40 мкг/кг/день, 35 мкг/кг/день, 30 мкг/кг/день, 26 мкг/кг/день, 25 мкг/кг/день, 20 мкг/кг/день, 15 мкг/кг/день, 13 мкг/кг/день, 10 мкг/кг/день, 6,5 мкг/кг/день, 5 мкг/кг/день, 3,2 мкг/кг/день, 3 мкг/кг/день, 2,5 мкг/кг/день, 2 мкг/кг/день, 1,6 мкг/кг/день, 1,5 мкг/кг/день, 1 мкг/кг/день, 0,5 мкг/кг/день, 0,25 мкг/кг/день, 0,1 мкг/кг/день или 0,05 мкг/кг/день; и/или причем профилактически или терапевтически эффективное количество составляет 1200 мкг/м2/день, 1150 мкг/м2/день, 1100 мкг/м2/день, 1050 мкг/м2/день, 1000 мкг/м2/день, 950 мкг/м2/день, 900 мкг/м2/день, 850 мкг/м2/день, 800 мкг/м2/день, 750 мкг/м2/день, 700 мкг/м2/день, 650 мкг/м2/день, 600 мкг/м2/день, 550 мкг/м2/день, 500 мкг/м2/день,450 мкг/м2/день, 400 мкг/м2/день, 350 мкг/м2/день, 300 мкг/м2/день, 250 мкг/м2/день, 200 мкг/м2/день,150 мкг/м2/день, 100 мкг/м2/день, 50 мкг/м2/день, 40 мкг/м2/день, 30 мкг/м2/день, 20 мкг/м2/день,15 мкг/м2/день, 10 мкг/м2/день или 5 мкг/м2/день. В другом варианте осуществления внутривенную дозу, составляющую 1200 мкг/м2 или меньше, 1150 мкг/м2 или меньше, 1100 мкг/м2 или меньше, 1050 мкг/м2
- 29 045070 или меньше, 1000 мкг/м2 или меньше, 950 мкг/м2 или меньше, 900 мкг/м2 или меньше, 8 50 мкг/м2 или меньше, 800 мкг/м2 или меньше, 750 мкг/м2 или меньше, 700 мкг/м2 или меньше, 650 мкг/м2 или меньше, 600 мкг/м2 или меньше, 550 мкг/м2 или меньше, 50 0 мкг/м2 или меньше, 450 мкг/м2 или меньше, 4 00 мкг/м2 или меньше, 350 мкг/м2 или меньше, 300 мкг/м2 или меньше, 250 мкг/м2 или меньше, 200 мкг/м2 или меньше, 150 мкг/м2 или меньше, 100 мкг/м2 или меньше, 50 мкг/м2 или меньше, 40 мкг/м2 или меньше, 30 мкг/м2 или меньше, 20 мкг/м2 или меньше, 15 мкг/м2 или меньше, 10 мкг/м2 или меньше или 5 мкг/м2 или меньше одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, вводят в течение приблизительно 24 ч, приблизительно 22 ч, приблизительно 20 ч, приблизительно 18 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 14 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 10 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 1,5 ч, приблизительно 1 ч, приблизительно 50 мин, приблизительно 40 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 20 мин, приблизительно 10 мин, приблизительно 5 мин, приблизительно 2 мин, приблизительно 1 мину, приблизительно 30 с или приблизительно 10 с для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Т-клеточной злокачественности. Суммарная доза за время реализации схемы предпочтительно составляет всего менее 9000 мкг/м2, 8000 мкг/м2, 7000 мкг/м2, 6000 мкг/м2 и может составлять менее 5000 мкг/м2, 4000 мкг/м2, 3000 мкг/м2, 2000 мкг/м2 или 1000 мкг/м2. В конкретных вариантах осуществления суммарная доза, назначаемая в схеме, составляет 100 мкг/м2-200 мкг/м2, 100 мкг/м2-500 мкг/м2, 100 мкг/м2-1000 мкг/м2 или 500 мкг/м2-1000 мкг/м2.
В предпочтительных вариантах осуществления дозу увеличивают на протяжении первых четырех, первой половины и первых 2/3 доз (например, в течение первых 2, 3, 4, 5 или 6 дней схемы введения в течение 10, 12, 14, 16, 18 или 20 дней одной дозы в день) схемы лечения до достижения суточного профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов. В некоторых вариантах осуществления субъекту назначают схему лечения, включающую одну или более доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, причем профилактически или терапевтически эффективное количество увеличивают, например, на 0,01 мкг/кг, 0,02 мкг/кг, 0,04 мкг/кг, 0,05 мкг/кг, 0,06 мкг/кг, 0,08 мкг/кг, 0,1 мкг/кг, 0,2 мкг/кг, 0,25 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 0,75 мкг/кг, 1 мкг/кг, 1,5 мкг/кг, 2 мкг/кг, 4 мкг/кг, 5 мкг/кг, 10 мкг/кг, 15 мкг/кг, 20 мкг/кг, 25 мкг/кг, 30 мкг/кг, 35 мкг/кг, 40 мкг/кг, 45 мкг/кг, 50 мкг/кг, 55 мкг/кг, 60 мкг/кг, 65 мкг/кг, 70 мкг/кг, 75 мкг/кг, 80 мкг/кг, 85 мкг/кг, 90 мкг/кг, 95 мкг/кг, 100 мкг/кг или 125 мкг/кг каждый день; или увеличивают, например, на 1 мкг/м2, 5 мкг/м2, 10 мкг/м2, 15 мкг/м2, 20 мкг/м2, 30 мкг/м2, 40 мкг/м2, 50 мкг/м2, 60 мкг/м2, 70 мкг/м2, 80 мкг/м2, 90 мкг/м2, 100 мкг/м2, 150 мкг/м2, 200 мкг/м2, 250 мкг/м2, 300 мкг/м2, 350 мкг/м2, 400 мкг/м2, 450 мкг/м2, 500 мкг/м2, 550 мкг/м2, 600 мкг/м2 или 650 мкг/м2, каждый день в ходе лечения. В некоторых вариантах осуществления субъекту назначают схему лечения, включающую одну или более доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, причем профилактически или терапевтически эффективное количество увеличивают в 1,25 раз, в 1,5 раза, в 2 раза, в 2,25 раз, в 2,5 раза или в 5 раз до достижения суточного профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов.
В конкретном варианте осуществления субъекту внутримышечно вводят одну или более доз, составляющих 200 мкг/кг или меньше, предпочтительно 175 мкг/кг или меньше, 150 мкг/кг или меньше, 125 мкг/кг или меньше, 100 мкг/кг или меньше, 95 мкг/кг или меньше, 90 мкг/кг или меньше, 85 мкг/кг или меньше, 80 мкг/кг или меньше, 75 мкг/кг или меньше, 70 мкг/кг или меньше, 65 мкг/кг или меньше, 60 мкг/кг или меньше, 55 мкг/кг или меньше, 50 мкг/кг или меньше, 45 мкг/кг или меньше, 40 мкг/кг или меньше, 35 мкг/кг или меньше, 30 мкг/кг или меньше, 25 мкг/кг или меньше, 20 мкг/кг или меньше, 15 мкг/кг или меньше, 10 мкг/кг или меньше, 5 мкг/кг или меньше, 2,5 мкг/кг или меньше, 2 мкг/кг или меньше, 1,5 мкг/кг или меньше, 1 мкг/кг или меньше, 0,5 мкг/кг или меньше или 0,5 мкг/кг или меньше одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Тклеточной злокачественности.
В другом варианте осуществления субъекту подкожно вводят одну или более доз, составляющих 200 мкг/кг или меньше, предпочтительно 175 мкг/кг или меньше, 150 мкг/кг или меньше, 125 мкг/кг или меньше, 100 мкг/кг или меньше, 95 мкг/кг или меньше, 90 мкг/кг или меньше, 85 мкг/кг или меньше, 80 мкг/кг или меньше, 75 мкг/кг или меньше, 70 мкг/кг или меньше, 65 мкг/кг или меньше, 60 мкг/кг или меньше, 55 мкг/кг или меньше, 50 мкг/кг или меньше, 45 мкг/кг или меньше, 40 мкг/кг или меньше, 35 мкг/кг или меньше, 30 мкг/кг или меньше, 25 мкг/кг или меньше, 20 мкг/кг или меньше, 15 мкг/кг или меньше, 10 мкг/кг или меньше, 5 мкг/кг или меньше, 2,5 мкг/кг или меньше, 2 мкг/кг или меньше, 1,5 мкг/кг или меньше, 1 мкг/кг или меньше, 0,5 мкг/кг или меньше или 0,5 мкг/кг или меньше одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения.
В другом варианте осуществления субъекту внутривенно вводят одну или более доз, составляющих 100 мкг/кг или меньше, предпочтительно 95 мкг/кг или меньше, 90 мкг/кг или меньше, 85 мкг/кг или
- 30 045070 меньше, 80 мкг/кг или меньше, 75 мкг/кг или меньше, 70 мкг/кг или меньше, 65 мкг/кг или меньше, 60 мкг/кг или меньше, 55 мкг/кг или меньше, 50 мкг/кг или меньше, 45 мкг/кг или меньше, 40 мкг/кг или меньше, 35 мкг/кг или меньше, 30 мкг/кг или меньше, 25 мкг/кг или меньше, 20 мкг/кг или меньше, 15 мкг/кг или меньше, 10 мкг/кг или меньше, 5 мкг/кг или меньше, 2,5 мкг/кг или меньше, 2 мкг/кг или меньше, 1,5 мкг/кг или меньше, 1 мкг/кг или меньше, 0,5 мкг/кг или меньше или 0,5 мкг/кг или меньше одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Тклеточной злокачественности. В другом варианте осуществления внутривенную дозу, составляющую 100 мкг/кг или меньше, 95 мкг/кг или меньше, 90 мкг/кг или меньше, 85 мкг/кг или меньше, 80 мкг/кг или меньше, 75 мкг/кг или меньше, 70 мкг/кг или меньше, 65 мкг/кг или меньше, 60 мкг/кг или меньше, 55 мкг/кг или меньше, 50 мкг/кг или меньше, 45 мкг/кг или меньше, 40 мкг/кг или меньше, 35 мкг/кг или меньше, 30 мкг/кг или меньше, 25 мкг/кг или меньше, 20 мкг/кг или меньше, 15 мкг/кг или меньше, 10 мкг/кг или меньше, 5 мкг/кг или меньше, 2,5 мкг/кг или меньше, 2 мкг/кг или меньше, 1,5 мкг/кг или меньше, 1 мкг/кг или меньше, 0,5 мкг/кг или меньше или 0,5 мкг/кг или меньше одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, вводят в течение приблизительно 6 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 1,5 ч, приблизительно 1 ч, приблизительно 50 мин, приблизительно 40 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 20 мин, приблизительно 10 мин, приблизительно 5 мин, приблизительно 2 мин, приблизительно 1 мин, приблизительно 30 се или приблизительно 10 с для предупреждения, лечения или уменьшения интенсивности одного или более симптомов аутоиммунного нарушения или Т-клеточной злокачественности.
В конкретных вариантах осуществления, в которых увеличивающиеся дозы вводят в течение первых дней схемы введения доз, доза в день 1 этой схемы составляет 5-100 мкг/м2/день и увеличивается до изложенной непосредственно выше суточной дозы к дню 3, 4, 5, 6 или 7. Например, в день 1 субъекту вводят дозу, составляющую приблизительно 51 мкг/м2/день, в день 2 - приблизительно 103 мкг/м2/день, в день 3 - приблизительно 207 мкг/м2/день, в день 4 - приблизительно 413 мкг/м2/день и в последующие дни этой схемы (например, дни 5-14) 826 мкг/м2/день.
В других вариантах осуществления первоначальная доза составляет 1/4, до 1/2, до равной суточной дозе в конце схемы, но вводится частями с интервалами в 6, 8, 10 или 12 ч. Например, составляющую 13 мкг/м2/день дозу вводят в четырех дозах, равных 3-4 мкг/кг, с интервалами в 6 ч для уменьшения уровня выброса цитокинов, причиной которого является введение антитела.
В конкретных вариантах осуществления, для уменьшения вероятности выброса цитокинов и других неблагоприятных эффектов, первые 1, 2, 3 или 4 дозы или все дозы в схеме вводят более медленно с помощью внутривенного введения. Например, доза, составляющая 51 мкг/м2/день, может вводиться в течение приблизительно 5 мин, приблизительно 15 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 45 мин, приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 10 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 14 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 18 ч, приблизительно 20 ч и приблизительно 22 ч. В некоторых вариантах осуществления дозу вводят с помощью медленной инфузии в течение периода времени, составляющего, например, 20-24 ч. В конкретных вариантах осуществления дозу нагнетают в насос, предпочтительно увеличивая концентрацию антитела, вводимого в ходе инфузии.
В других вариантах осуществления может вводиться заданная часть схемы в увеличивающихся дозах. Например, в случае схемы введения 51 мкг/м2/день-826 мкг/м2/день, описанной выше, часть может составлять 1/10, 1/4, 1/3, 1/2, 2/3 или 3/4 от суточных доз. Соответственно, когда часть будет равняться 1/10, суточные дозы будут составлять 5,1 мкг/м2 в день 1, 10,3 мкг/м2 в день 2, 20,7 мкг/м2 в день 3, 41,3 мкг/м2 в день 4 и 82,6 мкг/м2 в дни 5-14. Когда часть будет равняться 1/4, дозы будут составлять 12,75 мкг/м2 в день 1, 25,5 мкг/м2 в день 2, 51 мкг/м2 в день 3, 103 мкг/м2 в день 4 и 207 мкг/м2 в дни 5-14. Когда часть будет равняться 1/3, дозы будут составлять 17 мкг/м2 в день 1, 34,3 мкг/м2 в день 2, 69 мкг/м2 в день 3, 137,6 мкг/м2 в день 4 и 275,3 мкг/м2 в дни 5-14. Когда часть будет равняться 1/2, дозы будут составлять 25,5 мкг/м2 в день 1, 51 мкг/м2 в день 2, 103 мкг/м2 в день 3, 207 мкг/м2 в день 4 и 413 мкг/м2 в дни 5-14. Когда часть будет равняться 2/3, дозы будут составлять 34 мкг/м2 в день 1, 69 мкг/м2 в день 2, 137,6 мкг/м2 в день 3, 275,3 мкг/м2 в день 4 и 550,1 мкг/м2 в дни 5-14. Когда часть будет равняться 3/4, дозы будут составлять 38,3 мкг/м2 в день 1, 77,3 мкг/м2 в день 2, 155,3 мкг/м2 в день 3, 309,8 мкг/м2 в день 4 и 620 мкг/м2 в дни 5-14.
В конкретных вариантах осуществления антитело против CD3 или антигенсвязывающие фрагменты не вводят с использованием ежедневных доз на протяжении ряда дней, а точнее вводят с помощью инфузии непрерывно в течение 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч, 12 ч, 15 ч, 18 ч, 20 ч, 24 ч, 30 ч или 36 ч. Инфузия может быть неизменной или может начинаться с более низкой дозы, вводимой в течение, например, первых 1, 2, 3, 5, 6 и 8 ч инфузии, и впоследствии увеличиваться до более высокой дозы. В ходе инфузии пациент получает дозу, равную количеству, вводимому в приводимых в качестве примера схемах, изложенных выше, например, дозу, составляющую приблизительно 150 мкг/м2, 200 мкг/м2, 250 мкг/м2, 500 мкг/м2, 750 мкг/м2, 1000 мкг/м2, 1500 мкг/м2, 2000 мкг/м2, 3000 мкг/м2, 4 000 мкг/м2, 5000 мкг/м2, 6000 мкг/м2, 7000 мкг/м2, 8000 мкг/м2 или 9000 мкг/м2. В частности, скорость и продолжительность инфузии планируют в
- 31 045070 расчете на минимизацию уровня свободного антитела против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов у субъекта после введения. В некоторых вариантах осуществления уровень свободного антитела против
CD3 или антигенсвязывающих фрагментов не должен превышать 200 нг/мл свободного антитела. Кроме того, инфузию планируют в расчете на достижение комбинированного покрытия и модуляции Тклеточных рецепторов, составляющего по крайней мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CD3 или антигенсвязывающие фрагменты вводят для достижения определенного уровня комбинированного покрытия и модуляции Т-клеточных рецепторных комплексов на Т-клетках, определяемого с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, смотрите, например, пример 11 в публикации заявки на патент США № US 2003/0108548, которая тем самым включена в настоящее описание в качестве ссылки в ее полном объеме. В отдельных вариантах осуществления с помощью схемы введения доз достигается комбинированное покрытие и модуляция Т-клеточных рецепторов, составляющее по крайней мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%, с, в отдельных вариантах осуществления, малым количеством или отсутствием выявляемого свободного антитела против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов (например, меньше 200 нг/мл лекарственного средства выявляется в крови пациента).
В предпочтительных вариантах осуществления антитело против CD3 или антигенсвязывающие фрагменты вводят парентерально, например, внутривенно, внутримышечно или подкожно, или, альтернативно, вводят перорально. Антитело против CD3 или антигенсвязывающие фрагменты можно также вводить в виде препарата с замедленным высвобождением.
В отдельном варианте осуществления назначение одной или более доз или схемы введения доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов не вызывает или уменьшает по сравнению с другими иммуносупрессорами один или более из следующих нежелательных или неблагоприятных эффектов: отклонения основных показателей состояния организма (лихорадку, тахикардию, брадикардию, гипертензию, гипотензию), гематологические проявления (анемию, лимфопению, лейкопению, тромбоцитопению), головную боль, озноб, головокружение, тошноту, астению, боль в пояснице, боль в груди (сдавленность в груди), диарею, миалгию, боль, зуд, псориаз, ринит, потоотделение, реакцию в месте инъекции, расширение кровеносных сосудов, повышенный риск инфекции, вызываемой условно патогенными организмами, активацию вируса Эпштейна-Барра, апоптоз Т-клеток и повышенный риск развития некоторых типов рака. В другом отдельном варианте осуществления назначение одной или более доз профилактически или терапевтически эффективного количества одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов не вызывает или уменьшает по сравнению с другими иммуносупрессорами один или более из следующих нежелательных или неблагоприятных эффектов: отклонения основных показателей состояния организма (лихорадку, тахикардию, брадикардию, гипертензию, гипотензию), гематологические проявления (анемию, лимфопению, лейкопению, тромбоцитопению), головную боль, озноб, головокружение, тошноту, астению, боль в пояснице, боль в груди (сдавленность в груди), диарею, миалгию, боль, зуд, псориаз, ринит, потоотделение, реакцию в месте инъекции, расширение кровеносных сосудов, повышенный риск инфекции, вызываемой условно патогенными организмами, активацию вируса Эпштейна-Барра, апоптоз Т-клеток и повышенный риск развития некоторых типов рака.
В соответствии с настоящим изобретением дозу или схему введения доз, включающую профилактически или терапевтически эффективное количество одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов для лечения аутоиммунного нарушения, можно повторять через 1 месяц, 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 12 месяцев, 15 месяцев, 18 месяцев или 24 месяца или дольше после первоначальной или предыдущей дозы или схемы введения доз, включающей профилактически или терапевтически эффективное количество одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов. Повторную дозу или схему введения доз можно назначать, как правило, когда симптомы, связанные с указанным аутоиммунным нарушением, снова возникают после ослабления после первоначальной или предыдущей дозы или схемы введения доз, или когда симптомы, связанные с указанным аутоиммунным нарушением, не ослабляются после первоначальной дозы или схемы введения доз антитела против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов в соответствии со способами по настоящему изобретению. Например, что касается диабета, повторную дозу или схему введения доз, включающую профилактически или терапевтически эффективное количество одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, можно назначать субъекту, когда, например, среднее суточное введение субъекту инсулина через 1 месяц, 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 12 месяцев, 15 месяцев, 18 месяцев или 24 месяца или дольше после первоначального или предыдущего лечения антителом против CD3 или антигенсвязывающими фрагментами не уменьшается на по крайней мере 5%, по крайней мере 10%, по крайней мере 20%, по крайней мере 30%, по крайней мере 40%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 70%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% по сравнению с уровнями до лечения. Альтернативно, что касается диабета, повторную дозу или схему введения доз, включающую профилактически или терапевтически эффективное количество одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, можно назначать субъекту, когда, например, уровни НА 1 или НА 1 С у субъекта через 1 месяц, 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 12
- 32 045070 месяцев, 15 месяцев, 18 месяцев или 24 месяца или дольше после первоначального или предыдущего лечения антителом против CD3 или антигенсвязывающими фрагментами не уменьшаются на по крайней мере 5%, по крайней мере 10%, по крайней мере 20%, по крайней мере 30%, по крайней мере 40%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 70%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% по сравнению с уровнями до лечения. В другом варианте осуществления, что касается диабета, повторную дозу или схему введения доз, включающую профилактически или терапевтически эффективное количество одного или более из антител против CD3 или антигенсвязывающих фрагментов, можно назначать субъекту, когда, например, ответ в виде увеличения С-пептида через 1 месяц, 2 месяца, 4 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 12 месяцев, 15 месяцев, 18 месяцев или 24 месяца или дольше после первоначального или предыдущего лечения антителом против CD3 или антигенсвязывающими фрагментами уменьшается на более чем 5%, более чем 10%, более чем 20%, более чем 30%, более чем 40%, более чем 50%, более чем 60%, более чем 70%, более чем 80% или более чем 90% по сравнению с уровнями до лечения.
Аутоиммунные заболевания являются неинфекционными иммунологическими заболеваниями, вызванными иммунными ответами, направленными против нормальных компонентов клеток, тканей и органов человека. Аутоиммунные заболевания часто являются хроническими заболеваниями, которые мало-помалу разрушают являющиеся мишенями ткани и органы. Часто встречающиеся заболевания, в настоящее время отнесенные к аутоиммунным заболеваниям вследствие наличия несоответствующих аутоиммунных реакций, включают инсулинозависимый диабет типа I, ревматоидный артрит (RA), системную красную волчанку (SLE), рассеянный склероз (MS), воспалительное заболевание кишечника (IBD), злокачественную миастению, глютеновую болезнь, синдром Гужеро-Шегрена, болезнь Грейвса, болезнь Крона, аутоиммунный гепатит, псориаз, псориатическмй артрит, астму, аллергический ринит, эффекты вследствие трансплантации органа или гомологичную болезнь (GVHD) и многочисленные другие заболевания, в которые вовлечена воспалительная иммунная реакция.
Поскольку аутоиммунные заболевания типично являются хроническими, в их случае, как правило, требуется пожизненное лечение и слежение. По этой причине традиционные терапии для аутоиммунного заболевания, главным образом, направлены на борьбу с последствиями воспаления, вызванного заболеванием, и лишь немного аутоиммунных заболеваний можно вылечить или заставить исчезнуть с помощью такого лечения. В случае некоторых аутоиммунных заболеваний введение одного из ограниченного ряда иммуносупрессоров может привести к периодам ремиссии или исчезновения активного заболевания. Иммуносупрессоры, используемые для дополнительной терапии, включают вещества, которые подавляют продукцию цитокинов, уменьшают или подавляют экспрессию аутоантигенов или маскируют антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС). Иммуносупрессоры включают противовоспалительные лекарственные средства (например, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), циклофосфамид, бромокриптин, циклоспорин А, метотрексат, стероиды, такие как глюкокортикоиды, и цитокины или антагонисты рецепторов цитокинов. Пациенты редко могут прекратить прием этих иммуносупрессоров, поскольку аутоиммунное заболевание у них обычно вновь возникает при прекращении приема лекарственного средства. Аутоиммунное заболевание может стать не поддающимся лечению при продолжении приема иммуносупрессоров в течение длительного срока и может даже нуждаться в увеличивающихся дозах иммуносупрессоров.
Терапевтические антитела, направленные против CD3, как полагают, приводят к меньшему числу длительных побочных эффектов, чем многие из иммуносупрессорных химиотерапий, доступных в настоящее время для лечения аутоиммунных заболеваний (WO 2007/117600). Однако было установлено, что прежние терапии на основе антител являются проблематичными, особенно в случае использования многократного введения. Антилимфоцитарные терапии, такие как антилимфоцитарный глобулярный белок (ALG), и моноклональные антитела, направленные против В-клеток, такие как ритуксимаб (Rituxin®) и алемтузумаб (САМРАТН®), уменьшают популяции циркулирующих и тканевых В-клеток у подвергнутых лечению субъектов. Однако эти терапии также приводят к тяжелой форме иммуносупрессии, которая является нежелательной в случае лечения в течение длительного срока хронического аутоиммунного заболевания. Основным осложнением вызывающей тяжелую форму иммуносупрессии терапии является инфекция. Системная иммуносупрессия может также сопровождаться нежелательными токсическими эффектами и снижением уровней гемопоэтических стволовых клеток. Кроме того, у пациентов, получающих терапии на основе антител, часто вырабатываются значительные уровни человеческих антимышиных антител (HAMA), человеческих антихимерных антител (НАСА) и антиидиотипические ответы, которые могут ограничить повторные лечения, когда ремиссия заканчивается.
Как обсуждалось выше, антитела, направленные против антигенов Т-клетки, таких как Т-клеточный рецепторный комплекс (TCR), были предложены в качестве возможных терапевтических средств для иммуносупрессии аутоиммунного заболевания. Антитела против CD3, как полагают, вызывают такую иммуносупрессию в результате уменьшения патогенных Т-клеток и индукции регуляторных Т-клеток (WO 2007/117600; St. Clair E.W. (2009) Novel Targeted Therapies for Autoimmunity, Curr. Opin. Immunol. 21(6): 648-657; Ludvigsson, J. (2009) The Role of Immunomodulation Therapy in Autoimmune Diabetes, J. Diabetes Sci. Technol. 3(2) : 320-330). По этой причине антитела против Т-клеток, в том числе против
- 33 045070
CD3, использовались для оказания влияния на иммунологический статус у субъекта посредством супрессии, усиления или перенаправления Т-клеточных реакций на антиген. В частности, Теплизумаб, также известный как hOKT3y1 (Ala-Ala) (содержащий аланин в положениях 234 и 235) (MacroGenics, Inc.), является антителом против CD3, которое было сконструировано для изменения функции Т-лимфоцитов, которые опосредуют разрушение инсулин-продуцирующих бета-клеток панкреатических островков. Теплизумаб связывается с эпитопом ε-цепи CD3, представленной на зрелых Т-клетках, и поступает таким образом.
Благодаря частично своей перекрестной реактивности с нечеловеческим CD3 (которая делает возможным более точное и гибкое дозирование), антитела против CD3 по настоящему изобретению, как считают, особенно применимы для лечения аутоиммунного заболевания, несмотря на очевидные неудачи известного уровня техники.
Такие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты могут использоваться отдельно или вместе с другими фармакологическими средствами. В частности, в настоящем изобретении предусматриваются терапии, включающие введение таких антител или антигенсвязывающих фрагментов вместе с антителами против В-клеток (или их антигенсвязывающими фрагментами). Антитела против В-клеток известны в данной области техники (смотрите WO 2007/117600; WO 2005/000901; WO 2004/035607; патенты США №№ 5500362 и 5736137, публикации заявок на патенты США №№ 2003/0219433, 2005/0271658, 2005/0271658, 2005/0281817, 2006/024295, 2006/024300 и 2006/034835; Clark, E.A. et al. (1985) Role Of The Bp35 Cell Surface Polypeptide In Human B-Cell Activation, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82(6): 17661770; Press, O.W. et al. (1987) Monoclonal Antibody 1F5 (Anti-CD20) Serotherapy of Human В Cell Lymphomas, Blood 69: 584-591). Такое совместное введение можно выполнять, используя совместное введение отдельных антител или их антигенсвязывающих фрагментов, или посредством образования биспецифических антител, или более предпочтительно, посредством образования диател DART™, описанных выше, обладающих способностью к связыванию как с CD3, так и с В-клеточным антигеном.
Предпочтительно используемое антитело против В-клеток или антигенсвязывающий фрагмент будет направлено против маркера поверхности В-клеток, такого как маркер, выбираемый из CD19, CD20, CD22, CD23, CD32B, CD40, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), CD79a, CD79b, CD38, CD27, связанного с функцией лимфоцитов антигена (LFA), такого как LFA-I или LFA-3, CFA-I, или другой вспомогательной молекулы, вовлеченной в ассоциацию Т-клеток, В-клеток, которая приводит к активации Т-клеток и Вклеток в ходе адаптивного иммунного ответа. В дальнейшем предпочтительном варианте осуществления антителом против В-клеток может быть истощающее В-клетки антитело, такое как антитело, направленное против маркера, выбираемого из CD19, CD20, CD22, CD23, CD32B, CD40, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), связанного с функцией лимфоцитов антигена (LFA), такого как LFA-I или LFA-3, CFA-I, или другой вспомогательной молекулы, вовлеченной в ассоциацию Т-клеток, В-клеток.
Альтернативно, такая комбинированная терапия может включать введение антитела против CD3 или его антигенсвязывающего фрагмента в комбинации с антителом (или его антигенсвязывающим фрагментом), которое распознает антиген, присутствующий на антигенпрезентирующей клетке (например, В7-Н3). Тем не менее, в дополнительном предпочтительном варианте осуществления комбинированная терапия включает введение антитела против CD3 (или его антигенсвязывающего фрагмента) в комбинации с антителом (или его антигенсвязывающим фрагментом), которое распознает полипептид, участвующий в активации В-клеток (или напрямую, или опосредованно), или иммуномодулятор, такой как член семейства цитокинов TNF или интерферон (например, α, β или γ-интерферон). Как это будет понятно квалифицированным в данной области техники специалистам, такие интерфероны участвуют в регуляции белков, которые работают сообща при процессировании и презентации антигенов. Эти цитокины стимулируют клетки с увеличением экспрессии в них тяжелых цепей класса I HLA. В одном предпочтительном варианте осуществления комбинированная терапия включает введение субъекту, имеющему активное аутоиммунное заболевание, антитела против Т-клеточного антигена в комбинации с антителом против β-интерферона. В дополнительном предпочтительном варианте осуществления комбинированная терапия включает введение субъекту антитела, направленного против Т-клеточного антигена, в комбинации с антителом, выбираемым из антител против β-интерферона AVONEX®, BETASERON® и REBIF®. В дополнительном предпочтительном варианте осуществления комбинированная терапия включает введение субъекту антитела, направленного против Т-клеточного антигена, в комбинации с антителом, направленным против β-интерферона, для лечения субъекта, страдающего рассеянным склерозом.
В дополнительном варианте осуществления антитело против CD3 может быть немитогенным антителом или антителом с уменьшенной митогенностью, которое ингибирует или предотвращает активацию Т-клетки, когда Т-клетка приходит в контакт со специфическим антигеном на антигенпрезентирующей клетке, в частности, антигенпрезентирующей В-клетке. Используемый здесь термин немитогенное по отношению к Т-клетке антитело означает антитело, которое сконструировано посредством изменения Fc-рецептора антитела, так что оно не запускает первоначальные события активации и последующий выброс цитокинов, которые отмечаются при активации Т-клетки. Антителом с уменьшенной митоген
- 34 045070 ностью по отношению к Т-клетке, является антитело, специфическое в отношении Т-клеточного антигена, которое ослабляет первоначальные события активации и последующий выброс цитокинов, которые возникают при активации Т-клетки. Немитогенное антитело или антитело с уменьшенной митогенностью может применяться для предотвращения первоначальных побочных эффектов первой дозы, отмечаемых при введении пациенту антилимфоцитарного антитела. Немитогенным антителом или антителом с уменьшенной митогенностью может быть сконструированное антитело, содержащее модифицированный Fc-фрагмент, который предотвращает или ингибирует связывание клетками-эффекторами.
С. Способы введения
В одном аспекте варианты осуществления настоящего изобретения обеспечивают являющихся людьми субъектов, подвергнутых лечению для достижения и сохранения клинической ремиссии в течение более длительных периодов времени, чем ремиссии, достигаемые у пациентов, подвергнутых лечению с использованием традиционной терапии. Например, если с помощью традиционной терапии достигается ремиссия симптомов аутоиммунного заболевания в течение трех месяцев, композиции по настоящему изобретению могут обеспечить полную ремиссию симптомов вплоть до шести месяцев, вплоть до 12 месяцев и в некоторых случаях вплоть до одного-двух лет или дольше. Предусматривается, что в случае некоторых аутоиммунных заболеваний возможно достижение полной ремиссии, которая снова не прекращается, особенно если терапию начинают вскоре после диагностирования аутоиммунного заболевания.
Клиническая ремиссия, достигаемая с помощью комбинированной терапии, может быть полной ремиссией, или она может быть частичной ремиссией, при которой значительные ослабления симптомов заболевания сохраняются в течение продленного периода. Например, у субъекта, получающего терапию по настоящему изобретению, могут отмечаться уменьшенные аутоиммунные ответы, что определяется по уменьшению уровней обнаруживаемых аутоантител в жидкостях и тканях организма, например, в спинномозговой жидкости (CSF), сыворотке, моче или в тканях организма. У субъекта, получающего комбинированную терапию по настоящему изобретению, могут также отмечаться уменьшенные Тклеточные реакции на аутоантигены, что определяется с помощью in vitro анализов пролиферации или продукции цитокинов, используя мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) или очищенные Т-клетки, по сравнению с субъектами, подвергнутыми лечению с использованием традиционной терапии.
Композиции по настоящему изобретению могут вводиться любым подходящим способом, в том числе с помощью парентерального, местного, подкожного, внутрибрюшинного, внутрилегочного, интраназального введения и/или введения внутрь пораженных тканей. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Кроме того, антитело можно соответственно ввести с помощью инфузии в прерывистом режиме, например, с использованием увеличивающихся доз антитела. Предпочтительно введение доз осуществляют внутривенно или подкожно, а более предпочтительно с помощью внутривенной инфузии(й). Каждое подвергание воздействию можно обеспечить, используя один и тот же или различные способы введения. В одном варианте осуществления каждое подвергание воздействию осуществляют с помощью внутривенного введения. В другом варианте осуществления каждое подвергание воздействию осуществляют с помощью подкожного введения. Тем не менее, в другом варианте осуществления подвергание воздействию осуществляют с помощью как внутривенного, так и подкожного введения.
В одном варианте осуществления терапевтические антитела вводят в виде медленной внутривенной инфузии, которая может начинаться с почасовой скоростью для доставки молекул по настоящему изобретению за приблизительно 15 мин - 4 ч. Однако, если субъект демонстрирует инфузионную реакцию, скорость инфузии предпочтительно уменьшают, например, до половины скорости потока. Подвергаемые лечению субъекты могут получать профилактическое лечение ацетаминофеном/парацетамолом (например, приблизительно 1 г) и дифенгидрамина HCl (например, приблизительно 50 мг или эквивалентную дозу схожего средства), принимая их внутрь за приблизительно 30-60 мин до начала инфузии.
Лечение, обеспечиваемое комбинированными композициями по настоящему изобретению (включающими диатела DART™), может назначаться субъекту, используя первоначальную дозу первого антитела, которая меньше количества такого антитела, которое необходимо для достижения клинической эффективности терапии для аутоиммунного заболевания при введении в виде терапии, предусматривающей одно антитело. Доза терапевтического антитела против Т-клеток, которая меньше дозы, необходимой для достижения истощения Т-клеток, способных распознавать аутоантигены и реагировать на них, при терапии, предусматривающей одно антитело, может быть достаточной для обеспечения желаемой клинической эффективности. Способы определения дозы терапевтического антитела, необходимой для достижения клинической эффективности, известны квалифицированным в данной области техники специалистам. Например, клиническую эффективность у субъекта можно определить как период времени до прогрессирования заболевания, уменьшение клинических симптомов, уменьшение уровней лабораторных маркеров, уменьшение необходимости в повторном лечении или с помощью любого другого клинического средства, признанного в качестве пригодного индикатора улучшения состояния аутоиммунного заболевания.
- 35 045070
Второе антитело комбинированной терапии может также вводиться субъекту, нуждающемуся в лечении, в виде первоначальной дозы, которая меньше дозы, эффективной для достижения клинической эффективности при приведении только этого антитела. Например, дозы истощающего антитела против В-клеток, с помощью которых достигается составляющее менее чем 100% истощение В-клеток, составляющее менее чем 50% истощение В-клеток, составляющее менее чем 30% истощение В-клеток или даже не достигается истощение В-клеток, могут вводиться вместе с первым антителом против Т-клеток для достижения клинической эффективности, предусматривающей подавление иммунного ответа против аутоантигена, которая равна клинической эффективности, достигаемой при введении количества истощающего В-клетки антитела, которое обеспечивает 100% истощение В-клеток у субъекта при введении только этого антитела, или превосходит ее.
В некоторых случаях клинической эффективностью является эффективность, которая не достигается ни при введении только первого антитела, или только второго антитела. В других случаях клиническая эффективность может быть эквивалентна таковой, достигаемой при назначении терапии, предусматривающей одно антитело, причем комбинированная терапия обуславливает меньшую иммуносупрессию иммунной системы подвергаемого лечению субъекта, чем терапия, предусматривающая одно антитело. В одном предпочтительном варианте осуществления синергетическая реакция, обуславливаемая комбинированной терапией, уменьшает или аннулирует ответы против аутоантигена у субъекта при обеспечении более низких уровней иммуносупрессии. Общая иммуносупрессия является значительной проблемой для ранее доступных терапий на основе антител.
D. Фармацевтические препараты
Терапевтические препараты антител, используемые в вариантах осуществления настоящего изобретения, готовят для хранения, поставки и введения посредством смешивания композиции по настоящему изобретению с желаемой степенью чистоты с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами, общепризнанными в фармацевтической области, в форме лиофилизированных препаратов или водных растворов.
Термин фармацевтически приемлемый означает разрешенный регулирующим органом федерального правительства или правительства штата или приведенный в списке в Фармакопеи США или других общепризнанных фармакопеях для применения для животных и конкретнее для людей. Термин носитель относится к разбавителю, адъюванту (например, адъюванту Фрейнда (полному и неполному)), эксципиенту или носителю, с которым вводят терапевтическое средство. Такие фармацевтические носители могут быть стерильными жидкостями, такими как вода или масла, в том числе масла нефтяные, масла животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Вода является предпочтительным носителем, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. В качестве жидких носителей могут также использоваться солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина, особенно в случае инъецируемых растворов. Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, глицерин моностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое снятое молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и т.п. Композиция, если желательно, может также содержать незначительные количества смачивающих агентов или эмульгаторов, или рНбуферных веществ. Эти композиции могут принимать форму растворов, суспензий, эмульсии, таблеток, пилюль, капсул, порошков, препаратов с замедленным высвобождением и т.п.
Композиции по настоящему изобретению включают нерасфасованные композиции лекарственных средств, применимые для производства фармацевтических композиций, (например, композиции с примесью или нестерильные композиции) и фармацевтические композиции (т.е. композиции, которые подходят для введения субъекту или пациенту), которые могут использоваться для приготовления стандартных лекарственных форм. Такие композиции включают профилактически или терапевтически эффективное количество профилактического и/или терапевтического средства, описываемого здесь, или комбинации этих средств и фармацевтически приемлемый носитель. Предпочтительно, когда композиции по настоящему изобретению включают профилактически или терапевтически эффективное количество гуманизированных антител по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Как правило, ингредиенты композиций по настоящему изобретению поставляются или порознь, или смешаны вместе в стандартной лекарственной форме, например, в виде сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата в герметически закрытом контейнере, таком как ампула или саше, указывающем на количество активного агента. Если композиция должна вводиться с помощью инфузии, ее распределение осуществляют с использованием инфузионного флакона, содержащего стерильную воду или солевой раствор фармацевтического качества. Если композиция вводится с помощью инъекции, может предоставляться ампула со стерильной водой для инъекции или солевым раствором, так что ингредиенты могут быть смешаны до введения. Фармацевтические композиции, подходящие для инъекции, включают стерильные водные растворы, в которых активные агенты являются водорастворимыми, или дисперсии или стерильные порошки для приготовления стерильных инъецируемых растворов для немедленного введения. Композиции для применения в комбинированной терапии можно приготовить посредством включения активного антагониста или антитела в требуемом количестве вместе с подходящими
- 36 045070 носителями, например, водой, этанолом, полиолом (например, глицерином, пропиленгликолем и жидким полиэтиленгликолем) и их подходящими смесями. В композицию могут быть включены агенты для придания изотоничности, такие как сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит или хлорид натрия.
Композиции по настоящему изобретению могут быть приготовлены в виде нейтральных или солевых форм. Фармацевтически приемлемые соли включают, но без ограничения, те, которые образованы анионами, такими как те, которые получаются из соляной, фосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислот и т.д., и те, которые образованы катионами, такими как те, которые получаются из натрия, калия, аммония, кальция, гидроксидов трехвалентного железа, изопропиламина, триэтиламина, 2этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т.д.
Е. Наборы
Настоящим изобретением обеспечивается фармацевтический комплект или набор, включающий один или более контейнеров, наполненных гуманизированными антителами по настоящему изобретению. Кроме того, в фармацевтический комплект или набор могут быть также включены одно или более других профилактических или терапевтических средств, применимых для лечения заболевания. Настоящим изобретением также обеспечивается фармацевтический комплект или набор, включающий один или более контейнеров, наполненных одним или более ингредиентов фармацевтических композиций по настоящему изобретению. Такой контейнер(ы) может необязательно сопровождать сообщение в форме, предписанной государственным органом, регулирующим производство, применение или продажу фармацевтических препаратов или биологических продуктов, в котором отражено разрешение этим органом производства, применения или продажи для введения человеку.
Настоящим изобретением обеспечиваются наборы, которые могут использоваться в вышеприведенных способах. В одном варианте осуществления набор включает одно или более гуманизированных антител по настоящему изобретению. В другом варианте осуществления набор, кроме того, включает одно или более других профилактических или терапевтических средств, пригодных для лечения злокачественного новообразования, в одном или более контейнерах. В другом варианте осуществления набор, кроме того, включает одно или более цитотоксических антител, которые связываются с одним или более раковых антигенов, связанных с раком. В некоторых вариантах осуществления другим профилактическим или терапевтическим средством является химиотерапевтическое средство. В других вариантах осуществления профилактическим или терапевтическим средством является биологическое или гормональное терапевтическое средство.
В одном варианте осуществления настоящим изобретением обеспечивается готовое изделие, содержаеие антитела, которые используют для комбинированной терапии для лечения аутоиммунного заболевания. Готовое изделие включает контейнер, включающий первое антитело, которое связывается с антигеном, присутствующим на Т-клетке, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель внутри контейнера. Готовое изделие, кроме того, включает второй контейнер, включающий второе антитело, направленное против маркера В-клеточной поверхности, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель и инструкции в отношении введения композиции субъекту, нуждающемуся в лечении аутоиммунного заболевания. Если первое и второе антитела, как установлено, являются комплементарными и не оказывают неблагоприятный эффект друг на друга, первое и второе антитела могут быть предоставлены в одном контейнере, содержащем первое и второе антитела в соответствующих для введения концентрациях, вместе с листовкой-вкладышем и инструкциями в отношении введения.
Контейнеры готового изделия могут быть изготовлены из любого подходящего материала, который не будет вступать в реакцию с препаратом или иначе оказывать воздействие на препарат. Готовое изделие может, кроме того, включать второй или третий контейнер, включающий буфер в качестве фармацевтически приемлемого разбавителя, такой как бактериостатическая вода для инъекции, забуференный фосфатом солевой раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Готовое изделие может также включать другой материал, который может быть желателен с коммерческой точки зрения и точки зрения потребителя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
VII. Способы диагностирования с использованием антител против CD3 по настоящему изобретению
Антитела против CD3, созданные с помощью описываемых здесь способов, могут также использоваться для определения присутствия или отсутствия раковых клеток или их уровня посредством детектирования антигенов, которые являются циркулирующими в крови после их разъединения от клеточной поверхности (например, растворимого CD3). Такой циркулирующий антиген может быть интактным антигеном CD3 или его фрагментом, который сохраняет способность быть обнаруженным в соответствии со способами, изложенными здесь. Такое детектирование может быть осуществлено, например, с помощью анализа и использованием FACS, используя стандартные способы, обычно используемые в данной области техники.
В предпочтительном варианте осуществления способов диагностирования по этому изобретению антитело несет обнаруживаемую метку. Примеры меток, которые могут использоваться, включают радиоактивный агент (например, скандий-47, технеций-99m, индий-111, йод-131, рений-186, рений-188,
- 37 045070 самарий-153, гольмий-166, лютеций-177, медь-64, скандий-47, иттрий-900), фермент или флуорофор, такой как фикоэритрин или флуоресцеин изотиоцианат (также известный как фторизотиоцианат или
FITC).
Одним способом применения антител для диагностирования является in vivo визуализация опухоли посредством связывания антитела с радиоактивным или рентгеноконтрастным веществом, введение антитела индивидууму и использование рентгеновского аппарата или другого аппарата для получения изображения для визуализации местонахождения меченого антитела на поверхности раковых клеток, экспрессирующих антиген. Антитело вводят в концентрации, которая поддерживает связывание в физиологических условиях.
In vitro методы детектирования CD3 являются обычными в данной области техники и включают иммуноферментные твердофазные анализы (ELISA), иммунопреципитации, иммунофлуоресценцию, иммуноферментный анализ (EIA), радиоиммуноанализ (RIA) и анализ с использованием Вестернблоттинга.
Настоящим изобретением также обеспечиваются способы оказания помощи в диагностировании злокачественного новообразования, характеризующегося раковыми клетками, которые экспрессируют CD3, у индивидуума, используя антитело, которое связывается с CD3, и любые другие способы, которые могут использоваться для определения уровня экспрессии CD3. Как здесь используется, способы оказания помощи в диагностировании означают, что эти способы содействуют клиническому определению по классификации, или природы, рака и могут быть или могут не быть определяющими, что касается точного диагноза. Соответственно, способ оказания помощи в диагностировании рака может включать стадию детектирования уровня CD3 в биологическом образце от индивидуума и/или определение уровня экспрессии CD3 в образце. Антитела, распознающие антиген или его часть, могут также использоваться для создания диагностических иммуноанализов для детектирования антигена, разъединенного от живых или умирающих раковых клеток или секретированного ими, в жидкостях организма, включающих, но без ограничения, кровь, слюну, мочу, альвеолярную жидкость или асцитическую жидкость. Антитела против CD3, созданные с помощью описываемых здесь способов, могут использоваться для определения того, может ли индивидуум, у которого диагностирован рак, считаться кандидатом на иммунотерапию с использованием антител, направленных против CD3. В одном варианте осуществления биопсийный образец можно проверить в отношении экспрессии CD3, используя антитела, направленные против CD3. Индивидуумы с раковыми клетками, которые экспрессируют CD3, являются подходящими кандидатами на иммунотерапию с использованием антител, направленных против CD3. Окрашивание антителом против CD3 может также использоваться для проведения различения раковых тканей от нормальных тканей.
Способы применения антител против CD3 с целью диагностирования применимы как до, так и после любой формы противоракового лечения, например, химиотерапии или лучевой терапии, для определения, какие опухоли с наибольшей вероятностью будут отвечать на конкретное лечение, прогноза для индивидуума со злокачественным новообразованием, подтипа опухоли или источника метастатического заболевания, и прогрессирования заболевания или ответной реакции на лечение.
Композиции по этому изобретению, в частности, подходят для диагностирования болезненных состояний, отличных от рака, используя способы, описанные в общем выше, для применения с другими нездоровыми (нераковыми) клетки. Болезненные состояния, подходящие для применения в способах по этому изобретению, включают, но без ограничения, заболевания или нарушения, связанные с воспалительными или аутоиммунными реакциями у индивидуумов. Способы, описанные выше, могут использоваться для модулирования воспалительных или аутоиммунных реакций у индивидуумов. Заболевания и состояния, являющиеся следствием воспалительных и аутоиммунных нарушений, которые могут быть подвергнуты диагностированию и/или лечению, используя композиции и способы по настоящему изобретению, включают, в качестве иллюстрации, а не ограничения, рассеянный склероз, менингит, энцефалит, удар, другие повреждения головного мозга, воспалительное заболевание кишечника, в том числе неспецифический язвенный колит и болезнь Крона, злокачественную миастению, обыкновенную волчанку, ревматоидный артрит, астму, острый ювенильный диабет, СПИД-деменцию, атеросклероз, нефрит, ретинит, атопический дерматит, псориаз, ишемию миокарда и острое, лимфоцит-опосредованное повреждение легких.
Тем не менее, другие показания к диагностическому и/или терапевтическому применению антител и других терапевтических средств по настоящему изобретению включают введение индивидуумам, подверженным риску отторжения органа или трансплантата. За последние годы было достигнуто значительное увеличение эффективности хирургических методов трансплантации тканей и органов, таких как кожа, почка, печень, сердце, легкое, поджелудочная железа и костный мозг. Наверно, основной нерешенной проблемой является отсутствие удовлетворительных агентов для индукции иммунотолерантности у реципиента к трансплантированному аллотрансплантату или органу. Когда аллогенные клетки или органы трансплантируют хозяину (т.е. донор и реципиент являются различными индивидуумами одного и того же вида), иммунная система хозяина будет, вероятно, устанавливать иммунный ответ против чужеродных антигенов в трансплантате (реакцию хозяин против трансплантата), приводящий к разрушению трансплантированной ткани.
- 38 045070
Моноклональные антитела против CD3, созданные с помощью описываемых здесь способов, могут использоваться для определения присутствия или отсутствия человеческих раковых стволовых клеток в ряде тканей. Была выдвинута гипотеза, что раковые стволовые клетки (CSC) играют роль в росте опухоли и ее метастазировании (Ghotra, V.P. et al. (2009) The Cancer Stem Cell Microenvironment And Anti-Cancer Therapy, Int. J. Radiat.
Biol. 85(11): 955-962; Gupta, P.B. et al. (2009) Cancer Stem Cells: Mirage Or Reality? Nat. Med. 15(9): 1010-1012; Lawson, J.C. et al. (2009) Cancer Stem Cells In Breast Cancer And Metastasis, Breast Cancer Res. Treat. 118(2): 241-254;
Hermann, P.C. et al. (2009) Pancreatic Cancer Stem CellsInsights And Perspectives, Expert Opin. Biol. Ther. 9(10) : 1271-1278; Schatton, T. et al. (2009) Identification And Targeting Of Cancer Stem Cells, Bioessays 31(10): 1038-1049; Mittal, S. et al. (2009) Cancer Stem Cells: The Other Face Of Janus, Amer. J. Med. Sci. 338(2): 107-112; Alison, M.R. et al. (2009) Stem Cells And Lung Cancer: Future Therapeutic Targets? Expert Opin. Biol. Ther. 9(9): 1127-1141; CharafeJauffret, E. et al. (2009) Breast Cancer Stem Cells: Tools And Models To Rely On, BMC Cancer 9:202; Scopelliti, A. et al.
(2009) Therapeutic Implications Of Cancer Initiating Cells, Expert Opin. Biol. Ther. 9(8): 1005-1016; публикация РСТ-заявки № 2008/091908).
В соответствии с этой гипотезой CSC обеспечивают небольшую, особую субпопуляцию клеток внутри каждой опухоли, которые способны к неограниченному самообновлению и развитию в более зрелую опухолевую клетку(и), которая относительно ограничена в способности к репликации. Была выдвинута гипотеза, что эти раковые стволовые клетки, возможно, являются более устойчивыми к химиотерапевтическим средствам, облучению или другим токсическим условиям, и поэтому остаются после клинических терапий и позднее превращаются во вторичные опухоли, метастазы или ответственны за рецидив. Было выдвинуто предположение, что CSC могут возникать или из стволовых клеток нормальных тканей, или из клеток-предшественников дифференцированных тканей.
Описанные в этой заявке применения, которые распространяются на применение антител против CD3, также охватывают применение других агонистов, антагонистов и модуляторов CD3, описываемых здесь, для применения для идентификации и лечения раковых стволовых клеток. В таких вариантах осуществления антитела против CD3 и другие агонисты, антагонисты и модуляторы CD3 используются для идентификации, диагностирования или терапевтического лечения раковых стволовых клеток, используя способы, схожие с описанными способами, и осуществляют изменения в пределах средней компетенции специалиста-практика для пригонки способа к идентификации/диагностированию или лечению раковых стволовых клеток.
Теперь после общего описания настоящего изобретения его будет легче понять благодаря ссылке на следующие примеры, которые предоставлены в качестве иллюстрации и, как предполагается, не являются ограничением настоящего изобретения, кроме особо оговоренных случаев.
Пример 1. mAb 1 связывается как с CD3 человека, так и с CD3 яванского макака
Для оценки способности mAb1 к связыванию с CD3 человека был выполнен ELISA с захватом. Планшеты покрывали 1 мкг/мл растворимого CD3 яванского макака (sCD3) и инкубировали в присутствии различных концентраций химерного варианта антитела mAb1 (ch-mAb1) (содержащего последовательности вариабельных областей mAb1 и константные области антитела человека), гуманизированного варианта (h-mAb1) и антитела, состоящего из легкой цепи химерного антитела mAb1 и тяжелой цепи гуманизированного варианта mAb1. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 1А. Этот эксперимент показывает способность mAb1 к связыванию с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком. Кроме того, было выполнено сравнение связывание химерного антитела mAb1 с таковым антитела, в состав которого входят LC-2 гуманизированного варианта mAb1 и тяжелая цепь mAb1. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 1В. Этот эксперимент показывает способность mAb1 к связыванию с CD3 человека. Таким образом, фиг. 1А и 1В показывают, что гуманизированное mAb1 было способно к связыванию как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, не являющегося человеком. Гуманизированное mAb продемонстрировало связывание с sCD3 и hCD3, схожее с таковым химерного mAb1.
- 39 045070
Пример 2. Гуманизация mAbl
Были приготовлены гуманизированные производные mAbl. Ниже представлены аминокислотные последовательности этих гуманизированных производных и кодирующие их полинуклеотидные последовательности. CDR начертаны полужирно и подчеркнуты.
Аминокислотная последовательность варианта 1 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb1 (SEQ ID NO: 10):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASSSVS YMNWYQQKPG KAPKRLIYDS SKLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLQPE DFATYYCQQW SRNPPTFGGG TKVEIK
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 1 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb1 (SEQ ID NO: 11) :
gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgaca atcacctgtt ccgccagctc ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaagcccggc aaggccccca agcggctgat ctacgactcc tccaagctgg cctccggcgt gccctccaga ttctccggct ctggctccgg caccgagttc accctgacca tctccagcct gcagcccgag gacttcgcca cctactactg ccagcagtgg tcccggaacc cccctacctt cggcggaggc accaaggtgg aaatcaag
Аминокислотная последовательность варианта 2 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb1 (LC-2 mAb1) (SEQ ID NO: 12):
DWMTQSPAI MSAFPGEKVT ITCSASSSVS YMNWYQQKPG KAPKRWIYDS SKLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLQPE DFATYYCQQW SRNPPTFGGG TKVEIK
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 2 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb1 (SEQ ID NO: 13): gacgtggtga tgacccagtc tcctgccatc atgagtgctt tcccaggcga gaaagtgacc attacatgct ctgcttccag ctctgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaagccaggg aaagcaccca agaggtggat ctacgactcc tccaagctgg cctccggcgt gccaagccgg ttctctggta gtggctcagg aaccgagttt actctgacca tttccagcct gcagcctgaa gatttcgcaa catactattg tcagcagtgg tccagaaatc cccctacatt tggcggaggg actaaagtgg aaatcaag
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb1 (SEQ ID NO: 14):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT RSTMHWVRQA PGQGLEWIGY INPSSAYTNY NQKFKDRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASPQ VHYDYNGFPY WGQGTLVTVS S
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи гуманизированного mAb1 (SEQ ID NO: 15):
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc cggtccacca tgcactgggt gcgacaggcc ccaggccagg gactggaatg gatcggctac atcaacccct ccagcgccta caccaactac aaccagaaat tcaaggaccg cgtgaccatc accgccgaca agtccaccag caccgcctac atggaactgt ctagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ctccccccag gtgcactacg actacaacgg cttcccctac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc tcc
Пример 3. Гуманизация mAb2
Были приготовлены гуманизированные производные mAb2. Ниже представлены аминокислотные последовательности этих гуманизированных производных и кодирующие их полинуклеотидные последовательности. CDR начертаны полужирно и подчеркнуты.
Аминокислотная последовательность варианта 1 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-1 h-mAb2) (SEQ ID NO: 16):
IQAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWFQQ KPGQAPRTLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 1 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-1 h-mAb2) (SEQ ID NO: 17):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccagcag aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 2 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-2 h-mAb2) (SEQ ID NO: 18):
- 40 045070
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRTLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 2 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-2 h-mAb2) (SEQ ID NO: 19):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 3 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-3 h-mAb2) (SEQ ID NO: 20):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWFQE KPGQAPRTLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 3 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-3 h-mAb2) (SEQ ID NO: 21):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccaggag aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 4 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-4 h-mAb2) (SEQ ID NO: 22):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWFQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 4 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-4 h-mAb2) (SEQ ID NO: 23):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccagcag aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 5 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-5 h-mAb2) (SEQ ID NO: 24):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQE KPGQAPRTLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 5 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-5 h-mAb2) (SEQ ID NO: 25):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcaggag aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 6 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-6 h-mAb2) (SEQ ID NO: 26):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 6 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-6 h-mAb2) (SEQ ID NO: 27):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
- 41 045070
Аминокислотная последовательность варианта 7 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-7 h-mAb2) (SEQ ID NO: 28):
I QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWFQE KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 7 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-7 h-mAb2) (SEQ ID NO: 29):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccaggag aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 8 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-8 h-mAb2) (SEQ ID NO: 30):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQE KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 8 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-8 h-mAb2) (SEQ ID NO: 31):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcaggag aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 9 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-9 h-mAb2) (SEQ ID NO: 32):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQE KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 9 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-9 h-mAb2) (SEQ ID NO: 33):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcaggag aagccaggac aggcattcag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 10 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-10 h-mAb2) (SEQ ID NO: 34):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWFQQ KPDHLFTGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 10 вариабельной области легкой цепи гуманизированного mAb2 (VL-10 h-mAb2) (SEQ ID NO: 35):
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcactgg agcagtgact acctctaact acgctaattg gttccagcag aagcccgacc acctgttcac tgggctgatc ggcggaacca acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga
Аминокислотная последовательность варианта 1 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-1 h-mAb2) (SEQ ID NO: 36):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 1 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-1 h-mAb2) (SEQ ID NO: 37):
- 42 045070 gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 2 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-2 h-mAb2) (SEQ ID NO: 38):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 2 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-2 h-mAb2) (SEQ ID NO: 39):
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt cacctttaac acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 3 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-3 h-mAb2) (SEQ ID NO: 40):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 3 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-3 h-mAb2) (SEQ ID NO: 41):
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtggccagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 4 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-4 h-mAb2) (SEQ ID NO: 42):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 4 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-4 h-mAb2) (SEQ ID NO: 43):
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgtgaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 5 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-5 h-mAb2) (SEQ ID NO: 44):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 5 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-5 h-mAb2) (SEQ ID NO: 45):
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt cacctttaac acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtggccagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 6 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-6 h-mAb2) (SEQ ID NO: 46):
- 43 045070
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 6 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-6 h-mAb2) (SEQ ID NO: 47):
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt cacctttaac acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgtgaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 7 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-7 h-mAb2) (SEQ ID NO: 48):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 7 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-7 h-mAb2) (SEQ ID NO: 49): gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct cctggaaagg ggctggagtg ggtggccagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgtgaga cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg gtgaccgtgt ccagc
Аминокислотная последовательность варианта 8 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-8 h-mAb2) (SEQ ID NO: 50):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант 8 вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-8 h-mAb2) (SEQ ID NO: 51): gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcaac acatacgcta tgaattgggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggttgcaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actctgtgaa ggatagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg gtgactgtgt cttcc
Аминокислотная последовательность варианта QV вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-QV h-mAb2) (SEQ ID NO: 52):
EVQLVESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариант QV вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного mAb2 (VH-QV h-mAb2) (SEQ ID NO: 53): gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caaagggatc actgaaactg tcctgcgccg cctccggctt cacctttaac acatacgcta tgaattgggt gcgacaggca cctggcaagg gcctggagtg ggtggcaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc tactatgccg actctgtgaa ggatagattc acaatcagtc gcgacgattc ccagagcatt ctgtatctgc agatgaacaa tctgaaaact gaagacaccg ccatgtacta ttgtgtgcgg cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg gtgactgtgt cttcc
Пример 4.
mAb2 связывается как с CD3 человека, так и с CD3 яванского макака Как осуждалось выше, антитело mAb2 было изначально выделено на основе его способности к связыванию с CD3 человека. Для оценки способности mAb2 к связыванию с нечеловеческим CD3 был выполнен ELISA с захватом. Планшеты покрывали 1 мкг/мл CD3 (или человека, или яванского макака) и инкубировали в присутствии различных концентраций химерного варианта антитела mAb2 (ch-mAb2) (содержащего последовательности вариабельных областей mAb2 и константные области антитела человека). В качестве контроля планшеты также покрывали антителом, состоящим из легкой цепи гуманизированного mAb1 и тяжелой цепи химерного антитела. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 2А и 2В и показывают, что химерный вариант mAb2 продемонстрировал равное связывание с CD3 человека и с CD3 яванского макака.
- 44 045070
Пример 5. Анализ связывающих свойств вариантов легкой и тяжелой цепей h-mAb2
Анализ был проведен для определения эффекта вариаций остатков каркасных областей легкой цепи mAb2. В табл. 2 указаны исследованные замены.
Таблица 2
Легкая цепь | ||||||||||
№ остатка по Кабат: | 36 | 38 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | SEQ ID NO: | |
SEQ ID NO:5 № остатка: | 38 | 40 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | ||
Вариант | mAb2-VL | V | E | D | H | L | F | T | G | 5 |
h-mAb2 VL-1 | F | Q | G | Q | A | P | R | T | 16 | |
h-mAb2 VL-2 | V | 18 | ||||||||
h-mAb2 VL-3 | E | 20 | ||||||||
h-mAb2 VL-4 | G | 22 | ||||||||
h-mAb2 VL-5 | V | E | 24 | |||||||
h-mAb2 VL-6 | V | G | 26 | |||||||
h-mAb2 VL-7 | E | G | 28 | |||||||
h-mAb2 VL-8 | V | E | G | 30 | ||||||
h-mAb2 VL-9 | V | E | F | G | 32 | |||||
h-mAb2 VL-10 | D | H | L | F | T | G | 34 | |||
Тяжелая цепь | ||||||||||
№ остатка по Кабат: | 30 | 49 | 52a | 58 | 93 | SEQ ID NO: | ||||
SEQ ID NO:7 № остатка: | 30 | 49 | 53 | 61 | 99 | |||||
Вариант | mVH | N | A | Y | V | 7 | ||||
hVH-1 | S | G | A | 36 | ||||||
hVH-2 | N | 38 | ||||||||
hVH-3 | A | 40 | ||||||||
hVH-4 | V | 42 | ||||||||
hVH-5 | N | A | 44 | |||||||
hVH-6 | N | V | 46 | |||||||
hVH-6L | N | E | V | 54 | ||||||
hVH-6M | N | N | E | V | 72 | |||||
hVH-7 | A | V | 48 | |||||||
hVH-8 | N | A | V | 50 | ||||||
hVH-8L | N | A | E | V | 55 | |||||
hVH-8M | N | A | N | E | V | 74 |
Были образованы антитела, имеющие легкие цепи mAb2 с SEQ ID NO:11, но содержащие замены (с использованием нумерации по Kabat) D41G, H42Q, L43A, F44P, T45R или G46T, и тяжелые цепи химерного mAb2 (CDR mAb2 с hFRl-mFR2-hFR3-4), и их связывание оценивали, используя ELISA с захватом. Планшеты покрывали 1 мкг/мл экстраклеточного домена CD3 человека (растворимого hCD3 или shCD3) и инкубировали в присутствии различных концентраций антитела. Результаты (фиг. 3) указывают на то, что замена Т в положении 46 по Kabat аннулировала способность антитела к связыванию с shCD3.
Были проведены дополнительные исследования для определения влияния вариаций в положениях легкой цепи 36, 38, 44 и 46 по Kabat. Были образованы антитела, содержащие вариабельную область легкой цепи VL-8 h-mAb2, VL-9 h-mAb2 или VL-10 h-mAb2 и тяжелую цепь химерного антитела mAb2, и их оценивали, используя описанный выше ELISA с захватом. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 4 и показывают, что связывание с shCD3 антителом, содержащим вариабельную область легкой цепи hVL-8, было схожим с таковым антитела, содержащего легкую цепь химерного mAb2.
Были также образованы антитела, содержащие вариабельную область легкой цепи VL-6 h-mAb2, VL-7 h-mAb2 или VL-8 h-mAb2 и тяжелую цепь химерного антитела mAb2, и их оценивали, используя описанный выше ELISA с захватом (за исключением того, что планшеты покрывали 0,5 мкг/мл shCD3 в забуференном фосфатом солевом растворе) для определения влияния дополнительных замен в положениях 36, 38 и 46. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 5 и показывают, что замены F36V и T46G с использованием нумерации по Kabat были достаточными для получения антитела, связывание которого с shCD3 было схожим с таковым антитела, содержащего легкую цепь химерного mAb2.
Влияние замен в последовательности тяжелой цепи mAb2 оценивали посредством образования антител, содержащих легкую цепь химерного антитела mAb2 и вариабельную область тяжелой цепи VH-5 h-mAb2, VH-6 h-mAb2 или VH-7 h-mAb2, и оценки связывания, используя описанный выше ELISA с захватом (с использованием покрытия 1 мкг/мл shCD3). Результаты этих исследований представлены на фиг. 6. Кроме того, были образованы антитела, содержащие легкую цепь химерного антитела mAb2 и
- 45 045070 гуманизированный вариант вариабельной области тяжелой цепи VH-4 h-mAb2, VH-7 h-mAb2 или VH-9 h-mAb2. Связывание таких антител оценивали, используя описанный выше ELISA с захватом. Результаты этих исследований представлены на фиг. 7.
hVH-6L (и ее вариант hVH-6М) и hVH-8L (и ее вариант VH-8M) тяжелых цепей являются особенно предпочтительными для получения антител, обладающих меньшей аффинностью к CD3, чем антитела, в состав которых входят hVH-1, hVH-2, hVH-3, hVH-4, hVH-5, hVH-6, hVH-7 или hVH-8 табл. 2. В состав таких антител с уменьшенной аффинностью будет предпочтительно входить или hVH-6L тяжелой цепи, или VH-8L тяжелой цепи в комбинации с любой из VL-1 легкой цепи h-mAb2, VL-2 h-mAb2, VL-3 hmAb2, VL-4 h-mAb2, VL-5 h-mAb2, VL-6 h-mAb2, VL-7 h-mAb2, VL-8 h-mAb2, VL-9 h-mAb2 или VL-10 h-mAb2. Особенно предпочтительное деиммунизированное антитело будет состоять из hVH-6L (или ее варианта hVH-бМ) тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи h-mAb2, или hVH-8L (или ее варианта hVH-8M) тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи h-mAb2. Ниже представлены последовательности таких полипептидов:
Аминокислотная последовательность hVH-6L (SEQ ID NO: 54):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRNKYNNYAT EYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Аминокислотная последовательность hVH-8L (SEQ ID NO: 55):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRNKYNNYAT EYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS hVH-6L и hVH-8L тяжелых цепей были, кроме того, модифицированы для получения вариантов, содержащих модификацию в виде замены на аспарагин в положении 52а (S52aN). Аминокислотные последовательности этих модифицированных вариабельных областей тяжелых цепей и соответствующие полинуклеотидные последовательности, кодирующие их, представлены ниже:
Аминокислотная последовательность hVH-6M (SEQ ID NO: 72):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT EYAASVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи hVH-6M (SEQ ID NO: 73):
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcaac acatacgcta tgaattgggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggttggaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc gagtatgccg actctgtgaa ggatagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg gtgactgtgt cttcc
Аминокислотная последовательность hVH-8M (SEQ ID NO: 74):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRNKYNNYAT EYAASVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи hVH-8M (SEQ ID NO: 75):
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcaac acatacgcta tgaattgggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggttgcaagg atcaggaaca agtacaacaa ttatgcaacc gagtatgccg actctgtgaa ggatagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg gtgactgtgt cttcc hVH-8 di-1 и hVH-8 di-2 тяжелых цепей являются особенно предпочтительными для получения антител, которые являются менее иммуногенными, чем антитела, в состав которых входят hVH-1, hVH-2, hVH-3, hVH-4, hVH-5, hVH-6, hVH7 или hVH-8 табл. 2. Такие деиммунизированные антитела будут предпочтительно состоять из или hVH-8 di-1 тяжелой цепи, или hVH-8 di-2 тяжелой цепи в комбинации с любой из VL-1 легкой цепи h-mAb2, VL-2 h-mAb2, VL-3 h-mAb2, VL-4 h-mAb2, VL-5 h-mAb2, VL-6 hmAb2, VL-7 h-mAb2, VL-8 h-mAb2, VL-9 h-mAb2 или VL-10 h-mAb2. Особенно предпочтительное деиммунизированное антитело будет состоять из hVH-8 di-1 тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи h-mAb2, или hVH-8 di-2 тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи h-mAb2.
Аминокислотная последовательность hXR32VH-8 di-1 (SEQ ID NO: 56):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYTT YYAASVKGRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Аминокислотная последовательность hXR32VH-8 di-2 (SEQ ID NO: 57):
- 46 045070
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR TRSKANSYTT YYAASVKGRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Такие деиммунизированные антитела будут предпочтительно состоять из или hVH-8 di-1 тяжелой цепи, или hVH-8 di-2 тяжелой цепи в комбинации с любой из VL-1 легкой цепи h-mAb2, VL-2 h-mAb2, VL-3 h-mAb2, VL-4 h-mAb2, VL-5 h-mAb2, VL-6 h-mAb2, VL-7 h-mAb2, VL-8 h-mAb2, VL-9 h-mAb2 или VL-10 h-mAb2. Особенно предпочтительное деиммунизированное антитело будет состоять из hVH-8 di-1 тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи h-mAb2, или hVH-8 di-2 тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи hmAb2.
Были также созданы дополнительные гуманизированные варианты вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 7). Аминокислотные последовательности таких вариантов представлены ниже, при этом изменения по сравнению с SEQ ID NO: 7 начертаны полужирно и подчеркнуты.
Аминокислотная последовательность варианта а (I51T Y52cA) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 76):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TASKANNYAT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта b (I51T N54S) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 77):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKYNSYAT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта с (I51T А56Т) вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 78):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKYNNYTT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта d(I51T Y52cA N54S) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 79):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYAT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта е (I51T N54S А56Т) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 80):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKYNSYTT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта f'(I51T Y52cA N54S А56Т) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 81):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYTT YYADSVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта g(I51T D61A) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 82):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKYNNYAT YYAASVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта h(I51T D65G) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 83):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKYNNYAT YYADSVKGRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта i (I51T Y52cA N54S D61A) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 84):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYAT YYAASVKDRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта j (I51T Y52cA N54S D65G) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 85):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYAT YYADSVKGRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
- 47 045070
Аминокислотная последовательность варианта k(I51T Y52cA N54S D61A D65G) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 86):
EVKLLESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYAT YYAASVKGRF TISRDDSQSI LYLQMNNLKT EDTAMYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSA
Аминокислотная последовательность варианта 2k(I51T Y52cA N54S D61A D65G (VH8-A49G V93A)) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 87):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR TRSKANSYTT YYAASVKGRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Аминокислотная последовательность варианта 5k (I51T Y52cA N54S D61A D65G (VH8-V93A)) гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 (SEQ ID NO: 88):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR TRSKANSYTT YYAASVKGRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCAR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
Все такие дополнительные гуманизированные варианты вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела mAb2 могут использоваться для образования деиммунизированных антител по настоящему изобретению. В состав таких дополнительных деиммунизированных и гуманизированных антител будет предпочтительно входить вариабельная область тяжелой цепи: а, b, с, d, e, f, g, h, i, j, k, 2k или 5k, в комбинации с любой из вариабельных областей легких цепей: VL-1 h-mAb2, VL-2 hmAb2, VL-3 h-mAb2, VL-4 h-mAb2, VL-5 h-mAb2, VL-6 h-mAb2, VL-7 h-mAb2, VL-8 h-mAb2, VL-9 hmAb2 или VL-10 h-mAb2. В состав особенно предпочтительного деиммунизированного антитела будет входить вариабельная область тяжелой цепи 2k или 5k и вариабельная область легкой цепи VL-6 hmAb2, или вариабельная область тяжелой цепи hVH-8M8L di-2 и вариабельная область легкой цепи VL-6 h-mAb2. Варианты 2k и 5k связываются с белком А в вариабельной области, что тем самым облегчает очистку молекул (таких как диатела), в которых могут отсутствовать Fc-области или другие домены, которые могут использоваться для отделения таких молекул от других молекул. Варианты hVH-8M, hVH8L, hVH-6M и hVH-6L проявляют уменьшенную иммуногенность по сравнению с соответствующими родительскими полипептидами.
Настоящее изобретение, в частности, имеет отношение к деиммунизированным и гуманизированным антителам, в состав которых входят hVH-8 тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи. Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к деиммунизированным и гуманизированным антителам, в состав которых входят hVH-4 тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи. Кроме того, настоящее изобретение, в частности, имеет отношение к деиммунизированным и гуманизированным антителам, в состав которых входят hVH-2k тяжелой цепи и VL-6 легкой цепи.
Пример 6. Анализ связывающих свойств вариантов легкой и тяжелой цепей химерного и гуманизированного mAb2
Для оценки способности химерного и гуманизированного mAb2 к связыванию с нечеловеческим CD3 был выполнен ELISA с захватом. Планшеты покрывали 1 мкл/мл экстраклеточного домена CD3 (растворимого CD3) (или человека, или яванского макака) и инкубировали в присутствии различных концентраций антитела. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 8А и 8В и показывают, что mAb2 и его гуманизированный вариант продемонстрировали равное связывание с растворимым CD3 человека и с растворимым CD3 яванского макака.
Пример 7. Количественный анализ связывания mAb2 с CD3 человека и CD3 яванского макака
Для определения степени связывания между mAb2 и CD3 человека или яванского макака были выполнены анализы BIACORE™. В анализах BIACORE™ определяется скорость диссоциации, kd. Аффинность (KD) антитела к его мишени зависит от кинетических констант ассоциации (скорости ассоциации, ka) и диссоциации (скорости диссоциации, kd) в соответствии с уравнением KD=kd/ka. В анализах BIACORE™ используется поверхностный плазмонный резонанс для прямого определения этих кинетических параметров. Антитело против CD3 mAb2 (6,3-100 нМ) подвергали иммобилизации на подложке, используя антитела против EK, и инкубировали в присутствии растворимого CD3 человека (shCD3) или растворимого CD3 яванского макака (scCD3). Определяли динамику диссоциации, и выполняли приближение данных к двухвалентной природе антител. Результаты анализов BIACORE™ представлены на фиг. 9A-9D. Относящиеся к кинетике данные суммированы в табл. 3.
- 48 045070
Таблица 3
shCD3 | |||
Антитело | ka | kd | KD |
ch-mAb2 | 1,7х105 M-1 сект1 | 2,5xl0-3 сект1 | 14,7 нМ |
h-mAb2 | 1,9xl05 M-1 сект1 | 3, 8x10-3 сект1 | 2 0,0 нМ |
scCD3 | |||
Антитело | ka | kd | KD |
ch-mAb2 | 1, 6xl05 M-1 сект1 | 2,3x10-3 сек-1 | 14,4 нМ |
h-mAb2 | 1,7xl05 M-1 сект1 | 4,1х10-з сек-1 | 24,1 нМ |
Пример 8. Относящиеся к биспецифическому связыванию данные для диател DART™, содержащих CDR h-mAb2
CDR гуманизированного mAb2 (h-mAb2) использовали для создания ряда диател DART™, содержащих первый эпитопсвязывающий сайт, способный к связыванию с CD3, и второй эпитопсвязывающий сайт, способный к связыванию с Her2/neu (диатело DART™ Her2-h-mAb2), или с CD 19 (диатело DART™ CD19-h-mAb2), или с рецептором эпидермального фактора роста (EGFR) (диатело DART™ ERBITUX™ -h-mAb2).
Диатело DART™ Her2/neu-h-mAb2
Аминокислотная последовательность hXR32VL-Her-2VH-Е-спираль диатела DART™ Her2-h-mAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью Her2VH и между последовательностью Her2VH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 58):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGQV QLQQSGPELV KPGASLKLSC TASGFNIKDT YIHWVKQRPE QGLEWIGRIY PTNGYTRYDP KFQDKATITA DTSSNTAYLQ VSRLTSEDTA VYYCSRWGGD GFYAMDYWGQ GASVTVSSGG CGGGKVAALK EKVAALKEKV AALKEKVAAL KE
Аминокислотная последовательность Her2VLhXR32VH-K-спираль диатела DART™ Her2-h-mAb2 (линкеры между последовательностью Her2VL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 59):
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGNRSGTD FTFTISSVQA ADLAVYYCQQ HYTTPPTFGG
GTKLEIKRAG GGSGGGGEVQ LVESGGGLVQ PGGSLRLSCA ASGFTFNTYA
MNWVRQAPGK GLEWVARIRS KYNNYATYYA DSVKDRFTIS RDDSKNSLYL
QMNSLKTEDT AVYYCVRHGN FGNSYVSWFA YWGQGTLVTV SSGGCGGGEV
AALEKEVAAL EKEVAALEKE VAALEK
Диатело DART™ CD19-h-mAb2
Аминокислотная последовательность CD19VL-hXR32VH-Е-спираль диатела DART™ CD19-hmAb2 (линкеры между последовательностью CD19VL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 60):
DIQLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDSYLNWY QQIPGQPPKL LIYDASNLVS GIPPRFSGSG SGTDFTLNIH PVEKVDAATY HCQQSTEDPW TFGGGTKLEI KGGGSGGGGE VQLVESGGGL VQPGGSLRLS CAASGFTFNT YAMNWVRQAP GKGLEWVARI RSKYNNYATY YADSVKDRFT ISRDDSKNSL YLQMNSLKTE DTAVYYCVRH GNFGNSYVSW FAYWGQGTLV TVSSGGCGGG EVAALEKEVA ALEKEVAALE KEVAALEK
Аминокислотная последовательность hXR32VL-CD19VH-K-спираль диатела DART™ CD19-hmAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью CD19VH и между последовательностью CD19VH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 61):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGQV QLQQSGAELV RPGSSVKISC KASGYAFSSY WMNWVKQRPG QGLEWIGQIW PGDGDTNYNG KFKGKATLTA DESSSTAYMQ LSSLASEDSA VYFCARRETT TVGRYYYAMD YWGQGTTVTV SSGGCGGGKV AALKEKVAAL KEKVAALKEK VAALKE
Диатело DART™ ERBITUX™-h-mAb2
Аминокислотная последовательность hXR32VL-EGFRVH-E-сπираль диатела DART™ ERBITUX™h-mAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью EGFRVH и между последовательностью EGFRVH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 62):
- 49 045070
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGQV QLKQSGPGLV QPSQSLSITC TVSGFSLTNY GVHWVRQSPG KGLEWLGVIW SGGNTDYNTP FTSRLSINKD NSKSQVFFKM NSLQSNDTAI YYCARALTYY DYEFAYWGQG TLVTVSSGGC GGGEVAALEK EVAALEKEVA ALEKEVAALE К
Аминокислотная последовательность EGFRVL-hXR32VH-K-спираль диатела DART™ ERBITUXTMh-mAb2 (линкеры между последовательностью EGFRVL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 63):
DILLTQSPVI LSVSPGERVS FSCRASQSIG TNIHWYQQRT NGSPRLLIKY ASESISGIPS RFSGSGSGTD FTLSINSVES EDIADYYCQQ NNNWPTTFGA GTKLELKGGG SGGGGEVQLV ESGGGLVQPG GSLRLSCAAS GFTFNTYAMN WVRQAPGKGL EWVARIRSKY NNYATYYADS VKDRFTISRD DSKNSLYLQM NSLKTEDTAV YYCVRHGNFG NSYVSWFAYW GQGTLVTVSS GGCGGGKVAA LKEKVAALKE KVAALKEKVA ALKE
Было установлено, что такие диатела DART™ способны к связыванию с CD3 яванского макака (фиг. 10А-10С).
CDR гуманизированного mAb2 (h-mAb2) использовали для создания ряда диател DART™, содержащих первый эпитопсвязывающий сайт, способный к связыванию с CD3, и второй эпитопсвязывающий сайт, способный к связыванию с В7-Н3 (диатело DART™ B7-H3-1-h-mAb2 и B7-H3-2-h-mAb2).
Диатело DART™ B7-H3-1-h-mAb2
Аминокислотная последовательность hBRCA69DVL-hXR32VH-E-спираль диатела DART™ B7-H31-h-mAb2 (линкеры между последовательностью hBRCA69DVL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 64):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYCQQ GNTLPPTFGG GTKLEIKGGG GSGGGGEVQL VESGGGLVQP GGSLRLSCAA SGFTFNTYAM NWVRQAPGKG LEWVARIRSK YNNYATYYAD SVKDRFTISR DDSKNSLYLQ MNSLKTEDTA VYYCVRHGNF GNSYVSWFAY WGQGTLVTVS SGGCGGGEVA ALEKEVAALE KEVAALEKEV AALEK
Аминокислотная последовательность hXR32VL-hBRCA69DVH-K-спираль диатела DART™ B7-H31-h-mAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью hBRCA69DVH и между последовательностью hBRCA69DVH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 65):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGQV QLVQSGAEVK KPGASVKVSC KASGYTFTSY WMQWVRQAPG QGLEWMGTIY PGDGDTRYTQ KFKGRVTITA DKSTSTAYME LSSLRSEDTA VYYCARRGIP RLWYFDVWGQ GTTVTVSSGG CGGGKVAALK EKVAALKEKV AALKEKVAAL KE
Диатело DART™ B7-H3-2-h-mAb2
Аминокислотная последовательность hBRCA84DVL-hXR32VH-E-сnираль диатела DART™ B7-H32-h-mAb2 (линкеры между последовательностью hBRCA84DVL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 66):
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKALIYS ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ GTKLEIKGGG GSGGGGEVQL VESGGGLVQP GGSLRLSCAA SGFTFNTYAM NWVRQAPGKG LEWVARIRSK YNNYATYYAD SVKDRFTISR DDSKNSLYLQ MNSLKTEDTA VYYCVRHGNF GNSYVSWFAY WGQGTLVTVS SGGCGGGEVA ALEKEVAALE KEVAALEKEV AALEK
Аминокислотная последовательность hXR32VL-hBRCA84DVH-K-спираль диатела DART™ B7-H32-h-mAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью hBRCA84DVH и между последовательностью hBRCA84DVH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 67):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGEV QLVESGGGLV QPGGSLRLSC AASGFTFSSF GMHWVRQAPG KGLEWVAYIS SDSSAIYYAD TVKGRFTISR DNAKNSLYLQ MNSLRDEDTA VYYCGRGREN IYYGSRLDYW GQGTTVTVSS GGCGGGKVAA LKEKVAALKE KVAALKEKVA ALKE
Было установлено, что такие антитела DART™ способны к связыванию с растворимым CD3 яванского макака (фиг. 10D).
Пример 9. Диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), специфические в отношении HER2/neu и CD3, опосредуют мощное перенаправленное, опосредуемое Т-клетками уничтожение
Были приготовлены диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), спе- 50 045070 цифические в отношении HER2/neu и CD3. Такие диатела DART™ обладают способностью локализовать
Т-клетку (в результате связывания такой Т-клетки с CD3-связывающей частью CD3-связывающего диатела DART™) в положении опухолевой клетки (в результате связывания такой раковой клетки с
HER2/neu-связывающей частью диатела DART™). Локализованная Т-клетка может затем уничтожать опухолевую клетку в ходе процесса, называемого здесь перенаправленным уничтожением.
Было сконструировано диатело - перенаправляющий реагент с двумя аффинностями (DART™), специфический в отношении HER2/neu и CD3, содержащее способные к связыванию с HER2/neu вариабельные домены трастузумаба и способные к связыванию с CD3 вариабельные домены VH-8 h-mab2 и VL-6 h-mab2 (SEQ ID NO:58-59).
Для демонстрации способности диател DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения раковых клеток, описанное выше HER2/neu х CD3-биспецифическое диатело DART™ инкубировали в различных концентрациях с опухолевыми клетками-мишенями (опухолевыми клетками SKOV-3, опухолевыми клетками SKBR-3, опухолевыми клетками А549 и опухолевыми клетками MCF-7) и покоящимися РВМС-эффекторами (отношение Е:Т=30:1), и определяли цитотоксичность (анализ LDH). Результаты этих исследований свидетельствуют о способности HER2/neu x CD3-биспецифического диатела DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения опухолевых клеток.
Пример 10. Терапия с использованием моноклонального антитела против TCR для пациентов с диабетом аутоиммунного генеза
Пациенты:
Сорок пациентов с диабетом типа 1 привлекают для участия в соответствии со следующими критериями: возраст между 7 и 20 лет, диагностирование в пределах 6 недель в соответствии с критериями Американской ассоциации диабетологов и подтверждение наличия аутоантител против GAD65, ICA512 и/или инсулина. Пациенты остаются под наблюдением их личных врачей в ходе исследования.
Подходящих для участия в исследовании пациентов случайным образом зачисляют в контрольную группу и группу лечения гуманизированным антителом против CD3 (N297Q) (включающим VH-8 hmab2 и VL-6 h-mab2). После рандомизации отбирают образцы крови для установления исходных уровней HA1c, устанавливают ответ в виде увеличения С-пептида до лечения в ММТТ, и выполняют FPIR до лечения в IGTT. Пациентов обеих групп госпитализируют для получения ими или 6-дневного курса лечения гуманизированным моноклональным антителом против CD3 (N297Q), или плацебо. Антитело вводят внутривенно в следующей дозе: 17 мкг/м2 в день 1, 34,3 мкг/м2 в день 2, 69 мкг/м2 в день 3, 137,6 мкг/м2 в день 4 и 275,3 мкг/м2 в дни 5 и 6. Альтернативно, антитело может внутривенно вводиться в следующей дозе: 1,6 мкг/кг/день в день 1; 3,2 мкг/кг/день в день 2; 6,5 мкг/кг/день в день 3; 13 мкг/кг/день в день 4 и 26 мкг/кг/день в дни 5-14. В исследованиях с использованием увеличения дозы лечение может представлять собой, например, 1,42 мкг/кг/день в день 1; 5,7 мкг/кг/день в день 2; 11 мкг/кг/день в день 3; 26 мкг/кг/день в день 4 и 45,4 мкг/кг/день в дни 5-14. В последующих исследованиях терапию меняют с увеличением дозы и/или с уменьшением периода времени лечения. Например, в последующих исследованиях пациентам может назначаться 4-дневное лечение: 6,4 мкг/кг/день в день 1; 13 мкг/кг/день в день 2 и 26 мкг/кг/день в дни 3 и 4; во время дополнительных исследований с использованием увеличения дозы лечение может представлять собой 8 мкг/кг/день в день 1; 16 мкг/кг/день в день 2 и 32 мкг/кг/день в дни 3 и 4.
Во время первоначальных исследований дозу антитела в первые три дня лечения вводят с помощью медленной внутривенной инфузии в течение 20 ч для слежения за неблагоприятными реакциями. В последующих исследованиях время введения будут уменьшать, и/или дозу будут разбивать на 2-4 равных части, которые будут вводить в виде болюсных инъекций, равномерно распределенных в течение периода, составляющего 12 ч. Пациенты контрольной группы подвергаются метаболическим и иммунологическим исследованиям, но не получают моноклональные антитела. На протяжении всего исследования осуществляют контроль в отношении иммуносупрессорных эффектов моноклонального антитела против CD3 (N297Q) у пациентов.
За пациентами следят в течение 18 месяцев после лечения. Функционирование β-клеток определяют каждые 6 месяцев в случае уменьшенной толерантности к глюкозе и каждые 12 месяцев в случае нормальной толерантности к глюкозе. Пациентам разрешают соблюдать нормальный режим питания, и они остаются под наблюдением их личных врачей на протяжении всего исследования. Иммунологические анализы повторяют с интервалами в 6 месяцев. Пациенты будут получать терапию с использованием инсулина, как предписано их личными врачами.
Функционирование β-клеток будут анализировать в соответствии с изменениями уровней Спептида, определяемых с помощью радиоиммуноанализа. После отбора образцов для установления исходных уровней С-пептида и глюкозы пациентам дают смешанную пищу. Уровни С-пептида определяют в образцах, отобранных через 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин. Ответ в виде увеличения Спептида в тесте толерантности к смешанной пище (ММТТ) представляют в виде общей площади под кривой ответа (AUC). Считается, что изменение ответа произошло, если ответ отличается на более чем 7,5% от ответа при вхождении в исследование. Ответы в виде увеличения С-пептида у пациентов в
- 51 045070
ММТТ постоянно проверяют через 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев, 15 месяцев и 18 месяцев после лечения. Альтернативно, функционирование β-клеток оценивают с использованием FPIR (выброса инсулина на первой фазе) в IGTT. Уровни инсулина в сыворотке определяют с использованием модификации способа радиоиммуноанализа с использованием двух антител, используя моноиодированный тирозин А14-меченный инсулин (Amersham Pharmacia). FPIR рассчитывают как сумму уровней инсулина через 1 и 3 минуты после введения глюкозы (0,5 г/кг). Уровни гликозилированного гемоглобина определяют с помощью исследования ингибирования латекс-агглютинации.
Иммунологическая проверка: Уровень аутоантител против GAD65, IA2/ICA512 и инсулина определяют с помощью анализов радиосвязывания, известных в данной области техники (например, Woo et al., 2000, J. Immunol Methods 244: 91-103). Генотипирование HLA-DQA и HLA-DQB выполняют с помощью прямого секвенирования полиморфизмов экзона 2 после амплификации с помощью ПЦР. Уровень цитокинов в сыворотке после введения моноклонального антитела определяют с помощью иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA). Продукцию антиидиотипических антител проверяют с помощью анализа ELISA, используя связанное с планшетом антитела против CD3 (N297Q), или с помощью проточной цитометрии для определения блокирования связывания анти-CD3-FITC с CD3-цепью TCR.
Статистический анализ:
Будут проводиться анализы данных, касающихся остаточной функции бета-клеток, уровня аутоантител, уровня цитокинов и уровня гликозилированного гемоглобина. χ2 анализ будут проводить для проверки эффекта лечения лекарственным средством до и после введения лекарственного средства. Сравнение между контрольной группой и группой лечения будут осуществлять с помощью U-критерия МаннаУитни.
Пример 11. Диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), специфические в отношении В7Н3 и CD3, опосредуют мощное перенаправленное, опосредуемое Т-клетками уничтожение
Были приготовлены диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), специфические в отношении В7Н3 и CD3. В7Н3 был иммуногистологически обнаружен в линиях опухолевых клеток (Chapoval, A. et al. (2001) В7-Н3: А Costimulatory Molecule For T Cell Activation and IFN-γ Production, Nature Immunol. 2: 269-274; Saatian, B. et al. (2004) Expression Of Genes For B7-H3 And Other T Cell Ligands By Nasal Epithelial Cells During Differentiation And Activation, Amer. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 287: L217-L225; Castriconi et al. (2004) Identification Of 4Ig-B7-H3 As A NeuroblastomaAssociated Molecule That Exerts A Protective Role From An NK Cell-Mediated Lysis, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 101(34): 12640-12645); Sun, M. et al. (2002) Characterization of Mouse and Human B7-H3 Genes, J. Immunol. 168: 6294-6297). Несколько независимых исследований показали, что злокачественные опухолевые клетки человека демонстрируют явное увеличение экспрессии белка В7-Н3, и что эта увеличенная экспрессия связана с увеличением тяжести заболевания (Zang, X. et al. (2007) The B7 Family And Cancer Therapy: Costimulation And Coinhibition, Clin. Cancer Res. 13: 5271-5279), что наводит на мысль о том, что В7-Н3 используется опухолями в качестве пути ускользания от иммунной системы (Hofmeyer, K. et al. (2008) The Contrasting Role Of B7-H3, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 105(30): 10277-10278).
CD3-связывающαя часть таких антител DART™ состояла из описанных выше вариабельных областей легкой и тяжелой цепи гуманизированного mAb2 против CD3 (VH-8 h-mAb2 и VL-6 h-mAb2). В7Н3связывающая часть таких антител DART™ состояла из легкой цепи hBRCA84D-2 и тяжелой цепи hBRCA84D-2 (SEQ ID NO:64-65).
Такие диатела DART™ обладают способностью локализовать Т-клетку (в результате связывания такой Т-клетки с CD3-связывающей частью CD3-связывающего диатела DART™) в положении опухолевой клетки (в результате связывания такой раковой клетки с В7Н3-связывающей частью диатела DART™). Локализованная Т-клетка может затем опосредовать уничтожение опухолевой клетки в ходе процесса перенаправленного уничтожения.
Для демонстрации способности таких диател DART™ к опосредованию такого перенаправленного уничтожения раковых клеток диатело DART™ инкубировали в различных концентрациях с опухолевыми клетками-мишенями (опухолевыми клетками А498, опухолевыми клетками RECA905021E) и покоящимися РВМС-эффекторами (отношение Е:Т=30:1), и определяли цитотоксичность (анализ LDH). Диатело DART™ (4420-h-mAb2), обладающее двумя специфичностями к CD3 (h-mAb2) и флуоресцеину (антитело 4420), использовали в качестве контроля.
Диатело DART™ 4420-h-mAb2
Аминокислотная последовательность 4420VL-hXR32VH-Е-спираль диатела DART™ 4420-h-mAb2 (линкеры между последовательностью 4420VL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 68):
- 52 045070
DWMTQTPFS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSNGNTYLRW YLQKPGQSPK IVLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTHVP WTFGGGTKLE IKGGGSGGGG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSSGGCGG GEVAALEKEV AALEKEVAAL EKEVAALEK
Аминокислотная последовательность hXR32VL-4420VH-K-спираль диатела DART™ 4420-h-mAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью 4420VH и между последовательностью 4420VH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 69):
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI
GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF
GGGTKLTVLG GGGSGGGGEV KLDETGGGLV QPGRPMKLSC VASGFTFSDY
WMNWVRQSPE KGLEWVAQIR NKPYNYETYY SDSVKGRFTI SRDDSKSSVY
LQMNNLRVED MGIYYCTGSY YGMDYWGQGT SVTVSSGGCG GGKVAALKEK
VAALKEKVAA LKEKVAALKE
Результаты этих исследований (фиг. 11А-11В) указывают на способность В7Н3 х CD3биспецифического диатела DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих В7Н3.
Пример 12. Диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), специфические в отношении А33 и CD3, опосредуют мощное перенаправленное, опосредуемое Т-клетками уничтожение
Были приготовлены диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), специфические в отношении А33 и CD3 (диатело DART™ A33-h-mAb2). А33 является мембранным антигеном, который эксрессируется в нормальном эпителии толстой кишки и тонкой кишки человека и в >95% раков толстой кишки человека (Heath, J.K. et al. (1997) The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 94: 469-474).
Такие диатела DART™ обладают способностью локализовать Т-клетку (в результате связывания такой Т-клетки с CD3-связывающей частью CD3-связывающего диатела DART™) в положении опухолевой клетки (в результате связывания такой раковой клетки с А33-связывающей частью диатела DART™). Локализованная Т-клетка может затем опосредовать уничтожение опухолевой клетки в ходе процесса перенаправленного уничтожения.
CD3-связывающая часть таких диател DART™ состояла из описанных выше вариабельных областей легкой и тяжелой цепей гуманизированного mAb2 (VH-8 h-mAb2 и VL-6 h-mAb2). А33-связывающая часть таких диател DART™ состояла из антитела RECA47.
Диатело DART™ A33-h-mAb2
Аминокислотная последовательность RECA47VL-hXR32VH-K-спираль диатела DART™ A33-hmAb2 (линкеры между последовательностью RECA47VL и последовательностью hXR32VH и между последовательностью hXR32VH и последовательностью K-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 70): QIVLTQSPAI MSASPGERVT MTCSARSSIS FMYWYQQKPG SSPRLLIYDT SNLASGVPVR FSGSGSGTSY SLTISRMEAE DAATYYCQQW SSYPLTFGSG TKLELKRGGG SGGGGEVQLV ESGGGLVQPG GSLRLSCAAS GFTFNTYAMN WVRQAPGKGL EWVARIRSKY NNYATYYADS VKDRFTISRD DSKNSLYLQM NSLKTEDTAV YYCVRHGNFG NSYVSWFAYW GQGTLVTVSS GGCGGGKVAA LKEKVAALKE KVAALKEKVA ALKE
Аминокислотная последовательность hXR32VL-RECA47VH-E-спираль диатела DART™ A33-hmAb2 (линкеры между последовательностью hXR32VL и последовательностью RECA47VH и между последовательностью RECA47VH и последовательностью Е-спирали подчеркнуты) (SEQ ID NO: 71): QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGQV QLQQSGPELV KPGASVKISC KASGYTFSGS WMNWVKQRPG QGLEWIGRIY PGDGETNYNG KFKDKATLTA DKSSTTAYME LSSLTSVDSA VYFCARIYGN NVYFDVWGAG TTVTVSSGGC GGGEVAALEK EVAALEKEVA ALEKEVAALE К
Для демонстрации способности таких диател DART™ к опосредованию такого перенаправленного уничтожения раковых клеток, диатело DART™ инкубировали в различных концентрациях с опухолевыми клетками-мишенями (опухолевыми клетками Colo205, опухолевыми клетками RECA905021E) и покоящимися РВМС-эффекторами (отношение Е:Т=30:1), и определяли цитотоксичность (анализ LDH). Результаты этих исследований (фиг. 12А-12Е) свидетельствуют о способности А33 х CD3биспецифических диател DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих А33.
Пример 13. Диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™), специфические в отношении CD3, приводят к перенаправленному, опосредуемому Т-клетками уничтожению, эквивалентному таковому в случае других специфических в отношении CD3 человека диател
- 53 045070
Для дальнейшей оценки диател - перенаправляющих реагентов с двумя аффинностями (DART™), специфических в отношении CD3, по настоящему изобретению, способность описанного выше диатела DART™ CD19-h-mAb2 к вызову перенаправленного, опосредуемого Т-клетками уничтожения сравнивали с таковой CD19 х CD3-биспецифического диатела DART Moore, Р.А. и др. (2011) (Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma, Blood 117(17): 4542-4551). Диатело DART™ CD19-h-mAb2 проявляет специфичность в отношении CD3 человека, а также нечеловеческого CD3; CD19 х CD3-биспецифическое диатело DART Moore, P.A. и др. (2011) проявляет специфичность в отношении только CD3 человека.
Соответственно, клетки В-клеточной лимфомы человека Raji (смотрите Drexler, H.G. et al. (1998) History And Classification Of Human Leukemia-Lymphoma Cell Lines, Leuk. Lymphoma 31(3-4): 305-316; Arndt, R. (1984) Demonstration Of C3-Binding Circulating Immune Complexes Using Raji, Conglutinin And Anti-C3 Assays - A Critical Review, Immun. Infekt. 12(1): 3-11) или клетки лимфомы из клеток ткани человека JeKo-1 (Salaverria, I. et al. (2006) Mantle Cell Lymphoma: From Pathology And Molecular Pathogenesis To New Therapeutic Perspectives, Haematologica 91: 11-16; Jeon, H.J. et al. (1998) Establishment And Characterization Of A Mantle Cell Lymphoma Cell Line, Br. J. Haematol. 102(5): 1323-1326) инкубировали в присутствии диатела DART™ и покоящихся мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) (Е:Т=30:1). Результаты этого эксперимента (фиг. 13A и 13В) показывают, что диатело DART™ CD19-hmAb2 по настоящему изобретению приводит к перенаправленному, опосредуемому Т-клетками уничтожению, которое эквивалентно таковому, отмечаемому при использовании CD19 х CD3биспецифического диатела DART, специфического в отношении CD3 человека. Таким образом, расширение специфичности в отношении нечеловеческих гомологов CD3 не уменьшало способность диатела DART™ к опосредованию перенаправленного уничтожения.
Пример 14. Перенаправленный цитолиз с помощью диател перенаправляющих реагентов с двумя аффинностями (DART™), специфических в отношении CD3, обладающих перекрестной реактивностью с CD3 яванского макака
Была исследована способность описанного выше диатела DART™ CD19-h-mAb2 DART™ к вызову перенаправленного, опосредуемого Т-клетками уничтожения в присутствии Т-клеток или человека, или яванского макака.
Клетки рака толстой кишки человека НТ-29 (Marchis-Mouren, G. et al. (1988) НТ 29, A Model Cell Line: Stimulation By The Vasoactive Intestinal Peptide (VIP); VIP Receptor Structure And Metabolism, Biochimie 70(5): 663-671; Fogh, J. et al. (1975) In: J. Fogh (ed.), HUMAN TUMOR CELLS IN VITRO, New York: Plenum Press. 1975) инкубировали в присутствии Т-клеток человека или яванского макака (отношение Е:Т=30:1) и или описанного выше диатела DART™ CD19-h-mAb2, или CD19 х CD3биспецифического диатела DART, CD3-связывающие последовательности которого происходят из антитела FN-18. Антитело FN-18 проявляет специфичность в отношении только CD3 яванского макака (Nooij, F.J. et al. (1986) Differentiation Antigens On Rhesus Monkey Lymphocytes. I. Identification Of T Cells Bearing CD3 And CD8, And Of A Subset Of CD8-Bearing Cells, Eur. J. Immunol. 16(8): 975-979; Meng, G. et al. (1998) The Effect Of Anti-CD3-Immunotoxin On T Lymphocyte Function in vitro, Transpl. Immunol. 6(1) : 53-59). Определяли результирующей процент цитотоксичности в зависимости от концентрации диател. Результаты (фиг. 14A и 14В) показывают, что диатело DART™ CD19-h-mAb2 способно к опосредованию цитолиза в присутствии Т-клеток-эффекторов или человека, или яванского макака. В отличие от этого, диатело FN-18 было способно к опосредованию цитолиза только в присутствии Т-клеток яванского макака.
Пример 15. Диатела - перенаправляющие реагенты с двумя аффинностями (DART™) нуждаются во вхождение в контакт с клетками-мишенями
Для демонстрации того, что наблюдаемое перенаправленное уничтожение, опосредуемое CD3специфическим диателом DART™ по настоящему изобретению, было специфическим, определяли степень уничтожения в присутствии и в отсутствие клеток-мишеней.
РМВС человека инкубировали в присутствии описанного выше диатела DART™ ERBITUX™-hmAb2, (ERBITUX™-T-клеточный рецептор)-биспецифического диатела DART™ (способного к связыванию с EGFR (рецептором эпидермального фактора роста) и Т-клеточным рецептором) или диатела DART™ ERBITUX™-CD3 FN18 (способного к связыванию с EGFR и с CD3 яванского макака). Инкубации проводили в присутствии или в отсутствие клеток рака почки А498-мишеней (Giard, D.J. et al. (1973) In vitro Cultivation Of Human Tumors: Establishment Of Cell Lines Derived From A Series Of Solid Tumors, J. Natl. Cancer Inst. 51: 1417-1423; Fogh, J. (1978) Cultivation, Characterization, And Identification Of Human Tumor Cells With Emphasis On Kidney, Testis And Bladder Tumors, Natl. Cancer Inst. Monogr. 49: 5-9).
Гликопротеин CD69 является ранним антигеном активации Т- и В-лимфоцитов, представленным на клетках большинства гемопоэтических линий, включая нейтрофилы, после стимуляции (Atzenia, F. et al. (2002) Induction Of CD69 Activation Molecule On Human Neutrophils by GM-CSF, IFN-γ, and IFN-α, Cellular Immunol. 220(1): 20-29). По этой причине в качестве способа оценки активации иммунной системы
-
Claims (24)
- (1) указанные домены (А) и (Е) связаны с образованием указанного антигенсвязывающего домена, который способен иммуноспецифически связываться как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, отличного от человека;1. CD3-связывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий фрагмент антитела, который содержит CD3-специфичный VL домен антитела и CD3-специфичный домен VH антитела, где CD3-специфичный VL домен и CD3-специфичный VH домен образуют антигенсвязывающий домен, способный иммуноспецифически связываться как с эпитопом CD3 человека, так и с эпитопом CD3 млекопитающего, отличного от человека, где:(I) указанный CD3-специфичный домен VL содержит три определяющие комплементарность области (CDR) SEQ ID NO: 5 и (II) указанный CD3-специфичный домен VH содержит три определяющие комплементарность области (CDR) SEQ ID NO: 7, модифицированные так, что содержат одну или несколько замен, выбранных из группы, состоящей из:(i) I51T;(ii) S52aN;(iii) Y52cA;(iv) N54S;(v) A56T;(vi) Y58E;(vii) D61A и (viii) D65G;где указанная нумерация соответствует нумерации по Кэбат.
- (2) указанные домены (В) и (D) связаны с образованием сайта связывания, который иммуноспецифически связывается со вторым эпитопом, где указанный второй эпитоп отличается от эпитопа CD3 тем, что связывается с антигенсвязывающим доменом, образованным указанными доменами (А) и (Е); и (3) указанные домены (С) и (F) ковалентно связаны между собой.2. CD3-связывающαя молекула по п.1, где указанный CD3-специфичный домен VL выбран из группы, состоящей из h-mab2 VL-4 (SEQ ID NO: 22), h-mab2 VL-6 (SEQ ID NO: 26),- 55 045070 h-mab2 VL-7 (SEQ ID NO: 28), h-mab2 VL-8 (SEQ ID NO: 30), h-mab2 VL-9 (SEQ ID NO: 32) и h-mab2 VL-10 (SEQ ID NO: 34).
- 3. CD3-связывающая молекула по любому из пп.1-2, где указанный CD3-специфичный домен VH выбран из группы, состоящей из h-mab2 VH-6L (SEQ ID NO: 54), h-mab2 VH-8L (SEQ ID NO: 55), h-mab2 VH-8 di-1 (SEQ ID NO: 56), h-mab2 VH-8 di-2 (SEQ ID NO: 57), h-mab2 VH-6M (SEQ ID NO: 72), h-mab2 VH-8M (SEQ ID NO: 74), h-mab2 VH-2k (SEQ ID NO: 87) и h-mab2 VH-5k (SEQ ID NO: 88).
- 4. CD3-связывающая молекула по любому из пп.1-2, где указанный CD3-специфический домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотных последовательностей h-mab2 VH-1 (SEQ ID NO: 36), h-mab2 VH-2 (SEQ ID NO: 38), h-mab2 VH-3 (SEQ ID NO: 40), hmab2 VH-4 (SEQ ID NO: 42), h-mab2 VH-5 (SEQ ID NO: 44), h-mab2 VH-6 (SEQ ID NO:46), h-mab2 VH-7 (SEQ ID NO: 48) и h-mab2 VH-8 (SEQ ID NO: 50) тем, что содержит указанную аминокислотную замену.
- 5. CD3-связывающαя молекула по любому из пп.1-4, где указанная CD3-специфичная молекула представляет собой антитело.
- 6. CD3-связывающαя молекула по п.5, где в указанном антителе:(A) отсутствует область Fc или (B) содержится область Fc, которая:(i) не проявляет эффекторных функций; или (ii) обладает пониженной эффекторной функцией; или (iii) ухудшает способность Fc-области указанного антитела связываться с Fc-рецептором;где указанное отсутствие эффекторной функции, пониженная эффекторная функция и нарушение связывающей способности приведены в сравнении с рецептором Fc дикого типа.
- 7. CD3-связывающaя молекула по любому из пп.1-4, которая представляет собой CD3-связывающее диатело, которое содержит первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, где указанные цепи ковалентно связаны друг с другом, где:(I) указанная первая полипептидная цепь содержит амино (N-)конец и карбокси (С-) конец и от Nконца до С-конца:(i) домен (А), содержащий указанный CD3-специфический домен VL;(ii) домен (В), содержащий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи второго иммуноглобулина (VH2); и (iii) домен (С);где указанные домены (А) и (В) не связаны друг с другом с образованием сайта связывания эпитопа; и (II) указанная вторая полипептидная цепь содержит амино (N-) конец и карбокси (С-) конец и от Nконца до С-конца:(i) домен (D), содержащий связывающую область вариабельного домена легкой цепи указанного второго иммуноглобулина (VL2);(ii) домен (Е), содержащий указанный CD3-специфический домен VH; и (iii) домен (F);где указанные домены (D) и (Е) не связаны друг с другом с образованием сайта связывания эпитопа; и где:
- 8. CD3-связывающαя молекула по п.7, где указанный второй эпитоп не является эпитопом CD3.
- 9. CD3-связывающaя молекула по п.7, где указанный второй эпитоп представляет собой эпитоп CD3, который отличается от эпитопа CD3, тем, что связывается с антигенсвязывающим доменом, образованным указанными доменами (А) и (Е).
- 10. CD3-связывающaя молекула по любому из пп.1-9, которая является гуманизированной.
- 11. CD3-связывающaя молекула по любому из пп.1-4 или 7-10, которая способна иммуноспецифи- 56 045070 чески одновременно связываться с:(i) CD3 и (ii)(a) опухолевым антигеном или (ii)(b) клеточным поверхностным антигеном, рецептором или лигандом рецептора.
- 12. CD3-связывающая молекула по п.11, которая способна иммуноспецифически связываться с CD3 и с опухолевым антигеном, экспрессируемым на опухолевой клетке, где указанная опухолевая клетка представляет собой опухолевую клетку злокачественной опухоли, выбранной из группы, состоящей из рака молочной железы, рака простаты, рака желудка, рака легкого, рака желудка, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака печени, рака яичников, рака полости рта, рака глотки, рака пищевода, рака гортани, рака кости, рака кожи, меланомы, рака матки, рака яичка, рака мочевого пузыря, рака почки, рака головного мозга, глиобластомы, рака щитовидной железы, лимфомы, миеломы и лейкоза.
- 13. CD3-связывающαя молекула по п.11, способная иммуноспецифически связываться с CD3 и с клеточным поверхностным антигеном, рецептором или лигандом рецептора, где клеточный поверхностный антиген, рецептор или лиганд рецептора представляют собой HER2/neu, B7-H3, CD20, PSMA, IGF1R, EGFR, А33, CD19 или Ер-САМ.
- 14. CD3-связывающaя молекула по п.11, способная иммуноспецифически связываться с CD3 и с клеточным поверхностным антигеном, рецептором или лигандом рецептора, где клеточный поверхностный антиген, рецептор или лиганд рецептора представляют собой молекулу, вовлеченную в Т-клеточноеВ-клеточное связывание, где указанная молекула, вовлеченная в Т-клеточное-В-клеточное связывание выбрана из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD32B, CD38, CD40, CD79a, CD79b, CD80, CD86, LFA-I, LFA-3 и CFA-I.
- 15. CD3-связывающαя молекула по любому из пп.7-9, где:(А) указанный домен (В) содержит аминокислотные остатки 119-238 SEQ ID NO: 65 и (В) указанный домен (D) содержит аминокислотные остатки 1-107 SEQ ID NO: 64.
- 16. CD3-связывающaя молекула по любому из пп.7-9, где:(A) указанный домен (В) содержит аминокислотные остатки 119-240 SEQ ID NO: 67 и (B) указанный домен (D) содержит аминокислотные остатки 1-107 SEQ ID NO: 66.
- 17. CD3-связывающaя молекула по любому из пп.7-16, где указанный CD3-специфичный домен VL представляет собой h-mab2 VL-6 (SEQ ID NO: 26).
- 18. CD3-связывающαя молекула по любому из пп.7-9 или 15-17, которая содержит Fc-домен или его часть.
- 19. CD3-связывающaя молекула по любому из пп.7-9 или 15-18, где:(A) указанная первая полипептидная цепь дополнительно содержит последовательность Е-спирали и указанная вторая полипептидная цепь дополнительно содержит последовательность K-спирали; или (B) указанная первая полипептидная цепь дополнительно содержит последовательность К-спирали и указанная вторая полипептидная цепь дополнительно содержит последовательность Е-спирали;где указанная последовательность Е-спирали соответствует остаткам аминокислотной последовательности 244-271 SEQ ID NO: 62, и указанная последовательность K-спирали соответствует аминокислотной последовательности 247-274 SEQ ID NO: 63.
- 20. CD3-связывающaя молекула по п.19, которая содержит Fc-домен или его часть.
- 21. Фармацевтическая композиция, содержащая CD3-связывающую молекулу по любому из пп.1-20 и фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или растворитель.
- 22. Применение CD3-связывающей молекулы по любому из пп.1-20, или фармацевтической композиции по п.21, для получения лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования или аутоиммунного или воспалительного заболевания.
- 23. Применение по п.22, где указанное аутоиммунное или воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из инсулинозависимого диабета I типа, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, миастении Гравис, целиакии, синдрома Шегрена, болезни Грейва, болезни Крона, аутоиммунного гепатита, псориаза, псориатического артрита, астмы, аллергического ринита, эффектов просле трансплантации органов и болезни трансплантат против хозяина (GVHD).
- 24. Применение по п.23, где указанное аутоиммунное или воспалительное заболевание представляет собой инсулинозависимый диабет I типа.-
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US61/488,716 | 2011-05-21 | ||
US61/530,353 | 2011-09-01 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045070B1 true EA045070B1 (ru) | 2023-10-27 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2019200159B2 (en) | CD-3 binding molecules capable of binding to human and non-human CD3 | |
DK2699590T3 (en) | ENDOGLIN POLYPEPTIDES AND APPLICATIONS THEREOF | |
US10618962B2 (en) | Anti-CTLA4 antibodies | |
KR20230009459A (ko) | 인간 ceacam1/3/5에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 그의 용도 | |
US12030951B2 (en) | Anti-OX40 antibody and uses thereof | |
US20230151105A1 (en) | Anti-ox40 antibody and uses thereof | |
EA045070B1 (ru) | Cd3-связывающие молекулы, способные связаться с cd3 человека и cd3, не являющимся человеческим | |
NZ618021B2 (en) | Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3 |