EA043901B1 - ЛЕЧЕНИЕ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ПУТЕМ ДОСТАВКИ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННОЙ мРНК, КОДИРУЮЩЕЙ CFTR - Google Patents

ЛЕЧЕНИЕ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ПУТЕМ ДОСТАВКИ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННОЙ мРНК, КОДИРУЮЩЕЙ CFTR Download PDF

Info

Publication number
EA043901B1
EA043901B1 EA201992494 EA043901B1 EA 043901 B1 EA043901 B1 EA 043901B1 EA 201992494 EA201992494 EA 201992494 EA 043901 B1 EA043901 B1 EA 043901B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mrna
cftr
present
lipid
seq
Prior art date
Application number
EA201992494
Other languages
English (en)
Inventor
Майкл Хартлейн
Франк Дероза
Алан Кимура
Джонатан Абисал
Ануша Диаз
Шриран Карв
Зарна Пейтел
Original Assignee
Транслейт Био, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Транслейт Био, Инк. filed Critical Транслейт Био, Инк.
Publication of EA043901B1 publication Critical patent/EA043901B1/ru

Links

Description

Родственные заявки
Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет предварительных заявок на выдачу патентов США с серийным № 62/507061, поданной 16 мая 2017 года; с серийным № 62/532301, поданной 13 июля 2017 года; с серийным № 62/580782, поданной 2 ноября 2017 года; с серийным № 62/592238, поданной 29 ноября 2017 года; и с серийным № 62/659053, поданной 17 апреля 2018 года, раскрытия которых тем самым включены в настоящий документ посредством ссылки в полном своем объеме.
Перечень последовательностей
Настоящее описание ссылается на Перечень последовательностей (поданный в электронном виде как файл.txt под названием SL_MRT-2005PCT-US 16 мая 2018 года. Файл.txt был создан 15 мая 2018 года, и его размер составляет 152577 байтов Полное содержание Перечня последовательностей включено в настоящий документ посредством ссылки.
Предшествующий уровень техники
Кистозный фиброз является наследственным аутосомным заболеванием, возникающим в результате мутации гена CFTR, кодирующий хлорид-ионный канал, который, как полагают, участвует в регуляции множества других ионных каналов и транспортных систем в эпителиальных клетках. Потеря функции CFTR приводит к хроническому заболеванию легких, аберрантному продуцированию слизи и значительному снижению продолжительности жизни. См., в целом, Rowe et al., New Engl. J. Med. 352, 1992-2001 (2005).
В настоящее время не существует лечения кистозного фиброза (CF). В литературе задокументированы многочисленные трудности, возникающие при попытке индуцировать экспрессию CFTR в легких. Например, вирусные векторы, содержащие ДНК CFTR, запускали иммунные ответы, но симптомы CF после введения оставались. Conese et al., J. Cyst. Fibres. 10 Suppl 2, S114-28 (2011); Rosenecker et al., Curr. Opin. Mol. Ther. 8, 439-45 (2006). Также сообщалось о том, что отличная от вирусной доставка ДНК, в том числе ДНК CFTR, запускает иммунные ответы. Alton et al., Lancet 353, 947-54 (1999); Rosenecker et al., J Gene Med. 5, 49-60 (2003). Кроме того, отличные от вирусных ДНК-векторы сталкиваются с дополнительной проблемой, заключающейся в том, что механизм комплекса ядерных пор обычно не импортирует ДНК в ядро, где может происходить транскрипция. Pearson, Nature 460, 164-69 (2009).
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится, среди прочего, к способам лечения кистозного фиброза с помощью мРНК, кодирующей белок регулятора трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR). В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения кистозного фиброза, предусматривающим стадию введения субъекту, нуждающемуся в лечении, композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок-регулятор трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR), где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей CFTR, составляет по меньшей мере 0,4 мг/мл, и стадия введения предусматривает ингаляцию. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей CFTR, составляет по меньшей мере 0,5 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей CFTR, составляет по меньшей мере 0,6 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей CFTR, находится в диапазоне от 0,4 мг/мл до 0,8 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления доза мРНК, кодирующей CFTR, составляет 24 мг или меньше в неделю. В некоторых вариантах осуществления доза мРНК, кодирующей CFTR, составляет 16 мг или меньше в неделю. В некоторых вариантах осуществления доза мРНК, кодирующей CFTR, составляет 8 мг или меньше в неделю.
В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1.
В некоторых вариантах осуществления композицию распыляют перед ингаляцией. В некоторых вариантах осуществления композицию хранят в виде замороженной стерильной суспензии до введения. В некоторых вариантах осуществления композицию хранят в одноразовом флаконе до введения. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит менее 5,0 мл композиции. В некоторых вариантах осуществления дозировка мРНК, кодирующей белок CFTR, находится в диапазоне от 8 мг до 24 мг.
В некоторых вариантах осуществления МРНК, кодирующая белок CFTR, дополнительно содержит последовательность 5'-нетранслируемой области (UTR) под SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая белок CFTR, дополнительно содержит последовательность 3'нетранслируемой области (UTR) под SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6.
- 1 043901
В некоторых вариантах осуществления МРНК, кодирующая белок CFTR, инкапсулирована в наночастицу. В некоторых вариантах осуществления наночастица представляет собой липосому. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит один или более катионных липидов, один или более некатионных липидов и один или более PEG-модифицированных липидов. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит не более трех отличающихся липидных компонентов. В некоторых вариантах осуществления один отличающийся липидный компонент представляет собой катионный липид на основе стерина. В некоторых вариантах осуществления липосома имеет размер менее приблизительно 100 нм. В некоторых вариантах осуществления липосома имеет размер, находящийся в диапазоне от 40 нм до 60 нм. В некоторых вариантах осуществления не более трех отличающихся липидных компонентов представляют собой катионный липид, некатионный липид и PEG-модифицированный липид. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит холестериновый сложный эфир имидазола (ICE), 1,2диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DOPE) и 1,2-димиристоил-sn-глицерин, метоксиполиэтиленгликоль (DMG-PEG-2K). В некоторых вариантах осуществления ICE и DOPE присутствуют в молярном соотношении > 1:1. В некоторых вариантах осуществления ICE и DMG-PEG-2K присутствуют в молярном соотношении >10:1. В некоторых вариантах осуществления DOPE и DMG-PEG-2K присутствуют в молярном соотношении >5:1.
В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит от 3,0 до 4,0 мл композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит от 3,2 мл композиции.
Следует учитывать, что все варианты осуществления, описанные выше, применимы ко всем аспектам настоящего изобретения. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из следующих подробного описания, графических материалов и формулы изобретения. Однако, следует понимать, что подробное описание, графические материалы и формула изобретения, хотя в них и указываются варианты осуществления настоящего изобретения, приведены исключительно в иллюстративных целях, а не для ограничения. Различные изменения и модификации в пределах объема настоящего изобретения станут очевидными для специалистов в данной области.
Краткое описание графических материалов
Графические материалы приведены исключительно в иллюстративных целях, а не для ограничения.
На фиг. 1 изображена общая структура композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок CFTR, и упрощенный процесс составления.
На фиг. 2 изображен иллюстративный график числа копий мРНК/г в ткань легкого крысы после обработки крыс загруженными мРНК hCFTR липосомами.
На фиг. 3 изображен иллюстративный график числа копий мРНК в ткани легкого примата (NHP) после обработки NHP загруженными мРНК hCFTR липосомами.
На фиг. 4 изображен иллюстративный график, показывающий повышенную активность хлоридного канала, демонстрируемую после трансфекции загруженными мРНК hCFTR липосомами.
На фиг. 5 изображена иллюстративная IHC белка hCFTR в ткани легкого от примата после однократной дозы композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок CFTR.
На фиг. 6 изображен иллюстративный график кратного увеличения копий мРНК CO-hCFTR по сравнению с эндогенными уровнями мРНК CFTR в ткани легкого примата после однократной дозы композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок CFTR.
На фиг. 7 изображен иллюстративный график процента мРНК CO-hCFTR, доставленной в ткань легкого примата, по сравнению с тканью дыхательных путей после однократной дозы композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок CFTR.
На фиг. 8A-C показана экспрессия происходящего от мРНК белка CFTR в эпителиальных клетках верхней части бронхов примата, совместно локализованного с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO1 (который присутствует в клеточной мембране), после обработки распыленной мРНК CFTR, инкапсулированной в липидной наночастице, доставленной ингаляцией. На фиг. 8A представлены микроскопические изображения иммуноокрашивания эпителиальных клеток верхней части бронхов от примата, обработанного буфером (10% трегалозы) в качестве контроля; демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и окрашивание эндогенного белка ZO1 (справа) без видимого происходящего от мРНК белка CFTR, присутствующего в клеточных мембранах эпителиальных клеток верхней части бронхов. На фиг. 8B представлены микроскопические изображения иммуноокрашивания эпителиальных клеток верхней части бронхов от примата, обработанного распыленной мРНК CFTR (500 мкг/кг), демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и окрашивание эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR присутствует в клеточных мембранах эпителиальных клеток верхней части бронхов. На фиг. 8C представлены типичные микроскопические изображения иммуноокрашивания эпителиальных клеток верхней части бронхов от примата, обработанного распыленной мРНК CFTR (1000 мкг/кг), демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и окра- 2 043901 шивание эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR присутствует в клеточных мембранах эпителиальных клеток верхней части бронхов.
На фиг. 9A-C показана экспрессия полученного из мРНК CFTR белка в эпителиальных клетках нижних дыхательных путей примата, совместно локализованного с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO1 (который присутствует в клеточной мембране), после обработки распыленной мРНК CFTR, инкапсулированной в липидной наночастице, доставленной ингаляцией. На фиг. 9A представлены микроскопические изображения иммуноокрашивания эпителиальных клеток нижних дыхательных путей от примата, обработанного буфером (10% трегалозы) в качестве контроля; демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и эндогенного белка ZO1 (справа), при этом видимый происходящий от мРНК белок CFTR отсутствует в клеточных мембранах эпителиальных клеток нижней части бронхов. На фиг. 9B представлены микроскопические изображения иммуноокрашивания эпителиальных клеток нижних дыхательных путей от примата, обработанного распыленной мРНК CFTR (500 мкг/кг), демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и окрашивание эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR присутствует в клеточных мембранах эпителиальных клеток нижней части бронхов. На фиг. 9C представлены типичные микроскопические изображения иммуноокрашивания эпителиальных клеток нижних дыхательных путей от примата, обработанного распыленной мРНК CFTR (1000 мкг/кг), демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и окрашивание эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR присутствует в клеточных мембранах эпителиальных клеток нижней части бронхов.
На фиг. 10A-C показана экспрессия происходящего от мРНК белка CFTR в клетках альвеолярной области легкого примата, совместно локализованного с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO1 (который присутствует в клеточной мембране), после обработки распыленной мРНК CFTR, инкапсулированной в липидной наночастице, доставленной ингаляцией. На фиг. 10A представлены микроскопические изображения иммуноокрашивания примата, обработанного буфером (10% трегалозы) в качестве контроля; демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR отсутствует в клеточных мембранах альвеолярных клеток. На фиг. 10B представлены микроскопические изображения иммуноокрашивания от примата, обработанного распыленной мРНК CFTR (500 мкг/кг), демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR присутствует в клеточных мембранах альвеолярных клеток. На фиг. 10C показаны типичные микроскопические изображения иммуноокрашивания от примата, обработанного распыленной мРНК CFTR (1000 мкг/кг), демонстрирующие окрашивание происходящего от мРНК белка CFTR (слева), окрашивание эндогенного белка ZO1 (в центре) и оптическое слияние окрашивания происходящего от мРНК белка CFTR и окрашивания эндогенного белка ZO1 (справа), при этом происходящий от мРНК белок CFTR присутствует в клеточных мембранах альвеолярных клеток.
Определения
Для того чтобы настоящее изобретение было более понятным, сначала ниже определяются некоторые термины. Дополнительные определения для следующих терминов и других терминов приводятся о всему описанию. Публикации и другие справочные материалы, упоминаемые в настоящем документе для описания предшествующего уровня техники настоящего изобретения и для предоставления дополнительных подробностей, касающихся его осуществления на практике, тем самым включены посредством ссылки.
Примерно или приблизительно. Используемый в настоящем документе термин примерно или приблизительно применительно к одному или более рассматриваемым значениям относится к значению, которое подобно указанному эталонному значению. В определенных вариантах осуществления термин примерно или приблизительно относится к диапазону значений, которые находятся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или меньше в обоих направлениях (более или менее) от указанного эталонного значения, если не указано иное или иное не очевидно из контекста (кроме случаев, когда такое число будет превышать 100% возможного значения).
Доставка. Используемый в настоящем документе термин доставка охватывает и локальную, и системную доставку. Например, доставка мРНК охватывает ситуации, в которых мРНК доставляют в целевую ткань, и кодируемый белок экспрессируется и сохраняется в целевой ткани (что также называют локальным распределением или локальной доставкой), и ситуации, в которых мРНК доставляют в целевую ткань, и кодируемый белок экспрессируется и секретируется в систему кровообращения паци- 3 043901 ента (например, сыворотку) и систематически распределяется и захватывается другими тканями (что также называют системным распределением или системной доставкой). В некоторых вариантах осуществления доставка является легочной доставкой, например, включающей в себя распыление.
Инкапсуляция. Используемый в настоящем документе термин инкапсуляция или грамматический эквивалент, относится к процессу заключения молекулы мРНК в наночастицу.
Экспрессия. Как используется в настоящем документе, экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты относится к трансляции мРНК в полипептид, сборке нескольких полипептидов (например, тяжелой цепи или легкой цепи антитела) в интактный белок (например, антитело) и/или к посттрансляционной модификации полипептида или полностью собранного белка (например, антитела). В настоящей заявке термины экспрессия, продуцирование и грамматические эквиваленты используют взаимозаменяемо.
Функциональная. Как используется в настоящем документе, функциональная биологическая молекула представляет собой биологическую молекулу в форме, в которой она проявляет свойство и/или активность, которыми она характеризуется.
Период полужизни. Используемый в настоящем документе термин период полужизни означает время, необходимое для того, чтобы количество, например, концентрация или активность нуклеиновой кислоты или белка, упало до половины его значения, измеренного в начале периода времени.
Улучшать, увеличивать или уменьшать. Используемые в настоящем документе термины улучшать, увеличивать или уменьшать, или грамматические эквиваленты указывают значения, которые относятся к исходному измерению, такому как измерение у того же индивидуума, до начала лечения, описанного в настоящем документе, или к измерению у контрольного субъекта (или множественного контрольного субъекта) при отсутствии лечения, описанного в настоящем документе. Контрольный субъект - это субъект, страдающий той же формой заболевания, что и субъект, подвергаемый лечению, примерно того же возраста, что и субъект, подвергаемый лечению.
In Vitro. Используемый в настоящем документе термин in vitro относится к событиям, которые происходят в искусственной среде, например, в тестовой пробирке или реакционном сосуде, в культуре клеток и т.д., а не в многоклеточном организме.
In Vivo. Используемый в настоящем документе термин in vivo относится к событиям, которые происходят в многоклеточном организме, таком как человек и не являющееся человеком животное. В контексте систем на основе клеток этот термин может использоваться в отношении событий, которые происходят в живой клетке (в отличие, например, от in vitro систем).
Выделенное. Используемый в настоящем документе термин выделенное относится к веществу и/или соединению, которое было (1) отделено по меньшей мере от некоторых из компонентов, с которыми оно связано при изначальном получении (будь то в природе и/или в экспериментальных условиях), и/или (2) продуцировано, получено и/или изготовлено руками человека. Выделенные вещества и/или соединения могут быть отделены от приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или более чем приблизительно 99% других компонентов, с которыми они изначально связаны. В некоторых вариантах осуществления выделенное средства характеризуются приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или более чем приблизительно 99% чистотой. Как используется в настоящем документе, вещество является чистым, если оно практически не содержит других компонентов. Как используется в настоящем документе, вычисление процента чистоты выделенных веществ и/или соединений не должно включать вспомогательные средства (например, буфер, растворитель, воду и т.д.).
Матричная РНК (мРНК). Используемый в настоящем документе термин матричная РНК (мРНК) относится к полинуклеотиду, который кодирует по меньшей мере один полипептид. мРНК, как используется в настоящем документе, охватывает и модифицированные, и немодифицированные РНК. мРНК может содержать одну или более кодирующих и некодирующих областей. мРНК может быть очищена из природных источников, получена с использованием рекомбинантных систем экспрессии и необязательно очищена, химически синтезирована и т.д. При необходимости, например, в случае химически синтезированных молекул, мРНК может включать в себя нуклеозидные аналоги, такие как аналоги, имеющие химически модифицированные основания или сахара, каркасные модификации и т.д. Последовательность мРНК представлена в 5'-3'-направлении, если не указано иное.
Нуклеиновая кислота. Используемый в настоящем документе термин нуклеиновая кислота в его самом широком смысле относится к любому соединению и/или веществу, которое включено или может быть включено в полинуклеотидную цепь. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой соединение и/или вещество, которое включено или может быть включено в полинуклеотидную цепь посредством сложной фосфодиэфирной связи. В некоторых вариантах осуществления
- 4 043901 нуклеиновая кислота относится к индивидуальным остаткам нуклеиновой кислоты (например, нуклеотидам и/или нуклеозидам). В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота относится к полинуклеотидной цепи, содержащей индивидуальные остатки нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота охватывает РНК, а также одно- и/или двухнитевые ДНК и/или кДНК Кроме того, термины нуклеиновая кислота, ДНК, РНК и/или подобные термины включают в себя аналоги нуклеиновой кислоты, т.е. аналоги с каркасом, отличным от сложного фосфодиэфирного. Например, так называемые пептидные нуклеиновые кислоты, которые известны в уровне техники и имеют пептидные связи вместо сложных фосфодиэфирных связей в каркасе, рассматриваются в объеме настоящего изобретения. Термин нуклеотид последовательность, кодирующая аминокислота последовательность включает в себя все нуклеотидные последовательности, которые являются вырожденными версиями друг друга и/или кодируют одну и ту же аминокислотную последовательность. Нуклеотидные последовательности, которые кодируют белки и/или РНК, могут включать в себя интроны. Нуклеиновые кислоты может быть очищены от природных источников, получены с использованием рекомбинантных систем экспрессии и необязательно очищены, химически синтезированы и т.д. При необходимости, например, в случае химически синтезированных молекул, нуклеиновые кислоты могут включать в себя нуклеозидные аналоги, такие как аналоги, имеющие химически модифицированные основания или сахара, каркасные модификации и т.д. Последовательность нуклеиновой кислоты представлена в 5'-3'-направлении, если не указано иное. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой или содержит натуральные нуклеозиды (например, аденозин, тимидин, гуанозин, цитидин, уридин, дезоксиаденозин, дезокситимидин, дезоксигуанозин и дезоксицитидин); нуклеозидные аналоги (например, 2-аминоаденозин, 2-тиотимидин, инозин, пирроло-пиримидин, 3-метиладенозин, 5метилцитидин, C-5-пропинил-цитидин, C-5-пропинил-уридин, 2-аминоаденозин, С5-6ромуридин, C5фторуридин, С5-йодуридин, С5-пропинил-уридин, С5-пропинил-цитидин, C5-метилцитидин, 2аминоаденозин, 7-деазааденозин, 7-деазагуанозин, 8-оксоаденозин, 8-оксогуанозин, O(6)-метилгуанин и 2-тиоцитидин); химически модифицированные основания; биологически модифицированные основания (например, метилированные основания); интеркалированные основания; модифицированные сахара (например, 2'-фторрибоза, рибоза, 2'-дезоксирибоза, арабиноза и гексоза) и/или модифицированные фосфатные группы (например, фосфоротиоаты и 5'-N-фосфороαмидαтные связи). В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение, в частности, относится к немодифицированным нуклеиновым кислотам, то есть нуклеиновым кислотам (например, полинуклеотидам и остаткам, в том числе нуклеотидам и/или нуклеозидам), которые не были химически модифицированы для облегчения или достижения доставки. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды T и U используют взаимозаменяемо в описаниях последовательностей.
Пациент. Используемый в настоящем документе термин пациент или субъект относится к любому организму, в который может быть введена композиция, например, для экспериментальных, диагностических, профилактических, косметических и/или терапевтических целей. Типичные пациенты включают в себя животных (например, млекопитающих, таких как мыши, крысы, кролики, приматы и/или люди). В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек. Человек включает в себя пренатальные и постнатальные формы.
Фармацевтически приемлемый. Термин фармацевтически приемлемый, как используется в настоящем документе, относится к веществам, которые, в рамках медицинского заключения, являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерно с разумным отношением польза/риск.
Субъект. Используемый в настоящем документе термин субъект относится к человеку или любому отличному от человека животному (например, мышь, крыса, кролик, собака, кошка, крупный рогатый скот, свинья, овца, лошадь или примат). Человек включает в себя пренатальные и постнатальные формы. Во многих вариантах осуществления субъектом является человек. Субъектом может быть пациент, который относится к человеку, обращающемуся в медицинское учреждение для диагностирования или лечения заболевания. Термин субъект используют в настоящем документе взаимозаменяемо с индивидуумом или пациентом. Субъект может быть поражен или подвержен заболеванию или нарушению, но может проявлять или не проявлять симптомы заболевания или нарушения.
По сути. Используемый в настоящем документе термин по сути относится к качественному состоянию, демонстрирующему полную или почти полную меру или степень рассматриваемых характеристики или свойства. Рядовому специалисту в биологических областях будет понятно, что биологические и химические явления редко, если вообще когда-либо, доходят до завершения и/или завершаются или достигают, или избегают абсолютного результата. Поэтому, термин по сути используют в настоящем документе для обозначения потенциального отсутствия завершенности, присущего многим биологическим и химическим явлениям.
Лечение. Используемый в настоящем документе термин лечить, лечение или процесс лечения относится к любому способу, используемому для частичного или полного облегчения, улучшения, ослабления, подавления, предотвращения, задержки проявления, уменьшения степени тяжести и/или
- 5 043901 уменьшения частоты возникновения один или более симптомов или признаков конкретного заболевания, нарушения и/или состояния. Лечение может быть назначено субъекту, у которого не проявляются признаки заболевания и/или проявляются только ранние признаки заболевания, с целью уменьшения риска развития патологии, связанной с заболеванием.
Подробное описание
[Настоящее изобретение относится к, среди прочего, способам лечения кистозного фиброза, предусматривающим стадию введения субъекту, нуждающемуся в лечении, композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок-регулятор трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR), где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1, где концентрация мРНК составляет по меньшей мере 0,4 мг/мл и где стадия введения предусматривает ингаляцию.
В следующих разделах подробно описываются различные аспекты настоящего изобретения. Использование разделов не предназначено для ограничения настоящего изобретения. Каждый раздел может применяться к любому аспекту настоящего изобретения. В данной заявке использование или означает и/или, если не указано иное.
Кистозный фиброз
Кистозный фиброз, также известный как муковисцидоз, представляет собой аутосомное рецессивное генетическое нарушение, которое наиболее критически влияет на легкие, а также на поджелудочную железу, печень и кишечник (Gibson et al., Am J Respir Crit Care Med. (2003) 168(8):918-951; Ratjen et al., Lancet bond Engl. (2003) 361(9358):681-689; O'Sullivan et al., Lancet Lond Engl. (2009) 373(9678):18911904). Кистозный фиброз вызывается мутациями в гене, кодирующем белок-регулятор трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR). Этот белок функционирует как канал, который транспортирует хлоридные ионы через мембрану клеток и необходим для регулирования компонентов слизи, пота, слюны, слез и пищеварительных ферментов. Вызывающие заболевание мутации в белке CFTR вызывают дисфункцию его активности в качестве канала, что приводит к аномальному транспорту ионов хлорида и натрия через эпителий, приводящему к плотным, вязким выделениям в легком, поджелудочной железе и других органах, что характерно для заболевания CF (O'Sulliven et al., Lancet Lond Engl. (2009) 373(9678): 1891-1904; Rowe et al., N Engl J Med. (2005) 352(19): 1992-2001). У большинства пациентов с CF развивается тяжелое хроническое заболевание легких, связанное с обструкцией дыхательных путей, отчасти из-за повышенных уровней сульфатированных муцинов, воспаления и рецидивных инфекций, которые в конечном итоге приводят к летальному исходу; средняя прогнозируемая продолжительность жизни в США составляет 40,7 года. Кистозный фиброз является наиболее частым летальным генетическим заболеванием среди белого населения.
Симптомы часто появляются в младенчестве и детском возрасте, причем наиболее частыми являются респираторные симптомы, сопровождающиеся задержкой развития, стеатореей и мекониевой непроходимостью кишечника (Gibson et al., Am J Respir Crit Care Med. (2003) 168(8):918-951). Наиболее распространенные осложнения CF связаны с легкими и включают в себя закупорку узких проходов пораженных органов с густыми выделениями. Такие блокировки приводят к ремоделированию и инфекции в легком, вызывают повреждение поджелудочной железы из-за накопленных пищеварительных ферментов и закупорки кишечника. Диабет является наиболее распространенным нелегочным осложнением и представляет собой отдельное заболевание, известное как диабет, связанный с CF.
Легкие индивидуумов с CF колонизированы и заражены бактериями с раннего возраста. Это приводит к хронической инфекции дыхательных путей и воспалению, прогрессированию бронхоэктаза, задержке газов, гипоксемии и гиперкапнии. Легочная недостаточность является причиной 68,1% смертей, связанных с CF, в США. На начальной стадии обычные бактерии, такие как Staphylococcus aureus и Hemophilus influenzae, колонизируют и заражают легкие. Со временем доминирует Pseudomonas aeruginosa (а иногда Burkholderia cepacia). К 18 годам у 80% пациентов с классическим CF накапливается P. aeruginosa, а у 3,5% накапливается B. cepacia. Попав в легкие, эти бактерии адаптируются к окружающей среде и развивают устойчивость к обычно используемым антибиотикам.
Основной дефект, вызывающий CF, представляет собой аномальный эпителиальный транспорт анионов из-за недостаточной экспрессии или дисфункции белка CFTR. Белок CFTR в основном функционирует как хлоридный канал в мембранах эпителиальных клеток; однако он также участвует в ряде других функций клеточной мембраны, таких как ингибирование транспорта натрия через эпителиальный натриевый канал, регуляция хлоридного канала внешнего выпрямления и регуляция аденозинтрифосфатных (АТФ) каналов (О'Sullivan et al., Lancet Lond Engl. (2009) 373(9678):1891-1904). CF вызывается мутациями в гене, кодирующем белок CFTR, из которых было идентифицировано более 1500 вызывающих заболевание мутаций (O'Sullivan et al., Lancet Lond Engl. (2009) 373(9678): 1891-1904). Более распространенные генные мутации приводят к отсутствию синтеза белка CFTR (класс I), дефектному процессингу и созреванию белка CFTR (класс II) или экспрессии белка CFTR с дефектом регуляции, например, с пониженным связыванием АТФ и гидролизом (класс III) (Rowe et al., N Engl J Med. (2005) 352(19): 1992-2001). Делеция фенилаланина в положении 508 (F508del) является наиболее распространенной мутацией CFTR во всем мире и является дефектом класса II, при котором неправильно свернутый белок
- 6 043901 быстро разлагается клеткой вскоре после синтеза (Rowe et al., N Engl J Med. (2005) 352(19): 1992-2001). Недостаток функционального белка CFTR вызывает обструкцию слизистой оболочки экзокринных желез у пациентов с CF, вторичную по отношению к аномальному транспорту хлорида и натрия через эпителий. В легких это приводит к развитию густых, вязких выделений, которые блокируют дыхательные пути и подслизистые железы, что, в свою очередь, приводит к хронической бактериальной инфекции и воспалению, как описано выше.
Респираторные симптомы кистозного фиброза включают в себя постоянный кашель с выделением густой слизи (мокроты), хрипы, одышку, непереносимость физических упражнений, повторные инфекции легких и воспаленные носовые ходы или заложенный нос. Пищеварительные симптомы кистозного фиброза включают в себя неприятный запах, слизистый стул, плохое увеличение веса и роста, кишечную блокаду, особенно у новорожденных (мекониевую непроходимость кишечника) и тяжелые запоры.
Существует несколько различных способов оценки симптомов кистозного фиброза. В одном варианте осуществления один или более симптомов кистозного фиброза оценивают по объему форсированного выдоха (FEV), который измеряет, сколько воздуха человек может выдохнуть при форсированном дыхании. В одном варианте осуществления измеряется количество воздуха, выдыхаемого за первую секунду форсированного дыхания (FEV1). В одном варианте осуществления измеряется количество воздуха, выдыхаемого за вторую секунду форсированного дыхания (FEV2). В одном варианте осуществления измеряется количество воздуха, выдыхаемого за третью секунду форсированного дыхания (FEV3). В одном варианте осуществления измеряется форсированная жизненная емкость (FVC), которая представляет собой общее количество воздуха, выдыхаемого во время теста FEV. В одном варианте осуществления один или более симптомов кистозного фиброза оценивают по баллу респираторного домена пересмотренного опросника кистозного фиброза (CFQ-R). Балл респираторного домена CFQ-R является мерой респираторных симптомов, относящихся к пациентам с CF, таких как кашель, продуцирование мокроты и затрудненное дыхание. В одном варианте осуществления один или более симптомов кистозного фиброза оценивают по относительному риску легочного обострения. В одном варианте осуществления один или более симптомов кистозного фиброза оценивают по изменению массы тела. В одном варианте осуществления один или более симптомов кистозного фиброза оценивают по изменению ионов хлорида в потовой жидкости (ммоль/л).
Отбор пациентов
Настоящее изобретение подходит для лечения пациентов с различными дефектами CFTR, в том числе без ограничения пациентов с разными симптомами CFTR, мутациями или классами, описанными в настоящем документе.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, несущих одну или более, две или более, три или более, четыре или более или пять или более мутаций из класса I (синтез дефектного белка), показанных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, несущих одну или более, две или более, три или более, четыре или более или пять или более мутаций из класса II (аномальные процессинг и миграция), показанных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, несущих одну или более, две или более, три или более, четыре или более или пять или более мутаций из класса III (дефектное регулирование/гейтирование канала), показанных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, несущих одну или более, две или более, три или более, четыре или более или пять или более мутаций из класса IV (пониженная проводимость канала), показанных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, несущих одну или более, две или более, три или более, четыре или более или пять или более мутаций из класса V (пониженные синтез и/или миграция), показанных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, несущих любую комбинацию специфических мутаций, выбранных из табл. 1 (например, одну или более, две или более, три или более, четыре или более или пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более мутаций из разных классов, показанных в табл. 1).
- 7 043901
Таблица 1
Классификация мутации гена CFTR
Категория Мутация Специфические мутации
Класс I Дефектный синтез белка (бессмысленный, сдвиг рамки считывания, аберрантный сплайсинг) 1078delT, 1154 insTC, 1525-2А > G, 1717-1G > A, 1898+1G > A, 2184delA, 2184 ins A, 3007delG, 3120+1G > A, 3659delC, 3876delA, 3905insT, 394delTT, 4010del4, 4016insT, 4326delTC, 4374+1G > T, 441delA, 556delA, 621+1G> T, 6211G > T, 711+1G > T, 875+1G > C, E1104X, E585X, E60X, E822X, G542X, G551D/R553X, Q493X, Q552X, Q814X, R1066C, R1162X, R553X, V520F, W1282X, Y1092X
Класс II Аномальные процессинг и миграция A559T, D979A, AF508, ΔΙ507, G480C, G85E, N1303K, S549I, S549N, S549R
Класс III Дефектное регулирование/гейтирование канала G1244E, G1349D, G551D, G551S, G85E, H199R, П072Т, I48T, L1077P, R560T, S1255P, S549N (R75Q)
Класс IV Пониженная проводимость канала A800G, D1152H, D1154G, D614G, delM1140, E822K, G314E, G576A, G622D, G85E, H620Q, Il 139V, I1234V, L1335P, Ml 137V, P67L, R117C, R117P, R117H, R334W, R347H, R347P, R347P/R347H, R792G, S125 IN, V232D
Класс V Пониженные синтез и/или миграция 2789+5G > A, 3120G > A, 3272-26A > G, 3849+lOkbC > T, 5T вариант, 621+3A > G, 711+3 A > G, A445E, A455E, IVS8 poly T, P574H, 875+1G >C
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент представляет собой мужчину или женщину возрастом 2 лет или старше, или 3 лет или старше, или 6 лет или старше, или 7 лет или старше, или 12 лет или старше, или 13 лет или старше, или 18 лет или старше, или 19 лет или старше, или 25 лет или старше, или 25 лет или старше, или 30 лет или старше, или 35 лет или старше, или 40 лет или старше, или 45 лет или старше, или 50 лет или старше. В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении возраст пациента составляет менее 50 лет, или менее 45 лет, или менее 40 лет, или менее 35 лет, или менее 30 лет, или менее 25 лет, или менее 20 лет, или менее 19 лет, или менее 18 лет, или менее 13 лет, или менее 12 лет, или менее 7 лет, или менее 6 лет, или менее 3 лет, или менее 2 лет. В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент представляет собой мужчину или женщину возрастом от 2 до 18 лет, или от 2 до 12 лет, или от 2 до 6 лет, или от 6 до 12 лет, или от 6 до 18 лет, или от 12 до 16 лет, или от 2 до 50 лет, или от 6 до 50 лет, или от 12 до 50 лет, или от 18 до 50 лет. В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент представляет собой женщину, которая беременна или может стать беременной.
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент имеет значение ионов хлорида в потовой жидкости >60 ммоль/л, >65 ммоль/л, >70 ммоль/л, >75 ммоль/л, >80 ммоль/л, >85 ммоль/л, >90 ммоль/л, >95 ммоль/л, >100 ммоль/л, >110 ммоль/л, >120 ммоль/л, >130 ммоль/л, >140 ммоль/л или >150 ммоль/л при количественном поликарпиновом ионтофорезном тесте (задокументированное в медицинской карте субъекта). В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент имеет хроническое синусно-пульмональное заболевание и/или желудочнокишечные/пищевые аномалии, указывающие на заболевание CF. В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент имеет хроническое синусно-пульмональное заболевание и/или желудочно-кишечные/пищевые аномалии, указывающие на заболевание CF.
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент имеет FEV1 >50% и <90% (например, <85%, <80%, <75%, <70%, <65%, <60% или <55%) прогнозируемой нормы (т.е. среднего FEV пациентов без CF) на основе возраста, пола и роста пациента. В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент имеет насыщение кислородом в состоянии покоя >92% в комнатном воздухе (пульсовая оксиметрия). В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент имеет индекс массы тела >17,5 кг/м2 и массу >40 кг.
- 8 043901
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент получил или одновременно получает другие медицинские препараты от CF. Например, нуждающийся в лечении пациент может получать комбинированное лекарственное средство люмакафтор/ивакафтор (ORKAMBI) или мог проходить это лечение в течение по меньшей мере 28 дней до начала лечения в соответствии с настоящим изобретением. Другие медицинские препараты от CF могут включать в себя без ограничения рутинные ингаляционные терапевтические средства, направленные на очистку дыхательных путей и контроль респираторных инфекций, такие как бронходилататоры, рчДНКаза (PULMOZYME), гипертонический раствор, антибиотики, стероиды; и другие рутинные связанные с CF терапевтические средства, такие как системные антибиотики, ферменты поджелудочной железы, поливитамины, а также медицинские препараты против диабета и для печени.
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент не курил в течение минимум 2 лет. В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент не получает лечение ингаляционной рчДНКазой (PULMOZYME) в течение 24 часов до и/или после введения композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок CFTR в соответствии с настоящим изобретением.
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент получал лечение или в настоящее время получает лечение гормональными заместительными терапевтическими средствами, заместительной терапией гормона щитовидной железы, нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами и рецептурным дронабинолом (MARINOL) в ходе лечения.
В некоторых вариантах осуществления нуждающийся в лечении пациент прекратил использование одного или более других способов лечения кистозного фиброза, описанных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления пациент прекратил использование одного или более других способов лечения кистозного фиброза за по меньшей мере 12 часов, по меньшей мере 24 часа, по меньшей мере 36 часов, по меньшей мере 48 часов, по меньшей мере 72 часа, по меньшей мере 1 неделю, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 3 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере 5 недель, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере 7 недель или по меньшей мере 8 недель до введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением. В некоторых вариантах осуществления пациент прекратил использование одного или более других способов лечения кистозного фиброза за менее чем 12 часов, менее чем 24 часа, менее чем 36 часов, менее чем 48 часов, менее чем 72 часа, менее чем 1 неделю, менее чем 2 недели, менее чем 3 недели, менее чем 4 недели, менее чем 5 недель, менее чем 6 недель, менее чем 7 недель, менее чем 8 недель, менее чем 9 недель или менее чем 10 недель до введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением.
Состав и введение
В соответствии с настоящим изобретением соответствующий состав для лечения содержит мРНК, кодирующую любой полноразмерный белок CFTR, его фрагмент или часть, которые могут быть замещены для активности встречающегося в природе белка CFTR и/или снижения интенсивности, тяжести и/или частоты одного или более симптомов, связанных с кистозным фиброзом.
В некоторых вариантах осуществления соответствующей последовательность МРНК является последовательность МРНК, кодирующая человеческий белок CFTR (hCFTR). В некоторых вариантах осуществления соответствующая последовательность мРНК кодон-оптимизирована для эффективной экспрессии в человеческих клетках. Иллюстративные кодон-оптимизированная кодирующая CFTR последовательность МРНК И соответствующая аминокислотная последовательность показаны в табл. 2.
Таблица 2. Иллюстративные последовательности мРНК CFTR и белка
Кодоноптимиз ированн ая кодирую щая человеч AUGCAACGCUCUCCUCUUGAAAAGGCCUCGGUGGUGUCCAAGCU CUUCUUCUCGUGGACUAGACCCAUCCUGAGAAAGGGGUACAGAC AGCGCUUGGAGCUGUCCGAUAUCUAUCAAAUCCCUUCCGUGGAC UCCGCGGACAACCUGUCCGAGAAGCUCGAGAGAGAAUGGGACAG AGAACUCGCCUCAAAGAAGAACCCGAAGCUGAUUAAUGCGCUUA GGCGGUGCUUUUUCUGGCGGUUCAUGUUCUACGGCAUCUUCCUC UACCUGGGAGAGGUCACCAAGGCCGUGCAGCCCCUGUUGCUGGG ACGGAUUAUUGCCUCCUACGACCCCGACAACAAGGAAGAAAGAA
- 9 043901
еский GCAUCGCUAUCUACUUGGGCAUCGGUCUGUGCCUGCUUUUCAUC
CFTR GUCCGGACCCUCUUGUUGCAUCCUGCUAUUUUCGGCCUGCAUCA CAUUGGCAUGCAGAUGAGAAUUGCCAUGUUUUCCCUGAUCUACA
Последо AGAAAACUCUGAAGCUCUCGAGCCGCGUGCUUGACAAGAUUUCC
вательн AUCGGCCAGCUCGUGUCCCUGCUCUCCAACAAUCUGAACAAGUU
ость CGACGAGGGCCUCGCCCUGGCCCACUUCGUGUGGAUCGCCCCUC
мРНК UGCAAGUGGCGCUUCUGAUGGGCCUGAUCUGGGAGCUGCUGCAA GCCUCGGCAUUCUGUGGGCUUGGAUUCCUGAUCGUGCUGGCACU GUUCCAGGCCGGACUGGGGCGGAUGAUGAUGAAGUACAGGGACC AGAGAGCCGGAAAGAUUUCCGAACGGCUGGUGAUCACUUCGGAA AUGAUCGAAAACAUCCAGUCAGUGAAGGCCUACUGCUGGGAAGA GGCCAUGGAAAAGAUGAUUGAAAACCUCCGGCAAACCGAGCUGA AGCUGACCCGCAAGGCCGCUUACGUGCGCUAUUUCAACUCGUCC GCUUUCUUCUUCUCCGGGUUCUUCGUGGUGUUUCUCUCCGUGCU CCCCUACGCCCUGAUUAAGGGAAUCAUCCUCAGGAAGAUCUUCA CCACCAUUUCCUUCUGUAUCGUGCUCCGCAUGGCCGUGACCCGG CAGUUCCCAUGGGCCGUGCAGACUUGGUACGACUCCCUGGGAGC CAUUAACAAGAUCCAGGACUUCCUUCAAAAGCAGGAGUACAAGA CCCUCGAGUACAACCUGACUACUACCGAGGUCGUGAUGGAAAAC GUCACCGCCUUUUGGGAGGAGGGAUUUGGCGAACUGUUCGAGAA GGCCAAGCAGAACAACAACAACCGCAAGACCUCGAACGGUGACG ACUCCCUCUUCUUUUCAAACUUCAGCCUGCUCGGGACGCCCGUG CUGAAGGACAUUAACUUCAAGAUCGAAAGAGGACAGCUCCUGGC GGUGGCCGGAUCGACCGGAGCCGGAAAGACUUCCCUGCUGAUGG UGAUCAUGGGAGAGCUUGAACCUAGCGAGGGAAAGAUCAAGCAC UCCGGCCGCAUCAGCUUCUGUAGCCAGUUUUCCUGGAUCAUGCC CGGAACCAUUAAGGAAAACAUCAUCUUCGGCGUGUCCUACGAUG AAUACCGCUACCGGUCCGUGAUCAAAGCCUGCCAGCUGGAAGAG GAUAUUUCAAAGUUCGCGGAGAAAGAUAACAUCGUGCUGGGCGA AGGGGGUAUUACCUUGUCGGGGGGCCAGCGGGCUAGAAUCUCGC UGGCCAGAGCCGUGUAUAAGGACGCCGACCUGUAUCUCCUGGAC UCCCCCUUCGGAUACCUGGACGUCCUGACCGAAAAGGAGAUCUU CGAAUCGUGCGUGUGCAAGCUGAUGGCUAACAAGACUCGCAUCC UCGUGACCUCCAAAAUGGAGCACCUGAAGAAGGCAGACAAGAUU CUGAUUCUGCAUGAGGGGUCCUCCUACUUUUACGGCACCUUCUC GGAGUUGCAGAACUUGCAGCCCGACUUCUCAUCGAAGCUGAUGG GUUGCGACAGCUUCGACCAGUUCUCCGCCGAAAGAAGGAACUCG AUCCUGACGGAAACCUUGCACCGCUUCUCUUUGGAAGGCGACGC CCCUGUGUCAUGGACCGAGACUAAGAAGCAGAGCUUCAAGCAGA CCGGGGAAUUCGGCGAAAAGAGGAAGAACAGCAUCUUGAACCCC AUUAACUCCAUCCGCAAGUUCUCAAUCGUGCAAAAGACGCCACU GCAGAUGAACGGCAUUGAGGAGGACUCCGACGAACCCCUUGAGA GGCGCCUGUCCCUGGUGCCGGACAGCGAGCAGGGAGAAGCCAUC CUGCCUCGGAUUUCCGUGAUCUCCACUGGUCCGACGCUCCAAGC CCGGCGGCGGCAGUCCGUGCUGAACCUGAUGACCCACAGCGUGA ACCAGGGCCAAAACAUUCACCGCAAGACUACCGCAUCCACCCGG AAAGUGUCCCUGGCACCUCAAGCGAAUCUUACCGAGCUCGACAU CUACUCCCGGAGACUGUCGCAGGAAACCGGGCUCGAAAUUUCCG AAGAAAUCAACGAGGAGGAUCUGAAAGAGUGCUUCUUCGACGAU AUGGAGUCGAUACCCGCCGUGACGACUUGGAACACUUAUCUGCG
- 10 043901
GUACAUCACUGUGCACAAGUCAUUGAUCUUCGUGCUGAUUUGGU GCCUGGUGAUUUUCCUGGCCGAGGUCGCGGCCUCACUGGUGGUG CUCUGGCUGUUGGGAAACACGCCUCUGCAAGACAAGGGAAACUC CACGCACUCGAGAAACAACAGCUAUGCCGUGAUUAUCACUUCCA CCUCCUCUUAUUACGUGUUCUACAUCUACGUCGGAGUGGCGGAU ACCCUGCUCGCGAUGGGUUUCUUCAGAGGACUGCCGCUGGUCCA CACCUUGAUCACCGUCAGCAAGAUUCUUCACCACAAGAUGUUGC AUAGCGUGCUGCAGGCCCCCAUGUCCACCCUCAACACUCUGAAG GCCGGAGGCAUUCUGAACAGAUUCUCCAAGGACAUCGCUAUCCU GGACGAUCUCCUGCCGCUUACCAUCUUUGACUUCAUCCAGCUGC UGCUGAUCGUGAUUGGAGCAAUCGCAGUGGUGGCGGUGCUGCAG CCUUACAUUUUCGUGGCCACUGUGCCGGUCAUUGUGGCGUUCAU CAUGCUGCGGGCCUACUUCCUCCAAACCAGCCAGCAGCUGAAGC AACUGGAAUCCGAGGGACGAUCCCCCAUCUUCACUCACCUUGUG ACGUCGUUGAAGGGACUGUGGACCCUCCGGGCUUUCGGACGGCA GCCCUACUUCGAAACCCUCUUCCACAAGGCCCUGAACCUCCACAC CGCCAAUUGGUUCCUGUACCUGUCCACCCUGCGGUGGUUCCAGA UGCGCAUCGAGAUGAUUUUCGUCAUCUUCUUCAUCGCGGUCACA UUCAUCAGCAUCCUGACUACCGGAGAGGGAGAGGGACGGGUCGG AAUAAUCCUGACCCUCGCCAUGAACAUUAUGAGCACCCUGCAGU GGGCAGUGAACAGCUCGAUCGACGUGGACAGCCUGAUGCGAAGC GUCAGCCGCGUGUUCAAGUUCAUCGACAUGCCUACUGAGGGAAA ACCCACUAAGUCCACUAAGCCCUACAAAAAUGGCCAGCUGAGCA AGGUCAUGAUCAUCGAAAACUCCCACGUGAAGAAGGACGAUAUU UGGCCCUCCGGAGGUCAAAUGACCGUGAAGGACCUGACCGCAAA GUACACCGAGGGAGGAAACGCCAUUCUCGAAAACAUCAGCUUCU CCAUUUCGCCGGGACAGCGGGUCGGCCUUCUCGGGCGGACCGGU UCCGGGAAGUCAACUCUGCUGUCGGCUUUCCUCCGGCUGCUGAA UACCGAGGGGGAAAUCCAAAUUGACGGCGUGUCUUGGGAUUCCA UUACUCUGCAGCAGUGGCGGAAGGCCUUCGGCGUGAUCCCCCAG AAGGUGUUCAUCUUCUCGGGUACCUUCCGGAAGAACCUGGAUCC UUACGAGCAGUGGAGCGACCAAGAAAUCUGGAAGGUCGCCGACG AGGUCGGCCUGCGCUCCGUGAUUGAACAAUUUCCUGGAAAGCUG GACUUCGUGCUCGUCGACGGGGGAUGUGUCCUGUCGCACGGACA UAAGCAGCUCAUGUGCCUCGCACGGUCCGUGCUCUCCAAGGCCA AGAUUCUGCUGCUGGACGAACCUUCGGCCCACCUGGAUCCGGUC ACCUACCAGAUCAUCAGGAGGACCCUGAAGCAGGCCUUUGCCGA UUGCACCGUGAUUCUCUGCGAGCACCGCAUCGAGGCCAUGCUGG AGUGCCAGCAGUUCCUGGUCAUCGAGGAGAACAAGGUCCGCCAA UACGACUCCAUUCAAAAGCUCCUCAACGAGCGGUCGCUGUUCAG ACAAGCUAUUUCACCGUCCGAUAGAGUGAAGCUCUUCCCGCAUC GGAACAGCUCAAAGUGCAAAUCGAAGCCGCAGAUCGCAGCCUUG AAGGAAGAGACUGAGGAAGAGGUGCAGGACACCCGGCUUUAA (SEQ ID NO: 1)
Последо вательн ость человеч еского
MQRSPLEKASVVSKLFFSWTRPILRKGYRQRLELSDIYQIPSVDSADNL SEKLEREWDRELASKKNPKLINALRRCFFWRFMFYGIFLYLGEVTKA VQPLLLGRIIASYDPDNKEERSIAIYLGIGLCLLFIVRTLLLHPAIFGLHH IGMQMRIAMFSLIYKKTLKLSSRVLDKISIGQLVSLLSNNLNKFDEGLA LAHFVWIAPLQVALLMGLIWELLQASAFCGLGFLIVLALFQAGLGRM
- 11 043901
белка CFTR MMKYRDQRAGKISERLVITSEMIENIQSVKAYCWEEAMEKMIENLRQ TELKLTRKAAYVRYFNSSAFFFSGFFVVFLSVLPYALIKGIILRKIFTTIS FCIVLRMAVTRQFPWAVQTWYDSLGAINKIQDFLQKQEYKTLEYNLT TTEVVMENVTAFWEEGFGELFEKAKQNNNNRKTSNGDDSLFFSNFSL LGTPVLKDINFKIERGQLLAVAGSTGAGKTSLLMVIMGELEPSEGKIK HSGRISFCSQFSWIMPGTIKENIIFGVSYDEYRYRSVIKACQLEEDISKF AEKDNIVLGEGGITLSGGQRARISLARAVYKDADLYLLDSPFGYLDVL TEKEIFESCVCKLMANKTRILVTSKMEHLKKADKILILHEGSSYFYGTF SELQNLQPDFSSKLMGCDSFDQFSAERRNSILTETLHRFSLEGDAPVS WTETKKQSFKQTGEFGEKRKNSILNPINSIRKFSIVQKTPLQMNGIEED SDEPLERRLSLVPDSEQGEAILPRISVISTGPTLQARRRQSVLNLMTHSV NQGQNIHRKTTASTRKVSLAPQANLTELDIYSRRLSQETGLEISEEINE EDLKECFFDDMESIPAVTTWNTYLRYITVHKSLIFVLIWCLVIFLAEVA ASLVVLWLLGNTPLQDKGNSTHSRNNSYAVIITSTSSYYVFYIYVGVA DTLLAMGFFRGLPLVHTLITVSKILHHKMLHSVLQAPMSTLNTLKAG GILNRFSKDIAILDDLLPLTIFDFIQLLLIVIGAIAVVAVLQPYIFVATVP VIVAFIMLRAYFLQTSQQLKQLESEGRSPIFTHLVTSLKGLWTLRAFGR QPYFETLFHKALNLHTANWFLYLSTLRWFQMRIEMIFVIFFIAVTFISIL TTGEGEGRVGIILTLAMNIMSTLQWAVNSSIDVDSLMRSVSRVFKFID MPTEGKPTKSTKPYKNGQLSKVMIIENSHVKKDDIWPSGGQMTVKDL TAKYTEGGNAILENISFSISPGQRVGLLGRTGSGKSTLLSAFLRLLNTE GEIQIDGVSWDSITLQQWRKAFGVIPQKVFIFSGTFRKNLDPYEQWSD QEIWKVADEVGLRSVIEQFPGKLDFVLVDGGCVLSHGHKQLMCLARS VLSKAKILLLDEPSAHLDPVTYQIIRRTLKQAFADCTVILCEHRIEAML ECQQFLVIEENKVRQYDSIQKLLNERSLFRQAISPSDRVKLFPHRNSSK CKSKPQIAALKEETEEEVQDTRL (SEQ ID NO: 2)
В одном варианте осуществления кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR включает в себя SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR, соответствующая настоящему изобретению, характеризуется по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью по отношению к SEQ ID NO: 1 и кодирует белок CFTR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, соответствующая настоящему изобретению, также содержит 5' и 3' UTR последовательности. Ниже показаны иллюстративные 5' и 3' UTR последовательности.
Иллюстративная 5' UTR последовательность
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACA
CCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUC
CCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACG (SEQ ID NO: 3)
Иллюстративная 3' UTR последовательность
CGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGC
CACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU (SEQ ID NO: 4) или
GGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCC
ACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAAGCU (SEQ ID NO: 5)
- 12043901
Таким образом, в одном варианте осуществления иллюстративная полноразмерная кодоноптимизированная последовательность мРНК CFTR, соответствующая настоящему изобретению, представляет собой
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACA CCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUC CCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACGAUGCAACGCUCUCCUCUUG AAAAGGCCUCGGUGGUGUCCAAGCUCUUCUUCUCGUGGACUAGACCCAUCCUG AGAAAGGGGUACAGACAGCGCUUGGAGCUGUCCGAUAUCUAUCAAAUCCCUUC CGUGGACUCCGCGGACAACCUGUCCGAGAAGCUCGAGAGAGAAUGGGACAGAG AACUCGCCUCAAAGAAGAACCCGAAGCUGAUUAAUGCGCUUAGGCGGUGCUUU UUCUGGCGGUUCAUGUUCUACGGCAUCUUCCUCUACCUGGGAGAGGUCACCAA GGCCGUGCAGCCCCUGUUGCUGGGACGGAUUAUUGCCUCCUACGACCCCGACA ACAAGGAAGAAAGAAGCAUCGCUAUCUACUUGGGCAUCGGUCUGUGCCUGCUU UUCAUCGUCCGGACCCUCUUGUUGCAUCCUGCUAUUUUCGGCCUGCAUCACAU UGGCAUGCAGAUGAGAAUUGCCAUGUUUUCCCUGAUCUACAAGAAAACUCUGA AGCUCUCGAGCCGCGUGCUUGACAAGAUUUCCAUCGGCCAGCUCGUGUCCCUG CUCUCCAACAAUCUGAACAAGUUCGACGAGGGCCUCGCCCUGGCCCACUUCGU GUGGAUCGCCCCUCUGCAAGUGGCGCUUCUGAUGGGCCUGAUCUGGGAGCUGC UGCAAGCCUCGGCAUUCUGUGGGCUUGGAUUCCUGAUCGUGCUGGCACUGUUC
- 13 043901
CAGGCCGGACUGGGGCGGAUGAUGAUGAAGUACAGGGACCAGAGAGCCGGAAA GAUUUCCGAACGGCUGGUGAUCACUUCGGAAAUGAUCGAAAACAUCCAGUCAG UGAAGGCCUACUGCUGGGAAGAGGCCAUGGAAAAGAUGAUUGAAAACCUCCGG CAAACCGAGCUGAAGCUGACCCGCAAGGCCGCUUACGUGCGCUAUUUCAACUC GUCCGCUUUCUUCUUCUCCGGGUUCUUCGUGGUGUUUCUCUCCGUGCUCCCCU ACGCCCUGAUUAAGGGAAUCAUCCUCAGGAAGAUCUUCACCACCAUUUCCUUC UGUAUCGUGCUCCGCAUGGCCGUGACCCGGCAGUUCCCAUGGGCCGUGCAGAC UUGGUACGACUCCCUGGGAGCCAUUAACAAGAUCCAGGACUUCCUUCAAAAGC AGGAGUACAAGACCCUCGAGUACAACCUGACUACUACCGAGGUCGUGAUGGAA AACGUCACCGCCUUUUGGGAGGAGGGAUUUGGCGAACUGUUCGAGAAGGCCAA GCAGAACAACAACAACCGCAAGACCUCGAACGGUGACGACUCCCUCUUCUUUU CAAACUUCAGCCUGCUCGGGACGCCCGUGCUGAAGGACAUUAACUUCAAGAUC GAAAGAGGACAGCUCCUGGCGGUGGCCGGAUCGACCGGAGCCGGAAAGACUUC CCUGCUGAUGGUGAUCAUGGGAGAGCUUGAACCUAGCGAGGGAAAGAUCAAGC ACUCCGGCCGCAUCAGCUUCUGUAGCCAGUUUUCCUGGAUCAUGCCCGGAACC AUUAAGGAAAACAUCAUCUUCGGCGUGUCCUACGAUGAAUACCGCUACCGGUC CGUGAUCAAAGCCUGCCAGCUGGAAGAGGAUAUUUCAAAGUUCGCGGAGAAAG AUAACAUCGUGCUGGGCGAAGGGGGUAUUACCUUGUCGGGGGGCCAGCGGGCU AGAAUCUCGCUGGCCAGAGCCGUGUAUAAGGACGCCGACCUGUAUCUCCUGGA CUCCCCCUUCGGAUACCUGGACGUCCUGACCGAAAAGGAGAUCUUCGAAUCGU GCGUGUGCAAGCUGAUGGCUAACAAGACUCGCAUCCUCGUGACCUCCAAAAUG GAGCACCUGAAGAAGGCAGACAAGAUUCUGAUUCUGCAUGAGGGGUCCUCCUA CUUUUACGGCACCUUCUCGGAGUUGCAGAACUUGCAGCCCGACUUCUCAUCGA AGCUGAUGGGUUGCGACAGCUUCGACCAGUUCUCCGCCGAAAGAAGGAACUCG AUCCUGACGGAAACCUUGCACCGCUUCUCUUUGGAAGGCGACGCCCCUGUGUC AUGGACCGAGACUAAGAAGCAGAGCUUCAAGCAGACCGGGGAAUUCGGCGAAA AGAGGAAGAACAGCAUCUUGAACCCCAUUAACUCCAUCCGCAAGUUCUCAAUC GUGCAAAAGACGCCACUGCAGAUGAACGGCAUUGAGGAGGACUCCGACGAACC CCUUGAGAGGCGCCUGUCCCUGGUGCCGGACAGCGAGCAGGGAGAAGCCAUCC UGCCUCGGAUUUCCGUGAUCUCCACUGGUCCGACGCUCCAAGCCCGGCGGCGG CAGUCCGUGCUGAACCUGAUGACCCACAGCGUGAACCAGGGCCAAAACAUUCA CCGCAAGACUACCGCAUCCACCCGGAAAGUGUCCCUGGCACCUCAAGCGAAUC UUACCGAGCUCGACAUCUACUCCCGGAGACUGUCGCAGGAAACCGGGCUCGAA AUUUCCGAAGAAAUCAACGAGGAGGAUCUGAAAGAGUGCUUCUUCGACGAUAU
- 14 043901
GGAGUCGAUACCCGCCGUGACGACUUGGAACACUUAUCUGCGGUACAUCACUG UGCACAAGUCAUUGAUCUUCGUGCUGAUUUGGUGCCUGGUGAUUUUCCUGGCC GAGGUCGCGGCCUCACUGGUGGUGCUCUGGCUGUUGGGAAACACGCCUCUGCA AGACAAGGGAAACUCCACGCACUCGAGAAACAACAGCUAUGCCGUGAUUAUCA CUUCCACCUCCUCUUAUUACGUGUUCUACAUCUACGUCGGAGUGGCGGAUACC CUGCUCGCGAUGGGUUUCUUCAGAGGACUGCCGCUGGUCCACACCUUGAUCAC CGUCAGCAAGAUUCUUCACCACAAGAUGUUGCAUAGCGUGCUGCAGGCCCCCA UGUCCACCCUCAACACUCUGAAGGCCGGAGGCAUUCUGAACAGAUUCUCCAAG GACAUCGCUAUCCUGGACGAUCUCCUGCCGCUUACCAUCUUUGACUUCAUCCA GCUGCUGCUGAUCGUGAUUGGAGCAAUCGCAGUGGUGGCGGUGCUGCAGCCUU ACAUUUUCGUGGCCACUGUGCCGGUCAUUGUGGCGUUCAUCAUGCUGCGGGCC UACUUCCUCCAAACCAGCCAGCAGCUGAAGCAACUGGAAUCCGAGGGACGAUC CCCCAUCUUCACUCACCUUGUGACGUCGUUGAAGGGACUGUGGACCCUCCGGG CUUUCGGACGGCAGCCCUACUUCGAAACCCUCUUCCACAAGGCCCUGAACCUCC ACACCGCCAAUUGGUUCCUGUACCUGUCCACCCUGCGGUGGUUCCAGAUGCGC AUCGAGAUGAUUUUCGUCAUCUUCUUCAUCGCGGUCACAUUCAUCAGCAUCCU GACUACCGGAGAGGGAGAGGGACGGGUCGGAAUAAUCCUGACCCUCGCCAUGA ACAUUAUGAGCACCCUGCAGUGGGCAGUGAACAGCUCGAUCGACGUGGACAGC CUGAUGCGAAGCGUCAGCCGCGUGUUCAAGUUCAUCGACAUGCCUACUGAGGG AAAACCCACUAAGUCCACUAAGCCCUACAAAAAUGGCCAGCUGAGCAAGGUCA UGAUCAUCGAAAACUCCCACGUGAAGAAGGACGAUAUUUGGCCCUCCGGAGGU CAAAUGACCGUGAAGGACCUGACCGCAAAGUACACCGAGGGAGGAAACGCCAU UCUCGAAAACAUCAGCUUCUCCAUUUCGCCGGGACAGCGGGUCGGCCUUCUCG GGCGGACCGGUUCCGGGAAGUCAACUCUGCUGUCGGCUUUCCUCCGGCUGCUG AAUACCGAGGGGGAAAUCCAAAUUGACGGCGUGUCUUGGGAUUCCAUUACUCU GCAGCAGUGGCGGAAGGCCUUCGGCGUGAUCCCCCAGAAGGUGUUCAUCUUCU CGGGUACCUUCCGGAAGAACCUGGAUCCUUACGAGCAGUGGAGCGACCAAGAA AUCUGGAAGGUCGCCGACGAGGUCGGCCUGCGCUCCGUGAUUGAACAAUUUCC UGGAAAGCUGGACUUCGUGCUCGUCGACGGGGGAUGUGUCCUGUCGCACGGAC AUAAGCAGCUCAUGUGCCUCGCACGGUCCGUGCUCUCCAAGGCCAAGAUUCUG CUGCUGGACGAACCUUCGGCCCACCUGGAUCCGGUCACCUACCAGAUCAUCAG GAGGACCCUGAAGCAGGCCUUUGCCGAUUGCACCGUGAUUCUCUGCGAGCACC GCAUCGAGGCCAUGCUGGAGUGCCAGCAGUUCCUGGUCAUCGAGGAGAACAAG GUCCGCCAAUACGACUCCAUUCAAAAGCUCCUCAACGAGCGGUCGCUGUUCAG ACAAGCUAUUUCACCGUCCGAUAGAGUGAAGCUCUUCCCGCAUCGGAACAGCU CAAAGUGCAAAUCGAAGCCGCAGAUCGCAGCCUUGAAGGAAGAGACUGAGGAA GAGGUGCAGGACACCCGGCUUUAACGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAG UGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAA UAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU (SEQ ID NO: 6)
- 15 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная полноразмерная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACA CCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUC CCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACGAUGCAACGCUCUCCUCUUG AAAAGGCCUCGGUGGUGUCCAAGCUCUUCUUCUCGUGGACUAGACCCAUCCUG AGAAAGGGGUACAGACAGCGCUUGGAGCUGUCCGAUAUCUAUCAAAUCCCUUC CGUGGACUCCGCGGACAACCUGUCCGAGAAGCUCGAGAGAGAAUGGGACAGAG AACUCGCCUCAAAGAAGAACCCGAAGCUGAUUAAUGCGCUUAGGCGGUGCUUU UUCUGGCGGUUCAUGUUCUACGGCAUCUUCCUCUACCUGGGAGAGGUCACCAA GGCCGUGCAGCCCCUGUUGCUGGGACGGAUUAUUGCCUCCUACGACCCCGACA ACAAGGAAGAAAGAAGCAUCGCUAUCUACUUGGGCAUCGGUCUGUGCCUGCUU UUCAUCGUCCGGACCCUCUUGUUGCAUCCUGCUAUUUUCGGCCUGCAUCACAU UGGCAUGCAGAUGAGAAUUGCCAUGUUUUCCCUGAUCUACAAGAAAACUCUGA AGCUCUCGAGCCGCGUGCUUGACAAGAUUUCCAUCGGCCAGCUCGUGUCCCUG CUCUCCAACAAUCUGAACAAGUUCGACGAGGGCCUCGCCCUGGCCCACUUCGU GUGGAUCGCCCCUCUGCAAGUGGCGCUUCUGAUGGGCCUGAUCUGGGAGCUGC UGCAAGCCUCGGCAUUCUGUGGGCUUGGAUUCCUGAUCGUGCUGGCACUGUUC CAGGCCGGACUGGGGCGGAUGAUGAUGAAGUACAGGGACCAGAGAGCCGGAAA GAUUUCCGAACGGCUGGUGAUCACUUCGGAAAUGAUCGAAAACAUCCAGUCAG UGAAGGCCUACUGCUGGGAAGAGGCCAUGGAAAAGAUGAUUGAAAACCUCCGG CAAACCGAGCUGAAGCUGACCCGCAAGGCCGCUUACGUGCGCUAUUUCAACUC GUCCGCUUUCUUCUUCUCCGGGUUCUUCGUGGUGUUUCUCUCCGUGCUCCCCU ACGCCCUGAUUAAGGGAAUCAUCCUCAGGAAGAUCUUCACCACCAUUUCCUUC UGUAUCGUGCUCCGCAUGGCCGUGACCCGGCAGUUCCCAUGGGCCGUGCAGAC UUGGUACGACUCCCUGGGAGCCAUUAACAAGAUCCAGGACUUCCUUCAAAAGC AGGAGUACAAGACCCUCGAGUACAACCUGACUACUACCGAGGUCGUGAUGGAA AACGUCACCGCCUUUUGGGAGGAGGGAUUUGGCGAACUGUUCGAGAAGGCCAA
- 16 043901
GCAGAACAACAACAACCGCAAGACCUCGAACGGUGACGACUCCCUCUUCUUUU CAAACUUCAGCCUGCUCGGGACGCCCGUGCUGAAGGACAUUAACUUCAAGAUC GAAAGAGGACAGCUCCUGGCGGUGGCCGGAUCGACCGGAGCCGGAAAGACUUC CCUGCUGAUGGUGAUCAUGGGAGAGCUUGAACCUAGCGAGGGAAAGAUCAAGC ACUCCGGCCGCAUCAGCUUCUGUAGCCAGUUUUCCUGGAUCAUGCCCGGAACC AUUAAGGAAAACAUCAUCUUCGGCGUGUCCUACGAUGAAUACCGCUACCGGUC CGUGAUCAAAGCCUGCCAGCUGGAAGAGGAUAUUUCAAAGUUCGCGGAGAAAG AUAACAUCGUGCUGGGCGAAGGGGGUAUUACCUUGUCGGGGGGCCAGCGGGCU AGAAUCUCGCUGGCCAGAGCCGUGUAUAAGGACGCCGACCUGUAUCUCCUGGA CUCCCCCUUCGGAUACCUGGACGUCCUGACCGAAAAGGAGAUCUUCGAAUCGU GCGUGUGCAAGCUGAUGGCUAACAAGACUCGCAUCCUCGUGACCUCCAAAAUG GAGCACCUGAAGAAGGCAGACAAGAUUCUGAUUCUGCAUGAGGGGUCCUCCUA CUUUUACGGCACCUUCUCGGAGUUGCAGAACUUGCAGCCCGACUUCUCAUCGA AGCUGAUGGGUUGCGACAGCUUCGACCAGUUCUCCGCCGAAAGAAGGAACUCG AUCCUGACGGAAACCUUGCACCGCUUCUCUUUGGAAGGCGACGCCCCUGUGUC AUGGACCGAGACUAAGAAGCAGAGCUUCAAGCAGACCGGGGAAUUCGGCGAAA AGAGGAAGAACAGCAUCUUGAACCCCAUUAACUCCAUCCGCAAGUUCUCAAUC GUGCAAAAGACGCCACUGCAGAUGAACGGCAUUGAGGAGGACUCCGACGAACC CCUUGAGAGGCGCCUGUCCCUGGUGCCGGACAGCGAGCAGGGAGAAGCCAUCC UGCCUCGGAUUUCCGUGAUCUCCACUGGUCCGACGCUCCAAGCCCGGCGGCGG CAGUCCGUGCUGAACCUGAUGACCCACAGCGUGAACCAGGGCCAAAACAUUCA CCGCAAGACUACCGCAUCCACCCGGAAAGUGUCCCUGGCACCUCAAGCGAAUC UUACCGAGCUCGACAUCUACUCCCGGAGACUGUCGCAGGAAACCGGGCUCGAA AUUUCCGAAGAAAUCAACGAGGAGGAUCUGAAAGAGUGCUUCUUCGACGAUAU GGAGUCGAUACCCGCCGUGACGACUUGGAACACUUAUCUGCGGUACAUCACUG UGCACAAGUCAUUGAUCUUCGUGCUGAUUUGGUGCCUGGUGAUUUUCCUGGCC GAGGUCGCGGCCUCACUGGUGGUGCUCUGGCUGUUGGGAAACACGCCUCUGCA AGACAAGGGAAACUCCACGCACUCGAGAAACAACAGCUAUGCCGUGAUUAUCA CUUCCACCUCCUCUUAUUACGUGUUCUACAUCUACGUCGGAGUGGCGGAUACC CUGCUCGCGAUGGGUUUCUUCAGAGGACUGCCGCUGGUCCACACCUUGAUCAC CGUCAGCAAGAUUCUUCACCACAAGAUGUUGCAUAGCGUGCUGCAGGCCCCCA UGUCCACCCUCAACACUCUGAAGGCCGGAGGCAUUCUGAACAGAUUCUCCAAG GACAUCGCUAUCCUGGACGAUCUCCUGCCGCUUACCAUCUUUGACUUCAUCCA GCUGCUGCUGAUCGUGAUUGGAGCAAUCGCAGUGGUGGCGGUGCUGCAGCCUU
- 17 043901
ACAUUUUCGUGGCCACUGUGCCGGUCAUUGUGGCGUUCAUCAUGCUGCGGGCC UACUUCCUCCAAACCAGCCAGCAGCUGAAGCAACUGGAAUCCGAGGGACGAUC CCCCAUCUUCACUCACCUUGUGACGUCGUUGAAGGGACUGUGGACCCUCCGGG CUUUCGGACGGCAGCCCUACUUCGAAACCCUCUUCCACAAGGCCCUGAACCUCC ACACCGCCAAUUGGUUCCUGUACCUGUCCACCCUGCGGUGGUUCCAGAUGCGC AUCGAGAUGAUUUUCGUCAUCUUCUUCAUCGCGGUCACAUUCAUCAGCAUCCU GACUACCGGAGAGGGAGAGGGACGGGUCGGAAUAAUCCUGACCCUCGCCAUGA ACAUUAUGAGCACCCUGCAGUGGGCAGUGAACAGCUCGAUCGACGUGGACAGC CUGAUGCGAAGCGUCAGCCGCGUGUUCAAGUUCAUCGACAUGCCUACUGAGGG AAAACCCACUAAGUCCACUAAGCCCUACAAAAAUGGCCAGCUGAGCAAGGUCA UGAUCAUCGAAAACUCCCACGUGAAGAAGGACGAUAUUUGGCCCUCCGGAGGU CAAAUGACCGUGAAGGACCUGACCGCAAAGUACACCGAGGGAGGAAACGCCAU UCUCGAAAACAUCAGCUUCUCCAUUUCGCCGGGACAGCGGGUCGGCCUUCUCG GGCGGACCGGUUCCGGGAAGUCAACUCUGCUGUCGGCUUUCCUCCGGCUGCUG AAUACCGAGGGGGAAAUCCAAAUUGACGGCGUGUCUUGGGAUUCCAUUACUCU GCAGCAGUGGCGGAAGGCCUUCGGCGUGAUCCCCCAGAAGGUGUUCAUCUUCU CGGGUACCUUCCGGAAGAACCUGGAUCCUUACGAGCAGUGGAGCGACCAAGAA AUCUGGAAGGUCGCCGACGAGGUCGGCCUGCGCUCCGUGAUUGAACAAUUUCC UGGAAAGCUGGACUUCGUGCUCGUCGACGGGGGAUGUGUCCUGUCGCACGGAC AUAAGCAGCUCAUGUGCCUCGCACGGUCCGUGCUCUCCAAGGCCAAGAUUCUG CUGCUGGACGAACCUUCGGCCCACCUGGAUCCGGUCACCUACCAGAUCAUCAG GAGGACCCUGAAGCAGGCCUUUGCCGAUUGCACCGUGAUUCUCUGCGAGCACC GCAUCGAGGCCAUGCUGGAGUGCCAGCAGUUCCUGGUCAUCGAGGAGAACAAG GUCCGCCAAUACGACUCCAUUCAAAAGCUCCUCAACGAGCGGUCGCUGUUCAG ACAAGCUAUUUCACCGUCCGAUAGAGUGAAGCUCUUCCCGCAUCGGAACAGCU CAAAGUGCAAAUCGAAGCCGCAGAUCGCAGCCUUGAAGGAAGAGACUGAGGAA GAGGUGCAGGACACCCGGCUUUAAGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGU GCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAU
AAAAUUAAGUUGCAUCAAAGCU (SEQ ID NO: 7)
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA
- 18 043901
TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA
- 19 043901
TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC
AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 8)
- 20 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCTGATAT CTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCGG GAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCTG CGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGGA GGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGAC CCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGCT TGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATTTCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT
- 21 043901
CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA
- 22 043901
ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TTGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC
AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 9)
В еще одном варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT
- 23 043901
GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG
- 24 043901
AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTTGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACACACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TTGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 10).
- 25 043901
В еще одном варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT
- 26 043901
TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA
- 27 043901
TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCAACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 11).
В еще одном варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA
- 28 043901
CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCTATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA
- 29 043901
GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTTGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 12).
- 30 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATTTCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG
- 31 043901
AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT
- 32 043901
CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCAACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 13).
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCTGATAT CTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCGG GAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCTG CGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGGA GGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGAC CCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGCT TGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC
- 33 043901
ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCCGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT
- 34 043901
AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTTGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAGCCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 14).
- 35 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT
- 36 043901
CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCTATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTTGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACACACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG
- 37 043901
CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 15).
В еще одном варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT
- 38 043901
GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCCGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC
- 39 043901
ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAGTCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 16).
- 40 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCTGATAT CTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCGG GAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCTG CGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGGA GGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGAC CCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGCT TGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATTTCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG
- 41 043901
TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCTATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACACACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC
- 42 043901
ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 17).
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGAAGCCCCCTGGAGAAGGCCTCTGTGGTGAGCAAGCTGTTCTTCAGCT GGACCAGACCCATCCTGAGAAAGGGCTACAGACAGAGACTGGAGCTGTCTGACA TCTACCAGATCCCCTCTGTGGACTCTGCCGACAACCTGTCTGAGAAGCTGGAGAG AGAGTGGGACAGAGAGCTGGCCAGCAAGAAGAACCCCAAGCTGATCAATGCCCT GAGAAGATGCTTCTTCTGGAGATTCATGTTCTATGGCATCTTCCTGTACCTGGGAG AGGTGACCAAGGCCGTGCAGCCCCTGCTGCTGGGCAGGATCATTGCCAGCTATGA CCCTGACAACAAGGAGGAGAGAAGCATTGCCATCTACCTGGGCATTGGCCTGTGC CTGCTGTTCATTGTGAGAACCCTGCTGCTGCACCCTGCCATCTTTGGCCTGCACCA CATTGGCATGCAGATGAGAATTGCCATGTTCAGCCTGATCTACAAGAAGACCCTG AAGCTGAGCAGCAGAGTGCTGGACAAGATCAGCATTGGCCAGCTGGTGAGCCTG CTGAGCAACAACCTGAACAAGTTTGATGAGGGCCTGGCCCTGGCCCACTTTGTGT GGATTGCCCCCCTGCAGGTGGCCCTGCTGATGGGCCTGATCTGGGAGCTGCTGCA
- 43 043901
GGCCTCTGCCTTCTGTGGCCTGGGCTTCCTGATTGTGCTGGCCCTGTTCCAGGCCG GCCTGGGCAGAATGATGATGAAGTACAGAGACCAGAGAGCCGGCAAGATCTCTG AGAGACTGGTGATCACCTCTGAGATGATTGAGAACATCCAGTCTGTGAAGGCCTA CTGCTGGGAGGAGGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGACAGACAGAGCT GAAGCTGACCAGGAAGGCCGCCTATGTGAGATACTTCAACAGCTCTGCCTTCTTC TTCTCTGGCTTCTTTGTGGTGTTCCTGTCTGTGCTGCCCTATGCCCTGATCAAGGG CATCATCCTGAGGAAGATCTTCACCACCATCAGCTTCTGCATTGTGCTGAGGATG GCCGTGACCAGGCAGTTCCCCTGGGCCGTGCAGACCTGGTATGACAGCCTGGGGG CCATCAACAAGATCCAGGACTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACCCTGGAGT ACAACCTGACCACCACAGAGGTGGTGATGGAGAATGTGACAGCCTTCTGGGAGG AGGGCTTTGGAGAGCTGTTTGAGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACAGAAAGA CCAGCAATGGAGATGACAGCCTGTTCTTCAGCAACTTCAGCCTGCTGGGCACCCC TGTGCTGAAGGACATCAACTTCAAGATTGAGAGGGGCCAGCTGCTGGCCGTGGCC GGCAGCACAGGAGCCGGCAAGACCAGCCTGCTGATGGTGATCATGGGAGAGCTG GAGCCCTCTGAGGGCAAGATCAAGCACTCTGGCAGAATCAGCTTCTGCAGCCAGT TCAGCTGGATCATGCCTGGCACCATCAAGGAGAACATCATCTTTGGGGTGAGCTA TGATGAGTACAGGTACAGATCTGTGATCAAGGCCTGCCAGCTGGAGGAGGACAT CTCCAAGTTTGCCGAGAAGGACAACATTGTGCTGGGGGAGGGAGGCATCACCCT GTCTGGGGGCCAGAGAGCCAGAATCAGCCTGGCCAGAGCCGTGTACAAGGATGC CGACCTGTACCTGCTGGACAGCCCCTTTGGCTACCTGGATGTGCTGACAGAGAAG GAGATCTTTGAGAGCTGTGTGTGCAAGCTGATGGCCAACAAGACCAGGATCCTGG TGACCAGCAAGATGGAGCACCTGAAGAAGGCCGACAAGATCCTGATCCTGCATG AGGGCAGCAGCTACTTCTATGGCACCTTCTCTGAGCTGCAGAACCTGCAGCCTGA CTTCAGCAGCAAGCTGATGGGCTGTGACAGCTTTGACCAGTTCTCTGCTGAGAGA AGAAACAGCATCCTGACAGAGACCCTGCACAGGTTCAGCCTGGAGGGGGATGCC CCTGTGAGCTGGACAGAGACCAAGAAGCAGAGCTTCAAGCAGACAGGAGAGTTT GGGGAGAAGAGGAAGAACAGCATCCTGAACCCCATCAACAGCATCAGGAAGTTC AGCATTGTGCAGAAGACCCCCCTGCAGATGAATGGCATTGAGGAGGACTCTGAT GAGCCCCTGGAGAGAAGACTGAGCCTGGTGCCAGACTCTGAGCAGGGAGAGGCC ATCCTGCCCAGGATCTCTGTGATCAGCACAGGCCCCACCCTGCAGGCCAGAAGAA GACAGTCTGTGCTGAACCTGATGACCCACTCTGTGAACCAGGGCCAGAATATCCA CAGAAAGACCACAGCCAGCACCAGAAAGGTGAGCCTGGCCCCCCAGGCCAACCT GACAGAGCTGGACATCTACAGCAGAAGGCTGAGCCAGGAGACAGGCCTGGAGAT CTCTGAGGAGATCAATGAGGAGGACCTGAAGGAGTGCTTCTTTGATGACATGGA
- 44 043901
GAGCATCCCTGCCGTGACCACCTGGAACACCTACCTGAGATACATCACAGTGCAC AAGAGCCTGATCTTTGTGCTGATCTGGTGCCTGGTGATCTTCCTGGCCGAGGTGG CCGCCAGCCTGGTGGTGCTGTGGCTGCTGGGCAACACCCCCCTGCAGGACAAGGG CAACAGCACCCACAGCAGAAACAACAGCTATGCTGTGATCATCACCAGCACCAG CAGCTACTATGTGTTCTACATCTATGTGGGAGTGGCTGACACCCTGCTGGCCATG GGCTTCTTCAGAGGCCTGCCCCTGGTGCACACCCTGATCACAGTGAGCAAGATCC TGCACCACAAGATGCTGCACTCTGTGCTGCAGGCCCCCATGAGCACCCTGAACAC CCTGAAGGCTGGAGGCATCCTGAACAGATTCAGCAAGGACATTGCCATCCTGGAT GACCTGCTGCCCCTGACCATCTTTGACTTCATCCAGCTGCTGCTGATTGTGATTGG AGCCATTGCCGTGGTGGCCGTGCTGCAGCCCTACATCTTTGTGGCCACAGTGCCT GTGATTGTGGCCTTCATCATGCTGAGGGCCTACTTCCTGCAGACCAGCCAGCAGC TGAAGCAGCTGGAGTCTGAGGGCAGAAGCCCCATCTTCACCCACCTGGTGACCAG CCTGAAGGGCCTGTGGACCCTGAGGGCCTTTGGCAGACAGCCCTACTTTGAGACC CTGTTCCACAAGGCCCTGAACCTGCACACAGCCAACTGGTTCCTGTACCTGAGCA CCCTGAGATGGTTCCAGATGAGGATTGAGATGATCTTTGTGATCTTCTTCATTGCC GTGACCTTCATCAGCATCCTGACCACAGGGGAGGGCGAGGGCAGAGTGGGCATC ATCCTGACCCTGGCCATGAACATCATGAGCACCCTGCAGTGGGCCGTGAACAGCA GCATTGATGTGGACAGCCTGATGAGATCTGTGAGCAGAGTGTTCAAGTTCATTGA CATGCCCACAGAGGGCAAGCCCACCAAGAGCACCAAGCCCTACAAGAATGGCCA GCTGAGCAAGGTGATGATCATTGAGAACAGCCATGTGAAGAAGGATGACATCTG GCCCTCTGGAGGCCAGATGACAGTGAAGGACCTGACAGCCAAGTACACAGAGGG GGGCAATGCCATCCTGGAGAACATCAGCTTCAGCATCAGCCCTGGCCAGAGGGT GGGCCTGCTGGGCAGAACAGGCTCTGGCAAGAGCACCCTGCTGTCTGCCTTCCTG AGGCTGCTGAACACAGAGGGAGAGATCCAGATTGATGGGGTGAGCTGGGACAGC ATCACCCTGCAGCAGTGGAGGAAGGCCTTTGGGGTGATCCCCCAGAAGGTGTTCA TCTTCTCTGGCACCTTCAGGAAGAACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGTCTGACCA GGAGATCTGGAAGGTGGCCGATGAGGTGGGCCTGAGATCTGTGATTGAGCAGTT CCCTGGCAAGCTGGACTTTGTGCTGGTGGATGGAGGCTGTGTGCTGAGCCATGGC CACAAGCAGCTGATGTGCCTGGCCAGATCTGTGCTGAGCAAGGCCAAGATCCTGC TGCTGGATGAGCCCTCTGCCCACCTGGACCCTGTGACCTACCAGATCATCAGAAG AACCCTGAAGCAGGCCTTTGCCGACTGCACAGTGATCCTGTGTGAGCACAGAATT GAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAGTTCCTGGTGATTGAGGAGAACAAGGTGAGG CAGTATGACAGCATCCAGAAGCTGCTGAATGAGAGAAGCCTGTTCAGACAGGCC ATCAGCCCCTCTGACAGAGTGAAGCTGTTCCCCCACAGGAACAGCAGCAAGTGC AAGAGCAAGCCCCAGATTGCCGCCCTGAAGGAGGAGACAGAGGAGGAGGTGCA GGACACCAGACTGTGA (SEQ ID NO: 18).
- 45 043901
В еще одном варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCCCTGGAGAAGGCCAGCGTGGTGAGCAAGCTGTTCTTCAGC TGGACCAGGCCCATCCTGAGGAAGGGCTACAGGCAGAGGCTGGAGCTGAGCGAC ATCTACCAGATCCCCAGCGTGGACAGCGCCGACAACCTGAGCGAGAAGCTGGAG AGGGAGTGGGACAGGGAGCTGGCCAGCAAGAAGAACCCCAAGCTGATCAACGCC CTGAGGAGGTGCTTCTTCTGGAGGTTCATGTTCTACGGCATCTTCCTGTACCTGGG CGAGGTGACCAAGGCCGTGCAGCCCCTGCTGCTGGGCAGGATCATCGCCAGCTAC GACCCCGACAACAAGGAGGAGAGGAGCATCGCCATCTACCTGGGCATCGGCCTG TGCCTGCTGTTCATCGTGAGGACCCTGCTGCTGCACCCCGCCATCTTCGGCCTGCA CCACATCGGCATGCAGATGAGGATCGCCATGTTCAGCCTGATCTACAAGAAGACC CTGAAGCTGAGCAGCAGGGTGCTGGACAAGATCAGCATCGGCCAGCTGGTGAGC CTGCTGAGCAACAACCTGAACAAGTTCGACGAGGGCCTGGCCCTGGCCCACTTCG TGTGGATCGCCCCCCTGCAGGTGGCCCTGCTGATGGGCCTGATCTGGGAGCTGCT GCAGGCCAGCGCCTTCTGCGGCCTGGGCTTCCTGATCGTGCTGGCCCTGTTCCAG GCCGGCCTGGGCAGGATGATGATGAAGTACAGGGACCAGAGGGCCGGCAAGATC AGCGAGAGGCTGGTGATCACCAGCGAGATGATCGAGAACATCCAGAGCGTGAAG GCCTACTGCTGGGAGGAGGCCATGGAGAAGATGATCGAGAACCTGAGGCAGACC GAGCTGAAGCTGACCAGGAAGGCCGCCTACGTGAGGTACTTCAACAGCAGCGCC TTCTTCTTCAGCGGCTTCTTCGTGGTGTTCCTGAGCGTGCTGCCCTACGCCCTGAT CAAGGGCATCATCCTGAGGAAGATCTTCACCACCATCAGCTTCTGCATCGTGCTG AGGATGGCCGTGACCAGGCAGTTCCCCTGGGCCGTGCAGACCTGGTACGACAGC CTGGGCGCCATCAACAAGATCCAGGACTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACC CTGGAGTACAACCTGACCACCACCGAGGTGGTGATGGAGAACGTGACCGCCTTCT GGGAGGAGGGCTTCGGCGAGCTGTTCGAGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACA GGAAGACCAGCAACGGCGACGACAGCCTGTTCTTCAGCAACTTCAGCCTGCTGGG CACCCCCGTGCTGAAGGACATCAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTGCTGGC CGTGGCCGGCAGCACCGGCGCCGGCAAGACCAGCCTGCTGATGGTGATCATGGG CGAGCTGGAGCCCAGCGAGGGCAAGATCAAGCACAGCGGCAGGATCAGCTTCTG CAGCCAGTTCAGCTGGATCATGCCCGGCACCATCAAGGAGAACATCATCTTCGGC GTGAGCTACGACGAGTACAGGTACAGGAGCGTGATCAAGGCCTGCCAGCTGGAG
- 46 043901
GAGGACATCAGCAAGTTCGCCGAGAAGGACAACATCGTGCTGGGCGAGGGCGGC ATCACCCTGAGCGGCGGCCAGAGGGCCAGGATCAGCCTGGCCAGGGCCGTGTAC AAGGACGCCGACCTGTACCTGCTGGACAGCCCCTTCGGCTACCTGGACGTGCTGA CCGAGAAGGAGATCTTCGAGAGCTGCGTGTGCAAGCTGATGGCCAACAAGACCA GGATCCTGGTGACCAGCAAGATGGAGCACCTGAAGAAGGCCGACAAGATCCTGA TCCTGCACGAGGGCAGCAGCTACTTCTACGGCACCTTCAGCGAGCTGCAGAACCT GCAGCCCGACTTCAGCAGCAAGCTGATGGGCTGCGACAGCTTCGACCAGTTCAGC GCCGAGAGGAGGAACAGCATCCTGACCGAGACCCTGCACAGGTTCAGCCTGGAG GGCGACGCCCCCGTGAGCTGGACCGAGACCAAGAAGCAGAGCTTCAAGCAGACC GGCGAGTTCGGCGAGAAGAGGAAGAACAGCATCCTGAACCCCATCAACAGCATC AGGAAGTTCAGCATCGTGCAGAAGACCCCCCTGCAGATGAACGGCATCGAGGAG GACAGCGACGAGCCCCTGGAGAGGAGGCTGAGCCTGGTGCCCGACAGCGAGCAG GGCGAGGCCATCCTGCCCAGGATCAGCGTGATCAGCACCGGCCCCACCCTGCAG GCCAGGAGGAGGCAGAGCGTGCTGAACCTGATGACCCACAGCGTGAACCAGGGC CAGAACATCCACAGGAAGACCACCGCCAGCACCAGGAAGGTGAGCCTGGCCCCC CAGGCCAACCTGACCGAGCTGGACATCTACAGCAGGAGGCTGAGCCAGGAGACC GGCCTGGAGATCAGCGAGGAGATCAACGAGGAGGACCTGAAGGAGTGCTTCTTC GACGACATGGAGAGCATCCCCGCCGTGACCACCTGGAACACCTACCTGAGGTAC ATCACCGTGCACAAGAGCCTGATCTTCGTGCTGATCTGGTGCCTGGTGATCTTCCT GGCCGAGGTGGCCGCCAGCCTGGTGGTGCTGTGGCTGCTGGGCAACACCCCCCTG CAGGACAAGGGCAACAGCACCCACAGCAGGAACAACAGCTACGCCGTGATCATC ACCAGCACCAGCAGCTACTACGTGTTCTACATCTACGTGGGCGTGGCCGACACCC TGCTGGCCATGGGCTTCTTCAGGGGCCTGCCCCTGGTGCACACCCTGATCACCGT GAGCAAGATCCTGCACCACAAGATGCTGCACAGCGTGCTGCAGGCCCCCATGAG CACCCTGAACACCCTGAAGGCCGGCGGCATCCTGAACAGGTTCAGCAAGGACAT CGCCATCCTGGACGACCTGCTGCCCCTGACCATCTTCGACTTCATCCAGCTGCTGC TGATCGTGATCGGCGCCATCGCCGTGGTGGCCGTGCTGCAGCCCTACATCTTCGT GGCCACCGTGCCCGTGATCGTGGCCTTCATCATGCTGAGGGCCTACTTCCTGCAG ACCAGCCAGCAGCTGAAGCAGCTGGAGAGCGAGGGCAGGAGCCCCATCTTCACC CACCTGGTGACCAGCCTGAAGGGCCTGTGGACCCTGAGGGCCTTCGGCAGGCAG CCCTACTTCGAGACCCTGTTCCACAAGGCCCTGAACCTGCACACCGCCAACTGGT TCCTGTACCTGAGCACCCTGAGGTGGTTCCAGATGAGGATCGAGATGATCTTCGT GATCTTCTTCATCGCCGTGACCTTCATCAGCATCCTGACCACCGGCGAGGGCGAG GGCAGGGTGGGCATCATCCTGACCCTGGCCATGAACATCATGAGCACCCTGCAGT
- 47 043901
GGGCCGTGAACAGCAGCATCGACGTGGACAGCCTGATGAGGAGCGTGAGCAGGG TGTTCAAGTTCATCGACATGCCCACCGAGGGCAAGCCCACCAAGAGCACCAAGC CCTACAAGAACGGCCAGCTGAGCAAGGTGATGATCATCGAGAACAGCCACGTGA AGAAGGACGACATCTGGCCCAGCGGCGGCCAGATGACCGTGAAGGACCTGACCG CCAAGTACACCGAGGGCGGCAACGCCATCCTGGAGAACATCAGCTTCAGCATCA GCCCCGGCCAGAGGGTGGGCCTGCTGGGCAGGACCGGCAGCGGCAAGAGCACCC TGCTGAGCGCCTTCCTGAGGCTGCTGAACACCGAGGGCGAGATCCAGATCGACG GCGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGGAAGGCCTTCGGCGTGA TCCCCCAGAAGGTGTTCATCTTCAGCGGCACCTTCAGGAAGAACCTGGACCCCTA CGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTGGCCGACGAGGTGGGCCTGAG GAGCGTGATCGAGCAGTTCCCCGGCAAGCTGGACTTCGTGCTGGTGGACGGCGGC TGCGTGCTGAGCCACGGCCACAAGCAGCTGATGTGCCTGGCCAGGAGCGTGCTG AGCAAGGCCAAGATCCTGCTGCTGGACGAGCCCAGCGCCCACCTGGACCCCGTG ACCTACCAGATCATCAGGAGGACCCTGAAGCAGGCCTTCGCCGACTGCACCGTGA TCCTGTGCGAGCACAGGATCGAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAGTTCCTGGTGAT CGAGGAGAACAAGGTGAGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGCTGCTGAACGAGA GGAGCCTGTTCAGGCAGGCCATCAGCCCCAGCGACAGGGTGAAGCTGTTCCCCCA CAGGAACAGCAGCAAGTGCAAGAGCAAGCCCCAGATCGCCGCCCTGAAGGAGGA GACCGAGGAGGAGGTGCAGGACACCAGGCTGTGA (SEQ ID NO: 19).
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGATCCCCTCTGGAGAAGGCCTCAGTGGTGTCCAAGCTTTTCTTCTCCTG GACCAGGCCCATTTTAAGAAAGGGCTACAGGCAGAGACTTGAGCTGTCTGACATC TATCAGATCCCTTCTGTGGATTCTGCTGACAATCTTAGTGAAAAATTGGAAAGGG AGTGGGACAGAGAGCTGGCAAGTAAAAAGAACCCCAAGCTGATTAATGCCCTGA GGCGCTGCTTTTTTTGGAGATTCATGTTCTATGGCATATTCCTCTACCTTGGAGAA GTAACCAAAGCTGTACAGCCTCTCCTCCTTGGCAGAATCATTGCCTCCTATGATCC TGATAACAAGGAGGAGAGAAGCATAGCCATCTACCTGGGCATTGGGCTGTGCCT CTTGTTTATTGTGAGGACCCTTCTCTTGCACCCTGCCATCTTTGGCCTTCATCACAT TGGCATGCAAATGAGAATAGCAATGTTTAGTCTTATTTACAAAAAAACATTAAAA CTCTCTTCCAGGGTGTTGGACAAGATCAGTATTGGACAACTGGTCAGCCTGCTGA GCAACAACCTGAACAAGTTTGATGAAGGACTGGCCCTGGCCCACTTTGTCTGGAT TGCCCCCCTTCAGGTGGCTCTTTTGATGGGCCTGATCTGGGAACTCCTGCAGGCCT
- 48 043901
CTGCCTTCTGTGGGTTAGGCTTCCTGATAGTGCTAGCTCTCTTTCAGGCAGGGTTG GGTAGAATGATGATGAAGTACAGAGACCAGAGGGCTGGGAAGATATCTGAGAGG CTGGTCATTACTTCTGAAATGATAGAAAACATCCAGTCTGTTAAAGCTTACTGCT GGGAGGAGGCTATGGAAAAGATGATTGAGAACTTGAGGCAAACAGAGCTCAAGC TGACTAGGAAGGCAGCCTATGTCAGGTATTTCAACAGCAGTGCTTTCTTCTTCTCA GGCTTTTTCGTGGTCTTCTTGAGTGTTCTGCCCTATGCCCTCATCAAGGGGATAAT TTTGAGAAAGATTTTCACCACTATTTCCTTTTGCATTGTCCTGAGGATGGCTGTCA CCAGGCAATTCCCCTGGGCTGTGCAGACATGGTATGACTCTCTGGGGGCCATCAA CAAAATCCAAGATTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACCCTGGAATACAACCT CACCACCACAGAAGTTGTGATGGAGAATGTGACTGCATTCTGGGAGGAAGGATTT GGGGAGCTGTTTGAGAAAGCAAAACAAAACAATAATAACAGGAAAACCAGCAAT GGAGATGACTCCCTGTTCTTTTCCAACTTCTCTTTGTTGGGCACCCCTGTCCTGAA AGATATAAACTTTAAAATTGAAAGAGGGCAGCTGTTGGCAGTTGCTGGCTCCACA GGAGCTGGAAAAACTTCACTACTGATGGTGATCATGGGGGAGTTAGAACCCTCTG AAGGGAAAATAAAACATTCTGGGAGGATTAGTTTCTGCAGCCAGTTCAGCTGGAT CATGCCTGGGACCATTAAAGAAAATATTATATTTGGAGTGAGCTATGATGAATAT AGATATAGGAGTGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAAGACATCAGCAAATTT GCAGAGAAAGACAACATTGTTCTGGGTGAAGGTGGCATCACCCTGTCAGGAGGG CAAAGGGCCAGGATCAGCTTGGCCAGAGCAGTCTATAAAGATGCTGATCTGTACC TCCTGGATAGCCCTTTTGGCTATCTGGATGTTTTGACAGAGAAGGAAATTTTTGAG TCCTGTGTCTGCAAGTTAATGGCAAATAAAACAAGGATACTTGTGACCTCAAAAA TGGAACACCTGAAGAAGGCTGACAAAATTCTGATCCTGCATGAGGGCAGCAGCT ACTTTTATGGAACATTTTCTGAACTGCAGAATTTGCAACCAGACTTTTCATCAAAG CTCATGGGATGTGACAGTTTTGATCAGTTTTCTGCAGAAAGGAGAAACTCCATTT TGACTGAGACCCTGCACAGGTTCAGTCTGGAGGGGGATGCCCCAGTGAGTTGGAC TGAGACAAAGAAACAGAGCTTCAAGCAGACTGGAGAGTTTGGAGAAAAGAGGA AAAACTCAATTCTCAATCCCATCAATAGCATCAGGAAGTTCAGCATAGTTCAGAA GACTCCTTTGCAGATGAATGGGATTGAAGAGGACTCAGATGAGCCCCTGGAAAG GAGACTCTCCTTGGTGCCAGATTCAGAGCAGGGGGAAGCCATACTGCCAAGGAT CTCTGTGATTTCTACAGGGCCCACCCTCCAAGCAAGAAGGAGACAGTCAGTTTTA AACCTGATGACCCACTCTGTCAACCAGGGACAGAACATTCATAGAAAGACAACA GCATCTACAAGAAAAGTTTCACTGGCCCCTCAAGCCAATTTAACTGAACTAGATA TCTACAGCAGGAGGCTCAGCCAAGAAACAGGCCTGGAGATCTCAGAAGAAATAA ATGAGGAGGATTTGAAGGAATGCTTCTTTGATGATATGGAGAGCATCCCAGCTGT
- 49 043901
CACAACCTGGAACACCTACCTGAGATACATCACAGTGCACAAATCCCTCATCTTT GTACTTATATGGTGCCTTGTCATCTTCTTAGCTGAGGTGGCTGCTTCCCTGGTGGT GCTGTGGCTGCTGGGAAACACACCCCTCCAGGATAAAGGGAACTCTACTCACAGC AGGAACAACAGTTATGCTGTGATCATCACCAGTACCTCCTCCTACTATGTGTTCTA CATTTATGTTGGAGTTGCAGACACATTGCTTGCCATGGGTTTTTTTAGAGGACTCC CCCTGGTGCATACTCTCATCACTGTTTCCAAAATCCTTCACCACAAGATGCTGCAC AGTGTACTACAGGCTCCCATGAGCACCCTCAACACTCTTAAAGCAGGAGGAATCT TGAACAGATTTAGCAAGGACATTGCAATTCTTGATGACCTGCTTCCACTGACCAT CTTTGACTTCATCCAGCTTCTGCTCATTGTAATTGGTGCCATTGCTGTGGTAGCAG TGCTCCAGCCATATATTTTTGTGGCCACTGTGCCTGTTATTGTGGCCTTCATTATGT TGAGAGCCTACTTCCTGCAGACCTCTCAGCAGCTCAAGCAACTTGAAAGTGAGGG CAGGAGCCCCATATTTACACACTTGGTCACTTCCCTCAAAGGCCTCTGGACACTC AGAGCTTTTGGAAGACAACCTTATTTTGAAACTCTCTTCCACAAGGCTCTGAATCT CCACACAGCCAACTGGTTTCTGTATCTTTCAACACTGCGCTGGTTCCAGATGAGG ATTGAGATGATCTTTGTTATCTTCTTCATAGCTGTTACCTTCATCTCTATTCTGACA ACTGGTGAGGGGGAAGGGAGAGTAGGCATCATCCTCACACTAGCCATGAACATA ATGTCTACCTTACAATGGGCCGTGAACAGCTCCATAGATGTGGACAGCCTCATGA GAAGTGTGTCAAGAGTTTTCAAATTCATTGACATGCCCACAGAAGGCAAACCAAC CAAGAGCACAAAACCCTACAAGAATGGCCAGCTGAGTAAGGTCATGATCATTGA AAATTCTCATGTGAAGAAGGATGATATTTGGCCCAGTGGGGGCCAGATGACAGTC AAGGACCTCACTGCCAAATACACAGAGGGTGGAAATGCTATCCTAGAGAACATC TCCTTCTCCATCTCCCCAGGCCAAAGAGTTGGCTTGCTGGGCAGGACTGGCAGTG GCAAGTCCACCTTGCTCTCAGCATTTCTCAGGCTTTTAAATACAGAGGGAGAGAT TCAAATTGATGGGGTGTCTTGGGATAGTATAACACTTCAACAGTGGAGGAAAGCC TTTGGTGTGATTCCTCAGAAAGTGTTTATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAAAATCT GGACCCCTATGAACAGTGGAGTGACCAGGAAATCTGGAAGGTGGCAGATGAAGT GGGCCTAAGATCAGTCATAGAGCAGTTTCCTGGAAAGTTGGATTTTGTGCTTGTA GATGGAGGCTGTGTGCTGTCCCATGGCCATAAACAGCTAATGTGCCTGGCTAGGT CAGTGCTGAGCAAGGCCAAGATCCTGCTGTTAGATGAGCCTTCAGCCCATCTGGA CCCTGTGACATACCAGATTATCAGAAGAACTCTGAAGCAGGCCTTTGCTGACTGC ACTGTCATCCTGTGTGAGCACAGAATTGAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAGTTCC TTGTTATAGAAGAGAATAAGGTTAGGCAGTATGACAGCATTCAGAAACTGCTAA ATGAAAGATCTCTCTTCAGGCAAGCTATTTCACCATCTGATAGAGTGAAACTTTTT CCCCACAGAAATTCCTCTAAATGTAAATCTAAGCCCCAGATAGCTGCCTTGAAAG AGGAGACTGAAGAAGAAGTCCAGGACACCAGACTGTGA (SEQ ID NO: 20).
- 50 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGATCCCCGCTGGAGAAGGCATCTGTGGTGTCAAAACTGTTCTTTAGCT GGACAAGGCCCATCCTTAGGAAAGGGTACAGACAGAGGTTGGAGCTGTCAGACA TATATCAGATCCCTTCAGTGGACTCTGCAGACAACCTCTCTGAAAAGCTGGAGAG GGAATGGGACAGGGAACTGGCCAGCAAAAAAAACCCTAAACTGATTAATGCCCT GAGGAGGTGCTTCTTTTGGAGATTCATGTTCTATGGGATCTTCCTTTACCTGGGGG AGGTGACTAAAGCTGTTCAGCCTCTTCTTCTGGGGAGGATTATTGCCTCCTATGAC CCAGACAACAAAGAAGAAAGAAGCATAGCCATTTACTTAGGCATAGGCCTCTGC TTGCTCTTCATAGTTAGAACCCTCCTACTCCACCCAGCCATCTTTGGTCTCCACCA CATAGGTATGCAGATGAGAATAGCAATGTTCTCCTTGATCTACAAGAAGACCCTC AAGCTGTCCAGCAGGGTGCTGGACAAGATCTCCATAGGCCAGTTAGTCAGTCTAC TGTCCAATAACTTAAATAAGTTTGATGAGGGACTGGCACTGGCACATTTTGTGTG GATTGCCCCCCTCCAAGTGGCCCTTCTTATGGGCCTTATCTGGGAGCTGTTGCAGG CCTCTGCTTTCTGTGGCCTGGGTTTCCTCATAGTCCTAGCCTTATTCCAGGCTGGA CTGGGCAGAATGATGATGAAGTATAGGGACCAAAGAGCAGGGAAGATTTCTGAA AGGCTGGTTATAACTTCTGAGATGATTGAGAACATTCAGTCAGTGAAAGCTTACT GCTGGGAAGAAGCTATGGAAAAAATGATTGAAAATCTCAGACAGACTGAATTAA AGTTGACCAGGAAAGCTGCTTATGTCAGATACTTCAACTCCTCAGCCTTCTTTTTT TCTGGCTTCTTTGTTGTATTCCTTTCAGTCCTCCCCTATGCCCTGATTAAGGGCATT ATCTTGAGGAAAATTTTCACAACCATCTCCTTTTGTATTGTCCTCAGGATGGCTGT TACAAGGCAATTTCCTTGGGCTGTGCAAACTTGGTATGATAGCCTTGGAGCAATC AACAAGATCCAGGATTTCCTGCAAAAGCAGGAGTACAAGACATTGGAATACAAC CTTACCACCACTGAGGTGGTGATGGAAAATGTGACTGCCTTCTGGGAGGAGGGGT TTGGAGAGCTGTTTGAGAAAGCCAAACAGAACAACAACAATAGAAAGACCTCTA ATGGTGATGATTCCCTGTTCTTTTCTAACTTTAGTCTTCTGGGGACCCCAGTTCTG AAAGATATTAACTTTAAAATTGAAAGGGGACAGTTGCTGGCTGTGGCTGGGTCCA CTGGGGCTGGGAAGACAAGCCTGCTCATGGTGATCATGGGAGAGCTGGAACCCA GTGAAGGAAAGATCAAACACTCAGGCAGGATCTCCTTCTGCAGCCAGTTCTCATG GATTATGCCAGGCACTATTAAAGAAAATATCATCTTTGGTGTAAGCTATGATGAG TACAGGTATAGATCTGTAATTAAAGCCTGCCAGCTGGAGGAAGACATCTCTAAGT
- 51 043901
TTGCTGAGAAGGATAACATTGTGTTGGGGGAAGGGGGCATCACCCTTTCTGGTGG GCAGAGGGCTAGGATCTCCCTTGCTAGGGCAGTATACAAGGATGCTGACTTGTAC CTCTTGGATAGTCCTTTTGGCTACCTAGATGTGCTGACAGAGAAAGAAATATTTG AAAGCTGTGTGTGTAAGCTCATGGCTAACAAGACCAGGATCCTGGTCACCAGTAA AATGGAACACCTCAAAAAAGCAGACAAGATCCTTATTCTCCATGAGGGCTCCTCC TACTTCTATGGGACCTTCAGTGAGCTGCAGAATCTGCAGCCAGACTTCTCCTCAA AACTTATGGGCTGTGACTCCTTTGACCAATTCTCTGCAGAAAGAAGGAATAGCAT ACTGACAGAAACACTGCATAGATTCTCCCTGGAAGGAGATGCCCCAGTGAGTTGG ACAGAAACCAAAAAGCAGAGCTTCAAGCAGACTGGTGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAGAATTCTATCCTGAACCCCATCAATAGCATCAGGAAATTTAGCATAGTCCAAA AGACCCCCCTCCAGATGAATGGAATAGAGGAGGATAGTGATGAGCCTCTTGAGA GAAGGCTGTCCCTGGTTCCAGACAGTGAACAGGGTGAAGCCATTCTTCCGAGGAT CAGTGTCATCTCCACTGGGCCCACATTGCAGGCCAGAAGAAGACAGTCTGTTCTG AATTTGATGACACATTCTGTGAATCAAGGCCAGAATATCCATAGAAAAACCACTG CCAGCACCAGAAAAGTTTCTCTAGCCCCCCAGGCTAACCTGACTGAGTTAGACAT CTACAGCAGAAGGCTGAGCCAAGAGACTGGCTTGGAAATATCTGAGGAGATCAA TGAGGAGGACCTCAAGGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGTCAATCCCTGCAGTC ACTACATGGAACACTTACCTAAGGTACATCACAGTTCATAAGAGCCTCATCTTTG TCCTCATATGGTGTCTGGTCATCTTTTTAGCAGAAGTGGCTGCCAGCCTAGTTGTG CTGTGGTTACTGGGCAATACACCTCTTCAGGACAAAGGCAATAGCACACACAGCA GAAACAACTCCTATGCAGTGATCATCACCTCTACAAGCTCTTACTATGTATTCTAT ATATATGTGGGAGTGGCAGATACTCTCCTGGCCATGGGATTCTTCAGGGGATTAC CTCTAGTTCACACATTGATCACAGTGTCAAAAATTCTCCACCACAAGATGTTACA CAGTGTCCTGCAAGCCCCAATGTCTACTCTGAACACACTTAAGGCAGGTGGAATT TTGAATAGGTTTAGCAAGGACATAGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCTCTGACCAT CTTTGACTTCATCCAGTTACTGCTCATTGTAATTGGAGCCATTGCAGTGGTAGCAG TCCTACAGCCTTACATTTTTGTGGCTACTGTTCCTGTTATTGTGGCCTTCATTATGC TAAGAGCTTACTTCCTGCAAACAAGCCAACAGTTGAAACAGCTAGAAAGTGAGG GAAGGTCCCCCATCTTCACCCACCTGGTGACATCACTCAAGGGGCTATGGACTCT TAGGGCTTTTGGGAGACAGCCGTACTTTGAGACCTTATTCCATAAGGCCCTTAAC CTCCATACAGCAAACTGGTTCTTATACCTGAGTACTCTGAGGTGGTTTCAAATGA GGATTGAAATGATTTTTGTGATCTTCTTCATTGCTGTGACCTTCATCTCAATCTTG ACCACAGGAGAGGGGGAGGGCAGGGTGGGCATCATACTGACCTTGGCCATGAAC ATTATGTCAACCCTGCAGTGGGCTGTCAATAGCTCCATTGATGTGGACAGTCTGA
- 52 043901
TGAGGAGTGTCTCCAGGGTCTTCAAGTTTATTGACATGCCAACTGAGGGCAAACC CACCAAAAGCACTAAGCCATATAAAAATGGCCAACTGTCCAAAGTGATGATCATT GAAAATTCACATGTAAAGAAGGATGATATCTGGCCCTCTGGAGGACAGATGACA GTGAAAGACCTGACTGCCAAGTACACAGAGGGTGGTAATGCCATTCTTGAGAAC ATTAGTTTCAGTATTTCCCCGGGGCAAAGGGTGGGCCTCCTTGGCAGAACAGGCT CTGGCAAGAGTACCCTGCTGTCAGCCTTTTTAAGACTGTTGAACACTGAGGGAGA AATTCAGATTGATGGTGTCTCCTGGGATAGCATCACCCTCCAGCAGTGGAGAAAA GCTTTTGGAGTGATCCCGCAAAAGGTTTTCATCTTTTCAGGCACCTTCCGGAAGA ACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGTCTGACCAGGAAATATGGAAGGTAGCTGATG AAGTTGGGCTTAGGTCAGTCATAGAGCAGTTCCCAGGCAAACTGGACTTTGTCCT GGTGGATGGTGGATGTGTACTGAGTCATGGGCACAAACAGCTGATGTGCCTAGCC AGGTCTGTGCTCAGCAAGGCAAAGATATTGCTGCTTGATGAACCCAGTGCCCATC TGGACCCAGTCACATATCAGATCATCAGAAGAACATTGAAGCAGGCCTTTGCTGA TTGCACAGTTATCCTCTGTGAGCACAGGATTGAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAG TTTCTGGTGATTGAGGAGAATAAAGTAAGGCAGTATGACTCCATCCAGAAGCTGC TCAATGAAAGAAGCCTCTTTAGACAAGCTATCTCCCCCTCAGACAGGGTCAAATT GTTCCCTCACAGAAACAGCAGCAAGTGCAAGAGCAAGCCCCAAATTGCAGCCTT GAAAGAGGAGACAGAGGAAGAGGTGCAGGACACCAGACTCTGA (SEQ ID NO: 21).
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGAAGCCCCCTGGAGAAGGCCAGCGTGGTGAGCAAGCTGTTCTTCAGC TGGACCAGACCCATCCTGAGAAAGGGCTACAGACAGAGACTGGAGCTGAGCGAC ATCTACCAGATCCCCAGCGTGGACAGCGCCGACAACCTGAGCGAGAAGCTGGAG AGAGAGTGGGACAGAGAGCTGGCCAGCAAGAAGAACCCCAAGCTGATCAACGCC CTGAGAAGATGCTTCTTCTGGAGATTCATGTTCTACGGCATCTTCCTGTACCTGGG CGAGGTGACCAAGGCCGTGCAGCCCCTGCTGCTGGGCAGAATCATCGCCAGCTAC GACCCCGACAACAAGGAGGAGAGAAGCATCGCCATCTACCTGGGCATCGGCCTG TGCCTGCTGTTCATCGTGAGAACCCTGCTGCTGCACCCCGCCATCTTCGGCCTGCA CCACATCGGCATGCAGATGAGAATCGCCATGTTCAGCCTGATCTACAAGAAGACC CTGAAGCTGAGCAGCAGAGTGCTGGACAAGATCAGCATCGGCCAGCTGGTGAGC CTGCTGAGCAACAACCTGAACAAGTTCGACGAGGGCCTGGCCCTGGCCCACTTCG TGTGGATCGCCCCCCTGCAGGTGGCCCTGCTGATGGGCCTGATCTGGGAGCTGCT
- 53 043901
GCAGGCCAGCGCCTTCTGCGGCCTGGGCTTCCTGATCGTGCTGGCCCTGTTCCAG GCCGGCCTGGGCAGAATGATGATGAAGTACAGAGACCAGAGAGCCGGCAAGATC AGCGAGAGACTGGTGATCACCAGCGAGATGATCGAGAACATCCAGAGCGTGAAG GCCTACTGCTGGGAGGAGGCCATGGAGAAGATGATCGAGAACCTGAGACAGACC GAGCTGAAGCTGACCAGAAAGGCCGCCTACGTGAGATACTTCAACAGCAGCGCC TTCTTCTTCAGCGGCTTCTTCGTGGTGTTCCTGAGCGTGCTGCCCTACGCCCTGAT CAAGGGCATCATCCTGAGAAAGATCTTCACCACCATCAGCTTCTGCATCGTGCTG AGAATGGCCGTGACCAGACAGTTCCCCTGGGCCGTGCAGACCTGGTACGACAGC CTGGGCGCCATCAACAAGATCCAGGACTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACC CTGGAGTACAACCTGACCACCACCGAGGTGGTGATGGAGAACGTGACCGCCTTCT GGGAGGAGGGCTTCGGCGAGCTGTTCGAGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACA GAAAGACCAGCAACGGCGACGACAGCCTGTTCTTCAGCAACTTCAGCCTGCTGGG CACCCCCGTGCTGAAGGACATCAACTTCAAGATCGAGAGAGGCCAGCTGCTGGC CGTGGCCGGCAGCACCGGCGCCGGCAAGACCAGCCTGCTGATGGTGATCATGGG CGAGCTGGAGCCCAGCGAGGGCAAGATCAAGCACAGCGGCAGAATCAGCTTCTG CAGCCAGTTCAGCTGGATCATGCCCGGCACCATCAAGGAGAACATCATCTTCGGC GTGAGCTACGACGAGTACAGATACAGAAGCGTGATCAAGGCCTGCCAGCTGGAG GAGGACATCAGCAAGTTCGCCGAGAAGGACAACATCGTGCTGGGCGAGGGCGGC ATCACCCTGAGCGGCGGCCAGAGAGCCAGAATCAGCCTGGCCAGAGCCGTGTAC AAGGACGCCGACCTGTACCTGCTGGACAGCCCCTTCGGCTACCTGGACGTGCTGA CCGAGAAGGAGATCTTCGAGAGCTGCGTGTGCAAGCTGATGGCCAACAAGACCA GAATCCTGGTGACCAGCAAGATGGAGCACCTGAAGAAGGCCGACAAGATCCTGA TCCTGCACGAGGGCAGCAGCTACTTCTACGGCACCTTCAGCGAGCTGCAGAACCT GCAGCCCGACTTCAGCAGCAAGCTGATGGGCTGCGACAGCTTCGACCAGTTCAGC GCCGAGAGAAGAAACAGCATCCTGACCGAGACCCTGCACAGATTCAGCCTGGAG GGCGACGCCCCCGTGAGCTGGACCGAGACCAAGAAGCAGAGCTTCAAGCAGACC GGCGAGTTCGGCGAGAAGAGAAAGAACAGCATCCTGAACCCCATCAACAGCATC AGAAAGTTCAGCATCGTGCAGAAGACCCCCCTGCAGATGAACGGCATCGAGGAG GACAGCGACGAGCCCCTGGAGAGAAGACTGAGCCTGGTGCCCGACAGCGAGCAG GGCGAGGCCATCCTGCCCAGAATCAGCGTGATCAGCACCGGCCCCACCCTGCAG GCCAGAAGAAGACAGAGCGTGCTGAACCTGATGACCCACAGCGTGAACCAGGGC CAGAACATCCACAGAAAGACCACCGCCAGCACCAGAAAGGTGAGCCTGGCCCCC CAGGCCAACCTGACCGAGCTGGACATCTACAGCAGAAGACTGAGCCAGGAGACC GGCCTGGAGATCAGCGAGGAGATCAACGAGGAGGACCTGAAGGAGTGCTTCTTC
- 54 043901
GACGACATGGAGAGCATCCCCGCCGTGACCACCTGGAACACCTACCTGAGATAC ATCACCGTGCACAAGAGCCTGATCTTCGTGCTGATCTGGTGCCTGGTGATCTTCCT GGCCGAGGTGGCCGCCAGCCTGGTGGTGCTGTGGCTGCTGGGCAACACCCCCCTG CAGGACAAGGGCAACAGCACCCACAGCAGAAACAACAGCTACGCCGTGATCATC ACCAGCACCAGCAGCTACTACGTGTTCTACATCTACGTGGGCGTGGCCGACACCC TGCTGGCCATGGGCTTCTTCAGAGGCCTGCCCCTGGTGCACACCCTGATCACCGT GAGCAAGATCCTGCACCACAAGATGCTGCACAGCGTGCTGCAGGCCCCCATGAG CACCCTGAACACCCTGAAGGCCGGCGGCATCCTGAACAGATTCAGCAAGGACAT CGCCATCCTGGACGACCTGCTGCCCCTGACCATCTTCGACTTCATCCAGCTGCTGC TGATCGTGATCGGCGCCATCGCCGTGGTGGCCGTGCTGCAGCCCTACATCTTCGT GGCCACCGTGCCCGTGATCGTGGCCTTCATCATGCTGAGAGCCTACTTCCTGCAG ACCAGCCAGCAGCTGAAGCAGCTGGAGAGCGAGGGCAGAAGCCCCATCTTCACC CACCTGGTGACCAGCCTGAAGGGCCTGTGGACCCTGAGAGCCTTCGGCAGACAG CCCTACTTCGAGACCCTGTTCCACAAGGCCCTGAACCTGCACACCGCCAACTGGT TCCTGTACCTGAGCACCCTGAGATGGTTCCAGATGAGAATCGAGATGATCTTCGT GATCTTCTTCATCGCCGTGACCTTCATCAGCATCCTGACCACCGGCGAGGGCGAG GGCAGAGTGGGCATCATCCTGACCCTGGCCATGAACATCATGAGCACCCTGCAGT GGGCCGTGAACAGCAGCATCGACGTGGACAGCCTGATGAGAAGCGTGAGCAGAG TGTTCAAGTTCATCGACATGCCCACCGAGGGCAAGCCCACCAAGAGCACCAAGC CCTACAAGAACGGCCAGCTGAGCAAGGTGATGATCATCGAGAACAGCCACGTGA AGAAGGACGACATCTGGCCCAGCGGCGGCCAGATGACCGTGAAGGACCTGACCG CCAAGTACACCGAGGGCGGCAACGCCATCCTGGAGAACATCAGCTTCAGCATCA GCCCCGGCCAGAGAGTGGGCCTGCTGGGCAGAACCGGCAGCGGCAAGAGCACCC TGCTGAGCGCCTTCCTGAGACTGCTGAACACCGAGGGCGAGATCCAGATCGACG GCGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAAAGGCCTTCGGCGTGA TCCCCCAGAAGGTGTTCATCTTCAGCGGCACCTTCAGAAAGAACCTGGACCCCTA CGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTGGCCGACGAGGTGGGCCTGAG AAGCGTGATCGAGCAGTTCCCCGGCAAGCTGGACTTCGTGCTGGTGGACGGCGGC TGCGTGCTGAGCCACGGCCACAAGCAGCTGATGTGCCTGGCCAGAAGCGTGCTG AGCAAGGCCAAGATCCTGCTGCTGGACGAGCCCAGCGCCCACCTGGACCCCGTG ACCTACCAGATCATCAGAAGAACCCTGAAGCAGGCCTTCGCCGACTGCACCGTGA TCCTGTGCGAGCACAGAATCGAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAGTTCCTGGTGAT CGAGGAGAACAAGGTGAGACAGTACGACAGCATCCAGAAGCTGCTGAACGAGA GAAGCCTGTTCAGACAGGCCATCAGCCCCAGCGACAGAGTGAAGCTGTTCCCCCA CAGAAACAGCAGCAAGTGCAAGAGCAAGCCCCAGATCGCCGCCCTGAAGGAGGA GACCGAGGAGGAGGTGCAGGACACCAGACTGTGA (SEQ ID NO: 22).
- 55 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGCGCAGCCCCCTGGAGAAGGCCAGCGTGGTGAGCAAGCTGTTCTTCAGCT GGACCCGCCCCATCCTGCGCAAGGGCTACCGCCAGCGCCTGGAGCTGAGCGACA TCTACCAGATCCCCAGCGTGGACAGCGCCGACAACCTGAGCGAGAAGCTGGAGC GCGAGTGGGACCGCGAGCTGGCCAGCAAGAAGAACCCCAAGCTGATCAACGCCC TGCGCCGCTGCTTCTTCTGGCGCTTCATGTTCTACGGCATCTTCCTGTACCTGGGC GAGGTGACCAAGGCCGTGCAGCCCCTGCTGCTGGGCCGCATCATCGCCAGCTACG ACCCCGACAACAAGGAGGAGCGCAGCATCGCCATCTACCTGGGCATCGGCCTGT GCCTGCTGTTCATCGTGCGCACCCTGCTGCTGCACCCCGCCATCTTCGGCCTGCAC CACATCGGCATGCAGATGCGCATCGCCATGTTCAGCCTGATCTACAAGAAGACCC TGAAGCTGAGCAGCCGCGTGCTGGACAAGATCAGCATCGGCCAGCTGGTGAGCC TGCTGAGCAACAACCTGAACAAGTTCGACGAGGGCCTGGCCCTGGCCCACTTCGT GTGGATCGCCCCCCTGCAGGTGGCCCTGCTGATGGGCCTGATCTGGGAGCTGCTG CAGGCCAGCGCCTTCTGCGGCCTGGGCTTCCTGATCGTGCTGGCCCTGTTCCAGG CCGGCCTGGGCCGCATGATGATGAAGTACCGCGACCAGCGCGCCGGCAAGATCA GCGAGCGCCTGGTGATCACCAGCGAGATGATCGAGAACATCCAGAGCGTGAAGG CCTACTGCTGGGAGGAGGCCATGGAGAAGATGATCGAGAACCTGCGCCAGACCG AGCTGAAGCTGACCCGCAAGGCCGCCTACGTGCGCTACTTCAACAGCAGCGCCTT CTTCTTCAGCGGCTTCTTCGTGGTGTTCCTGAGCGTGCTGCCCTACGCCCTGATCA AGGGCATCATCCTGCGCAAGATCTTCACCACCATCAGCTTCTGCATCGTGCTGCG CATGGCCGTGACCCGCCAGTTCCCCTGGGCCGTGCAGACCTGGTACGACAGCCTG GGCGCCATCAACAAGATCCAGGACTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACCCTG GAGTACAACCTGACCACCACCGAGGTGGTGATGGAGAACGTGACCGCCTTCTGG GAGGAGGGCTTCGGCGAGCTGTTCGAGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACCGC AAGACCAGCAACGGCGACGACAGCCTGTTCTTCAGCAACTTCAGCCTGCTGGGCA CCCCCGTGCTGAAGGACATCAACTTCAAGATCGAGCGCGGCCAGCTGCTGGCCGT GGCCGGCAGCACCGGCGCCGGCAAGACCAGCCTGCTGATGGTGATCATGGGCGA GCTGGAGCCCAGCGAGGGCAAGATCAAGCACAGCGGCCGCATCAGCTTCTGCAG CCAGTTCAGCTGGATCATGCCCGGCACCATCAAGGAGAACATCATCTTCGGCGTG AGCTACGACGAGTACCGCTACCGCAGCGTGATCAAGGCCTGCCAGCTGGAGGAG
- 56 043901
GACATCAGCAAGTTCGCCGAGAAGGACAACATCGTGCTGGGCGAGGGCGGCATC ACCCTGAGCGGCGGCCAGCGCGCCCGCATCAGCCTGGCCCGCGCCGTGTACAAG GACGCCGACCTGTACCTGCTGGACAGCCCCTTCGGCTACCTGGACGTGCTGACCG AGAAGGAGATCTTCGAGAGCTGCGTGTGCAAGCTGATGGCCAACAAGACCCGCA TCCTGGTGACCAGCAAGATGGAGCACCTGAAGAAGGCCGACAAGATCCTGATCC TGCACGAGGGCAGCAGCTACTTCTACGGCACCTTCAGCGAGCTGCAGAACCTGCA GCCCGACTTCAGCAGCAAGCTGATGGGCTGCGACAGCTTCGACCAGTTCAGCGCC GAGCGCCGCAACAGCATCCTGACCGAGACCCTGCACCGCTTCAGCCTGGAGGGC GACGCCCCCGTGAGCTGGACCGAGACCAAGAAGCAGAGCTTCAAGCAGACCGGC GAGTTCGGCGAGAAGCGCAAGAACAGCATCCTGAACCCCATCAACAGCATCCGC AAGTTCAGCATCGTGCAGAAGACCCCCCTGCAGATGAACGGCATCGAGGAGGAC AGCGACGAGCCCCTGGAGCGCCGCCTGAGCCTGGTGCCCGACAGCGAGCAGGGC GAGGCCATCCTGCCCCGCATCAGCGTGATCAGCACCGGCCCCACCCTGCAGGCCC GCCGCCGCCAGAGCGTGCTGAACCTGATGACCCACAGCGTGAACCAGGGCCAGA ACATCCACCGCAAGACCACCGCCAGCACCCGCAAGGTGAGCCTGGCCCCCCAGG CCAACCTGACCGAGCTGGACATCTACAGCCGCCGCCTGAGCCAGGAGACCGGCC TGGAGATCAGCGAGGAGATCAACGAGGAGGACCTGAAGGAGTGCTTCTTCGACG ACATGGAGAGCATCCCCGCCGTGACCACCTGGAACACCTACCTGCGCTACATCAC CGTGCACAAGAGCCTGATCTTCGTGCTGATCTGGTGCCTGGTGATCTTCCTGGCCG AGGTGGCCGCCAGCCTGGTGGTGCTGTGGCTGCTGGGCAACACCCCCCTGCAGGA CAAGGGCAACAGCACCCACAGCCGCAACAACAGCTACGCCGTGATCATCACCAG CACCAGCAGCTACTACGTGTTCTACATCTACGTGGGCGTGGCCGACACCCTGCTG GCCATGGGCTTCTTCCGCGGCCTGCCCCTGGTGCACACCCTGATCACCGTGAGCA AGATCCTGCACCACAAGATGCTGCACAGCGTGCTGCAGGCCCCCATGAGCACCCT GAACACCCTGAAGGCCGGCGGCATCCTGAACCGCTTCAGCAAGGACATCGCCAT CCTGGACGACCTGCTGCCCCTGACCATCTTCGACTTCATCCAGCTGCTGCTGATCG TGATCGGCGCCATCGCCGTGGTGGCCGTGCTGCAGCCCTACATCTTCGTGGCCAC CGTGCCCGTGATCGTGGCCTTCATCATGCTGCGCGCCTACTTCCTGCAGACCAGCC AGCAGCTGAAGCAGCTGGAGAGCGAGGGCCGCAGCCCCATCTTCACCCACCTGG TGACCAGCCTGAAGGGCCTGTGGACCCTGCGCGCCTTCGGCCGCCAGCCCTACTT CGAGACCCTGTTCCACAAGGCCCTGAACCTGCACACCGCCAACTGGTTCCTGTAC CTGAGCACCCTGCGCTGGTTCCAGATGCGCATCGAGATGATCTTCGTGATCTTCTT CATCGCCGTGACCTTCATCAGCATCCTGACCACCGGCGAGGGCGAGGGCCGCGTG GGCATCATCCTGACCCTGGCCATGAACATCATGAGCACCCTGCAGTGGGCCGTGA
- 57 043901
ACAGCAGCATCGACGTGGACAGCCTGATGCGCAGCGTGAGCCGCGTGTTCAAGTT CATCGACATGCCCACCGAGGGCAAGCCCACCAAGAGCACCAAGCCCTACAAGAA CGGCCAGCTGAGCAAGGTGATGATCATCGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGACGA CATCTGGCCCAGCGGCGGCCAGATGACCGTGAAGGACCTGACCGCCAAGTACAC CGAGGGCGGCAACGCCATCCTGGAGAACATCAGCTTCAGCATCAGCCCCGGCCA GCGCGTGGGCCTGCTGGGCCGCACCGGCAGCGGCAAGAGCACCCTGCTGAGCGC CTTCCTGCGCCTGCTGAACACCGAGGGCGAGATCCAGATCGACGGCGTGAGCTGG GACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGCGCAAGGCCTTCGGCGTGATCCCCCAGAAG GTGTTCATCTTCAGCGGCACCTTCCGCAAGAACCTGGACCCCTACGAGCAGTGGA GCGACCAGGAGATCTGGAAGGTGGCCGACGAGGTGGGCCTGCGCAGCGTGATCG AGCAGTTCCCCGGCAAGCTGGACTTCGTGCTGGTGGACGGCGGCTGCGTGCTGAG CCACGGCCACAAGCAGCTGATGTGCCTGGCCCGCAGCGTGCTGAGCAAGGCCAA GATCCTGCTGCTGGACGAGCCCAGCGCCCACCTGGACCCCGTGACCTACCAGATC ATCCGCCGCACCCTGAAGCAGGCCTTCGCCGACTGCACCGTGATCCTGTGCGAGC ACCGCATCGAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAGTTCCTGGTGATCGAGGAGAACA AGGTGCGCCAGTACGACAGCATCCAGAAGCTGCTGAACGAGCGCAGCCTGTTCC GCCAGGCCATCAGCCCCAGCGACCGCGTGAAGCTGTTCCCCCACCGCAACAGCA GCAAGTGCAAGAGCAAGCCCCAGATCGCCGCCCTGAAGGAGGAGACCGAGGAG GAGGTGCAGGACACCCGCCTGTAA (SEQ ID NO: 23).
В еще одном варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGAAGCCCCCTGGAGAAGGCCAGCGTGGTGAGCAAGCTGTTCTTCAGC TGGACCAGACCCATCCTGAGAAAGGGCTACAGACAGAGACTGGAGCTGAGCGAC ATCTACCAGATCCCCAGCGTGGACAGCGCCGACAACCTGAGCGAGAAGCTGGAG AGAGAGTGGGACAGAGAGCTGGCCAGCAAGAAGAACCCCAAGCTGATCAACGCC CTGAGAAGATGCTTCTTCTGGAGATTCATGTTCTACGGCATCTTCCTGTACCTGGG CGAGGTGACCAAGGCCGTGCAGCCCCTGCTGCTGGGCAGAATCATCGCCAGCTAC GACCCCGACAACAAGGAGGAGAGAAGCATCGCCATCTACCTGGGCATCGGCCTG TGCCTGCTGTTCATCGTGAGAACCCTGCTGCTGCACCCCGCCATCTTCGGCCTGCA CCACATCGGCATGCAGATGAGAATCGCCATGTTCAGCCTGATCTACAAGAAGACC CTGAAGCTGAGCAGCAGAGTGCTGGACAAGATCAGCATCGGCCAGCTGGTGAGC CTGCTGAGCAACAACCTGAACAAGTTCGACGAGGGCCTGGCCCTGGCCCACTTCG TGTGGATCGCCCCCCTGCAGGTGGCCCTGCTGATGGGCCTGATCTGGGAGCTGCT
- 58 043901
GCAGGCCAGCGCCTTCTGCGGCCTGGGCTTCCTGATCGTGCTGGCCCTGTTCCAG GCCGGCCTGGGCAGAATGATGATGAAGTACAGGGACCAGAGAGCCGGCAAGATC AGCGAGAGACTGGTGATCACCAGCGAGATGATCGAGAACATCCAGAGCGTGAAG GCCTACTGCTGGGAGGAGGCCATGGAGAAGATGATCGAGAACCTGAGACAGACC GAGCTGAAGCTGACCAGAAAGGCCGCCTACGTGAGATACTTCAACAGCAGCGCC TTCTTCTTCAGCGGCTTCTTCGTGGTGTTCCTGAGCGTGCTGCCCTACGCCCTGAT CAAGGGCATCATCCTGAGAAAGATCTTCACCACCATCAGCTTCTGCATCGTGCTG AGAATGGCCGTGACCAGACAGTTCCCCTGGGCCGTGCAGACCTGGTACGACAGC CTGGGCGCCATCAACAAGATCCAGGACTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACC CTGGAGTACAACCTGACCACCACCGAGGTGGTGATGGAGAACGTGACCGCCTTCT GGGAGGAGGGCTTCGGCGAGCTGTTCGAGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACA GAAAGACCAGCAACGGCGACGACAGCCTGTTCTTCAGCAACTTCAGCCTGCTGGG CACCCCCGTGCTGAAGGACATCAACTTCAAGATCGAGAGAGGCCAGCTGCTGGC CGTGGCCGGCAGCACCGGCGCCGGCAAGACCAGCCTGCTGATGGTGATCATGGG CGAGCTGGAGCCCAGCGAGGGCAAGATCAAGCACAGCGGCAGAATCAGCTTCTG CAGCCAGTTCAGCTGGATCATGCCCGGCACCATCAAGGAGAACATCATCTTCGGC GTGAGCTACGACGAGTACAGATACAGAAGCGTGATCAAGGCCTGCCAGCTGGAG GAGGACATCAGCAAGTTCGCCGAGAAGGACAACATCGTGCTGGGCGAGGGCGGC ATCACCCTGAGCGGCGGCCAGAGAGCCAGAATCAGCCTGGCCAGAGCCGTGTAC AAGGACGCCGACCTGTACCTGCTGGACAGCCCCTTCGGCTACCTGGACGTGCTGA CCGAGAAGGAGATCTTCGAGAGCTGCGTGTGCAAGCTGATGGCCAACAAGACCA GAATCCTGGTGACCAGCAAGATGGAGCACCTGAAGAAGGCCGACAAGATCCTGA TCCTGCACGAGGGCAGCAGCTACTTCTACGGCACCTTCAGCGAGCTGCAGAACCT GCAGCCCGACTTCAGCAGCAAGCTGATGGGCTGCGACAGCTTCGACCAGTTCAGC GCCGAGAGAAGAAACAGCATCCTGACCGAGACCCTGCACAGATTCAGCCTGGAG GGCGACGCCCCCGTGAGCTGGACCGAGACCAAGAAGCAGAGCTTCAAGCAGACC GGCGAGTTCGGCGAGAAGAGAAAGAACAGCATCCTGAACCCCATCAACAGCATC AGAAAGTTCAGCATCGTGCAGAAGACCCCCCTGCAGATGAACGGCATCGAGGAG GACAGCGACGAGCCCCTGGAGAGAAGACTGAGCCTGGTGCCCGACAGCGAGCAG GGCGAGGCCATCCTGCCCAGAATCAGCGTGATCAGCACCGGCCCCACCCTGCAG GCCAGAAGAAGACAGAGCGTGCTGAACCTGATGACCCACAGCGTGAACCAGGGC CAGAACATCCACAGAAAGACCACCGCCAGCACCAGAAAGGTGAGCCTGGCCCCC CAGGCCAACCTGACCGAGCTGGACATCTACAGCAGAAGACTGAGCCAGGAGACC GGCCTGGAGATCAGCGAGGAGATCAACGAGGAGGACCTGAAGGAGTGCTTCTTC
- 59 043901
GACGACATGGAGAGCATCCCCGCCGTGACCACCTGGAACACCTACCTGAGATAC ATCACCGTGCACAAGAGCCTGATCTTCGTGCTGATCTGGTGCCTGGTGATCTTCCT GGCCGAGGTGGCCGCCAGCCTGGTGGTGCTGTGGCTGCTGGGCAACACCCCCCTG CAGGACAAGGGCAACAGCACCCACAGCAGAAACAACAGCTACGCCGTGATCATC ACCAGCACCAGCAGCTACTACGTGTTCTACATCTACGTGGGCGTGGCCGACACCC TGCTGGCCATGGGCTTCTTCAGAGGCCTGCCCCTGGTGCACACCCTGATCACCGT GAGCAAGATCCTGCACCACAAGATGCTGCACAGCGTGCTGCAGGCCCCCATGAG CACCCTGAACACCCTGAAGGCCGGCGGCATCCTGAACAGATTCAGCAAGGACAT CGCCATCCTGGACGACCTGCTGCCCCTGACCATCTTCGACTTCATCCAGCTGCTGC TGATCGTGATCGGCGCCATCGCCGTGGTGGCCGTGCTGCAGCCCTACATCTTCGT GGCCACCGTGCCCGTGATCGTGGCCTTCATCATGCTGAGAGCCTACTTCCTGCAG ACCAGCCAGCAGCTGAAGCAGCTGGAGAGCGAGGGCAGGAGCCCCATCTTCACC CACCTGGTGACCAGCCTGAAGGGCCTGTGGACCCTGAGAGCCTTCGGCAGACAG CCCTACTTCGAGACCCTGTTCCACAAGGCCCTGAACCTGCACACCGCCAACTGGT TCCTGTACCTGAGCACCCTGAGATGGTTCCAGATGAGAATCGAGATGATCTTCGT GATCTTCTTCATCGCCGTGACCTTCATCAGCATCCTGACCACCGGCGAGGGCGAG GGCAGAGTGGGCATCATCCTGACCCTGGCCATGAACATCATGAGCACCCTGCAGT GGGCCGTGAACAGCAGCATCGACGTGGACAGCCTGATGAGAAGCGTGAGCAGAG TGTTCAAGTTCATCGACATGCCCACCGAGGGCAAGCCCACCAAGAGCACCAAGC CCTACAAGAACGGCCAGCTGAGCAAGGTGATGATCATCGAGAACAGCCACGTGA AGAAGGACGACATCTGGCCCAGCGGCGGCCAGATGACCGTGAAGGACCTGACCG CCAAGTACACCGAGGGCGGCAACGCCATCCTGGAGAACATCAGCTTCAGCATCA GCCCCGGCCAGAGAGTGGGCCTGCTGGGCAGAACCGGCAGCGGCAAGAGCACCC TGCTGAGCGCCTTCCTGAGACTGCTGAACACCGAGGGCGAGATCCAGATCGACG GCGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAAAGGCCTTCGGCGTGA TCCCCCAGAAGGTGTTCATCTTCAGCGGCACCTTCAGAAAGAACCTGGACCCCTA CGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTGGCCGACGAGGTGGGCCTGAG AAGCGTGATCGAGCAGTTCCCCGGCAAGCTGGACTTCGTGCTGGTGGACGGCGGC TGCGTGCTGAGCCACGGCCACAAGCAGCTGATGTGCCTGGCCAGAAGCGTGCTG AGCAAGGCCAAGATCCTGCTGCTGGACGAGCCCAGCGCCCACCTGGACCCCGTG ACCTACCAGATCATCAGAAGAACCCTGAAGCAGGCCTTCGCCGACTGCACCGTGA TCCTGTGCGAGCACAGAATCGAGGCCATGCTGGAGTGCCAGCAGTTCCTGGTGAT CGAGGAGAACAAGGTGAGACAGTACGACAGCATCCAGAAGCTGCTGAACGAGA GAAGCCTGTTCAGACAGGCCATCAGCCCCAGCGACAGAGTGAAGCTGTTCCCCCA CAGAAACAGCAGCAAGTGCAAGAGCAAGCCCCAGATCGCCGCCCTGAAGGAGGA GACCGAGGAGGAGGTGCAGGACACCAGACTGTGA (SEQ ID NO: 24).
- 60 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGTCACCTCTGGAAAAGGCTAGCGTGGTCAGCAAGCTATTTTTTTCCT GGACCCGCCCGATACTCAGGAAGGGCTACCGACAGCGGCTGGAGCTGAGTGACA TTTATCAGATTCCCTCCGTCGATTCCGCTGACAACCTGTCTGAGAAACTGGAGCG GGAATGGGATAGGGAACTGGCGTCCAAAAAAAACCCCAAACTCATCAATGCACT CCGCAGATGCTTCTTCTGGCGGTTTATGTTTTATGGCATATTCCTGTATCTGGGGG AGGTGACGAAAGCCGTGCAGCCGCTGCTGCTTGGTCGCATTATCGCGTCATACGA TCCAGATAACAAGGAGGAAAGAAGTATCGCTATCTATCTCGGGATAGGGCTGTG CCTGCTCTTCATTGTGCGGACTCTTCTCTTGCACCCCGCCATTTTCGGTCTGCATCA TATAGGTATGCAGATGAGAATTGCGATGTTCTCATTGATTTACAAAAAAACGCTT AAGCTAAGTTCAAGGGTGCTAGATAAGATATCGATCGGCCAGCTGGTGTCTCTGC TTAGCAACAACCTCAATAAATTCGACGAAGGCCTTGCACTGGCCCACTTCGTGTG GATCGCCCCTCTGCAGGTGGCTCTGCTGATGGGGTTAATATGGGAGCTGTTGCAG GCCTCCGCTTTTTGTGGCCTGGGGTTTCTCATCGTGTTGGCCTTGTTTCAGGCAGG GCTGGGACGTATGATGATGAAATATAGGGATCAGAGGGCTGGCAAAATCTCTGA GCGCCTGGTTATTACGAGTGAAATGATTGAGAACATCCAGTCAGTGAAGGCCTAT TGCTGGGAGGAGGCCATGGAAAAAATGATTGAGAACCTACGCCAGACTGAGCTG AAGTTAACCAGAAAAGCCGCCTATGTGCGCTACTTTAACAGTAGCGCATTTTTCT TCTCCGGTTTTTTCGTGGTGTTTCTTAGTGTGTTGCCGTATGCCTTAATCAAGGGA ATAATACTCCGGAAGATTTTCACTACCATCAGCTTCTGTATCGTGTTGCGGATGGC CGTCACCCGGCAGTTTCCCTGGGCAGTACAGACTTGGTACGATTCTCTCGGAGCA ATTAACAAAATCCAAGACTTTCTACAAAAGCAGGAGTACAAGACCCTGGAGTAC AATCTGACCACCACAGAAGTCGTAATGGAGAATGTAACTGCCTTCTGGGAAGAG GGCTTTGGCGAACTCTTTGAAAAGGCCAAGCAGAACAATAACAACCGGAAGACC TCCAACGGGGACGACAGCTTATTTTTCAGCAATTTTTCTTTGCTCGGGACCCCTGT ACTGAAAGATATTAACTTTAAGATCGAGCGCGGACAACTCCTGGCTGTCGCCGGC AGCACTGGAGCTGGAAAAACATCACTGCTTATGGTGATAATGGGAGAACTCGAA CCAAGCGAGGGAAAAATAAAGCACTCTGGACGGATTAGTTTTTGCTCCCAGTTCT CGTGGATAATGCCTGGCACCATTAAGGAGAATATCATCTTTGGAGTGAGTTACGA CGAATACCGGTACCGGTCCGTTATCAAGGCTTGTCAACTCGAGGAGGACATTTCT
- 61 043901
AAATTCGCCGAAAAAGATAATATAGTGCTGGGCGAAGGAGGCATTACACTGAGC GGGGGTCAGAGAGCTCGAATTAGCCTCGCCCGAGCAGTCTATAAAGACGCCGAT CTTTACCTGCTGGATTCCCCTTTTGGGTATTTGGATGTTCTGACAGAGAAGGAAAT CTTTGAATCATGTGTCTGTAAACTGATGGCCAATAAGACTAGGATTCTAGTGACT TCGAAAATGGAGCACCTGAAAAAAGCGGACAAAATTCTGATACTCCATGAAGGG TCTTCCTACTTCTACGGCACCTTCTCAGAGTTGCAGAACTTACAACCTGATTTTTC ATCTAAGCTTATGGGGTGCGACTCGTTTGACCAGTTCTCCGCTGAAAGACGAAAC AGCATCTTAACGGAAACTCTTCACAGGTTCTCATTAGAGGGAGATGCGCCGGTGT CCTGGACAGAGACAAAAAAACAGTCTTTCAAACAGACAGGAGAGTTTGGCGAGA AGAGAAAAAACTCAATCCTCAATCCCATCAATTCTATTAGAAAGTTTAGCATCGT CCAAAAAACACCATTGCAGATGAATGGGATTGAGGAGGACAGTGATGAGCCTTT GGAACGAAGACTGTCCCTGGTACCCGATAGCGAACAGGGTGAGGCCATCCTTCCT AGGATCTCGGTCATAAGTACAGGGCCCACACTGCAGGCCAGGCGACGTCAAAGT GTCCTCAATCTTATGACGCACAGTGTGAATCAGGGGCAGAACATCCATCGTAAGA CGACAGCTTCAACTCGAAAGGTCAGTCTAGCTCCACAAGCCAATCTTACAGAGCT GGACATTTATTCCCGCCGCCTCAGTCAGGAGACCGGATTGGAAATATCAGAGGAA ATTAATGAAGAGGATCTGAAGGAATGCTTCTTTGATGACATGGAATCGATCCCCG CTGTTACTACCTGGAACACATATCTGAGATATATTACCGTCCATAAGAGCTTAAT CTTTGTACTGATATGGTGCTTGGTGATTTTCCTGGCAGAGGTTGCGGCGAGTTTGG TCGTGCTATGGCTCCTTGGAAACACTCCCCTGCAGGATAAGGGGAACTCCACTCA TAGCAGGAATAACAGCTATGCCGTGATCATCACCTCTACCTCCTCTTATTACGTGT TTTACATATACGTCGGTGTTGCGGATACCCTGTTGGCAATGGGGTTCTTTAGAGG ACTACCCCTAGTTCACACCCTGATCACCGTTTCGAAGATCTTGCACCACAAGATG CTTCATAGCGTTCTCCAAGCTCCTATGAGCACCCTTAATACACTGAAAGCAGGAG GTATCCTTAACCGCTTTTCCAAAGACATCGCTATACTCGACGATTTGCTCCCATTG ACCATCTTCGACTTCATTCAGCTGCTCCTCATTGTGATCGGCGCCATTGCCGTGGT CGCAGTGTTACAGCCATATATTTTCGTAGCCACCGTGCCCGTCATCGTGGCATTTA TCATGCTGCGCGCATATTTCTTACAGACATCTCAGCAACTGAAGCAGCTGGAATC TGAGGGCAGATCTCCTATTTTTACACACCTGGTTACCAGCCTGAAGGGCCTGTGG ACCCTGCGTGCTTTCGGTCGCCAACCCTACTTTGAGACTCTCTTCCATAAGGCTCT GAATTTACATACTGCCAATTGGTTCCTATACCTTAGTACCCTTCGGTGGTTCCAGA TGCGGATAGAAATGATCTTCGTGATTTTCTTCATCGCAGTCACTTTCATCTCTATT TTGACGACCGGTGAGGGCGAGGGCAGGGTGGGCATCATTCTGACTTTGGCCATGA ACATTATGTCAACACTCCAGTGGGCCGTTAATTCAAGCATTGATGTGGATTCCTTG
- 62 043901
ATGCGTTCCGTCAGCAGGGTATTTAAATTCATAGACATGCCCACCGAGGGCAAGC CAACAAAATCTACCAAGCCATACAAAAATGGCCAACTAAGCAAGGTCATGATTA TCGAGAATTCTCATGTGAAAAAGGACGACATTTGGCCTTCCGGGGGTCAAATGAC TGTAAAGGACCTGACGGCTAAATACACTGAGGGCGGTAATGCTATCTTGGAGAA CATCTCTTTCAGCATCTCCCCTGGCCAGAGAGTGGGACTGCTCGGGCGGACAGGC TCCGGAAAGTCTACGCTCCTTTCAGCATTCCTTAGACTTCTGAACACCGAAGGTG AGATTCAGATTGACGGGGTCTCTTGGGACTCCATCACACTTCAGCAATGGAGGAA GGCATTCGGTGTAATCCCCCAAAAGGTTTTTATCTTCTCCGGAACATTTCGTAAGA ATCTGGACCCGTACGAGCAGTGGTCAGATCAGGAGATCTGGAAAGTAGCAGACG AGGTCGGGCTACGGAGCGTTATTGAACAGTTTCCTGGCAAACTGGACTTCGTTTT GGTGGACGGAGGCTGTGTGCTGAGTCACGGCCATAAACAACTGATGTGCTTAGCT AGGTCTGTTCTCAGCAAGGCAAAGATTTTACTGCTGGATGAACCAAGCGCCCACC TTGATCCAGTGACATATCAAATCATCAGAAGAACTCTTAAACAGGCGTTCGCCGA CTGCACAGTGATCCTGTGTGAGCACAGAATAGAAGCCATGCTGGAATGTCAACA GTTTCTCGTGATTGAGGAGAACAAGGTGCGCCAGTACGATAGCATCCAGAAGTTA CTCAATGAAAGGTCACTCTTCAGGCAGGCCATCTCACCCAGCGACCGCGTTAAGC TGTTTCCACACCGAAACAGTTCCAAGTGCAAAAGTAAGCCACAGATTGCTGCACT GAAGGAAGAGACAGAAGAAGAAGTTCAGGACACTCGGCTCTGA (SEQ ID NO: 25).
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAGAGGAGCCCACTGGAGAAAGCCTCCGTGGTGAGTAAACTCTTTTTTAGTT GGACCAGACCCATCCTGCGAAAAGGATACAGGCAGCGCCTCGAGTTGTCAGATA TCTACCAGATTCCTTCTGTGGACTCAGCTGACAATTTGAGTGAGAAGCTGGAGCG GGAGTGGGATAGAGAGCTGGCGAGCAAAAAAAACCCCAAGCTTATCAATGCTCT GCGCCGCTGCTTTTTCTGGAGGTTCATGTTTTATGGGATCTTCCTGTACCTGGGGG AGGTCACCAAAGCTGTTCAGCCGCTCCTTCTTGGCCGCATCATCGCCAGCTATGA CCCTGATAATAAAGAAGAAAGGTCTATTGCTATTTATCTGGGAATTGGCCTCTGC TTGCTCTTCATCGTCCGCACCCTTCTGCTGCACCCTGCCATTTTTGGCCTTCACCAC ATCGGCATGCAAATGAGAATTGCCATGTTCTCCCTCATTTACAAAAAGACCCTGA AACTTTCCTCAAGAGTGTTAGATAAAATATCCATTGGTCAGCTGGTCAGCCTGCT GTCCAACAATCTTAACAAATTTGATGAAGGCTTGGCGCTGGCCCACTTCGTGTGG ATTGCACCTCTGCAGGTGGCCCTGTTGATGGGACTTATATGGGAGCTGCTTCAAG CCTCTGCTTTCTGTGGGCTGGGCTTTTTGATTGTACTGGCACTTTTTCAGGCTGGG
- 63 043901
CTCGGAAGAATGATGATGAAATACAGAGATCAGCGGGCCGGGAAGATATCAGAG CGACTTGTGATCACCAGTGAAATGATTGAAAATATTCAGAGCGTGAAAGCCTACT GCTGGGAAGAAGCCATGGAGAAGATGATTGAGAACCTGAGGCAGACAGAGCTCA AGCTCACTCGGAAGGCTGCTTATGTTCGCTATTTCAACAGCAGCGCCTTCTTCTTC AGTGGCTTCTTTGTTGTCTTCCTGTCTGTTCTGCCATATGCACTGATAAAAGGCAT TATTTTACGAAAGATCTTCACCACCATCAGTTTTTGCATCGTTCTCAGGATGGCCG TCACAAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTACGATTCCTTGGGGGCCAT CAACAAGATTCAAGATTTCTTGCAAAAACAAGAATATAAAACTTTAGAATACAAC CTCACCACCACTGAAGTGGTCATGGAAAATGTGACAGCCTTTTGGGAGGAGGGTT TTGGAGAATTGTTCGAGAAGGCAAAGCAGAATAACAACAACAGGAAGACGAGCA ATGGGGACGACTCTCTCTTCTTCAGCAACTTTTCACTGCTCGGGACCCCTGTGTTG AAAGATATAAACTTCAAGATCGAGAGGGGCCAGCTCTTGGCTGTGGCAGGCTCC ACTGGAGCTGGTAAAACATCTCTTCTCATGGTGATCATGGGGGAACTGGAGCCTT CCGAAGGAAAAATCAAGCACAGTGGGAGAATCTCATTCTGCAGCCAGTTTTCCTG GATCATGCCCGGCACCATTAAGGAAAACATCATATTTGGAGTGTCCTATGATGAG TACCGCTACCGGTCAGTCATCAAAGCCTGTCAGTTGGAGGAGGACATCTCCAAGT TTGCAGAGAAAGACAACATTGTGCTTGGAGAGGGGGGTATCACTCTTTCTGGAGG ACAAAGAGCCAGGATCTCTTTGGCCCGGGCAGTCTACAAGGATGCAGACCTCTAC TTGTTGGACAGTCCCTTCGGCTACCTCGACGTGCTGACTGAAAAAGAAATTTTTG AAAGCTGTGTGTGCAAACTGATGGCAAACAAGACCAGGATTCTTGTCACCAGCA AGATGGAACATCTGAAGAAAGCGGACAAAATTCTGATTCTGCATGAAGGGAGCT CCTACTTCTATGGAACATTTAGCGAGCTTCAGAACCTACAGCCAGACTTCTCCTCC AAATTAATGGGCTGTGACTCCTTCGACCAGTTCTCTGCAGAAAGAAGAAACTCTA TACTCACAGAGACCCTCCACCGCTTCTCCCTTGAGGGAGATGCCCCAGTTTCTTGG ACAGAAACCAAGAAGCAGTCCTTTAAGCAGACTGGCGAGTTTGGTGAAAAGAGG AAAAATTCAATTCTCAATCCAATTAACAGTATTCGCAAGTTCAGCATTGTCCAGA AGACACCCCTCCAGATGAATGGCATCGAAGAAGATAGTGACGAGCCGCTGGAGA GACGGCTGAGTCTGGTGCCAGATTCAGAACAGGGGGAGGCCATCCTGCCCCGGA TCAGCGTCATTTCCACAGGCCCCACATTACAAGCACGGCGCCGGCAGAGTGTTTT AAATCTCATGACCCATTCAGTGAACCAGGGCCAAAATATCCACAGGAAGACTAC AGCTTCTACCCGGAAAGTGTCTCTGGCCCCTCAGGCCAATCTGACCGAGCTGGAC ATCTACAGCAGGAGGCTCTCCCAGGAAACAGGGCTGGAAATATCTGAAGAGATT AATGAAGAGGATCTTAAAGAGTGCTTCTTTGATGACATGGAGAGCATCCCCGCGG TGACCACATGGAACACCTACCTTAGATATATTACTGTCCACAAGAGCCTCATATT
- 64 043901
TGTCCTCATCTGGTGCCTGGTTATTTTCCTCGCTGAGGTGGCGGCCAGTCTTGTTG TGCTCTGGCTGCTGGGCAACACTCCTCTCCAGGACAAGGGCAATAGTACTCACAG CAGAAATAATTCTTATGCCGTCATCATTACAAGCACCTCCAGCTACTACGTGTTCT ACATCTATGTGGGCGTGGCTGACACCCTCCTGGCCATGGGTTTCTTCCGGGGCCT GCCTTTGGTGCACACCCTCATCACAGTGTCAAAAATTCTGCACCATAAAATGCTT CATTCTGTCCTGCAGGCACCCATGAGCACTTTGAACACATTGAAGGCTGGCGGCA TCCTCAACAGATTTTCTAAAGATATTGCTATCCTGGATGATCTCCTCCCCCTGACA ATCTTTGACTTTATCCAGCTTCTGCTGATCGTGATTGGAGCCATAGCAGTGGTTGC TGTCCTGCAGCCCTACATTTTTGTGGCCACCGTGCCCGTGATTGTTGCCTTTATTA TGCTCAGAGCTTACTTCCTGCAAACTTCTCAACAGCTCAAACAGCTAGAATCTGA GGGCCGGAGCCCCATTTTTACCCACCTGGTGACTTCCCTGAAGGGACTGTGGACT CTGAGAGCATTCGGGCGACAGCCTTACTTTGAGACACTGTTCCACAAGGCCCTGA ACTTGCACACTGCCAACTGGTTTCTTTACCTGAGCACACTCCGCTGGTTCCAGATG CGGATAGAGATGATCTTCGTCATCTTTTTTATAGCTGTAACCTTCATTTCTATCCTT ACAACAGGAGAAGGAGAGGGCAGGGTGGGAATCATCCTCACGCTGGCTATGAAC ATAATGTCCACCTTGCAGTGGGCCGTGAATTCCAGTATAGATGTGGATTCTCTAA TGAGGAGTGTCTCCCGGGTGTTTAAATTCATTGATATGCCTACTGAGGGGAAACC CACCAAGTCAACAAAACCTTATAAGAATGGACAGCTGAGCAAGGTGATGATAAT TGAGAACAGCCACGTGAAGAAGGATGACATTTGGCCCAGCGGGGGCCAGATGAC TGTGAAGGACCTGACGGCCAAGTACACCGAAGGTGGAAATGCCATTTTGGAAAA CATCAGCTTCTCAATCTCTCCTGGGCAGAGAGTTGGATTGCTGGGTCGCACGGGC AGCGGCAAATCAACCCTGCTCAGTGCCTTCCTTCGGCTCCTGAATACAGAAGGCG AAATCCAAATTGACGGGGTGAGCTGGGACAGCATCACCCTGCAGCAGTGGAGAA AAGCATTTGGGGTCATTCCACAGAAAGTTTTCATCTTCTCTGGCACTTTCAGAAAG AACCTGGACCCCTATGAGCAGTGGAGCGACCAGGAGATCTGGAAGGTTGCAGAT GAAGTTGGCCTGCGGAGTGTGATAGAACAATTTCCTGGCAAGCTGGATTTTGTGC TGGTAGATGGAGGCTGCGTGCTGTCCCACGGCCACAAACAGCTGATGTGCCTCGC CCGCTCCGTTCTTTCAAAGGCCAAAATCTTGCTTTTGGATGAGCCCAGTGCTCACC TCGACCCAGTGACCTATCAGATAATCCGCAGGACCTTAAAGCAAGCTTTTGCCGA CTGCACCGTCATACTGTGTGAGCACCGGATTGAAGCAATGCTGGAATGCCAGCAG TTTCTGGTGATCGAGGAGAATAAGGTCCGGCAGTACGACAGCATCCAGAAGTTGT TGAATGAGCGCAGCCTTTTCCGCCAGGCCATCTCCCCATCTGACAGAGTCAAGCT GTTTCCACATAGGAACTCCTCTAAGTGCAAGTCCAAGCCCCAGATCGCTGCCCTC AAGGAGGAAACTGAGGAAGAGGTGCAGGATACCCGCCTGTGA (SEQ ID NO: 26).
- 65 043901
В другом варианте осуществления иллюстративная кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR представляет собой
ATGCAACGGAGTCCTCTGGAAAAAGCCTCTGTCGTATCTAAGCTTTTCTTCAGTTG GACACGCCCGATTTTGAGAAAGGGTTATCGGCAACGCTTGGAACTTAGTGACATC TACCAAATTCCAAGTGTAGACTCAGCCGATAACTTGAGCGAAAAGCTCGAACGA GAGTGGGATCGAGAACTGGCTAGCAAAAAAAATCCCAAACTCATAAATGCCCTG CGACGCTGTTTCTTTTGGCGATTTATGTTTTACGGTATTTTCCTTTATTTGGGTGAG GTCACGAAGGCTGTACAGCCACTGCTGCTGGGTCGCATCATTGCCTCTTACGACC CTGACAACAAAGAGGAGCGGTCAATAGCTATCTACCTTGGTATAGGACTTTGCTT GCTCTTCATAGTCCGCACGTTGCTTCTCCACCCTGCTATATTTGGTCTCCATCACA TTGGGATGCAAATGCGGATCGCGATGTTCAGTCTTATATATAAAAAGACTCTTAA ACTTTCCAGCCGGGTTCTGGATAAGATCTCTATTGGTCAACTGGTATCTCTTTTGT CTAACAACCTGAATAAGTTCGACGAGGGCCTTGCATTGGCCCATTTTGTATGGAT TGCCCCTTTGCAAGTCGCCCTCCTGATGGGATTGATCTGGGAACTCCTGCAAGCT AGTGCTTTTTGCGGATTGGGATTCCTCATAGTCCTTGCGCTCTTTCAGGCGGGACT TGGACGCATGATGATGAAGTATCGCGACCAACGAGCTGGCAAGATCAGTGAACG GCTTGTAATAACCAGTGAAATGATAGAGAACATCCAGAGCGTAAAAGCTTACTGT TGGGAAGAAGCGATGGAAAAGATGATTGAGAACCTTCGCCAGACAGAACTTAAA CTTACACGAAAGGCCGCTTATGTCCGGTACTTCAACTCTTCAGCATTTTTTTTTAG TGGCTTCTTTGTAGTGTTCCTGTCCGTCCTTCCGTATGCACTTATCAAGGGTATAA TACTTAGGAAAATCTTCACAACAATCAGTTTTTGCATAGTCCTTCGCATGGCAGTA ACTCGCCAATTTCCCTGGGCAGTTCAGACGTGGTACGACTCACTTGGCGCAATTA ACAAAATTCAAGATTTCCTCCAAAAGCAAGAGTATAAAACCTTGGAATACAACCT TACCACCACAGAAGTTGTAATGGAAAATGTCACAGCCTTCTGGGAGGAAGGTTTC GGCGAACTTTTTGAGAAGGCGAAGCAAAATAACAATAATCGGAAAACATCAAAC GGTGACGATTCACTGTTCTTTTCTAACTTTAGCCTTCTTGGGACGCCCGTCCTGAA GGACATAAACTTTAAGATTGAACGGGGTCAACTTCTCGCGGTCGCAGGGAGTACT GGAGCGGGGAAAACGAGCCTGCTGATGGTGATAATGGGGGAGTTGGAGCCCTCA GAAGGCAAGATCAAGCATAGTGGTAGAATTAGCTTCTGCAGTCAATTTAGTTGGA TTATGCCGGGCACGATCAAAGAAAATATAATCTTTGGGGTATCCTACGATGAATA CAGGTACCGATCAGTGATAAAAGCGTGCCAGCTTGAAGAAGACATTTCAAAGTTT GCTGAGAAGGATAATATCGTACTTGGAGAAGGAGGTATCACCCTGTCTGGGGGTC AACGAGCGAGGATCTCCCTGGCACGCGCCGTCTACAAGGACGCGGACCTCTATCT
- 66 043901
GTTGGATTCACCGTTCGGATATTTGGACGTGCTTACGGAGAAAGAAATATTTGAG AGCTGTGTTTGCAAGCTCATGGCAAATAAAACCAGAATATTGGTTACAAGCAAGA TGGAGCATCTTAAGAAAGCAGATAAAATCCTGATATTGCACGAGGGCTCTTCATA CTTCTACGGGACGTTTTCTGAGTTGCAGAACCTCCAGCCGGATTTCAGCTCTAAGC TGATGGGCTGTGATTCCTTTGATCAGTTTAGTGCGGAAAGACGAAACAGTATACT CACCGAAACACTGCACAGGTTCTCTCTGGAGGGCGACGCCCCGGTTTCCTGGACA GAGACGAAGAAGCAGTCCTTCAAACAGACAGGCGAGTTTGGGGAGAAAAGGAA AAATAGCATACTCAACCCGATTAACAGCATTCGCAAGTTCAGTATAGTACAAAAG ACCCCGTTGCAGATGAACGGTATAGAGGAAGATTCTGATGAGCCACTGGAAAGA CGGCTTTCTCTCGTTCCGGACAGTGAACAGGGAGAGGCAATACTGCCTCGGATCA GCGTTATCTCTACAGGACCTACTTTGCAAGCTCGGCGCCGACAGTCAGTCTTGAA TCTTATGACTCATAGTGTTAATCAAGGCCAGAATATCCATCGCAAGACCACCGCA AGTACAAGGAAAGTGAGCTTGGCACCTCAAGCAAACCTTACTGAACTTGATATCT ACTCACGGCGACTTTCACAGGAGACCGGACTTGAAATTAGTGAAGAAATTAACG AGGAGGACCTCAAGGAGTGCTTCTTCGATGACATGGAATCAATCCCCGCAGTCAC AACCTGGAACACTTATCTGAGGTATATAACAGTTCACAAGAGCCTCATTTTTGTA CTTATTTGGTGTTTGGTAATTTTCCTGGCGGAGGTTGCTGCTTCTTTGGTCGTCCTT TGGCTCCTCGGGAATACACCGCTCCAAGACAAAGGCAACTCTACCCATAGTAGGA ACAATTCATATGCAGTGATTATAACCAGTACATCATCTTATTACGTTTTCTATATT TATGTCGGGGTAGCTGACACGCTGTTGGCGATGGGCTTCTTTAGGGGCCTCCCCTT GGTACACACCCTTATCACGGTGAGTAAAATCCTGCATCACAAAATGCTTCATTCT GTACTCCAAGCGCCGATGAGTACGCTTAATACGCTGAAAGCAGGAGGGATACTG AATCGGTTCAGCAAGGACATCGCCATTCTGGATGACCTGCTTCCATTGACAATAT TTGATTTCATTCAGCTCCTTCTCATAGTTATTGGAGCCATAGCGGTGGTGGCTGTG CTTCAGCCTTATATATTCGTTGCCACAGTTCCCGTTATAGTGGCATTTATAATGCT CAGGGCCTACTTTCTCCAGACTTCCCAGCAGTTGAAGCAACTCGAATCAGAAGGA AGGTCACCTATTTTCACACATCTTGTGACTTCCTTGAAGGGCTTGTGGACGCTGCG GGCCTTCGGAAGACAACCATATTTTGAAACTCTCTTCCACAAAGCTTTGAATCTTC ATACTGCGAACTGGTTCCTGTATTTGAGTACTTTGCGCTGGTTCCAGATGAGGATA GAAATGATATTCGTTATCTTCTTTATCGCGGTTACGTTCATAAGTATCCTCACTAC GGGGGAGGGTGAGGGTAGAGTGGGCATAATACTGACCCTCGCCATGAACATTAT GTCCACCCTGCAGTGGGCGGTAAACAGCAGCATAGATGTGGATTCTTTGATGCGC AGTGTGAGCAGGGTTTTTAAGTTTATCGATATGCCGACGGAAGGAAAGCCCACTA AAAGCACGAAACCCTATAAAAATGGACAGCTTAGCAAAGTAATGATAATCGAGA
- 67 043901
ATAGCCATGTGAAAAAGGATGACATATGGCCTTCCGGAGGCCAAATGACTGTTA AAGATCTGACCGCTAAATATACCGAGGGCGGCAACGCAATACTCGAAAACATAA GCTTTTCCATAAGCCCCGGCCAACGCGTGGGTCTTCTGGGGAGGACTGGCTCCGG AAAATCAACGTTGCTTAGCGCGTTTTTGCGGCTCCTTAACACTGAAGGTGAGATC CAAATAGATGGCGTTAGTTGGGACTCTATAACACTGCAACAATGGCGGAAAGCTT TCGGCGTCATACCTCAGAAGGTGTTCATCTTTAGCGGAACGTTCAGGAAGAACTT GGATCCCTACGAACAATGGAGTGATCAAGAAATATGGAAAGTGGCAGATGAGGT AGGCTTGCGCAGTGTCATTGAACAATTCCCAGGGAAACTCGACTTTGTACTGGTG GACGGCGGTTGCGTCTTGTCACACGGGCACAAACAGTTGATGTGTTTGGCCCGCA GTGTTTTGTCTAAGGCGAAGATTCTGTTGCTCGACGAACCGAGTGCTCATCTTGAT CCCGTCACCTACCAAATCATCAGAAGGACGTTGAAGCAAGCTTTCGCCGACTGCA CTGTAATCCTTTGTGAGCATAGGATCGAAGCAATGCTCGAGTGCCAACAGTTCTT GGTTATAGAGGAGAATAAGGTTCGGCAATACGACTCAATACAGAAACTGCTTAA TGAGCGGTCACTCTTTCGACAAGCTATCTCTCCTAGTGACAGGGTAAAGCTTTTTC CTCATCGGAATTCCAGCAAGTGTAAGAGTAAACCACAGATCGCCGCCCTTAAAGA GGAGACCGAAGAAGAGGTGCAGGATACGAGACTTTAG (SEQ ID NO: 27).
В некоторых вариантах осуществления кодон-оптимизированная последовательность мРНК CFTR, соответствующая настоящему изобретению, характеризуется по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью по отношению к SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7 и кодирует белок CFTR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления соответствующая последовательность мРНК может быть последовательностью мРНК, кодирующей гомолог или аналог человеческого белка CFTR (hCFTR). Например, гомологом или аналогом белка hCFTR может быть модифицированный белок hCFTR, содержащий одну или более аминокислотных замен, делеций и/или вставок по сравнению с белком hCFTR дикого типа или встречающимся в природе с сохранением при этом существенной активности белка hCFTR. В некоторых вариантах осуществления мРНК, соответствующая настоящему изобретению, кодирует аминокислота последовательность, по меньшей мере на 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную по отношению к SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления МРНК, соответствующая настоящему изобретению, кодирует белок, по сути идентичный белку hCFTR. В некоторых вариантах осуществления мРНК, соответствующая настоящему изобретению, кодирует аминокислота последовательность, по меньшей мере на 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную по отношению к SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления мРНК, соответствующая настоящему изобретению, кодирует фрагмент или часть белка hCFTR. В некоторых вариантах осуществления мРНК, соответствующая настоящему изобретению, кодирует фрагмент или часть белка hCFTR, где фрагмент или часть белка все еще сохраняет активность CFTR, подобную таковой белка дикого типа. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления мРНК, соответствующая настоящему изобретению, имеет нуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7.
В некоторых вариантах осуществления мРНК, соответствующая настоящему изобретению, имеет нуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную по отношению к любой из SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 27.
В некоторых вариантах осуществления соответствующий мРНК кодирует белок слияния, включающий в себя полноразмерный белок hCFTR, его фрагмент или часть, слитые с другим белком (например, N- или C-концевое слияние). В некоторых вариантах осуществления белок, слитый с мРНК, кодирующей полноразмерный белок hCFTR, его фрагмент или часть, кодирует сигнал или нацеливающуюся на клетку последовательность.
мРНК В соответствии с настоящим изобретением могут быть синтезированы согласно любому из ряда известных способов. Например, мРНК В соответствии с настоящим изобретением могут быть синтезированы путем in vitro транскрипции (IVT). Вкратце, IVT, как правило, выполняют с матрицей линейной или кольцевой ДНК, содержащей промотор, пул рибонуклеотидтрифосфатов, буферную систему, которая может включать в себя DTT и ионы магния, и приемлемый ингибитор РНК-полимеразы (например, T3, T7 или SP6 РНК-полимеразы), ДНКазы I, пирофосфатазы и/или РНКазы. Точные условия будут
- 68 043901 варьировать в зависимости от конкретного применения.
Как правило, синтез мРНК включает в себя добавление кэпа на N-конец (5') и хвоста на C-конец (3'). Наличие кэпа важно для обеспечения устойчивости к нуклеазам, обнаруженным в большинстве эукариотических клеток. Наличие хвоста позволяет защитить мРНК от разложения экзонуклеазами.
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления мРНК (например, мРНК, кодирующие CFTR) включают в себя 5'-кэп-структуру. Добавление 5'-кэпа происходит, как правило, следующим образом: во-первых, концевая фосфатаза РНК удаляет одну из концевых фосфатных групп из 5'нуклеотида, оставляя два концевых фосфата; затем к концевым фосфатам с помощью гуанилилтрансферазы добавляют гуанозинтрифосфат (GTP) с образованием 5'5'5-трифосфатной связи; а затем метилируют 7-азот гуанина с помощью метилтрансферазы. Примеры кэп-структур включают в себя без ограничения m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A и G(5')ppp(5')G. Дополнительные кэп-структуры описаны в опубликованной заявке на выдачу патента США № 2016/0032356 и находящейся на предварительном рассмотрении заявке на выдачу патента США № 62/464327, поданной 27 февраля 2017 года, которые включены в настоящий документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах осуществления мРНК (например, мРНК, кодирующие CFTR) включают в себя 3'-хвостовую структуру. Как правило, хвостовая структура включает в себя хвост поли(А) и/или поли(С). Хвост поли-A или поли-C на 3'-конце мРНК, как правило, включает в себя по меньшей мере 50 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 150 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 200 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 250 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 300 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 350 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 400 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 450 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 500 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 550 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 650 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 700 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 750 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 800 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 850 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 900 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, по меньшей мере 950 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов или по меньшей мере 1 т.о. аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, соответственно. В некоторых вариантах осуществления хвост поли-A или поли-C может составлять от приблизительно 10 до 800 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов (например, от приблизительно 10 до 200 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 300 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 400 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 500 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 550 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 50 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 100 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 150 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 200 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 250 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 300 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 350 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 400 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 450 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 500 до 600 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 150 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 10 до 100 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов, от приблизительно 20 до 70 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов или от приблизительно 20 до 60 аденозиновых или цитозиновых нуклеотидов), соответственно. В некоторых вариантах осуществления хвостовая структура включает в себя комбинацию хвостов поли(А) и поли(С) различной длины, описанных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления хвостовая структура включает в себя по меньшей мере 50%, 55%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аденозиновых нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления хвостовая структура включает в себя по меньшей мере 50%, 55%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% цитозиновых нуклеотидов.
Модифицированная мРНК мРНК CFTR может содержать только встречающиеся в природе нуклеотиды (или немодифицированные нуклеотиды). В некоторых вариантах осуществления, однако, соответствующая мРНК CFTR может содержать каркасные модификации, модификации Сахаров и/или модификации оснований. Например, модифицированные нуклеотиды могут включать в себя без ограничения модифицированные пурины (аденин (A), гуанин (G)) или пиримидины (тимин (T), цитозин (C), урацил (U)) и в качестве модифицированных нуклеотидов аналоги или производные пуринов и пиримидинов, такие как, например, 1метил-аденин, 2-метил-аденин, 2-метилтио-N-6-изопентил-аденин, N-метил-аденин, N-изопентиладенин, 2-тио-цитозин, 3-метил-цитозин, 4-ацетил-цитозин, 5-метил-цитозин, 2,6-диаминопурин, 1метил-гуанин, 2-метил-гуанин, 2,2-диметил-гуанин, 7-метил-гуанин, инозин, 1-метил-инозин, псевдоура- 69 043901 цил (5-урацил), дигидро-урацил, 2-тио-урацил, 4-тио-урацил, 5-карбоксиметиламинометил-2-тио-урацил, 5-(карбоксигидроксиметил)-урацил, 5-фтор-урацил, 5-бром-урацил, 5-карбоксиметиламинометилурацил, 5-метил-2-тио-урацил, 5-метил-урацил, N-урαцил-5-сложный метиловый эфир оксиуксусной кислоты, 5-метиламинометил-урацил, 5-метоксиаминометил-2-тио-урацил, 5'-метоксикарбонилметилурацил, 5-метокси-урацил, урацил-5-сложный метиловый эфир оксиуксусной кислоты, урацил-5оксиуксусная кислота (v), 1-метил-псевдоурацил, квеуозин, бета-D-маннозил-квеуозин, вибутоксозин и фосфорамидаты, фосфоротиоаты, пептидные нуклеотиды, метилфосфонаты, 7-деазагуанозин, 5метилцитозин и инозин. Получение таких аналогов известно специалистам в данной области, например, из патента США № 4373071, патента США № 4401796, патента США № 4415732, патента США № 4458066, патента США № 4500707, патента США № 4668777, патента США № 4973679, патента США № 5047524, патента США № 5132418, патента США № 5153319, патентов США №№ 5262530 и 5700642, раскрытия которых включены посредством ссылки в своем полном объеме.
В некоторых вариантах осуществления мРНК (например, мРНК, кодирующие CFTR) могут содержать модификации каркаса РНК Как правило, каркасной модификацией является модификация, в которой фосфаты каркаса нуклеотидов, содержащихся в РНК, модифицированы химическим путем. Иллюстративные каркасные модификации, как правило, включают в себя без ограничения модификации из группы, состоящей из метилфосфонатов, метилфосфорамидатов, фосфорамидатов, фосфоротиоатов (например, цитидин-5'-O-(1-тиофосфата)), боранофосфатов, положительно заряженных гуанидиниевых групп и т.д., что означает замещение сложной фосфодиэфирной связи другими анионными, катионными или нейтральными группами.
В некоторых вариантах осуществления мРНК (например, мРНК, кодирующие CFTR) могут содержать модификации сахаров. Типичные модификации сахаров являются химической модификацией сахара, содержащегося в нуклеотидах, в том числе без ограничения модификации сахара, выбранные из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор-олигорибонуклеотида (2'-фтор-2'-дезоксицитидин-5'трифосфата, 2'-фтор-2'-дезоксиуридин-5'-трифосфата), 2'-дезокси-2'-деамин-олигорибонуклеотида (2'амино-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфата, 2'-амино-2'-дезоксиуридин-5'-трифосфата), 2'-Oалкилолигорибонуклеотида, 2'-дезокси-2'-C-алкилолигорибонуклеотида (2'-O-метилцитидин-5'трифосфата, 2'-метилуридин-5'-трифосфата), 2'-C-алкилолигорибонуклеотида и его изомеров (2'арацитидин-5'-трифосфата, 2'-арауридин-5'-трифосфата) или азидотрифосфатов (2'-азидо-2'дезоксицитидин-5'-трифосфата, 2'-азидо-2'-дезоксиуридин-5'-трифосфата).
В некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующие CFTR, являются немодифицированными. Среды-носители для доставки
В соответствии с настоящим изобретением, мРНК, кодирующая белок CFTR (например, полноразмерный, фрагмент или часть белка CFTR), как описано в настоящем документе, может быть доставлена в виде голой мРНК (неупакованной) или с помощью сред-носителей для доставки. Используемые в настоящем документе термины среда-носитель для доставки, среда-носитель для переноса, наночастица или грамматический эквивалент используют взаимозаменяемо.
Среды-носители для доставки могут быть составлены в комбинации с одним или более дополнительными нуклеиновыми кислотами, носителями, нацеливающими лигандами или стабилизирующими реагентами или в фармакологических композициях, где они смешиваются с соответствующими вспомогательными средствами. Методики для составления и введения лекарственных средств могут быть найдены в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa. Конкретную среду-носитель для доставки выбирают на основании ее способности облегчать трансфекции нуклеиновой кислоты в целевую клетку.
Согласно различным вариантам осуществления соответствующие среды-носители для доставки включают в себя без ограничения носители на основе полимеров, такие как полиэтиленимин (PEI), липидные наночастицы (LNP) и липосомы, нанолипосомы, церамид-содержащие нанолипосомы, протеолипосомы, как натуральные, так и полученные синтетически экзосомы, натуральные, синтетические и полусинтетические ламеллярные тельца, наночастицы, наночастицы фосфоросиликата натрия, наночастицы фосфата кальция, наночастицы диоксида кремния, нанокристаллические частицы, полупроводниковые наночастицы, поли(D-аргинин), золь-гели, нанодендримеры, системы доставки на основе крахмала, мицеллы, эмульсии, ниосомы, многодоменные блок-полимеры (виниловые полимеры, полимеры полипропилакриловой кислоты, динамические поликонъюгаты), сухие порошковые составы, плазмиды, вирусы, нуклеотиды фосфата кальция, аптамеры, пептиды и другие векторные метки.
Липосомальные среды-носители для доставки
В некоторых вариантах осуществления соответствующей средой-носителем для доставки является липосомальная среда-носитель для доставки, например, липидная наночастица (LNP) или липосома. В некоторых вариантах осуществления липосомы могут содержать один или более катионных липидов. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит один или более катионных липидов, один или более некатионных липидов, один или более липидов на основе холестерина и один или более PEGмодифицированных липидов. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит один или более катионных липидов, один или более некатионных липидов и один или более PEG-модифицированных
- 70 043901 липидов. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит не более четырех отличающихся липидных компонентов. В некоторых вариантах осуществления липосома содержит не более трех отличающихся липидных компонентов. В некоторых вариантах осуществления один отличающийся липидный компонент представляет собой катионный липид на основе стерина.
Используемый в настоящем документе термин катионные липиды относится к любому из ряда липидных и липидоидных соединений, которые обладают суммарным положительным зарядом при выбранном pH, таком как физиологический pH. Некоторые катионные липиды были описаны в литературе, многие из них являются коммерчески доступными.
Соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2010/144740, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4(диметиламино)-бутаноат, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя ионизируемые катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2013/149140, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид одной из следующих формул:
R2 R2
или его фармацевтически приемлемую соль, где каждый R1 и R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, необязательно замещенного, переменно насыщенного или ненасыщенного С1-С20алкила и необязательно замещенного, переменно насыщенного или ненасыщенного C6-C20-ацила; где каждый L1 и L2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, необязательно замещенного С1C30-алкила, необязательно замещенного переменно ненасыщенного С1-С30-алкенила и необязательно замещенного С1-С30-алкинил; где каждый m и о независимо выбран из группы, состоящей из нуля и любого положительного целого числа (например, где m равняется трем); и где n равняется нулю или любому положительному целому числу (например, где n равняется одному). В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид (15Z, 18Z)-N,N-диметил-6-(9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -ил)тетракоза-15,18-диен-1 -амин (HGT5000), имеющий структуру соединения:
(HGT-5000) и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид (15Z,18Z)-N,Nдиметил-6-((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -ил) тетракоза-4,15,18-триен-1 -амин (HGT5001), имеющий структуру соединения:
(HGT-5001) и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид и (15Z,18Z)-N,Nдиметил-6-((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -ил)тетракоза-5,15,18-триен-1 -амин (HGT5002), имеющий структуру соединения:
- 71 043901
(HGT-5002) и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные как аминоспиртовые липидоиды в публикации международной заявки WO 2010/053572, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2016/118725, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2016/118724, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, характеризующийся формулой 14,25-дитридецил-15,18,21,24-тетрааза-октатриаконтан, и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикациях международных заявок WO 2013/063468 и WO 2016/205691, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид следующей формулы:
или его фармацевтически приемлемые соли, где в каждом случае RL представляет собой независимо необязательно замещенный C6-C40-алкенил. В определенных вариантах осуществления композиции и спо- 72 043901 собы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
- 73 043901
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2015/184256, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид следующей формулы:
или его фармацевтически приемлемую соль, где каждый X независимо представляет собой O или S; каждый Y независимо представляет собой O или S; каждый m независимо равняется 0-20; каждый n независимо равняется 1-6; каждый RA независимо представляет собой водород, необязательно замещенный C1. 50алкил, необязательно замещенный C2-50алкенил, необязательно замещенный C2-50алкинил, необязательно замещенный C3-10карбоциклил, необязательно замещенный 3-14-членный гетероциклил, необязательно замещенный C6-14арил, необязательно замещенный 5-14 членный гетероарил или галоген; и каждый RB независимо представляет собой водород, необязательно замещенный C1-50алкил, необязательно замещенный C2-50алкенил, необязательно замещенный C2-50алкинил, необязательно замещенный C310карбоциклил, необязательно замещенный 3-14-членный гетероциклил, необязательно замещенный C614арил, необязательно замещенный 5-14-членный гетероарил или галоген. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид Target 23, имеющий структуру соединения:
ОН
ОН (Target 23), и его фармацевтически приемлемые соли.
- 74 043901
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2016/004202, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
или его фармацевтически приемлемую соль.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в J. McClellan, M. C. King, Cell 2010, 141, 210-217, и в Whitehead et al., Nature Communications (2014) 5:4277, которые включены в настоящий документ посредством ссылки. В определенных вариантах осуществления катионные липиды композиций и способов в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2015/199952, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
- 75 043901
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы
- 76 043901 в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
- 77 043901
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2017/004143, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
у Ν Ν и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
- 78 043901 и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
- 79 043901 и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
О
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
- 80 043901 и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2017/075531, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид следующей формулы:
или его фармацевтически приемлемую соль, где один из L1 или L2 представляет собой -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- или -NRaC(=O)O-; а другой из L1 или L2 представляет собой -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)X, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa-, или -NRaC(=O)O-, или прямую связь; каждый G1 и G2 независимо представляет собой незамещенный C1-C12-алкилен или C1-C12-алкенилен; G3 представляет собой C1-C24-алкилен, C1-C24-алкенилен, C3-C8-циклоалкилен, C3-C8-циклоалкенилен; Ra представляет собой H или C1-C12-алкил; каждый R1 и R2 независимо представляет собой C6-C24-алкил или C6-C24-αлкенил; R3 представляет собой H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 или -NR5 C(=O)R4; R4 представляет собой C1-C12-алкил; R5 представляет собой H
- 81 043901 или C1-C6-алкил; и x равняется 0, 1 или 2.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2017/117528, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2017/049245, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления катионные липиды композиций и способов в соответствии с настоящим изобретением включают в себя соединение одной из следующих формул:
- 82 043901 и его фармацевтически приемлемые соли. Для любой из этих четырех формул R4 независимо выбран из -(CH2)nQ и -(CH2)nCHQR; Q выбран из группы, состоящей из -OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(H)(R) и гетероцикла; и n равняется 1, 2 или 3. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2017/173054 и WO 2015/095340, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и
- 83 043901 способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид, имеющий структуру соединения:
и его фармацевтически приемлемые соли.
Другие соответствующие катионные липиды для использования в композициях и способах в соответствии с настоящим изобретением включают в себя расщепляемые катионные липиды, описанные в публикации международной заявки WO 2012/170889, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид следующей формулы:
где R1 выбран из группы, состоящей из имидазола, гуанидиния, амино, имина, енамина, необязательнозамещенного алкиламино (например, алкиламино, такого как диметиламино) и пиридила; где R2 выбран из группы, состоящей из одной из следующих двух формул:
и где каждый R3 и R4 независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного, переменно насыщенного или ненасыщенного C6-C20-алкила и необязательно замещенного, переменно насыщенного или ненасыщенного C6-C20-ацила; и где n равняется нулю или любому положительному целому числу (например, одному, двум, трем, четырем, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати, пятнадцати, шестнадцати, семнадцати, восемнадцати, девятнадцати, двадцати или больше). В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид HGT4001, имеющий структуру соединения:
(HGT4001), и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и спо- 84 043901 собы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид HGT4002, имеющий структуру соединения:
(HGT4002), и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид HGT4003, имеющий структуру соединения:
(HGT4003), и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид HGT4004, имеющий структуру соединения:
(HGT4004), и его фармацевтически приемлемые соли. В определенных вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид HGT4005, имеющий структуру соединения:
(HGT4005), и его фармацевтически приемлемые соли.
В некоторых вариантах осуществления композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением включают в себя катионный липид N-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-N,N,N-триметиламмония хлорид (DOTMA) (Feigner et al. (Proc. Nat'l Acad. Sci. 84, 7413 (1987); патент США № 4897355, который включен в настоящий документ посредством ссылки). Другие катионные липиды, соответствующие композициям и способам в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя, например, 5карбоксиспермилглициндиоктадециламид (DOGS); 2,3-диолеилокси-N-[2(спермин-карбоксамидо)этил]N,N-диметил-1-пропанаминий (DOSPA) (Behr et al. Proc. Nat.'l Acad. Sci. 86, 6982 (1989), патент США № 5171678; патент США № 5334761); 1,2-диолеоил-3-диметиламмония-пропан (DODAP); 1,2-диолеоил-3триметиламмония-пропан (DOTAP).
Дополнительные иллюстративные катионные липиды, соответствующие композициям и способам в соответствии с настоящим изобретением, также включают в себя 1,2-дистеарилокси-N,N-диметил-3аминопропан (DSDMA); 1,2-диолеилокси-N,N-диметил-3-аминопропан (DODMA); 1,2дилинолеилокси-N,N-диметил-3-аминопропан (DLinDMA); 1,2-дилиноленилокси-N,N-диметил-3аминопропан (DLenDMA); N-диолеил-N,N-диметиламмония хлорид (DODAC); N,N-дистеарил-N,Nдиметиламмония бромид (DDAB); N-(1,2-димиристилоксипроп-3-ил)-N,N-диметил-N-гидроксиэтил аммония бромид (DMRIE); 3-диметиламино-2-(холест-5-ен-3-бета-оксибутан-4-окси)-1-(цис,цис-9,12окгадекадиенокси)пропан (CLinDMA); 2-[5 '-(холест-5-ен-3-бета-окси)-3 '-оксапентокси)-3-диметил-1 (цис,цис-9', 1 -2'-октадекадиенокси)пропан (CpLinDMA); N,N-диметил-3,4-диолеилоксибензиламин (DMOBA); 1,2-N,N'-диолеилкарбамил-3-диметиламинопропан (DOcarbDAP); 2,3-дилинолеоилоксиN,N-диметилпропиламин (DLinDAP); 1,2-N,N'-дилинолеилкарбамил-3-диметиламинопропан (DLincarbDAP); 1,2-дилинолеоилкарбамил-3-диметиламинопропан (DLinCDAP); 2,2-дилинолеил-4диметиламинометил-[1,3]-диоксолан (DLin-K-DMA); 2-((8-[(3P)-холест-5-ен-3-илокси]оkтил)окси)- 85 043901
N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амин (октил-CLinDMA); (2R)-2-((8[(3 бета)-холест-5 -ен-3 -илокси] октил)окси)-N,N-диметил-3-[(9Z, 12Z)-0KTageka-9,12-диен-1 -илокси] пропан-1-амин (Octyl-CLinDMA (2R)); (2S)-2-((8-[(3P)-холест-5-ен-3-илокси]октил)окси)-N, fsl-диметил-3[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амин (Octyl-CLinDMA (2S)); 2,2-дилинолеил-4диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолан (DLin-K-XTC2-DMA) и 2-(2,2-ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1ил)-1,3 -диоксолан-4-ил)-N,N-диметилэтанамин (DLin-KC2-DMA) (см. WO 2010/042877, которая включена в настоящий документ посредством ссылки; Semple et al., Nature Biotech. 28: 172-176 (2010)). (Heyes, 1, et al., J Controlled Release 107: 276-287 (2005); Morrissey, DV., et al., Nat. Biotechnol. 23(8): 1003-1007 (2005); International Patent Publication WO 2005/121348). В некоторых вариантах осуществления один или более катионных липидов включают в себя по меньшей мере один из имидазола, диалкиламино или гуанидиниевого фрагмента.
В некоторых вариантах осуществления один или более катионных липидов, соответствующих композициям и способам в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя 2,2-дилинолеил-4диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолан (XTC); (3aR,5s,6aS)-N,N-диметил-2,2-ди((9Z,12Z)-октадека-9,12диенил)тетрагидро-3aH-циклопента[d][1,3]диоксол-5-амин (ALNY-100) и/или 4,7,13-трис(3-оксо-3(ундециламино)пропил)-N 1 ,N 16-диундецил-4,7,10,13-тетраазагексадекан-1,16-диамид (NC98-5).
В некоторых вариантах осуществления композиции в соответствии с настоящим изобретением включают в себя один или более катионных липидов, которые составляют по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или 70% по массе суммарного содержания липидов в композиции, например, липидной наночастицы. В некоторых вариантах осуществления композиции в соответствии с настоящим изобретением включают в себя один или более катионных липидов, которые составляют по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или 70%, в пересчете на мол.%, суммарного содержания липидов в композиции, например, липидной наночастицы. В некоторых вариантах осуществления композиции в соответствии с настоящим изобретением включают в себя один или более катионных липидов, которые составляют приблизительно 30-70% (например, приблизительно 30-65%, приблизительно 30-60%, приблизительно 3055%, приблизительно 30-50%, приблизительно 30-45%, приблизительно 30-40%, приблизительно 3550%, приблизительно 35-45% или приблизительно 35-40%) по массе суммарного содержания липидов в композиции, например, липидной наночастицы. В некоторых вариантах осуществления композиции в соответствии с настоящим изобретением включают в себя один или более катионных липидов, которые составляют приблизительно 30-70% (например, приблизительно 30-65%, приблизительно 30-60%, приблизительно 30-55%, приблизительно 30-50%, приблизительно 30-45%, приблизительно 30-40%, приблизительно 35-50%, приблизительно 35-45% или приблизительно 35-40%), в пересчете на мол.%, суммарного содержания липидов в композиции, например, липидной наночастицы.
В некоторых вариантах осуществления катионные липиды на основе стерина могут быть использованы вместо катионных липидов, описанных в настоящем документе, или в дополнение к таковым. Соответствующими катионными липидами на основе стерина являются диалкиламино-, имидазол- и гуанидиний-содержащие катионные липиды на основе стерина. Например, некоторые варианты осуществления относятся к композиции, содержащей один или более катионных липидов на основе стерина, содержащих имидазол, например, холестериновый сложный эфир имидазола или липид ICE (3S,10R,13R,17R)-10,13 -диметил-17-((R)-6-метилгептан-2-ил)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1 H-циклопента[a] фенантрен-3 -ил-3 -(1 H-имидазол-4-ил)пропаноат, представленный приведенной ниже структурой (I). В определенных вариантах осуществления липидная наночастица для доставки РНК (например, мРНК), кодирующей функциональный белок, может содержать один или более катионных липидов на основе имидазола, например, холестериновый сложный эфир имидазола или липид ICE (3S,10R,13R,17R)-10,13 -диметил-17-((R)-6-метилгептан-2-ил)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1 H-циклопента[a] фенантрен-3 -ил-3 -(1 H-имидазол-4-ил)пропаноат, представленный следующей структурой:
В некоторых вариантах осуществления процентное отношение катионного липида в липосоме может составлять более чем 10%, более чем 20%, более чем 30%, более чем 40%, более чем 50%, более чем 60% или более чем 70%. В некоторых вариантах осуществления катионный липид(ы) составляет(ют) приблизительно 30-50% (например, приблизительно 30-45%, приблизительно 30-40%, приблизительно 35-50%, приблизительно 35-45% или приблизительно 35-40%) массы липосомы. В некоторых вариантах осуществления катионный липид (например, липид ICE) составляет приблизительно 30%, приблизительно 35%, приблизительно 40%, приблизительно 45% или приблизительно 50% липосомы в молярном со
- 86 043901 отношении.
Используемая в настоящем документе фраза некатионный липид относится к любому нейтральному, цвиттерионному или анионному липиду. Используемая в настоящем документе фраза анионный липид относится к любому из ряда липидных соединений, которое несет суммарный отрицательный заряд при выбранном pH, таком как физиологический pH. Некатионные липиды включают в себя без ограничения дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), диолеоилфосфатидилхолин (DOPC), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), диолеоилфосфатидилглицерин (DOPG), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG), диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE), пальмитоилолеоилфосфатидилхолин (POPC), пальмитоилолеоил-фосфатидилэтаноламин (POPE), диолеоил-фосфатидилэтаноламин-4-(К-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (DOPE-mal), дипальмитоил-фосфатидил-этаноламин (DPPE), димиристоилфосфоэтаноламин (DMPE), дистеароил-фосфатидил-этаноламин (DSPE), фосфатидилсерин, сфинголипиды, цереброзиды, ганглиозиды, 16-O-монометил-PE, 16-O-диметил-PE, 18-1-транс-PE, 1-стеароил-2олеоил-фосфатидилэтаноламин (SOPE) или их смесь.
В некоторых вариантах осуществления такие некатионные липиды могут быть использованы отдельно, но предпочтительно используются в комбинации с другими липидами, например, катионными липидами. В некоторых вариантах осуществления некатионный липид может характеризоваться молярным соотношением, составляющим от приблизительно 5% до приблизительно 90% или от приблизительно 10% до приблизительно 70% от суммарного липида, присутствующего в липосоме. В некоторых вариантах осуществления некатионный липид представляет собой нейтральный липид, т.е. липид, который не несет суммарный заряд в условиях, при которых композицию составляют и/или вводят. В некоторых вариантах осуществления процентное отношение некатионного липида в липосоме может составлять более чем 5%, более чем 10%, более чем 20%, более чем 30% или более чем 40%.
Соответствующие катионные липиды на основе холестерина включают в себя, например, DC-Choi (Н,К-диметил-К-этилкарбоксамидохолестерин), 1,4-бис(3-К-олеиламино-пропил)пиперазин (Gao, et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. 179, 280 (1991); Wolf et al. BioTechniques 23, 139 (1997); патент США № 5744335) или ICE. В некоторых вариантах осуществления липид на основе холестерина может характеризоваться молярным соотношением, составляющим от приблизительно 2% до приблизительно 30% или от приблизительно 5% до приблизительно 20% от суммарного липида, присутствующего в липосоме. В некоторых вариантах осуществления процентное отношение липида на основе холестерина в липидной наночастице может составлять более чем 5%, более чем 10%, более чем 20%, более чем 30% или более чем 40%.
Применение полиэтиленгликоль (PEG)-модифицированных фосфолипидов и дериватизированных липидов, таких как дериватизированные церамиды (PEG-CER), в том числе К-октаноил-сфингозин-1[сукцинил(метоксиполиэтиленгликоль)-2000] (С8 PEG-2000 церамид) также предусматривается настоящим изобретением, либо отдельно, либо предпочтительно в комбинации с другими липидными составами, которые включают в себя среду-носитель для переноса (например, липидную наночастицу). Предусматриваемые PEG-модифицированные липиды включают в себя без ограничения полиэтиленгликолевую цепь длиной до S кДа, ковалентно присоединенную к липиду с алкильной цепью (цепями) длиной С6-С20. Добавление таких компонентов может предотвратить агрегацию комплекса и также может обеспечить возможность для продления времени циркуляции и улучшения доставки композиции липидов и нуклеиновых кислот в целевые ткани (Klibanov et al. (1990) FEBS Letters, 268 (1): 235-237), или они могут быть выбраны для быстрого обмена в составе in vivo (см. патент США № 5885613). Особенно применимыми заменяемыми липидами являются PEG-церамиды, имеющие более короткие ациловые цепи (например, C14 или C18). PEG-модифицированный фосфолипид и дериватизированные липиды в соответствии с настоящим изобретением могут характеризоваться молярным соотношением, составляющим от приблизительно 0% до приблизительно 20%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 20%, от приблизительно 1% до приблизительно 15%, от приблизительно 4% до приблизительно 10% или приблизительно 2% от суммарного липида, присутствующего в липосомальной среде-носителе для переноса.
Согласно различным вариантам осуществления отбор катионных липидов, некатионных липидов и/или PEG-модифицированных липидов, которые включают в себя липидную наночастицу, а также относительное молярное соотношение таких липидов друг к другу, основывается на характеристиках выбираемого липида(ов), природы предусматриваемых целевых клеток, характеристик мРНК, подлежащей доставке. Дополнительные факторы включают в себя, например, насыщенность алкильной цепи, а также размер, заряд, pH, pKa, фузогенность и токсичность выбираемого липида(ов). Таким образом, молярные соотношения могут быть соответствующим образом скорректированы.
В некоторых вариантах осуществления соответствующую среду-носитель для доставки составляют с использованием полимера в качестве носителя, отдельно или в комбинации с другими носителями, в том числе различными липидами, описанными в настоящем документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления липосомальные среды-носители для доставки, используемые в настоящем документе, также предусматривают наночастицы, содержащие полимеры. Соответствующие полимеры могут включать в себя, например, полиакрилаты, полиалкилцианоакрилаты, полилактид, сополимеры полилактида и полигликолида, поликапролактоны, декстран, альбумин, желатин, альгинат, коллаген, хитозан, циклодекстрины, протамин, пегилированный протамин, PLL, пегилированный PLL и полиэтиленимин
- 87 043901 (PEI). Если присутствует PEI, он может быть разветвленным PEI с молекулярной массой, находящейся в диапазоне от 10 до 40 кДа, например, разветвленный PEI 25 кДа (Sigma, N- 408727).
Соответствующие липосомы в соответствии с настоящим изобретением могут включать в себя один или более из катионных липидов, некатионных липидов, холестериновых липидов, PEGмодифицированных липидов и/или полимеров, описанных в настоящем документе, при различных отношениях. В качестве неограничивающих примеров, соответствующий липосомальный состав может включать в себя комбинацию, выбранную из cKK-E12, DOPE, холестерина и DMG-PEG2K; C12-200, DOPE, холестерина и DMG-PEG2K; HGT4003, DOPE, холестерина и DMG-PEG2K; ICE, DOPE, холестерина и DMG-PEG2K или ICE, DOPE и DMG-PEG2K.
В различных вариантах осуществления катионные липиды (например, cKK-E12, C12-200, ICE и/или HGT4003) составляют приблизительно 30-60% (например, приблизительно 30-55%, приблизительно 3050%, приблизительно 30-45%, приблизительно 30-40%, приблизительно 35-50%, приблизительно 35-45% или приблизительно 35-40%) липосомы в молярном соотношении. В некоторых вариантах осуществления процентное отношение катионных липидов (например, cKK-E12, C12-200, ICE и/или HGT4003) составляет или превышает приблизительно 30%, приблизительно 35%, приблизительно 40%, приблизительно 45%, приблизительно 50%, приблизительно 55% или приблизительно 60% липосомы в молярном соотношении.
В некоторых вариантах осуществления отношение катионного липида(ов) к некатионному липиду(ам) к липиду(ам) на основе холестерина к PEG-модифицированному липиду(ам) может составлять приблизительно 30-60:25-35:20-30:1-15, соответственно. В некоторых вариантах осуществления отношение катионного липида(ов) к некатионному липиду(ам) к липиду(ам) на основе холестерина к PEGмодифицированному липиду(ам) составляет примерно 40:30:20:10, соответственно. В некоторых вариантах осуществления отношение катионного липида(ов) к некатионному липиду(ам) к липиду(ам) на основе холестерина к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет примерно 40:30:25:5, соответственно. В некоторых вариантах осуществления отношение катионного липида(ов) к некатионному липиду(ам) к липиду(ам) на основе холестерина к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет примерно 40:32:25:3, соответственно. В некоторых вариантах осуществления отношение катионного липида(ов) к некатионному липиду(ам) к липиду(ам) на основе холестерина к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет примерно 50:25:20:5. В некоторых вариантах осуществления отношение стеринового липида(ов) к некатионному липиду(ам) к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет 50:45:5. В некоторых вариантах осуществления отношение стеринового липида(ов) к некатионному липиду(ам) к PEGмодифицированному липиду(ам) составляет 50:40:10. В некоторых вариантах осуществления отношение стеринового липида(ов) к некатионному липиду(ам) к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет 55:40:5. В некоторых вариантах осуществления отношение стеринового липида(ов) к некатионному липиду(ам) к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет 55:35:10. В некоторых вариантах осуществления отношение стеринового липида(ов) к некатионному липиду(ам) к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет 60:35:5. В некоторых вариантах осуществления отношение стеринового липида(ов) к некатионному липиду(ам) к PEG-модифицированному липиду(ам) составляет 60:30:10.
В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE и DOPE при молярном соотношении ICE:DOPE >1:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DOPE составляет <2,5:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DOPE составляет от 1:1 до 2,5:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DOPE составляет примерно 1,5:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DOPE составляет примерно 1,7:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DOPE составляет примерно 2:1. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении ICE:DMG-PEG-2K >10:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DMG-PEG2K составляет <16:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DMG-PEG-2K составляет примерно 12:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение ICE:DMGPEG-2K составляет примерно 14:1. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении DOPE:DMGPEG-2K >5:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение DOPE: DMG-PEG-2K составляет <11:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение DOPE: DMG-PEG-2K составляет примерно 7:1. В некоторых вариантах осуществления молярное соотношение DOPE: DMGPEG-2K составляет примерно 10:1. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE, DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении ICE:DOPE:DMG-PEG-2K 50:45:5. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE, DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении ICE:DOPE:DMG-PEG-2K 50:40:10. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE, DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении ICE:DOPE:DMG-PEG-2K 55:40:5. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE, DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении
- 88 043901
ICE:DOPE:DMG-PEG-2K 55:35:10. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE, DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении
ICE:DOPE:DMG-PEG-2K 60:35:5. В некоторых вариантах осуществления соответствующая липосома для настоящего изобретения содержит ICE, DOPE и DMG-PEG-2K при молярном соотношении
ICE:DOPE:DMG-PEG-2K 60:30:10.
Липосомальные среды-носители для переноса для применения в композициях в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены различными методиками, которые в настоящее время известны в уровне техники. Различные способы описаны в опубликованной заявке на выдачу патента США № US 2011/0244026, опубликованной заявке на выдачу патента США № US 2016/0038432 и находящейся на предварительном рассмотрении заявке на выдачу патента США № 62/580155, поданной 1 ноября 2017 года, все из которых включены в настоящий документ посредством ссылки, и могут быть использованы для осуществления настоящего изобретения.
Вкратце, процесс получения липидных наночастиц CFTR-мРНК включает в себя стадию нагревания первого набора из одного или более растворов с первым набором из одного или более растворов (т.е. приложения тепла от источника тепла к растворам) до температуры (или поддержания при температуре), превышающей температуру окружающей среды. Первый набор из одного или нескольких растворов может включать в себя неводный раствор, содержащий липиды, используемые для образования липидной наночастицы, и/или раствор, содержащий предварительно сформированные липидные наночастицы. Второй набор из одного или более растворов может включать в себя водный раствор мРНК CFTR и/или раствор, содержащий инкапсулированную в липидную наночастицу мРНК. В определенных вариантах осуществления процесс включает в себя стадию нагревания до температуры (или поддержания при температуре), превышающей температуру окружающей среды, первого раствора, содержащего предварительно сформированные липидные наночастицы, со вторым водным раствором, содержащим мРНК CFTR. В определенных вариантах осуществления процесс включает в себя стадию нагревания одного или обоих раствора мРНК и раствора с предварительно сформированными липидными наночастицами перед стадией смешивания. В некоторых вариантах осуществления процесс включает в себя нагревание одного или более из раствора, содержащего предварительно сформированные липидные наночастицы, раствора, содержащего мРНК, и раствора, содержащего инкапсулированную в липидную наночастицу мРНК, в ходе стадии смешивания. В некоторых вариантах осуществления процесс включает в себя стадию нагревания инкапсулированной в липидной наночастице мРНК после стадии смешивания. В некоторых вариантах осуществления температура, до которой нагревают один или более из растворов (или при которой поддерживают один или более из растворов), составляет или превышает приблизительно 30°C, 37°C, 40°C, 45°C, 50°C, 55°C, 60°C, 65°C или 70°C. В некоторых вариантах осуществления температура, до которой нагревают один или более из растворов, находится в диапазоне от приблизительно 25 до 70°C, от приблизительно 30 до 70°C, от приблизительно 35 до 70°C, от приблизительно 40 до 70°C, от приблизительно 45 до 70°C, от приблизительно 50 до 70°C или от приблизительно 60 до 70°C. В некоторых вариантах осуществления температура, превышающая температуру окружающей среды, до которой нагревают один или более из растворов, составляет приблизительно 65°C.
Для облегчения экспрессии мРНК in vivo среды-носители для доставки, такие как липосомы, могут быть составлены в комбинации с одним или более дополнительными нуклеиновыми кислотами, носителями, нацеливающими лигандами или стабилизирующими реагентами или в фармакологических композициях, где они смешиваются с соответствующими вспомогательными средствами. Методики для составления и введения лекарственных средств могут быть найдены в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.
Используемый в настоящем документе термин терапевтически эффективное количество в значительной степени определяется на основании общего количества терапевтического средства, содержащегося в фармацевтических композициях в соответствии с настоящим изобретением. Как правило, терапевтически эффективное количество является достаточным для достижения значимого положительного воздействия на субъекта (например, лечения, модуляции, излечения, предупреждения и/или облегчения кистозного фиброза). Например, терапевтически эффективное количество может представлять собой количество, достаточное для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического эффекта.
В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая мРНК, кодирующую CFTR, содержит мРНК при концентрации по меньшей мере 0,1 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая мРНК, кодирующую CFTR, содержит мРНК при концентрации по меньшей мере 0,2 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая мРНК, кодирующую CFTR, содержит мРНК при концентрации по меньшей мере 0,3 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая МРНК, кодирующую CFTR, содержит мРНК при концентрации по меньшей мере 0,4 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 0,5 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 0,6 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 0,7 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей
- 89 043901 мере 0,8 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 0,9 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 1,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 2,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 3,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 4,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 5,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 6,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 7,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 8,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 9,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация МРНК, кодирующей белок CFTR, составляет по меньшей мере 10,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация мРНК, кодирующей белок CFTR, находится в диапазоне от 0,1 мг/мл до 10,0 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую мРНК, кодирующую CFTR, составляют с разбавителем. В некоторых вариантах осуществления разбавитель выбран из группы, состоящей из DMSO, этиленгликоля, глицерина, 2-метил-2,4-пентандиола (MPD), пропиленгликоля, сахарозы и трегалозы. В некоторых вариантах осуществления состав содержит 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19% или 20% разбавителя.
Легочная доставка мРНК CFTR может быть составлена для доставки разными путями введения, в том числе без ограничения пероральным, ректальным, вагинальным, чресслизистым или кишечным введением; парентеральной доставкой, в том числе внутрикожной, чрескожной (местной), внутримышечной, подкожной, внутримозговой инъекциями, а также интратекальным, прямым внутрижелудочковым, внутривенным, внутриперитонеальным и/или интраназальным введением. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR составляют для легочной доставки. Как используется в настоящем документе, легочная доставка относится к доставка в легкое через, например, носовую полость, трахею, бронхи, бронхиолы и/или другую легочную систему. В конкретных вариантах осуществления мРНК CFTR составляют для распыления. В таких вариантах осуществления среда-носитель для доставки может находиться в аэрозольной композиции, которая может быть ингаляционной.
В некоторых вариантах осуществления сухой порошок мРНК CFTR составляют путем лиофилизации комплекса мРНК-липид. Тес самым заявитель включает посредством ссылки в полном объеме свою более раннюю заявку на выдачу патента № US14/124615, поданную 06.08.2012, по которой был выдан патент США № 9717690 от 08.01.2017 г. Лиофилизированный сухой порошок подходит для длительного хранения. Он может быть восстановлен с очищенной водой для введения субъекту при необходимости этого. В определенных вариантах осуществления при восстановление с приемлемой регидратирующей средой (например, очищенной водой, деионизированной водой, 5% декстрозой, 10% трегалозой и/или нормальным солевым раствором) восстановленная композиция демонстрирует фармакологическую или биологическую активность, сравнимую с наблюдаемой до лиофилизации. Например, в определенных вариантах осуществления фармакологическая и биологическая активность инкапсулированного полинуклеотида эквивалентна наблюдаемой до лиофилизации композиции; или, в качестве альтернативы, демонстрирует незначительное снижение фармакологической и биологической активности (например, снижение менее чем на приблизительно 1%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8% 9% или 10% биологической или фармакологической активности инкапсулированного полинуклеотида).
В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие лиофилизированные наночастицы или среды-носители для доставки на основе липидной наночастицы, характеризуются как стабильные (например, такие же стабильные, как фармацевтические композиции, содержащие эквивалентные нелиофилизированные среды-носители). Лиофилизация липидных наночастиц существенно не изменяет или не преобразует размер частиц липидных наночастиц после лиофилизации и/или восстановления. Например, в настоящем документе раскрываются фармацевтические композиции, содержащие лиофилизированные липидные среды-носители для доставки, в которых при восстановлении (например, с очищенной водой) липидные наночастицы не флоккулируются или не агрегируются, или, в качестве альтернативы, демонстрируют ограниченную или незначительную флоккуляцию или агрегацию (например, как определено по размеру частиц восстановленных липидных наночастиц).
Следовательно, в определенных вариантах осуществления при восстановлении лиофилизированной липидной наночастицы липидные наночастицы характеризуются Dv50 менее приблизительно 500 нм (например, менее приблизительно 300 нм, 200 нм, 150 нм, 125 нм, 120 нм, 100 нм, 75 нм, 50 нм, 25 нм или меньше). Подобным образом, в определенных вариантах осуществления при восстановлении лиофилизированной липидной наночастицы липидные наночастицы характеризуются Dv90 менее приблизительно 750 нм (например, менее приблизительно 700 нм, 500 нм, 300 нм, 200 нм, 150 нм, 125 нм, 100 нм, 75 нм,
- 90 043901 нм, 25 нм или меньше).
В других вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие лиофилизированные липидные среды-носители для доставки, характеризуются как имеющие индекс полидисперсности менее приблизительно 1 (например, менее 0,95, 0,9, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,25, 0,2, 0,1, 0,05 или меньше). В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие лиофилизированные липидные среды-носители для доставки, демонстрируют пониженную тенденцию к флоккуляции или к агрегации иным образом (например, в ходе лиофилизации или при восстановления). Например, при восстановлении липидные среды-носители для доставки могут иметь средний размер частиц (Zave) менее 500 нм (например, менее приблизительно 400 нм, 300 нм, 200 нм, 175 нм, 150 нм, 125 нм, 100 нм, 75 нм, 50 нм, 25 нм или меньше в растворе PBS).
В некоторых вариантах осуществления лиофилизированные липидные среды-носители для доставки (например, лиофилизированные липидные наночастицы) дополнительно включают в себя один или более лиопротекторов (например, сахара и/или углеводы) или, в качестве альтернативы, получены с использованием таковых. В определенных вариантах осуществления включение одного или более лиопротекторов в липидную наночастицу может улучшать или иным образом усиливать стабильность лиофилизированных липидных сред-носителей для доставки (например, при нормальных условиях хранения) и/или облегчать восстановление лиофилизированных липидных сред-носителей для доставки с использованием среды регидратации, с получением тем самым водного состава. Например, в определенных вариантах осуществления получают липидные наночастицы, и перед лиофилизацией буфер, присутствующий в липосомальном составе может быть заменен (например, путем центрифугирования) лиопротектором, таким как раствор или суспензия сахарозы (например, водный раствор, содержащий от приблизительно 1 до 50% или от 10 до 25% сахарозы). В некоторых вариантах осуществления лиопротектором является трегалоза. В некоторых вариантах осуществления лиопротектор содержит 10-50%, или 10-25%, или 10-20%, или 10-15% трегалозы. Другие лиопротекторы, которые могут быть использованы для получения лиофилизированных композиций, описанных в настоящем документе, включают в себя, например, декстран (например, 1,5 кДа, 5 кДа и/или 40 кДа) и инулин (например, 1,8 кДа и/или 4 кДа). Лиофилизированные липидные среды-носители для доставки характеризуются эффективностью инкапсуляции более чем приблизительно 80%.
Фармацевтическая композиция, содержащая лиофилизированную липидную наночастицу, включающую в себя кодирующую CFTR мРНК, является стабильной при 4°C в течение по меньшей мере 1 месяца, по меньшей мере 2 месяцев, по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 4 месяцев, по меньшей мере 5 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев или в течение по меньшей мере 1 года. В некоторых вариантах осуществления лиофилизированные липидные среды-носители для доставки могут храниться в условиях заморозки и сохраняться стабильными (например, как продемонстрировано минимальными потерями или их отсутствием в их предполагаемой фармацевтической или биологической активности) в течение продолжительных периодов времени (например, стабильными в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 24, 36 месяцев или дольше при хранении при приблизительно 4°C). В других вариантах осуществления лиофилизированные липидные среды-носители для доставки могут храниться без заморозки и сохраняться стабильными в течение продолжительных периодов времени (например, стабильными в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 24, 36 месяцев или дольше при хранении при приблизительно 25°C).
Фармацевтическая композиция в лиофилизированной форме может храниться в замороженном состоянии в течение 1, 2, 3, 4, 5 или 10 лет без потери фармакологической или биологической активности.
Соответственно, в настоящем документе также представлены способы лечения заболевания у субъекта путем введения эффективного количества фармацевтических композиций, включающих лиофилизированные липидные среды-носители для доставки мРНК CFTR субъекту (например, после восстановления с помощью регидратирующей среды, такой как стерильная вода для инъекций).
В некоторых вариантах осуществления состав вводят с помощью дозирующего ингалятора.
В некоторых вариантах осуществления состав вводят с помощью небулайзера.
Соответствующий состав мРНК CFTR для распыления может храниться в виде замороженной жидкости, или стерильной жидкости, или лиофилизированного, или сухого порошка и восстанавливаться перед распылением. В некоторых вариантах осуществления композицию хранят в одноразовом флаконе до распыления. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 50 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 40 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 30 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 20 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 10 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 9,0 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 8,0 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 7,0 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 6,0 мл или меньше композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 5,0 мл или меньше
- 91 043901 композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит от 4,0 мл до 5,0 мл композиции. В некоторых вариантах осуществления одноразовый флакон содержит 3,2 мл композиции.
В некоторых вариантах осуществления легочной доставка предусматривает ингаляцию (например, для назальной, трахеальной или бронхиальной доставки). В некоторых вариантах осуществления состав мРНК CFTR распыляют перед ингаляцией. Распыление может быть достигнуто с помощью любого небулайзера, известного в уровне техники. Небулайзер преобразует жидкость во взвесь так, что ее можно легче ингалировать в легкие. Небулайзеры эффективны для младенцев, детей и взрослых. Небулайзеры могут распылять большие дозы ингаляционных медицинских препаратов. Одним типом небулайзера является струйный небулайзер, который содержит трубку, соединенную с компрессором, которая заставляет сжатый воздух или кислород с высокой скоростью протекать через жидкий медицинский препарат, превращая его в аэрозоль, который затем вдыхается пациентом. Другим типом небулайзера является ультразвуковой небулайзер, который содержит электронный осциллятор, генерирующий ультразвуковую волну высокой частоты, которая вызывает механическую вибрацию пьезоэлектрического элемента, находящийся в контакте с резервуаром для жидкости. Высокочастотная вибрация жидкости достаточна для образования парообразной взвеси. Иллюстративными ультразвуковыми небулайзерами являются Omron NE-U17 и Beurer Nebulizer IH30. В третьем типе небулайзера предусматривается технология вибрирующей сетки (VMT). VMT включает в себя сетку/мембрану с 1000-7000 отверстиями, вибрирующую в верхней части резервуара для жидкости и тем самым вытесняющую взвесь очень мелких капель через отверстия в сетке/мембране. Иллюстративные небулайзеры VMT включают в себя Pari eFlow, Respironics i-Neb, Beurer Nebulizer IH50, Aerogen Aeroneb и Philips InnoSpire Go.
В некоторых вариантах объем распыления находится в диапазоне от 13,0 мл до 42,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 13,9 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 16,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 18,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 20,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 22,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 24,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 26,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 27,9 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 30,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 32,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 34,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 36,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 38,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 40,0 мл. В некоторых вариантах осуществления объем распыления представляет собой объем, меньший или равный 41,8 мл.
В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления находится в диапазоне от 1 минуты до 150 минут. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 1 минуте или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 2 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 3 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 6 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 9 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 12 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 15 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 18 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 21 минуте или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 24 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 27 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 30 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 33 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 36 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 40 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 45 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 50 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 55 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 60 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 67 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 70 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 80 мину- 92 043901 там или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 90 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 100 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 110 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 120 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 130 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 140 минутам или меньше. В некоторых вариантах осуществления продолжительность распыления равняется 150 минутам или меньше.
В некоторых вариантах осуществления число небулайзеров, используемых во время одного сеанса распыления, находится в диапазоне от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления 1 небулайзер используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 2 небулайзера используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 3 небулайзера используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 4 небулайзера используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 5 небулайзера используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 6 небулайзера используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 7 небулайзера используют во время одного сеанса распыления. В некоторых вариантах осуществления 8 небулайзера используют во время одного сеанса распыления.
Фармакокинетические показатели и распределение в тканях
В соответствии с настоящим изобретением введение состава, содержащего мРНК CFTR, приводит к доставке мРНК и кодируемого белка CFTR в различные целевые ткани, описанные в настоящем документе. В частности, введение состава, содержащего мРНК CFTR, в соответствии с настоящим изобретением приводит к терапевтически или клинически эффективным уровню или активности CFTR в целевой ткани. В различных вариантах осуществления целевая ткань включает в себя легкое, поджелудочную железу, почку, печень, селезенку, яички/яичники, слюнные железы, потовые железы, сердце и головной мозг. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является легкое. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является верхняя (т.е. верхушечная) доля правого или левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является нижняя (т.е. находящаяся ниже) доля правого или левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является средняя доля правого легкого.
В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является верхушечный сегмент правого легкого или верхне-задний сегмент левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является задний сегмент правого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является передний сегмент правого или левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является верхушечный сегмент правого или левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является боковой базальный сегмент правого или левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является передний базальный сегмент правого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является переднемедиальный базальный сегмент левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является боковой сегмент правого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является медиальный сегмент правого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является верхушечный язычковый сегмент левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является находящийся ниже язычковый сегмент левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является задний базальный сегмент правого или левого легкого. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является медиальный базальный сегмент правого легкого.
В конкретных вариантах осуществления целевой тканью являются эпителиальные клетки в легком. В некоторых вариантах осуществления целевой тканью является гладкомышечные клетки в легком. В определенном варианте осуществления целевой тканью является эпителиальные клетки протока поджелудочной железы. В определенном варианте осуществления целевой тканью является эпителиальные клетки желчного протока. В определенном варианте осуществления целевой тканью является эпителиальные клетки слюнных желез. В определенном варианте осуществления целевой тканью является почечные эпителиальные клетки. В определенном варианте осуществления целевой тканью является бетаS-клетки в секреторных клубках потовых желез. В определенном варианте осуществления целевой тканью является эпителиальные клетки половых путей.
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, достигает уровня экспрессии или активности белка CFTR, который составляет по меньшей мере 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 95% нормального уровня экспрессии или активности белка CFTR в целевой ткани, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, достигает уровня экспрессии или активности белка CFTR, который повышается по меньшей мере в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз или 10 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением,
- 93 043901 или историческим эталонным уровнем) в целевой ткани, описанной в настоящем документе.
Как правило, мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется достаточно длительным временем полужизни в целевой ткани, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления МРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется периодом полужизни по меньшей мере примерно 30 минут, 45 минут, 60 минут, 90 минут, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 12 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 25 часов, 30 часов, 35 часов, 40 часов, 3 дня, 7 дней, 14 дней, 21 день или месяц. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к выявляемому уровню или активности белка CFTR в целевой ткани (например, легком) или кровообращении через 12 часов, 24 часа, 30 часов, 36 часов, 42 часа, 48 часов, 54 часа, 60 часов, 66 часов, 72 часа, 78 часов, 84 часа, 90 часов, 96 часов, 102 часа, неделю, две недели, три недели или месяц после введения. Выявляемые уровень или активность могут быть определены с использованием различных способов, известных в уровне техники.
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в ткани верхней доли легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или 1500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в ткани нижней доли легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или 1500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в ткани средней доли легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или 1500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в дистальных тканях легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 200 раз, 300 раз, 400 раз или 500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в дистальной периферической ткани легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 200 раз или 300 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в боковой периферической ткани легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или 1500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в медиальной периферической ткани легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз или 1000 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в ткани средней части легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 150 раз, 200 раз, 250 раз, 300 раз, 350 раз, 400 раз, 450 раз или 500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
- 94 043901
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в проксимальной ткани легкого, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или 1500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к выявляемым уровню или активности белка CFTR в гортани, трахее, носовой раковине и/или жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF). В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к выявляемым уровню или активности белка CFTR в крови. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к выявляемым уровню или активности белка CFTR в легком, поджелудочной железе, почке, печени, селезенке, яичках/яичниках, слюнных железах, потовых железах, сердце и головном мозге.
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR, доставляемая в соответствии с настоящим изобретением, приводит к повышенным уровню или активности белка CFTR в гортани, трахее, трахеобронхиальном лимфатическом узле и/или крови, например, по меньшей мере на примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или 1500 раз по сравнению с контролем (например, эндогенным уровнем белка или активностью без лечения или перед лечением в соответствии с настоящим изобретением, или историческим эталонным уровнем).
Экспрессия мРНК CFTR может быть выявлена или количественно определена с помощью qPCR на РНК, очищенной из образцов ткани. Экспрессия белка CFTR могут быть определена путем измерения иммунных ответов на белок CFTR. В некоторых вариантах осуществления измеряют антитело IgG против белка CFTR с помощью ферментного иммуносорбентного анализа в собранных образцах сыворотки. В некоторых вариантах осуществления оценивают CFTR-специфические T-клеточные ответы с использованием собранных мононуклеарных клеток периферической крови. В некоторых вариантах осуществления измеряют T-клеточные ответы против CFTR с помощью иммуноферментного спот-анализа с использованием человеческого интерферона-у, как описано Calcedo et al. (Calcedo et al., Hum Gene Ther Clin Dev. (2013) 24:108-15). Качественная оценка белка CFTR также может быть выполнена с помощью анализа вестерн-блоттинга. Активность белка CFTR может быть измерена с помощью активности хлоридного канала CFTR в клетках приемлемой ткани. Фиксируют стабильный потенциал со средним значением 10-секундного интервала оценки после перфузии раствора. Активность CFTR оценивают по изменению разности потенциалов после перфузии изопротеренолом, не содержащим хлорида. Различные другие способы известны в уровне техники и могут быть использованы для определения экспрессии или активности мРНК CFTR и белка CFTR.
Терапевтическая эффективность
В соответствии с настоящим изобретением мРНК CFTR доставляют нуждающемуся в лечении пациенту с CF при терапевтически эффективной дозе и интервале введения в течение периода лечения, достаточного для улучшения, стабилизации или уменьшения одного или более симптомов кистозного фиброза по сравнению с контролем. Термины лечить или лечение, используемые в контексте кистозного фиброза в настоящем документе, относятся к облегчению одного или более симптомов, связанных с кистозным фиброзом, предупреждению или отсрочке появления одного или более симптомов кистозного фиброза и/или уменьшению тяжести или частоты одного или более симптомов кистозного фиброза.
В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективная доза мРНК CFTR составляет или превышает приблизительно 2 мг, 4 мг, 6 мг, 8 мг, 10 мг, 12 мг, 14 мг, 16 мг, 18 мг, 20 мг, 22 мг, 24 мг, 26 мг, 28 мг, 30 мг, 32 мг, 34 мг, 36 мг, 38 мг или 40 мг на дозу или ее эквивалент. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективная доза мРНК CFTR составляет или меньше приблизительно 50 мг, 48 мг, 46 мг, 44 мг, 42 мг, 40 мг, 38 мг, 36 мг, 34 мг, 32 мг, 30 мг, 28 мг, 26 мг, 24 мг, 22 мг, 20 мг, 18 мг, 16 мг, 14 мг, 12 мг, 10 мг, 8 мг, 6 мг или 4 мг на дозу или ее эквивалент. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективная доза мРНК CFTR составляет приблизительно 2-50 мг, 4-45 мг, 4-40 мг, 6-40 мг, 6-38 мг, 6-36 мг, 6-34 мг, 6-32 мг, 6-30 мг, 6-28 мг, 6-26 мг, 6-24 мг, 6-22 мг, 6-20 мг, 6-18 мг, 6-16 мг, 8-50 мг, 8-45 мг, 8-40 мг, 8-38 мг, 8-36 мг, 8-34 мг, 8-32 мг, 8-30 мг, 8-28 мг, 8-26 мг, 8-24 мг, 8-22 мг или 8-20 мг на дозу или ее эквивалент.
В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективную дозу мРНК CFTR вводят ежедневно, два раза в неделю неделя, еженедельно, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз каждые четыре недели, ежемесячно, один раз каждые два месяца, один раз каждые три месяца.
В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективную дозу мРНК CFTR вводят на протяжении периода по меньшей мере двух недель, трех недель, четырех недель, месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев, пяти месяцев, шести месяцев, семи месяцев, восьми месяцев, девяти месяцев, десяти месяцев, одиннадцати месяцев, двенадцати месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 4 лет, 5 лет или 10 лет.
Как правило, терапевтический эффект введения мРНК CFTR на пациента с кистозным фиброзом
- 95 043901 измеряют по сравнению с контролем. В некоторых вариантах осуществления контроль представляет собой тяжесть одного или более симптомов у одного и того же пациента до лечения. В некоторых вариантах осуществления контроль указывает на исторический эталонный уровень одного или более симптомов у пациентов с CF. В некоторых вариантах осуществления контроль указывает на нормальный уровень способности, физических условий или биомаркера, соответствующих одному или более измеряемым симптомам.
В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением измеряют с помощью балла по респираторному домену пересмотренного опросника кистозного фиброза (CFQ-R). В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения МРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением измеряют с помощью значения ионов хлорида в потовой жидкости. В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения МРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением измеряют с помощью индекса массы тела и/или масса тела. В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением измеряют по появлению или тяжести легочного обострения.
В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением измеряют с помощью минутного объема, частоты дыхательных движений и/или дыхательного объема. В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением в отношении дыхательной системы определяют путем выполнения спирометрии и оценки следующих параметров: объем форсированного выдоха за 1 секунду (FEV1): абсолютный объем (L) и процент в зависимости от возраста, пола и роста пациента, форсированная жизненная емкость (FVC): абсолютный объем (L) и процент в зависимости от возраста, пола и роста пациента, FEV1/FVC: отношение и процент в зависимости от возраста, пола и роста пациента, и/или форсированный поток выдоха за половину среднего FVC (FEF25-75%): абсолютный объем (L) и процент в зависимости от возраста, пола и роста пациента. В некоторых вариантах осуществления параметры могут быть нормализованы с использованием уравнений прогнозирования ERS Глобальной инициативы по оценке функции легких (GLI). В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением в отношении дыхательной система определяют с помощью рентгенографии грудной клетки.
В некоторых вариантах осуществления введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к изменению балла респираторного домена CFQ-R по меньшей мере на 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14 или по меньшей мере 15 пунктов по сравнению с контролем. В некоторых вариантах осуществления введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к изменению балла респираторного домена CFQ-R по меньшей мере на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19% или 20% по сравнению с контролем.
В некоторых вариантах осуществления введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к облегчению, предупреждению или задержке проявления легочного обострения. Как используется в настоящем документе, легочное обострения относится к одному или более из следующих синусно-пульмональных признаков/симптомов: изменение мокроты, новое или усиленное кровохарканье, усиленный кашель, повышенная одышка, недомогание/усталость/вялость, температура >38°C (~100,4°F), анорексия/потеря массы, боль/болезненность в синусах, изменения выделений синусов, изменение результатов физического обследования грудной клетки, снижение функции легких и рентгенологический признак легочной инфекции.
В некоторых вариантах осуществления введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к предупреждению или уменьшению воспаления, связанного с легочным обострением. Например, введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к снижению экспрессии маркеров воспаления и/или поражения легких, в том числе без ограничения C-реактивного белка, количества белых клеток, интерлейкина-8, комплексов нейтрофильная эластаза альфа 1-антипротеаза и матричные металлопротеины, в крови или сыворотке по сравнению с контролем, что указывает на соответствующий уровень соответствующих маркеров у пациента с CF без лечения. В качестве дополнения или альтернативы, введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к уменьшению концентрации в мокроте биоактивных липидных медиаторов, таких как цистеиниллейкотриены и nростагландины-E2, или количеств клеток в мокроте по сравнению с контролем, что указывает на соответствующий уровень соответствующих маркеров у пациента с CF без лечения.
В некоторых вариантах осуществления введение мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением приводит к увеличению массы по меньшей мере на 1 фунт, по меньшей мере 2 фунта, по меньшей мере 3 фунта, по меньшей мере 4 фунта, по меньшей мере 5 фунтов, по меньшей мере 6 фунтов, по меньшей мере 7 фунтов, по меньшей мере на 8 фунтов, по меньшей мере на 9 фунтов, по меньшей мере 10 фунтов, по меньшей мере 11 фунтов, по меньшей мере 12 фунтов, по меньшей мере 13 фунтов, по меньшей мере 14 фунтов или по меньшей мере 15 фунтов по сравнению с массой тела до лечения.
- 96 043901
В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR вводят в комбинации с одним или более потенциирующими средствами и/или корректирующими средствами CFTR. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR вводят в комбинации с одним или более потенциирующими средствами CFTR. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR вводят в комбинации с одним или более корректирующими средствами CFTR. Соответствующие потенциирующие средства и/или корректирующие средства CFTR включают в себя ивакафтор (товарный знак Kalydeco), лумакафтор (в комбинации с ивакафтором, продаваемый под товарным знаком Orkambi) или комбинацию ивакафтора и лумакафтора. Дополнительные соответствующие корректирующие средства включают в себя тезакафтор, VX-659 и VX-445. В некоторых вариантах осуществления мРНК CFTR вводят в комбинации с одним или более другими видами лечения CF, такими как гормональными заместительными терапевтическими средствами, заместительной терапией гормона щитовидной железы, нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами и рецептурным дронабинолом (MARINOL) в ходе лечения.
В некоторых вариантах осуществления потенциирующие средства и/или корректирующие средства CFTR и/или другие виды лечения кистозного фиброза могут быть введены до введения, одновременно с введением или после введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением. Например, потенциирующие средства и/или корректирующие средства CFTR и/или другие виды лечения кистозного фиброза могут быть введены в пределах 1 часа или дольше, в пределах 2 часов или дольше, в пределах 4 часов или дольше, в пределах 6 часов или дольше, в пределах 8 часов или дольше, в пределах 10 часов или дольше, в пределах 12 часов или дольше, в пределах 18 часов или дольше, в пределах 24 часов или дольше, в пределах 36 часов или дольше, в пределах 48 часов или дольше, в пределах 72 часов или дольше, в пределах 1 недели или дольше, в пределах 2 недель или дольше, в пределах 3 недель или дольше или в пределах 1 месяца или дольше до или после введения мРНК CFTR в соответствии с настоящим изобретением.
Примеры
Хотя некоторые соединения, композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением были описаны конкретно согласно некоторым вариантам осуществления, следующие примеры служат исключительно для иллюстрации соединений в соответствии с настоящим изобретением и не предназначены для их ограничения.
Пример 1. Состав композиции мРНК/липосома.
Кодон-оптимизированную человеческую матричную РНК регулятора трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR) синтезировали путем in vitro транскрипции из матрицы плазмидной ДНК, кодирующей ген, с последующим добавлением 5'-кэп-структуры (кэп 1) (Fechter, P.; Brownlee, G.G. Recognition of mRNA cap structures by viral and cellular proteins J. Gen. Virology 2005, 86, 12391249) и З'-поли(А) хвоста длиной примерно 250 нуклеотидов, как определено гель-электрофорезом. мРНК, кодирующая белок CFTR, также включала в себя 5'- и 3'-нетранслируемые области (UTR).
Раствор на водной основе, содержащий иллюстративную мРНК, кодирующую белок CFTR, объединяли с липидным раствором на основе этанола, выделяли и диализовали в конечный состав, приемлемый для хранения при -80°C. На фиг. 1 показана иллюстративная общая схема получения состава.
Липидный раствор содержал три липидных компонента с образованием липидных наночастиц. Все три биоразлагаемых компонента способствовали характеристикам конечного лекарственного продукта. Первым компонентом был ионизируемый липид - холестериновый сложный эфир имидазола (ICE). Это позволило получить положительно заряженную окружающую среду при низком pH, что способствует эффективной инкапсуляции отрицательно заряженной мРНК. Это может также играть ключевую роль во взаимодействии с клеточной поверхностью для обеспечения клеточного поглощения. Вторым компонентом LNP был 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DOPE). DOPE представляет собой цвиттерионный липид, который, как сообщается, обладает фузогенными свойствами для усиления поглощения и высвобождения лекарственной нагрузки. Конечный компонент был пегилированным (т.е. PEGмодифицированным) липидом, известным как 1,2-димиристоил-sn-глицерин, метоксиполиэтиленгликоль (DMG-PEG-2K). Добавление данного пегилированного липида обеспечивало контроль над размером частиц и стабильностью наночастиц и могло обеспечивать улучшенные свойства проникновения через слизистую оболочку для облегчения поглощения. Номинальное отношение зарядов азота/фосфора (N/P) в LNP составляло 4, а диапазон среднего размера частиц для мРНК, инкапсулированной в LNP, составлял 40-60 нм.
Пример 2. Введение дозы композиции мРНК CFTR/липосома.
В данных исследованиях оценивали композицию мРНК CFTR/липосома на модели крысы SpragueDawley. Никаких неблагоприятных воздействий на центральную нервную систему (CNS), сердечнососудистую (CV) систему или дыхание не наблюдали.
Оценки CNS
Нейроповеденческие оценки выполняли на 6 самцах/группа до введения дозы и в день 1 (через 4 и 24 часа после введения дозы). Измеряли и регистрировали температуру, влажность, уровень шума и освещенность в каждом помещении, чтобы гарантировать, что вариации окружающих условий были минимальными во время всех оценок. Не наблюдали влияния на нейроповедение, связанные с лечением
- 97 043901 загруженными мРНК hCFTR липосомами на основе ICE или контрольными липосомами на основе ICE со средой-носителем при ингаляционных дозах до 6,70 мг/кг загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE.
Оценки сердечно-сосудистой системы
Самцам крыс Sprague-Dawley (n=5/группа), которым предварительно имплантировали телеметрические устройства, вводили дозу путем исключительно назальной ингаляции загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE в течение максимум 6 часов при целевых дозах 0 (0,9% солевого раствора в качестве контроля) или 0,7, 3,75 или 6,4 мг/кг загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE или контрольных липосом на основе ICE со средой-носителем (не содержащих мРНК LNP, суспендированных в растворе, содержащем 10% трегалозы) (достигнутые дозы 0, 0,86, 3,52, 6,02 или 0 мг/кг, соответственно). Для целевых доз в 0,7 и 3,75 мг/кг вводили воздух после окончания воздействия для получения эквивалента суммарного времени фиксации для всех доз. За каждым днем введения дозы следовал минимальный 7дневный период вымывания. Всех животных возвращали в колонию после завершения всех оценок.
Телеметрические параметры включали в себя сердечно-сосудистые параметры (систолическое, диастолическое, среднее артериальное давление, пульсовое давление, частоту сердечных сокращений и электрокардиографические параметры [PR, QRS, QT, QTc]), активность и температуру тела. Другими параметрами, оцениваемыми в ходе исследования, были жизнеспособность, клинические наблюдения и масса тела. Средние концентрации аэрозоля и оцениваемые суммарные доставленные дозы загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE и липосомы на основе ICE со средой-носителем (суммарный липид) кратко описаны в табл. 3.
Таблица 3
Средние концентрации аэрозоля загруженных мРНК hCFTR липосом и липосом и оцениваемые суммарные доставленные дозы
Концентрация аэрозоля загруженных мРНК hCFTR липосом (мкг/л) Доставляемая доза загруженных мРНК hCFTR липосом (мг/кг)
Обработка Достигнутая Длительность воздействия (минуты) Средняя Достигнутаяа
Контроль 0 360 0
Среда-носитель 0 360 0
Низкая 30,5 40 0,86
Срединная 23,7 210 3,52
Высокая 23,7 360 6,02
a Общее среднее значение каждого отдельного животного для каждой группы обработки. Эта доза отражает общую доставленную дозу мРНК hCFTR
В дополнение к этому исследованию на крысах, аналогичные оценки сердечнососудистой системы также проводили как исследования с повторными дозами на крысах и обезьянах. В этих исследованиях с повторными дозами не наблюдали никаких связанных с тестируемым изделием эффектов в отношении каких-либо параметров CV, оцениваемых вплоть до самых высоких оцениваемых доз (6,7 мг/кг у крыс и 0,691 мг/кг у обезьян).
Оценки дыхательной системы
Эффекты в отношении дыхательной системы загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE оценивали как часть исследований однократной и повторной доз на крысах и обезьянах. После ингаляционного введения загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE крысам Sprague Dawley наблюдали увеличение минутного объема, а также частоты дыхательных движений и дыхательного объема во всех групп, получающих дозу до 6,4 мг/кг загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE, а также 10% трегалозы в качестве контролей.
Никаких эффектов не наблюдали в отношении параметров дыхательной системы, в том числе частоты дыхательных движений, дыхательного объема и производного минутного объема, после ингаляционного введения загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE крысам Sprague-Dawley при повторных дозах до 6,7 мг/кг или обезьянам Cynomolgus при однократных или повторных дозах до 0,85 мг/кг или 0,691 мг/кг соответственно.
Возникает минимальное токсикологическое опасение в отношении ICE, DOPE и DMG-PEG 2000 как компонентов композиции, разработанной для ингаляционного введения. В in silico оценки генотоксичности ICE, как предполагают, является отрицательным в отношении бактериальной мутагенности. Это согласуется с данными о негативной мутагенности/генотоксичности, которые доступны для имидазола и пропионовой кислоты, 2 компонентов фрагмента имидазолпропионовой кислоты ICE и для холестерина. DOPE представляет собой вариант глицерофосфолипида, фосфатидилэтаноламина, который является компонентом легочного сурфактанта. Ожидается, что разложение DOPE будет проходить по тому же пути, что и для других глицерофосфолипидов, с окончательным образованием этаноламина и
- 98 043901 олеиновой кислоты, которые присутствуют в кровообращении младенцев и взрослых. На основании информации о предполагаемых продуктах метаболического расщепления PEG 2000 и миристиновой кислоты предполагают, что DMG PEG 2000 будет иметь низкую токсичность. Возникает минимальное опасение о местной или системной токсичности на основании данных из исследований с PEG различных размеров, в то время как миристиновая кислота является жирной кислотой, присутствующей у большинства животных и в растительных жирах и присутствующей в кровообращении младенцев и взрослых.
Пример 3. Фармакокинетические показатели.
В исследовании данного примера крысам Sprague-Dawley или обезьянам вводили дозу в течение максимум 6 часов (для крыс) или в течение максимум 2 часов (для обезьян) путем ингаляции загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE или липосом на основе ICE отдельно, а затем умерщвляли через 24 часа для измерения уровней hCFTR в различных тканях. Целевые дозы показаны в табл. 4-6. Фактические измеряемые дозы составляли 420, 630 и 850 мкг/кг для загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE, вводимых обезьянам (что соответствует целевым дозам в заголовке табл. 4); 0,77, 4,05 и 6,70 мг/кг для загруженных мРНК hCFTR липосом на основе ICE, вводимых крысам (что соответствует целевым дозам в заголовке табл. 5); и 0,77, 4,05 и 6,70 мг/кг для липосом на основе ICE, вводимых крысам (что соответствует целевым дозам в заголовке табл. 6). Подробные результаты распределения в тканях представлены ниже в табл. 4, 5 и 6.
Таблица 4
Средние концентрации мРНК hCFTR в тканях и крови обезьян через 24 ч
после ингаляции загруженных мРНК hCFTR липосом
Ткань а Самцы Самки
Среданосител ь Целевая ингаляционная доза Среданосител ь Целевая ингаляционная доза
500 мкг/к г 750 мкг/к г 1000 мкг/к г 500 мкг/кг 750 мкг/к г 1000 мкг/к г
Головной мозг BQL 3,91 0,0968 BQL BQL 2,05 0,110 1,18
Сердце BQL BQL 0,165 BQL BQL BQL BQL 0,537
Почка BQL BQL BQL 0,0523 BQL BQL BQL 0,231
Гортань 0,166 BQL 5,54 1,87 BQL 5,15 3,37 2,59
Печень BQL BQL 0,0670 1,27 BQL 0,917 0,147 8,48
Легкое (средняя) 0,110 208 67,2 82,1 0,426 819 1390 1880
Селезенка BQL 0,420 BQL BQL BQL BQL 0,307 1,85
Яичко BQL BQL BQL 0,0912 — — — —
Яичник — — — — BQL 0,596 BQL 0,976
Трахея BQL 0,176 0,993 1,65 0,0657 1,54 14,4 4,72
Трахеобронхиальн ый LN BQL 30,9 0,284 70,3 BQL 0,147 468 5,28
Кровь 0,0501 BQL 0,0433 0,0120 0,0188 0,0035 1 0,385 0,0121
BQL: ниже предела количественного определения a Уровни в ткани выражены как 106 х копий/г, а уровни в крови - как 106 х копий/мл, для выражения уровней при сопоставимых массах, поскольку 1 мл крови ~1 г
- 99 043901
Таблица 5
Средние концентрации мРНК hCFTR в тканях и крови крыс через 24 ч после доз загруженных мРНК hCFTR липосом 0,7, 3,75 или 6,4 мг/кг
Самцы Самки
Ткань Среданосител ь 0,7 мг/к г 3,75 мг/кг 6,4 мг/кг Среданосител ь 0,7 мг/к г 3,75 мг/кг 6,4 мг/кг
Головной мозг BLQ BLQ BLQ 55,4 BLQ BLQ BLQ 32,4
Сердце BLQ BLQ BLQ 17,0 BLQ BLQ BLQ 41,1
Почка BLQ BLQ BLQ 0,37 BLQ BLQ BLQ 0,95
Г ортань 0,20 BLQ BLQ 4178 BLQ BLQ BLQ 1410
Печень NC BLQ BLQ 2,3 BLQ BLQ BLQ 9,75
Легкое 0,061 2057 5909 4 15613 0 BLQ 1361 3364 9 18000 0
Носовая раковина 0,12 BLQ BLQ 792 BLQ BLQ BLQ 1450
Селезенка BLQ BLQ BLQ 3,8 BLQ BLQ BLQ 1,09
Яичко 0,08 BLQ BLQ 9,5 BLQ BLQ BLQ BLQ
Яичник BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ 6,99
Трахея BLQ BLQ BLQ 2980 BLQ BLQ BLQ 787
Трахеобронхиальны й LN BLQ BLQ BLQ 108 BLQ BLQ BLQ 1,48
Кровь 0,076 0,68 14,7 0,20 0,016 0,29 133 1,48
BLQ: ниже уровня количественного определения
Концентрации в тканях (копии х 106/г)/концентрации в крови (копии х 106/мл), с предположением, что 1 мл крови - 1 г.
Таблица 6
Средние концентрации ICE в тканях (мкг/г) и крови (мкг/мл) крыс через 24 ч после ингаляционного введения дозы загруженных мРНК hCFTR липосом (дозы 0,7, 3,75 или 6,4 мг/кг)
Ткань Самцы Самки
Среданоситель 0,7 мг/кг 3,75 мг/кг 6,4 мг/кг Среданоситель 0,7 мг/кг 3,75 мг/кг 6,4 мг/кг
Головной мозг BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Сердце BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Почка BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Г ортань 1,57 2,61 BLQ 1,57 BLQ BLQ BLQ 1,41
Печень BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Легкое 317 20,3 139 245 293 22,5 147 317
Носовая раковина 0,290 BLQ BLQ 0,796 BLQ BLQ BLQ 0,724
Селезенка NA BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Яичко BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Яичник BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
Трахея 6,27 BLQ BLQ 3,65 BLQ BLQ BLQ 2,40
Трахеобронхиальный BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
LN Кровь BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ
BLQ: ниже уровня количественного определения
Концентрации в тканях (копии х 106/г)/концентрации в крови (копии х 106/мл), с предположением, что 1 мл крови » 1 г.
Эти данные показывают высокий уровень мРНК в ткани легкого и связанных с ними проблем дыхательных путей, таких как гортань, трахея, трахеобронхиальные лимфатические узлы и носовые раковины, с более низкими или фоновыми уровнями в сердце, головном мозге, печени, почке, селезенке, яичке и яичнике, особенно при более низких дозах введения, при этом самая высокая доза демонстрирует распределение мРНК hCFTR по различным тканям. Уровни в легких были высокими и зависимыми от дозы как у крыс, так и у NHP, при этом самые высокие уровни наблюдали при 6,4 мг/кг у крыс.
Кинетика клиренса мРНК в легких эффективно измеряли у крыс, поскольку можно было использовать большее количество умерщвленных крыс, чем обезьян. На фиг. 2 показан однокомпонентный экспоненциальный спад с периодом полужизни примерно 2-3 дня. Для NHP были доступны только две точки данных (фиг. 3), и эти данные, по-видимому, согласуются с данными на крысах с учетом различий в дозе.
Как показано в табл. 5, уровни мРНК в легком зависели от дозы относительно линейным образом. Измерения ткани легкого, выполненные после 28-дневного периода восстановления в конце 29-дневного исследования, показывали снижение воздействия в примерно 100 раз, подобно тому, что наблюдали че- 100 043901 рез 28 дней после исследования однократной дозы.
Также изучали токсикокинетику липосом ICE. He наблюдали измеримые уровни липосом ICE в цельной крови. Однако наблюдали измеримые и зависимые от дозы уровни липосом ICE в ткани легкого у крыс (табл. 6).
Пример 4. In vitro активность hCFTR в человеческих бронхиальных эпителиальных клетках.
Этот пример иллюстрирует исследование, при котором мРНК hCFTR трансфицировали в культивируемые человеческие бронхиальные эпителиальные клетки, после чего белок, экспрессируемый из трансфицированной мРНК hCFTR, обеспечивал значительное усиление транспорта хлоридов через мембрану бронхиальных эпителиальных клеток по сравнению с буфером, демонстрируя тем самым функциональную эффективность трансфицированных мРНК. Изменения в транспорте хлорида через мембрану бронхиальных эпителиальных клеток измеряли по кратковременному току выходной цепи в аппарате фиксации потенциала Уссинга для эпителиальных клеток (то есть в камере Уссинга). В частности, с использованием установленной процедуры для камеры Уссинга (Charles River Laboratories) мРНК hCFTR, инкапсулированную в липосому, содержащую ICE, DOPE и PEG-модифицированный липид, инкубировали в течение 2 или 4 часов на апикальной (слизистой), или базолатеральной (серозной) сторонах, или на обеих сторонах человеческих бронхиальных эпителиальных клетках. Также включали холостой буфер в качестве контроля, например, для оценки транспорта хлорида эндогенным CFTR в клетках. Затем измеряли индуцированную форсколином активность хлоридного канала с использованием анализа с камерой Уссинга. После измерения изменения тока как показателя транспорта хлорида через мембрану бронхиальных эпителиальных клеток в образцы добавляли ингибитор CFTR, чтобы показать, что изменение тока было связано с активностью CFTR.
Как показано на фиг. 4, по сравнению с контрольной группой (A. холостой буфер) обработка апикальной (слизистой) эпителиальной поверхности в течение 2 или 4 ч (образцы B и E, соответственно), а также апикальной и базолатеральной (серозной) эпителиальных поверхностей в течение 2 ч (образец C) с помощью МРНК hCFTR обеспечивала значительное усиление активности хлоридного канала. Кроме того, хлоридную активность во всех группах ингибировали ингибитором-172 CFTR. Результаты данного исследования показывают, что мРНК hCFTR, доставленная в липосоме в человеческие бронхиальные эпителиальные клетки, продуцирует в этих клетках активный белок CFTR. Это также показывает, что активный белок CFTR, продуцируемый мРНК hCFTR, обеспечивал значительно усиленный транспорт хлоридов по сравнению с эндогенным белком CFTR через клеточные мембраны трансфицированных человеческих бронхиальных эпителиальных клеток.
Пример 5. Распределение hCFTR после однократной дозы композиции мРНК hCFTR/липосома у приматов.
В исследовании данного примера отличных от человека приматов (NHP) обрабатывали однократным аэрозольным воздействием композиции мРНК CO-hCFTR/липосома. Как показано на фиг. 5, иммуногистохимическое (IHC) окрашивание поперечных срезов легкого демонстрирует зависимое от дозы повышение интенсивности для положительного выявления белка hCFTR. Кроме того, при выявлении и количественном определении мРНК hCFTR в тканях от NHP, выявляли широкое распространение в легких у обезьян, при этом уровни CO-hCFTR были на порядки выше (в >200 раз) по сравнению с эндогенным CFTR (фиг. 6). Кроме того, легкие обезьян, которые были целевыми органами, получали >90% дозы CO-CFTR, что поступали в дыхательные пути, по сравнению с другими тканями дыхательных путей, которые тестировали (фиг. 7).
Пример 6. Лечение субъектов с кистозным фиброзом композицией мРНК CO-hCFTR/липосома.
Исследование данного примера разрабатывали для оценки композиции мРНК CO-CFTR/липосома у пациентов с кистозным фиброзом.
Композицию мРНК CO-hCFTR/липосома (композицию CO-hCFTR) вводили путем распыления субъектам с кистозным фиброзом. Композицию CO-hCFTR вводили дозой на основании содержания в ней мРНК CO-hCFTR. Будет использоваться небулайзер для введения композиции CO-hCFTR путем распыления при скорости потока приблизительно 0,3 мл/минута. Композицию CO-hCFTR будут вводить субъектам при следующих 3 уровнях дозы: 8,0, 16,0 или 24,0 мг мРНК CO-hCFTR (уровни номинальной дозы) либо один раз, либо один раз в неделю на протяжении пяти недель. Другим субъектам буду вводить дозу плацебо-контроля.
Чтобы получать лечение с введением композиции CO-hCFTR, у пациентов будет подтвержденный диагноз CF, определяемый по всем следующим признакам: значение ионов хлорида в потовой жидкости >60 ммоль/л с помощью количественного поликарпинового ионтофорезного теста (задокументировано в медицинской записи субъекта), подтвержденная вызывающая заболевание мутация CFTR (генотип подтвержден при скрининговом визите) и хроническое синусно-пульмональное заболевание и/или желудочно-кишечные/пищевые аномалии, указывающий на заболевание CF; клинически стабильное заболевание CF, например, FEV1>50% и <90% прогнозируемой нормы для возраста, пола и роста при скрининге, насыщение кислородом в состоянии покоя >92% в комнатном воздухе (пульсовая оксиметрия), а также индекс массы тела >17,5 кг/м2 и масса >40 кг. Субъекты, получающие комбинированное лекарственное
- 101 043901 средство лумакафтор/ивакафтор (ORKAMBI), будут оставаться на нем на протяжении всего исследования, предпочтительно при стабильной дозе.
Процедуры и тесты, которые будут проводиться как для скрининга субъектов, так и во время исследования для оценки биологической активности композиции мРНК CO-CFTR/липосома, включают в себя показатели жизнедеятельности, пульсовую оксиметрию, физическое обследование, спирометрию, клинические лабораторные тесты (химический состав сыворотки, гематологию, коагуляцию, анализ мочи, СРБ), ECG, рентгенографию грудной клетки, пересмотренный опросник кистозного фиброза (CFQ-R), тест на беременность по сыворотке крови, отчет об AE и сопутствующих медицинских препаратах, измерение массы, забор образцов крови для анализов мРНК CO-hCFTR и ICE и забор образцов крови для анализов иммунного ответа. Некоторые субъекты также будут проходить бронхоскопию.
Бронхиальной эпителиальные клетки, полученные во время бронхоскопий, будут подготовлены для количественного определения экзогенной мРНК CO-hCFTR и эндогенной мРНК CFTR с помощью qPCR, а также для качественной оценки белка CFTR с помощью анализа вестернблоттинга.
Кроме того, во время бронхоскопии будут проводиться измерения более низкой разности потенциалов дыхательных путей для оценки активности хлоридного канала CFTR в бронхиальном эпителии Измерения разности потенциалов будут выполнены на выходе из язычка левого легкого, как описано Dransfield et al. (Dransfield et al., Chest. (2013) 144:498-506). Будет фиксироваться стабильный потенциал со средним значением 10-секундного интервала оценки после перфузии каждого раствора. Активность CFTR будут оценивать по изменению разности потенциалов после перфузии изопротеренолом, не содержащим хлорида.
Пересмотренный опросник кистозного фиброза (CFQ-R; версия для подростков и взрослых [пациентов в возрасте 14 лет и старше]) будет заполняться субъектами для достижения как исходного балла, так и баллов в ходе исследования для сравнения. Результаты респираторного домена CFQ-R будут представлять первостепенный интерес; определяли, что минимальное изменение по сравнению с исходным уровнем, представляющее клинически значимое улучшение в респираторном домене, составляет >4 (Quittner et al., Chest. (2009) 135:1610-8).
Пример 7. Совместная локализация CFTR с мембранным белком в бронхиальных клетках верхних дыхательных путей.
Данный пример демонстрирует экспрессию белка CFTR в различных тканях легкого, в том числе в бронхиальном эпителии верхних дыхательных путей, бронхиальном эпителии нижних дыхательных путей и альвеолярной ткани, после ингаляционного введения мРНК CFTR, составленной в липидной наночастице. Данный пример дополнительно демонстрирует посредством совместной локализации с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO-1, который обнаружен в клеточной мембране, что белок CFTR, экспрессируемый из введенной мРНК CFTR, локализуется в клеточной мембране ткани легкого, в том числе в эпителиальных клетках легкого, таких как бронхиальные эпителиальные клетки верхних дыхательных путей и бронхиальные эпителиальные клетки нижних дыхательных путей, а также в клеточных мембранах альвеолярных клеток.
Протокол исследования совместной локализации: Способ исследования иммуногистохимии и совместной локализации, описанный в этом параграфе, является общим для примеров 7, 8 и 9. Легочная доставка мРНК CFTR у приматов сопровождалась иммуногистохимией для выявления экспрессии белка и совместной локализации в мембране бронхиальных клеток верхних дыхательных путей и эпителиальных клеток нижних дыхательных путей и глубоких альвеолярных клеток легкого. Приматов в данном исследовании группировали в пять категорий и им вводили следующее: (1) контроль, трегалоза 10%; (2) контроль, LNP среда-носитель; (3) низкая доза CO-hCFTR, 500 мкг/кг, (4) средняя доза CO-hCFTR, 750 мкг/кг, (5) высокая доза CO-hCFTR, 1000 мкг/кг. Состав мРНК-LNP или контроли (без мРНК) вводили ежесуточно. Следовательно, животных подвергали в течение 60 минут аэрозольной композиции (группа 3, низкая доза, 500 мкг/кг), в течение 90 минут аэрозолю (группа 4, средняя доза, 750 мкг/кг) или в течение 120 минут аэрозолю (группа 5, высокая доза), как описано в табл. 4. В конце исследования животных умерщвляли и собирали ткани для иммуногистохимии с целью выявления экспрессии и локализации человеческого белка CFTR в легких. Для иммуногистохимического выявления кодон-оптимизированного человеческого белка CFTR срезы легкого инкубировали на протяжении ночи при 4°C с разбавлением 1:250 каждого из мышиного моноклонального антитела против CFTR (MAB 25031, R & D Systems) и антитела кролика против ZO1 (Ab214228, Abcam) или с антителом против CFTR отдельно и антителом против ZO1 отдельно. После инкубации на протяжении ночи срезы блокировали первым блокирующим средством, содержащим перекись водорода, инкубировали с вторичным антителом (антителом против мышиного DyLight 594 для антитела против CFTR и антителом против DyLight 488 кролика) с последующим вторым блокированием в растворе, содержащем 3% конскую сыворотку и 3% BSA, и подвергали конфокальной микроскопии на предмет совместной локализации. DyLight 594 испускает красный сигнал, a DyLight 488 испускает зеленый, и при совместной локализации двух сигналов (и, следовательно, белков, с которыми связывается каждый) оптическое слияние дает желтый сигнал.
Как показано на фиг. 8A, 8B и 8C, белок CFTR, транслируемый из введенной мРНК CFTR, экспрессируется в верхних дыхательных путях в бронхиальных эпителиальных клетках. В иллюстративном ис- 102 043901 следовании белок, полученный из мРНК CFTR, проявлял зависимую от дозы экспрессию и совместно локализовался с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO1 в мембране бронхиальных эпителиальных клеток верхних дыхательных путей. На фиг. 8A представлены типичные микроскопические изображения бронхиальных эпителиальных клеток от контрольного животного, которое получало 10% трегалозу отдельно, визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). На фиг. 8B представлены типичные микроскопические изображения бронхиальных эпителиальных клеток животного, которое получало мРНК CFTR при низкой дозе (500 мкг/кг), визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). На фиг. 8C представлены типичные микроскопические изображения бронхиальных эпителиальных клеток животного, которое получало мРНК CFTR при высокой дозе (1000 мкг/кг), визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). Как показано на фиг. , экспрессия CFTR была зависимой от дозы, то есть иммуноокрашивающий сигнал был сильнее при более высокой дозе (фиг. 8C, левое изображение), чем при низкой дозе (фиг. 8B, левое изображение). Также, как видно из позиционирования сигналов CFTR и ZO1, CFTR и ZO1 экспрессируются в клеточной мембране эпителиальных клеток. Два белка совместно локализовались, давая усиленный сигнал, который был желтым при визуальном наблюдении (фиг. 8B и 8C, правое изображение). Никакого красного сигнала, соответствующего CFTR, не наблюдали на фиг. 8A, что указывает на специфичность окрашивания. Также слитый оптический сигнал не был усиленным и монохроматическим для сигнала ZO-1 отдельно.
Пример 8. Совместная локализация CFTR с мембранным белком в эпителиальных клетках нижних дыхательных путей.
Для успешного терапевтического эффекта вводимая мРНК CFTR подлежала доставке в нижнюю часть легкого. Как показано на фиг. 9A, 9B и 9C, белок CFTR, транслируемый из введенной мРНК CFTR, экспрессировался в эпителиальных клетках нижних дыхательных путей. Белок, полученный из мРНК CFTR, проявлял зависимую от дозы экспрессию и совместно локализовался с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO1 в мембране эпителиальных клеток нижних дыхательных путей. На фиг. 9A показаны типичные микроскопические изображения среза ткани мембраны эпителиальных клеток нижних дыхательных путей от контрольного животного, которое получало 10% трегалозу отдельно, визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). На фиг. 9B показаны типичные микроскопические изображения среза ткани мембраны эпителиальных клеток нижних дыхательных путей животного, получавшего мРНК CFTR при низкой дозе (500 мкг/кг), визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). На фиг. 9C показаны типичные микроскопические изображения среза ткани нижних дыхательных путей животного, получавшего мРНК CFTR при высокой дозе (1000 мкг/кг), визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). Интенсивность экспрессии CFTR была выше при высокой дозе (фиг. 9C, левое изображение) по сравнению с низкой дозой (фиг. 9B, левое изображение). Слитое изображение на фиг. 9C было желтым, что указывает на то, что белка совместно локализованы, тогда как на фиг. 9A не было сигнала для CFTR (слева), как и ожидали в контроле.
Пример 9. Экспрессия полученного из мРНК CFTR белка в альвеолярной части легкого.
мРНК CFTR успешно поглощалась альвеолярными клетками в глубокой части легкого. Как показано на фиг. 10A, 10B и 10C, белок CFTR, транслируемый из введенной мРНК CFTR, экспрессировался в мембранах альвеолярных клеток и совместно локализовался с эндогенным мембранным белком плотных контактов ZO1 в мембранах альвеолярных клеток. На фиг. 10A показаны типичные микроскопические изображения среза ткани мембраны эпителиальных клеток нижних дыхательных путей от контрольного животного, которое получало 10% трегалозу отдельно, визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). На фиг. 10B показаны типичные микроскопические изображения среза ткани мембраны эпителиальных клеток нижних дыхательных путей животного, получавшего мРНК CFTR при низкой дозе (500 мкг/кг), визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). На фиг. 10C показаны типичные микроскопические изображения среза ткани нижних дыхательных путей животного, получавшего мРНК CFTR при высокой дозе (1000 мкг/кг), визуализированные по окрашиванию CFTR (слева), окрашиванию ZO1 (в центре) и окрашиванию оптического слияния CFTR и ZO1 (справа). Интенсивность экспрессии CFTR была выше при высокой дозе (фиг. 10C, левое изображение) по сравнению с низкой дозой (фиг. 10B, левое изображение). Слитое изображение на фиг. 10C было желтым, что указывает на то, что белка совместно локализованы, тогда как на фиг. 10A не было сигнала для CFTR (слева), как и ожидали в контроле.
Эквиваленты
Специалисты в данной области техники поймут или смогут обеспечить с использованием не более чем рутинных экспериментов множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления настояще- 103 043901 го изобретения, описанного в настоящем документе. Объем настоящего изобретения не предназначен для ограничения приведенным выше описанием, а скорее устанавливается следующей формулой изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ < 110> Транслейт Био, Инк..
< 12 0> ЛЕЧЕНИЕ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ПУТЕМ ДОСТАВКИ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННОЙ мРНК, КОДИРУЮЩЕЙ CFTR < 130> SL-MRT-2005PCT-US <140> Еще не определено <141> 2018-05-15 <150> 62/507,061 <151> 2017-05-16 <150> 62/532,301 <151> 2017-07-13 <150> 62/580,782 <151> 2017-11-02 <150> 62/592,238 <151> 2017-11-29 <150> 62/659,053 <151> 2017-04-17 <160>27 <170> PatentIn версия 3.5 <210>1 <211>4443 < 212> РНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 1 augcaacgcu cuccucuuga aaaggccucg guggugucca agcucuucuu cucguggacu agacccaucc ugagaaaggg guacagacag cgcuuggagc uguccgauau cuaucaaauc
120 ccuuccgugg acuccgcgga caaccugucc gagaagcucg agagagaaug ggacagagaa
180 cucgccucaa agaagaaccc gaagcugauu aaugcgcuua ggcggugcuu uuucuggcgg
240 uucauguucu acggcaucuu ccucuaccug ggagagguca ccaaggccgu gcagccccug
300 uugcugggac ggauuauugc cuccuacgac cccgacaaca aggaagaaag aagcaucgcu
360
- 104 043901
aucuacuugg 420 gcaucggucu gugccugcuu uucaucgucc ggacccucuu guugcauccu
gcuauuuucg 480 gccugcauca cauuggcaug cagaugagaa uugccauguu uucccugauc
uacaagaaaa 540 cucugaagcu cucgagccgc gugcuugaca agauuuccau cggccagcuc
gugucccugc 600 ucuccaacaa ucugaacaag uucgacgagg gccucgcccu ggcccacuuc
guguggaucg 660 ccccucugca aguggcgcuu cugaugggcc ugaucuggga gcugcugcaa
gccucggcau 720 ucugugggcu uggauuccug aucgugcugg cacuguucca ggccggacug
gggcggauga 780 ugaugaagua cagggaccag agagccggaa agauuuccga acggcuggug
aucacuucgg 840 aaaugaucga aaacauccag ucagugaagg ccuacugcug ggaagaggcc
auggaaaaga 900 ugauugaaaa ccuccggcaa accgagcuga agcugacccg caaggccgcu
uacgugcgcu 960 auuucaacuc guccgcuuuc uucuucuccg gguucuucgu gguguuucuc
uccgugcucc 1020 ccuacgcccu gauuaaggga aucauccuca ggaagaucuu caccaccauu
uccuucugua 1080 ucgugcuccg cauggccgug acccggcagu ucccaugggc cgugcagacu
ugguacgacu 1140 cccugggagc cauuaacaag auccaggacu uccuucaaaa gcaggaguac
aagacccucg 1200 aguacaaccu gacuacuacc gaggucguga uggaaaacgu caccgccuuu
ugggaggagg 1260 gauuuggcga acuguucgag aaggccaagc agaacaacaa caaccgcaag
accucgaacg 1320 gugacgacuc ccucuucuuu ucaaacuuca gccugcucgg gacgcccgug
cugaaggaca 1380 uuaacuucaa gaucgaaaga ggacagcucc uggcgguggc cggaucgacc
ggagccggaa 1440 agacuucccu gcugauggug aucaugggag agcuugaacc uagcgaggga
aagaucaagc 1500 acuccggccg caucagcuuc uguagccagu uuuccuggau caugcccgga
accauuaagg aaaacaucau cuucggcgug uccuacgaug aauaccgcua ccgguccgug
1560
- 105 043901
aucaaagccu 1620 gccagcugga agaggauauu ucaaaguucg cggagaaaga uaacaucgug
cugggcgaag 1680 gggguauuac cuugucgggg ggccagcggg cuagaaucuc gcuggccaga
gccguguaua 1740 aggacgccga ccuguaucuc cuggacuccc ccuucggaua ccuggacguc
cugaccgaaa 1800 aggagaucuu cgaaucgugc gugugcaagc ugauggcuaa caagacucgc
auccucguga 1860 ccuccaaaau ggagcaccug aagaaggcag acaagauucu gauucugcau
gagggguccu 1920 ccuacuuuua cggcaccuuc ucggaguugc agaacuugca gcccgacuuc
ucaucgaagc 1980 ugauggguug cgacagcuuc gaccaguucu ccgccgaaag aaggaacucg
auccugacgg 2040 aaaccuugca ccgcuucucu uuggaaggcg acgccccugu gucauggacc
gagacuaaga 2100 agcagagcuu caagcagacc ggggaauucg gcgaaaagag gaagaacagc
aucuugaacc 2160 ccauuaacuc cauccgcaag uucucaaucg ugcaaaagac gccacugcag
augaacggca 2220 uugaggagga cuccgacgaa ccccuugaga ggcgccuguc ccuggugccg
gacagcgagc 2280 agggagaagc cauccugccu cggauuuccg ugaucuccac ugguccgacg
cuccaagccc 2340 ggcggcggca guccgugcug aaccugauga cccacagcgu gaaccagggc
caaaacauuc 2400 accgcaagac uaccgcaucc acccggaaag ugucccuggc accucaagcg
aaucuuaccg 2460 agcucgacau cuacucccgg agacugucgc aggaaaccgg gcucgaaauu
uccgaagaaa 2520 ucaacgagga ggaucugaaa gagugcuucu ucgacgauau ggagucgaua
cccgccguga 2580 cgacuuggaa cacuuaucug cgguacauca cugugcacaa gucauugauc
uucgugcuga 2640 uuuggugccu ggugauuuuc cuggccgagg ucgcggccuc acugguggug
cucuggcugu 2700 ugggaaacac gccucugcaa gacaagggaa acuccacgca cucgagaaac
aacagcuaug ccgugauuau cacuuccacc uccucuuauu acguguucua caucuacguc
2760
- 106 043901
ggaguggcgg 2820 auacccugcu cgcgaugggu uucuucagag gacugccgcu gguccacacc
uugaucaccg 2880 ucagcaagau ucuucaccac aagauguugc auagcgugcu gcaggccccc
auguccaccc 2940 ucaacacucu gaaggccgga ggcauucuga acagauucuc caaggacauc
gcuauccugg 3000 acgaucuccu gccgcuuacc aucuuugacu ucauccagcu gcugcugauc
gugauuggag 3060 caaucgcagu gguggcggug cugcagccuu acauuuucgu ggccacugug
ccggucauug 3120 uggcguucau caugcugcgg gccuacuucc uccaaaccag ccagcagcug
aagcaacugg 3180 aauccgaggg acgauccccc aucuucacuc accuugugac gucguugaag
ggacugugga 3240 cccuccgggc uuucggacgg cagcccuacu ucgaaacccu cuuccacaag
gcccugaacc 3300 uccacaccgc caauugguuc cuguaccugu ccacccugcg gugguuccag
augcgcaucg 3360 agaugauuuu cgucaucuuc uucaucgcgg ucacauucau cagcauccug
acuaccggag 3420 agggagaggg acgggucgga auaauccuga cccucgccau gaacauuaug
agcacccugc 3480 agugggcagu gaacagcucg aucgacgugg acagccugau gcgaagcguc
agccgcgugu 3540 ucaaguucau cgacaugccu acugagggaa aacccacuaa guccacuaag
cccuacaaaa 3600 auggccagcu gagcaagguc augaucaucg aaaacuccca cgugaagaag
gacgauauuu 3660 ggcccuccgg aggucaaaug accgugaagg accugaccgc aaaguacacc
gagggaggaa 3720 acgccauucu cgaaaacauc agcuucucca uuucgccggg acagcggguc
ggccuucucg 3780 ggcggaccgg uuccgggaag ucaacucugc ugucggcuuu ccuccggcug
cugaauaccg 3840 agggggaaau ccaaauugac ggcgugucuu gggauuccau uacucugcag
caguggcgga 3900 aggccuucgg cgugaucccc cagaaggugu ucaucuucuc ggguaccuuc
cggaagaacc uggauccuua cgagcagugg agcgaccaag aaaucuggaa ggucgccgac
3960
- 107 043901 gaggucggcc ugcgcuccgu gauugaacaa uuuccuggaa 4020 gacgggggau guguccuguc gcacggacau aagcagcuca 4080 cucuccaagg ccaagauucu gcugcuggac gaaccuucgg 4140 uaccagauca ucaggaggac ccugaagcag gccuuugccg 4200 gagcaccgca ucgaggccau gcuggagugc cagcaguucc 4260 guccgccaau acgacuccau ucaaaagcuc cucaacgagc 4320 auuucaccgu ccgauagagu gaagcucuuc ccgcaucgga 4380 aagccgcaga ucgcagccuu gaaggaagag acugaggaag 4440 uaa
4443 agcuggacuu cgugcucguc ugugccucgc acgguccgug cccaccugga uccggucacc auugcaccgu gauucucugc uggucaucga ggagaacaag ggucgcuguu cagacaagcu acagcucaaa gugcaaaucg aggugcagga cacccggcuu <210> 2 <211> 1480 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met 1 Gln Arg Ser Pro 5 Leu Glu Lys Ala Ser 10 Val
Phe Ser Trp Thr 20 Arg Pro Ile Leu Arg 25 Lys Gly
Glu Leu Ser 35 Asp Ile Tyr Gln Ile 40 Pro Ser Val
Leu Ser 50 Glu Lys Leu Glu Arg 55 Glu Trp Asp Arg
Lys 65 Asn Pro Lys Leu Ile 70 Asn Ala Leu Arg Arg 75
Phe Met Phe Tyr Gly 85 Ile Phe Leu Tyr Leu 90 Gly
Val Ser Lys Leu Phe 15
Tyr Arg Gln Arg Leu 30
Asp Ser Ala Asp Asn 45
Glu Leu Ala Ser Lys 60
Cys Phe Phe Trp Arg 80
Glu Val Thr Lys Ala 95
- 108 043901
Val
Asn
Leu
Leu 145
Tyr
Ile
Glu
Ala
Cys 225
Gly
Glu
Lys
Arg
Phe 305
Ser
Gln Pro Leu
100
Lys Glu Glu
115
Leu Phe Ile 130
His His Ile
Lys Lys Thr
Gly Gln Leu
180
Gly Leu Ala
195
Leu Leu Met 210
Gly Leu Gly
Arg Met Met
Arg Leu Val
260
Ala Tyr Cys
275
Gln Thr Glu 290
Asn Ser Ser
Val Leu Pro
Leu Leu Gly
Arg Ser Ile
Val Arg Thr
135
Gly Met Gln
150
Leu Lys Leu 165
Val Ser Leu
Leu Ala His
Gly Leu Ile
215
Phe Leu Ile
230
Met Lys Tyr 245
Ile Thr Ser
Trp Glu Glu
Leu Lys Leu
295
Ala Phe Phe
310
Tyr Ala Leu 325
Arg Ile Ile 105
Ala Ile Tyr 120
Leu Leu Leu
Met Arg Ile
Ser Ser Arg
170
Leu Ser Asn
185
Phe Val Trp 200
Trp Glu Leu
Val Leu Ala
Arg Asp Gln
250
Glu Met Ile
265
Ala Met Glu 280
Thr Arg Lys
Phe Ser Gly
Ile Lys Gly
330
Ala Ser Tyr
Leu Gly Ile
125
His Pro Ala
140
Ala Met Phe 155
Val Leu Asp
Asn Leu Asn
Ile Ala Pro
205
Leu Gln Ala
220
Leu Phe Gln 235
Arg Ala Gly
Glu Asn Ile
Lys Met Ile
285
Ala Ala Tyr
300
Phe Phe Val 315
Ile Ile Leu
Asp Pro Asp 110
Gly Leu Cys
Ile Phe Gly
Ser Leu Ile
160
Lys Ile Ser
175
Lys Phe Asp 190
Leu Gln Val
Ser Ala Phe
Ala Gly Leu
240
Lys Ile Ser
255
Gln Ser Val 270
Glu Asn Leu
Val Arg Tyr
Val Phe Leu
320
Arg Lys Ile 335
- 109 043901
Phe Thr Thr Ile Ser Phe Cys Ile Val Leu Arg Met Ala Val Thr Arg
340 345350
Gln Phe Pro Trp Ala Val Gln Thr Trp Tyr Asp Ser Leu Gly Ala Ile
355 360365
Asn Lys Ile Gln Asp Phe Leu Gln Lys Gln Glu Tyr Lys Thr Leu Glu
370 375380
Tyr Asn Leu Thr Thr Thr Glu Val Val Met Glu Asn Val Thr Ala Phe
385 390 395400
Trp Glu Glu Gly Phe Gly Glu Leu Phe Glu Lys Ala Lys Gln Asn Asn
405 410415
Asn Asn Arg Lys Thr Ser Asn Gly Asp Asp Ser Leu Phe Phe Ser Asn
420 425430
Phe Ser Leu Leu Gly Thr Pro Val Leu Lys Asp Ile Asn Phe Lys Ile
435 440445
Glu Arg Gly Gln Leu Leu Ala Val Ala Gly Ser Thr Gly Ala Gly Lys
450 455460
Thr Ser Leu Leu Met Val Ile Met Gly Glu Leu Glu Pro Ser Glu Gly
465 470 475480
Lys Ile Lys His Ser Gly Arg Ile Ser Phe Cys Ser Gln Phe Ser Trp
485 490495
Ile Met Pro Gly Thr Ile Lys Glu Asn Ile Ile Phe Gly Val Ser Tyr
500 505510
Asp Glu Tyr Arg Tyr Arg Ser Val Ile Lys Ala Cys Gln Leu Glu Glu
515 520525
Asp Ile Ser Lys Phe Ala Glu Lys Asp Asn Ile Val Leu Gly Glu Gly
530 535540
Gly Ile Thr Leu Ser Gly Gly Gln Arg Ala Arg Ile Ser Leu Ala Arg
545 550 555560
Ala Val Tyr Lys Asp Ala Asp Leu Tyr Leu Leu Asp Ser Pro Phe Gly
565 570575
- 110 043901
Tyr
Lys
His
Tyr 625
Ser
Arg
Gly
Gln
Ile 705
Met
Ser
Ser
Val
Arg 785
Asn
Leu Asp Val
580
Leu Met Ala
595
Leu Lys Lys 610
Phe Tyr Gly
Ser Lys Leu
Arg Asn Ser
660
Asp Ala Pro 675
Thr Gly Glu 690
Asn Ser Ile
Asn Gly Ile
Leu Val Pro
740
Val Ile Ser
755
Leu Asn Leu 770
Lys Thr Thr
Leu Thr Glu
Leu Thr Glu
Asn Lys Thr
Ala Asp Lys
615
Thr Phe Ser
630
Met Gly Cys 645
Ile Leu Thr
Val Ser Trp
Phe Gly Glu
695
Arg Lys Phe
710
Glu Glu Asp 725
Asp Ser Glu
Thr Gly Pro
Met Thr His
775
Ala Ser Thr
790
Leu Asp Ile 805
Lys Glu Ile
585
Phe Glu Ser
Cys Val Cys 590
Arg Ile Leu 600
Val Thr Ser
605
Lys Met Glu
Ile Leu Ile
Leu His Glu
620
Gly Ser Ser
Glu Leu Gln
Asn Leu Gln 635
Pro Asp Phe
640
Asp Ser Phe
650
Asp Gln Phe
Ser Ala Glu
655
Glu Thr Leu
665
Thr Glu Thr 680
Lys Arg Lys
Ser Ile Val
Ser Asp Glu
730
Gln Gly Glu
745
Thr Leu Gln 760
Ser Val Asn
Arg Lys Val
Tyr Ser Arg
810
His Arg Phe
Lys Lys Gln
685
Asn Ser Ile
700
Gln Lys Thr 715
Pro Leu Glu
Ala Ile Leu
Ala Arg Arg
765
Gln Gly Gln
780
Ser Leu Ala 795
Arg Leu Ser
Ser Leu Glu 670
Ser Phe Lys
Leu Asn Pro
Pro Leu Gln
720
Arg Arg Leu
735
Pro Arg Ile 750
Arg Gln Ser
Asn Ile His
Pro Gln Ala
800
Gln Glu Thr
815
- 111 043901
Gly
Phe
Tyr
T rp 865
Leu
His
Tyr
Met
Ser 945
Met
Ser
Asp
Ala
Val
Gln
Leu Glu Ile Ser Glu Glu Ile Asn Glu Glu Asp Leu Lys Glu Cys
820 825 830
Phe Asp Asp Met Glu Ser Ile Pro Ala Val Thr Thr Trp Asn Thr
835 840 845
Leu Arg Tyr Ile Thr Val His Lys Ser Leu Ile Phe Val Leu Ile
850 855 860
Cys Leu Val Ile Phe Leu Ala Glu Val Ala Ala Ser Leu Val Val
870 875 880
Trp Leu Leu Gly Asn Thr Pro Leu Gln Asp Lys Gly Asn Ser Thr
885 890 895
Ser Arg Asn Asn Ser Tyr Ala Val Ile Ile Thr Ser Thr Ser Ser
900 905 910
Tyr Val Phe Tyr Ile Tyr Val Gly Val Ala Asp Thr Leu Leu Ala
915 920 925
Gly Phe Phe Arg Gly Leu Pro Leu Val His Thr Leu Ile Thr Val 930 935 940
Lys Ile Leu His His Lys Met Leu His Ser Val Leu Gln Ala Pro
950 955 960
Ser Thr Leu Asn Thr Leu Lys Ala Gly Gly Ile Leu Asn Arg Phe
965 970 975
Lys Asp Ile Ala Ile Leu Asp Asp Leu Leu Pro Leu Thr Ile Phe
980 985 990
Phe Ile Gln Leu Leu Leu Ile Val Ile Gly Ala Ile Ala Val Val
995 1000 1005
Val Leu Gln Pro 1010
Ala Phe Ile Met 1025
Leu Lys Gln Leu 1040
Tyr Ile Phe Val Ala Thr Val 10151020
Leu Arg Ala Tyr Phe Leu Gln 10301035
Glu Ser Glu Gly Arg Ser Pro 10451050
Pro Val Ile
Thr Ser Gln
Ile Phe Thr
- 112 043901
His Leu 1055 Val Thr Ser Leu Lys 1060 Gly Leu Trp Thr Leu 1065 Arg Ala Phe
Gly Arg 1070 Gln Pro Tyr Phe Glu 1075 Thr Leu Phe His Lys 1080 Ala Leu Asn
Leu His 1085 Thr Ala Asn Trp Phe 1090 Leu Tyr Leu Ser Thr 1095 Leu Arg Trp
Phe Gln 1100 Met Arg Ile Glu Met 1105 Ile Phe Val Ile Phe 1110 Phe Ile Ala
Val Thr 1115 Phe Ile Ser Ile Leu 1120 Thr Thr Gly Glu Gly 1125 Glu Gly Arg
Val Gly 1130 Ile Ile Leu Thr Leu 1135 Ala Met Asn Ile Met 1140 Ser Thr Leu
Gln Trp 1145 Ala Val Asn Ser Ser 1150 Ile Asp Val Asp Ser 1155 Leu Met Arg
Ser Val 1160 Ser Arg Val Phe Lys 1165 Phe Ile Asp Met Pro 1170 Thr Glu Gly
Lys Pro 1175 Thr Lys Ser Thr Lys 1180 Pro Tyr Lys Asn Gly 1185 Gln Leu Ser
Lys Val 1190 Met Ile Ile Glu Asn 1195 Ser His Val Lys Lys 1200 Asp Asp Ile
T rp Pro 1205 Ser Gly Gly Gln Met 1210 Thr Val Lys Asp Leu 1215 Thr Ala Lys
Tyr Thr 1220 Glu Gly Gly Asn Ala 1225 Ile Leu Glu Asn Ile 1230 Ser Phe Ser
Ile Ser 1235 Pro Gly Gln Arg Val 1240 Gly Leu Leu Gly Arg 1245 Thr Gly Ser
Gly Lys 1250 Ser Thr Leu Leu Ser 1255 Ala Phe Leu Arg Leu 1260 Leu Asn Thr
Glu Gly 1265 Glu Ile Gln Ile Asp 1270 Gly Val Ser Trp Asp 1275 Ser Ile Thr
- 113 043901
Leu Gln Gln Trp Arg Lys Ala 12801285
Phe Ile Phe Ser Gly Thr Phe 12951300
Gln Trp Ser Asp Gln Glu Ile 13101315
Leu Arg Ser Val Ile Glu Gln 13251330
Leu Val Asp Gly Gly Cys Val 13401345
Met Cys Leu Ala Arg Ser Val 13551360
Leu Asp Glu Pro Ser Ala His 13701375
Ile Arg Arg Thr Leu Lys Gln 13851390
Leu Cys Glu His Arg Ile Glu 14001405
Leu Val Ile Glu Glu Asn Lys 14151420
Lys Leu Leu Asn Glu Arg Ser 14301435
Ser Asp Arg Val Lys Leu Phe 14451450
Lys Ser Lys Pro Gln Ile Ala 14601465
Glu Val Gln Asp Thr Arg Leu 14751480
Phe Gly Val Ile Pro Gln Lys 1290
Arg Lys Asn Leu Asp Pro Tyr 1305
Trp Lys Val Ala Asp Glu Val 1320
Phe Pro Gly Lys Leu Asp Phe 1335
Leu Ser His Gly His Lys Gln 1350
Leu Ser Lys Ala Lys Ile Leu 1365
Leu Asp Pro Val Thr Tyr Gln 1380
Ala Phe Ala Asp Cys Thr Val 1395
Ala Met Leu Glu Cys Gln Gln 1410
Val Arg Gln Tyr Asp Ser Ile 1425
Leu Phe Arg Gln Ala Ile Ser 1440
Pro His Arg Asn Ser Ser Lys 1455
Ala Leu Lys Glu Glu Thr Glu 1470 <210> 3 <211> 140 <212> РНК <213> Искусственная последовательность
Val
Glu
Gly
Val
Leu
Leu
Ile
Ile
Phe
Gln
Pro
Cys
Glu
- 114 043901 <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 3 ggacagaucg ccuggagacg ccauccacgc uguuuugacc uccauagaag acaccgggac 60 cgauccagcc uccgcggccg ggaacggugc auuggaacgc ggauuccccg ugccaagagu 120 gacucaccgu ccuugacacg
140 < 210> 4 < 211> 105 < 212> РНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 4 cggguggcau cccugugacc ccuccccagu gccucuccug gcccuggaag uugccacucc 60 agugcccacc agccuugucc uaauaaaauu aaguugcauc aagcu
105 < 210> 5 < 211> 105 < 212> РНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 5 ggguggcauc ccugugaccc cuccccagug ccucuccugg cccuggaagu ugccacucca 60 gugcccacca gccuuguccu aauaaaauua aguugcauca aagcu
105 < 210> 6 < 211> 4688 < 212> РНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 6 ggacagaucg ccuggagacg ccauccacgc uguuuugacc uccauagaag acaccgggac 60 cgauccagcc uccgcggccg ggaacggugc auuggaacgc ggauuccccg ugccaagagu
- 115 043901
120
gacucaccgu 180 ccuugacacg augcaacgcu cuccucuuga aaaggccucg guggugucca
agcucuucuu 240 cucguggacu agacccaucc ugagaaaggg guacagacag cgcuuggagc
uguccgauau 300 cuaucaaauc ccuuccgugg acuccgcgga caaccugucc gagaagcucg
agagagaaug 360 ggacagagaa cucgccucaa agaagaaccc gaagcugauu aaugcgcuua
ggcggugcuu 420 uuucuggcgg uucauguucu acggcaucuu ccucuaccug ggagagguca
ccaaggccgu 480 gcagccccug uugcugggac ggauuauugc cuccuacgac cccgacaaca
aggaagaaag 540 aagcaucgcu aucuacuugg gcaucggucu gugccugcuu uucaucgucc
ggacccucuu 600 guugcauccu gcuauuuucg gccugcauca cauuggcaug cagaugagaa
uugccauguu 660 uucccugauc uacaagaaaa cucugaagcu cucgagccgc gugcuugaca
agauuuccau 720 cggccagcuc gugucccugc ucuccaacaa ucugaacaag uucgacgagg
gccucgcccu 780 ggcccacuuc guguggaucg ccccucugca aguggcgcuu cugaugggcc
ugaucuggga 840 gcugcugcaa gccucggcau ucugugggcu uggauuccug aucgugcugg
cacuguucca 900 ggccggacug gggcggauga ugaugaagua cagggaccag agagccggaa
agauuuccga 960 acggcuggug aucacuucgg aaaugaucga aaacauccag ucagugaagg
ccuacugcug 1020 ggaagaggcc auggaaaaga ugauugaaaa ccuccggcaa accgagcuga
agcugacccg 1080 caaggccgcu uacgugcgcu auuucaacuc guccgcuuuc uucuucuccg
gguucuucgu 1140 gguguuucuc uccgugcucc ccuacgcccu gauuaaggga aucauccuca
ggaagaucuu 1200 caccaccauu uccuucugua ucgugcuccg cauggccgug acccggcagu
ucccaugggc 1260 cgugcagacu ugguacgacu cccugggagc cauuaacaag auccaggacu
uccuucaaaa gcaggaguac aagacccucg aguacaaccu gacuacuacc gaggucguga
- 116 043901
1320
uggaaaacgu 1380 caccgccuuu ugggaggagg gauuuggcga acuguucgag aaggccaagc
agaacaacaa 1440 caaccgcaag accucgaacg gugacgacuc ccucuucuuu ucaaacuuca
gccugcucgg 1500 gacgcccgug cugaaggaca uuaacuucaa gaucgaaaga ggacagcucc
uggcgguggc 1560 cggaucgacc ggagccggaa agacuucccu gcugauggug aucaugggag
agcuugaacc 1620 uagcgaggga aagaucaagc acuccggccg caucagcuuc uguagccagu
uuuccuggau 1680 caugcccgga accauuaagg aaaacaucau cuucggcgug uccuacgaug
aauaccgcua 1740 ccgguccgug aucaaagccu gccagcugga agaggauauu ucaaaguucg
cggagaaaga 1800 uaacaucgug cugggcgaag gggguauuac cuugucgggg ggccagcggg
cuagaaucuc 1860 gcuggccaga gccguguaua aggacgccga ccuguaucuc cuggacuccc
ccuucggaua 1920 ccuggacguc cugaccgaaa aggagaucuu cgaaucgugc gugugcaagc
ugauggcuaa 1980 caagacucgc auccucguga ccuccaaaau ggagcaccug aagaaggcag
acaagauucu 2040 gauucugcau gagggguccu ccuacuuuua cggcaccuuc ucggaguugc
agaacuugca 2100 gcccgacuuc ucaucgaagc ugauggguug cgacagcuuc gaccaguucu
ccgccgaaag 2160 aaggaacucg auccugacgg aaaccuugca ccgcuucucu uuggaaggcg
acgccccugu 2220 gucauggacc gagacuaaga agcagagcuu caagcagacc ggggaauucg
gcgaaaagag 2280 gaagaacagc aucuugaacc ccauuaacuc cauccgcaag uucucaaucg
ugcaaaagac 2340 gccacugcag augaacggca uugaggagga cuccgacgaa ccccuugaga
ggcgccuguc 2400 ccuggugccg gacagcgagc agggagaagc cauccugccu cggauuuccg
ugaucuccac 2460 ugguccgacg cuccaagccc ggcggcggca guccgugcug aaccugauga
cccacagcgu gaaccagggc caaaacauuc accgcaagac uaccgcaucc acccggaaag
- 117 043901
2520
ugucccuggc 2580 accucaagcg aaucuuaccg agcucgacau cuacucccgg agacugucgc
aggaaaccgg 2640 gcucgaaauu uccgaagaaa ucaacgagga ggaucugaaa gagugcuucu
ucgacgauau 2700 ggagucgaua cccgccguga cgacuuggaa cacuuaucug cgguacauca
cugugcacaa 2760 gucauugauc uucgugcuga uuuggugccu ggugauuuuc cuggccgagg
ucgcggccuc 2820 acugguggug cucuggcugu ugggaaacac gccucugcaa gacaagggaa
acuccacgca 2880 cucgagaaac aacagcuaug ccgugauuau cacuuccacc uccucuuauu
acguguucua 2940 caucuacguc ggaguggcgg auacccugcu cgcgaugggu uucuucagag
gacugccgcu 3000 gguccacacc uugaucaccg ucagcaagau ucuucaccac aagauguugc
auagcgugcu 3060 gcaggccccc auguccaccc ucaacacucu gaaggccgga ggcauucuga
acagauucuc 3120 caaggacauc gcuauccugg acgaucuccu gccgcuuacc aucuuugacu
ucauccagcu 3180 gcugcugauc gugauuggag caaucgcagu gguggcggug cugcagccuu
acauuuucgu 3240 ggccacugug ccggucauug uggcguucau caugcugcgg gccuacuucc
uccaaaccag 3300 ccagcagcug aagcaacugg aauccgaggg acgauccccc aucuucacuc
accuugugac 3360 gucguugaag ggacugugga cccuccgggc uuucggacgg cagcccuacu
ucgaaacccu 3420 cuuccacaag gcccugaacc uccacaccgc caauugguuc cuguaccugu
ccacccugcg 3480 gugguuccag augcgcaucg agaugauuuu cgucaucuuc uucaucgcgg
ucacauucau 3540 cagcauccug acuaccggag agggagaggg acgggucgga auaauccuga
cccucgccau 3600 gaacauuaug agcacccugc agugggcagu gaacagcucg aucgacgugg
acagccugau 3660 gcgaagcguc agccgcgugu ucaaguucau cgacaugccu acugagggaa
aacccacuaa guccacuaag cccuacaaaa auggccagcu gagcaagguc augaucaucg
- 118 043901
3720 aaaacuccca cgugaagaag gacgauauuu ggcccuccgg aggucaaaug 3780 accugaccgc aaaguacacc gagggaggaa acgccauucu cgaaaacauc 3840 uuucgccggg acagcggguc ggccuucucg ggcggaccgg uuccgggaag 3900 ugucggcuuu ccuccggcug cugaauaccg agggggaaau ccaaauugac 3960 gggauuccau uacucugcag caguggcgga aggccuucgg cgugaucccc 4020 ucaucuucuc ggguaccuuc cggaagaacc uggauccuua cgagcagugg 4080 aaaucuggaa ggucgccgac gaggucggcc ugcgcuccgu gauugaacaa 4140 agcuggacuu cgugcucguc gacgggggau guguccuguc gcacggacau 4200 ugugccucgc acgguccgug cucuccaagg ccaagauucu gcugcuggac 4260 cccaccugga uccggucacc uaccagauca ucaggaggac ccugaagcag 4320 auugcaccgu gauucucugc gagcaccgca ucgaggccau gcuggagugc 4380 uggucaucga ggagaacaag guccgccaau acgacuccau ucaaaagcuc 4440 ggucgcuguu cagacaagcu auuucaccgu ccgauagagu gaagcucuuc 4500 acagcucaaa gugcaaaucg aagccgcaga ucgcagccuu gaaggaagag 4560 aggugcagga cacccggcuu uaacgggugg caucccugug accccucccc 4620 cuggcccugg aaguugccac uccagugccc accagccuug uccuaauaaa 4680 accgugaagg agcuucucca ucaacucugc ggcgugucuu cagaaggugu agcgaccaag uuuccuggaa aagcagcuca gaaccuucgg gccuuugccg cagcaguucc cucaacgagc ccgcaucgga acugaggaag agugccucuc auuaaguugc aucaagcu 4688 <210> 7 <211> 4688 <212> РНК <213> Искусственная последовательность <220>
- 119 043901 <223> Химически синтезированный олигонуклеотид
<400> 7 ccauccacgc uguuuugacc uccauagaag acaccgggac
ggacagaucg 60 ccuggagacg
cgauccagcc 120 uccgcggccg ggaacggugc auuggaacgc ggauuccccg ugccaagagu
gacucaccgu 180 ccuugacacg augcaacgcu cuccucuuga aaaggccucg guggugucca
agcucuucuu 240 cucguggacu agacccaucc ugagaaaggg guacagacag cgcuuggagc
uguccgauau 300 cuaucaaauc ccuuccgugg acuccgcgga caaccugucc gagaagcucg
agagagaaug 360 ggacagagaa cucgccucaa agaagaaccc gaagcugauu aaugcgcuua
ggcggugcuu 420 uuucuggcgg uucauguucu acggcaucuu ccucuaccug ggagagguca
ccaaggccgu 480 gcagccccug uugcugggac ggauuauugc cuccuacgac cccgacaaca
aggaagaaag 540 aagcaucgcu aucuacuugg gcaucggucu gugccugcuu uucaucgucc
ggacccucuu 600 guugcauccu gcuauuuucg gccugcauca cauuggcaug cagaugagaa
uugccauguu 660 uucccugauc uacaagaaaa cucugaagcu cucgagccgc gugcuugaca
agauuuccau 720 cggccagcuc gugucccugc ucuccaacaa ucugaacaag uucgacgagg
gccucgcccu 780 ggcccacuuc guguggaucg ccccucugca aguggcgcuu cugaugggcc
ugaucuggga 840 gcugcugcaa gccucggcau ucugugggcu uggauuccug aucgugcugg
cacuguucca 900 ggccggacug gggcggauga ugaugaagua cagggaccag agagccggaa
agauuuccga 960 acggcuggug aucacuucgg aaaugaucga aaacauccag ucagugaagg
ccuacugcug 1020 ggaagaggcc auggaaaaga ugauugaaaa ccuccggcaa accgagcuga
agcugacccg 1080 caaggccgcu uacgugcgcu auuucaacuc guccgcuuuc uucuucuccg
gguucuucgu gguguuucuc uccgugcucc ccuacgcccu gauuaaggga aucauccuca
1140
- 120 043901 caccaccauu cgugcagacu gcaggaguac caccgccuuu caaccgcaag gacgcccgug cggaucgacc uagcgaggga caugcccgga ccgguccgug uaacaucgug gcuggccaga ccuggacguc caagacucgc gauucugcau gcccgacuuc aaggaacucg gucauggacc gaagaacagc gccacugcag uccuucugua ucgugcuccg cauggccgug ugguacgacu cccugggagc cauuaacaag aagacccucg aguacaaccu gacuacuacc ugggaggagg gauuuggcga acuguucgag accucgaacg gugacgacuc ccucuucuuu cugaaggaca uuaacuucaa gaucgaaaga ggagccggaa agacuucccu gcugauggug aagaucaagc acuccggccg caucagcuuc accauuaagg aaaacaucau cuucggcgug aucaaagccu gccagcugga agaggauauu cugggcgaag gggguauuac cuugucgggg gccguguaua aggacgccga ccuguaucuc cugaccgaaa aggagaucuu cgaaucgugc auccucguga ccuccaaaau ggagcaccug gagggguccu ccuacuuuua cggcaccuuc ucaucgaagc ugauggguug cgacagcuuc auccugacgg aaaccuugca ccgcuucucu gagacuaaga agcagagcuu caagcagacc aucuugaacc ccauuaacuc cauccgcaag augaacggca uugaggagga cuccgacgaa acccggcagu auccaggacu gaggucguga aaggccaagc ucaaacuuca ggacagcucc aucaugggag uguagccagu uccuacgaug ucaaaguucg ggccagcggg cuggacuccc gugugcaagc aagaaggcag ucggaguugc gaccaguucu uuggaaggcg ggggaauucg uucucaaucg ccccuugaga
- 121 043901 ccuggugccg ugguccgacg gaaccagggc accucaagcg gcucgaaauu ggagucgaua gucauugauc acugguggug cucgagaaac caucuacguc gguccacacc gcaggccccc caaggacauc gcugcugauc ggccacugug ccagcagcug gucguugaag cuuccacaag gugguuccag cagcauccug gacagcgagc agggagaagc cauccugccu cuccaagccc ggcggcggca guccgugcug caaaacauuc accgcaagac uaccgcaucc aaucuuaccg agcucgacau cuacucccgg uccgaagaaa ucaacgagga ggaucugaaa cccgccguga cgacuuggaa cacuuaucug uucgugcuga uuuggugccu ggugauuuuc cucuggcugu ugggaaacac gccucugcaa aacagcuaug ccgugauuau cacuuccacc ggaguggcgg auacccugcu cgcgaugggu uugaucaccg ucagcaagau ucuucaccac auguccaccc ucaacacucu gaaggccgga gcuauccugg acgaucuccu gccgcuuacc gugauuggag caaucgcagu gguggcggug ccggucauug uggcguucau caugcugcgg aagcaacugg aauccgaggg acgauccccc ggacugugga cccuccgggc uuucggacgg gcccugaacc uccacaccgc caauugguuc augcgcaucg agaugauuuu cgucaucuuc acuaccggag agggagaggg acgggucgga cggauuuccg aaccugauga acccggaaag agacugucgc gagugcuucu cgguacauca cuggccgagg gacaagggaa uccucuuauu uucuucagag aagauguugc ggcauucuga aucuuugacu cugcagccuu gccuacuucc aucuucacuc cagcccuacu cuguaccugu uucaucgcgg auaauccuga
- 122 043901 gaacauuaug gcgaagcguc guccacuaag cgugaagaag aaaguacacc acagcggguc ccuccggcug uacucugcag ggguaccuuc ggucgccgac cgugcucguc acgguccgug uccggucacc gauucucugc ggagaacaag cagacaagcu gugcaaaucg cacccggcuu aguugccacu agcacccugc agugggcagu gaacagcucg agccgcgugu ucaaguucau cgacaugccu cccuacaaaa auggccagcu gagcaagguc gacgauauuu ggcccuccgg aggucaaaug gagggaggaa acgccauucu cgaaaacauc ggccuucucg ggcggaccgg uuccgggaag cugaauaccg agggggaaau ccaaauugac caguggcgga aggccuucgg cgugaucccc cggaagaacc uggauccuua cgagcagugg gaggucggcc ugcgcuccgu gauugaacaa gacgggggau guguccuguc gcacggacau cucuccaagg ccaagauucu gcugcuggac uaccagauca ucaggaggac ccugaagcag gagcaccgca ucgaggccau gcuggagugc guccgccaau acgacuccau ucaaaagcuc auuucaccgu ccgauagagu gaagcucuuc aagccgcaga ucgcagccuu gaaggaagag uaaggguggc aucccuguga ccccucccca ccagugccca ccagccuugu ccuaauaaaa aucgacgugg acugagggaa augaucaucg accgugaagg agcuucucca ucaacucugc ggcgugucuu cagaaggugu agcgaccaag uuuccuggaa aagcagcuca gaaccuucgg gccuuugccg cagcaguucc cucaacgagc ccgcaucgga acugaggaag gugccucucc uuaaguugca
- 123 043901 <210> 8 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Искусственно синтезированный олигонуклеотид < 400> 8 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt tcagccgctc 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag gtctattgct 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct gctgcaccct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt ctccctcatt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat tggtcagctg 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct ggcccacttc 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga gctgcttcaa 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca ggctgggctc 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatatcaga gcgacttgtg 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg ggaagaagcc 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg gaaggctgct 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt tgtcttcctg 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt caccaccatc 1020
- 124 043901 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca
- 125 043901 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg
- 126 043901 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat gaggagtgtc 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa gtcaacaaaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca cgtgaagaag 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc caagtacacc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg gcagagagtt 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt ccttcggctc 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat caccctgcag 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc tggcactttc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggttgcagat 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt tgtgctggta 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga 4443 <210>
<211>
<212>
<213>
4443
ДНК
Искусственная последовательность
- 127 043901 tagttggacc <220>
<223> Химически синтезированный олигонуклеотид <400> 9 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtctgatat 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatttcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa ctaccagatt ggatagagag tttctggagg tcagccgctc gtctattgct gctgcaccct ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat
- 128 043901 gacagccttt
1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc
- 129 043901 acaggaagac agctggacat ttaatgaaga ccacatggaa tctggtgcct tgggcaacac ccgtcatcat acaccctcct tgtcaaaaat tgaacacatt atgatctcct ccatagcagt ttgcctttat aatctgaggg ctctgagagc tgcacactgc agatgatctt aaggagaggg agtgggccgt ttaaattcat tacagcttct acccggaaag tgtctctggc ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat cacctacctt agatatatta ctgtccacaa ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag tcctctccag gacaagggca atagtactca tacaagcacc tccagctact acgtgttcta ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct gaaggctggc ggcatcctca acagattttc ccccctgaca atctttgact ttatccagct ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc ccggagcccc atttttaccc acctggtgac attcgggcga cagccttact ttgagacact caactggttt ctttacctga gcacactccg cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat cagggtggga atcatcctca cgctggctat gaattccagt atagatgtgg attctctaat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa
- 130 043901
3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca cgtgaagaag 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc caagtacacc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg gcagagagtt 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt ccttcggctc 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat caccctgcag 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc tggcactttc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggttgcagat 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt tgtgctggta 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcaccttga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga 4443 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
4443
ДНК
Искусственная последовательность
Химически синтезированный олигонуклеотид <400>
- 131 043901 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatatcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tagttggacc ctaccagatt ggatagagag tttctggagg tcagccgctc gtctattgct gctgcaccct ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt
- 132 043901 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa caacaggaag 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg gacccctgtg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc aggctccact 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc ttccgaagga 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat catgcccggc 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta ccggtcagtc 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga caacattgtg 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc tttggcccgg 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta cctcgacgtg 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa caagaccagg 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct gattctgcat 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca gccagacttc 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag aagaaactct 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt ttcttggaca 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag gaaaaattca 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac acccctccag 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag tctggtgcca 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac aggccccaca 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt gaaccagggc 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc ccctcaggcc 2400
- 133 043901 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtacaca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gcttgaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag
- 134 043901 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc caagtacacc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg gcagagagtt 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt ccttcggctc 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat caccctgcag 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc tggcactttc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggttgcagat 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt tgtgctggta 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcaccttga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 11 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 11 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat ctaccagatt 120
- 135 043901 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatatcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ggatagagag tttctggagg tcagccgctc gtctattgct gctgcaccct ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg
- 136 043901 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc
- 137 043901 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcca actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt
- 138 043901 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt ccttcggctc 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat caccctgcag 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc tggcactttc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggttgcagat 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt tgtgctggta 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 12 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 12 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg
- 139 043901
240 tcagccgctc ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatatcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc gtctattgct gctgcaccct ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga
- 140 043901 catgcccggc
1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc ctattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gcttgaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg
- 141 043901 cagcagaaat
2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag
- 142 043901
3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc tggcactttc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggttgcagat 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt tgtgctggta 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 13 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 13 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt tcagccgctc 300
- 143 043901 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatttcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 gtctattgct gctgcaccct ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc
- 144 043901 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat
- 145 043901 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcca actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc 3900 catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag tggcactttc
- 146 043901 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggttgcagat 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt tgtgctggta 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 14 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 14 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtctgatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt tcagccgctc 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag gtctattgct 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct gctgcaccct 420
- 147 043901 gccatttttg 480 tacaaaaaga 540 gtcagcctgc 600 gtgtggattg 660 gcctctgctt 720 ggaagaatga 780 atcaccagtg 840 atggagaaga 900 tatgttcgct 960 tctgttctgc 1020 agtttttgca 1080 tggtacgatt 1140 aaaactttag 1200 tgggaggagg 1260 acgagcaatg 1320 ttgaaagata 1380 ggagctggta 1440 aaaatcaagc 1500 accattaagg 1560 atcaaagcct 1620 gccttcacca ccctgaaact tgtccaacaa cacctctgca tctgtgggct tgatgaaata aaatgattga tgattgagaa atttcaacag catatgcact tcgttctcag ccttgggggc aatacaacct gttttggaga gggacgactc taaacttcaa aaacatctct acagtgggag aaaacatcat gtcagttgga catcggcatg ttcctcaaga tcttaacaaa ggtggccctg gggctttttg cagagatcag aaatattcag cctgaggcag cagcgccttc gataaaaggc gatggccgtc catcaacaag caccaccact attgttcgag tctcttcttc gatcgagagg tctcatggtg aatctcattc atttggagtg ggaggacatc caaatgagaa gtgttagata tttgatgaag ttgatgggac attgtactgg cgggccggga agcgtgaaag acagagctca ttcttcagtg attattttac acaagacagt attcaagatt gaagtggtca aaggcaaagc agcaactttt ggccagctct atcatggggg tgcagccagt tcctatgatg tccaagtttg ttgccatgtt aaatatccat gcttggcgct ttatatggga cactttttca agatatcaga cctactgctg agctcactcg gcttctttgt gaaagatctt tcccctgggc tcttgcaaaa tggaaaatgt agaataacaa cactgctcgg tggctgtggc aactggagcc tttcctggat agtaccgcta cagagaaaga ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtccgtc caacattgtg
- 148 043901 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gcttgaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc
- 149 043901 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt 4020 gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaag cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag tggcactttc ggttgcagat tgtgctggta
- 150 043901 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 15 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 15 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt tcagccgctc 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag gtctattgct 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct gctgcaccct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt ctccctcatt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat tggtcagctg
- 151 043901 ggcccacttc
540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatatcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg
- 152 043901 caagaccagg
1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc ctattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtacaca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gcttgaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt
- 153 043901 atgatctcct ccatagcagt ttgcctttat aatctgaggg ctctgagagc tgcacactgc agatgatctt aaggagaggg agtgggccgt ttaaattcat atggacagct ggcccagcgg atgccatttt gtcgcacggg aaggcgaaat aagcatttgg tggaccccta tgcggagtgt gcgtgctgtc ccaaaatctt ccccctgaca atctttgact ttatccagct ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc ccggagcccc atttttaccc acctggtgac attcgggcga cagccttact ttgagacact caactggttt ctttacctga gcacactccg cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat cagggtggga atcatcctca cgctggctat gaattccagt atagatgtgg attctctaat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa gagcaaggtg atgataattg agaacagcca gggccagatg actgtgaagg acctgacggc ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa gatagaacaa tttcctggca agctggattt ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag tggcactttc ggttgcagat tgtgctggta ccgctccgtt cccagtgacc
- 154 043901
4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 16 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 16 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt tcagccgctc 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag gtctattgct 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct gctgcaccct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt ctccctcatt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat tggtcagctg 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct ggcccacttc 600
- 155 043901 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca 720 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatatcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtccgtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg
- 156 043901 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc
- 157 043901 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag agtctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt 4200 ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag tggcactttc ggttgcagat tgtgctggta ccgctccgtt cccagtgacc catactgtgt
- 158 043901 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 17 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 17 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt tagttggacc 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtctgatat ctaccagatt 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg ggatagagag 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt tttctggagg 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt tcagccgctc 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag gtctattgct 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct gctgcaccct 420 gccatttttg gccttcacca catcggcatg caaatgagaa ttgccatgtt ctccctcatt 480 tacaaaaaga ccctgaaact ttcctcaaga gtgttagata aaatatccat tggtcagctg 540 gtcagcctgc tgtccaacaa tcttaacaaa tttgatgaag gcttggcgct ggcccacttc 600 gtgtggattg cacctctgca ggtggccctg ttgatgggac ttatatggga gctgcttcaa 660 gcctctgctt tctgtgggct gggctttttg attgtactgg cactttttca ggctgggctc 720
- 159 043901 ggaagaatga tgatgaaata cagagatcag cgggccggga agatttcaga 780 atcaccagtg aaatgattga aaatattcag agcgtgaaag cctactgctg 840 atggagaaga tgattgagaa cctgaggcag acagagctca agctcactcg 900 tatgttcgct atttcaacag cagcgccttc ttcttcagtg gcttctttgt 960 tctgttctgc catatgcact gataaaaggc attattttac gaaagatctt 1020 agtttttgca tcgttctcag gatggccgtc acaagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgatt ccttgggggc catcaacaag attcaagatt tcttgcaaaa 1140 aaaactttag aatacaacct caccaccact gaagtggtca tggaaaatgt 1200 tgggaggagg gttttggaga attgttcgag aaggcaaagc agaataacaa 1260 acgagcaatg gggacgactc tctcttcttc agcaactttt cactgctcgg 1320 ttgaaagata taaacttcaa gatcgagagg ggccagctct tggctgtggc 1380 ggagctggta aaacatctct tctcatggtg atcatggggg aactggagcc 1440 aaaatcaagc acagtgggag aatctcattc tgcagccagt tttcctggat 1500 accattaagg aaaacatcat atttggagtg tcctatgatg agtaccgcta 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaggacatc tccaagtttg cagagaaaga 1620 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtcagtc caacattgtg tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc
- 160 043901 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc ctattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtacaca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc
- 161 043901 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt 4020 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt 4320 ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag tggcactttc ggttgcagat tgtgctggta ccgctccgtt cccagtgacc catactgtgt ggagaataag ccgccaggcc
- 162 043901 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 18 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Искусственно синтезированный олигонуклеотид < 400> 18 atgcagagaa gccccctgga gaaggcctct gtggtgagca agctgttctt cagctggacc 60 agacccatcc tgagaaaggg ctacagacag agactggagc tgtctgacat ctaccagatc 120 ccctctgtgg actctgccga caacctgtct gagaagctgg agagagagtg ggacagagag 180 ctggccagca agaagaaccc caagctgatc aatgccctga gaagatgctt cttctggaga 240 ttcatgttct atggcatctt cctgtacctg ggagaggtga ccaaggccgt gcagcccctg 300 ctgctgggca ggatcattgc cagctatgac cctgacaaca aggaggagag aagcattgcc 360 atctacctgg gcattggcct gtgcctgctg ttcattgtga gaaccctgct gctgcaccct 420 gccatctttg gcctgcacca cattggcatg cagatgagaa ttgccatgtt cagcctgatc 480 tacaagaaga ccctgaagct gagcagcaga gtgctggaca agatcagcat tggccagctg 540 gtgagcctgc tgagcaacaa cctgaacaag tttgatgagg gcctggccct ggcccacttt 600 gtgtggattg cccccctgca ggtggccctg ctgatgggcc tgatctggga gctgctgcag 660 gcctctgcct tctgtggcct gggcttcctg attgtgctgg ccctgttcca ggccggcctg 720 ggcagaatga tgatgaagta cagagaccag agagccggca agatctctga gagactggtg 780 atcacctctg agatgattga gaacatccag tctgtgaagg cctactgctg ggaggaggcc
- 163 043901 gaaggccgcc
840 atggagaaga tgattgagaa cctgagacag acagagctga agctgaccag 900 tatgtgagat acttcaacag ctctgccttc ttcttctctg gcttctttgt 960 tctgtgctgc cctatgccct gatcaagggc atcatcctga ggaagatctt 1020 agcttctgca ttgtgctgag gatggccgtg accaggcagt tcccctgggc 1080 tggtatgaca gcctgggggc catcaacaag atccaggact tcctgcagaa 1140 aagaccctgg agtacaacct gaccaccaca gaggtggtga tggagaatgt 1200 tgggaggagg gctttggaga gctgtttgag aaggccaagc agaacaacaa 1260 accagcaatg gagatgacag cctgttcttc agcaacttca gcctgctggg 1320 ctgaaggaca tcaacttcaa gattgagagg ggccagctgc tggccgtggc 1380 ggagccggca agaccagcct gctgatggtg atcatgggag agctggagcc 1440 aagatcaagc actctggcag aatcagcttc tgcagccagt tcagctggat 1500 accatcaagg agaacatcat ctttggggtg agctatgatg agtacaggta 1560 atcaaggcct gccagctgga ggaggacatc tccaagtttg ccgagaagga 1620 ctgggggagg gaggcatcac cctgtctggg ggccagagag ccagaatcag 1680 gccgtgtaca aggatgccga cctgtacctg ctggacagcc cctttggcta 1740 ctgacagaga aggagatctt tgagagctgt gtgtgcaagc tgatggccaa 1800 atcctggtga ccagcaagat ggagcacctg aagaaggccg acaagatcct 1860 gagggcagca gctacttcta tggcaccttc tctgagctgc agaacctgca 1920 agcagcaagc tgatgggctg tgacagcttt gaccagttct ctgctgagag 1980 atcctgacag agaccctgca caggttcagc ctggaggggg atgcccctgt ggtgttcctg caccaccatc cgtgcagacc gcaggagtac gacagccttc caacagaaag cacccctgtg cggcagcaca ctctgagggc catgcctggc cagatctgtg caacattgtg cctggccaga cctggatgtg caagaccagg gatcctgcat gcctgacttc aagaaacagc gagctggaca
- 164 043901 agcagagctt ccatcaacag ttgaggagga agggagaggc gaagaagaca acagaaagac agctggacat tcaatgagga ccacctggaa tctggtgcct tgggcaacac ctgtgatcat acaccctgct tgagcaagat tgaacaccct atgacctgct ccattgccgt tggccttcat agtctgaggg ccctgagggc caagcagaca ggagagtttg gggagaagag catcaggaag ttcagcattg tgcagaagac ctctgatgag cccctggaga gaagactgag catcctgccc aggatctctg tgatcagcac gtctgtgctg aacctgatga cccactctgt cacagccagc accagaaagg tgagcctggc ctacagcaga aggctgagcc aggagacagg ggacctgaag gagtgcttct ttgatgacat cacctacctg agatacatca cagtgcacaa ggtgatcttc ctggccgagg tggccgccag ccccctgcag gacaagggca acagcaccca caccagcacc agcagctact atgtgttcta ggccatgggc ttcttcagag gcctgcccct cctgcaccac aagatgctgc actctgtgct gaaggctgga ggcatcctga acagattcag gcccctgacc atctttgact tcatccagct ggtggccgtg ctgcagccct acatctttgt catgctgagg gcctacttcc tgcagaccag cagaagcccc atcttcaccc acctggtgac ctttggcaga cagccctact ttgagaccct gaagaacagc ccccctgcag cctggtgcca aggccccacc gaaccagggc cccccaggcc cctggagatc ggagagcatc gagcctgatc cctggtggtg cagcagaaac catctatgtg ggtgcacacc gcaggccccc caaggacatt gctgctgatt ggccacagtg ccagcagctg cagcctgaag gttccacaag
- 165 043901 atggttccag
3240 gccctgaacc tgcacacagc caactggttc ctgtacctga gcaccctgag 3300 atgaggattg agatgatctt tgtgatcttc ttcattgccg tgaccttcat 3360 accacagggg agggcgaggg cagagtgggc atcatcctga ccctggccat 3420 agcaccctgc agtgggccgt gaacagcagc attgatgtgg acagcctgat 3480 agcagagtgt tcaagttcat tgacatgccc acagagggca agcccaccaa 3540 ccctacaaga atggccagct gagcaaggtg atgatcattg agaacagcca 3600 gatgacatct ggccctctgg aggccagatg acagtgaagg acctgacagc 3660 gaggggggca atgccatcct ggagaacatc agcttcagca tcagccctgg 3720 ggcctgctgg gcagaacagg ctctggcaag agcaccctgc tgtctgcctt 3780 ctgaacacag agggagagat ccagattgat ggggtgagct gggacagcat 3840 cagtggagga aggcctttgg ggtgatcccc cagaaggtgt tcatcttctc 3900 aggaagaacc tggaccccta tgagcagtgg tctgaccagg agatctggaa 3960 gaggtgggcc tgagatctgt gattgagcag ttccctggca agctggactt 4020 gatggaggct gtgtgctgag ccatggccac aagcagctga tgtgcctggc 4080 ctgagcaagg ccaagatcct gctgctggat gagccctctg cccacctgga 4140 taccagatca tcagaagaac cctgaagcag gcctttgccg actgcacagt 4200 gagcacagaa ttgaggccat gctggagtgc cagcagttcc tggtgattga 4260 gtgaggcagt atgacagcat ccagaagctg ctgaatgaga gaagcctgtt 4320 atcagcccct ctgacagagt gaagctgttc ccccacagga acagcagcaa 4380 aagccccaga ttgccgccct gaaggaggag acagaggagg aggtgcagga cagcatcctg gaacatcatg gagatctgtg gagcaccaag tgtgaagaag caagtacaca ccagagggtg cctgaggctg caccctgcag tggcaccttc ggtggccgat tgtgctggtg cagatctgtg ccctgtgacc gatcctgtgt ggagaacaag cagacaggcc gtgcaagagc caccagactg
- 166 043901
4440 tga 4443 <210> 19 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 19 atgcagagga gccccctgga gaaggccagc gtggtgagca agctgttctt cagctggacc 60 aggcccatcc tgaggaaggg ctacaggcag aggctggagc tgagcgacat ctaccagatc 120 cccagcgtgg acagcgccga caacctgagc gagaagctgg agagggagtg ggacagggag 180 ctggccagca agaagaaccc caagctgatc aacgccctga ggaggtgctt cttctggagg 240 ttcatgttct acggcatctt cctgtacctg ggcgaggtga ccaaggccgt gcagcccctg 300 ctgctgggca ggatcatcgc cagctacgac cccgacaaca aggaggagag gagcatcgcc 360 atctacctgg gcatcggcct gtgcctgctg ttcatcgtga ggaccctgct gctgcacccc 420 gccatcttcg gcctgcacca catcggcatg cagatgagga tcgccatgtt cagcctgatc 480 tacaagaaga ccctgaagct gagcagcagg gtgctggaca agatcagcat cggccagctg 540 gtgagcctgc tgagcaacaa cctgaacaag ttcgacgagg gcctggccct ggcccacttc 600 gtgtggatcg cccccctgca ggtggccctg ctgatgggcc tgatctggga gctgctgcag 660 gccagcgcct tctgcggcct gggcttcctg atcgtgctgg ccctgttcca ggccggcctg 720 ggcaggatga tgatgaagta cagggaccag agggccggca agatcagcga gaggctggtg 780 atcaccagcg agatgatcga gaacatccag agcgtgaagg cctactgctg ggaggaggcc 840 atggagaaga tgatcgagaa cctgaggcag accgagctga agctgaccag gaaggccgcc 900
- 167 043901 acttcaacag cctacgccct tcgtgctgag gcctgggcgc agtacaacct gcttcggcga gcgacgacag tcaacttcaa agaccagcct acagcggcag agaacatcat gccagctgga gcggcatcac aggacgccga aggagatctt ccagcaagat gctacttcta tgatgggctg agaccctgca agcagagctt cagcgccttc ttcttcagcg gcttcttcgt gatcaagggc atcatcctga ggaagatctt gatggccgtg accaggcagt tcccctgggc catcaacaag atccaggact tcctgcagaa gaccaccacc gaggtggtga tggagaacgt gctgttcgag aaggccaagc agaacaacaa cctgttcttc agcaacttca gcctgctggg gatcgagagg ggccagctgc tggccgtggc gctgatggtg atcatgggcg agctggagcc gatcagcttc tgcagccagt tcagctggat cttcggcgtg agctacgacg agtacaggta ggaggacatc agcaagttcg ccgagaagga cctgagcggc ggccagaggg ccaggatcag cctgtacctg ctggacagcc ccttcggcta cgagagctgc gtgtgcaagc tgatggccaa ggagcacctg aagaaggccg acaagatcct cggcaccttc agcgagctgc agaacctgca cgacagcttc gaccagttca gcgccgagag caggttcagc ctggagggcg acgcccccgt caagcagacc ggcgagttcg gcgagaagag ggtgttcctg caccaccatc cgtgcagacc gcaggagtac gaccgccttc caacaggaag cacccccgtg cggcagcacc cagcgagggc catgcccggc caggagcgtg caacatcgtg cctggccagg cctggacgtg caagaccagg gatcctgcac gcccgacttc gaggaacagc gagctggacc gaagaacagc
- 168 043901 ccatcaacag tcgaggagga agggcgaggc ggaggaggca acaggaagac agctggacat tcaacgagga ccacctggaa tctggtgcct tgggcaacac ccgtgatcat acaccctgct tgagcaagat tgaacaccct acgacctgct ccatcgccgt tggccttcat agagcgaggg ccctgagggc tgcacaccgc catcaggaag ttcagcatcg tgcagaagac cagcgacgag cccctggaga ggaggctgag catcctgccc aggatcagcg tgatcagcac gagcgtgctg aacctgatga cccacagcgt caccgccagc accaggaagg tgagcctggc ctacagcagg aggctgagcc aggagaccgg ggacctgaag gagtgcttct tcgacgacat cacctacctg aggtacatca ccgtgcacaa ggtgatcttc ctggccgagg tggccgccag ccccctgcag gacaagggca acagcaccca caccagcacc agcagctact acgtgttcta ggccatgggc ttcttcaggg gcctgcccct cctgcaccac aagatgctgc acagcgtgct gaaggccggc ggcatcctga acaggttcag gcccctgacc atcttcgact tcatccagct ggtggccgtg ctgcagccct acatcttcgt catgctgagg gcctacttcc tgcagaccag caggagcccc atcttcaccc acctggtgac cttcggcagg cagccctact tcgagaccct caactggttc ctgtacctga gcaccctgag ccccctgcag cctggtgccc cggccccacc gaaccagggc cccccaggcc cctggagatc ggagagcatc gagcctgatc cctggtggtg cagcaggaac catctacgtg ggtgcacacc gcaggccccc caaggacatc gctgctgatc ggccaccgtg ccagcagctg cagcctgaag gttccacaag gtggttccag
- 169 043901 atgaggatcg agatgatctt cgtgatcttc ttcatcgccg tgaccttcat 3360 accaccggcg agggcgaggg cagggtgggc atcatcctga ccctggccat 3420 agcaccctgc agtgggccgt gaacagcagc atcgacgtgg acagcctgat 3480 agcagggtgt tcaagttcat cgacatgccc accgagggca agcccaccaa 3540 ccctacaaga acggccagct gagcaaggtg atgatcatcg agaacagcca 3600 gacgacatct ggcccagcgg cggccagatg accgtgaagg acctgaccgc 3660 gagggcggca acgccatcct ggagaacatc agcttcagca tcagccccgg 3720 ggcctgctgg gcaggaccgg cagcggcaag agcaccctgc tgagcgcctt 3780 ctgaacaccg agggcgagat ccagatcgac ggcgtgagct gggacagcat 3840 cagtggagga aggccttcgg cgtgatcccc cagaaggtgt tcatcttcag 3900 aggaagaacc tggaccccta cgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa 3960 gaggtgggcc tgaggagcgt gatcgagcag ttccccggca agctggactt 4020 gacggcggct gcgtgctgag ccacggccac aagcagctga tgtgcctggc 4080 cagcatcctg gaacatcatg gaggagcgtg gagcaccaag cgtgaagaag caagtacacc ccagagggtg cctgaggctg caccctgcag cggcaccttc ggtggccgac cgtgctggtg caggagcgtg ctgagcaagg 4140 ccaagatcct gctgctggac gagcccagcg cccacctgga ccccgtgacc taccagatca 4200 tcaggaggac cctgaagcag gccttcgccg actgcaccgt gatcctgtgc gagcacagga 4260 tcgaggccat gctggagtgc cagcagttcc tggtgatcga ggagaacaag gtgaggcagt 4320 atcagcccca 4380 aagccccaga 4440 acgacagcat ccagaagctg ctgaacgaga ggagcctgtt caggcaggcc gcgacagggt gaagctgttc ccccacagga acagcagcaa gtgcaagagc tcgccgccct gaaggaggag accgaggagg aggtgcagga caccaggctg tga 4443
- 170 043901 <210> 20 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 20 atgcagagat cccctctgga gaaggcctca gtggtgtcca agcttttctt ctcctggacc 60 aggcccattt taagaaaggg ctacaggcag agacttgagc tgtctgacat ctatcagatc 120 ccttctgtgg attctgctga caatcttagt gaaaaattgg aaagggagtg ggacagagag 180 ctggcaagta aaaagaaccc caagctgatt aatgccctga ggcgctgctt tttttggaga 240 ttcatgttct atggcatatt cctctacctt ggagaagtaa ccaaagctgt acagcctctc 300 ctccttggca gaatcattgc ctcctatgat cctgataaca aggaggagag aagcatagcc 360 atctacctgg gcattgggct gtgcctcttg tttattgtga ggacccttct cttgcaccct 420 gccatctttg gccttcatca cattggcatg caaatgagaa tagcaatgtt tagtcttatt 480 tacaaaaaaa cattaaaact ctcttccagg gtgttggaca agatcagtat tggacaactg 540 gtcagcctgc tgagcaacaa cctgaacaag tttgatgaag gactggccct ggcccacttt 600 gtctggattg ccccccttca ggtggctctt ttgatgggcc tgatctggga actcctgcag 660 gcctctgcct tctgtgggtt aggcttcctg atagtgctag ctctctttca ggcagggttg 720 ggtagaatga tgatgaagta cagagaccag agggctggga agatatctga gaggctggtc 780 attacttctg aaatgataga aaacatccag tctgttaaag cttactgctg ggaggaggct 840 atggaaaaga tgattgagaa cttgaggcaa acagagctca agctgactag gaaggcagcc 900 tatgtcaggt atttcaacag cagtgctttc ttcttctcag gctttttcgt ggtcttcttg 960 agtgttctgc cctatgccct catcaagggg ataattttga gaaagatttt caccactatt 1020
- 171 043901 tccttttgca ttgtcctgag gatggctgtc accaggcaat tcccctgggc 1080 tggtatgact ctctgggggc catcaacaaa atccaagatt tcctgcagaa 1140 aagaccctgg aatacaacct caccaccaca gaagttgtga tggagaatgt 1200 tgggaggaag gatttgggga gctgtttgag aaagcaaaac aaaacaataa 1260 accagcaatg gagatgactc cctgttcttt tccaacttct ctttgttggg 1320 ctgaaagata taaactttaa aattgaaaga gggcagctgt tggcagttgc 1380 ggagctggaa aaacttcact actgatggtg atcatggggg agttagaacc 1440 aaaataaaac attctgggag gattagtttc tgcagccagt tcagctggat 1500 accattaaag aaaatattat atttggagtg agctatgatg aatatagata 1560 atcaaagcct gtcagttgga ggaagacatc agcaaatttg cagagaaaga 1620 ctgggtgaag gtggcatcac cctgtcagga gggcaaaggg ccaggatcag 1680 gcagtctata aagatgctga tctgtacctc ctggatagcc cttttggcta 1740 ttgacagaga aggaaatttt tgagtcctgt gtctgcaagt taatggcaaa 1800 atacttgtga cctcaaaaat ggaacacctg aagaaggctg acaaaattct 1860 gagggcagca gctactttta tggaacattt tctgaactgc agaatttgca 1920 tcatcaaagc tcatgggatg tgacagtttt gatcagtttt ctgcagaaag 1980 attttgactg agaccctgca caggttcagt ctggaggggg atgccccagt 2040 gagacaaaga aacagagctt caagcagact ggagagtttg gagaaaagag 2100 attctcaatc ccatcaatag catcaggaag ttcagcatag ttcagaagac 2160 atgaatggga ttgaagagga ctcagatgag cccctggaaa ggagactctc 2220 tgtgcagaca gcaggagtac gactgcattc taacaggaaa cacccctgtc tggctccaca ctctgaaggg catgcctggg taggagtgtc caacattgtt cttggccaga tctggatgtt taaaacaagg gatcctgcat accagacttt gagaaactcc gagttggact gaaaaactca tcctttgcag cttggtgcca
- 172 043901 gattcagagc agggggaagc catactgcca aggatctctg tgatttctac 2280 ctccaagcaa gaaggagaca gtcagtttta aacctgatga cccactctgt 2340 cagaacattc atagaaagac aacagcatct acaagaaaag tttcactggc 2400 aatttaactg aactagatat ctacagcagg aggctcagcc aagaaacagg 2460 tcagaagaaa taaatgagga ggatttgaag gaatgcttct ttgatgatat 2520 ccagctgtca caacctggaa cacctacctg agatacatca cagtgcacaa 2580 tttgtactta tatggtgcct tgtcatcttc ttagctgagg tggctgcttc 2640 ctgtggctgc tgggaaacac acccctccag gataaaggga actctactca 2700 aacagttatg ctgtgatcat caccagtacc tcctcctact atgtgttcta 2760 ggagttgcag acacattgct tgccatgggt ttttttagag gactccccct 2820 ctcatcactg tttccaaaat ccttcaccac aagatgctgc acagtgtact 2880 atgagcaccc tcaacactct taaagcagga ggaatcttga acagatttag 2940 gcaattcttg atgacctgct tccactgacc atctttgact tcatccagct 3000 gtaattggtg ccattgctgt ggtagcagtg ctccagccat atatttttgt 3060 cctgttattg tggccttcat tatgttgaga gcctacttcc tgcagacctc 3120 aagcaacttg aaagtgaggg caggagcccc atatttacac acttggtcac 3180 ggcctctgga cactcagagc ttttggaaga caaccttatt ttgaaactct 3240 gctctgaatc tccacacagc caactggttt ctgtatcttt caacactgcg 3300 atgaggattg agatgatctt tgttatcttc ttcatagctg ttaccttcat 3360 acaactggtg agggggaagg gagagtaggc atcatcctca cactagccat 3420 agggcccacc caaccaggga ccctcaagcc cctggagatc ggagagcatc atccctcatc cctggtggtg cagcaggaac catttatgtt ggtgcatact acaggctccc caaggacatt tctgctcatt ggccactgtg tcagcagctc ttccctcaaa cttccacaag ctggttccag ctctattctg gaacataatg
- 173 043901 tctaccttac aatgggccgt gaacagctcc atagatgtgg acagcctcat 3480 tcaagagttt tcaaattcat tgacatgccc acagaaggca aaccaaccaa 3540 ccctacaaga atggccagct gagtaaggtc atgatcattg aaaattctca 3600 gatgatattt ggcccagtgg gggccagatg acagtcaagg acctcactgc 3660 gagggtggaa atgctatcct agagaacatc tccttctcca tctccccagg 3720 ggcttgctgg gcaggactgg cagtggcaag tccaccttgc tctcagcatt 3780 ttaaatacag agggagagat tcaaattgat ggggtgtctt gggatagtat 3840 cagtggagga aagcctttgg tgtgattcct cagaaagtgt ttatcttctc 3900 agaaaaaatc tggaccccta tgaacagtgg agtgaccagg aaatctggaa 3960 gaagtgggcc taagatcagt catagagcag tttcctggaa agttggattt 4020 gatggaggct gtgtgctgtc ccatggccat aaacagctaa tgtgcctggc 4080 ctgagcaagg ccaagatcct gctgttagat gagccttcag cccatctgga 4140 taccagatta tcagaagaac tctgaagcag gcctttgctg actgcactgt 4200 gagcacagaa ttgaggccat gctggagtgc cagcagttcc ttgttataga 4260 gttaggcagt atgacagcat tcagaaactg ctaaatgaaa gatctctctt 4320 atttcaccat ctgatagagt gaaacttttt ccccacagaa attcctctaa 4380 aagccccaga tagctgcctt gaaagaggag actgaagaag aagtccagga 4440 gagaagtgtg gagcacaaaa tgtgaagaag caaatacaca ccaaagagtt tctcaggctt aacacttcaa tggcactttc ggtggcagat tgtgcttgta taggtcagtg ccctgtgaca catcctgtgt agagaataag caggcaagct atgtaaatct caccagactg tga 4443 <210> 21 <211> 4443 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 174 043901 tagctggaca <220>
<223> Химически синтезированный олигонуклеотид <400> 21 atgcagagat ccccgctgga gaaggcatct gtggtgtcaa aactgttctt 60 aggcccatcc ttaggaaagg gtacagacag aggttggagc tgtcagacat 120 ccttcagtgg actctgcaga caacctctct gaaaagctgg agagggaatg 180 ctggccagca aaaaaaaccc taaactgatt aatgccctga ggaggtgctt 240 ttcatgttct atgggatctt cctttacctg ggggaggtga ctaaagctgt 300 cttctgggga ggattattgc ctcctatgac ccagacaaca aagaagaaag 360 atttacttag gcataggcct ctgcttgctc ttcatagtta gaaccctcct 420 gccatctttg gtctccacca cataggtatg cagatgagaa tagcaatgtt 480 tacaagaaga ccctcaagct gtccagcagg gtgctggaca agatctccat 540 gtcagtctac tgtccaataa cttaaataag tttgatgagg gactggcact 600 gtgtggattg cccccctcca agtggccctt cttatgggcc ttatctggga 660 gcctctgctt tctgtggcct gggtttcctc atagtcctag ccttattcca 720 ggcagaatga tgatgaagta tagggaccaa agagcaggga agatttctga 780 ataacttctg agatgattga gaacattcag tcagtgaaag cttactgctg 840 atggaaaaaa tgattgaaaa tctcagacag actgaattaa agttgaccag 900 tatgtcagat acttcaactc ctcagccttc tttttttctg gcttctttgt 960 tcagtcctcc cctatgccct gattaagggc attatcttga ggaaaatttt 1020 tccttttgta ttgtcctcag gatggctgtt acaaggcaat ttccttgggc 1080 tggtatgata gccttggagc aatcaacaag atccaggatt tcctgcaaaa atatcagatc ggacagggaa cttttggaga tcagcctctt aagcatagcc actccaccca ctccttgatc aggccagtta ggcacatttt gctgttgcag ggctggactg aaggctggtt ggaagaagct gaaagctgct tgtattcctt cacaaccatc tgtgcaaact gcaggagtac
- 175 043901 gactgccttc
1140 aagacattgg aatacaacct taccaccact gaggtggtga tggaaaatgt 1200 tgggaggagg ggtttggaga gctgtttgag aaagccaaac agaacaacaa 1260 acctctaatg gtgatgattc cctgttcttt tctaacttta gtcttctggg 1320 ctgaaagata ttaactttaa aattgaaagg ggacagttgc tggctgtggc 1380 ggggctggga agacaagcct gctcatggtg atcatgggag agctggaacc 1440 aagatcaaac actcaggcag gatctccttc tgcagccagt tctcatggat 1500 actattaaag aaaatatcat ctttggtgta agctatgatg agtacaggta 1560 attaaagcct gccagctgga ggaagacatc tctaagtttg ctgagaagga 1620 ttgggggaag ggggcatcac cctttctggt gggcagaggg ctaggatctc 1680 gcagtataca aggatgctga cttgtacctc ttggatagtc cttttggcta 1740 ctgacagaga aagaaatatt tgaaagctgt gtgtgtaagc tcatggctaa 1800 atcctggtca ccagtaaaat ggaacacctc aaaaaagcag acaagatcct 1860 gagggctcct cctacttcta tgggaccttc agtgagctgc agaatctgca 1920 tcctcaaaac ttatgggctg tgactccttt gaccaattct ctgcagaaag 1980 atactgacag aaacactgca tagattctcc ctggaaggag atgccccagt 2040 gaaaccaaaa agcagagctt caagcagact ggtgagtttg gtgaaaagag 2100 atcctgaacc ccatcaatag catcaggaaa tttagcatag tccaaaagac 2160 atgaatggaa tagaggagga tagtgatgag cctcttgaga gaaggctgtc 2220 gacagtgaac agggtgaagc cattcttccg aggatcagtg tcatctccac 2280 ttgcaggcca gaagaagaca gtctgttctg aatttgatga cacattctgt caatagaaag gaccccagtt tgggtccact cagtgaagga tatgccaggc tagatctgta taacattgtg ccttgctagg cctagatgtg caagaccagg tattctccat gccagacttc aaggaatagc gagttggaca gaagaattct ccccctccag cctggttcca tgggcccaca gaatcaaggc
- 176 043901 cccccaggct
2340 cagaatatcc atagaaaaac cactgccagc accagaaaag tttctctagc 2400 aacctgactg agttagacat ctacagcaga aggctgagcc aagagactgg 2460 tctgaggaga tcaatgagga ggacctcaag gagtgcttct ttgatgacat 2520 cctgcagtca ctacatggaa cacttaccta aggtacatca cagttcataa 2580 tttgtcctca tatggtgtct ggtcatcttt ttagcagaag tggctgccag 2640 ctgtggttac tgggcaatac acctcttcag gacaaaggca atagcacaca 2700 aactcctatg cagtgatcat cacctctaca agctcttact atgtattcta 2760 ggagtggcag atactctcct ggccatggga ttcttcaggg gattacctct 2820 ttgatcacag tgtcaaaaat tctccaccac aagatgttac acagtgtcct 2880 atgtctactc tgaacacact taaggcaggt ggaattttga ataggtttag 2940 gctatcctgg atgatctcct ccctctgacc atctttgact tcatccagtt 3000 gtaattggag ccattgcagt ggtagcagtc ctacagcctt acatttttgt 3060 cctgttattg tggccttcat tatgctaaga gcttacttcc tgcaaacaag 3120 aaacagctag aaagtgaggg aaggtccccc atcttcaccc acctggtgac 3180 gggctatgga ctcttagggc ttttgggaga cagccgtact ttgagacctt 3240 gcccttaacc tccatacagc aaactggttc ttatacctga gtactctgag 3300 atgaggattg aaatgatttt tgtgatcttc ttcattgctg tgaccttcat 3360 accacaggag agggggaggg cagggtgggc atcatactga ccttggccat 3420 tcaaccctgc agtgggctgt caatagctcc attgatgtgg acagtctgat 3480 tccagggtct tcaagtttat tgacatgcca actgagggca aacccaccaa cttggaaata ggagtcaatc gagcctcatc cctagttgtg cagcagaaac tatatatgtg agttcacaca gcaagcccca caaggacata actgctcatt ggctactgtt ccaacagttg atcactcaag attccataag gtggtttcaa ctcaatcttg gaacattatg gaggagtgtc aagcactaag
- 177 043901
3540 ccatataaaa atggccaact gtccaaagtg atgatcattg aaaattcaca tgtaaagaag 3600 gatgatatct ggccctctgg aggacagatg acagtgaaag acctgactgc caagtacaca 3660 gagggtggta atgccattct tgagaacatt agtttcagta tttccccggg gcaaagggtg 3720 ggcctccttg gcagaacagg ctctggcaag agtaccctgc tgtcagcctt tttaagactg 3780 ttgaacactg agggagaaat tcagattgat ggtgtctcct gggatagcat caccctccag 3840 cagtggagaa aagcttttgg agtgatcccg caaaaggttt tcatcttttc aggcaccttc 3900 cggaagaacc tggaccccta tgagcagtgg tctgaccagg aaatatggaa ggtagctgat 3960 gaagttgggc ttaggtcagt catagagcag ttcccaggca aactggactt tgtcctggtg 4020 gatggtggat gtgtactgag tcatgggcac aaacagctga tgtgcctagc caggtctgtg 4080 ctcagcaagg caaagatatt gctgcttgat gaacccagtg cccatctgga cccagtcaca 4140 tatcagatca tcagaagaac attgaagcag gcctttgctg attgcacagt tatcctctgt 4200 gagcacagga ttgaggccat gctggagtgc cagcagtttc tggtgattga ggagaataaa 4260 gtaaggcagt atgactccat ccagaagctg ctcaatgaaa gaagcctctt tagacaagct 4320 atctccccct cagacagggt caaattgttc cctcacagaa acagcagcaa gtgcaagagc 4380 aagccccaaa ttgcagcctt gaaagaggag acagaggaag aggtgcagga caccagactc 4440 tga 4443 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
4443
ДНК
Искусственная последовательность
Химически синтезированный олигонуклеотид <400>
- 178 043901 atgcagagaa gccccctgga gaaggccagc gtggtgagca agctgttctt 60 agacccatcc tgagaaaggg ctacagacag agactggagc tgagcgacat 120 cccagcgtgg acagcgccga caacctgagc gagaagctgg agagagagtg 180 ctggccagca agaagaaccc caagctgatc aacgccctga gaagatgctt 240 ttcatgttct acggcatctt cctgtacctg ggcgaggtga ccaaggccgt 300 ctgctgggca gaatcatcgc cagctacgac cccgacaaca aggaggagag 360 atctacctgg gcatcggcct gtgcctgctg ttcatcgtga gaaccctgct 420 gccatcttcg gcctgcacca catcggcatg cagatgagaa tcgccatgtt 480 tacaagaaga ccctgaagct gagcagcaga gtgctggaca agatcagcat 540 gtgagcctgc tgagcaacaa cctgaacaag ttcgacgagg gcctggccct 600 gtgtggatcg cccccctgca ggtggccctg ctgatgggcc tgatctggga 660 gccagcgcct tctgcggcct gggcttcctg atcgtgctgg ccctgttcca 720 ggcagaatga tgatgaagta cagagaccag agagccggca agatcagcga 780 atcaccagcg agatgatcga gaacatccag agcgtgaagg cctactgctg 840 atggagaaga tgatcgagaa cctgagacag accgagctga agctgaccag 900 tacgtgagat acttcaacag cagcgccttc ttcttcagcg gcttcttcgt 960 agcgtgctgc cctacgccct gatcaagggc atcatcctga gaaagatctt 1020 agcttctgca tcgtgctgag aatggccgtg accagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgaca gcctgggcgc catcaacaag atccaggact tcctgcagaa 1140 aagaccctgg agtacaacct gaccaccacc gaggtggtga tggagaacgt 1200 cagctggacc ctaccagatc ggacagagag cttctggaga gcagcccctg aagcatcgcc gctgcacccc cagcctgatc cggccagctg ggcccacttc gctgctgcag ggccggcctg gagactggtg ggaggaggcc aaaggccgcc ggtgttcctg caccaccatc cgtgcagacc gcaggagtac gaccgccttc
- 179 043901 gcttcggcga gcgacgacag tcaacttcaa agaccagcct acagcggcag agaacatcat gccagctgga gcggcatcac aggacgccga aggagatctt ccagcaagat gctacttcta tgatgggctg agaccctgca agcagagctt ccatcaacag tcgaggagga agggcgaggc gaagaagaca acagaaagac gctgttcgag aaggccaagc agaacaacaa cctgttcttc agcaacttca gcctgctggg gatcgagaga ggccagctgc tggccgtggc gctgatggtg atcatgggcg agctggagcc aatcagcttc tgcagccagt tcagctggat cttcggcgtg agctacgacg agtacagata ggaggacatc agcaagttcg ccgagaagga cctgagcggc ggccagagag ccagaatcag cctgtacctg ctggacagcc ccttcggcta cgagagctgc gtgtgcaagc tgatggccaa ggagcacctg aagaaggccg acaagatcct cggcaccttc agcgagctgc agaacctgca cgacagcttc gaccagttca gcgccgagag cagattcagc ctggagggcg acgcccccgt caagcagacc ggcgagttcg gcgagaagag catcagaaag ttcagcatcg tgcagaagac cagcgacgag cccctggaga gaagactgag catcctgccc agaatcagcg tgatcagcac gagcgtgctg aacctgatga cccacagcgt caccgccagc accagaaagg tgagcctggc caacagaaag cacccccgtg cggcagcacc cagcgagggc catgcccggc cagaagcgtg caacatcgtg cctggccaga cctggacgtg caagaccaga gatcctgcac gcccgacttc aagaaacagc gagctggacc aaagaacagc ccccctgcag cctggtgccc cggccccacc gaaccagggc cccccaggcc
- 180 043901 aacctgaccg agctggacat ctacagcaga agactgagcc aggagaccgg 2460 agcgaggaga tcaacgagga ggacctgaag gagtgcttct tcgacgacat 2520 cccgccgtga ccacctggaa cacctacctg agatacatca ccgtgcacaa 2580 ttcgtgctga tctggtgcct ggtgatcttc ctggccgagg tggccgccag 2640 ctgtggctgc tgggcaacac ccccctgcag gacaagggca acagcaccca 2700 aacagctacg ccgtgatcat caccagcacc agcagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggccg acaccctgct ggccatgggc ttcttcagag gcctgcccct 2820 ctgatcaccg tgagcaagat cctgcaccac aagatgctgc acagcgtgct 2880 atgagcaccc tgaacaccct gaaggccggc ggcatcctga acagattcag 2940 gccatcctgg acgacctgct gcccctgacc atcttcgact tcatccagct 3000 gtgatcggcg ccatcgccgt ggtggccgtg ctgcagccct acatcttcgt 3060 cccgtgatcg tggccttcat catgctgaga gcctacttcc tgcagaccag 3120 aagcagctgg agagcgaggg cagaagcccc atcttcaccc acctggtgac 3180 ggcctgtgga ccctgagagc cttcggcaga cagccctact tcgagaccct 3240 gccctgaacc tgcacaccgc caactggttc ctgtacctga gcaccctgag 3300 atgagaatcg agatgatctt cgtgatcttc ttcatcgccg tgaccttcat 3360 accaccggcg agggcgaggg cagagtgggc atcatcctga ccctggccat 3420 agcaccctgc agtgggccgt gaacagcagc atcgacgtgg acagcctgat 3480 agcagagtgt tcaagttcat cgacatgccc accgagggca agcccaccaa 3540 ccctacaaga acggccagct gagcaaggtg atgatcatcg agaacagcca 3600 cctggagatc ggagagcatc gagcctgatc cctggtggtg cagcagaaac catctacgtg ggtgcacacc gcaggccccc caaggacatc gctgctgatc ggccaccgtg ccagcagctg cagcctgaag gttccacaag atggttccag cagcatcctg gaacatcatg gagaagcgtg gagcaccaag cgtgaagaag
- 181 043901 gacgacatct ggcccagcgg cggccagatg accgtgaagg acctgaccgc caagtacacc 3660 gagggcggca acgccatcct ggagaacatc agcttcagca tcagccccgg ccagagagtg 3720 ggcctgctgg gcagaaccgg cagcggcaag agcaccctgc tgagcgcctt cctgagactg 3780 ctgaacaccg agggcgagat ccagatcgac ggcgtgagct gggacagcat caccctgcag 3840 cagtggagaa aggccttcgg cgtgatcccc cagaaggtgt tcatcttcag cggcaccttc 3900 agaaagaacc tggaccccta cgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggtggccgac 3960 gaggtgggcc tgagaagcgt gatcgagcag ttccccggca agctggactt cgtgctggtg 4020 gacggcggct gcgtgctgag ccacggccac aagcagctga tgtgcctggc cagaagcgtg 4080 ctgagcaagg ccaagatcct gctgctggac gagcccagcg cccacctgga ccccgtgacc 4140 taccagatca tcagaagaac cctgaagcag gccttcgccg actgcaccgt gatcctgtgc 4200 gagcacagaa tcgaggccat gctggagtgc cagcagttcc tggtgatcga ggagaacaag 4260 gtgagacagt acgacagcat ccagaagctg ctgaacgaga gaagcctgtt cagacaggcc 4320 atcagcccca gcgacagagt gaagctgttc ccccacagaa acagcagcaa gtgcaagagc 4380 aagccccaga tcgccgccct gaaggaggag accgaggagg aggtgcagga caccagactg 4440 tga
4443 <210> 23 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 23 atgcagcgca gccccctgga gaaggccagc gtggtgagca agctgttctt cagctggacc 60 cgccccatcc tgcgcaaggg ctaccgccag cgcctggagc tgagcgacat ctaccagatc 120
- 182 043901 cccagcgtgg 180 ctggccagca 240 ttcatgttct 300 ctgctgggcc 360 atctacctgg 420 gccatcttcg 480 tacaagaaga 540 gtgagcctgc 600 gtgtggatcg 660 gccagcgcct 720 ggccgcatga 780 atcaccagcg 840 atggagaaga 900 tacgtgcgct 960 agcgtgctgc 1020 agcttctgca 1080 tggtacgaca 1140 aagaccctgg 1200 tgggaggagg 1260 accagcaacg 1320 acagcgccga agaagaaccc acggcatctt gcatcatcgc gcatcggcct gcctgcacca ccctgaagct tgagcaacaa cccccctgca tctgcggcct tgatgaagta agatgatcga tgatcgagaa acttcaacag cctacgccct tcgtgctgcg gcctgggcgc agtacaacct gcttcggcga gcgacgacag caacctgagc caagctgatc cctgtacctg cagctacgac gtgcctgctg catcggcatg gagcagccgc cctgaacaag ggtggccctg gggcttcctg ccgcgaccag gaacatccag cctgcgccag cagcgccttc gatcaagggc catggccgtg catcaacaag gaccaccacc gctgttcgag cctgttcttc gagaagctgg aacgccctgc ggcgaggtga cccgacaaca ttcatcgtgc cagatgcgca gtgctggaca ttcgacgagg ctgatgggcc atcgtgctgg cgcgccggca agcgtgaagg accgagctga ttcttcagcg atcatcctgc acccgccagt atccaggact gaggtggtga aaggccaagc agcaacttca agcgcgagtg gccgctgctt ccaaggccgt aggaggagcg gcaccctgct tcgccatgtt agatcagcat gcctggccct tgatctggga ccctgttcca agatcagcga cctactgctg agctgacccg gcttcttcgt gcaagatctt tcccctgggc tcctgcagaa tggagaacgt agaacaacaa gcctgctggg ggaccgcgag cttctggcgc gcagcccctg cagcatcgcc gctgcacccc cagcctgatc cggccagctg ggcccacttc gctgctgcag ggccggcctg gcgcctggtg ggaggaggcc caaggccgcc ggtgttcctg caccaccatc cgtgcagacc gcaggagtac gaccgccttc caaccgcaag cacccccgtg
- 183 043901 ctgaaggaca tcaacttcaa gatcgagcgc ggccagctgc tggccgtggc 1380 ggcgccggca agaccagcct gctgatggtg atcatgggcg agctggagcc 1440 aagatcaagc acagcggccg catcagcttc tgcagccagt tcagctggat 1500 accatcaagg agaacatcat cttcggcgtg agctacgacg agtaccgcta 1560 atcaaggcct gccagctgga ggaggacatc agcaagttcg ccgagaagga 1620 ctgggcgagg gcggcatcac cctgagcggc ggccagcgcg cccgcatcag 1680 gccgtgtaca aggacgccga cctgtacctg ctggacagcc ccttcggcta 1740 ctgaccgaga aggagatctt cgagagctgc gtgtgcaagc tgatggccaa 1800 atcctggtga ccagcaagat ggagcacctg aagaaggccg acaagatcct 1860 gagggcagca gctacttcta cggcaccttc agcgagctgc agaacctgca 1920 agcagcaagc tgatgggctg cgacagcttc gaccagttca gcgccgagcg 1980 atcctgaccg agaccctgca ccgcttcagc ctggagggcg acgcccccgt 2040 gagaccaaga agcagagctt caagcagacc ggcgagttcg gcgagaagcg 2100 atcctgaacc ccatcaacag catccgcaag ttcagcatcg tgcagaagac 2160 atgaacggca tcgaggagga cagcgacgag cccctggagc gccgcctgag 2220 gacagcgagc agggcgaggc catcctgccc cgcatcagcg tgatcagcac 2280 ctgcaggccc gccgccgcca gagcgtgctg aacctgatga cccacagcgt 2340 cagaacatcc accgcaagac caccgccagc acccgcaagg tgagcctggc 2400 aacctgaccg agctggacat ctacagccgc cgcctgagcc aggagaccgg 2460 agcgaggaga tcaacgagga ggacctgaag gagtgcttct tcgacgacat 2520 cggcagcacc cagcgagggc catgcccggc ccgcagcgtg caacatcgtg cctggcccgc cctggacgtg caagacccgc gatcctgcac gcccgacttc ccgcaacagc gagctggacc caagaacagc ccccctgcag cctggtgccc cggccccacc gaaccagggc cccccaggcc cctggagatc ggagagcatc
- 184 043901 cccgccgtga ccacctggaa cacctacctg cgctacatca ccgtgcacaa 2580 ttcgtgctga tctggtgcct ggtgatcttc ctggccgagg tggccgccag 2640 ctgtggctgc tgggcaacac ccccctgcag gacaagggca acagcaccca 2700 aacagctacg ccgtgatcat caccagcacc agcagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggccg acaccctgct ggccatgggc ttcttccgcg gcctgcccct 2820 ctgatcaccg tgagcaagat cctgcaccac aagatgctgc acagcgtgct 2880 atgagcaccc tgaacaccct gaaggccggc ggcatcctga accgcttcag 2940 gccatcctgg acgacctgct gcccctgacc atcttcgact tcatccagct 3000 gtgatcggcg ccatcgccgt ggtggccgtg ctgcagccct acatcttcgt 3060 cccgtgatcg tggccttcat catgctgcgc gcctacttcc tgcagaccag 3120 aagcagctgg agagcgaggg ccgcagcccc atcttcaccc acctggtgac 3180 ggcctgtgga ccctgcgcgc cttcggccgc cagccctact tcgagaccct 3240 gccctgaacc tgcacaccgc caactggttc ctgtacctga gcaccctgcg 3300 atgcgcatcg agatgatctt cgtgatcttc ttcatcgccg tgaccttcat 3360 accaccggcg agggcgaggg ccgcgtgggc atcatcctga ccctggccat 3420 agcaccctgc agtgggccgt gaacagcagc atcgacgtgg acagcctgat 3480 agccgcgtgt tcaagttcat cgacatgccc accgagggca agcccaccaa 3540 ccctacaaga acggccagct gagcaaggtg atgatcatcg agaacagcca 3600 gacgacatct ggcccagcgg cggccagatg accgtgaagg acctgaccgc 3660 gagggcggca acgccatcct ggagaacatc agcttcagca tcagccccgg 3720 gagcctgatc cctggtggtg cagccgcaac catctacgtg ggtgcacacc gcaggccccc caaggacatc gctgctgatc ggccaccgtg ccagcagctg cagcctgaag gttccacaag ctggttccag cagcatcctg gaacatcatg gcgcagcgtg gagcaccaag cgtgaagaag caagtacacc ccagcgcgtg
- 185 043901 ggcctgctgg gccgcaccgg cagcggcaag agcaccctgc tgagcgcctt cctgcgcctg 3780 ctgaacaccg agggcgagat ccagatcgac ggcgtgagct gggacagcat caccctgcag 3840 cagtggcgca aggccttcgg cgtgatcccc cagaaggtgt tcatcttcag cggcaccttc 3900 cgcaagaacc tggaccccta cgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggtggccgac 3960 gaggtgggcc tgcgcagcgt gatcgagcag ttccccggca agctggactt cgtgctggtg 4020 gacggcggct gcgtgctgag ccacggccac aagcagctga tgtgcctggc ccgcagcgtg 4080 ctgagcaagg ccaagatcct gctgctggac gagcccagcg cccacctgga ccccgtgacc 4140 taccagatca tccgccgcac cctgaagcag gccttcgccg actgcaccgt gatcctgtgc 4200 gagcaccgca tcgaggccat gctggagtgc cagcagttcc tggtgatcga ggagaacaag 4260 gtgcgccagt acgacagcat ccagaagctg ctgaacgagc gcagcctgtt ccgccaggcc 4320 atcagcccca gcgaccgcgt gaagctgttc ccccaccgca acagcagcaa gtgcaagagc 4380 aagccccaga tcgccgccct gaaggaggag accgaggagg aggtgcagga cacccgcctg 4440 taa
4443 <210> 24 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 24 atgcagagaa gccccctgga gaaggccagc gtggtgagca agctgttctt cagctggacc 60 agacccatcc tgagaaaggg ctacagacag agactggagc tgagcgacat ctaccagatc 120 cccagcgtgg acagcgccga caacctgagc gagaagctgg agagagagtg ggacagagag 180 ctggccagca agaagaaccc caagctgatc aacgccctga gaagatgctt cttctggaga
- 186 043901 gcagcccctg
240 ttcatgttct acggcatctt cctgtacctg ggcgaggtga ccaaggccgt 300 ctgctgggca gaatcatcgc cagctacgac cccgacaaca aggaggagag 360 atctacctgg gcatcggcct gtgcctgctg ttcatcgtga gaaccctgct 420 gccatcttcg gcctgcacca catcggcatg cagatgagaa tcgccatgtt 480 tacaagaaga ccctgaagct gagcagcaga gtgctggaca agatcagcat 540 gtgagcctgc tgagcaacaa cctgaacaag ttcgacgagg gcctggccct 600 gtgtggatcg cccccctgca ggtggccctg ctgatgggcc tgatctggga 660 gccagcgcct tctgcggcct gggcttcctg atcgtgctgg ccctgttcca 720 ggcagaatga tgatgaagta cagggaccag agagccggca agatcagcga 780 atcaccagcg agatgatcga gaacatccag agcgtgaagg cctactgctg 840 atggagaaga tgatcgagaa cctgagacag accgagctga agctgaccag 900 tacgtgagat acttcaacag cagcgccttc ttcttcagcg gcttcttcgt 960 agcgtgctgc cctacgccct gatcaagggc atcatcctga gaaagatctt 1020 agcttctgca tcgtgctgag aatggccgtg accagacagt tcccctgggc 1080 tggtacgaca gcctgggcgc catcaacaag atccaggact tcctgcagaa 1140 aagaccctgg agtacaacct gaccaccacc gaggtggtga tggagaacgt 1200 tgggaggagg gcttcggcga gctgttcgag aaggccaagc agaacaacaa 1260 accagcaacg gcgacgacag cctgttcttc agcaacttca gcctgctggg 1320 ctgaaggaca tcaacttcaa gatcgagaga ggccagctgc tggccgtggc 1380 ggcgccggca agaccagcct gctgatggtg atcatgggcg agctggagcc aagcatcgcc gctgcacccc cagcctgatc cggccagctg ggcccacttc gctgctgcag ggccggcctg gagactggtg ggaggaggcc aaaggccgcc ggtgttcctg caccaccatc cgtgcagacc gcaggagtac gaccgccttc caacagaaag cacccccgtg cggcagcacc cagcgagggc
- 187 043901
1440
aagatcaagc 1500 acagcggcag aatcagcttc tgcagccagt tcagctggat catgcccggc
accatcaagg 1560 agaacatcat cttcggcgtg agctacgacg agtacagata cagaagcgtg
atcaaggcct 1620 gccagctgga ggaggacatc agcaagttcg ccgagaagga caacatcgtg
ctgggcgagg 1680 gcggcatcac cctgagcggc ggccagagag ccagaatcag cctggccaga
gccgtgtaca 1740 aggacgccga cctgtacctg ctggacagcc ccttcggcta cctggacgtg
ctgaccgaga 1800 aggagatctt cgagagctgc gtgtgcaagc tgatggccaa caagaccaga
atcctggtga 1860 ccagcaagat ggagcacctg aagaaggccg acaagatcct gatcctgcac
gagggcagca 1920 gctacttcta cggcaccttc agcgagctgc agaacctgca gcccgacttc
agcagcaagc 1980 tgatgggctg cgacagcttc gaccagttca gcgccgagag aagaaacagc
atcctgaccg 2040 agaccctgca cagattcagc ctggagggcg acgcccccgt gagctggacc
gagaccaaga 2100 agcagagctt caagcagacc ggcgagttcg gcgagaagag aaagaacagc
atcctgaacc 2160 ccatcaacag catcagaaag ttcagcatcg tgcagaagac ccccctgcag
atgaacggca 2220 tcgaggagga cagcgacgag cccctggaga gaagactgag cctggtgccc
gacagcgagc 2280 agggcgaggc catcctgccc agaatcagcg tgatcagcac cggccccacc
ctgcaggcca 2340 gaagaagaca gagcgtgctg aacctgatga cccacagcgt gaaccagggc
cagaacatcc 2400 acagaaagac caccgccagc accagaaagg tgagcctggc cccccaggcc
aacctgaccg 2460 agctggacat ctacagcaga agactgagcc aggagaccgg cctggagatc
agcgaggaga 2520 tcaacgagga ggacctgaag gagtgcttct tcgacgacat ggagagcatc
cccgccgtga 2580 ccacctggaa cacctacctg agatacatca ccgtgcacaa gagcctgatc
ttcgtgctga tctggtgcct ggtgatcttc ctggccgagg tggccgccag cctggtggtg
- 188 043901 tgggcaacac ccgtgatcat acaccctgct tgagcaagat tgaacaccct acgacctgct ccatcgccgt tggccttcat agagcgaggg ccctgagagc tgcacaccgc agatgatctt agggcgaggg agtgggccgt tcaagttcat acggccagct ggcccagcgg acgccatcct gcagaaccgg agggcgagat ccccctgcag gacaagggca acagcaccca caccagcacc agcagctact acgtgttcta ggccatgggc ttcttcagag gcctgcccct cctgcaccac aagatgctgc acagcgtgct gaaggccggc ggcatcctga acagattcag gcccctgacc atcttcgact tcatccagct ggtggccgtg ctgcagccct acatcttcgt catgctgaga gcctacttcc tgcagaccag caggagcccc atcttcaccc acctggtgac cttcggcaga cagccctact tcgagaccct caactggttc ctgtacctga gcaccctgag cgtgatcttc ttcatcgccg tgaccttcat cagagtgggc atcatcctga ccctggccat gaacagcagc atcgacgtgg acagcctgat cgacatgccc accgagggca agcccaccaa gagcaaggtg atgatcatcg agaacagcca cggccagatg accgtgaagg acctgaccgc ggagaacatc agcttcagca tcagccccgg cagcggcaag agcaccctgc tgagcgcctt ccagatcgac ggcgtgagct gggacagcat cagcagaaac catctacgtg ggtgcacacc gcaggccccc caaggacatc gctgctgatc ggccaccgtg ccagcagctg cagcctgaag gttccacaag atggttccag cagcatcctg gaacatcatg gagaagcgtg gagcaccaag cgtgaagaag caagtacacc ccagagagtg cctgagactg caccctgcag
- 189 043901
3840 cagtggagaa aggccttcgg cgtgatcccc cagaaggtgt tcatcttcag cggcaccttc 3900 agaaagaacc tggaccccta cgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa ggtggccgac 3960 gaggtgggcc tgagaagcgt gatcgagcag ttccccggca agctggactt cgtgctggtg 4020 gacggcggct gcgtgctgag ccacggccac aagcagctga tgtgcctggc cagaagcgtg 4080 ctgagcaagg ccaagatcct gctgctggac gagcccagcg cccacctgga ccccgtgacc 4140 taccagatca tcagaagaac cctgaagcag gccttcgccg actgcaccgt gatcctgtgc 4200 gagcacagaa tcgaggccat gctggagtgc cagcagttcc tggtgatcga ggagaacaag 4260 gtgagacagt acgacagcat ccagaagctg ctgaacgaga gaagcctgtt cagacaggcc 4320 atcagcccca gcgacagagt gaagctgttc ccccacagaa acagcagcaa gtgcaagagc 4380 aagccccaga tcgccgccct gaaggaggag accgaggagg aggtgcagga caccagactg 4440 tga
4443 <210> 25 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 25 atgcagaggt cacctctgga aaaggctagc gtggtcagca agctattttt ttcctggacc 60 cgcccgatac tcaggaaggg ctaccgacag cggctggagc tgagtgacat ttatcagatt 120 ccctccgtcg attccgctga caacctgtct gagaaactgg agcgggaatg ggatagggaa 180 ctggcgtcca aaaaaaaccc caaactcatc aatgcactcc gcagatgctt cttctggcgg 240 tttatgtttt atggcatatt cctgtatctg ggggaggtga cgaaagccgt gcagccgctg 300
- 190 043901 ctgcttggtc gcattatcgc gtcatacgat ccagataaca aggaggaaag 360 atctatctcg ggatagggct gtgcctgctc ttcattgtgc ggactcttct 420 gccattttcg gtctgcatca tataggtatg cagatgagaa ttgcgatgtt 480 tacaaaaaaa cgcttaagct aagttcaagg gtgctagata agatatcgat 540 gtgtctctgc ttagcaacaa cctcaataaa ttcgacgaag gccttgcact 600 gtgtggatcg cccctctgca ggtggctctg ctgatggggt taatatggga 660 gcctccgctt tttgtggcct ggggtttctc atcgtgttgg ccttgtttca 720 ggacgtatga tgatgaaata tagggatcag agggctggca aaatctctga 780 attacgagtg aaatgattga gaacatccag tcagtgaagg cctattgctg 840 atggaaaaaa tgattgagaa cctacgccag actgagctga agttaaccag 900 tatgtgcgct actttaacag tagcgcattt ttcttctccg gttttttcgt 960 agtgtgttgc cgtatgcctt aatcaaggga ataatactcc ggaagatttt 1020 agcttctgta tcgtgttgcg gatggccgtc acccggcagt ttccctgggc 1080 tggtacgatt ctctcggagc aattaacaaa atccaagact ttctacaaaa 1140 aagaccctgg agtacaatct gaccaccaca gaagtcgtaa tggagaatgt 1200 tgggaagagg gctttggcga actctttgaa aaggccaagc agaacaataa 1260 acctccaacg gggacgacag cttatttttc agcaattttt ctttgctcgg 1320 ctgaaagata ttaactttaa gatcgagcgc ggacaactcc tggctgtcgc 1380 ggagctggaa aaacatcact gcttatggtg ataatgggag aactcgaacc 1440 aaaataaagc actctggacg gattagtttt tgctcccagt tctcgtggat 1500 aagtatcgct cttgcacccc ctcattgatt cggccagctg ggcccacttc gctgttgcag ggcagggctg gcgcctggtt ggaggaggcc aaaagccgcc ggtgtttctt cactaccatc agtacagact gcaggagtac aactgccttc caaccggaag gacccctgta cggcagcact aagcgaggga aatgcctggc
- 191 043901 accattaagg agaatatcat ctttggagtg agttacgacg aataccggta 1560 atcaaggctt gtcaactcga ggaggacatt tctaaattcg ccgaaaaaga 1620 ctgggcgaag gaggcattac actgagcggg ggtcagagag ctcgaattag 1680 gcagtctata aagacgccga tctttacctg ctggattccc cttttgggta 1740 ctgacagaga aggaaatctt tgaatcatgt gtctgtaaac tgatggccaa 1800 attctagtga cttcgaaaat ggagcacctg aaaaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggtctt cctacttcta cggcaccttc tcagagttgc agaacttaca 1920 tcatctaagc ttatggggtg cgactcgttt gaccagttct ccgctgaaag 1980 atcttaacgg aaactcttca caggttctca ttagagggag atgcgccggt 2040 gagacaaaaa aacagtcttt caaacagaca ggagagtttg gcgagaagag 2100 atcctcaatc ccatcaattc tattagaaag tttagcatcg tccaaaaaac 2160 atgaatggga ttgaggagga cagtgatgag cctttggaac gaagactgtc 2220 gatagcgaac agggtgaggc catccttcct aggatctcgg tcataagtac 2280 ctgcaggcca ggcgacgtca aagtgtcctc aatcttatga cgcacagtgt 2340 cagaacatcc atcgtaagac gacagcttca actcgaaagg tcagtctagc 2400 aatcttacag agctggacat ttattcccgc cgcctcagtc aggagaccgg 2460 tcagaggaaa ttaatgaaga ggatctgaag gaatgcttct ttgatgacat 2520 cccgctgtta ctacctggaa cacatatctg agatatatta ccgtccataa 2580 tttgtactga tatggtgctt ggtgattttc ctggcagagg ttgcggcgag 2640 ctatggctcc ttggaaacac tcccctgcag gataagggga actccactca 2700 ccggtccgtt taatatagtg cctcgcccga tttggatgtt taagactagg gatactccat acctgatttt acgaaacagc gtcctggaca aaaaaactca accattgcag cctggtaccc agggcccaca gaatcagggg tccacaagcc attggaaata ggaatcgatc gagcttaatc tttggtcgtg tagcaggaat
- 192 043901 aacagctatg ccgtgatcat cacctctacc tcctcttatt acgtgtttta 2760 ggtgttgcgg ataccctgtt ggcaatgggg ttctttagag gactacccct 2820 ctgatcaccg tttcgaagat cttgcaccac aagatgcttc atagcgttct 2880 atgagcaccc ttaatacact gaaagcagga ggtatcctta accgcttttc 2940 gctatactcg acgatttgct cccattgacc atcttcgact tcattcagct 3000 gtgatcggcg ccattgccgt ggtcgcagtg ttacagccat atattttcgt 3060 cccgtcatcg tggcatttat catgctgcgc gcatatttct tacagacatc 3120 aagcagctgg aatctgaggg cagatctcct atttttacac acctggttac 3180 ggcctgtgga ccctgcgtgc tttcggtcgc caaccctact ttgagactct 3240 gctctgaatt tacatactgc caattggttc ctatacctta gtacccttcg 3300 atgcggatag aaatgatctt cgtgattttc ttcatcgcag tcactttcat 3360 acgaccggtg agggcgaggg cagggtgggc atcattctga ctttggccat 3420 tcaacactcc agtgggccgt taattcaagc attgatgtgg attccttgat 3480 agcagggtat ttaaattcat agacatgccc accgagggca agccaacaaa 3540 ccatacaaaa atggccaact aagcaaggtc atgattatcg agaattctca 3600 gacgacattt ggccttccgg gggtcaaatg actgtaaagg acctgacggc 3660 gagggcggta atgctatctt ggagaacatc tctttcagca tctcccctgg 3720 ggactgctcg ggcggacagg ctccggaaag tctacgctcc tttcagcatt 3780 ctgaacaccg aaggtgagat tcagattgac ggggtctctt gggactccat 3840 caatggagga aggcattcgg tgtaatcccc caaaaggttt ttatcttctc 3900 catatacgtc agttcacacc ccaagctcct caaagacatc gctcctcatt agccaccgtg tcagcaactg cagcctgaag cttccataag gtggttccag ctctattttg gaacattatg gcgttccgtc atctaccaag tgtgaaaaag taaatacact ccagagagtg ccttagactt cacacttcag cggaacattt
- 193 043901 agtagcagac
cgtaagaatc 3960 tggacccgta cgagcagtgg tcagatcagg agatctggaa
gaggtcgggc 4020 tacggagcgt tattgaacag tttcctggca aactggactt
gacggaggct 4080 gtgtgctgag tcacggccat aaacaactga tgtgcttagc
ctcagcaagg 4140 caaagatttt actgctggat gaaccaagcg cccaccttga
tatcaaatca 4200 tcagaagaac tcttaaacag gcgttcgccg actgcacagt
gagcacagaa 4260 tagaagccat gctggaatgt caacagtttc tcgtgattga
gtgcgccagt 4320 acgatagcat ccagaagtta ctcaatgaaa ggtcactctt
atctcaccca 4380 gcgaccgcgt taagctgttt ccacaccgaa acagttccaa
aagccacaga 4440 ttgctgcact gaaggaagag acagaagaag aagttcagga
cgttttggtg taggtctgtt tccagtgaca gatcctgtgt ggagaacaag caggcaggcc gtgcaaaagt cactcggctc tga 4443 <210> 26 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 26 atgcagagga gcccactgga gaaagcctcc gtggtgagta aactcttttt 60 agacccatcc tgcgaaaagg atacaggcag cgcctcgagt tgtcagatat 120 ccttctgtgg actcagctga caatttgagt gagaagctgg agcgggagtg 180 ctggcgagca aaaaaaaccc caagcttatc aatgctctgc gccgctgctt 240 ttcatgtttt atgggatctt cctgtacctg ggggaggtca ccaaagctgt 300 cttcttggcc gcatcatcgc cagctatgac cctgataata aagaagaaag 360 atttatctgg gaattggcct ctgcttgctc ttcatcgtcc gcacccttct 420 tagttggacc ctaccagatt ggatagagag tttctggagg tcagccgctc gtctattgct gctgcaccct
- 194 043901 gccatttttg 480 tacaaaaaga 540 gtcagcctgc 600 gtgtggattg 660 gcctctgctt 720 ggaagaatga 780 atcaccagtg 840 atggagaaga 900 tatgttcgct 960 tctgttctgc 1020 agtttttgca 1080 tggtacgatt 1140 aaaactttag 1200 tgggaggagg 1260 acgagcaatg 1320 ttgaaagata 1380 ggagctggta 1440 aaaatcaagc 1500 accattaagg 1560 atcaaagcct 1620 gccttcacca ccctgaaact tgtccaacaa cacctctgca tctgtgggct tgatgaaata aaatgattga tgattgagaa atttcaacag catatgcact tcgttctcag ccttgggggc aatacaacct gttttggaga gggacgactc taaacttcaa aaacatctct acagtgggag aaaacatcat gtcagttgga catcggcatg ttcctcaaga tcttaacaaa ggtggccctg gggctttttg cagagatcag aaatattcag cctgaggcag cagcgccttc gataaaaggc gatggccgtc catcaacaag caccaccact attgttcgag tctcttcttc gatcgagagg tctcatggtg aatctcattc atttggagtg ggaggacatc caaatgagaa gtgttagata tttgatgaag ttgatgggac attgtactgg cgggccggga agcgtgaaag acagagctca ttcttcagtg attattttac acaagacagt attcaagatt gaagtggtca aaggcaaagc agcaactttt ggccagctct atcatggggg tgcagccagt tcctatgatg tccaagtttg ttgccatgtt aaatatccat gcttggcgct ttatatggga cactttttca agatatcaga cctactgctg agctcactcg gcttctttgt gaaagatctt tcccctgggc tcttgcaaaa tggaaaatgt agaataacaa cactgctcgg tggctgtggc aactggagcc tttcctggat agtaccgcta cagagaaaga ctccctcatt tggtcagctg ggcccacttc gctgcttcaa ggctgggctc gcgacttgtg ggaagaagcc gaaggctgct tgtcttcctg caccaccatc tgtgcagacc acaagaatat gacagccttt caacaggaag gacccctgtg aggctccact ttccgaagga catgcccggc ccggtcagtc caacattgtg
- 195 043901 cttggagagg ggggtatcac tctttctgga ggacaaagag ccaggatctc 1680 gcagtctaca aggatgcaga cctctacttg ttggacagtc ccttcggcta 1740 ctgactgaaa aagaaatttt tgaaagctgt gtgtgcaaac tgatggcaaa 1800 attcttgtca ccagcaagat ggaacatctg aagaaagcgg acaaaattct 1860 gaagggagct cctacttcta tggaacattt agcgagcttc agaacctaca 1920 tcctccaaat taatgggctg tgactccttc gaccagttct ctgcagaaag 1980 atactcacag agaccctcca ccgcttctcc cttgagggag atgccccagt 2040 gaaaccaaga agcagtcctt taagcagact ggcgagtttg gtgaaaagag 2100 attctcaatc caattaacag tattcgcaag ttcagcattg tccagaagac 2160 atgaatggca tcgaagaaga tagtgacgag ccgctggaga gacggctgag 2220 gattcagaac agggggaggc catcctgccc cggatcagcg tcatttccac 2280 ttacaagcac ggcgccggca gagtgtttta aatctcatga cccattcagt 2340 caaaatatcc acaggaagac tacagcttct acccggaaag tgtctctggc 2400 aatctgaccg agctggacat ctacagcagg aggctctccc aggaaacagg 2460 tctgaagaga ttaatgaaga ggatcttaaa gagtgcttct ttgatgacat 2520 cccgcggtga ccacatggaa cacctacctt agatatatta ctgtccacaa 2580 tttgtcctca tctggtgcct ggttattttc ctcgctgagg tggcggccag 2640 ctctggctgc tgggcaacac tcctctccag gacaagggca atagtactca 2700 aattcttatg ccgtcatcat tacaagcacc tccagctact acgtgttcta 2760 ggcgtggctg acaccctcct ggccatgggt ttcttccggg gcctgccttt 2820 tttggcccgg cctcgacgtg caagaccagg gattctgcat gccagacttc aagaaactct ttcttggaca gaaaaattca acccctccag tctggtgcca aggccccaca gaaccagggc ccctcaggcc gctggaaata ggagagcatc gagcctcata tcttgttgtg cagcagaaat catctatgtg ggtgcacacc
- 196 043901 ctcatcacag tgtcaaaaat tctgcaccat aaaatgcttc attctgtcct 2880 atgagcactt tgaacacatt gaaggctggc ggcatcctca acagattttc 2940 gctatcctgg atgatctcct ccccctgaca atctttgact ttatccagct 3000 gtgattggag ccatagcagt ggttgctgtc ctgcagccct acatttttgt 3060 cccgtgattg ttgcctttat tatgctcaga gcttacttcc tgcaaacttc 3120 aaacagctag aatctgaggg ccggagcccc atttttaccc acctggtgac 3180 ggactgtgga ctctgagagc attcgggcga cagccttact ttgagacact 3240 gccctgaact tgcacactgc caactggttt ctttacctga gcacactccg 3300 atgcggatag agatgatctt cgtcatcttt tttatagctg taaccttcat 3360 acaacaggag aaggagaggg cagggtggga atcatcctca cgctggctat 3420 tccaccttgc agtgggccgt gaattccagt atagatgtgg attctctaat 3480 tcccgggtgt ttaaattcat tgatatgcct actgagggga aacccaccaa 3540 ccttataaga atggacagct gagcaaggtg atgataattg agaacagcca 3600 gatgacattt ggcccagcgg gggccagatg actgtgaagg acctgacggc 3660 gaaggtggaa atgccatttt ggaaaacatc agcttctcaa tctctcctgg 3720 ggattgctgg gtcgcacggg cagcggcaaa tcaaccctgc tcagtgcctt 3780 ctgaatacag aaggcgaaat ccaaattgac ggggtgagct gggacagcat 3840 cagtggagaa aagcatttgg ggtcattcca cagaaagttt tcatcttctc 3900 agaaagaacc tggaccccta tgagcagtgg agcgaccagg agatctggaa 3960 gaagttggcc tgcggagtgt gatagaacaa tttcctggca agctggattt 4020 gcaggcaccc taaagatatt tctgctgatc ggccaccgtg tcaacagctc ttccctgaag gttccacaag ctggttccag ttctatcctt gaacataatg gaggagtgtc gtcaacaaaa cgtgaagaag caagtacacc gcagagagtt ccttcggctc caccctgcag tggcactttc ggttgcagat tgtgctggta
- 197 043901 gatggaggct gcgtgctgtc ccacggccac aaacagctga tgtgcctcgc ccgctccgtt 4080 ctttcaaagg ccaaaatctt gcttttggat gagcccagtg ctcacctcga cccagtgacc 4140 tatcagataa tccgcaggac cttaaagcaa gcttttgccg actgcaccgt catactgtgt 4200 gagcaccgga ttgaagcaat gctggaatgc cagcagtttc tggtgatcga ggagaataag 4260 gtccggcagt acgacagcat ccagaagttg ttgaatgagc gcagcctttt ccgccaggcc 4320 atctccccat ctgacagagt caagctgttt ccacatagga actcctctaa gtgcaagtcc 4380 aagccccaga tcgctgccct caaggaggaa actgaggaag aggtgcagga tacccgcctg 4440 tga
4443 <210> 27 <211> 4443 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Химически синтезированный олигонуклеотид < 400> 27 atgcaacgga gtcctctgga aaaagcctct gtcgtatcta agcttttctt cagttggaca 60 cgcccgattt tgagaaaggg ttatcggcaa cgcttggaac ttagtgacat ctaccaaatt 120 ccaagtgtag actcagccga taacttgagc gaaaagctcg aacgagagtg ggatcgagaa 180 ctggctagca aaaaaaatcc caaactcata aatgccctgc gacgctgttt cttttggcga 240 tttatgtttt acggtatttt cctttatttg ggtgaggtca cgaaggctgt acagccactg 300 ctgctgggtc gcatcattgc ctcttacgac cctgacaaca aagaggagcg gtcaatagct 360 atctaccttg gtataggact ttgcttgctc ttcatagtcc gcacgttgct tctccaccct 420 gctatatttg gtctccatca cattgggatg caaatgcgga tcgcgatgtt cagtcttata 480 tataaaaaga ctcttaaact ttccagccgg gttctggata agatctctat tggtcaactg
- 198 043901 ggcccatttt
540 gtatctcttt tgtctaacaa cctgaataag ttcgacgagg gccttgcatt 600 gtatggattg cccctttgca agtcgccctc ctgatgggat tgatctggga 660 gctagtgctt tttgcggatt gggattcctc atagtccttg cgctctttca 720 ggacgcatga tgatgaagta tcgcgaccaa cgagctggca agatcagtga 780 ataaccagtg aaatgataga gaacatccag agcgtaaaag cttactgttg 840 atggaaaaga tgattgagaa ccttcgccag acagaactta aacttacacg 900 tatgtccggt acttcaactc ttcagcattt ttttttagtg gcttctttgt 960 tccgtccttc cgtatgcact tatcaagggt ataatactta ggaaaatctt 1020 agtttttgca tagtccttcg catggcagta actcgccaat ttccctgggc 1080 tggtacgact cacttggcgc aattaacaaa attcaagatt tcctccaaaa 1140 aaaaccttgg aatacaacct taccaccaca gaagttgtaa tggaaaatgt 1200 tgggaggaag gtttcggcga actttttgag aaggcgaagc aaaataacaa 1260 acatcaaacg gtgacgattc actgttcttt tctaacttta gccttcttgg 1320 ctgaaggaca taaactttaa gattgaacgg ggtcaacttc tcgcggtcgc 1380 ggagcgggga aaacgagcct gctgatggtg ataatggggg agttggagcc 1440 aagatcaagc atagtggtag aattagcttc tgcagtcaat ttagttggat 1500 acgatcaaag aaaatataat ctttggggta tcctacgatg aatacaggta 1560 ataaaagcgt gccagcttga agaagacatt tcaaagtttg ctgagaagga 1620 cttggagaag gaggtatcac cctgtctggg ggtcaacgag cgaggatctc 1680 gccgtctaca aggacgcgga cctctatctg ttggattcac cgttcggata actcctgcaa ggcgggactt acggcttgta ggaagaagcg aaaggccgct agtgttcctg cacaacaatc agttcagacg gcaagagtat cacagccttc taatcggaaa gacgcccgtc agggagtact ctcagaaggc tatgccgggc ccgatcagtg taatatcgta cctggcacgc tttggacgtg
- 199 043901 taaaaccaga
1740 cttacggaga aagaaatatt tgagagctgt gtttgcaagc tcatggcaaa 1800 atattggtta caagcaagat ggagcatctt aagaaagcag ataaaatcct 1860 gagggctctt catacttcta cgggacgttt tctgagttgc agaacctcca 1920 agctctaagc tgatgggctg tgattccttt gatcagttta gtgcggaaag 1980 atactcaccg aaacactgca caggttctct ctggagggcg acgccccggt 2040 gagacgaaga agcagtcctt caaacagaca ggcgagtttg gggagaaaag 2100 atactcaacc cgattaacag cattcgcaag ttcagtatag tacaaaagac 2160 atgaacggta tagaggaaga ttctgatgag ccactggaaa gacggctttc 2220 gacagtgaac agggagaggc aatactgcct cggatcagcg ttatctctac 2280 ttgcaagctc ggcgccgaca gtcagtcttg aatcttatga ctcatagtgt 2340 cagaatatcc atcgcaagac caccgcaagt acaaggaaag tgagcttggc 2400 aaccttactg aacttgatat ctactcacgg cgactttcac aggagaccgg 2460 agtgaagaaa ttaacgagga ggacctcaag gagtgcttct tcgatgacat 2520 cccgcagtca caacctggaa cacttatctg aggtatataa cagttcacaa 2580 tttgtactta tttggtgttt ggtaattttc ctggcggagg ttgctgcttc 2640 ctttggctcc tcgggaatac accgctccaa gacaaaggca actctaccca 2700 aattcatatg cagtgattat aaccagtaca tcatcttatt acgttttcta 2760 ggggtagctg acacgctgtt ggcgatgggc ttctttaggg gcctcccctt 2820 cttatcacgg tgagtaaaat cctgcatcac aaaatgcttc attctgtact 2880 atgagtacgc ttaatacgct gaaagcagga gggatactga atcggttcag gatattgcac gccggatttc acgaaacagt ttcctggaca gaaaaatagc cccgttgcag tctcgttccg aggacctact taatcaaggc acctcaagca acttgaaatt ggaatcaatc gagcctcatt tttggtcgtc tagtaggaac tatttatgtc ggtacacacc ccaagcgccg caaggacatc
- 200 043901 ccttctcata
2940 gccattctgg atgacctgct tccattgaca atatttgatt tcattcagct 3000 gttattggag ccatagcggt ggtggctgtg cttcagcctt atatattcgt 3060 cccgttatag tggcatttat aatgctcagg gcctactttc tccagacttc 3120 aagcaactcg aatcagaagg aaggtcacct attttcacac atcttgtgac 3180 ggcttgtgga cgctgcgggc cttcggaaga caaccatatt ttgaaactct 3240 gctttgaatc ttcatactgc gaactggttc ctgtatttga gtactttgcg 3300 atgaggatag aaatgatatt cgttatcttc tttatcgcgg ttacgttcat 3360 actacggggg agggtgaggg tagagtgggc ataatactga ccctcgccat 3420 tccaccctgc agtgggcggt aaacagcagc atagatgtgg attctttgat 3480 agcagggttt ttaagtttat cgatatgccg acggaaggaa agcccactaa 3540 ccctataaaa atggacagct tagcaaagta atgataatcg agaatagcca 3600 gatgacatat ggccttccgg aggccaaatg actgttaaag atctgaccgc 3660 gagggcggca acgcaatact cgaaaacata agcttttcca taagccccgg 3720 ggtcttctgg ggaggactgg ctccggaaaa tcaacgttgc ttagcgcgtt 3780 cttaacactg aaggtgagat ccaaatagat ggcgttagtt gggactctat 3840 caatggcgga aagctttcgg cgtcatacct cagaaggtgt tcatctttag 3900 aggaagaact tggatcccta cgaacaatgg agtgatcaag aaatatggaa 3960 gaggtaggct tgcgcagtgt cattgaacaa ttcccaggga aactcgactt 4020 gacggcggtt gcgtcttgtc acacgggcac aaacagttga tgtgtttggc 4080 ttgtctaagg cgaagattct gttgctcgac gaaccgagtg ctcatcttga tgccacagtt ccagcagttg ttccttgaag cttccacaaa ctggttccag aagtatcctc gaacattatg gcgcagtgtg aagcacgaaa tgtgaaaaag taaatatacc ccaacgcgtg tttgcggctc aacactgcaa cggaacgttc agtggcagat tgtactggtg ccgcagtgtt tcccgtcacc
- 201 043901
4140 taccaaatca tcagaaggac gttgaagcaa gctttcgccg actgcactgt aatcctttgt 4200 gagcatagga tcgaagcaat gctcgagtgc caacagttct tggttataga ggagaataag 4260 gttcggcaat acgactcaat acagaaactg cttaatgagc ggtcactctt tcgacaagct 4320 atctctccta gtgacagggt aaagcttttt cctcatcgga attccagcaa gtgtaagagt 4380 aaaccacaga tcgccgccct taaagaggag accgaagaag aggtgcagga tacgagactt 4440 tag 4443

Claims (34)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ лечения кистозного фиброза (CF), предусматривающий стадию введения субъекту, нуждающемуся в лечении, композиции, содержащей мРНК, кодирующую белок-регулятор трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR), где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1, где концентрация мРНК составляет по меньшей мере 0,4 мг/мл, где стадия введения предусматривает ингаляцию.
  2. 2. Способ по п.1, где концентрация мРНК составляет по меньшей мере 0,5 мг/мл.
  3. 3. Способ по п.1, где концентрация мРНК составляет по меньшей мере 0,6 мг/мл.
  4. 4. Способ по п.1, где концентрация мРНК находится в диапазоне от 0,4 мг/мл до 0,8 мг/мл.
  5. 5. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1.
  6. 6. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1.
  7. 7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1.
  8. 8. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, идентичную по отношению к SEQ ID NO: 1.
  9. 9. Способ по любому из предыдущих пунктов, где композицию распыляют перед ингаляцией.
  10. 10. Способ по любому из предыдущих пунктов, где композицию хранят в виде замороженной стерильной суспензии до введения.
  11. 11. Способ по любому из предыдущих пунктов, где композицию хранят в одноразовом флаконе до введения.
  12. 12. Способ по п.11, где одноразовый флакон содержит менее 5,0 мл композиции.
  13. 13. Способ по любому из предыдущих пунктов, где дозировка мРНК, кодирующей белок CFTR, находится в диапазоне от 8 мг до 24 мг.
  14. 14. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, дополнительно содержит последовательность 5'-нетранслируемой области (UTR) под SEQ ID NO: 4.
  15. 15. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, дополнительно содержит последовательность 3'-нетранслируемой области (UTR) под SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6.
  16. 16. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, инкапсулирована в наночастицу.
  17. 17. Способ по п.16, где наночастица представляет собой липосому.
  18. 18. Способ по п.17, где липосома содержит один или более катионных липидов, один или более некатионных липидов и один или более PEG-модифицированных липидов.
  19. 19. Способ по п.18, где липосома содержит не более трех отличающихся липидных компонентов.
  20. 20. Способ по п.19, где один отличающийся липидный компонент представляет собой катионный липид на основе стерина.
  21. 21. Способ по любому из пп.17-20, где липосома имеет размер менее приблизительно 100 нм.
  22. 22. Способ по п.21, где липосома имеет размер, находящийся в диапазоне от 40 нм до 60 нм.
    - 202 043901
  23. 23. Способ по п.19, где не более трех отличающихся липидных компонентов представляют собой катионный липид, некатионный липид и PEG-модифицированный липид.
  24. 24. Способ по любому из пп.19-23, где липосома содержит холестериновый сложный эфир имидазола (ICE), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DOPE) и 1,2-димиристоил-sn-глицерин, метоксиполиэтиленгликоль (DMG-PEG-2K).
  25. 25. Способ по п.24, где ICE и DOPE присутствуют в молярном соотношении >1:1.
  26. 26. Способ по п.24, где ICE и DMG-PEG-2K присутствуют в молярном соотношении >10:1.
  27. 27. Способ по п.24, где DOPE и DMG-PEG-2K присутствуют в молярном соотношении >5:1.
  28. 28. Способ по п.12, где одноразовый флакон содержит от 3,0 до 4,0 мл композиции.
  29. 29. Способ по п.28, где одноразовый флакон содержит 3,2 мл композиции.
  30. 30. Способ по любому из предыдущих пунктов, где мРНК, кодирующая белок CFTR, содержит полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 91%, или по меньшей мере на 92%, или по меньшей мере на 93%, или по меньшей мере на 94%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 96%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99%, или на 100% идентичную по отношению к любой из от SEQ ID NO: 6 до SEQ ID NO: 27.
  31. 31. Способ по любому из предыдущих пунктов, где композицию хранят в форме лиофилизированного сухого порошка.
  32. 32. Способ по любому из предыдущих пунктов, где композиция в лиофилизированной форме является стабильной в замороженном состоянии в течение 1, 2, 3, 4, 5 или 10 лет без потери фармакологической или биологической активности мРНК, кодирующей белок CFTR.
  33. 33. Способ по любому из предыдущих пунктов, где композицию в лиофилизированной форме дополнительно восстанавливают в водном растворе перед введением.
  34. 34. Способ по п.33, где водный раствор представляет собой очищенную воду.
EA201992494 2017-05-16 2018-05-16 ЛЕЧЕНИЕ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ПУТЕМ ДОСТАВКИ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННОЙ мРНК, КОДИРУЮЩЕЙ CFTR EA043901B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62/507,061 2017-05-16
US62/532,301 2017-07-13
US62/580,782 2017-11-02
US62/592,238 2017-11-29
US62/659,053 2018-04-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EA043901B1 true EA043901B1 (ru) 2023-07-04

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018268859B2 (en) Treatment of cystic fibrosis by delivery of codon-optimized mrna encoding CFTR
US20220324926A1 (en) TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF NEBULIZED mRNA ENCODING CFTR
US20210353556A1 (en) Lipid Nanoparticle Formulations for mRNA Delivery
EP3060303B1 (en) Mrna therapy for argininosuccinate synthetase deficiency
AU2021232818B2 (en) Mrna therapy for pompe disease
US20230372440A1 (en) Improved process and formulation of lipid nanoparticles
EP3641834B1 (en) Messenger rna therapy for the treatment of friedreich&#39;s ataxia
US20230226147A1 (en) Composition and methods for treatment of primary ciliary dyskinesia
US20240261432A1 (en) Polynucleotide compositions, related formulations, and methods of use thereof
US20220110884A1 (en) Process of preparing mrna-loaded lipid nanoparticles
US20220160827A1 (en) TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF CODON-OPTIMIZED mRNA ENCODING CFTR
US20220133631A1 (en) Process of preparing ice-based lipid nanoparticles
EA043901B1 (ru) ЛЕЧЕНИЕ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ПУТЕМ ДОСТАВКИ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННОЙ мРНК, КОДИРУЮЩЕЙ CFTR
WO2021021988A1 (en) Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mrna encoding cftr