EA043536B1 - Антагонистические антитела, направленные против пептида, кодируемого геном кальцитонина, и способы их применения - Google Patents
Антагонистические антитела, направленные против пептида, кодируемого геном кальцитонина, и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA043536B1 EA043536B1 EA201691787 EA043536B1 EA 043536 B1 EA043536 B1 EA 043536B1 EA 201691787 EA201691787 EA 201691787 EA 043536 B1 EA043536 B1 EA 043536B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- cgrp
- subject
- headache
- administration
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 178
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 137
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 title description 43
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 title description 6
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 title description 5
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 title description 5
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 title description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 140
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 81
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 80
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 claims description 77
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 66
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 59
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 58
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 44
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims description 19
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 17
- 230000001667 episodic effect Effects 0.000 claims description 12
- ZISSAWUMDACLOM-UHFFFAOYSA-N triptane Chemical group CC(C)C(C)(C)C ZISSAWUMDACLOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003521 serotonin 5-HT1 receptor agonist Substances 0.000 claims description 8
- 102100038518 Calcitonin Human genes 0.000 description 252
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 235
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 220
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 189
- 229940127597 CGRP antagonist Drugs 0.000 description 166
- 239000003735 calcitonin gene related peptide receptor antagonist Substances 0.000 description 165
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 158
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 158
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 111
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 100
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 98
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 88
- 108090000932 Calcitonin Gene-Related Peptide Proteins 0.000 description 87
- 102000004414 Calcitonin Gene-Related Peptide Human genes 0.000 description 81
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 80
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 80
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 80
- 102220623841 Sulfotransferase 2B1_L99V_mutation Human genes 0.000 description 70
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 69
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 69
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 66
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 64
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 51
- 102200160559 rs104894505 Human genes 0.000 description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 45
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 45
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 45
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 43
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 36
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 35
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 34
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 33
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 33
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 31
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 26
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 26
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 25
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 25
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 25
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 22
- 230000004044 response Effects 0.000 description 22
- 102220153443 rs886061038 Human genes 0.000 description 22
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 21
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 21
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 21
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 21
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 21
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 20
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 20
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 20
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 20
- 102220054262 rs727503280 Human genes 0.000 description 20
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 20
- -1 flufenisad Chemical compound 0.000 description 19
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 19
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 19
- 230000001457 vasomotor Effects 0.000 description 19
- 230000008859 change Effects 0.000 description 18
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 18
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 17
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 16
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- 238000011161 development Methods 0.000 description 16
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 16
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 16
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 16
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 16
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 16
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 16
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 16
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 16
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 208000006561 Cluster Headache Diseases 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 14
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 14
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 14
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 13
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 13
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 13
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 12
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 12
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 12
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102000014468 Calcitonin Gene-Related Peptide Receptors Human genes 0.000 description 11
- 108010078311 Calcitonin Gene-Related Peptide Receptors Proteins 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102220567128 Ornithine decarboxylase antizyme 1_L56I_mutation Human genes 0.000 description 11
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- 230000007383 nerve stimulation Effects 0.000 description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 102200015467 rs121912287 Human genes 0.000 description 11
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 11
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 10
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 10
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 10
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 10
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 10
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 10
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 208000033830 Hot Flashes Diseases 0.000 description 9
- 206010060800 Hot flush Diseases 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 9
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 102220497377 14-3-3 protein zeta/delta_S58E_mutation Human genes 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 8
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 8
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- ITIXDWVDFFXNEG-JHOUSYSJSA-N olcegepant Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCN(CC1)C=1C=CN=CC=1)NC(=O)N1CCC(CC1)N1C(NC2=CC=CC=C2C1)=O)C1=CC(Br)=C(O)C(Br)=C1 ITIXDWVDFFXNEG-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 8
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 8
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 208000008548 Tension-Type Headache Diseases 0.000 description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 7
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 7
- 230000009992 cAMP activation Effects 0.000 description 7
- DNKYDHSONDSTNJ-XJVRLEFXSA-N chembl1910953 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)N)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CN=CN1 DNKYDHSONDSTNJ-XJVRLEFXSA-N 0.000 description 7
- 208000018912 cluster headache syndrome Diseases 0.000 description 7
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 7
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 7
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 7
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 7
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 102220040412 rs587778307 Human genes 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- 229960003708 sumatriptan Drugs 0.000 description 7
- KQKPFRSPSRPDEB-UHFFFAOYSA-N sumatriptan Chemical compound CNS(=O)(=O)CC1=CC=C2NC=C(CCN(C)C)C2=C1 KQKPFRSPSRPDEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxane-3,4,5-triol;dihydrate Chemical compound O.O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N 0.000 description 6
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102220480290 Copper-transporting ATPase 2_F37A_mutation Human genes 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 6
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 206010043269 Tension headache Diseases 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 6
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 6
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 6
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 6
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 6
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 6
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000012492 Biacore method Methods 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 5
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 5
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 5
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 5
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 5
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 5
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 5
- 210000002441 meningeal artery Anatomy 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 5
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 5
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 102200042162 rs145415848 Human genes 0.000 description 5
- 102220059909 rs372266620 Human genes 0.000 description 5
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 5
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 5
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 5
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 102220467337 Protein BEX4_L99A_mutation Human genes 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 102220614284 Tachykinin-3_K35A_mutation Human genes 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 229960004895 bretylium tosylate Drugs 0.000 description 4
- KVWNWTZZBKCOPM-UHFFFAOYSA-M bretylium tosylate Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1.CC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1Br KVWNWTZZBKCOPM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102220364315 c.296T>C Human genes 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 description 4
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 229960004127 naloxone Drugs 0.000 description 4
- UZHSEJADLWPNLE-GRGSLBFTSA-N naloxone Chemical compound O=C([C@@H]1O2)CC[C@@]3(O)[C@H]4CC5=CC=C(O)C2=C5[C@@]13CCN4CC=C UZHSEJADLWPNLE-GRGSLBFTSA-N 0.000 description 4
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 4
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 4
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 4
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 4
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 4
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 4
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012552 review Methods 0.000 description 4
- 239000000952 serotonin receptor agonist Substances 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102220640318 Aldehyde dehydrogenase, mitochondrial_T30V_mutation Human genes 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 208000010541 Familial or sporadic hemiplegic migraine Diseases 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 206010019476 Hemiplegic migraine Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010022773 Intracranial pressure increased Diseases 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N Meloxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=NC=C(C)S1 ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 3
- 102220601992 Neutrophil elastase_A57S_mutation Human genes 0.000 description 3
- BRUQQQPBMZOVGD-XFKAJCMBSA-N Oxycodone Chemical compound O=C([C@@H]1O2)CC[C@@]3(O)[C@H]4CC5=CC=C(OC)C2=C5[C@@]13CCN4C BRUQQQPBMZOVGD-XFKAJCMBSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 102220539256 Programmed cell death 1 ligand 2_S58T_mutation Human genes 0.000 description 3
- 102220539527 Prostaglandin D2 receptor 2_S58Y_mutation Human genes 0.000 description 3
- 102220538345 Putative stereocilin-like protein_K35M_mutation Human genes 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102220506568 Small ubiquitin-related modifier 2_K35E_mutation Human genes 0.000 description 3
- 208000007271 Substance Withdrawal Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- ULCUCJFASIJEOE-NPECTJMMSA-N adrenomedullin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]1C(N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)[C@@H](C)O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 ULCUCJFASIJEOE-NPECTJMMSA-N 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- KRMDCWKBEZIMAB-UHFFFAOYSA-N amitriptyline Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2C(=CCCN(C)C)C2=CC=CC=C21 KRMDCWKBEZIMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 3
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- JAQUASYNZVUNQP-PVAVHDDUSA-N dextrorphan Chemical compound C1C2=CC=C(O)C=C2[C@@]23CCN(C)[C@@H]1[C@H]2CCCC3 JAQUASYNZVUNQP-PVAVHDDUSA-N 0.000 description 3
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 3
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 3
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BCGWQEUPMDMJNV-UHFFFAOYSA-N imipramine Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2N(CCCN(C)C)C2=CC=CC=C21 BCGWQEUPMDMJNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229960001929 meloxicam Drugs 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 3
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 3
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 3
- 206010029410 night sweats Diseases 0.000 description 3
- 230000036565 night sweats Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 3
- 229960002085 oxycodone Drugs 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 3
- 229960002895 phenylbutazone Drugs 0.000 description 3
- VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N phenylbutazonum Chemical compound O=C1C(CCCC)C(=O)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003653 radioligand binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 229960000371 rofecoxib Drugs 0.000 description 3
- RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N rofecoxib Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C1=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)OC1 RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102200128633 rs104893843 Human genes 0.000 description 3
- 102200131344 rs59914820 Human genes 0.000 description 3
- 102220335306 rs924843423 Human genes 0.000 description 3
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 3
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 230000008326 skin blood flow Effects 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 3
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 2
- RDJGLLICXDHJDY-NSHDSACASA-N (2s)-2-(3-phenoxyphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RDJGLLICXDHJDY-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 2-[(E)-N-[2-(4-chlorophenoxy)propoxy]-C-propylcarbonimidoyl]-3-hydroxy-5-(thian-3-yl)cyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCC\C(=N/OCC(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1)C1=C(O)CC(CC1=O)C1CCCSC1 KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 0.000 description 2
- 102220496119 5-hydroxytryptamine receptor 3B_F27A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 102220496099 5-hydroxytryptamine receptor 3B_V32A_mutation Human genes 0.000 description 2
- VCCNKWWXYVWTLT-CYZBKYQRSA-N 7-[(2s,3r,4s,5s,6r)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2s,3r,4r,5r,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chromen-4-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C(OC1=C2)=CC(=O)C1=C(O)C=C2O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 VCCNKWWXYVWTLT-CYZBKYQRSA-N 0.000 description 2
- 102000004379 Adrenomedullin Human genes 0.000 description 2
- WKEMJKQOLOHJLZ-UHFFFAOYSA-N Almogran Chemical compound C1=C2C(CCN(C)C)=CNC2=CC=C1CS(=O)(=O)N1CCCC1 WKEMJKQOLOHJLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102220491290 Annexin A1_S34A_mutation Human genes 0.000 description 2
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010152 Bonferroni least significant difference Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 208000001387 Causalgia Diseases 0.000 description 2
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 2
- 206010009094 Chronic paroxysmal hemicrania Diseases 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N Gabapentin Chemical compound OC(=O)CC1(CN)CCCCC1 UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 108020004996 Heterogeneous Nuclear RNA Proteins 0.000 description 2
- 101000741445 Homo sapiens Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 101001081479 Homo sapiens Islet amyloid polypeptide Proteins 0.000 description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 2
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- LUZRJRNZXALNLM-UHFFFAOYSA-N LSM-1639 Chemical compound C1C(C=2C=CC=C3NC=C(C=23)C2)C2N(C)CC1C(=O)NC(C(N12)=O)(C)OC1(O)C1CCCN1C(=O)C2CC1=CC=CC=C1 LUZRJRNZXALNLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000701029 Murid betaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029216 Nervousness Diseases 0.000 description 2
- 208000007920 Neurogenic Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 2
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 2
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003141 Tachykinin Human genes 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 102220475439 Vacuolar protein sorting-associated protein 33A_N31A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 206010047139 Vasoconstriction Diseases 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000000464 adrenergic agent Substances 0.000 description 2
- 210000004079 adrenergic fiber Anatomy 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 229960002133 almotriptan Drugs 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 229960000836 amitriptyline Drugs 0.000 description 2
- VIROVYVQCGLCII-UHFFFAOYSA-N amobarbital Chemical compound CC(C)CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O VIROVYVQCGLCII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 230000002460 anti-migrenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 2
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- ZRIHAIZYIMGOAB-UHFFFAOYSA-N butabarbital Chemical compound CCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O ZRIHAIZYIMGOAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UZVHFVZFNXBMQJ-UHFFFAOYSA-N butalbital Chemical compound CC(C)CC1(CC=C)C(=O)NC(=O)NC1=O UZVHFVZFNXBMQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002546 butalbital Drugs 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 102220345545 c.103A>C Human genes 0.000 description 2
- 102220421646 c.83T>C Human genes 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 2
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- PBKVEOSEPXMKDN-LZHUFOCISA-N chembl2311030 Chemical class CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O.C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@]3(C(=O)N4[C@H](C(N5CCC[C@H]5[C@]4(O)O3)=O)C(C)C)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1.C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@]3(C(=O)N4[C@H](C(N5CCC[C@H]5[C@]4(O)O3)=O)C(C)CC)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1.C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@]3(C(=O)N4[C@H](C(N5CCC[C@H]5[C@]4(O)O3)=O)CC(C)C)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1.C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@](C(N21)=O)(NC(=O)[C@H]1CN(C)[C@H]2[C@@H](C=3C=CC=C4NC=C(C=34)C2)C1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 PBKVEOSEPXMKDN-LZHUFOCISA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- OROGSEYTTFOCAN-DNJOTXNNSA-N codeine Chemical compound C([C@H]1[C@H](N(CC[C@@]112)C)C3)=C[C@H](O)[C@@H]1OC1=C2C3=CC=C1OC OROGSEYTTFOCAN-DNJOTXNNSA-N 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 208000012790 cranial neuralgia Diseases 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 2
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 229940028367 dhe-45 Drugs 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229960000616 diflunisal Drugs 0.000 description 2
- HUPFGZXOMWLGNK-UHFFFAOYSA-N diflunisal Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=C1 HUPFGZXOMWLGNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PBUNVLRHZGSROC-VTIMJTGVSA-N dihydro-alpha-ergocryptine Chemical compound C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@]3(C(=O)N4[C@H](C(N5CCC[C@H]5[C@]4(O)O3)=O)CC(C)C)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1 PBUNVLRHZGSROC-VTIMJTGVSA-N 0.000 description 2
- XYYVYLMBEZUESM-UHFFFAOYSA-N dihydrocodeine Natural products C1C(N(CCC234)C)C2C=CC(=O)C3OC2=C4C1=CC=C2OC XYYVYLMBEZUESM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEALOBQTUQIVGU-QNIJNHAOSA-N dihydroergocornine Chemical compound C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@]3(C(=O)N4[C@H](C(N5CCC[C@H]5[C@]4(O)O3)=O)C(C)C)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1 SEALOBQTUQIVGU-QNIJNHAOSA-N 0.000 description 2
- 229960004290 dihydroergocornine Drugs 0.000 description 2
- LIMAOLZSWRJOMG-HJPBWRTMSA-N dihydroergocristine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@](C(N21)=O)(NC(=O)[C@H]1CN(C)[C@H]2[C@@H](C3=CC=CC4=NC=C([C]34)C2)C1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 LIMAOLZSWRJOMG-HJPBWRTMSA-N 0.000 description 2
- 229960004318 dihydroergocristine Drugs 0.000 description 2
- 229960002032 dihydroergocryptine Drugs 0.000 description 2
- 229960004704 dihydroergotamine Drugs 0.000 description 2
- LUZRJRNZXALNLM-JGRZULCMSA-N dihydroergotamine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@@](C(N21)=O)(C)NC(=O)[C@H]1CN([C@H]2[C@@H](C=3C=CC=C4NC=C(C=34)C2)C1)C)C1=CC=CC=C1 LUZRJRNZXALNLM-JGRZULCMSA-N 0.000 description 2
- ADYPXRFPBQGGAH-UMYZUSPBSA-N dihydroergotamine mesylate Chemical compound CS(O)(=O)=O.C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@@](C(N21)=O)(C)NC(=O)[C@H]1CN([C@H]2[C@@H](C=3C=CC=C4NC=C(C=34)C2)C1)C)C1=CC=CC=C1 ADYPXRFPBQGGAH-UMYZUSPBSA-N 0.000 description 2
- 229960000807 dihydroergotamine mesylate Drugs 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 229960002472 eletriptan Drugs 0.000 description 2
- OTLDLQZJRFYOJR-LJQANCHMSA-N eletriptan Chemical compound CN1CCC[C@@H]1CC1=CN=C2[C]1C=C(CCS(=O)(=O)C=1C=CC=CC=1)C=C2 OTLDLQZJRFYOJR-LJQANCHMSA-N 0.000 description 2
- 239000012055 enteric layer Substances 0.000 description 2
- 229940040520 ergoloid mesylates Drugs 0.000 description 2
- YREISLCRUMOYAY-IIPCNOPRSA-N ergometrine maleate Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O.C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 YREISLCRUMOYAY-IIPCNOPRSA-N 0.000 description 2
- 229940030804 ergonovine maleate Drugs 0.000 description 2
- 229960004943 ergotamine Drugs 0.000 description 2
- OFKDAAIKGIBASY-VFGNJEKYSA-N ergotamine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@@](C(N21)=O)(C)NC(=O)[C@H]1CN([C@H]2C(C3=CC=CC4=NC=C([C]34)C2)=C1)C)C1=CC=CC=C1 OFKDAAIKGIBASY-VFGNJEKYSA-N 0.000 description 2
- 229960001903 ergotamine tartrate Drugs 0.000 description 2
- XCGSFFUVFURLIX-UHFFFAOYSA-N ergotaminine Natural products C1=C(C=2C=CC=C3NC=C(C=23)C2)C2N(C)CC1C(=O)NC(C(N12)=O)(C)OC1(O)C1CCCN1C(=O)C2CC1=CC=CC=C1 XCGSFFUVFURLIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 2
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 2
- 229960001395 fenbufen Drugs 0.000 description 2
- ZPAKPRAICRBAOD-UHFFFAOYSA-N fenbufen Chemical compound C1=CC(C(=O)CCC(=O)O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZPAKPRAICRBAOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001419 fenoprofen Drugs 0.000 description 2
- 229960002390 flurbiprofen Drugs 0.000 description 2
- SYTBZMRGLBWNTM-UHFFFAOYSA-N flurbiprofen Chemical compound FC1=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229940097789 heavy mineral oil Drugs 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 2
- OROGSEYTTFOCAN-UHFFFAOYSA-N hydrocodone Natural products C1C(N(CCC234)C)C2C=CC(O)C3OC2=C4C1=CC=C2OC OROGSEYTTFOCAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004801 imipramine Drugs 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 2
- 229960004752 ketorolac Drugs 0.000 description 2
- OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N ketorolac Chemical compound OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N leuprolide acetate Chemical compound CC(O)=O.CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 229960003464 mefenamic acid Drugs 0.000 description 2
- HYYBABOKPJLUIN-UHFFFAOYSA-N mefenamic acid Chemical compound CC1=CC=CC(NC=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=C1C HYYBABOKPJLUIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 2
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 2
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 229960005254 naratriptan Drugs 0.000 description 2
- AMKVXSZCKVJAGH-UHFFFAOYSA-N naratriptan Chemical compound C12=CC(CCS(=O)(=O)NC)=CC=C2NC=C1C1CCN(C)CC1 AMKVXSZCKVJAGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- DLWSRGHNJVLJAH-UHFFFAOYSA-N nitroflurbiprofen Chemical compound FC1=CC(C(C(=O)OCCCCO[N+]([O-])=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 DLWSRGHNJVLJAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 229960002739 oxaprozin Drugs 0.000 description 2
- OFPXSFXSNFPTHF-UHFFFAOYSA-N oxaprozin Chemical compound O1C(CCC(=O)O)=NC(C=2C=CC=CC=2)=C1C1=CC=CC=C1 OFPXSFXSNFPTHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 2
- 208000007777 paroxysmal Hemicrania Diseases 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002702 piroxicam Drugs 0.000 description 2
- QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N piroxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=CC=CC=N1 QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 2
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 2
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 2
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MMXZSJMASHPLLR-UHFFFAOYSA-N pyrroloquinoline quinone Chemical compound C12=C(C(O)=O)C=C(C(O)=O)N=C2C(=O)C(=O)C2=C1NC(C(=O)O)=C2 MMXZSJMASHPLLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 2
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 2
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229960000425 rizatriptan Drugs 0.000 description 2
- TXHZXHICDBAVJW-UHFFFAOYSA-N rizatriptan Chemical compound C=1[C]2C(CCN(C)C)=CN=C2C=CC=1CN1C=NC=N1 TXHZXHICDBAVJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102200110348 rs151344481 Human genes 0.000 description 2
- 102220168578 rs199904091 Human genes 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000000862 serotonergic effect Effects 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N sildenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000894 sulindac Drugs 0.000 description 2
- MLKXDPUZXIRXEP-MFOYZWKCSA-N sulindac Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(F)=CC=C2\C1=C/C1=CC=C(S(C)=O)C=C1 MLKXDPUZXIRXEP-MFOYZWKCSA-N 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 2
- 108060008037 tachykinin Proteins 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- MIMJSJSRRDZIPW-UHFFFAOYSA-N tilmacoxib Chemical compound C=1C=C(S(N)(=O)=O)C(F)=CC=1C=1OC(C)=NC=1C1CCCCC1 MIMJSJSRRDZIPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960001017 tolmetin Drugs 0.000 description 2
- UPSPUYADGBWSHF-UHFFFAOYSA-N tolmetin Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(CC(O)=O)N1C UPSPUYADGBWSHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- PHLBKPHSAVXXEF-UHFFFAOYSA-N trazodone Chemical compound ClC1=CC=CC(N2CCN(CCCN3C(N4C=CC=CC4=N3)=O)CC2)=C1 PHLBKPHSAVXXEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 2
- 210000003901 trigeminal nerve Anatomy 0.000 description 2
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 2
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 2
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 229960001360 zolmitriptan Drugs 0.000 description 2
- ULSDMUVEXKOYBU-ZDUSSCGKSA-N zolmitriptan Chemical compound C1=C2C(CCN(C)C)=CNC2=CC=C1C[C@H]1COC(=O)N1 ULSDMUVEXKOYBU-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 229960003414 zomepirac Drugs 0.000 description 2
- ZXVNMYWKKDOREA-UHFFFAOYSA-N zomepirac Chemical compound C1=C(CC(O)=O)N(C)C(C(=O)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1C ZXVNMYWKKDOREA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- VLPIATFUUWWMKC-SNVBAGLBSA-N (2r)-1-(2,6-dimethylphenoxy)propan-2-amine Chemical compound C[C@@H](N)COC1=C(C)C=CC=C1C VLPIATFUUWWMKC-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- CCIWVEMVBWEMCY-RCFOMQFPSA-N (2s)-1-[(3as,4s,7as)-4-hydroxy-4-(2-methoxyphenyl)-7,7-diphenyl-1,3,3a,5,6,7a-hexahydroisoindol-2-yl]-2-(2-methoxyphenyl)propan-1-one Chemical compound COC1=CC=CC=C1[C@H](C)C(=O)N1C[C@H](C(CC[C@@]2(O)C=3C(=CC=CC=3)OC)(C=3C=CC=CC=3)C=3C=CC=CC=3)[C@H]2C1 CCIWVEMVBWEMCY-RCFOMQFPSA-N 0.000 description 1
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 1
- KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N (2s)-5-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC1CC[C@@H](C(O)=O)N1 KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N 0.000 description 1
- DIWRORZWFLOCLC-HNNXBMFYSA-N (3s)-7-chloro-5-(2-chlorophenyl)-3-hydroxy-1,3-dihydro-1,4-benzodiazepin-2-one Chemical compound N([C@H](C(NC1=CC=C(Cl)C=C11)=O)O)=C1C1=CC=CC=C1Cl DIWRORZWFLOCLC-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- KPJZHOPZRAFDTN-ZRGWGRIASA-N (6aR,9R)-N-[(2S)-1-hydroxybutan-2-yl]-4,7-dimethyl-6,6a,8,9-tetrahydroindolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@H](CO)CC)C2)=C3C2=CN(C)C3=C1 KPJZHOPZRAFDTN-ZRGWGRIASA-N 0.000 description 1
- LDXQLWNPGRANTO-GOSISDBHSA-N (9r)-7-[[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]methyl]-9-methyl-5-(4-methylphenyl)-8,9,10,11-tetrahydro-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]naphthyridine-6,13-dione Chemical compound C([C@H](CN(CC=1C=C(C=C(C=1)C(F)(F)F)C(F)(F)F)C1=O)C)CN(C(C2=NC=CC=C22)=O)C1=C2C1=CC=C(C)C=C1 LDXQLWNPGRANTO-GOSISDBHSA-N 0.000 description 1
- TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N (R,R)-tramadol Chemical compound COC1=CC=CC([C@]2(O)[C@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N 0.000 description 1
- WFNAKBGANONZEQ-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-chlorophenyl)-phenylmethyl]-4-methylpiperazine Chemical compound C1CN(C)CCN1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=CC=C1 WFNAKBGANONZEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 102220497380 14-3-3 protein zeta/delta_S58A_mutation Human genes 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- SVUOLADPCWQTTE-UHFFFAOYSA-N 1h-1,2-benzodiazepine Chemical compound N1N=CC=CC2=CC=CC=C12 SVUOLADPCWQTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- GNXFOGHNGIVQEH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(2-methoxyphenoxy)propyl carbamate Chemical compound COC1=CC=CC=C1OCC(O)COC(N)=O GNXFOGHNGIVQEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 102100022738 5-hydroxytryptamine receptor 1A Human genes 0.000 description 1
- 101710138638 5-hydroxytryptamine receptor 1A Proteins 0.000 description 1
- USSIQXCVUWKGNF-UHFFFAOYSA-N 6-(dimethylamino)-4,4-diphenylheptan-3-one Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CC(C)N(C)C)(C(=O)CC)C1=CC=CC=C1 USSIQXCVUWKGNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220624207 ATP synthase F(0) complex subunit C2, mitochondrial_S58I_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220586180 ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit, mitochondrial_E54R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 1
- 108010060263 Adenosine A1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000030814 Adenosine A1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 229940077122 Adenosine A1 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 101800004616 Adrenomedullin Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N Arg-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- TWXZVVXRRRRSLT-IMJSIDKUSA-N Asn-Cys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TWXZVVXRRRRSLT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- IQTUDDBANZYMAR-WDSKDSINSA-N Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O IQTUDDBANZYMAR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 101710192393 Attachment protein G3P Proteins 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000019260 B-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010012919 B-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- KPYSYYIEGFHWSV-UHFFFAOYSA-N Baclofen Chemical compound OC(=O)CC(CN)C1=CC=C(Cl)C=C1 KPYSYYIEGFHWSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229920002799 BoPET Polymers 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124638 COX inhibitor Drugs 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710169873 Capsid protein G8P Proteins 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N Clonidine Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1NC1=NCCN1 GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- HCYAFALTSJYZDH-UHFFFAOYSA-N Desimpramine Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2N(CCCNC)C2=CC=CC=C21 HCYAFALTSJYZDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012848 Dextrorphan Substances 0.000 description 1
- 102220559422 Diacylglycerol kinase epsilon_L99R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 101000895909 Elizabethkingia meningoseptica Endo-beta-N-acetylglucosaminidase F1 Proteins 0.000 description 1
- 101000895912 Elizabethkingia meningoseptica Endo-beta-N-acetylglucosaminidase F2 Proteins 0.000 description 1
- 101000895922 Elizabethkingia meningoseptica Endo-beta-N-acetylglucosaminidase F3 Proteins 0.000 description 1
- 208000027534 Emotional disease Diseases 0.000 description 1
- 206010066919 Epidemic polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 description 1
- 102000004300 GABA-A Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000839 GABA-A Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMBQKKAJIKAWKF-UHFFFAOYSA-N Glutethimide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)CCC(=O)NC1=O JMBQKKAJIKAWKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101001033280 Homo sapiens Cytokine receptor common subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 101000690940 Homo sapiens Pro-adrenomedullin Proteins 0.000 description 1
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710089039 Ig gamma-2 chain C region Proteins 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100039346 Immunoglobulin heavy constant gamma 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029567 Immunoglobulin kappa light chain Human genes 0.000 description 1
- 101710189008 Immunoglobulin kappa light chain Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MKXZASYAUGDDCJ-SZMVWBNQSA-N LSM-2525 Chemical compound C1CCC[C@H]2[C@@]3([H])N(C)CC[C@]21C1=CC(OC)=CC=C1C3 MKXZASYAUGDDCJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- OZYUPQUCAUTOBP-QXAKKESOSA-N Levallorphan Chemical compound C([C@H]12)CCC[C@@]11CCN(CC=C)[C@@H]2CC2=CC=C(O)C=C21 OZYUPQUCAUTOBP-QXAKKESOSA-N 0.000 description 1
- JAQUASYNZVUNQP-USXIJHARSA-N Levorphanol Chemical compound C1C2=CC=C(O)C=C2[C@]23CCN(C)[C@H]1[C@@H]2CCCC3 JAQUASYNZVUNQP-USXIJHARSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710156564 Major tail protein Gp23 Proteins 0.000 description 1
- SBDNJUWAMKYJOX-UHFFFAOYSA-N Meclofenamic Acid Chemical compound CC1=CC=C(Cl)C(NC=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=C1Cl SBDNJUWAMKYJOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- XADCESSVHJOZHK-UHFFFAOYSA-N Meperidine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(C(=O)OCC)CCN(C)CC1 XADCESSVHJOZHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N Meprobamate Chemical compound NC(=O)OCC(C)(CCC)COC(N)=O NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEYCTXHKTXCGPB-UHFFFAOYSA-N Methaqualone Chemical compound CC1=CC=CC=C1N1C(=O)C2=CC=CC=C2N=C1C JEYCTXHKTXCGPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZXKDOXHBHYTKP-UHFFFAOYSA-N Metohexital Chemical compound CCC#CC(C)C1(CC=C)C(=O)NC(=O)N(C)C1=O NZXKDOXHBHYTKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 208000000060 Migraine with aura Diseases 0.000 description 1
- 229940121948 Muscarinic receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 239000005041 Mylar™ Substances 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 102220526348 NHP2-like protein 1_A57F_mutation Human genes 0.000 description 1
- 229940099433 NMDA receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- BLXXJMDCKKHMKV-UHFFFAOYSA-N Nabumetone Chemical compound C1=C(CCC(C)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 BLXXJMDCKKHMKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJBLNOPPDWQMCH-MBPVOVBZSA-N Nalmefene Chemical compound N1([C@@H]2CC3=CC=C(C=4O[C@@H]5[C@](C3=4)([C@]2(CCC5=C)O)CC1)O)CC1CC1 WJBLNOPPDWQMCH-MBPVOVBZSA-N 0.000 description 1
- UIQMVEYFGZJHCZ-SSTWWWIQSA-N Nalorphine Chemical compound C([C@@H](N(CC1)CC=C)[C@@H]2C=C[C@@H]3O)C4=CC=C(O)C5=C4[C@@]21[C@H]3O5 UIQMVEYFGZJHCZ-SSTWWWIQSA-N 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010040718 Neurokinin-1 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- PHVGLTMQBUFIQQ-UHFFFAOYSA-N Nortryptiline Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2C(=CCCNC)C2=CC=CC=C21 PHVGLTMQBUFIQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- UQCNKQCJZOAFTQ-ISWURRPUSA-N Oxymorphone Chemical compound O([C@H]1C(CC[C@]23O)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O UQCNKQCJZOAFTQ-ISWURRPUSA-N 0.000 description 1
- 102100038551 Peptide-N(4)-(N-acetyl-beta-glucosaminyl)asparagine amidase Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 206010054956 Phonophobia Diseases 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical group OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPCVHQBVMYCJOM-UHFFFAOYSA-N Propiverine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(OCCC)C(=O)OC1CCN(C)CC1 QPCVHQBVMYCJOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KNAHARQHSZJURB-UHFFFAOYSA-N Propylthiouracile Chemical compound CCCC1=CC(=O)NC(=S)N1 KNAHARQHSZJURB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 102220600632 Ribosomal protein S6 kinase-like 1_E54Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000710942 Ross River virus Species 0.000 description 1
- 229910006124 SOCl2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102220579175 SUN domain-containing protein 5_S58P_mutation Human genes 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- LPMRCCNDNGONCD-RITPCOANSA-N Selfotel Chemical compound OC(=O)[C@@H]1C[C@H](CP(O)(O)=O)CCN1 LPMRCCNDNGONCD-RITPCOANSA-N 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 101000895926 Streptomyces plicatus Endo-beta-N-acetylglucosaminidase H Proteins 0.000 description 1
- 108091027544 Subgenomic mRNA Proteins 0.000 description 1
- 102100037346 Substance-P receptor Human genes 0.000 description 1
- PCSMJKASWLYICJ-UHFFFAOYSA-N Succinic aldehyde Chemical compound O=CCCC=O PCSMJKASWLYICJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- 102000011040 TRPV Cation Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010062740 TRPV Cation Channels Proteins 0.000 description 1
- DRHKJLXJIQTDTD-OAHLLOKOSA-N Tamsulosine Chemical compound CCOC1=CC=CC=C1OCCN[C@H](C)CC1=CC=C(OC)C(S(N)(=O)=O)=C1 DRHKJLXJIQTDTD-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 1
- 206010043169 Tearfulness Diseases 0.000 description 1
- SEQDDYPDSLOBDC-UHFFFAOYSA-N Temazepam Chemical compound N=1C(O)C(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 SEQDDYPDSLOBDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- IUJDSEJGGMCXSG-UHFFFAOYSA-N Thiopental Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=S)NC1=O IUJDSEJGGMCXSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N Topiramic acid Chemical compound C1O[C@@]2(COS(N)(=O)=O)OC(C)(C)O[C@H]2[C@@H]2OC(C)(C)O[C@@H]21 KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N 0.000 description 1
- 229940123445 Tricyclic antidepressant Drugs 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 208000006593 Urologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- SECKRCOLJRRGGV-UHFFFAOYSA-N Vardenafil Chemical compound CCCC1=NC(C)=C(C(N=2)=O)N1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(CC)CC1 SECKRCOLJRRGGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001407 Vascular Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 102000016913 Voltage-Gated Sodium Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010053752 Voltage-Gated Sodium Channels Proteins 0.000 description 1
- 206010048010 Withdrawal syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 229940081735 acetylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008649 adaptation response Effects 0.000 description 1
- 239000002582 adenosine A1 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001800 adrenalinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 102000030484 alpha-2 Adrenergic Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020004101 alpha-2 Adrenergic Receptor Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940059260 amidate Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 229960001301 amobarbital Drugs 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000561 anti-psychotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003420 antiserotonin agent Substances 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 description 1
- 229960003153 aprobarbital Drugs 0.000 description 1
- UORJNBVJVRLXMQ-UHFFFAOYSA-N aprobarbital Chemical compound C=CCC1(C(C)C)C(=O)NC(=O)NC1=O UORJNBVJVRLXMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N azocan-1-yl-(3,4,5-trimethoxyphenyl)methanone Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(C(=O)N2CCCCCCC2)=C1 WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000794 baclofen Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-M barbiturate Chemical compound O=C1CC(=O)[N-]C(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 1
- 239000012724 barbiturate sedative Substances 0.000 description 1
- 208000013404 behavioral symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N buprenorphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]11CC[C@]3([C@H](C1)[C@](C)(O)C(C)(C)C)OC)CN2CC1CC1 RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N 0.000 description 1
- 229960001736 buprenorphine Drugs 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940015694 butabarbital Drugs 0.000 description 1
- IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N butorphanol Chemical compound N1([C@@H]2CC3=CC=C(C=C3[C@@]3([C@]2(CCCC3)O)CC1)O)CC1CCC1 IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N 0.000 description 1
- 229960001113 butorphanol Drugs 0.000 description 1
- 238000013262 cAMP assay Methods 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050923 calcitonin gene-related peptide (8-37) Proteins 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229930003827 cannabinoid Natural products 0.000 description 1
- 239000003557 cannabinoid Substances 0.000 description 1
- DRCMAZOSEIMCHM-UHFFFAOYSA-N capsazepine Chemical compound C1C=2C=C(O)C(O)=CC=2CCCN1C(=S)NCCC1=CC=C(Cl)C=C1 DRCMAZOSEIMCHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940054025 carbamate anxiolytics Drugs 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- OFZCIYFFPZCNJE-UHFFFAOYSA-N carisoprodol Chemical compound NC(=O)OCC(C)(CCC)COC(=O)NC(C)C OFZCIYFFPZCNJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004587 carisoprodol Drugs 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 229960004831 chlorcyclizine Drugs 0.000 description 1
- 229960004782 chlordiazepoxide Drugs 0.000 description 1
- ANTSCNMPPGJYLG-UHFFFAOYSA-N chlordiazepoxide Chemical compound O=N=1CC(NC)=NC2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 ANTSCNMPPGJYLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SOYKEARSMXGVTM-UHFFFAOYSA-N chlorphenamine Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(CCN(C)C)C1=CC=C(Cl)C=C1 SOYKEARSMXGVTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003291 chlorphenamine Drugs 0.000 description 1
- TZFWDZFKRBELIQ-UHFFFAOYSA-N chlorzoxazone Chemical compound ClC1=CC=C2OC(O)=NC2=C1 TZFWDZFKRBELIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003633 chlorzoxazone Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 231100000762 chronic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 229960002896 clonidine Drugs 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 229960004362 clorazepate Drugs 0.000 description 1
- XDDJGVMJFWAHJX-UHFFFAOYSA-M clorazepic acid anion Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C(C(=O)[O-])N=C1C1=CC=CC=C1 XDDJGVMJFWAHJX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 1
- 229960004126 codeine Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000036757 core body temperature Effects 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- JURKNVYFZMSNLP-UHFFFAOYSA-N cyclobenzaprine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C(=CCCN(C)C)C2=CC=CC=C21 JURKNVYFZMSNLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003572 cyclobenzaprine Drugs 0.000 description 1
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229950007605 dapitant Drugs 0.000 description 1
- HXGBXQDTNZMWGS-RUZDIDTESA-N darifenacin Chemical compound C=1C=CC=CC=1C([C@H]1CN(CCC=2C=C3CCOC3=CC=2)CC1)(C(=O)N)C1=CC=CC=C1 HXGBXQDTNZMWGS-RUZDIDTESA-N 0.000 description 1
- 229960002677 darifenacin Drugs 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229960003914 desipramine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229960001985 dextromethorphan Drugs 0.000 description 1
- XLMALTXPSGQGBX-GCJKJVERSA-N dextropropoxyphene Chemical compound C([C@](OC(=O)CC)([C@H](C)CN(C)C)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XLMALTXPSGQGBX-GCJKJVERSA-N 0.000 description 1
- 229960004193 dextropropoxyphene Drugs 0.000 description 1
- 229950006878 dextrorphan Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 1
- 229960003529 diazepam Drugs 0.000 description 1
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- ATKXDQOHNICLQW-UHFFFAOYSA-N dichloralphenazone Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl.OC(O)C(Cl)(Cl)Cl.CN1C(C)=CC(=O)N1C1=CC=CC=C1 ATKXDQOHNICLQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005422 dichloralphenazone Drugs 0.000 description 1
- RBOXVHNMENFORY-DNJOTXNNSA-N dihydrocodeine Chemical compound C([C@H]1[C@H](N(CC[C@@]112)C)C3)C[C@H](O)[C@@H]1OC1=C2C3=CC=C1OC RBOXVHNMENFORY-DNJOTXNNSA-N 0.000 description 1
- 229960000920 dihydrocodeine Drugs 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 229940064790 dilantin Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000520 diphenhydramine Drugs 0.000 description 1
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- RUZYUOTYCVRMRZ-UHFFFAOYSA-N doxazosin Chemical compound C1OC2=CC=CC=C2OC1C(=O)N(CC1)CCN1C1=NC(N)=C(C=C(C(OC)=C2)OC)C2=N1 RUZYUOTYCVRMRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001389 doxazosin Drugs 0.000 description 1
- RMEDXOLNCUSCGS-UHFFFAOYSA-N droperidol Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1C(=O)CCCN1CC=C(N2C(NC3=CC=CC=C32)=O)CC1 RMEDXOLNCUSCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000394 droperidol Drugs 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001951 dura mater Anatomy 0.000 description 1
- 229940011681 elavil Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003174 enzyme fragment complementation Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N etomidate Chemical compound CCOC(=O)C1=CN=CN1[C@H](C)C1=CC=CC=C1 NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229940085392 excedrin Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 206010067039 familial hemiplegic migraine Diseases 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 229960002428 fentanyl Drugs 0.000 description 1
- PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N fentanyl Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C(=O)CC)C(CC1)CCN1CCC1=CC=CC=C1 PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000009459 flexible packaging Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003528 flurazepam Drugs 0.000 description 1
- SAADBVWGJQAEFS-UHFFFAOYSA-N flurazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(CCN(CC)CC)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1F SAADBVWGJQAEFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229960002284 frovatriptan Drugs 0.000 description 1
- SIBNYOSJIXCDRI-SECBINFHSA-N frovatriptan Chemical compound C1=C(C(N)=O)[CH]C2=C(C[C@H](NC)CC3)C3=NC2=C1 SIBNYOSJIXCDRI-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229960002870 gabapentin Drugs 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 229960002972 glutethimide Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000002837 heart atrium Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 102000055647 human CSF2RB Human genes 0.000 description 1
- 229940045644 human calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- LLPOLZWFYMWNKH-CMKMFDCUSA-N hydrocodone Chemical compound C([C@H]1[C@H](N(CC[C@@]112)C)C3)CC(=O)[C@@H]1OC1=C2C3=CC=C1OC LLPOLZWFYMWNKH-CMKMFDCUSA-N 0.000 description 1
- 229960000240 hydrocodone Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- WVLOADHCBXTIJK-YNHQPCIGSA-N hydromorphone Chemical compound O([C@H]1C(CC[C@H]23)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O WVLOADHCBXTIJK-YNHQPCIGSA-N 0.000 description 1
- 229960001410 hydromorphone Drugs 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010023260 immunoglobulin Fv Proteins 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 208000022119 inability to concentrate Diseases 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000008863 intramolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229950005286 lanepitant Drugs 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 1
- 229960000263 levallorphan Drugs 0.000 description 1
- 229960003406 levorphanol Drugs 0.000 description 1
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960004391 lorazepam Drugs 0.000 description 1
- 229940087857 lupron Drugs 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 150000002671 lyxoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229960003803 meclofenamic acid Drugs 0.000 description 1
- BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N memantine Chemical compound C1C(C2)CC3(C)CC1(C)CC2(N)C3 BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004640 memantine Drugs 0.000 description 1
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 1
- ALARQZQTBTVLJV-UHFFFAOYSA-N mephobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)N(C)C1=O ALARQZQTBTVLJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004815 meprobamate Drugs 0.000 description 1
- 229960000582 mepyramine Drugs 0.000 description 1
- YECBIJXISLIIDS-UHFFFAOYSA-N mepyramine Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CN(CCN(C)C)C1=CC=CC=N1 YECBIJXISLIIDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229940071648 metered dose inhaler Drugs 0.000 description 1
- 229960001797 methadone Drugs 0.000 description 1
- 229960002803 methaqualone Drugs 0.000 description 1
- 229960002330 methocarbamol Drugs 0.000 description 1
- 229960002683 methohexital Drugs 0.000 description 1
- DFTAZNAEBRBBKP-UHFFFAOYSA-N methyl 4-sulfanylbutanimidate Chemical compound COC(=N)CCCS DFTAZNAEBRBBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001703 methylphenobarbital Drugs 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001186 methysergide Drugs 0.000 description 1
- 229960003404 mexiletine Drugs 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 206010052787 migraine without aura Diseases 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 208000008013 morphine dependence Diseases 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 239000003149 muscarinic antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 239000003158 myorelaxant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003703 n methyl dextro aspartic acid receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- CVXJAPZTZWLRBP-MUUNZHRXSA-N n-[(2r)-1-[acetyl-[(2-methoxyphenyl)methyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propan-2-yl]-2-(4-piperidin-1-ylpiperidin-1-yl)acetamide Chemical compound COC1=CC=CC=C1CN(C(C)=O)C[C@H](NC(=O)CN1CCC(CC1)N1CCCCC1)CC1=CNC2=CC=CC=C12 CVXJAPZTZWLRBP-MUUNZHRXSA-N 0.000 description 1
- OLYXPBZBZBVRGD-UHFFFAOYSA-N n-[2-(4-amino-6,7-dimethoxy-5-pyridin-2-ylquinazolin-2-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinolin-5-yl]methanesulfonamide Chemical compound COC=1C(OC)=CC2=NC(N3CC4=C(C(=CC=C4)NS(C)(=O)=O)CC3)=NC(N)=C2C=1C1=CC=CC=N1 OLYXPBZBZBVRGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIWFCOIGUNPHPM-UHFFFAOYSA-N n-[[2-methoxy-5-(trifluoromethoxy)phenyl]methyl]-2-phenylpiperidin-3-amine Chemical compound COC1=CC=C(OC(F)(F)F)C=C1CNC1C(C=2C=CC=CC=2)NCCC1 ZIWFCOIGUNPHPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004270 nabumetone Drugs 0.000 description 1
- 229960000805 nalbuphine Drugs 0.000 description 1
- NETZHAKZCGBWSS-CEDHKZHLSA-N nalbuphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]1(O)CC[C@@H]3O)CN2CC1CCC1 NETZHAKZCGBWSS-CEDHKZHLSA-N 0.000 description 1
- 229960005297 nalmefene Drugs 0.000 description 1
- 229960000938 nalorphine Drugs 0.000 description 1
- 229940024844 naloxone injection Drugs 0.000 description 1
- DQCKKXVULJGBQN-XFWGSAIBSA-N naltrexone Chemical compound N1([C@@H]2CC3=CC=C(C=4O[C@@H]5[C@](C3=4)([C@]2(CCC5=O)O)CC1)O)CC1CC1 DQCKKXVULJGBQN-XFWGSAIBSA-N 0.000 description 1
- 229960003086 naltrexone Drugs 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002742 neurokinin 1 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000002746 neurokinin 2 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000002740 neurokinin 3 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 1
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124643 non-selective drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000820 nonprescription drug Substances 0.000 description 1
- 230000002474 noradrenergic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001158 nortriptyline Drugs 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003401 opiate antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000014 opioid analgesic Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADIMAYPTOBDMTL-UHFFFAOYSA-N oxazepam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C(O)N=C1C1=CC=CC=C1 ADIMAYPTOBDMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004535 oxazepam Drugs 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005118 oxymorphone Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- VOKSWYLNZZRQPF-GDIGMMSISA-N pentazocine Chemical compound C1C2=CC=C(O)C=C2[C@@]2(C)[C@@H](C)[C@@H]1N(CC=C(C)C)CC2 VOKSWYLNZZRQPF-GDIGMMSISA-N 0.000 description 1
- 229960005301 pentazocine Drugs 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108040002068 peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl)asparagine amidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229960000482 pethidine Drugs 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 229960002695 phenobarbital Drugs 0.000 description 1
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036211 photosensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229940093430 polyethylene glycol 1500 Drugs 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960001233 pregabalin Drugs 0.000 description 1
- AYXYPKUFHZROOJ-ZETCQYMHSA-N pregabalin Chemical compound CC(C)C[C@H](CN)CC(O)=O AYXYPKUFHZROOJ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229960003910 promethazine Drugs 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229960003510 propiverine Drugs 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- DSDNAKHZNJAGHN-UHFFFAOYSA-N resinferatoxin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(CC(=O)OCC=2CC3(O)C(=O)C(C)=CC3C34C(C)CC5(OC(O4)(CC=4C=CC=CC=4)OC5C3C=2)C(C)=C)=C1 DSDNAKHZNJAGHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSDNAKHZNJAGHN-MXTYGGKSSA-N resiniferatoxin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(CC(=O)OCC=2C[C@]3(O)C(=O)C(C)=C[C@H]3[C@@]34[C@H](C)C[C@@]5(O[C@@](O4)(CC=4C=CC=CC=4)O[C@@H]5[C@@H]3C=2)C(C)=C)=C1 DSDNAKHZNJAGHN-MXTYGGKSSA-N 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 102220285537 rs1381256979 Human genes 0.000 description 1
- 102220201747 rs140921822 Human genes 0.000 description 1
- 102220278864 rs1554568431 Human genes 0.000 description 1
- 102200131364 rs28928903 Human genes 0.000 description 1
- 102200006383 rs372266620 Human genes 0.000 description 1
- 102220278934 rs372266620 Human genes 0.000 description 1
- 102220031962 rs431825177 Human genes 0.000 description 1
- 102220089529 rs59914820 Human genes 0.000 description 1
- 102200148363 rs672601362 Human genes 0.000 description 1
- 102220098911 rs878854588 Human genes 0.000 description 1
- 229940102127 rubidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 210000003752 saphenous vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 238000002821 scintillation proximity assay Methods 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 229960002060 secobarbital Drugs 0.000 description 1
- KQPKPCNLIDLUMF-UHFFFAOYSA-N secobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC=C)C(=O)NC(=O)NC1=O KQPKPCNLIDLUMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003341 sedoheptuloses Chemical class 0.000 description 1
- 230000020341 sensory perception of pain Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 229960003310 sildenafil Drugs 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000245 skin permeability Toxicity 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- AEQFSUDEHCCHBT-UHFFFAOYSA-M sodium valproate Chemical compound [Na+].CCCC(C([O-])=O)CCC AEQFSUDEHCCHBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001797 sucrose acetate isobutyrate Substances 0.000 description 1
- 235000010983 sucrose acetate isobutyrate Nutrition 0.000 description 1
- UVGUPMLLGBCFEJ-SWTLDUCYSA-N sucrose acetate isobutyrate Chemical compound CC(C)C(=O)O[C@H]1[C@H](OC(=O)C(C)C)[C@@H](COC(=O)C(C)C)O[C@@]1(COC(C)=O)O[C@@H]1[C@H](OC(=O)C(C)C)[C@@H](OC(=O)C(C)C)[C@H](OC(=O)C(C)C)[C@@H](COC(C)=O)O1 UVGUPMLLGBCFEJ-SWTLDUCYSA-N 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 102220533808 tRNA wybutosine-synthesizing protein 5_R28L_mutation Human genes 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229960002613 tamsulosin Drugs 0.000 description 1
- 229940090016 tegretol Drugs 0.000 description 1
- 229960003188 temazepam Drugs 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001331 thermoregulatory effect Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229960003279 thiopental Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 229940041597 tofranil Drugs 0.000 description 1
- 229960004045 tolterodine Drugs 0.000 description 1
- OOGJQPCLVADCPB-HXUWFJFHSA-N tolterodine Chemical compound C1([C@@H](CCN(C(C)C)C(C)C)C=2C(=CC=C(C)C=2)O)=CC=CC=C1 OOGJQPCLVADCPB-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 229960004394 topiramate Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 229960004380 tramadol Drugs 0.000 description 1
- TVYLLZQTGLZFBW-GOEBONIOSA-N tramadol Natural products COC1=CC=CC([C@@]2(O)[C@@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 TVYLLZQTGLZFBW-GOEBONIOSA-N 0.000 description 1
- LLPOLZWFYMWNKH-UHFFFAOYSA-N trans-dihydrocodeinone Natural products C1C(N(CCC234)C)C2CCC(=O)C3OC2=C4C1=CC=C2OC LLPOLZWFYMWNKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960003991 trazodone Drugs 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- JOFWLTCLBGQGBO-UHFFFAOYSA-N triazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1Cl JOFWLTCLBGQGBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003386 triazolam Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000003029 tricyclic antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960002004 valdecoxib Drugs 0.000 description 1
- LNPDTQAFDNKSHK-UHFFFAOYSA-N valdecoxib Chemical compound CC=1ON=C(C=2C=CC=CC=2)C=1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 LNPDTQAFDNKSHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDIAUFOIMFAIPU-UHFFFAOYSA-N valepotriate Natural products CC(C)CC(=O)OC1C=C(C(=COC2OC(=O)CC(C)C)COC(C)=O)C2C11CO1 BDIAUFOIMFAIPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940102566 valproate Drugs 0.000 description 1
- 229960002381 vardenafil Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 102000038650 voltage-gated calcium channel activity Human genes 0.000 description 1
- 108091023044 voltage-gated calcium channel activity Proteins 0.000 description 1
- 150000003742 xyloses Chemical class 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка заявляет приоритет по временной патентной заявке США № 61/968897, поданной 21 марта 2014 г., временной патентной заявке США № 62/083809, поданной 24 ноября 2014 г. и временной патентной заявке США № 62/119778, поданной 23 февраля 2015 г., которые включены в данный документ в качестве ссылок в полном объеме во всех отношениях.
Известный уровень техники
CGRP (пептид, кодируемый геном кальцитонина) представляет собой состоящий из 37 аминокислот нейропептид, принадлежащий к семейству пептидов, которое включает кальцитонин, адреномедуллин и амилин. У людей существует две формы CGRP (α-CGRP и β-CGRP), обладающие схожей активностью. Они различаются тремя аминокислотами и демонстрируют диффренциальное распределение. По меньшей мере два субтипа рецепторов CGRP могут также отвечать за различия в активности. CGRP является нейротрансмиттером в центральной нервной системе, и как было продемонстрировано, является сильным вазодилататором в периферической системе, где CGRP-содержащие нейроны тесно ассоциированы с кровеносными сосудами. CGRP-медиируемая вазодилатация также ассоциирована с нейрогенным воспалением, как часть каскада событий, приводящего к транссудации плазмы и вазодилатации микроциркуляторной части сосудистого русла, и присутствует при мигрени.
Была отмечена возможная связь CGRP с вазомоторными симптомами (Wyon et al. Scand. J. Urol. Nephrol. 35: 92-96 (2001); Wyon et al. менопауза 7(1):25-30 (2000)). Вазомоторные симптомы (VMS), такие как приливы крови и ночная потливость, являются наиболее распространенными симптомами, ассоциированными с менопаузой, наблюдающимися у от 60 до 80% всех женщин после естественной или хирургически-индуцированной менопаузы. Приливы крови вероятно являются адаптивным ответом центральной нервной системы (ЦНС) на снижение уровня половых стероидных гормонов (Freedman Am. J. Human Biol. 13:453-464 (2001)). Ha сегодняшний день наиболее эффективными видами терапии приливов являются гормональные методы лечения, включая эстрогены и/или некоторые прогестины. Гормональные методы лечения могут быть эффективными для облегчения приливов, но не являются пригодными для всех женщин. Наблюдаемые психологические и эмоциональные симптомы, такие как нервозность, усталость, раздражительность, бессонница, депрессия, потеря памяти, головная боль, тревога, нервозность или неспособность концентрироваться считаются вызванными потерей сна после приливов крови и ночной потливости (Kramer et al., в: Murphy et al., 3.sup.rd Int'l Symposium on Recent Advances in Urological Cancer диагноз and Treatment-Proceedings, Paris, France: SCI: 3-7 (1992)).
Мужчины также испытывают приливы крови после отмены стероидного гормона (андрогена). Это наблюдается в случае возрастного снижения андрогенов (Katovich, et al., Proceedings of the Society for Experimental Biology & Medicine, 1990, 193(2): 129-35), а также в крайних случаях выключения эндокринной функции, ассоциированных с лечением рака простаты (Berendsen, et al., European Journal of Pharmacology, 2001, 419(1): 47-54). Треть таких пациентов испытывает постоянные и частые симптомы, достаточно тяжелые для того, чтобы вызывать значительный дискомфорт и неудобства.
CGRP является сильным вазодилататором, который задействован в патологии других вазомоторных симптомов, таких как формы сосудистой головной боли, включая мигрени (с аурой или без) и кластерная головная боль. Durham, N. Engl. J. Med. 350:1073-1075, 2004. Уровни CGRP в сыворотке в наружной яремной вене повышены у пациентов во время приступов мигрени. Goadsby et al., Ann. Neurol. 28:183-7, 1990. Внутривенное введение человеческого α-CGRP индуцировало головную боль и мигрень у пациентов, страдающих мигренью без ауры, позволяя предположить, что CGRP играет причинную роль при мигрени. Lassen et al., Cephalalgia 22:54-61, 2002.
Возможное участие CGRP в мигрени послужило основой для разработки и тестирования ряда соединений, которые ингибируют высвобождение CGRP (например, суматриптан), антагонизируют рецептор CGRP (например, дипептидное производное BIBN4096BS (Boerhringer Ingelheim); CGRP(8-37)), или взаимодействуют с одним или несколькими ассоциированными с рецептором белками, такими как мембранный белок рецепторной активности (RAMP) или белковый компонент рецептора (RCP), которые оба влияют на связывание CGRP с его рецепторами. Brain, S. et al., Trends in Pharmacological Sciences 23:5153, 2002. Субтипы альфа-2 адренорецептора и рецепторы аденозина A1 также контролируют (ингибируют) высвобождение CGRP и возбуждение тройничного нерва (Goadsby et al., Brain 125:1392-401, 2002). Агонист рецептора аденозина A1 GR79236 (метрафадил), который, как было продемонстрировано, ингибирует нейрогенную вазодилатацию и тригеминальную ноцицепцию у людей, может также обладать противомигреневой активностью (Arulmani et al., Cephalalgia 25:1082-1090, 2005; Giffin et al., Cephalalgia 23:287-292, 2003.)
Этой теории противоречит наблюдение, что лечение соединениями, ингибирующими исключительно нейрогенное воспаление (например, антагонистами рецептора тахикинина NK1) или возбуждение тройничного нерва (например, агонистами рецептора 5HTID), как было продемонстрировано, является относительно неэффективным в качестве средства купирования приступов мигрени, что заставило некоторых исследователей высказывать сомнения в том, что ингибирование высвобождения CGRP является первичным механизмом действия эффективных противомигреневых терапий. Arulmani et al., Eur. J.
- 1 043536
Pharmacol. 500:315-330, 2004.
Мигрень представляет собой комплексное распространенное неврологическое состояние, характеризующееся тяжелыми эпизодическими приступами головной боли и ассоциированными признаками, которые могут включать тошноту, рвоту, чувствительность к свету, звукам или движению. У некоторых пациентов, головной боли предшествует, или она сопровождается аурой. Головная боль может быть тяжелой и может также быть односторонней у определенных пациентов.
Приступы мигрени оказывают разрушительное воздействие на повседневную жизнь. В США и Западной Европе общее количество людей, страдающих от мигрени, составляет 11% от населения в целом (6% мужчин; 15-18% женщин). Кроме того, медианная частота приступов у индивидуума составляет 1,5/месяц. Хотя существует ряд способов лечения, предназначенных для смягчения или ослабления симптомов, пациентам, испытывающим более 3-4 приступов мигрени в месяц, рекомендуется превентивная терапия. Goadsby et al., New Engl. J. Med. 346(4): 257-275, 2002.
Различные способы фармакологического вмешательства, которые использовались для лечения мигрени, и разнообразие откликов у пациентов свидетельствуют о многообразном характере этого расстройства. Таким образом, такие относительно неселективные лекарственные средства, как алкалоиды спорыньи (например, эрготамин, дигидроэрготамин, метисергид), проявляющие серотонинергическую, а также адренергическую, норадренергическую и допаминергическую активность, использовались на протяжении более восьмидесяти лет для лечения мигрени. Другие способы лечения включают опиаты (например, оксикодон) и β-адренергические антагонисты (например, пропранолол). Некоторые пациенты, обычно, с более мягкими симптомами, способны контролировать свои симптомы с помощью отпускаемых без рецепта лекарств, таких как один или несколько нестероидных противовоспалительных агентов (NSAIDs), таких как комбинация аспирина, ацетаминофена и кофеина (например, Excedrin® Migraine (экседринмигрень)).
В последнее время некоторых пациентов с мигренью лечили топираматом, противосудорожным средством, которое блокирует потенциал-зависимые натриевые каналы, и определенные глутаматные рецепторы (АМРА-каинат), потенцирует активность рецептора GABA-A, и блокирует карбоангидразу. Относительно недавний успех агонистов рецептора серотонина 5HT-1B/1D и/или 5НТ-1а, таких как суматриптан, у некоторых пациентов подтолкнул исследователей к предположению о серотонинергической этиологии расстройства. К сожалению, хотя некоторые пациенты хорошо откликались на этот способ лечения, другие были относительно невосприимчивыми к нему.
Было предположено, что в основе расстройства лежит дисфункция ионного канала в аминергических ядрах ствола мозга, однако точная патофизиология мигрени изучена недостаточно. Было показано, что одна из форм мигрени, семейная гемиплегическая мигрень, ассоциирована с миссенс-мутациями в а1-субъединице потенциал-управляемых кальциевых каналах P/Q-типа, и считается вероятным, что другие мутации ионных каналов также будут обнаружены в других популяциях пациентов. Хотя дилатация кровеносных сосудов ассоциирована с и усиливает болевые симптомы мигрени, такие нервнососудистые события в настоящее время считаются результатом, а не причиной состояния. В общем, объединяющим признаком мигрени считается дисфункция путей ствола мозга, модулирующих сенсорный вход. Goadsby, P.J. et al., New Engl. J. Med. 346(4): 257-275, 2002.
Краткое описание сущности изобретения
В некоторых аспектах, изобретение, раскрытое в данном документе, касается антагонистических антител против CGRP и способов использования антагонистических антител против CGRP для лечения или профилактики вазомоторных симптомов. Примеры вазомоторных симптомов приведены в данном документе, такие как прилив крови. В некоторых случаях, антагонистические антитела против CGRP используются для лечения или профилактики головной боли, такой как мигрень с аурой или без нее, гемиплегическая мигрень, кластерные головные боли, мигренозная невралгия, хронические головные боли, головные боли напряжения и головные боли, вызванные другими медицинскими состояниями (такими как инфекция или повышенное внутричерепное давление вследствие опухоли).
В одном аспекте, настоящее изобретение предусматривает способ лечения или профилактики по меньшей мере одного вазомоторного симптома у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP.
В одном аспекте, настоящее изобретение предусматривает способ лечения или профилактики головной боли (например, мигрени и кластерной головной боли) у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способ облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования головной боли (например, мигрени и кластерной головной боли) у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP.
В одном аспекте, изобретение предусматривает способ лечения или снижения частоты по меньшей мере одного вазомоторного симптома и/или головной боли у субъекта. В одном варианте реализации, способ включает введение субъекту в течение множества дней некоторого количества моноклонального
- 2 043536 антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP, причем количество, вводимое в каждый из множества дней, составляет менее 1000 мг. В одном варианте реализации, способ включает введение субъекту в течение множества дней некоторого количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP, причем количество, вводимое в каждый из множества дней, имеет значение в диапазоне 100-2000 мг. В некоторых вариантах реализации, головная боль представляет собой мигрень (например, хроническую мигрень или эпизодическую мигрень). В некоторых вариантах реализации, два из множества дней разделены интервалом более чем семь дней. В некоторых вариантах реализации, частота головной боли снижается по меньшей мере на семь дней после однократного введения. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела, вводимого в первый день, отличается от (например, превышает) количество моноклонального антитела, вводимого во второй день. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят менее чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное введение. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, введение включает использование предварительно наполненного шприца, содержащего определенное количество моноклонального антитела. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, месячное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 40 или более часов (например 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, или более) по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. Месячное количество часов головной боли могут быть уменьшено более чем на 60 ч. В некоторых вариантах реализации, месячное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, после указанного введения, снижается на 25% или больше (например, 30, 35, 40, 45, 50%, или больше) по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. Месячное количество часов головной боли могут быть уменьшено на 40% или больше. В некоторых вариантах реализации, месячное количество дней головной боли, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 3 или больше дней (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше дней) по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В некоторых вариантах реализации, способ дополнительно включает введение субъекту второго агента одновременно или последовательно с моноклональным антителом. Второй агент может быть любым из агонистов 5-НТ1, триптанов, алкалоидов спорыньи и нестероидных противовоспалительных лекарственных средств. В некоторых вариантах реализации, второй агент представляет собой агент, принимаемый субъектом профилактически. В некоторых вариантах реализации, месячное применение второго агента субъектом снижается по меньшей мере на 15% после введения моноклонального антитела. В некоторых вариантах реализации, второй агент представляет собой триптан. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным моноклональным антителом. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR Н3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает способ уменьшения величины месячного количества часов головной боли, испытываемой субъектом. В одном варианте реализации, способ включает введение субъекту количества моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает величину месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 20 (например, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 или больше часов головной боли) после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, величина месячного количества часов головной боли снижается по меньшей мере на около 50 ч. В одном варианте реализации, способ включает введение субъекту количества моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает величину месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 15% (например, 20, 25, 30, 35, 40%, или больше) после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, величина месячного количества часов головной боли снижается по меньшей мере на около 30%. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело представляет собой антагонистическое антитело против CGRP. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят меньше чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное или внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации по меньшей мере 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, (в которых) моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело,
- 3 043536 имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR
H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает способ уменьшения величины месячного количества дней головной боли, испытываемой субъектом. В одном варианте реализации, способ включает введение субъекту количества моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает величину месячного количества дней головной боли по меньшей мере на 3 (например 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше дней головной боли) после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, величина месячного количества дней головной боли снижается по меньшей мере на около 6 дней головной боли. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело представляет собой антагонистическое антитело против CGRP. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят меньше чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное или внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации по меньшей мере 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, (в которых) моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает способ уменьшения использования субъектом лекарственного препарата против головной боли, включающий введение субъекту моноклонального антитела (например, антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает месячное применение субъектом лекарственного препарата против головной боли по меньшей мере на 15% (например 20, 25, 30, 35, 40%, или больше). В некоторых вариантах реализации, лекарственный препарат против головной боли выбирают из группы, состоящей из агонистов 5-НТ1, триптанов, опиатов, β-адренергических антагонистов, алкалоидов спорыньи, и нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDs). В некоторых вариантах реализации, лекарственным препаратом против головной боли является триптан. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят меньше чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное или внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации по меньшей мере 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, (в которых) моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает способ лечения или уменьшения частоты головной боли (например, мигрени) у субъекта, включающий введение субъекту разовой дозы моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) в количестве, которое модулирует путь CGRP, причем количество моноклонального антитела имеет значение в диапазоне 100-2000 мг.
В дополнительном варианте реализации, изобретение предусматривает способы облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования головной боли (например, мигрени и кластерной головной боли) у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным агентом, пригодным для лечения головной боли. Такие дополнительные агенты включают 5-НТ1-подобные агонисты (и агонисты, воздействующие на другие сайты 5-НТ1), и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAIDs).
Примеры агонистов 5-НТ1, которые могут быть использованы в комбинации с антителом против CGRP, включают класс соединений, известных как триптаны, такие как суматриптан, золмитриптан, наратриптан, ризатриптан, елетриптан, алмотриптан, и фроватриптан. Известно, что алкалоиды спорыньи и родственные соединения также обладают агонистической активностью к 5-НТ и использовались для лечения головной боли, такой как мигрень. Такие соединения включают, в частности, эрготамин тартрат, эргоновин малеат, и эрголоид мезилаты (например, дигидроэргокорнин, дигидроэргокристин, дигидроэргокриптин и дигидроэрготамин мезилат (DHE 45)).
- 4 043536
Примеры NSAIDs, которые могут быть использованы в комбинации с антителом против CGRP включают аспирин, диклофенак, дифлусинал, этодолак, фенбуфен, фенопрофен, флуфенисад, флурбипрофен, ибупрофен, индометацин, кетопрофен, кеторолак, меклофенамовую кислоту, мефенамовую кислоту, набуметон, напроксен, оксапрозин, фенилбутазон, пироксикам, сулиндак, толметин или зомепирак, ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2), целекоксиб; рофекоксиб; мелоксикам; JTE-522; L-745,337; NS398; или их фармацевтически приемлемые соли.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способ облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования приливов крови у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способы облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования приливов крови у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным агентом, пригодным для лечения приливов крови. Такие дополнительные агенты включают, без ограничений, гормональные методы лечения, включая эстрогены и/или прогестины.
В одном варианте реализации, антагонистическое антитело против CGRP, используемое в любом из описанных выше способов, представляет собой любое из антител, описанных в данном документе.
В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP распознает человеческий CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывается с обоими из человеческих α-CGRP и β-CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывается с человеческим и крысиным CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывает C-концевой фрагмент, содержащий аминокислоты 25-37 CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывает С-концевой эпитоп в пределах аминокислот 25-37 CGRP.
В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP является гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, антитело является человеческим. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP представляет собой антитело G1 (как описано в данном документе). В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP включает один или несколько CDR (гипервариабельных участков) например, один, два, три, четыре, пять или, в некоторых вариантах реализации, все шесть CDR) антитела G1 или вариантов G1, представленных в табл. 6. В других вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, представленную на фиг. 5 (SEQ ID NO: 1), и аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, представленную на фиг. 5 (SEQ ID NO: 2).
В некоторых вариантах реализации, антитело содержит модифицированную константную область, такую как константную область, которая является иммунологически инертной (включая частично иммунологически инертную), например, не инициирует медиируемый комплементом лизис, не стимулирует опосредованную антителами клеточную цитотоксичность (ADCC), не активирует микроглию, или обладает сниженной одной или несколькими из указанных активностей. В некоторых вариантах реализации, константная область является модифицированной, как описано в Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624; заявке PCT № PCT/GB99/01441; и/или патентной заявке Великобритании № 9809951.8. В других вариантах реализации, антитело содержит константную область тяжелой цепи человеческого IgG2, содержащую следующие мутации: А330Р331 на S330S331 (нумерация аминокислот в соответствии с последовательностью IgG2 дикого типа). Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624. В некоторых вариантах реализации, константная область тяжелой цепи антитела представляет собой тяжелую цепь человеческого IgG1 с любыми из следующих мутаций: E233L234L235G236 (SEQ Ш NO: 48)
1) А327А330Р331 на G327S330S331;
на
P233V234A235 с делецией G236;
E233L234L235 на P233V234A235;
4) E233L234L235G236A327A330P331 (SEQ ID NO: 49)
P233V234A235G327S330S331 (SEQ ID NO: 50) делецией
G236;
E233L234L235A327A330P331 (SEQ ID NO: 51) на P233V234A235G327S330S331 (SEQ ID NO: 50);
2)
3) на
5) и 6)
N297 на А297 или любую другую аминокислоту кроме N. В некоторых вариантах реализации, константная область тяжелой цепи антитела представляет собой тяжелую цепь человеческого IgG4 с любыми из следующих мутаций: E233F234L235G236 (SEQ ID NO: 52) на P233V234A235 с делецией G236: E233F234L235 на P233V234A235; и S228L235 наР228Е235.
В других вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования. В некоторых вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования путем мутации остатка присоединения олигосахарида (такого как Asn297) и/или фланкирующих остатков, являющихся частью последовательности распознавания N-гликозилирования в константной области. В некоторых вариантах реализации, константная область агликозилирована для Nсвязанного гликозилирования. Константная область может быть агликозилирована для N-связанного гликозилирования ферментативно или путем экспрессии в дефицитной по гликозилированию клетке
- 5 043536 хозяине.
Аффинность связывания (KD) антагонистического антитела против CGRP с CGRP (такого как человеческий α-CGRP при измерении методом поверхностного плазмонного резонанса при соответствующей температуре, такой как 25 или 37°С) може составлять от около 0,02 до около 200 нМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет любое значение из около 200 нМ, около 100 нМ, около 50 нМ, около 10 нМ, около 1 нМ, около 500 пМ, около 100 пМ, около 60 пМ, около 50 пМ, около 20 пМ, около 15 пМ, около 10 пМ, около 5 пМ, или около 2 пМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет значение меньше любой величины из около 250 нМ, около 200 нМ, около 100 нМ, около 50 нМ, около 10 нМ, около 1 нМ, около 500 пМ, около 100 пМ, или около 50 пМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет значение меньше около 50 нМ.
Антагонистическое антитело против CGRP может быть введено до, во время и/или после головной боли. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP вводят перед приступом головной боли (например, мигрени и кластерной головной боли). Введение антагонистического антитела против CGRP может осуществляться любыми средствами, известными специалистам, включая: орально, внутривенно, подкожно, интраартериально, внутримышечно, интраназально (например, с ингаляцией или без нее), интракардиально, интраспинально, интраторакально, интраперитонеально, интравентрикулярно, сублингвально, трансдермально, и/или путем ингаляции. Введение может быть системным, например, внутривенным, или локализованным.
В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP может быть введено в сочетании с другим агентом, таким как другой агент для лечения головной боли.
В другом аспекте, изобретение предусматривает использование антагонистического антитела против CGRP для производства лекарственного средства, предназначенного для использования в любом из способов, описанных в данном документе, например, для лечения или профилактики головной боли.
В другом аспекте, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для предотвращения или лечения головной боли (например, мигрени и кластерной головной боли), содержащую эффективное количество антагонистического антитела против CGRP, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами.
В другом аспекте, изобретение предусматривает набор для использования в любом из способов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации, набор включает контейнер, композицию, содержащую антагонистическое антитело против CGRP, описанное в данном документе, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, и инструкции по использованию композиции в любом из способов, описанных в данном документе.
Настоящее изобретение также предусматривает антагонистические антитела против CGRP и полипептиды, полученные из антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. Соответственно, в одном аспекте, изобретение предусматривает антитело G1 (взаимозаменяемо обозначаемое G1), которое продуцируется экспрессионными векторами, имеющими номера доступа АТСС РТА-6866 и РТА6867. Например, в одном варианте реализации предусматривается антитело, содержащее тяжелую цепь, продуцируемую экспрессионным вектором с номером доступа АТСС РТА-6867. В дополнительном варианте реализации предусматривается антитело, содержащее легкую цепь, продуцируемую экспрессионным вектором с номером доступа АТСС РТА-6866. Аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелой цепи и легкой цепи G1 представлены на фиг. 5. Участки, определяющие комплементарность (гипервариабельные участки, CDR) антитела G1 (включая CDR по системам нумерации Chothia и Kabat) также представлены на фиг. 5. Следует понимать, что ссылка на любую часть или целую область G1 охватывает последовательности, продуцируемые экспрессионными векторами, имеющими номера доступа АТСС РТА-6866 и РТА-6867, и/или последовательности, изображенные на фиг. 5. В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает варианты антитела G1 с аминокислотными последовательностями, представленными в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает антитело, содержащее домен VH, который по меньшей мере на 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97% по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.
В другом аспекте, изобретение предусматривает антитело, содержащее домен VL, который по меньшей мере на 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97% по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В другом аспекте, изобретение предусматривает антитело, содержащее фрагмент или область антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. В одном варианте реализации, фрагмент представляет собой легкую цепь антитела G1. В другом варианте реализации, фрагмент представляет собой тяжелую цепь антитела G1. В еще одном варианте реализации, фрагмент содержит одну или несколько вариабельных областей из легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела G1. В еще одном варианте реализа- 6 043536 ции, фрагмент содержит одну или несколько вариабельных областей из легкой цепи и/или тяжелой цепи, представленных на фиг. 5. В еще одном варианте реализации, фрагмент содержит один или несколько
CDR из легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела G1.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полипептиды (которые могут быть или не быть антителом), содержащие VH CDR3, как представлено в SEQ ID NO: 5, или последовательность, которая отличается от SEQ ID NO: 5 1, 2, 3, 4, или 5 аминокислотными замещениями. В конкретном варианте реализации, такие аминокислотные замещения являются консервативными замещениями.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полипептиды (которые могут быть или не быть антителом), содержащие VL CDR3, как представлено в SEQ ID NO: 8, или последовательность, которая отличается от SEQ ID NO: 8 1, 2, 3, 4, или 5 аминокислотными замещениями. В конкретном варианте реализации, такие аминокислотные замещения являются консервативными замещениями.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полипептиды (которые могут быть или не быть антителом), содержащие любой один или несколько из следующих: а) один или несколько CDR(s) антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; b) CDR H3 из тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; с) CDR L3 из легкой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; d) три CDR из легкой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; е) три CDR из тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; f) три CDR из легкой цепи и три CDR из тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. В некоторых вариантах реализации, изобретение дополнительно предусматривает полипептиды (которые могут быть или не быть антителом), содержащие любой один или несколько из следующих: а) один или несколько (один, два, три, четыре, пять или шесть) CDR(s), выделенных из антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; b) CDR, выделенный из CDR H3 из тяжелой цепи антитела G1; и/или с) CDR, выделенный из CDR L3 из легкой цепи антитела G1. В некоторых вариантах реализации, CDR представляет собой CDR, представленный на фиг. 5. В некоторых вариантах реализации, один или несколько CDR, выделенных из антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, являются по меньшей мере на около 85%, по меньшей мере около 86%, по меньшей мере около 87%, по меньшей мере около 88%, по меньшей мере около 89%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 91%, по меньшей мере около 92%, по меньшей мере около 93%, по меньшей мере около 94%, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98%, или по меньшей мере около 99% идентичными по отношению к по меньшей мере одному, по меньшей мере двум, по меньшей мере трем, по меньшей мере четырем, по меньшей мере пяти, или по меньшей мере шести CDR G1 или его вариантов.
В некоторых вариантах реализации, CDR представляет собой CDR по системе Kabat. В других вариантах реализации, CDR представляет собой CDR по системе Chothia. В других вариантах реализации, CDR представляет собой комбинацию CDR по системам Kabat и Chothia (также называемую объединенный CDR или расширенный CDR). Другими словами, для любого данного варианта реализации, содержащего более одного CDR, причем CDR могут быть любыми из Kabat, Chothia, и/или объединенных.
В некоторых вариантах реализации, полипептид (такой как антитело) содержит аминокислотную последовательность KASKXaaVXaaTYVS (SEQ ID NO. 53), где Хаа в положении 5 обозначает R, W, G, L, или N; и где Xaa в положении 7 обозначает Т, А, D, G, R, S, W, или V. В некоторых вариантах реализации, аминокислотная последовательность KASKXaaVXaaTYVS (SEQ ID NO: 53) представляет собой CDR1 легкой цепи антитела.
В некоторых вариантах реализации, полипептид (такой как антитело) содержит аминокислотную последовательность XaaXaaSNRYXaa (SEQ ID NO. 54), где Хаа в положении 1 обозначает G или А; где Xaa в положении 2 обозначает А или H; и где Xaa в положении 7 обозначает L, Т, I или S. В некоторых вариантах реализации, аминокислотная последовательность XaaXaaSNRYXaa (SEQ ID NO: 54) представляет собой CDR2 легкой цепи антитела.
В некоторых вариантах реализации, полипептид (такой как антитело) содержит аминокислотную последовательность EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG (SEQ ID NO: 55), где Xaa в положении 5 обозначает Е, R, K, Q, или N; где Xaa в положении 8 обозначает A, G, N, E, H, S, L, R, С, F, Y, V, D, или Р; где Xaa в положении 9 обозначает S, G, T, Y, С, Е, L, A, P, I, N, R, V, D, или М; где Xaa в положении 12 обозначает H или F; где Xaa в положении 15 обозначает E или D. В некоторых вариантах реализации, аминокислотная последовательность EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG (SEQ ID NO: 55) представляет собой CDR2 тяжелой цепи антитела.
В некоторых вариантах реализации, полипептид (такой как антитело) содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в которой аминокислотный остаток в положении 99 SEQ ID NO: 1 представляет собой L или замещен на A, N, S, Т, V, или R; и в которой аминокислотные остатки в положении 100 SEQ ID NO: 1 представляют собой А или замещены на L, R, S, V, Y, С, G, Т, K, или P.
В некоторых вариантах реализации, антитело представляет собой человеческое антитело. В других вариантах реализации, антитело представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах реализации, антитело является моноклональным. В некоторых вариантах реализации, антитело (или по- 7 043536 липептид) является выделенным. В некоторых вариантах реализации, антитело (или полипептид) является по существу чистым.
Константная область тяжелой цепи антител может принадлежать к любым типам константной области, таким как IgG, IgM, IgD, IgA, и IgE; и любым изотипам, таким как IgG1, IgG2, IgG3, и IgG4.
В некоторых вариантах реализации, антитело содержит модифицированную константную область, как описано в данном документе.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полинуклеотид (который может быть выделенным), содержащий полинуклеотид, кодирующий фрагмент или область антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. В одном варианте реализации, фрагмент представляет собой легкую цепь антитела G1. В другом варианте реализации, фрагмент представляет собой тяжелую цепь антитела G1. В еще одном варианте реализации, фрагмент содержит одну или несколько вариабельных областей из легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела G1. В еще одном варианте реализации, фрагмент содержит один или несколько (т.е., один, два, три, четыре, пять или шесть) участков, определяющих комплементарность (CDR) из легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела G1.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полинуклеотид (который может быть выделенным), содержащий полинуклеотид, который кодирует антитело G1 или его варианты, представленные в табл. 6. В некоторых вариантах реализации, полинуклеотид содержит любой из или оба полинуклеотида, представленные SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полинуклеотиды кодирующие любые из антител (включая фрагменты антител) или полипептидов, описанных в данном документе.
В другом аспекте, изобретение предусматривает вектора (включая экспрессионные и клонирующие вектора) и клетки-хозяева, содержащие любой полинуклеотид, раскрытый в данном документе. В некоторых вариантах реализации, вектор представляет собой pDb.CGRP.hFcGI, имеющий № АТСС РТА6867. В других вариантах реализации, вектор представляет собой pEb.CGRP.hKGI, имеющий № АТСС РТА-6866.
В другом аспекте, изобретение предусматривает клетку-хозяина, содержащую полинуклеотид, кодирующий любое из антител, описанных в данном документе.
В другом аспекте, изобретение предусматривает комплекс CGRP, связанный с любым из антител или полипептидов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации, антитело представляет собой антитело G1 или его варианты, представленные в табл. 6.
В другом аспекте, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество любого из полипептидов (включая антитела, такие как антитело, содержащее один или несколько CDR антитела G1) или полинуклеотидов, описанных в данном документе, и фармацевтически приемлемый вспомогательное вещество.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способ получения антитела G1, включающий культивацию клетки-хозяина или ее потомства в условиях, позволяющих продуцировать антитела G1, где клетка-хозяин содержит экспрессионный вектор, который кодирует антитело G1; и, в некоторых вариантах реализации, очистку антитела G1. В некоторых вариантах реализации, экспрессионный вектор содержит одну или обе полинуклеотидные последовательности, представленные SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способы получения любых антител или полипептидов, описанных в данном документе, путем экспрессии одного или нескольких полинуклеотидов, кодирующих антитело (которое может экспрессироваться раздельно в виде отдельных легкой или тяжелой цепей, или легкая и тяжелая цепь экспрессируются вместе из одного вектора) или полипептид в пригодной клетке, обычно с последующим извлечением и/или выделением антитела или полипептидов, представляющих интерес.
Антагонистическое антитело против CGRP и полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие антитела и полипептиды по настоящему изобретению, могут быть использованы для лечения, предотвращения, облегчения, контроля или снижения частоты болезней, ассоциированных с аномальной функцией CGRP, таких как головная боль (например, мигрень, кластерная головная боль, хроническая головная боль, и тензионная головная боль) и другие состояния, которые могут лечиться или предотвращаться путем антагонизации активности CGRP.
В другом аспекте, изобретение предусматривает наборы и композиции, содержащие любую одну или несколько композиций, описанных в данном документе. Такие наборы, обычно в пригодной упаковке и снабженные соответствующими инструкциями, пригодны для использования в любом из способов, описанных в данном документе.
В одном аспекте, изобретение предусматривает композицию для использования в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе.
В одном аспекте, изобретение предусматривает композицию для использования в лечении или для снижения частоты по меньшей мере одного вазомоторного симптома и/или головной боли у субъекта. В одном варианте реализации, использование включает введение субъекту в течение множества дней некоторого количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела
- 8 043536 против CGRP), которое модулирует путь CGRP, причем количество, вводимое в каждый из множества дней, составляет менее 1000 мг. В одном варианте реализации, использование включает введение субъекту в течение множества дней некоторого количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP, причем количество, вводимое в каждый из множества дней, имеет значение в диапазоне 100-2000 мг. В некоторых вариантах реализации, головная боль представляет собой мигрень (например, хроническую мигрень или эпизодическую мигрень). В некоторых вариантах реализации, два из множества дней разделены интервалом более чем семь дней. В некоторых вариантах реализации, частота головной боли снижается по меньшей мере на семь дней после однократного введения. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела, вводимого в первый день, отличается от (например, превышает) количество моноклонального антитела, вводимого во второй день. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят менее чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное введение. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, введение включает использование предварительно наполненного шприца, содержащего определенное количество моноклонального антитела. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, месячное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 40 или более часов (например, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, или более) по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. Месячное количество часов головной боли могут быть уменьшено более чем на 60 ч. В некоторых вариантах реализации, месячное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, после указанного введения, снижается на 25% или больше (например, 30, 35, 40, 45, 50% или больше) по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. Месячное количество часов головной боли могут быть уменьшено на 40% или больше. В некоторых вариантах реализации, месячное количество дней головной боли, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 3 или больше дней (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше дней) по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В некоторых вариантах реализации, использование дополнительно включает введение субъекту второго агента одновременно или последовательно с моноклональным антителом. Второй агент может быть любым из агонистов 5-НТ1, триптанов, алкалоидов спорыньи и нестероидных противовоспалительных лекарственных средств. В некоторых вариантах реализации, второй агент представляет собой агент, принимаемый субъектом профилактически. В некоторых вариантах реализации, месячное применение второго агента субъектом снижается по меньшей мере на 15% после введения моноклонального антитела. В некоторых вариантах реализации, второй агент представляет собой триптан. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным моноклональным антителом. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает композицию, используемую для снижения величины месячного количества часов головной боли, испытываемой субъектом. В одном варианте реализации, использование включает введение субъекту количества моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает величину месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 20 (например, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 или больше часов головной боли) после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, величина месячного количества часов головной боли снижается по меньшей мере на около 50 ч. В одном варианте реализации, использование включает введение субъекту количества моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает величину месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 15% (например, 20, 25, 30, 35, 40% или больше) после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, величина месячного количества часов головной боли снижается по меньшей мере на около 30%. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело представляет собой антагонистическое антитело против CGRP. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят меньше чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное или внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации по меньшей мере 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, (в которых) моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2,
- 9 043536 как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8;
или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает композицию, используемую для снижения величины месячного количества дней головной боли, испытываемой субъектом. В одном варианте реализации, использование включает введение субъекту количества моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает величину месячного количества дней головной боли по меньшей мере на 3 (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше дней головной боли) после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, величина месячного количества дней головной боли снижается по меньшей мере на около 6 дней головной боли. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело представляет собой антагонистическое антитело против CGRP. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят меньше чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное или внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации по меньшей мере 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, (в которых) моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает композицию, используемую для снижения использования лекарственного препарата против головной боли у субъекта, включающий введение субъекту моноклонального антитела (например, антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP, где количество моноклонального антитела эффективно снижает месячное применение субъектом лекарственного препарата против головной боли по меньшей мере на 15% (например, 20, 25, 30, 35, 40% или больше). В некоторых вариантах реализации, лекарственный препарат против головной боли выбирают из группы, состоящей из агонистов 5-НТ1, триптанов, опиатов, β-адренергических антагонистов, алкалоидов спорыньи, и нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDs). В некоторых вариантах реализации, лекарственным препаратом против головной боли является триптан. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела составляет менее 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, субъекту вводят меньше чем 3 дозы в месяц. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой подкожное или внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, композицию моноклонального антитела готовят в концентрации по меньшей мере 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, (в которых) моноклональное антитело вводят в объеме менее 2 мл. В некоторых вариантах реализации, субъект является человеком. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело является человеческим или гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело включает (а) антитело, имеющее CDR H1, как представлено в SEQ ID NO: 3; CDR H2, как представлено в SEQ ID NO: 4; CDR H3, как представлено в SEQ ID NO: 5; CDR L1, как представлено в SEQ ID NO: 6; CDR L2, как представлено в SEQ ID NO: 7; и CDR L3, как представлено в SEQ ID NO: 8; или (b) вариант антитела в соответствии с (а), как показано в табл. 6.
В одном аспекте, изобретение предусматривает композицию, используемую для лечения или снижения частоты головной боли (например, мигрени) у субъекта, включающий введение субъекту разовой дозы моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) в количестве, которое модулирует путь CGRP, причем количество моноклонального антитела имеет значение в диапазоне 100-2000 мг.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 представляет собой таблицу, показывающую аффинности связывания 12 мышиных антител для фрагментов человеческого α-CGRP с разными замещениями аланина. Аффинности связывания измеряли при 25°С с использованием Biacore путем пропускания Fabs над CGRPs на чипе. Значения в рамке отображают потерю аффинности аланиновых мутантов по сравнению с исходным фрагментом, 25-37 (выделено курсивом), за исключением K35A, который был получен из 19-37 исходного фрагмента. a указывает аффинности для фрагментов 19-37 и 25-37, представленные как среднее ± стандартное отклонение для двух независимых измерений на разных сенсорных чипах. b указывает взаимодействия, отклоняющиеся от модели простого бимолекулярного взаимодействия вследствие двухфазной диссоциации, аффинности которых определялись с использованием модели конформационных изменений. Значения величин, выделенные серым фоном разной интенсивности: белый (1,0) обозначает исходную аффинность; светло-серый (менее 0,5) обозначает аффинность, повышенную по сравнению с исходной; темносерый (более 2) обозначает аффинность ниже исходной; и черный указывает, что связывание не наблю- 10 043536 далось.
Фиг. 2А и 2В демонстрируют эффект введения CGRP 8-37 (400 нмоль/кг), антитела 4901 (25 мг/кг) и антитела 7D11 (25 мг/кг) на кожный кровоток, измеренный как поток кровяных клеток после электроимпульсной стимуляции в течение 30 с. CGRP 8-37 вводили внутривенно (в/в) за 3-5 мин до электроимпульсной стимуляции. Антитела вводили интраперитонеально (IP) за 72 ч до электроимпульсной стимуляции. Каждая точка на графиках соответствует значению AUC (площадь под кривой) для одной крысы, получавшей препараты в указанных условиях. Каждая линия на графиках обозначает среднее значение AUC для крыс, получавших указанный препарат. AUC (площадь под кривой) равняется произведению Апоток на Авремя. Апоток обозначает изменение величины потока, выраженной в единицах потока после электроимпульсной стимуляции; и Авремя обозначает период времени, необходимый для возвращения величины лотока кровяных клеток к уровню до электроимпульсной стимуляции.
Фиг. 3 показывает эффект введения разных доз антитела 4901 (25, 5, 2,5 или 1 мг/кг) на кожный кровоток, измеренный как поток кровяных клеток после электроимпульсной стимуляции в течение 30 с. Антитела вводили внутривенно (IV) за 24 ч до электроимпульсной стимуляции. Каждая точка на графике соответствует величине AUC для одной из крыс, получавших указанный препарат. Линия на графике показывает среднее значение AUC для крыс, получавших указанный препарат.
Фиг. 4А и 4В демонстрируют эффект введения антитела 4901 (1 мг/кг или 10 мг/кг, в/в), антитела 7Е9 (10 мг/кг, в/в), и антитела 8В6 (10 мг/кг, в/в) на кожный кровоток, измеренный как поток кровяных клеток после электроимпульсной стимуляции в течение 30 с. Антитела вводили внутривенно (в/в) с последующей электроимпульсной стимуляцией в моменты времени 30, 60, 90 и 120 мин после введения антитела. Ось Y показывает величину AUC в процентах от уровня AUC без введения антитела (момент времени 0). Ось X показывает период времени (минут) между введением антител и электроимпульсной стимуляцией. * обозначает P <0,05, и ** обозначает Р<0,01, по сравнению с моментом времени 0. Данные анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Даннета.
Фиг. 5 показывает аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи (SEQ ID NO: 1) и вариабельного участка легкой цепи (SEQ ID NO: 2) антитела G1. CDR по системе Kabat выделены жирным шрифтом, и CDR по системе Chothia - подчеркиванием. Аминокислотные остатки вариабельных участков тяжелой цепи и легкой цепи пронумерованы последовательно.
Фиг. 6 изображает картирование эпитопа антитела G1 методом пептидного конкурентного анализа с использованием Biacore. N-биотинилированный человеческий α-CGRP захватывали на сенсорном чипе SA. Поток связывани Fab G1 (50 нМ) в отсутствие конкурентного пептида или предварительно инкубированный в течение 1 ч с 10 мкМ конкурентного пептида пропускали над чипом. Измеряли связывание связывани Fab G1 с человеческим α-CGRP на чипе. Ось Y показывает процент связывания, блокируемый в присутствии конкурентного пептида по сравнению со связыванием в отсутствие конкурентного пептида.
Фиг. 7 показывает эффект введения антитела G1 (1 мг/кг или 10 мг/кг, в/в) или носителя (PBS (фосфатно-солевой буфер), 0,01% Tween 20) на кожный кровоток, измеренный как поток кровяных клеток после электроимпульсной стимуляции в течение 30 с. Антитело G1 или носитель вводили внутривенно (в/в) с последующей электроимпульсной стимуляцией нерва в моменты времени 30, 60, 90 и 120 мин после введения антитела. Ось Y показывает величину AUC в процентах от уровня AUC без введения антитела или носителя (принимался за 100%) (момент времени 0). Ось X показывает период времени (минут) между введением антител и электроимпульсной стимуляцией. * обозначает P<0,05, и ** обозначает P<0,01, по сравнению с носителем. Данные анализировали с использованием двухфакторного дисперсионного анализа и апостериорных тестов Бонферрони.
Фиг. 8А показывает эффект введения антитела G1 (1, 3 или 10 мг/кг, в/в) или носителя (PBS, 0,01% Tween 20) на кожный кровоток, измеренный как поток кровяных клеток после электроимпульсной стимуляции в течение 30 с через 24 ч после введения дозы. Антитело G1 или носитель вводили внутривенно (в/в) за 24 ч до электроимпульсной стимуляции нерва. Ось Y показывает общую площадь под кривой (изменение потока кровяных клеток, умноженное на время от момента стимуляции до возвращения потока к базовой линии, AUC). Ось X показывает различные дозы антитела G1. * обозначает P<0,05, и ** обозначает P<0,01, по сравнению с носителем. Данные анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа и теста множественного сравнения Данна.
Фиг. 8В показывает эффект введения антитела G1 (0,3, 1, 3 или 10 мг/кг, в/в) или носителя (PBS, 0,01% Tween 20) на кожный кровоток, измеренный как поток кровяных клеток после электроимпульсной стимуляции в течение 30 с через 7 дней после введения дозы. Антитело G1 или носитель вводили внутривенно (в/в) за 7 дней до электроимпульсной стимуляции нерва. Ось Y показывает общую AUC. Ось X показывает различные дозы антитела G1. ** обозначает P<0,01, и *** обозначает P<0,001, по сравнению с носителем. Данные анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа и теста множественного сравнения Данна.
Фиг. 8С показывает анализ данных, представленных на фиг. 8А и 8В, путем аппроксимации кривых. Антитело G1 или носитель вводили внутривенно (в/в) за 24 ч или за 7 дней до электроимпульсной
- 11 043536 стимуляции нерва. Ось Y показывает общую AUC. Ось X показывает различные дозы антитела G1 в мг/кг на логарифмической шкале для определения EC50.
Фиг. 9 показывает эффект антитела mu7E9 (10 мг/кг), BIBN4096BS или носителя (PBS, 0,01% Tween 20) на изменение диаметра средней менингеальной артерии после стимуляции электрическим полем. Антитело mu7E9, BIBN4096BS или носитель вводили внутривенно (в/в) в момент времени 0 мин после установления отклика на электрическую стимуляцию. Ось Y показывает изменения диаметра средней менингеальной артерии после стимуляции электрическим полем. Диаметр в состоянии покоя соответствует 0%. Ось X показывает время (минут) электроимпульсной стимуляции. * обозначает P<0,05, и ** обозначает P<0,01, по сравнению с носителем. Данные анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа и теста множественного сравнения Даннета.
Фиг. 10 показывает эффект различных доз антитела G1 (1, 3 или 10 мг/кг, в/в) или носителя (PBS, 0,01% Tween 20) на изменение диаметра средней менингеальной артерии после стимуляции электрическим полем. Антитело G1 или носитель вводили внутривенно (в/в) за 7 дней до стимуляции электрическим полем. Ось Y показывает изменения диаметра средней менингеальной артерии. Диаметр в состоянии покоя соответствует 0%. Ось X показывает напряжение стимуляции. * обозначает P<0,05, ** обозначает P<0,01, и *** обозначает P<0,001, по сравнению с носителем. Данные анализировали с использованием двухфакторного дисперсионного анализа и апостериорных тестов Бонферрони.
Фиг. 11А показывает эффект антитела mu4901 (10 мг/кг) или носителя (PBS, 0,01% Tween 20), при внутривенном (в/в) введении за 24 ч, на снижение внутренней температуры тела, индуцированное подкожной инъекцией налоксона (1 мг/кг), у морфинзависимых крыс. Ось Y показывает разницу температур по сравнению с базовой линией. Ось X показывает время, прошедшее с момента инъекции налоксона.
Фиг. 11В показывает эффект антитела mu4901 (10 мг/кг) или носителя (PBS, 0,01% Tween 20), при внутривенном (в/в) введении за 24 ч, на увеличение температуры поверхности хвоста, индуцированное подкожной инъекцией налоксона (1 мг/кг) у морфинзависимых крыс. Ось Y показывает разницу температур по сравнению с базовой линией. Ось X показывает время, прошедшее с момента инъекции налок сона.
Фиг. 12 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Фиг. 13 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Фиг. 14 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Фиг. 15 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Фиг. 16 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Фиг. 17 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Фиг. 18 представляет собой график, иллюстрирующий результаты сравнивающих эффект разных доз антитела G1 с плацебо.
Детальное описание клинических клинических клинических клинических клинических клинических клинических исследований исследований исследований исследований исследований исследований исследований
В некоторых аспектах, изобретение, раскрытое в данном документе, предусматривает способы лечения и/или предотвращения вазомоторных симптомов (например, приливов крови) у особы путем введения особе терапевтически эффективного количества антагонистического антитела против CGRP.
В некоторых аспектах, изобретение, раскрытое в данном документе, предусматривает способы лечения и/или предотвращения головной боли (например, мигрени, кластерной головной боли, хронической головной боли и головной боли напряжения) у особы путем введения особе терапевтически эффективного количества антагонистического антитела против CGRP. В некоторых случаях, головная боль представляет собой мигрень.
В некоторых аспектах, изобретение, раскрытое в данном документе, также предусматривает антагонистические антитела против CGRP и полипептиды, полученные из G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает способы по лучения и использования таких антител и полипептидов.
В данном изобретении приводятся ссылки на различные публикации (включая патенты и патентные заявки). Описания этих публикаций в полном объеме настоящим включены в данный документ в качестве ссылок.
Общие методики.
В практике различных аспектов настоящего изобретения будут использоваться, если не указано иное, обычные методики молекулярной биологии (включая рекомбинантные методики), микробиологии, биологии клетки, биохимии и иммунологии, доступные квалифицированным специалистам в данной области техники. Такие методики подробно описаны в литературе, например
- 12 043536
Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor
Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic
Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons;
Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M.
Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain реакция, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997);
Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D.
Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D.
Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).
Определения.
Антитело представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., посредством по меньшей мере одного сайта распознавания антигена, расположенного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. В используемом в данном документе значении, данный термин охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также их фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')2, Fv), одноцепочечные (ScFv), их мутанты, гибридные белки, содержащие участок, являющийся антителом (такие как доменные антитела), и любые другие модифицированные конфигурации молекулы иммуноглобулина, содержащие сайт распознавания антигена. Антитело включает антитела любого класса, такого как IgG, IgA или IgM (или их подкласса), и антитело не должно обязательно принадлежать к какому-либо конкретному классу. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелых цепей антитела, иммуноглобулины могут быть отнесены к разным классам. Существуют пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и несколько из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелых цепей, соответствующие разным классам иммуноглобулинов, называются альфа, дельта, эпсилон, гамма, и мю, соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации разных классов иммуноглобулинов хорошо известны.
В используемом в данном документе значении, моноклональное антитело относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е., индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифическими, будучи нацеленными на отдельный антигенный сайт. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые типично включают разные антитела, нацеленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело нацелено против отдельной детерминанты антигена. Определение моноклональный указывает на характер антитела как полученного из по существу гомогенной популяции антител, и не должно истолковываться как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для использования в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены по методу гибридом, впервые описанному Kohler and Milstein, 1975, Nature, 256:495, или могут быть получены способами рекомбинантных ДНК, такими как описанные в патент США № 4816567. Моноклональные антитела могут также быть выделены из фаговых библиотек, полученных с использованием способов, описанных, например, в McCafferty et al., 1990, Nature, 348:552-554.
В используемом в данном документе значении, гуманизированные антитела относятся к формам нечеловеческих (например, мышиных) антител, которые являются специфическими химерными иммуноглобулинами, цепями иммуноглобулинов, или их фрагментами (такими как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или
- 13 043536 другие антигенсвязывающие субпоследовательности антител), содержащими минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. Большей частью, гуманизированные антитела являются человеческими иммуноглобулинами (антитело реципиента), в которых остатки из принадлежащего реципиенту участка, определяющего комплементарность (CDR), замещены на остатки из CDR, принадлежащего не являющемуся человеком вида (донорное антитело), такого как мышь, крыса или кролик, имеющего желательную специфичность, аффинность и биологическую активность. В некоторых случаях, остатки каркасного участка (FR) Fv человеческого иммуноглобулина замещены на соответствующие не принадлежащие человеку остатки. Кроме того, гуманизированное антитело может содержать остатки, не присутствующие ни в антителе реципиента, ни в импортируемых последовательностях CDR или каркасного участка, но включенные для дополнительного уточнения и оптимизации характеристик антитела. В общем, гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного, и типично двух, вариабельных доменов, в которых все или по существу все из участков CDR соответствуют не принадлежащему человеку иммуноглобулину, и все или по существу все из участков FR принадлежат консенсусной последовательности человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело будет также содержать по меньшей мере часть константной области или домена (Fc) иммуноглобулина, типично, человеческого иммуноглобулина. Антитела могут содержать участки Fc, модифицированные как описано в WO 99/58572. Другие формы гуманизированных антител имеют один или несколько CDR (один, два, три, четыре, пять, шесть), которые являются измененными по сравнению с исходным антителом, которые также называются одним или несколькими CDR, полученными из одного или нескольких CDR исходного антитела.
В используемом в данном документе значении, человеческое антитело означает антитело, имеющее аминокислотную последовательность соответствующую антителу, продуцируемому человеком, и/или полученное с использованием любых способов получения человеческих антител, известных специалистам или раскрытых в данном документе. Это определение человеческого антитела включает антитела, содержащие по меньшей мере один полипептид тяжелой цепи человека или по меньшей мере один полипептид легкой цепи человека. Одним из таких примеров является антитело, содержащее полипептиды мышиной легкой цепи и человеческой тяжелой цепи. Человеческие антитела могут быть получены с использованием различных методик, известных специалистам. В одном варианте реализации, человеческое антитело выбирают из фаговой библиотеки, причем такая фаговая библиотека экспрессирует человеческие антитела (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, PNAS, (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). Человеческие антитела также могут быть получены путем введения локусов человеческого иммуноглобулина в трансгенных животных, например мышей, в которых эндогенные гены иммуноглобулина были частично или полностью инактивированы. Этот подход описан в патентах США № 5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425 и 5661016. Альтернативно, человеческое антитело может быть получено путем иммортализации человеческих B-лимфоцитов, которые продуцируют антитело, направленны против антигена-мишени (такие В-лимфоциты могут быть выделены из индивидуума или могут быть иммунизированы in vitro). См., например, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (l):86-95; и патенте США № 5750373.
В используемом в данном документе значении, термин пептид, кодируемый геном кальцитонина и CGRP относится к любой форме пептида, кодируемого геном кальцитонина, и его вариантам, которые сохраняют по меньшей мере часть активности CGRP. Например, CGRP может быть α-CGRP или βCGRP. В используемом в данном документе значении, CGRP включает нативные последовательности CGRP, принадлежащие всем видам млекопитающих, например, человеку, собачьим, кошачьим, лошадиным и бычьим.
В используемом в данном документе значении, антагонистическое антитело против CGRP (взаимозаменяемо называемое антитело против CGRP) относится к антителу, способному связываться с CGRP и ингибировать биологическую активность CGRP и/или метаболический путь (пути), медиируемые сигнализацией CGRP. Антагонистическое антитело против CGRP охватывает антитела, которые модулируют, блокируют, антагонизируют, подавляют или снижают (включая значительно) биологическую активность CGRP, или иначе антагонизируют путь CGRP, включая метаболические пути, медиируемые сигнализацией CGRP, такой как связывание рецептора и/или вызывание клеточного ответа на CGRP. В целях настоящего изобретения, следует четко понимать, что термин антагонистическое антитело против CGRP охватывает все ранее определенные термины, названия и функциональные состояния и характеристики, посредством которых собственно CGRP, биологическая активность CGRP (включая, без ограничений, его способность медиировать любой аспект головной боли), или последствия биологической активности, по существу сводятся к нулю, уменьшаются или нейтрализуются в любой значимой степени. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывает CGRP и предотвращает связывание CGRP с рецептором CGRP. В других вариантах реализации, антитело против CGRP связывает CGRP и предотвращает активацию рецептора CGRP. Примеры антагонистических антител против CGRP представлены в данном документе.
В используемом в данном документе значении, термины G1 и антитело G1 используются взаи
- 14 043536 мозаменяемо по отношению к антителу, продуцируемому экспрессионными векторами, имеющими номера депонирования в ATCC PTA-6867 и ATCC PTA-6866. Аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелой цепи и легкой цепи представлены на фиг. 5. Участки CDR антитела G1 (включая CDR по системам Chothia и Kabat) схематично изображены на фиг. 5. Полинуклеотиды, кодирующие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, представлены в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. Определение характеристик G1 описано в примерах.
Термины полипептид, олигопептид, пептид и белок используются взаимозаменяемо в данном документе по отношению к полимерам аминокислот любой длины. Полимер может быть линейным или разветвленным, он может содержать модифицированные аминокислоты, и он может содержать в цепи звенья, не являющиеся аминокислотами. Термины также охватывают полимер аминокислот, который был модифицирован природным путем или путем вмешательства; например, образованием дисульфидной связи, гликозилированием, липидированием, ацетилированием, фосфорилированием, или любыми другими манипуляциями или модификациями, такими как конъюгация с компонентом метки. Данное определение также включает, например, полипептиды, содержащие один или несколько аналогов аминокислоты (включая, например, неприродные аминокислоты и т.д.), а также другие модификации, известные специалистам. Следует понимать, что, поскольку полипептиды по данному изобретению основаны на антителе, полипептиды могут существовать в виде одиночной цепи или ассоциированных цепей.
Полинуклеотид или нуклеиновая кислота, используемые взаимозаменяемо в данном документе, относятся к полимерам нуклеотидов любой длины, и включают ДНК и РНК. Нуклеотиды могут быть дезоксирибонуклеотидами, рибонуклеотидами, модифицированными нуклеотидами или основаниями, и/или их аналогами, или любым субстратом, который может быть включен в полимер с помощью ДНКили РНК-полимеразы. Полинуклеотид может содержать модифицированные нуклеотиды, такие как метилированные нуклеотиды и их аналоги. Модификации структуры нуклеотида, если они присутствуют, могут быть введены до или после сборки полимера. Последовательность нуклеотидов может включать компоненты, не являющиеся нуклеотидами. Полинуклеотид может быть дополнительно модифицирован после полимеризация, например, путем конъюгации с компонентом метки. Другие типы модификаций включают, например, кэпы, замещение одного или нескольких природных нуклеотидов на аналог, межнуклеотидные модификации, такие как, например, с незаряженными связями (например, метилфосфонаты, полные сложные эфиры фосфорной кислоты, фосфоамидаты, карбаматы и т.д.) и с заряженными связями (например, фосфоротиоаты, фосфородитиоаты и т.д.), содержащие присоединенные фрагменты в боковых цепях, такие как, например, белки (например, нуклеазы, токсины, антитела, сигнальные пептиды, ply-L-лизин и т.д.), содержащие интеркаляторы (например, акридин, псорален и т.д.), содержащие комплексообразователи (например, металлы, радиоактивные металлы, бор, металлы-окислители и т.д.), содержащие алкилирующие фрагменты, содержащие модифицированные связи (например, альфааномерные нуклеиновые кислоты и т.д.), а также немодифицированные формы полинуклеотида (полинуклеотидов). Дополнительно, любая из гидроксильных групп, обычно присутствующих в сахарах, может быть замещена, например, на фосфонатные группы, фосфатные группы, защищена стандартными защитными группами или активирована для получения дополнительных связей с дополнительными нуклеотидами, или могут быть конъюгирована с твердыми носителями. 5'- и 3'-концевые OH могут быть фосфорилированы или замещены аминами или органическими фрагментами кэпирующих групп, содержащими от 1 до 20 атомов углерода. Другие гидроксилы также могут быть дериватизированы в стандартные защитные группы. Полинуклеотиды могут также содержать формы с аналогами рибозных или дезоксирибозных сахаров, являющихся общеизвестными для специалистов, включая, например, 2'-Ометил-, 2'-О-аллил, 2'-фтор- или 2'-азидо-рибозу, карбоциклические аналоги сахаров, α-аномерные сахара, эпимерные сахара, такие как арабиноза, ксилозы или ликсозы, пиранозные сахара, фуранозные сахара, седогептулозы, ациклические аналоги и абазические нуклеозидные аналоги, такие как метилрибозид. Одна или несколько фосфодиэфирных связей могут быть замещены на альтернативные связывающие группы. Такие альтернативные связывающие группы включают, без ограничений, варианты реализации, в которых фосфат замещен на P(O)S (тиоат), P(S)S (дитиоат), (O)NR2 (амидат), P(O)R, P(O)OR', CO или СН2 (формацеталь), в которых каждый R или R' независимо обозначает H или замещенный или незамещенный алкил (1-20 С), необязательно содержащий простую эфирную (-О-) связь, арил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил или аралдил. Связи в полинуклеотиде не должны быть все обязательно идентичными. Предшествующее описание относится ко всем полинуклеотидам, упоминаемым в данном документе, включая РНК и ДНК.
Вариабельная область антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела или вариабельной области тяжелой цепи антитела, по отдельности или в комбинации. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей состоят каждая из четырех каркасных участков (FR), соединенных тремя участками, определяющими комплементарность (CDR), также известными как гипервариабельные области. CDR в каждой цепи удерживаются вместе на небольшом расстоянии друг от друга с помощью FRs и, вместе с CDR другой цепи, участвуют в образовании антиген-связывающего сайта антител. Существует по меньшей мере два способа определения CDR: (1) подход, основанный на перекрестно-видовой вариабельности последовательности (т.е. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed.,
- 15 043536
1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); и (2) подход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов антиген-антитело (Al-lazikani et al. (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)). В используемом в данном документе значении, CDR могут относиться к CDR, определенным с помощью любого из подходов или комбинации обоих подходов.
Константная область антитела относится к константной области легкой цепи антитела или константной области тяжелой цепи антитела, по отдельности или в комбинации.
Эпитоп, который предпочтительно связывается или специфически связывается (используются в данном документе взаимозаменяемо) с антителом или полипептидом, является термином, хорошо понятным специалистам, и способы определения такого специфического или предпочтительного связывания также хорошо известны специалистам. Говорят, что молекула проявляет специфическое связывание или предпочтительное связывание, если она реагирует или ассоциируется более часто, более быстро, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело специфически связывается или предпочтительно связывается с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче, и/или с большей продолжительностью, чем с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом CGRP, представляет собой антитело, которое связывает этот эпитоп с большей аффинностью, авидностью, легче, и/или с большей продолжительностью, чем другие эпитопы CGRP или эпитопы, не относящиеся к CGRP. При прочтении этого определения также понятно, что, например, антитело (или фрагмент или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может специфически или предпочтительно связываться или не связываться со второй мишенью. По существу, специфическое связывание или предпочтительное связывание не требует обязательно (хотя и могут включать) исключительное связывание. В общем, но не обязательно, ссылка на связывание подразумевает предпочтительное связывание.
В используемом в данном документе значении, по существу чистый относится к материалу, который является по меньшей мере на 50% чистым (т.е. не содержит загрязнений), более предпочтительно, по меньшей мере на 90% чистым, более предпочтительно, по меньшей мере на 95% чистым, более предпочтительно, по меньшей мере на 98% чистым, более предпочтительно, по меньшей мере на 99% чистым.
Клетка-хозяин включает индивидуальную клетку или культуру клеток, которая может быть или не быть реципиентом для вектора (векторов) для включения полинуклеотидных вставок. Клетки-хозяева включают потомство отдельной клетки-хозяина, и потомство может не быть обязательно полностью идентичным (по морфологии или по комплементу геномной ДНК) исходным родительским клеткам вследствие природной, случайной или целенаправленной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом (полинуклеотидами) по настоящему изобретению.
Термин Fc-область используется для обозначения С-концевого участка тяжелой цепи иммуноглобулина. Fc-область может быть нативной последовательностью Fc-области или вариантом Fc-области. Хотя границы Fc-области тяжелой цепи иммуноглобулина могут изменяться, Fc-область тяжелой цепи человеческого обычно определяется как проходящая от аминокислотного остатка в положении Cys226, или от Pro230, до ее карбоксильного конца. Нумерация остатков в Fc-области соответствует EU-индексу, как в системе Kabat. Kabat et al., Sequences of Proteins of Imunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991. Fc-область иммуноглобулина обычно содержит два константных домена, СН2 и СН3.
В используемом в данном документе значении, Fc-рецептор и FcR описывают рецептор, который связывается с Fc-областью антитела. Предпочтительный FcR представляет собой человеческий FcR с нативной последовательностью. Кроме этого, предпочтительным FcR является такой, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcyRI, FcyRII и FcyRIII, включая аллельные варианты и альтернативно расщепленные формы этих рецепторов. Рецепторы FcyRII включают FcyRIIA (активирующий рецептор) и FcyRIIB (ингибирующий рецептор), которые имеют схожие аминокислотные последовательности, различающиеся преимущественно в цитоплазматических доменах. Обзор FcRs приведен в Ravetch and Kinet, 1991, Ann. Rev. Immunol., 9:457-92; Capel et al., 1994, Immunomethods, 4:25-34; и de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med., 126:330-41. FcR также включает неонатальный рецептор, FcRn, который отвечает за перенос материнских IgGs плоду (Guyer et al., 1976, J. Immunol., 117:587; и Kim et al., 1994, J. Immunol., 24:249).
Комплемент-зависимая цитотоксичность и CDC относятся к лизису мишени в присутствии комплемента. Путь активации комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с молекулой (например, антителом), образующей комплекс со своим антигеном. Для оценки активации комплемента может быть проведен анализ CDC, например, как описано в GazzanoSantoro et al., J. Immunol. Methods, 202:163 (1996).
Функциональная Fc-область обладает по меньшей мере одной эффекторной функцией Fc-области с нативной последовательностью. Типичные примеры эффекторных функций включают связывание C1q; комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC); связывание Fc-рецептора; опосредованную анти- 16 043536 телами клеточную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например В-клеточных рецепторов; BCR) и т.д. Такие эффекторные функции обычно требуют объединения Fc-области со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела) и могут быть определены с использованием различных анализов, известных специалистам и используемых для оценки таких эффекторных функций антител.
Fc-область с нативной последовательностью включает аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности Fc-области, существующей в природе. Вариант Fcобласти включает аминокислотную последовательность, которая отличается от Fc-области с нативной последовательностью за счет по меньшей мере одной модификации аминокислоты, но сохраняет по меньшей мере одну эффекторную функцию Fc-области с нативной последовательностью. Предпочтительно, вариант Fc-области имеет по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с Fcобластью с нативной последовательностью или с Fc-областью исходного полипептида, например, от около одного до около десяти аминокислотных замещений, и предпочтительно от около одного до около пяти аминокислотных замещений в Fc-области с нативной последовательностью или в Fc-области исходного полипептида. Вариант Fc-области в данном документе будет предпочтительно обладать по меньшей мере около 80% идентичности последовательности с Fc-областью с нативной последовательностью и/или с Fc-областью исходного полипептида, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере около 90% идентичности последовательности с ней, более предпочтительно, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98%, по меньшей мере около 99% идентичности последовательности с ней.
В используемом в данном документе значении опосредованная антителами клеточная цитотоксичность и ADCC относятся к клеточно медиируемой реакции, в которой неспецифические цитотоксические клетки, экспрессирующие Fc-рецепторы (FcRs) (например, природные клетки-убийцы (NK), нейтрофилы и макрофаги) распознают связанное антитело на клетке-мишени и затем вызывают лизис клетки-мишени. ADCC-активность молекулы, представляющей интерес, может быть оценена с использованием in vitro анализа ADCC, такого как описанный в патенте США № 5500362 или 5821337. Пригодные эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и NK-клетки. Альтернативно или дополнительно, ADCC-активность молекулы, представляющей интерес, может быть оценена in vivo, например, на животной модели, такой как раскрытые в Clynes et al., 1998, PNAS (USA), 95:652-656.
В используемом в данном документе значении, лечение представляет собой подход, предназначенный для достижения полезных или желательных клинических результатов. В целях настоящего изобретения, полезные или желательные клинические результаты включают, без ограничений, один или несколько из следующих: улучшение любого аспекта головной боли, включая уменьшение тяжести, ослабление интенсивности боли и других ассоциированных симптомов, снижение частоты рецидивов, повышение качества жизни лиц, страдающих от головной боли, и уменьшение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения головной боли. Для мигрени другие ассоциированные симптомы включают, без ограничений, тошноту, рвоту и чувствительность к свету, звукам и/или движениям. Для кластерной головной боли другие ассоциированные симптомы включают, без ограничений, припухлость под или вокруг глаз, чрезмерная слезливость, покраснение глаз, ринорея или заложенный нос, и раскрасневшееся лицо.
Снижение частоты головной боли означает любой результат из снижения тяжести (которое может включать уменьшение потребности в и/или количества (например, воздействия) других лекарственных средств и/или терапий, обычно используемых при этом состоянии, включая, например, эрготамина, дигидроэрготамина или триптанов при мигрени), продолжительности и/или частоты (включая, например, задержку или увеличение периода времени до следующего эпизодического приступа у особы). Как понятно специалистам в данной области техники, индивидуумы могут различаться по своему отклику на лечение и, по существу, например, способ снижения частоты головной боли у особы отражает введение антагонистического антитела против CGRP на основе обоснованного ожидания, что такое введение может вероятно вызвать такое снижение частоты у данного конкретного индивидуума.
Облегчение головной боли или одного или нескольких симптомов головной боли означает уменьшение или улучшение одного или нескольких симптомов головной боли по сравнению с отсутствием введения антагонистического антитела против CGRP. Облегчение также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.
В используемом в данном документе значении, контроль головной боли относится к поддержанию или снижению тяжести или продолжительности одного или нескольких симптомов головной боли или частоты приступов головной боли у особы (по сравнению с уровнем, существовавшим до проведения лечения). Например, продолжительность или тяжесть головной боли, или частоты приступов снижается у особы на любую величину из по меньшей мере около 10, 20, 30, 40, 50, 60 или 70%, по сравнению с уровнем до проведения лечения.
В используемом в данном документе значении, час головной боли относится к часу, на протяжении которого субъект испытывает головную боль. Часы головной боли могут быть выражены в целых
- 17 043536 часах (например, один час головной боли, два часа головной боли, три часа головной боли и т.д.) или в целых и дробных величинах часов (например, 0,5 ч головной боли, 1,2 ч головной боли, 2,67 ч головной боли и т.д.). Один или несколько часов головной боли могут быть указаны по отношению к определенному интервалу времени. Например, часы головной боли в день могут относиться к числу часов головной боли, которые субъект испытывает на протяжении дня (например, за 24-часовой период времени). В другом примере, часы головной боли в неделю могут относиться к числу часов головной боли, которую субъект испытывает в течение недели (например, за 7-дневный период). Следует понимать, что недельный интервал может соответствовать или не соответствовать календарной неделе. В другом примере, месячное количество часов головной боли может относиться к число часов головной боли, которую субъект испытывает на протяжении месяца. Следует понимать, что месячный интервал (например, период, равный 28-31 дням) может изменяться по числу дней в зависимости от конкретного месяца и могут соответствовать или не соответствовать календарному месяцу. В еще одном примере, годовое количество часов головной боли может относиться к числу часов головной боли, которую субъект испытывает на протяжении года. Следует понимать, что годовой интервал (например, период, равный 365 или 366 дням) может изменяться по числу дней в зависимости от конкретного года и могут соответствовать или не соответствовать календарному году. В некоторых вариантах реализации, час головной боли могут (быть указан) по отношению к конкретному типу головной боли (например, мигрень, кластерная головная боль, хроническая головная боль и тензионная головная боль). Например, час мигрени может относиться к часу, на протяжении которого субъект испытывает мигрень.
В используемом в данном документе значении, день головной боли относится к дню, на протяжении которого субъект испытывает головную боль. Дни головной боли могут быть выражены в целых днях (например, один день головной боли, два дня головной боли, три дня головной боли и т.д.) или в целых и дробных величинах дней например, 0,5 дня головной боли, 1,2 дня головной боли, 2,67 дней головной боли и т.д.). Один или несколько дней головной боли могут быть указан по отношению к конкретному интервалу времени. Например, недельное количество дней головной боли может относиться к числу дней головной боли, которую субъект испытывает в течение недели (например, за 7-дневный период). Следует понимать, что недельный интервал может соответствовать или не соответствовать календарной неделе. В другом примере, месячное количество дней головной боли может относиться к числу дней головной боли, которую субъект испытывает в течение месяца. Следует понимать, что месячный интервал (например, период, равный 28-31 дням) может изменяться по числу дней в зависимости от конкретного месяца и могут соответствовать или не соответствовать календарному месяцу. В еще одном примере, годичное количество дней головной боли может относиться к числу дней головной боли, которую субъект испытывает в течение года. Следует понимать, что годовой интервал (например, период, равный 365 или 366 дням) может изменяться по числу дней в зависимости от конкретного года и могут соответствовать или не соответствовать календарному году. В некоторых вариантах реализации, день головной боли могут быть указан по отношению к конкретному типу головной боли (например, мигрени, кластерной головной боли, хронической головной боли и головной боли напряжения). Например, день мигрени может относиться ко дню, на протяжении которого субъект испытывает мигрень.
В используемом в данном документе значении, задержка развития головной боли означает отсрочку, препятствование, замедление, торможение, стабилизацию и/или задержку прогрессирования болезни. Такая задержка может иметь разную продолжительность по времени, в зависимости от истории болезни и/или особ, получающих лечение. Квалифицированному специалисту в данной области техники понятно, что достаточная или значительная задержка может, фактически, охватывать предотвращение, в том смысле, что у индивидуума не происходит развития головной боли (например, мигрени). Способ, который задерживает развитие симптома, представляет собой способ, уменьшающий вероятность развития симптома в данный период времени и/или снижающий степень интенсивности симптомов в данный период времени, по сравнению с отсутствием использования способа. Такие сравнения типично основаны на клинических исследованиях, проводимых с использованием статистически значимого числа субъектов.
Развитие или прогрессирование головной боли означает начальные проявления и/или последующее прогрессирование расстройства. Развитие головной боли могут детектироваться и оцениваться с использованием стандартных клинических методик, хорошо известных специалистам. Однако развитие также относится к прогрессированию, которое может быть необнаруживаемым. В целях данного описания, развитие или прогрессирование относится к биологической последовательности проявления симптомов. Развитие включает эпизод, рецидив и начальные проявления. В используемом в данном документе значении начальные проявления или эпизод головной боли включают первичные проявления и/или рецидив.
В используемом в данном документе значении, эффективная доза или эффективное количество лекарственного препарата, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для обеспечения благоприятных или желательных результатов. При профилактическом применении, благоприятные или желательные результаты включают такие результаты, как устранение или снижение риска, ослабление тяжести или задержка начальных проявлений болезни, включая биохи
- 18 043536 мические, гистологические и/или поведенческие симптомы болезни, ее осложнения и промежуточные патологические фенотипы, проявляющиеся в ходе развития болезни. При терапевтическом применении, благоприятные или желательные результаты включают клинические результаты, такие как снижение интенсивности боли, продолжительности или частоты приступов головной боли, и ослабление одного или нескольких симптомов, вызываемых головной болью (биохимических, гистологических и/или поведенческих), включая ее осложнения и промежуточные патологические фенотипы, проявляющиеся в ходе развитие болезни, повышение качества жизни лиц, страдающих от болезни, снижение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения болезни, усиление эффекта другого лекарственного средства, и/или задержку прогрессирования болезни у пациентов. Эффективная доза может быть введена в один или несколько приемов. В целях данного описания, эффективная доза лекарственного препарата, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для проведения профилактического или терапевтического лечения, непосредственно или косвенно. Как должно быть понятно в клиническом контексте, эффективная доза лекарственного препарата, соединения или фармацевтической композиции могут быть достигнута или не достигнута в сочетании с другим лекарственным препаратом, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, эффективная доза может рассматриваться в контексте введения одного или нескольких терапевтических агентов, и отдельный агент может рассматриваться как введенный в эффективном количестве, если, в сочетании с одним или несколькими другими агентами, желательный результат может быть достигнут или достигается.
Индивидуум или субъект представляет собой млекопитающее, более предпочтительно, человека. Млекопитающие также включают, без ограничений, сельскохозяйственных животных, спортивных животных, домашних питомцев, приматов, лошадей, собак, кошек, мышей и крыс.
В используемом в данном документе значении, вектор означает конструкт, способный доставлять, и предпочтительно экспрессировать один или несколько генов или одну или несколько последовательностей, представляющих интерес, в клетке-хозяине. Примеры векторов включают, без ограничений, вирусные вектора, экспрессионные вектора голых ДНК или РНК, плазмидные, космидные или фаговые вектора, экспрессионные вектора ДНК или РНК, ассоциированные с катионными агентами конденсации, экспрессионные вектора ДНК или РНК, инкапсулированные в липосомы, и определенные эукариотические клетки, такие как клетки-продуценты.
В используемом в данном документе значении, контрольная последовательность экспрессии означает последовательность нуклеиновой кислоты, которая направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты. Контрольная последовательность экспрессии могут быть промотором, таким как конститутивный или индуцируемый промотор, или энхансером. Контрольная последовательность экспрессии функционально связана с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая должна быть транскрибирована.
В используемом в данном документе значении, фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает любой материал, который, в комбинации с активным ингредиентом, позволяет ингредиенту сохранять биологическую активность и является не-реактивным по отношению к иммунной системе субъекта. Примеры включают, без ограничений, любые стандартные фармацевтические носители, такие как забуференный фосфатом солевой раствор, воду, эмульсии, такие как эмульсия типа масло в воде, и различные типы смачивающих агентов. Предпочтительными разбавителями для аэрозольного или парентерального введения являются фосфатносолевой буфер или нормальный (0,9%) солевой раствор. Композиции, содержащие такие носители, составляют хорошо известными обычными способами (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; и Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000).
Термин kon, в используемом в данном документе значении, относится к константе скорости ассоциации антитела с антигеном.
Термин koff, в используемом в данном документе значении, относится к константе скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген.
Термин KD, в используемом в данном документе значении, относится к константе равновесной диссоциации взаимодействия антитело-антиген.
В используемом в данном документе значении, термин вазомоторный симптом относится к состояниям, связанным с вазодилатацией. Такая вазодилатация может быть ассоциирована или потенциально ассоциирована с головной болью (такой как мигрень с аурой или без нее; гемиплегическая мигрень; хроническая мигрень; эпизодическая мигрень; частая эпизодическая мигрень; кластерные головные боли; мигренозная невралгия; хронические головные боли; головные боли напряжения; головные боли, вызванные другими медицинскими состояниями (такими как инфекция или повышенное внутричерепное давление вследствие опухоли); хроническая пароксизмальная гемикрания; смешанная головная боль не связанная со структурными повреждениями; головная боль связанные с несосудистыми внутричерепными поражениями; головная боль, ассоциированная с введением вещества или прекращением его введения; головная боль, связанная с инфекцией вне головы; головная боль, связанная с метаболическим расстройством; головная боль, связанная с повреждением черепа, шеи, глаз, ушей, носа и околоносовых по- 19 043536 лостей, зубов и полости рта или других лицевых или черепных структур; черепные невралгии; и боль в нервном стволе и деафферентационная боль), приливами крови (или приступообразным ощущением жара), приступообразным ощущением холода, бессонницей, нарушениями сна, эмоциональными расстройствами, раздражительностью, чрезмерной потливостью, ночной потливостью, дневной потливостью, усталостью и т.п., вызванными, в числе прочего, терморегуляторной дисфункцией.
В используемом в данном документе значении, термины прилив, прилив крови и приступообразное ощущение жара являются принятыми в данной области тезники терминами, которые относятся к эпизодическим нарушениям температуры тела, типично заключающимся во внезапном приливе крови к коже, обычно сопровождающимся потением субъекта.
A. Способы предотвращения или лечения вазомоторных симптомов и/или головной боли.
В одном аспекте, изобретение предусматривает способ лечения или снижения частоты по меньшей мере одного вазомоторного симптома у субъекта. В другом аспекте, изобретение предусматривает способ лечения или уменьшения частоты головной боли (например, мигрени) у субъекта. В некоторых вариантах реализации, способ включает введение особе эффективного количества антитела или полипептидов, полученных из антитела, которое модулирует путь CGRP (например, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP). В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один вазомоторный симптом может быть ассоциирован с головной болью (например, мигренью) и/или приливами крови.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способ облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования по меньшей мере одного вазомоторного симптома у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP. В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один вазомоторный симптом может быть ассоциирован с головной болью (например, мигренью) и/или приливами крови.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способы облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования головной боли (например, мигрени) у особы, или симптомов, ассоциированных с головной болью (например, диареи или светочувствительности), включающий введение особе эффективного количества антитела, которое модулирует путь CGRP, или антагонистического антитела против CGRP, в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным агентом, пригодным для лечения головной боли.
Такие дополнительные агенты включают, без ограничений, агонисты 5-НТ и NSAID. Например, антитело и по меньшей мере один дополнительный агент могут быть введены совместно, т.е. они могут быть даны с достаточно малым интервалом во времени, чтобы обеспечить перекрывание их индивидуальных терапевтических эффектов. Например, количество агониста 5-НТ или NSAID, введенного в комбинации с антителом против CGRP, должно быть достаточным для снижения частоты рецидивов головной боли у пациентов или продуцирования более длительной эффективности по сравнению с введением любого одного из этих агентов в отсутствие другого. Эта процедура может быть использована для лечения головных болей, относящихся к любому из широкого спектра классов, включая: мигрень с аурой или без нее; гемиплегическая мигрень; хроническая мигрень; эпизодическая мигрень; частая эпизодическая мигрень; кластерные головные боли; мигренозная невралгия; хронические головные боли; головные боли напряжения; головные боли, вызванные другими медицинскими состояниями (такими как инфекция или повышенное внутричерепное давление вследствие опухоли); хроническая пароксизмальная гемикрания; смешанная головная боль, не связанная со структурными повреждениями; головная боль, связанная с несосудистыми внутричерепными поражениями; головная боль, связанная с введением вещества или прекращением его введения; головная боль, связанная с инфекцией вне головы; головная боль, связанная с метаболическим расстройством; головная боль, связанная с повреждением черепа, шеи, глаз, ушей, носа и около носовых полостей, зубов и полости рта или других лицевых или черепных структур; черепные невралгии; и боль в нервном стволе и деафферентационная боль.
Дополнительные неограничительные примеры дополнительных агентов, которые могут быть введены в комбинации с антагонистическим антителом против CGRP, включают один или несколько из:
(i) опиоидный анальгетик, например морфин, героин, гидроморфон, оксиморфон, леворфанол, леваллорфан, метадон, меперидин, фентанил, кокаин, кодеин, дигидрокодеин, оксикодон, гидрокодон, пропоксифен, налмефен, налорфин, налоксон, налтрексон, бупренорфин, буторфанол, налбуфин или пентазоцин;
(ii) нестероидное противоспалительное лекарственное средство (NSAID), например аспирин, диклофенак, дифлусинал, этодолак, фенбуфен, фенопрофен, флуфенисад, флурбипрофен, ибупрофен, индометацин, кетопрофен, кеторолак, меклофенамовая кислота, мефенамовая кислота, набуметон, напроксен, оксапрозин, фенилбутазон, пироксикам, сулиндак, толметин или зомепирак, ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2), целекоксиб; рофекоксиб; мелоксикам; JTE-522; L-745,337; NS398, или его фармацевтически приемлемая соль;
(iii) барбитуратное седативное средство, например амобарбитал, апробарбитал, бутабарбитал, бутабитал, мефобарбитал, метарбитал, метогекситал, пентобарбитал, фенобарбитал (phenobartital), секобарбитал, талбуттал, теамилал или тиопентал, или его фармацевтически приемлемая соль;
(iv) барбитуратный анальгетик, например буталбитал или его фармацевтически приемлемая соль,
- 20 043536 или композиция, содержащая буталбитал;
(v) бензодиазепин, обладающий седативным действием, например хлордиазепоксид, клоразепат, диазепам, флуразепам, лоразепам, оксазепам, темазепам или триазолам, или его фармацевтически приемлемая соль;
(vi) Hi-антагонист, обладающий седативным действием, например дифенгидрамин, пириламин, прометазин, хлорфенирамин или хлорциклизин или его фармацевтически приемлемая соль;
(vii) седативное средство, такое как глутетимид, мепробамат, метаквалон или дихлоралфеназон, или его фармацевтически приемлемая соль;
(viii) скелетный миорелаксант, например баклофен, каризопродол, хлорзоксазон, циклобензаприн, метокарбамол или орфренадин или его фармацевтически приемлемая соль;
(ix) антагонист рецептора NMDA, например декстрометорфан ((+)-3-гидрокси-М-метилморфинан) или его метаболит декстрорфан ((+)-3-гидрокси-N-метилморфинан), кетамин, мемантин, пирролохинолинхинон или цис-4-(фосфонометил)-2-пиперидинкарбоновая кислота или его фармацевтически приемлемая соль;
(х) альфа-адренергическое средство, например доксазосин, тамсулозин, клонидин или 4-амино-6,7диметокси-2-(5-метансульфонамидо-1,2,3,4-тетрагидроизохинол-2-ил)-5-(2-пиридил)хиназолин;
(xi) трициклический антидепрессант, например дезипрамин, имипрамин, амитриптилин или нортриптилин;
(xii) противосудорожное средство, например карбамазепин или вальпроат;
(xiii) антагонист тахикинина (NK), особенно антагонист NK-3, NK-2 или NK-1, например (aR,9R)-7[3,5-бис(трифторметил)бензил]-8,9,10,11-тетрагидро-9-метил-5-(4-метилфенил)-7Н-[1,4]диазоцино[2,1g][1,7]нафтиридин-6-13-дион (TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5-бис(трифторметил)фенил]этокси-3-(4фторфенил)-4-морфолинил]метил]-1,2-дигидро-3H-1,2,4-триазол-3-он (MK-869), ланепитант, дапитант или 3-[[2-метокси-5-(трифторметокси)фенил]метиламино]-2-фенилпиперидин (2S,3S);
(xiv) мускариновый антагонист, например оксибутин, толтеродин, пропиверин, тропсиум хлорид или дарифенацин;
(xv) ингибитор СОХ-2, например целекоксиб, рофекоксиб или валдекоксиб;
(xvi) неселективный ингибитор СОХ (предпочтительно, с защитой желудочно-кишечного (GI) тракта), например нитрофлурбипрофен (НСТ-1026);
(xvii) аналгетик, являющийся производным анилина, в частности парацетамол;
(xviii) нейролептик, такой как дроперидол;
(xix) агонист (например, резинфератоксин) или антагонист (например, капсазепин) ваниллоидного рецептора;
(xix) бета-адренергетик, такой как пропранолол;
(хх) местный анестетик, такой как мексилетин;
(xxi) кортикостероид, такой как дексаметазон;
(xxii) агонист или антагонист серотонинового рецептора;
(xxiii) холинергический (никотиновый) анальгетик;
(xxiv) трамадол (Tramadol) (торговая марка);
(xxv) ингибитор PDEV, такой как силденафил, варденафил или таладафил;
(xxvi) альфа-2-дельта лиганд, такой как габапентин или прегабалин;
(xxvii) каннабиноид; и (xxviii) антидепрессант, такой как амитриптилин (элавил), тразодон (дезирел) и имипрамин (тофранил) или противосудорожные средства, такие как фенитоин (дилантин) или карбамазепин (тегретол).
Квалифицированные специалисты в данной области техники смогут определить пригодные величины дозировок для конкретных агентов для использования в комбинации с антителом против CGRP. Например, суматриптан может быть введен в дозировке от около 0,01 до около 300 мг. В некоторых случаях, суматриптан может быть введен в дозировке от 2 до 300 мг. При непарентеральном введении, типичная доза суматриптана составляет от около 25 до около 100 мг, причем около 50 мг обычно является предпочтительной, а при парентеральном введении предпочтительная доза составляет около 6 мг. Однако, эти дозы могут меняться в соответствии со способами, являющимися стандартом в данной области техники, с целью их оптимизации для конкретного пациента или для конкретной комбинированной терапии. Дополнительно, например, целекоксиб может быть введен в количестве от 50 до 500 мг.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способы облегчения, контроля, снижения частоты, или задержки развития или прогрессирования приливов крови у особы, включающий введение особе эффективного количества антагонистического антитела против CGRP в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным агентом, пригодным для лечения приливов крови. Такие дополнительные агенты включают, без ограничений, гормональные методы лечения, включая эстрогены и/или некоторые прогестины.
В другом аспекте, раскрываемое изобретение предусматривает способ лечения или уменьшения частоты головной боли (например, мигрени) у субъекта, включающий введение субъекту в течение множества дней количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического анти- 21 043536 тела против CGRP), которое модулирует путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела, вводимое в каждый из множества дней, может иметь значение в диапазоне 0,1 мг - 5000 мг, 1 мг - 5000 мг, 10 мг - 5000 мг, 100 мг - 5000 мг, 1000 мг - 5000 мг, 0,1 мг - 4000 мг, 1 мг - 4000 мг, 10 мг - 4000 мг, 100 мг - 4000 мг, 1000 мг - 4000 мг, 0,1 мг - 3000 мг, 1 мг - 3000 мг, 10 мг - 3000 мг, 100 мг - 3000 мг, 1000 мг - 3000 мг, 0,1 мг - 2000 мг, 1 мг - 2000 мг, 10 мг - 2000 мг, 100 мг - 2000 мг, 1000 мг - 2000 мг, 0,1 мг - 1000 мг, 1 мг -1000 мг, 10 мг - 1000 мг или 100 мг - 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, указанное количество имеет значение в диапазоне 100 - 2000 мг.
В другом аспекте, раскрываемое изобретение предусматривает способ лечения или уменьшения частоты головной боли (например, мигрени) у субъекта, включающий введение субъекту разовой дозы моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) в количестве, которое модулирует путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, разовая доза может представлять собой количество антитела в диапазоне 0,1 мг - 5000 мг, 1 мг - 5000 мг, 10 мг - 5000 мг, 100 мг 5000 мг, 1000 мг - 5000 мг, 0,1 мг - 4000 мг, 1 мг - 4000 мг, 10 мг - 4000 мг, 100 мг - 4000 мг, 1000 мг 4000 мг, 0,1 мг - 3000 мг, 1 мг - 3000 мг, 10 мг - 3000 мг, 100 мг - 3000 мг, 1000 мг - 3000 мг, 0,1 мг - 2000 мг, 1 мг - 2000 мг, 10 мг - 2000 мг, 100 мг - 2000 мг, 1000 мг - 2000 мг, 0,1 мг - 1000 мг, 1 мг - 1000 мг, 10 мг - 1000 мг или 100 мг - 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, разовая доза может представлять собой количество антитела в диапазоне 100 - 2000 мг.
В другом аспекте, раскрываемое изобретение предусматривает способ лечения или снижения частоты по меньшей мере одного вазомоторного симптома у субъекта, включающий введение субъекту в течение множества дней количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, количество моноклонального антитела, вводимое в каждый из множества дней, может иметь значение в диапазоне 0,1 мг - 5000 мг, 1 мг - 5000 мг, 10 мг - 5000 мг, 100 мг - 5000 мг, 1000 мг - 5000 мг, 0,1 мг 4000 мг, 1 мг - 4000 мг, 10 мг - 4000 мг, 100 мг - 4000 мг, 1000 мг - 4000 мг, 0,1 мг - 3000 мг, 1 мг - 3000 мг, 10 мг - 3000 мг, 100 мг - 3000 мг, 1000 мг - 3000 мг, 0,1 мг - 2000 мг, 1 мг - 2000 мг, 10 мг - 2000 мг, 100 мг - 2000 мг, 1000 мг - 2000 мг, 0,1 мг - 1000 мг, 1 мг - 1000 мг, 10 мг - 1000 мг или 100 мг - 1000 мг. В некоторых вариантах реализации, указанное количество имеет значение в диапазоне 100 - 2000 мг.
В другом аспекте, раскрываемое изобретение предусматривает способ уменьшения величины месячного количества часов головной боли, испытываемой субъектом, включающий введение субъекту количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 0,1, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или больше часов головной боли после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, моноклональное (антитело) может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 20 ч головной боли после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 40 ч головной боли. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 0,1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, моноклональное (антитело) может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества часов головной боли по меньшей мере на 15% после разовой дозы.
В другом аспекте, раскрываемое изобретение предусматривает способ уменьшения величины месячного количества дней головной боли, испытываемой субъектом, включающий введение субъекту количества моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества дней головной боли по меньшей мере на 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше дней головной боли после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества дней головной боли по меньшей мере на 3 дня головной боли после разовой дозы. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения величины месячного количества дней головной боли по меньшей мере на 0,1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше после разовой дозы.
В другом аспекте, раскрываемое изобретение предусматривает способ уменьшения использования субъектом лекарственного препарата против головной боли, включающий введение субъекту моноклонального антитела (например, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), которое модулирует путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения месячного применения субъектом лекарственного препарата против головной боли по меньшей мере на 0,1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45,
- 22 043536
50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше. В некоторых вариантах реализации, моноклональное антитело может использоваться в количестве, эффективном для снижения месячного применения субъектом лекарственного препарата против головной боли по меньшей мере на 15%. Лекарственный препарат против головной боли могут быть лекарственным препаратом против головной боли любого типа, описанного в любом месте данного документа. Неограничительные примеры лекарственных препаратов против головной боли включают агонисты 5-НТ1 (и агонисты, воздействующие на другие сайты 5-НТ1), триптаны (например, суматриптан, золмитриптан, наратриптан, ризатриптан, елетриптан, алмотриптан, афроватриптан), алкалоиды спорыньи (например, эрготамин тартрат, эргоновин малеат, и эрголоид мезилаты (например, дигидроэргокорнин, дигидроэргокристин, дигидроэргокриптин, и дигидроэрготамин мезилат (DHE 45)) и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAIDs) (например, аспирин, диклофенак, дифлусинал, этодолак, фенбуфен, фенопрофен, флуфенисад, флурбипрофен, ибупрофен, индометацин, кетопрофен, кеторолак, меклофенамовую кислоту, мефенамовую кислоту, набуметон, напроксен, оксапрозин, фенилбутазон, пироксикам, сулиндак, толметин или зомепирак, ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2), целекоксиб; рофекоксиб; мелоксикам; JTE-522; L-745,337; NS398; или их фармацевтически приемлемые соли), опиаты (например, оксикодон) и β-адренергические антагонисты (например, пропранолол).
Для всех способов, описанных в данном документе, ссылки на антитела (например, моноклональные антитела, которые модулируют путь CGRP, антагонистические антитела против CGRP, моноклональные антагонистические антитела против CGRP) также включают композиции, содержащие один или несколько таких агентов. Соответственно, такая композиция может быть использована в соответствии со способом, относящимся к антителу, описанному в данном документе. Такие композиции могут дополнительно содержать пригодные вспомогательные вещества, такие как фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, как описано в других разделах данного документа. Настоящее изобретение может быть использовано само по себе или в комбинации с другими обычными способами лечения.
Антитело, описанное в данном документе (например, моноклональное антитело, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP) может быть введено индивидууму или субъекту в любой терапевтической дозе, любым пригодным путем и в любой пригодной композиции. Квалифицированному специалисту в данной области техники должно быть понятно, что примеры, описанные в данном документе, должны рассматриваться не в качестве ограничительных, а как иллюстрирующие доступные методики. Соответственно, в некоторых вариантах реализации, антитело, описанное в данном документе, может быть введено индивидууму в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение, например, в виде болюса или путем непрерывной инфузии на протяжении периода времени, внутримышечным, интраперитонеальным, интрацереброспинальным, подкожным, внутрисуставным, сублингвальным, интраартериальным, интрасиновиальным, с помощью инсуффляции, интратекальным, оральным, с помощью ингаляции, интраназальным (например, с ингаляцией или без нее), буккальным, ректальным, трансдермальным, интракардиальным, внутрикостным, интрадермальным, трансмукозальным, вагинальным, интравитреальным, периартикулярным, локальным, накожным или местным путями. Введение может быть системным, например, внутривенное введение, или локализованным. Коммерчески доступные распылители для жидких композиций, включая струйные распылители и ультразвуковые распылители, являются пригодными для введения. Жидкие композиции могут распыляться непосредственно, а лиофилизированный порошок может быть распылен после восстановления. Альтернативно, антитело, описанное в данном документе, может быть переведено в форму аэрозоля с использованием фторуглеродной композиции и ингалятора с мерной дозой, или вводиться ингаляцией в виде лиофилизированного и размолотого порошка.
В некоторых вариантах реализации, антитело, описанное в данном документе, может быть введено посредством методов сайт-специфической или целевой местной доставки. Примеры методов сайтспецифической или целевой местной доставки включают различные имплантируемые в виде депо источники антитела или катетеры для местной доставки, такие как инфузионные катетеры, постоянный катетер, или игольчатый катетер, искусственные протезы, адвентициальные оболочки, шунты и стенты или другие имплантируемые устройства, сайт-специфические носители, прямые инъекции, или прямое нанесение. См., например, публикацию PCT № WO 00/53211 и патенте США № 5981568.
Различные композиции антитела, описанные в данном документе, могут быть использованы для введения. В некоторых вариантах реализации, антитело может быть введено в чистом виде. В некоторых вариантах реализации, антитело и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество могут образовывать различные композиции. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества известны специалистам, и представляют собой относительно инертные вещества, которые облегчают введение фармакологически эффективного вещества. Например, вспомогательное вещество может придавать форму или консистенцию, или действовать как разбавитель. Пригодные вспомогательные вещества включают, без ограничений, стабилизаторы, смачивающие агенты и эмульгаторы, соли для изменения осмолярности, капсулирующие агенты, буферы, и средства, усиливающие проницаемость кожи. Вспомогательные вещества, а также композиции для парентеральной и непарентеральной доставки лекарственного средства описаны в Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000).
- 23 043536
В некоторых вариантах реализации, композиции таких агентов, включая антитела, описанные в данном документе, могут быть составлены для введения путем инъекции (например, интраперитонеально, внутривенно, подкожно, внутримышечно и т.д.). Соответственно, такие агенты могут быть скомбинированы с фармацевтически приемлемыми носителями, такими как солевой раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и т.п. Конкретная схема приема, т.е. доза, распределение по времени и повторение, будет зависеть от конкретного индивидуума и истории болезни этого индивидуума.
В некоторых вариантах реализации, композиции этих агентов, включая антитела, описанные в данном документе, могут быть составлены для периферического введения. Такие композиции могут быть введены периферически любым пригодным периферическим путем, включая внутривенный и подкожный. Агент, приготовленный для периферического введения, может включать вещество, лекарственное средство и/или антитело, которые не доставляются центрально, спинально, интратекально или непосредственно в ЦНС. Неограничительные примеры путей периферического введения включают путь, являющийся оральным, сублигвальным, буккальным, местным, ректальным, ингаляцией, трансдермальным, подкожным, внутривенным, интраартериальным, внутримышечным, интракардиальным, внутрикостным, интрадермальным, интраперитонеальным, трансмукозальным, вагинальным, интравитреальным, внутрисуставным, периартикулярным, локальным или накожным.
Терапевтические композиции антител, используемые в соответствии с раскрываемым изобретением, могут быть приготовлены для хранения и/или применения путем смешения антитела, имеющего желательную степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000)), и могут в некоторых случаях иметь форму лиофилизированных композиций или водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях. Терапевтическая композиция антитела может содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ или стабилизаторов, причем неограничительные примеры таких веществ включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; соли, такие как хлорид натрия; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид, бензетония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин, или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты (например, в концентрации от 0,1 мМ до 100 мМ, от 0,1 мМ до 1 мМ, от 0,01 мМ до 50 мМ, от 1 мМ до 50 мМ, от 1 мМ до 30 мМ, от 1 мМ до 20 мМ, от 10 мМ до 25 мМ), такие как глицин, глутамин, метионин, аспарагин, гистидин, аргинин, или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты (например, в концентрации от 0,001 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,001 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,001 мг/мл до 0,1 мг/мл, от 0,001 мг/мл до 0,01 мг/мл, от 0,01 мг/мл до 0,1 мг/мл), такие как ЭДТА (например, динатрия ЭДТА дигидрат); сахара (например, в концентрации от 1 мг/мл до 500 мг/мл, от 10 мг/мл до 200 мг/мл, от 10 мг/мл до 100 мг/мл, от 50 мг/мл до 150 мг/мл), такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества (например, в концентрации от 0,01 мг/мл до 10 мг/мл, от 0,01 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,01 мг/мл до 0,5 мг/мл) такие как твин (TWEEN™) (например, полисорбат (например, полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80)), плюроник (PLURONICS™) или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Композиция антитела может быть охарактеризована по любому из различных физических свойств. Например, жидкая композиция антитела может иметь любой пригодный pH для обеспечения терапевтической эффективности, безопасности и хранения. Например, pH жидкой композиции антитела может иметь значение от pH 4 до около pH 9, от pH 5 до pH 8, от pH 5 до pH 7 или от pH 6 до pH 8. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция антитела может иметь pH, равный 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10 или выше или ниже.
В другом примере, жидкая композиция антитела может иметь любую пригодную вязкость для обеспечения терапевтической эффективности, безопасности и хранения. Например, вязкость жидкой композиции антитела может иметь значение от 0,5 сантипуаз (сП) до 100 сП, от 1 сП до 50 сП, от 1 сП до 20 сП, от 1 сП до 15 сП или от 5 сП до 15 сП при 25°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция антитела может иметь вязкость 0,5, 1, 1,2, 1,4, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,6, 2,8, 3,0, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4,0, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5,0, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8, 6,0, 6,2, 6,4, 6,6, 6,8, 7,0, 7,2, 7,4, 7,6, 7,8, 8,0, 8,2, 8,4, 8,6, 8,8, 9,0, 9,2, 9,4, 9,6, 9,8, 10,0, 10,2, 10,4, 10,6, 10,8, 11,0, 11,2, 11,4, 11,6, 11,8, 12,0, 12,2, 12,4, 12,6, 12,8, 13,0, 13,2, 13,4, 13,6, 13,8, 14,0, 14,2, 14,4, 14,6, 14,8 или 15,0 сП при 25°С, или вязкость может быть выше или ниже.
В другом примере, жидкая композиция антитела может иметь любую пригодную проводимость для обеспечения терапевтической эффективности, безопасности и хранения. Например, проводимость жид
- 24 043536 кой композиции антитела может иметь значение от 0,1 миллисименс на сантиметр (мСм/см) до 15 мСм/см, от 0,1 мСм/см до 10 мСм/см, от 0,1 мСм/см до 5 мСм/см, от 0,1 мСм/см до 2 мСм/см или от 0,1 мСм/см до 1,5 мСм/см. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция антитела может иметь проводимость, равную 0,19, 0,59, 1,09, 1,19, 1,29, 1,39, 1,49, 1,59, 1,69, 1,79, 1,89, 1,99, 2,09, 2,19, 2,29, 2,39, 2,49, 2,59, 2,69, 2,79, 2,89, 2,99, 3,09, 3,19, 3,29, 3,39, 3,49, 3,59, 3,69, 3,79, 3,89, 3,99, 4,09, 4,19, 4,29, 4,39, 4,49, 4,59, 4,69, 4,79, 4,89, 4,99, 5,09, 6,09, 6,59, 7,09, 7,59, 8,09, 8,59, 9,09, 9,59, 10,09, 10,59, 11,09, 11,59, 12,09, 12,59, 13,09, 13,59, 14,09, 14,59 или 15,09 мСм/см или проводимость может быть выше или ниже.
В другом примере, жидкая композиция антитела может иметь любую пригодную осмоляльность для обеспечения терапевтической эффективности, безопасности и хранения. Например, осмоляльность жидкой композиции антитела может иметь значение от 50 миллиосмоль на килограмм (мОсм/кг) до 5000 мОсм/кг, от 50 мОсм/кг до 2000 мОсм/кг, от 50 мОсм/кг до 1000 мОсм/кг, от 50 мОсм/кг до 750 мОсм/кг или от 50 мОсм/кг до 500 мОсм/кг. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция антитела может иметь осмоляльность, равную 50, 60, 70, 80, 90, 100 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 420, 440, 460, 480, 500, 520, 540, 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680, 700, 720, 740, 760, 780, 800, 820, 840, 860, 880, 900, 920, 940, 960, 980, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500 мОсм/кг, или осмоляльность может быть выше или ниже.
Липосомы, содержащие антитело, могут быть получены способами, известными специалистам, такими как описанные в Epstein, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688 (1985); Hwang, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4030 (1980); и патент США № 4485045 и 4544545. Липосомы с увеличенным временем циркуляции раскрыты в патенте США № 5013556. Особенно пригодные липосомы могут быть получены методом обращенно-фазового выпаривания с липидной композицией, содержащей фосфатидилхолин, холестерин и ПЭГ-дериватизированный фосфатидилэтаноламин (ПЭГ-ФЭ). Липосомы экструдируют через фильтры с определенным размером пор для получения липосом желательного диаметра.
Активные ингредиенты также могут быть заключены в микрокапсулы, полученные, например, методами коацервации или межфазной полимеризации, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметакрилатные) микрокапсулы, соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных средств(например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсиях. Такие методики раскрыты в Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000).
Могут быть получены препараты с замедленным высвобождением. Пригодные примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, причем матрицы представляют собой формованные изделия, например, пленки, или микрокапсулы. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли-(2-гидроксиэтилметакрилат), или поли(виниловый спирт)), полилактиды (патент США № 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и 7-этил-Е-глутамата, недеградирующий этилен-винилацетат, деградирующие сополимеры молочной кислоты-гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT™ (микросферы для инъекций, состоящие из сополимера молочной кислотыгликолевой кислоты и лейпролида ацетата), сахарозы ацетат изобутират, и поли-D-(-)-3-гидроксимасляная кислота.
Композиции для использования при in vivo введении должны обычно быть стерильными. Это легко обеспечивается, например, фильтрацией через мембраны для стерильной фильтрации. Терапевтические композиции антитела обычно помещают в контейнер, имеющий порт для стерильного доступа, например, пакет с раствором для внутривенного введения или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожных инъекций.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут иметь вид дозированных лекарственных форм, таких как таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии, или суппозитории, для орального, парентерального или ректального введения, или введения путем ингаляции или инсуффляции. В некоторых случаях, дозированная лекарственная форма может поставляться в предварительно наполненной емкости (например, предварительно наполненный шприц), пригодной для введения разовой дозы субъекту.
Для приготовления твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент может быть смешан с фармацевтическим носителем, например обычными ингредиентами для изготовления таблеток, такими как кукурузный крахмал, лактоза, сахароза, сорбит, тальк, стеариновая кислота, стеарат магния, дикальцийфосфат или камеди, и другие фармацевтические разбавители, например вода, до получения твердой предварительно подготовленной (preformulation) композиции, содержащей гомогенную смесь соединения по настоящему изобретению, или его нетоксичной фармацевтически приемлемой соли. Когда такие предварительно приготовленные композиции называются гомогенными, это означает, что активный ингредиент равномерно диспергирован в композиции, так чтобы композиция могла быть легко разделена на дозированные лекарственные формы одинаковой эффективности, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Эту твердую предварительно приготовленную композицию затем делят на дозированные лекарственные формы описанного выше типа, содержащие от 0,1 до около 500 мг активного ингре
- 25 043536 диента по настоящему изобретению. На таблетки или пилюли из новой композиции могут быть нанесено покрытие или они могут быть иначе скомбинированы для получения лекарственной формы, обеспечивающей преимущество пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний компонент дозы и внешний компонент дозы, причем последний имеет форму оболочки первого. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который должен препятствовать разрушению в желудке и позволять внутреннему компоненту проходить в интактном виде в двенадцатиперстную кишку или высвобождаться замедленно. Различные материалы могут быть использованы для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий, такие материалы включают ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.
Пригодные поверхностно-активные агенты включают, в частности, неионные агенты, такие как полиоксиэтиленсорбитаны (например твин (Tween™) 20, 40, 60, 80 или 85) и другие сорбитаны (например Span™ 20, 40, 60, 80 или 85). Композиции с поверхностно-активным агентом будут удобно содержать от 0,05 до 5% поверхностно-активного агента, и могут иметь его содержание от 0,1 до 2,5%. Следует понимать, что в случае необходимости могут быть добавлены другие ингредиенты, например маннит или другие фармацевтически приемлемые носители.
Пригодные эмульсии могут быть получены с использованием коммерчески доступных жировых эмульсий, такие как интралипид (Intralipid™), липосин (Liposyn™), инфонутрол (Infonutrol™), липофундин(Lipofundin™) и липифизан (Lipiphysan™). Активный ингредиент может быть или растворен в предварительно смешанной эмульсионной композиции или, альтернативно, он может быть растворен в масле (например, соевом масле, сафлоровом масле, хлопковом масле, кунжутном масле, кукурузном масле или миндальном масле), и эмульсию получают в результате смешения с фосфолипидом (например, фосфолипидами яйца, соевыми фосфолипидами или соевым лецитином) и водой. Следует понимать, что могут быть добавлены другие ингредиенты, например, глицерин или глюкоза, для регулирования тоничности эмульсии. Пригодные эмульсии будут типично содержать до 20% масла, например от 5 до 20%. Жировая эмульсия может содержать капельки жира (размером) от 0,1 до 1,0 1м, особенно от 0,1 до 0,5 1м, и иметь pH в диапазоне значений от 5,5 до 8,0.
Эмульсионные композиции могут быть, таким образом (those), получены путем смешения антитела с интралипидом (Intralipid™) или его компонентами (соевым маслом, яичными фосфолипидами, глицерином и водой).
Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях, или их смеси, и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать пригодные фармацевтически приемлемые эксципиенты, как указано выше. В некоторых вариантах реализации, композиции вводят оральным или назальным дыхательным путем для локального или системного действия. Композиции в предпочтительно стерильных фармацевтически приемлемых растворителях могут быть распылены путем использования газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства или распыляющее устройство может быть присоединено к лицевой маске, тенту или дыхательному аппарату с прерывистым положительным давлением. Композиции раствора, суспензии или порошка могут быть введены, предпочтительно, орально или назально, из устройств, осуществляющих доставку композиции соответствующим образом.
В некоторых вариантах реализации, композиция, содержащая антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, может быть приготовлена для любого пригодного пути введения с количеством антитела в диапазоне значений от 0,1 мг до 3000 мг, от 1 мг до 1000 мг, от 100 до 1000 мг, или от 100 до 500 мг. В некоторых случаях, композиция, содержащая антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, может содержать количество антитела, составляющее, самое большее, или по меньшей мере 0,1, 1, 100, 1, 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 800, 825, 850, 875, 900, 925, 950, 975, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000 или 3000 мг.
В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция содержащая антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, может быть приготовлено для любого пригодного пути введения в концентрации антитела в диапазоне значений от 0,1 до 500 мг/мл, от 0,1 до 375 мг/мл, от 0,1 до 250 мг/мл, от 0,1 до 175 мг/мл, от 0,1 до 100 мг/мл, от 1 мг/мл до 500 мг/мл, от 1 мг/мл до 375 мг/мл, от 1 мг/мл до 300 мг/мл, от 1 мг/мл до 250 мг/мл, от 1 мг/мл до 200 мг/мл, от 1 мг/мл до 150 мг/мл, от 1 мг/мл до 100 мг/мл, от 10 мг/ мл до 500 мг/мл, от 10 мг/мл до 375 мг/мл, от 10 мг/мл до 250 мг/мл, от 10 мг/мл до 150 мг/мл, от 10 мг/мл до 100 мг/мл, от 100 мг/мл до 500 мг/мл, от 100 мг/мл до 450 мг/мл, от 100 мг/мл до 400 мг/мл, от 100 мг/мл до 350 мг/мл, от 100 мг/мл до 300 мг/мл, от 100 мг/мл до 250 мг/мл, от 100 мг/мл до 200 мг/мл или от 100 мг/мл до 150 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция может содержать антитело, описанное в данном доку- 26 043536 менте в концентрации, составляющей, самое большее, по меньшей мере, или менее чем 0,1, 0,5, 1, 5, 10,
20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145,
150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310,
320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 или 500 мг/мл.
Композиция антитела может содержать один или несколько компонентов, включая антитело и другие вещества, описанные в любом месте данного документа. Антитело и другие компоненты могут присутствовать в любом пригодном количестве и/или любой пригодной концентрации для обеспечения терапевтической эффективности антитела, безопасности и хранения. В одном примере, композиция антитела может быть раствором, содержащим 51,4 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 20 мМ гистидинаа, 0,1 мг/мл метионина, 84 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,05 мг/мл динатрия ЭДТА дигидрата и 0,2 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 200 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 15 мМ аргинина, 78 мг/мл сахарозы, 0,3 мг/мл ЭДТА, и 0,1 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 175 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 20 мМ глицина, 88 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,015 мг/мл ЭДТА и 0,25 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 225 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 23 мМ аспарагина, 84 мг/мл сорбита, 0,1 мг/мл ЭДТА и 0,15 мг/мл полисорбата 60.
В другом примере, композиция антитела может содержать 150 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 17 мМ аспарагина, 74 мг/мл маннита, 0,025 мг/мл ЭДТА и 0,2 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 100 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 16 мМ аргинина, 87 мг/мл маннита, 0,025 мг/мл ЭДТА и 0,15 мг/мл полисорбата 20.
В другом примере, композиция антитела может содержать 250 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 25 мМ гистидина, 74 мг/мл маннита, 0,025 мг/мл ЭДТА и 0,25 мг/мл полисорбата 20.
В другом примере, композиция антитела может содержать 50 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 19 мМ аргинина, 84 мг/мл сахарозы, 0,05 мг/мл ЭДТА и 0,3 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 125 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 22 мМ глицина, 79 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,15 мг/мл ЭДТА и 0,15 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может быть раствором, содержащим 175 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 20 мМ гистидина, 0,1 мг/мл метионина, 84 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,05 мг/мл динатрия ЭДТА дигидрата, и 0,2 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 200 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 30 мМ аргинина, 78 мг/мл сахарозы, 0,3 мг/мл ЭДТА, и 0,1 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 175 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 20 мМ глицина, 88 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,015 мг/мл ЭДТА и 0,15 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 150 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 20 мМ гистидина, 84 мг/мл сахарозы, 0,05 мг/мл ЭДТА и 0,2 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 225 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 23 мМ гистидина, 84 мг/мл сорбита, 0,1 мг/мл ЭДТА и 0,15 мг/мл полисорбата 60.
В другом примере, композиция антитела может содержать 150 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 17 мМ аспарагина, 74 мг/мл маннита, 0,3 мг/мл ЭДТА и 0,2 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 100 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 16 мМ аргинина, 87 мг/мл маннита, 0,025 мг/мл ЭДТА и 0,25 мг/мл полисорбата 20.
В другом примере, композиция антитела может содержать 250 мг/мл антитела (например, антитела
- 27 043536
G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 25 мМ гистидина, 89 мг/мл маннита, 0,025 мг/мл ЭДТА и 0,25 мг/мл полисорбата 20.
В другом примере, композиция антитела может содержать 125 мг/мл антитела (например, антитела
G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 29 мМ аргинина, 84 мг/мл сахарозы, 0,05 мг/мл ЭДТА и 0,3 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 150 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 25 мМ аспарагина, 84 мг/мл маннита, 0,05 мг/мл ЭДТА и 0,2 мг/мл полисорбата 80.
В другом примере, композиция антитела может содержать 145 мг/мл антитела (например, антитела G1, другого антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP), 22 мМ гистидина, 72 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,05 мг/мл ЭДТА и 0,1 мг/мл полисорбата 80.
Антитело, описанное в данном документе, может быть введено с использованием любого пригодного способа, в том числе путем инъекции (например, интраперитонеально, внутривенно, подкожно, внутримышечно и т.д.). Антитела также могут быть введены путем ингаляции, как описано в данном документе. В некоторых случаях, антитело может быть введено назально с ингаляцией или без нее. В общем, для введения антитела, описанного в данном документе, начальный вариант дозировки могут составлять около 2 мг/кг. В целях настоящего изобретения, типичная суточная доза может составлять около от любого значения из от 3 мкг/кг до 30 мкг/кг и до от 300 мкг/кг до 3 мг/кг, до от 30 мг/кг до 100 мг/кг или больше, в зависимости от вышеупомянутых факторов. Например, может быть использована доза, равная около 1 мг/кг, около 2,5 мг/кг, около 5 мг/кг, около 10 мг/кг, м около 25 мг/кг. Для повторного введения на протяжении нескольких дней или дольше, в зависимости от состояния, лечение проводят до достижения желательного подавления симптомов или до достижения достаточных терапевтических уровней, например, для уменьшения боли. Типичный пример схемы приема включает введение начальной дозы, равной около 8,5 мг/кг, с последующим введением еженедельно поддерживающей дозы, равной около 2,8 мг/кг антитела, или с последующим введением поддерживающей дозы, равной около 2,8 мг/кг раз в две недели. Другой типичный пример схемы приема включает введение дозы 100, 125, 150, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 675 или 900 мг субъекту раз в месяц подкожно. Другой типичный пример схемы приема включает введение начальной дозы 675 мг подкожно, с последующей ежемесячной дозой 225 мг антитела подкожно. Однако, могут быть использованы другие схемы приема, в зависимости от модели фармакокинетического распада, которой хочет достичь практикующий врач. Например, в некоторых вариантах реализации, предусматривается введение доз один-четыре раза в неделю. Прогресс этой терапии легко контролируется обычными способами и анализами. Схема приема (включая используемый антагонист(ы) CGRP) может изменяться со временем.
В некоторых вариантах реализации, доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанные в данном документе и вводимые субъекту могут иметь значения в диапазоне от 0,1 мкг = до 3000 мг, от 1 мг до 1000 мг, от 100 до 1000 мг, от 100 до 500 мг, от 0,1 мг до 5000 мг, от 1 мг до 4000 мг, от 250 мг до 1000 мг, от 500 мг до 1000 мг, от 100 мг до 900 мг, от 400 мг до 900 мг, от 10 мг до 3000 мг, от 10 мг до 2000 мг, от 100 мг до 2000 мг, от 150 мг до 2000 мг, от 200 мг до 2000 мг, от 250 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг, от 350 мг до 2000 мг, от 400 мг до 2000 мг, от 450 мг до 2000 мг, от 500 мг до 2000 мг, от 550 мг до 2000 мг, от 600 мг до 2000 мг, от 650 мг до 2000 мг, от 700 мг до 2000 мг, от 750 мг до 2000 мг, от 800 мг до 2000 мг, от 850 мг до 2000 мг, от 900 мг до 2000 мг, от 950 мг до 2000 мг, или от 1000 мг до 2000 мг. В некоторых вариантах реализации, доза или количество антитела, описанные в данном документе и вводимые субъекту, могут составлять, могут составлять самое большее, могут составлять менее чем, или могут составлять по меньшей мере 0,1 мкг, 1 мкг, 100 мкг, 1, 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 800, 825, 850, 875, 900, 925, 950, 975, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000 или 3000 мг. В некоторых вариантах реализации, количество имеет значение в диапазоне от 100 до 2000 мг.
В некоторых вариантах реализации, доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанные в данном документе и вводимые субъекту, могут иметь значения в диапазоне от 0,1 до 500, от 0,1 до 100, от 0,1 до 50, от 0,1 до 20, от 0,1 до 10, от 1 до 10, от 1 до 7, 1 до 5 или от 0,1 до 3 мг/кг веса тела. В некоторых вариантах реализации, доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанные в данном документе и вводимые субъекту, могут составлять, могут составлять самое большее, могут составлять менее чем, или могут составлять по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 15,5, 16,0, 16,5, 17,0, 17,5, 18,0, 18,5, 19,0, 19,5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100,
- 28 043536
110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475 или 500 мг/кг веса тела.
В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) описан в данном документе, вводится субъекту, может меняться. В некоторых вариантах реализации, разовая доза антитела может быть дана субъекту на протяжении терапии. В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела вводится субъекту, является постоянной (например, вводится раз в месяц). В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела, описанные в данном документе, вводится субъекту, является переменной (например, начальная доза со следующей дозой через месяц, с последующими дополнительными дозами через три месяца и семь месяцев). В некоторых вариантах реализации, частота, с которой антитело вводится субъекту, составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее один, два, три, четыре, пять или шесть раз в день. В некоторых вариантах реализации, частота, с которой антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP) вводится субъекту, составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее одну, две, три, четыре, пять или шесть дозу (доз) в день.
В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, вводится субъекту, составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать или двадцать раз в каждые один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать, двадцать один, двадцать два, двадцать три, двадцать четыре, двадцать пять, двадцать шесть, двадцать семь, двадцать восемь, двадцать девять, тридцать, тридцать один, тридцать два, тридцать три, тридцать четыре, тридцать пять, тридцать шесть, тридцать семь, тридцать восемь, тридцать девять, сорок, сорок один, сорок два, сорок три, сорок четыре, сорок пять, сорок шесть, сорок семь, сорок восемь, сорок девять, пятьдесят, пятьдесят пять, шестьдесят, шестьдесят пять, семьдесят, семьдесят пять, восемьдесят, восемьдесят пять, девяносто, девяносто пять, сто, сто двадцать пять, сто пятьдесят, сто восемьдесят или двести дней.
В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, вводится субъекту, составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать или двадцать раз в каждые один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать, двадцать один, двадцать два, двадцать три, двадцать четыре, двадцать пять, двадцать шесть, двадцать семь, двадцать восемь, двадцать девять, тридцать, тридцать один, тридцать два, тридцать три, тридцать четыре, тридцать пять, тридцать шесть, тридцать семь, тридцать восемь, тридцать девять, сорок, сорок один, сорок два, сорок три, сорок четыре, сорок пять, сорок шесть, сорок семь, сорок восемь, сорок девять, пятьдесят, пятьдесят пять, шестьдесят, шестьдесят пять, семьдесят, семьдесят пять, восемьдесят, восемьдесят пять, девяносто, девяносто пять или сто недель. В некоторых вариантах реализации, частота, с которой антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, вводится субъекту, составляет менее чем одна, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, или пятнадцать доз в неделю.
В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) вводится субъекту, составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать или двадцать раз за каждый месяц, каждые два месяца, каждые три месяца, каждые четыре месяца, каждые пять месяцев, каждые шесть месяцев, каждые семь месяцев, каждые восемь месяцев, каждые девять месяцев, каждые десять месяцев, каждые одиннадцать месяцев, каждые двенадцать месяцев, каждые тринадцать месяцев, каждые четырнадцать месяцев, каждые пятнадцать месяцев, каждые шестнадцать месяцев, каждые семнадцать месяцев, или каждые восемнадцать месяцев. В некоторых вариантах реализации, частота, с которой антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против
- 29 043536
CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, вводится субъекту, составляет менее чем один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, или пятнадцать доз в месяц. В некоторых вариантах реализации, доза или количество антитела может быть введена (например, подкожно или внутривенно) субъекту один раз, два раза, три раза, четыре раза, пять раз, шесть раз, семь раз, восемь раз, девять раз, десять раз или больше в месяц.
В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2150, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 2950, 3000 мг или больше может быть введено (например, подкожно или внутривенно) субъекту раз в месяц. В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве от 0,1 мг до 5000 мг, от 1 мг до 4000 мг, от 10 мг до 3000 мг, от 10 мг до 2000 мг, от 100 мг до 2000 мг, от 150 мг до 2000 мг, от 200 мг до 2000 мг, от 250 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг, от 350 мг до 2000 мг, от 400 мг до 2000 мг, от 450 мг до 2000 мг, от 500 мг до 2000 мг, от 550 мг до 2000 мг, от 600 мг до 2000 мг, от 650 мг до 2000 мг, от 700 мг до 2000 мг, от 750 мг до 2000 мг, от 800 мг до 2000 мг, от 850 мг до 2000 мг, от 900 мг до 2000 мг, от 950 мг до 2000 мг или от 1000 мг до 2000 мг, от может быть введено (например, подкожно или внутривенно) субъекту раз в месяц. В некоторых вариантах реализации, 100-2000 мг антитела вводят раз в месяц.
В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве 50, 100 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2150, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 2950 мг, 3000 мг, или больше может вводиться (например, подкожно или внутривенно) субъекту раз в три месяца. В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве от 0,1 мг до 5000 мг, от 1 мг до 4000 мг, от 10 мг до 3000 мг, от 10 мг до 2000 мг, от 100 мг до 2000 мг, от 150 мг до 2000 мг, от 200 мг до 2000 мг, от 250 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг, от 350 мг до 2000 мг, от 400 мг до 2000 мг, от 450 мг до 2000 мг, от 500 мг до 2000 мг, от 550 мг до 2000 мг, от 600 мг до 2000 мг, от 650 мг до 2000 мг, от 700 мг до 2000 мг, от 750 мг до 2000 мг, от 800 мг до 2000 мг, от 850 мг до 2000 мг, от 900 мг до 2000 мг, от 950 мг до 2000 мг или от 1000 мг до 2000 мг может вводиться (например, подкожно или внутривенно) субъекту раз в три месяца. В некоторых вариантах реализации, от 450 мг до 2000 мг вводят один раз в три месяца или меньше.
В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве 50, 100 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2150, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 2950, 3000 мг или больше может вводиться (например, подкожно или внутривенно) субъекту через каждые шесть месяцев. В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве от 0,1 мг до 5000 мг, от 1 мг до 4000 мг, от 10 мг до 3000 мг, от 10 мг до 2000 мг, от 100 мг до 2000 мг, от 150 мг до 2000 мг, от 200 мг до 2000 мг, от 250 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг, от 350 мг до 2000 мг, от 400 мг до 2000 мг, от 450 мг до 2000 мг, от 500 мг до 2000 мг, от 550 мг до 2000 мг, от 600 мг до 2000 мг, от 650 мг до 2000 мг, от 700 мг до 2000 мг, от 750 мг до 2000 мг, от 800 мг до 2000 мг, от 850 мг до 2000 мг, от 900 мг до 2000 мг, от 950 мг до 2000 мг или от 1000 мг до 2000 мг может вводиться (например, подкожно или внутривенно) субъекту через каждые шесть месяцев. В некоторых вариантах реализации, от 450 мг до 2000 мг вводят один раз в каждые шесть месяцев или меньше.
В некоторых вариантах реализации, частота, с которой доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) вводится субъекту (например, подкожно или внутривенно), составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать или двадцать раз в каждый квартал. Следует понимать, что квартал может относяться к периоду времени, равному четверти года, или могут также относятся к календарному кварталу, такому как период времени с 1 января по 31 марта, с 1 апреля по 30 июня, с 1 июля по 30 сентября или с 1 октября по 31 декабря. В некоторых случаях, квартал может относиться к периоду времени, равному приблизительно трем месяцам.
В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве 50, 100 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2150, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 2950, 3000 мг или больше может вводиться (например, подкожно или внутривенно) субъекту каждый квартал. В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве от 0,1 мг до 5000 мг, от 1 мг до 4000 мг, от 10 мг до 3000 мг, от 10 мг до 2000 мг, от 100 мг до 2000 мг, от 150 мг до 2000 мг, от 200 мг до 2000 мг, от 250 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг, от 350 мг до 2000 мг, от 400 мг до 2000 мг, от 450 мг до 2000 мг, от 500
- 30 043536 мг до 2000 мг, от 550 мг до 2000 мг, от 600 мг до 2000 мг, от 650 мг до 2000 мг, от 700 мг до 2000 мг, от
750 мг до 2000 мг, от 800 мг до 2000 мг, от 850 мг до 2000 мг, от 900 мг до 2000 мг, от 950 мг до 2000 мг, или от 1000 мг до 2000 мг может вводиться (например, подкожно или внутривенно) субъекту каждый квартал.
В некоторых вариантах реализации, частота, с которой вводится доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), составляет, составляет по меньшей мере, составляет менее чем, или составляет самое большее один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать или двадцать раз каждый год, каждые два года, каждые три года, каждые четыре года, или каждые пять лет. В некоторых вариантах реализации, частота, с которой антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP) вводится субъекту, составляет менее чем одна, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать, двадцать одна, двадцать две, двадцать три, двадцать четыре или двадцать пять доз в год.
В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве 50, 100 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2150, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 2950, 3000 мг или больше может быть введено субъекту один раз в год. В некоторых вариантах реализации, антитело в дозе или количестве от 0,1 мг до 5000 мг, от 1 мг до 4000 мг, от 10 мг до 3000 мг, от 10 мг до 2000 мг, от 100 мг до 2000 мг, от 150 мг до 2000 мг, от 200 мг до 2000 мг, от 250 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг, от 350 мг до 2000 мг, от 400 мг до 2000 мг, от 450 мг до 2000 мг, от 500 мг до 2000 мг, от 550 мг до 2000 мг, от 600 мг до 2000 мг, от 650 мг до 2000 мг, от 700 мг до 2000 мг, от 750 мг до 2000 мг, от 800 мг до 2000 мг, от 850 мг до 2000 мг, от 900 мг до 2000 мг, от 950 мг до 2000 мг, или от 1000 мг до 2000 мг может быть введено субъекту один раз в год. В некоторых вариантах реализации, от 450 мг до 2000 мг вводят один раз в год или меньше.
В некоторых вариантах реализации, способ может включать введение антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе субъекту в течение множества дней. Два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или больше дней из множества дней могут быть разделены более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или больше днями. В некоторых вариантах реализации, два из множества дней разделены интервалом более чем один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать, двадцать один, двадцать два, двадцать три, двадцать четыре, двадцать пять, двадцать шесть, двадцать семь, двадцать восемь, двадцать девять, тридцать или больше дней. Кроме того, в некоторых вариантах реализации, количество антитела, вводимого в первый день из множества дней может отличаться (например, быть больше или меньше) от количества антитела, вводимого во второй день.
В некоторых вариантах реализации, начальная доза (например, ударная доза) антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, может быть введена субъекту, с последующим введением одной или нескольких дополнительных доз с желательными интервалами. В некоторых вариантах реализации, начальная доза и одна или несколько дополнительных доз являются одинаковыми. В некоторых вариантах реализации, одна или несколько дополнительных доз отличаются от начальной дозы. В некоторых вариантах реализации, частота, с которой вводятся одна или несколько дополнительных доз, является постоянной (например, каждый месяц). В некоторых вариантах реализации, частота, с которой вводятся одна или несколько дополнительных доз, меняется (например, одна дополнительная доза вводится через один месяц после начальной дозы, с последующим введением другой дополнительной дозы через три месяца после начальной дозы). Могут использоваться любая желательная и/или терапевтическая схема введения начальной ударной дозы, дополнительных доз, и частота дополнительных доз (например, включая описанные в данном документе). Типичный пример схемы лечения включает начальную ударную дозу 675 мг антагонистического антитела против CGRP, вводимую подкожно, с последующими поддерживающими дозами 225 мг антитела, вводимыми подкожно с интервалами в один месяц.
В некоторых вариантах реализации, субъекту может быть введена начальная доза антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), равная 0,1 мкг, 1 мкг, 100 мкг, 1, 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 800, 825, 850, 875, 900, 925, 950, 975, 1000, 1500, 2000 или 3000 мг с
- 31 043536 последующими одной или несколькими дополнительными дозами антитела, равными 0,1, 1, 100 мкг, 1,
10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 450, 475, 500, 525, 550, 575,
600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 800, 825, 850, 875, 900, 925, 950, 975, 1000, 1500, 2000 или 3000 мг.
В некоторых вариантах реализации, доза или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, может быть разделена на поддозы и введена в виде множества поддоз, в зависимости, например, от пути введения и/или конкретной вводимой композиции. Например, в случаях, когда доза вводится подкожно, подкожная доза может быть разделена на множество поддоз, и каждая поддоза вводится в разные места во избежание, например, большой разовой подкожной инъекции в одно место. Например, подкожная доза 900 мг может быть разделена на четыре поддозы по 225 мг каждая и каждая доза 225 мг вводится в разные места, что поможет минимизировать объем инъекции в каждое место. Поддозы могут быть поделены поровну (например, на 4 равные поддозы) или могут быть неравными (например, на 4 поддозы, две из которых вдвое больше других поддоз).
В некоторых вариантах реализации, число доз антитела, вводимых субъекту за курс лечения, может меняться в зависимости от, например, достижения сниженной частоты вазомоторного симптома и/или головной боли у субъекта. В некоторых вариантах реализации, вазомоторный симптом ассоциирован с формой головной боли (например, мигрени, хронической мигрени, эпизодической мигрени, другого типа головной боли и т.д.). Например, число доз, вводимых за курс лечения, может составлять, может составлять по меньшей мере, или могут составлять самое большее 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50. В некоторых случаях (например, в случаях, когда субъект имеет хроническую мигрень), лечение может проводиться без ограничений по времени. В некоторых случаях, лечение может быть неотложным, так чтобы субъекту для лечения вводили самое большее 1, 2, 3, 4, 5 или 6 доз.
В некоторых вариантах реализации, доза (или поддоза) или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, может быть составлена в виде жидкой композиции и введена (например, путем подкожной инъекции, путем внутривенной инъекции) субъекту. В таких случаях, объем жидкой композиции, содержащей антитело, может меняться в зависимости от, например, концентрации антитела в жидкой композиции, желательной дозы антитела, и/или используемого пути введения. Например, объем жидкой композиции, содержащей антитело, описанное в данном документе, и введенной (например, путем инъекции, такой как, например, подкожная инъекция или внутривенная инъекция) субъекту, может иметь значение от 0,001 мл до 10,0 мл, от 0,01 мл до 5,0 мл, от 0,1 мл до 5 мл, от 0,1 мл до 3 мл, от 0,5 мл до 2,5 мл или от 1 мл до 2,5 мл. Например, объем жидкой композиции, содержащей антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, и введенной (например, путем инъекции, такой как, например, подкожная инъекция или внутривенная инъекция) субъекту может составлять, может составлять по меньшей мере, может составлять менее чем, или могут составлять самое большее 0,001, 0,005, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10,0 мл.
В некоторых вариантах реализации, доза (или поддоза) или количество антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, может поставляться в предварительно наполненных емкостях, пригодных для введения антитела субъекту. Такие предварительно наполненные емкости могут быть предназначены для самовведения или для введения другим лицом. Например, доза (или поддоза) или количество антитела, описанные в данном документе, может поставляться в виде жидкой композиции в предварительно наполненных шприцах. В таких примерах, предварительно наполненные шприцы могут быть предназначены для самовведения или для введения другим лицом. В некоторых случаях, предварительно наполненные шприцы могут быть предназначены для подкожного введения и/или внутривенного введения.
В целях настоящего изобретения, требующаяся доза антитела может зависеть от используемого антитела (или его композиций), типа и тяжести вазомоторного симптома, типа и тяжести головной боли (например, мигрени) или другого состояния, подлежащего лечению, от того, с профилактической или с терапевтической целью вводится агент, предшествующей терапии, клинической истории пациента и отклика на агент, и мнения лечащего врача. Типично, клинический врач будет вводить антитело до достижения дозы, обеспечивающей желательный результат. Доза и/или частота могут меняться по ходу лечения.
Эмпирические соображения, такие как период полувыведения, обычно будут приниматься во внимание при определении дозы. Например, антитела, совместимые с иммунной системой человека, такие как гуманизированные антитела или полностью человеческие антитела, могут быть использованы для увеличения периода полувыведения антитела и для предотвращения атаки антитела со стороны иммун- 32 043536 ной системы хозяина. Частота введения может быть определена и откорректирована по ходу терапии, и обычно, но не обязательно, основана на лечении и/или подавлении и/или облегчении и/или задержке головной боли (например, мигрени) или другого состояния. Альтернативно, пролонгированное непрерывное высвобождение композиции антител может быть пригодным. Различные композиции и устройства для достижения пролонгированного высвобождения известны специалистам.
В одном варианте реализации, дозы антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, могут быть определены эмпирически у индивидуумов, которые получают один или несколько приемов антитела. Индивидуумам дают постепенно возрастающие дозы антитела. Для оценки эффективности антитела может проводиться наблюдение за показателем болезни.
Введение антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP) в соответствии со способами по настоящему изобретению может быть непрерывным или прерывистым, в зависимости, например, от физиологического состояния реципиента, независимо от того, является цель введения терапевтической или профилактической, и других факторов, известных квалифицированным практикующим врачам. Введение антитела может быть по существу непрерывным на протяжении предварительно заданного периода времени, или может осуществляться в виде последовательности разделенных доз, например, до, во время, или после развития головной боли (например, мигрень); до; во время; до и после; во время и после; до и во время; или до, во время, и после развития головной боли. Введение может осуществляться до, во время и/или после любого события, которое вероятно приведет к возникновению головной боли.
В некоторых вариантах реализации может присутствовать несколько антител. Могут присутствовать по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять разных, или больше антител. В общем, эти антитела могут обладать комплементарными активностями, которые не оказывают отрицательного влияния друг на друга. Антитело (например, моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP, антагонистическое антитело против CGRP, моноклональное антагонистическое антитело против CGRP), описанное в данном документе, также может использоваться в сочетании с другими антагонистами CGRP или антагонистами рецепторов CGRP. Например, могут быть использованы один или несколько из следующих антагонистов CGRP: антисмысловая молекула, нацеленная на CGRP (включая антисмысловую молекулу, нацеленную на нуклеиновую кислоту, кодирующую CGRP), соединение, ингибирующее CGRP, структурный аналог CGRP, доминантно-негативную мутацию рецептора CGRP, которая связывает CGRP, и антитело против рецептора CGRP. Антитело также может использоваться в сочетании с другими агентами, усиливающими и/или дополняющими эффективность агентов.
Диагностика или оценка головной боли хорошо известна специалистам в данной области техники. Оценка может проводиться на основании субъективных показателей, таких как характеризация симптомов пациентом. Например, мигрень может быть диагностирована на основании следующих критериев: 1) эпизодические приступы головной боли, длящиеся от 4 до 72 ч; 2) с двумя из следующих симптомов: односторонняя боль, пульсация, обострение при движении, и боль умеренная или тяжелая по интенсивности; и 3) один из следующих симптомов: тошнота или рвота, и фотофобия или фонофобия. Goadsby et al., N. Engl. J. Med. 346:257-270, 2002. В некоторых вариантах реализации, оценка головной боли (например, мигрени) может осуществляться по количеству часов головной боли, как описано в других разделах данного документа. Например, оценка головной боли (например, мигрени) может осуществляться по суточному количеству часов головной боли, недельному количеству часов головной боли, месячному количеству часов головной боли и/или годовому количеству часов головной боли. В некоторых случаях, количеству часов головной боли может указываться субъектом.
Эффективность лечения может оцениваться способами, хорошо известными специалистам. Например, может оцениваться купирование боли. Соответственно, в некоторых вариантах реализации, купирование боли субъективно определяется через 1, 2, или несколько часов после введения антитела против CGRP. В некоторых вариантах реализации, частота приступов головной боли субъективно определяется после введения антитела против CGRP.
В некоторых вариантах реализации, способ лечения или снижения частоты головной боли у субъекта, как описано в данном документе, может снижать частоту головной боли после разового введения антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе, в течение длительного периода времени. Например, частота головной боли может снижаться на протяжении по меньшей мере 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50 или больше дней после разового введения.
В некоторых вариантах реализации, способ лечения или снижения частоты головной боли у субъекта, как описано в данном документе, может уменьшать число часов головной боли, испытываемой субъ- 33 043536 ектом, по сравнению с уровнем до введения, после введения субъекту одной или нескольких доз антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе. Например, суточное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, после введения субъекту одной или нескольких доз антитела, может быть уменьшено на 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 ч головной боли по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В некоторых случаях, суточное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, после введения субъекту одной или нескольких доз антитела, может быть уменьшено на 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше, по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В другом примере, недельное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или больше часов головной боли по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В некоторых случаях, недельное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше, по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В другом примере, месячное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125 или больше часов головной боли по сравнению с уровнем до введения. В некоторых случаях, недельное количество часов головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше, по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения.
В некоторых вариантах реализации, способ лечения или снижения частоты головной боли у субъекта, как описано в данном документе, может уменьшать число дней головной боли, испытываемой субъектом, по сравнению с уровнем до введения, после введения субъекту одной или нескольких доз антитела (например, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антагонистического антитела против CGRP), описанного в данном документе. Например, недельное количество дней головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5 или 7 дней головной боли по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В некоторых случаях, недельное количество дней головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% или больше, по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения. В другом примере, месячное количество дней головной боли, испытываемой субъектом, может быть уменьшено после введения субъекту одной или нескольких доз антитела на 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 или больше дней головной боли, по сравнению с уровнем до введения.
В некоторых вариантах реализации, способ может включать введение субъекту одного или нескольких дополнительных агентов одновременно или последовательно с антителом (например, моноклональным антителом, которое модулирует путь CGRP, антагонистическим антителом против CGRP, моноклональным антагонистическим антителом против CGRP). В некоторых вариантах реализации, дополнительный агент может быть лекарственным препаратом против головной боли, таким как приведенный в примере лекарственный препарат против головной боли (например, агонисты 5-НТ1, триптаны, алкалоиды спорыньи, опиаты, β-адренергические антагонисты, NSAID) описанные в любом месте данного документа. В некоторых вариантах реализации, терапевтический эффект может быть увеличен по сравнению с использованием антитела или одного или нескольких дополнительных агентов по отдельности. Соответственно, может быть достигнут синергический эффект между антителом и одним или несколькими дополнительными агентами. В некоторых вариантах реализации, один или несколько дополнительн агентов могут приниматься субъектом профилактически.
B. Антагонистические антитела против CGRP.
В некоторых вариантах реализации, в способах по изобретению используется антитело, которое может быть антагонистическим антителом против CGRP. Антагонистическое антитело против CGRP может относиться к любой молекуле антитела, которая блокирует, подавляет или снижает (в том числе значительно) биологическую активность CGRP, включая метаболические пути, медиируемые сигнализацией CGRP, такие как связывание рецептора и/или вызывание клеточного ответа на CGRP.
Антагонистические антитело против CGRP может проявлять любую одну или несколько из следующих характеристик: (а) связывание с CGRP; (b) блокирование связывания CGRP с его рецептором (рецепторами); (с) блокирование или снижение активации рецептора CGRP (включая активацию cAMP); (d) ингибирование биологической активности CGRP или метаболических путей, медиируемых сигнальной функцией CGRP; (e) предотвращение, облегчение или исцеления любого аспекта головной боли (например, мигрени); (f) увеличение клиренса CGRP; и (g) ингибирование (снижение) синтеза CGRP, продуцирования или высвобождения. Антагонистические антитела против CGRP известны специалистам.
- 34 043536
См., например, Tan et al., Clin. Sci. (Lond). 89:565-73, 1995; Sigma (Миссури, США), Номер продукта
С7113 (клон № 4901); Plourde et al., Peptides 14:1225-1229, 1993.
В некоторых вариантах реализации, антитело взаимодействует с CGRP, ингибируя CGRP и/или путь CGRP, включая метаболические пути, медиируемые сигнальной функцией CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP распознает человеческий CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывается с обоими из человеческих α-CGRP и β-CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывается с человеческим и крысиным CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывает С-концевой фрагмент, содержащий аминокислоты 25-37 CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP связывает C-концевой эпитоп в пределах аминокислот 25-37 CGRP.
Антитела, пригодные для использования по настоящему изобретению, могут охватывать моноклональные антитела, поликлональные антитела, фрагменты антител (например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc и т.д.), химерные антитела, биспецифические антитела, гетероконъюгированные антитела, одноцепочечные (ScFv), их мутанты, гибридные белки, содержащие участок, являющийся антителом (например, доменным антителом), гуманизированные антитела, и любые другие молекулы иммуноглобулина с модифицированной конфигурацией, содержащие сайт распознавания антигена требуемой специфичности, включая гликозилированные варианты антител, аминокислотные последовательности вариантов антител, и ковалентно модифицированные антитела. Антитела может быть мышиными, крысиными, человеческими, или иметь любое другое происхождение (включая химерные или гуманизированные антитела).
В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP является гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, антитело является человеческим. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP представляет собой антитело G1 (как описано в данном документе). В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP включает один или несколько CDR (гипервариабельных участков), например один, два, три, четыре, пять или, в некоторых вариантах реализации, все шесть CDR) антитела G1 или вариантов G1, представленных в табл. 6. В других вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, представленную на фиг. 5 (SEQ ID NO: 1), и аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, представленную на фиг. 5 (SEQ ID NO: 2).
В некоторых вариантах реализации, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR) и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), выбранны из группы, состоящей из (a) LCVR17 (SEQ ГО NO: 58) и HCVR22 (SEQ ГО NO: 59); (Ь)
LCVR18 (SEQ ГО NO: 60) и HCVR23 (SEQ ГО NO: 61); (с) LCVR19 (SEQ ГО NO: 62) и
HCVR24 (SEQ ГО NO: 63); (d) LCVR20 (SEQ ГО NO: 64) и HCVR25 (SEQ ГО NO: 65);
(е) LCVR21 (SEQ ГО NO: 66) и HCVR26 (SEQ ГО NO: 67); (f) LCVR27 (SEQ ID NO: 68) и HCVR28 (SEQ ID NO: 69); (g) LCVR29 (SEQ ID NO: 70) и HCVR30 (SEQ ID NO: 71);
(h) LCVR31 (SEQ ID NO: 72) и HCVR32 (SEQ ID NO: 73); (i) LCVR33 (SEQ ID NO: 74) и HCVR34 (SEQ ID NO: 75); (j) LCVR35 (SEQ ID NO: 76) и HCVR36 (SEQ ID NO: 77);
и (k) LCVR37 (SEQ ID NO: 78) и HCVR38 (SEQ ID NO: 79).
Последовательности этих областей представлены в данном документе. Другие примеры антител описаны в US 20110305711, US 20120294802, US 20120294797 и US 20100172895, которые включены в данный документ в качестиве ссылок.
В некоторых вариантах реализации, антитело содержит модифицированную константную область, такую как константная область, являющаяся иммунологически инертной, описанная в данном документе. В некоторых вариантах реализации, константная область является модифицированной, как описано в Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624; заявке PCT № PCT/GB99/01441; и/или патентной заявке Великобритании № 9809951.8. В других вариантах реализации, антитело содержит константную область тяжелой цепи человеческого IgG2, содержащую следующие мутации: А330Р331 на S330S331 (нумерация аминокислот в соответствии с последовательностью IgG2 дикого типа). Eur. J. Immunol. (1999) 29:26132624. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит константную область IgG4, содержащую следующие мутации: E233F234L235 на P233V234A235. В других вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования. В некоторых вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования путем мутации остатка присоединения олигосахарида (такого как Asn297) и/или фланкирующих остатков, являющихся частью последовательности распознавания N-гликозилирования в константной области. В некоторых вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования. Константная область может быть агликозилирована для N-связанного гликозилирования ферментативно или путем экс- 35 043536 прессии в дефицитной по гликозилированию клетке-хозяине.
Аффинность связывания (KD) антагонистического антитела против CGRP с CGRP (таким как человеческий α-CGRP) может составлять от около 0,02 до около 200 нМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет любое значение из около 200 нМ, около 100 нМ, около 50 нМ, около 10 нМ, около 1 нМ, около 500 пМ, около 100 пМ, около 60 пМ, около 50 пМ, около 20 пМ, около 15 пМ, около 10 пМ, около 5 пМ, или около 2 пМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет значение меньше любой величины из около 250 нМ, около 200 нМ, около 100 нМ, около 50 нМ, около 10 нМ, около 1 нМ, около 500 пМ, около 100 пМ, или около 50 пМ.
Одним из способов определения аффинности связывания антител с CGRP является измерение аффинности связывания монофункциональных Fab-фрагментов антитела. Для получения монофункциональных Fab-фрагментов, антитело (например, IgG) может быть гидролизовано папаином или экспрессировано рекомбинантными методами. Аффинность Fab-фрагмента антитела против CGRP может быть определена методом поверхностного плазмонного резонанса (система поверхностного плазмонного резонанса (SPR) Biacore3000™, Biacore, INC, Piscataway NJ), оснащенная сенсорными чипами с предварительно иммобилизированным стрептавидином (SA), с использованием HBS-EP подвижного буфера (0,01М HEPES, pH 7,4, 0,15 NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% об./об. Surfactant P20). Биотинилированный человеческий CGRP (или любой другой CGRP) может быть разбавлен буфером HBS-EP до концентрации менее 0,5 мкг/мл и пропускаться путем инъекции по индивидуальным каналам чипа с использованием различных времен контакта для получения двух диапазонов плотности антигена - 50-200 единиц отклика (RU) для детальных кинетических исследований или 800-1000 RU для скрининговых анализов. Исследования регенерации показали, что 25 мМ NaOH в 25% об./об. этаноле эффективно удаляет связанный Fab, при сохранении активности CGRP на чипе на протяжении более 200 инъекций. Типично, серийные разбавления (в диапазоне концентраций 0,1-10х, расчетное значение KD) очищенных образцов Fab вводят на 1 мин при расходе 100 дл/минуту и наблюдают диссоциацию в течение до 2 ч. Концентрации белков Fab определяют методами ИФА и/или электрофорезом SDS-PAGE (полиакриламидный гель с добавкой ДСН) с использованием известной концентрации Fab (определенной по анализу аминокислот) в качестве стандарта. Кинетические константы ассоциации (kon) и константы диссоциации (koff) получуют одновременно путем аппроксимации данных глобально с использованием 1:1 модели связывания Лэнгмюра (Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, В. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110) с помощью программы BIAevaluation. Значения равновесной константы диссоциации (KD) рассчитывают как koff/kon. Этот протокол пригоден для использования при определении аффинности связывания антитела с любым CGRP, включая человеческий CGRP, CGRP других млекопитающих (такие как мышиный CGRP, крысиный CGRP, CGRP приматов), а также разных форм CGRP (таких как α- и β-формы). Аффинность связывания антитела обычно измеряют при 25°С, но она также может быть измерена при 37°С.
Антитела, включая антагонистические антитела против CGRP, могут быть получены любым способом, известным специалистам. Путь введения и график иммунизации животного-хозяина обычно соответствуют принятым и обычным методикам стимуляции антителом и продуцирования, как дополнительно описано в данном документе. Общие методики продуцирования человеческих и мышиных антител известны специалистам и описаны в данном документе.
Предусматривается, что любое млекопитающее-субъект, включая людей, или его антителопродуцирующие клетки могут быть с помощью определенных манипуляций использованы в качестве основы для продуцирования гибридомных клеточных линий млекопитающего, включая человека. Типично, животное-хозяина инокулируют интраперитонеально, внутримышечно, орально, подкожно, интраплантарно и/или интрадермально определенным количеством иммуногена, включая способы, описанные в данном документе.
Гибридомы могут быть получены из лимфоцитов и иммортализованных клеток миеломы с использованием общей методики гибридизации соматических клеток Kohler, В. and Milstein, С. (1975) Nature 256:495-497 или модифицированной в соответствии с Buck, D. W., et al., In vitro, 18:377-381 (1982). Для гибридизации могут быть использованы доступные линии миеломы, включая, без ограничений, Х63Ag8.653 и предлагаемые Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, Calif., USA. В общем, методика предусматривает слияние клеток миеломы и лимфоидных клеток с использованием вещества, стимулирующего слияние, такого как гликоль, или электрических средств, хорошо известных квалифицированным специалистам в данной области техники. После слияния, клетки отделяют от среды для слияния и выращивают в селективной питательной среде, такой как среда с гипоксантином-аминоптериномтимидином (HAT), для устранения негибридизованных родительских клеток. Любая из сред, описанных в данном документе, с добавкой сыворотки или без нее, может быть использована для культивации гибридом, которые секретируют моноклональные антитела. В качестве другой альтернативы методу слияния клеток, иммортализованные с помощью EBV (вирус Эпштейна-Барр) В-клетки могут быть использованы для продуцирования моноклональных антител (например, моноклональныз антител против CGRP) по данному изобретению. Гибридомы растягивают и субклонируют, при необходимости, и супернатанты анализируют на активность по отношению к иммуногену с помощью обычных процедур иммунологиче- 36 043536 ского анализа (например, радиоиммуноанализ, ферментный иммунологический анализ, или флуоресцентный иммунологический анализ).
Гибридомы, которые могут быть использованы в качестве источника антител, охватывают все производные, потомство клеток родительских гибридом, которые продуцируют моноклональные антитела, специфические к CGRP, или их часть.
Гибридомы, продуцирующие такие антитела, могут выращиваться in vitro или in vivo с использованием известных процедур. Моноклональные антитела могут быть выделены из питательных сред или жидкостей организма с помощью обычных процедур очистки иммуноглобулинов, таких как осаждение с помощью сульфата аммония, гель-электрофорез, диализ, хроматография, и ультрафильтрация, при необходимости. Нежелательная активность, если она присутствует, могут быть устранена, например, путем пропускания препарата над адсорбентами, состоящими из иммуногена, присоединенного к твердой фазе, и элюирования или высвобождения желательного антитела от иммуногена. Иммунизация животногохозяина с помощью человеческого CGRP, или фрагмента, содержащего целевую аминокислотную последовательность, конъюгированную с белком, являющимся иммуногенным для вида, подлежащего иммунизации, например, гемоцианин моллюска фиссуреллы, сывороточный альбумин, бычий тиреоглобулин, или ингибитор соевого трипсина, с использованием бифункционального или дериватизирующего агента, например, малеимидобензоилсульфосукцинимидного сложного эфира (конъюгация через цистеиновые остатки), N-гидроксисукцинимида (через лизиновые остатки), глутаральдегида, янтарного альдегида, SOCl2, или R1N=C=NR, где R и R1 обозначают разные алкильные группы, может дать популяцию антител (например, моноклональных антител).
При необходимости, антитело (например, моноклональное или поликлональное антагонистическое антитело против CGRP), представляющее интерес, может быть секвенировано и полинуклеотидная последовательность может затем быть клонировано в вектор для экспрессии или размножения. Последовательность, кодирующая антитело, представляющее интерес, может поддерживаться в векторе в клеткехозяине, и клетка-хозяин может быть затем размножена и заморожена для последующего использования. В альтернативе, полинуклеотидная последовательность может быть использована для генетической манипуляции с целью гуманизации антитела или для улучшения аффинности, или других характеристик антитела. Например, константная область может быть генетически модифицирована для придания большего сходства с человеческими константными областями во избежание иммунного ответа, если антитело используется в клинических испытаниях и лечении людей. Может быть желательным проведение генетических манипуляций с последовательностью антитела для получения большей аффинности к CGRP и большей эффективности ингибирования CGRP. Квалифицированному специалисту в данной области техники будет понятно, что можно выполнить одно или несколько изменений полинуклеотида в антагонистическом антителе против CGRP при сохранении его связывающей способности с CGRP.
Гуманизация моноклонального антитела может включать четыре общих стадии. Они представляют собой: (1) определение нуклеотидной и предсказанной аминокислотной последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей исходного антитела; (2) проектирование гуманизированного антитела, т.е. определение того, какой каркасный участок антитела использовать в процессе гуманизации; (3) методология/методики собственно гуманизации; и (4) трансфекция и экспрессия гуманизированного антитела. См., например, патентах США № 4816567; 5807715; 5866692; 6331415; 5530101; 5693761; 5693762; 5585089; и 6180370.
Был описан ряд гуманизированных молекул антитела, содержащих антигенсвязывающий сайт, выделенный из не принадлежащего человеку иммуноглобулина, включая химерные антитела, имеющие V-области грызунов или модифицированные V-области грызунов и их ассоциированных участков, определяющих комплементарность (CDR), слитых с человеческими константными доменами. См., например, Winter et al., Nature 349:293-299 (1991), Lobuglio et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:4220-4224 (1989), Shaw et al., J. Immunol. 138:4534-4538 (1987), и Brown et al., Cancer Res. 47:3577-3583 (1987). Другие ссылки описывают CDR грызунов, привитые к человеческому несущему каркасному участку (FR) перед слиянием с соответствующим константным доменом человеческого антитела. См., например, Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988), Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988), и Jones et al., Nature 321:522-525 (1986). Другая ссылка описывает CDR грызуна, поддерживаемые рекомбинантно сконструированным каркасными участками грызуна. См., например, европейскую патентную публикацию № 0519596. Такие гуманизированные молекулы сконструированы для минимизации нежелательного иммунологического ответа на молекулы антитела грызуна против человека, который ограничивает продолжительность и эффективность терапевтического применения таких веществ у реципиентов-людей. Например, константная область антитела может быть модифицирована таким образом, чтобы она была иммунологически инертной (например, не инициировала лизис комплемента). См., например публикацию PCT № PCT/GB99/01441; патентную заявку Великобритании № 9809951.8. Другие способы гуманизации антител, которые также могут быть использованы, раскрыты в Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19:24712476 (1991) и в патентах США № 6180377; 6054297; 5997867; 5866692; 6210671; и 6350861; и в публикации PCT № WO 01/27160.
В другой альтернативе, полностью человеческие антитела могут быть получены при использовании
- 37 043536 коммерчески доступных мышей, которые были модифицированы для экспрессии специфических белков человеческих иммуноглобулинов. Трансгенные животные, предназначенные для продуцирования более желательного (например, полностью человеческих антител) или более сильного иммунного ответа, также могут быть использованы для получения гуманизированных или человеческих антител. Примерами такой технологии являются Xenomouse™ фирмы Abgenix, Inc. (Fremont, СА) и HuMAb-Mouse® и ТС Mouse™ фирмы Medarex, Inc. (Princeton, NJ).
В альтернативе, антитела могут быть получены рекомбинантными методами и экспрессированы с использованием любого способа, известного специалистам. В другой альтернативе, антитела могут быть получены рекомбинантно по технологии фагового дисплея. См., например, патентах США № 5565332; 5580717; 5733743; и 6265150; и Winter et al., Annu. Rev. Immunol. 12:433-455 (1994). Альтернативно, технология фагового дисплея (McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)) может быть использована для продуцирования человеческих антител и фрагментов антител in vitro, из генных репертуаров вариабельного (V) домена иммуноглобулина от неиммунизированных доноров. В соответствии с этой методикой, гены V-домена антитела клонируют в рамке в ген основного или минорного белка оболочки нитевидного бактериофага, такого как М13 или fd, и представляются как функциональные фрагменты антител на поверхности фаговой частицы. Поскольку нитевидная частица содержит одноцепочечную копию ДНК фагового генома, селекция на основе функциональных свойств антитела также приводит к селекции гена, кодирующего антитело, демонстрирующее такие свойства. Таким образом, фаг имитирует некоторые свойства В-клетки. Фаговый дисплей может проводиться в различных форматах; обзор приведен, например, в Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993). Для фагового дисплея могут быть использованы несколько источников сегментов V-гена. Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991) выделили широкий спектр антител против оксазолона из небольшой случайной комбинаторной библиотеки V-генов, выделенных из селезенок иммунизированных мышей. Репертуар Vгенов от неиммунизированных человеческих доноров может быть сконструирован, и антитела к широкому спектру антигенов (включая аутоантигены) могут быть выделены по существу согласно методикам, описанным Mark et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), или Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993). При природном иммунном ответе, гены антитела накапливают мутации с высокой скоростью (соматическая гипермутация). Некоторые из вносимых изменений будут придавать более высокую аффинность, и Вклетки, представляющие высокоаффинный поверхностный иммуноглобулин, предпочтительно реплицируются и дифференцируются при последующей антигенной стимуляции. Этот природный процесс можно имитировать путем использования методики, известной как перетасовка цепи (Marks, et al., Bio/Technol. 10:779-783 (1992)). В этом способе, аффинность первичных человеческих антител, полученных с помощью фагового дисплея, может быть улучшена путем последовательной замены генов Vобластей тяжелой и легкой цепей на репертуары природных вариантов (репертуары) генов V-домена, полученных от неиммунизированных доноров. Эта методика позволяет продуцировать антитела и фрагменты антител с аффинностями в диапазоне пМ-нМ. Стратегия получения очень больших репертуаров фаговых антител (также известных как мать всех библиотек) была описана Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21:2265-2266 (1993). Перетасовка генов также может быть использована для получения человеческих антител из антител грызунов, когда человеческое антитело имеет аффинности и специфичности, схожие с исходным антителом грызуна. В соответствии с этим способом, который также называется импринтинг эпитопа, ген V-домена тяжелой или легкой цепей антител грызунов, полученных методом фагового дисплея, заменяют на репертуар генов человеческого V-домена, создавая химеры грызунчеловек. Селекция по антигену приводит к выделению человеческих вариабельных областей, способных восстанавливать функциональный антигенсвязывающий сайт, т.е. эпитоп определяет (впечатывает) выбор партнера. При повторении процесса для замены оставшегося V-домена грызуна получают человеческое антитело (см. публикацию PCT № WO 93/06213, опубликованную 1 апреля 1993 г.). В отличие от традиционной гуманизации антител грызунов методом трансплантации CDR, эта методика обеспечивает получение полностью человеческих антител, которые не имеют остатков каркасных или CDR-участков грызуна.
Понятно, что хотя приведенное выше описание относится к гуманизированным антителам, рассмотренные общие принципы применимы к направленной модификации антител, предназначенных для использования, например, для собак, кошек, приматов, лошадей и крупного рогатого скота. Дополнительно понятно, что один или несколько аспектов гуманизации антител, описанных в данном документе, могут быть скомбинированы, например, трансплантация CDR, мутация каркасной области и мутация CDR.
Антитела могут быть получены рекомбинантными методами путем выделения сначала антител и антитело-продуцирующих клеток у животных-хозяев, получения генной последовательности, и использования генной последовательности для рекомбинантной экспрессии антитела в клетках-хозяевах (например, клетках СНО). Другой способ, который может быть использован, заключается в экспрессии последовательности антитела в растениях (например, табака) или трансгенном молоке. Способы рекомбинантной экспрессии антител в растениях или молоке раскрыты в литературе. См., например, Peeters, et al.
- 38 043536
Vaccine 19:2756 (2001); Lonberg, N. and D. Huszar Int.Rev.Immunol 13:65 (1995); и Pollock, et al., J. Immunol Methods 231:147 (1999).
Способы получения производных антител, например, гуманизированных, одноцепочечных и т.д., известны специалистам.
Иммунологические анализы и сортировка методами проточной цитометрии, такими как активируемая флуоресценцией сортировка клеток (FACS) также могут быть использованы для выделения антител, специфических по отношению к CGRP.
Антитела могут быть связаны с различными носителями. Носители могут быть активными и/или инертными. Примеры носителей включают полипропилен, полистирол, полиэтилен, декстран, найлон, амилазы, стекло, природные и модифицированные целлюлозы, полиакриламиды, агарозы и магнетит. Носитель по природе может быть растворимым или нерастворимым. Квалифицированные специалисты в данной области техники знают другие пригодные носители для связывания антител, или могут определить такие, используя рутинные эксперименты. В некоторых вариантах реализации, носитель содержит фрагмент, нацеленный на миокард.
ДНК, кодирующая моноклональные антитела, легко выделяется и секвенируется с использованием обычных процедур (например, путем использования олигонуклеотидных зондов, способных специфически связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи моноклональных антител). Клетки гибридом служат предпочтительным источником такой ДНК. После выделения, ДНК может быть помещена в экспрессионные вектора (такие как экспрессионные вектора, раскрытые в публикации PCT № WO 87/04462), которые затем трансфицируют в клетки-хозяева, такие как клетки Е.coli, клетки COS обезьян, клетки яичника китайского хомячка (СНО), или клетки миеломы, которые иначе не продуцируют белок иммуноглобулина, для обеспечения синтеза моноклональных антител в рекомбинантных клеткаххозяевах. См., например, публикацию PCT № WO 87/04462. ДНК также может быть модифицирована, например, путем замещения кодирующей последовательности на константные домены человеческих тяжелой и легкой цепей вместо гомологичных мышиных последовательностей, Morrison et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851 (1984), или путем ковалентного присоединения к кодирующей последовательности иммуноглобулина всей или части кодирующей последовательности полипептида, не являющегося иммуноглобулином. Таким способом получают химерные или гибридные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к любому моноклональному антителу против CGRP, описанному в данном документе.
Антитела (например, антагонистические антитела против CGRP) и полипептиды, полученные из антител, могут быть идентифицированы или охарактеризованы с использованием способов, известных специалистам, в которых детектируется и/или измеряется снижение, ослабление или нейтрализация биологической активности CGRP. Например, антагонистическое антитело против CGRP также может быть идентифицировано путем инкубации агента-кандидата с CGRP и контроля любой одной или нескольких из следующих характеристик: (а) связывание с CGRP; (b) блокирование связывания CGRP с его рецептором (рецепторами); (с) блокирование или снижение активации рецептора CGRP (включая активацию cAMP); (d) ингибирование биологической активности CGRP или метаболических путей, медиируемых сигнальной функцией CGRP; (e) предотвращение, облегчение или исцеления любого аспекта головной боли (например, мигрени); (f) увеличение клиренса CGRP; и (g) ингибирование (снижение) синтеза CGRP, продуцирования или высвобождения. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP или полипептид идентифицируют путем инкубации агента-кандидата с CGRP и контроля связывания и/или сопутствующего снижения или нейтрализации биологической активности CGRP. Анализ связывания может проводиться с очищенным полипептидом (полипептидами) CGRP, или с клетками, экспрессирующими в природных условиях, или трансфицированных для обеспечения экспрессии, полипептида (полипептидов) CGRP. В одном варианте реализации, анализ связывания представляет собой конкурентный анализ связывания, в котором оценивается способность антителакандидата конкурировать с известным антагонистом CGRP за связывание с CGRP. Анализ может проводиться в различных форматах, включая формат ИФА. В других вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP идентифицируют путем инкубации агента-кандидата с CGRP и контроля связывания и сопутствующего ингибирования активации рецептора CGRP, экспрессируемого на поверхности клетки.
После первичной идентификации активность антитела-кандидата (например, антагонистического антитела против CGRP) может быть дополнительно подтверждена и уточнена с помощью биоанализов, предназначенных для тестирования целевых биологических активностей. Альтернативно, биоанализы могут быть использованы для прямого скрининга кандидатов. Например, CGRP промотирует ряд измеримых изменений в чувствительных клетках. Они включают, без ограничений, стимуляцию сАМР в клетках (например, клетках SK-N-MC). Антагонистическая активность также может быть измерена с помощью животных моделей, таких как измерение вазодилатации кожи, индуцируемой стимуляцией подкожного нерва крысы. Escott et al., Br. J. Pharmacol. 110: 772-776, 1993. Животные модели головных болей (таких как мигрень) могут быть дополнительно использованы для тестирования эффективности антагонистических антител или полипептидов. Reuter, et al., Functional Neurology (15) Suppl, 3, 2000. Не- 39 043536 которые из способов идентификации и характеризации антагонистического антитела против CGRP или полипептида описаны детально в Примерах.
Антитела, включая антагонистические антитела против CGRP, могут быть охарактеризованы с использованием способов, хорошо известными специалистам. Например, один способ заключается в идентификации эпитопа, с которым оно связывается, или картировании эпитопа. Существует много известных специалистам способов картирования и характеризации расположения эпитопов в белках, включая определение кристаллической структуры комплекса антитело-антиген, конкурентные анализы, анализы экспрессии генного фрагмента, и анализы с использованием синтетических пептидов, как описано, например, в Главе 11, Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999. В дополнительном примере, картирование эпитопа может быть использовано для определения последовательности, с которой связывается антагонистическое антитело против CGRP. Картирование эпитопа коммерчески доступно из различных источников, например Pepscan Systems (Edelhertweg 15, 8219 РН Lelystad, The Netherlands). Эпитоп может быть линейным эпитопом, т.е. состоять из одного отрезка последовательности аминокислот, или конформационным эпитопом, образованным в результате трехмерных взаимодействий аминокислот, которые не обязательно будут входить в состав одного отрезка. Пептиды различной длины (например, длиной по меньшей мере 4-6 аминокислот) могут быть выделены или синтезированы (например, рекомбинантно) и использованы в анализах связывания с антагонистическим антителом против CGRP. В другом примере, эпитоп, с которым связывается антагонистическое антитело против CGRP, может быть определен с помощью системного скрининга путем использования перекрывающихся пептидов, полученных из последовательности CGRP, и определения связывания с антагонистическим антителом против CGRP. В соответствии с анализами экспрессии генных фрагментов, открытая рамка считывания, кодирующая CGRP, фрагментируется или случайным образом, или с помощью специфических генетических конструкций, и определяется реакционная способность экспрессируемых фрагментов CGRP по отношению к тестируемому антителу. Генные фрагменты могут, например, быть получены методом ПЦР и затем транскрибированы и транслированы в белок in vitro, в присутствии радиоактивных аминокислот. Связывание антитела с радиоактивно мечеными фрагментами CGRP затем определяют методом иммунопреципитации и электрофореза на геле. Определенные эпитопы также могут быть идентифицированы путем использования больших библиотек случайных пептидных последовательностей, представляемых на поверхности фаговых частиц (фаговые библиотеки). Альтернативно, определенная библиотека перекрывающихся пептидных фрагментов может быть протестирована на связывание с тестируемым антителом с помощью простых анализов связывания. В дополнительном примере, мутагенез антигенсвязывающего домена, эксперименты с обменом доменами и сканирующий аланином мутагенез могут быть проведены для идентификации остатков, требуемых, достаточных и/или необходимых для связывания эпитопа. Например, эксперименты с обменом доменами могут быть проведены с использованием мутантного CGRP, в котором различные фрагменты полипептида CGRP замещаются (обмениваются) на последовательности из близкородственного, но антигенно отличного белка (такого как другой член семейства белка нейротрофина). С помощью анализа связывания антитела с мутантным CGRP, можно оценить важность конкретного фрагмента CGRP для связывания антитела.
Еще один способ, который может быть использован для характеризации антитела, включая антагонистическое антитело против CGRP, заключается в использовании конкурентных анализов с другими антителами, про которые известно, что они связываются с этим же антигеном, т.е. различными фрагментами CGRP, для определения того, связывается ли антагонистическое антитело против CGRP с тем же самым эпитопом, что и другие антитела. Конкурентные анализы хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области техники.
Экспрессионный вектор может быть использован для направления экспрессии антитела, включая антагонистическое антитело против CGRP. Квалифицированный специалист в данной области техники знаком с введением экспрессионных векторов для обеспечения экспрессии экзогенного белка in vivo. См., например, патенты США № 6436908; 6413942; и 6376471. Введение экспрессионных векторов включает локальное или системное введение, включая инъекцию, оральное введение, введение с помощью генной пушки или катетера, и местное введение. В другом варианте реализации, экспрессионный вектор вводят напрямую в симпатический ствол или ганглий, или в коронарную артерию, предсердие, желудочек или перикард.
Также может быть использована целевая доставка терапевтических композиций, содержащих экспрессионный вектор, или субгеномные полинуклеотиды. Методики рецептор-медиируемой доставки ДНК описаны, например, в Findeis et al., Trends Biotechnol. (1993) 11:202; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer (J.A. Wolff, ed.) (1994); Wu et al., J. Biol. Chem. (1988) 263:621; Wu et al., J. Biol. Chem. (1994) 269:542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87:3655; Wu et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:338. Терапевтические композиции, содержащие полинуклеотид, вводят в диапазоне от около 100 нг до около 200 мг ДНК для локального введения по протоколу генной терапии. Также могут быть использованы по протоколу генной терапии диапазоны концентраций от около 500 нг до около 50 мг, от около 1 мкг до около 2 мг, около 5 мкг до около 500 мкг, около 20 мкг до около 100
- 40 043536 мкг ДНК. Терапевтические полинуклеотиды и полипептиды могут быть доставлены с использованием носителей для генной доставки. Носитель для доставки генов может иметь вирусное или невирусное происхождение (см. в общем, Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51; Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5:845; Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1:185; и Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148). Экспрессия таких кодирующих последовательностей может быть индуцирована с помощью эндогенных принадлежащих млекопитающим или гетерологичных промоторов. Экспрессия кодирующей последовательности может быть конститутивной или регулируемой.
Вектора на основе вирусов для доставки желательного полинуклеотида и экспрессии в желательной клетке хорошо известны специалистам. Типичные примеры носителей на основе вирусов включают, без ограничений, рекомбинантные ретровирусы (см., например, публикации PCT № WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; патенты США № 5219740 и 4777127; патент Великобритании № 2200651; и патент ЕР № 0345242), вектора на основе альфавируса (например, вектора на основе вируса Sindbis, вируса леса Семлики (АТСС VR-67; АТСС VR1247), вируса реки Росс (АТСС VR-373; АТСС VR-1246) и вируса венесуэльского лошадиного энцефалита (АТСС VR-923; ATcC VR-1250; АТСС VR 1249; АТСС VR-532)), и вектора на основе аденоассоциированого вируса (AAV) (см., например, публикации PCT № WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 и WO 95/00655). Также могут быть использовано введение ДНК, полученной из инактивированного аденовируса, как описано в Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147.
Также могут быть использованы невирусные носители для доставки и способы, включая, без ограничений, поликонденсированные ДНК, связанные или не связанные с отдельно взятым инактивированным аденовирусом (см., например, Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147); связанные с лигандами ДНК (см., например, Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264:16985); клетки-носители для доставки в эукариотические клетки (см., например, патент США № 5814482; публикации PCT № WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763; и WO 97/42338) и нейтрализацию ядерного заряда или слияние с клеточными мембранами. Также могут быть использованы голые ДНК. Типичные примеры способов введения голых ДНК описаны в публикации PCT № WO 90/11092 и патенте США № 5580859. Липосомы, которые могут выступать в качестве носителей для доставки генов, описаны в патенте США № 5422120; публикациях PCT № WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445; и ЕР 0524968. Дополнительные подходы описаны в Philip, Mol. Cell Biol. (1994) 14:2411, и в Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:1581.
C. Антитело G1 и связанные с ним антитела, полипептиды, полинуклеотиды, вектора и клеткихозяева.
Данное изобретение охватывает композиции, включая фармацевтические композиции, содержащие антитело G1 и его варианты, представленные в табл. 6, или полипептид, полученный из антитела G1 и его вариантов, представленных в табл. 6; и полинуклеотиды, содержащие последовательности, кодирующие G1 и его варианты или полипептид. В некоторых вариантах реализации, композиции содержат одно или несколько антител или полипептидов (которые могут быть или не быть антителом), которые связываются с CGRP, и/или один или несколько полинуклеотидов, содержащих последовательности, кодирующие одно или несколько антител или полипептидов, которые связываются с CGRP. Такие композиции могут дополнительно содержать пригодные эксципиенты, такие как фармацевтически приемлемые эксципиенты, включая буферы, хорошо известные специалистам.
В некоторых вариантах реализации, антагонистические антитела против CGRP и полипептиды по изобретению обладают любой (одной или несколькими) из следующих характеристик: (а) связывание с CGRP; (b) блокирование связывания CGRP с его рецептором (рецепторами); (с) блокирование или снижение активации рецептора CGRP (включая активацию cAMP); (d) ингибирование биологической активности CGRP или метаболических путей, медиируемых сигнальной функцией CGRP; (e) предотвращение, облегчение или исцеления любого аспекта головной боли (например, мигрени); (f) увеличение клиренса CGRP; и (g) ингибирование (снижение) синтеза CGRP, продуцирования или высвобождения.
В некоторых вариантах реализации, изобретение предусматривает любой из следующих вариантов, или композиции (включая фармацевтические композиции), содержащие любой из следующих вариантов: (а) антитело G1 или его варианты, представленные в табл. 6; (b) фрагмент или область антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (с) легкую цепь антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (d) тяжелую цепь антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (е) одну или несколько вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (f) один или несколько CDR (один, два, три, четыре, пять или шесть CDR) антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (g) CDR H3 тяжелой цепи антитела G1; (h) CDR L3 легкой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (i) три CDR легкой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (j) три CDR тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (k) три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи, антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; и (l) антитело, содержащее любой вариант из описанных в пунктах (b) (k). В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает полипептиды, содержащие любой один или несколько из вышеуказанных вариантов.
Участки CDR антитела G1 (включая CDR по системам Chothia и Kabat) схематично изображены на
- 41 043536 фиг. 5. Определение участков CDR хорошо известно специалистам в данной области техники. Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации, CDR могут быть комбинацией CDR по системам Kabat и Chothia (также называемой объединенные CDR или расширенные CDR). В некоторых вариантах реализации, CDR представляют собой CDR по системе Kabat. В других вариантах реализации, CDR представляют собой CDR по системе Chothia. Другими словами, в вариантах реализации с более чем одним CDR, CDR могут быть любыми из Kabat, Chothia, комбинированными CDR, или их комбинациями.
В некоторых вариантах реализации, изобретение предусматривает полипептид (который могут быть или не быть антителом), который содержит по меньшей мере один CDR, по меньшей мере два, по меньшей мере три, или по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, или все шесть CDR, которые по существу идентичны по меньшей мере одному CDR, по меньшей мере двум, по меньшей мере трем, по меньшей мере четырем, по меньшей мере пяти или всем шести CDR G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. Другие варианты реализации включают антитела, имеющие по меньшей мере два, три, четыре, пять или шесть CDR(s), которые по существу идентичны по меньшей мере двум, трем, четырем, пяти или шести CDR G1, или получены из G1. В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один, два, три, четыре, пять или шесть CDR(s) являются по меньшей мере на около 85, 86, 87, 88, 89, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичными по отношению к по меньшей мере одному, двум, трем, четырем, пяти или шести CDR G1 или его вариантов, представленных в табл. 6. Следует понимать, что, в целях настоящего изобретения, специфичность связывания и/или общая активность обычно сохраняется, хотя степень проявления активности может меняться по сравнению с G1 или его вариантами, представленными в табл. 6 (может быть больше или меньше).
В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает полипептид (который могут быть или не быть антителом), содержащий аминокислотную последовательность G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, которая содержит любой из следующих вариантов: по меньшей мере 5 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере 8 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 10 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 15 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 20 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 25 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 30 последовательно расположенных аминокислот из последовательности G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, где по меньшей мере 3 из аминокислот проинадлежат к вариабельной области G1 (фиг. 5) или ее вариантов, представленных в табл. 6. В одном варианте реализации, вариабельная область принадлежит к легкой цепи G1. В другом варианте реализации, вариабельная область принадлежит к тяжелой цепи G1. Типичный полипептид содержит последовательно расположенные аминокислоты (длины указаны выше) из вариабельных участков как тяжелой, так и легкой цепей G1. В другом варианте реализации, 5 (или больше) последовательно расположенных аминокислот принадлежат к участку, определяющему комплементарность (CDR) G1, представленного на фиг. 5. В некоторых вариантах реализации, последовательно расположенные аминокислоты принадлежат к вариабельной области G1.
Аффинность связывания (KD) антагонистического антитела против CGRP и полипептида с CGRP (таким как человеческий α-CGRP) может составлять от около 0,06 до около 200 нМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет любое значение из около 200 нМ, 100 нМ, около 50 нМ, около 10 нМ, около 1 нМ, около 500 пМ, около 100 пМ, около 60 пМ, около 50 пМ, около 20 пМ, около 15 пМ, около 10 пМ, около 5 пМ, или около 2 пМ. В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания имеет значение меньше любой величины из около 250 нМ, около 200 нМ, около 100 нМ, около 50 нМ, около 10 нМ, около 1 нМ, около 500 пМ, около 100 пМ, или около 50 пМ.
В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает способы получения любого из таких антител или полипептидов. Антитела по настоящему изобретению могут быть получены с использованием процедур, известных специалистам. Полипептиды могут быть получены путем протеолитической или другой деградации антител, рекомбинантными способами (например, одноцепочечные (single) или гибридные полипептиды), как описано выше, или путем химического синтеза. Полипептиды антител, особенно короткое полипептиды длиной до около 50 аминокислот, удобно получать путем химического синтеза. Способы химического синтеза известны специалистам и являются коммерчески доступными. Например, антитело может быть получено с помощью автоматизированного полипептидного синтезатора, использующего твердофазный метод. См. также патентах США № 5807715; 4816567; и 6331415.
В другой альтернативе, антитела могут быть получены рекомбинантно с использованием процедур, хорошо известных специалистам. В одном варианте реализации, полинуклеотид содержит последовательность, кодирующую вариабельные участки тяжелой цепи и/или легкой цепи антитела G1, представленного в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. В другом варианте реализации, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, клонируют в один или несколько векторов для экспрессии или размножения. Последовательность, кодирующая антитело, представляющее интерес, может поддерживаться в векторе в клетке-хозяине, и клетка-хозяин может быть затем растянута и заморожена для последующего использования. Вектора (включая экспрессион
- 42 043536 ные вектора) и клетки-хозяева дополнительно описаны в данном документе.
В некоторых вариантах реализации, изобретение также охватывает одноцепочечные фрагменты вариабельной области (scFv) антител по настоящему изобретению, таких как G1. Одноцепочечные фрагменты вариабельной области получают путем связывания вариабельных областей легкой и/или тяжелой цепей с использованием короткого связывающего пептида. Bird et al. (1988) Science 242:423-426. Примером связывающего пептида является (GGGGS)3 (SEQ ID NO: 57), который образует мостик длиной приблизительно 3,5 нм между карбоксильным концом одной вариабельной области и аминоконцом другой вариабельной области. Были сконструированы и использовались линкеры с другими последовательностями. Bird et al. (1988). Линкеры могут быть в свою очередь модифицированы для обеспечения дополнительных функций, таких как присоединение лекарственных средств или присоединение к твердым подложкам. Одноцепочечные варианты могут быть получены рекомбинантно или путем синтеза. Для получения scFv путем синтеща может быть использован автоматизированный синтезатор. Для рекомбинантного продуцирования scFv, пригодная плазмида, содержащая полинуклеотид, кодирующий scFv, может быть введена в пригодную клетку-хозяина, которая может быть эукариотической, такой как клетки дрожжей, растений, насекомых или млекопитающих, или прокариотической, такой как Е.coli. Полинуклеотиды, кодирующие scFv, представляющий интерес, могут быть получены с помощью рутинных манипуляций, таких как лигирование полинуклеотидов. Полученный scFv может быть выделен с использованием стандартных методик очистки белков, известных специалистам.
Другие формы одноцепочечных антител, таких как диатела, также охвачены (данным документом). Диатела представляют собой бивалентные, биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессируются на одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, слишком короткого для того, чтобы обеспечить возможность конъюгации двух доменов, расположенных в одной цепи, тем самым принуждая домены к конъюгации с комплементарными доменами другой цепи и создавая два антигенсвязывающих сайта (см., например, Holliger, P., et al. (1993) Proc. Natl. Acad Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123).
Например, биспецифические антитела, моноклональные антитела, обладающие специфичностями связывания по отношению к по меньшей мере двум разным антигенам, могут быть получены с использованием антитела, раскрытого в данном документе. Способы получения биспецифических антител известны специалистам (см., например, Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121:210). Традиционно, рекомбинантное продуцирование биспецифических антител было основано на коэкспрессии двух пар тяжелая цепь-легкая цепь иммуноглобулина, причем две тяжелые цепи имеют разные специфичности (Millstein and Cuello, 1983, Nature 305, 537-539).
В соответствии с одним подходом к получению биспецифических антител, вариабельные домены антитела с желательными специфичностями связывания (паратопы антитело-антиген) сливают с последовательностями константного домена иммуноглобулина. Слияние предпочтительно проводят с константным доменом тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащим по меньшей мере часть шарнирного, СН2 и CH3 участков. Предпочтительно, чтобы константная область первой тяжелой цепи (СН1), содержащая сайт, необходимый для связывания легкой цепи, присутствовала в по меньшей мере одном из (продуктов) слияния. ДНК, кодирующие (продукты) слияния тяжелой цепи иммуноглобулина и, при необходимости, легкой цепи иммуноглобулина, вставляют в разные экспрессионные вектора и совместно трансфицируют в пригодный организм-хозяин. Это обеспечивает большую гибкость в регулировании взаимного соотношения трех полипептидных фрагментов в вариантах реализации, когда неравные соотношения трех полипептидных цепей, используемых при конструировании, обеспечивают оптимальный выход. Однако, можно вставлять кодирующие последовательности двух или всех трех полипептидных цепей в один экспрессионный вектор, если экспрессия по меньшей мере двух полипептидных цепей в равных соотношениях приводит к высокому выходу, или если величины соотношений не имеют особого значения.
В одном подходе, биспецифические антитела состоят из тяжелой цепи гибридного иммуноглобулина с первой специфичностью связывания в одной ветви, и пары тяжелая цепь-легкая цепь гибридного иммуноглобулина (обеспечивающей вторую специфичность связывания) в другой ветви. Такая асимметричная структура, с легкой цепью иммуноглобулина только в одной половине биспецифической молекулы, облегчает разделение желательного биспецифического соединения и нежелательных комбинаций иммуноглобулиновых цепей. Этот подход описан в публикации PCT № WO 94/04690, опубликованной 3 марта 1994 г.
Гетероконъюгированные антитела, содержащие два ковалентно связанные антитела, также входят в объем изобретения. Такие антитела использовались для нацеливания клеток иммунной системы на нежелательные клетки (патент США № 4676980), и для лечения инфекции ВИЧ (публикации заявок PCT № WO 91/00360 и WO 92/200373; EP 03089). Гетероконъюгированные антитела могут быть получены с использованием любых удобных способов сшивания. Пригодные сшивающие агенты и методики хорошо известны специалистам, и описаны в патенте США № 4676980.
Химерные или гибридные антитела также могут быть получены in vitro с использованием известных способов химического синтеза белков, включая способы, предусматривающие использование сши- 43 043536 вающих агентов. Например, иммунотоксины могут быть сконструированы с использованием реакции дисульфидного обмена или путем образования тиоэфирной связи. Примеры реагентов, пригодных для этой цели, включают иминотиолят и метил-4-меркаптобутиримидат.
Гуманизированное антитело, содержащее один или несколько CDR антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, или один или несколько CDR, выделенных из антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, могут быть получены с использованием любых способов, известных специалистам. Например, для гуманизации моноклонального антитела могут быть использованы четыре общих стадии.
В некоторых вариантах реализации, изобретение охватывает модификации антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, включая функционально эквивалентные антитела, которые существенно не отличаются по своим свойствам, и варианты, имеющие повышенную или сниженную активность и/или аффинность.
Например, аминокислотная последовательность антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6, может быть мутирована для получения антитела с желательной аффинностью связывания с CGRP. Модификация полипептидов является рутинной практикой в данной области техники и не требуют детального описания в данном документе. Типичные примеры модификации полипептидов приведены в Примерах. Примеры модифицированных полипептидов включают полипептиды с консервативными замещениями аминокислотных остатков, одну или несколько делеций или аддиций аминокислот, которые не ухудшают значительно функциональную активность, или использование химических аналогов.
Инсерции аминокислотных последовательностей включают амино- и/или карбоксиконцевые слияния, имеющие длину в диапазоне от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или больше остатков, а также инсерции одноро или множества аминокислотных остатков внутри последовательности. Примеры терминальных инсерций включают антитело с N-концевым метионильным остатком или антитело, слитое с эпитопом-меткой. Другие инсерционные варианты молекулы антитела включают присоединение к N- или С-концу антитела фермента или полипептида, который увеличивает период полувыведения антитела из сыворотки.
Варианты замещения имеют удаление по меньшей мере одного аминокислотного остатка в молекуле антитела и вставку другого остатка на его место. Сайты, представляющие наибольший интерес для заместительного мутагенеза, включают гипервариабельные области, но предусматриваются также изменения каркасных областей (FR). Консервативные замещения представлены в табл. 1 под заголовком консервативные замещения. Если такие замещения приводят к изменению биологической активности, то могут быть введены более значительные изменения, обозначенные как типичные замещения в табл. 1, или как дополнительно описано ниже со ссылкой на классы аминокислот, и продукты могут быть подвергнуты скринингу.
Таблица 1. Аминокислотные замещения
Исходный остаток | Консервативные замещения | Типичные замещения |
Ala (А) | Val | Val; Leu; He |
Arg (R) | Lys | Lys; Gin; Asn |
Asn (N) | Gin | Gin; His; Asp, Lys; Arg |
- 44 043536
Asp (D) | Glu | Glu; Asn |
Cys (С) | Ser | Ser; Ala |
Gln(Q) | Asn | Asn; Glu |
Glu(E) | Asp | Asp; Gln |
Gly (G) | Ala | Ala |
His (H) | Arg | Asn; Gln; Lys; Arg |
He (I) | Leu | Leu; Val; Met; Ala; Phe; норлейцин |
Leu (L) | Ile | норлейцин; lie; Val; Met; Ala; Phe |
Lys (K) | Arg | Arg; Gln; Asn |
Met (M) | Leu | Leu; Phe; Ile |
Phe (F) | Tyr | Leu; Val; Ile; Ala; Tyr |
Pro (P) | Ala | Ala |
Ser(S) | Thr | Thr |
Thr(T) | Ser | Ser |
Trp (W) | Tyr | Tyr; Phe |
Tyr(Y) | Phe | Trp; Phe; Thr; Ser |
Val (V) | Leu | lie; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин |
Существенные модификации биологических свойств антитела осуществляются путем выбора замещений, которые значительно отличаются по своему эффекту на сохранение (а) структуры полипептидного скелета в области замещения, например, такой как конформация листа или спирали, (b) заряд или гидрофобность молекулы в целевом сайте, или (с) объем боковой цепи. Встречающиеся в природе остатки разделены на группы на основании общих свойств боковых цепей:
(1) неполярные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) полярные без заряда: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислотные (отрицательно заряженные): Asp, Glu;
(4) основные (положительно заряженные): Lys, Arg;
(5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro; и (6) ароматические: Tip, Tyr, Phe, His.
Неконсервативные замещения проводят путем замены члена одного из этих классов на другой класс.
Любой цистеиновый остаток, не принимающий участия в сохранении надлежащей конформации антитела, также может быть замещен, обычно на серин, для улучшения устойчивости молекулы к окислению и предотвращения аберрантного сшивания. Наоборот, цистеиновая связь (связи) может быть добавлена в антитело для улучшения его стабильности, особенно в тех случаях, когда антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как фрагмент Fv.
Аминокислотные модификации могут изменяться от замены или модификации одной или нескольких аминокислот до полной перестройки области, такой как вариабельная область. Изменения в вариабельной области могут изменять аффинность связывания и/или специфичность. В некоторых вариантах реализации, в CDR-домене выполняется не более чем от одного до пяти консервативных аминокислотных замещений. В других вариантах реализации, в CDR-домене выполняется не более чем от одного до трез консервативных аминокислотных замещений. В других вариантах реализации, CDR-домен представляет собой CDR H3 и/или CDR L3.
Модификации также включают гликозилированные и негликозилированные полипептиды, а также полипептиды с другими посттрансляционными модификациями, такими как, например, гликозилирование разными сахарами, ацетилирование и фосфорилирование. Антитела гликозилируют в консервативных положениях в мз константных областях (Jefferis and Lund, 1997, Chem. Immunol. 65:111-128; Wright and Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32). Олигосахаридные боковые цепи иммуноглобулинов влияют на функцию белка (Boyd et al., 1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard, 1990, Biochem. 29:4175-4180) и внутримолекулярные взаимодействия между частями гликопротеина, что может отражаться на конформации и презентируемой трехмерной поверхности гликопротеина (Hefferis and Lund, supra; Wyss and Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409-416). Олигосахариды могут также служить для нацеливания данного гликопротеина на определенные молекулы на основании специфических структур
- 45 043536 распознавания. Также сообщалось, что гликозилирование антител влияет на опосредованную антителами клеточную цитотоксичность (ADCC). В частности, сообщалось, что клетки СНО с тетрациклинрегулируемой экспрессии в(1,4)-М-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII), представляющей собой гликозилтрансферазу, катализирующую образование GlcNAc в точках ветвления, обладают повышенной
ADCC-активностью (Umana et al., 1999, Mature Biotech. 17:176-180).
Гликозилирование антител типично является N-связанным или О-связанным. N-связанный относится к присоединению углеводного фрагмента к боковой цепь аспарагинового остатка. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин, аспарагин-X-треонин и аспарагин-X-цистеин, где X обозначает любую аминокислоту за исключением пролина,являются последовательностями распознавания для ферментативного присоединения углеводного фрагмента к аспарагиновой боковой цепи. Таким образом, присутствие любой из этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из Сахаров N-ацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы к оксиаминокислоте, чаще всего серину или треонину, хотя могут быть использованы также 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин.
Добавление сайтов гликозилирования в антитело удобно осуществляется путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы она содержала одну или несколько из вышеописанных трипептидных последовательностей (для сайтов N-связанного гликозилирования). Альтернатива также может быть получена путем аддиции, или замещения, одного или нескольких сериновых или треониновых остатков в последовательность исходного антитела (для сайтов O-связанного гликозилирования).
Характер гликозилирования антител также может быть изменен без изменения базовой нуклеотидной последовательности. Гликозилирование в значительной степени зависит от клетки-хозяина, используемой для экспрессии антитела. Поскольку типы клеток, используемых для экспрессии рекомбинантных гликопротеинов, например, антител, в качестве потенциальных терапевтических средств, редко являются нативными клетками, можно ожидать вариаций в характере гликозилирования антител (см., например Hse et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:9062-9070).
В дополнение к выбору клеток-хозяев, факторы, влияющие на гликозилирование при рекомбинантном продуцировании антител, включают способ выращивания, рецептуру среды, плотность культуры, оксигенацию, pH, схемы очистки и т.п. Были предложены различные способы для изменения характера гликозилирования, обеспечиваемого в конкретном организме-хозяине, включая введение или сверхэкспрессию определенных ферментов, участвующих продуцировании олигосахарида (патенты США № 5047335; 5510261 и 5278299).
Гликозилирование, или определенные типы гликозилирования, могут быть ферментативно удалены из гликопротеина, например, с использованием эндогликозидазы Н (Endo Н), N-гликозидазы F, эндогликозидазы F1, эндогликозидазы F2, эндогликозидазы F3. Дополнительно, рекомбинантная клетка-хозяин может быть генетически модифицирована для превращения в дефектную по переработке определенных типов полисахаридов. Эти и схожие методики хорошо известны специалистам.
Другие способы модификации включают использование методик связывания, известных специалистам, включая, без ограничений, ферментативные способы, окислительное замещение и хелатообразование. Модификации могут быть использованы, например, для присоединения меток для иммунологического анализа. Модифицированные полипептиды G1 могут быть получены с использованием отработанных процедур в данной области техники и могут быть подвергнуты скринингу с использованием стандартных методов анализа, известных специалистам, некоторые из которых описаны ниже и в Примерах.
В некоторых вариантах реализации изобретения, антитело содержит модифицированную константную область, такую как константная область, которая является иммунологически инертной или частично инертной, например, не инициирует медиируемый комплементом лизис, не стимулирует опосредованную антителами клеточную цитотоксичность (ADCC), или не активирует микроглию; или имеет сниженные (по сравнению с немодифицированным антителом) любую одну или несколько из следующих активностей: инициирование медиируемого комплементом лизиса, стимулирование опосредованной антителами клеточной цитотоксичности (ADCC), или активирование микроглии. Разные модификации константной области могут быть использованы для достижения оптимального уровня и/или комбинации эффекторных функций. См., например, Morgan et al., Immunology 86:319-324 (1995); Lund et al., J. Immunology 157:4963-9 157:4963-4969 (1996); Idusogie et al., J. Immunology 164:4178-4184 (2000); Tao et al., J. Immunology 143: 2595-2601 (1989); и Jefferis et al., Immunological Reviews 163:59-76 (1998). В некоторых вариантах реализации, константная область является модифицированной, как описано в Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624; заявке PCT № PCT/GB99/01441; и/или патентной заявке Великобритании № 9809951.8. В других вариантах реализации, антитело содержит константную область тяжелой цепи человеческого IgG2, содержащую следующие мутации: А330Р331 на S330S331 (нумерация аминокислот в соответствии с последовательностью IgG2 дикого типа). Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624. В других вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования. В некоторых вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования путем мутации гликозилированного аминокислотного остатка или фланкирующих остатков,
- 46 043536 являющихся частью последовательности распознавания N-гликозилирования в константной области. Например, N297 сайта N-гликозилирования может быть мутирован на A, Q, K, или Н. См., Tao et al., J. Immunology 143: 2595-2601 (1989); и Jefferis et al., Immunological Reviews 163:59-76 (1998). В некоторых вариантах реализации, константная область агликозилирована для N-связанного гликозилирования. Константная область может быть агликозилирована для N-связанного гликозилирования ферментативно (например, путем удаления углевода ферментом PNGase (пептид-N-гликозидаза)), или путем экспрессии в дефицитной по гликозилированию клетке-хозяине.
Другие модификации антитела включают антитела, модифицированные как описано в публикации PCT № WO 99/58572, опубликована 18 ноября 1999 г. These антитела содержат, в дополнение к связывающему домену, нацеленному на молекулу-мишень, эффекторный домен, имеющий аминокислотную последовательность, по существу гомологичную всему или части константного домена тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. Такие антитела способны связываться с молекулой-мишенью без инициирования значительного комплементзависимого дизиса, или клеточно-медиируемой деструкции мишени. В некоторых вариантах реализации эффекторный домен способен специфически связывать FcRn и/или FcyRIIb. Они типично основаны на химерных доменах, выделенных из двух или больше CH2 доменах тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. Антитела, модифицированные таким образом, являются особенно пригодными для использования в хронической терапии антителами, во избежание воспалительных и другие нежелательных реакций на обычную терапию антителами.
В некоторых вариантах реализации, изобретение включает варианты реализации со зрелой аффинностью. Например, антитела со зрелой аффинностью могут быть получены с помощью процедур, известных специалистам (Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci., USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-9; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896; и WO 2004/058184).
Следующие способы могут быть использованы для регуляции аффинности антитела и для характеризации CDR. Один из способов характеризации CDR антитела и/или изменения (такого как улучшение) аффинности связывания полипептида, такого как антитело, называется мутагенез со сканированием библиотеки. В общем, мутагенез со сканированием библиотеки работает следующим образом. Одно или несколько аминокислотных положений в CDR замещают двумя или больше (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, или 20) аминокислотами с использованием известных специалистам способов. В результате этого получают маленькие библиотеки клонов (в некоторых вариантах реализации, по одной для каждого анализируемого аминокислотного положения), каждая со сложностью в два или больше членов (если две или больше аминокислот используют для замещения каждого положения). Обычно, библиотека также включает клон, содержащий нативную (незамещенную) аминокислоту. Небольшое количество клонов, например около 20-80 клонов (в зависимости от сложности библиотеки), из каждой библиотеки подвергают скринингу на аффинность связывания с полипептидом-мишенью (или другой мишенью связывания), и идентифицируют кандидаты с повышенным, таким же, пониженным, или без связывания. Способы определения аффинности связывания хорошо известны специалистам. Аффинность связывания может быть определена с использованием анализа поверхностного плазмонного резонанса методом Biacore, который детектирует различия в аффинности связывания около в 2 раза или больше. Biacore особенно полезен в тех случаях, когда исходное антитело уже связывается с относительно высокой аффинностью, например, имеет KD, равную около 10 нМ или меньше. Скрининг с использованием поверхностного плазмонного резонанса Biacore описан в данном документе в Примерах.
Аффинность связывания может быть определена с использованием Kinexa Biocensor, сцинтилляционных анализов сближения, ИФА, иммунологического анализа ORIGEN (IGEN), гашения флуоресценции, переноса флуоресценции, и/или дрожжевого дисплея. Аффинность связывания также может быть подвергнута скринингу с использованием пригодного биоанализа.
В некоторых вариантах реализации, каждое аминокислотное положение в CDR замещают (в некоторых вариантах реализации, по одному за раз) всеми 20 природными аминокислотами с использованием известных специалистам способов мутагенеза (некоторые из которых описаны в данном документе). В результате этого получают маленькие библиотеки клонов (в некоторых вариантах реализации, по одной на каждое анализируемое аминокислотное положение), каждая со сложностью в 20 членов (если каждое положение замещается всеми 20 аминокислотами).
В некоторых вариантах реализации, библиотека для использования при скрининге содержит замещения в двух или больше положениях, которые могут находиться в одном CDR или в двух или больше CDR. Таким образом, библиотека может содержать замещения в двух или больше положениях в одном CDR. Библиотека может содержать замещения в двух или больше положениях в двух или больше CDR. Библиотека может содержать замещение в 3, 4, 5 или больше положениях, причем указанных положения находятся в двух, трех, четырех, пяти или шести CDR. Замещение может быть получено с использованием кодонов с низкой избыточностью. См., например, табл. 2 в Balint et al. (1993) Gene 137(1): 109-18).
CDR может представлять собой CDRH3 и/или CDRL3. CDR может быть одним или несколькими из CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, и/или CDRH3. CDR может представлять собой CDR по сис- 47 043536 теме Kabat, CDR по системе Chothia или расширенный CDR.
Кандидаты с улучшенным связыванием могут быть секвенированы, с идентификацией при этом мутанта с замещением CDR, которое приводит к повышенной аффинности (также называемым улучшенным замещением). Кандидаты, способьные связываться, также могут быть секвенированы, с идентификацией при этом замещений CDR, при которых сохраняется связывание.
Может быть проведено множество раундов скрининга. Например, кандидаты (каждый содержит аминокислотное замещение в одном или нескольких положениях одного или нескольких CDR) с улучшенным связыванием также пригодны для конструирования второй библиотеки, содержащей по меньшей мере исходную и замещенную аминокислоту в каждом улучшенном положении CDR (т.е. аминокислотном положении в CDR, в котором мутант с замещением продемонстрировал улучшенное связывание). Приготовление и скрининг или селекция такой библиотеки дополнительно описаны ниже.
Мутагенез со сканированием библиотеки также предусматривает средства для характеризации CDR, в той степени, в которой частота клонов с улучшенным связыванием, таким же связыванием, пониженным связыванием или отсутствием связывания также содержит информацию о важности каждого аминокислотного положения для стабильности комплекса антитело-антиген. Например, если некоторое положение CDR сохраняет связывание при замене на все 20 аминокислот, то это положение идентифицируется как положение, которое с низкой вероятностью требуется для связывания антигена. Наоборот, если некоторое положение CDR сохраняет связывание только при небольшой доле замещений, то это положение идентифицируется как положение, важное для функции CDR. Таким образом, способы мутагенеза со сканированием библиотеки дают информацию, касающуюся положений в CDR, которые могут быть заменены на различные аминокислоты (включая все 20 аминокислот), и положений в CDR, которые не могут быть изменены или которые могут быть заменены только на несколько аминокислот.
Кандидаты с улучшенной аффинностью могут быть объединены во вторую библиотеку, которая включает улучшенную аминокислоту, исходную аминокислоту в данном положении, и может дополнительно включать дополнительные замещения в данном положении, в зависимости от сложности библиотеки, являющейся желательной или допустимой при использовании желательного способа скрининга или селекции. Дополнительно, при необходимости, прилегающие аминокислотные положения могут быть рандомизированы по меньшей мере двумя или больше аминокислотами. Рандомизация прилегающих аминокислоты может обеспечить дополнительную конформационную гибкость мутантной CDR, которая может, в свою очередь, обеспечить возможность или способствовать введению большего количества улучшающих мутаций. Библиотека может также содержать замещения в положениях, которые не демонстрируют улучшенной аффинности при первом раунде скрининга.
Вторая библиотека подвергается скринингу или селекции членов библиотеки с улучшенной и/или измененной аффинностью связывания с использованием любого способа, известного специалистам, включая скрининг с использованием анализа поверхностного плазмонного резонанса методом Biacore, и селекцию с использованием любого способа селекции, известного специалистам, включая фаговый дисплей, дрожжевой дисплей и рибосомальный дисплей.
В некоторых вариантах реализации, изобретение также охватывает гибридные белки, содержащие один или несколько фрагментов или областей антител (таких как G1) или полипептидов по данному изобретению. В одном варианте реализации, предусматривается гибридный полипептид, который содержит по меньшей мере 10 последовательно расположенных аминокислот вариабельной области легкой цепи, представленной в SEQ ID NO: 2 (фиг. 5) и/или по меньшей мере 10 аминокислот вариабельной области тяжелой цепи, представленной в SEQ ID NO: 1 (фиг. 5). В других вариантах реализации, предусматривается гибридный полипептид, который содержит по меньшей мере около 10, по меньшей мере около 15, по меньшей мере около 20, по меньшей мере около 25, или по меньшей мере около 30 последовательно расположенных аминокислот вариабельной области легкой цепи, представленной в SEQ ID NO: 2 (фиг. 5), и/или по меньшей мере около 10, по меньшей мере около 15, по меньшей мере около 20, по меньшей мере около 25, или по меньшей мере около 30 последовательно расположенных аминокислот вариабельной области тяжелой цепи, представленной в SEQ ID NO: 1 (фиг. 5). В другом варианте реализации, гибридный полипептид содержит вариабельную область легкой цепи и/или вариабельную область тяжелой цепи G1, как показано в SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 1 фиг. 5. В другом варианте реализации, гибридный полипептид содержит один или несколько CDR(s) G1. В других вариантах реализации, гибридный полипептид содержит CDR H3 и/или CDR L3 антитела G1. В целях настоящего изобретения, гибридный белок G1 содержит одно или несколько антител G1 и другую аминокислотную последовательность, с которой оно не связано в нативной молекуле, например, гетерологичную последовательность или гомологичную последовательность из другой области. Типичные примеры гетерологичных последовательностей включают, без ограничений, метку, такую как метка FLAG или метка 6His (SEQ ID NO: 56). Метки хорошо известны специалистам.
Гибридный полипептид G1 может быть создан способами, известными специалистам, например, путем синтеза или рекомбинантно. Типично, гибридные белки G1 по настоящему изобретению получают путем приготовления и (an) экспрессии кодирующего их полинуклеотида, с использованием рекомбинантных способов, описанных в данном документе, хотя они также могут быть получены другими спо- 48 043536 собами, известными специалистам, включая, например, химический синтез.
В некоторых аспектах, данное изобретение также предусматривает композиции, содержащие антитела или полипептиды, полученные из G1, конъюгированного (например, связанного) с агентом, который способствует связыванию с твердой подложкой (таким как биотин или авидин). Для простоты, обычно будет проводиться ссылка на G1 или антитела, подразумевающая, что данные способы применимы к любым вариантам реализации связывания CGRP, описанным в данном документе. Конъюгация обычно относится к связыванию таких компонентов, как описано в данном документе. Связывание (которое обычно закрепляет такие компоненты в тесной связи по меньшей мере для введения) может быть осуществлено любым из ряда способов. Например, возможна прямая реакция между агентом и антителом, когда каждый из них имеет заместитель, способный реагировать с другим. Например, нуклеофильная группа, такая как амино или сульфгидрильная группа, на одном (из них) может быть способна реагировать с карбонилсодержащей группой, такой как ангидрид или галогеноангидрид, или с алкильной группой, содержащей пригодную отходящую группу (например, галогенид) на другом.
Антитело или полипептид может быть связаны с агентом-меткой (альтернативно называемым метка), таким как флуоресцентная молекула, радиоактивная молекула или любые другие метки, известные специалистам. Специалистам известны метки, которые обычно обеспечивают (прямо или опосредованно) сигнал.
В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает композиции (включая фармацевтические композиции) и наборы, содержащие антитело G1, и/или любое из или все антитела или полипептиды, описанные в данном документе.
В некоторых вариантах реализации, изобретение также предусматривает выделенные полинуклеотиды, кодирующие антитела и полипептиды по изобретению (включая антитело, содержащее полипептидные последовательности вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, представленные на фиг. 5), и вектора и клетки-хозяева, содержащие полинуклеотид.
В некоторых вариантах реализации, изобретение предусматривает полинуклеотиды (или композиции, включая фармацевтические композиции), содержащие полинуклеотиды, кодирующие любые материалы из следующих: (а) антитело G1 или его варианты, представленные в табл. 6; (b) фрагмент или область антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (с) легкую цепь антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (d) тяжелую цепь антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (е) одну или несколько вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (f) один или несколько CDR (один, два, три, четыре, пять или шесть CDR) антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (g) CDR H3 тяжелой цепи антитела G1; (h) CDR L3 легкой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (i) три CDR легкой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (j) три CDR тяжелой цепи антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; (k) три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи, антитела G1 или его вариантов, представленных в табл. 6; и (l) антитело, содержащее любой вариант из описанных в пунктах (b) - (k). В некоторых вариантах реализации, полинуклеотид содержит любой из или оба полинуклеотида, представленные в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10.
В другом аспекте, изобретение предусматривает полинуклеотиды, кодирующие любые антитела (включая фрагменты антител) и полипептиды, описанные в данном документе, такие как антитела и полипептиды, имеющие нарушенную эффекторную функцию. Полинуклеотиды могут быть получены с помощью процедур, известных специалистам.
В другом аспекте, изобретение предусматривает композиции (такие как фармацевтические композиции) содержащие любые полинуклеотиды по изобретению. В некоторых вариантах реализации, композиция содержит экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий антитело G1, как описано в данном документе. В другом варианте реализации, композиция содержит экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий любые антитела или полипептиды, описанные в данном документе. В других вариантах реализации, композиция содержит любой из или оба полинуклеотида, представленные SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. Экспрессионные вектора и введение полинуклеотидных композиций дополнительно описаны в данном документе.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способ получения любых полинуклеотидов, описанных в данном документе.
Полинуклеотиды, комплементарные любым таким последовательностям, также входят в объем настоящего изобретения. Полинуклеотиды могут быть одноцепочечными (кодирующими или антисмысловыми) или двухцепочечными, и могут представлять собой молекулы ДНК (геномные, кДНК или синтетические) или РНК. Молекулы РНК включают молекулы гетерогенной ядерной РНК (гяРНК), которые содержат интроны и однозначно соответствуют молекуле ДНК, и молекулы мРНК, которые не содержат интроны. Дополнительные кодирующие или некодирующие последовательности могут, но не обязательно, присутствовать в полинуклеотиде по настоящему изобретению, и полинуклеотид может, но не обязательно, быть связан с другими молекулами и/или материалами подложки.
Полинуклеотиды могут содержать нативную последовательность (т.е. эндогенную последовательность, которая кодирует антитело или его часть) или могут содержать вариант такой последовательно
- 49 043536 сти. Варианты полинуклеотидов содержат одно или несколько замещений, аддиций, делеций и/или инсерций таким образом, чтобы иммунореактивность кодируемого полипептида не снижалась по сравнению с нативной иммунореактивной молекулой. Эффект кодируемого полипептида на иммунореактивность можно обычно оценить, как описано в данном документе. Варианты предпочтительно проявляют по меньшей мере около 70% идентичности, более предпочтительно, по меньшей мере около 80% идентичности, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере около 90% идентичности с полинуклеотидной последовательностью, кодирующей нативное антитело или его часть.
Говорят, что две полинуклеотидные или полипептидные последовательности являются идентичными, если порядок расположения нуклеотидов или аминокислот в двух последовательностях одинаков при выравнивании с максимальным соответствием, как описано ниже. Сравнения двух последовательностей типично проводят путем сравнивания последовательностей в окне сравнения с целью идентификации и сравнения подобия локальных участков последовательностей. Окно сравнения, в используемом в данном документе значении, относится к сегменту, состоящему по меньшей мере из около 20 последовательно расположенных позиций, обычно от 30 до около 75, от 40 до около 50, в котором последовательность может сравниваться с референсной последовательностью, состоящей из такого же числа последовательно расположенных позиций после выравнивания двух последовательностей.
Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может быть проведено с использованием программы Megalign in пакета прикладных биоинформационных программ Lasergene (DNASTAR, Inc., Madison, WI), с использованием параметров по умолчанию. Эта программа реализует несколько схем выравнивания, описанных в следующих литературных источниках:
Dayhoff, М.О.
(1978) A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships, в книге: Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730.
Предпочтительно, процент идентичности последовательностей определяется путем сравнения двух выровненных последовательностей в окне сравнения, состоящем из по меньшей мере 20 позиций, причем часть последовательности полинуклеотида или полипептида в окне сравнения может содержать аддиции или делеции (т.е. пробелы), составляющие 20 процентов или меньше, обычно от 5 до 15 процентов, или от 10 до 12 процентов, по сравнению с референсными последовательностями (не содержащими аддиции или делеции) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент рассчитывается путем определения числа позиций, в которых в обоих последовательностях находятся идентичные основания нуклеиновых кислот или аминокислотные остатки, с получением числа совпадающих позиций, деления числа совпадающих позиций на общее число позиций в референсной последовательности (т.е. размер окна), и умножения результатов на 100, с получением процента идентичности последовательностей.
Варианты могут также, или альтернативно, быть по существу гомологичными по отношению к нативному гену, или его части или комплементу. Такие полинуклеотидные варианты способны гибридизироваться в умеренно жестких условиях с природной последовательностью ДНК, кодирующей нативное антитело (или комплементарной последовательностью).
Пригодные умеренно жесткие условия включают предварительную промывку раствором 5xSSC, 0,5% SDS, 1,0 мМ ЭДТА (pH 8,0); гибридизацию при 50-65°С, 5xSSC, в течение ночи; с последующей промывкой дважды при 65°С в течение 20 мин каждым из 2х, 0,5х и 0,2xSSC, содержащим 0, 1% SDS.
В используемом в данном документе значении, высокожесткими условиями или условиями высокой жесткости являются такие, в которых: (1) используются низкая ионная сила и высокая температура для промывки, например, 0,015 М хлорида натрия/0,0015 М цитрата натрия/0,1% додецилсульфата натрия при 50°С; (2) используется денатурирующий агент во время гибридизации, такой как формамид, например, 50% (об./об.) формамида с 0,1% бычьего сывороточного альбумина/0,1% фиколла/0,1% поливинилпирролидона/50 мМ натрийфосфатного буфера с pH 6,5, с 750 мМ хлорида натрия, 75 мМ цитрата натрия при 42°С; или (3) используются 50% формамид, 5xSSC (0,75 М NaCl, 0,075 М цитрата натрия), 50 мМ фосфата натрия (pH 6,8), 0,1% пирофосфата натрия, 5х раствор Денхардта, озвученная ДНК спермы
- 50 043536 лосося (50 мкг/мл), 0,1% SDS (додецилсульфат натрия), и 10% сульфата декстрана при 42°С, с промывками при 42°С в 0,2xSSC (хлорид натрия/цитрат натрия) и 50% формамиде при 55°С, с последующей промывкой в услоовиях высокой жесткости, состоящей из 0,1xSSC, содержащего ЭДТА, при 55°С. Квалифицированному специалисту будет понятно, каким образом отрегулировать температуру, ионную силу и т.д. требуемым образом для учета таких факторов, как длина зонда и т.п.
Рядовым специалистам в данной области техники будет понятно, что в результате вырожденности генетического кода, существует большое количество нуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептид, описанный в данном документе. Некоторые из таких полинуклеотидов несут минимальную гомологию с нуклеотидной последовательностью любого нативного гена. Тем не менее, полинуклеотиды, различающиеся вследствие отличий в использовании кодонов, конкретно предусмотрены настоящим изобретением. Дополнительно, аллели генов, содержащих полинуклеотидные последовательности, предусматриваемые в данном документе, входят в объем настоящего изобретения. Аллели представляют собой эндогенные гены, измененные в результате одной или нескольких мутаций, такие как делеции, аддиции и/или замещения нуклеотидов. Образующиеся при этом мРНК и белок могут, но не обязательно будут, иметь измененную структуру или функцию. Аллели могут быть идентифицированы с использованием стандартных методик (таких как гибридизация, амплификация и/или сравнение и базой данных последовательностей).
Полинуклеотиды по настоящему изобретению могут быть получены с использованием химического синтеза, рекомбинантных способов, или ПЦР. Способы химического синтеза полинуклеотидов хорошо известны специалистам и не требуют детального описания в данном документе. Квалифицированный специалист в данной области техники может использовать последовательности, предусматриваемые в данном документе, и коммерческий синтезатор ДНК для продуцирования желательной ДНК-последовательности.
Для получения полинуклеотидов с использованием рекомбинантных способов полинуклеотид, содержащий желательную последовательность, может быть вставлен в пригодный вектор, и вектор в свою очередь может быть введен в пригодную клетку-хозяина для репликации и амплификации, как дополнительно описано в данном документе. Полинуклеотиды могут быть введены в клетки-хозяева любыми способами, известными специалистам. Клетки трансформируют введением экзогенного полинуклеотида путем прямого поглощения, эндоцитоза, трансфекции, F-спаривания или электропорации. После введения, экзогенный полинуклеотид может поддерживаться в клетке как неинтегрированный вектор (такой как плазмида) или быть интегрирован в геном клетки-хозяина. Амплифицируемый таким образом полинуклеотид может быть выделен из клетки-хозяина способами, хорошо известными в данной области техники. См., например, Sambrook et al. (1989).
Альтернативно, ПЦР позволяет репродуцировать ДНК-последовательности. Технология ПЦР хорошо известна специалистам и описана в патентах США № 4683195, 4800159, 4754065 и 4683202, а также в PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al. eds., Birkauswer Press, Boston (1994).
РНК может быть получена путем использования выделенной ДНК в соответствующем векторе и введения его в пригодную клетку-хозяина. Когда клетка реплицируется и ДНК транскрибируется в РНК, эта РНК может быть затем выделена с использованием способов, хорошо известных квалифицированным специалистам в данной области техники, как описано, например, в Sambrook et al. (1989).
Пригодные клонирующие вектора могут быть сконструированы в соответствии со стандартными методиками, или могут быть выбраны из большого числа клонирующих векторов, доступных в данной области техники. Хотя выбранный клонирующий вектор может меняться в зависимости от клеткихозяина, предназначенной для использования, пригодные клонирующие вектора обычно будут обладать способностью к саморепликации, могут иметь один (сайт-)мишень для конкретной эндонуклеазы рестрикции, и/или может нести гены маркера, который может быть использован при селекции клонов, содержащих вектор. Пригодные примеры включают плазмиды и бактериальные вирусы, например, pUC18, pUC19, Bluescript (например, pBS SK+) и его производные, mp18, mp19, pBR322, nMB9, ColE1, pCR1, RP4, фаговые ДНК, и челночные вектора, такие как pSA3 и рАТ28. Эти и многие другие клонирующие вектора доступны от коммерческих поставщиков,таких как BioRad, Strategene и Invitrogen.
Экспрессионные вектора обычно представляют собой реплицируемые полинуклеотидные конструкты, содержащие полинуклеотид в соответствии с любым из различных аспектов изобретения. Подразумевается, что экспрессионный вектор должен быть пригодным для репликации в клетках-хозяевах или в качестве эписом или как составная часть хромосомной ДНК. Пригодные экспрессионные вектора включают, без ограничений, плазмиды, вирусные вектора, включая аденовирусы, аденоассоциированые вирусы, ретровирусы, космиды, и экспрессионный вектор (вектора), раскрытые в публикации PCT № WO 87/04462. Компоненты вектора могут обычно включать, без ограничений, один или несколько из следующего: сигнальная последовательность; точка начала репликации; один или несколько маркерных генов; пригодные контрольные элементы транскрипции (такие как промоторы, энхансеры и терминатор). Для экспрессии (т.е., трансляции) также обычно требуются один или несколько контрольных элементов трансляции, таких как сайты связывания рибосом, сайты инициации трансляции, и стоп-кодоны.
- 51 043536
Вектора, содержащие полинуклеотиды, представляющие интерес, могут быть введены в клеткухозяина с помощью любого из ряда соответствующих способов, включая электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; бомбардировку микрочастицами; липофекцию; и инфекцию (например, в тех случаях, когда вектор представляет собой инфекционнеый агент, такой как вирус коровьей оспы). Выбор (способа) введения вектора или полинуклеотидов будет часто зависеть от характеристик клетки-хозяина.
В некоторых аспектах, изобретение также предусматривает клетки-хозяева, содержащие любые из полинуклеотидов, описанных в данном документе. Любые клетки-хозяева, способные сверхэкспрессировать гетерологичные ДНК, могут быть использованы с целью выделения генов, кодирующих антитело, полипептид или блок, представляющие интерес. Неограничительные примеры клеток-хозяев млекопитающих включают, без ограничений, клетки COS, HeLa и СНО. См. также публикацию PCT № WO 87/04462. Пригодные клетки-хозяева, не принадлежащие млекопитающим, включают прокариоты (такие как E.coli или В.subtillis) и дрожжи (такие как S.cerevisae, S.pombe; или K.lactis). Предпочтительно, клетки-хозяева экспрессируют кДНК на уровне, около в 5 раз выше, более предпочтительно, в 10 раз выше, еще более предпочтительно, в 20 раз выше, чем для соответствующего эндогенного антитела или белка, представляющего интерес, если они присутствуют, в клетках-хозяевах. Скрининг клеток-хозяев на специфическое связывание с А $ 1-40 проводится путем иммунологического анализ или методом FACS. Клетка, сверхэкспрессирующая антитело или белок, представляющий интерес, может быть идентифицирована.
D. Композиции.
В некоторых вариантах реализации, композиции, используемые в способе по изобретению, содержат эффективное количество антитела (например, антагонистического антитела против CGRP, моноклонального антитела, которое модулирует путь CGRP) или антитела, полученного из полипептида, описанного в данном документе. Примеры таких композиций, а также способы составления, также описаны в предыдущем разделе и ниже. В одном варианте реализации, композиция дополнительно содержит антагонист CGRP. В некоторых вариантах реализации, композиция содержит один или несколько моноклональных антител, которые модулируют путь CGRP. В некоторых вариантах реализации, композиция содержит один или несколько антагонистических антител против CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP распознает человеческий CGRP. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP является гуманизированным. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP включает константную область, которая не инициирует ненужного или нежелательного иммунного ответа, такого как медиируемый антителом лизис или ADCC. В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP включает один или несколько CDR(s) антитела G1 (например, один, два, три, четыре, пять или, в некоторых вариантах реализации, все шесть CDR G1). В некоторых вариантах реализации, антагонистическое антитело против CGRP является человеческим.
Следует понимать, что композиции могут содержать более одного антитела (например, более одного антагонистического антитела против CGRP - смесь антагонистических антител против CGRP, распознающую разные эпитопы CGRP). Другие типичные примеры композиций содержат несколько антагонистических антител против CGRP, которые распознают один и тот же эпитоп (одни и те же эпитопы), или разные виды антагонистических антител против CGRP, которые связываются с разными эпитопами CGRP.
Композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы (Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K.E. Hoover). Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях. Терапевтическая композиция антитела может содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, эксципиентов или стабилизаторов, причем неограничительные примеры таких веществ включают буферы, такие как фосфатный, цитратный, и на основе других органических кислот; соли, такие как хлорид натрия; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид, бензетония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты (например, в концентрации от 0,1 мМ до 100 мМ, от 0,1 мМ до 1 мМ, от 0,01 мМ до 50 мМ, от 1 мМ до 50 мМ, от 1 мМ до 30 мМ, от 1 мМ до 20 мМ, от 10 мМ до 25 мМ) такие как глицин, глутамин, метионин, аспарагин, гистидин, аргинин, или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу, или декстрины; хелатирующие агенты (например, в концентрации от 0,001 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,001 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,001 мг/мл до 0,1 мг/мл, от 0,001 мг/мл до 0,01 мг/мл) такие как ЭДТА (например, динатрия ЭДТА дигидрат); сахара (например, в концентрации от 1 мг/мл до 500 мг/мл, от 10 мг/мл до 200 мг/мл, от 10 мг/мл до 100 мг/мл, от 50 мг/мл до 150
- 52 043536 мг/мл), такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества (например, в концентрации от 0,01 мг/мл до 10 мг/мл, от 0,01 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 1 мг/мл, от 0,01 мг/мл до 0,5 мг/мл) такие как твин (TWEEN™) (например, полисорбат (например, полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80)), плюроник (PLURONICS™) или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Фармацевтически приемлемые эксципиенты дополнительно описаны в данном документе.
Антитело (например, антагонистическое антитело против CGRP) и его композиции также могут использоваться в сочетании с другими агентами, служащими для усиления и/или дополнения эффективности агентов.
E. Наборы.
В одном аспекте, изобретение также предусматривает наборы для использования в способах по настоящему изобретению. Наборы могут включать один или несколько контейнеров, содержащих антитело, описанное в данном документе (например, антагонистическое антитело против CGRP (такое как гуманизированное антитело)), или полипептид, описанный в данном документе, и инструкции по использованию в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. В общем, такие инструкции содержат описание введения антитела для лечения, облегчения или предотвращения головной боли (такой как мигрень) в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. Набор может дополнительно содержать описание выбора индивидуума, пригодного для лечения, основаное на идентификации индивидуума, страдающего от головной боли или индивидуама с риском возникновения головной боли. В других вариантах реализации, инструкции содержат описание введения антитела (например, антагонистического антитела против CGRP) индивидууму с риском возникновения головной боли (такой как мигрень).
В некоторых вариантах реализации, антитело представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах реализации, антитело является человеческим. В других вариантах реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело. В других вариантах реализации. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит один или несколько CDR(s) антитела G1 (например, один, два, три, четыре, пять или, в некоторых вариантах реализации, все шесть CDR G1).
Инструкции, касающиеся использования антитела (например, антагонистического антитела против CGRP) обычно включают информацию о дозировке, схеме приема, и пути введения для предполагаемого лечения. Контейнеры могут быть разовыми дозами, упаковками большого размера (например, многодозовые упаковки) или дробными дозами. Инструкции, вкладываемые в наборы, типично представляют собой письменные инструкции на ярлыке или на вкладыше в упаковку (например, бумажный лист, входящий в набор), но также приемлемыми являются машиносчитываемые инструкции (например, инструкции на магнитном или оптическом запоминающем диске).
Ярлык или вкладыш в упаковку указывает, что композиция используется для лечения, облегчения и/или предотвращения головной боли (такой как мигрень). Могут быть предусмотрены инструкции по реализации любого из способов, описанных в данном документе.
Наборы по настоящему изобретению находятся в пригодной упаковке. Пригодная упаковка включает, без ограничений, флаконы, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, герметизированные лавсановые (Mylar) или пластиковые пакеты) и т.п. Также предусматриваются упаковки для использования в комбинации с конкретным устройством, таким как ингалятор, устройство для назального введения (например, распылитель) или инфузионное устройство, такое как насос minipump. Набор может иметь стерильный входной порт (например, контейнер может быть пакетом с раствором для внутривенного введения или флаконом с пробкой, протыкаемой иглой для подкожной инъекции). Контейнер может также иметь стерильный входной порт (например, контейнер может быть пакетом с раствором для внутривенного введения или флаконом с пробкой, протыкаемой иглой для подкожной инъекции). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой антагонистическое антитело против CGRP и/или моноклональное антитело, которое модулирует путь CGRP. Контейнер может дополнительно содержать второй фармацевтически активный агент.
Наборы могут необязательно предусматривать дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретирующая информация. Нормально, набор содержит контейнер и ярлык или вкладыш(и) в упаковку на контейнере или связанные с ним.
Следующие примеры приведены для иллюстрации изобретения, без его ограничения.
Примеры
Пример 1. Получение и характеризация моноклональных антител, направленных против CGRP.
Получение антитела против CGRP. Для получения антител против CGRP, обладающих перекрестно-видовой реактивностью по отношению к CGRP крысы и человека, мышей иммунизировали 25-100 мкг человеческого α-CGRP или β-CGRP, конъюгированного с KLH в адъюванте (50 мкл на подушечку лапы, 100 мкл в общем на мышь) с различными интервалами. Иммунизация в общем проводилась, как описано в Geerligs H.J. et al., 1989, J. Immunol. Methods 124:95-102; Kenney J.S. et al., 1989, J. Immunol. Methods 121:157-166; и Wicher K. et al., 1989, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 89:128-135. Мышей снача
- 53 043536 ла иммунизировали 50 мкг человеческого α-CGRP или Р-CGRP, конъюгированного с KLH в CFA (полный адъювант Фрейнда). Через 21 день мышей иммунизировали повторно 25 мкг человеческого β-CGRP (для мышей, сначала иммунизированных человеческим α-CGRP) или α-CGRP (для мышей, сначала иммунизированных человеческим β-CGRP), конъюгированными с KLH в IFA (неполный адъювант Фрейнда). Через двадцать три дня после повторной иммунизации, проводили третью иммунизацию 25 мкг αCGRP крысы, конъюгированным с KLH в IFA. Через десять дней титры антитела определяли с помощью ИФА. Четвертую иммунизацию проводили с использованием 25 мкг пептида (крысиный α-CGRP-KLH) в IFA через 34 дня после третьей иммунизации. Конечную бустерную иммунизацию проводили с использованием 100 мкг растворимого пептида (крысиный α-CGRP) через 32 дня после четвертой иммунизации.
Спленоциты получали из иммунизированной мыши и сливали с клетками миеломы NSO в соотношении 10:1, с полиэтиленгликолем 1500. Гибриды высеивали на 96-луночные планшеты в среду DMEM, содержащую 20% сыворотку лошади и 2-оксалоацетат/пируват/инсулин (Sigma), и начинали селекцию гипоксантином/аминоптерином/тимидином. В день 8 во все лунки добавляли 100 мкл DMEM, содержащей 20% сыворотку лошади. Супернатанты гибридов подвергали скринингу методом иммунологического анализа с ловушкой для антитела.
Определение класса антитела проводили с использованием класс-специфических вторых антител.
Панель клеточных линий, продуцирующих моноклональное антитело, выбирали на основании их связывания с человеческим и крысиным CGRP для проведения дополнительных анализов. Эти антитела и характеристики приведены ниже в табл. 2 и 3.
Очистка и получение фрагмента Fab. Моноклональные антитела, выбранные для проведения дополнительных анализов, были очищены от супернатантов гибридомных культур методом аффинной хроматографии на белке А. Супернатанты уравновешивали при pH 8. Супернатанты затем загружали на колонку с белком A MabSelect (Amersham Biosciences № 17-5199-02), уравновешенную с помощью PBS (фосфатно-солевого буфера) при pH 8. Колонку промывали 5 объемами колонки PBS, pH 8. Антитела элюировали 50 мМ цитрат-фосфатным буфером, pH 3. Элюированные антитела нейтрализовали 1М фосфатным буфером, pH 8. Очищенные антитела подвергали диализу с PBS, pH 7,4. Концентрации антитела определяли методом ДСН-ПААГ (SDS-PAGE), с использованием калибровочной кривой для мышиного моноклонального антитела.
Fabs получали методом протеолиза папаином полных антител с использованием набора Immunopure Fab (Pierce № 44885) и очищали с помощью хроматографии на белке А в соответствии с инструкциями производителя. Концентрации определяли методом ИФА и/или электрофореза ДСН-ПААГ с использованием стандартного Fab с известной концентрацией (определенной путем аминокислотного анализа), и по А280 с использованием 1OD (1 единица оптической плотности)=0,6 мг/мл (или теоретического эквивалента, определяемого на основании аминокислотной последовательности).
Определение аффинности Fabs. Аффинности моноклональных антител против CGRP определяли при 25°С или при 37°С с использованием системы поверхностного плазмонного резонанса (SPR) Biacore3000™ (Biacore, INC, Piscataway NJ) с подвижным буфером производителя, HBS-EP (10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% об./об. полисорбата Р20). Аффинность определяли путем связывания биотинилированных на N-конце пептидов CGRP (синтезированы по специальному заказу фирмами GenScript Corporation, New Jersey или Global Peptide Services, Colorado) предварительно иммобилизированным стрептавидином на чипе SA и измерения кинетики связывания антитела Fab титрованием на поверхности CGRP. Биотинилированный CGRP разбавляли HBS-EP и наносили на чип в концентрации менее 0,001 мг/мл. Благодаря использованию переменного времени прохождения по индивидуальным каналам чипа были получены два диапазона плотностей антигена: <50 единиц отклика (RU) для подробных кинетических исследований и около 800 RU для исследований концентрирования и скрининга. Двух- или трехкратные серийные разбавления, типично в диапазоне концентраций 1 мкМ - 0,1 нМ (около соответствующие 0,1-10х ожидаемым значениям KD), очищенных фрагментов Fab впрыскивали на 1 мин при расходе 100 дл/мин, и наблюдали диссоциацию в течение 10 мин. После каждого цикла связывания, поверхности регенерировали 25 мМ NaOH в 25 об./об.% этаноле, который позволял проводить измерения на протяжении сотен циклов. Кинетические константу ассоциации (kon) и константу диссоциации (koff) получали одновременно путем аппроксимации данных по уравнению модели 1:1 связывания Лэнгмюра (Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, В. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110) с помощью программы BIAevaluation. Глобальные равновесные константы диссоциации (KD) или аффинности рассчитывали по отношению KD=koff/kon. Аффинности мышиных фрагментов Fab представлены в табл. 2 и 3.
Картирование эпитопов мышиного антитела против CGRP. Для определения эпитопа человеческого α-CGRP, с которым связываются антитела против CGRP, аффинности связывания фрагментов Fab с различными фрагментами CGRP измеряли, как описано выше, путем связывания фрагментов аминокислот 19-37 и аминокислот 25-37 биотинилированного на N-конце CGRP на сенсорном чипе SA. Фиг. 1 показывает их аффинности связывания, измеренные при 25°С. Как показано на фиг. 1, все антитела, за ис
- 54 043536 ключением антитела 4901, связываются с фрагментами 19-37 и 25-37 человеческого α-CGRP с аффинностью, схожей с их аффинностью связывания с полноразмерным человеческим α-CGRP (1-37). Антитело 4901 связывается с фрагментом 25-37 человеческого α-CGRP с аффинностью, в шесть раз меньшей, чем при связывании с фрагментом полноразмерного человеческого α-CGRP, преимущественно из-за снижения скорости диссоциации. Данные показывают, что эти антитела против CGRP обычно связываются с С-концевой областью CGRP.
Проводили аланиновое сканирование для дополнительного определения аминокислот человеческого α-CGRP, участвующих в связывании антитела против CGRP. Разные варианты человеческого α-CGRP с одним замещением аланина были получены методом пептидного синтеза. Их аминокислотные последовательности представлены в табл. 4 вместе со всеми другими пептидами, используемыми в анализе Biacore. Аффинности фрагментов Fab антител против CGRP по отношению к этим вариантам определяли с использованием Biacore, как описано выше. Как показано на фиг. 1, все 12 антител нацелены на Сконцевой эпитоп, причем аминокислота F37 является наиболее важным остатком. Мутация F37 на аланин значительно снижала аффинность или даже полностью ингибировала связывание антител против CGRP с пептидом. Следующим по важности аминокислотным остатком является G33, однако, замещение на аланин в этом положении влияло только на высокоаффинные антитела (7Е9, 8В6, 10А8 и 7D11). Аминокислотный остаток S34 также играет значительную, но меньшую, роль в связывании этих четырех высокоаффинных антител.
Таблица 2. Характеристики связывания моноклональных антител против CGRP с человеческим α-CGRP и их антагонистическая активность
Антитела | KD с человеческим аCGRP при 25 °C (нМ) | KD с человеческим аCGRP при 37 °C (нМ) | Блокирование клетками связывания человеческого аCGRP с его рецептором при 25 °C (измеренное по активации сАМР) | 1С50 (нМ связывающих сайтов) при 25 °C (комнатная температуры), измеренная по анализу связывания радиолигандов. |
7Е9 | 1,о | 0,9 | Да | 2,5 |
8В6 | 1Д | 1,2 | Да | 4,0 |
10А8 | 2,1 | 3,0 | Да | н.о. |
7D11 | 4,4 | 5,4 | Да | н.о. |
6Н2 | 9,3 | 42 | Да | 12,9 |
4901 | 61 | 139 | Да | 58 |
14Е10 | 80 | 179 | Да | н.о. |
9В8 | 85 | 183 | Нет | н.о. |
13С2 | 94 | 379 | Нет | н.о. |
14А9 | 148 | 581 | Нет | н.о. |
6D5 | 210 | 647 | Нет | н.о. |
1С5 | 296 | 652 | Нет | н.о. |
Примечание: антитело 4901 является коммерчески доступным (Sigma, Product No. С7113). н.о. - не определено.
Таблица 3. Характеристики связывания моноклональных антител против CGRP с крысиным α-CGRP и антагонистическая активность
Антитела | KD с крысиным a-CGRP при 37 °C (нМ) | Блокирование клетками связывания крысиного α-CGRP с его рецептором при 25 °C (измеренное по активации сАМР) | In vivo блокирование в анализе на подкожном нерве |
4901 | 3,4 | Да | Да |
7Е9 | 47 | Да | Да |
6Н2 | 54 | Нет | Нет |
8В6 | 75 | Да | Да |
7D11 | 218 | Да | Да |
10А8 | 451 | Нет | н.о. |
9В8 | 876 | Нет | н.о. |
14Е10 | 922 | Нет | н.о. |
13С2 | > 1000 | Нет | н.о. |
14А9 | > 1000 | Нет | н.о. |
6D5 | > 1000 | Нет | н.о. |
1С5 | > 1000 | Нет | н.о. |
н.о. указывает, что тестирование антитела не проводилось.
- 55 043536
Таблица 4. Аминокислотные последовательности фрагментов человеческого α-CGRP (SEQ ID NOS: 15-40) и родственные пептиды (SEQ ID NOS: 41-47)
CGRP | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO |
1-37 (WT) (дикий тип) | ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF | 15 |
8-37 | VTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF | 16 |
19-37 | SGGVVKNNFVPTNVGSKAF | 17 |
Р29А (19-37) | SGGVVKNNFVATNVGSKAF | 18 |
К35А (19-37) | SGGVVKNNFVPTNVGSAAF | 19 |
К35Е (19-37) | SGGVVKNNFVPTNVGSEAF | 20 |
К35М (19-37) | SGGVVKNNFVPTNVGSMAF | 21 |
K35Q (19-37) | SGGVVKNNFVPTNVGSQAF | 22 |
F37A (19-37) | SGGVVKNNFVPTNVGSKAA | 23 |
25-38А | NNFVPTNVGSKAFA | 24 |
25-37 | NNFVPTNVGSKAF | 25 |
F27A (25-37) | NNAVPTNVGSKAF | 26 |
V28A (25-37) | NNFAPTNVGSKAF | 27 |
Р29А (25-37) | NNFVATNVGSKAF | 28 |
Т30А (25-37) | NNFVPANVGSKAF | 29 |
N31A(25-37) | NNFVPTAVGSKAF | 30 |
V32A (25-37) | NNFVPTNAGSKAF | 31 |
G33A (25-37) | NNFVPTNVASKAF | 32 |
S34A (25-37) | NNFVPTNVGAKAF | 33 |
F37A (25-37) | NNFVPTNVGSKAA | 34 |
26-37 | NFVPTNVGSKAF | 35 |
19-37-СООН | SGGVVKNNFVPTNVGSKAF | 36 |
19-36-СООН | SGGVVKNNFVPTNVGSKA | 37 |
1-36-СООН | ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKA | 38 |
1-19-СООН | ACDTATCVTHRLAGLLSRS | 39 |
1-13-СООН | ACDTATCVTHRLA | 40 |
крысиный а (1-37) | SCNTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKDNFVPTNVGSEAF | 41 |
крысиный а (19- 37) | SGGVVKDNFVPTNVGSEAF | 42 |
человеческий β(137) | ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF | 43 |
крысиный β (1-37) | SCNTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKDNFVPTNVGSKAF | 44 |
Человеческий кальцитонин (1-32) | CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP | 45 |
Человеческий амилин (1-37) | KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY | 46 |
Человеческий адреномедудлин (1-52) | YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDK DKDNVAPRSKISPQGY | 47 |
Все пептиды амидированы на С-конце, за исключением SEQ ID NOS: 36-40. Остатки, выделенные жирным шрифтом, указывают точковые мутации.
Пример 2. Скрининг антагонистических антител против CGRP с использованием in vitro анализов.
Мышиные антитела против CGRP были подвергнуты дополнительному скринингу на антагонистную активность in vitro с использованием анализа клеточной активации сАМР и анализа связывания.
Антагонистическую активность измеряли с помощью анализа сАМР. Пять микоролитров человеческого или крысиного α-CGRP (конечная концентрация 50 нМ) в присутствии антитела против CGRP (конечная концентрация 1-3000 нМ) или без него, или крысиного α-CGRP или человеческого α-CGRP (конечная концентрация 0,1 нМ-10 мкМ; В качестве положительного контроля активации с-АМР) дозировали на 384-луночный планшет (Nunc, Cat. № 264657). Десять микролитров клеток (человеческих SK-NMC в случае использования человеческого α-CGRP, или крысиных L6 от АТСС в случае использования крысиного α-CGRP) в буфере для стимуляции (20 мМ HEPES, рН 7,4, 146 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 1 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2, и 500 мкМ 3-изобутил-1-метилксантина (IBMX)) добавляли в лунки планшета. Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин.
После инкубации проводили активацию сАМР с использованием системы для анализа HitHunter™ Enzyme Fragment Complementation Assay (Applied Biosystems) в соответствии с инструкциями производителя. Анализ основан на использовании генетически модифицированного фермента β-галактозидазы, который состоит из двух фрагментов, называемых акцептор фермента (ЕА) и донор фермента (ED). Когда эти два фрагмента разделены, фермент неактивен. Когда фрагменты соединены, они могут спонтанно рекомбинировать с образованием активного фермента в результате процесса, называемого комплементация. Платформа для анализа EFC использует пептидный конъюгат ED-cAMP, в котором сАМР распозна- 56 043536 ется (антителом) против cAMP. Этот фрагмент ED способен к повторной ассоциации с ЕА с образованием активного фермента. При анализе антитело против сАМР оптимально титруют для связывания с конъюгатом ED-cAMP и ингибирования образования фермента. сАМР, присутствующий в образцах клеточного лизата, конкурируют с конъюгатом ED-cAMP за связывание с антителом против сАМР. Количество свободного конъюгата ED в анализе пропорционально концентрации сАМР. Таким образом, сАМР измеряют по образованию активного фермента, который количественно определяется по превращению люминесцентного субстрата β-галактозидазы. Анализ активации сАМР проводили путем прибавления 10 мкл буфера для лизиса и антитела против сАМР (в соотношении 1:1) с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 60 мин. Затем прибавляют 10 μл реагента ED-cAMP в каждую лунку и инкубируют в течение 60 мин при комнатной температуре. После инкубации, прибавляют в каждую лунку 20 мкл реагента ЕА и смесь CL (содержащую субстрат) (в соотношении 1:1) и инкубируют в течение 1-3 ч или в течение ночи при комнатной температуре. Планшет считывают со скоростью 1 с/лунку на инструменте РМТ или 30 с/участок на фотоприемнике (imager). Антитела, которые ингибируют активацию сАМР с помощью α-CGRP, были идентифицированы (обозначены Да) в табл. 2 и 3 выше. Данные в табл. 2 и 3 показывают, что антитела, демонстрирующие антагонистическую активность при анализе, обычно обладают высокой аффинностью. Например, антитела, имеющие KD (определенную при 25°С), равную около 80 нМ или меньше с человеческим α-CGRP, или имеющие KD (определенную при 37°С), равную около 47 нМ или меньше с крысиным α-CGRP, проявляют антагонистическую активность в данном анализе.
Анализ связывания радиолиганда. Анализ связывания проводили для измерения IC50 антитела против CGRP при блокировании связывания CGRP с рецептором, как описано выше. Zimmermann et al., Peptides 16:421-4, 1995; Mallee et al., J. Biol. Chem. 277:14294-8, 2002. Мембраны (25 мкг) клеток SK-N-MC инкубировали в течение 90 мин при комнатной температуре в буфере для инкубации (50 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 5 мМ MgCl2, 0,1% БСА (бычий сывороточный альбумин)), содержащем 10 пМ 25I-человеческий αCGRP в общем объеме 1 мл. Для определения ингибирующих концентраций (IC50), антитела или немеченый CGRP (в качестве контроля), из около 100-кратно концентрированного маточного раствора растворяди с разными концентрациями в буфере для инкубации и инкубировали в тоже самое время с мембранами и 10 пМ 125I-человеческим α-CGRP. Инкубацию прекращали фильтрацией через фильтр из стеклянного микроволокна (GF/B, 1 мкм), блокированный 0,5% полиэтиленимина. Строили графики кривых доза-ответ и значения Ki определяли с использованием уравнения
Ki=IC50/( 1 +([лиганд]/KD), где константа равновесной диссоциации KD=8 пМ для человеческого α-CGRP с рецептором CGRP1, присутствующим в клетках SK-N-MC, и Bmax=0,025 пмоль/мг белка. Указанное значение IC50 (для молекул IgG) пересчитывали для связывающих сайтов (путем его умножения на 2), чтобы его можно было сравнивать с аффинностями (KD), определенными с помощью Biacore (см. табл. 2).
В табл. 2 приведены значения IC50 для мышиных антител 7Е9, 8В6, 6Н2 и 4901. Данные указывают, что аффинность антитела обычно коррелирует с IC50: антитела с более высокой аффинностью (более низкими значениями KD) имеют более низкие значения IC50 в анализе связывания радиолиганда.
Пример 3. Эффект антагонистических антител против CGRP на вазодилатацию кожи, индуцируемую стимуляцией подкожного нерва крысы.
Для тестирования антагонистической активности антитела против CGRP эффект антител на вазодилатацию кожи путем стимуляции подкожного нерва крысы тестировали с использованием крысиной модели, описанной ранее. Escott et al., Br. J. Pharmacol. 110:772-776, 1993. В этой крысиной модели электрическая стимуляция подкожного нерва индуцирует высвобождение CGRP нервными окончаниями, приводя к усилению кожного кровотока. Кровоток в коже лапы самцов крыс Sprague Dawley (170-300 г, из Charles River Hollister) измеряли после стимуляции подкожного нерва.
Крыс поддерживали под анестезией с помощью 2% изофлурана. Бретилия тозилат (30 мг/кг, внутривенное (в/в) введение) давали в начале эксперимента для минимизации вазоконстрикции вследствие сопутствующей стимуляции симпатических волокон подкожного нерва. Температуру тела поддерживали при 37°С путем использования ректального зонда, термостатически соединенного с грелкой-матрацем с контролируемой температурой. Соединения, включая антитела, положительный контроль (CGRP 8-37), и носитель (PBS, 0,01% Tween 20) вводили внутривенно через правую бедренную вену, за исключением эксперимента, представленного на фиг. 3, тестируемое соединение и контроль вводили инъекцией через хвостовую вену, и для экспериментов, представленных на фиг. 2А и 2В, антитела 4901 и 7D11 вводили инъекцией интраперитонеально (IP). Соединение положительного контроля CGRP 8-37 (антагонист вазодилатации), из-за его короткого периода полувыведения, давали за 3-5 мин до стимуляции нерва в количестве 400 нмоль/кг (200 мкл). Tan et al., Clin. Sci. 89:656-73, 1995. Антитела давали в разных дозах (1, 2,5, 5, 10 и 25 мг/кг).
Для экспериментов, представленных на фиг. 2А и 2В, антитело 4901 (25 мг/кг), антитело 7D11 (25 мг/кг), или контрольный носитель (PBS с 0,01% Tween 20) вводили интраперитонеально (IP) за 72 ч до электроимпульсной стимуляции. Для эксперимента, представленного на фиг. 3, антитело 4901 (1, 2,5, 5
- 57 043536 или 25 мг/кг) или контрольный носитель (PBS с 0,01% Tween 20) вводили внутривенно за 24 ч до электроимпульсной стимуляции. После введения антител или контрольного носителя подкожный нерв правой задней лапы обнажали хирургически, перерезали проксимально и накрывали полимерной пленкой для предотвращения высыхания. Лазерный допплеровский зонд помещали на медиодорсальную часть шкуры задней лапы, которая является областью, иннервируемой подкожным нервом. Кожный кровоток, измеряемый как поток кровяных клеток, контролировали с помощью лазерного доплеровского флоуметра. После установления стабильного базового потока (отклонения менее 5%) в течение по меньшей мере 5 мин, нерв помещали на платиновые биполярные электроды и электрически стимулировали 60 импульсами (2 Гц, 10 В, 1 мс, в течение 30 с) и затем (стимуляцию) повторяли через 20 мин. Кумулятивное изменение кожного кровотока оценивали по площади под кривой зависимости потока от времени (AUC, равна изменению потока, умноженному на изменение времени) для каждого отклика потока на электроимпульсную стимуляцию. Рассчитывали средний отклик кровотока на две стимуляции. Животные находились под анестезией в течение периода времени от одного до трех часов.
Как показано на фиг. 2А и 2В, увеличение кровотока, стимулируемое путем воздействия на подкожный нерв электрическими (electronic) импульсами, ингибировалось в присутствии CGRP 8-37 (400 нмоль/кг, в/в введение), антитела 4901 (25 мг/кг, ip (интраперитонеальное) введение), или антитела 7D11 (25 мг/кг, ip введение) по сравнению с контролем. CGRP 8-37 вводили за 3-5 мин до стимуляции подкожного нерва; и антитела вводили за 72 ч до стимуляции подкожного нерва. Как показано на фиг. 3, увеличение кровотока, стимулируемое воздействием на подкожный нерв электрическими импульсами, ингибировалось в присутствии антитела 4901 в разных дозах (1, 2,5, 5 и 25 мг/кг), введенного внутривенно за 24 ч до стимуляции подкожного нерва.
Для экспериментов, представленных на фиг. 4А и 4В, подкожный нерв обнажали хирургически перед введением антитела. Подкожный нерв правой задней лапы обнажали хирургически, перерезали проксимально и накрывали полимерной пленкой для предотвращения высыхания. Лазерный допплеровский зонд помещали на медиодорсальную часть шкуры задней лапы, которая является областью, иннервируемой подкожным нервом. Кожный кровоток, измеряемый как поток кровяных клеток, контролировали с помощью лазерного доплеровского флоуметра. Через период времени от тридцати до сорока пяти минут после инъекции бретилия тозилата, когда устанавливался стабильный базовый поток (отклонения менее 5%) в течение по меньшей мере 5 мин, нерв помещали на платиновые биполярные электроды и электрически стимулировали (2 Гц, 10 В, 1 мс, в течение 30 с) и (стимуляцию) повторяли через 20 мин. Среднее значение отклика величины кровотока на эти две стимуляции использовали для определения базового отклика (момент времени 0) на электрическую стимуляцию. Затем вводили внутривенном (в/в) антитело 4901 (1 мг/кг или 10 мг/кг), антитело 7Е9 (10 мг/кг), антитело 8В6 (10 мг/кг) или носитель (PBS с 0,01% Tween 20). Нерв затем стимулировали (2 Гц, 10 В, 1 мс, в течение 30 с) через 30, 60, 90 и 120 мин после введения антитела или носителя. Животных выдерживали под анестезией в течение приблизительно трех часов. Кумулятивное изменение кожного кровотока оценивали по площади под кривой зависимости потока от времени (AUC, равняется изменению потока, умноженному на изменение времени) для каждого отклика потока на электроимпульсную стимуляцию.
Как показано на фиг. 4А, увеличение кровотока, стимулируемое воздействием на подкожный нерв электрическими импульсами, в значительной степени ингибировалось в присутствии антитела 4901, 1 мг/кг, введеного внутривенно (в/в), при проведении электроимпульсной стимуляции через 60, 90 и 120 мин после введения антитела, и увеличение кровотока, стимулируемое воздействием на подкожный нерв электрическими импульсами, в значительной степени ингибировалось в присутствии антитела 4901, 10 мг/кг, введеного внутривенно (в/в), при проведении электроимпульсной стимуляции через 30, 60, 90 и 120 мин после введения антитела. Фиг. 4В показывает, что увеличение кровотока стимулируемое воздействием на подкожный нерв электрическими импульсами, в значительной степени ингибировалось в присутствии антитела 7Е9 (10 мг/кг, в/в введение) при проведении электроимпульсной стимуляции через 30, 60, 90 и 120 мин после введения антитела, и в присутствии антитела 8В6 (10 мг/кг, в/в введение) при проведении электроимпульсной стимуляции через 30 мин после введения антитела.
Эти данные указывают, что антитела 4901, 7Е9, 7D11 и 8В6 эффективно блокируют активность CGRP, измеряемую по вазодилатации кожи, индуцированной стимуляцией подкожного нерва крысы.
Пример 4. Характеризация антитела G1 против CGRP и его вариантов.
Аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи антитела G1 против CGRP представлены на фиг. 5. Для экспрессии и характеризации антитела G1 и его вариантов использовались следующие способы.
Используемый экспрессионный вектор. Экспрессия фрагмента Fab антител находилась под контролем промотора IPTG lacZ, схожего с описанным в Barbas (2001) Phage display: a laboratory manual, Cold Spring Harbor, NY, Cold Spring Harbor Laboratory Press pg. 2.10. Vector pComb3X), однако, модификации включали добавление и экспрессию следующих дополнительных доменов: человеческий константный домен легкой цепи каппа и константный домен СН1 человеческого иммуноглобулина IgG2, область С цепи гамма-2 Ig, белок с номером доступа Р01859; легкая цепь каппа иммуноглобулина (Homo sapiens), белок с номером доступа САА09181.
- 58 043536
Маломасштабное получение Fab. Из E.coli, трансформированных (с использованием или компетентных для электропорации клеток TG1 или компетентных для химических методов клеток Тор 10) с помощью библиотеки Fab, использовались отдельные колонии для инокуляции как мастер-планшета (агар LB + карбенициллин (50 мкг/мл) + 2% глюкозы), так и рабочего планшета (2 мл/лунку, 96 лунок/планшет), где каждая лунка содержала 1,5 мл LB + карбенициллин (50 мкг/мл) + 2% глюкозы. Планшет покрывали газопроницаемой клейкой герметизирующей пленкой (ABgene, Surrey, UK). Оба планшета инкубировали при 30°С в течение 12-16 ч; рабочий планшет энергично встряхивали. Мастерпланшет хранили при 4°С до необходимости, в то время как клетки с рабочего планшета осаждали центрифугированием (4000 об/мин, 4°С, 20 мин) и ресуспендировали в 1,0 мл LB + карбенициллин (50 мкг/мл) + 0,5 мМ IPTG для индуцирования экспрессии Fabs путем энергичного встряхивания в течение 5 ч при 30°С. Индуцированные клетки центрифугировали при 4000 об./мин, 4°С, в течение 20 мин, и ресуспендировали в 0,6 мл буфере HB-SEP Biacore (10 мМ Hepes pH 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005 об./об.% Р20). Лизис ресуспендированных в HB-SEP клеток проводили путем замораживания (-80°С) и затем оттаивания при 37°С. Клеточные лизаты центрифугировали при 4000 об/мин, 4°С, в течение 1 ч для отделения обломков от содержащих Fab супернатантов, которые затем фильтровали (0,2 мкм) с использованием аналитической системы для фильтрации 96-луночных планшетов Millipore MultiScreen Assay System 96-Well Filtration Plate и вакуумного манифолда. Для анализа профильтрованных супернатантов использовали Biacore путем их пропускания над CGRPs на сенсорном чипе. Выбранные по аффинности клоны, экспрессирующие Fabs, выделяли из мастер-планшета, и использовали для получения матричной ДНК для ГЩР, секвенирования и приготовления плазмид.
Крупномасштабное получение Fab. Для определения кинетических параметров, Fabs экспрессировали в больших масштабах следующим образом. Колбы Эрленмайера, содержащие 150 мл LB + карбенициллин (50 мкг/мл) + 2% глюкозы, инокулировали 1 мл закваски, представляющей собой ночную культуру выбранного по аффинности клона экспрессирующего Fab E.coli. Остаток культуры-закваски (ок. 3 мл) использовали для приготовления ДНК-плазмиды (QIAprep mini-prep, набор фирмы Qiagen) для секвенирования и дополнительных манипуляций. Большую культуру инкубировали при 30°С при энергичном встряхивании до достижения значения оптической плотности OD600hm, равного 1,0 (типично 12-16 ч). Осадок клеток собирали центрифугированием при 4000 об/мин, 4°С в течение 20 мин, и ресуспендировали в 150 мл LB + карбенициллин (50 мкг/мл) + 0,5 мМ IPTG. После 5 ч экспрессии при 30°С, клетки собирали центрифугированием при 4000 об/мин, 4°С в течение 20 мин, ресуспендировали в 10 мл буфера HBS-EP Biacore, и лизировали с использованием одного цикла замораживание (-80°С)/оттаивание (37°С). Осадок клеточных лизатов собирали центрифугированием при 4000 об/мин, 4°С в течение 1 ч, и супернатант собирали и фильтровали (0,2 мкм). Профильтрованные супернатанты загружали на колонки с сефарозным сорбентом Ni-NTA superflow sepharose (Qiagen, Valencia, CA), уравновешенные PBS, pH 8, затем промывали 5 объемами колонки PBS, pH 8. Индивидуальные Fabs элюировались в разные фракции с помощью PBS (pH 8) + 300 мМ имидазола. Фракции, содержащие Fabs, объединяли и диализировали в PBS, затем количественно определяли методом ИФА перед анализами аффинности.
Получение полного антитела. Для экспрессии полного антитела вариабельные участки тяжелой и легкой цепей клонировали в экспрессионные вектора млекопитающих и трансфицировали с использованием липофектамина в клетки HEK 293 для транзиентной экспрессии. Антитела очищали с помощью белка А с использованием стандартных способов.
Вектор pDb.CGRP.hFcGI представляет собой экспрессионный вектор, содержащий тяжелую цепь антитела G1, и является пригодным для транзиентной или стабильной экспрессии тяжелой цепи. Вектор pDb.CGRP.hFcGI имеет нуклеотидные последовательности, соответствующие следующим областям: промоторая область мышиного цитомегаловируса (нуклеотиды 7-612); синтетический интрон (нуклеотиды 613-1679); кодирующая область DHFR (нуклеотиды 688-1253); сигнальный пептид человеческого гормона роста (нуклеотиды 1899-1976); вариабельная область тяжелой цепи G1 (нуклеотиды 1977-2621); константная область тяжелой цепи человеческого IgG2, содержащая следующие мутации: А330Р331 на S330S331 (нумерация аминокислот в соответствии с последовательностью IgG2 дикого типа; см. Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624). Вектор pDb.CGRP.hFcGI был депонирован в АТСС 15 июля 2005 г., и ему был присвоен номер доступа ATCC PTA-6867.
Вектор pEb.CGRP.hKGI представляет собой экспрессионный вектор, содержащий легкую цепь антитела G1, и является пригодным для транзиентной экспрессии легкой цепи. Вектор pEb.CGRP.hKGI имеет нуклеотидные последовательности, соответствующие следующим областям: промоторая область мышиного цитомегаловируса (нуклеотиды 2-613); интрон человеческого EF-1 (нуклеотиды 614-1149); сигнальный пептид человеческого гормона роста (нуклеотиды 1160-1237); вариабельный участок легкой цепи антитела G1 (нуклеотиды 1238-1558); константная область человеческой цепи каппа (нуклеотиды 1559-1882). Вектор pEb.CGRP.hKGI был депонирован в АТСС 15 июля 2005 г., и ему был присвоен номер доступа ATCC PTA-6866.
Анализ Biacore для определения аффинности. Аффинности моноклонального антитела G1 и его вариантов определяли при 25 или 37°С с использованием системы поверхностного плазмонного резонанса (SPR) Biacore3000™ (Biacore, INC, Piscataway NJ). Аффинность определяли путем связывания биотини
- 59 043536 лированного на N-конце CGRP или фрагментов с предварительно иммобилизированным стрептавидином (сенсорный чип SA) и измерения кинетики связывания фрагментов Fab антитела G1 или вариантов, титруемых по CGRP или фрагменту на чипе. Все анализы Biacore проводили в подвижном буфере HBS-EP (10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% об./об. полисорбата Р20). Поверхности с CGRP готовили путем разведения N-биотинилированного CGRP до концентрации менее 0,001 мг/мл в буфере HBS-EP и впрыскивания на сенсорный чип SA с использованием переменных значений времени контакта. Поверхности с низкой емкостью, соответствующие уровням связывания <50 единиц отклика (RU), использовались для кинетических исследований с высоким разрешением, в то время как поверхности с высокой емкостью (около 800 RU связанного CGRP) использовались исследований концентраций, скрининга и определений аффинности в растворе. Кинетические данные были получены путем серийного разведения Fab антитела G1 с двух- или трехкратным шагом в диапазоне концентраций 1 мкм - 0,1 нМ (соответствует диапазону 0,1-10х расчетных KD). Образцы типично впрыскивают на 1 мин при объемном расходе 100 дл/мин и время наблюдения диссоциации составляло по меньшей мере 10 мин. После каждого цикла связывания, поверхности регенерировали 25 мМ NaOH в 25% об./об. этаноле, что позволяло проводить сотни циклов измерений. Полную концентрационную зависимость, полученную в результате титрования (типично для двух параллельных экспериментов) глобально аппроксимировали уравнением для модели 1:1 связывания Лэнгмюра с использованием программы BIAevaluation. В результате этого получали уникальную пару кинетических констант скорости ассоциации и диссоциации (соответственно, kon и koff) для каждого связывающего взаимодействия, отношение которых дает константу равновесной диссоциации (KD=koff/kon). Аффинности (значения KD), определенные таким образом, приведены в табл. 6 и 7.
Анализ связывающих взаимодействий с высокой разрешающей способностью для очень низких скоростей диссоциации. Для взаимодействий с крайне низкими скоростями диссоциации (в частности, для связывания Fab антитела G1 с человеческим α-CGRP на чипе при 25°С) аффинности получали с помощью двухстадийного эксперимента. Использовали описанный выше протокол со следующими модификациями. Константу скорости ассоциации (kon) определяли путем впрыскивания серийных растворов для титрования с 2-кратным разбавлением (два параллельных измерения) в диапазоне концентраций 550 нМ-1 нМ в течение 30 с при объемном расходе 100 мкл/мин и продолжительности фазы диссоциации всего 30 с. Константу скорости диссоциации (koff) определяли путем впрыскивания трех концентраций (высокой, средней и низкой) из этой же серии растворов для титрования с двумя параллельными измерениями в течение 30 с при продолжительности фазы диссоциации 2 ч. Аффинность (KD) каждого взаимодействия получали путем объединения значений kon и koff, полученных в обоих типах экспериментов, как показано в табл. 5.
Определение аффинности раствора методом Biacore. Аффинность антитела G1 в растворе для крысиного α-CGRP и F37A (19-37) человеческого α-CGRP измеряли методом Biacore при 37°С. Использовали поверхность CGRP-чипа с высокой емкостью (для детектирования был выброан высокоаффинный человеческий α-CGRP) и подвижный буфер HBS-EP подавали с объемным расходом 5 мкл/мин. Фрагмент Fab антитела G1 при постоянной концентрации 5 нМ (которая должна быть близкой к или ниже ожидаемого для взаимодействий в растворе значения KD) предварительно инкубировали с конкурирующим пептидом, представляющим собой крысиный α-CGRP или F37A (19-37) человеческого α-CGRP, при конечных концентрациях в диапазоне от 1 нМ до 1 мкМ с 3-кратными серийными разбавлениями. Растворы Fab антитела G1, в отсутствие или при присутствии в растворе конкурирующего пептида, впрыскивали на CGRP на чипе и контролировали истощение связывающих откликов, детектируемых на поверхности чипа, в результате конкуренции в растворе. Такие связывающие отклики преобразовывали в концентрации свободного Fab с использованием калибровочной кривой, которую строили путем титрования отдельно взятого Fab антитела G1 (5, 2,5, 1,25, 0,625, 0,325 и 0 нМ) на CGRP на чипе. Строили график зависимости концентраций свободного Fab от концентрации конкурирующего в растворе пептида, используемого для получения каждой точки данных, и аппроксимоировали уравнением для модели аффинности в растворе с использованием программы BIAevaluation. Аффинности в растворе, определенные (косвенно) таким образом, представлены в табл. 5 и 7 и использовались для подтверждения аффинностей, полученных при впрыскивании Fabs непосредственно на N-биотинилированные CGRPs на SAчипе. Близкое совпадение между значениями аффинности, определенными этими двумя способами, подтверждает, что фиксация N-биотинилированного варианта CGRP на чипе не изменяет его нативную активность связывания в растворе.
Табл. 5 ниже показывает аффинности связывания антитела G1 с человеческим α-CGRP, человеческим β-CGRP, крысиным α-CGRP и крысиным β-CGRP, определенные методом Biacore путем пропускания потока фрагментов Fab над N-биотинилированным CGRP на SA-чипе. Для того чтобы лучше разделить аффинности связывающих взаимодействий, имеющих крайне низкие скорости диссоциации, аффинности были также определены путем проведения двухстадийного эксперимента, дополняющего это направление анализа, и была также определена аффинность взаимодействия крысиного α-CGRP в растворе (как описано выше). Близкое совпадение аффинностей, измеренных в обеих ориентациях анализа,
- 60 043536 подтверждает, что аффинность связывания нативного крысиного α-CGRP в растворе не изменяется, если его N-биотинилировать и закрепить на SA-чипе.
Таблица 5. Аффинности связывания Fabs антитела G1, определенные путем титрования CGRPs на чипе
CGRP на чипе | Темп. (°C) | kon (1/Мс) | Uf (1/с) | KD (нМ) |
Человеческий a-CGRP | 25 | 1,86 х 105 | 7,80 х 10'6 | 0,042 (7 %, п=4)* |
Человеческий a-CGRP | 37 | 5,78 х 105 | 3,63 х 10'5 | 0,063 (4 %, п=2)* |
Человеческий β-CGRP | 37 | 4,51 х105 | 6,98 х 10'5 | 0,155 |
Крысиный a-CGRP | 25 | 5,08 х 104 | 6,18 х 10'5 | 1,22 (12 %, п=2)* |
Крысиный a-CGRP | 37 | 1,55 х 105 | 3,99 х 10'4 | 2,57* (KD в растворе=10 (50 %, п=4)** |
Крысиный β-CGRP | 37 | 5,16 х 105 | 7,85 х 10'5 | 0,152 |
*Аффинности α-CGRPs (крысиного и человеческого) определяли путем проведения двухстадийного эксперимента с высокой разрешающей способностью, в котором фазу диссоциации контролировали в течение 2 ч (значения к^, koff, и KD являются средними для и параллельных измерений, стандартное отклонение выражено как процент дисперсии). Аффинности для β-CGRPs (крысиного и человеческого) определяли путем глобального анализа с использованием фазы диссоциации продолжительностью всего 20 мин, который не позволял проводить точное количественное определение из крайне (низких) скоростей диссоциации (их скорости диссоциации, вероятно, ниже, чем указано в данном документе, поэтому их аффинности, вероятно, имеют еще более высокие значения). Fab антитела G1 диссоциировал крайне медленно со всеми CGRPs (за исключением крысиного α-CGRP) и имел скорости диссоциации, приближающиеся к пределу разрешения анализа Biacore (особенно при 25°С).
**Аффинность в растворе, определенная по измерениям истощения откликов связывания, детектируемых для CGRP на чипе по отношению к Fab антитела G1, предварительно инкубированному с раствором конкурента крысиного a-CGRP.
В табл. 6 ниже приведены антитела, имеющие вариации аминокислотной последовательности по сравнению с антителом G1, и их аффинности по отношению к крысиному α-CGRP и человеческому аCGRP. Все аминокислотные замещения вариантов, представленных в табл. 6, описываются по сравнению с последовательностью G1. Аффинности связывания фрагментов Fab определяли методом Biacore путем пропускания их потока над CGRPs на SA-чипе.
Таблица 6. Аминокислотные последовательности и данные по аффинностям связывания для вариантов антитела G1, определенным при 37°С методом Biacore
Клон | L1 | L2 | Н2 | HC-FW3 | а-крысиный koff (1/с) | акрысиный KD (нМ) | а- человеческий koff (1/с) | а- человеческий KD (нМ) |
G1 | 3,99x102 | 2,57 | 3,63 х102 | 0,063 | ||||
Ml | A100L | Ι,ΙΟχΙΟ'3 | 1,73х10'4 | |||||
М2 | L99A A100R | 2,6x102 | 58 | ЗДхЮ'4 | 3 | |||
М3 | L99A A100S | 2£х102 | 61 | 2Дх10~4 | 1,7 | |||
М4 | L99A A100V | 1,52х10'3 | 84,4 | 6,95x1ο'5 | 0,43 | |||
М5 | L99A | 7,35х10'4 | 40,8 | 3,22х10'5 | 0,20 |
-61 043536
A100Y | ||||||||
Мб | L99N | 7,84х10'4 | 43,6 | 1,ЗЗхЮ'4 | 0,83 | |||
М7 | L99N А100С | 9,18х10'4 | 51,0 | 2,43х10'4 | 1,52 | |||
М8 | L99N A100G | 7,45х10'4 | 41,4 | 9,20x1ο'5 | 0,58 | |||
М9 | L99N A100Y | н.о. | н.о. | Ι,ΟΟχΙΟ'5 | 0,06 | |||
М10 | L99S A100S | 1,51х10'3 | 83,9 | 1,73х10'4 | 1,08 | |||
МН | L99S А100Т | 4,83х10'3 | 268,3 | 2,83х10'4 | 1,77 | |||
М12 | L99S A100V | 1,94х10'3 | 107,8 | Ι,ΟΙχΙΟ'4 | 0,63 | |||
М13 | L99T A100G | 1,84х10'3 | 102,2 | 1,86х10'4 | 1,16 | |||
М14 | L99T А100К | н.о. | н.о. | Ι,ΟΟχΙΟ'5 | 0,06 | |||
М15 | L99T А100Р | 1,15х10'3 | 63,9 | 1,58х10'5 | 0,10 | |||
М16 | L99T A100S | 9,96х10'4 | 55,3 | 1,65х10'4 | 1,03 | |||
М17 | L99T A100V | 2,06х10'3 | 114,4 | 1,85х10'4 | 1,16 | |||
М18 | L99V A100G | 1,22х10'3 | 67,8 | 7,03х10'5 | 0,44 | |||
М19 | L99V A100R | н.о. | н.о. | Ι,ΟΟχΙΟ'5 | 0,06 | |||
М20 | R28W | L99R A100L | 1,44х10'3 | 80,0 | 1,36х10'4 | 0,85 | ||
М21 | R28W | L99S | 195x101 | 151 | 142x101 | 123 | ||
М22 | R28W | L99T | Ι,ΙΟχΙΟ'3 | 61,1 | 1,16х10'4 | 0,73 | ||
М23 | R28G | L99T A100V | 7,99х10'4 | 44,4 | 1,30х10'4 | 0,81 | ||
М24 | R28L | L99T A100V | 1,04х10'3 | 57,8 | 1,48х10'4 | 0,93 | ||
М25 | R28N | L99T A100V | 14x101 | 76 | 1,4х10'4 | 1,3 | ||
М26 | R28N | A57G | L99T A100V | 9,24х10'4 | 51,3 | 1,48х10'4 | 0,93 | |
М27 | R28N ТЗОА | L99T A100V | 3,41х10'3 | 189,4 | 3,57х10'4 | 2,23 | ||
М28 | R28N T30D | E54R A57N | L99T A100V | 1,25х10'3 | 69,4 | 9,96х10'5 | 0,62 | |
М29 | R28N T30G | L99T A100V | 3,59х10'3 | 199,4 | 3,80х10'4 | 2,38 | ||
МЗО | R28N T30G | Е54К А57Е | L99T A100V | 6,38х10'3 | 354,4 | 5,90х10'4 | 3,69 | |
М31 | R28N T30G | Е54К A57G | L99T A100V | 3,61х10'3 | 200,6 | 3,47х10'4 | 2,17 | |
М32 | R28N T30G | Е54К А57Н | L99T A100V | 2,96х10'3 | 164,4 | 2,71х10'4 | 1,69 | |
МЗЗ | R28N T30G | Е54К A57N | L99T A100V | 9,22х10'3 | 512,2 | 7,50х10'4 | 4,69 |
- 62 043536
S58G | ||||||||
M34 | R28N T30G | E54K A57N S58T | L99T A100V | 2,17xl0'3 | 120,6 | 6,46xl0'4 | 4,04 | |
М3 5 | R28N T30G | E54K A57S | L99T A100V | 3,99xl0'3 | 221,7 | 3,39xl0'4 | 2,12 | |
M36 | R28N T30R | L99T A100V | 4,79xl0'3 | 266,1 | 2,39xl0'4 | 1,49 | ||
M37 | R28N T30S | A57G | L99T A100V | l,45xl0'3 | 80,6 | 2,26xl0'4 | 1,41 | |
М3 8 | R28N T30W | L99T A100V | 5,11x10 s | 283,9 | 2,18xl0'4 | 1,36 | ||
М3 9 | R28N | G50A L56T | A57N S58Y | L99T A100V | 9,95xl0'3 | 552,8 | 4,25xl0'4 | 2,66 |
M40 | R28N | G50A L56T | E54K A57L | L99T A100V | 0,36 | 20000,0 | l,28xl0'3 | 8,00 |
M41 | R28N | G50A L56T | E54K A57N E64D | L99T A100V | 4,53xlO'3 | 251,7 | 2,10xW4 | 1,31 |
M42 | R28N | G50A L56T | E54K A57N H61F | L99T A100V | 7,52xl0'3 | 417,8 | 4,17xl0'4 | 2,61 |
M43 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58C | L99T A100V | 4,53xl0'3 | 251,7 | 2,63xl0'4 | 1,64 |
M44 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58E | L99T A100V | 6,13xl0'3 | 443 | 2,10xl0~4 | 2,05 |
M45 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58E E64D | L99T A100V | 5.58xl0'3 | 259 | 2.11X10'4 | 1,85 |
M46 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58E H61F | L99T A100V | 2,94xl0'3 | 163,3 | 5,39xl0'4 | 3,37 |
M47 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58G | L99T A100V | 8,23xl0'3 | 457,2 | 3,32xl0'4 | 2,08 |
M48 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58L | L99T A100V | 0,0343 | 1905,6 | 8,42xl0'4 | 5,26 |
M49 | R28N | G50A L56T | E54K A57N S58Y H61F | L99T A100V | 0,0148 | 822,2 | 5,95xl0'4 | 3,72 |
M50 | R28N | G50A L56T | E54K A57R | L99T A100V | 5,30xl0'3 | 294,4 | 4,06xl0'4 | 2,54 |
M51 | R28N | L56I | E54K A57G | L99T A100V | l,18xl0'3 | 65,6 | l,31xl0'4 | 0,82 |
M52 | R28N | L56I | E54K A57N S58A | L99T A100V | 2,29xl0'3 | 127,2 | 2,81xl0'4 | 1,76 |
M53 | R28N | L56I | E54K A57N | L99T A100V | l,91xl0'3 | 106,1 | 3,74xl0'4 | 2,34 |
- 63 043536
S58G | ||||||||
M54 | R28N T30A | G50A | Е54К A57N S58P | L99T A100V | 2,16х10'3 | 120,0 | 1,79х10'3 | 11,19 |
M55 | R28N ТЗОА | L56S | Е54К A57N S58E E64D | L99T A100V | 5,85х10'3 | 325,0 | 4,78х10'4 | 2,99 |
M56 | R28N T30D | L56S | Е54К A57N H61F | L99T A100V | 9,35х10'3 | 519,4 | 4,79х10'4 | 2,99 |
M57 | R28N T30D | L56S | Е54К A57N S58E | L99T A100V | 0,0104 | 1,200 | 122x101 | 3,08 |
M58 | R28N T30D | L56S | Е54К A57N S58I H61F | L99T A100V | Нет связывания | н.о. | 1,95х10'3 | 12,19 |
M59 | R28N T30D | L56S | Е54К A57N S58N H61F | L99T A100V | 0,0123 | 683,3 | 5,24х10'4 | 3,28 |
M60 | R28N T30D | L56S | Е54К A57N S58R H61F | L99T A100V | 0,0272 | 1511,1 | 9,11х10'4 | 5,69 |
M61 | R28N T30G | А51Н | E54Q A57N H61F | L99T A100V | 5,21х10'3 | 289,4 | 4,59х10'4 | 2,87 |
M62 | R28N T30G | А51Н L56T | Е54К A57N S58E | L99T A100V | 175x101 | 242 | 157x101 | 5,86 |
M63 | R28N T30G | G50A | Е54К A57N S58T | L99T A100V | 2,65х10'3 | 147,2 | 1,50х10'3 | 9,38 |
M64 | R28N T30G | G50A | Е54К A57N S58V | L99T A100V | 0,0234 | 1300,0 | 1,32х10'3 | 8,25 |
M65 | R28N T30G | G50A L56I | Е54К А57С | L99T A100V | 4,07х10'3 | 226,1 | 8,03х10'4 | 5,02 |
M66 | R28N T30G | L56I | Е54К А57Е | L99T A100V | 5,11х10'3 | 283,9 | 5,20х10'4 | 3,25 |
M67 | R28N T30G | L56I | Е54К A57F | L99T A100V | 1,71х10'3 | 95,0 | 8,20х10'4 | 5,13 |
M68 | R28N T30G | L56I | Е54К A57N S58D E64D | L99T A100V | 6,76х10'3 | 375,6 | 4,28х10'4 | 2,68 |
M69 | R28N T30G | L56I | Е54К A57N S58E | L99T A100V | 1,81х10'3 | 100,6 | 7,ЗЗх10'4 | 4,58 |
M70 | R28N T30G | L56I | Е54К A57S | L99T A100V | 6,07х10'3 | 337,2 | 5,59х10'4 | 3,49 |
M71 | R28N T30G | L56I | Е54К A57Y | L99T A100V | 2,12х10'3 | 117,8 | 1,28х10'3 | 8,00 |
- 64 043536
М72 | R28N T30G | L56S | Е54К | L99T A100V | 3,95х10'3 | 219,4 | 4,00х10'4 | 2,50 |
М73 | R28N T30G | L56S | Е54К A57N S58Y E64D | L99T A100V | 3,00х10'3 | 166,7 | 2,55х10'4 | 1,59 |
М74 | R28N T30G | L56S | Е54К A57S | L99T A100V | 6,ОЗхЮ'3 | 335,0 | 5,97х10'4 | 3,73 |
М75 | R28N T30G | L56S | Е54К A57V | L99T A100V | 1,87х10'2 | 1038,9 | 1,16х10'3 | 7,25 |
М76 | R28N T30S | G50A L56T | A57G | L99T A100V | 1,16х10'3 | 64,4 | 3,64х10'4 | 2,28 |
М77 | R28N T30S | G50A L56T | Е54К A57D | L99T A100V | 0,0143 | 794,4 | 4,77х10'4 | 2,98 |
М78 | R28N T30S | G50A L56T | Е54К A57N S58T | L99T A100V | 0,167 | 9277,8 | 1,31х10'3 | 8,19 |
М79 | R28N T30S | G50A L56T | Е54К А57Р | L99T A100V | 0,19 | 10555,6 | 1,29х10'3 | 8,06 |
М80 | R28N T30S | L56I | Е54К A57N S58V | L99T A100V | 0,0993 | 5516,7 | 2,09х10'3 | 13,06 |
М81 | R28N T30S | L56S | Е54К A57N S58E | L99T A100V | 4,29xlO'J | 238,3 | 4,90х10'4 | 3,06 |
М82 | R28N T30V | А51Н L56T | A57N | L99T A100V | 6,99х10'3 | 388,3 | 8,77х10'4 | 5,48 |
М83 | R28N T30V | А51Н L56T | Е54К A57N S58M H61F | L99T A100V | Нет связывания | н.о. | 9,ЗЗх10'4 | 5,83 |
М84 | R28N T30V | А51Н L56T | E54N A57N | L99T A100V | 1,76х10'2 | 977,8 | 1,08х10'3 | 6,75 |
Все CDR, включая CDR по системам Kabat и Chothia. Аминокислотные остатки пронумерованы последовательно (см. фиг. 5). Все клоны имеют последовательности L3+H1+H3, идентичные G1.
KD=koff/kon. Все значения koff определяли в режиме скрининга, за исключением выделенных подчеркиванием, которые были получены путем глобального анализа рядов концентраций Fab (G1 анализировали в режиме высокого разрешения). Таким образом, выделенные подчеркиванием значения KD были определены экспериментально путем измерений kon. Другие значения kon были приняты равными значениям для М25.
Н.о. - не определено.
Для определения эпитопа человеческого α-CGRP, который распознается антителом G1, использовали вышеописанные анализы Biacore. Человеческий α-CGRP был приобретен в виде Nбиотинилированного варианта для обеспечения способности к связыванию с высокой аффинностью с сенсорными чипами SA. Определяли связывание фрагмента Fab G1 с человеческим α-CGRP на чипе в отсутствие или в присутствии пептида CGRP. Типично, раствор пептид/Fab с молярным соотношением 2000:1 (например, 10 мкМ пептида в 50 нМ Fab G1) вводили впрыскиванием на человеческий α-CGRP на чипе. Фиг. 6 показывает процент связывания, блокируемый конкурентным пептидом. Данные, представленные на фиг. 6, показывают, что пептидами, блокирующими 100% связывания Fab G1 с человеческим α-CGRP, являются 1-37 (WT (дикого типа)), 8-37, 26-37, Р29А (19-37), К35А (19-37), K35E (19-37), и К35М (19-37) человеческого α-CGRP; 1-37 β-CGRP (WT); 1-37 крысиного α-CGRP (WT); и 1-37 крысиного β-CGRP (WT). Все эти пептиды амидированы на С-конце. Пептиды F37A (19-37) и 19-37 (последний не амидирован на С-конце) человеческого α-CGRP также блокировали около от 80 до 90% связывания Fab G1 с человеческим α-CGRP. Пептид 1-36 (не амидированный на С-конце) человеческого αCGRP блокировал около 40% связывания Fab G1 с человеческим α-CGRP. Пептидный фрагмент 19-36 (амидированный на С-конце) человеческого α-CGRP; пептидные фрагменты 1-13 и 1-19 человеческого α-CGRP (оба не амидированы на С-конце); и человеческие амилин, кальцитонин и адреномедуллин (все амидированы на С-конце) не конкурируют со связыванием Fab G1 с человеческим α-CGRP на чипе. Эти данные демонстрируют, что G1 нацелен на С-концевой эпитоп CGRP, и что как идентичность самого крайнего остатка (F37), так и его амидирование важны для связывания.
Были также определены аффинности связывания Fab G1 с вариантами человеческого α-CGRP (при 37°С). В табл. 7 ниже приведены аффинности, измеренные непосредственно путем титрования связывания Fab G1 с N-биотинилированным человеческим α-CGRP и вариантами на чипе. Данные в табл. 7 показывают, что антитело G1 связывается с С-концевым эпитопом, причем F37 и G33 являются наиболее важными остатками. G1 не связывается с CGRP, если на С-конце (амидированном) добавляется дополни
- 65 043536 тельный аминокислотный остаток (аланин).
Таблица 7. Аффинности связывания Fab G1 с человеческим α-CGRP и вариантами, измеренные при 37°С (их аминокислотные последовательности см. в табл. 4)
CGRP на чипе | kon (1/Мс) | koff(l/c) | KD (нМ) |
1-37 (WT) (дикий тип) | 4,68x1ο5 | 7,63x1ο'5 | 0,16 (высокая разрешающая способность, KD = 0,06) |
19-37 | 4,60х105 | 7,30х10'5 | 0,16 |
25-37 | 3,10χ105 | 8,80х10'5 | 0,28 |
F27A (25-37) | 3,25х105 | 1,24х10'4 | 0,38 |
V28A (25-37) | 3,32х105 | 9,38х10'5 | 0,28 |
Р29А (25-37) | 2,26х105 | 1,78х10'4 | 0,79 |
Т30А (25-37) | 1,79х105 | 8,41х10'5 | 0,47 |
N31A(25-37) | 2,17х105 | 1,14х10'4 | 0,53 |
V32A (25-37) | 2,02х105 | 3,46х10'4 | 1,71 |
G33A (25-37) | 2,07х105 | 0,0291 | 141 |
S34A (25-37) | 2,51х105 | 7,64х10'4 | 3,04 |
К35А (19-37) | 2,23х105 | 2,97х10'4 | 1,33 |
К35Е (19-37) | 5,95х104 | 5,79х10'4 | 9,73 |
К35М (19-37) | 2,63х105 | 1,34х10'4 | 0,51 |
K35Q (19-37) | 1,95х105 | 2,70х10'4 | 1,38 |
F37A (25-37) | 8,90х104 | 8,48х10'3 | 95 (KD в растворе =172 нМ) |
38А (25-38А) | - | - | Связывание не детектируется |
Приведенные выше данные указывают, что эпитоп, с которым связывается антитело G1, расположен в С-концевой области человеческого α-CGRP, и аминокислоты 33 и 37 человеческого α-CGRP являются важными для связывания антитела G1. Для связывания также важно амидирование остатка F37.
Пример 5. Эффект антагонистического антитела G1 против CGRP на вазодилатацию кожи, индуцированную стимуляцией подкожного нерва крысы.
Для тестирования антагонистической активности антитела G1 против CGRP, эффект антитела на вазодилатацию кожи стимуляцией подкожного нерва крысы тестировали с использованием крысиной модели, описанной в примере 3. Вкратце, крыс поддерживали под анестезией с помощью 2% изофлурана. Бретилия тозилат (30 мг/кг, внутривенное (в/в) введение) давали в начале эксперимента для минимизации вазоконстрикции вследствие сопутствующей стимуляции симпатических волокон подкожного нерва. Температуру тела поддерживали равной 37°С путем использования ректального зонда, подключенного с помощью термостата к грелке-матрацу с контролируемой температурой. Подкожный нерв правой задней лапы обнажали хирургически, перерезали проксимально и накрывали полимерной пленкой для предотвращения высыхания. Лазерный допплеровский зонд помещали на медиодорсальную часть шкуры задней лапы, которая является областью, иннервируемой подкожным нервом. Кожный кровоток, измеряемый как поток кровяных клеток, контролировали с помощью лазерного доплеровского флоуметра. В экспериментах по определению эффектов антитела на протяжении двух часов после инъекции через от тридцати до сорока пяти минут после инъекции бретилия тозилата, после устанавления стабильного базового потока (отклонения менее 5%) в течение по меньшей мере 5 мин, нерв помещали на платиновые биполярные электроды и электрически стимулировали (2 Гц, 10 В, 1 мс, в течение 30 с), и (стимуляцию) повторяли через 20 мин. Среднее значение отклика величины кровотока на эти две стимуляции использовали для определения базового отклика (момент времени 0) на электрическую стимуляцию. Затем вводили внутривенно (в/в) антитело G1 (1 или 10 мг/кг) или носитель (PBS с 0,01% Tween 20 в объеме, равном 10 мг/кг G1). Нерв затем стимулировали (2 Гц, 10 В, 1 мс, в течение 30 с) в моменты времени 30, 60, 90 и 120 мин после введения антитела. Животных выдерживали под анестезией в течение приблизительно трех часов. Кумулятивное изменение кожного кровотока оценивали по площади под кривой зависимости потока от времени (AUC, равняется изменению потока, умноженному на изменение времени) для каждого отклика потока на электроимпульсную стимуляцию.
Как показано на фиг. 7, увеличение кровотока, стимулируемое воздействием на подкожный нерв электрическими импульсами, в значительной степени ингибировалось в присутствии антитела G1 в количестве 1 мг/кг (в/в введение) по сравнению с носителем, при электрической стимуляции подкожного нерва через 90 мин после введения антитела. Увеличение кровотока, стимулируемое воздействием на подкожный нерв электрическими импульсами, в значительной степени ингибировалось в присутствии антитела G1 в дозе 10 мг/кг (в/в введение) по сравнению с носителем, при электрической стимуляции подкожного нерва через 90 мин и 120 мин после введения антитела.
В экспериментах по определению эффектов антител в более отдаленные моменты времени при анализе на подкожной вене, крысам вводили в/в инъекцией указанные дозы антитела за 24 ч или 7 дней до подготовки животного к стимуляции подкожного нерва, как описано выше. В этих экспериментах было невозможно установить базовый отклик индивидуальных крысы на электроимпульсную стимуляцию перед введением дозы, поэтому группы, получавшие лечение, сравнивали с животными, которым вводили носитель (PBS, 0,01% Tween 20) в моменты времени 24 ч или 7 дней.
- 66 043536
Как показано на фиг. 8А и 8В, увеличение кровотока в дорсомедиальной области кожи задней лапы, вызванное стимуляцией подкожного нерва, в значительной степени ингибировалось в группах животных, получавших 10 мг/кг или 3 мг/кг G1 в момент времени за 24 ч или 7 дней до стимуляции по сравнению с группами носителя, введение которым осуществлялось в те же моменты времени.
На фиг. 8С изображен анализ методом аппроксимации кривой данных зависимости отклик-доза, представленных на фиг. 8А и 8В, для определения дозы, требуемой для концентрации, обеспечивающей 50% от максимально возможного эффекта (EC50). Значение ЕС50 для момента времени 24 ч равно 1,3 мг/кг, и ЕС50 для момента времени 7 дней имеет немного более низкое значение (0,8 мг/кг).
Пример 6. Острый эффект антагонистического антитела mu7E9 против CGRP в анализе на артерии твердой мозговой оболочки (закрытое черепное окно).
Модель закрытого черепного окна. Целью этого эксперимента было определение острого эффекта антагонистических антител против CGRP и его сравнение с острым эффектом антагониста рецептора CGRP BIBN4096BS. Эксперименты проводили, как описано выше (Williamson et al., Cephalalgia 17(4):518-24 (1997)), со следующими модификациями. Крыс Sprague Dawley (300-400 г) анестезировали с помощью 70 мг/кг пентобарбитала i.p. (интраперитонеально). Анестезию поддерживали с помощью 20 мг/кг/ч пентобарбитала в/в (внутривенно). Крысам вводили канюлю в яремную вену для доставки всех лекарственных препаратов. Кровяное давление контролировали с помощью зонда (катетер mikro-tip, Millar Instruments), который вводили через бедренную артерию в брюшную аорту. Крысам проводили трахеотомию и частоту дыхания поддерживали на уровне 75 вдохов в минуту при объеме 3,5 мл. После фиксации головы в стереотактическом инструменте и снятия скальпа, окно размером 2x6 мм в левой теменной области латерально непосредственно рядом с сагиттальным швом было сделано путем истончения кости с помощью бормашины. С помощью микроманипулятора платиновый биполярный электрод опускали на поверхность и накрывали тяжелым минеральным маслом. В латеральном положении по отношению к электродному окну создавали другое окно размером 5x6 мм, заполненное тяжелым минеральным маслом, через которое непрерывно контролировали диаметр ветви средней менингеальной артерии (ММА) с помощью ПЗС-камеры и анализатора размеров видеоизображения (Living Systems). После подготовки, крысы отдыхали в течение не менее 45 мин. Устанавливали базовый отклик на электрическую стимуляцию (15 В, 10 Гц, импульсы 0,5 мс, 30 с), и затем крысам вводили в/в тестируемое соединение (10 мг/кг mu7E9, 300 мкг/кг BIBN4096BS или PBS 0,01% Tween 20). Дополнительную электрическую стимуляцию проводили в моменты времени 5 (BIBN4096BS), 30, 60, 90 и 120 мин после введения дозы. Все данные регистрировали с использованием прикладной программы Chart (ADInstruments).
Как показано на фиг. 9, mu7E9 в дозе 10 мг/кг в значительной степени блокирует дилатацию ММА, вызываемую стимуляцией электрическим полем в течение 60 мин после введения дозы, и поддерживает эффект на протяжении анализа (120 мин). Для сравнения, BIBN4096BS блокирует дилатацию ММА через 5 мин после введения дозы, но эффект полностью исчезал за 90 мин. Величина блокировки сопоставима для BIBN4096BS и mu7E9.
Пример 7. Хронический эффект антагонистического антитела G1 против CGRP в артерии твердой мозговой оболочки (закрытое черепное окно) assay.
Целью этого эксперимента было определение того, будет ли антитело против CGRP продолжать блокировать электростимулируемую дилатацию ММА через 7 дней после введения дозы. Подготовка крыс была идентична вышеописанному острому эксперименту (пример 6) со следующими исключениями. Крысам вводили путем в/в инъекции (10, 3 или 1 мг/кг G1) за 7 дней до процедуры создания закрытого черепного окна и стимуляции. Было невозможно установить базовый дилатационный отклик на электрическую стимуляцию до введения дозы, как и в остром эксперименте, поэтому группы, получавшие антитело, сравнивали с дилатацией ММА в контрольной группе, получавшей носитель (PBS, 0,01% Tween 20). После того как крысам позволяли отдохнуть не менее 45 мин, твердую мозговую оболочку электрически стимулировали с интервалами 30 мин. Стимуляцию проводили при 2,5, 5, 10, 15 и 20 В, все при 10 Гц, импульсами по 0,5 мс в течение 30 с.
Как показано на фиг. 10, G1 в дозах 10 и 3 мг/кг в значительной степени блокировал дилатацию ММА, вызываемую электрической стимуляцией в диапазоне значений от 10 до 20 В. Эти данные демонстрируют, что G1 может блокировать стимулируемую электрическими импульсами дилатацию ММА на протяжении до 7 дней после введения дозы.
Пример 8. Модель прилива крови после отмены морфина.
Модель отмены морфина у крыс представляет собой принятую модель механизмов приливов крови при менопаузе на грызунах (Sipe et al., Brain Res. 1028(2): 191-202 (2004); Merchenthaler et al., Maturitas 30:307-316 (1998); Katovich et al., Brain Res. 494:85-94 (1989); Simpkins et al., Life Sciences 32:1957-1966 (1983)). В основном, зависимость крыс от морфина создают путем имплантации гранул морфина под кожу. После установления зависимости животным делают инъекцию налоксона (опиоидный антагонист), который немедленно вызывает у них абстинентный синдром. Этот абстинентный синдром сопровождается повышением температуры кожи, снижением температуры внутри тела, повышением частоты сердечных сокращений и повышением уровня лютеинизирующего гормона в сыворотке. Все эти признаки
- 67 043536 по величине и времени проявления схожи с наблюдаемыми при человеческих приливах крови (Simpkins et al., Life Sciences 32:1957-1966 (1983)). Кроме того, если крысам вводят эстрадиол перед индукцией абстинентного синдрома, то симптомы прилива крови уменьшаются (Merchenthaler et al., Maturitas
30:307-316 (1998)). Именно поэтому считается, что модель отмены морфина имитирует клинический прилив крови.
Крыс с удаленными яичниками заказывали у фирмы Charles River Laboratories. Не ранее чем через 7 дней после овариэктомии вызывали морфиновую зависимость путем имплантации подкожно гранулы морфина (75 мг морфиновой основы). Через два дня имплантировали еще 2 гранулы. На следующий день крысам вводили инъекцией внутривенно 10 мг/кг 4901 [**] или носитель (PBS, 0,01% tween). Через два дня после второй имплантации гранул крыс анестезировали кетамином (90 мг/кг) и слегка ограничивали в движениях (lightly restrained). Термопару для измерения температуры поверхности тела закрепляли клейкой лентой у основания хвоста и ректальную термопару использовали для измерения внутренней температуры тела. Данные регистрировали с использованием прикладной программы Chart (ADInstruments). После записи в течение 15 мин стабильной базовой температуры вводили инъекцией налоксон (1 мг/кг) подкожно. Температуру регистрировали непрерывно в течение следующих 60 мин. Результаты представлены на фиг. 11А и 11В.
Пример 9. Лечение хронической мигрени.
Мужчина в возрасте 45 лет был идентифицирован как страдающий от хронической мигрени на протяжении по меньшей мере трех месяцев. Определение наличия хронической мигрени проводилось путем изучения истории частых головных болей, позволяющих предположить проявление хронической мигрени (например, 15 дней в месяц) на протяжении по меньшей мере трех месяцев перед проведением скрининга. Подтверждение частоты головной боли осуществлялось путем последующего сбора базовой информации, демонстрирующей наличие головных болей по меньшей мере в 15 дней, причем по меньшей мере 8 дней в месяц отвечали любому одному из следующих критериев: i. соответствие характеристикам приступа мигрени; и/или ii. предваряются или сопровождаются мигреневой аурой.
Для снижения частоты случаев мигрени у субъекта, субъекту вводили дозу 225 мг антагонистического антитела против CGRP (например, антитела G1). Антагонистическое антитело против CGRP поставлялось в виде жидкой композиции в концентрации 150 мг/мл. Дозу 225 мг вводили подкожной инъекцией 1,5 мл с задней стороны плеча субъекта. Альтернативно, доза может быть введена субъекту путем внутривенной инфузии. В таких случаях 5,85 мл (раствора) 150 мг/мл антитела против CGRP может быть объединено с 0,9% раствора хлорида натрия (нормальный солевой раствор) в пакете для внутривенного (IV) вливания с общим объемом в пакете 130 мл. 100 мл из объема пакета для внутривенного (IV) вливания вводят субъекту путем внутривенной инфузии на протяжении одного часа, при общей дозе 225 мг. Введение доз повторяют через каждые двадцать восемь дней до тех пор, пока не будет наблюдаться снижение частоты случаев мигрени. Сниженную частоту хронической мигрени анализируют с использованием различных критериев, которые включают число дней головной боли, число часов, когда наблюдаются головные боли (например, часов головной боли), тяжесть головных болей, и число дней мигрени, наблюдаемых у субъекта.
Пример 10. Лечение хронической мигрени.
Женщина в возрасте 37 лет была идентифицирована как страдающая от хронической мигрени на протяжении по меньшей мере трех месяцев. Определение наличия хронической мигрени проводилось путем изучения истории частых головных болей, позволяющих предположить проявление хронической мигрени (например, 15 дней в месяц) на протяжении по меньшей мере трех месяцев перед проведением скрининга. Подтверждение частоты головной боли осуществлялось путем последующего сбора базовой информации, демонстрирующей наличие головных болей по меньшей мере в 15 дней, причем по меньшей мере 8 дней в месяц отвечали любому одному из следующих критериев: i. соответствие характеристикам приступа мигрени; и/или ii. предваряются или сопровождаются мигреневой аурой.
Для снижения частоты случаев мигрени у субъекта, субъекту вводили начальную ударную дозу 675 мг антагонистического антитела против CGRP (например, антитела G1). Антагонистическое антитело против CGRP поставлялось в виде жидкой композиции в концентрации 150 мг/мл. Ударную дозу 675 мг вводили в виде трех подкожных инъекций по 225 мг в 1,5 мл в различные области тела субъекта (например, задняя сторона плеча, нижняя часть живота/живот/талия, передняя часть бедра и т.д.). Введение повторяли через каждые двадцать восемь дней в дозах по 225 мг (например, с помощью одной подкожной инъекции 1,5 мл в руку субъекта) до тех пор, пока не будет наблюдаться снижение частоты случаев мигрени. Сниженную частоту хронической мигрени анализируют с использованием различных критериев, которые включают число дней головной боли, число часов, когда наблюдаются головные боли (например, часов головной боли), тяжесть головных болей, и число дней мигрени, наблюдаемых у субъекта.
Пример 11. Лечение хронической мигрени.
Мужчина в возрасте 23 лет был идентифицирован как страдающий от хронической мигрени на протяжении по меньшей мере трех месяцев. Определение наличия хронической мигрени проводилось путем изучения истории частых головных болей, позволяющих предположить проявление хронической мигрени (например, 15 дней в месяц) на протяжении по меньшей мере трех месяцев перед проведением скри- 68 043536 нинга. Подтверждение частоты головной боли осуществлялось путем последующего сбора базовой информации, демонстрирующей наличие головных болей по меньшей мере в 15 дней, причем по меньшей мере 8 дней в месяц отвечали любому ОДНОМУ из следующих критериев: i. соответствие характеристикам приступа мигрени; и/или ii. предваряются или сопровождаются мигреневой аурой.
Для снижения частоты случаев мигрени у субъекта, субъекту вводили дозу 900 мг антагонистического антитела против CGRP (например, антитела G1). Антагонистическое антитело против CGRP поставлялось в виде жидкой композиции в концентрации 150 мг/мл. Дозу 900 мг вводили в виде четырех подкожных инъекций по 225 мг в 1,5 мл в различные области тела субъекта (например, задняя сторона плеча, нижняя часть живота/живот/талия, передняя часть бедра и т.д.). Введение доз повторяют через каждые двадцать восемь дней до тех пор, пока не будет наблюдаться снижение частоты случаев мигрени. Сниженную частоту хронической мигрени анализируют с использованием различных критериев, которые включают число дней головной боли, число часов, когда наблюдаются головные боли (например, часов головной боли), тяжесть головных болей, и число дней мигрени, наблюдаемых у субъекта.
Пример 12. Лечение эпизодической мигрени.
Мужчина в возрасте 28 был идентифицирован как страдающий от эпизодической мигрени с высокой частотой (приступов). Субъектов идентифицировали как страдающих от эпизодической мигрени с высокой частотой приступов с использованием критериев, включающих: наличие истории головных болей в более чем 8 дней в месяц на протяжении по меньшей мере 3 месяцев до проведения скрининга; и подтверждение частоты головных болей путем последующего сбора базовой информации проявление головных болей (любого типа) в течение от 8 до 14 дней, причем по меньшей мере 8 дней отвечают по меньшей мере одному из следующих критериев: i. мигрень; ii. вероятная мигрень; и/или ш. использование триптанов или соединений на основе спорыньи.
Для снижения частоты случаев мигрени у субъекта, субъекту вводят дозу 675 мг антагонистического антитела против CGRP (например, антитела G1). Антагонистическое антитело против CGRP поставлялось в виде жидкой композиции в концентрации 150 мг/мл. Дозу 675 мг вводили путем трех 225 мг подкожных инъекций по 1,5 мл в различные области тела субъекта (например, задняя сторона плеча, нижняя часть живота/живот/талия, передняя часть бедра и т.д.). Введение доз повторяют через каждые двадцать восемь дней до тех пор, пока не будет наблюдаться снижение частоты случаев мигрени. Сниженную частоту эпизодической мигрени анализируют с использованием различных критериев, которые включают число дней головной боли, число часов, когда наблюдаются головные боли (например, часов головной боли), тяжесть головных болей, и число дней мигрени, наблюдаемых у субъекта.
Пример 13. Лечение эпизодической мигрени.
Женщина в возрасте 52 была идентифицирована как страдающая от эпизодической мигрени с высокой частотой приступов. Субъектов идентифицировали как страдающих от эпизодической мигрени с высокой частотой приступов с использованием критериев, включающих: наличие истории головных болей в более чем 8 дней в месяц на протяжении по меньшей мере 3 месяцев до проведения скрининга; и подтверждение частоты головных болей путем последующего сбора базовой информации проявление головных болей (любого типа) в течение от 8 до 14 дней, причем по меньшей мере 8 дней отвечают по меньшей мере одному из следующих критериев: i. мигрень; ii. вероятная мигрень; и/или ш. использование триптанов или соединений на основе спорыньи.
Для снижения частоты случаев мигрени у субъекта, субъекту вводили дозу 225 мг антагонистического антитела против CGRP (например, антитела G1). Антагонистическое антитело против CGRP поставлялось в виде жидкой композиции в концентрации 150 мг/мл. Дозу 225 мг вводили подкожной инъекцией 1,5 мл в заднюю часть плеча субъекта. Введение доз повторяют через каждые двадцать восемь дней до тех пор, пока не будет наблюдаться снижение частоты случаев мигрени. Сниженную частоту эпизодической мигрени анализируют с использованием различных показателей, которые включают наблюдения числа дней головной боли, числа часов, когда наблюдаются головные боли (например, часов головной боли), тяжести головных болей и числа дней мигрени у субъекта.
Пример 14. Неклиническая токсикология и фармакокинетика.
Антагонистическое антитело против CGRP G1 хорошо переносилось в ходе проведения исследований токсичности продолжительностью 1 месяц при повторном внутривенном (IV) введении доз крысам Sprague-Dawley (SD) и яванским макакам, и избирательная органная токсичность не наблюдалась в обоих этих исследованиях. Уровень отсутствия нежелательных эффектов (NOAEL) был определен равным 100 мг/кг/неделю по результатам исследований как на крысах, так и на обезьянах. Этот уровень доз соответствовал системной экспозиции с максимальными концентрациями (Cmax), равными 2570 и 3440 мкг/мл, и значениями площадей под кривой (AUC(0-168 ч)), равными 194000 мкг-ч/мл и 299000 мкг-ч/мл (день 22) у крыс и обезьян, соответственно.
В IV/SC (внутривенное/подкожное введение) исследованиях на крысах продолжительностью 3 месяца не наблюдалось избирательной органной токсичности и G1 хорошо переносился до наивысшей тестируемой дозы, равной 300 мг/кг. В исследованиях на обезьянах продолжительностью 3 месяца, периваскулярное воспаление ресничной артерии в результате отложения иммунных комплексов наблюдалось
- 69 043536 при >100 мг/кг. Этот результат был объяснен иммуногенным ответом обезьян на гуманизированное антитело и не был признан клинически релевантным. Наибольшая тестируемая доза в данных исследованиях на обезьянах, равная 300 мг/кг, по меньшей мере в 10 раз превышает наивысшую ожидаемую клиническую дозу, составляющую 2000 мг или 29 мг/кг в пересчете на удельные величины(принимая средний вес субъектов равным 70 кг).
Пример 15. Клиническая фармакокинетика.
Фармакокинетику (РК) антитела G1 после разового внутривенного (IV) введения изучали в четырех рандомизированных двойных слепых исследованиях с контролем по плацебо для доз от 10 до 2000 мг. Максимальные концентрации в плазме (Cmax) достигались вскоре после завершения внутривенной (IV) инфузии продолжительностью 1 ч. Медианное время до Cmax (Tmax) имело значения в диапазоне от 1,0 до 3,0 ч, с последующим многоэтапным снижением. Cmax и общая экспозиция увеличивались приблизительно линейно с повышением дозы G1. Конечный период полувыведения (t1/2) составлял от 36,4 до 48,3 дней. Данные о метаболизме G1 в печени отсутствуют, первичным является метаболизм путем протеосомальной деградации.
Одно из исследований определяло фармакокинетику для доз 30 и 300 мг при введении дважды, с интервалом в две недели. Максимальные концентрации и площадь под профилем концентрация-время увеличивались с повышением дозы. Кажущийся конечный период полувыведения (t1/2) после второй дозы составлял 41,2 дней (30 мг) и 50,0 дней (300 мг) (среднее арифметическое). Соотношения накопления в плазме G1 после двух IV доз, введенных с интервалом в 15 дней, составляли 1,5 (30 мг) и 1,4 (300 мг).
Пример 16. Клиническая безопасность и фармакокинетика.
В шести исследованиях антитело G1 вводили 118 здоровым особам мужского и женского пола, а 57 особ мужского и женского пола получали плацебо. Исследование включало разовые внутиривенные (IV) дозы в диапазоне значений от 0,2 до 2000 мг, две IV-дозы до 300 мг с введением раз в 14 дней и подкожное (SC) введение 225 и 900 мг. Шесть исследований включали: два исследования фармакокинетики (PK) и фармакодинамики (PD) при внутривенном (IV) введении разовой дозы с эскалацией здоровым мужчинам (исследования В0141001 и В0141002); перекрестное исследование в двух когортах с контролем по плацебо для изучения острых эффектов IV введения антитела G1 на реакцию вызванного капсаицином покраснения у здоровых добровольцев (В0141006); исследование с параллельными группами с повторным введением доз антитела G1 здоровым добровольцам мужского и женского пола (В0141007); исследование по оценке безопасности и переносимости при внутривенном введении разовой дозы до 2000 мг здоровым добровольцам-женщинам (В0141008), и исследование по сравнению относительной безопасности и биодоступности при внутривенном (IV) и подкожном (SC) введении (G1-SC-IV).
Результаты шести исследований сведены в табл. 11 ниже. Из пяти исследований с внутривенным введением (B0141001, B0141002, В0141006, B0141007 и B0141008), три имели по существу идентичные планы проведения и оценки. В исследовании B014100 тестировали дозы 0,2, 1 и 3 мг, которые вводили путем одной внутривенной (IV) инфузии продолжительностью один час. Исследование имело дизайн с параллельными группами. Участники находились в клинике на протяжении семи дней после инфузии, с проведением многочисленных анализов в каждый из этих дней. После выписки, пациентов повторно осматривали через неделю после выписки (день 14), и затем через один, два и три месяца после инфузии. В исследовании B0141002 тестировали дозы в диапазоне значений от 10 до 1000 мг при разовом введении. Наконец, в исследовании В0141008 тестировали дозы 300, 1000, 1500 или 2000 мг. Исследование B0141006 отличалось от остальных, потому что оно также было нацелено на включение фармакодинамических показателей, полученных путем измерения ингибирования вызываемого капсаицином покраснения в течение периода времени до одной недели после внутрифенной инфузии антитела G1.
Для исследований с внутривенным введением профили нежелательных эффектов (AEs) регистрировались только для периода после первого введения. В исследовании В0141007 тестировали повторные дозы антитела G1 по 30 или 300 мг внутривенно с интервалом в две недели, с использованием дизайна с параллельными группами. Каждый пригодный для включения в исследования субъект вносился в рандомизационную последовательность через интерактивную интернет-систему, которая содержала назначение лечения. Схема рандомизации была разработана ведущим статистиком. Участники всех исследований обычно были здоровыми мужчинами и женщинами (в возрасте от 18 до 65 лет); все участники подписывали формы информированного согласия. Все исследования были одобрены наблюдательными советами по проведению исследований (IRBs). Нежелательные эффекты (AEs) были определены как любое неблагоприятное медицинское явление у участников клинических исследований, при наличии причинной связи с исследуемым препаратом или без таковой. Нежелательные эффекты, наблюдавшиеся после введения исследуемого препарата или плацебо, назывались возникшими при лечении нежелательными эффектами (TEAEs), независимо от потенциальной причинно-следственной зависимости с исследуемым препаратом. За всеми субъектами, испытывавшими TEAEs, велось наблюдение через соответствующие интервалы времени до разрешения эффекта или до стабилизации эффекта и/или до достижения новой базовой линии. Все TEAEs ранжировали на слабые, умеренные или тяжелые. Серьезные нежелательные эффекты (SAEs) были априорно определены как любое нежелательное медицинское явление, которое при любой дозе приводило к смерти, было угрожающим для жизни (т.е. субъект испытывал непосредст- 70 043536 венную угрозу смерти во время явления), требовало госпитализации пациента или продолжения существующей госпитализации, приводило к стойкой или значительной инвалидности/нетрудоспособности (например, значительное нарушение способности субъекта выполнять нормальные жизненные функции), приводило к пороку развития/врожденному дефекту, или любое другое медицински важное явление. Связанные с лечением нежелательные эффекты (TRAEs) должны были приниматься во внимание в случае возникновения одной из следующих ситуаций: 1) может быть установлена вероятная временная взаимосвязь между началом проявления нежелательного эффекта и введением исследуемого продукта; 2) нежелательный эффект не может быть легко объяснен клиническим состоянием пациента, интеркуррентным заболеванием, или сопутствующими терапиями; 3) нежелательный эффект ослабевает при прекращении применения исследуемого продукта или снижении дозы.
Кровяное давление, частоту пульса и температуру в ротовой полости измеряли при скрининге, перед введением дозы, немедленно после завершения инфузии и многократно во время нахождения пациентов в клиниках, а также при всех посещениях клиники. Лабораторные испытания включали химические показатели сыворотки, гематологию и анализ мочи. Лабораторные испытания гематологии, химии, коагуляции и мочи проводили многократно за время исследований безопасности. ЭКГ регистрировали при скрининге, перед введением дозы в день 1, немедленно после завершения инфузии и еще пять раз на протяжении первого дня, а также при всех посещениях клиники. Значения интервала QT с корректировкой Фридериция (QTcF) определяли с использованием поправочной формулы частоты сердечных сокращений Фридериция. Абсолютные значения и отклонения от базовой линии для параметров ЭКГ интервал QT, частота сердечных сокращений, интервал QTcF, интервал PR и интервал QRS оценивали по когортам, способу лечения, и времени после введения дозы. В дополнение к оценкам безопасности, описанным выше, протокол B014008 включал полную офтальмологическую оценку на базовой линии и в три момента времени после введения дозы (день 28, день 84, и день 168).
Клинически данные и основные жизненные показатели обобщали с помощью описательных таблиц и сводных статистических данных. Лабораторные и другие данные по безопасности обобщали как функцию любого изменения (значения, выходящие за пределы нормальной области значений), а также любых клинически релевантных изменений, которые были определены априорно. Сводные таблицы были стратифицированы по дозам и данные для разных исследований объединяли. Дополнительно, сравнения консолидированных данных для всех экспозиций антитела G1 сравнивали с плацебо. Плацебо также сопоставляли с дозами антитела G1 100 мг и выше (100, 300, 1000, 1500 и 2000 мг), и с дозами антитела G1 1000 мг и выше (1000, 1500 и 2000 мг).
В исследованиях с внутривеным/подкожным (IV/SC) введением (G1-SC-IV) тридцать шесть субъектов рандомизировали по разовому введению антитела G1 (225 или 900 мг) или плацебо, доставляемых с помощью подкожной (SC) болюсной инъекции или внутривенной инфузии продолжительностью 1 ч. Субъекты находились в клиническом исследовательском подразделении в течение семи дней после введения дозы и периодически возвращались в клинику при дополнительных амбулаторных посещениях до дня исследований 90. ЭКГ проводили многократно в день 1 (перед введением дозы, в часы 1, 6, 12), день 3, день 7, пока субъекты находились в клинике, и один раз при завершении исследований (день 90). Основные жизненные показатели, включая температуру, кровяное давление и частоту сердечных сокращений, определяли перед введением дозы, в дни 1, 3, 7 и 90.
Таблица 11
Исследование | Популяция исследования | Лечение антителом G1 |
В0141001 | Здоровые взрослые мужчины (п=24) | Однократная внутривенная (IV) инфузия 0,2, 1 или 3 мг в когортах по восемь (шесть/когорту, активное лечение; два в когорте плацебо) |
В0141002 | Здоровые взрослые мужчины (п=40) | Однократная IV инфузия 10, 30, 100, 300 или 1000 мг в когортах по восемь (шесть/когорту, активное лечение; 10 в когорте плацебо) |
В0141006 | Здоровые взрослые мужчины (п= 12) | Две перекрестно-модифицированные когорты, плацебо или IV инфузия 300 мг в когортах по шесть. В первый период, все участники получали плацебо. Во втором периоде (включен в данное исследование), 12 участников получали плацебо и 11 получали 300 мг. |
В0141007 | Здоровые взрослые мужчины и женщины (п = 21) | Две внутривенные инфузии с интервалом две недели по 30 или 300 мг в когортах по 10 или 11 (шесть/когорту, активное лечение; девять в когорте плацебо) |
В0141008 | Здоровые взрослые женщины (п=31) | Однократная IV инфузия 300, 1000, 1500, или 2000 мг (пять в когорте 2000 мг; шесть/когорту в остальных экспериментальных группах; восемь в когорте плацебо) |
G1-SC-IV | Тридцать шесть субъектов (п = 36) | Однократная подкожная (SC) болюсная инъекция или однократная IV инфузия 225 или 900 мг |
- 71 043536
В широком диапазоне анализируемых доз в пяти исследованиях с внутривенным введением (от 0,2 до 2000 мг), антитело G1 внутривенно имело приемлемую переносимость. В табл. 8 собраны данные об общей частоте нежелательных эффектов (АЕ) по дозам для исследований с внутривенным введением. На основании этих результатов определения переносимости явные угрозы безопасности не выявлены. По всем испытаниям при исследованиях с внутривенным введением, участники, получавшие плацебо, сообщали в среднем об 1,3 возникших при лечении нежелательных эффектах (TEAEs). Они представляют собой все зарегистрированные эффекты, независимо от мнения исследователей о взаимосвязи с исследуемым препаратом. По всем дозам G1 при внутривенном введении, этот показатель составлял 1,4 TEAEs/субъекта. Субъекты, получавшие дозы G1 100 мг или выше, имели в среднем 1,5 TEAEs; получавшие дозы 1000 мг или выше, имели в среднем 1,6 TEAEs.
Таблица 8
Субъекты, анализируемы е по нежелательны м эффектам | Числ о АЕ - η (Ν) | Субъект ы с АЕ η(Ν) | Субъекты с серьезным и АЕ - η (Ν) | Субъект ы с тяжелым и АЕ η(Ν) | Субъекты 9 вышедши е из испытани й из-за АЕ -η(Ν) | Снижение дозы или временное прекращени е приема - η (Ν) | |
Плацеб о | 45 | 57 (Н) | 23 (8) | 0 | 0 | 2(1) | 0 |
0,2 мг | 6 | 5(0) | 2(0) | 0 | 0 | 0 | 0 |
1 мг | 6 | 1(1) | 3(0) | 0 | 0 | 0 | 0 |
3 мг | 6 | Ю (2) | 4(1) | 0 | 0 | 0 | 0 |
10 мг | 6 | 5(1) | 4(1) | 0 | 0 | 0 | 0 |
30 мг | 12 | 21 (Н) | 8(5) | 0 | 0 | 0 | 0 |
100 мг | 6 | 5(1) | 4(1) | 0 | 0 | 0 | 0 |
300 мг | 29 | 47 (Ю) | 20 (7) | 1(1) | 1(1) | 0 | 0 |
1000 мг | 12 | 17 (4) | 8(4) | 0 | 0 | 0 | 0 |
1500 мг | 6 | 8(0) | 3(0) | 0 | 1(0) | 0 | 0 |
2000 мг | 5 | 12 (2) | 4(1) | 0 | 0 | 0 | 1(1) |
АЕ - нежелательные эффекты;
N - любые эффекты, независимо от того, связаны они с лечением или нет;
(N) - считаются связанными с лечением по мнению исследователя.
Примечание: для протокола B0141006 (плацебо и 300 мг) включены только данные для первого периода активного лечения, из-за его перекрестного характера.
В исследованиях с внутривенным введением связанные с лечением нежелательные эффекты (TRAEs, или AEs, которые могут быть связаны с терапией по мнению главного исследователя) были зарегистрированы у 21,2% субъектов, получавших внутривенно G1, по сравнению с 17,7% у получавших плацебо. При дозах 100 мг G1 или выше, TRAEs наблюдались у 22,4% участников. При дозах 1000 мг или выше, TRAEs наблюдались у 21,7% участников. Антитело G1, по-видимому, не ассоциировано с какими-либо клинически значимыми изменениями основных жизненных показателей (систолическое и диастолическое кровяное давление [ВР], температура и частота сердечных сокращений [HR]), аномалии на электрокардиограмме (ECG) (включая QTcB и QTcF), реакция в месте инфузии, или результаты клинических лабораторных анализов. Наблюдались ограниченные эффекты на тесты функции печени (аспартатаминотрансфераза [AST], аланинаминотрансфераза [ALT], общий билирубин, и щелочная фосфатаза) с увеличением первой степени (grade 1) общего билирубина у одного субъекта, получавшего плацебо (исследование B0141001), и увеличением первой степени (grade 1) ALT у одного субъекта, получавшего плацебо (исследование B0141002). Клинически значимые аномалии функции печени не наблюдались у субъектов, получавших любые исследованные дозы G1. Отсутствуют данные об отличиях между G1 и плацебо по гематологиченским тестам оценки функции почек, элоектролитам, или по тестам мочи.
В исследовании IV/SC (G1-SC-IV), безопасность и переносимость были сопоставимыми для подкожного (SC) и внутривенного (IV) путей доставки. Средняя частота сердечных сокращений и кровяное давление (диастолическое и систолическое) не изменялись при лечении антителом G1, также отсутствовали какие-либо значимые изменения любых сердечно-сосудистых параметров после лечения антителом G1 подкожно (SC). Сводные данные о TRAEs, наблюдаемых в ходе исследований с подкожным введением, приведены ниже в табл. 12.
- 72 043536
Таблица 12
900 мг (№6) | 225 мг (N=6) | Плацебо (N=6) | |
Желудочно -кишечные (GI) расстройства | 2 (33,3 %) | 0 | 1 (16,7 %) |
ЦНС | 0 | 1 (16,7 %) | 0 |
Инфекции и инвации | 0 | 0 | 0 |
Скелетно-мышечная | |||
система и | 0 | 0 | 0 |
соединительная ткань Дыхательная система Расстройства | 0 | 0 | 0 |
репродуктивной | о | 0 | 0 |
системы и молочных | |||
желез | |||
Травмы | 0 | 0 | 0 |
беременность | 0 | 0 | 0 |
Почки | 1 (16,7 %) | 0 | 0 |
Сосудистая система | 0 | 0 | 0 |
В исследованиях с введением разовой дозы (B0141001, B0141002, B0141006 и B0141008), фармакокинетические (PK) параметры рассчитывали для доз в диапазоне значений от 30 мг до 2000 мг. Средний по группе конечный период полувыведения (t1/2) имел значения в диапазоне приблизительно от 40 до 48 дней. Cmax и общая экспозиция (оцениваемая по AUCinf) возрастали с увеличением дозы. Увеличение AUCinf было приблизительно пропорционально дозе между 30 и 1000 мг, и возрастало быстрее дозы между 1000 и 2000 мг. Объем распределения был низким, от 6 до 10 л.
В исследовании с введением двух доз (B0141007), кажущийся конечный период полувыведения после второй дозы имел значение в интервале от 41 до 50 дней. Концентрации в плазме накапливались после второй дозы, с коэффициентом накопления приблизительно 1,5. Кроме того, в исследованиях IV/SC (G1-SC-IV), анализ фармакокинетических показателей указывает на то, что G1 при подкожной доставке имеет схожий период полувыведения с внутривенной доставкой.
Пример 17. Предотвращение хронической мигрени в клинических исследованиях антитела G1.
Многоцентровое рандомизированное двойное слепое многодозовое исследование с двойной имитацией, с контролем по плацебо, с параллельными группами, по сравнению антагонистического антитела против CGRP G1 с плацебо проводили на субъектах с хронической мигренью. Субъекты, допущенные до отбора для участия в исследовании, начинали с базового 28-дневного вводного периода. Получаемая от субъектов информация об их головной боли и состоянии здоровья регистрировалась ежедневно на протяжении исследований, с использованием системы электронного дневника головной боли. На протяжении вводного периода или исследований не допускались изменения в медикаментозном лечении мигрени. Использовались следующие критерии включения: (1) мужчины или женщины в возрасте от 18 до 65 лет; (2) подписанный и датированный документ об информированном согласии, указывающий, что субъект был проинформирован о всех существенных аспектах исследований, включая любые известные и потенциальные риски и доступные альтернативные методы лечения; (3) хроническая мигрень, отвечающая диагностическим критериям, перечисленным в Международной классификации головных болей (International Classification of Headache Disorders, ICHD-III beta version, 2013); (4) субъекты могут использовать до двух разных ежедневных лекарственных средств для профилактики мигрени (например, топирамат, пропранолол, амитриптилин) или других медицинских состояний (например, пропранолол используется при гипертензии), если доза и схема приема оставались стабильными на протяжении по меньшей мере 2 месяцев до начала 28-дневного вводного периода; (5) индекс массы тела (ИМТ) от 17,5 до 34,5 кг/м2, и общая масса тела от 50 кг до 120 кг, включительно; (6) субъект не обладает репродуктивным потенциалом, как определено в способах, или, если субъекты обладают репродуктивным потенциалом, то они соглашаются или на воздержание, или на использование (или на использование их партнером) приемлемого метода контрацепции на протяжении предполагаемой продолжительности исследований; (7) продемонстрированное соблюдение условий использования электронного дневника головной боли на протяжении вводного периода путем введения данных о головной боли минимум в 24/28 дней (уровень соблюдения 85%). В пункте (3) выше использовались следующие диагностические критерии хронической мигрени: (а) история частых головных болей, позволяющая предположить наличие хронической мигрени (15 дней в месяц) на протяжении по меньшей мере трех месяцев до проведения скрининга; (b) подтверждение частоты головных болей путем последующего сбора базовой информации на протяжении 28-дневной вводной фазы, демонстрирующей головные боли в по меньшей мере 15 дней, причем по меньшей мере 8 дней в месяц отвечают любому одному из следующих критериев (i) могут быть калифицированы как приступ мигрени, (ii) предваряются или сопровождаются мигреневой аурой, или (iii) облегчаются с помощью соединений спорыньи или производных триптана.
Критерии исключения требовали, чтобы субъекты не соответствовали одному из следующих критериев: (1) начальные проявления хронической мигрени после достижения возраста 50 лет; (2) субъект по
- 73 043536 лучал ботокс (onabotulinum toxin А) для лечения мигрени или по любым медицинским или косметическим причинам, требующим инъекции в голову, лицо или шею на протяжении шести месяцев до проведения скрининга; (3) субъект использует лекарственные средства, содержащие опиоиды (включая кодеин) или барбитураты (включая фиоринал (Fiorinal®), фиорацет (Fioracet®), или любую другую комбинацию, содержащую буталбитал) в течение более чем 4 дней в месяц для лечения мигрени или по любой другой причине; (4) неудачное использование >2 категорий лекарственных средств или >3 профилактических средств (в двух категориях лекарственных средств) вследствие отсутствия эффективности при лечении эпизодической или хронической мигрени после соответствующего пробного курса лечения; (5) клинически значимая гематологическая, почечная, эндокринная, легочная, желудочно-кишечная, мочеполовая, неврологическая или глазная болезнь, на усмотрение исследователя; (6) субъекты со свидетельствами или историей клинически значимых психиатрических проблем, включая глубокую депрессию, паническое расстройство, или генерализованное тревожное расстройство (в соответствии с критериями Диагностического и статистического руководства, 5-е издание (Diagnostic and Statistical Manual 5th edition [DSM-5])); (7) систолическое кровяное давление при скрининге выше 160 мм рт.ст. или ниже 90 мм рт.ст.; (8) диастолическое кровяное давление при скрининге выше 110 мм рт.ст. или ниже 50 мм рт.ст.; (9) история клинически значимой сердечно-сосудистой болезни или сосудистой ишемии (такие как миокардиальной, неврологической [например, церебральная ишемия], периферическая ишемия конечностей, или другие ишемические явления); (10) прошлая или текущая история рака, за исключением субъектов с базальноклеточной карциномой, которая была удалена; (11) беременные или кормящие женщины; (12) история гиперчувствительных реакций на инъекции белков, включая моноклональные антитела; (13) лечение исследовательским лекарственным средством в течение 30 дней перед включением в исследования; (14) клинически значимая аномалия базовой поверхностной ЭКГ в 12 отведениях, включая синусовые паузы >2 с, блокада сердца второй или третьей степени или другие аномалии, признанные клинически значимыми исследователем; (15) базовая ЭКГ с 12 отведениями, демонстрирующая QTcF >450 мс для мужчин и 470 мс для женщин при скрининге (если QTcF превышает эти значения, ЭКГ повторяли и среднее из трех значений QTcF использовали для определения потенциальной пригодности субъекта для участия в исследованиях; QTc определяли с использованием формулы Фридериция); (16) любой результат, который по мнению исследователя клинически значимо отклоняется от нормы, включая гематологические показатели, химические показатели крови, пробы на коагуляцию или анализ мочи (тесты с аномальными результатами было разрешено повторять для подтверждения) (17) печеночные ферменты (аланинаминотрансфераза [ALT], аспартатаминотрансфераза [AST], щелочная фосфатаза) более чем в 1,3 раза превышает верхний предел нормы (ULN) после подтверждения повторным тестом; (18) креатинин сыворотки более чем в 1,5 раза превышает ULN, клинически значимая протеинурия (полоски для экспресс-анализа мочи +4) или свидетельства болезни почек.
Субъектов с подтвержденной хронической мигренью и высокой готовностью к соблюдению правил ведения ежедневного длневника головной боли на протяжении вводного периода рандомизировали во время посещения 2 (день 1) в одну из трех ветвей исследований. Рандомизацию проводили с использованием электронной интерактивной интернет-системы. Субъектов стратифицировали по полу и базовому медикаментозному лечению мигрени. Лекарственный препарат вводили раз в месяц (каждые 28 дней) для проведения в общей сложности трех сеансов лечения за период 3 месяцев. Введение лекарственного препарата проводилось при посещении 2 (день 1; первая доза), посещении 3 (день 29; вторая доза), и посещении 4 (день 57; третья и последняя доза). Итоговые оценки при завершении исследования определяли при посещении 5 (день 85), приблизительно через 28 дней после третьей и последней дозы. Инъекции вводили подкожно на протяжении 3-месячного периода (каждые 28 дней) субъектам в каждой из следующих групп: (1) особы, рандомизированные в ветвь 900 мг, получали четыре активных инъекции каждые 28 дней; (2) особы, рандомизированные в ветвь 675/225 мг, получали три активных инъекции и одну инъекцию плацебо в первом варианте курса лечения, и одну активную инъекцию и три инъекции плацебо во втором и третьем вариантах курса лечения; (3) особы, рандомизированные в группу плацебо, получали четыре инъекции плацебо каждые 28 дней. Активные инъекции содержали 225 мг антитела G1. Конечные точки определяли по электронному ежедневному дневнику головной боли, представляющему собой интерактивную интернет-систему, регистрирующую данные за предшествующий 24-часовой период. Общая продолжительность головной боли регистрировалась численно, в часах, а также число часов головной боли с каждым уровнем тяжести. Тяжесть головной боли субъективно оценивалась субъектом в предварительно заданные моменты времени следующим образом: отсутствие боли, слабая боль, умеренная боль и тяжелая боль. Субъектов также просили указывать, присутствовали или нет следующие сопутствующие симптомы в предварительно заданные моменты времени: фотофобия, фонофобия, тошнота и рвота. Дополнительную конечную точку определяли по контролю использования триптанов (например, суматриптана) в качестве неотложного лекарственного средства против головной боли субъектами, участвующими в исследовании, на протяжении исследований. Сводные данные и демографические сведения о субъектах, участвующих в исследовании, приведены в табл. 9.
- 74 043536
Таблица 9
Плацебо | 675/225 мг | 900 мг | Всего | |
После рандомизации | 89 | 88 | 87 | 264 |
Завершили исследования | 77 (86,5 %) | 72 (81,8%) | 76 (87,4 %) | 225 |
Анализировались по назначенному лечению (ITT) | 89 ( 100 %) | 87 (98,9 %) | 85 (97,7 %) | 261 (98,9 %) |
В анализе безопасности | 89 ( 100 %) | 88 ( 100 %) | 86 (98,9 %) | 263 (99,6 %) |
Не завершили исследования | 12 (13,5 %) | 16 (18,2 %) | 11 (12,6%) | 39 (14,8 %) |
Возраст (среднее значение в годах) | 40,7 | 40 | 41,5 | 40,75 |
% женщин | 85,4 % | 86,3 % | 86,2 % | 85,9 % |
Число лет с мигренью | 20,4 | 15,8 | 18,7 | 18,3 |
Среднее уменьшение числа часов головной боли по сравнению с базовой линией в каждую из недель 1, 2 и 3 (W1, W2, и W3, соответственно) для каждой группы представлено графически на фиг. 15. Результаты показывают значительное снижение в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо в каждой из точек W1, W2 и W3, включая самую первую неделю.
Среднее снижение числа часов головной боли по сравнению с базовой линией в каждый из месяцев 1, 2, и 3 (M1, M2, и М3, соответственно) для каждой группы представлено графически на фиг. 12. Результаты показывают значительное снижение в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо во все три момента времени, включая после самой первой дозы. Статистическая значимость по сравнению с группой плацебо для данных на фиг. 12 указана с помощью приведенных р-значений.
Среднее число часов головной боли в каждой группе на базовой линии, и при посещениях 2, 3, и 4 (V2, V3, и V4, соответственно) представлено графически на фиг. 13. Результаты показывают значительное снижение в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо во все три момента времени, включая после самой первой дозы.
Среднее снижение числа дней головной боли умеренной или тяжелой интенсивности по сравнению с базовой линией в каждый из месяцев 1, 2, и 3 (M1, M2, и М3, соответственно) для каждой группы представлено на фиг. 14. Результаты показывают статистически значимое снижение в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо во все три момента времени, включая после самой первой дозы. Статистическая значимость по сравнению с группой плацебо указана с помощью приведенных p-значений.
Среднее снижение числа случаев использования триптанов в качестве неотложного лекарственного средства по сравнению с базовой линией в каждый из месяцев 1, 2, и 3 (M1, M2, и М3, соответственно) для каждой группы представлено графически на фиг. 16. Результаты показывают значительное снижение использования триптанов в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо во все три момента времени, включая после самой первой дозы. Статистическая значимость по сравнению с группой плацебо указана с помощью приведенных p-значений на фиг. 16.
Значимое снижение числа часов головной боли также наблюдалось у субъектов с использованием профилактических средств (например, топирамата и амитриптилина или пропранолола) по сравнению с группой плацебо.
Обе дозы хорошо переносились, и проблемы с безопасностью не возникали. Сводные данные о возникающих при лечении нежелательных эффектах (ТЕАЕ) по группам приведены в табл. 10. Различия между связанными (с применением препарата) ТЕАЕ почти полностью объясняются слабыми эффектами, возникающими при инъекциях (эритема, некоторый дискомфорт). Серьезные ТЕАЕ не были связаны с лекарственным препаратом (отсутствие связанных с препаратом нежелательных эффектов).
- 75 043536
Таблица 10
Плацебо N (%) | 675/225 мг N (%) | 900 мг N ( %) | |
ТЕАЕ | 36 (40,4) | 47 (53,4) | 41 (47,7) |
Связанные (с препаратом) ТЕАЕ | 15 (16,9) | 25 (28,4) | 28 (32,6) |
Серьезные ТЕАЕ | 1(1,1) | 1(1,1) | 2(2,3) |
ТЕАЕ, вызывающие прекращение участия в исследованиях | 1(1,1) | 6 (6,8) | 5 ( 5,8) |
Смертей | 0 | 0 | 0 |
Пример 18. Предотвращение эпизодической мигрени с высокой частотой приступов в клинических исследованиях антитела G1.
Многоцентровое рандомизированное двойное слепое исследование с контролем по плацебо, с параллельными группами, по сравнению антитела против CGRP G1 с плацебо проводили на субъектах с эпизодической мигренью с высокой частотой приступов (HFEM). План исследований соответствовал описанному в примере 17, с двумя отличиями. Во-первых, критерии включения (3) предусматривали субъектов, отвечающих критериям к эпизодической мигрени в соответствии со вторым изданием Международного общества головной боли (Second Edition of The International Headache Society) (Olesen and Steiner 2004), которые испытывали мигрень с высокой частотой приступов, изложенным следующим образом: (а) история головных болей в более чем 8 дней в месяц на протяжении по меньшей мере 3 месяцев до проведения скрининга; (Ь) подтверждение частоты головных болей путем последующего сбора базовой информации на протяжении 28-дневной вводной фазы о проявлениях головных болей (любого типа) в течение от 8 до 14 дней, причем по меньшей мере 8 дней отвечают критериям по меньшей мере чего-то одного из (i) мигрени, (и) вероятной мигрени, или (iii) использования триптанов или соединений на основе спорыньи. Во-вторых, были изменены схемы приема для групп, получающих G1. Конкретнее, инъекции вводили подкожно на протяжении периода 3 месяцев (каждые 28 дней) субъектам в каждой из следующих групп: (1) особы, рандомизированные в ветвь 675 мг, получали 675 мг G1 каждые 28 дней; (2) особы, рандомизированные в ветвь 225 мг, получали 225 мг G1 каждые 28 дней; и (3) особы, рандомизированные на плацебо, получали инъекцию плацебо каждые 28 дней. Сводные исходные данные и демографические характеристики субъектов, участвующих в исследованиях, приведены в табл. 13. Конечные точки исследований включали снижение числа дней мигрени и снижение числа дней головной боли любой тяжести.
Таблица 13
Плацебо | 225 мг | 675 мг | Всего | |
После рандомизации | 104 | 96 | 97 | 297 |
Анализировались по назначенному лечению (ITT) | 104 (100 %) | 95 (99 %) | 96 (99 %) | 295 (99 %) |
В анализе безопасности | 104 (100 %) | 96(100 %) | 97 (100 %) | 297(100 %) |
Возраст (среднее значение в годах) | 42,0 | 40,8 | 40,7 | 41,2 |
% женщин | 88% | 91% | 85% | 88% |
% белых | 82% | 77% | 76% | 78% |
Среднее снижение числа дней мигрени по сравнению с базовой линией в каждый из месяцев 1, 2, и 3 (Ml, М2, и М3, соответственно) для каждой группы представлено на фиг. 17. Результаты показывают статистически значимое снижение в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо во все три момента времени, включая после самой первой дозы. Статистическая значимость по сравнению с группой плацебо указана с помощью приведенных р-значений.
Среднее снижение числа дней головной боли любой тяжести по сравнению с базовой линией в каждый из месяцев 1, 2, и 3 (Ml, М2, и М3, соответственно) для каждой группы представлено на фиг. 18. Результаты показывают статистически значимое снижение в обеих группах лечения по сравнению с группой плацебо во все три момента времени, включая после самой первой дозы. Статистическая значимость по сравнению с группой плацебо указана с помощью приведенных р-значений.
Обе дозы хорошо переносились, и проблемы с безопасностью не возникали. Сводные данные о возникающих при лечении нежелательных эффектах (ТЕАЕ) по группам приведены в табл. 14. Четыре серьезные случая TEAEs были связаны с одним случаем перелома малоберцовой кости, одним случаем тремора вследствие прекращения приема препарата и двумя случаями мигрени, требующей лечения в палате экстренной помощи (ER).
-76043536
Таблица 14
Плацебо N (%) | 225 мг N (%) | 675 мг N (%) | |
ТЕАЕ | 58 (56) | 44 (46) | 57 (59) |
Связанные (с препаратом) ТЕАЕ | 24 (23 %) | 26 (27 %) | 24 (25 %) |
Серьезные ТЕАЕ | 0 | 2 (2 %) | 2 (2 %) |
Связанные (с препаратом) серьезные | 0 | 0 | 0 |
ТЕАЕ | |||
ТЕАЕ, вызывающие прекращение участия в исследованиях | 0 | 4 (4 %) | 2 (2 %) |
Смертей | 0 | 0 | 0 |
Пример 19. Неклиническая безопасность.
Два исследования по оценке безопасности антитела G1 были проведены на яванских макаках. В первом исследовании оценивали безопасность разовой дозы антитела G1. Во втором исследовании оценивали безопасность повторных доз антитела G1. Каждое из исследований и их результаты дополнительно описаны более подробно ниже. В исследованиях как с разовой, так и повторными дозами, антитело G1 было приготовлено в виде композиции раствора 51,4 мг/мл в 20 мМ гистидина, 84 мг/мл трегалозы дигидрата, 0,2 мг/мл полисорбата 80, 0,05 мг/мл динатрия ЭДТА дигидрата и 0,1 мг/мл L-метионина, pH около 5,5. Композиция носителя имела идентичный состав, но без антитела G1. Дополнительно, в обоих исследованиях, периодически брали образцы крови для анализа концентрации антитела G1 в плазме с использованием валидированного метода ИФА.
Данные сначала аггрегировали в сводные таблицы и фигуры с использованием прикладных программ GraphPad Prism (версия 6.0) и Excel 2010 (Microsoft). Для исследований с однократной экспозицией, телеметрические данные анализировали с использованием дисперсионного анализа (ANOVA). Анализ проводили с использованием прикладной программы SAS Release 8.2. Для нормализации интервала QT по диапазону интервалов R-R, для каждого животного генерировали коэффициенты коррекции для индивидуальных животных (IACFs) путем соотнесения каждого RR-интервала с ассоциированным с ним QT-интервалом. Для набора данных определяли линейную регрессию этого отношения QT/RRинтервалов. Тангенс угла наклона этой линейной регрессии использовали в качестве IACF для соответствующего животного во всех экспериментах. Этот IACF использовали для расчета откорректированного QT-интервала (QTc) с использованием следующего уравнения:
QT-I(c) = интервал QT с поправкой на частоту сердечных сокращений = QT-I -[(RR - 300)*(IACF)].
В исследованиях с многократными дозами для анализа данных также использовали однофакторный дисперсионный анализ. Если результат дисперсионного анализа был значимым (Р<0,05), для сравнения между группами использовали апостериорный критерий Даннета. Для каждого пола, экспериментальную группу сравнивали с контрольной группой (носитель) при 5% уровне значимости двусторонней вероятности.
Телеметрические исследования с разовой дозой.
Восьми взрослым самцам яванских макак (Charles River Primates) хирургическими методами устанавливали инструменты для телеметрии и давали по меньшей мере две недели на восстановление. Использовали имплантируемые устройства (DSI TL11M2-D70-PCT) и приемники (RMC-1) производства Data Sciences International.
Животным давали акклиматизироваться к клеткам для сбора телеметрических данных по меньшей мере в течение ночи перед введением дозы. Во время акклиматизации проводили предварительную запись гемодинамических параметров для проверки правильности функционирования преобразователей и оборудования. Во время сбора телеметрических данных животные были размещены индивидуально в клетках, оборудованных приёмниками телеметрических данных. В дни, когда сбор данных не проводился, животные находились в клетках без приёмников телеметрических данных. Животные содержались при дневном цикле с 12 ч освещения, 12 ч темноты, со свободным (ad libitum) доступом к воде и получали сертифицированный корм для приматов.
В первой фазе исследований, животным (8 самцов) вводили один лишь носитель, и сбор телеметрических данных начинали около за 1 ч перед введением дозы и проводили в течение 22 ч после введения дозы. Через шесть дней после введения носителя, эти же животные получали однократное внутривенное (IV) введение антитела G1 (100 мг/кг, доза, около в 10 раз превышающая фармакологическую ЕС50 для яванских макак). Телеметрически передаваемые электрокардиографические и гемодинамические данные снова непрерывно регистрировали для всех животных. Дополнительно, за этими животными велось наблюдение в течение около 24 ч в дни 3, 7, 10 и 14 после получения ими разовой дозы антитела G1. Телеметрически передаваемые сигналы ЭКГ и кровяного давления поступали с имплантированных радиотелеметрических устройств на приемниик. установленные в каждой клетке. Принятые сигналы проходили через устройство обмена данных (DSI модель DEM) и далее в систему сбора данных на основе ПК (DSI,
-77043536 программа Ponemah P3 версия 3.4); для анализа данных использовалась программа Emka Technologies версия 2.4.0.20 (Emka Technologies). Частота аналогово-цифровой дискретизации была равна 1000 Гц для телеметрически передаваемых данных ЭКГ и 500 Гц для данных кровяного давления. Данные регистрировали в виде средних значений за 1 мин.
Среднее по группе систолическое кровяное давление (SBP) имело близкие значения до и после лечения антителом G1 на протяжении первого дня после введения дозы и в последующие дни (телеметрические данные животных собирали в дни 3, 7, 10 и 14 с интервалами времени, идентичными использованным в день 1). В часы 1-4 после введения дозы, когда концентрации антитела G1 в крови имели максимальные уровни (средняя концентрация 3500 мкг/мл в момент времени 4 ч), среднее SBP было равно 111 мм рт.ст. по сравнению со 113 мм рт.ст. в тот же интервал времени после введения носителя. Кроме того, SBP было равно 110 мм рт.ст. в дни 3 и 7, 109 мм рт.ст. в день 10, и 110 мм рт.ст. в день 14 после введения антитела G1. Аналогичные данные о SBP были зарегистрированы для других интервалов времени. Поскольку эти исследования проводились по перекрестному (crossover) плану, получавшие препарат животные служили своими собственными контролями. При анализе данных как разностей значений кровяного давления после введения антитела G1 по сравнению с введением носителя, имеются несущественные статистически значимые снижения SBP в последний интервал времени в дни 7, 10 и 14.
Было обнаружено, что после лечения антителом G1, диастолическое кровяное давление (DBP) было около на 3 мм рт.ст. ниже средних значений, полученных после введения носителя. С часов 5-22, средние по группам значения для групп носителя и антитела G1 имели схожие значения. Такая же тенденция наблюдалась в другие дни, когда незначительное снижение DBP (в диапазоне значений 2,62-3,5 мм рт.ст.) наблюдалось в первый интервал измерений, с отдельными изменениями аналогичной величины наблюдавшимися нерегулярно в дни 7-10 в интервале 7-22 ч. Аналогично результатам, наблюдавшимся для DBP, незначительное снижение частоты сердечных сокращений наблюдалось при первой оценке (часы 14) по сравнению с введением носителя. Различия не детектировались при промежуточных оценках и снова появлялись между часами 18-22 во все дни.
Кроме того, что касается результатов ЭКГ, не наблюдалось статистически значимых изменений интервала QTc в любой момент времени по сравнению с введением носителя. Хотя статистически значимые изменения RR, PR, RS и QT наблюдались на протяжении периода 14 дней по сравнению с носителем, они все были несущественными по абсолютной величине.
Исследования безопасности с повторными дозами.
Исследование безопасности с повторными дозами включало 48 взрослых наивных по отношению к антителу G1 яванских макак при равном соотношении полов (по 6 особей каждого пола в группе) (Charles River Primates). Животные получали носитель или антитело G1 в виде внутривенной инъекции раз в неделю в течение 14 недель в дозах 10, 100 или 300 мг/кг. В каждой группе, двум животным, по одному каждого пола, давали дополнительно 4 месяца на восстановление после окончания введения доз.
Измерения ЭКГ и кровяного давления регистрировали один раз в фазе предварительных исследований, дважды после достиженеия стабильного состояния (до введения дозы и через 4 ч после введения дозы в день 85) и один раз около через 1 неделю после окончания введения доз (день 103 фазы восстановления). Животных анестезировали кетамином и ЭКГ записывали с использованием восьми отведений. Измерения ЭКГ (включая частоту сердечных сокращений) проводили по собранным данным с использованием системы прикладных программ Life Science Suite Ponemah Physiology Platform через DSI, с использованием отведений I, II, aVF, CG4RL и CV4LL в качестве стандарта. Коррекцию на частоту сердечных сокращений для интервала QT (QTc) рассчитывали с использованием формулы Базетта.
Кровяное давление регистрировали перед первой дозой, после 12 недель введения доз (13 доз) и приблизительно через 1 неделю после завершения введения доз. Не было замечено значительных изменений значений SBP или DBP в любой из групп животных, получавших препарат, по сравнению с животными, получавшими носитель. Средние по группам частоты сердечных сокращений были относительно постоянными по группам дозировок и по моментам времени измерений, без выявленых статистических различий. Концентрации антитела G1 в плазме измеряли на протяжении первой недели введения доз и во время определения кровяного давления и ЭКГ, и демонстрировали кумулятивный эффект при повторном еженедельном введении доз.
Кроме того, в отношении результатов ЭКГ, не наблюдалось значительных различий в значениях интервала QTc для всех доз и моментов времени. Дополнительно, не наблюдалось никаких значительных или релевантных изменений ЭКГ по любому из параметров ЭКГ, анализируемых в ходе данных исследований.
В общем, антитело G1 очень хорошо переносилось в обоих исследованиях, при этом не было замечено клинически значимых изменений любых гемодинамических параметров или любых релевантных изменений любых параметров ЭКГ. У яванских макак, долгосрочное ингибирование CGRP антителом G1 очевидно не влияло на сердечно-сосудистые и гемодинамические параметры.
Следует понимать, что примеры и варианты реализации, описанные в данном документе, служат только иллюстративным целям, и что, в свете этого, особы, квалифицированные в данной области техники, будут предвидеть различные модификации или изменения, которые должны быть включены в сущ- 78 043536 ность и объем данной заявки. Все публикации, патенты и патентные заявки, упоминаемые в данном документе, настоящим включены в данный документ в качестве ссылок в полном объеме по существу в такой же степени, как если бы для каждой индивидуальной публикации, патента или патентной заявки было конкретно и индивидуально указано, что они таким образом включены в качестве ссылок.
Депонирование биологического материала.
Следующие материалы были депонированы в Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209, USA (ATCC)):
Материал Антитело № Номер доступа ATCC Дата депонировани pDb.CGRP.hFcGI тяжелая цепь G1 РТА-6867 15 июля 2005 г.
pEb.CGRP.hKGI легкая цепь G1 РТА-6866 15 июля 2005 г.
Вектор pEb.CGRP.hKGI представляет собой полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок легкой цепи G1 и константную область каппа-легкой цепи; и вектор pDb.CGRP.hFcGI представляет собой полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи G1 и константную область тяжелой цепи IgG2, содержащую следующие мутации: А330Р331 на S330S331 (нумерация аминокислот в соответствии с последовательностью IgG2 дикого типа; см. Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624).
Указанное депонирование было проведено согласно положениям Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целяй патентной процедуры и правилах его выполнения (Будапештский договор). Это обеспечивает сохранение жизнеспособной депонированной культуры в течение 30 лет с даты депонирования. Депонированный материал должен быть доступным через АТСС согласно условиям Будапештского договора, и в соответствии с соглашением между Rinat Neuroscience Corp. и АТСС, которое обеспечивает постоянную и неограниченную доступность потомства депонированной культуры для публики после выдачи соответствующего патента США или после раскрытия для публики любой патентной заявки США или иностранной патентной заявки, в зависимости от того, какая из них появится раньше, и гарантирует доступность потомства для особы, определенной комиссаром по патентам и торговым маркам США как имеющей право на это в соответствии с разделом 122 Свода законов США (35 USC Section 122) и правилами действия комиссара при этом (включая раздел 1.14 Свода федеральных постановлений США (37 CFR Section 1.14) с конкретной ссылкой на 886 OG 638). Правопреемник данной заявки согласился с тем, что если культура депонированных материалов погибнет или будет утрачена или уничтожена при культивировании в пригодных условиях, то материалы будут немедленно заменены после получения уведомления на другие такие же. Доступность депонированных материалов не должна истолковываться как лицензия на практическую реализацию изобретения в нарушение прав, предоставленных властью любого правительства в соответствии с его патентным за конодательством.
Последовательности антител.
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи G1 (SEQ ID NO: 1) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWISWVRQAPGKGLEWVAEIRSESDA
SATHYAEAVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA3flTAVYYCLAYFDYGLAIQNYW
GQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи G1 (SEQ ID NO: 2)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASKRVTTYVSWYQQKPGQAPRLLIYGASNRYLGI
PARF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDF AVYYCSQ S YNYP YTFGQGTKLEIK
G1 CDR H1 (расширенный CDR) (SEQ ID NO: 3)
GFTFSNYWIS
G1 CDR H2 (расширенный CDR) (SEQ ID NO: 4)
EIRSESDASATHYAEAVKG | |
G1 CDR H3 (SEQ ID NO: 5) | YFDYGLAIQNY |
G1 CDR L1 (SEQ ID NO: 6) | KASKRVTTYVS |
G1 CDR L2 (SEQ ID NO: 7) | GASNRYL |
G1 CDR L3 (SEQ ID NO: 8) | SQSYNYPYT |
Нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи G1 (SEQ ID NO: 9)
- 79 043536
GAAGTTCAGCTGGTTGAATCCGGTGGTGGTCTGGTTCAGCCAGGTGGTTCCCTGC GTCTGTCCTGCGCTGCTTCCGGTTTCACCTTCTCCAACTACTGGATCTCCTGGGTT CGTCAGGCTCCTGGTAAAGGTCTGGAATGGGTTGCTGAAATCCGTTCCGAATCCG ACGCGTCCGCTACCCATTACGCTGAAGCTGTTAAAGGTCGTTTCACCATCTCCCGT GACAACGCTAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGTGCTGAAGACA CCGCTGTTTACTACTGCCTGGCTTACTTTGACTACGGTCTGGCTATCCAGAACTAC TGGGGTCAGGGTACCCTGGTTACCGTTTCCTCC
Нуклеотидная последовательность вариабельной области легкой цепи G1 (SEQ ID NO: 10) GAAATCGTTCTGACCCAGTCCCCGGCTACCCTGTCCCTGTCCCCAGGTGAACGTGCT
ACCCTGTCCTGCAAAGCTTCCAAACGGGTTACCACCTACGTTTCCTGGTACCAGCAG AAACCCGGTCAGGCTCCTCGTCTGCTGATCTACGGTGCTTCCAACCGTTACCTCGGTA TCCCAGCTCGTTTCTCCGGTTCCGGTTCCGGTACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTC CCTGGAACCCGAAGACTTCGCTGTTTACTACTGCAGTCAGTCCTACAACTACCCCTA CACCTTCGGTCAGGGTACCAAACTGGAAATCAAA
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи полного антитела G1 (включая модифицированный IgG2, как описано в данном документе) (SEQ ID NO: 11)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWISWVRQAPGKGLEWVAEIRSESDA SATHYAEAVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRADflTAVYYCLAYFDYGLAIQNYWG QGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPML DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Аминокислотная последовательность легкой цепи полного антитела G1 (SEQ ID NO: 12) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASKRVTTYVSWYQQKPGQAPRLLIYGASNRYLGI
PARF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDF AVYYC SQ S YNYP YTFGQGTKLEIKRTVAAP S VFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLS STLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLS SP VTKSFNRGEC
Нуклеотидная последовательность тяжелой цепи полного антитела G1 (включая модифицированный IgG2, как описано в данном документе) (SEQ ID NO: 13) GAAGTTCAGCTGGTTGAATCCGGTGGTGGTCTGGTTCAGCCAGGTGGTTCCCTGC
GTCTGTCCTGCGCTGCTTCCGGTTTCACCTTCTCCAACTACTGGATCTCCTGGGTT CGTCAGGCTCCTGGTAAAGGTCTGGAATGGGTTGCTGAAATCCGTTCCGAATCCG ACGCGTCCGCTACCCATTACGCTGAAGCTGTTAAAGGTCGTTTCACCATCTCCCG TGACAACGCTAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGTGCTGAAGAC
- 80 043536
ACCGCTGTTTACTACTGCCTGGCTTACTTTGACTACGGTCTGGCTATCCAGAACTA CTGGGGTCAGGGTACCCTGGTTACCGTTTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCT GTCTTCCCACTGGCCCCATGCTCCCGCAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGG GCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCAGAACCTGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGG CGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCCTCAGGTCTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCATCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCT ACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCAAGCAACACCAAGGTCGACAAGACCGTGG AGAGAAAGTGTTGTGTGGAGTGTCCACCTTGTCCAGCCCCTCCAGTGGCCGGACC ATCCGTGTTCCTGTTCCCTCCAAAGCCAAAGGACACCCTGATGATCTCCAGAACC CCAGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCAGAGGTGCAG TTCAACTGGTATGTGGACGGAGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCAAGA GAGGAGCAGTTCAACTCCACCTTCAGAGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGGTGCACC AGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTATAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGGACTGC CATCCAGCATCGAGAAGACCATCTCCAAGACCAAGGGACAGCCAAGAGAGCCAC AGGTGTATACCCTGCCCCCATCCAGAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCC TGACCTGTCTGGTGAAGGGATTCTATCCATCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTC CAACGGACAGCCAGAGAACAACTATAAGACCACCCCTCCAATGCTGGACTCCGA CGGATCCTTCTTCCTGTATTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAG GGAAACGTGTTCTCTTGTTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTATACCC AGAAGAGCCTGTCCCTGTCTCCAGGAAAGTAA
Нуклеотидная последовательность легкой цепи полного антитела G1 (SEQ ID NO: 14) GAAATCGTTCTGACCCAGTCCCCGGCTACCCTGTCCCTGTCCCCAGGTGAACGTG
CTACCCTGTCCTGCAAAGCTTCCAAACGGGTTACCACCTACGTTTCCTGGTACCA GCAGAAACCCGGTCAGGCTCCTCGTCTGCTGATCTACGGTGCTTCCAACCGTTAC CTCGGTATCCCAGCTCGTTTCTCCGGTTCCGGTTCCGGTACCGACTTCACCCTGAC CATCTCCTCCCTGGAACCCGAAGACTTCGCTGTTTACTACTGCAGTCAGTCCTAC AACTACCCCTACACCTTCGGTCAGGGTACCAAACTGGAAATCAAACGCACTGTG GCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCTCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCCGGAA CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCGCGCGAGGCCAAAGTACA GTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCCGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCT GAGTTCTCCAGTCACAAAGAGCTTCAACCGCGGTGAGTGCTAA
Сравнение аминокислотных последовательностей человеческого и крысиного CGRP (человеческий α-CGRP (SEQ ID NO: 15); человеческий β-CGRP (SEQ ID NO: 43); крысиный α-CGRP (SEQ ID NO: 41); и крысиный β-CGRP (SEQ ID NO: 44)):
NH2-ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-CONH2 (человеческий α-CGRP)
NH2-ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-CONH2 (человеческий β-CGRP)
NH2-SCNTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKDNFVPTNVGSEAF-CONH2 (крысиный α-CGRP)
NH2-SCNTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKDNFVPTNVGSKAF-CONH2 (крысиный β-CGRP)
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR17 (SEQ ID NO: 58) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSEYHSG
VPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR22 (SEQ ID NO: 59)
- 81 043536
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWMGAIYE GTGDTRYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRS3flTAVYYCARLSDYVSGFSYW GQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR18 (SEQ ID NO: 60) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSEYHSG
VPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR23 (SEQ ID NO: 61) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWMGAIYE
GTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRS3flTAVYYCARLSDYVSGFSYW
GQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR19 (SEQ ID NO: 62) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKDISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSGYHSG
VP SRF SGSGSGTDFTLTIS SLQPEDF AT YYCQQGDALPPTFGGGTKVEIK
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR24 (SEQ ID NO: 63) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWMGAIYEG
TGKTVYIQKFADRVTITADKSTSTAYMELSSLRSЭДTAVYYCARLSDYVSGFGYWG
QGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR20 (SEQ ID NO: 64) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSEYHSGV
PSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTKLEIK
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR25 (SEQ ID NO: 65) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWMGAIYE
GTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДTAVYYCARLSDYVSGFGYW
GQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR21 (SEQ ID NO: 66)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSGYHSG
VPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGTKVEIK
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR26 (SEQ ID NO: 67) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWMGAIYEG
TGKTVYIQKFAGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSSflTAVYYCARLSDYVSGFGYWG
QGTTVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR27 (SEQ ID NO: 68)
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLAS
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR28 (SEQ ID NO: 69) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGA
TYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAЭДTAVYFCARGDIW GQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR29 (SEQ ID NO: 70)
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLAS
GVPSRF SGSGSGTDFTLTIS SLQPED VATYYCLGS YDC S SGDCF VFGGGTKVEIKR
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR30 (SEQ ID NO: 71) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGIND
NTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRA3flTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR31 (SEQ ID NO: 72) QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLAS
GVPSRF SGSGSGTDFTLTIS SLQPED VATYYCLGS YDC S SGDCF VFGGGTKVEIKR
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR32 (SEQ ID NO: 73) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGIND
NTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRA3flTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR33 (SEQ ID NO: 74)
-
Claims (16)
- QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRАминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR34 (SEQ ID NO: 75) QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTDflTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSАминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR35 (SEQ ID NO: 76) QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRАминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR36 (SEQ ID NO: 77) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAЭДTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSАминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи LCVR37 (SEQ ID NO: 78) QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSTTLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVLАминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи HCVR38 (SEQ ID NO: 79) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSIKYSVDSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRA3flTAVYYCARDRLNYYDSSGYYHYKYYGMAVWGQGTTVTVS SФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ лечения или снижения частоты случаев мигрени у субъекта, включающий введение субъекту композиции, содержащей моноклональное антитело, которое ингибирует путь пептида, связанного с геном кальцитоцина (CGRP), с частотой один раз в месяц, причем введение является подкожным, причем количество моноклонального антитела, вводимое один раз в месяц, составляет 225-900 мг, и при этом моноклональное антитело содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 12.
- 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что мигрень представляет собой хроническую мигрень.
- 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что мигрень представляет собой эпизодическую мигрень.
- 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что частота мигрени снижается по меньшей мере на семь дней после разового введения.
- 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что месячное количество часов мигрени, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 40 или более часов по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения.
- 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что месячное количество дней мигрени, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 3 или более дней по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения.
- 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что месячное количество часов мигрени, испытываемой субъектом, снижается после указанного введения на 25% или более по сравнению с уровнем, наблюдавшимся у субъекта до введения.
- 8. Способ по п.1, отличающийся тем, что количество моноклонального антитела, вводимое в первый месяц, отличается от количества моноклонального антитела, вводимого во второй месяц.
- 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что количество моноклонального антитела, вводимое в первый месяц, больше, чем количество моноклонального антитела, вводимое во второй месяц.
- 10. Способ по п.1, отличающийся тем, что введение включает использование одного или более предварительно наполненных шприцев, содержащих моноклональное антитело.
- 11. Способ по п.1, отличающийся тем, что моноклональное антитело в композиции готовят в концентрации 150 мг/мл.
- 12. Способ по п.1, отличающийся тем, что композицию, содержащую моноклональное антитело, вводят в объеме 1,5 мл.
- 13. Способ по п.1, дополнительно включающий введение субъекту второго агента одновременно или последовательно с моноклональным антителом.
- 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что второй агент выбирают из группы, состоящей из агонистов 5-НТ1, триптанов, алкалоидов спорыньи и нестероидных противовоспалительных лекарственных средств.
- 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что месячное применение второго агента субъектом снижается по меньшей мере на 15% после введения композиции, содержащей моноклональное антитело.
- 16. Способ по п.14, отличающийся тем, что второй агент представляет собой триптан.-
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US61/968,897 | 2014-03-21 | ||
US62/083,809 | 2014-11-24 | ||
US62/119,778 | 2015-02-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA043536B1 true EA043536B1 (ru) | 2023-05-31 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11555064B2 (en) | Treating headache comprising administering an antibody to calcitonin gene-related peptide | |
US10329343B2 (en) | Methods for treating headache using antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide | |
US20230235032A1 (en) | Antagonist Antibodies Directed Against Calcitonin Gene-Related Peptide and Methods Using Same | |
US20220048986A1 (en) | Preventing, treating, and reducing (persistent) post-traumatic headache | |
EA043536B1 (ru) | Антагонистические антитела, направленные против пептида, кодируемого геном кальцитонина, и способы их применения | |
NZ724442B2 (en) | Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same |