EA043419B1 - METHOD FOR OBTAINING LYOPHILIZED PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON THERAPEUTIC PROTEIN - Google Patents
METHOD FOR OBTAINING LYOPHILIZED PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON THERAPEUTIC PROTEIN Download PDFInfo
- Publication number
- EA043419B1 EA043419B1 EA202090731 EA043419B1 EA 043419 B1 EA043419 B1 EA 043419B1 EA 202090731 EA202090731 EA 202090731 EA 043419 B1 EA043419 B1 EA 043419B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- protein
- approximately
- concentration
- target
- formulation
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 246
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 245
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 82
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims description 35
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 241
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 146
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 101
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 41
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 40
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 38
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 25
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 25
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 23
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 22
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 22
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 21
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 21
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 20
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 17
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 17
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 17
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 12
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 12
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 12
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 12
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 claims description 9
- 108010017584 romiplostim Proteins 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 8
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 claims description 8
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 8
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 7
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 229960004262 romiplostim Drugs 0.000 claims description 7
- WUWDLXZGHZSWQZ-WQLSENKSSA-N semaxanib Chemical compound N1C(C)=CC(C)=C1\C=C/1C2=CC=CC=C2NC\1=O WUWDLXZGHZSWQZ-WQLSENKSSA-N 0.000 claims description 7
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 claims description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 5
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 claims description 5
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 claims description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- CMXXUDSWGMGYLZ-XRIGFGBMSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CMXXUDSWGMGYLZ-XRIGFGBMSA-N 0.000 claims description 3
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 3
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 229940097346 sulfobutylether-beta-cyclodextrin Drugs 0.000 claims 4
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 claims 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 57
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 51
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 30
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 28
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 20
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 15
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 14
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 14
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 14
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 11
- 238000012369 In process control Methods 0.000 description 11
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 11
- 238000010965 in-process control Methods 0.000 description 11
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- -1 Citrate Succinate Acetate Glutamate Chemical compound 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 9
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 8
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 8
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 8
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 8
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 8
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 8
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 8
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 8
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 8
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 8
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 8
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 8
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 7
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 7
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 7
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 7
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 7
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 6
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 5
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 5
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 5
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 5
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 description 4
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 description 4
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 4
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 4
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 4
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 4
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 4
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 108010067396 dornase alfa Proteins 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 230000000065 osmolyte Effects 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 4
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 4
- DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxane-3,4,5-triol;dihydrate Chemical compound O.O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229940063137 norditropin Drugs 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 3
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 2
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 2
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 2
- 206010020852 Hypertonia Diseases 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXEKPEMOWBOYRF-UHFFFAOYSA-N [2-[(1-azaniumyl-1-imino-2-methylpropan-2-yl)diazenyl]-2-methylpropanimidoyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C(C)(C)N=NC(C)(C)C(N)=N LXEKPEMOWBOYRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 229940099550 actimmune Drugs 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 2
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 229940073621 enbrel Drugs 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 238000012395 formulation development Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 2
- 108010042414 interferon gamma-1b Proteins 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940087875 leukine Drugs 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229940071846 neulasta Drugs 0.000 description 2
- 229940029345 neupogen Drugs 0.000 description 2
- 229940127285 new chemical entity Drugs 0.000 description 2
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 2
- 108010044644 pegfilgrastim Proteins 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 2
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 2
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 229940107568 pulmozyme Drugs 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 102220080600 rs797046116 Human genes 0.000 description 2
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 2
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Polymers OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N (2s)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSNRWDQKZIEDDB-SQYFZQSCSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC DSNRWDQKZIEDDB-SQYFZQSCSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-dihydroxyethyl)oxolane-3,4-diol Polymers OCC(O)C1OCC(O)C1O JNYAEWCLZODPBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 3-[dimethyl-[3-[[(4r)-4-[(3r,5s,7r,8r,9s,10s,12s,13r,14s,17r)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]propyl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC(O)CS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 0.000 description 1
- UXIKEUINZRRDQO-UHFFFAOYSA-N 3-methylphenol;phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1.CC1=CC=CC(O)=C1 UXIKEUINZRRDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001535291 Analges Species 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N Dimethyl dicarbonate Chemical compound COC(=O)OC(=O)OC GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010035713 Glycodeoxycholic Acid Proteins 0.000 description 1
- WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N Glycodeoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 1
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N Isomaltose Natural products OC[C@H]1O[C@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N 0.000 description 1
- 125000000899 L-alpha-glutamyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- SNEIUMQYRCDYCH-LURJTMIESA-N N(alpha)-acetyl-L-arginine Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N SNEIUMQYRCDYCH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001274216 Naso Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N O6-alpha-D-Galactopyranosyl-D-galactose Natural products OCC1OC(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)C(O)C(O)C1O AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072194 Ovidrel Proteins 0.000 description 1
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 description 1
- 102400000050 Oxytocin Human genes 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 description 1
- 206010034016 Paronychia Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001363 Polidocanol Polymers 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002701 Polyoxyl 40 Stearate Polymers 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229920002642 Polysorbate 65 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101800001707 Spacer peptide Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N Sulfobutanedioic acid Chemical class OC(=O)CC(C(O)=O)S(O)(=O)=O ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- PGTXKIZLOWULDJ-UHFFFAOYSA-N [Mg].[Zn] Chemical compound [Mg].[Zn] PGTXKIZLOWULDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 229940003504 avonex Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007068 beta-elimination reaction Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 229940021459 betaseron Drugs 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229940101815 blincyto Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- NFCRBQADEGXVDL-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NFCRBQADEGXVDL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004182 chemical digestion Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- WXCQAWGXWVRCGP-UHFFFAOYSA-N choline sulfate Chemical compound C[N+](C)(C)CCOS([O-])(=O)=O WXCQAWGXWVRCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 108010017271 denileukin diftitox Proteins 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N dimyristoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L disodium;2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCC(C([O-])=O)(C(C([O-])=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCO SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000005429 filling process Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229940053641 forteo Drugs 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940063135 genotropin Drugs 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N gentiobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940047135 glycate Drugs 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N glycodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 229940048921 humira Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 229940054136 kineret Drugs 0.000 description 1
- 229950006462 lauromacrogol 400 Drugs 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940063149 nutropin Drugs 0.000 description 1
- QXFHPLPMTXEJPV-UHFFFAOYSA-N octane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCS(O)(=O)=O QXFHPLPMTXEJPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 229940100027 ontak Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000013495 osmolality determination method Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940112876 ovidrel Drugs 0.000 description 1
- 238000010525 oxidative degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 description 1
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 description 1
- 230000037324 pain perception Effects 0.000 description 1
- 235000016236 parenteral nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 230000037048 polymerization activity Effects 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001816 polyoxyethylene sorbitan tristearate Substances 0.000 description 1
- 235000010988 polyoxyethylene sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099429 polyoxyl 40 stearate Drugs 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229940099511 polysorbate 65 Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229940093916 potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000006318 protein oxidation Effects 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 229940038850 rebif Drugs 0.000 description 1
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical class O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical group [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003339 sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N sorbitan Polymers OCC(O)C1OCC(O)[C@@H]1O JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910001428 transition metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229940099073 xolair Drugs 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретениеField of technology to which the invention relates
Настоящее изобретение относится к биофармацевтическим препаратам, в частности к терапевтическим белкам, способам их применения, фармацевтическим составам на их основе и способам получения фармацевтических составов. В частности, настоящее изобретение относится к способам получения лиофилизированных фармацевтических составов.The present invention relates to biopharmaceuticals, in particular to therapeutic proteins, methods of their use, pharmaceutical compositions based on them and methods for producing pharmaceutical compositions. In particular, the present invention relates to methods for preparing lyophilized pharmaceutical compositions.
Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for creating the invention
За последние десять лет развитие технологий сделало возможным получение разнообразных активных молекул для фармацевтических путей применения. Поскольку понимание природы механизмов биологического действия прогрессирует, эти молекулы можно разрабатывать с определенными свойствами, с которыми небольшие количества продукта могут быть эффективными.Over the past ten years, technological developments have made it possible to obtain a variety of active molecules for pharmaceutical applications. As understanding of the nature of the mechanisms of biological action progresses, these molecules can be developed with specific properties for which small amounts of the product can be effective.
Поскольку эти молекулы могут быть более крупными и/или более сложными, чем традиционные органические и неорганические лекарственные средства (т.е. содержать несколько функциональных групп в дополнение к сложным трехмерным структурам), составление таких продуктов создает особые проблемы. Чтобы продукт оставался биологически активным, в составе должна сохраняться неизменной конформационная целостность по меньшей мере сердцевинной последовательности аминокислот белка с защитой в то же время этих нескольких функциональных групп белка от разрушения. Пути разрушения белков могут предусматривать химическую нестабильность (т.е. любой процесс, который включает модификацию белка посредством образования или расщепления связей, что приводит к образованию нового химического объекта) или физическую нестабильность (т.е. изменения структуры белка высшего порядка). Химическая нестабильность может быть результатом дезамидирования, рацемизации, гидролиза, окисления, бета-элиминирования или дисульфидного обмена. Физическая нестабильность может быть результатом, например, денатурации, агрегации, осаждения или адсорбции. Тремя наиболее распространенными путями разрушения белков являются агрегация, дезамидирование и окисление белков. Cleland et al. (1993), Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377.Because these molecules may be larger and/or more complex than traditional organic and inorganic drugs (ie, contain multiple functional groups in addition to complex three-dimensional structures), the formulation of such products poses special challenges. For a product to remain biologically active, the composition must maintain unchanged the conformational integrity of at least the core amino acid sequence of the protein while protecting these several functional groups of the protein from destruction. Pathways for protein degradation may involve chemical instability (i.e., any process that involves modification of a protein through the formation or cleavage of bonds, resulting in the formation of a new chemical entity) or physical instability (i.e., higher order changes in protein structure). Chemical instability may result from deamidation, racemization, hydrolysis, oxidation, beta elimination, or disulfide exchange. Physical instability may result from, for example, denaturation, aggregation, precipitation or adsorption. The three most common pathways of protein degradation are protein aggregation, deamidation, and protein oxidation. Cleland et al. (1993), Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377.
Эти разработанные молекулы ввиду их синтетической природы являются преимущественно лиофилизированными (высушенными посредством сублимации), так как данная форма выпуска может обеспечивать улучшенную стабильность при хранении. Сублимационная сушка представляет собой обычно используемую методику сохранения белков, которая служит для удаления воды из белкового препарата, представляющего интерес. Сублимационная сушка или лиофилизация представляет собой способ, с помощью которого материал, который должен быть высушен, сначала замораживают, а затем ледяной или замороженный растворитель удаляют посредством сублимации в вакуумной среде. В предварительно лиофилизированные составы может быть включено вспомогательное вещество для повышения стабильности во время процесса сублимационной сушки и/или для улучшения стабильности лиофилизированного продукта при хранении. Pikal, М. (1990), Biopharm. 3(9)26-30 и Arakawa et al. (1991), Pharm. Res. 8(3):285-291.These developed molecules, due to their synthetic nature, are preferably lyophilized (freeze-dried) as this form of release can provide improved storage stability. Freeze drying is a commonly used protein preservation technique that serves to remove water from the protein preparation of interest. Freeze drying or lyophilization is a method by which the material to be dried is first frozen and then the ice or frozen solvent is removed by sublimation in a vacuum environment. An excipient may be included in pre-lyophilized formulations to improve stability during the freeze-drying process and/or to improve the storage stability of the lyophilized product. Pikal, M. (1990), Biopharm. 3(9)26-30 and Arakawa et al. (1991), Pharm. Res. 8(3):285-291.
Разработанная молекула с конкретными биологическими мишенями и вытекающими из этого требованиями к дозировке продукта создает новые проблемы для способа изготовления. Существующий уровень техники включает простой способ, где продукт составляют до целевой концентрации и затем разливают в контейнеры с заданным объемом.A developed molecule with specific biological targets and resulting product dosage requirements creates new challenges for the manufacturing method. The current state of the art includes a simple method where the product is formulated to a target concentration and then filled into containers of a predetermined volume.
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
Настоящее изобретение направлено на способ получения лиофилизированного лекарственного препарата. В частности, оно относится к составлению, разливанию и обеспечению требуемого количества продукта, присутствующего после восстановления с помощью фиксированного объема разбавителя для лиофилизированного продукта для применения.The present invention is directed to a method for producing a lyophilized drug. In particular, it relates to the formulation, dispensing and provision of the required amount of product present after reconstitution with a fixed volume of diluent for the lyophilized product for use.
В соответствии с настоящим изобретением предусмотрен способ получения лиофилизированного фармацевтического состава на основе терапевтического белка, который включает получение состава с нерасфасованным количеством терапевтического белка, измерение концентрации терапевтического белка в указанном нерасфасованном составе, корректировку заполняемой массы белка в указанном нерасфасованном составе с получением фиксированной дозы белка и лиофилизацию состава со скорректированной заполняемой массой белка с получением конечного состава в контейнере, где концентрация продукта после восстановления с помощью фиксированного объема находится в пределах предварительно определенного диапазона приемлемых значений.In accordance with the present invention, there is provided a method for producing a lyophilized pharmaceutical composition based on a therapeutic protein, which includes preparing a composition with a bulk amount of therapeutic protein, measuring the concentration of therapeutic protein in said bulk composition, adjusting the loading weight of the protein in said bulk composition to obtain a fixed dose of protein, and lyophilization formulation with an adjusted protein fill mass to produce a final formulation in a container where the concentration of the product after reconstitution with a fixed volume is within a predetermined range of acceptable values.
В вышеуказанном способе концентрация белка в конечном составе предпочтительно является равной приблизительно 20 или 25 мг/мл или меньше, при этом наиболее предпочтительно она составляет приблизительно 0,5 мг/мл, приблизительно 0,05 мг/мл, приблизительно 18 мг/мл, приблизительно 20 мг/мл и приблизительно 21 мг/мл. Предпочтительные терапевтические белки в способах согласно настоящему изобретению представляют собой ромиплостим, блинатумомаб, инфликсимаб, трастузумаб, AMG 701 и AMG 330. AMG 701 и AMG 330 представляют собой биспецифические конструкции на основе одноцепочечных антител, и другие биспецифические конструкции на основе одноцепочечных антител (например, биспецифические активаторы, привлекающие Т-клетки) представляют собой предпочтительIn the above method, the protein concentration in the final formulation is preferably about 20 or 25 mg/ml or less, most preferably about 0.5 mg/ml, about 0.05 mg/ml, about 18 mg/ml, about 20 mg/ml and approximately 21 mg/ml. Preferred therapeutic proteins in the methods of the present invention are romiplostim, blinatumomab, infliximab, trastuzumab, AMG 701 and AMG 330. AMG 701 and AMG 330 are bispecific single chain antibody constructs, and other bispecific single chain antibody constructs (e.g., bispecific activators that attract T cells) represent a preferred
- 1 043419 ные терапевтические белки в способах по настоящему изобретению. Предпочтительные фармацевтические вспомогательные вещества, присутствующие в составе, включают в себя сахара, при этом наиболее предпочтительными являются трегалоза, сахароза и гидрат любого из них. Предпочтительные фармацевтические вспомогательные вещества также включают в себя буферные вещества, при этом предпочтительными являются гистидин, моногидрат лимонной кислоты, фосфат натрия, фосфат калия и глутаминовая кислота. Предпочтительные вспомогательные вещества дополнительно включают в себя поверхностно-активные вещества, при этом наиболее предпочтительными являются полисорбат 20 и полисорбат 80. Предпочтительные вспомогательные вещества и терапевтические белки, применяемые в соответствии со способами согласно настоящему изобретению, представлены в табл. 1 с предпочтительными приблизительными концентрациями каждого перечисленного ниже белка и вспомогательного вещества.- 1043419 new therapeutic proteins in the methods of the present invention. Preferred pharmaceutical excipients present in the formulation include sugars, with trehalose, sucrose and a hydrate of any of these being most preferred. Preferred pharmaceutical excipients also include buffering agents, with histidine, citric acid monohydrate, sodium phosphate, potassium phosphate and glutamic acid being preferred. Preferred excipients further include surfactants, with polysorbate 20 and polysorbate 80 being most preferred. Preferred excipients and therapeutic proteins used in accordance with the methods of the present invention are presented in table. 1 with preferred approximate concentrations of each protein and excipient listed below.
Таблица 1Table 1
Предпочтительные компоненты составаPreferred Formulation Components
В соответствии с настоящим изобретением состав может дополнительно содержать другие вспомогательные вещества, описанные в данном документе ниже.In accordance with the present invention, the composition may additionally contain other excipients described herein below.
- 2 043419- 2 043419
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
Фиг. 1 представляет собой карту поверхности отклика, на которой показано иллюстративное проектное поле для низкодозированного продукта, в котором параметры состава и заполняемая масса будут соответствовать типичной стратегии контроля. Серая область представляет область, в которой изменчивость способа/восстановления будет характеризоваться более чем 50% вероятностью получения ошибочного результата подбора концентрации белка. В большом квадрате показан текущий рабочий диапазон для разработки состава. В меньшем прямоугольнике показан эффективный рабочий диапазон.Fig. 1 is a response surface map showing an exemplary design field for a low-dose product where the formulation parameters and fill mass would correspond to a typical control strategy. The gray area represents the area where method/recovery variability would have a greater than 50% chance of mismatching the protein concentration. The large square shows the current operating range for formulation development. The smaller box shows the effective operating range.
Фиг. 2 представляет собой карту поверхности отклика, на которой показано иллюстративное проектное поле для низкодозированного продукта, в котором рассматривается осмоляльность в дополнение к концентрации нерасфасованного продукта и заполняемому объему. В светло-сером участке показана спецификация по концентрации в лекарственном препарате с увеличенным шагом, где изменчивость способа/восстановления будет характеризоваться более чем 50% вероятностью получения ошибочного результата подбора концентрации белка. В темно-серой зоне показана спецификация по осмоляльности. В прямоугольнике показан диапазон проектного поля для заполняемой массы (ось x) и концентрации в нерасфасованном составе (ось y) в рабочем диапазоне для внутрипроизводственного контроля (IPC) с пределом предупреждения (ALOR).Fig. 2 is a response surface map showing an exemplary design field for a low-dose product that considers osmolality in addition to bulk product concentration and fill volume. The light gray area shows the drug concentration specification in increments where method/recovery variability would have a greater than 50% chance of mismatching the protein concentration. The dark gray area shows the osmolality specification. The box shows the range of the design field for fill mass (x-axis) and bulk concentration (y-axis) within the operating range for in-process control (IPC) with warning limit (ALOR).
Фиг. 3 представляет собой карту поверхности отклика, на которой показан пример пригодной, но не устойчивой к ошибкам стратегии контроля заполняемой массы и параметров состава. С помощью кривой и двунаправленной стрелки показана вероятная ошибка целевого параметра заполнения. В светло-серой зоне представлена спецификация по концентрации в лекарственном препарате с увеличенным шагом, при этом в светло-серой зоне показано, где изменчивость способа/восстановления будет характеризоваться более чем 50% вероятностью получения ошибочного результата подбора концентрации белка. В темно-серой зоне определена спецификация по осмоляльности. В прямоугольнике показан IPC/ALOR.Fig. 3 is a response surface map showing an example of a useful but not error-tolerant strategy for controlling fill mass and formulation parameters. The curve and double-headed arrow indicate the likely error of the target fill parameter. The light gray area represents the drug concentration specification in increments, with the light gray area showing where method/reconstitution variability would have a greater than 50% chance of mismatching the protein concentration. The dark gray area defines the osmolality specification. The rectangle shows IPC/ALOR.
Фиг. 4 представляет собой карту поверхности отклика, на которой показан пример стратегии контроля заполняемой массы и параметров состава с затрудненным контролем порогов диапазона с ожидаемой меньшей концентрацией в нерасфасованном составе и меньшей заполняемой массой. С помощью левой кривой и двунаправленной стрелки показана вероятная ошибка целевого параметра заполнения при низком заполняемом объеме. С помощью правой кривой и двунаправленной стрелки показана вероятная ошибка целевого параметра заполнения при большем заполняемом объеме. В светло-серой зоне представлена спецификация по концентрации в лекарственном препарате с увеличенным шагом, при этом в светло-серой зоне показано, где изменчивость способа/восстановления будет характеризоваться более чем 50% вероятностью получения ошибочного результата подбора концентрации белка. В темносерой зоне определена спецификация по осмоляльности. В прямоугольнике показан IPC/ALOR.Fig. 4 is a response surface map showing an example of a control strategy for fill mass and formulation parameters with difficult control of range thresholds with an expected lower bulk concentration and lower fill mass. The left curve and double-headed arrow show the likely fill target error when fill volume is low. The right curve and double-headed arrow show the likely fill target error at larger fill volumes. The light gray area represents the drug concentration specification in increments, with the light gray area showing where method/reconstitution variability would have a greater than 50% chance of mismatching the protein concentration. The dark gray zone defines the osmolality specification. The rectangle shows IPC/ALOR.
Фиг. 5 представляет собой карту поверхности отклика, на которой показан пример комбинированной стратегии использования результата подбора концентрации в нерасфасованном составе для последующей корректировки заданного значения заполняемой массы с учетом общей дозы продукта в целевом флаконе, которая в результате приводит к пригодному, устойчивому к ошибкам способу получения лиофилизированного лекарственного средства. С помощью кривой и двунаправленной стрелки показана вероятная ошибка целевого параметра заполнения. В светло-серой зоне определена спецификация по концентрации в лекарственном препарате с увеличенным шагом, как показано на фиг. 1-4. В темно-серой зоне определена спецификация по осмоляльности. В ромбоиде показан IPC/ALOR, усеченный спецификацией по осмоляльности при наибольших заполняемых объемах в пределах IPC/ALOR.Fig. 5 is a response surface map illustrating an example of a combined strategy of using the result of concentration selection in a bulk formulation to subsequently adjust the fill mass setpoint based on the total product dose in the target vial, resulting in a suitable, error-tolerant process for producing a lyophilized drug. facilities. The curve and double-headed arrow indicate the likely error of the target fill parameter. The light gray area defines the drug concentration specification in increments as shown in FIG. 1-4. The dark gray area defines the osmolality specification. The rhomboid shows the IPC/ALOR truncated by the osmolality specification at the largest fill volumes within the IPC/ALOR.
На фиг. 6 показана концентрация белкового продукта после восстановления в зависимости от нормализованных значений заполняемой массы, как определено в соответствии с примером 1 далее в данном документе.In fig. 6 shows the protein product concentration after reconstitution as a function of normalized fill weight values as determined in accordance with Example 1 hereinafter.
На фиг. 7 показана осмоляльность в зависимости от нормализованных значений заполняемой массы, как определено в соответствии с примером 1 далее в данном документе.In fig. 7 shows osmolality as a function of normalized fill mass values as determined in accordance with Example 1 later herein.
Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention
Определение терминовDefinition of terms
В последующем описании широко используется ряд терминов. Для облегчения понимания настоящего изобретения приведены следующие определения.In the following description, a number of terms are used extensively. To facilitate understanding of the present invention, the following definitions are provided.
Если не указано иное, то форма единственного числа существительных и выражение по меньшей мере один используются взаимозаменяемо и означают один или больше одного. Кроме того, если по контексту не требуется иное, термины в единственном числе будут включать их формы во множественном числе, а термины во множественном числе будут включать их формы в единственном числе.Unless otherwise noted, the singular form of nouns and the expression at least one are used interchangeably to mean one or more than one. In addition, unless the context otherwise requires, terms in the singular will include their plural forms, and terms in the plural will include their singular forms.
Как используется в данном документе, фармацевтический состав или состав представляет собой стерильную композицию из (i) фармацевтически активного лекарственного средства, такого как биологически активный белок, который является подходящим для парентерального введения (в том числе без ограничения внутривенного, внутримышечного, подкожного, аэрозольного, внутрилегочного, интраназального и интратекального введения) пациенту, нуждающемуся в этом, и (ii) одного или нескольких фармацевтически приемлемых наполнителей, разбавителей и других добавок, которые считаются безопасными Федеральным управлением по лекарственным средствам или другими иностранными нациоAs used herein, a pharmaceutical composition or composition is a sterile composition of (i) a pharmaceutically active drug, such as a biologically active protein, that is suitable for parenteral administration (including, but not limited to, intravenous, intramuscular, subcutaneous, aerosol, intrapulmonary , intranasal and intrathecal administration) to a patient requiring it, and (ii) one or more pharmaceutically acceptable excipients, diluents and other additives that are considered safe by the Federal Drug Administration or other foreign national authorities.
- 3 043419 нальными органами. Фармацевтические составы включают в себя жидкие (например, водные) растворы, которые можно непосредственно вводить, и лиофилизированные порошки, которые можно восстанавливать до растворов посредством добавления разбавителя перед введением. Из термина фармацевтический состав, тем не менее, определенным образом исключены композиции для местного введения пациентам, композиции для перорального приема и композиции для парентерального питания.- 3 043419 by local authorities. Pharmaceutical formulations include liquid (eg, aqueous) solutions that can be directly administered and lyophilized powders that can be reconstituted into solutions by adding a diluent prior to administration. The term pharmaceutical composition, however, specifically excludes compositions for topical administration to patients, compositions for oral administration and compositions for parenteral nutrition.
Срок годности при хранении, как используется в данном документе, означает период хранения, во время которого активный ингредиент (например, антитело) в фармацевтическом составе характеризуется минимальным разрушением (например, разрушением, составляющим не более чем приблизительно 5-10%) при хранении фармацевтического состава в указанных условиях хранения (например, 2-8°С). Методики оценки разрушения варьируются в зависимости от природы белка в фармацевтическом составе. Иллюстративные методики включают HPLC в режиме эксклюзионной хроматографии (SEC) для выявления, например, агрегации; обращенно-фазовую (RP) HPLC для выявления, например, фрагментации белка; ионообменную HPLC для выявления, например, изменений заряда белка; а также массспектрометрию, флуоресцентную спектроскопию, спектроскопию кругового дихроизма (CD), инфракрасную спектроскопию с преобразованием Фурье (FT-IR) и рамановскую спектроскопию для выявления конформационных изменений белка. Все эти методики можно применять по отдельности или в комбинации для оценки разрушения белка в фармацевтическом составе и определения срока годности при хранении этого состава. Фармацевтические составы по настоящему изобретению предпочтительно проявляют не более чем приблизительно 5-10% увеличение разрушения (например, фрагментации, агрегации или разворачивания) в течение двух лет при хранении при 2-8°С.Shelf life, as used herein, means the period of storage during which the active ingredient (e.g., antibody) in a pharmaceutical composition exhibits minimal degradation (e.g., no more than about 5-10% degradation) upon storage of the pharmaceutical composition under specified storage conditions (eg 2-8°C). Methodologies for assessing degradation vary depending on the nature of the protein in the pharmaceutical formulation. Exemplary techniques include HPLC in size exclusion chromatography (SEC) mode to detect, for example, aggregation; reverse phase (RP) HPLC to detect, for example, protein fragmentation; ion exchange HPLC to detect, for example, changes in protein charge; as well as mass spectrometry, fluorescence spectroscopy, circular dichroism (CD) spectroscopy, Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), and Raman spectroscopy to detect protein conformational changes. All of these techniques can be used individually or in combination to evaluate protein degradation in a pharmaceutical formulation and determine the shelf life of that formulation. The pharmaceutical compositions of the present invention preferably exhibit no more than about 5-10% increase in degradation (eg, fragmentation, aggregation or unfolding) over two years when stored at 2-8°C.
Как используется в данном документе, стабильные составы биологически активных белков представляют собой составы, которые проявляют (i) снижение агрегации и/или снижение потери биологической активности на по меньшей мере 20% при хранении при 2-8°С в течение по меньшей мере 2 лет по сравнению с контрольным образцом состава либо (ii) снижение агрегации и/или снижение потери биологической активности в условиях термического стресса (например, 25°С в течение от 1 недели до 12 недель; 40°С в течение 1-12 недель; 52°С в течение 7-8 дней и т. д.). В одном варианте осуществления состав считается стабильным, если белок в составе сохраняет свою физическую стабильность, химическую стабильность и/или биологическую активность.As used herein, stable bioactive protein formulations are those that exhibit (i) a reduction in aggregation and/or a reduction in loss of biological activity by at least 20% when stored at 2-8°C for at least 2 years compared to a control sample formulation, or (ii) reduced aggregation and/or reduced loss of biological activity under thermal stress conditions (e.g., 25°C for 1 week to 12 weeks; 40°C for 1 to 12 weeks; 52°C C within 7-8 days, etc.). In one embodiment, a formulation is considered stable if the protein in the formulation retains its physical stability, chemical stability, and/or biological activity.
Можно сказать, что белок сохраняет свою физическую стабильность в составе, если, например, он не демонстрирует признаков агрегации, осаждения и/или денатурации при визуальном изучении цвета и/или прозрачности или при измерении посредством рассеяния UV-излучения или с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) или электрофореза, как, например, в отношении мутности или образования агрегатов.A protein can be said to retain its physical stability in a formulation if, for example, it does not show signs of aggregation, precipitation and/or denaturation when visually examined for color and/or clarity or when measured by UV scattering or size exclusion chromatography (SEC) ) or electrophoresis, such as for turbidity or aggregate formation.
Можно сказать, что белок сохраняет свою химическую стабильность в составе, если, например, химическая стабильность в определенный момент времени является такой, что в результате модификации белка посредством образования или расщепления связей не образуется новый химический объект. В дополнительном варианте осуществления химическую стабильность можно оценивать посредством выявления и количественного определения химически измененных форм белка. Химическое изменение может включать, например, изменение размера (например, усечение), которое можно оценивать с применением эксклюзионной хроматографии, SDS-PAGE и/или матрично-активированной лазерной десорбции-ионизации/времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI/TOF MS). Другие типы химического изменения включают, например, изменение заряда (например, в результате дезамидирования), которое можно оценивать с помощью ионообменной хроматографии. Окисление представляет собой другую часто наблюдаемую химическую модификацию.A protein can be said to retain its chemical stability in its composition if, for example, the chemical stability at a particular point in time is such that modification of the protein by bond formation or cleavage does not result in the formation of a new chemical entity. In a further embodiment, chemical stability can be assessed by identifying and quantifying chemically altered forms of the protein. The chemical change may include, for example, a change in size (eg, truncation), which can be assessed using size exclusion chromatography, SDS-PAGE and/or matrix-assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry (MALDI/TOF MS). Other types of chemical change include, for example, charge change (eg, as a result of deamidation), which can be assessed using ion exchange chromatography. Oxidation is another commonly observed chemical modification.
Можно сказать, что белок сохраняет свою биологическую активность в фармацевтическом составе по сравнению с немодифицированным белком, если, например, процентное значение биологической активности составленного белка (например, антитела), определенное с помощью анализа (например, анализа связывания антигена), по сравнению с контрольным раствором составляет от приблизительно 50% до приблизительно 200%, от приблизительно 60% до приблизительно 170%, от приблизительно 70% до приблизительно 150%, от приблизительно 80% до приблизительно 125% либо от приблизительно 90% до приблизительно 110%. В дополнительном варианте осуществления можно сказать, что белок сохраняет свою биологическую активность в фармацевтическом составе, если, например, без ограничения, биологическая активность белка в определенный момент времени составляет по меньшей мере 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.A protein can be said to retain its biological activity in a pharmaceutical formulation compared to an unmodified protein if, for example, the percentage of biological activity of the formulated protein (e.g., antibody) determined by an assay (e.g., antigen binding assay) compared to a control solution is from about 50% to about 200%, from about 60% to about 170%, from about 70% to about 150%, from about 80% to about 125%, or from about 90% to about 110%. In a further embodiment, a protein may be said to retain its biological activity in a pharmaceutical formulation if, for example, without limitation, the biological activity of the protein at a given time is at least 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100%.
Используемые в данном документе термины содержащий и содержит предназначены для обозначения того, что составы и способы включают перечисленные элементы, но не исключают другие неперечисленные элементы. Термины фактически состоящий из и фактически состоит из, используемые для определения составов и способов, включают перечисленные элементы, исключают неперечисленные элементы, которые изменяют основную природу состава и/или способа, но не исключают другие неперечисленные элементы. Таким образом, состав, фактически состоящий из элементов, определенных в данном документе, не будет исключать следовые количества других элементов, таких как загрязняющие вещества после каких-либо способов выделения и очистки или фармацевтически приемлемые носиAs used herein, the terms "comprising" and "comprising" are intended to indicate that the compositions and methods include the listed elements, but do not exclude other unlisted elements. The terms actually consisting of and actually consisting of, used to define compositions and methods, include listed elements, exclude unlisted elements that change the essential nature of the composition and/or method, but do not exclude other unlisted elements. Thus, a composition actually consisting of the elements defined herein will not exclude trace amounts of other elements, such as contaminants from any isolation and purification processes or pharmaceutically acceptable carriers
- 4 043419 тели (например, фосфатно-солевой буферный раствор), консерванты и т. п., но будет исключать, например, дополнительные неуказанные аминокислоты. Термины состоящий из и состоит из, используемые для определения составов и способов, исключают элементы в более чем следовых количествах из других ингредиентов и существенных стадий способа введения композиций, описанных в данном документе. Варианты осуществления, определенные каждым из этих переходных терминов, находятся в пределах объема настоящего раскрытия и изобретения, воплощенного в данном документе.- 4 043419 bodies (for example, phosphate-buffered saline), preservatives, etc., but will exclude, for example, additional unspecified amino acids. The terms consisting of and consisting of, when used to define compositions and methods, exclude elements in more than trace amounts from other ingredients and essential steps of the method of administration of the compositions described herein. The embodiments defined by each of these transitional terms are within the scope of the present disclosure and the invention embodied herein.
Используемый в данном документе термин выделенный относится к белку (например, антителу), который был идентифицирован и отделен и/или извлечен из компонента его природной среды. Загрязняющие компоненты его природной среды представляют собой материалы, которые будут препятствовать диагностическим или терапевтическим путям применения белка, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах осуществления белок будет очищен (1) до более чем 95% по весу антитела, как определено с помощью метода Лоури, и наиболее предпочтительно до более чем 99% по весу, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с применением секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до однородности согласно SDS-PAGE в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с применением кумасси синего или, предпочтительно, серебряного красителя. Выделенный белок включает белок in situ в рекомбинантных клетках, так как по меньшей мере один компонент природной среды белка будет отсутствовать. Обычно, однако, выделенный белок получают с помощью по меньшей мере одной стадии очистки.As used herein, the term isolated refers to a protein (eg, antibody) that has been identified and separated and/or recovered from a component of its natural environment. Contaminants in its natural environment are materials that will interfere with diagnostic or therapeutic applications of the protein, and may include enzymes, hormones, and other protein or non-protein solutes. In preferred embodiments, the protein will be purified (1) to greater than 95% by weight of the antibody, as determined by the Lowry method, and most preferably to greater than 99% by weight, (2) to an extent sufficient to obtain at least 15 residues of the N-terminal or internal amino acid sequence using a spin-beaker sequencer, or (3) to homogeneity by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using Coomassie blue or, preferably, silver dye. The isolated protein includes the protein in situ in the recombinant cells, since at least one component of the protein's natural environment will be missing. Typically, however, the isolated protein is obtained through at least one purification step.
Настоящее изобретение относится к способам получения фармацевтических составов на основе терапевтических белков, таких как антитела. Антитела (Ab) и их синоним иммуноглобулины (Ig) представляют собой гликопротеины, имеющие одинаковые структурные характеристики. Хотя антитела проявляют специфичность связывания с конкретным антигеном, иммуноглобулины включают как антитела, так и другие антителоподобные молекулы, которые лишены антигенной специфичности. Полипептиды последнего типа, например, продуцируются на низких уровнях в лимфатической системе и на увеличенных уровнях в миеломах. Таким образом, используемый в данном документе термин антитело или пептид(пептиды) антитела относится к интактному антителу, производному антитела, аналогу антитела, генетически измененному антителу, антителу, имеющему детектируемую метку, антителу, которое конкурирует за специфическое связывание с антителом, раскрытым в данном описании, или его антигенсвязывающему фрагменту (например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, однодоменному антителу), который конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание, и включает химерные, гуманизированные, полностью человеческие и биспецифические антитела. В определенных вариантах осуществления антигенсвязывающие фрагменты получают, например, с помощью методик рекомбинантной ДНК. В дополнительных вариантах осуществления антигенсвязывающие фрагменты получают посредством ферментативного или химического расщепления интактных антител. Антигенсвязывающие фрагменты включают без ограничения Fab, Fab', F(ab)2, F(ab')2, Fv и одноцепочечные антитела.The present invention relates to methods for preparing pharmaceutical compositions based on therapeutic proteins such as antibodies. Antibodies (Abs) and their synonym immunoglobulins (Ig) are glycoproteins that share the same structural characteristics. Although antibodies exhibit binding specificity to a particular antigen, immunoglobulins include both antibodies and other antibody-like molecules that lack antigen specificity. Polypeptides of the latter type, for example, are produced at low levels in the lymphatic system and at increased levels in myelomas. Thus, as used herein, the term antibody or antibody peptide(s) refers to an intact antibody, an antibody derivative, an antibody analogue, a genetically modified antibody, an antibody having a detectable label, an antibody that competes for specific binding with an antibody disclosed herein , or an antigen-binding fragment thereof (eg, Fab, Fab', F(ab') 2 , Fv, single domain antibody) that competes with the intact antibody for specific binding, and includes chimeric, humanized, fully human and bispecific antibodies. In certain embodiments, antigen binding fragments are produced, for example, using recombinant DNA techniques. In additional embodiments, antigen-binding fragments are produced by enzymatic or chemical digestion of intact antibodies. Antigen binding fragments include, but are not limited to, Fab, Fab', F(ab)2, F(ab')2, Fv and single chain antibodies.
Используемый в данном документе термин интактные антитела относится к антителам, содержащим две тяжелые цепи и две легкие цепи. Таким образом, этот термин включает без ограничения полностью человеческие антитела, генетически измененные антитела, биспецифические антитела и производные антител, при условии, что такие антитела содержат две тяжелые цепи и две легкие цепи.As used herein, the term intact antibodies refers to antibodies containing two heavy chains and two light chains. Thus, the term includes, without limitation, fully human antibodies, genetically engineered antibodies, bispecific antibodies and antibody derivatives, provided that such antibodies contain two heavy chains and two light chains.
Используемый в данном документе термин моноклональное антитело не ограничен антителами, полученными с помощью гибридомной технологии. Термин моноклональное антитело относится к антителу, которое получено из одного клона, в том числе любого эукариотического, прокариотического или фагового клона, а не к способу его получения.As used herein, the term monoclonal antibody is not limited to antibodies produced by hybridoma technology. The term monoclonal antibody refers to an antibody that is derived from a single clone, including any eukaryotic, prokaryotic or phage clone, and not to the method of its preparation.
Моноклональные антитела и конструкции на основе антител, составленные в соответствии с настоящим изобретением, конкретно включают химерные антитела (иммуноглобулины), в которых часть тяжелой и/или легкой цепи является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных от определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, тогда как остальная часть цепи(цепей) является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагменты таких антител, при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность (патент США № 4816567; Morrison et al. (1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855). Химерные антитела, представляющие интерес в данном документе, включают приматизированные антитела, содержащие антигенсвязывающие последовательности вариабельного домена, полученные от примата, отличного от человека (например, мартышковых, человекообразных обезьян и т. д.), и последовательности человеческих константных областей. Были описаны разнообразные подходы к получению химерных антител. См., например, Morrison et al. (1985), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851; Takeda et al. (1985), Nature 314:452, Cabilly et al., патент США № 4816567; Boss et al., патент США № 4816397; Tanaguchi et al., EP 0171496; EP 0173494; а также GB 2177096.Monoclonal antibodies and antibody constructs formulated in accordance with the present invention specifically include chimeric antibodies (immunoglobulins) in which part of the heavy and/or light chain is identical or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from a particular species or belonging to a particular class or a subclass of antibodies, while the remainder of the chain(s) is identical or homologous to the corresponding sequences in antibodies derived from another species or belonging to another class or subclass of antibodies, as well as fragments of such antibodies, provided that they exhibit the desired biological activity ( US Patent No. 4,816,567; Morrison et al (1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855). Chimeric antibodies of interest herein include primatized antibodies containing antigen binding variable domain sequences derived from a non-human primate (eg, marmosets, apes, etc.) and human constant region sequences. A variety of approaches to the production of chimeric antibodies have been described. See, for example, Morrison et al. (1985), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851; Takeda et al. (1985), Nature 314:452, Cabilly et al., US Patent No. 4816567; Boss et al., US Patent No. 4816397; Tanaguchi et al., EP 0171496; EP 0173494; and also GB 2177096.
Моноклональные антитела и конструкции на основе антител, составленные в соответствии с настоящим изобретением, конкретно включают антитела, называемые человеческими или полностью человеческими. Каждый из терминов человеческое антитело и полностью человеческое антителоMonoclonal antibodies and antibody constructs formulated in accordance with the present invention specifically include antibodies referred to as human or fully human. Each of the terms human antibody and fully human antibody
- 5 043419 относится к антителу, которое имеет аминокислотную последовательность человеческого иммуноглобулина, в том числе к антителам, выделенным из библиотек человеческих иммуноглобулинов или от животных, трансгенных по одному или нескольким человеческим иммуноглобулинам, которые не экспрессируют эндогенные иммуноглобулины; например, антителам XenoMouse® и антителам, описанным Kucherlapati и соавт. в патенте США № 5939598.- 5 043419 refers to an antibody that has the amino acid sequence of a human immunoglobulin, including antibodies isolated from libraries of human immunoglobulins or from animals transgenic for one or more human immunoglobulins that do not express endogenous immunoglobulins; for example, XenoMouse® antibodies and the antibodies described by Kucherlapati et al. in US Patent No. 5939598.
Термин генетически измененные антитела означает антитела, аминокислотная последовательность которых отличается от аминокислотной последовательности нативного антитела. Ввиду значимости методик рекомбинантной ДНК для получения антител не следует ограничиваться последовательностями аминокислот, обнаруживаемыми в природных антителах; антитела можно переконструировать с получением желаемых характеристик. Существует множество возможных видоизменений, и они варьируются от изменений всего одной или нескольких аминокислот до полного переконструирования, например, вариабельной и/или константной области. Изменения константной области, как правило, будут осуществляться с целью улучшения или изменения таких характеристик, как фиксация комплемента, взаимодействие с мембранами и другие эффекторные функции, а также технологичность изготовления и вязкость. Изменения вариабельной области будут осуществляться с целью улучшения характеристик связывания с антигеном.The term genetically modified antibodies means antibodies whose amino acid sequence differs from the amino acid sequence of the native antibody. Because of the importance of recombinant DNA techniques for the production of antibodies, one should not be limited to the amino acid sequences found in natural antibodies; antibodies can be redesigned to achieve desired characteristics. There are many possible modifications and they range from changes in just one or a few amino acids to complete redesign, for example, of the variable and/or constant region. Changes to the constant region will typically be made to improve or change characteristics such as complement fixation, membrane interaction and other effector functions, as well as processability and viscosity. Variable region changes will be made to improve antigen binding characteristics.
Fab-фрагмент состоит из одной легкой цепи, а также CH1 и вариабельных областей одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовывать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи.The Fab fragment consists of one light chain, as well as C H1 and variable regions of one heavy chain. The heavy chain of a Fab molecule cannot form a disulfide bond with another heavy chain molecule.
Fab'-фрагмент содержит одну легкую цепь и одну тяжелую цепь, которая содержит большую часть константной области между доменами Сш и CH2, так что между двумя тяжелыми цепями может образовываться межцепочечная дисульфидная связь с образованием молекулы F(ab')2.The Fab' fragment contains one light chain and one heavy chain, which contains most of the constant region between the Cw and CH2 domains, so that an interchain disulfide bond can form between the two heavy chains to form the F(ab')2 molecule.
F(ab')2-фрагмент содержит две легкие цепи и две тяжелые цепи, содержащие часть константной области между доменами CH и CH2, так что между двумя тяжелыми цепями образуется межцепочечная дисульфидная связь.The F(ab') 2 fragment contains two light chains and two heavy chains containing part of the constant region between the CH and CH2 domains, so that an interchain disulfide bond is formed between the two heavy chains.
Термины Fv-фрагмент и одноцепочечное антитело относятся к полипептидам, которые содержат вариабельные области антитела как из тяжелой, так и из легкой цепей, но лишены константных участков. Подобно целому антителу, они способны селективно связываться с конкретным антигеном. При молекулярной массе, составляющей лишь приблизительно 25 кДа, Fv-фрагменты являются намного меньшими, чем обычные антитела (150-160 кДа), которые состоят из двух тяжелых белковых цепей и двух легких цепей, и даже меньшими, чем Fab-фрагменты (приблизительно 50 кДа, одна легкая цепь и половина тяжелой цепи).The terms Fv fragment and single chain antibody refer to polypeptides that contain antibody variable regions from both the heavy and light chains, but lack constant regions. Like whole antibodies, they are capable of selectively binding to a specific antigen. With a molecular weight of only approximately 25 kDa, Fv fragments are much smaller than conventional antibodies (150-160 kDa), which consist of two heavy protein chains and two light chains, and even smaller than Fab fragments (approximately 50 kDa). kDa, one light chain and half a heavy chain).
Однодоменное антитело представляет собой фрагмент антитела, состоящий из однодоменного Fvзвена, например, VH или VL. Подобно целому антителу, они способны селективно связываться с конкретным антигеном. При молекулярной массе, составляющей лишь 12-15 кДа, однодоменные антитела являются намного меньшими, чем обычные антитела (150-160 кДа), которые состоят из двух тяжелых белковых цепей и двух легких цепей, и даже меньшими, чем Fab-фрагменты (приблизительно 50 кДа, одна легкая цепь и половина тяжелой цепи) и одноцепочечные вариабельные фрагменты (приблизительно 25 кДа, два вариабельных домена, один из легкой и один из тяжелой цепи). Первые однодоменные антитела были сконструированы из антител, состоящих только из тяжелых цепей, которые обнаружены у верблюдовых. Хотя большинство исследований однодоменных антител в настоящее время проводится с использованием вариабельных доменов тяжелой цепи, было показано, что вариабельные домены легкой цепи и нанотела, полученные из легких цепей, также специфично связываются с эпитопами-мишенями.A single-domain antibody is an antibody fragment consisting of a single-domain Fv unit, for example, VH or VL . Like whole antibodies, they are capable of selectively binding to a specific antigen. With a molecular weight of only 12-15 kDa, single-domain antibodies are much smaller than conventional antibodies (150-160 kDa), which consist of two heavy protein chains and two light chains, and even smaller than Fab fragments (approximately 50 kDa, one light chain and half a heavy chain) and single chain variable fragments (approximately 25 kDa, two variable domains, one light chain and one heavy chain). The first single-domain antibodies were constructed from heavy chain-only antibodies found in camelids. Although most single-domain antibody research is currently conducted using heavy chain variable domains, light chain variable domains and light chain-derived nanobodies have also been shown to specifically bind to target epitopes.
Используемый в данном документе термин биспецифический означает конструкцию на основе антитела, которая является по меньшей мере биспецифической, т.е. она содержит по меньшей мере первый связывающий домен и второй связывающий домен, где первый связывающий домен связывается с одним антигеном или одной мишенью (например, CD3), а второй связывающий домен связывается с другим антигеном или другой мишенью (например, ВСМА; например, CD33). Соответственно конструкции на основе антител в соответствии с настоящим изобретением обладают специфичностью в отношении по меньшей мере двух различных антигенов или мишеней. Термин биспецифическая конструкция на основе антитела по настоящему изобретению также охватывает полиспецифические конструкции на основе антител, такие как триспецифические конструкции на основе антител, где последние содержат три связывающих домена, или конструкции с более чем тремя (например, четырьмя, пятью и т. д.) видами специфичности.As used herein, the term bispecific means an antibody construct that is at least bispecific, i.e. it comprises at least a first binding domain and a second binding domain, wherein the first binding domain binds to one antigen or one target (e.g., CD3) and the second binding domain binds to another antigen or another target (e.g., BCMA; e.g., CD33) . Accordingly, the antibody constructs of the present invention have specificity for at least two different antigens or targets. The term bispecific antibody construct of the present invention also covers multispecific antibody constructs, such as trispecific antibody constructs where the latter contain three binding domains, or constructs with more than three (e.g., four, five, etc.) types of specificity.
С учетом того, что конструкции на основе антител в соответствии с настоящим изобретением являются (по меньшей мере) биспецифическими, они не встречаются в природе и заметно отличаются от продуктов, встречающихся в природе. Следовательно, биспецифические конструкция на основе антитела или иммуноглобулин представляют собой искусственное гибридное антитело или иммуноглобулин с по меньшей мере двумя различными связывающими участками с различной специфичностью. Биспецифические конструкции на основе антител можно получать с помощью разнообразных способов, в том числе слияния гибридом или связывания Fab'-фрагментов. См., например, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990).Given that the antibody constructs of the present invention are (at least) bispecific, they are not naturally occurring and are markedly different from naturally occurring products. Therefore, a bispecific antibody construct or immunoglobulin is an artificial hybrid antibody or immunoglobulin with at least two different binding sites with different specificities. Bispecific antibody constructs can be generated by a variety of methods, including hybridoma fusion or Fab' binding. See, for example, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990).
- 6 043419- 6 043419
По меньшей мере два связывающих домена и вариабельных домена конструкции на основе антитела по настоящему изобретению могут содержать или не содержать пептидные линкеры (спейсерные пептиды). Термин пептидный линкер в соответствии с настоящим изобретением включает аминокислотную последовательность, с помощью которой аминокислотные последовательности одного (вариабельного и/или связывающего) домена и другого (вариабельного и/или связывающего) домена конструкции на основе антитела по настоящему изобретению связываются друг с другом. Важной технической особенностью такого пептидного линкера является то, что у него отсутствует какая-либо полимеризационная активность. Среди подходящих пептидных линкеров находятся те, которые описаны в патентах США 4751180 и 4935233 или WO 88/09344. Пептидные линкеры также можно применять для присоединения других доменов, или модулей, или областей (таких как домены, увеличивающие период полувыведения) к конструкции на основе антитела по настоящему изобретению.The at least two binding domains and variable domains of the antibody construct of the present invention may or may not contain peptide linkers (spacer peptides). The term peptide linker in accordance with the present invention includes an amino acid sequence by which the amino acid sequences of one (variable and/or binding) domain and another (variable and/or binding) domain of the antibody construct of the present invention are linked to each other. An important technical feature of such a peptide linker is that it does not have any polymerization activity. Suitable peptide linkers include those described in US Pat. Nos. 4,751,180 and 4,935,233 or WO 88/09344. Peptide linkers can also be used to attach other domains or modules or regions (such as half-life increasing domains) to the antibody construct of the present invention.
В случае применения линкера этот линкер предпочтительно имеет длину и последовательность, достаточную для обеспечения того, чтобы каждый из первого и второго доменов мог независимо от другого сохранять свою дифференциальную специфичность связывания. Для пептидных линкеров, которые соединяют по меньшей мере два связывающих домена (или два вариабельных домена) в конструкции на основе антитела по настоящему изобретению, предпочтительными являются те пептидные линкеры, которые содержат лишь небольшое количество аминокислотных остатков, например, 12 аминокислотных остатков или меньше. Таким образом, предпочтительными являются пептидные линкеры из 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 или 5 аминокислотных остатков. Предусматривается, что пептидный линкер с менее чем 5 аминокислотами содержит 4, 3, 2 или одну аминокислоту, при этом предпочтительными являются Gly-богатые линкеры. Особенно предпочтительной единственной аминокислотой в случае с указанным пептидным линкером является Gly. Соответственно, указанный пептидный линкер может состоять из единственной аминокислоты Gly. Другой предпочтительный вариант осуществления пептидного линкера характеризуется аминокислотной последовательностью Gly-Gly-Gly-Gly-Ser, т.е. Gly4Ser (SEQ ID NO: 1), или ее полимерами, т.е. (Gly4Ser)x, где x представляет собой целое число, равное 1 или больше (например, 2 или 3). Предпочтительные линкеры показаны под SEQ ID NO: 1-9. Характеристики указанного пептидного линкера, которые включают отсутствие способствования образованию вторичных структур, известны из уровня техники и описаны, например, в Dall'Acqua et al. (Biochem. (1998) 37, 9266-9273), Cheadle et al. (Mol. Immunol. (1992) 29, 21-30) и Raag and Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80). Предпочтительными являются пептидные линкеры, которые, помимо прочего, не способствуют образованию каких-либо вторичных структур. Связь указанных доменов друг с другом можно обеспечивать, например, с помощью генной инженерии, как описано в примерах. Способы получения слитых и функционально связанных биспецифических одноцепочечных конструкций и обеспечения их экспрессии в клетках млекопитающих или бактерий хорошо известны из уровня техники (например, WO 99/54440 или Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2001).If a linker is used, the linker preferably has a length and sequence sufficient to ensure that each of the first and second domains can maintain its differential binding specificity independently of the other. For peptide linkers that connect at least two binding domains (or two variable domains) in an antibody construct of the present invention, preferred are those peptide linkers that contain only a small number of amino acid residues, for example, 12 amino acid residues or less. Thus, peptide linkers of 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 or 5 amino acid residues are preferred. A peptide linker with less than 5 amino acids is contemplated to contain 4, 3, 2 or one amino acid, with Gly-rich linkers being preferred. A particularly preferred single amino acid in the case of said peptide linker is Gly. Accordingly, said peptide linker may consist of a single amino acid Gly. Another preferred embodiment of the peptide linker is characterized by the amino acid sequence Gly-Gly-Gly-Gly-Ser, i.e. Gly4Ser (SEQ ID NO: 1), or polymers thereof, i.e. (Gly4Ser)x, where x is an integer equal to 1 or greater (for example, 2 or 3). Preferred linkers are shown under SEQ ID NO: 1-9. The characteristics of said peptide linker, which include not promoting the formation of secondary structures, are known in the art and are described, for example, in Dall'Acqua et al. (Biochem. (1998) 37, 9266-9273), Cheadle et al. (Mol. Immunol. (1992) 29, 21-30) and Raag and Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80). Preferred are peptide linkers that, among other things, do not promote the formation of any secondary structures. The connection of these domains with each other can be ensured, for example, using genetic engineering, as described in the examples. Methods for preparing fused and operably linked bispecific single-strand constructs and causing them to be expressed in mammalian or bacterial cells are well known in the art (eg, WO 99/54440 or Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2001).
В соответствии с особенно предпочтительным вариантом осуществления и как документально подтверждено в прилагаемых примерах, каждая из конструкций на основе антител AMG 701 и AMG 330 по настоящему изобретению представляет собой биспецифическую конструкцию на основе одноцепочечного антитела, более предпочтительно биспецифический одноцепочечный Fv (scFv). Хотя два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируются отдельными генами, их можно соединить с применением рекомбинантных способов с помощью синтетического линкера, описанного в данном документе выше, позволяющего им образовывать единую белковую цепь, в которой VL- и VH-участки спариваются с образованием моновалентной молекулы; см., например, Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85:58795883). Эти фрагменты антител получают, применяя традиционные методики, известные специалистам в данной области, и фрагменты оценивают в отношении функции таким же образом, как и целые или полноразмерные антитела. Следовательно, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) представляет собой слитый белок на основе вариабельных областей тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL) иммуноглобулинов, обычно соединенных коротким линкерным пептидом длиной от приблизительно десяти до приблизительно 25 аминокислот, предпочтительно приблизительно 15-20 аминокислот. Линкер обычно богат глицином для обеспечения гибкости, а также серином или треонином для обеспечения растворимости и может соединять N-конец VH с С-концом VL либо наоборот. Этот белок сохраняет специфичность исходного иммуноглобулина, несмотря на удаление константных областей и введение линкера.In a particularly preferred embodiment, and as documented in the accompanying examples, the AMG 701 and AMG 330 antibody constructs of the present invention are each a bispecific single chain antibody construct, more preferably a bispecific single chain Fv (scFv). Although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are encoded by separate genes, they can be joined recombinantly using the synthetic linker described above, allowing them to form a single protein chain in which the VL and VH regions are paired with the formation of a monovalent molecule; see, for example, Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85:58795883). These antibody fragments are prepared using conventional techniques known to those skilled in the art, and the fragments are assessed for function in the same manner as whole or full-length antibodies. Therefore, a single chain variable fragment (scFv) is a fusion protein based on the heavy chain (VH) and light chain (VL) variable regions of immunoglobulins, typically linked by a short linker peptide of about ten to about 25 amino acids in length, preferably about 15 to 20 amino acids. The linker is typically rich in glycine for flexibility and serine or threonine for solubility and can connect the N-terminus of VH to the C-terminus of VL or vice versa. This protein retains the specificity of the original immunoglobulin despite the removal of constant regions and the introduction of a linker.
Биспецифические одноцепочечные молекулы известны из уровня техники и описаны в WO 99/54440, Mack, J. Immunol. (1997), 158, 3965-3970, Mack, PNAS, (1995), 92, 7021-7025, Kufer, Cancer Immunol. Immunother., (1997), 45, 193-197, Loffier, Blood, (2000), 95, 6, 2098-2103, Briihl, Immunol., (2001), 166, 2420-2426, Kipriyanov, J. Mol. Biol., (1999), 293, 41-56. Методики, описанные для получения одноцепочечных антител (см., помимо прочего, патент США 4946778), можно адаптировать для получения конструкций на основе одноцепочечных антител, специфично распознающих выбранную(выбранные) мишень(мишени).Bispecific single chain molecules are known in the art and are described in WO 99/54440, Mack, J. Immunol. (1997), 158, 3965-3970, Mack, PNAS, (1995), 92, 7021-7025, Kufer, Cancer Immunol. Immunother., (1997), 45, 193-197, Loffier, Blood, (2000), 95, 6, 2098-2103, Briihl, Immunol., (2001), 166, 2420-2426, Kipriyanov, J. Mol. Biol., (1999), 293, 41-56. The techniques described for the production of single chain antibodies (see, but not limited to, US Pat. No. 4,946,778) can be adapted to produce single chain antibody constructs that specifically recognize the selected target(s).
Бивалентные (также называемые двухвалентными) или биспецифические одноцепочечные вариабельные фрагменты (би-scFv или ди-scFv в формате (scFv)2) можно конструировать посредством связывания двух молекул scFv (например, с линкерами, описанными в данном документе выше). Если эти двеBivalent (also called bivalent) or bispecific single chain variable fragments (bi-scFv or di-scFv in (scFv) 2 format) can be constructed by linking two scFv molecules (eg, with the linkers described above herein). If these two
- 7 043419 молекулы scFv имеют одинаковую специфичность связывания, то получаемая в результате молекула (scFv)2 предпочтительно будет называться бивалентной (т.е. она имеет две валентности для одного и того же эпитопа-мишени). Если две молекулы scFv имеют различную специфичность связывания, то получаемая в результате молекула (scFv)2 предпочтительно будет называться биспецифической. Связывание можно осуществлять посредством получения одной пептидной цепи с двумя VH-областями и двумя VLобластями, в результате чего образуются тандемные scFv (см., например, Kufer P. et al. (2004) Trends in Biotechnology 22(5):238-244). Другой возможностью является создание молекул scFv с линкерными пептидами, которые являются слишком короткими для того, чтобы две вариабельные области сворачивались вместе (например, длиной приблизительно пять аминокислот), что вынуждает scFv димеризоваться. Этот тип известен как диатела (см., например, Hollinger, Philipp et al. (July 1993) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 90 (14): 6444-8).- 7 043419 scFv molecules have the same binding specificity, the resulting (scFv)2 molecule will preferably be called bivalent (ie it has two valencies for the same target epitope). If two scFv molecules have different binding specificities, the resulting (scFv)2 molecule will preferably be called bispecific. Linking can be accomplished by producing a single peptide chain with two VH regions and two VL regions, resulting in tandem scFvs (see, for example, Kufer P. et al. (2004) Trends in Biotechnology 22(5):238-244) . Another possibility is to create scFv molecules with linker peptides that are too short for the two variable regions to fold together (eg, approximately five amino acids long), thereby forcing the scFv to dimerize. This type is known as diabodies (see, for example, Hollinger, Philipp et al. (July 1993) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 90 (14): 6444-8).
Как описано в данном документе выше, в настоящем изобретении предусмотрен предпочтительный вариант осуществления, где конструкция на основе антитела имеет формат, выбранный из группы, состоящей из (scFv)2, scFv, однодоменного mAb, диател и олигомеров в любом из этих форматов.As described herein above, the present invention provides a preferred embodiment wherein the antibody construct is in a format selected from the group consisting of (scFv)2, scFv, single domain mAb, diabodies, and oligomers in any of these formats.
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом осуществления конструкции на основе антитела по настоящему изобретению тяжелая цепь (VH) и легкая цепь (VL) связывающего домена, связывающегося с антигеном-мишенью CD3 и CD33 либо с ВСМА, не являются непосредственно соединенными с помощью описанного выше пептидного линкера, но связывающий домен образуется вследствие образования биспецифической молекулы, как описано для диатела. Таким образом, VH-цепь связывающего домена для CD3 может быть слита с VL связывающего домена для CD33 или ВСМА с помощью такого пептидного линкера, тогда как VH-цепь связывающего домена для CD3 слита с VL связывающего домена для CD33 или ВСМА с помощью такого пептидного линкера.In another preferred embodiment of the antibody construct of the present invention, the heavy chain (VH) and light chain (VL) of the binding domain binding to the target antigen CD3 and CD33 or BCMA are not directly linked by the above-described peptide linker, but the binding domain is formed due to the formation of a bispecific molecule, as described for the diabody. Thus, the VH chain of the CD3 binding domain can be fused to the VL binding domain for CD33 or BCMA using such a peptide linker, while the VH chain of the CD3 binding domain is fused to the VL binding domain for CD33 or BCMA using such a peptide linker. .
Термины аминоконцевой и карбоксиконцевой и их сокращенные формы N-конец и С-конец используются в данном документе для обозначения положений в полипептидах. Если это позволяет контекст, эти термины используются со ссылкой на конкретную последовательность или часть полипептида для обозначения близости или относительного положения. Например, определенная последовательность, размещенная в направлении карбокси-конца относительно эталонной последовательности в полипептиде, расположена со стороны карбоксильного конца эталонной последовательности, но необязательно находится на карбоксильном конце полноразмерного полипептида.The terms amino-terminal and carboxy-terminal and their abbreviated forms N-terminal and C-terminal are used herein to refer to positions in polypeptides. When the context allows, these terms are used with reference to a specific sequence or portion of a polypeptide to indicate proximity or relative position. For example, a particular sequence located carboxyl-terminally relative to a reference sequence in a polypeptide is located at the carboxyl-terminus of the reference sequence, but is not necessarily at the carboxyl-terminus of the full-length polypeptide.
Используемый в данном документе термин аминокислота относится к природным и/или неприродным либо синтетическим аминокислотам, включающим глицин и оптические как D-, так и Lизомеры, аналоги аминокислот и пептидомиметики, в том числе без ограничения N-ацетил-аналоги оптических D- или L-изомеров (например, N-ацетиларгинин). В некоторых аспектах термин аминокислота относится к мономерным аминокислотам.As used herein, the term amino acid refers to natural and/or non-natural or synthetic amino acids, including glycine and both D- and L-optical isomers, amino acid analogues and peptidomimetics, including without limitation N-acetyl-analogs of optical D- or L- isomers (for example, N-acetylarginine). In some aspects, the term amino acid refers to monomeric amino acids.
Как правило, номенклатура, используемая применительно к культивированию клеток и тканей, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетике, а также химии и гибридизации белков и нуклеиновых кислот, и методики, относящиеся к ним, которые описаны в данном документе, хорошо известны и широко применяются в данной области техники. Способы и методики по настоящему изобретению, как правило, осуществляют в соответствии с традиционными способами, хорошо известными из уровня техники и описанными в различных общих и более специализированных литературных источниках, которые цитируются и обсуждаются на протяжении всего настоящего описания, если не указано иное. См., например, Sambrook et al. (2001), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., и Ausubel et al. (1992), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, а также Harlow and Lane (1990), Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Любые ферментативные реакции и методики очистки осуществляют в соответствии со спецификацией производителя, как обычно выполняется в данной области техники или как описано в данном документе. Терминология, используемая применительно к аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, и лабораторные процедуры и методики, относящиеся к ним, которые описаны в данном документе, хорошо известны и широко применяются в данной области техники. Стандартные методики можно применять для химических синтезов, химических анализов, получения, составления и доставки фармацевтических средств, а также лечения пациентов.In general, the nomenclature used in connection with cell and tissue culture, molecular biology, immunology, microbiology, genetics, and protein and nucleic acid chemistry and hybridization, and techniques related thereto, which are described herein are well known and widely used in this field of technology. The methods and procedures of the present invention are generally carried out in accordance with traditional methods well known in the art and described in various general and more specialized literature references which are cited and discussed throughout this specification unless otherwise indicated. See, for example, Sambrook et al. (2001), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., and Ausubel et al. (1992), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, and Harlow and Lane (1990), Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Any enzymatic reactions and purification procedures are carried out in accordance with the manufacturer's specifications, as typically performed in the art or as described herein. The terminology used in relation to analytical chemistry, synthetic organic chemistry, and medicinal and pharmaceutical chemistry, and laboratory procedures and techniques related thereto, which are described herein, are well known and widely used in the art. Standard techniques can be used for chemical syntheses, chemical analyses, preparation, formulation and delivery of pharmaceuticals, and treatment of patients.
Применение промежуточных концентраций в составахThe use of intermediate concentrations in formulations
Цель получения белкового состава состоит в превращении высокоочищенного раствора рекомбинантного белка (лекарственного вещества) в стабильную, эффективную биофармацевтическую дозированную форму. Kamerzell et al. (2011), 63(13): 1118-59 (включено посредством ссылки). Первая стадия, часто называемая получением характеристик перед составлением, включает определение физикохимических свойств белка и путей его нестабильности, что позволяет разрабатывать составы, содержащие различные вспомогательные вещества, для обеспечения стабильности белка в определенных условиях хранения. Вместе с этим необходимо разрабатывать аналитические способы для отслеживания физико-химической целостности и биологической активности белка в условиях составления (например, в присутствии вспомогательных веществ) наряду со спецификациями для определения приемлемых ограThe goal of protein formulation is to convert a highly purified solution of recombinant protein (drug substance) into a stable, effective biopharmaceutical dosage form. Kamerzell et al. (2011), 63(13): 1118-59 (incorporated by reference). The first stage, often referred to as preformulation characterization, involves determining the physicochemical properties of the protein and its instability pathways, allowing the development of formulations containing various excipients to ensure protein stability under specific storage conditions. At the same time, it is necessary to develop analytical methods to monitor the physicochemical integrity and biological activity of the protein under formulation conditions (e.g., in the presence of excipients), along with specifications to determine acceptable limits.
- 8 043419 ничений для любых изменений этих параметров. Конкретные составы с различными концентрациями белка с целевыми уровнями различных фармацевтических вспомогательных веществ затем тестируют в экспериментальных условиях, чтобы убедиться в стабильности, растворимости и тоничности в течение срока годности при хранении. Кроме того, выбирают первичный контейнер (например, флакон, картридж или предварительно заполненный шприц) для хранения смеси белка и вспомогательного вещества и облегчения парентерального введения пациентом или медицинским работником. Вся биофармацевтическая лекарственная или вакцинная дозированная форма (белок, вспомогательные вещества, первичный контейнер и устройство для доставки) должна быть разработана как с масштабируемостью, что обеспечивает возможность коммерческого производства в стерильных условиях, так и в соответствии со всеми нормативными рекомендациями по получению и тестированию биофармацевтических дозированных форм для применения в медицине.- 8 043419 deductions for any changes to these parameters. Specific formulations of varying protein concentrations with target levels of various pharmaceutical excipients are then tested under experimental conditions to ensure stability, solubility and tonicity through shelf life. Additionally, a primary container (eg, a vial, cartridge, or prefilled syringe) is selected to store the protein-excipient mixture and facilitate parenteral administration by the patient or healthcare professional. The entire biopharmaceutical drug or vaccine dosage form (protein, excipients, primary container and delivery device) must be designed to be both scalable to enable commercial production under sterile conditions and to comply with all regulatory guidelines for the preparation and testing of biopharmaceutical dosage units. forms for use in medicine.
Как правило, разработка состава начинается с идентификации подходящего pH и буферной системы с помощью стратегии биофизического скрининга. Буферные вещества добавляют к раствору белка для стабилизации pH, что, в свою очередь, стабилизирует белок, поскольку стабильность белка, как правило, связана с характерным узким диапазоном pH. См. Garidel and Bassarab (2009), Impact of formulation design on stability and quality, в: Quality for Biologics: Critical Quality Attributes, Process and Change Control, Production Variation, Characterisation, Impurities and Concerns, Biopharm Knowledge Publishing, London, UK, pp. 94-113 (включено посредством ссылки). В забуференный раствор белка затем добавляют другие вспомогательные вещества для составов, такие как стабилизаторы (например, сахара), объемообразующие средства (например, маннит) и поверхностно-активные вещества (например, полисорбат 20). В случае с лиофилизированным составом такую смесь для составления в жидкой форме затем лиофилизируют.Typically, formulation development begins with the identification of a suitable pH and buffer system using a biophysical screening strategy. Buffers are added to a protein solution to stabilize the pH, which in turn stabilizes the protein, since protein stability is typically associated with a characteristic narrow pH range. See Garidel and Bassarab (2009), Impact of formulation design on stability and quality, in: Quality for Biologics: Critical Quality Attributes, Process and Change Control, Production Variation, Characterisation, Impurities and Concerns, Biopharm Knowledge Publishing, London, UK, pp. 94-113 (incorporated by reference). Other formulation auxiliaries such as stabilizers (eg, sugars), bulking agents (eg, mannitol), and surfactants (eg, polysorbate 20) are then added to the buffered protein solution. In the case of a lyophilized formulation, such a mixture is then lyophilized to be formulated in liquid form.
При лиофилизации, как и в других способах получения лекарственных препаратов, ключевым контрольным параметром является заполняемая масса терапевтического белка для доставки требуемой дозы пациенту. Для продуктов с более высокой концентрацией приемлемой является простая стратегия контроля концентрации продукта на стадии составления с последующим контролем заполняемой массы в качестве части процесса заполнения. Однако, для доставки очень низкой дозы продукта величиной в несколько микро- или даже миллиграммов эта простая стратегия для обеспечения доставки дозы начинает испытывать проблемы в обеспечении возможности получения пациентом требуемой дозы. Связанные с этим опасения заключаются в том, что этикетка продукта может не отражать состав продукта внутри контейнера, и что может возникнуть затруднение при извлечении материала для дозирования. Следовательно, существует потребность в способе, обеспечивающем больший контроль над заполняемой массой терапевтического белка в лиофилизированном фармацевтическом составе.In lyophilization, as in other methods of drug production, the key control parameter is the loading mass of therapeutic protein to deliver the required dose to the patient. For higher concentration products, a simple strategy of controlling the product concentration at the formulation stage, followed by monitoring the fill mass as part of the filling process, is acceptable. However, to deliver a very low dose of product of a few micro- or even milligrams in size, this simple strategy for ensuring dose delivery begins to have problems in ensuring that the patient can receive the required dose. Related concerns are that the product label may not reflect the composition of the product inside the container and that it may be difficult to remove the material for dispensing. Therefore, there is a need for a method that provides greater control over the loading weight of therapeutic protein in a lyophilized pharmaceutical formulation.
Как отмечено выше, простая стратегия контроля концентрации продукта на стадии составления, за которой следует контроль заполняемой массы в качестве части процесса заполнения, является приемлемой для более высоких концентраций терапевтического белка, но может приводить к проблемам при более низких концентрациях. Проектное поле для контроля заполняемой массы для низкодозированного продукта, когда целевые параметры заполняемой массы и состава контролируются по отдельности, демонстрирует более высокую изменчивость с большей правдоподобностью того, что продукт не будет соответствовать спецификации для выпуска продукта. Вследствие изменчивости процесса изготовления точный контроль нерасфасованного состава недостижим из-за масштаба процесса и свойственной оборудованию изменчивости при изготовлении. Другая проблема состоит в том, что лиофилизированному продукту свойственна увеличенная изменчивость, поскольку продукт должен быть восстановлен, что также является изменчивым процессом.As noted above, a simple strategy of controlling product concentration at the formulation stage, followed by controlling the fill mass as part of the fill process, is acceptable for higher concentrations of therapeutic protein, but can lead to problems at lower concentrations. The design margin for fill mass control for a low dose product, when target fill mass and composition parameters are controlled separately, exhibits higher variability with a greater likelihood that the product will not meet product release specifications. Due to the variability of the manufacturing process, precise control of the bulk formulation is not achievable due to the scale of the process and inherent equipment variability during manufacturing. Another problem is that a lyophilized product has increased variability because the product must be reconstituted, which is also a variable process.
Типичная стратегия контроля (показанная на фиг. 1) будет характеризоваться более чем 50% вероятностью получения ошибочного результата подбора концентрации белка. На фиг. 1 наблюдаемая общая изменчивость данных об однородности лиофилизированного продукта составляет 0,01 мг/мл. Для обеспечения минимальной возможности средний рабочий диапазон должен быть ограничен таким образом, чтобы он соответствовал диапазону спецификации с увеличением шага до 3x0,01=0,03 мг/мл. Целевой процесс в белом поле характеризуется качеством, при котором на одну партию приходится менее 0,1% флаконов, не соответствующих спецификации (OOS). В отличие от этого, целевой процесс в закрашенной зоне характеризуется более высокими показателями OOS. Как можно видеть на фиг. 1, текущий рабочий диапазон (большой квадрат) содержит пороги допустимости для желаемого состава. Эффективный рабочий диапазон (меньший прямоугольник на фиг. 1), однако, требует более жестких допусков по заполнению, чем можно достигнуть как в рамках изменчивости состава, так и в рамках контроля заполняемой массы.A typical control strategy (shown in Figure 1) will have a greater than 50% chance of producing an erroneous protein concentration selection. In fig. 1 The observed overall variability in the lyophilized product homogeneity data is 0.01 mg/mL. To ensure minimum capability, the average operating range should be limited to match the specification range in increments of 3x0.01=0.03 mg/ml. The target white box process is characterized by a quality of less than 0.1% out of specification (OOS) vials per batch. In contrast, the target process in the shaded area has higher OOS scores. As can be seen in FIG. 1, the current operating range (large square) contains the tolerance thresholds for the desired composition. The effective operating range (smaller rectangle in Fig. 1), however, requires tighter fill tolerances than can be achieved through both formulation variability and fill mass control.
Таким образом, процесс, при котором также необходимо рассматривать другие показатели качества продукта (например, осмоляльность, pH), а также концентрацию белка, может быть нереализуемым или непригодным при использовании стандартной методологии. На фиг. 2 показано иллюстративное проектное поле, в котором рассматривается спецификация по осмоляльности. Серым цветом показаны широкие условия получения ошибочного результата в рамках рабочего диапазона для IPC с пределом предупреждения.Thus, a process that also needs to consider other product quality indicators (e.g., osmolality, pH) as well as protein concentration may not be feasible or suitable using standard methodology. In fig. Figure 2 shows an illustrative design field that considers the osmolality specification. The gray color shows the broad conditions for producing an erroneous result within the operating range for IPC with a warning limit.
Стандартная методология может также приводить к пригодной, но не устойчивой к ошибкам страA standard methodology may also result in a usable but not error-tolerant system.
- 9 043419 тегии контроля заполняемой массы и параметров состава (см. фиг. 3). Как показано на фиг. 1, IPC/ALOR содержит зоны, которые не соответствуют спецификации по концентрации в лекарственном препарате. В пределах зоны несоответствия спецификации по концентрации в лекарственном препарате (белой зоны в пределах IPC/ALOR) остается очень небольшое пространство для ошибки целевого параметра заполнения. Таким образом, как показано на фиг. 3, стандартная методология может приводить к процессу с затрудненным контролем порогов диапазона, пригодному, но без достаточной устойчивости к ошибкам.- 9 043419 tags for monitoring the filling mass and composition parameters (see Fig. 3). As shown in FIG. 1, IPC/ALOR contains areas that do not meet drug product concentration specifications. Within the drug product concentration out-of-specification zone (the white zone within the IPC/ALOR), there is very little room for target fill parameter error. Thus, as shown in FIG. 3, standard methodology may result in a process with difficult control of range thresholds, suitable but without sufficient robustness to errors.
Увеличение заполняемого объема может быть недостаточным изменением процесса для создания пригодного состава с приемлемой устойчивостью к ошибкам. Фиг. 4 представляет собой карту поверхности отклика, на которой заполняемый объем увеличен. Диапазон целевого параметра заполнения можно привести в соответствие с IPC/ALOR и спецификациями продукта, но устойчивость к ошибкам может оставаться неприемлемой. Диапазон заполняемой массы в допустимом диапазоне концентрации в нерасфасованном составе имеет недостаточную устойчивость к ошибкам.Increasing the fill volume may not be a sufficient process change to create a suitable formulation with acceptable error tolerance. Fig. 4 is a map of the response surface in which the filled volume is increased. The fill target range can be adjusted to meet IPC/ALOR and product specifications, but error tolerance may still be unacceptable. The range of the filling mass within the permissible concentration range in the bulk formulation has insufficient error tolerance.
Если результат подбора концентрации в нерасфасованном составе используют для последующей корректировки заполняемой массы терапевтического белка, рабочий диапазон можно изменить настолько, чтобы обеспечить получение состава, являющегося как пригодным, так и достаточно устойчивым к ошибкам. Как показано на фиг. 5, модифицированный рабочий диапазон (IPC/ALOR) позволяет ожидаемому диапазону целевого параметра заполнения находиться в пределах спецификаций по концентрации и осмоляльности. Таким образом, диапазон целевого параметра заполнения может быть представлен в пределах спецификаций по концентрации и другим параметрам с достаточной устойчивостью к ошибкам.If the result of adjusting the concentration in the bulk formulation is used to subsequently adjust the loading mass of the therapeutic protein, the operating range can be changed sufficiently to provide a formulation that is both suitable and reasonably robust. As shown in FIG. 5, the modified operating range (IPC/ALOR) allows the expected range of the target filling parameter to be within the concentration and osmolality specifications. In this way, the range of the target filling parameter can be represented within the specifications for concentration and other parameters with sufficient robustness to errors.
До настоящего времени эту методику применяли для определения единицы складского хранения (SKU) низких доз применительно к SKU для низкодозированного ромиплостима (Nplate®), блинатумомаба (Blincyto®), инфликсимаба и трастузумаба. Подробности применения этой методики представлены в разделе Демонстрационные примеры далее в данном документе.To date, this methodology has been used to define low-dose stock keeping units (SKUs) for SKUs for low-dose romiplostim (Nplate®), blinatumomab (Blincyto®), infliximab, and trastuzumab. Details of this technique are presented in the Demonstrations section later in this document.
Вспомогательные вещества в целомExcipients in general
Одной из задач при получении составов является стабилизация продукта от видов стресса при изготовлении, перевозке и хранении, которую можно реализовать с помощью определенных вспомогательных веществ для составов. В целом, вспомогательные вещества можно классифицировать на основе механизмов, посредством которых они стабилизируют белки от различных видов химического и физического стресса. Некоторые вспомогательные вещества смягчают эффекты конкретного вида стресса или регулируют конкретную восприимчивость конкретного белка. Другие вспомогательные вещества оказывают более общее влияние на физическую и ковалентную стабильность белков.One of the tasks in obtaining formulations is to stabilize the product from types of stress during manufacturing, transportation and storage, which can be achieved with the help of certain auxiliary substances for the formulations. In general, excipients can be classified based on the mechanisms by which they stabilize proteins against various types of chemical and physical stress. Some excipients mitigate the effects of a particular type of stress or regulate the specific susceptibility of a particular protein. Other excipients have a more general effect on the physical and covalent stability of proteins.
Распространенные вспомогательные вещества, применяемые в жидких и лиофилизированных белковых составах, представлены в табл. 2 (см. Kamerzell et al. (2011), Advanced Drug Delivery Rev. 63(13): 1118-59).Common excipients used in liquid and lyophilized protein formulations are presented in Table. 2 (see Kamerzell et al. (2011), Advanced Drug Delivery Rev. 63(13): 1118-59).
- 10 043419- 10 043419
Таблица 2table 2
Вспомогательные компоненты в белковых составахAuxiliary components in protein compositions
- 11 043419- 11 043419
- 12 043419- 12 043419
Другие вспомогательные вещества известны из уровня техники и могут быть найдены в Powell et al. (1998), Compendium of Excipients for Parenteral Formulations, PDA J. Pharm. Sci. Tech., 52:238-311, который включен в данный документ посредством ссылки.Other excipients are known in the art and can be found in Powell et al. (1998), Compendium of Excipients for Parenteral Formulations, PDA J. Pharm. Sci. Tech., 52:238-311, which is incorporated herein by reference.
С учетом идей и указаний, приведенных в данном документе, специалисты в данной области будут знать, какое количество или диапазон количества вспомогательного вещества можно включать в любойGiven the ideas and guidance provided herein, those skilled in the art will know what amount or range of amounts of excipient can be included in any
- 13 043419 конкретный состав для получения биофармацевтического состава по настоящему изобретению. Например, количество и тип соли, которая должна быть включена в биофармацевтический состав по настоящему изобретению, можно выбрать, исходя из желаемой осмоляльности (т.е. изотоничности, гипотоничности или гипертоничности) конечного раствора, а также количеств и осмоляльности других компонентов, которые должны быть включены в состав. Аналогичным образом, в качестве примера со ссылкой на тип полиола или сахара, включенного в состав, количество такого вспомогательного вещества будет зависеть от его осмоляльности.- 13 043419 specific composition for obtaining the biopharmaceutical composition of the present invention. For example, the amount and type of salt to be included in the biopharmaceutical composition of the present invention can be selected based on the desired osmolality (i.e., isotonicity, hypotonicity, or hypertonicity) of the final solution, as well as the amounts and osmolality of other components that must be included in the composition. Likewise, by way of example, with reference to the type of polyol or sugar included in the formulation, the amount of such excipient will depend on its osmolality.
Специалисты в данной области могут определить, какое количество или диапазон количества вспомогательного вещества, которое способствует сохранению стабильности биофармацевтического препарата, можно включать в любой конкретный состав для получения биофармацевтического состава по настоящему изобретению. Например, количество и тип соли, которая должна быть включена в биофармацевтический состав по настоящему изобретению, можно выбрать, исходя из желаемой осмоляльности (т.е. изотоничности, гипотоничности или гипертоничности) конечного раствора, а также количеств и осмоляльности других компонентов, которые должны быть включены в состав. Аналогичным образом, в качестве примера со ссылкой на тип полиола или сахара, включенного в состав, количество такого вспомогательного вещества будет зависеть от его осмоляльности.Those skilled in the art will be able to determine what amount or range of amounts of an excipient that helps maintain the stability of a biopharmaceutical can be included in any particular formulation to formulate the biopharmaceutical composition of the present invention. For example, the amount and type of salt to be included in the biopharmaceutical composition of the present invention can be selected based on the desired osmolality (i.e., isotonicity, hypotonicity, or hypertonicity) of the final solution, as well as the amounts and osmolality of other components that must be included in the composition. Likewise, by way of example, with reference to the type of polyol or sugar included in the formulation, the amount of such excipient will depend on its osmolality.
Приблизительно 5% вес./об. сорбита, например, может обеспечивать достижение изотоничности, тогда как вспомогательного вещества сахарозы для достижения изотоничности необходимо приблизительно 9% вес./об.. Выбор количества или диапазона концентраций одного или нескольких вспомогательных веществ, которые можно включать в биофармацевтический состав по настоящему изобретению, был пояснен на примере выше посредством ссылки на соли, полиолы и сахара. Однако, специалистам в данной области будет понятно, что соображения, описанные в данном документе и дополнительно поясненные на примере посредством ссылки на конкретные вспомогательные вещества, в равной степени применимы ко всем типам и комбинациям вспомогательных веществ, включая, например, соли, аминокислоты, другие средства, регулирующие тоничность, поверхностно-активные вещества, стабилизаторы, объемообразующие средства, криопротекторы, лиопротекторы, антиоксиданты, ионы металлов, хелатообразующие средства и/или консерванты.Approximately 5% w/v. sorbitol, for example, can achieve isotonicity, while the sucrose excipient requires approximately 9% w/v to achieve isotonicity. The choice of the amount or concentration range of one or more excipients that can be included in the biopharmaceutical composition of the present invention has been explained in the example above by reference to salts, polyols and sugars. However, those skilled in the art will appreciate that the considerations described herein and further illustrated by example by reference to specific excipients apply equally to all types and combinations of excipients, including, for example, salts, amino acids, other agents , regulating tonicity, surfactants, stabilizers, bulking agents, cryoprotectors, lyoprotectors, antioxidants, metal ions, chelating agents and/or preservatives.
Кроме того, если конкретное вспомогательное вещество указано в составе посредством, например, процентного содержания (%) вес/объем, специалистам в данной области будет понятно, что также рассматривается эквивалентная молярная концентрация этого вспомогательного вещества.Additionally, if a particular excipient is indicated in a formulation by, for example, a percentage (%) w/v, those skilled in the art will appreciate that the equivalent molar concentration of that excipient is also considered.
Средним специалистам в данной области будет понятно, что концентрации вышеуказанных вспомогательных веществ обладают взаимозависимостью в конкретном составе. В качестве примера, концентрацию объемообразующего средства можно снизить в случае, например, наличия высокой концентрации белка/пептида или высокой концентрации стабилизирующего средства. Кроме того, среднему специалисту в данной области будет понятно, что в целях поддержания изотоничности конкретного состава, в котором отсутствует объемообразующее средство, концентрация стабилизирующего средства может быть соответствующим образом скорректирована (т.е. может использоваться количество стабилизатора, регулирующее тоничность).Those of ordinary skill in the art will appreciate that the concentrations of the above excipients are interdependent in a particular formulation. As an example, the concentration of the bulking agent can be reduced if, for example, there is a high concentration of protein/peptide or a high concentration of stabilizing agent. In addition, one of ordinary skill in the art will appreciate that in order to maintain isotonicity of a particular formulation lacking a bulking agent, the concentration of the stabilizing agent may be adjusted accordingly (ie, a tonicity-controlling amount of stabilizer may be used).
Буферные вещества pH раствора оказывает влияние на химическую целостность аминокислотных остатков белка (например, дезамидирование Asn и окисление Met) и подержание его структуры высшего порядка. Таким образом, специалисты в данной области применяют буферные средства для контроля pH раствора и оптимизации стабильности белка. Максимальная стабильность белкового лекарственного средства обычно находится в пределах узкого диапазона pH. Несколько подходов (например, исследования стабильности методом ускоренного старения и калориметрические скрининговые исследования) являются применимыми для этой цели (Remmele et al. (1999), Biochemistry, 38(16): 5241-7). После окончательной разработки состава лекарственный препарат следует изготавливать и поддерживать в рамках предварительно определенной спецификации на протяжении всего его срока годности при хранении. Следовательно, буферные средства почти всегда используют для контроля pH в составе.Buffering agents Solution pH influences the chemical integrity of protein amino acid residues (eg, Asn deamidation and Met oxidation) and the maintenance of its higher order structure. Thus, those skilled in the art use buffering agents to control the pH of the solution and optimize protein stability. The maximum stability of a protein drug is usually within a narrow pH range. Several approaches (eg, accelerated aging stability studies and calorimetric screening studies) are useful for this purpose (Remmele et al. (1999), Biochemistry, 38(16): 5241-7). Once the formulation is finalized, the drug product should be manufactured and maintained within predetermined specifications throughout its shelf life. Therefore, buffers are almost always used to control the pH of a formulation.
Органические кислоты, фосфаты и Трис обыкновенно используют в качестве буферных веществ в белковых составах (см. табл. 3). Буферная емкость буферных соединений является максимальной при pH, равном рКа, и уменьшается по мере увеличения или уменьшения pH относительно данного значения. Девяносто процентов буферной емкости находится в пределах одной единицы pH от их pKa. Буферная емкость также увеличивается пропорционально увеличению концентрации буферного вещества.Organic acids, phosphates and Tris are commonly used as buffers in protein formulations (see Table 3). The buffering capacity of buffer compounds is maximum at a pH equal to pKa and decreases as the pH increases or decreases relative to this value. Ninety percent of the buffer capacity is within one pH unit of their pKa. The buffer capacity also increases in proportion to the increase in the concentration of the buffer substance.
- 14 043419- 14 043419
Таблица 3Table 3
Широко применяемые буферные средства и их значения рКа Widely used buffers and their pKa values
В дополнение к вышеуказанному, некоторые терапевтические белки могут быть самобуферизующимися при фармацевтически значимой концентрации. В составах на основе таких белков может вообще не быть необходимым включение традиционного буфера. См. заявку на патент США 2012/0028877, которая включена в данный документ посредством ссылки.In addition to the above, some therapeutic proteins may be self-buffering at pharmaceutically relevant concentrations. In formulations based on such proteins, the inclusion of a traditional buffer may not be necessary at all. See US Patent Application 2012/0028877, which is incorporated herein by reference.
Сахара и углеводыSugars and carbohydrates
Сахара часто применяют для стабилизации белков как в жидких, так и в лиофилизированных составах. Считается, что дисахариды, такие как сахароза и трегалоза, стабилизируют белки посредством преимущественной гидратации при высоких концентрациях в жидком состоянии, а также посредством специфических взаимодействий с белками и образования вязких стеклообразных матриц в твердом состоянии. Молекулы Сахаров могут увеличивать вязкость растворов моноклональных антител, по-видимому, посредством механизма преимущественной гидратации. Сахароспирты, такие как сорбит, могут стабилизировать белки в растворе и в лиофилизированном состоянии. Маннит часто применяют в качестве объемообразующего средства в лиофилизированных составах. Лактозу применяют в качестве молекулыносителя для ингаляционных составов на основе белков. Производные циклодекстрина могут стабилизировать белки в жидких составах на основе антител, вакцинных антигенов и таких меньших белков, как факторы роста, интерлейкин-2 и инсулин. Стабилизаторы и объемообразующие средства.Sugars are often used to stabilize proteins in both liquid and lyophilized formulations. Disaccharides such as sucrose and trehalose are thought to stabilize proteins through preferential hydration at high concentrations in the liquid state and through specific interactions with proteins and the formation of viscous glassy matrices in the solid state. Sugar molecules can increase the viscosity of monoclonal antibody solutions, apparently through the mechanism of preferential hydration. Sugar alcohols such as sorbitol can stabilize proteins in solution and in the lyophilized state. Mannitol is often used as a bulking agent in lyophilized formulations. Lactose is used as a carrier molecule for protein-based inhalation formulations. Cyclodextrin derivatives can stabilize proteins in liquid formulations based on antibodies, vaccine antigens and smaller proteins such as growth factors, interleukin-2 and insulin. Stabilizers and volume-forming agents.
Объемообразующее средства, как правило, применяют в лиофилизированных составах для улучшения внешнего вида продукта и предотвращения утечки. Условия в составе обычно разрабатывают таким образом, чтобы объемообразующее средство выкристаллизовывалось из замороженной аморфной фазы (во время замораживания либо отжига при температуре выше Tg'), придавая лепешке структуру и объем. Маннит и глицин являются примерами широко применяемых объемообразующих средств.A bulking agent is typically used in lyophilized formulations to improve the appearance of the product and prevent leakage. Formulation conditions are usually designed such that the bulking agent crystallizes out of the frozen amorphous phase (during freezing or annealing at temperatures above Tg'), imparting structure and volume to the cake. Mannitol and glycine are examples of commonly used bulking agents.
Стабилизаторы включают класс соединений, которые могут служить в качестве криопротекторов, лиопротекторов и стеклообразующих средств. Действие криопротекторов заключается в стабилизации белков во время замораживания или в замороженном состоянии при низких температурах (Р. Cameron, ed., Good Pharmaceutical Freeze-Drying Practice, Interpharm Press, Inc., Buffalo Grove, IL, (1997)). Лиопротекторы стабилизируют белки в виде твердой дозированной формы, высушенной посредством сублимации, путем сохранения конформационных свойств белка, подобных нативным, во время стадий дегидратации при сублимационной сушке. Свойства в стеклообразном состоянии были классифицированы как прочность или хрупкость в зависимости от соответствующих релаксационных свойств, которые зависят от температуры. Важно, чтобы криопротекторы, лиопротекторы и стеклообразующие средства оставались в той же фазе, что и белок, с целью придания стабильности. Сахара, полимеры и полиолы относятся к этой категории и могут иногда играть все три роли.Stabilizers include a class of compounds that can serve as cryoprotectants, lyoprotectants, and glass formers. The action of cryoprotectants is to stabilize proteins during freezing or when frozen at low temperatures (R. Cameron, ed., Good Pharmaceutical Freeze-Drying Practice, Interpharm Press, Inc., Buffalo Grove, IL, (1997)). Lyoprotectants stabilize proteins in freeze-dried solid dosage form by maintaining native-like conformational properties of the protein during the dehydration steps of freeze-drying. Properties in the glassy state have been classified as strength or brittleness depending on the corresponding relaxation properties, which are temperature dependent. It is important that cryoprotectants, lyoprotectants and glass formers remain in the same phase as the protein to impart stability. Sugars, polymers and polyols fall into this category and can sometimes play all three roles.
Полиолы охватывают класс вспомогательных веществ, который включает сахара (например, маннит, сахарозу, сорбит) и другие многоатомные спирты (например, глицерин и пропиленгликоль). Полимер полиэтиленгликоль (PEG) включен в эту категорию. Полиолы обычно применяют в качестве стабилизирующих вспомогательных веществ и/или изотонических средств как в жидких, так и в лиофилизированных белковых составах для парентерального введения. Применительно к ряду Гофмейстера полиолы являются космотропными и преимущественно вытесняются с поверхности белков. Полиолы могут защищать белки как от физических, так и от химических путей разрушения. Преимущественно вытесняемые сорастворители увеличивают эффективное поверхностное натяжение растворителя на границе раздела с белком, в силу чего большинство энергетически выгодных конформаций белка представляют собой конформации с наименьшими площадями поверхности.Polyols cover a class of excipients that includes sugars (eg, mannitol, sucrose, sorbitol) and other polyhydric alcohols (eg, glycerol and propylene glycol). Polyethylene glycol (PEG) polymer is included in this category. Polyols are commonly used as stabilizing excipients and/or isotonic agents in both liquid and lyophilized protein formulations for parenteral administration. In relation to the Hofmeister series, polyols are kosmotropic and are predominantly displaced from the surface of proteins. Polyols can protect proteins from both physical and chemical degradation pathways. Predominantly displaced cosolvents increase the effective surface tension of the solvent at the protein interface, causing most energetically favorable protein conformations to be those with the smallest surface areas.
- 15 043419- 15 043419
Маннит представляет собой объемообразующее средство, часто используемое в лиофилизированных составах, поскольку он выкристаллизовывается из аморфной фазы белка во время сублимационной сушки, придавая лепешке структурную стабильность (например, Leukine®, Enbrel® Lyo, Betaseron®). Его обычно применяют в комбинации с крио- и/или лиопротектором, таким как сахароза. Из-за склонности маннита к кристаллизации в замороженном состоянии сорбит и сахароза являются предпочтительными средствами, регулирующими тоничность/стабилизаторами в жидких составах для защиты продукта от видов стресса, обусловленных замораживанием-размораживанием, возникающих во время транспортировки или при замораживании нерасфасованного продукта перед изготовлением. Сорбит и сахароза являются гораздо более устойчивыми к кристаллизации и, следовательно, с меньшей вероятностью отделяются от белка в результате разделения фаз. Интересно отметить, что, хотя маннит применяли в количествах, регулирующих тоничность, в нескольких представленных на рынке жидких составах, таких как Actimmune®, Forteo® и Rebif®, этикетки продуктов таких лекарственных средств содержат предупреждение не замораживать. Применения восстанавливающих Сахаров (содержащих свободные альдегидные или кетонные группы), таких как глюкоза и лактоза, необходимо избегать, так как они могут реагировать с поверхностными лизиновыми и аргининовыми остатками белков и гликировать их посредством реакции Майяра между альдегидными группами и первичными аминогруппами (Chevalier F, et al., Nahrung, 46(2): 58-63 (2002); Humeny A, et al., J Agric Food Chem. 50(7): 2153-60 (2002)). Сахароза может гидролизоваться до фруктозы и глюкозы в кислых условиях (Kautz С. F. and Robinson A. L., JACS, 50(4) 1022-30 (1928)) и, следовательно, может вызывать гликирование.Mannitol is a bulking agent often used in lyophilized formulations because it crystallizes from the amorphous protein phase during freeze-drying, imparting structural stability to the lozenge (e.g., Leukine®, Enbrel® Lyo, Betaseron®). It is usually used in combination with a cryo- and/or lyoprotectant such as sucrose. Because of mannitol's tendency to crystallize when frozen, sorbitol and sucrose are preferred tonicity adjusters/stabilizers in liquid formulations to protect the product from the types of freeze-thaw stress encountered during transportation or when freezing the bulk product prior to manufacturing. Sorbitol and sucrose are much more resistant to crystallization and are therefore less likely to separate from the protein as a result of phase separation. It is interesting to note that although mannitol has been used in tonicity-regulating amounts in several commercially available liquid formulations, such as Actimmune®, Forteo®, and Rebif®, the product labels for these formulations contain a warning not to freeze. The use of reducing sugars (containing free aldehyde or ketone groups), such as glucose and lactose, should be avoided as they can react with the surface lysine and arginine residues of proteins and glycate them through the Maillard reaction between aldehyde groups and primary amino groups (Chevalier F, et al., Nahrung, 46(2): 58-63 (2002); Humeny A, et al., J Agric Food Chem. 50(7): 2153-60 (2002)). Sucrose can be hydrolyzed to fructose and glucose under acidic conditions (Kautz C. F. and Robinson A. L., JACS, 50(4) 1022-30 (1928)) and therefore can cause glycation.
В конкретных вариантах осуществления композиций по настоящему изобретению стабилизатор (или комбинацию стабилизаторов) добавляют к лиофилизированному составу для предотвращения или снижения агрегации и химического разрушения, вызванных лиофилизацией или вызванных хранением. Опалесцирующий или мутный раствор после восстановления указывает на то, что произошло осаждение белка. Термин стабилизатор означает вспомогательное вещество, способное к предотвращению агрегации или другого физического разрушения, а также химического разрушения (например, автолиза, дезамидирования, окисления и т. д.) в водном и твердом состояниях. Стабилизаторы, которые традиционно используют в фармацевтических композициях, включают без ограничения сахарозу, трегалозу, маннозу, мальтозу, лактозу, глюкозу, раффинозу, целлобиозу, генциобиозу, изомальтозу, арабинозу, глюкозамин, фруктозу, маннит, сорбит, глицин, аргинин-HCl, полигидроксисоединения, в том числе полисахариды, такие как декстран, крахмал, гидроксиэтилкрахмал, циклодекстрины, N-метилпирролидон, целлюлоза и гиалуроновая кислота, хлорид натрия, Carpenter et al. (1991), Develop. Biol. Standard 74:225.In specific embodiments of the compositions of the present invention, a stabilizer (or combination of stabilizers) is added to the lyophilized formulation to prevent or reduce aggregation and chemical degradation caused by lyophilization or caused by storage. An opalescent or cloudy solution after reconstitution indicates that protein precipitation has occurred. The term stabilizer means an excipient capable of preventing aggregation or other physical degradation as well as chemical degradation (e.g., autolysis, deamidation, oxidation, etc.) in aqueous and solid states. Stabilizers traditionally used in pharmaceutical compositions include, but are not limited to, sucrose, trehalose, mannose, maltose, lactose, glucose, raffinose, cellobiose, gentiobiose, isomaltose, arabinose, glucosamine, fructose, mannitol, sorbitol, glycine, arginine-HCl, polyhydroxy compounds, including polysaccharides such as dextran, starch, hydroxyethyl starch, cyclodextrins, N-methylpyrrolidone, cellulose and hyaluronic acid, sodium chloride, Carpenter et al. (1991), Develop. Biol. Standard 74:225.
ОсмолитыOsmolytes
Осмолиты, в настоящее время применяемые в качестве вспомогательных веществ в белковых составах, перечислены в табл. 2. Другие осмолиты, обычно встречающиеся в природе, которые могут быть применимыми в качестве вспомогательных веществ, включают таурин, бетаин, триметиламин-И-оксид (ТМАО), холин-О-сульфат и саркозин.Osmolytes currently used as excipients in protein formulations are listed in Table. 2. Other osmolytes commonly found in nature that may be useful as excipients include taurine, betaine, trimethylamine-I-oxide (TMAO), choline-O-sulfate and sarcosine.
Белки и полимерыProteins and polymers
Белковые вспомогательные вещества усложняют составление, особенно в том, что касается разработки аналитических способов отслеживания стабильности белковых лекарственного средства или вакцины в присутствии белкового вспомогательного вещества. Полимеры оценивались в качестве вспомогательных веществ (например, в качестве объемообразующих средств) в лиофилизированных белковых составах. Изучаются составы на основе белковых лекарственных средств и вакцин с контролируемым высвобождением, в которых белки составлены с полимерами, такими как сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) и полиэтиленгликоль (PEG). Множество дополнительных водорастворимых полимеров (например, гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС), карбоксиметилцеллюлоза (CMC)) использовалось для получения составов на основе белковых лекарственных средств для местного применения.Protein excipients add complexity to formulation, especially when it comes to developing analytical methods to monitor the stability of a protein drug or vaccine in the presence of a protein excipient. Polymers have been evaluated as excipients (eg, bulking agents) in lyophilized protein formulations. Protein drug and controlled release vaccine formulations are being explored, in which proteins are formulated with polymers such as copolymer of lactic-glycolic acid (PLGA) and polyethylene glycol (PEG). A variety of additional water-soluble polymers (eg, hydroxyethylcellulose (HEC), carboxymethylcellulose (CMC)) have been used to prepare topical protein drug formulations.
PEG может стабилизировать белки посредством двух различных температурозависимых механизмов. При более низких температурах он преимущественно вытесняется с поверхности белка, но было показано, что он взаимодействует с развернутой формой белка при более высокой температуре благодаря своей амфипатической природе (Lee and Lee (1987), Biochemistry, 26(24): 7813-9). Он может защищать белки посредством преимущественного вытеснения при более низких температурах, но, возможно, и посредством снижения количества продуктивных столкновений между развернутыми молекулами при более высоких температурах. PEG также является криопротектором и использовался в Recombinate®, лиофилизированном составе на основе рекомбинантного антигемофильного фактора.PEG can stabilize proteins through two different temperature-dependent mechanisms. At lower temperatures it is preferentially displaced from the protein surface, but has been shown to interact with the unfolded form of the protein at higher temperatures due to its amphipathic nature (Lee and Lee (1987), Biochemistry, 26(24): 7813-9). It may protect proteins by preferential displacement at lower temperatures, but possibly also by reducing the number of productive collisions between unfolded molecules at higher temperatures. PEG is also a cryoprotectant and was used in Recombinate®, a lyophilized formulation based on recombinant antihemophilic factor.
АнтиоксидантыAntioxidants
Многие различные источники могут окислять остатки в белках. Окислительное повреждение белка можно свести к минимуму посредством тщательного контроля процесса изготовления и хранения продукта, в том числе таких факторов, как атмосферный кислород, температура, воздействие света и химическое загрязнение. Если такие способы контроля являются неприемлемыми, в состав можно включать вспомогательные вещества из группы антиоксидантов.Many different sources can oxidize residues in proteins. Oxidative damage to proteins can be minimized through careful control of the product's manufacturing and storage processes, including factors such as atmospheric oxygen, temperature, light exposure, and chemical contamination. If such control methods are unacceptable, antioxidant excipients can be included in the composition.
Наиболее широко применяемыми фармацевтическими вспомогательными веществами из группыThe most widely used pharmaceutical excipients from the group
- 16 043419 антиоксидантов являются восстановители, средства захвата растворенного кислорода/свободных радикалов или хелатообразующие средства. Антиоксиданты в составах на основе терапевтических белков должны быть водорастворимыми и должны оставаться активными на протяжении всего срока годности продукта при хранении. Восстановители и средства захвата растворенного кислорода/свободных радикалов действуют посредством удаления активных форм кислорода из раствора. Хелатообразующие средства (например, EDTA) могут быть эффективными, связывая следовые количества загрязняющих веществ, представляющих собой ионы металлов, которые способствуют образованию свободных радикалов. Например, в жидком составе на основе кислотного фактора роста фибробластов EDTA ингибирует окисление цистеиновых остатков, катализируемое ионами металлов. EDTA применялся в представленных на рынке продуктах, таких как Kineret® и Ontak®.- 16 043419 antioxidants are reducing agents, dissolved oxygen/free radical scavenging agents or chelating agents. Antioxidants in therapeutic protein formulations must be water soluble and must remain active throughout the shelf life of the product. Reducing agents and dissolved oxygen/free radical scavengers act by removing reactive oxygen species from solution. Chelating agents (eg, EDTA) can be effective by binding trace amounts of contaminants, which are metal ions that contribute to the formation of free radicals. For example, in a liquid formulation based on acidic fibroblast growth factor, EDTA inhibits the oxidation of cysteine residues catalyzed by metal ions. EDTA has been used in commercially available products such as Kineret® and Ontak®.
Ионы металловMetal ions
В целом, ионы переходных металлов являются нежелательными в белковых составах, поскольку они могут катализировать реакции физического и химического разрушения белков. Однако, специфические ионы металлов включают в составы, если они действуют в качестве кофакторов для белков. Ионы металлов можно также применять в суспензионных составах на основе белков, где они образуют координационные комплексы (например, в цинковой суспензии инсулина). Применение ионов магния (10-120 мМ) было предложено для ингибирования изомеризации аспарагиновой кислоты до изоаспарагиновой кислоты (WO 2004/039337).In general, transition metal ions are undesirable in protein formulations because they can catalyze physical and chemical degradation reactions of proteins. However, specific metal ions are included in formulations if they act as cofactors for proteins. Metal ions can also be used in protein-based suspension formulations, where they form coordination complexes (for example, in a zinc suspension of insulin). The use of magnesium ions (10-120 mM) has been proposed to inhibit the isomerization of aspartic acid to isoaspartic acid (WO 2004/039337).
Было обнаружено, что ионы металлов придают стабильность и/или увеличенную активность в составе на основе человеческой дезоксирибонуклеазы (rhDNase, Pulmozyme®). Ионы Са+2 (не более 100 мМ) увеличивают стабильность фермента посредством специфического связывающего участка (Chen et al. (1999), J Pharm Sci. 88(4): 477-82). В действительности удаление ионов кальция из раствора с EGTA вызывало увеличение дезамидирования и агрегации. Однако, этот эффект наблюдался только с ионами Са+2; наблюдалось, что другие двухвалентные катионы - Mg+2, Mn+2 и Zn+ - дестабилизируют rhDNase.Metal ions have been found to impart stability and/or increased activity in a human deoxyribonuclease based formulation (rhDNase, Pulmozyme®). Ca +2 ions (not more than 100 mM) increase the stability of the enzyme through a specific binding site (Chen et al. (1999), J Pharm Sci. 88(4): 477-82). In fact, removal of calcium ions from the EGTA solution caused an increase in deamidation and aggregation. However, this effect was observed only with Ca +2 ions; Other divalent cations, Mg +2 , Mn +2 , and Zn + , have been observed to destabilize rhDNase.
Аналогичные эффекты наблюдались в составе на основе фактора свертывания крови VIII. Ионы Са+ и Sr+ стабилизируют белок, тогда как другие, такие как Mg+2, Mn+2 и Zn+2, Cu+2 и Fe+2 дестабилизируют его (Fatouros, et al. (1997), Int. J. Pharm., 155, 121-131). В отдельном исследовании с фактором свертывания крови VIII в присутствии ионов Al+3 наблюдалось значительное увеличение скорости агрегации (Derrick et al. (2004), J. Pharm. Sci., 93(10): 2549-57). Авторы отмечают, что другие вспомогательные вещества, такие как буферные соли, часто загрязнены ионами Al+3, и иллюстрируют необходимость применения вспомогательных веществ надлежащего качества в составляемых продуктах. Вакцины, содержащие живые или убитые аттенуированные пикорнавирусы, такие как вирусы гепатита А и полиомиелита, конформационно стабилизируют с помощью магния. Ионы металлов, таких как кальций, магний и цинк, улучшают стабильность окситоцина в водном растворе. Инсулин может связываться с цинком, что приводит к образованию димеров и гексамеров в кристаллической форме, что позволяет получать различные составы с различными профилями высвобождения in vivo. Химическая и термическая стабильность состава на основе гексамерного инсулина варьируется в присутствии различных уровней цинка и фенола.Similar effects were observed in a formulation based on coagulation factor VIII. Ca + and Sr + ions stabilize the protein, while others such as Mg +2 , Mn +2 and Zn +2 , Cu +2 and Fe +2 destabilize it (Fatouros, et al. (1997), Int. J. Pharm., 155, 121-131). In a separate study with coagulation factor VIII, a significant increase in aggregation rate was observed in the presence of Al +3 ions (Derrick et al. (2004), J. Pharm. Sci., 93(10): 2549-57). The authors note that other excipients, such as buffer salts, are often contaminated with Al +3 ions, and illustrate the need for the use of appropriate quality excipients in formulated products. Vaccines containing live or killed attenuated picornaviruses, such as hepatitis A and polio viruses, are conformationally stabilized with magnesium. Metal ions such as calcium, magnesium and zinc improve the stability of oxytocin in aqueous solution. Insulin can bind to zinc, resulting in the formation of dimers and hexamers in crystalline form, allowing for different formulations with different in vivo release profiles. The chemical and thermal stability of the hexameric insulin formulation varies in the presence of varying levels of zinc and phenol.
Специфические лигандыSpecific ligands
Один из подходов к улучшению конформационной стабильности белковых терапевтических лекарственных средств заключается в извлечении преимуществ из наличия лигандсвязывающих участков, свойственных для белка. Например, Pulmozyme® не только требует наличия двухвалентных ионов металлов для осуществления своей ферментативной активности, а и обладает улучшенной конформационной стабильностью в присутствии ионов кальция. Как кислотный, так и основный факторы роста фибробластов (aFGF и bFGF) оценивались в клиническом аспекте в отношении их способности содействовать заживлению ран, и оба белка в естественных условиях связываются с протеогликанами с высоким отрицательным зарядом на клеточных поверхностях. Разнообразные другие соединения с высоким отрицательным зарядом также связываются с aFGF и существенно стабилизируют его посредством взаимодействия с участком связывания полианионов в белке.One approach to improve the conformational stability of protein therapeutic drugs is to take advantage of the presence of ligand-binding sites inherent in the protein. For example, Pulmozyme® not only requires the presence of divalent metal ions for its enzymatic activity, but also has improved conformational stability in the presence of calcium ions. Both acidic and basic fibroblast growth factors (aFGF and bFGF) have been evaluated clinically for their ability to promote wound healing, and both proteins naturally bind to highly negatively charged proteoglycans on cell surfaces. A variety of other highly negatively charged compounds also bind to aFGF and substantially stabilize it through interaction with the polyanion binding site of the protein.
Поверхностно-активные веществаSurfactants
Молекулы белков имеют высокую склонность к взаимодействию с поверхностями, что делает их восприимчивыми к адсорбции и денатурации на границах раздела фаз воздух-жидкость, флаконжидкость и жидкость-жидкость (силиконовое масло). Этот путь разрушения находится в обратной зависимости от концентрации белка и приводит к образованию растворимых или нерастворимых белковых агрегатов или к потере белка из раствора посредством адсорбции на поверхностях. В дополнение к адсорбции на поверхности контейнера, поверхностно-индуцированное разрушение усиливается при физическом встряхивании, которое будет происходить во время перевозки и обращения.Protein molecules have a high propensity to interact with surfaces, making them susceptible to adsorption and denaturation at air-liquid, vial-liquid, and liquid-liquid (silicone oil) interfaces. This degradation pathway is inversely related to protein concentration and results in the formation of soluble or insoluble protein aggregates or loss of protein from solution through adsorption to surfaces. In addition to adsorption to the container surface, surface-induced degradation is enhanced by physical shaking that will occur during transport and handling.
Поверхностно-активные вещества обычно применяют в белковых составах для предотвращения поверхностно-индуцированного разрушения. Поверхностно-активные вещества представляют собой амфипатические молекулы, обладающие способностью оттеснять белки от положений на границах раздела фаз. Гидрофобные части молекул поверхностно-активных веществ занимают положения на границах раздела фаз (например, воздух/жидкость), тогда как гидрофильные части молекул остаются ориентироSurfactants are commonly used in protein formulations to prevent surface-induced degradation. Surfactants are amphipathic molecules that have the ability to displace proteins from positions at phase boundaries. The hydrophobic portions of surfactant molecules occupy positions at phase boundaries (e.g., air/liquid), while the hydrophilic portions of the molecules remain orientated
- 17 043419 ванными к объему растворителя. При достаточных концентрациях (как правило, около критической мицеллярной концентрации детергента) поверхностный слой молекул поверхностно-активных веществ служит для предотвращения адсорбции молекул белков на границе раздела фаз. Таким образом поверхностно-индуцированное разрушение сводится к минимуму.- 17 043419 baths to the volume of solvent. At sufficient concentrations (usually around the critical micellar detergent concentration), a surface layer of surfactant molecules serves to prevent the adsorption of protein molecules at the interface. In this way, surface-induced damage is minimized.
Наиболее широко применяемыми поверхностно-активными веществами являются неионогенные полиэтоксилированные сложные эфиры сорбитана и жирных кислот, т.е. полисорбат 20 и полисорбат 80 (например, в лекарственных препаратах Avonex®, Neupogen®, Neulasta®). Эти две молекулы отличаются только длиной алифатической цепи, которая придает гидрофобный характер молекулам, соответственно С-12 и С-18. Полисорбат 80 является более поверхностно-активным и имеет более низкую критическую мицеллярную концентрацию, чем полисорбат 20. Было показано, что как полисорбат 20, так и полисорбат 80 обеспечивают защиту от агрегации, индуцированной встряхиванием. Полисорбат 20 и полисорбат 80 также обеспечивают защиту от стресса, индуцированного замораживанием, лиофилизацией и восстановлением. Как полисорбат 20, так и полисорбат 80 могут содержать пероксиды, которые могут окислять белки, и они сами могут разрушаться посредством окисления либо гидролиза, оказывая различные эффекты в отношении стабильности белков. Также может быть трудно контролировать уровень полисорбата 20 или полисорбата 80 в составах из-за их сложного поведения во время мембранной фильтрации (особенно при концентрациях, при которых полисорбаты образуют мицеллы в растворе). Поверхностно-активное вещество полоксамер 188 также применялось в нескольких представленных на рынке жидких продуктах, таких как Gonal-F®, Norditropin® и Ovidrel®. В целом считается, что неионогенные поверхностно-активные вещества стабилизируют белки в основном посредством оттеснения молекул белков от гидрофобных поверхностей (например, границ раздела фаз воздух-вода), тем самым предотвращая разворачивание белков на этих гидрофобных границах раздела фаз. Неионогенные поверхностно-активные вещества могут также блокировать адсорбцию молекул белков на других гидрофобных поверхностях, присутствующих во время обработки. Кроме того, неионогенные поверхностноактивные вещества могут непосредственно взаимодействовать с гидрофобными областями молекул белков. Моноклональные антитела могут оказывать влияние на критическую мицеллярную концентрацию полисорбата 20 по сравнению с буфером в отдельности.The most widely used surfactants are nonionic polyethoxylated sorbitan fatty acid esters, i.e. polysorbate 20 and polysorbate 80 (eg, in Avonex®, Neupogen®, Neulasta®). The two molecules differ only in the length of the aliphatic chain, which gives the hydrophobic character to the molecules, C-12 and C-18, respectively. Polysorbate 80 is more surfactant and has a lower critical micellar concentration than polysorbate 20. Both polysorbate 20 and polysorbate 80 have been shown to provide protection against shake-induced aggregation. Polysorbate 20 and polysorbate 80 also provide protection against stress induced by freezing, lyophilization and reconstitution. Both polysorbate 20 and polysorbate 80 may contain peroxides that can oxidize proteins, and they themselves may be destroyed by oxidation or hydrolysis, having different effects on protein stability. It can also be difficult to control the level of polysorbate 20 or polysorbate 80 in formulations due to their complex behavior during membrane filtration (especially at concentrations at which polysorbates form micelles in solution). Poloxamer 188 surfactant has also been used in several commercially available liquid products such as Gonal-F®, Norditropin® and Ovidrel®. In general, nonionic surfactants are thought to stabilize proteins primarily by pushing protein molecules away from hydrophobic surfaces (e.g., air-water interfaces), thereby preventing proteins from unfolding at these hydrophobic interfaces. Nonionic surfactants can also block the adsorption of protein molecules onto other hydrophobic surfaces present during treatment. In addition, nonionic surfactants can directly interact with the hydrophobic regions of protein molecules. Monoclonal antibodies may affect the critical micellar concentration of polysorbate 20 compared to buffer alone.
Детергенты могут также оказывать влияние на термодинамическую конформационную стабильность белков. И в этом случае эффекты данного вспомогательного вещества будут специфичными для белка. Например, было показано, что полисорбаты снижают стабильность некоторых белков и увеличивают стабильность других белков. Дестабилизации белков детергентами можно дать рациональное объяснение в контексте гидрофобных хвостов молекул детергентов, которые могут участвовать в специфическом связывании с белками в частично или полностью развернутом состоянии. Такие типы взаимодействий могут вызывать сдвиг конформационного равновесия в сторону более развернутых состояний белка (т.е. увеличение доступности гидрофобных частей молекулы белка в дополнение к связыванию полисорбата). В качестве альтернативы, если белок в нативном состоянии имеет некоторые гидрофобные поверхности, связывание детергента с белком в нативном состоянии может стабилизировать эту конформацию.Detergents can also affect the thermodynamic conformational stability of proteins. And in this case, the effects of this excipient will be specific to the protein. For example, polysorbates have been shown to reduce the stability of some proteins and increase the stability of other proteins. The destabilization of proteins by detergents can be rationalized in the context of the hydrophobic tails of detergent molecules, which may be involved in specific binding to proteins in a partially or fully unfolded state. These types of interactions can cause a shift in conformational equilibrium toward more unfolded states of the protein (i.e., increasing the accessibility of hydrophobic portions of the protein molecule in addition to polysorbate binding). Alternatively, if the native state protein has some hydrophobic surfaces, detergent binding to the native state protein may stabilize this conformation.
Другой аспект полисорбатов заключается в том, что они по своей природе являются восприимчивыми к окислительному разрушению. Часто в качестве исходных материалов они содержат достаточные количества пероксидов для того, чтобы вызвать окисление боковых цепей остатков в белках, в частности, метионина. Потенциальная возможность окислительного повреждения вследствие добавления стабилизатора подчеркивает тот факт, что в составах необходимо использовать наиболее низкие эффективные концентрации вспомогательных веществ. Для поверхностно-активных веществ эффективная концентрация данного белка будет зависеть от механизма стабилизации. Было высказано предположение, что если механизм стабилизации с помощью поверхностно-активного вещества связан с предотвращением поверхностной денатурации, то эффективная концентрация будет находиться около критической мицеллярной концентрации детергента. Если же механизм стабилизации связан со специфическими взаимодействиями белка и детергента, то эффективная концентрация поверхностно-активного вещества будет связана с концентрацией белка и стехиометрией взаимодействия (Randolph et al. (2002), Pharm Biotechnol., 13:159-75).Another aspect of polysorbates is that they are inherently susceptible to oxidative degradation. They often contain sufficient peroxides as starting materials to cause oxidation of side chain residues in proteins, particularly methionine. The potential for oxidative damage due to the addition of a stabilizer highlights the fact that the lowest effective concentrations of excipients should be used in formulations. For surfactants, the effective concentration of a given protein will depend on the stabilization mechanism. It has been suggested that if the mechanism of surfactant stabilization is related to the prevention of surface denaturation, then the effective concentration will be around the critical micellar detergent concentration. If the stabilization mechanism is related to specific protein-detergent interactions, then the effective surfactant concentration will be related to the protein concentration and the stoichiometry of the interaction (Randolph et al. (2002), Pharm Biotechnol., 13:159-75).
Поверхностно-активные вещества можно также добавлять в соответствующих количествах для предотвращения поверхностной агрегации во время замораживания и высушивания (Chang (1996), J. Pharm. Sci. 85:1325). Иллюстративные поверхностно-активные вещества включают анионные, катионные, неионогенные, цвиттерионные и амфотерные поверхностно-активные вещества, в том числе поверхностно-активные вещества, полученные из встречающихся в природе аминокислот. Анионные поверхностно-активные вещества включают без ограничения лаурилсульфат натрия, диоктилсульфосукцинат натрия и диоктилсульфонат натрия, хенодезоксихолевую кислоту, натриевую соль Nлауроилсаркозина, додецилсульфат лития, натриевую соль 1-октансульфоновой кислоты, гидрат холата натрия, дезоксихолат натрия и натриевую соль гликодезоксихолевой кислоты. Катионные поверхностноактивные вещества включают без ограничения хлорид бензалкония или хлорид бензетония, моногидрат хлорида цетилпиридиния и бромид гексадецилтриметиламмония. Цвиттерионные поверхностноSurfactants can also be added in appropriate amounts to prevent surface aggregation during freezing and drying (Chang (1996), J. Pharm. Sci. 85:1325). Exemplary surfactants include anionic, cationic, nonionic, zwitterionic, and amphoteric surfactants, including surfactants derived from naturally occurring amino acids. Anionic surfactants include, but are not limited to, sodium lauryl sulfate, sodium dioctyl sulfosuccinate and sodium dioctyl sulfonate, chenodeoxycholic acid, sodium Nlauroyl sarcosine, lithium dodecyl sulfate, sodium 1-octane sulfonic acid, sodium cholate hydrate, sodium deoxycholate and sodium glycodeoxycholic acid. Cationic surfactants include, but are not limited to, benzalkonium chloride or benzethonium chloride, cetylpyridinium chloride monohydrate and hexadecyltrimethylammonium bromide. Zwitterionic superficially
- 18 043419 активные вещества включают без ограничения CHAPS, CHAPSO, SB3-10 и SB3-12. Неионогенные поверхностно-активные вещества включают без ограничения дигитонин, Triton X-100, Triton X-114, TWEEN-20 и TWEEN-80. В другом варианте осуществления поверхностно-активные вещества включают лауромакрогол 400, полиоксил-40-стеарат, полиоксиэтилен-10, -40, -50 и -60-гидрогенизированное касторовое масло, моностеарат глицерина, полисорбат 40, 60, 65 и 80, соевый лецитин и другие фосфолипиды, такие как DOPC, DMPG, DMPC и DOPG; сложный эфир сахарозы и жирной кислоты, метилцеллюлозу и карбоксиметилцеллюлозу.- 18 043419 active substances include, without limitation, CHAPS, CHAPSO, SB3-10 and SB3-12. Nonionic surfactants include, but are not limited to, digitonin, Triton X-100, Triton X-114, TWEEN-20 and TWEEN-80. In another embodiment, the surfactants include lauromacrogol 400, polyoxyl 40 stearate, polyoxyethylene 10, -40, -50 and -60 hydrogenated castor oil, glycerol monostearate, polysorbate 40, 60, 65 and 80, soy lecithin and other phospholipids such as DOPC, DMPG, DMPC and DOPG; sucrose fatty acid ester, methylcellulose and carboxymethylcellulose.
СолиSalts
Соли часто добавляют для увеличения ионной силы состава, которая может быть важна для растворимости, физической стабильности и изотоничности белка. Соли могут оказывать влияние на физическую стабильность белков разнообразными способами. Ионы могут стабилизировать нативное состояние белков посредством связывания с заряженными остатками на поверхности белка. В качестве альтернативы, они могут стабилизировать денатурированное состояние посредством связывания с пептидными группами вдоль остова белка (-CONH-). Соли могут также стабилизировать нативную конформацию белка посредством экранирования отталкивающих электростатических взаимодействий между остатками в молекуле белка. Электролиты в белковых составах также могут экранировать притягивающие электростатические взаимодействия между молекулами белков, что может приводить к агрегации и нерастворимости белков.Salts are often added to increase the ionic strength of the formulation, which can be important for protein solubility, physical stability, and isotonicity. Salts can affect the physical stability of proteins in a variety of ways. Ions can stabilize the native state of proteins by binding to charged residues on the protein surface. Alternatively, they may stabilize the denatured state by binding to peptide groups along the protein backbone (-CONH-). Salts can also stabilize the native conformation of a protein by shielding repulsive electrostatic interactions between residues in the protein molecule. Electrolytes in protein formulations can also shield attractive electrostatic interactions between protein molecules, which can lead to protein aggregation and insolubility.
Эффект соли в отношении стабильности и растворимости белков в значительной степени варьируется в зависимости от характеристик видов ионов. Ряд Гофмейстера появился в 1880-х годах как способ ранжирования электролитов по порядку на основе их способности к осаждению белков (Сасасе et al. (1997), Quarterly Reviews of Biophysics, 30(3): 241-277). В этом сообщении ряд Гофмейстера используют для иллюстрации размаха эффектов стабилизации белков с помощью ионогенных и неионогенных сорастворенных веществ. В таблице С сорастворенные вещества упорядочены по их общим эффектам в отношении состояния белков в растворе от стабилизирующих (космотропных) до дестабилизирующих (хаотропных). В целом, различия в эффектах среди анионов являются намного большими, чем различия в эффектах, наблюдаемые для катионов, и для обоих типов эффекты являются наиболее очевидными при более высоких концентрациях, чем допустимые в составах для парентерального введения. Высокие концентрации космотропов (например, >1 моль/л сульфата аммония) обычно используют для осаждения белков из раствора с помощью процесса, называемого высаливанием, где космотроп преимущественно вытесняется с поверхности белка, снижая растворимость белка в его нативной (свернутой) конформации. Удаление или разбавление соли вернет белок в раствор. Термин всаливание относится к применению дестабилизирующих ионов (например, таких как гуанидин и хлорид), которые увеличивают растворимость белков посредством сольватации пептидных связей в остове белка. Увеличение концентраций хаотропа будет способствовать конформации белка в денатурированном (развернутом) состоянии, поскольку увеличивается растворимость пептидной цепи. Относительная эффективность ионов в отношении всаливания и высаливания определяет их положение в ряду Гофмейстера.The effect of salt on protein stability and solubility varies greatly depending on the characteristics of the ion species. The Hoffmeister series originated in the 1880s as a way to rank electrolytes based on their ability to precipitate proteins (Sasase et al. (1997), Quarterly Reviews of Biophysics, 30(3): 241-277). In this report, the Hofmeister series is used to illustrate the scope of the effects of protein stabilization by ionic and nonionic cosolutes. In Table C, cosolutes are ordered by their overall effects on the state of the proteins in solution, from stabilizing (kosmotropic) to destabilizing (chaotropic). In general, the differences in effects among anions are much greater than the differences in effects observed for cations, and for both types, effects are most evident at higher concentrations than those allowed in parenteral formulations. High concentrations of kosmotropes (e.g., >1 mol/L ammonium sulfate) are commonly used to precipitate proteins from solution through a process called salting out, where the kosmotrope is preferentially displaced from the protein surface, reducing the solubility of the protein in its native (folded) conformation. Removing or diluting the salt will return the protein to solution. The term salting-in refers to the use of destabilizing ions (such as guanidine and chloride) that increase the solubility of proteins by solvation of peptide bonds in the protein backbone. Increasing chaotrope concentrations will promote the conformation of the protein in a denatured (unfolded) state, as the solubility of the peptide chain increases. The relative effectiveness of ions in salting-in and salting-out determines their position in the Hofmeister series.
- 19 043419- 19 043419
Таблица 4Table 4
Ряд Гофмейстера для солейHofmeister series for salts
Для поддержания изотоничности в составе для парентерального введения концентрации солей обычно ограничены величиной менее чем 150 мМ для комбинаций одновалентных ионов. В этом диапазоне концентраций механизм стабилизации с помощью солей, вероятно, обусловлен экранированием электростатических отталкивающих внутримолекулярных сил или притягивающих межмолекулярных сил (экранированием Дебая-Хюккеля). Интересно, что, как было показано, хаотропные соли являются более эффективными, чем космотропы в аналогичных концентрациях, при стабилизации структуры белка по этому механизму. Считается, что хаотропные анионы связываются более прочно, чем космотропные ионы. Что касается разрушения ковалентных связей в белках, в соответствии с теорией ДебаяХюккеля ожидаются дифференциальные эффекты ионной силы в отношении этого механизма. Соответственно, опубликованные сообщения о стабилизации белков с помощью хлорида натрия сопровождаются сообщениями, в которых хлорид натрия ускорял разрушение ковалентных связей. Механизмы, посредством которых соли оказывают влияние на стабильность белков, являются специфичными для белка и могут в значительной степени варьироваться в зависимости от pH раствора. Примером, где вспомогательное вещество может быть применимым для обеспечения доставки белкового лекарственного средства, является пример некоторых высококонцентрированных составов на основе антител. В последние несколько лет было показано, что соли являются эффективными в снижении вязкости таких составов (Liu et al. (2005, 2006), J. Pharm Sci., 94(9): 1928-40, исправление в J Pharm Sci., 95(1): 234-5).To maintain isotonicity in parenteral formulations, salt concentrations are typically limited to less than 150 mM for monovalent ion combinations. In this concentration range, the mechanism of stabilization by salts is likely due to shielding of electrostatic repulsive intramolecular forces or attractive intermolecular forces (Debye-Hückel shielding). Interestingly, chaotropic salts have been shown to be more effective than kosmotropes at similar concentrations in stabilizing protein structure through this mechanism. It is believed that chaotropic anions bind more tightly than kosmotropic ions. Regarding the breaking of covalent bonds in proteins, differential ionic strength effects are expected with respect to this mechanism according to the Debye-Hückel theory. Accordingly, published reports of protein stabilization with sodium chloride are accompanied by reports in which sodium chloride accelerated the breakdown of covalent bonds. The mechanisms by which salts affect protein stability are protein specific and can vary greatly depending on the pH of the solution. An example where an excipient may be useful to facilitate the delivery of a protein drug is that of some highly concentrated antibody formulations. In the last few years, salts have been shown to be effective in reducing the viscosity of such formulations (Liu et al. (2005, 2006), J. Pharm Sci., 94(9): 1928-40, correction to J Pharm Sci., 95 (1): 234-5).
КонсервантыPreservatives
Консерванты необходимы для разработки многоразовых составов для парентерального введения, которые предусматривают более одного извлечения из одного и того же контейнера. Их основная функция заключается в ингибировании роста микроорганизмов и обеспечении стерильности продукта на протяжении всего срока годности при хранения или срока применения лекарственного препарата. Широко применяемые консерванты включают бензиловый спирт, фенол и м-крезол. Хотя консерванты имеют долгую историю применения, разработка белковых составов, которые содержат консерванты, может быть сложной задачей. Консерванты почти всегда оказывают дестабилизирующий эффект в отношении белков (агрегация), и это стало основным фактором ограничения их применения в многодозовых белковых составах (Roy et al. (2005), J. Pharm. Sci., 94(2): 382-96). Было показано, что бензиловый спирт также оказывает влияние на структуру и стабильность белков в зависимости от концентрации, температуры и времени. Из-за этих дестабилизирующих эффектов множество лиофилизированных белковых составов восстанавливают с помощью разбавителя, содержащего бензиловый спирт, для сведения к минимуму времени контакта с белком до введения.Preservatives are needed to develop multi-dose parenteral formulations that allow for more than one withdrawal from the same container. Their main function is to inhibit the growth of microorganisms and ensure the sterility of the product throughout the shelf life or period of use of the medicinal product. Commonly used preservatives include benzyl alcohol, phenol and m-cresol. Although preservatives have a long history of use, developing protein formulations that contain preservatives can be challenging. Preservatives almost always have a destabilizing effect on proteins (aggregation), and this has become a major factor limiting their use in multidose protein formulations (Roy et al. (2005), J. Pharm. Sci., 94(2): 382-96) . Benzyl alcohol has also been shown to affect the structure and stability of proteins depending on concentration, temperature and time. Because of these destabilizing effects, many lyophilized protein formulations are reconstituted with a diluent containing benzyl alcohol to minimize contact time with the protein prior to administration.
Большинство белковых лекарственных средств составлялись только для однократного применения. Однако, если возможно получить многодозовые составы, они имеют дополнительное преимущество, заключающееся в обеспечении удобства для пациентов и увеличении рыночной привлекательности. Хорошим примером является гормон роста человека (hGH), в случае с которым разработка составов с доMost protein drugs are formulated for single use only. However, if multi-dose formulations are possible, they have the added benefit of providing convenience to patients and increasing marketability. A good example is human growth hormone (hGH), in which the development of formulations from up to
- 20 043419 бавлением консервантов привела к появлению на рынке более удобных форм выпуска в виде многоразовых инъекционных ручек. В настоящее время доступны по меньшей мере четыре таких устройства в виде ручек, содержащих составы на основе hGH с добавлением консервантов. Norditropin® (жидкий), Nutropin AQ® (жидкий) и Genotropin (лиофилизированный - двухкамерный картридж) содержат фенол, тогда как Somatrope® составлен с м-крезолом.- 20 043419 the addition of preservatives led to the appearance on the market of more convenient forms of release in the form of reusable injection pens. At least four such pen devices are currently available, containing hGH-based formulations with added preservatives. Norditropin® (liquid), Nutropin AQ® (liquid) and Genotropin (lyophilized - dual chamber cartridge) contain phenol, while Somatrope® is formulated with m-cresol.
При разработке составов для получения дозированных форм с добавлением консервантов необходимо рассматривать несколько аспектов. Эффективная концентрация консерванта в лекарственном препарате должна быть оптимизирована. Для этого необходимо провести тестирование данного консерванта в дозированной форме в диапазонах концентраций, которые обеспечивают противомикробную эффективность без нарушения стабильности белка. Например, три консерванта были успешно подвергнуты скринингу во время разработки жидкого состава для рецептора интерлейкина 1 (I типа) с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC). Консерванты ранжировали по порядку, исходя из их влияния на стабильность при концентрациях, обычно используемых в представленных на рынке продуктах (Remmele et al. (1998), Pharm. Res., 15(2): 200-8).Several aspects must be considered when developing formulations for dosage forms containing added preservatives. The effective concentration of the preservative in the medicinal product must be optimized. To do this, it is necessary to test this preservative in dosage form at concentration ranges that provide antimicrobial effectiveness without compromising protein stability. For example, three preservatives were successfully screened during the development of a liquid formulation for interleukin 1 receptor (type I) using differential scanning calorimetry (DSC). Preservatives were ranked based on their effect on stability at concentrations typically used in marketed products (Remmele et al. (1998), Pharm. Res., 15(2): 200-8).
Как и предполагалось, разработка жидких составов, содержащих консерванты, является более сложной задачей, чем разработка лиофилизированных составов. Высушенные посредством сублимации продукты можно лиофилизировать без консерванта и восстанавливать с помощью разбавителя, содержащего консервант, в момент применения. Это сокращает время, в течение которого консервант контактирует с белком, таким образом значительно сводя к минимуму связанные с этим риски для стабильности. При применении жидких составов эффективность и стабильность консерванта должны поддерживаться в течение всего срока годности продукта при хранении (обычно приблизительно 18-24 месяцев). Важно отметить, что эффективность консерванта должна быть продемонстрирована в конечном составе, содержащем активное лекарственное средство и все вспомогательные компоненты.As expected, developing liquid formulations containing preservatives is more challenging than developing lyophilized formulations. Freeze-dried products can be lyophilized without preservative and reconstituted with a preservative-containing diluent at the time of use. This reduces the time the preservative is in contact with the protein, thereby significantly minimizing the associated stability risks. When liquid formulations are used, the effectiveness and stability of the preservative must be maintained throughout the shelf life of the product (usually approximately 18-24 months). It is important to note that the effectiveness of the preservative must be demonstrated in the final formulation containing the active drug and all excipients.
Некоторые консерванты могут вызывать реакции в месте инъекции, что является еще одним фактором, который необходимо рассматривать при выборе консерванта. В клинических испытаниях, направленных на оценивание консервантов и буферных веществ для Norditropin®, наблюдалось снижение восприятия боли при применении составов, содержащих фенол и бензиловый спирт, по сравнению с составом, содержащим м-крезол (Kappelgaard (2004), Horm. Res. 62 Suppl 3:98-103). Интересно, что среди широко применяемых консервантов бензиловый спирт обладает анестезирующими свойствами (Minogue and Sun (2005), Anesth. Analg. 100(3): 683-6).Some preservatives may cause injection site reactions, which is another factor to consider when choosing a preservative. In a clinical trial evaluating preservatives and buffering agents for Norditropin®, a reduction in pain perception was observed with formulations containing phenol and benzyl alcohol compared to a formulation containing m-cresol (Kappelgaard (2004), Horm. Res. 62 Suppl 3:98-103). Interestingly, among the commonly used preservatives, benzyl alcohol has anesthetic properties (Minogue and Sun (2005), Anesth. Analg. 100(3): 683-6).
Демонстрационные примерыDemo examples
Все публикации, патенты и патентные заявки, обсуждаемые и цитируемые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Следует понимать, что раскрытое изобретение не ограничивается конкретными описанными методологией, протоколами и материалами, так как они могут варьироваться. Кроме того, следует понимать, что используемая в данном документе терминология предназначена только для целей описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема прилагаемой формулы изобретения.All publications, patents and patent applications discussed and cited herein are incorporated herein by reference in their entirety. It should be understood that the disclosed invention is not limited to the specific methodology, protocols and materials described, as these may vary. In addition, it should be understood that the terminology used herein is for purposes of describing specific embodiments only and is not intended to limit the scope of the appended claims.
Специалистам в данной области будут понятны или они будут способны определить посредством проведения только обычных экспериментов многие эквиваленты конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, описанных в данном документе. Подразумевается, что такие эквиваленты охватываются приведенной ниже формулой изобретения.Those skilled in the art will recognize or be able to determine, through routine experimentation alone, many equivalents to the specific embodiments of the present invention described herein. Such equivalents are intended to be covered by the following claims.
Пример 1.Example 1.
Этот эксперимент демонстрирует, что посредством корректировки целевых параметров заполняемой массы может быть получена точная целевая концентрация белка для соответствующего восстановленного лекарственного препарата.This experiment demonstrates that by adjusting target fill parameters, an accurate target protein concentration can be obtained for the corresponding reconstituted drug.
Материалы.Materials.
Буфер, содержащий: маннит, сахарозу, L-гистидин, полисорбат 20 при pH 5.Buffer containing: mannitol, sucrose, L-histidine, polysorbate 20 at pH 5.
Контейнер: флакон, объем 3 куб. см, с внутренней кольцевой канавкой на горлышке, стекло типа I, необработанный, венчик диаметром 13 мм с пробкой диаметром 13 мм, 4432/50 V-50.Container: bottle, volume 3 cubic meters. cm, with internal ring groove on the neck, glass type I, untreated, 13 mm diameter rim with 13 mm diameter stopper, 4432/50 V-50.
Ромиплостим в виде отфильтрованного очищенного нерасфасованного продукта.Romiplostim is a filtered, purified bulk product.
Способ.Way.
1. Разбавляют лекарственное средство с получением целевого состава продукта (0,5 мг/мл) с использованием требуемого количества буфера для разбавления.1. Dilute the drug to obtain the target product composition (0.5 mg/ml) using the required amount of dilution buffer.
2. Фильтруют составленный раствор с помощью фильтра из поливинилидендифторида (PVDF) с диаметром пор 0,22 мкм.2. Filter the prepared solution using a polyvinylidene difluoride (PVDF) filter with a pore diameter of 0.22 μm.
3. Подготавливают флаконы и пробку: флаконы объемом 3 куб. см промывают и депирогенизируют.3. Prepare bottles and stoppers: bottles with a volume of 3 cubic meters. cm are washed and depyrogenated.
4. Заполняют достаточное количество флаконов соответствующей целевой заполняемой массой: 0,307, 0,322, 0,342, 0,357, 0,373 г.4. Fill a sufficient number of vials with the appropriate target filling mass: 0.307, 0.322, 0.342, 0.357, 0.373 g.
5. Частично закупоривают флаконы пробками и помещают в лиофилизатор.5. Partially seal the vials with stoppers and place them in a lyophilizer.
6. Прогоняют требуемый цикл лиофилизации с надлежащим замораживанием, вакуумом, с первичным и вторичным высушиванием, с последующим закупориванием и выгрузкой лиофилизированного6. Run the required lyophilization cycle with proper freezing, vacuum, primary and secondary drying, followed by capping and discharging the lyophilized
- 21 043419 продукта в герметизированных флаконах.- 21 043419 product in sealed bottles.
7. Восстанавливают продукт с помощью заданного объема для восстановления, составляющего 0,32 мл воды для инъекций.7. Reconstitute the product with the specified reconstitution volume of 0.32 ml water for injection.
8. Измеряют полученную концентрацию белка во флаконах с использованием поглощения ультрафиолетового излучения (UV). Коэффициент поглощения определяют как количество света определенной длины волны, которое поглощается при прохождении через аналит. Единица оптической плотности зависит от коэффициента собственного поглощения молекулы, ее концентрации и длины оптического пути аналита. Ароматические аминокислоты фенилаланин, тирозин и триптофан в молекулах белков поглощают свет в UV-диапазоне, составляющем 260-290 нм. Поглощение UV-излучения в этом диапазоне обыкновенно используют для определения присутствия белка в растворе.8. Measure the resulting protein concentration in the vials using ultraviolet (UV) absorption. Absorption coefficient is defined as the amount of light of a certain wavelength that is absorbed when passing through an analyte. The unit of optical density depends on the intrinsic absorption coefficient of the molecule, its concentration and the optical path length of the analyte. The aromatic amino acids phenylalanine, tyrosine and tryptophan in protein molecules absorb light in the UV range of 260-290 nm. UV absorption in this range is usually used to determine the presence of protein in solution.
9. Измеряют осмоляльность продукта с использованием понижения точки замерзания.9. Measure the osmolality of the product using freezing point depression.
10. Осуществляют анализ для определения эффекта скорректированных целевых параметров заполняемой массы как в отношении белка, так и в отношении осмоляльности.10. Analyze to determine the effect of the adjusted target fill parameters on both protein and osmolality.
Таблица 5Table 5
Краткое описание значений заполняемой массы и концентрации белкаBrief description of filling weight and protein concentration values
Наблюдалась сильная линейная взаимосвязь между концентрацией восстановленного белка и заполняемым объемом, о чем свидетельствует значение R2, составляющее 0,9964, как показано на фиг. 6. Эту линейную взаимосвязь можно объяснить теоретически с использованием массового баланса белка, как показано ниже:A strong linear relationship was observed between reduced protein concentration and fill volume, as evidenced by the R 2 value of 0.9964 as shown in FIG. 6. This linear relationship can be explained theoretically using protein mass balance as shown below:
с =(с с восстановленньш восстановленный v составленный потере J заполняемыйc =(c c restored restored v composed loss J filled
[уравнение 1] _ ^составленный ттеря у восстановленный ту заполняемый г восстановленный[equation 1] _ ^compiled tterya y restored that filled g restored
[уравнение 2] где Свосстановленный означает концентрацию белка после восстановления, V восстановлеНный означает объем продукта после восстановления, Составленный означает концентрацию белка в нерасфасованном составе, Спотеря означает потерю белка вследствие связывания с фильтром и контейнерами, и V заполняемый означает заполняемый объем в каждом флаконе. Поскольку концентрация в нерасфасованном составе, потеря белка из-за связывания и объем для восстановления являются постоянными величинами в данном прогоне, концентрация белка после восстановления пропорциональна заполняемому объему, как указано в уравнении 2.[Equation 2] where C recovered means the protein concentration after reconstitution, V recovered means the volume of product after reconstitution, Compounded means the protein concentration in the bulk formulation, C loss means the loss of protein due to binding to the filter and containers, and V fill means fillable volume in each bottle. Since the bulk concentration, protein loss due to binding, and reconstitution volume are constant in a given run, the protein concentration after reconstitution is proportional to the refill volume as given in Equation 2.
В эксперименте полупромышленного масштаба изменчивость концентрации белка в конечном восстановленном лекарственном препарате (DP) определяли с использованием 10 повторностей для каждого условия заполнения, как показано в табл. 6. Следовательно, наблюдаемая изменчивость представляет как изменчивость процесса, так и аналитическую изменчивость, в том числе изменчивость, связанную с восстановлением продукта.In a pilot scale experiment, the variability in protein concentration of the final reconstituted drug product (DP) was determined using 10 replicates for each loading condition, as shown in Table 1. 6. Observed variability therefore represents both process variability and analytical variability, including variability associated with product recovery.
- 22 043419- 22 043419
Таблица 6Table 6
Изменчивость концентрации (восстановленного) белка при каждом условии . заполненияVariability of (reduced) protein concentration under each condition. filling
Влияние заполняемой массы на осмоляльность (восстановленного DP) Конечный лекарственный препарат после восстановления тестировали в отношении осмоляльности в заполненных флаконах при пяти целевых параметрах заполняемой массы. Результаты определения осмоляльности до заполнения и после восстановления обобщены в табл. 7. Согласно результатам при целевой заполняемой массе 0,341 г осмоляльность не изменяется после заполнения и восстановления, что указывает на то, что потеря вспомогательных веществ в заметных количествах не происходила. Осмоляльность незначительно увеличивается при более высоких заполняемых объемах и незначительно уменьшается при более низких заполняемых объемах, если объем для восстановления поддерживается постоянным.Effect of Fill Mass on Osmolality (Reconstituted DP) The final drug product after reconstitution was tested for osmolality in the filled vials at five target fill mass parameters. The results of osmolality determination before filling and after restoration are summarized in Table. 7. According to the results, at a target filling mass of 0.341 g, the osmolality did not change after filling and reconstitution, indicating that loss of excipients did not occur in appreciable amounts. Osmolality increases slightly at higher fill volumes and decreases slightly at lower fill volumes if the recovery volume is held constant.
Таблица 7Table 7
Краткое описание значений заполняемой массы и осмоляльностиBrief description of fill mass and osmolality values
- 23 043419- 23 043419
Была обнаружена линейная взаимосвязь при построении графика зависимости осмоляльности продукта (нормализованной по целевой осмоляльности 313 мОсм/кг при целевой заполняемой массе) от заполняемой массы/объема (нормализованной по целевому значению 0,341 г), как показано на фиг. 7. Эту линейную взаимосвязь можно объяснить посредством определения осмоляльности и ее зависимости от концентрации компонентов буфера.A linear relationship was found when product osmolality (normalized to target osmolality of 313 mOsm/kg at target fill weight) was plotted against fill weight/volume (normalized to target 0.341 g), as shown in FIG. 7. This linear relationship can be explained by determining osmolality and its dependence on the concentration of buffer components.
Осмоляльность является мерой концентрации растворенного вещества, определяемой как количество осмолей (Осм) растворенного вещества на килограмм растворителя (осмоль/кг или Осм/кг). В отличие от молярности (моль/л), по осмоляльности измеряют количество молей частиц растворенного вещества (таких как диссоциированный ион), а не количество молей растворенного вещества. Осмоляльность раствора можно рассчитать с помощью следующего выражения:Osmolality is a measure of the concentration of a solute, defined as the number of osmoles (Osm) of solute per kilogram of solvent (osmol/kg or Osm/kg). Unlike molarity (mol/L), osmolality measures the number of moles of solute particles (such as a dissociated ion) rather than the number of moles of solute. The osmolality of a solution can be calculated using the following expression:
Осмоляльность (Осм/кг) = плотностьOsmolality (Osm/kg) = Density
[уравнение 3];[Equation 3];
где φ означает осмотический коэффициент, n означает количество частиц (например, ионов), на которые молекула диссоциирует, и С означает молярную концентрацию (моль/л) растворенного вещества.where φ denotes the osmotic coefficient, n denotes the number of species (such as ions) into which the molecule dissociates, and C denotes the molar concentration (mol/L) of the solute.
В случае, когда заполняемая масса (или объем) на 10% превышает целевой объем, концентрация каждого вида вспомогательных веществ в составе увеличивается на 10% после восстановления до постоянного объема. Поскольку (φi и ni являются постоянными величинами в известном составе, увеличение концентрации каждого вида вспомогательных веществ на 10% приводит к увеличению осмоляльности на 10%, как показано в уравнении 3. Аналогичным образом, уменьшение заполняемого объема на 10% приводит к уменьшению концентрации вспомогательных веществ на 10% и, следовательно, к уменьшению осмоляльности на 10%.In the case where the filling mass (or volume) is 10% higher than the target volume, the concentration of each type of excipient in the composition is increased by 10% after restoration to a constant volume. Since (φ i and ni are constant values in a known composition, increasing the concentration of each type of excipient by 10% leads to an increase in osmolality by 10%, as shown in equation 3. Similarly, reducing the filled volume by 10% leads to a decrease in the concentration of excipients substances by 10% and, consequently, to a decrease in osmolality by 10%.
Пример 2.Example 2.
Белок блинатумомаб в концентрации 55 мкг/мл составляли с 200 мМ L-лизин-HCl, 25 мМ лимонной кислотой, 15% вес./об. дигидратом трегалозы, 0,1% вес./об. полисорбатом 80 при pH 7,0. Допустимый диапазон концентраций составленного белка определяли на стадии фильтрации нерасфасованного продукта. Использовали значения концентрации нерасфасованного продукта в диапазоне от 48,0 мкг/мл до 65,0 мкг/мл. Целевые значения заполняемой массы рассчитывали, исходя из измеренной концентрации белка, чтобы получить целевую концентрацию в восстановленном лекарственном препарате 12,5 мкг/мл после восстановления с помощью 3 мл воды.Blinatumomab protein at a concentration of 55 μg/ml was formulated with 200 mM L-lysine-HCl, 25 mM citric acid, 15% w/v. trehalose dihydrate, 0.1% w/v. polysorbate 80 at pH 7.0. The acceptable concentration range of the formulated protein was determined at the filtration stage of the bulk product. Bulk product concentrations ranging from 48.0 μg/mL to 65.0 μg/mL were used. Load target values were calculated from the measured protein concentration to obtain a target reconstituted drug concentration of 12.5 μg/mL after reconstitution with 3 mL water.
С1 *V = (С -С ΥΎ восстановленный г восстановленный ^составленный г заполняемый гдеC 1 *V = (C -C ΥΎ restored g restored ^composed g filled where
С .WITH .
восстановленный восстановленныйrestored restored
1Д СЛСВОС СОДбеЛКЭ восстановленный1D SLSVOS SODbelKE restored
Затем целевое содержание белка можно умножить на плотность продукта и разделить на измеренную концентрацию лекарственного средства (при необходимости скорректированную по потере вследствие связывания) для определения целевой заполняемой массы.The target protein content can then be multiplied by the product density and divided by the measured drug concentration (corrected for loss due to binding if necessary) to determine the target fill weight.
Целевую заполняемую массу рассчитывают в соответствии со следующей формулой с соответствующим диапазоном значений заполняемой массы 0,634-0,858 г.The target fill mass is calculated according to the following formula with a corresponding fill mass value range of 0.634-0.858 g.
Заполняемая q — МКГ . — г , целевая доза (За,5-----) * плотность (1,07—) флакон мл масса (г) концентрация DS (х где DS, как обычно понимают специалисты в данной области, относится к лекарственному веществу. В более общем изложении,The q to be filled is MCG. - g, target dose (Za.5-----) * density (1.07-) vial ml mass (g) concentration DS (x where DS, as is usually understood by specialists in the field, refers to the drug substance. B more generally,
- 24 043419 скорректированная заполняемая масса = (целевая фиксированная доза терапевтического белка) х (плотность) концентрация терапевтического белка в нерасфасованном составе- 24 043419 adjusted fill weight = (target fixed dose of therapeutic protein) x (density) concentration of therapeutic protein in bulk formulation
Пример 3.Example 3.
Лекарственный препарат на основе инфликсимаба с 20±1,5 мг/мл инфликсимаба составляли с 10 мМ фосфатом натрия, 10% вес./об. сахарозой, 0,01% вес./об. полисорбатом 80, при pH 7,2 после восстановления с помощью 10 мл воды для инъекций.An infliximab-based drug with 20±1.5 mg/ml infliximab was formulated with 10 mM sodium phosphate, 10% w/v. sucrose, 0.01% w/v. polysorbate 80, at pH 7.2 after reconstitution with 10 ml water for injection.
Целевую заполняемую массу рассчитывают в соответствии со следующей формулой с соответствующим диапазоном значений заполняемой массы 4,85-5,63 г.The target fill weight is calculated according to the following formula with an appropriate fill weight range of 4.85-5.63 g.
Расчет целевой заполняемой массы:Calculation of target filling mass:
гг (целевое содержание белка (100 мг}) х (плотность (1,042 —)) gg (target protein content (100 mg}) x (density (1.042 -))
Целевая заполняемая _ мл77 масса (г) концентрация белка в высвобождающемся лекарственном /мг\ веществе (—) МЛTarget filling _ ml 77 mass (g) protein concentration in the released drug / mg \ substance (—) ml
Пример 4.Example 4.
Трастузумаб в концентрации 21 мг/мл составляли с 0,303 мг/мл L-гистидина, 0,470 мг/мл моногидрата гидрохлорида L-гистидина, 19,1 мг/мл дигидрата α,α-трегалозы, 0,0840 мг/мл полисорбата 20, при pH 6,1. Целевую заполняемую массу рассчитывают в соответствии с формулой, приведенной ниже, с варьирующимися диапазонами значений заполняемой массы согласно требованиям к доставке продукта. Целевые параметры заполняемой массы находятся в диапазоне 3,1-21,2 г (в зависимости от соответствующей формы выпуска). Этот продукт имеет множество форм выпуска с общей концентрацией лекарственного вещества 21 мг/мл.Trastuzumab at a concentration of 21 mg/ml was formulated with 0.303 mg/ml L-histidine, 0.470 mg/ml L-histidine hydrochloride monohydrate, 19.1 mg/ml α,α-trehalose dihydrate, 0.0840 mg/ml polysorbate 20, at pH 6.1. The target fill weight is calculated according to the formula below, with varying ranges of fill weight values according to product delivery requirements. The target parameters of the filling mass are in the range of 3.1-21.2 g (depending on the corresponding release form). This product comes in multiple formulations with a total drug concentration of 21 mg/ml.
Целевую заполняемую массу для каждой партии лекарственного препарата в данном примере 4 и последующих примерах рассчитывают с использованием следующей информации:The target fill weight for each batch of drug product in this Example 4 and subsequent examples is calculated using the following information:
Целевая заполняемая (целевое содержание белка [мг]) х (плотность [г/мл]) масса [г] общая концентрация лекарственного вещества [мг/мл]Target fill (target protein content [mg]) x (density [g/ml]) mass [g] total drug concentration [mg/ml]
В качестве примера, целевая заполняемая масса для формы выпуска со 150 мг [г] (156 мг) х (1,01 г/мл) общая концентрация лекарственного вещества [21 мг/мл]As an example, the target fill mass for a 150 mg formulation [g] (156 mg) x (1.01 g/ml) total drug concentration [21 mg/ml]
В качестве другого примера, целевая заполняемая масса для формы выпуска с 420 мг [г] (440 мг) х (1,01 г/мл) общая концентрация лекарственною вещества [21 мг/мд]As another example, the target fill mass for a 420 mg [g] formulation (440 mg) x (1.01 g/mL) total drug concentration [21 mg/ppm]
В качестве дополнительного примера, целевая заполняемая масса для формы выпуска с 60 мг [г] (65 мг) х (1,01 г/мл) общая концентрация лекарственного вещества [21 мг/мл]As an additional example, the target fill mass for a 60 mg formulation [g] (65 mg) x (1.01 g/mL) total drug concentration [21 mg/mL]
Пример 5.Example 5.
AMG 701 представляет собой биспецифический активатор, привлекающий Т-клетки (BiTE®), в виде конструкции на основе одноцепочечных вариабельных доменов антитела к ВСМА и антитела к CD3 (см. NCI Drug Dictionary и другие литературные источники). AMG 701 с концентрацией белка 1 мг/мл составляли с 10 мМ L-глутаминовой кислотой, 9,0% вес./об. сахарозой, 0,010% вес./об. полисорбатом 80, при pH 4,2. Целевую заполняемую массу рассчитывают в соответствии с формулой, приведенной ниже, с варьирующимися диапазонами значений заполняемой массы согласно требованиям к доставке продукта. AMG 701 имеет три формы выпуска с диапазоном целевых параметров заполняемой массы для первой формы выпуска 0,47-0,57 г, для второй формы выпуска 1,60-1,96 г и для третьей формы выпуска 3,284,01 г.AMG 701 is a bispecific T cell engagement activator (BiTE®) based on the single chain variable domains of anti-BCMA and anti-CD3 (see NCI Drug Dictionary and other literature). AMG 701 with a protein concentration of 1 mg/ml was formulated with 10 mM L-glutamic acid, 9.0% w/v. sucrose, 0.010% w/v. polysorbate 80, at pH 4.2. The target fill weight is calculated according to the formula below, with varying ranges of fill weight values according to product delivery requirements. The AMG 701 has three release forms with a range of target fill mass parameters for the first release form of 0.47-0.57 g, for the second release form 1.60-1.96 g and for the third release form 3,284.01 g.
Для первой формы выпуска:For the first release form:
(целевое содержание белка (0,50 мг)) х (плотность (1,032 —)) Целевая заполняемая масса (г) = мл концентрация белка в высвобождающемся лекарственном веществе (1,0 —) мл7 (target protein content (0.50 mg)) x (density (1.032 -)) Target filling mass (g) = ml protein concentration of drug released (1.0 -) ml 7
Для второй формы выпуска:For the second release form:
(целевое содержание белка (1,71 мг)) * (плотность (1,032 —))(target protein content (1.71 mg)) * (density (1.032 -))
Целевая заполняемая масса (г) — --------------------------------------------------- мл концентрация оелка в высвооождакпцемся лекарственном веществе (1,0 —)Target Fill Weight (g) ------------------------------------------- -------- ml concentration of oil in the released drug substance (1.0 -)
--
Claims (17)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/559,420 | 2017-09-15 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA043419B1 true EA043419B1 (en) | 2023-05-24 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP3681483B1 (en) | Process for lyophilized pharmaceutical formulation of a therapeutic protein | |
US20230047111A1 (en) | Pharmaceutical formulations of tnf-alpha antibodies | |
EP0779818B1 (en) | Liquid immunoglobulin formulations | |
KR102546471B1 (en) | liquid pharmaceutical composition | |
JP7473603B2 (en) | Liquid pharmaceutical composition | |
US20220257763A1 (en) | Room temperature stable lyophilized protein | |
JP7190822B2 (en) | Formulation of human anti-RANKL antibody and method of use thereof | |
RU2683823C2 (en) | Sustained type human growth hormone preparation | |
KR20090089881A (en) | Liquid anti-rabies antibody formulations | |
JP2010536786A (en) | Preparation of antibody and FC fusion molecule using polycation | |
EP3071181A1 (en) | Pharmaceutical composition of an anti-vegf antibody | |
US20170112903A1 (en) | Lyophilized pharmaceutical composition of fc-peptide fusion protein | |
JP2022105056A (en) | Protein solution formulation containing high concentration of anti-vegf antibody | |
US20210324052A1 (en) | Formulations of anti-rsv antibodies and methods of use thereof | |
EA043419B1 (en) | METHOD FOR OBTAINING LYOPHILIZED PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON THERAPEUTIC PROTEIN | |
JP2022551622A (en) | Stable formulations of integrin antibodies | |
JP2023553641A (en) | Anti-IL5R antibody preparation |