EA043404B1

EA043404B1 - Биспецифические антитела против плазменного калликреина и фактора xii

Info

Publication number: EA043404B1
Application number: EA201791527
Authority: EA
Inventors: Стивен Р. Комо; Эндрю Никсон; Никса Кастрапели; Джон А. Кеннистон; Грегори П. Конли; Шона Мэйсон; Эллисон П. Линдберг; Кристофер Копач; Берт Эйделман
Original assignee: Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед
Priority date: 2015-01-02
Filing date: 2015-12-31
Publication date: 2023-05-23

Description

Перекрестные ссылки на родственные заявки

Для настоящей заявки испрашивается приоритет по дате подачи по предварительной патентной заявке США № 62/099236, поданной 2 января 2015 г., по предварительной патентной заявке США № 62/200363, поданной 3 августа 2015 и по предварительной патентной заявке США № 62/261609, поданной 1 декабря 2015. Указанные заявки включены в настоящий документ во всей полноте посредством ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Фактор XII (FXII) является первичным активатором, преобразующим прекалликреин в плазменный калликреин (pKal). Активированный плазменный калликреин расщепляет кининоген высокой молекулярной массы (КВММ) и высвобождает брадикинин (БК). pKal может также активировать латентный фактор XII в активный фактор XII (фактор XIIa). В болезненных состояниях, связанных с аномальной активацией контактной системы, таких как наследственный ангионевротический отек, неконтролируемые уровни БК могут вызывать у пациентов приступы.

Сущность изобретения

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к биспецифическому антителу, включающему: первый полипептид, содержащий легкую цепь первого антитела, включающую вариабельный участок легкой цепи (V_L) и константный участок легкой цепи (C_L) (например, легкую каппа-цепь или легкую лямбда-цепь); и второй полипептид, содержащий тяжелую цепь первого антитела, включающую в себя вариабельный участок тяжелой цепи (VH) и константный участок тяжелой цепи (CH). Первый либо второй полипептид биспецифического антитела дополнительно включают второе антитело, представляющее собой одноцепочечное антитело, которое может быть присоединено к С-концу первого либо второго полипептида. Первое либо второе антитело связывает плазменный калликреин (pKal) (например, активный pKal), а другое антитело связывает фактор XII (например, активный фактор XIIa, или FXIIa), например, первое антитело связывает pKal, а второе антитело связывает FXIIa, или наоборот.

В некоторых вариантах осуществления первое антитело представляет собой IgG. В одном из примеров, IgG включает в себя модифицированную тяжелую цепь, у которой, по сравнению с аналогом дикого типа, С-концевой остаток лизина удален или заменен. Например, модифицированная тяжелая цепь первого антитела может содержать С-концевой остаток глицина, а не лизина, как в тяжелой цепи IgG дикого типа. В одном из примеров биспецифическое антитело может быть тетравалентным.

В некоторых вариантах осуществления второй полипептид биспецифического антитела включает пептидный линкер между тяжелой цепью первого антитела и вторым антителом. В одном из примеров пептидный линкер может представлять собой SGGGS (SEQ ID NO: 22).

Во составе второго антитела, которое представляет собой антитело типа scFv, VH может быть присоединено к N-концу V_L. Альтернативно, VH присоединен к С-концу V_L. В некоторых примерах второе антитело содержит пептидный линкер между участками VH и V_L, например линкер (G₄S)₄ (SEQ ID NO: 23). В некоторых вариантах осуществления антитело scFc включает дисульфидные мостики между цепями VH и V_L. Например, цепь VH может содержать остаток цистеина в положении 44 (ЦИС44), а цепь V_Lможет содержать остаток цистеина в положении 100, причем между Цис44 в VH и Цис₁₀₀ в V_L может быть образован дисульфидный мостик. В некоторых примерах, второе антитело не содержит KR-мотива на Сконце.

В любом из биспецифичных антител, описанных в настоящем документе, VH первого антитела содержит те же определяющие комплементарность участки (CDR), что и последовательность с SEQ ID NO: 1. В некоторых примерах VH первого антитела включает аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1. В одном из примеров тяжелая цепь первого антитела включает аминокислотную последовательность из остатков 20-470 последовательности с SEQ ID NO: 9. В одном из примеров тяжелая цепь первого антитела состоит из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 9, 149 или 150. Альтернативно или дополнительно, VL первого антитела имеет те же CDR, что и в последовательности с SEQ ID NO: 2. В некоторых примерах VL первого антитела включает аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 2.

Дополнительно, V_H второго антитела может иметь те же CDR, что присутствуют в любой из последовательностей с SEQ ID NO: 3, 4 и 123-126. В некоторых примерах, VH второго антитела включает в себя любые аминокислоты с SEQ ID NO: 3, 4 и 123-126. Альтернативно или дополнительно, V_L второго антитела содержит те же CDR, что присутствуют в любой из последовательностей с SEQ ID NO: 5-8 и 127-130. В некоторых примерах V_L второго антитела включает остатки 1-111 любой из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 5-8 и 127. В одном из примеров VL второго антитела содержит одну из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 5-8 и 127-130.

В некоторых примерах биспецифическое антитело, описанное в настоящем документе, включает первый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 10 и второй полипептид, содержащий любую из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 11-20, 47-122, 141148 и 151-158.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к биспецифическому антителу, включающему первое антитело, связывающее плазменный калликреин (pKal) и второе антитело, связывающее фактор

- 1 043404

XII, например, первое антитело, связывающее активный pKal и/или второе антитело, связывающее активный фактор XII (FXIIa). В некоторых вариантах осуществления первое антитело включает цепь VH, содержащую те же определяющие комплементарность участки (CDR), что и в последовательности с SEQ ID NO: 1, и/или цепь V_L, содержащую те же CDR, что и в последовательности с SEQ ID NO: 2. Например, V_H первого антитела содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1, и/или V_L первого антитела содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 2.

Альтернативно или дополнительно, второе антитело включает в себя цепь VH, содержащую те же CDR, что и последовательности с SEQ ID NO: 3 или 4, и/или цепь V_L, содержащую те же CDR, что и последовательности с SEQ ID NO: 5, 6, 7 или 8. Например, цепь VH второго антитела включает аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 3 или 4, и/или V_L второго антитела включает аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 5, 6, 7 или 8.

Альтернативно или дополнительно, второе антитело включает цепь VH, содержащую те же CDR, что и любая из последовательностей с SEQ ID NO: 123-126, и/или цепь V_L, содержащую те же CDR, что и последовательность с SEQ ID NO: 127. Например, VH цепочка второго антитела включает любую из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 123-126, и/или V_L второго антитела включает остатки 1-111 любой из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 5-8 и 127.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к изолированной нуклеиновой кислоте или набору нуклеиновых кислот, включающих в себя первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид первого антитела, как описано в настоящем документе, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид второго антитела, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая нуклеотидные последовательности расположены на двух отдельных молекулах нуклеиновой кислоты (например, на двух векторах, таких как экспрессирующие векторы). Альтернативно, первая и вторая нуклеотидные последовательности расположены на одной молекуле нуклеиновых кислот (например, на векторе, таком как экспрессирующий вектор).

Нуклеиновая кислота или набор нуклеиновых кислот, описанный в настоящем документе, может представлять собой набор векторов, включающий первый вектор, содержащий первую нуклеотидную последовательность и второй вектор, включающий вторую нуклеотидную последовательность. В некоторых примерах первый и второй векторы представляют собой экспрессирующие векторы, в которых первая и вторая нуклеотидные последовательности функционально связаны с промотором. В других примерах нуклеиновая кислота, описанная в настоящем документе, представляет собой вектор, содержащий как первую, так и вторую нуклеотидные последовательности. Любой из описанных в настоящем документе векторов может быть экспрессирующим вектором. Например, экспрессирующий вектор может содержать первую и вторую нуклеотидную последовательность, функционально связанные с промотором. Изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей вектор или набор векторов, описанные в настоящем документе.

Дополнительно, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим любые биспецифические антитела или нуклеиновые кислоты/наборы нуклеиновых кислот, описанные в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Такая композиция может использоваться для лечения болезней, связанных с системой контактной активации (например, наследственный ангионевротический отек (НАО) или тромбоз). Способ лечения, описанный в настоящем документе, включает введение нуждающемуся в лечении субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для использования при лечении болезни, как это описано в настоящем документе, причем фармацевтическая композиция содержит любое из описанных в настоящем документе биспецифических антител или нуклеиновых кислот/набор нуклеиновых кислот, кодирующих биспецифические антитела, и фармацевтически приемлемый носитель, а также к применению такой фармацевтической композиции в производстве лекарственных средств для применения при лечении такой болезни, например, НАО или тромбоз. В некоторых вариантах осуществления тромбоз ассоциируется с фибрилляцией предсердий, тромбозом глубоких вен (ТГВ), легочной эмболией, инсультом или формированием артериального или венозного тромба.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу подготовки биспецифических антител, который включает: а) культивирование клеток-хозяев или набора клеток-хозяев, как это описано в настоящем документе, в условиях, допускающих экспрессию первого полипептида и второго полипептида; и b) выделение биспецифического антитела, включающего первый полипептид и второй полипептид. В некоторых примерах клетка-хозяин содержит экспрессирующий вектор, включающий первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид.

Как минимум один вариант осуществления настоящего изобретения подробно описан в приведенном ниже описании. Другие характеристики или преимущества настоящего изобретения будут очевидны из последующих чертежей и подробного описания нескольких вариантов осуществления, а также из прилагаемой формулы изобретения.

- 2 043404

Краткое описание фигур

Следующие чертежи являются частью настоящего описания и включены для дополнительной демонстрации некоторых аспектов настоящего изобретения, которые можно лучше понять путем отсылки к одному или нескольким из этих чертежей в сочетании с подробным описанием конкретных вариантов осуществления, приведенных в настоящем документе.

Фиг. 1 показывает активность различных клонов биспецифических антител для ингибирования pKal, в том числе клонов Х120-А01 (scFv= 559C-M184-B04 H4L), Х121-Е01 (scFv= 559C-M184-GO3 H4L), Х122-А01 (scFv= 559C-M71-F06 H4L), и Х122-С01 (scFv= 559C-M71-F06 L4H).

Фиг. 2 содержит диаграммы, показывающие ингибирующую анти-FXIIa активность клонов Х120А01 (A and В), Х122-А01 (С), Х121-Е01 (D), Х122-С01 (Е), и контрольного клона M71-F06 IgG (F).

Фиг. 3 содержит графики, показывающие примеры данных аналитической гель-фильтрационной хроматографии (ГФХ) пяти биспецифических молекул. Первый пик показывает, что эти клоны образуют агрегат с высокой молекулярной массой (ВМК) с процентной площадью пика (%ВМК) в диапазоне от 16,5 до 33,8%. A: 620I-X136-C11. В: 620I-X136-C05. С: 620I-X136-G05. D: 620I-X136-D12. Е: 620I-X136A01.

Фиг. 4 включает графики, показывающие сокращение агрегатов с высокой молекулярной массой для 620I-X0173-A11 (620I-X0136-D12 со вставленным дисульфидным мостиком между Н44 и L100) для различных концентраций. A: 620I-X0173-A11 при 1 мг/мл. В: 62О1-ХО173-А11 при 10 мг/мл. С: 620IX0173-A11 при 20 мг/мл. D: 62О1-ХО173-А11 при 45 мг/мл.

Фиг. 5 содержит графики, демонстрирующие ингибирующую активность антител против pKal, антител против FXIIa, комбинации антител против pKal и антител против FXIIa, а также биспецифических антител D12, определенную с применением реконструированной плазмы. A: DX-2930 в присутствии одноцепочечного высокомолекулярного кининогена (ВМКГ). В: антитела против FXIIa в присутствии одноцепочечного ВМКГ. С: DX-2930+антитела против FXIIa в присутствии одноцепочечного ВМКГ. D: биспецифический клон 620I-X0136-D12 в присутствии одноцепочечного ВМКГ.

Фиг. 6 содержит графики, демонстрирующие ингибирующую активность антител против pKal, антител против FXIIa, комбинации антител против pKal и антител против FXIIa, а также биспецифических антител D12, определенную с применением реконструированной плазмы. A: DX-2930 в отсутствие ВМКГ. В: антитела против FXIIa в отсутствие ВМК. С: DX-2930+антитела против FXIIa в отсутствие ВМКГ. D: биспецифический клон 620I-X0136-D12 в отсутствие ВМКГ.

Фиг. 7 содержит графики, демонстрирующие ингибирующую активность антител против pKal, антител против FXIIa, комбинации антител против pKal и антител против FXIIa, а также биспецифических антител D12, определенную с применением реконструированной плазмы. A: DX-2930 в отсутствие ВМКГ. В: антитела против FXIIa в отсутствие ВМКГ. С: DX-2930+антитела против FXIIa в отсутствие ВМКГ. D: биспецифический клон D12 в отсутствие ВМКГ.

Фиг. 8 показывает действие биспецифического антитела (D12) в трех концентрациях по сравнению с антителом против FXIIa (D06) и антителами против pKal (H03) в тесте на активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ).

Фиг. 9 включает графики, демонстрирующие результаты теста Биакор на связывание клона 620IX0173-A11 (620I-X0136-D12 с дисульфидным мостиком) против pKal (верхняя сенсорграмма) и FXIIa (нижняя сенсорграмма). А: связывание pKal (верхняя кривая) выше, чем пустой поверхности (средняя кривая) и пре-калликреина (внизу). Оригинальные изоляты FXIIa показали неспецифическое связывание с чипом Биакор, что объясняет сигналы связывания, наблюдаемые в случае пре-Кал и пустого образца. В: Связывание FXIIa (верхняя кривая) значительно выше, чем FXII (нижняя кривая) и пустой образец (средняя кривая).

Фиг. 10 содержит графики, показывающие расчет IC₅₀ и кажущейся Ki биспецифических антител с тремя дисульфидными мостиками в тесте на ингибирующую активность плазмы. А и В: клон 620IX0173-A11. С и D: клон 620I-X0173-C07. Е и F: клон 620I-X0173-G11.

Фиг. 11 демонстрирует ингибирующие свойства биспецифических антител 620I-X0177-A01 (а.k.a. 620I-X0173-A11), определенные в тесте на ингибирование плазмы.

Фиг. 12 включает графики, демонстрирующие снижение аффинности биспецифических антител по сравнению с IgG-предшественниками. А: свойства связывания родительского клона 559С-Х0211А01(левая панель) и биспецифического антитела 62OI-XO177-AO1 (правая панель). В: свойства связывания родительского клона DX-2930 (левая панель) и биспецифического антитела А01 (правая панель).

Фиг. 13 показывает зависящую от дозы задержку в АЧТВ, вызванную различными указанными антителами. Клоны D06, 1А01 и F12 представляют собой антитела против FXIIa. Клон Н03 представляет собой антитело против pKal. Клоны D12 и 7А01 являются биспецифическими антителами без дисульфидных мостиков и с таковыми соответственно.

Фиг. 14 показывает зависящую от дозы задержку отложения фибрина клонами 1А01 (559С-Х211А01) и 7А01 (620I-X0177-A01).

Фиг. 15 представляет собой результат белкового гель-электрофореза в ПААГ с ДСН, показывающий образцы биспецифического антитела 620I-X0177-A01 в восстанавливающих (дорожки 2-4) и невос

- 3 043404 станавливающих условиях (дорожки 6-8).

Фиг. 16 включает графики, показывающие результаты аналитической гель-фильтрационной хроматографии (ГФХ) биспецифического антитела 620I-X0177-A01, демонстрирующие рН-зависимое расщепление. Пики в диапазоне 15,7-16,1 мин соответствуют правильно сформированному биспецифическому антителу. Пики на 17-й минуте соответствуют DX-2930 IgG1. Пики на 22-й минуте соответствуют расщепленному одноцепочечному антителу. А: рН 6,0. В: рН 7,0. С: рН 8,0.

Фиг. 17 показывает результаты белкового гель-электрофореза в ПААГ с ДСН указанных биспецифических антител, у которых заменен либо удален С-концевой лизин IgG при t=0. А: невосстанавливающие условия. В: восстанавливающие условия.

Фиг. 18 показывает результаты белкового гель-электрофореза в ДСН указанных биспецифических антител, у которых заменен либо удален С-концевой лизин IgG при t=48 ч в восстанавливающих условиях. Положительным контролем служит биспецифическое антитело 620I-X0177-A01.

Фиг. 19 включает графики, показывающие результаты аналитической гель-фильтрационной хроматографии (ГФХ) контрольного биспецифического антитела 620I-X0177-A01. Пики в диапазоне 15,7-16,1 минут соответствуют правильно сформированному биспецифическому антителу. Пики на 17-й минуте соответствуют DX-2930 IgG1. Пики на 22-й минуте соответствуют расщепленному одноцепочечному антителу. A: t=0. В: t=48 ч.

Фиг. 20 включает графики, показывающие результаты гель-фильтрационной хроматографии (ГФХ) модифицированных антител по прошествии 48 ч при комнатной температуре и рН=7,5. А: 0620I-X180E07. В: 620I-X180-G03. С: 620I-X180-A05. D: 62О1-Х18О-ЕО6. Е: 620I-X180-C11. F: 620I-X179-C01. G: 620I-X179-G05. Н: 620I-X179-A09.

Фиг. 21 показывает результаты белкового гель-электрофореза в ДСН указанных биспецифических антител, в которых заменен либо удален С-концевой лизин тяжелой цепи IgG в невосстанавливающих условиях. Положительным контролем служит биспецифическое антитело 620I-X0177-A01. Образцы инкубировали с эндопротеиназой LysC при 37°С в течение 1 ч.

Фиг. 22 содержит графики, показывающие пример ингибирования pKal биспецифическими антителами. На панели 1 показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620I-X0179-A09 (незакрашенные круги), 620I-X0179-C01 (закрашенные треугольники), и 620I-X0179-E05 (незакрашенные треугольники). На панели 2 показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620I-X0179G05 (незакрашенные круги), 620I-X0180-E07 (закрашенные треугольники), и 620I-X0180-G03 (незакрашенные треугольники). На панели 3 показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620IX0180-A05 (незакрашенные круги) и 620I-X0180-C11 (закрашенные круги). Антитела DX-2930 служили контролем на каждой из панелей.

Фиг. 23 включает графики, демонстрирующие пример ингибирования FXIIa биспецифическими антителами. На панели 1 показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 62О1-ХО179-АО9 (незакрашенные круги), 620I-X0179-C01 (закрашенные треугольники), и 620I-X0179-E05 (незакрашенные треугольники). На панели 2 показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620IX0179-G05 (незакрашенные круги), 620I-X0180-E07 (закрашенные треугольники), и 620I-X0180-G03 (незакрашенные треугольники). На панели 3 показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620I-X0180-A05 (незакрашенные круги) и 620I-X0180-C11 (закрашенные круги). Антитела DX-4012 (559С-М0192-Н11) служили контролем на каждой из панелей.

Фиг. 24 включает графики, демонстрирующие пример ингибирования активированной плазмы биспецифическими антителами. На верхней левой панели показаны ингибирующие свойства DX-2930 с контрольных панелей 1, 2 и 3, а также DX-4012. На верхней правой панели показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620I-X0179-A09 (закрашенные круги) и 620I-X0179-C01 (незакрашенные круги). На нижней левой панели показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620IX0179-E05 (закрашенные круги), 620I-X0179-G05 (незакрашенные круги), и 620I-X0180-E07 (закрашенные треугольники). На правой нижней панели показаны ингибирующие свойства биспецифических антител 620I-X0180-G03 (закрашенные круги), 620I-X0180-A05 (незакрашенные круги), и 620I-X0180-C11 (закрашенные треугольники).

Описание вариантов осуществления

Система контактной активации инициирует внутренний путь свертывания крови посредством высвобождения провоспалительного пептида брадикинина (БК). БК высвобождается в результате каскада активаций ферментов в системе контактной активации. Фактор XIIa (FXIIa) преобразует прекалликреин в плазменный калликреин (pKal). Активированный pKal затем расщепляет высокомолекулярный кининоген (ВМКГ), что приводит к высвобождению брадикинина (БК). Важно, что pKal может также активировать латентный фактор XII, производя дополнительный активный фактор XIIa. Считается, что формируется петля цикл положительной обратной связи, причем pKal активирует FXII до FXIIa, a FXIIa активирует прекалликреин до pKal.

В заболеваниях, связанных с контактной системой активации, таких как наследственный ангионевротический отек (НАО) или тромбоз, неконтролируемые уровни БК могут вызывать воспалительные реакции, такие как приступы НАО у пациентов. Соответственно, агенты, контролирующие уровни БК, на

- 4 043404 пример, ингибиторы pKal и FXII, могут иметь важное терапевтическое значение.

В настоящем документе описываются биспецифические антитела, связывающиеся как с pKal, так и с FXIIa, например, с активным pKal и/или FXIIa, а также способы их использования для ингибирования как pKal, так и FXII, и лечения болезней, связанных с контактной системой активации, таких как наследственный ангионевротический отек (НАО) и тромбоз. Как показано ниже в примерах, ряд биспецифических антител, описанных в настоящем документе, ингибируют активность как pKal, так и FXIIa. Помимо теоретического аспекта, ожидается, что биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, будут демонстрировать превосходные терапевтические эффекты при лечении болезней, связанных с контактной системой активации, по сравнению с агентами, которые могут ингибировать либо pKal, либо FXII, ввиду того, что биспецифические антитела могут ингибировать активность как pKal, так и FXII, уменьшая тем самым уровень БК синергидно, например, блокируя петлю положительной обратной связи между pKal и FXII.

Связывание биспецифических антител с pKal и FXII

В настоящем документе под термином антитело (взаимозаменяемо используемом во множественном числе) подразумевается молекула иммуноглобулина, или его функциональный фрагмент, способный связываться с целевым антигеном, таким как углевод, полинуклеотид, липид или полипептид, через хотя бы один сайт распознавания антигена, расположенного в вариабельном участке молекулы иммуноглобулина. Мультиспецифические антитела, например, биспецифические антитела, представляют собой молекулу иммуноглобулина или ее функциональный фрагмент/вариант, способный связываться с несколькими целевыми антигенами, например, двумя антигенами или двумя эпитопами одного антигена. Биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, могут связываться с плазменным калликреином (pKal) и фактором XII. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела могут связываться и ингибировать как активный pKal, так и FXIIa.

Термин антиген, используемый в настоящем документе, относится к любой молекуле (например, белка, нуклеиновой кислоты, полисахарида или липида), способной генерировать антитела. Эпитоп представляет собой часть антигена (например, часть pKal или FXII), с которой связывается антитело. Эпитопы обычно содержат химически активные (например, полярные, неполярные или гидрофобные) поверхностные группы таких фрагментов, как аминокислоты или полисахаридные боковые цепи, и могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики, а также особые зарядовые свойства. Эпитоп может быть линейным по своему характеру или не являться непрерывным, например, представлять собой конформационный эпитоп, который формируется пространственным соотношением между несмежными аминокислотами антигена, а не линейной серией аминокислот. Понятие конформационного эпитопа включает в себя эпитопы, возникшие в результате фолдинга антигена, при котором аминокислоты из различных участков линейной последовательности антигена приводятся в непосредственную близость в трехмерном пространстве.

Биспецифическое антитело, описываемое в настоящем документе, состоит из двух антительных фрагментов, причем первое антитело связывается с pKal (например, активным pKal), а второй антительный фрагмент связывается с FXII (например, FXIIa). Первые и вторые антительные фрагменты могут быть получены из двух антител-предшественников, способных связываться с желаемыми антигенами, например, pKal (например, активным pKal) и FXII (например, FXIIa). Одно или оба антителапредшественника для получения биспецифических антител, описанных в настоящем документе, могут встречаться естественным образом (например, антитело, полученное от подходящего донора, такого как человек, мышь, крыса, кролик, лошадь или овца), быть генетически модифицированными (например, человеческие антитела, химерные антитела) или быть антителами, полученными из естественной или синтетической библиотеки антител. В некоторых вариантах осуществления одно из антителпредшественников представляет собой антитело IgG, например, антитело IgG, связывающееся с pKal, таким как DX-2930, или антитело IgG, связывающееся с FXIIa, а другое антитело-предшественник является антителом scFv, например, антителом scFv, связывающимся с FXIIa, таким как клоны анти-FXIIa, описанные в настоящем документе, или антитела scFv, связывающиеся с pKal.

Тяжелая цепь встречающейся естественным образом молекулы IgG, как правило, содержит остатки лизина на С-конце. В некоторых вариантах осуществления этот С-концевой остаток лизина может быть либо удален, либо заменен, например, на остаток глицина, в биспецифическом антителе, описанном в настоящем документе. Альтернативно или дополнительно, KR-мотив, обычно присутствующий на стыке вариабельного и константного участков легкой цепи, может быть удален из легкой цепи первого антитела, второго антитела или обоих, в биспецифических антителах, описанных в настоящем документе. В некоторых примерах KR-мотив удален из scFv-фрагмента (например, на С-конце scFv) любого из описанных здесь биспецифических антител. Эти мутации могут снизить протеолитическое расщепление и/или улучшить экспрессию, производство и/или изготовление биспецифических антител.

В некоторых примерах по крайней мере одно из антител-предшественников может быть антителом с созревшей аффинностью, то есть антителом, имеющим одну или несколько модификаций в одном или нескольких CDR или каркасных участках (КУ), по сравнению с немодифицированным антителомпредшественником, что приводит к улучшению аффинности антитела к целевому антигену. Предпочти

- 5 043404 тельные антитела с созревшей аффинностью могут иметь наномолярную или даже пикомолярную аффинность к целевому антигену. Созревание аффинности антител может осуществляться различными способами, известными в пределах уровня техники, в том числе путем шаффлинга вариабельного домена (см., например, Marks et al. 1992, Bio/Technology 10:779-783), случайного мутагенеза остатков в CDR и/или КУ (см., например, Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol. 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol. 154(7):3310-9; and Hawkins et al, 1992, J. Mol. Biol. 226:889-896). Антитела-предшественники могут принадлежать к любому классу, например, IgD, IgE, IgG, IgA, или IgM, или их подклассам, или являться одноцепочечным антителом, например, scFv.

Каждый антительный фрагмент биспецифического антитела, описанных в настоящем документе, может представлять собой антитело в любой форме, включая, не ограничиваясь нижеперечисленным, интактные (т.е. полные) антитела, их антиген-связывающие фрагменты (например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv), одноцепочечные антитела (scFv антитела) и тетравалентные антитела. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела являются тетравалентными и включают два сайта связывания pKal и два сайта связывания FXII.

В некоторых вариантах осуществления фрагменты анти-pKal, анти-FXII, или оба в биспецифических антителах, описанных в настоящем документе, специфически связываются с соответствующим целевым антигеном или его эпитопом. Антитело, которое специфически связывается с антигеном или эпитопом, является термином, широко известным в данной области техники, и способы определения такого специфического связывания также хорошо известны в данной области техники. Утверждается, что молекула демонстрирует специфическое связывание, если она реагирует или ассоциирует более часто, быстрее, с более высокой продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретным целевым антигеном, чем с альтернативными мишенями. Антитело специфически связывается с целевым антигеном или эпитопом, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с более высокой продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Например, антитело, которое специфически (или предпочтительно) связывается с антигеном (например, человеческим pKal или FXII) или его антигенным эпитопом, представляет собой антитело, которое связывает этот целевой антиген с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с более высокой продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами того же антигена. Кроме того, при чтении данного определения следует понимать, что, например, антитело, которое специфически связывается с первым целевым антигеном, может связываться или не связываться специфически или предпочтительно со вторым целевым антигеном. Как таковое, специфическое связывание или предпочтительное связывание не обязательно требует (хотя может в себя включать) эксклюзивное связывание. Как правило, но не обязательно, ссылка на связывание подразумевает предпочтительное связывание. В некоторых примерах антитело, которое специфически связывается с целевым антигеном или его эпитопом, может не связываться с другими антигенами или другими эпитопами того же антигена. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, специфически связываются как с активным pKal, так и с FXIIa.

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, обладают подходящей аффинностью связывания с одним или обоими целевыми антигенами (например, pKal или FXIIa) или с их антигенными эпитопами. В настоящем документе термин аффнность связывания относится к кажущейся константе ассоциации или K_A. K_A является величиной, обратной константе диссоциации (KD). Биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, могут обладать аффинностью связывания (KD) по меньшей мере 10^-5, 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9, 10^-10 М или ниже для одного или обоих целевых антигенов или антигенных эпитопов. Увеличение аффинности связывания соответствует уменьшению KD. Более высокая аффинность связывания с первым антигеном и вторым антигеном по отношению к третьему антигену может быть обозначена более высоким K_A (или меньшим численным значением KD) для связывания первого антигена и второго антигена, чем K_A (или численное значение KD) для связывания третьего антигена. В таких случаях антитело имеет специфичность для первого антигена и второго антигена (например, первый белок в первой конформации или его имитатор, а также второй белок в первой конформации или его имитатор) по отношению к третьему антигену (например, те же самые первый или второй белок во второй конформации или их имитаторы; или третий белок). Различия в аффинности связывания (например, для оценки специфичности или других сравнений) могут быть по меньшей мере 1,5, 2, 3, 4, 5, 1о, 15, 20, 37,5, 50, 70, 80, 91, 100, 500, 1000, 10оОо или 105.

Аффинность связывания (или специфичность связывания) может определяться различными способами, включая равновесный диализ, равновесное связывание, гель-фильтрацию, ИФА, поверхностный плазмонный резонанс или спектроскопию (например, с применением флуоресцентного анализа). Оценка аффинности связывания может производиться, например, в буфере HBS-P (10 мМ HEPES рН 7,4, 150 мМ NaCl, 0,005% (об./об.) сурфактант Р20). Эти методы могут использоваться для измерения концентрации связывающего белка в комплексе в зависимости от концентрации белка-мишени. Концентрация связывающего белка в комплексе ([Комплекс]) связана с концентрацией свободного белка-мишени ([Свобод

- 6 043404 ный]) и концентрацией сайтов связывания для связывающего белка на мишени, где (N) является количеством сайтов связывания на одну молекулу мишени, согласно следующему уравнению:

[Комплекс]=[N][Свободный]/(Kd+[Свободный])

Однако не всегда точная оценка K_A необходима, поскольку иногда достаточно получить количественное измерение аффинности, например, с применением такого способа, как ИФА или FACS, пропорциональное К_А, которое, таким образом, может использоваться для сравнения, например для определения того, является ли более высокая аффинность, например, в 2 раза выше, или получить качественное измерение аффинности, или получить косвенный показатель аффинности, например, активность в функциональных тестах, например, in vitro или in vivo.

(i) Фрагмент анти-pKal

Любое антитело, способное связывать pKal, например, активный pKal, может использоваться для получения биспецифических антител, описанных в настоящем документе. В некоторых примерах антиpKal антительный фрагмент биспецифического антитела может связываться с человеческим pKal и ингибировать его активность по крайней мере на 50% (например, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более). Константа ингибирования (Ki) является мерой мощности ингибитора; она равна концентрации ингибитора, необходимой для уменьшения активности фермента в два раза и не зависит от концентрации фермента или субстрата. Ингибирующая активность анти-pKal антительного фрагмента биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, может быть определена рутинными способами. В некоторых примерах биспецифическое антитело, описанное в настоящем документе, имеет значение кажущейся анти-pKal Ki, _каж менее 1 нМ, например 0,5 нМ, 0,2 нМ, 0,1 нМ, 0,09 нМ, 0,08 нМ, 0,07 нМ, 0,06 нМ, 0,05 нМ, 0,04 нМ, 0,03 нМ, 0,02 нМ, 0,01 нМ или ниже. Значение Ki, _каж для антитела может быть оценено способами, известными на существующем уровне техники.

В некоторых вариантах осуществления анти-pKal фрагмент биспецифического антитела может взаимодействовать с одним или несколькими из следующих остатков: V410, L412, Т413, А414, Q415, R416, L418, С419, Н434, С435, F436, D437, G438, L439, W445, Y475, K476, V477, S478, Е479, G480, D483, F524, Е527, K528, Y552, D554, Y555, А564, D572, А573, С574, К575, G576, S578, Т596, S597, W598, G599, Е600, G601, С602, А603, R604, Q607, Р608, G609, V610, и Y611 в человеческом pKal. Последовательность аминокислот С-концевого фрагмента pKal человека, включающего в себя аминокислотные остатки, участвующие в связывании (выделены жирным шрифтом и подчеркнуты), показана ниже (SEQ ID NO: 21):

391-IVGGTNSSWG EWPWQVSLQV KLTAQRHLCG GSLIGHQWVL TAAHCFDGLP

LQDWRIYSG ILNLSDITKD TPFSQIKEII

APLNYTEFQK PISLPSKGDT STIYTNCWVT

PLVTNEECQK RYQDYKITQR MVCAGYKEGG

RLVGITSWGE GCARREQPGV YTKVAEYMDW

IHONYKVSEG NHDIALIKLQ

GWGFSKEKGE IQNILQKVNI

KDACKGDSGG PLVCKHNGMW

ILEKTQSSDG KAQMQSPA -638

В некоторых примерах анти-pKal антительный фрагмент может связывать эпитоп pKal, состоящий из следующих сегментов в последовательности с SEQ ID NO: 21, приведенной выше: V410-C419, H434L439, Y475-G480, F524-K528, Y552-Y555, D572-S578, T596-R6O4, or Q607-Y611.

В одном из примеров анти-pKal фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, является производной от антитела DX-2930, которая описана в заявке US 20120201756 (включенной по ссылке в настоящем документе). Ниже приводится вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи DX-2930, а также полная последовательность тяжелой цепи и легкой цепи этого антитела (CDR: выделены жирным шрифтом и подчеркнуты; сигнальные последовательности: выделены курсивом):

Вариабельный участок тяжелой цепи DX-2930 (SEQ ID NO: 1):

- 7 043404

EVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVROAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGOGTMVTVSS

Вариабельный участок легкой цепи DX-2930 (SEQ ID NO: 2):

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYOOKPGKAPKLLIYKASTLESGVP

SRFSGSGSGTEFTLTISSLOPDDFATYYCOQYNTYWTFGOGTKVEIK

Тяжелая цепь DX-2930 ^идентификационный номер 9)

MG^SCYYDFiVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Легкая цепь DX-2930 (SEQ ID NO: 10)

MGiYSCYYDFiVATATGWSDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKP GKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

В некоторых примерах, анти-pKal фрагмент биспецифического антитела включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, состоящий из аминокислотной последовательности, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичной последовательности с SEQ ID NO: 1, и/или вариабельный участок легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичной последовательности с SEQ ID NO: 2. Процентная идентичность двух аминокислотных последовательностей определяется с помощью алгоритма Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, 1990, модифицированного как описано в Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993. Такой алгоритм встроен в программы NBLAST и XBLAST (версия 2,0), описанных в Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990. BLAST-запросы о белках могут быть выполнены с помощью программы XBLAST с параметрами score=50, wordlength=3 для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных к интересующим молекулам белка. В тех случаях, когда между двумя последовательностями существуют разрывы, можно использовать программу Gapped BLAST, описанной в Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402, 1997. При использовании программ BLAST и Gapped BLAST можно использовать параметры по умолчанию соответствующих программ (например, XBLAST и NBLAST).

В других примерах анти-pKal фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, которая включает те же три CDR, что и в последовательности с SEQ ID NO: 1, и/или те же три CDR, что и в последовательности с SEQ ID NO: 2. Два вариабельных участка тяжелой цепи (или два вариабельных участка легкой цепи), имеющие одинаковые CDR, означают, что CDR в двух вариабельных участках тяжелой цепи (или в вариабельных участках легкой цепи), определяемые одной и той же схемой нумерации, идентичны. Схемы нумерации для определения CDR антитела могут представлять собой, например, схему нумерации Kabat (Kabat et al. (1991), 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.), схему нумерации Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948), схему нумерации Contact (MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)), схему нумерации IMGT (Lefranc M P et al., Dev Comp Immunol, 2003 January; 27(1) : 55-77), и схему нумерации AHo (Honegger A and Pluckthun A, J Mol Biol, 2001 Jun. 8; 309(3):65770). Как известно специалисту в данной области техники, CDR приведенных в качестве примера антител против pKal и FXII, идентифицированные в настоящем документе, были определены согласно схеме нумерации Chothia, используемой в качестве примера.

Альтернативно, анти-pKal фрагмент может включать одну или несколько (например, до 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) мутаций в одном или нескольких CDR по сравнению с последовательностями с SEQ ID NO: 1 и/или 2. Такие мутации могут представлять собой консервативные замены аминокислот. В настоящем документе консервативная замена аминокислоты относится к заменам аминокислот, которые не меняют относительного заряда или размеров белка, в котором производится замена аминокислоты. Консервативные замены аминокислот включают замены друг на друга аминокислот, принадлежащим следующим группам: (а) М, I, L, V; (b) F, Y, W; (с) K, R, H; (d) A, G; (e) S, T; (f) Q, N и (g) E, D.

В любом из примеров, описанных в настоящем документе, анти-pKal фрагмент биспецифических антител может включать одну или несколько (например, 1, 2, 3, 4, 5 или более) замен или делеций по сравнению с антителами сравнения. Такие мутации могут быть введены, например, для уменьшения про

- 8 043404 теолитического расщепления биспецифического антитела и/или для улучшения экспрессия, производства и/или изготовления биспецифического антитела. В некоторых вариантах осуществления анти-pKal фрагмент биспецифического антитела представляет собой IgG, причем остаток лизина на С-конце тяжелой цепи IgG удален или заменен по сравнению с диким типом. В некоторых вариантах осуществления С-концевой лизин тяжелой цепи IgG заменен на нейтральный аминокислотный остаток, например, остаток глицина или аланина.

Примеры последовательности таких мутированных тяжелых цепей анти-pKal фрагмента биспецифического антитела представлены ниже (тяжелая цепь DX-2930 приведена в качестве примера).

Тяжелая цепь DX-2930 с удаленным С-концевым остатком лизина (SEQ ID NO: 149)

MG^SCYYYFYVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA

PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Тяжелая цепь DX-2930 с заменой С-концевого остатка лизина на глицин (SEQ ID NO: 150)

MG^SCTTLFLVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA

PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGG

Выделенные курсивом фрагменты вышеуказанных последовательностей относятся к сигнальным пептидам. Анти-pKal фрагмент биспецифического антитела, описанный в настоящем документе, может включать те же сигнальные пептиды, либо сигнальные пептиды могут быть удалены или заменены на другие сигнальные пептиды. Применение сигнальных пептидов для производства секретируемых белков широко известно на существующем уровне техники.

Анти-pKal фрагмент биспецифического антитела может представлять собой любую форму антитела, включая, не ограничиваясь нижеперечисленным, интактные (т.е. полноразмерные) антитела, их антиген-связывающие фрагменты (например, Fab, Fab', F(ab')₂, Fv) и одноцепочечные антитела. В некоторых примерах вариабельный участок тяжелой цепи анти-pKal фрагмента, описанного в настоящем документе, связан с константным участком тяжелой цепи (CH), который может быть полноразмерным константным участком тяжелой цепи или его фрагментом (например, СН1, СН2, СН3, или их комбинацией). Константный участок тяжелой цепи может быть производным от любого C_H, известного на существующем уровне техники. В некоторых вариантах осуществления C_H является тяжелой гамма-цепью. Альтернативно или дополнительно, вариабельный участок легкой цепи анти-pKal фрагмента связан с константным участком легкой цепи (CL), который может представлять собой любой C_L, известный на существующем уровне техники. В некоторых примерах, C_L представляет собой легкую каппа-цепь. В других примерах CL представляет собой легкую лямбда-цепь. На существующем уровне техники константные участки легких и тяжелых цепей широко известны, например, те, которые содержатся в базе данных IMGT (www.imgt.org) или www.vbase2.org/vbstat.php., из которых обе включены в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых примерах анти-pKal фрагмент является IgG, которое может содержать ту же тяжелую цепь, что и DX-2930 (идентификатор последовательности 9) и/или ту же легкую цепь, что и DX-2930 (идентификатор последовательности 10).

Альтернативно, анти-pKal фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, может быть одноцепочечным антителом (scFv), в котором вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи соединены, например, через пептидный линкер, такой как (GGGGS)₄(SEQ ID NO: 23). В одном примере вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи соединены в ориентации H^L. В другом примере вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи соединены в ориентации L^ H. В некоторых вариантах осуществления фрагмент scFv, относящийся к легкой цепи, не содержит мотива Лиз-Арг (KR-мотива) на своем С-конце.

В одном из примеров анти-pKal фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, представляет собой DX-2930 (антитело IgG), описанное в настоящем документе, которое содержит тяжелую цепь согласно последовательности с SEQ ID NO: 9 и легкую цепь согласно последовательности с SEQ ID NO: 10 либо их антиген-связывающий фрагмент.

- 9 043404 (ii) Фрагмент анти-FXII

Любые антитела, способные связывать FXII, такие как активный FXII (FXIIa), могут использоваться при дизайне описанных здесь биспецифических антител. В некоторых примерах анти-FXII антительный фрагмент биспецифического антитела может связывать человеческий FXIIa и ингибировать его активность по крайней мере на 50% (например, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более). Ингибиторная активность анти-FXII антительного фрагмента биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, может быть определена рутинными методами. В некоторых примерах биспецифическое антитело, описанное в настоящем документе, имеет кажущуюся анти-FXIIa Ki, _каж менее 1 нМ, например 0,5 нМ, 0,2 нМ, 0,1 нМ, 0,09 нМ, 0,08 нМ, 0,07 нМ, 0,06 нМ, 0,05 нМ, 0,04 нМ, 0,03 нМ, 0,02 нМ, 0,01 нМ или ниже. Значение Ki, _каж для антитела может быть оценено способами, известными на существующем уровне техники.

В одном из примеров анти-FXII фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, взят из клонов против FXII 59C-M0071-F06, 559C-M0179-D04, 559С-М0181-С02, 559C-M0180G03, и 559С-М0184-В04. Ниже приводятся вариабельные участки тяжелой цепи и вариабельные участки легкой цепи этих клонов (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты).

Вариабельный участок тяжелой цепи клонов 559C-MOO71-FO6, 559C-M0179-D04, 559С-М0181-С02, и 559C-M0180-G03 (SEQ ID NO: 3):

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYIMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

Вариабельный участок тяжелой цепи 559С-М0184-В04 (SEQ ID

NO: 4):

EVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSFYSMHWVROAPGKGLEWVSRIYPSGGVTK

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

Вариабельный участок легкой цепи клонов 559C-M0071-F06 и 559С-М0184-В04 (SEQ ID NO: 5):

DIQMTQSPLSLPVTPGEPAS ISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGOSPQLLIYLGSNR

ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGOGTKVEIKR

Вариабельный участок легкой цепи клона 559C-M0179-D04 (SEQ

ID NO: 6) :

DIQMTQSPLSLSVAPGEPAS ISCRSSQSLLHRNGHNYLDWYLQKPGOSPQLLIYLGSNR

ASGVPERFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCMQALQARTFGOGTKVEIKR

Вариабельный участок легкой цепи клона 559С-М0181-С02 (SEQ

ID NO: 7):

DIQMTQSPLSLPVTPGEPAS ISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR

ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTRTFGOGTKVEIKR

Вариабельный участок легкой цепи клона 559C-M0180-G03 (SEQ ID NO: 8): DIQM T QS P L S L PVT PGE PASIS CRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQIMIYLGSNR ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPRTFGOGTKVEIKR

Вариабельный участок тяжелой цепи 620I-X0173-A11 (6201Х0177-А01) (SEQ ID NO: 123)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVROAPGKCLEWVSSIWPSGGHTR

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGOGTTVTVSS

Вариабельный участок тяжелой цепи клона 620I-X0173-C07 (620I-X0177-C01) (SEQ ID NO: 124)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKCLEWVSSIYPSGGKTS

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGOGTTVTVS5

Вариабельный участок тяжелой цепи клона 620I-X0173-E07 (620I-X0177-E01) (SEQ ID NO: 125) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVROAPGKCLEWVSVIYPSGGKTR YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGOGTTVTVSS Вариабельный участок тяжелой цепи клона 620I-X0173-G11 (620I-X0177-G01) (SEQ ID NO: 126) EVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKCLEWVSSIYPSGGLTK YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGOGTTVTVS5

Вариабельный участок легкой цепи клона 620I-X0173-A11 (SEQ ID NO: 127)

DIVMT QS РL S L РVT РGEPAS IS CRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR

ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGCGTKVEIKR

- 10 043404

Вариабельный участок легкой цепи клона 620I-X0173-C07 (SEQ ID NO: 128)

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPQLLIYLGSNR

ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGCGTKVEIKR

Вариабельный участок легкой цепи клона 620I-X0173-E07 (SEQ

ID NO: 129)

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPQLLIYLGSNR

ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGCGTKVEIKR

Вариабельный участок легкой цепи клона 620I-X0173-G11 (SEQ

ID NO: 130)

DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPOLLIYLGSNR

ASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGCGTKVEIKR

Вариабельные участки легких цепей клонов 620I-X0173-A11 (SEQ ID NO: 127), 620I-X0173-C07 (SEQ ID NO: 128), 62OI-XO173-EO7 (SEQ ID NO: 129), и 620I-X0173-G11 (SEQ ID NO: 130) идентичны.

В некоторых примерах, анти-FXIIa фрагмент биспецифического антитела включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, состоящий из аминокислотной последовательности, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичной последовательности с с SEQ ID NO: 3 или 4, и/или вариабельный участок легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичной последовательности с любым из SEQ ID NO: 5-8. Например, вариабельный участок тяжелой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 3, а вариабельный участок легкой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичную любой из последовательностей с SEQ ID NO: 5-8. В некоторых примерах, вариабельный участок тяжелой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 4, а вариабельный участок легкой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 5.

В некоторых примерах анти-FXIIa фрагмент биспецифического антитела включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, по крайней мере, на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную любой из последовательностей с SEQ ID NO: 123-126 и/или вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность, по крайней мере, на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную любой из последовательностей с SEQ ID NO. Например, вариабельный участок тяжелой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 123, а вариабельный участок легкой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичной последовательности с SEQ ID NO: 127. Альтернативно, вариабельный участок тяжелой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 124, а вариабельный участок легкой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичной последовательности с SEQ ID NO: 128. Альтернативно, вариабельный участок тяжелой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 125, а вариабельный участок легкой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 129. Альтернативно, вариабельный участок тяжелой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95%, или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 126, а вариабельный участок легкой цепи может включать аминокислотную последовательность, не менее чем на 80% (например, 85%, 90%, 95% или 98%) идентичную последовательности с SEQ ID NO: 130.

В других примерах анти-FXIIa фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, включает вариабельный участок тяжелой цепи и/или вариабельный участок легкой цепи, включающий те же три CDR, что и в клонах 559C-MOO71-FO6, 559C-M0179-D04, 559С-М0181-С02, 559CM0180-G03, 559С-М0184-В04, 620I-X0173-A11, 620I-X0173-C07, 620I-X0173-E07, или 620I-X0173-G11 и/или те же три CDR, что и в следующих клонах. См. табл. 1 ниже:

- 11 043404

Таблица 1. Последовательности CDR в анти-FXIIa клонах

Кло ны	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HCDR1	HCDR2	HCDR3
559	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	GYIMA	YIYPSGGIT	QRYRGPKYY
с-	NGY	(SEQ ID	WT	(SEQ	VYA	YYMDV (SEQ
МОО 71- F06	NYLD (SEQ ID NO: 34)	NO : 3 6)	(SEQ ID NO: 37)	ID NO: 41)	DSVKG (SEQ ID NO: 43)	ID NO: 45)
559	RSSQSLLHR	LGSNRAS	MQALQAR	GYIMA	YIYPSGGIT	QRYRGPKYY
с-	NGH	(SEQ ID	T	(SEQ	VYA	YYMDV (SEQ
М01 79- D04	NYLD (SEQ ID NO: 35)	NO : 3 6)	(SEQ ID NO: 38)	ID NO: 41)	DSVKG (SEQ ID NO: 43)	ID NO: 45)
559	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTR	GYIMA	YIYPSGGIT	QRYRGPKYY
с-	NGY	(SEQ ID	T	(SEQ	VYA	YYMDV (SEQ
М01 81- С02	NYLD (SEQ ID NO: 34)	NO : 3 6)	(SEQ ID NO: 39)	ID NO: 41)	DSVKG (SEQ ID NO: 43)	ID NO: 45)
559	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	GYIMA	YIYPSGGIT	QRYRGPKYY
с-	NGY	(SEQ ID	RT	(SEQ	VYA	YYMDV (SEQ
М01 80- G03	NYLD (SEQ ID NO: 34)	NO : 3 6)	(SEQ ID NO : 4 0)	ID NO: 41)	DSVKG (SEQ ID NO: 43)	ID NO: 45)
559	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	FYSMH	RIYPSGGVT	QRYRGPKYY
с-	NGY	(SEQ ID	WT	(SEQ	KYA	YYMDV (SEQ
М01 84- В04	NYLD (SEQ ID NO: 34)	NO : 3 6)	(SEQ ID NO: 37)	ID NO: 42)	DSVKG (SEQ ID NO: 44)	ID NO: 45)
620	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	QYVMH	SIWPSGGHT	QRYRGPKYYY
I-	NGYNYLD	(SEQ ID	WT (SEQ	(SEQ	RYADSVKG	YMDV (SEQ
Х01	(SEQ ID	NO : 3 6)	ID NO:	ID	(SEQ ID	ID NO:
73- Al 1	NO: 131)		37)	NO: 132)	NO: 133)	134)
620	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	WYVMH	SIYPSGGKT	QRYRGPKYYY
I-	NGYNYLD	(SEQ ID	WT (SEQ	(SEQ	SYADSVKG	YMDV (SEQ
Х01	(SEQ ID	NO : 3 6)	ID NO:	ID	(SEQ ID	ID NO:
73- С07	NO: 131)		37)	NO: 135)	NO : 13 6)	134)
620	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	WYSMH	VIYPSGGKT	QRYRGPKYYY
I-	NGYNYLD	(SEQ ID	WT (SEQ	(SEQ	RYADSVKG	YMDV (SEQ
Х01	(SEQ ID	NO : 3 6)	ID NO:	ID	(SEQ ID	ID NO:
73- Е07	NO: 131)		37)	NO: 137)	NO: 138)	134)
620	RSSQSLLHS	LGSNRAS	MQALQTP	HYVMH	SIYPSGGLT	QRYRGPKYYY
I-	NGYNYLD	(SEQ ID	WT (SEQ	(SEQ	KYADSVKG	YMDV (SEQ
Х01	(SEQ ID	NO : 3 6)	ID NO:	ID	(SEQ ID	ID NO:
73- G11	NO: 131)		37)	NO: 139)	NO : 14 0)	134)

Альтернативно, анти-FXIIa фрагмент может включать одну или несколько (например, до 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) мутаций в одном или нескольких CDR тяжелой и/или легкой цепи, перечисленных в табл. 1 выше, по сравнению с любым из клонов 559C-M0071-F06, 559C-M0179-D04, 559С-М0181-С02, 559CM0180-G03, 559С-М0184-В04, 620I-X0173-A11, 620I-X0173-C07, 620I-X0173-E07, или 620I-X0173-G11. Такие мутации могут представлять собой консервативные замены аминокислот, описанные в настоящем документе.

В некоторых вариантах осуществления анти-FXIIa фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, представляет собой молекулу IgG, которая может встречаться естественным образом или быть мутантом, включая, например, одну или несколько (например, 1, 2, 3, 4, 5 или более) мутаций или делеций, например для уменьшения протеолитического расщепления биспецифических антител, для уменьшения неоднородности зарядов биспецифических антител и/или для улучшения экспрессии, производства и/или изготовления биспецифических антител. В некоторых вариантах осуществ

- 12 043404 ления остаток лизина на С-конце тяжелой цепи IgG удален или заменен по сравнению с диким типом. В некоторых вариантах осуществления С-концевой лизин тяжелой цепи IgG заменен на нейтральный аминокислотный остаток, например, остаток глицина или аланина.

Анти-FXIIa фрагмент биспецифического антитела может представлять собой любую форму антитела, включая, не ограничиваясь нижеперечисленным, интактные (т.е. полноразмерные) антитела, их антиген-связывающие фрагменты (например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv) и одноцепочечные антитела. В некоторых примерах вариабельный участок тяжелой цепи анти-pKal фрагмента, описанного в настоящем документе, связан с константным участком тяжелой цепи (CH), который может быть полноразмерным константным участком тяжелой цепи или его фрагментом (например, С_Н1, СН2, СН3 или их комбинацией). Константный участок тяжелой цепи может быть производным от любого CH, известного на существующем уровне техники. В некоторых вариантах осуществления CH является тяжелой гамма-цепью. Альтернативно или дополнительно, вариабельный участок легкой цепи анти-pKal фрагмента связан с константным участком легкой цепи (C_L), который может представлять собой любой C_L, известный на существующем уровне техники. В некоторых примерах C_L представляет собой легкую каппа-цепь. В других примерах C_L представляет собой легкую лямбда-цепь. На существующем уровне техники константные участки тяжелой и легкой цепей, например, описанные здесь, хорошо известны.

Альтернативно, анти-FXIIa фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, может быть одноцепочечным антителом, в котором вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи соединены, например, через пептидный линкер, такой как (GGGGS)₄ (SEQ ID NO: 23). Вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи соединены в ориентации H^L или L^ H. В некоторых вариантах осуществления фрагмент scFv, относящийся к легкой цепи, не содержит KR-мотива на своем С-конце.

В некоторых вариантах осуществления анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv, включающий вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательностям с SEQ ID NO: 3 или 4 и/или вариабельный участок легкой цепи согласно любой из последовательностей с SEQ ID NO: 5-8. В одном из примеров анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv-антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 3, и вариабельный участок легкой цепи согласно любой из последовательностей с SEQ ID NO: 5-8 в любой из ориентаций H^L или L^. В другом примере анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv-антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 4, и вариабельный участок легкой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 5 в любой из ориентации H^L или L^. В некоторых вариантах осуществления анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv, включающий вариабельный участок тяжелой цепи согласно любой из последовательностей с SEQ ID NO: 123-126 и/или вариабельный участок легкой цепи согласно любой из последовательностей с SEQ ID NO: 127-130. В одном из примеров анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv-антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 123, и вариабельный участок легкой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 127 в любой из ориентаций H^L или L^. В одном из примеров анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv-антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 123, и вариабельный участок легкой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 127 в любой из ориентации H^L или L^. В другом примере анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv-антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 124, и вариабельный участок легкой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 128 в любой из ориентации H^L или L^. В другом примере анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFvантитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 125, и вариабельный участок легкой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 129 в любой из ориентаций H^L или L^. В другом примере анти-FXIIa фрагмент представляет собой scFv-антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 126, и вариабельный участок легкой цепи согласно последовательности с SEQ ID NO: 130 в любой из ориентации H^L или L^.

В некоторых вариантах осуществления, вариабельные участки легкой и тяжелой цепей любого из scFv антител, описанных в настоящем документе, дополнительно соединены, например, с помощью дисульфидного мостика, например, между 44-м остатком VH и 100-м остатком V_L.

(iii) Формат анти-pKal/анти-FXII биспецифических антител

Анти-pKal/анти-FXIIa биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, могут иметь любой формат биспецифических антител из известных на существующем уровне техники, например, описанных в работах Klein et al., mAbs 4(6):653-663, 2012; Kontermann et al., mAbs 4(2):182-197, 2012; и Coloma et al., Nature Biotechnology 15:159-163, 1997. В некоторых примерах биспецифические антитела могут быть гибридными полноразмерными антителами (также известными как квадромное или трифункциональное антитело), включающее одну ветвь (комплекс из тяжелой цепи/легкой цепи), связывающую pKal и другую ветвь (комплекс из тяжелой цепи/легкой цепи), связывающую FXII. В некоторых примерах биспецифические антитела представляют собой биспецифическое антитело Fab'₂, содержащее один

- 13 043404

Fab-фрагмент, связывающий pKal, и другой Fab-фрагмент, связывающий FXII, или Tpu-Fab-содержащую молекулу, включающую две копии фрагмента Fab, связывающегося с одним из целевых антигенов (например, pKal или FXIIa), и одну копию фрагмента Fab, связывающегося с другим целевым антигеном (например, FXIIa или pKal). Алльтернативно, биспецифическое антитело представляет собой тандемную молекулу scFv, которая включает по меньшей мере одну копию scFv, связывающегося с pKal, и одну копию другого scFv, связывающегося с FXIIa. Биспецифическое антитело, описываемое в настоящем документе, также может быть диателом или одноцепочечным диателом, известным на существующем уровне техники. Другие примеры включают, не ограничиваясь нижеперечисленным, IgG2, F(ab')2, CovXантитело, scFv₄-Ig, IgG-scFv, scFv-IgG, DVD-Ig, IgG-sVD, sVD-IgG, 2-in-1-IgG, mAb², Tandemab с общей LC, kih IgG, kih IgG с общей LC, CrossMab, kih IgG-scFab, mAb-Fv, зарядовые пары, SEED-антитело, диатело (Db), dsDd, scDb, tandAbs, тандемное scFv, трипл-боди, Fab-scFv и F(ab')₂-scFv₂. См., например, фиг. 2 в работе Kontermann et al., mAbs 4 (2):182-197, 2012.

В некоторых вариантах осуществления каркас биспецифических антител, описанных в настоящем документе, по конструкции включает в себя фрагмент антитела IgG и scFv-фрагмент, соединенный с Сконцом тяжелой цепи либо легкой цепи IgG-фрагмента (например, с С-концом тяжелой цепи IgG, см., например, Coloma, M.J. & Morrison, S.L. Design and production of novel tetravalent bispecific antibodies. Nature Biotechnology. 15(2): 159-163. 1997). Тяжелая или легкая цепь IgG может быть соединена с scFv через короткий пептидный линкер, например, пептид, насыщенный остатками Гли и Сер. В одном примере пептидный линкер включает аминокислотную последовательность SGGGS (SEQ ID NO: 22).

Такое биспецифическое антитело может включать первый полипептид, содержащий легкую цепь первого антитела, включающую в себя вариабельный участок легкой цепи (VL) и константный участок легкой цепи (CL), и второй полипептид, включающий химерный белок, содержащий от N-конца к Сконцу тяжелую цепь первого антитела, которая включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи (VH), константный участок тяжелой цепи (CH), и второе антитело, которое может быть одноцепочечным антителом. Альтернативно, биспецифическое антитело может включать первый полипептид, содержащий тяжелую цепь первого антитела, включающую в себя вариабельный участок тяжелой цепи (V_L) и константный участок тяжелой цепи (C_L) или его фрагмент, и второй полипептид, включающий химерный белок, содержащий, от N-конца к С-концу, легкую цепь первого антитела, которая включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи (V_L), константный участок легкой цепи (C_L), и второе антитело, которое является одноцепочечным антителом. В некоторых примерах первое антитело может связываться с pKal (например, с активным pKal), а второе антитело может связываться с FXII (например, FXIIa). В других примерах первое антитело может связываться с FXIIa, а второе антитело может связываться с pKal.

CL легкой цепи первого антитела может быть любым CL, известным на существующем уровне техники. В некоторых вариантах осуществления, CL представляет собой легкую каппа-цепь. В некоторых вариантах осуществления, CL представляет собой легкую лямбда-цепь. CH тяжелой цепи первого антитела может быть любым C_H, известным на существующем уровне техники. В некоторых вариантах осуществления CH является тяжелой гамма-цепью. На существующем уровне техники такие константные участки тяжелой и легкой цепей, например, описанные здесь, хорошо известны.

В одном из примеров биспецифическое антитело состоит из антитела, полученного из DX-2930 и scFv-антитела на основе клонов 559C-M0071-F06, 559C-M0179-D04, 559С-М0181-С02, 559C-MO18O-GO3, 559С-М0184-В04, 620I-X0173-A11, 620I-X0173-C07, 62О1-ХО173-ЕО7 или 620I-X0173-G11 в ориентации H^L или L^H (см. выше описание изобретения). Антитела, полученные от антитела-предшественника, могут включать тяжелую цепь и легкую цепь, в значительной степени аналогичные таковым цепям антитела-предшественника (идентичность последовательностей составляет не менее 80%, 85%, 90%, 95% или 98%). В некоторых примерах такие антитела включают те же CDR тяжелой и легкой цепей что и у антитела-предшественника. В других примерах такое антитело включает в себя CDR тяжелой и/или легкой цепи, которые в значительной степени идентичны CDR антитела-предшественника, например, имея до 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных замен, таких как консервативные замены аминокислотных остатков, по сравнению с CDR антитела-предшественника.

В некоторых вариантах осуществления scFv-антитело в биспецифическом антителе включает V_H, присоединенный к N-концу VL. В другом варианте осуществления scFv-антитело включает V_H, присоединенный к С-концу VL. В любом из scFv-антител, описанных в настоящем документе, участки VH и VL могут быть соединены через линкер, например пептидный линкер.

Пептидный линкер, как описано в данном документе, может включать, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислот. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер может состоять из 2-50, 5-25 или 5-20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер представляет собой SGGGS. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер представляет собой (G₄S)_x, где х может принимать значения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. В некоторых вариантах осуществления х равно 4.

Любой из описанных в настоящем документе пептидных линкеров, например, линкер SGGGS (SEQ ID NO: 22) или линкер (GGGGS)₄ (SEQ ID NO: 23) может включать аминокислоты, встречающиеся и/или не встречающиеся естественным образом. Естественным образом встречающиеся аминокислоты вклю

- 14 043404 чают в себя аланин (Ала), аргинин (Арг), аспарагин (Асн), аспарагиновую кислоту (Асп), цистеин (Цис), глутаминовую кислоту (Глу), глутамин (Глн), глицин (Гли), гистидин (Гис), изолейцин (Иле), лейцин (Лей), лизин (Лиз) метионин (Мет), орнитин (Орн), фенилаланин (Фен), пролин (Про), Серин (Сер), треонин (Тре), триптофан (Трп), тирозин (Тир) и валин (Вал). Аминокислоты, не встречающиеся естественным образом, могут включать в себя защищенные аминокислоты, такие как естественные аминокислоты, защищенные такими группами, как ацетил, формил, тозил, нитрогруппа и т.п. К числу примеров неестественно встречающихся аминокислот относятся, не ограничиваясь нижеперечисленным, азидогомоаланин, гомопропаргилглицин, гомоаллилглицин, р-бромофенилаланин, р-иодофенилаланин, азидофенилаланин, ацетилфенилаланин или этинилфенилаланин, аминокислоты, содержащие внутренние алкены, такие как транс-кротилалкен, аллиловый эфир серина, аллилглицин, пропаргилглицин, винилглицин, пирролизин, N-сигма-о-азидобензилоксикарбонил-L-лизин (AzZLys), N-сигма-пропаргилоксикарбонилL-лизин, N-сигма-2-азидоэтоксикарбонил-L-лизин, N-сигма-трет-бутилоксикарбонил-L-лизин (BocLys), N-сигма-аллилоксикарбонил-L-лизин (AlocLys), N-сигма-ацетил-L-лизин (AcLys), N-сигмабензилоксикарбонил-L-лизин (ZLys), N-сигма-циклопентилоксикарбонил-L-лизин (CycLys), N-сигма-Dпролил-L-лизин, N-сигма-никотиноил-L-лизин (NicLys), N-сигма-N-Ме-антранилоил-L-лизин (NmaLys), N-сигма-L-лизин, N-сигма-9-флуоренилмесоксикарбонил-L-лизин, N-сигма-метил-L-лизин, N-сигмадиметил-L-лизин, N-сигма-триметил-L-лизин, N-сигма-изопропил-L-лизин, N-сигма-дансил-L-лизин, Nсигма-о,р-динитрофенил-L-лизин, N-сигма-р-толуолсулфонил-L-лизин, N-сигма-DL-2-амино-2карбоксиэтил-L-лизин, N-сигма-фенилпирувамиде-L-лизин, N-сигма-пирувамиде-L-лизин, азидогомоаланин,гомопропаргилглицин, гомоаллилглицин, р-бромофенилаланин, р-иодофенилаланин, азидофенилаланин, ацетилфенилаланин или этинилфенилаланин, аминокислоты, содержащие внутренние алкены, такие как транс-кротилалкен, аллиловый эфир серина, аллилглицин, пропаргилглицин и винилглицин.

В некоторых вариантах осуществления scFv-фрагмент биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, может быть сконструирован таким образом, что включает цистеиновые остатки как в V_H, так и в V_L цепях, для формирования одного или нескольких дисульфидных мостиков, что может уменьшить образование высокомолекулярных агрегатов. В некоторых примерах цистеиновый остаток может быть включен в качестве 44-го остатка VH-цепи. Альтернативно или дополнительно, остаток цистеина может быть включен как 100-й остаток VL-цепи.

Примерами анти-pKal/анти-FXIIa биспецифических антител являются клоны Х0120-А01, Х0120С01, Х0120-Е01, X0120-G01, Х0121-А03, Х0121-С01, Х0121-Е01, X0121-G01, Х0122-А01, Х0122-С01, 620I-X0173-A11, 620I-X0173-C07, 620I-X0173-E07 и 620I-X0173-G11, описанные в Примерах ниже. Другие примеры анти-pKal/анти-FXIIa биспецифических антител включают клоны 6201-Х138-А08, 620IX136-B02, 620I-X139-A12, 620I-X137-B08, 6201-Х142-А04, 620I-X142-B11, 620I-X138-B01, 620I-X136C01, 620I-Х138-А12, 620I-X136-A12, 620I-X138-A02, 620I-X136-A05, 620I-Х138-С07, 620I-X136-E07, 620I-X142-B02, 620I-X136-F11, 620I-Х142-А05, 620I-X136-C09, 620I-X138-B10, 620I-X136-C08, 620IХ139-А11, 620I-X136-D05, 620I-X138-D04, 620I-X136-G08, 620Т-Х142-В07, 620I-X142-A11, 620I-X138G12, 620I-X142-A10, 620I-X138-D03, 620I-X137-C08, 620I-X142-E02, 620I-X136-E05, 620I-Х138-В06, 620I-X136-A09, 620I-X138-A06, 620I-X137-A10, 620I-Х139-В10, 620I-X136-A04, 620I-X138-D06, 620IX136-C11, 620I-Х138-В07, 620I-X136-A02, 620I-X139-G02, 620I-X136-B07, 620I-Х138-Е03, 620I-X136G05, 620I-X139-D12, 620I-X136-A01, 620I-Х138-С12, 620I-X136-G10, 620I-X138-D05, 620I-X136-F07, 620Т-Х138-А01, 620I-X142-E09, 620I-X138-D11, 620I-X136-C05, 620I-Х142-А02, 620I-X136-C04, 620IX138-F02, 620I-X136-G04, 620I-X139-G12, 620I-X136-B11, 620I-X142-D04, 620I-X136-D06, 620I-Х139А01, 620I-X136-D12, 620I-X138-F05, 620I-X136-A11, 620Т-Х139-Е05, 620I-X136-C12 и 620Т-Х138-Е05, описанные в приведенных ниже примерах.

Создание биспецифических антител

Любые подходящие методы, известные на существующем уровне техники, например, стандартная рекомбинантная технология, могут использоваться для создания биспецифических антител, описанных в настоящем документе. Примеры приведены ниже.

Гены тяжелых и легких цепей подходящих антител-предшественников могут быть получены с помощью обычной технологии, например, с применением ПЦР-амплификации подходящего источника. В одном из примеров ДНК, кодирующая моноклональное антитело, специфичное к целевому антигену, может быть легко выделена и секвенирована с применением обычных процедур (например, с помощью олигонуклеотидных зондов, способных специфично связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи моноклональных антител). Источником такой ДНК может служить клетка, например, клетка гибридомы. В другом примере может быть получена последовательность ДНК, кодирующая моноклональное антитело, специфичное к целевому антигену, например, из базы данных или другого имеющегося в открытом доступе источника, и ДНК может быть синтезирована. Гены антитела-предшественника также могут быть получены путем скрининга подходящей библиотеки антител относительно интересующего антигена.

Полученные таким образом гены тяжелых и легких цепей антител могут быть проанализированы с целью выявления определяющих комплементарность участков (CDR) с помощью рутинной технологии. Любой из полипептидов биспецифических антител, описанных в настоящем документе, может быть под- 15 043404 готовлен с помощью обычной рекомбинантной технологии и вставлен в подходящие экспрессирующие векторы для производства в подходящих клетках-хозяевах.

Нуклеотидные последовательности, кодирующие один или несколько биспецифических антител, описанных в настоящем документе, могут быть клонированы в один экспрессирующий вектор, так, что каждая нуклеотидная последовательность функционально связана с подходящим промотором. Альтернативно, нуклеотидные последовательности могут быть функционально свзяаны с единым промотором, таким образом, что обе последовательности экспрессируются под одним и тем же промотором. В некоторых примерах экспрессия двух полипептидов контролируется общим промотором. В других примерах экспрессия каждого из двух полипептидов находится под контролем отдельного промотора. Альтернативно, нуклеотидные последовательности, кодирующие эти два полипептида, клонируются в два вектора, которые могут быть введены в одну и ту же либо разные клетки. Когда два полипептида экспрессируются в различных клетках, каждый из них может быть выделен из клетки-хозяина, экспрессирующей таковой, и две изолированные тяжелые цепи могут быть смешаны и инкубированы в соответствующих условиях, позволяющих формирование биспецифических антител.

Как правило, нуклеотидная последовательность, кодирующая одну или все цепи биспецифического антитела, может быть клонирована в подходящий экспрессирующий вектор в функциональной связи с подходящим промотором, используя способы, известные на существующем уровне техники. Например, нуклеотидная последовательность и вектор могут быть, в подходящих условиях, приведены в контакт с рестрикционным ферментом, для создания комплементарных концов на каждой молекуле, которые могут образовывать пары друг с другом и сшиваться вместе с помощью лигазы. Альтернативно, синтетические нуклеотидные линкеры могут быть лигированы к концам гена. Эти синтетические линкеры содержат нуклеотидные последовательности, соответствующие определенному сайту рестрикции в векторе. Выбор экспрессирующего вектора/промотора лица зависит от типа клеток-хозяев, которые будут использоваться при производстве антител.

Для экспрессии биспецифических антител, описанных в настоящем документе, можно использовать различные промоторы, включая, не ограничиваясь нижеперечисленным, среднеранний промотор цитомегаловируса (CMV), вирусные длинные концевые повторы (LTR), такие как LTR вируса саркомы Рауса, HIV-LTR, HTLV-1 LTR, ранний промотор обезьяньего вируса 40 (SV40), lac UV5 - промотор Е. coli и тирозинкиназный (ТК) промотор вируса простого герпеса.

Можно также использовать регулируемые промоторы. К числу таких регулируемых промоторов относятся те, которые используют lac-репрессор из Е. coli в качестве модулятора транскрипции для регулирования транскрипции с содержащих lac-оператор промоторов клеток млекопитающих [Brown, M. et al., Cell, 49:603-612 (1987)], those using the tetracycline repressor (tetR) [Gossen, M., and Bujard, H., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551 (1992); Yao, F. et al., Human Gene Therapy, 9:1939-1950 (1998); Shockelt, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:6522-6526 (1995)]. К другим системам относятся димер FK506, VP16 или р65 с применением астрадиола, RU486, дифенола мурислерона или рапамицина. Доступны индуцибельные системы от Invitrogen, Clontech и Ariad.

Могут использоваться регулируемые промоторы, включающие в себя репрессор с опероном. В одном из вариантов осуществления, lac-репрессор из Е. coli может функционировать в качестве модулятора транскрипции для регулирования транскрипции с содержащих lac-оператор промоторов клеток млекопитающих [М. Brown et al., Cell, 49:603-612 (1987)]; Gossen and Bujard (1992); [M. Gossen et al., Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992)], в комбинации с тетрациклиновым репрессором (tetR) и активатором транскрипции (VP 16) для создания химерного белка-активатора транскрипции в tetR-клетках млекопитающих tTa (tetR-VP 16), с tetO-несущим минимальным промотором, произведенным от основного средне-раннего промотора человеческого цитомегаловируса (hCMV) для создания системы операторов tetRtet для контроля экспрессии генов в клетках млекопитающих. В одном из вариантов осуществления используется тетрациклин-индуцибельный переключатель. Тетрациклиновый репрессор (tetR) сам по себе, а не химерные продукты слияния транскрипционного фактора tetR-клеток млекопитающих, может функционировать как мощный транс-модулятор для регуляции экспрессии генов в клетках млекопитающих, в случае, если тетрациклиновый оператор должным образом расположен после ТАТА-элемента CMVIEпромотора (Yao et al., Human Gene Therapy). Одно из преимуществ этого тетрациклин-индуцибельного переключателя заключается в том, что он не требует использования трансактивирующего или репрессорного химерного белка клеток млекопитающих, включающих тетрациклиновую репрессорную систему, так как эти белки могут быть в некоторых обстоятельствах токсичными для клеток (Gossen et al., Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992); Shockett et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:6522-6526 (1995)), для достижения его регулируемых эффектов.

Дополнительно, вектор может содержать, например, все или некоторые из следующих элементов: доступный для выбора маркерный ген, например ген неомицина для выбора стабильных или временных трансфектантов среди клеток млекопитающих; энхансерные/промоторные последовательности среднераннего промотора человеческого CMV для обеспечения высоких уровней транскрипции; сигналы терминации транскрипции и РНК-процессинга из SV40 для обеспечения стабильности мРНК; точки начала репликации и ColE1 из СВ40-полиомы для правильной эписомальной репликации; внутренние рибосо

- 16 043404 мальные сайты связывания (IRES), универсальные сайты множественного клонирования и Т7 и SP6PHK-промоторы для транскрипции in vitro смысловой и антисмысловой РНК. Подходящие векторы и способы изготовления векторов, содержащих трансгены, хорошо известны и доступны на существующем уровне техники.

Примеры сигналов полиаденилирования, полезных для практического применения описанных здесь способов, включают в себя, не ограничиваясь нижеперечисленным, сигнал полиаденилирования человеческого коллагена I, сигнал полиаденилирования человеческого коллагена II и сигнал полиаденилирования SV40.

В других аспектах изобретение относится к способу подготовки биспецифического антитела, включающего культивирование клетки-хозяина или клеток-хозяев, описанных в настоящем документе, в условиях, допускающих экспрессию первого полипептида и второго полипептида; и очистку биспецифического антитела, содержащего первый полипептид и второй полипептид. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин содержит экспрессирующий вектор, включающий первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид, описанный в настоящем документе, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид, описанный в настоящем документе.

Подходящими клетками-хозяевами для использования при подготовке биспецифических антител, описанных в настоящем документе, могут служить любые клетки-хозяева, известные на существующем уровне техники, которые могут использоваться для производства белка, включая, не ограничиваясь нижеперечисленным, бактериальные клетки, дрожжевые клетки, клетки насекомых, растительные клетки или клетки млекопитающих.

Биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, могут быть наработаны в бактериальных клетках, например, в клетках E.coli. Альтернативно, биспецифические антитела могут быть наработаны в эукариотических клетках. В одном из вариантов осуществления, антитела экспрессируются в дрожжевой клетке, такой как Pichia (см., например, Powers et al., 2001, J. Immunol. Methods. 251:123-35), Hanseula, или Saccharomyces. В другом варианте осуществления биспецифические антитела могут быть наработаны в клетках млекопитающих. Клетки млекопитающих, которые могут использоваться как клетки-хозяева для экспрессии антител, включают, не ограничиваясь нижеперечисленным, клетки 293 (см., например, АТСС CRL-1573, American Type Culture Collection®, и Expi293F™ cells, Life Technologies™), клетки яичника китайского хомячка (СНО) (включая клетки dhfr-CHO), описанные в Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, используемые с выборочным DHFR-маркером, например, как описано в Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601 621), лимфоцитную линию клеток, например, клетки миеломы NS0 и клетки SP2, клетки COS и клетки трансгенного животного, например, трансгенного млекопитающего. Например, клетка может представлять собой эпителиальную клетку молочной железы.

В одном из примеров системы для рекомбинантной экспрессии биспецифических антител, описанных в настоящем документе, рекомбинантный экспрессирующий вектор, кодирующий оба полипептида биспецифического антитела, вводится в клетки dhfr-СНО посредством трансфекции, опосредованной фосфатом кальция. В рекомбинантном экспрессирующем векторе нуклеиновые кислоты, кодирующие два полипептида, функционально связаны с регуляторными элементами энхансер/промотор (например, производными от SV40, CMV, аденовируса и т.п., например, регуляторный элемент CMVэнхансер/АdМLР-промотор или регуляторный элемент SV40-энхансер/AdMLP-промотор) для обеспечения высокого уровня транскрипции генов. Рекомбинантный экспрессирующий вектор также содержит ген DHFR, который позволяет выбирать ячейки СНО, трансфецированные вектором с помощью метотрексатного отбора/амплификации. Выбранные трансформантные клетки-хозяева культивируются для экспрессии двух полипептидов. Тетрамерная молекула, образуемая в результате этого процесса, может быть выделена из среды культивирования. Еще один пример системы рекомбинантной экспрессии описан в примере 2.

Стандартные методы молекулярной биологии используются для подготовки рекомбинантного экспрессирующего вектора, трансфекции клеток-хозяев, отбора трансформантов, культивирования клетокхозяев и выделения антител из среды культивирования. Например, некоторые антитела могут быть очищены с помощью аффинной хроматографии с сорбентом, связанным с протеином А или протеином G.

Применение биспецифических антител

Биспецифические антитела или кодирующие нуклеиновые кислоты либо наборы нуклеиновых кислот, описанные в настоящем документе, могут использоваться в диагностических и терапевтических целях. Они также могут использоваться в качестве исследовательских инструментов в фундаментальных и терапевтических исследованиях.

(i) Фармацевтические композиции

Биспецифические антитела (или кодирующие нуклеиновые кислоты или наборы нуклеиновых кислот), описанные в настоящем документе, могут быть смешаны с фармацевтически приемлемым носителем (эксципиентом), в том числе буфером, для создания фармацевтической композиции, используемой при лечении от целевого заболевания. Термин приемлемый означает, что носитель должен быть совместим с активным ингредиентом состава (и, предпочтительно, способен стабилизировать активный

- 17 043404 ингредиент) и не наносит вреда субъекту, получающему лечение. Фармацевтически приемлемые эксципиенты (носители) включают в себя буферы, хорошо известные на существующем уровне техники. См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. Е. Hoover.

Фармацевтические композиции, которые будут использоваться в настоящих способах, могут включать фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы в виде лиофилизатов или водных растворов. (Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover). Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и могут включать такие буферы, как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие, как октадецилдиметилбензил аммония хлорид; гексаметониум хлорид; бензалкониум хлорид, бензетониум хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабены; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофилильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, например, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстраны; хелатирующие агенты, такие как ЕДТА; сахара, например, сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; соль-формирующие противоионы, например, натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие, как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).

В некоторых примерах фармацевтический состав, описанный в настоящем документе, включает липосомы, содержащие биспецифическое антитело, которые могут быть подготовлены способами, известными на существующем уровне техники, например, описанными в Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688 (1985); Hwang, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030 (1980); и патенты США №№ 4485045 и 4544545. Липосомы с улучшенным временем циркуляции описаны в патенте США № 5013556. Особенно полезные липосомы могут быть созданы способом обратно-фазового выпаривания с липидным составом, включающим фосфатидилхолин, холестерин и ПЭГилированный фосфатидилэтаноламин (ПЭГ-РЕ). Липосомы выдавливаются с помощью фильтров с определенным размером пор, для получения липосом с требуемым диаметром.

Биспецифическое антитело или кодирующие нуклеиновые кислоты могут также быть заключены в микрокапсулы, подготовленные, например, с помощью образования коацерватов или путем полимеризации на границе фаз, например, гидроксиметилцеллулозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметацилатные) микрокапсулы, соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственных препаратов (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или макроэмульсии. Такие методы известны на существующем уровне техники, см., например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000).

В других примерах фармацевтическая композиция, описанная в настоящем документе, может быть сформулирована в формате с постепенным высвобождением. К числу подходящих примеров препаратов с постепенным высвобождением относятся полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащих антитела, которые представляют собой форму профилированных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриц с постепенным высвобождением включают полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат), или поли(виниловый спирт)), полилактиды (патент США № 3773919), кополимеры L-глутаминовой кислоты и 7-этил-L-глутамата, неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые кополимеры молочной и гликолевой кислот, такие как LUPRON DEPOT™ (инъекцируемые микросферы, состоящие из кополимера молочной и гликолевой кислот и лейпролида ацетата), сахарозы ацетат изобутират и поли-D-(-)-3-гидроксибутановая кислота.

Фармацевтические композиции, используемые для введения in vivo, должны быть стерильными. Это легко достигается, например, путем фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны. Лечебные композиции, содержащие антитела, как правило, помещены в контейнер с портом стерильного доступа, например в мешок для внутривенного раствора или флакон с крышкой, протыкаемой иглой для подкожных инъекций.

Фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, могут иметь различные единицы дозировки, такие как таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии, или суппозитории для перорального, парентерального или ректального введения или введения путем ингаляции или инсуффляции.

Для подготовки твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент может быть смешан с фармацевтическим носителем, например, с обычными ингредиентами таблеток, такими как кукурузный крахмал, лактоза, сахароза, сорбитол, тальк, стеариновая кислота, стеарат магния, дикальцийфосфат или смолы, и другие фармацевтические разбавители, например вода, для образования твердой композиции до придания лекарственной формы, содержащей однородную смесь соединения согласно настоящему изобретению или его нетоксичной фармацевтически приемлемой соли. Однород

- 18 043404 ность композиции до придания ей лекарственной формы предполагает, что активный ингредиент равномерно распределен по всей композиции, так что композицию можно легко разделить на равноэффективные формы единичной дозировки, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Эта твердая композиция до придания лекарственной формы затем делится на формы дозировки, описанные выше, содержащие от 0,1 до примерно 500 мг активного ингредиента согласно настоящему изобретению. Таблетки или пилюли этой инновационной композиции могут быть покрыты оболочкой или иным образом обработаны, чтобы предоставить дозировку, которая дает преимущество длительного действия. Например, таблетка или пилюля могут включать компоненты внутренней и внешней дозировки, причем последний представляет собой оболочку первого. Эти два компонента могут быть разделены желудочно-резистентным слоем, который не распадается в желудке и позволяет внутреннему компоненту поступать в двенадцатиперстную кишку или задерживает его высвобождение. Для таких желудочно-резистентных слоев или покрытий могут использоваться различные материалы, включая ряд полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

К подходящим поверхностно-активным агентам относятся, в частности, неионные агенты, такие как полиоксиэтиленсорбитаны (например, Tween™ 20, 40, 60, 80 или 85) и другие сорбитаны (например, Span™ 20, 40, 60, 80 или 85). Композиции с поверхностно-активным агентом вполне могут содержать от 0,05 до 5% поверхностно-активного вещества, и могут содержать от 0,1 до 2,5%. Желательно, чтобы при необходимости была возможность добавлять и другие ингредиенты, например, маннитол или другие фармацевтически приемлемые носители.

Подходящие эмульсии могут быть подготовлены с применением коммерчески доступных жировых эмульсий, таких как Intralipid™, Liposyn™, Infonutrol™, Lipofundin™ и Lipiphysan™. Активный ингредиент может быть либо растворен в предварительно смешанной эмульсионной композиции, либо, альтернативно, он может быть растворен в масле (например, соевом масле, саффлоровом масле, хлопковом масле, кунжутном масле, кукурузном масле или миндальном масле), а также эмульсии, образованной при смешении фосфолипида (например, яичного фосфолипида, соевого фосфолипида или соевого лецитина) и воды. Желательно, чтобы при необходимости можно было добавить другие ингредиенты, например, глицерин или глюкозу для регулировки тоничности эмульсии. Подходящие эмульсии обычно содержат до 20% масла, например, от 5 до 20%. Жировая эмульсия может включать жировые капли в диапазоне от 0,1 до 1,0.im, особенно 0,1 и 0,5.im, и имеет рН в диапазоне от 5,5 до 8,0.

Эмульсионные композиции могут быть подготовлены путем смешивания биспецифических антител с Intralipid™ или его компонентами (соевое масло, яичные фосфолипиды, глицерин и вода).

Фармацевтические композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях, их смеси, а также порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты, как указано выше. В некоторых вариантах осуществления композиции через оральный или назальный дыхательный тракт для обеспечения местного или системного эффекта.

Составы, предпочтительно в стерильном фармацевтически приемлемом растворителе, могут распыляться с помощью газов. Распыляемые растворы могут вдыхаться непосредственно с распыляющего устройства, или распыляющее устройство может быть прикреплено к лицевой маске, кислородной палатке или аппарату для вентиляции легких с положительным перемежающимся давлением. Раствор, суспензия или порошковые композиции могут быть введены, предпочтительно орально или назально, с помощью аппаратов, которые доставляют препарат надлежащим способом.

(ii) Лечение болезней

Биспецифические антитела (или кодирующие нуклеиновые кислоты или наборы нуклеиновых кислот), описанные в настоящем документе, могут применяться для лечения заболевания или расстройства, связанных с одним или обоими антигенами, с которыми связывается биспецифическое антитело. Например, если биспецифическое антитело способно придерживаться и блокировать активность pKal и FXIIa, оно может использоваться для лечения болезней, связанных с нарушением регуляции системы контактной активации, например НАО и тромбоза.

НАО (включая НАО типа I, типа II и типа III) представляет собой расстройство, характерное для периодических приступов острой отечности, например, конечностей, лица, пищеварительного и дыхательного путей. НАО может быть вызван незначительными травмами или стрессом. Отечность желудочно-кишечного тракта, вызванная приступом НАО, может вызывать сильную боль в животе, тошноту и рвоту. Отечность дыхательных путей может ограничивать дыхание и приводить к помехам в дыхательных путях, представляющим угрозу жизни.

Термин тромбоз (например, венозный тромбоз или артериальный тромбоз) относится к формированию кровяных сгустков внутри кровеносного сосуда, который может помешать потоку крови по системе ее циркуляции. К тромбозам может относиться тромбоз, связанный с фибрилляцией предсердий, ТГВ, легочной эмболией, инсультом или другими артериальными или венозными тромботическими синдромами.

Для практического применения метода, описанного в настоящем документе, эффективное количе

- 19 043404 ство фармацевтической композиции, о которой говорилось выше, может быть введено субъекту (например, человеку), нуждающемуся в лечении, подходящим способом, таким, как внутривенное введение, например, в виде болюсов или непрерывного введения в течение некоторого периода времени, а также внутримышечно, интраперитонеально, интрацереброспинально, подкожно, интраартикулярно, интрасиновиально, интратекально, орально, путем ингаляции или наружным способом. Для введения могут использоваться коммерчески доступные небулайзеры для распыления жидких композиций, включая струйные небулайзеры и ультразвуковые небулайзеры. Жидкие композиции могут быть непосредственно распылены, а лиофилизированный порошок может быть распылен после растворения. Альтернативно, биспецифические антитела, описанные в настоящем документе, могут быть аэрозолированы с применением фторуглеродной лекарственной формы и дозирующего ингалятора либо могут вдыхаться в виде лиофилизированного и исмельченного порошка.

Субъект, подвергающийся лечению способами, описанными в настоящем документе, может представлять собой млекопитающее, более предпочтительно человека. К млекопитающим относятся, не ограничиваясь нижеперечисленным, сельскохозяйственные животные, спортивные животные, домашние животные, приматы, лошади, собаки, кошки, мыши и крысы. Человек, нуждающийся в лечении, может быть больным, с риском развития или с подозрением на целевое заболевание/расстройство, например, НАО или тромбоз. В некоторых вариантах осуществления тромбоз ассоциируется с фибрилляцией предсердий, тромбозом глубоких вен (ТГВ), легочной эмболией, инсультом или формированием артериального или венозного тромба. Субъект, имеющий целевое заболевание или расстройство, может быть идентифицирован на основе обычного медицинского освидетельствования, например лабораторных тестов, функциональных исследований органов, томографии или ультразвукового обследования. Субъект с подозрением на какое-либо из указанных целевых заболеваний/расстройств, может демонстрировать один или несколько симптомов заболевания/расстройства. Субъект, подверженный риску заболевания/расстройства, может быть субъектом, подвергающимся одному или нескольким факторам риска развития этой болезни/расстройства.

Термин эффективное количество, используемый в настоящем документе, относится к количеству каждого активного вещества, необходимого для обеспечения терапевтического воздействия на субъект, самого по себе либо в сочетании с одним или несколькими другими активными веществами. Эффективные количества варьируют, как это понятно квалифицированному специалисту в данной области техники, в зависимости от конкретного излечиваемого состояния, степени тяжести состояния, индивидуальных параметров пациента, включая возраст, физическое состояние, размер, пол и вес, продолжительности лечения, характера параллельной терапии (если таковая присутствует), конкретного способа введения и подобных факторов, сведения о которых входят в область знаний и компетенций врачейтерапевтов. Эти факторы хорошо известны квалифицированному специалисту в данной области техники и могут быть учтены без выхода за рамки рутинных исследовательских работ. Как правило, предпочтительным считается применение максимальной дозы отдельных компонентов или их комбинаций, т.е. наибольшей безопасной дозы в соответствии с разумным медицинским назначением. Тем не менее, как понятно специалисту в данной области техники, пациент может настаивать на более низкой дозе или более переносимой дозе по медицинским причинам, психологическим причинам или практически любым другим причинам.

Эмпирические соображения, такие как период полувыведения, как правило, будут влиять на определение дозировки. Например, антитела, совместимые с иммунной системой человека, такие как гуманизированные антитела или полностью человеческие антитела, могут использоваться для продления периода полувыведения антитела и для предотвращения атаки антител со стороны иммунной системы организма-хозяина. Частота введения может быть определена и скорректирована с учетом курса терапии и, как правило, но не обязательно, основана на лечении и/или подавлении и/или смягчении и/или задержки развития целевого заболевания/расстройства. Альтернативно, подходящим может оказаться лекарственная форма с постепенным высвобождением биспецифического антитела. На существующем уровне техники известны различные лекарственные формы и аппараты для обеспечения постепенного высвобождения.

В одном из примеров дозировка биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, может определяться эмпирически на отдельных субъектах, которым было введено антитело один или несколько раз. Отдельным субъектам вводятся возрастающие дозы антагониста. Для оценки эффективности антагониста можно отслеживать изменения индикатора заболевания/расстройства.

Как правило, при введении любого из описанных в настоящем документе антител первоначальная предполагаемая доза может составлять около 2 мг/кг. Для целей настоящего изобретения типичная ежедневная доза может варьироваться от 0,1 до 3 мкг/кг, до 30 мкг/кг, до 300 мкг/кг, до 3 мг/кг, до 30 мг/кг, до 100 мг/кг или более, в зависимости от вышеупомянутых факторов. В случае неоднократного введения в течение нескольких дней или дольше, в зависимости от состояния, лечение поддерживается до тех пор, пока не произойдет желаемого подавления симптомов или до тех пор, пока не будут обеспечены терапевтические уровни, достаточные для облегчения заболевания или расстройства или его симптомов. Пример режима дозирования включает в себя введение начальной дозы примерно 2 мг/кг, за которым

- 20 043404 следует еженедельная поддерживающая доза примерно 1 мг/кг антитела, или поддерживающая доза примерно 1 мг/кг один раз в две недели. Однако другие режимы дозирования могут быть полезны, в зависимости от схемы фармакокинетического распада, которую этот врач желает достичь. Например, предусматривается дозирование, начиная с 1-4 раз в неделю. В некоторых вариантах осуществления может использоваться дозировка, варьирующая от примерно 3 мкг/мг до примерно 2 мг/кг (например, около 3 мкг/мг, около 10 мкг/мг, около 30 мкг/мг, около 100 мкг/мг, около 300 мкг/мг, около 1 мг/кг и около 2 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления частота дозировки составляет один раз в неделю, каждые 2 недели, каждые 4 недели, каждые 5 недель, каждые 6 недель, каждые 7 недель, каждые 8 недель, каждые 9 недель или каждые 10 недель; или один раз в месяц, каждые два месяца или каждые три месяца или реже. Прогресс в этом лечении легко контролируется традиционными способами и анализами. Режим дозирования (включая используемые антитела) может варьироваться со временем.

В некоторых вариантах осуществления взрослому пациенту с нормальным весом могут вводиться дозы в диапазоне от примерно 0,3 до 5,00 мг/кг. Конкретный режим дозировки, т.е. доза, время и повторность, будет зависеть от конкретного субъекта и его истории болезни этого, а также от свойств отдельных веществ (таких, как период полувыведения вещества и другие факторы, хорошо известные на существующем уровне техники).

Для целей настоящего изобретения соответствующая доза биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, будет зависеть от конкретных антител (или их композиций), типа и тяжести болезни/расстройства, от того, вводятся ли антитела в профилактических или терапевтических целях, предшествующего лечения, истории болезни пациента и реакции на антагониста, а также от предписаний лечащего врача. Как правило, врачи будут вводить биспецифическое антитело, пока не будет достигнута дозировка, обеспечивающая желаемый результат. Введение одного или нескольких биспецифических антител может быть непрерывным или периодическим, в зависимости, например, от физиологического состояния реципиента, от того, является ли цель введения терапевтической или профилактической, а также от других факторов, известных квалифицированным специалистам в данной области техники. Введение биспецифического антитела может быть существенно непрерывной в течение предустановленного периода времени или может представлять собой серию распределенных доз, например, до, во время или после развития целевого заболевания или расстройства.

Термин лечение, используемый в настоящем документе, относится к применению или введению композиции, включающей одно или более активных веществ субъекту, имеющего целевое заболевание или расстройство, симптом заболевания/расстройства или предрасположенность к заболеванию/расстройству, с целью лечения, исцеления, облегчения, ослабления, модификации, устранения, улучшения, корректировки или воздействия на расстройство, симптом заболевания или предрасположенность к заболеванию или расстройству.

Облегчение заболевания/расстройства включает в себя задержку в развитии или прогрессировании этого заболевания или снижение тяжести заболевания. Облегчение болезни необязательно включает в себя исцеление. Термин задержка развития целевого заболевания или расстройства в настоящем документе означает отсрочку, затруднение, замедление, снижение темпа, стабилизацию и/или торможение прогрессирования этого заболевания. Задержка может быть различной продолжительности, в зависимости от истории болезни и/или субъектов, к которым применяется лечение. Под способом, задерживающим или облегчающим развитие болезни, или задерживающим начало заболевания, подразумевается способ, который уменьшает вероятность разработки одного или более симптомов заболевания в данный промежуток времени и/или уменьшает степень выраженности симптомов в данный промежуток времени, по сравнению со случаем, когда способ не используется. Такие сопоставления обычно основываются на клинических исследованиях, включающих число субъектов, достаточное для того, чтобы дать статистически значимый результат.

Термины развитие или прогрессирование болезни означают первоначальные проявления и/или последующее прогрессирование болезни. Развитие болезни может быть обнаружено и оценено с применением стандартных клинических методов, хорошо известных на существующем уровне техники. Однако термин развитие также касается прогрессирования, которое может быть необнаружимым. Для целей настоящего изобретения, термины развитие или прогрессирование относятся к биологическому ходу изменения симптомов. Термин развитие включает проявление, повторное проявление и наступление. В настоящем документе термины наступление или проявление целевого заболевания или расстройства включают начальное и/или повторное проявление.

В некоторых вариантах осуществления биспецифическое антитело, описанное в настоящем документе, вводится субъекту, нуждающемуся в лечении, в количестве, достаточном для того, чтобы ингибировать активность одного или обоих целевых антигенов по меньшей мере на 20% (например, на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более) in vivo. В других вариантах осуществления антитело вводится в количестве, эффективно снижающем уровень одного или обоих целевых антигенов по крайней мере на 20% (например, на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более).

Обычные методы, известные на существующем уровне техники, могут использоваться для введения фармацевтической композиции субъекту в зависимости от вида заболевания, подлежащего лечению, или

- 21 043404 от локализации заболевания. Композиция может также быть введена другими обычными способами, например, орально, парентерально, вдыханием аэрозолей, местно наружно, ректально, назально, буккально, вагинально или с помощью имплантированного резервуара. Термин парентеральный, используемый в настоящем документе, включает подкожные, внутрикожные, внутривенные, внитримышечные, интраартикулярные, внутриартериальные, интрасиновиальные, внутригрудинные, интратекальные, внутриочаговые и внутричерепные инъекции или инфузионные способы. Дополнительно она может быть введена субъекту посредством инъекции веществ замедленного всасывания, например, с применением инъецируемых веществ с 1-, 3-или 6-месячным сроком всасывания или биоразлагаемых материалов и способов.

Инъецируемые композиции могут содержать различные носители, например, растительные масла, диметилактамид, диметилформамид, этиллактат, этилкарбонат, изопропилмиристат, этанол и многоатомные спирты (глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и т.п.). Для внутривенных инъекций, растворимые в воде антитела могут быть введены с помощью капельницы, причем инфузируется фармацевтическая композиция, содержащая антитела и физиологически приемлемые эксципиенты. Физиологически приемлемые эксципиенты могут включать, например, 5% декстрозу, 0,9% соляной раствор, раствор Рингера или другие подходящие эксципиенты. Внутримышечные препараты, например, стерильная форма подходящей растворимой соли антитела, могут быть растворены и введены в фармацевтическом эксципиенте, например, в воде для инъекций, 0,9% соляном растворе или 5% растворе глюкозы.

В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело вводится с помощью сайтспецифичных или местных направленных способов. К числу примеров способов сайт-специфичной или местной направленной доставки относятся различные имплантируемые депо биспецифических антител или катетеры местного введения, например, инфузионные катетеры, вживленные катетеры или игольные катетеры, синтетические импланты, адвентиальные оболочки, шунты и стенты, а также другие имплантиуемые устройства, сайт-специфичные носители, прямая инъекция или прямое нанесение. См. например, Договор о патентной кооперации № WO 00/53211 и патент США № 5981568.

Возможно также применение направленной доставки терапевтических композиций, содержащих антисмысловые полинуклеотиды, экспрессирующие векторы или субгеномные полинуклеотиды. Рецептор-опопсредованные способы доставки ДНК описаны, например, в Findeis et al., Trends Biotechnol. (1993) 11:202; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer (J. A. Wolff, ed.) (1994); Wu et al., J. Biol. Chem. (1988) 263:621; Wu et al., J. Biol. Chem. (1994) 269:542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87:3655; , J. Biol. Chem. (1991) 266:338.

Терапевтические композиции, содержащие полинуклеотиды (например, кодирующие биспецифические антитела, описанные в настоящем документе), вводятся в количестве от примерно 100 нг до примерно 200 мг ДНК в случае местного введения в протоколе генной терапии. В некоторых вариантах осуществления в протоколе генной терапии могут также использоваться диапазоны концентрации от примерно 500 нг до примерно 50 мг, от примерно 1 мкг до примерно 2 мг, от примерно 5 до примерно 500 мкг и от примерно 20 до примерно 100 мкг ДНК или более.

Описываемые в настоящем документе терапевтические полинуклеотиды и полипептиды могут быть доставлены с применением средств генной доставки. Средство доставки генов может быть вирусного или невирусного происхождения (см. обзоры Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51; Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5:845; Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1:185; and Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148). Экспрессия таких кодирующих последовательностей может быть индуцирована с применением эндогенных промоторов и/или энхансеров млекопитающих или гетерологичных промоторов и/или энхансеров. Экспрессия кодирующей последовательности может быть конститутивной либо регулируемой.

Векторы вирусного происхождения для доставки желаемого полинуклеотида и экспрессии в желаемой клетке хорошо известны на существующем уровне техники. Примеры средств вирусного происхождения включают в себя, не ограничиваясь нижеперечисленным, рекомбинантные ретровирусы (см., например, Договоры о патентной кооперации №№ WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; патенты США Nos. 5219740 и 4777127; патент Великобритании № 2,200,651; и Европейский патент № 0345242), векторы на основе альфавирусов (например, вектора на основе вируса Синдбис, вируса леса Семлики (АТСС VR-67; ATCC VR-1247), вируса Росс-Ривер (АТСС VR-373; АТСС VR-1246) и вируса венесуэльского энцефалита лошадей (АТСС VR923; АТСС VR-1250; АТСС VR 1249; АТСС VR-532)), а также векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV) (см., например, Договора о патентной кооперации №№ WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 and WO 95/00655). Введение ДНК, связанной с убитым аденовирусом, описанное, например, в Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147, также может быть применено.

Кроме того, можно использовать невирусные средства и способы, включая, не ограничиваясь нижеперечисленным, поликатионные конденсированные ДНК, связанные или не связанные с убитыми аденовирусами самими по себе (см., например, Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147); лигандассоциированные ДНК (см. например, Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264:16985); эукариотические средства доставки (см. например, патент США № 5814482; Договора о патентной кооперации №№ WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/307 63; and WO 97/42338) и нейтрализацию заряда нуклеиновых кислот или слия

- 22 043404 ние с клеточными мембранами. Можно также использовать депротеинизированную ДНК. Примеры способов введения депротеинизированнои ДНК описаны в Договоре о патентной кооперации № WO 90/11092 and патенте США № 5580859. Липосомы, которые могут выступать в качестве средств генной доставки, описаны в патенте США № 5422120; Договорах о патентной кооперации №№ WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445 и европейском патенте № 0524968. Дополнительные подходы описаны в Philip, Mol. Cell. Biol. (1994) 14:2411, и в Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:1581.

Конкретный режим дозировки, т.е. доза, расписание и повторность, используемый в способе, описанном в настоящем документе, будет зависеть от конкретного субъекта и истории болезни данного субъекта.

В некоторых вариантах осуществления более одного биспецифического антитела или комбинация биспецифического антитела и другого подходящего терапевтического агента могут быть введены субъекту, нуждающемуся в лечении. Биспецифическое антитело также может использоваться совместно с другими агентами, которые служат для усиления и/или дополнения эффективности агентов.

Эффективность лечения в отношении целевого заболевания/расстройства может быть оценена с помощью способов, хорошо известных на существующем уровне техники.

Комплекты для использования при лечении целевых заболеваний

Настоящее изобретение также относится к комплектам для использования в целях смягчения целевых заболеваний или расстройств. Эти комплекты могут включать один или несколько контейнеров, содержащих одно или несколько биспецифических антител и/или одну или несколько изолированных нуклеиновых кислот или наборов нуклеиновых кислот, описанных в настоящем документе.

В некоторых вариантах осуществления комплект может содержать инструкции по применению в соответствии с любым из описанных в настоящем документе способов. Включенные в комплект инструкции могут содержать описание введения биспецифического антитела для лечения, задержки наступления или облегчения целевого заболевания, например, НАО или тромбоза. Этот комплект может дополнительно включать описание выбора субъекта, подходящего для лечения, основанного на определении того, имеет ли этот субъект целевое заболевание. В других вариантах осуществления инструкции содержат описание введения антитела субъекту, подвергающемуся риску развития целевой болезни.

Инструкции, касающиеся использования биспецифического антитела, описанного в настоящем документе, как правило, содержат информацию о дозировке, графике введения и способе введения при предполагаемом лечении. Контейнеры могут представлять собой единичные дозы, упаковки крупных партий (например, многодозовые упаковки) или субдозовые упаковки. Инструкции, поставляемые в комплекте согласно изобретению, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше (например, бумажный лист, вложенный в комплект), однако также допустимы машинносчитываемые инструкции (например, инструкции, записанные на магнитном или оптическим диске).

На этикетке или вкладыше указывается, что композиция используется для лечения, задержки наступления и/или облегчения целевого заболевания или расстройства. Инструкции могут касаться использования любого из описанных в настоящем документе способов.

Комплекты этого изобретения имеют подходящую упаковку. Подходящая упаковка включает в себя, не ограничиваясь нижеперечисленным, флаконы, бутылки, банки, гибкие упаковки (например, запечатанные майларовые или пластиковые пакеты) и т.п. Также предусмотрена упаковка для использования в сочетании с конкретным устройством, таким как ингалятор, устройство для назального введения (например, распылитель) или инфузионное устройство, например мини-насос. Комплект может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или флакон с крышкой, которую можно проткнуть иглой для подкожной инъекции). Контейнер также может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или флакон с крышкой, которую можно проткнуть иглой для подкожной инъекции). По крайней мере один из активных агентов в композиции представляет собой биспецифическое антитело, описанное в настоящем документе.

В комплекты могут необязательно входить дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретируемые сведения. Как правило, комплект включает контейнер и этикетку или вкладыш(и), находящиеся на контейнере или прикрепленные к нему. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет статьи изделия промышленного производства, включающие содержимое комплектов, описанных выше.

Общее описание способов

Практика настоящего изобретения будет использовать, если не указано иное, обычные способы молекулярной биологии (включая способы рекомбинантной технологии), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, не выходящие за пределы существующего уровня техники. Такие методы в полной мере разъясняются в литературе, например, в Molecular Cloning: A Laboratory Manual, издание второе (Sambrook, et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle,

- 23 043404

J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and С. С Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel, et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).

Предполагается, что квалифицированный специалист в данной области техники может без дополнительных творческих усилий, основываясь на вышеприведенном описании, использовать настоящее изобретение в полной мере. Поэтому следующие конкретные варианты осуществления должны толковаться как исключительно иллюстративные, но не ограничивающие остальное описание изобретения каким бы то ни было образом. Все публикации, упоминаемые в настоящем документе, включены посредством ссылки для целей или по существу предмета, на который дается ссылка.

Пример 1. Конструкция и характеристика образца биспецифических антител, связывающих pKal и фактор XIIa

Несколько взятых для примера биспецифических антител против pKal и FXIIa, включая клоны Х0120-А01, Х0120-С01, Х0120-Е01, X0120-G01, Х0121-А03, Х0121-С01, Х0121-Е01, X0121-G01, Х0122А01 и Х0122-С01 были сконструированы с применением DX-2930 и одного из анти-FXIIa клонов 559CM0071-F06, 559С-М0184-В04, 559C-MO179-DO4, 559С-М0181-С02 и 559C-M0180-G03 в качестве антител-предшественников. См. табл. 2 ниже:

Таблица 2. Компоненты образцов биспецифических антител

Клоны биспецифических антител	Фрагмент анти-pKal	Фрагмент анти-FXIIa
Х0120-А01	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559C-M0184-B04 (H^L), присоединенный к Cконцу тяжелой цепи DX-2930
Х0120-С01	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559C-M0184-B04 (L^H), присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
Х0120-Е01	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559C-M0179-D04 (H->L) , присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
X0120-G01,	DX-2930 dgG)	scFv клона 559C-M0179-D04 (L->H) , присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
Х0121-А03	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559С-М0181-С02 (H->L) , присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
Х0121-С01	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559С-М0181-С02 (L->H) , присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
Х0121-Е01	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559C-M0180-G03 (H->L) , присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
X0121-G01	DX-2930 dgG)	scFv клона 559C-M0180-G03 (ЪАН), присоединенный к С-
		концу тяжелой цепи DX-2930
Х0122-А01,	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559C-M0071-F06 (H^L), присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930
Х0122-С01	DX-2930 (TgG)	scFv клона 559C-M0071-F06 (ЪАН), присоединенный к Сконцу тяжелой цепи DX-2930

- 24 043404

Среди анти-FXIIa клонов 559C-M0071-F06 является клоном-предшественником, 559С-М0184-В04 получен путем созревания аффинности HCDR1+2, а клоны 559C-M0179-D04, 559С-М0181-С02 и 559CM0180-G03 получены в результате созревания аффинности легкой цепи.

Все клоны-образцы биспецифических антител, перечисленные в табл. 2 выше, являются тетравалентными молекулами, включающими четыре полипептидные цепи, в том числе две полипептидные цепи легкой цепи DX-2930 (SEQ ID NO: 10, приведена выше), и две химерных полипептидных цепи тяжелой цепи DX-2930 (за исключением лизинового остатка в шарнирном домене константной цепи), соединенные с scFv-цепью одного из клонов FXIIa. scFv-цепь каждого из пяти анти-FXIIa клонов была синтезирована как в ориентации тяжелая-легкая (H^L), так и в ориентации легкая-тяжелая (L^H). Во всех примерах scFv-цепей использовался внутренний линкер (GGGGS)₄ (SEQ ID NO: 23). Цепи scFv были сконструированы таким образом, что первые две аминокислоты (RT) клонов с ориентацией легкаятяжелая стояли в начале константного участка до начала линкерной последовательности. Клоны в ориентации тяжелая-легкая содержали только первую аминокислоту (R) из константного участка легкой цепи до стоп-кодонов.

Ниже перечислены аминокислотные последовательности химерных полипептидов каждого из образцов биспецифических антител:

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0120-А01 (SEQ ID NO: 11):

MGWSCIILFLVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA

PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP

RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFY SMHWVRQAPGKGLEWVSRIYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC TRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGE PASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKIS RVEAEDVGVYYCMQALQT PWT FGQGTKVEIKR

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0120-С01 (SEQ ID NO: 12):

MG^SCYYFFFVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA

PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHS NGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTPWTFGQGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG FTFSFYSMHWVRQAPGKGLEWVSRIYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED TAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

- 25 043404

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0120-Е01 (SEQ ID NO: 13):

MGWSCTTYFiVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA

PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGY IMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC TRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLSVAPGE PASISCRSSQSLLHRNGHNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPERFSGSGSGTDFTLRIS RVEAEDVGVYYCMQALQARTFGQGTKVEIKR

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела X0120-G01 (SEQ ID NO: 14):

MWSCTTLFLVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLSVAPGEPASISCRSSQSLLHR NGHNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPERFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCMQA LQARTFGQGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF TFSGYIMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDT AVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0121-А03 (SEQ ID NO: 15):

MGiVSCTTLFLVATATGAASEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGY IMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC TRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGE PASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKIS RVEAEDVGVYYCMQALQTRTFGQGTKVEIKR

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0121-С01 (SEQ ID NO: 16):

MG^SCTTLFLVATAT’GAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP

- 26 043404

CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHS NGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTRTFGQGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF TFSGYIMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDT AVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0121-Е01 (SEQ ID NO: 17):

MGWSCIJLFLVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGY IMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC TRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGE PASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQIMIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKIS RVEAEDVGVYYCMQALQTPRTFGQGTKVEIKR

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела X0121-G01 (SEQ ID NO: 18):

MGiVSCTJLFLVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHS NGYNYLDWYLQKPGQSPQIMIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTPRTFGQGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG FTFSGYIMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED TAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0122-А01 (SEQ ID NO: 19):

MGVSCYYFFFVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGY IMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC TRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGE PASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKIS RVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKR

- 27 043404

Химерный полипептид тяжелая цепь-scFv клона биспецифического антитела Х0122-С01 (SEQ ID NO: 20):

MG^SCYYYFYVATATGAHSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQA PGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVP RRDEFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHS NGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTPWTFGQGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG FTFSGYIMAWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED TAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWGKGTTVTVSS

Для построения экспрессирующей кассеты для образцов биспецифических антител, описанных выше, кодирующие последовательности тяжелых и легких цепей DX-2930 были клонированы в вектор pRh1-CHO, модифицированный вставкой С-концевого SGGGS-линкера, соединенного с кодирующей последовательностью scFv. Линкерный участок содержал сайт рестрикции BamHI для эффективного клонирования последовательностей scFv. Пять анти-фактор XIIa клонов были выбраны для вставки в конструкцию через сайты рестрикции BamHI/XbaI.

Нуклеотидные последовательности, кодирующие биспецифические антитела (в формате цистронного оперона), приводятся ниже:

Х0120-А01 (SEQ ID NO: 24)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC

- 28 043404

TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGCAGCCTG AGACTGTCTTGCGCTGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCTTCTACAGCATGCACTGGGTCCGACAGG CTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCCGGATCTACCCCTCTGGCGGCGTGACCAAATACGC CGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAG ATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGGCAGCGGTACAGAGGCC CCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACAACCGTGACCGTGTCTAGCGGAGG CGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGTGGTGGCGGAAGTGGCGGAGGCGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCTGCCAGCATCAGCTGCAGAA GCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACTGGTATCTGCAGAAGCCCGG CCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAGCGGCGTGCCCGACAGATTC AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGG GCGTGTACTATTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCCCTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGA AAT CAAGAGAT GAAT C TAGA

Х0120-С01 (SEQ ID NO: 25)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

- 29 043404

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG

- 30 043404

CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCT GCCAGCATCAGCTGCAGAAGCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACT GGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAG CGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGG GTCGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCCCTGGACCTTCG GCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGTGGAAGCGG AGGCGGAGGAAGTGGCGGAGGCGGCTCTGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGAGGCGGACTGGTG CAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGTCTTGCGCTGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCTTCTACAGCA TGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCCGGATCTACCCCTCTGG CGGCGTGACCAAATACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACCC GGCAGCGGTACAGAGGCCCCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGT GACCGTGTCCAGCTGAATCTAGA

Х0120-Е01 (SEQ ID NO: 26)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA

- 31 043404

AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTG AGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCATGGCCTGGGTCCGACAGG CTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGGCGGCATCACCGTGTACGC CGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAG ATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGGCAGCGGTACAGAGGCC CCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGTGACCGTGTCTAGCGGAGG CGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGTGGTGGCGGAAGTGGCGGCGGAGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGAGCGTGGCACCTGGCGAGCCTGCCAGCATCAGCTGCAGAA GCAGCCAGAGCCTGCTGCACCGGAACGGCCACAACTACCTGGACTGGTATCTGCAGAAGCCCGG CCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAGCGGCGTGCCCGAGAGATTC AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGCGGATCAGCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGG GCGTGTACTATTGCATGCAGGCTCTGCAGGCCAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAAT CAAGAGAT GAAT C TAGA

- 32 043404

X0120-G01 (SEQ ID NO: 27)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC

CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC

TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA

CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC

CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC

AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT

ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG

CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA

TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC

CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT

TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA

GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA

AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG

AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA

AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC

TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT

CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC

CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT

GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT

GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC

TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG

TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC

CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC

ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT

GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT

AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC

TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC

CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC

CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG

- 33 043404

CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG

GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC

CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC

GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT

ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG

CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG

CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT

CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG

CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG

TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA

TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG

CGGAGGATCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGAGCGTGGCACCTGGCGAGCCT

GCCAGCATCAGCTGCAGAAGCAGCCAGAGCCTGCTGCACCGGAACGGCCACAACTACCTGGACT

GGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAG

CGGCGTGCCCGAGAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGCGGATCAGCCGG

GTCGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCTCTGCAGGCCAGAACCTTCGGCC

AGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGTGGAAGCGGAGG

CGGAGGAAGTGGCGGAGGCGGCTCTGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAG

CCTGGCGGCAGCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCATGG

CCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGGCGG

CATCACCGTGTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAAC

ACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACCCGGC

AGCGGTACAGAGGCCCCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGTGAC

CGTGTCCAGCTGAATCTAGA

Х0121-А03 (SEQ ID NO: 28)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC

CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC

TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA

CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC

CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC

AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT

ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG

CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA

- 34 043404

TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAGGCAGCCTG AGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCATGGCCTGGGTCCGACAGG CTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGGCGGCATCACCGTGTACGC CGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAG ATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGGCAGCGGTACAGAGGCC CCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGTGACCGTGTCTAGCGGAGG CGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGTGGTGGCGGAAGTGGCGGCGGAGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCTGCCAGCATCAGCTGCAGAA GCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACTGGTATCTGCAGAAGCCCGG CCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAGCGGCGTGCCCGACAGATTC AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGG GCGTGTACTATTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAAT CAAGAGAT GAAT C TAGA

- 35 043404

Х0121-С01 (SEQ ID NO: 29)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC

CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC

TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA

CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC

CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC

AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT

ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG

CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA

TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC

CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT

TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA

GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA

AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG

AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA

AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC

TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT

CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC

CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT

GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT

GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC

TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG

TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC

CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC

- 36 043404

ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC С С T G G G САС С CAGAC C TAGAT С T G СAAC G T GAAC CACAAG С С С T С СAACAC CAAAG T G GACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCT GCCAGCATCAGCTGCAGAAGCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACT GGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAG CGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGG GTCGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCGGACCTTCGGCC AGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGTGGAAGCGGAGG CGGAGGAAGTGGCGGAGGCGGCTCTGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAG CCTGGCGGCAGCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCATGG CCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGGCGG CATCACCGTGTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAAC ACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACCCGGC AGCGGTACAGAGGCCCCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGTGAC CGTGTCCAGCTGAATCTAGA

Х0121-Е01 (SEQ ID NO: 30)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

- 37 043404

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG

- 38 043404

TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA

TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG

CGGAGGATCCGAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAGGCAGCCTG

AGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCATGGCCTGGGTCCGACAGG

CTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGGCGGCATCACCGTGTACGC

CGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAG

ATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGGCAGCGGTACAGAGGCC

CCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGTGACCGTGTCTAGCGGAGG

CGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGTGGTGGCGGAAGTGGCGGCGGAGGCAGCGACATCCAG

ATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCTGCCAGCATCAGCTGCAGAA

GCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACTGGTATCTGCAGAAGCCCGG

CCAGTCCCCCCAGATCATGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAGCGGCGTGCCCGACAGATTC

AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGG

GCGTGTACTATTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCCCAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGA

AAT CAAGAGAT GAAT C TAGA

X0121-G01 (SEQ ID NO: 31)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC

CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC

TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA

CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC

CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC

AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT

ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG

CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA

TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC

CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT

TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA

GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA

AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG

AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA

AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC

TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT

CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC

- 39 043404

CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCT GCCAGCATCAGCTGCAGAAGCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACT GGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCCAGATCATGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAG CGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGG GTCGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCCCAGAACCTTCG GCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGTGGAAGCGG AGGCGGAGGAAGTGGCGGAGGCGGCTCTGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTG CAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCA TGGCCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGG CGGCATCACCGTGTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACCC GGCAGCGGTACAGAGGCCCCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGT GACCGTGTCCAGCTGAATCTAGA

- 40 043404

Х0122-А01 (SEQ ID NO: 32)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC

CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC

TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA

CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC

CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC

AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT

ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG

CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA

TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC

CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT

TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA

GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA

AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG

AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA

AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC

TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT

CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC

CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT

GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT

GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC

TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG

TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC

CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC

ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT

GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT

AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC

TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC

CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC

CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG

CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG

GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC

CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC

- 41 043404

GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT

ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAGGCAGCCTG AGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCATGGCCTGGGTCCGACAGG CTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGGCGGCATCACCGTGTACGC CGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAG ATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCCGGCAGCGGTACAGAGGCC CCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGTGACCGTGTCTAGCGGAGG CGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGTGGTGGCGGAAGTGGCGGCGGAGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCTGCCAGCATCAGCTGCAGAA GCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACTGGTATCTGCAGAAGCCCGG CCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAGCGGCGTGCCCGACAGATTC AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGG GCGTGTACTATTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCCCTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGA

AAT CAAGAGATGAATC TAGA

Х0122-С01 (SEQ ID NO: 33)

ATGGGATGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCTACAGCCACAGGCGTGCACTCCGA

CATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACC

TGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCC

CCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTC

TGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTAC

TACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGA

CCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGC

CTCCGTGGTCTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGAC

AACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCT

ACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTG

CGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGA TGAGGCGCGCCTTCGCGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCCCCCCCC CCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTT TCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGA

- 42 043404

GCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGA

AGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGG

AACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAA

AGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTC TTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGAT CTGGGGCCTCGGTGCAGATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCC CGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGGAT GGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACAGCCACAGGCGCTCACTCCGAGGTGCAATTGCT GGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGC TTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGG TGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCAC CATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGAC ACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCT GGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCCTCTGTGTTCCCGCT AGCACCCTCCAGCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCTGCTCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTAC TTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCATACCTTCC CTGCCGTGCTCCAGTCCTCCGGCCTGTACAGCCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCCTCCAGCTC CCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAAGTGGACAAG CGGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACACCCACACCTGTCCCCCTTGCCCTGCCCCTGAACTGCTGG GCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCC CGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTTAATTGGTAC GTGGACGGCGTGGAAGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCT ACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTG CAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCTCGCGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT CCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGG CCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTG TACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGA TGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCTCCCGGCAAGTCTGG CGGAGGATCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAGCCT GCCAGCATCAGCTGCAGAAGCAGCCAGAGCCTGCTGCACAGCAACGGCTACAACTACCTGGACT GGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCAGCAACAGAGCCAG CGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCCGG GTCGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCCCTGCAGACCCCCTGGACCTTCG GCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGTGGAAGCGG AGGCGGAGGAAGTGGCGGAGGCGGCTCTGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTG CAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGGCTACATCA TGGCCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTACCCCAGCGG CGGCATCACCGTGTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACCC GGCAGCGGTACAGAGGCCCCAAGTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCACCACCGT GACCGTGTCCAGCTGAATCTAGA

Были сконструированы экспрессирующие pRhl-плазмиды, кодирующие вышеуказанные биспецифические антитела. После стерилизующей фильтрации через 0,2-мкм фильтр плазмиды трансфецировали в 60 мл d1 культуры клеток Expi293F™, культивируемые в среде экспрессии Expi293™ с применением ExpiFectamine™ в качестве трансфекционного реагента, как описано в протоколе LifeTech (Life Technologies™, Карлсбад, Калифорния). Усилители трансфекции 1 и 2 Expifectamine™ добавляли на 2-й день культивирования, как описано в протоколе LifeTech. Культуры инкубировали при 37С, 8% СО2, 140 об/мин в течение 7-го дня. Культуры затем в собирали с помощью центрифугирования с последующей стерилизующей фильтрацией через фильтр 0,2 мкм и хранили при 4°С. Клоны были серийно очищены на колонке с протеином А.

Различные концентрации биспецифических антител инкубировали с индивидуальными образцами

- 43 043404

FXIIa и pKal, и способность этих протеаз расщеплять пептидный субстрат отслеживалась во времени путем измерения изменений флуоресценции химического зонда, ковалентно прикрепленного к пептидному субстрату. Наклоны этих кинетических кривых эквивалентны скоростям ферментативного протеолиза, зависимость которых от концентрации ингибитора затем отображали на графике. Результирующие графики затем аппроксимируются уравнением прочно связывающегося ингибитора (Уравнение 1) с помощью нелинейной регрессии, чтобы получить кажущиеся константы ингибирования (Ki¹^).

([£] - [/] -К°^№) + J([E] -[7] -К“^№У - 4[Е]

V = I/---------------² [Уравнение 1]

На фиг. 1 и 2 показаны графики ингибирования активности pKal и FXIIa для каждого из испытанных биспецифических антител. Все испытанные клоны были способны ингибировать как pKal, так и FXIIa. Ниже в табл. 3 перечислены Ki^ по pKal и FXIIa для каждого из биспецифических антител.

Таблица 3. Кажущиеся константы ингибирования биспецифических антител

Биспецифическое антитело	_К±каж _{по рКа1} (нМ)	_К±каж _{по FXIIa} (нМ)
Х120-А01	0,1376 +/- 0,0206	0,0515 +/- 0,0186
Х121-Е01	0,1593 +/- 0,0245	0,6114 +/- 0,0714
Х122-А01	0,1693 +/- 0,0242	6,0467 +/- 0,6497
Х122-С01	0,1610 +/- 0,0221	5,6900 +/- 0,6512
Контрольное IgG M71-F06	Нет данных	0,8758 +/- 0,0579

Пример 2. Конструкция и характеристика образцов биспецифических антител, связывающих pKal и фактор XIIa

Еще одна серия образцов биспецифических антител против pKal и FXIIa была сконструирована следующим образом. IgG-фрагмент молекулы была той же, что и в примере 1, т.е. DX-2930. Для фрагмента анти-FXIIa были выбраны 36 изолятов и преобразованы в фрагменты scFv как в ориентации легкая/тяжелая, так и тяжелая/легкая. Фрагменты scFv были соединены с DX-2930 с помощью линкера SGGGS (SEQ ID NO: 22). При конструировании фрагментов scFv для соединения анти-FXIIa вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей друг к другу использовался линкер (G₄S)₄. Ниже приводятся последовательности биспецифических антител.

Сконструированные биспецифические молекулы показали анти-pKal активность, в целом соответствующую значениям, определенным ранее для DX-2930 (табл. 4). Некоторые значения продемонстрировали меньшую активность против pKal, возможно, из-за ошибок при определении концентрации или, возможно, из-за агрегирования. Анти-FXIIa активность компонента scFv, была в основном ниже, чем ранее определенная величина, возможно, из-за внутренней нестабильности, связанной с фрагментами scFv (табл. 4). Активность биспецифических молекул в анализе с применением плазмы показала заметное улучшение по сравнению с DX-2930 и анти-FXIIa антител IgG. В этом тесте DX-2930 показало активность в диапазоне от 70 до 100 нМ, в то время как антитело-предшественник против FXIIa продемонстрировало ингибирование порядка ~100 нМ. Группа испытанных биспецифических молекул, продемонстрировала ингибирование в диапазоне 1-10 нМ (табл. 5).

- 44 043404

Таблица 4. Ki, кажущаяся, определенная для 72 биспецифических анти-pKal+анти-FXIIa антител против соответствующих мишеней. В качестве контроля использовались DX-2930 и лучшее антитело против FXIIa (559C-M0292-D07).

	Ориентац ия scFv	Биспецифическ ИЙ изолят	FXII- название	Исправлены ая анти- pKal Ki , каж (рМ)	Исправленн ая анти- FXIIa Ki, каж (рМ)
1	H^L	620I-X136-C07	559C- M0177-B11	182	699
	L^H	620I-X138-A08	559C- M0177-B11	920	357
2	H^L	620I-X136-B02	559C- M0177-C12	210	2857
	L^H	620I-X139-A12	559C- M0177-C12	2053	4084
3	H^L	620I-X137-B08	559C- M0178-A08	312	409
	L^H	620I-X142-A04	559C- M0178-A08	162	1233
4	H^L	620I-X142-B11	559C- M0179-A03	622	7719
	L^H	620I-X138-B01	559C- M0179-A03	169	6628
5	H^L	620I-X136-C01	559C- M0182-B04	173	957
	L^H	620I-X138-A12	559C- M0182-B04	405	1925

- 45 043404

6	H^L	620I-X136-A12	559C- M0182-D04	234	304
	L^H	620I-X138-A02	559C- M0182-D04	206	288
7	H^L	620I-X136-A05	559C- M0182-H01	179	111
	L^H	620I-X138-C07	559C- M0182-H01	196	314
8	H^L	620I-X136-E07	559C- M0182-H04	190	312
	L^H	620I-X142-B02	559C- M0182-H04	156	955
9	H^L	620I-X136-F11	559C- M0183-B12	201	235
	L^H	620I-X142-A05	559C- M0183-B12	160	2140
10	H^L	620I-X136-C09	559C- M0183-C03	173	90
	L^H	620I-X138-B10	559C- M0183-C03	75	58
11	H^L	620I-X136-C08	5590- M0183-D08	216	1231
	L^H	620I-X139-A11	559C- M0183-D08	235	3835
12	H^L	620I-X136-D05	559C- M0183-H08	55	13
	L^H	620I-X138-D04	559C- M0183-H08	215	79
13	H^L	620I-X136-G08	559C- M0184-B04	176	28
	L^H	620I-X142-B07	559C- M0184-B04	224	775
14	H^L	620I-X142-A11	559C- M0184-D01	158	195
	L^H	620I-X138-G12	559C-	186	766

- 46 043404

			M0184-D01
15	H^L	620I-X142-A10	559C- M0184-E06	175	389
	L^H	620I-X138-D03	559C- M0184-E06	79	344
16	H^L	620I-X137-C08	559C- M0184-F12	153	34
	L^H	620I-X142-E02	559C- M0184-F12	162	186
17	H^L	620I-X136-E05	559C- M0191-A03	158	172
	L^H	620I-X138-B06	559C- M0191-A03	330	405
18	H^L	620I-X136-A09	559C- M0191-B11	190	X
	L^H	620I-X138-A06	559C- M0191-B11	145	X
19	H^L	620I-X137-A10	559C- M0191-C09	195	205
	L^H	620I-X139-B10	559C- M0191-C09	247	189
20	H^L	620I-X136-A04	559C- M0191-E04	171	230
	L^H	620I-X138-D06	559C- M0191-E04	199	132
21	H^L	620I-X136-C11	559C- M0191-E09	154	38
	L^H	620I-X138-B07	559C- M0191-E09	246	135
22	H^L	620I-X136-A02	5590- M0191-H09	176	136
	L^H	620I-X139-G02	559C- M0191-H09	171	161
23	H^L	620I-X136-B07	559C- M0191-H10	168	99

- 47 043404

	L^H	620I-X138-E03	559C- M0191-H10	178	122
24	H^L	620I-X136-G05	559C- M0192-A01	179	100
	L^H	620I-X139-D12	559C- M0192-A01	428	383
25	H^L	620I-X136-A01	559C- M0192-A03	135	224
	L^H	620I-X138-C12	559C- M0192-A03	267	697
26	H^L	620I-X136-G10	559C- M0192-D02	171	28
	L^H	620I-X138-D05	559C- M0192-D02	519	139
27	H^L	620I-X136-F07	559C- M0192-D12	183	167
	L^H	620I-X138-A01	559C- M0192-D12	154	465
28	H^L	620I-X142-E09	559C- M0192-F01	174	163
	L^H	620I-X138-D11	5590- M0192-F01	178	443
29	H^L	620I-X136-C05	559C- M0192-F06	150	58
	L^H	620I-X142-A02	559C- M0192-F06	152	63
30	H^L	620I-X136-C04	559C- M0192-F07	205	189
	L^H	620I-X138-F02	559C- M0192-F07	464	794
31	H^L	620I-X136-G04	559C- M0192-G03	179	107
	L^H	620I-X139-G12	559C- M0192-G03	276	252
32	H^L	620I-X136-B11	559C-	172	184

- 48 043404

			M0192-G05
	L^H	620I-X142-D04	559С- M0192-G05	170	414
33	H^L	620I-X136-D06	559С- М0192-Н04	176	84
	L^H	620I-X139-A01	559С- М0192-Н04	146	53
34	H^L	620I-X136-D12	559С- М0192-Н11	179	63
	L^H	620I-X138-F05	559С- М0192-Н11	214	147
35	H^L	620I-X136-A11	559С- M0292-D07	199	193
	L^H	620I-X139-E05	559С- M0292-D07	196	172
36	H^L	620I-X136-C12	559С- М0177-А06	217	1567
	L^H	620I-X138-E05	559С- М0177-А06	186	245
37	Планшет 1		DX-2930	160	X
	Планшет 2		DX-2930	138	X
38	Планшет 1		559C- M292-D07	X	36
	Планшет 2		559C- M292-D07	X	38

Таблица 5. Сравнение изолятов-предшественников анти-FXIIa и анти-pKal/aHTu-FXIIa биспецифических молекул в тесте с активированной плазмой. Плазму разбавляли 1:40. К разбавленной плазме добавляли ингибиторы и 2,5% эллаговую кислоту. Через 2 мин активацию тушили путем добавления кукурузного ингибитора трипсина. Активность pKal измеряли путем добавления про-флуоресцентного субстрата.

		Ингибирование плазмы
		IgG	Биспецифическо е антитело
ИЗолят анти- FXII IgG	ИЗолят биспецифическог о антитела	IC50 (пМ)	IC50/Ki (пМ)
559C-M0192-A03	620I-X0136-A01	514	52
559C-M0192-FO6	620I-X0136-C05	304	2 . б
559C-M0192-E09	620I-X0136-C11	31	1.8
559C-M0192-H11	620I-X0136-D12	101	3
559C-M0192-A01	620I-X0136-G05	198	8

Для дальнейших анализов были отобраны пять образцов-кандидатов (620I-X0136-D12, 620I-X0136C05, 620I-X0136-C11, 620I-X0136-G05 и 620I-X0136-A01). Из этих пяти лучших кандидатов 620I-X0136A01 был исключен из-за низких значений экспрессии и множественных пиков на гель-фильтрационной хроматографии. Из оставшихся 4 лучших кандидатов каждый изолят содержал разную долю высокомолекулярных агрегатов (16-35%) (фиг. 3). Было определено, что доля агрегатов зависела от концентрации, поэтому была выдвинута гипотеза, что агрегаты являются димерными структурами, взаимодействующими через scFv-домены.

Образец биспецифического антитела, 620I-X0136-D12 (D12) оценили на способность ингибировать активность плазменного pKal с помощью теста на ингибирование плазмы. В кратком изложении, реконструированная плазма, содержащая некоторое количество пре-pKal и FXII в присутствии или отсутствие ВМКГ, была разбавлена 1:40 в тестовом буфере (20 мМ трис-HCl рН 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мм ЭДТА, 0,1% ПЭГ-8000 и 0,1% Тритон Х-100). Концентрации пре-pKal, FXII и ВМКГ эквивалентны их нормальной

- 49 043404 концентрации в плазме. Ингибиторы добавляли к реконструированной плазме в различных концентрациях в 96-луночном микропланшете при комнатной температуре. Затем контактную активацию инициировали добавлением 25% (2,5% конечная концентрация) раствора разбавленной эллаговой кислоты, содержимое перемешали осторожным встряхиванием микропланшета, и инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре, после чего добавили 100 нМ CTI. 10 мкл этой смеси затем перенесли в аналогичный микропланшет, содержащий 80 мкл из тестового буфера, заранее доведенного до 30°С. Этот планшет с разбавлением затем инкубировали еще 5 мин при 30°С, и протеолиз PFR-AMC оценивали как описано выше, но производили перерасчет концентраций ингибитора, отложенных по оси X для кривой, для аппроксимации кривой согласно измененному уравнению Моррисона для прочного связывания ингибиторов (конечное разбавление плазмы составило 1:400). Результаты теста представлены на фиг. 5 (в присутствии одноцепочечного ВМКГ) и фиг. 6 (в отсутствие ВМКГ). Биспецифическое антитело показало лучшие результаты, чем его IgG-предшественники, вместе взятые, особенно в присутствии ВМКГ. С применением уравнения прочно связывающегося ингибитора значения кажущейся Ki для D12 были определены как 8,8 нМ в присутствии ВМК и 2,6 нМ в отсутствие ВМКГ.

Биспецифическое антитело-кандидат 620I-X0136-D12 (D12) было также исследовано на предмет способности задерживать активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) в АЧТВ-анализе по сравнению с анти-FXIIa антителами (D06) и анти-pKal антителами (Н03) (фиг. 7). В кратком изложении, молекулы ингибиторов (или контрольный буфер разведения=25 мМ HEPES, рН 7,5, 125 мм NaCl) добавляли в трех концентрациях (25, 50, 100) к чистой плазме в пропорции 1:1, и уравновешивали при 37°С в течение 5 мин. 2x50, мкл из этой смеси было перенесено в 2 отдельных кюветы (с металлическим шариком) для анализа с помощью системы KC4 Delta. По истечении 60 с 50 мкл АЧТВ-реагента (активатор, Pacific Hemostasis APTT-XL) добавляли во вращающиеся кюветы, а через 180 с после добавления АЧТВ (при t=0 с), добавляли 50 мкл CaCl2. Прибор KC4 Delta фиксировал время коагуляции в секундах.

Биспецифическое антитело-кандидат 620I-X0136-D12 (D12) также испытали на способность ингибировать образование фибрина (фиг. 8).

Последовательности антител: все биспецифические молекулы, описанные в данном Примере, содержали первый полипептид, включающий тяжелую цепь DX-2930, линкер SGGGS и анти-FXIIa scFv в ориентации тяжелая/легкая или легкая/тяжелая. Легкую цепь DX-2 93 0 также экспрессировали с применением того же самого вектора. Для каждого изолята перечислены только последовательности фрагментов, включающих тяжелые цепочки+scFv. >легкая цепь DX-2930 (без сигнальной последовательности)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVP

SRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 46)

Биспецифические молекулы, имеющие своим предшественниками 36 образцов анти-FXIIa IgG: >620I-Х0136-С07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0177-B11 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYIMVWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGYTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 51)

- 50 043404 >620I-Х0138-А08=тяжелая цепь DX2930+559C-M0177-B11 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYIMVWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGYTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 52) >620I-Х0136-В02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0177-C12 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYHMHWVRQAPGKGLEWVSR IVPSGGMTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 53)

620I-Х0139-А12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0177-C12 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYHMHWVRQAPGKG LEWVSRIVPSGGMTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 54) >620I-Х0137-В08=тяжелая цепь DX2930+559C-M0178-A08 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYIMGWVRQAPGKGLEWVSR

- 51 043404

IYPSGGATQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 55) >6201-Х0142-А04=тяжелая цепь DX2930+559C-M0178-A08 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYIMGWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGATQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY

YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 56) >6201-Х0142-В11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0179-A03 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYIMAWVRQAPGKGLEWVSY IYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDIGVYYCMQGRHR PYTFGQGTRLEIKR (SEQ ID NO: 57) >6201-Х0138-В01=тяжелая цепь DX2930+559C-M0179-A03 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDIGVYYCMQGRHRPYTFGQGTRLEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYIMAWVRQAPGKG LEWVSYIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 58)

- 52 043404 >620I-Х0136-C01=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-B04 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMQWVRQAPGKGLEWVSY IYPSGGHTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 59) >620I-Х0138-А12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-B04 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMQWVRQAPGKG LEWVSYIYPSGGHTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 60) >620I-Х0136-А12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-D04 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYTMNWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGKTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 61) >6201-Х0138-А02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-D04 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYTMNWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGKTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 62)

- 53 043404 >6201-Х0136-А05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-H01 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IWPSGGMTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 63) >6201-Х0138-С07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-H01 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYVMHWVRQAPGKG LEWVS SIWPSGGMTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 64) >6201-Х0136-Е07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-H04 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYIMGWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGTTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 65) >6201-Х0142-В02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0182-H04 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT

- 54 043404

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYIMGWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGTTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 66) >620I-Х0136-F11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-B12 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMYWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGITHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 67) >620I-Х0142-А05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-B12 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMYWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGITHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 68) >620I-Х0136-С09=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-C03 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYNMHWVRQAPGKGLEWVSY ISPSGGKTKYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 69)

- 55 043404 >620I-Х0138-В10=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-C03 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYNMHWVRQAPGKG LEWVSYISPSGGKTKYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 70) >620^Х0136-С08=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-D08 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYIMGWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGVTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 71) >620I-Х0139-А11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-D08 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYIMGWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGVTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 72)

- 56 043404 >620I-Х0136-D05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-H08 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYIMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 73) >620I-Х0138-D04=тяжелая цепь DX2930+559C-M0183-H08 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYIMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 74) >6201-Х0136-608=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-B04 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYSMHWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 75) >6201-Х0142-В07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-B04 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYSMHWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 76)

- 57 043404 >620I-Х0142-А11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-D01 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYVMGWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGLTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 77) >620I-Х0138-G12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-D01 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYVMGWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGLTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY

YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 78) >620I-Х0142-А10=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-E06 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMQWVRQAPGKGLEWVSS IWPSGGKTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 79) >620I-Х0138-D03=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-E06 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMQWVRQAPGKG LEWVSSIWPSGGKTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY

YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 80)

- 58 043404 >620I-Х0137-С08=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-F12 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKGLEWVSG IWPSGGRTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 81) >6201-Х0142-Е02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0184-F12 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKG LEWVSGIWPSGGRTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 82) >620I-Х0136-Е05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-A03 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYIMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGNTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 83) >620I-Х0138-В06=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-A03 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYIMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGNTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 84)

- 59 043404 >6201-Х0136-А09=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-B11 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS LRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDE FDIWGQGTMVTVS SA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 85) >6201-Х0138-А06=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-B11 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSWHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 86) >6201-Х0137-А10=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-C09 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSPYIMHWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGATVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 87) >6201-Х0139-В10=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-C09 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSPYIMHWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGATVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 88) >6201-Х0136-А04=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-E04 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL

- 60 043404

SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYIMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGMTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 89) >620I-Х0138-D06=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-E04 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYIMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGMTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 90) >6201-Х0136-С11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-E09 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKGLEWVSV IYPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 91) >6201-Х0138-В07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-E09 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKG LEWVSVIYPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 92)

- 61 043404 >6201-Х0136-А02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-H09 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 93) >6201-Х0139-С02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-H09 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYVMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 94) >6201-Х0136-В07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-H10 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYTMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGFTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 95) >6201-Х0138-Е03=тяжелая цепь DX2930+559C-M0191-H10 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYTMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGFTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 96)

- 62 043404 >6201-Х0136-605=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-A01 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 97) >620I-Х0139-D12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-A01 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY

YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 98) >6201-Х0136-А01=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-A03 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMQWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGMTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 99) >6201-Х0138-С12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-A03 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK

- 63 043404

PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMQWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGMTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 100) >6201-Х0136-010=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-D02 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTIS RDNS KNT LYLQMNS LRAE DTAVYYCAYRRIGVPRRDE EDIWGQG TMVTVS SA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IWPSGGFTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 101) >620I-Х0138-D05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-D02 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKG LEWVSSIWPSGGFTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 102) >6201-Х0136-Р07=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-D12 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYIMQWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGRTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 103)

- 64 043404 >6201-Х0138-А01=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-D12 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYIMQWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGRTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 104) >6201-Х0142-Е09=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-F01 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYNMAWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGMTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT

PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 105) >6201-Х0138-Ы1=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-F01 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYNMAWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGMTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 106) >6201-Х0136-С05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-F06 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IYPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 107)

- 65 043404 >620I-Х0142-А02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-F06 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKG LEWVSSIYPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 108) >620Т-Х0136-С04=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-F07 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMSWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 109) >620I-Х0138-F02=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-F07 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMSWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGVTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 110) >620I-Х0136-G04=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-G03 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYNMVWVRQAPGKGLEWVSR IWPSGGKTTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 111)

- 66 043404 >620ЕХ0139^12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-G03 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYNMVWVRQAPGKG LEWVSRIWPSGGKTTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 112) >6201-Х0136-В11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-G05 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYTMVWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGVTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 113) >620I-Х0142-D04=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-G05 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYTMVWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGVTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 114) >620I-Х0136-D06=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-H04 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGLTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 115)

- 67 043404 >620ЬХ0139-А01=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-H04 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGLTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 116) >620I-Х0136-D12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-H11 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IWPSGGHTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 117) >620I-Х0138-F05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0192-H11 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKG LEWVSSIWPSGGHTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 118) >6201-Х0136-А11=тяжелая цепь DX2930+559C-M0292-D07 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYVMHWVRQAPGKGLEWVSS IWPSGGKTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDAWG

- 68 043404

QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 119) >620I-Х0139-Е05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0292-D07 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYVMHWVRQAPGKG LEWVSSIWPSGGKTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDAWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 120) >620I-Х0136-С12=тяжелая цепь DX2930+559C-M0177-A06 L4H scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYSMHWVRQAPGKGLEWVSR IYPSGGITSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYYYMDVWG KGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 121) >620I-Х0138-Е05=тяжелая цепь DX2930+559C-M0177-A06 H4L scFv

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYSMHWVRQAPGKG LEWVSRIYPSGGITSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 122)

Пример 3. Конструкция и характеристика образцов биспецифических антител, содержащих дисульфидную связь

Для борьбы с агрегированием была спроектирована дисульфидная связь между остатком VH 44 (С44) и остатком VL 100 (С₁₀₀) на scFv-участке 4 клонов: 620I-X0177-A01 (620I-X0173-A11), 620I-X0177C01 (620I-X0173-C07), 620I-X0177-E01 (620I-X0173-E07) и 620I-X0177-G01 (620I-X0173-G11). Гельфильтрационный анализ биспецифических молекул, содержащих scFv-фрагменты с дисульфидными связями, показал резкое сокращение высокомолекулярных пиков, в результате чего эти значения упали до 12% (фиг. 4). Это сокращение агрегирования наблюдалось для всех испытанных концентраций. Биакоранализ этих биспецифических клонов показал сильное специфическое связывание с pKal и FXIIa (фиг. 9). Ингибирование плазмы этими изолятами варьировало в диапазоне от 0,5 до 8 нМ (фиг. 10).

Тест на ингибирование плазмы, описанный в настоящем документе, был выполнен для определения ингибиторной активности биспецифического антитела 620I-X0177-A01. Плазму разбавляли 1:40 и инги

- 69 043404 биторы добавляли к разбавленной плазме. 2,5% (конечная концентрация) раствора разбавленной эллаговой кислоты добавляли к плазме. Спустя примерно 2 мин активацию плазмы тушили добавлением CTI. Активность pKal в плазме измеряли путем добавления профлуоресцентного субстрата, как описано в настоящем документе. Полученные таким образом результаты показаны на фиг. 11.

Ингибиторную активность клона 620I-X0177-A01 сравнили с ингибиторной активностью антителпредшественников самих по себе или в комбинации. Наблюдалось снижение аффинности биспецифических антител по сравнению с IgG-предшественниками (фиг. 12).

Дополнительно способность различных биспецифических антител влиять на АЧТВ была оценена способами, описанными в настоящем документе. Все протестированные антитела показали задержку с АЧТВ, зависящую от дозы (фиг. 13).

Были также проанализированы способности клонов антител 1А01 (анти-FXIIa) and 7A01 (биспецифичных против pKal и FXII) ингибировать отложение фибрина, и результаты показаны на фиг. 14. Наблюдалось ингибирование отложения фибрина, зависящее от дозы.

В целом, согласно тесту на ферментативное ингибирование, значения кажущихся Ki отдельных анти-pKal и анти-FXIIa компонентов образца биспецифического антитела 620I-X0177-A01 примерно совпадали со значениями для молекул-предшественников, чьи кажущиеся Ki составляют 389 и 73 пМ соответственно. Удивительным образом, дополнительные эксперименты в контактно-активированной разбавленной плазме свидетельствуют о том, что данное биспецифическое антитело предотвращало образование pKal более чем в 5 раз эффективнее, чем 1: 1 комбинации антител-предшественников, и более чем в 20 раз эффективнее, чем любое из антител-предшественников само по себе. Эти данные свидетельствуют о том, что биспецифическое антитело было бы уникально мощным в отношении своей способности прерывать петлю положительный обратной связи контактной системы активации.

Последовательности биспецифических антител с scFv-участками, связанными дисульфидными связями, приводятся ниже:

> 620I-X0173-A11 (620I-X0177-A01)=620I-X0136-D12 с модификацией на уровне генов зародышевой линии+оптимизацией гена scFv+дисулвфидной стабилизацией

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IWPSGGHTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 47) >620I-X0173-C07 (620I-X0177-C01)=620I-X0136-C05 с модификацией на уровне генов зародышевой линии+оптимизацией гена scFv+дисульфидной стабилизацией

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IYPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 48)

- 70 043404 > 620I-X0173-E07 (620I-X0177-E01)=620I-X0136-C11 с модификацией на уровне генов зародышевой линии+оптимизацией гена scFv+дисульфидной стабилизацией

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKCLEWVSV IYPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 49) > 620I-X0173-G11 (620I-X0177-G01)= 620I-X0136-G05 с модификацией на уровне генов зародышевой линии+оптимизацией гена scFv+дисульфидной стабилизацией

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 50)

Пример 4. Конструкция и характеристика образцов биспецифических антител с С-концевыми заменами и/или делециями

Образцы биспецифических антител (620I-X0177-A01, 620I-X0177-C01, 620I-X0177-E01, 620IX0177-G01) были оценены на предмет технологичности и выполнимости производства. Образцы биспецифических антител инкубировали при комнатной температуре в течение 48 ч при различных значениях рН перед проведением анализа. Образцы затем разделяли на белковом гель-электрофорезе с ДСН, как показано, например, для биспецифического антитела 620I-X0177-A01 на фиг. 15, или анализировали с помощью гель-фильтрационной хромаграфии (фиг. 16А-16С). В восстанавливающих условиях (фиг. 15, дорожки 2-6) наблюдалось рН-зависимое усиление полос 30 и 50 кДа и ослабление полосы 80 кДа. Появление этих неожиданных полос указывало на то, что биспецифические антитела претерпевали непредвиденное протеолитическое расщепление. Появление тех же 30 кДа-компонент в невосстанавливающих условиях свидетельствует о том, что продукты расщепления являются мономерами (фиг. 15, полосы 6-8). В гель-фильтрационном анализе на 15,7-16,1 мин наблюдались пики, представляющие собой правильно сформированные биспецифические антитела, пик на 17 мин представлял собой DX-2930, а пик на 22 минуте представлял собой расщепленное одноцепочечное антитело (фиг. 16).

Образцы биспецифических антител были сконструированы таким образом, что С-концевой остаток лизина тяжелой цепи IgG1 был удален или заменен на глицин.

Ниже приводятся аминокислотные последовательности первых полипептидов биспецифических антител с делецией С-концевого остатка лизина или заменой С-концевого остатка лизина на остаток глицина тяжелой цепи первого антитела. Эти первые полипептиды могут вступать во взаимодействие с легкой цепью DX-2930.

- 71 043404 > 620I-X0179-A09 (620I-X0177-A01 с делецией IgG-C-концевого Лиз)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKCLEWVSSI WPSGGHTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 141) > 62О1-ХО179-СО1 (620I-X0177-A01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на Гли)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IWPSGGHTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 142) > 62О1-ХО179-ЕО5 (62OI-XO177-CO1 с делецией IgG-C-концевого Лиз)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKCLEWVSSI YPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 143)

- 72 043404 > 620I-X0179-G05 (620I-X0177-C01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на Гли)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IYPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 144) > 620I-X0180-A05 (620I-X0177-G01 с делецией IgG-C-концевого Лиз)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKCLEWVSSI YPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 145) > 620I-X0180-C11 (620I-X0177-G01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на Гли)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 146) > 620I-X0180-E07 (620I-X0177-E01 с делецией IgG-C-концевого Лиз)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKCLEWVSVI YPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 147)

- 73 043404 >620I-X0180-G03 (620I-X0177-E01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на Гли)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

SSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK

PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKCLEWVSV IYPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEIKR (SEQ ID NO: 148)

Каждый из образцов биспецифических антител с делецией С-концевого остатка лизина или заменой С-концевого остатка лизина на остаток глицина тяжелой цепи первого антитела исследовали путем разделения биспецифических антител на гель-электрофорезе в ПААГ с ДСН при t=0 (фиг. 17). Образцы каждого биспецифического антитела, кроме того, концентрировали с применением спин-фильтров Amicon с границей фильтрации 10 кДа до примерно 10 мг/мл в 50 мМ HEPES, рН 7,5 и инкубировали при комнатной температуре в течение 48 ч. Образцы затем были исследованы в ПААГ с ДСН (фиг. 18). В каждом случае удаление или замена С-концевого лизина уменьшали или устраняли отщепление scFv от биспецифического антитела.

Образцы биспецифических антител также исследовали с помощью аналитической гельфильтрационной хроматографии, результаты которой свидетельствуют о том, что удаление или замена С-концевого лизина уменьшает расщепление биспецифических антител (фиг. 19-20). Расщепление биспецифических антител также оценивали инкубацией антител с EndoLysC при 37°С в течение 1 ч с последующим разделением в ПААГ с ДСН (фиг. 21). Белковые полосы 50 кДа соответствовали Fab-фрагменту DX-2930, а полосы 100 кДа соответствовали гомодимеру Fc-scFv, что, в свою очередь, указывает на то, что делеция или замена С-концевого лизина тяжелой цепи снижает расщепление биспецифических антител.

Образцы биспецифических антител с делецией или заменой С-концевого лизина были также исследованы на способность ингибировать pKal, FXIIa и активированную плазму по сравнению с контрольным антителами DX-2930 и DX-4012 (табл. 1, фиг. 22-24). Обнаружено, что каждый из образцов биспецифических антител функционально эквивалентен биспецифическому антителу-предшественнику (биспецифическому антителу без делеции или замены С-концевого лизина тяжелой цепи IgG1). Замена может снизить неоднородность зарядов биспецифического антитела.

- 74 043404

Таблица 6. Сводка по биспецифическим антителам, использованным в биохимических анализах, а также контрольным IgG DX-2930 и DX-4012. Были проведены тесты для оценки ингибирования pKal, ингибирования FXIIa и ингибирования активированной плазмы.

Rмар кир овк а	Xмаркир овка(и ли ΌΧ- Ι	Биспеци фическо е антител о— предшес твенник	Изменен ие на С-конце IgG	Анти-FXIIa scFv	Ингибиро вание pKal Ki, каж (пМ)	Ингибир ование FXIIa Ki, каж (пМ)	Ингибиро вание активиро ванной плазмы, IC50/Ki, каж (пМ)
620 I- R00 52- А01	6201- Х0179- А0 9	6201- Х0177- А01	Лиз- делеция	559С-М0192- Hll GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	225	90	7,6 (Ki)
620 I- R00 52- С01	6201- Х0179- С01	6201- Х0177- А01	Лиз-Гли	559С-М0192- Hll GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	243	108	7,8 (Ki)
620 I- R00 52- Е01	6201- Х0179- Е05	6201- Х0177- С01	Лиз- делеция	559C-M0192- F06 GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	203	99	7,4 (Ki)
620 I- R00 52- G01	6201- Х0179- G05	6201- Х0177- С01	Лиз-Гли	559C-M0192- F06 GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	226	52	8,1 (Ki)
620 I-	6201- Х0180-	6201- Х0177-	Лиз- делеция	559C-M0192- E09	243	92	3,0 (Ki)

R00 52- E03	E07	E01		GL/GO/Дисуль фид H4L scFV
620 I- R00 52- 003	6201- X0180- G03	6201- X0177- E01	Лиз-Гли	559С-М0192- Е09 GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	208	71	2,8 (Ki)
620 I- R00 52- A03	6201- X0180- A05	6201- X0177- G01	Лиз- делеция	559С-М0192- А01 GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	254	116	7,3 (Ki)
620 I- R00 52- G03	6201- X0180- 011	6201- X0177- G01	Лиз-Гли	559С-М0192- А01 GL/GO/Дисуль фид H4L scFV	232	140	9,2 (Ki)
	DX- 2930				127, 131, 151	нет данных	90, 68, 74, 74, 66 (1050)
	DX- 4012				нет данных	θ, 2, 9	279, 291 (1050)

Альтернативно или дополнительно, упомянутый выше Лиз-Арг-мотив (KR) на С-конце анти-FXIIa фрагмента scFv-участков мог быть удален. Ниже приводятся аминокислотные последовательности пер

- 75 043404 вых полипептидов биспецифических антител с делецией С-концевого остатка лизина или заменой Сконцевого остатка лизина на остаток глицина тяжелой цепи первого антитела и делецией С-концевой последовательности лизин-аргинин scFv-фрагмента.

> 62О1-ХО186-СО5 (620I-X0177-A01 с делецией IgG-C-концевого Лиз и удаленным С-концевым KRмотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYVMHWVRQAPGKCLEWVSSI WPSGGHTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 151) > 620I-X0185-C01 (620I-X0177-A01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на глицин и удаленным Сконцевым KR-мотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMI SRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGKSGGGSDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKG LEWVSVIYPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRQRYRGPKYYY YMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO: 152) > 620I-X0186-E05 (620I-X0177-C01 с делецией IgG-C-концевого Лиз и удаленным С-концевым KRмотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKCLEWVSSI YPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 153)

- 76 043404 > 620I-X0185-E01 (620I-X0177-C01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на глицин и удаленным Сконцевым KR-мотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV

YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IYPSGGKTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 154) > 620I-X0186-A05 (620I-X0177-G01 с делецией IgG-C-концевого Лиз и удаленным С-концевым KRмотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKCLEWVSSI YPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 155) > 620I-X0185-A03 (620I-X0177-G01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на глицин и удаленным Сконцевым KR-мотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMHWVRQAPGKCLEWVSS IYPSGGLTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 156)

-

Claims

> 620I-X0186-G07 (620I-X0177-E01 с делецией IgG-C-концевого Лиз и удаленным С-концевым KRмотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKCLEWVSVI YPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWGQ GTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYN YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP WTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 157) > 620I-X0185-G01 (620I-X0177-E01 с заменой IgG-C-концевого Лиз на глицин и удаленным Сконцевым KR-мотивом)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITV YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGGSGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYSMHWVRQAPGKCLEWVSV IYPSGGKTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQRYRGPKYYYYMDVWG QGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY NYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQT PWTFGCGTKVEI (SEQ ID NO: 158)

Вышеупомянутые полипептиды могут взаимодействивать с легкой цепью DX-2930 формируя биспецифическое антитело, которое также находится в пределах объема настоящего изобретения.

Другие варианты осуществления

Все признаки, описанные в данном описании, могут быть объединены в любой комбинации. Каждый признак, раскрываемый в данном описании, может быть заменен альтернативным признаком, служащим той же, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если явно не указано иное, то все раскрываемые признаки являются лишь примером родовой серии эквивалентных или схожих признаков.

Согласно вышеприведенному описанию квалифицированный специалист в данной области техники способен легко определить существенные признаки настоящего изобретения и без отступления от его существа и объема может вносить различные изменения и модификации изобретения, чтобы приспособить его к различным случаям применения и условиям. Таким образом, другие варианты осуществления также включены в формулу изобретения.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Биспецифическое антитело, которое связывает плазменный калликреин (pKal) и фактор XII, включающее первое антитело и второе антитело, где первое антитело связывает pKal и включает первый полипептид, включающий легкую цепь первого антитела, при этом легкая цепь содержит определяющий комплементарность участок (CDR) 1 легкой цепи (LC), содержащий последовательность RASQSISSWLA, LC CDR2, содержащий последовательность KASTLES и LC CDR3, содержащий последовательность QQYNTYWT; и второй полипептид, который включает тяжелую цепь первого антитела, при этом тяжелая цепь содержит CDR1 тяжелой цепи (НС), содержащий HYIMM, НС CDR2, содержащий последовательность GIYSSGGITVYADSVKG, НС CDR3, содержащий последвательность RRIGVPRRDEFDI, причем С-конец первого полипептида или второго полипептида соединен со вторым антителом, которое представляет собой одноцепочечное антитело; и где второе антитело связывает фактор XII и содержит:

(a) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность

- 78 043404

RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPWT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность GYIMA, НС CDR2, содержащий последовательность YIYPSGGITVYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHRNGHNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQART, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность GYIMA, НС CDR2, содержащий последовательность YIYPSGGITVYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(c) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTRT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность GYIMA, НС CDR2, содержащий последовательность YIYPSGGITVYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(d) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPRT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность GYIMA, НС CDR2, содержащий последовательность YIYPSGGITVYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(e) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPRT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность FYSMH, НС CDR2, содержащий последовательность RIYPSGGVTKYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(f) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPWT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность QYVMH, НС CDR2, содержащий последовательность SIWPSGGHTRYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(g) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPWT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность WYVMH, НС CDR2, содержащий последовательность SIYPSGGKTSYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV;

(h) вариабельнй домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPWT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность WYSMH, НС CDR2, содержащий последовательность VIYPSGGKTRYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV; или (i) вариабельный домен легкой цепи, содержащий LC CDR1, содержащий последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD, LC CDR2, содержащий последовательность LGSNRAS, и LC CDR3, содержащий последовательность MQALQTPWT, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий НС CDR1, содержащий последовательность HYVMH, НС CDR2, содержащий последовательность SIYPSGGLTKYADSVKG, НС CDR3, содержащий последовательность QRYRGPKYYYYMDV.
2. Биспецифическое антитело по п.1, отличающееся тем, что второе антитело соединено с С-концом второго полипептида первого антитела.
3. Биспецифическое антитело по п.1 или 2, отличающееся тем, что первое антитело представляет собой IgG.
4. Биспецифическое антитело по п.3, отличающееся тем, что первое антитело представляет собой IgG и включает мутированную тяжелую цепь, у которой по сравнению с аналогом дикого типа Сконцевой остаток лизина удален или заменен.
5. Биспецифическое антитело по п.4, где тяжелая цепь первого антитела содержит С-концевой остаток глицина, а не остаток лизина.
6. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-5, отличающееся тем, что второе антитело не содержит KR-мотива на своем С-конце.
7. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-6, отличающееся тем, что антитело является тетравалентным.
8. Биспецифическое антитело по любому из пп.2-7, отличающееся тем, что второй полипептид включает пептидный линкер между тяжелой цепью первого антитела и вторым антителом.
9. Биспецифическое антитело по п.8, где пептидный линкер представляет собой SGGGS.
10. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что легкая цепь первого антитела содержит константный участок легкой цепи (CL), который представляет собой легкую каппа-

- 79 043404 цепь или легкую лямбда-цепь.
11. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-10, отличающееся тем, что вариабельный участок тяжелой цепи (VH) второго антитела соединен с N-концом вариабельного участка легкой цепи (V_L) второго антитела или VH второго антитела соединен с С-концом V_L второго антитела.
12. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-11, отличающееся тем, что второе антитело включает пептидный линкер между вариабельным участком тяжелой цепи (V_H) и вариабельным участком легкой цепи (V_L).
13. Биспецифическое антитело по п.12, где пептидный линкер представляет собой (G₄S)₄.
14. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-13, отличающееся тем, что между вариабельным участком тяжелой цепи (VH) и вариабельным участком легкой цепи (VL) второго антитела образуется дисульфидная связь.
15. Биспецифическое антитело по п.14, где дисульфидная связь образована между С44 VH и С₁₀₀ V_L, где положения CDR антитела определены согласно схеме нумерации Chothia.
16. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-15, где тяжелая цепь первого антитела содержит вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
17. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-16, отличающееся тем, что тяжелая цепь первого антитела содержит аминокислотную последовательность аминокислотных положений 20-470 последовательности SEQ ID NO: 9, 149 или 150.
18. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-17, где легкая цепь первого антитела содержит вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
19. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-18, где вариабельный участок тяжелой цепи (VH) второго антитела содержит аминокислотную последовательность с любой из SEQ ID NO: 3, 4 и 123-126.
20. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-19, где вариабельный участок легкой цепи (V_L) второго антитела содержит аминокислотные положения 1-111 любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 5-8 и 127 или VL второго антитела содержит любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 5-8 и 127.
21. Биспецифическое антитело по п.1, отличающееся тем, что первый полипептид содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 10, а второй полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей с SEQ ID NO: 11-20, 47-122, 141-148 и 151-158.
22. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-21, где первое антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1, и первое антитело содержит вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 2.
23. Биспецифическое антитело по п.22, где второе антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий любую из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 3, 4 и 123-126; и/или второе антитело включает вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотные положения 1-111 любой из аминокислотных последовательностей с SEQ ID NO: 5-8 и 127.
24. Изолированная нуклеиновая кислота, содержащая первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид по любому из пп.1-23, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид по любому из пп.1-23, где первая нуклеотидная последовательность или вторая нуклеотидная последовательность дополнительно кодируют второе антитело по любому из пп.1-23.
25. Экспрессирующий вектор, содержащий изолированную нуклеиновую кислоту по п.24.
26. Экспрессирующий вектор по п.25, где первая нуклеотидная последовательность и/или вторая нуклеотидная последовательность функционально связаны с промотором.
27. Экспрессирующий вектор по п.26, где первые и вторые нуклеотидные последовательности функционально связаны с одним и тем же или различными промоторами.
28. Фармацевтическая композиция, включающая (i) биспецифическое антитело по любому из пп.123 или изолированную нуклеиновую кислоту по п.25 и (ii) фармацевтически приемлемый носитель.
29. Клетка-хозяин, включающая экспрессирующий вектор по любому из пп.25-27.
30. Способ получения биспецифического антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п.29 в условиях, допускающих экспрессию первого полипептида и второго полипептида, первого антитела и второго антитела; и выделение биспецифического антитела.
31. Применение фармацевтической композиции для лечения заболевания, связанного с системой контактной активации, включающей (i) биспецифическое антитело по любому из пп.1-24 или нуклеиновую кислоту по п.25 и (ii) фармацевтически приемлемый носитель.
32. Применение по п.31, причем заболевание, связанное с системой контактной активации, представляет собой наследственный ангионевротический отек или тромбоз.
33. Применение биспецифического антитела по любому из пп.1-23 для изготовления лекарственного средства для применения в лечении заболевания, связанного с системой контактной активации.

-