EA042734B1 - COMBINATION CONTAINING A PPAR AGONIST AS ELAFIBRANOR AND AN ACETYL-CoA CARBOXYLASE (ACC) INHIBITOR - Google Patents
COMBINATION CONTAINING A PPAR AGONIST AS ELAFIBRANOR AND AN ACETYL-CoA CARBOXYLASE (ACC) INHIBITOR Download PDFInfo
- Publication number
- EA042734B1 EA042734B1 EA201992475 EA042734B1 EA 042734 B1 EA042734 B1 EA 042734B1 EA 201992475 EA201992475 EA 201992475 EA 042734 B1 EA042734 B1 EA 042734B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- fibrosis
- elafibranor
- liver
- nash
- inhibitors
- Prior art date
Links
Description
Настоящее изобретение относится к комбинированной терапии для лечения воспалительных, метаболических, фиброзных и холестатических заболеваний.The present invention relates to combination therapy for the treatment of inflammatory, metabolic, fibrotic and cholestatic diseases.
1-[4-Метилтиофенил]-3-[3,5-диметил-4-карбоксидиметилметилоксифенил]проп-2-ен-1-он (элафибранор или ELA, ранее называвшийся GFT505), раскрытый в патентном документе WO 2004/005233, обладает свойствами, которые могут быть полезны для лечения ряда гастроэнтерологических заболеваний и заболеваний печени, в частности холестатических заболеваний, например ПБХ (первичный билиарный холангит) и ПСХ (первичный склерозирующий холангит), или заболеваний печени, в частности неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП), например неалкогольный стеатогепатит (НАСГ).1-[4-Methylthiophenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-carboxydimethylmethyloxyphenyl]prop-2-en-1-one (elafibranor or ELA, formerly GFT505) disclosed in patent document WO 2004/005233 has properties that may be useful in the treatment of a number of gastroenterological and liver diseases, in particular cholestatic diseases, such as PBC (primary biliary cholangitis) and PSC (primary sclerosing cholangitis), or liver diseases, in particular non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), for example non-alcoholic steatohepatitis (NASH).
Элафибранор был протестирован на клиническую эффективность при НАСГ в годичном исследовании 2b фазы по данным биопсии печени (GFT505-212-7), одном из крупнейших интервенционных исследований, когда-либо проводившихся в отношение НАСГ. На сегодняшний день более чем у 800 пациентов и здоровых добровольцев элафибранор продемонстрировал полезные свойства в отношении НАСГ, включая, в частности, изменение к лучшему маркеров дисфункции печени, включая АЛТ, ACT, υΓΤΦ, ЩФ; улучшение чувствительности к инсулину и гомеостаза глюкозы; благоприятные эффекты на липиды в плазме, в том числе снижение уровня триглицеридов в плазме и X-ЛПНП, а также повышение уровня X-ЛПВП; противовоспалительные свойства; эффективность по гистологическим параметрам НАСГ (стеатоз, воспаление, фиброз) на животных моделях болезней и антифиброзную активность. Отсутствие проблем безопасности было подтверждено в полном токсикологическом анализе до двухлетних исследований канцерогенности. В настоящее время элафибранор оценивается в 3 фазе клинических исследований для лечения НАСГ. Во 2 фазе клинических исследований также запланирована оценка данной молекулы для лечения ПБХ.Elafibranor was tested for clinical efficacy in NASH in a one-year phase 2b liver biopsy study (GFT505-212-7), one of the largest intervention studies ever conducted for NASH. To date, in more than 800 patients and healthy volunteers, elafibranor has demonstrated beneficial properties for NASH, including but not limited to improvement in markers of liver dysfunction including ALT, ACT, υΓΤΦ, ALP; improved insulin sensitivity and glucose homeostasis; beneficial effects on plasma lipids, including a reduction in plasma triglycerides and LDL-X, and an increase in HDL-X; anti-inflammatory properties; efficacy on histological parameters of NASH (steatosis, inflammation, fibrosis) in animal models of disease and antifibrotic activity. The absence of safety concerns was confirmed in a full toxicological analysis prior to two years of carcinogenicity studies. Elafibranor is currently being evaluated in Phase 3 clinical trials for the treatment of NASH. Phase 2 clinical trials are also scheduled to evaluate this molecule for the treatment of PBC.
Ввиду своего хорошего терапевтического и фармакологического профиля элафибранор является весьма перспективной молекулой, которая потенциально может использоваться в комбинированных фармакологических подходах для нацеливания на параллельные или комплементарные ключевые пути, вовлеченные в большое количество воспалительных, метаболических, фиброзных и холестатических заболеваний.Due to its good therapeutic and pharmacological profile, elafibranor is a very promising molecule that can potentially be used in combined pharmacological approaches to target parallel or complementary key pathways involved in a large number of inflammatory, metabolic, fibrotic and cholestatic diseases.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Настоящее изобретение относится к комбинированному лекарственному препарату, содержащему:The present invention relates to a combination drug containing:
(i) агонист PPAR, в частности соединение по формуле (I) или его фармацевтически приемлемую соль:(i) a PPAR agonist, in particular a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
где Y1 представляет собой галоген, группу Ra или Ga-Ra;where Y 1 represents a halogen, a group Ra or Ga-Ra;
A представляет собой группу CH=CH или CH2-CH2;A represents a CH=CH or CH2-CH2 group;
Y2 представляет собой группу Gb-Rb;Y2 is a Gb-Rb group;
Ga и Gb, идентичные или отличающиеся друг от друга, представляют собой атом кислорода или серы;Ga and Gb, identical or different from each other, represent an oxygen or sulfur atom;
Ra представляет собой атом водорода, незамещенную (C1-C6)алkильную группу, (C6-C14)арильную группу или (C1-C6)алкильную группу, которая замещена одним или несколькими атомами галогена, (C1-C6)алkоkси- или (C1-C6)алкилтиогруппу, (C3-C14)циκлоалκильные группы, (C3-C14)циkлоалkилтиогруппы или гетероциклические группы;Ra represents a hydrogen atom, an unsubstituted (C 1 -C 6 )alkyl group, a (C 6 -C 14 )aryl group, or a (C 1 -C 6 )alkyl group which is substituted by one or more halogen atoms, (C 1 -C 6 ) alkoxy or (C 1 -C 6 ) alkylthio, (C 3 -C 14 ) cycloalkyl groups, (C 3 -C 14 ) cycloalkylthio groups or heterocyclic groups;
Rb представляет собой (C1-C6)алкильную группу, замещенную по меньшей мере группой -COORc, где Rc представляет собой атом водорода или (C1-C6)алκильную группу, которая замещена или не замещена одним или несколькими атомами галогена, (C3-C14)циклоалкильные группы, или гетероциклические группы; иRb is a (C 1 -C 6 )alkyl group substituted with at least a -COORc group, where Rc is a hydrogen atom or a (C 1 -C 6 )alkyl group which is substituted or unsubstituted by one or more halogen atoms, ( C 3 -C 14 cycloalkyl groups, or heterocyclic groups; And
Y4 и Y5, идентичные или отличающиеся друг от друга, представляют собой (C1-C6)алκильную группу, которая замещена или не замещена одним или несколькими атомами галогена, (C3-C14)циклоалкильные группы или гетероциклические группы;Y 4 and Y5, identical or different from each other, represent a (C 1 -C 6 )alkyl group which is substituted or unsubstituted by one or more halogen atoms, (C 3 -C 14 )cycloalkyl groups or heterocyclic groups;
(ii) анти-НАСГ, антифиброзный или антихолестатический агент.(ii) an anti-NASH, anti-fibrotic or anti-cholestatic agent.
В конкретном варианте осуществления соединение по формуле (I):In a particular embodiment, a compound of formula (I):
Y1 представляет собой галоген, группу Ra или Ga-Ra;Y1 is a halogen, Ra or Ga-Ra group;
A представляет собой группу CH=CH;A represents a CH=CH group;
Y2 представляет собой группу Gb-Rb;Y2 is a Gb-Rb group;
Ga и Gb, идентичные или отличающиеся друг от друга, представляют собой атом кислорода или серы;Ga and Gb, identical or different from each other, represent an oxygen or sulfur atom;
- 1 042734- 1 042734
Ra представляет собой (С1-Сб)алкильную или (С3-С14)циклоалкильную группу, в частности (С1-С6)алкильную или (С3-С14)циклоалкильную группу, замещенную или не замещенную одним или несколькими атомами галогена;Ra is a (C1-C6)alkyl or ( C3 - C14 )cycloalkyl group, in particular a (C1- C6 )alkyl or ( C3 - C14 )cycloalkyl group, whether or not substituted with one or more halogen atoms;
Rb представляет собой (C1-C6)алкильную группу, замещенную группой -COOR3, где Rc представляет собой атом водорода или алкильную группу, имеющую от одного до четырех атомов углерода; иRb is a (C 1 -C 6 )alkyl group substituted with a -COOR 3 group, where Rc is a hydrogen atom or an alkyl group having one to four carbon atoms; And
Y4 и Y5 независимо представляют собой (C1-C4)алкильную группу.Y 4 and Y 5 independently represent a (C 1 -C 4 )alkyl group.
В конкретном варианте осуществления соединение по формуле (I):In a particular embodiment, a compound of formula (I):
Y 1 представляет группу Ra или Ga-Ra;Y 1 represents a Ra or Ga-Ra group;
A представляет собой группу CH2-CH2;A is a CH2-CH2 group;
Y2 представляет собой группу Gb-Rb;Y2 is a Gb-Rb group;
Ga представляет собой атом кислорода или серы и Gb представляет собой атом кислорода;Ga is an oxygen or sulfur atom and Gb is an oxygen atom;
Ra представляет собой (С1-С6)алкильную или (С3-С14)циклоалкильную группу;Ra is a (C1-C 6 )alkyl or (C 3 -C 14 )cycloalkyl group;
Rb представляет собой (С1-С6)алкильную группу, замещенную по меньшей мере группой -COORc, где Rc представляет собой атом водорода или (С1-С4)алкильную группу;Rb is a (C1-C 6 )alkyl group substituted with at least a -COORc group, where Rc is a hydrogen atom or a (C1-C 4 )alkyl group;
Y4 и Y5 независимо представляют собой (С1-С4)алкильную группу.Y 4 and Y 5 independently represent a (C1-C 4 )alkyl group.
В конкретном варианте осуществления соединение по формуле (I):In a particular embodiment, a compound of formula (I):
Y1 представляет собой атом галогена или группу Ra или Ga-Ra;Y 1 represents a halogen atom or a Ra or Ga-Ra group;
A представляет собой группу CH2-CH2;A is a CH2-CH2 group;
Y2 представляет собой группу Gb-Rb;Y 2 is a Gb-Rb group;
Ga представляет собой атом кислорода или серы и Gb представляет собой атом кислорода;Ga is an oxygen or sulfur atom and Gb is an oxygen atom;
Ra представляет собой (С1-С6)алкильную или (С3-С14)циклоалкильную группу, которая замещена одним или несколькими атомами галогена;Ra represents a (C1-C 6 )alkyl or (C 3 -C 14 )cycloalkyl group which is substituted by one or more halogen atoms;
Rb представляет собой (С1-С6)алкильную группу, замещенную или не замещенную одним или несколькими атомами галогена и замещенную по меньшей мере группой -COORc, где Rc представляет собой атом водорода или (С1-С4)алкильную группу; иRb is a (C1-C 6 )alkyl group, substituted or unsubstituted with one or more halogen atoms and substituted with at least a -COORc group, where Rc is a hydrogen atom or a (C1-C 4 )alkyl group; And
Y4 и Y5 представляют собой (С1-С4)алкильную группу.Y 4 and Y 5 represent a (C1-C 4 )alkyl group.
В конкретном варианте осуществления в соединении по формуле (I) Gb представляет собой атом кислорода и Rb представляет собой (С1-С6)алкильную группу, замещенную группой -COORc, где Rc представляет собой атом водорода или незамещенную линейную или разветвленную (С1-С4)алкильную группу.In a specific embodiment, in the compound of formula (I), Gb is an oxygen atom and Rb is a (C1-C 6 )alkyl group substituted with a -COORc group, where Rc is a hydrogen atom or an unsubstituted linear or branched (C1-C 4 ) an alkyl group.
В конкретном варианте осуществления в соединении по формуле (I) Y1 представляет собой (С1-С6)алкилтиогруппу, которая содержит (С1-С6)алкильную группу, которая является линейной или разветвленной, которая замещена или не замещена одним или несколькими атомами галогена.In a specific embodiment, in the compound of formula (I), Y 1 is a (C1-C 6 )alkylthio group that contains a (C1-C 6 )alkyl group that is linear or branched, that is substituted or unsubstituted by one or more halogen atoms .
В конкретном варианте осуществления соединение по формуле (I) выбрано из группы, состоящей из:In a specific embodiment, the compound of formula (I) is selected from the group consisting of:
1-[4-метилтиофенил]-3-[3,5-диметил-4-карбоксидиметилметилоксифенил]проп-2-ен-1-она (элафибранора или GFT505),1-[4-methylthiophenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-carboxydimethylmethyloxyphenyl]prop-2-en-1-one (elafibranor or GFT505),
1-[4-метилтиофенил]-3-[3,5-диметил-4-изопропилоксикарбонилдиметилметилоксифенил]проп-2-ен1-она,1-[4-methylthiophenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-isopropyloxycarbonyldimethylmethyloxyphenyl]prop-2-en1-one,
1-[4-метилтиофенил]-3-[3,5-диметил-4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилоксифенил]проп-2ен-1-она,1-[4-methylthiophenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-tert-butyloxycarbonyldimethylmethyloxyphenyl]prop-2en-1-one,
1-[4-трифторметилфенил]-3-[3,5-диметил-4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилоксифенил]проп2-ен-1-она,1-[4-trifluoromethylphenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-tert-butyloxycarbonyldimethylmethyloxyphenyl]prop2-en-1-one,
1-[4-трифторметилфенил]-3-[3,5-диметил-4-карбоксидиметилметилоксифенил]проп-2-ен-1-она,1-[4-trifluoromethylphenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-carboxydimethylmethyloxyphenyl]prop-2-en-1-one,
1-[4-трифторметилоксифенил]-3-[3,5-диметил-4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилоксифенил]проп-2-ен-1-она,1-[4-trifluoromethyloxyphenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-tert-butyloxycarbonyldimethylmethyloxyphenyl]prop-2-en-1-one,
1-[4-трифторметилоксифенил]-3-[3,5-диметил-4-карбоксидиметилметилоксифенил]проп-2-ен-1-она, 2-[2,6-диметил-4-[3-[4-(метилтио)фенил]-3-оксопропил]фенокси] -2-метилпропановой кислоты и изопропилового эфира 2-[2,6-диметил-4-[3-[4-(метилтио)фенил]-3-оксопропил]фенокси] -2-метилпропановой кислоты.1-[4-trifluoromethyloxyphenyl]-3-[3,5-dimethyl-4-carboxydimethylmethyloxyphenyl]prop-2-en-1-one, 2-[2,6-dimethyl-4-[3-[4-(methylthio )phenyl]-3-oxopropyl]phenoxy]-2-methylpropanoic acid and 2-[2,6-dimethyl-4-[3-[4-(methylthio)phenyl]-3-oxopropyl]phenoxy]-2- isopropyl ester methylpropanoic acid.
В конкретном варианте осуществления изобретения компонент (ii) представляет собой анти-НАСГ агент. Иллюстративные, не ограничивающие анти-НАСГ агенты, полезные в практике осуществления настоящего изобретения, включают:In a specific embodiment of the invention, component (ii) is an anti-NASH agent. Illustrative, non-limiting anti-NASH agents useful in the practice of the present invention include:
ингибиторы ацетил-КоА-карбоксилазы;acetyl-CoA carboxylase inhibitors;
агонисты аденозиновых рецепторов A3;A3 adenosine receptor agonists;
антагонисты альдостерона и антагонисты минералокортикоидов;aldosterone antagonists and mineralocorticoid antagonists;
стимулятор АМФ-активируемой протеинкиназы агонист рецепторов амилина и агонисты рецепторов кальцитонина;AMPK-activated protein kinase stimulator, amylin receptor agonist and calcitonin receptor agonists;
ингибиторы ангиопоэтин-подобного белка 3;angiopoietin-like protein 3 inhibitors;
анти-ЛПС антитела;anti-LPS antibodies;
ингибиторы апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот;inhibitors of the apical sodium-dependent bile acid transporter;
бетаин безводный или RM-003;betaine anhydrous or RM-003;
- 2 042734 биологически активные липиды;- 2 042734 biologically active lipids;
антагонисты каннабиноидных CBl-рецепторов;cannabinoid CBl receptor antagonists;
двойной ингибитор каннабиноидных CB1-рецепторов/iNOS;dual inhibitor of cannabinoid CB1 receptors/iNOS;
ингибиторы каспазы;caspase inhibitors;
ингибиторы катепсина;cathepsin inhibitors;
антагонисты CCK;CCK antagonists;
модуляторы хемокинового CCK3 и ингибиторы лиганда эотаксина 2;chemokine CCK3 modulators and eotaxin 2 ligand inhibitors;
ингибиторы диацилглицерин O-ацилтрансферазы (дГаТ);diacylglycerol O-acyltransferase (dGaT) inhibitors;
ингибиторы дипептидилпепдидазы IV (дПП4);dipeptidyl peptidase IV (dPP4) inhibitors;
агонисты лиганда инсулина и инсулиновых рецепторов;agonists of insulin ligand and insulin receptors;
сенсибилизатор инсулина и антагонист рецепторов MHC-1;an insulin sensitizer and an MHC-1 receptor antagonist;
ингибиторы NOX (НадФН-оксидазы), например двойные ингибиторы NOX 1 и 4;NOX inhibitors (Nadfn-oxidase), for example dual NOX inhibitors 1 and 4;
модуляторы белка внеклеточного матрикса;extracellular matrix protein modulators;
ингибиторы стеароил-Коа-десатуразы-1/конъюгаты жирных и желчных кислот (FABAC);stearoyl-Coa desaturase-1 inhibitors/fatty-bile acid conjugates (FABAC);
ингибиторы синтазы жирных кислот (FAS):fatty acid synthase (FAS) inhibitors:
лиганды рецепторов фактора роста фибробластов 19 (FGF-19), например рекомбинантный белок фактора роста фибробластов 19 (FGF-19) или функциональный сконструированный вариант белка FGF-19;fibroblast growth factor 19 (FGF-19) receptor ligands, such as recombinant fibroblast growth factor 19 (FGF-19) protein or a functional engineered variant of the FGF-19 protein;
лиганды рецепторов фактора роста фибробластов 21 (FGF-21), например белок фактора роста фибробластов 21 (FGF-21) или функциональный сконструированный вариант белка FGF-21;fibroblast growth factor 21 (FGF-21) receptor ligands, for example, fibroblast growth factor 21 (FGF-21) protein or a functional engineered variant of the FGF-21 protein;
агонисты фарнезоидных X-рецепторов (FXR);farnesoid X receptor (FXR) agonists;
ингибиторы галектина 3;galectin 3 inhibitors;
аналоги глюкагоноподобного пептида-1 (ГПП-1) и агонисты рецепторов ГПП-1;glucagon-like peptide-1 (GLP-1) analogs and GLP-1 receptor agonists;
модуляторы сопряженных с G-белком рецепторов (GPCR);G-protein coupled receptor (GPCR) modulators;
антагонист сопряженных с G-белком рецепторов 84, ингибитор лиганда фактора роста соединительной ткани и агонисты рецепторов свободной жирной кислоты 1;G protein-coupled receptor antagonist 84, connective tissue growth factor ligand inhibitor and free fatty acid receptor agonists 1;
ингибиторы сигнального пути Hedgehog в клетках;inhibitors of the Hedgehog signaling pathway in cells;
ингибиторы интегрина;integrin inhibitors;
ингибиторы кетогексокиназы, ингибиторы лейкотриенов (LT)/фосфодиэстеразы (ФдЭ)/липоксигеназы (LO);ketohexokinase inhibitors, leukotriene (LT)/phosphodiesterase (PDE)/lipoxygenase (LO) inhibitors;
ингибиторы гомолога лизилоксидазы 2 (ингибиторы LOXL2);lysyl oxidase 2 homologue inhibitors (LOXL2 inhibitors);
макролиды;macrolides;
модулятор метил-CpG-связывающего белка и ингибиторы трансглутаминазы;methyl-CpG-binding protein modulator and transglutaminase inhibitors;
антагонисты микроРНК;miRNA antagonists;
ингибитор семейства митохондриальных носителей и ингибитор митохондриального белканосителя фосфата;a mitochondrial carrier family inhibitor and a mitochondrial phosphate carrier protein inhibitor;
моноклональные антитела;monoclonal antibodies;
ингибиторы миелопероксидазы;myeloperoxidase inhibitors;
модуляторы mTOR;mTOR modulators;
стимулятор Nad-зависимой деацетилазы сиртуин-1;stimulator of Nad-dependent deacetylase sirtuin-1;
ингибитор ФдЭ-5;PDE-5 inhibitor;
агонисты рецепторов никотиновой кислоты (GPR109);nicotinic acid receptor agonists (GPR109);
лиганды ядерных рецепторов;nuclear receptor ligands;
агонисты белка P2Y13;agonists of the P2Y13 protein;
стимуляторы фенилаланин-гидроксилазы;phenylalanine hydroxylase stimulants;
антагонисты рецепторов, активируемых протеазами (PAR)-2;protease-activated receptor (PAR)-2 antagonists;
модуляторы протеинкиназы;protein kinase modulators;
агонисты PPAR-альфа;PPAR alpha agonists;
агонисты PPAR-гамма;PPAR-gamma agonists;
агонисты PPAR-дельта;PPAR delta agonists;
агонисты PPAR-альфа/гамма;PPAR alpha/gamma agonists;
агонисты PPAR-альфа/дельта;PPAR alpha/delta agonists;
PPAR-гамма/дельта;PPAR-gamma/delta;
агонисты PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонисты PPAR;PPAR alpha/gamma/delta agonists or PPAR pan agonists;
ингибиторы Rho-ассоциированной протеинкиназы 2 (ROCK2);inhibitors of Rho-associated protein kinase 2 (ROCK2);
ингибиторы натрий-глюкозного транспортера (SGLT) 1;inhibitors of sodium glucose transporter (SGLT) 1;
ингибиторы натрий-глюкозного транспортера (SGLT) 2;sodium glucose transporter (SGLT) 2 inhibitors;
ингибиторы стеароил-Коа-десатуразы-1;stearoyl-Coa desaturase-1 inhibitors;
ингибиторы регулирующей сигналы киназы 1 (ASK1);signal-regulating kinase 1 (ASK1) inhibitors;
агонисты тиреоидных β-рецепторов (THR β);agonists of thyroid β-receptors (THR β);
антагонисты толл-подобных рецепторов 2 (TLR-2);antagonists of toll-like receptors 2 (TLR-2);
антагонисты толл-подобных рецепторов 4 (TLR-4);toll-like receptor 4 (TLR-4) antagonists;
- 3 042734 ингибиторы естественных киллерных T-клеток I типа;- 3 042734 inhibitors of natural killer T-cells type I;
модуляторы рецепторов тирозинкиназы (RTK);tyrosine kinase receptor modulators (RTK);
ингибиторы анионообменника уратов 1 и ингибиторы ксантиноксидазы;urate anion exchanger 1 inhibitors and xanthine oxidase inhibitors;
ингибиторы белка сосудистой адгезии-1 (VAP-1) и агонисты рецепторов витамина D (VDR).vascular adhesion protein-1 (VAP-1) inhibitors; and vitamin D receptor (VDR) agonists.
В дополнительном конкретном варианте осуществления изобретения компонент (ii) представляет собой анти-НАСГ агент.In a further specific embodiment of the invention, component (ii) is an anti-NASH agent.
В конкретном варианте осуществления анти-НАСГ агент выбран из:In a particular embodiment, the anti-NASH agent is selected from:
ингибиторов ацетил-Коа-карбоксилазы;acetyl-Coa carboxylase inhibitors;
анти-ЛПС антител;anti-LPS antibodies;
ингибиторов апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот;inhibitors of the apical sodium-dependent bile acid transporter;
биологически активных липидов;biologically active lipids;
антагонистов каннабиноидных CB1-рецепторов;cannabinoid CB1 receptor antagonists;
двойного ингибитора каннабиноидных CB1-рецепторов/iNOS;a dual inhibitor of cannabinoid CB1 receptors/iNOS;
ингибиторов каспазы;caspase inhibitors;
ингибиторов катепсина;cathepsin inhibitors;
антагонистов CCK;CCK antagonists;
ингибиторов диацилглицерин O-ацилтрансферазы (дГаТ);diacylglycerol O-acyltransferase (dGaT) inhibitors;
ингибиторов дипептидилпепдидазы IV (дПП4);dipeptidyl peptidase IV (dPP4) inhibitors;
ингибиторов NOX (НадФН-оксидазы), например двойных ингибиторов NOX 1 и 4;NOX (NadPH oxidase) inhibitors, eg dual NOX 1 and 4 inhibitors;
модуляторов белка внеклеточного матрикса;extracellular matrix protein modulators;
ингибиторов стеароил-Коа-десатуразы-1/конъюгатов жирных и желчных кислот (FABAC);stearoyl-Coa desaturase-1/fatty-bile acid conjugates (FABAC) inhibitors;
лигандов рецепторов фактора роста фибробластов 19 (FGF-19), например рекомбинантного белка фактора роста фибробластов 19 (FGF-19) или функционального сконструированного варианта белка FGF-19;fibroblast growth factor 19 (FGF-19) receptor ligands, such as recombinant fibroblast growth factor 19 (FGF-19) protein or a functional engineered variant of the FGF-19 protein;
лигандов рецепторов фактора роста фибробластов 21 (FGF-21), например белка фактора роста фибробластов 21 (FGF-21) или функционального сконструированного варианта белка FGF-21;fibroblast growth factor 21 (FGF-21) receptor ligands, for example, fibroblast growth factor 21 (FGF-21) protein or a functional engineered variant of the FGF-21 protein;
агонистов фарнезоидных X-рецепторов (FXR);farnesoid X receptor (FXR) agonists;
ингибиторов галектина 3;galectin 3 inhibitors;
аналогов глюкагоноподобного пептида-1 (ГПП-1);analogues of glucagon-like peptide-1 (GLP-1);
модуляторов сопряженных с G-белком рецепторов (GPCR);G-protein coupled receptor (GPCR) modulators;
ингибиторов интегрина;integrin inhibitors;
ингибиторов лейкотриенов (LT)/фосфодиэстеразы (ФдЭ)/липоксигеназы (LO);leukotriene (LT)/phosphodiesterase (PDE)/lipoxygenase (LO) inhibitors;
макролидов;macrolides;
антагонистов микроРНК, моноклональных антител;miRNA antagonists, monoclonal antibodies;
модуляторов mTOR;mTOR modulators;
лигандов ядерных рецепторов;nuclear receptor ligands;
агонистов белка P2Y13;agonists of the P2Y13 protein;
антагонистов рецепторов, активируемых протеазами (PAR)-2;protease-activated receptor (PAR)-2 antagonists;
модуляторов протеинкиназы;protein kinase modulators;
агонистов PPAR-альфа;PPAR-alpha agonists;
агонистов PPAR-гамма;PPAR-gamma agonists;
агонистов PPAR-дельта;PPAR delta agonists;
агонистов PPAR-альфа/гамма;PPAR alpha/gamma agonists;
агонистов PPAR-альфа/дельта;PPAR alpha/delta agonists;
PPAR-гамма/дельта;PPAR-gamma/delta;
агонистов PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонистов PPAR;PPAR alpha/gamma/delta agonists or PPAR pan agonists;
ингибиторов Rho-ассоциированной протеинкиназы 2 (ROCK2);inhibitors of Rho-associated protein kinase 2 (ROCK2);
ингибиторов натрий-глюкозного транспортера (SGLT) 2;sodium glucose transporter (SGLT) 2 inhibitors;
ингибиторов регулирующей сигналы киназы 1 (ASK1);signal-regulating kinase 1 (ASK1) inhibitors;
агонистов тиреоидных β-рецепторов (THR β);agonists of thyroid β-receptors (THR β);
антагонистов толл-подобных рецепторов 4 (TLR-4);antagonists of toll-like receptors 4 (TLR-4);
модуляторов рецепторов тирозинкиназы (RTK);tyrosine kinase (RTK) receptor modulators;
ингибиторов белка сосудистой адгезии-1 (VAP-1) и агонистов рецепторов витамина D (VDR).vascular adhesion protein-1 (VAP-1) inhibitors; and vitamin D receptor (VDR) agonists.
Другие анти-НАСГ агенты включают KB-GE-001 и NGM-386, а также NGM-395, NC-10 и TMC-606F. Дополнительные анти-НАСГ агенты включают икосабутат, NC-101, NAIA-101, колесевелам и PRC-4016.Other anti-NASH agents include KB-GE-001 and NGM-386 as well as NGM-395, NC-10 and TMC-606F. Additional anti-NASH agents include icosabutate, NC-101, NAIA-101, colesevelam, and PRC-4016.
В конкретном варианте осуществления изобретения компонент (ii) представляет собой антифиброзный агент. Иллюстративные, не ограничивающие антифиброзные агенты, полезные в практике осуществления настоящего изобретения, включают:In a particular embodiment of the invention, component (ii) is an anti-fibrotic agent. Illustrative, non-limiting anti-fibrotic agents useful in the practice of the present invention include:
- 4 042734 агонисты аденозиновых рецепторов A3;- 4 042734 A3 adenosine receptor agonists;
блокаторы рецепторов ангиотензина II антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на трансформирующий фактор роста бета 2 (TGF-e2);angiotensin II receptor blockers; antisense oligonucleotides targeting transforming growth factor beta 2 (TGF-e2);
биологически активные липиды;biologically active lipids;
ингибиторы каспазы;caspase inhibitors;
миметики каннабиноидных CB2-рецепторов;cannabinoid CB2 receptor mimetics;
двойные агонисты фарнезоидных X-рецепторов (FXR)/TGR5;double farnesoid X receptor (FXR)/TGR5 agonists;
ингибиторы NOX (наДФн-оксидазы), например, двойные ингибиторы NOX 1 и 4;NOX (naDPH oxidase) inhibitors, eg dual NOX 1 and 4 inhibitors;
ингибиторы галектина 3;galectin 3 inhibitors;
ингибиторы сигнального пути Hedgehog в клетках;inhibitors of the Hedgehog signaling pathway in cells;
иммуномодуляторы;immunomodulators;
ингибиторы интегрина;integrin inhibitors;
модуляторы макрофагальных маннозных рецепторов;macrophage mannose receptor modulators;
стимуляторы металлопротеиназ-9 (MMP-9);metalloproteinase-9 (MMP-9) stimulators;
моноклональные антитела;monoclonal antibodies;
ингибиторы NF-каппа-Б;NF-kappa-B inhibitors;
нестероидные противовоспалительные препараты (нПВП);non-steroidal anti-inflammatory drugs (nPVDs);
модуляторы PDGFR;PDGFR modulators;
агонисты PPAR-альфа;PPAR alpha agonists;
агонисты PPAR-гамма;PPAR-gamma agonists;
агонисты PPAR-дельта;PPAR delta agonists;
агонисты PPAR-альфа/гамма;PPAR alpha/gamma agonists;
агонисты PPAR-альфа/дельта;PPAR alpha/delta agonists;
PPAR-гамма/дельта;PPAR-gamma/delta;
агонисты PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонисты PPAR.PPAR alpha/gamma/delta agonists or PPAR pan agonists.
В другом конкретном варианте осуществления антифиброзный агент выбран из группы, состоящей из:In another specific embodiment, the antifibrotic agent is selected from the group consisting of:
антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на трансформирующий фактор роста бета 2 (TGF-e2);antisense oligonucleotides targeting transforming growth factor beta 2 (TGF-e2);
биологически активных липидов;biologically active lipids;
ингибиторов каспазы;caspase inhibitors;
миметиков каннабиноидных CB2-рецепторов;cannabinoid CB2 receptor mimetics;
двойных агонистов фарнезоидных X-рецепторов (FXR)/TGR5;dual farnesoid X receptor (FXR)/TGR5 agonists;
ингибиторов NOX (надФн-оксидазы), например, двойных ингибиторов NOX 1 и 4;NOX (nadPn oxidase) inhibitors, eg dual NOX 1 and 4 inhibitors;
ингибиторов галектина 3;galectin 3 inhibitors;
иммуномодуляторов;immunomodulators;
ингибиторов интегрина;integrin inhibitors;
модуляторов макрофагальных маннозных рецепторов;macrophage mannose receptor modulators;
стимуляторов металлопротеиназ-9 (MMP-9);stimulators of metalloproteinases-9 (MMP-9);
моноклональных антител;monoclonal antibodies;
ингибиторов NF-каппа-B;NF-kappa-B inhibitors;
нестероидных противовоспалительных препаратов (нПВП) модуляторов PDGFR;non-steroidal anti-inflammatory drugs (nPVD) PDGFR modulators;
агонистов PPAR-альфа;PPAR-alpha agonists;
агонистов PPAR-гамма;PPAR-gamma agonists;
агонистов PPAR-дельта;PPAR delta agonists;
агонистов PPAR-альфа/гамма;PPAR alpha/gamma agonists;
агонистов PPAR-альфа/дельта;PPAR alpha/delta agonists;
PPAR-гамма/дельта;PPAR-gamma/delta;
агонистов PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонистов PPAR.PPAR alpha/gamma/delta agonists; or PPAR pan agonists.
Другие антифиброзные агенты включают HEC-585, INV-240, терапевтическуюOther antifibrotic agents include HEC-585, INV-240, therapeutic
РНК-интерференцию (Silence Therapeutics) и программу SAMiRNA (Bioneer Corp).RNA interference (Silence Therapeutics) and the SAMiRNA program (Bioneer Corp).
Другие иллюстративные антифиброзные агенты включают пирфенидон или ингибиторы рецепторов тирозинкиназы (RTKI), например нинтеданиб, сорафениб и другие RTKI, или блокаторы рецепторов ангиотензина II (AT1), или ингибитор CTGF, или любое антифиброзное соединение, соединение, способное вмешиваться в TGFe- и BMP-активируемые пути, включая активаторы латентного комплекса TGFe, например MMP2, MMP9, THBS1 или интегрины клеточной поверхности, рецепторы TGFe I типа (TGFBRI) или типа II (TGFBRII) и их лиганды, например TGFe, активин, ингибин, нодал, антимюллеровский гормон, GDF или BMP, вспомогательные корецепторы (также известные как рецепторы III типа) или компоненты SMAD-зависимого канонического пути, включая регуляторные или ингибирующие бел- 5 042734 ки SMAD или члены SMAD-независимых или неканонических путей, включая различные ветви сигнального пути MAPK, сигнального пути TAK1, сигнального пути Rho ГТФаз, пути фосфатидилинозитол-3киназы/AKT, TGFe-индуцированный процесс EMT или канонические и неканонические сигнальные пути Hedgehog, включая лиганды Hh или гены-мишени, или любые члены пути WNT, или пути Notch, которые чувствительны к влиянию TGFe.Other exemplary antifibrotic agents include pirfenidone or tyrosine kinase receptor inhibitors (RTKIs) such as nintedanib, sorafenib and other RTKIs or angiotensin II receptor (AT1) blockers or a CTGF inhibitor or any antifibrotic compound, a compound capable of interfering with TGFe- and BMP- activated pathways, including TGFe latent complex activators, eg MMP2, MMP9, THBS1 or cell surface integrins, TGFe type I (TGFBRI) or type II (TGFBRII) receptors and their ligands, eg TGFe, activin, inhibin, nodal, anti-Müllerian hormone, GDF or BMPs, accessory co-receptors (also known as type III receptors), or components of a SMAD-dependent canonical pathway, including SMAD regulatory or inhibitory proteins, or members of SMAD-independent or non-canonical pathways, including various branches of the MAPK signaling pathway, the TAK1 signaling pathway , the Rho GTPases signaling pathway, the phosphatidylinositol-3 kinase/AKT pathway, the TGFe-induced EMT process, or canonical and non-canonical Hedgehog signaling pathways, including Hh ligands or target genes, or any members of the WNT pathway, or the Notch pathway that are sensitive to the influence of TGFe.
В конкретном варианте осуществления изобретения компонент (ii) представляет собой антихолестатический агент. Иллюстративные, не ограничивающие антихолестатические агенты, полезные в практике осуществления настоящего изобретения, включают:In a particular embodiment of the invention, component (ii) is an anti-cholestatic agent. Illustrative, non-limiting, anti-cholestatic agents useful in the practice of the present invention include:
ингибиторы апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBTi);inhibitors of the apical sodium-dependent bile acid transporter (ASBTi);
желчные кислоты;bile acids;
ингибиторы катепсина;cathepsin inhibitors;
антагонисты CCK;CCK antagonists;
ингибиторы CD40;CD40 inhibitors;
ингибиторы CD80;CD80 inhibitors;
ингибиторы NOX (НаДФН-оксидазы), например, двойные ингибиторы NOX 1 и 4;NOX (NaDPH oxidase) inhibitors, eg dual NOX 1 and 4 inhibitors;
агонисты фарнезоидных X-рецепторов (FXR);farnesoid X receptor (FXR) agonists;
рекомбинантный фактор роста фибробластов (FGF) 19;recombinant fibroblast growth factor (FGF) 19;
ингибиторы лиганда фракталкина;fractalkine ligand inhibitors;
ингибиторы натрий-зависимого котранспортера желчных кислот в подвздошной кишке; моноклональные антитела;inhibitors of the sodium-dependent bile acid cotransporter in the ileum; monoclonal antibodies;
агонисты PPAR-альфа;PPAR alpha agonists;
агонисты PPAR-гамма;PPAR-gamma agonists;
агонисты PPAR-дельта;PPAR delta agonists;
агонисты PPAR-альфа/гамма;PPAR alpha/gamma agonists;
агонисты PPAR-альфа/дельта;PPAR alpha/delta agonists;
PPAR-гамма/дельта;PPAR-gamma/delta;
агонисты PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонисты PPAR.PPAR alpha/gamma/delta agonists or PPAR pan agonists.
В конкретном варианте осуществления антихолестатический агент выбран из группы, состоящей из:In a particular embodiment, the anti-cholestatic agent is selected from the group consisting of:
ингибиторов апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBTi);inhibitors of the apical sodium-dependent bile acid transporter (ASBTi);
желчных кислот;bile acids;
ингибиторов катепсина;cathepsin inhibitors;
антагонистов CCK;CCK antagonists;
ингибиторов CD40;CD40 inhibitors;
ингибиторов CD80;CD80 inhibitors;
ингибиторов NOX (НаДФН-оксидазы);NOX inhibitors (NaDPH oxidase);
агонистов фарнезоидных X-рецепторов (FXR);farnesoid X receptor (FXR) agonists;
рекомбинантного фактора роста фибробластов (FGF) 19;recombinant fibroblast growth factor (FGF) 19;
ингибиторов лиганда фракталкина;fractalkine ligand inhibitors;
ингибиторов натрий-зависимого котранспортера желчных кислот в подвздошной кишке; моноклональных антител;inhibitors of the sodium-dependent bile acid cotransporter in the ileum; monoclonal antibodies;
агонистов PPAR-альфа;PPAR-alpha agonists;
агонистов PPAR-гамма;PPAR-gamma agonists;
агонистов PPAR-дельта;PPAR delta agonists;
агонистов PPAR-альфа/гамма;PPAR alpha/gamma agonists;
агонистов PPAR-альфа/дельта;PPAR alpha/delta agonists;
PPAR-гамма/дельта;PPAR-gamma/delta;
агонистов PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонистов PPAR;PPAR alpha/gamma/delta agonists or PPAR pan agonists;
Иллюстративные ингибиторы ацетил-КоА-карбоксилазы включают, но не ограничиваются, GS-0976, ND-654, AC-8632, PF05221304, CP640186, гемкабен, MK-4074 и PF05175157.Exemplary acetyl-CoA carboxylase inhibitors include, but are not limited to, GS-0976, ND-654, AC-8632, PF05221304, CP640186, gemcaben, MK-4074, and PF05175157.
Иллюстративные агонисты аденозиновых рецепторов A3 включают, но не ограничиваются, 2-(1-гексинил)-N-метиладенозин, пиклиденозон CF-101 (IB-MECA), намоденозон CF-102, 2-C1-IB-MECA, CP-532,903, инозин, LUF-6000 и MRS-3558.Exemplary A3 adenosine receptor agonists include, but are not limited to, 2-(1-hexynyl)-N-methyladenosine, piclidenosone CF-101 (IB-MECA), namodenosone CF-102, 2-C1-IB-MECA, CP-532,903, inosine, LUF-6000 and MRS-3558.
Иллюстративные антагонисты альдостерона и антагонисты минералокортикоидных рецепторов включают, но не ограничиваются, апараренон (MT 3995), амилорид, спиронолактон, эплеренон, канренон и канреноат калия, прогестерон, дроспиренон, гестоден и бенидипин.Exemplary aldosterone antagonists and mineralocorticoid receptor antagonists include, but are not limited to, apararenone (MT 3995), amiloride, spironolactone, eplerenone, potassium canrenone and canrenoate, progesterone, drospirenone, gestodene, and benidipine.
Иллюстративные стимуляторы АМФ-активируемой протеинкиназы включают, но не ограничиваются, PXL-770, MB-11055 дебио-0930B метформин, CNX-012, O-304, кальциевую соль мангиферина, элтромбопаг, каротуксимаб и имеглимин.Exemplary AMPK stimulators include, but are not limited to, PXL-770, MB-11055 debio-0930B metformin, CNX-012, O-304, mangiferin calcium, eltrombopag, carotuximab, and imeglimin.
Иллюстративный агонист рецепторов амилина и агонисты рецепторов кальцитонина, включают, но не ограничиваются, KBP-042 и KBP-089.Exemplary amylin receptor agonists and calcitonin receptor agonists include, but are not limited to, KBP-042 and KBP-089.
- 6 042734- 6 042734
Иллюстративные ингибиторы ангиопоэтин-подобного белка 3 включают, но не ограничиваются,Exemplary angiopoietin-like protein 3 inhibitors include, but are not limited to,
ARO-ANG3, IONIS-ANGGPTL3-LRx или AKCEA-ANGPTL3LRx, эвинакумаб и ALN-ANG.ARO-ANG3, IONIS-ANGGPTL3-LRx or AKCEA-ANGPTL3LRx, evinacumab, and ALN-ANG.
Согласно изобретению, термин антагонисты рецепторов ангиотензина 1-го типа в контексте данного документа включает, но не ограничивается, ирбесартан.According to the invention, the term angiotensin type 1 receptor antagonists in the context of this document includes, but is not limited to, irbesartan.
Согласно изобретению, термин анти-ЛПС антитела в контексте данного документа включает, но не ограничивается, IMM-124-E.According to the invention, the term anti-LPS antibodies in the context of this document includes, but is not limited to, IMM-124-E.
Иллюстративные антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на трансформирующий фактор роста бета 2, включают, но не ограничиваются, ASPH-0047, IMC-TR1 и ISTH-0047.Exemplary antisense oligonucleotides targeting transforming growth factor beta 2 include, but are not limited to, ASPH-0047, IMC-TR1, and ISTH-0047.
Иллюстративный ингибитор апикального натрий-зависимого транспортера желчных кислот включает, но не ограничивается, A-4250, воликсибат, мараликсибат, ранее SHP-625, GSK-2330672, элобиксибат и CJ-14199.An exemplary inhibitor of the apical sodium dependent bile acid transporter includes, but is not limited to, A-4250, volixibate, maralixibate, formerly SHP-625, GSK-2330672, elobixibate, and CJ-14199.
Иллюстративные желчные кислоты включают, но не ограничиваются, обетихолевую кислоту (ОХК) и УДХК, норурсодезоксихолевую кислоту и урсодиол.Exemplary bile acids include, but are not limited to, obeticholic acid (OCA) and UDCA, norursodeoxycholic acid, and ursodiol.
Иллюстративные биоактивные липиды включают, но не ограничиваются ими, 5-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE, DS-102).Illustrative bioactive lipids include, but are not limited to, 5-hydroxyeicosapentaenoic acid (15-HEPE, DS-102).
В дополнительном конкретном варианте осуществления биологически активный липид может быть выбран из ненасыщенных жирных кислот, например 25 арахидоновой кислоты, икосапентэтилового эфира, эйкозапентаеновой кислоты и докозагексаеновой кислоты.In a further specific embodiment, the biologically active lipid may be selected from unsaturated fatty acids, for example 25 arachidonic acid, icosapentethyl ester, eicosapentaenoic acid, and docosahexaenoic acid.
Иллюстративные антагонисты каннабиноидных CB1-рецепторов включают, но не ограничиваются, намацизумаб, GRC-10801, MRI-1569, MRI-1867, DBPR-211, AM-6527: AM-6545, NESS-11-SM, CXB-029, GCC-2680, TM-38837, Org-50189, PF-514273, BMS-812204, ZYO-1, AZD-2207, AZD-1175, отенабант, ибипинабант, суринабант, римонабант, дринабант, SLV-326, V-24343 и O-2093.Illustrative cannabinoid CB1 receptor antagonists include, but are not limited to, namacizumab, GRC-10801, MRI-1569, MRI-1867, DBPR-211, AM-6527: AM-6545, NESS-11-SM, CXB-029, GCC- 2680, TM-38837, Org-50189, PF-514273, BMS-812204, ZYO-1, AZD-2207, AZD-1175, otenabant, ibipinabant, surinabant, rimonabant, drinabant, SLV-326, V-24343 and O- 2093.
Иллюстративные миметики каннабиноидных CB2-рецепторов включают, но не ограничиваются, анабасум (ресунаб, JKT-101).Illustrative cannabinoid CB2 receptor mimetics include, but are not limited to, perinasum (resunab, JKT-101).
Иллюстративные ингибиторы каспазы включают, но не ограничиваются, эмрикасан, белнакасан, нивокасан, IDN-7314, F-573, VX-166, YJP-60107, MX-1122, IDN-6734, TLC-144, SB-234470, IDN-1965, VX-799, SDZ-220-976 и L-709049.Exemplary caspase inhibitors include, but are not limited to, emricasan, belnacasan, nivocasan, IDN-7314, F-573, VX-166, YJP-60107, MX-1122, IDN-6734, TLC-144, SB-234470, IDN-1965 , VX-799, SDZ-220-976 and L-709049.
Иллюстративные ингибиторы катепсина включают, но не ограничиваются, VBY-376, VBY-825, VBY-036, VBY-129, VBY-285, Org-219517, LY3000328, RG-7236 и BF/PC-18.Exemplary cathepsin inhibitors include, but are not limited to, VBY-376, VBY-825, VBY-036, VBY-129, VBY-285, Org-219517, LY3000328, RG-7236, and BF/PC-18.
Иллюстративные антагонисты CCK включают, но не ограничиваются, антагонисты CCK2/5, например, ценикривирок; PG-092, RAP-310, INCB-10820, RAP-103, PF-04634817 и CCX-872.Exemplary CCK antagonists include, but are not limited to, CCK2/5 antagonists such as cenicriviroc; PG-092, RAP-310, INCB-10820, RAP-103, PF-04634817 and CCX-872.
Иллюстративные ингибиторы CD40 включают, но не ограничиваются, FFp-104, x1-050, DOM-0800, XmAb-5485, KGYY-15, FFP-106, TDI-0028 и ABI-793.Exemplary CD40 inhibitors include, but are not limited to, FFp-104, x1-050, DOM-0800, XmAb-5485, KGYY-15, FFP-106, TDI-0028 and ABI-793.
Иллюстративные ингибиторы CD80 включают, но не ограничиваются, рудекс, FPT-155, толеримаб, галиксимаб, SCH-212394, IGM-001, ASP-2408 и SCH-204698.Exemplary CD80 inhibitors include, but are not limited to, Rudex, FPT-155, tolerimab, galiximab, SCH-212394, IGM-001, ASP-2408, and SCH-204698.
Иллюстративные модуляторы хемокинового CCK3 и ингибиторы лиганда эотаксина 2 включают, но не ограничиваются, бертилимумаб, CM-101 (гуманизированный), CM-102 и RNS-60.Exemplary chemokine CCK3 modulators and eotaxin 2 ligand inhibitors include, but are not limited to, bertilimumab, CM-101 (humanized), CM-102, and RNS-60.
Иллюстративные ингибиторы диацилглицерин O-ацилтрансферазы включают, но не ограничиваются, IONIS-DGAT2Rx (ранее ISIS-DGAT2Rx), LY-3202328, BH-03004, KR-69530, OT-13540, AZD-7687, PF-06865571, PF-06424439 и ABT-046.Exemplary diacylglycerol O-acyltransferase inhibitors include, but are not limited to, IONIS-DGAT2Rx (formerly ISIS-DGAT2Rx), LY-3202328, BH-03004, KR-69530, OT-13540, AZD-7687, PF-06865571, PF-06424439 and ABT-046.
Иллюстративные ингибиторы дипептидилпепдидазы IV включают, но не ограничиваются, эвоглиптин, видаглиптин, фотаглиптин, алоглиптин, саксаглиптин, тилоглиптин, анаглиптин, ситаглиптин, ретаглиптин, мелоглиптин, госоглиптин, трелаглиптин, тенелиглиптин, дутоглиптин, линаглиптин, гемиглиптин, йоглиптин, бетаглиптин, имиглиптин, омариглиптин, видаглиптин и денаглиптин.Exemplary dipeptidyl peptidase IV inhibitors include, but are not limited to, evogliptin, vidagliptin, fotagliptin, alogliptin, saxagliptin, tylogliptin, anagliptin, sitagliptin, retagliptin, melogliptin, gosogliptin, trelagliptin, teneligliptin, dutogliptin, linagliptin, gemigliptin, yogliptin, yogliptin, betarigliptin, betarigliptin vidagliptin and denagliptin.
Иллюстративные ингибиторы синтазы жирных кислот (FAS) включают, но не ограничиваются, TVB-2640; TVB-3664; TVB-3166, TVB-3150, TVB-3199, TVB-3693BZL-101, 2-октадециновую кислоту, MDX-2, фасналл, MT-061, G28UCM, MG-28, HS-160, GSK-2194069, KD-023, цилостазол.Exemplary fatty acid synthase (FAS) inhibitors include, but are not limited to, TVB-2640; TVB-3664; TVB-3166, TVB-3150, TVB-3199, TVB-3693BZL-101, 2-octadecic acid, MDX-2, fasnall, MT-061, G28UCM, MG-28, HS-160, GSK-2194069, KD-023 , cilostazol.
В конкретном варианте осуществления ингибитор FAS представляет собой соединение, выбранное из следующего списка соединений:In a specific embodiment, the FAS inhibitor is a compound selected from the following list of compounds:
- 7 042734- 7 042734
- 8 042734- 8 042734
В конкретном варианте осуществления ингибитор FAS представляет собой TVB-2640.In a specific embodiment, the FAS inhibitor is TVB-2640.
Иллюстративные агонисты фарнезоидных X-рецепторов (FXR)/TGR5 включают, но не ограничиваются, INT-767.Exemplary farnesoid X receptor (FXR)/TGR5 agonists include, but are not limited to, INT-767.
Иллюстративные ингибиторы NOX (НАДФН-оксидазы) включают, но не ограничиваются, двойные ингибиторы NOX 1 и 4; GKT-831 (2-(2-хлорфенил)-4-[3-(диметиламино)фенил]-5-метил-1Hпиразоло[4,3-с]пиридин-3,6(2H,5H)-дион, ранее GKT137831 и GKT-901.Exemplary NOX (NADPH oxidase) inhibitors include, but are not limited to, dual NOX inhibitors 1 and 4; GKT-831 (2-(2-chlorophenyl)-4-[3-(dimethylamino)phenyl]-5-methyl-1Hpyrazolo[4,3-c]pyridine-3,6(2H,5H)-dione, formerly GKT137831 and GKT-901.
Иллюстративные модуляторы белка внеклеточного матрикса включают, но не ограничиваются, CNX-024, CNX-025 и SB-030.Exemplary extracellular matrix protein modulators include, but are not limited to, CNX-024, CNX-025, and SB-030.
Иллюстративные агонисты фарнезоидных X-рецепторов (FXR) включают, но не ограничиваются, обетихолевую кислоту (ОХК), GS-9674, LJN-452 или LJN452, LMB763, EDP-305, AKN-083, INT-767, GNF-5120, LY2562175, INV-33, NTX-023-1, EP-024297, Px-103 и SR-45023.Exemplary farnesoid X receptor (FXR) agonists include, but are not limited to, obeticholic acid (OCA), GS-9674, LJN-452 or LJN452, LMB763, EDP-305, AKN-083, INT-767, GNF-5120, LY2562175 , INV-33, NTX-023-1, EP-024297, Px-103 and SR-45023.
Иллюстративные ингибиторы лиганда фракталкина включают, но не ограничиваются, E-6011 и KAN-0440567.Exemplary fractalkine ligand inhibitors include, but are not limited to, E-6011 and KAN-0440567.
Иллюстративный лиганд рецепторов фактора роста фибробластов 19 (FGF-19), рекомбинантный белок фактора роста фибробластов 19 (FGF-19) или функциональный сконструированный вариант FGF-19 включают, но не ограничиваются, NGM-282.Exemplary fibroblast growth factor 19 (FGF-19) receptor ligand, recombinant fibroblast growth factor 19 (FGF-19) protein, or FGF-19 functional engineered variant include, but are not limited to, NGM-282.
Иллюстративный лиганд рецепторов фактора роста фибробластов 21 (FGF-21), белок фактора роста фибробластов 21 (FGF-21), включает, но не ограничивается, PEG-FGF21 (ранее BMS-986036), YH-25348, BMS-986171, YH-25723, LY-3025876 и NNC-0194-0499.An exemplary fibroblast growth factor 21 (FGF-21) receptor ligand, fibroblast growth factor 21 (FGF-21) protein, includes, but is not limited to, PEG-FGF21 (formerly BMS-986036), YH-25348, BMS-986171, YH- 25723, LY-3025876 and NNC-0194-0499.
Иллюстративные ингибиторы галектина 3 включают, но не ограничиваются, GR-MD-02, TD-139, ANG-4021, галектин-3С, LJPC-201, TFD-100, GR-MD-03, GR-MD-04, GM-MD-01, GM-CT-01, GM-CT-02, Gal-100 и Gal-200.Exemplary galectin 3 inhibitors include, but are not limited to, GR-MD-02, TD-139, ANG-4021, galectin-3C, LJPC-201, TFD-100, GR-MD-03, GR-MD-04, GM- MD-01, GM-CT-01, GM-CT-02, Gal-100 and Gal-200.
Иллюстративные аналоги глюкагоноподобного пептида (ГПП-1) включают, но не ограничиваются, семаглутид, лираглутид, эксенатид, албиглутид, дулаглутид, ликсисенатид, локсенатид, эфпегленатид, таспоглутид, MKC-253, DLP-205 и ORMD-0901Illustrative glucagon-like peptide (GLP-1) analogs include, but are not limited to, semaglutide, liraglutide, exenatide, albiglutide, dulaglutide, lixisenatide, loxenatide, efpeglenatide, taspoglutide, MKC-253, DLP-205, and ORMD-0901
Иллюстративные агонисты рецепторов глюкагоноподобного пептида-1 (ГПП-1) включают, но не ограничиваются, LY-3305677 и оксинтомодулин длительного действия.Exemplary glucagon-like peptide-1 (GLP-1) receptor agonists include, but are not limited to, LY-3305677 and long acting oxyntomodulin.
Иллюстративные модуляторы сопряженных с G-белком рецепторов (GPCR), включают, но не ограничиваются, CNX-023.Exemplary G protein coupled receptor (GPCR) modulators include, but are not limited to, CNX-023.
Иллюстративный антагонист сопряженных с G-белком рецепторов 84 (антагонист GPR84), ингибитор лиганда фактора роста соединительной ткани и агонист рецепторов свободной жирной кислоты 1 (агонист FFAR1) включают, но не ограничиваются, PBI-4050, PBI-4265, PBI-4283 и PBI-4299.Exemplary G protein-coupled receptor 84 antagonist (GPR84 antagonist), connective tissue growth factor ligand inhibitor, and free fatty acid receptor 1 agonist (FFAR1 agonist) include, but are not limited to, PBI-4050, PBI-4265, PBI-4283, and PBI -4299.
- 9 042734- 9 042734
Иллюстративные ингибиторы сигнального пути Hedgehog в клетках включают, но не ограничиваются, висмодегиб, TAK-441, IPI-926, саридегиб, сонидегиб/эрисмодегиб, BMS-833923/XL139, PF04449913, таладегиб/LY2940680, ETS-2400, SHR-1539 и CUR61414.Exemplary Hedgehog signaling inhibitors in cells include, but are not limited to, vismodegib, TAK-441, IPI-926, saridegib, sonidegib/erismodegib, BMS-833923/XL139, PF04449913, taladegib/LY 2 940680, ETS-2400, SHR-1539 and CUR61414.
Иллюстративные ингибиторы натрий-зависимого котранспортера желчных кислот в подвздошной кишке включают, но не ограничиваются, A-4250, GSK-2330672, воликсибат, CJ-14199 и элобиксибат.Exemplary inhibitors of the sodium-dependent bile acid cotransporter in the ileum include, but are not limited to, A-4250, GSK-2330672, volixibate, CJ-14199, and elobixibate.
Иллюстративные иммуномодуляторы включают, но не ограничиваются, PBI-4050, PBI-4265, PBI4283, PBI-4299 и AIC-649.Illustrative immunomodulators include, but are not limited to, PBI-4050, PBI-4265, PBI4283, PBI-4299 and AIC-649.
Иллюстративный сенсибилизатор инсулина и агонист рецепторов MHC-1 включают, но не ограничиваются, MSDC-0602k, MSDC-0602, CSTI-100 и AMRI.Exemplary insulin sensitizer and MHC-1 receptor agonist include, but are not limited to, MSDC-0602k, MSDC-0602, CSTI-100, and AMRI.
Иллюстративные ингибиторы интегрина включают, но не ограничиваются, ингибиторы интегрина фирмы Pliant Therapeutic, ингибиторы интегрина фирмы Indalo Therapeutics, ингибиторы интегрина Сент-Луисского университета, ProAgio и GSK-3008348.Exemplary integrin inhibitors include, but are not limited to, Pliant Therapeutic Integrin Inhibitors, Indalo Therapeutics Integrin Inhibitors, Saint Louis University Integrin Inhibitors, ProAgio, and GSK-3008348.
Иллюстративные ингибиторы кетогексокиназы включают, но не ограничиваются, JNJ-28165722; JNJ-42065426; JNJ-42152981; JNJ-42740815; JNJ-42740828 и PF-06835919.Exemplary ketohexokinase inhibitors include, but are not limited to, JNJ-28165722; JNJ-42065426; JNJ-42152981; JNJ-42740815; JNJ-42740828 and PF-06835919.
Иллюстративные ингибиторы лейкотриенов/фосфодиэстеразы/липоксигеназы включают, но не ограничиваются, типелукаст (ранее MN-001), томелукаст, сулукаст, масилукаст, зафирлукаст, пранлукаст, монтелукаст, гемилукаст, верлукаст, аклукаст, побиликаст, циналукаст и иралукаст.Exemplary leukotriene/phosphodiesterase/lipoxygenase inhibitors include, but are not limited to, tipelukast (formerly MN-001), tomelukast, sulukast, masilukast, zafirlukast, pranlukast, montelukast, gemilukast, verlukast, aclukast, pobilikast, cinalukast, and iralukast.
Иллюстративные ингибиторы гомолога лизилоксидазы 2 включают, но не ограничиваются, раппапорт, интермун, фармаксис, AB-0023, симтузумаб, PXS-5382A и PXS-5338.Exemplary lysyl oxidase 2 homologue inhibitors include, but are not limited to, Rappaport, Intermun, Pharmaxis, AB-0023, Simtuzumab, PXS-5382A, and PXS-5338.
Иллюстративные макролиды включают, но не ограничиваются, солитромицин, азитромицин и эритромицин.Illustrative macrolides include, but are not limited to, solitromycin, azithromycin, and erythromycin.
Иллюстративные модуляторы макрофагальных маннозных рецепторов включают, но не ограничиваются, AB-0023, MT-1001, [18F]FB18mHSA, ксемис, технеций Tc 99m тильманоцепт и CDX-1307.Exemplary macrophage mannose receptor modulators include, but are not limited to, AB-0023, MT-1001, [18F]FB18mHSA, xemis, Tc 99m technetium tilmanocept, and CDX-1307.
Иллюстративные модулятор метил-CpG-связывающего белка и ингибиторы трансглютаминазы включают, но не ограничиваются, цистеамин, EC цистеамин, цистеамина битартрат с энтеросолюбильным покрытием, цистеамина битартрат (с энтеросолюбильным покрытием), бенну, цистеамина битартрат (с энтеросолюбильным покрытием), раптор, цистеамина битартрат, DR цистеамин, энтеросолюбильный цистеамина битартрат с отсроченным высвобождением, меркаптамин, меркаптамин (с энтеросолюбильным покрытием), бенну, меркаптамин (с энтеросолюбильным покрытием), раптор, RP-103, RP-104, процисби и меркаптамин (с энтеросолюбильным покрытием).Exemplary methyl-CpG-binding protein modulator and transglutaminase inhibitors include, but are not limited to, cysteamine, EC cysteamine, enteric-coated cysteamine bitartrate, cysteamine bitartrate (enteric-coated), bennu, cysteamine bitartrate (enteric-coated), raptor, cysteamine bitartrate , DR cysteamine, delayed-release enteric cysteamine bitartrate, mercaptamine, mercaptamine (enteric-coated), bennu, mercaptamine (enteric-coated), raptor, RP-103, RP-104, procisbi, and mercaptamine (enteric-coated).
Иллюстративные антагонисты miRNA включают, но не ограничиваются, RG-125 (ранее AZD4076), RGLS-5040, RG-101, MGN-5804 и MRG-201.Exemplary miRNA antagonists include, but are not limited to, RG-125 (formerly AZD4076), RGLS-5040, RG-101, MGN-5804, and MRG-201.
Иллюстративные стимуляторы металлопротеаз-9 (MMP-9) включают, но не ограничиваются, стимулятор MMP-9 Elastomics Ab.Exemplary metalloprotease-9 (MMP-9) stimulators include, but are not limited to, Elastomics Ab MMP-9 stimulator.
Иллюстративный ингибитор семейства митохондриальных носителей и ингибитор митохондриального белка-носителя фосфата включают, но не ограничиваются, TRO-19622, трофос, олесоксим, RG-6083 или RO-7090919.Exemplary mitochondrial carrier family inhibitor and mitochondrial phosphate carrier protein inhibitor include, but are not limited to, TRO-19622, trophos, olesoxime, RG-6083, or RO-7090919.
Иллюстративные ингибиторы миелопероксидазы включают, но не ограничиваются, PF-06667272.Exemplary myeloperoxidase inhibitors include, but are not limited to, PF-06667272.
Иллюстративные моноклональные антитела (мАт) включают, но не ограничиваются, бертилимумаб, NGM-313, мАт, нацеленные на IL-20, фрезолимумаб (анти-TGFe) (ранее GC1008), тимолумаб, ранее BTT-1023, намацизумаб, омализумаб, ранибизумаб, бевацизумаб, лебрикизумаб, эпратузумаб, фелвизумаб, матузумаб, монализумаб, реслизумаб, форалумаб (NI-0401, анти-CD3), симтизумаб (GS-6624) мАт против LOXL2, устекинумаб, анти-ФНО-антитело и инебилизумабIllustrative monoclonal antibodies (mAbs) include, but are not limited to, bertilimumab, NGM-313, IL-20 targeting mAbs, frezolimumab (anti-TGFe) (formerly GC1008), thymolumab, formerly BTT-1023, namacizumab, omalizumab, ranibizumab, bevacizumab, lebrikizumab, epratuzumab, felvizumab, matuzumab, monalizumab, reslizumab, foralumab (NI-0401, anti-CD3), simtizumab (GS-6624) anti-LOXL2 mAb, ustekinumab, anti-TNF antibody, and inebilizumab
Иллюстративные моноклональные антитела выбраны из группы, состоящей из анти-П.20 мАт, антиTGFe антител, анти-CD3 антител, анти-.ОХ.2 антител и анти-ФНО антител.Exemplary monoclonal antibodies are selected from the group consisting of anti-P.20 mAbs, antiTGFe antibodies, anti-CD3 antibodies, anti-.OX.2 antibodies, and anti-TNF antibodies.
Иллюстративные модуляторы mTOR включают, но не ограничиваются, MSDC-0602 и генную терапию на основе AAB, которую вводят совместно с SVP-сиролимусом.Exemplary mTOR modulators include, but are not limited to, MSDC-0602 and AAB-based gene therapy co-administered with SVP-sirolimus.
Иллюстративный стимулятор НАД-зависимой деацетилазы сиртуин-1; ингибитор ФДЭ-5 включают, но не ограничиваются, NS-0200.An exemplary NAD-dependent deacetylase sirtuin-1 stimulator; PDE-5 inhibitor include, but are not limited to, NS-0200.
Иллюстративные ингибиторы NF-каппа-В включают, но не ограничиваются, LC-280126.Exemplary NF-kappa-B inhibitors include, but are not limited to, LC-280126.
Иллюстративные агонисты рецептора никотиновой кислоты (GPR109) включают, но не ограничиваются, ARI-3037MO, MMF, LUF 6283, ацифран, IBC 293, MK-1903, GSK256073, MK-6892, MK-0354, SLx-4090, ломитапид, лексибулин, апабеталон, ацифран, ларопипрант, дапоринад, анацетрапиб, INCB-19602, ST-07-02, ломефлоксацин, ниацин и ларопипрант с контролируемым высвобождением.Exemplary nicotinic acid receptor (GPR109) agonists include, but are not limited to, ARI-3037MO, MMF, LUF 6283, acifran, IBC 293, MK-1903, GSK256073, MK-6892, MK-0354, SLx-4090, lomitapide, lexibulin, apabetalone, acifran, laropiprant, daporinad, anacetrapib, INCB-19602, ST-07-02, lomefloxacin, niacin, and controlled release laropiprant.
Иллюстративные нестероидные противовоспалительные лекарственные препараты (НПВП) включают, но не ограничиваются, F-351, салицилаты (аспирин), ацетаминофен, производные пропионовой кислоты (ибупрофен, напроксен), производные уксусной кислоты (индометацин, диклофенак), производные эноловой кислоты (пироксикам, фенилбутазон), производные антраниловой кислоты (меклофеналминовую кислоту, флуфенамовую кислоту), селективные ингибиторы COX-2 (целекоксиб, парекоксиб) и сульфонанилиды (нимесулид).Illustrative non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) include, but are not limited to, F-351, salicylates (aspirin), acetaminophen, propionic acid derivatives (ibuprofen, naproxen), acetic acid derivatives (indomethacin, diclofenac), enolic acid derivatives (piroxicam, phenylbutazone ), anthranilic acid derivatives (meclofenalmic acid, flufenamic acid), selective COX-2 inhibitors (celecoxib, parecoxib) and sulfonanilides (nimesulide).
Иллюстративные лиганды ядерных рецепторов включают, но не ограничиваются, DUR-928 (ранееExemplary nuclear receptor ligands include, but are not limited to, DUR-928 (formerly
- 10 042734- 10 042734
DV 928).DV 928).
Иллюстративные агонисты белка P2Y13 включают, но не ограничиваются, C-209.Exemplary P2Y13 protein agonists include, but are not limited to, C-209.
Иллюстративные модуляторы PDGFR включают, но не ограничиваются, BOT-501 и BOT-191.Exemplary PDGFR modulators include, but are not limited to, BOT-501 and BOT-191.
Иллюстративные стимуляторы фенилаланин-гидроксилазы включают, но не ограничиваются, пегвалиазу, сапроптерин, AAV-PAH, CDX-6114 сепиаптерин, RMN-168, ALTU-236, ETX-101, хепастем, ролипрам и алпростадил.Exemplary phenylalanine hydroxylase stimulants include, but are not limited to, pegvalase, sapropterin, AAV-PAH, CDX-6114 sepiapterin, RMN-168, ALTU-236, ETX-101, hepastem, rolipram, and alprostadil.
Иллюстративные агонисты PPAR-альфа включают, но не ограничиваются, фенофибрат, ципрофибрат, пемафибрат, гемфиброзил, клофибрат, бинифибрат, клинофибрат, клофибриновую кислоту, никофибрат, пирифибрат, плафибрид, ронифибрат, теофибрат, токофибрат и SR10171;Illustrative PPAR alpha agonists include, but are not limited to, fenofibrate, ciprofibrate, pemafibrate, gemfibrozil, clofibrate, binifibrate, clinofibrate, clofibric acid, nicofibrate, pyrifibrate, plafibride, ronifibrate, theofibrate, tocofibrate, and SR10171;
Иллюстративные агонисты PPAR-гамма включают, но не ограничиваются, пиоглитазон, дейтерированный пиоглитазон, росиглитазон, эфатутазон, ATx08-001, OMS-405, CHS-131, THR-0921, SER-150-DN, KDT-501, GED-0507-34-Levo, CLC-3001 и ALL-4.Exemplary PPAR-gamma agonists include, but are not limited to, pioglitazone, deuterated pioglitazone, rosiglitazone, efatutazone, ATx08-001, OMS-405, CHS-131, THR-0921, SER-150-DN, KDT-501, GED-0507- 34-Levo, CLC-3001 and ALL-4.
Иллюстративные агонисты PPAR-дельта включают, но не ограничиваются, GW501516 (эндурабол или ({4-[({4-метил-2-[4-(трифторметил)фенил]-1,3-тиазол-5-ил}метил)сульфанил]-2-метилфенокси}уксусную кислоту)), MBX8025 (селаделпар или {2-метил-4-[5-метил-2-(4-трифторметил-фенил)-2H[1,2,3]триазол-4-илметилсилфанил]фенокси}уксусную кислоту), GW0742 ([4-[[[2-[3-фтор-4-(трифторметил)фенил]-4-метил-5-тиазолил]метил]тио]-2-метилфенокси]уксусную кислоту), L165041, HPP-593 и NCP-1046.Exemplary PPAR delta agonists include, but are not limited to, GW501516 (endurabol or ({4-[({4-methyl-2-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-1,3-thiazol-5-yl}methyl)sulfanyl ]-2-methylphenoxy}acetic acid)), MBX8025 (celadelpar or {2-methyl-4-[5-methyl-2-(4-trifluoromethyl-phenyl)-2H[1,2,3]triazol-4-ylmethylsilfanyl ]phenoxy}acetic acid), GW0742 ([4-[[[2-[3-fluoro-4-(trifluoromethyl)phenyl]-4-methyl-5-thiazolyl]methyl]thio]-2-methylphenoxy]acetic acid) , L165041, HPP-593 and NCP-1046.
Иллюстративные агонисты PPAR-альфа/гамма (также называемые глитазарами) включают, но не ограничиваются, сароглитазар, алеглитазар, мураглитазар, тесаглитазар и DSP-8658.Illustrative PPAR-alpha/gamma agonists (also referred to as glitazars) include, but are not limited to, saroglitazar, aleglitazar, muraglitazar, tesaglitazar, and DSP-8658.
В дополнение к элафибранору иллюстративные агонисты PPAR-альфа/дельта включают, без ограничения, T913659.In addition to elafibranor, exemplary PPAR alpha/delta agonists include, without limitation, T913659.
Иллюстративные агонисты PPAR-гамма/дельта включают, но не ограничиваются, конъюгированную линолевую кислоту (КЛК) и T3D-959.Exemplary PPAR gamma/delta agonists include, but are not limited to, conjugated linoleic acid (CLA) and T3D-959.
Иллюстративные агонисты PPAR-альфа/гамма/дельта или пан-агонисты PPAR, включают, но не ограничиваются, IVA337 (ланифибранор), TTA (тетрадецилтиоуксусную кислоту), бавачинин, GW4148, GW9135, безафибрат, лобеглитазон и CSO38.Exemplary PPAR alpha/gamma/delta agonists or PPAR pan agonists include, but are not limited to, IVA337 (lanifibranor), TTA (tetradecylthioacetic acid), bavachinin, GW4148, GW9135, bezafibrate, lobeglitazone, and CSO38.
Иллюстративные антагонисты рецепторов, активируемых протеазами (PAR)-2, включают, но не ограничиваются, PZ-235 и NP-003.Exemplary protease-activated receptor (PAR)-2 antagonists include, but are not limited to, PZ-235 and NP-003.
Иллюстративные модуляторы протеинкиназы включают, но не ограничиваются, CNX-014, MB-11055, ALF-1, мангиферин, амлексанокс, GS-444217, REG-101 и валин.Exemplary protein kinase modulators include, but are not limited to, CNX-014, MB-11055, ALF-1, mangiferin, amlexanox, GS-444217, REG-101, and valine.
Иллюстративный ингибиторы Rho-ассоциированной протеинкиназы 2 (ROCK2) включают, но не ограничиваются, KD-025, TRX-101, BA-1049, LYC-53976, INS-117548 и RKI-1447.Exemplary inhibitors of Rho-associated protein kinase 2 (ROCK2) include, but are not limited to, KD-025, TRX-101, BA-1049, LYC-53976, INS-117548, and RKI-1447.
Иллюстративные ингибиторы регулирующей сигналы киназы 1 (ASK1) включают, но не ограничиваются, селонсертиб (ранее GS-4997).Exemplary signal-regulating kinase 1 (ASK1) inhibitors include, but are not limited to, seloncertib (formerly GS-4997).
Иллюстративные ингибиторы натрий-глюкозного транспортера (SGLT) 1 включают, но не ограничиваются, ЬХ-4212/ЬХ-4211/сотаглифлозин, SAR-439954, LIK-066 (ликоглифозин), LX-2761, GSK161235, LP-925219, KGA-2727, SAR-7226, SAR-474832, SY-008 и AVX-3O3O.Exemplary sodium glucose transporter (SGLT) 1 inhibitors include, but are not limited to, LX-4212/LX-4211/Sotagliflozin, SAR-439954, LIK-066 (lycoglyfosin), LX-2761, GSK161235, LP-925219, KGA-2727 , SAR-7226, SAR-474832, SY-008 and AVX-3O3O.
Иллюстративные ингибиторы натрий-глюкозного транспортера (SGLT) 2 включают, но не ограничиваются, ремоглифлозин, дапаглифлозин, эмпаглифлозин, эртуглифлозин, сотаглифлозин, ипраглифлозин, тианаглифлозин, канаглифлозин, тофоглифлозин, янаглифлозин, бексаглифлозин, лусеоглифлозин, серглифлозин, HEC-44616, AST-1935 и PLD-101.Exemplary sodium glucose transporter (SGLT) 2 inhibitors include, but are not limited to, remogliflozin, dapagliflozin, empagliflozin, ertugliflozin, sotagliflozin, ipragliflozin, tianagliflozin, canagliflozin, tofogliflozin, yanagliflozin, bexagliflozin, luceogliflozin, sergliflozin, HEC-44616, AST-1935, and PLD-101.
Иллюстративные ингибиторы стеароил-КоА-десатуразы-1/конъюгаты жирных и желчных кислот включают, но не ограничиваются, арамхол, GRC-9332, стимхол, SN-2998, GSK-1940029 и XEN-801.Exemplary stearoyl-CoA desaturase-1/fatty-bile acid conjugates include, but are not limited to, aramchol, GRC-9332, stimchol, SN-2998, GSK-1940029, and XEN-801.
Иллюстративные агонисты Р-рецепторов тиреоидного гормона (THR β) включают, но не ограничиваются, VK-2809, MGL-3196, MGL-3745, SKL-14763, собетиром, BCT-304, ZYT-1, MB-07811 и эпротиром.Exemplary thyroid hormone P receptor (THRβ) agonists include, but are not limited to, VK-2809, MGL-3196, MGL-3745, SKL-14763, sobetir, BCT-304, ZYT-1, MB-07811, and eprotir.
Иллюстративные антагонисты толл-подобных рецепторов 2 и 4 (TLR-2) антагонисты включают, но не ограничиваются, CI-201, также известный как VB-201.Exemplary toll-like receptor 2 and 4 (TLR-2) antagonists include, but are not limited to, CI-201, also known as VB-201.
Иллюстративные антагонисты толл-подобных рецепторов 4 (TLR-4) включают, но не ограничиваются, налтрексон, JKB-121, также известный как налмефен, M-62812, ресаторвид, дендрофилин, CS-4771, AyuV-1, AyuV-25, NI-0101, EDA-HPVE7 и эриторан.Exemplary toll-like receptor 4 (TLR-4) antagonists include, but are not limited to, naltrexone, JKB-121, also known as nalmefene, M-62812, resatorvid, dendrofilin, CS-4771, AyuV-1, AyuV-25, NI -0101, EDA-HPVE7 and eritoran.
Иллюстративные ингибиторы естественных киллерных T-клеток I типа включают, но не ограничиваются, GRI-0621.Exemplary type I natural killer T cell inhibitors include, but are not limited to, GRI-0621.
Иллюстративные модуляторы рецепторов тирозинкиназы (RTK) включают, но не ограничиваются, CNX-025, KBP-7018, нинтеданиб и сорафениб.Exemplary tyrosine kinase (RTK) receptor modulators include, but are not limited to, CNX-025, KBP-7018, nintedanib, and sorafenib.
Иллюстративные ингибиторы анионообменника уратов 1 и ингибиторы ксантиноксидазы включают, но не ограничиваются, лезинурад, RLBN-1001, веринурад, KUX-1151 и лезинурад + аллопуринол.Exemplary urate anion exchanger 1 inhibitors and xanthine oxidase inhibitors include, but are not limited to, lesinurad, RLBN-1001, verinurad, KUX-1151, and lesinurad + allopurinol.
Иллюстративные ингибиторы белка сосудистой адгезии-1 (VAP-1), также называемые медьсодержащие оксидазы 2 (AOC3), включают, но не ограничиваются, BI-1467335, ранее PXS-4728A, CP-664511, PRX-167700, ASP-8232, RTU-1096, RTU-007 и BTT-1023.Exemplary inhibitors of vascular adhesion protein-1 (VAP-1), also referred to as copper-containing oxidases 2 (AOC3), include, but are not limited to, BI-1467335, formerly PXS-4728A, CP-664511, PRX-167700, ASP-8232, RTU -1096, RTU-007 and BTT-1023.
Иллюстративные агонисты рецепторов витамина D (VDR) включают, но не ограничиваются, каль- 11 042734 циферол, альфакальцидол, 1,25-дигидроксивитамин D3, витамин D2, витамин D3, кальцитриол, витаминExemplary vitamin D receptor (VDR) agonists include, but are not limited to, calciferol, alfacalcidol, 1,25-dihydroxyvitamin D3, vitamin D2, vitamin D3, calcitriol, vitamin
D4, витамин D5, дигидротахистерол, кальципотриол, такальцитол, 1,24-дигидроксивитамин D3 и парикальцитол.D4, vitamin D5, dihydrotachysterol, calcipotriol, tacalcitol, 1,24-dihydroxyvitamin D3, and paricalcitol.
Согласно настоящему изобретению термин агонисты PPAR относится к агонистам рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом, которые представляют собой класс лекарственных препаратов, играющих центральную роль в гомеостазе липидов и глюкозы. PPARa главным образом влияет на метаболизм жирных кислот, и его активация уровень содержания липидов, тогда как PPARy в основном участвует в регуляции адипогенеза, энергетического баланса и биосинтеза липидов. PPARδ участвует в окислении жирных кислот, главным образом в скелетных и сердечных мышцах, но также регулирует уровень глюкозы и холестерина в крови.According to the present invention, the term PPAR agonists refers to peroxisome proliferator-activated receptor agonists, which are a class of drugs that play a central role in lipid and glucose homeostasis. PPARa mainly affects fatty acid metabolism and its lipid activation, while PPARy is mainly involved in the regulation of adipogenesis, energy balance and lipid biosynthesis. PPARδ is involved in fatty acid oxidation, mainly in skeletal and cardiac muscle, but also regulates blood glucose and cholesterol levels.
В более конкретном варианте осуществления соединение по формуле (I) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль.In a more specific embodiment, the compound of formula (I) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат по настоящему изобретению:In a specific embodiment, the combination drug of the present invention:
компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль;component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
компонент (ii) выбран из GKT-831, арамхола, SHP-625, эмрикасана, сароглитазара, IMM-124-E, GS-9674, НГМ-282, A-4250, GR-MD-02, gS-4997, F-351, солитромицина, ремоглифлозина, BTT-1023, IVA-337 (ланифибранора), JKB-121 (налмефена), KD-025, MSDC-0602 или MSDC-0602k, PBI-4050, PEG-FGF21, типелукаста, VK-2809, MGL-3196, Gs-0976, RG-125, воликсибата, пиоглитазона, семаглутида, GSK2330672, MBX-8025, CP-640186, селонсертиба, GKT-831, PXS-4728A, висмодегиба, CF-102 (намоденосона), MT-3995 (апараренона), икосапентэтилового эфира, KD-025, DUR-928 и гемкабена, в частности селонсертиба, GKT-831, PXS-4728A, арамхола, PBI-4050, MSDC-0602k, VK-2809, MGL-3196, висмодегиба, CF-102 (намоденосона), MT-3995 (апараренона), JKB-121 (налмефена), эмрикасана, KD-025 и DUR-928.component (ii) is selected from GKT-831, aramhol, SHP-625, emrikasan, saroglitazar, IMM-124-E, GS-9674, NGM-282, A-4250, GR-MD-02, gS-4997, F- 351, solitromycin, remogliflozin, BTT-1023, IVA-337 (lanifibranor), JKB-121 (nalmefene), KD-025, MSDC-0602 or MSDC-0602k, PBI-4050, PEG-FGF21, tipelukast, VK-2809, MGL-3196, Gs-0976, RG-125, Volixibate, Pioglitazone, Semaglutide, GSK2330672, MBX-8025, CP-640186, Seloncertib, GKT-831, PXS-4728A, Vismodegib, CF-102 (Namodenoson), MT-3995 (apararenone), icosapentethyl ether, KD-025, DUR-928 and gemcaben, in particular seloncertib, GKT-831, PXS-4728A, aramchol, PBI-4050, MSDC-0602k, VK-2809, MGL-3196, vismodegib, CF -102 (namodenoson), MT-3995 (apararenone), JKB-121 (nalmefene), emrikasan, KD-025 and DUR-928.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат по настоящему изобретению:In a specific embodiment, the combination drug of the present invention:
компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль;component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
компонент (ii) выбран из GKT-831, арамхола, SHP-625, эмрикасана, сароглитазара, IMM-124-E, GS-9674, NGM-282, A-4250, GR-MD-02, GS-4997, LJN-452, F-351, солитромицина, ремоглифлозина, BTT-1023, IVA-337 (ланифибранора), JKB-121, KD-025, MSDC-0602, PBI-4050, PEG-FGF21, типелукаста, VK-2809, MGL-3196, GS-0976, пентасы, RG-125, воликсибата, пиоглитазона, урсодезоксихолевой кислоты, семаглутида, GSK2330672 и MBX-8025, в частности из арамхола, SHP-625, эмрикасана, сароглитазара, IMM-124-E, GS-9674, NGM-282, A-4250, GR-MD-02, GS-4997, LJN-452, F-351, солитромицина, ремоглифлозина, BTT-1023, IVA-337 (ланифибранора), JKB-121, KD-025, MSDC-0602, PBI-4050, PEG-FGF21, типелукаста, VK-2809, MGL-3196, GS-0976, RG-125, воликсибата, пиоглитазон, урсодезоксихолевой кислоты, семаглутида, GSK2330672 и MBX-8025.component (ii) is selected from GKT-831, aramhol, SHP-625, emrikasan, saroglitazar, IMM-124-E, GS-9674, NGM-282, A-4250, GR-MD-02, GS-4997, LJN- 452, F-351, solitromycin, remogliflozin, BTT-1023, IVA-337 (lanifibranor), JKB-121, KD-025, MSDC-0602, PBI-4050, PEG-FGF21, tipelukast, VK-2809, MGL-3196 , GS-0976, pentases, RG-125, volixibate, pioglitazone, ursodeoxycholic acid, semaglutide, GSK2330672 and MBX-8025, specifically from aramchol, SHP-625, emrikasan, saroglitazar, IMM-124-E, GS-9674, NGM -282, A-4250, GR-MD-02, GS-4997, LJN-452, F-351, solitromycin, remogliflozin, BTT-1023, IVA-337 (lanifibranor), JKB-121, KD-025, MSDC- 0602, PBI-4050, PEG-FGF21, tipelukast, VK-2809, MGL-3196, GS-0976, RG-125, volixibate, pioglitazone, ursodeoxycholic acid, semaglutide, GSK2330672 and MBX-8025.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат по настоящему изобретению:In a specific embodiment, the combination drug of the present invention:
компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль;component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
компонент (ii) выбран из GKT-831, арамхола, SHP-625, эмрикасана, сароглитазара, IMM-124-E, GS-9674, NGM-282, A-4250, GR-MD-02, gS-4997, F-351, солитромицина, ремоглифлозина, BTT-1023, IVA-337 (ланифибранора), JKB-121, KD-025, MSDC-0602, PBI-4050, PEG-FGF21, типелукаста, BK-2809, MGL-3196, GS -0976, пентасы, RG-125, воликсибата, пиоглитазона, семаглутида, GSK2330672 и MBX-8025.component (ii) is selected from GKT-831, aramhol, SHP-625, emrikasan, saroglitazar, IMM-124-E, GS-9674, NGM-282, A-4250, GR-MD-02, gS-4997, F- 351, solitromycin, remogliflozin, BTT-1023, IVA-337 (lanifibranor), JKB-121, KD-025, MSDC-0602, PBI-4050, PEG-FGF21, tipelukast, BK-2809, MGL-3196, GS-0976 , pentases, RG-125, volixibate, pioglitazone, semaglutide, GSK2330672 and MBX-8025.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат представляет собой комбинацию ELA и GKT-831, ELA и селонсертиба, ELA и GS-0976 или ELA и пентасы.In a particular embodiment, the combination drug is a combination of ELA and GKT-831, ELA and Seloncertib, ELA and GS-0976, or ELA and Pentasa.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат представляет собой комбинацию ELA и GS-0976, ELA и CP-640186, ELA и селонсертиба, ELA и GKT-831 (ранее GKT137831), ELA и BI-1467335/PXS-4728A, ELA и арамхола, ELA и PBI-4050, ELA и MSDC-0602k, ELA и VK-2809, ELA и MGL-3196, ELA и висмодегиба, ELA и CF-102 (намоденосона), ELA и MT-3995 (апараренон), ELA и JKB-121 (налмефен), ELA и эмрикасан, ELA и KD-025, ELA и DUR-928 или ELA и гемкабен.In a specific embodiment, the combination drug is a combination of ELA and GS-0976, ELA and CP-640186, ELA and seloncertib, ELA and GKT-831 (formerly GKT137831), ELA and BI-1467335/PXS-4728A, ELA and aramchol, ELA and PBI-4050, ELA and MSDC-0602k, ELA and VK-2809, ELA and MGL-3196, ELA and vismodegib, ELA and CF-102 (namodenoson), ELA and MT-3995 (apararenone), ELA and JKB- 121 (nalmefene), ELA and emrikasan, ELA and KD-025, ELA and DUR-928 or ELA and gemkaben.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат представляет собой комбинацию ELA и селонсертиба, ELA и GKT-831 (ранее GKT137831), ELA и BI-1467335/PXS4728A, ELA и арамхола, ELA и PBI-4050, ELA и MSDC-0602k, ELA и VK-2809, ELA и MGL-3196, ELA и висмодегиба, ELA и CF-102 (намоденосона), ELA и MT-3995 (апараренона), ELA и JKB-121 (налмефена), ELA и эмрикасана, ELA и KD-025, а также ELA и DUR-928In a particular embodiment, the combination drug is a combination of ELA and seloncertib, ELA and GKT-831 (formerly GKT137831), ELA and BI-1467335/PXS4728A, ELA and aramchol, ELA and PBI-4050, ELA and MSDC-0602k, ELA and VK-2809, ELA and MGL-3196, ELA and vismodegib, ELA and CF-102 (namodenoson), ELA and MT-3995 (apararenone), ELA and JKB-121 (nalmefene), ELA and emrikasan, ELA and KD-025 , as well as ELA and DUR-928
В дополнительном конкретном варианте данного осуществления компонент (ii) не является ОХК или CVC.In a further specific embodiment of this implementation, component (ii) is not OCC or CVC.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) выбран из ингибитора АКК, ингибитора ASK1,In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof and component (ii) is selected from an ACC inhibitor, an ASK1 inhibitor,
- 12 042734 двойного ингибитора NOX1 и NOX4, ингибитора VAP-1, ингибиторов стеароил-КоА-десатуразы1/конъюгата жирных и желчных кислот, антагониста GPR84/агониста FFAR1 или иммуномодулятора, модулятора mTOR или сенсибилизатора инсулина, агониста THRe, ингибитора сигнального пути hedgehog, агониста аденозиновых рецепторов A3, антагониста альдостероновых рецепторов, антагониста- 12 042734 dual NOX1 and NOX4 inhibitor, VAP-1 inhibitor, stearoyl-CoA desaturase1/fatty bile acid conjugate inhibitors, GPR84 antagonist/FFAR1 agonist or immunomodulator, mTOR modulator or insulin sensitizer, THRe agonist, hedgehog signaling pathway inhibitor, agonist adenosine A3 receptors, aldosterone receptor antagonist, antagonist
TLR-4, ингибитора каспазы, ингибитора ROCK2 и лиганда ядерных рецепторов.TLR-4, a caspase inhibitor, a ROCK2 inhibitor, and a nuclear receptor ligand.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль, и компонент (ii) представляет собой ингибитор АКК (в частности, GS-0976 или CP-640186, или гемкабен), ингибитор ASK1 (в частности, селонсертиб), двойной ингибитор NOX1 и NOX4 (в частности, GKT-831, ранее GKT137831), ингибитор VAP-1 (в частности, BI-1467335/PXS-4728A), ингибиторы стеароил-КоА-десатуразы-1/конъюгат жирных и желчных кислот (в частности, арамхол), антагонист GPR84/агонист FFAR1 или иммуномодулятор (в частности, PBI-4050), модулятор mTOR или сенсибилизатор инсулина (в частности, MSDC-0602k), агонист THRe (в частности, VK-2809 или MGL-3196), ингибитор сигнального пути Hedgehog (в частности, висмодегиб), агонисты аденозиновых рецепторов A3 (в частности, CF-102 (намоденосон)), антагонист альдостероновых рецепторов (в частности, MT-3995 (апараренон)), антагонист TLR-4 (в частности, JKB-121 (налмефен)), ингибитор каспазы (в частности, эмрикасан), ингибитор ROCK2 (в частности, KD-025) и лиганд ядерных рецепторов (в частности, DUR-928).In a specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an ACC inhibitor (particularly GS-0976 or CP-640186 or gemcaben), an ASK1 inhibitor (particularly seloncertib) , dual NOX1 and NOX4 inhibitor (particularly GKT-831, formerly GKT137831), VAP-1 inhibitor (particularly BI-1467335/PXS-4728A), stearoyl-CoA desaturase-1 inhibitors/fatty bile acid conjugate ( eg aramhol), GPR84 antagonist/FFAR1 agonist or immunomodulator (eg PBI-4050), mTOR modulator or insulin sensitizer (eg MSDC-0602k), THRe agonist (eg VK-2809 or MGL-3196) , Hedgehog signaling inhibitor (particularly vismodegib), adenosine A3 receptor agonists (particularly CF-102 (namodenoson)), aldosterone receptor antagonist (particularly MT-3995 (apararenone)), TLR-4 antagonist (particularly , JKB-121 (nalmefene)), a caspase inhibitor (particularly emrikasan), a ROCK2 inhibitor (particularly KD-025), and a nuclear receptor ligand (particularly DUR-928).
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибитор ASK1, двойной ингибитор NOX1 и NOX4, ингибитор VAP-1, ингибиторы стеароил-КоА-десатуразы-1/конъюгат жирных и желчных кислот, антагонист GPR84/агонист FFAR1 или иммуномодулятор, модулятор mTOR или сенсибилизатор инсулина, агонист THRe, ингибитор сигнального пути hedgehog, агонист аденозиновых рецепторов A3, антагонист альдостероновых рецепторов, антагонист TLR-4, ингибитор каспазы, ингибитор ROCK2 и лиганд ядерных рецепторов.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and component (ii) is an ASK1 inhibitor, a dual NOX1 and NOX4 inhibitor, a VAP-1 inhibitor, stearoyl-CoA desaturase-1 inhibitors/fatty bile conjugate acid, GPR84 antagonist/FFAR1 agonist or immunomodulator, mTOR modulator or insulin sensitizer, THRe agonist, hedgehog signaling pathway inhibitor, A3 adenosine receptor agonist, aldosterone receptor antagonist, TLR-4 antagonist, caspase inhibitor, ROCK2 inhibitor, and nuclear receptor ligand.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль, и компонент (ii) представляет собой ингибитор ASK1 (в частности, селонсертиб), двойной ингибитор NOX1 и NOX4 (в частности, GKT-831, ранее GKT137831), ингибитор VAP-1 (в частности, BI-1467335/PXS-4728A), ингибиторы стеароил-КоА-десатуразы-1/конъюгат жирных и желчных кислот (в частности, арамхол), антагонист GPR84/агонист FFAR1 или иммуномодулятор (в частности, PBI-4050), модулятор mTOR или сенсибилизатор инсулина (в частности, MSDC-0602k), агонист THRe (в частности, VK-2809 или MGL-3196), ингибитор сигнального пути hedgehog (в частности, висмодегиб), агонист аденозиновых рецепторов A3 (в частности, CF-102 (намоденосон)), антагонист альдостероновых рецепторов (в частности, MT-3995 (апараренон)), антагонист TLR-4 (в частности, JKB-121 (налмефен)), ингибитор каспазы (в частности, эмрикасан), ингибитор ROCK2 (в частности, KD025) и лиганд ядерных рецепторов (в частности, DUR-928).In a specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an ASK1 inhibitor (particularly seloncertib), a dual NOX1 and NOX4 inhibitor (particularly GKT-831, formerly GKT137831), VAP-1 inhibitor (particularly BI-1467335/PXS-4728A), stearoyl-CoA desaturase-1 inhibitors/fatty bile acid conjugate (particularly aramchol), GPR84 antagonist/FFAR1 agonist or immunomodulator (particularly PBI -4050), mTOR modulator or insulin sensitizer (particularly MSDC-0602k), THRe agonist (particularly VK-2809 or MGL-3196), hedgehog signaling pathway inhibitor (particularly vismodegib), adenosine A3 receptor agonist (in in particular CF-102 (namodenoson)), aldosterone receptor antagonist (in particular MT-3995 (apararenone)), TLR-4 antagonist (in particular JKB-121 (nalmefene)), caspase inhibitor (in particular emrikasan), a ROCK2 inhibitor (particularly KD025); and a nuclear receptor ligand (particularly DUR-928).
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибитор АКК.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an AKC inhibitor.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой GS-0976, CP-640186 или гемкабен.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof and component (ii) is GS-0976, CP-640186, or gemcaben.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой GS-0976.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is GS-0976.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой CP-640186.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is CP-640186.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой гемкабен.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is gemcaben.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибитор ASK1.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an ASK1 inhibitor.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой селонсертиб.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is seloncertib.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой двойной ингибитор NOX1 и NOX4.In a specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a dual inhibitor of NOX1 and NOX4.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой GKT-831.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is GKT-831.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибитор VAP-1.In a specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a VAP-1 inhibitor.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой BI-1467335/PXS-4728A.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is BI-1467335/PXS-4728A.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибиторы стеароил-КоА- 13 042734 десатуразы-1/конъюгат жирных и желчных кислот.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof and component (ii) is stearoyl-CoA desaturase-1/fatty bile acid conjugate inhibitors.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой арамхол.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is aramchol.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой антагонист GPR84/агонист FFAR1.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a GPR84 antagonist/FFAR1 agonist.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой PBI-4050.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is PBI-4050.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой модулятор mTOR или сенсибилизатор инсулина.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an mTOR modulator or insulin sensitizer.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой, в частности, MSDC-0602k.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is, in particular, MSDC-0602k.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой агонист THRe.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a THRe agonist.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой VK-2809 или MGL-3196.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is VK-2809 or MGL-3196.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой VK-2809.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is VK-2809.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой MGL-3196.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is MGL-3196.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибитор сигнального пути Hedgehog в клетках.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an inhibitor of the Hedgehog signaling pathway in cells.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой висмодегиб.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is vismodegib.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой агонист аденозиновых рецепторов A3.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an A3 adenosine receptor agonist.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой CF-102 (намоденосон).In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is CF-102 (namodenoson).
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой антагонист альдостероновых рецепторов.In a specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is an aldosterone receptor antagonist.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую сольи компонент (ii) представляет собой MT-3995 (апараренон).In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is MT-3995 (apararenone).
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой антагонист TLR-4.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a TLR-4 antagonist.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой JKB-121 (налмефен).In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is JKB-121 (nalmefene).
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую сольи компонент (ii) представляет собой лиганд ядерных рецепторов.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a nuclear receptor ligand.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой эмрикасан.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is emrikasan.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой ингибитор ROCK2.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a ROCK2 inhibitor.
В более конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой KD-025.In a more specific embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is KD-025.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой лиганд ядерных рецепторов.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is a nuclear receptor ligand.
В конкретном варианте осуществления компонент (i) представляет собой элафибранор или его фармацевтически приемлемую соль и компонент (ii) представляет собой DUR-928.In a particular embodiment, component (i) is elafibranor or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and component (ii) is DUR-928.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат по изобретению дополнительно содержит по меньшей мере один другой терапевтически активный агент, выбранный из ингибиторов JAK/STAT и другого противовоспалительного агента и/или иммуносупрессивного агента.In a specific embodiment, the combination drug product of the invention further comprises at least one other therapeutically active agent selected from JAK/STAT inhibitors and another anti-inflammatory agent and/or immunosuppressive agent.
Иллюстративные противовоспалительные и/или иммуносупрессивные агенты включают глюкокортикоиды, НПВП, циклофосфамид, нитрозомочевины, аналоги фолиевой кислоты, аналоги пурина, аналоги пиримидина, метотрексат, азатиоприн, меркаптопурин, циклоспорин, мириоцин, такролимус, сиролимус, производные микофеноловой кислоты, финголимод и другие модуляторы сфингозин-1-фосфатных рецепторов 1, моноклональные и/или поликлональные антитела против таких мишеней, как провоспалительные цитокины и провоспалительные рецепторы цитокинов, T-клеточные рецепторы и интегрины.Illustrative anti-inflammatory and/or immunosuppressive agents include glucocorticoids, NSAIDs, cyclophosphamide, nitrosoureas, folic acid analogs, purine analogs, pyrimidine analogs, methotrexate, azathioprine, mercaptopurine, cyclosporine, myriocin, tacrolimus, sirolimus, mycophenolic acid derivatives, fingolimod, and other sphingosine modulators. 1-phosphate receptors 1, monoclonal and/or polyclonal antibodies against targets such as pro-inflammatory cytokines and pro-inflammatory cytokine receptors, T-cell receptors and integrins.
В другом конкретном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению может до- 14 042734 полнительно содержать по меньшей мере один терапевтически активный агент с известной антифибротической активностью, например пирфенидон или ингибиторы рецепторов тирозинкиназы (RTKI), например нинтеданиб, сорафениб и другие RTKI, или блокаторы рецепторов ангиотензина II (AT1), или ингибитор CTGF, или любое антифиброзное соединение, соединение, способное вмешиваться в TGFe- и BMP-активируемые пути, включая активаторы латентного комплекса TGFe, например MMP2, MMP9, THBS1 или интегрины клеточной поверхности, рецепторы TGFe I типа (TGFBRI) или типа II (TGFBRII) и их лиганды, например, TGFe, активин, ингибин, нодал, антимюллеровский гормон, GDF или BMP, вспомогательные корецепторы (также известные как рецепторы III типа) или компоненты SMAD-зависимого канонического пути, включая регуляторные или ингибирующие белки SMAD, или члены SMAD-независимых или неканонических путей, включая различные ветви сигнального пути MAPK, сигнального пути TAK1, сигнального пути Rho ГТФаз, пути фосфатидилинозитол-3киназы/AKT, TGFe-индуцированный процесс EMT или канонические и неканонические сигнальные пути Hedgehog, включая лиганды Hh или гены-мишени, или любые члены пути WNT, или пути Notch, которые чувствительны к влиянию сигнализации TGFe.In another specific embodiment, the combination of the present invention may further comprise at least one therapeutically active agent with known antifibrotic activity, such as pirfenidone, or tyrosine kinase receptor inhibitors (RTKIs), such as nintedanib, sorafenib, and other RTKIs, or angiotensin receptor blockers. II (AT1), or CTGF inhibitor, or any antifibrotic compound capable of interfering with TGFe- and BMP-activated pathways, including TGFe latent complex activators, e.g. MMP2, MMP9, THBS1 or cell surface integrins, TGFe type I receptors (TGFBRI ) or type II (TGFBRII) and their ligands, e.g. TGFe, activin, inhibin, nodal, anti-Müllerian hormone, GDF or BMP, accessory co-receptors (also known as type III receptors) or components of the SMAD-dependent canonical pathway, including regulatory or inhibitory SMAD proteins, or members of SMAD-independent or non-canonical pathways, including various branches of the MAPK signaling pathway, TAK1 signaling pathway, Rho GTPases signaling pathway, phosphatidylinositol-3 kinase/AKT pathway, TGFe-induced EMT process, or canonical and non-canonical Hedgehog signaling pathways, including ligands Hh or target genes, or any members of the WNT pathway or Notch pathway that are sensitive to the effects of TGFe signaling.
В конкретном варианте осуществления изобретения другой терапевтически активный агент представляет собой агонист PPAR.In a specific embodiment of the invention, the other therapeutically active agent is a PPAR agonist.
В другом конкретном варианте осуществления агонист PPAR представляет собой агонист PPAR-альфа, агонист PPAR-гамма, агонист PPAR-дельта, двойной агонист PPAR-альфа/гамма, двойной агонист PPAR-альфа/дельта, двойной агонист PPAR-гамма/дельта или пан-агонист PPAR-альфа/гамма/дельта.In another specific embodiment, the PPAR agonist is a PPAR alpha agonist, a PPAR gamma agonist, a PPAR delta agonist, a PPAR alpha/gamma dual agonist, a PPAR alpha/delta dual agonist, a PPAR gamma/delta dual agonist, or a pan- PPAR-alpha/gamma/delta agonist.
В конкретном варианте осуществления другой терапевтически активный агент представляет собой: по меньшей мере один агонист PPAR-альфа;In a specific embodiment, the other therapeutically active agent is: at least one PPAR alpha agonist;
по меньшей мере один агонист PPAR-гамма;at least one PPAR-gamma agonist;
по меньшей мере один агонист PPAR-дельта;at least one PPAR delta agonist;
по меньшей мере один двойной агонист PPAR-альфа/дельта;at least one PPAR alpha/delta dual agonist;
по меньшей мере один агонист PPAR-альфа и по меньшей мере один агонист PPAR-дельта;at least one PPAR alpha agonist and at least one PPAR delta agonist;
по меньшей мере один двойной агонист PPAR-альфа/гамма;at least one PPAR alpha/gamma dual agonist;
по меньшей мере один агонист PPAR-альфа и по меньшей мере один агонист PPAR-гамма;at least one PPAR alpha agonist and at least one PPAR gamma agonist;
по меньшей мере один двойной агонист PPAR-гамма/дельта;at least one PPAR gamma/delta dual agonist;
по меньшей мере один агонист PPAR-гамма и по меньшей мере один агонист PPAR-дельта;at least one PPAR gamma agonist and at least one PPAR delta agonist;
по меньшей мере, один пан-агонист PPAR-альфа/гамма/дельта и по меньшей мере один агонист PPAR-альфа, по меньшей мере один агонист PPAR-гамма и по меньшей мере один агонист PPAR-дельта.at least one PPAR alpha/gamma/delta pan agonist and at least one PPAR alpha agonist, at least one PPAR gamma agonist and at least one PPAR delta agonist.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат по изобретению представляет собой композицию, содержащую компоненты (i) и (ii), как описано выше, и фармацевтически приемлемый носитель.In a particular embodiment, the combination drug of the invention is a composition containing components (i) and (ii) as described above and a pharmaceutically acceptable carrier.
В конкретном варианте осуществления комбинированный лекарственный препарат представляет собой составный комплект, включающих компоненты (i) и (ii), как описано выше, для последовательного, раздельного или одновременного использования.In a specific embodiment, the combined drug product is a composite kit comprising components (i) and (ii) as described above, for sequential, separate or simultaneous use.
В дополнительном варианте осуществления компоненты (i) и (ii) составляют в виде инъекционной суспензии, геля, масла, пилюли, таблетки, суппозитория, порошка, капсулы, аэрозоля, мази, крема, пластыря или с использованием галеновых форм для пролонгированного и/или медленного высвобождения.In a further embodiment, components (i) and (ii) are formulated as an injectable suspension, gel, oil, pill, tablet, suppository, powder, capsule, aerosol, ointment, cream, patch, or using galenic formulations for prolonged and/or slow release.
Настоящее изобретение также относится к комбинированному лекарственному препарату по изобретению для применения в качестве лекарственного средства.The present invention also relates to a combination drug according to the invention for use as a medicine.
Изобретение также относится к раскрытому здесь комбинированному лекарственному препарату для применения в способе лечения заболевания. В другом варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества комбинированного лекарственного препарата, описанного здесь. В другом варианте осуществления предусматривается использование комбинированного лекарственного препарата по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания.The invention also relates to a combination medicinal product disclosed herein for use in a method of treating a disease. In another embodiment, the invention relates to a method of treating a disease comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a combination drug described herein. In another embodiment, the combination drug of the invention is used for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease.
В частности, комбинированный лекарственный препарат по настоящему изобретению полезен для лечения заболеваний, например, иммунных, воспалительных, метаболических, фиброзных и холестатических заболеваний. В конкретном варианте осуществления заболевание выбрано из группы, состоящей из метаболических заболеваний печени, неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), заболеваний печени, вызванных лекарственным средством, заболеваний печени, вызванных алкоголем, заболеваний печени, вызванных возбудителем инфекции, воспалительных заболеваний печени, заболеваний печени, опосредованных дисфункцией иммунной системы, дислипидемии, сердечно-сосудистых заболеваний, рестеноза, синдрома X, метаболического синдрома, диабета, ожирения, гипертензии, хронических холангиопатий, например, первичного склерозирующего холангита (ПСХ), первичного билиарного холангита (ПБХ), билиарной атрезии, прогрессирующего семейного внутрипеченочного холестаза 3-го типа (ПСВХ3), воспалительных заболеваний кишки, болезни Крона,In particular, the combination drug of the present invention is useful in the treatment of diseases such as immune, inflammatory, metabolic, fibrotic and cholestatic diseases. In a particular embodiment, the disease is selected from the group consisting of metabolic liver disease, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), non-alcoholic steatohepatitis (NASH), drug-induced liver disease, alcohol-induced liver disease, infectious agent-induced liver disease, inflammatory liver disease, liver disease mediated by immune system dysfunction, dyslipidemia, cardiovascular disease, restenosis, syndrome X, metabolic syndrome, diabetes, obesity, hypertension, chronic cholangiopathy, eg, primary sclerosing cholangitis (PSC), primary biliary cholangitis (PBC) , biliary atresia, progressive familial intrahepatic cholestasis type 3 (PSIC3), inflammatory bowel disease, Crohn's disease,
- 15 042734 язвенного колита, келоида, перенесенного инфаркта миокарда, склеродермии/системного склероза, воспалительных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, раковых заболеваний, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы, рака желудочно-кишечного тракта, рака желудка, менингиомы на фоне нейрофиброматоза, нейроэндокринных опухолей поджелудочной железы, экзокринных опухолей поджелудочной железы, лейкемии, миелопролиферативных/миелодиспластических заболеваний, мастоцитоза, дерматофибросаркомы, солидных опухолей, включая рак молочной железы, легких, щитовидной железы или толстой и прямой кишки, рак предстательной железы, фиброза или цирроза печени любого происхождения, фиброза или цирроза печени, вызванных метаболическими заболеваниями, фиброза или цирроза печени, вызванных НАЖБП, фиброза или цирроза печени, вызванных НАСГ, фиброза или цирроза печени, вызванных алкоголем, фиброза или цирроза печени, вызванных лекарственным средством, фиброза или цирроза печени, вызванных возбудителем инфекции, фиброза или цирроза печени, вызванных паразитарной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных бактериальной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных вирусной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных HBV-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных HCV-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных ВИЧ-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных двойной HCV- и ВИЧинфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных излучением или химиотерапией, фиброза желчных путей, фиброза или цирроза печени вследствие любого хронического холестатического заболевания, фиброза кишечника любой этиологии, фиброза, вызванного болезнью Крона, фиброза, вызванного язвенным колитом, фиброза кишечного тракта (например, тонкой кишки), фиброза толстой кишки, фиброза желудка, фиброза кожи, фиброза эпидермиса, фиброза эндодермы, фиброза кожи вследствие склеродермии/системного склероза, фиброза легких, фиброза легких вследствие хронических воспалительных заболеваний дыхательных путей, например ХОБЛ, астмы, эмфиземы, легких курильщика, туберкулеза, пневмофиброза, идиопатического легочного фиброза (ИЛФ), фиброза сердца, фиброза почки, нефрогенного системного фиброза, фиброза мышцы, фиброза мягкой ткани (например, средостения или забрюшинного пространства), фиброза костного мозга, артрофиброза, фиброза сухожилия, фиброза хряща, фиброза поджелудочной железы, фиброза матки, фиброза нервной системы, фиброза яичка, фиброза яичника, фиброза надпочечника, фиброза артерии, фиброза вены, фиброза глаза, эндомиокардиального фиброза, средостенного фиброза, миелофиброза, ретроперитонеального фиброза, массивного прогрессивного фиброза (осложнение пневмокониоза у работников угольной промышленности), пролиферативного фиброза, неопластического фиброза, фиброза околоимплантационной области и асбестового пневмокониоза, артрофиброза, адгезивного капсулита.- 15 042734 ulcerative colitis, keloid, myocardial infarction, scleroderma/systemic sclerosis, inflammatory diseases, neurodegenerative diseases, cancers, liver cancer, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal tract cancer, gastric cancer, meningioma on the background of neurofibromatosis, pancreatic neuroendocrine tumors , exocrine pancreatic tumors, leukemia, myeloproliferative/myelodysplastic diseases, mastocytosis, dermatofibrosarcoma, solid tumors including breast, lung, thyroid, or colon and rectal cancer, prostate cancer, liver fibrosis or cirrhosis of any origin, liver fibrosis or cirrhosis liver fibrosis or cirrhosis caused by NAFLD, liver fibrosis or cirrhosis caused by NASH, liver fibrosis or cirrhosis caused by alcohol, liver fibrosis or cirrhosis caused by a drug, liver fibrosis or cirrhosis caused by an infectious agent, fibrosis or cirrhosis liver fibrosis or cirrhosis caused by a parasitic infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by a bacterial infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by a viral infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by an HBV infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by an HCV infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by HIV infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by dual HCV and HIV infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by radiation or chemotherapy, fibrosis of the biliary tract, fibrosis or cirrhosis of the liver due to any chronic cholestatic disease, intestinal fibrosis of any etiology, fibrosis caused by Crohn's disease , fibrosis due to ulcerative colitis, fibrosis of the intestinal tract (eg, small intestine), fibrosis of the colon, fibrosis of the stomach, fibrosis of the skin, fibrosis of the epidermis, fibrosis of the endodermis, fibrosis of the skin due to scleroderma/systemic sclerosis, fibrosis of the lungs, fibrosis of the lungs due to chronic inflammatory diseases respiratory tract, eg, COPD, asthma, emphysema, smoker's lung, tuberculosis, pulmonary fibrosis, idiopathic pulmonary fibrosis (IPF), cardiac fibrosis, renal fibrosis, nephrogenic systemic fibrosis, muscle fibrosis, soft tissue fibrosis (eg, mediastinal or retroperitoneal), fibrosis bone marrow, arthrofibrosis, tendon fibrosis, cartilage fibrosis, pancreatic fibrosis, uterine fibrosis, nervous system fibrosis, testicular fibrosis, ovarian fibrosis, adrenal fibrosis, arterial fibrosis, vein fibrosis, ocular fibrosis, endomyocardial fibrosis, mediastinal fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis , massive progressive fibrosis (a complication of pneumoconiosis in coal industry workers), proliferative fibrosis, neoplastic fibrosis, peri-implantation fibrosis and asbestos pneumoconiosis, arthrofibrosis, adhesive capsulitis.
В наиболее предпочтительном варианте осуществления заболевание выбрано из группы, состоящей из метаболических заболеваний печени, неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), заболеваний печени, вызванных лекарственным средством, заболеваний печени, вызванных алкоголем, заболеваний печени, вызванных возбудителем инфекции, воспалительных заболеваний печени, заболеваний печени, опосредованных дисфункцией иммунной системы, дислипидемии, сердечно-сосудистых заболеваний, рестеноза, синдрома X, метаболического синдрома, диабета, ожирения, гипертензии, хронических холангиопатий, например первичного склерозирующего холангита (ПСХ), первичного билиарного холангита (ПБХ), билиарной атрезии, прогрессирующего семейного внутрипеченочного холестаза 3-го типа (ПСВХ3), воспалительных заболеваний кишки, болезни Крона, язвенного колита, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы, рака желудочно-кишечного тракта, рака желудка, колоректального рака, фиброза или цирроза печени, вызванных метаболическими заболеваниями, фиброза или цирроза печени, вызванных НАЖБП, фиброза или цирроза печени, вызванных НАСГ, фиброза или цирроза печени, вызванных алкоголем, фиброза или цирроза печени, вызванных лекарственным средством, фиброза или цирроза печени, вызванных возбудителем инфекции, фиброза или цирроза печени, вызванных паразитарной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных бактериальной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных вирусной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных HBV-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных HCV-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных ВИЧ-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных двойной HCV- и ВИЧ-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных излучением или химиотерапией, фиброза желчных путей, фиброза или цирроза печени вследствие любого хронического холестатического заболевания, фиброза кишечника любой этиологии, фиброза, вызванного болезнью Крона, фиброза, вызванного язвенным колитом, фиброза кишечного тракта (например, тонкой кишки), фиброза толстой кишки, фиброза желудка, фиброза легких, фиброза легких вследствие хронических воспалительных заболеваний дыхательных путей, например ХОБЛ, астмы, эмфиземы, легких курильщика, туберкулеза, пневмофиброза, идиопатического легочного фиброза (ИЛФ).In the most preferred embodiment, the disease is selected from the group consisting of metabolic liver disease, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), non-alcoholic steatohepatitis (NASH), drug-induced liver disease, alcohol-induced liver disease, infectious liver disease, inflammatory liver disease, liver disease mediated by immune system dysfunction, dyslipidaemia, cardiovascular disease, restenosis, syndrome X, metabolic syndrome, diabetes, obesity, hypertension, chronic cholangiopathy, eg primary sclerosing cholangitis (PSC), primary biliary cholangitis (PBC) , biliary atresia, progressive familial intrahepatic cholestasis type 3 (PSIC3), inflammatory bowel disease, Crohn's disease, ulcerative colitis, liver cancer, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal cancer, gastric cancer, colorectal cancer, liver fibrosis or cirrhosis caused by metabolic diseases, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by NAFLD, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by NASH, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by alcohol, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a drug, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by an infectious agent, fibrosis or cirrhosis of the liver, liver fibrosis or cirrhosis caused by bacterial infection liver fibrosis or cirrhosis caused by viral infection liver fibrosis or cirrhosis caused by HBV infection liver fibrosis or cirrhosis caused by HCV infection liver fibrosis or cirrhosis caused by HIV infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by dual infection with HCV and HIV, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by radiation or chemotherapy, fibrosis of the biliary tract, fibrosis or cirrhosis of the liver due to any chronic cholestatic disease, intestinal fibrosis of any etiology, fibrosis due to Crohn's disease , fibrosis due to ulcerative colitis, fibrosis of the intestinal tract (for example, small intestine), fibrosis of the colon, fibrosis of the stomach, fibrosis of the lungs, fibrosis of the lungs due to chronic inflammatory diseases of the respiratory tract, such as COPD, asthma, emphysema, smoker's lungs, tuberculosis, pneumofibrosis, idiopathic pulmonary fibrosis (IPF).
В дополнительном аспекте изобретение относится к комбинации по изобретению для применения при ингибировании пролиферации и/или активации фибробластов, ответственных за образование коллагеновых волокон и/или ответственных за секрецию внеклеточного матрикса.In a further aspect, the invention relates to a combination of the invention for use in inhibiting the proliferation and/or activation of fibroblasts responsible for the formation of collagen fibers and/or responsible for the secretion of extracellular matrix.
Согласно настоящему изобретению термин аутоиммунные заболевания используется для обозначения состояния, которое возникает в результате патологического иммунного ответа организма на вещества и ткани, обычно присутствующие в организме. Заболевание может быть ограничено определеннымиAccording to the present invention, the term autoimmune disease is used to refer to a condition that results from an abnormal immune response of the body to substances and tissues normally present in the body. The disease may be limited to certain
- 16 042734 органами (например, при диабете I типа или аутоиммунном тиреоидите) или поражать определенную ткань в разных местах (например, при синдроме Гудпасчера, поражении базальной мембраны в легком и почке).- 16 042734 organs (for example, in type I diabetes or autoimmune thyroiditis) or to affect a specific tissue in different places (for example, in Goodpasture's syndrome, basement membrane damage in the lung and kidney).
Термин воспаление используется для обозначения состояния, которое возникает в результате защитного ответа, включающего клетки хозяина, кровеносные сосуды и белки, а также другие медиаторы, которые могут служить для устранения причины повреждения клеток/тканей, а также некротических клеток/тканей в результате первоначального инсульта, и начать процесс восстановления. Воспалительная реакция может проявляться болью, жаром, покраснением, отеком, расширением кровеносных сосудов, усилением кровотока и потерей функции.The term inflammation is used to refer to a condition that results from a protective response involving host cells, blood vessels and proteins, and other mediators that may serve to eliminate the cause of cell/tissue damage and necrotic cells/tissue from the initial stroke. and start the recovery process. The inflammatory response can present with pain, heat, redness, swelling, dilation of blood vessels, increased blood flow, and loss of function.
Согласно настоящему изобретению термины фиброз, фиброзное заболевание, фиброзное расстройство и соответствующие отклонения от нормы означают патологическое состояние чрезмерного наложения фиброзной соединительной ткани в органе или ткани. Более конкретно, фиброз представляет собой патологический процесс, который включает в себя усиленное образование фиброзного рубца и повышенную секрецию внеклеточного матрикса соединительной тканью в ответ на повреждение ткани. Физиологически отложение соединительной ткани может нарушить строение и функцию соответствующего органа или ткани.According to the present invention, the terms fibrosis, fibrotic disease, fibrotic disorder and related abnormalities mean a pathological condition of excessive overlay of fibrous connective tissue in an organ or tissue. More specifically, fibrosis is a pathological process that includes increased fibrous scar formation and increased secretion of extracellular matrix by connective tissue in response to tissue injury. Physiologically, the deposition of connective tissue can disrupt the structure and function of the corresponding organ or tissue.
Согласно настоящему изобретению, фиброз или фиброзное расстройство могут быть связаны с любым органом или фиброзом ткани. Иллюстративные, не ограничивающие примеры конкретного фиброза органа включают фиброз печени, кишечника, почки, кожи, эпидермиса, эндодермы, мышцы, сухожилия, хряща, сердца, поджелудочной железы, легкого, матки, нервной системы, яичка, полового члена, яичника, надпочечника, артерии, вены, толстой кишки, кишечного тракта (например, тонкой кишки), желчных путей, мягкой ткани (например, средостения или забрюшинного пространства), костного мозга, фиброз сустава или желудка, в частности фиброз печени, почки, кожи, эпидермиса, эндодермы, мышцы, сухожилия, хряща, сердца, поджелудочной железы, легкого, матки, нервной системы, яичка, яичника, надпочечника, артерии, вены, толстой кишки, кишечного тракта (например, тонкой кишки), желчных путей, мягкой ткани (например, средостения или забрюшинного пространства), костного мозга, сустава, глаза или желудка.According to the present invention, fibrosis or fibrotic disorder can be associated with any organ or tissue fibrosis. Illustrative, non-limiting examples of specific organ fibrosis include fibrosis of the liver, intestines, kidney, skin, epidermis, endoderm, muscle, tendon, cartilage, heart, pancreas, lung, uterus, nervous system, testicle, penis, ovary, adrenal gland, artery , vein, colon, intestinal tract (for example, small intestine), biliary tract, soft tissue (for example, mediastinum or retroperitoneal space), bone marrow, fibrosis of the joint or stomach, in particular fibrosis of the liver, kidney, skin, epidermis, endoderm, muscle, tendon, cartilage, heart, pancreas, lung, uterus, nervous system, testicle, ovary, adrenal gland, artery, vein, colon, intestinal tract (eg, small intestine), biliary tract, soft tissue (eg, mediastinum or retroperitoneum), bone marrow, joint, eye or stomach.
Согласно настоящему изобретению термины холестаз, или холестатическое заболевание, или холестатическое расстройство и соответствующие отклонения от нормы означают патологическое состояние, определяемое уменьшением оттока желчи из-за нарушения секреции гепатоцитами или затруднения оттока желчи через внутри- или внепеченочные желчные протоки. Следовательно, клиническое определение холестаза - это любое состояние, при котором сохраняются вещества, которые обычно выводятся с желчью.According to the present invention, the terms cholestasis or cholestatic disease or cholestatic disorder and the corresponding abnormalities mean a pathological condition defined by a decrease in the outflow of bile due to impaired secretion by hepatocytes or obstruction of the outflow of bile through the intra- or extrahepatic bile ducts. Therefore, the clinical definition of cholestasis is any condition that retains substances that are normally excreted in the bile.
В конкретном варианте осуществления фиброзное расстройство выбрано из группы, состоящей из фиброза печени, кишечника, легких, сердца, почек, мышц, кожи, мягкой ткани (например, средостения или забрюшинного пространства), костного мозга, интестинального и суставного (например, коленного сустава, плеча или других суставов) фиброза.In a specific embodiment, the fibrotic disorder is selected from the group consisting of liver, intestinal, lung, heart, kidney, muscle, skin, soft tissue (e.g., mediastinal or retroperitoneal), bone marrow, intestinal, and articular (e.g., knee, shoulder or other joints) fibrosis.
В предпочтительном варианте осуществления фиброзное расстройство выбрано из группы, состоящей из фиброза печени, легкого, кожи, почки и интестинального фиброза.In a preferred embodiment, the fibrotic disorder is selected from the group consisting of liver, lung, skin, kidney and intestinal fibrosis.
В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения подлежащее лечению фиброзное расстройство выбирают из группы, состоящей из следующего неполного списка фиброзных расстройств: неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), пневмофиброза, идиопатического легочного фиброза, фиброза кожи, фиброза глаза (например, капсульного фиброза), эндомиокардиального фиброза, средостенного фиброза, миелофиброза, ретроперитонеального фиброза, массивного прогрессивного фиброза (осложнение пневмокониоза у работников угольной промышленности), пролиферативного фиброза, неопластического фиброза, фиброза легких вследствие хронических воспалительных заболеваний дыхательных путей (ХОБЛ, астмы, эмфиземы, легких курильщика, туберкулеза), фиброза печени, вызванного алкоголем или лекарственным средством, цирроза печени, фиброза печени, вызванного возбудителем инфекции, фиброза печени, вызванного излучением или химиотерапией, нефрогенного системного фиброза, болезни Крона, язвенного колита, келоида, перенесенного инфаркта миокарда, склеродермии/системного склероза, артрофиброза, некоторых форм адгезивного капсулита, хронических фиброзирующих холангиопатий, например первичного склерозирующего холангита (ПСХ) и первичного билиарного холангита (ПБХ), билиарной атрезии, прогрессирующего семейного внутрипеченочного холестаза 3-го типа (ПСВХ3), фиброза околоимплантационной области и асбестового пневмокониоза.In a more preferred embodiment of the present invention, the fibrotic disorder to be treated is selected from the group consisting of the following non-exhaustive list of fibrotic disorders: non-alcoholic steatohepatitis (NASH), pulmonary fibrosis, idiopathic pulmonary fibrosis, skin fibrosis, ocular fibrosis (e.g., capsular fibrosis), endomyocardial fibrosis, mediastinal fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, massive progressive fibrosis (a complication of pneumoconiosis in coal workers), proliferative fibrosis, neoplastic fibrosis, pulmonary fibrosis due to chronic inflammatory airway diseases (COPD, asthma, emphysema, smoker's lungs, tuberculosis), liver fibrosis, alcohol or drug-induced liver cirrhosis, infectious agent-induced liver fibrosis, radiation or chemotherapy-induced liver fibrosis, nephrogenic systemic fibrosis, Crohn's disease, ulcerative colitis, keloid, previous myocardial infarction, scleroderma/systemic sclerosis, arthrofibrosis, some forms of adhesive capsulitis, chronic fibrosing cholangiopathy, such as primary sclerosing cholangitis (PSC) and primary biliary cholangitis (PBC), biliary atresia, progressive familial intrahepatic cholestasis type 3 (PSIC3), peri-implant fibrosis, and asbestos pneumoconiosis.
Холестаз определяется как уменьшение оттока желчи из-за нарушения секреции гепатоцитами (печеночно-клеточный холестаз) или обструкции оттока желчи через внутри- или внепеченочные желчные протоки (обструктивный холестаз). В клинической практике холестаз представляет собой любое состояние, при котором отток желчи из печени замедляется или блокируется. В соответствии с конкретным вариантом осуществления изобретения холестатическое заболевание выбрано из группы, состоящей из первичного билиарного холангита (ПБХ), первичного склерозирующего холангита (ПСХ), внутрипеченочного холестаза беременных, прогрессирующего семейного внутрипеченочного холестаза, билиарной атрезии, холелитиаза, инфекционного холангита, холангита, связанного с гистиоцитозом из клеток Лан- 17 042734 герганса, синдрома Алажиля, несиндромальной недостаточности функции желчевыводящих путей, холестаза, вызванного лекарственным средством, и холестаза, связанного с полным парентеральным питанием. В предпочтительном варианте осуществления холестатическим заболеванием является ПБХ илиCholestasis is defined as a decrease in the outflow of bile due to impaired secretion by hepatocytes (hepatocellular cholestasis) or obstruction of the outflow of bile through the intra- or extrahepatic bile ducts (obstructive cholestasis). In clinical practice, cholestasis is any condition in which the flow of bile from the liver is slowed down or blocked. In accordance with a specific embodiment of the invention, the cholestatic disease is selected from the group consisting of primary biliary cholangitis (PBC), primary sclerosing cholangitis (PSC), intrahepatic cholestasis of pregnancy, progressive familial intrahepatic cholestasis, biliary atresia, cholelithiasis, infectious cholangitis, cholangitis associated with 17 042734 gergans cell histiocytosis, Alagille syndrome, non-syndromic biliary deficiencies, drug-induced cholestasis, and total parenteral nutrition-associated cholestasis. In a preferred embodiment, the cholestatic disease is PBC or
ПСХ, в частности ПБХ.PSC, in particular PBC.
Примеры воспалительных заболеваний, фиброзных заболеваний, метаболических заболеваний и холестатических заболеваний включают метаболические заболевания печени, неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП), неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), заболевания печени, вызванные лекарственным средством, заболевания печени, вызванные алкоголем, заболевания печени, вызванные возбудителем инфекции, воспалительные заболевания печени, заболевания печени, опосредованные дисфункцией иммунной системы, дислипидемию, сердечно-сосудистые заболевания, рестеноз, синдром X, метаболический синдром, диабет, ожирение, гипертензию, хронические холангиопатии, например первичный склерозирующий холангит (ПСХ), первичный билиарный холангит (ПБХ), билиарную атрезию, прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз 3-го типа (ПСВХ3), воспалительные заболевания кишки, болезнь Крона, язвенный колит, келоид, перенесенный инфаркт миокарда, склеродермию/системный склероз, воспалительные заболевания, нейродегенеративные заболевания, раковые заболевания, рак печени, гепатоцеллюлярную карциному, рак желудочно-кишечного тракта, рак желудка, менингиому на фоне нейрофиброматоза, нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы, экзокринные опухоли поджелудочной железы, лейкемию, миелопролиферативные/миелодиспластические заболевания, мастоцитоз, дерматофибросаркому, солидные опухоли, включая рак молочной железы, легких, щитовидной железы или толстой и прямой кишки, рак предстательной железы, фиброз или цирроз печени любого происхождения, фиброз или цирроз печени, вызванные метаболическими заболеваниями, фиброз или цирроз печени, вызванные НАЖБП, фиброз или цирроз печени, вызванные НАСГ, фиброз или цирроз печени, вызванные алкоголем, фиброз или цирроз печени, вызванные лекарственным средством, фиброз или цирроз печени, вызванные возбудителем инфекции, фиброз или цирроз печени, вызванные паразитарной инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные бактериальной инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные вирусной инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные HBVинфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные HCV-инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные ВИЧ-инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные двойной HCV- и ВИЧ-инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные излучением или химиотерапией, фиброз желчных путей, фиброз или цирроз печени вследствие любого хронического холестатического заболевания, фиброз кишечника любой этиологии, фиброз, вызванный болезнью Крона, фиброз, вызванный язвенным колитом, фиброз кишечного тракта (например, тонкой кишки), фиброз толстой кишки, фиброз желудка, фиброз кожи, фиброз эпидермиса, фиброз эндодермы, фиброз кожи вследствие склеродермии/системного склероза, фиброз легких, фиброз легких вследствие хронических воспалительных заболеваний дыхательных путей, например, ХОБЛ, астмы, эмфиземы, легких курильщика, туберкулеза, пневмофиброз, идиопатический легочный фиброз (ИЛФ), фиброз сердца, фиброз почки, нефрогенный системный фиброз, фиброз мышцы, фиброз мягкой ткани (например, средостения или забрюшинного пространства), фиброз костного мозга, артрофиброз, фиброз сухожилия, фиброз хряща, фиброз поджелудочной железы, фиброз матки, фиброз нервной системы, фиброз яичка, фиброз яичника, фиброз надпочечника, фиброз артерии, фиброз вены, фиброз глаза, эндомиокардиальный фиброз, средостенный фиброз, миелофиброз, ретроперитонеальный фиброз, массивный прогрессивный фиброз (осложнение пневмокониоза у работников угольной промышленности), пролиферативный фиброз, неопластический фиброз, фиброз околоимплантационной области и асбестовый пневмокониоз, артрофиброз, адгезивный капсулит.Examples of inflammatory diseases, fibrotic diseases, metabolic diseases, and cholestatic diseases include metabolic liver disease, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), non-alcoholic steatohepatitis (NASH), drug-induced liver disease, alcohol-induced liver disease, infectious agent-induced liver disease , inflammatory liver disease, liver disease mediated by immune system dysfunction, dyslipidemia, cardiovascular disease, restenosis, syndrome X, metabolic syndrome, diabetes, obesity, hypertension, chronic cholangiopathy eg primary sclerosing cholangitis (PSC), primary biliary cholangitis (PBC) ), biliary atresia, progressive familial intrahepatic cholestasis type 3 (PSIC3), inflammatory bowel disease, Crohn's disease, ulcerative colitis, keloid, previous myocardial infarction, scleroderma/systemic sclerosis, inflammatory diseases, neurodegenerative diseases, cancers, liver cancer, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal cancer, gastric cancer, neurofibromatosis meningioma, pancreatic neuroendocrine tumors, pancreatic exocrine tumors, leukemia, myeloproliferative/myelodysplastic diseases, mastocytosis, dermatofibrosarcoma, solid tumors including breast, lung, thyroid cancer or colon and rectum, prostate cancer, fibrosis or cirrhosis of the liver of any origin, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by metabolic diseases, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by NAFLD, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by NASH, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by alcohol, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a drug, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by an infectious agent, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a parasitic infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a bacterial infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a viral infection, fibrosis or cirrhosis of the liver, liver fibrosis or cirrhosis caused by HCV infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by HIV infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by dual HCV and HIV infection, liver fibrosis or cirrhosis caused by radiation or chemotherapy, biliary tract fibrosis , fibrosis or cirrhosis of the liver due to any chronic cholestatic disease, intestinal fibrosis of any etiology, fibrosis due to Crohn's disease, fibrosis due to ulcerative colitis, fibrosis of the intestinal tract (for example, small intestine), fibrosis of the colon, fibrosis of the stomach, fibrosis of the skin, fibrosis of the epidermis , endoderm fibrosis, skin fibrosis due to scleroderma/systemic sclerosis, pulmonary fibrosis, pulmonary fibrosis due to chronic inflammatory airway diseases, eg COPD, asthma, emphysema, smoker's lung, tuberculosis, pneumofibrosis, idiopathic pulmonary fibrosis (IPF), cardiac fibrosis, fibrosis kidney, nephrogenic systemic fibrosis, muscle fibrosis, soft tissue fibrosis (e.g. mediastinal or retroperitoneal), bone marrow fibrosis, arthrofibrosis, tendon fibrosis, cartilage fibrosis, pancreatic fibrosis, uterine fibrosis, nervous system fibrosis, testicular fibrosis, ovarian fibrosis, adrenal fibrosis, arterial fibrosis, vein fibrosis, ocular fibrosis, endomyocardial fibrosis, mediastinal fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, massive progressive fibrosis (a complication of pneumoconiosis in coal workers), proliferative fibrosis, neoplastic fibrosis, peri-implant fibrosis and asbestos pneumoconiosis, arthrofibrosis, adhesive capsulitis.
Предпочтительно заболевание выбрано из группы, состоящей из метаболических заболеваний печени, неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), заболеваний печени, вызванных лекарственным средством, заболеваний печени, вызванных алкоголем, заболеваний печени, вызванных возбудителем инфекции, воспалительных заболеваний печени, заболеваний печени, опосредованных дисфункцией иммунной системы, дислипидемии, сердечно-сосудистых заболеваний, рестеноза, синдрома X, метаболического синдрома, диабета, ожирения, гипертензии, хронических холангиопатий, например, первичного склерозирующего холангита (ПСХ), первичного билиарного холангита (ПБХ), билиарной атрезии, прогрессирующего семейного внутрипеченочного холестаза 3-го типа (ПСВХ3), воспалительных заболеваний кишки, болезни Крона, язвенного колита, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы, рака желудочно-кишечного тракта, рака желудка, колоректального рака, фиброза или цирроза печени, вызванных метаболическими заболеваниями, фиброза или цирроза печени, вызванных НАЖБП, фиброза или цирроза печени, вызванных НАСГ, фиброза или цирроза печени, вызванных алкоголем, фиброза или цирроза печени, вызванных лекарственным средством, фиброза или цирроза печени, вызванных возбудителем инфекции, фиброза или цирроза печени, вызванных паразитарной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных бактериальной инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных вирусной инфекцией, фиброз или цирроз печени, вызванные HBV-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных HCV-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных ВИЧ-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных двойной HCV- и ВИЧ-инфекцией, фиброза или цирроза печени, вызванных излучением или химиотерапией, фиброзаPreferably, the disease is selected from the group consisting of metabolic liver diseases, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), non-alcoholic steatohepatitis (NASH), drug-induced liver diseases, alcohol-induced liver diseases, infectious liver diseases, inflammatory liver diseases, liver disease mediated by immune system dysfunction, dyslipidemia, cardiovascular disease, restenosis, syndrome X, metabolic syndrome, diabetes, obesity, hypertension, chronic cholangiopathy, eg, primary sclerosing cholangitis (PSC), primary biliary cholangitis (PBC), biliary atresia , progressive familial intrahepatic cholestasis type 3 (PSIC3), inflammatory bowel disease, Crohn's disease, ulcerative colitis, liver cancer, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal cancer, gastric cancer, colorectal cancer, liver fibrosis or cirrhosis caused by metabolic diseases, liver fibrosis or cirrhosis caused by NAFLD, liver fibrosis or cirrhosis caused by NASH, liver fibrosis or cirrhosis caused by alcohol, liver fibrosis or cirrhosis caused by a drug, liver fibrosis or cirrhosis caused by an infectious agent, liver fibrosis or cirrhosis caused by a parasitic infection , fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a bacterial infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by a viral infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by HBV infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by HCV infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by HIV infection, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by dual infection with HCV and HIV, fibrosis or cirrhosis of the liver caused by radiation or chemotherapy, fibrosis
- 18 042734 желчных путей, фиброза или цирроза печени вследствие любого хронического холестатического заболевания, фиброза кишечника любой этиологии, фиброза, вызванного болезнью Крона, фиброза, вызванного язвенным колитом, фиброза кишечного тракта (например, тонкой кишки), фиброза толстой кишки, фиброза желудка, фиброза легких, фиброза легких вследствие хронических воспалительных заболеваний дыхательных путей, например, ХОБЛ, астмы, эмфиземы, легких курильщика, туберкулеза, пневмофиброза, идиопатического легочного фиброза (ИЛФ).- 18 042734 biliary tract, fibrosis or cirrhosis of the liver due to any chronic cholestatic disease, intestinal fibrosis of any etiology, fibrosis caused by Crohn's disease, fibrosis caused by ulcerative colitis, fibrosis of the intestinal tract (for example, small intestine), fibrosis of the large intestine, fibrosis of the stomach, lung fibrosis, pulmonary fibrosis due to chronic inflammatory airway diseases, eg COPD, asthma, emphysema, smoker's lung, tuberculosis, pneumofibrosis, idiopathic pulmonary fibrosis (IPF).
Термин терапия или лечение относится к излечению или профилактике расстройства у субъекта, нуждающегося в этом. Лечение включает введение имеющему заявленное расстройство субъекту соединения, в частности, содержащегося в фармацевтической композиции, т.е. пациенту, чтобы вылечить, задержать, купировать или замедлить развитие расстройства, улучшая тем самым состояние субъекта. Лечение также может быть назначено пациенту, который является здоровым или подвержен риску развития холестатического или фиброзного расстройства, чтобы предотвратить или задержать расстройство.The term therapy or treatment refers to the cure or prevention of a disorder in a subject in need thereof. The treatment comprises administering to a subject having the claimed disorder a compound, in particular one contained in a pharmaceutical composition, i.e. to the patient in order to cure, delay, arrest or slow the development of the disorder, thereby improving the condition of the subject. Treatment may also be given to a patient who is healthy or at risk of developing a cholestatic or fibrotic disorder to prevent or delay the disorder.
Следовательно, согласно изобретению лечение иммунного, воспалительного, метаболического, фиброзного и холестатического заболевания включает введение комбинации по настоящему изобретению, например, в форме фармацевтической композиции, содержащей компоненты (i) и (ii) комбинации, субъекту, у которого объявлено расстройство, для лечения, задержки, купирования или замедления прогрессирования расстройства, таким образом улучшая состояние пациента или здорового субъекта, в частности субъекта, который подвержен риску развития такого заболевания.Therefore, according to the invention, the treatment of an immune, inflammatory, metabolic, fibrotic, and cholestatic disease comprises administering a combination of the present invention, for example, in the form of a pharmaceutical composition containing components (i) and (ii) of the combination, to a subject declared to have a disorder, for treatment, delay, arrest or slow the progression of the disorder, thereby improving the condition of the patient or healthy subject, in particular the subject who is at risk of developing such a disease.
Лечение включает введение комбинации по изобретению пациенту, имеющего симптомы болезни, чтобы вылечить, задержать или замедлить прогресс, таким образом улучшая состояние пациента или здорового субъекта, в частности субъекта, который подвергается риску развития воспалительных, метаболических, фиброзных и холестатических заболеваний.Treatment includes administering a combination of the invention to a symptomatic patient to cure, delay or slow progress, thereby improving the condition of the patient or a healthy subject, in particular a subject who is at risk of developing inflammatory, metabolic, fibrotic and cholestatic diseases.
Субъект, подлежащий лечению, является млекопитающим, предпочтительно человеком. Субъект, подлежащий лечению согласно изобретению, может быть выбран на основе нескольких критериев, связанных с фиброзными заболеваниями, например, предшествующих лекарственных терапий, связанных патологий, генотипа, воздействия факторов риска, вирусной инфекции, а также на основании обнаружения любого соответствующего биомаркера, который можно оценить с помощью методов визуализации и иммунологического, биохимического, ферментативного, химического методов или методов обнаружения нуклеиновых кислот.The subject to be treated is a mammal, preferably a human. The subject to be treated according to the invention may be selected based on several criteria associated with fibrotic diseases, e.g., prior drug therapies, associated pathologies, genotype, exposure to risk factors, viral infection, as well as the detection of any relevant biomarker that can be assessed. using imaging techniques and immunological, biochemical, enzymatic, chemical or nucleic acid detection methods.
Субъекты, подлежащие лечению согласно изобретению, могут быть выбраны на основе нескольких критериев, связанных с воспалительными, метаболическими, фиброзными и холестатическими заболеваниями, например предшествующих лекарственных терапий, связанных патологий, генотипа, воздействия факторов риска, вирусной инфекции, а также любого другого соответствующего биомаркера, который можно оценить с помощью методов визуализации и иммунологического, биохимического, ферментативного, химического метода или метода обнаружения нуклеиновых кислот.Subjects to be treated according to the invention may be selected based on several criteria related to inflammatory, metabolic, fibrotic and cholestatic diseases, such as prior drug therapies, associated pathologies, genotype, exposure to risk factors, viral infection, as well as any other relevant biomarker, which can be assessed by imaging and immunological, biochemical, enzymatic, chemical or nucleic acid detection methods.
В конкретном варианте осуществления лечение воспалительного, метаболического, фиброзного и холестатического заболевания может включать введение композиции, содержащей по меньшей мере два соединения по формуле (I). В этом варианте осуществления вводимый компонент (ii) предоставляется в той же композиции, что и по меньшей мере два соединения по формуле (I), или в отдельной форме, например, в другой композиции.In a specific embodiment, the treatment of inflammatory, metabolic, fibrotic and cholestatic disease may include the introduction of a composition containing at least two compounds of formula (I). In this embodiment, the input component (ii) is provided in the same composition as at least two compounds of formula (I), or in a separate form, for example, in a different composition.
В другом варианте осуществления комбинация по изобретению предназначена для одновременного, последовательного или раздельного введения в терапии, поэтому может быть включена в различные композиции. В случае последовательного введения соединение по формуле (I), в частности ELA, может быть введен до компонента (ii), или компонент (ii) вводится до соединения по формуле (I).In another embodiment, the combination according to the invention is intended for simultaneous, sequential or separate administration in therapy, therefore, can be included in various compositions. In the case of sequential administration, the compound of formula (I), in particular ELA, can be introduced before component (ii), or component (ii) is introduced before the compound of formula (I).
Соединение по формуле (I) может быть составлено в виде фармацевтически приемлемых солей, в частности солей кислот или оснований, совместимых с фармацевтическим применением. Соли соединений по формуле (I) включают фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания, фармацевтически приемлемые соли металлов, соли аммония и алкилированные соли аммония. Данные соли могут быть получены во время конечной стадии очистки соединения или путем включения соли в предварительно очищенное соединение.The compound of formula (I) may be formulated as pharmaceutically acceptable salts, in particular acid or base salts compatible with pharmaceutical use. Salts of compounds of formula (I) include pharmaceutically acceptable acid addition salts, pharmaceutically acceptable base addition salts, pharmaceutically acceptable metal salts, ammonium salts and alkylated ammonium salts. These salts can be obtained during the final purification step of the compound or by incorporating the salt into the pre-purified compound.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут содержать один или несколько наполнителей или носителей, приемлемых в фармацевтическом контексте (например, солевые растворы, физиологические растворы, изотонические растворы и т.д., совместимые с фармацевтическим применением и хорошо известные специалисту в данной области техники).The pharmaceutical compositions of the present invention may also contain one or more excipients or carriers acceptable in a pharmaceutical context (eg, saline solutions, saline solutions, isotonic solutions, etc., compatible with pharmaceutical use and well known to a person skilled in the art).
Эти композиции могут также содержать один или несколько агентов или носителей, выбранных среди диспергирующих агентов, солюбилизаторов, стабилизаторов, консервантов и т.д. Агенты или носители, пригодные для данных композиций (жидких и/или инъекционных и/или твердых), представляют собой, в частности, метилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, полисорбат 80, маннит, желатин, лактозу, растительные масла, аравийскую камедь, липосомы и т.д.These compositions may also contain one or more agents or carriers selected from among dispersing agents, solubilizers, stabilizers, preservatives, and the like. Agents or carriers suitable for these compositions (liquid and/or injectable and/or solid) are, in particular, methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, gum arabic, liposomes, etc. .d.
Данные композиции могут быть составлены в форме инъекционных суспензий, гелей, масел, мазей, пилюль, таблеток, суппозиториев, порошков, желатиновых капсул, капсул, аэрозолей и т. д., в некоторых случаях с использованием галеновых форм или устройств, обеспечивающих пролонгированное и/илиThese compositions can be formulated in the form of injectable suspensions, gels, oils, ointments, pills, tablets, suppositories, powders, gelatin capsules, capsules, aerosols, etc., in some cases using galenic forms or devices that provide prolonged and / or
- 19 042734 медленное высвобождение. Для этого типа композиции предпочтительно могут быть использованы такие агенты, как целлюлоза, карбонаты или крахмалы.- 19 042734 slow release. For this type of composition, agents such as cellulose, carbonates or starches may preferably be used.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, содержащие соединение по формуле (I) и один или несколько компонентов (ii), могут быть введены различными способами и в разных формах. Например, соединение (соединения) может быть введено системным путем, per os, парентерально, ингаляцией, с помощью назального спрея, закапыванием в нос или инъекцией, такой как, например, внутривенно, путем внутримышечного введения, путем подкожного введения, путем внутрикожным введения, путем наружного применения, путем внутриартериальным введения и т.д.Pharmaceutical compositions of the present invention containing a compound of formula (I) and one or more components (ii) may be administered in various ways and in various forms. For example, the compound(s) may be administered systemically, per os, parenterally, by inhalation, by nasal spray, by nasal instillation, or by injection, such as, for example, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, external application, by intra-arterial administration, etc.
Конечно, способ введения будет адаптирован к форме вводимых соединений в соответствии с процедурами, хорошо известными специалистам в данной области техники.Of course, the route of administration will be adapted to the form of the compounds administered, in accordance with procedures well known to those skilled in the art.
Компоненты (i) и (ii) комбинированного лекарственного препарата по изобретению вводят в терапевтически эффективных количествах. В контексте настоящего изобретения термин эффективное количество относится к количеству соединения, достаточному для получения желаемого терапевтического результата.Components (i) and (ii) of the combination drug according to the invention are administered in therapeutically effective amounts. In the context of the present invention, the term effective amount refers to an amount of a compound sufficient to produce the desired therapeutic result.
Частота и/или доза введения может быть адаптирована специалистом в данной области техники в зависимости от пациента, патологии, формы введения и т.д. Как правило, комбинация (например, в форме фармацевтической композиции или набора из частей) по настоящему изобретению может быть введена для лечения фиброзного заболевания для компонента (i) или компонента (ii) в дозе, составляющей от 0,01 до 4000 мг/сутки, например, от 50 до 2000 мг/сутки и, в частности, от 100 до 1000 мг/сутки.The frequency and/or dose of administration may be adapted by one of ordinary skill in the art depending on the patient, pathology, form of administration, etc. Typically, the combination (eg, in the form of a pharmaceutical composition or kit of parts) of the present invention may be administered for the treatment of fibrotic disease for component (i) or component (ii) at a dose of 0.01 to 4000 mg/day, for example, from 50 to 2000 mg/day, and in particular from 100 to 1000 mg/day.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения ELA используется в комбинации с компонентом (ii) в дозе, составляющей для элафибранора от 80 до 120 мг/сутки.In a preferred embodiment of the invention, ELA is used in combination with component (ii) at a dose of 80 to 120 mg/day for elafibranor.
В другом предпочтительном варианте осуществления действующие вещества вводят в виде одной или нескольких фармацевтических композиций в форме пилюли или таблетки, предназначенных для перорального приема.In another preferred embodiment, the active ingredients are administered as one or more pharmaceutical compositions in the form of a pill or tablet intended for oral administration.
Введение может осуществляться один раз в сутки или даже несколько раз, если это необходимо.The introduction can be carried out once a day or even several times, if necessary.
Далее изобретение описано со ссылкой на следующие неограничивающие примеры.The invention is further described with reference to the following non-limiting examples.
Описание фигурDescription of figures
Сокращения, используемые на фигурах, в таблицах и в тексте:Abbreviations used in figures, tables and text:
α-SMA - α-актин гладких мышц,α-SMA - α-smooth muscle actin,
AP-1 - активирующий белок-1,AP-1 - activating protein-1,
ASBTi - ингибитор апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот,ASBTi is an inhibitor of the apical sodium-dependent bile acid transporter,
ASK1 - регулирующая апоптотические сигналы киназа 1,ASK1 - apoptotic signal-regulating kinase 1,
AT1 - рецепторы ангиотензина II 1-го типа,AT1 - angiotensin II type 1 receptors,
CLA, КЛК - конъюгированная линолевая кислота,CLA, CLA - conjugated linoleic acid,
COPD, ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких,COPD, COPD - chronic obstructive pulmonary disease,
CTGF - фактор роста соединительной ткани,CTGF - connective tissue growth factor,
CVC - ценикривирок,CVC - cenicrivirok,
DGAT, ДГАТ - диацилглицерин O-ацилтрансфераза,DGAT, DGAT - diacylglycerol O-acyltransferase,
DMSO, ДМСО - диметилсульфоксид,DMSO, DMSO - dimethyl sulfoxide,
DPP4, ДПП4 - дипептидилпептидаза 4,DPP4, DPP4 - dipeptidyl peptidase 4,
ELISA, ИФА - иммуноферментный анализ,ELISA, ELISA - enzyme immunoassay,
EOB - разность по Блиссу,EOB - Bliss difference,
EOBHSA - наиболее эффективный отдельный агент по Блиссу,EOBHSA is the most effective single Bliss agent,
FABAC - конъюгат жирных и желчных кислот,FABAC - conjugate of fatty and bile acids,
FBS, ФБС - фетальная бычья сыворотка,FBS, FBS - fetal bovine serum,
FGF - фактор роста фибробластов,FGF - fibroblast growth factor,
FXR - фарнезоидный X-рецептор,FXR - farnesoid X receptor,
GDF - фактор роста и дифференцировки,GDF - growth and differentiation factor,
GLP-1, ГПП-1 - глюкагоноподобный пептид-1,GLP-1, GLP-1 - glucagon-like peptide-1,
GPCR - рецептор, сопряженный с G-белком,GPCR - G-protein coupled receptor
HBV - вирус гепатита B,HBV - hepatitis B virus,
HCV - вирус гепатита C,HCV - hepatitis C virus,
15-HEPE - 5-гидроксиэйкозапентаеновая кислота,15-HEPE - 5-hydroxyeicosapentaenoic acid,
HIV, ВИЧ - вирус иммунодефицита человека,HIV, HIV - human immunodeficiency virus,
HSC, ЗКП - звездчатая клетка печени,HSC, HSC - liver stellate cell,
IC50 - концентрация полумаксимального ингибирования, iNOS - индуцируемая синтаза оксида азота,IC 50 - concentration of half-maximal inhibition, iNOS - inducible nitric oxide synthase,
IPF, ИЛФ - идиопатический легочный фиброз,IPF, IPF - idiopathic pulmonary fibrosis,
LO - липоксигеназа,LO - lipoxygenase,
ЛПС - липополисахарид,LPS - lipopolysaccharide,
LT - лейкотриены,LT - leukotrienes,
MAPK - митоген-активируемая протеинкиназа,MAPK - mitogen-activated protein kinase,
- 20 042734- 20 042734
MMP-9, ММП-9 - матриксная металлопротеиназа 9,MMP-9, MMP-9 - matrix metalloproteinase 9,
MMPase, ММП - матриксная металлопротеиназа,MMPase, MMP - matrix metalloproteinase,
NADPH, НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат,NADPH, NADP - nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,
НАЖБП - неалкогольная жировая болезнь печени,NAFLD - non-alcoholic fatty liver disease,
NAFLD, НАСГ - неалкогольный стеатогепатит,NAFLD, NASH - non-alcoholic steatohepatitis,
NF-kB - ядерный фактор каппа-B,NF-kB - nuclear factor kappa-B,
NOX NADPH - NOX, НАДФН-оксидаза,NOX NADPH - NOX, NADPH oxidase,
NSAIDs, НПВП - нестероидные противовоспалительные препараты,NSAIDs, NSAIDs - non-steroidal anti-inflammatory drugs,
PAR - рецептор, активируемый протеазами,PAR is a protease-activated receptor
PBC, ПБХ - первичный билиарный холангит,PBC, PBC - primary biliary cholangitis,
PBS, ФСБ - фосфатно-солевой буферный раствор,PBS, FSB - phosphate-buffered saline solution,
PDE, ФДЭ - фосфодиэстераза,PDE, PDE - phosphodiesterase,
PDGF - фактор роста тромбоцитов,PDGF - platelet growth factor,
PFIC3, ПСВХ3 - прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз 3-го типа,PFIC3, PSI3 - progressive familial intrahepatic cholestasis type 3,
PFOR - пируват:ферредоксин-оксидоредуктаза,PFOR - pyruvate:ferredoxin oxidoreductase,
PPAR - рецептор, активируемый пролифератором пероксисом,PPAR, peroxisome proliferator-activated receptor
PPRE - PPAR-отвечающий элемент,PPRE - PPAR Responding Element,
PSC, ПСХ - первичный склерозирующий холангит,PSC, PSC - primary sclerosing cholangitis,
ROCK - Rho-ассоциированная протеинкиназа 2,ROCK - Rho-associated protein kinase 2,
RTK - рецептор тирозинкиназы,RTK - tyrosine kinase receptor,
SGLT - натрий-глюкозный транспортер,SGLT - sodium glucose transporter,
STAT - переносчики сигнала и активаторы транскрипции,STAT - signal carriers and transcription activators,
TGFe - трансформирующий фактор роста β,TGFe - transforming growth factor β,
TGFBRI - рецепторы TGFe I типа,TGFBRI - type I TGFe receptors,
TGFBRII - рецепторы TGFe II типа,TGFBRII - type II TGFe receptors,
THBS1 - тромбоспондин 1,THBS1 - thrombospondin 1,
THR β - β-рецептор тиреоидного гормона,THR β - thyroid hormone β-receptor,
TIMP - тканевый ингибитор металлопротеиназ 1,TIMP - tissue inhibitor of metalloproteinases 1,
TLR-4 - толл-подобный рецептор 4,TLR-4 - toll-like receptor 4,
VAP-1 - белок сосудистой адгезии-1,VAP-1 - vascular adhesion protein-1,
VDR - рецептор витамина D.VDR - vitamin D receptor.
Фиг. 1: Эффект комбинации 1 мг/кг/сутки ELA и 10 мг/кг/сутки ОХК на показатель поверхности фиброза.Fig. 1: Effect of combination of 1 mg/kg/day ELA and 10 mg/kg/day OCA on fibrosis surface index.
Фиг. 2: Эффект комбинации 3 мг/кг/сутки ELA и 10 мг/кг/сутки ОХК на показатель поверхности фиброза.Fig. 2: Effect of combination of 3 mg/kg/day ELA and 10 mg/kg/day OCA on fibrosis surface index.
Фиг. 3: Эффект комбинации 1 мг/кг/сутки ELA и 10 мг/кг/сутки ОХК на печеночный коллаген.Fig. 3: Effect of the combination of 1 mg/kg/day ELA and 10 mg/kg/day OCA on hepatic collagen.
Фиг. 4: Эффект комбинации 3 мг/кг/сутки ELA и 10 мг/кг/сутки ОХК на печеночный коллаген.Fig. 4: Effect of the combination of 3 mg/kg/day ELA and 10 mg/kg/day OCA on hepatic collagen.
Фиг. 5: эффект комбинации 3 мг/кг/сутки ELA и 10 мг/кг/сутки ОХК на маркеры фиброза.Fig. 5: Effect of combination of 3 mg/kg/day ELA and 10 mg/kg/day OCA on markers of fibrosis.
Фиг. 6: Различное противофиброзное действие элафибранора в сравнении с ценикривироком и безафибратом, в ЗКП человека, индуцированных TGFe.Fig. Figure 6: Different antifibrotic effects of elafibranor versus cenicriviroc and bezafibrate in TGFe-induced human HSC.
Лишенные сыворотки ЗКП перед активацией профиброгенным цитокином TGFe1 (1 нг/мл) предварительно инкубировали в течение 1 ч с элафибранором (A), ценикривироком (B) или безафибратом (панагонистом PPAR-α/γ/δ).Serum-deprived HSCs were pre-incubated for 1 h with elafibranor (A), cenicriviroc (B), or bezafibrate (a PPAR-α/γ/δ panagonist) prior to activation with the profibrogenic cytokine TGFe1 (1 ng/mL).
После 48 ч инкубирования с помощью ИФА измеряли экспрессию α-SMA.After 48 hours of incubation, α-SMA expression was measured by ELISA.
Полученные значения преобразовывали в процентное ингибирование по сравнению с контролем TGFe1. Данные представлены как среднее значение (трехкратной повторности) ± стандартное отклонение (SD). Статистический анализ проводили с использованием одностороннего ANOVA с последующими ретроспективными анализами с поправкой Бонферрони, используя программное обеспечение Sigma Plot 11.0 [*: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001 (сравнение с группой TGFe1 1 нг/мл)]. Подбор кривой и расчет концентрации полумаксимального ингибирования (IC50) проводили с помощью программного обеспечения XLFit 5.3.1.3.The values obtained were converted to percent inhibition compared to the TGFe1 control. Data are presented as mean (triple replication) ± standard deviation (SD). Statistical analysis was performed using one-way ANOVA followed by Bonferroni-adjusted post-hoc analyzes using Sigma Plot 11.0 software [*: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001 (comparison with TGFe1 1 ng/mL group)]. Curve fitting and calculation of half-maximal inhibition concentration (IC 50 ) was performed using XLFit 5.3.1.3 software.
Фиг. 7: Комбинация элафибранора с ценикривироком синергически ингибирует α-SMA в ЗКП человека, индуцированных TGFe1.Fig. 7: The combination of Elafibranor with Cenicriviroc synergistically inhibits α-SMA in human HSCs induced by TGFe1.
Комбинации тестировались в матричной форме исследования зависимости доза-эффект и анализировались в соответствии с моделью аддитивизма разности по Блиссу.The combinations were tested in a matrix form dose-response study and analyzed according to the Bliss difference additivism model.
Были подготовлены серии разведений элафибранора (горизонтальный ряд) и ценикривирока (вертикальный ряд), включая их соответствующие контроли ДМСО.Dilution series of elafibranor (horizontal row) and cenicriviroc (vertical row) were prepared, including their respective DMSO controls.
Полученные смеси добавляли в лишенные сыворотки ЗКП за 1 ч до активации профиброгенным цитокином TGFe1 (1 нг/мл).The resulting mixtures were added to serum-deprived HSCs 1 h prior to activation by the profibrogenic cytokine TGFe1 (1 ng/mL).
(A) Процент ингибирования α-SMA по сравнению с контролем TGFe1 для всех пар комбинаций. Данные представлены как среднее значение четырехкратной повторности.(A) Percent inhibition of α-SMA compared to TGFe1 control for all pairs of combinations. Data are presented as the mean of quadruple replication.
- 21 042734 (B) Баллы по Блиссу рассчитывали, как описано в разделе Материалы и методы. Любая пара соединений со значениями по Блиссу >10 считалась синергической (окрашена от светло-серого до черного). Также был рассчитан общий балл по Блиссу, включающий все комбинации.- 21 042734 (B) Bliss scores were calculated as described in the Materials and Methods section. Any pair of compounds with Bliss values >10 was considered synergistic (colored from light gray to black). A total Bliss score including all combinations was also calculated.
(C) Значения полученных данных пары синергетических комбинаций построены в виде гистограммы. Данные представлены как среднее значение (четырехкратной повторности) ± стандартное отклонение (SD). Статистический анализ проводили с помощью одностороннего анализа ANOVA с последующими ретроспективными анализами с поправкой Бонферрони, используя программное обеспечение Sigma Plot 11.0 [*: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001 (сравнение с группой комбинированный лекарственный препарат)].(C) The values of the obtained data of a pair of synergistic combinations are plotted as a histogram. Data are presented as mean (four times) ± standard deviation (SD). Statistical analysis was performed by one-way ANOVA followed by Bonferroni-adjusted retrospective analyzes using Sigma Plot 11.0 software [*: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001 (comparison with combination drug group)].
Фиг. 8: Безафибрат не синергирует с ценикривироком для уменьшения фиброза в ЗКП человека, индуцированных TGFe1Fig. 8: Bezafibrate does not synergize with cenicriviroc to reduce fibrosis in TGFe1-induced human HSC
Комбинации тестировались в матричной форме исследования зависимости доза-эффект и анализировались в соответствии с моделью аддитивизма разности по Блиссу.The combinations were tested in a matrix form dose-response study and analyzed according to the Bliss difference additivism model.
Были подготовлены серии разведений элафибранора (горизонтальный ряд) и безафибрата (вертикальный ряд), включая их соответствующие контроли ДМСО. Полученные смеси добавляли в лишенные сыворотки ЗКП за 1 ч до активации профиброгенным цитокином TGFe1 (1 нг/мл).Dilution series of elafibranor (horizontal row) and bezafibrate (vertical row) were prepared, including their respective DMSO controls. The resulting mixtures were added to serum-deprived HSCs 1 h prior to activation by the profibrogenic cytokine TGFe1 (1 ng/mL).
(A) Процентное ингибирование α-SMA по сравнению с контролем TGFe1.(A) Percent inhibition of α-SMA compared to TGFe1 control.
(B) Баллы разности по Блиссу рассчитывали, как описано в разделе Материалы и методы. Любая пара соединений со значениями по Блиссу >10 считалась синергической (окрашена от светло-серого до черного). Также был рассчитан общий балл по Блиссу, включающий все комбинации.(B) Bliss difference scores were calculated as described in the Materials and Methods section. Any pair of compounds with Bliss values >10 was considered synergistic (colored from light gray to black). A total Bliss score including all combinations was also calculated.
Фиг. 9: Комбинации элафибранора с MSDC-0602, PXS-4728A, апарареноном, CF-102. висмодегибом. PBI-4050, KD-025, DUR-928, VK-2809 и эмриказаном синергически ингибируют α-SMA в ЗКП человека, индуцированных TGFe1.Fig. 9: Elafibranor combinations with MSDC-0602, PXS-4728A, apararenone, CF-102. vismodegib. PBI-4050, KD-025, DUR-928, VK-2809, and emrycane synergistically inhibit α-SMA in TGFe1-induced human HSCs.
Комбинации тестировались в матричной форме исследования зависимости доза-эффект и анализировались в соответствии с моделью аддитивизма разности по Блиссу. Проценты ингибирования α-SMA по сравнению с контролем TGFe1 построены в виде гистограммы для репрезентативных синергических комбинаций. Данные представлены как среднее значение (четырехкратной повторности) ± стандартное отклонение (SD). *: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001 с использованием одностороннего анализа ANOVA и ретроспективного анализа с критерием наименьшей значимой разности (LSD) Фишера. MSDC=MSDC-0602.The combinations were tested in a matrix form dose-response study and analyzed according to the Bliss difference additivism model. Percent inhibition of α-SMA compared to TGFe1 control plotted as a histogram for representative synergistic combinations. Data are presented as mean (four times) ± standard deviation (SD). *: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001 using one-way ANOVA and retrospective analysis with Fisher's least significant difference (LSD) test. MSDC=MSDC-0602.
Фиг. 10: Комбинации элафибранора с CP-640186, GS-0976 или JKB-121 (налмефена) синергически ингибируют секрецию коллагена в микротканях печениFig. Figure 10: Combinations of Elafibranor with CP-640186, GS-0976, or JKB-121 (nalmefene) synergistically inhibit collagen secretion in hepatic microtissues
Микроткани обрабатывали с помощью метаболической индукции стимулом НАСГ только с одним элафибранором или без него (белая полоса), только с одним соединением (ii) (черная полоса) или их комбинацией (серая полоса). Комбинации тестировались в матричной форме исследования зависимости доза-эффект и анализировались в соответствии с моделью аддитивизма разности по Блиссу. Проценты ингибирования НАСГ по сравнению с контролем стимула построены в виде гистограммы для репрезентативных синергических комбинаций. Данные представлены как среднее значение (трехкратной повторности)±стандартное отклонение (SD). *: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001 с использованием одностороннего анализа ANOVA и ретроспективного анализа с критерием наименьшей значимой разности (LSD) Фишера.Microtissues were treated by metabolic induction with NASH stimulus with or without elafibranor alone (white bar), with compound (ii) alone (black bar), or a combination of both (grey bar). The combinations were tested in a matrix form dose-response study and analyzed according to the Bliss difference additivism model. Percent NASH inhibition versus stimulus control plotted as a histogram for representative synergistic combinations. Data are presented as mean (triple replication) ± standard deviation (SD). *: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001 using one-way ANOVA and retrospective analysis with Fisher's least significant difference (LSD) test.
Фиг. 11: Комбинация элафибранора с гемкабеном синергически ингибирует секрецию ФНОа в макрофагах, активированных ЛПС.Fig. 11: The combination of elafibranor with gemcaben synergistically inhibits TNF-α secretion in LPS-activated macrophages.
Комбинации тестировались в матричной форме исследования зависимости доза-эффект и анализировались в соответствии с моделью аддитивизма разности по Блиссу. Проценты ингибирования ФНОа по сравнению с контролем ЛПС построены в виде гистограммы для репрезентативных синергических комбинаций. Данные представлены как среднее значение (четырехкратной повторности) ± стандартное отклонение (SD). *: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001 с использованием одностороннего анализа ANOVA и ретроспективного анализа с критерием наименьшей значимой разности (LSD) Фишера.The combinations were tested in a matrix form dose-response study and analyzed according to the Bliss difference additivism model. Percentage of TNFa inhibition compared to LPS control plotted as a histogram for representative synergistic combinations. Data are presented as mean (four times) ± standard deviation (SD). *: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001 using one-way ANOVA and retrospective analysis with Fisher's least significant difference (LSD) test.
Фиг. 12: Комбинации элафибранора с CP640186, VK-2809, апараренона (Apa) или арамхола (Aram) синергически ингибируют накопление жира в HepG2.Fig. 12: Combinations of elafibranor with CP640186, VK-2809, apararenone (Apa), or aramchol (Aram) synergistically inhibit fat accumulation in HepG2.
Комбинации тестировались в матричной форме исследования зависимости доза-эффект и анализировались в соответствии с моделью аддитивизма разности по Блиссу. Проценты ингибирования накопления жира по сравнению с контролем, обработанным СЖК, построены в виде гистограммы для репрезентативных синергетических комбинаций. Данные представлены как среднее значение (четырехкратной повторности) ± стандартное отклонение (SD). *: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001 с использованием одностороннего анализа ANOVA и ретроспективного анализа с критерием наименьшей значимой разности (LSD) Фишера.The combinations were tested in a matrix form dose-response study and analyzed according to the Bliss difference additivism model. Percent inhibition of fat accumulation compared to FFA-treated control plotted as a histogram for representative synergistic combinations. Data are presented as mean (four times) ± standard deviation (SD). *: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001 using one-way ANOVA and retrospective analysis with Fisher's least significant difference (LSD) test.
Фиг. 13: Комбинация элафибранора с MGL-3196 синергически ингибирует накопление жира в 3D культуре сфероидов Huh7.Fig. 13: The combination of Elafibranor with MGL-3196 synergistically inhibits fat accumulation in 3D Huh7 spheroid culture.
Сфероиды обрабатывали с помощью метаболического стимула НАСГ только с одним элафибрано- 22 042734 ром или без него (белая полоса), только с MGL3196 (серая полоса) или их комбинацией (черная полоса).Spheroids were treated with the NASH metabolic stimulus with or without Elafibranor alone (white bar), with MGL3196 alone (grey bar), or a combination of the two (black bar).
Измерение накопления липидов проводили, как описано в материалах и методах. Стандартные отклонения показаны в виде усов (n=3). Расчетное значение по Блиссу указано в верхнем левом углу. Значимые разницы (*p<0,05; * p<0,01; *p<0,001) после однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) и анализа с критерием наименьшей значимой разности (LSD) Фишера.Measurement of lipid accumulation was performed as described in materials and methods. Standard deviations are shown as whiskers (n=3). The calculated Bliss value is indicated in the upper left corner. Significant differences (*p<0.05; *p<0.01; *p<0.001) after one-way analysis of variance (ANOVA) and Fisher's least significant difference (LSD) test.
Фиг. 14: Элафибранор (GFT505, 3 мг/кг/сутки) и селонсертиб (SEL, 30 мг/кг/сут) синергически снижают фиброз, ремоделирование ткани и маркеры воспаления у мышей с НАСГ (мышей, получавших диету CDFF).Fig. 14: Elafibranor (GFT505, 3 mg/kg/day) and selonsertib (SEL, 30 mg/kg/day) synergistically reduce fibrosis, tissue remodeling, and inflammatory markers in NASH mice (CDFF-fed mice).
(A) Процент поверхности фиброза оценивали путем морфометрического количественного определения положительно окрашенной пикросириусом области относительно площади среза печени.(A) Fibrosis surface percentage was assessed by morphometric quantification of the area positively stained with picrosirius relative to the area of the liver section.
(B) Содержание печеночного коллагена.(B) Hepatic collagen content.
(C) Плазменная концентрация PIIINP, суррогатные маркеры фиброза печени.(C) Plasma concentration of PIIINP, surrogate markers of liver fibrosis.
(D) Плазменная концентрация TIMP1, суррогатные маркеры фиброза печени,(D) Plasma concentration of TIMP1, surrogate markers of liver fibrosis,
Экспрессию Col1a1 (E), MMP2 (F), TGFe1 (G) в качестве маркеров фиброза и ремоделирования ткани, а также ФНОа (H) и CCK2 (I), маркеров воспаления, оценивали с помощью количественной ПЦР в реальном времени.Expression of Col1a1 (E), MMP2 (F), TGFe1 (G) as markers of fibrosis and tissue remodeling, as well as TNFa (H) and CCK2 (I), markers of inflammation, was assessed by quantitative real-time PCR.
Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение, a p<0,05, аа p<0,01, ааа p<0,001 с использованием одностороннего критерия Стьюдента с поправкой Уэлча. HSA, модель наиболее эффективного отдельного агента.Data are expressed as mean ± SD, a p<0.05, aa p<0.01, aaa p<0.001 using a one-tailed Student's t-test with Welch's correction. HSA, the most efficient single agent model.
Фиг. 15: Элафибранор (GFT505, 1 или 3 мг/кг/сутки) и GKT-831 (GKT, 60 мг/кг/сутки) синергически снижают НАСГ и фиброз у мышей с НАСГ (мышей, получавших диету CDFF).Fig. 15: Elafibranor (GFT505, 1 or 3 mg/kg/day) and GKT-831 (GKT, 60 mg/kg/day) synergistically reduce NASH and fibrosis in NASH mice (CDFF-fed mice).
(A) Процент поверхности фиброза оценивали путем морфометрического количественного определения положительно окрашенной пикросириусом области относительно площади среза печени.(A) Fibrosis surface percentage was assessed by morphometric quantification of the area positively stained with picrosirius relative to the area of the liver section.
(B) Гистологическая оценка очагов воспаления в 10 полях зрения микроскопа (20х).(B) Histological evaluation of inflammatory lesions in 10 microscopic fields (20x).
(C) Балл по шкале оценки активности НАЖБП, рассчитанный путем расчета суммы степеней выраженности стеатоза, балонной дистрофии и лобулярного воспаления (минимум 0 - максимум 8) по данным Сети клинических исследований НАСГ (Kleiner 2005, Brunt 1999).(C) NAFLD activity score calculated by calculating the sum of the degrees of steatosis, balloon degeneration and lobular inflammation (minimum 0 - maximum 8) according to the NASH Clinical Research Network (Kleiner 2005, Brunt 1999).
Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение, а p<0,05, аа p<0,01, ааа p<0,001 использованием одностороннего критерия Стьюдента с поправкой Уэлча. $ p<0,05, $$ p<0,01, $$$ p<0,001 с использованием одностороннего U-критерия Манна-Уитни (непараметрического). HSA, модель наиболее эффективного отдельного агентаData are expressed as mean ± SD, a p<0.05, aa p<0.01, aaa p<0.001 using one-tailed Student's t-test with Welch's correction. $ p<0.05, $$ p<0.01, $$$ p<0.001 using one-tailed Mann-Whitney U-test (non-parametric). HSA, Most Efficient Single Agent Model
Фиг. 16: Элафибранор (GFT505, 1 мг/кг/сутки) и GS-0976 (GS, 30 мг/кг/сут) синергически снижают стеатоз и массу тела у мышей с НАСГ (мышей, получавших диету CDFF).Fig. 16: Elafibranor (GFT505, 1 mg/kg/day) and GS-0976 (GS, 30 mg/kg/day) synergistically reduce steatosis and body weight in NASH mice (CDFF-fed mice).
(A) Степень стеатоза, оцениваемая путем гистологического исследования в соответствии с рекомендациями NASH Clinical Research Network.(A) The degree of steatosis, assessed by histological examination in accordance with the recommendations of the NASH Clinical Research Network.
(B) Содержание печеночных триглицеридов.(B) Hepatic triglyceride content.
(C) Потеря массы тела после 8 недель лечения по сравнению с контролем. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение, a p<0,05, аар<0,01, ааа p<0,001 с использованием одностороннего критерия Стьюдента с поправкой Уэлча. HSA, модель наиболее эффективного отдельного агента(C) Weight loss after 8 weeks of treatment compared to controls. Data are expressed as mean ± SD, a p<0.05, aap<0.01, aaa p<0.001 using one-tailed Student's t-test with Welch's correction. HSA, Most Efficient Single Agent Model
ПримерыExamples
Пример 1. План исследования комбинированной терапии.Example 1 Combination Therapy Study Design.
Материалы и методы.Materials and methods.
Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО, Fluka, кат. № 41640).Compounds were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, Fluka cat. no. 41640).
1. Пример в модели ЗКП человека, индуцированных TGFe1.1. An example in a model of human HSC induced by TGFe1.
Культура ЗКП человека.The culture of human HSP.
Первичные звездчатые клетки печени человека (ЗКП) (Innoprot) культивировали в среде STeCM (ScienCell, кат. № 5301), дополненной 2% фетальной бычьей сыворотки (ФБС, ScienCell, кат. № 0010), 1% пенициллина/стрептомицина (ScienCell, кат. № 0503) и добавкой для роста звездчатых клеток (SteCGS; ScienCell, кат. № 5352). Для улучшения адгезии флаконы для культивирования клеток покрывали поли-Ь-лизином (Sigma, кат. № P4707).Primary human liver stellate cells (HSCs) (Innoprot) were cultured in STeCM medium (ScienCell, cat. no. 5301) supplemented with 2% fetal bovine serum (FBS, ScienCell, cat. no. No. 0503) and Stellate Growth Supplement (SteCGS; ScienCell Cat. No. 5352). To improve adhesion, cell culture flasks were coated with poly-L-lysine (Sigma, cat. no. P4707).
Подготовка композиций.Preparation of compositions.
Двухкомпонентная матрица комбинаций.Two-component matrix of combinations.
Для этих экспериментов была создана шахматная матрица. Исходные ELA и компонент (ii) серийно разводили в ДМСО в серии из 5 точек в горизонтальном ряде (ELA) и в серии из 11 точек в вертикальном ряде (компонент (ii)) 96-луночного планшета. Впоследствии матрица комбинаций 5X11 была получена путем смешивания всех концентраций одного агента в соотношении 1:1. Опытные концентрации для каждого соединения были выбраны на основе соответствующей IC50 каждого соединения в качестве отдельного агента, полученной путем измерения содержания α-SMA в модели ЗКП, стимулированных с помощью TGFe1.For these experiments, a chess matrix was created. Stock ELA and component (ii) were serially diluted in DMSO in a series of 5 points in a horizontal row (ELA) and in a series of 11 points in a vertical row (component (ii)) of a 96-well plate. Subsequently, a 5X11 combination matrix was obtained by mixing all concentrations of one agent in a 1:1 ratio. Experimental concentrations for each compound were selected based on the respective IC 50 of each compound as a single agent, obtained by measuring the content of α-SMA in a model of HSCs stimulated with TGFe1.
Активация ЗКП человека TGFe1 и обработка соединением.Human HSC TGFe1 activation and compound treatment.
Первичные звездчатые клетки печени человека (ЗКП) (Innoprot) культивировали в стандартных ус- 23 042734 ловиях, как описано выше. Затем клетки высевали при плотности 2х104 клеток/лунку в 96-луночные планшеты для измерения α-SMA с помощью ИФА. На следующий день культуральную среду удаляли и клетки промывали ФСБ (Invitrogen, кат. № 14190). ЗКП человека культивировали в течение 24 ч в бессывороточной и не содержащей SteCGS среде. Для обработки ELA компонентом (ii) и соответствующими комбинациями ELA/компонент (ii) лишенные сыворотки ЗКП человека предварительно инкубировали в течение 1 ч с соединениями с последующим добавлением профиброгенных стимулов TGF-β 1 (PeproTech, кат. № 100-21, 1 нг/мл) в бессывороточной и не содержащей SteCGS среде в течение дополнительных 48 ч.Primary human liver stellate cells (HSCs) (Innoprot) were cultured under standard conditions as described above. The cells were then seeded at a density of 2x10 4 cells/well in 96-well plates for measuring α-SMA by ELISA. The next day, the culture medium was removed and the cells were washed with PBS (Invitrogen, cat. no. 14190). Human HSCs were cultured for 24 h in serum-free and SteCGS-free medium. For treatment with ELA component (ii) and the respective ELA/component (ii) combinations, serum-deprived human HSCs were pre-incubated for 1 h with the compounds followed by the addition of TGF-β 1 profibrogenic stimuli (PeproTech cat. no. 100-21, 1 ng/ ml) in serum-free and SteCGS-free medium for an additional 48 hours.
ИФА α-SMA.ELISA α-SMA.
Уровень α-SMA измеряли с помощью сэндвич-варианта ИФА. Говоря кратко, лунки планшета для ИФА сначала покрывали иммобилизованным антителом (мышиное моноклональное анти-ACTA2, Abnova) при 4°C в течение ночи. После 3 промывок в ФСБ + 2% Твин-20 в течение 1 ч добавляли блокирующий раствор, состоящий из ФСБ + 0,2% БСА, после чего следовал еще один цикл промывки. Клеточные лизаты переносили в лунки для связывания с иммобилизованным антителом на 2 ч при комнатной температуре. После процедуры промывки, добавляли идентифицирующее антитело (биотинилированное мышиное моноклональное анти-ACTA2 антитело, Abnova) на 2 ч при комнатной температуре с последующими тремя промывками. Для обнаружения сначала в течение 30 мин при комнатной температуре применяли стрептавидин, конъюгированный с HRP (R&D Systems, кат. № DY998). После промывки добавляли субстрат ТМБ HRB (BD, кат. № 555214) и инкубировали в течение 7 мин при комнатной температуре в темноте. После окисления ТМБ образует водорастворимый синий продукт реакции, который с добавлением серной кислоты становится желтым (останавливающий раствор), что позволяет точно измерять интенсивность при 450 нм, используя спектрофотометр. Полученный цвет прямо пропорционален количеству α-SMA, присутствующего в лизате.The level of α-SMA was measured using a sandwich ELISA. Briefly, the wells of the ELISA plate were first coated with immobilized antibody (mouse monoclonal anti-ACTA2, Abnova) at 4°C overnight. After 3 washes in PBS + 2% Tween-20 for 1 hour, a blocking solution consisting of PBS + 0.2% BSA was added, followed by another wash cycle. Cell lysates were transferred to the wells for binding to the immobilized antibody for 2 hours at room temperature. After the washing procedure, identification antibody (biotinylated mouse monoclonal anti-ACTA2 antibody, Abnova) was added for 2 hours at room temperature followed by three washes. For detection, streptavidin conjugated to HRP (R&D Systems cat. no. DY998) was used first for 30 minutes at room temperature. After washing, TMB HRB substrate (BD, cat. no. 555214) was added and incubated for 7 min at room temperature in the dark. After oxidation, TMB forms a water-soluble blue reaction product, which turns yellow with the addition of sulfuric acid (stopping solution), which allows accurate measurement of the intensity at 450 nm using a spectrophotometer. The resulting color is directly proportional to the amount of α-SMA present in the lysate.
2. Пример в модели активации ЗКП в 3D микроткани печени человека.2. An example in a model of HSC activation in 3D human liver microtissue.
3D культура микроткани печени человека.3D human liver microtissue culture.
Криоконсервированные первичные гепатоциты человека (IPHH 11) и криоконсервированные первичные непаренхимные клетки человека (NPCs, IPHN 11) поставлялись фирмой BioreclamationIVT. Криоконсервированные первичные звездчатые клетки печени человека (ЗКП) поставлялись фирмой Innoprot. Образцы 3D микротканей печени человека InSightTM (MT-02-302-95; InSphero AG) получали, используя IPHH 11, IPHN 11 и ЗКП человека, в 96-луночной культуральной платформе с висячими каплями (Gravity PLUSTM). После формирования микротканей их переносили в специальную 96-луночную платформу для культивирования и анализа микроткани (Gravity TRAPTM). Дальнейшие манипуляции и обработка соединениями проводились в планшетах Gravity TRAPTM. После формирования трехмерные микроткани культивировали в среде 3D InSight™ Human Liver Maintenance Medium-INF (hLiMM CS-07-001b-01; InSphero AG) при 37°C, 5% CO2 в увлажненном инкубаторе для культур клеток в течение 4 суток. Половину питательной среды обновляли каждые 2 суток.Cryopreserved primary human hepatocytes (IPHH 11) and cryopreserved primary human non-parenchymal cells (NPCs, IPHN 11) were supplied by BioreclamationIVT. Cryopreserved primary human liver stellate cells (HSCs) were supplied by Innoprot. 3D human liver microtissue samples InSightTM (MT-02-302-95; InSphero AG) were obtained using IPHH 11, IPHN 11 and human HSC in a 96-well hanging drop culture platform (Gravity PLUSTM). After microtissue formation, they were transferred to a special 96-well microtissue culture and analysis platform (Gravity TRAPTM). Further manipulations and processing of compounds were carried out in tablets Gravity TRAPTM. After formation, 3D microtissues were cultured in 3D InSight™ Human Liver Maintenance Medium-INF (hLiMM CS-07-001b-01; InSphero AG) at 37°C, 5% CO 2 in a humidified cell culture incubator for 4 days. Half of the nutrient medium was renewed every 2 days.
Подготовка композиций: Двухкомпонентная матрица комбинаций.Preparation of compositions: Two-component combination matrix.
Для этих экспериментов была создана шахматная матрица. Исходные ELA и компонент (ii) серийно разводили в ДМСО в серии из двух точек в горизонтальном ряде (ELA) и в серии из трех точек в вертикальном ряде (компонент (ii)) 96-луночного планшета. Впоследствии матрица комбинаций 2X3 была получена путем смешивания всех концентраций одного агента в соотношении 1:1.For these experiments, a chess matrix was created. Stock ELA and component (ii) were serially diluted in DMSO in a two-dot-in-horizontal (ELA) series and in a three-dot-in-vertical series (component (ii)) of a 96-well plate. Subsequently, a 2X3 combination matrix was obtained by mixing all concentrations of one agent in a 1:1 ratio.
Метаболическая стимуляция 3D микроткани печени человека InSightTM и обработка соединениями.Metabolic stimulation of 3D human liver microtissue InSightTM and treatment with compounds.
3D микроткань печени человека InSightTM (InSPhero) культивировали в стандартных условиях, как описано выше. Затем микроткани культивировали в течение 24 ч в бессывороточной среде. Для лечения ELA компонентом (ii) и соответствующими комбинациями ELA/компонент (ii) лишенные сыворотки микроткани обрабатывали как с помощью метаболической индукции стимулом НАСГ, так и соединениями (день 0) с последующим возобновлением метаболической индукции стимулом НАСГ на день 3 в течение дополнительных 3 дней. Супернатанты для измерения Col1a1 собирали на 6-й день.3D human liver microtissue InSightTM (InSPhero) was cultured under standard conditions as described above. Then the microtissues were cultured for 24 h in a serum-free medium. For ELA treatment with component (ii) and the respective ELA/component (ii) combinations, serum-deprived microtissues were treated with both metabolic induction with NASH stimulus and compounds (Day 0) followed by resumption of metabolic induction with NASH stimulus on day 3 for an additional 3 days . Supernatants for Col1a1 measurement were collected on day 6.
ИФА Col1a1.ELISA Col1a1.
Уровень Col1a1 измеряли с помощью сэндвич-варианта ИФА. Говоря кратко, лунки планшета для ИФА сначала покрывали иммобилизованным антителом (иммобилизованным мышиным антителом к проколлагену Ia1 человека, Elisa Pro-Collagen Ia1/COLIA1, DuoSet ELISA, R&D, кат. № DY6220-05) при комнатной температуре в течение ночи. После трех промывок в ФСБ + 0,5% Твин-20 в течение 1 ч добавляли блокирующий раствор, состоящий из ФСБ + 0,1% БСА, после чего следовал еще один цикл промывки. Культуральные супернатанты переносили в лунки для связывания с иммобилизованным антителом на 2 ч при комнатной температуре. После процедуры промывки, добавляли идентифицирующее антитело (детектируемое биотинилированное овечье антитело к проколлагену Ia1 человека) на 2 ч при комнатной температуре с последующими тремя промывками. Для обнаружения сначала в течение 20 мин при комнатной температуре применяли стрептавидин, конъюгированный с HRP. После промывки добавляли субстрат ТМБ HRB (BD, кат. № 555214) и инкубировали в течение 20 мин при комнатной темпера- 24 042734 туре в темноте. После окисления ТМБ образует водорастворимый синий продукт реакции, который с добавлением серной кислоты становится желтым (останавливающий раствор), что позволяет точно измерять интенсивность при 450 нм, используя спектрофотометр. Полученный цвет прямо пропорционален количеству col1a1, присутствующего в супернатанте.Col1a1 levels were measured using sandwich ELISA. Briefly, the wells of the ELISA plate were first coated with immobilized antibody (immobilized mouse anti-human procollagen Ia1 antibody, Elisa Pro-Collagen Ia1/COLIA1, DuoSet ELISA, R&D, cat. no. DY6220-05) at room temperature overnight. After three washes in PBS + 0.5% Tween-20 for 1 hour, a blocking solution consisting of PBS + 0.1% BSA was added, followed by another wash cycle. The culture supernatants were transferred to the wells for binding to the immobilized antibody for 2 hours at room temperature. After the washing procedure, identification antibody (detectable biotinylated sheep anti-human procollagen Ia1 antibody) was added for 2 hours at room temperature followed by three washes. For detection, streptavidin conjugated with HRP was first used for 20 min at room temperature. After washing, TMB HRB substrate (BD, cat. no. 555214) was added and incubated for 20 min at room temperature in the dark. After oxidation, TMB forms a water-soluble blue reaction product, which turns yellow with the addition of sulfuric acid (stopping solution), which allows accurate measurement of the intensity at 450 nm using a spectrophotometer. The color obtained is directly proportional to the amount of col1a1 present in the supernatant.
3. Пример в макрофагах, активированных ЛПС.3. An example in macrophages activated by LPS.
Дифференцировка моноцитов THP-1 в макрофаги.Differentiation of THP-1 monocytes into macrophages.
Моноциты THP-1 (ECACC, кат. № 88081201) высевали при плотности 25550 клеток/лунку в 384-луночный планшет со средой RPMI1640 (Gibco, 21875), дополненной 10% СВФ, и дифференцировали в макрофаги с использованием ФМА (форбол-12-миристат-13-ацетат, Sigma, P8139) в конечной концентрации 100 нг/мл в течение 24 ч.THP-1 monocytes (ECACC, cat. no. 88081201) were seeded at a density of 25550 cells/well in a 384-well plate with RPMI1640 medium (Gibco, 21875) supplemented with 10% SVF and differentiated into macrophages using PMA (phorbol-12- myristate-13-acetate, Sigma, P8139) at a final concentration of 100 ng/ml for 24 hours.
Подготовка композиций: Двухкомпонентная матрица комбинаций.Preparation of compositions: Two-component combination matrix.
Для этих экспериментов была создана шахматная матрица. Исходные ELA и компонент серийно разводили в ДМСО в серии из 6 точек в вертикальном ряде (ELA) и в серии из 10 точек в горизонтальном ряде (компонент) 96-луночного планшета для других соединений. Впоследствии матрица комбинаций 6X10 была получена путем смешивания всех концентраций одного агента в соотношении 1:1.For these experiments, a chess matrix was created. Stock ELA and component were serially diluted in DMSO in a 6 dot in vertical row (ELA) series and in a 10 dot in a horizontal row (component) series of a 96-well plate for other compounds. Subsequently, a 6X10 combination matrix was obtained by mixing all concentrations of one agent in a 1:1 ratio.
Обработки соединением и стимуляция ЛПС.Compound treatments and LPS stimulation.
После 24 ч среду с ФМА удаляли и заменяли на бессывороточную среду RPMI. Для обработок ELA компонентом и соответствующими комбинациями ELA/компонент лишенные сыворотки макрофаги THP-1 предварительно инкубировали в течение 24 ч с соединениями с последующим добавлением липополисахарида ЛПС (100 нг/мл, E.coli 055 B5, Sigma, L6529) в течение дополнительных 6 ч.After 24 h, the medium with PMA was removed and replaced with serum-free RPMI medium. For treatments with ELA component and appropriate ELA/component combinations, serum-deprived THP-1 macrophages were pre-incubated for 24 h with compounds followed by addition of LPS lipopolysaccharide (100 ng/mL, E. coli 055 B5, Sigma, L6529) for an additional 6 h .
Количественное определение ФНОа человека.Quantitative determination of human TNFa.
ФНОа человека в супернатанте определяли количественно с использованием технологии гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF) (Cisbio 62HTNFAPEG), основанной на технологии FRET. Метод FRET (резонансный перенос энергии флуоресценции) основан на переносе энергии между двумя флуорофорами, донором и акцептором, когда они находятся в непосредственной близости. Молекулярные взаимодействия между биомолекулами можно оценить, связав каждого партнера с флуоресцентной меткой и определив уровень переноса энергии (665 нм). Клеточный супернатант, образец или стандарт помещали непосредственно в аналитический планшет для обнаружения с помощью реактивов HTRF®. Антитела, меченные донором и акцептором HTRF, предварительно смешивали и добавляли в одну стадию дозирования. Интенсивность сигнала пропорциональна количеству образованного комплекса антиген-антитело и, следовательно, концентрации ФНОа. Путем подбора данных с четырехпараметрической логистической моделью получали калибровочную кривую из семи точек (от 39 пг/мл до 2500 пг/мл с введенным человеческим ФНОа).Human TNFa in the supernatant was quantified using time resolved homogeneous fluorescence (HTRF) technology (Cisbio 62HTNFAPEG) based on FRET technology. FRET (fluorescence resonance energy transfer) is based on the transfer of energy between two fluorophores, a donor and an acceptor, when they are in close proximity. Molecular interactions between biomolecules can be assessed by associating each partner with a fluorescent label and determining the level of energy transfer (665 nm). The cell supernatant, sample or standard was placed directly into the assay plate for detection with HTRF® reagents. HTRF donor and acceptor labeled antibodies were premixed and added in one dosing step. The intensity of the signal is proportional to the amount of antigen-antibody complex formed and, consequently, to the concentration of TNFa. By fitting data with a four-parameter logistic model, a seven-point calibration curve was generated (from 39 pg/ml to 2500 pg/ml with human TNFa injected).
4. Пример в гепатоцитах, нагруженных жиром (HepG2).4. Example in hepatocytes loaded with fat (HepG2).
Клеточная культура HepG2.Cell culture of HepG2.
Клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека культивировали в среде DMEM с 4,5 г/л глюкозы (Gibco, кат. № 31053, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС, Gibco, кат. № 10270), 1% пенициллина/стрептомицина (Gibco, кат. № 15140), 1% MEM НЗАК (Gibco, кат. № 11140), 1% L-глутамина (Gibco, кат. № 25030) и 1% пирувата натрия (Gibco, кат. № 11360).Human hepatocellular carcinoma cells were cultured in DMEM with 4.5 g/L glucose (Gibco cat. no. 31053 supplemented with 10% fetal bovine serum (PBS, Gibco cat. no. 10270), 1% penicillin/streptomycin no. 15140), 1% MEM NSAA (Gibco, cat. no. 11140), 1% L-glutamine (Gibco, cat. no. 25030), and 1% sodium pyruvate (Gibco, cat. no. 11360).
Подготовка композиций: Двухкомпонентная матрица комбинацийComposition preparation: Two-component combination matrix
Для этих экспериментов была создана шахматная матрица. Исходные ELA и компонент серийно разводили в ДМСО в серии из 5 точек в горизонтальном ряде (ELA) и в серии из 11 точек в вертикальном ряде (компонент) 384-луночного планшета. Впоследствии матрица комбинаций 5X11 была получена путем смешивания всех концентраций одного агента в соотношении 1:1.For these experiments, a chess matrix was created. Stock ELA and component were serially diluted in DMSO in a series of 5 dots in a horizontal row (ELA) and in a series of 11 dots in a vertical row (component) of a 384-well plate. Subsequently, a 5X11 combination matrix was obtained by mixing all concentrations of one agent in a 1:1 ratio.
Подготовка свободной жирной кислоты (СЖК).Free fatty acid (FFA) preparation.
Олеиновая (кат. № O1383) и пальмитиновая (P0500) кислоты были приобретены в фирме Sigma. Исходные растворы FFA (100 мМ) готовили в 0,1 М NaOH при 80°C. Рабочие растворы 4,5 мМ пальмитата/10% бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 9 мМ олеата/10% БСА готовили путем комплексирования соответствующего объема исходного раствора с 10% БСА (с низким содержанием эндотоксина без FFA; Sigma-Aldrich, Борнем, Бельгия) на водяной бане при 55°C (15 мин).Oleic (cat. no. O1383) and palmitic (P0500) acids were purchased from Sigma. Stock solutions of FFA (100 mM) were prepared in 0.1 M NaOH at 80°C. Working solutions of 4.5 mM palmitate/10% bovine serum albumin (BSA) and 9 mM oleate/10% BSA were prepared by complexing an appropriate volume of stock solution with 10% BSA (low endotoxin without FFA; Sigma-Aldrich, Bornem, Belgium). ) in a water bath at 55°C (15 min).
Нагрузка жиром и обработка соединением.Fat loading and compound processing.
Для оценки содержания липидных капель HepG2 высевали при плотности 40000 клеток/лунку в 384-луночные планшеты. На следующий день культуральную среду удаляли и клетки промывали ФСБ (Invitrogen, кат. № 14190). HepG2 культивировали в течение 24 ч в бессывороточной среде. Для обработки ELA компонентом и соответствующими комбинациями ELA/компонент лишенные сыворотки HepG2 предварительно инкубировали в течение 24 ч с соединениями с последующим добавлением смеси олеиновая кислота:пальмитиновая кислота (2:1) в конечной концентрации 0,5 мМ в течение дополнительных 24 ч.To assess lipid droplet content, HepG2 was seeded at a density of 40,000 cells/well in 384-well plates. The next day, the culture medium was removed and the cells were washed with PBS (Invitrogen, cat. no. 14190). HepG2 was cultured for 24 h in a serum-free medium. For treatment with ELA component and appropriate ELA/component combinations, serum-deprived HepG2 was pre-incubated for 24 h with compounds followed by addition of oleic acid:palmitic acid (2:1) at a final concentration of 0.5 mM for an additional 24 h.
Измерение внутриклеточных липидных капель.Measurement of intracellular lipid droplets.
Для измерения внутриклеточного содержания липидных капель клетки доводили до комнатной температуры и промывали 40 мкл ФСБ. Клетки инкубировали в течение 30 мин при комнатной темпера- 25 042734 туре с 40 мкл разбавленного реактива Adipored (2,5 мкл реактива Adipored в 200 мкл ФСБ) (Lonza,To measure the intracellular content of lipid droplets, the cells were brought to room temperature and washed with 40 µl of PBS. Cells were incubated for 30 min at room temperature with 40 µl of diluted Adipored reagent (2.5 µl of Adipored reagent in 200 µl of PBS) (Lonza,
Walkersville, MD). Относительную флуоресценцию измеряли (k возбуждения при 485 нм, k излучения при 580 нм) с использованием флуоресцентного спектрометра (Spark Tecan, кат. № 30086376, SN № 1801002745). Анализы проводили в четырех повторах.Walkersville, MD). Relative fluorescence was measured (k excitation at 485 nm, k emission at 580 nm) using a fluorescence spectrometer (Spark Tecan cat. no. 30086376, SN no. 1801002745). Analyzes were performed in four repetitions.
5. Пример в 3D культуре сфероидов Huh7.5. Example in 3D culture of Huh7 spheroids.
3D культура сфероидов Huh7.3D culture of Huh7 spheroids.
Криоконсервированные Huh7 были приобретены в ECACC. Клетки выращивали в планшетах с необработанной поверхностью (Costar), среде Уильяма (Sigma), содержащей 10% ФБС (Gibco) при 37°C, 5% CO2 в увлажненном инкубаторе для культур клеток. Клетки агрегировали и формировали сфероиды в течение 5 суток.Cryopreserved Huh7 were purchased from ECACC. Cells were grown in untreated plates (Costar), William's medium (Sigma) containing 10% PBS (Gibco) at 37° C., 5% CO 2 in a humidified cell culture incubator. The cells aggregated and formed spheroids for 5 days.
Подготовка композиций: Двухкомпонентная матрица комбинаций.Preparation of compositions: Two-component combination matrix.
Для этих экспериментов была создана шахматная матрица. Исходные ELA и компонент (ii) серийно разводили в ДМСО в серии из двух точек в горизонтальном ряде (ELA) и в серии из трех точек в вертикальном ряде (компонент (ii)) 96-луночного планшета. Впоследствии матрица комбинаций 2X3 была получена путем смешивания всех концентраций одного агента в соотношении 1:1.For these experiments, a chess matrix was created. Stock ELA and component (ii) were serially diluted in DMSO in a two-dot-in-horizontal (ELA) series and in a three-dot-in-vertical series (component (ii)) of a 96-well plate. Subsequently, a 2X3 combination matrix was obtained by mixing all concentrations of one agent in a 1:1 ratio.
Метаболическая стимуляция 3D культуры сфероидов Huh7 и обработка соединениями.Metabolic stimulation of 3D culture of Huh7 spheroids and treatment with compounds.
3D сфероиды Huh7 культивировали в стандартных условиях, как описано выше. Затем их культивировали в течение 24 ч в бессывороточной среде. Для лечения ELA компонентом (ii) и соответствующими комбинациями ELA/компонент (ii) лишенные сыворотки сфероиды обрабатывали как с помощью метаболического стимула НАСГ, так и соединениями (день 0) с последующим возобновлением метаболического стимула НАСГ и соединения на день 4 в течение дополнительных 3 дней. Сфероиды окрашивали на предмет наличия накопления липидов на 7-й день.Huh7 3D spheroids were cultured under standard conditions as described above. Then they were cultured for 24 h in a serum-free medium. For ELA treatment with component (ii) and the respective ELA/component (ii) combinations, serum-deprived spheroids were treated with both the NASH metabolic stimulus and compounds (Day 0) followed by the resumption of the NASH metabolic stimulus and compound on day 4 for an additional 3 days . Spheroids were stained for lipid accumulation on day 7.
Окрашивание и количественное определение липидов.Staining and quantification of lipids.
Внутриклеточное накопление липидов определяли количественно с использованием реактива для анализа AdipoRedTM Assay Reagent (Lonza). Сфероиды подвергали количественному флуоресцентному анализу при λexc: 485 нм и λem: 572 нм, используя спектрофотометр для чтения планшетов (TECAN).Intracellular lipid accumulation was quantified using the AdipoRedTM Assay Reagent (Lonza). The spheroids were subjected to quantitative fluorescence analysis at λexc: 485 nm and λem: 572 nm using a plate reader spectrophotometer (TECAN).
Результаты и обсуждение.Results and discussion.
Аномальная персистенция дифференцированных миофибробластов характерна для многих фиброзных заболеваний. После повреждения печени покоящиеся ЗКП подвергаются процессу активации, который характеризуется дифференцировкой в (α-SMA)-положительные миофибробласты. Агонист PPAR элафибранор обладает антифибротической активностью в ЗКП человека, активированных профиброгенным цитокином TGFe1 (фиг. 9). Здесь показано, что комбинации MSDC-0602, PXS-4728, апараренона, CF-102 (намоденосона), висмодегиба, PBI-4050, эмрикасана, DUR-928, VK-2809 или KD-025 с элафибранором неожиданно синергически ингибируют секрецию α-SMA ЗКП (фиг. 9).Abnormal persistence of differentiated myofibroblasts is characteristic of many fibrotic diseases. After liver injury, quiescent HSCs undergo an activation process that is characterized by differentiation into (α-SMA)-positive myofibroblasts. The PPAR agonist elafibranor has antifibrotic activity in human HSCs activated by the profibrogenic cytokine TGFe1 (Fig. 9). Here it is shown that combinations of MSDC-0602, PXS-4728, apararenone, CF-102 (namodenoson), vismodegib, PBI-4050, emrikasan, DUR-928, VK-2809 or KD-025 with elafibranor unexpectedly synergistically inhibit α-SMA secretion ZKP (Fig. 9).
Поскольку печень состоит из клеток разных типов (гепатоциты, иммунные клетки, ЗКП, ...) и поскольку активация ЗКП может быть результатом различных стимулов, вовлекающих другие клетки печени, для тестирования комбинированного лечения фиброза также использовалась модель микротканей печени. Обработка метаболическим стимулом НАСГ увеличивала секрецию коллагена микротканью. В этой модели элафибранор синергировал с CP-640186, GS-0976 и налмефеном для ингибирования секреции коллагена (фиг. 10).Because the liver is made up of different cell types (hepatocytes, immune cells, HSC, ...) and because HSC activation can be the result of different stimuli involving other liver cells, a liver microtissue model was also used to test combination treatments for fibrosis. Treatment with NASH metabolic stimulus increased collagen secretion by microtissue. In this model, elafibranor synergized with CP-640186, GS-0976 and nalmefene to inhibit collagen secretion (Fig. 10).
В совокупности эти результаты демонстрируют синергические антифибротические эффекты комбинаций элафибранора с MSDC-0602, PXS-4728, апарареноном, CF-102 (намоденозоном), висмодегибом, PBI-4050, эмрикасаном, DUR-928, VK-2809, KD-025, CP-640186, GS-0976 или налмефеном (JKB-121).Taken together, these results demonstrate synergistic antifibrotic effects of elafibranor combinations with MSDC-0602, PXS-4728, apararenone, CF-102 (namodenosone), vismodegib, PBI-4050, emrikasan, DUR-928, VK-2809, KD-025, CP- 640186, GS-0976 or nalmefene (JKB-121).
Метаболические заболевания, например НАЖБП/НАСГ, связаны с неспецифическим воспалением. Активация иммунных клеток продуцирует цитокины, которые изменяют метаболические функции печени и периферических органов (жировой ткани, поджелудочной железы, ...). Проницаемость стенки кишечника, описанная при метаболических и печеночных заболеваниях, приводит к увеличению циркулирующих бактериальных компонентов (липополисахаридов или ЛПС), которые активируют макрофаги в печени и периферических органах (жировой ткани). Поскольку PPAR обладают противовоспалительной активностью, авторы изобретения исследовали, может ли элафибранор и другие соединения ингибировать активацию макрофагов с помощью ЛПС. В модели моноцитов THP1, дифференцированных в макрофаги, обработка ЛПС активирует макрофаги, что измеряется секрецией ФНОа. Только элафибранор (1 мкм) ингибировал ФНОа на 21% (фиг. 11). Комбинация элафибранора с гемкабеном неожиданно эффективно ингибировала секрецию ФНОа на 50% (фиг. 11). Следовательно, этот результат показывает способность элафибранора к синергизму с другими соединениями для снижения уровня воспаления, наблюдаемого при ряде заболеваний, включая НАСГ и метаболические заболевания.Metabolic diseases such as NAFLD/NASH are associated with non-specific inflammation. Activation of immune cells produces cytokines that alter the metabolic functions of the liver and peripheral organs (adipose tissue, pancreas, ...). The permeability of the intestinal wall, described in metabolic and hepatic diseases, leads to an increase in circulating bacterial components (lipopolysaccharides or LPS) that activate macrophages in the liver and peripheral organs (adipose tissue). Because PPARs have anti-inflammatory activity, the inventors investigated whether elafibranor and other compounds could inhibit macrophage activation by LPS. In a THP1 monocyte model differentiated into macrophages, LPS treatment activates macrophages as measured by TNF-α secretion. Only elafibranor (1 μm) inhibited TNFa by 21% (Fig. 11). The combination of elafibranor with gemcaben surprisingly effectively inhibited TNFa secretion by 50% (Fig. 11). Therefore, this result shows the ability of elafibranor to synergize with other compounds to reduce the level of inflammation seen in a number of diseases, including NASH and metabolic diseases.
НАЖБП/НАСГ характеризуется первичным накоплением жира в гепатоцитах (стеатозом), который вызывает липотоксичность, приводя к воспалению, гибели клеток, ремоделированию ткани и, в конечном итоге, к фиброзу. Поскольку известно, что PPARa и PPARδ индуцируют окисление жира и ингибируют липогенез de novo, мы хотели посмотреть, может ли элафибранор в комбинации с другими соединениями предотвращать накопление жира в гепатоцитах. Таким образом, клетки HepG2 обрабатывалиNAFLD/NASH is characterized by a primary accumulation of fat in hepatocytes (steatosis) that causes lipotoxicity leading to inflammation, cell death, tissue remodeling and ultimately fibrosis. Since PPARa and PPARδ are known to induce fat oxidation and inhibit de novo lipogenesis, we wanted to see if elafibranor in combination with other compounds could prevent fat accumulation in hepatocytes. Thus, HepG2 cells were treated
- 26 042734 свободной жирной кислотой (СЖК), чтобы вызвать накопление липидных капель. В этой модели отдельно взятый элафибранор (10 мкМ) уменьшал накопление жира на 20%. Снижение неожиданно достигло- 26 042734 free fatty acid (FFA) to cause accumulation of lipid droplets. In this model, elafibranor alone (10 µM) reduced fat accumulation by 20%. The decline unexpectedly reached
40%, когда элафибранор был объединен с CP-640186, VK-2809, апарареноном или арамхолом (фиг. 12).40% when elafibranor was combined with CP-640186, VK-2809, apararenone, or aramchol (Fig. 12).
Также для решения этого вопроса использовалась трехмерная (3D) модель гепатоцитов in vitro, позволяющая более физиологично воспроизводить структуру печени. В этой модели накопление жира было получено путем обработки метаболическим стимулом НАСГ. Элафибранор (3 мкМ) снизил содержание жира на 12% (фиг. 13). Комбинация элафибранора с MGL-3196 (1 мкМ) эффективно снижала содержание липидов в гепатоцитах на 28% (фиг. 13), демонстрируя синергический эффект при совместном применении обоих препаратов.Also, to solve this issue, a three-dimensional (3D) model of hepatocytes in vitro was used, which allows more physiologically to reproduce the structure of the liver. In this model, fat accumulation was obtained by treatment with a NASH metabolic stimulus. Elafibranor (3 μM) reduced fat content by 12% (Fig. 13). The combination of elafibranor with MGL-3196 (1 μM) effectively reduced hepatocyte lipids by 28% (Fig. 13), showing a synergistic effect when both drugs were used together.
В совокупности эти результаты показывают, что элафибранор синергизирует с CP-640186, VK-2809, апарареноном, арамхолом и MGL-3196, в частности, для уменьшения стеатоза.Taken together, these results indicate that elafibranor synergizes with CP-640186, VK-2809, apararenone, aramchol, and MGL-3196, in particular to reduce steatosis.
В заключение эти результаты показывают способность элафибранора взаимодействовать с MSDC-0602, PXS-4728, апарареноном, CF-102 (намоденозоном), висмодегибом, PBI-4050, эмрикасаном, DUR-928, KD-025, CP-640186, GS-0976, налмефеном (JKB-121), BK-2809, MGL-3196 и арамхол, в частности, для снижения уровня НАЖБП.In conclusion, these results show the ability of elafibranor to interact with MSDC-0602, PXS-4728, apararenone, CF-102 (namodenosone), vismodegib, PBI-4050, emrikasan, DUR-928, KD-025, CP-640186, GS-0976, nalmefene (JKB-121), BK-2809, MGL-3196 and aramchol, in particular to reduce NAFLD levels.
Пример 2. Комбинация ELA и ОХК.Example 2 Combination of ELA and OCC.
Материалы и методы.Materials and methods.
Оценка элафибранора, ОХК и комбинации элафибранор + ОХК на хронической модели CDAA + 1% холестерина (12 недель).Evaluation of elafibranor, OCA, and the combination of elafibranor + OCA in a chronic CDAA + 1% cholesterol model (12 weeks).
Профилактические эффекты отдельно взятых элафибранора, ОХК и их комбинации оценивали в крысиной модели фиброзирующего НАСГ, получавших диету CDAA + 1% холестерин. Самцы крыс линии Вистар весом 150-175 г получали контрольную диету (CSAA), диету CDAA + 1% холестерин или диету CDAA + 1% с добавлением элафибранора в дозе 1, 3 и 10 мг/кг/сутки, ОХК в дозе 10 и 30 мг/кг/сутки или комбинированных лекарственных препаратов (элафибранора в дозе 1, 3 и 10 мг/кг/сутки в комбинации с ОХК в дозе 10 мг/кг/сутки) в течение 12 недель.The prophylactic effects of elafibranor alone, OCA, and their combination were evaluated in a rat model of fibrosing NASH fed a CDAA + 1% cholesterol diet. Male Wistar rats weighing 150-175 g received a control diet (CSAA), CDAA diet + 1% cholesterol or CDAA + 1% diet with the addition of elafibranor at a dose of 1, 3 and 10 mg/kg/day, OCA at a dose of 10 and 30 mg / kg / day or combined drugs (elafibranor at a dose of 1, 3 and 10 mg / kg / day in combination with OCA at a dose of 10 mg / kg / day) for 12 weeks.
Вес тела и потребление пищи контролировали дважды в неделю. В последний день лечения крыс умерщвляли после 6-часового периода голодания. Печень быстро удаляли для биохимического и гистологического исследований.Body weight and food intake were monitored twice a week. On the last day of treatment, rats were sacrificed after a 6 hour fasting period. The liver was quickly removed for biochemical and histological studies.
Все процедуры на животных выполняли в соответствии со стандартными протоколами и в соответствии со стандартными рекомендациями по правильному уходу и использованию лабораторных животных.All animal procedures were performed according to standard protocols and in accordance with standard guidelines for the proper care and use of laboratory animals.
Гистология.Histology.
Заливка тканей и изготовление срезов.Tissue filling and cutting.
Части печени сначала фиксировали в течение 12 ч в 4%-ном растворе формалина. Затем кусочки печени промывали 30 мин в ФСБ и обезвоживали в растворах этанола (последовательные ванны 70-, 80-, 95- и 100%-ного этанола). Куски печени выдерживали в трех различных ваннах ксилола (Sigma-Aldrich, кат. № 534056), а затем в двух ваннах жидкого парафина (56°C). Затем кусочки печени помещали в лотки, которые аккуратно заполняли Histowax®, чтобы полностью покрыть ткань.Parts of the liver were first fixed for 12 h in a 4% formalin solution. Then the liver pieces were washed for 30 min in PBS and dehydrated in ethanol solutions (successive baths of 70%, 80%, 95%, and 100% ethanol). The liver pieces were aged in three different baths of xylene (Sigma-Aldrich, cat. no. 534056) and then in two baths of liquid paraffin (56°C). The liver pieces were then placed in trays which were carefully filled with Histowax® to completely cover the tissue.
Парафиновые блоки, содержащие кусочки ткани, отделяли от лотков и хранили при комнатной температуре. Из блоков печени получали срезы толщиной 3 мкм.Paraffin blocks containing tissue pieces were removed from the trays and stored at room temperature. Sections of 3 μm thick were obtained from liver blocks.
Окрашивание гематоксилином/эозином.Hematoxylin/eosin staining.
Срезы печени подвергали депарафинированию, регидратировали и выдерживали в течение 3 мин в гематоксилине Майера (Microm, кат. № F/C0303). Затем срезы печени промывали водой и инкубировали в течение 1 мин в эозине G (VWR, кат. № 1.09844.1000). Срезы промывали в воде, затем обезвоживали и монтировали с использованием среды CV Mount medium (Leica, кат. № 14046430011).Liver sections were deparaffinized, rehydrated and incubated for 3 min in Mayer's hematoxylin (Microm cat. no. F/C0303). Then the liver sections were washed with water and incubated for 1 min in eosin G (VWR, cat. no. 1.09844.1000). Sections were washed in water, then dehydrated and mounted using CV Mount medium (Leica cat. no. 14046430011).
Окрашивание пикросириусом красным.Stained with picrosirius red.
Срезы печени подвергали депарафинированию, регидратировали и перед промывкой в ванне 0,5%-ной уксусной кислоты (Panreac, кат. № 131008.1611) выдерживали в течение 15 мин в 0,1%-ном растворе Fast Green FCF (Sigma-Aldrich, кат. № F7258). Затем срезы печени промывали водой и инкубировали 30 мин в 0,1%-ном растворе сириуса красного (Direct Red 80, Fluka, кат. № 43665) в насыщенной водной пикриновой кислоте (Sigma-Aldrich, кат. № P6744). Затем срезы обезвоживали и монтировали с использованием среды CV Mount medium (Leica, кат. № 14046430011).Liver sections were deparaffinized, rehydrated, and, before washing in a 0.5% acetic acid bath (Panreac, cat. no. 131008.1611), incubated for 15 min in 0.1% Fast Green FCF solution (Sigma-Aldrich, cat. No. F7258). The liver sections were then washed with water and incubated for 30 min in 0.1% Sirius Red (Direct Red 80, Fluka, cat. no. 43665) in saturated aqueous picric acid (Sigma-Aldrich, cat. no. P6744). Sections were then dehydrated and mounted using CV Mount medium (Leica, cat. no. 14046430011).
Гистологические исследования.Histological studies.
Гистологические исследования проводил специалист, работающий с обезличенными данными по источнику каждого образца печени. Виртуальные слайды были получены с использованием сканера Pannoramic 250 от фирмы-производителя 3D Histech. Баллы, суммирующие основные гистологические поражения при НАСГ, определялись по данным Сети клинических исследований НАСГ (Kleiner 2005, Brunt 1999) для каждого животного. Говоря кратко, оценивали стеатоз, лобулярное воспаление и балонную дистрофию гепатоцитов. Балл по шкале оценки активности НАЖБП (балл по шкале оценки NAS) устанавливался для каждого испытуемого животного как невзвешенная сумма определения степени выраженности стеатоза (0-3), лобулярного воспаления (0-3) и балонной дистрофии (0-2).Histological studies were performed by a specialist working with anonymized data on the source of each liver sample. Virtual slides were obtained using a Pannoramic 250 scanner from 3D Histech. Scores summarizing the main histological lesions in NASH were determined from the NASH Clinical Research Network (Kleiner 2005, Brunt 1999) for each animal. Briefly, steatosis, lobular inflammation, and balloon degeneration of hepatocytes were assessed. The NAFLD activity rating scale score (NAS score) was set for each test animal as the unweighted sum of the determination of the severity of steatosis (0-3), lobular inflammation (0-3) and balloon dystrophy (0-2).
Используя программное обеспечение Quant Center (3D Histech, включая модули Pattern QuantUsing Quant Center software (3D Histech including Pattern Quant modules
- 27 042734 и Histo Quant), определяли количество участков с окрашенным коллагеном. Говоря кратко, модуль- 27 042734 and Histo Quant), the number of areas with stained collagen was determined. In short, the module
Pattern Quant использовали для обнаружения ткани и измерения ее поверхности. Затем использовали модуль Histo Quant для определения содержания окрашенного коллагена и измерения его поверхности на основе метода цветового порога. Площадь фиброза затем выражали в процентах от поверхности коллагена ко всей ткани на одно животное.Pattern Quant was used to detect tissue and measure its surface. The Histo Quant module was then used to determine the content of colored collagen and measure its surface based on the color threshold method. The area of fibrosis was then expressed as a percentage of collagen surface to total tissue per animal.
Измерение содержания печеночного коллагена.Measurement of hepatic collagen content.
Содержание печеночного коллагена определяли с помощью соответствующего набора QuickZyme (Анализ общего коллагена, кат. № QZB-totcol2). Анализ основан на обнаружении гидроксипролина, который является непротеиногенной аминокислотой, найденной, в основном, в тройной спирали коллагена. Таким образом, гидроксипролин в тканевых гидролизатах можно использовать в качестве прямого показателя количества коллагена, присутствующего в ткани (без различия между проколлагеном, зрелым коллагеном и продуктами распада коллагена).Hepatic collagen content was determined using the appropriate QuickZyme kit (Total Collagen Assay, cat. no. QZB-totcol2). The assay is based on the detection of hydroxyproline, which is a non-proteinogenic amino acid found primarily in the collagen triple helix. Thus, hydroxyproline in tissue hydrolysates can be used as a direct measure of the amount of collagen present in tissue (without distinction between procollagen, mature collagen, and collagen breakdown products).
Перед дозированием гидроксипролина необходим полный гидролиз образцов тканей в 6 М HCl при 95°C. Анализ приводит к образованию хромогена с максимальной поглощающей способностью при 570 нм. Результаты выражены в виде мг коллагена/г печени.Complete hydrolysis of tissue samples in 6 M HCl at 95°C is necessary before dosing hydroxyproline. The analysis results in the formation of a chromogen with maximum absorbance at 570 nm. Results are expressed as mg collagen/g liver.
альфа-2-макроглобулин (a2M).alpha-2-macroglobulin (a2M).
Плазматическую концентрацию a2M определяли с помощью набора Abcam (кат. № ab157730) в соответствии с инструкциями производителя. Говоря кратко, микропланшет предварительно покрывают антителом, специфичным к крысиному a2M. Затем стандарты, контроли и образцы вносили в лунки пипеткой, и любой a2M, присутствующий в плазме, связывался с иммобилизованным антителом. После промывки в лунки добавляют вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена. После промывки в лунки добавляют раствор субстрата. Ферментативную реакцию останавливают добавлением стопреагента. Интенсивность цвета, измеренная при 450 нм, пропорциональна количеству a2M, связанного на начальном этапе. Затем значения выборки выводили из калибровочной кривой. Результаты выражены в нг/мл.Plasma concentration of a2M was determined using the Abcam kit (p/n ab157730) according to the manufacturer's instructions. Briefly, the microplate is pre-coated with an antibody specific for rat a2M. The standards, controls and samples were then pipetted into the wells and any a2M present in the plasma was bound to the immobilized antibody. After washing, a secondary antibody labeled with horseradish peroxidase is added to the wells. After washing, the substrate solution is added to the wells. The enzymatic reaction is stopped by adding a stop agent. The color intensity measured at 450 nm is proportional to the amount of a2M bound initially. The sample values were then derived from the calibration curve. Results are expressed in ng/ml.
N-Терминальный пропептид проколлагена III (PIIINP).N-terminal propeptide of procollagen III (PIIINP).
Плазматическую концентрацию PIIINP определяли с помощью метода ИФА, используя набор фирмы Cloud-Clone Corp (кат. № SEA573Ra), в соответствии с инструкциями производителя. Микротитрационный планшет предварительно покрыт антителом, специфичным к PIIINP. Стандарты или образцы добавляют в соответствующие лунки микротитрационного планшета с биотинилированным антителом, специфичным к PIIINP. Затем в каждую лунку микропланшета добавляют авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRP), и инкубируют. После добавления раствора субстрата ТМБ только те лунки, которые содержат PIIINP, биотинилированное антитело и авидин, конъюгированный с ферментом, будут демонстрировать изменение цвета. Фермент-субстратную реакцию останавливали добавлением раствора серной кислоты и изменение цвета измеряли спектрофотометрически при длине волны 450±10 нм. Концентрацию PIIINP в образцах затем определяли путем сравнения OD образцов с калибровочной кривой. Результаты выражены в пг/мл.Plasma concentration of PIIINP was determined by ELISA using a kit from Cloud-Clone Corp (Cat. No. SEA573Ra) according to the manufacturer's instructions. The microtiter plate is pre-coated with an antibody specific for PIIINP. Standards or samples are added to the appropriate wells of a microtiter plate with biotinylated PIIINP specific antibody. Avidin conjugated with horseradish peroxidase (HRP) is then added to each well of the microplate and incubated. After adding the TMB substrate solution, only those wells containing PIIINP, biotinylated antibody, and enzyme-conjugated avidin will show a color change. The enzyme-substrate reaction was stopped by adding a sulfuric acid solution and the color change was measured spectrophotometrically at a wavelength of 450±10 nm. The concentration of PIIINP in the samples was then determined by comparing the OD of the samples with the calibration curve. Results are expressed in pg/ml.
Анализ экспрессии генов печени.Analysis of liver gene expression.
Тотальную РНК выделяли из печени крыс с помощью набора Rneasy Mini Kit (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя. Тотальную РНК подвергали обратной транскрипции в кДНК с использованием M-MLV RT (ревертазы вируса мышиного лейкоза Молони) (Invitrogen, кат. № 28025) в 1х буфере RT (Invitrogen), 0,5 мМ DTT (Invitrogen), 0,18 мМ смеси dNTP (Promega), 200 нг pdN6 (Amersham) и 30 ед. ингибитора РНКаз (Promega).Total RNA was isolated from rat liver using the Rneasy Mini Kit (Qiagen) according to the manufacturer's instructions. Total RNA was reverse transcribed into cDNA using M-MLV RT (Moloney mouse leukemia virus reversetase) (Invitrogen, cat. no. 28025) in 1x RT buffer (Invitrogen), 0.5 mM DTT (Invitrogen), 0.18 mM mixture dNTP (Promega), 200 ng pdN6 (Amersham) and 30 u. RNase inhibitor (Promega).
Затем проводили количественную ПЦР с использованием системы обнаружения ПНР-анализатора реального времени CFX96 Touch™ (Biorad). Говоря кратко, ПЦР проводили в формате 96-луночного планшета в 25 мкл общего объема, содержащего 1 мкл реакции с обратной транскрипцией, 0,5 мкл обратных и прямых праймеров (по 10 пмоль каждый) и 12,5 мкл 2X iQ SYBR Green Supermix (BioRad), используя следующие последовательности праймеров:Quantitative PCR was then performed using the detection system of the CFX96 Touch™ real-time PNR analyzer (Biorad). Briefly, PCR was performed in a 25 µl total volume 96-well plate format containing 1 µl reverse transcription reaction, 0.5 µl reverse and forward primers (10 pmol each) and 12.5 µl 2X iQ SYBR Green Supermix ( BioRad) using the following primer sequences:
- 28 042734- 28 042734
Уровни экспрессии нормализовали, используя экспрессию гена RPLP0 в качестве референсного гена домашнего хозяйства в образцах. Для каждого гена калибровочные кривые строили путем выбора наилучших точек (по меньшей мере трех точек), чтобы иметь эффективность ПЦР, близкую к 100%, и коэффициент корреляции, близкий к 1. Уровни экспрессии определяли, используя уравнение калибровочной кривой как для генов домашнего хозяйства, так и для целевого гена (принимая во внимание специфическую эффективность ПЦР для каждого целевого гена).Expression levels were normalized using RPLP0 gene expression as a housekeeping reference gene in the samples. For each gene, calibration curves were built by selecting the best points (at least three points) to have a PCR efficiency close to 100% and a correlation coefficient close to 1. Expression levels were determined using the calibration curve equation as for housekeeping genes, and for the target gene (taking into account the specific efficiency of PCR for each target gene).
Результаты и обсуждение.Results and discussion.
Процент по сравнению с необработанными диетой CDAA + 1% холестерина крысами. *p<0,01,*p<0,001 в сравнении с группой CDAA + 1% холестерина (ANOVA+Бонферрони). # p<0,05, ## p<0,07 в сравнении с лучшим отдельным агентом (t-критерий Стьюдента). (+маркер воспаления).Percent compared to untreated CDAA + 1% cholesterol diet in rats. *p<0.01,*p<0.001 vs. CDAA + 1% cholesterol group (ANOVA+Bonferroni). # p<0.05, ## p<0.07 versus best single agent (Student's t-test). (+ inflammation marker).
Западный образ жизни неизменно связан с высоким уровнем заболеваемости неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ), хроническим заболеванием печени, которое часто прогрессирует до фиброза и цирроза печени, и в конечном итоге может привести к гепатоцеллюлярной карциноме. В настоящее время не существует одобренной терапии НАСГ. Комбинации лекарственных препаратов, направленных одновременно на нескольких терапевтических мишеней, имеют потенциал, чтобы значительно улучшить реакцию на лекарственное средство и оказывать благоприятное действие на более обширную категорию пациентов. Комбинации лекарственных препаратов ранее были испытаны при других системных заболеваниях, например гипертонии, дислипидемии или диабете 2-го типа, и продемонстрировали лучший контроль над основными заболеваниями, а также снизили заболеваемость и смертность. Как элафибранор (агонист PPAR α/δ), так и ОХК (агонист FXR) показали эффективность при НАСГ и фиброзе в конечных точках недавних исследований 2B фазы. Авторы изобретения хотели сравнить их действие на соответствующие исходы при патологии НАСГ и определить терапевтические эффекты комбинации.Western lifestyles are consistently associated with a high incidence of non-alcoholic steatohepatitis (NASH), a chronic liver disease that often progresses to fibrosis and cirrhosis, and can eventually lead to hepatocellular carcinoma. There is currently no approved therapy for NASH. Combinations of drugs that target multiple therapeutic targets simultaneously have the potential to significantly improve drug response and benefit a broader patient population. Drug combinations have previously been tested in other systemic diseases, such as hypertension, dyslipidemia, or type 2 diabetes, and have shown better control of the underlying diseases and reduced morbidity and mortality. Both elafibranor (a PPAR α/δ agonist) and OCA (FXR agonist) have been shown to be effective in NASH and fibrosis at the endpoints of recent phase 2B studies. The inventors wanted to compare their effects on respective outcomes in NASH pathology and to determine the therapeutic effects of the combination.
Для достижения этой цели гистологию НАСГ и фиброз индуцировали путем кормления крыс линии Вистар согласно L-аминокислотной диете с дефицитом холина, дополненной холестерином (диета CDAA/хол). Животные в экспериментальная группа получали или элафибранор, или ОХК, или оба соединения в течение всего периода исследования. НАСГ и развитие фиброза оценивали гистологически. Также проводились дополнительные биохимические и молекулярные анализы с различными соответствующими биомаркерами.To achieve this goal, NASH histology and fibrosis were induced by feeding Wistar rats on a choline-deficient L-amino acid diet supplemented with cholesterol (CDAA/chol diet). Animals in the experimental group received either elafibranor, or OCA, or both during the entire study period. NASH and development of fibrosis were assessed histologically. Additional biochemical and molecular analyzes were also performed with various relevant biomarkers.
У крыс линии Вистар, получавших диету CDAA/хол, развилась связанная с НАСГ гистология и фиброз с высоким уровнем тяжелого поражения заболеванием. У всех животных наблюдался прогрессирующий стеатоз, лобулярное воспаление и балонная дистрофия, и балл по шкале оценки NAS варьировал от 6 до 8. Гистология печени (положительно окрашенная пикросириусом область) и биохимия (концентрация печеночного коллагена) показали в среднем четырехкратное увеличение содержания в печени фиброзной ткани, и балл оценки фиброза составлял или 3, или 4 для всех животных на диете CDAA/x, которые не получали медикаментозного лечения. Экспрессия генов, связанных с воспалением, окисли- 29 042734 тельным стрессом, ремоделированием ткани и фиброзом, была увеличена и соответствовала профилям генной экспрессии, о которых сообщалось ранее у пациентов с тяжелым поражением НАСГ.Wistar rats fed a CDAA/Chol diet developed NASH-related histology and fibrosis with a high level of severe disease involvement. All animals showed progressive steatosis, lobular inflammation, and balloon dystrophy, and the NAS score ranged from 6 to 8. Liver histology (positive picrosirius staining area) and biochemistry (hepatic collagen concentration) showed an average four-fold increase in liver fibrous tissue , and the fibrosis score was either 3 or 4 for all animals on the CDAA/x diet that did not receive drug treatment. Expression of genes associated with inflammation, oxidative stress, tissue remodeling, and fibrosis was increased and consistent with gene expression profiles previously reported in patients with severe NASH.
Введение только элафибранора и ОХК приводило к очень значительному ослаблению развития фиброза. Аналогичная эффективность при фиброзе наблюдалась у животных, которые получали оба соединения, хотя в значительно более низких дозах. Повреждение гепатоцитов, о котором судили по раздуванию, предотвращалось или ослаблялось элафибранором дозозависимым образом. Напротив, отдельно взятая ОХК продемонстрировала частичное ослабление балонной дистрофии при дозах, которые были использованы в этом исследовании. Лобулярное воспаление ослаблялось элафибранором дозозависимым образом и в меньшей степени при использовании ОХК. Наконец, введение одного из препаратовкандидатов частично ослабило увеличение маркеров ремоделирования ткани, воспаления и окислительного стресса, и комбинация обоих соединений была более эффективной по сравнению с любым отдельным агентом.The introduction of only elafibranor and OCC led to a very significant weakening of the development of fibrosis. Similar efficacy in fibrosis was seen in animals treated with both compounds, albeit at significantly lower doses. Hepatocyte injury, as judged by swelling, was prevented or attenuated by elafibranor in a dose-dependent manner. In contrast, single OCC showed partial relief of ballooning at the doses used in this study. Lobular inflammation was attenuated with elafibranor in a dose-dependent manner and to a lesser extent with OCA. Finally, administration of one of the candidate drugs partially attenuated the increase in markers of tissue remodeling, inflammation, and oxidative stress, and the combination of both compounds was more effective than any single agent.
Таким образом, здесь показано, что синергическое действие элафибранора и ОХК на фиброз печени в модели НАСГ, индуцированной диетой CDAA/x, дает сравнимый терапевтический эффект при значительно более низких дозах обоих препаратов-кандидатов по сравнению с любым отдельным агентом. Исходя из этого исследования, можно достоверно ожидать, что дозы обоих препаратов-кандидатов могут быть снижены по меньшей мере в 1,5, 2, 2,5 или даже по меньшей мере в 3 раза для того, чтобы получить результаты, аналогичные начальной дозе каждого соединения, используемого по отдельности. Кроме того, элафибранор показал явный защитный эффект на фоне повреждения печени. Эффекты ОХК на балонную дистрофию и лобулярное воспаление в этой модели были скорее незначительными. Из этого исследования можно сделать вывод, что комбинация элафибранор/ОХК будет полезна для более обширной категории пациентов, а соответствующее снижение терапевтической дозы уменьшит частоту побочных эффектов лекарственного препарата.Thus, it is shown here that the synergistic effect of elafibranor and OCA on hepatic fibrosis in the CDAA/x diet-induced model of NASH results in a comparable therapeutic effect at significantly lower doses of both candidate drugs compared to either single agent. Based on this study, it can be reliably expected that the doses of both candidate drugs can be reduced by at least 1.5, 2, 2.5 or even at least 3 times in order to obtain results similar to the starting dose of each. compound used alone. In addition, elafibranor showed a clear protective effect against the background of liver damage. The effects of OCA on balloon dystrophy and lobular inflammation were rather modest in this model. From this study, it can be concluded that the combination of elafibranor/OHC will be useful for a wider category of patients, and an appropriate reduction in the therapeutic dose will reduce the incidence of side effects of the drug.
Пример 3. Комбинация ELA и CVC.Example 3 Combination of ELA and CVC.
Материалы и методы.Materials and methods.
Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО, Fluka, кат. № 41640). CVC поставлялся коммерчески фирмой CLINISCIENCES (ссыл: A13643-10, Серийный номер: 497223-25-3).Compounds were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, Fluka cat. no. 41640). CVC was supplied commercially by CLINISCIENCES (ref: A13643-10, Serial no: 497223-25-3).
Безафибрат был синтезирован фирмой Genfit.Bezafibrate was synthesized by Genfit.
Культура ЗКП человека.The culture of human HSP.
Первичные звездчатые клетки печени человека (ЗКП) (Innoprot) культивировали в среде STeCM (ScienCell, кат. № 5301), дополненной 2% фетальной бычьей сыворотки (ФБС, ScienCell, кат. № 0010), 1% пенициллина/стрептомицина (ScienCell, кат. № 0503) и добавкой для роста звездчатых клеток (SteCGS; ScienCell, кат. № 5352). Для улучшения адгезии флаконы для культивирования клеток покрывали поли-Ь-лизином (Sigma, кат. № P4707).Primary human liver stellate cells (HSCs) (Innoprot) were cultured in STeCM medium (ScienCell, cat. no. 5301) supplemented with 2% fetal bovine serum (FBS, ScienCell, cat. no. No. 0503) and Stellate Growth Supplement (SteCGS; ScienCell Cat. No. 5352). To improve adhesion, cell culture flasks were coated with poly-L-lysine (Sigma, cat. no. P4707).
Подготовка композиций.Preparation of compositions.
Двухкомпонентная матрица комбинаций (элафибранор/CVC).Two-component combination matrix (elafibranor/CVC).
Для этих экспериментов была создана шахматная матрица. Исходные CVC и элафибранор серийно разводили в ДМСО в серии из пяти точек в горизонтальном ряде (элафибранор) и в серии из шести точек в вертикальном ряде (ценикривирок) 96-луночного планшета. Впоследствии матрица комбинаций 6X7 была получена путем смешивания всех концентраций одного агента в соотношении 1:1. Опытные концентрации для каждого соединения были выбраны на основе соответствующей IC50 каждого соединения в качестве отдельного агента, полученной путем измерения содержания α-SMA в модели ЗКП, стимулированных с помощью TGFe1.For these experiments, a chess matrix was created. Stock CVC and elafibranor were serially diluted in DMSO in a series of five points in a horizontal row (elafibranor) and in a series of six points in a vertical row (cenicrivirok) of a 96-well plate. Subsequently, a 6X7 combination matrix was obtained by mixing all concentrations of one agent in a 1:1 ratio. Experimental concentrations for each compound were selected based on the respective IC 50 of each compound as a single agent, obtained by measuring the content of α-SMA in a model of HSCs stimulated with TGFe1.
Активация ЗКП человека TGFe1 и обработка соединениемHuman HSC TGFe1 Activation and Compound Treatment
Первичные звездчатые клетки печени человека (ЗКП) (Innoprot) культивировали в стандартных условиях, как описано выше. Затем для измерения α-SMA с помощью ИФА клетки высевали при плотности 2х104 клеток/лунку в 96-луночные планшеты.Primary human liver stellate cells (HSC) (Innoprot) were cultured under standard conditions as described above. Cells were then seeded at a density of 2×10 4 cells/well in 96-well plates to measure α-SMA by ELISA.
На следующий день культуральную среду удаляли и клетки промывали ФСБ (Invitrogen, кат. № 14190). ЗКП человека культивировали в течение 24 ч в бессывороточной и не содержащей SteCGS среде. Для обработки CVC, элафибранором, безафибратом и парными комбинациями CVC/элафибранор и CVC/безафибрат лишенные сыворотки ЗКП человека предварительно инкубировали в течение 1 ч с соединениями с последующим добавлением профиброгенных стимулов TGF-e1 (PeproTech, кат. № 100-21, 1 нг/мл) в бессывороточной и не содержащей SteCGS среде в течение дополнительных 48 ч.The next day, the culture medium was removed and the cells were washed with PBS (Invitrogen, cat. no. 14190). Human HSCs were cultured for 24 h in serum-free and SteCGS-free medium. For treatment with CVC, elafibranor, bezafibrate, and CVC/elafibranor and CVC/bezafibrate paired combinations, serum-deprived human HSCs were pre-incubated for 1 h with the compounds followed by the addition of TGF-e1 profibrogenic stimuli (PeproTech, cat. no. 100-21, 1 ng/ ml) in serum-free and SteCGS-free medium for an additional 48 hours.
ИФА α-SMA.ELISA α-SMA.
Уровень α-SMA измеряли с помощью сэндвич-варианта ИФА. Говоря кратко, лунки планшета для ИФА сначала покрывали иммобилизованным антителом (мышиное моноклональное анти-ACTA2, Abnova) при 4°C в течение ночи. После 3 промывок в ФСБ + 0,2% Твин-20 в течение 1 ч добавляли блокирующий раствор, состоящий из ФСБ + 0,2% БСА, после чего следовал еще один цикл промывки. Клеточные лизаты переносили в лунки для связывания с иммобилизованным антителом на 2 ч при комнатной температуре. После процедуры промывки добавляли идентифицирующее антитело (биотинилированное мышиное моноклональное анти-ACTA2 антитело, Abnova) на 2 ч при комнатной температуре сThe level of α-SMA was measured using a sandwich ELISA. Briefly, the wells of the ELISA plate were first coated with immobilized antibody (mouse monoclonal anti-ACTA2, Abnova) at 4°C overnight. After 3 washes in PBS + 0.2% Tween-20 for 1 hour, a blocking solution consisting of PBS + 0.2% BSA was added, followed by another wash cycle. Cell lysates were transferred to the wells for binding to the immobilized antibody for 2 hours at room temperature. After the washing procedure, identifying antibody (biotinylated mouse monoclonal anti-ACTA2 antibody, Abnova) was added for 2 hours at room temperature with
- 30 042734 последующими тремя промывками. Для обнаружения сначала в течение 30 мин при комнатной температуре применяли стрептавидин, конъюгированный с HRP (R&D Systems, кат. № DY998). После промывки добавляли субстрат ТМБ HRB (BD, кат. № 555214) и инкубировали в течение 7 мин при комнатной температуре в темноте. После окисления ТМБ образует водорастворимый синий продукт реакции, который с добавлением серной кислоты становится желтым (останавливающий раствор), что позволяет точно измерять интенсивность при 450 нм, используя спектрофотометр. Полученный цвет прямо пропорционален количеству α-SMA, присутствующего в лизате.- 30 042734 three subsequent washes. For detection, streptavidin conjugated to HRP (R&D Systems cat. no. DY998) was used first for 30 minutes at room temperature. After washing, TMB HRB substrate (BD, cat. no. 555214) was added and incubated for 7 min at room temperature in the dark. After oxidation, TMB forms a water-soluble blue reaction product, which turns yellow with the addition of sulfuric acid (stopping solution), which allows accurate measurement of the intensity at 450 nm using a spectrophotometer. The resulting color is directly proportional to the amount of α-SMA present in the lysate.
Определение синергии методом разности по Блиссу.Determination of synergy by the Bliss difference method.
Значения α-SMA, полученные с помощью метода ИФА, сначала преобразовывали в процентное ингибирование по сравнению с контролем TGF-e1. Затем, используя эти процентные ингибирования, для определения синергических эффектов комбинаций лекарственных препаратов была определена разность по Блиссу. Сначала определяли ожидаемый балл аддитивизма по Блиссу (E) по формулеThe α-SMA values obtained using the ELISA method were first converted to percent inhibition compared to the TGF-e1 control. Bliss difference was then determined using these percentage inhibitions to determine the synergistic effects of the drug combinations. First, the expected Bliss additivism score (E) was determined using the formula
E=(A+B)-(AxB), где A и B - процентное ингибирование элафибранора (A) (или безафибрата) и ценикривирока (B) в данной дозе.E=(A+B)-(AxB), where A and B are the percentage inhibition of elafibranor (A) (or bezafibrate) and cenicriviroc (B) at a given dose.
Разница между ожиданиемым по Блиссу и наблюдаемым ингибированием комбинированного CVC/элафибранора (или безафибрата) в одной и той же дозе является баллом Разности по Блиссу.The difference between Bliss' expected and observed inhibition of combined CVC/elafibranor (or bezafibrate) at the same dose is the Bliss Difference score.
Балл разности по Блиссу = 0 указывает на то, что комбинированное лечение является аддитивным (как и ожидалось для эффектов в отдельности);A Bliss difference score of 0 indicates that the combination treatment is additive (as expected for effects alone);
Балл разности по Блиссу > 0 указывает на активность, превышающую аддитивную (синергизм); иA Bliss difference score > 0 indicates activity greater than additive (synergism); And
Балл разности по Блиссу < 0 означает, что активность комбинации меньше аддитивной (антагонизм).Bliss difference score < 0 means that the activity of the combination is less additive (antagonism).
Для комбинаций элафибранор + CVC и безафибрат + CVC путем суммирования всех баллов по Блиссу был рассчитан дополнительный общий балл по Блиссу.For combinations of elafibranor + CVC and bezafibrate + CVC, an additional overall Bliss score was calculated by summing all Bliss scores.
Для подтверждения синергизма экспериментальные значения, соответствующие наивысшему баллу по Блиссу для комбинации CVC/элафибранор, были построены в виде гистограммы.To confirm synergy, the experimental values corresponding to the highest Bliss score for the CVC/elafibranor combination were plotted as a histogram.
Значимость наблюдаемых различий между CVC/элафибранором или CVC/безафибратом по сравнению с наиболее эффективным отдельным агентом определяли с помощью t-критерия Стьюдента. [*: p<0,05; *: p<0,01; *: p<0,001]The significance of observed differences between CVC/elafibranor or CVC/bezafibrate compared to the most effective individual agent was determined using Student's t-test. [*: p<0.05; *: p<0.01; *: p<0.001]
Результаты и выводы.Results and conclusions.
Аномальная персистенция дифференцированных миофибробластов характерна для многих фиброзных заболеваний.Abnormal persistence of differentiated myofibroblasts is characteristic of many fibrotic diseases.
После повреждения печени покоящиеся ЗКП подвергаются процессу активации, который характеризуется дифференцировкой в (α-SMA)-положительные миофибробласты.After liver injury, quiescent HSCs undergo an activation process that is characterized by differentiation into (α-SMA)-positive myofibroblasts.
Агонист PPAR элафибранор обнаруживает антифибротическую активность в ЗКП человека, активированных профиброгенным цитокином TGFe1. Маркер α-SMA был снижен на 80% с IC50 3,17 мкМ (фиг. 6A). Тем не менее другие агонисты PPAR, например безафибрат, продемонстрировали слабый антифиброзный профиль (фиг. 6C), что позволяет предположить, что агонисты PPAR не являются эквивалентными в отношении их антифибротических свойств. Отдельно взятый CVC во всех дозах не показал значительного эффекта в ЗКП, активированных TGFe (фиг. 6B). Чтобы оценить, может ли комбинация элафибранора с CVC синергически снижать фиброз, проводились эксперименты с матрицей комбинаций в ЗКП, индуцированных TGFe. Говоря кратко, растворы CVC и элафибранора серийно разбавляли в шахматном формате, создавая матрицу из 42 комбинаций, охватывающую большую панель комбинаций элафибранор/CVC. Путем расчета баллов разности по Блиссу была впервые определена синергия. Эти эксперименты показали, что элафибранор может синергизировать с CVC для снижения секреции α-SMA в активированных ЗКП (фиг. 7A и B). Один из лучших примеров синергизма показан на фиг. 7C с 5 мкМ каждого соединения. Несмотря на то, что 5 мкМ отдельно взятого CVC не проявляют какой-либо антифибротической активности, их добавление к 5 мкМ элафибранора может значительно синергически увеличивать активность элафибранор и достигать 60% ингибирования (по сравнению с 40% с 5 мкМ элафибранора). Напротив, комбинация CVC с безафибратом продемонстрировала гораздо более низкие баллы по Блиссу (фиг. 8A и B), и ни одна из комбинаций не дала статистически значимых результатов.The PPAR agonist elafibranor exhibits antifibrotic activity in human HSCs activated by the profibrogenic cytokine TGFe1. The α-SMA marker was reduced by 80% with an IC 50 of 3.17 μM (FIG. 6A). However, other PPAR agonists, such as bezafibrate, showed a weak antifibrotic profile (FIG. 6C), suggesting that PPAR agonists are not equivalent in terms of their antifibrotic properties. CVC alone at all doses showed no significant effect in TGFe-activated HSCs (FIG. 6B). To evaluate whether the combination of elafibranor with CVC could synergistically reduce fibrosis, matrix combination experiments were performed in TGFe-induced HSC. Briefly, CVC and elafibranor solutions were serially diluted in a staggered format, creating a matrix of 42 combinations covering a large panel of elafibranor/CVC combinations. Synergy was determined for the first time by calculating the Bliss difference score. These experiments showed that elafibranor can synergize with CVC to reduce α-SMA secretion in activated HSCs (Fig. 7A and B). One of the best examples of synergy is shown in Fig. 7C with 5 μM of each compound. Although 5 µM of CVC alone did not show any antifibrotic activity, their addition to 5 µM elafibranor can significantly synergistically increase elafibranor activity and achieve 60% inhibition (compared to 40% with 5 µM elafibranor). In contrast, the combination of CVC with bezafibrate showed much lower Bliss scores (Figures 8A and B) and neither combination was statistically significant.
В заключение заявители обнаружили неожиданные антифибротические активности для комбинации ELA и CVC. Эти результаты показывают, что комбинация соединения по формуле (I) с CVC может быть синергетической и может обеспечивать терапевтические эффекты при нескольких типах заболеваний, например, фиброзных заболеваний.In conclusion, Applicants have found unexpected antifibrotic activities for the combination of ELA and CVC. These results indicate that the combination of a compound of formula (I) with CVC may be synergistic and may provide therapeutic effects in several types of diseases, such as fibrotic diseases.
Пример 4. Комбинации элафибранора с селонсертибом (SEL), GKT-831 или GS-0976 (GS): оценка в мышиной модели фиброзирующего НАСГ (8 недель).Example 4 Elafibranor Combinations with Seloncertib (SEL), GKT-831 or GS-0976 (GS): evaluation in a mouse model of fibrosing NASH (8 weeks).
Профилактические эффекты комбинаций элафибранора с селонсертибом, GKT-831 или GS-0976 оценивали на мышах, получавших L-аминокислотную диету с дефицитом холина (CDAA), дополненную 2% холестерина и 30% молочного жира и кукурузного сиропа с высоким содержанием фруктозы 55 (55%The prophylactic effects of combinations of elafibranor with seloncertib, GKT-831 or GS-0976 were evaluated in mice fed a choline-deficient L-amino acid (CDAA) diet supplemented with 2% cholesterol and 30% milk fat and high fructose corn syrup 55 (55%
- 31 042734 фруктозы/45% глюкозы для конечной концентрации 42 г/л) в питьевой воде Mells et al. J. Nutr. Biochem.- 31 042734 fructose/45% glucose for a final concentration of 42 g/l) in drinking water Mells et al. J. Nutr. Biochem.
2015) (диета CDFF). Самцов мышей C57Bl/6J в возрасте 5-6 недель кормили согласно контрольной (CSAA) диете (n=4), CDFF (n=12) или CDFF с добавлением элафибранора (в дозе 1 или 3 мг/кг/сутки), селонсертиба (в дозе 30 мг/кг/сутки) или GKT-831 (в дозе 60 мг/кг/сутки) или GS-0976 (в дозе мг/кг/сутки) отдельно или в комбинации (n=8 на группу) в течение 8 недель.2015) (CDFF diet). Male C57Bl/6J mice aged 5-6 weeks were fed on the control (CSAA) diet (n=4), CDFF (n=12) or CDFF supplemented with elafibranor (at a dose of 1 or 3 mg/kg/day), seloncertib ( at a dose of 30 mg/kg/day) or GKT-831 (at a dose of 60 mg/kg/day) or GS-0976 (at a dose of mg/kg/day) alone or in combination (n=8 per group) for 8 weeks.
Массу тела, потребление пищи и воды контролировали дважды в неделю. В последний день лечения образцы плазмы получали методом отбора образцов крови из ретроорбитального синуса и после 6часового периода голодания мышей умерщвляли. Печень быстро удаляли для биохимического и гистологического анализов. Все процедуры на животных выполняли в соответствии со стандартными протоколами и в соответствии со стандартными рекомендациями по правильному уходу и использованию лабораторных животных.Body weight, food and water intake were monitored twice a week. On the last day of treatment, plasma samples were obtained by retroorbital sinus blood sampling and mice were sacrificed after a 6 hour fasting period. The liver was quickly removed for biochemical and histological analysis. All animal procedures were performed according to standard protocols and in accordance with standard guidelines for the proper care and use of laboratory animals.
Гистология.Histology.
Заливка тканей и изготовление срезов.Tissue filling and cutting.
Срезы печени фиксировали в 4%-ном растворе формалина. Затем кусочки печени промывали 30 мин в ФСБ и обезвоживали в растворах этанола (последовательные ванны 70-, 80-, 95- и 100%-ного этанола). Куски печени выдерживали в трех различных ваннах ксилола (Honeywell, кат. № 534056), а затем в двух сменах жидкого парафина (59°C). Затем кусочки печени помещали в лотки, которые аккуратно заполняли Histowax®, чтобы полностью покрыть ткань.Liver sections were fixed in 4% formalin solution. Then the liver pieces were washed for 30 min in PBS and dehydrated in ethanol solutions (successive baths of 70%, 80%, 95%, and 100% ethanol). The liver pieces were aged in three different xylene baths (Honeywell, cat. no. 534056) and then in two changes of liquid paraffin (59°C). The liver pieces were then placed in trays which were carefully filled with Histowax® to completely cover the tissue.
Парафиновые блоки, содержащие кусочки ткани, отделяли от лотков и хранили при комнатной температуре. Из блоков печени получали срезы толщиной 3 мкм.Paraffin blocks containing tissue pieces were removed from the trays and stored at room temperature. Sections of 3 μm thick were obtained from liver blocks.
Окрашивание гематоксилином/эозином/сафранином.Staining with hematoxylin/eosin/safranin.
Срезы печени подвергали депарафинированию, регидратировали и выдерживали в течение 3 мин в гематоксилине Майера (Microm, кат. № F/C0303). Затем срезы печени промывали водой и выдерживали 1 мин в 0,5%-ном спиртовом растворе эозина Y (VWR, кат. № 1.02439.0500) и 0,5%-ном растворе эритрозина (VWR, кат. № 1.15936.0010) и промывали этанолом. Затем срезы выдерживали в течение 2 мин в сафранине, а также в конечном итоге обезвоживали и монтировали с использованием среды CV Mount medium (Leica, кат. № 046430011).Liver sections were deparaffinized, rehydrated and incubated for 3 min in Mayer's hematoxylin (Microm cat. no. F/C0303). Then the liver sections were washed with water and incubated for 1 min in 0.5% alcohol solution of eosin Y (VWR, cat. no. 1.02439.0500) and 0.5% erythrosin solution (VWR, cat. no. 1.15936.0010) and washed with ethanol. Sections were then incubated for 2 min in safranin and finally dehydrated and mounted using CV Mount medium (Leica cat. no. 046430011).
Окрашивание пикросириусом красным.Stained with picrosirius red.
Срезы печени подвергали депарафинированию, регидратировали и перед промывкой в ванне 0,5%-ной уксусной кислоты (Panreac, кат. № 131008.1611) выдерживали в течение 15 мин в 0,1%-ном растворе Fast Green FCF (Sigma-Aldrich, кат. № F7258). Затем срезы печени промывали водой и инкубировали 30 мин в 0,1%-ном растворе сириуса красного (Direct Red 80, Fluka, кат. № 43665) в насыщенной водной пикриновой кислоте (Sigma-Aldrich, кат. № P6744). Затем срезы обезвоживали и монтировали с использованием среды CV Mount medium (Leica, кат. № 14046430011).Liver sections were deparaffinized, rehydrated, and, before washing in a 0.5% acetic acid bath (Panreac, cat. no. 131008.1611), incubated for 15 min in 0.1% Fast Green FCF solution (Sigma-Aldrich, cat. No. F7258). The liver sections were then washed with water and incubated for 30 min in 0.1% Sirius Red (Direct Red 80, Fluka, cat. no. 43665) in saturated aqueous picric acid (Sigma-Aldrich, cat. no. P6744). Sections were then dehydrated and mounted using CV Mount medium (Leica, cat. no. 14046430011).
Гистологические исследования.Histological studies.
Гистологические исследования проводил специалист, работающий с обезличенными данными по источнику каждого образца печени. Виртуальные слайды были получены с использованием сканера Pannoramic 250 от фирмы-производителя 3D Histech. Баллы, суммирующие основные гистологические поражения при НАСГ, определялись по данным Сети клинических исследований НАСГ (Kleiner 2005, Brunt 1999) для каждого животного. Говоря кратко, оценивали стеатоз, лобулярное воспаление и балонную дистрофию гепатоцитов. Балл по шкале оценки активности НАЖБП (NAS) устанавливался для каждого испытуемого животного как невзвешенная сумма определения степени выраженности стеатоза (0-3), лобулярного воспаления (0-3) и балонной дистрофии (0-2).Histological studies were performed by a specialist working with anonymized data on the source of each liver sample. Virtual slides were obtained using a Pannoramic 250 scanner from 3D Histech. Scores summarizing the main histological lesions in NASH were determined from the NASH Clinical Research Network (Kleiner 2005, Brunt 1999) for each animal. Briefly, steatosis, lobular inflammation, and balloon degeneration of hepatocytes were assessed. The NAFLD Activity Scale (NAS) score was set for each test animal as the unweighted sum of the determination of the severity of steatosis (0-3), lobular inflammation (0-3) and balloon dystrophy (0-2).
Используя программное обеспечение Quant Center (3D Histech, включая модули Pattern Quant и Histo Quant), определяли количество участков с окрашенным коллагеном. Говоря кратко, модуль Pattern Quant использовали для обнаружения ткани и измерения ее поверхности. Затем использовали модуль Histo Quant для определения содержания окрашенного коллагена и измерения его поверхности на основе метода цветового порога. Площадь фиброза затем выражали в процентах от поверхности коллагена ко всей ткани на одно животное.Using the Quant Center software (3D Histech, including Pattern Quant and Histo Quant modules), the number of areas with stained collagen was determined. In short, the Pattern Quant module was used to detect tissue and measure its surface. The Histo Quant module was then used to determine the content of colored collagen and measure its surface based on the color threshold method. The area of fibrosis was then expressed as a percentage of collagen surface to total tissue per animal.
Биохимический анализ образцов печени.Biochemical analysis of liver samples.
Измерение содержания печеночного коллагена.Measurement of hepatic collagen content.
Содержание печеночного коллагена определяли с помощью соответствующего набора QuickZyme (Анализ общего коллагена, кат. № QZB-totcol2). Анализ основан на обнаружении гидроксипролина, который является непротеиногенной аминокислотой, найденной, в основном, в тройной спирали коллагена. Таким образом, гидроксипролин в тканевых гидролизатах можно использовать в качестве прямого показателя количества коллагена, присутствующего в ткани (без различия между проколлагеном, зрелым коллагеном и продуктами распада коллагена).Hepatic collagen content was determined using the appropriate QuickZyme kit (Total Collagen Assay, cat. no. QZB-totcol2). The assay is based on the detection of hydroxyproline, which is a non-proteinogenic amino acid found primarily in the collagen triple helix. Thus, hydroxyproline in tissue hydrolysates can be used as a direct measure of the amount of collagen present in tissue (without distinction between procollagen, mature collagen, and collagen breakdown products).
Перед дозированием гидроксипролина необходим полный гидролиз образцов тканей в 6 М HCl при 95°C. Анализ приводит к образованию хромогена с максимальной поглощающей способностью при 570 нм. Результаты выражены в виде мг коллагена/г печени.Complete hydrolysis of tissue samples in 6 M HCl at 95°C is necessary before dosing hydroxyproline. The analysis results in the formation of a chromogen with maximum absorbance at 570 nm. Results are expressed as mg collagen/g liver.
Измерение содержания печеночных триглицеридов.Measurement of hepatic triglycerides.
Приблизительно 100 мг замороженной ткани печени гомогенизировали с помощью гомогенизатораApproximately 100 mg of frozen liver tissue was homogenized using a homogenizer
- 32 042734 ткани (Precellys®24, Bertin Technologies, Франция) в 150 мМ буфера NaCl, содержащем 15,4 мМ NaN3.- 32 042734 tissues (Precellys®24, Bertin Technologies, France) in 150 mM NaCl buffer containing 15.4 mM NaN 3 .
Липидные фракции в гомогенатах экстрагировали смесью хлороформ-метанол (2:1, об./об.) с последующим измерением триглицеридов (Biolabo, кат. № 80019).The lipid fractions in the homogenates were extracted with chloroform-methanol (2:1, v/v) followed by triglyceride measurement (Biolabo cat. no. 80019).
Измерение N-терминального пропептида плазменного проколлагена III (PIIINP).Measurement of N-terminal propeptide of plasma procollagen III (PIIINP).
Плазматическую концентрацию PIIINP определяли с помощью метода ИФА, используя набор от фирмы Cloud-Clone Corp (кат. № SEA573Mu), в соответствии с инструкциями производителя. Микротитрационный планшет предварительно покрыт антителом, специфичным к PIIINP. Стандарты или образцы добавляют в соответствующие лунки микротитрационного планшета с биотинилированным антителом, специфичным к PIIINP. Затем в каждую лунку микропланшета добавляют авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRP), и инкубируют. После добавления раствора субстрата ТМБ только те лунки, которые содержат PIIINP, биотинилированное антитело и авидин, конъюгированный с ферментом, будут демонстрировать изменение цвета. Фермент-субстратную реакцию останавливали добавлением раствора серной кислоты и изменение цвета измеряли спектрофотометрически при длине волны 450±10 нм. Концентрацию PIIINP в образцах затем определяли путем сравнения OD образцов с калибровочной кривой. Результаты выражены в пг/мл.Plasma concentration of PIIINP was determined by ELISA using a kit from Cloud-Clone Corp (cat. no. SEA573Mu), according to the manufacturer's instructions. The microtiter plate is pre-coated with an antibody specific for PIIINP. Standards or samples are added to the appropriate wells of a microtiter plate with biotinylated PIIINP specific antibody. Avidin conjugated with horseradish peroxidase (HRP) is then added to each well of the microplate and incubated. After adding the TMB substrate solution, only those wells containing PIIINP, biotinylated antibody, and enzyme-conjugated avidin will show a color change. The enzyme-substrate reaction was stopped by adding a sulfuric acid solution and the color change was measured spectrophotometrically at a wavelength of 450±10 nm. The concentration of PIIINP in the samples was then determined by comparing the OD of the samples with the calibration curve. Results are expressed in pg/ml.
Измерение плазменного тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1).Measurement of plasma tissue metalloproteinase inhibitor 1 (TIMP-1).
Уровни TIMP-1 в плазме крови измеряли с помощью количественного сэндвич-варианта метода ИФА, используя набор от фирмы R&D Systems (кат. № MTM100), в соответствии с экспериментальным протоколом PRO LIDO 000020. Говоря кратко, моноклональное антитело, специфичное к мышиному TIMP-1, было предварительно нанесено на микропланшет. Стандарты, контроль и образцы пипеткой вносили в лунки, и любой присутствующий TIMP-1 мыши связывался с иммобилизованным антителом. После промывки любых несвязанных веществ в лунки добавляли специфичное к мышиному TIMP-1 поликлональное антитело, связанное с ферментом. После промывки для удаления любого несвязанного реагента антитело-фермент в лунки добавляют раствор субстрата. Ферментативная реакция образовывает синий продукт, который становится желтым при добавлении стоп-реагента. Интенсивность измеренного цвета пропорциональна количеству мышиного TIMP-1, связанного на начальном этапе. Затем значения выборки рассчитывали по стандартной кривой. Результаты выражены в пг/мл.Plasma levels of TIMP-1 were measured using a quantitative sandwich ELISA using a kit from R&D Systems (cat. no. MTM100), according to experimental protocol PRO LIDO 000020. Briefly, a monoclonal antibody specific for mouse TIMP- 1 was pre-applied to a microplate. Standards, controls, and samples were pipetted into the wells, and any mouse TIMP-1 present was bound to the immobilized antibody. After washing any unbound substances, a mouse TIMP-1 specific polyclonal antibody coupled to the enzyme was added to the wells. After washing to remove any unbound antibody-enzyme reagent, the substrate solution is added to the wells. The enzymatic reaction produces a blue product which turns yellow upon addition of Stop Reagent. The intensity of the measured color is proportional to the amount of mouse TIMP-1 bound initially. The sample values were then calculated from the standard curve. Results are expressed in pg/ml.
Анализ экспрессии генов печени.Analysis of liver gene expression.
Тотальную РНК выделяли из печени мышей с помощью набора Rneasy Mini Kit (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя. Тотальную РНК подвергали обратной транскрипции в кДНК с использованием M-MLV RT (ревертазы вируса мышиного лейкоза Молони) (Invitrogen, кат. № 28025) в 1х буфере RT (Invitrogen), 0,5 мМ DTT (Invitrogen), 0,18 мМ смеси dNTP (Promega), 200 нг pdN6 (Amersham) и 30 ед. ингибитора РНКаз (Promega).Total RNA was isolated from mouse liver using the Rneasy Mini Kit (Qiagen) according to the manufacturer's instructions. Total RNA was reverse transcribed into cDNA using M-MLV RT (Moloney mouse leukemia virus reversetase) (Invitrogen, cat. no. 28025) in 1x RT buffer (Invitrogen), 0.5 mM DTT (Invitrogen), 0.18 mM mixture dNTP (Promega), 200 ng pdN6 (Amersham) and 30 u. RNase inhibitor (Promega).
Затем проводили количественную ПЦР с использованием системы обнаружения ПЦР-анализатора реального времени CFX96 Touch™ (Biorad). Говоря кратко, ПЦР проводили в формате 96-луночного планшета в 25 мкл общего объема, содержащего 1 мкл реакции с обратной транскрипцией, 0,5 мкл обратных и прямых праймеров (по 10 пмоль каждый) и 12,5 мкл 2X iQ SYBR Green Supermix (BioRad), используя следующие последовательности праймеров:Quantitative PCR was then performed using the CFX96 Touch™ Real Time PCR Detection System (Biorad). Briefly, PCR was performed in a 25 µl total volume 96-well plate format containing 1 µl reverse transcription reaction, 0.5 µl reverse and forward primers (10 pmol each) and 12.5 µl 2X iQ SYBR Green Supermix ( BioRad) using the following primer sequences:
Уровни экспрессии нормализовали, используя экспрессию гена GAPDH в качестве референсного гена домашнего хозяйства в образцах. Для каждого гена калибровочные кривые строили путем выбора наилучших точек (по меньшей мере трех точек), чтобы иметь эффективность ПЦР, близкую к 100%, и коэффициент корреляции, близкий к 1. Уровни экспрессии определяли, используя уравнение калибровочной кривой как для генов домашнего хозяйства, так и для целевого гена (принимая во внимание специфическую эффективность ПЦР для каждого целевого гена).Expression levels were normalized using GAPDH gene expression as a housekeeping reference gene in the samples. For each gene, calibration curves were built by selecting the best points (at least three points) to have a PCR efficiency close to 100% and a correlation coefficient close to 1. Expression levels were determined using the calibration curve equation as for housekeeping genes, and for the target gene (taking into account the specific efficiency of PCR for each target gene).
--
Claims (5)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17305452.9 | 2017-04-18 | ||
EP18305150.7 | 2018-02-13 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA042734B1 true EA042734B1 (en) | 2023-03-20 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11484517B2 (en) | Combination comprising a PPAR agonist such as elafibranor and an acetyl-CoA carboxylase (ACC) inhibitor | |
US20200061028A1 (en) | Pharmaceutical compositions for combination therapy | |
ES2959842T3 (en) | Combination of a PPAR agonist with an FXR agonist | |
AU2018223976B2 (en) | Pharmaceutical compositions for combination therapy | |
EA042734B1 (en) | COMBINATION CONTAINING A PPAR AGONIST AS ELAFIBRANOR AND AN ACETYL-CoA CARBOXYLASE (ACC) INHIBITOR | |
EA041166B1 (en) | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR COMBINATION THERAPY | |
EA044618B1 (en) | COMBINED PRODUCT FOR THE TREATMENT OF FIBROUS OR CHOLESTATIC DISEASE |