EA042696B1

EA042696B1 - Нейтрализующие вирус иммунодефицита человека антитела и способы их применения

Info

Publication number: EA042696B1
Application number: EA201990685
Authority: EA
Inventors: Йоханнес Шейд; Мишель Нуссенцвейг; Памела Дж. Бьеркман; Рон Дискин
Original assignee: Дзе Рокфеллер Юниверсити; Кэлифорниа Инститьют Оф Текнолоджи
Priority date: 2011-05-17
Filing date: 2012-05-17
Publication date: 2023-03-15

Description

Перекрестная ссылка на связанные заявки

По заявке на данное изобретение испрашивается приоритет согласно 35 U.S.C. §119(е) предварительной заявки США № 61/486960, которая подана 17 мая 2011 г. Ее раскрытие включено в настоящее описание в полном объеме.

Заявление об исследовании, финансируемом государством

Исследование, которое привело к созданию настоящего изобретения, отчасти поддержано грантом National Institutes of Health № P01 AI08677-01. Соответственно, правительство США имеет определенные права на это изобретение.

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к антителам, направленным на эпитопы вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Настоящее изобретение, кроме того, относится к получению и применению нейтрализующих антител широкого спектра, направленных на оболочечный белок gp120 ВИЧ для профилактики и лечения ВИЧ-инфекции.

Предпосылки изобретения

ВИЧ вызывает синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Иммунный ответ на ВИЧ-инфекцию у нонпрогрессоров показывает, что специфический вирусный иммунитет может ограничивать инфекцию и симптомы заболевания. У некоторых ВИЧ-инфицированных индивидуумов были обнаружены нейтрализующие IgG антитела широкого спектра в сыворотке; относительно специфичности и активности этих антител известно мало, несмотря на их возможную важность при разработке эффективных вакцин, и не установлена корреляция ни одной характеристики с защитным иммунитетом. На моделях на животных пассивный перенос нейтрализующих антител может вносить вклад в защиту от заражения вирусом. У ВИЧ-инфицированных индивидуумов также могут развиваться нейтрализующие гуморальные ответы, но детальный состав серологического ответа до сих пор не известен в полной мере.

Для СПИДа описано множество иммунологических патологий. К ним относятся, но ими не ограничиваются, патологии функции В-клеток, патологический гуморальный ответ, нарушенная клеточная функция моноцитов, ослабленное образование цитокинов, подавленная функция естественных киллеров и пониженная цитотоксическая функция клеток, нарушенная способность лимфоцитов распознавать и отвечать на растворимые антигены и истощение популяции лимфоцитов Т4 хелперов/индукторов.

Известны аминокислотные и РНК последовательности, кодирующие env ВИЧ, из множества штаммов ВИЧ (Modrow, S. et al., J. Virology, 61(2):570 (1987)). Вирион ВИЧ покрыт мембраной или оболочкой, полученной из наружной мембраны клеток-хозяев. Эта мембрана содержит популяцию оболочечных гликопротеинов (gp160), заякоренных в бислое мембраны карбокси-концевой областью. Каждый гликопротеин содержит два сегмента: N-концевой сегмент и С-концевой сегмент. N-концевой сегмент, называемый gp120 благодаря его относительной молекулярной массе, равной приблизительно 120 кДа, выступает в водную среду, окружающую вирион. С-концевой сегмент, называемый gp41, пронизывает мембрану. N-концевой gp120 и С-концевой gp41 ковалентно связаны посредством пептидной связи, которая, в частности, восприимчива к протеолитическому расщеплению. См. публикацию европейской патентной заявки № 0335635, McCune et al., и цитируемые в ней ссылки, каждая из которых включена в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

Предложено несколько подходов для создания вакцины против СПИДа, включая в качестве неограничивающих примеров, инактивированные и аттенуированные противовирусные вакцины, субъединичные вакцины из инфицированных вирусом клеток, вирусные антигены, полученные рекомбинантными способами, вакцины на основе синтетических пептидов, антиидиотипические вакцины и вакцины на основе носителя-вируса. Дополнительный подход к терапевтическому и профилактическому лечению ВИЧ включает получение высокоэффективных нейтрализующих моноклональных антител широкого спектра. Во многих исследованиях сообщалось о клонировании и получении моноклональных антител различными способами для нацеливания на сайт связывания CD4, а также на другие части шипа вириона и для нейтрализации ВИЧ. В целом, эти способы включают способы самостоятельного слияния или фагового дисплея. Как правило, при получении нейтрализующих антител против ВИЧ с помощью способов фагового дисплея комбинируют случайные комбинации тяжелых и легких цепей и выбирают случайную пару. В исследованиях сообщалось об ограниченном числе моноклональных антител, таких как, например, антитело b12 фагового дисплея, которые являются высокоэффективными с широким спектром и нейтрализующими (обозначает антитела, которые могут нейтрализовать множество штаммов ВИЧ в сыворотках) против ВИЧ. Моноклональное антитело b12 представляет собой нейтрализующее антитело широкого спектра, о котором сообщалось, что оно предотвращает ВИЧ-инфекцию у макак. Другое нейтрализующее антитело широкого спектра включает 2G12, которое имеет нехарактерную структуру, которая до сих пор не была обнаружена в каком-либо другом антителе, с тремя антигенсвязывающими участками.

VRC01 представляет собой недавно обнаруженное нейтрализующее антитело широкого спектра, которое нацелено на сайт связывания CD4 (CD4bs) на шипе ВИЧ. VRC01 был выделен путем очистки отдельных В-клеток, которые связываются с растворимым меченным биотином стабилизированным коровым фрагментом gp120 с измененной поверхностью ВИЧ (X. Wu et al., Science 329, 856 (Aug 13, 2010)). Несмотря на успех, выделение было неэффективным, было получено только три близкородствен- 1 042696 ных связывающих ВИЧ антитела из 25 миллионов мононуклеарных клеток периферической крови одного индивидуума. Подобно другим антителам против ВИЧ, получаемых способом захвата отдельных клеток антигеном, антитело VRC01-3 показало очень высокий уровень соматических мутаций, которые необходимы для эффективности и широты спектра. Эта высокая частота мутаций является вероятной помехой клонирования антитела, поскольку мутировавшие последовательности могут прекратить быть комплементарными праймерами, используемыми для клонирования.

В некоторых исследованиях сообщалось, что у определенных пациентов происходит продукция антитела против ВИЧ, которые являются нейтрализующими и имеют широкий спектр. В исследованиях сообщалось, что антитела могут защищать от начальной ВИЧ-инфекции в экспериментах по пассивному переносу у приматов, не являющихся человеком, и могут модулировать вирусную нагрузку во время инфекции. См., например, Mascola, 2000; Shibata, 1999; Veazey, 2003; Parren, 2001; Mascola, 1999; Trkola, 2005; Wei, 2003; Frost, 2005; Burton, 2004; Mascola, 2007; Karlsson Hedestam, 2008; McMichael, 2006; Zolla-Pazner, 2004.

Краткое изложение сущности изобретения

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к нейтрализующим антителам широкого спектра против ВИЧ. В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь, которая содержит консенсусную аминокислотную последовательность:

QXXLXQSGGXVKKPGXSVXVSCXASGYXXFXXYXIHWXRQAPGXGXXWVGXIXPRXGXXXXAXX

FQGRLSLTRDXXXXXXTXXXFMDLXGLRXDDTAVYFCARXXXXXXXXXXXXXXXXXXDX (SEQ ID NO: 1), где X обозначает любую аминокислоту или отсутствие аминокислоты.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему легкую цепь, которая содержит консенсусную аминокислотную последовательность:

EIXLTQSPXSLSXSXGEXXTISCXXXQXXXXXXXLXWYQQRXGXARPLLIXXXSXXXXGVPXRF

SGXXXGXXYXLXISXLXXDDXAXYFCXXYEXXXXXXX (SEQ ID NO: 2), где X обозначает любую аминокислоту или отсутствие аминокислоты.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность, и легкую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность. Настоящее изобретение дополнительно относится к способу получения выделенного антитела против ВИЧ, содержащего тяжелую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность, и легкую цепь, содержащую высококонсервативную консенсусную последовательность.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему консенсусную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему одну или обе консенсусные последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2, или последовательности, которые по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентичны им, при условии, что антитело не имеет аминокислотную последовательность VRC01.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему одну или обе консенсусные последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2, и где антитело нейтрализует вирус ВИЧ ZM53M.PB12 в концентрации IC₅₀меньше чем 1,0 мкг/мл, или вирус ВИЧ R1166.c1 в концентрации IC₅₀ меньше чем 1,0 мкг/мл, или DU172.17 в концентрации IC₅₀ меньше чем 30 мкг/мл. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему одну или обе консенсусные последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2, где антитело нейтрализует вирус ВИЧ, устойчивый к VRC01, в концентрации IC₅₀ меньше чем 30 мкг/мл.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, выбранному из группы, состоящей из 3BNC117, 3BNC60, 12А12, 12А21, NIH45-46, 8ANC131, 8ANC134, IB2530, INC9 и 8ANC196.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему области CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и области CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности соответствующих областей антитела против ВИЧ, выбранного из группы, состоящей из 3BNC117, 3BNC60, 12А12, 12А21, NIH45-46, bANC131, 8ANC134, IB2530, INC9 и 8ANC196.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбран- 2 042696 ную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5-438.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 439-583.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь и легкую цепь, которые содержат аминокислотную последовательность, изложенную в табл. А или табл. В.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему последовательность вставки, содержащую аминокислотную последовательность: ASWDFDF (SEQ ID NO: 3).

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему последовательность вставки, содержащую аминокислотную последовательность: TARDY (SEQ ID NO: 4).

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему последовательности вставки SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения эффективности и области нейтрализации ВИЧ выделенного антитела против ВИЧ, включающему встраивание по меньшей мере одной последовательности вставки SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.

Согласно другому варианту осуществления, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим выделенное антитело против ВИЧ по изобретению.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим антитело по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим выделенное антитело против ВИЧ по изобретению.

Согласно другим вариантам осуществления настоящее изобретение относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующим выделенное антитело против ВИЧ по изобретению, и клеткам, содержащим такие векторы.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения ВИЧ-инфекции или заболевания, связанного с ВИЧ, включающему стадии: идентификации млекопитающего, нуждающегося в такой профилактике или лечении, и введения указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного антитела против ВИЧ по изобретению.

Согласно другому варианту осуществления способ дополнительно включает введение второго терапевтического средства. Согласно другому варианту осуществления второе терапевтическое средство представляет собой противовирусное средство.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу снижения репликации вируса или распространения инфекции на дополнительные клетки-хозяева или ткани, который включает приведение клетки млекопитающего в контакт по меньшей мере с одним антителом по изобретению. Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, инфицированного ВИЧ, способ включает введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело по изобретению.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу получения и введения препарата антитела против ВИЧ, который подходит для введения млекопитающему, который имеет ВИЧ-инфекцию или имеет риск возникновения ВИЧ-инфекции, в количестве и в соответствии со схемой, достаточными для того, чтобы индуцировать защитный иммунный ответ против ВИЧ, или снижения вируса ВИЧ у млекопитающего. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу обнаружения антитела против ВИЧ, содержащего тяжелую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность, и легкую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность, в биологическом образце.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенным антителам по изобретению для применения в лечении ВИЧ.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к набору, содержащему фармацевтически приемлемую стандартную дозу фармацевтически эффективного количества выделенного антитела против ВИЧ по изобретению и фармацевтически приемлемую стандартную дозу фармацевтически эффективного количества средства против ВИЧ, выбранного из группы, состоящей из ненуклеозидного ингибитора обратной транскриптазы, ингибитора протеазы, ингибитора входа или слияния и ингибиторов интегразы, где две фармацевтически приемлемые стандартные дозы необязательно могут быть в форме общей фармацевтически приемлемой стандартной дозы.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к набору для диагностики, прогнозирования или контроля за лечением ВИЧ у индивида, который содержит один или несколько реактивов для обнаружения, которые специфически связываются с нейтрализующими антителами против ВИЧ в биологическом образце индивида. В другом аспекте изобретения в наборе дополнительно преду- 3 042696 смотрены реактивы для осуществления ПЦР или масс-спектрометрии.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1A-D показана нейтрализующая активность антитела против ВИЧ при IC₅₀. (А) Ограниченная панель. Верхняя линия обозначает номер донора, затем клон или антитело (табл. 4); вирусы представлены слева. Цвета обозначают концентрации при IC₅₀: красный <0,1 мкг/мл; оранжевый 0,1-1 мкг/мл; желтый 1-10 мкг/мл; зеленый >10 мкг/мл; белый - отсутствие нейтрализации при любой тестируемой концентрации. (В) Расширенная панель. (С) Объединенный график сравнения нейтрализации для VRC01, NIH45-46, 3BNC117. Длина линий и размер кругов обратно пропорциональны IC₅₀. Цвета обозначают вирусные клады: красный А; синий В; зеленый С; фуксия D; черный АЕ; золотой AG. (D) Последовательность тяжелых цепей 3BNC60, 1В2530 и 8ANC134 с покрытием пептидами, найденными с помощью масс-спектрометрии, светло-серым. Красные точки обозначают отличия от соответствующих зародышевых последовательностей.

На фиг. 2А-С показаны связывающие свойства антител против ВИЧ. (А) Репрезентативные сенсограммы SPR для связывания YU2-gp140 и 2СС-core ревертированными к зародышевой линии антителами 12А12, 12А21 и 12А (GL). (В) График показывает K_A для репрезентативных антител. (С) График показывает среднюю интенсивность флуоресценции связывания антитела против CD4i с экспрессирующими Bal.26 клетками 293Т после инкубации с обозначенными антителами. В таблице указано, индуцирует антитело доступность сайта CD4i или нет.

На фиг. 3А и 3В показана консенсусная последовательность антитела против ВИЧ и аминокислотные последовательности антител против ВИЧ. (А) Выравнивание аминокислот относительно каркасной (FR) и CDR областей для консенсуса, зародышевых генов, 10 выбранных антител и 8ANC195. Остатки пронумерованы согласно структуре 3BNC60. (В) Как на (А), для легких цепей. (С, D и Е) Кристаллическая структура Fab 3BNC60.

На фиг. 4А и 4В показан выход сильно мутировавших тяжелых цепей иммуноглобулинов с использованием конкретных праймеров. (А) Совместное сравнение нового и старого набора праймеров. Красные ячейки обозначают успешную амплификацию генов IgV_H. (В) Антитела против ВИЧ, которые связываются с 2СС-core из Pt 8. Клональные семейства представлены по-разному развернутыми секторами. Два клона с высоким уровнем мутаций, которые не амплифицировали с использованием старого набора праймеров, показаны на заштрихованных секторах круговой диаграммы.

На фиг. 5 показаны последовательности тяжелой (А) и легкой (В) цепей Ig V новых клональных членов VRC01.

На фиг. 6 показана нейтрализующая активность сыворотки пациента. (А) В таблице суммирована нейтрализующая активность очищенных IgG сыворотки против панели вирусов Tier 2 в анализе Tzm-bl. Темно-красные ячейки показывают значения IC₅₀ ниже 10 мкг/мл, оранжевые между 10 и 100 мкг/мл и желтые выше 100 мкг/мл. (В) На точечной диаграмме суммированы значения IC50, представленные на А, для еще 4 всесторонне протестированных пациентов.

На фиг. 7 продемонстрировано обнаружение антител посредством масс-спектрометрии. MS/MS спектр активированной столкновениями диссоциации, зарегистрированной на двухзарядных пептидах HSDYCDFDVWGSGSQVIVSSASTK из 3BNC153HC (А) и DGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTVIVTSASTK из 8ANC134HC. (В) Наблюдаемые фрагментарные ионы b-типа (содержащие N-конец) и фрагментарные ионы у-типа (содержащие С-конец) помечены на спектре. Потеря воды из фрагментарных ионов обозначена с помощью*. Ионы, соответствующие потере воды из родительского иона, помечены в спектре. Наблюдаемые расщепления остова обозначены в последовательности 1 для ионов b-типа и L для ионов у-типа.

На фиг. 8А и 8В продемонстрирована аффинность антител против ВИЧ. (А) Антитело, связывающееся с gp140 и 2СС-core, которое измеряли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Сенсограммы SPR для антитела, связывающего выбранные клоны антитела 3BNC, показаны в зависимости от времени. (В) На столбиковой диаграмме представлена аффинность связывания (K_A) для антигенов gp140 и 2СС-core для выбранных антител IgG, представленных на A. RU, единицы ответа.

На фиг. 9А-9С проиллюстрирован анализ соматических гипермутаций выбранных антител против ВИЧ для последовательностей (А) гена тяжелой цепи иммуноглобулина, (В) гена к легкой цепи и (С) гена λ легкой цепи. Последовательности выровнены с соответствующими им зародышевыми нуклеотидными последовательностями. Соматические мутации показаны красными буквами, дополнительно серые прямоугольники обозначают заместительные мутации. Зародышевые аминокислотные последовательности с обозначающей консенсусные остатки, представлены над выравниванием нуклеотидов.

На фиг. 10А-10С представлены последовательности антител из одного размноженного нейтрализующего клона у каждого пациента (A) (Pt)1, (В) Pt3 и (С) Pt8. Пептиды, идентифицированные посредством масс-спектрометрии, обозначены цветом. Варианты, отмеченные звездочкой, являются уникально идентифицируемыми с помощью одного или нескольких масс-спектрометрически наблюдаемых пептидов (показано светло-серым). Остальные масс-спектрометрически наблюдаемые пептиды картируются неуникально во множестве вариантов, как показано темно-серым. Подчеркнутые аминокислоты обозна- 4 042696 чают нетрипсинолитические сайты расщепления в представленных вариантах. Предполагают, что расщепление происходит через химотрипсинолитическое расщепление или дополнительные мутации (не наблюдаемые среди клонированных вариантов), которые помещают остаток лизина или аргинина в эти сайты.

Подробное описание изобретения

I. Антитела, нейтрализующие ВИЧ.

QXXLXQSGGXVKKPGXSVXVSCXASGYXXFXXYXIHWXRQAPGXGXXWVGXIXPRXGXXXXAXX

EIXLTQSPXSLSXSXGEXXTISCXXXQXXXXXXXLXWYQQRXGXARPLLIXXXSXXXXGVPXRF

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему одну или обе последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2 или последовательностей, которые по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентична с ними, при условии, что антитело не имеет аминокислотную последовательность VRC01. Процентную долю идентичности определяют, как описано далее в настоящем документе.

Настоящее изобретение в других вариантах осуществления относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь, которая содержит высококонсервативную аминокислотную последовательность тяжелой цепи, и легкую цепь, которая содержит высококонсервативную аминокислотную последовательность легкой цепи. Высоко консервативную аминокислотную последовательность тяжелой цепи определяют в настоящем документе как аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 1. Высококонсервативную аминокислотную последовательность легкой цепи определяют в настоящем документе как аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 2. Процентную долю идентичности определяют, как описано далее в настоящем документе.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь, которая содержит высококонсервативную аминокислотную последовательность тяжелой цепи, и легкую цепь, которая содержит высококонсервативную аминокислотную последовательность легкой цепи, при условии, что антитело не имеет последовательность VRC01.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему одну или обе последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2, де антитело нейтрализует вирус ВИЧ ZM53M.PB12 в концентрации IC₅₀ меньше чем 1,0 мкг/мл, или вирус ВИЧ R1166.c1 в концентрации IC₅₀ меньше чем 1,0 мкг/мл, или DU172.17 в концентрации IC₅₀ меньше чем 30 мкг/мл. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему одну или обе последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2, где антитело нейтрализует вирус ВИЧ, устойчивый к VRC01, в концентрации IC₅₀ меньше чем 30 мкг/мл. Вирус ВИЧ, устойчивый к VRC01, определяют в настоящем документе как вирус ВИЧ, который устойчив к нейтрализации с помощью VRC01 при значении IC₅₀ 5 0 мкг/мл. Вирусы ВИЧ, устойчивые к VRC01, включают, например, НО86.8, DU172.17, 250-4, 278-50 и 620345.C1.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, выбранному из группы, состоящей из 3BNC117, 3BNC60, 12А12, 12А21, NIH45-46, bANC131, 8ANC134, IB2530, INC9 и 8ANC196.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу про- 5 042696 тив ВИЧ, содержащему области CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и области CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности соответствующих областей антитела против

ВИЧ, выбранного из группы, состоящей из 3BNC117, 3BNC60, 12А12, 12А21, NIH45-46, bANC131,

8ANC134, IB2530, INC9 и 8ANC196.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5-438.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему тяжелую цепь и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, изложенную в табл. А или В.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему последовательность вставки, содержащую аминокислотную последовательность: ASWDFDF (SEQ ID NO: 3). В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, где последовательностью вставки SEQ ID NO: 3, которая соответствует области FR3 тяжелой цепи, начинающейся с аминокислоты 74 в 3BNC117 и 3BNC60, как показано на фиг. 5А, заменяют соответствующую область, определенную посредством выравнивания последовательностей, антитела против ВИЧ по изобретению. Например, SEQ ID NO: 3 может быть вставлена после седьмой аминокислоты FR3 тяжелой цепи.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, содержащему последовательность вставки, содержащую аминокислотную последовательность: TARDY (SEQ ID NO: 4). В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, где последовательностью вставки SEQ ID NO: 4, которая соответствует области CDR3 тяжелой цепи, начинающейся с аминокислоты 103 в NIH45-46, как показано на фиг. 5А, заменяют соответствующую область, определенную посредством выравнивания последовательностей, антитела против ВИЧ по изобретению. Например, SEQ ID NO: 4 может быть вставлена после четвертой аминокислоты в CDR3 тяжелой цепи.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному антителу против ВИЧ, где последовательностью вставки SEQ ID NO: 3, которая соответствует области FR3 тяжелой цепи, начинающейся с аминокислоты 74 в 3BNC117 и 3BNC60, как показано на фиг. 5А, заменяют соответствующую область, определенную посредством выравнивания последовательностей, антитела против ВИЧ по изобретению, и последовательностью вставки SEQ ID NO: 4, которая соответствует области CDR3 тяжелой цепи, начинающейся с аминокислоты 103 в NIH45-46, как показано на фиг. 5А, заменяют соответствующую область, определенную посредством выравнивания последовательностей, антитела против ВИЧ по изобретению. Например, SEQ ID NO: 3 может быть вставлена после седьмой аминокислоты FR3 тяжелой цепи и SEQ ID NO: 4 может быть вставлена после четвертой аминокислоты CDR3 тяжелой цепи.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения эффективности и ширины нейтрализации ВИЧ выделенного антитела против ВИЧ, включающему получение выделенного антитела против ВИЧ, где последовательностью вставки SEQ ID NO: 3, которая соответствует области FR3 тяжелой цепи, начинающейся с аминокислоты 74 в 3BNC117 и 3BNC60, как показано на фиг. 5А, заменяют соответствующую область, определенную посредством выравнивания последовательностей, антитела против ВИЧ по изобретению и/или последовательностью вставки SEQ ID NO: 4, которая соответствует области CDR3 тяжелой цепи, начинающейся с аминокислоты 103 в NIH45-46, как показано на фиг. 5А, заменяют соответствующую область, определенную посредством выравнивания последовательностей, антитела против ВИЧ по изобретению. Например, SEQ ID NO: 3 может быть вставлена после седьмой аминокислоты FR3 тяжелой цепи и/или SEQ ID NO: 4 может быть вставлена после четвертой аминокислоты CDR3 тяжелой цепи. Специалист в данной области может модифицировать аминокислотную последовательность антитела с использованием рекомбинантных способов и/или синтетических химических способов для получения полипептида или антитела. Также специалист в данной области может идентифицировать улучшенное антитело против ВИЧ с более высокими эффективностью и шириной нейтрализации посредством использования анализа на нейтрализацию ВИЧ, как описано ниже.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к улучшенному выделенному антителу против ВИЧ, содержащему по меньшей мере одну из последовательностей вставки SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, где улучшенное выделенное антитело против ВИЧ имеет более высокие эффективность и ширину нейтрализации ВИЧ, чем указанное выделенное антитело против ВИЧ без последовательностей вставки SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4. Специалист в данной области может идентифицировать улучшенное антитело против ВИЧ с более высокой эффективностью и шириной нейтрализации ВИЧ посредством использования анализа на нейтрализацию ВИЧ, как описано ниже.

- 6 042696

Специалист в данной области может модифицировать аминокислотную последовательность антитела, используя рекомбинантные способы и/или синтетические химические способы для получения полипептида или антитела.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения выделенного антитела против ВИЧ, содержащего консенсусную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения выделенного антитела против ВИЧ, содержащего одну или обе из консенсусной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2 или последовательности, которые по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентичны с ними, при условии, что антитело не имеет аминокислотной последовательности VRC01. Процент идентичности определяют, как описано далее в настоящем документе.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу обнаружения выделенного антитела против ВИЧ, включающему получение содержащего иммуноглобулин биологического образца у млекопитающего, выделение антитела против ВИЧ из указанного образца, определение аминокислотной последовательности антитела против ВИЧ и идентификацию присутствия последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу отбора выделенного антитела против ВИЧ, включающему определение присутствия одной или обеих из консенсусной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и легкой цепи SEQ ID NO: 2 или последовательностей, которые по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95%, или по меньшей мере на 97%, или по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентичны с ними, при условии, что антитело не имеет аминокислотной последовательности VRC01. Процент идентичности определяют, как описано далее в настоящем документе. Биологический образец может представлять собой кровь, сыворотку, слюну, мочу, мокроту, образец соскоба клеток или биопсию ткани. Аминокислотные последовательности могут быть определены посредством известных в данной области способов, включая, например, ПЦР и масс-спектрометрию.

Термин антитело (Ab), как используют в настоящем документе, включает моноклональные антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела и полиреактивные антитела) и фрагменты антител. Таким образом, термин антитело, как используют в каком-либо контексте в настоящем описании, включает, но этим не ограничивается, какой-либо специфический связывающий элемент, класс иммуноглобулинов и/или изотип (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, IgD, IgE и IgM) и биологически значимый фрагмент или его специфический связывающий элемент, включая в качестве неограничивающих примеров Fab, F(ab')₂, Fv и scFv (одноцепочечный или родственный объект). В данной области понимают, что антитело представляет собой гликопротеин, который содержит по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, взаимно связанные посредством дисульфидных связей, или их антигенсвязывающую часть. Тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (CH1, CH2 и CH3). Легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (V_L) и константной области легкой цепи (C_L).

Вариабельные области как тяжелых, так и легких цепей содержат каркасные области (FWR) и определяющие комплементарность области (CDR). Четыре FWR области являются относительно консервативными, тогда как области CDR (CDR1, CDR2 и CDR3) представляют гипервариабельные области и расположены от NH₂-конца к СООН-концу следующим образом: FWR1, CDR1, FWR2, CDR2, FWR3, CDR3, FWR4. Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном, в то время как, в зависимости от изотипа, константная область(и) может опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами организма-хозяина.

Также в определение антитело, как используют в настоящем документе, включены химерные антитела, гуманизированные антитела и рекомбинантные антитела, антитела человека, создаваемые из трансгенного не относящегося к человеку животного, а также антитела, выбранные из библиотек с использованием методов обогащения, доступных среднему специалисту.

Термином вариабельный обозначают тот факт, что среди антител определенные сегменты в (V) доменов сильно различаются по последовательности. V-домен опосредует связывание антигена и определяет специфичность конкретного антитела к его конкретному антигену. Однако вариабельность неравномерно распределена по 110-аминокислотному отрезку вариабельных областей. Напротив, V-области состоят из относительно инвариантных фрагментов, называемых каркасными областями (FR) по 15-30 аминокислот, которые разделены более короткими областями предельной вариабельности, которые называют гипервариабельными областями, каждая из которых составляет 9-12 аминокислот в длину. Вариабельные области нативных тяжелых и легких цепей содержат по четыре FR, главным образом принимающих конфигурацию бета-складчатого слоя, которые соединены посредством гипервариабельных областей, которые образуют петли, соединяющие структуру бета-складчатого слоя, и в некоторых случаях формирующие его часть. Гипервариабельные области в каждой цепи удерживаются вместе в

- 7 042696 непосредственной близости за счет FR и вместе с гипервариабельными областями из другой цепи вносят вклад в формирование антигенсвязывающего участка антитела (см., например, Rabat et al., Sequences of

Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.

(1991)).

Термин гипервариабельная область, как используют в настоящем документе, относится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена.

Гипервариабельная область в целом содержит аминокислотные остатки из определяющей комплементарность области (CDR).

Термин моноклональное антитело, как используют в настоящем документе, относится к антителу, получаемому из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, содержащиеся в популяции, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах.

Термин поликлональное антитело относится к препаратам, которые содержат различные антитела, направленные на различные детерминанты (эпитопы).

Моноклональные антитела в настоящем документе включают химерные антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, получаемых от конкретных видов, или относится к конкретному классу или подклассу антител, где остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, получаемых от других видов, или относится к другому классу или подклассу антител, а также фрагменты таких антител при условии, что они проявляют желательную биологическую активность (см., например, патент США № 4816567; и Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Настоящее изобретение относится к антигенсвязывающим последовательностям вариабельной области, получаемым из антител человека. Соответственно, химерные антитела, представляющие главный интерес, в настоящем документе включают антитела, которые имеют одну или несколько антигенсвязывающих последовательностей человека (например, CDR) и содержат одну или несколько последовательностей, получаемых из антитела, которое не является антителом человека, например, последовательность области FR или С. Кроме того, химерные антитела, включенные в настоящий документ, представляют собой те, которые содержат антигенсвязывающую последовательность вариабельной области человека одного класса или подкласса антител и другую последовательность, например последовательность области FR или С, получаемую из другого класса или подкласса антител.

Гуманизированным антителом в целом считают антитело человека, которое имеет один или несколько аминокислотных остатков, введенных в него из источника, который не относится к человеку. Эти не относящиеся к человеку аминокислотные остатки часто обозначают как импортные остатки, которые типично берут из импортной вариабельной области. Гуманизацию можно осуществлять согласно способу Winter и коллег (см., например, Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)), посредством замены последовательностями импортной гипервариабельной области соответствующих последовательностей антитела человека. Соответственно, такие гуманизированные антитела представляют собой химерные антитела (см., например, патент США № 4816567), где значительно меньше чем интактная вариабельная область человека заменена на соответствующую последовательность от не являющихся человеком видов.

Фрагмент антитела содержит часть интактного антитела, такую как антигенсвязывающая или вариабельная область интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают, но ими не ограничиваются, фрагменты Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv; диатела; линейные антитела (см., например, патент США № 5641870; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]); молекулы одноцепочечных антител и полиспецифические антитела, сформированные из фрагментов антител.

Fv представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный участок распознавания антигена и связывания антигена. Этот фрагмент содержит димер домена вариабельной области одной тяжелой и одной легкой цепи, которые имеют плотную нековалентную связь. Из укладки этих двух доменов выступают шесть гипервариабельных петель (по три петли из каждой из Н и L цепи), которые предоставляют аминокислотные остатки для связывания антигена и придают антителу специфичность связывания антигена. Однако даже одна вариабельная область (или половина Fv, содержащая только три CDR, специфичные для антигена) имеет способность распознавать и связывать антиген, несмотря на более низкую аффинность, чем целый сайт связывания.

Одноцепочечные Fv (sFv или scFv) представляют собой фрагменты антител, которые содержат домены V_H и V_L антитела, соединенные в одну полипептидную цепь. Полипептид sFv дополнительно может содержать полипептидный линкер между доменами VH и VL, который позволяет sFv формировать желаемую структуру для связывания антигена. Обзор о sFv см., например, в Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, p. 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, ниже.

Термин диатела относится к маленьким фрагментам антител, получаемым посредством конструирования фрагментов sFv с короткими линкерами (приблизительно 5-10 остатков) между доменами V_H и V_L, так что достигают межцепного, но не внутрицепного спаривания V-доменов, что ведет к бивалент- 8 042696 ному фрагменту, т.е. фрагменту, который имеет два участка связывания антигена. Биспецифические диатела представляют собой гетеродимеры двух кроссоверных фрагментов sFv, в которых домены VH и V_L двух антител присутствуют в различных полипептидных цепях. Диатела описаны более полно, например, в ЕР 404097; WO 93/11161 и Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993).

Доменные антитела (dAb), которые могут быть получены в полностью гуманизированной форме, представляют собой самые маленькие известные антигенсвязывающие фрагменты антител в диапазоне приблизительно от 11 приблизительно до 15 кДа. dAb представляют собой функциональные вариабельные области тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов (VH и V_L соответственно). Они имеют высокий уровень экспрессии в микробной клеточной культуре, показывают благоприятные биофизические свойства, включая, например, но не ограничиваясь этим, растворимость и температурную стабильность, и хорошо подходят для отбора и созревания аффинности посредством систем отбора in vitro, таких как, например, фаговый дисплей. dAb биологически активны в качестве мономеров, и вследствие их маленького размера и присущей стабильности им можно придавать формат более крупных молекул для того, чтобы создавать лекарственные средства с пролонгированным временем полужизни в сыворотке или другими фармакологическими активностями. Примеры этой методики описаны, например, в WO 9425591 для антител, получаемых из тяжелой цепи Ig Camelidae, а также в US 20030130496, где описано выделение однодоменных полностью человеческих антител из фаговых библиотек.

Fv и sFv представляют собой только частицы с интактными антигенсвязывающими участками, которые лишены константных областей. Таким образом, они подходят для ослабленного неспецифического связывания во время использования in vivo. sFv слитные белки можно сконструировать для того, чтобы добиваться слияния эффекторного белка на амино- или карбоксиконце sFv. См., например, Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, выше. Фрагмент антитела также может представлять собой линейное антитело, например, как описано, например, в патенте США № 5641870. Такие линейные фрагменты антител могут быть моноспецифическими или биспецифическими.

В определенных вариантах осуществления антитела по описанному изобретению являются биспецифическими или мультиспецифическими. Биспецифические антитела представляют собой антитела, которые обладают специфичностями связывания по меньшей мере с двумя различными эпитопами. Образцовые биспецифические антитела могут связывать два различных эпитопа на одном антигене. Другие такие антитела могут объединять первый антигенсвязывающий участок с сайтом связывания для второго антигена. Альтернативно, анти-ВИЧ фрагмент можно комбинировать с фрагментом Fab, который связывается с триггерной молекулой на лейкоците, такой как молекула рецептора Т-клетки (например, CD3), или Fc-рецептором для IgG (FcyR), таким как FcyRI (CD64), (CD32) и FcyRIII (CD16), с тем, чтобы сосредоточить и локализовать клеточные механизмы защиты на инфицированных клетках. Биспецифические антитела также можно использовать для того, чтобы локализовать цитотоксические средства на инфицированных клетках. Биспецифические антитела могут быть получены в виде полноразмерных антител или фрагментов антител (например, биспецифические антитела F(ab')₂). Например, в WO 96/16673 описаны биспецифическое антитело против ЕгЬВ2/против FcyRIII, а в патенте США № 5837234 раскрыто биспецифическое антитело против ЕгЬВ2/против FcyRI. Например, о биспецифическом антителе против ErbB2/Fca сообщалось в WO 98/02463; в патенте США № 5821337 описано биспецифическое антитело против ЕгЬВ2/против CD3. См. также, например, Mouquet et al., Polyreactivity Increases The Apparent Affinity Of Anti-HIV Antibodies By Heteroligation. Nature, 467, 591-5 (2010).

Способы получения биспецифических антител известны в данной области. Традиционное получение полноразмерных биспецифических антител основано на совместной экспрессии двух пар тяжелой цепи-легкой цепи иммуноглобулина, где две цепи обладают различными специфичностями (см., например, Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)). Схожие методики раскрыты, например, в WO 93/08829, Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991) и см. также; Mouquet et al., Polyreactivity Increases The Apparent Affinity Of Anti-HIV Antibodies By Heteroligation. Nature, 467, 591-5 (2010).

Альтернативно, вариабельные области антител с желаемыми специфичностями связывания (связывающие антитело-антиген участки) сливают с последовательностями константного домена иммуноглобулина. Слияние происходит с использованием константного домена тяжелой цепи Ig, содержащего по меньшей мере часть шарнирной области и областей CH2 и CH3. Согласно некоторым вариантам осуществления, первая константная область тяжелой цепи (CH1), содержащая сайт, необходимый для соединения с легкой цепью, присутствует по меньшей мере в одном из слитых белков. ДНК, кодирующую слитые белки тяжелой цепи иммуноглобулина, и, при желании, легкую цепь иммуноглобулина, вставляют в отдельные векторы экспрессии и совместно трансфицируют в подходящую клетку-хозяина. Это обеспечивает более высокую гибкость при корректировании взаимных пропорций трех полипептидных фрагментов в вариантах осуществления, когда неравные отношения трех полипептидных цепей, используемых в конструкции, обеспечивают оптимальный выход желаемого биспецифического антитела. Однако можно вставлять кодирующие последовательности для двух или всех трех полипептидных цепей в один вектор экспрессии, когда экспрессия по меньшей мере двух полипептидных цепей в равных отношениях ведет к высокому выходу или когда отношения не оказывают значимого влияния на выход желаемой комбина- 9 042696 ции цепей.

Способы создания биспецифических антител из фрагментов антител также описаны в литературе. Например, биспецифические антитела могут быть получены с использованием химического связывания. Например, Brennan et al., Science, 229:81 (1985) описывают процедуру, где интактные антитела протеолитически расщепляют для того, чтобы генерировать фрагменты F(ab')₂. Эти фрагменты восстанавливают в присутствии дитиолового комплексообразующего средства, арсенита натрия, чтобы стабилизировать вицинальные дитиолы и предотвратить образование межмолекулярных дисульфидов. Затем образуемые фрагменты Fab' превращают в производные тионитробензоата (TNB). Затем одно из производных Fab'-TNB повторно превращают в Fab'-тиол посредством восстановления с меркаптоэтиламином и смешивают с эквимолярным количеством другого производного Fab'-TNB для того, чтобы формировать биспецифическое антитело. Получаемые биспецифические антитела можно использовать в качестве средств для избирательной иммобилизации ферментов.

Другие модификации антитела предусмотрены в настоящем документе. Например, антитело может быть сшито с одним из множества небелковых полимеров, например полиэтиленгликолем, полипропиленгликолем, полиоксиалкиленами или сополимерами полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля. Антитело также можно заключать в микрокапсулы, получаемые, например, способами коацервации или интерфазной полимеризацией (например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и полиметилметакрилатные микрокапсулы соответственно), в коллоидных системах доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсиях. Такие способы раскрыты, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A., Ed., (1980).

Как правило, антитела по изобретению получают рекомбинантными способами, с использованием векторов и способов, доступных в данной области. Антитела человека также можно получать с помощью В-клеток, активированных in vitro (см., например, патенты США № 5567610 и 5229275). Общие способы в молекулярной генетике и генетической инженерии, которые можно использовать в настоящем изобретении, описаны в текущих изданиях Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, под редакцией D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, CA), Guide to Protein Purification в Methods in Enzymology (M.P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, CA), Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 2nd Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY) и Gene Transfer and Expression Protocols, pp. 109-128, ed. E.J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.). Реактивы, клонирующие векторы и наборы для генетических манипуляций доступны у коммерческих продавцов, таких как BioRad, Stratagene, Invitrogen, ClonTech и Sigma-Aldrich Co.

Антитела человека также могут быть получены в трансгенных животных (например, мышах), которые способны продуцировать полный репертуар антител человека в отсутствие продукции эндогенных иммуноглобулинов. Например, описано, что гомозиготная делеция гена соединительной области тяжелой цепи антитела (JH) у химерных и зародышевых мутантных мышей ведет к полному ингибированию продукции эндогенных антител. Перенос массива генов иммуноглобулинов зародышевой линии человека в таких мутантных мышей зародышевой линии ведет к продукции антител человека после антигенной стимуляции. См., например, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immuno, 7:33 (1993); патент США № 5545806, 5569825, 5591669 (все GenPharm); патент США № 5545807; и WO 97/17852. Таких животных можно конструировать генетически для того, чтобы получать антитела человека, содержащие полипептид по описанному изобретению.

Разработаны различные способы получения фрагментов антител. Традиционно, эти фрагменты получали посредством протеолитического расщепления интактных антител (см., например, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods, 24:107-117 (1992) и Brennan et al., Science, 229:81 (1985)). Однако эти фрагменты теперь могут быть получены непосредственно с помощью рекомбинантных клеток-хозяев. Е. coli может экспрессировать и секретировать фрагменты Fab, Fv и ScFv антител, таким образом делая возможным легкое получение больших количеств этих фрагментов. Фрагменты Fab'-SH можно непосредственно выделять из Е. coli и химически связывать для того, чтобы формировать фрагменты F(ab')₂ (см., например, Carter et al., Bio/Technology, 10:163-167 (1992)). Согласно другому подходу, фрагменты F(ab')₂ можно выделять непосредственно из культуры рекомбинантных клеток-хозяев. Фрагмент Fab и F(ab')2 с повышенным временем полужизни in vivo, содержащим остатки эпитопа связывания рецептора спасения, описаны в патенте США № 5869046. Другие способы получения фрагментов антител очевидны практикующим специалистам.

Другие способы, которые известны в данной области для отбора фрагментов антител из библиотек с использованием методик обогащения, включая в качестве неограничивающих примеров фаговый дисплей, рибосомный дисплей (Hanes and Pluckthun, 1997, Proc. Nat. Acad. Sci. 94:4937-4942), бактериальный дисплей (Georgiou, et al., 1997, Nature Biotechnology, 15:29-34) и/или дрожжевой дисплей (Kieke, et al., 1997, Protein Engineering, 10:1303-1310), можно использовать в качестве альтернативы ранее рассмотрен

- 10 042696 ным методам для того, чтобы выбирать одноцепочечные антитела. Одноцепочечные антитела выбирают из библиотеки одноцепочечных антител, получаемых непосредственно с использованием методов нитчатых фагов. Метод фагового дисплея известна в данной области (например, см. метод из Cambridge Antibody Technology (CAT)), как раскрыто в патентах США № 5565332; 5733743; 5871907; 5872215; 5885793; 5962255; 6140471; 6225447; 6291650; 6492160; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915; 6593081, а также других членах семейства США, или заявки, которые полагаются на приоритет подачи GB 9206318, которая подана 24 мая 1992 г.; см. также Vaughn, et al. 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314). Одноцепочечные антитела также можно разрабатывать и конструировать с использованием доступного метода рекомбинантных ДНК, такой как способ амплификации ДНК (например, ПЦР), или возможно посредством использования соответствующей гибридомной кДНК в качестве матрицы.

Вариантные антитела также включены в объем изобретения. Таким образом, варианты последовательностей, перечисленных в изобретении, также включены в объем изобретения. Дополнительные варианты последовательностей антител, обладающие улучшенной аффинностью, могут быть получены с использованием известных в данной области способов, и они включены в объем изобретения. Например, замены аминокислот можно использовать для того, чтобы получать антитела с дополнительно улучшенной аффинностью. Альтернативно, оптимизацию кодонов нуклеотидной последовательности можно использовать для того, чтобы улучшать эффективность трансляции в экспрессирующих системах для получения антитела.

Такие последовательности вариантных антител будут обладать 70% или больше (т.е. 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или больше) идентичностью последовательностей с последовательностями, перечисленными в настоящем описании. Такую идентичность последовательностей вычисляют по отношению к полной длине эталонной последовательности (т.е. последовательности, указанной в описании). Процент идентичности, как указано в настоящем документе, представляет собой то, что определяют с использованием BLAST версии 2.1.3 с использованием параметров по умолчанию, которые точно определены в NCBI (National Center for Biotechnology Information; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) [матрица Blosum 62; штраф за открытие пропуска = 11 и штраф за продолжение пропуска = 1]. Например, настоящее изобретение относится к пептидным последовательностям, которые содержат по меньшей мере приблизительно 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150 или больше перекрывающихся пептидов из одной или нескольких последовательностей, описанных в настоящем документе, а также все промежуточные длины между этими значениями. Как используют в настоящем документе, термин промежуточные длины предназначен для того, чтобы описывать какую-либо длину между указанными значениями, такую как 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и т.д.; 21, 22, 23 и т.д.; 30, 31, 32 и т.д.; 50, 51, 52, 53 и т.д.; 100, 101, 102, 103 и т.д.; 150, 151, 152, 153 и т.д.

Настоящее изобретение относится к антителам, или отдельно или в комбинации с другими антителами, такими как, но ими не ограничиваются, VRC01 и PG9, которые имеют нейтрализующую активность широкого спектра в сыворотке.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способам получения и введения композиции антитела против ВИЧ, которая подходит для введения пациенту-человеку или не являющемуся человеком примату, который имеет ВИЧ-инфекцию или риск ВИЧ-инфекции, в количестве и в соответствии со схемой, достаточными для того, чтобы индуцировать защитный иммунный ответ против ВИЧ или снижение вируса ВИЧ у человека.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к вакцине, содержащей по меньшей мере одно антитело по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Согласно одному из вариантов осуществления вакцина представляет собой вакцину, которая содержит по меньшей мере одно антитело, описанное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Вакцина может содержать множество антител, обладающих характеристиками, описанными в настоящем документе, в какой-либо комбинации и, кроме того, может содержать антитела, нейтрализующие ВИЧ, как известно в данной области.

Следует понимать, что композиции могут представлять собой отдельные или комбинации антител, описанных в настоящем документе, которые могут быть теми же самыми или различными, чтобы профилактически или терапевтически лечить прогрессирование различных субтипов ВИЧ-инфекции после вакцинации. Такие комбинации можно выбирать в соответствии с желаемым иммунитетом. Когда антитело вводят животному или человеку, его можно комбинировать с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или адъювантами, которые известны среднему специалисту в данной области. Композиция дополнительно может содержать нейтрализующие антитела широкого спектра, известные в данной области, включая в качестве неограничивающих примеров VRC01, PG9 и bl2.

Кроме того, в отношении определения эффективного уровня у пациента для лечения ВИЧ, в частности, подходящие модели на животных доступны и широко применяются для оценки эффективности различных протоколов генной терапии против ВИЧ in vivo (Sarver et al. (1993b), выше). Эти модели включают мышей, обезьян и кошек. Даже несмотря на то, что эти животные по природе не восприимчивы к заболеванию ВИЧ, модели на химерных мышах (например, SCID, bg/nu/xid, NOD/SCID, SCID-hu,

- 11 042696 иммунокомпетентные SCID-hu, BALB/c с удаленным костным мозгом) с реконструированными мононуклеарными клетками периферической крови человек (РВМС), лимфатическими узлами, эмбриональной печенью/тимусом или другими тканями, можно инфицировать лентивирусным вектором или ВИЧ, и использовать в качестве моделей патогенеза ВИЧ. Аналогичным образом, можно использовать вирус иммунодефицита обезьян (SIV)/модель на обезьянах, как и вирус иммунодефицита кошек (FΓV)/модель на кошках.

Фармацевтическая композиция может содержать другие фармацевтические средства в сочетании с вектором по изобретению, когда используют для терапевтического лечения СПИД. Эти другие фармацевтические средства можно использовать традиционным для них образом (т.е. в качестве противовирусных средств для лечения ВИЧ-инфекции). Примеры средств против ВИЧ включают, без ограничения, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторы протеазы, ингибиторы входа или слияния и ингибиторы интегразы.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции на основе антител, которая содержит эффективное количество выделенного антитела против ВИЧ, или аффинно зрелой версии, которое предусматривает выбор профилактического или терапевтического лечения для того, чтобы снижать инфекцию вирусом ВИЧ. Фармацевтическую композицию на основе антител по настоящему изобретению можно формулировать посредством любого числа стратегий, известных в данной области (например, см. McGoff and Scher, 2000, Solution Formulation of Proteins/Peptides: In McNally, E.J., ed. Protein Formulation and Delivery. New York, NY: Marcel Dekker; p. 139-158; Akers and Defilippis, 2000, Peptides and Proteins as Parenteral Solutions. In: Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. Philadelphia, PA: Talyor and Francis; p. 145-177; Akers, et al., 2002, Pharm. Biotechnol. 14:47-127). Фармацевтически приемлемая композиция, подходящая для введения пациенту, содержит эффективное количество антитела в составе, который сохраняет биологическую активность, при этом также способствуя максимальной стабильности во время хранения в приемлемом диапазоне температур. Фармацевтические композиции также могут содержать, в зависимости от желаемого состава, фармацевтически приемлемые разбавители, фармацевтически приемлемые носители и/или фармацевтически приемлемые эксципиенты, или какие-либо такие наполнители, широко используемые для того, чтобы формулировать фармацевтические композиции для введения животному или человеку. Разбавитель выбирают с тем, чтобы не влиять на биологическую активность комбинации. Примеры таких разбавителей представляют собой дистиллированную воду, физиологический фосфатносолевой буфер, растворы Рингера, раствор декстрозы и раствор Хэнка. Количество эксципиента, которое можно использовать в фармацевтической композиции или составе по данному изобретению, представляет собой количество, которое служит единообразному распределению антитела по всей композиции с тем, чтобы его можно было единообразно диспергировать, когда оно подлежит доставке нуждающемуся в этом индивиду. Оно может служить разведению антитела до концентрации, которая обеспечивает желаемые полезные паллиативные или лечебные результаты, при этом одновременно минимизируя какиелибо нежелательные побочные эффекты, которые могут возникать из-за слишком высокой концентрации. Также они могут обладать эффектом консерванта. Таким образом, для антитела, обладающего высокой физиологической активностью, используют большее количество эксципиента. С другой стороны, для какого-либо активного ингредиента(ов), который проявляет более низкую физиологическую активность, используют меньшее количество эксципиента.

Описанные выше антитела и композиции антител или композиции вакцин, содержащие по меньшей мере одно или комбинацию антител, описанных в настоящем документе, можно вводить для профилактического и терапевтического лечения вирусной инфекции ВИЧ.

Настоящее изобретение также относится к выделенным полипептидам, содержащим аминокислотные последовательности легких цепей и тяжелых цепей, перечисленных в табл. А, В и на фиг. 10А-10С; консенсусные последовательности для тяжелых и легких цепей SEQ ID NO: 1 и 2 и последовательности вставки SEQ ID NO: 3 и 4.

В других связанных вариантах осуществления изобретение относится к вариантам полипептидов, которые кодируют аминокислотные последовательности антител против ВИЧ, перечисленные в табл. А, В и на фиг. 10А-10С; консенсусные последовательности для тяжелых и легких цепей SEQ ID NO: 1 и 2; и последовательности вставки SEQ ID NO: 3 и 4. Эти варианты полипептидов имеют по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99% или более идентичность последовательностей по сравнению с полипептидной последовательностью по настоящему изобретению, как определяют с использованием способов, описанных в настоящем документе, (например, анализ BLAST с использованием стандартных параметров). Специалист в данной области учтет, что эти значения можно соответствующим образом корректировать для того, чтобы определять соответствующую идентичность белков, кодируемых, учитывая аминокислотное сходство и т.п.

Термин полипептид используют в его стандартном значении, т.е. последовательность аминокислот. Полипептиды не ограничены конкретной длиной продукта. Пептиды, олигопептиды и белки вклю

- 12 042696 чены в определение полипептида, и такие термины можно использовать взаимозаменяемо в настоящем документе, если конкретно не указано иное. Этот термин также включает постэкспрессионные модификации полипептида, например гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п., а также другие модификации, известные в данной области, как встречающиеся в природе, так и не встречающиеся в природе. Полипептид может представлять собой целый белок или его подпоследовательность. Конкретные полипептиды, представляющие интерес, в контексте настоящего изобретения представляют собой аминокислотные подпоследовательности, содержащие CDR, VH и V_L, способные связывать антиген или ВИЧ-инфицированную клетку.

Вариант полипептида, как термин используют в настоящем документе, представляет собой полипептид, который типично отличается от полипептида, конкретно описанного в настоящем документе, одной или несколькими заменами, делециями, добавлениями и/или инсерциями. Такие варианты могут быть природными или могут быть созданы синтетически, например, посредством модификации одной или нескольких из указанных выше полипептидных последовательностей по изобретению и оценки одной или нескольких биологических активностей полипептида, как описано в настоящем документе, и/или использования любого числа способов, хорошо известных в данной области.

Например, определенными аминокислотами можно заменять другие аминокислоты в структуре белка без значительной утраты его способности связывать другие полипептиды (например, антигены) или клетки. Поскольку связывающая способность и свойства белка определяют биологическую функциональную активность этого белка, определенные замены в аминокислотной последовательности можно выполнять в последовательности белка и, соответственно, в лежащей в его основе кодирующей последовательности ДНК, посредством чего получают белок с схожими свойствами. Таким образом, предполагают, что различные изменения можно выполнять в пептидных последовательностях раскрытых композиций или в соответствующих последовательностях ДНК, которые кодируют указанные пептиды, без значительной утраты их биологической полезности или активности.

Во многих случаях вариант полипептида содержит одну или несколько консервативных замен. Консервативная замена представляет собой замену, при которой аминокислотой заменяют другую аминокислоту, которая обладает схожими свойствами, так что специалист в области химии пептидов будет ожидать, что вторичная структура и гидрофобные свойства полипептида будут по существу не изменены.

Замены аминокислот в целом основаны на относительном сходстве заместителей боковых цепей аминокислот, например их гидрофобности, гидрофильности, заряда, размера и т.п. Образцовые замены, которые учитывают различные приведенные выше характеристики, хорошо известны специалистам в данной области и включают аргинин и лизин; глутамат и аспартат; серин и треонин; глутамин и аспарагин и валин, лейцин и изолейцин.

Гомология или идентичность последовательностей относится к процентной доле остатков в варианте полинуклеотидной или полипептидной последовательности, которые идентичны невариантной последовательности после выравнивания последовательностей и введения пропусков, в случае необходимости, чтобы достичь максимального процента гомологии. В конкретных вариантах осуществления варианты полинуклеотидов и полипептидов имеют гомологию полинуклеотидов или полипептидов по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 98% или по меньшей мере приблизительно 99% с полинуклеотидом или полипептидом, описанным в настоящем документе.

Такие последовательности вариантов полипептидов будут иметь 70% или больше (т.е. 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или больше) идентичность последовательностей с последовательностями, перечисленными в описании. В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полипептидным фрагментам, содержащим перекрывающиеся фрагменты различной длины из аминокислотных последовательностей, описанных в настоящем документе. Например, в этом изобретении предусмотрены пептидные последовательности, которые содержат по меньшей мере приблизительно 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150 или больше перекрывающихся пептидов из одной или нескольких последовательностей, описанных в настоящем документе, а также все промежуточные длины между ними.

Изобретение также включает последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие часть или все легкие и тяжелые цепи описанных патентоспособных антител, а также их фрагменты. Из-за избыточности генетического кода существуют варианты этих последовательностей, которые кодируют такие же аминокислотные последовательности.

Настоящее изобретение также относится к выделенным последовательностям нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептиды для тяжелых и легких цепей антител против ВИЧ, перечисленных в табл. А, В и на фиг. 10А-10С; консенсусные последовательности для тяжелых и легких цепей SEQ ID NO: 1 и 2 и последовательности вставки SEQ ID NO: 3 и 4.

В других связанных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к вариантам полинуклеотидов, которые кодируют пептидные последовательности тяжелых и легких цепей антител против ВИЧ, перечисленных в табл. А, В и на фиг. 10А-10С; консенсусные последовательности для тяжелых и

- 13 042696 легких цепей SEQ ID NO: 1 и 2 и последовательности вставки SEQ ID NO: 3 и 4. Эти варианты полинуклеотидов имеют по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99%, или большую идентичность последовательностей по сравнению с полинуклеотидной последовательностью по данному изобретению, определенной с использованием способов, описанных в настоящем документе, (например, анализ BLAST с использованием стандартных параметров). Специалист в данной области учтет, что эти значения можно соответствующим образом корректировать для того, чтобы определять соответствующую идентичность белков, кодируемых двумя нуклеотидными последовательностями, учитывая вырожденность кодонов, аминокислотное сходство, положение рамки считывания и т.п.

Термины нуклеиновая кислота и полинуклеотид используют взаимозаменяемо в настоящем документе, чтобы отослать к одноцепочечной или двухцепочечной РНК, ДНК или смешанным полимерам. Полинуклеотиды могут включать геномные последовательности, внегеномные и плазмидные последовательности, и сконструированные сегменты генов меньшего размера, которые экспрессируют или которые можно адаптировать для того, чтобы экспрессировать полипептиды.

Выделенная нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, которая по существу отделена от других геномных последовательностей ДНК, а также белков или комплексов, таких как рибосомы и полимеразы, которые в природе сопровождают нативную последовательность. Термин охватывает последовательность нуклеиновой кислоты, которую удалили из ее природного окружения, и включает рекомбинантные или клонированные ДНК изоляты и химически синтезированные аналоги или аналоги, биологически синтезированные с помощью гетерологичных систем. По существу чистая нуклеиновая кислота включает изолированные формы нуклеиновой кислоты.

Соответственно, это относится к нуклеиновой кислоте, как исходно выделяют, и не исключает генов или последовательностей, которые позже добавлены к выделенной нуклеиновой кислоте руками человека.

Вариант полинуклеотида, как термин используют в настоящем документе, представляет собой полинуклеотид, который типично отличается от полинуклеотида, конкретно описанного в настоящем документе, одной или несколькими заменами, делециями, добавлениями и/или инсерциями. Такие варианты могут встречаться в природе или их можно синтетически создавать, например, посредством модификации одной или нескольких полинуклеотидных последовательностей по изобретению и оценки одной или нескольких биологических активностей кодируемого полипептида, как описано в настоящем документе, и/или использования любого числа способов, хорошо известных в данной области.

Можно выполнять модификации в структуре полинуклеотидов по описанному изобретению и все еще получать функциональную молекулу, которая кодирует вариант или производное полипептида с желаемыми характеристиками. Когда желают изменить аминокислотную последовательность полипептида для того, чтобы создавать эквивалентный, или даже улучшенный, вариант или часть полипептида по изобретению, специалист в данной области обычно изменяет один или несколько кодонов кодирующей последовательности ДНК.

Как правило, варианты полинуклеотидов содержат одну или несколько замен, добавлений, делеций и/или инсерций, так что иммуногенные связывающие свойства полипептида, кодируемого вариантом полинуклеотида, по существу не ухудшены относительно полипептида, кодируемого полинуклеотидной последовательностью, конкретно изложенной в настоящем документе.

В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотидным фрагментам, которые содержат перекрывающиеся фрагменты различной длины из последовательности, идентичной или комплементарной одной или нескольким последовательностям, описанным в настоящем документе. Например, в настоящем изобретении предусмотрены полинуклеотиды, которые содержат по меньшей мере приблизительно 10, 15, 20, 30, 40, 50, 75, 10о, 150, 200, 300, 400, 500 или 1000 или больше смежных нуклеотидов из одной или нескольких последовательностей, описанных в настоящем документе, а также все промежуточные длины между ними, и охватывают любую длину между указанными значениями, такую как 16, 17, 18, 19 и т.д.; 21, 22, 23 и т.д.; 30, 31, 32 и т.д.; 50, 51, 52, 53 и т.д.; 100, 101, 102, 103 и т.д.; 150, 151, 152, 153 и т.д.; и включают все целые числа 200-500; 500-1000.

В другом варианте осуществления изобретения предусмотрены полинуклеотидные композиции, которые способны к гибридизации в условиях с жесткостью от умеренной до высокой с полинуклеотидной последовательностью, предоставленной в настоящем документе, или ее фрагментом или ее комплементарной последовательностью. Способы гибридизации хорошо известны в данной области молекулярной биологии. С целью иллюстрации подходящие умеренные жесткие условия для тестирования гибридизации полинуклеотида по данному изобретению с другими полинуклеотидами включают предварительное промывание в растворе 5х SSC, 0,5% SDS, 1,0 мМ ЭДТА (рН 8,0); гибридизацию при 50-60°C, 5х SSC, в течение ночи; с последующим промыванием два раза при 65°С. в течение 20 мин с использованием каждого из 2х, 0,5х и 0,2х SSC, содержащего 0,1% SDS. Специалист в данной области поймет, что жесткостью гибридизации можно легко манипулировать, например, посредством изменения содержания соли в

- 14 042696 растворе для гибридизации и/или температуры, при которой осуществляют гибридизацию. Например, в другом варианте осуществления подходящие очень жесткие условия гибридизации включают те, что описаны выше, за тем исключением, что температуру гибридизации повышают, например, до 60-65°С или 65-70°С.

В некоторых вариантах осуществления полипептид, кодируемый вариантом или фрагментом полинуклеотида, обладает такой же специфичностью связывания (т.е., специфически или предпочтительно связывается с тем же эпитопом или штаммом ВИЧ), что и полипептид, кодируемый нативным полинуклеотидом. В некоторых вариантах осуществления описанные полинуклеотиды, варианты, фрагменты и гибридизуемые последовательности полинуклеотидов кодируют полипептиды, которые имеют уровень связывающей активности по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 70% и по меньшей мере приблизительно 90% от такового для полипептидной последовательности, конкретной изложенной в настоящем документе.

Полинуклеотиды по описанному изобретению или их фрагменты, независимо от длины самой кодирующей последовательности, можно комбинировать с другими последовательностями ДНК, такими как промоторы, сигналы полиаденилирования, дополнительные сайты рестрикционных ферментов, множественные сайты клонирования, другие кодирующие сегменты и т.п., так что их общая длина может значительно варьировать. Используют фрагменты нуклеиновых кислот почти любой длины. Например, иллюстративные полинуклеотидные сегменты с общими длинами приблизительно 10000, приблизительно 5000, приблизительно 3000, приблизительно 2000, приблизительно 1000, приблизительно 500, приблизительно 200, приблизительно 100, приблизительно 50 пар оснований в длину и т.п. (включая все промежуточные длины) включены во многие реализации настоящего изобретения.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидные последовательности, предусмотренные в настоящем документе, используют в качестве зондов или праймеров для гибридизации нуклеиновых кислот, например, в качестве праймеров для ПЦР. Способность таких зондов нуклеиновых кислот к специфичной гибридизации с последовательностью, представляющей интерес, позволяет им обнаруживать присутствие комплементарных последовательностей в данном образце. Однако описанное изобретение охватывает другие варианты применения, такие как использование информации о последовательности для получения праймеров мутантного вида или праймеров для применения в получении других генетических конструкций. По существу, сегменты нуклеиновых кислот по описанному изобретению, которые содержат область последовательности непрерывной последовательности по меньшей мере приблизительно 15 нуклеотидов в длину, которая имеет такую же последовательность, как непрерывная последовательность 15 нуклеотидов в длину, описанная в настоящем документе, или комплементарную ей, являются особенно полезными. Более длинные непрерывные идентичные или комплементарные последовательности, например, приблизительно 20, 30, 40, 50, 100, 200, 500, 1000 (включая промежуточные длины), включая полноразмерные последовательности, и все длины между ними, также используют в некоторых вариантах осуществления.

Молекулы полинуклеотидов, имеющие области последовательностей, состоящие из непрерывных нуклеотидных фрагментов 10-14, 15-20, 30, 50 или даже 100-200 нуклеотидов или около того (также включая промежуточные длины), идентичные или комплементарные полинуклеотидной последовательности, описанной в настоящем документе, в частности, рассматривают в качестве зондов для гибридизации для использования, например, в саузерн- и нозерн-блоттинге и/или праймеров для использования, например, в ПЦР. Общий размер фрагмента, а также размер комплементарного фрагмента(ов) в конечном итоге зависит от предполагаемого использования или применения конкретного сегмента нуклеиновой кислоты. Фрагменты меньших размеров в целом используют в гибридизационных вариантах осуществления, где длина непрерывной комплементарной области может варьировать, например, между приблизительно 15 и приблизительно 100 нуклеотидами, но можно использовать непрерывные комплементарные фрагменты больших размеров, в соответствии с длинами комплементарных последовательностей, которые желают обнаруживать.

Использование зонда для гибридизации приблизительно 15-25 нуклеотидов в длину делает возможным формирование двойной молекулы, которая является как стабильной, так и избирательной. Можно использовать молекулы, имеющие непрерывные комплементарные последовательности во фрагментах больше чем 12 оснований в длину, хотя для того, чтобы повысить стабильность и избирательность гибрида и тем самым повысить качество и степень специфичности получаемых гибридных молекул. Можно использовать молекулы нуклеиновой кислоты, которые имеют комплементарные генам фрагменты 15-25 непрерывных нуклеотидов или даже длиннее, где это желательно.

Зонды для гибридизации выбирают из какой-либо части какой-либо из последовательностей, описанных в настоящем документе. Все, что требуется, это просмотреть последовательности, изложенные в настоящем документе, или какую-либо непрерывную часть последовательностей от приблизительно 1525 нуклеотидов в длину вплоть до и включая полноразмерную последовательность, которую хотят использовать в качестве зонда или праймера. Выбор последовательностей зондов и праймеров обусловлен различными факторами. Например, можно желать использовать праймеры в направлении концов общей последовательности.

- 15 042696

Кроме того, объем изобретения включает векторы, такие как векторы экспрессии, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты по изобретению. Клетки, трансформированные такими векторами, также включены в объем изобретения.

Настоящее изобретение также относится к векторам и клеткам-хозяевам, содержащим нуклеиновую кислоту по изобретению, а также к рекомбинантным способам получения полипептида по изобретению. Векторы по изобретению включают те, что способны к репликации в клетке или организме любого типа, включая, например, плазмиды, фаг, космиды и минихромосомы. В некоторых вариантах осуществления векторы, содержащие полинуклеотид по описанному изобретению, представляют собой векторы, подходящие для размножения или репликации полинуклеотида, или векторы, подходящие для экспрессии полипептида по настоящему изобретению. Такие векторы известны в данной области и коммерчески доступны.

Вектор включает челночные и векторы экспрессии. Типично, конструкция плазмиды также содержит точку начала репликации (например, точка начала репликации ColE1) и селективный маркер (например, устойчивость к ампициллину или тетрациклину), для репликации и отбора плазмид в бактериях, соответственно. Вектор экспрессии относится к вектору, который содержит необходимые управляющие последовательности или регуляторные элементы для экспрессии антител, содержащих фрагмент антитела по изобретению, в бактериальных или эукариотических клетках.

Как используют в настоящем документе, термин клетка может представлять собой какую-либо клетку, включая в качестве неограничивающих примеров эукариотические, многоклеточные виды (например, в противоположность одноклеточной дрожжевой клетке), такие как, но не ограничиваясь этим, клетку млекопитающего или клетку человека. Клетка может присутствовать в виде одного объекта или может составлять часть более крупного скопления клеток. Такое более крупное скопление клеток может включать, например, клеточную культуру (или смешанную или чистую), ткань (например, эндотелиальную, эпителиальную, слизистую или другую ткань), орган (например, легкое, печень, мышцу и другие органы), систему органов (например, кровеносную систему, дыхательную систему, желудочнокишечный тракт, мочевыделительную систему, нервную систему, покровную систему или другую систему органов) или организм (например, птицу, млекопитающее или т.п.).

Полинуклеотиды по изобретению можно синтезировать, целиком или частями, которые затем комбинируют, и вставлять в вектор с использованием стандартных способов молекулярной и клеточной биологии, включая, например, субклонирование полинуклеотида в линеаризованный вектор с использованием подходящих участков рестрикции и рестрикционных ферментов. Полинуклеотиды по описанному изобретению амплифицируют посредством полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидных праймеров, комплементарных каждой цепи полинуклеотида. Эти праймеры также содержат сайты расщепления рестрикционных ферментов для того, чтобы содействовать субклонированию в вектор. Компоненты реплицируемых векторов в целом включают, но этим не ограничиваются, одно или несколько из следующего: сигнальная последовательность, точка начала репликации и один или несколько маркерных или селективных генов.

Для того чтобы экспрессировать полипептид по изобретению, нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептид, или функциональные эквиваленты могут быть вставлены в подходящий вектор экспрессии, т.е. вектор, который содержит необходимые элементы для транскрипции и трансляции вставленной кодирующей последовательности. Способы, хорошо известные специалистам в данной области, можно использовать для того, чтобы конструировать векторы экспрессии, содержащие последовательности, которые кодируют полипептид, представляющий интерес, и подходящие транскрипционные и трансляционные управляющие элементы. Эти способы включают способы рекомбинантной ДНК in vitro, синтетические способы и генетическую рекомбинацию in vivo. Такие способы описаны, например, в Sambrook, J., et al. (1989), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, N.Y., и Ausubel, F.M. et al. (1989), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.

Настоящее изобретение также относится к наборам, которые можно использовать при осуществлении диагностических и прогностических анализов с использованием антител, полипептидов и нуклеиновых кислот по настоящему изобретению. Наборы по настоящему изобретению содержат подходящий контейнер, который содержит антитело против ВИЧ, полипептид или нуклеиновую кислоту по изобретению в меченой или немеченой форме. Кроме того, когда антитело, полипептид или нуклеиновую кислоту поставляют в меченой форме, подходящей для непрямого анализа связывания, набор дополнительно содержит реактивы для осуществления подходящего непрямого анализа. Например, набор может содержать один или несколько подходящих контейнеров, содержащих субстраты ферментов или средства для получения производных, в зависимости от свойств метки. Также могут быть включены контрольные образцы и/или инструкции. Настоящее изобретение также относится к наборам для обнаружения присутствия антител против ВИЧ или нуклеотидной последовательности антитела против ВИЧ по настоящему изобретению в биологическом образце посредством ПЦР или масс-спектрометрии.

Метка, как используют в настоящем документе, относится к поддающемуся обнаружению соединению или композиции, которая конъюгирована непосредственно или опосредованно с антителом с тем,

- 16 042696 чтобы создавать меченое антитело. Метку также можно конъюгировать с полипептидом и/или последовательностью нуклеиновой кислоты, описанной в настоящем документе. Метка может быть поддающейся обнаружению сама по себе (например, радиоизотопные метки или флуоресцентные метки) или, в случае ферментативной метки, может катализировать химическое изменение соединения субстрата или композиции, которое поддается обнаружению. Антитела и полипептиды по описанному изобретению также можно модифицировать для того, чтобы они содержали эпитопную метку или метку, например, для использования в очистке или диагностических применениях. Подходящее средство обнаружения включает использование меток, таких как, но не ограничиваясь этим, радионуклеотиды, ферменты, коферменты, флуорофоры, хемилюминофоры, хромогены, субстраты или кофакторы ферментов, ингибиторы ферментов, комплексы простетических групп, свободные радикалы, частицы, красители и т.п.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к диагностическим способам.

Диагностические способы в целом включают приведение биологического образца, полученного от пациента, например, такого как кровь, сыворотка, слюна, моча, мокрота, образец соскоба клеток или биопсия ткани, в контакт с антителом против ВИЧ и определение того, связывается ли антитело, предпочтительно, с образцом по сравнению с контрольным образцом или с предварительно определяемым пороговым значением, тем самым указывая на присутствие вируса ВИЧ.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способам обнаружения присутствия антител против ВИЧ по настоящему изобретению в биологическом образце от пациента. Способы обнаружения в целом включают получение от пациента биологического образца, например, такого как кровь, сыворотка, слюна, моча, мокрота, образец соскоба клеток или биопсия ткани, и выделение антител против ВИЧ или их фрагментов или нуклеиновых кислот, которые кодируют антитела против ВИЧ, и анализ присутствия антител против ВИЧ в биологическом образце. Также настоящее изобретение относится к способам обнаружения нуклеотидной последовательности антител против ВИЧ в клетке. Нуклеотидную последовательность антитела против ВИЧ также можно обнаруживать с использованием праймеров, описанных в настоящем документе. Присутствие антитела против ВИЧ в биологическом образце от пациента может быть определено с использованием известных рекомбинантных способов и/или с использованием масс-спектрометра.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу обнаружения антитела против ВИЧ, содержащего тяжелую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность, и легкую цепь, которая содержит высококонсервативную консенсусную последовательность, в биологическом образце, который включает получение содержащего иммуноглобулин биологического образца у млекопитающего, выделение антитела против ВИЧ из указанного образца и идентификацию высококонсервативных консенсусных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи. Биологический образец может представлять собой кровь, сыворотку, слюну, мочу, мокроту, образец соскоба клеток или биопсию ткани. Аминокислотные последовательности могут быть определены посредством известных в данной области способов, включая, например, ПЦР и масс-спектрометрию.

Термин оценка включает любую форму измерения и включает определение того, присутствует элемент или нет. Термины определение, измерение, оценивание, оценка и анализ используют взаимозаменяемо, и они включают количественное и качественное определение. Оценка может быть относительной или абсолютной. Оценка присутствия включает определение количества чего-либо присутствующего и/или определение того, присутствует оно или отсутствует. Как используют в настоящем документе, термины определение, измерение, оценивание и анализ используют взаимозаменяемо, и они включают как количественное, так и качественное определение.

II. Способ снижения репликации вируса.

Кроме того, предусмотрены способы снижения повышения титра вируса ВИЧ, репликации вируса, пролиферации вируса или количества вирусного белка ВИЧ у индивида. По другому аспекту способ включает введение индивиду эффективного количества антитела против ВИЧ для того, чтобы снижать повышение титра ВИЧ, репликацию вируса или количество белка ВИЧ одного или нескольких штаммов или изолятов ВИЧ у индивида.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу снижения репликации вируса или распространения ВИЧ-инфекции на дополнительные клетки-хозяева или ткани, который включает приведение клетки млекопитающего в контакт с антителом или его частью, которое связывается с антигенным эпитопом на gp120.

III. Способ лечения.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, инфицированного вирусной инфекцией, например, такой как ВИЧ, который включает введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции, которая содержит антитела против ВИЧ, описанные в настоящем документе. Согласно одному из вариантов осуществления способ лечения млекопитающего, инфицированного ВИЧ, включает введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции, которая содержит антитело по настоящему изобретению или его фрагмент. Композиции по изобретению могут содержать больше чем одно антитело, обладающее раскрытыми ха- 17 042696 рактеристиками (например, множество или пул антитела). Она также может включать другие нейтрализующие антитела против ВИЧ, как известно в данной области, например, но этим не ограничиваются,

VRC01, PG9 и b12.

Доказано, что пассивная иммунизация является эффективной и безопасной стратегией профилактики и лечения вирусных заболеваний. (См., например, Keller et al., Clin. Microbiol. Rev. 13:602-14 (2000); Casadevall, Nat. Biotechnol. 20:114 (2002); Shibata et al., Nat. Med. 5:204-10 (1999) и Igarashi et al., Nat. Med. 5:211-16 (1999), каждая из которых включена в настоящий документ в качестве ссылки). Пассивная иммунизация с использованием моноклональных антител человека предоставляет стратегию незамедлительного лечения для неотложной профилактики и лечения ВИЧ.

Индивиды с риском связанных с ВИЧ заболеваний или нарушений включают пациентов, которые вступали в контакт с инфицированным человеком или которые подвергались воздействию ВИЧ какимлибо другим образом. Введение профилактического средства может происходить до манифестации симптомов, характерных для связанных с ВИЧ заболевания или нарушения, так что заболевание или нарушение предотвращают или, альтернативно, задерживают его прогрессирование.

Для лечения человека и не относящихся к человеку пациентов in vivo пациенту вводят или предоставляют фармацевтический состав, содержащий антитело против ВИЧ по изобретению. Когда используют для терапии in vivo, антитела по изобретению вводят пациенту в терапевтически эффективных количествах (т.е. количествах, которые устраняют или снижают вирусную нагрузку пациента). Антитела вводят пациенту-человеку в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение, например, в виде болюса или посредством непрерывного вливания в течение определенного периода времени, посредством внутримышечного, интраперитонеального, интрацереброспинального, подкожного, внутрисуставного, интрасиновиального, интратекального, перорального, местного или ингаляционного пути. Антитела можно вводить парентерально, когда возможно, в место клеток-мишеней или внутривенно. В некоторых вариантах осуществления антитело вводят посредством внутривенного или подкожного введения. Терапевтические композиции по изобретению можно вводить пациенту или индивиду системно, парентерально или локально. Указанные выше параметры для оценки успешного лечения и улучшения при заболевании легко измерять посредством стандартных процедур, знакомых врачу.

Для парентерального введения антитела можно формулировать в стандартной дозированной инъецируемой форме (раствор, суспензия, эмульсия) вместе с фармацевтически приемлемым, парентеральным наполнителем. Примеры таких наполнителей включают, но этим не ограничиваются, воду, физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и 5% сывороточный альбумин человека. Неводные наполнители включают, но этим не ограничиваясь, жирные масла и этилолеат. В качестве носителей можно использовать липосомы. Наполнитель может содержать незначительные количества добавок, таких как вещества, которые повышают изотоничность и химическую стабильность, например, такие как буферы и консерванты. Антитела можно формулировать в таких наполнителях в концентрациях приблизительно от 1 до 10 мг/мл.

Доза и схема дозирования зависят от различных факторов, которые легко определит врач, таких как природа инфекции, например ее терапевтический индекс, пациент и анамнез пациента. В целом, пациенту вводят терапевтически эффективное количество антитела. В некоторых вариантах осуществления вводимое количество антитела находится в диапазоне приблизительно от 0,1 приблизительно до 50 мг/кг массы организма пациента. В зависимости от типа и тяжести инфекции, приблизительно от 0,1 приблизительно до 50 мг/кг массы тела (например, приблизительно 0,1-15 мг/кг/доза) антитела составляет начальную рассматриваемую дозу для введения пациенту, например, или посредством одного или нескольких раздельных введений или посредством непрерывного вливания. Контроль за динамикой терапии легко осуществлять с помощью стандартных способов и анализов, а также основываясь на критериях, известных врачу или другим специалистам в данной области. Указанные выше параметры для оценки успешного лечения и улучшения заболевания можно легко измерять с помощью стандартных процедур, знакомых врачу.

Другие терапевтические схемы можно комбинировать с введением антитела к ВИЧ по настоящему изобретению. Комбинированное введение включает совместное введение, использование отдельных составов или единого фармацевтического состава и последовательное введение в любом порядке, где предпочтительно имеет место период времени, в течение которого оба (или все) активные средства одновременно проявляют свои биологические активности. Такая комбинированная терапия может вести к синергическому терапевтическому эффекту. Указанные выше параметры оценки успешного лечения и улучшения заболевания можно легко измерять посредством стандартных процедур, знакомых врачу.

Термины лечение или облегчение используют взаимозаменяемо, и они относятся как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или предупредительным мерам; где цель состоит в том, чтобы предотвращать или замедлять (облегчать) целевое патологическое состояние или нарушение. Нуждающиеся в лечении включают тех, кто уже имеет нарушение, а также тех, кто склонен иметь нарушение, или тех, у кого нарушение должно быть предотвращено. Индивида или млекопитающее успешно лечат от инфекции, если после получения терапевтического количества антитела согласно способам по настоящему изобретению пациент показывает поддающееся наблюдению и/или измерению снижение

- 18 042696 или отсутствие одного или нескольких из следующего: снижение числа инфицированных клеток или отсутствие инфицированных клеток; снижение процента инфицированных клеток среди всех клеток и/или определенная степень облегчения одного или нескольких симптомов, связанных с конкретной инфекцией; пониженная болезненность и смертность и улучшение в вопросах качества жизни. Указанные выше параметры оценки успешного лечения и улучшения заболевания легко измерять посредством стандартных процедур, знакомых врачу.

Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству антитела или лекарственного средства, эффективного для того, чтобы лечить заболевание или нарушение у индивида или млекопитающего.

Введение в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами включает одновременное (конкурентное) и последовательное введение в любом порядке.

Носители, как используют в настоящем документе, включают фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы, которые не токсичны для клетки или млекопитающего, подвергаемых их воздействию в используемых дозах и концентрациях. Часто физиологически приемлемый носитель представляет собой водный рН буферный раствор. Примеры физиологически приемлемых носителей включают, но ими не ограничиваясь, буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая в качестве неограничивающих примеров аскорбиновую кислоту; низкомолекулярные (меньше чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как, но ими не ограничиваясь, сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как, но ими не ограничиваясь, поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как, но ими не ограничиваясь, глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая в качестве неограничивающих примеров глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие средства, такие как, но ими не ограничиваясь, ЭДТА; сахароспирты, такие как, но не ограничиваясь этим, маннит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как, но ими не ограничиваясь, натрий; и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как, но ими не ограничиваясь, TWEEN; полиэтиленгликоль (PEG) и PLURONICS.

Там, где предусмотрены диапазоны значений, понятно, что изобретение охватывает каждое промежуточное значение, до десятой доли единицы нижнего предела, пока контекст явно не диктует иное, между верхним и нижним пределом этого диапазона и какое-либо другое объявленное или промежуточное значение в этом объявленном диапазоне. Также изобретение включает верхние и нижние пределы этих диапазонов, которые могут быть независимо включены в меньшие диапазоны, при условии исключения какого-либо конкретно исключенного предела в этом объявленном диапазоне. Когда объявленный диапазон включает один или оба предела, диапазоны, исключающие любой или оба этих включенных предела, также включены в изобретение.

Пока не определено иным образом, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, в котором их обыкновенно понимает специалист в той области, к которой относится это изобретение. Несмотря на то, что какие-либо способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в настоящем документе, также можно использовать на практике или при тестировании настоящего изобретения, описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, указанные в настоящем документе, включены в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме.

Как используют в настоящем документе и в приложенной формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число, пока контекст не диктует очевидно иное.

Публикации, описанные в настоящем документе, предоставлены только для их раскрытия перед датой подачи настоящего изобретения. Ничего в настоящем документе не должно рассматриваться как признание того, что настоящее изобретение не может датировать такую публикацию задним числом на основании более раннего изобретения. Кроме того, предоставленные даты публикации могут отличаться от фактических дат публикаций, которые могут требовать независимого подтверждения.

Каждая из заявок и патентов, цитированных в этом тексте, а также каждый документ или литературный источник, патентная или непатентная литература, цитируемая в каждой из заявок и патентов (в том числе во время ведения каждого выданного патента; цитируемые в заявке документы), и каждая из РСТ и иностранных заявок или патентов, соответствующих и/или запрашивающих приоритет какой-либо из этих заявок и патентов, и каждый из документов, которые цитируют или к которым отсылают в каждом из цитируемых в заявке документов, в явной форме включены в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме. В более общем смысле документы или литературные источники цитируют в этом тесте, или список цитируемой литературы перед формулой изобретения; или в самом тексте; и каждый из этих документов или литературных источников (цитируемых в настоящем документе литературных источников), а также каждый документ или литературный источник, цитируемый в каждом из цитируемых в настоящем документе литературных источников (включая любые описания, инструкции производителей и т.д.), настоящим в явной форме включены в настоящий документ в качестве ссылки.

Следующие неограничивающие примеры служат тому, чтобы дополнительно иллюстрировать настоящее изобретение.

- 19 042696

Пример 1.

Материалы, способы и оборудование.

Образцы.

Образцы от людей собирали после подписания информированного согласия в соответствии с согласованными с Institutional Review Board (IRB) протоколами всеми участвующими учреждениями. Пациента 1 выбирали из когорты нонпрогрессоров, которую вели в Aaron Diamod AIDS Research Center, New York. Пациентов 3 и 8 выбирали из группы отборных контроллеров, которую вели в Ragon Institute в Boston. Пациентов 1, 3 и 8 отбирали, основываясь на их широкой нейтрализующей активности сыворотки против стандартной панели изолятов ВИЧ. Пациента 12 выбирали из когорты протокола G из International Aids Vaccine Initiative, основываясь на широкой нейтрализующей активности сыворотки.

Окрашивание, сортировка отдельных клеток и клонирование антител.

Осуществляли окрашивание и сортировку отдельных клеток 2СС-core и gp140 специфичных Ig+ В-клеток памяти (J.F. Scheid et al., Nature, 458, 636 (Apr 2, 2009)). В кратком изложении, CD19+ В-клетки обогащали из мононуклеарных клеток периферической крови с использованием магнитных бус MACS против CD19 человека (Miltenyi Biotec) и впоследствии окрашивали антителами против CD20 человека и против IgG человека (Becton Dickinson), а также биотинилированного 2СС-core (В. Dey et al., PLoS Pathog 5, e1000445 (May, 2009)) или тримера YU2-gp140 (R. Diskin, P.M. Marcovecchio, P.J. Bjorkman, Nat. Struct. Mol. Biol. 17, 608 (May, 2010)) с последующим обнаружением с использованием связанного со стрептавидином фикоэритрина (РЕ, Beckton Dickinson). Отдельные клетки сортировали на клеточном сортере FACSAria III (Becton Dickinson), исключая клеточные дубликаты, в 96-луночные планшеты для ПЦР (Denville), содержащие 4 мкл/лунка ледяного 0,5х фосфатно-солевого буфера (PBS), содержащего 10 мМ DTT, 8 ед. RNAsin® (Promega), 0,4 ед. 5'-3' Prime RNAse Inhibidor™ (Eppendorf). Планшеты запечатывали пленкой Microseal® 'F' (BioRad), незамедлительно замораживали на сухом льду перед хранением при -80°С.

Осуществляли синтез кДНК и амплификацию Ig (H. Wardemann et al., Science, 301, 1374 (Sep 5, 2003)) со следующими модификациями.

Вместо использования исходных наборов праймеров, первую и вторую иммуноглобулинспецифичные ПЦР осуществляли с использованием праймеров, описанных в табл. 1, в полугнездовом подходе. Осуществляли клонирование продуктов ПЦР тяжелой и легкой цепей в соответствующие им векторы экспрессии и 100% идентичность клонированных экспрессионных плазмид с исходным продуктом ПЦР подтверждали посредством секвенирования до экспрессии антител в клетках HEK 293.

ELISA.

96-луночные планшеты для ELISA с высоким связыванием (Costar) покрывали в течение ночи 100 нг/лунка очищенных антигенов (gp140, gp120, gp41, gp120^core и 2СС-core) (В. Dey et al., PLoS Pathog 5, el000445 (May, 2009)) и мутантных белков (gp120 D368R, gp120 I420R) в PBS. После промывания планшеты блокировали 2 ч с использованием 2% BSA, 1 мкМ ЭДТА, 0,05% Tween-PBS (блокирующий буфер) и затем инкубировали 2 ч с антителами IgG, разведенными 4 мкг/мл и несколько последующих разведений 1:4 в PBS. После промывания планшеты проявляли посредством инкубации в течение 1 ч с антителами козы, конъюгированными с пероксидазой хрена, против IgG мыши (Jackson ImmunoReseach) (0,8 мкг/мл в блокирующем буфере) и посредством добавления 100 мкл хромогенного субстрата пероксидазы хрена (раствор ABTS, Invitrogen). Оптические плотности измеряли на 405 нм (OD405 _nm) с использованием считывателя микропланшетов для ELISA (Molecular Devices). Вычитали фоновые значения, полученные посредством инкубации только PBS в покрытых лунках. Антитела IgG тестировали на полиреактивность (Н. Mouquet et al., Nature, 467, 591 (Sep 30, 2010)), и их считали полиреактивныим, когда они распознавали по меньшей мере два структурно различных антигена из четырех тестируемых; оцДНК, дцДНК, инсулин и LPS. Пороговые значения для реактивности определяли посредством использования контрольных антител mGO53 (отрицательные), eiJB40 (слабо положительные) и ED38 (сильно положительные).

Анализ нейтрализации: осуществляли скрининг нейтрализации (D.C. Montefiori, Curr Protoc. Immunol. Chapter 12, Unit 12 11 (Jan, 2005)). Вкратце, нейтрализацию обнаруживали как снижение экспрессии репортерного гена люциферазы после одного раунда инфекции в клетках Tzm-bl. Для того чтобы исключать неспецифическую противовирусную активность в образцах антител, MuLV (вирус лейкемии мышей) использовали в качестве отрицательного контроля.

Клоноспецифическая идентификация плазматических клеток костного мозга.

Плазматические клетки костного мозга окрашивали антителами против CD138 и против CD19 человека (Becton Dickinson) после очистки фиколлом мононуклеарных клеток из аспиратов костного мозга с использованием Ficoll-Paque (GE Healthcare). Осуществляли массовую сортировку CD138+ CD19+ плазматических клеток человека на клеточном сортере FACSAriaIII (Becton Dickinson) и выполняли выделение РНК на 100000 клеток с использованием реактива Trizol LS (Invitrogen) согласно инструкциям производителей. Осуществляли обратную транскрипцию РНК с использованием обратной транскриптазы Superscript III (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителей. Затем кДНК подвергали

- 20 042696 иммуноглобулинспецифичной ПЦР со следующими модификациями: 1 мкл кДНК амплифицировали в 2 раундах гнездовой клоноспецифической ПЦР тяжелой цепи иммуноглобулина с использованием первого раунда прямого лидерного праймера и обратного праймера константной области, представленных в табл. 1, с последующими клоноспецифическими прямым и обратным праймерами, разработанными на основе результатов секвенирования из анализа отдельных клеток. Продукты ПЦР очищали в геле и клонировали в векторы ТОРО ТА (Invitrogen) согласно инструкциям производителей. Осуществляли скрининг колоний посредством ПЦР с клоноспецифическими праймерами и секвенировали.

Поверхностный плазмонный резонанс.

Все эксперименты осуществляли с использованием Biacore T100 (Biacore, Inc) в подвижном буфере HBS-EP+ (Biacore, Inc) при 25°С, как описано ранее (Mouquet 2010). Белки YU-2 gp140 и 2СС-core в концентрации 12,5 мкг/мл иммобилизовали на чипах СМ5 (Biacore, Inc.) посредством связывания аминов при рН 4,5, что вело к уровню иммобилизации 100 RU. Для кинетических измерений на gp140- и 2СС-core-дериватизированных чипах IgG впрыскивали через проточные кюветы при 700 нМ и 4 последовательных разведениях 1:2 в подвижном буфере HBS-EP+ (Biacore, Inc.) при скоростях потока 40 мкл/мин с 3 мин ассоциации и 5 мин диссоциации. Поверхность датчика регенерировали между каждым экспериментом с использованием 30-секундного впрыска 10 мМ глицин-HCl рН 2,5 со скоростью потока 50 мкл/мин. Скорость диссоциации (kd (c^-1)), скорость ассоциации (ka (М^-1 с^-1) и константы связывания (KD (M) или KA (M^-1) вычисляли после вычитания фоновых сигналов (связывание с контрольными проточными кюветами и сигнал подвижного буфера HBS-EP+) с использованием программного обеспечения Biacore T100 Evaluation с использованием кинетического анализа и модели связывания 1:1. Сенсограммы, представленные на фиг. 2 и 8, получены из обработки данных Biacore с использованием программного обеспечения Scrubber 2 (Center for Biomolecular Interaction Analysis, University of Utah).

Индукция сайта CD4i.

293Т трансфицировали gp160^BAL.²⁶Ac или gp160^YU.2Ac в конструкции рМХ-IRES-GFP (Pietzsch et al. 2010) с использованием Fugene™6 (Roche) при соотношении плазмида:Fugene 1:2. После 48 ч клетки 293T промывали в PBS и открепляли с использованием буфера для диссоциации клеток, не содержащего трипсин, (Gibco) и ресуспендировали в концентрации 10⁷ кл/мл в буфере FACS (1 х PBS, 2% FBS, 2 мМ ЭДТА). sCD4 (Progenies Pharmaceuticals, Inc.) и добавляли мАТ в экспрессирующие gp160 клетки 293Т в серии разведений 1:4, начиная с конечной концентрации 40 мкг/мл. mGO представляет собой отрицательное контрольное антитело, которое не связывается с gp160Δс (Н. Mouquet et al., Nature, 467, 591 (Sep 30, 2010)). После инкубации в течение 15 мин на льду клетки делили и окрашивали в течение 25 мин на льду с использованием меченных Alexa647 CD4-индуцированных мАТ (3-67; (J.F. Scheid et al., Nature, 458, 636 (Apr 2, 2009)) или меченных Alexa647 контрольных мАТ (т.е. PG16; L.M. Walker et al., Science, 326, 285 (Oct 9, 2009)) или 2G12 для gp160^YU.2 и 2G12 для gp160^BAL.26). Мечение антител осуществляли посредством использования Alexa Fluor® 647 Microscale Protein Labeling Kit (Invitrogen). Клетки анализировали на клеточном анализаторе LSRFortessa (BD Bioscience).

Кристаллизация.

IgG 3BNC60 экспрессировали посредством временной экспрессии в клетках HEK293-6E, а фрагмент Fab получали посредством расщепления папаином (R. Diskin, P.M. Marcovecchio, P.J. Bjorkman, Nat. Struct. Mol. Biol. 17, 608 (May, 2010). Скрининг кристаллизации проводили при 20°С посредством паровой диффузии в нанолитровых сидячих каплях с использованием робота для кристаллизации Mosquito™ (TTP LabTech) на планшетах для кристаллизации MRC (Jena Bioscience). Комбинировали Fab 3BNC60 в концентрации 9,5 мг/мл с резервуарным раствором в соотношении 1:1 для того, чтобы создавать 400 нл капли. Начальные кристаллизационные хиты получали с использованием PEGRx HT™ (Hampton Research) кристаллизационного сита и дополнительно оптимизировали вручную. Кристаллы, подходящие для сбора данных, росли после нескольких недель в 11,7% полиэтиленгликоле 20000, 0,1 М ацетате натрия рН 5,0, 100 мМ тартрате калия/натрия, 20 мМ сульфате лития, 10 мМ N-циклогексил-2аминоэтансульфоновой кислоте (CHES) рН 9,5 в моноклинической группе симметрии P2₁ с двумя Fab в асимметричном элементе. Кристаллы вымачивали в резервуарном растворе с добавлением 15% глицерина в течение 2 ч перед погружением в резервуарный раствор с добавлением 30% глицерина и мгновенного охлаждения в жидком азоте. Дифракционные данные собирали в канале синхротронного излучения 12-2 Stanford Synchrotron Radiation Lightsource (SSRL) при 100 К с использованием детектора Pilatus 6M. Данные индексировали, интегрировали и масштабировали с использованием XDS W. Kabsch, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 66, 125 (Feb, 2010) (табл. 8). Молекулярное замещение проводили с использованием Phaser с доменами V_H и C_H1 из противоопухолевого антитела СТМ01 (код PDB 1AD9) и с доменами VL и CL антитела против gp120 b13 (код PDB 3IDX) в качестве поисковых моделей. Построение и уточнение моделей до разрешения 2,65 А выполняли итеративно с использованием Phenix P. Emsley, В. Lohkamp, W.G. Scott, K. Cowtan, Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 66, 486 (Apr, 2010) и Coot (P. Emsley, B. Lohkamp, W.G. Scott, K. Cowtan, Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 66, 486 (Apr, 2010)). Структуру уточняли с использованием целевой функции максимального правдоподобия и некристаллографических ограничений симметрии. Конечная модель (R_work=20,7%; R_free=25,7%) содержит 6478 атомов

- 21 042696 белка, 146 молекул воды и 28 атомов сахаров (табл. 8). 91,9, 7,6 и 0,5% остатков находились в благоприятных, допустимых и недопустимых областях карты Рамачандрана соответственно. Структурный анализ и визуализацию выполняли с использованием PyMol (The PyMOL Molecular Graphics System, версия 1.3, Schrodinger, LLC). Структура 3BNC60 состоит из остатков 3-205 для легкой цепи (включая первый Nацетилглюкозамин в N-связанном углеводе, прикрепленном к Asn72) и 2-217 для тяжелой цепи. Порядок остатков на концевых остатках и остатков 133-140 в домене CH1 был нарушен.

Масс-спектрометрия.

IgG очищали от сыворотки с использованием ProteinG Sepharose (GE Healthcare) согласно инструкциям производителей. Затем IgG расщепляли иммобилизованным папаином (Pierce) и расщепленные смеси фрагментов Fab-Fc инкубировали с насыщающими количествами биотинилированного белка 2CC-core. Стрептавидин, связанный с Dynabeads (Invitrogen), добавляли после инкубации в течение 15 мин при комнатной температуре и подвергали 10 раундам промывания в фосфатно-солевом буфере (Gibco). Связанные Fab фрагменты элюировали литий-додецил-сульфатным буфером (Invitrogen) при 95°С и чистоту образца подтверждали SDS-электрофорезом в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием серебром или окрашиванием кумасси перед анализом посредством масс-спектрометрии.

Выделенные Fab фрагменты восстанавливали дитиотреитолом, алкилировали с использованием йодоацетамида, разрешали посредством одномерного электрофореза в геле на 4-12% геле NuPAGE Novex Bis-Tris (Invitrogen) и окрашивали кумаси синим (Thermo Fisher). Фрагменты Fab вырезали из геля и расщепляли с использованием 200 нг трипсина (Promega). Получаемые пептиды выделяли с использованием смолы для обращенной фазы (PORS 20 R2, Applied Biosystem) и элюировали с использованием аликвоты 40% ацетонитрила в 0,5% уксусной кислоте и второй аликвоты 80% ацетонитрила в 0,5% уксусной кислоте. Ацетонитрил удаляли с использованием SpeedVac (Thermo Fisher Scientific) и аликвоты остающегося раствора загружали под давлением на самоуплотняющуюся колонку PicoFrit® (New Objective, Woburn, MA) со встроенной головкой испускателя (360 мкм O.D., 50 мкм I.D., 10 мкм головка), набитую 6 см материала С18 для обращенной фазы (ReproSil-Pur C18-AQ, 3 мкм гранулы из Dr. Maisch GmbH) и сопрягали с ВЭЖХ системой Agilent серии 1200 (Agilent) или с масс-спектрометром LTQ Orbitrap™ XL или масс-спектрометром LTQ Orbitrap Velos™ (Thermo Fisher Scientific) с использованием самодельного источника микроэлектрораспыления. Пептиды элюировали в масс-спектрометр со следующим градиентом: от 0 до 5% В за 5 мин, 40% В за 125 мин, 60% В за 150 мин, 100% В за 165 мин (А = 0,1 М уксусная кислота, В = 70% ацетонитрил в 0,1 М уксусной кислоте, скорость потока 90 нл/мин). Оба прибора работали в зависимом от данных режиме и для обоих масс-спектрометров задавали целевое значение 5е5 ионов и разрешение 60000 (при 400 m/z). Для анализа на LTQ Orbitrap™ XL за полным сканированием следовало 8 MS/MS сканирований для 8 наиболее распространенных ионов из этого полного сканирования. Пептиды (только зарядовые состояния >1) выделяли с окном 2 Да, целевым окном 1е4 ионов, диссоциировавших через CAD (нормализованная энергия столкновения = 35, Q активации = 0,25, время активации = 30 мс) и массу анализировали в LTQ. Для анализа на LTQ Orbitrap™ Velos за полным сканированием следовали 10 MS/MS сканирования на разрешении 7500 для 10 наиболее распространенных ионов из непосредственно предшествующего полного сканирования. Пептиды (только зарядовое состояние >2) выделяли с окном 3 Да, целевым окном ионов 2е5, диссоциировавших через HCD (нормализованная энергия столкновения = 40, время активации = 0,100 мс) и массу анализировали в Orbitrap. Для любого прибора ионы, выбранные для MS/MS, ставили в список исключений на 30 с. Проводили поиск получаемых MS/MS спектров в базе данных Human IPI и служебной базе данных специфических IgG пациентов с использованием Xtandem!, пептиды автоматически сравнивали с триптическими пептидами в базе данных Human IPI и служебной пациентоспецифической базе данных. Совпадения пептидов, соответствующие специфическим IgG пациентов, подтверждали вручную.

Множественное выравнивание последовательностей.

Все множественные выравнивания последовательностей проводили с использованием CLUSTALW2 с параметрами по умолчанию (весовая матрица: GONNET для белков и UIB для ДНК, открытие пропуска = 10, продолжение пропуска = 0,1). Расцвеченные выравнивания создавали с использованием пакета TeXshade.

Консенсус выравнивания.

Консенсусные последовательности для множества последовательностей создавали, основываясь на идентичности и сходстве между остатками (>=70%). Аминокислоты группировали по сходству следующим образом: FYW, ILVM, RK, DE, GA, ST и NQ.

Филогенетические зародышевые деревья.

Родство между последовательностями создавали с использованием способа ближайшего связывания. Консенсусное дерево способом бутстрэпа, которое получали из 1000 реплик, брали для того, чтобы представить родство. Сворачивали ветви, соответствующие разбиениям, воспроизведенным меньше чем в 50% реплик бутстрэпа. Процентная доля реплицированных деревьев, в которых связанные последовательности, кластеризовались вместе в бустрэп-тесте (1000 реплик), показана после ветвей. Деревья изображают в масштабе, при этом длина ветвей в тех же единицах, что и эволюционные расстояния, исполь- 22 042696 зуемые для построения филогенетического дерева. Эволюционные расстояния вычисляли с использованием способа числа различий, и они приведены в единицах числа различий аминокислот на одну последовательность. Все неопределенные положения удаляли для каждой пары последовательностей. Эволюционный анализ проводили в MEGA5.

Вычисление отношения R/S.

Последовательности ДНК накладывали на выравнивания белков для вычисления отношения замещения/замены. Все положения пропусков удаляли из анализа. Анализ отношения R/S проводили с использованием скриптов на Perl.

Пример 2.

Выделение антител против ВИЧ.

Для того чтобы определить, ограничено ли клонирование антитела против ВИЧ по причине соматических мутаций, разрабатывали новую серию праймеров для того, чтобы избегать этой потенциальной проблемы (табл. 1). Новый набор праймеров тестировали посредством сортировки В-клеток, которые связываются с коровым белком ВИЧ gp120, у которого отсутствуют петли V1-3 и который содержит пару стабилизирующих дисульфидных связей (2СС-core). В отличие от затравки с измененной поверхностью, используемой для клонирования VRC01, затравка 2СС-core также делает возможным захват антител на CD4-индуцированном сайте связывания корецептора (CD4i).

При непосредственном сравнении новый набор праймеров повышал выход цепей IgH по сравнению с начальным набором праймеров (фиг. 4A). Антитела, полученные с использованием нового набора праймеров, содержали больше мутаций (среднее 35,6 против 19,8, р=<0,0001 и максимум 85 против 50 для IgH) и содержали клоны, которые не были найдены с использованием исходного набора праймеров (фиг. 4A). Для того чтобы определить, спасают ли новые праймеры VRC01-подобные антитела от клеток, которые сортировали с использованием YU2 gp140, проверяли замороженные образцы кДНК от того индивидуума, которого уже тщательно проверяли с использованием исходного набора праймеров без продуцирования каких-либо связанных с VRC01 клонов. В 80 лунках находили три антитела, соответствующие вариантам VRC01, определенную посредством последовательностей IgH и IgL (фиг. 5А и 5В). Пришли к заключению, что VRC01-подобные антитела захватывал тример gp140, а также что праймеры, которые специально разрабатывали для клонирования антител с высоким уровнем мутаций, захватывали относительно большую фракцию антител против ВИЧ из В-клеток памяти пациентов с высокими титрами нейтрализующих антител широкого спектра.

Четырех неродственных ВИЧ-инфицированных индивидуумов, включая 2 европейских, 1 испанского и 1 африканского донора, показывающих высокие титры нейтрализующих антител широкого спектра, проверяли с использованием затравки 2СС-core, включая 2 индивидуумов, предварительно клонированные антитела которых не могли объяснять их серологическую активность (табл. 2 и фиг. 6А и 6В). 576 антител, представляющих 201 различный уникальный и разнородный клон, получали из начальной популяции 1,5x105 IgG⁺ B-клеток памяти (табл. 3).

Пример 3.

Специфичность связывания антител против ВИЧ.

Размер клонов антител, захваченных посредством затравки 2СС-core, различался широко в диапазоне 2-76 разнородных членов (табл. 3). Для того чтобы определить, связывались ли с шипом ВИЧ антитела, захваченные посредством 2СС-core, осуществляли ELISA с использованием YU2 gp120 на репрезентативных членах каждого размноженного клона. Все тестируемые антитела связывались с gp120 (табл. 3).

Сайт связывания антител на шипе ВИЧ картировали с использованием мутантных белков, которые затрагивают или CD4bs (gp120 (D368R)), или CD4-индуцированный сайт связывания корецептора (CD4i, gp120 (I420R)). Как сообщалось, X. Wu et al., Science, 329, 856 (Aug 13, 2010), VRC01 классифицировали как антитело против CD4bs, поскольку оно чувствительно к мутации D368R, но по причине близости сайта CD4i оно также показывает некоторую чувствительность к мутации I420R. NIH45-46, который представляет собой вариант VRC01, и антитела 3BNC60, 8ANC131 и 12А12, показывающие паттерны ELISA, которые схожи с VRC01 (эти клональные члены отбирали, основываясь на нейтрализующей активности, табл. 3). Другие клоны, включая 1В2530 и 8ANC195, в равной мере чувствительны к обеим мутациям, и их нельзя точно классифицировать на основе только ELISA.

Для того чтобы определить, являются ли антитела полиреактивными, осуществляли ELISA на очищенной оцДНК, дцДНК, инсулине и LPS. 63% тестированных антител против 2СС-core были полиреактивными. Пришли к заключению, что большинство антител, захваченных посредством 2СС-затравки, распознают или CD4bs, или сайт CD4i на gp120 и многие также являются полиреактивными.

Пример 4.

Соматическая гипермутация.

Соматическая гипермутация необходима для развития высокой аффинности связывания антигена, и в некоторых случаях она вносит вклад в полиреактивность антител против ВИЧ. Для того чтобы тестировать, если это имеет место, специфические антитела против 2СС-core с высоким уровнем мутаций, четыре репрезентативных антитела реверсировали в соответствующую зародышевую линию. Реверсиро- 23 042696 вание вело к полной потере связывания антигена в ELISA для всех четырех протестированных клонов и к потере полиреактивности.

Пример 5.

Нейтрализация ВИЧ.

Нейтрализующую ВИЧ активность измеряли в стандартизированных анализах in vitro с использованием начальной панели из восьми вирусов, содержащих три яруса 1 клады А, В и С и пять ярусов 2 клады В Env вариантов псевдовирусов (M.S. Seaman et al., J. Virol. 84, 1439 (Feb, 2010)). Нейтрализующую активность антител сравнивали с VRC01 и IgG очищенной сыворотки от доноров (фиг. 1А, табл. 4 и фиг. 6). Антитела, показывающие высокие уровни нейтрализующей активности, дополнительно тестировали на панели из 15 дополнительных ярусов 2 клады А, В, С, D, G, AG и АЕ Env вариантов псевдовирусов (фиг. 1В, табл. 5), включая пять вирусов, которые устойчивы к VRC01 (фиг. 1В и табл. 5).

90% всех протестированных антител показывали некоторую нейтрализующую активность и шесть клонов содержали варианты антител, которые показывали высокие уровни эффективности и ширины (фиг. 1А-С и табл. 4 и 5). Эти клоны также были наиболее распространенными среди тех, которые захвачены посредством 2СС-затравки у каждого из четырех исследованных пациентов (табл. 3). Наиболее впечатляющее из новых антител, 3BNC117, относящееся к клону с 76 членами, показало среднюю IC₈₀ на комбинированной группе из 14 яруса 2 вирусов 0,5 мкг/мл по сравнению с 1,8 мкг/мл для VRC01 (фиг. 1С, табл. 4 и 5).

Только 4 из 20 протестированных вирусов были более чувствительны к VRC01, чем 3BNC117, тогда как 14 были более чувствительны к 3BNC117, включая DU172.17, который полностью устойчив к VRC01, но чувствителен к 3BNC117 (фиг. 1В и С). NIH45-46, новый вариант VRC01, более эффективен, чем VRC01, на 15 из 20 протестированных вирусов, но все еще менее эффективен, чем 3BNC117 (фиг. 1В и С и табл. 4 и 5).

Имела место значительная вариация в ширине и эффективности нейтрализации среди членов пяти клонов наиболее эффективных нейтрализующих антител. Например, 3BNC156, вариант 3BNC117, нейтрализовал только два вируса в начальной панели, и в значительно более высоких концентрациях, чем 3BNC117 (фиг. 1А и табл. 4) и 3BNC55, другой вариант, находился между двумя другими, показывающими активность против шести вирусов при средней IC₅₀ 4 мкг/мл (фиг. 1 и табл. 4). Наконец, наиболее активные антитела имели высокий уровень гипермутаций. Среднее число мутаций для верхних 10 антител составляло 72 для V_H и 45 для V_L, и это связано с их шириной и эффективностью (табл. 4 и 5). Ревертирование мутировавших остатков к зародышевой линии вело к полной потере нейтрализующей активности для всех протестированных антител.

Пример 6.

Идентификация диагностических пептидов.

Приведенная выше стратегия клонирования захватывала антитела, полученные посредством антигенсвязывающих В-клеток памяти, но эти клетки не продуцировали циркулирующие антитела, и вместо этого они брали начало из плазматических клеток в костном мозге. Однако сходный антиген не может быть использован в качестве затравки для захвата плазматическими клетками, поскольку они не экспрессируют поверхностный Ig A. (Radbruch et al., Nat. Rev. Immunol. 6, 741 (Oct, 2006)). Кроме того, родство между плазматическими клетками в костном мозге и циркулирующими В-клетками памяти не определяется точно. Для того чтобы определить, найдены ли также антитела, клонированные из В-клеток памяти, в компартменте плазматических клеток костного мозга, экспрессирующие CD138 плазматические клетки очищали от парных образцов костного мозга от 2 из 4 исследуемых индивидуумов и использовали ПЦР для специфической амплификации генов IgV_H для более эффективных антител, клонированных из В-клеток памяти у этих индивидуумов. Далее приведены клоноспецифические праймеры для RU01:

CTGCAACCGGTGTACATTCTCAAGTGCAACTGGTGC (прямой) (SEQ ID

NO:584), CTGCAACCGGTGTACATTCTCAGGTCCATTTGTCACAG (прямой), (SEQ

ID NO:585) TGCGAAGTCGACGCTGACGAGACAGTGACCTGC (обратный) (SEQ ID

NO:586), TGCGAAGTCGACGCTGAAGAGACAATAATTTG (обратный) (SEQ ID

NO:587), TGCGAAGTCGACGCTGACGAGACAATAACT (обратный) (SEQ ID

NO:588) и для RU10: CTGCAACCGGTGTACATTTTCAGGGGCACTTGGTG (прямой) (SEQ ID NO:589), TGCGAAGTCGACGCTGAGGTGACGATGACCGTG (обратный) (SEQ ID NO: 590) .

Члены выбранных клонов и большое число дополнительных вариантов легко идентифицировали у обоих пациентов.

Для того чтобы подтвердить, что эти антитела также можно найти в сыворотке, IgG, очищенные от сыворотки тех же двух и одного дополнительного индивидуума, адсорбировали на затравке 2СС-core и осуществляли масс-спектрометрию элюированных IgG (фиг. 1D, 7 и 10А-10С). Во всех случаях находили диагностические пептиды для высокоактивных вариантов антител (фиг. 7, 10А-10С). Пришли к выводу, что эффективные антитела против ВИЧ широкого спектра, клонированные из В-клеток памяти, также находили в компартменте плазматических клеток костного мозга и в циркулирующих IgG пациентов с

- 24 042696 высокими титрами нейтрализующих антител широкого спектра в сыворотке.

Пример 7.

Связывающие характеристики антитела против ВИЧ.

Для того чтобы определить, связана ли аффинность антитела к gp120 с нейтрализующей активностью, связывание высокоактивных антител, выбранных клональных родственников и ревертированных клеток-предшественников зародышевой линии сравнивали с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (фиг. 2А и 2В, 8 и табл. 6).

Наилучшие нейтрализующие антитела показывали аффинности (KA) в диапазоне ξ10⁷-10¹² (M^-1) на тримерах YU2 gp140 и ^107-10¹¹ (M^-1) на 2СС-core (фиг. 2А и 2В и табл. 6). В соответствии с их описанными нейтрализующей эффективностью и шириной 3BNC66, 3BNC156 и 3BNC55 показывали более низкие аффинности на тримерах YU2 gp140, чем 3BNC117, но, к удивлению, аффинности к 2СС-core не коррелируют с нейтрализующей активностью (фиг. 1, 8, табл. 4 и 6). Связывание с помощью SPR не обнаруживали для любого из тестированных ревертированных к зародышевой линии антител (фиг. 2В, табл. 6). Приходили к выводу, что антитела против ВИЧ, захваченные посредством YU2 2СС-core, склонны проявлять более высокую аффинность к соответствующему тримеру gp140, чем к 2СС-core.

Когда VRC01 связывается с шипом ВИЧ, это создает большие конформационные изменения, которые имитируют связывание CD4 и обнажают сайт CD4i. В отличие от этого, Ь12 и большинство других известных антител против CD4bs не вызывают подобного.

Для того чтобы определить, является ли это общим признаком высокоактивных антител, HIV-BAL.26AC или -YU2 gp160Δс экспрессировали на поверхности клеток HEK 293Т и связывание CD4i антитела измеряли в присутствии или отсутствии CD4 или антител против CD4bs (фиг. 2С). За одним исключением, все высокоактивные тестированные антитела походили на CD4 и VRC01 в том отношении, что они облегчали связывание антитела против CD4i с ВИЧ-BAL.26 или YU2 gp160Δс или с обоими (фиг. 2С).

Только высокоактивное антитело, которое не имело эту общую характеристику, 8ANC195, не было традиционным антителом против CD4bs в том отношении, что оно было в равной мере чувствительно к мутациям D368R и I420R (табл. 3). Кроме того, оно отличалось от других высокоактивных антител своим паттерном нейтрализации: оно не нейтрализует какой-либо из вирусов яруса 1 и показывает эффективную активность против Н086.8, вируса клады В, устойчивого ко всем другим протестированным антителам, включая 3BNC117, VRC01 и Ь12 (фиг. 1А и В и табл. 4 и 5).

Пример 8.

Идентичность последовательностей антител против ВИЧ.

Для того чтобы определить, обладают ли высокоактивные антитела против CD4bs общими признаками последовательностей, 10 лучших антител: выравнивали два варианта, каждый из пяти независимо полученных клонов антител от пяти различных пациентов (фиг. 3). Сравнение областей IgV_H выявляло высококонсервативную консенсусную последовательность, покрывающую 68 остатков IgVH (фиг. 3А). Консенсус IgVH содержал шесть контактных остатков VRC01-gp120, включая VRC01-Arg 71, который имитирует ключевое взаимодействие Arg59_CD4 и Asp368_gp120 (фиг. 3А). Кроме того, консенсус, содержащий шесть контактных остатков, полностью консервативен в обоих близко родственных зародышевых генах IgVH (VH1-2 и VH1-46), которые дают начало всем антителам в этом классе (фиг. 3А и 3В).

Кодоны, кодирующие консенсусные остатки, обладали высоким уровнем соматических мутаций в десяти выбранных антителах, тем не менее аминокислотные последовательности были консервативны (фиг. 9). Отношение замен к молчащим мутациям в консенсусных остатках находилось в диапазоне 0,71,7, тогда как оно составляло 3,5-22 в неконсенсусных остатках, указывая на то, что консервативность консенсуса является результатом жесткого отбора (табл. 7). В отличие от тяжелой цепи, легкая цепь VRC01 образует только 8 из всего 32 контактов с gp120. В соответствии с ее более ограниченной ролью сравнение последовательностей легкой цепи тех же антител обнаружило менее обширный консенсус, покрывающий 53 остатка IgV_L, включая три контактных остатка VRC01-gp120 (фиг. 3В). Наконец, подобно тяжелым цепям, легкие цепи возникали из ограниченного набора генов зародышевой линии: 2 получали из IgK1D-33, 2 из IgK3-11 и один из IgL1-47 (фиг. 3В и табл. 3). Антитело 8ANC195, которое отличалось от других в нескольких важных аспектах, не соответствовало консенсусу полностью и не возникало из родственных тяжелых или легких цепей (фиг. 3А и 3В). Приходили к выводу, что имеет место значительная конвергенция последовательностей среди высокоактивных агонистических антител против CD4bs (HAAD).

Пример 9.

Кристаллическая структура Fab 3BNC60.

Для того чтобы определить, является ли структура антител у различных пациентов также консервативной, разрешали кристаллическую структуру Fab 3BNC60 с разрешением 2,65 А и сравнивали ее с VRC01. Структура выявила четыре домена V_H, C_H1, V_L и C_L классического Fab и определяющие комплементарность области (CDR) в V_H и V_L, которые формируют антигенсвязывающий участок. Два Fab в асимметричном элементе 3BNC60 были почти идентичны; однако конформация остатков 74-78 в петле,

- 25 042696 соединяющей тяжи D и Е, слегка варьировала из-за различного химического окружения, сформированного посредством контактов кристаллической решетки.

Наложение доменов VH из 3BNC60 и VRC01 в VRC01-gp120 сокристаллической структуре (Т. Zhou et al., Science, 329, 811 (Aug 13, 2010)) давало среднее квадратичное отклонение (rmsd) 1,3 А (вычислено для 111 Са атомов) с основными различиями, заключенными в остатках 58-65 CDR2 (нумерация 3BNC60). Наложение структур показывало консервативность области контакта, распознающей gp120. Например, Arg72_3BNC60 принимал схожую конформацию, как у Arg71_VRC01, который имитирует важный солевой мостик, обычно образуемый между Arg59_CD4 и Asp368_gp120. Кроме того, Trp47_3BNC60 принимал схожую конформацию, как Trp47_VRC01, остаток, который контактирует с gp120 и вовлечен в сложную сеть взаимодействий ароматических и алифатических остатков, которые стабилизируют конформации CDRH3 и CDRL3. Gln65_3BNC60, который соответствует Gln64_VRC01, находится в сегменте остатков (остатки 58-65), который отличается по структуре от VRC01. Конформация этой области 3BNC60, которая вовлечена в контакт решетки в кристаллах, вероятно меняется при связывании gp120, поскольку он будет сталкиваться с CD4-связывающей петлей на gp120.

Наложение доменов V_L 3BNC60 и VRC01 давало rmsd 0,9 А (вычислено для 95 Са атомов) и показывало, что некоторые из контактирующих с gp120 остатков структурно консервативны; Tyr91_3BNC60 и Glu91a_3BNC60 принимали схожие конформации, как у Tyr91_VRC01 и Glu96_VRC01, которые контактировали с петлей D gp120 через полярные взаимодействия. В целом, эти структурные сравнения показывают, что 3BNC60 связывает gp120 с той же архитектурой, как наблюдали для связывания VRC01.

Пример 10.

Консенсусная последовательность антитела против ВИЧ.

В приведенных выше экспериментах определяли класс агонистических антител против CD4bs, HAAD, которые имеют общие консенсусные последовательности IgV_H и IgV_L, включая восемь контактных остатков между VRC01 и шипом ВИЧ (фиг. 3А и 3В). У пяти различных доноров, отобранных по их высокому уровню серологической активности против ВИЧ, эти антитела брали начало только из двух близкородственных генов зародышевой линии IgVH и трех IgVL, которые соответствуют HAAD консенсусу: VH1-2 и VH1-46 различаются только 7 аминокислотами, ни одна из которых не является частью консенсуса (фиг. 3А). Несмотря на обширную соматическую гипермутацию, консенсусные остатки сохранялись в своей форме зародышевой линии.

Единственное исключение из консенсуса, 8ANC195, отличалось от других во множестве аспектов, что показывает, что оно может иметь уникальный способ распознавания антигена: отсутствие Arg в тяжелой цепи, который имитирует необходимый сайт контакта Arg59_CD4 и Asp368_gp120; уникальный нейтрализующий паттерн; и неспособность содействовать связыванию антитела против CD4i. Это антитело представляет собой одно из двух различных высокоактивных антител, возникающих у одного пациента, дающих дополнительное подтверждение идее о том, что серологическая нейтрализующая активность является комбинаторной.

- 26 042696

Таблица А

SEQ ID NO:	Антитело	Аминокислотная последовательность тяжелой цепи
5	8A253HC	QGQLVQSGGGLKKPGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTAYNFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRPDDTAVYYCARDGLGEVAPDYRYGIDVWGQGS TV IVTAASTKG
6	8A275HC	QGLLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
7	8ABM11	FQGHLVQSGGGVKKPGTSVTLSCLASEYTFTEFTIHWIRQ APGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYRFQDRLSLRRDRSTGTVF MELRSLRTDDTAVYYCARDGLGELAPAYHYGIDAWGQGTT VIVTSASTS
8	8 ABM 12	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSAST
9	8ABM13	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEDTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTS
10	8ABM14	GHLVQSGGGXKKPGTSVTISCLASEYTFTEFTIHRIRQAP GQGPLWLGLIKGSGRLMTSYGFQDRLSLRRDRSTGTVEME LRSLRTDDTAVYYCARDGLGELAPAYHYGIDVWGQGTTVI VTSASTS

- 27 042696

11	8ABM2 0	GVHFQGHLVQSGGGVKKPGSSVTISCLASEYTFTEFTIHW IRQAPGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYRFQDRLSLRRDRSTG TVFMELRGLRIDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDVWGQ GTTVIVTSASTS
12	8ABM2 4	FQGQLVQSGGGVKKPGSSVTISCLASEYTFTEFTIHWIRQ APGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYGFQDRLSVRRDRSTGTVF MELRSLRTDDTAVYYCARDGLGELAPAYHYGIDVWGQGTT VIVTSASTS
13	8ABM2 6	QGQLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTS
14	8ABM2 7	QGHLVQSGXEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSXYAIGWVRQA PGQGLEWMGGIIPILGT TNYAQRFQGGVTITADE S TNTAY MDVS S LRS DD TAVYYCAKAPYRPRGS GNYYYAMDVWGQGT TVIVSSASTS
15	8ANC105HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
16	8ANC116HC	QGQLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVSSASTKG
17	8ANC127HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLVSEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
18	8ANC131HC	QGQLVQSGGGLKKPGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTAYNFQDRLRLRRDRSTGTVFM ELRGLRPDDTAVYYCARDGLGEVAPDYRYGIDVWGQGS TV IVTAASTKG
19	8ANC134HC	QGQLVQSGGGVKKPGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPVWLGLIKRSGRLMTSYKFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRLDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGS TV

- 28 042696

		IVTSASTKG
20	8ANC13HC	QGQLVQSGGGVKKPGASVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTAYKFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRPEDTAVYYCARDGLGEVAPDYRYGIDVWGQGSTV IVSAASTKG
21	8ANC171HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
22	8ANC18	GVHFQGHLVQSGGGVKKPGSSVTISCLASEYTFTEFTIHW IRQAPGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYRFQDRLSLRRDRSTG TVFMELRGLRIDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDVWGQ GSTVIVTSASTS
23	8ANC182HC	QGQLVQSGGGVKKPGTSVTISCLASEYTFTEFTIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTAYRFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRNLRMDDTAVYYCARDGLGELAPAYQYGIDVWGQGTTV IVSSASTKG
24	8ANC192HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
25	8ANC22HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEDTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
26	8ANC26HC	QGQLVQSGGGVKKPGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPVWLGLIKRSGRLMTSYKFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRLDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGSKV IVTPASTKG
27	8ANC2HC	QGQLVQSGGGVKKLGTSVTIPCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
28	8ANC30HC	QGQLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM

- 29 042696

		ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
29	8ANC37HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
30	8ANC40HC	QGHLVQSGGGVKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVTSASTKG
31	8ANC41HC	QGQLVQSGGGVKKTGTSVTISCLASEYTFTEFTIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTANRFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRSLRIDDTAVYYCARDGLGELAPAYHYGIDVWGQGTTI IVTSASTKG
32	8ANC45HC	QGQLVQSGGGVKKTGTSVTISCLASEYTFTEFTIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTANRFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRSLRIDDTAVYYCARDGLGELAPAYHYGIDVWGQGTTI IVTSASTKG
33	8ANC50HC	QGQLVQSGGGVKKPGTSVTISCLASEYTFTEFTIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTAYRFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRNLRMDDTAVYYCARDGLGELAPAYQYGIDVWGQGTTV IVSSASTKG
34	8ANC53HC	QGQLVQSGGGGKKLGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYQFQDRLSLRRDRSTGTVFM ELRGLRVDDTAVYYCARDGLGEVAPAYLYGIDAWGQGTTV IVSSASTKG
35	8ANC88HC	QGQLVQSGGGVKKPGTSVTISCLASEYTFNEFVIHWIRQA PGQGPLWLGLIKRSGRLMTSYKFQDRLNLRRDRSTGTVFM ELRGLRPDDTAVYYCARDGLGEVAPDYRYGIDVWGQGS TV IVTAASTKG
36	8ANC103HC	QVQLQQWGSGLLKPSETLSLTCAVYGGSFRSYYWNWIRQS PGKGLEWIGEVSHSGSTNYNPALKSRVTISVDTSKNQFSL KVKSVTAADTALYYCSRGRGKRCSGAYCFAGYFDSWGQGG LVWSSASTKG
37	8ANC106HC	E VQLVE S GGGWE PGE S LRL S CAAS GET FRS YDMFWVRQA

- 30 042696

		TGKSLEWVSAIGIAGDTYYSGSVKGRFTISRENARTSLYL QLSGLRVEDSAVYFCVRGSPPRIAATEYNYYYGLDVWGQG TTVSVFSASTKG
38	8ANC107HC	VVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYVVNWVRQA PGQGLEWMGGMIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
39	8ANC108HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYVVNWVRQA PGQGLEWMGGIIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADEPKNTVY LDFNSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
40	8ANC109HC	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSEHYMSWIRLA PGKGLEWLSYISSSTRTTYSADSVRGRFTISRDTAKQLLF LHMSSLRAEDTAVYYCVRLYGGINGWFDQWGQGTLVSVSS ASTKG
41	8ANC10HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGGSFSNYAFSWVRQA PGEGLEWMGRIIPIFGTAKYTQKLQGRVTITADKFTSTVY MELSSLRSEDTAIYYCASLHQGPIGYTPWHPPPRAPLGQS VCG
42	8ANC111HC	QVQLVE S GAEVKKPGASVKVS CKAS GYTFTSHDINWVRQA TGQGLEWMGWMNPNSGDTGYAHKFQGRVTMTRNTPISTAY MELSSLRSEDTAVYYCARGRATSRNTPWAHYYDSSGYYGA GDYWGQGTLVTVS SAS TKG
43	8ANC112HC	QVQLVE S GGGWQPGRS LRL FCAAS G FAFNT YGMHWVRQA PGKGLEWVAVTWHDGSQKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRAEDTAIYYCASDQGGFDDSSGYFAPGGMDVWGR GTTVIVSSAPTKG
44	8ANC113HC	QVQLVE S GAE LRKPGE S LEIS CKAS GYS FS S HWIGWARQM PGKGLEWMGIIYPGDSNTIYS PS FQGQVTISADKSINTAY LQWSSLKASDTAMYFCASNYHDYFYWGQGTLVTVSSASTK G
45	8ANC114HC	EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG

- 31 042696

46	8ANC115HC	QVQLVQSGAE VRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYWNWVRQA PGQGLEWMGG11PIEGIAKYAQKFQDRVTMTADE PKNTVY LDFNSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
47	8ANC117HC	EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
48	8ANC11HC	QVFVQLVQSGGGLVQPGGSVRLSCTASGFLFSTYSMNWVR QAPGKGLEWVSSISTTSNYIYYADSVKGRFTISRSNGQGS LYLQLNSLRVEDTAVYYCARDTKVGAPRQDCYAMDLWGQR DHGHRLLSFHQGPIGLPPGALLQ
49	8ANC121HC	QVQLLESGPGLVTPSGTLSLACAVSGASISSSHWWTWVRQ SPGKGLEWIGEIDRRGTTNYNPSLRSRVTILLDNSKNQFS LSLRSVTAADTAVYYCTKVYAGLFNERTYGMDVWGHGTTV LVSSASTKG
50	8ANC126HC	QVQLVE S GAE VRKPGS S LKVS CKS S GGT FS RYWNWVRQA PGQGLEWMGG11PIEGIAKYAQKFQDRVTMTADE S KNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
51	8ANC130HC	QVQLLQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSINWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDDEAIYEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
52	8ANC132HC	QVQLVQSGTEVQKPGASVKVSCKTSGYTFSKYYIHWVRQA PGQGLEWVGRINTDSGGTDYAEKFQGRVTMTRDTSITTVY LEMRGLTSDDTAAFYCARGPPHAGGWTIYYYGLDVWGQGT SVIVSSASTKG
53	8ANC133HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGHTLSELSINWVRHV PGKGLEWMGGLDPEDGEAIHEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY VELSSLRSEDTAMYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
54	8ANC136HC	E VQLVE S GGGWQPGRS LRL S CAAS GFTFSHHGIHWVRQA PGEGLEWVAVISEDGTNIHYEDSVRGRFTISRDNSKNTVD LQMNSLRAEDTAVYYCASLISMRDGDAFDLWGQGTRVTVS

- 32 042696

		SASTKG
55	8ANC137HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYWNWVRQA PGQGLEWMGG11PIEGIAKYAQKFQDRVTMTADE S KNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
56	8ANC139HC	QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQA PGKGLEWVS SISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNS LY LQMNSLRAEDTAVYYCAREGSYYYGMDVWGQGTTVTVSSA STKG
57	8ANC140HC	EVQLVQS GGGLVQPGRS LRLS CAAS GET FDDYAMHWVRQA PGKGLEWVSGISWNSGTIGYADSVRGRFTISRDDAKSSLY LQMNSLRTEDTALYYCAKDGWVGSGSSTLRGSDYWGQGTL VTVSSASTKG
58	8ANC142HC	QIHLVQSGTDVKKPGSSVTVSCKAYGVNTFGLYAVNWVRQ APGQSLEYIGQIWRWKSSASHHFRGRVLISAVDLTGSSPP ISSLEIKNLTSDDTAVYFCTTTSTYDQWSGLHHDGVMAFS SRGQGTLISVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTYGLAHVL
59	8ANC143HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYWNWVRQA PGQGLEWMGG11PIEGIAKYAQKFQDRVTMTADE PKNTVY LDFNSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
60	8ANC144HC	QLQLQESGPGLVKPWETLVLTCSVSGGSISSGDYYWGWIR QSPGKGPEWIGNIFYSSGNTYYNTSLKSRVTISVDVSKNR FSLKLTSMTAADTAVYYCGRLSNKGWFDPWGQGTLVSVSS ASTKG
61	8ANC145HC	QVQLLE S GGGLVQRGGS LRL S C TAS G FVFNNYWMTWVRQA PGNGLEWVANIDQDGSEKHYLDSVKGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAIYYCARVRFKVTAWHRFDSWGQGDLVTV SSTSTKG
62	8ANC146HC	LVQLLQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDDEAIYEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
63	8ANC147HC	QVQLVESGGGLGQPGGSLRLSCAASGFTFRNYAMSWVRQA AGKGLEWVSGVSGGGDTTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLY

- 33 042696

		LQMNNLRAEDTAVYYCAKDKGVWGSSDFDYWGQGTLVTVS SASTKG
64	8ANC148HC	QVHLVQSGAEVKKPGASVRVSCKASGYTFTTYGISWVRQA PGQGLEWMGWISAHSGDTNYAQKLQARVTMTTDTSTNTAY MELRSLTSDDTAVYYCARDRPRHYYDRGGYYSPFDYWGQG TLVTVSSASTKG
65	8ANC149HC	QVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNIFAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFAS PNYAQRFQGRVTITADE STS TVH MELSSLRSEDTAIYYCAKDAHMHIEEPRDYDYIWGTSPYY FDYWGQGTLVTVS SASTKG
66	8ANC14HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDSEDGEAFYKQNFQGRVTMTEDTSTDTAY MELRRLRSEDTAVYYCATADRFKVAQDEGLFVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
67	8ANC150HC	QVQLLQSGGEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDDEAIYEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
68	8ANC151HC	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQA PGKGLEWVSYISGSSYTIYYADSVRGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRDEDTAVYFCARATPPNPLNLYNYDSSGSSFDYW GQGTLVTVSSASTKG
69	8ANC153HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYWNWVRQA PGQGLEWMGGMIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
70	8ANC154HC	QVQLVE S GAE VRKPGS S LKVS CKS S GGT FS RYWNWVRQA PGQGLEWMGG11PIEGIAKYAQKFQDRVTMTADE PKNTVY LDFNSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
71	8ANC155HC	QVQLVQS GAEIKKPGE S LKISCKAS GYT FNDYWIGWVRQM PGKGLEWMGIFYPDDSDSNYSPSFQGRVTISADKSITTAY LQWSTLKASDSAMYFCARLLGDSGAFDIWGQGTMVIVSSA STKG
72	8ANC156HC	EVQLVESGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRFWNWVRQA

- 34 042696

		PGQGLEWMGGMIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
73	8ANC157HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
74	8ANC158HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRFWNWVRQA PGQGLEWMGGMIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
75	8ANC160HC	QVQLVQS GGGWQPGRS LRL S CAAS GFTFSHHGIHWVRQA PGEGLEWVAVISEDGTNIHYEDSVRGRFTISRDNSKNTVD LQMNSLRAEDTAVYYCASLISMRDGDAFDLWGQGTRVTVS SASTKG
76	8ANC161HC	EVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFKNAWMSWVRQA PGKGLEWVGHIKSKTDGGTIDYAAPVKGRFTISRDDSKNT LYLQMNSLKIEDTAVYYCTTDIGSGRGWDFHYYDSNDWGQ GTLVTVSSASTKG
77	8ANC162HC	EVQLVQSGGGWQPGRSLRLSCWSGFTFSSFTFHWVRQA PGKGLEWVAGMSFHATYIYYADSVKGRFTISRDDSQDTLY LEMDSLRSEDTAIYYCARDPGIHDYGDYAPGAFDYWGQGS PVTVSSASTKG
78	8ANC163HC	LVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGHTLSELSINWVRHV PGKGLEWMGGLDPEDGEAIHEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY STLSVWAPVAAAMYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
79	8ANC164HC	EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYSISWVRQA PGQGLEWMGGIIPIFATTHYGQKFQGRIKITADKSTSTAY MELSRLRSEDTAVYYCARDREFYFYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKG
80	8ANC165HC	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYAGSFSGYYWTWIRQP PGKGLEWIGEVNHGGSTNYNPSLKSRVTLSVDTSKNQFSL KLTSVTAADTAVYYCARVSRYDFWSGNYGSYGLDVWGQGT TVTVSSASTKG

- 35 042696

81	8ANC166HC	WQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRFWNWVRQA PGQGLEWMGGMIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
82	8ANC168HC	LVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYSLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDSEDGEAIYKQNFQGRVTMTEDTSTDTAY MELSRLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLFVIFDYWGQG TTGHRLLSLHQGPHRLYSLGTLLSRAPIVQTHMA
83	8ANC169HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
84	8ANC16HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PIEGLEWMGG TIPIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
85	8ANC173HC	QVQLVQWGAGLLKPLETLSLTCAVYGGSFNGYFWSWIRQT PGKGLEWIGEINHGGSANFNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSL KLASVTAADTAIYYCARGRITMVRGDPQRGGVRMDVWGQG TSVTVSSASTKG
86	8ANC174HC	QVQLMQSGAEVKRPGASVKVSCKAFRHSLNNLGISWIRRA PGRGLEWLGWINVYEGNTKYGRRFQGRVTMTTDRSTNTVS MELRSLTSDDTAVYYCARDNHFWSGSSRYYYFGMDVWGQG TTVIVSSASTKG
87	8ANC175HC	QVQLVQS GGGLVQPGE S LRL S C TAS G FT FS S YNMNWVRQA PGKGLEWISYISDKSKNKYYADSVRGRFTISRDNAQNSLF LQMSSLRDEDTAVYYCTREGPQRSFYFDYWGQGIQVTVSS ASTKG
88	8ANC176HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNHYWSWIRQP PGKGLEWIGYIYHSGNINYKSSLKSRATISIDTSNNQFSL KLS SVIAADTAVYYCARNFGPGS PNYGMDVWGQGT TVTVS SASTKG
89	8ANC177HC	WQLVQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGDFYWSWIR QPPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRLTISVDTSKNQF SLRLSSVTAADTAVYYCARDLNSRIVGALDAFDIWGQGTM

- 36 042696

		VTVSSASTKG
90	8ANC178HC	QVQLVESGGALVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYAMSWVRQA PGKGLEWVSAISRSGGS TYYADSVKGRFTISIDNSNNTLY LQMNSLRVEDTAVYYCAKREAFYYGAGGYGMDVWGQGTTV TVSSASTKG
91	8ANC179HC	EVQLVE S GGGLVKPGGS LRL S CEAS G FT FTNAWMNWVRQA PGKGLEWVGRIKSQTHGGTTRYAAPVKGRFTISRDDSKHT LYLQMDRLTTEDTAVYYCTGTITGSTFYYYGMDVWGQGTT VTVSPASTKG
92	8ANC17HC	EVQLVESGGGLLQPGGSLRLSCAASGFSFNDFEMNWVRQA PGKGLEWVSYISNDGTMIHYADSVKGRFTISRDNAKKSLF LQMNSLRAEDTAVYYCARLAEVPPAIRGSYYYGMDVWGQG TTVTVASASTKG
93	8ANC180HC	QVQLQESGPGLLRPLETLSLTCSVSGGSIRGYFWSWVRQP AGRGLEWIGRIYSSGTTRFNPSLKSRVRLSIDTAKSEVSL NITSVTAADSASYFCAGTSPVHGGLDLWGLGLRVTVSSAS TKG
94	8ANC181HC	HLVQSGTEVKKPGSSVTVSCKAYGVNTFGLYAVNWVRQAP GQSLEYIGQIWRWKSSASHHFRGRVLISAVDLTGSSPPIS SLEIKNLTSDDTAVYFCTTTSTYDQWSGLHHDGVMAFSSW GQGTLISVSAASTKG
95	8ANC184HC	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDDEAIYEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
96	8ANC185HC	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHWMHWVRQA PGKGLVWVSRIHSDGRSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLY LQMNSLRAEDTAVYYCARGAAVFGWIIGGMDLWGQGTTV TVSSASTKG
97	8ANC186HC	E VQ L VE S G G G WQ P G G S L RL S CAAS G FM FKN YAMH W VRQ P PGKGLEWVAVIWYGGRDQNYADSVKGRFTISRDDSDNTLY LQMNSLRAGDTAVYFCARNSQVGRLMPAAGVWGQGTLVTV SSASTKG
98	8ANC187HC	EVQLVESGGGLIQRGGSLRLSCVASGFPVSDNHMSWVRQA PGKGLEWVSIIYSDGGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYL

- 37 042696

		QMNSLRATDTAVYYCARDPGFHYGLDVWGQGTTVTVSSAS TKG
99	8ANC188HC	WQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFRSYWMSWVRQA PGRGLEWVANIKQDGSEKYYADSVKGRFTISRDNTKNSLY LQMNSLRAEDTAVFYCASRGDRYGPIDYWGQGTLVTVSSA STKG
100	8ANC191HC	WQLVESGTEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGSDISWVRQA PGQGLEWMGGIIPMFDIENHAEKFRGRLTITAVKSTGAAY MELSSLRSEDAAVYYCARSSGNYDFAYDIWGQGTRVIVSS AS TKG
101	8ANC193HC	EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG TIPIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
102	8ANC194HC	EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFRNFAMSWVRQA PGKGLEWVS SISGSGGS TYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRGEDTAVYFCAKGVGYDILTGLGDAFDIWGQGTV VAVSSASTKG
103	8ANC195HC	QIHLVQSGTEVKKPGSSVTVSCKAYGVNTFGLYAVNWVRQ APGQSLEYIGQIWRWKSSASHHFRGRVLISAVDLTGSSPP ISSLEIKNLTSDDTAVYFCTTTSTYDKWSGLHHDGVMAFS SWGQGTLISVSAASTKG
104	8ANC196HC	WQLVQSGTEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGSDISWVRQA PGQGLEWMGGIIPMFDIEDHAQKFRGRLTITADKSTGAAY MELSSLRSEDAAVYYCARSSGNYDFAFDIWGQGTRLIVSS AS TKG
105	8ANC20HC	QVQLGESGGGLVEPGGSLRLSCAASGFLFSDYQMSWIRLA PGKGLEWIS FISGFGSVYYADSVEGRFTISRDNARNSLYL QMNNLRAEDTAVYYCARAYGTGNWRGLYYYYYGMDVWGHG TTVTVSSASTKG
106	8ANC21HC	QLQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSTYTMHWVRQA PGKGLEWVAVISYDGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRGEDTAVYYCARSPSYYFDYWGQGTLVTVSAAST KG
107	8ANC24HC	QVQLVQSGAEVKMPGASVKVSCKVSGYSLTELSIHWVRQA

- 38 042696

		PGKRLEWMGGFDPEDDERIYAQKFQDRVTMTEDTSTDTAY MDLNSLRSEDTAVYYCTTGGLYCSSISCIMDVWGQGTTVI VSSASTKG
108	8ANC25HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKRLEWMGGFDPEDGERIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAY MELNSLRSDDTAVYYCATGGLYCSSISCIMDVWGQGTTVT VSSASTKG
109	8ANC27HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDSEDGEAIYKQNFQGRVTMTEDTSTDTAY MELSRLRSEDTAVYYCATADRFKVAQDEGLFVIFDYWGQG NPGHRLLSLHQGPIGLPPGTLPPKATSGHAARR
110	8ANC31HC	QVQLVE S GGGWQPGRS LRL S CAAS G FT FS S YAMHWVRQA PGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDDSKS TVY LQINSLRAADTAVYFCAREGGLRFLEWLFWGQGTLVTVSS GESSASTKG
111	8ANC33HC	EFQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCTGSTFSFSSDDMNWVRQA PGKGLEWVSSMSDSGSHIYYADFVKGRFTISRDNAKKSLY LQMNSLRAEDTAVYYCAQSRPPQRLYGMDVWGQGTTVTVS SASTKG
112	8ANC34HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDGEASFEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
113	8ANC36HC	QVQLVESGGGWQPGKSLRLSCAASGFTFSTHAMHWVRQA PGKGLDWVAVISHDGDNQYYADAVKGRFTISRDDSRDTVF LQMNSLRTEDTGVYYCAADSSGSNWFDYWGQGILVTVSSA STKG
114	8ANC38HC	EPMFQPGQSGGVVVQSGESLHLSCEASGFKFASQMMHWVR HVPGRGLEWVALISWDGS GKL FADSVRGRFTIHRWNDRNS LYLDVKNVRPEDAAIYYCTRNGFDVWGQGILVTVSSASTK G
115	8ANC39HC	QVQLLQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDDEAIYEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG

- 39 042696

116	8ANC3HC	QVHLQESGPRLVRSSETLSLTCSVPGGSIVNPITNYYWSW IRQSPRKGLQWIGDIYYTGTSSRNPSLDSRVSISMDVSRK QISLTLYSVTAADTAVHYCASQSLSWYRPSGYFESWGQGI LVTVSSASTKG
117	8ANC43HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSMKVSCKSSGGTFSNHAISWVRQA PGKGLEWMGGIIPMSGTTNYLQKFQGRVTITADEFATTAY MELSSLTSEDTAVYYCARARADSHTPIDAFDIWGPGTRVI VSSASTKG
118	8ANC46HC	QVQLVQSGTEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDSDIAWVRQA PGQGLEWMGGIT PMFDMAKSAQKFRGRL11TADKS TGTAY MELSSLRYEDAAVYFCARSSGNFEFAFEIWGQGTKIIVSL ASTKG
119	8ANC48HC	QVQLVQS GAEVKKPGASVKVS CKAS GYTFTSYDINWVRQA TGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQTFQGRVTMTRNTSISTAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRWLPQYYYYGMDVWGQGTTVT VSSASTKG
120	8ANC49HC	FVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNFNTYWMNWVRQA PGKGLEWVANMKEDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCARNPESRCIVGRNRGWCRYFDLWG RGSLVTVSPASTKG
121	8ANC51HC	LVQLVE S GGGWQPGRS LRL S CAAS G FT FS TYAMHWVRQA PGKGLEWVAVISYDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRAEDTAVYYCARPKFLPGADIWWAATPFDYWG QGNPGHRLLSFHQGPIGLPPG
122	8ANC57HC	PMFQPGQSGGVVVQSGESLHLSCEASGFKFASQMMHWVRH VPGRGLEWVALISWDGSGKLFADSVRGRFTIHRWNDRNSL YLDVKNVRPEDAAIYYCTRNGFDVWGQGILVTVSSASTKG
123	8ANC58HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGHTLSELSINWVRHV PGKGLEWMGGLDPEDGEAIHEPKFQGRLTMTEDTSTDTAY VELSSLRSEDTAMYYCATADPFKVAQDEGLYVIFDYWGQG TLVTVSSASTKG
124	8ANC5HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRFWNWVRQA PGQGLEWMGGMIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG

- 40 042696

125	8ANC60HC	LVQLVESGGGWQPGKSLRLSCATSGFTFSTYGMHWVRQA PGKGLEWVAVIWYDGSYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLF LQMNSLRAEDTAMYYCGREMAVGGTKALDHWGQGTLVTVS SASTKG
126	8ANC63HC	QVQLVQSGAEAKRPGDSVKVSCKASGYTFTEYYIHWVRQT PGQGFEWMGIITPGAGNTTYAQKFQGRITVTRDTSAATVY MELSNLTSEDTAVYFCSRGVSFWGQGTLVTVSSASTKG
127	8ANC65HC	QVQMVASGGGLVKPGGSLRLSCEASGFTFSDYYMSWVRQA PGKGLEWISYITSGGNALYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCARDLLHAHDFGRQGTLVTVSSAST KG
128	8ANC67HC	Q VQ L VE S G G G WQ P GR S LRLSCATSGFTSKNY G VH W VRQA PGKGLEWVAVIWYDGSNKFYADSVKGRFTISRDRSKNMVY LQMNSLRVEDTAIYYCARDSVAFVLEGPIDYWGQGTLVTV SSASTKG
129	8ANC69HC	QVQLVQS GAEVKKPGASVKVS CKAS GYT FT DYYIHWVRQA PGQGLEWMGWINPSTGGTNFVQKFLGRVTMTSDTSINTAY MELRRLKNDDAAIYYCATYSTRQFFHYYYVTDVWGQGTTV TVSSASTKG
130	8ANC6HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRASGGSFGNYAINWVRQA PMQGLEWMGGIIPIFGTTNYAQNFRGRVTINADTFTNTVN MDLSSLRSEDTAVYYCGRSINAAVPGLEGVYYYYGMAVWG QGTTVTVSSASTKG
131	8ANC70HC	QVQLHQWGAGLLKPSDTLSLTCGILGVSPPGSLTGYYWTW IRQPPGKGLEWIGEVYHSGSTNYNPSLASRVTISMGTTKT Q FS LRL T SVTAADSAVYYCAS GKVWGITARPRDAGL DVWG QGTTVTVTSASTKG
132	8ANC71HC	EVQWESGGGLVQPGGSLRLSCVASGFTFSEYWMSWVRQA PGKGLEWVATIKRDGSEESYVDSVKGRFTISRDNAKNSLY LQMNSLRAEDTAVYYCARVRDPNYNLHFDSWGQGTLVTVS SASTKG
133	8ANC72HC	QVQLVE SGGGLIQPGGSLRLS CEAS G FAVGDINYMS WVRQ APGKGLEWVSVLYSGGSSQYADSVKGRFTISRDNSRNTLY LQMDNLRAEDTAVYYCARGLRVYFDLWGQGILVTVSSAST KG

- 41 042696

134	8ANC74HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
135	8ANC75HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSRSYYWGWIR QPPGKGLEWVGSIYYTGSTYYSPSLKSRVTISVDTSQNQF SLKLNSVTAADTAVYYCARQKGSGTSLLYWGQGTLVTVSS AS TKG
136	8ANC76HC	QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAINWVRQA PGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLETSVSTAY LQINSLKAEDTAVYYCARDLLESRTYYNDIRDCWGQGTLV TVSSASTKG
137	8ANC78HC	QVQLQESGSGLVKPSGTLSLTCAVSNGPISSGNWWSWVRQ TPEKGLEWIGEVYHSGSTNHNPSLKSRATILVDKSKNQFS LNLRSVTAADTAVYYCARVRGSWNFDYWGQGILVTVS SAS TKG
138	8ANC79HC	QHQLVPCVAEVRKPGASVKVSCKVSGYTLTEISMHWVRQA PGKGLEWMGGFDREDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATTYLAWPDGFDGYSSSWYWFDP WGQGTLVTVSSASMQGPMLLSPTGTLLPRAPLVQTRPGP
139	8ANC7HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYWNWVRQA PGQGLEWMGGIIPIFGIAKYAQKFQDRVTMTADESKNTVY LDFSSLRSDDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGTTVIVSSASTKG
140	8ANC80HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAFSWVRQA PGQGLEWMGG11PIFGTENYAQKFQGRVTITADKS T S TAY MELSSLRSEDTAVYYCARDRSSAIGYCSSISCYKGSFDIW GQGTMVTVSSASTKG
141	8ANC82HC	QVHLEESGPGLVKTSQTLSLTCSVSSYSISRSGYFWTWIR QRPGKGLEWIGYIYFNGRTTYNPSLKSRITISRDTSHSQF SLTLNSLSAADTAVYYCGRCQDGLASRPIDFWGQGTLVTV SSASTKG
142	8ANC83HC	QVQLVE S GGGWQPGKS LRLSCAISGFL FNNYGGQWVRQA PGKGLEWVAAISYDGNNRYYADSAKGRFLISRDTPKNILY LQIYSLRLDDTAVYYCARDSVSKSYSAPPEFWGQGTWTV

- 42 042696

		SSASTKG
143	8ANC91HC	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSDGSINSNSYYWAWIR QSPGKGLEWIGSVYYFGGTYYSPSLKSRVTMSVDRSKNQF SLNVSSVTAADTAIYYCARHVRPYDRSGYPERPNWFDPWG RGTLVTVSSASTKG
144	8ANC92HC	RVQLVQSGAEVKKPGSSVTVSCKASGGSFSSYAISWVRQA PGQGLEWVGGVKVMFGTVHYSQKVQGRVTITADDSTGTSY LELSGLRSADTAVYYCARNAGAYFYPFDIWGQGTLIIVSS AS TKG
145	8ANC93HC	QVQLVQS GAEVKKPGASVKVS CKAS GYT FTRYHIHWVRHA PGQGLEWMGKINPSRASTKYAKKFQDRVTMTRDTSTSTVY MELSSLRGDDTAVYYCGREMGTFTLLGWIDHYDFYPMDV WGQGT PVTVS SAS TKG
146	8ANC9HC	QVQLVQSGAEVRKPGSSLKVSCKSSGGTFSRYWNWVRQA PGQGLEWMGG11PIEGIAKYAQKFQDRVTMTADE S KNTVY LDFSSLRSGDTAVYYCARDRGDTRLLDYGDYEDERYYYGM DVWGQGT TVTVS SAS TKG
147	12A10HC	SQHLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNYILHWWRQA PGQGLEWMGLIKPVFGAVNYARQFQGRIQLTRDIYREIAF LDLSGLRSDDTAVYYCARDESGDDLKWHLHPWGQGTQVIV SPASTKG
148	12A12HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRISCQASGYSFTDYVLHWWRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYARRFQGRINFDRDIYRE TAE MDLSGLRSDDTALYFCARDGSGDDTSWHLDPWGQGTLVIV SAASTKG
149	12A13HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRISCQASGYSFTDYVLHWYRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYARRFQGRINFDRDIYREIAF MDLSGLRSDDTALYFCARDGSGDDTSWYLDPWGQGTLVIV SAASTKG
150	12A16HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRISCQASGYTFTDYVLHWWRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYARRFQGRINFDRDIYRE TAY MDLSGLRSDDTARYFCARDGSGDDTSWHLHPWGQGTLVIV SAASTKG
151	12A17HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFMNYIIHWWRQA PGQRLEWMGWINPVFGARNYAHRFQGRINFDRDINRETFQ

- 43 042696

		MELTGLRSDDTAVYYCARDGSGDARDWHLDPWGQGTLVIV SSASTKG
152	12A1HC	SQHLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNYILHWWRQA PGQGLEWMGLIKPVFGAVNYARQFQGRIQLTRDINREIAF LDLSGLRSDDTAVYYCARDESGDDLKWHLHPWGQGTQVIV SPASTKG
153	12A20HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFMNYIIHWWRQA PGQRLEWMGWINPVFGARNYAHRFQGRINFDRDINRETFQ MDLTGLRSDDTAVYYCARDGSGDARDWHLHPWGQGTLVIV SSASTKG
154	12A21HC	SQHLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNYILHWWRQA PGQGLEWMGLIKPVFGAVNYARQFQGRIQLTRDIYREIAF LDLSGLRSDDTAVYYCARDESGDDLKWHLHPWGQGTQVIV SPASTKG
155	12A22HC	SQQLVQSGTQVKKTGASVRVSCQASGYDFTKYLIHWWRQA PGQGLEWMGWMKPVYGATNYAHRFQGRIS FTRDIYREIAF MDLNGLRSDDTAVYFCARDGGGDDRTWLLDAWGQGTLVIV SSASTKG
156	12A23HC	SQHLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNYILHWWRQA PGQGLEWMGLIKPVFGAVNYARQFQGRIQLTRDINREIAF LDLSGLRSDDTAVYYCARDESGDDLKWHLHPWGQGTQVIV SPASTKG
157	12A27HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRISCQASGYTFTDYVLHWWRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYARRFQGRINFDRDIYREIAF LDLSGLRSDDTARYFCARDGSGDDTSWHLHPWGQGTLVIV SAASTKG
158	12A2HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRISCQASGYTFTDYVLHWWRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYARRFQGRINFDRDIYREIAY MDLSGLRSDDTARYFCARDGSGDDTSWHLHPWGQGTLVIV SAASTKG
159	12A30HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRISCQASGYTFTDYVLHWWRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYARRFQGRINFDRDIYREIAY MDLSGLRSDDTARYFCARDGSGDDTSWHLHPWGQGTLVIV SAASTKG
160	12A37HC	SQQLVQSGTQVKKTGASVRVSCQASGYDFTKYLIHWWRQA

- 44 042696

		PGQGLEWMGWMKPVYGATNYAHRFQGRIS FTRDIYREIAF MDLNGLRSDDTAVYFCARDGGGDDRTWLLDAWGQGTLVIV SSASTKG
161	12A46HC	SQQLVQSGAQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNHFLHWWRQA PRQGLEWMGWINPVHGGRNYARRFQGRINFGRDVYQETAY MELSGLRNDDTATYFCARGGGDGRNWHLHPWGQGTLVIVS AASTKG
162	12A4HC	SQHLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNYILHWWRQA PGQGLEWMGLIKPVFGAVNYARQFQGRIQLTRDIYREIAF LDLSGLRSDDTAVYYCARDESGDDLKWHLHPWGQGTQVIV SPASTKG
163	12A55HC	SQQLVQSGAQVKKPGASLRVSCQASGYTFMNYLLHWWRQA PGQGLEWMGWINPVYGAVNYAHRFQGRLTFSRDVYREIAY MDLNGLRSDDTAVYFCARDGSGDDRNWHLDPWGQGTLVIV SSASTKG
164	12A56HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTNYILHWWRQA PGRGLEWMGLIKPVYGAVNYARQFQGRIQLTRDIYREIAF LDLSGLRPDDTAVYYCARDESGYDLNWHLDSWGQGTQVIV SPASTKG
165	12A6HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFTDYVLHWWRQA PGQGLEWMGWIKPVYGARNYAHRFQGRINFDRDVYREIAY MDLSGLRSDDTAVYFCARDGSGDATSWHLHPWGQGTLVIV SSASTKG
166	12A7HC	SQQLVQSGTQVKKPGASVRVSCQASGYTFMNYIIHWWRQA PGQRLEWMGWINPVFGARNYAHRFQGRINFDRDINRETFQ MELTGLRSDDTAVYYCARDGSGDARDWHLDPWGQGTLVIV SSASTKG
167	12A9HC	QVTLVQSGAEVKKPGASVRISCRASGFTFDDYSDYSFIPT TYLIHWFRQAPGQGLEWMAWINSVNGGRNIARQFQGRVTV ARDRSNSIAFLEFSGLRHDDTAVYFCARDRRDDDRAWLLD PWGQGTRVTVS SAS TKG
168	LSSB2339HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKYIVHWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLTSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG

- 45 042696

169	LSSB2351HC	QVRLE Q S G TAVRKP GASVTISCQAS GYNFVKFFIHWVRQR PGQGFEWVGMIEPFRGRPWSAGNFQGRLSLSRDVSTETLY MTLNNLRSDDTAVYFCARLEAESDSHSRPIMFDHWGHGSL VTVSSASTKG
170	LSSB2361HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
171	LSSB2364HC	QVRLEQSGAAVRKPGASVTLSCQASGYNFVNYIIHWVRQR PGLDFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDVSTEILY MTLSSLRSDDTATYFCARAEAESQSHSRPIMFDFWGQGSR VTVSSASTKG
172	LSSB2367HC	QVRLSQSGAAIKKPGASVTISCETEGYTFINYIIHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGRPWFGQSVQGRLSLRRDTYTEWY MTLSGLTSDDAGHYFCARNEPQYHDGNGHSLPGMFDYWGQ GTLVAVSSASTKG
173	LSSB2416HC	QVRL S Q S GAAVKKP GASVTIVCE TE GYNFIDY11HWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGRPWSGQKVHGRLSLWRDTSTEKVY MTLTGLTSDDTGLYFCGRNEPQYHDDNGHSLPGMIDYWGQ GTMVTVSSASTKG
174	LSSB2434HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
175	LSSB2483HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
176	LSSB2490HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
177	LSSB2503HC	QVRLE Q S GAAVRKP GASVT L S C QAS GYN FVRY11HWVRQR PGLDFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFGGRLSLTRDVSTEILY MTLTSLRSDDTATYFCARAEAESQSHSRPIMFDSWGQGSR

- 46 042696

		VTVSSASTKG
178	LSSB2525HC	QVRLE Q S GNAVRKP GASVTISCQAS GYNFVKFFIHWVRQR PGQGFEWVGMIEPFRGRPWSAGNFQGRLSLSRDVSTETLY MTLNNLRSDDTAVYFCARLEAESDSHSRPIMFDHWGHGSL VTVSSASTKG
179	LSSB2530HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKY11HWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
180	LSSB2538HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFLNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
181	LSSB2554HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKY11HWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
182	LSSB2573HC	QVRLSQSGAAIKKPGASVTISCETEGYTFINYIIHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGRPWFGQSVQGRLSLRRDTYTEWY MTLSGLTSDDTGLYFCARNEPQYHDGNGHSLPGMFDSWGQ GTLVAVSSASTKG
183	LSSB2578HC	QVQL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
184	LSSB2586HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKYIVHWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
185	LSSB2609HC	QVRL FQS GAAMKKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDISTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
186	LSSB2612HC	QVRLE Q S G TAMRKPGASVTL S CQAS GYNFVKYIVHWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY

- 47 042696

		MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
187	LSSB2630HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
188	LSSB2640HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
189	LSSB2644HC	QVRLSQSGAAIKKPGASVTISCETEGYTFINYIIHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGRPWFGQSVQGRLSLRRDTYTEWY MTLSGLTSDDTGLYFCARNEPQYHDGNGHSLPGMFDSWGQ GTLVAVSSASTKG
190	LSSB2665HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
191	LSSB2666HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKY11HWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
192	LSSB2669HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKY11HWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
193	LSSB2680HC	QVRLE Q S GVAMRKPGASVTL S CQAS GYNFVKY11HWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDIHSRPIILTGPGEYGL DLEHMDWTWRILCLLAVAPGCHSQ
194	LSSB2683HC	QVRLE Q S GAAMRKP GASVT L S C QAS GYN FVKYIVHWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
195	LSSB344HC	QVRLEQSGTAVRKPGASVTISCQASGYNFVKFFIHGVRQR

- 48 042696

		PGQGFEWVGMIEPFRGRPWSAGNFQGRLSLSRDVSTETLY MTLNNLRSDDTAVYFCARLEAESDSHSRPIMFDHWGHGSL VTVSSASTKG
196	LSSNEC107HC	QVRLVQSGPQVKTAGASMRVSCEASGYRFLDYIIVWIRQT HGQHFEYVGMINPRGGTPWPSSKFRDRLTLTRDIYTDTFY LGLNNLGSGDTAIYFCARLEADGDDYSPKMFDYWGQGTRI IVSAASTKG
197	LSSNEC108HC	QVHT FQS GS SMKKS GASVTIS CEAT GYNIKNYILHWVRQK PGRGFEWVGMIDPINGRPWFGQPFRGRLTLTRDLSTETFY MSLSGLTSDDTATYFCARREADYHDGNGHTLPGMFDFWGP GTLITVSSASTKG
198	LSSNEC109HC	QVSLVQSGPQVKTPGASMRVSCETSGYRFLDYIIVWIRQT HGQHFEYVGMINPRGGTPWPSSKFRDRLTMTRDIHTDTFY LGLNNLRSDDTAIYFCARLEADGDDYSPKMFDYWGQGTRI IVSAASTKG
199	LSSNEC110HC	QVRLVQSGPQMKTPGASLRLSCEVSGYRFLDYFIVWVRQT GGQGFEYVGMINPRGGRPWSSWKFRDRLSLTRDIETDTFY LGLNNLRSDDTAIYFCARLEADGDNYSPKMVDYWGQGTKI IVSPASTKG
200	LSSNEC116HC	QVRL S QS GAAWKT GAS VTIS СЕ ТЕ GYNFVNY11HWVRRP PGRGFEWLGMIDPRNGHPWFAQTVRGRLSLRRDTFKETVY MTLSGLTSDDTGVYFCARNEPQYHSLPGMFDYWGHGTPVT VSSASTKG
201	LSSNEC117HC	QVRLVQSGAQLKKPGASVTVSCEASGYNFVNYIINWVRQT PGRGFEWVGMIDPRRGRPWSAQKFQGRLTLTRDIDSEKLY MHLSGLRGDDTAVYYCARQDSDFHDGHGHTLRGMFDSWGQ GSPVTVSSASTKG
202	LSSNEC118HC	QVRLVQSGPQVKTPGASMRISCEASGYRFQDYIIVWIRQT HGQGFEYVGMINPRGGTPWSSSKFRDRLSLTRDIYTDTFY LGLNNLGSDDTAIYFCARLEADGGDYSPKMFDYWGQGTRI IVSAASTKG
203	LSSNEC11HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG

- 49 042696

204	LSSNEC122HC	QVRLVQSGPQVKRPGASIRLSCETSGYRFQDYIVAWIRQT RGQRFEFVGMVNPRGGRPWPSSKFRDRVTLTRDIESETFH LGLNDLTSDDTATYFCARLEADGADYSPKMFDFWGQGTKI WSPASTKG
205	LSSNEC123HC	QVRLEQSGAAVRKPGASVTLSCQASGYNFVNYIIHWVRQR PGLDFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFEGRLSLSRDVSTEVLY MTLSSLRSDDTATYFCARAEAESQSHSRPIMFDYWGQGSR VTVSSASTKG
206	LSSNEC127HC	QVRLEQSGAAMRKPGASVTLSCQASGYNFVKYIIHWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
207	LSSNEC18HC	QVRLSQSGAAVMKTGASVTISCETEGFNFVNYIIHWVRRP PGRGFEWLGMIDPRNGHPWFAQTVRGRLSLRRDT FNEIVY MTLSGLTTDDTGLYFCARNEPQYHSLPGMFDYWGQGTPVT VSSASTKG
208	LSSNEC24HC	QVRLSQSGAAMKKPGASVTISCETEGYTFINYIIHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGRPWFGQSVQGRLSLRRDTYTEWY MTLSGLTSDDAGLYFCARNEPQYHDGNGHSLPGMFDYWGQ GTLVAVSSASTKG
209	LSSNEC29HC	QVRLSQSGAAWKTGASVTISCETEGYTFVNYIIHWVRQS PGRGFEWLGMIDPRNGHPWFGQRLRGRLSLRRDRSTETVF MTLSGLTSDDTAIYFCARNEPQYYDGSGHSLPGMFDYWGQ GTRVWSSASTKG
210	LSSNEC2HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
211	LSSNEC33HC	QVRLVQSGPQVKTPGASIRLSCEASGYRFLDYFIVWVRQT PGQGFEYVGMINPRGGRPWSSWKFRDRLSLTREIDTDTFY LGLSNLRSDDTAIYFCARLEADGDDYSPKMVDYWGQGTKI IVSAASTKG
212	LSSNEC34HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ

- 50 042696

		GSLITVSSASTKG
213	LSSNEC3HC	QVRLEQSGAAVRTPGASVTLSCQASGYKFVNYIIHWVRQR PGLAFEWVGMIDPYRGRPWSAHSFEGRLSLSRDVSMEILY MTLTSLRSDDTATYFCARAEAESQSHSRPIISTSGAR
214	LSSNEC46HC	QVQ FFQS GS SMKKS GASVTIS CEAT GYNIKNHILHWVRQK PGRGFEWVGMIDPINGRPWFGQAFRGRLTLTRDLSTETFY MSLSGLTSDDTATYFCARREADYHDGNGHTLPGMFDFWGP GTLVTVSSASTKG
215	LSSNEC48HC	QVRLSQSGAAWKTGASVTISCETEGYTFVNHI IHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGHPWFGQRLRGRLSLRRDRSTETVF MTLSGLTSDDIGIYFCARNEPQYFDGSGHSLPGMFDYWGQ GTRVWSSASTKG
216	LSSNEC52HC	QVRLSQSGAAWKTGASVTISCETEGYTFVNYI IHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGHPWFGQRLQGRLSLRRDRSTETVF MTLSGLTSDDTGIYFCARNEPQYYDGSGHSLPGMFDYWGQ GTRVWSSASTKG
217	LSSNEC56HC	QVRLVQSGPQVKTPGASMRVSCEASGYRFLDYIIVWIRQT HGQHFEYVGMINPRGGTPWPSSKFRDRLSLTRDIHTDTFY LGLNNLGSDDTAIYFCARLEADGDDYSPKMFDHWGQGTRI IVSAASTKG
218	LSSNEC60HC	QVRLE Q S GAAVKKPGASVTISCQAS GYNFVKFFIHWVRQR PGQGFEWVGMIEPYRGRPWSAGNFQGRLSLSRDVSTETLY MTLNNLRSDDTAVYFCARLEAESDSHSRPIMFDHWGHGSL VTVSSASTKG
219	LSSNEC66HC	QVRLS QS GAAVMKTGASVTIS СЕ ТЕGYNFVNY11HWVRRP PGRGFEWLGMIDPKNGHPWFAQAVRGRLSLRRDTFNEWY MTLSGLTSDDTGLYFCARNEPQYHDGNGHSLPGMFDFWGQ GTLVTVSSASTKG
220	LSSNEC70HC	QVRLSQSGAAWKTGASVTISCETEGYTFVNYI IHWVRQP PGRGFEWLGMIDPRNGHPWFGQRFRGRLSLRRDRSTETVF MTLSGLTSDDNGIYFCARNEPQYYDGSGHSLPGMFDYWGQ GTRVWSSASTKG
221	LSSNEC72HC	QVRLEQSGAAVRKPGASVTLSCQASGYNFVNYIIHWVRQR PGLDFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDVSTEILY MTLSSLRSDDTATYFCARAEAESQSHSRPIMFDFWGQGSR

- 51 042696

		VTVSSASTKG
222	LSSNEC7HC	QVRLEQSGAAVRKPGASVTLSCQASGYNFVNYIIHWVRQR PGLDFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDVSTEILY MTLNSLRSDDTATYFCARAEAESQSHSRPIMFDSWGQGSR VTVSSASTKG
223	LSSNEC82HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
224	LSSNEC89HC	QVRLEQSGGALRKPGASVTLSCQASGYNFVKYIIHWVRQR PGLGFEWVGMIDPYRGRPWYAHSFAGRLSLSRDTSTETLY MTLSSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMDWTWRILCL LAWPAST KG
225	LSSNEC8HC	QVRL FQS GAAMRKPGASVTIS CEAS GYNFMNY FVHWVRQR PGRGFEWLGMINPRGGRPWSAQSVQGRLTLTRDTSTEMFY MRLDGLRSDDTATYFCARNEADYHDGNGHSLRGMFDYWGQ GSLITVSSASTKG
226	LSSNEC94HC	QVRLEQSGAAMRKPGASVTLSCQASGYNFVKYIVHWVRQK PGLGFEWVGMIDPYRGRPWSAHKFQGRLSLSRDTSMEILY MTLTSLKSDDTATYFCARAEAASDSHSRPIMFDHWGQGSR VTVSSASTKG
227	LSSNEC95HC	QVRLVQSGPQVKRPGASIRLSCESSGYRFQDYIVAWIRQT RGQGFEFVGMVNPRGGRPWPSSRFRDRVTLTRDIESETFY LGLNDLTSDDTATYFCARLEADGSDYSPKMFDFWGQGTKI WS PAS TKG
228	LSSNEC9HC	QVRLVQSGAQLKKPGASVTVSCEASGYNFVNYIINWVRQT PGRS FEWVGMIDPRRGRPWSAQKFQGRLTLTRDIDSEKLY MHLSGLRGDDTAVYYCARQDSDFHDGHGHTLRGMFDSWGQ GSPVTVSSASTKG
229	LSSB2055HC	QVQLVQSGPELMKPGSSVKVSCRASGDNFLTSTFNWLRQA PGQRLEWMGRFIPSLGLITSAPKFSDRLTITADQATLTAY MELTGLTSEDTALYYCARGLCRGGNCRLGPSGWLDPWGRG TQVTVSSASTKG
230	LSSB2066HC	QWLIQS GAEVKRPGS S VKVS CKAS GGS FPITWVRQAPGH GLEWMGGINPFFGTTNYAQKFQGRVSITADESTSTTYLHL

- 52 042696

		SDLRSEDTAVYFCARENREKWLVLRSWFAPWGQGTLVTVS SASTKG
231	LSSB2068HC	EESGPGLVKPSQTLSLTCSVSGDSVSSGGYFWSWIRQHPT KGLECLGYVYYTGNTYYNPSLKSPPTIEVAMANNQVSLKL GSVTAADTAVYYCARIKRFRGGNYFDTWGHGLLVTVSSAS TKG
232	LSSB2080HC	LAQLEQSGGGWKPGGSLRLPCAASGFTFIDYYMAWIRLA PGKGLEWLSYISKNGDYTKYSESLKGRFTISRDNAKNLVI LQLNRLRADDTAIYFCARADGLTYFGELLQYIFDLWGQGA RVIVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGHASV
233	LSSB2133HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFRNYAVHWVRQA PGQGLEWMGEINGGNGNTEYSQKSQGRLTITRDISATTAY MELSSLRSDDTAVYYCARVAYVHVVTTRSLDNWGQGTLVT VSSASTKG
234	LSSB2182HC	QVQIRQSGPGLVKPLETLSLSCIVFGGSFIAYHWTWIRQA PLKGLEWIGDIDQGGDITYSPSLKSRVTMSVDRSKSQFSL KL S SVTAADAAVYYCVRG P PNRYAVT S FT S GTHRERS S YY FDYWGPGTLVTVS SASTKG
235	LSSB218HC	KAPATLSLSPGERATLSCRASQSVGSDLAWYQQKPGQAPR LLIYDASNRATAIPARFSGSGSGTDFTLSISSLEPEDFAV YFCQQRYDKITFGQGTRLEIQRTVAAPSVFIFPPSDEQ
236	LSSB2277HC	FVQLVESGGGWQPGTSLRLSCTTSGFIFSDYGMHWVRQA AGKGLEWVAVIWHDGSNRFYADSVKGRFTISRDNSKNAVY LEMNNLRVEDTALYYCARTSMDIDYWGQGTPVTVSSASTK G
237	LSSB2288HC	QVYLVQSGPELKKPGASVKISCKASGYNFPKYAIHWVRQA PGQGLQWMGWINGDNGDARYSQKLQGRVTPSTDTSASWY MELKRLRSEDTAVYYCARALYPWEIGGVPSTMGDDYWGQG TLITVSSASTKG
238	LSSB331HC	QVHLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVSGGSFSGFFWTWIRQS PGKGLEWIGEVNHSGFTHSNPSLESRATISVAASNTQFSL RLASVTAADTAIYFCALRYFDWSPFRRDTYGTDVWGQGTT VIVSSASTKG
239	LSSNEC101HC	QVQLVQSGAELKKPGSSVKVSCKASGGTFNNHTFNWVRQA PGQGLEWMGRTIPILGSRDYAKT FQDRVT11ADKS T S TVY

- 53 042696

		LELRRLKSEDTGVYYCATSMYYFDSGGYYRNTDLDKWGQG SLVTVSSASTKG
240	LSSNEC106HC	GLDLEHDGHHKEEPRASVTVSCEASGYNFVNYIIHWVRLT PGRGFEWMGMIDPRRGRPWSAQKFQGRLTLTRDIDSERLY MQLSGLRGDDTAVYFCARQEPDFHDGHGHTLRGMFDSWGQ GSPVSVSSASTKG
241	LSSNEC112HC	QVQLVQSGAELKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAINWVRQA PGQGFEWMGGIIPLFATPTYAQKFQGRVRITADDSTSTAY MELSSLRSDDTAVYFCARPNWRSALDYWGQGTLVTVSSA STKG
242	LSSNEC115HC	QARLDQWGTGLLKPSETLSLKCAVFGVLFTDYNWTWVRQS PGKGLEWIGHLDHRGGGNYNPSLESRVTISLDYSKAQFSL HLKSVTVADTALYYCAGAVKGFWFDEVYNWFGPWSQGTLV TVASASTKG
243	LSSNEC124HC	QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGASISSRNWWTWVRQ PPGKGLEWIGEIYESGATNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFS LRLTSVTAADTAVYFCARLMTFGGLIGTLDYWGQGTLVTV LQPPPRAHRYHPRNLLQEHLCARVMP
244	LSSNEC125HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAISWVRQA PGQGLEWMGG11PS FSMSNYAQDFQGRLTITADE STS SVY MELNSLRSEDTAVYYCARDFPRFHRLVGNYDFWRGTLDRF SYMDLWGRGTAVTVS SAS TKG
245	LSSNEC126HC	QVHLVQSGAEAKRPGSSVRVSCRASGGDFSSYTLSWVRQA PGQGIEWMGGWPMLDTVHYAQKFQGRLTLSVDEGTSTAY MELSSLRSEDTAMYYCTRGRQTFRAIWSGPPAVFDIWGQG TLVIVSSASTKG
246	LSSNEC14HC	NGGSLRLSCRVSGFGFHLYEMNWVRQAPGKGLEWISSISG SGESTHYSDSITGRFSMSRDEAKDSLYLQMNNLRVEDTAV YYCTRGFSMGDGTGFSFDTWGRGTMVTVSSGLDTVSLAST KGPSVFPLAPCSRSTSDARLS
247	LSSNEC16HC	AARLDQWGTGLVKPSETLSLKCAVFGVDFPDYTWTWARQA PGKGLEWIGHRDHRGGSSYNPSLSGRATISLDTSKAQFSL HIKSVTVADTATYYCAGAVAGLWFEDAYNWFGPWSQGTLV TVAAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGHASVL
248	LSSNEC21HC	QARLDQWGTGLLKPSETLSLKCAVFGVLFTDYNWTWVRQS

- 54 042696

		PGKGLEWIGHLDHRGGGNYNPSLESRVTISLDYSKAQFSL HLKSVTVADTALYYCAGAVKGLWFDETYTWFGPWSQGTRV TVASASTKGPSVFPLAPSSKSTSGTRDLS
249	LSSNEC30HC	QVQLVQSEAEVKKPGS SVKVS CKAS GGT FRGYTISWVRQA PGQGLEWMGRIIPILGKAIYAPSFQGRVTLTADKSTGTAY MELSRLRSDDTAVYYCAKVKMRGSSGYYYLFDDWGQGTLV TVSSASTKG
250	LSSNEC49HC	QVHLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLSELSIHWVRQG PGRGLEWMANFDPEDGETIYAPQFQGRVTLTEDTSTDTAY MQLTSLRSEDTAVYYCATDRYTDTGRWGPGTLVTVSSAST KG
251	LSSNEC54HC	QARLDQWGTGLLKPSETLSLKCAVFGVLFTDYNWTWVRQS PGKGLEWIGHLDHRGGGSYNPSLESRVSISLDYSKAQFSL HLKSVTVADTALYYCAGAVKGFWFDEPSTWFGPWSQGTMV TVASASTKG
252	LSSNEC55HC	QARLDQWGTGLLKPSETLSLKCAVFGVLFTDYNWTWVRQS PGKGLEWIGHLDHRGGGNYNPSLESRVTISLDYSKAQFSL HLKSVTVADTALYYCAGAVKGFWFDEVYNWFGPGVREPWL PSPQPPPRAHRSSPWHPPPRAPLVTATVP
253	LSSNEC57HC	QARLDQWGTGLLKPSETLSLKCAVFGVLFTDYNWTWVRQS PGKELEWIGHLDHRGGGNYNPSLESRVTISLDYSKAQFSL HLKSVTVADTARYYCAGAVKGFWFDDPYTWFGPWSQGTLV TVASASTKG
254	LSSNEC5HC	QVHLVQSGAEAKRPGSSVRVSCRASGGDFSSYTLSWVRQA PGQGLERMGGWPMLDTVHYAQKFQGRLTLSVDEGTSTAY MELSSLRSEDTAMYYCTRGRQTFRAIWSGPPWFDIWGQG TLVSVSSASTKG
255	LSSNEC67HC	QFRLVQSGPEVKNPGSSVTVSCKASGGTFSGLGINWVRQA PGQGLEWLGDIKTMYGTTNYAPKFQGRVTITADESTSTSY MELSGLRSEDTAVFYCVRELFGHHPAFGVWGQGTSVIVSS ASTKG
256	LSSNEC74HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGVSWVRQA PGQGLEWMGWISPYSGNTNYAQRLQDRVTMTTDTSTNTAY MELRSLRSDDTAVYYCAARSYYYYSMDVWGQGTTVTVSSA STKG

- 55 042696

257	LSSNEC77HC	QVQLVQSGADVKKPGASVKVSCKVSGYTVSELSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEDGKTVSAQNFQGRVTMTEDKSTGTAN MELRSLRSEDTAVYYCATTVQLIVDFCNGGPCYNFDDWGQ GTLVTVSSASTKG
258	LSSNEC85HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTLSSYTISWVRQA PGQGLEWMGRLIPLVDIT TYAQKFQGRVTITADT S TNTAY MELSNLRSEDTAIYHCATSTMIAAVINDAFDLWGQGTTVT VSSASTKG
259	LSSNEC91HC	QVQLVQS GAEVKKPGASVKVS CKAS GNTFTSYGITWVRQA PGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQDRLTMTTDTSTSTAY MELRSLRSDDTAVYYCAFSRHYGSGNYDYWGQGTLVTVSS AS TKG
260	LSSNEC92HC	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQP PGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSL KLSSVTAADTAVYYCARLPIGSGWYGRDYWGQGTLVTVSS AS TKG
261	3A124HC	EVQLLESGGGLVRPGGSLXLSCSASGFTFNSYAMSWVRQA PGKGLEWVS SVSASGEMTYYADSVRGRFTISRDNANNALH LQMNSLRAEXTAVYYCAKVGGTVWSGYSNYLDYWGPGTLV TVSSASTKG
262	3A125HC	QVQLVQS GAEVKKPGASVKVS CKPSSNTFTSHYIHWVRQA PGQGLEWMGMINPGGSTRYAPKFQGRVTLTRDTSTRTVYM ELSSLRSEDTAVYYCARPQYNLGRDPLDVWGLGTMVTVSS AS TKG
263	3A140HC	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCADSGFTFRSYSMHWVRQA PGKGLAWVS SISSTSNYIYYADSVKGRFTISRDNAKNS LY LQMNSLRAEDTAVYYCARTFITASWFDSWGQGTLVTVSSA STKG
264	3A144HC	VSGGRFSNYGLSWVRQAPGQGLEWMGRIVPAINRAKYAQK FQGRVILTADKITDTAYMELRSLRSEDTAIFYCARDPQIE IRGNAFDIWGQGTWTVSSASTKG
265	3A160HC	QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCNVYGGSMISYYWSWIRQP PGKGLEWIGHVYNSGNTKYSPSLKNRVTISMDTSRNLFSL KVTSVTPADTAVYYCARADYDNIWDSRGGFDLWGQGTLVT VSSASTKG

- 56 042696

266	3A18HC	QVQLVQLLQSGAEVKKPGSSVKVSCQISGYGFSNYAISWV RQAPGQGLEWLGRIVPAVGMTEYAQKFQGRVT FTADRS TI TAYMDLRGLRSDDTAVYYCVRDPQVEVRGNAFDIWGQGTM VTVSSASTKG
267	3A204HC	QVQLVQSGAEMKKPGASVKVSCKASGHTFTNYYMHWVRQA PGQGLEWMGMINPTGDSTRYAQRFQGRVTMTRDTSTRTVY MELSSLRSDDTAVYYCARAHHDFWRAPVDVWGKGTTVTVS SASTKG
268	3A228HC	EVQLVQS GAEVKKPGE SLRISCKTS GYNFNDDWIAWVRQR PDKGPEWMGIFYPGDSQATYSPSFQGHVTFSADTSISTAY LQWTSLKASDTAIYYCARTRCFGANCFNFMDVWGKGTALT VTVSSASTKG
269	3A233HC	QVQLQESGPGPVKPSETLSLTCTVSGGSMISYYWSWIRQP PGKGLEWIGYIFTNGRTTYSPSLRSRVTISLDTSTNHFSL RLKSVTAADTAIYYCARLDGEAFRYYLDLWGQGNLVTVSS ASTKG
270	3A244HC	IRSFYWHWIRQSPGKGLEWLGSVFDNGLTTHNPSLKSRLT ISEDPSRNQISLKLRSMTAADTAVYYCARGDYDILTSSYQ FDYWGQGTLVAVS SASTKG
271	3A255HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVFGASIRSFYWHWIRQS PGKGLEWLGSVFDNGLTTYNPSLKNRLSISEDPSRNQISL NLRSMTAADTAVYYCARADYDLLTSSYHFDSWGQGTLVTV SSASTKG
272	3A296HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISYYYWSWIRQP PGKGLEWIGDIYYSGTTDYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSL KLSSVTAADTAVYYCARRRGQRLLAYFDYWGQGSLVTVSS ASTKG
273	3A334HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAPGYTFIGHYMHWIRQA PGQGLEWMGWINPNSGDTNYAQTFQGRVTMTRDTSISTAY MELTRLRSDDTAVYYCARDLRPMRGNWAMHVWGEGTTVTV SSASTKG
274	3A366HC	CTVSGGSISSAGYYWTWIRQHPGKGLEFIGYIYYIGTTYY NPSLKSRLTISIDTSKNQFSLKLSSVTAADTAIYYCARDY TARGRHFFDYWGQGALVTVS SASTKG
275	3A381HC	SSFAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFEATSYAQKFQDRLT

- 57 042696

		ITTDESTTTAYMDLSSLRSEDTAVYYCARAQGDILTEGYF DYWGQGTLVTVS SASTKG
276	3A384HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKVSFFSNYGISWVRQRPG QGLEWMGRIIPAIDDMTYAQT FRGRVT FSADKFT T TAYME LTGLTFEDTATYFCARDPQVNRRGNCFDHWGQGTLVTVSS ASTKG
277	3A419HC	LEWMGRIIPAIDDVTYAQTFRGRVTFSADKFTTTAYMDLT GLRSEDTATYFCARDPQVNRRGNCFDHWGQGTLVTVSSAS TKG
278	3A461HC	QVQLVQSGAEVKKPGAAVKISCKASRFTFSSYYIHWVRQA PGQGLEWMGIINPSGGSTSNAQKFQDRVTLTRDMSTGTVY MELSRLTSEDTAVYYCATPEPSSIVAPLYYWGQGTLVTVS SASTKG
279	3A474HC	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFGGHAVSWVRQA PGKGLEWLSQISGTGSRTDYADAVKGRFTVSRDNSKKTVY LQMNSLRVEDTALFYCATRSPGGGYAFDIWGQGAMVTVSS ASTKG
280	3A518HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSAGYYWSWIR QHPEKGLEFIGYIYYLGTTYYNPSLKSRVSISIDTSNNQF SLELSSVSAADTAIYYCARDYTASGRHFFDYWGQGTLVTV SSASTKG
281	3A539HC	EVQLLESGGALVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSSMSWVRQA PGKGLEWVSAIGSGRGS T FYADSVKGRFTISRDNSKNTLS LQMNSLTAEDTATYYCTKTGGLLRFPEVWGKGTTVTVSSA STKG
282	3A576HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQA PGQGLEWMGGIIPIFEAASYAQKFQDRLTITTDESTTTAY MDLSSLRSEDTAIYYCARAQGDILTEGYFDYWGQGTLVTV S SAS TKG
283	3A613HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTYYWSWIRQP PGKGLEWIGYISYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSL KLSSVTAADTAVYYCARHKSVLLWFRELDYWGQGTLVTVS SASTKG
284	3A64HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGVRFSSNAISWVRQA PGQGLEWMGRTTPMLGGANHAPS FKGRVTISADE S TRTVY

- 58 042696

		MEMSSLRYEDTAVYYCASGRREGLNFLLDYWGQGTLVTVS SASTKG
285	3A650HC	QVQLVQS GAEVRKPGASVKVS CKTSGYTFTNSYIHWVRQA PGQGLEWMGIINPPGGNTYYAQKFHGRVTLTRDTSTSTVY MELNSLRSEDTAVYFCARPHSPTNIPSRPLDYWGQGTLVT VSSASTKG
286	3A67HC	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYPLAELSVHWVRQV PGKGLEWVGGFDPEEGKTVYAQKFQGRVTMTEDRSTDTVY MELISLRYEDTAVYYCATDNPVLQLGELSSSLDYWGQGTL VTVSSASTKG
287	3A779HC	PSETLSLTCRVSGASISNFYWTWIRQPAGKGLEWIGRLYS SDKTNYNPSLNGRVTMSLDTSKNQFSLRLTSMTDADTAIY YCAREKGQWVTLPPYYFDSWGQGILVTVSSASTKG
288	3A816HC	NTFTSHYVHWVRQAPGQGLEWMGMINPGGTTRYAPKFQDR VTLTRDTSTRTVYMELRSLRSEDTAVYYCARPQYNLGREP LNVWGQGTMVTVS SAS TKG
289	3A869HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASISNFYWTWIRQP AGKGLEWVGRLYSSDRTNYNPSLNGRVTMSLDTSKNQFSL RLTSMTDADTAIYFCAREKGQWLTVPPYYFDSWGQGILVT VSSASTKG
290	3A93HC	CTVSGGSIISYYWNWIRQSPGKGLEWLGYIFDGGRANYNP SLRSRLTMSVDTSKNQISLKVKSVTAADSAIYYCARLDGE AFRYYFDSWGQGTLVTVSSASTKG
291	3A966HC	QTLSLTCSVSGGSISSAGYYWGWIRQHPGKGLEWIGHIYY SGNTNYNPSLKSRLSMSVETSKNQFSLNLASVTAADTAVY FCARDYSAAGRHL FDSWGQGILVTVS SAS TKG
292	3A978HC	KPSQTLSLTCTVSGGSISSAGYYWTWIRHHPGKGLEFIGY IYHIGTPYYNPSLKSRLTISIDTSKNQFSLKLSSVTAADT AIYYCARDYTARGRHFFDYWGQGALVTVS SAS TKG
293	3ANC3HC	QVQLVQSGADVKKPGASVTVSCKTDEDEDDFRAHLVQWMR QAPGQRLEWVGWIKPQTGQPSYAQKFQGRVTLTREVSTST VFLQLRNLRSDDTAVYYCARPRGGRDNWSFHVWGRGTLVT VSSASTKG
294	3ANC42HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYTFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY

- 59 042696

		MELRGLKFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
295	3ANC66HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYKFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLRFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
296	3ANC79HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCEAYGYKFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYTSAVNYSPKYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLRVDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
297	3B10HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSNGSISSGGYYWSWLR QFPGKGLEWIGSIHYTGRTMYNPSLMGRPALSMDTSNNQF SLKLRSVTAADTALYFCARDLQWIFWDPWGQGTLVTVSS ASTKG
298	ЗВ120НС	LQQLQVPRLSMWRVFKVAAATGAQTLTVEEPGSSVKVSCK ASGGSSTAYGYSWVRQAPGQGFEWMGRIIPFYGIITYAPK FQGRVTITADRS T S TVYME L T S L T FADTAL FFCARD FGDP RNGYYFDSWDQGLWLTVSSASTKG
299	ЗВ126НС	QVHLVQSGAEVKKPGSSVRVSCKASGWTFGDSVNSAITWV RQAPGQGLEWMGRFIPILGLSNYAQKFQDRVTINVDRSTN TAYMELSGLRSEDTAVYYCARLITGMNAPWFYYMDVWGKG TTITVSSASTKG
300	ЗВ129НС	FICFSVWRLLEFGGRLVQPGGSLRLSCSASGFTFSNSAM SWVRQAPGKGLEWVS SIL S S GVGT FYADSVKGRFTVSRDN SRNTLYLQMKSLRAEDTALYYCAKVQIQQLNFGVITDAGL DVWGKGT TLIVS SASTKG
301	ЗВ142НС	QVQLGQSGTEVKKPGFSVKVSCKASGGSSTAYGYSWVRQA PGQGFEWMGRIIPFYGIITYAPKFQGRVTITADRSTSTVY MELTSLTFADTALFFCARDFGDPRNGYYFDSWDQGLWLTV S SASTKG
302	ЗВ154НС	QVQLVQSGGEVRKPGSSVKVPCKISGNAFSNYGVNWVRQA PGQGLEWVGRIIPVIGVAQHAPKFQGRVTITADKS TTTAY LELSSLRSDDTAVYFCAKDHGDPRTGYYFDYWGQGALVTV SSASTKG
303	ЗВ165НС	QVQLLQSGTEVKKPGSSVKVSCRASGWTLGNSPNSAIGWV

- 60 042696

		RQAPGQGLEWIGRIIPILDVTNYAQKFQGRVTISADKS TN IAYMEISSLGSEDTAFYYCARVITGMTSPWYFYMDVWGEG TTVIVSSASTKG
304	3B171HC	VQS QVYLVQS GGEVKKPGS SVKVS CKAS GDS FS S SVITWV RQAPGQGPEWMGRIIPVLGVAAYAQNFYGRVTISADTS SN TAYMELSSLRFEDTAVFYCARETGRGGNLALRQYFFDSWG QGTLVTVSSPSTKG
305	3B17HC	EVQLVESGGGLVQPGGSLRISCSATGFTFSTHAMHWVRQA PGKGLEYVSAINSNGRSAFYADSVKGRVTISRDNSKNTLF LQMTSLRAEDTAVYYCVKGPLLRYLDSWGQGTLVTVSSAS TKG
306	3B186HC	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFNEYYMSWIRQA PGQGLEWVANIGSSDAYTIYADSVKGRFTISRDNAENTVY LQMNSLRGEDTAVYYCARIEGYCSNSRCSNYFDPWGQGAL VTVSSASTKG
307	3B193HC	MFLFLVAGATGVQSQVYLVPFGPEVKKPGSSVKVSCKASG DS FTS SVITWVRQAPGQGPEWMGRVIPVLGVAAYAQKFYG RVTITADTSSNTAYMEVNSLRFEDTAVYYCARETGRGGNL ALRQYFFDSWGQGTLVTVSSPSTKG
308	3B22HC	CQVQLVESGGGWQPGRSLRLSCVGSGFTFSSSGMHWVRQ APGKGLEWVAVISSDGSDEYYGDSVEGRFTISRDNSKNTL FLQLDSLEAEDSAVYYCAKTPPHYDALTGYPSSVLEFWGL GTLVTVSSASTKG
309	3B27HC	EVQLVESGGGLVQPGGSLRISCSATGFTFSTHAMHWVRQA PGKGLEYVSAINSNGRSAFYADSVKGRVTISRDNSKNTLF LQMTSLRAEDTAVYYCVKGPLLRYLDSWGQGTLVTVSSAS TKG
310	3B29HC	QVHLVQSGAEVKKPGSSVRVSCKASGWTFGDSVNSAITWV RQAPGQGLEWMGRFIPILGLSNYAQKFQDRVTINVDRSTN TAYMELSGLRSEDTAVYYCARLITGMNAPWFYYMDVWGKG TTITVSSASTKG
311	3B2HC	SGGRLVQPGGSLRLSCSASGFTLSNSAMSWVRQAPGKGLE WVSSILSSGVGTFYADSVKGRFTVSRDNSRNTLYLQMKSL RAEDTALYYCAKVQIQQLNFGVITDAGLDVWGKGTTLIVS SASTKG

- 61 042696

312	3B31HC	EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFTTYDISWVRQA PGQGLEWIGGILPDFGAPSYAQKFQDRVTITTDESSRTAY MELNSLRSEDTAIYYCARGRGDDFWSGESPSWYFDYWGQG TQVTVSSASTKG
313	ЗВЗЗНС	PLVQLE P S GVEVKKRGASVKVS CKVS GYS L ТЕ L SMHWVRQ APGKGLEWMGSFDPLDGDTIYAQKFQGRVTMTVDTSTDTA YMDLSSLRFEDTAVYYCATPSKAYYYDSPNYEGDFYMDVW GKGTTVIVSSASTKG
314	ЗВ40НС	QVQLVE S GGGWQPGRS LRL S CVGS G FT ES S S GMHWVRQA PGKGLEWVAVISSDGSDEYYGDSVEGRFTISRDNSKNTLF LQLDSLEAEDSAVYYCAKTPPHYDALTGYPSSVLEFWGLG TLVTVSSASTKG
315	ЗВ41НС	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQA PGKGLEWMGVFDPLEGDGVYAEKFRGRVIMTEDTSTDTGY MELTSLRSEDTAIYYCATKAKDYYYESSDYSPYYYYYMDV WGKGT TVTVS SAS TKG
316	ЗВ44НС	EVRLLESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFTFSNSALSWVRQA PGKGLEWVSSWSSGGDTFYADSVKGRFTISRDNSRNTLY LQMKSLRAEDTALYYCAKVQIQQLNFGVITDAGMDVWGKG TTVIVSSASTKG
317	ЗВ45НС	VEEPGSSVKVSCKASGGSSTAYGYSWVRQAPGQGFEWMGR IIP FYG11TYAPKFQGRVTITADRS T S TVYMELTRLT FAD TALFFCARDYGDPRNGYYFDSWDQGLWLTVSSASTKG
318	ЗВ48НС	QVQLVESGGGLVQPGGSLRISCSATGFTFSTHAMHWVRQA PGKGLEYVSAINSNGRSAFYADSVKGRVTISRDNSKNTLF LQMTSLRAEDTAVYYCVKGPLLRYLDSWGQGTLVTVSSAS TKG
319	ЗВ50НС	QVQLVQSGPGLVKPSETLSLTCSVSNGSISSGGYYWSWLR QFPGKGLEWIGSIHYTGRTFYNPSLMGRTALSMDTSNNQF SLKVSSVTAADTALYYCARELQWMFVVDPWGQGTLVTVSS AS TKG
320	ЗВ51НС	QVQLLQSGTEVKKPGSSVKVSCRASGWTLGNSPNSAIGWV RQAPGQGLEWIGRIIPILDVTNYAQKFQGRVTISADKS TN IAYMEISSLGSEDTAFYYCARVITGMTSPWYFYMDVWGEG TTVIVSSASTKG

- 62 042696

321	3B56HC	QVQLVQSGGEVKKPGASVKVSCKVSGYSLTELSMHWVRQA PGKGLEWMGVFDPLEGDGVYVQKFRGRVIMTEDTSTDTAY MELTSLRSEDTAIYYCATKAKDYYYESSDYSPYYYYYMDV WGKGT TVTVS SAS TKG
322	3B57HC	G S EVQLVE S GAEVKKRGASVKVS CKVSGYSLTEL SMHWVR QAPGKGLEWMGSFDPLDGDTIYAQKFQGRVTMTVDTSTDT AYMDLSSLRFEDTAVYYCATPSKAYYYDSPNYEGDFYMDV WGKGTTVIVSSASTKG
323	3B5HC	SWQLVESGPGLVKPSETLSLTCSVSNGSISSGGYYWSWL RQFPGKGLEWIGSIHYTGRTMYNPSLMGRPALSMDTSNNQ FSLKLRSVTAADTALYFCARDLQWIFWDPWGQGTLVTVS SASTKG
324	3B61HC	SVDERLLEFGGRLVQPGGSLRLSCSASGFTFSNSAMSWVR QAPGKGLEWVS SILS S GVGT FYADSVKGRFTVSRDNSRNT LYLQMKSLRAEDTALYYCAKVQIQQLNFGVITDAGLDVWG KGTTLIVSSASTKG
325	3B6HC	QLQLKESGPGMVKPSETLSLTCSVSGASWSANDYWGWIR QAPGKGLECIGIILYTGSTFYNPSLQSRVTISRDPSKNHV SLTLTSVTAADSAVYYCARIPYHSESYYNWIGGFDVWGQ GTRVTVSSASTKG
326	3B77HC	QVHLVQSGAEVKKPGSSVRVSCKASGWTFGDSVNSAITWV RQAPGQGLEWMGRFIPILGLSNYAQKFQDRVTINVDRSTN TAYMELSGLRSEDTAVYYCARLITGMNAPWFYYMDVWGKG TTITVSSASTKG
327	3B79HC	QVQLGQSGTEVKKPGFSVKVSCKASGGSSTAYGYSWVRQA PGQGFEWMGRIIP FYG11TYAPKFQGRVTITADRS T S TVY MELTSLTFADTALFFCARDFGDPRNGYYFDSWDQGLWLTV SSASTKG
328	3B84HC	SQVQLVESGPGLVKPSETLSLTCSVSNGSISSGGYYWSWL RQFPGKGLEWIGSIHYTGRTMYNPSLMGRPALSMDTSNNQ FSLKLSSVTAADTALYFCARDLQWIFWDPWGQGTLVTVS SASTKG
329	3B86HC	RVHSQVQLVESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGHYW NWIRQHPGKGLEWIGHIYNIATTYYNPSLKSRVSISVDTS KNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSGRWTIGARIYFDNWG

- 63 042696

		QGALVAVSSASTKG
330	3B8HC	QVQLVQSGGEVRKPGSSVKVPCKISGNAFSNYGVNWVRQA PGQGLEWVGRIIPVIGVAQHAPKFQGRVTITADKS TTTAY LELSSLRSDDTAVYFCAKDHGDPRTGYYFDYWGQGALVTV SSASTKG
331	3B93HC	QVHLVQSGAEVKKPGSSVRVSCEASGWTFGSVNSAITWVR QAPGQGLEWMGRTIPFLGISNYAQKFQGRVTITADKS TNI AYVDVT S L T S QDTAVYYCARLIT GMTAPW FYYMDVWGKGT TVTVSSASTKG
332	3BNC101HC	EVQLVQSGSDVKKPGTTVTISCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGQGLEWIGWINPRTGQPNHAKQLQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LIVSSASTKG
333	3BNC124HC	QSQVHLVQSGAEVKKPGSSVKVSCQASGGTFNTFAINWVR QAPGQGLEWVGGIIPVFGTASYAQKFQGRVTVTTDESRGT AYMELNSLRSEDTAVYYCARGQTDLNDDLWSDYSTPGFDY WGQGTLVTVS SAS TKG
334	3BNC130HC	RVQLGQS GAEVKKPGASVKVS CKVS GNSLTEFSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEEGETVPAQKFKGRVTMTEDTSTNTAY MELSSLRSEDTAVYYCSTEPREMGTLTAGFEYWGQGTLVI VSSASTKG
335	3BNC149HC	QPQLVQSGSGAEVKKPGASVRISCEASEYNVFDHFMQWVR QAPMEGLEWMGWINPRGGYPSYSPTFQGRLTFTRQPSWDD S TIT FHMELRGLRHDDTAVYYCARPHS PDDAWS LDVWGRG TLVTVSSASTKG
336	3BNC177HC	LQPRVHSEVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLSDLS MHWVRQAPGKGLEWMGGFDEEDGEITYAQKFQGRVSMTED TSRDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATAPRLELGELSSGFHY WGLGTLVTVS SAS TKG
337	3BNC17HC	RVQLGQS GAEVKKPGASVKVS CKVS GNSLTEFSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEEGETVPAQKFKGRVTMTEDTSTNTAY MELSSLRSEDTAVYYCSTEPREMGTLTAGFEYWGQGTLVI VSSASTKG
338	3BNC48HC	IWAPLIAVTFLVLHCESLGTCCCCQASGGTFNTFAINWVR QAPGQGLEWVGGIIPVFGTASYAQKFQGRVTVTTDESRGT

- 64 042696

		AYMELNSLRSEDTAVYYCARGQTDLNDDLWSDYSTPGFDY WGQGTLVTVSSASTKG
339	3BNC58HC	EVQLVE S GAEVKKPGASVKVS CKVS GYT L S DL SMHWVRQA PGKGLEWMGGFDEEDGEITYAQKFQGRVSMTEDTSRDTAY MELSSLRSEDTAVYYCATAPRLELGELSSGFHYWGLGTLV TVSSASTKG
340	3BNC78HC	EVQLVE S GAEVKKPGASVKVACKVS GKKL S DL SIHWVRQA PGKGLEWMGGFDEEDGKISYERKFQGRVTMTEDTARDTAF MEMSSLRSDDTAVYFCAAAPRLDLGELSSGFHFWGLGTLV SVSSASTKG
341	3BNC82HC	CNPRVHS EVQLVE S GAEVKKPGASVKVACKVS GKKL S DL S IHWVRQAPGKGLEWMGGFDEEDGKISYERKFQGRVSMTED TARDTAFMEMSSLRSDDTAVYFCAAAPRLDLGELSSGFHF WGLGTLVTVSSASTKG
342	3BNC8HC	EVQLVE S GAEVKKPGASVKVS CKVS GNSLTEFSIHWVRQA PGKGLEWMGGFDPEEGETVPAQKFKGRLTMTEDTSTNTAY MELSSLRSEDTAVYYCSTEPREMGTLTAGFEYWGQGTLVT VSSASTKG
343	3a426hc	QVQLQESGPGLVKPSETXSLTCSVSNGSISSGGYYWSWLR QFPGKGLEWIGSIHYTGRTMYNPSLMGRPALSMDTSNNQF SLKLSSVTAADTALYFCARDLQWIFWDPWGQGTLVTVSS ASTKG
344	3a515hc	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFTTYDISWVRQA PGQGLEWMGGILPDFGAPSYAQKFQDRVTITTDESSSTAY MELNSLRSEDTAIYYCARGRGDDFWSGESPSWYFDYWGQG TLVTVSSASTKG
345	3b46HC	GYSEVQLVQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGHYWN WIRQHPGKGLEWIGHIYNIATTYYNPSLKSRVSISVDTSK NQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSGRWTIGARIYFDNWGQ GALVAVSSASTKG
346	3ANC32HC	QVQLVQSGADVKKPGATVTVSCKTDEDEDDFRAHLMQWMR QAPGQRLEWVGWIKPQTGQPSYGQKFQGRVTLTREVSTST VFLQLRNLRSDDTAVYYCARPRGGRDNWSFHVWGRGTLVT VSSASTKG
347	3ANC3HC	QVQLVQSGADVKKPGASVTVSCKTDEDEDDFRAHLVQWMR

- 65 042696

		QAPGQRLEWVGWIKPQTGQPSYAQKFQGRVTLTREVSTST VFLQLRNLRSDDTAVYYCARPRGGRDNWSFHVWGRGTLVT VSSASTKG
348	3ANC41HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYTFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLKFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
349	3ANC42HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYTFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLKFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
350	3ANC66HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYKFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLRFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
351	3ANC70HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYKFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLRFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
352	3ANC75HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCETYGYTFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLKFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
353	3ANC79HC	QVQLVQSGAAVKKPGASVKVSCEAYGYKFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYTSAVNYSPKYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLRVDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
354	3ANC87HC	QVQLVQSGGAVKKPGASVKVSCETYGYTFTDHFMHWWRQA PGQGLEWMGWINPYSSAVSYSPRYQGRVTMTRDTFLETVY MELRGLKFDDTAIYYCATPKSGRDYWSFDLWGQGTLVTVS SASTKG
355	3ANC8HC	QVQLVQSGADVKKPGASVTVSCKTDEDEDDFRAHLVQWMR QAPGQRLEWVGWIKPQTGQPSYAQKFQGRVTLTREVSTST VFLQLRNLRSDDTAVYYCARPRGGRDNWSFHVWGRGTLVT VSSASTKG

- 66 042696

356	3ANC96HC	QVQLVQSGADVKKPGASVTVSCKTDEDEDDFRAHLVQWMR QAPGQRLEWVGWIKPQTGQPSYAQKFQGRVTLTREVSTST VFLQLRNLRSDDTAVYYCARPRGGRDNWSFHVWGRGTLVT VSSASTKG
357	3B106HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVI VSSASTKG
358	3B16HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPCQFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTK
359	3B180HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPCQFQGRVSLTRQASWDFDT ISFYMDLKALRLDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
360	3B183HC	QVRLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYEIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDS YSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGSQVT VSSASTKG
361	3B191HC	QVRLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYEIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDS YSFYMDLKALRSDDTGVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
362	3B21HC	QVRLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYEIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDS YSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
363	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGPQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
364	3BBM60	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYRDFDVWGSGTQVT

- 67 042696

		VSSASTKG
365	3BBM60	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKIRDYSIHWWRQA PGQGLQWVGWINPQTGQPNIPRPFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLEALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
366	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLEALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
367	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
368	3BBM60	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDT YSFYMGLKAVRSDDTAIYFCARQRSDFWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
369	3BBM60	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
370	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISGHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
371	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNIPRQFQGRISLTRQASGDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFGVWGSGTQVT VSSASTKG
372	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDIDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
373	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT

- 68 042696

		FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
374	3BBM60	QVHLSHSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
375	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
376	3BBM60	QVHLSQSGAWTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
377	3BBM60	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARHRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
378	3BNC101HC	EVQLVQSGSDVKKPGTTVTISCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGQGLEWIGWINPRTGQPNHAKQLQGRVTLTRERST STVEMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LIVSSASTKG
379	3BNC102HC	QPQLVQSGSGAEVKKPGASVRISCEASEYNVFDHFMQWVR QAPGQGLEWMGWINPRGGYPSYSPRFQGRLTFTRQPSWDD S SVT FHMELRGLRHDDTAVYYCARPHS PDDAWS LDVWGRG TLVTVSSASTKG
380	3BNC104HC	EVQLVQS GS DVRKPGATVTVS CKADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
381	3BNC105HC	HVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRLDDTAIYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
382	3BNC106HC	WQLVQS GS DVRKPGAT VT VS CKADE DE DD FTAYNY FMHW

- 69 042696

		VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
383	3BNC107HC	QVQLVQSGAALKKPGASLRISCQAYGYKFTDYLIHWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYKFQGRVSLTRDTFEEILF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGGGSQVLVSSA STKG
384	3BNC108HC	QVQLVQSGTAVKKPGASVRVSCQASGYTFTDYFIYWWRQA PGQGLEWLGWINPRTSQPSYPYRFQGRVTLTRDIFEEMLY MDLRGLRSDDTGIYFCARRHSDYCDFDIWGSGTQIIVSSA STKG
385	3BNC10HC	EVQLVQSGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
386	3BNC114HC	EVQLVQSGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
387	3BNC117HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
388	3BNC126HC	QPQLVQSGSGAEVKKPGASVRISCEASEYNVFDHFMQWVR QAPGQGLEWMGWINPRGGYPSYSPTFQGRLTFTRQPSWDD S TIT FHMELRGLGHDDTAVYYCARPHS PDDAWS LDVWGRG TLVTVSSASTKG
389	3BNC127HC	EVQLVESGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGQGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
390	3BNC134HC	QVQLVQSGAALKKPGASLRISCQAYGYKFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYKFQGRVSLTRDTFQEILF MNLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQILVSSA STKG

- 70 042696

391	3BNC140HC	EVQLVQS GS DVRKPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
392	3BNC141HC	WQLVQS GS DVRKPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
393	3BNC142HC	QVQLVQSGAALRRPGASVRISCQAYGYRFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIRPETGQPSYSYRFQGRVTLTRDTFEEIHF MDLRGLRYDDTATYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVSVSSA STRG
394	3BNC148HC	QVQLVQS GS DVRRPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSRGRGTS LTVSSASTRG
395	3BNC149HC	QPQLVQSGSGAEVRRPGASVRISCEASEYNVFDHFMQWVR QAPMEGLEWMGWINPRGGYPSYSPTFQGRLTFTRQPSWDD S TIT FHMELRGLRHDDTAVYYCARPHS PDDAWS LDVWGRG TLVTVSSASTRG
396	3BNC151HC	QVQLVQSGATLRRPGASVRISCQAYGYRFTDHLIHWWRQA PGQGLEWIGWIRPETGQPSYAYRFQGRVSLTRDTFEEILF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDLDVWGGGTQLLVSSA STRG
397	3BNC153HC	QVQLVQSGAALRRPGASLRISCLTYGYRFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIRPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVIVSSA STRG
398	3BNC156HC	QVQLVQSGAALRRPGASLRISCQTYGYRFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIRPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGGGSQVIVSSA STRG
399	3BNC158HC	QVQLVQSGAALRRPGASLRISCQTYGYRFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIRPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVIVSSA

- 71 042696

		STKG
400	3BNC159HC	QVQLVQSGAALRRPGASVRISCQTYGYRFTDHLIHWWRQA PGQGLEWIGWIKPDTGQPSYSSRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVLVSSA STKG
401	3BNC15HC	QVQLVQSGAALKKPGASLRISCQTYGYKFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVLVSSA STKG
402	3BNC173HC	QVQLVQS GS DVRKPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
403	3BNC175HC	EVQLVQS GS DVRKPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
404	3BNC176HC	QVQLLQSGAAVTRPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPRTGQPNNPRQFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLRGLRSDDTAIYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTRG
405	3BNC181HC	EVQLVQS GS DVRRPGATVTVS GRADE DE DD FTAYDY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
406	3BNC186HC	EVQLVQS GS DVRRPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
407	3BNC18HC	EVQLVQS GS DVRRPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
408	3BNC193HC	QVQLVQSGTAVRRPGASVRVSCQASGYTFTDYFIYWWRQA PGQGLEWLGWINPRTSQPSYPYRFQGRVTLTRDIFEEMLY

- 72 042696

		MDLRGLRSDDTGIYFCARRHSDYCDFDIWGSGTQIIVSSA STKG
409	3BNC196HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRISLTRQASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
410	3BNC20HC	QVQLVQS GS DVRKPGATVTVS CKADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
411	3BNC29HC	WQLVQSGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
412	3BNC31HC	QVQLVQSGAALKKPGASVRISCQTYGYKFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVLVSSA STKG
413	3BNC33HC	WQLVQSGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
414	3BNC42HC	QVQLVQSGAALKKPGASVRISCQAYGYKFTDYLIHWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYKFQGRVTLTRDTFEEILF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVIVSSA STKGA
415	3BNC44HC	EVQLVESGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
416	3BNC45HC	WQLVQSGSDVRKPGATVTVSCKADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
417	3BNC53HC	QVQLVQSGAALKKPGASVRISCQAYGYKFTDHLIYWWRQA

- 73 042696

		PGQGLEWIGWIKPETGQPSYAYKFQGRVTLTRDTFEEIHF MDLRGVRNDDTATYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVIVSSA STKG
418	3BNC54HC	EVQLVE S GS DVRKPGATVTVS CKADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
419	3BNC55HC	QVQLVQSGTAVKRPGASVRVSCQASGYTFTDYFIYWWRQA PGQGLEWLGWINPLTSQPSYPSRFQGRLTLTRDTFDEMLY MDLRGLRSDDTGIYFCARRHSDYCDFDIWGSGTQIIVSSA STKG
420	3BNC59HC	EVQLVQS GS DVRKPGATVTVS CKADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMKLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
421	3BNC60HC	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDT YSFYMDLKAVRSDDTAIYFCARQRSDFWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
422	3BNC62HC	QVRLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYEIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDS YSFYMDLKALRSDDTGVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
423	3BNC64HC	QVHLSQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYKISDHFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDT YSFYMDLKALRSDDTAIYFCARQRSDFWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
424	3BNC65HC	QVQLL P FGGAVTKPGASVRVS CEAS GYNIRDY FIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPCQFQGRVSLTRPASWDFDT ISFYMDLKALRLDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
425	3BNC66HC	QVQLVQSGAALKKPGASLRISCQTYGYKFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIAF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHTDYCVFDVWGSGSQIIVSSA STKG

- 74 042696

426	3BNC6HC	QVQLVE S GS DVRKPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHAKQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTKG
427	3BNC72HC	QVQLVQSGAALKKPGASLRISCQTYGYKFTDHLIYWWRQA PGQGLEWMGWIKPETGQPSYSYRFQGRVSLTRDTFEEIVF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVIVSSA STKG
428	3BNC75HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLKALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VYSASTKG
429	3BNC79HC	QVQLLQSGAAVTKPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPKTGQPNNPRQFQGRVSLTRQASWDFDT ISFYMDLKALRLDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTKG
430	3BNC81HC	RQVQLVQSGAALKKPGASLRISCQAYGYKFTDHLIYWWRQ APGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYKFQGRVSLTRDTFQEIL FMDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQILVSS AS TKG
431	3BNC84HC	QVQLVQSGAALKKPGASLRISCQAYGYKFTDHLIYWWRQA PGQGLEWIGWIKPETGQPSYSYKFQGRVSLTRDTFQEILF MDLRGLRSDDTAIYFCARRHSDYCDFDVWGSGSQVIVSSA STKG
432	3BNC86HC	QVQLVQS GS DVRKPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
433	3BNC87HC	QVQLLQSGAAVTRPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPRTGQPNNPRQFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLRALRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTRG
434	3BNC89HC	QVQLVQ S G TAVRRP GAS VRVS C QAS GYTFIDHFIYWWRQA PGQGLEWLGWINPLTSQPSYPSRFQGRLTLTRDTFDEMLY MDLRGLRSDDTGIYFCARRHSDYCDFDIWGSGTQIIVSSA
		STRG
435	3BNC91HC	QVQLLQSGAWTRPGASVRVSCEASGYRIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPQTGQPNIPRPFQGRVTLTRHASWDFDT FSFYMDLRALRSDDTAIYFCARRRSDYCDFDVWGSGTHVT VSSASTRG
436	3BNC92HC	EVQLVQSGSDVRRPGATVTVSCRADEDEDDFTAYNYFMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
437	3BNC94HC	QVQLVQS GS DVRRPGATVTVS GRADE DE DD FTAYNY FMHW VRQAPGHGLEWIGWINPRTGQPNHARQFQGRVTLTRERST STVFMRLTNLRLDDTAVYFCARPLRGGDTWHYHSWGRGTS LTVSSASTRG
438	3BNC95HC	QVQLLQSGAAVTRPGASVRVSCEASGYNIRDYFIHWWRQA PGQGLQWVGWINPRTGQPNNPRLFQGRVSLTRHASWDFDT FSFYMDLRAVRSDDTAVYFCARQRSDYWDFDVWGSGTQVT VSSASTRG

- 75 042696

Таблица В

SSEQ ID NO:	Антитело	Аминокислотная последовательность легкой цепи
439	8ANC131KC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGLNFWWYQQKRGQ APRLLIHAPSGRAPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF AIYYCQEYSSTPYNFGPGTRVDRKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
440	8ANC134KC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGLNFWWYQQKGGQ APRLLIHGPTDRAPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF ALYYCQEYSSTPYNFGPGTRVDRKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
441	8ANC13KC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGLNFWWYQQKRGQ APRLLIHGPSHRAPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF AIYYCQEYSSTPYNFGPGTRVDRKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
442	8ANC45KC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGVNFWWYQQKRGQ APRLLIYGPSNRAPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF ALYYCQEYSSTPYNFGPGTRVDRKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
443	8ANC50KC	EIVLTQSPTTLSLSPGERATLSCRASQGVNLWWYQQKRGQ
		APRLLIYGPSDRAPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF ALYYCQEYSSTPYNFGTGTRVDRKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
444	8ANC88KC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGLNFWWYQQKRGQ APRLLIHAPSDRAPGVPDRFSARGSGTDFSLVISSVEPDDF AIYYCQEYSSTPYNFGPGTRVDRKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
445	8ancl82kc	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGVNFWWYQQKRGQ APRLLIYGPSDRAPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF ALYYCQEYS S T PYNFGTGTRVDRKRTVAAP
446	8ancl92kc	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGVNFWWYQQKRGQ APRLLIYGNSDRVPGVPDRFSARGSGTEFSLVISSVEPDDF ALYYCQEYSSTPYNFGPGTRVDRKRTVAA
447	8ANC14KC	SEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSINNYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGGGSGTDFTLTISSLEPE DFAVYYCQQRANWRLLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQ
448	8ANC16KC	EIVMTQSPDTLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPG QAPRLLIYGASTRATAVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSED SAVYYCQQYYQWLSYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQ
449	8ANC195KC	DIQMTQSPSTLAASIGGTVRVSCRASQSITGNWVAWYQQRP GKAPRLLIYRGAALLGGVPSRFSGSAAGTDFTLTIGNLQAE DFGTFYCQQYDTYPGTFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSD EQ
450	8ANC24KC	SEIVMTQSPATLSMSPGERATLSCRASLSVNTNLAWYQQKP GQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSE DFALYYCQQYNHWPQTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQK
451	8ANC5KC	DIQMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDINNFLNWYQQKPG KAPRLLIYDASNLESGVSSRFSGSRSGTDFTLTISSLLPED IATYSCQQYSNLPYTFSQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE Q
452	12а12кс	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAGQGIGSSLQWYQQKPG KAPKLLVHGASNLHRGVPSRFSGSGFHTTFSLTISGLQRDD FATYFCAVLEFFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKS
453	12al3kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAGQGIGSSLQWYQQKPG

- 76 042696

		KAPKLLVHGASNLHRGVPSRFSGSGFHTTFSLTISGLQRDD FATYFCAWEFFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQL
454	12а16кс	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQGIGSSLQWYQQKPG RAPNLLVHGASKLHRGVPSRFSGSGFHTTFSLTISGLQRDD FATYFCAVLEFFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK
455	12alkc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVSINCQAGQGLGSSLNWYQQKPG RAPKLLVHGASNLQRGVPSRFSGSGFHTTFTLTISSLQPDD VATYFCAAFQWFGPGTKVEIKRT
456	12a20kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVSIHCQAGQGIGSSLNWYQQKPG RAPRLLVHGASNLQRGVPSRFSGSGFHTTFTLTISSLQPDD VATYWCAALEFFGPGTKVEI
457	12a21kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTINCQAGQGIGSSLNWYQKKPG RAPKLLVHGASNLQRGVPSRFSGSGFHTTFTLTISSLQPDD VATYFCAVFQWFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK
458	12a22kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAGQGIGSSLNWYQQKPG RAPKLLVYGASNLQRGVPSRFSGSGFHTTFTLTISSLQPED FATYFCSVYEFLGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
459	12a23kc	DIQMTQSPSSLSVSVGDRVSITCRATQGIGNSLNWYQQKPG KAPKVLIYGTTKLHGGVPSRFSGGGSGSTGTLTIDSLQPED IATYFCQLFEFFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
460	12a27kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQGIGSSLQWYQQKPG RAPNLLVHGASNLHRGVPSRFSGSGFHTTFSLTISGLQRDD FATYFCAVLEFFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
461	12a4 6kc	DIQMTQSPSSLPASVGDTVTITCQAGQGIGSSLQWYQQRPG RAPNLLVYDASNLQRGVPSRFTGTGFHTTFTLTIRGLRPED FGTYFCASLEFFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
462	12a55kc	YIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCQAGQGIGSSLNWYQQKPG KAPKLLVHGASNLQRGVSSRFSGSGFHTTFTLTISSLRPED VGTYFCEVYEFIGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
463	12a56kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVSINCQAGQGIGSSLNWYQQKRG KAPKLLVHGASTLQRGVPSRFSGSGFHTTFTLTISSLQPDD VATYFCESFQWFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
464	12a6kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQGIGSSLQWYQQKPG RAPKLLVHGASNLHRGVPSRFSGSGFHTSFTLTISSLQPDD VATYFCAVLEFFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ

- 77 042696

465	12a7kc	DIQMTQSPSSLSASVGDRVSIHCQAGQGIGSSLKWYQQKSG RAPRLLVHGASNLQRGVPSRFSGSGFHTTFTLTISSLQPDD VATYWCAVLEFFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
466	LSSB2339LC	QSVLTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPNLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSDGSVRLFGGGTTLTVLSQPKAAPSVTLFP PSNGGR
467	LSSB2351LC	QSALTQTPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYQQFP GAAPKLLIRRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRLD DEAYYFCATYDSGWSIRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
468	LSSB2364LC	SQAWTQPPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNLVYWYKQF PGTAPKLLIRRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRP DDEAFYFCATYDSHGSIRLFGGGTLLTVLSQPKAAPSVTLF PP
469	LSSB2367LC	QTWTQPPSASGTPGQRVTISCSGGGSNIGGNLVSWYQHFP GAAPKLLIYRNDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLTISGLRSD DEATYFCAAYDCTLSLRLFGGGTTLNVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
470	LSSB2490LC	QSALTQPPSVSGTPGQNVTISCSGGGSNVGGNLVSWYQHFP GAAPKLLIHRDNQRPSGVPDRFSVLKSGNSASLAISGPRSD DEAFYFCAVYDSSLSLGLFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
471	LSSB2530LC	QSALTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPTLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEGFYFCATYDSDGSIRLFGGGTALTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEELK
472	LSSB2554LC	NFMLTQAPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQYP GTAPKLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISELRPD DEAFYFCATYDSDGSIRLFGGGTALTVLSQPKAAPSV
473	LSSB2586LC	NFMLTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPNLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSDGSIRLFGGGTTLTVLSQPKAAPSVTLFP P
474	LSSB2612LC	QSVLTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP

- 78 042696

		GTAPKLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSDGSIRLFGGGTALTVLSQPKAAPS
475	LSSB2640LC	QLVLTQPPSVSGTPGQNVTISCSGGGSHVGGNLVSWYQHFP GAAPKLLIHRDNQRPSGVPDRFSALKSGNSASLAISGLRSD DEAFYFCAVYDSSLSLGLFGGGTKLTVLSQPKAAPSVT
476	LSSB2644LC	RTWTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQL PGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQA EDEADYYCQSYDSSLSGSGVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTL FPPSSEEL
477	LSSB2666LC	QSALTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPKLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEALYFCATYDSDGSIRLFGGGTALTVLSQPKAAPSVTLFP PGWEE
478	LSSB2680LC	QPVLTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPNLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAITGLRPD DEAFYFCATYDSDGSIRLFGGGTALTVLSQPKAAPSVTLFP P
479	LSSB2683LC	QSALTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPNLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSDGSIRLFGGGTTLTVLSQPKAAPSVTLF
480	LSSB344LC	QSALTQTPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYQQFP GAAPKLLIRRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRLD DEAYYFCATYDSGWSIRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
481	LSSNEC107LC	QLVLTQPPSVSATPGQTVTISCSGSGSNVGGNHVYWYRQLP GAAPTLVISKTDHRPSRVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRPD DEAAYFCATYDTGLSLRLFGGGTRLAVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
482	LSSNEC108LC	QSALTQPPATSGTPGQRVTISCSGGGSNVGGNLVSWYQQFP GAAPKLILHRDGQRPSGVPDRFSASKSGTSASLTISGLRSD DEATYFCAAFDSALSLPLFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
483	LSSNEC117LC	QSVLTQVLSVSGTPGQRVIISCSGTSSNVGGNLVSWYQHLP GAAPRLLIHRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLVISGLRSD DEADYFCGAYDSTFSLPVFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP

- 79 042696

		PSSEEL
484	LSSNEC118LC	NFMLTQPPSVSATPGQTVTISCSGSGSNVGGNHVYWYRQLP GAAPTLVISKTDHRPSRVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRPD DEAVYFCATYDTGLSLRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTQFP PSSEE
485	LSSNEC122LC	QSALTQPPSVSATPGQTVTISCSGSGSNVGGNHVYWYRQLP GAAPTLLISKTNHRPSQVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEADYFCGTYDTSLSLRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
486	LSSNEC24LC	QSALTQPPSASGTPGQRVTISCSGGGSNIGGNLVSWYQHFP GTAPKLLIYRNDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLTISGLRSD DEATYFCAAYDSSLSLRLFGGGTTLNVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
487	LSSNEC2LC	QSALTQPPSVSGTPGQNVTISCSGGGSDVGGNLVSWYQHFP GAAPKLLIHRDNQRPSGVPDRFSALKSGNSASLAISGLRSD DEAFYFCAVYDSSLSLGLFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
488	LSSNEC33LC	QAVVTQPPSVSATPGQTVTISCSGSGSNVGGNHVYWYRQLP GAAPTLLISKTNRRPSQVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRPD DEADYFCATYDTDLSLRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
489	LSSNEC46LC	QSALTQPPAASGAPGQRVTISCSGGGSNVGGNLVSWYQQFP GAAPKLILHRDGQRPSGVPDRFSASKSGTSASLTISGLRSD DEATYFCAAYDSAVSLPVFGGGTKLTVLSQPKAAPLVT
490	LSSNEC48LC	NFMLTQPPSASGTPGQRVTISCSGGGSNIGGNLVSWYQHFP GAAPKLLIYRNDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSD DKATYFCAAYDSTLSLRLFGGGTTLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEE
491	LSSNEC52LC	QSVLTQVLSVSGTPGQRVIISCSGTSSNVGGNLVSWYQHLP GAAPRLLIHRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLVISGLRSD DEADYFCAAYDSTFSLPVFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSE
492	LSSNEC56LC	QSALTQPPSVSATPGQTVTISCSGSGSNVGGNHVYWYRQLP GAAPTLLISKTDHRPSRVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAIYFCATYDTGLSLRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP

- 80 042696

		PSSEEL
493	LSSNEC60LC	QSALTRTPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYQQFP GAAPKLLIRRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRLD DEAYYFCATYDSGWSIRLFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
494	LSSNEC70LC	QSALTQAPSASGTPGQRVTISCSGGGSNIGGNLVSWYQHFP GAAPKLLIYRNDQRPSGVPDRFSASKSGTSASLAISGLRSD DEATYFCAAYDSTLSLRLFGGGTTLAVLSQPKA
495	LSSNEC72LC	NFMLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNLVYWYKQFP GTAPKLLIRRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSHGSIRLFGGGTLLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
496	LSSNEC7LC	QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNLVYWYKQFP GTAPKLLIRRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLTISGLRPD DEAFYFCATYDSQGSTRLFGGGTVLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
497	LSSNEC89LC	QSALTQPPSVSGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPKLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSQGSFRVFGGGTALTVLSQPKAAPSVTLYP PSSEE
498	LSSNEC94LC	NFMLTQPPSASGAPGQRVTISCSGGPSNVGGNYVYWYRQFP GTAPNLLILRDDQRPSGVPDRFSASKSGNSASLAISGLRPD DEAFYFCATYDSDGSIRLFGGGTTLTVLSQPKAAPSVTLFP PSSEEL
499	LSSNEC9LC	QVLSVSGTPGQRVIISCSGTSSNVGGNLVSWYQHLPGAAPR LLIHRDDQRPSGVPDRFSGSKSGNSASLVISGLRSDDEADY FCAAYDSTFSLPVFGGGTRLTVLSQPKAAPSVTLYAPSSEE
500	LSSB2066KC	PVTLSASVGDRVTITCRASEDISKYLNWYQHKPGKAPKLLI YTASSLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPDDFATYYCQ QSYTSSVTFGQGTRVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
501	LSSB2080KC	PATLAVSPGERATISCKSSQNLLYSANNQHSLAWYQQRPGQ PPKLLLYWASTRLSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISNLQAEDV AVYYCQQYYSPPPTFGQGTKVEIRRTVAAPSVFIFPPSDEQ L
502	LSSB2133KC	TLSASVGDRVTITCRASQSINNYLNWYQQKPGKAPKLLIYA

- 81 042696

		ASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFVTYYCQQT YSNPRMFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
503	LSSB2182KC	KAPATLSLSPGERATLSCRASQSVGSDLAWYQQKPGQAPRL LIYDASNRATAIPARFSGSGSGTDFTLSISSLEPEDFAVYF CQQRYDKITFGQGTRLEIQRTVAAPSVFIFPPSDEQ
504	LSSB331KC	RGPVTLAVSLGERATITCKSSQSVLVHSNNKNYLSWYQQKP GQPPKLLIYWASTRESGVPERFSGSGSGTDFTLSISSLQAE DVAVYYCHQYFSTPRTFGQGTKVEIKGTVAAPSVFIFPPSD EQL
505	3A124KC	SEIVLTQSPATLSLSPGESATLSCRASQSLSSSLAWYQQKP GQAPRLLIYDTSDRATGIPARFSGRGSGTDFTLTISSLEPE DFAVYYCQQRSNWAITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD
506	3A125KC	EIVLTQSPGTLSLSPGEXATLSCRASQTISNNYLXWYQQKA GQAPRLLIYGASSGATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPE DFAVYYCQQYGLSPWTFGRGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
507	3A140LC	QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGAYNYVSWYRQH PGKAPKLMINDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQA EDEADYYCCSYAGTYSYVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFP PSSEEL
508	3A144KC	APVTLSASVGDTVTITCRASQPIATFLNWYQHKPGQAPKLL IYAASTFQRGAPSRYSGSGSGTDFTLTINSLQPEDLATYYC QQTFTDPVTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD
509	3A160KC	DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASQGISHYLAWYQQKPG KVPRLLIYAASRLQSGVTSRFSGSGSGTEFTLTISSLLPED AAVYFCQKYDTDPMTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD
510	3A18KC	DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCRANQHIRSFLNWYQQTPG KAPKLLIYAASTLQRGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLERED LATYYCQQTYTSPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE
511	3A204KC	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNNYLAWYQQKP GQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPE DFAVYYCQQYATSSLYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPS D
512	3A228KC	LSVSLGERATINCKSSQSILYSSDKKNYLAWYQQKIGQPPK LLLYWASTRESGIPDRFSGSGSGSDFTLTISSLQPEDVAVY YCQQYYISPFTFGPGTKVDLKRTVAAPSVFIFPPSD

- 82 042696

513	3A233LC	NFMLTQPASVSGSPGQSITLSCTGTTSDVRDSNFVSWYQQV PGKAPKLIIYDVSARPSGVSFRFSGSKSGNTASLTISGLQA EDEALYYCSSFTPTNTLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVT
514	3A244LC	SQSVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGPSTGAVTSGFYPHWFQQ KPGQAPRALIYSTSNKYSWTPARFSGSLLGGKAVLTLSDVQ PDDEAEYYCLLLLYYGGPWIFGGGTKLTVLVS
515	3A255LC	QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCASSTGAVTSGFYPHWFQQK PGQAPRALIYSTSNRYSWTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQP EDEAEYYCLLLPYYGGPWIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEEL
516	3A296KC	EIVMTQSPATLSVSPGDRATLSCRASQSVSTNLAWYQQKPG QAPRLLIYGASTRATGIPATFSGSGFATEFTLTISSLQSED FAVYYCQQYNNWPPAFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
517	3A334LC	QSVLTQPPSASGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQP PGKAPKVIIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQA EDEADYYCSSYAGSNNFVFGTGTEVTWGQPKANPTVTLFP PSSEELL
518	3A366KC	S L SASVGDRVTITCRASE SIS FYLNWYQQKPGKAPELLIFA TSTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQLEDFATYYCQQS SSTPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
519	ЗАЗ84КС	DIQMTQSPSSLSAYVGDRVTITCRASQNINTYLNWYQQRPG KAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLETED FAVYYCQQTYRSVTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSD
520	ЗА419КС	LSAYVGDRVTITCRASQNINTYLNWYQQRPGKAPKLLIYAA STLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLETEDFAVYYCQQTY SSVTFGQGTKLETRRTVAAPSVFIFPPSD
521	ЗА461КС	SEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQK PVQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEP EDFAVYYCQQYGTLHPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPP SD
522	ЗА474КС	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSNYLAWYQQKP GQAPRLLIYGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLSISRLEPE DIAVYYCHQYGSSQRFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
523	ЗА518КС	DIQMTQS PS SLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPG KAPKLLIYAASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED

- 83 042696

		FATYYCQQSSSKPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
524	3A539LC	NFMLTQPASVSGSPGQSITISCSGTGSDIGVYNYVSWYQQH PGKAPRLMIYDVTNRPSGVSNRFSGSKSGFTASLTISGLQG DDEADYYCSSYSSTNTYVFGTGTHVTVLGQPKANPTVTLFP PSSEEL
525	3A576LC	QSALTQPPSASGTPGQRVTISCSGSYHNIGSNAVNWYQQLP GTAPKLLIYSNDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSE DEADYYCAAWDDSLHVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPS SEEL
526	3A613LC	QSALTQPPSASGTPGQRVTISCSGSYHNIGSNAVNWYQQLP GTAPKLLIYSNDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSE DEADYYCAAWDDSLHVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPS SEEL
527	3A64KC	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDITTYLAWLQQKPG KAPKSLIYSASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGLQPED FATYYCQQYNYYPITFGLGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE
528	3A650KC	IILFLVATATGSWAQSALTQPRSVSGSLGQSVTISCTGSSS DVGRYNYVSWYQHHPGKAPKLMISDVNKRPSGVPDRFSGSK SGNTASLTISGLQAEDETDYYCCSYAGSYIWVFGG
529	3A67KC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPG QAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSDTDFTLTISSLEPED FAVYYCQQRGIWPLQITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPS DE
530	3A779KC	LSASVGDRVTITCRASQSIDRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAA SSLHTDVPSRFSGSGAGTYFTLTITSLQPEDFATYYCQQSH SPSFGQESYSITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD
531	3A816KC	VTLSLSPGERATLSCRASQTISNNYLAWYQQKPGQAPRLLI YGASSGATGLPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCH QYALSPWTFGRGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
532	3A869KC	11L FLVATAT GVHS DIQMTQSPSSL SASVGDRVTIT GRAS Q SIDRYLNWYQHKPGKAPKLLIYAASNLHTDVPSRFSGSGAG TYFTLTITSLQPEDFATYYCQQSHSPSFGQESYSIAFGQGT RLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE
533	3A93LC	QSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTNSDVGYSYVSWFQQHP GKVPKLLIYDVSRRSSGVSNRFSGSRSGNTASLTISGLRAE

- 84 042696

		DEADYYCGSFTTSLTLVFGGGTKLAVLVSPS
534	За42 бкс	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSRYLAWYQQKP GQAPRLIIYDASSRASGIPDRFSGSGSETDFTLTITRLEPE DFAVYYCQLYGTSPKFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPS D
535	За515кс	DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSHGDTYLKCF QQRPGQSPRRPIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISR VEAEDVGV
536	ЗЫ29кс	GPATLSVSPGERATLSCRASQSLRNNLAWYQQKTGQSPRLL IYAVSTRATGIPPRFSGGGSGTEFTLTIDSLQSEDFAVYFC QQYDSPQWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD
537	ЗЫ711С	QSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGGQNFVSWYQQH PGTAPQLLIYDVTNRPAGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLRT EDEADYYCASFTILNGVDYVFGTGTKVTVLLSPSQPYL
538	ЗЬ27кс	EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRAGQSVSSDLAWYQHKPG QAPRLLIYDASKRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPED FAVYYCQHRTNWPPSIТ FGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPS D
539	ЗЬ41кс	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKP GQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLSISRLEPE DFAVYYCQQYGTSSCTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIF
540	ЗЬ45кс	EIVLTQSPGTLSLSPGDRAALSCRASETLSGNSLAWYQQKR GQPPRLLIFAASSRATGIPERFSGGGSGTDFTLTITRLEPE DFAVYFCQQYVDAPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD
541	ЗЬ46кс	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNNLAWYQQKP GQAPRLLMSGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPE DFAVYHCQQYGSSPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPP
542	ЗЬ571с	QSVLTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQH PGKAPKTMIFDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQA Е DEADYYC S S YAGRNT FYVFG Т G Т ТVTVQVS Р S Q Р Р Р
543	ЗЬ8кс	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYAQKPG QAPRLIIYGASSRASAIPDRFRGSGSGTDFTLTISRLEPED FAVYYCQQYDDAPITFGHGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE
544	3BNC55KC	DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCQTSAGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSRLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT

- 85 042696

		YYCQVYEFFGPGTRLDLKSTVAA
545	3BNC60KC	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPARFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDVATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAA
546	ЗапсЗкс	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCQASRDTDNSLTWYQQKPG RPPKLLIYHWNLGPGVPSRFSGSASSATQSTLIISDFQPD DVATYFCQNYEFFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
547	ЗЫОбкс	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFWPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
548	ЗЫ бкс	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFWPGTRLDLKRTVAAPSVFI FPPSD
549	ЗЫ 8 Оке	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTFTCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRGWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFAVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
550	ЗЫ83кс	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLETGVPSRFTGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
551	ЗЫ91кс	DIQMTHSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLETGVPSRFTGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
552	ЗЬ21кс	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLETGVPSRFTGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
553	ЗЬпс102кс	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQGISNSLNWYQQKPG KAPRLLIYGTSTLQRGVPSRFSGSGSGTRFTVTINSLQPED IATYFCQHNEFFGRGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQL
554	ЗЬпс104кс	DIQMTQSPSSLSASIGDRVNITCQASRDTGSALNWYQQKVG RPPRLLISAVSNLGAGVPSRFSGRRSGTQSTLTINTLQPED IATYFCQHYEFFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
555	3bncl05кс	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTFTCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSRLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFAVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
556	ЗЬпс107кс	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP

- 86 042696

		KLLMYDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
557	3bncl08kc	DIQMTQSPSSLSARVGDKVTITYQTSAGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSRLVTGAPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
558	3bncll7kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFWPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
559	3bncl34kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTINCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
560	3bncl42kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCHTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMFDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEVFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
561	3bncl51kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
562	3bncl53kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRLSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
563	3bncl56kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQKRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRLSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
564	3bncl58kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRLSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
565	3bncl59kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
566	3bncl5kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRLSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
567	3bncl7 6kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQAEDIATY FCQVYEFAVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD

- 87 042696

568	3bncl93kc	DIQMTQSPSSLSARVGDKVTITCQTSAGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSRLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
569	3bncl96kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLMYDGSTLERGVPARFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDVATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
570	3bnc31kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMCDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
571	3bnc42kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTTKGYLNWYQQRRGRAP KLLMFDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDLAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
572	3bnc53kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCHTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMFDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEVFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
573	3bnc62kc	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLETGVPSRFTGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
574	3bnc65kc	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTFTCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFAVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
575	ЗЬпсббкс	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRLSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
576	3bnc75kc	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFWPGTRLDLKRTVAAPSVFI FPPSD
577	3bnc7 9kc	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTFTCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFAVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPSD
578	3bnc81kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTINCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSD
579	3bnc84kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTINCQTNKGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSKLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDIAT
		YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
580	3bnc87kc	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFWPGTRLDLKRTVAAPSVFI FPPSD
581	3bnc89kc	DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCQTSAGYLNWYQQRRGRAP KLLMYDGSRLVTGVPSRFSGRRWGTQYNLTIGSLQPEDVAT YYCQVYEFFGPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
582	3bnc91kc	DIQMTQSPSSLSARVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFAVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD
583	3bnc95kc	DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCQANGYLNWYQQRRGKAPK LLIYDGSKLERGVPSRFSGRRWGQEYNLTINNLQPEDIATY FCQVYEFIVPGTRLDLKRTVAAPSVFIFPPSD

- 88 042696

Таблица 1

Прямые праймеры лидерной последовательности
VH1 LEADER-A	ATGGACTGGACCTGGAGGAT	SEQ ID NO:591
VH1 LEADER-В	ATGGACTGGACCTGGAGCAT	SEQ ID NO:592
VH1 LEADER-С	ATGGACTGGACCTGGACAAT	SEQ ID NO:593
VH1 LEADER-D	GGCCTTCTCTTTGTGGTGGC	SEQ ID NO:594
VH1 LEADER-Е	ATGGACTGGACCTGGAGGGT	SEQ ID NO:595
VH1 LEADER-F	ATGGACTGGATTTGGAGGAT	SEQ ID NO:596
VH1 LEADER-G	AGGTTCCTCTTTGTGGTGGCAG	SEQ ID NO:597

VH3 LEADER-A	TAAAAGGTGTCCAGTGT	SEQ ID NO:598
VH3 LEADER-В	TAAGAGGTGTCCAGTGT	SEQ ID NO:599
VH3 LEADER-C	TAGAAGGTGTCCAGTGT	SEQ ID NO:600
VH3 LEADER-D	GCTATTTTTAAAGGTGTCCAGTGT	SEQ ID NO:601
VH3 LEADER-E	TAGAAGGTGTCCAGTGT	SEQ ID NO:602
VH3 LEADER-F	TTAAAGCTGTCCAGTGT	SEQ ID NO:603

VH4 LEADER-A	ATGAAACACCTGTGGTTCTTCC	SEQ ID NO:604
VH4 LEADER-В	ATGAAACACCTGTTTCTT	SEQ ID NO:605
VH4 LEADER-C	ATGAAGCACCTGTGGTTCTT	SEQ ID NO:606
VH4 LEADER-D	ATGAAACATCTGTGGTTCTT	SEQ ID NO:607

VH5 LEADER-A	TTCTCCAAGGAGTCTGT	SEQ ID NO:608
VH5 LEADER-B	CCTCCACAGTGAGAGTCTG	SEQ ID NO:609
VH6 LEADER-A	ATGTCTGTCTCCTTCCTCATC	SEQ ID NO:610
VH7 LEADER-A	GGCAGCAGCAACAGGTGCCCA	SEQ ID NO:611
Обратные праймеры константной области

3' Cg CHI (г амма)	GGAAGGTGTGCACGCCGCTGGTC	SEQ ID NO:612
3' IgG (внутренний)	GTTCGGGGAAGTAGTCCTTGAC	SEQ ID NO:613

Таблица 2

	Пол	Клада	Год рождения	Год диагноза	CD4+ Т кл/мкл	Копии вируса/мл	Клинический статус

ptl	Мужской	В	1948	1985	354	4722	нонпрогрессор
pt3	Мужской	В	1965	2002	427	880	нонпрогрессор
pt8	Мужской	В	1962	1989	580	<50	отборный контролер
pt!2	Мужской	Нет данных	Нет данных	Нет данных	Нет данных	Нет данных	Нет данных

Таблица ЗА

Название АТ	VH	D	JH	(-)	CDR3 (а. к.)	SEQ ID NO
3BNC4	1-2	7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	614
3BNC23	1-2	6-25/3-3	2/6	3	QRSDFWDFDV	615
3BNC42	1-2	7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	616
3BNC53	1-2	3-3	2/6	3	RHSDYCDFDV	617
3BNC55	1-2	3-3/6-19/5-12	2/6	3	RHSDYCDFDI	618
3BNC62	1-2	6-25/6-13/6-6	2/6	3	QRSDYWDFDV	619

- 89 042696

3BNC65	1-2	6-25/6-6	2/6	3	QRSD YWDFD V	620
3BNC66	1-2	7-27	2/6	3	RHTDYCDFDV	621
3BNC72	1-2	7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	622
3BNC79	1-2	6-25/6-6	2/6	3	QRSD YWDFD V	623
3BNC81	1-2	7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	624
3BNC89	1-2	3-3/6-19/5-12	2/6	3	RHSDYCDFDI	625
3BNC91	1-2	2-21/6-25	2/6	3	RRSDYCDFDV	626
3BNC95	1-2	6-25/2-8	2/6	3	QRSD YWDFD V	627
3BNC105	1-2	6-6/6-25	2/6	3	QRSD YWDFD V	628
3BNC107	1-2	7-27/3-3	2/6	3	RHSDYCDFDV	629
3BNC108	1-2	3-3/6-19/6-25	2/6	3	RHSDYCDFDI	630
3BNC117	1-2	6-25/2-8	2/6	3	QRSD YWDFD V	631
3BNC134	1-2	7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	632
3BNC142	1-2	3-3	2/6	3	RHSDYCDFDV	633
3BNC151	1-2	7-27/4-17/3-3	2/6	3	RHSDYCDLDV	634
3BNC156	1-2	3-3/7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	635
3BNC159	1-2	7-27	2/6	3	RHSDYCDFDV	636
3BNC176	1-2	6-25/6-6	2/6	3	QRSD YWDFD V	637
3BNC196	1-2	6-25/6-6/6-13	2/6	3	QRSD YWDFD V	638
3BNC6	1-2	3-16/1-7	2	1	PLRGGDTWHYH S	639
3BNC101	1-2	1-7/3-16	2	1	PLRGGDTWHYH S	640
3BNC102	1-2	3-22/1-26/1-20	2	3	PHSPDDAWSLD V	641
3BNC126	1-2	3-22/1-26/1-20	2	3	PHSPDDAWSLD V	642
3BNC149	1-2	3-22/1-26/1-20	2	3	PHSPDDAWSLD V	643
3ANC3	1-2	2-21/2-15	1/2	1	PRGGRDNW SFH V	644
3ANC42	1-2	ND	2	2	PKSGRDYWSFD L	645
3BNC3	1-69	5-5/5-18/5-24	3	2	ATGYSYGYLDA	646

- 90 042696

					FDI
3BNC8	1-24	5-24/4-17	4	3	EPREMGTLT AG FEY	647
3BNC48	1-69	3-3	4	5	GQTDLNDDLWS DYSTPGFDY	648
3ANC38	1-69	3-3	4	5	GQTDLNDDFWS EYSTPGFDY	649
3BNC49	1-69	3-22/6-19/5-12	6	3	GEFDSSGFDYE SWYPYYMDV	650
3BNC58	1-24	3-16/3-10	4/5	2	APRLELGEL S SG FH Y	651
3BNC78	1-24		4/5	2	APRLDLGELSS GFHF	652
3BNC78	1-24		4/5	2	APRLDLGEL S S GFHF	653
3BNC71	1-24	1-24	4/5	3	DNPLLQ S GEF S S SLDN	654
3BNC71	1-24	1-24	4/5	3	DNPLLQ S GEF S S SLEN	655
3BNC144	1-69	3-9/5-5	4	3	AQ GDILTEGYF DY	656

Название AT	(+)	Длина	Мутации ТЦ	Набор праймеров	к/1	Vk/1	Jk/1	(-)
3BNC4	1	10	72	новый	к	1D-33	3	1
3BNC23	1	10	79	новый	к	1D-33	3	1
3BNC42	2	10	69	новый	к	1D-33	3	1
3BNC53	2	10	74	новый	к	1D-33	3	1
3BNC55	2	10	64	новый	к	1D-33	1/3	1
3BNC62	1	10	81	новый	к	1D-33	3	1
3BNC65	1	10	82	новый	к	1D-33	3	1
3BNC66	2	10	69	новый	к	1D-33	3	1
3BNC72	1	10	72	новый	к	1D-33	3	1

- 91 042696

3BNC79	1	10	76	новый	к	1D-33	3	1
3BNC81	2	10	71	новый	к	1D-33	3	1
3BNC89	2	10	68	новый	к	1D-33	3	1
3BNC91	2	10	76	новый	к	1D-33	3	1
3BNC95	1	10	72	новый	к	1D-33	3	1
3BNC105	1	10	77	новый	к	1D-33	3	1
3BNC107	2	10	69	новый
3BNC108	2	10	62	новый	к	1D-33	3	1
3BNC117	1	10	72	новый	к	1D-33	3	1
3BNC134	2	10	71	новый	к	1D-33	3	1
3BNC142	2	10	72	новый	к	1D-33	3	1
3BNC151	2	10	69	новый	к	1D-33	3	1
3BNC156	2	10	72	новый	к	1D-33	3	1
3BNC159	2	10	71	новый	к	1D-33	3	1
3BNC176	1	10	72	новый	к	1D-33	3	1
3BNC196	1	10	78	новый	к	1D-33	3	1
3BNC6	3	12	55	новый	к	1D-33	1/3	1
3BNC101	3	12	54	новый
3BNC102	1	12	63	новый	к	1D-33	1/3	1
3BNC126	1	12	65	новый
3BNC149	1	2	68	новый
3ANC3	3	12	59	новый	к	1D-33	3	1
3ANC42	2	12	53	новый	к	1D-33	3	1
3BNC3	0	14	22	новый	L	1-44	1	2
3BNC8	1	14	21	старый	к	3-11	2	0
3BNC48	0	20	18	новый
3ANC38	0	20	12	новый	1	1-47	1/6	2
3BNC49	0	20	23	старый	к	3-20	3
3BNC58	1	15	16	старый	к	3-11	2	0
3BNC78	2	15	38	старый
3BNC78	2	15	39	старый
3BNC71	0	16	22	старый	к	3-11	5
3BNC71	0	16	17	старый	к	3-11	5
3BNC144	0	13	15	старый	к/1	1-44/1-47	1	2

- 92 042696

							данных
3BNC6	QHYEF	681	1	5	44		+	24
3BNC101	Нет данных						Нет данных	1
3BNC102	QHYEF	682	1	5	34		-	1
3BNC126	Нет данных						Нет данных	1
3BNC149	Нет данных						Нет данных	1
3ANC3	QHYEF	683	0	5	47		+	1
3ANC42	QQYEF	684	1	5	41		Нет данных	4
3BNC3	AAWDDT LYV	685	0	9	19	CD4i	+	7
3BNC8	QHRSIWP LMCT	686	2	11	10	CD4i	+	3
3BNC48	Нет данных						Нет данных
3ANC38	GAWDDT LYV	687	0	9	8	CD4i	-	2
3BNC49	Нет данных					CD4i	Нет данных	2
3BNC58	QQRTIWP PGCS	686	1	11	10	CD4i	Нет данных	2
3BNC78	Нет данных						Нет данных	1
3BNC78	Нет данных						Нет данных	2
3BNC71	Нет данных					CD4i	Нет данных	1
3BNC71						CD4i	Нет данных	1
3BNC144	Нет данных		1	9		CD4i	Нет данных	1

- 93 042696

Таблица 3B

Название	VH	D	JH	(-)	CDR3 (а.к.)	SEQ ID
Ат						NO
1NC2	1-46	3-22/5-5	4/5	4	NEADYHDGNGHSLR GMFD Υ	687
1NC3	1-46	6-19	4/5	3	AEAESQSHSRPIMFDF	688
1NC7	1-46	6-19/1- 14	4/5	3	AEAESQSHSRPIMFDS	689
1NC9	1-46	5-12/2-8	4/5	4	QDSDFHDGHGHTLRG MFD S	690
INC 18	1-46	1-14/2- 21	4/5	2	NEPQYHSLPGMFDY	691
1NC24	1-46	3-16	4/5	3	NEPQYHDGNGHSLPG MFD Y	692
1NC29	1-46	3-16/6- 19	4/5	3	NEPQYYDGSGHSLPG MFD Y	693
1NC33	1-46	5-12	4/5	5	LEADGDDYSPKMVD Y	694
1NC46	1-46	3-9/3-16	4/5	3	READYHDGNGHTLPG MFDF	695
1NC48	1-46	3-9/6-19	4/5	2	NEPQYFDGSGHSLPG MFD Y	696
1NC52	1-46	3-16/6- 19	4/5	3	NEPQYYDGSGHSLPG MFD Y	697
1NC56	1-46	5-12/3-9	4/5	5	LEADGDDYSPKMFDH	698
1NC60	1-46	3-22/1- 26	1/5	4	LEAESDSHSRPIMFD H	699
1NC66	1-46	3-16	4/5	2	NEPQYHDGNGHSLPG MFDF	700
1NC70	1-46	3-16/6- 19	4/5	3	NEPQYYDGSGHSLPG MFD Y	701
1NC72	1-46	6-19/1- 14	4/5	3	AEAESQSHSRPIMFDF	702
1NC94	1-46	6-13/6- 19	4/5	3	AEAASD SHSRPIMFD H	703
1NC95	1-46	3-16/6-	4/5	4	LEADGSDYSPKMFDF	704

- 94 042696

		19
INC 107	1-46	3-3/5-12	4/5	5	LEADGDDYSPKMFDY	705
INC 108	1-46	3-9/3-16	4/5	4	READYHDGNGHTLPG MFDF	706
INC 109	1-46	5-1/6-19	4/5	5	LEADGDDYSPKMFDY	707
1NC110	1-46	5-24/6- 19	4/5	4	LEADGDNYSPKMVD Y	708
1NC116	1-46	2-21	4	2	NEPQYHSLPGMFDY	709
1NC118	1-46	3-9/5-12	4	3	LEADGGDYSPKMFDY	710
INC 122	1-46	3-16/3-3	4	4	LEADGADYSPKMFDF	711
1NC123	1-46	6-19	4	3	AEAESQ SHSRPIMFD	712
1NC127	1-46	6-13/6- 19	4/5	3	AEAASDSHSRPIMFD H	713
1B344	1-46	3-22/1- 26	1/5	4	LEAESDSHSRPIMFD H	714
1B2416	1-46	1-14/3- 16	4	4	NEPQYHDDNGHSLPG MID Y	715
1B2503	1-46	6-19	5	3	AEAESQSHSRPIMFDS	716
1B2573	1-46	3-22	4/5	2	NEPQYHDGNGHSLPG MFD S	717
1NC5	1-69	3-3	3	1	GRQTFRAIWSGPPVV FDI	718
1NC126	1-69	3-3	3	1	GRQTFRAIWSGPPAV FDI	719
INC 16	4-34	3-10	5	2	AVAGLWFEDAYNWF GP	720
1NC21	4-34	3-10	5	2	AVKGLWFDETYTWF GP	721
1NC54	4-34	3-10	5	2	AVKGFWFDEPSTWFG P	722
1NC57	4-34	3-10	5	2	AVKGFWFDDPYTWF GP	723
1NC115	4-34	3-10	5	2	AVKGFWFDEVYNWF	724
					GP

- 95 042696

Название AT	(+)	Длина	Мутации ТЦ	Набор праймеров	к/1	Vk/1	Jk/1	О
1NC2	2	19	74	новый	1	1-47	3	1
1NC3	2	16	86	новый	1	1-47	6/7	1
1NC7	2	16	77	новый	1	1-47	6/7	1
1NC9	4	19	67	новый	1	1-47	3	1
INC 18	1	14	85	новый
1NC24	2	19	79	новый	1	1-47	3	1
1NC29	1	19	87	новый
1NC33	0	15	84	новый	1	1-47	3	2
1NC46	3	19	85	новый	1	1-47	3	1
1NC48	1	19	88	новый	1	1-47	3	1
1NC52	1	19	82	новый	1	1-47	3	1
1NC56	2	15	91	новый	1	1-47	3	1
1NC60	3	16	72	новый	1	1-47	3	1
1NC66	2	19	91	новый	1	1-47	3	1
1NC70	1	19	85	новый	1	1-47	3	1
1NC72	2	16	77	новый	1	1-47	6/7	1
1NC94	3	16	81	новый	1	1-47	3	2
1NC95	0	15	93	новый
INC 107	1	15	90	новый	1	1-47	3	1
INC 108	3	19	85	новый	1	1-47	3	1
INC 109	1	15	85	новый
1NC110	1	15	88	новый
1NC116	1	14	83	новый
1NC118	0	15	86	новый	1	1-47	3	1
INC 122	1	15	94	новый	1	1-47	3	1
1NC123	2	16	78	новый	1	1-47	3	1
1NC127	3	16	81	новый	1	1-47	3	2
1B344	3	16	72	новый	1	1-47	3	1
1B2416	2	19	81	новый
1B2503	1	16	78	новый	1	1-47	3	1
1B2573	2	19	81	новый
1NC5	2	18	47	новый	к	3-11	2	0
1NC126	2	18	47	новый
INC 16	0	16	75	новый	к	1D-39	2/3	0
1NC21	1	16	58	новый
1NC54	1	16	59	новый
1NC57	1	16	61	новый
1NC115	1	16	58	новый

- 96 042696

Название AT	CDR3 (а.к.)	SEQ ID NO	(+)	Длина	Мутации лц	Связывание	NEUT	# родственников
1NC2	AVYDSS LSLGL	725	0	11	47		+	15
1NC3	ATYD SQ RSIRL	726	2	11	55		+	1
1NC7	ATYD SQ G STRL	727	1	11	51		+	1
1NC9	AAYDST FSLPV	728	0	11	53	?	+	2
1NC18	Нет данных						Нет данных	1
1NC24	AAYDSS LSLRL	729	0	11	30		+	2
1NC29	Нет данных						Нет данных	1
1NC33	ATYDTD LSLRL	730	1	11	49		+	1
1NC46	AAYDSA VSLP V	731	0	11	52		Нет данных	1
1NC48	AAYDST LSLRL	732	1	11	37		Нет данных	1
1NC52	AAYDST FSLPV	733	0	11	54		Нет данных	1
1NC56	ATYDTG LSLRL	734	1	11	58		Нет данных	1
1NC60	ATYD SG WSIRL	735	1	11	46		+	3
1NC66	AAYDST LSLRL	736	1	11	33		Нет данных	1

- 97 042696

1NC70	AAYDST LSLRL	737	1	11	40		Нет данных	1
1NC72	ATYD SQ GSTRL	738	1	11	51		+	2
1NC94	ATYD SD GSIRL	739	1	11	41		-	5
1NC95	Нет данных						Нет данных	1
1NC107	ATYDTG LSLRL	740	1	11	58		Нет данных	1
1NC108	AAFD SA LSLPL	741	0	11	51		+	1
1NC109	Нет данных						Нет данных	1
1NC110	Нет данных						Нет данных	1
1NC116	Нет данных						Нет данных	1
1NC118	ATYDTG LSLRL	742	1	11	54		Нет данных	1
1NC122	GTYDTS LSLRL	743	1	11	57		Нет данных	1
1NC123	ATYD SH GSIRL	744	2	11	48		-	1
1NC127	ATYD SD GSIRL	745	1	11	41	?	+	5
1B344	ATYD SG WSIRL	746	1	11	46		+	1
1B2416	Нет данных						Нет данных	1
1B2503	GTYD SQ GSTRL	743	1	11	49		Нет данных	1
1B2573	Нет данных						-	2
1NC5	QHRSNW PWT	744	2	9		CD4BS	+	1
1NC126	Нет данных						Нет данных	1
1NC16	QQ SF AV PYT	745	0	9	35	Нет данных	Нет данных	1
1NC21	Нет данных					Нет данных	Нет данных	1
1NC54	Нет данных					Нет данных	Нет данных	1
1NC57	Нет данных					Нет данных	Нет данных	1
1NC115	Нет данных					Нет данных	Нет данных	1

- 98 042696

Таблица 3C

Название AT	VH	D	JH	(-)	CDR3 (а.к.)	SEQ ID NO
8ANC13	1-46	3-16	6	4	DGLGEVAPDYRYGID V	746
8ANC22	1-46	3-16	6	3	DGLGEVAPAYLYGID A	747
8ANC26	1-46	3-16	6	3	DGLGEVAPAYLYGID A	748
8ANC37	1-46	3-16	6	3	DGLGEVAPAYLYGID A	749
8ANC41	1-46	3-16	6	3	DGLGELAPAYHYGID V	750
8ANC50	1-46	3-16	6	3	DGLGELAPAYQYGID V	751
8ANC88	1-46	3-16	6	4	DGLGEVAPDYRYGID V	752
8ANC127	1-46	3-16	6	3	DGLGEVAPAYLYGID A	753
8ANC131	1-46	3-16	6	3	DGLGEVAPDYRYGID V	754
8ANC142	1-69	3-3	Нет данных	2	TSTYDQWSGLHHDG VMAF S S	755
8ANC46	1-69	3-22/2- 15	3	2	S SGNFEFAFEI	756
8ANC191	1-69	3-22/2- 15	3	2	S S GNYDFAYDI	757
8ANC196	1-69	3-22/2- 15	3	2	S S GNYDFAFDI	758
8ANC14	1-24	6-13/5- 5	4	4	ADRFKVAQDEGLFVI FD Y	759

- 99 042696

8ANC34	1-24	6-13/5- 5	4	4	ADPFKVAQDEGLYVI FD Y	760
8ANC58	1-24	6-13/5- 5	4	4	ADPFKVAQDEGLYVI FD Y	761
8ANC168	1-24	6-13/5- 5	4	4	ADPFKVAQDEGLFVI FD Y	762
8ANC5	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	763
8ANC7	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	764
8ANC9	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	765
8ANC77	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	766
8ANC107	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	767
8ANC108	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	768
8ANC137	1-69	4-17/3- 10	6	8	DRGDTRLLDYGDYED ERYYYGMDV	769
8ANC16	1-69	2-2	3	2	DRS S AIGYC S SISC YK GSFDI	770
8ANC24	1-24	2-2	6	1	GGLYCSSISCIMDV	771
8ANC25	1-24	2-2	6	1	GGLYCSSISCIMDV	772
8ANC38	3-43	3-16	5	1	NGFD V	773
Название AT	(+)	Длина	Мутации ТЦ	Набор праймеров	k/1	Vk/1	Jk/1	(-)
8ANC13	1	16	75	новый	к	3-11	2/3	1
8ANC22	0	16	85	новый
8ANC26	0	16	76	новый	к	3-11	2/3	1
8ANC37	0	16	82	новый	к	3-11	2/3	1
8ANC41	1	16	71	новый	к	3-11	2/3	1

- 100 042696

8ANC50	0	16	71	новый	к	3-11	2/3	1
8ANC88	0	16	73	новый	к	3-11	2/3	1
8ANC127	0	16	86	новый
8ANC131	1	16	75	новый	к	3-11	2/3	1
8ANC142	2	20	72	новый	к	1-5	1/5	1
8ANC46	0	и	30	старый	1	1-40	3	1
8ANC191	0	и	28	старый
8ANC196	0	и	25	старый
8ANC14	1	18	И	старый	к	3-11	4	0
8ANC34	0	18	10	новый
8ANC58	0	18	18	новый
8ANC168	1	18	И	новый
8ANC5	3	24	40	старый	к	1D-33	2	0
8ANC7	3	24	37	новый
8ANC9	3	24	35	старый
8ANC77	3	24	50	старый
8ANC107	3	24	38	старый
8ANC108	3	24	37	старый
8ANC137	3	24	37	новый
8ANC16	1	21	12	старый	к	3-15	2	0
8ANC24	0	14	12	старый	к	3-15	1	0
8ANC25	0	14	6	старый
8ANC38	0	5	70	новый	1	2-11	3	0

- 101 042696

8ANC41	QEYS STP YN	777	0	9	42		+	2
8ANC50	QEYS STP YN	778	0	9	46	CD4BS	+	2
8ANC88	QEYS STP YN	779	0	9	46		Нет данных	1
8ANC127	Нет данных						Нет данных	1
8ANC131	QEYS STP YN	780	0	9	45	CD4BS	+	1
8ANC142	QQYDTYP GT	781	0	9	43	?	+	2
8ANC46	QSYDRSL RGS V	782	1	11	30	Нет данных	Нет данных	1
8ANC191	Нет данных						Нет данных	1
8ANC196	Нет данных						Нет данных	1
8ANC14	QQRANWR LLT	783	2	10	9	CD4i	+	2
8ANC34	Нет данных						Нет данных	5
8ANC58	Нет данных						Нет данных	3
8ANC168	Нет данных						Нет данных	1
8ANC5	QQYSNLP YT	784	0	9	17	CD4i	-	2
8ANC7	Нет данных						Нет данных	2
8ANC9	Нет данных						Нет данных	1
8ANC77	Нет данных						Нет данных	3
8ANC107	Нет данных						Нет данных	2
8ANC108	Нет данных						Нет данных	4
8ANC137	Нет данных						Нет данных	1
8ANC16	QQYYQWL	785	0	10	13	Нет данных	Нет	8
	S YT						данных
8ANC24	QQYNHWP QT	786	0	9	7	CD4i	+	1
8ANC25	Нет данных						Нет данных	1
8ANC38	CLKKTS S YV	787	2	9	41	CORE	+	2

- 102 042696

Таблица 3D

Название Ат	VH	D	JH	(-)	CDR3 (а.к.)	SEQ ID NO
12А1	1-2	5-12/3-10	4/5	4	DESGDDLKWHL HP	787
12А2	1-2	4-17	4/5	3	DGSGDDTSWHLH Р	788
12А4	1-2	5-12/3-10	4/5	4	DESGDDLKWHL HP	789
12 Аб	1-2	1-26/3-10	4/5	2	DGSGDATSWHLH Р	790
12А7	1-2	1-26	4/5	4	DGSGDARDWHL DP	791
12А9	1-2	3-3	4/5	5	DRRDDDRAWLL DP	792
12А12	1-2	1-26/3-10	4/5	4	DGSGDDTSWHLD P	793
12А13	1-2	1-26	4/5	4	DGSGDDTSWYLD P	794
12А20	1-2	1-26	4/5	3	DGSGDARDWHL HP	795
12А22	1-2	3-16	4/5	4	DGGGDDRTWLL DA	796
12А23	1-2	3-3	4/5	5	DRRDDGLDWLL DP	797
12А27	1-2	1-26/3-10	4/5	3	DGSGDDTSWHLH P	798
12А46	1-2	3-10	4/5	1	GGGDGRNWHLH P	799
12А55	1-2	1-26	4/5	4	DGSGDDRNWHL DP	800
12А56	1-2	1-26	4/5	4	DESGYDLNWHL D S	801
Название Ат	(+)	Длина	# Мутации ТЦ	Набор праймеров	k/1	Vk/1	Jk/1	(-)
12А1	2	13	60	новый	k	ID-33	3	0
12А2	2	13	67	новый	k	ID-33	3	10
12А4	2	13	59	новый	k	ID-33	3	0
12 Аб	2	13	61	новый	k	ID-33	3	1
12А7	1	13	62	новый	k	ID-33	3	1
12А9	3	13	62	новый	k	ID-33	3	1
12А12	1	13	60	новый	k	ID-33	3	1
12А13	0	13	61	новый	k	ID-33	3	1
12А20	3	13	61	новый	k	ID-33	3	1
12А22	1	13	61	новый	k	ID-33	3	1
12А23	2	13	51	новый	k	ID-33	3	1
12А27	2	13	68	новый	k	ID-33	3	1
12А46	3	13	62	новый	k	ID-33	3	1
12А55	1	13	63	новый	k	ID-33	3	2
12А56	1	13	66	новый	k	ID-33	3	1

- 103 042696

	W
12 Аб	A VLEF	804	0	5	39		+	1
12А7	A VLEF	805	0	5	41		Нет данных	2
12А9	QLFEF	806	0	5	39		Нет данных	1
12А12	A VLEF	807	0	5	41	CD4BS	+	1
12А13	AVVEF	808	0	5	41		Нет данных	1
12А20	AALEF	809	0	5	40		+	1
12А22	S VYEF	810	0	5	39		+	2
12А23	QLFEF	811	0	5	39		+	1
12А27	A VLEF	812	0	5	40		Нет данных	1
12А46	ASLEF	813	0	5	43		+	1
12А55	EVYEF	814	0	5	37		+	1
12А56	ESFQW	815	0	5	37		Нет данных	1

Таблица 3E

Название Ат	VH	D	JH	О	CDR3 (а.к.)	SEQ ID NO
ЗВ191	1-2	6-25/6-13/6-6	2/6	3	QRSDYWDFDV	816
ЗВ6	4-39	3-9/3-10	3	2	IP YHSES YYK VVI GGFD V	817
ЗВ8	1-69	4-17/3-22	4	3	DHGDPRTGYYFD Y	818
ЗВ27	3-64	3-9/1-26/4-17	5	1	GPLLRYLD S	819
ЗВ41	1-24	3-16	6	4	KAKDYYYES SD Y SPYYYYYMDV	820
ЗВ46	4-31	3-3/2-8	4/5	0	GSGRWTIGARIY FDN	821
ЗВ 144	3-30	3-3/3-10/3-16	4/5	2	TPPHYDVLTGYP S SVLEF	822
ЗВ117	1-69	5-5/5-18/5-24	3	2	ATGYSYGYLDAF DI	823
ЗА869	4-4/4-59	6-19/5-12/1- 26	4	2	EKGQWLTVPPYY FD S	824
ЗА228	5-51	3-3/2-2	6	1	TRCF GANCFNFM D V	825
ЗА461	1-46	2-2	4	1	PEP S SIVAPLYY	826
ЗА18	1-69	3-10/5-24	3	3	DPQVEVRGNAFD I	827
ЗА125	1-46	1-20/1-7/3-10	3	2	PQYNLGRDPLDV	828
ЗА255	4-59	3-3/3-9	4	3	ADYDLLT S SYHF D S	829
3A233	4-59/4-61	3-3/4-17	4/5	3	LDGEAFRYYLDL	830

- 104 042696

Название Ат	(+)	Длина	# Мутации ТЦ	Набор праймеров	к/1	Vk/1	Jk/1	(-)
ЗВ191	1	10	81	новый	к	1D-33	3	1
ЗВ6	1	18	50	новый	к	1-9	1/3	0
ЗВ8	2	13	50	новый	к	3-20	1/5	2
ЗВ27	0	9	18	старый	к	3-11	1/5	0
ЗВ41	2	22	17	старый	к	3-20	2	0
ЗВ46	2	15	22	старый	к	3-20	1/4	0
ЗВ144	1	18	23	старый	к	3-15	1/5	0
ЗВ117	0	14	22	новый	1	1-44	1	2
ЗА869	1	1	33	старый	к	1D-39	5	0
ЗА228	1	1	34	старый	к	4-1	3	0
ЗА461	0	1	15	старый	к	3-20	1	0
ЗА18	1	1	40	старый	к	1D-39	5	0
ЗА125	1	1	22	старый	к	3-20	1	0
ЗА255	1	1	35	старый	1	7-43	3	0
3A233	1	1	32	старый	1	2-14	2/3	0

Название Ат	CDR3 (а.к.)	SEQ ID NO	(+)	Длина	Связывание	NEUT	# родстве
							нников
ЗВ191	QVYEF	831	0	5	CD4BS	+	7
ЗВ6	QQLAT	832	0	5	GP41	+	11
ЗВ8	QQYDD APIT	833	0	9	GP41	-	9
ЗВ27	QHRTNWPPSIT	834	2	11	CD4i	-	3
ЗВ41	QQYGTSSCT	835	0	9	CD4i	-	2
ЗВ46	QQYGSSPPT	836	0	9	GP41	Нет данных	2
ЗВ 144	QQYNNWPPIT	837	0	10	Нет данных	Нет данных	4
ЗВ117	AAWDDTLYV	838	0	9	Нет данных	Нет данных	1
ЗА869	QQSHSPS	839	1	7	CD4BS	+	1
ЗА228	QQYYISP	840	0	7	VAR	+	4
ЗА461	QQYGTLHPRT	841	2	10	GP41	-	3
ЗА18	QQTYTSPIT	842	0	9	GP41	-	2
ЗА125	QQYGLSPWT	843	0	9	GP41	-	4
ЗА255	LLLPYYGGPWI	844	0	11	GP41	-	2
3A233	S SFTPTNTLV	845	0	10	GP41	-	2

Таблица 3F

Название Ат	VH	D	JH	(-)	CDR3 (а.к.)	SEQID NO
1В2434	15341	3-22/5-5	1	4	NEADYHDGNGHSLRGM FD Y	846
1В218	1-69	3-3	3	1	GRQTFRAIWSGPPVVF DI	847
1В331	4-34	3-9/3-3	6	3	RYFDWSPFRRDTYGTD V	848
1В2174	4-34	3-9/3-3	6	3	RYLDWSPIGRDTYGTD V	849
1В2055	1-69	2-21	2/5	1	GLCRGGNCRLGPSGWL DP	850
1В2133	1-3	4-17/2- 21	4	1	VAYVHVVTTRSLDN	851
1А64	4-59	5-5/5-18	6	2	HEAPRYSYAFRRYYHY	852

- 105 042696

					GLD V
1A621	4-59	3-3/3-9	6	1	VISGRITIFYYNYIDV	853
1A577	3-48	3-10/3- 16	1	3	GTLWFGESGLRLDH	854
1A732	3-7/3- 73	3-22/3- 10	6	2	NRRVAMPEAMILSFYM D V	855
1A74	4-34	3-3/3-9	4	1	VVPMFSIFGVVKANYF DY	856
1A695	4-59	3-3/3-9	3	2	AGLDYNFWNGKGRKG AFD V	857
1A479	1-69	3-22	4	1	GFRGSPFSSGSLYFDS	858
1A182	1-69	4-17/1- 26	6	6	AVITDLHTFGDYELEDP SYYYMDV	859
1A693	3-23	7-27/3- 22	4	1	RGRRQIGDY	860
1A79	5-51	3-9/3-3	3	4	SYYDFSIGDGNDAFDV	861
1A27	3-11	3-6/5-5	5	2	DTTTFTTFGGGPNMGG FDP	862

Название Ат	(+)	Длина	# Мутации ТЦ	Набор праймеров	к/1	Vk/1	Jk/1	(-)
1B2434	2	19	74	новый	1	1-47	3	1
1B218	2	18	47	новый	к	3-11	2	0
1B331	3	17	40	новый	к	4-1	1/4	0
1B2174	2	17	41	новый	к	4-1	1/4	0
1B2055	2	18	62	новый	к	3-15	1	2
1B2133	1	14	22	новый	к	1D-39	1	0
1A64	5	20	20	старый	1	1-44	3	2
1A621	1	16	30	старый	1	1-47	3	1
1A577	1	14	15	старый	к	1-16	2	0
1A732	2	18	9	старый	к	3-20	3	0
1A74	1	18	23	старый	1	1-51	3	1
1A695	3	19	9	старый	к	1-5	1	1
1A479	1	16	25	старый	к	3-20	1	0
1A182	1	24	28	старый	к	1-5	1	0
1A693	3	9	17	старый	к	1D-39	2	0
1A79	0	16	30	старый	1	1-47	1	3
1A27	0	19	50	старый		1-9	1	0

- 106 042696

Название Ат	CDR3 (а.к.)	SEQ ID NO	(+)	Длина	Связывание	NEUT	# родственников
1В2434	AVYDSSLSLGL	863	0	11	CD4BS	+	7
1В218	QHRSNWPWT	864	2	9	CD4BS	+	10
1В331	HQYFSTPRT	865	2	9	CORE	+	4
1В2174	HQYFNTPRT	866	2	9		Нет данных	1
1В2055	QQYEDPPWT	867	0	9	Нет данных	Нет данных	3
1В2133	QQTYSNPRM	868	1	9	CD4i	-	2
1А64	ASWDDSLSGW V	869	0	11	CD4BS	+	24
1А621	ASWDNSLSGPV	870	0	11	CD4BS	+	3
1А577	QQYNSFPPT	871	0	9	CD4BS	+	8
1А732	QQYGRSP	872	1	7	CD4BS	+	1
1А74	GTWDSSLSAVL	873	0	11	CORE	+	2
1А695	QQYD S	874	0	э	CORE	+	2
1А479	HQYAYSPRT	875	2	9	CORE	+	11
1А182	QQYKSYSGT	876	0	9	CD4i	+	3
1А693	QHSFGSPPWT	877	1	11	CD4i	-	1
1А79	AAWDD SFDYV	878	0	10	V3	+	27
1А27	QQLRT	879	1	5	GP41	-	8

Таблица 4A

Пациент 3, Клон RU01

	3BNC62	3BNC176	3BNC60	3BNC117	3BNC95	3BNC104
MW965.26	<0, 09	<0, 10	<0, 04	<0, 09	<0, 07	>50
BaL.26	<0, 09	<0, 10	<0, 04	<0, 09	<0, 07	0,025
DJ263.8	<0, 09	<0, 10	<0, 04	<0, 09	<0, 07	0,054
6535.3	0, 68	0,46	0,54	0,55	1,0	>50
RHPA4259.7	<0, 09	<0, 10	<0, 05	0, 041	<0, 07	0,0252
TRO.11	<0, 09	<0, 10	<0, 05	0, 077	<0, 07	3,791
PVO.4	<0, 09	<0, 10	0, 09	<0, 09	<0, 07	0,348
YU2.DG	<0, 09	<0, 10	<0, 05	0, 054	<0, 07	0,034
	3BNC91	3BNC55	3BNC89	3ANC3	3BNC53	3BNC72
MW965.26	<0, 08	0, 04	>0, 05	0, 18	0, 09	<0, 06
BaL.26	>178	>30	>110	>50	>30	>139
DJ263.8	>178	>30	>110	>50	>30	>139
6535.3	1	2, 6	1,7	>50	13, 6	8,49
RHPA4259.7	<0, 08	2,2	12,4	7 , 66	100, 6	>139
TRO.11	3, 06	18,4	52,4	10,76	>155	>139
PVO.4	0,44	3, 9	2,7	36, 77	>155	>139
YU2.DG	<0, 08	0, 9	0,39	35, 01	>155	>139
	3BNC156	3BNC158	3BNC153	3BNC108
MW965.26	0, 08	0, 11	0, 15	Нет данных
BaL.26	>111	>109	>100	20, 6
DJ263.8	>111	>109	>100	>55
6535.3	11,1	9, 9	28, 9	>55
RHPA4259.7	>111	>109	>100	45, 91
TRO.11	>111	>109	>100	>55
PVO.4	>111	>109	>100	>55
YU2.DG	>111	>109	>100	25, 5
	3BNC142	3BNC66	3BNC42 3BNC102

- 107 042696

MW965.26	0, 14	1,24	Нет данных	>50
BaL.26	>172	>189	>2 6	>50
DJ263.8	>172	>189	>2 6	>50
6535.3	>172	>189	>2 6	>50
RHPA4259.7	>172	>189	>2 6	>50
TRO.11	>172	>189	>2 6	>50
PVO. 4	>172	>189	NF	>50
YU2.DG	>172	>189	>2 6	>50

Пациент 3, Клоны RU02-07

	3A67	3A383	3BNC8	3ANC44	ЗА576	3ANC38
MW965.26	0, 1	0,5	0,74	25,49	>50	>50
BaL.26	19, 2	5, 3	>50	27,91	27	>50
DJ263.8	>50	>50	>50	>50	>50	>50
6535.3	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
RHPA4259.7	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
TRO.11	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
PVO. 4	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
YU2.DG	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50

Клон В12 и NIH 45

	B12	VRC01	NIH45-46
MW965.26	0,2	<0, 08	0, 04
BaL.26	0,2	0, 1	<0, 04
DJ263.8	>50	0, 08	<0, 04
6535.3	1,4	0,539	0, 14
RHPA4259.7	0, 1	0, 06	0, 034
TRO.11	>50	0,2	1,9
PVO. 4	>50	0,2	0, 17
YU2.DG	2,2	0, 12	<0, 05

Пациент 1, Клон RU08

Таблица 4B

	1B2640	1B2530	1B2364	1NC2	1NC9	1B2490
MW965.26	41,76	0,762	1,85	>50	>50	>50
BaL.26	0, 08	>50	>25	0, 11	1,37	0, 058
DJ263.8	>50	2,71	3,75	>50	>50	>50
6535.3	>50	>50	>25	>50	>50	>50
RHPA4259.7	0, 04	3, 6	2,18	0,59	0, 09	0,414
TRO.11	0,23	0,516	0,27	0, 17	0,2	1,06
PVO. 4	1,05	0,275	0,161	0,37	0,34	2,97
YU2.DG	0,2	0,209	2,46	0, 12	0, 13	0, 125

- 108 042696

	1B2351	1B344	1NC24	1NC3	1NC7	1NC33
MW965.26	>50	>50	>50	>25	>50	>50
BaL.26	>50	>50	>50	>25	>50	>50
DJ263.8	8,46	12, 62	>50	>25	>50	>50
6535.3	>50	>50	>50	>25	>50	22,04
RHPA4259.7	36,48	29, 98	>50	>25	34,27	>50
TRO.11	0,331	0,27	0,2	3,37	16, 57	>50
PVO.4	0,25	0,27	0, 19	6, 68	1,39	1,84
YU2.DG	0, 058	0,25	0,16	18,26	>50	>50
	1NC108	1B2644	1B2339	1NC123
MW965.26	>50	>25	>25	>50
BaL.26	>50	>25	>25	>50
DJ263.8	>50	>25	>25	>50
6535.3	>50	>25	>25	>50
RHPA4259.7	>50	>25	>25	>50
TRO.11	19.37	>25	>25	>50
PVO.4	3.13	>25	>25	>50
YU2.DG	>50	>25	>25	>50

Пациент 1, Клон RU09

	1B218
MW965.26	>119
BaL.26	1, 1
DJ263.8	>119
6535.3	3, 6
RHPA4259.7	>100
TRO.11	>100
PVO.4	>100
YU2.DG	>100

Таблица 4C

Пациент 8, Клон RU10

	8ANC192	8ANC134	8ANC13	8ANC131	8ANC182	8ANC50	8ANC45
MW965.26	>73	>50	>50	>50	>115	>50	>50
BaL.26	0,08	0,02	0,04	0,06	0,08	0,17	0,296
DJ263.8	<0,03	0,003	0,008	0,004	<0,05	0,04	0,041
6535.3	0,34	0,06	0,27	0,2	0,89	2,27	0,813
RHPA4259.7	>50	>50	>50	>50	>100	>50	>50
TRO.ll	>100	>50	>50	>50	>100	>50	>50
PVO.4	0,89	0,46	0,63	0,81	1,2	3,89	4,259
YU2.DG	0,09	0,15	0,21	0,18	0,22	0,42	0,499

Пациент 8, Клоны RU11-15

	8ANC57	8ANC195	8ANC24	8ANC14	8ACN5
MW965.26	24,1	>50	0,29	2,01	>50
BaL.26	4,35	>50	47,53	>50	>50
DJ263.8	30, 19	>50	>50	>50	>50
6535.3	>103	0,2	>50	>50	>50
RHPA4259.7	1, 65	0,34	>50	>50	>50
TRO.ll	32,07	0, 18	>50	>50	>50
PVO.4	101,15	0,52	>50	>50	>50
YU2.DG	27,52	0, 79	>50	>50	>50

- 109 042696

Таблица 4D

Пациент 12, Клон RU16

	12 Al 2	12A21	12A4	12 A3 7	12A22	12 Al 6
MW965.26	0, 042	0, 075	0, 098	0, 056	0, 06	0,167
BaL.26	0, 017	<0,001	<0,001	0, 005	0, 04	0, 042
DJ263.8	0, 002	0, 035	0, 017	0, 013	0, 08	0, 012
6535.3	21,97	>50	>50	>50	>25	15, 44
RHPA4259.7	0, 086	0, 038	0, 041	0, 042	0, 04	0,207
TRO.11	0,288	0,164	0,257	0, 827	0, 56	0,751
PVO. 4	0, 928	0,584	0, 819	0,516	0, 45	2,44
YU2.DG	0, 084	0, 015	0, 018	0, 019	0, 11	0,234
	12A20	12A6	12A23	12A46	12A55
MW965.26	0, 192	0,112	5, 1	>50	0,58
BaL.26	0, 035	0,072	0,57	0, 013	2,87
DJ263.8	0, 05	0,004	0, 63	5, 79	>50
6535.3	48,73	>2 4	14,73	48,85	>50
RHPA4259.7	0, 109	0,227	0,496	>50	>50
TRO.11	0, 689	1,52	2,88	>50	21,45
PVO. 4	3, 04	3,32	2,24	2, 18	0, 99
YU2.DG	0, 142	0,222	0, 053	0, 49	0, 1

Клон В12 и NIH45

	B12	VRC01	NIH45-46
MW965.26	0,2	<0, 08	0, 04
BaL.26	0,2	0, 1	<0, 04
DJ263.8	>50	0, 08	<0, 04
6535.3	1,4	0, 539	0, 14
RHPA4259.7	0, 1	0, 06	<0, 05
TRO.11	>50	0,2	1, 9
PVO. 4	>50	0,2	0, 17
YU2.DG	2,2	0, 12	<0, 05

Таблица 4E

Пациент 3, клон RU01

	3BNC62	3BNC176	3BNC60	3BNC117	3BNC95	3BNC104
MW965.26	<0, 09	<0, 10	0, 09	<0, 09	<0, 07	>50
BaL.26	<0, 09	<0, 10	<0, 04	<0, 09	<0, 07	0, 09
DJ263.8	0, 1	<0, 10	0, 1	0, 1	0, 1	0, 187
6535.3	2,24	1,7	1,77	2,44	4,5	>50
RHPA4259.7	<0, 09	<0, 10	0, 07	0, 137	<0, 07	0, 06
TRO.11	<0, 09	<0, 10	0, 12	0, 077	<0, 07	30,847
PVO. 4	0,23	0,16	0,27	0, 19	0,23	0, 901
YU2.DG	<0, 09	<0, 10	0, 07	0, 054	<0, 07	0, 097
	3BNC91	3BNC55	3BNC89	3ANC3	3BNC53	3BNC72	3BNC156
MW965.26	<0,08	0.15	0.16	0.64	0.61	0.37	0.47
BaL.26	>178	>30	>110	>50	>30	>139	>111
DJ263.8	>178	>30	>110	>50	>30	>139	>111
6535.3	6,7	5.53	5.92	>50	73.38	133.665	69.66
RHPA4259.7	0,52	8.03	>110	>50	>155	>139	>111
TRO.ll	32,31	41.67	>110	>50	>155	>139	>111
PVO.4	2,65	6.5	10.18	>50	>155	>139	>111
YU2.DG	<0,08	1.07	1.49	>50	>155	>139	>111

- 110 042696

	3BNC158	3BNC153	3BNC108	3BNC142	3BNC66	3BNC42	3BNC102
MW965.26	0,6	0,63	Нет данных	0,8	29,98	Нет данных	>50
BaL.26	>109	>100	>55	>172	>189	>26	>50
DJ263.8	>109	>100	>55	>172	>189	>26	>50
6535.3	97,75	>100	>55	>172	>189	>26	>50
RHPA4259.7	>109	>100	>55	>172	>189	>26	>50
TRO.11	>109	>100	>55	>172	>189	>26	>50
PVO.4	>109	>100	>55	>172	>189	Нет данных	>50
YU2.DG	>109	>100	>55	>172	>189	>26	>50

Пациент 3, Клоны RU02-07

	3A67	ЗАЗ 83	3BNC8	3ANC44	ЗА576	3ANC38
MW965.26	16	>25	0,74	>50	>50	>50
BaL.26	>50	>25	>50	>50	>50	>50
DJ263.8	>50	>25	>50	>50	>50	>50
6535.3	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
RHPA4259.7	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
TRO.11	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
PVO.4	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50
YU2.DG	>50	Нет данных	>50	>50	>50	>50

Клон В12 и NIH 45

	B12	VRC01	45-46
MW965.26	Нет данных	<0, 08	0,21
BaL.26	Нет данных	0, 1	0, 06
DJ263.8	Нет данных	0,553	0, 06
6535.3	Нет данных	2,7	0,28
RHPA4259.7	0,39	0,185	0, 146
TRO.11	>50	0, 832	9, 56
PVO.4	>50	1,2	0,47
YU2.DG	7, 8	0,372	0, 08

Пациент 1, Клон RU08

Таблица 4F

	1B2640	1B2530	1B2364	1NC2	1NC9	1B2490	1B2351
MW965.26	>50	>50	>2 5	>50	>50	>50	>50
BaL.26	0,32	>50	>2 5	0,51	19, 92	0,3	>50
DJ263.8	>50	>50	>2 5	>50	>50	>50	>50
6535.3	>50	>50	>2 5	>50	>50	>50	>50
RHPA4259.7	0,25	>50	>2 5	4,33	0,4	1,97	>50
TRO.11	1, 62	2,46	1,77	0,55	0, 65	3,58	1,13
PVO.4	2,97	1,25	0, 65	1, 08	1,32	10,57	0, 88
YU2.DG	0,7	7,74	>2 5	0,39	0,56	0,59	0,48
	1B344	1NC24	1NC3	1NC7	1NC33	1NC108	1B2644
MW965.26	>50	>50	>25	>50	>50	>50	>25
BaL.26	>50	>50	>25	>50	>50	>50	>25
DJ263.8	>50	>50	>25	>50	>50	>50	>25
6535.3	>50	>50	>25	>50	>50	>50	>25
RHPA4259.7	>50	>50	>25	>50	>50	>50	>25
TRO.11	0, 89	0, 66	>25	>50	>50	>50	>25
PVO.4	0, 94	0, 6	>25	7,17	10, 12	25, 08	>25
YU2.DG	1,29	0,55	>25	>50	>50	>50	>25

- 111 042696

	1B2339	1NC123
MW965.26	>25	>50
BaL.26	>25	>50
DJ263.8	>25	>50
6535.3	>25	>50
RHPA4259.7	>25	>50
TRO.11	>25	>50
PVO. 4	>25	>50
YU2.DG	>25	>50

Пациент 1, Клон RU09

	1B218
MW 9 65.26	>119
BaL.26	5, 61
DJ263.8	>119
6535.3	35, 12
RHPA4259.7	>100
TRO.11	>100
PVO. 4	>100
YU2.DG	>100

Таблица 4G

Пациент 8, Клон RU 10

	8ANC192	8ANC134	8ANC13	8ANC131	8ANC182	8ANC50	8ANC45
TRO. 11	>73	>50	>50	>50	>115	>50	>50
BaL.26	0,43	0,11	0,18	0,31	0,73	0,77	7,45
DJ263.8	0,1	0,044	0,069	0,046	0,11	0,15	0,166
6535.3	1,43	2	2,3	1,9	3,93	13,65	10,473
RHPA4259.7	>100	>50	>50	>50	>100	>50	>50
TRO. 11	>100	>50	>50	>50	>100	>50	>50
PVO.4	3,94	2,5	3,7	4,9	4,43	14,99	17,315
YU2.DG	0,51	0,616	1,07	0,92	1,46	1,59	2,942

Пациент 8, Клоны RU11-15

	8AN57	8AN195	8AN2 4	8AN14	8AN5
TRO.11	>103	>50	0,76	6, 64	>50
BaL.26	24,76	>50	>50	>50	>50
DJ263.8	>103	>50	>50	>50	>50
6535.3	>103	0, 91	>50	>50	>50
RHPA4259.7	14,44	1,56	>50	>50	>50
TRO.11	>103	0, 89	>50	>50	>50
PVO.4	>103	1,87	>50	>50	>50
YU2.DG	91,49	2,77	>50	>50	>50

Таблица 4H

Пациент 12, Клон RU16

	12 Al 2	12A21	12A4	12 A3 7	12A22	12Al 6
MW965.26	0,2	0, 85	1,24	0,3	0,21	0,58
BaL.26	0, 08	0, 004	0, 007	0, 03	0, 14	0,25
DJ263.8	0,31	0,42	1,06	0,57	1,86	0, 12
6535.3	>50	>50	>50	>50	>25	>42
RHPA4259.7	0,4	0, 13	0, 19	0, 19	0, 13	0, 93
TRO.11	0, 98	0,57	1,12	3, 81	1,94	2,57
PVO.4	3, 15	2,09	2,95	1,8	1,49	8,72
YU2.DG	0,31	0, 06	0, 1	0, 07	0,36	1,13

А2 0 Ί 12А6 12А23 12А46 12А55

- 112 042696

MW965.26	2,2	0,52	>50	>50	4,49
BaL.26	0,23	0,47	3,47	0, 08	>50
DJ263.8	Нет данных	0,08	30, 81	>50	>50
6535.3	Нет данных	>24	>50	>50	>50
RHPA4259.7	0,49	1,02	1, 69	>50	>50
TRO.11	2,41	5, 15	10, 11	>50	>50
PVO. 4	11,2	17,34	7,81	797	4,3
YU2.DG	0, 67	1,2	0,19	0,25	0,29

Клон В12 и NIH45

Таблица 5A

Анализ нейтрализации Tzm-bl in vitro, значения IC₅₀ расширенной панели

	B12	VRC01	NIH45- 46	3BNC60	3BNC62	3BNC117	3BNC55
Q842.dl2	>50	0,03	0,008	0,01	<0,01	<0,01	0,011
3415.vl.cl	2,5	0,06	0,017	0,1	0,17	0,17	0,11
3365.v2.c20	>50	0,03	0,029	0,02	0,03	0,03	0,221
H086.8*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	>30
ZM53M.PB12	>50	1,3	0,187	0,22	0,3	0,21	12,549
Dul72.17*	0,3	>50	>30	3,81	1,72	1,19	3,518
ZM109F.PB4	>50	0,128	0,059	0,22	0,14	0,14	0,083
3016.v5.c45	1,1	0,16	>30	1,4	0,42	1,38	>30
231965.cl	0,07	0,34	0,021	0,07	0,05	0,05	0,505
X1254_c3	>50	0,07	0,027	0,09	0,08	0,08	0,138
250-4*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	0,236
251-18	>50	2,5	1,445	0,35	0,32	0,26	>30
278-50*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	>30
620345.cl*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	>30
R1166.C1	>50	1,7	0,445	0,14	0,32	0,17	0,298
	1NC9	1B2530	8ANC131	8ANC134	8ANC195	12A12	12A21
Q842.dl2	0,02	0,249	0,053	0,061	>30	0,014	0,015
3415.vl.cl	0,266	0,065	0,299	0,323	2,404	0,121	0,82
3365.v2.c20	0,329	4,357	>30	>30	>30	0,068	0,045
H086.8*	>30	>30	>50	>50	0,095	>30	>30
ZM53M.PB12	0,705	0,912	>30	>30	9,626	0,593	0,42
Dul72.17*	>30	>30	>30	>30	10,797	0,196	0,126
ZM109F.PB4	0,023	>30	>30	>30	>30	0,148	2,104
3016.v5.c45	>30	>30	>30	>30	0,195	1,163	0,097
231965.cl	0,393	0,168	6,346	>30	0,514	2,217	>30
X1254_c3	>30	>30	>30	>30	1,524	1,032	26,793
250-4*	>30	>30	>50	>50	>50	>30	>30
251-18	1,234	9,847	0,968	1,56	0,284	2,622	1,713
278-50*	>30	>30	>50	>50	>50	>30	>30
620345.cl*	>30	>30	>50	>50	>50	>30	>30
R1166.C1	0,651	0,119	>30	>30	0,986	0,342	0,292

- 113 042696

Таблица 5B

Анализ нейтрализации Tzm-bl in vitro, значения IC₈₀ расширенной панели

	B12	VRC01	45-46	3BNC60	3BNC62	3BNC117	3BNC55
Q842.dll	>50	0,096	0,026	0,03	0,03	0,01	0,062
3415.vl.cl	14,1	0,15	0,069	0,37	0,4	0,47	0,388
3365.v2.c20	>50	0,17	0,114	0,08	0,09	0,1	2,341
Н086.8*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	>30
ZM53M.PB12	>50	4	0,652	0,76	1,1	0,85	>30
Dul72.17*	2,6	>50	>30	>15	12,18	8,9	>30
ZM109F.PB4	>50	0,754	0,22	1,23	0,78	0,88	0,396
3016.v5.c45	4	0,42	>30	7,38	2,35	>15	>30
231965.С1	0,16	1,2	0,1	0,25	0,22	0,22	2,78
Х1254 сЗ	>50	0,19	0,078	0,29	0,27	0,27	0,571
250-4*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	1,922
251-18	>50	H,2	5,255	0,96	1	0,82	>30
278-50*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	>30
620345.С1*	>50	>50	>30	>15	>15	>15	>30
R1166.C1	>50	4,6	1,679	0,51	0,89	0,64	2,351
	1NC9	1B2530	8ANC131	8ANC134	8ANC195	12A12	12A21
Q842.dl2	0,133	2,191	0,179	0,205	>30	0,06	0,066
3415.vl.cl	1,002	0,35	1,555	2,643	17,743	0,418	0,296
3365.v2.c20	2,163	>30	>30	>30	>30	0,192	0,166
Н086.8*	>30	>30	>50	>50	5,328	>30	>30
ZM53M.PB12	2,771	4,022	>30	>30	>30	2,069	1,458
Dul72.17*	>30	>30	>30	>30	>30	0,992	0,637
ZM109F.PB4	0,146	>30	>30	>30	>30	0,698	13,686
3016.v5.c45	>30	>30	>30	>30	0,872	11,864	0,358
231965.C1	2,276	0,963	>30	>30	2,355	15,102	>30
X1254_c3	>30	>30	>30	>30	6,949	5,777	>30
250-4*	>30	>30	>50	>50	>50	>30	>30
251-18	6,291	>30	5,55	6,281	1,511	9,39	6,063
278-50*	>30	>30	>50	>50	>50	>30	>30
620345.C1*	>30	>30	>50	>50	>50	>30	>30
R1166.C1	2,669	0,684	>30	>30	4,83	1,85	2,137

- 114 042696

Таблица 6

Аффинность антител IgG к лигандам YU-2 gp140 и 2СС-соге, измеренная с помощью поверхностного плазмонного резонанса

	gp!40			2СС-Соге
	кДМ^С¹)	k_d (с¹)	K_D(M)	ка (MV)	ка (с¹)	K_D(M)
12А12	4,59Е+04	1,44Е-05	ЗД5Е-10	6,ЗЗЕ+04	1,70Е-06	2,69Е-11
12А21	9Д8Е+04	ЗД4Е-07	3,75Е12	1,82Е+05	3,ЗОЕ-04	1,81Е-09
12AGL	/	/	/	/	/	/
3BNC60	2,73Е+04	1,86Е-04	6,81Е-09	3,02Е+04	1,64Е-03	5,45Е-08
3BNC117	3,04Е+04	1,99Е-04	6,54Е-09	1,49Е-03	4,05Е+04	3,68Е-08
3BNC55	1Д1Е+04	7Д5Е-04	5,78Е-08	8Д5Е-04	ЗД6Е+04	2,57Е-08
3BNC66	1,60Е+04	1,41Е-03	8,81Е-08	3,96Е+04	1,ЗЗЕ-ОЗ	3,36Е-08
3BNC156	1ДЗЕ+04	1,98Е-03	1,75Е-07	1,88Е+04	1,53Е-03	8Д2Е-08
3BNC108	/	/	/	/	/	/
3BNC60GL	/	/	/	/	/	/
8ANC131	6Д9Е+04	1,09Е-03	1,65Е-08	4,88Е+04	3,23Е-03	6,61Е-08
8ANC134	1,55Е+04	1,74Е-03	1ДЗЕ-07	2,08Е+04	9,57Е-04	4,61Е-08
8AGL	/	/	/	/	/	/
8ANC195	4,88Е+04	1,67Е-03	3,43Е-08	2,41Е+04	1,32Е-03	5,47Е-08
1NC9	4,83Е+04	5,81Е-04	1,20Е-08	5Д1Е+04	2Д6Е-04	4,61Е-09
1В2530	4,74Е+04	1,62Е-03	3,42Е-08	6,83Е+04	4,02Е-04	5,90Е-09
1GL	/	/	/	/	/	/
4546	4,26Е+04	2,87Е-04	6,75Е-09	1Д2Е+05	4,94Е-04	4,40Е-09
VRC01	1,83Е+04	8,08Е-06	4,41Е-10	2,84Е+04	3,25Е-05	1Д5Е-09

Таблица 7A

Отношение замены/молчащие мутации для последовательностей тяжелой цепи 10 отобранных антител

	Все нуклеотиды	Консенсусные нуклеотиды	Неконсенсусные нуклеотиды
3BNC117HC	1,8	1,0	3,5
3BNC60HC	2,0	1,1	4,4
12А12НС	2,8	1,7	6, 3
12А21НС	2, 6	1,5	4,8
NIH4546HC	1,7	0, 9	5, 5
VRCO1HC	2,2	1,1	22,0
8ANC131HC	2,7	1,3	8,0
8ANC134HC	2,2	1,5	3,7
1В2530НС	2,0	0, 9	11,0
1NC9HC	1,9	0, 7	12,0

Таблица 7B

Отношение замены/молчащие мутации для последовательностей легкой цепи 10 отобранных антител

	Все нуклеотиды	Консенсусные нуклеотиды	Неконсенсусные нуклеотиды
3BNC117KC	1,7	0, 8	2, 8
3BNC60KC	1,7	0, 7	4, 0
12А12КС	1,7	0, 6	4, 0
12А21КС	2,5	1,4	4,3
NIH4546KC	1,7	0, 9	3, 0
VRCO1KC	1,8	0, 8	4, 0
8ANC131KC	1,5	0, 5	4,2
8ANC134KC	1,5	0, 5	4,2
1B2530LC	1,9	2, 0	1, 8
1NC9LC	1,2	0, 9	1, 8

- 115 -

Claims

Таблица 8

Сбор данных о кристаллизации и уточнение статистики

Кристалл Fab 3BN60

Сбор данных*

Длина волны (А) 0,9537

Группа симметрии Р21

Размеры элементарной ячейки а (А) 63, 6

Ь (А) 155, 7 с (А) 74,8 α,β,γ (Υ) 90,0, 110,4, 90,0

Разрешение, (А) 39.172.65

Rmrgd- F ( % ) ^§ 8,3 (55,5)

Rmeas ( ) § 7,7 (53,4)

Ι/σΙ 15,7 (2,5)

Законченность (%) 96, 0 (68, 1)

Кратность 5,0 (3,6)

Отражения 192709

Уникальные отражения 38111

Уточнение

Разрешение (А) 39.172.65

Число отражений 37086

Rwork/Rfree (%) ⁺ 20,7/25,7

RMSD длины связей (А) 0, 01

RMSD углов связей (Y) 1,3

Средний В-фактор А² 64,9

Анализ Рамачандрана

Благоприятные (%) 91,9

Допустимые (%) 7, 6

Выбросы (%) 0,5

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее области CDR1, CDR2 и CDR3 в указанной вариабельной области тяжелой цепи, которые представляют собой NCPIN, WLKPRGGAVNYARKFQG и GKYCTARDYYNWDFEH соответственно; и области CDR1, CDR2 и CDR3 в указанной вариабельной области легкой цепи, которые представляют собой RTSQSGSL, SGSTRAA и QQYEF соответственно.
2. Выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует вирус ВИЧ SM53M.PB12 при концентрации IC₅o, равной менее 1,0 мкг/мл, или вирус ВИЧ R1166.c1 при концентрации IC₅o, равной менее 1,0 мкг/мл.
3. Выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует вирус ВИЧ, резистентный к VRC01, при концентрации IC₅₀, равной менее 30 мкг/мл.
4. Выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, где антитело является химерным антителом, гуманизированным антителом, рекомбинантным антителом или антителом человека.
5. Выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.4, где антитело является антителом человека.
6. Выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.4, где антитело является рекомбинантным антителом.
7. Композиция для профилактики или лечения ВИЧ-инфекции или заболевания, связанного с ВИЧ, содержащая выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и второе антитело, отличающееся от анти-ВИЧ антитела, или его антигенсвязывающий фрагмент.
8. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6.
9. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.8.

- 116 042696
10. Клетка для экспрессии анти-ВИЧ антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащая вектор по п.9.
11. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и фармацевтически приемлемый носитель.
12. Фармацевтическая композиция по п.11, дополнительно содержащая второе терапевтическое средство.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, где указанное второе терапевтическое средство является противовирусным средством.
14. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11-13, где анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является рекомбинантным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
15. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.11-14 для профилактики или лечения ВИЧ-инфекции или заболевания, связанного с ВИЧ.
16. Способ получения анти-ВИЧ антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по пп.1-6, где способ включает культивирование клетки, содержащей вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую и легкую цепи указанного антитела или фрагмента, в условиях экспрессии нуклеиновой кислоты; и выделение указанного анти-ВИЧ антитела или его фрагмента.
17. Способ обнаружения анти-ВИЧ антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-6, у пациента, где способ включает приведение биологического образца, полученного у пациента, в контакт с агентом, который связывается с указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом или который гибридизуется с ДНК или мРНК, кодирующей антитело или фрагмент; и анализ биологического образца на наличие анти-ВИЧ антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или клетки, которая содержит по крайней мере одну ДНК или мРНК, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
18. Набор для профилактики или лечения инфекции ВИЧ или заболевания, связанного с ВИЧ, содержащий фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного выделенного анти-ВИЧ антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-6 и фармацевтически эффективное количество средства против ВИЧ, выбранное из группы, состоящей из ингибитора ненуклеозидной обратной транскриптазы, ингибитора протеазы, ингибитора входа или слияния и ингибитора интегразы.
19. Набор по п.18, где выделенное анти-ВИЧ антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и средство против ВИЧ может необязательно принимать форму единичной фармацевтической композиции.
20. Набор для диагностики, прогнозирования или мониторинга лечения ВИЧ у пациента, содержащий один или несколько реагентов обнаружения, которые специфически связываются с анти-ВИЧ антителом по любому из пп.1-6 в биологическом образце индивида.
21. Набор по п.20, дополнительно содержащий реагенты для проведения ПЦР.
22. Набор по п.20, дополнительно содержащий реагенты для проведения масс-спектрометрии.

- 117 -