EA042018B1 - NLRP3 MODULATORS - Google Patents
NLRP3 MODULATORS Download PDFInfo
- Publication number
- EA042018B1 EA042018B1 EA202092539 EA042018B1 EA 042018 B1 EA042018 B1 EA 042018B1 EA 202092539 EA202092539 EA 202092539 EA 042018 B1 EA042018 B1 EA 042018B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cancer
- alkyl
- compound
- mmol
- pyrazolo
- Prior art date
Links
Description
Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs
В данном изобретении представлены химические соединения (например, соединение или фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, и/или сокристалл, и/или комбинация соединения), которые модулируют (например, агонизируют или частично агонизируют) NLRP3, которые являются полезными, например, для лечения состояния, заболевания или нарушения, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может исправить дефицит активности врожденной иммунной системы, который способствует патологии и/или симптомам, и/или прогрессированию, и/или резистентному к лечению состоянию, заболеванию или нарушению (например, рак с низкой инфильтрацией Т-клеток) у субъекта (например, человека). В этом раскрытии также представлены композиции, а также другие способы их применения и изготовления.The present invention provides chemical compounds (e.g., a compound or pharmaceutically acceptable salt and/or hydrate and/or co-crystal and/or combination of a compound) that modulate (e.g., agonize or partially agonize) NLRP3 that are useful, for example, for treatment of a condition, disease, or disorder in which enhancement of NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune system activity that contributes to the pathology and/or symptoms and/or progression and/or treatment-resistant condition, disease, or disorder (e.g., cancer with low T cell infiltration) in a subject (eg, human). This disclosure also provides compositions, as well as other methods for their use and manufacture.
Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for the creation of the invention
Рецепторы, подобные домену олигомеризации нуклеотидов (NLR), включают семейство внутриклеточных рецепторов, которые выявляют патоген-ассоциированные молекулярные структуры (РАМР) и эндогенные молекулы (см., например, Ting, J. Р. Y. et al., The NLR gene family: a standard nomenclature, Immunity, 28(3): 285-287, (2008)).Nucleotide oligomerization domain-like receptors (NLRs) include a family of intracellular receptors that detect pathogen-associated molecular structures (PAMPs) and endogenous molecules (see, e.g., Ting, J. P. Y. et al., The NLR gene family : a standard nomenclature, Immunity, 28(3): 285-287, (2008)).
NLRP представляют подсемейство NLR, которые включают домен пирина и состоят из белков, таких как NLRP1, NLRP3, NLRP4, NLRP6, NLRP7 и NLRP12. Считается, что NLRP участвуют в образовании мультибелковых комплексов, называемых инфламмасомами (см., например, Chaput, С. et al., NODlike receptors in lung diseases, Frontiers in Immunology, 4: article 393, (2013)). Эти комплексы обычно включают один или два белка NLR, адаптерный апоптоз-ассоциированный Speck-подобный белок, содержащий CARD-домен (ASC) и прокаспазу-1 F (см., например, Bauernfeind, F and Hornung, V. Of inflammasomes and pathogens-sensing of microbes by the inflammasome, EMBO Molecular Medicine, 5(6): 814-826, (2013)).NLRPs are a subfamily of NLRs that include a pyrin domain and are composed of proteins such as NLRP1, NLRP3, NLRP4, NLRP6, NLRP7, and NLRP12. NLRPs are believed to be involved in the formation of multiprotein complexes called inflammasomes (see, e.g., Chaput, C. et al., NODlike receptors in lung diseases, Frontiers in Immunology, 4: article 393, (2013)). These complexes typically include one or two NLR proteins, an adapter apoptosis-associated Speck-like protein containing the CARD domain (ASC) and pro-caspase-1 F (see, e.g., Bauernfeind, F and Hornung, V. Of inflammasomes and pathogens- sensing of microbes by the inflammasome, EMBO Molecular Medicine, 5(6): 814-826, (2013)).
Одна такая инфламмасома образована каркасом NLRP3, адаптером ASC и прокаспазой-1 (см., например, Hirota, J.A., et al., The airway epithelium nucleotide-binding domain and leucine-rich repeat protein 3 inflammasome is activated by urban particulate matter, Journal of Allergy and Clinical Immunology, 129(4):1116.e6-1125.e6, (2012)), и его экспрессия, как полагают, индуцируется воспалительными цитокинами и агонистами TLR в миелоидных клетках и человеческих клетках бронхиального эпителия (Id.). Считается, что инфламмасома NLRP3 опосредует зависимое от каспазы-1 превращение про-IL-1β и проIL-18 в IL-1e и IL-18. Кроме того, IL-1e и IL-18 имеют потенциал для лечения различных типов рака (см., например, Chen, L-C. et al., EMBO Mol Med., 4(12): 1276-1293 (2012) и Tse, В. W-C. et al., PLoS One, 6(9): e24241 (2011)). Было показано, что IL-18 преодолевает устойчивость к ингибиторам контрольных точек в животных опухолевых моделях рака толстой кишки (см., например, Ma, Z. et al., Clin. Cancer Res. Jan 11. (2016) DOI:10.1158/1078-0432.CCR-15-1655).One such inflammasome is formed by the NLRP3 scaffold, ASC adapter, and procaspase-1 (see, e.g., Hirota, J.A., et al., The airway epithelium nucleotide-binding domain and leucine-rich repeat protein 3 inflammasome is activated by urban particulate matter, Journal of Allergy and Clinical Immunology, 129(4):1116.e6-1125.e6, (2012)), and its expression is believed to be induced by inflammatory cytokines and TLR agonists in myeloid cells and human bronchial epithelial cells (Id.). The NLRP3 inflammasome is thought to mediate the caspase-1 dependent conversion of pro-IL-1β and proIL-18 to IL-1e and IL-18. In addition, IL-1e and IL-18 have the potential to treat various types of cancer (see, for example, Chen, L-C. et al., EMBO Mol Med., 4(12): 1276-1293 (2012) and Tse, B. W-C et al., PLoS One, 6(9): e24241 (2011)). IL-18 has been shown to overcome resistance to checkpoint inhibitors in animal tumor models of colon cancer (see, for example, Ma, Z. et al., Clin. Cancer Res. Jan 11. (2016) DOI:10.1158/1078 -0432.CCR-15-1655).
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
Изобретение направлено на соединения формулы (I):The invention is directed to compounds of formula (I):
где все переменные являются такими, как определено ниже в настоящем документе.where all variables are as defined below in this document.
Также, в объем изобретения входят фармацевтически приемлемые соли, стереоизомеры, таутомеры и сольваты соединений формулы (I).Also within the scope of the invention are the pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers and solvates of the compounds of formula (I).
Изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие одно или несколько соединений по изобретению. Изобретение также направлено на способы лечения рака с применением одного или нескольких соединений по изобретению.The invention is also directed to pharmaceutical compositions containing one or more compounds of the invention. The invention is also directed to methods of treating cancer using one or more of the compounds of the invention.
Изобретение также обеспечивает способы и промежуточные соединения для получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, стереоизомеров, таутомеров и сольватов.The invention also provides methods and intermediates for the preparation of compounds of formula (I) or their pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers and solvates.
Соединения по изобретению можно применять в терапии.The compounds of the invention can be used in therapy.
Соединения по настоящему изобретению можно применять для изготовления лекарственного средства для лечения рака.The compounds of the present invention can be used in the manufacture of a medicament for the treatment of cancer.
Соединения по настоящему изобретению можно применять по отдельности, в комбинации с другими соединениями по настоящему изобретению или в комбинации с одним или более чем одним агентом(ами).The compounds of the present invention may be used alone, in combination with other compounds of the present invention, or in combination with one or more agent(s).
Другие признаки и преимущества изобретения будут очевидны из следующего подробного описания и формулы изобретения.Other features and advantages of the invention will be apparent from the following detailed description and claims.
- 1 042018- 1 042018
Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention
Соединения по изобретению.Compounds according to the invention.
В первом аспекте настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb-1):In a first aspect, the present invention provides a compound of formula (IIIb-1):
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль, где:or a stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R2 независимо выбран из Н, С1-4алкила, замещенного 0-3 F, -(CH2)1-2CH(OH)CH2F, -(CH2)i-2CH(OH)CF3, -(CH2)i-2CH(OH)CH2CF3, -(CH2)i-2OCHF2, -(CH2)1-зOCFз, -(CH2)1-2OCH2CFз, -(CH2)2-5OH, -(CH2)2-5CN, -(СН2)1-2СН(СНз)ОН, -(СН2)1-2СН(СН3)СН2ОН, -(СН2)1-2С(СНз)2ОН,R 2 is independently selected from H, C 1-4 alkyl substituted with 0-3 F, -(CH 2 ) 1-2 CH(OH)CH 2 F, -(CH 2 )i- 2 CH(OH)CF3, - (CH2)i-2CH(OH)CH2CF3, -(CH2)i-2OCHF2, -(CH2)1-3OCF3, -(CH2)1-2OCH2CF3, -(CH2)2-5OH, -(CH2)2-5CN , -(CH2)1-2CH(CH3)OH, -( CH2 ) 1-2CH ( CH3 ) CH2OH , -(CH2)1-2C(CH3)2OH,
- C(CH3)2(CH2)1-2OH, -(СН2)1-2С(СН3)2СН2ОН, -СН2СН(ОН)СН2ОН, -СН2СН(ОН)(С1-4алкила),- C (CH3) 2 (CH 2 ) 1-2 OH, - (CH 2 ) 1-2 C (CH 3 ) 2 CH 2 OH, -CH 2 CH (OH) CH 2 OH, -CH 2 CH (OH )(C 1-4 alkyl),
- CH(CHз)(CH2)1-2OH,-СН2СН(С1-2алкила)(СН2)1-2ОН, -СН2СН(С1-4алкокси)(СН2)1-2ОН, -(СН^ОССмалкила замещенного 0-2 Re), -(СН2)1-2СН(СНз)О(С1-4алкила), -<СН2)1-2С(СНзЬО(С1.4алкила),-CH(CH3)(CH2)1-2OH,-CH2CH(C1-2alkyl)(CH2)1-2OH,-CH2CH(C1-4alkoxy)(CH2)1-2OH,-(CH^OCC-alkyl substituted 0-2 R e ), -(CH 2 ) 1- 2 CH (CH3)O (C1-4 alkyl), -<CH 2 ) 1- 2 C (CH3O (C1.4 alkyl),
- СН(СНз)(СН2)1-2О(С1.4алкила), -СН2СН(ОН)(СН2)1-2О(С1-4алкила), -<CH2)1-2CH<CHз)NH2, -СН2С(СН3ЬКН2, -(СН2)2-зNH(С1-4алкила), -(СН2Ь^(С1.4алкилаЬ, -<CH2)1-зC<O)NH2, -(СН2)1-2С(СН3ЬСОКН2,- CH (CHz) (CH 2 ) 1- 2 O (C1.4 alkyl), -CH 2 CH (OH) (CH 2 ) 1- 2 O (C 1-4 alkyl), -<CH 2 ) 1- 2 CH< CHz) NH 2 , -CH 2 C (CH 3 bKH 2 , - (CH 2) 2-3 NH (C 1-4 alkyl), - (CH 2 b ^ (C 1.4 alkyl b, -<CH 2 ) 1-3 C < O) NH 2 , -(CH 2 ) 1- 2 C (CH 3 LSOCH 2 ,
- (СН2)1.2С(О)NH(С1.4алкила, замещенного 0-2 Re), -(СН2)1-2С(О)N(СН3)(С1-4алкила, замещенного 0-2 Re), -(СН2)o-1СН(СНз)(СН2)o-1С(O)NH(С1-4алкила), -(СН2)1-2С(О)N(С1-4алкила)2,- (CH 2 ) 1 . 2 C(O)NH(C 1.4 alkyl substituted with 0-2 R e ), -(CH 2 ) 1-2 C(O)N(CH 3 ) (C 1-4 alkyl substituted with 0-2 R e ), -(CH2)o-1CH(CH3)(CH2)o-1C(O)NH(C1-4alkyl), -(CH2)1-2C(O)N(C1-4alkyl)2,
- (СН2)o-1СН(СНз)С(O)N(С1-4алкила)2, -(СН2)1-2С(О)N(С1-2αлкил)(СН2)2О(С1-4алкила), -(CH2)2-зNHC(O)Ra, -(CH2)1-2CH(CHз)NHC(O)Ra, -СН2С(СНз^НС(О^а, -(CH2)2-зN(CHз)C(O)Ra, -(СН2)2-зS(О)2(С1-4αлкила), -СН2СН(СН3)S(О)2(С1-4αлкилα), -(СН2)2-3NHS(О)2(С1-4алкила), -СН2СН(СН3)NHS(О)2(С1-4алкила),- (CH2)o-1CH(CH3)C(O)N(C1-4alkyl)2, -(CH2)1-2C(O)N(C1-2αkyl)(CH2)2O(C1-4alkyl), -( CH2)2-3NHC(O)R a , -(CH2)1-2CH(CH3)NHC(O)R a , -CH2C(CH3^HC(O^ a , -(CH2)2-3N(CH3)C (O)R a , -(CH2)2-3S(O)2(C1-4αkyl), -CH 2 CH(CH 3 )S(O) 2 (C 1-4 αkylα), -(CH 2 ) 2 -3 NHS(O) 2 (C 1-4 alkyl), -CH 2 CH (CH 3 )NHS(O) 2 (C 1-4 alkyl),
- (СН2)2-3NHS(О)2(C3-6циклоαлкила),- (CH 2 ) 2-3 NHS(O) 2 (C 3-6 cycloαkyl),
-(СН2)1-3-(гетероарила, содержащего от 5 до 10 кольцевых атомов, при этом от 1 до 4 кольцевых атомов, каждый, независимо выбраны из N, N(Rf), О и S), и указанный гетероарил замещен 0-2 Rd;-(CH 2 ) 1-3 -(heteroaryl containing from 5 to 10 ring atoms, with 1 to 4 ring atoms, each independently selected from N, N(R f ), O and S), and the specified heteroaryl substituted with 0-2 R d ;
R3 независимо представляет собойR 3 is independently
R4 независимо представляет собой Н или F;R 4 is independently H or F;
Ra независимо представляет собой С1-4алкил, замещенный 0-1 Re, С3-6циклоалкил, замещенный 0-2 Rd,R a is independently C1-4 alkyl substituted with 0-1 R e , C3-6 cycloalkyl substituted with 0-2 R d ,
фенил или гетероарил, выбранный из оксазолила, изоксазолила, тиазолила, пиридила и пиразинила, где указанные фенил и гетероарил замещены 0-2 Rd;phenyl or heteroaryl selected from oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, pyridyl and pyrazinyl, wherein said phenyl and heteroaryl are substituted with 0-2 R d ;
Rd при каждом появлении независимо выбран из: F, С1, ОН, СИ, С1-4алкила, С1-4алкокси, С1-4галогеналкила, ИН2, И(С1-4алкила)2, -ИНС(О)(С1-4алкила) и фенила;R d at each occurrence is independently selected from: F, C1, OH, SI, C 1-4 alkyl, C 1-4 alkoxy, C 1-4 haloalkyl, IN 2 , I(C 1-4 alkyl) 2 , -INS (O)(C 1-4 alkyl) and phenyl;
Re независимо выбран из F, ОН и С1-4алкокси; иR e is independently selected from F, OH and C 1-4 alkoxy; And
Rf при каждом появлении независимо выбран из: Н, С1-4алкила, -С(О)(С1-4алкила) и -С(О)(С 1 -4галогеналкила).R f at each occurrence is independently selected from: H, C 1-4 alkyl, -C(O)(C 1-4 alkyl), and -C(O)(C 1-4 haloalkyl).
- 2 042018- 2 042018
В двенадцатом аспекте в объеме одиннадцатого аспекта изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb-1) или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль, где:In a twelfth aspect, within the scope of the eleventh aspect, the invention provides a compound of formula (IIIb-1), or a stereoisomer, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R2 независимо выбран из Н, C1-4αлкила, замещенного 0-3 F, -(CH2)1-2CH(OH)CH2F, -(CH2)1-2CH(OH)CF3, -(CH2)i-2CH(OH)CH2CF3, -(CH2)1.2OCHF2, -(CH2)i-3OCF3, -(CH2)1.2OCH2CF3, -(CH2)2-4OH, -(CH2)2-4CN, -(СН2)1-2СН(СНз)ОН, -(СН2)1-2СН(СНз)СН2ОН, -(СН2)1-2С(СНз)2ОН, -С(СНз)2(СН2)1-2ОН, -(СН2)1-2С(СНз)2СН2ОН, -CH2CH(OH)CH2OH, -СН2СН(ОН)(С1-4алкила),R 2 is independently selected from H, C 1-4 αalkyl substituted with 0-3 F, -(CH 2 ) 1-2 CH(OH)CH 2 F, -(CH2)1-2CH(OH)CF3, -(CH2 )i-2CH(OH)CH2CF3, -(CH 2 )1. 2 OCHF 2 , -(CH2)i-3OCF3, -(CH 2 )1. 2 OCH 2 CF3, -(CH2)2-4OH, -(CH2)2-4CN, -(CH2)1-2CH(CH3)OH, -(CH2)1-2CH(CH3)CH2OH, -(CH2)1 -2C(CH3)2OH, -C(CH3)2(CH2)1-2OH, -(CH2)1-2C(CH3)2CH2OH, -CH2CH(OH)CH2OH, -CH2CH(OH)(C1-4alkyl),
- CH(CH3)(CH2)1-2OH,-СН2СН(С1-2αлкuла)(СН2)1-2ОН, -СН2СН(C1-4αлкокси)(СН2)1-2ОН, -(СН2)2-4О(C1-4алкила, замещенного 0-1 Re), -(СН2)1-2СН(СН3)О(C1-4aлкила), -(СН2)1-2С(СН3)2О(C1-4aлкила),- CH (CH 3 ) (CH 2 ) 1-2 OH, -CH 2 CH (C 1-2 αlkula) (CH 2 ) 1-2 OH, -CH 2 CH (C 1-4 αlkoxy) (CH 2 ) 1-2 OH, -(CH 2 ) 2-4 O(C 1-4 alkyl substituted with 0-1 R e ), -(CH 2 ) 1-2 CH(CH 3 )O(C 1-4 alkyl) , -(CH 2 ) 1-2 C (CH 3 ) 2 O (C 1-4 alkyl),
- СН(СНз)(СН2)1-2О(C1-4aлкила), -СЩСЩОНХСЩф^ОЩмалкила), -(СЩЬСНЩНз^Щ -CH2C(CH3)2NH2, -(СН2)2-зNH(C1-4aлкила), -(СЩЬ^СмалкилаХ, 4CH2)WC(O)NH2, -(C^^QC^hCON^,- CH (CH3) (CH2) 1-2O (C1-4 alkyl), -CHSCHOHCHSHCHf ^ OSH malalkyl), - (CHCHSCHNz ^ SC -CH 2 C (CH 3 ) 2NH 2 , - (CH2) 2-3NH (C1-4 alkyl) ), -(C^^CmalkylaX, 4CH 2 ) W C(O)NH 2 , -(C^^QC^hCON^,
- (СН2)1-2С(О)NH(С1-4aлкила, замещенного 0-2 Re), -(СН2)1-2С(О)N(СН3)(C1-4aлкила, замещенного 0-2 Re), -(СН2)0-1СН(СН3)(СН2)0-1С(O)NH(С1-4aлкила), -(СН2)1-2С(О)N(C1-4aлкила)2,- (CH 2 ) 1-2 C (O) NH (C 1-4 alkyl substituted with 0-2 R e ), - (CH 2) 1-2C (O) N (CH 3) (C 1-4 alkyl substituted with 0- 2 R e ), -(CH2) 0-1 CH(CH 3 )(CH 2 ) 0-1 C(O)NH(C 1-4 alkyl), -(CH 2 ) 1-2 C(O)N (C 1-4 alkyl) 2 ,
- (СН2)0-1СН(СН3)С(O)N(C1-4aлкила)2, -(СН2)1-2С(О)N(С1-2aлкuла)(СН2)2О(С1-4aлкила), -(CH2)2-3NHC(O)Ra, -CH2CH(CH3)NHC(O)Ra, -CH2C(CH3)2NHC(O)Ra, -(СН2)2-3S(О)2(C1-4αлкила), -СН2СН(СН3)S(О)2(C1-4αлкила), -(CH2)2-3NHS(O)2(C1-4αлкила), -СН2СН(СН3)NHS(О)2(C1-4αлкила), -(СН2)2-3NHS(О)2(C3-6циклоαлкила),- (CH 2 ) 0-1 CH (CH 3 ) C (O) N (C 1-4 alkyl) 2 , - (CH 2 ) 1-2 C (O) N (C 1-2 alkyl) (CH 2 ) 2 O (C 1-4 alkyl), -(CH 2 ) 2-3 NHC(O)R a , -CH2CH(CH3)NHC(O)R a , -CH2C(CH 3 ) 2 NHC(O)R a , -(CH 2 ) 2-3 S(O) 2 (C 1-4 αkila), -CH 2 CH(CH 3 )S(O) 2 (C 1-4 αkila), -(CH 2 ) 2 -3 NHS(O) 2 (C 1-4 αkyl), -CH 2 CH(CH 3 )NHS(O) 2 (C 1-4 αkyl), -(CH 2 ) 2-3 NHS(O) 2 ( C 3-6 cycloalkyl),
и -(СН2)1-2(гетероарила), где гетероарил выбран из имидазолила, пиразолила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, оксадиазолила, пиридила и пиридазинила, и гетероарил замещен 0-2 Rd;and -(CH 2 ) 1-2 (heteroaryl), where heteroaryl is selected from imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, oxadiazolyl, pyridyl and pyridazinyl, and heteroaryl is substituted with 0-2 Rd;
Ra независимо представляет собой C1-4αлкил, замещенный 0-1 Re,R a is independently C 1-4 αkyl substituted with 0-1 R e ,
фенил или гетероарил, выбранный из оксазолила, пиридила и пиразинила, где указанные фенил и гетероарил замещены 0-2 Rd; иphenyl or heteroaryl selected from oxazolyl, pyridyl and pyrazinyl, wherein said phenyl and heteroaryl are substituted with 0-2 R d ; And
Rd при каждом появлении независимо выбран из: F, Cl, CN, C1-4aлкила, C1-4aлкокси и C 1 -4галогеналкила.R d at each occurrence is independently selected from: F, Cl, CN, C 1-4 alkyl, C 1-4 alkoxy, and C 1 -4 haloalkyl.
Во втором аспекте в объеме одиннадцатого или двенадцатого аспектов, изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb-1) или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль, где:In a second aspect, within the scope of the eleventh or twelfth aspects, the invention provides a compound of formula (IIIb-1), or a stereoisomer, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R3 независимо представляет собойR 3 is independently
В третьем аспекте изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb-2),In a third aspect, the invention provides a compound of formula (IIIb-2),
- 3 042018 nh2 - 3 042018 nh 2
VN-R2 VN-R 2
C ιΓC ιΓ
HN'N (IIIb-2) или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль, гдеHN' N (IIIb-2) or its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt, where
R2 независимо выбран из Н, C1-4алкила, замещенного 0-3 F, -(СН2)2-4ОН, -(CH2)2-4CN, -(СН2)1-2СН(СН3)ОН, -(СН2)1-2С(СН3)2ОН, -СН2СН(ОН)СН2ОН, -СН2СН(ОН)(C1-4алкила),R 2 is independently selected from H, C 1-4 alkyl substituted with 0-3 F, -(CH 2 ) 2-4 OH, -(CH 2 ) 2-4 CN, -(CH 2 ) 1-2 CH(CH 3 ) OH, -(CH 2 ) 1-2 C (CH 3 ) 2 OH, -CH 2 CH (OH) CH 2 OH, -CH 2 CH (OH) (C 1-4 alkyl),
- СН(СНз)(СН2)1-2ОН, -СН2СН(С1-2алкила)(СН2)1-2ОН, -ОДСад^алкоксиХСЩ^ОН,- CH (CH3) (CH2) 1-2OH, -CH2CH (C1-2 alkyl) (CH2) 1-2OH, -ODSad ^ alkoxyCHSCH ^ OH,
- (СН2)2-4О(C1-4алкила, замещенного 0-2 Re), -CH2C(CH3)2NH2, -(CH2)1-3C(O)NH2, -(CH2)1-2C(CH3)2CONH2, -(СН2)1-2С(О)NH(С1-4алкила), -(СН2)o-1СН(CHз)(СН2)o-1С(O)NH(С1-4алкилα), -(СН2)1-2С(О)N(С1-4алкила)2, -(СН2)o-1СН(CHз)С(O)N(C1-4алкила)2, -(СН2)1-2С(О)NH(C1-4алкила, замещенного 0-2 Re),- (CH 2 ) 2-4 O (C 1-4 alkyl substituted with 0-2 R e ), -CH 2 C (CH 3 ) 2 NH 2 , -(CH 2 ) 1-3 C (O) NH 2 , -(CH 2 ) 1-2 C(CH 3 ) 2 CONH 2 , -(CH2)1-2C(O)NH(C1-4alkyl), -(CH2)o-1CH(CH3)(CH2)o- 1C(O)NH(C1-4alkylα), -(CH2)1-2C(O)N(C1-4alkyl)2, -(CH2)o-1CH(CH3)C(O)N(C1-4alkyl)2 , -(CH2)1-2C(O)NH(C1-4alkyl substituted with 0-2 R e ),
- (CH2)1-2C(O)N(CH3)(C1-4алкила, замещенного 0-2 Re), -CH2CH(CH3)NHC(O)(С1-4алкила),- (CH 2 ) 1-2 C(O)N(CH 3 )(C 1-4 alkyl substituted with 0-2 R e ), -CH 2 CH(CH 3 )NHC(O)(C 1-4 alkyl ),
- (СН2)2-3S(О)2(С1-4алкила), -СН2СН(CH3)S(О)2(С1-4алкила), -(СН2)2-3NHS(О)2(С1-4алкила),- (CH 2 ) 2-3 S(O) 2 (C 1-4 alkyl), -CH 2 CH (CH 3 )S (O) 2 (C 1-4 alkyl), -(CH 2 ) 2-3 NHS(O) 2 (C 1-4 alkyl),
- СН2СН(CH3)NHS(О)2(C1-4алкила), -(СН2)2-3NHS(О)2(C3-6циклоалкила),- CH 2 CH (CH 3 )NHS (O) 2 (C 1-4 alkyl), - (CH 2 ) 2-3 NHS (O) 2 (C 3-6 cycloalkyl),
Re независимо выбран из F, ОН и C1-4алкокси.R e is independently selected from F, OH and C 1-4 alkoxy.
В четвертом аспекте изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb-2), или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль, гдеIn a fourth aspect, the invention provides a compound of formula (IIIb-2), or a stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein
R2 независимо выбран из Н, -CH2CHF2, -(CH2)2-4OH, -(CH2)2-4CN, -СН2СН(СН3)ОН, -СН2С(СН3)2ОН,R 2 is independently selected from H, -CH 2 CHF 2 , -(CH 2 ) 2-4 OH, -(CH 2 ) 2-4 CN, -CH 2 CH(CH 3 )OH, -CH 2 C(CH 3 ) 2 OH,
-СН2СН(ОН)СН2ОН,-CH2CH(OH)CH2OH,
-СН2СН(ОН)СН2СНз,-CH2CH(OH)CH2CH3,
-СН(СНз)(СН2)2ОН,-CH (CH3) (CH2) 2OH,
-СН2СН(СНз)СН2ОН,-CH2CH(CH3)CH2OH,
-СН2СН(ОСНз)СН2ОН, -(СН2)2О(СН2)2ОН, -(СН2)2О(СН2)2ОСНз, -CH2C(CH3)2NH2, -(CH2)1-3C(O)NH2,-CH 2 CH (OCH3)CH 2 OH, -(CH2)2O(CH2)2OH, -(CH2)2O(CH2)2OCH3, -CH2C(CH3)2NH2, -(CH2)1-3C(O)NH 2 ,
-CH2C(CH3)2CONH2, -(CH2)1-2C(O)NH(CH3), -(CH2)1-2C(O)NH(CH2CH3), -(CH2)1-2C(O)NH(CH(CH3)2),-CH 2 C(CH 3 ) 2 CONH 2 , -(CH 2 ) 1-2 C(O)NH(CH 3 ), -(CH 2 ) 1-2 C(O)NH(CH 2 CH 3 ), -(CH 2 ) 1-2 C(O)NH(CH(CH 3 ) 2 ),
-(CH2)o-iCH(CH3)(CH2)o-iC(0)NH(CH3),-(CH2)o-iCH(CH3)(CH2)o-iC(0)NH(CH3),
-(CH2)o-iCH(CH3)C(0)N(CH3)2,-(CH2)o-iCH(CH3)C(0)N(CH3)2,
-C(CH3)2C(O)NH(CH2CHF2),-C(CH3)2C(O)NH(CH2CHF2),
-(CH2)1-2C(O)NH(C(CH3)2CH2OH),-(CH2)1-2C(O)NH(C(CH3)2CH2OH),
-(CH2)o-iCH(CH3)C(0)NH(CH(CH3)2), -(CH2)i-2C(O)N(CH3)2,-(CH2)o-iCH(CH3)C(0)NH(CH(CH3)2), -(CH 2 )i- 2 C(O)N(CH3)2,
-CH2C(O)NH(CH2CHF2), -(CH2)1-2C(O)NH(CH2)2OH, -(CH2)1-2C(O)NH(CH2)2OCH3,-CH2C(O)NH(CH2CHF2), -(CH2)1-2C(O)NH(CH2)2OH, -(CH2)1-2C(O)NH(CH2)2OCH3,
-CH(CH3)C(O)NH(CH2CHF2),-CH(CH 3 )C(O)NH(CH 2 CHF 2 ),
-CH(CH3)C(O)NH(CH2)2-3OH,-CH(CH3)C(O)NH(CH2)2-3OH,
-(CH2)1-2C(O)N(CH3)(CH2)2OCH3,-(CH2)1-2C(O)N(CH3)(CH2)2OCH3,
-(CH2)2-3NHS(O)2CH3,-(CH 2 ) 2-3 NHS(O) 2 CH 3 ,
-CH2CH(CH3)NHC(O)(CH3), -(CH2)2-3S(O)2CH3, -(СН2)2-з8(О)2СН2СНз,-CH2CH(CH3)NHC(O)(CH3), -(CH2)2-3S(O)2CH3, -(CH 2 ) 2 -38(O) 2 CH 2 CH3,
-CH2CH(CH3)NHS(O)2CH3, -(СН2)2-зNHS(О)2(циклопропилα),-CH2CH(CH3)NHS(O)2CH3, -(CH2)2-3NHS(O)2(cyclopropylα),
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb):In another aspect, the invention provides a compound of formula (IIIb):
или его таутомер, или фармацевтически приемлемую соль, гдеor its tautomer, or a pharmaceutically acceptable salt, where
- 4 042018- 4 042018
R2 независимо выбран из Н, C1-4αлкилα, замещенного 0-3 F, -(CH2)1-2CH(OH)CF3, -СН2СН(CH3)NHC(О)(C1-4алкила), -СН2С(СН3)2NHC(О)(С1-4алкила), -(CH2)2-3NHC(O)Ra,R 2 is independently selected from H, C 1-4 αlkylα substituted with 0-3 F, -(CH 2 ) 1-2 CH(OH)CF 3 , -CH 2 CH(CH 3 )NHC(O)(C 1- 4 alkyl), -CH 2 C(CH 3 ) 2 NHC(O)(C 1-4 alkyl), -(CH 2 ) 2-3 NHC(O)R a ,
- (CH2)2-3NHC(O)CF(CH3)2, -(CH2)2-3N(CH3)C(O)Ra, -(CH2)2-3OH, -(CH2)1-2CH(CH3)OH, -(CH2)1-2C(CH3)2OH, -CH2CH(OH)CH2OH, -СН(СНз)(СН2)1-2ОН, -(СН2)2-4О(C1-4алкила), -CH2CH(CH3)NH2, -CHiQC^NHi, -(СН2)2-3NH(С1-4алкилα), -(СН2)2-3N(C1-4алкила)2, -(СН2)2-3NHS(О)2(С1-4алкила), -(СН2)2-3S(О)2(C1-4алкила),- (CH2)2-3NHC(O)CF(CH3)2, -(CH2)2-3N(CH3)C(O)R a , -(CH2)2-3OH, -(CH2)1-2CH(CH3 )OH, -(CH2)1-2C(CH3)2OH, -CH2CH(OH)CH2OH, -CH(CH3)(CH2)1-2OH, -(CH2)2-4O(C1-4alkyl), -CH2CH( CH3)NH2, -CHiQC^NHi, -(CH 2 ) 2-3 NH(C 1-4 alkylα), -(CH 2 ) 2-3 N(C 1-4 alkyl) 2 , -(CH 2 ) 2 -3 NHS(O) 2 (C 1-4 alkyl), -(CH 2 ) 2-3 S(O) 2 (C 1-4 alkyl),
-(СН2)1-3(гетероарила), при этом гетероарил выбран из имидазолила, пиразолила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, оксадиазолила и пиридила, и гетероарил замещен 0-2 Rd;-(CH 2 ) 1-3 (heteroaryl), wherein heteroaryl is selected from imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, oxadiazolyl and pyridyl, and heteroaryl is substituted with 0-2 R d ;
R3 независимо представляет собойR 3 is independently
Ra независимо представляет собой С1-4алкил, С3-6циклоалкил,R a is independently C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl,
, фенил или гетероарил, выбранный из оксазолила, изоксазолила, тиазолила, пиридила и пиразинила, где указанный фенил и гетероарил замещены 0-2 Rd;, phenyl or heteroaryl selected from oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, pyridyl and pyrazinyl, wherein said phenyl and heteroaryl are substituted with 0-2 R d ;
Rd при каждом появлении независимо выбран из: F, Cl, CN, C1-4алкилα, C1-4алкокси, C1-4галогеноалкила и фенила; иR d at each occurrence is independently selected from: F, Cl, CN, C 1-4 alkylα, C 1-4 alkoxy, C 1-4 haloalkyl, and phenyl; And
Rf при каждом появлении независимо выбран из: Н, C1-4алкила, С(О)(C1-4алкила) и С(О)(C1-4галогеналкила).R f at each occurrence is independently selected from: H, C 1-4 alkyl, C(O)(C 1-4 alkyl), and C(O)(C 1-4 haloalkyl).
В другом аспекте в рамках вышеуказанного аспекта изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb), или его таутомер или фармацевтически приемлемую соль, гдеIn another aspect, within the scope of the above aspect, the invention provides a compound of formula (IIIb), or a tautomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein
R2 независимо выбранR 2 independently selected
- CH2C(CH3)2NHC(O)(С1-4алкила), из Н, C1-4aлкилa,- CH 2 C(CH 3 ) 2 NHC(O)(C 1-4 alkyl), from H, C 1-4 alkyl,
-(CH2)2-3NHC(O)Ra,-(CH2)2-3NHC(O)R a ,
-(CH2)1-2CHF2,-(CH2)1-2CHF2,
-(CH2)2-3OH,-(CH2)2-3OH,
-(CH2)i-2CH(OH)CF3,-(CH2)i-2CH(OH)CF3,
-(CH2)1-2CH(CH3)OH,-(CH2)1-2CH(CH3)OH,
-(СН2)1—2С(СНз)2ОН, -CH2CH(OH)CH2OH, -СН(СНз)(СН2)1—2ОН, -(СН2)2-4О(С1-4алкила), -CH2CH(CH3)NH2,-(CH2)1-2C(CH3)2OH, -CH2CH(OH)CH2OH, -CH(CH3)(CH2)1-2OH, -(CH2)2-4O(C1-4alkyl), -CH2CH(CH3)NH2 ,
-(СН2)2-3NHS(О)2(С1-4алкила),-(CH 2 ) 2 -3 NHS (O) 2 (C 1-4 alkyl),
-CH2C(CH3)2NH2, -(СН2)2-3NH(С1-4алкила), -(СН2)2-3N(С1-4алкила)2,-CH 2 C(CH 3 ) 2 NH 2 , -(CH 2 ) 2-3 NH(C 1-4 alkyl), -(CH 2 ) 2-3 N(C 1-4 alkyl) 2 ,
-(СН2)2-зS(О)2(C1-4алкила),-(CH2)2-3S(O)2(C1-4alkyl),
Ra независимо представляет собой C1-4алкил,R a is independently C 1-4 alkyl,
- 5 042018 фенил или гетероарил, выбранный из оксазолила, пиридила и пиразинила, где указанные фенил и гетероарил замещены 0-2 Rd.- 5 042018 phenyl or heteroaryl selected from oxazolyl, pyridyl and pyrazinyl, where said phenyl and heteroaryl are substituted with 0-2 R d .
В другом аспекте в рамках любого из двух вышеупомянутых аспектов изобретение обеспечивает соединение формулы (IIIb), или его таутомер или фармацевтически приемлемую соль, где R3 независимо представляет собойIn another aspect, within either of the above two aspects, the invention provides a compound of formula (IIIb), or a tautomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 3 is independently
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное из приведенных в качестве примера соединений, или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль.In another aspect, the invention provides a compound selected from the exemplary compounds, or a stereoisomer, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное из соединений по примерам 1151, или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль.In another aspect, the invention provides a compound selected from the compounds of Examples 1151, or a stereoisomer, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное из соединений по примерам 1285, или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль.In another aspect, the invention provides a compound selected from the compounds of Examples 1285, or a stereoisomer, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное из соединений по примерам 1624, или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль.In another aspect, the invention provides a compound selected from the compounds of Examples 1624, or a stereoisomer, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изIn another aspect, the invention provides a compound selected from
- 6 042018- 6 042018
- 7 042018- 7 042018
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль.or its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt.
- 8 042018- 8 042018
В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изIn another aspect, the invention provides a compound selected from
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
- 9 042018- 9 042018
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
- 10 042018- 10 042018
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
- 11 042018- 11 042018
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
- 12 042018- 12 042018
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
- 13 042018- 13 042018
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль. В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение, выбранное изor its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt. In another aspect, the invention provides a compound selected from
или его стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль.or its stereoisomer, tautomer or pharmaceutically acceptable salt.
В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает соединение, выбранное из любого поднабора соединений, или одного соединения из приведенных в качестве примера соединений в рамках любого из вышеуказанных аспектов.In another aspect, the present invention provides a compound selected from any subset of compounds, or one compound from exemplary compounds within any of the above aspects.
Квалифицированный специалист поймет, что некоторые описанные в настоящем документе химические структуры могут быть представлены на бумаге с помощью одной или нескольких других резонансных форм; или могут существовать в одной или нескольких других таутомерных формах, даже если кинетически специалист признает, что такие таутомерные формы представляют только очень небольшую часть образца такого соединения(й). Такие соединения явно рассматриваются в объеме данного изобретения, хотя такие резонансные формы или таутомеры не представлены в явной форме в настоящем документе.The skilled artisan will appreciate that some of the chemical structures described herein may be represented on paper by one or more other resonant forms; or may exist in one or more other tautomeric forms, even if the kinetic expert recognizes that such tautomeric forms represent only a very small fraction of the sample of such compound(s). Such compounds are expressly contemplated within the scope of this invention, although such resonance forms or tautomers are not explicitly represented herein.
Другие аспекты и варианты осуществления изобретения.Other aspects and embodiments of the invention.
В одном аспекте представлены способы модулирования (например, агонизирования, частичного агонизирования, антагонизирования) активности NLRP3, которые включают приведение в контактIn one aspect, methods for modulating (e.g., agonizing, partially agonizing, antagonizing) NLRP3 activity are provided, which include contacting
- 14 042018- 14 042018
NLRP3 с химическим соединением, описанным в настоящем документе (например, соединением, описанным в целом или конкретно в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой солью, или содержащими их композициями). В предпочтительных вариантах осуществления способы модулирования активности NLRP3 являются агонизирующими и частично агонизирующими. В некоторых вариантах осуществления способы модулирования активности NLRP3 являются агонизирующими. В некоторых вариантах осуществления способы модулирования активности NLRP3 являются частично агонизирующими. Способы включают способы in vitro, например, приведение в контакт образца, который включает одну или несколько клеток, содержащих NLRP3 (например, клетки ТНР-1), с химическим соединением. Способы также могут включать способы in vivo; например, введение химического соединения субъекту (например, человеку), имеющему заболевание, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может исправить дефицит врожденной иммунной активности, который способствует возникновению патологии и/или симптомов, и/или прогрессированию заболевания (например, рак; например, рефрактерный рак).NLRP3 with a chemical compound described herein (eg, a compound described generally or specifically herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or compositions containing them). In preferred embodiments, methods for modulating NLRP3 activity are agonizing and partially agonizing. In some embodiments, methods for modulating NLRP3 activity are agonizing. In some embodiments, methods for modulating NLRP3 activity are partially agonizing. The methods include in vitro methods, such as contacting a sample that includes one or more cells containing NLRP3 (eg, THP-1 cells) with a chemical compound. The methods may also include in vivo methods; e.g., administering a chemical compound to a subject (e.g., human) having a disease in which increased NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune activity that contributes to pathology and/or symptoms and/or disease progression (e.g., cancer; e.g., refractory cancer).
В некоторых вариантах осуществления соединения по изобретению являются полезными для лечения состояния, заболевания или нарушения, в котором снижение активности NLRP3 (например, состояния, заболевания или нарушения, связанного с подавленной или нарушенной передачей сигналов NLRP3) способствует возникновению патологии и/или симптомов, и/или прогрессированию состояния, заболевания или нарушения (например, рака) у субъекта (например, человека).In some embodiments, the compounds of the invention are useful in the treatment of a condition, disease, or disorder in which a decrease in NLRP3 activity (e.g., a condition, disease, or disorder associated with suppressed or impaired NLRP3 signaling) contributes to pathology and/or symptoms, and/ or the progression of a condition, disease, or disorder (eg, cancer) in a subject (eg, human).
Рак считается рефрактерным, если он не отвечает на лечение рака (или является резистентным к лечению рака). Рефрактерный рак также известен как резистентный рак.A cancer is considered refractory if it does not respond to cancer treatment (or is resistant to cancer treatment). Refractory cancer is also known as resistant cancer.
В другом аспекте представлены способы лечения рака, которые включают введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества химического соединения, описанного в настоящем документе (например, соединения, описанного в целом или конкретно в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащих их композиций). В некоторых вариантах осуществления рак может представлять собой рефрактерный рак.In another aspect, methods of treating cancer are provided which comprise administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a chemical compound described herein (e.g., a compound described generally or specifically herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or compositions). In some embodiments, the cancer may be a refractory cancer.
В дополнительном аспекте представлены способы лечения заболевания, в которых усиление передачи сигналов NLRP3 может исправить дефицит врожденной иммунной активности, который способствует возникновению патологии и/или симптомов, и/или прогрессированию заболевания, которые включают введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества химического соединения, описанного в настоящем документе (например, соединения, описанного в целом или конкретно в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащих их композиций).In a further aspect, methods are provided for treating a disease wherein enhancing NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune activity that contributes to the onset of pathology and/or symptoms and/or disease progression, which comprises administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a chemical compound. described herein (eg, a compound described generally or specifically herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or compositions containing them).
В другом аспекте представлены способы лечения, которые включают введение субъекту, имеющему заболевание, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может исправить дефицит активности врожденной иммунной системы, который способствует возникновению патологии и/или симптомов, и/или прогрессированию заболевания, эффективного количества химического соединения, описанного в настоящем документе (например, соединения, описанного в настоящем документе в целом или конкретно, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащих их композиций).In another aspect, methods of treatment are provided which comprise administering to a subject having a disease in which an increase in NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune system activity that contributes to pathology and/or symptoms and/or disease progression, an effective amount of a chemical compound described herein (eg, a compound described herein generally or specifically, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or compositions containing them).
В следующем аспекте представлены способы лечения, которые включают введение субъекту химического соединения, описанного в настоящем документе (например, соединения, описанного в целом или конкретно в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащих их композиций), при этом химическое соединение вводят в количестве, которое является эффективным для лечения заболевания, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может исправить дефицит активности врожденной иммунной системы, который способствует возникновению патологии и/или симптомов, и/или прогрессированию заболевания, тем самым осуществляя лечение заболевания.In a further aspect, methods of treatment are provided that include administering to a subject a chemical compound described herein (e.g., a compound described generally or specifically herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or compositions containing the same), wherein the chemical compound is administered to an amount that is effective for treating the disease, in which the enhancement of NLRP3 signaling can correct the deficiency in the activity of the innate immune system that contributes to the occurrence of pathology and/or symptoms and/or disease progression, thereby treating the disease.
Варианты осуществления могут включать один или несколько из следующих признаков.Embodiments may include one or more of the following features.
Химическое соединение можно вводить в комбинации с одним или несколькими дополнительными способами лечения рака (например, хирургическим вмешательством, лучевой терапией, химиотерапией, токсинотерапией, иммунотерапией, криотерапией или генной терапией, или их комбинацией; например, способами лечения рака, которые включают введение одного или нескольких (например, двух, трех, четырех, пяти, шести или более) дополнительных противораковых агентов. Неограничивающие примеры дополнительных противораковых агентов (химиотерапевтических агентов) выбирают из алкилирующего агента (например, цисплатин, карбоплатин, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, ифосфамид и/или оксалиплатин); антиметаболита (например, азатиоприн и/или меркаптопурин); терпеноида (например, алкалоид барвинка и/или таксан; например, винкристин, винбластин, винорелбин и/или виндезин, таксол, паклитаксел и/или доцетаксел); топоизомеразы (например, топоизомераза типа I и/или топоизомераза типа 2; например, камптотецины, такие как иринотекан и/или топотекан; амсакрин, этопозид, этопозид фосфат и/или тенипозид); цитотоксического антибиотика (например, актиномицин, антрациклины, доксорубицин, даунорубицин, валрубицин, идарубицин, эпирубицин, блеомицин, пликамицин и/или митомицин); гормона (например, агонист лютенизирующий гормон рилизинг гормона; например, лейпролидин, гозерелин, трипторелин, гистрелин, бикалутамид, флутамид и/или нилутамид); антитела (например, абциксимаб, адалимумаб, алемтузумаб, атлизумаб, базиликсимаб, белимумаб, бевацизумаб, бретуксимаб ведотин, канакинумаб, цетуксимаб, цертолизумаба пегол, даклизумаб, деносумаб, экулизуThe chemical compound may be administered in combination with one or more additional cancer treatments (e.g., surgery, radiation therapy, chemotherapy, toxin therapy, immunotherapy, cryotherapy, or gene therapy, or a combination thereof; for example, cancer treatments that include administering one or more (e.g., two, three, four, five, six, or more) additional anti-cancer agents Non-limiting examples of additional anti-cancer agents (chemotherapeutic agents) are selected from an alkylating agent (e.g., cisplatin, carboplatin, mechlorethamine, cyclophosphamide, chlorambucil, ifosfamide, and/or oxaliplatin ); antimetabolite (eg azathioprine and/or mercaptopurine); terpenoid (eg vinca alkaloid and/or taxane; eg vincristine, vinblastine, vinorelbine and/or vindesine, taxol, paclitaxel and/or docetaxel); topoisomerases (eg topoisomerase type I and/or type 2 topoisomerase; for example, camptothecins such as irinotecan and/or topotecan; amsacrine, etoposide, etoposide phosphate and/or teniposide); a cytotoxic antibiotic (eg, actinomycin, anthracyclines, doxorubicin, daunorubicin, valrubicin, idarubicin, epirubicin, bleomycin, plicamycin, and/or mitomycin); a hormone (eg, a luteinizing hormone-releasing hormone agonist; eg, leuprolidine, goserelin, triptorelin, gistrelin, bicalutamide, flutamide, and/or nilutamide); antibodies (eg, abciximab, adalimumab, alemtuzumab, atlizumab, basiliximab, belimumab, bevacizumab, bretuximab vedotin, canakinumab, cetuximab, certolizumab pegol, daclizumab, denosumab, eculizumab
- 15 042018 маб, эфализумаб, гемтузумаб, голимумаб, ибритумомаб тиуксетан, инфликсимаб, ипилимумаб, муромоHa6-CD3, натализумаб, офатумумаб, омализумаб, паливизумаб, панитумуаб, ранибизумаб, ритуксимаб, тоцилизумаб, тозитумомаб и/или трастузумаб); антиангиогенного агента; цитокина; тромботического агента; агента, ингибирующего рост; противоглистного средства; и ингибитора иммунных контрольных точек, который нацелен на рецептор иммунных контрольных точек, выбранный из CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-1 - PD-L1, PD-1 - PD-L2, Т-клеточного иммуноглобулина и муцина 3 (TIM3 или HAVCR2), галектина 9-TIM3, фосфатидилсерина-TIM3, белка гена активации лимфоцитов 3 (LAG3), лиганда МНС класса IILAG3, лиганда 4-1ВВ-4-1ВВ, лиганда ОХ40-ОХ40, GITR, лиганда GITR-GITR, CD27, CD70-CD27, TNFRSF25, TNFRSF25 - TL1A, CD40L, лиганд CD40-CD40, HVEM-LIGHT-LTA, HVEM, HVEM-BTLA, HVEM-CD160, HVEM-LIGHT, HVEM-BTLA-CD160, CD80, CD80-PDL-1, PDL2-CD80, CD244, CD48CD244, CD244, ICOS, лиганда ICOS-ICOS, B7-H3, B7-H4, VISTA, TMIGD2, HHLA2-TMIGD2, бутирофилинов, включая BTNL2, семейства Siglec, членов семейства TIGIT и PVR, KIR, ILT и LIR, NKG2D и NKG2A, MICA и MICB, CD244, CD28, CD86-CD28, CD86-CTLA, CD80-CD28, фосфатидилсерина, TIM3, фосфатидилсерина-TIM3, SIRPA-CD47, VEGF30, нейрофилина, CD160, CD30 и CD155 (например, CTLA-4 или PD1, или PD-L1) и других иммуномодулирующих агентов, таких как интерлейкин-2 (IL-2), индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), IL-10, трансформирующего фактора роста-β (TGFe), CD39, CD73, аденозина-CD39-CD73 и CXCR4-CXCL12.- 15 042018 mab, efalizumab, gemtuzumab, golimumab, ibritumomab tiuxetan, infliximab, ipilimumab, muromoHa6-CD3, natalizumab, ofatumumab, omalizumab, palivizumab, panitumuab, ranibizumab, rituximab, tocilizumab, tositumumab and/or trastuzumab); an anti-angiogenic agent; cytokine; thrombotic agent; a growth inhibitory agent; antihelminthic; and an immune checkpoint inhibitor that targets an immune checkpoint receptor selected from CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-1-PD-L1, PD-1-PD-L2, T-cell immunoglobulin, and mucin 3 (TIM3 or HAVCR2), galectin 9-TIM3, phosphatidylserine-TIM3, lymphocyte activation gene protein 3 (LAG3), MHC class IILAG3 ligand, 4-1BB-4-1BB ligand, OX40-OX40 ligand, GITR, GITR-GITR ligand , CD27, CD70-CD27, TNFRSF25, TNFRSF25 - TL1A, CD40L, CD40-CD40 ligand, HVEM-LIGHT-LTA, HVEM, HVEM-BTLA, HVEM-CD160, HVEM-LIGHT, HVEM-BTLA-CD160, CD80, CD80- PDL-1, PDL2-CD80, CD244, CD48CD244, CD244, ICOS, ICOS-ICOS ligand, B7-H3, B7-H4, VISTA, TMIGD2, HHLA2-TMIGD2, butyrophylins including BTNL2, Siglec family, TIGIT family members and PVR , KIR, ILT and LIR, NKG2D and NKG2A, MICA and MICB, CD244, CD28, CD86-CD28, CD86-CTLA, CD80-CD28, phosphatidylserine, TIM3, phosphatidylserine-TIM3, SIRPA-CD47, VEGF30, neurophilin, CD160, CD30 and CD155 (eg CTLA-4 or PD1 or PD-L1) and other immunomodulatory agents, such as interleukin-2 (IL-2), indolamine-2,3-dioxygenase (IDO), IL-10, transforming growth factor-β (TGFe), CD39, CD73, adenosine-CD39-CD73 and CXCR4-CXCL12.
Субъект может иметь рак; например, субъект подвергался и/или подвергается, и/или будет подвергаться одной или нескольким видов лечения рака.The subject may have cancer; for example, the subject has been and/or is and/or will be undergoing one or more cancer treatments.
Неограничивающие примеры рака включают острый миелоидный лейкоз, адренокортикальную карциному, саркому Капоши, лимфому, рак анального канала, рак аппендикса, тератоидную/рабдоидную опухоль, базальноклеточную карциному, рак желчных протоков, рак мочевого пузыря, рак костей, рак головного мозга, рак молочной железы, бронхиальную опухоль, карциноидную опухоль, опухоль сердца, рак шейки матки, хордому, хронический лимфоцитарный лейкоз, хроническое миелопролиферативное новообразование, рак толстой кишки, колоректальный рак, краниофарингиому, рак желчных протоков, рак эндометрия, эпендимому, рак пищевода, эстезионейробластому, саркому Юинга, рак глаза, рак маточной трубы, рак желчного пузыря, карциноидную опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальную опухоль желудочно-кишечного тракта, герминогенную опухоль, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, рак сердца, рак печени, гипофарингеальный рак, рак поджелудочной железы, рак почки, рак гортани, хронический миелогенный лейкоз, рак губы и полости рта, рак легких, меланому, карциному из клеток Меркеля, мезотелиому, рак ротоглотки, рак полости рта, остеосаркому, рак яичников, рак полового члена, фарингеальный рак, рак предстательной железы, рак прямой кишки, рак слюнной железы, рак кожи, рак тонкой кишки, саркому мягких тканей, рак яичек, рак горла, рак щитовидной железы, рак уретры, рак матки, рак влагалища и рак вульвы.Non-limiting examples of cancer include acute myeloid leukemia, adrenocortical carcinoma, Kaposi's sarcoma, lymphoma, anal cancer, appendix cancer, teratoid/rhabdoid tumor, basal cell carcinoma, bile duct cancer, bladder cancer, bone cancer, brain cancer, breast cancer, bronchial tumor, carcinoid tumor, cardiac tumor, cervical cancer, chordoma, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloproliferative neoplasm, colon cancer, colorectal cancer, craniopharyngioma, bile duct cancer, endometrial cancer, ependymoma, esophageal cancer, esthesioneuroblastoma, Ewing's sarcoma, cancer eye, fallopian tube cancer, gallbladder cancer, gastrointestinal carcinoid tumor, gastrointestinal stromal tumor, germ cell tumor, hairy cell leukemia, head and neck cancer, heart cancer, liver cancer, hypopharyngeal cancer, pancreatic cancer, kidney cancer , larynx cancer, chronic myelogenous leukemia, lip cancer and oral cavity, lung cancer, melanoma, Merkel cell carcinoma, mesothelioma, oropharyngeal cancer, oral cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, penile cancer, pharyngeal cancer, prostate cancer, rectal cancer, salivary gland cancer, skin cancer, cancer small intestine, soft tissue sarcoma, testicular cancer, throat cancer, thyroid cancer, urethral cancer, uterine cancer, vaginal cancer, and vulvar cancer.
В других вариантах осуществления у млекопитающего был выявлен рак или инфекционное заболевание. Типичные инфекционные заболевания включают, без ограничения, инфекцию, вызываемую бактерией Acinobacter, актиномикоз, африканскую сонную болезнь, синдром приобретенного иммунодефицита, амебиаз, анаплазмоз, сибирскую язву, инфекцию Arcanobacterium haemolyticum, аргентинскую геморрагическую лихорадку, аскаридоз, аспергиллез, астровирусную инфекцию, бабезиоз, инфекции Bacillus cereus, бактериальную пневмонию, бактериальный вагиноз, инфекцию Bacteroides, балантидиоз, инфекцию Baylisascaris, инфекцию вируса BK, черную пьедру, инфекцию Blastocystic hominis, бластомикоз, боливийскую геморрагическую лихорадку, ботулизм, бразильскую геморрагическую лихорадку, бруцеллез, бубонную чуму, инфекцию Burkholderi, язвы Бурули, калицивирусную инфекцию, камптобактериоз, кандидоз, болезнь кошачьих царапин, целлюлит, болезнь Чагаса, шанкроид, ветряную оспу, чикунгунья, хламидиоз, инфекцию Chlamydophila pneumoniae, холеру, хромобластомикоз, клонорхоз, инфекцию Clostridium difficile, кокцидиоидомикоз, колорадскую клещевую лихорадку, простуду, болезнь Крейтцфельда-Якоба, крымско-конголезскую геморрагическую лихорадку, критококкоз, криптоспоридиоз, кожный синдром блуждающей личинки, циклоспориаз, цистицеркоз, цитомегаловирусную инфекцию, лихорадку Денге, инфекцию Desmodesmus, деинтамебиаз, дифтерию, дифиллоботриоз, дракункулез, геморрагическую лихорадку Эбола, эхинококкоз, эрлихиоз, энтеробиоз, инфекцию Enterococcus, инфекцию Enterovirus, эпидемический тиф, инфекционную эритему, внезапную экзантему, фасциолопсидоз, фасциолез, фатальную семейную бессоницу, филяриоз, отравление пищи Clostridium myonecrosis, инфекцию свободноживущими амебами, инфекцию Fusobacterium, газовую гангрену, геотрихоз, синдром Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, гардиоз, сап, гнатостомоз, гонорею, паховую гранулему, инфекции стрептококка группы А, инфекции стрептококка группы В, инфекцию Haemophilus influenzae, синдром рука-нога-рот, хантавирусный легочный синдром, болезнь, вызванную вирусом Heartland, инфекцию Heliobacter pylori, гемолитический уремический синдром, геморрагическую лихорадку с почечным синдромом, гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, простой герпес, гистоплазмоз, анкилостомоз, бокавирусную инфекцию человека, эрлихиоз человека, гранулоцитарный анаплазмоз человека, метапневмовирусную инфекцию человека, моноцитарный эрлихиоз человека, вирус папилломы человека, инфекцию вируса парагриппа человека, гименолепидоз, инфекционный мононуклеоз Эпштейна-Барра, грипп, изоспороз, болезнь Кавасаки, кератит, инфекцию Kingella kingae, куру, лаосскую лихорадку, леIn other embodiments, the mammal has been diagnosed with cancer or an infectious disease. Typical infectious diseases include, without limitation, Acinobacter infection, actinomycosis, African sleeping sickness, acquired immunodeficiency syndrome, amoebiasis, anaplasmosis, anthrax, Arcanobacterium haemolyticum infection, Argentine hemorrhagic fever, ascariasis, aspergillosis, astrovirus infection, babesiosis, Bacillus infections cereus, bacterial pneumonia, bacterial vaginosis, Bacteroides infection, balantidiasis, Baylisascaris infection, BK virus infection, black piedra, Blastocystic hominis infection, blastomycosis, Bolivian hemorrhagic fever, botulism, Brazilian hemorrhagic fever, brucellosis, bubonic plague, Burkholderi infection, Buruli ulcers, calicivirus infection, camptobacteriosis, candidiasis, cat-scratch disease, cellulitis, Chagas disease, chancroid, chickenpox, chikungunya, chlamydia, Chlamydophila pneumoniae infection, cholera, chromoblastomycosis, clonorchiasis, Clostridium difficile infection, coccidioidomycosis, colora tick fever, common cold, Creutzfeldt-Jakob disease, Crimean-Congo hemorrhagic fever, critococcosis, cryptosporidiosis, wandering larva skin syndrome, cyclosporiasis, cysticercosis, cytomegalovirus infection, dengue fever, Desmodesmus infection, deintamebiasis, diphtheria, diphyllobothriasis, dracunculiasis, hemorrhagic fever , echinococcosis, ehrlichiosis, enterobiasis, Enterococcus infection, Enterovirus infection, epidemic typhus, infectious erythema, sudden exanthema, fasciolopsiosis, fascioliasis, fatal familial insomnia, filariasis, Clostridium myonecrosis food poisoning, free-living amoebae infection, Fusobacterium infection, gas gangrene, geotrichosis, syndrome Gerstmann-Straussler-Scheinker, gardiasis, glanders, gnathostomiasis, gonorrhea, granuloma inguinal, group A streptococcal infections, group B streptococcal infections, Haemophilus influenzae infection, hand-foot-mouth syndrome, hantavirus pulmonary syndrome, Heartland virus disease, Heliobacter infection er pylori, hemolytic uremic syndrome, hemorrhagic fever with renal syndrome, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, herpes simplex, histoplasmosis, hookworm infection, human bocavirus infection, human ehrlichiosis, human granulocytic anaplasmosis, human metapneumovirus infection, human monocytic ehrlichiosis, human papillomavirus, human parainfluenza virus infection, hymenolepiasis, Epstein-Barr infectious mononucleosis, influenza, isosporosis, Kawasaki disease, keratitis, Kingella kingae infection, kuru, Laotian fever, le
- 16 042018 гионеллез, понтиакскую лихорадку, лейшманиоз, проказу, лептоспироз, листериоз, болезнь Лайма, лимфатический филяриатоз, лимфоцитарный хориоменингит, малярию, геморрагическую лихорадку Марбург, корь, ближневосточный респираторный синдром, мелиоидоз, менингит, менингококковую инфекцию, метагонимоз, микроспоридиоз, контагиозный моллюск, оспу обезьян, эпидемический паротит, мышиный сыпной тиф, микоплазменную пневмонию, мицетому, миаз, конъюнктивит новорожденных, вариант болезни Крейтцфельда-Якоба, нокардиоз, онхоцеркоз, паракокцидиоидомикоз, парагонимоз, пастереллез, педикулез волосистой части головы, нательный педикулез, лобковый педикулез, воспалительные заболевания органов малого таза, коклюш, чуму, пневмонию, полиомиелит, инфекцию Prevotella, первичный амебный менингоэнцефалит, прогрессирующую мультифокальную лейкоэнцефалопатию, пситтакоз, Ку-лихорадку, бешенство, лихорадку крысиных укусов, инфекцию респираторносинцитиального вируса, риноспоридиоз, риновирусную инфекцию, риккетсиозную инфекцию, осповидный риккетсиоз, лихорадку долины Рифт, пятнистую лихорадку Скалистых гор, ротавирусную инфекцию, краснуху, сальмонеллез, тяжелый острый респираторный синдром, чесотку, шистосомоз, сепсис, шигеллез, опоясывающий лишай, оспу, споротрихоз, стафилококковое пищевое отравление, стафилококковую инфекцию, стронгилоидоз, подострый склерозирующий лейкоэнцефалит, сифилис, тениоз, стоблняк, трихофитию области бороды и усов, трихофитию кожи головы, трихофитию тела, трихофитию паховой и подмышечной области, трихофитию ладоней и кистей рук, черный лишай, трихофитию стопы, дерматофитный онихомикоз, разноцветный лишай, токсокароз, трахому, токсоплазмоз, трихиноз, трихомоноз, трихиуриаз, туберкулез, туляремию, инфекция Ureaplasma urealyticum, венесуэльский энцефалит лошадей, венесуэльскую геморрагическую лихорадку, вирусную пневмонию, лихорадку Западного Нила, белую пьедру, инфекцию Yersinia psuedotuberculosis, йерсениоз, желтую лихорадку и зигомикоз.- 16 042018 hyonellosis, Pontiac fever, leishmaniasis, leprosy, leptospirosis, listeriosis, Lyme disease, lymphatic filariasis, lymphocytic choriomeningitis, malaria, Marburg hemorrhagic fever, measles, Middle East respiratory syndrome, melioidosis, meningitis, meningococcal infection, metagonimiasis, microsporidiosis mollusks , monkeypox, mumps, murine typhus, mycoplasma pneumonia, mycetoma, myiasis, neonatal conjunctivitis, Creutzfeldt-Jakob disease variant, nocardiosis, onchocerciasis, paracoccidioidomycosis, paragonimiasis, pasteurellosis, pediculosis of the scalp, underwear pediculosis, pubic pediculosis, inflammatory diseases pelvic organ disease, whooping cough, plague, pneumonia, poliomyelitis, Prevotella infection, primary amoebic meningoencephalitis, progressive multifocal leukoencephalopathy, psittacosis, Q fever, rabies, rat bite fever, respiratory syncytial virus infection, rhinosporidiosis, rhinovirus infection, RI rickettsial infection, smallpox rickettsiosis, Rift Valley fever, Rocky Mountain spotted fever, rotavirus infection, rubella, salmonellosis, severe acute respiratory syndrome, scabies, schistosomiasis, sepsis, shigellosis, shingles, smallpox, sporotrichosis, staphylococcal food poisoning, staphylococcal infection, strongyloidiasis , subacute sclerosing leukoencephalitis, syphilis, teniasis, stoblitis, trichophytosis of the beard and mustache area, trichophytosis of the scalp, trichophytosis of the body, trichophytosis of the inguinal and axillary region, trichophytosis of the palms and hands, black lichen, trichophytosis of the foot, onychomycosis dermatophytosis, versicolor versicolor, toxocariasis, trachoma, toxoplasmosis, trichinosis, trichomoniasis, trichiuriasis, tuberculosis, tularemia, Ureaplasma urealyticum infection, Venezuelan equine encephalitis, Venezuelan hemorrhagic fever, viral pneumonia, West Nile fever, white piedra, Yersinia psuedotuberculosis infection, yerseniasis, yellow fever, and zygomycosis.
Химическое соединение можно вводить внутриопухолево.The chemical compound can be administered intratumorally.
Химическое соединение можно вводить системно (включая, но без ограничения, перорально, подкожно, внутримышечно, внутривенно).The chemical compound can be administered systemically (including, but not limited to, orally, subcutaneously, intramuscularly, intravenously).
Способы могут дополнительно включать идентификацию субъекта.The methods may further include identifying the subject.
Другие варианты осуществления включают те, которые описаны в разделе Подробное описание изобретения и/или формуле изобретения.Other embodiments include those described in the Detailed Description and/or the claims.
Определения.Definitions.
Чтобы облегчить понимание изложенного внастоящем документе изобретения, ниже определен ряд дополнительных терминов. В целом, номенклатура, используемая в настоящем документе и описанные лабораторные методики в области органической химии, медицинской химии и фармакологии хорошо известны и широко используются в данной области. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, как правило, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области, к которой относится это изобретение.To facilitate understanding of the invention set forth herein, a number of additional terms are defined below. In general, the nomenclature used herein and the laboratory procedures described in the fields of organic chemistry, medicinal chemistry, and pharmacology are well known and widely used in the art. Unless otherwise indicated, all technical and scientific terms used herein generally have the same meaning as generally understood by a person skilled in the art to which this invention pertains.
Если специально не указано в настоящем документе, ссылки, сделанные в единственном числе, могут также включать множественное число. Например, могут относиться к одному или же одному или нескольким.Unless specifically stated herein, references made in the singular may also include the plural. For example, they can refer to one or one or more.
Если не указано иное, что любой гетероатом с ненасыщенными валентностями, как предполагается, имеет достаточно атомов водорода для насыщения валентностей.Unless otherwise stated, any heteroatom with unsaturated valences is assumed to have enough hydrogen atoms to saturate the valences.
В целях ясности и в соответствии со стандартными правилами в данной области, символ I используется в формулах и таблицах, чтобы показать связь, которая является точкой присоединения фрагмента или заместителя к центру/ядру структуры.For the purposes of clarity, and in accordance with standard rules in the art, the symbol I is used in formulas and tables to indicate a bond, which is the point of attachment of a moiety or substituent to the center/core of the structure.
В дополнение, для ясности, когда заместитель имеет тире (-) не между двумя буквами или символами; это используется, чтобы указать точку присоединения для заместителя. Например, -OCH3 прикреплен через атом кислорода.In addition, for clarity, when a substitute has a dash (-) not between two letters or characters; this is used to indicate the point of attachment for a substituent. For example, -OCH3 is attached via an oxygen atom.
Используемый в настоящем документе термин NLRP3 предназначен для включения, без ограничения, нуклеиновых кислот, полинуклеотидов, олигонуклеотидов, смысловых и антисмысловых полинуклеотидных цепей, комплементарных последовательностей, пептидов, полипептидов, белков, гомологичных и/или ортологичных молекул NLRP3, изоформ, предшественников, мутантов, вариантов, производных, вариантов сплайсинга, аллелей, различных видов и их активных фрагментов.As used herein, the term NLRP3 is intended to include, without limitation, nucleic acids, polynucleotides, oligonucleotides, sense and antisense polynucleotide strands, complementary sequences, peptides, polypeptides, proteins, homologous and/or orthologous NLRP3 molecules, isoforms, precursors, mutants, variants , derivatives, splicing variants, alleles, various species and their active fragments.
Агонист NLRP3 включает соединения, которые на белковом уровне напрямую связывают или модифицируют NLRP3 таким образом, что активность NLRP3 увеличивается, например, путем активации, стабилизации, изменения распределения или иным образом.An NLRP3 agonist includes compounds that, at the protein level, directly bind or modify NLRP3 in such a way that NLRP3 activity is increased, for example, by activation, stabilization, distribution change, or otherwise.
Некоторые описанные в настоящем документе соединения, которые агонизируют NLRP3 в меньшей степени, чем полный агонист NLRP3, могут функционировать в анализах в качестве антагонистов, а также в качестве агонистов. Эти соединения антагонизируют активацию NLRP3 полным агонистом NLRP3, поскольку они предотвращают полный эффект взаимодействия с NLRP3. Однако соединения также сами по себе активируют некоторую активность NLRP3, обычно меньшую, чем соответствующее количество полного агониста NLRP3. Такие соединения могут называться как частичные агонисты NLRP3.Certain compounds described herein that agonize NLRP3 to a lesser extent than a full NLRP3 agonist may function as antagonists as well as agonists in assays. These compounds antagonize NLRP3 activation by a full NLRP3 agonist because they prevent the full effect of interaction with NLRP3. However, the compounds also themselves activate some NLRP3 activity, usually less than the corresponding amount of a full NLRP3 agonist. Such compounds may be referred to as NLRP3 partial agonists.
В некоторых вариантах осуществления соединения, описанные в настоящем документе, являютсяIn some embodiments, the compounds described herein are
- 17 042018 агонистами (например, полными агонистами) NLRP3. В других вариантах осуществления соединения, описанные в настоящем документе, являются частичными агонистами NLRP3.- 17 042018 NLRP3 agonists (eg full agonists). In other embodiments, the compounds described herein are NLRP3 partial agonists.
Как правило, рецептор существует в активной (Ra) и неактивной (Ri) конформации. Некоторые соединения, которые влияют на рецептор, могут изменять соотношение Ra к Ri (Ra/Ri). Например, полный агонист увеличивает соотношение Ra/Ri и может вызвать максимальный эффект насыщения. Частичный агонист, когда он связан с рецептором, дает более низкий ответ, чем ответ, вызываемый полным агонистом (например, эндогенным агонистом). Таким образом, Ra/Ri для частичного агониста меньше, чем для полного агониста. Однако эффективность частичного агониста может быть больше или меньше, чем таковая полного агониста.As a rule, the receptor exists in active (Ra) and inactive (Ri) conformation. Some compounds that affect the receptor can change the ratio of Ra to Ri (Ra/Ri). For example, a full agonist increases the Ra/Ri ratio and can produce a maximal satiety effect. A partial agonist, when bound to a receptor, produces a lower response than that elicited by a full agonist (eg, an endogenous agonist). Thus, the Ra/Ri for a partial agonist is less than for a full agonist. However, the effectiveness of a partial agonist may be greater or less than that of a full agonist.
Используемый в настоящем документе термин приемлемый в отношении состава, композиции или ингредиента означает отсутствие стойкого вредного воздействия на общее состояние здоровья субъекта, подвергаемого лечению.As used herein, the term "acceptable" in relation to a formulation, composition, or ingredient means that there is no persistent adverse effect on the general health of the subject being treated.
API относится к активному фармацевтическому ингредиенту.API refers to the active pharmaceutical ingredient.
Используемые в настоящем документе термины эффективное количество или терапевтически эффективное количество относятся к достаточному количеству вводимого химического соединения (например, соединения, проявляющего активность в качестве митохондриального разобщающего агента, или его фармацевтически приемлемой соли и/или гидрата, и/или сокристалла; например, соединения, такого как никлозамид, или его фармацевтически приемлемой соли и/или гидрата, и/или сокристалла; например, соединения, такого как аналог никлозамида, или его фармацевтически приемлемой соли и/или гидрата, и/или сокристалла), которое будет ослаблять до некоторой степени один или несколько симптомов заболевания или состояния, подвергаемого лечению. Результат включает уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания, или любое другое желаемое изменение биологической системы. Например, эффективное количество для терапевтических применений представляет собой количество композиции, содержащей соединение, раскрытое в настоящем документе, необходимое для обеспечения клинически значимого уменьшения симптомов заболевания. Подходящее эффективное количество в каждом отдельном случае может быть определено с использованием любого подходящего метода, такого как исследование увеличения дозы.As used herein, the terms effective amount or therapeutically effective amount refer to a sufficient amount of a chemical compound (e.g., a compound exhibiting activity as a mitochondrial uncoupler, or a pharmaceutically acceptable salt and/or hydrate and/or co-crystal thereof; e.g., compounds, such as niclosamide, or a pharmaceutically acceptable salt and/or hydrate and/or co-crystal thereof; e.g., a compound such as a niclosamide analog, or a pharmaceutically acceptable salt and/or hydrate and/or co-crystal thereof), which will weaken to some extent one or more symptoms of the disease or condition being treated. The result includes the reduction and/or alleviation of the signs, symptoms or causes of the disease, or any other desired change in the biological system. For example, an effective amount for therapeutic applications is the amount of a composition containing a compound disclosed herein required to provide a clinically significant reduction in the symptoms of a disease. An appropriate effective amount in each individual case may be determined using any suitable method, such as a dose escalation study.
Термин вспомогательное вещество или фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество означает фармацевтически приемлемый материал, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, носитель, растворитель или инкапсулирующий материал. В одном варианте осуществления каждый компонент является фармацевтически приемлемым в том смысле, что он совместим с другими ингредиентами фармацевтического состава и подходит для использования в контакте с тканью или органом человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции, иммуногенности, или других проблем или осложнений, соизмеримых с разумным соотношением польза/риск. См., напр., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, London, UK (2012); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe et al., Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: (2009); Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash and Ash Eds.; Gower Publishing Company: (2007); Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, (2009).The term excipient or pharmaceutically acceptable excipient means a pharmaceutically acceptable material, composition, or carrier such as a liquid or solid excipient, diluent, carrier, solvent, or encapsulating material. In one embodiment, each component is pharmaceutically acceptable in the sense that it is compatible with the other ingredients of the pharmaceutical formulation and is suitable for use in contact with a human or animal tissue or organ without undue toxicity, irritation, allergic reaction, immunogenicity, or other problems or complications. commensurate with a reasonable benefit/risk ratio. See, for example, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, London, UK (2012); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe et al., Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: (2009); Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash and Ash Eds.; Gower Publishing Company: (2007); Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, (2009).
Термин фармацевтически приемлемая соль относится к составу соединения, который не вызывает значительного раздражения в организме, которому его вводят, и не отменяет биологическую активность и свойства соединения. В некоторых случаях фармацевтически приемлемые соли получают путем реакции соединения, описанного в настоящем документе, с кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и т.п. В некоторых случаях фармацевтически приемлемые соли получают путем взаимодействия соединения, имеющего кислотную группу, описанную в настоящем документе, с основанием с образованием соли, такой как соль аммония, соль щелочного металла, такая как соль натрия или калия, соль щелочноземельного металла, такая как соль кальция или магния, соль органических оснований, такая как дициклогексиламин, N-метилD-глюкамин, трис(гидроксиметил)метиламин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и т.п., или другими способами, определенными ранее. Фармакологически приемлемая соль конкретно не ограничивается, поскольку ее можно использовать в лекарственных средствах. Примеры соли, которую описанные в настоящем документе соединения образуют с основанием, включают следующее: их соли с неорганическими основаниями, такими как натрий, калий, магний, кальций и алюминий; их соли с органическими основаниями, такими как метиламин, этиламин и этаноламин; их соли с основными аминокислотами, такими как лизин и орнитин; и соль аммония. Соли могут представлять собой кислотноаддитивные соли, которые конкретно представлены в качестве примера кислотно-аддитивными солями, образованными со следующим: минеральными кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота и фосфорная кислота: органическими кислотами, такими как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, метансульфоновая кислота иThe term pharmaceutically acceptable salt refers to a formulation of a compound that does not cause significant irritation to the organism to which it is administered and does not alter the biological activity and properties of the compound. In some instances, pharmaceutically acceptable salts are prepared by reacting a compound described herein with acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, salicylic acid, and etc. In some cases, pharmaceutically acceptable salts are prepared by reacting a compound having an acidic group as described herein with a base to form a salt such as an ammonium salt, an alkali metal salt such as a sodium or potassium salt, an alkaline earth metal salt such as a calcium salt or magnesium, an organic base salt such as dicyclohexylamine, N-methylD-glucamine, tris(hydroxymethyl)methylamine, and salts with amino acids such as arginine, lysine, and the like, or by other methods previously defined. The pharmacologically acceptable salt is not particularly limited as long as it can be used in medicines. Examples of the salt that the compounds described herein form with a base include the following: their salts with inorganic bases such as sodium, potassium, magnesium, calcium, and aluminum; their salts with organic bases such as methylamine, ethylamine and ethanolamine; their salts with basic amino acids such as lysine and ornithine; and ammonium salt. The salts may be acid addition salts, which are specifically exemplified by acid addition salts formed with the following: mineral acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid and phosphoric acid; organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid and
- 18 042018 этансульфоновая кислота; кислыми аминокислотами, такими как аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота.- 18 042018 ethanesulfonic acid; acidic amino acids such as aspartic acid and glutamic acid.
Термин фармацевтическая композиция относится к смеси соединения, описанного в настоящем документе, с другими химическими компонентами (в совокупности называемыми в настоящем документе вспомогательными веществами), такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты и/или загустители. Фармацевтическая композиция облегчает введение соединения в организм. В данной области существует множество способов введения соединения, включая, но без ограничения: ректальное, пероральное, внутривенное, аэрозольное, парентеральное, офтальмологическое, легочное и местное введение.The term pharmaceutical composition refers to a mixture of a compound described herein with other chemical components (collectively referred to herein as excipients) such as carriers, stabilizers, diluents, dispersing agents, suspending agents and/or thickeners. The pharmaceutical composition facilitates the administration of the compound to the body. There are many routes of administration of a compound in the art, including, but not limited to, rectal, oral, intravenous, aerosol, parenteral, ophthalmic, pulmonary, and topical administration.
Термин субъект относится к животному, включая, но без ограничения, приматов (например, человека), обезьяну, корову, свинью, овцу, козу, лошадь, собаку, кошку, кролика, крысу или мышь. Термины субъект и пациент используются здесь взаимозаменяемо по отношению, например, к млекопитающему, такому как человек.The term subject refers to an animal, including, but not limited to, primates (eg, humans), monkey, cow, pig, sheep, goat, horse, dog, cat, rabbit, rat, or mouse. The terms subject and patient are used interchangeably herein with respect to, for example, a mammal such as a human.
Термины лечить, лечение и терапия в контексте лечения заболевания или нарушения означают ослабление или устранение нарушения, заболевания или состояния, или одного или нескольких симптомов, связанных с нарушением, заболеванием или состоянием; или замедление прогрессирования, распространения или ухудшения заболевания, нарушения или состояния, или одного или нескольких их симптомов. Лечение рака относится к одному или нескольким из следующих эффектов: (1) ингибирование, до некоторой степени, роста опухоли, в том числе (i) замедление и (ii) полное купирование роста; (2) уменьшение количества опухолевых клеток; (3) поддержание размера опухоли; (4) уменьшение размера опухоли; (5) ингибирование, в том числе (i) уменьшение, (ii) замедление или (iii) полное прекращение инфильтрации опухолевых клеток в периферические органы; (6) ингибирование, включая (i) уменьшение, (ii) замедление или (iii) полное прекращение метастазирования; (7) усиление противоопухолевой иммунной реакции, которая может приводить к (i) поддержанию размера опухоли, (ii) уменьшению размера опухоли, (iii) замедлению роста опухоли, (iv) уменьшению, замедлению или предотвращению инвазии, и/или (8) облегчению, до некоторой степени, тяжести или количества одного или нескольких симптомов, связанных с нарушением.The terms treat, treatment, and therapy, in the context of treating a disease or disorder, mean alleviating or eliminating the disorder, disease, or condition, or one or more of the symptoms associated with the disorder, disease, or condition; or slowing the progression, spread, or worsening of a disease, disorder, or condition, or one or more of its symptoms. Cancer treatment refers to one or more of the following effects: (1) inhibition, to some extent, tumor growth, including (i) slowing and (ii) complete arrest of growth; (2) reduction in the number of tumor cells; (3) maintenance of tumor size; (4) reduction in tumor size; (5) inhibition, including (i) reduction, (ii) slowing down or (iii) complete cessation of infiltration of tumor cells into peripheral organs; (6) inhibition, including (i) reduction, (ii) delay or (iii) complete cessation of metastasis; (7) enhancement of the antitumor immune response, which may result in (i) maintenance of tumor size, (ii) reduction in tumor size, (iii) slowing of tumor growth, (iv) reduction, slowing or prevention of invasion, and/or (8) alleviation to some extent, the severity or number of one or more symptoms associated with the disorder.
Термин галогено относится к фтору (F), хлору (Cl), брому (Br) или йоду (I).The term halo refers to fluorine (F), chlorine (Cl), bromine (Br), or iodine (I).
Термин алкил относится к углеводородной цепи, которая может быть прямой или разветвленной цепью, содержащей указанное количество атомов углерода. Например, C1_10 указывает, что группа может содержать от 1 до 10 (включительно) атомов углерода. Неограничивающие примеры включают метил, этил, изопропил, трет-бутил, н-гексил.The term alkyl refers to a hydrocarbon chain, which may be straight or branched chain, containing the specified number of carbon atoms. For example, C1_ 10 indicates that the group may contain from 1 to 10 (inclusive) carbon atoms. Non-limiting examples include methyl, ethyl, isopropyl, t-butyl, n-hexyl.
Термин алкилен относится к разветвленному или неразветвленному двухвалентному алкилу (например, -CH2-).The term alkylene refers to a branched or straight chain divalent alkyl (eg -CH2-).
Термин галогеналкил относится к алкилу, в котором один или несколько атомов водорода заменены на независимо выбранный галогено.The term haloalkyl refers to alkyl in which one or more hydrogen atoms have been replaced by an independently selected halo.
Термин алкокси относится к -О-алкильному радикалу (например, -OCH3).The term alkoxy refers to an -O-alkyl radical (eg -OCH3).
Термин галогеналкокси относится к -О-галогеналкильной группе, как определено выше, с указанным числом атомов углерода, присоединенных через кислородный мостик. Например, C1.6галогеналкокси включает C1, C2, C3, С4, C5 и С6галогеналкокси группы. Примеры галогеналкокси включают, но без ограничения, трифторметокси, 2,2,2-трифторэтокси и пентафторэтокси.The term haloalkoxy refers to a -O-haloalkyl group, as defined above, with the number of carbon atoms indicated via an oxygen bridge. For example, C1 . 6 haloalkoxy includes C1, C2 , C3 , C4 , C5 and C6 haloalkoxy groups. Examples of haloalkoxy include, but are not limited to, trifluoromethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy, and pentafluoroethoxy.
Термин алкенил относится к углеводородной цепи, которая может быть прямой или разветвленной цепью, имеющей одну или несколько углерод-углеродных двойных связей. Алкенильный фрагмент содержит указанное количество атомов углерода. Например, С2-6 указывает, что группа может содержать от 2 до 6 (включительно) атомов углерода.The term alkenyl refers to a hydrocarbon chain, which may be straight or branched chain, having one or more carbon-carbon double bonds. The alkenyl fragment contains the indicated number of carbon atoms. For example, C 2 - 6 indicates that the group may contain from 2 to 6 (inclusive) carbon atoms.
Термин алкинил относится к углеводородной цепи, которая может быть прямой или разветвленной цепью, имеющей одну или несколько тройных углерод-углеродных связей. Алкинильный фрагмент содержит указанное количество атомов углерода. Например, С2-6 указывает, что группа может содержать от 2 до 6 (включительно) атомов углерода.The term alkynyl refers to a hydrocarbon chain, which may be a straight or branched chain having one or more carbon-carbon triple bonds. The alkynyl fragment contains the indicated number of carbon atoms. For example, C 2 - 6 indicates that the group may contain from 2 to 6 (inclusive) carbon atoms.
Термин ароматический обычно относится к кольцу, которое включает циклический массив резонансно-стабилизированных 4n+2 пи-электронов, где п является целым числом (например, 1 или 2). Ароматические фрагменты включают арильные и гетероарильные группы. Термин неароматический описывает любой фрагмент, который не попадает под определение ароматический.The term aromatic generally refers to a ring that includes a cyclic array of resonantly stabilized 4n+2 pi electrons, where n is an integer (eg, 1 or 2). Aromatic moieties include aryl and heteroaryl groups. The term non-aromatic describes any moiety that does not fall within the definition of aromatic.
Термин арил относится к 6-углеродной моноциклической, 10-углеродной бициклической или 14углеродной трициклической ароматической кольцевой системе, в которой 0, 1, 2, 3 или 4 атома каждого кольца могут быть замещены заместителем, и где кольцо, содержащее моноциклический радикал, является ароматическим, и в котором по меньшей мере одно из конденсированных колец, содержащих бициклический или трициклический радикал, является ароматическим, например, тетрагидронафтил. Примеры арильных групп также включают фенил, нафтил и т.п.The term aryl refers to a 6-carbon monocyclic, 10-carbon bicyclic, or 14-carbon tricyclic aromatic ring system in which 0, 1, 2, 3, or 4 atoms of each ring may be substituted with a substituent, and where the ring containing the monocyclic radical is aromatic, and wherein at least one of the fused rings containing the bicyclic or tricyclic radical is aromatic, eg tetrahydronaphthyl. Examples of aryl groups also include phenyl, naphthyl, and the like.
Используемый в настоящем документе термин циклоалкил включает насыщенные циклические углеводородные группы, содержащие 3-10 атомов углерода, предпочтительно 3-8 атомов углерода и более предпочтительно 3-6 атомов углерода, при этом циклоалкильная группа может быть необязательноAs used herein, the term cycloalkyl includes saturated cyclic hydrocarbon groups containing 3-10 carbon atoms, preferably 3-8 carbon atoms, and more preferably 3-6 carbon atoms, wherein the cycloalkyl group may optionally be
- 19 042018 замещенной. Предпочтительные циклоалкильные группы включают, без ограничения, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил и циклооктил. Используемый в настоящем документе термин циклоалкилен относится к двухвалентному циклоалкилу.- 19 042018 substituted. Preferred cycloalkyl groups include, without limitation, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cycloheptyl, and cyclooctyl. As used herein, the term cycloalkylene refers to divalent cycloalkyl.
Термин гетероарил относится к ароматической 5-8-членной моноциклической, 8-12-членной бициклической или 11-14-членной трициклической кольцевой системе, имеющей 1-3 гетероатома в случае моноциклической, 1-6 гетероатомов в случае бициклической или 1-9 гетероатомов в случае трициклической, при этом указанные гетероатомы выбраны из О, N или S (например, атомы углерода и 1-3, 1-6 или 1-9 гетероатомов N, О или S в случае моноциклической, бициклической или трициклической, соответственно), где 0, 1, 2, 3 или 4 атома каждого кольца могут быть замещены заместителем, и где кольцо, содержащее моноциклический радикал, является ароматическим, и где по меньшей мере одно из конденсированных колец, содержащих бициклический или трициклический радикал, является ароматическим (но не обязательно должно быть кольцо, которое содержит гетероатом, например, тетрагидроизохинолинил. Примеры гетероарильных групп также включают пиридил, фурил или фуранил, имидазолил, бензимидазолил, пиримидинил, тиофенил или тиенил, хинолинил, индолил, тиазолил и т.п.The term heteroaryl refers to an aromatic 5-8 membered monocyclic, 8-12 membered bicyclic or 11-14 membered tricyclic ring system having 1-3 heteroatoms in the case of monocyclic, 1-6 heteroatoms in the case of bicyclic or 1-9 heteroatoms in in the case of tricyclic, wherein said heteroatoms are selected from O, N, or S (for example, carbon atoms and 1-3, 1-6, or 1-9 N, O, or S heteroatoms in the case of monocyclic, bicyclic, or tricyclic, respectively), where 0 , 1, 2, 3, or 4 atoms of each ring may be substituted with a substituent, and where the ring containing the monocyclic radical is aromatic, and where at least one of the fused rings containing the bicyclic or tricyclic radical is aromatic (but need not be be a ring which contains a heteroatom, such as tetrahydroisoquinolinyl.Examples of heteroaryl groups also include pyridyl, furyl or furanyl, imidazolyl, benzimidazolyl, pyrimidinyl, thiophenyl or thienium l, quinolinyl, indolyl, thiazolyl, and the like.
Термин гетероциклил относится к неароматической 5-8-членной моноциклической, 7-12-членной бициклической или мостиковой или 11-14-членной трициклической кольцевой системе, имеющей 1-3 гетероатома в случае моноциклический, 1-6 гетероатомов в случае бициклический, спиро или мостиковой, или 1-9 гетероатомов в случае трициклической, при этом указанные гетероатомы выбраны из О, N или S (например, атомы углерода и 1-3, 1-6 или 1-9 гетероатомов N, О или S в случае моноциклической, бициклической или трициклической, соответственно), где 0, 1, 2 или 3 атома каждого кольца могут быть замещены заместителем. Примеры гетероциклильных групп включают пиперазинил, пирролидинил, диоксанил, морфолинил, тетрагидрофуранил и т.п. Термин гетероциклоалкилен относится к двухвалентному гетероциклилу.The term heterocyclyl refers to a non-aromatic 5-8 membered monocyclic, 7-12 membered bicyclic or bridged, or 11-14 membered tricyclic ring system having 1-3 heteroatoms if monocyclic, 1-6 heteroatoms if bicyclic, spiro or bridged , or 1-9 heteroatoms in the case of tricyclic, while said heteroatoms are selected from O, N or S (for example, carbon atoms and 1-3, 1-6 or 1-9 heteroatoms N, O or S in the case of monocyclic, bicyclic or tricyclic, respectively), where 0, 1, 2, or 3 atoms of each ring may be substituted with a substituent. Examples of heterocyclyl groups include piperazinyl, pyrrolidinyl, dioxanyl, morpholinyl, tetrahydrofuranyl, and the like. The term heterocycloalkylene refers to a divalent heterocyclyl.
Кроме того, предполагается, что атомы, составляющие соединения по настоящим вариантам осуществления, включают все изотопные формы таких атомов. В контексте настоящего описания изотопы включают атомы, имеющие одинаковый атомный номер, но разные массовые числа. В качестве общего примера и без ограничения изотопы водорода включают тритий и дейтерий, а изотопы углерода включают 13С и 14С.Further, the atoms constituting the compounds of the present embodiments are intended to include all isotopic forms of such atoms. As used herein, isotopes include atoms having the same atomic number but different mass numbers. By way of general example and without limitation, hydrogen isotopes include tritium and deuterium, and carbon isotopes include 13 C and 14 C.
Подробное описание одного или нескольких вариантов осуществления изобретения представлено на сопровождающих чертежах и в описании ниже. Другие признаки и преимущества изобретения будут очевидны из описания и чертежей, а также из формулы изобретения.A detailed description of one or more embodiments of the invention is presented in the accompanying drawings and in the description below. Other features and advantages of the invention will be apparent from the description and drawings, as well as from the claims.
В этом изобретении представлены химические соединения (например, соединение или его фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, и/или сокристалл, и/или комбинация соединения с лекарственным средством), которые модулируют (например, агонизируют или частично агонизируют) NLRP3, которые являются полезными, например, для лечения состояния, заболевания или нарушения, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может исправить дефицит активности врожденной иммунной системы (например, состояния, заболевания или нарушения, связанного с недостаточным иммунным ответом), который способствует патологии и/или симптомам, и/или прогрессированию состояния, заболевания или нарушения (например, рака) у субъекта (например, человека). Кроме того, в данном изобретении представлены композиции, а также другие способы их применения и изготовления.This invention provides chemical compounds (e.g., a compound or a pharmaceutically acceptable salt and/or hydrate and/or co-crystal and/or compound-drug combination thereof) that modulate (e.g., agonize or partially agonize) NLRP3 that are useful for example, to treat a condition, disease, or disorder in which increased NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune system activity (e.g., a condition, disease, or disorder associated with an inadequate immune response) that contributes to the pathology and/or symptoms, and/ or the progression of a condition, disease, or disorder (eg, cancer) in a subject (eg, human). In addition, this invention provides compositions, as well as other methods of their use and manufacture.
Фармацевтические композиции и введение.Pharmaceutical compositions and administration.
В некоторых вариантах осуществления химическое соединение (например, соединение, которое модулирует (например, агонизирует или частично агонизирует) NLRP3, или его фармацевтически приемлемую соль и/или гидрат, и/или сокристалл, и/или комбинацию с лекарственным средством) вводят в виде фармацевтической композиции, которая включает химическое соединение и одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, и необязательно одно или несколько дополнительных терапевтических агентов, как описано в настоящем документе.In some embodiments, a chemical compound (e.g., a compound that modulates (e.g., agonizes or partially agonizes) NLRP3, or a pharmaceutically acceptable salt and/or hydrate and/or co-crystal and/or drug combination thereof) is administered as a pharmaceutical a composition that includes a chemical compound and one or more pharmaceutically acceptable excipients, and optionally one or more additional therapeutic agents, as described herein.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит соединение по настоящему изобретению или его соль и одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, и одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.In some embodiments, the pharmaceutical composition contains a compound of the present invention, or a salt thereof, and one or more pharmaceutically acceptable excipients. In some embodiments, the pharmaceutical composition contains a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and one or more pharmaceutically acceptable excipients. In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises a therapeutically effective amount of a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
В некоторых вариантах осуществления химические соединения можно вводить в комбинации с одним или несколькими общепринятыми фармацевтическими вспомогательными веществами. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества включают, но без ограничения, ионообменные вещества, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, самоэмульгирующиеся системы доставки лекарственных средств (SEDDS), такие как d-a-токоферол, полиэтиленгликоль 1000 сукцинат, поверхностноактивные вещества, используемые в фармацевтических лекарственных формах, такие как Твины, полоксамеры или другие аналогичные полимерные матрицы для доставки, сывороточные белки, такие как чеIn some embodiments, the chemical compounds may be administered in combination with one or more conventional pharmaceutical excipients. Pharmaceutically acceptable excipients include, but are not limited to, ion exchangers, alumina, aluminum stearate, lecithin, self-emulsifying drug delivery systems (SEDDS) such as d-a-tocopherol, polyethylene glycol 1000 succinate, surfactants used in pharmaceutical dosage forms such as tweens, poloxamers or other similar polymeric delivery matrices, whey proteins such as che
- 20 042018 ловеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, трис, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смеси частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, двухзамещенный фосфат натрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воск разного вида, блокполимеры полиэтилена и полиоксипропилена, и ланолин. Для улучшения доставки описанных в настоящем документе соединений могут быть также использованы циклодекстрины, такие как α-, и γ-циклодекстрин, или химически модифицированные производные, такие как гидроксиалкилциклодекстрины, включая 2- и 3-гидроксипропил-в-циклодекстрины, или другие солюбилизированные производные. Могут быть изготовлены лекарственные формы или композиции, содержащие химическое соединение, описанное в настоящем документе, в диапазоне 0,005-100%, при этом баланс состоит из нетоксичного вспомогательного вещества. Рассматриваемые композиции могут содержать 0,001-100% химического соединения, обеспеченного в настоящем документе, в одном варианте осуществления 0,195%, в другом варианте осуществления 75-85%, в дополнительном варианте осуществления 20-80%. Фактические способы изготовления таких дозированных форм известны или будут очевидны специалистам в данной области; например, см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition (Pharmaceutical Press, London, UK. 2012).- 20 042018 human serum albumin, buffer substances such as phosphates, tris, glycine, sorbic acid, potassium sorbate, mixtures of partial glycerides of saturated vegetable fatty acids, water, salts or electrolytes such as protamine sulfate, dibasic sodium phosphate, potassium hydrogen phosphate, chloride sodium, zinc salts, colloidal silicon dioxide, magnesium trisilicate, polyvinylpyrrolidone, cellulose-based materials, polyethylene glycol, sodium carboxymethyl cellulose, polyacrylates, waxes of various kinds, polyethylene and polyoxypropylene block polymers, and lanolin. Cyclodextrins such as α- and γ-cyclodextrin, or chemically modified derivatives such as hydroxyalkylcyclodextrins, including 2- and 3-hydroxypropyl-β-cyclodextrins, or other solubilized derivatives, may also be used to improve delivery of the compounds described herein. Can be made dosage forms or compositions containing the chemical compound described herein, in the range of 0.005-100%, while the balance consists of a non-toxic excipient. Contemplated compositions may contain 0.001-100% of the chemical compound provided herein, in one embodiment 0.195%, in another embodiment 75-85%, in a further embodiment 20-80%. The actual methods for making such dosage forms are known or will be apparent to those skilled in the art; for example, see Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition (Pharmaceutical Press, London, UK. 2012).
Способы введения и компоненты композиции.Methods of administration and components of the composition.
В некоторых вариантах осуществления химические соединения, описанные в настоящем документе, или их фармацевтическую композицию можно вводить нуждающемуся в этом субъекту любым приемлемым способом введения. Приемлемые способы введения включают, но без ограничения, буккальный, кожный, эндоцервикальный, эндосинусиальный, эндотрахеальный, энтеральный, эпидуральный, интерстициальный, внутрибрюшной, внутриартериальный, внутрибронхиальный, интрабурсальный, интрацеребральный, внутрицистернальный, внутрикоронарный, внутридермальный, внутрипротоковый. интрадуоденальный, интрадуральный, внутриэпидермальный, внутрипищеводный, внутрижелудочный, внутридесневой, внутриподвздошный, внутрилимфатический, интрамедуллярный, интраменингеальный, внутримышечный, внутриовариальный, интраперитонеальный, интрапростатический, внутрилегочный, интрасинальный, интраспинальный, внутрисиновиальный, внутритестикулярный, интратекальный, интратубулярный, внутриопухолевый, внутриматочный, внутрисосудистый, внутривенный, назальный, назогастральный, пероральный, парентеральный, чрескожный, перидуральный, ректальный, респираторный (ингаляционный), подкожный, сублингвальный, подслизистый, местный, трансдермальный, трансмукозальный, транстрахеальный, мочеточниковый, уретральный и вагинальный. В некоторых вариантах осуществления предпочтительныя способом введения является парентеральный (например, внутриопухолевый). В некоторых вариантах осуществления предпочтительным способом введения является системный.In some embodiments, the chemical compounds described herein, or a pharmaceutical composition thereof, may be administered to a subject in need thereof by any acceptable route of administration. Acceptable routes of administration include, but are not limited to, buccal, dermal, endocervical, endo-sinus, endotracheal, enteral, epidural, interstitial, intra-abdominal, intra-arterial, intra-bronchial, intra-bursal, intra-cerebral, intra-cisternal, intra-coronary, intra-dermal, intra-ductal. intraduodenal, intradural, intraepidermal, intraesophageal, intragastric, intragingival, intrailiac, intralymphatic, intramedullary, intrameningeal, intramuscular, intraovarian, intraperitoneal, intraprostatic, intrapulmonary, intrasinal, intraspinal, intrasynovial, intratesticular, intrathecal, intratubular, intravascular, intravascular, nasal, nasogastric, oral, parenteral, percutaneous, epidural, rectal, respiratory (inhalation), subcutaneous, sublingual, submucosal, topical, transdermal, transmucosal, transtracheal, ureteral, urethral and vaginal. In some embodiments, the preferred route of administration is parenteral (eg intratumoral). In some embodiments, the preferred route of administration is systemic.
Композиции могут быть составлены для парентерального введения, например, составлены для инъекции посредством внутривенного, внутримышечного, подкожного или даже внутрибрюшинного пути введения. Обычно такие композиции могут быть изготовлены в виде инъекционных лекарственных средств, либо в виде жидких растворов, либо в виде суспензий; также могут быть изготовлены твердые формы, подходящие для использования в приготовлении растворов или суспензий при добавлении жидкости перед инъекцией; и препараты также могут быть эмульгированы. Изготовление таких составов будет известно специалистам в данной области в свете настоящего изобретения.The compositions may be formulated for parenteral administration, eg formulated for injection via the intravenous, intramuscular, subcutaneous or even intraperitoneal routes of administration. Typically, such compositions may be formulated as injectables, either as liquid solutions or suspensions; also can be made solid forms suitable for use in the preparation of solutions or suspensions by adding a liquid before injection; and preparations can also be emulsified. The manufacture of such formulations will be known to those skilled in the art in light of the present invention.
Фармацевтические формы, подходящие для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы или дисперсии; составы, включающие кунжутное масло, арахисовое масло или водный пропиленгликоль; и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий непосредственно перед применением. Во всех случаях композиция должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы ее можно было легко вводить путем инъекции. Она также должна быть стабильной в условиях изготовления и хранения, и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы.Pharmaceutical forms suitable for injection use include sterile aqueous solutions or dispersions; formulations comprising sesame oil, peanut oil, or aqueous propylene glycol; and sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions or dispersions immediately before use. In all cases, the composition must be sterile and must be fluid to the extent that it can be easily administered by injection. It must also be stable under the conditions of manufacture and storage, and must be protected from the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi.
Носитель также может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие смеси и растительные масла. Соответствующая текучесть может поддерживаться, например, при помощи покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и при помощи поверхностно-активных веществ. Предохранение от действия микроорганизмов может быть достигнуто за счет различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях будет предпочтительно включать изотонические агенты, например, сахара или хлорид натрия. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может быть достигнута за счет включения в композиции средств, замедляющих абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.The carrier may also be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, polyol (eg glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycol, etc.), suitable mixtures thereof, and vegetable oils. Appropriate fluidity can be maintained, for example, by using a coating such as lecithin, by maintaining the required particle size in the case of a dispersion, and by using surfactants. Protection against the action of microorganisms can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like. In many cases, it will be preferable to include isotonic agents, such as sugars or sodium chloride. Prolonged absorption of injectable compositions can be achieved by including in the composition agents that delay absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.
Стерильные растворы для инъекций готовят путем включения активных соединений в необходимом количестве в подходящий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше,Sterile injectable solutions are prepared by incorporating the active compounds in the required amount in a suitable solvent with various other ingredients listed above,
- 21 042018 при необходимости, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают путем включения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций предпочтительными способами изготовления являются методы вакуумной сушки и лиофилизация, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из их раствора, предварительно подвергнутого стерилизации фильтрованием.- 21 042018 if necessary, followed by filter sterilization. Typically, dispersions are prepared by incorporating the various sterilized active ingredients into a sterile carrier which contains the basic dispersion medium and the other necessary ingredients listed above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, the preferred methods of manufacture are vacuum drying and lyophilization methods, which allow the preparation of a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from their previously sterilized filtered solution.
Внутриопухолевые инъекции описаны, например, в Lammers, et al., Effect of Intratumoral Injection on the Biodistribution and the Therapeutic Potential of HPMA Copolymer-Based Drug Delivery Systems Neoplasia. 10:788-795 (2006).Intratumoral injections are described, for example, in Lammers, et al., Effect of Intratumoral Injection on the Biodistribution and the Therapeutic Potential of HPMA Copolymer-Based Drug Delivery Systems Neoplasia. 10:788-795 (2006).
Фармакологически приемлемые вспомогательные вещества, используемые в ректальной композиции в виде геля, крема, клизмы или ректального суппозитория, включают, без ограничения, любой один или несколько из глицеридов масла какао, синтетических полимеров, таких как поливинилпирролидон, PEG (например, мази PEG), глицерина, глицеринозированного желатина, гидрогенизированных растительных масел, полоксамеров, смесей полиэтиленгликолей с различной молекулярной массой и сложных эфиров жирных кислот полиэтиленгликоля, вазелина, безводного ланолина, жира печени акулы, сахарината натрия, ментола, масла сладкого миндаля, сорбита, бензоата натрия, аноксида SBN, эфирного масла ванили, аэрозоля, парабенов в феноксиэтаноле, метил-пара-оксибензоата натрия, пропил-параоксибензоата натрия, диэтиламина, карбомеров, карбопола, метилоксибензоата, макрогола цетостеарилового эфира, кокоилкаприлокапрата, изопропилового спирта, пропиленгликоля, жидкого парафина, ксантановой камеди, карбокси-метабисульфита, эдетата натрия, бензоата натрия, метабисульфита калия, экстракт семян грейпфрута, метилсульфонилметана (MSM), молочной кислоты, глицина, витаминов, таких как витамины А и Е, а также ацетата калия.Pharmacologically acceptable excipients used in a rectal gel, cream, enema or rectal suppository formulation include, without limitation, any one or more of cocoa butter glycerides, synthetic polymers such as polyvinylpyrrolidone, PEG (e.g. PEG ointments), glycerin , glycerinated gelatin, hydrogenated vegetable oils, poloxamers, blends of polyethylene glycols of various molecular weights and polyethylene glycol fatty acid esters, petroleum jelly, anhydrous lanolin, shark liver oil, sodium saccharinate, menthol, sweet almond oil, sorbitol, sodium benzoate, SBN anoxide, ethereal vanilla oil, aerosol, parabens in phenoxyethanol, sodium methyl parahydroxybenzoate, sodium propyl paraoxybenzoate, diethylamine, carbomers, carbopol, methyloxybenzoate, macrogol cetostearyl ether, cocoyl caprylocaprate, isopropyl alcohol, propylene glycol, liquid paraffin, xanthan gum, carboxy metabisulphite, edetat and sodium, sodium benzoate, potassium metabisulphite, grapefruit seed extract, methylsulfonylmethane (MSM), lactic acid, glycine, vitamins such as vitamins A and E, and potassium acetate.
В некоторых вариантах осуществления суппозитории могут быть изготовлены путем смешивания описанных в настоящем документе химических соединений с подходящими нераздражающими вспомогательными веществами или носителями, такими как масло какао, полиэтиленгликоль или воск для суппозиториев, которые являются твердыми при температуре окружающей среды, но жидкими при температуре тела и поэтому плавятся в прямой кишке и высвобождают активное соединение. В других вариантах осуществления композиции для ректального введения имеют форму клизмы.In some embodiments, suppositories can be made by mixing the chemical compounds described herein with suitable non-irritating excipients or carriers, such as cocoa butter, polyethylene glycol, or suppository wax, which are solid at ambient temperature but liquid at body temperature and therefore melt in the rectum and release the active compound. In other embodiments, the rectal compositions are in the form of an enema.
В других вариантах осуществления соединения, описанные в настоящем документе, или их фармацевтическая композиция являются подходящими для местной доставки в пищеварительный тракт или желудочно-кишечный тракт путем перорального введения (например, в твердых или жидких лекарственных формах).In other embodiments, the compounds described herein, or a pharmaceutical composition thereof, are suitable for topical delivery to the digestive tract or gastrointestinal tract by oral administration (eg, in solid or liquid dosage forms).
Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах химическое соединение смешано с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, такими как цитрат натрия или дикальцийфосфат, и/или: а) наполнителями или расширителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, b) связывающими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидинон, сахароза и гуммиарабик, с) увлажняющими веществами, такими как глицерин, d) дезинтегрирующими агентами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия, е) агентами, замедляющими растворение, такими как парафин, f) ускорителями абсорбции, такими как соединения четвертичного аммония, g) смачивающими агентами, такими как, например, цетиловый спирт и моностеарат глицерина, h) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина, и i) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма может также содержать буферные агенты. Твердые композиции подобного типа также могут быть использованы в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах с использованием таких наполнителей, как лактоза или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой и т.п.Solid dosage forms for oral administration include capsules, tablets, pills, powders and granules. In such solid dosage forms, the chemical compound is mixed with one or more pharmaceutically acceptable excipients such as sodium citrate or dicalcium phosphate and/or: a) excipients or extenders such as starches, lactose, sucrose, glucose, mannitol and silicic acid, b ) binders such as, for example, carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinylpyrrolidinone, sucrose and gum arabic, c) wetting agents such as glycerol, d) disintegrating agents such as agar-agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicates and sodium carbonate, e) dissolution retarding agents such as paraffin, f) absorption accelerators such as quaternary ammonium compounds, g) wetting agents such as, for example, cetyl alcohol and glycerol monostearate, h) absorbents, such as kaolin and bentonite clay, and i) lubricants such as talc, stea calcium rat, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, sodium lauryl sulfate and mixtures thereof. In the case of capsules, tablets and pills, the dosage form may also contain buffering agents. Solid compositions of a similar type can also be used as fillers in soft and hard gelatin capsules using fillers such as lactose or milk sugar, as well as high molecular weight polyethylene glycols and the like.
В одном варианте осуществления композиции будут иметь форму стандартной лекарственной формы, такой как пилюля или таблетка, и, таким образом, композиция может содержать, наряду с химическим соединением, обеспеченным в настоящем документе, разбавитель, такой как лактоза, сахароза, дикальцийфосфат или т.п.; смазывающее вещество, такое как стеарат магния или т.п.; и связывающее вещество, такое как крахмал, гуммиарабик, поливинилпирролидин, желатин, целлюлоза, производные целлюлозы и т.п. В другой твердой лекарственной форме порошок, микрогранулы, раствор или суспензию (например, в пропиленкарбонате, растительных маслах, PEG, полоксамере 124 или триглицеридах) заключают в капсулу (капсулу на основе желатина или целлюлозы). Также, рассматриваются единичные дозированные формы, в которых одно или несколько химических соединений, обеспеченных в настоящем документе, или дополнительных активных агентов являются физически разделенными; например, капсулы с гранулами (или таблетки в капсуле) каждого лекарственного средства; двухслойные таблетки; двухкамерные желатиновые капсулы и т.д. Также, рассматриваются пероральные лекарственные формыIn one embodiment, the compositions will be in unit dosage form such as a pill or tablet and thus the composition may contain, along with the chemical compound provided herein, a diluent such as lactose, sucrose, dicalcium phosphate, or the like. .; a lubricant such as magnesium stearate or the like; and a binder such as starch, gum arabic, polyvinylpyrrolidine, gelatin, cellulose, cellulose derivatives, and the like. In another solid dosage form, the powder, microgranules, solution or suspension (eg in propylene carbonate, vegetable oils, PEG, poloxamer 124 or triglycerides) is encapsulated (gelatin or cellulose based capsule). Also contemplated are unit dosage forms in which one or more chemical compounds provided herein or additional active agents are physically separated; for example, capsules with granules (or tablets in a capsule) of each drug; bilayer tablets; double chamber gelatin capsules, etc. Also, oral dosage forms are considered.
- 22 042018 с энтеросолюбильным покрытием или с замедленным высвобождением.- 22 042018 enteric coated or sustained release.
Другие физиологически приемлемые соединения включают смачивающие агенты, эмульгирующие агенты, диспергирующие агенты или консерванты, которые являются особенно полезными для предотвращения роста или действия микроорганизмов. Различные консерванты хорошо известны и включают, например, фенол и аскорбиновую кислоту.Other physiologically acceptable compounds include wetting agents, emulsifying agents, dispersing agents, or preservatives, which are particularly useful in preventing the growth or action of microorganisms. Various preservatives are well known and include, for example, phenol and ascorbic acid.
В некоторых вариантах осуществления вспомогательные вещества являются стерильными и обычно не содержат нежелательных веществ. Эти композиции можно стерилизовать обычными, хорошо известными методами стерилизации. Для различных вспомогательных веществ для пероральных лекарственных форм, таких как таблетки и капсулы, стерильность не требуется. Обычно достаточно стандарта USP/NF.In some embodiments, the excipients are sterile and generally free of unwanted substances. These compositions can be sterilized by conventional, well known sterilization techniques. For various excipients for oral dosage forms, such as tablets and capsules, sterility is not required. The USP/NF standard is usually sufficient.
В некоторых вариантах осуществления твердые пероральные лекарственные формы могут дополнительно включать один или несколько компонентов, которые химически и/или структурно способствуют композиции к доставке химического соединения в желудок или нижний отдел ЖКТ; например, восходящую ободочную кишку и/или поперечную ободочную кишку, и/или дистальные отделы толстой кишки, и/или тонкую кишку. Иллюстративные методики составления описаны, например, в работе Filipski, K.J., et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2013, 13, 776-802, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.In some embodiments, solid oral dosage forms may further include one or more components that chemically and/or structurally assist the composition in delivering the chemical to the stomach or lower GI tract; for example, the ascending colon and/or the transverse colon and/or the distal colon and/or the small intestine. Illustrative formulation techniques are described, for example, in Filipski, K.J., et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2013, 13, 776-802, which is incorporated herein by reference in its entirety.
Примеры включают методы нацеливания на верхние отделы ЖКТ, например, Accordion Pill (Intec Pharma), плавающие капсулы и материалы, способные прилипать к стенкам слизистой оболочки.Examples include upper GI targeting methods such as Accordion Pill (Intec Pharma), floating capsules, and materials capable of adhering to mucosal walls.
Другие примеры включают методы нацеливания на нижние отделы ЖКТ. Для нацеливания на различные области кишечного тракта существует несколько энтеросолюбильных/рН-чувствительных покрытий и вспомогательных веществ. Эти материалы обычно представляют собой полимеры, которые предназначены для растворения или эродирования в определенных диапазонах рН, выбранные исходя из области ЖКТ желаемого высвобождения лекарственного средства. Эти материалы также защищают кислото-неустойчивые лекарственные средства от действия желудочного сока или ограничивают воздействие в тех случаях, когда активный ингредиент может вызывать раздражение верхних отделов ЖКТ (например, ряд фталатов гидроксипропилметилцеллюлозы, Coateric (поливинилацетатфталат), ацетатфталат целлюлозы, ацетат сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, серии Eudragit (сополимеры метакриловой кислоты и метилметакрилата) и Marcoat). Другие методы включают дозированные формы, которые реагируют на местную флору в желудочно-кишечном тракте, капсулу с управляемой давлением доставкой в толстую кишку и Pulsincap.Other examples include lower GI targeting techniques. Several enteric/pH sensitive coatings and excipients exist to target different areas of the intestinal tract. These materials are typically polymers that are designed to dissolve or erode within specific pH ranges, selected based on the region of the GI tract that drug release is desired. These materials also protect acid-labile drugs from gastric acid attack or limit exposure where the active ingredient may cause upper GI irritation (e.g., the hydroxypropyl methylcellulose phthalates range, Coateric (polyvinyl acetate phthalate), cellulose acetate phthalate, hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate, the Eudragit series (copolymers of methacrylic acid and methyl methacrylate) and Marcoat). Other methods include dosage forms that respond to local flora in the gastrointestinal tract, the colonic pressure-controlled delivery capsule, and Pulsincap.
Глазные композиции могут включать, без ограничения, любое одно или несколько из следующего: вискогены (например, карбоксиметилцеллюлозу, глицерин, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль); стабилизаторы (например, плюроник (триблок-сополимеры), циклодекстрины); консерванты (например, бензалкония хлорид, ETDA, SofZia (борная кислота, пропиленгликоль, сорбит и хлорид цинка; Alcon Laboratories, Inc.), пурит (стабилизированный оксихлорокомплекс; Allergan, Inc.)).Ophthalmic compositions may include, without limitation, any one or more of the following: viscogenes (eg, carboxymethylcellulose, glycerin, polyvinylpyrrolidone, polyethylene glycol); stabilizers (eg pluronic (triblock copolymers), cyclodextrins); preservatives (eg, benzalkonium chloride, ETDA, SofZia (boric acid, propylene glycol, sorbitol, and zinc chloride; Alcon Laboratories, Inc.), purite (stabilized oxychloro complex; Allergan, Inc.)).
Композиции для местного применения могут включать мази и кремы. Мази представляют собой полутвердые препараты, которые обычно основаны на вазелине или других производных вазелина. Кремы, содержащие выбранный активный агент, обычно представляют собой вязкие жидкие или полутвердые эмульсии, часто либо масло-в-воде, либо вода-в-масле. Кремовые основы обычно смываются водой и содержат масляную фазу, эмульгатор и водную фазу. Масляная фаза, также иногда называемая внутренней фазой, обычно состоит из вазелина и жирного спирта, такого как цетиловый или стеариловый спирт; водная фаза обычно, хотя и не обязательно, превышает по объему масляную фазу и обычно содержит увлажняющее вещество. Эмульгатор в составе крема обычно представляет собой неионогенное, анионное, катионное или амфотерное поверхностно-активное вещество. Как и в случае с другими носителями или наполнителями, мазевая основа должна быть инертной, стабильной, не вызывающей раздражения и неаллергенной.Compositions for topical application may include ointments and creams. Ointments are semi-solid preparations that are usually based on petrolatum or other petroleum jelly derivatives. Creams containing the selected active agent are usually viscous liquid or semi-solid emulsions, often either oil-in-water or water-in-oil. Cream bases are usually water-washable and contain an oil phase, an emulsifier and an aqueous phase. The oil phase, also sometimes referred to as the internal phase, usually consists of petrolatum and a fatty alcohol such as cetyl or stearyl alcohol; the aqueous phase usually, although not necessarily, exceeds the volume of the oil phase and usually contains a wetting agent. The emulsifier in a cream is usually a non-ionic, anionic, cationic, or amphoteric surfactant. As with other carriers or excipients, the ointment base must be inert, stable, non-irritating and non-allergenic.
В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, могут включать один или несколько из следующих компонентов: липиды, межслойные сшитые многослойные везикулы, биоразлагаемые наночастицы или микрочастицы на основе поли(D,L-молочной-со-гликолевой кислоты) [PLGA], и липидные бислои на основе нанопористых частиц.In any of the above embodiments, the pharmaceutical compositions described herein may include one or more of the following components: lipids, cross-linked multilayer vesicles, biodegradable nanoparticles or microparticles based on poly(D,L-lactic-co-glycolic acid) [ PLGA], and lipid bilayers based on nanoporous particles.
Дозировки.Dosages.
Дозировки могут варьироваться в зависимости от требований для пациента, тяжести состояния, подвергаемого лечению, и конкретного применяемого соединения. Определение правильной дозировки для конкретной ситуации может быть осуществлено специалистом в области медицины. Общую суточную дозу можно разделить и вводить частями в течение дня или путем обеспечения непрерывной доставки.Dosages may vary depending on the requirements of the patient, the severity of the condition being treated and the particular compound being used. Determination of the correct dosage for a particular situation can be carried out by a person skilled in the art of medicine. The total daily dose may be divided and administered in portions throughout the day or by providing continuous delivery.
В некоторых вариантах осуществления соединения, описанные в настоящем документе, вводят в дозе от примерно 0,001 мг/кг до примерно 500 мг/кг (например, от примерно 0,001 мг/кг до примерно 200 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 200 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 150 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 100 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 50 мг/кг; от примерноIn some embodiments, the compounds described herein are administered at a dose of about 0.001 mg/kg to about 500 mg/kg (e.g., about 0.001 mg/kg to about 200 mg/kg; about 0.01 mg/kg up to about 200 mg/kg, from about 0.01 mg/kg to about 150 mg/kg, from about 0.01 mg/kg to about 100 mg/kg, from about 0.01 mg/kg to about 50 mg/kg kg; from approx.
- 23 042018- 23 042018
0,01 мг/кг до примерно 10 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 5 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 1 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 0,5 мг/кг; от примерно 0,01 мг/кг до примерно 0,1 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 200 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 150 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 100 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 50 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 10 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 5 мг/кг; от примерно 1 мг/кг до примерно 1 мг/кг; от примерно 0,1 мг/кг до примерно 0,5 мг/кг).0.01 mg/kg to about 10 mg/kg; from about 0.01 mg/kg to about 5 mg/kg; from about 0.01 mg/kg to about 1 mg/kg; from about 0.01 mg/kg to about 0.5 mg/kg; from about 0.01 mg/kg to about 0.1 mg/kg; from about 0.1 mg/kg to about 200 mg/kg; from about 0.1 mg/kg to about 150 mg/kg; from about 0.1 mg/kg to about 100 mg/kg; from about 0.1 mg/kg to about 50 mg/kg; from about 0.1 mg/kg to about 10 mg/kg; from about 0.1 mg/kg to about 5 mg/kg; from about 1 mg/kg to about 1 mg/kg; about 0.1 mg/kg to about 0.5 mg/kg).
Режимы введения.Introduction modes.
Вышеуказанные дозировки можно вводить на ежедневной основе (например, в виде одной дозы или в виде двух или более разделенных доз) или не ежедневной основе (например, через день, каждые два дня, каждые три дня, один раз в неделю, два раза в неделю, раз в две недели, раз в месяц).The above dosages may be administered on a daily basis (eg, as a single dose or as two or more divided doses) or on a non-daily basis (eg, every other day, every two days, every three days, once a week, twice a week once every two weeks, once a month).
В некоторых вариантах осуществления период введения соединения, описанного в настоящем документе, составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 9 недель, 10 недель, 11 недель, 12 недель, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев или более. В другом варианте осуществления период, в течение которого введение прекращается, составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 9 недель, 10 недель, 11 недель, 12 недель, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев или более. В одном варианте осуществления терапевтическое соединение вводят индивидууму в течение некоторого периода времени, за которым следует отдельный период времени. В другом варианте осуществления терапевтическое соединение вводят в течение первого периода и после первого периода следует второй период, при этом введение прекращают во время второго периода, затем следует третий период, когда введение терапевтического соединения начинают, и затем после третьего периода следует четвертый период, когда введение прекращают. В одном аспекте этого варианта осуществления период введения терапевтического соединения, за которым следует период, когда введение прекращают, повторяют в течение определенного или неопределенного периода времени. В другом варианте осуществления период введения составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 9 недель, 10 недель, 11 недель, 12 недель, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев или более. В другом варианте осуществления период, в течение которого введение прекращают, составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 9 недель, 10 недель, 11 недель, 12 недель, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев или более.In some embodiments, the administration period for a compound described herein is 1 day, 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 8 days, 9 days, 10 days, 11 days, 12 days, 13 days, 14 days, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 11 weeks, 12 weeks, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, 8 months , 9 months, 10 months, 11 months, 12 months or more. In another embodiment, the period during which administration is stopped is 1 day, 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 8 days, 9 days, 10 days, 11 days, 12 days, 13 days, 14 days, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 11 weeks, 12 weeks, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, 8 months, 9 months, 10 months, 11 months, 12 months or more. In one embodiment, the therapeutic compound is administered to the individual over a period of time followed by a separate period of time. In another embodiment, the therapeutic compound is administered during a first period, and the first period is followed by a second period, with administration being stopped during the second period, followed by a third period when administration of the therapeutic compound is started, and then following the third period, a fourth period when administration is stop. In one aspect of this embodiment, the period of administration of the therapeutic compound, followed by the period when the administration is stopped, is repeated for a specified or indefinite period of time. In another embodiment, the administration period is 1 day, 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 8 days, 9 days, 10 days, 11 days, 12 days, 13 days, 14 days, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 11 weeks, 12 weeks, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, 8 months, 9 months, 10 months, 11 months, 12 months or more. In another embodiment, the period during which administration is stopped is 1 day, 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 8 days, 9 days, 10 days, 11 days, 12 days, 13 days, 14 days, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 11 weeks, 12 weeks, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, 8 months, 9 months, 10 months, 11 months, 12 months or more.
Способы лечения.Methods of treatment.
В некоторых вариантах осуществления обеспечены способы лечения субъекта, имеющего состояние, заболевание или нарушение, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может корректировать дефицит активности врожденной иммунной системы (например, состояние, заболевание или нарушение, связанное с недостаточным иммунным ответом), который способствует патологии и/или симптомам, и/или прогрессированию состояния, заболевания или нарушения (например, рака).In some embodiments, methods are provided for treating a subject having a condition, disease, or disorder in which increased NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune system activity (e.g., a condition, disease, or disorder associated with a deficient immune response) that contributes to the pathology and/ or symptoms and/or progression of a condition, disease, or disorder (eg, cancer).
Показания к применению.Indications for use.
В любом из способов, описанных в настоящем документе, субъекта может иметь рак. В некоторых примерах любого из способов, описанных в настоящем документе, млекопитающее было идентифицировано как имеющее рак, или было диагностировано как имеющее рак.In any of the methods described herein, the subject may have cancer. In some examples of any of the methods described herein, the mammal has been identified as having cancer, or has been diagnosed as having cancer.
Неограничивающие примеры рака включают: острый миелоидный лейкоз, адренокортикальную карциному, саркому Капоши, лимфому, рак анального канала, рак аппендикса, тератоидную/рабдоидную опухоль, базальноклеточную карциному, рак желчных протоков, рак мочевого пузыря, рак костей, рак головного мозга, рак молочной железы, бронхиальную опухоль, карциноидную опухоль, опухоль сердца, рак шейки матки, хордому, хронический лимфоцитарный лейкоз, хроническое миелопролиферативное новообразование, рак толстой кишки, колоректальный рак, краниофарингиому, рак желчных протоков, рак эндометрия, эпендимому, рак пищевода, эстезионейробластому, саркому Юинга, рак глаза, рак маточной трубы, рак желчного пузыря, карциноидную опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальную опухоль желудочно-кишечного тракта, герминогенную опухоль, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, рак сердца, рак печени, гипофарингеальный рак, рак поджелудочной железы, рак почки, рак гортани, хронический миелогенный лейкоз, рак губы и полости рта, рак легких, меланому, карциному из клеток Меркеля, мезотелиому, рак ротоглотки, рак полости рта, остеосаркому, рак яичников, рак полового члена, фарингеальный рак, рак предстательной железы, рак прямой кишки, рак слюнной железы, рак кожи, рак тонкой кишки, саркому мягких тканей, рак яичек, рак горла, рак щитовидной железы, рак уретры, рак матки, рак влагалища и рак вульвы.Non-limiting examples of cancer include: acute myeloid leukemia, adrenocortical carcinoma, Kaposi's sarcoma, lymphoma, anal cancer, appendix cancer, teratoid/rhabdoid tumor, basal cell carcinoma, bile duct cancer, bladder cancer, bone cancer, brain cancer, breast cancer , bronchial tumor, carcinoid tumor, heart tumor, cervical cancer, chordoma, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloproliferative neoplasm, colon cancer, colorectal cancer, craniopharyngioma, bile duct cancer, endometrial cancer, ependymoma, esophageal cancer, esthesioneuroblastoma, Ewing's sarcoma, eye cancer, fallopian tube cancer, gallbladder cancer, gastrointestinal carcinoid tumor, gastrointestinal stromal tumor, germ cell tumor, hairy cell leukemia, head and neck cancer, heart cancer, liver cancer, hypopharyngeal cancer, pancreatic cancer, cancer kidney, laryngeal cancer, chronic myelogenous leukemia, lip cancer and oral cavity, lung cancer, melanoma, Merkel cell carcinoma, mesothelioma, oropharyngeal cancer, oral cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, penile cancer, pharyngeal cancer, prostate cancer, rectal cancer, salivary gland cancer, skin cancer, cancer small intestine, soft tissue sarcoma, testicular cancer, throat cancer, thyroid cancer, urethral cancer, uterine cancer, vaginal cancer, and vulvar cancer.
В некоторых вариантах осуществления неограничивающие примеры рака включают: рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, рак поджелудочной железы и рак предстательной железы.In some embodiments, non-limiting examples of cancer include: breast cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, and prostate cancer.
Способы диагностики субъекта как имеющего рак или идентификации млекопитающего как имеюMethods for diagnosing a subject as having cancer or identifying a mammal as having
- 24 042018 щего рак хорошо известны в данной области. Например, медицинский работник (например, врач, помощник врача или техник) может диагностировать рак у млекопитающего, наблюдая один или несколько симптомов рака у млекопитающего. Неограничивающие примеры симптомов рака включают: усталость, уплотнение или ощущаемый участок утолщения под кожей, изменение веса, желтуху, потемнение или покраснение кожи, незаживающие язвы, изменения существующих родинок, изменения в поведении кишечника и мочевого пузыря, постоянный кашель или затрудненное дыхание, затрудненное глотание, охриплость голоса, стойкое несварение желудка или дискомфорт после еды, стойкая необъяснимая боль в мышцах или суставах, стойкая необъяснимая лихорадка или ночная потливость, а также необъяснимые кровотечения или синяки. Способы диагностики субъекта как имеющего рак или идентификации субъекта как имеющего рак могут дополнительно включать выполнение одного или нескольких диагностических тестов (например, выполнение одного или нескольких диагностических тестов на биопсии или образце крови).- 24 042018 cancers are well known in the art. For example, a medical professional (eg, physician, physician assistant, or technician) may diagnose cancer in a mammal by observing one or more symptoms of cancer in the mammal. Non-limiting examples of cancer symptoms include: fatigue, hardness or a felt area of thickening under the skin, weight change, jaundice, darkening or redness of the skin, ulcers that do not heal, changes in existing moles, changes in bowel and bladder behavior, persistent cough or difficulty breathing, difficulty swallowing, hoarseness, persistent indigestion or discomfort after eating, persistent unexplained muscle or joint pain, persistent unexplained fever or night sweats, and unexplained bleeding or bruising. Methods for diagnosing a subject as having cancer or identifying a subject as having cancer may further include performing one or more diagnostic tests (eg, performing one or more diagnostic tests on a biopsy or blood sample).
В некоторых примерах любого из описанных в настоящем документе способов субъект может представлять собой субъекта, имеющего рак, субъекта, диагностированного как имеющего рак, или субъекта, идентифицированного как имеющего рак, который не отвечал на ранее введенное лечение рака. Диагностические тесты для диагностики субъекта как имеющего рак или идентификации млекопитающего как имеющего рак известны в данной области.In some examples of any of the methods described herein, the subject may be a subject having cancer, a subject diagnosed as having cancer, or a subject identified as having cancer who has not responded to a previously administered cancer treatment. Diagnostic tests for diagnosing a subject as having cancer or identifying a mammal as having cancer are known in the art.
В некоторых вариантах осуществления обеспечены способы лечения субъекта, имеющего состояние, заболевание или нарушение, при котором усиление передачи сигналов NLRP3 может корректировать дефицит активности врожденной иммунной системы (например, состояние, заболевание или нарушение, связанное с недостаточным иммунным ответом), который способствует патологии и/или симптомам, и/или прогрессированию состояния, заболевания или нарушения (например, рака).In some embodiments, methods are provided for treating a subject having a condition, disease, or disorder in which increased NLRP3 signaling can correct a deficiency in innate immune system activity (e.g., a condition, disease, or disorder associated with a deficient immune response) that contributes to the pathology and/ or symptoms and/or progression of a condition, disease, or disorder (eg, cancer).
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения рака, при этом рак может представлять собой любой рак, который не вызывает оптимального ответа врожденной иммунной системы.In some embodiments, the present invention provides a method of treating cancer, wherein the cancer may be any cancer that does not elicit an optimal response from the innate immune system.
Врожденная иммунная система относится к части иммунной системы, состоящей из клеток, которые реагируют на угрозы для организма, такие как инфекции или рак, антиген-неспецифическим образом и стимулируют адаптивную, антиген-специфическую иммунную систему. В целом, полное устранение угрозы и долговременная защита (=иммунитет) требует активности адаптивной, антиген-специфической иммунной системы, которая, в свою очередь, зависит от стимуляции со стороны врожденной иммунной системы.The innate immune system refers to the part of the immune system that is made up of cells that respond to threats to the body, such as infections or cancer, in an antigen-non-specific manner and stimulate an adaptive, antigen-specific immune system. In general, complete elimination of a threat and long-term protection (=immunity) requires the activity of an adaptive, antigen-specific immune system, which in turn depends on stimulation from the innate immune system.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения, при этом рак выбирают исходя из устойчивости к ингибированию контрольных точек Т-клеток, независимо от типа рака и на основании отсутствия ответа на предыдущую терапию ингибиторами контрольных точек Т-клеток, или на основании типа рака, который обычно устойчив к терапии ингибиторами контрольных точек Т-клеток, такого как гормон-рецептор-положительный рак молочной железы, рак толстой кишки или прямой кишки с микросателлитной стабильностью, рак поджелудочной железы и рак предстательной железы.In some embodiments, the present invention provides a method of treatment, wherein the cancer is selected based on resistance to T cell checkpoint inhibition, regardless of cancer type, and based on lack of response to previous therapy with T cell checkpoint inhibitors, or based on cancer type, which is generally resistant to T cell checkpoint inhibitor therapy, such as hormone receptor positive breast cancer, microsatellite stable colon or rectal cancer, pancreatic cancer and prostate cancer.
В некоторых других вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения рака, включающий агонист NLPR3 по настоящему изобретению, для лечения невоспаленных опухолей с низкой инфильтрацией CD8+ Т-клетками для повышения иммуногенности опухоли и стимулирования воспалительных ответов. Например, комбинацию можно применять для лечения солидной опухоли на основании результатов биопсии, которые продемонстрировали низкую инфильтрацию CD8+ Т-клетками или низкую экспрессию генов, продуцируемых CD8+ Т-клетками.In some other embodiments, the present invention provides a cancer treatment method comprising an NLPR3 agonist of the present invention for treating non-inflammatory tumors with low CD8+ T cell infiltration to increase tumor immunogenicity and stimulate inflammatory responses. For example, the combination can be used to treat a solid tumor based on biopsy results that demonstrate low infiltration by CD8+ T cells or low expression of genes produced by CD8+ T cells.
Устойчивость к ингибированию контрольных точек Т-клеток относится к прогрессированию рака в ответ на терапию или отсутствию ответа в течение 6 месяцев терапии в соответствии с критериями согласованного ответа для соответствующего рака, такими как RECIST1.1 для большинства солидных опухолей.Resistance to T cell checkpoint inhibition refers to progression of cancer in response to therapy or failure to respond within 6 months of therapy according to consensus response criteria for the respective cancer, such as RECIST1.1 for most solid tumors.
Инфильтрация Т-клетками относится к проценту Т-клеток от всех ядросодержащих клеток по данным иммуногистохимического анализа образцов биопсии опухоли.T cell infiltration refers to the percentage of T cells of all nucleated cells as determined by immunohistochemical analysis of tumor biopsy specimens.
Инфильтрация CD8+ Т-клетками относится к проценту CD8+ клеток от всех ядросодержащих клеток по данным иммуногистохимического анализа образцов биопсии опухоли.CD8+ T cell infiltration refers to the percentage of CD8+ cells of all nucleated cells as determined by immunohistochemical analysis of tumor biopsy specimens.
В дополнение к иммуногистохимическому анализу для количественного определения CD8+ Тклеток в образцах биопсии, экспрессия генов, продуцируемых CD8+ Т-клетками, таких как интерферону, может быть измерена путем количественного определения мРНК с использованием, например, секвенирования следующего поколения и дать информацию по инфильтрации CD8+ Т-клетками. Пороговые значения для низкой и высокой инфильтрации CD8+ Т-клетками с помощью иммуногистохимического анализа методов количественной оценки мРНК разрабатываются различными группами и принимают во внимание спектр инфильтрации CD8+ Т-клетками при раковых заболеваниях, а также для конкретных видов рака.In addition to immunohistochemical analysis to quantify CD8+ T cells in biopsy specimens, the expression of genes produced by CD8+ T cells, such as interferon, can be measured by mRNA quantification using, for example, next generation sequencing and provide information on CD8+ T-cell infiltration. cells. Thresholds for low and high CD8+ T cell infiltration by immunohistochemical analysis of mRNA quantification methods are being developed by various groups and take into account the spectrum of CD8+ T cell infiltration in cancers as well as for specific cancers.
В любом из описанных в настоящем документе способов субъект может иметь инфекционное заболевание. В некоторых примерах любого из описанных в настоящем документе способов субъект был идентифицирован как имеющий инфекционное заболевание, или был диагностирован как имеющий инIn any of the methods described herein, the subject may have an infectious disease. In some examples of any of the methods described herein, the subject has been identified as having an infectious disease, or has been diagnosed as having
- 25 042018 фекционное заболевание. Например, инфекционное заболевание может быть вызвано бактерией, вирусом, грибом, паразитом или микобактерией.- 25 042018 infectious disease. For example, an infectious disease may be caused by a bacterium, virus, fungus, parasite, or mycobacterium.
Типичные инфекционные заболевания включают, без ограничения, инфекцию, вызываемую бактерией Acinobacter, актиномикоз, африканскую сонную болезнь, синдром приобретенного иммунодефицита, амебиаз, анаплазмоз, сибирскую язву, инфекцию Arcanobacterium haemolyticum, аргентинскую геморрагическую лихорадку, аскаридоз, аспергиллез, астровирусную инфекцию, бабезиоз, инфекции Bacillus cereus, бактериальную пневмонию, бактериальный вагиноз, инфекцию Bacteroides, балантидиоз, инфекцию Baylisascaris, инфекцию вируса ВК, черную пьедру, инфекцию Blastocystic hominis, бластомикоз, боливийскую геморрагическую лихорадку, ботулизм, бразильскую геморрагическую лихорадку, бруцеллез, бубонную чуму, инфекцию Burkholderi, язвы Бурули, калицивирусную инфекцию, камптобактериоз, кандидоз, болезнь кошачьих царапин, целлюлит, болезнь Чагаса, шанкроид, ветряную оспу, чикунгунья, хламидиоз, инфекцию Chlamydophila pneumoniae, холеру, хромобластомикоз, клонорхоз, инфекцию Clostridium difficile, кокцидиоидомикоз, колорадскую клещевую лихорадку, простуду, болезнь Крейтцфельда-Якоба, крымско-конголезскую геморрагическую лихорадку, критококкоз, криптоспоридиоз, кожный синдром блуждающей личинки, циклоспориаз, цистицеркоз, цитомегаловирусную инфекцию, лихорадку Денге, инфекцию Desmodesmus, деинтамебиаз, дифтерию, дифиллоботриоз, дракункулез, геморрагическую лихорадку Эбола, эхинококкоз, эрлихиоз, энтеробиоз, инфекцию Enterococcus, инфекцию Enterovirus, эпидемический тиф, инфекционную эритему, внезапную экзантему, фасциолопсидоз, фасциолез, фатальную семейную бессоницу, филяриоз, отравление пищи Clostridium myonecrosis, инфекцию свободноживущими амебами, инфекцию Fusobacterium, газовую гангрену, геотрихоз, синдром Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, гардиоз, сап, гнатостомоз, гонорею, паховую гранулему, инфекции стрептококка группы А, инфекции стрептококка группы В, инфекцию Haemophilus influenzae, синдром рука-нога-рот, хантавирусный легочный синдром, болезнь, вызванную вирусом Heartland, инфекцию Heliobacter pylori, гемолитический уремический синдром, геморрагическую лихорадку с почечным синдромом, гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, простой герпес, гистоплазмоз, анкилостомоз, бокавирусную инфекцию человека, эрлихиоз человека, гранулоцитарный анаплазмоз человека, метапневмовирусную инфекцию человека, моноцитарный эрлихиоз человека, вирус папилломы человека, инфекцию вируса парагриппа человека, гименолепидоз, инфекционный мононуклеоз Эпштейна-Барра, грипп, изоспороз, болезнь Кавасаки, кератит, инфекцию Kingella kingae, куру, лаосскую лихорадку, легионеллез, понтиакскую лихорадку, лейшманиоз, проказу, лептоспироз, листериоз, болезнь Лайма, лимфатический филяриатоз, лимфоцитарный хориоменингит, малярию, геморрагическую лихорадку Марбург, корь, ближневосточный респираторный синдром, мелиоидоз, менингит, менингококковую инфекцию, метагонимоз, микроспоридиоз, контагиозный моллюск, оспу обезьян, эпидемический паротит, мышиный сыпной тиф, микоплазменную пневмонию, мицетому, миаз, конъюнктивит новорожденных, вариант болезни Крейтцфельда-Якоба, нокардиоз, онхоцеркоз, паракокцидиоидомикоз, парагонимоз, пастереллез, педикулез волосистой части головы, нательный педикулез, лобковый педикулез, воспалительные заболевания органов малого таза, коклюш, чуму, пневмонию, полиомиелит, инфекцию Prevotella, первичный амебный менингоэнцефалит, прогрессирующую мультифокальную лейкоэнцефалопатию, пситтакоз, Ку-лихорадку, бешенство, лихорадку крысиных укусов, инфекцию респираторносинцитиального вируса, риноспоридиоз, риновирусную инфекцию, риккетсиозную инфекцию, осповидный риккетсиоз, лихорадку долины Рифт, пятнистую лихорадку Скалистых гор, ротавирусную инфекцию, краснуху, сальмонеллез, тяжелый острый респираторный синдром, чесотку, шистосомоз, сепсис, шигеллез, опоясывающий лишай, оспу, споротрихоз, стафилококковое пищевое отравление, стафилококковую инфекцию, стронгилоидоз, подострый склерозирующий лейкоэнцефалит, сифилис, тениоз, стоблняк, трихофитию области бороды и усов, трихофитию кожи головы, трихофитию тела, трихофитию паховой и подмышечной области, трихофитию ладоней и кистей рук, черный лишай, трихофитию стопы, дерматофитный онихомикоз, разноцветный лишай, токсокароз, трахому, токсоплазмоз, трихиноз, трихомоноз, трихиуриаз, туберкулез, туляремию, инфекция Ureaplasma urealyticum, венесуэльский энцефалит лошадей, венесуэльскую геморрагическую лихорадку, вирусную пневмонию, лихорадку Западного Нила, белую пьедру, инфекцию Yersinia psuedotuberculosis, йерсениоз, желтую лихорадку и зигомикоз.Typical infectious diseases include, without limitation, Acinobacter infection, actinomycosis, African sleeping sickness, acquired immunodeficiency syndrome, amoebiasis, anaplasmosis, anthrax, Arcanobacterium haemolyticum infection, Argentine hemorrhagic fever, ascariasis, aspergillosis, astrovirus infection, babesiosis, Bacillus infections cereus, bacterial pneumonia, bacterial vaginosis, Bacteroides infection, balantidiasis, Baylisascaris infection, BK virus infection, black piedra, Blastocystic hominis infection, blastomycosis, Bolivian hemorrhagic fever, botulism, Brazilian hemorrhagic fever, brucellosis, bubonic plague, Burkholderi infection, Buruli ulcers, calicivirus infection, camptobacteriosis, candidiasis, cat-scratch disease, cellulitis, Chagas disease, chancroid, chickenpox, chikungunya, chlamydia, Chlamydophila pneumoniae infection, cholera, chromoblastomycosis, clonorchiasis, Clostridium difficile infection, coccidioidomycosis, colora tick fever, common cold, Creutzfeldt-Jakob disease, Crimean-Congo hemorrhagic fever, critococcosis, cryptosporidiosis, wandering larva skin syndrome, cyclosporiasis, cysticercosis, cytomegalovirus infection, dengue fever, Desmodesmus infection, deintamebiasis, diphtheria, diphyllobothriasis, dracunculiasis, hemorrhagic fever , echinococcosis, ehrlichiosis, enterobiasis, Enterococcus infection, Enterovirus infection, epidemic typhus, infectious erythema, sudden exanthema, fasciolopsiosis, fascioliasis, fatal familial insomnia, filariasis, Clostridium myonecrosis food poisoning, free-living amoebae infection, Fusobacterium infection, gas gangrene, geotrichosis, syndrome Gerstmann-Straussler-Scheinker, gardiasis, glanders, gnathostomiasis, gonorrhea, granuloma inguinal, group A streptococcal infections, group B streptococcal infections, Haemophilus influenzae infection, hand-foot-mouth syndrome, hantavirus pulmonary syndrome, Heartland virus disease, Heliobacter infection er pylori, hemolytic uremic syndrome, hemorrhagic fever with renal syndrome, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, herpes simplex, histoplasmosis, hookworm infection, human bocavirus infection, human ehrlichiosis, human granulocytic anaplasmosis, human metapneumovirus infection, human monocytic ehrlichiosis, human papillomavirus, human parainfluenza virus infection, hymenolepiasis, Epstein-Barr infectious mononucleosis, influenza, isosporiasis, Kawasaki disease, keratitis, Kingella kingae infection, kuru, Laotian fever, legionellosis, Pontiac fever, leishmaniasis, leprosy, leptospirosis, listeriosis, Lyme disease, lymphatic filariasis, lymphocytic choriomeningitis, malaria, Marburg haemorrhagic fever, measles, Middle East respiratory syndrome, melioidosis, meningitis, meningococcal disease, metagonimiasis, microsporidiosis, molluscum contagiosum, monkeypox, mumps, murine typhus, mycoplasma pneumonia, mycetoma, m iasis, neonatal conjunctivitis, variant Creutzfeldt-Jakob disease, nocardiosis, onchocerciasis, paracoccidioidomycosis, paragonimiasis, pasteurellosis, head lice, pediculosis underwear, lice pubis, pelvic inflammatory disease, whooping cough, plague, pneumonia, poliomyelitis, Prevotella infection, primary amoebic meningoencephalitis, progressive multifocal leukoencephalopathy, psittacosis, Q fever, rabies, rat bite fever, respiratory syncytial virus infection, rhinosporidiosis, rhinovirus infection, rickettsial infection, smallpox rickettsiosis, Rift Valley fever, Rocky Mountain spotted fever, rotavirus infection, rubella, salmonella severe acute respiratory syndrome, scabies, schistosomiasis, sepsis, shigellosis, herpes zoster, smallpox, sporotrichosis, staphylococcal food poisoning, staphylococcal infection, strongyloidiasis, subacute sclerosing leukoencephalitis, syphilis, taeniasis, tetanus, trichophytosis of the beard and moustache c, trichophytosis of the scalp, trichophytosis of the body, trichophytosis of the inguinal and axillary region, trichophytosis of the palms and hands, black lichen, trichophytosis of the foot, dermatophytic onychomycosis, versicolor versicolor, toxocariasis, trachoma, toxoplasmosis, trichinosis, trichomoniasis, trichiuriasis, tuberculosis, tularemia, infection Ureaplasma urealyticum, Venezuelan equine encephalitis, Venezuelan hemorrhagic fever, viral pneumonia, West Nile fever, white piedra, Yersinia psuedotuberculosis infection, yerseniasis, yellow fever, and zygomycosis.
Способы диагностики субъекта как имеющего инфекционное заболевание или идентификации субъекта как имеющего инфекционное заболевание хорошо известны в данной области. Например, медицинский работник (например, врач, помощник врача или техник) может диагностировать инфекционное заболевание у субъекта, наблюдая один или несколько симптомов инфекционного заболевания у субъекта. Неограничивающие примеры симптомов инфекционного заболевания включают лихорадку, диарею, усталость и мышечные боли. Способы диагностики млекопитающего как имеющего инфекционное заболевание или идентификации субъекта как имеющего инфекционное заболевание могут дополнительно включать выполнение одного или нескольких диагностических тестов (например, выполнение одного или нескольких диагностических тестов на биопсии или образце крови). Диагностические тесты для диагностики субъекта как имеющего инфекционное заболевание или идентификации субъекта как имеющего инфекционное заболевание известны в данной области.Methods for diagnosing a subject as having an infectious disease or identifying a subject as having an infectious disease are well known in the art. For example, a healthcare professional (eg, a physician, physician assistant, or technician) may diagnose an infectious disease in a subject by observing one or more symptoms of the infectious disease in the subject. Non-limiting examples of symptoms of an infectious disease include fever, diarrhea, fatigue, and muscle pain. Methods for diagnosing a mammal as having an infectious disease or identifying a subject as having an infectious disease may further include performing one or more diagnostic tests (eg, performing one or more diagnostic tests on a biopsy or blood sample). Diagnostic tests for diagnosing a subject as having an infectious disease or identifying a subject as having an infectious disease are known in the art.
Комбинированная терапия.Combined therapy.
- 26 042018- 26 042018
Данное изобретение рассматривает как режимы монотерапии, так и режимы комбинированной терапии.The present invention contemplates both monotherapy regimens and combination therapy regimens.
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в настоящем документе, могут дополнительно включать проведение одной или нескольких дополнительных терапий (например, одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов и/или одного или нескольких терапевтических режимов) в комбинации с введением описанных в настоящем документе соединений.In some embodiments, the methods described herein may further include the administration of one or more additional therapies (eg, one or more additional therapeutic agents and/or one or more therapeutic regimens) in combination with the administration of the compounds described herein.
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в настоящем документе, могут дополнительно включать проведение одного или нескольких дополнительных способов лечения рака.In some embodiments, the methods described herein may further include one or more additional cancer treatments.
Один или несколько дополнительных способов лечения рака могут включать, без ограничения, хирургическое вмешательство, лучевую терапию, химиотерапию, токсинотерапию, иммунотерапию, криотерапию, противораковые вакцины (например, вакцину против HPV, вакцину против гепатита В, Oncophage, Provenge) и генную терапию, а также их комбинации. Иммунотерапия включает, без ограничения, адоптивную клеточную терапию, создание стволовых клеток и/или дендритных клеток, переливание крови, лаваж и/или другие способы лечения, включая, без ограничения, замораживание опухоли.One or more additional cancer treatments may include, without limitation, surgery, radiation therapy, chemotherapy, toxin therapy, immunotherapy, cryotherapy, cancer vaccines (eg, HPV vaccine, hepatitis B vaccine, Oncophage, Provenge), and gene therapy, and also their combinations. Immunotherapy includes, without limitation, adoptive cell therapy, generation of stem cells and/or dendritic cells, blood transfusion, lavage, and/or other therapies, including, but not limited to, tumor freezing.
В некоторых вариантах осуществления один или несколько дополнительных способов лечения рака представляют собой химиотерапию, которая может включать введение одного или нескольких дополнительных химиотерапевтических агентов.In some embodiments, one or more additional cancer treatments are chemotherapy, which may include the administration of one or more additional chemotherapeutic agents.
В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия рака включает (химиотерапевтический агент) иммуномодулирующий фрагмент, например, ингибитор иммунных контрольных точек. В некоторых из этих вариантов осуществления ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на рецептор иммунных контрольных точек, выбранный из CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-1 - PD-L1, PD-1 -PD-L2, Тклеточного иммуноглобулина и муцина 3 (TIM3 или HAVCR2), галектина 9-TIM3, фосфатидилсеринаTIM3, белка гена активации лимфоцитов 3 (LAG3), лиганда МНС класса II-LAG3, лиганда 4-1ВВ-4-1ВВ, лиганда ОХ40-ОХ40, GITR, лиганда GITR-GITR, CD27, CD70-CD27, TNFRSF25, TNFRSF25-TL1A, CD40L, лиганда CD40-CD40, HVEM-LIGHT-LTA, HVEM, HVEM-BTLA, HVEM-CD160, HVEM-LIGHT, HVEM-BTLA-CD160, CD80, CD80-PDL-1, PDL2-CD80, CD244, CD48-CD244, CD244, ICOS, лиганда ICOS-ICOS, B7-H3, B7-H4, VISTA, TMIGD2, HHLA2-TMIGD2, бутирофилинов, включая BTNL2, семейства Siglec, членов семейства TIGIT и PVR, KIR, ILT и LIR, NKG2D и NKG2A, MICA и MICB, CD244, CD28, CD86-CD28, CD86-CTLA, CD80-CD28, фосфатидилсерина, TIM3, фосфатидилсерина-TIM3, SIRPA-CD47, VEGF30, нейрофилина, CD160, CD30 и CD155 (например, CTLA-4 или PD1, или PD-L1) и других иммуномодулирующих агентов, таких как интерлейкин-2 (IL-2), индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), IL-10, трансформирующего фактора роста-β (TGFe), CD39, CD73, аденозина-CD39-CD73 и CXCR4-CXCL12. См., например, Postow, M.J. Clin. Oncol. 33, 1 (2015).In some embodiments, the complementary cancer therapy comprises (the chemotherapeutic agent) an immunomodulatory moiety, eg, an immune checkpoint inhibitor. In some of these embodiments, the immune checkpoint inhibitor targets an immune checkpoint receptor selected from CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-1-PD-L1, PD-1-PD-L2, T cell immunoglobulin, and mucin 3 (TIM3 or HAVCR2), galectin 9-TIM3, phosphatidylserine TIM3, lymphocyte activation gene 3 (LAG3), MHC class II-LAG3 ligand, 4-1BB-4-1BB ligand, OX40-OX40 ligand, GITR, GITR- ligand GITR, CD27, CD70-CD27, TNFRSF25, TNFRSF25-TL1A, CD40L, CD40-CD40, HVEM-LIGHT-LTA, HVEM, HVEM-BTLA, HVEM-CD160, HVEM-LIGHT, HVEM-BTLA-CD160, CD80, CD80 -PDL-1, PDL2-CD80, CD244, CD48-CD244, CD244, ICOS, ICOS-ICOS ligand, B7-H3, B7-H4, VISTA, TMIGD2, HHLA2-TMIGD2, butyrophylins including BTNL2, Siglec family, family members TIGIT and PVR, KIR, ILT and LIR, NKG2D and NKG2A, MICA and MICB, CD244, CD28, CD86-CD28, CD86-CTLA, CD80-CD28, Phosphatidylserine, TIM3, Phosphatidylserine-TIM3, SIRPA-CD47, VEGF30, Neurophilin, CD160, CD30 and CD155 (eg CTLA-4 or PD1 or PD-L1) and others their immunomodulatory agents such as interleukin-2 (IL-2), indolamine-2,3-dioxygenase (IDO), IL-10, transforming growth factor-β (TGFe), CD39, CD73, adenosine-CD39-CD73 and CXCR4 -CXCL12. See, for example, Postow, M.J. Clin. oncol. 33, 1 (2015).
В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунной контрольной точки нацелен на рецептор иммунной контрольной точки, выбранный из CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-1-PD-L1 и PD-1-PD-L2.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor targets an immune checkpoint receptor selected from CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-1-PD-L1, and PD-1-PD-L2.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунных контрольных точек выбран из: ниволумаба (также известного как OPDIVO; ранее имеющего обозначение 5С4, BMS-936558, MDX-1106 или ONO-4538), пембролизумаба (также известного как KEYTRUDA, ламбролизумаб и MK-3475. См. WO 2008/156712), PDR001 (Novartis; см. WO 2015/112900), MEDI-0680 (AstraZeneca; AMP-514; см. WO 2012/145493), цемиплимаба (REGN-2810) (Regeneron; см. WO 2015/112800), JS001 (TAIZHOU JUNSHI PHARMA; см. Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10: 136 (2017)), BGB-A317 (Beigene; см. WO 2015/35606 и US 2015/0079109), INCSHR1210 (SHR-1210; Jiangsu Hengrui Medicine; см. WO 2015/085847; Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10: 136 (2017)), TSR-042 (ANB011; Tesaro Biopharmaceutical; см. WO 2014/179664), GLS-010 (WBP3055; Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals; см. Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)), AM-0001 (Armo), STI-1110 (Sorrento Therapeutics; см. WO 2014/194302), AGEN2034 (Agenus; см. WO 2017/040790), MGD013 (Macrogenics); IBI308 (Innovent; см. WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/132825, WO 2017/133540); BMS-936559 (ранее 12А4 или MDX-1105; см., например, патент США 7943743 и WO 2013/173223), MPDL3280A (также известный как RG7446, атезолизумаб и TECENTRIQ; патент США 8217149; см., также, Herbst et al. (2013) J Clin Oncol 31 (Suppl):3000), дурвалумаб (IMFINZI; MEDI-4736; AstraZeneca; см. WO 2011/066389), авелумаб (Pfizer; MSB-0010718C; BAVENCIO; см. WO 2013/079174), STI-1014 (Sorrento; см. WO 2013/181634), CX-072 (Cytomx; см. WO 2016/149201), KN035 (3D Med/Alphamab; см. Zhang et al., Cell Discov.7:3 (March 2017), LY3300054 (Eli Lilly Co.; см., например, WO 2017/034916), CK-301 (Checkpoint Therapeutics; см. Gorelik et al., AACR:Abstract 4606 (Apr 2016)); урелумаб, PF-05082566, MEDI6469, TRX518, варлилумаб, СР-870893, BMS-986016, MGA271, лирилумаб, IPH2201, эмактузумаб, INCB024360, галунисертиб, улокуплумаб, BKT140, бавитуксимаб, СС-90002, бевацизумаб, MNRP1685A, иперилимумаб (YERVOY; патент США 6984720), MK-1308 (Merck), AGEN-1884 (Agenus Inc.; WO 2016/196237) и тремелимумаб (ранее тицилимумаб, СР-675,206; AstraZeneca; см., например, WO 2000/037504 и Ribas, Update Cancer Ther. 2 (3): 133-39 (2007)).In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from: nivolumab (also known as OPDIVO; formerly 5C4, BMS-936558, MDX-1106, or ONO-4538), pembrolizumab (also known as KEYTRUDA, lambrolizumab, and MK-3475. See WO 2008/156712), PDR001 (Novartis; see WO 2015/112900), MEDI-0680 (AstraZeneca; AMP-514; see WO 2012/145493), cemiplimab (REGN-2810) (Regeneron; see WO 2015 /112800), JS001 (TAIZHOU JUNSHI PHARMA; see Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10: 136 (2017)), BGB-A317 (Beigene; see WO 2015/35606 and US 2015/ 0079109), INCSHR1210 (SHR-1210; Jiangsu Hengrui Medicine; see WO 2015/085847; Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10: 136 (2017)), TSR-042 (ANB011; Tesaro Biopharmaceutical ; see WO 2014/179664), GLS-010 (WBP3055; Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals; see Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)), AM-0001 (Armo ), STI-1110 (Sorrento Therapeutics; see WO 2014/194302), AGEN2034 (Agenus; see WO 2017/040790), MGD013 (Macrogenics); IBI308 (Innovent; see WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/132825, WO 2017/133540); BMS-936559 (formerly 12A4 or MDX-1105; see e.g. U.S. Patent 7943743 and WO 2013/173223), MPDL3280A (also known as RG7446, atezolizumab and TECENTRIQ; U.S. Patent 8217149; see also Herbst et al. (2013) J Clin Oncol 31 (Suppl): 3000), durvalumab (IMFINZI; MEDI-4736; AstraZeneca; see WO 2011/066389), avelumab (Pfizer; MSB-0010718C; BAVENCIO; see WO 2013/079174), STI-1014 (Sorrento; see WO 2013/181634), CX-072 (Cytomx; see WO 2016/149201), KN035 (3D Med/Alphamab; see Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017), LY3300054 (Eli Lilly Co.; see e.g. WO 2017/034916), CK-301 (Checkpoint Therapeutics; see Gorelik et al., AACR: Abstract 4606 (Apr 2016)); urelumab, PF-05082566 , MEDI6469, TRX518, варлилумаб, СР-870893, BMS-986016, MGA271, лирилумаб, IPH2201, эмактузумаб, INCB024360, галунисертиб, улокуплумаб, BKT140, бавитуксимаб, СС-90002, бевацизумаб, MNRP1685A, иперилимумаб (YERVOY; патент США 6984720), MK-1308 (Merck), AGEN-1884 (Agenus Inc.; WO 2016/196237) and tremelimumab (formerly thicil imumab, CP-675,206; AstraZeneca; see, for example, WO 2000/037504 and Ribas, Update Cancer Ther. 2 (3): 133-39 (2007)).
В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунных контрольных точек выбран из: ниволумаба, пембролизумаба, JS001, BGB-A317, INCSHR1210, TSR-042, GLS-010, STI-1110, MGD013, IBI308, BMS-936559, атезолизумаба, дурваламаба, авеллумаба, STI-1014, СХ-072, KN035, LY3300054, CK-301, урелумаба, PF-05082566, MEDK469, TRX518, варлилумаба, BMS-986016, ипилимумаба, AGENIn some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from: nivolumab, pembrolizumab, JS001, BGB-A317, INCSHR1210, TSR-042, GLS-010, STI-1110, MGD013, IBI308, BMS-936559, atezolizumab, durvalamab, avellumab, STI -1014, CX-072, KN035, LY3300054, CK-301, urelumab, PF-05082566, MEDK469, TRX518, varlilumab, BMS-986016, ipilimumab, AGEN
- 27 042018- 27 042018
1884 и тремелимумаба.1884 and tremelimumab.
В некоторых из этих вариантов осуществления ингибитор иммунных контрольных точек выбран из: урелумаба, PF-05082566, MEDI6469, TRX518, варлилумаба, Ср-870893, пембролизумаба (PD1), ниволумаба (PD1), атезолизумаба (ранее MPDL3280A) (PD-L1), авелумаба (PD-L1), PDR001 (PD1), BMS986016, MGA271, лирилумаба, IPH2201, эмактузумаба, INCB024360, галунисертиба, улокуплумаба, BKT140, бавитуксимаба, СС16 - 90002Р, бевацизумаба и MNRP1685A.In some of these embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from: urelumab, PF-05082566, MEDI6469, TRX518, varlilumab, Cp-870893, pembrolizumab (PD1), nivolumab (PD1), atezolizumab (formerly MPDL3280A) (PD-L1), avelumab (PD-L1), PDR001 (PD1), BMS986016, MGA271, lirilumab, IPH2201, emactuzumab, INCB024360, galunisertib, ulokuplumab, BKT140, bavituximab, CC16-90002P, bevacizumab, and MNRP1685A.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунных контрольных точек выбран из: ниволумаба, ипилимумаба, пембролизумаба, атезолизумаба, дурвалумаба и авелумаба.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from: nivolumab, ipilimumab, pembrolizumab, atezolizumab, durvalumab, and avelumab.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунных контрольных точек выбран из ниволумаба и ипилимумаба.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from nivolumab and ipilimumab.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный противораковый агент (химиотерапевтический агент) представляет собой агонист STING. Например, агонист STING может включать циклические динуклеотиды, такие как cAMP, cGMP и cGAMP, а также модифицированные циклические динуклеотиды, которые включают один или несколько из следующих признаков модификации (связь 2'-О/3'-О, фосфоротиоатная связь, аналог аденина и/или гуанина, модификация 2'-ОН (например, -OCH3 или замена, например, -F или N3). См., например, WO 2014/189805.In some embodiments, the additional anti-cancer agent (chemotherapeutic agent) is a STING agonist. For example, a STING agonist may include cyclic dinucleotides such as cAMP, cGMP, and cGAMP, as well as modified cyclic dinucleotides that include one or more of the following modification features (2'-O/3'-O bond, phosphorothioate bond, adenine analog, and /or guanine, 2'-OH modification (eg -OCH3 or substitution, eg -F or N 3 ) See, for example, WO 2014/189805.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент представляет собой алкилирующий агент. Алкилирующие агенты названы так из-за их способности алкилировать многие нуклеофильные функциональные группы в условиях, существующих в клетках, включая, но без ограничения, раковые клетки. В другом варианте осуществления алкилирующий агент включает, но без ограничения, цисплатин, карбоплатин, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, ифосфамид и/или оксалиплатин. В одном из вариантов осуществления алкилирующие агенты могут функционировать путем нарушения функции клеток, образуя ковалентные связи с амино, карбоксильными, сульфгидрильными и фосфатными группами в биологически важных молекулах, или они могут действовать, изменяя ДНК клетки. В следующем варианте осуществления алкилирующий агент является синтетическим, полусинтетическим или производным.In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is an alkylating agent. Alkylating agents are so named because of their ability to alkylate many nucleophilic functional groups under conditions found in cells, including, but not limited to, cancer cells. In another embodiment, the alkylating agent includes, but is not limited to, cisplatin, carboplatin, mechlorethamine, cyclophosphamide, chlorambucil, ifosfamide, and/or oxaliplatin. In one embodiment, alkylating agents may function by disrupting cell function by forming covalent bonds with amino, carboxyl, sulfhydryl, and phosphate groups on biologically important molecules, or they may act to alter the cell's DNA. In a further embodiment, the alkylating agent is synthetic, semi-synthetic, or a derivative.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент представляет собой антиметаболит. Антиметаболиты маскируются под пурины или пиримидины, строительные блоки ДНК и в целом предотвращают включение этих веществ в ДНК во время фазы S (клеточного цикла), останавливая нормальное развитие и деление. Антиметаболиты также могут влиять на синтез РНК. В одном из вариантов осуществления антиметаболит включает, но без ограничения, азатиоприн и/или меркаптопурин. В следующем варианте осуществления антиметаболит является синтетическим, полусинтетическим или производным.In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is an antimetabolite. Antimetabolites masquerade as purines or pyrimidines, the building blocks of DNA, and generally prevent these substances from being incorporated into DNA during the S (cell cycle) phase, stopping normal development and division. Antimetabolites can also interfere with RNA synthesis. In one embodiment, the antimetabolite includes, but is not limited to, azathioprine and/or mercaptopurine. In a further embodiment, the antimetabolite is synthetic, semi-synthetic, or a derivative.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент представляет собой растительный алкалоид и/или терпеноид. Эти алкалоиды получены из растений и блокируют деление клеток, в целом, предотвращая функцию микротрубочек. В одном варианте осуществления растительный алкалоид и/или терпеноид представляет собой алкалоид барвинка, подофиллотоксин и/или таксан. Алкалоиды барвинка, как правило, связываются со специфическими участками тубулина, ингибируя сборку тубулина в микротрубочки, как правило, во время М фазы клеточного цикла. В одном из вариантов осуществления алкалоид барвинка получен, без ограничения, из мадагаскарского барвинка, Catharanthus roseus (ранее известного как Vinca rosea). В одном из вариантов осуществления алкалоид барвинка включает, без ограничения, винкристин, винбластин, винорелбин и/или виндезин. В одном из вариантов осуществления таксан включает, но без ограничения, таксол, паклитаксел и/или доцетаксел. В другом варианте осуществления растительный алкалоид или терперноид является синтетическим, полусинтетическим или производным. В дополнительном варианте осуществления подофиллотоксин представляет собой, без ограничения, этопозид и/или тенипозид. В одном из вариантов осуществления таксан представляет собой, без ограничения, доцетаксел и/или ортатаксел. В одном из вариантов осуществления лекарственное средство против рака представляет собой топоизомеразу. Топоизомеразы являются важными ферментами, которые поддерживают топологию ДНК. Ингибирование топоизомераз типа I или типа II нарушает как транскрипцию, так и репликацию ДНК, нарушая правильную суперспирализацию ДНК. В дополнительном варианте осуществления топоизомераза представляет собой, без ограничения, ингибитор топоизомеразы типа I или ингибитор топоизомеразы типа II. В одном из вариантов осуществления ингибитор топоизомеразы типа I представляет собой, без ограничения, камптотецин. В другом варианте осуществления камптотецин представляет собой, без ограничения, экзатекан, иринотекан, луртотекан, топотекан, BNP 1350, CKD 602, DB 67 (AR67) и/или ST 1481. В одном из вариантов осуществления ингибитор топоизомеразы типа II представляет собой, без ограничения, эпиподофиллотоксин. В другом варианте осуществления эпиподофиллотоксин представляет собой, без ограничения, амсакрин, этопозид, этопозид фосфат и/или тенипозид. В другом варианте осуществления топоизомераза является синтетической, полусинтетической или производной, включая те, которые встречаются в природе, такие как, без ограничения, эпиподофиллотоксины, вещества, встречающиеся в природе в корне American Mayapple (Podophyllum peltatum).In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is a plant alkaloid and/or terpenoid. These alkaloids are derived from plants and block cell division, generally preventing microtubule function. In one embodiment, the plant alkaloid and/or terpenoid is a vinca alkaloid, podophyllotoxin and/or a taxane. Vinca alkaloids tend to bind to specific sites on tubulin, inhibiting the assembly of tubulin into microtubules, typically during the M phase of the cell cycle. In one embodiment, the vinca alkaloid is derived, without limitation, from the Madagascar vinca, Catharanthus roseus (formerly known as Vinca rosea). In one embodiment, the vinca alkaloid includes, without limitation, vincristine, vinblastine, vinorelbine, and/or vindesine. In one embodiment, the taxane includes, but is not limited to, taxol, paclitaxel, and/or docetaxel. In another embodiment, the plant alkaloid or terpernoid is synthetic, semi-synthetic, or derived. In a further embodiment, podophyllotoxin is, without limitation, etoposide and/or teniposide. In one embodiment, the taxane is, without limitation, docetaxel and/or orthotaxel. In one embodiment, the cancer drug is a topoisomerase. Topoisomerases are important enzymes that maintain the topology of DNA. Inhibition of type I or type II topoisomerases disrupts both transcription and DNA replication, disrupting proper DNA supercoiling. In a further embodiment, the topoisomerase is, without limitation, a type I topoisomerase inhibitor or a type II topoisomerase inhibitor. In one embodiment, the type I topoisomerase inhibitor is, without limitation, camptothecin. In another embodiment, camptothecin is, without limitation, exatecan, irinotecan, lurtothecan, topotecan, BNP 1350, CKD 602, DB 67 (AR67), and/or ST 1481. In one embodiment, the type II topoisomerase inhibitor is, without limitation , epipodophyllotoxin. In another embodiment, epipodophyllotoxin is, without limitation, amsacrine, etoposide, etoposide phosphate, and/or teniposide. In another embodiment, the topoisomerase is synthetic, semi-synthetic, or derived, including those naturally occurring such as, but not limited to, epipodophyllotoxins, naturally occurring substances in the root of American Mayapple (Podophyllum peltatum).
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент представляетIn some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is
- 28 042018 собой стильбеноид. В другом варианте осуществления стильбеноид включает, но без ограничения, ресвератрол, пикеатаннол, пиносильвин, птеростильбен, альфа-виниферин, ампелопсин А, ампелопсин Е, диптоиндонезин С, диптоиндонезин F, эпсилон-винферин, флексуозол А, гнетин D, хемслеянол D, хопеафенол, транс-диптоиндонезин В, астрингин, пицеид и диптоиндонезин А. В другом варианте осуществления стильбеноид является синтетическим, полусинтетическим или производным.- 28 042018 is a stilbenoid. In another embodiment, the stilbenoid includes, but is not limited to, resveratrol, piceatannol, pinosylvin, pterostilbene, alpha-viniferin, ampelopsin A, ampelopsin E, diptoindonesin C, diptoindonesin F, epsilon-vinferin, flexuosol A, gnetin D, chemsleyanol D, hopeeaphenol, trans-diptoindonesin B, astringin, piceid, and diptoindonesin A. In another embodiment, the stilbenoid is synthetic, semi-synthetic, or derived.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент представляет собой цитотоксический антибиотик. В одном из вариантов осуществления цитотоксический антибиотик представляет собой, без ограничения, актиномицин, антрацендион, антрациклин, талидомид, дихлоруксусную кислоту, никотиновую кислоту, 2-дезоксиглюкозу и/или хлофазимин. В одном варианте осуществления актиномицин представляет собой, без ограничения, актиномицин D, бацитрацин, колистин (полимиксин Е) и/или полимиксин В. В другом варианте осуществления антрацендион представляет собой, без ограничения, митоксантрон и/или пиксантрон. В другом варианте осуществления антрациклин представляет собой, без ограничения, блеомицин, доксорубицин (адриамицин), даунорубицин (дауномицин), эпирубицин, идарубицин, митомицин, пликамицин и/или валрубицин. В другом варианте осуществления цитотоксический антибиотик является синтетическим, полусинтетическим или производным.In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is a cytotoxic antibiotic. In one embodiment, the cytotoxic antibiotic is, without limitation, actinomycin, anthracenedione, anthracycline, thalidomide, dichloroacetic acid, nicotinic acid, 2-deoxyglucose, and/or chlofazimine. In one embodiment, the actinomycin is, without limitation, actinomycin D, bacitracin, colistin (polymyxin E), and/or polymyxin B. In another embodiment, the anthracenedione is, without limitation, mitoxantrone and/or pixantrone. In another embodiment, the anthracycline is, without limitation, bleomycin, doxorubicin (adriamycin), daunorubicin (daunomycin), epirubicin, idarubicin, mitomycin, plicamycin, and/or valrubicin. In another embodiment, the cytotoxic antibiotic is synthetic, semi-synthetic, or a derivative.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент выбран из эндостатина, ангиогенина, ангиостатина, хемокинов, ангиоаррестина, ангиостатина (фрагмент плазминогена), антиангиогенных факторов, происходящих из коллагена базальной мембраны (тумстатин, канстатин или аррестин), антиангиогенного антитромбина III, ингибиторов трансдукции сигнала, ингибитора хрящевого происхождения (CDI), фрагмента комплемента CD59, фрагмента фибронектина, gro-бета, гепариназ, фрагмента гексасахарида гепарина, хорионического гонадотропина человека (hCG), интерферона альфа/бета/гамма, интерферон-индуцируемого белка (IP-10), интерлейкина-12, kringle 5 (фрагмент плазминогена), ингибиторов металлопротеиназы (TIMP), 2-метоксиэстрадиола, ингибитора плацентарной рибонуклеазы, ингибитора активатора плазминогена, фактора тромбоцитов-4 (PF4), фрагмента пролактина 16 кД, связанного с пролиферином белка (PRP), различных ретиноидов, тетрагидрокортизола-S, тромбоспондина-1 (TSP-1), трансформирующего фактора роста-бета (TGF-β), васкулостатина, вазостатина (фрагмент кальретикулина) и т.п.In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is selected from endostatin, angiogenin, angiostatin, chemokines, angioarrestin, angiostatin (plasminogen fragment), basement membrane collagen-derived anti-angiogenic factors (tumstatin, canstatin, or arrestin), anti-angiogenic antithrombin III, signal transduction inhibitors, inhibitor cartilaginous origin (CDI), CD59 complement fragment, fibronectin fragment, gro-beta, heparinases, heparin hexasaccharide fragment, human chorionic gonadotropin (hCG), interferon alpha/beta/gamma, interferon-inducible protein (IP-10), interleukin-12 , kringle 5 (plasminogen fragment), metalloproteinase inhibitors (TIMP), 2-methoxyestradiol, placental ribonuclease inhibitor, plasminogen activator inhibitor, platelet factor-4 (PF4), 16 kD prolactin fragment, proliferin-related protein (PRP), various retinoids, tetrahydrocortisol-S, thrombospondin-1 (TSP-1), transforming growth factor-beta (TGF-β), vasculostatin, vasostatin (calreticulin fragment), etc.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент выбран из абиратерона ацетата, альтретамина, ангидровинбластина, ауристатина, бексаротена, бикалутамида, BMS 184476, 2,3,4,5,6-пентафтор-N-(3-фтор-4-метоксифенил)бензолсульфонамида, блеомицина, N,N-диметилL-валил-L-валил-N-метил-L-валил-L-пролил-L-пролин-т-бутиламида, кахектина, цемадотина, хлорамбуцила, циклофосфамида, 3',4'-дидегидро-4'-дезокси-8'-норвин-калейкобластина, доцетаксола, доксетаксела, циклофосфамида, карбоплатина, кармустина, цисплатина, криптофицина, циклофосфамида, цитарабина, дакарбазина (DTIC), дактиномицина, даунорубицина, децитабина, доластатина, доксорубицина (адриамицина), этопозида, 5-фторурацила, финастерида, флутамида, гидроксимочевины и гидроксимочевинатаксанов, ифосфамида, лиарозола, лонидамина, ломустина (CCNU), MDV3100, мехлорэтамина (азотистого иприта), мелфалана, изетионата мивобулина, ризоксина, сертенефа, стрептозоцина, митомицина, метотрексата, таксанов, нилутамида, онапристона, паклитаксела, преднимустина, прокарбазина, RPR109881, фосфата страмустина, тамоксифена, тасонермина, таксола, третиноина, винбластина, винкристина, сульфат виндезина и винфлюнина.In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is selected from abiraterone acetate, altretamine, anhydrovinblastine, auristatin, bexarotene, bicalutamide, BMS 184476, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-methoxyphenyl)benzenesulfonamide, bleomycin, N,N-dimethylL-valyl-L-valyl-N-methyl-L-valyl-L-prolyl-L-proline-t-butylamide, cachectin, cemadotin, chlorambucil, cyclophosphamide, 3',4'-didehydro- 4'-deoxy-8'-norvin-kaleukoblastin, docetaxol, doxetaxel, cyclophosphamide, carboplatin, carmustine, cisplatin, cryptophycin, cyclophosphamide, cytarabine, dacarbazine (DTIC), dactinomycin, daunorubicin, decitabine, dolastatin, doxorubicin (adriamycin), etoposide, 5-fluorouracil, finasteride, flutamide, hydroxyurea and hydroxyurea-taxanes, ifosfamide, liarozole, lonidamine, lomustine (CCNU), MDV3100, mechlorethamine (nitrogen mustard), melphalan, mivobulin isethionate, rhizoxin, sertenef, streptozocin, mitomycin, methotrexate, takowsan, shepriest na, paclitaxel, prednimustine, procarbazine, RPR109881, stramustine phosphate, tamoxifen, tasonermin, taxol, tretinoin, vinblastine, vincristine, vindesine sulfate and vinflunine.
В некоторых вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент представляет собой платину, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, азатиоприн, меркаптопурин, винкристин, винбластин, винорелбин, виндезин, этопозид и тенипозид, паклитаксел, доцетаксел, иринотекан, топотекан, амсакрин, этопозид, этопозид фосфат, тенипозид, 5фторурацил, лейковорин, метотрексат, гемцитабин, таксан, лейковорин, митомицин С, тегафур-урацил, идарубицин, флударабин, митоксантрон, ифосфамид и доксорубицин. Дополнительные агенты включают ингибиторы mTOR (мишень рапамицина млекопитающих), включая, но без ограничения, рапамицин, эверолимус, темсиролимус и дефоролимус.In some embodiments, the additional chemotherapeutic agent is platinum, cisplatin, carboplatin, oxaliplatin, mechlorethamine, cyclophosphamide, chlorambucil, azathioprine, mercaptopurine, vincristine, vinblastine, vinorelbine, vindesine, etoposide and teniposide, paclitaxel, docetaxel, irinotecan, topotecan, amsacrine, etoposide , etoposide phosphate, teniposide, 5fluorouracil, leucovorin, methotrexate, gemcitabine, taxane, leucovorin, mitomycin C, tegafururacil, idarubicin, fludarabine, mitoxantrone, ifosfamide, and doxorubicin. Additional agents include mTOR (mammalian target of rapamycin) inhibitors including, but not limited to, rapamycin, everolimus, temsirolimus, and deforolimus.
В еще других вариантах осуществления дополнительный химиотерапевтический агент может быть выбран из тех, которые описаны в патенте США 7927613.In yet other embodiments, the additional chemotherapeutic agent may be selected from those described in US Pat. No. 7,927,613.
В еще одном варианте осуществления способы могут дополнительно включать введение одного или обоих из: (i) одного или нескольких противогрибковых агентов (например, выбранных из группы, состоящей из бифоназола, бутоконазола, клотримазола, эконазола, кетоконазола, луликоназола, миконазола, омоконазола, оксиконазола, сертаконазола, сульконазола, тиоконазола, альбаконазола, эфинаконазола, эпозиконазола, флуконазола, изавуконазола, итраконазола, позаконазола, пропиконазола, равусконазола, терконазола, вориконазола, абафунгина, аморолфина, бутенафина, нафтифина, тербинафина, анидулафунгина, каспофунгина, микафунгина, бензойной кислоты, циклопирокса, флуцитозина, 5фторцитозина, гризеофульвина, галопрогина, толнафлата, ундециленовой кислоты и перуанского бальзама), и (ii) один или несколько антибиотиков (например, выбранных из группы, состоящей из амикацина, гентамицина, канамицина, неомицина, нетилмицина, тобрамицина, паромомицина, стрептомицина, спектиномицина, гелданамицина, гербимицина, рифаксимина, лоракарбефа, эртапенема, дорипенема, имипенема, циластатина, меропенема, цефадроксила, цефазолина, цефалотина, цефалотина, цефалексиIn yet another embodiment, the methods may further comprise administering one or both of: (i) one or more antifungal agents (e.g., selected from the group consisting of bifonazole, butoconazole, clotrimazole, econazole, ketoconazole, luliconazole, miconazole, omoconazole, oxiconazole, сертаконазола, сульконазола, тиоконазола, альбаконазола, эфинаконазола, эпозиконазола, флуконазола, изавуконазола, итраконазола, позаконазола, пропиконазола, равусконазола, терконазола, вориконазола, абафунгина, аморолфина, бутенафина, нафтифина, тербинафина, анидулафунгина, каспофунгина, микафунгина, бензойной кислоты, циклопирокса, флуцитозина , 5-fluorocytosine, griseofulvin, haloprogin, tolnaflat, undecylenic acid, and Balsam of Peru), and (ii) one or more antibiotics (e.g., selected from the group consisting of amikacin, gentamicin, kanamycin, neomycin, netilmicin, tobramycin, paromomycin, streptomycin, spectinomycin , geldanamycin, herbimycin, ri Faximin, loracarbef, ertapenem, doripenem, imipenem, cilastatin, meropenem, cefadroxil, cefazolin, cephalothin, cephalothin, cephalexi
- 29 042018 на, цефаклора, цефамандола, цефокситина, цефпрозила, цефуроксима, цефиксима, цефдинира, цефдиторена, цефоперазона, цефотаксима, цефподоксима, цефтазидима, цефтибутена, цефтизоксима, цефтриаксона, цефепима, цефтаролина фосамила, цефтобипрола, тейкопланина, ванкомицина, телаванцина, далбаванцина, оритаванцина, клиндамицина, линкомицина, даптомицина, азитромицина, кларитромицина, диритромицина, эритромицина, рокситромицина, тролеандомицина, телитромицина, спирамицина, азтреонама, фуразолидона, нитрофурантоина, линезолида, позизолида, радезолида, торезолида, амоксициллина, ампициллина, азлоциллина, карбенициллина, клоксациллина, диклоксациллина, флуклоксациллина, мезлоциллина, метициллина, нафциллина, оксациллина, пенициллина G, пенициллина V, пиперациллина, пенициллина G, темоциллина, тикарциллина, амоксициллина, кальвуланата, ампициллина, суббактама, пиперациллина, тазобактама, тикарциллина, клавуланата, бацитрацина, колистина, полимиксина В, ципрофлоксацина, эноксацина, гатифлоксацина, гемифлоксацина, левофлоксацина, ломефлоксацина, моксифлоксацина, налидиксовой кислоты, норфлоксацина, офлоксацина, тровафлоксацина, грепафлоксацина, спарфлоксацина, темафлоксацина, мафенида, сульфацетамида, сульфадиазина, сульфадиазина серебра, сульфадиметоксина, сульфаметоксазола, сульфаниламида, сульфасалазина, сульфизоксазола, триметоприм-сульфаметоксазола, сульфонамидохризиодина, демеклоциклина, миноциклина, окситетрациклина, тетрациклина, клофазимина, дапсона, дапреомицина, циклосерина, этамбутола, этионамида, изониазида, пиразинамида, рифампицина, рифабутина, рифапентина, стрептомицина, арсфенамина, хлорамфеникола, фосфомицина, фусидовой кислоты, метронидазола, мупироцина, платенсимицина, хинупристина, далопристина, тиамфеникола, тигециклина, тинидазола, триметоприма и тейксобактина).- 29 042018 на, цефаклора, цефамандола, цефокситина, цефпрозила, цефуроксима, цефиксима, цефдинира, цефдиторена, цефоперазона, цефотаксима, цефподоксима, цефтазидима, цефтибутена, цефтизоксима, цефтриаксона, цефепима, цефтаролина фосамила, цефтобипрола, тейкопланина, ванкомицина, телаванцина, далбаванцина, оритаванцина, клиндамицина, линкомицина, даптомицина, азитромицина, кларитромицина, диритромицина, эритромицина, рокситромицина, тролеандомицина, телитромицина, спирамицина, азтреонама, фуразолидона, нитрофурантоина, линезолида, позизолида, радезолида, торезолида, амоксициллина, ампициллина, азлоциллина, карбенициллина, клоксациллина, диклоксациллина, flucloxacillin, mezlocillin, methicillin, nafcillin, oxacillin, penicillin G, penicillin V, piperacillin, penicillin G, temocillin, ticarcillin, amoxicillin, calvulanate, ampicillin, subbactam, piperacillin, tazobactam, ticarcillin, clavulanate, bacitracin, colistin, polymyxiproflon, enoxacin, gati флоксацина, гемифлоксацина, левофлоксацина, ломефлоксацина, моксифлоксацина, налидиксовой кислоты, норфлоксацина, офлоксацина, тровафлоксацина, грепафлоксацина, спарфлоксацина, темафлоксацина, мафенида, сульфацетамида, сульфадиазина, сульфадиазина серебра, сульфадиметоксина, сульфаметоксазола, сульфаниламида, сульфасалазина, сульфизоксазола, триметоприм-сульфаметоксазола, сульфонамидохризиодина, demeclocycline, minocycline, oxytetracycline, tetracycline, clofazimine, dapsone, dapreomycin, cycloserine, ethambutol, ethionamide, isoniazid, pyrazinamide, rifampicin, rifabutin, rifapentine, streptomycin, arsphenamine, chloramphenicol, fosfomycin, fusidic acid, metronidazole, platensimypristin, mupirocin, dapremycin , thiamphenicol, tigecycline, tinidazole, trimethoprim and teixobactin).
В некоторых вариантах осуществления второй терапевтический агент или режим применяют к субъекту до приведения в контакт с химическим соединением или его введения (например, примерно за час или примерно за 6 ч, или примерно за 12 ч или примерно за 24 ч, или примерно за 48 ч, или примерно за 1 неделю, или примерно за 1 месяц).In some embodiments, the second therapeutic agent or regimen is administered to the subject prior to contacting or administering the chemical compound (e.g., about one hour or about 6 hours or about 12 hours or about 24 hours or about 48 hours , or about 1 week, or about 1 month).
В других вариантах осуществления второй терапевтический агент или режим применяют к субъекту примерно в то же время, что и приведение в контакт с химическим соединением или его введением. Например, второй терапевтический агент или режим и химическое соединение вводят субъекту одновременно в одной и той же дозированной форме. В качестве другого примера, второй терапевтический агент или режим и химическое соединение вводят субъекту одновременно в раздельных дозированных формах.In other embodiments, the implementation of the second therapeutic agent or regimen is applied to the subject at about the same time as bringing into contact with the chemical compound or its introduction. For example, the second therapeutic agent or regimen and the chemical compound are administered to the subject simultaneously in the same dosage form. As another example, the second therapeutic agent or regimen and the chemical compound are administered to the subject simultaneously in separate dosage forms.
В еще других вариантах осуществления второй терапевтический агент или режим вводят субъекту после приведения в контакт с химическим соединением или его введением (например, примерно через один час или примерно через 6 ч, или примерно через 12 ч, или примерно через 24 ч, или примерно через 48 ч, или примерно через 1 неделю, или примерно через 1 месяц).In still other embodiments, the second therapeutic agent or regimen is administered to the subject after contact with or administration of the chemical compound (e.g., about one hour, or about 6 hours, or about 12 hours, or about 24 hours, or about 48 hours, or after about 1 week, or after about 1 month).
Отбор пациентовPatient Selection
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в настоящем документе, дополнительно включают стадию идентификации субъекта (например, пациента), нуждающегося в таком лечении (например, посредством биопсии, эндоскопии или другого обычного метода, известного в данной области). В некоторых вариантах осуществления белок NLRP3 может служить биомаркером определенных типов рака.In some embodiments, the methods described herein further include the step of identifying a subject (eg, patient) in need of such treatment (eg, via biopsy, endoscopy, or other conventional method known in the art). In some embodiments, the implementation of the NLRP3 protein can serve as a biomarker for certain types of cancer.
В некоторых вариантах осуществления химические соединения, способы и композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить определенным устойчивым к лечению популяциям пациентов (например, пациентам, устойчивым к ингибиторам контрольных точек).In some embodiments, the chemicals, methods, and compositions described herein can be administered to certain treatment-resistant patient populations (eg, patients resistant to checkpoint inhibitors).
В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению можно применять в терапии. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает комбинированный препарат, состоящий из соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительного терапевтического агента(ов), для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии.In some embodiments, the implementation of the compounds of the present invention can be used in therapy. In some embodiments, the present invention provides a combination preparation consisting of a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and an additional therapeutic agent(s), for simultaneous, separate, or sequential use in therapy.
В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, или содержащую его фармацевтическую композицию можно применять в качестве лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению можно применять для изготовления лекарственного средства для лечения рака.In some embodiments, a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition containing it, can be used as a drug. In some embodiments, the implementation of the compounds of the present invention can be used for the manufacture of drugs for the treatment of cancer.
В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению можно применять для изготовления лекарственного средства для модулирования активности NLRP3. В некоторых вариантах осуществления модулирование включает агонизирование NLRP3.In some embodiments, the compounds of the present invention can be used to make a medicament for modulating NLRP3 activity. In some embodiments, modulation includes agonizing NLRP3.
Способы изготовления.Manufacturing methods.
Как будет понятно квалифицированному специалисту, способы синтеза соединений по приведенным в настоящем документе формулам будут очевидны для специалистов в данной области. Например, описанные в настоящем документе соединения могут быть синтезированы, например, с использованием одного или нескольких способов, описанных в настоящем документе, и/или с использованием способов, описанных, например, в US 2015/0056224, содержание каждого из которых включено в качестве ссылки в полном объеме. Синтетические химические превращения и методологии защитных групп (защита и снятие защиты), применимые при синтезе описанных в настоящем документе соединений, известны в данAs the skilled artisan will appreciate, methods for synthesizing the compounds of the formulas provided herein will be apparent to those skilled in the art. For example, the compounds described herein can be synthesized, for example, using one or more of the methods described herein and/or using the methods described, for example, in US 2015/0056224, the contents of each of which are incorporated by reference. in full. Synthetic chemistries and protecting group methodologies (protection and deprotection) applicable to the synthesis of the compounds described herein are known in the art.
- 30 042018 ной области и включают, например, такие, которые описаны у R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and RGM. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), и в их последующих изданиях. Исходные материалы, используемые при получении соединений по изобретению, являются известными, получены известными способами или являются коммерчески доступными. Квалифицированный специалист также поймет, что описанные в настоящем документе условия и реагенты могут быть заменены альтернативными признанными в данной области эквивалентами. Например, во многих реакциях триэтиламин может быть заменен другими основаниями, такими как ненуклеофильные основания (например, диизопропиламин, 1,8-диазабицикло-ундек-7-ен, 2,6-ди-трет-бутилпиридин или тетрабутилфосфазен).- 30 042018 and include, for example, those described in R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and RGM. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), and their subsequent editions. The starting materials used in the preparation of the compounds of the invention are known, prepared by known methods, or commercially available. The skilled artisan will also appreciate that the conditions and reagents described herein may be replaced by alternative equivalents recognized in the art. For example, in many reactions, triethylamine can be replaced by other bases, such as non-nucleophilic bases (eg, diisopropylamine, 1,8-diazabicycloundec-7-ene, 2,6-di-tert-butylpyridine, or tetrabutylphosphazene).
Квалифицированный специалист распознает множество аналитических методов, которые можно использовать для характеристики описанных в настоящем документе соединений, включая, например, 1Н ЯМР, гетероядерный ЯМР, масс-спектрометрию, жидкостную хроматографию и инфракрасную спектроскопию. Вышеприведенный список представляет собой подмножество методов определения характеристик, доступных квалифицированному специалисту, и не предназначен для ограничения.The skilled artisan will recognize a variety of analytical techniques that can be used to characterize the compounds described herein, including, for example, 1H NMR, heteronuclear NMR, mass spectrometry, liquid chromatography, and infrared spectroscopy. The above list is a subset of characterization methods available to the skilled artisan and is not intended to be limiting.
Следующие сокращения имеют указанные значения:The following abbreviations have the meanings indicated:
ACN=ацетонитрил,ACN=acetonitrile,
АсОН=уксусная кислота,AcOH=acetic acid,
CDCl3=хлороформ-d,CDCl 3 = chloroform-d,
CD3OD=метанол-d,CD 3 OD=methanol-d,
CH2Cl2=Дихлорметан,CH 2 Cl 2 = Dichloromethane,
CH3ReO3=метилтриоксорений,CH 3 ReO 3 \u003d methyltrioxorhenium,
Cs2CO3=карбонат цезия,Cs 2 CO 3 \u003d cesium carbonate,
CuI=йодид меди (I), d=дублет,CuI=copper(I) iodide, d=doublet,
DCM=дихлорметан,DCM=dichloromethane,
DIEA=N,N-диэтилизопропиламин,DIEA=N,N-diethylisopropylamine,
DMF=N,N-диметилформамид,DMF=N,N-dimethylformamide,
DMSO=диметилсульфоксид,DMSO=dimethyl sulfoxide,
ES=ионизация электрораспылением,ES=electrospray ionization,
Et2O=диэтиловый эфир,Et 2 O = diethyl ether,
EtOAc=этилацетат,EtOAc=ethyl acetate,
EtOH=этанол, экв.=эквиваленты, г=граммы, ч=час(ы),EtOH=ethanol, equiv.=equivalents, g=grams, h=hour(s),
НС1=хлористый водород (обычно в виде раствора),HC1 = hydrogen chloride (usually in the form of a solution),
H2O=вода,H 2 O \u003d water,
Н2О2=перекись водорода,H 2 O 2 \u003d hydrogen peroxide,
HATU=1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний-3-оксид гексафторфосфат,HATU=1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium-3-oxide hexafluorophosphate,
HPLC=высокоэффективная жидкостная хроматография,HPLC=high performance liquid chromatography,
Т2=йод,T2=iodine,
K2CO3=карбонат калия,K 2 CO 3 \u003d potassium carbonate,
K2HPO4=фосфат калия, двухосновный,K 2 HPO4 = potassium phosphate, dibasic,
К1=йодид калия,K1=potassium iodide,
LC/MS=жидкостная хроматография/масс-спектрометрия,LC/MS=liquid chromatography/mass spectrometry,
LiBH4=борогидрид лития, m=мультиплет, m/z=отношение массы к заряду,LiBH4=lithium borohydride, m=multiplet, m/z=mass-to-charge ratio,
М=молярный, m-CPBA=мета-хлорпероксибензойная кислота, мг=миллиграмм(ы),M=molar, m-CPBA=meta-chloroperoxybenzoic acid, mg=milligram(s),
МеОН=метанол,MeOH=methanol,
МГ ц=мегагерцы, мл=миллилитр(ы), ммоль=миллимоль(и), МТО=метилтриоксорений, NaHCO3=гидрокарбонат натрия, Na2CO3=карбонат натрия, NaOH=гидроксид натрия,MG c = megahertz, ml = milliliters (s), mmol = millimoles (s), MTO = methyltrioxorhenium, NaHCO 3 = sodium hydrogen carbonate, Na 2 CO 3 = sodium carbonate, NaOH = sodium hydroxide,
- 31 042018- 31 042018
Na2SO4=сульфат натрия,Na 2 SO 4 \u003d sodium sulfate,
NEt3 и ТЕА=триметиламин,NEt 3 and TEA=trimethylamine,
NH4OH или NH3H2O=гидроксид аммония,NH 4 OH or NH 3 H 2 O = ammonium hydroxide,
NH4HCO3=rugpoKap6oHam аммония, нм=нанометр,NH 4 HCO 3 \u003d rugpoKap6oHam ammonium, nm \u003d nanometer,
PdCl2(PPh3)2=бис(трифенилфосфин)палладий(И) дихлорид,PdCl 2 (PPh 3 ) 2 \u003d bis (triphenylphosphine) palladium (I) dichloride,
Pd(dppf)Cl2=1,1 '-бис(дифенилфосфино)ферроцен,Pd (dppf) Cl 2 \u003d 1.1 '-bis (diphenylphosphino) ferrocene,
Pd(dppf)Cl2DCM=комплекс 1,1 '-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорметан,Pd(dppf)Cl 2 DCM=1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene-dichloromethane complex,
Pd(OH)2=гидроксид палладия,Pd(OH) 2 = palladium hydroxide,
РМВ=пара-метоксибензил,PMB=p-methoxybenzyl,
РОС13=оксихлорид фосфора, ррт=частей на миллион, Pt=платина,POC1 3 =phosphorus oxychloride, ppm=ppm, Pt=platinum,
Pt/C=платина на угле, rt=комнатная температура, RT=время удерживания, s=синглет, t=триплет,Pt/C=platinum on carbon, rt=room temperature, RT=retention time, s=singlet, t=triplet,
TFA=трифторуксусная кислота,TFA=trifluoroacetic acid,
TLC=тонкослойнαя хроматография,TLC = thin layer chromatography,
TosMIC=толуолсульфонилметилизоцианид,TosMIC=toluenesulfonyl methyl isocyanide,
TsCl=пара-толуолсульфонилхлорид, °C=градусы Цельсия, мкмоль=микромоль(и).TsCl=p-toluenesulfonyl chloride, °C=degrees Celsius, µmol=micromol(s).
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены рядом способов, хорошо известных специалистам в области органического синтеза. Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием способов, описанных ниже, а также синтетическими способами, известными в области синтетической органической химии, или их вариациями, которые оценят специалисты в данной области. Предпочтительные способы включают, но без ограничения, способы, описанные ниже.The compounds of the present invention can be prepared in a number of ways well known to those skilled in the art of organic synthesis. The compounds of the present invention can be synthesized using the methods described below, as well as synthetic methods known in the field of synthetic organic chemistry, or variations thereof, which will be appreciated by experts in this field. Preferred methods include, but are not limited to, the methods described below.
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены с использованием реакций и методик, описанных в этом разделе (например, схемы 1-11).Compounds of the present invention can be prepared using the reactions and procedures described in this section (eg, Schemes 1-11).
Соединение 10 может быть получено с помощью последовательности синтеза, показанной на схеме 1. Индол 1, где группа Hal представляет собой галогенид, такой как бромид, может быть превращен в промежуточное соединение 2 с помощью реагента, такого как этил 2-хлор-2-оксоацетат. Обработка промежуточного соединения 2 соответствующим образом функционализированным гидразином (NH2-NHPG1) в присутствии кислоты, такой как уксусная кислота, обеспечивает получение промежуточного соединения 3, которое затем может быть превращено в промежуточное соединение 4 с помощью хлорирующего реагента, такого как POCl3. Добавление аммиака или соответствующим образом функционализированного амина (NH2-PG2) к промежуточному соединению 4 обеспечивает получение промежуточного соединения 5. Депротекция промежуточного соединения 5 может быть выполнена несколькими способами, известными специалисту в данной области. Например, когда PG1=PG2=PMB, промежуточное соединение d 5 может быть обработано реагентом, таким как TFA, чтобы получить промежуточное соединение 6. Сочетание между промежуточным соединением 6 и реагентом для реакции сочетания 7 под действием подходящего катализатора обеспечивает получение промежуточного соединения 8. Например, эта стадия может быть осуществлена путем обработки промежуточного соединения 6 подходящим эфиром бороновой кислоты, таким как 3-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол, в присутствии катализатора, такого как Pd(dppf)Cl2, с получением промежуточного соединения 8. Альтернативно, эта стадия может быть осуществлена путем обработки промежуточного соединения 6 подходящим гетероциклом, таким как пиразол, в присутствии медного катализатора, такого как иодид меди(Т), и лиганда, такого как N,N'-диметилэтилендиамин, с получением промежуточного соединения 8. На последней стадии схемы 1 соединение 10 может быть получено путем обработки промежуточного соединения 8 соответствующим образом функционализированным алкилирующим реагентом (R2-X), где X представляет собой уходящую группу, такую как галогенид, в присутствии основания, такого как карбонат калия. Необязательно, если R3 содержит защитную группу, ее можно удалить на этой стадии в подходящих условиях. Например, если R3-M представляет собой 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол, тетрагидропирановая группа может быть удалена путем обработки реагентом, таким как TFA.Compound 10 can be prepared using the synthetic sequence shown in Scheme 1. Indole 1, where the Hal group is a halide such as bromide, can be converted to intermediate 2 using a reagent such as ethyl 2-chloro-2-oxoacetate . Treatment of intermediate 2 with an appropriately functionalized hydrazine (NH2-NHPG 1 ) in the presence of an acid such as acetic acid provides intermediate 3 which can then be converted to intermediate 4 with a chlorinating agent such as POCl3. Addition of ammonia or an appropriately functionalized amine (NH2-PG 2 ) to intermediate 4 provides intermediate 5. Deprotection of intermediate 5 can be accomplished in several ways known to the person skilled in the art. For example, when PG 1 =PG 2 =PMB, intermediate d 5 can be treated with a reagent such as TFA to give intermediate 6. Coupling between intermediate 6 and coupling reagent 7 under the action of a suitable catalyst provides intermediate 8 For example, this step can be carried out by treating intermediate 6 with a suitable boronic acid ester such as 3-(tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole in the presence of a catalyst such as Pd( dppf)Cl2 to give intermediate 8. Alternatively, this step can be carried out by treating intermediate 6 with a suitable heterocycle such as pyrazole in the presence of a copper catalyst such as copper(T) iodide and a ligand such as N,N '-dimethylethylenediamine to give intermediate 8. In the last step of Scheme 1, compound 10 can be prepared by treating intermediate 8 with an appropriately functionalized alkylating reagent (R2-X) where X is a leaving group such as a halide in the presence of a base such as potassium carbonate. Optionally, if R 3 contains a protecting group, it can be removed at this stage under suitable conditions. For example, if R 3 -M is 1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole , the tetrahydropyran group can be removed by treatment with a reagent such as TFA.
- 32 042018- 32 042018
Схема 1.Scheme 1.
Альтернативно, промежуточное соединение 6 может быть сначала функционализировано с помощью алкилирующего реагента R2-X с получением соединения 10а, а затем превращено в соединение 10 с помощью подходящего партнера по связыванию R3-M под действием катализатора, как показано на схеме 2.Alternatively, intermediate 6 can be first functionalized with an alkylating reagent R2-X to give compound 10a and then converted to compound 10 with a suitable binding partner R3 -M under the action of a catalyst as shown in Scheme 2.
Схема 2.Scheme 2.
Альтернативный синтез промежуточного соединения 8 может быть выполнен с помощью двухстадийной последовательности, показанной на схеме 3. На первой стадии промежуточное соединение 5 (полученное, как показано на схеме 1) может быть подвергнуто сочетанию с подходящим реагентом для реакции сочетания R3-M под действием подходящего катализатора с получением промежуточного соединения 11, которое затем можно затем подвергнуть депротекции с помощью кислоты, такой как TFA, с получением промежуточного соединения 8.An alternative synthesis of Intermediate 8 can be performed using the two-step sequence shown in Scheme 3. In the first step, Intermediate 5 (prepared as shown in Scheme 1) can be coupled with a suitable R 3 -M coupling reagent under the action of a suitable catalyst to give intermediate 11, which can then be deprotected with an acid such as TFA to give intermediate 8.
Схема 3.Scheme 3.
Аналоги, такие как соединения 13а и 13b, могут быть получены в соответствии с синтетическим путем, проиллюстрированным на схеме 4. Удаление защитной группы из 12 (полученное, как показано на схеме 1 или 2) может быть выполнено с использованием подходящих условий с получением соединения 13а. Например, если PG=Boc, это может быть достигнуто обработкой реагентом, таким как TFA. Если R3 содержит защитную группу, она также может быть удалена на этой стадии. Например, если R3 содержит пиразол, защищенный тетрагидропираном, обработка реагентом, таким как TFA, может удалить эту группу. Затем соединение 13а может быть превращено в желаемый конечный продукт путем обработки соответствующими реагентами. Например, 13а может быть превращено в амид путем обработки соответствующим образом замещенной карбоновой кислотой в присутствии подходящего реагента для реакции связывания, такого как HATU, и основания, такого как N,N-диuзопропuлэтuламин. Альтернативно, соединение 13а может быть превращено в изоиндолинон путем обработки реагентом, таким как метил 2(бромметил)бензоат или его соответствующим образом замещенным аналогом, в присутствии основания,Analogues such as compounds 13a and 13b can be prepared according to the synthetic route illustrated in Scheme 4. Deprotection of 12 (prepared as shown in Scheme 1 or 2) can be performed using the appropriate conditions to give compound 13a . For example, if PG=Boc, this can be achieved by treatment with a reagent such as TFA. If R 3 contains a protecting group, this can also be removed at this stage. For example, if R 3 contains pyrazole protected with tetrahydropyran, treatment with a reagent such as TFA can remove this group. Compound 13a can then be converted to the desired end product by treatment with appropriate reagents. For example, 13a can be converted to an amide by treatment with an appropriately substituted carboxylic acid in the presence of a suitable coupling reaction reagent such as HATU and a base such as N,N-diisopropylethylamine. Alternatively, compound 13a can be converted to isoindolinone by treatment with a reagent such as methyl 2(bromomethyl)benzoate or an appropriately substituted analog thereof, in the presence of a base,
- 33 042018 такого как Ν,Ν-диизопропилэтиламин. Альтернативно, соединение 13а может быть алкилировано путем обработки соответствующим образом замещенным альдегидом или кетоном в присутствии подходящего восстанавливающего агента, такого как триацетоксиборгидрид натрия. Альтернативно, соединение 13а может быть превращено в сульфонамид путем обработки соответствующим образом замещенным сульфонилхлоридом в присутствии основания, такого как триэтиламин. Альтернативно, соединение 13а может быть превращено в мочевину путем обработки соответствующим образом замещенным изоцианатом или карбамоилхлоридом в присутствии основания, такого как триэтиламин. Альтернативно, соединение 13а может быть превращено в карбамат путем обработки соответствующим образом замещенным хлорформиатом в присутствии основания, такого как триэтиламин.- 33 042018 such as N,N-diisopropylethylamine. Alternatively, compound 13a can be alkylated by treatment with an appropriately substituted aldehyde or ketone in the presence of a suitable reducing agent such as sodium triacetoxyborohydride. Alternatively, compound 13a can be converted to the sulfonamide by treatment with an appropriately substituted sulfonyl chloride in the presence of a base such as triethylamine. Alternatively, compound 13a can be converted to urea by treatment with an appropriately substituted isocyanate or carbamoyl chloride in the presence of a base such as triethylamine. Alternatively, compound 13a can be converted to the carbamate by treatment with an appropriately substituted chloroformate in the presence of a base such as triethylamine.
Схема 4.Scheme 4.
Аналоги, такие как соединения 15а и 15b, могут быть получены в соответствии с путем синтеза, проиллюстрированным на схеме 5. Удаление защитной группы из промежуточного соединения 14 (полученного, как показано на схеме 1 или 2) может быть осуществлено с использованием подходящих условий с получением соединения 15а. Например, если PG=TBS, это может быть осуществлено путем обработки реагентом, таким как TBAF. Затем соединение 15а может быть превращено в соединение 15b путем обработки соответствующими реагентами. Например, соединение 15а может быть превращено в ариловый или гетероариловый эфир путем обработки соответствующим образом замещенным фенолом в присутствии подходящих реагентов, таких как DIAD и трифенилфосфин. На последней стадии, если R3 содержит защитную группу, ее можно удалить с использованием подходящих условий. Например, если R3 содержит пиразол, защищенный тетрагидропираном, обработка реагентом, таким как TFA, может удалить эту группу.Analogues such as compounds 15a and 15b can be prepared according to the synthetic route illustrated in Scheme 5. Deprotection of intermediate 14 (prepared as shown in Scheme 1 or 2) can be carried out using suitable conditions to give compounds 15a. For example, if PG=TBS, this can be done by treatment with a reagent such as TBAF. Compound 15a can then be converted to compound 15b by treatment with appropriate reagents. For example, compound 15a can be converted to an aryl or heteroaryl ether by treatment with an appropriately substituted phenol in the presence of suitable reagents such as DIAD and triphenylphosphine. In the last step, if R 3 contains a protecting group, it can be removed using suitable conditions. For example, if R 3 contains pyrazole protected with tetrahydropyran, treatment with a reagent such as TFA can remove this group.
Схема 5.Scheme 5.
Соединение 22 может быть получено с помощью последовательности синтеза, представленной на схеме 6. Промежуточное соединение 17 можно получить путем обработки хинолина 16 подходящим галогенирующим реагентом, таким как йод, в присутствии основания, такого как гидроксид натрия. Промежуточное соединение 17 затем можно сочетать с соответствующим образом замещенным алкином 18 под действием подходящего катализатора, такого как Pd(Ph3)4, с получением циклизированного продукта 19. Дальнейшее превращение в соединение 21 может быть осуществлено с помощью двухстадийной последовательности, сначала путем обработки промежуточного соединения 19 подходящим окислителем, таким как m-СРВА, с получением оксида 20, который может быть превращен в соединение 21 с помощью реагента, такого как тозилхлорид, и амина, такого как аммиак. Реакция кросс-сочетания между соединением 21 и подходящим партнером по реакции сочетания под действием катализатора затем дает соединение 22.Compound 22 can be prepared using the synthetic sequence shown in Scheme 6. Intermediate 17 can be prepared by treating quinoline 16 with a suitable halogenating agent such as iodine in the presence of a base such as sodium hydroxide. Intermediate 17 can then be combined with an appropriately substituted alkyne 18 under the action of a suitable catalyst such as Pd(Ph 3 ) 4 to give the cyclized product 19. Further conversion to compound 21 can be carried out in a two-step sequence, first by treating the intermediate 19 with a suitable oxidizing agent such as m-CPBA to give oxide 20 which can be converted to compound 21 with a reagent such as tosyl chloride and an amine such as ammonia. Cross-coupling reaction between compound 21 and a suitable coupling partner under the action of a catalyst then gives compound 22.
Схема 6.Scheme 6.
- 34 042018- 34 042018
Аналоги, такие как соединение 29, могут быть получены в соответствии с путем синтеза, показанным на схеме 7. На схеме 7 образование амидной связи между промежуточным соединением 23 и кислотой 24 в присутствии подходящего связывающего реагента, такого как HATU, дает промежуточное соединение 25. Промежуточное соединение 25 может подвергаться реакции циклизации в присутствии подходящих реагентов, таких как C2Cl6 и PPh3, с получением промежуточного соединения 26. Дальнейшее превращение в соединение 28 может быть осуществлено с помощью двухстадийной последовательности, сначала путем обработки промежуточного соединения 26 подходящим окислителем, таким как mCPBA, с получением оксида 27, который затем превращают в соединение 28 с помощью реагента, такого как тозилхлорид, и амина, такого как аммиак. Затем реакция кросс-сочетания между соединением 28 и подходящим партнером по реакции сочетания под действием катализатора дает соединение 29.Analogues such as compound 29 can be prepared according to the synthetic route shown in Scheme 7. In Scheme 7, formation of an amide bond between intermediate 23 and acid 24 in the presence of a suitable coupling reagent such as HATU yields intermediate 25. compound 25 may undergo a cyclization reaction in the presence of suitable reagents such as C 2 Cl6 and PPh 3 to give intermediate 26. Further conversion to compound 28 may be carried out in a two-step sequence, first by treating intermediate 26 with a suitable oxidizing agent such as mCPBA to give oxide 27 which is then converted to compound 28 with a reagent such as tosyl chloride and an amine such as ammonia. Then cross-coupling reaction between compound 28 and a suitable coupling partner under the action of a catalyst gives compound 29.
Схема 7.Scheme 7.
R2COOH Й R2 ϊ 1 24 I Ϊ I стадия 2 I Г 4^R2 стадия 3 п он —Г Ar 0 — к/ J) стадия 1 I |J I ПR 2 COOH J R 2 ϊ 1 24 I Ϊ I stage 2 I G 4 ^R 2 stage 3 p on -G Ar 0 - k / J) stage 1 I |JI P
Hal R4 Ul-5l\4Hal R 4 Ul-5l\4
Аналоги, такие как соединение 33, могут быть получены в соответствии с путем синтеза, показанным на схеме 8. На схеме 8 промежуточное соединение 25 (полученное, как показано на схеме 7) может быть превращено в промежуточное соединение 30 с помощью подходящего реагента, такого как реагент Лавессона, в присутствии основания, такого как пиридин. Дальнейшее превращение в соединение 32 может быть осуществлено с помощью двухстадийной последовательности, сначала путем обработки соединения 30 подходящим окислителем, таким как m-CPBA, с получением оксида 31, который может быть превращен в соединение 32 с помощью реагента, такого как тозилхлорид. и амина, такой как аммиак. Реакция кросс-сочетания между соединением 32 и подходящим партнером по реакции сочетания под действием катализатора затем дает соединение 33.Analogues such as Compound 33 can be prepared according to the synthetic route shown in Scheme 8. In Scheme 8, Intermediate 25 (prepared as shown in Scheme 7) can be converted to Intermediate 30 using a suitable reagent such as Lawesson's reagent, in the presence of a base such as pyridine. Further conversion to compound 32 can be done in a two-step sequence, first by treating compound 30 with a suitable oxidant such as m-CPBA to give oxide 31, which can be converted to compound 32 with a reagent such as tosyl chloride. and an amine such as ammonia. Cross-coupling reaction between compound 32 and a suitable coupling partner under the action of a catalyst then gives compound 33.
Схема 8.Scheme 8.
Аналоги, такие как соединение 40, могут быть получены в соответствии со способами синтеза, показанными на схеме 9. На схеме 9 соединение 34 (полученное в соответствии с WO 2013/045400) может быть защищено подходящей защитной группой, такой как РМВ, с получением промежуточного соединения 35. Промежуточное соединение 35 затем может быть превращено в промежуточное соединение 36 с помощью хлорирующего реагента, такого как POCl3. Добавление аммиака или соответствующим образом функционализированного амина (NH2-PG2) к промежуточному соединению 36 дает промежуточное соединение 37. Депротекция промежуточного соединения 37 может быть осуществлена несколькими способами, известными специалисту в данной области. Например, если PG1=PG2=PMB, соединение 5 может быть обработано реагентом, таким как TFA, с получением промежуточного соединения 38. Соединение 39 может быть получено путем обработки промежуточного соединения 38 соответствующим образом функционализированным алкилирующим реагентом (R2-X), где X представляет собой уходящую группу, такую как галогенид, в присутствии основания, такого как карбонат калия. Сочетание между соединением 39 и реагентом для реакции сочетания под действием подходящего катализатора дает соединение 40. Необязательно, если R3 содержит защитную группу, ее можно удалить на этой стадии сAnalogues such as compound 40 can be prepared according to the synthetic methods shown in Scheme 9. In Scheme 9, compound 34 (prepared according to WO 2013/045400) can be protected with a suitable protecting group such as PMB to provide an intermediate compound 35. Intermediate 35 can then be converted to intermediate 36 using a chlorinating reagent such as POCl 3 . Addition of ammonia or an appropriately functionalized amine (NH2-PG 2 ) to intermediate 36 gives intermediate 37. Deprotection of intermediate 37 can be accomplished in several ways known to those skilled in the art. For example, if PG 1 =PG 2 =PMB, compound 5 can be treated with a reagent such as TFA to give intermediate 38. Compound 39 can be prepared by treating intermediate 38 with an appropriately functionalized alkylating reagent (R2-X), where X is a leaving group such as a halide in the presence of a base such as potassium carbonate. Coupling between compound 39 and a coupling reagent under the action of a suitable catalyst gives compound 40. Optionally, if R 3 contains a protecting group, it can be removed at this stage with
- 35 042018 использованием подходящих условий. Например, если R3-M представляет собой 1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол, тетрагидропирановая группа может быть удалена путем обработки реагентом, таким как TFA.- 35 042018 using suitable conditions. For example, if R 3 -M is 1-(tetrahydro-2Hpyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole , the tetrahydropyran group can be removed by treatment with a reagent such as TFA.
Схема 9.Scheme 9.
Соединение 52 может быть получено с помощью последовательности синтеза, представленной на схеме 10. На схеме 10 обработка хинолина 41, где группа Hal1 представляет собой галогенид, такой как бромид, замещенным амином 42, где Rlb представляет собой Н, защитную группу, такую как РМВ или Rla, обеспечивает соединение 43. Обработка соединения 43 йодирующим реагентом, таким как NIS, дает соединение 44, которое может быть подвергнуто сочетанию с соответствующим образом замещенным алкином 45 под действием подходящего катализатора, такого как Pd(Ph3)2Cl2 и CuI, с получением соединения 46. Циклизация соединения 46 может быть осуществлена под действием основания, такого как NaOH, с получением соединения 47. Превращение в соединение 48 может быть выполнено путем обработки соединения 47 подходящим окислителем, таким как m-CPBA. Обработка соединения 48 реагентом, таким как тозилхлорид, и амином, таким как аммиак, дает соединение 49. Сочетание между соединением 49 и реагентом по реакции сочетания 50 под действием подходящего катализатора дает соединение 51. Например, эта стадия может быть осуществлена путем обработки соединения 49 подходящим эфиром бороновой кислоты, таким как 3-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол, в присутствии катализатора, такого как Pd(dppf)Cl2, с получением соединения 51. Альтернативно, эта стадия может быть осуществлена путем обработки соединения 49 подходящим гетероциклом, таким как пиразол, в присутCompound 52 can be prepared using the synthesis sequence shown in Scheme 10. In Scheme 10, treatment of quinoline 41, where the Hal 1 group is a halide such as bromide, is substituted with amine 42, where R lb is H, a protecting group such as PMB or R la provides compound 43. Treatment of compound 43 with an iodinating reagent such as NIS gives compound 44 which can be coupled with an appropriately substituted alkyne 45 under the action of a suitable catalyst such as Pd(Ph 3 ) 2 Cl 2 and CuI to give compound 46. Cyclization of compound 46 can be done with a base such as NaOH to give compound 47. Conversion to compound 48 can be done by treating compound 47 with a suitable oxidizing agent such as m-CPBA. Treatment of compound 48 with a reagent such as tosyl chloride and an amine such as ammonia gives compound 49. Coupling between compound 49 and the coupling reagent 50 under the action of a suitable catalyst gives compound 51. For example, this step can be carried out by treating compound 49 with a suitable boronic acid ester such as 3-(tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole in the presence of a catalyst such as Pd(dppf)Cl 2 to give compound 51. Alternatively, this step can be carried out by treating compound 49 with a suitable heterocycle such as pyrazole in the presence of
- 36 042018 ствии медного катализатора, такого как йодид меди(1), и лиганда, такого как Ν,Ν'-диметилэтилендиамин, с получением соединения 51. На последней стадии на схеме 10 соединение 52 может быть получено путем депротекции соединения 51 с помощью подходящего реагента, такого как TFA.- 36 042018 in the presence of a copper catalyst such as copper(1) iodide and a ligand such as N,N'-dimethylethylenediamine to give compound 51. a reagent such as TFA.
Схема 11.Scheme 11.
Соединение 61 может быть получено с помощью последовательности синтеза, показанной на схеме 11. На схеме 11 обработка хинолина 53, где группа Hal1 представляет собой галогенид, такой как хлорид, соответствующим образом замещенным гидразином, таким как (4-метоксибензил)гидразин, обеспечивает соединение 54. Обработка соединения 54 подходящим реагентом, таким как PCl3, в подходящем растворителе, таком как толуол, дает соединение 55. Превращение в соединение 56 может быть осуществлено путем обработки соединения 55 подходящим окислителем, таким как МТО. Затем соединение 56 может быть превращено в соединение 57 с помощью подходящего реагента, такого как POCl3. Обработка соединения 57 амином, таким как аммиак, обеспечивает получение соединения 58. Депротекция соединения 58 может быть осуществлена под действием кислоты, такой как TFA, с получением соединения 59. Сочетание между соединением 59 и подходящим реагентом для реакции сочетания под действием подходящего катализатора дает соединение 60. Например, эта стадия может быть осуществлена путем обработки соединения 59 подходящим эфиром бороновой кислоты, таким как 3-(тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол, в присутствии катализатора, такого как Pd(dppf)Cl2, с получением соединения 60. Соединение 61 может быть получено путем обработки соединения 60 соответствующим образом функционализированным алкилирующим реагентом (R2-X), где X представляет собой уходящую группу, такую как галогенид, в присутствии основания, такого как карбонат калия. Необязательно, если R2 или R3 содержит защитную группу, ее можно удалить на этой стадии с использованием подходящих условий. Например, если R3-M представляет собой 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол, тетрагидропирановая группа может быть удалена путем обработки реагентом, таким как TFA.Compound 61 can be prepared using the synthetic sequence shown in Scheme 11. In Scheme 11, treatment of quinoline 53, where the Hal 1 group is a halide such as chloride, with an appropriately substituted hydrazine such as (4-methoxybenzyl)hydrazine provides the compound 54. Treatment of compound 54 with a suitable reagent such as PCl 3 in a suitable solvent such as toluene gives compound 55. Conversion to compound 56 can be accomplished by treating compound 55 with a suitable oxidizing agent such as MTO. Compound 56 can then be converted to compound 57 with a suitable reagent such as POCl 3 . Treatment of compound 57 with an amine such as ammonia provides compound 58. Deprotection of compound 58 can be carried out with an acid such as TFA to give compound 59. Coupling between compound 59 and a suitable coupling reagent with a suitable catalyst gives compound 60 For example, this step can be carried out by treating compound 59 with a suitable boronic acid ester such as 3-(tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole in the presence of a catalyst such as Pd(dppf)Cl 2 to give compound 60. Compound 61 can be prepared by treating compound 60 with an appropriately functionalized alkylating reagent (R2-X) where X is a leaving group such as a halide in the presence of a base such as potassium carbonate. Optionally, if R 2 or R 3 contains a protecting group, it can be removed at this stage using suitable conditions. For example, if R 3 -M is 1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole , the tetrahydropyran group can be removed by treatment with a reagent such as TFA.
ПримерыExamples
Для дополнительной иллюстрации вышеизложенного, включены следующие неограничивающие иллюстративные схемы синтеза. Варианты этих примеров в пределах объема формулы изобретения находятся в компетенции специалиста в данной области и считаются подпадающими под объем изобретения, как описано и заявлено в настоящем документе. Читатель поймет, что квалифицированный специалист, обеспеченный настоящим изобретением, и опытный в данной области сможет выполнить и использовать изобретение без исчерпывающих примеров.To further illustrate the foregoing, the following non-limiting illustrative synthesis schemes are included. Variations of these examples within the scope of the claims are within the purview of a person skilled in the art and are considered to fall within the scope of the invention as described and claimed herein. The reader will appreciate that a person skilled in the art provided by the present invention and skilled in the art will be able to make and use the invention without exhaustive examples.
- 37 042018- 37 042018
Пример 1. Получение 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола.Example 1 Preparation of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol.
Стадия 1. Этил-2-(6-бром-1Н-индол-3-ил)-2-оксоацетат.Step 1 Ethyl 2-(6-bromo-1H-indol-3-yl)-2-oxoacetate.
В круглодонную колбу объемом 150 мл вносили 6-бром-1Н-индол (1,15 г, 5,89 ммоль, 1,00 экв.) в Et2O (30 мл). Затем добавляли этил 2-хлор-2-оксоацетат (922 мг, 6,78 ммоль, 1,15 экв.) и пиридин (3 мл). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакцию гасили добавлением воды. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью этилацетат/петролейный эфир (1:3) с получением этил 2-(6-бром-1H-индол-3-ил)-2-оксоацетата (900 мг, 60%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z 296.1 [М+Н]+.To a 150 ml round bottom flask was added 6-bromo-1H-indole (1.15 g, 5.89 mmol, 1.00 eq.) in Et 2 O (30 ml). Ethyl 2-chloro-2-oxoacetate (922 mg, 6.78 mmol, 1.15 eq.) and pyridine (3 mL) were then added. The resulting solution was stirred at room temperature overnight. The reaction was then quenched by adding water. The resulting solution was extracted with ethyl acetate and the combined organic layers were concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column eluting with ethyl acetate/petroleum ether (1:3) to give ethyl 2-(6-bromo-1H-indol-3-yl)-2-oxoacetate (900 mg, 60%) as a solid substances. LC-MS m/z 296.1 [M+H]+.
Стадия 2. 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н,4Н,5Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-он.Step 2. 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H,4H,5H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-4-one.
В круглодонную колбу на 250 мл вносили раствор этил 2-(6-бром-1H-индол-3-ил)-2-оксоацетата (1,7 г, 5,74 ммоль, 1,00 экв.) и [(4-метоксифенил)метил]гидразина (1,007 г, 6,62 ммоль, 1,15 экв.) в этаноле (25 мл) и уксусной кислоте (3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 80°С. Затем реакцию гасили добавлением воды. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом и органические слои объединяли. Раствор сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на колонке с силикагелем смесью этилацетат/петролейный эфир (4:1) с получением 7бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н,4Н,5Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-она (1,5 г, 68%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z 384.1 [М+Н]+.A solution of ethyl 2-(6-bromo-1H-indol-3-yl)-2-oxoacetate (1.7 g, 5.74 mmol, 1.00 eq.) and [(4- methoxyphenyl)methyl]hydrazine (1.007 g, 6.62 mmol, 1.15 eq.) in ethanol (25 ml) and acetic acid (3 ml). The resulting solution was stirred overnight at 80°C. The reaction was then quenched by adding water. The resulting solution was extracted with ethyl acetate and the organic layers were combined. The solution was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column with ethyl acetate/petroleum ether (4:1) to give 7bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H,4H,5H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-4-one (1.5 g, 68%) as a solid. LC-MS m/z 384.1 [M+H] + .
Стадия 3. 7-бром-4-хлор-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолинStage 3. 7-bromo-4-chloro-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline
В круглодонную колбу на 250 мл вносили раствор 7-бром-2-[(4-метоксифенил)-метил]-2Н,4Н,5Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-она (1,3 г, 3,38 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (10 мл). К раствору добавляли DMF (0,5 мл) и POCl3 (1,031 г, 6,72 ммоль, 2,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 6 ч при 25°С. Затем реакцию гасили добавлением водного раствора K2HPO4. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном, и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением 7-бром-4-хлор-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-пиразоло[3,4с]хинолина (1,17 г, 86%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS m/z 402.3 [М+Н]+.A solution of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)-methyl]-2H,4H,5Hpyrazolo[3,4-c]quinolin-4-one (1.3 g, 3.38 mmol, 1.00 eq.) in dichloromethane (10 ml). DMF (0.5 ml) and POCl 3 (1.031 g, 6.72 mmol, 2.00 eq.) were added to the solution. The resulting solution was stirred for 6 hours at 25°C. The reaction was then quenched by adding an aqueous solution of K2HPO4. The resulting solution was extracted with dichloromethane and the combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in vacuo to give 7-bromo-4-chloro-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline (1 .17 g, 86%) as an off-white solid. LC-MS m/z 402.3 [M+H] + .
Стадия 4. 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н,6Н,7Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 4 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H,6H,7H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine
В герметично закрытую пробирку объемом 50 мл помещали раствор 7-бром-4-хлор-2-[(4A solution of 7-bromo-4-chloro-2-[(4
- 38 042018 метоксифенил)метил]-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (180 мг, 0,45 ммоль, 1,00 экв.) и аммиака (3 мл, 5,00 экв.) в диоксане (3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 80°С. Затем реакцию гасили добавлением воды. Полученный раствор экстрагировали смесью дихлорметан:CH3OH (5:1), и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем смесью дихлорметан/метанол (10:1) с получением 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н,6Н,7Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (140 мг, 81%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z 383.2 [М+Н]+.- 38 042018 methoxyphenyl)methyl]-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline (180 mg, 0.45 mmol, 1.00 eq.) and ammonia (3 ml, 5.00 eq.) in dioxane (3 ml). The resulting solution was stirred overnight at 80°C. The reaction was then quenched by adding water. The resulting solution was extracted with dichloromethane:CH 3 OH (5:1) and the combined organic layers were concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column with dichloromethane/methanol (10:1) to give 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H,6H,7Hpyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine ( 140 mg, 81%) as a solid. LC-MS m/z 383.2 [M+H]+.
Стадия 5. 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 5. 7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
В герметично закрытую пробирку объемом 30 мл вносили раствор 7-бром-2-[(4метоксифенил)метил]-2Н,6Н,7Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (400 мг, 1,04 ммоль, 1,00 экв.) в трифторуксусной кислоте (5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 80°С. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем смесью дихлорметан/метанол (12:1) с получением 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (250 мг, 92%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS m/z 263.1 [М+Н]+.A solution of 7-bromo-2-[(4methoxyphenyl)methyl]-2H,6H,7H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (400 mg, 1.04 mmol, 1.00 eq.) in trifluoroacetic acid (5 ml). The resulting solution was stirred overnight at 80°C. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column with dichloromethane/methanol (12:1) to give 7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (250 mg, 92%) as an off-white solid . LC-MS m/z 263.1 [M+H]+.
Стадия 6. 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 6 2-[3-(Benzyloxy)propyl]-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine
В герметично закрытую пробирку объемом 100 мл вносили раствор 7-бром-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (688 мг, 2,62 ммоль, 1,00 экв.) в DMF (8 мл). К раствору добавляли Cs2CO3 (1,029 г, 3,16 ммоль, 1,20 экв.) и [(3-бромпропокси)метил]бензол (624,24 мг, 2,72 ммоль, 1,10 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 25°С. Затем реакцию гасили добавлением воды. Полученный раствор экстрагировали смесью дихлорметан:CH3OH (5:1) и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем смесью дихлорметан/метанол (20:1) с получением 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-бром-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (500 мг, 46%) в виде темно-красного твердого вещества. LC-MS m/z 411.3 [М+Н]+.A solution of 7-bromo-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline-4-amine (688 mg, 2.62 mmol, 1.00 eq.) in DMF (8 ml) was added to a sealed 100 ml tube. Cs 2 CO 3 (1.029 g, 3.16 mmol, 1.20 eq.) and [(3-bromopropoxy)methyl]benzene (624.24 mg, 2.72 mmol, 1.10 eq.) were added to the solution. The resulting solution was stirred overnight at 25°C. The reaction was then quenched by adding water. The resulting solution was extracted with dichloromethane:CH 3 OH (5:1) and the combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column with dichloromethane/methanol (20:1) to give 2-[3-(benzyloxy)propyl]-7-bromo-2Hpyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (500 mg, 46 %) as a dark red solid. LC-MS m/z 411.3 [M+H] + .
Стадия 7. 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-(1H-пиразол-3-ил)-[1,3]оксазоло[5,4-с]хинолин-4-амин.Step 7 2-[3-(Benzyloxy)propyl]-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]oxazolo[5,4-c]quinoline-4-amine
В герметичную пробирку объемом 50 мл вносили раствор 2-[3-(бензилокси)-пропил]-7-бром[1,3]оксазоло[5,4-с]хинолин-4-амина (500 мг, 1,21% ммоль, 1,00 экв.), 3-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)-1H-пиразол (472 мг, 2,43 ммоль, 2,00 экв.) и Cs2CO3 (1,193 мг, 3,00 экв.) в смеси диоксан/вода (10:1, 11 мл). К раствору добавляли Pd(dppf)Cl2DCM (199,3 мг, 0,20 экв.) в атмосфере азота. Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 100°С. Затем реакцию гасили добавлением воды. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном:CH3OH (5:1) и органические слои объединяли. Раствор сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на колонке с силикагелем смесью дихлорметан/метанол (15:1) с получением 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-(1H-пиразол-3-ил)[1,3]оксазоло[5,4-с]хинолин-4-амина (300 мг, 62%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z 399.2 [М+Н]+.A solution of 2-[3-(benzyloxy)-propyl]-7-bromo[1,3]oxazolo[5,4-c]quinoline-4-amine (500 mg, 1.21% mmol , 1.00 eq.), 3-(tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)-1H-pyrazole (472 mg, 2.43 mmol, 2.00 eq.) and Cs 2 CO 3 (1.193 mg , 3.00 eq.) in dioxane/water (10:1, 11 ml). Pd(dppf)Cl 2 DCM (199.3 mg, 0.20 eq.) was added to the solution under a nitrogen atmosphere. The resulting solution was stirred overnight at 100°C. The reaction was then quenched by adding water. The resulting solution was extracted with dichloromethane:CH 3 OH (5:1) and the organic layers were combined. The solution was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column with dichloromethane/methanol (15:1) to give 2-[3-(benzyloxy)propyl]-7-(1H-pyrazol-3-yl)[1,3]oxazolo[5,4- c]quinoline-4-amine (300 mg, 62%) as a solid. LC-MS m/z 399.2 [M+H] + .
Стадия 8. 3-[4-амино-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ол.Step 8 3-[4-Amino-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol.
В герметично закрытую пробирку объемом 50 мл помещали раствор 2-[3-(бензилокси)пропил]-7(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (100 мг, 0,25 ммоль, 1,00 экв.) в трифторуксусной кислоте (5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 70°С. Затем реакцию гасили добавлением воды. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (от 20,0% ACN до 55,0% за 9 мин); детектор, УФ 254/210 нм. Это обеспечило получение 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-nиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]пропан-1-ола (11,6 мг, 15%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) δ 8.55 (s, 1H), 7.97-7.92 (m, 2H), 7.68 (br s, 2H), 6.72 (s, 1H), 4.60 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 3.60 (t, J=6.4 Гц, 2H), 2.26-2.21 (m, 2Н). LC-MS m/z 309.1 [M+H]+.A solution of 2-[3-(benzyloxy)propyl]-7(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (100 mg, 0.25 mmol, 1.00 eq.) in trifluoroacetic acid (5 ml). The resulting solution was stirred overnight at 70°C. The reaction was then quenched by adding water. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: XBridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 µm; mobile phase, water (10 mM NH4HCO3) and ACN (20.0% ACN to 55.0% in 9 min); detector, UV 254/210 nm. This provided 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-n-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]propan-1-ol (11.6 mg, 15%) as a white solid. 1Н NMR (400 MHz, CD 3 OD-d 4 ) δ 8.55 (s, 1H), 7.97-7.92 (m, 2H), 7.68 (br s, 2H), 6.72 (s, 1H), 4.60 (t, J =6.8 Hz, 2H), 3.60 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.26-2.21 (m, 2H). LC-MS m/z 309.1 [M+H] + .
Пример 2. Получение 2-(3-феноксипропил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4амина.Example 2 Preparation of 2-(3-phenoxypropyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4amine.
- 39 042018- 39 042018
Стадия 1. 7-бром-2-(3-феноксипропил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1. 7-bromo-2-(3-phenoxypropyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (16,9 мг, 0,064 ммоль) в DMF (214 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (25,1 мг, 0,077 ммоль) и затем (3бромпропокси)бензол (15,2 мг, 0,071 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-СН2С12) с получением 7-бром-2-(3-феноксипропил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (17,1 мг, 67%). LC-MS m/z 397/399 [М+Н]+.Cesium carbonate (25.1 mg, 0.077 mmol ) and then (3-bromopropoxy)benzene (15.2 mg, 0.071 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml), washed with H2O (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 C1 2 ) to give 7-bromo-2-(3-phenoxypropyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline- 4-amines (17.1 mg, 67%). LC-MS m/z 397/399 [M+H]+.
Стадия 2. 2-(3-феноксипропил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 2 2-(3-phenoxypropyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
Смесь 7-бром-2-(3-феноксипропил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (17,1 мг, 0,043 ммоль), 3(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (16,7 мг, 0,086 ммоль) и карбоната цезия (42,1 мг, 0,129 ммоль) в смеси диоксана (387 мкл) и H2O (43,0 мкл) при комнатной температуре продували N2 в течение 5 мин, затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (6,3 мг, 8,6 мкмоль). Реакционную смесь герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 21 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 16% В, 1656% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании результатов масс-спектрометрических измерений (МС). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(3-феноксипропил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (3,6 мг, 22%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.71-8.66 (m, 1H), 7.92-7.88 (m, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.61 (dd, J=8.0, 1.5 Гц, 1H), 7.29-7.23 (m, 2Н), 6.94-6.90 (m, 3H), 6.70 (d, J=2.1 Гц, 1H), 6.66-6.42 (m, 2Н), 4.62 (t, J=7.0 Гц, 2Н), 4.06-4.02 (m, 2Н), 2.41 (quin, J=6.4 Гц, 2Н). Условия аналитической LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 385.3 [М+Н]+; RT: 1,39 мин.A mixture of 7-bromo-2-(3-phenoxypropyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (17.1 mg, 0.043 mmol), 3(4,4,5,5-tetramethyl- 1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (16.7 mg, 0.086 mmol) and cesium carbonate (42.1 mg, 0.129 mmol) in a mixture of dioxane (387 µl) and H 2 O (43 0 µl) at room temperature was purged with N2 for 5 min, then [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (6.3 mg, 8.6 µmol) was added. The reaction mixture was sealed and stirred at 100°C for 21 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H2O (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 16% B, 1656% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on the results of mass spectrometric measurements (MS). Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(3-phenoxypropyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine ( 3.6 mg, 22%). 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.71-8.66 (m, 1H), 7.92-7.88 (m, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.61 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1H ), 7.29-7.23 (m, 2Н), 6.94-6.90 (m, 3H), 6.70 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.66-6.42 (m, 2Н), 4.62 (t, J=7.0 Hz, 2Н), 4.06-4.02 (m, 2Н), 2.41 (quin, J=6.4 Hz, 2Н). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 385.3 [M+H]+; RT: 1.39 min.
Примеры 3 и 4. Получение 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2-[3-(пиридин-2-илокси)пропил]-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина и 1-{3- [4-амино-7-(1 H-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло [3,4-с]хинолин-2-ил] пропил }-1,2дигидропиридин-2-она.Examples 3 and 4 Preparation of 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2-[3-(pyridin-2-yloxy)propyl]-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-4-amine and 1-{ 3-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]propyl}-1,2dihydropyridin-2-one.
Стадия 1. 7-бром-2-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1 7-bromo-2-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (240 мг, 0,636 ммоль) в DMF (2121 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (622 мг, 1,91 ммоль) с последующим (3бромпропокси)(трет-бутил)диметилсиланом (162 мкл, 0,700 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и H2O (50 мл). СлоиCesium carbonate (622 mg, 1.91 mmol ) followed by (3-bromopropoxy)(tert-butyl)dimethylsilane (162 µl, 0.700 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 16 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (50 ml) and H 2 O (50 ml). Layers
- 40 042018 разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (50 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением 7-бром-2-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (214 мг, 77%) в виде белого твердого вещества, в смеси с ~5% региоизомерного продукта. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.31 (dd, J=8.4, 2.0 Гц, 1H), 6.96 (br s, 2H), 4.49 (t, J=7.1 Гц, 2Н), 3.63 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 2.14 (quin, J=6.6 Гц, 2Н), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); LC-MS m/z 435 [M+H]+.- 40 042018 was separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (50 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (24 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 7-bromo-2-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-2Hpyrazolo[3, 4-c]quinoline-4-amine (214 mg, 77%) as a white solid, admixed with ~5% regioisomeric product. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.31 (dd, J=8.4 , 2.0 Hz, 1H), 6.96 (br s, 2H), 4.49 (t, J=7.1 Hz, 2H), 3.63 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.14 (quin, J=6.6 Hz, 2H) , 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); LC-MS m/z 435 [M+H]+.
Стадия 2. 2-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Hпиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 2. 2-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4 -c]quinoline-4-amine.
Смесь 7-бром-2-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-2Н-пиразоло[3,4-с]-хинолин-4-амина (214 мг, 0,491 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)1H-пиразола (205 мг, 0,737 ммоль) и карбоната цезия (480 мг, 1,474 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (4423 мкл) и H2O (491 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли [1,Г-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (17,98 мг, 0,025 ммоль). Смесь барботировали N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (50 мл), промывали H2O (50 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (50 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэшхроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением 2-(3-((третбутилдиметилсилил)окси)пропил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (242 мг, 97%) в виде коричневой пены. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.76 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.62 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.7 Гц, 1H), 6.86 (br s, 2H), 6.48 (d, J=1.7 Гц, 1H), 5.30 (dd, J=9.9, 2.0 Гц, 1H), 4.51 (t, J=7.1 Гц, 2Н), 4.09-4.00 (m, 1H), 3.64 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.62-3.53 (m, 1H), 2.48-2.37 (m, 1H), 2.21-2.12 (m, 2Н), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.79 (br d, J=12.5 Гц, 1H), 1.63-1.48 (m, 3H), 0.88 (s, 9Н), 0.06-0.01 (m, 6Н); LC-MS m/z 507 [М+Н]+.A mixture of 7-bromo-2-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]-quinoline-4-amine (214 mg, 0.491 mmol), 1-(tetrahydro- 2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)1H-pyrazole (205 mg, 0.737 mmol) and cesium carbonate (480 mg , 1.474 mmol) was evacuated and refilled with N2, then 1,4-dioxane (4423 µl) and H2O (491 µl) were added. The resulting mixture was purged with N2 for 10 min, then [1,H-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (17.98 mg, 0.025 mmol) was added. The mixture was sparged with N 2 for 1 min, then sealed and stirred at 100° C. for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (50 ml), washed with H 2 O (50 ml) and saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 2-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran- 2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline-4-amine (242 mg, 97%) as a brown foam. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.7 Hz, 1H), 6.86 (br s, 2H), 6.48 (d, J=1.7 Hz, 1H), 5.30 (dd, J=9.9, 2.0 Hz , 1H), 4.51 (t, J=7.1 Hz, 2H), 4.09-4.00 (m, 1H), 3.64 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.62-3.53 (m, 1H), 2.48-2.37 ( m, 1H), 2.21-2.12 (m, 2H), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.79 (br d, J=12.5 Hz, 1H), 1.63-1.48 (m, 3H), 0.88 (s, 9H ), 0.06–0.01 (m, 6Н); LC-MS m/z 507 [M+H] + .
Стадия 3. 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил)пропан-1-ол.Step 3. 3-(4-Amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl) propan-1-ol.
К раствору 2-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Hпиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (182 мг, 0,359 ммоль) в THF (1796 мкл) добавляли тетрабутиламмония фторид (1 М раствор в THF) (431 мкл, 0,431 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAcCH2Cl2, затем 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Нпиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)-пропан-1-ола (128 мг, 91%). Ы ЯМР (400 МГц, DMSOd6) δ 8.78 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.62 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.8 Гц, 1H), 6.90 (br s, 2Н), 6.48 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Гц, 1H), 4.69 (t, J=5.0 Гц, 1H), 4.52 (t, J=7.1 Гц, 2Н), 4.07-4.00 (m, 1H), 3.62-3.54 (m, 1H), 3.45 (q, J=6.0 Гц, 2Н), 2.47-2.37 (m, 1H), 2.10 (quin, J=6.6 Гц, 2H), 1.94 (br s, 1H), 1.79 (br d, J=12.6 Гц, 1H), 1.64-1.47 (m, 3H); LC-MS m/z 393 [M+H]+.To a solution of 2-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4- c]quinoline-4-amine (182 mg, 0.359 mmol) in THF (1796 μl) was added tetrabutylammonium fluoride (1 M solution in THF) (431 μl, 0.431 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (24 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAcCH 2 Cl 2 then 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro -2H-pyran-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)-propan-1-ol (128 mg, 91%). S NMR (400 MHz, DMSOd 6 ) δ 8.78 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.8 Hz, 1H), 6.90 (br s, 2H), 6.48 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Hz, 1H) , 4.69 (t, J=5.0 Hz, 1H), 4.52 (t, J=7.1 Hz, 2H), 4.07-4.00 (m, 1H), 3.62-3.54 (m, 1H), 3.45 (q, J=6.0 Hz, 2H), 2.47-2.37 (m, 1H), 2.10 (quin, J=6.6 Hz, 2H), 1.94 (br s, 1H), 1.79 (br d, J=12.6 Hz, 1H), 1.64-1.47 (m, 3H); LC-MS m/z 393 [M+H] + .
Стадия 4. 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2-[3-(пиридин-2-илокси)пропил]-2Н-пиразоло-[3,4-с]хинолин-4-амин и 1 - {3-[4-амино-7-(1Н-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[3,4-с] -хинолин-2-ил]пропил} -1,2-дигидропиридин-2-он.Step 4. 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2-[3-(pyridin-2-yloxy)propyl]-2H-pyrazolo-[3,4-c]quinolin-4-amine and 1 - { 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]-quinolin-2-yl]propyl}-1,2-dihydropyridin-2-one.
К раствору 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил)пропан-1-ола (40 мг, 0,102 ммоль), пиридин-2(1H)-она (10,7 мг, 0,112 ммоль) и трифенилфосфина (32,1 мг, 0,122 ммоль) в THF (1019 мкл) при 0°С по каплям добавляли диизопропил азодикарбоксилат (24,1 мкл, 0,122 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме.To a solution of 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl)propane -1-ol (40 mg, 0.102 mmol), pyridin-2(1H)-one (10.7 mg, 0.112 mmol) and triphenylphosphine (32.1 mg, 0.122 mmol) in THF (1019 µl) at 0°C diisopropyl azodicarboxylate (24.1 μl, 0.122 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (250 мкл) и добавляли TFA (250 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 и снова концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 3% В, 3-43% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании результатов масс-спектрометрических измерений (МС). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 7(1H-пиразол-3-ил)-2-(3-(пиридин-2-илокси)пропил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (28,5 мг, 56%) и 1 -(3 -(4-амино-7-(1 H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)пиридин-2(1 H)-она, TFA (11,6 мг, 23%).The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 (250 μl) and TFA (250 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in CH2Cl2 and concentrated again. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 3% B, 3-43% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on the results of mass spectrometric measurements (MS). Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 7(1H-pyrazol-3-yl)-2-(3-(pyridin-2-yloxy)propyl)-2H-pyrazolo[3,4-c] quinoline-4-amine, TFA (28.5 mg, 56%) and 1-(3-(4-amino-7-(1 H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c] quinolin-2-yl)propyl)pyridin-2(1 H)-one, TFA (11.6 mg, 23%).
Характеристические данные для 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2-(3-(пиридин-2-илокси)пропил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA: 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.15-8.07Characterization data for 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2-(3-(pyridin-2-yloxy)propyl)-2Hpyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, TFA: 1 H NMR ( 500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.03 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.15-8.07
- 41 042018 (m, 2H), 7.90 (br d, J=7.7 Гц, 1H), 7.87-7.78 (m, 1H), 7.72-7.65 (m, 1H), 6.99-6.92 (m, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.75 (d, J=8.3 Гц, 1H), 4.70 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 4.33 (t, J=6.1 Гц, 2Н), 2.49-2.42 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 386.3 [М+Н]+; RT: 1.18 мин.- 41 042018 (m, 2H), 7.90 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.87-7.78 (m, 1H), 7.72-7.65 (m, 1H), 6.99-6.92 (m, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.75 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.70 (t, J=6.7 Hz, 2H), 4.33 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.49-2.42 (m, 2H) . Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 386.3 [M+H]+; RT: 1.18 min.
Характеристические данные для 1-(3-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло-[3,4-с]хинолин-2ил)nроnил)пиридин-2(1H)-она, TFA: 78 (br s, 1H), 6.39 (d, J=9.1 Гц, 1H), 6.24 (t, J=62 Гц, 1H), 4.55 (br t, J=6.9 Гц, 2Н), 4.01 (br t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.40-2.32 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 386.3 [М+Н]+; RT 1.03 мин.Characteristic data for 1-(3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo-[3,4-c]quinolin-2yl)pronyl)pyridin-2(1H)-one , TFA: 78 (br s, 1H), 6.39 (d, J=9.1 Hz, 1H), 6.24 (t, J=62 Hz, 1H), 4.55 (br t, J=6.9 Hz, 2H), 4.01 ( br t, J=6.9 Hz, 2H), 2.40-2.32 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 386.3 [M+H]+; RT 1.03 min.
Соединения по примерам 5-9 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 3, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).The compounds of Examples 5-9 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in Example 3 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 42 042018- 42 042018
- 43 042018- 43 042018
Пример 10. Получение 2-(2-этоксиэтил)-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина.Example 10 Preparation of 2-(2-ethoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
Стадия 1. 7-бром-N,2-бис(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1. 7-bromo-N,2-bis(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору 7-бром-4-хлор-2-(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (2,428 г, 6,03 ммоль) в DMSO (20,10 мл) при комнатной температуре добавляли (4-метоксифенил)метанамин (1,576 мл, 12,06 ммоль) с последующим К,К-диизопропилэтиламином (3,15 мл, 18,09 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (500 мл), промывали H2O (2x250 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (250 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением коричневого масла. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAc-гексаны) с получением 7-бром-N,2-бис(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (2,880 г, 95%) в виде грязно-белой пены. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 (s, 1H), 7.96 (t, J=6.2 Гц, 1H), 7.85 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.63 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.37 (d, J=8.7 Гц, 2H), 7.32-7.27 (m, 3H), 6.95-6.90 (m, 2H), 6.87-6.82 (m, 2H), 5.58 (s, 2H), 4.66 (d, J=6.0 Гц, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.69 (s, 3H); LC-MS m/z 503/505 [M+H]+.To a solution of 7-bromo-4-chloro-2-(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline (2.428 g, 6.03 mmol) in DMSO (20.10 mL) was added at room temperature (4-methoxyphenyl)methanamine (1.576 ml, 12.06 mmol) followed by N,K-diisopropylethylamine (3.15 ml, 18.09 mmol). The reaction mixture was stirred at 70°C for 18 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (500 ml), washed with H2O (2x250 ml) and saturated aqueous NaCl (250 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo to give a brown oil. The crude product was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc-hexanes) to give 7-bromo-N,2-bis(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline- 4-amines (2.880 g, 95%) as an off-white foam. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.79 (s, 1H), 7.96 (t, J=6.2 Hz, 1H), 7.85 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.32-7.27 (m, 3H), 6.95-6.90 (m, 2H), 6.87-6.82 (m, 2H), 5.58 (s, 2H ), 4.66 (d, J=6.0 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.69 (s, 3H); LC-MS m/z 503/505 [M+H]+.
Стадия 2. N,2-бис(4-метоксибензил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пuразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 2 N,2-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору пиразола (97 мг, 1,43 ммоль), 7-бром-N,2-бис(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (600 мг, 1,19 ммоль), йодида медu(I) (11,35 мг, 0,060 ммоль) и (1S,2S)-N1,N2диметилциклогексан-1,2-диамина (33,9 мг, 0,238 ммоль) в толуоле (2,5 мл) добавляли карбонат калия (362 мг, 2,62 ммоль). Реакционную смесь продували N2 и перемешивали при 120°С в течение 24 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали и очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAc-гексан) с получением N,2-бис(4-метоксибензил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (495 мг, 85%). LC-MS m/z 491.4 [М+Н]+.To a solution of pyrazole (97 mg, 1.43 mmol), 7-bromo-N,2-bis(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline-4-amine (600 mg, 1.19 mmol) , copper(I) iodide (11.35 mg, 0.060 mmol) and (1S,2S)-N1,N2dimethylcyclohexane-1,2-diamine (33.9 mg, 0.238 mmol) in toluene (2.5 ml) were added carbonate potassium (362 mg, 2.62 mmol). The reaction mixture was purged with N2 and stirred at 120° C. for 24 h. The reaction mixture was then cooled to room temperature, diluted with EtOAc and filtered through a pad of celite. The filtrate was concentrated and purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc-hexane) to give N,2-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2Hpyrazolo[3 ,4-c]quinoline-4-amine (495 mg, 85%). LC-MS m/z 491.4 [M+H] + .
Стадия 3. 7-(1H-пиразол-1-uл)-2Н-пuразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 3. 7-(1H-pyrazolo-1-ul)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору N,2-бис(4-метоkсuбензил)-7-(177-пиразол-1 -ил)-2Н-пиразоло [3,4-с]хинолин-4-амина (501 мг, 1,02 ммоль) в TFA (3934 мкл, 51,1 ммоль) добавляли анизол (1116 мкл, 10,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал растирали с Et2O, а затем фильтровали с получением 7-(177-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, соли TFA (350 мг, 94%). 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d4) δ 8.81 (s, 1H), 8.39 (d, J=2.3 Гц, 1H), 8.26 (d, J=8.6 Гц, 1H), 8.11 (d, J=1.9 Гц, 1H), 7.92 (dd, J=8.6, 1.9 Гц, 1H), 7.83 (d, J=1.2 Гц, 1H), 6.63 (d, J=1.8 Гц, 1Н); LC-MS m/z 251.1 [М+Н]+.To a solution of N,2-bis(4-methoxubenzyl)-7-(177-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (501 mg, 1.02 mmol) in TFA (3934 µl, 51.1 mmol) anisole (1116 µl, 10.2 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 80° C. overnight. The reaction mixture was cooled to room temperature and concentrated in vacuo. The crude material was triturated with Et 2 O and then filtered to give 7-(177-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, TFA salt (350 mg, 94%) . 1Н NMR (400 MHz, methanol-d 4 ) δ 8.81 (s, 1H), 8.39 (d, J=2.3 Hz, 1H), 8.26 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.11 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.83 (d, J=1.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J=1.8 Hz, 1H); LC-MS m/z 251.1 [M+H] + .
Стадия 4. 2-(2-этоксиэтил)-7-(1 H-пиразол-1 -ил)-2И-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 4 2-(2-ethoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору 1-бром-2-этоксиэтана (9,17 мг, 0,060 ммоль) и 7-(1Н-пuразол-1-ил)-2H-nиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (15 мг, 0,060 ммоль) в DMF (0,3 мл) добавляли Cs2CO3 (78 мг, 0,240 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч перед фильтрованием. Неочищенный продукт очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 6% В, 6-46% В в течение 25 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаTo a solution of 1-bromo-2-ethoxyethane (9.17 mg, 0.060 mmol) and 7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-nirazolo[3,4c]quinoline-4-amine (15 mg, 0.060 mmol ) in DMF (0.3 ml) was added Cs 2 CO 3 (78 mg, 0.240 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours before being filtered. The crude product was purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 6% B, 6-46% B for 25 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal precipitation.
- 44 042018 ривания с получением 2-(2-этоксиэтил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2H-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (6,9 мг, 26%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.70 (s, 1H), 8.49 (d, J=2.0 Гц, 1H), 8.03 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.88 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.68 (dd, J=8.4, 2.1 Гц, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.60 (t, J=5.3 Гц, 2Н), 3.92 (t, J=5.3 Гц, 2Н), 3.48 (q, J=6.9 Гц, 2Н), 1.08 (t, J=6.9 Гц, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 323.2 [М+Н]+; RT: 1.03 мин.- 44 042018 to obtain 2-(2-ethoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (6.9 mg, 26%) . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.70 (s, 1H), 8.49 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.88 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.68 (dd, J=8.4, 2.1 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.60 (t, J=5.3 Hz, 2H), 3.92 (t, J =5.3 Hz, 2H), 3.48 (q, J=6.9 Hz, 2H), 1.08 (t, J=6.9 Hz, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 323.2 [M+H]+; RT: 1.03 min.
Соединения по примерам 11-19 получали в соответствии с методиками синтеза, описанным в примере 10, из соответствующих исходных материалов. Метод LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).Compounds of examples 11-19 were obtained in accordance with the methods of synthesis described in example 10, from the appropriate starting materials. LC/MS method: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 45 042018- 45 042018
- 46 042018- 46 042018
Пример 20. Получение 2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин4-амина.Example 20 Preparation of 2-[2-(morpholin-4-yl)ethyl]-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline4-amine.
Стадия 1. 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1. 7-(1-(Tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
Смесь 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (2,988 г, 7,92 ммоль), 1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (3,31 г, 11,9 ммоль) и трехосновного фосфата калия (5,05 г, 23,8 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем ее смешивали с диоксаном (33,0 мл) и H2O (6,60 мл). Полученную суспензию барботировали N2 в течение 15 мин, затем добавляли хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1 '-бифенил) [2-(2'-амино-1,1'бифенил)]палладий(П) (0,312 г, 0,396 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (400 мл) и H2O (400 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (400 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (10 мл), фильтровали и промывали CH2Cl2 (3x10 мл) с получением 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (1,865 г, 70%). 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.59-13.20 (m, 1H), 8.82-8.51 (m, 1H), 8.21-8.03 (m, 1H), 7.77-7.65 (m, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.44-7.30 (m, 1H), 6.93 (br s, 2H), 6.49 (d, J=1.3 Гц, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Гц, 1H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.62-3.55 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 1H), 1.97-1.91 (m, 1H), 1.79 (br d, J=13.1 Гц, 1H), 1.62-1.49 (m, 3H); LC-MS m/z 335 [M+H]+.7-Bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine mixture, TFA (2.988 g, 7.92 mmol), 1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4.4 ,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (3.31 g, 11.9 mmol) and tribasic potassium phosphate (5.05 g, 23.8 mmol) were evacuated and again filled with N2, then it was mixed with dioxane (33.0 ml) and H2O (6.60 ml). The resulting suspension was bubbled with N2 for 15 min, then chloro(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropyl-1,1'-biphenyl) [2-(2'-amino-1,1'biphenyl) ]palladium(II) (0.312 g, 0.396 mmol). The reaction mixture was stirred at 100° C. for 2 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with EtOAc (400 ml) and H2O (400 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (2x200 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (400 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (10 ml), filtered and washed with CH 2 Cl 2 (3x10 ml) to give 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl )-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline-4-amine (1.865 g, 70%). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.59-13.20 (m, 1H), 8.82-8.51 (m, 1H), 8.21-8.03 (m, 1H), 7.77-7.65 (m, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.44-7.30 (m, 1H), 6.93 (br s, 2H), 6.49 (d, J=1.3 Hz, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Hz , 1H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.62-3.55 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 1H), 1.97-1.91 (m, 1H), 1.79 (br d, J=13.1 Hz, 1H), 1.62-1.49 (m, 3H); LC-MS m/z 335 [M+H]+.
Стадия 2. 2-[2-(морфолин-4-ил)этил] -7-(1 H-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 2 2-[2-(morpholin-4-yl)ethyl]-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло-[3,4-с]хинолин-4-амина (16,3 мг, 0,049 ммоль) в DMF (162 мкл) добавляли карбонат цезия (47,6 мг, 0,146 ммоль) с последующим 4-(2-бромэтил)морфолином, гидробромидом (14,7 мг, 0,054 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (2 мл) и экстрагировали EtOAc (3x2 мл). Объединенные органические слои концентрировали.To a solution of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo-[3,4-c]quinoline-4-amine (16.3 mg, 0.049 mmol) in DMF (162 μl) was added cesium carbonate (47.6 mg, 0.146 mmol) followed by 4-(2-bromoethyl)morpholine, hydrobromide (14.7 mg, 0.054 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 16 hours, the Reaction mixture was diluted with H 2 O (2 ml) and was extracted with EtOAc (3x2 ml). The combined organic layers were concentrated.
Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (200 мкл) и TFA (200 мкл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 6% В, 6-46% В в течение 20 мин, затем 4минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов МС. Фракции, содержащие желаемый продукт (более полярный из двух наблюдаемых региоизомерных продуктов), объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-морфолиноэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (10,8 мг, 59%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 7.93 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70 (br s, 1H), 7.64 (br d, J=7.4 Гц, 1H), 6.97-6.80 (m, 2H), 6.73 (d, J=1.9 Гц, 1H), 4.56 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 3.57-3.53 (m, 4H), 2.88 (br t, J=6.5 Гц, 2Н), 2.48-2.43 (m, 4H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 363.9 [М+Н]+; RT: 0.84 мин.The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (200 μl) and TFA (200 μl) and stirred at room temperature for 1.5 h. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 6% B, 6-46% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS signals. Fractions containing the desired product (the more polar of the two observed regioisomeric products) were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-morpholinoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4 -c]quinoline-4-amine (10.8 mg, 59%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 7.93 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70 (br s, 1H), 7.64 (br d, J=7.4 Hz, 1H), 6.97-6.80 (m, 2H), 6.73 (d, J=1.9 Hz, 1H), 4.56 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.57-3.53 (m, 4H), 2.88 (br t, J=6.5 Hz, 2H), 2.48-2.43 (m, 4H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 363.9 [M+H]+; RT: 0.84 min.
Соединения по примерам 21-28 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 20, из соответствующих исходных материалов. В примере 27 реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 4 ч. Для реакций, в которых два региоизомерных пика наблюдались с помощью HPLC, продукт обычно был основным пиком и был более полярным из двух пиков, наблюдаемых в используемых условиях HPLC. Условия аналитического LC/MS: колонка: WatersThe compounds of Examples 21-28 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in Example 20 from the appropriate starting materials. In example 27, the reaction mixture was stirred at 50° C. for 4 hours. For reactions in which two regioisomeric peaks were observed by HPLC, the product was usually the main peak and was the more polar of the two peaks observed under the HPLC conditions used. Analytical LC/MS conditions: column: Waters
- 47 042018- 47 042018
XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).XBridge C18, 2.1x50mm, 1.7µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 48 042018- 48 042018
Пример 29.Example 29.
N-этилацетамида.N-ethylacetamide.
Получение N-[2-[4-aMUHO-7-(1 Н-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло [3,4-с]хинолин-2-ил]этил] -Obtaining N-[2-[4-aMUHO-7-(1 H-pyrazol-3 -yl)-2H-pyrazolo [3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl] -
Стадия 1. 7-бром-2-(2-бромэтил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1. 7-bromo-2-(2-bromoethyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
В круглодонную колбу на 250 мл вносили 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин (2 г, 7,60 ммоль, 1 экв.), DMF (70 мл, 957,67 ммоль), Cs2CO3 (5,0 г, 15,20 ммоль, 2 экв.) и 1,2-дибромэтан (2,1 г, 11,40 ммоль, 1,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре и затем разбавляли EtOAc (350 мл). Полученную смесь промывали H2O (2x100 мл) и рассолом (2x100 мл). Затем смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем, используя смесь этилацетат/петролейный эфир (0-70%) с получением 7-бром-2-(2-бромэтил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (1,5 г, 53%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z [М+Н]+=368.9.To a 250 ml round bottom flask was added 7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (2 g, 7.60 mmol, 1 eq.), DMF (70 ml, 957.67 mmol) , Cs 2 CO 3 (5.0 g, 15.20 mmol, 2 eq.) and 1,2-dibromoethane (2.1 g, 11.40 mmol, 1.5 eq.). The resulting solution was stirred for 5 h at room temperature and then diluted with EtOAc (350 ml). The resulting mixture was washed with H2O (2x100 ml) and brine (2x100 ml). The mixture was then concentrated and the residue was purified on a silica gel column using ethyl acetate/petroleum ether (0-70%) to give 7-bromo-2-(2-bromoethyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4 -amine (1.5 g, 53%) as a solid. LC-MS m/z [M+H]+=368.9.
Стадия 2. 7-бром-2-[2-(этиламино)этил]-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 2 7-bromo-2-[2-(ethylamino)ethyl]-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
В 30-мл герметичную пробирку вносили 7-бром-2-(2-бромэтил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин (500 мг, 1,35 ммоль, 1 экв.), ACN (10 мл, 0,24 ммоль), K2CO3 (373,5 мг, 2,70 ммоль, 2 экв.), KI (22,4 мг, 0,14 ммоль, 0,1 экв.) и этанамин (609,2 мг, 13,51 ммоль, 10 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 65°С. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем, используя смесь дихлорметан/метанол (0-10%) с получением 7бром-2-[2-(этиламино)этил]-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (250 мг, 55%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z [M+H]+=334.1.7-bromo-2-(2-bromoethyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (500 mg, 1.35 mmol, 1 eq.), ACN ( 10 ml, 0.24 mmol), K2CO3 (373.5 mg, 2.70 mmol, 2 eq.), KI (22.4 mg, 0.14 mmol, 0.1 eq.) and ethanamine (609.2 mg, 13.51 mmol, 10 eq.). The resulting solution was stirred for 16 hours at 65°C. The reaction mixture was filtered and the filtrate was concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column using dichloromethane/methanol (0-10%) to give 7bromo-2-[2-(ethylamino)ethyl]-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (250 mg, 55%) as a solid. LC-MS m/z [M+H] + =334.1.
Стадия 3. N-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил] этил)-N-этилацетамид.Step 3 N-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)-N-ethylacetamide.
В 25-мл трехгорлую круглодонную колбу, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили 7-бром-2-[2-(этиламино)этил]-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин (250 мг, 0,75 ммоль, 1 экв.), DCM (10 мл, 157,30 ммоль), TEA (227,1 мг, 2,24 ммоль, 3 экв.) и Ac2O (91,6 мг, 0,90 ммоль, 1,2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем, используя смесь дихлорметан/метанол (0-10%) с получением N-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пирaзоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)-Nэтилацетамида (200 мг, 71%) в виде твердого вещества. LC-MS m/z [М+Н]+=376.1.To a 25 ml three-necked round bottom flask, purged and maintained under an inert nitrogen atmosphere, was added 7-bromo-2-[2-(ethylamino)ethyl]-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (250 mg , 0.75 mmol, 1 eq.), DCM (10 ml, 157.30 mmol), TEA (227.1 mg, 2.24 mmol, 3 eq.) and Ac 2 O (91.6 mg, 0. 90 mmol, 1.2 eq.). The resulting solution was stirred for 5 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified on a silica gel column using dichloromethane/methanol (0-10%) to give N-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c] quinolin-2-yl]ethyl)-Nethylacetamide (200 mg, 71%) as a solid. LC-MS m/z [M+H] + = 376.1.
Стадия 4. N-[2-[4-амино-7-(1 Н-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил] этил] -Nэтилацетамид.Step 4 N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl]-N-ethylacetamide.
В 25-мл круглодонную колбу вносили N-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]этил)-N-этилацетамид (200 мг, 0,53 ммоль, 1 экв.), Na2CO3 (112,7 мг, 1,06 ммоль, 2 экв.), 3(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол (206,3 мг, 1,06 ммоль, 2 экв.), Pd(PPh3)4 (61,4 мг, 0,05 ммоль, 0,1 экв.) в диоксане (5 мл, 0,06 ммоль) и H2O (1,25 мл, 620,08 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 80°С на масляной бане. Полученную смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем, используя смесь дихлорметан/метанол (10:1). Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC, используя следующие условия: колонка: XBridge Shield RP18 OBD, колонка 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза А: вода (10 мМ NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 13 до 40% В в течение 7 мин; 254/210 нм; RT: 6,55 мин. Это обеспечило получение N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил]-N-этилацетамида (82,6 мг, 43%) в виде белого твердого вещества. 1H-ЯМР: (300 МГц, DMSO-d6, ppm): δ 13.33-12.84 (m, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.94-7.64 (m, 4H), 6.80-6.74 (m, 3H), 4.65-4.54 (m, 2H), 3.85-3.73 (m, 2H), 3.34-3.06 (m, 2H), 2.01 (s, 2H), 1.70 (s, 1H), 1.02-0.94 (m, 3H). Методы LC: колонка: Kinetex EVO 3.0x50 мм, частицыN-(2-[4-Amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl)-N-ethylacetamide (200 mg, 0.53 mmol, 1 eq.), Na 2 CO 3 (112.7 mg, 1.06 mmol, 2 eq.), 3(tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (206.3 mg , 1.06 mmol, 2 eq.), Pd(PPh 3 ) 4 (61.4 mg, 0.05 mmol, 0.1 eq.) in dioxane (5 ml, 0.06 mmol) and H 2 O ( 1.25 ml, 620.08 mmol). The resulting solution was stirred for 16 hours at 80° C. in an oil bath. The resulting mixture was concentrated and the residue was purified on a silica gel column using dichloromethane/methanol (10:1). The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: column: XBridge Shield RP18 OBD, column 19x250 mm, 10 µm; mobile phase A: water (10 mM NH4HCO3), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 13 to 40% B over 7 min; 254/210 nm; RT: 6.55 min. This provided N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl]-N-ethylacetamide (82, 6 mg, 43%) as a white solid. 1 H-NMR: (300 MHz, DMSO-d 6 , ppm): δ 13.33-12.84 (m, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.94-7.64 (m, 4H), 6.80-6.74 (m, 3H ), 4.65-4.54 (m, 2H), 3.85-3.73 (m, 2H), 3.34-3.06 (m, 2H), 2.01 (s, 2H), 1.70 (s, 1H), 1.02-0.94 (m, 3H ). LC methods: column: Kinetex EVO 3.0x50 mm, particles
- 49 042018- 49 042018
2,6 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,03% NH3H2O; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание в течение 0,60 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. m/z [М+Н]+=336.3. LC RT: 1,030 мин.2.6 µm; mobile phase A: water with 0.03% NH 3 H 2 O; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold for 0.60 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. m/z [M+H]+=336.3. LC RT: 1.030 min.
Пример 30. Получение 2-(2-{гексагидро-1Н-фуро[3,4-с]пиррол-5-ил}этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Нпиразоло [3,4-с]хинолин-4-амина.Example 30 Preparation of 2-(2-{hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5-yl}ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2Hpyrazolo[3,4-c ]quinoline-4-amine.
HN-NHN-N
Стадия 1. 7-бром-2-(2-[гексагидро-1H-фуро[3,4-с]пиррол-5-ил]этил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4амин.Step 1. 7-bromo-2-(2-[hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5-yl]ethyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4amine.
В 30-мл герметичную пробирку вносили 7-бром-2-(2-бромэтил)-2Н-пиразоло-[3,4-с]хинолин-4амин (400 мг, 1,08 ммоль, 1 экв.), K2CO3 (298,8 мг, 2,16 ммоль, 2 экв.), KI (17,9 мг, 0,11 ммоль, 0,1 экв.) и гексагидро-1H-фуро[3,4-с]пиррол (611,6 мг, 5,40 ммоль, 5 экв.) в ACN (10 мг, 0,24 ммоль, 0,225 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 65°С. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (0-10%) с получением 7-бром-2-(2-[гексагидро-1Н-фуро[3,4-с]пиррол-5-ил]этил)2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (120 мг, 28%) в виде твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=402.1.7-bromo-2-(2-bromoethyl)-2H-pyrazolo-[3,4-c]quinoline-4amine (400 mg, 1.08 mmol, 1 eq.), K 2 CO 3 (298.8 mg, 2.16 mmol, 2 eq.), KI (17.9 mg, 0.11 mmol, 0.1 eq.) and hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrole ( 611.6 mg, 5.40 mmol, 5 eq) in ACN (10 mg, 0.24 mmol, 0.225 eq). The resulting solution was stirred for 16 hours at 65°C. The reaction mixture was filtered and the filtrate was concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column using dichloromethane/methanol (0-10%) to give 7-bromo-2-(2-[hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5-yl]ethyl) 2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (120 mg, 28%) as a solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =402.1.
Стадия 2. 2-(2-[гексагидро-1H-фуро[3,4-с]пиррол-5-ил]этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амин.Step 2. 2-(2-[hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5-yl]ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3.4c] quinoline-4-amine.
В 30-мл герметичную пробирку вносили 7-бром-2-(2-[гексагидро-1Н-фуро[3,4-с]пиррол-5-ил]этил)2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин (120 мг, 0,30 ммоль, 1 экв.), Na2CO3 (63,2 мг, 0,60 ммоль, 2 экв.), 3(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (115,8 мг, 0,60 ммоль, 2 экв.), Pd(PPh3)4 (34,5 мг, 0,03 ммоль, 0,1 экв.) в диоксане (4 мл) и H2O (1 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 80°С. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем, используя смесь дихлорметан/метанол (0-10%). Неочищенный продукт снова очищали препаративной HPLC с использованием следующих условиях: колонка: XBridge Shield RP18 OBD, колонка 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза А: вода (10 мМ NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 15 до 40% В в течение 7,5 мин; 210/254 нм; RT: 6,90 мин. Это обеспечило получение 2-(2-[гексагидро-1 H-фуро [3,4-с]пиррол-5 -ил]этил)-7-(1 H-пиразол-3 -ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (27,9 мг, 24%) в виде твердого вещества. 1Н-ЯМР: (300 МГц, DMSO-d6, ppm): δ 13.28-12.85 (m, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.91-7.63 (m, 4H), 6.77-6.74 (m, 3H), 4.56-4.51 (m, 2H), 3.72-3.67 (m, 2H), 3.35-3.31 (m, 2H), 2.95-2.91 (m, 2H), 2.67-2.55 (m, 4H), 2.40-2.36 (m, 2H). Методы LC: колонка: Kinetex EVO 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,03% NH3H2O; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,60 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. m/z [М+Н]+=390.2. LC RT: 1,030 мин.7-bromo-2-(2-[hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5-yl]ethyl)2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4 -amine (120 mg, 0.30 mmol, 1 eq.), Na 2 CO 3 (63.2 mg, 0.60 mmol, 2 eq.), 3 (tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane-2- yl)-1H-pyrazole (115.8 mg, 0.60 mmol, 2 eq.), Pd(PPh 3 ) 4 (34.5 mg, 0.03 mmol, 0.1 eq.) in dioxane (4 ml ) and H 2 O (1 ml). The resulting solution was stirred for 16 h at 80°C. The resulting mixture was cooled to room temperature and concentrated. The residue was purified on a silica gel column using dichloromethane/methanol (0-10%). The crude product was again purified by preparative HPLC using the following conditions: column: XBridge Shield RP18 OBD, column 19x250 mm, 10 µm; mobile phase A: water (10 mM NH4HCO3), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 15 to 40% B over 7.5 minutes; 210/254 nm; RT: 6.90 min. This provided 2-(2-[hexahydro-1H-furo[3,4-c]pyrrol-5-yl]ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2Hpyrazolo[3,4- c]quinoline-4-amine (27.9 mg, 24%) as a solid. 1 H-NMR: (300 MHz, DMSO-d 6 , ppm): δ 13.28-12.85 (m, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.91-7.63 (m, 4H), 6.77-6.74 (m, 3H ), 4.56-4.51 (m, 2H), 3.72-3.67 (m, 2H), 3.35-3.31 (m, 2H), 2.95-2.91 (m, 2H), 2.67-2.55 (m, 4H), 2.40-2.36 (m, 2H). LC Methods: Column: Kinetex EVO 3.0x50 mm, particles 2.6 µm; mobile phase A: water with 0.03% NH3H2O; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.60 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. m/z [M+H] + =390.2. LC RT: 1.030 min.
- 50 042018- 50 042018
Пример 31. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}5-фторпиридин- 2-карбоксамида.Example 31 Preparation of N-{2-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}5-fluoropyridin-2- carboxamide.
Стадия 1. трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-карбамат.Step 1: tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-carbamate.
К раствору 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (3,00 г, 7,96 ммоль) в DMF (22,73 мл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (7,78 г, 23,87 ммоль) с последующим трет-бутил (2-бромэтил)карбаматом (1,961 г, 8,75 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (300 мл) и H2O (300 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (300 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали.Cesium carbonate (7 .78 g, 23.87 mmol) followed by tert-butyl (2-bromoethyl) carbamate (1.961 g, 8.75 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 20 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (300 ml) and H2O (300 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (100 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (300 ml), dried over Na 2 SO 4 and filtered.
Добавляли целит и смесь концентрировали в вакууме. Этот продукт в сухом виде загружали на колонку и очищали флэш-хроматографией (80 г силикагеля с картриджем с твердой загрузкой 25 г; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (2,06 г, 64%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц,Celite was added and the mixture concentrated in vacuo. This dry product was loaded onto a column and purified by flash chromatography (80 g silica gel with 25 g solid-load cartridge; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give t-butyl (2-(4-amino -7-bromo-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (2.06 g, 64%) as a white solid. 1 H NMR (400 MHz,
DMSO-d6) δ 8.67 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.30 (dd, J=8.3, 2.0 Гц, 1H), 7.05 (br t, J=5.4 Гц, 1H), 6.98 (br s, 2H), 4.45 (br t, J=6.1 Гц, 2H), 3.48 (q, J=6.0 Гц, 2H), 1.33 (s, 9H); LC-MS m/z 406/408 [M+H]+.DMSO-d 6 ) δ 8.67 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.30 (dd, J=8.3, 2.0 Hz, 1H) , 7.05 (br t, J=5.4 Hz, 1H), 6.98 (br s, 2H), 4.45 (br t, J=6.1 Hz, 2H), 3.48 (q, J=6.0 Hz, 2H), 1.33 (s , 9H); LC-MS m/z 406/408 [M+H]+.
Стадия 2. трет-бутил (2-(4-αмино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пирαн-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамат.Step 2. tert-butyl 2-yl)ethyl)carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (1,01 г, 2,49 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-Ш-пиразола (1,037 г, 3,73 ммоль) и карбоната цезия (2,430 г, 7,46 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (22,37 мл) и H2O (2,486 мл). Полученную смесь барботировали N2 в течение 15 мин, затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (0,091 г, 0,124 ммоль). Смесь барботировали N2 в течение 1 мин, затем перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (300 мл), промывали H2O (150 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (150 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (80 г силикагеля; линейный градиент 010% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2)-ил)-1H-пиразол5-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (1,2 г, колич.) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.71 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.62 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.57 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.8 Гц, 1H), 7.07 (br t, J=5.7 Гц, 1H), 6.89 (br s, 2H), 6.48 (d, J=1.7 Гц, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Гц, 1H), 4.48 (br t, J=6.1 Гц, 2Н), 4.07-4.01 (m, 1H), 3.61-3.54 (m, 1H), 3.50 (q, J=6.0 Гц, 2Н), 2.47-2.36 (m, 1H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.79 (br d, J=13.4 Гц, 1H), 1.64-1.48 (m, 3H), 1.35 (s, 9Н); LC-MS m/z 478 [М+Н]+.A mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (1.01 g, 2.49 mmol), 1-( tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-III-pyrazole (1.037 g, 3.73 mmol) and cesium carbonate (2.430 g, 7.46 mmol) was evacuated and refilled with N 2 , then 1,4-dioxane (22.37 ml) and H 2 O (2.486 ml) were added. The resulting mixture was sparged with N 2 for 15 min, then [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (0.091 g, 0.124 mmol) was added. The mixture was sparged with N2 for 1 min, then stirred at 100°C for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (300 ml), washed with H2O (150 ml) and saturated aqueous NaCl (150 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (80 g silica gel; linear gradient 010% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give tert-butyl (2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2)- yl)-1H-pyrazol5-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (1.2 g, quant.) as a yellow solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.71 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.62 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.8 Hz, 1H), 7.07 (br t, J=5.7 Hz, 1H), 6.89 (br s, 2H), 6.48 (d, J=1.7 Hz, 1H ), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Hz, 1H), 4.48 (br t, J=6.1 Hz, 2Н), 4.07-4.01 (m, 1H), 3.61-3.54 (m, 1H), 3.50 (q , J=6.0 Hz, 2Н), 2.47-2.36 (m, 1H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.79 (br d, J=13.4 Hz, 1H), 1.64-1.48 (m, 3H), 1.35 (s, 9H); LC-MS m/z 478 [M+H] + .
Стадия 3. 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA.Step 3 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA.
К раствору трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (1,2 г, 2,5 ммоль) в CH2Cl2 (6,17 мл) добавляли TFA (6,17 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали для удаления примерно половины объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (75 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x10 мл) с получением 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (1,121 г, 87%) в виде не совсем белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.69-12.94 (m, 1H), 9.85-9.68 (m, 1H), 9.38-9.22 (m, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.17-8.13 (m, 2H), 8.09 (br s, 2H), 7.94 (d, J=7.2 Гц, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.80 (d, J=2.1 Гц, 1H), 4.77 (t, J=5.7 Гц, 2H), 3.55-3.49 (m, 2H); LC-MS m/z 294 [M+H]+.To a solution of tert-butyl (2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4-c]quinoline-2 -yl)ethyl)carbamate (1.2 g, 2.5 mmol) in CH2Cl2 (6.17 ml) TFA (6.17 ml) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was concentrated to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (75 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x10 ml) to give 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4 α-amine, 2 TFA (1.121 g, 87%) as an off-white solid. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.69-12.94 (m, 1H), 9.85-9.68 (m, 1H), 9.38-9.22 (m, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.17-8.13 ( m, 2H), 8.09 (br s, 2H), 7.94 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.80 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.77 (t, J =5.7 Hz, 2H), 3.55-3.49 (m, 2H); LC-MS m/z 294 [M+H] + .
Стадия 4. N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}-5фторпиридин-2-карбоксамид.Step 4 N-{2-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}-5fluoropyridine-2-carboxamide.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пирαзоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (40 мг,To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (40 mg,
- 51 042018- 51 042018
0,077 ммоль) и 5-фторпиколиновой кислоты (10,8 мг, 0,077 ммоль) в DMF (384 мкл) при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (53,5 мкл, 0,307 ммоль), а затем HATU (29,2 мг, 0,077 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,2 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удержание при 2% В, 2-42% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-5-фторпиколинамид, 2 TFA (15,8 мг, 31%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.06 (br t, J=5.8 Гц, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.61 (d, J=2.5 Гц, 1H), 8.12-8.02 (m, 3H), 7.90-7.77 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 4.71 (br t, J=5.9 Гц, 2H), 3.94-3.86 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 417.3 [М+Н]+; RT: 1.13 мин.0.077 mmol) and 5-fluoropicolic acid (10.8 mg, 0.077 mmol) in DMF (384 µl) N,N-diisopropylethylamine (53.5 µl, 0.307 mmol) was added at room temperature followed by HATU (29.2 mg , 0.077 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.2 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 2% B, 2-42% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2- yl)ethyl)-5-fluoropicolinamide, 2 TFA (15.8 mg, 31%). 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.06 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.61 (d, J=2.5 Hz, 1H), 8.12-8.02 (m, 3H), 7.90-7.77 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 4.71 (br t, J=5.9 Hz, 2H), 3.94-3.86 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 417.3 [M+H]+; RT: 1.13 min.
Альтернативная методика получения N-{2-[4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло-[3,4с]хинолин-2-ил]этил}-5-фторпиридин-2-карбоксамида.Alternative procedure for the preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo-[3,4c]quinolin-2-yl]ethyl}-5-fluoropyridine-2-carboxamide .
К раствору 5-фторпиколиновой кислоты (29,8 мг, 0,211 ммоль) в DMF (479 мкл) при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (66,8 мкл, 0,384 ммоль) с последующим HATU (72,9 мг, 0,192 ммоль). Этот раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем по каплям добавляли к раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA (100 мг, 0,192 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (100 мкл, 0,575 ммоль) в DMF (479 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и H2O (50 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (50 мл). Объединенные органические слои промывали 10% водн. LiCl (2x50 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (50 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт помещали в МеОН-CH2Cl2, добавляли целит и смесь концентрировали в вакууме. Этот продукт загружали на колонку в сухом виде и очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля RediSep Gold с картриджем с твердой загрузкой 5 г; линейный градиент 0-20% МеОН-CH2Cl2) с получением N-(2-(4-амино-7(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-5-фторпиколинамида (33,7 мг, 42%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.33-12.77 (m, 1H), 9.04 (t, J=5.9 Гц, 1H), 8.69 (br s, 1H), 8.62 (d, J=2.7 Гц, 1H), 8.09 (dd, J=8.7, 4.7 Гц, 1H), 7.93-7.84 (m, 3H), 7.82-7.64 (m, 1H), 7.64-7.51 (m, 1H), 6.84-6.76 (m, 1H), 6.74 (br s, 2H), 4.65 (t, J=6.2 Гц, 2Н), 3.88 (q, J=6.2 Гц, 2Н); LC-MS m/z 417 [M+H]+.To a solution of 5-fluoropicolic acid (29.8 mg, 0.211 mmol) in DMF (479 µl) at room temperature was added N,N-diisopropylethylamine (66.8 µl, 0.384 mmol) followed by HATU (72.9 mg, 0.192 mmol ). This solution was stirred at room temperature for 5 min, then added dropwise to a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4 -amine, 2 TFA (100 mg, 0.192 mmol) and N,N-diisopropylethylamine (100 μl, 0.575 mmol) in DMF (479 μl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was diluted with EtOAc (50 ml) and H2O (50 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (50 ml). The combined organic layers were washed with 10% aq. LiCl (2x50 ml) and saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was taken up in MeOH-CH 2 Cl 2 , celite was added and the mixture was concentrated in vacuo. This product was loaded onto the column dry and purified by flash chromatography (24 g RediSep Gold silica gel with 5 g solid load cartridge; linear gradient 0-20% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give N-(2-(4- amino-7(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-5-fluoropicolinamide (33.7 mg, 42%) as a white solid. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.33-12.77 (m, 1H), 9.04 (t, J=5.9 Hz, 1H), 8.69 (br s, 1H), 8.62 (d, J=2.7 Hz, 1H ), 8.09 (dd, J=8.7, 4.7 Hz, 1H), 7.93-7.84 (m, 3H), 7.82-7.64 (m, 1H), 7.64-7.51 (m, 1H), 6.84-6.76 (m, 1H ), 6.74 (br s, 2H), 4.65 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.88 (q, J=6.2 Hz, 2H); LC-MS m/z 417 [M+H] + .
Соединения по примерам 32-101 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 31, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).The compounds of Examples 32-101 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in Example 31 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 52 042018- 52 042018
- 53 042018- 53 042018
- 54 042018- 54 042018
- 55 042018- 55 042018
- 56 042018- 56 042018
- 57 042018- 57 042018
- 58 042018- 58 042018
-59042018-59042018
- 60 042018- 60 042018
- 61 042018- 61 042018
- 62 042018- 62 042018
- 63 042018- 63 042018
Пример 102. Получение 2-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}2,3-дигидро-1 H-изоиндол-1 -он.Example 102 Preparation of 2-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}2,3-dihydro- 1 H-isoindole-1-one.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (50 мг, 0,096 ммоль) в DMF (479 мкл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (84 мкл, 0,48 ммоль) и метил 2(бромметил)бензоат (22,0 мг, 0,096 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 17 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS, используя следующие условия: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удержание при 0% В, 0-40% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов MS и UV.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (50 mg, 0.096 mmol) in DMF ( 479 µl) N,N-diisopropylethylamine (84 µl, 0.48 mmol) and methyl 2(bromomethyl)benzoate (22.0 mg, 0.096 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 17 h. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 20 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS and UV signals.
- 64 042018- 64 042018
Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)изоиндолuн-1-она (6,5 мг, 16%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.86 (br d, J=7.7 Гц, 1H), 7.767.52 (m, 5H), 7.48-7.43 (m, 1H), 6.72 (br s, 1H), 6.82-6.70 (m, 2H), 4.73 (br t, J=5.8 Гц, 2Н), 4.33 (s, 2H), 4.12 (br t, J=5.5 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 410.0 [М+Н]+; RT: 1.11 мин.Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2- yl)ethyl)isoindolin-1-one (6.5 mg, 16%). 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.86 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.767.52 (m, 5H), 7.48-7.43 (m, 1H), 6.72 (br s, 1H), 6.82-6.70 (m, 2H), 4.73 (br t, J=5.8 Hz, 2H), 4.33 (s, 2H), 4.12 (br t , J=5.5 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: Waters XBridge C18 column, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 410.0 [M+H]+; RT: 1.11 min.
Пример 103. Получение 2-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}6-фтор-2,3-дигидро-1 H-изоиндол-1 -она.Example 103 Preparation of 2-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}6-fluoro-2, 3-dihydro-1H-isoindol-1-one.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пирαзоло[3,4-с]хинолuн-4-аминα, 2 TFA (50 мг, 0,096 ммоль) в DMF (479 мкл) добавляли N,N-диизопропuлэтuлaмин (84 мкл, 0,48 ммоль) и метил 2(бромметил)-5-фторбензоат (23,7 мг, 0,096 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакция разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS, используя следующие условия: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частиц 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: выдержка 0 минут при 4% В, 4-44% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов МС. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-6фторизоиндолин-1-она, TFA (16,1 мг, 30%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.96 (s, 1H), 8.14-8.05 (m, 1H), 8.02 (br d, J=8.3 Гц, 1H), 7.89-7.76 (m, 2H), 7.61 (dd, J=8.3, 4.4 Гц, 1H), 7.47-7.33 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 4.81 (br t, J=5.6 Гц, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.14 (br t, J=5.5 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 428.3 [М+Н]+; RT: 1,35 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amineα, 2 TFA (50 mg, 0.096 mmol) in DMF ( 479 μl) N,N-diisopropylethylamine (84 μl, 0.48 mmol) and methyl 2(bromomethyl)-5-fluorobenzoate (23.7 mg, 0.096 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h. The reaction was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18 , 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 4% B, 4-44% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2- yl)ethyl)-6fluoroisoindolin-1-one, TFA (16.1 mg, 30%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.96 (s, 1H), 8.14-8.05 (m, 1H), 8.02 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.89-7.76 (m, 2H), 7.61 (dd, J=8.3, 4.4 Hz, 1H), 7.47-7.33 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 4.81 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.14 (br t, J=5.5 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 428.3 [M+H] + ; RT: 1.35 min.
Пример 104. Получение 2-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}5 -хлор-2,3-дигидро-1 H-изоиндол- 1-она.Example 104 Preparation of 2-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}5-chloro-2, 3-dihydro-1H-isoindol-1-one.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пuразоло[3,4-с]хинолuн-4-амина, 2 TFA (50 мг, 0,096 ммоль) в DMF (479 мкл) добавляли N,N-дuизопропилэтuламин (84 мкл, 0,479 ммоль) и метил 2(бромметил)-4-хлорбензоат (25,3 мг, 0,096 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы размером 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 11% В, 11-51% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов МС. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)5-хлоризоиндолин-1-она (11,9 мг, 28%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.77 (s, 1H), 7.93 (br s, 1H), 7.89 (br d, J=8.3 Гц, 1H), 7.77-7.59 (m, 4H), 7.50 (br d, J=8.0 Гц, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.74 (br t, J=5.5 Гц, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.10 (br t, J=5.4 Гц, 2Н). Аналитический метод LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (50 mg, 0.096 mmol) in DMF ( 479 µl) N,N-diisopropylethylamine (84 µl, 0.479 mmol) and methyl 2(bromomethyl)-4-chlorobenzoate (25.3 mg, 0.096 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column : XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 11% B, 11-51% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2- yl)ethyl)5-chloroisoindolin-1-one (11.9 mg, 28%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (s, 1H), 7.93 (br s, 1H), 7.89 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.77-7.59 (m, 4H), 7.50 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.74 (br t, J=5.5 Hz, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.10 (br t, J=5.4 Hz, 2H ). Analytical method LC/MS: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: from 0
- 65 042018 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 444.1 [М+Н]+; RT: 1,37 мин.- 65 042018 to 100% B for 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 444.1 [M+H]+; RT: 1.37 min.
Пример 105. Получение 2-(2-{[(2-метилфенил)метил]амино}этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина.Example 105 Preparation of 2-(2-{[(2-methylphenyl)methyl]amino}ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2Hpyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (35 мг, 0,067 ммоль) в DMF (336 мкл) добавляли 2-метилбензальдегид (10,1 мкл, 0,087 ммоль), а затем триацетоксиборгидрид натрия (42,7 мг, 0,201 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (100 мкл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-60% В в течение 25 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-((2-метилбензил)амино)этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина, 2 TFA (17,5 мг, 40%). Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H), 8.16-8.10 (m, 2H), 7.92 (br d, J=8.3 Гц, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.44 (br d, J=7.2 Гц, 1H), 7.34-7.29 (m, 1H), 7.29-7.24 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.91 (br t, J=5.6 Гц, 2H), 4.28 (s, 2H), 3.76-3.69 (m, 2H), 2.36 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В втечение 3 мин, затем удерживание в течение 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 398.1 [М+Н]+; RT: 1,08 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (35 mg, 0.067 mmol) in DMF ( 336 µl) 2-methylbenzaldehyde (10.1 µl, 0.087 mmol) was added followed by sodium triacetoxyborohydride (42.7 mg, 0.201 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H2O (100 μl) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-60% B for 25 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-((2-methylbenzyl)amino)ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3.4c] quinoline-4-amine, 2 TFA (17.5 mg, 40%). Ή NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.02 (s, 1H), 8.16-8.10 (m, 2H), 7.92 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.44 (br d, J=7.2 Hz, 1H), 7.34-7.29 (m, 1H), 7.29-7.24 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.91 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 4.28 (s, 2H), 3.76-3.69 (m, 2H), 2.36 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 398.1 [M+H]+; RT: 1.08 min.
Соединения по примерам 106-112 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным для примера 105, из соответствующих исходных материалов. Для примеров 106 и 108 триэтиламин (2,5 экв.) добавляли к исходному материалу перед добавлением других реагентов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм).The compounds of examples 106-112 were prepared according to synthetic procedures similar to those described for example 105 from the appropriate starting materials. For examples 106 and 108, triethylamine (2.5 eq.) was added to the starting material before adding other reagents. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 66 042018- 66 042018
- 67 042018- 67 042018
Пример 113. Получение №{2-[4-амино-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]этил}метансульфонамида.Example 113 Preparation of N{2-[4-amino-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl}methanesulfonamide.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (35 мг, 0,067 ммоль) в DMF (224 мкл) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (37,4 мкл, 0,269 ммоль), а затем метансульфонилхлорид (8,1 мг, 0,070 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Фракции собирали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания. Продукт дополнительно очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 13% В, 13-36% В в течение 25 мин, затем 2-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании UV-сигналов. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил)этил)метансульфонамида, TFA (6,1 мг, 19%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.97 (s, 1H), 8.16-8.09 (m, 2H), 7.90 (br d, J=8.5 Гц, 1H), 7.82 (br s, 1H), 7.33 (br t, J=5.8 Гц, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.62 (br t, J=5.6 Гц, 2H), 3.60-3.56 (m, 2H), 2.90 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: Колонка: Waters XBridge C18, 2,1x 50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 372 [М+Н]+; RT: 0,94 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (35 mg, 0.067 mmol) in DMF ( 224 µl) triethylamine (37.4 µl, 0.269 mmol) was added at room temperature followed by methanesulfonyl chloride (8.1 mg, 0.070 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 20 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fractions were collected based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation. The product was further purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 13% B, 13-36% B for 25 min, then 2 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was started based on UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl) ethyl)methanesulfonamide, TFA (6.1 mg, 19%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.97 (s, 1H), 8.16-8.09 (m, 2H), 7.90 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 7.82 (br s, 1H), 7.33 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.62 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 3.60-3.56 (m, 2H), 2.90 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: Column: Waters XBridge C18, 2.1x 50 mm, 1.7 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 372 [M+H]+; RT: 0.94 min.
Пример 114. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]этил} бензолсульфонамида.Example 114 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl}benzenesulfonamide.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (51 мг, 0,098 ммоль) в DMF (326 мкл) при 0°С добавляли по каплям триэтиламин (54,5 мкл, 0,391 ммоль), затем бензолсульфонилхлорид (13,1 мкл, 0,103 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 11% В, 11-51% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)бензолсульфонамида (34,3 мг, 80%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.59 (s, 1H), 7.92-7.88 (m, 2H), 7.87-7.80 (m, 1H), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.71-7.60 (m, 2H), 7.58-7.48 (m, 3H), 6.72 (d, J=2.0 Гц, 1H), 6.686.52 (m, 2Н), 4.49 (t, J=6.1 Гц, 2Н), 3.40 (br t, J=6.1 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 434.3 [М+Н]+; RT: 1 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (51 mg, 0.098 mmol) in DMF ( 326 μl) at 0° C., triethylamine (54.5 μl, 0.391 mmol) was added dropwise followed by benzenesulfonyl chloride (13.1 μl, 0.103 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 11% B, 11-51% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl) ethyl)benzenesulfonamide (34.3 mg, 80%). 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.59 (s, 1H), 7.92-7.88 (m, 2H), 7.87-7.80 (m, 1H), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.71-7.60 (m, 2H), 7.58-7.48 (m, 3H), 6.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.686.52 (m, 2H), 4.49 (t, J=6.1 Hz, 2H), 3.40 ( br t, J=6.1 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 434.3 [M+H]+; RT: 1 min.
- 68 042018- 68 042018
Пример 115. Получение 3-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}1 -фенил мочевиныExample 115 Preparation of 3-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}1-phenyl urea
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (40 мг, 0,077 ммоль) в DMF (384 мкл) при 0°С добавляли триэтиламин (42,8 мкл, 0,307 ммоль), а затем фенилизоцианат (8,3 мкл, 0,077 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли Н2О (0,2 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 8% В, 8-48% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 1-(2-(4амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-3-фенилмочевины (16,5 мг, 52%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.93 (br d, J=8.0 Гц, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.72-7.66 (m, 1H), 7.62 (br d, J=8.0 Гц, 1H), 7.37 (br d, J=7.7 Гц, 2Н), 7.21 (t, J=8.0 Гц, 2Н), 6.89 (t, J=7.3 Гц, 1H), 6.836.75 (m, 2H), 6.73 (d, J=1.7 Гц, 1H), 6.33-6.29 (m, 1H), 4.53 (br t, J=5.5 Гц, 2Н), 3.72-3.66 (m, 2H). Колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 413.1 [M+H]+; RT: 1.14 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (40 mg, 0.077 mmol) in DMF ( 384 μl) at 0° C., triethylamine (42.8 μl, 0.307 mmol) was added followed by phenyl isocyanate (8.3 μl, 0.077 mmol). The reaction mixture was stirred at 0°C for 1 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.2 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 8% B, 8-48% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 1-(2-(4amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl) ethyl)-3-phenylurea (16.5 mg, 52%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.93 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.72-7.66 ( m, 1H), 7.62 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.37 (br d, J=7.7 Hz, 2H), 7.21 (t, J=8.0 Hz, 2H), 6.89 (t, J=7.3 Hz, 1H), 6.836.75 (m, 2H), 6.73 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.33-6.29 (m, 1H), 4.53 (br t, J=5.5 Hz, 2H), 3.72- 3.66(m, 2H). Column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 413.1 [M+H]+; RT: 1.14 min.
Пример 116. Получение 1-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}3,3-диметил мочевины.Example 116 Preparation of 1-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}3,3-dimethyl urea .
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (40 мг, 0,077 ммоль) в DMF (384 мкл) при 0°С добавляли триэтиламин (42,8 мкл, 0,307 ммоль), а затем диметилкарбамил хлорид (7,1 мкл, 0,077 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, затем при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,2 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 1% В, 1-41% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинала на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 3-(2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил)этил)-1,1-диметилмочевины (20,5 мг, 73%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.64 (s, 1H), 7.94 (br d, J=8.3 Гц, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.76-7.54 (m, 2Н), 6.73 (br s, 3H), 6.50 (br t, J=5.4 Гц, 1H), 4.47 (br t, J=5.9 Гц, 2Н), 3.57-3.52 (m, 2H), 2.75 (s, 6H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 365.3 [М+Н]+; RT: 0,89 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (40 mg, 0.077 mmol) in DMF ( 384 μl) at 0° C., triethylamine (42.8 μl, 0.307 mmol) was added followed by dimethylcarbamyl chloride (7.1 μl, 0.077 mmol). The reaction mixture was stirred at 0°C for 30 min, then at room temperature for 1.5 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.2 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 1% B, 1-41% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was started based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 3-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl) ethyl)-1,1-dimethylurea (20.5 mg, 73%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.64 (s, 1H), 7.94 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.76-7.54 (m, 2H), 6.73 ( br s, 3H), 6.50 (br t, J=5.4 Hz, 1H), 4.47 (br t, J=5.9 Hz, 2Н), 3.57-3.52 (m, 2H), 2.75 (s, 6H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 365.3 [M+H]+; RT: 0.89 min.
- 69 042018- 69 042018
Пример 117. Получение фенил N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло-[3,4-с]хинолин-2ил]этил} карбаматаExample 117 Preparation of Phenyl N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo-[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl} carbamate
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (40 мг, 0,077 ммоль) в DMF (384 мкл) при 0°С добавляли триэтиламин (42,8 мкл, 0,307 ммоль), а затем фенилхлорформиат (9,6 мкл, 0,077 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,2 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 5% В, 5-45% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением фенил (2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата, TFA (4,9 мг, 12%). Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.95-9.67 (m, 1H), 9.34-9.20 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.15 (br d, J=8.5 Гц, 1H), 8.12 (br s, 1H), 7.96 (br t, J=5.9 Гц, 1H), 7.92 (br d, J=8.0 Гц, 1H), 7.82 (br s, 1H), 7.30 (br t, J=7.6 Гц, 2H), 7.19-7.14 (m, 1H), 7.02 (br d, J=7.7 Гц, 2Н), 6.80 (s, 1H), 4.64 (br t, J=5.4 Гц, 2H), 3.70-3.65 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: 0-100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1,0 мл/мин; детекция: UV при 220 нм. m/z 414.4 [М+Н]+; RT: 1,26 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (40 mg, 0.077 mmol) in DMF ( 384 μl) at 0° C., triethylamine (42.8 μl, 0.307 mmol) was added followed by phenyl chloroformate (9.6 μl, 0.077 mmol). The reaction mixture was stirred at 0°C for 30 min. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.2 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 5% B, 5-45% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give phenyl (2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl )ethyl)carbamate, TFA (4.9 mg, 12%). Ή NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.95-9.67 (m, 1H), 9.34-9.20 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.15 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 8.12 (br s, 1H), 7.96 (br t, J=5.9 Hz, 1H), 7.92 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.82 (br s, 1H), 7.30 (br t, J=7.6 Hz, 2H), 7.19-7.14 (m, 1H), 7.02 (br d, J=7.7 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.64 (br t, J=5.4 Hz, 2H), 3.70-3.65 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0-100% B over 3 min, then hold for 0.75 min at 100% B; flow rate: 1.0 ml/min; detection: UV at 220 nm. m/z 414.4 [M+H]+; RT: 1.26 min.
Пример 118. Получение трет-бутил-N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил]этил}карбамата.Example 118 Preparation of tert-butyl N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl]ethyl}carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (39 мг, 0,096 ммоль), 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (37,3 мг, 0,192 ммоль) и карбоната цезия (94 мг, 0,29 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (864 мкл) и H2O (96 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли 1,1'-бис(ди-третбутилфосфино)ферроцен-палладий дихлорид (6,26 мг, 9,60 мкмоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (30 мл) и промывали H2O (30 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (30 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удержание при 7% В, 7-45% В в течение 25 мин, затем 7-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания. Материал дополнительно очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условиях: колонка: XBridge Phenyl, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 9% В, 9-49% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушилиA mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (39 mg, 0.096 mmol), 3-(4.4, 5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (37.3 mg, 0.192 mmol) and cesium carbonate (94 mg, 0.29 mmol) were evacuated and refilled with N2, then 1,4-dioxane (864 µl) and H2O (96 µl) were added. The resulting mixture was purged with N2 for 10 min, then 1,1'-bis(di-tert-butylphosphino)ferrocene-palladium dichloride (6.26 mg, 9.60 µmol) was added. The mixture was purged with N2 for 1 min, then sealed and stirred at 100°C for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (30 mL) and washed with H2O (30 mL). The aqueous layer was extracted with EtOAc and the combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (30 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 7% B, 7-45% B for 25 min, then 7 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation. The material was further purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge Phenyl, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 9% B, 9-49% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried.
- 70 042018 путем центробежного выпаривания с получением трет-бутил (2-(4-амuно-7-(1H-пuразол-3-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2)-ил)этил)карбамата (5,7 мг, 15%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1H), 7.97-7.88 (m, 2H), 7.73-7.67 (m, 1H), 7.64 (br d, J=6.6 Гц, 1H), 7.05 (br d, J=4.7 Гц, 1H), 7.02-6.83 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 4.47 (br t, J=5.0 Гц, 2H), 3.53-3.46 (m, 2H), 1.34 (s, 9H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 394.1 [М+Н]+; RT: 1,18 мин.- 70 042018 by centrifugal evaporation to obtain tert-butyl (2- (4-amino-7- (1H-pyrazol-3-yl) -2H pyrazolo [3,4-c] quinolin-2) -yl) ethyl) carbamate ( 5.7 mg, 15%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1H), 7.97-7.88 (m, 2H), 7.73-7.67 (m, 1H), 7.64 (br d, J=6.6 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=4.7 Hz, 1H), 7.02-6.83 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 4.47 (br t, J=5.0 Hz, 2H), 3.53-3.46 (m, 2H), 1.34(s, 9H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 394.1 [M+H]+; RT: 1.18 min.
Пример 119. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}N-метилацетамида.Example 119 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}N-methylacetamide.
Стадия 1. трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)(метил)карбамат.Step 1: tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)(methyl)carbamate.
К раствору 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (513 мг, 1,36 ммоль) в DMF (4534 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (1330 мг, 4,08 ммоль), затем трет-бутил (2хлорэтил)(метил)карбамат (290 мг, 1,50 ммоль) и бромид лития (11,8 мг, 0,136 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч, затем при 50°С в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (100 мл), промывали 10% водн. LiCl (2x50 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Добавляли целит, и смесь концентрировали в вакууме. Этот материал загружали на колонку в сухом виде и очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля с картриджем для твердой загрузки 25 г; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)(метил)карбамата (321 мг, 56%) в виде желтой пены. ЯМР соответствует соотношению ротамеров ~2:1. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.70-8.64 (m, 1H), 7.85 (br d, J=8.3 Гц, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.30 (dd, J=8.4, 2.0 Гц, 1H), 6.95 (br s, 2H), 4.54 (t, J=5.5 Гц, 2Н), 3.70 (br d, J=3.0 Гц, 2Н), 2.79-2.71 (m, 3H), 1.29 (br s, 3H), 1.01 (s, 6H). LC-MS m/z 420/422 [M+H]+.Cesium carbonate (1330 mg, 4 08 mmol), then tert-butyl (2chloroethyl)(methyl)carbamate (290 mg, 1.50 mmol) and lithium bromide (11.8 mg, 0.136 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 19 h, then at 50°C for 16 h. The reaction mixture was diluted with EtOAc (100 ml), washed with 10% aq. LiCl (2x50 ml) and saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over Na 2 SO 4 and filtered. Celite was added and the mixture concentrated in vacuo. This material was loaded onto the column dry and purified by flash chromatography (40 g silica gel with 25 g solid loading cartridge; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give t-butyl (2-(4-amino -7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)(methyl)carbamate (321 mg, 56%) as a yellow foam. NMR corresponds to the ratio of rotamers ~2:1. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.70-8.64 (m, 1H), 7.85 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.30 (dd , J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.95 (br s, 2H), 4.54 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.70 (br d, J=3.0 Hz, 2H), 2.79-2.71 (m, 3H), 1.29 (br s, 3H), 1.01 (s, 6H). LC-MS m/z 420/422 [M+H] + .
Стадия 2. трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)(метил)карбамат.Step 2. tert-Butyl 2-yl)ethyl)(methyl)carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-(метил)карбамата (320 мг, 0,761 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Hпиразола (318 мг, 1,14 ммоль) и карбоната цезия (744 мг, 2,28 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (6852 мкл) и H2O (761 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (27,9 мг, 0,038 ммоль). Смесь барботировали N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл), промывали H2O (100 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (100 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро2Н-пuран-2)-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пuразоло[3,4-с]хuнолuн-2-uл)этuл)(метuл)карбамата (305 мг, 81%) в виде желтой пены. ЯМР соответствует соотношению ротамеров ~2:1. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.74-8.66 (m, 1H), 8.01 (br d, J=7.9 Гц, 1H), 7.62 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.57 (d, J=1.8 Гц, 1H), 7.31 (dd, J=8.0, 1.8 Гц, 1H), 6.85 (br s, 2H), 6.48 (s, 1H), 5.30 (dd, J=9.9, 2.0 Гц, 1H), 4.57 (br t, J=5.5 Гц, 2H), 4.08-4.00 (m, 1H), 3.73 (br s, 2H), 3.63-3.53 (m, 1H), 2.77-2.69 (m, 3H), 2.46-2.37 (m, 1H), 2.01-1.89 (m, 1H), 1.79 (br d, J=12.3 Гц, 1H), 1.63-1.48 (m, 3H), 1.32 (br s, 3H), 1.13-1.02 (m, 6H). LC-MS m/z 492 [M+H]+.A mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-(methyl)carbamate (320 mg, 0.761 mmol), 1-( tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1Hpyrazole (318 mg, 1.14 mmol) and cesium carbonate (744 mg, 2.28 mmol) was evacuated and refilled with N 2 , then 1,4-dioxane (6852 μl) and H 2 O (761 μl) were added. The resulting mixture was purged with N 2 for 10 min, then [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (27.9 mg, 0.038 mmol) was added. The mixture was sparged with N 2 for 1 min, then sealed and stirred at 100° C. for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (100 ml), washed with H 2 O (100 ml) and saturated aqueous NaCl (100 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give t-butyl (2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro2H-puran-2)- yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)(methyl)carbamate (305 mg, 81%) as a yellow foam. NMR corresponds to the ratio of rotamers ~2:1. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74-8.66 (m, 1H), 8.01 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.62 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.31 (dd, J=8.0, 1.8 Hz, 1H), 6.85 (br s, 2H), 6.48 (s, 1H), 5.30 (dd, J=9.9, 2.0 Hz, 1H) , 4.57 (br t, J=5.5 Hz, 2H), 4.08-4.00 (m, 1H), 3.73 (br s, 2H), 3.63-3.53 (m, 1H), 2.77-2.69 (m, 3H), 2.46 -2.37 (m, 1H), 2.01-1.89 (m, 1H), 1.79 (br d, J=12.3 Hz, 1H), 1.63-1.48 (m, 3H), 1.32 (br s, 3H), 1.13-1.02 (m, 6H). LC-MS m/z 492 [M+H] + .
Стадия 3. 2-(2-(метиламино)этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 3 2-(2-(methylamino)ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)(метил)карбамата (304 мг, 0,618 ммоль) в CH2Cl2 (1546 мкл) при комнатной температуре добавляли TFA (1546 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной темTo a solution of tert-butyl (2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4-c]quinolin-2 -yl)ethyl)(methyl)carbamate (304 mg, 0.618 mmol) in CH 2 Cl 2 (1546 μl) TFA (1546 μl) was added at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature
- 71 042018 пературе в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в потоке N2, чтобы удалить примерно половину объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (20 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x2 мл) с получением 2-(2-(метиламино)этил)-7-(1Нпиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA (272 мг, 82%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.70-12.93 (m, 1H), 9.84-9.66 (m, 1H), 9.45-9.26 (m, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.79-8.65 (m, 2Н), 8.19-8.10 (m, 2Н), 7.93 (br d, J=8.0 Гц, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.80 (d, J=2.0 Гц, 1H), 4.85 (brt, J=5.6 Гц, 2H), 3.61 (br s, 2H), 2.70 (br s, 3H). LC-MS m/z 308 [M+H]+.- 71 042018 temperature for 2 h. The reaction mixture was concentrated in a stream of N2 to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (20 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x2 ml) to give 2-(2-(methylamino)ethyl)-7-(1Hpyrazol-3 -yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin- 4-amine, 2 TFA (272 mg, 82%) as an off-white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.70-12.93 (m, 1H), 9.84-9.66 (m, 1H), 9.45-9.26 (m, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.79-8.65 (m , 2Н), 8.19-8.10 (m, 2Н), 7.93 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.80 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.85 (brt, J=5.6 Hz, 2H), 3.61 (br s, 2H), 2.70 (br s, 3H). LC-MS m/z 308 [M+H]+.
Стадия 4. N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}-Nметилацетамид.Step 4 N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}-Nmethylacetamide.
К раствору 2-(2-(метиламино)этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (20 мг, 0,037 ммоль) в DMF (208 мкл) при комнатной температуре добавляли уксусную кислоту (2,136 мкл, 0,037 ммоль), затем Ν,Ν-диизопропилэтиламин (26,0 мкл, 0,149 ммоль) и HATU (14,20 мг, 0,037 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы размером 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1 H-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-N метилацетамида, TFA (14,1 мг, 80%). ЯМР соответствует соотношению ротамеров ~2:1. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.86 (s, 1H), 8.07-7.99 (m, 2H), 7.80 (br dd, J=8.1, 6.6 Гц, 1H), 7.75 (br d, J=1.5 Гц, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.70 (brt, J=5.9 Гц, 0.67Н), 4.61 (brt, J=6.1 Гц, 1.33Н), 3.92-3.86 (m, 0.67H), 3.83 (br t, J=6.1 Гц, 1.33H), 2.87 (s, 2H), 2.79 (s, 1H), 1.96 (s, 2H), 1.91 (s, 1H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: 0-100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1,0 мл/мин; детекция: UV при 220 нм. m/z 350.3 [М+Н]+; RT: 0,87 мин.To a solution of 2-(2-(methylamino)ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (20 mg, 0.037 mmol) acetic acid (2.136 µl, 0.037 mmol) was added to DMF (208 µl) at room temperature followed by Ν,N-diisopropylethylamine (26.0 µl, 0.149 mmol) and HATU (14.20 mg, 0.037 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column : XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 20 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-2 -yl)ethyl)-N methylacetamide, TFA (14.1 mg, 80%). NMR corresponds to the ratio of rotamers ~2:1. 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 (s, 1H), 8.07-7.99 (m, 2H), 7.80 (br dd, J=8.1, 6.6 Hz, 1H), 7.75 (br d, J=1.5 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.70 (brt, J=5.9 Hz, 0.67H), 4.61 (brt, J=6.1 Hz, 1.33H), 3.92-3.86 (m, 0.67H), 3.83 ( br t, J=6.1 Hz, 1.33H), 2.87 (s, 2H), 2.79 (s, 1H), 1.96 (s, 2H), 1.91 (s, 1H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0-100% B for 3 min, then hold 0.75 min at 100% B; flow rate: 1.0 ml/min; detection: UV at 220 nm. m/z 350.3 [M+H]+; RT: 0.87 min.
Пример 120. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}N-метилбензамида.Example 120 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}N-methylbenzamide.
К бензойной кислоте (12,6 мг, 0,103 ммоль) добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,5 М раствор в DMF) (0,374 мл, 0,187 ммоль), а затем HATU (0,4 М раствор в DMF) (0,233 мл, 0,093 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем по каплям добавляли к раствору 2-(2-(метиламино)этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (0,25 М раствор в DMF с 0,75 М Ν,Ν-диизопропилэтиламином) (0,374 мл, 0,093 ммоль). Прозрачный оранжевый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 7% В, 7-47% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1Нпиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-N-метилбензамида (30,5 мг, 79%). ЯМР соответствует соотношению ротамеров ~2:1. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.81 (br s, 0.67H), 8.63-8.54 (m, 0.33H), 7.98-7.85 (m, 2H), 7.72-7.67 (m, 1H), 7.64 (br d, J=7.4 Гц, 1H), 7.46-7.12 (m, 4H), 6.94-6.56 (m, 4H), 4.744.68 (m, 1.33H), 4.60-4.54 (m, 067H), 4.01-3.95 (m, 1.33H), 3.82-3.75 (m, 0.67H), 3.02 (br s, 1H), 2.74 (br s, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 412.1 [M+H]+; RT: 1.21 мин.To benzoic acid (12.6 mg, 0.103 mmol) was added Ν,N-diisopropylethylamine (0.5 M solution in DMF) (0.374 ml, 0.187 mmol) followed by HATU (0.4 M solution in DMF) (0.233 ml , 0.093 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 min, then added dropwise to a solution of 2-(2-(methylamino)ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c] quinoline-4-amine, 2 TFA (0.25 M solution in DMF with 0.75 M Ν,N-diisopropylethylamine) (0.374 mL, 0.093 mmol). The clear orange solution was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 7% B, 7-47% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1Hpyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl) ethyl)-N-methylbenzamide (30.5 mg, 79%). NMR corresponds to the ratio of rotamers ~2:1. 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.81 (br s, 0.67H), 8.63-8.54 (m, 0.33H), 7.98-7.85 (m, 2H), 7.72-7.67 (m, 1H), 7.64 (br d, J=7.4 Hz, 1H), 7.46-7.12 (m, 4H), 6.94-6.56 (m, 4H), 4.744.68 (m, 1.33H), 4.60-4.54 (m, 067H), 4.01 -3.95 (m, 1.33H), 3.82-3.75 (m, 0.67H), 3.02 (br s, 1H), 2.74 (br s, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 412.1 [M+H]+; RT: 1.21 min
Пример 121. Получение 2-{2-[бензил(метил)амино]этил}-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4- 72 042018Example 121 Preparation of 2-{2-[benzyl(methyl)amino]ethyl}-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-72 042018
с]хинолин-4-амина.c]quinoline-4-amine.
К раствору 2-(2-(метиламино)этил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина при комнатной температуре, 2 TFA (20 мг, 0,037 ммоль) в DMF (187 мкл) добавляли бензальдегид (5,0 мкл, 0,049 ммоль), а затем триацетоксиборгидрид натрия (23,8 мг, 0,112 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (100 мкл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с исполь зованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 12% В, 12-37% В в течение 25 мин, затем 2-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-(бензил(метил)амино)этил)7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (10,0 мг, 50%). Ή ЯМР (500 МГц, DMSOde) δ 8.98 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.12 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.93 (dd, J=8.2, 1.4 Гц, 1H), 7.81 (d, J=1.9 Гц, 1H), 7.38-7.29 (m, 5H), 6.78 (d, J=2.3 Гц, 1H), 4.91-4.81 (m, 2H), 4.23-3.97 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: 0-100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,75 минут при 100% В; скорость потока: 1,0 мл/мин; детекция: UV при 220 нм. m/z 398 [М+Н]+; RT: 1,03 мин.To a solution of 2-(2-(methylamino)ethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine at room temperature, 2 TFA (20 mg, 0.037 mmol) in DMF (187 μl) was added benzaldehyde (5.0 μl, 0.049 mmol) followed by sodium triacetoxyborohydride (23.8 mg, 0.112 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H2O (100 µl) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18 , 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 12% B, 12-37% B for 25 min, then 2 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-(benzyl(methyl)amino)ethyl)7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c] quinoline-4-amine, TFA (10.0 mg, 50%). Ή NMR (500 MHz, DMSOde) δ 8.98 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.12 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.93 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.38-7.29 (m, 5H), 6.78 (d, J=2.3 Hz, 1H), 4.91-4.81 (m, 2H), 4.23-3.97 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0-100% B over 3 minutes, then hold 0.75 minutes at 100% B; flow rate: 1.0 ml/min; detection: UV at 220 nm. m/z 398 [M+H]+; RT: 1.03 min.
- {2-[4-амино-7-(1 Н-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2Пример 122. Получение ил]этил}пирролидин-2-она.- {2-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-2 Example 122 Preparation of yl]ethyl}pyrrolidin-2-one.
Стадия 1. N-(2-[7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)-4-хлорбутанамид.Step 1 N-(2-[7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)-4-chlorobutanamide.
В трехгорлую круглодонную колбу объемом 100 мл вносили 2-(2-аминоэтил)-7-бром-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин (900 мг, 2,94 ммоль, 1 экв.), DCM (30 мл), пиридин (697,6 мг, 8,82 ммоль, 3 экв.) и 4-хлорбутаноилхлорид (829,0 мг, 5,88 ммоль, 2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем реакцию гасили добавлением МеОН. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью дихлорметан/метанол (10:1) с получением N-(2-[7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)-4-хлорбутанамида (240 мг, 21%) в виде светло-желтого твердого вещества. LC-MS m/z [М+Н]+=390.1.2-(2-Aminoethyl)-7-bromo-2Hpyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine (900 mg, 2.94 mmol, 1 eq.), DCM (30 ml), pyridine (697.6 mg, 8.82 mmol, 3 eq.) and 4-chlorobutanoyl chloride (829.0 mg, 5.88 mmol, 2 eq.). The resulting solution was stirred for 16 hours at room temperature. The reaction was then quenched by adding MeOH. The resulting mixture was concentrated. The residue was loaded onto a silica gel column and eluted with dichloromethane/methanol (10:1) to give N-(2-[7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)-4- chlorobutanamide (240 mg, 21%) as a light yellow solid. LC-MS m/z [M+H] + =390.1.
Стадия 2. 1-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)пирролидин-2-он.Step 2 1-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)pyrrolidin-2-one.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили N-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин2-ил]этил)-4-хлорбутанамид (300 мг, 0,73 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (7 мл). Затем добавляли t-BuOK (163,9 мг, 1,46 ммоль, 2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. РеN-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin2-yl]ethyl)-4-chlorobutanamide (300 mg, 0.73 mmol, 1 eq.) in THF (7 ml). Then t-BuOK (163.9 mg, 1.46 mmol, 2 eq) was added. The resulting solution was stirred for 16 hours at room temperature. Re
- 73 042018 акцию гасили добавлением H2O (20 мл). Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюируя смесью дихлорметан/метанол (10:1) с получением 1-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]этил)пирролидин-2-она (200 мг, 73%) в виде светло-желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=374.1.- 73 042018 the action was quenched by adding H2O (20 ml). The resulting solution was extracted with ethyl acetate (3x20 ml). The resulting mixture was concentrated. The residue was applied to a silica gel column eluting with dichloromethane/methanol (10:1) to give 1-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl)pyrrolidine -2-one (200 mg, 73%) as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=374.1.
Стадия 3. 1-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил]пирролидин-2 он.Step 3 1-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl]pyrrolidin-2-one.
В герметичную пробирку объемом 20 мл, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили 1-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)пирролидин-2-он (200 мг, 0,53 ммоль, 1 экв.), Cs2CO3 (348,3 мг, 1,07 ммоль, 2 экв.), 3-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Hпиразол (207,4 мг, 1,07 ммоль, 2 экв.), Pd(dppf)Cl2 (39,1 мг, 0,05 ммоль, 0,1 экв.) в диоксане (5 мл) и Н2О (1,25 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 80°С. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюируя смесью дихлорметан/метанол (10:1). Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использовани ем следующих условий: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (15% PhaseB до 40% за 7 мин); детектор, UV. Это обеспечило получение 1-[2-[4амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил]пирролидин-2-она (35,4 мг, 18%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР: (300 МГц, DMSO-d6, ppm): δ 13.32-12.85 (m br, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.90-7.52 (m, 4H), 6.86 (s, 1H), 6.76 (s, 2H), 4.58-4.56 (m, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.28-3.25 (m, 2H), 2.181-(2-[4-Amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)pyrrolidin- 2-one (200 mg, 0.53 mmol, 1 eq.), Cs 2 CO 3 (348.3 mg, 1.07 mmol, 2 eq.), 3-(tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane- 2-yl)-1Hpyrazole (207.4 mg, 1.07 mmol, 2 eq.), Pd(dppf)Cl 2 (39.1 mg, 0.05 mmol, 0.1 eq.) in dioxane (5 ml ) and H 2 O (1.25 ml). The resulting solution was stirred for 16 h at 80°C. The resulting mixture was cooled to room temperature and concentrated. The residue was applied to a silica gel column eluting with dichloromethane/methanol (10:1). The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: XBridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 µm; mobile phase, water (10 mM NH 4 HCO 3 ) and ACN (15% PhaseB to 40% in 7 min); detector, UV. This provided 1-[2-[4amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl]pyrrolidin-2-one (35.4 mg, 18%) as a white solid. 1 H-NMR: (300 MHz, DMSO-d 6 , ppm): δ 13.32-12.85 (m br, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.90-7.52 (m, 4H), 6.86 (s, 1H) , 6.76 (s, 2H), 4.58-4.56 (m, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.28-3.25 (m, 2H), 2.18
2.14 (m, 2H), 1.96-1.83 (m, 2H). Методы LC: Колонка: Kinetex EVO 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,03% NH3H2O; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем 0,60 мин выдержка при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. m/z 362.2 [М+Н]+. RT: 0,939 мин.2.14 (m, 2H), 1.96-1.83 (m, 2H). LC methods: Column: Kinetex EVO 3.0x50 mm, particles 2.6 µm; mobile phase A: water with 0.03% NH3H2O; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then 0.60 min hold at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. m/z 362.2 [M+H] + . RT: 0.939 min.
Пример 123. Получение N-{3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил] пропил} бензамида.Example 123 Preparation of N-{3-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]propyl}benzamide.
Стадия 1. трет-бутил (3-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)-пропил)карбамат.Step 1: tert-butyl (3-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)-propyl) carbamate.
К раствору 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина при комнатной температуре, TFA (0,40 г, 1,06 ммоль) в DMFA (3,54 мл) добавляли карбонат цезия (1,037 г, 3,18 ммоль). затем трет-бутил (3бромпропил) карбамат (0,278 г, 1,17 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 40 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и Н2О (50 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (50 мл). Объединенные органические слои промывали нас. водн. NaCl (50 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля; линейный градиент 0-10% MeOH-CH2Cl2) с получением третбутил (3-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)карбамата (379 мг, 85%) в виде белой пены. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.74 (s, 1H), 7.83 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.59 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.31 (dd, J=8.3, 2.1 Гц, 1H), 7.02-6.92 (m, 3H), 4.43 (t, J=7.0 Гц, 2Н), 3.01-2.92 (m, 2Н), 2.04 (quin, J=6.9 Гц, 2Н), 1.37 (s, 9Н). LC-MS m/z 420/422 [М+Н]+.Cesium carbonate (1.037 d, 3.18 mmol). then tert-butyl (3-bromopropyl) carbamate (0.278 g, 1.17 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 40 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (50 ml) and H 2 O (50 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (50 ml). The combined organic layers were washed with us. aq. NaCl (50 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (24 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give tert-butyl (3-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline -2-yl) propyl) carbamate (379 mg, 85%) as a white foam. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (s, 1H), 7.83 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.59 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.31 (dd, J=8.3, 2.1 Hz, 1H), 7.02-6.92 (m, 3H), 4.43 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.01-2.92 (m, 2H), 2.04 (quin, J=6.9 Hz, 2H), 1.37 ( s, 9H). LC-MS m/z 420/422 [M+H] + .
Стадия 2. трет-бутил (3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)карбамат.Step 2. tert-butyl 2-yl)propyl)carbamate.
Смесь трет-бутил (3-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)карбамата (378 мг, 0,899 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-Шпиразола (375 мг, 1,35 ммоль) и карбоната цезия (879 мг, 2,70 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (8094 мкл) и H2O (899 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли [1,Г-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (32,9 мг, 0,045 ммоль). Смесь барботировали N2 в течение 1 мин, затем перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (200 мл), промывали H2O (100 мл) иA mixture of tert-butyl (3-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)propyl)carbamate (378 mg, 0.899 mmol), 1-(tetrahydro-2H- pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-Spirazole (375 mg, 1.35 mmol) and cesium carbonate (879 mg, 2.70 mmol) was evacuated and refilled with N 2 , then 1,4-dioxane (8094 µl) and H 2 O (899 µl) were added. The resulting mixture was purged with N 2 for 10 min, then [1,H-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (32.9 mg, 0.045 mmol) was added. The mixture was sparged with N 2 for 1 min, then stirred at 100° C. for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (200 ml), washed with H2O (100 ml) and
- 74 042018 насыщенным водным раствором NaCl (100 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2)-ил)-1Нпиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)карбамата (474 мг, колич.) в виде коричневой пены. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.77 (s, 1H), 7.99 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.62 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.7 Гц, 1H), 6.98 (br t, J=5.4 Гц, 1H), 6.89 (s, 2H), 6.48 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.30 (dd, J=9.9, 2.0 Гц, 1H), 4.46 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 4.04 (br d, J=9.3 Гц, 1H), 3.62-3.53 (m, 1H), 2.97 (q, J=6.5 Гц, 2Н), 2.46 -2.36 (m, 1H), 2.11 -2.01 (m, 2H), 1.99-1.89 (m, 1H), 1.79 (br d, J=12.5 Гц, 1H), 1.64-1.48 (m, 3H), 1.38 (s, 9Н). LC-MS m/z 492 [M+H]+.- 74 042018 saturated aqueous NaCl solution (100 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give t-butyl (3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2 )-yl)-1Hpyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)propyl)carbamate (474 mg, quant.) as a brown foam. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (s, 1H), 7.99 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.7 Hz, 1H), 6.98 (br t, J=5.4 Hz, 1H), 6.89 (s, 2H), 6.48 (d, J=1.8 Hz, 1H) , 5.30 (dd, J=9.9, 2.0 Hz, 1H), 4.46 (t, J=6.9 Hz, 2H), 4.04 (br d, J=9.3 Hz, 1H), 3.62-3.53 (m, 1H), 2.97 (q, J=6.5 Hz, 2H), 2.46 -2.36 (m, 1H), 2.11 -2.01 (m, 2H), 1.99-1.89 (m, 1H), 1.79 (br d, J=12.5 Hz, 1H) , 1.64-1.48 (m, 3H), 1.38 (s, 9H). LC-MS m/z 492 [M+H]+.
Стадия 3. 2-(3-аминопропил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA.Step 3 2-(3-aminopropyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA.
К раствору трет-бутил (3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пирαзол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)карбамата (442 мг, 0,899 ммоль) в CH2Cl2 (2248 мкл) добавляли TFA (2248 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали для удаления примерно половины объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (50 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x2 мл) с получением 2-(3-аминопропил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (423 мг, 88%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.51 (br s, 1H), 9.86-9.70 (m, 1H), 9.29-9.17 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 8.13 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.92 (dd, J=8.3, 1.1 Гц, 1H), 7.83 (br d, J=9.2 Гц, 4Н), 6.80 (d, J=2.2 Гц, 1H), 4.63 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.29-2.19 (m, 2H). LC-MS m/z 308 [M+H]+.To a solution of tert-butyl (3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4-c]quinolin-2 -yl)propyl)carbamate (442 mg, 0.899 mmol) in CH 2 Cl 2 (2248 µl) TFA (2248 µl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was concentrated to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (50 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x2 ml) to give 2-(3-aminopropyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4 α-amine, 2 TFA (423 mg, 88%) as an off-white solid. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.51 (br s, 1H), 9.86-9.70 (m, 1H), 9.29-9.17 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 8.13 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=8.3, 1.1 Hz, 1H), 7.83 (br d, J=9.2 Hz, 4H), 6.80 (d, J=2.2 Hz , 1H), 4.63 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.29-2.19 (m, 2H). LC-MS m/z 308 [M+H] + .
Стадия 4. N-{3-[4-aмино-7-(1H-пирaзол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]пропил}бензaмид.Step 4 N-{3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]propyl}benzamide.
К раствору 2-(3-αминопропил)-7-(1H-пирαзол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-αмина, 2 TFA (40 мг, 0,075 ммоль) и бензойной кислоты (9,1 мг, 0,075 ммоль) в DMF (374 мкл) при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (52,1 мкл, 0,299 ммоль), а затем HATU (28,4 мг, 0,075 ммоль).To a solution of 2-(3-α-minopropyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-α-min, 2 TFA (40 mg, 0.075 mmol) and benzoic acid (9.1 mg, 0.075 mmol) in DMF (374 μl) at room temperature was added N,N-diisopropylethylamine (52.1 μl, 0.299 mmol) followed by HATU (28.4 mg, 0.075 mmol).
Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,2 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 7% В, 7-47% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(3-(4амино-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)пропил)бензамида (10,4 мг, 34%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.76 (s, 1H), 8.58 (br t, J=5.2 Гц, 1H), 7.92 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.83 (br d, J=7.4 Гц, 2H), 7.69 (br s, 1H), 7.64 (br d, J=7.7 Гц, 1H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.47-7.43 (m, 2H), 6.99-6.76 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (br t, J=6.7 Гц, 2Н), 3.38-3.31 (m, 2H), 2.26-2.17 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 412.1 [М+Н]+; RT: 1,17 мин.The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was diluted with H2O (0.2 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 7% B, 7-47% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(3-(4amino-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl) propyl)benzamide (10.4 mg, 34%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.76 (s, 1H), 8.58 (br t, J=5.2 Hz, 1H), 7.92 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.83 (br d, J=7.4 Hz, 2H), 7.69 (br s, 1H), 7.64 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.47-7.43 (m, 2H ), 6.99-6.76 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (br t, J=6.7 Hz, 2Н), 3.38-3.31 (m, 2H), 2.26-2.17 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 412.1 [M+H]+; RT: 1.17 min.
Соединения по примерам 124-126 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными описанным для примера 123, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм).The compounds of examples 124-126 were prepared according to synthetic procedures similar to those described for example 123 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 75 042018- 75 042018
Пример 127. Получение трет-бутил-N-{2-[4-амино-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]этил}карбамата.Example 127 Preparation of tert-butyl N-{2-[4-amino-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl}carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-карбамата (400 мг, 0,985 ммоль), 4,4,5,5-тетраметил-2-(тиофен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолана (310 мг, 1,48 ммоль) и карбоната цезия (962 мг, 2,95 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (8861 мкл) и H2O (985 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли [1,1'бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (36,0 мг, 0,049 ммоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл), промывали H2O (100 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (100 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)карбамата (396 мг, 98%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1h), 7.92 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.70 (d, J=1.8 Гц, 1H), 7.55 (dd, J=3.6, 1.0 Гц, 1H), 7.53 (dd, J=5.1, 1.0 Гц, 1H), 7.49 (dd, J=8.1, 1.9 Гц, 1H), 7.15 (dd, J=5.0, 3.6 Гц, 1H), 7.07 (br t, J=5.7 Гц, 1H), 6.82 (br s, 2H), 4.46 (br t, J=6.1 Гц, 2Н), 3.49 (q, J=6.0 Гц, 2Н), 1.34 (s, 9H); LC-MS m/z 410 [М+Н]+.A mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-carbamate (400 mg, 0.985 mmol), 4.4.5, 5-tetramethyl-2-(thiophen-2-yl)-1,3,2-dioxaborolane (310 mg, 1.48 mmol) and cesium carbonate (962 mg, 2.95 mmol) were evacuated and refilled with N2, then added 1,4-dioxane (8861 µl) and H2O (985 µl). The resulting mixture was purged with N2 for 10 min, then [1,1'bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (36.0 mg, 0.049 mmol) was added. The mixture was purged with N2 for 1 min, then sealed and stirred at 100°C for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (100 mL), washed with H2O (100 mL) and saturated aqueous NaCl (100 mL ), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give tert-butyl (2-(4-amino-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo [3,4-c]quinolin-2yl)ethyl)carbamate (396 mg, 98%) as an off-white solid. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.66 (s, 1h), 7.92 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.70 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.55 (dd, J= 3.6, 1.0Hz, 1H), 7.53 (dd, J=5.1, 1.0Hz, 1H), 7.49 (dd, J=8.1, 1.9Hz, 1H), 7.15 (dd, J=5.0, 3.6Hz, 1H), 7.07 (br t, J=5.7 Hz, 1H), 6.82 (br s, 2H), 4.46 (br t, J=6.1 Hz, 2H), 3.49 (q, J=6.0 Hz, 2H), 1.34 (s, 9H); LC-MS m/z 410 [M+H]+.
- 76 042018- 76 042018
Пример 128. Получение N-{2-[4-амино-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}-2метил-1,3-оксазол-4-карбоксамида.Example 128 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}-2methyl-1,3-oxazole -4-carboxamide.
Стадия 1. 2-(2-аминоэтил)-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA.Step 1 2-(2-Aminoethyl)-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA.
К суспензии трет-бутил (2-(4-амино-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)карбамата (376 мг, 0,918 ммоль) в CH2Cl2 (2295 мкл) добавляли TFA (2295 мкл), в результате чего смесь превращалась в оранжевый раствор (отмечено быстрое выделение газа). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали для удаления примерно половины объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (25 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x10 мл) с получением 2-(2-аминоэтил)7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (428,6 мг, 87%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 9.95-9.10 (m, 2H), 9.02 (s, 1Н), 8.13 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 8.178.05 (m, 2H), 7.93 (d, J=1.3 Гц, 1Н), 7.83 (br d, J=8.1 Гц, 1H), 7.65 (dd, J=5.1, 1.0 Гц, 1Н), 7.63 (dd, J=3.6, 1.1 Гц, 1Н), 7.21 (dd, J=5.1, 3.7 Гц, 1H), 4.76 (t, J=5.7 Гц, 2Н), 3.55-3.48 (m, 2H); LC-MS m/z 310 [M+H]+.To a suspension of tert-butyl (2-(4-amino-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl)ethyl)carbamate (376 mg, 0.918 mmol) in CH 2 Cl 2 (2295 μl) was added with TFA (2295 μl), resulting in the mixture turning into an orange solution (rapid gas evolution noted). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (25 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x10 ml) to give 2-(2-aminoethyl)7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (428.6 mg, 87%) as an off-white solid. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.95-9.10 (m, 2H), 9.02 (s, 1H), 8.13 (d, J=8.2 Hz, 1H), 8.178.05 (m, 2H), 7.93 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.83 (br d, J=8.1 Hz, 1H), 7.65 (dd, J=5.1, 1.0 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=3.6, 1.1 Hz, 1Н), 7.21 (dd, J=5.1, 3.7 Hz, 1H), 4.76 (t, J=5.7 Hz, 2Н), 3.55-3.48 (m, 2H); LC-MS m/z 310 [M+H]+.
Стадия 2. N-{2-[4-амино-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил}-2-метил-1,3оксазол-4-карбоксамид.Step 2. N-{2-[4-amino-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}-2-methyl-1,3oxazol- 4-carboxamide.
К 2-метилоксазол-4-карбоновой кислоте (13,0 мг, 0,092 ммоль) добавляли N,Nдиизопропилэтиламин (0,5 М раствор в DMF) (0,335 мл, 0,167 ммоль), затем HATU (0,4 М раствор в DMF) (0,209 мл, 0,084 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее по каплям добавляли к суспензии 2-(2-аминоэтил)-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолина-4-амин, 2 TFA (0,25 М в DMF с 0,75 М N,N-диизопропилэтиламина (0,335 мл, 0,084 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 16% В, 16-56% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-2-метилоксазол-4-карбоксамида (22,9 мг, 59%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.74 (s, 1Н), 8.49 (br t, J=5.6 Гц, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.95 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.74 (d, J=1.4 Гц, 1H), 7.57-7.50 (m, 3H), 7.40-7.24 (m, 2H), 7.15 (dd, J=5.0, 3.9 Гц, 1H), 4.61 (br t, J=6.1 Гц, 2H),To 2-methyloxazole-4-carboxylic acid (13.0 mg, 0.092 mmol) was added N,N-diisopropylethylamine (0.5 M solution in DMF) (0.335 ml, 0.167 mmol) followed by HATU (0.4 M solution in DMF) (0.209 ml, 0.084 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 min, then it was added dropwise to a suspension of 2-(2-aminoethyl)-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline-4-amine, 2 TFA (0.25 M in DMF with 0.75 M N,N-diisopropylethylamine (0.335 ml, 0.084 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 10 mM ammonium acetate, mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate, gradient: 0 min hold at 16% B, 16-56% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B flow rate: 20 ml/min column temperature: 25° C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals Fractions containing the desired product were pooled and dried by centrifugal evaporation from a floor N-(2-(4-amino-7(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-2-methyloxazole-4-carboxamide (22.9 mg, 59%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.49 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.95 (d, J=8.0 Hz, 1H) , 7.74 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.57-7.50 (m, 3H), 7.40-7.24 (m, 2H), 7.15 (dd, J=5.0, 3.9 Hz, 1H), 4.61 (br t, J=6.1Hz, 2H),
3.80 (q, J=5.8 Гц, 2H), 2.42 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм), m/z 419 [М+Н]+; RT: 1,34 мин.3.80 (q, J=5.8 Hz, 2H), 2.42 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm), m/z 419 [M+H] + ; RT: 1.34 min.
Соединения по примерам 129-131 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными описанным для примера 128, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание в течение 0,75 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм).Compounds of Examples 129-131 were prepared according to synthetic procedures similar to those described for Example 128 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold for 0.75 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 77 042018- 77 042018
Пример 132. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пuразол-1-ил)-2Н-nuразоло[3,4-с]хuнолин-2ил]этил} бензамида.Example 132 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-nurazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl}benzamide.
step 3step 3
Стадия 1. трет-бутил (2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)карбамат.Step 1: tert-butyl (2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl)ethyl)carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-карбамата (0,498 г, 1,23 ммоль), 1H-пиразола (0,125 г, 1,84 ммоль) и карбоната натрия (0,520 г, 4,90 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли DMSO (12,26 мл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли N,N'-диметuлэтuлендuамин (0,396 мл, 3,68 ммоль) и йодид меди(I) (0,350 г, 1,84 ммоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 120°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл), промывали H2O (200 мл), 1: 1 Н2О-водн. NH4OH (200 мл) и насыщ. водн. NaCl (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэшхроматографией (80 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-nuразоло[3,4-с]хuнолин-2-uл)этил)карбамата (395 мг, 82%). 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1H), 8.55 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.99 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.87 (d, J=2.1 Гц, 1H), 7.75 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.67 (dd, J=8.4, 2.3 Гц, 1H), 7.07 (br t, J=5.5 Гц, 1H), 6.89 (br s, 2Н), 6.55-6.53 (m, 1H), 4.46 (br t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.49 (q, J=6.0 Гц, 2Н), 1.34 (s, 9H); LC-MS m/z 394 [М+Н]+.A mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-carbamate (0.498 g, 1.23 mmol), 1H-pyrazole ( 0.125 g, 1.84 mmol) and sodium carbonate (0.520 g, 4.90 mmol) were evacuated and refilled with N2, then DMSO (12.26 ml) was added. The resulting mixture was purged with N2 for 10 min, then N,N'-dimethylethylene diamine (0.396 mL, 3.68 mmol) and copper(I) iodide (0.350 g, 1.84 mmol) were added. The mixture was purged with N2 for 1 min, then sealed and stirred at 120°C for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature. The reaction mixture was diluted with EtOAc (200 ml), washed with H2O (200 ml), 1:1 H 2 O-aq. NH4OH (200 ml) and sat. aq. NaCl (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (80 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give tert-butyl (2(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-nurazolo[ 3,4-c]quinoline-2-yl)ethyl)carbamate (395 mg, 82%). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.66 (s, 1H), 8.55 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.99 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.75 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.4, 2.3 Hz, 1H), 7.07 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 6.89 (br s, 2Н), 6.55-6.53 (m, 1H), 4.46 (br t, J=6.0 Hz, 2Н), 3.49 (q, J=6.0 Hz, 2Н), 1.34 (s, 9H); LC-MS m/z 394 [M+H]+.
- 78 042018- 78 042018
Стадия 2. 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA.Step 2 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA.
К раствору трет-бутил (2-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)карбамата (396 мг, 1,01 ммоль) в CH2Cl2 (2516 мкл) добавляли TFA (2516 мкл) (было отмечено выделение газа). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали для удаления примерно половины объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (25 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3 х10 мл) с получением 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (464 мг, 88%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 9.94-9.69 (m, 1H), 9.529.28 (m, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.62 (d, J=2.5 Гц, 1H), 8.27-8.21 (m, 2H), 8.16-8.06 (m, 3H), 8.01-7.97 (m, 1H), 7.85 (d, J=1.4 Гц, 1H), 6.67-6.60 (m, 1H), 4.77 (t, J=5.6 Гц, 2Н), 3.51 (br d, J=3.8 Гц, 2Н); LC-MS m/z 294 [M+H]+.To a solution of tert-butyl (2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl)ethyl)carbamate (396 mg, 1.01 mmol ) in CH 2 Cl 2 (2516 μl) was added TFA (2516 μl) (gas evolution was noted). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (25 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3 x 10 ml) to give 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin- 4-amines, 2 TFA (464 mg, 88%) as white solid. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.94-9.69 (m, 1H), 9.529.28 (m, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.62 (d, J=2.5 Hz, 1H), 8.27 -8.21 (m, 2H), 8.16-8.06 (m, 3H), 8.01-7.97 (m, 1H), 7.85 (d, J=1.4 Hz, 1H), 6.67-6.60 (m, 1H), 4.77 (t , J=5.6 Hz, 2H), 3.51 (br d, J=3.8 Hz, 2H); LC-MS m/z 294 [M+H]+.
Стадия 3. N-{2-[4-амино-7-(1 H-пиразол-1 -ил)-2Н-пиразоло [3,4-с]хинолин-2-ил]этил}бензамид.Step 3 N-{2-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl}benzamide.
К бензойной кислоте (11,6 мг, 0,095 ммоль) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,5 М раствор в DMF) (0,345 мл, 0,173 ммоль), а затем HATU (0,4 М раствор в DMF) (0,216 мл, 0,086 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее по каплям добавляли к суспензии 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (0,25 М в DMF с 0,75 М N,N-диизопропилэтиламина) (0,345 мл, 0,086 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 8% В, 8-48% В в течение 25 мин, затем 7-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов МС. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-2-ил)этил)бензамида (23,1 мг, 67%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.72 (s, 1H), 8.70-8.66 (m, 1H), 8.54 (br d, J=1.9 Гц, 1H), 8.01-7.95 (m, 1H), 7.87 (br s, 1H), 7.84-7.78 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.68-7.64 (m, 1H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.48-7.42 (m, 2Н), 6.89 (br s, 2H), 6.54 (br s, 1H), 4.66-4.60 (m, 2H), 3.85-3.80 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 398.1 [М+Н]+; RT: 1,24 мин.To benzoic acid (11.6 mg, 0.095 mmol) was added N,N-diisopropylethylamine (0.5 M solution in DMF) (0.345 ml, 0.173 mmol) followed by HATU (0.4 M solution in DMF) (0.216 ml , 0.086 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 min, then it was added dropwise to a suspension of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin- 4-amine, 2 TFA (0.25 M in DMF with 0.75 M N,N-diisopropylethylamine) (0.345 mL, 0.086 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 8% B, 8-48% B for 25 min, then 7 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was started based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinolin-2-yl) ethyl)benzamide (23.1 mg, 67%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.72 (s, 1H), 8.70-8.66 (m, 1H), 8.54 (br d, J=1.9 Hz, 1H), 8.01-7.95 (m, 1H), 7.87 (br s, 1H), 7.84-7.78 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.68-7.64 (m, 1H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.48-7.42 (m, 2H) , 6.89 (br s, 2H), 6.54 (br s, 1H), 4.66–4.60 (m, 2H), 3.85–3.80 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 398.1 [M+H]+; RT: 1.24 min.
Пример 133. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-nиразоло[3,4-с]хинолин-2ил]этил}пиридин-2-карбоксамида.Example 133 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-n-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl}pyridine-2-carboxamide.
К пиколиновой кислоте (11,7 мг, 0,095 ммоль) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,5 М раствор в DMF) (0,345 мл, 0,173 ммоль), а затем HATU (0,4 М раствор в DMF) (0,216 мл, 0,086 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее по каплям добавляли к суспензии 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (0,25 М в DMF с 0,75 М К,К-диизопропилэтиламина) (0,345 мл, 0,086 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 8% В, 8-48% В в течение 23 мин, затем 6-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)пиколинамида (11,4 мг, 33%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.07 (brt, J=6.1 Гц, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (d, J=4.7 Гц, 1H), 8.52 (d, J=2.2 Гц, 1H), 8.02-7.94 (m, 3H), 7.85 (d, J=1.9 Гц, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.65 (dd, J=8.5, 1.9 Гц, 1H), 7.59 (br t, J=5.5 Гц, 1H), 6.86 (br s, 2Н), 6.54 (s, 1H), 4.67-4.63 (m, 2Н), 3.90 (q, J=5.9 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3To picolinic acid (11.7 mg, 0.095 mmol) was added N,N-diisopropylethylamine (0.5 M solution in DMF) (0.345 ml, 0.173 mmol) followed by HATU (0.4 M solution in DMF) (0.216 ml , 0.086 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 min, then it was added dropwise to a suspension of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin- 4-amine, 2 TFA (0.25 M in DMF with 0.75 M K,K-diisopropylethylamine) (0.345 ml, 0.086 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 8% B, 8-48% B for 23 min, then 6 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2yl) ethyl)picolinamide (11.4 mg, 33%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.07 (brt, J=6.1 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (d, J=4.7 Hz, 1H), 8.52 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.02-7.94 (m, 3H), 7.85 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.65 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.59 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 6.86 (br s, 2H), 6.54 (s, 1H), 4.67-4.63 (m, 2H), 3.90 (q, J=5.9 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% in 3
- 79 042018 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 399.0 [М+Н]+; RT: 0,98 мин.- 79 042018 min, then holding 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 399.0 [M+H]+; RT: 0.98 min.
Пример 134. Получение метил N-[[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло-[4,5-с]хинолин-2ил]метил] карбамата.Example 134 Preparation of methyl N-[[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo-[4,5-c]quinolin-2yl]methyl] carbamate.
стадия 4stage 4
Стадия 1. трет-бутил N-[[(7-бром-4-гидроксихинолин-3-ил)карбамоил]метил]kарбамат.Step 1. tert-Butyl N-[[(7-bromo-4-hydroxyquinolin-3-yl)carbamoyl]methyl]karbamate.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили 3-амино-7-бромхинолин-4-ол (10 г, 41,83 ммоль, 1 экв.), HATU (23,9 г, 62,74 ммоль, 1,5 экв.), 2-[[(трет-бутокси)-карбонил]амино]уксусную кислоту (7,3 г, 41,83 ммоль, 1 экв.), DCM (100 мл), DIEA (16,2 г, 125,35 ммоль, 3,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученный раствор промывали 30 мл EtOAc и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Это обеспечило получение 15 г (90,5%) трет-бутил N[[(7-бром-4-гидроксихинолин-3-ил)карбамоил]метил]карбамата в виде твердого вещества розового цвета.3-Amino-7-bromoquinolin-4-ol (10 g, 41.83 mmol, 1 eq.), HATU (23.9 g, 62.74 mmol, 1.5 eq.) was added to a 500 ml round bottom flask. , 2-[[(tert-butoxy)-carbonyl]amino]acetic acid (7.3 g, 41.83 mmol, 1 eq.), DCM (100 ml), DIEA (16.2 g, 125.35 mmol , 3.0 eq.). The resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting solution was washed with 30 ml EtOAc and filtered. The filtrate was concentrated in vacuo. This provided 15 g (90.5%) of tert-butyl N[[(7-bromo-4-hydroxyquinolin-3-yl)carbamoyl]methyl]carbamate as a pink solid.
Стадия 2. трет-бутил N-([7-бром-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил)карбамат.Step 2 tert-butyl N-([7-bromo-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили трет-бутил N-[[(7-бром-4-гидроксихинолин-3ил)карбамоил]метил]карбамат (20 г, 50,47 ммоль, 1 экв.), THF (250 мл), реагент Лавессона (16,3 г, 40,38 ммоль, 0,8 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при 70°С. Затем реакцию гасили добавлением 200 мл водн. NaHCO3. Смесь экстрагировали EtOAc (500 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Это обеспечивает получение 9 г (45,2%) трет-бутил N-([7-бром-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил)карбамата в виде светложелтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=386.1.To a 500 ml round bottom flask was added tert-butyl N-[[(7-bromo-4-hydroxyquinolin-3yl)carbamoyl]methyl]carbamate (20 g, 50.47 mmol, 1 eq.), THF (250 ml), Lawesson's reagent (16.3 g, 40.38 mmol, 0.8 eq.). The resulting solution was stirred for 3 hours at 70°C. The reaction was then quenched by adding 200 ml aq. NaHC03 . The mixture was extracted with EtOAc (500 ml). The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in vacuo. This provides 9 g (45.2%) of tert-butyl N-([7-bromo-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =386.1.
Стадия 3. 7-бром-2-(((трет-бутоксикарбонил)амино)метил)тиазоло[4,5-с]хинолин-5-оксид.Step 3 7-bromo-2-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)thiazolo[4,5-c]quinoline-5-oxide.
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили трет-бутил N-([7-бром-[1,3]-тиазоло[4,5с]хинолин-2-ил]метил)карбамат (1,3 г, 3,30 ммоль, 1 экв.), DCM (20 мл), m-СРВА (3,3 г, 13,19 ммоль, 4 экв., 70%). Полученный раствор перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Остаток наносили на колонку с силикагелем со смесью дихлорметан/метанол (70:1). Это привело к получению 1 г (73,92%) 7-бром-2-([[(трет-бутокси)карбонил]амино]метил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олата в виде светло-желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=412.1.tert-Butyl N-([7-bromo-[1,3]-thiazolo[4,5c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate (1.3 g, 3.30 mmol, 1 eq.), DCM (20 ml), m-CPBA (3.3 g, 13.19 mmol, 4 eq., 70%). The resulting solution was stirred for 5 hours at room temperature. The residue was applied to a silica gel column with dichloromethane/methanol (70:1). This resulted in 1 g (73.92%) of 7-bromo-2-([[(tert-butoxy)carbonyl]amino]methyl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-5- um-5-olata as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =412.1.
Стадия 4. трет-бутил N-[[7-бром-4-(трет-бутиламино)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2ил]метил]карбамат.Step 4: tert-butyl N-[[7-bromo-4-(tert-butylamino)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2yl]methyl]carbamate.
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили 7-бром-2-([[(трет-бутокси)карбонил]амино]метил)[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олат (700 мг, 1,71 ммоль, 1 экв.), DCM (20 мл), 2-метилпропан-2амин (623,9 мг, 8,53 ммоль, 5 экв.), (4-метилбензол)сульфонил-4-метилбензол-1-сульфонат (1,1 г, 3,41 ммоль, 2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Получен7-Bromo-2-([[(tert-butoxy)carbonyl]amino]methyl)[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5-olate ( 700 mg, 1.71 mmol, 1 eq.), DCM (20 ml), 2-methylpropan-2amine (623.9 mg, 8.53 mmol, 5 eq.), (4-methylbenzene)sulfonyl-4-methylbenzene -1-sulfonate (1.1 g, 3.41 mmol, 2 eq.). The resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. Received
- 80 042018 ную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали препаративной TLC (РЕ/ЕА=2:1). Это обеспечило получение 680 мг (85,6%) трет-бутил N-[[7-бром-4-(трет-бутиламино)-[1,3]тиазоло[4,5с]хинолин-2-ил]метил]карбамата. в виде светло-желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=466.2.- 80 042018 the mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative TLC (PE/EA=2:1). This provided 680 mg (85.6%) of tert-butyl N-[[7-bromo-4-(tert-butylamino)-[1,3]thiazolo[4,5c]quinolin-2-yl]methyl]carbamate . as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=466.2.
Стадия 5. трет-бутил N-[[4-(трет-бутиламино)-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло-[4,5-с]хинолин-2ил] метил] карбамат.Step 5. tert-butyl N-[[4-(tert-butylamino)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo-[4,5-c]quinolin-2yl]methyl] carbamate.
В 30-мл герметичную пробирку, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили трет-бутил N-[[7-бром-4-(трет-бутиламино)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил]карбамат (680 мг, 1,46 ммоль, 1 экв.), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (567,0 мг, 2,92 ммоль, 2 экв.), Cs2CO3 (1,4 г, 4,38 ммоль, 3 экв.), диоксан (10 мл), H2O (1 мл), Pd(dppf)Cl2 (213,8 мг, 0,29 ммоль, 0,2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 100°С. Полученный раствор экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали препаративной TLC (РЕ/ЕА=1:2). Это обеспечило получение 420 мг (63,52%) трет-бутил Н-[[4-(третбутиламино)-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил]карбамата в виде светложелтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=453.2.In a 30-mL sealed test tube, purged and maintained in an inert nitrogen atmosphere, tert-butyl N-[[7-bromo-4-(tert-butylamino)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline- 2-yl]methyl]carbamate (680 mg, 1.46 mmol, 1 eq.), 5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (567.0 mg, 2.92 mmol, 2 eq.), Cs 2 CO 3 (1.4 g, 4.38 mmol, 3 eq.), dioxane (10 ml), H 2 O (1 ml), Pd(dppf)Cl 2 (213.8 mg, 0.29 mmol, 0.2 eq.). The resulting solution was stirred for 16 h at 100°C. The resulting solution was extracted with EtOAc and the combined organic layers were concentrated in vacuo. The crude product was purified by preparative TLC (PE/EA=1:2). This provided 420 mg (63.52%) of tert-butyl H-[[4-(tert-butylamino)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline -2-yl]methyl]carbamate as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=453.2.
Стадия 6. метил N-[[4-(трет-бутиламино)-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2ил]метил]карбамат.Step 6 Methyl N-[[4-(tert-butylamino)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2yl]methyl]carbamate.
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили раствор трет-бутил N-[[4-(трет-бутиламино)-7-(1Hпиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил]карбамата (150 мг, 0,33 ммоль, 1 экв.) в THF (10 мл). Добавляли NaH (26,5 мг, 0,66 ммоль, 2 экв., 60%), а затем метилкарбонохлоридат (62,6 мг, 0,66 ммоль, 2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем реакцию гасили добавлением МеОН. Полученную смесь концентрировали и нагревали с обратным холодильником в МеОН в течение 2 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и очищали препаративной TLC (ЕА:РЕ=1:2). Это обеспечило получение 80 мг (58,80%) метил N-[[4-(третбутиламино)-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]-тиазоло[4,5-с]хинолин-2]ил]метил]карбамата в виде светложелтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=411.1.A solution of tert-butyl N-[[4-(tert-butylamino)-7-(1Hpyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-2- yl]methyl]carbamate (150 mg, 0.33 mmol, 1 eq.) in THF (10 mL). NaH (26.5 mg, 0.66 mmol, 2 eq., 60%) was added followed by methyl carbonochloridate (62.6 mg, 0.66 mmol, 2 eq.). The resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. The reaction was then quenched by adding MeOH. The resulting mixture was concentrated and refluxed in MeOH for 2 h. The reaction mixture was then cooled to room temperature and purified by preparative TLC (EA:PE=1:2). This provided 80 mg (58.80%) of methyl N-[[4-(tert-butylamino)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]-thiazolo[4,5-c]quinoline- 2]yl]methyl]carbamate as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=411.1.
Стадия 7. метил N-[[4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил]карбамат.Step 7 Methyl N-[[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl]carbamate.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили метил N-[[4-(трет-бутиламино)-7-(1H-пиразол-5ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин]-2-ил]метил]карбамат (80 мг, 0,19 ммоль, 1 экв.) и TFA (5 мл). Полученный раствор перемешивали при 70°С в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали в вакууме и очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (10% PhaseB до 60% за 7 мин); детектор, UV 254 нм. Это обеспечило получение 25,9 мг (37,50%) метил N-[[4-амино-7-(1H-пиразол-5ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил]карбамата в виде белого твердого вещества. Методы LC: колонка: Kinetex 2,6 мкм EVO C18 100А 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода-5 мМ NH4HCO3; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2,1 мин, затем удерживание в течение 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=355.1. 1Н-ЯМР: (300 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 13.45-12.97 (m, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.897.57 (m, 3H), 7.02-6.93 (m, 2Н), 6.84 (s, 1H), 4.67 (d, J=5.9 Гц, 2Н), 3.64 (s, 3H).Methyl N-[[4-(tert-butylamino)-7-(1H-pyrazol-5yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin]-2-yl] was added to a 25 ml round bottom flask. methyl]carbamate (80 mg, 0.19 mmol, 1 eq) and TFA (5 ml). The resulting solution was stirred at 70° C. for 16 hours. The resulting mixture was concentrated in vacuo and purified by preparative HPLC using the following conditions: XBridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 μm; mobile phase, water (10 mM NH 4 HCO 3 ) and ACN (10% PhaseB to 60% in 7 min); detector, UV 254 nm. This provided 25.9 mg (37.50%) of methyl N-[[4-amino-7-(1H-pyrazol-5yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl ]methyl]carbamate as a white solid. LC methods: column: Kinetex 2.6 µm EVO C18 100A 3.0x50 mm, 2.6 µm particles; mobile phase A: water-5 mM NH4HCO3; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2.1 minutes, then hold for 0.7 minutes at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =355.1. 1 H-NMR: (300 MHz, DMSO-d 6 , ppm) δ 13.45-12.97 (m, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.897.57 (m, 3H), 7.02 -6.93 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 4.67 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.64 (s, 3H).
- 81 042018- 81 042018
Пример 135. Получение N-(2-(4-амuно-7-(1H-пиразол-5-ил)тиазоло[4,5-с]хинолuн-2ил)этил)бензамида.Example 135 Preparation of N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)thiazolo[4,5-c]quinolin-2yl)ethyl)benzamide.
Стадия 1. трет-бутил N-[2-[(7-бром-4-гидроксихинолин-3-ил)карбамоил]этил]карбамат.Step 1. tert-Butyl N-[2-[(7-bromo-4-hydroxyquinolin-3-yl)carbamoyl]ethyl]carbamate.
Раствор 3-амино-7-бромхинолин-4-ола гидрохлорида (25 г, 90,73 ммоль, 1 экв.), 3-[[(третбутокси)карбонил]амино]пропановой кислоты (20,6 г, 108,87 ммоль, 1,20 экв.), HATU (51,7 г, 136,10 ммоль, 1,5 экв.) и DIEA (35,2 г, 272,20 ммоль, 3 экв.) в DCM (200 мл) перемешивали при 25°С в течение 3 ч. Полученную смесь разбавляли водой (200 мл). Полученную смесь экстрагировали CH2Cl2 (2x200 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (1x200 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток промывали EtOAc (3x100 мл) с получением трет-бутил N-[2-[(7бром-4-гидроксихинолин-3-ил)карбамоил]этил]карбамата (35 г, 94,02%) в виде красного твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=410.1.Solution of 3-amino-7-bromoquinolin-4-ol hydrochloride (25 g, 90.73 mmol, 1 eq.), 3-[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]propanoic acid (20.6 g, 108.87 mmol , 1.20 eq.), HATU (51.7 g, 136.10 mmol, 1.5 eq.) and DIEA (35.2 g, 272.20 mmol, 3 eq.) in DCM (200 ml) were stirred at 25° C. for 3 hours. The resulting mixture was diluted with water (200 ml). The resulting mixture was extracted with CH 2 Cl 2 (2x200 ml). The combined organic layers were washed with brine (1x200 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. The residue was washed with EtOAc (3x100 ml) to give tert-butyl N-[2-[(7bromo-4-hydroxyquinolin-3-yl)carbamoyl]ethyl]carbamate (35 g, 94.02%) as a red solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=410.1.
Стадия 2. трет-бутил N-(2-[7-бром-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил)карбамат.Step 2 tert-butyl N-(2-[7-bromo-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate.
Раствор трет-бутил N-[2-[(7-бром-4-гидроксихинолин-3-ил)карбамоил]этил]карбамата (3,7 г, 9,02 ммоль, 1 экв.) и реактива Лавессона (3,6 г, 8,90 ммоль, 0,99 экв.) в метилбензоле (30 мл) перемешивали в течение 1 ч при 100°С. Полученную смесь разбавляли водой (100 мл). Смесь подщелачивали до рН 8 насыщенным водн. NaHCO3. Полученную смесь экстрагировали EtOAc (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (1x100 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью РЕ/EtOAc (5:1) с получением трет-бутил N-(2-[7-бром-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолuн-2-ил]этил)карбамата (830 мг, 22,54%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=408.0. 1Н-ЯМР: 1H ЯМР (400 МГц, метанол d4) δ 9,35 (с, 1H), 8,36 (д, J=2,0 Гц, 1H), 8,05 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,86 (м, 1H), 3,65 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 3,45 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 1,42 (с, 9Н).A solution of tert-butyl N-[2-[(7-bromo-4-hydroxyquinolin-3-yl)carbamoyl]ethyl]carbamate (3.7 g, 9.02 mmol, 1 eq) and Lawesson's reagent (3.6 g, 8.90 mmol, 0.99 eq.) in methylbenzene (30 ml) was stirred for 1 h at 100°C. The resulting mixture was diluted with water (100 ml). The mixture was basified to pH 8 with saturated aq. NaHC03 . The resulting mixture was extracted with EtOAc (3x100 ml). The combined organic layers were washed with brine (1x100 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (5:1) to give tert-butyl N-(2-[7-bromo-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-2- yl]ethyl)carbamate (830 mg, 22.54%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=408.0. 1 H-NMR: 1 H NMR (400 MHz, methanol d4) δ 9.35 (s, 1H), 8.36 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J=8 .7 Hz, 1H), 7.86 (m, 1H), 3.65 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.45 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1, 42 (s, 9H).
Стадия 3. 7-бром-2-(2-[[(трет-бутокси)карбонил]амино]этил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5 олат.Step 3: 7-bromo-2-(2-[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]ethyl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5-olate.
Раствор трет-бутил N-(2-[7-бром-[1,3]тиазоло[4,5-с]хuнолин-2-uл]этил)карбамата (800 мг, 1,96 ммоль, 1 экв.) и m-СРВА (676,2 мг, 3,92 ммоль, 2 экв.) в DCM (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя смесью CH2Cl2/МеОН (50:1) с получением 7-бром-2-(2-[[(третбутокси)карбонил]амино]этил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олата (432 мг, 51,96%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=424.0.A solution of tert-butyl N-(2-[7-bromo-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate (800 mg, 1.96 mmol, 1 eq) and m-CPBA (676.2 mg, 3.92 mmol, 2 eq.) in DCM (20 ml) was stirred at room temperature for 4 h. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with CH 2 Cl 2 /MeOH (50:1) to give 7-bromo-2-(2-[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]ethyl)-[1,3]thiazolo[ 4,5-c]quinoline-5-ium-5-olate (432 mg, 51.96%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=424.0.
Стадия 4. трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил)карбамат.Step 4 tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate.
К перемешиваемому раствору 7-бром-2-(2-[[(трет-бутокси)карбонил]амино]-этил)-[1,3]тиазоло[4,5с]хинолин-5-иум-5-олата (2 г, 4,71 ммоль, 1 экв.) и NH4OH (10 мл) в DCM (30 мл) добавляли TsCl (1,8 г, 9,44 ммоль, 2,00 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью РЕ/EtOAc (1:1) с получением трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-[1,3]тиазоло[4,5с]хинолин-2-ил]этил)карбамата (1,2 г, 60,14%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z):To a stirred solution of 7-bromo-2-(2-[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]ethyl)-[1,3]thiazolo[4,5c]quinoline-5-ium-5-olate (2 g , 4.71 mmol, 1 eq.) and NH 4 OH (10 ml) in DCM (30 ml) was added TsCl (1.8 g, 9.44 mmol, 2.00 eq.). The resulting mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (1:1) to give tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-[1,3]thiazolo[4.5c]quinoline- 2-yl]ethyl)carbamate (1.2 g, 60.14%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z):
- 82 042018- 82 042018
[М+Н]+=423.0. 1Н-ЯМР: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 7.76-7.74 (m, 2H), 7.39 (m, 1H), 7.17 (d, J=14.8 Гц, 3H), 3.46 (m, 2H), 3.32 (m, 2H), 1.37 (s, 9H).[M+H]+=423.0. 1H-NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.76-7.74 (m, 2H), 7.39 (m, 1H), 7.17 (d, J=14.8 Hz, 3H), 3.46 (m, 2H ), 3.32 (m, 2H), 1.37 (s, 9H).
Стадия 5. трет-бутил N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2ил]этил]карбамат.Step 5 tert-butyl N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2yl]ethyl]carbamate.
К перемешиваемому раствору трет-бутил К-(2-[4-амино-7-бром-[1,3]тиазоло-[4,5-с]хинолин-2ил]этил)карбамата (1,1 г, 2,60 ммоль, 1 экв.), 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Ипиразола (1,1 г, 5,67 ммоль, 2,18 экв.) и Cs2CO3 (2,5 г, 7,80 ммоль, 3 экв.) в диоксане (15 мл) и H2O (1,5 мл) добавляли Pd(dppf)Cl2 (0,4 г, 0,52 ммоль, 0,2 экв.) при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при 90°С в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной TLC (CH2Cl2/МеОН 10:1) с получением третбутил N-[2-[4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил]карбамата (690 мг, 64,69%) в виде светло-желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=411.2.To a stirred solution of tert-butyl K-(2-[4-amino-7-bromo-[1,3]thiazolo-[4,5-c]quinolin-2yl]ethyl)carbamate (1.1 g, 2.60 mmol, 1 eq.), 3-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1-ipyrazole (1.1 g, 5.67 mmol, 2.18 eq. ) and Cs 2 CO 3 (2.5 g, 7.80 mmol, 3 eq.) in dioxane (15 ml) and H2O (1.5 ml) was added Pd(dppf)Cl 2 (0.4 g, 0. 52 mmol, 0.2 eq.) at room temperature under nitrogen. The resulting mixture was stirred for 16 hours at 90° C. under a nitrogen atmosphere. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by preparative TLC (CH 2 Cl 2 /MeOH 10:1) to give tert-butyl N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1.3]thiazolo[4.5 -c]quinolin-2-yl]ethyl]carbamate (690 mg, 64.69%) as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=411.2.
Стадия 6. 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амин.Step 6 2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили трет-бутил N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил]карбамат (80 мг, 0,19 ммоль, 1 экв.), DCM (4 мл), HCl в диоксане (4 мл). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (от 20% фазы В до 45% за 8 мин); детектор, UV 210/254 нм. Это обеспечило получение 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]-тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амина (15 мг, 24,80%) в виде светложелтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=311.0. 1Н-ЯМР: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSC-d6) δ 13.04-12.91 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.96-7.62 (m, 3H), 6.94-6.82 (m, 3H), 3.29 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 3.07 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 1.86 (s, 2H).tert-Butyl N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl] was added to a 25 ml round bottom flask. ethyl]carbamate (80 mg, 0.19 mmol, 1 eq.), DCM (4 ml), HCl in dioxane (4 ml). The resulting solution was stirred at room temperature for 6 hours. The resulting mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: XBridge Shield RP18 OBD column, 5 µm, 19x150 mm; mobile phase, water (10 mM NH 4 HCO 3 ) and ACN (20% phase B to 45% in 8 min); detector, UV 210/254 nm. This provided 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]-thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (15 mg, 24.80% ) as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =311.0. 1H-NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSC-d 6 ) δ 13.04-12.91 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.96-7.62 (m, 3H), 6.94-6.82 (m, 3H), 3.29 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.07 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.86 (s, 2H).
Стадия 7. N-(2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил)этил)бензамид.Step 7 N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl)ethyl)benzamide.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (80 мг, 0,26 ммоль, 1 экв.), DCM (5 мл), TEA (78,2 мг, 0,77 ммоль, 3 экв.), бензоилхлорид (43,5 мг, 0,31 ммоль, 1,2 экв.). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка Sunfire Prep C18 OBD, 10 мкм, 19x250 мм; подвижная фаза, вода (0,05% TFA) и CAN (от 10% фазы В до 60% за 7 мин); детектор, UV 210/254 нм. Это обеспечило получение 15,5 мг (11,38%) N-(2-(4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)тиазоло[4,5с]хинолин-2-ил)этил)бензамида 2,2,2-трифторацетата в виде светло-розового твердого вещества. Методы LC: колонка: Agilent Poroshell HPH-d8 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода/5 ммоль NH4HCO3; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2,1 мин, затем удерживание в течение 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1,0 мл/мин. LC RT: 1,236 мин. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=415.2. 1Н-ЯМР: (400 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 9.29-9.08 (m, 1H), 8.78 (t, J=5.8 Гц, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.09-8.07 (m, 2H), 8.00-7.98 (m, 3H), 7.56-7.45 (m, 3H), 6.87 (d, J=2.4 Гц, 1H), 3.83 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 3.55 (t, J=6.6 Гц, 2H).2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (80 mg, 0. 26 mmol, 1 eq.), DCM (5 ml), TEA (78.2 mg, 0.77 mmol, 3 eq.), benzoyl chloride (43.5 mg, 0.31 mmol, 1.2 eq.). The resulting solution was stirred at room temperature for 16 hours. The resulting mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: Sunfire Prep C18 OBD column, 10 µm, 19x250 mm; mobile phase, water (0.05% TFA) and CAN (10% phase B to 60% in 7 min); detector, UV 210/254 nm. This provided 15.5 mg (11.38%) of N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)thiazolo[4.5c]quinolin-2-yl)ethyl)benzamide 2 ,2,2-trifluoroacetate as a light pink solid. LC Methods: Column: Agilent Poroshell HPH-d8 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water/5 mmol NH 4 HCO 3 ; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2.1 minutes, then hold for 0.6 minutes at 95% B; flow rate: 1.0 ml/min. LC RT: 1.236 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=415.2. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 , ppm) δ 9.29-9.08 (m, 1H), 8.78 (t, J=5.8 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.09-8.07 (m, 2H), 8.00-7.98 (m, 3H), 7.56-7.45 (m, 3H), 6.87 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.83 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.55 (t, J =6.6 Hz, 2H).
Соединения по примерам 136-141 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными описанным в примере 135, из соответствующих исходных материалов.The compounds of Examples 136-141 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in Example 135 from the appropriate starting materials.
Пример 136. N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил]nиридин-2карбоксамид.Example 136 N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl]niridine-2carboxamide.
Методы LC: колонка: Kinetex EVO 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода/5 ммоль NH4HCO3; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. LC RT: 1,207 мин. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=416.0. 1Н-ЯМР: (400 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 13.42-12.94 (m, 1H), 9.20 (t, J=6.0 Гц, 1H), 8.66 (d, J=5.0 Гц, 1H), 8.10-8.00 (m, 3H), 7.98-7.56 (m, 4H), 6.98-6.81 (m, 3H), 3.91 (m, 2H), 3.51 (t, J=6.9 Гц, 2H).LC Methods: Column: Kinetex EVO 3.0x50 mm, particles 2.6 µm; mobile phase A: water/5 mmol NH 4 HCO 3 ; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. LC RT: 1.207 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=416.0. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 13.42-12.94 (m, 1H), 9.20 (t, J=6.0 Hz, 1H), 8.66 (d, J=5.0 Hz, 1H), 8.10- 8.00 (m, 3H), 7.98-7.56 (m, 4H), 6.98-6.81 (m, 3H), 3.91 (m, 2H), 3.51 (t, J=6.9 Hz, 2H).
- 83 042018- 83 042018
Пример 137. N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил]оксетан-2карбоксамид.Example 137 N-[2-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl]oxetan-2carboxamide.
Методы LC: колонка: Express C18 2,1x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода + 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил + 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 100% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 100% В; скорость потока: 1,0 мл/мин. LC RT: 0,829 мин. LCMS: (ES, m/z): [M+H]+=395.1. 1Н-ЯМР: (400 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 13.34 (s, 1H), 8.39 (d, J=6.2 Гц, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.83-7.75 (m, 3H), 6.98-6.82 (m, 3H), 4.92 (m, 1H), 4.65-4.51 (m, 2H), 3.70 (m, 2H), 3.41 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 2.94-2.85 (m, 1H), 2.45 (m, 1H).LC methods: column: Express C18 2.1x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water + 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile + 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 100% B over 2 min, then hold 0.7 min at 100% B; flow rate: 1.0 ml/min. LCRT: 0.829 min. LCMS: (ES, m/z): [M+H] + =395.1. 1 H-NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 , ppm) δ 13.34 (s, 1H), 8.39 (d, J=6.2 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.83-7.75 (m, 3H ), 6.98-6.82 (m, 3H), 4.92 (m, 1H), 4.65-4.51 (m, 2H), 3.70 (m, 2H), 3.41 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.94-2.85 ( m, 1H), 2.45 (m, 1H).
Пример 138. 2-(3-аминопропил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)-1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амин.Example 138 2-(3-aminopropyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine
^н2 NH2 |Г у__/^ n 2 NH 2 | G y __ /
Методы LC: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1,5 мл/мин. LC RT: 0,776 мин. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=325.3. 1Н ЯМР: (400 МГц, Метанол-d4, ppm) δ 8.01 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.83-7.69 (m, 3H), 6.77 (d, J=2.3 Гц, 1H), 3.26 (t, J=7.5 Гц, 2H), 2.97-2.89 (m, 2H), 2.18-2.11 (m, 2H).LC Methods: Column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, 2.2 µm particles; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1.5 ml/min. LCRT: 0.776 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=325.3. 1Н NMR: (400 MHz, Methanol-d 4 , ppm) δ 8.01 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.83-7.69 (m, 3H), 6.77 (d, J=2.3 Hz, 1H), 3.26 ( t, J=7.5 Hz, 2H), 2.97-2.89 (m, 2H), 2.18-2.11 (m, 2H).
Пример 139. N-[3-[4-амино-7-(1H-nиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]пропил]αцетамид.Example 139 N-[3-[4-amino-7-(1H-nirazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]propyl]α-cetamide.
NH2 __\NH 2 __\
N JJ S “Η0 NQf СНз N JJ S “Η 0 N Qf SNz
Методы LC: колонка: Kinetex EVO, 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода с 10 мМ NH4HCO3; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. ЖХ RT: 1,020 мин. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=366.95. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 13.45-12.96 (m, 1H), 8.02-7.96 (m, 2H), 7.83-7.79 (m, 3H), 6.98-6.85 (m, 3H), 3.22-3.17 (m, 4H), 2.08-1.95 (m, 2H), 1.83 (s, 3H).LC Methods: Column: Kinetex EVO, 3.0x50 mm, particles 2.6 µm; mobile phase A: water with 10 mM NH4HCO3; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. LC RT: 1.020 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=366.95. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , ppm) δ 13.45-12.96 (m, 1H), 8.02-7.96 (m, 2H), 7.83-7.79 (m, 3H), 6.98-6.85 (m, 3H) , 3.22-3.17 (m, 4H), 2.08-1.95 (m, 2H), 1.83 (s, 3H).
Пример 140. N-{[4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил}-Nэтилацетамид.Example 140 N-{[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl}-N-ethylacetamide.
Методы LC: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 50% В за 2 мин, от 50 до 100% В за 0,3 мин, затем удерживание 0,4 мин при 100% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. LC RT: 1,679 мин. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=367.1. 1Н-ЯМР: (CD3OD, ppm): δ 8.061(s, 1H), 7.848-7.741 (m, 3H), 6.785(s, 1H), 5.091-4.990 (m, 2H), 3.654-3.572 (m, 2H), 2.252 (s, 3H), 1.301-1.166 (m, 3H).LC Methods: Column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, 2.2 µm particles; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 50% B in 2 min, 50 to 100% B in 0.3 min, then hold 0.4 min at 100% B; flow rate: 1.2 ml/min. LC RT: 1.679 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=367.1. 1H-NMR: (CD3OD, ppm): δ 8.061(s, 1H), 7.848-7.741 (m, 3H), 6.785(s, 1H), 5.091-4.990 (m, 2H), 3.654-3.572 (m, 2H ), 2.252 (s, 3H), 1.301–1.166 (m, 3H).
- 84 042018- 84 042018
Пример 141. 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-(1Н-пиразол-3-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амин.Example 141 2-[3-(Benzyloxy)propyl]-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine
1H ЯМР (400 МГц, метанол-d4) δ 8.07 (br s, 1H), 7.81 (br s, 3H), 7.37-7.14 (m, 5H), 6.80 (br s, 1H), 4.53 (s, 2H), 3.66 (t, J=6.0 Гц, 2H), 2.37-2.14 (m, 2H). LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=416.1.1H NMR (400 MHz, methanol-d 4 ) δ 8.07 (br s, 1H), 7.81 (br s, 3H), 7.37-7.14 (m, 5H), 6.80 (br s, 1H), 4.53 (s, 2H ), 3.66 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.37-2.14 (m, 2H). LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=416.1.
Пример 142. Получение 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]пропан-1 ола.Example 142 Preparation of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]propan-1ol.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили раствор 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-(1H-пиразол-3ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амина (290 мг, 0,70 ммоль, 1,00 экв.) в этаноле (30 мл). К раствору добавляли Pd(OH)2 (29 мг). Полученный раствор дегазировали и снова заполняли водородом. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 80°С на масляной бане. Твердые вещества собирали фильтрацией. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (HPLC-10): колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (10,0% ACN до 36,0% за 8 мин); детектор, 254/210 нм. Это обеспечило получение 35,7 мг (16%) 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-[1,3]тиазоло[4,5с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола в виде белого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=326.0. 1НЯМР: (DMSO-d6, 300 МГц, ppm): δ 8.02 (s, 1H), 7.82-7.58 (m, 3H), 6.89-6.83 (m, 3H), 4.65 (t, J=5.1 Гц, 1H), 3.58-3.52 (m, 2Н), 3.23 (t, J=5.1 Гц, 2Н), 2.05-1.96 (m, 2Н).A solution of 2-[3-(benzyloxy)propyl]-7-(1H-pyrazol-3yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (290 mg , 0.70 mmol, 1.00 eq.) in ethanol (30 ml). Pd(OH) 2 (29 mg) was added to the solution. The resulting solution was degassed and refilled with hydrogen. The resulting solution was stirred for 2 hours at 80° C. in an oil bath. Solids were collected by filtration. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions (HPLC-10): XBridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 µm; mobile phase, water (10 mM NH4HCO 3 ) and ACN (10.0% ACN to 36.0% in 8 min); detector, 254/210 nm. This provided 35.7 mg (16%) of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]thiazolo[4.5c]quinolin-2-yl]propan-1 -ol as a white solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =326.0. 1HNMR: (DMSO-d6, 300 MHz, ppm): δ 8.02 (s, 1H), 7.82-7.58 (m, 3H), 6.89-6.83 (m, 3H), 4.65 (t, J=5.1 Hz, 1H) , 3.58-3.52 (m, 2H), 3.23 (t, J=5.1 Hz, 2H), 2.05-1.96 (m, 2H).
Пример 143. Получение 2-[(диметиламино)метил]-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин4-амина.Example 143 Preparation of 2-[(dimethylamino)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline4-amine
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили 2-(аминометил)-7-(1H-пиразол-5-ил)[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (50 мг, 0,17 ммоль, 1 экв.), МеОН (5 мл), АсОН (0,1 мл), НСНО (41,1 мг, 0,51 ммоль, 3,00 экв., 37%), NaBH4 (19,1 мг, 0,51 ммоль, 3,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (20% фазы В до 60% за 8 мин); детектор, UV 254 нм. Это обеспечило получение 10,1 мг (18,45%) 2-[(диметиламино)метил]-7-(1Hпиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амина в качестве белого твердого вещества. Методы LC: колонка: Kinetex EVO C18 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода/5 ммоль NH4HCO3; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. LC RT: 0,81 мин. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=325.0. 1Н-ЯМР: (400 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 12.96 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.83-7.57 (m, 3H), 6.98 (s, 2H), 6.84 (s, 1H), 3.94 (s, 2H), 2.37 (s, 6H).2-(Aminomethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (50 mg, 0.17 mmol , 1 eq.), MeOH (5 ml), AcOH (0.1 ml), HCHO (41.1 mg, 0.51 mmol, 3.00 eq., 37%), NaBH 4 (19.1 mg, 0.51 mmol, 3.00 eq.). The resulting solution was stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: XBridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 µm; mobile phase, water (10 mM NH4HCO3) and ACN (20% phase B to 60% in 8 min); detector, UV 254 nm. This provided 10.1 mg (18.45%) of 2-[(dimethylamino)methyl]-7-(1Hpyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine as a white solid. LC Methods: Column: Kinetex EVO C18 3.0x50 mm, particles 2.6 µm; mobile phase A: water/5 mmol NH4HCO3; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. LCRT: 0.81 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =325.0. 1 H-NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 , ppm) δ 12.96 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.83-7.57 (m, 3H), 6.98 (s, 2H), 6.84 (s , 1H), 3.94 (s, 2H), 2.37 (s, 6H).
Пример 144. Получение 2-[3-(диэтиламино)пропил]-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5с]хинолин-4-амина.Example 144 Preparation of 2-[3-(diethylamino)propyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5c]quinoline-4-amine
Раствор 2-(3-аминопропил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амина (70 мг, 0,222-(3-Aminopropyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine solution (70 mg, 0.22
- 85 042018 ммоль, 1 экв.), ацетальдегида (14,3 мг, 0,32 ммоль, 1,5 экв.) и NaBH3CN (27,1 мг, 0,43 ммоль, 2 экв.) в CH3COOH (0,5 мл) и МеОН (10 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (колонка: XBridge Prep OBD C18, колонка 30x150 мм 5 мкм; подвижная фаза А: вода (10 мМ NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 25 до 45% В за 10 мин; 254/210 нм; RT: 8 мин) с получением 2-[3-(диэтиламино)пропил]-7(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]тиазоло[4,5-с]хинолин-4-амина (9,8 мг, 11,94%) в виде грязно-белого твердого вещества. Методы LC: колонка: Shim-pack XR-ODS 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 1,7 мин, затем удерживание в течение 1,0 мин при 95% В; скорость потока: 1,5 мл/мин. LC RT: 0.753 мин. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=381.4. 1Н-ЯМР: (300 МГц, CD3OD, ppm) δ 8.03 (s, 1H), 7.83 (d J=8.2 Гц, 1H), 7.77-7.70 (m, 2H), 6.78 (d, J=2.3 Гц, 1H), 3.23 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.67-2.60 (m, 6H), 2.16-2.08 (m, 2H), 1.09-1.05 (m, 6H).- 85 042018 mmol, 1 eq.), acetaldehyde (14.3 mg, 0.32 mmol, 1.5 eq.) and NaBH 3 CN (27.1 mg, 0.43 mmol, 2 eq.) in CH 3 COOH (0.5 ml) and MeOH (10 ml) were stirred overnight at room temperature. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions (column: XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm 5 µm column; mobile phase A: water (10 mM NH 4 HCO 3 ), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min ; gradient: 25 to 45% B over 10 min; 254/210 nm; RT: 8 min) to give 2-[3-(diethylamino)propyl]-7(1H-pyrazol-5-yl)-[1, 3]thiazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (9.8 mg, 11.94%) as an off-white solid. LC Methods: Column: Shim-pack XR-ODS 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 1.7 min, then hold for 1.0 min at 95% B; flow rate: 1.5 ml/min. LCRT: 0.753 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=381.4. 1 H-NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm) δ 8.03 (s, 1H), 7.83 (d J=8.2 Hz, 1H), 7.77-7.70 (m, 2H), 6.78 (d, J=2.3 Hz, 1H), 3.23 (t, J=7.4 Hz, 2H), 2.67-2.60 (m, 6H), 2.16-2.08 (m, 2H), 1.09-1.05 (m, 6H).
Пример 145. с] хинолин-4-амина.Example 145 c] quinoline-4-amine.
Получение 2-[(диметиламино)метил]-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-Preparation of 2-[(dimethylamino)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-
Стадия 1. трет-бутил N-([7-бром-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил)карбамат.Step 1 tert-butyl N-([7-bromo-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили трет-бутил N-[[(7-бром-4-гидроксихинолин-3ил)карбамоил]метил]карбамат (10 г, 25,24 ммоль, 1 экв.), DCM (250 мл), CCl3CCl3 (9,0 г, 37,86 ммоль, 1,50 экв.), TEA (10,2 г, 100,80 ммоль, 3,99 экв.), PPh3 (9,9 г, 37,75 ммоль, 1,50 экв.). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученную смесь разбавляли водой (200 мл). Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном 3x200 мл, объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем со смесью этилацетат/петролейный эфир (1:4) с получением 5 г (52,38%) трет-бутил N-([7-6pom[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил)карбамата в виде твердого вещества розового цвета. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=378.0.To a 500 ml round bottom flask was added tert-butyl N-[[(7-bromo-4-hydroxyquinolin-3yl)carbamoyl]methyl]carbamate (10 g, 25.24 mmol, 1 eq.), DCM (250 ml), CCl 3 CCl 3 (9.0 g, 37.86 mmol, 1.50 eq.), TEA (10.2 g, 100.80 mmol, 3.99 eq.), PPh 3 (9.9 g, 37 .75 mmol, 1.50 eq.). The resulting solution was stirred at room temperature for 1 hour. The resulting mixture was diluted with water (200 ml). The resulting solution was extracted with dichloromethane 3x200 ml, the combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue was applied to a silica gel column with ethyl acetate/petroleum ether (1:4) to give 5 g (52.38%) tert-butyl N-([7-6pom[1.3]oxazolo[4.5-c] quinolin-2-yl]methyl)carbamate as a pink solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =378.0.
Стадия 2. 7-бром-2-([[(трет-бутокси)карбонил]амино]метил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5олат.Step 2. 7-bromo-2-([[(tert-butoxy)carbonyl]amino]methyl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5olate.
В круглодонную колбу объемом 100 мл помещали трет-бутил N-([7-бром-[1,3]оксазоло[4,5с]хинолин-2-ил]метил)карбамат (4,2 г, 11,10 ммоль, 1 экв.), DCM (50 мл), m-СРВА (9,6 г, 55,63 ммоль, 5,01 экв.). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (50:1). Полученную смесь концентрировали с получением 1,8 г (41,12%) 7-бром-2([[(трет-бутокси)карбонил]амино]метил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олата в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=394.0.In a 100 ml round bottom flask was placed tert-butyl N-([7-bromo-[1,3]oxazolo[4,5c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate (4.2 g, 11.10 mmol, 1 eq.), DCM (50 ml), m-CPBA (9.6 g, 55.63 mmol, 5.01 eq.). The resulting solution was stirred at room temperature for 2 hours. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The residue was applied to a silica gel column using dichloromethane/methanol (50:1). The resulting mixture was concentrated to give 1.8 g (41.12%) of 7-bromo-2([[(tert-butoxy)carbonyl]amino]methyl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline- 5-ium-5-olata as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =394.0.
Стадия 3. трет-бутил N-([4-амино-7-бром-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил)карбамат.Step 3 tert-butyl N-([4-amino-7-bromo-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate.
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили 7-бром-2-([[(трет-бутокси)карбонил]амино]метил)- 86 0420187-bromo-2-([[(tert-butoxy)carbonyl]amino]methyl)- 86 042018
[1 ,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олат (1,8 г, 4,57 ммоль, 1 экв.) в DCM (5 мл) и NH3H2O (5 мл). Затем добавляли TsCl (1,8 г, 9,44 ммоль, 2,07 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (50:1). Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Это обеспечило получение 950 мг (52,91%) трет-бутил К-([4-амино-7бром[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил)карбамата в виде оранжевого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=393.0.[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5-olate (1.8 g, 4.57 mmol, 1 eq.) in DCM (5 ml) and NH3H2O (5 ml). TsCl (1.8 g, 9.44 mmol, 2.07 eq.) was then added. The resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was applied to a silica gel column using dichloromethane/methanol (50:1). The resulting mixture was concentrated under vacuum. This provided 950 mg (52.91%) of tert-butyl K-([4-amino-7bromo[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate as an orange solid . LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=393.0.
Стадия 4. трет-бутил N-[[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2ил]метил]карбамат.Step 4 tert-butyl N-[[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2yl]methyl]carbamate.
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили трет-бутил N-([4-амино-7-бром-[1,3]оксазоло[4,5с]хинолин-2-ил]метил)карбамат (900 мг, 2,29 ммоль, 1 экв.), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)-1H-пиразол (0,9 г, 4,58 ммоль, 2,00 экв.), Cs2CO3 (2,2 г, 6,87 ммоль, 3,00 экв.) и Pd(dppf)Cl2 (334,9 мг, 0,46 ммоль, 0,20 экв.) в диоксане (5 мл) и H2O (0,5 мл) в атмосфере N2. Полученную смесь перемешивали в течение ночи при 105°С в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1:4) с получением 680 мг (78,10%) трет-бутил N-[[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2ил]метил]карбамата в виде коричневого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=381.2.tert-Butyl N-([4-amino-7-bromo-[1,3]oxazolo[4,5c]quinolin-2-yl]methyl)carbamate (900 mg, 2.29 mmol , 1 eq.), 5-(4,4,5,5-Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)-1H-pyrazole (0.9 g, 4.58 mmol, 2.00 eq.) , Cs 2 CO 3 (2.2 g, 6.87 mmol, 3.00 eq.) and Pd(dppf)Cl 2 (334.9 mg, 0.46 mmol, 0.20 eq.) in dioxane (5 ml) and H2O (0.5 ml) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred overnight at 105° C. under nitrogen. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified on a silica gel column using ethyl acetate/petroleum ether (1:4) to give 680 mg (78.10%) tert-butyl N-[[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl) -[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2yl]methyl]carbamate as a brown solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =381.2.
Стадия 5. 2-(аминометил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4-амин.Step 5 2-(Aminomethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4-amine
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили трет-бутил N-[[4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]метил]карбамат (100 мг, 0,26 ммоль, 1 экв.) в DCM (5 мл) и HCl (4N) в диоксане (2 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (от 15% фазы В до 33% за 8 мин); детектор, UV 254 нм. Это обеспечило получение 8,9 мг (12,08%) 2-(аминометил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4амина в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+= 281.1. 1Н-ЯМР: 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 12.96 (s, 1H), 8.35 (m, 4Н), 6.88 (d, J=34.5 Гц, 3H), 4.16 (s, 2H), 1.24 (s, 1H).tert-Butyl N-[[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]methyl] was added to a 25 ml round bottom flask. carbamate (100 mg, 0.26 mmol, 1 eq.) in DCM (5 ml) and HCl (4N) in dioxane (2 ml). The resulting solution was stirred for 1.5 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated in vacuo. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: XBridge Shield RP18 OBD column, 5 µm, 19x150 mm; mobile phase, water (10 mM NH 4 HCO 3 ) and ACN (15% phase B to 33% in 8 min); detector, UV 254 nm. This provided 8.9 mg (12.08%) of 2-(aminomethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4amine as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + = 281.1. 1H-NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.96 (s, 1H), 8.35 (m, 4H), 6.88 (d, J=34.5 Hz, 3H), 4.16 (s, 2H), 1.24 ( s, 1H).
Стадия 6. 2-[(диметиламино)метил]-7-(1H-пиразол-5-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4-амин.Step 6 2-[(dimethylamino)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4-amine
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили 2-(аминометил)-7-(1H-пиразол-5-ил)[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (40 мг, 0,14 ммоль, 1 экв.), НСНО (12,9 мг, 0,43 ммоль, 3,0 экв.) в МеОН (2 мл) и CH3COOH (0,2 мл). Затем добавляли NaBH3CN (26,9 мг, 0,43 ммоль, 3,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условиях: колонка: XBridge Prep OBD C18, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: вода (10 мМ NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 5 до 40% В за 7,5 мин; 254/210 нм; RT: 7,1 мин. Это обеспечило получение 10 мг (22,73%) 2-[(диметиламино)метил]-7-(1Н-пиразол-5-ил)[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4-амина в виде белого твердого вещества. Методы LC: колонка: Kinetex EVO C18 3,0x50 мм, частицы 2,6 мкм; подвижная фаза А: вода/5 ммоль NH4HCO3; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин. LC RT: 1,039 мин. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=309.1. 1Н-ЯМР: (300 МГц, CD3OD, ppm) δ 8.16-7.98 (m, 2H), 7.82 (d, J=37.3 Гц, 2Н), 6.81 (s, 1H), 3.98 (s, 2H), 2.48 (s, 6H).2-(Aminomethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (40 mg, 0.14 mmol , 1 eq.), HCHO (12.9 mg, 0.43 mmol, 3.0 eq.) in MeOH (2 ml) and CH3COOH (0.2 ml). NaBH 3 CN (26.9 mg, 0.43 mmol, 3.0 eq.) was then added. The resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions: column: XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm, 5 µm; mobile phase A: water (10 mM NH 4 HCO 3 ), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 5 to 40% B in 7.5 minutes; 254/210 nm; RT: 7.1 min. This provided 10 mg (22.73%) of 2-[(dimethylamino)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4-amine in form of a white solid. LC Methods: Column: Kinetex EVO C18 3.0x50 mm, particles 2.6 µm; mobile phase A: water/5 mmol NH 4 HCO 3 ; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min. LC RT: 1.039 min. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =309.1. 1 H-NMR: (300 MHz, CD 3 OD, ppm) δ 8.16-7.98 (m, 2H), 7.82 (d, J=37.3 Hz, 2H), 6.81 (s, 1H), 3.98 (s, 2H) , 2.48(s, 6H).
Пример 146. 2-[3-(бензилокси)пропил]-7-(1H-пиразол-3-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4-амин.Example 146 2-[3-(Benzyloxy)propyl]-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4-amine
Соединение по примеру 146 получали согласно методикам синтеза, аналогичным методикам, описанным в примере 145, с использованием соответствующих исходных материалов. 1H ЯМР (400 МГц, метанол-d4) δ 8.02 (br s, 1H), 7.97 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.64 (br d, J=1.5 Гц, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.31-7.16 (m, 5H), 6.74 (d, J=1.6 Гц, 1H), 4.51 (s, 2Н), 3.66 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.17 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.33 - 2.18 (m, 2H). LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=400.2.Example 146 was prepared according to synthetic procedures similar to those described in Example 145 using the appropriate starting materials. 1H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ 8.02 (br s, 1H), 7.97 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.64 (br d, J=1.5 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H) , 7.31-7.16 (m, 5H), 6.74 (d, J=1.6 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.66 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.17 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.33 - 2.18 (m, 2H). LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =400.2.
- 87 042018- 87 042018
Пример 147. Получение 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]пропан1-ола.Example 147 Preparation of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]propan1-ol
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили раствор 2-[3-(бензилокси)-пропил]-7-(1H-пиразол3-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин-4-амина (200 мг, 0,50 ммоль, 1,00 экв.) в этаноле (30 мл). К раствору добавляли Pd(OH)2 (100 мг). Полученный раствор дегазировали и снова заполняли водородом. Полученный раствор перемешивали в течение 2 дней при 70°С на масляной бане. Твердые вещества удаляли фильтрацией. Раствор концентрировали под вакуумом. Остаток очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (HPLC-10): колонка X Bridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (от 10,0% ACN до 36,0% за 8 мин); детектор, UV 254/210 нм. Это обеспечило получение 45 мг (29%) 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-[1,3]оксазоло[4,5-с]хинолин2-ил]пропан-1-ола в виде белого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=310,1. 1Н-ЯМР: (CD3OD, 300 МГц, ppm): δ 8.14-7.96 (m, 2H), 7.85-7.81 (m, 1H), 7.78-7.68 (m, 1H), 6.79 (s, 1H), 3.74 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.17 (t, J=4.5 Гц, 2Н), 2.21-2.12 (m, 2H).A solution of 2-[3-(benzyloxy)-propyl]-7-(1H-pyrazol3-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (200 mg, 0.50 mmol, 1.00 eq.) in ethanol (30 ml). Pd(OH) 2 (100 mg) was added to the solution. The resulting solution was degassed and refilled with hydrogen. The resulting solution was stirred for 2 days at 70° C. in an oil bath. Solids were removed by filtration. The solution was concentrated under vacuum. The residue was purified by preparative HPLC using the following conditions (HPLC-10): X Bridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 µm; mobile phase, water (10 mM NH 4 HCO 3 ) and ACN (10.0% ACN to 36.0% in 8 min); detector, UV 254/210 nm. This provided 45 mg (29%) of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-[1,3]oxazolo[4,5-c]quinolin2-yl]propan-1-ol as a white solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=310.1. 1 H-NMR: (CD 3 OD, 300 MHz, ppm): δ 8.14-7.96 (m, 2H), 7.85-7.81 (m, 1H), 7.78-7.68 (m, 1H), 6.79 (s, 1H) , 3.74 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.17 (t, J=4.5 Hz, 2H), 2.21-2.12 (m, 2H).
Пример 148. Получение 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)фуро[2,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола.Example 148 Preparation of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)furo[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol
Стадия 1. 7-бром-4-иодохинолин-3-ол.Stage 1. 7-bromo-4-iodoquinoline-3-ol.
В круглодонную колбу объемом 250 мл помещали раствор 7-бромхинолин-З-ола (2000 мг, 8,93 ммоль, 1,00 экв.) в 2N растворе NaOH (40 мл). К этой смеси по каплям добавляли раствор йода (4536 мг, 17,86 ммоль) в 20% водном йодиде калия (40 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при 25°С. Затем значение рН раствора доводили до 6-7 уксусной кислотой. Твердые вещества собирали фильтрованием и трижды промывали 15 мл H2O. Это обеспечило получение 2740 мг (88%) 7-бром-4йодохинолин-3-ола в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=350.0.A solution of 7-bromoquinolin-3-ol (2000 mg, 8.93 mmol, 1.00 eq.) in 2N NaOH solution (40 ml) was placed in a 250 ml round bottom flask. To this mixture was added dropwise a solution of iodine (4536 mg, 17.86 mmol) in 20% aqueous potassium iodide (40 ml). The resulting solution was stirred for 3 hours at 25°C. Then the pH value of the solution was adjusted to 6-7 with acetic acid. The solids were collected by filtration and washed three times with 15 ml H2O. This provided 2740 mg (88%) of 7-bromo-4-iodoquinolin-3-ol as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=350.0.
Стадия 2. 3-[7-бромфуро[2,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ол.Step 2 3-[7-bromofuro[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol.
В круглодонную колбу объемом 250 мл, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили раствор 7-бром-4-йодохинолин-3-ола (1575 мг, 4,50 ммоль, 1,00 экв.) в CH3CN (20 мл) и TEA (10 мл). К раствору добавляли пент-4-ин-1-ол (378 мг, 4,50 ммоль, 1,00 экв.), Pd(PPh3)4 (156 мг, 0,14 ммоль, 0,03 экв.) и CuI (27 мг, 0,14 ммоль, 0,03 экв). Полученный раствор перемешивали в течение 12 ч при 70°С на масляной бане. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1/2). Это обеспечило получение 681 мг (49%) 3-[7-бромфуро[2,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола в виде желтого твердого вещества LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=306.2.To a 250 ml round bottom flask, purged and maintained under an inert nitrogen atmosphere, was added a solution of 7-bromo-4-iodoquinolin-3-ol (1575 mg, 4.50 mmol, 1.00 eq.) in CH 3 CN (20 ml ) and TEA (10 ml). To the solution were added pent-4-yn-1-ol (378 mg, 4.50 mmol, 1.00 eq.), Pd(PPh 3 ) 4 (156 mg, 0.14 mmol, 0.03 eq.) and CuI (27 mg, 0.14 mmol, 0.03 eq). The resulting solution was stirred for 12 hours at 70° C. in an oil bath. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was applied to a silica gel column using ethyl acetate/petroleum ether (1/2). This provided 681 mg (49%) of 3-[7-bromofuro[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol as a yellow solid LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=306.2.
Стадия 3. 7-бром-2-(3-гидроксипропил)фуро[2,3-с]хинолин-5-иум-5-олат.Step 3: 7-bromo-2-(3-hydroxypropyl)furo[2,3-c]quinoline-5-ium-5-olate.
В круглодонную колбу объемом 250 мл, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили раствор 3-[7-бромфуро[2,3-с]хинолин-2-ил]-пропан-1-ола (681 мг, 2,22 ммоль, 1,00 экв.) в диTo a 250 ml round bottom flask, purged and maintained under an inert nitrogen atmosphere, was added a solution of 3-[7-bromofuro[2,3-c]quinolin-2-yl]-propan-1-ol (681 mg, 2.22 mmol , 1.00 equiv.) in di
- 88 042018 хлорметане (20 мл). К раствору добавляли m-CPBA (824 мг, 4,77 ммоль, 2,15 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 25°С. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (25/1). Это обеспечило получение 470 мг (66%) 7-бром-2-(3-гидроксипропил)фуро[2,3-с]хинолин-5-иум-5-олата в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=322.2.- 88 042018 chloromethane (20 ml). m-CPBA (824 mg, 4.77 mmol, 2.15 eq) was added to the solution. The resulting solution was stirred for 2 hours at 25°C. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was applied to a silica gel column using dichloromethane/methanol (25/1). This provided 470 mg (66%) of 7-bromo-2-(3-hydroxypropyl)furo[2,3-c]quinoline-5-ium-5-olate as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=322.2.
Стадия 4. 3-[4-амино-7-бромфуро[2,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ол В круглодонную колбу объемом 250 мл вносили раствор 7-бром-2-(3-гидроксипропил)фуро[2,3-с]хинолин-5-иум-5-олата (470 мг, 1,46 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (20 мл). К раствору добавляли NH3-H2O (10 мл) и TsCl (416 мг, 2,18 ммоль, 1,50 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 25°С. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (10/1). Это обеспечило получение 390 мг (83%) 3-[4-амино-7-бромфуро[2,3с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=321.2.Step 4. 3-[4-Amino-7-bromofuro[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol A solution of 7-bromo-2-(3-hydroxypropyl) was added to a 250 ml round bottom flask. furo[2,3-c]quinoline-5-ium-5-olate (470 mg, 1.46 mmol, 1.00 eq.) in dichloromethane (20 mL). NH3-H2O (10 ml) and TsCl (416 mg, 2.18 mmol, 1.50 eq.) were added to the solution. The resulting solution was stirred for 2 hours at 25°C. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was loaded onto a silica gel column using dichloromethane/methanol (10/1). This provided 390 mg (83%) of 3-[4-amino-7-bromofuro[2,3c]quinolin-2-yl]propan-1-ol as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =321.2.
Стадия 5. 3-[4-амино-7-(1 H-пиразол-3 -ил)фуро [2,3-с]хинолин-2-ил] пропан-1 -ол.Step 5 3-[4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)furo[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol.
В круглодонную колбу объемом 100 мл, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили раствор 3-[4-амино-7-бромфуро[2,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола (390 мг, 1,21 ммоль, 1,00 экв.) в смеси диоксан/вода (15/3 мл). К раствору добавляли 3-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Hпиразол (350 мг, 1,80 ммоль, 1,49 экв.), Cs2CO3 (785 мг, 2,45 ммоль, 2,01 экв.) и Pd(dppf)Cl2.DCM (200 мг, 0,24 ммоль, 0,20 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 12 ч при 100°С на масляной бане. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (10/1). Полученный неочищенный продукт (250 мг) очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (HPLC-10): колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза, вода (10 мМ NH4HCO3) и ACN (от 15,0% ACN до 35,0% за 9 мин); детектор, UV 254/210 нм. Это обеспечило получение 77 мг (21%) 3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3ил)фуро[2,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1-ола в виде белого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=309.1. 1Н-ЯМР (CD3OD, 400 МГц, ppm): δ 8.10-8.01 (m, 2Н), 7.86-7.64 (m, 2Н), 7.10 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.69 (t, J=6.4 Гц, 2Н), 3.03 (t, J=7.2 Гц, 2Н), 2.09-2.02 (m, 2H).A 100 ml round-bottom flask, purged and maintained under an inert nitrogen atmosphere, was filled with a solution of 3-[4-amino-7-bromofuro[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol (390 mg, 1 .21 mmol, 1.00 eq.) in dioxane/water (15/3 mL). To the solution was added 3-(tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1Hpyrazole (350 mg, 1.80 mmol, 1.49 eq.), Cs 2 CO 3 (785 mg, 2.45 mmol , 2.01 eq.) and Pd(dppf)Cl 2 .DCM (200 mg, 0.24 mmol, 0.20 eq.). The resulting solution was stirred for 12 hours at 100° C. in an oil bath. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was loaded onto a silica gel column using dichloromethane/methanol (10/1). The resulting crude product (250 mg) was purified by preparative HPLC using the following conditions (HPLC-10): XBridge Shield RP18 OBD column, 19x250 mm, 10 µm; mobile phase, water (10 mM NH4HCO3) and ACN (15.0% ACN to 35.0% in 9 min); detector, UV 254/210 nm. This provided 77 mg (21%) of 3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3yl)furo[2,3-c]quinolin-2-yl]propan-1-ol as a white solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =309.1. 1H-NMR (CD3OD, 400 MHz, ppm): δ 8.10-8.01 (m, 2H), 7.86-7.64 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.69 (t, J =6.4 Hz, 2H), 3.03 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.09-2.02 (m, 2H).
Пример 149. Получение 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-nиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина.Example 149 Preparation of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-p-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine
Стадия 1. 7-бром-2-(4-метоксибензил)-2,5-дигидро-4Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-он.Step 1. 7-bromo-2-(4-methoxybenzyl)-2,5-dihydro-4H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4-one.
К суспензии 7-бром-2,5-дигидро-4Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-она (256 мг, 0,969 ммоль) (полученной согласно WO 2013/045400) в DMF (9694 мкл) добавляли карбонат калия (402 мг, 2,91 ммоль) и 1(хлорметил)-4-метоксибензол (158 мкл, 1,163 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Реакционную смесь разбавляли 10% МеОН-EtOAc (200 мл), промывали H2O (200 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Использовали без дополнительной очистки. LC-MS m/z 384/386 [М+Н]+. По видимому, присутствовало незначительное количество региоизомерного продукта, и использовали на следующих трех стадиях синтеза.The carbonate potassium (402 mg, 2.91 mmol) and 1(chloromethyl)-4-methoxybenzene (158 µl, 1.163 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 days. The reaction mixture was diluted with 10% MeOH-EtOAc (200 ml), washed with H2O (200 ml) and saturated aqueous NaCl (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. Used without further purification. LC-MS m/z 384/386 [M+H] + . Apparently, there was a small amount of regioisomeric product, and was used in the next three stages of the synthesis.
- 89 042018- 89 042018
Стадия 2. 7-бром-4-хлор-2-(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин.Step 2. 7-bromo-4-chloro-2-(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline.
К смеси 7-бром-2-(4-метоксибензил)-2,5-дигидро-4Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-она (неочищенный продукт из предыдущей реакции) в CH2Cl2 (4548 мкл) и DMF (227 мкл) при 0°С добавляли по каплям фосфорилхлорид (107 мкл, 1,146 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 17 ч. Добавляли дополнительное количество POCl3 (53,5 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляли дополнительное количество DMF (0,5 мл) и перемешивали в течение 3 ч. Реакцию гасили медленным добавлением при перемешивании 1,5 М водн. K2HPO4 (100 мл). Смесь экстрагировали CH2Cl2 (2x100 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в смеси CH2Cl2 и МеОН, смешивали с целитом и концентрировали в вакууме. Этот материал загружали на колонку методом сухого ввода и повторно очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAc-CH2Cl2) с получением 7-бром-4-хлор-2-(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолина (108 мг, 28%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS m/z 402/404 [М+Н]+.To a mixture of 7-bromo-2-(4-methoxybenzyl)-2,5-dihydro-4H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4-one (crude product from previous reaction) in CH 2 Cl 2 (4548 µl ) and DMF (227 μl) at 0°C was added dropwise phosphoryl chloride (107 μl, 1.146 mmol). The solution was stirred at room temperature for 17 hours. Additional POCl 3 (53.5 μl) was added and stirred at room temperature for 1.5 hours. Additional DMF (0.5 ml) was added and stirred for 3 hours. The reaction was quenched by slow addition with stirring of 1.5 M aq. K2HPO4 (100 ml). The mixture was extracted with CH 2 Cl 2 (2x100 ml). The combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in a mixture of CH 2 Cl 2 and Meon, mixed with celite and concentrated in vacuo. This material was loaded onto the column by dry injection and repurified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc-CH 2 Cl 2 ) to give 7-bromo-4-chloro-2-(4-methoxybenzyl)- 2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline (108 mg, 28%) as an off-white solid. LC-MS m/z 402/404 [M+H]+.
Стадия 3. 7-бром-N,2-бис(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 3. 7-bromo-N,2-bis(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine.
К раствору 7-бром-4-хлор-2-(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолина (108 мг, 0,268 ммоль) в DMSO (894 мкл) при комнатной температуре добавляли (4-метоксифенил)метанамин (70,1 мкл, 0,536 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (140 мкл, 0,805 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 22 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Этот продукт использовали без дополнительной очистки. LC-MS m/z 503/505 [М+Н]+.To a solution of 7-bromo-4-chloro-2-(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline (108 mg, 0.268 mmol) in DMSO (894 µl) was added (4-methoxyphenyl )methanamine (70.1 µl, 0.536 mmol) and N,N-diisopropylethylamine (140 µl, 0.805 mmol). The reaction mixture was stirred at 80° C. for 22 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H 2 O (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. This product was used without further purification. LC-MS m/z 503/505 [M+H] + .
Стадия 4. 7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин, TFA.Step 4. 7-bromo-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, TFA.
Раствор 7-бром-N,2-бис(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (143 мг, 0,284 ммоль) в TFA (568 мкл) герметично закрывали и перемешивали при 70°С в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт концентрировали из CH2Cl2 (2x2 мл). Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (0,5 мл), фильтровали и промывали CH2Cl2 (3x0,5 мл) с получением 7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, TFA (99 мг, 92%) в виде белого твердого вещества. LC-MS m/z 263/265 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.26-12.95 (m, 1H), 9.81-9.57 (m, 1H), 8.95-8.56 (m, 2H), 8.18 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.93 (br s, 1H), 7.80-7.70 (m, 1H).A solution of 7-bromo-N,2-bis(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (143 mg, 0.284 mmol) in TFA (568 µl) was sealed and stirred at 70 °C for 16 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and concentrated in vacuo. The crude product was concentrated from CH 2 Cl 2 (2x2 ml). The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (0.5 ml), filtered and washed with CH 2 Cl 2 (3x0.5 ml) to obtain 7-bromo-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, TFA (99 mg, 92%) as a white solid. LC-MS m/z 263/265 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.26-12.95 (m, 1H), 9.81-9.57 (m, 1H), 8.95-8.56 (m, 2H), 8.18 (d, J=8.5 Hz, 1H) , 7.93 (br s, 1H), 7.80–7.70 (m, 1H).
Стадия 5. трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)карбамат.Step 5 tert-Butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate
К раствору 7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, TFA (98 мг, 0,26 ммоль) в DMF (742 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (254 мг, 0,780 ммоль) с последующим трет-бутил (2-бромэтил)карбаматом (64,1 мг, 0,286 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Добавляли целит, и смесь концентрировали в вакууме. Этот материал загружали на колонку методом сухого ввода и очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля с 5 г картриджа для загрузки методом сухого ввода; линейный градиент 0-10% МеОНCH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (54,2 мг, 51%). Продукт соответствовал второму из двух наблюдаемых региоизомерных пиков, элюированных из колонки; это был менее полярный продукт, наблюдаемый в условиях LC-MS. LC-MS m/z 406/408 [М+Н]+; 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.42 (s, 1H), 7.98 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.57 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.29 (dd, J=8.3, 2.0 Гц, 1H), 7.16-7.06 (m, 2H), 6.99 (br t, J=5.6 Гц, 1H), 4.43 (br t, J=5.9 Гц, 2H), 3.43 (q, J=5.9 Гц, 2H), 1.33 (s, 9H).Cesium carbonate (254 mg, 0.780 mmol ) followed by tert-butyl (2-bromoethyl)carbamate (64.1 mg, 0.286 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml) and H 2 O (20 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 and filtered. Celite was added and the mixture concentrated in vacuo. This material was loaded onto a dry-load column and purified by flash chromatography (24 g silica gel with 5 g dry-load cartridge; linear gradient 0-10% MeOHCH2Cl2) to give t-butyl (2-(4-amino-7- bromine-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (54.2 mg, 51%). The product was consistent with the second of two observed regioisomeric peaks eluted from the column; it was a less polar product observed under LC-MS conditions. LC-MS m/z 406/408 [M+H]+; 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.42 (s, 1H), 7.98 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.57 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.29 (dd, J= 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.16-7.06 (m, 2H), 6.99 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 4.43 (br t, J=5.9 Hz, 2H), 3.43 (q, J=5.9 Hz, 2H), 1.33 (s, 9H).
Стадия 6. трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)карбамат.Step 6. tert-butyl 2-yl)ethyl)carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (53,2 мг, 0,131 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Hпиразола (54,6 мг, 0,196 ммоль) и карбоната цезия (128 мг, 0,393 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (1178 мкл) и H2O (131 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 15 мин, затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) (4,79 мг, 6,55 мкмоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 010% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2)-ил)-1Н-пиразол5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата. LC-MS m/z 478 [М+Н]+.A mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (53.2 mg, 0.131 mmol), 1-(tetrahydro- 2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1Hpyrazole (54.6 mg, 0.196 mmol) and cesium carbonate (128 mg, 0.393 mmol) was evacuated and refilled with N2, then 1,4-dioxane (1178 µl) and H2O (131 µl) were added. The resulting mixture was purged with N2 for 15 min, then [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (4.79 mg, 6.55 µmol) was added. The mixture was purged with N2 for 1 min, then stirred at 100°C for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H2O (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; 010% MeOH-CH 2 Cl 2 linear gradient) to give t-butyl (2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2)- yl)-1H-pyrazol5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate. LC-MS m/z 478 [M+H] + .
Стадия 7. 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 7 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine
К раствору трет-бутил (2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (62,6 мг, 0,131 ммоль) в CH2Cl2 (328 мкл) добавляли TFATo a solution of tert-butyl (2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinoline-2 -yl)ethyl)carbamate (62.6 mg, 0.131 mmol) in CH 2 Cl 2 (328 μl) TFA was added
- 90 042018 (328 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали для удаления примерно половины объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (4 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x1 мл) с получением 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (64,3 мг, 94%) в виде белого твердого вещества. Часть этого продукта (10 мг) дополнительно очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 20 минут, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (7,1 мг). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 13.24-13.03 (m, 1H), 9.52-8.98 (m, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.23 (d, J=8.2 Гц, 1H), 8.09 (br s, 1H), 7.92 (br d, J=5.9 Гц, 1H), 7.88 - 7.78 (m, 1H), 6.82 (d, J=2.1 Гц, 1H), 4.73 (br t, J=5.6 Гц, 2H), 3.48-3.44 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 294.0 [М+Н]+; RT: 0,52 мин.- 90 042018 (328 µl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. The reaction mixture was concentrated to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (4 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x1 ml) to give 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4 α-amine, 2 TFA (64.3 mg, 94%) as a white solid. A portion of this product (10 mg) was further purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 20 minutes, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (7.1 mg). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.24-13.03 (m, 1H), 9.52-8.98 (m, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.23 (d, J=8.2 Hz, 1H), 8.09 ( br s, 1H), 7.92 (br d, J=5.9 Hz, 1H), 7.88 - 7.78 (m, 1H), 6.82 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.73 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 3.48-3.44 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 294.0 [M+H]+; RT: 0.52 min.
Пример 150. Получение N-{2-[4-αмино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил]этил}пиридин-2-карбоксамида.Example 150 Preparation of N-{2-[4-α-mino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl]ethyl}pyridine-2-carboxamide.
К раствору пиколиновой кислоты (7,06 мг, 0,057 ммоль) в DMF (174 мкл) при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (18,17 мкл, 0,104 ммоль), а затем HATU (19,84 мг, 0,052 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее по каплям добавляли к раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (27,2 мг, 0,052 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (27,3 мкл, 0,157 ммоль) в DMFA (174 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 4% В, 4-44% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1Нпиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)пиколинамида (14,2 мг, 68%). 'll ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.10 (t, J=5.9 Гц, 1H), 8.62 (d, J=4.7 Гц, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.1 Гц, 1H), 8.03-7.95 (m, 2H), 7.87 (d, J=1.3 Гц, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.64 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.61-7.57 (m, 1H), 7.07-6.84 (m, 2H), 6.75 (d, J=2.1 Гц, 1H), 4.63 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.86 (q, J=5.9 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 399. [М+Н]+; RT: 0,92 мин.To a solution of picolinic acid (7.06 mg, 0.057 mmol) in DMF (174 µl) was added N,N-diisopropylethylamine (18.17 µl, 0.104 mmol) at room temperature, followed by HATU (19.84 mg, 0.052 mmol) . This mixture was stirred at room temperature for 5 minutes, then it was added dropwise to a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 4-amine, 2 TFA (27.2 mg, 0.052 mmol) and N,N-diisopropylethylamine (27.3 µl, 0.157 mmol) in DMFA (174 µl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was diluted with H 2 O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 4% B, 4-44% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1Hpyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl) ethyl)picolinamide (14.2 mg, 68%). 'll NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.10 (t, J=5.9 Hz, 1H), 8.62 (d, J=4.7 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.08 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.03-7.95 (m, 2H), 7.87 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.64 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.61-7.57 ( m, 1H), 7.07-6.84 (m, 2H), 6.75 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.63 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.86 (q, J=5.9 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 399. [M+H]+; RT: 0.92 min.
Пример 151. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]этил}2-хлор-1,3 -тиазол-4-карбоксамида.Example 151 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl]ethyl}2-chloro-1, 3-thiazole-4-carboxamide.
К раствору 2-хлортиазол-4-карбоновой кислоты (9,39 мг, 0,057 ммоль) в DMF (130 мкл) при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (18,17 мкл, 0,104 ммоль), а затем HATU (19,84To a solution of 2-chlorothiazole-4-carboxylic acid (9.39 mg, 0.057 mmol) in DMF (130 µl) at room temperature was added N,N-diisopropylethylamine (18.17 µl, 0.104 mmol) followed by HATU (19, 84
- 91 042018 мг, 0,052 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее по каплям добавляли к раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (27,2 мг, 0,052 ммоль) и К,К-диизопропилэтиламина (27,3 мкл, 0,157 ммоль) в DMF (130 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 7% В, 7-47% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением К-(2-(4-амино-7-(1Нпиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)-2-хлортиазол-4-карбоксамида (14,7 мг, 64%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.83 (br t, J=5.5 Гц, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.63 (br d, J=7.7 Гц, 1H), 6.99-6.88 (m, 2H), 6.76 (d, J=1.9 Гц, 1H), 4.60 (br t, J=5.6 Гц, 2H), 3.82-3.75 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм). m/z 439.0 [М+Н]+; RT: 1,16 мин.- 91 042018 mg, 0.052 mmol). This mixture was stirred at room temperature for 5 minutes, then it was added dropwise to a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 4-amine, 2 TFA (27.2 mg, 0.052 mmol) and K,K-diisopropylethylamine (27.3 µl, 0.157 mmol) in DMF (130 µl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 7% B, 7-47% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1Hpyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl) ethyl)-2-chlorothiazole-4-carboxamide (14.7 mg, 64%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.83 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J=8.3 Hz, 1H) , 7.87 (s, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.63 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 6.99-6.88 (m, 2H), 6.76 (d, J=1.9 Hz, 1H), 4.60 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 3.82-3.75 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 439.0 [M+H]+; RT: 1.16 min.
Пример 152. Получение 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина.Example 152 Preparation of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine
Стадия 1. Синтез 7-бромхинолин-4-амина.Stage 1. Synthesis of 7-bromoquinoline-4-amine.
Раствор 7-бром-4-хлорхинолина (6,8 г, 28,04 ммоль, 1 экв.) в водном растворе аммиака (20 мл) и CH3CN (50 мл) перемешивали в течение 2 дней при 120°С. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью РЕ/EtOAc (5:1) с получением 7-бромхинолин-4-амина (1,1 г, 17,59%) в виде твердого вещества желтого цвета. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=223.0/225.0.A solution of 7-bromo-4-chloroquinoline (6.8 g, 28.04 mmol, 1 eq.) in aqueous ammonia (20 ml) and CH3CN (50 ml) was stirred for 2 days at 120°C. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (5:1) to give 7-bromoquinoline-4-amine (1.1 g, 17.59%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=223.0/225.0.
Стадия 2. Синтез 7-бром-3-йодохинолин-4-амина.Stage 2. Synthesis of 7-bromo-3-iodoquinoline-4-amine.
Раствор 7-бромхинолин-4-амина (1,1 г, 4,93 ммоль, 1 экв.) и NIS (1029 мг, 5,92 ммоль, 1,2 экв.) в CH3CN (20 мл) перемешивали в течение 2 ч при 65°С. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью РЕ/EtOAc (2:1) с получением 7-бром-3-йодохинолин-4-амина (850 мг, 49%) в виде коричнево-желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z):[M+H]+=249.9/251.9. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-de) δ 8.63 (s, 1H), 8.28 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.96 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.60 (dd, J=9.0, 1.7 Гц, 1H), 7.01 (s, 2H).A solution of 7-bromoquinoline-4-amine (1.1 g, 4.93 mmol, 1 eq.) and NIS (1029 mg, 5.92 mmol, 1.2 eq.) in CH3CN (20 mL) was stirred for 2 h at 65°C. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (2:1) to give 7-bromo-3-iodoquinoline-4-amine (850 mg, 49%) as a brown-yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =249.9/251.9. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 8.63 (s, 1H), 8.28 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.60 (dd, J=9.0 , 1.7 Hz, 1H), 7.01 (s, 2H).
Стадия 3. Синтез трет-бутил К-[4-(4-амино-7-бромхинолин-3-ил)бут-3-ин-1-ил]карбамата.Stage 3. Synthesis of tert-butyl K-[4-(4-amino-7-bromoquinolin-3-yl)but-3-yn-1-yl]carbamate.
Раствор 7-бром-3-йодохинолин-4-амина (3 г, 8,6 ммоль, 1 экв.), трет-бутил К-(бут-3-ин-17-bromo-3-iodoquinoline-4-amine solution (3 g, 8.6 mmol, 1 eq.), tert-butyl K-(but-3-yn-1
- 92 042018 ил)карбамата (1745 мг, 10,3 ммоль, 1,2 экв.), CuI (163,7 мг, 0,86 ммоль, 0,1 экв.), Pd(PPh3)2Cl2 (603,4 мг, 0,86 ммоль, 0,1 экв.) и TEA (4349 мг, 42,9 ммоль, 5 экв.) в Et2O (30 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью РЕ/EtOAc (2:1) с получением трет-бутил N-[4-(4-амино-7-бромхинолин-3-ил)бут-3-ин-1-ил]карбамата (1,4 г, 41,7%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=390.1/392.1.- 92 042018 yl) carbamate (1745 mg, 10.3 mmol, 1.2 eq.), CuI (163.7 mg, 0.86 mmol, 0.1 eq.), Pd (PPh 3 ) 2 Cl 2 ( 603.4 mg, 0.86 mmol, 0.1 eq.) and TEA (4349 mg, 42.9 mmol, 5 eq.) in Et 2 O (30 ml) were stirred overnight at room temperature under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (2:1) to give tert-butyl N-[4-(4-amino-7-bromoquinolin-3-yl)but-3-yn-1-yl ]carbamate (1.4 g, 41.7%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=390.1/392.1.
Стадия 4. Синтез трет-бутил N-(2-[7-бром-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]-этил)карбамата.Step 4. Synthesis of tert-butyl N-(2-[7-bromo-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate.
Раствор трет-бутил N-[4-(4-амино-7-бромхинолин-3-ил)бут-3-ин-1-ил]-карбамата (1,8 г, 4,612 ммоль, 1 экв.) и KOH (5,17 г, 9,2 ммоль, 2,0 экв.) в DMF (20 мл) перемешивали в течение ночи при 40°С в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью РЕ/EtOAc (1:1) с получением трет-бутил N(2-[7-бром-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил)карбамата (540 мг, 30%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=390.1/392.1. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 12.38 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.31 (d, J=8.7 Гц, 1H), 8.18 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.74 (dd, J=8.8, 1.8 Гц, 1H), 7.04 (t, J=5.5 Гц, 1H), 6.54 (s, 1H), 3.39-3.35 (m, 2H), 2.96 (t, J=7.2 Гц, 2Н), 1.37 (s, 9H).A solution of tert-butyl N-[4-(4-amino-7-bromoquinolin-3-yl)but-3-yn-1-yl]-carbamate (1.8 g, 4.612 mmol, 1 eq.) and KOH ( 5.17 g, 9.2 mmol, 2.0 eq.) in DMF (20 ml) was stirred overnight at 40° C. under nitrogen. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (1:1) to give t-butyl N(2-[7-bromo-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl) carbamate (540 mg, 30%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H] + =390.1/392.1. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.38 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.31 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.18 (d, J=1.7 Hz, 1H) , 7.74 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1H), 7.04 (t, J=5.5 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 3.39-3.35 (m, 2H), 2.96 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).
Стадия 5. Синтез 7-бром-2-(2-[[(трет-бутокси)карбонил]амино]этил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-5иум-5-олата.Step 5. Synthesis of 7-bromo-2-(2-[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]ethyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-5ium-5-olate.
Раствор трет-бутил N-(2-[7-бром-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил)-карбамата (360 мг, 0,922 ммоль, 1 экв.) и mCPBA (318,3 мг 1,85 ммоль, 2 экв.) в DCM (10 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH2Cl2/МеОН (20:1) с получением 7-бром-2-(2[[(трет-бутокси)карбонил]амино]этил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-5-иум-5-олата (120 мг, 32%) в виде желтого твердого вещества LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=406.1/408.1.A solution of tert-butyl N-(2-[7-bromo-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl)-carbamate (360 mg, 0.922 mmol, 1 eq) and mCPBA (318, 3 mg 1.85 mmol, 2 eq.) in DCM (10 ml) was stirred overnight at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with CH 2 Cl 2 /MeOH (20:1) to give 7-bromo-2-(2[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]ethyl)-1H-pyrrolo[3 ,2-c]quinoline-5-ium-5-olate (120 mg, 32%) as yellow solid LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=406.1/408.1.
Стадия 6. Синтез трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил)карбаната.Step 6. Synthesis of tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbanate.
Раствор 7-бром-2-(2-[[(трет-бутокси)карбонил]амино]этил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-5-иум-5олата (180 мг, 0,44 ммоль, 1 экв.) и TsCl (168,9 мг, 0,88 ммоль, 2 экв.) в NH3H2O (5 мл) и DCM (15 мл) перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH2Cl2/МеОН (30:1) с получением трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-2ил]этил)карбамата (175 мг, 97,5%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [М+Н]+=405.1/407.1.A solution of 7-bromo-2-(2-[[(tert-butoxy)carbonyl]amino]ethyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-5-ium-5olate (180 mg, 0.44 mmol, 1 eq.) and TsCl (168.9 mg, 0.88 mmol, 2 eq.) in NH3H2O (5 ml) and DCM (15 ml) were stirred for 2 h at room temperature. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with CH 2 Cl 2 /MeOH (30:1) to give tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-1H-pyrrolo[3,2-c] quinolin-2yl]ethyl)carbamate (175 mg, 97.5%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H] + =405.1/407.1.
Стадия 7. Синтез трет-бутил N-[2-[4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-1Н-пирроло-[3,2-с]хинолин-2ил]этил]карбамата.Step 7. Synthesis of tert-butyl N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo-[3,2-c]quinolin-2yl]ethyl]carbamate.
Раствор трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил)-карбамата (175 мг, 0,43 ммоль, 1 экв.), 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)--4Н-пиразола (167,6 мг, 0,86 ммоль, 2,0 экв.), Pd(dppf)Cl2 (63,19 мг, 0,086 ммоль, 0,2 экв.) и Cs2CO3 (422 мг, 1,295 ммоль, 3 экв.) в диоксане (10 мл) и H2O (1 мл) перемешивали в течение ночи при 90°С в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH2Cl2/МеОН (10:1) с получением трет-бутил N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил]карбамата (152 мг, 89,7%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=393.2.A solution of tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl)-carbamate (175 mg, 0.43 mmol, 1 eq. ), 3-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)--4H-pyrazole (167.6 mg, 0.86 mmol, 2.0 eq.), Pd(dppf)Cl 2 (63.19 mg, 0.086 mmol, 0.2 eq.) and Cs 2 CO 3 (422 mg, 1.295 mmol, 3 eq.) in dioxane (10 ml) and H2O (1 ml) were stirred overnight at 90° C. under nitrogen. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with CH 2 Cl 2 /MeOH (10:1) to give t-butyl N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[ 3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl]carbamate (152 mg, 89.7%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=393.2.
Стадия 8. Синтез 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина.Step 8. Synthesis of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine.
Раствор трет-бутил N-[2-[4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-2ил]этил]карбамата (152 мг, 0,38 ммоль, 1 экв.) в HCl в 1,4-диоксане (4N, 5 мл) перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом, а затем очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 1-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 20 минут, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали наосновании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=293.0. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.94-8.55 (m, 1H), 8.23 (br d, J=8.2 Гц, 1H), 8.17 (br d, J=0.8 Гц, 1H), 7.97 (br d, J=7.2 Гц, 1H), 7.92-7.81 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.84 (br s, 1H), 3.42-3.42 (m, 1H), 3.29-3.19 (m, 2H), 3.14 (br d, J=7.6 Гц, 2Н).A solution of tert-butyl N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2yl]ethyl]carbamate (152 mg, 0.38 mmol, 1 eq.) in HCl in 1,4-dioxane (4N, 5 ml) was stirred for 2 h at room temperature. The resulting mixture was concentrated in vacuo and then purified by preparative HPLC using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 1 minute hold at 0% B, 0-40% B for 20 minutes, then 4 minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was started based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=293.0. 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.94-8.55 (m, 1H), 8.23 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 8.17 (br d, J=0.8 Hz, 1H), 7.97 (br d , J=7.2 Hz, 1H), 7.92-7.81 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.84 (br s, 1H), 3.42-3.42 (m, 1H), 3.29-3.19 (m, 2H) , 3.14 (br d, J=7.6 Hz, 2H).
- 93 042018- 93 042018
Пример 153. Получение 2-[2-(диметиламино)этил]-7-(1Н-пиразол-5-ил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин4-амина.Example 153 Preparation of 2-[2-(dimethylamino)ethyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline4-amine
Раствор 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (50 мг, 0,17 ммоль, 1 экв.), НСНО (15,4 мг, 0,51 ммоль, 3 экв.) и NaBH3CN (21,5 мг, 0,34 ммоль, 2 экв.) в МеОН (10 мл) и CH3COOH (0,5 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (колонка: Sunfire Prep C18 OBD, 10 мкм, 19x250 мм; подвижная фаза А: вода (0,05% TFA), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 15 до 30% В за 8 мин; 254/210 нм; Rt: 6,37 мин) с получением 2-[2-(диметиламино)этил]-7-(1Н-пиразол-5-ил)-1Нпирроло[3,2-с]хинолин-4-амина; бис(трифторуксусной кислоты) (13,4 мг, 14,29%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+ =321.2 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d4, ppm) δ 8.17 (dd, J=8.5, 2.5 Гц, 1H), 8.06 (dt, J=3.7, 1.8 Гц, 1H), 7.95 (dt, J=8.3, 1.6 Гц, 1H), 7.77 (d, J=2.3 Гц, 1H), 6.92 (d, J=2.5 Гц, 1H), 6.84 (d, J=2.3 Гц, 1H), 3.60 (dd, J=8.9, 6.8 Гц, 2Н), 3.36 (t, J=7.9 Гц, 2Н), 3.01 (s, 6H).2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine solution (50 mg, 0.17 mmol, 1 eq.), HCHO (15.4 mg, 0.51 mmol, 3 eq.) and NaBH 3 CN (21.5 mg, 0.34 mmol, 2 eq.) in MeOH (10 ml) and CH3COOH (0.5 ml) were stirred overnight at room temperature. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions (column: Sunfire Prep C18 OBD, 10 µm, 19x250 mm; mobile phase A: water (0.05% TFA), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 15 to 30% B over 8 min; 254/210 nm; Rt: 6.37 min) to give 2-[2-(dimethylamino)ethyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1Hpyrrolo [3,2-c]quinoline-4-amine; bis(trifluoroacetic acid) (13.4 mg, 14.29%) as an off-white solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+ =321.2 1H NMR (400 MHz, methanol-d 4 , ppm) δ 8.17 (dd, J=8.5, 2.5 Hz, 1H), 8.06 ( dt, J=3.7, 1.8Hz, 1H), 7.95 (dt, J=8.3, 1.6Hz, 1H), 7.77 (d, J=2.3Hz, 1H), 6.92 (d, J=2.5Hz, 1H), 6.84 (d, J=2.3 Hz, 1H), 3.60 (dd, J=8.9, 6.8 Hz, 2H), 3.36 (t, J=7.9 Hz, 2H), 3.01 (s, 6H).
Пример 154. Получение N-{2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-2ил]этил} пропанамида.Example 154 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2yl]ethyl}propanamide.
Раствор 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (50 мг, 0,17 ммоль, 1 экв.), пропаноил хлорида (19,0 мг, 0,21 ммоль, 1,2 экв.) и TEA (34,6 мг, 0,34 ммоль, 2 экв.) в DCM (10 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (колонка: Sunfire Prep C18 OBD, 10 мкм, 19x250 мм; подвижная фаза А: вода (0,05% TFA), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 15 до 30% В за 8 мин; 254/210 нм; RT: 6,37 мин) с получением 3,3,3-трифторпроп-1-ен-2-ола N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил]пропанамида гидрата (8,5 мг, 10,39%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [М+Н]+=349.2. 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d4, ppm) δ 8.16 (d, J=8.4 Гц, 1H), 8.04 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.94 (dd, J=8.4, 1.6 Гц, 1H), 7.76 (d, J=2.3 Гц, 1H), 6.83-6.80 (m, 2Н), 3.59 (t, J=7.1 Гц, 2Н), 3.05 (t, J=7.0 Гц, 2Н), 2.20-2.18 (m, 2H), 1.10 (t, J=7.6 Гц, 3H).2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine solution (50 mg, 0.17 mmol, 1 eq.), propanoyl chloride (19.0 mg, 0.21 mmol, 1.2 eq.) and TEA (34.6 mg, 0.34 mmol, 2 eq.) in DCM (10 ml) were stirred overnight at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions (column: Sunfire Prep C18 OBD, 10 µm, 19x250 mm; mobile phase A: water (0.05% TFA), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 15 to 30% B over 8 min; 254/210 nm; RT: 6.37 min) to give 3,3,3-trifluoroprop-1-en-2-ol N-[2-[4-amino -7-(1H-pyrazol-5-yl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl]propanamide hydrate (8.5 mg, 10.39%) as an off-white solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H] + =349.2. 1Н NMR (400 MHz, methanol-d 4 , ppm) δ 8.16 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.94 (dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H ), 7.76 (d, J=2.3 Hz, 1H), 6.83-6.80 (m, 2H), 3.59 (t, J=7.1 Hz, 2H), 3.05 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.20-2.18 (m, 2H), 1.10 (t, J=7.6 Hz, 3H).
Пример 155. Получение N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-2ил]этил]пиридин-2-карбоксамида.Example 155 Preparation of N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2yl]ethyl]pyridine-2-carboxamide.
Раствор 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (50 мг, 0,17 ммоль, 1 экв.), пиридин-2-карбоновой кислоты (25,2 мг, 0,21 ммоль, 1,2 экв.), HATU (130 мг, 0,34 ммоль, 2 экв.) и DIEA (66,3 мг, 0,51 ммоль, 3 экв.) в DCM (10 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (колонка: Sunfire Prep C18 OBD, 10 мкм, 19x250 мм; подвижная фаза А: вода (0,05% TFA), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 15 до 40% В за 8 мин; 254/210 нм; RT: 7,5 мин) с получением N-[2-[4-амино-7-(1Н-пиразол5-ил)-Ш-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил]этил]пиридин-2-карбоксамида; бис(трифторуксусной кислоты) (11,1 мг, 10,4%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=398.2. 1Н ЯМР (300 МГц, Метанол d4, ppm) δ 8.62 (s, 1H), 8.09 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 7.97-7.89 (m, 3H), 7.77 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.81 (s, 2H), 3.86 (t, J=7.0 Гц, 2H), 3.31 (s, 4H), 3.18 (t, J=6.9 Гц, 2H).2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine solution (50 mg, 0.17 mmol, 1 eq.), pyridine-2-carboxylic acid (25.2 mg, 0.21 mmol, 1.2 eq.), HATU (130 mg, 0.34 mmol, 2 eq.) and DIEA (66.3 mg, 0.51 mmol , 3 eq.) in DCM (10 ml) was stirred overnight at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The crude product was purified by preparative HPLC using the following conditions (column: Sunfire Prep C18 OBD, 10 µm, 19x250 mm; mobile phase A: water (0.05% TFA), mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 15 to 40% B over 8 min; 254/210 nm; RT: 7.5 min) to give N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol5-yl)-III-pyrrolo[ 3,2-c]quinolin-2-yl]ethyl]pyridine-2-carboxamide; bis(trifluoroacetic acid) (11.1 mg, 10.4%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=398.2. 1H NMR (300 MHz, methanol d 4 , ppm) δ 8.62 (s, 1H), 8.09 (t, J=6.7 Hz, 2H), 7.97-7.89 (m, 3H), 7.77 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.81 (s, 2H), 3.86 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.31 (s, 4H), 3.18 (t, J=6.9 Hz, 2H).
- 94 042018- 94 042018
Пример 156. Получение 2-[(оксолан-2-ил)метил]-7-(Ш-пиразол-5-ил)-Ш-пирроло[3,2-с]хинолин-4аминаExample 156 Preparation of 2-[(oxolan-2-yl)methyl]-7-(III-pyrazol-5-yl)-III-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine
Стадия 1. Синтез 7-бром-3-йодохинолин-4-ола.Stage 1. Synthesis of 7-bromo-3-iodoquinoline-4-ol.
Раствор 7-бромхинолин-4-ола (11 г, 49,095 ммоль, 1 экв.) и йод(сульфанил)амина (10,25 г, 58,9 ммоль, 1,2 экв.) в CH3CN (200 мл) перемешивали в течение 2 ч при 65°С. Осажденные твердые вещества собирали фильтрованием и промывали ацетонитрилом (3x10 мл). Это привело к получению 7-бром-3йодохинолин-4-ола (15,7 г, 91,4%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=349.9.Solution of 7-bromoquinolin-4-ol (11 g, 49.095 mmol, 1 eq.) and iodine(sulfanyl)amine (10.25 g, 58.9 mmol, 1.2 eq.) in CH 3 CN (200 ml) stirred for 2 h at 65°C. The precipitated solids were collected by filtration and washed with acetonitrile (3x10 ml). This resulted in 7-bromo-3-iodoquinolin-4-ol (15.7 g, 91.4%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=349.9.
Стадия 2. Синтез 7-бром-4-хлор-3-йодохинолина.Stage 2. Synthesis of 7-bromo-4-chloro-3-iodoquinoline.
Раствор 7-бром-3-йодохинолин-4-ола (15,7 г, 44,8 ммоль, 1 экв.) и трихлорида фосфорила (20,64 г, 134,59 ммоль, 3 экв.) в диоксане (400 мл, 4721,6 ммоль, 105 экв.) перемешивали в течение 2 ч при 100°С. Реакцию гасили водой/льдом. Смесь нейтрализовали до рН 8 насыщенным водным раствором NaHCO3. Осажденные твердые вещества собирали фильтрованием и промывали водой (3x10 мл). Это привело к получению 7-бром-4-хлор-3-йодхинолина (16 г, 96,8%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=367.8.Solution of 7-bromo-3-iodoquinolin-4-ol (15.7 g, 44.8 mmol, 1 eq.) and phosphoryl trichloride (20.64 g, 134.59 mmol, 3 eq.) in dioxane (400 ml , 4721.6 mmol, 105 eq.) was stirred for 2 h at 100°C. The reaction was quenched with water/ice. The mixture was neutralized to pH 8 with saturated aqueous NaHCO 3 . The precipitated solids were collected by filtration and washed with water (3x10 ml). This resulted in 7-bromo-4-chloro-3-iodoquinoline (16 g, 96.8%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=367.8.
Стадия 3. Синтез 7-бром-3-йод-N-[(4-метоксифенил)метил]хинолин-4-амина.Stage 3. Synthesis of 7-bromo-3-iodo-N-[(4-methoxyphenyl)methyl]quinoline-4-amine.
Раствор 7-бром-4-хлор-3-йодхинолина (16 г, 43,43 ммоль, 1 экв.) и 1-(4-метоксифенил)метанамина (11,9 г, 86,8 ммоль, 2 экв.), основания Хунига (18,67 г, 130,3 ммоль, 3 экв.) в DMF (400 мл) перемешивали в течение ночи при 80°С. Полученную смесь экстрагировали EtOAc (3x300 мл). Объединенные органические слои промывали водой (3x300 мл), сушили над безводным Na2SO4. После фильтрования фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в EtOAc (50 мл). Осажденные твердые вещества собирали фильтрованием и промывали EtOAc (3x10 мл). Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Это привело к получению 7-бром-3-йод-N-[(4метоксифенил)метил]хинолин-4-амина (7 г, 34,36%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [М+Н]+=468.9. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.75 (s, 1H), 8.21 (d, J=9.1 Гц, 1H), 8.01 (d, J=2.1 Гц, 1H), 7.60 (dd, J=9.1, 2.1 Гц, 1H), 7.24 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 6.85 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 6.45 (t, J=6.6 Гц, 1H), 4.83 (d, J=6.6 Гц, 2Н), 3.70 (s, 3H).Solution of 7-bromo-4-chloro-3-iodoquinoline (16 g, 43.43 mmol, 1 eq.) and 1-(4-methoxyphenyl)methanamine (11.9 g, 86.8 mmol, 2 eq.), Hunig base (18.67 g, 130.3 mmol, 3 eq.) in DMF (400 ml) was stirred overnight at 80°C. The resulting mixture was extracted with EtOAc (3x300 ml). The combined organic layers were washed with water (3x300 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 . After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in EtOAc (50 ml). The precipitated solids were collected by filtration and washed with EtOAc (3x10 ml). The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. This resulted in 7-bromo-3-iodo-N-[(4methoxyphenyl)methyl]quinoline-4-amine (7 g, 34.36%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=468.9. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (s, 1H), 8.21 (d, J=9.1 Hz, 1H), 8.01 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.60 (dd, J=9.1 , 2.1 Hz, 1H), 7.24 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.85 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.45 (t, J=6.6 Hz, 1H), 4.83 (d, J=6.6 Hz, 2H), 3.70 (s, 3H).
- 95 042018- 95 042018
Стадия 4. Синтез 7-бром-М-[(4-метоксифенил)метил]-3-[3-(оксолан-2-ил)проп-1-ин-1-ил]хинолин-4амина.Step 4. Synthesis of 7-bromo-M-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3-[3-(oxolan-2-yl)prop-1-yn-1-yl]quinolin-4amine.
Раствор 7-бром-3-йод-М-[(4-метоксифенил)метил]хинолин-4-амина (1 г, 2,1 ммоль, 1 экв.), 2-(проп2-ин-1-ил)оксолана (704 мг, 6,4 ммоль, 3 экв.), CuI (40 мг, 0,21 ммоль, 0,1 экв.), Pd(PPh3)2Cl2 (748 мг, 1,06 ммоль, 0,5 экв.) и триэтиламина (1,08 г, 10,66 ммоль, 5 экв.) в этоксиэтане (20 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя смесью РЕ/EtOAc (2:1) с получением 7-бром-N-[(4-метоксифенил)метил]-3-[3-(оксолан-2-ил)проп-1-ин-1ил]хинолин-4-амина (560 мг, 58,2%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=451.1.Solution of 7-bromo-3-iodo-M-[(4-methoxyphenyl)methyl]quinoline-4-amine (1 g, 2.1 mmol, 1 eq.), 2-(prop2-yn-1-yl)oxolane (704 mg, 6.4 mmol, 3 eq.), CuI (40 mg, 0.21 mmol, 0.1 eq.), Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 (748 mg, 1.06 mmol, 0, 5 eq.) and triethylamine (1.08 g, 10.66 mmol, 5 eq.) in ethoxyethane (20 ml) was stirred overnight at room temperature under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluting with PE/EtOAc (2:1) to give 7-bromo-N-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3-[3-(oxolan-2-yl)prop-1- in-1yl]quinoline-4-amine (560 mg, 58.2%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=451.1.
Стадия 5. Синтез 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1Н-пирроло[3,2с]хинолина.Step 5. Synthesis of 7-bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline.
Раствор 7-бром-N-[(4-метоксифенил)метил]-3-[3-(оксолан-2-ил)проп-1 -ин-1 -ил] хинолин-4-амина (560 мг, 1,24 ммоль, 1 экв.) и t-BuOK (278,44 мг, 2,48 ммоль, 2 экв.) в 1-метилпирролидин-2-оне (5 мл) перемешивали в течение ночи при 65°С в атмосфере азота. Реакцию гасили насыщенным раствором NH4Cl (водн.) при 0°С. Остаток очищали флэш-хроматографией с обращенной фазой с использованием следующих условий: колонка, С18 с силикагелем; подвижная фаза, МеОН в воде, градиент от 10% до 50% за 10 мин; детектор, UV 254 нм. Это привело к получению 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2[(оксолан-2-ил)метил]-1H-пирроло[3,2-с]хинолина (320 мг, 57,1%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=451.1 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 9.12 (s, 1H), 8.21 (d, J=2.1 Гц, 1H), 8.09 (d, J=9.1 Гц, 1H), 7.55 (dd, J=9.0, 2.1 Гц, 1H), 6.85 (s, 4H), 6.82 (s, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.16 (q, J=6.4 Гц, 1H), 3.77 (q, J=6.9 Гц, 1H), 3.62 (q, J=7.4 Гц, 1H), 2.99 (dd, J=5.8, 4.0 Гц, 2Н), 2.01 (ddd, J=12.1, 6.8, 4.4 Гц, 1H), 1.85-1.77 (m, 2H), 1.62-1.55 (m, 1H).7-Bromo-N-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3-[3-(oxolan-2-yl)prop-1-yn-1-yl]quinoline-4-amine solution (560 mg, 1.24 mmol, 1 eq.) and t-BuOK (278.44 mg, 2.48 mmol, 2 eq.) in 1-methylpyrrolidin-2-one (5 ml) were stirred overnight at 65° C. under nitrogen. The reaction was quenched with a saturated solution of NH 4 Cl (aq.) at 0°C. The residue was purified by reverse phase flash chromatography using the following conditions: column, C18 silica gel; mobile phase, MeOH in water, gradient from 10% to 50% in 10 min; detector, UV 254 nm. This resulted in 7-bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline (320 mg, 57.1% ) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =451.1 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.12 (s, 1H), 8.21 (d, J=2.1 Hz, 1H) , 8.09 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.55 (dd, J=9.0, 2.1 Hz, 1H), 6.85 (s, 4H), 6.82 (s, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.16 ( q, J=6.4 Hz, 1H), 3.77 (q, J=6.9 Hz, 1H), 3.62 (q, J=7.4 Hz, 1H), 2.99 (dd, J=5.8, 4.0 Hz, 2H), 2.01 ( ddd, J=12.1, 6.8, 4.4 Hz, 1H), 1.85-1.77 (m, 2H), 1.62-1.55 (m, 1H).
Стадия 6. Синтез 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1H-пирроло[3,2с]хинолин-5-иум-5-олата.Step 6. Synthesis of 7-bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline-5-ium-5-olate.
Раствор 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1H-пирроло[3,2-с]хинолина (320 мг, 0,71 ммоль, 1 экв.) и mCPBA (349 мг, 1,42 ммоль, 2 экв., 70%) в дихлорметане (10 мл) перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной TLC (CH2Cl2/МеОН 30:1) с получением 7-бром-1-[(4метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-5-иум-5-олата (200 мг, 60,4%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=467.1.7-Bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline solution (320 mg, 0.71 mmol, 1 eq.) and mCPBA (349 mg, 1.42 mmol, 2 eq., 70%) in dichloromethane (10 ml) were stirred for 2 h at room temperature. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative TLC (CH 2 Cl 2 /MeOH 30:1) to give 7-bromo-1-[(4methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3.2 -c]quinoline-5-ium-5-olate (200 mg, 60.4%) as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =467.1.
Стадия 7. Синтез 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1H-пирроло[3,2с]хинолин-4-амина.Step 7. Synthesis of 7-bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline-4-amine.
Раствор 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-5иум-5-олата (200 мг, 0,428 ммоль, 1 экв.) и NH4OH (3,00 мл, 85,601 ммоль, 180,03 экв.) в дихлорметане (9 мл) перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем добавляли TsCl (163,17 мг, 0,856 ммоль, 2 экв.) к вышеуказанной смеси и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной TLC (CH2Cl2/МеОН 10:1) с получением 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1Нпирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (160 мг, 80,17%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=466.1.7-Bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-5ium-5-olate solution (200 mg, 0.428 mmol, 1 eq) and NH4OH (3.00 ml, 85.601 mmol, 180.03 eq) in dichloromethane (9 ml) were stirred for 5 min at room temperature. TsCl (163.17 mg, 0.856 mmol, 2 eq) was then added to the above mixture and stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative TLC (CH 2 Cl 2 /MeOH 10:1) to give 7-bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1Hpyrrolo[3.2 -c]quinoline-4-amine (160 mg, 80.17%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H] + =466.1.
Стадия 8. Синтез 1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-7-(1H-пиразол-5-ил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-4-амина.Step 8. Synthesis of 1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinolin- 4-amines.
Раствор 7-бром-1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)метил]-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4амина (160 мг, 0,34 ммоль, 1 экв.) и 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (133 мг, 0,68 ммоль, 2 экв.), Cs2CO3 (335 мг, 1,0 ммоль, 3 экв.), Pd(dppf)Cl2CH2Cl2 (56 мг, 0,069 ммоль, 0,2 экв.) в 1,4-диоксане (5 мл), воде (0,5 мл) перемешивали в течение 3 ч при 90°С в атмосфере азота. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной TLC (CH2Cl2/МеОН 8:1) с получением 1-[(4-метоксифенил)метил]-2-[(оксолан-2-ил)-метил]-7-(1Н-пиразол-5ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (100 мг, 64,27%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=454.2.7-Bromo-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4amine solution (160 mg, 0.34 mmol , 1 eq.) and 3-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (133 mg, 0.68 mmol, 2 eq.), Cs 2 CO 3 (335 mg, 1.0 mmol, 3 eq.), Pd(dppf)Cl 2 CH 2 Cl 2 (56 mg, 0.069 mmol, 0.2 eq.) in 1,4-dioxane (5 ml) , water (0.5 ml) was stirred for 3 h at 90° C. under nitrogen. The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative TLC (CH 2 Cl 2 /MeOH 8:1) to give 1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)-methyl]-7-(1H-pyrazol-5yl )-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (100 mg, 64.27%) as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=454.2.
Стадия 9. Синтез 2-[(оксолан-2-ил)метил]-7-(1H-пиразол-5-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина.Step 9 Synthesis of 2-[(oxolan-2-yl)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine.
Раствор 1 -[(4-метоксифенил)метил] -2-[(оксолан-2-ил)метил] -7-(1 Н-пиразол-5 -ил)-1 Н-пирроло[3,2с]хинолин-4-амина (40 мг, 0,088 ммоль, 1 экв.) и трифторметансульфиновой кислоты (0,5 мл) в 2,2,2трифторацетальдегиде (2 мл) перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Остаток подщелачивали до рН 8 насыщенным водным раствором Na2CO3. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт (40 мг) очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий (колонка: Xbridge Prep С18 OBD, 19x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: вода (10 ммоль/л NH4HCO3+0,1% NH3.H2O), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 25 мл/мин; градиент: от 15 до 35% В за 7 мин; 254/210 нм; RT: 6,37 мин) с получением 2-[(оксолан-2ил)метил]-7-(1Н-пиразол-5-ил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (3,7 мг, 12,58%) в виде светложелтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=334.2. 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d4) δ 8.10 (s,1-[(4-Methoxyphenyl)methyl]-2-[(oxolan-2-yl)methyl]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline-4 solution α-amine (40 mg, 0.088 mmol, 1 eq.) and trifluoromethanesulfinic acid (0.5 ml) in 2,2,2-trifluoroacetaldehyde (2 ml) were stirred for 3 hours at room temperature under nitrogen. The residue was basified to pH 8 with saturated aqueous Na 2 CO 3 . The resulting mixture was concentrated under reduced pressure. The crude product (40 mg) was purified by preparative HPLC using the following conditions (column: Xbridge Prep C18 OBD, 19x150 mm, 5 µm; mobile phase A: water (10 mmol/l NH 4 HCO 3 +0.1% NH3.H2O) , mobile phase B: ACN; flow rate: 25 ml/min; gradient: 15 to 35% B over 7 min; 254/210 nm; RT: 6.37 min) to give 2-[(oxolan-2yl)methyl ]-7-(1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (3.7 mg, 12.58%) as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=334.2. 1Н NMR (400 MHz, methanol-d 4 ) δ 8.10 (s,
- 96 042018- 96 042018
1H), 7.98 (s, 1H), 7.81-7.79 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 4.29-4.22 (m, 1H), 3.95-3.90 (m,1H), 7.98 (s, 1H), 7.81-7.79 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 4.29-4.22 (m, 1H), 3.95 -3.90 (m,
1H), 3.81-3.76 (m, 1H), 3.31-3.30 (m, 2H), 2.18-2.05 (m, 1H), 1.97-1.90 (m, 3H), 1.74-1.66 (m, 1H), 1.28-1.23 (m, 1H).1H), 3.81-3.76 (m, 1H), 3.31-3.30 (m, 2H), 2.18-2.05 (m, 1H), 1.97-1.90 (m, 3H), 1.74-1.66 (m, 1H), 1.28- 1.23(m, 1H).
Пример 157. Получение К-{2-[4-амино-7-(Ш-пиразол-5-ил)-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-2ил]этил}-2-фтор-2-метилпропанамида.Example 157 Preparation of N-{2-[4-amino-7-(III-pyrazol-5-yl)-2H-[1.2.3]triazolo[4.5-c]quinolin-2yl]ethyl}- 2-fluoro-2-methylpropanamide.
стадия 1 ~ стадия 2stage 1 ~ stage 2
CICI
стадия 7stage 7
Стадия 1. Синтез 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-3-иум-3олата.Step 1. Synthesis of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-3-ium-3olate.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили 7-бром-4-хлор-3-нитрохинолин (10,64 г, 37 ммоль, 1 экв.) и TEA (22,47 г, 222 ммоль, 6 экв.) в DCM (200 мл), затем добавляли [(4метоксифенил)метил]гидразина дигидрохлорид (12,5 г, 55,5 ммоль, 1,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 дня при комнатной температуре. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном 3x200 мл, органические слои объединяли и концентрировали. Это привело к получению 11 г (77%) 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-3-иум-3-олата в виде красного твердого вещества. lC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=385.2.In a 500 ml round bottom flask were added 7-bromo-4-chloro-3-nitroquinoline (10.64 g, 37 mmol, 1 eq.) and TEA (22.47 g, 222 mmol, 6 eq.) in DCM (200 ml), then [(4methoxyphenyl)methyl]hydrazine dihydrochloride (12.5 g, 55.5 mmol, 1.5 eq.) was added. The resulting solution was stirred for 1 day at room temperature. The resulting solution was extracted with dichloromethane 3x200 ml, the organic layers were combined and concentrated. This resulted in 11 g (77%) of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-3-ium-3- olata as a red solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=385.2.
Стадия 2. Синтез 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолина.Stage 2. Synthesis of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-3-иум-3-олат (11 г, 28,5 ммоль, 1 экв.) в толуоле (100 мл) и CHCl3 (100 мл), затем последовательно добавляли НМРА (20 мл) и PCl3 (31,07 г, 228 ммоль, 8 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 дня при 100°С. Полученную смесь концентрировали. Значение рН раствора доводили до 7-8 с помощью NaHCO3. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью дихлорметан/этилацетат (30:1). Это привело к получению 5,7 г (54%) 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолина в виде коричневого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=369.2. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 9.35 (s, 1H), 8.80 (d, J=1.7 Гц, 1H), 8.38 (d, J=8.5 Гц, 1H), 8.07 (dd, J=8.5, 1.9 Гц, 1H), 7.42 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 6.95 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 5.94 (s, 2H), 5.76 (s, 1H), 3.74 (s, 3H).7-Bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-3-ium-3-olate (11 g , 28.5 mmol, 1 eq.) in toluene (100 ml) and CHCl 3 (100 ml), then HMPA (20 ml) and PCl 3 (31.07 g, 228 mmol, 8 eq.) were added sequentially. The resulting solution was stirred for 1 day at 100°C. The resulting mixture was concentrated. The pH of the solution was adjusted to 7-8 with NaHCO 3 . The residue was applied to a silica gel column and eluted with dichloromethane/ethyl acetate (30:1). This resulted in 5.7 g (54%) of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline as a brown solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=369.2. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.35 (s, 1H), 8.80 (d, J=1.7 Hz, 1H), 8.38 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.95 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.94 (s, 2H), 5.76 (s, 1H), 3.74 (s, 3H).
Стадия 3. Синтез 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5 олата.Stage 3. Synthesis of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5-olate.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H
- 97 042018- 97 042018
[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин (6,8 г, 18,4 ммоль, 1 экв.) в МеОН (70 мл) и Н2О2 (70 мл), затем добавляли МТО (2,30 г, 9,2 ммоль, 0,50 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюируя смесью дихлорметан/этилацетат (15:1). Это привело к получению 5,7 г (80%) 7-бром-2-[(4метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олата в виде желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=385.2.[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline (6.8 g, 18.4 mmol, 1 eq.) in MeOH (70 ml) and H 2 O 2 (70 ml), then MTO was added (2.30 g, 9.2 mmol, 0.50 eq.). The resulting solution was stirred for 16 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. The residue was applied to a silica gel column eluting with dichloromethane/ethyl acetate (15:1). This resulted in 5.7 g (80%) of 7-bromo-2-[(4methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5- olata as a yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=385.2.
Стадия 4. Синтез 7-бром-4-хлор-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолина.Stage 4. Synthesis of 7-bromo-4-chloro-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили 7-бром-2-[(4-метоксифенил метил]-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-5-иум-5-олат (4,2 г, 10,9 ммоль, 1 экв.) и DMF (2 мл) в DCM (100 мл), затем добавляли POCl3 (2,51 г, 16,354 ммоль, 1,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ночи при 40°С. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном 3x100 мл, органические слои объединяли и концентрировали. Это привело к получению 4,5 г 7-бром-4-хлор-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолина в виде коричневого неочищенного твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=403.0.7-Bromo-2-[(4-methoxyphenyl methyl]-2H[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-5-ium-5-olate (4.2 g, 10.9 mmol, 1 eq.) and DMF (2 ml) in DCM (100 ml), then POCl 3 (2.51 g, 16.354 mmol, 1.5 eq.) was added. The resulting solution was stirred for 1 night at 40° C. The resulting solution was extracted with dichloromethane 3x100 ml, the organic layers were combined and concentrated to give 4.5 g of 7-bromo-4-chloro-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H[1, 2,3]triazolo[4,5-c]quinoline as brown crude solid LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=403.0.
Стадия 5. Синтез 7-бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина.Step 5. Synthesis of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine.
В герметично закрытую пробирку объемом 250 мл вносили 7-бром-4-хлор-2-[(4метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин (4,5 г, 11,148 ммоль, 1 экв.) в диоксане (50 мл) и NH3H2O (50 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ночи при 110°С. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/этилацетат (10:1). Полученную смесь концентрировали. Это привело к получению 2,7 г (63%) 7бром-2-[(4-метоксифенил)метил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина в виде коричневого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=384.2. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.01 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.69 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.49 (s, 2H), 7.40 (dd, J=8.4, 1.7 Гц, 1H), 7.37 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 6.95 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 5.93 (s, 2H), 3.74 (s, 3H).7-bromo-4-chloro-2-[(4methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline (4.5 g, 11.148 mmol, 1 equiv.) in dioxane (50 ml) and NH3H2O (50 ml). The resulting solution was stirred for 1 night at 110°C. The resulting mixture was concentrated. The residue was loaded onto a silica gel column using dichloromethane/ethyl acetate (10:1). The resulting mixture was concentrated. This resulted in 2.7 g (63%) of 7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine as a brown solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=384.2. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.01 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.49 (s, 2H), 7.40 (dd, J= 8.4, 1.7 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.95 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.93 (s, 2H), 3.74 (s, 3H).
Стадия 6. Синтез 7-бром-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина.Stage 6. Synthesis of 7-bromo-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine.
В круглодонную колбу объемом 250 мл вносили 7-бром-2-[(4-метоксифенил)-метил]-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (1,12 г, 2,9 ммоль, 1 экв.) и TFA (30 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 80°С. Полученную смесь концентрировали. Это привело к получению 1,3 7-бром-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина в виде коричневого неочищенного твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=264.0.7-bromo-2-[(4-methoxyphenyl)-methyl]-2H[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (1.12 g, 2.9 mmol, 1 eq.) and TFA (30 ml). The resulting solution was stirred for 16 h at 80°C. The resulting mixture was concentrated. This resulted in 1,3 7-bromo-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine as a brown crude solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=264.0.
Стадия 7. Синтез 7-[1-(оксан-2-ил)-1H-пиразол-5-ил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина.Step 7. Synthesis of 7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine.
В круглодонную колбу объемом 100 мл, продутую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, вносили 7-бром-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (1,3 г, 4,923 ммоль, 1 экв.), Cs2CO3 (4,81 г, 14,768 ммоль, 3 экв.), 1-(оксан-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (2,74 г, 9,845 ммоль, 2,00 экв.), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2 (804,00 мг, 0,985 ммоль, 0,2 экв.) в диоксане (20 мл) и Н2О (4 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 90°С. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (8:1). Это привело к получению 1,2 г (72%) 7-[1-(оксан-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолина4-амина в виде темно-зеленого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=336.1.To a 100 ml round bottom flask, purged and maintained under an inert nitrogen atmosphere, was added 7-bromo-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (1.3 g, 4.923 mmol , 1 eq.), Cs 2 CO 3 (4.81 g, 14.768 mmol, 3 eq.), 1-(oxan-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3 ,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (2.74 g, 9.845 mmol, 2.00 eq.), Pd(dppf)Cl 2 .CH 2 Cl 2 (804.00 mg, 0.985 mmol, 0 .2 eq.) in dioxane (20 ml) and H 2 O (4 ml). The resulting solution was stirred for 16 hours at 90°C. The resulting mixture was concentrated. The residue was applied to a silica gel column using dichloromethane/methanol (8:1). This resulted in 1.2 g (72%) of 7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c ]quinoline4-amine as a dark green solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =336.1.
Стадия 8. Синтез трет-бутил N-(2-[4-амино-7-[1-(оксан-2-ил)-1H-пиразол-5-ил]-2Н[1,2,3]триазоло)[4,5-с]хинолин-2-ил]этил)карбамата.Step 8. Synthesis of tert-butyl N-(2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H[1,2,3]triazolo)[ 4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate.
В круглодонную колбу объемом 500 мл вносили 7-[1-(оксан-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (1,5 г, 4,47 ммоль, 1 экв.) в DMF (30 мл), затем трет-бутил N-(2бромэтил)карбамат (2,00 г, 8,9 ммоль, 2 экв.) и Cs2CO3 (4,37 г, 13,4 ммоль, 3 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Твердые вещества собирали фильтрованием. Это привело к получению 1,5 г (70%) трет-бутил N-(2-[4-амино-7-[1(оксан-2-ил)-1H-пиразол-5-ил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил)карбамата в виде коричневого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=479.2. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 8.18 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.43 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.36 (s, 2H), 7.07 (t, J=5.8 Гц, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.375.26 (m, 1H), 4.79 (t, J=5.4 Гц, 2Н), 4.12-3.98 (m, 1H), 3.58 (t, J=7.7 Гц, 3H), 2.49-2.31 (m, 2H), 2.04-1.89 (m, 1H), 1.87-1.74 (m, 1H), 1.69-1.49 (m, 3H), 1.31 (s, 9H).7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine was added to a 500 ml round bottom flask. (1.5 g, 4.47 mmol, 1 eq.) in DMF (30 ml) followed by tert-butyl N-(2-bromoethyl)carbamate (2.00 g, 8.9 mmol, 2 eq.) and Cs 2 CO 3 (4.37 g, 13.4 mmol, 3 eq.). The resulting solution was stirred for 16 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. Solids were collected by filtration. This resulted in 1.5 g (70%) tert-butyl N-(2-[4-amino-7-[1(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H-[1 ,2,3]triazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate as a brown solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=479.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.18 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.43 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.36 (s, 2H), 7.07 (t, J=5.8 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.375.26 (m, 1H), 4.79 (t, J=5.4 Hz, 2H), 4.12-3.98 (m, 1H), 3.58 (t, J=7.7 Hz, 3H), 2.49-2.31 (m, 2H), 2.04-1.89 (m, 1H), 1.87-1.74 (m, 1H), 1.69-1.49 (m , 3H), 1.31 (s, 9H).
Стадия 9. Синтез 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина.Step 9. Synthesis of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine.
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили трет-бутил N-(2-[4-амино-7-[1-(оксан-2-ил)-1Hпиразол-5-ил]-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил)карбамат (1,2 г, 2,508 ммоль, 1 экв.) в HCl в 1,4-диоксане (4 N, 20 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном 3x100 мл и водные слои объединяли. Это привело к получению 1,1 г 2-(2-аминоэтил)-7-(Ш-пиразол-5-ил)-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амина в виде коричневого неочищенного твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=295.1.tert-Butyl N-(2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl]-2H-[1,2,3]triazolo [4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate (1.2 g, 2.508 mmol, 1 eq.) in HCl in 1,4-dioxane (4 N, 20 mL). The resulting solution was stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. The resulting solution was extracted with dichloromethane 3x100 ml and the aqueous layers were combined. This resulted in 1.1 g of 2-(2-aminoethyl)-7-(III-pyrazol-5-yl)-2H[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine in as a brown crude solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =295.1.
- 98 042018- 98 042018
Стадия 10. Синтез N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-2-ил]этил]2-фтор-2-метилпропанамида.Step 10. Synthesis of N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinolin-2-yl]ethyl ]2-fluoro-2-methylpropanamide.
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н[1,2,3]триазоло[4,5-с]хинолин-4-амин (40 мг, 0,13 ммоль, 1 экв.) и 2-фтор-2-метилпропановую кислоту (14,4 мг, 0,13 ммоль, 1 экв.) в DCM (4 мл), затем HATU (103,3 мг, 0,27 ммоль, 2 экв.) и DIEA (52,6 мг, 0,4 ммоль, 3 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в МеОН (4 мл), добавляли NaOH (10,8 мг, 0,27 ммоль, 2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 70°С. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюируя смесью дихлорметан/метанол (10:1) с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт дополнительно очищали препаративной HPLC с использованием следующих условий: колонка: XBridge Prep OBD С18, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: вода (10 ммоль/л NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 8 до 45% В за 7 мин; 254/210 нм; RT: 6,45 мин. Это привело к получению 4 мг (7,70%) N-[2[4-амино-7-(1 H-пиразол-5 -ил)-2Н-[ 1,2,3] -триазоло[4,5-с]хинолин)-2-ил]этил]-2-фтор-2метилпропанамида в виде белого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [M +H]+=383.4. 1Н ЯМР (400 МГц, Метанол-d4) δ 8.22 (d, J=8.2 Гц, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 6.79 (s, 1H), 5.00-4.94 (m, 2H), 3.91 (t, J=5.7 Гц, 2Н), 1.45 (d, J=21.8 Гц, 6Н).2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H[1,2,3]triazolo[4,5-c]quinoline-4-amine (40 mg, 0.13 mmol, 1 eq.) and 2-fluoro-2-methylpropanoic acid (14.4 mg, 0.13 mmol, 1 eq.) in DCM (4 mL) followed by HATU (103.3 mg, 0.27 mmol, 2 eq.) and DIEA (52.6 mg, 0.4 mmol, 3 eq.). The resulting solution was stirred for 16 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. The crude product was dissolved in MeOH (4 ml), NaOH (10.8 mg, 0.27 mmol, 2 eq.) was added. The resulting solution was stirred for 2 hours at 70°C. The resulting mixture was concentrated. The residue was applied to a silica gel column eluting with dichloromethane/methanol (10:1) to give the crude product. The crude product was further purified by preparative HPLC using the following conditions: column: XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm, 5 µm; mobile phase A: water (10 mmol/l NH 4 HCO 3 ), mobile phase B: ACN; flow rate: 60 ml/min; gradient: 8 to 45% B in 7 min; 254/210 nm; RT: 6.45 min. This resulted in 4 mg (7.70%) N-[2[4-amino-7-(1 H-pyrazol-5-yl)-2H-[ 1,2,3]-triazolo[4,5- c]quinolin)-2-yl]ethyl]-2-fluoro-2-methylpropanamide as a white solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=383.4. 1 H NMR (400 MHz, Methanol-d 4 ) δ 8.22 (d, J=8.2 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 6.79 (s, 1H), 5.00-4.94 ( m, 2H), 3.91 (t, J=5.7 Hz, 2H), 1.45 (d, J=21.8 Hz, 6H).
Соединения по примерам 158-162 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 157, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS.The compounds of Examples 158-162 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in Example 157 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions.
А: колонка: Ascentis Express C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1,5 мл/мин; детекция: MS и UV.A: column: Ascentis Express C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: water with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1.5 ml/min; detection: MS and UV.
В: колонка: PoroShell HPH C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; температура: 40°С; градиент: от 5 до 50% В за 3 мин, затем до 95% В за 0,2 мин, затем удерживание 1,0 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV.B: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, 2.7 µm particles; mobile phase A: acetonitrile with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: water with 5 mM ammonium bicarbonate; temperature: 40°C; gradient: 5 to 50% B in 3 min, then to 95% B in 0.2 min, then hold 1.0 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
С: колонка: PoroShell HPH C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В за 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV.C: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: acetonitrile with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: water with 5 mM ammonium bicarbonate; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
- 99 042018- 99 042018
Соединения по примерам 163-184 получали согласно методикам синтеза, аналогичным методикам, описанным в примере 20, примере 31 или примере 132, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацето нитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV (220 нм).The compounds of examples 163-184 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in example 20, example 31 or example 132 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 100 042018- 100 042018
- 101 042018- 101 042018
- 102 042018- 102 042018
- 103 042018- 103 042018
Соединения по примерам 185-193 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 20, примере 31 или примере 132, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS.The compounds of examples 185-193 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in example 20, example 31 or example 132 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions.
А: колонка: PoroShell НРН С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV.A: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
В: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; Подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV.B: column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, 2.2 µm particles; mobile phase A: water with 0.05% TFA; Mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
С: колонка: Kinetex EVO С18, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбоната аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; детекция: MS и UV.C: column: Kinetex EVO C18, 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
- 104042018- 104042018
Примеры 179 и 180.Examples 179 and 180.
Рацемический продукт получали из соответствующих исходных соединений и очищали препара- 105 042018 тивной хиральной SFC с использованием следующих условий с получением соединения по примеру 179 и соединения по примеру 180 в виде отдельных не определенных изомеров: прибор: Waters 100 Prep SFC;The racemic product was prepared from the appropriate starting compounds and purified with preparative chiral SFC using the following conditions to give Example 179 and Example 180 as separate undetermined isomers: Instrument: Waters 100 Prep SFC;
колонка: Chiral AS, 30x250 мм. 5 мкм; подвижная фаза: 65% СО2/35% IPA с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 179 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 3,87 мин. Соединение по примеру 180 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 12,58 мин.column: Chiral AS, 30x250 mm. 5 µm; mobile phase: 65% CO 2 /35% IPA with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of Example 179 (first eluting isomer), retention time: 3.87 min. Compound of Example 180 (second eluting isomer), retention time: 12.58 min.
Условия аналитической хиральной SFC: Прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiralpak AS,Analytical Chiral SFC Conditions: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiralpak AS,
4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 65% CO2/35% IPA с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 179 (первый элюируемый изомер), время удержива ния: 2,5 мин. Соединение по примеру 180 (второй элюируемый изомер). Время удерживания: 5,6 мин.4.6x100mm, 5 micron; mobile phase: 65% CO 2 /35% IPA with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of Example 179 (first eluting isomer), retention time: 2.5 min. Example 180 compound (second eluting isomer). Retention time: 5.6 min.
Пример 194. Получение 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2-(2-(пиридин-2-иламино)этил)-2Н-пиразоло[3,4Example 194 Preparation of 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2-(2-(pyridin-2-ylamino)ethyl)-2H-pyrazolo[3.4
с]хинолин-4-амина.c]quinoline-4-amine.
Стадия 1. 2-(2-(пиридин-2-иламино)этил)-7-( 1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 Н-пиразол-5 -ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1. 2-(2-(pyridin-2-ylamino)ethyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4 -c]quinoline-4-amine.
Смесь 2-(2-аминоэтил)-7-(1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (40 мг, 0,106 ммоль) и карбоната натрия (44,9 мг, 0,424 ммоль) вакумировали и снова заполняли N2, затем добавляли DMSO (1060 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли 2-бромпиридин (11,12 мкл, 0,117 ммоль), Ν,Ν'-диметилэтилендиамин (34,2 мкл, 0,318 ммоль) и йодид меди(1) (30,3 мг, 0,159 ммоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 120°С в течение 18 ч. Добавляли дополнительное количество 2бромпиридина (11,12 мкл, 0,117 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 1 ч. Добавляли дополнительное количество 2-бромпиридина (25 мкл) и реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл), 1: 1 Н2О-водн. NH4OH (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением 2-(2(пиридин-2-иламино)этил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[3,4с]хинолин-4-амина (4,3 мг, 9%). LC-MS m/z 455 [М+Н]+.A mixture of 2-(2-aminoethyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1 H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4s]quinoline-4-amine ( 40 mg, 0.106 mmol) and sodium carbonate (44.9 mg, 0.424 mmol) were evacuated and refilled with N2, then DMSO (1060 µl) was added. The resulting mixture was purged with N2 for 10 min, then 2-bromopyridine (11.12 µl, 0.117 mmol), N,N'-dimethylethylenediamine (34.2 µl, 0.318 mmol) and copper(1) iodide (30.3 mg , 0.159 mmol). The mixture was purged with N2 for 1 min, then sealed and stirred at 120°C for 18 h. Additional 2-bromopyridine (11.12 µl, 0.117 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at 120°C for 1 h. amount of 2-bromopyridine (25 µl) and the reaction mixture was stirred at 120°C for 4 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H2O (20 ml), 1:1 H 2 O-a . NH 4 OH (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 2-(2(pyridin-2-ylamino)ethyl)-7-(1-(tetrahydro-2H- pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[3,4c]quinoline-4-amine (4.3 mg, 9%). LC-MS m/z 455 [M+H]+.
Стадия 2. 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2-(2-(пиридин-2-иламино)этил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 2 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2-(2-(pyridin-2-ylamino)ethyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К раствору 2-(2-(пиридин-2-иламино)этил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (4,3 мг, 9,46 мкмоль) в CH2Cl2 (0,1 мл) добавляли TFA (0,1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 и концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с исполь зованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 2-минутное удерживание при 1% В, 1-23% В в течение 25 мин, затем 2-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2-(2-(пиридин-2иламино)этил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (2,6 мг, 46%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.96 (s, 1H), 8.13-8.09 (m, 2H), 7.99 (br d, J=6.0 Гц, 1H), 7.90 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.55-7.48 (m, 1H), 6.77 (d, J=2.0 Гц, 1H), 6.67-6.60 (m, 2H), 4.73 (t, J=5.9 Гц, 2Н), 3.94 (br t, J=5.8 Гц, 2Н). Условия ана литического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1%To a solution of 2-(2-(pyridin-2-ylamino)ethyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4-c ]quinoline-4-amine (4.3 mg, 9.46 μmol) in CH 2 Cl 2 (0.1 ml) was added TFA (0.1 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 and concentrated. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 2 min hold at 1% B, 1-23% B for 25 min, then 2 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2-(2-(pyridin-2ylamino)ethyl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline -4-amines, 2 TFA (2.6 mg, 46%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.96 (s, 1H), 8.13-8.09 (m, 2H), 7.99 (br d, J=6.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.55-7.48 (m, 1H), 6.77 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.67-6.60 (m, 2H), 4.73 (t, J=5.9 Hz, 2H ), 3.94 (br t, J=5.8 Hz, 2Н). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1%
- 106 042018 трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 371.1 [М+Н]+; RT: 0,92 мин.- 106 042018 trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 371.1 [M+H]+; RT: 0.92 min.
Пример 195. Получение N-(2-(4-амuно-8-хлор-7-(1H-nиразол-3-ил)-2Н-nuразоло[3,4-с]хинолин-2ил)этил)-5 -фторпиколинамид.Example 195 Preparation of N-(2-(4-amino-8-chloro-7-(1H-nirazol-3-yl)-2H-nurazolo[3,4-c]quinolin-2yl)ethyl)-5-fluoropicolinamide .
Стадия 1. 7-бром-8-хлор-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 1. 7-bromo-8-chloro-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine.
К суспензии 7-бром-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, TFA (0,500 г, 1,326 ммоль) в CHCl3 (13,26 мл) при комнатной температуре добавляли 2-хлор-1,3-бис-(метоксикарбонил)гуанидин (0,333 г, 1,591 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Реакционную смесь разбавляли 10% МеОН-CH2Cl2 (200 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (200 мл). Водный слой экстрагировали 10% МеОН-CH2Cl2 (3x100 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и фильтровали. Добавляли целит, и смесь концентрировали в вакууме. Этот продукт загружали на колонку и очищали флэш-хроматографией (RediSep Gold с 80 г силикагеля с картриджем с сухой загрузкой 25 г; линейный градиент 0-7% МеОН-CH2Cl2) с получением 7-бром-8-хлор-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (31 мг, 8%). LC-MS m/z 297/299 [М+Н]+.To a suspension of 7-bromo-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, TFA (0.500 g, 1.326 mmol) in CHCl 3 (13.26 ml), -bis-(methoxycarbonyl)guanidine (0.333 g, 1.591 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 days. The reaction mixture was diluted with 10% MeOH-CH 2 Cl 2 (200 ml) and washed with saturated aqueous NaHCO 3 (200 ml). The aqueous layer was extracted with 10% MeOH-CH 2 Cl 2 (3x100 ml). The combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 and filtered. Celite was added and the mixture concentrated in vacuo. This product was loaded onto a column and purified by flash chromatography (RediSep Gold with 80 g silica gel with 25 g dry loaded cartridge; 0-7% MeOH-CH 2 Cl 2 linear gradient) to give 7-bromo-8-chloro-2Hpyrazolo[ 3,4-c]quinoline-4-amine (31 mg, 8%). LC-MS m/z 297/299 [M+H] + .
Стадия 2. трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-8-хлор-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамат.Step 2: tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-8-chloro-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate.
К раствору 7-бром-8-хлор-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина (31 мг, 0,104 ммоль) в DMF (417 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (102 мг, 0,313 ммоль), а затем трет-бутил (2бромэтил)карбамат (25,7 мг, 0,115 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, добавляли дополнительное количество карбоната цезия (51 мг, 0,16 ммоль) и третбутил (2-бромэтил)карбамата (11,7 мг, 0,0522 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Добавляли целит, и смесь концентрировали в вакууме. Этот продукт загружали на колонку методом сухого ввода и очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля с 5 г картриджей с сухой загрузкой; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-8-хлор-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (37 мг, 81%) в виде белого твердого вещества. LC-MS m/z [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.10 (br s, 2H), 7.05 (br t, J=5.8 Гц, 1H), 4.45 (br t, J=6.0 Гц, 2H), 3.47 (q, J=5.9 Гц, 2H), 1.33 (s, 9H).Cesium carbonate (102 mg, 0.313 mmol ) followed by tert-butyl (2 bromoethyl) carbamate (25.7 mg, 0.115 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 h, additional cesium carbonate (51 mg, 0.16 mmol) and tert-butyl (2-bromoethyl) carbamate (11.7 mg, 0.0522 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at 40° C. for 2 h. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml) and H2O (20 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 and filtered. Celite was added and the mixture concentrated in vacuo. This product was loaded onto a dry run column and purified by flash chromatography (12 g silica gel with 5 g dry loaded cartridges; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give t-butyl (2-(4-amino -7-bromo-8-chloro-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (37 mg, 81%) as a white solid. LC-MS m/z [M+H] + ; 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.10 (br s, 2H), 7.05 (br t, J=5.8 Hz , 1H), 4.45 (br t, J=6.0 Hz, 2H), 3.47 (q, J=5.9 Hz, 2H), 1.33 (s, 9H).
Стадия 3. трет-бутил (2-(4-амино-8-хлор-7-(1-(тетрагидро-2Н-пuран-2-ил)-1H-nиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамат.Step 3. tert-butyl (2-(4-amino-8-chloro-7-(1-(tetrahydro-2H-puran-2-yl)-1H-nirazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4- c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate.
Смесь трет-бутил (2-(4-амино-7-бром-8-хлор-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамата (20 мг, 0,045 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пuран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-дuоксаборолан-2-ил)-1Hпиразола (15,15 мг, 0,054 ммоль) и трехосновного фосфата калия (28,9 мг, 0,136 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (189 мкл) и H2O (37,8 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 15 мин, затем добавляли хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1'бифенил)[2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладий(П) (1,785 мг, 2,269 мкмоль). Смесь продували N2 в течениеA mixture of tert-butyl (2-(4-amino-7-bromo-8-chloro-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (20 mg, 0.045 mmol), 1-( tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1Hpyrazole (15.15 mg, 0.054 mmol) and tribasic phosphate potassium (28.9 mg, 0.136 mmol) was evacuated and refilled with N2, then 1,4-dioxane (189 µl) and H2O (37.8 µl) were added. The resulting mixture was purged with N2 for 15 min, then chloro(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropyl-1,1'biphenyl)[2-(2'-amino-1,1'-biphenyl) was added. ]palladium(II) (1.785 mg, 2.269 µmol). The mixture was purged with N2 for
- 107 042018 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОНCH2Cl2) с получением трет-бутил (2-(4-амино-8-хлор-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)-этил)карбамата (17,3 мг, 75%). LC-MS m/z 512 [М+Н]+.- 107 042018 min, then sealed and stirred at 100°C for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H 2 O (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml) , dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOHCH 2 Cl 2 ) to give t-butyl (2-(4-amino-8-chloro-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran -2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)-ethyl)carbamate (17.3 mg, 75%). LC-MS m/z 512 [M+H]+.
Стадия 4. 2-(2-аминоэтил)-8-хлор-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амин, 2 TFA.Step 4 2-(2-aminoethyl)-8-chloro-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinoline-4-amine, 2 TFA.
К раствору трет-бутил (2-(4-амино-8-хлор-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил))-1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)карбамат (17,3 мг, 0,034 ммоль) в CH2Cl2 (169 мкл) при комнатной температуре добавляли TFA (169 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали для удаления примерно половины объема, затем ее по каплям добавляли к Et2O (2 мл). Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x1 мл). Твердые вещества растворяли в СН2С12-МеОН и концентрировали в вакууме с получением 2-(2-аминоэтил)-8-хлор-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (17,2 мг, 92%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS m/z 328 [М+Н]+.To a solution of tert-butyl (2-(4-amino-8-chloro-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl))-1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[3,4- c]quinolin-2-yl)ethyl)carbamate (17.3 mg, 0.034 mmol) in CH 2 Cl 2 (169 μl) TFA (169 μl) was added at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. The reaction mixture was concentrated to remove about half the volume, then it was added dropwise to Et 2 O (2 ml). The resulting solid was collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x1 ml). The solids were dissolved in CH 2 C1 2 -MeOH and concentrated in vacuo to give 2-(2-aminoethyl)-8-chloro-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c] quinoline-4-amine, 2 TFA (17.2 mg, 92%) as an off-white solid. LC-MS m/z 328 [M+H] + .
Стадия 5. N-(2-(4-амино-8-хлор-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-5фторпиколинамид.Step 5 N-(2-(4-amino-8-chloro-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin-2-yl)ethyl)-5fluoropicolinamide.
К раствору 5-фторпиколиновой кислоты (4,80 мг, 0,034 ммоль) в DMF (155 мкл) при комнатной температуре добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (10,78 мкл, 0,062 ммоль), а затем HATU (11,77 мг, 0,031 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем по каплям добавляли к раствору 2-(2-аминоэтил)-8-хлор-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (17,2 мг, 0,031 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламина (16,17 мкл, 0,093 ммоль) в DMF (155 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 11% В, 11-51% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-8хлор-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-2-ил)этил)-5-фторпиколинамида (4,2 мг, 29%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 13.33-12.92 (m, 1H), 9.06 (t, J=6.0 Гц, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.61 (d, J=2.6 Гц, 1H), 8.12-8.06 (m, 2H), 7.88 (td, J=8.7, 2.8 Гц, 1H), 7.85-7.66 (m, 2H), 7.36-6.96 (m, 2H), 6.72 (br s, 1H), 4.65 (br t, J=6.1 Гц, 2Н), 3.88 (q, J=6.1 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 451.0 [M+H]+; RT: 1,15 мин.To a solution of 5-fluoropicolic acid (4.80 mg, 0.034 mmol) in DMF (155 µl) was added Ν,N-diisopropylethylamine (10.78 µl, 0.062 mmol) at room temperature, followed by HATU (11.77 mg, 0.031 mmol). This mixture was stirred at room temperature for 5 min, then added dropwise to a solution of 2-(2-aminoethyl)-8-chloro-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c ]quinoline-4-amine, 2 TFA (17.2 mg, 0.031 mmol) and N,N-diisopropylethylamine (16.17 μl, 0.093 mmol) in DMF (155 μl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 11% B, 11-51% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-8chloro-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]quinolin- 2-yl)ethyl)-5-fluoropicolinamide (4.2 mg, 29%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.33-12.92 (m, 1H), 9.06 (t, J=6.0 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.61 (d, J=2.6 Hz, 1H) , 8.12-8.06 (m, 2H), 7.88 (td, J=8.7, 2.8 Hz, 1H), 7.85-7.66 (m, 2H), 7.36-6.96 (m, 2H), 6.72 (br s, 1H), 4.65 (br t, J=6.1 Hz, 2H), 3.88 (q, J=6.1 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 451.0 [M+H]+; RT: 1.15 min.
Соединения по примерам 196-204 получали согласно методикам синтеза, аналогичным методикам, описанным в примерах 150 и 151, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).The compounds of examples 196-204 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in examples 150 and 151 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 108 042018- 108 042018
- 109 042018- 109 042018
- 110 042018- 110 042018
Пример 205. Получение 2-(2-(4-амuно-7-(1H-пuразол-3-uл)-2Н-nиразоло[4,3-с]хuнолuн-2-ил)этил)6-фторизоиндолин-1 -онаExample 205 Preparation of 2-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-nirazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethyl)6-fluoroisoindoline-1 - she
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, 2 TFA (40 мг, 0,077 ммоль) в DMF (384 мкл) при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (66,8 мкл, 0,384 ммоль) и метил 2-(бромметил)-5-фторбензоат (18,95 мг, 0,077 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Раствор разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы размером 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 21% В, 21-61% В в течение 20 мин, затем 4минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этил)-6-фторизоиндолин-1-она (23,1 мг, выход 70%). 1Н ЯМР (500 МГц,To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, 2 TFA (40 mg, 0.077 mmol) in DMF ( 384 µl) N,N-diisopropylethylamine (66.8 µl, 0.384 mmol) and methyl 2-(bromomethyl)-5-fluorobenzoate (18.95 mg, 0.077 mmol) were added at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1.5 h. The solution was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 21% B, 21-61% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl) ethyl)-6-fluoroisoindolin-1-one (23.1 mg, 70% yield). 1H NMR (500 MHz,
DMSO-d6) δ 13.30-12.70 (m, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.96 (d, J=7.9 Гц, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.79-7.65 (m, 1H), 7.647.56 (m, 2H), 7.46-7.36 (m, 2H), 6.91 (br d, J=0.7 Гц, 2Н), 6.75 (d, J=1.5 Гц, 1H), 4.72 (br t, J=5.4 Гц, 2Н), 4.31 (s, 2H), 4.07 (br t, J=5.7 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 428 [М+Н]+; RT: 1,18 мин.DMSO-d6) δ 13.30-12.70 (m, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.96 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.79-7.65 (m, 1H), 7.647 .56 (m, 2H), 7.46-7.36 (m, 2H), 6.91 (br d, J=0.7 Hz, 2H), 6.75 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.72 (br t, J=5.4 Hz, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.07 (br t, J=5.7 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 428 [M+H]+; RT: 1.18 min.
Пример 206. Получение N-(2-(4-амuно-7-(1H-nuразол-3-uл)-2Н-пиразоло[4,3-с]хuнолuн-2ил)этил)метансульфонамида.Example 206 Preparation of N-(2-(4-amino-7-(1H-nurazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)ethyl)methanesulfonamide.
К раствору 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-nuразол-3-ил)-2Н-nиразоло[4,3-с]хuнолин-4-амuна при 0°С, 2 TFA (40 мг, 0,077 ммоль) в DMF (256 мкл) добавляли триэтиламин (42,8 мкл, 0,307 ммоль) и метансульфонилхлорид (6,23 мкл, 0,081 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (0,1 мл) и DMF (до общего объема 2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS с использованием следующих условий: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 8% В, 8-48% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением N-(2-(4-амино-7-(1 Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло [4,3-с]хинолин-2ил)этил)метансульфонамида (18,3 мг, 64%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.50 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.82-7.55 (m, 2Н), 7.32-7.25 (m, 1H), 6.76 (d, J=1.1 Гц, 1H), 4.50 (br t, J=5.4 Гц, 2Н), 3.60-3.52 (m, 2H), 2.85 (d, J=2.4 Гц, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 372.2 [М+Н]+; RT: 0,93 мин.To a solution of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-nurazol-3-yl)-2H-nirazolo[4,3-c]quinoline-4-amine at 0°C, 2 TFA (40 mg, 0.077 mmol ) triethylamine (42.8 µl, 0.307 mmol) and methanesulfonyl chloride (6.23 µl, 0.081 mmol) were added to DMF (256 µl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H2O (0.1 ml) and DMF (to a total volume of 2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS using the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 8% B, 8-48% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give N-(2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl )ethyl)methanesulfonamide (18.3 mg, 64%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.50 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.82-7.55 (m, 2H), 7.32- 7.25 (m, 1H), 6.76 (d, J=1.1 Hz, 1H), 4.50 (br t, J=5.4 Hz, 2H), 3.60-3.52 (m, 2H), 2.85 (d, J=2.4 Hz, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 372.2 [M+H]+; RT: 0.93 min.
- 111 042018- 111 042018
Примеры 207 и 208. Получение 2-(2-метоксиэтил)-7-(Ш-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло-[4,3с]хинолин-4-амина и 1-(2-метоксиэтил)-7-(Ш-пиразол-3-ил)-Ш-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина.Examples 207 and 208 Preparation of 2-(2-methoxyethyl)-7-(III-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo-[4,3c]quinoline-4-amine and 1-(2-methoxyethyl)-7 -(III-pyrazol-3-yl)-III-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine.
Стадия 1. 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 1. 7-(1-(Tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine.
Смесь 7-бром-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, TFA (0,932 г, 2,47 ммоль), 1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-Ш-пиразола (1,031 г, 3,71 ммоль) и трехосновного фосфата калия (1,574 г, 7,41 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем ее смешивали с 1,4-диоксаном (10,30 мл) и H2O (2,059 мл). Полученную суспензию продували N2 в течение 15 мин, затем добавляли хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1 '-бифенил) [2-(2'-амино-1,1'бифенил)]палладий(П) (0,039 г, 0,049 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (10 мл) и H2O (10 мл). Эту смесь фильтровали, и твердое вещество промывали H2O (2x2 мл) и EtOAc (2x2 мл), затем сушили в вакууме с получением 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (670 мг, 81%). LC-MS m/z 335 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.32 (br s, 1H), 8.19 (d, J=8.2 Гц, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.37 (br d, J=7.7 Гц, 1H), 7.08 (br s, 2H), 6.52 (d, J=1.5 Гц, 1H), 5.31 (dd, J=9.8, 1.9 Гц, 1H), 4.07-3.99 (m, 1H), 3.62-3.57 (m, 1H), 2.47-2.36 (m, 1H), 2.00-1.92 (m, 1H), 1.80 (brd, J=12.9 Гц, 1H), 1.64-1.49 (m, 3H).7-Bromo-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4-amine mixture, TFA (0.932 g, 2.47 mmol), 1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4.4 ,5,5-Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-III-pyrazole (1.031 g, 3.71 mmol) and tribasic potassium phosphate (1.574 g, 7.41 mmol) were evacuated and refilled with N2 , then it was mixed with 1,4-dioxane (10.30 ml) and H 2 O (2.059 ml). The resulting suspension was purged with N2 for 15 min, then chloro(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropyl-1,1'-biphenyl) [2-(2'-amino-1,1'biphenyl) ]palladium(II) (0.039 g, 0.049 mmol). The reaction mixture was stirred at 100° C. for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with EtOAc (10 ml) and H2O (10 ml). This mixture was filtered and the solid was washed with H2O (2x2 ml) and EtOAc (2x2 ml), then dried in vacuo to give 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl )-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (670 mg, 81%). LC-MS m/z 335 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (br s, 1H), 8.19 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J=1.5 Hz, 1H) , 7.37 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.08 (br s, 2H), 6.52 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.31 (dd, J=9.8, 1.9 Hz, 1H), 4.07- 3.99 (m, 1H), 3.62-3.57 (m, 1H), 2.47-2.36 (m, 1H), 2.00-1.92 (m, 1H), 1.80 (brd, J=12.9 Hz, 1H), 1.64-1.49 ( m, 3H).
Стадия 2. 2-(2-метоксиэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин и 1-(2метоксиэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-1H-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 2. 2-(2-methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine and 1-(2methoxyethyl)-7-(1H- pyrazol-3-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine.
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (29 мг, 0,087 ммоль) в DMF (289 мкл) добавляли карбонат цезия (85 мг, 0,260 ммоль), а затем 2бромэтилметиловый эфир (8,97 мкл, 0,095 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (2 мл) и экстрагировали EtOAc (3x2 мл). Объединенные органические слои концентрировали.To a suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (29 mg, 0.087 mmol) in DMF (289 µl) cesium carbonate (85 mg, 0.260 mmol) was added followed by 2 bromoethyl methyl ether (8.97 µl, 0.095 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 20 hours. The reaction mixture was diluted with H2O (2 ml) and extracted with EtOAc (3x2 ml). The combined organic layers were concentrated.
Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (200 мкл) и TFA (200 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 2% В, 2-42% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-метоксиэтил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (7,3 мг, 27%). Другой региоизомер также выделяли и дополнительно очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 1-(2метоксиэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, TFA (3,8 мг, 9,8%).The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (200 μl) and TFA (200 μl) and stirred at room temperature for 2 h. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 2% B, 2-42% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (7, 3 mg, 27%). The other regioisomer was also isolated and further purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 20 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 1-(2methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, TFA ( 3.8 mg, 9.8%).
Характеристические данные для 2-(2-метоксиэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-4-амина (Пример 207): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.50 (s, 1H), 8.08 (br d, J=1.6 Гц, 1H), 7.87 (br s, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.64 (br d, J=7.9 Гц, 1H), 7.13-6.95 (m, 2H), 6.75 (br s, 1H), 4.57 (br s, 2H), 3.83-3.79 (m, 2H), 3.25 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижCharacterization data for 2-(2-methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinoline-4-amine (Example 207): 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.50 (s, 1H), 8.08 (br d, J=1.6 Hz, 1H), 7.87 (br s, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.64 (br d, J=7.9 Hz, 1H ), 7.13-6.95 (m, 2H), 6.75 (br s, 1H), 4.57 (br s, 2H), 3.83-3.79 (m, 2H), 3.25 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; feat
- 112 042018 ная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 309.2 [М+Н]+; RT: 1.02 мин.- 112 042018 phase B: 95:5 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 309.2 [M+H]+; RT: 1.02 min.
Характеристические данные для 1-(2-метоксиэтил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3с]хинолин-4-амина (Пример 208): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.64 (s, 1H), 8.43 (d, J=8.5 Гц, 1H), 8.18 (br s, 1H), 7.97 (br d, J=8.5 Гц, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.86 (d, J=2.2 Гц, 1H), 4.97 (t, J=5.1 Гц, 2Н), 3.88 (t, J=5.1 Гц, 2Н), 3.18 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 309.0 [М+Н]+; RT: 0,97 мин.Characterization data for 1-(2-methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrazolo[4,3c]quinoline-4-amine (Example 208): 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.64 (s, 1H), 8.43 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.18 (br s, 1H), 7.97 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.86 (d, J=2.2 Hz, 1H), 4.97 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.88 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 309.0 [M+H]+; RT: 0.97 min.
Пример 209. Получение 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этан-1ола.Example 209 Preparation of 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethan-1ol
Стадия 1. 2-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)этил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 1. 2-(2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol5-yl)-2H-pyrazolo[4,3 -c]quinoline-4-amine.
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (80 мг, 0,239 ммоль) в DMF (797 мкл) добавляли карбонат цезия (234 мг, 0,718 ммоль), а затем (2бромэтокси)(трет-бутил)диметилсилан (56,5 мкл, 0,263 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля RediSep Gold; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2). Выделяли второй элюируемый региоизомер с получением 2-(2-((третбутилдиметилсилил)окси)этил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-4-амина (58,5 мг, 50%). LC-MS m/z 493 [М+Н]+; 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) Сдвиг 8.57 (br s, 1H), 8.18 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.60 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.37 (br d, J=6.9 Гц, 1H), 7.53-7.07 (m, 2H), 6.52 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.32 (dd, J=10.0, 2.2 Гц, 1H), 4.54 (t, J=4.8 Гц, 2Н), 4.08-4.01 (m, 3H), 3.63-3.56 (m, 1H), 2.48-2.36 (m, 1H), 1.99-1.93 (m, 1H), 1.80 (br d, J=12.5 Гц, 1H), 1.64-1.49 (m, 3H), 0.80-0.74 (m, 9H), 0.13 (s, 6H).To a suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (80 mg, 0.239 mmol) in DMF (797 µl) cesium carbonate (234 mg, 0.718 mmol) was added followed by (2-bromoethoxy)(tert-butyl)dimethylsilane (56.5 µl, 0.263 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml) and H2O (20 ml). The aqueous layer was extracted with EtOAc (20 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (24 g RediSep Gold silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ). The second eluting regioisomer was isolated to give 2-(2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[ 4,3c]quinoline-4-amine (58.5 mg, 50%). LC-MS m/z 493 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) Shift 8.57 (br s, 1H), 8.18 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.60 (d, J=1.7 Hz, 1H) , 7.37 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 7.53-7.07 (m, 2H), 6.52 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.32 (dd, J=10.0, 2.2 Hz, 1H), 4.54 (t, J=4.8 Hz, 2H), 4.08-4.01 (m, 3H), 3.63-3.56 (m, 1H), 2.48-2.36 (m, 1H), 1.99-1.93 (m, 1H), 1.80 (br d, J=12.5 Hz, 1H), 1.64-1.49 (m, 3H), 0.80-0.74 (m, 9H), 0.13 (s, 6H).
Стадия 2. 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-этан-1-ол.Step 2 2-(4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-ethan-1-ol.
К суспензии 2-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)этил)-7-( 1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Hпиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (58 мг, 0,118 ммоль) в CH2Cl2 (294 мкл) добавляли TFA (294 мкл). Полученный прозрачный оранжевый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (500 мкл) и концентрировали.To a suspension of 2-(2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethyl)-7-(1 -(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3- c]quinoline-4-amine (58 mg, 0.118 mmol) in CH 2 Cl 2 (294 μl) TFA (294 μl) was added. The resulting clear orange solution was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was concentrated. The crude product was dissolved in CH2Cl2 (500 µl) and concentrated.
Этот продукт растворяли в смеси CH2Cl2 (300 мкл) и МеОН (300 мкл), и добавляли карбонат калия (81 мг, 0,589 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (20 мл). Слои разделяли, и органический слой экстрагировали 5% МеОН-EtOAc (5x10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (10 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в МеОН-CH2Cl2 и добавляли целит. Смесь концентрировали в вакууме, загружали на колонку методом сухого ввода и очищали флэшхроматографией (RediSep Gold с 12 г силикагеля с картриджем с твердой фазой 5 г; линейный градиент 0-60% МеОН-CH2Cl2) с получением 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил)этан-1-ола (23 мг, 66%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.38-12.79 (m, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.07 (br d, J=8.0 Гц, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.83-7.47 (m, 2H), 7.04-6.83 (m, 2H), 6.75 (brThis product was dissolved in a mixture of CH 2 Cl 2 (300 μl) and MeOH (300 μl) and potassium carbonate (81 mg, 0.589 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml) and saturated aqueous NaHCO 3 (20 ml). The layers were separated and the organic layer was extracted with 5% MeOH-EtOAc (5x10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (10 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in MeOH-CH 2 Cl 2 and celite was added. The mixture was concentrated in vacuo, loaded onto a dry run column and purified by flash chromatography (RediSep Gold with 12 g silica gel with 5 g solids cartridge; linear gradient 0-60% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 2-(4-amino -7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)ethan-1-ol (23 mg, 66%) as a white solid. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.38-12.79 (m, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.07 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.83 -7.47 (m, 2H), 7.04-6.83 (m, 2H), 6.75 (br
- 113 042018 s, 1H), 5.04 (t, J=5.3 Гц, 1H), 4.45 (t, J=5.1 Гц, 2Н), 3.87 (q, J=5.2 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм). m/z 295.0 [М+Н]+; RT: 0,62 мин.- 113 042018 s, 1H), 5.04 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.45 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.87 (q, J=5.2 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm). m/z 295.0 [M+H]+; RT: 0.62 min.
Пример 210. ил)циклопентан-1 -ола.Example 210 yl)cyclopentan-1-ol
цис-3-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2Получениеcis-3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-2 Preparation
Стадия 1. 2-(цис-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)циклопентил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 1. 2-(cis-3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)cyclopentyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[ 4,3-c]quinoline-4-amine.
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (30 мг, 0,090 ммоль), трифенилфосфина (24,71 мг, 0,094 ммоль) и транс-3-((третбутилдиметилсилил)окси)циклопентан-1-ола (20,39 мг, 0,094 ммоль) в DMF (897 мкл) добавляли диизопропилазодикарбоксилат (17,66 мкл, 0,090 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 5 мин, затем при комнатной температуре в течение 17 ч. Добавляли дополнительное количество транс-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)циклопентан-1-ола (20,39 мг, 0,094 ммоль), трифенилфосфина (24,71 мг, 0,094 ммоль) и диизопропилазодикарбоксилата (17,66 мкл, 0,090 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (RediSep gold с 12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2). Второй элюируемый региоизомер выделяли с получением 2-(цис-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-циклопентил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (17,6 мг, 37%). LC-MS m/z 533 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.60 (s, 1Н), 8.16 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.59 (dd, J=8.1, 1.5 Гц, 2Н), 7.31 (dd, J=8.1, 1.6 Гц, 1H), 6.96 (br s, 2H), 6.50 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Гц, 1H), 5.00 (quin, J=7.7 Гц, 1H), 4.41 (quin, J=5.8 Гц, 1H), 4.064.01 (m, 1H), 3.63-3.52 (m, 1H), 2.63-2.55 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 1H), 2.26 (qd, J=7.5, 3.8 Гц, 2Н), 2.09-1.92 (m, 3H), 1.88-1.76 (m, 2Н), 1.64-1.49 (m, 3H), 0.86 (d, J=1.0 Гц, 9Н), 0.08 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).To suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (30 mg, 0.090 mmol), triphenylphosphine (24.71 mg, 0.094 mmol) and trans-3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)cyclopentan-1-ol (20.39 mg, 0.094 mmol) in DMF (897 µl) was added diisopropyl azodicarboxylate (17.66 µl, 0.090 mmol ). The reaction mixture was stirred at 0° C. for 5 minutes, then at room temperature for 17 hours. Additional trans-3((tert-butyldimethylsilyl)oxy)cyclopentan-1-ol (20.39 mg, 0.094 mmol) was added, triphenylphosphine (24.71 mg, 0.094 mmol) and diisopropyl azodicarboxylate (17.66 µl, 0.090 mmol) and stirred at room temperature for 1 h. NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (RediSep gold with 12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ). The second eluting regioisomer was isolated to give 2-(cis-3((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-cyclopentyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl)- 2Hpyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (17.6 mg, 37%). LC-MS m/z 533 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.60 (s, 1H), 8.16 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.59 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 2H), 7.31 (dd, J =8.1, 1.6 Hz, 1H), 6.96 (br s, 2H), 6.50 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.30 (dd, J=10.0, 2.0 Hz, 1H), 5.00 (quin, J=7.7 Hz, 1H), 4.41 (quin, J=5.8 Hz, 1H), 4.064.01 (m, 1H), 3.63-3.52 (m, 1H), 2.63-2.55 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 1H), 2.26 (qd, J=7.5, 3.8 Hz, 2H), 2.09-1.92 (m, 3H), 1.88-1.76 (m, 2H), 1.64-1.49 (m, 3H), 0.86 (d, J= 1.0 Hz, 9H), 0.08 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).
Стадия 2. цис-3-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)циклопентан-1-ол.Step 2 cis-3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)cyclopentan-1-ol.
К раствору 2-(цис-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)циклопентил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (17 мг, 0,032 ммоль) в CH2Cl2 (160 мкл) добавляли TFA (160 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (300 мкл) и концентрировали в вакууме.To a solution of 2-(cis-3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)cyclopentyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4, 3-c]quinoline-4-amine (17 mg, 0.032 mmol) in CH 2 Cl 2 (160 μl) TFA (160 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 (300 μl) and concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (150 мкл) и МеОН (150 мкл) и добавляли карбонат калия (22 мг, 0,16 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь разбавляли 1:1 МеОН-CH2Cl2 (1 мл), фильтровали и промывали 1:1 МеОН-CH2Cl2 (2x0,5 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме, затем его смешивали с DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 3% В, 3-43% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением цис-3-(4амино-7-(1Н-пиразол-3-ил-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ила)циклопентан-1-ола (6,3 мг, 59%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.63 (s, 1H), 8.07 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.63 (br d, J=8.5 Гц, 1H), 7.09-6.96 (m, 2H), 6.75 (d, J=1.4 Гц, 1H), 5.04-4.96 (m, 2Н), 4.29-4.24 (m, 1H), 2.32-2.23 (m, 1H), 2.222.14 (m, 1H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.90-1.78 (m, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: WatersThe crude product was mixed with CH2Cl2 (150 µl) and MeOH (150 µl) and potassium carbonate (22 mg, 0.16 mmol) was added. The suspension was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction mixture was diluted with 1:1 MeOH-CH 2 Cl 2 (1 ml), filtered and washed with 1:1 MeOH-CH 2 Cl 2 (2x0.5 ml). The filtrate was concentrated in vacuo, then it was mixed with DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 3% B, 3-43% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give cis-3-(4amino-7-(1H-pyrazol-3-yl-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)cyclopentan- 1-ol (6.3 mg, 59%) 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.63 (s, 1H), 8.07 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H) , 7.71 (br s, 1H), 7.63 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 7.09-6.96 (m, 2H), 6.75 (d, J=1.4 Hz, 1H), 5.04-4.96 (m, 2H ), 4.29-4.24 (m, 1H), 2.32-2.23 (m, 1H), 2.222.14 (m, 1H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.90-1.78 (m, 3H).Analytical LC conditions /MS: column: Waters
- 114 042018- 114 042018
XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/.z 335.2 [М+Н]+; RT: 0,87 мин.XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/.z 335.2 [M+H]+; RT: 0.87 min.
Соединения по примерам 211-246 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примерах 207 и 208, 209 или 210 из соответствующих исходных соединений алкилгалогенида, мезилата или спирта. Температура реакций алкилирования варьировалась от комнатной до 90°С, и в некоторых случаях добавляли дополнительные эквиваленты алкилирующего реагента. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). ___________________________________________________________________________________Compounds of examples 211-246 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in examples 207 and 208, 209 or 210 from the corresponding starting compounds of alkyl halide, mesylate or alcohol. The temperature of the alkylation reactions ranged from room temperature to 90° C., and additional equivalents of the alkylating reagent were added in some cases. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). _________________________________________________________________________________
- 115 042018- 115 042018
- 116 042018- 116 042018
- 117 042018- 117 042018
- 118 042018- 118 042018
- 119 042018- 119 042018
- 120 042018- 120 042018
Примеры 238 и 239.Examples 238 and 239.
Рацемический продукт, соединение по примеру 237, получали из соответствующих исходных соединений и очищали препаративной хиральной SFC с использованием следующих условий, чтобы получить соединение по примеру 238 и соединение по примеру 239 в виде отдельных не определенных изомеров: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral AD, 30x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 80% СО2/20% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 238 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 25,73 мин. Соединение по примеру 239 (второй эобируемый изомер). Время удерживания: 30,37 мин.The racemic product, Example 237, was prepared from the respective starting compounds and purified by preparative chiral SFC using the following conditions to give Example 238 and Example 239 as separate undetermined isomers: Instrument: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral AD, 30x250 mm, 5 µm; mobile phase: 80% CO2/20% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of Example 238 (first eluting isomer), retention time: 25.73 min. Example 239 compound (second desired isomer). Retention time: 30.37 min.
- 121 042018- 121 042018
Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiralpak AD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 80% CO2/20% IPA с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 238 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 11,4 мин. Соединение по примеру 239 (второй элюируемый изомер). Время удерживания: 13,3 мин.Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiralpak AD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 80% CO2/20% IPA with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 238 (first eluting isomer), retention time: 11.4 min. Example 239 compound (second eluting isomer). Retention time: 13.3 min.
Пример 247. Получение 2-(2-метоксиэтил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина.Example 247 Preparation of 2-(2-methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine
Смесь 7-бром-2-(2-метоксиэтил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (33 мг, 0,103 ммоль), 1Hпиразола (10,49 мг, 0,154 ммоль) и карбоната натрия (43,6 мг, 0,411 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли DMSO (1027 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли N,N'-диметилэтилендиамин (33,2 мкл, 0,308 ммоль) и йодид меди(I) (29,4 мг, 0,154 ммоль).A mixture of 7-bromo-2-(2-methoxyethyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (33 mg, 0.103 mmol), 1Hpyrazole (10.49 mg, 0.154 mmol) and sodium carbonate ( 43.6 mg, 0.411 mmol) was evacuated and refilled with N 2 , then DMSO (1027 μl) was added. The resulting mixture was purged with N 2 for 10 min, then N,N'-dimethylethylenediamine (33.2 μl, 0.308 mmol) and copper(I) iodide (29.4 mg, 0.154 mmol) were added.
Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 120°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл), 1: 1 Н2О-водн. NH4OH (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: Xbridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 3% В, 3-43% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-метоксиэтил)-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (17,4 мг, 52%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.52 (d, J=2.2 Гц, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.14 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.85 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.76 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.67 (dd, J=8.4, 2.1 Гц, 1H), 7.10-7.00 (m, 2H), 6.55 (s, 1H), 4.57 (t, J=5.0 Гц, 2Н), 3.81 (t, J=5.0 Гц, 2Н), 3.25 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 308.9 [М+Н]+; RT: 1,13 мин.The mixture was purged with N 2 for 1 min, then sealed and stirred at 120° C. for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H 2 O (20 ml), 1:1 N 2 O-aq. NH 4 OH (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: Xbridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 3% B, 3-43% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-methoxyethyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine ( 17.4 mg, 52%). 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.14 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.76 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.10-7.00 (m, 2H), 6.55 (s, 1H), 4.57 ( t, J=5.0 Hz, 2H), 3.81 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 308.9 [M+H]+; RT: 1.13 min.
Пример 248. Получение 2-(2-метоксиэтил)-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина.Example 248 Preparation of 2-(2-methoxyethyl)-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine
Смесь 7-бром-2-(2-метоксиэтил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (33 мг, 0,103 ммоль), 4,4,5,5тетраметил-2-(тиофен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолана (32,4 мг, 0,154 ммоль) и трехосновного фосфата калия (65,4 мг, 0,308 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли 1,4-диоксан (428 мкл) и H2O (86 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 15 мин, затем добавляли хлор(2дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1 '-бифенил) [2-(2'-амино-1,1 '-бифенил)]палладий(И) (2,021 мг, 2,57 мкмоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 20 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл) и промывали H2O (20 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл), и объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 14% В, 14-54% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS и UV. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(2-метоксиэтил)-7-(тиофен-2-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (26,9 мг, 81%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.51 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.2 Гц, 1H), 7.69 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.55 (d, J=3.7 Гц, 1H), 7.54A mixture of 7-bromo-2-(2-methoxyethyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (33 mg, 0.103 mmol), 4,4,5,5tetramethyl-2-(thiophene-2 -yl)-1,3,2-dioxaborolane (32.4 mg, 0.154 mmol) and tribasic potassium phosphate (65.4 mg, 0.308 mmol) were evacuated and filled with N 2 again, then 1,4-dioxane (428 μl) was added ) and H 2 O (86 μl). The resulting mixture was purged with N 2 for 15 min, then chlorine(2dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropyl-1,1'-biphenyl) [2-(2'-amino-1,1'-biphenyl) was added ]palladium(II) (2.021 mg, 2.57 µmol). The mixture was purged with N2 for 1 min, then sealed and stirred at 100°C for 20 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml) and washed with H2O (20 ml). The aqueous layer was extracted with EtOAc (20 ml) and the combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 14% B, 14-54% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS and UV signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(2-methoxyethyl)-7-(thiophen-2-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (26, 9 mg, 81%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.51 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J=3.7 Hz, 1H), 7.54
- 122 042018- 122 042018
7.50 (m, 2H), 7.15 (dd, J=5.0, 3.7 Гц, 1H), 7.21-7.05 (m, 2H), 4.56 (t, J=4.9 Гц, 2Н), 3.82-3.79 (m, 2H), 3.24 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм. m/z: 325.2 [М+Н]+; RT: 1,28 мин.7.50 (m, 2H), 7.15 (dd, J=5.0, 3.7 Hz, 1H), 7.21-7.05 (m, 2H), 4.56 (t, J=4.9 Hz, 2H), 3.82-3.79 (m, 2H) , 3.24(s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm. m/z: 325.2 [M+H]+; RT: 1.28 min.
Примеры 249 и 250. Получение 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил)этан-1 -ола и 2-(4-амино-7-( 1 Н-пиразол-1 -ил)-1 H-пиразоло[4,3-с]хинолин-1 -ил)этан-1 -ола.Examples 249 and 250 Preparation of 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)ethan-1-ol and 2-(4- amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1-yl)ethan-1-ol.
Стадия 1. N,2-бис(4-метоксибензил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 1 N,2-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine.
Смесь 7-бром-N,2-бис(4-метоксибензил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (102 мг, 0,203 ммоль), 1H-пиразола (20,69 мг, 0,304 ммоль) и карбоната натрия (86 мг, 0,810 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем добавляли DMSO (2026 мкл). Полученную смесь продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли N,N'-диметилэтилендиамин (65,4 мкл, 0,608 ммоль) и йодид меди(I) (57,9 мг, 0,304 ммоль). Смесь продували N2 в течение 1 мин, затем герметично закрывали и перемешивали при 120°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали H2O (20 мл), 1:1 Н2О-водн. NH4OH (20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэшхроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAc-CH2Cl2) с получением N,2-6uc(4метоксибензил)-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (83,5 мг, 84%) в виде белого твердого вещества. LC-MS m/z 491 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=2.1 Гц, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.13 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.95 (br t, J=5.3 Гц, 1H), 7.90 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.75 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.69 (dd, J=8.5, 2.2 Гц, 1H), 7.35 (d, J=7.8 Гц, 4H), 6.99-6.94 (m, 2Н), 6.91-6.85 (m, 2Н), 6.55-6.53 (m, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.71 (d, J=5.6 Гц, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).A mixture of 7-bromo-N,2-bis(4-methoxybenzyl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (102 mg, 0.203 mmol), 1H-pyrazole (20.69 mg, 0.304 mmol ) and sodium carbonate (86 mg, 0.810 mmol) was evacuated and filled with N 2 again, then DMSO (2026 μl) was added. The resulting mixture was purged with N2 for 10 min, then N,N'-dimethylethylenediamine (65.4 µl, 0.608 mmol) and copper(I) iodide (57.9 mg, 0.304 mmol) were added. The mixture was purged with N2 for 1 min, then sealed and stirred at 120°C for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (20 ml), washed with H2O (20 ml), 1:1 H 2 O- aq. NH 4 OH (20 ml) and saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc-CH 2 Cl 2 ) to give N,2-6uc(4methoxybenzyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4 ,3-c]quinoline-4-amine (83.5 mg, 84%) as a white solid. LC-MS m/z 491 [M+H] + ; 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.61 (d, J=2.1 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.13 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.95 (br t, J= 5.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.69 (dd, J=8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J= 7.8 Hz, 4H), 6.99-6.94 (m, 2H), 6.91-6.85 (m, 2H), 6.55-6.53 (m, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.71 (d, J=5.6 Hz, 2H ), 3.74 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).
Стадия 2. 7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин, TFA.Step 2. 7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, TFA.
Раствор N,2-бис(4-метоксибензил)-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (82,5 мг, 0,168 ммоль) в TFA (336 мкл) герметично закрывали и перемешивали при 70°С в течение 18 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт концентрировали из CH2Cl2 (4x2 мл). Неочищенный продукт растирали с CH2Cl2, смешивая его с CH2Cl2 (1 мл), фильтровали и затем промывали CH2Cl2 (3x1 мл) с получением 7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-4-амина, TFA (52,8 мг, 86%) в виде грязно-белого твердого вещества. LC-MS m/z 251 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.35-13.08 (m, 1H), 9.78-9.51 (m, 1H), 8.88-8.59 (m, 3H), 8.34 (br d, J=7.4 Гц, 1H), 8.25 (br s, 1H), 8.13-8.00 (m, 1H), 7.88 (br s, 1H), 6.66 (br s, 1H).Solution of N,2-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (82.5 mg, 0.168 mmol) in TFA (336 μl) was sealed and stirred at 70°C for 18 h, then cooled to room temperature and concentrated in vacuo. The crude product was concentrated from CH 2 Cl 2 (4x2 ml). The crude product was triturated with CH 2 Cl 2 mixing it with CH 2 Cl 2 (1 ml), filtered and then washed with CH 2 Cl 2 (3x1 ml) to give 7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo [4,3c]quinoline-4-amine, TFA (52.8 mg, 86%) as an off-white solid. LC-MS m/z 251 [M+H] + ; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.35-13.08 (m, 1H), 9.78-9.51 (m, 1H), 8.88-8.59 (m, 3H), 8.34 (br d, J=7.4 Hz, 1H), 8.25 (br s, 1H), 8.13–8.00 (m, 1H), 7.88 (br s, 1H), 6.66 (br s, 1H).
Стадия 3. 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этан-1-ол и 2-(4-амино7-(1 Н-пиразол-1 -ил)-1 H-пиразоло[4,3-с]хинолин-1 -ил)этан-1 -ол.Step 3. 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethan-1-ol and 2-(4-amino7 -(1H-pyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1-yl)ethan-1-ol.
К суспензии 7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина, TFA (26 мг, 0,071 ммоль) в DMF (238 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (69,8 мг, 0,214 ммоль), а затем 2бромэтан-1-ол (5,56 мкл, 0,079 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и при 50°С в течение 6 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (2 мл) и экстрагировали EtOAc (3x2Cesium carbonate was added to a suspension of 7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, TFA (26 mg, 0.071 mmol) in DMF (238 µl) at room temperature (69.8 mg, 0.214 mmol) followed by 2-bromoethan-1-ol (5.56 µl, 0.079 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 18 h and at 50°C for 6 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (2 ml) and was extracted with EtOAc (3x2
- 123 042018 мл). Объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 25 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-1-ил)-1H-пиразоло[4,3-с]хинолин-1-ил)этан1-ола, TFA (4,1 мг, 14%). Другой региоизомер также выделяли и дополнительно очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-40% В в течение 25 мин, затем 5-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-1-ил)2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)этан-1-ола, TFA (4 мг, 13%).- 123 042018 ml). The combined organic layers were concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 μm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 25 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1-yl)ethane1 -ola, TFA (4.1 mg, 14%). The other regioisomer was also isolated and further purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-40% B for 25 min, then 5-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)ethan- 1-ol, TFA (4 mg, 13%).
Характеристические данные для 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил)этан-1-ола (Пример 249): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSOA) δ 8.80 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.22 (d, J=8.5 Гц, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.86 (br d, J=9.1 Гц, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.16 (br d, J=1.9 Гц, 1H), 4.50 (br t, J=5.0 Гц, 2H), 3.88 (br s, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m.z 295.1 [М+Н]+; RT: 0,81 мин.Characterization data for 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)ethan-1-ol (Example 249): 1 H NMR ( 500 MHz, DMSOA) δ 8.80 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.22 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.86 (br d, J=9.1 Hz, 1H ), 7.82 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.16 (br d, J=1.9 Hz, 1H), 4.50 (br t, J=5.0 Hz, 2H), 3.88 (br s, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). mz 295.1 [M+H]+; RT: 0.81 min.
Характеристические данные для 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-1H-пиразоло[4,3-с]хинолин-1ил)этан-1-ола (Пример 250): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.68-8.64 (m, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.54 (d, J=9.0 Гц, 1H), 8.22 (br s, 1H), 7.98 (dd, J=8.8, 1.3 Гц, 1H), 7.87 (d, J=1.0 Гц, 1H), 6.66 (d, J=1.7 Гц, 1H), 5.19-5.07 (m, 1H), 4.86 (br t, J=5.1 Гц, 2Н), 3.93 (br t, J=4.8 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 295.2 [М+Н]+; RT: 0,97 мин.Characterization data for 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1yl)ethan-1-ol (Example 250): 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.68-8.64 (m, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.54 (d, J=9.0 Hz, 1H), 8.22 (br s, 1H), 7.98 (dd, J= 8.8, 1.3 Hz, 1H), 7.87 (d, J=1.0 Hz, 1H), 6.66 (d, J=1.7 Hz, 1H), 5.19-5.07 (m, 1H), 4.86 (br t, J=5.1 Hz , 2Н), 3.93 (br t, J=4.8 Hz, 2Н). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 295.2 [M+H]+; RT: 0.97 min.
Примеры 251 и 252. Получение 3-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пирaзоло[4,3-с]хинолин-2ил)пропан-1 -ола и 3-(4-амино-7-( 1 Н-пиразол-1 -ил)-1 Н-пиразоло [4,3-с]хинолин-1 -ил)пропан-1 -ола.Examples 251 and 252 Preparation of 3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)propan-1-ol and 3-(4- amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1-yl)propan-1-ol.
Cs2CO3, DMF, rt;Cs 2 CO 3 , DMF, rt;
TFATFA
CH2CI2, rt;CH 2 CI 2 , rt;
K2CO3 K2CO3 _
CH2CI2, МеОНCH 2 CI 2 , MeOH
К суспензии 7-(1H-пирaзол-1-ил)-2Н-пирaзоло[4,3-с]хинолин-4-aминa, TFA (26 мг, 0,071 ммоль) в DMF (238 мкл) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (69,8 мг, 0,214 ммоль), а затем (3бромпропокси)(трет-бутил)диметилсилан (18,19 мкл, 0,079 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (2 мл) и экстрагировали EtOAc (3x2 мл). Объединенные органические слои концентрировали в вакууме.Cesium carbonate was added to a suspension of 7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine, TFA (26 mg, 0.071 mmol) in DMF (238 µl) at room temperature (69.8 mg, 0.214 mmol) followed by (3-bromopropoxy)(tert-butyl)dimethylsilane (18.19 µl, 0.079 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was diluted with H2O (2 ml) and extracted with EtOAc (3x2 ml). The combined organic layers were concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (150 мкл) и добавляли TFA (150 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт концентрировали из CH2Cl2 (300 мкл).The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 (150 μl) and TFA (150 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was concentrated from CH2Cl2 (300 µl).
Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (150 мкл) и МеОН (150 мкл) и добавляли карбонат калия (49 мг, 0,36 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь разбавляли 1:1 МеОН-CH2Cl2 (1 мл) и фильтровали (фильтрующая пипетка). Фильтрат концентрировали в вакууме, затем его смешивали с DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (150 μl) and MeOH (150 μl) and potassium carbonate (49 mg, 0.36 mmol) was added. The suspension was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction mixture was diluted 1:1 MeOH-CH 2 Cl 2 (1 ml) and filtered (filter pipette). The filtrate was concentrated in vacuo, then mixed with DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5
- 124 042018 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 10 мМ ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 1% В, 1-41% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания. Каждый продукт дополнительно очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-20% В в течение 25 минут, затем 5-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 3-(4-амино-7-(1Hпиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)пропан-1-ола, TFA (12,2 мг, 41%) и 3-(4-амино-7-(1Нпиразол-1-ил)-1H-пиразоло[4,3-с]хинолин-1-ил)пропан-1-ола, TFA (4,1 мг, 14%).- 124 042018 microns; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 10 mM ammonium acetate; gradient: 0 min hold at 1% B, 1-41% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation. Each product was further purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 minute hold at 0% B, 0-20% B for 25 minutes, then 5 minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 3-(4-amino-7-(1Hpyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)propan-1 -ol, TFA (12.2 mg, 41%) and 3-(4-amino-7-(1Hpyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1-yl)propan-1 -ola, TFA (4.1 mg, 14%).
Характеристические данные для 3-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил)пропан-1-ола (Пример 251): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.90-8.88 (m, 1H), 8.61-8.57 (m, 1H), 8.26 (d, J=8.7 Гц, 1H), 8.15-8.12 (m, 1H), 7.95 (br d, J=8.2 Гц, 1H), 7.84 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.91-4.75 (m, 1H), 4.54 (br t, J=7.0 Гц, 2Н), 3.45 (br t, J=6.0 Гц, 2Н), 2.08 (quin, J=6.4 Гц, 2Н). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 309.1 [М+Н]+, RT: 0,83 мин.Characterization data for 3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)propan-1-ol (Example 251): 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.90-8.88 (m, 1H), 8.61-8.57 (m, 1H), 8.26 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.15-8.12 (m, 1H), 7.95 (br d , J=8.2 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.91-4.75 (m, 1H), 4.54 (br t, J=7.0 Hz, 2H), 3.45 (br t, J=6.0 Hz, 2H), 2.08 (quin, J=6.4 Hz, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 309.1 [M+H]+, RT: 0.83 min.
Характеристические данные для 3-(4-амино-7-(1H-пиразол-1-ил)-1H-пиразоло[4,3-с]хинолин-1ил)пропан-1-ола (Пример 252): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 8.68 (d, J=2.4 Гц, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.46 (d, J=9.0 Гц, 1H), 8.26 (d, J=1.9 Гц, 1H), 8.04 (dd, J=8.9, 1.7 Гц, 1H), 7.88 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.85 (br t, J=7.2 Гц, 2Н), 3.55-3.51 (m, 2Н), 2.10-2.02 (m, 2H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 309.2 [М+Н]+; RT: 0,75 мин.Characterization data for 3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-1-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-1yl)propan-1-ol (Example 252): 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) 5 8.68 (d, J=2.4Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.46 (d, J=9.0Hz, 1H), 8.26 (d, J=1.9Hz, 1H) , 8.04 (dd, J=8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.85 (br t, J=7.2 Hz, 2H), 3.55-3.51 (m, 2H) , 2.10-2.02 (m, 2H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 309.2 [M+H] + ; RT: 0.75 min.
Пример 253. Получение 2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]пропан-1ола.Example 253 Preparation of 2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl]propan-1ol.
Стадия 1. Синтез этил 2-[4-амино-7-[1-(оксан-2-ил)-1H-пиразол-5-ил]-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин2-ила]пропаноата.Step 1. Synthesis of ethyl 2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin2-yl]propanoate.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили 7-[1-(оксан-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин (100 мг, 0,299 ммоль, 1 экв.), Cs2CO3 (292 мг, 0,89 ммоль, 3 экв.), DMF (5 мл), этил-2-бромпропаноат (64,9 мг, 0,36 ммоль, 1,2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 65°С. Остаток растворяли в 15 мл H2O. Полученный раствор экстрагировали 2x15 мл этилацетата и концентрировали. Это привело к получению 100 мг (77%) этил 2-[4-амино-7-[1-(оксан-2-ил)-1Hпиразол-5-ил]-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]пропаноата в виде твердого вещества желтого цвета. LCMS: (ES, m/z): [M+H]+=435.5.7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (100 mg, 0.299 mmol, 1 eq.), Cs 2 CO 3 (292 mg, 0.89 mmol, 3 eq.), DMF (5 ml), ethyl 2-bromopropanoate (64.9 mg, 0.36 mmol, 1.2 eq.) . The resulting solution was stirred for 2 hours at 65°C. The residue was dissolved in 15 ml H2O. The resulting solution was extracted with 2x15 ml of ethyl acetate and concentrated. This resulted in 100 mg (77%) of ethyl 2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl]-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin- 2-yl]propanoate as a yellow solid. LCMS: (ES, m/z): [M+H] + =435.5.
Стадия 2. Синтез этил 2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил]пропаноата.Step 2. Synthesis of ethyl 2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl]propanoate.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили этил 2-[4-амино-7-[1-(оксан-2-ил) -1Н-пиразол-5ил]-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]пропаноат (100 мг, 0,23 ммоль, 1 экв.), DCM (10 мл), HCl в диоксане (0,5 мл, 16,4 ммоль, 71,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Это привело к получению 60 мг (74%) этил 2-[4-амино-7Ethyl 2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1H-pyrazol-5yl]-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl ]propanoate (100 mg, 0.23 mmol, 1 eq.), DCM (10 ml), HCl in dioxane (0.5 ml, 16.4 mmol, 71.5 eq.). The resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was concentrated. This resulted in 60 mg (74%) ethyl 2-[4-amino-7
- 125 042018 (1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]пропаноата в виде желтого вещества желтого цвета. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=351.4.- 125 042018 (1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl]propanoate in the form of a yellow yellow substance. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=351.4.
Стадия 3. Синтез 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)пропан-1-ола.Stage 3. Synthesis of 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)propan-1-ol.
В круглодонную колбу объемом 25 мл вносили этил 2-[4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]пропаноат (60 мг, 0,171 ммоль, 1 экв.), МеОН (10 мл), NaBH4 (16,20 мг, 0,428 ммоль, 2,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 0°С. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC в следующих условиях: колонка Sunfire Prep C18 OBD, 10 мкм, 19x250 мм; подвижная фаза, вода (0,05% TFA) и ACN (от 15% PhaseB до 25% за 9 мин); детектор, 254/210 нм. Это привело к получению 20 мг (27%) 2-(4-амино-7-(1H-пиразол5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)пропан-1-ола в виде белого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=309.2. 1Н ЯМР (400 МГц, метанол^) δ 8.82 (s, 1H), 8.36-8.34 (d, J=8.0 Гц, 1H), 8.02-8.01 (m, 1H), 7.95-7.93 (m, 1H), 7.77-7.76 (d, J=2.4 Гц, 1H), 6.83-6.82 (d, J=2.4 Гц, 1H), 4.87-4.74 (m, 1H), 3.98-3.93 (m, 2H), 1.69-1.68 (d, J=6.8 Гц, 3H).Ethyl 2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl]propanoate (60 mg, 0.171 mmol, 1 eq.), MeOH (10 ml), NaBH4 (16.20 mg, 0.428 mmol, 2.5 eq.). The resulting solution was stirred for 2 h at 0°C. The resulting mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC under the following conditions: Sunfire Prep C18 OBD column, 10 µm, 19x250 mm; mobile phase, water (0.05% TFA) and ACN (15% PhaseB to 25% in 9 min); detector, 254/210 nm. This resulted in 20 mg (27%) of 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)propan-1-ol as white solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=309.2. 1 H NMR (400 MHz, methanol^) δ 8.82 (s, 1H), 8.36-8.34 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.02-8.01 (m, 1H), 7.95-7.93 (m, 1H), 7.77-7.76 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.83-6.82 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.87-4.74 (m, 1H), 3.98-3.93 (m, 2H), 1.69-1.68 ( d, J=6.8 Hz, 3H).
Соединения по примерам 254-285 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примерах 150, 151, 209 или 253, из соответствующих исходных соединений. Условия аналитической LC/MS.The compounds of examples 254-285 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in examples 150, 151, 209 or 253 from the corresponding starting compounds. Analytical LC/MS conditions.
А: колонка: PoroShell HPH С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.A: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
В: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.B: column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, 2.2 µm particles; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
С: колонка: Kinetex EVO C18, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбоната аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.C: column: Kinetex EVO C18, 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
D: колонка: Kinetex XB-C18, 2,1x30 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 35% В в течение 1,7 мин, затем до 100% в течение 0,5 мин, затем удерживание 0,6 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV. Е: Колонка: PoroShell HPH С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 0 до 30% В в течение 3 мин, затем до 95% в течение 0,2 мин, затем 1,0 мин удерживание при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.D: column: Kinetex XB-C18, 2.1x30 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 35% B over 1.7 min, then to 100% over 0.5 min, then hold 0.6 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV. E: Column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 0 to 30% B over 3 min, then to 95% over 0.2 min, then 1.0 min hold at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
F: колонка: XSelect HSS T3, 4,6x100 мм, частицы 3,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 6,0 мин, затем удерживание 2,0 мин при 100% В; скорость потока: 1,5 мл/мин; обнаружение: UV.F: column: XSelect HSS T3, 4.6x100 mm, particles 3.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 6.0 min, then hold 2.0 min at 100% B; flow rate: 1.5 ml/min; detection: UV.
G: колонка: Ascentis Express C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2,0 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1,5 мл/мин; обнаружение: MS и UV.G: column: Ascentis Express C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2.0 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1.5 ml/min; detection: MS and UV.
Н: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 50% в течение 3 мин, а затем до 95% В в течение 0,3 мин, затем удерживание 0,4 минуты при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.H: column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 50% over 3 minutes, then to 95% B over 0.3 minutes, then hold 0.4 minutes at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
I: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 40% в течение 3 мин, а затем до 100% В в течение 0,3 мин, затем удерживание 0,4 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин; обнаружение: MS и UV.I: column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 40% over 3 min, then to 100% B over 0.3 min, then hold 0.4 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min; detection: MS and UV.
J: колонка: PoroShell HPH С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 3,2 мин, затем удерживание 1,0 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.J: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 3.2 min, then hold 1.0 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
K: колонка: PoroShell HPH С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 40% В за 3,0 мин, затем до 95% В за 0,2 мин, затем 1,0 мин удерживание при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.K: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 40% B in 3.0 min, then to 95% B in 0.2 min, then 1.0 min hold at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
L: колонка: PoroShell HPH С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 1,7 мин, затем 1,0 мин удерживание при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.L: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 1.7 min, then 1.0 min hold at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
М: колонка: Titan С18, 2,1x50 мм, частицы 1,9 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 50% в течение 2,2 мин, затем до 100% В в течение 0,8 мин, затем удерживание 0,8 мин при 95% В; скорость потока: 0,7 мл/мин; обнаружение: MS и UV.M: column: Titan C18, 2.1x50 mm, particles 1.9 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 50% over 2.2 min, then to 100% B over 0.8 min, then hold 0.8 min at 95% B; flow rate: 0.7 ml/min; detection: MS and UV.
- 126 042018- 126 042018
N: колонка: Ascentis Express C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 100% В в течение 2,0 мин, затем удерживание 0,8 мин при 95% В; скорость потока: 1,5 мл/мин; обнаружение: MS и UV.N: column: Ascentis Express C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 100% B over 2.0 min, then hold 0.8 min at 95% B; flow rate: 1.5 ml/min; detection: MS and UV.
О: колонка: Kinetex XB-C18, 2,1x30 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 100% В в течение 0,8 мин, затем удерживание 0,5 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UVA: Column: Kinetex XB-C18, 2.1x30 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 100% B over 0.8 min, then hold 0.5 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV
- 127 042018- 127 042018
- 128 042018- 128 042018
- 129 042018- 129 042018
- 130 042018- 130 042018
- 131 042018- 131 042018
- 132 042018- 132 042018
Пример 286.Example 286.
стадия 1stage 1
стадия 1stage 1
Стадия 1. Получение этил (2Z)-3-(4-бром-2-нитрофенил)-2-цианопроn-2-еноата.Step 1. Obtaining ethyl (2Z)-3-(4-bromo-2-nitrophenyl)-2-cyanopron-2-enoate.
В круглодонную колбу объемом 100 мл добавляли 4-бром-2-нитробензальдегид (8 г, 34,8 ммоль, 1 экв.), H2O (40 мл), этил 2-цианоацетат (4,33 г, 38,2 ммоль, 1,1 экв.), морфолин (0,30 г, 3,4 ммоль, 0,1 экв.). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный раствор разбавляли 50 мл H2O. Полученный раствор экстрагировали 2x200 мл этилацетата. Органический слой промывали 2x200 мл рассола. Полученный раствор сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Это привело к получению 11 г (97,3%) этил (2Z)-3-(4-бром-2-нитрофенил)-2-цианопроп-2-еноата в виде желтого твердого вещества.To a 100 ml round bottom flask was added 4-bromo-2-nitrobenzaldehyde (8 g, 34.8 mmol, 1 eq.), H 2 O (40 ml), ethyl 2-cyanoacetate (4.33 g, 38.2 mmol , 1.1 eq.), morpholine (0.30 g, 3.4 mmol, 0.1 eq.). The resulting solution was stirred at room temperature for 1 h. The resulting solution was diluted with 50 ml H2O. The resulting solution was extracted with 2x200 ml of ethyl acetate. The organic layer was washed with 2x200 ml of brine. The resulting solution was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated. This resulted in 11 g (97.3%) of ethyl (2Z)-3-(4-bromo-2-nitrophenyl)-2-cyanoprop-2-enoate as a yellow solid.
Стадия 2. Получение 4-(4-бром-2-нитрофенил)-1H-пиррол-3-карбонитрила.Stage 2. Obtaining 4-(4-bromo-2-nitrophenyl)-1H-pyrrole-3-carbonitrile.
В круглодонную колбу объемом 250 мл вносили этил (2Z)-3-(4-бром-2-нитрофенил)-2-цианопроп-2еноат (12 г, 36,9 ммоль, 1 экв.), EtOH (100 мл). После этого по каплям добавляли EtONa в EtOH (16,7 мл, 44,7 ммоль, 1,2 экв.) при перемешивании при 5°С в течение 30 мин. К этой реакционной смеси добавляли по каплям раствор TosMIC (8,65 г, 44,3 ммоль, 1,2 экв.) в DCM (50 мл) при перемешивании при 5°С в течение 20 мин. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 25°С. Полученный раствор разбавляли 500 мл H2O. Значение рН раствора доводили до 8 с помощью концентрированной HCl. Полученный раствор экстрагировали 3x500 мл DCM. Полученную смесь промывали 2x500 мл рассола. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1:3). Это привело к получению 6,8 г (63,1%) 4-(4-бром-2-нитрофенил)-1Н-пиррол-3-карбонитрила в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [М+Н]+=291.9. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 8.41 (d, J=1.9 Гц, 1H), 8.15 (dd, J=8.3, 1.9 Гц, 1H), 7.78 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.74 (d, J=11.9 Гц, 1H), 6.19 (d, J=11.7 Гц, 1H).Ethyl (2Z)-3-(4-bromo-2-nitrophenyl)-2-cyanoprop-2-enoate (12 g, 36.9 mmol, 1 eq.), EtOH (100 ml) was added to a 250 ml round bottom flask. EtONa in EtOH (16.7 ml, 44.7 mmol, 1.2 eq.) was then added dropwise with stirring at 5° C. for 30 minutes. To this reaction mixture was added dropwise a solution of TosMIC (8.65 g, 44.3 mmol, 1.2 eq.) in DCM (50 ml) with stirring at 5° C. for 20 minutes. The resulting solution was stirred for 2 hours at 25°C. The resulting solution was diluted with 500 ml H2O. The pH of the solution was adjusted to 8 with concentrated HCl. The resulting solution was extracted with 3x500 ml DCM. The resulting mixture was washed with 2x500 ml of brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated. The residue was applied to a silica gel column using ethyl acetate/petroleum ether (1:3). This resulted in 6.8 g (63.1%) of 4-(4-bromo-2-nitrophenyl)-1H-pyrrole-3-carbonitrile as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=291.9. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.41 (d, J=1.9 Hz, 1H), 8.15 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.5 Hz, 1H) , 7.74 (d, J=11.9 Hz, 1H), 6.19 (d, J=11.7 Hz, 1H).
Стадия 3. Получение трет-бутил N-[2-[3-(4-бром-2-нитрофенил)-4-циано-1Н-пиррол-1ил]этил]карбамата.Step 3. Preparation of tert-butyl N-[2-[3-(4-bromo-2-nitrophenyl)-4-cyano-1H-pyrrol-1yl]ethyl]carbamate.
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили 4-(4-бром-2-нитрофенил)-1Н-пиррол-3-карбонитрил (1,8 г, 6,2 ммоль, 1 экв.), DMF (15 мл), Cs2CO3 (6,02 г, 18,5 ммоль, 3 экв.), трет-бутил N-(2бромэтил)карбамат (2,07 г, 9,2 ммоль, 1,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при 80°С. Полученный раствор разбавляли 100 мл H2O. Полученный раствор экстрагировали 3x100 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 3x100 мл рассола. Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Это привело к получению 2,1 г (78,3%) трет-бутил N-[2-[3-(4-6pom-2нитрофенuл)-4-цuано-1H-nuррол-1-ил]этил]карбамата в виде желтого масла. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=435.1. 1Н ЯМР (300 МГц, Метанол-d4) δ 8.12 (d, J=2.0 Гц, 1H), 7.86 (dd, J=8.3, 2.0 Гц, 1H), 7.527.44 (m, 2H), 6.98-6.93 (m, 1H), 4.06 (t, J=6.1 Гц, 2Н), 3.39 (t, J=5.9 Гц, 2Н), 1.40 (s, 9H).4-(4-Bromo-2-nitrophenyl)-1H-pyrrole-3-carbonitrile (1.8 g, 6.2 mmol, 1 eq.), DMF (15 ml), Cs 2 CO 3 (6.02 g, 18.5 mmol, 3 eq.), tert-butyl N-(2bromoethyl)carbamate (2.07 g, 9.2 mmol, 1.5 eq.). The resulting solution was stirred for 3 hours at 80°C. The resulting solution was diluted with 100 ml H 2 O. The resulting solution was extracted with 3x100 ml ethyl acetate. The resulting mixture was washed with 3x100 ml of brine. The mixture was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated. This resulted in 2.1 g (78.3%) of tert-butyl N-[2-[3-(4-6pom-2nitrophenyl)-4-cyano-1H-nurrol-1-yl]ethyl]carbamate as yellow oil. LC-MS: (ES, m/z): [M+H] + =435.1. 1 H NMR (300 MHz, Methanol-d 4 ) δ 8.12 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.86 (dd, J=8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.527.44 (m, 2H), 6.98- 6.93 (m, 1H), 4.06 (t, J=6.1 Hz, 2H), 3.39 (t, J=5.9 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H).
- 133 042018- 133 042018
Стадия 4. Получение трет-бутил N-(2-[4-амuно-7-бром-2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2ил]этил)карбамата.Step 4. Preparation of tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrrolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl)carbamate.
В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили трет-бутил N-[2-[3-(4-бром-2-нитрофенил)-4циано-1H-пuррол-1-ил]этил]карбамат (2,1 г, 4.8 ммоль, 1 экв.), НОАс (20 мл). После этого добавляли Fe (1,35 г, 24,3 ммоль, 5 экв.) порциями при 50°С. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 50°С. Полученный раствор разбавляли 100 мл МеОН. Твердые вещества отфильтровывали. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (15:1). Это привело к получению 1,8 г (92,1%) трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-2Нпирроло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)карбамата в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [М+Н]+=405.1 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-φ) δ 7.76 (d, J=8.2 Гц, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.46 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.25-7.17 (m, 1H), 7.17-6.91 (m, 3H), 4.21 (t, J=5.6 Гц, 2Н), 3.36 (q, J=5.7 Гц, 2Н), 1.35 (s, 9H).tert-Butyl N-[2-[3-(4-bromo-2-nitrophenyl)-4cyano-1H-pyrrol-1-yl]ethyl]carbamate (2.1 g, 4.8 mmol, 1 eq.), HOAc (20 ml). After that, Fe (1.35 g, 24.3 mmol, 5 eq.) was added in portions at 50°C. The resulting solution was stirred for 2 hours at 50°C. The resulting solution was diluted with 100 ml of MeOH. Solids were filtered off. The resulting mixture was concentrated. The residue was loaded onto a silica gel column using dichloromethane/methanol (15:1). This resulted in 1.8 g (92.1%) of tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-2Hpyrrolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate as yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=405.1 1 H NMR (300 MHz, DMSO-φ) δ 7.76 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.46 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.25-7.17 (m, 1H), 7.17-6.91 (m, 3H), 4.21 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.36 (q, J=5.7 Hz, 2H), 1.35 (s, 9H).
Стадия 5. трет-бутил N-(2-[4-амино-7- [ 1 -(оксан-2-ил)-1 H-пиразол-5 -ил] -2Н-пирроло[3,4-с]хинолин2-ил]этил)карбамат.Step 5. tert-butyl N-(2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1 H-pyrazol-5-yl]-2H-pyrrolo[3,4-c]quinoline2 -yl]ethyl)carbamate.
В круглодонную колбу объемом 50 мл, продуваемую и поддерживаемую в инертной атмосфере азота, помещали трет-бутил N-(2-[4-амино-7-бром-2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)карбамат (1,8 г, 4,441 ммоль, 1 экв.), 1-(оксан-2-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-uл)-1H-пuразол (1,85 г, 6,662 ммоль, 1,5 экв.), Cs2CO3 (4,34 г, 13,324 ммоль, 3 экв.), диоксан (20 мл), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2 (0,73 г, 0,888 ммоль, 0,2 экв.), H2O (0,5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 90°С. Полученную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (12:1). Это привело к получению 1,8 г (85%) трет-бутил N-(2-[4-амино-7-[1-(оксан2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]-2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)карбамата в виде желтого твердого вещества. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=477.2.Into a 50 ml round bottom flask, purged and maintained under an inert nitrogen atmosphere, was placed tert-butyl N-(2-[4-amino-7-bromo-2H-pyrrolo[3,4-c]quinolin-2-yl]ethyl )carbamate (1.8 g, 4.441 mmol, 1 eq.), 1-(oxan-2-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-ul )-1H-pyrazole (1.85 g, 6.662 mmol, 1.5 eq.), Cs 2 CO 3 (4.34 g, 13.324 mmol, 3 eq.), dioxane (20 ml), Pd(dppf)Cl 2. CH 2 Cl 2 (0.73 g, 0.888 mmol, 0.2 eq.), H2O (0.5 ml). The resulting solution was stirred for 16 hours at 90°C. The resulting mixture was concentrated. The residue was loaded onto a silica gel column using dichloromethane/methanol (12:1). This resulted in 1.8 g (85%) tert-butyl N-(2-[4-amino-7-[1-(oxan2-yl)-1H-pyrazol-5-yl]-2H-pyrrolo[3 ,4-c]quinolin-2-yl]ethyl)carbamate as a yellow solid. LC-MS (ES, m/z): [M+H]+=477.2.
Стадия 6. 2-(2-аминоэтил)-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-4-амин.Step 6 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrrolo[3,4-c]quinoline-4-amine
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили трет-бутил N-(2-[4-амино-7-[1-(оксан-2-ил)-1Hпиразол-5-ил]-2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил)карбамат (1,6 г, 3,357 ммоль, 1 экв.), HCl (газ) в 1,4диоксане (20 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Это привело к получению 1,4 г 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-4-амина в виде желтого твердого вещества. LC-MS-PH-BMS-L15-001-6: (ES, m/z): [M+H]+=293.1. 1Н ЯМР (400 МГц, Метанол^) δ 8.13-8.04 (m, 2H), 7.92-7.83 (m, 2H), 7.83-7.86 (m, 1H), 7.80-7.75 (d, J=2.3 Гц, 1H), 6.80 (d, J=2.3 Гц, 1H), 4.65 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 3.58 (t, J=6.2 Гц, 2Н).tert-Butyl N-(2-[4-amino-7-[1-(oxan-2-yl)-1Hpyrazol-5-yl]-2H-pyrrolo[3,4-c] quinolin-2-yl]ethyl)carbamate (1.6 g, 3.357 mmol, 1 eq.), HCl (gas) in 1,4-dioxane (20 ml). The resulting solution was stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. This resulted in 1.4 g of 2-(2-aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)2H-pyrrolo[3,4-c]quinoline-4-amine as a yellow solid. LC-MS-PH-BMS-L15-001-6: (ES, m/z): [M+H]+=293.1. 1H NMR (400 MHz, Methanol^) δ 8.13-8.04 (m, 2H), 7.92-7.83 (m, 2H), 7.83-7.86 (m, 1H), 7.80-7.75 (d, J=2.3 Hz, 1H) , 6.80 (d, J=2.3 Hz, 1H), 4.65 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.58 (t, J=6.2 Hz, 2H).
Стадия 7. Получение N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2ил]этил]пиридин-2-карбоксамида.Step 7: Preparation of N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrrolo[3,4-c]quinolin-2yl]ethyl]pyridine-2-carboxamide.
В круглодонную колбу объемом 50 мл вносили 2-(2-аминоэтил)-7-(1Н-пиразол-5-ил)-2Нпирроло[3,4-с]хинолин-4-амин (150 мг, 0,282 ммоль, 1 экв., 55%), DCM (5 мл), HATU (161 мг, 0,423 ммоль, 1,50 экв.), DIEA (129 мг, 0,998 ммоль, 3,54 экв.), пиридин-2-карбоновую кислоту (35 мг 0,284 ммоль, 1,01 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC в следующих условиях: колонка: XBridge Prep OBD С18, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: вода (10 ммоль/л NH4HCO3), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 15 до 27% В за 7,5 мин; 254/210 нм; RT: 6,87 мин. Это привело к получению 14,9 мг (13,13%) N-[2-[4-амино-7-(1H-пиразол-5-uл)2Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2-ил]этил]пиридин-2-карбоксамида в виде светло-желтого твердого вещества. LC-MS: (ES, m/z): [М+Н]+=398.3 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 12.78-12.74 (m, 1H), 9.25 (s, 1H), 9.09 (t, J=6.0 Гц, 1H), 8.57-8.65 (m, 2H), 8.13 (d, J=1.9 Гц, 1H), 8.05-7.94 (m, 5H), 7.74-7.78 (m, 2H), 7.61-7.74 (m, 1H), 6.76 (d, J=2.3 Гц, 1H), 4.50 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.78-3.96 (m, 2H).2-(2-Aminoethyl)-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2Hpyrrolo[3,4-c]quinoline-4-amine (150 mg, 0.282 mmol, 1 eq. , 55%), DCM (5 ml), HATU (161 mg, 0.423 mmol, 1.50 eq.), DIEA (129 mg, 0.998 mmol, 3.54 eq.), pyridine-2-carboxylic acid (35 mg 0.284 mmol, 1.01 eq.). The resulting solution was stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC under the following conditions: column: XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm, 5 µm; mobile phase A: water (10 mmol/l NH 4 HCO 3 ), mobile phase B: ACN; flow rate: 60 ml/min; gradient: 15 to 27% B in 7.5 minutes; 254/210 nm; RT: 6.87 min. This resulted in 14.9 mg (13.13%) of N-[2-[4-amino-7-(1H-pyrazol-5-ul)2H-pyrrolo[3,4-c]quinolin-2-yl ]ethyl]pyridine-2-carboxamide as a light yellow solid. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+=398.3 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.78-12.74 (m, 1H), 9.25 (s, 1H), 9.09 (t , J=6.0 Hz, 1H), 8.57-8.65 (m, 2H), 8.13 (d, J=1.9 Hz, 1H), 8.05-7.94 (m, 5H), 7.74-7.78 (m, 2H), 7.61- 7.74 (m, 1H), 6.76 (d, J=2.3 Hz, 1H), 4.50 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.78-3.96 (m, 2H).
Примеры 287 и 288.Examples 287 and 288.
- 134 042018- 134 042018
Стадия 1. Этил 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)бутаноат.Step 1 Ethyl 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinolin-2-yl )butanoate.
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (100 мг, 0,299 ммоль) и карбоната цезия (292 мг, 0,897 ммоль) в DMF (997 мкл) добавляли этил 3бромбутаноат (87 мг, 0,449 ммоль). Суспензию перемешивали при 70°С в течение 3 ч. Добавляли дополнительное количество этил 3-бромбутаноата (87 мг, 0,449 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 2 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОНCH2Cl2) с получением этил 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)бутаноата (85,8 мг, 0,191 ммоль, выход 64,0%) в виде белого твердого вещества.To a suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (100 mg, 0.299 mmol) and carbonate cesium (292 mg, 0.897 mmol) in DMF (997 μl) was added ethyl 3-bromobutanoate (87 mg, 0.449 mmol). The suspension was stirred at 70° C. for 3 hours. Additional ethyl 3-bromobutanoate (87 mg, 0.449 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 70°C for 2 h and then cooled to room temperature. The reaction mixture was diluted with H 2 O (20 ml) and was extracted with EtOAc (3x20 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOHCH 2 Cl 2 ) to give ethyl 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H -pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)butanoate (85.8 mg, 0.191 mmol, 64.0% yield) as a white solid.
LC-MS m/z 449 [М+Н]+; 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.56 (s, 1H), 8.15 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.59 (dd, J=5.1, 1.6 Гц, 2Н), 7.31 (d, J=8.2 Гц, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.50 (d, J=1.7 Гц, 1H), 5.29 (br d, J=9.7 Гц, 1H), 5.125.02 (m, 1H), 4.09-3.95 (m, 3H), 3.58 (br t, J=9.4 Гц, 1H), 3.15-3.06 (m, 1H), 3.05-2.97 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 1H), 1.99-1.92 (m, 1H), 1.83-1.74 (m, 1H), 1.63 (d, J=6.7 Гц, 3H), 1.55 (br t, J=8.6 Гц, 3H), 1.09 (t, J=7.1 Гц, 3H).LC-MS m/z 449 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.56 (s, 1H), 8.15 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.59 (dd, J=5.1, 1.6 Hz, 2H), 7.31 (d, J =8.2 Hz, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.50 (d, J=1.7 Hz, 1H), 5.29 (br d, J=9.7 Hz, 1H), 5.125.02 (m, 1H), 4.09- 3.95 (m, 3H), 3.58 (br t, J=9.4 Hz, 1H), 3.15-3.06 (m, 1H), 3.05-2.97 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 1H), 1.99-1.92 (m, 1H), 1.83-1.74 (m, 1H), 1.63 (d, J=6.7 Hz, 3H), 1.55 (br t, J=8.6 Hz, 3H), 1.09 (t, J=7.1 Hz, 3H ).
Стадия 2. 3 -(4-амино-7-( 1 Н-пиразол-3 -ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)бутан-1 -ол.Step 2 3-(4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)butan-1-ol.
К суспензии этил 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)бутаноата (85 мг, 0,190 ммоль) в THF (1895 мкл) по каплям добавляли боргидрид лития (2 М раствор в THF) (284 мкл, 0,569 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. По каплям добавляли дополнительное количество боргидрида лития (2 М раствор в THF) (284 мкл, 0,569 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,25 ч перед добавлением по каплям метанола (46,1 мкл, 1,137 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Реакционную смесь разбавляли H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (4x20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в МеОН (630 мкл) и добавляли 4 М хлористый водород в диоксане (47,4 мкл, 0,190 ммоль). Реакционную смесь разбавляли МеОН (1,5 мл) и CH2Cl2 (1,5 мл) (с получением прозрачного раствора) и добавляли карбонат на диоксиде кремния (карбонат SiliBond, Silicycle, 0,51 ммоль/г) (1,5 г, 0,765 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь фильтровали и промывали 50% МеОН-CH2Cl2 (3x6 мл). К фильтрату добавляли целит (достаточное количество для заполнения 5 г картриджа). Смесь концентрировали в вакууме. Этот продукт подвергали сухой загрузке и очищали флэш-хроматографией (RediSep Gold с 12 г силикагеля с картриджем с твердой загрузкой 5 г; линейный градиент 0-70% МеОН-CH2Cl2) с получением 3-(4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)бутан-1-ола (38 мг, 55%). LCMS m/z 323.6 [М+Н]+.To a suspension of ethyl 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3s]quinolin-2-yl) butanoate (85 mg, 0.190 mmol) in THF (1895 μl) was added dropwise lithium borohydride (2 M solution in THF) (284 μl, 0.569 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Additional lithium borohydride (2 M solution in THF) (284 μl, 0.569 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1.25 h before methanol (46.1 µl, 1.137 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 days. The reaction mixture was diluted with H2O (20 ml) and extracted with EtOAc (4x20 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in MeOH (630 μl) and 4 M hydrogen chloride in dioxane (47.4 μl, 0.190 mmol) was added. The reaction mixture was diluted with MeOH (1.5 ml) and CH2Cl2 (1.5 ml) (to give a clear solution) and carbonate on silica (SiliBond carbonate, Silicycle, 0.51 mmol/g) (1.5 g, 0.765 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 1 h. The mixture was filtered and washed with 50% MeOH-CH 2 Cl 2 (3x6 ml). Celite was added to the filtrate (enough to fill a 5 g cartridge). The mixture was concentrated in vacuo. This product was dry-loaded and purified by flash chromatography (RediSep Gold with 12 g silica gel with 5 g solid-load cartridge; linear gradient 0-70% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 3-(4-amino-7-( 1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinolin-2-yl)butan-1-ol (38 mg, 55%). LCMS m/z 323.6 [M+H] + .
Затем рацемическое соединение очищали препаративной хиральной SFC с использованием следующих условий с получением соединений по примерам 287 и 288 в виде отдельных не определенных изомеров: прибор: Berger SFC MGII: колонка: ChiralCEL YMC SB, 30x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 85% СО2/15% МеОН с 0,1% NH4OH; скорость потока: 85 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Пример 287 (первый элюируемый изомер). Пример 288 (второй элюируемый изомер).The racemic compound was then purified with preparative chiral SFC using the following conditions to give the compounds of Examples 287 and 288 as individual undefined isomers: instrument: Berger SFC MGII: column: ChiralCEL YMC SB, 30x250 mm, 5 µm; mobile phase: 85% CO 2 /15% MeOH with 0.1% NH4OH; flow rate: 85 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 287 (first eluting isomer). Example 288 (second eluting isomer).
Условия аналитической хиральной SFC: Прибор: Agilent analytical SFC; колонка: YMC SB, 4,6x250 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 85% СО2/15% IPA с 0,1% NH4OH; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Пример 287 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 30,9 мин. Пример 288 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 33,4 мин.Analytical Chiral SFC Conditions: Instrument: Agilent analytical SFC; column: YMC SB, 4.6x250 mm, 5 microns; mobile phase: 85% CO 2 /15% IPA with 0.1% NH4OH; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 287 (first eluting isomer), retention time: 30.9 min. Example 288 (second eluting isomer), retention time: 33.4 min.
Пример 287: LC-MS m/z 323 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.47-12.74 (m, 1H), 8.61 (br s, 1H), 8.11 (d, J=8.1 Гц, 1H), 8.00-6.94 (m, 5H), 6.77 (br s, 1H), 4.88-4.77 (m, 1H), 4.61 (br t, J=4.7 Гц, 1H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.26-3.18 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 2.04-1.94 (m, 1H), 1.58 (br d, J=6.6 Гц, 3H).Example 287: LC-MS m/z 323 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.47-12.74 (m, 1H), 8.61 (br s, 1H), 8.11 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.00-6.94 (m, 5H), 6.77 (br s, 1H), 4.88-4.77 (m, 1H), 4.61 (br t, J=4.7 Hz, 1H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.26-3.18 (m, 1H), 2.20- 2.10 (m, 1H), 2.04-1.94 (m, 1H), 1.58 (br d, J=6.6 Hz, 3H).
Пример 288: LC-MS m/z 323 [M+H]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.41-12.85 (m, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.10 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.99-6.91 (m, 5H), 6.76 (br s, 1H), 4.87-4.77 (m, 1H), 4.61 (t, J=4.9 Гц, 1H), 3.423.34 (m, 1H), 3.26-3.18 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 2.04- 1.93 (m, 1H), 1.58 (d, J=6.6 Гц, 3H).Example 288: LC-MS m/z 323 [M+H]+; 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.41-12.85 (m, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.10 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.99-6.91 (m, 5H), 6.76 (br s, 1H), 4.87-4.77 (m, 1H), 4.61 (t, J=4.9 Hz, 1H), 3.423.34 (m, 1H), 3.26-3.18 (m, 1H), 2.20-2.10 ( m, 1H), 2.04-1.93 (m, 1H), 1.58 (d, J=6.6 Hz, 3H).
- 135 042018- 135 042018
Пример 289. Получение (2R)-3-[4-амино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил]-2метоксипропан-1-ола, HCl.Example 289 Preparation of (2R)-3-[4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl]-2methoxypropan-1-ol, HCl.
Стадия 1. 2-((R)-2-метокси-3-(тритилокси)пропил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амин.Step 1. 2-((R)-2-methoxy-3-(trityloxy)propyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5yl)-2H-pyrazolo[ 4,3-c]quinoline-4-amine.
К раствору (R)-2-метокси-3-(тритилокси)пропан-1-ола (156 мг, 0,449 ммоль) в CH2Cl2 (997 мкл) при температуре 0°С добавляли триэтиламин (125 мкл, 0,897 ммоль), затем метансульфонилхлорид (34,7 мкл, 0,449 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакцион ную смесь разбавляли H2O (2 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2x2 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме.To a solution of (R)-2-methoxy-3-(trityloxy)propan-1-ol (156 mg, 0.449 mmol) in CH 2 Cl 2 (997 μl) at a temperature of 0 ° C was added triethylamine (125 μl, 0.897 mmol) , then methanesulfonyl chloride (34.7 µl, 0.449 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H2O (2 ml) and extracted with CH 2 Cl 2 (2x2 ml). The combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт растворяли в DMF (997 мкл) и добавляли к смеси 7-(1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (100 мг, 0,299 ммоль) и карбоната цезия (292 мг, 0,897 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем при 40°С в течение 3 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли H2O (30 мл) и экстрагировали EtOAc (2x30 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (30 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (RediSep Gold с 24 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2) с получением 2-((R)-2-метокси-3-(тритилокси)пропил)-7-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (80 мг, 40%) в виде белого твердого вещества. Продукт соответствовал второму из двух наблюдаемых региоизомерных пиков, элюированных из колонки. LC-MS m/z 665 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8.48-8.44 (m, 1H), 8.13-8.08 (m, 1H), 7.61-7.57 (m, 2H), 7.45-7.40 (m, 6H), 7.36-7.29 (m, 7H), 7.28-7.22 (m, 3H), 7.01 (s, 2H), 6.52-6.47 (m, 1H), 5.34-5.28 (m, 1H), 4.68-4.53 (m, 2H), 4.09-4.00 (m, 1H), 3.92-3.84 (m, 1H), 3.63-3.51 (m, 1H), 3.22-3.19 (m, 3H), 3.25-3.15 (m, 1H), 3.05-2.97 (m, 1H), 2.44-2.36 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 1H), 1.841.76 (m, 1H), 1.63-1.48 (m, 3H).The crude product was dissolved in DMF (997 μl) and added to a mixture of 7-(1-(tetrahydro-2Hpyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4 -amine (100 mg, 0.299 mmol) and cesium carbonate (292 mg, 0.897 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 2 hours, then at 40°C for 3 hours and then at room temperature overnight. The reaction mixture was diluted with H2O (30 ml) and extracted with EtOAc (2x30 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (30 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (RediSep Gold with 24 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 2-((R)-2-methoxy-3-(trityloxy)propyl)-7- (1(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (80 mg, 40%) as white solid . The product corresponded to the second of the two observed regioisomeric peaks eluted from the column. LC-MS m/z 665 [M+H]+; 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.48-8.44 (m, 1H), 8.13-8.08 (m, 1H), 7.61-7.57 (m, 2H), 7.45-7.40 (m, 6H), 7.36- 7.29 (m, 7H), 7.28-7.22 (m, 3H), 7.01 (s, 2H), 6.52-6.47 (m, 1H), 5.34-5.28 (m, 1H), 4.68-4.53 (m, 2H), 4.09-4.00 (m, 1H), 3.92-3.84 (m, 1H), 3.63-3.51 (m, 1H), 3.22-3.19 (m, 3H), 3.25-3.15 (m, 1H), 3.05-2.97 (m , 1H), 2.44-2.36 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 1H), 1.841.76 (m, 1H), 1.63-1.48 (m, 3H).
Стадия 2. (R)-3-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)--2-метоксипропан1-ол, HCl.Step 2. (R)-3-(4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)--2-methoxypropan1-ol, HCl.
К раствору 2-((R)-2-метокси-3-(тритилокси)пропил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (80 мг, 0,120 ммоль) в МеОН (401 мкл) добавляли 4 М хлористоводородную кислоту в диоксане (90 мкл, 0,361 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь добавляли к Et2O (6 мл) и полученные твердые вещества собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (3x2 мл). Твердые вещества растворяли в смеси 1:1 MeCN-H2O (2 мл), фильтровали, замораживали при -78°С и лиофилизировали с получением (R)-3-(4-aмино-7-(1Н-пирaзол-3-ил)-2Н-пирaзоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метоксипропaн-1-ол, HCl (34 мг, выход 75%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.16 (s, 1Н), 9.819.66 (m, 1Н), 8.97 (s, 1Н), 8.68-8.53 (m, 1Н), 8.20 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 8.12 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.92 (dd, J=8.2, 1.5 Гц, 1H), 7.84 (d, J=2.2 Гц, 1H), 6.82 (d, J=2.3 Гц, 1H), 4.67 (dd, J=14.1, 3.5 Гц, 1H), 4.52 (dd, J=14.1, 7.7 Гц, 1H), 3.71 (td, J=8.1, 5.0 Гц, 1H), 3.53 (d, J=5.1 Гц, 2Н), 3.26 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм). m/z 339.2 [М+Н]+; RT: 0.52 мин.To a solution of 2-((R)-2-methoxy-3-(trityloxy)propyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol5-yl)-2H-pyrazolo[4 ,3-c]quinoline-4-amine (80 mg, 0.120 mmol) in MeOH (401 μl) was added 4 M hydrochloric acid in dioxane (90 μl, 0.361 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction mixture was added to Et 2 O (6 ml) and the resulting solids were collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (3x2 ml). The solids were dissolved in 1:1 MeCN-H 2 O (2 ml), filtered, frozen at -78°C and lyophilized to give (R)-3-(4-amino-7-(1H-pyrazole-3- yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2-methoxypropan-1-ol, HCl (34 mg, 75% yield) as a white solid. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.16 (s, 1H), 9.819.66 (m, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.68-8.53 (m, 1H), 8.20 (d, J =8.2 Hz, 1H), 8.12 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.84 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.82 (d, J =2.3Hz, 1H), 4.67 (dd, J=14.1, 3.5Hz, 1H), 4.52 (dd, J=14.1, 7.7Hz, 1H), 3.71 (td, J=8.1, 5.0Hz, 1H), 3.53 (d, J=5.1 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm). m/z 339.2 [M+H]+; RT: 0.52 min.
Соединения по примерам 290-302 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примерах 150 и 151, из соответствующих исходных соединений. Условия анаCompounds of examples 290-302 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in examples 150 and 151 from the corresponding starting compounds. Ana conditions
- 136 042018 литического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). Соединения по примерам 300 и 299 получали в виде отдельных не определенных изомеров путем очистки рацемического соединения хиральной SFC в следующих условиях: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral IC, 21x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 60% СО2/40% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 60 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 300 (первый элюируемый изомер) RT: 7,50 мин. Соединение по примеру 299 (второй элюируемый изомер). Время удерживания: 9,91 мин. Аналитические хиральные условия SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral AD, 4,6x100 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 85% CO2/15% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 300 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 5,3 мин. Соединение по примеру 299 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 6,8 мин.- 136 042018 lytic LC/MS: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). Compounds of examples 300 and 299 were obtained as individual undefined isomers by purifying the racemic compound with chiral SFC under the following conditions: instrument: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral IC, 21x250 mm, 5 µm; mobile phase: 60% CO 2 /40% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 60 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of example 300 (first eluting isomer) RT: 7.50 min. Example 299 compound (second eluting isomer). Retention time: 9.91 min. Analytical Chiral Conditions SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral AD, 4.6x100 mm, 5 µm; mobile phase: 85% CO 2 /15% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of example 300 (first eluting isomer), retention time: 5.3 min. Compound of Example 299 (second eluting isomer), retention time: 6.8 min.
- 137 042018- 137 042018
- 138 042018- 138 042018
Соединения по примерам 303-406 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 207 и примере 208, примере 209, примере 210 или примере 210 из соответствующих исходных соединений, алкилгалогенида, мезилата, тозилата, эпоксида или спирта, которые, в некоторых случаях могут содержать подходящие защитные группы. Температура реакций алкилирования варьируется от комнатной до 90°С и, в некоторых случаях, добавляли дополнительные эквиваленты алкилирующего реагента. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).The compounds of examples 303-406 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in example 207 and example 208, example 209, example 210 or example 210 from the appropriate starting compounds, alkyl halide, mesylate, tosylate, epoxide or alcohol, which, in in some cases may contain suitable protecting groups. The temperature of the alkylation reactions ranged from room temperature to 90° C. and, in some cases, additional equivalents of the alkylating agent were added. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
Соединения по следующим примерам получали в виде отдельных не определенных изомеров путем очистки рацемического соединения хиральной SFC в следующих условиях: Соединения по примерам 315 и 316: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral AD, 3x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 75% СО2/25% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 315 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 10,61 мин. Соединение по примеру 316 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 14,97 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiralpak AD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 75% CO2/25% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 315 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 5,2 мин. Соединение по примеру 316 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 7,0 мин.Compounds of the following examples were obtained as individual undefined isomers by purifying the racemic compound with chiral SFC under the following conditions: Compounds of examples 315 and 316: instrument: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral AD, 3x250 mm, 5 µm; mobile phase: 75% CO2/25% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 315 (first eluting isomer), retention time: 10.61 min. Example 316 (second eluting isomer), retention time: 14.97 minutes. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiralpak AD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 75% CO2/25% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 315 (first eluting isomer), retention time: 5.2 min. Example 316 (second eluting isomer), retention time: 7.0 min.
Примеры 318 и 319: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral AD, 30x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 65% CO2/35% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 318 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 5,47 мин. Соединение по примеру 319 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 11,53 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiralpak AD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 65% СО2/35% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 318 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 2,6 мин. Соединение по примеру 319 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 5,2 мин.Examples 318 and 319: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral AD, 30x250 mm, 5 µm; mobile phase: 65% CO 2 /35% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 318 (first eluting isomer), retention time: 5.47 min. Example 319 (second eluting isomer), retention time: 11.53 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiralpak AD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 65% CO 2 /35% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 318 (first eluting isomer), retention time: 2.6 min. Example 319 (second eluting isomer), retention time: 5.2 min.
Примеры 324 и 325: прибор: Berger SFC MGII; колонка: CHIRALCEL AS SFC 30x250 мм ID, 5 мкм; подвижная фаза: 78/18 CO2/(MeOH с 0,5% DEA); скорость потока: 65 мл/мин; длина волны детектора: 270 нм. Соединение по примеру 324 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 60 мин. СоедиExamples 324 and 325: Apparatus: Berger SFC MGII; column: CHIRALCEL AS SFC 30x250 mm ID, 5 µm; mobile phase: 78/18 CO 2 /(MeOH with 0.5% DEA); flow rate: 65 ml/min; detector wavelength: 270 nm. Example 324 (first eluting isomer), retention time: 60 min. Connect
- 139 042018 нение по примеру 325 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 65 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Agilent analytical SFC; колонка: AS 4,6x250 мм ID, 5 мкм; подвижная фаза: 85/15 СО2/(МеОН с 0,5% DEA); скорость потока: 2 мл/мин. Соединение по примеру 324 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 44,0 мин. Соединение по примеру 325 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 48,4 мин.- 139 042018 Example 325 (second eluting isomer), retention time: 65 min. Analytical chiral SFC conditions: instrument: Agilent analytical SFC; column: AS 4.6x250 mm ID, 5 µm; mobile phase: 85/15 CO 2 /(MeOH with 0.5% DEA); flow rate: 2 ml/min. Example 324 (first eluting isomer), retention time: 44.0 min. Example 325 (second eluting isomer), retention time: 48.4 min.
Примеры 327 и 328: прибор: Berger SFC MGII; колонка: CHIRALCEL YMC SB SFC 30x250 мм ID, 5 мкм; подвижная фаза: 78/18 CO2/(MeOH с 0,5% DEA); скорость потока: 85 мл/мин; длина волны детектора: 265 нм. Соединение по примеру 327 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 55 мин. Соединение по примеру 328 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 61 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Agilent analytical SFC; колонка: YMC SB, 4,6x250 мм ID, 5 мкм; подвижная фаза: 80/20 СО2/(МеОН с 0,5% DEA); скорость потока: 2 мл/мин. Соединение по примеру 327 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 22,3 мин. Соединение по примеру 328 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 25,5 мин.Examples 327 and 328: Apparatus: Berger SFC MGII; column: CHIRALCEL YMC SB SFC 30x250 mm ID, 5 µm; mobile phase: 78/18 CO 2 /(MeOH with 0.5% DEA); flow rate: 85 ml/min; detector wavelength: 265 nm. Example 327 (first eluting isomer), retention time: 55 min. Example 328 (second eluting isomer), retention time: 61 min. Analytical chiral SFC conditions: instrument: Agilent analytical SFC; column: YMC SB, 4.6x250 mm ID, 5 µm; mobile phase: 80/20 CO 2 /(MeOH with 0.5% DEA); flow rate: 2 ml/min. Example 327 (first eluting isomer), retention time: 22.3 min. Compound of Example 328 (second eluting isomer), retention time: 25.5 min.
Примеры 337 и 338: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral OJ, 30x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 90% CO2/10% MeOH с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 337 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 16,36 мин. Соединение по примеру 338 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 26,8 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral OJ, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 90% СО2/10% MeOH с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 337 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 9,9 мин. Соединение по примеру 338 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 14,3 мин.Examples 337 and 338: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral OJ, 30x250 mm, 5 µm; mobile phase: 90% CO 2 /10% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 337 (first eluting isomer), retention time: 16.36 min. Example 338 (second eluting isomer), retention time: 26.8 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral OJ, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 90% CO2/10% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 337 (first eluting isomer), retention time: 9.9 min. Example 338 (second eluting isomer), retention time: 14.3 min.
Примеры 341 и 342: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral AD, 30x250 мм. 5 мкм; подвижная фаза: 65% CO2/35% IPA-ACN 50-50 с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 341 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 17,91 мин. Соединение по примеру 342 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 22,64 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral AD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 65% CO2/35% IPA-ACN 50-50 с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 341 (первый элюируемый изомер), время выдержки: 7,2 мин. Соединение по примеру 342 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 8,8 мин.Examples 341 and 342: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral AD, 30x250 mm. 5 µm; mobile phase: 65% CO 2 /35% IPA-ACN 50-50 with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 341 (first eluting isomer), retention time: 17.91 min. Example 342 (second eluting isomer), retention time: 22.64 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral AD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 65% CO 2 /35% IPA-ACN 50-50 with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of example 341 (first eluting isomer), holding time: 7.2 min. Example 342 (second eluting isomer), retention time: 8.8 min.
Примеры 344 и 345: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral OD, 30x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 80% CO2/20% MeOH с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 344 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 23,91 мин. Соединение по примеру 345 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 29,15 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral OD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 80% СО2/20% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 344 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 8,0 мин. Соединение по примеру 345 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 9,8 мин.Examples 344 and 345: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral OD, 30x250 mm, 5 µm; mobile phase: 80% CO 2 /20% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 344 (first eluting isomer), retention time: 23.91 min. Compound of Example 345 (second eluting isomer), retention time: 29.15 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral OD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 80% CO2/20% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 344 (first eluting isomer), retention time: 8.0 min. Example 345 (second eluting isomer), retention time: 9.8 min.
Примеры 346 и 347: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral AD, 30x 250 мм. 5 мкм; подвижная фаза: 85% CO2/15% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 346 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 21,99 мин. Соединение по примеру 347 (изомер, второ элюируемый изомер). Время удерживания: 26,03 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral AD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 85% CO2/15% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 346 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 10,8 мин. Соединение по примеру 347 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 12,9 мин.Examples 346 and 347: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral AD, 30x250 mm. 5 µm; mobile phase: 85% CO 2 /15% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 346 (first eluting isomer), retention time: 21.99 min. Example 347 compound (isomer, second eluting isomer). Retention time: 26.03 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral AD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 85% CO 2 /15% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 346 (first eluting isomer), retention time: 10.8 min. Example 347 (second eluting isomer), retention time: 12.9 min.
Примеры 376 и 377: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: Chiral IC, 21x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 75% CO2/25% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 60 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 376 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 26,43 мин. Соединение по примеру 377 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 30,30 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral IC, 4,6x150 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 75% CO2/25% МеОН с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 376 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 19,6 мин. Соединение по примеру 377 (второй элюируемый изомер). Время удерживания: 21,9 мин.Examples 376 and 377: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: Chiral IC, 21x250 mm, 5 µm; mobile phase: 75% CO 2 /25% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 60 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Compound of Example 376 (first eluting isomer), retention time: 26.43 min. Compound of Example 377 (second eluting isomer), retention time: 30.30 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral IC, 4.6x150 mm, 5 microns; mobile phase: 75% CO 2 /25% MeOH with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 376 (first eluting isomer), retention time: 19.6 min. Example 377 compound (second eluting isomer). Retention time: 21.9 min.
Примеры 378 и 379: прибор: Waters 100 Prep SFC; колонка: хиральный OD, 30x250 мм. 5 мкм; подвижная фаза: 65% CO2/35% IPA с 0,1% DEA; скорость потока: 100 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 378 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 6,98 мин. Соединение по примеру 379 (второй элюируемый изомер), время удерживания: 10,17 мин. Условия аналитической хиральной SFC: прибор: Shimadzu Nexera UC SFC; колонка: Chiral OD, 4,6x100 мм, 5 микрон; подвижная фаза: 65% CO2/35% IPA с 0,1% DEA; скорость потока: 2 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм. Соединение по примеру 378 (первый элюируемый изомер), время удерживания: 2,4 мин. Соединение по примеру 379 (элюируемый вторым изомер), время удерживания: 3,0 мин.Examples 378 and 379: Apparatus: Waters 100 Prep SFC; column: chiral OD, 30x250 mm. 5 µm; mobile phase: 65% CO 2 /35% IPA with 0.1% DEA; flow rate: 100 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 378 (first eluting isomer), retention time: 6.98 min. Compound of Example 379 (second eluting isomer), retention time: 10.17 min. Conditions for Analytical Chiral SFC: Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; column: Chiral OD, 4.6x100 mm, 5 microns; mobile phase: 65% CO 2 /35% IPA with 0.1% DEA; flow rate: 2 ml/min; detector wavelength: 220 nm. Example 378 (first eluting isomer), retention time: 2.4 min. Example 379 (second eluting isomer), retention time: 3.0 min.
- 140 042018- 140 042018
- 141 042018- 141 042018
- 142 042018- 142 042018
- 143 042018- 143 042018
- 144042018- 144042018
- 145 042018- 145 042018
- 146 042018- 146 042018
- 147 042018- 147 042018
- 148 042018- 148 042018
- 149 042018- 149 042018
- 150 042018- 150 042018
- 151 042018- 151 042018
- 152 042018- 152 042018
- 153 042018- 153 042018
- 154 042018- 154 042018
- 155 042018- 155 042018
- 156 042018- 156 042018
- 157 042018- 157 042018
- 158 042018- 158 042018
Пример 407. Получение 2-(4-αмино-7-(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2метилпропан-1-ола, TFA.Example 407 Preparation of 2-(4-α-mino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2methylpropan-1-ol, TFA
Стадия 1. Этил 2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)-2-метилпропаноат.Step 1 Ethyl 2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinolin-2-yl )-2-methylpropanoate.
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (50 мг, 0,150 ммоль) в DMF (498 мкл) добавляли карбонат цезия (146 мг, 0,449 ммоль), а затем этил 2-бром-2-метилпропаноат (24,14 мкл, 0,164 ммоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОНCH2Cl2) с получением этил 2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метилпропаноата (50,1 мг, выход 75%) в виде белого твердого вещества. LC-MS m/z 449 [М+Н]+; 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-A) δ 8.79 (s, 1H), 8.14 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.61 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.59 (d, J=1.8 Гц, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.5 Гц, 1H), 7.16-6.99 (m, 2H), 6.50 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.29 (dd, J=10.0, 2.0 Гц, 1H), 4.13 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 4.07-3.99 (m, 1H), 3.63-3.54 (m, 1H), 2.49-2.36 (m, 2H), 1.95 (s, 6H), 1.79 (brd, J=12.0 Гц, 1H), 1.62-1.49 (m, 3H), 1.12 (t, J=7.1 Гц, 3H).To a suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (50 mg, 0.150 mmol) in DMF (498 µl) cesium carbonate (146 mg, 0.449 mmol) was added followed by ethyl 2-bromo-2-methylpropanoate (24.14 µl, 0.164 mmol). The suspension was stirred at room temperature for 20 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml) and H 2 O (20 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOHCH 2 Cl 2 ) to give ethyl 2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H -pyrazol-5-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2-methylpropanoate (50.1 mg, 75% yield) as a white solid. LC-MS m/z 449 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-A) δ 8.79 (s, 1H), 8.14 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.61 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.16-6.99 (m, 2H), 6.50 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.29 (dd, J=10.0, 2.0 Hz , 1H), 4.13 (q, J=7.1 Hz, 2H), 4.07-3.99 (m, 1H), 3.63-3.54 (m, 1H), 2.49-2.36 (m, 2H), 1.95 (s, 6H), 1.79 (brd, J=12.0 Hz, 1H), 1.62-1.49 (m, 3H), 1.12 (t, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2. 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метилпропан-1-ол, TFA.Step 2 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2-methylpropan-1-ol, TFA.
К суспензии этил 2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)-2-метилпропаноата (50,1 мг, 0,112 ммоль) в THF (1005 мкл) добавляли МеОН (112 мкл) с получением прозрачного бесцветного раствора. Раствор охлаждали до 0°С и по каплям добавляли борогидрид лития (2 М раствор в THF) (168 мкл, 0,335 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 минут, затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме.To a suspension of ethyl 2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3s]quinolin-2-yl) -2-methylpropanoate (50.1 mg, 0.112 mmol) in THF (1005 µl) MeOH (112 µl) was added to give a clear colorless solution. The solution was cooled to 0°C and lithium borohydride (2 M solution in THF) (168 μl, 0.335 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at 0°C for 15 minutes, then at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with H 2 O (20 ml) and was extracted with EtOAc (3x10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo.
- 159 042018- 159 042018
Неочищенный продукт смешивали с CH2C12 (200 мкл) и TFA (200 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (300 мкл) и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр с нейлоновой мембраной Acrodisc 0,45 мкм) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 0% В, 0-30% В в течение 20 мин, затем 4-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2-(4-амино-7-(1Нпиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метилпропан-1-ола, TFA (30,8 мг, 63%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 13.22 (br s, 1H), 9.60-9.42 (m, 1H), 9.03-8.99 (m, 1H), 8.83-8.61 (m, 1H), 8.22 (d, J=8.2 Гц, 1H), 8.06 (br s, 1H), 7.92 (br d, J=7.9 Гц, 1H), 7.83 (br s, 1H), 6.82 (d, J=2.2 Гц, 1H), 5.32 (br s, 1H), 1.64 (s, 6H); два протона СН не наблюдаются, вероятно, из-за перекрытия пиком воды. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 323.0 [М+Н]+; RT: 0,9 мин.The crude product was mixed with CH2C12 (200 µl) and TFA (200 µl) and stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 (300 μl) and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter with 0.45 µm Acrodisc nylon membrane) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0-minute hold at 0% B, 0-30% B for 20 min, then 4-minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2-(4-amino-7-(1Hpyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2- methylpropan-1-ol, TFA (30.8 mg, 63%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.22 (br s, 1H), 9.60-9.42 (m, 1H), 9.03-8.99 (m, 1H), 8.83-8.61 (m, 1H), 8.22 (d , J=8.2 Hz, 1H), 8.06 (br s, 1H), 7.92 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 6.82 (d, J=2.2 Hz, 1H), 5.32 (br s, 1H), 1.64 (s, 6H); two CH protons are not observed, probably due to the overlap of the water peak. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 323.0 [M+H]+; RT: 0.9 min.
Соединения по примерам 408-409 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в примере 407, из соответствующих исходных соединений - алкилхлорида или мезилата. Температура реакции алкилирования варьировалась от комнатной до 50°С. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).Examples 408-409 were prepared following synthetic procedures similar to those described in Example 407 from the appropriate alkyl chloride or mesylate starting materials. The temperature of the alkylation reaction varied from room temperature to 50°C. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
Пример 410. Получение 3-(4-амино-7(1H-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-3метилбутан-1-ола, TFA.Example 410 Preparation of 3-(4-amino-7(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-3methylbutan-1-ol, TFA
стадия 1stage 1
- 160 042018- 160 042018
Стадия 1. метил 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)-3-метилбутаноат.Step 1. Methyl 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinolin-2-yl )-3-methylbutanoate.
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4амина (30 мг, 0,090 ммоль) в DMF (299 мкл) добавляли карбонат цезия (88 мг, 0,269 ммоль), а затем метил 3-метилбут-2-еноат (12,90 мкл, 0,099 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч. Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество метил 3-метилбут-2-еноата (25,8 мкл, 0,198 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 22 ч. Добавляли дополнительное количество метил 3-метилбут-2-еноата (50 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Добавляли дополнительное количество метил 3-метилбут-2-еноат (50 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (12 г силикагеля; линейный градиент 010% МеОН-CH2Cl2) с получением метил-3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-3-метилбутаноата в виде смеси с непрореагировавшим исходным соединением (20 мг). Этот продукт использовали без дополнительной очистки.To a suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4amine (30 mg, 0.090 mmol) in DMF (299 µl) cesium carbonate (88 mg, 0.269 mmol) was added followed by methyl 3-methylbut-2-enoate (12.90 µl, 0.099 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 19 hours. The reaction mixture was stirred at 50° C. for 2 hours. Additional methyl 3-methylbut-2-enoate (25.8 μl, 0.198 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 50° C. for 22 hours. Additional methyl 3-methylbut-2-enoate (50 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. Additional methyl 3-methylbut-2-enoate (50 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (20 ml) and H 2 O (20 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (12 g silica gel; linear gradient 010% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give methyl-3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)- 1H-pyrazol-5-yl)2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-3-methylbutanoate as a mixture with unreacted starting compound (20 mg). This product was used without further purification.
Стадия 2. 3-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-3-метилбутан-1-ол, TFA.Step 2 3-(4-Amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-3-methylbutan-1-ol, TFA.
Продукт, полученный на предыдущей стадии, суспендировали в THF (401 мкл), а затем добавляли МеОН (44,6 мкл). Смесь охлаждали до 0°С и по каплям добавляли боргидрид лития (2 М раствор в THF) (66,9 мкл, 0,134 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Добавляли дополнительное количество LiBH4 (67 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли дополнительное количество LiBH4 (134 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме.The product obtained in the previous step was suspended in THF (401 µl) and then MeOH (44.6 µl) was added. The mixture was cooled to 0° C. and lithium borohydride (2 M solution in THF) (66.9 μl, 0.134 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 h. Additional LiBH 4 (67 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. An additional amount of LiBH 4 (134 μl) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was diluted with H2O (20 ml) and extracted with EtOAc (3x10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (20 ml), dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (150 мкл) и TFA (150 мкл), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (300 мкл) и концентрировали в вакууме.The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (150 μl) and TFA (150 μl) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 (300 μl) and concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт смешивали с CH2Cl2 (150 мкл) и МеОН (150 мкл) и добавляли триэтиламин (31,1 мкл, 0,223 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2 (300 мкл) и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр с нейлоновой мембраной Acrodisc 0,45 мкм) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge C18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 0-минутное удерживание при 1% В, 1-41% В в течение 20 мин, затем 4минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 3-(4-амино-7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-3-метилбутан-1-ола TFA (10,2 мг, 50%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 13.22-13.01 (m, 1H), 9.59-9.35 (m, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.91-8.72 (m, 1H), 8.21 (d, J=8.3 Гц, 1H), 8.10 (br s, 1H), 7.92 (br d, J=7.9 Гц, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.82 (d, J=1.9 Гц, 1H), 4.58 (br s, 1H), 3.29 (br t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.19 (t, J=6.9 Гц, 2H), 1.72 (s, 6H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 337.2 [М+Н]+; RT: 1,1 мин.The crude product was mixed with CH 2 Cl 2 (150 μl) and MeOH (150 μl) and triethylamine (31.1 μl, 0.223 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in CH 2 Cl 2 (300 μl) and concentrated in vacuo. The crude product was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter with 0.45 µm Acrodisc nylon membrane) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 0 min hold at 1% B, 1-41% B for 20 min, then 4 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-3-yl)-2Hpyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-3- methylbutan-1-ol TFA (10.2 mg, 50%). 1Н NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.22-13.01 (m, 1H), 9.59-9.35 (m, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.91-8.72 (m, 1H), 8.21 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.10 (br s, 1H), 7.92 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.82 (d, J=1.9 Hz, 1H), 4.58 (br s, 1H), 3.29 (br t, J=6.8 Hz, 2H), 2.19 (t, J=6.9 Hz, 2H), 1.72 (s, 6H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 337.2 [M+H]+; RT: 1.1 min.
- 161 042018- 161 042018
Пример 411. Получение 2-[(морфолин-4-ил)метил]-7-(Ш-пиразол-5-ил)-Ш-пирроло[3,2-с]хинолин4-амина.Example 411 Preparation of 2-[(morpholin-4-yl)methyl]-7-(III-pyrazol-5-yl)-III-pyrrolo[3,2-c]quinoline4-amine
Стадия 1. 7-бром-К-(4-метоксибензил)-3-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-проп-1-ин-1ил)хинолин-4-амин.Step 1. 7-bromo-N-(4-methoxybenzyl)-3-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-prop-1-yn-1yl)quinolin-4-amine.
К суспензии 7-бром-3-йод-К-(4-метоксибензил)хинолин-4-амина (4,89 г, 10,42 ммоль) в DMFA (34,7 мл) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (5,81 мл, 41,7 ммоль). Смесь продували N2 в течение 15 мин, затем добавляли бис(трифенилфосфин)палладий(П) дихлорид (0,146 г, 0,208 ммоль) и йодид меди(I) (0,099 г, 0,521 ммоль). Смесь продували N2 в течение 2 мин, затем по каплям добавляли 2(проп-2-ин-1-илокси)тетрагидро-2Н-пиран (1,753 г, 12,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (300 мл), промывали водным раствором LiCl (3x200 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт смешивали с Et2O (50 мл), твердые вещества собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (4x10 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAcгексаны). Продукт хроматографии объединяли с твердыми веществами после фильтрации с получением 7-бром-К[-(4-метоксибензил)-3-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)проп-1-ин-1-ил)хинолин-4-амина (4,62 г, 92%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS m/z 481/483 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSOd6) δ 8.36-8.30 (m, 2H), 8.00-7.95 (m, 2H), 7.66 (dd, J=9.0, 2.1 Гц, 1H), 7.26 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 6.89-6.84 (m, 2Н), 5.09 (d, J=6.7 Гц, 2Н), 4.74-4.71 (m, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 4.39-4.32 (m, 1H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.50-3.41 (m, 1H), 1.76-1.57 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, 4H).Triethylamine (5.81 ml, 41.7 mmol). The mixture was purged with N 2 for 15 min, then bis(triphenylphosphine)palladium(II) dichloride (0.146 g, 0.208 mmol) and copper(I) iodide (0.099 g, 0.521 mmol) were added. The mixture was purged with N2 for 2 min, then 2(prop-2-yn-1-yloxy)tetrahydro-2H-pyran (1.753 g, 12.51 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 19 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (300 ml), washed with aqueous LiCl solution (3x200 ml) and saturated aqueous NaCl solution (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo . The crude product was mixed with Et 2 O (50 ml), the solids were collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (4x10 ml). The filtrate was concentrated in vacuo and the residue was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc hexanes). The chromatography product was combined with solids after filtration to give 7-bromo-K[-(4-methoxybenzyl)-3-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)prop-1-yn-1- yl)quinoline-4-amine (4.62 g, 92%) as a yellow solid. LC-MS m/z 481/483 [M+H]+; 1Н NMR (400 MHz, DMSOd 6 ) δ 8.36-8.30 (m, 2H), 8.00-7.95 (m, 2H), 7.66 (dd, J=9.0, 2.1 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.7 Hz , 2Н), 6.89-6.84 (m, 2Н), 5.09 (d, J=6.7 Hz, 2Н), 4.74-4.71 (m, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 4.39-4.32 (m, 1H ), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.50-3.41 (m, 1H), 1.76-1.57 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, 4H).
Стадия 2. 7-бром-1-(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2с]хинолин.Step 2. 7-bromo-1-(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline.
Смесь 7-бром-К-(4-метоксибензил)-3-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)проп-1-ин-1-ил)хинолин4-амина (3,540 г, 7,35 ммоль) и трет-бутоксид калия (1,650 г, 14,71 ммоль) в THF (36,8 мл) перемешивали7-Bromo-N-(4-methoxybenzyl)-3-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)prop-1-yn-1-yl)quinolin4-amine mixture (3.540 g, 7 .35 mmol) and potassium tert-butoxide (1.650 g, 14.71 mmol) in THF (36.8 ml) were stirred
- 162 042018 при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH4Cl (200 мл) и экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaCl (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (80 г силикагеля; линейный градиент 0100% EtOAc-гексаны) с получением 7-бром-1-(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолина (2,87 г, 81%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS m/z 481/483 [М+Н]+; 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-k) δ 9.16 (s, 1H), 8.23 (d, J=2.2 Гц, 1H), 8.08 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.57 (dd, J=9.0, 2.1 Гц, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.90-6.86 (m, 2H), 6.85-6.81 (m, 2H), 5.87 (s, 2H), 4.90 (d, J=12.8 Гц, 1H), 4.73-4.67 (m, 2H), 3.74 (ddd, J=11.2, 8.4, 2.3 Гц, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.50-3.44 (m, 1H), 1.581.33 (m, 5H), 1.28-1.19 (m, 1H).- 162 042018 at room temperature for 24 hours The reaction was quenched by adding a saturated aqueous solution of NH 4 Cl (200 ml) and was extracted with EtOAc (2x200 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (80 g silica gel; linear gradient 0100% EtOAc-hexanes) to give 7-bromo-1-(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2yl)oxy)methyl) -1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline (2.87 g, 81%) as an off-white solid. LCMS m/z 481/483 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-k) δ 9.16 (s, 1H), 8.23 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=9.0 , 2.1 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.90-6.86 (m, 2H), 6.85-6.81 (m, 2H), 5.87 (s, 2H), 4.90 (d, J=12.8 Hz, 1H) , 4.73-4.67 (m, 2H), 3.74 (ddd, J=11.2, 8.4, 2.3 Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.50-3.44 (m, 1H), 1.581.33 (m, 5H) , 1.28-1.19 (m, 1H).
Стадия 3. 7-бром-1-(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1Н-пирроло[3,2с]хинолин-5-оксид.Step 3. 7-bromo-1-(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline-5-oxide.
К раствору 7-бром-1 -(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолина (2,87 г, 5,96 ммоль) в CH2Cl2 (29,8 мл) порциями добавляли 3хлорпероксибензойную кислоту (<77%) (1,737 г, 7,75 ммоль). Прозрачный оранжевый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли CH2Cl2 (200 мл), промывали смесью 1:1 10% масса/масса, водного раствора Na2S2O3 и насыщенного водного раствора NaHCO3 (2x200 мл), а затем H2O (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2). Смешанные фракции повторно очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-10% МеОН-CH2Cl2). Фракции, содержащие продукт из обеих колонок, объединяли с получением 7-бром-1-(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2с]хинолин-5-оксида (2,591 г, 87%) в виде оранжевой пены. LC-MS m/z 497/499 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H), 8.90 (d, J=2.1 Гц, 1H), 8.12 (d, J=9.1 Гц, 1H), 7.76 (dd, J=9.0, 2.2 Гц, 1H), 6.92-6.88 (m, 3H), 6.86-6.82 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.88 (d, J=12.8 Гц, 1H), 4.71-4.66 (m, 2H), 3.76-3.69 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.50-3.43 (m, 1H), 1.58-1.33 (m, 5H), 1.28-1.20 (m, 1H).To a solution of 7-bromo-1-(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinoline (2.87 g, 5 .96 mmol) in CH 2 Cl 2 (29.8 ml) was added portionwise 3-chloroperoxybenzoic acid (<77%) (1.737 g, 7.75 mmol). The clear orange solution was stirred at room temperature for 2 h. The reaction mixture was diluted with CH2Cl2 (200 ml), washed with a 1:1 mixture of 10% w/w, aqueous Na 2 S 2 O 3 and saturated aqueous NaHCO 3 (2x200 ml) and then H2O (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ). The mixed fractions were repurified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ). Fractions containing product from both columns were combined to give 7-bromo-1-(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3.2c ]quinoline-5-oxide (2.591 g, 87%) as an orange foam. LC-MS m/z 497/499 [M+H]+; 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H), 8.90 (d, J=2.1 Hz, 1H), 8.12 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.76 (dd, J=9.0, 2.2 Hz, 1H), 6.92-6.88 (m, 3H), 6.86-6.82 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.88 (d, J=12.8 Hz, 1H), 4.71-4.66 (m, 2H ), 3.76-3.69 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.50-3.43 (m, 1H), 1.58-1.33 (m, 5H), 1.28-1.20 (m, 1H).
Стадия 4. 7-бром-N,1-бис(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-окси)метил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин- 4-амин.Stage 4. 7-bromo-N,1-bis(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-oxy)methyl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinoline-4 -amine.
К раствору 7-бром-1 -(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-метил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолина 5-оксида (2,590 г, 5,21 ммоль) в CH2Cl2 (26,0 мл) добавляли N,Nдиизопропилэтиламин (2,72 мл, 15,62 ммоль), 4-метоксибензиламин (0,816 мл, 6,25 ммоль) и PyBroP (2,91 г, 6,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционную смесь разбавляли CH2Cl2 (200 мл), промывали H2O (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (80 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAc-гексаны) с получением 7-бром-М,1-бис(4-метоксибензил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-метил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (2,414 г, 75%) в виде желтого твердого вещества. LC-MS m/z 616/618 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 7.80 (t, J=6.0 Гц, 1H), 7.75 (d, J=8.9 Гц, 1H), 7.69 (d, J=2.1 Гц, 1H), 7.37 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 7.10 (dd, J=8.8, 2.2 Гц, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.90-6.86 (m, 4H), 6.85-6.82 (m, 2H), 5.75 (s, 2H), 4.80 (d, J=12.8 Гц, 1H), 4.72 (d, J=6.0 Гц, 2Н), 4.67 (t, J=3.4 Гц, 1H), 4.61 (d, J=12.8 Гц, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.49-3.42 (m, 1H), 1.601.33 (m, 5H), 1.29-1.21 (m, 1H).To a solution of 7-bromo-1-(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-methyl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinoline 5-oxide (2.590 g , 5.21 mmol) in CH 2 Cl 2 (26.0 ml) were added N,Ndiisopropylethylamine (2.72 ml, 15.62 mmol), 4-methoxybenzylamine (0.816 ml, 6.25 mmol) and PyBroP (2. 91 g, 6.25 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The reaction mixture was diluted with CH 2 Cl 2 (200 ml), washed with H 2 O (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (80 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc-hexanes) to give 7-bromo-M,1-bis(4-methoxybenzyl)-2(((tetrahydro-2H-pyran-2- yl)oxy)-methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (2.414 g, 75%) as a yellow solid. LC-MS m/z 616/618 [M+H]+; 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.80 (t, J=6.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.37 ( d, J=8.7 Hz, 2H), 7.10 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.90-6.86 (m, 4H), 6.85-6.82 (m, 2H), 5.75 (s, 2H), 4.80 (d, J=12.8Hz, 1H), 4.72 (d, J=6.0Hz, 2H), 4.67 (t, J=3.4Hz, 1H), 4.61 (d, J=12.8Hz , 1H), 3.72 (s, 3H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.49-3.42 (m, 1H), 1.601.33 (m, 5H), 1.29-1.21 (m , 1H).
Стадия 5. N,1 -бис(4-метоксибензил)-7-(1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 H-пиразол-5-ил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амин.Step 5. N,1-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1 H-pyrazol-5-yl)-2(((tetrahydro-2H-pyran -2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine.
Смесь 7-бром-N,1-бис(4-метоксибензил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (2,414 г, 3,92 ммоль), 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-5-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,416 г, 5,09 ммоль) и трехосновного фосфата калия (2,493 г, 11,75 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем ее смешивали с 1,4-диоксаном (16,31 мл) и H2O (3,26 мл). Полученную смесь барботировали N2 в течение 15 мин, затем добавляли хлор(2дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1 '-бифенил)[2-(2'-амино-1,1 ‘-бифенил)]палладий(11) (0,062 г, 0,078 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (200 мл), промывали H2O (3x200 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (200 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (80 г силикагеля; линейный градиент 0100% EtOAc-гексаны) с получением N,1-бис(4-метоксибензил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Hпиразол-5-ил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (2.644 г, 98%) в виде оранжевой пены. LC-MS m/z 688 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 7.91 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.78-7.72 (m, 2Н), 7.54 (d, J=1.8 Гц, 1H), 7.40 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 7.12 (dd, J=8.5, 1.9 Гц, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.93-6.89 (m, 2H), 6.88-6.81 (m, 4H), 6.47 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.20 (br d, J=9.8 Гц, 1H), 4.83 (d, J=12.5 Гц, 1H), 4.79-4.72 (m, 1H), 4.71-4.66 (m, 2H), 4.66-4.60 (m, 1H), 4.07-3.99 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.77-3.69 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.55-3.44 (m, 2Н), 2.45-2.34 (m, 1H), 1.97-1.89 (m, 1H), 1.74 (br d, J=12.2 Гц, 1H), 1.61-1.34 (m, 8H), 1.30-1.21 (m, 1H).A mixture of 7-bromo-N,1-bis(4-methoxybenzyl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine ( 2.414 g, 3.92 mmol), 1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-5-(4,4,5,5tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole (1.416 g, 5.09 mmol) and tribasic potassium phosphate (2.493 g, 11.75 mmol) were evacuated and refilled with N2, then it was mixed with 1,4-dioxane (16.31 ml) and H2O (3.26 ml ). The resulting mixture was bubbled with N2 for 15 min, then chloro(2dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropyl-1,1'-biphenyl)[2-(2'-amino-1,1'-biphenyl)] was added. palladium(11) (0.062 g, 0.078 mmol). The reaction mixture was stirred at 100°C for 1 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (200 ml), washed with H 2 O (3x200 ml) and saturated aqueous NaCl (200 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (80 g silica gel; linear gradient 0100% EtOAc-hexanes) to give N,1-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1Hpyrazole -5-yl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (2.644 g, 98%) as orange foam. LC-MS m/z 688 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.78-7.72 (m, 2H), 7.54 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.40 (d, J =8.7 Hz, 2H), 7.12 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.93-6.89 (m, 2H), 6.88-6.81 (m, 4H), 6.47 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.20 (br d, J=9.8 Hz, 1H), 4.83 (d, J=12.5 Hz, 1H), 4.79-4.72 (m, 1H), 4.71 -4.66 (m, 2H), 4.66-4.60 (m, 1H), 4.07-3.99 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.77-3.69 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.55 -3.44 (m, 2H), 2.45-2.34 (m, 1H), 1.97-1.89 (m, 1H), 1.74 (br d, J=12.2 Hz, 1H), 1.61-1.34 (m, 8H), 1.30- 1.21(m, 1H).
- 163 042018- 163 042018
Стадия 6. (1 -(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-7-(1 Н-пиразол-3 -ил)-1 Н-пирроло[3,2с]хинолин-2-ил)метанол.Step 6. (1-(4-Methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2c]quinolin-2-yl )methanol.
К суспензии N, 1-бис(4-метоксибензил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (500 мг, 0,727 ммоль) в МеОН (7269 мкл) добавляли 4 М соляную кислоту в 1,4-диоксан (363 мкл, 1,454 ммоль). Смесь обрабатывали ультразвуком до тех пор, пока она не превратилась в прозрачный желтый раствор. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин, при этом она происходило образование суспензии. Реакционную смесь добавляли к Et2O (70 мл), твердые вещества собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (2x4 мл). Твердые вещества смешивали с 20% МеОН-CH2Cl2 (200 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (200 мл). Слои разделяли, и органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением (1-(4-метоксибензил)-4-((4метоксибензил)амино)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил)метанола (361 мг, 96%) в виде белого твердого вещества. LC-MS m/z 520 [М+Н]+; 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.26-12.80 (m, 1H), 7.95 (d, J=1.9 Гц, 1H), 7.87-7.82 (m, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.70-7.53 (m, 1H), 7.51-7.43 (m, 1H), 7.41-7.32 (m, 2H), 6.97-6.91 (m, 3H), 6.90-6.82 (m, 4H), 6.76-6.67 (m, 1H), 5.79 (br s, 2H), 5.40-5.33 (m, 1H), 4.80-4.71 (m, 2H), 4.63-4.55 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (s, 3H).To a suspension of N, 1-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2(((tetrahydro-2H-pyran-2 -yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (500 mg, 0.727 mmol) in MeOH (7269 μl) was added 4 M hydrochloric acid in 1,4-dioxane (363 μl , 1.454 mmol). The mixture was sonicated until it turned into a clear yellow solution. The reaction mixture was stirred at room temperature for 45 minutes, whereupon a suspension formed. The reaction mixture was added to Et 2 O (70 ml), the solids were collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (2x4 ml). The solids were mixed with 20% MeOH-CH 2 Cl 2 (200 ml) and saturated aqueous NaHCO 3 (200 ml). The layers were separated and the organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo to give (1-(4-methoxybenzyl)-4-((4methoxybenzyl)amino)-7-(1H-pyrazol-3-yl)- 1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl)methanol (361 mg, 96%) as a white solid. LC-MS m/z 520 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.26-12.80 (m, 1H), 7.95 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.87-7.82 (m, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.70 -7.53 (m, 1H), 7.51-7.43 (m, 1H), 7.41-7.32 (m, 2H), 6.97-6.91 (m, 3H), 6.90-6.82 (m, 4H), 6.76-6.67 (m, 1H), 5.79 (br s, 2H), 5.40-5.33 (m, 1H), 4.80-4.71 (m, 2H), 4.63-4.55 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (s, 3H ).
Стадия 7. 1 -(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-7-(1 H-пиразол-3 -ил)-1 Н-пирроло[3,2с]хинолин-2-карбальдегид.Step 7 1-(4-methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline-2-carbaldehyde.
К суспензии (1 -(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-7-( 1Н-пиразол-3 -ил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-2-ил)метанола (0,361 г, 0,695 ммоль) в CH2Cl2 (19,85 мл) добавляли периодинан Десса-Мартина (0,589 г, 1,390 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакцию гасили добавлением смеси 10% водн. Na2S2O3 (10 мл) и насыщенного водного раствора NaHCO3 (10 мл), и его интенсивно перемешивали в течение 30 мин, затем экстрагировали 10% МеОН-CH2Cl2 (2x20 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля; линейный градиент 0-10% MeOH-CH2Cl2) с получением 1-(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-7-(1Нпиразол-3-ил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-2-карбальдегида, в смеси с небольшим количеством соответствующего продукта без одной из 4-метоксибензиламиногрупп (309 мг, 86%) в виде желтого твердого вещества, который использовали без дополнительной очистки. LC-MS m/z 518 [М+Н]+.To a suspension of (1-(4-methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl)methanol ( 0.361 g, 0.695 mmol) in CH 2 Cl 2 (19.85 ml) was added Dess-Martin periodinan (0.589 g, 1.390 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction was quenched by adding a mixture of 10% aq. Na 2 S 2 O 3 (10 ml) and saturated aqueous NaHCO 3 (10 ml) and stirred vigorously for 30 min, then extracted with 10% MeOH-CH 2 Cl 2 (2x20 ml). The combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography (40 g silica gel; linear gradient 0-10% MeOH-CH 2 Cl 2 ) to give 1-(4-methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-7-(1Hpyrazole- 3-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-2-carbaldehyde, mixed with a small amount of the corresponding product without one of the 4-methoxybenzylamino groups (309 mg, 86%) as a yellow solid, which was used without additional cleaning. LC-MS m/z 518 [M+H] + .
Стадии 8 и 9. 2-(морфолинометил)-7-(1H-пиразол-3-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амин, 2 АсОН.Steps 8 and 9 2-(morpholinomethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine, 2 AcOH.
К суспензии 1 -(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-7-(1 Н-пиразол-3 -ил)-1 Н-пирроло[3,2с]хинолин-2-карбальдегида (47,7 мг, 0,092 ммоль) в DCE (461 мкл) при комнатной температуре добавляли морфолин (11,92 мкл, 0,138 ммоль) и триметилортоформиат (81 мкл, 0,737 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (39,1 мг, 0,184 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество триацетоксиборгидрида натрия (20 мг, 0,094 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NaHCO3 (4 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2x4 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме.To a suspension of 1-(4-methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2c]quinoline-2-carbaldehyde (47 .7 mg, 0.092 mmol) in DCE (461 μl) at room temperature were added morpholine (11.92 μl, 0.138 mmol) and trimethyl orthoformate (81 μl, 0.737 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, then sodium triacetoxyborohydride (39.1 mg, 0.184 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Additional sodium triacetoxyborohydride (20 mg, 0.094 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. The reaction mixture was diluted with saturated aqueous NaHCO 3 (4 ml) and extracted with CH 2 Cl 2 (2x4 ml). The combined organic layers were dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo.
Неочищенный продукт растворяли в TFA (415 мкл) и добавляли TfOH (46 мкл). Реакционную смесь герметично закрывали и перемешивали при 40°С в течение 2,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и по каплям добавляли к Et2O (15 мл). Полученные твердые вещества собирали вакуумной фильтрацией. Этот продукт очищали препаративной HPLC (три инжекции по 1 мл) (колонка: Waters XBridge 19x100 мм; линейный градиент 10-90% В-А за 10 мин; растворитель А=5% MeCN-H2O с 10 мМ NH4OAc; растворитель В=95% MeCN-H2O с 10 мМ NH4OAc; скорость потока: 30 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм). Фракции, содержащие продукт, замораживали при -78°С и лиофилизировали с получением 2-(морфолинметил)-7-(1Н-пиразол-3-ил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина, 2 АсОН (21,6 мг, 50%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 12.05 -11.95 (m, 1H), 8.15 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.90 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.68 (br s, 1H), 7.59 (br d, J=8.6 Гц, 1H), 6.73 (d, J=2.0 Гц, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.52 (s, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.62-3.59 (m, 4Н), 2.44 (br s, 4H), 1.88 (s, 6H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм). m/z 349.2 [М+Н]+; RT: 0,45 мин.The crude product was dissolved in TFA (415 µl) and TfOH (46 µl) was added. The reaction mixture was sealed and stirred at 40° C. for 2.5 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and added dropwise to Et 2 O (15 ml). The resulting solids were collected by vacuum filtration. This product was purified by preparative HPLC (three 1 ml injections) (column: Waters XBridge 19x100 mm; linear gradient 10-90% VA over 10 min; solvent A=5% MeCN-H 2 O with 10 mM NH 4 OAc; solvent B=95% MeCN-H 2 O with 10 mM NH 4 OAc, flow rate: 30 ml/min, detector wavelength: 220 nm). Fractions containing the product were frozen at -78°C and lyophilized to obtain 2-(morpholinemethyl)-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine, 2 AcOH (21.6 mg, 50%) as a white solid. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.05 -11.95 (m, 1H), 8.15 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.68 (br s, 1H), 7.59 (br d, J=8.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.52 (s, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.62 -3.59 (m, 4H), 2.44 (br s, 4H), 1.88 (s, 6H). Analytical LC/MS conditions: column: Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm). m/z 349.2 [M+H]+; RT: 0.45 min.
Соединения по примерам 412-422 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанными для примеров 150, 151 и 411, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).Compounds of Examples 412-422 were prepared according to synthetic procedures similar to those described for Examples 150, 151 and 411 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 164 042018- 164 042018
- 165 042018- 165 042018
- 166 042018- 166 042018
Пример 423. Получение 2,3-диметил-7-(Ш-пиразол-3-ил)-Ш-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина.Example 423 Preparation of 2,3-dimethyl-7-(III-pyrazol-3-yl)-III-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine
Стадия 1. З-бром-N, 1-бис(4-метоксибензил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-Ш-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амин.Stage 1. 3-bromo-N, 1-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl)-2(((tetrahydro- 2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-III-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine.
К раствору N, 1 -бис(4-метоксибензил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (510 мг, 0,741 ммоль) в DMF (4943 мкл) добавляли N-бромсукцинимид (139 мг, 0,779 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли EtOAc (100 мл), промывали H2O (2x100 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (100 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (24 г силикагеля; линейный градиент 0-100% EtOAc-гексаны) с получением 3-бром-N,1-бис(4-метоксибензил)-7-(1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4амина (506 мг, 89%) в виде желтой пены. LC-MS m/z 766/768 [М+Н]+; 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 7.96 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.78 (d, J=1.8 Гц, 1H), 7.55 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.45-7.41 (m, 2H), 7.18 (dd, J=8.6, 1.9 Гц, 1H), 6.98-6.92 (m, 3H), 6.90 - 6.83 (m, 4H), 6.50 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.20 (br d, J=9.7 Гц, 1H), 4.88 (dd, J=12.8, 1.8 Гц, 1H), 4.85-4.79 (m, 1H), 4.79-4.73 (m, 1H), 4.73-4.66 (m, 2H), 4.06-3.99 (m, 1H), 3.793.71 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.55-3.43 (m, 2H), 2.46-2.34 (m, 1H), 1.97-1.88 (m, 1H), 1.75 (br d, J=12.5 Гц, 1H), 1.62-1.32 (m, 8H), 1.25-1.18 (m, 1H).To a solution of N, 1 -bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2(((tetrahydro-2H-pyran-2 -yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (510 mg, 0.741 mmol) in DMF (4943 μl) was added N-bromosuccinimide (139 mg, 0.779 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The mixture was diluted with EtOAc (100 ml), washed with H 2 O (2x100 ml) and saturated aqueous NaCl (100 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (24 g silica gel; linear gradient 0-100% EtOAc-hexanes) to give 3-bromo-N,1-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2Hpyran-2- yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4amine (506 mg, 89 %) as a yellow foam. LC-MS m/z 766/768 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.96 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.45- 7.41 (m, 2H), 7.18 (dd, J=8.6, 1.9 Hz, 1H), 6.98-6.92 (m, 3H), 6.90 - 6.83 (m, 4H), 6.50 (d, J=1.8 Hz, 1H) , 5.87 (s, 2H), 5.20 (br d, J=9.7 Hz, 1H), 4.88 (dd, J=12.8, 1.8 Hz, 1H), 4.85-4.79 (m, 1H), 4.79-4.73 (m, 1H), 4.73-4.66 (m, 2H), 4.06-3.99 (m, 1H), 3.793.71 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.55-3.43 (m, 2H), 2.46-2.34 (m, 1H), 1.97-1.88 (m, 1H), 1.75 (br d, J=12.5 Hz, 1H), 1.62-1.32 (m, 8H), 1.25-1.18 (m, 1H ).
Стадия 2. N,1-бис(4-метоксибензил)-3-метил-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амин.Step 2. N,1-bis(4-methoxybenzyl)-3-methyl-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2(((tetrahydro- 2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine.
Смесь 3-бром-N,1-бис(4-метоксибензил)-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (268 мг, 0,350 ммоль), метилбороновой кислоты (27,2 мг, 0,454 ммоль) и трехосновного фосфата калия (223 мг, 1,049 ммоль) вакуумировали и снова заполняли N2, затем ее смешивали с 1,4-диоксаном (1942 мкл) и H2O (388 мкл). Смесь продували N2 в течение 25 мин, затем добавляли хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'триизопропил-1,Г-бифенил)[2-(2'-амино-1,Г-бифенил)]палладий(П) (13,75 мг, 0,017 ммоль). Реакционную смесь герметично закрывали и перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Добавляли дополнительное количество метилбороновой кислоты (27,2 мг, 0,454 ммоль) и хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'триизопропил-1,Г-бифенил)-[2-(2'-амино-1,Г-бифенил)]палладия(П) (13,75 мг, 0,017 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл), промывали H2O (100 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (100 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (40 г силикагеля RediSep Gold; линейный градиент 0-75% EtOAcCH2Cl2) с получением N,1-бис(4-метоксибензил)-3-метил-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол5-ил)-2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (173 мг, 71%) в виде желтой пены. LC-MS m/z 702 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 7.91 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.72 (d, J=1.7 Гц, 1H), 7.54 (d, J=1.8 Гц, 1H), 7.44 (d, J=8.6 Гц, 2H), 7.11 (dd, J=8.5, 1.8 Гц, 1H), 6.93-6.87 (m, 2H), 6.87-6.81 (m, 4H), 6.73 (t, J=6.0 Гц, 1H), 6.47 (d, J=1.8 Гц, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.19 (br d, J=9.9 Гц, 1H), 4.81- 167 042018A mixture of 3-bromo-N,1-bis(4-methoxybenzyl)-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2(((tetrahydro-2H- pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (268 mg, 0.350 mmol), methylboronic acid (27.2 mg, 0.454 mmol) and tribasic potassium phosphate ( 223 mg, 1.049 mmol) was evacuated and refilled with N2, then it was mixed with 1,4-dioxane (1942 µl) and H2O (388 µl). The mixture was purged with N2 for 25 min, then chloro(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'triisopropyl-1,T-biphenyl)[2-(2'-amino-1,T-biphenyl)]palladium( P) (13.75 mg, 0.017 mmol). The reaction mixture was sealed and stirred at 100°C for 30 min. Additional methylboronic acid (27.2 mg, 0.454 mmol) and chloro(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'triisopropyl-1,G-biphenyl)-[2-(2'-amino-1,G -biphenyl)]palladium(II) (13.75 mg, 0.017 mmol). The reaction mixture was stirred at 100°C for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with EtOAc (100 ml), washed with H 2 O (100 ml) and saturated aqueous NaCl (100 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The crude material was purified by flash chromatography (40 g RediSep Gold silica gel; linear gradient 0-75% EtOAcCH 2 Cl 2 ) to give N,1-bis(4-methoxybenzyl)-3-methyl-7-(1-(tetrahydro-2H -pyran-2-yl)-1H-pyrazol5-yl)-2-(((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (173 mg, 71%) as a yellow foam. LC-MS m/z 702 [M+H] + ; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.72 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.44 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.11 (dd, J=8.5, 1.8 Hz, 1H), 6.93-6.87 (m, 2H), 6.87-6.81 (m, 4H), 6.73 (t, J=6.0 Hz, 1H), 6.47 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.19 (br d, J=9.9 Hz, 1H), 4.81-167 042018
4.60 (m, 5H), 4.06-3.99 (m, 1H), 3.79-3.71 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.53-3.44 (m, 2H), 2.60 (s, 3H), 2.45-2.35 (m, 1H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.74 (br d, J=11.9 Гц, 1H), 1.64-1.34 (m, 8H), 1.27-1.20 (m, 1H)4.60 (m, 5H), 4.06-3.99 (m, 1H), 3.79-3.71 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.53-3.44 (m, 2H), 2.60 ( s, 3H), 2.45-2.35 (m, 1H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.74 (br d, J=11.9 Hz, 1H), 1.64-1.34 (m, 8H), 1.27-1.20 (m , 1H)
Стадия 3. (1 -(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-3-метил-7-( 1 H-пиразол-3 -ил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-2-ил)метанол.step 3 2-yl)methanol.
К суспензии N, 1 -бис(4-метоксибензил)-3 -метил-7-(1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 H-пиразол-5-ил)2-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (172 мг, 0,245 ммоль) в МеОН (2451 мкл) добавляли 4 М хлористоводородную кислоту в 1,4-диоксане (123 мкл, 0,490 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь добавляли к Et2O (20 мл), твердые вещества собирали вакуумной фильтрацией и промывали Et2O (2x3 мл). Твердые вещества смешивали с 10% МеОН-CH2Cl2 (100 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (100 мл). Слои разделяли, и органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением (1-(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-3-метил-7-(1H-пиразол3-ил)-1H-пирроло[3,2-с]хинолин-2-ил)метанола (104 мг, 80%) в виде белого твердого вещества. LC-MS m/z 534 [М+Н]+; 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.25-12.80 (m, 1H), 7.95-7.92 (m, 1H), 7.88-7.71 (m, 1H), 7.51-7.31 (m, 3H), 6.94-6.89 (m, 4H), 6.88-6.82 (m, 3H), 6.75-6.68 (m, 1H), 6.58-6.46 (m, 1H), 5.81 (br s, 2H), 5.19-5.12 (m, 1H), 4.82-4.75 (m, 2Н), 4.57-4.53 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.57 (s, 3H).To a suspension of N, 1-bis(4-methoxybenzyl)-3-methyl-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1 H-pyrazol-5-yl)2-(((tetrahydro- 2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (172 mg, 0.245 mmol) in MeOH (2451 μl) was added 4 M hydrochloric acid in 1.4 -dioxane (123 μl, 0.490 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was added to Et 2 O (20 ml), the solids were collected by vacuum filtration and washed with Et 2 O (2x3 ml). The solids were mixed with 10% MeOH-CH 2 Cl 2 (100 ml) and saturated aqueous NaHCO3 (100 ml). The layers were separated and the organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo to give (1-(4-methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-3-methyl-7-(1H-pyrazole3 -yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinolin-2-yl)methanol (104 mg, 80%) as a white solid. LC-MS m/z 534 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.25-12.80 (m, 1H), 7.95-7.92 (m, 1H), 7.88-7.71 (m, 1H), 7.51-7.31 (m, 3H), 6.94 -6.89 (m, 4H), 6.88-6.82 (m, 3H), 6.75-6.68 (m, 1H), 6.58-6.46 (m, 1H), 5.81 (br s, 2H), 5.19-5.12 (m, 1H ), 4.82-4.75 (m, 2H), 4.57-4.53 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.57 (s, 3H).
Стадия 4. 2,3-диметил-7-(1 Н-пиразол-3-ил)-1 Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амин.Step 4 2,3-dimethyl-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine
К раствору (1 -(4-метоксибензил)-4-((4-метоксибензил)амино)-3-метил-7-( 1 Н-пиразол-3 -ил)-1Hпирроло[3,2-с]хинолин-2-ил)метанола (24 мг, 0,045 ммоль) в TFA (202 мкл) добавляли триэтилсилан (35,9 мкл, 0,225 ммоль) и TfOH (22,49 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный материал растворяли в МеОН (300 мкл) и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр) и очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с ацетатом аммония; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с ацетатом аммония; градиент: 0-минутное удерживание при 2% В, 2-42% В в течение 20 мин, затем 0-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания с получением 2,3-диметил-7-(1Н-пиразол-3-ил)-1Н-пирроло[3,2-с]хинолин-4-амина (5,8 мг, 47%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 11.84 (br s, 1H), 8.02 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.69 (br s, 1H), 7.63 (br d, J=8.3 Гц, 1H), 6.73 (d, J=1.7 Гц, 1H), 6.49-6.36 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.34 (s, 3H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 278.2 [М+Н]+; RT: 1,12 мин.To a solution of (1 -(4-methoxybenzyl)-4-((4-methoxybenzyl)amino)-3-methyl-7-(1H-pyrazol-3 -yl)-1Hpyrrolo[3,2-c]quinoline-2 -yl)methanol (24 mg, 0.045 mmol) in TFA (202 µl) were added triethylsilane (35.9 µl, 0.225 mmol) and TfOH (22.49 µl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude material was dissolved in MeOH (300 μl) and concentrated in vacuo. The crude material was dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter) and purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, particles 5 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with ammonium acetate; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with ammonium acetate; gradient: 0 minute hold at 2% B, 2-42% B for 20 minutes, then 0 minute hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation to give 2,3-dimethyl-7-(1H-pyrazol-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]quinoline-4-amine (5, 8 mg, 47%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.84 (br s, 1H), 8.02 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.69 (br s, 1H), 7.63 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 6.73 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.49-6.36 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.34 (s, 3H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 278.2 [M+H]+; RT: 1.12 min.
Соединения по примерам 424-456 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным для примеров 150, 151, 209, 253 или 286, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS.Compounds of Examples 424-456 were prepared according to synthetic procedures similar to those described for Examples 150, 151, 209, 253, or 286 from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions.
А: колонка: PoroShell HPH C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.A: column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
В: колонка: CORTECS С18, 2,1x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,09% FA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,1% FA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.B: column: CORTECS C18, 2.1x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 0.09% FA; mobile phase B: acetonitrile with 0.1% FA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
С: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.C: column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
D: колонка: Kinetex XB-C18, 2,1x30 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 100% В в течение 1,2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.D: column: Kinetex XB-C18, 2.1x30 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 100% B over 1.2 min, then hold 0.6 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
Е: колонка: Kinetex EVO C18, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% В в течение 2 мин, затем удерживание 0,6 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл мин; обнаружение: MS и UV.E: column: Kinetex EVO C18, 3.0x50 mm, particles 2.2 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% B over 2 min, then hold 0.6 min at 95% B; flow rate: 1 ml min; detection: MS and UV.
F: Колонка: PoroShell HPH C18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 5 мМ бикарбонатом аммония; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 5 до 60% В за 3 мин, затем до 95% за 0,2 мин, затем удерживание 1,0 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.F: Column: PoroShell HPH C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 5 mM ammonium bicarbonate; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 5 to 60% B in 3 min, then to 95% in 0.2 min, then hold 1.0 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
G: колонка: Xbridge ВЕН Shield RP18, 2,1x50 мм, частицы 2,5 мкм; подвижная фаза А: 0,1 NH3.H2O; подвижная фаза В: ацетонитрил; температура: 40°С; градиент: от 10 до 50% В за 2,2 мин, затем до 95% за 0,6 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV.G: column: Xbridge BH Shield RP18, 2.1x50 mm, particles 2.5 µm; mobile phase A: 0.1 NH3.H2O; mobile phase B: acetonitrile; temperature: 40°C; gradient: 10 to 50% B in 2.2 min, then to 95% in 0.6 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV.
Н: колонка: Ascentis Express С18, 3,0x50 мм, частицы 2,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05%H: column: Ascentis Express C18, 3.0x50 mm, particles 2.7 µm; mobile phase A: water with 0.05%
- 168 042018- 168 042018
TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 95% В в течение 2,0 мин, затем удерживание 0,7 мин при 95% В; скорость потока: 1,5 мл/мин; обнаружение: MS и UV.TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 95% B over 2.0 min, then hold 0.7 min at 95% B; flow rate: 1.5 ml/min; detection: MS and UV.
I: колонка: Titan С18, 2,1x50 мм, частицы 1,9 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 10 до 95% в течение 2,0 мин, затем удерживание 0,65 мин при 95% В; скорость потока: 0,7 мл/мин; обнаружение: MS и UV.I: column: Titan C18, 2.1x50 mm, particles 1.9 µm; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 10 to 95% over 2.0 min, then hold 0.65 min at 95% B; flow rate: 0.7 ml/min; detection: MS and UV.
J: колонка: Shim-pack XR-ODS, 3,0x50 мм, частицы 2,2 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% TFA; температура: 40°С; градиент: от 5 до 30% за 2,5 мин, а затем до 95% В за 0,7 мин, затем удерживание 1,0 мин при 95% В; скорость потока: 1,2 мл/мин; обнаружение: MS и UV.J: column: Shim-pack XR-ODS, 3.0x50 mm, 2.2 µm particles; mobile phase A: water with 0.05% TFA; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% TFA; temperature: 40°C; gradient: 5 to 30% in 2.5 min, then to 95% B in 0.7 min, then hold 1.0 min at 95% B; flow rate: 1.2 ml/min; detection: MS and UV.
- 169 042018- 169 042018
- 170 042018- 170 042018
- 171 042018- 171 042018
- 172 042018- 172 042018
- 173 042018- 173 042018
Пример 457. Получение 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина.Example 457 Preparation of 7-(1H-pyrazol-3-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine
К суспензии 7-(1-(тетрагидро-2Н-пuран-2-uл)-1H-пиразол-5-uл)-2Н-пиразоло-[4,3-с]хuнолuн-4амина (30 мг, 0,0 9 ммоль) в DCM (150 мкл) добавляли TFA (150 мкл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный материал помещали в DCM (300 мкл) и концентрировали, затем его растворяли в DMF (2 мл), фильтровали (шприцевой фильтр с нейлоновой мембраной Acrodisc 0,45 мкм) и очищали препаративной HPLC с получением 7-(1Н-пиразол-3-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-4-амина (13,6 мг, 60,6%). 1H ЯМР (500 MHz, DMSO-d6) δ 14.35-13.89 (m, 1H), 13.24-12.82 (m, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.13 (d, J=8.3 Гц, 1H), 8.04-7.94 (m, 1H), 7.86-7.68 (m, 2H), 7.52-7.03 (m, 2H), 6.80 (br s, 1H). Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). m/z 250.9 [М+Н]+; RT: 0,89 мин.To a suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo-[4,3-c]quinolin-4amine (30 mg, 0.0 9 mmol) in DCM (150 µl) was added TFA (150 µl). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The crude material was taken up in DCM (300 µl) and concentrated, then dissolved in DMF (2 ml), filtered (syringe filter with 0.45 µm Acrodisc nylon membrane) and purified by prep HPLC to give 7-(1H-pyrazole-3- yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-4-amine (13.6 mg, 60.6%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 14.35-13.89 (m, 1H), 13.24-12.82 (m, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.13 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.04 -7.94 (m, 1H), 7.86-7.68 (m, 2H), 7.52-7.03 (m, 2H), 6.80 (br s, 1H). Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). m/z 250.9 [M+H]+; RT: 0.89 min.
- 174 042018- 174 042018
Пример 458. Получение 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-N,Nдиметилацетамида, TFA.Example 458 Preparation of 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-N,N-dimethylacetamide, TFA
Суспензию 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-1Н-пиразоло-[4,3-с]хинолин-4амина (34 мг, 0,102 ммоль), карбоната цезия (83 мг, 0,254 ммоль) и 2-хлор-N,N-диметилацетамида (24,72 мг, 0,203 ммоль) в DMFA (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (10 мл) и промывали водой. Органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Затем остаток обрабатывали EtOAc (1 мл). Добавляли 4N HCl в диоксане (0,5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали препаративной LC/MS в следующих условиях: колонка: XBridge С18, 200x19 мм, частицы 5 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил: вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; градиент: 5-минутное удерживание при 0% В, 0-28% В в течение 25 мин, затем 0-минутное удерживание при 100% В; скорость потока: 20 мл/мин; температура колонки: 25°С. Сбор фракций начинали на основании сигналов MS. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и сушили путем центробежного выпаривания. Аналитический метод LC/MS использовали для определения конечной чистоты. Условия инжекции 1: колонка: Waters XBridge C18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм). LCMS М+Н: 336,26; время удерживания: 1,04 мин. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.91 (s, 1H), 8.18 (m, 2Н), 7.94 (br d, J=7.9 Гц, 1H), 7.88 (br s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.63 (s, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.92 (s, 3H).Suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrazolo-[4,3-c]quinoline-4amine (34 mg, 0.102 mmol), carbonate cesium (83 mg, 0.254 mmol) and 2-chloro-N,N-dimethylacetamide (24.72 mg, 0.203 mmol) in DMFA (1 ml) was stirred at room temperature for 3 h. The reaction mixture was diluted with EtOAc (10 ml) and washed with water. The organic layer was dried over sodium sulfate and concentrated. The residue was then treated with EtOAc (1 ml). 4N HCl in dioxane (0.5 ml) was added. The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 minutes and concentrated in vacuo. The crude material was purified by preparative LC/MS under the following conditions: column: XBridge C18, 200x19 mm, 5 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile: water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; gradient: 5 min hold at 0% B, 0-28% B for 25 min, then 0 min hold at 100% B; flow rate: 20 ml/min; column temperature: 25°C. Fraction collection was initiated based on MS signals. Fractions containing the desired product were combined and dried by centrifugal evaporation. Analytical method LC/MS was used to determine the final purity. Injection Conditions 1: Column: Waters XBridge C18, 2.1x50 mm, 1.7 µm particles; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm). LCMS M+H: 336.26; retention time: 1.04 min. 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.91 (s, 1H), 8.18 (m, 2H), 7.94 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.88 (br s, 1H), 6.84 ( s, 1H), 5.63 (s, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.92 (s, 3H).
Альтернативный способ получения 2-(4-амино-7-(1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил) -N,N-диметилацетамида.An alternative route for the preparation of 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)-N,N-dimethylacetamide.
Стадия 1. Этил 2-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)ацетат.Step 1 Ethyl 2-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinolin-2-yl )acetate.
Суспензию 7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-1Н-пиразоло-[4,3-с]хинолин-4амина (700 мг, 2,093 ммоль), карбоната цезия (1705 мг, 5,23 ммоль) и этил-2-хлорацетата (513 мг, 4,19 ммоль) в DMF (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего LC/MS показала полное превращение. Реакцию гасили водой (10 мл), экстрагировали 5% MeOH/DCM (3x). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали в вакууме и очищали флэшхроматографией (0-20% MeOH/DCM, 2N NH3) с получением желаемого изомера (550 мг, 62,5%). LC/MS М+=393.3.Suspension of 7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-1H-pyrazolo-[4,3-c]quinoline-4amine (700 mg, 2.093 mmol), carbonate cesium (1705 mg, 5.23 mmol) and ethyl 2-chloroacetate (513 mg, 4.19 mmol) in DMF (6 ml) were stirred at room temperature for 3 hours, after which LC/MS showed complete conversion. The reaction was quenched with water (10 ml), extracted with 5% MeOH/DCM (3x). The combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 , concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (0-20% MeOH/DCM, 2N NH 3 ) to give the desired isomer (550 mg, 62.5%). LC/MS M + =393.3.
Стадия 2. 2-(4-амино-7-(Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-уксусная кислота.Step 2 2-(4-Amino-7-(III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-acetic acid.
К суспензии кислоты, полученной на стадии 1, в THF/MeOH (1:1, 12 мл) добавляли водный раствор NaOH (2N, 2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, прежде чем ее концентрировать в вакууме. Затем добавляли раствор HCl в Et2O (2N, 8 мл). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем концентрировали и нейтрализовали до рН 6 водным раствором NaHCO3. Продукт собирали вакуумной фильтрацией, промывали Et2O и водой, и сушили под вакуумом с получением 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2To a suspension of the acid obtained in step 1 in THF/MeOH (1:1, 12 ml) was added an aqueous solution of NaOH (2N, 2 ml). The mixture was stirred at room temperature for 3 hours before being concentrated in vacuo. Then a solution of HCl in Et 2 O (2N, 8 ml) was added. The resulting suspension was stirred at room temperature for 30 min, then concentrated and neutralized to pH 6 with an aqueous solution of NaHCO 3 . The product was collected by vacuum filtration, washed with Et2O and water, and dried under vacuum to give 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-2
- 175 042018 ил)уксусной кислоты в виде белого твердого вещества (350 мг, 85%). LCMS М+=309.2. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) сдвиг 9.06-8.68 (m, 2Н), 8.28-7.59 (m, 4H), 6.77 (s, 1H), 5.36 (s, 2H).- 175 042018 yl)acetic acid as a white solid (350 mg, 85%). LCMS M + =309.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) shift 9.06-8.68 (m, 2H), 8.28-7.59 (m, 4H), 6.77 (s, 1H), 5.36 (s, 2H).
Стадия 3. 2-(4-амино-7-(Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-М,К-диметилацетамид.Step 3 2-(4-Amino-7-(III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-N,N-dimethylacetamide.
Суспензию 2-(4-амино-7-(Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-уксусной кислоты (20 мг, 0,065 ммоль), основания Хунига (68,0 мкл, 0,389 ммоль) в DMF (0,8 мл) обрабатывали ультразвуком в течение 2 мин перед добавлением раствора диметиламина (97 мкл, 0,195 ммоль, 2 М в THF) и HATU (24,67 мг, 0,065 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч перед добавлением дополнительного количества HATU (24,67 мг, 0,065 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC с получением 2-(4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3с]хинолин-2-ил)--К,К-диметилацетамида. LC/MS M+=336.1.Suspension of 2-(4-amino-7-(III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-acetic acid (20 mg, 0.065 mmol), Hunig's base ( 68.0 µl, 0.389 mmol) in DMF (0.8 ml) was sonicated for 2 min before dimethylamine solution (97 µl, 0.195 mmol, 2 M in THF) and HATU (24.67 mg, 0.065 mmol) were added. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour before additional HATU (24.67 mg, 0.065 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes and then concentrated in vacuo. The crude product was purified by preparative HPLC to give 2-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3c]quinolin-2-yl)--K,K-dimethylacetamide. LC/MS M + =336.1.
Соединения по примерам 459-487 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным для соединений по предыдущим примерам, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).Compounds of examples 459-487 were prepared according to synthetic procedures similar to those described for the compounds of previous examples from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
- 176 042018- 176 042018
- 177 042018- 177 042018
- 178 042018- 178 042018
- 179 042018- 179 042018
- 180 042018- 180 042018
- 181 042018- 181 042018
(brt, 7=7.3 Гц, 2Н)(brt, 7=7.3Hz, 2H)
13.28 (brs, 1Н), 13.1513.02 (ш, 1Н), 12.87 (brs, 1Н), 8.73 (brt, 7=5.8 Гц, 1Н), 8.79 - 8.54 (m, 2Н), 8.28- 8.23 (т, 2Н), 8.15 (br s, 1Н), 7.95 (brd, 7=8.4 Гц, 1Н), 7.85 (brs, 1Н), 6.88 (s, 1Н), 6.82 (d, 7=1.9 Гц, 1Н), 3.65 (q, 7=7.1 Гц, 2Н), 3.07 (brt,7=7,2 Гц, 2Н)________13.28 (brs, 1Н), 13.1513.02 (br, 1Н), 12.87 (brs, 1Н), 8.73 (brt, 7=5.8 Hz, 1Н), 8.79 - 8.54 (m, 2Н), 8.28 - 8.23 (t, 2Н), 8.15 (br s, 1Н), 7.95 (brd, 7=8.4 Hz, 1Н), 7.85 (brs, 1Н), 6.88 (s, 1Н), 6.82 (d, 7=1.9 Hz, 1Н), 3.65 (q, 7=7.1Hz, 2H), 3.07 (brt,7=7.2Hz, 2H)_______
8.20 (d, 7=8.4 Гц, 1Н), 7.92 (s, 1Н), 7.74- 7.62 (m, 2Н), 6.77 (d, 7=1.8 Гц, 1Н), 6.356.25 (ш, 2Н), 3.65 (s, 2Н), 3.60- 3.57 (ш, 4Н), 2.45 (br s, 4Н)8.20 (d, 7=8.4 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.74-7.62 (m, 2H), 6.77 (d, 7=1.8 Hz, 1H), 6.356.25 (br, 2H), 3.65 (s, 2H), 3.60-3.57 (br, 4H), 2.45 (br s, 4H)
8.81 - 8.39 (ш, 2Н), 8.26 (d, 7=8.3 Гц, 1Н), 8.18 (s, 1Н), 8.01 (d, 7=8.5 Гц, 1Н), 7.85 (brs, 1Н), 6.86 (d, 7=2.2 Гц, 1Н), 4.40 (s, 2Н), 3.983.88 (ш, ЗН), 3.82 (dd, 7=10.3, 5.9 Гц, 1Н), 3.713.65 (ш, 1Н), 2.37 -2.25 (ш, 1Н), 2,11 -2,02 (ш, 1Н)8.81 - 8.39 (br, 2H), 8.26 (d, 7=8.3 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.01 (d, 7=8.5 Hz, 1H), 7.85 (brs, 1H), 6.86 (d , 7=2.2 Hz, 1Н), 4.40 (s, 2Н), 3.983.88 (br, ZN), 3.82 (dd, 7=10.3, 5.9 Hz, 1Н), 3.713.65 (br, 1Н), 2.37 - 2.25 (w, 1H), 2.11 -2.02 (w, 1H)
3-(4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-N,N,23-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-N,N,2
Пример 488. Получение триметилпропанамида, TFA.Example 488 Preparation of trimethylpropanamide, TFA
Стадия 1.Stage 1
Получение метил-3 -(4-амино-7-(1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 Н-пиразол-5 -ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолина-2-ил)-2-метилпропаноата.Obtaining methyl-3 - (4-amino-7- (1 - (tetrahydro-2H-pyran-2-yl) -1 H-pyrazol-5 -yl) -2H pyrazolo[4,3-c] quinolin-2-yl )-2-methylpropanoate.
Суспензиюsuspension
7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло-[4,3-с]хинолин-4 амина (0,2 г, 0,598 ммоль) и карбоната цезия (0,585 г, 1,794 ммоль) в DMF (1,994 мл) перемешивали в течение короткого периода времени (~2 мин), затем обрабатывали метил (R)-3-6pom-2метилпропаноатом (0,178 г, 0,96 моль). Затем реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали. Через 5 ч реакционную смесь обрабатывали 0,1 г дополнительного количества карбоната цезия и 0,1 г дополнительного количества метил (R)-3-бром-2-метилпропаноата. Перемешивание при 60°С продолжа ли, после чего реакционную смесь выливали в воду и значение рН доводили до ~6. Полученную смесь дважды экстрагировали EtOAc, и объединенный органический экстракт сушили, концентрировали и очищали хроматографией на силикагеле (50-100% THF-гексан) с получением метил 3-(4-амино-7-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метилпропаноата (195 мг, 0,449 ммоль, выход 75%) в виде бесцветного стекла. Условия аналитического LC/MS: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм). RT: 0,69 мин. m/z 435.3 [М+Н]+.7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo-[4,3-c]quinoline-4 amine (0.2 g, 0.598 mmol) and cesium carbonate (0.585 g, 1.794 mmol) in DMF (1.994 ml) was stirred for a short period of time (~2 min), then treated with methyl (R)-3-6pom-2-methylpropanoate (0.178 g, 0.96 mol). Then the reaction mixture was heated to 60°C and stirred. After 5 hours the reaction mixture was treated with 0.1 g additional cesium carbonate and 0.1 g additional methyl (R)-3-bromo-2-methylpropanoate. Stirring at 60°C was continued after which the reaction mixture was poured into water and the pH was adjusted to ~6. The resulting mixture was extracted twice with EtOAc and the combined organic extract was dried, concentrated and purified by silica gel chromatography (50-100% THF-hexane) to give methyl 3-(4-amino-7-(1(tetrahydro-2H-pyran-2- yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2-methylpropanoate (195 mg, 0.449 mmol, 75% yield) as colorless glass. Analytical LC/MS conditions: column: Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm). RT: 0.69 min. m/z 435.3 [M+H]+.
Стадия 2. Получение 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Нпиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метилпропановой кислоты.Step 2. Preparation of 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl )-2-methylpropanoic acid.
Раствор метил 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3Methyl 3-(4-amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4.3
- 182 042018- 182 042018
с]хинолин-2-ил)-2-метилпропаноата (190 мг, 0,437 ммоль) в THF (2,2 мл) обрабатывали водным раствором гидроксида лития (2,186 мл, 2,186 ммоль), а затем 0,6 мл МеОН. Реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 3 ч. Большая часть органического растворителя была удалена в потоке азота, а остаток разбавляли 2 мл воды и фильтровали. Фильтрат доводили до рН ~5,5 ледяной НОАс, и полученный осадок фильтровали, промывали водой и сушили на воздухе с получением 3-(4-амино-7-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-2-метилпропановой кислоты (135 мг, 0,321 ммоль, выход 73,4%) в виде белого порошка. Условия аналитического LC/MS: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм). RT: 0,63 мин. m/z 421.2 [М+Н]+.c]quinolin-2-yl)-2-methylpropanoate (190 mg, 0.437 mmol) in THF (2.2 ml) was treated with aqueous lithium hydroxide (2.186 ml, 2.186 mmol) followed by 0.6 ml MeOH. The reaction mixture was heated to 60° C. and stirred for 3 hours. Most of the organic solvent was removed under nitrogen flow, and the residue was diluted with 2 ml of water and filtered. The filtrate was adjusted to pH ~5.5 with ice cold HOAc and the resulting precipitate was filtered, washed with water and air dried to give 3-(4-amino-7-(1(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazole -5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-2-methylpropanoic acid (135 mg, 0.321 mmol, 73.4% yield) as a white powder. Analytical LC/MS conditions: column: Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm). RT: 0.63 min. m/z 421.2 [M+H]+.
Стадия 3. Получение 3-(4-амино-7-(Ш-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2-ил)-К,К,2триметилпропанамида, TFA.Step 3. Preparation of 3-(4-amino-7-(III-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2-yl)-K,K,2trimethylpropanamide, TFA.
Раствор 3-(4-амино-7-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин2-ил)-2-метилпропановой кислоты (18 мг, 0,043 ммоль) и диметиламина ((2 М в THF), 86 мкл, 0,171 ммоль) в DMF (214 мкл) обрабатывали ВОР (22,72 мг, 0,051 ммоль), и полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь обрабатывали 0,8 мл TFA-DCM (1: 1) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC. Концентрирование соответствующих фракций обеспечило получение 3-(4-амино-7-(1H-пиразол-5-ил)-2Н-пиразоло[4,3-с]хинолин-2ил)-К,К,2-триметилпропанамида, TFA (10 мг, 49%) в виде бесцветного твердого вещества. Условия аналитического LC/MS: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм). RT: 0,56 мин. m/z 364.1 [M+H]+. 1Н ЯМР (400 МГц, MeOH-d4) δ 8.70 (s, 1H), 8.30 (d, J=8.3 Гц, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (d, J=8.2 Гц, 1H), 7.79 (d, J=2.2 Гц, 1H), 6.85 (d, J=2.2 Гц, 1H), 4.63 (ABq, JAB=13.3 Гц, JAX=9.4 Гц, JBX=4.9 Гц, Δν=109 Гц, 2Н), 3.773.87 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 1.28 (d, J=6.9 Гц, 3H).3-(4-Amino-7-(1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin2-yl)-2 solution -methylpropanoic acid (18 mg, 0.043 mmol) and dimethylamine ((2 M in THF), 86 μl, 0.171 mmol) in DMF (214 μl) were treated with BOP (22.72 mg, 0.051 mmol) and the resulting solution was stirred for 1 h at room temperature. The reaction mixture was then treated with 0.8 ml TFA-DCM (1:1) and stirred for 2 hours at room temperature. The reaction mixture was concentrated under vacuum. The crude product was purified by preparative HPLC. Concentration of the appropriate fractions provided 3-(4-amino-7-(1H-pyrazol-5-yl)-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-2yl)-K,K,2-trimethylpropanamide, TFA (10 mg, 49%) as a colorless solid. Analytical LC/MS conditions: column: Acquity UPLC VEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm). RT: 0.56 min. m/z 364.1 [M+H] + . 1Н NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 8.70 (s, 1H), 8.30 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.79 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.85 (d, J=2.2 Hz, 1H), 4.63 (ABq, J AB =13.3 Hz, J AX =9.4 Hz, J BX =4.9 Hz, Δν=109 Hz , 2Н), 3.773.87 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 1.28 (d, J=6.9 Hz, 3H).
Соединения по примерам 489-624 получали в соответствии с методиками синтеза, аналогичными методикам, описанным в предыдущих примерах, из соответствующих исходных материалов. Условия аналитического LC/MS: колонка: Waters XBridge С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 5:95 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: 95:5 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 0 до 100% В в течение 3 мин, затем удерживание 0,50 мин при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; обнаружение: MS и UV (220 нм).The compounds of examples 489-624 were prepared according to synthetic procedures similar to those described in the previous examples from the appropriate starting materials. Analytical LC/MS conditions: column: Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 µm; mobile phase A: 5:95 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; mobile phase B: 95:5 acetonitrile:water with 0.1% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 0 to 100% B over 3 min, then hold 0.50 min at 100% B; flow rate: 1 ml/min; detection: MS and UV (220 nm).
Условия аналитического LC/MS для соединений по примерам 489 и 612: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: вода с 0,05% трифторуксусной кислоты; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% трифторуксусной кислоты; температура: 50°С; градиент: от 2 до 98% В в течение 1 мин, затем удерживание 0,50 мин при 98% В; скорость потока: 0,8 мл/мин; обнаружение: MS и UV (254 нм).Analytical LC/MS conditions for the compounds of examples 489 and 612: column: Acquity UPLC BEN C18, 2.1 x 50 mm, particles 1.7 μm; mobile phase A: water with 0.05% trifluoroacetic acid; mobile phase B: acetonitrile with 0.05% trifluoroacetic acid; temperature: 50°C; gradient: 2 to 98% B over 1 min, then hold 0.50 min at 98% B; flow rate: 0.8 ml/min; detection: MS and UV (254 nm).
- 183 042018- 183 042018
- 184 042018- 184 042018
- 185 042018- 185 042018
- 186 042018- 186 042018
- 187 042018- 187 042018
- 188 042018- 188 042018
- 189 042018- 189 042018
- 190 042018- 190 042018
- 191 042018- 191 042018
- 192 042018- 192 042018
- 193 042018- 193 042018
- 194 042018- 194 042018
- 195 042018- 195 042018
- 196 042018- 196 042018
- 197 042018- 197 042018
- 198 042018- 198 042018
- 199 042018- 199 042018
- 200 042018- 200 042018
- 201 042018- 201 042018
- 202 042018- 202 042018
- 203 042018- 203 042018
- 204 042018- 204 042018
- 205 042018- 205 042018
- 206 042018- 206 042018
- 207 042018- 207 042018
Оценка биологической активности.Assessment of biological activity.
Измерение продукции IL-Ιβ в РМА-дифференцированных клетках ТНР-1.Measurement of IL-Ιβ production in PMA-differentiated THP-1 cells.
Клетки ТНР-1 получали из Американской коллекции типовых культур и субкультивировали в соответствии с инструкциями поставщика. Перед экспериментами клетки культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% инактивированный нагреванием FBS, пенициллин (100 единиц/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл), и поддерживали в log фазе до начала эксперимента. Перед экспериментом ТНР-1 обрабаTHP-1 cells were obtained from the American Type Culture Collection and subcultured according to the supplier's instructions. Prior to experiments, cells were cultured in RPMI 1640 medium containing 10% heat-inactivated FBS, penicillin (100 units/ml) and streptomycin (100 μg/ml) and maintained in log phase until the beginning of the experiment. Before the experiment, THP-1 was processed
- 208 042018 тывали РМА (форбол-12-миристат-13-ацетат) (10 мкг/мл) в течение 24 ч. В день эксперимента среду удаляли и прикрепляющиеся клетки обрабатывали трипсином в течение 2 мин, затем клетки собирали, промывали PBS (фосфатно-солевым буферным раствором), замедляли вращение, ресуспендировали в 2% инактивированном нагреванием FBS с RPMI при концентрации 1х106 клеток/мл и 100 мкл высевали на 96-луночный планшет. Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) и добавляли в культуральную среду для достижения желаемой концентрации (например, 100, 30, 10, 3, 1, 0,3 или 0,1 мкМ). Клетки инкубировали с соединениями в течение 4 ч. Бесклеточный супернатант собирали, и продукцию IL-1e оценивали с помощью ELISA. Параллельно в каждом эксперименте использовали контрольные образцы, обработанные только носителем. Конечная концентрация DMSO составляла 1%. Соединения показали дозозависимое увеличение продукции IL-1 β в РМА-дифференцированных клетках ТНР-1.- 208 042018 PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) (10 µg/mL) was waived for 24 h. On the day of the experiment, the medium was removed and the attached cells were treated with trypsin for 2 min; -saline buffer solution), slowed rotation, resuspended in 2% heat-inactivated FBS with RPMI at a concentration of 1x10 6 cells/ml and 100 μl were sown on a 96-well plate. The compounds were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and added to the culture medium to achieve the desired concentration (eg 100, 30, 10, 3, 1, 0.3 or 0.1 μM). Cells were incubated with compounds for 4 hours. Cell-free supernatant was collected and IL-1e production was assessed by ELISA. In parallel, control samples treated with vehicle alone were used in each experiment. The final concentration of DMSO was 1%. The compounds showed a dose-dependent increase in IL-1β production in PMA-differentiated THP-1 cells.
Измерение продукции ΙΙ-1β в РМА-дифференцированных клетках ТНР-1 (альтернативная методика).Measurement of ΙΙ-1β production in PMA-differentiated THP-1 cells (alternative method).
Клетки ТНР-1 получали из Американской коллекции типовых культур и субкультивировали в соответствии с инструкциями поставщика. Перед экспериментами клетки культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% инактивированной нагреванием FBS, пенициллин (100 единиц/мл), стрептомицин (100 мкг/мл), HEPES (10 мМ) и пируват натрия (1 мМ), и поддерживали в log-фазе до начала эксперимента. Перед экспериментом клетки ТНР-1 обрабатывали РМА (форбол-12-миристат-13-ацетат) (20 мкг/мл) в течение ночи. В день эксперимента среду удаляли и прикрепленные клетки обрабатывали трипсином в течение 2 мин, затем клетки собирали, промывали PBS (фосфатно-солевой буферный раствор), осаждали центрифугированием и ресуспендировали в 2% инактивированной нагреванием FBS с RPMI при концентрация 50000 клеток/лунку в 384-луночном планшете. Бесклеточный супернатант собирали, и продукцию ΙΙ-1β оценивали с помощью ELISA. Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) и добавляли в культуральную среду до достижения желаемой концентрации (например, 100, 30, 10, 3, 1, 0,3 или 0,1 мкМ). Клетки инкубировали с соединениями в течение 2 ч. Параллельно в каждом эксперименте использовали контрольные образцы, обработанные только носителем. Конечная концентрация DMSO составляла 1%. Соединения показали дозозависимое увеличение продукции ΙΙ-1β в РМАдифференцированных клетках ТНР-1.THP-1 cells were obtained from the American Type Culture Collection and subcultured according to the supplier's instructions. Prior to experiments, cells were cultured in RPMI 1640 medium containing 10% heat-inactivated FBS, penicillin (100 units/mL), streptomycin (100 μg/mL), HEPES (10 mM), and sodium pyruvate (1 mM), and maintained at log- phase before the start of the experiment. Prior to the experiment, THP-1 cells were treated with PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) (20 μg/ml) overnight. On the day of the experiment, the medium was removed and the attached cells were trypsinized for 2 min, then the cells were collected, washed with PBS (phosphate buffered saline), pelleted by centrifugation and resuspended in 2% heat inactivated FBS with RPMI at a concentration of 50,000 cells/well in 384- well plate. The cell-free supernatant was collected and ΙΙ-1β production was assessed by ELISA. The compounds were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and added to the culture medium until the desired concentration was reached (eg 100, 30, 10, 3, 1, 0.3 or 0.1 μM). Cells were incubated with compounds for 2 hours. In parallel, control samples treated with vehicle alone were used in each experiment. The final concentration of DMSO was 1%. The compounds showed a dose-dependent increase in ΙΙ-1β production in PMA differentiated THP-1 cells.
Измерение продукции ΙΙ-1β - протокол hTRF (вторая альтернативная методика).Measurement of ΙΙ-1β production - hTRF protocol (second alternative method).
Последовательные разведения соединений в DMSO добавляли в 384-луночные планшеты с низким объемом по 100 нл/лунку с использованием акустического диспенсера ECHO 550 (Labcyte) до достижения конечной начальной концентрации 10 мкМ в анализе.Serial dilutions of compounds in DMSO were added to low volume 384-well plates at 100 nl/well using an ECHO 550 acoustic dispenser (Labcyte) until a final starting concentration of 10 μM was reached in the assay.
Клетки ТНР-1 в среде RPMI (Gibco, 11875) с 10% FBS при плотности 1х106 клеток/мл в колбе Т175 обрабатывали форбол-12-миристат-13-ацетатом (РМА) (Sigma, Р1585) при конечной концентрации 50 нг/мл в течение ночи при 37°С и 5% CO2 для дифференцировки. Клетки собирали на следующий день после промывания лунки dPBS с использованием 0,5% трипсина. Раствор клеток готовили из 1х106 клеток/мл для 50000 клеток в 50 мкл/лунку в среде RPMI с 2% FBS. Клетки высевали с помощью многоканальной пипетки на разведения соединения в 384-луночных планшетах Greiner с черным прозрачным дном, обработанным тканевой культурой (781090). Планшеты инкубировали в инкубаторе при 37°С при 5% CO2 в течение 2 ч.THP-1 cells in RPMI medium (Gibco, 11875) with 10% FBS at a density of 1x10 6 cells/ml in a T175 flask were treated with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) (Sigma, P1585) at a final concentration of 50 ng/ml ml overnight at 37°C and 5% CO2 for differentiation. Cells were harvested the day after the well was washed with dPBS using 0.5% trypsin. A cell solution was prepared from 1x10 6 cells/ml for 50,000 cells in 50 μl/well in RPMI medium with 2% FBS. Cells were plated using a multichannel pipette for compound dilutions in Greiner 384-well tissue cultured black clear bottom plates (781090). The plates were incubated in an incubator at 37°C at 5% CO2 for 2 h.
После инкубации в течение 2 ч планшеты с клетками вращали в центрифуге в течение 5 мин при 1200 об/мин. Используя Felix (CyBio), 8 мкл супернатанта переносили в 384-луночные, малого объема, белые прокси-планшеты. (Perkin Elmer, 6008230). Набор Human ILlbeta hTRF kit использовали для анализа супернатанта (CISBIO, 62HIL1BPEG). Для построения стандартной кривой ILlBeta к набору прилагались инструкции, а затем антитела из набора разбавляли в соотношении 1:40, а не 1:20, как указано в инструкциях к набору. После объединения антитела добавляли в планшеты, 5 мкл/лунку. Планшеты герметично закрывали и инкубировали при 4°С в течение ночи. Затем планшеты считывали на Perkin Elmer EnVision при 665/615 нм с использованием hTRF-лазера. Соединения показали дозозависимое увеличение продукции IL-1e.After incubation for 2 hours, the plates with cells were rotated in a centrifuge for 5 minutes at 1200 rpm. Using Felix (CyBio), 8 μl of the supernatant was transferred into 384-well, small volume, white proxy plates. (Perkin Elmer, 6008230). The Human ILbeta hTRF kit was used to analyze the supernatant (CISBIO, 62HIL1BPEG). Instructions were included with the kit to generate a standard ILlBeta curve, and then the antibodies from the kit were diluted 1:40 instead of 1:20 as indicated in the kit instructions. After pooling, the antibodies were added to the plates, 5 μl/well. The plates were sealed and incubated at 4°C overnight. The plates were then read on a Perkin Elmer EnVision at 665/615 nm using an hTRF laser. The compounds showed a dose-dependent increase in IL-1e production.
Измерение продукции IL-1e - анализ цельной крови человека.Measurement of IL-1e production - analysis of human whole blood.
Серийные разведения соединений в DMSO добавляли в 384-луночные планшеты с низким объемом по 100 мкл/лунку, используя акустический диспенсер ECHO 550 (Labcyte), до достижения конечной начальной концентрации 10 мкМ в анализе.Serial dilutions of compounds in DMSO were added to low volume 384-well plates at 100 μl/well using an ECHO 550 acoustic dispenser (Labcyte) until a final starting concentration of 10 μM was reached in the assay.
Цельную венозную кровь человека, полученную от здоровых доноров, предварительно обрабатывали LPS (Invivogen, номер по каталогу tlrl-eblps) при концентрации 1 нг/мл в течение четырех часов при 37°С в инкубаторе с 95% увлажненного воздуха и 5% CO2. Праймированную кровь добавляли в планшет с соединением и инкубировали в течение дополнительных 4 ч при 37°С. IL-1beta в супернатантах измеряли с использованием набора AlphLISA (номер по каталогу AL220) в соответствии с инструкциями производителя. Соединения показали дозозависимое увеличение продукции IL-1e. EC50 определяли с использованием праймированной, но необработанной крови в качестве исходного уровня.Human venous whole blood from healthy donors was pretreated with LPS (Invivogen, catalog number tlrl-eblps) at 1 ng/mL for four hours at 37° C. in a 95% humidified air, 5% CO2 incubator. The primed blood was added to the compound plate and incubated for an additional 4 hours at 37°C. IL-1beta in supernatants was measured using the AlphLISA kit (catalog number AL220) according to the manufacturer's instructions. The compounds showed a dose-dependent increase in IL-1e production. EC 50 was determined using primed but untreated blood as baseline.
Измерение продукции IL-1e - протокол hTRF мыши.Measurement of IL-1e production - mouse hTRF protocol.
Иммортализованные мышиные макрофаги, полученные от мышей C57BL/6, получали от ErickeImmortalized mouse macrophages derived from C57BL/6 mice were obtained from Ericke
- 209 042018- 209 042018
Latz, University of Bonn/University of Massachusetts Worchester, MA. Клетки собирали с использованием 0,05% трипсина и промывали PBS. Клетки высевали при плотности 30000 клеток на лунку в 25 мкл среды DMEM (Gibco, 11965), дополненной 2% FBS, и инкубировали в течение 10 мин при 37°С и 5% СО2. LPS-EB (Invivogen, tlr-eblps) добавляли до конечной концентрации 200 нг/мл при 5 мкл/лунку, и клетки инкубировали в течение 2 часов при 37°С и 5% CO2.Latz, University of Bonn/University of Massachusetts Worchester, MA. Cells were harvested using 0.05% trypsin and washed with PBS. Cells were seeded at a density of 30,000 cells per well in 25 μl of DMEM (Gibco, 11965) supplemented with 2% FBS and incubated for 10 min at 37°C and 5% CO 2 . LPS-EB (Invivogen, tlr-eblps) was added to a final concentration of 200 ng/ml at 5 μl/well and the cells were incubated for 2 hours at 37°C and 5% CO2.
Серийные разведения соединений в DMSO добавляли к клеткам в 384-луночных планшетах с малым объемом по 60 мкл/лунку с использованием акустического диспенсера ECHO 550 (Labcyte) до достижения конечной начальной концентрации 50 мкМ в анализе и инкубировали с соединениями в течение дополнительных 2 ч при 37°С при 5% СО2.Serial dilutions of compounds in DMSO were added to cells in low volume 384-well plates at 60 μl/well using an ECHO 550 acoustic dispenser (Labcyte) to reach a final initial concentration of 50 μM in the assay and incubated with compounds for an additional 2 h at 37 °C at 5% CO 2 .
После инкубации в течение 2 ч планшеты с клетками вращали в центрифуге в течение 5 мин при 1200 об/мин. Используя Felix (CyBio), 8 мкл супернатанта переносили в 384-луночные, малого объема, белые прокси-планшеты. (Perkin Elmer, 6008230). Набор Human IL1beta hTRF kit использовали для анализа супернатанта (CISBIO, 62MIL1BPEH). Для построения стандартной кривой IL1Beta следовали инструкциям, которые прилагались к набору (антитела из набора разбавляли в соотношении 1:40, а не 1:20, как указано в инструкциях к набору). После объединения антитела добавляли в планшеты при 5 мкл/лунку. Планшеты герметично закрывали и инкубировали при 4°С в течение ночи. Затем планшеты считывали на Perkin Elmer EnVision при 665/615 нм с использованием hTRF-лазера. Затем данные преобразовывали в пг/мл IllBeta. Соединения показали дозозависимое увеличение продукции II.-1 β.After incubation for 2 hours, the plates with cells were rotated in a centrifuge for 5 minutes at 1200 rpm. Using Felix (CyBio), 8 μl of the supernatant was transferred into 384-well, small volume, white proxy plates. (Perkin Elmer, 6008230). The Human IL1beta hTRF kit was used to analyze the supernatant (CISBIO, 62MIL1BPEH). To construct the standard IL1Beta curve, the instructions that came with the kit were followed (antibodies from the kit were diluted 1:40, not 1:20 as indicated in the kit instructions). After pooling, the antibodies were added to the plates at 5 μl/well. The plates were sealed and incubated at 4°C overnight. The plates were then read on a Perkin Elmer EnVision at 665/615 nm using an hTRF laser. The data were then converted to pg/ml IllBeta. The compounds showed a dose-dependent increase in II.-1 β production.
Анализы связывающих репортеров TLR7 и TLR8 человека in vitro.In vitro human TLR7 and TLR8 binding reporter assays.
Логарифмически растущие клетки человека HEK-Blue, коэкспрессирующие ген TLR7 или TLR8 и NF-kB/AP1-индуцируемый репортерный ген SEAP (секретируемая эмбриональная щелочная фосфатаза; Invivogen, San Diego, CA) добавляли в индивидуальные лунки 384-луночного планшета (15000 клеток на 20 мкл на лунку) и поддерживали в течение 24 ч при 37°С, 5% CO2. Тестируемые соединения или DMSO распределяли по отдельным лункам на следующий день с использованием акустической технологии обработки жидкости (100 нл на лунку), а затем клетки инкубировали в течение 18 ч при 37°С, 5% CO2. Продукцию клеточного SEAP измеряли с помощью планшетного ридера Envision через тридцать минут после добавления свежеприготовленного реагента Quanti-Blue (приготовленного в соответствии с инструкциями производителя; Invivogen, San Diego, CA) в клеточные реакции HEK-Blue TLR Nf-kB-SEAP. Все значения EC50 (полумаксимальная эффективная концентрация) определяли с использованием собственного программного обеспечения для анализа данных. Нормализованное значение EC50=абсолютное значение, определяемое установкой 100% Ymax с использованием значений эталонного стандарта RLU (относительные световые единицы) для клеток, обработанных 50 мкМ эталонного стандарта.Logarithmically growing human HEK-Blue cells co-expressing the TLR7 or TLR8 gene and NF-kB/AP1-inducible reporter gene SEAP (Secreted Embryonic Alkaline Phosphatase; Invivogen, San Diego, CA) were added to individual wells of a 384-well plate (15,000 cells per 20 µl per well) and maintained for 24 h at 37°C, 5% CO2. Test compounds or DMSO were dispensed into individual wells the following day using sonic fluid technology (100 nL per well) and cells were then incubated for 18 hours at 37°C, 5% CO2. Cellular SEAP production was measured with an Envision plate reader thirty minutes after freshly prepared Quanti-Blue reagent (prepared according to manufacturer's instructions; Invivogen, San Diego, CA) was added to HEK-Blue TLR Nf-kB-SEAP cellular reactions. All EC 50 values (half maximum effective concentration) were determined using proprietary data analysis software. Normalized EC5 0 value =absolute value determined by setting 100% Ymax using RLU (Relative Light Units) reference standard values for cells treated with 50 μM reference standard.
Таблица включает биологические данные соединений, которые были проанализированы с использованием одной или нескольких из вышеуказанных методик. Ключ к диапазонам активности: А=<1 мкМ; В=>1 мкМ, <20 мкМ; С=>20 мкМ, <100 мкМ; D=>100 мкМ.The table includes biological data for compounds that have been analyzed using one or more of the above methods. Key to activity ranges: A=<1 μM; B=>1 µM, <20 µM; С=>20 µM, <100 µM; D=>100 μM.
- 210 042018- 210 042018
- 211 042018- 211 042018
- 212 042018- 212 042018
- 213 042018- 213 042018
- 214 042018- 214 042018
- 215 042018- 215 042018
-216042018-216042018
- 217 042018- 217 042018
- 218 042018- 218 042018
- 219 042018- 219 042018
- 220 042018- 220 042018
- 221 042018- 221 042018
- 222 042018- 222 042018
- 223 042018- 223 042018
- 224 042018- 224 042018
- 225 042018- 225 042018
- 226 042018- 226 042018
- 227 042018- 227 042018
- 228 042018- 228 042018
- 229 042018- 229 042018
Описан ряд вариантов осуществления изобретения. Тем не менее, следует понимать, что различные модификации могут быть выполнены без оступления от сущности и объема изобретения. Соответственно, другие варианты осуществления находятся в объеме следующей формулы изобретения.A number of embodiments of the invention have been described. However, it should be understood that various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention. Accordingly, other embodiments are within the scope of the following claims.
Claims (15)
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/662,240 | 2018-04-25 | ||
US62/764,818 | 2018-08-16 | ||
US62/825,044 | 2019-03-28 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA042018B1 true EA042018B1 (en) | 2022-12-27 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US12037344B2 (en) | NLRP3 modulators | |
JP7003143B6 (en) | Substituted imidazoquinolines as NLRP3 modifiers | |
CN109071535B (en) | NLRP3 modulators | |
US11344543B2 (en) | NLRP3 modulators | |
KR20210046023A (en) | Imidazo[4,5-c]quinoline-derived NLRP3-modulator | |
KR20210045430A (en) | Imidazo[4,5-c]quinoline-derived NLRP3-modulator | |
JP2020536897A (en) | Cyclic dinucleotide as an anticancer drug | |
US20220087991A1 (en) | Nlrp3 modulators | |
US20220089572A1 (en) | Nlrp3 modulators | |
US20220089571A1 (en) | Nlrp3 modulators | |
EA042018B1 (en) | NLRP3 MODULATORS | |
US20230348458A1 (en) | Nlrp3 modulators | |
EA040307B1 (en) | NLRP3 MODULATORS | |
EA037780B1 (en) | Nlrp3 modulators | |
WO2024053650A1 (en) | COMPOUND HAVING INHIBITORY ACTIVITY AGAINST DIACYLGLYCEROL KINASE α AND/OR ζ, AND PHARMACEUTICAL USE THEREOF |